JPH08511785A - プロテインキナーゼｃ阻害剤として有用なインドロカルバゾール - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 次式Ｉ：

Description

【発明の詳細な説明】 プロテインキナーゼＣ阻害剤として有用なインドロカルバゾール 本発明は、次式Ｉ： を有するストレプトマイセス ロンギスポロフラバス（Streptomyces longispor oflavus） の突然変異体から得ることのできる新規の二次的代謝産物又はその医 薬として許容し得る塩に関する。 式Ｉの化合物それ自身、次式II： を有するスタウロスポリンの３’−ジメチル誘導体である。 物理化学データ、すなわち¹H-NMR分光分析法において観察される結合定数に基 づき、式（Ｉ）の化合物の絶対配置はスタウロスポリン（Staurosporine）にお けるものと同じであると推定される。 化合物Ｉ又はIIの医薬として許容し得る塩は、例えば適当な鉱酸、例えばハロ ゲン化水素酸、硫酸又はリン酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸水素塩、又はホ スフェート、適当な脂肪族又は芳香族スルホン酸又はＮ−置換スルファミン酸と の塩、例えばメタンスルホネート、ベンゼンスルホネート、ｐ−トルエンスルホ ネート又はＮ−シクロヘキシルスルファメート又はＮ−シクロヘキシルスルファ メート（シクラメート）との塩、又は強有機カルボン酸、例えば低級アルカンカ ルボン酸又は所望により置換された又はヒドロキシル化された脂肪族二カルボン 酸、例えばアセテート、オキサレート、マロネート、マレエート、フマレート、 マレート、タルトレート又はシトロネートとの塩である。 本発明は、更に式Ｉの化合物の製造方法に関しこの方法は適当な普通培地中でストレプトマイセス ロンギスポロフラバス（Strepto myces longisporoflavus） 突然変異体Ｍ14（DSM8325）を培養し次いで該化合物 を単離することを含んでなる。特に本法は、炭素の同化性源、窒素の同化性源お よび無機塩を含有する培地中でストレプトマイセス ロンギスポロフラバス（St reptomyces longisporoflavus） を培養し、培養ブロスから細胞を分離し次いで それを有機水−不混和性溶剤で抽出し、有機相を水性相から分離し、蒸発により 有機相を濃縮し次いで得られた式Ｉの粗製化合物をクロマトグラフィー法および ／又は結晶化により同又は異なる有機水−不混和性溶剤から精製することを含ん でなる。 普通培地として、炭素および窒素の適当な源並びに無機塩を含有する水性溶液 又は懸濁液を用いることが好ましい。特に、炭素および窒素の適当な源は複雑な 有機物質、例えばタンパク質およびタンパク質加水分解物、典型的にはカゼイン 、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、綿実油、大豆ミート、ひまわり種由来タン パク質栄養源等である。適当な無機塩は典型的には、アルカリ金属およびアルカ リ土類金属、例えばナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムの塩 化物、炭酸塩、スルフェートおよびホスフェート並びに又商業的に入手可能な微 量元素混合物が含まれる。更に成長促進物質、特にビタミンを好都合には商業的 に入手可能な標準ビタミン溶液の形で添加できる。本発明の実施例で用いられる 普通培地を用いることが好ましい。 培養は、好気的に、すなわち表面培地において、又は好ましくは空気又は酸素 を振とうフラスコ又は発酵槽中に導入しながら振とう又は撹拌しつつ表面下で培 養される。培養は、中性pH範囲で、すなわち約pH５−８、好ましくはpH６−７で そして約25−30℃の温度範囲で、好ましくは約28℃で好ましく行なわれる。 式Ｉの化合物を単離するため、培養が完結したら培養ブロスから 分離し、次いで有機水−不混和性溶剤で抽出する。