HU221724B1

HU221724B1 - Koleszterin-bioszintézis inhibitor és béta-laktám koleszterinabszorpció-inhibitor kombinációját tartalmazó gyógyszerkészítmények és eljárás előállításukra

Info

Publication number: HU221724B1
Application number: HU9501854A
Authority: HU
Inventors: Harry R. Davis
Original assignee: Schering Corp.
Priority date: 1992-12-23
Filing date: 1993-12-21
Publication date: 2002-12-28
Also published as: MY109538A; US5661145A; EE9400341A; EE03383B1; LT3300B; LV10919A; AU680864B2; SK78395A3; YU80293A; NZ259790A; EP0675714A1; GR3029405T3; NO311325B1; PL174128B1; CZ287125B6; CA2152351C; NO952529L; LTIP1514A; NO952529D0; CZ164395A3

Abstract

A találmány tárgya gyógyszerkészítmény atherosclerosis kezelésére vagymegelőzésére és a plazma-koleszterinszin- tek csökkentésére, amely egy(I) általános képletű ?-laktám koleszterinabszorpció inhibitort – aholA jelentése (c) általános képletű csoport, amelyben R1, R2 és R3egymástól függetlenül hidrogénatom, adott esetben szubsztituáltalkoxi-, alkil-, fenoxi-, hidroxicsoport, meta-helyzetű halogénatomvagy –C(O)R12 általános képletű csoport, amelyben R12 alkoxicsoport; DB'–(CH2)q– általános képletű csoport, amelyben B' fenilcsoport, és q=3 vagy 4; B'–O–(CH2)2– általános képletű csoport, amelyben B' 4-fluor-fenil- vagy 3-metoxi-fenil-csoport; 3-fenil-1-propenil-csoport; vagybenzil-ciklopropil-csoport; R hidrogén- vagy fluoratom, alkil-,alkenil-, alkinilcsoport vagy B–(CH2)h– általános képletű csoport,amelyben h= 0, 1, 2 vagy 3; és B az előbbiekben meghatározott (c)általános képletű csoport; és R4 (e) általános képletű csoport,amelyben n= 1; és R7 alkil-, alkoxicsoport, hidroxi-, trifluor-metoxi-csoport vagy halogénatom – és egy koleszterinbioszintézis inhibitorttartalmaz egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval kombinálva. ŕ

Description

A találmány a plazma-koleszterinszintek csökkentésére felhasználható, koleszterinbioszintézis inhibitort és falaktéin koleszterinabszorpció inhibitort tartalmazó gyógyszerkészítményre, egy, az atherosclerosis kezelésére vagy megelőzésére vagy a plazma-koleszterinszintek csökkentésére szolgáló, koleszterinbioszintézis inhibitort és β-laktám koleszterinabszorpció inhibitort tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítási eljárására, valamint egy, kombinációban atherosclerosis kezelésére vagy megelőzésére vagy a plazma-koleszterinszintek csökkentésére szolgáló gyógyszerkészítményeket külön tárolóedényekben egyedi adagokban tartalmazó készletre (kitté) vonatkozik.

A plazma-koleszterinszintek szoros összefüggésben állnak a koszorúér-betegséggel együtt járó klinikai események előfordulásával. A humán és állati szervezetekben a teljes testkoleszterin-homeosztázis szabályozása magában foglalja a koleszterinbioszintézisnek, az epesavbioszintézisnek, valamint a koleszterintartalmú plazmalipoproteinek katabolizmusának a modulációját. A koleszterinbioszintézisért és katabolizmusért felelős leglényegesebb szerv a máj, így a plazma-koleszterinszintek nagyságát is elsődlegesen a máj határozza meg. A májban történik azoknak a nagyon kis sűrűségű lipoproteineknek (very low density lipoproteins, VLDL) a szintézise és kiválasztása, amelyek később a keringésben kis sűrűségű lipoproteinekké (low density lipoproteins, LDL) metabolizálódnak. A kis sűrűségű lipoproteinek a leglényegesebb koleszterinszállító lipoproteinek a plazmában; a kis sűrűségű lipoproteinek koncentrációjának növekedése fokozott atherosclerosissal jár együtt.

A koleszterinhomeosztázis meghatározásának egy másik lényeges tényezőjét a vékonybélben történő koleszterinabszorpció képezi. Egy Westem-diéta szerint táplálkozó átlagember az élelmiszerrel naponként 300-500 mg koleszterint visz be a szervezetébe. Ezen túlmenően mindennap 600-1000 mg koleszterin juthat keresztül a beleken. Az utóbbi koleszterin egy epekomponens, amely a májból kerül kiválasztásra. A koleszterin abszorpciója komplex és sokoldalú folyamat Korábban már beszámoltak arról, hogy bélüregben lévő összes koleszterin körülbelül 50%-át a beleket burkoló sejtek (azaz az enterocyták) abszorbeálják. Ez a koleszterin egyaránt tartalmaz táplálékból származó és epe- vagy májeredetű koleszterint is. Az enterocytákban újonnan abszorbeálódott koleszterin legnagyobb részét az acil-koenzim-A:koleszterin-acil-transzferáz (ACAT) enzim észteresíti. Ezek a koleszteril-észterek ezt követően trigliceridekkel és egyéb komponensekkel (például foszfolipidekkel, apoproteinekkel) együtt egy másik lipoproteinosztályba, a kilomikronok osztályába kerülnek át.

