HU193373B - Process for preparing cyclic 9'-thiapeptide-ergot alkaloids - Google Patents
Process for preparing cyclic 9'-thiapeptide-ergot alkaloids Download PDFInfo
- Publication number
- HU193373B HU193373B HU851921A HU192185A HU193373B HU 193373 B HU193373 B HU 193373B HU 851921 A HU851921 A HU 851921A HU 192185 A HU192185 A HU 192185A HU 193373 B HU193373 B HU 193373B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- culture
- compounds
- thia
- medium
- ergotamine
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
- C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D513/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
- C07D513/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains three hetero rings
- C07D513/14—Ortho-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
- C07D519/02—Ergot alkaloids of the cyclic peptide type
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Neurology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás az (I) általános képletü, ciklusos 9’-tiapeptid - ergotalkaloidoknak szabad bázis formájában vagy savaddíciós sóikként való előállítására. Az (I) általános képletben
R, metilcsoportot és R2 izobutil- vagy benzilcsoportot jelent, vagy
R, etilcsoportot és R2 benzilcsoportot jelent, vagy
Rt izopropilcsoportot és R2 izopropil-, szék. butil-, izobutil- vagy benzilcsoportot jelent.
Az (I) általános képietű vegyületek két izomervegyület, úgy mint a 8R és a 8S konfigurációjú vegyület formájában fordulnak elő. Előnyösek a 8R konfigurációjú (1) általános képletü vegyületek.
A találmány szerinti módon úgy nyerjük az (I) általános képietű vegyületeket és savaddíciós sóikat, hogy a megfelelő 9’-metilénvegyületet termelő törzs folyékony táptalajú tenyészetéhez L-tiazolidin-4-karbonsavat vagy ennek a savnak a sóját adjuk, és az így kapott vegyületeket kívánt esetben savaddíciós sóikká alakítjuk át.
A találmány szerinti eljárást a következőképp hajthatjuk végre:
Az (1) általános képietű vegyületek 9’-metilénszármazékait termelő törzsekként a Claviceps purpurea törzseket használhatjuk, valamint olyanokat, amelyeket a Claviceps purpurea kiindulási törzsből besugárzással vagy mutagén anyagokkal való kezeléssel végzett mutációval vagy szelektálással nyerhetünk.
A 9’-tia-ergotamin és a 9’-tia-ergotaminin előállítására ergotamin/ergotaminint termelő törzsként például előnyös a Claviceps purpurea NRRL 12043 jelű mutánsát alkalmaznunk. Ebből a törzsből egy tenyészetet az United States Department of Agriculture-nél //Northern Régiónál Research Center/ Peoria, Illinois állam, Amerikai Egyesült Államok/ NRRL 12043 számon, 1979. szeptember 20-án letétbe helyeztünk.
A 9’-tia-ergokrisztin és a 9’-tia-ergokrisztinin előállítására előnyös ergokrisztin/ergokrisztinint termelő törzsként például a Claviceps purpurea NRRL 12044 jelű mutánsát alkalmaznunk. Ebből a törzsből egy tenyészetet a fenti helyen, NRRL 12044 számon, 1979. szeptember 20-án letétbe helyeztünk.
A többi (I) általános képietű vegyület előállítására használható törzsek ismertek, és a nyilvánosság rendelkezésére állnak. Az NRRL 12043 és 12044 jelű törzsek fermentációs nyerése és jellemzőik
a./ Az NRRL 12043 jelű törzs jellemzői
A kiindulási gombatörzset Bromus im Wallisban (Svájc) talált ergotamint tartalmazó szklerociumból különítettük el. Ultraibolya sugárzást és vegyszereket felhasználó több mutagén kezelés után nyertük a találmány szerint alkalmazott NRRL 12043 jelű törzset, amit a következőképp jellemezhetünk:
Az NRRL 12043 jelű törzs kis micéliumdarabkáját agarlemez közepére oltjuk, a táptalaj összetétele a következőkben megadott: 60 g szacharóz, 10 g aszparagin, 0,5 g Casamino-savak (Difco), 0,25 g kálium-dihidrogén-foszfát, 0,25 g magnézium-szulíát-heptahidrát, 0,125 g kálium-klorid, 16 mg vas-szulfát-heptahidrát, 10 mg cink-szulfát-heptahidrát, 15 g agar és desztillált víz ad 1 liter. A pH-t 25%-os ammóniaoldattal 6,0-ra állítjuk. A táptalajt 20 percig 120°C-on sterilizáljuk. 24°C-os hőmérsékleten, 7 nap múlva a tenyészet mintegy 3 cm, 14 nap múlva körülbelül 5 cm és 20 nap múlva körülbelül 8 cm átmérőjű. A tenyészet kerek és enyhén begyürődött, a széle diffúz. A tenyészet színe a központban piszkos ibolya, a szélén piszkos szürke. A 20 napos tenyészet emsénként körülbelül százmillió csírát tartalmaz. A csírák oválisak, méretük 6—12 x 4—7 μ.
b./ Az NRRL 12044 jelű törzs jellemzői
A kiindulási gombatörzset Roggenben, Észak-Amerikában talált ergokrisztint tartalmazó szklerociumból különítettük el. Ultraibolya sugárzást és vegyszereket felhasználó több mutagén kezelés után nyertük a találmány szerint alkalmazott NRRL 12044 jelű törzset, amit a következőképp jellemezhetünk:
Az NRRL 12044 jelű törzs kis micéliumdarabkáját agarlemez közepére oltjuk, a táptalaj összetétele a következőkben megadott: 70 g malátaextraktum (Wander), 30 g burgonya (Stocki, Knorr), 15 g agar és desztillált víz ad 1 liter. A pH érték 5,3—5,7. A táptalajt 20 percig 120°C-on sterilizáljuk. 24°C-os hőmérsékleten, 7 nap múlva a tenyészet mintegy 2 cm, 14 nap múlva körülbelül 4 cm és 20 nap múlva körülbelül 5 cm átmérőjű.