適当な有機溶剤には、脂肪族 酸のエステル、典型的には低級アルキルエステル、例えば低級アルカン酸例えば 酢酸のメチル又はエチルエステル、およびハロゲン化炭化水素、例えば塩化メチ ル又はクロロホルムが含まれる。水性培養ブロスの抽出は２回又は３回行なわれ る。一緒にした抽出物を蒸発により濃縮後、残留物をクロマトグラフィー手段、 例えばクロマトグラフィー法（例えばHPLC又はフラッシュクロマトグラフィー法 ）又はTLCにより更に精製する。択一的に又は追加的に、生成物は有機水−不混 和性溶剤、例えば前記の一つから結晶化され得る。式Ｉの化合物は好都合には例 えば酢酸エチルから結晶化される。 新規化合物は、価値ある、特に薬理的に価値ある性質を有しそして哺乳動物、 例えばヒト又は動物の疾患の予防および治療に対して使用できる。 例えば、式Ｉの化合物は、酵素プロテインキナーゼＣのイソタイプの選択的阻 害剤である。式IIのスタウロスポリンは、酵素プロテインキナーゼＣのイソタイ プの阻害において著しい差異を示さないが、式Ｉの化合物は最も選択的でかつ優 先的にイソタイプα，β−２およびγを阻害し、一方イソタイプβ−１およびイ ータはより低い程度に（５−１０の因子により）阻害される。プロテインキナー ゼＣのイソタイプα，β−２およびγは、約0.04μmol／literの濃度（IC₅₀）で すでに式Ｉの化合物により阻害される。式Ｉの化合物は、他の酵素、例えばプロ テインキナーゼＡ、プロテイン−ホスホリラーゼ−キナーゼおよびタンパク質− チロシン−キナーゼを、はるかにより高い濃度でのみ阻害する。これは、式Ｉの 化合物の驚くべき選択性を実証する。 プロテインキナーゼＣのイソタイプに対する前記阻害作用を基礎 にしてすでに期待されるように、ヒトＴ24膀胱癌細胞の増殖に対する阻害作用に よって実証できる抗増殖作用を有する。 前記作用のために、式Ｉの化合物は、プロテインキナーゼＣに応答する疾患の 予防又は治療に対し、特に使用できる。該化合物は例えば膀胱癌の治療に対し抗 腫瘍活性剤としても使用できる。 新規化合物は、多薬品耐性腫瘍、特にＰ−糖タンパク質介在耐性の治療に対し 更に使用でき、そして他の抗腫瘍活性化合物、特にMDR（多薬品耐性）様ドキソ ルビシン、ダウロルビシン（daurubicin）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、 エトポシド、タキソール（taxol）、ミトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ又は ミトキサントロンと組合せたとき、相乗作用を示す。 更に、式Ｉの化合物は、破骨細胞のプロトンポンプの強力な阻害剤である。破 骨細胞は正常な骨再生中に、骨吸収に対して応答し得る骨細胞の種類であり、こ れは骨芽細胞誕生形成により忠実に従われる。オステオペニアは、破骨細胞と骨 芽細胞の相対する作用の不均衡から生じその不均衡は例えば骨吸収の速度が付加 成長の速度を超える場合である。生成低pHは、骨の無機質を除去しそして分泌さ れたリソソーム酵素を活性化次いでこれは暴露された有機コラーゲンマトリック スを消化する。プロトンは、細胞外くぼみに相接する細胞のえり羽のある境界膜 に位置するATP−依存性Ｈ⁺−ポンプ（H⁺ -ATPアーゼプロトンポンプ、破骨細胞 プロトンポンプ）により破骨細胞から輸送される。プロトン分泌の阻害は、骨損 失を制御する方法を提供するであろう。破骨細胞プロトンポンプは、多様の細胞 空胞（例えば、クラスリンーコート小胞、クロム塩染色性顆粒、リソソーム）の 膜内に存在するＨ⁺ -ATPアーゼ酵素の多重結合の空胞のクラスのメンバーと思わ れる。驚くべきことに、そしてスタウロスポリンおよびその誘導体から知られて いることに反して、本発明 に係る化合物は、ウシの脳からのクラスリンーコート小胞から単離されたH⁺ -AT Pアーゼプロトンポンプの極めて強力な阻害剤である。 H⁺ -ATPアーゼプロトンポンプに対する阻害作用のために、本発明に係る化合 物は、多様の病理学的症状の特徴的高められた骨損失、例えば原発性骨粗しょう 症（年少者の、特発性、先天性、閉経後、不随意の）および悪性疾患、腎不全、 悪性吸収症候群、肝性疾患、不動化、関節症および医原性症状に関連した二次的 オステオペニアの予防又は治療に対して使用できる。 