A kilomikronokat a bélsejtek szekretálják a nyirokba, ahonnan ezt kővetően a kilomikronok a vérbe kerülhetnek. Ténylegesen a belekben abszorbeált összes koleszterin a májba jut ezen az úton. Amennyiben a belekben történd koleszterinabszorpciót valamilyen módon csökkentjük, kevesebb koleszterin kerül a májba. Ennek következtében csökken a hepaticus lipoprotein (VLDL) -termelés, ugyanakkor fokozódik a plazmakoleszterin, legnagyobbrészt LDL hepaticus clearance-e.

Ily módon a bélben történő koleszterinabszorpció gátlásának nettó hatosa az, hogy csökken a plazmában a ko5 leszterin szintje.

A béta-laktámok, így a WO 93/02048 számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentésben ismertetett (3R, 45)-1,4-bisz(4-metoxi-fenil)-3-(3-fenil-propil)-2azetidinon hatásosan gátolja a koleszterin bélben törté10 nő abszorpcióját, és igy számos állatfaj esetén (például hörcsögökben, patkányokban, nyulakban, majmokban) csökkenti a plazma koleszterinszintjét.

A koleszterinbioszintézis 3-hidroxi-3-metil-glutaril-koenzim-A (HMG CoA) reduktáz (ECl.1.1.34) inhi15 bitorok által való gátlásáról kimutatták, hogy ily módon hatásosan lehet csökkenteni a plazma-koleszterinszintet [Witzum, J. L., Circulation, 80 (5), 1101-1114 (1989)], valamint visszaszorítani az atherosclerosist. Egy HMG CoA reduktáz inhibitorral és egy epesav20 szekvesztránssal végzett kombinált gyógyászati kezelés esetén a korábbiakban már bebizonyították, hogy humán hyperlipidaemiás betegekben a kombinált kezelés lényegesen hatásosabb, mint az akár az egyik, akár a másik szerrel önmagában végzett kezelés [Illingworth,

D. R., Drugs 36 (Suppl. 3), 63-71 (1988)].

Meglepő módon azt találtuk, hogy egy béta-laktám koleszterinabszorpció inhibitor és egy HMG CoA reduktáz inhibitor [például lovasztatin (MEVACOR™) vagy pravasztatin (PRAVACHOL®)] kombinációja alultáplált kutyákban és Rhesus-majmokban, valamint koleszterinnel táplált hörcsögökben és nyulakban nagyobb mértékben csökkenti a plazma-koleszterinszintet, mint az említett szerek bármelyikének önmagában történő alkalmazása. Ezek a megfigyelések igen váratla35 nők voltak, tekintettel arra, hogy a HMG CoA reduktáz inhibitorok önmagukban egyáltalán nem csökkentik a hörcsögök és majmok plazma-koleszterinszintjét.

A találmány tárgya egy β-laktám koleszterinabszorpció inhibitornak egy koleszterinbioszintézis inhibi40 torral kombinált alkalmazása (és hasonlóképpen egy koleszterinbioszintézis inhibitornak egy β-laktám koleszterinabszorpció inhibitorral kombinált alkalmazása) atherosclerosis kezelésére vagy megelőzésére vagy plazma-koleszterinszintek csökkentésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.

A találmány további részét képezi egy olyan gyógyszerkészítmény, amely hatásos mennyiségben egy koleszterinbioszintézis inhibitort, egy β-laktám koleszterinabszorpció inhibitort, valamint egy gyógyszerészeti50 lég elfogadható hordozót tartalmaz. Ugyancsak a találmány oltalmi kőiébe tartozik egy olyan készlet (kit), amely külön tárolóedények egyikében egy koleszterinbioszintézis inhibitor hatásos mennyiségét tartalmazza egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóban, egy másik torolóedényben pedig egy β-laktám koleszterinabszorpció inhibitor hatásos mennyiségét tartalmazza egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóban. Továbbá szintén a találmány tárgyát képezi egy eljárás egy koleszterinbioszintézis inhibitort és egy β-laktám koleszterinabszorpció inhibitort tartalmazó, atheroscle2

HU 221 724 BI rosis kezelésére vagy megelőzésére vagy a plazma-koleszterinszintek csökkentésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.

A találmány szerinti kombinációban történő felhasználásra alkalmas koleszterinbioszintézis inhibitorok 5 közé tartoznak - többek között - például a következők: HMG CoA reduktáz inhibitorok, például lovasztatin, pravasztatin, fluvasztatin, simvasztatin és atorvastatin (Cl—981); HMG CoA szintetáz inhibitorok, például L-659,699 {(E,E-íl-[3 7?-(hidroxi-metiI)-4’- 10 oxo-2'R-oxetanil]-3,5,7R-trimetil-2,4-undekadiénsav}; szkvalén-szintézis inhibitorok, például szkvalesztatin 1; valamint szkvalén-epoxidáz inhibitorok, például NB-598 f(£)-A-etil-7V-(6,6-dimetil-2-heptén-4-inil)-3-[[3,3 ’-di(5-tienil)]-metoxi]-benzil-amin- 15 hidroklorid}. Az előnyős HMG CoA reduktáz inhibitorok közé a lovasztatin, a pravasztatin és a simvasztatin tartozik.

A β-laktám koleszterinabszorpció inhibitorok közé tartoznak a WO 93/02048 számon közzétett nemzetkö- 20 zi szabadalmi bejelentésben ismertetett új (I) általános képletű vegyületek, valamint az ugyanebben a nemzetközi szabadalmi bejelentésben (II) általános képletű vegyietekként azonosított származékok; ezeket a vegyületeket a koleszterinszint csökkentésére alkalmazható 25 származékokként írták le. Az (I) és (Π) általános képletű vegyületek részletes ismertetését az alábbiakban adjuk meg.