A micélium sekélyen lekerekített; fehér, a légtérbe nyúló vattaszerű hifafonadékkal van befedve, a központban mintegy 1 cm átmérőjű kráterformájú kidudorodással. Ebből sugárirányú ráncok indulnak ki. Az agaron tenyésztett micélium ibolya színű. A tenyészetben erősebb és gyengébb elszíneződésű koncentrikus gyűrűk vannak. A tenyészet széle diffúz. A 20 napos tenyészet emsénként körülbelül százmillió csírát tartalmaz. Méreteikben erősen szórnak (5—12 x 3 x 7 μ); többnyire azonban 5—6 x 3 μ méretűek. A micéliumban nincs alkaloida.
Szaporítás és az oltóanyag előállítása a./ NRRL 12043
Az NRRL 12043 törzs szaporítását és az oltóanyag előállítását úgy végezhetjük el, hogy a fent leírt tenyészet csíráit steril vízben felszuszpendáljuk, és ezzel a ferdecsöves agart beoltjuk, a táptalaj összetétele: 70 g malátaextraktum (Wander), 30 g burgonya (Stocki, Knorr), 15 g agar és desztillált víz ad 1 liter. A pH érték 5,3—5,7. A táptalajt 20 percig 120°C-on sterilizáljuk. 14 nap múlva egy ilyen ferdecsöves agartenyészet körülbelül egymilliárd csírát tartalmaz (12 ml táptalaj, 18 mm átmérőjű és 20 cm hosszú kémcsőben ékszerűen kialakulva). Egy ilyen ferdecsöves agartenyészetből a csírákat steril vízben felszuszpendáljuk úgy, hogy a szuszpenzió egymillió — tízmillió csíra/ml koncentrációjú legyen. Az előbbi táptalajú ferdecsöves agarokat az így kapott szuszpenzió 0,5—0,5 ml-ével egyenletesen beoltjuk. Ezeket a tenyészeteket 24°C-on 14 napon át inkubáljuk. Ezután a tenyészeteket —40°C-on tároljuk.
b./ NRRL 12044
Az NRRL 12044 jelű törzs szaporítása és ebből oltóanyag előállítása úgy történhet, hogy a fent leírt tenyészetből a csírákat steril vízben felszuszpendáljuk, és a fent leírt táptalajú ferdecsöves agarokat ezzel beoltjuk. 18 nap múlva egy ilyen ferdecsöves agartenyészet körülbelül egy — két milliárd csírát tartalmaz (12 ml táptalaj, 18 mm átmérőjű és 20 cm hosszú kémcsőben ékszerűen kialakulva) . Egy ilyen ferdecsöves agartenyészetből a csírákat steril vízben felszuszpendáljuk úgy, hogy a szuszpenzió egymillió — tíz millió csíra/ml koncentrációjú legyen. Az előbbi táptalajú ferdecsöves agarokat az így kapott szuszpenzió 0,5—0,5 ml-ével egyenletesen beoltjuk. Ezeket a tenyészeteket 24°C-on 14 napon át inkubáljuk. Ezután a tenyészeteket —40°C-on tároljuk.
Előtenyészetek
A találmány szerinti eljárás kivitelezésénél előnyösnek bizonyult a csírákat előbb előfokozat/ok/on át elszaporítani, mielőtt ezekkel a termőtáptalajt beoltanánk. Először is olyan táptalajt kell választani, ami a jó szaporodási képességet és a gyors micéliumnövekedést biztosítja. Az ilyen táptalaj a következőket tartalmazza: szénforrást, bőséges mennyiségben, mono- vagy diszacharid formájában, adott esetben polialkoholokkal való kombinációban, nitrogénforrást aminosav vagy ammóniumsó formájában, továbbá ásványi sókat, nyomelemeket és növényi magvakból nyert bioszanyagokat. Előnyös a pH-t 5 és 7 közé beállítani. Az első lépésben a táptalajt a csírákkal bőségesen beoltjuk, és rázógépen vagy különböző méretű fermentorokban 22—26°C-on, 4—7 napig inkubáljuk. így sűrű tenyészet keletkezik a laza, vattaszerű,
2—3 mm átmérőjű, nem pigmentált micéliumpelyhekből, amik 3—6 μ átmérőjű, hosszú hifafonalakból állnak.
Főtenyészetek
Az egy vagy adott esetben több előfokozatban kapott tenyészet egy részével beoltjuk a termőtáptalajt, ami előnyösen olyan összetételű, hogy rövid idő alatt nagy micéliumtömeg szaporodik el benne. A legjobb és legolcsóbb szénforrásnak a szacharóz bizonyult, nitrogénforrásnak az ammóniumsók, így az ammónium-oxalát, -citrát, -szukcinát és a -formiát. Ezenkívül ásványi sóknak és nyomelemként vasnak és cinknek is kell lennie a táptalajban. A tenyésztést vagy Erlen4 meyer lombikban, vagy különböző nagyságú fermentorokban hajtjuk végre. Fontos a jó levegőztetés. Az optimális hőmérséklet 24°C.