適用の他の分野は、コリン作動性ニューロン、線条体ニューロンおよび感覚ニ ューロン、例えば背面根神経節ニューロンの機能を高めることである。更に、治 験用化合物は、興奮性アミノ酸により誘発された変性から哺乳動物の神経細胞を 保護するための方法において使用できる。例はアルツハイマー病、運動ニューロ ン病、パーキンソン病、脳血管性疾患、AIDS痴呆、てんかん、ハンチントン病お よび脳又は脊髄に対する震盪又は浸透損傷である。これらの場合において、創作 力のある化合物は、神経栄養の因子、好ましくは神経栄養集団のメンバーそして 最も好ましくは神経成長因子（NGF）と組合わせて投与できる。 本発明は又、治療的に有効量の活性化合物、特に前記疾患の一つの予防又は治 療に対して有効である量、並びに医薬として許容し得る担体（これは局所、例え ば皮膚腫瘍、経腸、例えば経口又は直腸、又は非経口（例えばi.v.，s.c.又は経 皮）投与に対し適当であり、そしてそれは無機又は有機の、固体又は液体である ）を含んでなる医薬組成物に関する。経口投与に対し用いられる組成物は、特に 錠剤又はゼラチンカプセル剤であり、これらは有効成分並びに希釈剤、例えばラ クトース、デキストロース、シュクロース、マニトー ル、ソルビトール、セルロースおよび／又はグリセロール、および／又は滑沢剤 、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸又はその塩、例えばステアリン酸マグネ シウム又はステアリン酸カルシウム、および／又はポリエチレングリコールを含 んでなる。錠剤は又、結合剤、例えばケイ酸マグネシウムアルミニウム、デンプ ン例えばとうもろこし、小麦又は米デンプン、ゼラチン、メチルセルロース、ナ トリウムカルボキシメチルセルロースおよび／又はポリビニルピロリドンおよび 所望により崩壊剤、例えばデンプン、寒天、アルギン酸又はその塩、例えばアル ギン酸ナトリウム、および／又は発泡性混合物、又は吸着剤、着色剤、矯正剤お よび甘味剤を含んでなる。本発明の薬理的に活性な化合物は、更に非経口的に投 与できる組成物又は輸液に対する溶液の形で更に使用できる。そのような溶液は 好ましくは等張性水性溶液又は懸濁液であり、それは使用前に、例えば純粋な活 性成分又は活性成分と担体、例えばマニトールを含んでなる凍結乾燥組成物の場 合に製造されることができる。医薬組成物は殺菌できおよび／又は賦形剤、例え ば防腐剤、安定剤、湿潤剤および／又は乳化剤、可溶化剤、浸透圧調節用塩およ び／又は緩衝剤を含んでなる。所望により、更に薬理的に活性な物質を含有でき る本発明の医薬組成物は、自体公知の方法で、例えば通常の混合、造粒、糖皮か け、溶解又は凍結乾燥プロセスにより製造されそして約0.01％〜90％、凍結乾燥 品の場合には、100％まで、特に約0.１％〜約50％の活性成分を含んでなり、１ ％未満の活性成分の濃度は局所投与用組成物に特に適している。 本発明はまた、好ましくは医薬組成物の形で、ヒト又は動物の予防又は治療に 対し、特に前記疾患の場合において式Ｉの化合物の使用に関する。本発明は特に そのような治療を必要とする温血動物において、プロテアーゼＣ特にその前記ア イソタイプの阻害方法に関 し、その際式Ｉの化合物の有効プロテインキナーゼＣ−阻害用量を、温血動物の 種のこの代表例に投与する。本発明は、同様に特にそのような治療を必要とする 温血動物種において破骨細胞プロトンポンプを阻害する方法に関し、その際式Ｉ の化合物の有効破骨細胞プロトンポンプ−阻害用量をそのような温血種に投与す る。活性成分の用量は、特に疾患のタイプおよび程度、処置すべき種の性質およ び大きさ、年令および種の症状、処理に対する応答および活性成分を投与する方 法に依存する。例えば、約70kgの体重を有する温血動物種の代表例に１mg−1500 mg、好ましくは10mg〜500mgの式Ｉの化合物の日用量を投与する。