Az (I) általános képletű vegyületekben vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóikban 30

A jelentése (c) általános képletű csoport, amelyben

R_b R₂ és R₃ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkoxi-, (1-6 szénatomos alkoxi)-(l-6 szénatomos alkil)-, (1-6 szénatomos alkoxi)-(l-6 szénatomos al- 35 koxi)-, (1-6 szénatomos alkoxi)-karbonil(1-6 szénatomos alkoxi)-, (1-6 szénatomos alkil)-(l-6 szénatomos alkándioil)-, allil-oxi-, fenoxi-, hidroxicsoport, meta-helyzetű halogénatom vagy -C(O)Rj₂ általános képletű csoport, 40 ahol

R₁₂ jelentése 1-6 szénatomos alkoxicsoport;

D jelentése B’-(CH₂)_q- általános képletű csoport, amelyben

B’ jelentése fenilcsoport, és 45 q értéke 3 vagy 4;

B’-O-(CH₂)₂- általános képletű csoport, amelyben

B’ jelentése 4-fluor-fenil- vagy 3-metoxi-fenilcsoport; 3-fenil-l-propenil-csoport; vagy 50

B’-CH₂-V- általános képletű csoport, amelyben B’ jelentése fenilcsoport; és V jelentése ciklopropiléncsoport;

R jelentése hidrogén- vagy fluoratom, 1-15 szénatomos alkil-, 1—15 szénatomos alkenil-, 1-15 szén- 55 atomos alkinilcsoport vagy B-(CH₂)_h- általános képletű csoport, amelyben h értéke 0,1,2 vagy 3; és B jelentése az előbbiekben meghatározott (c) általános képletű csoport; és 60

Rt jelentése (e) általános képletű csoport, amelyben n értéke 1; és

R₇ jelentése 1-6 szénatomos alkil-, 1-6 szénatomos alkoxicsoport, halogénatom, hidroxivagy trifluor-metoxi-csoport.

A (II) általános képletű vegyületekben vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóikban R₂₀ jelentése fenilcsoport, W-szubsztituált fenilcsoport, naftilcsoport, W-szubsztituált naftilcsoport, 1,3dioxa-ciklopentil-csoport, heteroarilcsoport, Wszubsztituált heteroarilcsoport, benzokondenzált heteroarilcsoport, W-szubsztituált benzokondenzált heteroarilcsoport, amelyben heteroarilcsoport jelentése a fentiekben meghatározott;

R₂i, R₂2 és R₂₃ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy R₂₀;

W jelentése 1-3 egymástól függetlenül kiválasztott szubsztituens a fentiekben meghatározott csoportból;

E, F és G jelentése egymástól függetlenül kémiai kötés;

3-6 szénatomos cikloalkiléncsoport; 1-10 szénatomos alkiléncsoport; 2-10 szénatomos alkeniléncsoport; 2-10 szénatomos alkiniléncsoport; egy, a fentiekben meghatározott alkilén-, alkenilén- vagy alkiniléncsoport, amelyet a következő szubsztituensek közül egymástól függetlenül kiválasztott egy vagy I több csoport szubsztituál: fenilcsoport, W-szubsztituált fenilcsoport, heteroarilcsoport és W-szubszti- j tuált heteroarilcsoport, amelyben W és a heteroaril- | csoport jelentése a fentiekben meghatározott; egy, a Γ fentiekben meghatározott alkilén-, alkenilén- vagy al- 1 kiniléncsoport, amelyet a következő szubsztituensek ΐ közül egymástól függetlenül kiválasztott egy vagy } több csoport megszakít: oxigén-, kénatom, szulfe- ?

nil-, szulfonilcsoport, -NRg általános képletű cső- fi port, karbonilcsoport, 3-6 szénatomos cikloalkilén- | csoport, W-szubsztituált feniléncsoport, heteroarilén- 1 csoport vagy W-szubsztituált heteroariléncsoport; vagy egy, a fentiekben meghatározott megszakított alkilén-, alkenilén- vagy alkiniléncsoport, amelyet a következő szubsztituensek közül egymástól függetlenül kiválasztott egy vagy több csoport szubsztituál: fenilcsoport, W-szubsztituált fenilcsoport, heteroarilcsoport és W-szubsztituált heteroarilcsoport; vagy

R₂₁-E és R₂₂-F egyike a következő csoportból kerül kiválasztásra: halogénatom, hidroxicsoport, rövid szénláncú alkoxicsoport, -OC(O)R₅, -NR₁₀Rn általános képletű csoport, merkaptocsoport vagy rövid szénláncú alkil-tio-csoport; és

R₅, R^ és R₈-R₁₄ jelentése a fentiekben meghatáro- ⁷ zott; l azzal a megkötéssel, hogy amennyiben G jelentése kémiai kötés, akkor ^23 jelentése hidrogénatomtól eltérő;

valamint azzal a megkötéssel, hogy amennyiben ^23 jelentése

W-szubsztituált fenilcsoport, akkor W jelenlétében j para-helyzetű halogénatomtól eltérő. í

Előnyösek az olyan (I) általános képletű vegyületek, J amelyekben R jelentése hidrogénatom. Az előnyös (I) ál- í talános képletű vegyületek egy másik csoportjába azok '

HU 221 724 Bl a származékok tartoznak, amelyekben D jelentése B’—(CH₂)_q— vagy B’-CH₂-V- általános képletű csoport, ahol B’ és V jelentése, valamint q értéke a fentiekben meghatározott. Az előnyös (I) általános képletű vegyületek egy harmadik csoportját azok a származékokai- 5 kotják, amelyek képletében R4 jelentése R₇ csoporttal szubsztituált fenilcsoport. Az (1) általános képletű vegyületek egy további előnyös csoportjába tartoznak az olyan vegyületek, amelyek képletében A jelentése -(CH₂)_p-X-B általános képletó csoport, ahol X és B je- 10 lentése, valamint p értéke a fentiekben meghatározott.

