HU224697B1 - Photocured cross-linked-hyaluronic acid gel and method of preparation thereof - Google Patents
Photocured cross-linked-hyaluronic acid gel and method of preparation thereof Download PDFInfo
- Publication number
- HU224697B1 HU224697B1 HU0000390A HUP0000390A HU224697B1 HU 224697 B1 HU224697 B1 HU 224697B1 HU 0000390 A HU0000390 A HU 0000390A HU P0000390 A HUP0000390 A HU P0000390A HU 224697 B1 HU224697 B1 HU 224697B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- hyaluronic acid
- gel
- photoreactive
- photocured
- crosslinking
- Prior art date
Links
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims description 147
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims description 147
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 60
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 45
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 237
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 189
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 111
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 73
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 41
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 35
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 25
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 22
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 21
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 20
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 claims description 19
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 17
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 16
- 230000000181 anti-adherent effect Effects 0.000 claims description 15
- 150000002016 disaccharides Chemical group 0.000 claims description 15
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 15
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 14
- 239000003519 biomedical and dental material Substances 0.000 claims description 13
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 10
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 7
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000001414 amino alcohols Chemical group 0.000 claims description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical group 0.000 claims description 5
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000001851 cinnamic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 claims description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 claims description 3
- 125000001140 1,4-phenylene group Chemical group [H]C1=C([H])C([*:2])=C([H])C([H])=C1[*:1] 0.000 claims description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 2
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 31
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 27
- 239000000047 product Substances 0.000 description 24
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 19
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 18
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 13
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 13
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 13
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 12
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 12
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 12
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 12
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 12
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 11
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 description 11
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 11
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 description 10
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 description 10
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 10
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- -1 methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy Chemical group 0.000 description 9
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 6
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 6
- 229910001507 metal halide Inorganic materials 0.000 description 6
- 150000005309 metal halides Chemical class 0.000 description 6
- 239000005297 pyrex Substances 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 210000003815 abdominal wall Anatomy 0.000 description 5
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 5
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 5
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 5
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 5
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 4
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 4
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 4
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 4
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 230000003141 anti-fusion Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- YWIQQKOKNPPGDO-UHFFFAOYSA-N 2,3-didehydrophenylalanine zwitterion Chemical group OC(=O)C(N)=CC1=CC=CC=C1 YWIQQKOKNPPGDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000003848 UV Light-Curing Methods 0.000 description 2
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 150000001555 benzenes Chemical group 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 239000002178 crystalline material Substances 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical compound C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000002406 microsurgery Methods 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000094 2-phenylethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- HBKRWYGZVMKRGZ-UHFFFAOYSA-N 3-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)propanoic acid Chemical compound CC1=CN(CCC(O)=O)C(=O)NC1=O HBKRWYGZVMKRGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASYVZGDYOMRIPZ-UHFFFAOYSA-N 3-(ethyliminomethylideneamino)-n,n-dimethylpropan-1-amine;iodomethane Chemical compound IC.CCN=C=NCCCN(C)C ASYVZGDYOMRIPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FNEHAOQZWPHONV-UHFFFAOYSA-N 9h-carbazole;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 FNEHAOQZWPHONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010060964 Arterial haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- KYXHKHDZJSDWEF-LHLOQNFPSA-N CCCCCCC1=C(CCCCCC)C(\C=C\CCCCCCCC(O)=O)C(CCCCCCCC(O)=O)CC1 Chemical compound CCCCCCC1=C(CCCCCC)C(\C=C\CCCCCCCC(O)=O)C(CCCCCCCC(O)=O)CC1 KYXHKHDZJSDWEF-LHLOQNFPSA-N 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000037716 Chondroitin-sulfate-ABC endolyases Human genes 0.000 description 1
- 108090000819 Chondroitin-sulfate-ABC endolyases Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010021928 Infertility female Diseases 0.000 description 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 208000004210 Pressure Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000031737 Tissue Adhesions Diseases 0.000 description 1
- 241000425571 Trepanes Species 0.000 description 1
- 238000012084 abdominal surgery Methods 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001361 achilles tendon Anatomy 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004414 alkyl thio group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 210000002159 anterior chamber Anatomy 0.000 description 1
- 230000003373 anti-fouling effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004744 butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 206010061592 cardiac fibrillation Diseases 0.000 description 1
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- UGOLAPHJCTVIEW-UHFFFAOYSA-N chloro-dimethyl-sulfanylidene-$l^{5}-phosphane Chemical compound CP(C)(Cl)=S UGOLAPHJCTVIEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000012611 container material Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000000447 dimerizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010932 ethanolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002600 fibrillogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 238000010304 firing Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 description 1
- 238000011902 gastrointestinal surgery Methods 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 description 1
- 231100001261 hazardous Toxicity 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009802 hysterectomy Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000008407 joint function Effects 0.000 description 1
- 238000002684 laminectomy Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- ORSBYYWOQGYWPJ-UHFFFAOYSA-N n'-cyclohexyl-n-(2-morpholin-4-ylethyl)methanediimine;hydrochloride Chemical compound Cl.C1CCCCC1N=C=NCCN1CCOCC1 ORSBYYWOQGYWPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229940105631 nembutal Drugs 0.000 description 1
- 239000012434 nucleophilic reagent Substances 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 231100000191 repeated dose toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002151 serous membrane Anatomy 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-N trans-cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-N 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
- A61L15/28—Polysaccharides or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/20—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L31/00—Materials for other surgical articles, e.g. stents, stent-grafts, shunts, surgical drapes, guide wires, materials for adhesion prevention, occluding devices, surgical gloves, tissue fixation devices
- A61L31/04—Macromolecular materials
- A61L31/042—Polysaccharides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Surgery (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Description
A leírás terjedelme 20 oldal (ezen belül 2 lap ábra)
HU 224 697 Β1
A találmány technikai háttere
A találmány tárgya biokompatibilis fotokémiailag kezelt térhálósított hialuronsavgél, amely hidrogél és specifikus fizikai jellemzőkkel rendelkezik, továbbá eljárás ugyanezen gél előállítására, illetve alkalmazási eljárás biogyógyászati anyagként történő felhasználásra.
A találmány háttere
A hialuronsav megtalálható az állati szövetekben és biokompatibilis anyag, valamint biológiailag lebontható vegyület. Fizikai jellemzői vonatkozásában ennek jobb tulajdonságai vannak, mivel nagyban vízmegkötő jellemzőjű, valamint vizes oldata magas viszkozitású oldat.
Hidrogélt állítunk elő a hialuronsav kémiai módosításával, majd a módosított hialuronsav valamely eljárással történő térhálósításával, így egy hálós rendszert alakítunk ki, majd a hálós szerkezetbe vizes közeget, mint például vizet, építünk be. A hidrogél viszkoelasztikus jellemzőkkel rendelkezik, továbbá megfelelő viszkozitású.
A térhálósított hialuronsav makromolekulákat képez attól függetlenül, hogy milyen kötéseket tartalmaz. A térhálósított hialuronsav biológiai lebonthatóságát módosíthatjuk és szabályozhatjuk úgy, hogy a térhálósítás fokát megváltoztatjuk.
Különféle térhálósítási eljárásokat ismerünk. A térhálósítást például végrehajthatjuk úgy, hogy egy hidrofób kötést alkalmazunk vagy ionos kötést alkalmazunk. Továbbá térhálósítást végezhetünk hialuronsav esetében, valamely nukleofil reagens bevezetésével [JP-W-3-502704 számú japán szabadalom (4,937,270 számú amerikai egyesült államokbeli ennek megfelelő szabadalom), a „JP-W a fentiekben azt jelenti, hogy nem közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentés], továbbá térhálósítást végezhetünk hidrofób kötésen keresztül úgy, hogy a hialuronsavat észterezzük (4,851,521 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom), és térhálósítást végezhetünk ionos kötésen keresztül polivegyértékű ionok alkalmazásával (EP 0507604 A2 számú szabadalom), ezeket a térhálósítási eljárásokat a szakirodalomban leírták. Mivel az ilyen molekulákban a térhálósító kötések enyhén kötőerővel rendelkező kötések a kovalens kötéshez képest, ezek különféle külső változásokra érzékenyek. Ilyen változások például a pH változása, az ionerősség változása, a hőmérséklet változása és hasonló módosulások. Ezen túlmenően amennyiben ilyen anyagokat, mint biogyógyszereket alkalmazva az élő testben való tartózkodási idejük rövid, és igen nehéz ezt az időtartamot megfelelően szabályozni abból a célból, hogy a hialuronsav fiziológiai hatását megfelelő ideig a testben kifejtse.
A hialuronsavmolekulák kovalens kötéssel történő térhálósítási eljárása, amelynek során divinil-szulfoncsoporttal történik a térhálósítás [JP-B-4-30691 számú szabadalom (a 4,582,865 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalomnak megfelel), ahol a „JP-B” a fentiekben „vizsgált japán közzétett szabadalmat” jelent], továbbá a térhálósítás történhet epoxidcsoporton keresztül [JP-W-61-502729 számú szabadalom (amely megfelel a 4,886,787 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalomnak), a JP-A-5-140201 számú szabadalom, ahol „JP-A” elnevezés alatt „nem vizsgált közzétett japán szabadalmi bejelentést” értünk] ismert térhálósítási eljárások. Az ezekben alkalmazott térhálósító reagensek, illetve térhálósító vegyületek toxikus vegyületek. A folyamatban melléktermékként háromdimenziós hálós szerkezet is kialakul a divinil-szulfoncsoporttal, az epoxidcsoporttal vagy hasonló csoportokkal történő térhálósítás esetében, amennyiben a hialuronsavba ilyen csoportokat vezettünk, és az így kialakult térhálósított hialuronsav nem oldható adott oldószerekben, mint például vízben vagy hasonló oldószerekben. A reakció során el nem reagált alacsony molekulatömegű molekulák épülnek be a hálós szerkezetbe, és ezeket igen nehéz ettől elválasztani vagy eltávolítani a szerkezetből.
Másrészt leírtak egy hialuronsav-térhálósítási eljárást fotokezeléses térhálósító reakciót, amelyet ultraibolya sugárral hajtanak végre [JP-A-6-73102 számú szabadalom (amely megfelel az 5,462,976 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalomnak) és ASAIO Journal. 38, M154-M157 (1992) közlemény]. Ez a térhálósítási módszer azzal az előnnyel rendelkezik, hogy az a fotoreaktív hialuronsavszármazék, amelybe egy fotoreaktív térhálósító csoportot vezettek be, vízoldható még azelőtt, mielőtt a fotokezelt térhálósítás megtörténne, és nem keletkezik a térhálósítás során háromdimenzionális hálós szerkezet, ebből eredően az el nem reagált kis molekulatömegű vegyületek könnyen eltávolíthatók a termékből. Ebben az esetben a fotoreakció egy tiszta reakció, és nem reagált kis molekulatömegű vegyületektől mentes fotokezelt térhálósított hialuronsavszármazékot eredményez. Továbbá a reakcióban kapott térhálósított szerkezet kovalens kötést tartalmaz, és így a fotokezelt térhálósított hialuronsavszármazék testben történő tartózkodási idejét szabályozhatjuk, ez a szabályozás könnyen elvégezhető a térhálósítás fokának szabályozásával.
Ezen túlmenően amikor a fent leírt fotokezelt térhálósított hialuronsavszármazékokat biogyógyászati anyagként szándékozták felhasználni, például antiadhéziós anyagként használták, a filmszerű formákat vizsgálták [ASAIO Journal. 38, M154-M157 (1992)]. Igen nehéz volt az ilyen esetekben megakadályozni a szövetek és szervek finom részecskéinek adhézióját. Ebből eredően egy injektálható fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, amelyet az ilyen finom helyekre injekció formában adagolhatunk, nagyon kívánatos termék lenne.
A fotokezelt térhálósított hialuronsav hidrogél formája, illetve az ilyen forma előállítási eljárása, amely a találmány szerinti forma és előállítási eljárás, a szakirodalomban eddig nem ismert.
Egy szokásos térhálósított hialuronsav hidrogél esetében a szennyezések eltávolítása, mint például az el nem reagált kis molekulatömegű vegyületek eltávolítása, valamint a hidrogél fizikai jellemzőinek szabályozása, igen nehéz. Továbbá igen nehéz olyan körülmé2
HU 224 697 Β1 nyék kialakítása a hidrogél előállítása során úgy, hogy a megfelelő fizikai jellemzőkkel rendelkező hidrogélt nyerjük.
A találmány részletes leírása A találmány tárgya egy fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, amely vizes közeget tartalmaz, és amelyet úgy állítunk elő, hogy egy fotoreaktív hialuronsavszármazékot, amelybe korábban fotoreaktív térhálósító csoportot vezettünk be, besugárzunk ultraibolya sugárral, és így a közös fotoreaktív térhálósító csoportokat dimerizáljuk és ciklobutángyűrűt képezünk, amely reakció során egy hálós szerkezet keletkezik. A találmány tárgya továbbá a fent leírt gél előnyös előállítási eljárásai.
A találmány tárgya továbbá injektálható biogyógyászati anyag, amely fotokezelt térhálósított hialuronsavgélt tartalmaz, és amely kiváló biztonsággal alkalmazható, kiváló biokompatibilitású és biológiailag lebontható tulajdonsággal rendelkezik.