この総日用量 は、好ましくは１〜３回の日用量に分けられる。経口投与の場合の用量は、非経 口投与の場合におけるよりも約２〜３倍より高く、すなわちむしろ前記用量の上 限内にある。 更に式Ｉの化合物は、従って他の薬理的に活性な化合物、例えばプロテインキ ナーゼＣのサブタイプ又は被骨細胞プロトンポンプを阻害する化合物の製造に対 する価値ある中間体である。 新規菌株ストレプトマイセス ロンギスポロフラバス（Streptomyces longisp oroflavus）M14 DSM8325は、本発明の別の態様である。 以下の実施例は、いかなる場合も何ら制限することなく本発明を説明する。実験部 １．ストレプトマイセス ロンギスポロフラバス（Streptomyces longisporofla vus）突然変異株M14の生産および単離 ストレプトマイセス ロンギスポロフラバス（Streptomyces longisporoflavu s）菌株R19／col.15（土壌から単離）の三種のペトリー皿培養物を調製し次いで 胞子形成寒天SPA上で28℃で５−７日間 インキュベートした： 可溶性デンプン（とうもろこしデンプン） 20ｇ／ｌ 酵母エキス ４ｇ／ｌ 寒天 20ｇ／ｌ 殺菌前のpH 約７ 培養物は、菌糸の表面上で灰色を示していた。 インキュベーション後、殺菌したツイーン80溶液（0.5％）を各プレートに添 加した。胞子を穏やかに加圧しながら接種用ループを用いこれらのプレートの表 面をけずり落とすことにより移動させた。次いで、得られた胞子懸濁液をガラス ペトリー皿に移した。胞子濃度を制御し次いで顕微鏡で測定する。懸濁液を、一 定撹拌しながらUVランプ下で照射した：50秒間500mW／cm²。照射された胞子懸濁 液を次いで100〜1000倍に希釈し、暗所中室温で１時間放置し、次いで完全培地 プレート（胞子形成寒天ＳＰＡ）上で平板培養する。プレートを暗所中28℃で５ 日間インキュベートし次いでそれらを「最少培地」（MM）（ｌ−アスパラギン0. 5ｇ／ｌ、K₂HPO₄・3H₂O 0.65ｇ／ｌ、MgSO₄・7H₂O 0.2ｇ／ｌ、FeSO₄・7H₂O 0 .01ｇ／ｌ、グルコース10.0ｇ／ｌ、pH7.0−7.2）、トリプトファンで補充され た最少培地（MMT）および完全培地（SPA）にレプリカープレートした。28℃で４ 日間インキュベーション後、レプリカをオリジナルと比較した。形状、色、大き さおよび最少培地に対する発育に関して異なるコロニーを、プレートから単離し 、発酵させそして培養ブロスをTHLおよびHPLCにより分析した。 １つのコロニーは、両方の最少培地上で劣ったかつ薄い発育を有するように思 われたが完全培地上では正常な発育（いわゆるゴーストコロニー）を有するもの と思われそして突然変異体Ｍ14と名づけられた。 培地NL３（マニトール40ｇ／ｌ、サンプロ（ファルマメディア）20ｇ／ｌ、KH₂ PO₄ 0.5ｇ／ｌ、SAG471 0.5g／ｌ、殺菌前のpH：6.5、殺菌後のpH：6.31）中で 発酵５日後、突然変異体M14の培養ブロス抽出物のTLCおよびHPLC分析は、M14生 成物が主に１種の化合物であることを示した： TLCにおいて：（CH₂Cl₂／イソプロパノーノレ 10：１）Rf_化合物（0.69）＜R f_{スタウロスホ リン}（0.14）、（抽出：培養ブロス／CH₂Cl₂ １：１）。 HPLCにおいて：Rt_化合物（〜８分）＜Rt_{スタウロスホ リン}（〜9.5分）、（抽出：培養ブ ロス／メタノール １：１、遠心分離）。 HPLC条件：UV検出器（Spectra Physics）：290nm、ポンプ（Spectra Physics） 、 カラム：LiChrospher 100RP-8；５μｍ；４×125（カートリッジ）；溶液Ａ：ホ スフェート緩衝液 pH＝ ３ヘリウムで脱ガス、溶液Ｂ：アセトニトリル／溶液 Ａ 80：20 ヘリウムで脱ガス；最少圧：20バール、最大圧：300バール、分析 中の常圧：流れ：1.25ml／分；注入容量：20ml。