Az alkaloidatermelés kezdetén, normálisan a 3.—6. napon a főtenyészethez adunk literenként 1—5 g L-tiazolidin-4-karbonsavat, vagy ennek a savnak a sóját, így például a kálium-, nátrium- vagy az ammónium sóját. Ezután a tenyészeteket további 6—12 napon át inkubáljuk. A 9.—18. nap folyamán sűrű tenyészet képződik, ami finom pelyhek mellett főleg 0,5—3 mm hosszú és 0,1 — 1 mm vastag hengeres kompakt micéliumrészekből áll. A micéliumdarabok szerkezetükben plektenchimatikus szövet képét mutatják, gömb vagy poliéderes — alacsony hengeres alakú, erős falú, sok vakuolummal ellátott sejtekből, amik 6—12 x 6—14 μ, főleg 8 x 9 μ méretűek, és amik 100 μ-ig terjedő hosszúságú hifafonalakkal vannak átszőve. A sejtek barnásán pigmentáltak. A tenyészet szurlete szintén barnás színű.
Amikor a micéliumtömeg súlya és alkaloidtartalma már csökken, az alkaloidot szerves oldószerekkel nyerhetjük ki az egész tenyészetből, önmagában ismert extrakciós eljárásokkal, vagy a micéliumot szűréssel vagy centrifugálással elválasztjuk a szűrlettől, és a két részt külön extraháljuk. A peptidalkaloidok főrésze a micéliumokban halmozódik fel.
Az (I) általános képletű vegyületek elkülönítése
Ezeket a kéntartalmú ergotalkaloidokat a tenyészetből, a tenyészet szűrletéből vagy a micéliumtömegből különíthetjük el ismert extrakciós eljárások segítségével. A vegyületek tisztítása a szokásos tisztítást fokozatokon keresztül történik, így például aktív oldószerekből inaktív oldószerekkel való kicsapással, vagy nehezen oldható sókká való átalakítással. Különösen alkalmasak az ismert tisztítási eljárás'ok, így például az alumínium-oxidon, kieselgélen, Sephadex LH-20-οη stb. való kromatográfiás eljárások, a mindenkor megfelelő oldószerrendszerekben. Miként az ismert ergotalkaloidok, úgy ezek az új 9’-tiapeptid-ergotalka!oidok is érzékenyek a napfényre. Szabad formájukban és poláros oldószerekkel készült oldataikban egy bizonyos egyensúlyi helyzetig, a mindig meglévő másik formává izomerizálódnak. Sók, így például a metánszulfonsavval képzett sók formájában a 9’-tia-ergotamin és a 9’-tia-ergokrisztin hosszabb időn át stabil.
A találmány szerinti új vegyületek a szak irodalomban eddig még ismeretlenek. Ezeknek a vegyületeknek állatkísérletekben érdekes farmakológiai tulajdonságaik vannak, és ezért gyógyszerként alkalmazhatók.
Ezeknek a vegyületeknek különösen a dopamínreceptorokat stimuláló hatása van. A dopaminerg tulajdonságot 0,5—100 mg/kg dózisban olyan patkányokon állapítottuk meg, amelyeknél a íeketeállományba (Substantia 3
-3193373 nigra) adott 6-hidroxi-dopamin injekció a nigromeostriatalis dopaminpálya féloldali sérülését okozta (a módszert lásd U. Ungerstedt Acta Physiol. Scand. Suppl. 367, 69—93 (1971)). A hatóanyag beadása utáni jelentős aktiválódást arról lehetett felismerni, hogy a patkányok a nem denervált oldal irányába forogtak.
Az új vegyületeket dopaminerg tulajdonságuk alapján a Parkinson-kór kezelésére használhatjuk.
Az új vegyületeknek továbbá prolaktinelválasztást gátló hatásuk is van. így patkányon 0,01 — 1 mg/kg s.c. dózisban adva gátolta az implantatiokat, és 1 —10 mg/kg p.o. dózisban pedig a lactatiot (Experientia 34, 1330 (1978)).
Az új vegyületeket prolaktinelválasztást gátló hatásuk alapján például lactatiogátlásra, galactorrhoeagátlásra, a hyperprolaktinaemiás hypogonadismus, az acromegalia vagy a prolaktinoma kezelésére használhatjuk.
Az új vegyületek továbbá a krónikusan implantált patkányok alvás/ébrenlét ciklusában, legalább 3 mg/kg i.p. vagy 10 mg/kg p.o. dózisban csökkentették a paradox alvás hosszát és meghosszabbították az ébrenlétet (lásd J. M. Vigouret és társai, Pharmacology 16, 1, 156—173 (1978)).
Az új vegyületek ezenkívül 0,3 mg/kg
i.p. dózisban a szenzórius információfeldolgozás agyi idegsejtmagjaiban növelték a glükózanyagcserét (módszert lásd L. Solokoff, Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism 1, 7—36 (1981), Η. E. Savaki és társai, Brain Research 233, 347 (1982) és J. McCulloch és társai, Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism 1, 133—136 (1981)).
Ezeknek az eredményeknek alapján az új vegyületek alkalmasak különösen korai stádiumban az öregkori elbutulás (dementia senilis) kezelésére, és az éberség növelésére.
Ezenkívül a találmány szerinti új vegyületeknek érszűkítő hatásuk is van, amit legalább 10 nM/liter dózisban kutyából kivett Artéria carotis externa spirális csíkján in vitro ki lehetett mutatni (E. Müller — Schweinitzer, Naunyn — Schmiedeberg’s Arch. Pharmacol. 292, 113—118 (1976))·
Érszűkítő hatásuk alapján az új vegyületek a migrén kezelésére is használhatók.