Különösen előnyösek az olyan (I) általános képletű vegyületek, amelyek képletében A jelentése -(CH₂)_p-X-B általános képletó csoport, ahol p értéke 0, és X jelentése kémiai kötés. Az (I) általános képlet- 15 ben R_t, R₂ és R₃ jelentése előnyösen hidrogénatom vagy meto-helyzetó fluoratom. Az olyan (I) általános képletó vegyületek, amelyek képletében Rj és R₃ mindegyikének jelentése hidrogénatom, és R₂ pára-helyzetű, még előnyösebbek. 20

Az (I) általános képletó vegyületekben R₇ jelentése előnyösen 1-6 szénatomos alkil-, 1-6 szénatomos alkoxicsoport, halogénatom vagy trifluor-metoxi-csoport. Még előnyösebbek az olyan (I) általános képletű vegyületek, amelyek képletében n értéke 1, és R₇ a 25 para-helyzetben van.

Az egyik előnyös β-laktám koleszterinabszorpció inhibitor a (3/?,4S)-l,4-bisz(4-metoxi-fenil)-3-(3-fenilpropil)-2-azetidinon [amely SCH 48461 jelzésű vegyületként is ismert], 30

A találmány szerinti kombinációknak a plazma-koleszterinszintek csökkentésére gyakorolt hatását a következő vizsgálati eljárások útján mutatjuk be. Ezekben az eljárásokban a β-laktám koleszterinabszorpció inhibitor a (37?,4Sj-l,4-bisz(4-metoxi-fenil)-3-(3-fenil-propil)-2-aze- 35 tidinon (a továbbiakban A. vegyület), míg a HMG CoA reduktáz inhibitor a lovasztatin és a pravasztatin [a pravasztatin-nátrium PRAVACHOL® márkanéven ismert].

1. kísérlet - Az A. vegyület és a lovasztatin kombinációjának hypocholesterinaemiás hatása 40 koleszterinnel táplált hörcsögben

Módszerek:

100 és 125 g közötti testtömegű hím aranyhörcsögöket (Charles River Labs, Wilmington, Massachusetts, Amerikai Egyesült Államok) a vizsgálat megkezdéséig 45

Wayne-féle rágcsálóeleséggel tápláltunk. A vizsgálat kezdetekor (1. nap) az állatokat csoportokra osztottuk (n=4-6/csoport), majd az állatokkal 0,5 tömeg% koleszterinnel (Research Diets Inc., New Brunswick, New

Jersey, Amerikai Egyesült Államok) kiegészített 5001.

számú Purina-féle eleséget etettünk. Az első naptól kezdve 7 napon keresztül napi egy alkalommal orális gyomorszonda alkalmazásával 0,2 ml kukoricaolajban 3 mg/kg

A. vegyületet és 10 mg/kg lovasztatint adtunk be az állatoknak. A 7. napon az állatokat dekapitáció útján leöltük, a vért etilén-diamin-tetraecetsavat (EDTA) tartalmazó csövekbe gyűjtöttük, majd plazmát állítottunk elő 4 °C hőmérsékleten kis sebességgel végzett centrifügálással. ~

A nem koplaltatott (nonfasted) plazma-koleszterinszinteket az Allain és munkatársai által kidolgozott koleszterin-oxidáz-módszemek [Allain et al., Clin. Chem.,

20,470-475 (1974)] egy módosított változata útján határoztuk meg; az ennek során alkalmazott reagensek kit (készlet) formájában a következő helyről szerezhetők be: Wako Pure Chemicals Industries, Ltd. (Oszaka, Japán). A teljes koleszterinre a szérum 10 μΐ-ét 1 ml olyan 0,15 M tris-pufferben (pH 7,0) vizsgáltuk, amely 0,1% p-klór-fenolt, 0,13 egység/ml koleszterin-oxidázt,

0,13 egység/ml koleszterin-észter-hidrolázt, 2,4 egység/ml peroxidázt és 0,015% 4-amino-antipirint tartalmazott. A vizsgálatokat 37 °C hőmérsékleten 10 percen í keresztül koleszterinstandardok mellett végeztük, és a ka- 1 pott vörös kínon pigment abszorbanciáját 505 nm hűl- j lámhosszon spektrofotometriásán határoztuk meg. t

Eredmények: T

A 7 napon keresztül 0,5% koleszterintartalmú eleség- | gél etetett hörcsögökben a plazma koleszterinmennyi- L sége megduplázódott. A plazma koleszterinnövekedése 1 elsősorban a VLDL és az LDL mennyiségének emelke- t désében nyilvánult meg [Schnitzer-Polokoff et al., |

Comp. Biochem. Physiol., 99A, 665-670 (1991)]. Az |

A. vegyület 3 mg/kg/nap mennyiségben történő beadása |

15%-kal csökkentette a plazma-koleszterinszinteket, míg a lovasztatinnak 10 mg/kg/nap dózis mellett semmiféle hatása nem volt (1. táblázat). Amennyiben az A. vegyületet és a lovasztatint kombinációban adtuk be, 31%os plazmakoleszterinszint-csökkenést tapasztaltunk, ami szignifikánsan nagyobb, mint a két komponens különkülön történő alkalmazásakor bármelyik esetben is elérhető változás (1. táblázat).

1. táblázat

Csoport	Dózis (mg/kg/nap)	n(darab)	Hörcsög-piazmakoleszterin (mg/dl)
Kontroll	-	6	227±6
A. vegyület	3	4	192±6*
Lovasztatin	10	4	223±14
A. vegyület+Lovasztatin	3 10	4	156±11·Μ>

Az értékek jelentése: átlag ± középérték szórása. 1 p<0,05 a kontrollcsoporthoz viszonyítva.

^b: p<0,05 önmagában az A. vegyülethez, illetve önmagában a lovasztatinhoz viszonyítva. '

HU 221 724 Bl

2. kísérlet - Az A. vegyület és a lovasztatin kombinációjának hypocholesterinaemiás hatása koleszterinnel táplált nyulakban

Módszerek:

2,4 és 2,6 kg közötti testtömegű hím új-zélandi fehér nyulakat egy héten keresztül 1% koleszterint és 6% földimogyoró-olajat tartalmazó eleséggel etettünk.

A ptazma-koleszterinszintben az átlagértéktől egynél nagyobb standard deviációt mutató hiper- és hiporeaktív nyulakat kizártuk a vizsgálatból, majd az állatokat négy olyan csoportba osztottuk, amely csoportok összességében azonos szérum-koleszterinszinttel rendelkeztek (n=8/csoport). Az állatokat ezt kővetően olyan eleséggel etettük, amely 0,5% koleszterint és 6% földimogyoró-olajat tartalmazott 1.) önmagában, 2.) 0,03%

A. vegyülettel, 3.) 0,015% lovasztatinnal, vagy 4.) 0,03% A. vegyülettel és 0,015% lovasztatinnal. Négy héten keresztül hetenként nem koptaltatott szérummintákat nyertünk, és a szérum-koleszterinszinteket az 1. kísérletben ismertetett eljárásnak megfelelően határoztuk meg.

Eredmények:

Az egyhetes, 1% koleszterin/6% földimogyoró-olaj diétával végzett kisérlet hozzávetőleg 1000 mg/dl értékű átlagos szérum-koleszterinszinteket eredményezett 25 (2. táblázat). A négyhetes vizsgálati időszak alatt a nyíllak négy csoportjában hasonló mértékű táplálékfogyasztást és súlygyarapodást figyeltünk meg. Az A. vegyületet 0,03 tömeg% mennyiségben tartalmazó táplálékkal bevitt dózis számításaink szerint 14 mg/kfinap dózisnak felelt meg, ugyanakkor a lovasztatin esetén a táplá5 lókban alkalmazott 0,015 tömeg% koncentráció 7 mg/kg/nap dózist jelentett. A kontrollcsoportban a szérumkoleszterinszint folyamatosan nőtt, a kezdeti időpontban mért 1015 mg/dl értékről a négyhetes időtartam végére 1358 mg/dl értékre emelkedett (2. táblázat). 10 A 0. héthez viszonyítva az A. vegyület önmagában 29%-kal csökkentette a szérumkoleszterint a 4. hét végére, míg a lovasztatin önmagában a négyhetes periódus végére 33%-os csökkenést eredményezett, azonban ezek a csökkenések az ANOVA szerint statisztikailag 15 nem voltak szignifikánsak. Az A. vegyület és a lovasztatin kombinációja valamennyi időpontban a plazma-koleszterinszintek statisztikailag szignifikáns csökkenését eredményezte; a 0. héthez képest a 4. hét végére ennek a csökkenésnek az értéke 61% volt (2. táb20 lázat). A szérum-koleszterinszintekben bekövetkező relatív csökkenések még nagyobbak voltak abban az esetben, amikor a 4. heti értékeket a kontrollcsoporthoz hasonlítottuk; ebben az esetben az A. vegyület önmagában 47%-os csökkenést, a lovasztatin önmagában 51%os csökkenést okozott, ugyanakkor az A. vegyülettel és a lovasztatinnal végzett kombinált terápia 72%-os csökkenést eredményezett.

2. táblázat

	Nyúl-szcrumkoleszterinszintek (mg/dl)
Csoport	0. hét	l.hét	2. hét	3. hét	4. hét
Kontroll	1015 ±90	1138 ±170	1316 ±164	1437 ±211	1358 ±193
A. vegyület (0,03% a táplálékban)	1005 ±89	781 ±122	879· ±109	808* ±121	713* ±112
Lovasztatin (0,015% a táplálékban)	993 ±95	895 ±150	839* ±80	767« ±87	667* ±81
A. vegyület+Lovasztatin	986	552*»	506*^b	427*-^b	382*-^b
(0,03%+0,015% a táplálékban)	±93	±76	±58	±62	±66

Az értékek jelentése: átlag±középérték szórása (8 nyúl/csoport).

*: p<0,05 a kontrollcsoporthoz viszonyítva.

^b: p<0,05 a 0. heti értékhez viszonyítva ANOVA szerint, valamennyi kezelés esetén.

3. kísérlet - Lovasztatinnal kombinált A. vegyület hypocholesterinaemiás hatása koleszterin- 50 mentes táplálékkal etetett Khesus-majmokban

Módszerek:

4,4 kg és 8,5 kg közötti testtömegű Rhesusmajmokat (17 hím, 3 nőstény) két héten keresztül 5% 55 kukoricaolajat tartalmazó, zsírmentes majomeledellel (5038-7. számú Purina) tápláltunk. A majmokat négy csoportba osztottuk oly módon, hogy az egyes csoportok átlagban azonos szérum-koleszterinszinttel és testtömeggel rendelkeztek (n=5/csoport). Az állatokat ezt 60 követően olyan zsírmentes eledellel etettük, amely 5% kukoricaolajat tartalmazott 1.) önmagában, 2.) ‘ mg/kg/nap dózisú A. vegyülettel, 3.) 20 mg/kg/nap dó- [ zisú lovasztatinnal, vagy 4.) 3 mg/kg/nap dózisú A. vegyülettel és 20 mg/kg/nap dózisú lovasztatinnal. Három héten keresztül hetenként koptaltatott szérummintákat nyertünk, és a szérum-koleszterinszinteket az 1. kísérletben ismertetett eljárásnak megfelelően határoztuk meg. i

A statisztikai eltéréseket a szérum-koleszterinszintekben fellépő változásokon végzett ANOVA és Dunnett t I teszt alkalmazásával határoztuk meg. A p<0,05 valószí- í nűségi szintet tekintettük szignifikánsnak. ⁷

HU 221 724 Bl

Eredmények:

A kontrollmajmokat 5% kukoricaolajat tartalmazó, zsírmentes eledellel tápláltuk oly módon, hogy a háromhetes vizsgálati időszak ideje alatt az állatokban állandó szérum-koleszterinszintet tartottunk fenn (3. táblá- 5 zat). Egyedileg az A. vegyület 3 mg/kg/nap dózisa és a lovasztatin 20 mg/kg/nap dózisa a szérum-koleszterinszint enyhe csökkenését okozta a 3. hét végére, azonban ezek a változások a kontrollcsoport 3. heti értékeihez viszonyítva statisztikailag nem voltak szignifikánsak. Az A. vegyület és a lovasztatin kombinációja valamennyi időpontban szignifikánsan nagyobb plazmakoleszterinszint-csökkenést eredményezett, mint bármely komponens önmagában történő alkalmazása; a kombinációval a 3. hét végére 25%-os csökkenést lehetett elérni (3. táblázat).

3. táblázat

	Rhesus-majom-szérumkoleszterinszint (mg/dl)
Csoport	0. hét	l.hét	2. hét	3. hét
Kontroll	131 ±1	129 ±7	125 ±8	132 ±8
A. vegyület (3 mg/kg/nap)	140 ±10	122 ±11	117 ±7	125 ±9
Lovasztatin (20 mg/kg/nap)	139 ±7	127 ±6	117 ±5	120 ±6
A. vegyület+Lovasztatin	136	108*	101*	102*
(3+20 mg/kg/nap)	±8	±7	±7	±8

Az éltékek jelentése: átlag±középérték szórása (5 majom/csoport). *: p<0,05 a kontrollcsoporthoz viszonyítva.

4. kísérlet - Lovasztatinnal kombinált A. vegyület hypocholesterinaemiás hatása kutyaele- 30 dellel etetett kutyákban

Módszerek:

Tizenöt hím vadászkopót (beagle) három csoportba osztottunk oly módon, hogy az egyes csoportok átlagban azonos szérum-koleszterinszinttel és testtömeggel 35 rendelkeztek (n=5/csoport). Az állatokat ezt követően hét napon keresztül olyan kutyaeledellel (5006. számú Purina Dog Chow) etettük, amely maltodextrint és 1.) 0,0234% A. vegyületet, vagy 2.) 0,0234% lovasztatint, vagy 3.) 0,0234% A. vegyület és 0,0234% lovasztatin 40 kombinációt tartalmazott. A 0., 3. és 7. napon szérummintákat nyertünk, és a teljes szénun-koleszterinszinteket az 1. kísérletben ismertetett eljárásnak megfelelően határoztuk meg. A statisztikai eltéréseket ANOVA alkalmazásával határoztuk meg. A p<0,05 valószínűségi jszintet tekintettük szignifikánsnak. f

Eredmények: r

A csak 0,0234% (5 mg/kg/nap) A. vegyületet, illet- Γ ve csak 0,0234% (5 mg/kg/nap) lovasztatint tartalmazó kutyaeledellel táplált kutyák esetén a szérum-ko- t leszterinszint a 3. napon vagy a 7. napon nem tért el a f

0. napon mért alapszinttől. Az 5 mg/kg/nap dózisú A. I vegyület és az 5 mg/kg/nap dózisú lovasztatin kombiná- r ciója a 0. napon mért alapértékhez képest a szérum-koleszterinszintek 33%-os csökkenését eredményezte (4. táblázat). A kombinált kezelést kapott csoportban a szérum-koleszterinszintek a 7. napon szignifikánsan kisebbek voltak, mint akár az A. vegyülettel önmagában, akár a lovasztatinnal egyedileg kezelt csoportban (4. táblázat).

4. táblázat

	Kutya-szérumkolesztcrinszint (mg/dl)
Csoport	0. nap	3. nap	7. nap
A. vegyület (5 mg/kg/nap)	114 ±5	106 ±13	109 ±10
Lovasztatin (5 mg/kg/nap)	107 ±10	107 ±8	114 ±9
A. vegyület+Lovasztatin (mindegyik	109	89	77+»
5 mg/kg/nap)	±8	±4	±3

Az értékek jelentése: átlag+közcpértck szórása (5 kutya/csoport).

·: p<0,05 a 0. naphoz viszonyítva.

^b: p<0,05 az A. vegyülettel önmagában vagy a lovasztatinnal önmagában végzett kezelés 7. napi értékeihez viszonyítva.

HU 221 724 Bl

5. kísérlet- Pravasztatinnal (PRAVACHOL®) kombinált A. vegyület hypocholesterinaemiás hatása kutyaeledellel etetett kutyákban

Módszerek: 5

A 4. kísérletben leírtakhoz hasonlóan, de 14 napig etettük a kutyákat 1.) A. vegyületet (amely SCH 48461 néven is ismert) vagy 2.) pravasztatint (PRAVACHOL®) vagy 3.) A. vegyület és pravasztatin (PRAVACHOL®) kombinációját tartalmazó kutyaeledellel, a 10 kontrollállatok pedig csak kutyaeledelt kaptak.

Eredmények:

A kísérlet eredményeit az 1. ábrán szereplő diagramon ábrázoljuk. Az ábrázolt mérési eredményekből az látszik, hogy az A. vegyület (SCH 48461) önmagában 15 a 3., 6., 11. és 14. napon nem csökkentette lényegesen a plazma-koleszterinszintet a kutyákban, a pravasztatin (PRAVACHOL®) önmagában is jelentősen csökkentett plazma-koleszterinszintet produkált a kontrolihoz képest, a két hatóanyag kombinációja mind az A. 20 vegyülethez viszonyítva, mind a pravasztatinhoz lényegesen csökkentett plazma-koleszterinszintet biztosított, különösen a 11. és 14. napon. A kombináció a két vegyület külön-külön mért hatásának összegénél lényegesen jelentősebb csökkenést eredményez, amiből 25 megállapítható, hogy alkalmazásukkor szinergikus hatás lép fel, ami az egyes vegyületek külön-külön végzett hatásának vizsgálatakor nem volt előre feltételezhető.

A plazma-koleszterinszint csökkentése a talál- 30 mány szerinti gyógyszerkészítmény két komponensének beadásával élhető el. A komponenseket beadhatjuk egyidejűleg vagy egymást követően, illetve beadhatjuk egyetlen olyan gyógyszerkészítmény formájában is, amely egy gyógyszerészetileg elfogadható hor- 35 dozóban egy koleszterinbioszintézis inhibitort és egy β-laktám koleszterinabszorpció inhibitort tartalmaz.

A kombináció komponenseit egyedileg vagy együttesen beadhatjuk bármely szokásos orális vagy parenteralis dózisformában, amilyenek például a kapszulák, 40 tabletták, porok, ostyák, szuszpenziók vagy az oldatok. A készítményeket szokásos gyógyszerészeti vivőanyagok és adalékok felhasználásával, valamint szokásos módszerek alkalmazásával állíthatjuk elő. Ezek közé a gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyagok 45 és adalékok közé tartoznak - egyebek mellett - például a nem toxikus, kompatibilis töltőanyagok, kötőanyagok, szétesést elősegítő anyagok, pufferek, tartósítószerek, antioxidánsok, kenőanyagok (lubrikánsok), ízesítőszerek, sűrítőszerek, színezőanyagok, 50 emulgeálószerek stb.

Jellegzetes β-laktám koleszterinabszoipció inhibitort tartalmazó készítményeket ismertetnek a fentiekben már hivatkozott WO 93/02048 számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentésben. A koleszterin- 55 bioszintézis inhibitort tartalmazó készítmények jól ismertek a szakterületen. Amennyiben a két hatóanyagot egyetlen készítmény formájában kívánjuk beadni, az előbbiekben említett nemzetközi bejelentésben ismertetett dózisformákat az ezen a területen jártas szak- 60 ember gond nélkül képes megfelelőképpen módosítani.

A plazma-koleszterinszintek csökkentésére szolgáló találmány szerinti kombinációkban lévő vegyületek napi dózisai a következők: a koleszterinbioszintézis inhibitorok esetén a jellegzetes dózis az emlős egy testtömegkilogrammjára vonatkoztatva naponként 0,1-80 mg, amely dózist egyetlen adagban, illetve több részletben, szokásosan naponként egy vagy két alkalommal adunk be; a β-laktám koleszterinabszorpció inhibitor esetén a jellegzetes dózis az emlős egy testtömegkilogrammjára vonatkoztatva naponként _

0,1-10 mg, amely dózist egyetlen adagban, illetve több részletben adunk be. A beadandó kombináció bármely komponensének pontos dózisát a kezelőorvos határozza meg; ennek konkrét értékét befolyásolja - egyebek mellett - például a beadandó vegyület hatékonysága, továbbá a beteg kora, testtömege, állapota, valamint a kezelésre adott válaszreakciója.

Az emlősökben lévő plazma-koleszterinszintek csökkentése érdekében az ilyen kezelésre szoruló betegnek a következő dózistartományokban adhatjuk be a találmány szerinti kombinációban lévő vegyületeket: a HMG CoA reduktáz inhibitorok esetén adagonként körülbelül 10 mg és körülbelül 40 mg közötti mennyiségű hatóanyagot alkalmazunk napi egy-két alkalommal, és igy a napi teljes dózis körülbelül 10 mg és körülbelül 80 mg közötti értékű; az egyéb koleszterinbioszihtézis T inhibitorok esetén adagonként körülbelül 1 mg é&törül- 4belül 1000 mg közötti mennyiségű hatóanyagol»<aikal- * mázunk napi egy-két alkalommal, és így a napi teljes f dózis körülbelül 1 mg és körülbelül 2 g közöttrértékű. . ;

A β-laktám koleszterinabszorpció inhibitort adagon- ⁵ _aként körülbelül 1 mg és körülbelül 1000 mg'közötti L mennyiségben, napi 1 -4 alkalommal adhatjuk be. E

Amennyiben egy kombináció komponenseit egymástól f elkülönítve adjuk be, az egyes komponensek naponta T beadott dózisainak száma nem szükségszerűen ugyanaz, például abban az esetben, ahol az egyik komponens hatástartama hosszabb idejű, ezt a komponenst elegendő kisebb gyakorisággal alkalmazni.

Mivel a jelen találmány a plazma-koleszterinszintek oly módon történő csökkentésére vonatkozik, amelynek során egymástól elkülönítetten beadható hatóanyagok kombinációjával végzett kezelést alkalmazunk, a találmány kiterjed a különálló gyógyszerkészítmények készlet - kit - formájában történő kombinálására is. Ebben az értelemben a készlet két különálló egység, egy koleszterinbioszintézis inhibitor gyógyszerkészítmény és egy β-laktám koleszterinabszorpció inhibitor gyógyszerkészítmény kombinációját jelenti. A készlet előnyösen tartalmazza az elkülönített komponensek beadására vonatkozó utasításokat. Az ilyen készletforma különösen előnyös azokban az esetekben, ahol a különálló komponenseket eltérő (például orális és parenterális) dózisformákban, illetve eltérő dózisintervallumokban kell beadni. <

A találmány szerinti gyógyszerkészítmény és kit a gyógyszerészeti technológiában önmagában ismert r módszerek alkalmazásával előállíthatok.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Szinergikus hatású gyógyszerkészítmény atherosclerosis kezelésére vagy megelőzésére vagy a plazmakoleszterinszintek csökkentésére, amely egy (I) általános képletű β-laktám koleszterinabszorpció inhibitort - amely képletben

A jelentése (c) általános képletű csoport, amelyben

R_b R₂ és R₃ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkoxi-, (1-6 szénatomos alkoxiXl-6 szénatomos alkil}-, (1-6 szénatomos alkoxi)-(l-6 szénatomos alkoxi)-, (1-6 szénatomos alkoxi)-karbonil-(l-6 szénatomos alkoxi)-, (1-6 szénatomos alkil)-(l — 6 szénatomos alkándioil)-, allil-oxi-, fenoxi-, hidroxicsoport, meta-helyzetű halogénatom vagy -C(O)R₁₂általános képletű csoport, ahol

R₁₂ jelentése 1-6 szénatomos alkoxicsoport;

D jelentése B’-(CH₂)_q- általános képletű csoport, amelyben

B’ jelentése fenilcsoport, és q értéke 3 vagy 4;

B’-O-(€H₂)₂- általános képletű csoport, amelyben

B’ jelentése 4-fluor-fenil- vagy 3-metoxi-fenilcsoport;

3-fenil-l-propenil-csoport; vagy B’-CH₂-V- általános képletű csoport, amelyben

B’ jelentése fenilcsoport; és V jelentése ciklopropiléncsoport;

R jelentése hidrogén- vagy fluoratom, 1-15 szénatomos alkil-, 1-15 szénatomos alkenil-, 1-15 szénatomos alkinilcsoport vagy B-ÍCH^- általános képletű csoport, amelyben h értéke 0,1,2 vagy 3; és B jelentése az előbbiekben meghatározott (c) általános képletű csoport; és

R4 jelentése (e) általános képletű csoport, amelyben n értékelés

R₇ jelentése 1-6 szénatomos alkil-, 1-6 szénatomos alkoxicsoport, halogénatom, hidroxivagy trifluor-metoxi-csoport vagy gyógyszerészetileg elfogadható sóját és egy koleszterinbioszintézis inhibitort tartalmaz egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval kombinálva.
2. Az 1. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely egy, a HMG CoA reduktáz inhibitorok, szkvalén-szintézis inhibitorok és szkvalén-epoxidáz inhibitorok közül kiválasztott koleszterinhioszintézis inhibitort tartalmaz.
3. A 2. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely egy, a lovasztatin, pravasztatin, fluvasztatin, simvasztatin, atorvasztatin (CI-981), L-659,699, szkvalesztatin 1 és NB-598 közül kiválasztott koleszterinbioszintézis inhibitort tartalmaz.
4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény, amely olyan (I) általános képletű β-laktám koleszterinabszorpció inhibitort tartalmaz, amelynek képletében

R jelentése hidrogénatom; és

A, D és lejelentése az 1. igénypontban megadott.
5. A 4. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely β-laktám koleszterinabszorpció inhibitorként (35,45)-1,4-bisz(4-metoxi-fenil)-3-(3-fenil-propil)-2azetidinont tartalmaz.
6. Eljárás atherosclerosis kezelésére vagy megelőzésére vagy a plazma-koleszterinszintek csökkentésére szolgáló, hatóanyagként egy β-laktám koleszterinabszorpció inhibitort és egy koleszterinhioszintézis inhibitort tartalmazó szinergikus hatású gyógyszerkészítmény előállitására, azzal jellemezve, hogy egy 1. igénypont szerinti (I) általános képletű β-laktám koleszterinabszorpció inhibitort és egy koleszterinhioszintézis inhibitort egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval keverünk, és a keveréket gyógyszerkészítménnyé kikészítjük.
7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy egy, a 2. vagy 3. igénypontban meghatározottko- «+ leszterinbioszintézis inhibitort és egy 1., 4. vagy· 5. fe igénypontok bármelyikében meghatározott β-laktátritko- fe leszterinabszorpció inhibitort keverünk össze egy gyógy- |= szerészetileg elfogadható hordozóval. \
8. Kombinációban atherosclerosis kezelésérevagy .

megelőzésére vagy plazma-koleszterinszintek csökken- í tésére szolgáló gyógyszerhatóanyagokat külön tároló- | edényekben egyedi adagokban tartalmazó készlet (kit), t amely egyik tárolóedényben egy koleszterinbioszinté- *zis inhibitor hatásos mennyiségét, egy másik tárolóedényben pedig egy 1. igénypont szerinti (I) általános képletű β-laktám koleszterinabszorpció inhibitor hatásos mennyiségét tartalmazza egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóban.
9. A 8. igénypont szerinti készlet, amely egyik tárolóedényben egy 2. vagy 3. igénypontban meghatározott koleszterinhioszintézis inhibitor hatásos mennyiségét, egy másik tárolóedényben pedig egy 1., 4. vagy 5. igénypontok bármelyikében meghatározott β-laktám koleszterinabszorpció inhibitor hatásos mennyiségét tartalmazza egy gyógyszerészetileg elfogadható hordozóban.