こう配条件 突然変異株ストレプトマイセス ロンギスポロフラバス（Streptomyces longi sporoflavus）M14に関する更なる記載： −胞子形成寒天SPS上で菌糸黄色ないし複色、 −原株ストレプトマイセス ロンギスポロフラバス（Streptomyces longisporoflavus）Ｒ19／coll5と類似の発育、 −液体培地NL148a中直径３mmまでの小白色ペレット、 −生産性：４日間培養培地NL３中３’−ジメチルスタウロスポリン約150mg。２．30ｌのスケールでのストレプトマイセス ロンギスポロフラバス（Streptom yces longisporoflavus）突然変異体Ｍ14の発酵 ２回接種工程を用い発酵を開始する。前培養および発酵のために用いられた培 地は次の通りである： 前培養培地NL148a マニトール 22ｇ／ｌ ラボレムコ（Lab lemco）（Oxoid） ４ｇ／ｌ ペプトンＣ ５ｇ／ｌ 酵母エキス 0.5ｇ／ｌ カシトン（Casitone）（Bacto） ３ｇ／ｌ NaCl 1.5ｇ／ｌ 殺菌前のpH： 7.6 殺菌後のpH： 6.5−6.8； 発酵培地NL３（泡消SAG471はもし必要な場合のみ加えられる）、上記参照。 用いた温度は約28℃である。接種工程を約7.6からのpHで行い、一方発酵は約6 .0〜7.0のpHで行なわれる。 ａ．第一の前培養 クリオーチューブ、寒天斜面又は寒天平板を、培地NL148aを含有するエルレン マイヤーフラスコに接種するために用いる。フラスコを28℃で48時間220rpmで接 種せしめたまゝにする。 １個のじゃま板を備えた500mlのエルレンマイヤーフラスコ中の培地NL148a 10 0mlに接種するため、１mlの新しい培養物を用いる（ １％接種）。フラスコを28℃で48時間250rpmでインキュベートする。 ｂ．第二の前培養 ４個のじゃま板を備えた2000mlのエルレンマイヤーフラスコ中培地NL148a 500 mlに接種するため、第一の前培養からの25mlを用いる（５％接種）。フラスコを 28℃で48時間120rpmでインキュベートする。 ｃ．生産工程（発酵） 30ｌの発酵培地NL３に接種するため、600mlの第二の前培養物を用いる（２％ 接種）。発酵を、撹拌および曝気しながら600rpm、１ｖ／ｖ／分および0.5バー ル過圧で28℃で117時間行なう。rpmを酸素飽和が30％未満に低下しないような方 法で制御する。代謝物の生産は、HPLC分析により追跡する。３．３’−ジメチルスタウロスポリンの単離 ａ．振とうフラスコ培養物から 例２に従って得られた振とうフラスコ培養物の培養ブロス約1.5ｌを２ｌの塩 化メチレンと共に激しく撹拌する。抽出した細胞物質を、ハイフロ（フィルター 助剤として用いられた珪藻土）を用い濾過により除去し次いで二相を分離する。 澄明な濾液の水性相を、２ｌの酢酸エチルを用い追加の抽出工程に委ねる。得ら れた有機抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥し次いで蒸発乾固する。少量の酢酸 エチルから結晶化後、３’−ジメチルスタウロスポリンを薄い黄色結晶体として 得る。融点＞220℃（分解のもと）。旋光度α（ジオキサン、ｃ＝１％ｗ／ｖ、2 0℃）：＋26.1°（436nmで）、＋13.2°±5.3°（546nmで）、＋11.1°±5.3° （578nmで）、＋11.1°±5.3°（589nmで、ナトリウムＤ₂線）。 FAB-MS（器機ZAB HF、チオグリシンを用いたポジチブ型）：453（Ｍ −Ｈ⁺）；更に338，311，295および142に主なシグナル（ｍ／ｅ）。正確な分子 量：452.517（C₂₇H₂₄N₄O₃） DMSO-d₆中の¹H NMR（80℃で）：9.30（d，1H，H-4），8.27（s，1H，H-6），8.0 2（d，1H，H-8），7.98（d，1H，H-11），7.61（d，1H,H-1），7.50（dd，1H，H -2），7.46（dd，1H，H-10），7.35（t，1H，H-3），7.29（t，1H，H-9），6.92 （dd，1H，H-6’），6.12（br.