Az új vegyületek továbbá roncsolt agyú és gerincvelőjű patkányokon (Brit. J. Pharmac. Chemother. 30, 78—87 (1967)) körülbelül
5—50 pg/kg i.v. dózisban vérnyomásnövekedéssel összekötött, hosszan tartó presszoros hatást fejtettek ki. Az új vegyületek Mellander-macskán (Angiologica 3, 77—99 (1966)) körülbelül 0,5—50 pg/kg i.a. dózisban a véredények erős, dózisfüggő és tartós összehúzódását okozták.
Ennek a hatásnak az alapján az új vegyületeket a vénás tónus növelésére szolgáló szerekként is használhatjuk.
Végül a találmány szerinti új vegyületeknek, az alvás/ébrenlét ciklusban adódott eredmények alapján, serotoninerg hatásuk van. Erre a hatásra és az Ungerstedt-modellnél elért eredményekre való tekintettel az új vegyületeket főleg idősebb embereknél depreszszió elleni szerként is használhatjuk.
A találmány tárgya továbbá az (I) általános képletű vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítása is. Ezek előállításához a gyógyszerészeiben szokásos hordozó- és segédanyagokat használhatjuk fel.
A következő példákban a hőmérsékleti értékek nem korrigáltak.
1. példa
9’-Tia~ergotamin és 9’-tia-ergotaminin
1. Az NRRL 12043 jelű törzs tenyésztése
a. / Előtenyészet
A Claviceps purpurea NRRL 12043 jelű mutáns törzs ferdecsöves agartenyészetének csíráit (körülbelül egymilliárd csíra) 10 ml steril vízben felszuszpendáljuk. Ennek a csíraszuszpenziónak 1 ml-ével beoltunk 200 ml folyékony táptalajt az előtenyészethez, amely táptalajt 500 ml-es Erlenmeyer lombikba teszszük, és aminek az összetétele a következő:
g/liter
Szacharóz 100
Proflo (részben zsírtalanított gyapotmagliszt) 10
Ammónium-oxalát 3
Kálcium-nitrát-tetrahidrát 1
Kálium-dihidrogén-foszfát 0,25
Magnézium-szulfát-heptahidrát 0,25 Kálium-klorid 0,125
Vas-szulfát-heptahidrát 0,0166
Cink-szulfát-heptahidrát 0,0068
Desztillált víz ad 1 liter
A táptalaj pH-ját ammóniaoldattal 6,5-re állítjuk. A táptalajt ezután 20 percen át l20°C-on sterilizáljuk. Ezt az előtenyészetet 24°C-on 5 napon át forgatva rázzuk (180 perc'1, 5 cm-es kör). A növekedés végén a tenyészet pH-ja 5,3, és a micéliumtömeg száraz súlya 22 g/liter.
b. / Főtenyészet
Az előtenyészet 10 ml-ével beoltunk 50 ml folyékony táptalajt a főtenyészethez, amely táptalajt 500 ml-es Erlenmeyer lombikba teszszük, és aminek az összetétele a következő:
g/liter
Szacharóz 240
Ammónium-oxalát 9,6
Kálcium-nitrát-tetrahidrát 2,5
Magnézium-szulfát-heptahidrát 0,625 Kálium-dihidrogén-foszfát 0,625
Kálium-klorid 0,312
Vas-szulfát-heptahidrát 0,0252
Cink-szulfát-heptahidrát 0,0102
Desztillált víz ad 1 liter
A táptalaj pH-ját 25%-os ammóniaoldattal 6,2-ra állítjuk. Ezután a táptalajt 20 percen át 110°C-on sterilizáljuk.
-4193373
Ezt a tenyészetet 24°C-on körrázógépen inkubáljuk (180 perc'1, 5 cm-es kör). 4 nap inkubációs idő után minden egyes tenyészethez 90 mg L-tiazolidin-4-karbonsavat adunk. A tenyészeteket ezután még 10 napig inkubáljuk a körrázógépen. A fermentáció befejeződése után a tenyészeteket leszűrjük. A micéliumtömeget kíméletesen megszárítjuk. A főtenyészetből származó micéliumtömeg száraz súlya 85 g/liter. Az alkaloidatartalom: 12 mg/g. A 9’-tia-ergotamin és a 9’-tia-ergotaminin összmennyisége az összalkaloidtartalom 10%-a.
2. A cím szerinti vegyületek elkülönítése
500 g száraz micéliumtömeget Ultra-Turrax készüléken 1600—1600 ml metanol + 2% ammóniaoldat eleggyel kétszer, majd 1200— 1200 ml metanollal kétszer homogenizálunk úgy, hogy minden egyes homogenizálás öt percig tartson, és az egyesített szűrletet legfeljebb 40°C-os fürdőhőmérsékleten, vákuumban bepároljuk (körülbelül 50 g borvörös bepárlási maradék). Ezt a bepárlási maradékot 500 ml metanolban oldjuk, és az oldatot 10 cm2 keresztmetszetű kromatográfiás csőben elhelyezett 500 g II. aktivitásfokú alumínium-oxidon (Woelm) át szűrjük, 2000 ml metanollal mossuk, és az egyesített szűrletet vákuumban szárazra pároljuk (25 g sárga hab). Ezt a bepárlási maradékot 200-szoros mennyiségű Kieselgel 60-on (Merck), diklór-metán + 2% metanol futtatóval kromatográfiásan szétválasztjuk. Az egyes frakciók bepárlási maradékait vékonyrétegkromatográfiásan vizsgáljuk, és egyesítjük azokat a frakciókat, amelyek csak a 9’-tia-ergotaminnak •1. Táblázat io megfelelő foltot mutatják (R; értékek az 1. táblázatban).