A részletes vizsgálataink során egy fenti gélt állítottunk elő, amelynek a szerkezeti jellemzői az alábbiak:
1. fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, amelynek tárolási modulusa (G’) 50-1500 Pa, veszteségi modulusa (G”) 10-300 Pa és tangensdeltaértéke (G”/G’) 0,1-0,8 közötti szám dinamikus viszkoelaszticitásmérésben 10 Hz frekvencia mellett, és amely olyan hidrogél, amelyet úgy nyerünk, hogy egy fotoreaktív hialuronsavszármazékot, amelyben a fotoreaktív térhálósító csoport kémiailag kötött a hialuronsav valamely funkciós csoportjához, ultraibolya fénnyel besugárzunk, és így a kölcsönös fotoreaktív térhálósító csoportokat térhálósítjuk;
2. fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, amelyben a térhálósítás mértéke 0,01-0,5%/mol a felépítő diszacharidegységre számítva a hialuronsavban, és amely olyan hidrogél, amelyet úgy nyerünk, hogy fotoreaktív hialuronsavszármazékot, amelyben valamely fotoreaktív térhálósító csoport kémiailag kötött a hialuronsav valamely funkciós csoportjához, ultraibolya fénnyel besugárzunk;
3. a fenti 1. vagy 2. pont szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, ahol a fotoreaktív térhálósító csoport fahéjsavszármazék, amely távtartó egységgel rendelkezik, és kémiailag a hialuronsav valamely funkciós csoportjához kapcsolódik, és így egy úgynevezett fotoreaktív hialuronsavszármazékot képez;
a közös fotoreaktív térhálósító csoportok a fotoreaktív hialuronsavszármazékban dimerizálódtak, mégpedig ultraibolyafény-besugárzás segítségével, és egy ciklobutángyűrűt képeztek, és így egy hálós szerkezet alakult ki; és a fenti gél egy hidrogél, amely vizes közeget tartalmaz a fenti hálószerkezetben;
4. a 3. fenti pontnak megfelelő fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, amelyben a távtartó egy amino-alkoholból leszármaztatott csoport valamely aminosavból leszármaztatott vagy valamely peptidből leszármaztatott csoport;
5. a 3. vagy 4. pont szerinti fent leírt fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, ahol a fotoreaktív térhálósító csoport az (1) vagy a (2) képletű csoport:
-NH(CR1R2)nOCOCH=CH-Ph (1) ahol az általános képletben R1 és R2 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy kis szénatomos alkilcsoport; Ph jelentése valamely fenilcsoport; és n jelentése 2-18 közötti egész szám;
-A-NH-Ph-CH=CHCOOR3 (2) ahol az általános képletben R3 jelentése kis szénatomos alkilcsoport vagy aralkilcsoport; A jelentése ~(NHCR4R5CO)m- általános képletű csoport vagy -NH(CR4R5)hCO- általános képletű csoport; R4 és R5 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy kis szénatomos alkilcsoport; -Ph- csoportjelentése para-fenilén-csoport; m jelentése 1-6 közötti egész szám; és h jelentése 1-18 közötti egész szám;
6. az 1-5. pontok szerinti fenti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, ahol a fotoreaktív térhálósító csoportot az alkotó diszacharidegységekbe 0,05-10%/mol mennyiségben vezettük be;
7. fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, amely tárolási modulusa (G') 50-1500 Pa, veszteségi modulusa (G) 10-300 Pa közötti és tangensdelta(G”/G’) értéke dinamikus viszkoelaszticitásban 10 Hz frekvencia mellett 0,1-0,8 közötti, és amely egy hidrogél, amelyet úgy állítunk elő, hogy egy fotoreaktív hialuronsavszármazékot ultraibolya fénnyel besugárzunk, amely származékban egy fotoreaktív térhálósító csoport kémiailag kötött a hialuronsav valamely funkciós csoportjához, és így a közös fotoreaktív térhálósító csoportokat térhálósítjuk, valamint a térhálósított terméket hőkezelésnek vetjük alá;
8. fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, amelynek tárolási modulusa (G’) 50-1500 Pa közötti, veszteségi modulusa (G”) 10-300 Pa közötti és tangensdelta-értéke (G”/G’) dinamikus viszkoelaszticitásban 10 Hz frekvencia mellett 0,1-0,8 közötti, és amely egy hidrogél, amelyet úgy állítunk elő, hogy valamely fotoreaktív hialuronsavszármazékot, amelyben valamely fotoreaktív térhálósító csoport kémiailag kötött a hialuronsav valamely funkciós csoportjához, hőkezelünk, majd a hőkezelt hialuronsavszármazékot ultraibolya fénnyel besugározzuk, és a közös fotoreaktív térhálósító csoportokat térhálósítjuk;
9. fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, amelynek tárolási modulusa (G’) 50-1500 Pa közötti, veszteségi modulusa (G”) 10-300 Pa közötti és tangensdelta-értéke (G”/G’) dinamikus viszkoelaszticitásban 10 Hz frekvencia mellett 0,1-0,8 közötti, és amely valamely hidrogél, amelyet úgy állítunk elő, hogy a fotoreaktív hialuronsavszármazékot, amelyben egy fotoreaktív térhálósító csoport kémiailag kötött a hialuronsav valamely funkciós csoportjához, hőkezeljük, majd a hőkezelt fotoreaktív hialuronsavszármazékot ultraibolya fénnyel besugározzuk, és így a közös fotoreaktív térhálósító csoportokat térhálósítjuk, majd a térhálósított terméket ismét hőkezelésnek vetjük alá;
HU 224 697 Β1
10. fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, amely az 1-9. fenti pontok bármelyike szerinti gél, ahol a gél endotoxintartalma 0,25 endotoxin egység (EU)/g vagy ennél kisebb;
11. eljárás fotokezelt térhálósított hialuronsavgél előállítására, azzal jellemezve, hogy:
0,5-10 tömeg% mennyiségű fotoreaktív hialuronsavszármazékot tartalmazó vizes közegű oldatot, ahol a származékban valamely fotoreaktív térhálósító csoport kémiailag kötött a hialuronsav valamely funkciós csoportjához, ultraibolya fénnyel besugárzunk, és intermolekuláris és/vagy intramolekuláris térhálósító kötést hozunk létre a közös fotoreaktív térhálósító csoportok dimerizációjával, és így hálós szerkezetet állítunk elő;
12. a fenti 11. pont szerinti eljárás valamely fotokezelt térhálósított hialuronsavgél előállítására, ahol a fenti vizes közegű fotoreaktív hialuronsavszármazék oldatának ultraibolya fénnyel történő besugárzása előtt és/vagy után hőkezelést végzünk;
13. a fenti 12. pont szerinti eljárás fotokezelt térhálósított hialuronsavgél előállítására, azzal jellemezve, hogy a hőkezelést 100-125 °C hőmérsékleten 5-30 perc időtartamon át végezzük nagynyomású gőz segítségével;
14. biogyógyászati anyag, azzal jellemezve, hogy ez az 1-10. pontok bármelyike szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél tartalmazza;
15. a 14. pont szerinti fenti biogyógyászati anyag, amely antiadhéziós hatást fejt ki;
16. biogyógyászati anyagkészlet, azzal jellemezve, hogy egy térhálósított hialuronsavgélt és egy fenti gélt tartalmazó tartályt tartalmaz olyan állapotban, hogy ez a tartály kivehető;
17. a 16. fenti pont szerinti biogyógyászati anyagkészlet, ahol a fenti tartály olyan tartály, amely önmagából kinyomja az injektálás céljára a fenti gélt;
18. biogyógyászati anyagkészlet, azzal jellemezve, hogy az 1-10. pontok bármelyike szerinti térhálósított hialuronsavgélt tartalmaz, valamint egy fenti gélt tartó tartályt tartalmaz olyan helyzetben, hogy ez a tartály kivehető; és
19. a 18. fenti pont szerinti biogyógyászati anyagkészlet, ahol a fenti tartály olyan tartály, amely önmagából kinyomja az injektálás céljára alkalmazott gélt.
Az ábrák rövid leírása
1. ábra: Bemutatjuk egy fotoreaktív hialuronsavszármazék-oldatban a fotokezelt térhálósítást.
2. ábra: Függvény, amelyen bemutatjuk a DS (szubsztitúció foka) és egy fotokezelt térhálósított hialuronsavgél vízabszorpciós arányának viszonyát.
A találmány szerinti eljárás előnyös végrehajtása Az alábbiakban a találmány szerinti terméket és eljárást részletesen ismertetjük.
A találmány szerinti leírásban „fotokezelt térhálósított hialuronsavszármazék” elnevezés alatt egy olyan származékot jelölünk, amelyet úgy nyerünk, hogy egy fotoreaktív hialuronsavszármazékot, amelyben egy fotoreaktív térhálósító csoport kémiailag kötött, ultraibolya fénnyel besugárzunk, és a közös fotoreaktív térhálósító csoportok dimerizációja történik, így a hialuronsavszármazék térhálósodik, és egy hálós szerkezetet képez. A „fotokezelt térhálósított hialuronsavgél” elnevezés alatt a találmány szerinti leírásban hidrogéleket értünk, amely hidrogélen valamely vizes közeget, mint például vizet, valamely puffért, fiziológiai sóoldatot, puffereit fiziológiai sóoldatot, valamely vizes oldatot, amely vízoldható szerves oldószert tartalmaz és hasonlókat tartalmaz diszperzióközegként a hálós szerkezetben (háromdimenziós hálós szerkezet), amely szerkezet a fotokezelt térhálósított hialuronsavban (a továbbiakban egyszerű elnevezésben „a találmány szerinti gél”) keletkezik. A „hialuronsav funkciós csoport” elnevezés alatt a találmány szerinti leírásban olyan funkciós csoportokat értünk, amelyek a hialuronsavban találhatók, és alkalmasak kémiai kötést létrehozni a fotoreaktív térhálósító csoportokkal; ilyen funkciós csoportok lehetnek például a karboxilcsoport és a hidroxilcsoport. A „kis szénatomos alkilcsoport” vagy „kis szénatomos alkoxicsoport” elnevezés alatt a találmány szerinti leírásban olyan alkilcsoportokat vagy alkoxicsoportokat értünk, amelyek 1-8 szénatomot, előnyösen 1-4 szénatomot tartalmaznak.
Elsőként a találmány szerinti gélben a fizikai jellemzőket adjuk meg a viszkoelaszticitás vonatkozásában, illetve megadjuk a termék térhálósított szerkezetét a térhálósítás mértékének megadásával.
A találmány szerinti fotoreaktív hialuronsavszármazékban található fotoreaktív térhálósító csoport minősége nem döntő befolyású mindaddig, amíg ez a csoport képes ultraibolyafény-besugárzásra dimerizálni és egy ciklobutángyűrűt képezni, valamint amíg ez a csoport fahéjsavból vagy szubsztituált fahéjsavszármazékból vezethető le [például fahéjsavszármazékokból és hasonló vegyületekből, amelyekben a benzolgyűrű bármely egy vagy két hidrogénatomja a fahéjsavban, kis szénatomos alkilcsoporttal (például metilcsoporttal, etilcsoporttal, propilcsoporttal, izopropilcsoporttal, butilcsoporttal, terc-butil-csoporttal és hasonló csoportokkal), kis szénatomos alkoxicsoporttal (például metoxicsoporttal, etoxicsoporttal, propoxicsoporttal, izopropoxicsoporttal, butoxicsoporttal és hasonló csoportokkal), valamely aminocsoporttal, valamely hidroxilcsoporttal és hasonló csoportokkal szubsztituált], valamely karboxi-szénatomos alkil-timin-csoport [például 1-(2-karboxi-etil)-timin-csoport és hasonló csoportok], valamely karboxi-kis szénatomos alkil-szubsztituált-kumaril-csoport (például 7-kumaril-oxi-ecetsav és hasonló csoportok) és hasonló vegyületek. Ezen vegyületek közül különösen előnyös fotoreaktív térhálósító csoport, amelybe a fahéjsavból vagy fahéjsavszármazékból levezethető csoportot építünk be, különösen előnyös. Ezen túlmenően mivel a fotoreaktív térhálósító csoport egy olyan csoport, amelyben a távtartó csoport egy fotoreaktív vegyülethez kötött, amely lehet például fahéjsav és hasonló csoportok, és ezek a vegyületek is előnyö4
HU 224 697 Β1 sek. Előnyös távtartó csoportok lehetnek a két vagy több funkciós csoportot tartalmazó csoportok, ahol a funkciós csoportok képesek kötődni a fotoreaktív vegyület, mint például fahéjsav és hasonló vegyületek mindkét funkciós csoportjához és a hialuronsav funkciós csoportjához. Részletesebben, ezek lehetnek aminosavak vagy ezek származékai, peptidek és amino-alkoholok, valamint hasonló vegyületek, ezek a vegyületek előnyös vegyületek, különösen előnyös vegyületek az amino-alkoholok. A fotoreaktív térhálósító csoport a hialuronsav felépítő szacharidegységeinek bármely funkciós csoportjába bevezethető, például bevezethető az N-acetil-D-glükózaminba és a D-glükuronsavban, különösen előnyösen az ilyen térhálósító csoportot a D-glükuronsav karboxilcsoportjára vezetjük be.
Amennyiben fotoreaktív térhálósító csoportként fahéjsavat alkalmazunk, távtartó egységként pedig amino-alkoholt alkalmazunk, a fotoreaktív hialuronsavszármazék előnyösen olyan szerkezetű, hogy a fahéjsav karboxilcsoportja kémiailag kötött az amino-alkohol hidroxilcsoportjához észterkötéssel és az amino-alkohol aminocsoportja kémiailag kötött amidkötéssel a hialuronsav karboxilcsoportjához. Amennyiben fotoreaktív térhálósító csoportként aminofahéjsavat alkalmazunk, és távtartó egységként aminosavat vagy peptidet használunk, olyan vegyület, ahol a távtartó egység karboxilcsoportja kémiailag kötött amidkötéssel az amino-fahéjsav aminocsoportjához és az aminosav vagy peptid aminocsoportja kémiai kötéssel, azaz amidkötéssel kötött a hialuronsav karboxilcsoportjához.
Részletesebben, a fotoreaktív térhálósító csoportok, amelyekhez távtartó egység kötött az (1) általános képletű csoportok vagy a (2) általános képletű csoportok, ezeket a csoportokat az alábbiakban bemutatjuk, mint különösen előnyös csoportokat.
—NH(CR1R2)nOCOCH=CH-Ph (1)
Az (1) általános képletben R1 és R2 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy kis szénatomos alkilcsoport (előnyösen 1-4 szénatomos alkilcsoport); Ph jelentése fenilcsoport, amely nemcsak a C6H5-csoport lehet, hanem szusztituált benzolgyűrű is lehet, amely bármely helyzetben egy vagy két hidrogénatom helyett szubsztituenst tartalmazhat, ahol az egy vagy két szubsztituens lehet kis szénatomos alkilcsoport vagy kis szénatomos alkoxicsoport, amelyek 1-4 szénatomot tartalmaznak, aminocsoport, hidroxilcsoport és hasonló csoportok; és n jelentése 2-18 közötti, előnyösen 2-12 közötti egész szám.
Az (1) általános képlettel jellemzett fotoreaktív térhálósító csoport kémiailag kötött például a hialuronsav karboxilcsoportjához amidkötés segítségével, és így fotoreaktív hialuronsavszármazékot alkot.
-A-NH-Ph-CH=CHCOOR3 (2)
A (2) általános képletben R3 jelentése kis szénatomos alkilcsoport, előnyösen 1-4 szénatomos alkilcsoport (például metilcsoport, etilcsoport vagy hasonló csoport) vagy aralkilcsoport, amely 7-20 szénatomot tartalmaz, előnyösen benzilcsoport vagy fenetilcsoport; A jelentése -(NHCR4R5CO)m- általános képletű csoport vagy -NH(CR4R5)hCO- általános képletű csoport;
R4 és R5 mindegyikének jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy kis szénatomos alkilcsoport (előnyösen 1-4 szénatomos alkilcsoport); -Ph- jelentése para-fenilén-csoport, amely szubsztituálatlan vagy szubsztituált lehet, és nemcsak a -C6H4- képletű csoportot értjük alatta, hanem szubsztituált benzolgyűrű lehet, amelynek a benzolgyűrűben található orto- vagy meta-helyzetű hidrogénatomja szubsztituenssel helyettesített, amely szubsztituens lehet kis szénatomos alkilcsoport vagy alkoxicsoport, amely 1-4 szénatomot tartalmaz, aminocsoport, hidroxilcsoport vagy hasonló csoport; m jelentése 1-6 közötti, előnyösen 1-3 közötti egész szám; és h jelentése 1-18 közötti, előnyösen 1-12 közötti egész szám.
A találmány szerinti eljárásban alkalmazható hialuronsav nem limitált, azonban 10 000-50 000 tömegű átlagos molekulatömegű hialuronsavat alkalmazunk általában kiindulási anyagként. Különféle molekulatömegű kiindulási anyagot választhatunk a felhasználástól függően. Az átlagos molekulatömeg előnyösen 500 000-3 000 000 és különösen előnyösen 800 000-2 500 000 közötti érték. Az alábbi előállítási eljárásban előnyösen a hialuronsav vízoldható sóját, mint például alkálifémsóját (például nátriumsóját, káliumsóját és hasonló sókat), alkáliföldfémsóját (például kalciumsóját vagy hasonló sókat) vagy hasonló sókat alkalmazunk, azonban más sók vagy szabad sav forma ugyancsak alkalmazható az eljárásban mindaddig, amíg ezek a reakcióban alkalmazott oldószerben oldhatóak, és a reakció esetében a reakció előrehaladására nem gyakorolnak hatást. A leírásban „hialuronsav elnevezésbe esetenként beleértjük ennek sóit is.
A találmány szerinti eljárásban alkalmazható fotoreaktív hialuronsavszármazékot úgy állíthatjuk elő, hogy a hialuronsavat például önmagában vízben vagy vizes oldatban oldjuk, amely vizes oldat vízzel elegyedő szerves oldószert [például dioxánt, dimetil-formamidot, N-metil-pirrolidont, acetamidot, alkoholt (például metanolt, etanol), piridint és hasonló oldószert] tartalmaz. Ezt követően a fotoreaktív térhálósító csoportot például karbodiimid eljárással vezetjük be a molekulába vízoldható karbodiimid alkalmazásával [amely lehet például 1-etil-3-(3-dimetil-amino-propil)-karbodiimid-hidroklorid (a továbbiakban „EDCHCI” rövidítéssel jelzett), 1-etil-3-(3-dimetil-amino-propil)-karbodiimid-metil-jodid, 1-ciklohexil-3-(2-morfolino-etil)-karbodiimid-hidroklorid], valamint a reakcióban kondenzáló segédanyagot alkalmazunk (amely lehet például N-hidroxi-szukcinimid, N-hidroxi-benzotriazol és hasonló vegyületek).
A reakcióban nyert termék tisztítását szokásos eljárásokkal végezhetjük, amely lehet például etanolos csapadékként történő leválasztás vagy dialízis. A tisztítás és szárítás után a szubsztitúció fokát (a továbbiakban „DS” rövidítéssel jelzett és ez a fotoreaktív térhálósító csoport/hialuronsav diszacharidegység-tartalom aránya) értéket határozzuk meg a nyert fotoreaktív hialuronsavszármazékban, ezt úgy végezzük, hogy spektrofotométer segítségével meghatározzuk a termék körülbelül 269 nm hullámhossz mellett mért abszorpcióértékét.
HU 224 697 Β1
Steril és lényegében endotoxinmentes (például az endotoxintartalom 0,25 EU/g vagy ennél kisebb) fotoreaktív hialuronsavszármazékok és fotokezelt térhálósított hialuronsavgélek állíthatók elő, amennyiben steril vagy lényegében endotoxinmentes reagenseket, vizet, tartályokat és hasonló eszközöket alkalmazunk, és figyelmet fordítunk a munkaterület sterilizálására, ahol az előállítást végezzük.
Egy fotoreaktív térhálósító csoport hialuronsavba történő bevezetésére alkalmazható speciális vegyületek az (1-1) általános képletű vagy (2-1) általános képletű vegyületek:
H2N(CR1R2)nOCOCH=CH-Ph (1-1) ahol R1, R2, Ph és n jelentése a fent megadott.
H-A-NH-Ph-CH=CHCOOR3 (2-1) ahol A, -Ph- és R3 jelentése a fent megadott.
Részletesebben, az (1-1) általános képletű vegyület (1-2) általános képletű hidrokloridsóját az 1. reakcióvázlat szerinti eljárással állíthatjuk elő.
1. reakcióvázlat
Első reakció
R6HN(CR1R2)nOH (3)+XCOCH=CH-Ph (4)-> R6HN(CR1R2)nOCOCH=CH-PH (5)
Második reakció (5)+HCI->HCI H2N(CR1R2)nOCOCH=CH-Ph (1-2) ahol az általános képletben R6 jelentése aminocsoport védőcsoport, amely savas kezeléssel hasítható, és lehet például terc-butoxi-karbonil-csoport és hasonló csoportok; és X jelentése halogénatom, például klóratom és hasonló csoport.
Az (1-2) általános képletű vegyületet az alábbiak szerint állíthatjuk elő.
A (3) általános képletű vegyülethez szerves oldószert (például kloroformot és hasonló oldószert) adagolunk, valamint az oldathoz valamely szerves bázist (például trietil-amint és hasonlót) adagolunk jeges hűtés közben. Az elegyhez ezt követően sorrendben (4) általános képletű vegyületet, majd valamely bázikus katalizátort (például 4-dimetil-amino-piridin és hasonló vegyületet) adagolunk. Ezt követően a reakcióelegyet szobahőmérsékleten keverjük, majd a reakcióelegyhez valamely szerves oldószert (például etil-acetátot és hasonló oldószert) adagolunk. A kapott elegyet sorrendben több részlet gyenge sav vizes oldatával,.vízzel, több részlet gyenge alkalikus vizes oldattal, vízzel, telített nátrium-klorid vizes oldattal és hasonló oldattal mossuk. A szerves oldószeres fázist elválasztjuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton vagy hasonló szárítószeren megszárítjuk. A szárítóanyagot és egyéb csapadékot leszűrjük, majd a szűrletet vákuumban bepároljuk, és így az (5) általános képletű vegyületet nyerjük.
Az (5) általános képletű vegyület jeges hűtés mellett és keverés közben 1-5 m hidrogén-klorid szerves oldószeres oldatot (például dioxános vagy hasonló oldatot) adagolunk. A kivált csapadékot ezt követően leszűrjük. A kristályos anyagot szerves oldószerrel mossuk, majd vákuumban megszárítjuk, és így az (1-2) általános képletű vegyületet nyerjük.
Részletesebben, a (2-1) általános képletű vegyület hidrokloridsóját [(2-2) általános képletű vegyület] a 2.
reakcióvázlat szerinti eljárással állíthatjuk elő.
2. reakcióvázlat
1. reakció
R6-A-OH (6)+H2N-Ph-CH-CHCOOR3 (7) -> R6-A-HN-Ph-CH=CHCOOR3 (8)
2. reakció (8)+HCI—> HCI H-A-HN-Ph-CH=CHCOOR3 (2-2) ahol az általános képletekben R3 és R6 jelentése a fent megadott.
Ezen túlmenően a (2-2) általános képletű vegyületet az alábbiak szerint állíthatjuk elő.
A (6) általános képletű vegyülethez szerves oldószert (kloroformot és hasonló oldószert) adagolunk, majd ezt követően az elegyhez valamely szerves fázis (például trietil-amin és hasonló) jelenlétében aktivátormolekulát (például dimetil-foszfino-tioil-kloridot és hasonló vegyületet) adagolunk jeges hűtés közben, így a (6) általános képletű vegyület karboxilcsoportját aktiváljuk. A (6) általános képletű vegyületet aktiválását követően a vegyülethez (7) általános képletű vegyületet adagolunk jeges hűtés közben valamely szerves bázis (például trietil-amin és hasonló) jelenlétében, majd az elegyet szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően a reakcióelegyhez valamely szerves oldószert (például etil-acetátot és hasonlót) adagolunk, majd az elegyet sorrendben több részlet gyenge vizes oldattal, vízzel, több részletben gyenge alkalikus vizes oldattal, vízzel, telített nátrium-klorid vizes oldattal és hasonló mosófolyadékkal mossuk. A szerves réteget elválasztjuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton vagy hasonló szárítószeren megszárítjuk. A szárítószert és hasonló csapadékot szűréssel eltávolítjuk, majd a szűrletet vákuumban szárítjuk, és így a (8) általános képletű vegyületet nyerjük.
A (8) általános képletű vegyülethez jeges hűtés mellett 1-5 m hidrogén-klorid szerves oldószeres oldatot adagolunk (ahol az oldószer például dioxán és hasonló). Ezután a reakcióelegyet keverjük, majd az elegyhez valamely szerves oldószert adagolunk (amely lehet például dietil-éter és hasonló oldószer). A kivált kristályos anyagot leszűrjük, majd szerves oldószerrel mossuk, és végül vákuumban megszárítjuk, így a (2-2) általános képletű vegyületet nyerjük.
Amennyiben a fotoreaktív térhálósító csoportba távtartó csoportot építünk be, ez a fotoreaktív hialuronsavszármazék fotoreaktivitását növeli, ez a növelési mérték függ a szabadsági foktól és a távtartó hidrofób kötés jellemzőitől. A fotoreaktív reakcióban való érzékenység növekedése abban jelentkezik, hogy a távtartó egység bevezetése esetében lehetséges fotokezelt térhálósítást elérni olyan kis mértékű fotoreaktív térhálósító csoport bevezetés mellett, amely mellett normálesetben korábban a fotokezelt térháíósítás igen nehezen volt elvégezhető.
A korábban leírt szokásos eljárások szerint a fent leírt fotoreaktív hialuronsavszármazékot fénnyel történő besugárzással térhálósították vizes oldatban, ez a vizes
HU 224 697 Β1 oldat a fotoreaktív hialuronsavszármazékot tartalmazta, ez az oldatot először tartály fölött megszárították, és egy filmet vagy hasonló formát állítottak elő, majd ezt ultraibolya fénnyel besugározták, és így fotokezelt térhálósított hialuronsavfilmet nyertek. Az eljárás során nemcsak azt érik el, hogy a film könnyen átbocsátja az ultraibolya fényt, hanem a fotoreaktív térhálósító csoportok egymáshoz közelebb helyezkednek el, mivel hidrofób jellegűek, és ugyanakkor a film dehidratálódik, vagy a filmképzés során a víz elpárolog. Kimutatták, hogy az így kialakított körülmények a fotoreakciót elősegítik. Például amennyiben egy fotoreaktív térhálósító csoport egy fahéjsavmaradék és a közös fahéjsavmaradékok közötti távolság 4, a molekulák dimerizálhatók, azaz térhálósíthatók ultraibolyafény-besugárzással, amely ultraibolya fény speciális hullámhosszúságú, azonban ez a térhálósítás egyéb intermolekuláris távolságok esetében nem történik meg. Ebből eredően a filmképzést, amely a fotoreaktív térhálósító csoportokat egymáshoz közelebb hozza, úgy tekinthető, mint a fotoreakció végrehajtásának fontos lépése. Ezen túlmenően a transz-fahéjsav dimerizálható ultraibolyafény-besugárzással a fenti körülmények között, ugyanakkor geometriai izomerje (azaz a cisz-fahéjsav) a dimerizációban inaktív. Amennyiben a szokásos fotoreaktív hialuronsavszármazék vizes oldatát ultraibolya fénnyel besugározzuk, figyelembe kell venni, hogy a térhálósítás nehéz lehet, mivel a vízmolekulák megakadályozzák a közös fotoreaktív térhálósító csoportok egymáshoz közelebb történő kerülését, valamint a folyamat során transz-cisz izomerizáció történik a dimerizáció során.
Vizsgálataink során kimutattuk, hogy fotokezelt térhálósított hialuronsavgél állítható elő úgy, hogy egy fotoreaktív hialuronsavszármazék magas koncentrációjú vizes oldatát állítjuk elő, és így a közös fotoreaktív térhálósító csoportokat gyakrabban hozzuk közeli helyzetbe, majd az oldat rétegét olyan alakúvá alakítjuk, amely lehetővé teszi az ultraibolya sugarak könnyű áthatolását, és ezt követően ezt a formát ultraibolya fénnyel besugározzuk.
A találmány szerinti eljárásban amennyiben a fotoreaktív hialuronsavat ultraibolya fénnyel besugározzuk fotokezelt térhálósított hialuronsavgélt állítunk elő, amely kívánt fizikai jellemzőkkel, mint például viszkoelaszticitással és hasonlókkal rendelkezik, ezt úgy végezzük, hogy megfelelő fotoreakciókörülményeket, mint például fotoreakcióoldat-koncentrációt, besugárzási időt (az ultraibolya fénnyel) és hasonlókat vagy megfelelő DS értéket választunk ki. A fotoreaktív hialuronsavszármazék vizes közeggel alkotott oldatának amelyet fénnyel sugárzunk be - koncentrációja előnyösen 0,5-10 tömeg%.
Amennyiben körülbelül 1 millió értékű molekulatömegű fotoreaktív hialuronsavszármazékot alkalmazunk, előnyösen alkalmazható koncentráció 1-4 tömeg% közötti érték. Alacsonyabb koncentrációk alkalmazása esetében a dimerizálás helyett, mint ahogy ezt az alábbiakban leírjuk, inkább izomerizáció történik. Ezzel ellentétben nagyobb koncentrációk esetében nehezen állítható elő egyenletes gél.
Amennyiben egy hígabb vizes oldatot alkalmazunk és ilyen oldatot sugárzunk be, amelynek koncentrációja a fenti koncentrációnál kisebb, és a besugárzást ultraibolya fénnyel végezzük a fentiek szerint, elsősorban izomerek keletkeznek. Amennyiben a besugárzást ultraibolya sugarakkal folytatjuk, a hialuronsav szacharídlánca önmaga elhasad az ultraibolya fény hatására, és így a molekulatömeg csökkenése áll elő. Ennek alapján jelentős, hogy olyan reakciókörülményeket alakítsunk ki, amelyekben a fotokezelt térhálósító reakció megfelelő hatásossággal történik anélkül, hogy a hialuronsav szacharidláncára káros hatást gyakorolna a besugárzás. Alapvető fontosságú tehát, hogy a fent megadott koncentrációjú valamely vizes oldatot állítsunk elő. Az 1. ábrán bemutatjuk a fotokezelt térhálósítás vizes közegben történő folyamatát, amelyben (a) azt mutatja, hogy híg oldatban ultraibolya fénnyel történő besugárzás hatásában milyen mértékben változik egy fotoreaktív hialuronsavszármazék. A víz molekulák megakadályozzák a közös fotoreaktív térhálósító csoportokat abban, hogy a térhálósításhoz szükséges helyzetbe kerüljenek, és így elsősorban izomerizáció történik. A (b) ábrán bemutatjuk speciális koncentráció esetében oldatban a fotoreaktív hialuronsavszármazék változását az ultraibolya fénnyel történő besugárzás hatására. A hidrofób fotoreaktív térhálósító csoportok kevésbé lépnek vízzel kölcsönhatásba, mint egy híg oldatban, és ezek vonzzák egymást hidrofób kötés erő segítségével, és olyan molekulaelrendeződést alakítanak ki, amely térhálósításra kész. Ebből eredően a fotoreaktív térhálósító csoportok besugárzás hatására dimerizálódnak, amikor vizes közeget tartalmaznak, és így a térhálósítás megtörténik. Abból a célból, hogy a térhálósítás javított fotoreaktivitását biztosítsuk, az oldatban megfelelő koncentráció mellett különösen előnyösen olyan fotoreaktív hialuronsavszármazékot alkalmazunk, amely esetben a molekulában található fotoreaktív térhálósító csoport a fent leírt távtartó csoportot tartalmazza, és így nagy flexibilitással rendelkezik.
A fent leírt fotoreakciókoncentráció függ a szubsztitúció fokától (DS), azaz a hialuronsavba bevezetett fotoreaktív térhálósító csoportok számától. A DS értéket annak alapján számíthatjuk, hogy % arányban kifejezzük a fotoreaktív térhálósító csoport bevezetett mennyiséget a hialuronsav diszacharidegység építő elemére vonatkoztatva. Például egy olyan fotoreaktív hialuronsavszármazék DS értéke, amely az alkotóelem diszacharidegységére vagy 200 szacharidegységére vonatkoztatva egy fotoreaktív térhálósító csoport 100% vagy másik esetben 1% érték. Ugyanolyan besugárzási körülmények között, amelyet fénnyel végzünk, amikor alacsonyabb DS értéket alkalmazunk, kisebb arányú térhálósítás történik.
A találmány szerinti eljárásban, amennyiben 500 000 vagy nagyobb molekulatömegű hialuronsavat alkalmazunk, a DS érték a fotoreaktív hialuronsavszármazékban ahhoz, hogy a fent megadott fotoreakciókoncentráció alkalmazásával a térhálósítást elérjük, lehet körülbelül 0,05-10%, előnyösen 0,3-5% és különösen előnyösen 0,5-3% közötti, és ez változhat a kiindulási hialuronsav molekulatömegétől függően.
HU 224 697 Β1
A fénnyel besugárzandó fotoreaktív hialuronsavszármazék oldatában oldószerként alkalmazható vizes közeg lehet például víz, valamely puffer, fiziológiás sóoldat, puffereit fiziológiás sóoldat és hasonló oldat. A biogyógyászati anyag esetében előnyösen alkalmazható közeg valamely puffer, fiziológiás sóoldat és puffereit fiziológiás sóoldat [például foszfátpufferelt fiziológiás sóoldat (PBS) és hasonló]. Amennyiben víztől eltérő vizes közeget alkalmazunk, az oldott anyag koncentrációját, valamint a közeg fajtáját alkalmazhatjuk arra, hogy finoman szabályozzuk a kapott gél fizikai jellemzőit, amely gél a találmány szerinti anyag, és ezeket a körülményeket megfelelően kell megválasztani abból a szempontból is, hogy a kapott gélt milyen célra alkalmazzuk.
A fotoreaktív hialuronsavszármazék-oldatot általában úgy állítjuk elő, hogy valamely fotoreaktív hialuronsavszármazékot, amely elválasztott és tisztított a szintetikus eljárásban, vizes közegben oldunk. A fotoreaktív hialuronsavszármazék-oldat esetében egyes esetekben lehetséges, hogy a fotoreaktív hialuronsavszármazékot a szintetikus reakcióelegyben ilyen elegyként alkalmazzuk, vagy az elegy koncentrált állapotában alkalmazzuk.
Amennyiben a fotoreaktív hialuronsavszármazék DS értéke egy meghatározott érték a ciklobutángyűrű képződés aránya, azaz a térhálósítás-arány megváltoztatható úgy, hogy a fotoreakciókoncentráció fenti értékét megváltoztatjuk, illetve változik a kapott gél fizikai jellemzőinek értéke is. Amennyiben a fotoreakciókoncentráció értékét megnöveljük, a térhálósítás aránya növekszik, és a gél elaszticitása is történik, amint ezt viszkoelaszticitásméréssel meghatároztuk, amely mérés a fotokezelt térhálósított hialuronsavgélen végeztünk. A térhálósítás arányának növekedésével a hálós szerkezet sűrűbbé válik. A fotokezelt térhálósított hialuronsavgélben a ciklobutángyürű-arány meghatározható mint a térhálósítás mértéke, amely térhálósítás a DS érték és a térhálósítás-arány szorzata, és ezt a dimer mol%-ban/hialuronsav alkotóelem diszacharid értékben fejezzük ki. Előnyös térhálósítás-érték 0,01-0,5%/mol hialuronsav alkotóelem diszacharidegység.
Egy szárított fotokezelt térhálósított hialuronsavgél (a továbbiakban egyszerűen „szárított gél”) vízabszorpcióját befolyásolja a térhálósítás foka, és így ezzel mérhető a térhálósítás mértéke. A vízabszorpció-értéket az alábbi képlettel fejezhetjük ki:
Vízabszorpció (%)=az abszorbeált víz tömeg/a szárított gél tömege* 100
Amint a térhálósítás foka, azaz a térhálósítási arány növekszik, a hálószerkezet sűrűbbé válik, és a vízfelvétel csökken, így a szárított gél csökkentett vízabszorpciót mutat. A találmány szerinti szárított gél vízabszorpciója általában körülbelül 20 (*100%)—150 (*100%) közötti, előnyösen 30 (*100%)—120 (*100%) közötti, legelőnyösebben 40 (*100%)-100 (*100%) közötti érték, amennyiben a szárított gél ilyen vízabszorpcióját 24 órán át történő fiziológiás sóoldatban végzett (0,9%-os nátrium-klorid vizes oldat) bemerítés után mérjük.
A találmány szerinti gél lehet egy 0,5-10 tömeg% hialuronsav- tartalmú gél, amely a fotokezelt térhálósított hialuronsavszármazékból adódik. Részletesebben, a fotoreaktív hialuronsavszármazékból, amelynek átlagos molekulatömege körülbelül 1 millió érték, nyert fotokezelt térhálósított hialuronsavgél előnyösen a gélben 1-4 tömeg% hialuronsavat tartalmaz.
A találmány szerinti gél fizikai jellemzői viszkoelaszticitásmérés során a dinamikus viszkoelasztikus jellemzővel adhatók meg, ezek például a tárolási modulus (G’)> a veszteségi modulus (G”), a tangensdelta-érték (tang5; G”/G’) és hasonló értékek. Amennyiben a tárolási modulus magas érték és a veszteségi modulus alacsony érték, ez magas elaszticitást jelent, azaz kemény gél keletkezett. Fordított esetben a magas veszteségi modulus és az alacsony tárolási modulus érték nagy viszkozitású gélt jelez.
A találmány szerinti gél fizikai jellemzői az alábbiak: a tárolási modulus (G’) 50-1500 Pa közötti, előnyösen 100-500 Pa közötti érték; a veszteségi modulus (G”) 10-300 Pa közötti, előnyösen 50-150 Pa közötti érték; és a tangens delta (tangő; G”/G') 0,1-0,8 közötti, előnyösen 0,2-0,5 közötti érték, dinamikus viszkoelaszticitásban 10 Hz frekvencia mellett kifejezve.
A fénnyel történő, azaz ultraibolya fénnyel történő besugárzás esetében az ultraibolya fény fajtája nem limitált. A fénnyel vagy ultraibolya sugarakkal történő besugárzást általában számos másodperc-több perc időtartamon át végezzük egy fényforrás alkalmazásával, amely megfelelő fotoreakcióhoz szükséges hullámhosszú fényt szolgáltat, ez a hullámhossz 200-600 nm közötti, előnyösen 200-450 nm közötti érték (alkalmazható például nagynyomású higanylámpa, fém-halogenid-lámpa vagy hasonló fényforrás), a rövid hullámhosszú sugarakat kiszűrjük, mivel ezek az ultraibolya sugarakkal történő dimerizálás miatt nem kívánatosak, és ezt valamilyen szűrővel vagy hasonló eszközzel végezzük [például Pyrex üveg (kereskedelmi név) vagy hasonlók], A besugárzás módja nem különösen korlátozott, és különféle módok választhatók, amelyek a felhasználási célnak megfelelnek. Például a fotoreaktív hialuronsavszármazék-oldatot tartályba visszük, amely egyben a végső kereskedelmi géltermék tárolására is alkalmas (a találmány szerinti termék), és ezt besugározzuk az alábbi módon; az oldatot szalag szállítópár közé helyezzük, és ez a szállítószalag ultraibolyafény-áteresztő anyagból készül, majd mozgás közben az oldatot besugározzuk; vagy a fotoreaktív hialuronsavoldatot egy cső belső felületén át tápláljuk, amely cső ultraibolya fényt áteresztő anyagból készült, és a betáplálás során az oldatot ultraibolya fénnyel besugározzuk.
A találmány szerinti eljárás során, amelyben a találmány szerinti gél előállítását végezzük, a fent leírt viszkoelaszticitású követelményeknek megfelelő gélt állíthatunk elő, még akkor is, amennyiben a fotoreaktív hialuronsavszármazék oldatát az ultraibolyafény-besugárzás előtt és/vagy után hőkezelésnek vetjük alá, amely hőkezelést nagynyomású gőzzel végzünk, amely gőz 100-125 °C hőmérsékletű, és a hőkezelést
HU 224 697 Β1
5-30 percen át végezzük (autoklávozás). Ezt a hőkezelés! eljárást sterilizációs folyamatnak is tekinthetjük, amely szükséges a gyógyászati eszközök vagy gyógyszerek esetében is.
A fotoreaktív hialuronsavszármazék-oldat, amely ultraibolya fénnyel besugárzandó besugárzási körülményei és az ezt befogadó tartály anyaga, valamint formája, amely edényben a fotoreakciót végrehajtjuk, valamint az ultraibolya sugarat befogadó része nem limitáló tényező, azzal a feltétellel, hogy az ultraibolya fény az adott befogadófelületen keresztülhatolhat. Például a tartó lehet rétegszerű, csőszerű, fecskendőszerü, ampullaszerü vagy hasonló forma. Figyelembe kell venni, hogy a térhálósítási reakció egyenletesen történjen az eljárás során, és ebből a célból az edény alakja olyan legyen, amelyen keresztül az ultraibolya fény egyenletesen és megfelelő mértékben áthalad. Különösen előnyösen alkalmazható egyenletesen térhálósított gél előállítására egy rétegszerű oldat, amely vékony réteggé alakított ultraibolya fénnyel történő besugárzása. A fotoreakcióban alkalmazható tartály olyan alakú lehet, amely a fotoreaktív hialuronsavszármazékot hordozza, és a találmány szerinti nyert gél, amelyet a fotoreakcióban nyerünk is ebben található, valamint nem szükséges az, hogy ez a tartály zárt tartály legyen. Például a tartály lehet egy egyszerű lemez (tányér) alakú.
A találmány szerinti gélt biogyógyászati anyagként, mint például antiadhéziós anyagként alkalmazzuk, a találmány szerinti gél tárolására szolgáló tartály előnyösen olyan alakú, amely a találmány szerinti gélt steril formában megőrzi felhasználásáig, és amelyből a találmány szerinti gél alkalmazás esetén megfelelő módon kivehető. Az ilyen tartós tárolásra alkalmas tartály alkalmazható a fotoreakció végrehajtásában is. A találmány szerinti gélt steril körülmények közötti tartós tárolására alkalmas tartály, amely steril tárolást a felhasználásig végzünk, illetve amely tartályból a gél könnyen alkalmazható és adagolható az adagolás helyére (amennyiben a gélt antiadhéziós anyagként alkalmazzuk a kezelt terület vagy helyzet egy érintett területe a testnek, amelyet adhéziótól védetté kell tenni), lehet olyan tartály, mint például fecskendő, cső és hasonló forma. Ezen túlmenően a tartály, amelyből a gélt könnyen kivehetjük és a megfelelő helyre alkalmazhatjuk, lehet például ampulla és hasonló tartály is.
Amennyiben a fotoreaktív hialuronsavszármazékot a tartályba visszük, majd a tartályba vitt fotoreaktív hialuronsavszármazékot ultraibolya fénnyel besugározzuk abból a célból, hogy a fenti fotoreakció megtörténjen, a tartály anyaga olyan anyag legyen, amely alkalmas az ultraibolya fény átbocsátására, és egyben az ultraibolya fény hatására nem bomlik. Ezen túlmenően, amennyiben a találmány szerinti gélt humán testre szándékozunk alkalmazni biogyógyászati termékként, a fotoreakció után a gélt előnyösen sterilizáljuk például nagynyomású gőzzel (autoklávozás). Amennyiben a tartályba töltött fotokezelt térhálósított gél autoklávozásos sterilizáció alkalmazásával sterilizáljuk, a tartály anyaga előnyösen üveg, műanyag vagy hasonló, amely anyagok bizonyos fokig hőállóak. A fenti tartályba mért gél mennyisége nem különösebb befolyású; általában ez a mennyiség például 0,5-500 ml közötti, amely mennyiség a működési, illetve a gazdaságossági tényezők figyelembevételével meghatározott mennyiség.
Lehetséges, hogy a fenti szerint fénybesugárzással nyert hidrogélt dehidratáljuk például szárítás vagy hasonló eljárás segítségével, majd ezt követően kívánt mennyiség vizes közeg adagolással duzzasztjuk, és így a fent leírt fizikai jellemzőkkel rendelkező találmány szerinti gélt nyerünk. Ebben az esetben a szárítást előnyösen olyan eljárással végezzük, amely a hialuronsav-szacharidláncra és a térhálósított szerkezetre nem fejt ki káros hatást.
Lehetséges továbbá, hogy a találmány szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgélt tároljuk, illetve szállítjuk szárított szilárd gél formában, amely a fenti forma, és a felhasználáskor újra duzzasztjuk megfelelő mennyiségű vizes közeg adagolásával.
A találmány szerinti gélt nagymértékben alkalmazzák biogyógyászati anyagként. Mivel a gél saját jellemzőiből eredően magas biokompatibilitású, ezen túlmenően a hialuronsav további jellemzőkkel is rendelkezik a térhálósítás miatt, amelyek például a meghosszabbított élő testben történő tartózkodási idő (javult tartózkodási idő), illetve a javított fizikokémiai jellemzők, mint például a viszkoelaszticitás és hasonlók, és ezek lehetővé teszik, hogy a találmány szerinti gélt biogyógyászati anyagként alkalmazzuk, és ez megfelelően felhasználható gyógyászatban.
Mivel a találmány szerinti gél azzal jellemezhető, hogy nem veszélyes és nem toxikus vizes közeg legnagyobb részben ez nem mutat toxicitást az élő testben, és nagy biztonsággal alkalmazható élő testek kezelésében.
Részletesebben, amennyiben intraperitoneális úton patkányoknak 100 ml/kg találmány szerinti gélt (amely megfelel 2000 mg hialuronsav/kg értéknek) adagolunk egy dózisban, ezek nem pusztulnak el, és semmilyen súlyos elváltozás sem történik, amely a gélnek tulajdonítható.
Ezen túlmenően tengerimalacokban antigénképesség-tesztvizsgálatot végeztünk, és így az aktív anaphylaxist vizsgáltuk. A tengerimalacokat 20 mg vagy 2 mg találmány szerinti géllel intraperitoneális úton érzékennyé tettük, majd ezt követően az állatoknak további 40 mg gélt adagoltunk intraperitoneális úton. A vizsgálatban nem tapasztaltunk antigénképesség-reakciót.
Amennyiben a találmány szerinti gélt biogyógyászati anyagként alkalmazzuk, például antiadhéziós anyagként használjuk, figyelembe kell venni, hogy a gél megnövelt elaszticitása javított hatást gyakorol a gáthatásban, a szövetek esetében, illetve a testben történő tartózkodási idő vonatkozásában, eközben a megnövelt viszkozitás a ragadósság növekedését eredményezi, amely tapadás a szövethez történik, illetve az érintett területre történő javított injektálhatóságot eredményezi. Ebből eredően a gél előnyösen ilyen alkalmazás esetében jól kiegyenlített elaszticitású és viszkozitású. Amennyiben G’ értéke meghaladja az 1500 értéket
HU 224 697 Β1 vagy a tangensdelta-érték kisebb mint 0,1, a gél nagyban elasztikussá válik, és úgynevezett kemény és törékeny gél alakul ki, ennek következtében nehéz a gélt az érintett területre injektálni. Másrészt amennyiben G’ értéke kisebb mint 50 érték vagy a tangensdelta értéke meghaladja a 0,8 értéket, a gél nagyban viszkózus géllé alakul és oldatként viselkedik, ebből eredően nem megfelelő keménységű és az antiadhéziós hatáshoz szükséges gáthatás elveszik. Ennek következtében a találmány szerinti gél legalkalmasabban akkor alkalmazható, ha megfelelő fizikokémiai tulajdonságokkal rendelkezik és ekkor adhézióellenes anyagként használhatjuk.
A szervekhez történő adhézió, amely operáció után gyakran megtörténik, klinikailag nemkívánatos, és szükséges ebből a szempontból hatásos antiadhéziós anyag kifejlesztése. Egy antiadhéziós anyag kívánatos jellemzői az alábbiak: az anyag (1) gáthatást fejt ki a szervek között, amelyek valószínűleg adhéziót szenvedhetnek, (2) a sérült területen megfelelő bevonójellemzőkkel rendelkezik, (3) nem késlekedik a sérülés gyógyításában, (4) a testben marad a gyógyítási periódus során, és előnyösen a gyógyítás után a testen belül lebomlik és abszorbeálódik, (5) veszélytelen, nem toxikus, biokompatibilis és hasonló jellemzőkkel rendelkezik.
A találmány szerinti fotokezelt térhálósítási eljárásban nyert találmány szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél kiváló biokompatibilitású és biztonságos, valamint kielégíti a fent leírt követelmények mindegyikét. A gáthatás, amely különösen jelentős, a térhálósított gél fizikokémiai jellemzőivel biztosított, és a testben történő tartózkodás meghosszabbítását a fotokezelt térhálósított hálószerkezet kialakulása biztosítja.
A gél amorf jellege például lehetővé teszi, hogy a gélt injekciós fejen vagy tűn keresztül az injekciós fecskendőből a sérült rész finom helyeire injektálhassuk (például ez lehet sérült rész és hasonló részek). Ebből a szempontból a találmány szerinti gél azzal jellemezhető, hogy nagyobb elaszticitású, mint egy hialuronsavoldat, azonban keménysége olyan lágyságot mutat, hogy keresztülhalad egy injekciós fecskendő tűjén. A gél továbbá injektálható sérült részre egy kis átmérőjű csövön keresztül is (injekciós fej), és endoszkópiás mikrosebészeti eljárásban és hasonlókban is alkalmazható.
A találmány szerinti gélt tartalmazó antiadhéziós anyag az alábbi jellemzőkkel rendelkezik:
(1) kiváló antiadhéziós hatást fejt ki;
(2) hidrogél forma, amelynek fizikai jellemzői lehetővé teszik a sérült részre történő injektálását;
(3) a szövetekhez nagy tapadást mutat, és megfelelően ragacsos a szövetek irányába, amennyiben ezekre adagoljuk vagy injektáljuk, és így megfelelő időtartamon át a sérült részeken marad és antiadhéziós hatását kifejti;
(4) nem szükséges eltávolítása és az adagolás helyéről abszorbeálható, azaz felszívódik, amely hely lehet hasi üreg, illetve hasonlók, majd metabolizál és kiürül; és (5) biztonságosan alkalmazható: nem tapasztaltunk semmilyen állati tesztvizsgálatban egyetlen dózis toxicitás tesztvizsgálat alkalmazásakor biztonsági problémákat, további ismételt dózis-toxicitás tesztvizsgálatokban és antigénképesség-tesztvizsgálatban sem.
A találmány szerinti gélt antiadhéziós anyagként az alábbi területeken alkalmazhatjuk.
(1) Szülészet és nőgyógyászat területe Összenövések megszüntetése, amely összenövések méhen belüli operációból eredhetnek, amely operációt női sterilitás ellen végeznek, méhoperáció, méhkürt-operáció, petefészek-operáció, méhbelhártyát kezelő operáció, császármetszés, medencén belüli összenövések szétválasztása vagy hasonló.
(2) Gasztrointesztinális operáció területe Összenövés-ellenes hatás, amely összenövések lehetnek bélösszenövések, amelyek hasüregi operáció után alakulnak ki vagy hasonló összenövések.
(3) Orthopédiai területek
Összenövés-ellenes hatás, amely összenövések
Achilles-ín-operáció, hajlítóizom- és ínoperáció, ízületplasztika, lamin ectomia és hasonlók következtében jönnek létre.
A találmány szerinti gél alkalmazása a gyógyászat terület, mint biogyógyászati termék az alábbi lehet.
(1) Szemészeti operáció segédanyagai. Például a gélt az elülső kamrába injektáljuk az alábbi operációk során: szem belsejébe történő lencsebeültetés, teljes szaruhártya-átültetés vagy hasonlók, vagy a gélt a szembeni nyomás fenntartására alkalmazzuk retinaleválás esetében és hasonlók esetében, vagy a gélt az üvegtest újratöltésére alkalmazzuk.
(2) ízület működést javító hatóanyagként történő alkalmazás. Például a gélt az ízületi üregbe injektáljuk abból a célból, hogy a fájdalmat csökkentsük, javítsuk az ízület mozgathatóságának határértékeit, a kóros ízületnedv-mennyiséget normalízáljuk és hasonlók, az ízületi gyulladás, mint például a reumás ízületi gyulladás térdízületben, az ízület körüli gyulladás vállízületben és hasonlók esetében.
(4) Műanyag operációs területen a protézis-rendellenesség kezelésében való alkalmazás.
(5) A felfekvés vagy égés kezelésében.
(6) Egy hatóanyag fenntartott kibocsátású készítményben történő alkalmazás.
A találmány szerinti gél összenövés-ellenes anyagként történő alkalmazása esetében az adott sérült területre alkalmazandó gél mennyisége nem adható meg pontosan, mivel ez változik, az adagolt hely típusától (például a szerv típusától és hasonlóktól), méretétől vagy a kialakult rendellenesség súlyosságától, illetve az adagolás céljától függően is. Általában az adagolt dózis 0,5-500 ml/hely közötti, előnyösen körülbelül
1- 100 ml/hely hely közötti, legelőnyösebben körülbelül
2- 50 ml/hely közötti érték.
A találmány szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél háromdimenziós hálós szerkezettel rendelkezik. Amennyiben egy hatóanyagot, aktív gyógyszert foglalunk ebbe a hálóba, ez megfelelő készítmény a ható10
HU 224 697 Β1 anyag fenntartott kibocsátású formájának előállítására. A gélbe történő bevezetést hatásosan végrehajthatjuk úgy, hogy a szárított gélt a hatóanyag valamely oldatába merítjük. Ezen túlmenően mivel a fotokezelt térhálósított gél a térhálósítás után nem igényel tisztítást, a hatóanyagot előzetesen is adagolhatjuk a fotoreaktív hialuronsavszármazék oldatához, amelyet besugárzunk. Bármely fenti eljárás alkalmazható a találmány szerint.
Ezen túlmenően valamely hatóanyag kémiailag köthető a fotoreaktív hialuronsavszármazékhoz (kovalens kötéssel, ionos kötéssel és hasonlókkal), majd ezt követően az anyagot fotoreakcióba vihetjük, és így térhálósíthatjuk. Például amennyiben egy hatóanyagot kovalens kötéssel vezetünk a molekulába, a hatóanyag és a fotoreaktív hialuronsavszármazék karboxilcsoportja vagy hidroxilcsoportja reagálhat egymással amidkötésen vagy észterkötésen keresztül, majd ezt a kiindulási anyagot ultraibolya fénnyel besugározzuk. Amennyiben valamely hatóanyagot ionos kötéssel kapcsolunk a molekulához, egy kationos hatóanyag kötődhet a hialuronsav karboxilcsoportjához ionos kötésen keresztül úgy, hogy ezt az ionos hatóanyagot a fotoreaktív hialuronsavval elegyítjük, majd az elegyet ultraibolya fénnyel besugározzuk. Ezen túlmenően egy fotoreaktív hialuronsavszármazékot, amely fotoreaktív térhálósító csoportot tartalmaz, amely csoporthoz valamely hatóanyag kötött fotoreakcióban reagáltathatunk és térhálósítást végezhetünk.
Példák
A találmány szerinti anyagot és eljárást részletesen bemutatjuk az alábbi előállítási példákon, példákon és tesztvizsgálati példákon. A példák nem jelentik a találmány tárgykörének korlátozását.
1. előállítási példa
Fotoreaktív hialuronsavszármazék előállítása (DS 0,53%)
1,5 liter vízben 10 g (25 mmol) diszacharidegység nátrium-hialuronátot oldunk [a Seikagaku Corporation terméke, átlagos molekulatömeg (MS): 950,000], majd az oldathoz 750 ml 1,4-dioxánt adagolunk. Az így keletkezett oldathoz 288 mg (2,5 mmol) N-hidroxi-szukcínimid 50 ml dioxános oldatát, majd 1240 mg (1,25 mmol) EDCHCI 50 ml térfogatú vizes oldatát és 35 mg (1,25 mmol) HCIH2N(CH2)6OCOCH=CHPh 50 ml vizes oldatát adagoljuk 5 perces időtartamokon belül, miközben az elegyet jéggel hűtjük. Az elegyet ezt követően 8 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az elegyhez 10 g nátrium-klorid vizes oldatát adagoljuk, majd a keverést 1 órán át folytatjuk. A kapott oldatot 5 liter etanolba öntjük. A kívánt csapadékot centrifugálással (400 ford./perc*15 perc) elválasztjuk, majd sorrendben három részlet 80%-os etanollal, majd egy részlet etanollal mossuk és megszárítjuk, 9,73 g fehér szilárd fotoreaktív hialuronsavszármazékot nyerünk (DS: 0,53%; endotoxin: 0,8 pg/mg).
A jelen előállítási példában és az ezt követő előállítási példákban és példákban az endotoxintartalmat Toxicolor System LS-20 készlettel, DIA készlettel és
Et-1 készlettel határoztuk meg, amelyek mindegyike a
Seikagaku Corporation terméke (kereskedelmi név; a továbbiakban ugyanilyen néven jelzett).
A fotokezelt térhálósított hialuronsavgél endotoxintartalmát a fent leírt eljárással mértük azután, hogy a példákban leírt fotokezelt térhálósított hialuronsavgélt enzimmel oldhatóvá tettük (például chondroitinase ABC segítségével, amely a Seikagaku Corporation terméke).
Az endotoxintartalom kifejezésében egy endotoxin egység (EU) megfelel 345 pg endotoxinnak.
2. előállítási példa
Fotoreaktív hialuronsavszármazék előállítása (DS 0,75%)
Az előállítási eljárást az 1. előállítási példa szerintieknek megfelelően végezzük. Az eljárásban 10 g (25 mmol diszacharidegység) nátrium-hialuronátot (a Seikagaku Corporation terméke; MS: 950,000), 65 ml 0,05 mólos N-hidroxi-szukcinimid dioxános oldatot (3,25 mmol), 65 ml 0,025 mólos vizes EDC HCI oldatot (1,625 mmol) és 65 ml 0,025 mólos vizes HCI H2N(CH2)6OCOCH-CHPh oldatot (1,625 mmol) alkalmazunk. 9,74 g fehér szilárd fotoreaktív hialuronsavszármazékot nyerünk (DS: 0,75%; endotoxin:
2,5 pg/mg).
3. előállítási példa
Fotoreaktív hialuronsavszármazék előállítása (DS 0,90%)
Az előállítást az 1. előállítási példa szerinti eljárásnak megfelelően végezzük. Az eljárásban 2,0 g (5,0 mmol diszacharidegység) nátrium-hialuronátot (a Seikagaku Corporation terméket; MS: 950,000), 69 mg (0,6 mmol) N-hidroxi-szukcinimid 3 ml vizes oldatát 58 mg (0,3 mmol) EDC HCI 3 ml vizes oldatát és 85 mg (0,3 mmol) HCI H2N(CH2)6OCOCH=CHPh 3 ml vizes oldatát alkalmazzuk. 2,1 g fehér szilárd fotoreaktív hialuronsavszármazékot nyerünk (DS: 0,90%; endotoxin: 2,4 pg/mg).
4. előállítási példa
Fotoreaktív hialuronsavszármazék előállítása (DS 1,06%)
Az előállítást az 1. előállítási példa szerinti eljárásnak megfelelően végezzük; Az eljárásban 10 g (25 mmol diszacharidegység) nátrium-hialuronátot (a Seikagaku Corporation terméke; MS: 950,000), 100 ml 0,05 mólos dioxános N-hidroxi-szukcinimid-oldatot (5,0 mmol) 100 ml 0,025 mólos vizes EDC HCI oldatot (2,5 mmol) és 100 ml 0,025 mólos vizes HCI H2N(CH2)6OCOCH=CHPh oldatot (2,5 mmol) alkalmazunk. 9,64 g fehér szilárd fotoreaktív hialuronsavszármazékot nyerünk (DS: 1,06%; endotoxin: 3,2 pg/mg).
5. előállítási példa
Fotoreaktív hialuronsavszármazék előállítása (DS0,26%)
Az előállítást az 1. előállítási példa szerinti eljárásnak megfelelően végezzük. Az eljárásban 5 g (12,5 mmol di11
HU 224 697 Β1 szacharidegység) nátrium-hialuronátot (a Seikagaku Corporation terméket; MS: 950,000) 288 mg (2,5 mmol) N-hidroxi-szukcinimid 50 ml dioxános oldatát 240 mg (1,25 mmol) EDCHCI 50 ml vizes oldatát 355 mg (1,25 mmol) HCIH2N(CH2)6OCOCH=CHPh 50 ml térfogatú vizes oldatát alkalmazzuk. 4,9 g fehér szilárd fotoreaktív hialuronsavszármazékot nyerünk (DS: 1,26%; endotoxin: 1,0 pg/mg).
6. előállítási példa
Fotoreaktív hialuronsavszármazék előállítása (DS 1,29%)
Az előállítási eljárást az 1. előállítási példa eljárásának megfelelően végezzük. Az eljárásban 10 g (25 mmol diszacharidegység) nátrium-hialuronátot (a Seikagaku Corporation terméket; MS: 950,000) 50 ml 0,1 mólos dioxános N-hidroxi-szukcinimid-oldatot (5,0 mmol) 50 ml 0,05 mólos vizes EDC HCI oldatot (2,5 mmol) és 50 ml 0,05 mólos vizes HCIH2N(CH2)6OCOCH=CHPh (2,5 mmol) oldatot alkalmazunk. 10,0 g fehér szilárd fotoreaktív hialuronsavszármazékot nyerünk (DS: 1,29%; endotoxin: 2,5 pg/mg).
7. előállítási példa
Fotoreaktív hialuronsavszármazék előállítása (DS 1,55%)
Az előállítási eljárást az 1. előállítási példa szerinti eljárásnak megfelelően végezzük. Az eljárásban 10 g (25 mmol diszacharidegység) nátrium-hialuronátot (a Seikagaku Corporation terméket; MS: 950,000), 150 ml 0,05 mólos dioxános N-hidroxi-szukcinimid(7,5 mmol) oldatot 150 ml 0,025 mólos vizes EDC HCI (3,75 mmol) oldatot és 150 ml 0,025 mólos vizes HCIH2N(CH2)6OCOCH=CHPh (3,75 mmol) oldatot alkalmazunk. 9,92 g fotoreaktív hialuronsavszármazékot nyerünk, amely fehér szilárd anyag (DS: 1,55%; endotoxin: 1,2 pg/mg).
8. előállítási példa
Fotoreaktív hialuronsavszármazék előállítása (DS 1,93%)
600 ml vízben oldunk 4,0 g (10,0 mmol diszacharidegység) nátrium-hialuronátot (a Seikagaku Corporation terméke; MS: 950,000), és az oldathoz 300 ml 1,4-dioxánt adagolunk. A reakcióelegyhez sorrendben 230 mg (2,0 mmol) N-hidroxi-szukcinimid 10 ml vizes oldatát 192 mg (1,0 mmol) EDC HCI 10 ml vizes oldatát és 284 mg (1,0 mmol) HCI H2N(CH2)6OCOCH=CHPh vizes oldatát (10 ml) adagoljuk 5 perces időközönként. Az adagolás közben az elegyet jéggel hűtjük. Ezután az elegyet 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd keverés közben az elegyhez 2 g nátrium-klorid vizes oldatát adagoljuk, a keverést tovább folytatjuk. Ezt követően a kapott oldatot 3,0 liter etanolba öntjük. A kívánt kivált csapadékot centrifugálással elválasztjuk (4000 ford./percx15 perc), majd sorrendben háromszor 80%-os etanollal és egyszer etanollal mossuk, ezután az anyagot megszárítjuk és 4,1 g fehér szilárd fotoreaktív hialuronsavszármazékot nyerünk (DS: 1,93%; endotoxin: 2,1 pg/mg).
9. előállítási példa
Fotoreaktív hialuronsavszármazék előállítása (DS 2,87%)
Az előállítási eljárást az 1. előállítási példa szerintieknek megfelelően hajtjuk végre. Az eljárásban 10 g (25 mmol diszacharidegység) nátrium-hialuronátot (a Seikagaku Corporation terméke; MS: 950,000) 864 mg (7,5 mmol) N-hidroxi-szukcinimid 50 ml dioxános oldatát 718 mg (3,75 mmol) EDC HCI 50 ml vizes oldatát és 1,06 g (3,75 mmol) HCI H2N(CH2)6OCOCH=CHPh 50 ml vizes oldatát alkalmazzuk. 10 g fehér szilárd fotoreaktív hialuronsavszármazékot nyerünk (DS: 2,87%; endotoxin: 2,8 pg/mg).
10. előállítási példa
Fotoreaktív hialuronsavszármazék előállítása (DS 2,28%)
Az előállítási eljárását az 1. előállítási példa szerintieknek megfelelően végezzük. Az eljárásban 50 g (125 mmol diszacharidegység) nátrium-hialuronátot (a Seikagaku Corporation terméke; MS: 950,000), 3,45 g (30 mmol) N-hidroxi-szukcinimid, 250 ml vizes oldatát 2,88 g (15 mmol) EDC HCI 250 ml vizes oldatát és 15 mmol HCI H2N(CH2)6OCOCH=CHPh 250 ml vizes oldatát alkalmazzuk. 49 g fehér szilárd fotoreaktív hialuronsavszármazékot nyerünk, amely fehér szilárd anyag (DS: 2,28%; endotoxin: 3,2 pg/mg).
1. példa
A példában leírjuk egy fotokezelt térhálósított hialuronsavgél előállítását, amelyet a 6. előállítási példában nyert fotoreaktív hialuronsavszármazék fotokezelés térhálósításával nyerünk vizes oldatban, majd ezt követően a közeget 1,5 mmol foszfáttal puffereit fiziológiai sóoldatra (pH 7,4) cseréljük.
1,4 tömeg%-os vizes oldat fotoreaktív hialuronsavszármazék (DS: 1,29%) (6. előállítási példában nyert) anyagot Pyrex üveglemezek között tartunk, amely üveglemezek vastagsága 2,5 mm és egymástól 1,0 mm távolságban elhelyezettek, ezt az oldatot 3 KW fém-halogenid-lámpa segítségével ultraibolya fénnyel besugározzuk 4 perc alatt, a besugárzást mindkét oldalról elvégezzük (összesen 8 perc időtartam), ezt követően az oldatot 45 °C hőmérsékleten szárítjuk. A kapott szárított gélhez 1,5 mmol-os foszfáttal puffereit fiziológiás sóoldatot (pH 7,4) adagolunk úgy, hogy a koncentrációt 2 tömeg% értékre állítjuk be. Ezt követően a szárított gélt egy napon át duzzasztjuk, és így egy fotokezelt térhálósított hialuronsavgélt nyerünk (endotoxin: 0,11 EU/g).
2. példa
A példában leírjuk a fotokezelt térhálósított hialuronsavgélek előállítási eljárását, amelyeket az 1., 4. és 7. előállítási példákban nyert fotoreaktív hialuronsavszármazékok térhálósítával nyerünk egy 1,4 tömeg%-os oldatban, amely 1,5 mmol foszfáttal puffereit fiziológiás sóoldat (pH 7,4).
Az 1., 4., illetve 7. előállítási példákban nyert fotoreaktív hialuronsavszármazékok (sorrendben DS érté12
HU 224 697 Β1 kék 0,53%, 1,06% és 1,55%) 1,4 tömeg%-os 1,5 mmol foszfáttal puffereit fiziológiai sóoldatban készült (pH
7.4) oldatát Pyrex üveglemezek között tartjuk, amely üveglemezek vastagsága 2,5 mm és egymástól 1,0 mm távolságra elhelyezettek. Ezután ezt az oldatot 3 KW fém-halogenid-lámpa alkalmazásával 4 percen át mindkét oldalról ultraibolya fénnyel besugározzuk (összesen 8 perc időtartam), így fotokezelt térhálósított hialuronsavgélt nyerünk.
A gélekben sorrendben az endotoxintartalom 0,03 EU/g, 0,12 EU/g és 0,05 EU/g, a DS 0,53%, 1,06% és 1,55% érték mellett.
3. példa
A példában fotokezelt térhálósított hialuronsavgéleket állítunk elő az 1-9. előállítási példákban nyert fotoreaktív hialuronsavszármazékok fotokezelt térhálósítával, amely térhálósítást 2,0 tömeg%-os 1,5 mmol foszfáttal puffereit fiziológiás sóoldatban (pH 7,4) végzünk.
Az 1-9. előállítási példákban nyert fotoreaktív hialuronsavszármazékok mindegyikéből (sorrendben DS: 0,53%, 0,75%, 0,90%, 1,06%, 1,26%, 1,29%, 1,55%, 1,93% és 2,87%) 2,0 tömeg%-os oldatot készítünk
1,5 mmol foszfáttal puffereit fiziológiás sóoldatban (pH
7.4) . Az oldatot Pyrex üveglapok között tartjuk, amelyek mindegyikének vastagsága 2,5 mm és egymástól 1,0 mm távolságra elhelyezettek, majd mindkét oldalról ultraibolya sugárral besugározzuk (3 KW fém-halogenid-lámpa), a besugárzást 4 percen át végezzünk oldalanként (8 perc összes idő), és így fotokezelt térhálósított hialuronsavgélt nyerünk.
4. példa
A példa szerinti eljárásban fotokezelt térhálósított hialuronsavgéleket nyerünk az 1., 4. és 7. előállítási példákban nyert fotoreaktív hialuronsavszármazékok fotokezelt térhálósítával 3,2 tömeg%-os 1,5 mmol foszfáttal puffereit fiziológiás sóoldatban (pH 7,4).
Minden egyes 1., 4. és 7. előállítási példában nyert fotoreaktív hialuronsavszármazékból (DS sorrendben: 0,53%, 1,06% és 1,55%) 3,2 tömeg%-os oldatot készítünk 1,5 mmol foszfáttal puffereit fiziológiás sóoldatban (pH 7,4), az oldatot Pyrex üveglemezek között tartjuk, amelyek 2,5 mm vastagságúak és és 1,0 mm távolságra vannak egymástól elhelyezve. Az oldatot 3 KW fém-halogenid-lámpa alkalmazásával mindkét oldalról ultraibolya fénnyel besugározzuk (összes idő 8 perc), így fotokezelt térhálósított hialuronsavgélt nyerünk.
5. példa
A példa szerinti eljárásban fotokezelt térhálósított hialuronsavgélt nyerünk a 3. példában nyert DS 1,55% és 2,87% fotokezelt térhálósított hialuronsavgélek hőkezelésével.
A 3. példában nyert fotokezelt térhálósított hialuronsavgéleket, amelyeket a DS 1,55% és 2,87% értékű fotoreaktív hialuronsavszármazékokból nyerünk, egyenként 10 ml térfogatú ampullába mérjük, majd autoklávozással 121 °C hőmérsékleten 8 percen át hőkezelésnek vetjük alá.
A fizikai jellemzők mérése
Az 1., 4., 5. és 7. előállítási példákban nyert fotoreaktív hialuronsavszármazékok, amelyek előállítási koncentrációja (oldatkoncentráció: a hialuronsav koncentrációban kifejezve) 1,4 tömeg%, 2,0 tömeg% vagy 3,2 tömeg% fotokezelt térhálósított hialuronsavgéleket állítunk elő a 2-4. példák szerinti eljárásnak megfelelően, amelyekben az előállítási koncentráció 1,4 tömeg%, 2,0 tömeg% vagy 3,2 tömeg% érték, illetve az 5. példában előállított hőkezelt fotokezelt térhálósított hialuronsavgéleket állítjuk elő, majd ezeknek megmérjük dinamikus viszkoelaszticitását [tárolási modulus G’, veszteségi modulus G”, tangens delta tangó (G”/G’)j, dinamikus viszkozitását (η) és vízbeni oldatuknak vízabszorpcióját mérjük. Az így előállított hialuronsavoldat fizikai jellemzői olyanok, hogy az előállítási koncentráció ugyanolyan értékre áll be, mint a fent leírt fotokezelt térhálósított hialuronsavgél-koncentráció, és ezeket a fizikai jellemzőket a fentiek szerint mérjük. A dinamikus viszkoelaszticitás értékét és a dinamikus viszkozitás értékét CSL-50 modell reométer Modellel mérjük, amely a Carri-Med terméke, az alábbi körülmények alkalmazásával.
Mérési módszer: oszcillációs testvizsgálat, stresszszabályozás
Mérési hőmérséklet: 37 °C
Mérési geometria: 4 cm
Távköz: 800 pm
Frekvencia: 10 Hz
A vízabszorpciót ultraibolya abszorpciós eljárással számítottuk Blue Dextran alkalmazásával (a továbbiakban „B. D.”), amelyet az EP 0205674 A1 számú szabadalomban írtak le. A vizes közegként fiziológiai sóoldatot (0,9% nátrium-klorid vizes oldat) alkalmaztunk.
Amennyiben a szárított gélt egy B. D. oldatba helyezzük, a gél csak vizet abszorbeál, mivel a B. D. magas molekulatömegű és nem tud a gélbe hatolni. Ennek megfelelően a nem abszorbeált B. D. oldat koncentrációja a kezdeti értékhez képest növekszik attól függően, hogy milyen mennyiségű víz abszorbeálódik. A koncentrációkülönbséget abszorpció- (610 nm) méréssel határozzuk meg, és ezután a vízabszorpció mértékét az alábbi egyenlettel számítjuk.
Vízabszorpció (x 100%)=(1 -y 1 /y2)/Ax1000 ahol y1 az A mg szárított gél/gramm 0,1 tömeg% B. D. oldat kezdeti koncentrációjánál mért abszorpció; és y2 a B. D. oldatban végzett 24 órás duzzasztás utáni abszorpcióérték.
Ezt követően megvizsgáltuk szárított fotokezelt térhálósított hialuronsavgélek vízabszorpcióját, amely géleket a 3. példa szerint állítottunk elő a fotoreaktív hialuronsavszármazékokból, amelyeknek DS értéke 0,53%, 0,75%, 0,90%, 1,26%, 1,55% és 1,93% érték.
A dinamikus viszkoelaszticitás és hasonló jellemzők mérésének néhány eredményét az 1. táblázatban mutatjuk be. A DS érték és a vízabszorpció függvényét pedig a 2. ábrán mutatjuk be. Az 1. táblázatban a mérésnek alávetett minták koncentrációját úgy határoztuk meg, hogy meghatároztuk a gélben a hialuronsavkomponens-tartalmat egy karbazol-kénsav-reakció eljárás alkalmazásával.
HU 224 697 Β1
1. táblázat
| Példaszám | DS (%) | Koncentráció (előállított) (%) | Koncentráció (mért) (%) | Hőkezelés | Frekvencia: 10 Hz | |||
| G· (Pa) | G” (Pa) | tangö | η (Pá s) | |||||
| 2 | 0,53 | 1,4 | 1,22 | - | 66 | 41 | 0,63 | 0,7 |
| 1,06 | 1,4 | 1,37 | - | 146 | 65 | 0,45 | 1,0 | |
| 1,55 | 1,4 | 1,24 | - | 149 | 64 | 0,43 | 1,0 | |
| Hialuronsav | 1,4 | 1,38 | - | 46 | 44 | 0,97 | 0,7 | |
| 3 | 0,53 | 2,0 | 1,96 | - | 146 | 78 | 0,53 | 1,2 |
| 1,06 | 2,0 | 1,80 | - | 339 | 109 | 0,32 | 1,7 | |
| 1,26 | 2,0 | 1,70 | - | 273 | 96 | 0,35 | 1,5 | |
| 1,55 | 2,0 | 2,04 | - | 342 | 105 | 0,31 | 1,7 | |
| 2,87 | 2,0 | 1,62 | - | 427 | 103 | 0,24 | 1,7 | |
| Hialuronsav | 2,0 | 2,00 | - | 241 | 102 | 0,42 | 1,6 | |
| 4 | 0,53 | 3,2 | 2,63 | - | 550 | 216 | 0,39 | 3,4 |
| 1,06 | 3,2 | 2,77 | - | 818 | 223 | 0,27 | 3,5 | |
| 1,55 | 3,2 | 2,78 | - | 1002 | 248 | 0,25 | 3,9 | |
| Hialuronsav | 3,2 | 3,35 | - | 560 | 304 | 0,54 | 4,8 | |
| 5 | 1,55 | 2,0 | 2,04 | 121 °C, 8 perc | 173 | 86 | 0,50 | 1,4 |
| 2,78 | 2,0 | 1,62 | 121 °C, 8 perc | 310 | 101 | 0,32 | 1,6 | |
| Hialuronsav | 3,2 | 3,02 | 121 °C, 8 perc | 407 | 281 | 0,69 | 4,5 |
6. példa
A példában előállítjuk a fotokezelt térhálósított hialuronsavgéleket, amelyeket úgy nyerünk, hogy eltérő körülmények között ultraibolya sugárzással történő ke- 35 zelést végzünk, és hőkezelést végzünk egy 2 tömeg%-os oldatban minden egyes fotoreaktív hialuronsavszármazék esetében, amelyet a 10. előállítási példában nyertünk. A kezelést 1,5 mmol foszfáttal puffereit fiziológiás sóoldatban (pH 7,4) végezzük. 40
A 2,28% DS értékű fotoreaktív hialuronsavszármazékot a 10. előállítási példának megfelelően állítjuk elő, ezt 2,0 tömeg%-os oldatként 1,5 mmol foszfáttal puffereit fiziológiás sóoldatban (pH 7,4) oldjuk. A kapott oldatot az alábbi 3. eljárásnak megfelelően ultraibolya 45 fénnyel besugározzuk. A besugárzás előtt, amely besugárzást ultraibolya fénnyel végzünk, és/vagy ezt követően az oldatot (vagy gélt) hőkezelésnek vetjük alá az alábbi körülmények alkalmazásával. Ezután mérjük a térhálósítás arányát, a térhálósítás mértékét és a ka- 50 pott gél viszkoelaszticitásjellemzőit.
Az ultraibolya fénnyel végzett besugárzás körülményei (UV-besugárzás):
(1) A 2-4. példák szerinti eljárásnak megfelelően járunk el. A fotoreaktív hialuronsavszármazékok vi- 55 zes oldatát Pyrex üveglemezek közé helyezzük, amelyek mindegyike 2,5 mm vastagságú és egymástól 1,0 mm távolságra helyezkedik el. Ezt követően az oldatot 3 KW fém-halogenid-lámpa segítségével mindkét oldalról 4 percen át ultraibolya 60 besugárzásnak vetjük alá (összesen 8 perc időtartam).
(2) Az oldatot polietilénfilmek között tartjuk, és 400 W nagynyomású higanylámpa segítségével mindegyik oldalról 3 másodpercig ultraibolya fénnyel besugározzuk.
(3) Az oldatot 400 W nagynyomású higanylámpa segítségével besugározzuk egy kvarccsőben, melynek átmérője 5 mm.
A hőkezelés körülményei (autoklávozási eljárás):
A: Az UV-besugárzás után; 121 °C, 8 perc B: Az UV-besugárzás előtt; 121 °C, 8 perc C: Az UV-besugárzás előtt; 121 °C, 8 perc és az
UV-besugárzás után; 100 °C, 10 perc
D: Az UV-besugárzás után; 121 °C, 15 perc.
A mérések eredményeit a 2. táblázatban mutatjuk be.
A térhálósítás arányát az alábbi egyenlettel számítjuk.
Térhálósítás aránya (%)= A dimerizált fahéjsav mólok száma*2/a bevezetett fahéjsav mólok száma *100 Részletesebben, a fahéjsavat vagy ennek dimerjét kémiailag hasítjuk, és a fotokezelt térhálósított hialuronsavgélből extraháljuk. Mivel a fahéjsav és ennek dimerjének molekulatömege eltérő, az extraktumot fahéjsavra és dimerjére választjuk szét gélpermeabilitásos kromatográfia (GPC) segítségével. Minden egyes komponens mennyiségét kvantitatívan meghatározzuk, és
HU 224 697 Β1 így az egyes mólok számát mérjük. A térhálósítás arányát a fenti egyenlet alapján számítjuk.
A térhálósítás kiterjedését az alábbi egyenlettel számítjuk:
Térhálósítás mértéke (%)= DS*térhálósítás aránya/1OO 5
Amint az egyenletekből kitűnik, a térhálósítási arány a bevezetett fahéjsavra vonatkozó érték, a térhálósítás mértéke (a térhálósítási arány és a DS szorzata) a dimer/hialuronsav diszacharidegység építőelemek molarány-százalékában fejezhető ki.
2. táblázat
| DS (%) | Fénybesugárzás körülményei | Hőkezelés körűimé- | Térhálósítás aránya (%) | Térhálósítás mértéke | Frekvencia: 10 Hz | |||
| nyei | (%) | G' (Pa) | G” (Pa) | tangó | η (Pá s) | |||
| 2,28 | (1) | A | 4,1 | 9,4*10-2 | 161 | 68 | 0,42 | 1,1 |
| 2,28 | (2) | A | 1,9 | 4,4*10-2 | 122 | 56 | 0,46 | 0,9 |
| 2,28 | (3) | B | 2,5 | 5,6*10-2 | 146 | 70 | 0,48 | 1,1 |
| 2,28 | (3) | C | 2,5 | 5,6*10-2 | 144 | 84 | 0,59 | 1,3 |
| 2,28 | (2) | D | 1,9 | 4,4*10-2 | 108 | 84 | 0,78 | 1,3 |
1. tesztvizsgálati példa
Összenövés- (adhézióellenes) ellenes hatás patkányméhszarvmodellben
Az antiadhéziós (összenövés-ellenes) ellenes hatást mérjük a találmány szerinti gélek esetében, amelyeket az 1., 3., 5. és 6. példákban nyerünk, továbbá összehasonlítás céljából az ultraibolya fénnyel történő besugárzás előtt fotoreaktív hialuronsavszármazékok esetében, amelyeket az 1. és 3. példákban állítunk elő (a továbbiakban „nem térhálósított hialuronsavgél) kereskedelemben kapható antiadhéziós (összenövés-ellenes) TC7 anyagra [Interceed (kereskedelmi név), a Johnson & Johnson terméke] és hialuronsav 1,5 mmol foszfáttal puffereit fiziológiás sóoldatban készült 3,2 tömeg%-os oldata esetében egy patkányméhszarvösszenövés-modellben.
1. Tesztvizsgálati állat
Héthetes Crj:SD (SPF.) nőstény patkányokat szereztünk be és a tesztvizsgálat előtt egy héten át tápláltuk. Minden egyes csoport öt patkányt tartalmazott.
2. Tesztvizsgálati eljárás
2-1. A patkányméhszarvösszenövés-modell előállítása
A patkány hasát érzéstelenítés mellett Nembutal segítségével borotváltuk. Ezt követően középvonali bemetszést végeztünk, amelynek hossza körülbelül 4 cm.
(a) A jobb hasfalat kimetszettük az izomrétegig egy trepán segítségével, amely szemsebészetben alkalmazott, majd az izomréteget csipesszel kifejtettük.
(b) A méhet kiemeltük, és négy átlós bemetszést végeztünk körülbelül 1 centiméterrel a petefészek alatt a méhnyak irányába 2-3 mm távolságokban. Vérzéscsillapítást végeztünk minden egyes vágás esetében bármely időpontban elektromos kiégetéssel.
(c) Az átlós bemetszések körülbelül 3-4 mm-es helyzetétől a méhszarvon és a hasfalhiány végétől számított 3-4 mm helyzetet összevarrjuk egy egyetlen 8/0 varrattal, és így az (a) és (b) fenti pontokban mért traumát lezárjuk.
2-2. Adagolás
Tesztvizsgálati csoport
A fotokezelt térhálósított hialuronsavgéleket, a nem térhálósított hialuronsavgéleket és a fent leírt hialuronsavoldatokat, valamint a kereskedelemben kapható 1,5*1,5 cm2 területű TC7 anyagot 1 mm térfogatban injektáltuk vagy inzertáltuk a hasi fal hiányos részei és a méhszarv bemetszési részei közé. Részletesebben, a fenti géleket az alábbiak szerint adagoltuk. A fent leírt valamennyi gél 1 mm mennyiségét pontosan megmértük, majd 1 mm térfogatú injekciós fecskendőbe mértük [Terumo Syringe (márkanév), amely tuberculin céljára alkalmazott; γ-sugárral sterilizált, belső átmérője a csőnek körülbelül 4 mm, a csúcs belső átmérője körülbelül 1 mm], ezután az anyagot a fecskendő csúcsán keresztül a sérült és hiányos részek közé fecskendezzük, amely rész a hasfal hiányos része és a méhszarv bemetszési része között található.
Kontrollcsoport
Ugyanezt a műveletet végeztük el a hasfalon és a méhszarvterületen a bal oldalon ugyanezen állatban, amely állatot a tesztvizsgálati eljárásban alkalmaztunk anélkül, hogy az anyagok inzertálását elvégeztük volna.
3. Értékelés
A beültetést követően 7. napon a patkányokat elpusztítottuk, az elpusztítást kivéreztetéssel végeztük a carotid artérián keresztül érzéstelenítés közben, amely érzéstelenítést etil-éterrel hajtottunk végre. Az összenövéstől szenvedő helyzeteket kimetszés után megvizsgáltuk, és mértük az összenövés mértékét. Az alábbi értékelőrendszert alkalmaztuk:
0...Nincs összenövés.
1.. .Kismértékű és könnyen szétválasztható összenövést tapasztalható.
2.. .Közepes és szétválasztható összenövés tapasztalható.
3.. .5.lyos és nem szétválasztható összenövés tapasztalható.
HU 224 697 Β1
4. Eredmények
A vizsgálat eredményeit a 3. táblázatban adjuk meg. A 3. táblázatban az ultraibolya sugárral végzett besugárzás körülményei, valamint a hőkezelés körülményei megegyeznek a 6. példában leírt körülményekkel.
3. táblázat
| Példaszám | DS (%) | Fénybesugárzás körülményei | Hőkezelés körülményei | Antiadhéziós (összenövés-ellenes) hatás | |
| tesztvizsgálati csoport | kontrollcsoport | ||||
| 1 | 1,29 | 0) | - | 0, 0, 0, 0, 0 | 2, 2, 2, 2, 2 |
| - | 1,29 | nem besugárzott | - | 2, 2, 2, 2, 2 | 2, 2, 2, 2, 2 |
| 3 | 1,06 | (1) | - | 1, 1,0, 0,0 | 2, 2, 2, 2, 2 |
| 3 | 1,26 | (D | - | 2, 0, 0, 0, 0 | 2, 2, 2, 2, 2 |
| - | 1,26 | nem besugárzott | - | 2, 2, 2, 2, 0 | 2, 2, 2, 2, 2 |
| 3 | 1,55 | (1) | - | 0, 0, 0, 0, 0 | 2, 2, 2, 2, 2 |
| 5 | 1,55 | (1) | A | 0, 0, 0, 0, 0 | 2, 2, 2, 2, 2 |
| 3 | 2,87 | (1) | - | 0, 0, 0, 0, 0 | 2, 2, 2, 2, 2 |
| 5 | 2,87 | (1) | A | 0, 0, 0, 0, 0 | 2, 2, 2, 2, 2 |
| 6 | 2,28 | (2) | A | 1,0, 0, 0,0 | 2, 2, 2, 2, 2 |
| 6 | 2,28 | (3) | D | 1,0, 1,0,0 | 2, 2, 2, 2, 2 |
| Összehasonlítás | |||||
| TC7 | - | - | - | 2, 2, 2, 2, 2 | 2, 2, 2, 2, 2 |
| 3,2% hialuronsavoldat | A | 2, 2, 2, 2, 2 | 2, 2, 2, 2, 2 | |
Mint a 3. táblázat adataiból kitűnik, a kereskedelemben kapható összenövés-ellenes film, a TC7 nem tökéletesen hatásos ebben az összenövési modellben a találmány szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél bizonyítottan megfelelően hatásosan antiadhéziós, azaz összenövés-ellenes hatást fejtett ki a modellben.
Mivel a nem térhálósított gélek, illetve a hialuronsav 3,2%-os oldata, amelyek hasonló viszkoelaszticitás- és viszkozitásértékekkel rendelkeznek, mint a fototérhálósított gélek nem mutattak semmilyen hatást valószínű, hogy a találmány szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél antiadhéziós (összenövés-ellenes) hatása a fotokezeléses térhálósítás következtében jön létre.
2. tesztvizsgálati példa
A találmány szerinti gél antiadhéziós (összenövés-ellenes) hatását vizsgáljuk a tesztvizsgálati példában ugyanolyan méhszarv-adhéziósmodellben, mint az
1. tesztvizsgálati példában anélkül, hogy a hiányos hasfalrészeken, illetve a méhszarv bemetszési része- 50 ken vérzéscsillapítást végeznénk.
A találmány szerinti gél antiadhéziós (összenövés-ellenes) hatását az 1. tesztvizsgálati példához hasonlóan mértük és értékeltük azzal az eltéréssel, hogy az eljárás során vérzéscsillapítást nem végeztünk a 55 hasfalmetszéseken, illetve a méhszarv esetében, valamint 0,5 ml fotokezelt térhálósított hialuronsavgélt alkalmaztunk, amelynek koncentrációja 2% és DS értéke 2,5%, valamint amelyet az ultraibolya fénnyel történő besugárzás előtt 10 percen át 105 °C hőmérsékleten 60 hőkezelésnek vetettünk alá, valamint az ultraibolya fénnyel történő besugárzást követően 8 percen át 121 °C hőmérsékleten hőkezeltünk (n=10). Kontrollként ugyanolyan állatot alkalmaztunk, mint a tesztvizsgálati csoportban anélkül, hogy az anyagokat ugyanolyan módon inzertáltuk volna, mint az 1. tesztvizsgálati példában.
A kapott eredményeket a 4. táblázatban mutatjuk be.
4. táblázat
| Állat száma | Kontrollcsoport | Tesztvizsgálati csoport |
| 1 | 2 | 0 |
| 2 | 2 | 0 |
| 3 | 2 | 0 |
| 4 | 2 | 0 |
| 5 | 2 | 0 |
| 6 | 2 | 0 |
| 7 | 2 | 0 |
| 8 | 2 | 2 |
| 9 | 2 | 0 |
| 10 | 2 | 0 |
0,5 ml dózis esetében a fotokezelt térhálósított hialuronsavgél jelentős antiadhéziós (összenövés-ellenes) hatást mutatott olyan modellen, amelyben vérzéscsillapítást nem alkalmaztunk. Más szóval a 4. táblázat
HU 224 697 Β1 adatai azt mutatják, hogy a fotokezelt térhálósított hialuronsavgél jobb hatású, mint a kereskedelemben kapható TC7 anyag, amelyet nem alkalmazhatunk a sérült területre anélkül, hogy vérzéscsillapítást alkalmaznánk.
3. tesztvizsgálati példa
A fotokezelt térhálósított hialuronsavgél antiadhéziós (összenövés-ellenes) hatása patkánybélösszenövés-modellben
1. Tesztvizsgálati anyag
2% koncentrációjú és 2,5% DS értékű fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, amely az ultraibolyafény-besugárzás előtt 10 percen át 105 °C hőmérsékleten hőkezelt és az ultraibolyafény-besugárzást követően 8 percen át 121 °C hőmérsékleten hőkezelt.
2. Tesztvizsgálati állat hetes SD nőstény patkányokat szereztünk be és a tesztvizsgálat előtt 1 héten át tápláltunk.
3. Adhéziós (összenövési) modell előállítása
A savós membránt a csípőbéltől a vastagbélig lineáris módon lefejtettük 20 cm hosszban és 3-4 mm szélességben. Vérzéscsillapítást nem alkalmaztunk.
4. Adagolás és csoportosítás
A gél előírt mennyiségét (0,5 ml, 1,0 ml vagy 2,0 ml) 1 mm-es fecskendőből injektáltuk a sérült területre. Az adagolás után a bélcsatornát a hasüregbe visszahelyeztük, majd a hasüreget lezártuk. A gél adagolása nélküli összenövési modellt kontrollcsoportként alkalmaztuk. Az egyes modellekben 0,5 ml, 1,0 ml és 2,0 ml gélt alkalmaztunk és ezeket 0,5 ml, 1,0 ml és 2,0 ml csoportoknak neveztük. Minden egyes csoport 10 patkányt tartalmazott.
5. Értékelés és eredmények
A beültetést követő 7. napon a patkányokat a karotid artérián keresztül történő kivéreztetéssel elpusztítottuk érzéstelenítés mellett, amelyet etil-éterrel hajtottunk végre. A kimetszés után az összenövés mértékét értékeltük az 1. tesztvizsgálati példában leírt értékelési jelzőszámokkal. A nyert eredményeket az 5. táblázatban mutatjuk be.
5. táblázat
| Állat száma | Kontroll- csoport | Tesztvizsgálati csoport | ||
| 0,5 ml | 1,0 ml | 2,0 ml | ||
| 1 | 2 | 0 | 0 | 0 |
| 2 | 2 | 0 | 0 | 0 |
| 3 | 2 | 1 | 0 | 0 |
| 4 | 2 | 0 | 0 | 0 |
| 5 | 2 | 0 | 0 | 0 |
| 6 | 2 | 0 | 0 | 1 |
| 7 | 2 | 0 | 0 | 0 |
| 8 | 1-2 | 0 | 0 | 0 |
| 9 | 1-2 | 1-2 | 0 | 0 |
| 10 | 1-2 | 0 | 0 | 0 |
Valamennyi tesztvizsgálati csoport (mindhárom esetben) jelentős összenövés-ellenes hatást mutatott a kontrollcsoporttal összehasonlítva. Az 5. táblázat eredményei nemcsak azt mutatják, hogy a találmány szerinti gélek hatásosak összenövés-ellenes hatásban, hanem hogy ezek a szövettapadásban is jobbak, a szövetbiokompatibilitásban is jobbak, valamint a bél perisztatikus mozgását figyelembe véve jobb jellemzőjűek.
Ezen túlmenően a beültetés utáni 7. napon történő kimetszés esetében az 1. és 2. tesztvizsgálati példákban, az állatokban, a fotokezelt térhálósított hialuronsavgél adagolt mennyisége szabad szemmel a továbbiakban nem látható. Ez mutatja a találmány szerinti gél biológiai lebonthatóságát.
Mint a korábbi leírásban leírtuk és bizonyítottuk, fotokezelt térhálósított hialuronsavgélt könnyen előállíthatunk ultraibolya fénnyel történő besugárzás segítségével nagy koncentrációjú vizes oldat fotoreaktív hialuronsavszármazék besugárzásával. A találmány szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél olyan fizikai jellemzőkkel rendelkezik, amely a megfelelő viszkoelaszticitás, szövetaffinitás, biológiai lebonthatóság és hasonlók, miközben a hialuronsav magából eredő jellemzőit is megtartja, amelyek a toxicitásmentesség, az antigénképzés-mentesség, a biokompatibilitás, a biológiai lebonthatóság és hasonlók. Ebből eredően várhatóan számos területen alkalmazható gyógyászati anyagként és az alkalmazás nagy biztonsággal történhet. Alkalmazható például antiadhéziós (összenövés-ellenes) anyagként, fenntartott hatóanyag-kibocsátású hatóanyag formákban hordozóanyagként és hasonló módon. Ezen túlmenően a gél injektálható az érintett helyzetek finom részeiben, a testben fecskendő segítségével, cső segítségével vagy hasonló eszközzel. Ebből eredően a találmány szerinti gél mikrosebészeti és hasonló eljárásokban is alkalmazható.
Claims (19)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, amelynek tárolási modulusa (G’) 50-1500 Pa közötti, veszteségi modulusa (G”) 10-300 Pa közötti és tangensdelta-értéke (G7G’) 0,1-0,8 közötti dinamikus viszkoelaszticitásban reométerrel mérve a következő feltételek mellett:mérési módszer: oszcillációs tesztmódszer, stresszkontroll;mérés hőmérséklete: 37 °C; mérési geometria: 4 cm; távolság: 800 pm; és frekvencia: 10 Hz;mimellett valamely fotoreaktív hialuronsavszármazék ultraibolya fénnyel történő besugárzásával nyert gél, amely egy fahéjsavszármazékot tartalmazó távtartó csoportot, amely a hialuronsav funkciós csoportjához kémiailag kötött, azért, hogy a fotoreaktív hialuronsavszármazékot úgy dimerizálja, hogy az ciklobutángyűrűket képezzen, és ezáltal hálós szerkezetet alkosson,HU 224 697 Β1 és a gél injektálható hidrogélt tartalmazó vizes közegként legyen jelen a hálós szerkezetben.
- 2. Az 1. igénypont szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, ahol a térhálósítás mértéke 0,01-0,5% a hialuronsavat alkotó diszacharidegység móljára nézve.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, ahol a víz abszorpciója 2000-15 000%, amely a következőképpen definiálható:abszorbeált víz tömege vízabszporpció (%)=-*100% szárított gél tömege
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, ahol a távtartó csoport egy amino-alkoholból, aminosavból vagy peptidből származó csoport.
- 5. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, ahol a fotoreaktív térhálósító csoport az (1) vagy a (2) általános képletű csoport:-NH(CR1R2)nOCOCH=CH-Ph (1) ahol az általános képletben R1 és R2 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-8 szénatomos alkilcsoport; Ph jelentése fenilcsoport; és n értéke 2-18 közötti egész szám;-A-NH-Ph-CH=CHCOOR3 (2) ahol az általános képletben R3 jelentése 1-8 szénatomos alkilcsoport vagy egy aralkilcsoport; A jelentése -(NHCR4R5CO)m- vagy -NH(CR4R5)hCO- általános képletű csoport; R4 és R5 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-8 szénatomos alkilcsoport; -Ph- jelentése para-fenilén-csoport; m értéke 1-6 közötti egész szám; és h értéke 1-18 közötti egész szám.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, ahol a fotoreaktív térhálósító csoportot az alkotó diszacharid 0,5-10%/mol arányban alkotja.
- 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, ahol a fotoreaktív hialuronsavszármazékból ultraibolya sugárzással vizes közegben hidrogélt nyerünk, és ezt követően a térhálósított terméket hőkezelésnek vetjük alá.
- 8. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, ahol a hidrogélt úgy nyerjük, hogy egy fotoreaktív hialuronsavszármazékot hőkezelésnek vetünk alá, majd ezt az ultraibolya fénnyel vizes közegben besugározzuk.
- 9. A 8. igénypont szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, ahol a besugárzást követően további hőkezelést végzünk.
- 10. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, ahol a gél endotoxintartalma 0,25 endotoxin egység (EU)/g vagy ennél kisebb.
- 11. Az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél, amely alkalmas arra, hogy egy tartályból kinyomható legyen.
- 12. Eljárás az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgél előállítására, azzal jellemezve, hogy egy fotoreaktív hialuronsavszármazék 0,5-10 tömeg%-os vizes közegben készült oldatát ultraibolya fénnyel besugározzuk, amelyben egy fotoreaktív térhálósító csoport kémiailag kötött a hialuronsav valamely funkciós csoportjához; és a kölcsönös fotoreaktív térhálósító csoportok dimerizációjával intermolekuláris és/vagy intramolekuláris térhálósítást végzünk a hálós szerkezetet kialakítására.
- 13. A 12. igénypont szerinti eljárás fotokezelt térhálósított hialuronsavgél előállítására, ahol hőkezelést végzünk az ultraibolya fénnyel történő besugárzás előtt és/vagy után képzett fotoreaktív hialuronsavszármazék fent említett vizes oldatában.
- 14. A 13. igénypont szerinti eljárás fotokezelt térhálósított hialuronsavgél előállítására, ahol a hőkezelést 100-125 °C hőmérsékleten 5-30 perc közötti időtartamon át nagynyomású gőzzel hajtjuk végre.
- 15. Biogyógyászati anyag, amely az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgélt tartalmazza.
- 16. A 15. igénypont szerinti biogyógyászati anyag, amely antiadhezív (összenövés-ellenes) hatással rendelkezik.
- 17. Biogyógyászati anyagot tartalmazó készlet, amely egy térhálósított hialuronsavgélt és a fenti gélt tartalmazó tartályt olyan állapotban foglalja magában, hogy a injektálás céljából kinyomható legyen.
- 18. Biogyógyászati anyagot tartalmazó készlet, amely az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti fotokezelt térhálósított hialuronsavgélt tartalmazza olyan állapotban, hogy abból ez kivehető legyen.
- 19. A 18. igénypont szerinti biogyógyászati anyagot tartalmazó készlet, ahol olyan tartályt alkalmazunk, amelyből a fenti gélt injektálás céljából ki lehessen nyomni.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31982595 | 1995-11-15 | ||
| PCT/JP1996/003349 WO1997018244A1 (en) | 1995-11-15 | 1996-11-14 | Photocured cross-linked-hyaluronic acid gel and method of preparation thereof |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0000390A2 HUP0000390A2 (hu) | 2000-05-28 |
| HUP0000390A3 HUP0000390A3 (en) | 2000-09-28 |
| HU224697B1 true HU224697B1 (en) | 2006-01-30 |
Family
ID=18114635
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0000390A HU224697B1 (en) | 1995-11-15 | 1996-11-14 | Photocured cross-linked-hyaluronic acid gel and method of preparation thereof |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6031017A (hu) |
| EP (1) | EP0861270B1 (hu) |
| JP (1) | JP3439481B2 (hu) |
| KR (1) | KR100509882B1 (hu) |
| CN (1) | CN1098863C (hu) |
| AT (1) | ATE221086T1 (hu) |
| AU (1) | AU722250B2 (hu) |
| CA (1) | CA2237192C (hu) |
| DE (1) | DE69622575T2 (hu) |
| ES (1) | ES2179215T3 (hu) |
| HK (1) | HK1015799A1 (hu) |
| HU (1) | HU224697B1 (hu) |
| NO (1) | NO982212L (hu) |
| RU (1) | RU2197501C2 (hu) |
| WO (1) | WO1997018244A1 (hu) |
Families Citing this family (83)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6630457B1 (en) * | 1998-09-18 | 2003-10-07 | Orthogene Llc | Functionalized derivatives of hyaluronic acid, formation of hydrogels in situ using same, and methods for making and using same |
| JP4172176B2 (ja) * | 2000-12-19 | 2008-10-29 | 生化学工業株式会社 | 光反応性ヒアルロン酸およびその製造方法ならびに光架橋ヒアルロン酸および医用材料 |
| DE60117502T2 (de) * | 2000-12-19 | 2006-08-24 | Seikagaku Corp. | Photohärtbare Derivate von Hyaluronsäure, Verfahren zu deren Herstellung, vernetztes und photogehärtetes Derivat der Hyaluronsäure und diese enthaltendes medizinisches Material |
| FR2819722B1 (fr) * | 2001-01-19 | 2006-11-24 | Corneal Ind | Utilisation de l'acide hyaluronique ou d'au moins l'un de ses sels dans le cadre d'un traitemnet chirurgical de la presbytie |
| WO2002060971A1 (en) | 2001-01-31 | 2002-08-08 | Seikagaku Corporation | Crosslinked polysaccharide sponge |
| EP1249247B1 (en) | 2001-03-30 | 2007-02-28 | Chisso Corporation | Pharmaceutical preparation for the treatment of gynecological diseases |
| US6673919B2 (en) | 2001-03-30 | 2004-01-06 | Chisso Cororation | Chemically modified hyaluronic acid or salts thereof, and a process for producing thereof |
| JP2003052819A (ja) * | 2001-08-10 | 2003-02-25 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | 薬剤充填注射器包装物およびその滅菌または殺菌方法 |
| ITPD20020064A1 (it) * | 2002-03-12 | 2003-09-12 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Derivati esterei dell'acido ialuronico per la preparazione di idrogelda utilizzare in campo biomedico, sanitario e chirurgico e come sistem |
| KR20040009891A (ko) * | 2002-07-26 | 2004-01-31 | 주식회사 엘지생명과학 | 히알루론산의 유도체 겔 및 그 제조방법 |
| US7019082B2 (en) * | 2002-08-09 | 2006-03-28 | Carnegie Mellon University | Polymers, supersoft elastomers and methods for preparing the same |
| US7465766B2 (en) | 2004-01-08 | 2008-12-16 | The Cleveland Clinic Foundation | Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof |
| US6982298B2 (en) | 2003-01-10 | 2006-01-03 | The Cleveland Clinic Foundation | Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof |
| US8138265B2 (en) | 2003-01-10 | 2012-03-20 | The Cleveland Clinic Foundation | Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof |
| US8137688B2 (en) | 2003-01-10 | 2012-03-20 | The Cleveland Clinic Foundation | Hydroxyphenyl cross-linked macromolecular network and applications thereof |
| US20040167480A1 (en) * | 2003-02-21 | 2004-08-26 | Advanced Medical Optics, Inc. | Administration of multiple viscoelastic solutions with a multi-compartment syringe |
| EP1607405B1 (en) * | 2003-03-11 | 2011-05-04 | Seikagaku Corporation | Photocrosslinked polysaccharide composition and process for producing the same |
| JP2004323454A (ja) * | 2003-04-25 | 2004-11-18 | Chisso Corp | 薬剤 |
| CA2538090C (en) | 2003-09-12 | 2012-03-06 | Seikagaku Corporation | Polysaccharide pseudo-sponge |
| US7893174B2 (en) * | 2004-03-05 | 2011-02-22 | Carnegie Mellon University | Atom transfer radical polymerization process |
| US8293890B2 (en) * | 2004-04-30 | 2012-10-23 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Hyaluronic acid based copolymers |
| EP1794192B1 (en) * | 2004-09-15 | 2016-05-04 | Seikagaku Corporation | Photoreactive polysaccharide, photocrosslinked polysaccharide products, the method of making them and medical materials made therefrom |
| US20060069063A1 (en) * | 2004-09-27 | 2006-03-30 | Yng-Jiin Wang | Crosslinked polygalacturonic acid used for postsurgical tissue adhesion prevention |
| US20090088846A1 (en) | 2007-04-17 | 2009-04-02 | David Myung | Hydrogel arthroplasty device |
| CA2590159C (en) * | 2004-12-30 | 2011-07-12 | Genzyme Corporation | Regimens for intra-articular viscosupplementation |
| WO2006138542A2 (en) * | 2005-06-15 | 2006-12-28 | Surmodics, Inc. | Macromer composition including light activated initiator |
| JP5147396B2 (ja) * | 2005-07-06 | 2013-02-20 | 生化学工業株式会社 | 薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル |
| RU2472809C2 (ru) * | 2005-09-02 | 2013-01-20 | Колбар Лайфсайенс Лтд. | Поперечно сшитые полисахаридные и белковые матрицы и способы их получения |
| CN103120701B (zh) * | 2005-10-12 | 2014-11-05 | 生化学工业株式会社 | 包含疏水基团结合型糖胺聚糖在制备预防或治疗角膜上皮层病症的药物中的用途 |
| JP5043364B2 (ja) * | 2006-05-01 | 2012-10-10 | 生化学工業株式会社 | 多糖誘導体の製造方法 |
| CN100389145C (zh) * | 2006-09-29 | 2008-05-21 | 北京大学 | 含天然高分子的水凝胶及其辐射制备方法 |
| WO2008069348A1 (en) | 2006-12-06 | 2008-06-12 | Seikagaku Corporation | Pharmaceutical agent having long-lasting effect of treating arthritic disorders |
| WO2009029049A1 (en) * | 2007-08-30 | 2009-03-05 | National University Of Singapore | A bone and/or dental cement composition and uses thereof |
| ES2585483T3 (es) | 2008-02-13 | 2016-10-06 | The Cleveland Clinic Foundation | Mejora molecular de la matriz extracelular y métodos de uso |
| WO2009117737A2 (en) * | 2008-03-21 | 2009-09-24 | Biomimedica, Inc | Methods, devices and compositions for adhering hydrated polymer implants to bone |
| WO2009135029A2 (en) | 2008-04-30 | 2009-11-05 | The Cleveland Clinic Foundation | Compositions and methods to treat urinary incontinence |
| US20120209396A1 (en) | 2008-07-07 | 2012-08-16 | David Myung | Orthopedic implants having gradient polymer alloys |
| CA2727777A1 (en) * | 2008-07-07 | 2010-01-14 | Biomimedica, Inc. | Hydrophilic interpenetrating polymer networks derived from hydrophobic polymers |
| JP5722773B2 (ja) | 2008-08-05 | 2015-05-27 | バイオミメディカ インコーポレイテッド | ポリウレタングラフト化ヒドロゲル |
| WO2010033726A2 (en) | 2008-09-17 | 2010-03-25 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Drug delivery composition comprising a self-assembled gelator |
| ITRM20080636A1 (it) * | 2008-11-28 | 2010-05-29 | Univ Palermo | Procedimento per la produzione di derivati funzionalizzati dell acido ialuronico e relativi idrogeli. |
| GB2481561B (en) | 2009-03-27 | 2013-12-11 | Univ Carnegie Mellon | Preparation of functional star macromolecules |
| WO2010138074A1 (en) * | 2009-05-29 | 2010-12-02 | Hilborn Joens | Hyaluronic acid based delivery systems |
| JO3008B1 (ar) * | 2009-08-13 | 2016-09-05 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | تركيب صيدلي لتخفيف الألم |
| CN101716331B (zh) * | 2009-12-16 | 2012-03-07 | 中山大学 | 利用支链淀粉-对硝基肉桂酸接枝物原位包埋蛋白类生物大分子的方法 |
| WO2011075742A1 (en) * | 2009-12-18 | 2011-06-23 | Biomimedica, Inc. | Method, device, and system for shaving and shaping of a joint |
| WO2012008722A2 (ko) * | 2010-07-12 | 2012-01-19 | 신풍제약 주식회사 | 조직 증강용 충전 조성물 |
| AU2011293169A1 (en) | 2010-08-27 | 2013-03-21 | Biomimedica, Inc. | Hydrophobic and hydrophilic interpenetrating polymer networks derived from hydrophobic polymers and methods of preparing the same |
| EP2618821A4 (en) | 2010-09-24 | 2014-08-13 | Brigham & Womens Hospital | NANOSTRUCTURED GELS FOR CONTROLLED RELEASE OF CAPSUED MEDIUM |
| US9644042B2 (en) | 2010-12-17 | 2017-05-09 | Carnegie Mellon University | Electrochemically mediated atom transfer radical polymerization |
| ITTO20110428A1 (it) * | 2011-05-13 | 2012-11-14 | Rottapharm Spa | Esteri dell'acido ialuronico, loro preparazione ed uso in dermatologia |
| CN102225220A (zh) * | 2011-06-14 | 2011-10-26 | 天津晶明新技术开发有限公司 | 眼科手术粘弹剂 |
| WO2013028756A1 (en) | 2011-08-22 | 2013-02-28 | Carnegie Mellon University | Atom transfer radical polymerization under biologically compatible conditions |
| EP2763707B1 (en) | 2011-10-03 | 2018-03-28 | Hyalex Orthopaedics, Inc. | Polymeric adhesive for anchoring compliant materials to another surface |
| AU2012340699A1 (en) | 2011-11-21 | 2014-06-19 | Biomimedica, Inc. | Systems, devices, and methods for anchoring orthopaedic implants to bone |
| WO2013126745A2 (en) | 2012-02-23 | 2013-08-29 | Carnegie Mellon University | Ligands designed to provide highly active catalyst complexes |
| CZ304267B6 (cs) * | 2012-11-27 | 2014-02-05 | Contipro Biotech S.R.O. | Fotoreaktivní derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy, 3D síťovaný derivát kyseliny hyaluronové, způsob jeho přípravy a použití |
| RU2513838C1 (ru) * | 2013-02-21 | 2014-04-20 | Общество с ограниченной ответственностью "ДЖИ-Групп" | Гистоэквивалент-биопластический материал |
| KR101869988B1 (ko) * | 2013-03-27 | 2018-06-21 | 주식회사 엘지화학 | 점탄성 히알루론산 가교물 제조용 조성물, 및 이를 이용하여 얻은 히알루론산 가교물 |
| WO2015053282A1 (ja) * | 2013-10-08 | 2015-04-16 | キユーピー株式会社 | カルボキシメチル基含有修飾ヒアルロン酸および／またはその塩の架橋物およびその製造方法 |
| US10513683B2 (en) | 2013-12-18 | 2019-12-24 | Japan Science And Technology Agency | Structure used for animal cells, method of separating animal cells, and method of adjusting elasticity of surface of structure used for animal cells |
| WO2016006693A1 (ja) * | 2014-07-11 | 2016-01-14 | 株式会社メニコン | 視認性確保材および視認性確保材吐出装置 |
| US9982070B2 (en) | 2015-01-12 | 2018-05-29 | Carnegie Mellon University | Aqueous ATRP in the presence of an activator regenerator |
| US11077228B2 (en) | 2015-08-10 | 2021-08-03 | Hyalex Orthopaedics, Inc. | Interpenetrating polymer networks |
| BR112018005842B1 (pt) * | 2015-09-30 | 2021-07-27 | Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc. | Composições viscoelásticas e método para assegurar o campo de visão de um endoscópio |
| KR20170090965A (ko) * | 2016-01-29 | 2017-08-08 | 한미약품 주식회사 | 복합 히알루론산 가교물 및 그 제조방법 |
| EP3452094B1 (en) | 2016-05-06 | 2021-11-17 | The Brigham and Women's Hospital, Inc. | Binary self assembled gels for controlled delivery of encapsulated agents to cartilage |
| CN109890847A (zh) | 2016-10-31 | 2019-06-14 | 丘比株式会社 | 凝胶组合物和其制造方法 |
| WO2018132582A1 (en) | 2017-01-12 | 2018-07-19 | Carnegie Mellon University | Surfactant assisted formation of a catalyst complex for emulsion atom transfer radical polymerization processes |
| US11020410B2 (en) | 2017-02-03 | 2021-06-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Self-assembled gels formed with anti-retroviral drugs, prodrugs thereof, and pharmaceutical uses thereof |
| CN106832439A (zh) * | 2017-03-26 | 2017-06-13 | 广州市芯检康生物科技有限公司 | 一种用于全血成分保护的新型气凝胶多功能即用型复合材料及其制备方法 |
| CA3061480A1 (en) * | 2017-05-08 | 2018-11-15 | Alivio Therapeutics, Inc. | Formulation of nanostructured gels for increased agent loading and adhesion |
| CN107469140B (zh) * | 2017-08-14 | 2021-01-05 | 高鼎精细化工(昆山)有限公司 | 一种具抗菌功能的光动力学抗菌敷料、制备方法及应用 |
| EP3760647A4 (en) | 2018-02-28 | 2021-12-01 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | NEW DERIVATIVE OF PHOTORETICULABLE ALGINIC ACID |
| US10869950B2 (en) | 2018-07-17 | 2020-12-22 | Hyalex Orthopaedics, Inc. | Ionic polymer compositions |
| CN108837299B (zh) * | 2018-07-18 | 2020-08-07 | 武汉大学 | 一种智能调节血糖的微针贴片及其制备方法 |
| CN113825495A (zh) | 2018-10-11 | 2021-12-21 | 阿利维奥治疗学股份有限公司 | 用于智能释放的不可注射水凝胶调配物 |
| MX2021005327A (es) * | 2018-11-22 | 2021-06-23 | Univ Jichi Medical | Composicion viscoelastica para asegurar el campo visual de un endoscopio. |
| AU2019403430A1 (en) | 2018-12-21 | 2021-05-27 | Advanced Aesthetic Technologies, Inc. | Crosslinked polysaccharides and related methods |
| CN110063758A (zh) * | 2019-05-27 | 2019-07-30 | 博志生物科技(深圳)有限公司 | 一种紫外线光固化凝胶微创穿刺注射方法及系统 |
| IT201900019724A1 (it) * | 2019-10-24 | 2021-04-24 | Bmg Pharma S P A | “procedimento in solvente organico per la purificazione dell’acido ialuronico sale sodico” |
| CN111617313B (zh) * | 2020-04-29 | 2022-09-06 | 天津医科大学眼科医院 | 一种眼用线性凝胶在作为临床孔源性视网膜脱离药物方面中的应用 |
| WO2023038463A1 (ko) | 2021-09-09 | 2023-03-16 | 선바이오(주) | 6-arm peg 수화겔의 시간 경과에 따른 졸-겔 전환 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5410016A (en) * | 1990-10-15 | 1995-04-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Photopolymerizable biodegradable hydrogels as tissue contacting materials and controlled-release carriers |
| EP0610441A4 (en) * | 1991-10-29 | 1996-01-10 | Clover Cons Ltd | CROSSLINKABLE POLYSACCHARIDES, POLYCATIONS AND LIPIDS CAN BE USED TO ENCODE AND DISPENSE MEDICINAL PRODUCTS. |
| JP2855307B2 (ja) * | 1992-02-05 | 1999-02-10 | 生化学工業株式会社 | 光反応性グリコサミノグリカン、架橋グリコサミノグリカン及びそれらの製造方法 |
-
1996
- 1996-11-14 HU HU0000390A patent/HU224697B1/hu active IP Right Grant
- 1996-11-14 US US09/068,227 patent/US6031017A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-11-14 JP JP51874597A patent/JP3439481B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1996-11-14 WO PCT/JP1996/003349 patent/WO1997018244A1/en not_active Application Discontinuation
- 1996-11-14 AT AT96938473T patent/ATE221086T1/de active
- 1996-11-14 EP EP96938473A patent/EP0861270B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-11-14 AU AU75872/96A patent/AU722250B2/en not_active Expired
- 1996-11-14 CN CN96199650A patent/CN1098863C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-11-14 RU RU98111203/04A patent/RU2197501C2/ru active
- 1996-11-14 ES ES96938473T patent/ES2179215T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-11-14 DE DE69622575T patent/DE69622575T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-11-14 KR KR1019980703648A patent/KR100509882B1/ko active IP Right Grant
- 1996-11-14 CA CA002237192A patent/CA2237192C/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-05-14 NO NO982212A patent/NO982212L/no not_active Application Discontinuation
-
1999
- 1999-03-01 HK HK99100824A patent/HK1015799A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2179215T3 (es) | 2003-01-16 |
| KR19990067621A (ko) | 1999-08-25 |
| HK1015799A1 (en) | 1999-10-22 |
| CA2237192A1 (en) | 1997-05-22 |
| AU722250B2 (en) | 2000-07-27 |
| EP0861270B1 (en) | 2002-07-24 |
| JP3439481B2 (ja) | 2003-08-25 |
| AU7587296A (en) | 1997-06-05 |
| CA2237192C (en) | 2006-06-20 |
| JPH11512778A (ja) | 1999-11-02 |
| CN1207744A (zh) | 1999-02-10 |
| NO982212D0 (no) | 1998-05-14 |
| DE69622575T2 (de) | 2003-02-13 |
| KR100509882B1 (ko) | 2006-01-27 |
| DE69622575D1 (de) | 2002-08-29 |
| US6031017A (en) | 2000-02-29 |
| EP0861270A1 (en) | 1998-09-02 |
| HUP0000390A2 (hu) | 2000-05-28 |
| ATE221086T1 (de) | 2002-08-15 |
| HUP0000390A3 (en) | 2000-09-28 |
| CN1098863C (zh) | 2003-01-15 |
| WO1997018244A1 (en) | 1997-05-22 |
| NO982212L (no) | 1998-07-14 |
| RU2197501C2 (ru) | 2003-01-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU224697B1 (en) | Photocured cross-linked-hyaluronic acid gel and method of preparation thereof | |
| KR100293043B1 (ko) | 광경화성글리코사미노글리칸유도체,가교결합된글리코사미노글리칸및이의제조방법 | |
| EP0587715B1 (en) | Water insoluble derivatives of polyanionic polysaccharides | |
| US4937270A (en) | Water insoluble derivatives of hyaluronic acid | |
| US5527893A (en) | Water insoluble derivatives of polyanionic polysaccharides | |
| JP6063867B2 (ja) | ジスルフィド結合架橋生体適合性高分子ヒドロゲルおよびこれを含む製剤 | |
| RU2768716C2 (ru) | Высвобождающие сероводород полимерные соединения | |
| AU2006276435B2 (en) | Cellulose derivative | |
| JP2002519481A (ja) | ヒアルロン酸アミドおよびそれらの誘導体、並びにそれらの製造法 | |
| BR112020024735A2 (pt) | composição de hidrogel compreendendo um polímero reticulado | |
| JPH0959303A (ja) | 生体適合性ヒアルロン酸ゲル及びその用途 | |
| US20210261760A1 (en) | Hydrogel composition comprising a crosslinked polymer |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HFG4 | Patent granted, date of granting |
Effective date: 20051118 |