，OH），4.99（d，1H，H-7），4.94（d，1H，H-7 ’），4.84（dd，1H，H-3’），3.77（ddd，1H，H-4’），3.02-2.95（m，1H，H -5’a），2.62（s，3H，4’-CH₃ -NH），2.31（s，1H，2’-CH₃），2.26（ddd，1 H，H-5’b）。 結合定数（HZ）：J_1.2＝J_3.4＝8.0；J_8.9＝J_10.11＝8.0；_J3'.4'＝3.2；J_3'.5' ＝1.2；J_4'.5'a＝4.0；J_4'.5'b＝12.4；J_5'a.5'b＝12.5；J_5'a.6'＝8.2；J_{5'b.6 '} ＝6.2。 DMSO-d₆中の¹³C NMR（80℃で）：171.5；138.8；136.0；132.3；129.3；125.4 ；125.1；124.8；124.3；123.9；122.5；120.7；119.8；119.0；114.9；113.9； 113.8；108.2；94.3；80.5；68.4；53.7；45.1；30.1；28.5；25.8。 IR（KBr）：3420，3252，3049，2930，1660，1587，1458，1420，1398，1348，1 317 ，1283，1250，1227，1173，1151，1126，1101，10 70，1045，1020，955，922，851，822，789，773，744，663，631cm^-1（最も顕 著な吸収帯には下線が引かれている）。 分光データは表現された構造に十分に一致している。 ｂ．Ａ−発酵槽培養物から 異なる発酵槽培養物から得られる発酵ブロス（例２ｃ）を一緒にして77ｌを得 る。10kgのハイフロを添加後、全ブロスを酢酸エチルの容量で２回激しく撹拌し ながら洗浄する。一緒にした有機相を分離し、濃縮し次いで蒸発乾固する。粗製 抽出物を１ｌのｎ−ヘプタンで砕く。ヘプタン相の蒸発により、淡いオイルの残 留物を得、これはTLC分析に従いスタウロスポリン関連化合物を完全に欠いてい る。 ヘプタン−不溶性残留物をジクロロメタンに溶解し、これは結晶の第一の生産 物である自発的結晶化に到る。原結晶物をメタノールに溶解し、活性炭で処理し 次いで濾過する。澄明な濾液を濃縮し次いで酢酸エチルから再結晶する。 母液およびジクロロメタン中すでに得られた溶液を一緒にし次いでシリカゲル Si60（メルク、粒径15−25μｍ）を用い１ｌのカラムでクロマトグラフィー処理 する。所望の生成物を含有する分画を、95％ジクロロメタンおよび５％メタノー ルから成る溶剤混合物で溶出させ、一緒にし次いで蒸発乾固する。同法を用いこ れらの分画の再クロマトグラフィー処理により、半純粋物質を得る。酢酸エチル から再結晶し、純粋な物質の第二の生産物を得る。母液を、くり返しのクロマト グラフィー法および再結晶サイクルにより更に精製し、純粋な物質の第三の生産 物を得る。 結晶化物および目的生産物を含有するクロマトグラフィー分画をプールし次い で酢酸エチルから結晶化する。薄黄色結晶を濾過により単離し次いで高真空下で 乾燥する。生産物の物理化学的性質は、 例３ａで得られた生産物のそれと同一である。４．医薬組成物 50mgの活性成分を含んでなる錠剤を以下の組成物において常法で製造する：組成物 ： 活性成分 50ｇ 小麦デンプン 150ｇ ラクトース 125ｇ コロイドシリカ 10ｇ タルク 20ｇ ステアリン酸マグネシウム ２ｇ 357ｇ製造 ：活性成分を小麦デンプンの一部、ラクトースおよびコロイドシリカと混合 し、次いで混合物を篩にかける。より一部の小麦デンプンを水溶中５倍量の水で ペーストにし、次いで粉末混合物を、わずかに混練可能な組成物が形成されるま でこのペーストと共に混練する。 混練可能な組成物を、約３mmのメッシュ径の篩に加圧して通し次いで乾燥し、 次いで得られた乾燥顆粒を再び篩に通す。しかる後、残りの小麦デンプン、タル クおよびステアリン酸マグネシウムを混合し、次いで混合物を圧縮し、各々50mg の活性成分を含有する357mgの1000個の切り目入りの錠剤を得る。５．