9’-Tia-ergotamin
Azokat a frakciókat, amelyek a vékonyrétegkromatográfiás analízis szerint Rf értéküknek megfelelően csak 9’-tia-ergotamint tartalmaznak, etil-acetátban oldjuk, az oldatot talkumrétegen át tisztára szűrjük, vákuumban betöményítjük, kevés hexánt adunk hozzá, mire az alkaloida kikristályosodik. Ugyanabból az oldószerből való átkristályosítással fehéres-sárgás színű tiszta kristályokat nyerünk. Olvadáspontja: 199°C-tól lassú bomlás; [a]£° =—165° (c = 0,5, kloroformban)
9'-Tia-ergotamin-metánszulfonát
180 mg 9’-Tia-ergotamint kevés etanolban oldunk, és az oldathoz hozzáadjuk 29 mg metánszulfonsavnak alkoholos oldatát, mire az alkaloida metánszulfonátként kikristályosodik. Metanolból való átkristályosítás után tiszta fehér sót kapunk.
Olvadáspontja: 211°C-tól bomlik;
= +76° (c — 0,51, metanolban) 9’-Tia-ergotaminin
Azokat a kromatográfiás frakciókat, amelyek vékonyrétegkromatográfiásan a megfelelő Rf érték (lásd 1. táblázatot) mellett egy foltot adnak, etil-acetátban oldjuk, az oldatokat egyesítjük, és talkumrétegen át tisztára szűrjük. A koncentrált oldathoz kevés hexánt adunk, mire az alkaloida fehér kristályok formájában kiválik. Ugyanebből az oldószerből átkristályosítva kapjuk a tiszta vegyületet. Olvadáspontja: 199°C-tól bomlik; jaj20 = = + 343° (c = 0,55, kloroformban) al2° =
| ergotaminnal /Et/ és hasonlítva | az ergotamininnel | /Et-in/ | össze· | |
| Réteg és futtatószer | Tia-Et | Et Tia-Et-in | Et-in | |
| Alox Etil-acetát/szék. | ||||
| butanol 9:1 Toluol/izopropanol | 0,44 | 0,34 | 0,58 | 0,59 |
| 9:1 Toluol/izopropanol | 0,58 | 0,50 | 0,69 | 0,63 |
| 19:1 2/ Kieselgel Toluol/izopropanol | 0,30 | 0,24 | 0,58 | 0,46 |
| 85:15 Diklór-metán/metanol | 0,15 | 0,11 | 0,43 | 0,31 |
| 93:7 | 0,25 | 0,22 | 0,55 | 0,52 |
| Aluminium-oxid - Fertigplatten Merck | F 254 /Typ E/ |
2/
Kieselgel ·
A vékonyrétegkromatogramon a foltok UV fényben 254 nm-nél kékesibolya, 366 nm-nél pedig világoskék színűek. Ha a kromatogramot jódgözzel hívjuk elő, a foltok barna színűek.
A tipikusan az ergotalkaloidokhoz való van Urk-reagens kiválónak bizonyult a foltok előhívására. A kromatogramot ezzel a reagenssel bepermetezve a foltok kékesibolya színűek, és ez a szín napfény vagy leheletnyi királyvízgőz hatására megerősödik.
Fertigplatten Merck F 254
2. példa
9’-Tia-ergokrisztin és 9’-tia-ergokrisztinin
1. Az NRRL 12044 jelű törzs tenyésztése
Az NRRL 12044 jelű törzset az 1. példával analóg módon tenyésztjük. A főtenyészet micéliumtömegének száraz súlya 80 g/liter. Az alkaloidatartalom 10 mg/kg. A cím szerinti vegyületek összmennyisége az összalkaloidtartalom 8%-a.
2. A cím szerinti vegyületek elkülönítése
500 g száraz micéliumtömeget Ultraturrax készüléken 1500—1500 ml metanol + 2% 5
-5193373 ammóniaoldat eleggyel kétszer, majd 1500—
1500 ml metanollal kétszer homogenizálunk úgy, hogy minden egyes homogenizálás öt percig tartson. Az egyesített szürletet legfeljebb 40°C-os fürdőhőmérsékleten, vákuum- f, bán bepároljuk (190 g borvörös bepárlási maradék). A bepárlási maradékot 900 ml metanolban oldjuk, és az oldatot 600 g alumínium-oxidból (bázikus, II. aktivitásfokú) álló 10 cm magas rétegen át szűrjük, 2000 ml 10 metanollal mossuk, és a szürletet vákuumban szárazra pároljuk. (108 g). Ezt a bepárlási maradékot metanolban 3000 g Sephadex LH-20 tölteten szétválasztjuk, az eluátumból 200 ml-es frakciókat veszünk, és a frak- ig ciókat bepároljuk. Egyesítjük azokat a bepárlási maradékokat, amelyek a vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint az új tiapeptid-ergotalkaloidokat tartalmazzák (526 mg), és ezt metanolban 120 g Sephadex LH-20 tölte- 20 ten újból kromatografáljuk, mire a 9’-tia-ergokrisztin/-ergokrisztinin 156 mg súlyú tiszta keverékét kapjuk. Ennek a két vegyületnek az elválasztását az ismert kromatográfiás eljárással végezzük el, Kieselgel 60 (Merck) tölteten, diklór-metán + 2% metanol futtatószerrel.
9’-Tia-ergokrisztin
Egyesítjük azokat a bepárolt frakciókat, amelyek a vékonyrétegkromatográfiás analízis szerint Rf értéküknek (lásd 2. táblázatot) megfelelően csak 9’-tia-ergokrisztint tartalmaznak, és ezt benzolból kikristályosítjuk, így 28 mg 9’-tia-ergokrisztint nyerünk. Olvadáspontja: 146°C, lassú bomlás közben zsugorodik; [a] 1° = —176° (c = 0,5, kloroformban) 9’-Tia-ergokrisztinin
Egyesítjük azokat a frakciókat, amelyek a vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint egységesek, és a megfelelő Rf értékűek (lásd
2. táblázatot), és ezt etanol/etil-acetát elegyből kikristályosítjuk. Olvadáspontja: 209— 210°C, bomlik; [a] 20 = +344° (c = 0,51, kloroformban)
2. Táblázat a vékonyrétegkromatográfiás Rf értékeket mutatja az ergokrisztinnel/Ek/ és az ergokrisztininnel /Ek-in/ összehasonlítva
| Réteg és futtatószer | Tia-Ek | Ek | Tia-Ek-in | Ek-: |
| Alox 1/ Etil-acetát/szék. butanol 9:1 | 0,68 | 0,63 | 0,78 | 0,70 |
| Toluol/izopropanol 9:1 | 0,68 | 0,62 | 0,69 | 0,66 |
| Toluol/izopropanol 19:1 | 0,50 | 0,42 | 0,58 | 0,47 |
| 2 / Kieselgel Toluol/izopropanol 85:15 | 0,37 | 0,28 | C,56 | 0,48 |
| Diklór-metán/metanol 93:7 | 0,47 | 0,41 | 0,70 | 0,60 |
Alumínium-oxid - Fertigplatten Merck F 254 /Typ E/ Kieselgel - Fertigplatten Merck F 254
A kromatográfiás foltok előhívását az 1. példa szerint végezzük el.
3. példa
9’-Tia-a-ergokriptin és 9’-tia-a-ergokriptinin
Az 1. vagy 2. példával analóg módon állíthatjuk elő a cím szerinti vegyületeket úgy, hogy ergokriptin/ergokriptinint termelő törzset alkalmazunk.
9’-Tia-a-ergokriptin
Olvadáspontja: 203—205°C (bomlik);
[a] p° = +46° (c = 0,7, dimetil-formamidban) 9' -Tia-a-ergokriptinin
Olvadáspontja: 228—230°C (bomlik);
[a] 20 =-)-281° (c = 0,8, dimetil-formamidban)
Claims (2)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás az (I) általános képletű vegyü55 letek előállítására — a képletbenR, metilcsoportot és R2 izobutil- vagy benzilcsoportot jelent, vagyR, etilcsoportot és R2 benzilcsoportot jelent, vagy ρθ R1 izopropilcsoportot és R2 izopropil-, szék.butil-, izobutil- vagy benzilcsoportot jelent — azzal jellemezve, hogy a megfelelő 9’-metilénvegyületet termelő Claviceps purpurea törzs folyékony táptalajú tenyészetéhez L-tiazoli65 din-4-karbonsavat vagy ennek a savnak sóját-6193373 adjuk, és végül kívánt esetben az így kapott vegyületeket savaddíciós sóikká átalakítjuk.
- 2. Eljárás az (1) általános képletű vegyületeket. — a képletben R( és R2 jelentése az 1. igénypontban megadott — fiziológiailag 5 elviselhető savaddíciós sóikat hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított hatóanyagot a gyógyszerkészítésben szokásos hordozó-, hígító-, töltő- és/vagy egyéb segédanyaggal együtt kikészítjük.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH5104/81A CH649300A5 (de) | 1981-08-07 | 1981-08-07 | Ergopeptinderivate, ihre herstellung und verwendung. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT37960A HUT37960A (en) | 1986-03-28 |
| HU193373B true HU193373B (en) | 1987-09-28 |
Family
ID=4287999
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU822537A HU190405B (en) | 1981-08-07 | 1982-08-06 | Process for producing cyclic 9'-thia-ergopeptine derivatives |
| HU851921A HU193373B (en) | 1981-08-07 | 1982-08-06 | Process for preparing cyclic 9'-thiapeptide-ergot alkaloids |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU822537A HU190405B (en) | 1981-08-07 | 1982-08-06 | Process for producing cyclic 9'-thia-ergopeptine derivatives |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US4542135A (hu) |
| JP (1) | JPS5843982A (hu) |
| AT (1) | AT382156B (hu) |
| AU (1) | AU558414B2 (hu) |
| BE (1) | BE894046A (hu) |
| CA (1) | CA1191802A (hu) |
| CH (1) | CH649300A5 (hu) |
| CS (1) | CS235303B2 (hu) |
| DD (2) | DD206379A5 (hu) |
| DE (1) | DE3228230A1 (hu) |
| DK (1) | DK352082A (hu) |
| ES (2) | ES8402348A1 (hu) |
| FI (1) | FI72979C (hu) |
| FR (1) | FR2511003B1 (hu) |
| GB (1) | GB2109795B (hu) |
| GR (1) | GR77262B (hu) |
| HU (2) | HU190405B (hu) |
| IE (1) | IE53647B1 (hu) |
| IL (1) | IL66471A (hu) |
| IT (1) | IT1152489B (hu) |
| MY (1) | MY8600311A (hu) |
| NL (1) | NL8203067A (hu) |