３’−ジメチルスタウロスポリンメタンスルホネート塩の製造 10mlの脱イオン水に溶解した0.65ml（10mmol）のメタンスルホン酸の溶液を、 250mlの脱イオン水に懸濁させた5.12ｇ（10mmol）の３’ジメチルスタウロスポ リン（例３ｂで得られた如き）の懸濁液に撹拌しながら添加する。添加は30分以 内に完結する。懸濁液が殆 ど完全に溶解するまで更に45分間撹拌を継続する。残りの固体粒子を濾過により 除去する。澄明な濾液を凍結乾燥する。残留物をメタノール中に溶解し次いで活 性炭で処理する。濾過した溶液を結晶化が起こるまで濃縮する。生成した沈殿物 を濾過し次いで高真空下で乾燥する。元素分析によれば、精製した物質は2.5モ ル当量の水を含有しそして200℃を超える温度で分解する。微生物の寄託 菌株ストレプトマイセス ロンギスポロフラバス（Streptomyces longisporof lavus）は、No．DSM8325のもとで、ドイツ連邦共和国，ブラウンシュワイクにあ るドイッチェ ザンムルク フォン マイクロオルガニズメン ウント ツエル クルトレン（DSM）（ジャーマン コレクション オブ マイクロオルガニズム ス アンド セルカルチュアーズ）に1993年５月27日に寄託された。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ， ＣＮ，ＣＺ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，Ｋ Ｐ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＩ，ＳＫ， ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 ペーター，ハインリッヒ スイス国，ツェーハー―4102 ビニンゲ ン，ビュンテンベク 69 (72)発明者 メルカー，テフィレ スイス国，ツェーハー―4414 フュリンス ドルフ，エルゴルツシュトラーセ 72

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．次式Ｉ： で表わされる化合物又はその医薬として許容し得る塩。 ２．¹H NMR（DMSO-d₆、80℃）における次の化学シフトおよび結合定数Ｊ（Hz ）： 9.30（d，1H，H-4），8.27（s，1H，H-6），8.02（d，1H，H-8），7.98（d，1H ，H-11），7.61（d，1H，H-1），7.50（dd，1H，H-2），7.46（dd，1H，H-10） ，7.35（t，1H，H-3），7.29（t，1H，H-9），6.92（dd，1H，H-6’），6.12（b r.，OH），4.99（d，1H，H-7），4.94（d，1H，H-7’），4.84（dd，1H，H-3’ ），3.77（ddd，1H，H-4’），3.02-2.95（m，1H，H-5’a），2.62（s，3H，4’ -CH₃ -NH），2.31（s，1H，2’-CH3），2.26（ddd，1H，H-5’b）； J_1.2＝J_3.4＝8.0；J_8.9＝J_10.11＝8.0；J_3'.4'＝3.2；J_3'.5'＝1.2；J_4'.5'a＝4 .0；J_4'.5'b＝12.4；J_5'a.5'b＝12.5；J_5'a.6'＝8.2；J_5.b.6'＝6.2 を示す、請求の範囲第１項記載の次式Ｉａ： で表わされる化合物。 ３．請求の範囲第１項記載の式Ｉの化合物を含んでなる医薬組成物。 ４．ヒト又は動物体の予防又は治療において使用するための式Ｉの化合物。 ５．請求の範囲第１項記載の化合物の製造方法であって、適当な普通培地中でストレプトマイセス ロンギスポロフラバス（Streptomyces longisporoflavus ）突然変異体Ｍ14（DSM8325）を培養し次いで該化合物を単離することを含んで なる、前記方法。 ６．請求の範囲第５項記載の方法によって得られる化合物又はその医薬として 許容し得る塩。 ７．菌株ストレプトマイセス ロンギスポロフラバス（Streptomyces longisp oroflavus） Ｍ14（DSM8325）。