| NZ (1) | NZ201504A (hu) |
| PH (1) | PH22998A (hu) |
| PT (1) | PT75384B (hu) |
| SE (1) | SE452011B (hu) |
| ZA (1) | ZA825727B (hu) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH649300A5 (de) * | 1981-08-07 | 1985-05-15 | Sandoz Ag | Ergopeptinderivate, ihre herstellung und verwendung. |
| JPS60104129A (ja) * | 1983-11-11 | 1985-06-08 | Hitachi Ltd | フッ素含有ポリアミド酸誘導体及びポリイミドの製造方法 |
| HU195729B (en) * | 1985-02-05 | 1988-07-28 | Sandoz Ag | Process for producing pharmaceutical compositions containing 9,10-dihydro-ergot-alkaloides |
| HU193317B (en) * | 1985-06-12 | 1987-09-28 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for producing 2-bromo-alpha-ergochristin |
| DE69330601T2 (de) * | 1992-12-24 | 2002-07-04 | Pharmacia & Upjohn Spa | Serotoninergische ergolin derivate |
| DE10041478A1 (de) | 2000-08-24 | 2002-03-14 | Sanol Arznei Schwarz Gmbh | Neue pharmazeutische Zusammensetzung |
| DE10334187A1 (de) * | 2003-07-26 | 2005-03-03 | Schwarz Pharma Ag | Substituierte 2-Aminotetraline zur Behandlung von Depressionen |
| DE10334188B4 (de) * | 2003-07-26 | 2007-07-05 | Schwarz Pharma Ag | Verwendung von Rotigotin zur Behandlung von Depressionen |
| DE10361258A1 (de) * | 2003-12-24 | 2005-07-28 | Schwarz Pharma Ag | Verwendung von substituierten 2-Aminotetralinen zur vorbeugenden Behandlung von Morbus Parkinson |
| US20050197385A1 (en) * | 2004-02-20 | 2005-09-08 | Schwarz Pharma Ag | Use of rotigotine for treatment or prevention of dopaminergic neuron loss |
| DE102004014841B4 (de) * | 2004-03-24 | 2006-07-06 | Schwarz Pharma Ag | Verwendung von Rotigotin zur Behandlung und Prävention des Parkinson-Plus-Syndroms |
| US20070022720A1 (en) * | 2005-07-27 | 2007-02-01 | The Toro Company | Cleaner for cooling system screen of outdoor power equipment unit |
| US8710092B2 (en) * | 2009-12-23 | 2014-04-29 | Map Pharmaceuticals, Inc. | Substituted indolo 4,3 FG quinolines useful for treating migraine |
| BR112013033339A2 (pt) | 2011-06-23 | 2016-08-16 | Map Pharmaceuticals Inc | análogos de fluorergolina |
| WO2013095707A1 (en) | 2011-12-19 | 2013-06-27 | Map Pharmaceuticals, Inc. | Novel iso-ergoline derivatives |
| CA2859175A1 (en) | 2011-12-21 | 2013-06-27 | Map Pharmaceuticals, Inc. | Novel neuromodulatory compounds |
| US9012640B2 (en) | 2012-06-22 | 2015-04-21 | Map Pharmaceuticals, Inc. | Cabergoline derivatives |
| CZ2013590A3 (cs) * | 2013-07-25 | 2014-09-03 | Teva Czech Industries S.R.O. | Izolovaný kmen houby Claviceps purpurea (Fr.) Tul., CCM 8404 |
| CN113308442B (zh) * | 2021-04-28 | 2023-06-27 | 天津大学 | 重组酿酒酵母菌株及其构建方法 |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3314959A (en) * | 1961-05-10 | 1967-04-18 | Sandoz Ltd | Intermediates for the synthesis of ergot alkaloids |
| FR2292M (fr) * | 1962-06-27 | 1964-01-27 | Sandoz Sa | Médicament a base d'une combinaison de dihydro-ergotamine, de caféine et d'une hydantoine. |
| CH602765A5 (hu) * | 1974-09-27 | 1978-07-31 | Sandoz Ag | |
| CH602766A5 (en) * | 1974-09-27 | 1978-07-31 | Sandoz Ag | 10-Alpha-methoxy-di:hydro-beta-ergosine derivs. |
| DE2750090A1 (de) * | 1976-11-19 | 1978-06-01 | Sandoz Ag | Neue verabreichungsformen fuer organische verbindungen |
| CH626373A5 (hu) * | 1977-02-22 | 1981-11-13 | Sandoz Ag | |
| GB1584464A (en) * | 1977-04-19 | 1981-02-11 | Farmaceutici Italia | Ergot alkaloids |
| DE2717953A1 (de) * | 1977-04-22 | 1978-10-26 | Sandoz Ag | Neue therapeutische mischung und verfahren zu deren herstellung |
| YU216177A (en) * | 1977-09-09 | 1984-02-29 | Rudolf Rucman | Process for preparing 2-bromo ergosine |
| CH636011A5 (en) * | 1978-01-01 | 1983-05-13 | Sandoz Ag | Administration forms for organic compounds |
| EP0003286B1 (de) * | 1978-01-20 | 1982-03-24 | Sandoz Ag | Ergopeptidalkaloid-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen |
| DE2803543A1 (de) * | 1978-01-27 | 1979-08-02 | Sandoz Ag | Ergopeptidalkaloidderivate, ihre verwendung und herstellung |
| YU40046B (en) * | 1978-09-04 | 1985-06-30 | Lek Tovarna Farmacevtskih | Process for preparing 2-bromo-9,10-dihydroergosine |
| US4609731A (en) * | 1979-10-10 | 1986-09-02 | Sandoz Ltd. | Process for brominating ergot alkaloids |
| DD200571A1 (de) * | 1981-07-22 | 1983-05-18 | Alfred Baumert | Verfahren zur herstellung von ergopeptinen mit modifiziertem prolinteil |
| CH649300A5 (de) * | 1981-08-07 | 1985-05-15 | Sandoz Ag | Ergopeptinderivate, ihre herstellung und verwendung. |
-
1981
- 1981-08-07 CH CH5104/81A patent/CH649300A5/de not_active IP Right Cessation
-
1982
- 1982-07-28 DE DE19823228230 patent/DE3228230A1/de not_active Ceased
- 1982-07-30 FI FI822670A patent/FI72979C/fi not_active IP Right Cessation
- 1982-08-02 NL NL8203067A patent/NL8203067A/nl not_active Application Discontinuation
- 1982-08-03 US US06/404,832 patent/US4542135A/en not_active Expired - Fee Related
- 1982-08-04 GB GB08222490A patent/GB2109795B/en not_active Expired
- 1982-08-05 JP JP57137147A patent/JPS5843982A/ja active Granted
- 1982-08-05 SE SE8204585A patent/SE452011B/sv not_active IP Right Cessation
- 1982-08-05 CA CA000408786A patent/CA1191802A/en not_active Expired
- 1982-08-05 ES ES514766A patent/ES8402348A1/es not_active Expired
- 1982-08-05 AU AU86785/82A patent/AU558414B2/en not_active Ceased
- 1982-08-05 IL IL66471A patent/IL66471A/xx unknown
- 1982-08-05 PT PT75384A patent/PT75384B/pt unknown
- 1982-08-05 GR GR68967A patent/GR77262B/el unknown
- 1982-08-05 DK DK352082A patent/DK352082A/da not_active Application Discontinuation
- 1982-08-05 FR FR8213834A patent/FR2511003B1/fr not_active Expired
- 1982-08-05 NZ NZ201504A patent/NZ201504A/en unknown
- 1982-08-06 DD DD82242325A patent/DD206379A5/de unknown
- 1982-08-06 DD DD82256213A patent/DD211582A5/de unknown
- 1982-08-06 HU HU822537A patent/HU190405B/hu not_active IP Right Cessation
- 1982-08-06 BE BE1/10569A patent/BE894046A/fr not_active IP Right Cessation
- 1982-08-06 IE IE1906/82A patent/IE53647B1/en unknown
- 1982-08-06 AT AT0302682A patent/AT382156B/de not_active IP Right Cessation
- 1982-08-06 HU HU851921A patent/HU193373B/hu not_active IP Right Cessation
- 1982-08-06 IT IT22768/82A patent/IT1152489B/it active
- 1982-08-06 ZA ZA825727A patent/ZA825727B/xx unknown
- 1982-08-06 PH PH27690A patent/PH22998A/en unknown
- 1982-08-06 CS CS825871A patent/CS235303B2/cs unknown
-
1983
- 1983-09-29 ES ES526119A patent/ES526119A0/es active Granted
-
1985
- 1985-07-02 US US06/751,272 patent/US4681880A/en not_active Expired - Fee Related
-
1986
- 1986-12-30 MY MY311/86A patent/MY8600311A/xx unknown
-
1987
- 1987-05-05 US US07/047,362 patent/US4804660A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU193373B (en) | Process for preparing cyclic 9'-thiapeptide-ergot alkaloids | |
| US6596518B2 (en) | Percyquinnin, a process for its production and its use as a pharmaceutical | |
| US20020143021A1 (en) | Phenylahistin and the phenylahistin analogs, a new class of anti-tumor compounds | |
| EP1751272B1 (en) | Production of tacrolimus (fk-506) using new streptomyces species | |
| JPH08511785A (ja) | プロテインキナーゼｃ阻害剤として有用なインドロカルバゾール | |
| SU735154A3 (ru) | Способ получени алкалоидов спорыньи | |
| RU2261254C2 (ru) | Мемнопептиды, способ их получения и их применение | |
| JPH09508271A (ja) | インドールジテルペンアルカロイド化合物 | |
| US4803217A (en) | Hapalindolinone compounds as vassopressin antagonists | |
| US5885959A (en) | Cyclic peptide compounds and their production process | |
| TOKI et al. | PS-990, A NOVEL NEURITOGENIC COMPOUND FROM Acremoniums p. | |
| EP0818464B1 (en) | Methylsulfomycin l, a process for its production and its use | |
| JP2002518057A (ja) | ムンバイスタチン、その製造法およびその医薬としての使用 | |
| US5236929A (en) | Compound uca1064-b | |
| JP3733163B2 (ja) | 化合物ｔａｎ−２１７７、その製造法および用途 | |
| JPH05306271A (ja) | 新規なアルカロイドおよびその製造方法 | |
| FI75188C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara 9'-tiaergopeptinderivat. | |
| JPH05331172A (ja) | 生物活性プソイロチンａおよびｄ、アスペルギルス・フミガタスから得られる新規な代謝産物、その調製方法およびその使用 | |
| JP3564543B2 (ja) | フロピリジン抗細菌剤 | |
| JP2002509444A (ja) | Ｗｆ１４５７３またはその塩、それらの製法および用途 | |
| CS235340B2 (cs) | Způsob výroby derivátů ergopeptinu | |
| JPH07324088A (ja) | コレシストキニン−ｂ／ガストリン受容体拮抗剤 | |
| JPH025856A (ja) | ツルニチニチソウの細胞培養によるビンカミンおよびエピビンカミンの製造方法 | |
| JP2002509445A (ja) | 新規化合物 | |
| JPH0272185A (ja) | 新規物質ｋｓ―５０２ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |