DE3228230A1

DE3228230A1 - Ergopeptinderivate, verfahren zu deren herstellung, diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen und ihre anwendung in der therapeutischen behandlung

Info

Publication number: DE3228230A1
Application number: DE19823228230
Authority: DE
Inventors: Georg Dr. 4102 Binningen Bolliger; Hans Dr. 4059 Basel Kobel; Jean-Jacques Dr. 4104 Oberwil Sanglier; Hans 4123 Allschwil Tscherter
Original assignee: Sandoz AG; Sandoz Patent GmbH
Current assignee: Sandoz AG; Sandoz Patent GmbH
Priority date: 1981-08-07
Filing date: 1982-07-28
Publication date: 1983-02-17
Also published as: AT382156B; NZ201504A; ES526119A0; DK352082A; NL8203067A; IT8222768A0; IT1152489B; ES8504825A1; CS235303B2; DD211582A5; SE452011B; ES514766A0; FI822670A0; AU558414B2; CA1191802A; FI72979B; US4681880A; SE8204585L; GR77262B; ATA302682A

Description

- 7 - 100-5632

Ergopeptinderivate, Verfahren zu deren Herstellung, diese enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen und ihre Anwendung in der therapeutischen Behandlung

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Ergopeptinderivate, Verfahren zu deren Herstellung, pharmazeutische Zusammensetzungen, die diese Ergopeptinderivate enthalten sowie die Anwendung dieser Ergopeptinderivate bei der therapeutischen Behandlung.

Die Erfindung betrifft insbesondere cyclische 9'-Thia-peptidergotalkaloide in Form der freien Basen oder ihrer Säureadditionssalze.

Diese Verbindungen, im folgenden als erfindungsgemässe Verbindungen bezeichnet, umfassen die 9'-Thiaderivate der sowohl in der Natur vorkommenden oder fermentativ herstellbaren wie auch synthetisch zugänglichen cyclischen Peptidergotalkaloxden. Sie können gegebenenfalls die in der Chemie der Peptidergotalkaloxden üblichen Substituenten tragen. Ferner können sie als Isomere vorliegen, z.B. als 8R- und 8S-Isomere.

Insbesondere werden Verbindungen der Formel I umfasst,

100-5632

worin

R. eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeutet,

'R₂ eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen Oder eine Benzylgruppe bedeutet,

R₃ und R₄ unabhängig voneinander je für Wasserstoff oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen stehen,

R_ Wasserstoff bedeutet oder, falls R- für Wasserstoff steht, auch Brom bedeuten kann,

R₆ und. R₇ je für Wasserstoff stehen oder

R_c und R_ zusammen eine einfache Bindung bilden oder

R^ für Methoxy und R_ für Wasserstoff stehen und

Rg Wasserstoff, eine Methylgruppe oder ein Halogenatom mit einer Ordnungszahl von 9 bis 35 bedeutet.

in Form der freien Basen oder ihrer Säureadditionssalze .

- 9 - 100-5632

In der Formel I steht R, beispielsweise für Methyl oder Isopropyl. R„ bedeutet z.B. n- oder iso-Propyl, n-, iso- oder sec.-Butyl oder Benzyl. R₃ bedeutet beispielsweise eine n- oder iso-Propyl, vorzugsweise eine Aethyl- oder Methylgruppe. R₄ steht bevorzugt für ein Wassers to ff atom oder eine Methylgruppe. R₁. bedeutet bevorzugt Wasserstoff. R, und R_ bilden

O /

zweckmässigerweise eine Bindung oder stehen für Wasserstoff. R_R bedeutet zweckmässigerweise Wasserstoff, Brom oder Methyl.

Die Verbindungen der Formel I können in Form von zwei Isomerengruppen vorliegen, nämlich die Verbindungen mit der Konfiguration 8R und diejenigen mit der Konfiguration 8S_T Die Verbindungen der Formel I mit der Konfiguration 8R sind bevorzugt.

Gemäss der vorliegenden Erfindung gelangt man zu den erfindungsgemassen Verbindungen, indem man ein entsprechendes reaktives Lysergsäurederivat mit einem Säureadditionssalz eines entsprechenden schwefelhaltigen Aminocyclols kondensiert und die erhaltenen Verbindungen gewünschtenfalls in ihre Säureadditionssalze überführt.

- 10 - 100-5632

Unter "Aminocyclol" ist hier ein cyclisch gebautes Tripeptid vom Typ der am Aufbau der Peptidergotalkaloide beteiligten Polypeptidreste gemeint.

Die erf indungsgeitiassen Verbindungen, die von fermentativ herstellbaren Verbindungen abgeleitet sind, können ebenfalls erhalten werden, indem man einer flüssigen Kultur eines die entsprechende 9'-Methylen-Verbindung produzierenden Stammes L-Thiazolidin-4-carbonsäure oder ein Salz dieser Säure zugibt.

Insbesondere gelangt man zu den Verbindungen der Formel I und ihren Säureadditionssalzen, indem man

a) ein Säureadditionssalz einer Verbindung der Formel II oder eines Prekursors davon,

worin R, und R~ obige Bedeutung besitzen, mit einem reaktiven Säurederivat einer Verbindung der Formel III oder eines Prekursors davon,

100-5632

COOH

III

worin R₃, R., R₅, R_g, R_ und R_ obige Bedeutung besitzen, kondensiert oder

b) zur Herstellung einer Verbindung der Formel Ia,

^Ia

worin entweder

R, für Methyl steht und R₃ Isobutyl oder Benzyl

bedeutet oder

R, für Aethy1 steht und R₂ Benzyl bedeutet oder

R, für Isopropyl steht und R₃ Isopropyl, sek.-

Butyl, Isobutyl oder Benzyl bedeutet.

einer flüssigen Kultur eines die entsprechende 9'-Methylen-Verbindung produzierenden Stammes L-Thiazolidin-4-carbonsäure oder ein Salz dieser Säure zugibt,

- 12 - 100-5632

und die erhaltenen Verbindungen gewünschtenfalls in ihre Säureadditionssalze überführt.

Das erfindungsgemässe Verfahren a) kann analog zu bekannten Methoden für die Kondensation zur Herstellung von analogen cyclischen Peptidergotalkaloiden erfolgen.

Ein geeignetes Saureadditionssalz der Verbindung der Formel II ist das Hydrochlorid.

Als reaktionsfähige, funktionelle Derivate einer Verbindung der Formel III können beispielsweise das Säurechlorid, das Säureazid oder das gemischte Anhydrid mit Schwefelsäure oder Trifluoressigsäure eingesetzt werden.

Vorzugsweise verwendet man das Additionsprodukt einer Verbindung der Formel III mit Dimethylformamid oder Acetamid und Thionylchlorid, Phosgen oder Oxalylchlorid. Vorzugsweise wird die Reaktion in Gegenwart von Triäthylamin oder Pyridin durchgeführt. Geeignete Lösungsmittel sind z.B. Chloroform, Methylenchlorid, Dimethylformamid oder Acetonitril.

Die Umsetzung kann bei Temperaturen zwischen - 30 ° bis +20 ^Q C durchgeführt werden.

- 13 - 100-5632

Die Ausgangsverbindung der Formel II und/oder III kann auch in Form eines Prekursors verwendet werden, d.h. in Form einer Verbindung, die auf an sich bekannte Weise in die Ausgangsverbindung übergeführt werden kann. Nach der Kondensation kann das erhaltene Produkt nach an sich bekannten Methoden in eine Verbindung der Formel I übergeführt werden.

Falls die erhaltenen Verbindungen in 9,10-Stellung ungesättigt sind, werden sie in Form von Gemischen der Isomeren 8R und 8S erhalten, die auf an sich bekannte Weise aufgetrennt werden können, beispielsweise chromatographisch. Gewünschtenfalls können die 8R- und 8S-Isomeren auf an sich bekannte Weise epimerisiert werden, beispielsweise durch Behandlung

mit Säuren.

Die freien Basen können in Säureadditxonssalze umgewandelt werden und umgekehrt. Für die Salzbildung geeignete Säuren sind z.B. die Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Maleinsäure, Fumarsäure und Weinsäure.

H ti *

- 14 - 100-5632

Die Ausgangsverbindungen der Formel II sind neu und können nach an sich bekannten Methoden, z.B. wie folgt hergestellt werden:

Nach intramolekularer Kondensation eines geeigneten Derivates der L-Thiazolidin-4-carbonsäure mit einem geeigneten Derivat einer Verbindung der Formel IV,

COOH

IV H

.X.

worin R₂ obige Bedeutung besitzt, werden die erhaltenen Verbindungen der Formel V,

""V^₁T V

worin R» obige Bedeutung besitzt, mit Verbindungen der Formel VI,

- 15 - 100-5632

COCl

worin R₁ obige Bedeutung besitzt und R_g für
eine Schutzgruppe steht, umgesetzt. Durch
anschliessende Hydrierung oder vorzugsweise saure Behandlung des Reaktionsproduktes/ zweckmässigerweise mit Trifluoressigsäure, werden Verbindungen der
Formel VII erhalten,

Rq-OOC

³¹¹¹ VII

worin R^, R^ und R_g obige Bedeutung besitzen- Aus einer Verbindung der Formel VII wird die entsprechende Säure der Formel VIII freigesetzt,

VIII

worin R, und R„ obige Bedeutung besitzen, und über das entsprechende Säureazid der Formel IX,

- 16 - 100-5632

IX

worin R₁ und R₂ obige Bedeutung besitzen, in das Aminocyclol der Formel II überführt. Bevorzugt wird das Säureazid der Formel IX direkt in das Aminocyclol der Formel II überführt; die Reaktion kann aber auch über eine Verbindung der Formel X,

Z-NH , , „ _χ

worin R₁ und R_? obige Bedeutung besitzen und Z eine abspaltbare Gruppe, z.B. eine Benzyloxycarbonylgruppe bedeutet, erfolgen.

Soweit die Herstellung der Ausgangsverbindungen nicht beschrieben wird, sind diese bekannt oder nach an sich bekannten Verfahren bzw. analog zu den hier beschriebenen Verfahren herstellbar.

Das erfindungsgemässe Verfahren b) kann wie folgt durchgeführt werden:

- 11 - 100-5632

Als Stämme, die 9'-Methylenderivate der Verbindungen der Formella produzieren, können Stämme von Claviceps purpurea verwendet werden sowie solche, die aus einem Ausgangsstamm von Claviceps purpurea durch Mutation unter Einwirkung von Strahlen oder Behandlung mit mutagenen Substanzen oder durch Selektion gev/onnen werden können.

. Zur Herstellung von 9'-Thia-ergotamin und 9'-Thiaergotaminin, zum Beispiel, wird als bevorzugter Ergotamin/Ergotaminin produzierender Stamm die Claviceps purpurea Mutante NRRL 12043 verwendet. Eine Kultur davon wurde am 20.9.1979 beim United States Department of Agriculture (Northern Regional Research Center) , Peoria, 111. , USA unter der KuI tur.-nummer NRRL 12043 deponiert.

Zur Herstellung von 9'-Thia-ergocristin und 9'-Thiaergocristinin wird als bevorzugter Ergocristin/ Ergocristinin produzierender Stamm die Claviceps purpurea Mutante NRRL 12044 verwendet. Eine Kultur davon wurde am 20.9.1979 bei der oben erwähnten Deponierungsstelle unter der Kulturnumrcer NRRL 12044 deponiert.

Die zur Herstellung der übrigen Verbindungen der Formel I verwendbaren Stämme sind bekannt und stehen ebenfalls der Oeffentlichkeit zur Verfügung.

- 18 - 100-5632

Charakteristikum und fermentative Gewinnung der Stänune NRRL 12043 und 12044

^a) Charakteristikum_des_Stammes_NRRL_12043

Der Ausgangspilzstaitim wurde aus einem auf Bromus im Wallis (Schweiz) gefundenen Sklerotium, welches Ergotamin enthielt, isoliert. Durch mehrere mutagene Behandlungsschritte unter Verwendung von Ultra-Violett-Strahlen und Chemikalien gelangte man zu dem erfindungsgemäss verwendeten Stamm NRRL 1204 3, welcher folgendermassen charakterisiert werden kann:

Es wird ein kleines Mycelstück des Stammes NRRL 1204 im Zentrum einer Agarplatte mit einem Medium der nachfolgend angegebenen Zusammensetzung ausgeimpft:

60 g Saccharose, 10 g Asparagin, 0,5 g Casamino-Acids (Difco), 0,25 g KH₂PO₄, 0,25 g MgSO₄.7 H₂O, 0,125 g KCl, 16 mg FeSO₄. 7H₂O, 10 mg ZnSO₄.7 H₃O, 15 g Agar und dest. Wasser ad 1 Liter. Der pH-Wert wird mit einer 25%-igen Ammoniak-Lösung auf 6,0 eingestellt. Das Medium wird 20 Minuten bei 12O⁰C sterilisiert. Bei 24⁰C ist nach 7 Tagen eine Kolonie von etwa 3 cm Durchmesser, nach 14 Tagen von etwa 5 cm und nach 20 Tagen von etwa 8 cm Durchmesser entstanden. Die Kolonie ist gewölbt und leicht gefaltet. Der Rand ist diffus. Die Farbe der Kolonie ist im Zentrum beigeviolett und am Rand beige-grau. Eine 2 0 Tage alte

2 8 Kolonie enthält pro cm ca. 1.10 Konidien. Diese sind oval und haben Dimensionen von 6 - 12 χ 4 - 7 μ.

- 19 - 100-5632

b) Charakteristikum_des_Stammes_12044

Der Ausgangspilzstamm wurde aus einem auf Roggen in Nordamerika gefundenen Sklerotium, welches Ergocristin enthielt, isoliert. Durch mehrere mutagene Behandlungsschritte unter Verwendung von Ultra-Violett-Strahlen und Chemikalien gelangte man zu dem erfindungsgemäss verwendeten Stamm NRRL 12044, welcher folgendermassen charakterisiert werden kann:

Es wird ein kleines Mycelstück des Stammes NRRL 12044 im Zentrum einer Agarplatte mit einem Medium der nachfolgend angegebenen Zusammensetzung ausgeimpft:

70 g Malzextrakt (Wander), 30 g Kartoffeln (Stocki, Knorr), 15 g Agar und dest. Wasser ad. 1 Liter. Der pH-Wert beträgt 5,3 - 5,7. Das Medium wird 2 0 Minuten bei 120 ° C sterilisiert. Bei 24 ° C ist nach 7 Tagen eine Kolonie von etwa 2 cm Durchmesser, nach 14 Tagen von etwa 4 cm und nach 20 Tagen von etwa 5 cm Durchmesser entstanden.

Das Mycel ist flach gewölbt und mit einem weissen, in den Luftraum ragenden, watteartigen Hyphengeflecht bedeckt. Im Zentrum wird ein kraterförmiger Hocker von etwa 1 cm Durchmesser ausgebildet. Von ihm gehen radiale Falten aus. Das dem Agar aufliegende Mycel ist violett gefärbt. Es entstehen konzentrische Zonen mit stärkerer und solche mit schwächerer Pigmentierung. Der Rand ist diffus* Ein 20 Tage altes Mycel enthält

2 8
pro cm ca. 1.10 Konidien. Diese streuen in ihren Dimensionen ziemlich stark (5 - 12 χ 3 - 7 fi; meist jedoch 5 - 6 χ 3 ju) · Das Mycel enthält keine Alkaloide.

to ^- * *

„ t* m · · WM ·* *"

- 20 - 100-5632

Vermehrun2_und_Imgf stoff hers teilung;

a) NRRL_12g43

Vermehrung und Impfstoffherstellung des Stammes NRRL 12043 können in der Weise erfolgen, dass man von einer der oben beschriebenen Kolonien die Konidien in sterilem Wasser abschwemmt und damit Schrägagarröhrchen mit dem Agarmedium beimpft, bestehend aus: 70 g Malzextrakt (Wander), 30 g Kartoffeln (Stocki, Knorr), 15 g Agar und dest. Wasser ad 1 Liter. Der pH-Wert beträgt 5,3 - 5,7. Das Medium wird 20 Minuten bei 12O⁰C sterilisiert. Nach 14 Tagen enthält eine solche Sehrägagarkultür (12 ml Medium in einem Reagenzglas von 18 mm Durchmesser und 20 cm Länge,

9 keilförmig ausgelegt) etwa 1.10 Konidien. Von einer solchen Schrägagarkultur werden Konidien in sterilem Wasser aufgeschwemmt und dabei eine Konzentration von 10 - 10 Sporen/ml hergestellt. Mit je 0/5 ml dieser Suspension werden Schrägagarröhrchen mit dem gleichen Medium gleichmässig beimpft. Diese Kulturen werden bei 24⁰C während 14 Tagen bebrütet. Hierauf werden sie bei -4O⁰C gelagert.

b) NRRL__12044

Vermehrung und Impfstoffherstellung des Stammes NRRL 12044 können in der Weise erfolgen, dass man von einer der oben beschriebenen Kolonien die Konidien in sterilem Wasser abschwemmt und damit Schrägagarröhrchen mit dem oben beschriebenen Agarmedium beimpft. Nach 18 Tagen enthält eine solche Schrägagarkultur

322823Q

- 21 - 100-5632

(12 ml Medium in einem Reagenzglas von 18 mm Durchmesser und 20 cm Länge, keilförmig ausge-

g
legt) etwa 1 - 2.10 Konidien. Von einer solchen Schrägagarkultur werden Konidien in sterilem Wasser aufgeschwemmt und dabei eine Konzentration von 10 - 10 Sporen/ml hergestellt. Mit je 0,5 ml dieser Suspension werden Schrägagarröhrchen mit dem gleichen Medium gleichmässig beimpft. Diese Kulturen werden bei 24⁰C während 14 Tagen bebrütet. Hierauf werden sie bei -4 0⁰C gelagert.

Bei der Durchführung des erfindungsgemässen Verfahrens hat es sich als vorteilhaft erwiesen, die Sporen erst über Vorstufe(n) heranzuzüchten, bevor das Produktionsmedium angeimpft wird. Anfänglich soll man ein Medium wählen, in welchem gute Sporenkeimung und ein schnelles Mycelwachstum stattfindet. Für ein solches Medium sind geeignet: eine Kohlenstoffquelle in reichlicher Konzentration in Form eines Mono- oder Disaccharide, gegebenenfalls in Kombination mit einem Polyalkohol, eine Stickstoffquelle in Form einer Aminosäure oder eines Ammoniumsalzes, ferner Mineralsalze, Spurenelemente und komplexe Zusätze aus pflanzlichen Samen. Das pH wird vorteilhaft zwischen 5 und 7 eingestellt. Das Medium wird in der ersten Stufe mit Konidien reichlich beimpft und auf der Schüttelmaschine oder in Fermentern von verschiedenen Grossen bei 22 - 26⁰C während 4-7 Tagen inkubiert. Es entsteht eine dichte Kultur aus lockeren, watteartigen, 2 - 3 mm messenden, unpigmentierten Mycelflocken, welche aus langen Hyphen von 3 - 6 μ. Durchmesser bestehen.

- 22 - 100-5632

Mit einem Teil der in einer oder gegebenenfalls mehreren Vorstufen erhaltenen Kultur wird das Produktionsmedium beimpft, welches vorteilhaft eine solche Zusammensetzung aufweist, dass in kurzer Zeit ein hohes Mycelgewicht erreicht wird. Als beste und billigste Kohlenstoffquelle hat sich Saccharose erwiesen, als Stickstoffquelle Ammoniumsalze, wie Oxalat, Zitrat, Succinat und Formiat. Feiner sollen Mineralsalze und als Spurenelemente Eisen und Zink zugegen sein. Die Kulturen werden entweder in Erlenmeyerkolben oder in Fermentern von verschiedenen Grossen durchgeführt. Wichtig ist eine gute Belüftung. Die optimale Temperatür liegt bei 24 ⁰C.

Am Anfang der Alkaloidbildung, normalerweise zwischen dem 3. und 6. Tag der Hauptkultur, werden 1-5 g/Liter L-Thiazolidin-4-carbonsäure, oder von einem Salze dieser Säure, wie z.B. das Kalium-, Natrium- oder Ammoniumsalz, zur Hauptkultur gegeben. Hierauf werden die Kulturen weiter während 6-12 Tagen bebrütet. Es entsteht im Verlaufe von 9-18 Tagen eine dichte Kultur, die hauptsächlich aus 0,5 - 3 mm langen und 0,1 - 1 mm dicken zylindrischen kompakten Mycelpartikeln neben feinen Flocken besteht. Die Mycelpartikel zeigen in ihrer Struktur das Bild eines plectenchymatischen Gewebes aus kugeligen oder polyedrischen bis kurzzylindrischen, dickwandigen und stark vakuolisierten Zellen von 6 - 12 χ 6 - 14 ju, vornehmlich 8 χ 9 μ, welches von bis zu 100 ju langen Hyphen durchzogen ist.

- 23 - 100-5632

Sie sind bräunlich pigmentiert. Das Kulturfiltrat ist ebenfalls bräunlich gefärbt.

Wenn sich die Zunahme des Gewichtes und des Alkaloidgehaltes des Mycels verringert, können nach an sich bekannten Methoden die Alkaloide mit organischen Lösungsmitteln aus dem gesamten Kulturbrei extrahiert werden, oder man trennt das Mycel durch Filtration oder Zentrifugation vom Filtrat und extrahiert beide Teile separat. Der Hauptanteil der Peptidalkaloide ist im Mycel angereichert.

Diese Schwefel-enthaltenden Ergotpeptine lassen sich aus der Kulturbrühe, aus dem Kulturfiltrat oder aus dem Mycel durch bekannte extraktive Verfahren isolieren. Die Reinigung erfolgt unter Anwendung üblicher Reinigungssehritte, wie zum Beispiel durch Fällungen aus aktiven mit inaktiven Lösungsmitteln oder durch üeberfuhren in schwerlösliche Salze. Besonders geeignet sind bekannte Reinigungsverfahren, wie z.B.

Chromatographie an Aluminiumoxiden, Kieselgelen, Sephadex LH-20 usw. in den jeweils geeigneten Lösungsmittel systemen. Wie die bekannten Ergotpeptine sind auch diese neuen 9'-Thia-ergopeptine gegen Tageslicht empfindlich. In freier Form und in polaren Lösungsmitteln isomerisieren sie bis zu einem bestimmten Gleichgewicht in die jeweils andere Form.

t»*» V #

B · ir 4

- 24 - 100-5632

In Salzform, wie sie z.B. mit Methansulfonsäure hergestellt werden können, sind 9'-Thia-ergotamin und 9'-Thia-ergocristin über längere Zeit stabil.

Erfindungsgemäss erhaltene Verbindungen können, falls erwünscht, nach an sich bekannten Methoden in weitere Verbindungen der Formel I überführt werden.

So können die Verbindungen der Formel I, worin R₃ und/oder R. und/oder R_ft für Wasserstoff stehen,, zu weiteren Verbindungen der Formel I, worin R_ und/oder R₄ Alkyl bedeuten und/oder R_g Methyl bedeutet, alkyliert werden.

Ferner können die Verbindungen der Formel I, worin R₆ und R- zusammen eine einfache Bindung bilden, zu weiteren Verbindungen der Formel I, worin R_ und R_

ο / je Wasserstoff bedeuten, reduziert werden.

Ausserdem können die Verbindungen der Formel I, worin Rg für Wasserstoff steht, halogeniert werden.

Die erfindungsgemässen Verbindungen sind in der Literatur bisher nicht beschrieben worden. Sie weisen im Tierversuch interessante pharmakologische Eigenschaften auf und können daher als Heilmittel verwendet werden.

Insbesondere zeigen diese Verbindungen eine Dopaminrezeptoren-stimulierende Wirkung. Die dopaminergen Eigenschaften konnten an Ratten, bei denen durch eine 6-Hydroxydopamin-Injektion in die substantia nigra eine unilaterale Verletzung der nigro-neostriatalen Dopaminbahn erzeugt wurde, mit Dosen zwischen etwa

- 25 - 100-5632

0,5 bis 100 mg/kg festgestellt v/erden [Methode nach ü. Ungerstedt, Acta physiol. scand. Suppl. 367, 69-93 (1971)]. Nach Verabreichung des Wirkstoffes war eine deutliche Aktivierung dadurch erkennbar, dass die Ratten in Richtung der nicht denervierten Seite rotierten.

Die neuen Substanzen können aufgrund ihrer dopaminergen Eigenschaften zur Behandlung von Parkinsonismus Anwendung finden.

Ferner besitzen die neuen Verbindungen eine Prolaktinsekretions-hemmende Wirkung. So hemmen sie bei der Ratte die Implantationen nach subkutaner Applikation von Dosen zwischen 0,01 und 1 mg/kg und die Laktation mit Dosen von 1 bis 10 mg/kg p.o. [Lit.:

Experiential 1330 (1978)].

Die neuen Substanzen können aufgrund ihrer Prolaktinsekretions-hemmenden Eigenschaften z.B. zur Laktationshemmung, Galaktorrhoehemmung, zur Behandlung des hyperprolaktinaemischen Hypogonadismus und der Akromegalie oder zur Behandlung von Prolaktinomen Anwendung finden.

Ferner bewirken die neuen Substanzen am Schlaf/Wach-Zyklus bei der chronisch implantierten Ratte ab ca. 3 mg/kg i.p. oder 10 mg/kg p.o. eine Reduktion der Dauer des paradoxalen Schlafes und eine Verlängerung des Wachzustandes [siehe J.M. Vigouret et al., Pharmacology 16, 1, 156 - 173 (1978)]. üeberdies bewirken sie bei 0,3 mg/kg i.p. eine Erhöhung des Glukosestoffwechsels in Hirnnervenkernen sensorischer Informationsverarbeitung (Methode nach L. Solokoff, Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism 1981, 3., 7-36, H. E. Savaki et al., Brain Research 1982, 233, 347 und J. McCulloch et al., Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism 1981, JL, 133-136).

- 26 - 100-5632

Aufgrund dieser Resultate sind die neuen Substanzen für die Behandlung der senilen Demenz, insbesondere im Frühstadium und zur Vigilanzerhöhung geeignet.

Ausserdem besitzen die erfindungsgemässen Verbindungen vasokonstriktorische Aktivität, welche in vitro an Spiralstreifen der Arteria carotis externa des Hundes [E. Müller-Schweinitzer,'Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol., 292, 113 - 118 (1976)], mit Dosen ab 10 nM/Liter gezeigt werden kann.

Aufgrund ihrer vasokonstriktorischen Wirkung werden die neuen Substanzen zur Behandlung der Migräne verwendet.

Ferner bewirken sie an der Ratte mit zerstörtem Gehirn und Rückenmark [Brit. J. Pharmac. Chemother. 3_0 (1967), 78 - 87] mit einer Dosis von etwa 5 bis etwa 50 yg/k'g i.v. einen langanhaltenden pressorischen Effekt verbunden mit einer Blutdrucksteigerung. An der Mellander-Katze [Angiologica 3 (1966), 77 - 99} 0 bewirken sie eine starke, dosisabhängige und langanhaltende Konstriktion der Kapazitätsgefässe in Dosen von etwa 0,5 bis etwa 5 0 ,ug/kg i.a.

Aufgrund dieser Aktivität können die Substanzen als venentonisierende Mittel Anwendung finden.

Schliesslich bewirken die erfindungsgemässen Verbindungen aufgrund der Ergebnisse am Schlaf/Wach-Zyklus eine serotoninerge Wirkung. Im Hinblick auf diese Wirkung und die Ergebnisse am Ungerstedt-Modell können sie als Antidepressiva vor allem bei älteren Leuten Anwendung finden.

- 27 - 100-5632

Gegenstand der Erfindung sind auch pharmazeutische Zusammensetzungen, die die erfindungsgemässen Verbindungen enthalten. Für ihre Herstellung können die in der Pharmazie gebräuchlichen Hilfs- und Trägerstoffe verwendet v/erden.

Ferner betrifft die Erfindung die Anwendung der
neuen Substanzen als Pharmazeutika, beispielsweise bei der therapeutischen Behandlung/ z.B. zur Behandlung des Parkinsonismus oder als Prolaktinsekretionshemmer.

In den nachfolgenden Beispielen, die die Erfindung näher erläutern, erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden und sind unkorrigiert.

β *■ *·■«

- 28 - 100-5632

Beispiel 1 (Verfahren a); 9,lO-Dihydro-9'-thia-a-erqokryptin oder N-([2'R,5'S,10'aS,10'bS]-Hexahydro-lOb-hydroxy-5-isobutyl~2-isopropyl-3,6~dioxo-8H,IQH-oxazolo[3,2-a] thiazolo[4_/3-c]pyrazin-2-yl)-6-methyl-5R-ergolin-8ßcarboxamid oder

[5'α,10α]-9,lQ-Dihydro-12'-hydroxy-2'-(1-methyläthyl)-5'-(2-methylpropyl)-9'-thiaergotaman-3',6 *,18-trion

30 ml absolutes Dimethylformamid werden unter Rühren auf - 15 ° abgekühlt und tropfenweise mit einer Lösung von 1 ml Oxalylchlorid in 5 ml absolutem Acetonitril versetzt. Anschliessend trägt man 2,95 g trockene 9,10-Dihydro-lysergsäure ein, wobei unter vorübergehender Lösung ein grauweisser Niederschlag ausfällt. Nach 30 Minuten Rühren bei 0 ° verdünnt man unter starkem Kühlen mit 6 ml absolutem Pyridin und trägt 1,40 g (2R,5S,10aS,1ObS)-2-Amino-dihydro~ 10b-hydroxy-5-isobutyl-2-isopropyl-8H,10H-oxazolo [3,2-a]thiazolo[4,3-c]pyrazin~3(2H),6(5H)-dion-0 hydrochlorid ein, rührt kräftig während 2 Stunden und lässt die Temperatur langsam von - 10 ° bis 0 ° steigen.

Zur Aufarbeitung wird unter starker Kühlung mit 6,5 ml Citrat-Puffer pH = 4 verdünnt und mit 2N-Soda—Lösung alkalisch gestellt. Nach dreimaliger Extraktion mit Methylenchlorid, Trocknen über Natriumsulfat, Filtrieren und Eindampfen der Extrakte wird das Rohprodukt an 100 g Kieselgel ehromatographiert, wobei die Titelverbindung mit 3 % Methanol in Methylenchlorid .eluiert und aus Methylenchlorid/Aether kristallisiert wird.

Smp.: 182 - 184 ° (Zers.); [ct]£^u = + 9,6° (c = 0,5 in Dimethylformamid).

100-5632

Das Ausgangsmaterial kann wie folgt hergestellt werden:

Zu einer Lösung von 95,8 g N-tert.Butyloxycarbonyl-L-leucin in 450 ml absolutem Aether werden 61,0 g L-Thiazolidin-4-carbonsäure-methy!ester in 450 ml absolutem Aether zugegeben. Nach 15 Minuten Rühren bei Raumtemperatur wird eine Lösung von 94,4 g Dicyclohexylcarbodiimid in 200 ml absolutem Aether zugetropft. Nach 90 Minuten Rühren bei Raumtemperatur wird vom Harnstoff abfiltriert. Das Filtrat wird der Reihe nach mit IN-Salzsäure-Lösung, Eiswasser, 2N-Natriumbicarbonat-Lösung und Eiswasser extrahiert.

Nach dreimaliger Nachextraktion mit Aether werden die organischen Phasen vereinigt, mit Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft. Das resultierende gelbe Harz wird direkt weiter umgesetzt. Man löst das so erhaltene, geschützte Dipeptid in 350 ml absolutem Methylenchlorid und versetzt die klare Lösung unter Eiskühlung mit 140 ml Trifluoressigsäure. Nach 16 Stunden Stehenlassen bei Raumtemperatur wird die rotbraune Lösung am Rotationsverdampfer eingeengt, in Methylenchlorid aufgenommen und mit 2N~Soda-Lösung alkalisch gestellt. Nach zweimaliger Nachextraktion mit Methylenchlorid werden die organischen Phasen vereinigt, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft. Die Titelverbindung kristallisiert nach Aufnahme in Aether und Zugabe von Hexan in weissen Kristallen vom

«· *»»··· »· ·· Τ1ΟΟΟΟΠ

- 30 - 100-5632

Smp. 142 - 143 °; [cc]^ = - 113 ° (c = 0,8 in Chloroform).

72,7 g (6S,8aS)-Dihydro-6-isobutyl-3H-thiazolo [3,4-a]pyrazin-5(6H),8(7H)-dion in 175 ml absolutem Dioxan werden mit 114 ,5 g S(+)-Isopropyl-benzyloxymalonsäure-äthyl-esterchlorid und 50,9 g 2,6-Lutidin vermengt und 4 Stunden bei + 70 ° gerührt. Nach Verdünnen mit 1 Liter Aether wird der Reihe nach je zweimal mit 2N-Salzsäure-Lösung und gesättigter Natriumbicarbonat-Lösung geschüttelt. Die wässrigen Phasen werden noch zweimal mit Aether nachextrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und am Vakuum eingedampft. Das bräunliche Rohprodukt wird an 2,4 kg Kieselgel chromatographiert, wobei das Acylierungsprodukt mit 2 % Methanol in Methylenchlorid als gelbes OeI eluiert wird, welches direkt weiter umgesetzt wird.

Man löst das gelbe OeI in 600 ml Trifluoressigsäure und lässt die Lösung 18 Stunden bei Raumtemperatur stehen. Nach Einengen der rotbraunen Lösung wird der Rückstand in 1 Liter Methylenchlorid aufgenommen und mit 2N-Soda-Lösung alkalisch gestellt. Die wässerige Phase wird noch zweimal mit 300 ml Methylenchlorid nachextrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft.

100-5632

Das rotbraune Rohprodukt wird an 2,4 kg Kieselgel chromatographiert, wobei die Titelverbindung mit 2 % Methanol in Methylenchlorid eluiert wird.

Kristallisation aus Aether/Petroläther ergibt

20

weisse Kristalle vom Smp. 106 - 108 °; [^al - 7,5 ° (c = 1,0 in Chloroform).

-2-carbon säure

27,6 g (2R,5S,10aS,10bS)-Hexahydro-lOb-hydroxy-5-isobutyl-2-isopropyl-3,6-dioxo-8H,10H-oxazolo [3 , 2-a]thiazolo[4,3-c]pyrazin-2-carbonsäureäthylester werden in 600 ml 1N-Natronlauge gelöst und 5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Zur Aufarbeitung wird bei 0 ° mit 2N-SaIzsäure-Lösung auf pH = 4 ₇5 gestellt und wiederholt mit Essigester extrahiert. Nach Trocknen der organischen Extrakte und Eindampfen des Lösungsmittels unterhalb + 30 ° und anschliessendem Verdünnen mit Aether erhält man die Titelverbindung als weisse Kristalle vom Smp. 149 - 151 ° (Zers.).

In ein auf - 15 ° gekühltes, gerührtes Gemisch'von 7,0 ml absolutem Dimethylformamid und 100 ml absolutem Methylenchlorid tropft man innert 10 Minuten eine Lösung von 6,0 ml Oxalylchlorid in 50 ml absolutem Methylenchlorid zu und rührt

y 9 H vw« t* · ·

- 32 - 100-5632

noch weitere 10 Minuten. Nach Verdünnen mit 100 ml absolutem Aether werden 17,3 g (2R,5S,1OaS,1ObS) Hexahydro-1Ob-hydroxy-5-isobutyl-2-isopropyl-3,6-dioxo-8H,10H-oxazolo[3,2-a]thiazolo[4,3-c]pyrazin- 2-carbonsäure rasch eingetragen, wobei eine klare Lösung entsteht, die noch 10 Minuten bei - 10 ° gerührt wird. Dann überschichtet man mit einer Lösung von 30 g Natriumazid in 120 ml Wasser, verdünnt mit 800 ml Methylenchlorid und schüttelt das 2-Phasengemisch 4 Minuten kräftig. Dann fügt man 1 Liter eiskalte, gesättigte Natriumbicarbonat-Lösung hinzu, trennt die organische Phase ab und trocknet gut über Natriumsulfat. Nach Einengen des Lösungsmittels und Verdünnen mit abs. Aether erhält man die Titelverbindung als weisse Kristalle. Smp. 100 ° (Verpuffung).

12£λ5§_λ1 OaS^l ObS )_-2-Amino^dihYd rg-1 Ob-hvdroxY-5-

S_-, 2-a]_thiazolo

Eine Lösung von 12,7 g (2R,5S,1OaS,1ObS)-Hexahydro 10b-hydroxy-5-isobutyl-2-isopropyl~3,6-dioxo-8H, lOH-oxazolo[3,2-a]thiazolo[4,3-c]pyrazin-2-carbonylazid in 180 ml absolutem Methyl-äthylketon wird mit 3,18 ml 10N-Salzsäure-Lösung versetzt und während 15 Minuten unter Rückfluss gekocht. Nach Eindampfen des Reaktionsgemisches und Verdünnen mit absolutem Aether erhält man die Titelverbindung als gelbliche Kristalle. Smp. 123 - 126 ° (Zers.).

- 33 - 100-5632

Beispiel 2 (Verfahren a):

9 ' -Thia-p.-ergokryptinin und 9 ' -Thia-a-erg'okryptin. oder N-([2'R,5'S,10'aS,10'bS]-Hexahydro-lOb-hydroxy-5-isobutyl-2-isopropyl-3,6-dioxo-8H,10H-oxazolo[3,2-a] thiazoio[4,3-c]pyrazin-2-yl)9,lO-didehydro-6-metnyl-5R-ergolin-8a-carboxamid und

N-([2'R,5¹S,10'aS,10'bS]-Hexahydro-lOb-hydroxy-5-isobutyl-2-isopropyl-3,6-dioxo-8H/10H-oxazolo[3,2-a] thiazolo[4_/3-c]pyrazin-2-yl)9,lO-didehydro-6-methyl- SR-ergolin-SS-carboxamid oder

[5'α,8a]-12'-Hydroxy-2'-(1-methyläthyl)-5'-(2-methylpropyl)-9'-thiaergotaman-3',6',18-trion und [5 'cc] -12 ' -Hydroxy-2 ' - (1-methyläthyl) -5 ' - (2-methylpropyl)-9'-thiaergotaman-3',6',18-trion

2,50 g wasserfreie Lysergsäure werden in 25 ml absolutem Dimethylformamid durch Zugabe von 2,11 g Trifluoressigsäure gelöst und unter Rühren auf - 10 gebracht. Bei dieser Temperatur tropft man innert 5 Minuten eine Mischung von 2,52 g Trifluoressigsäureanhydrid in 15 ml absolutem Acetonitril zu und rührt die klare Lösung noch 10 Minuten. Anschliessend trägt man unter starker Kühlung 15 ml Pyridin und 2,71 g (2R,5S,10aS,10bS)-2-Amino-dihydro-10b-hydroxy-5-isobutyl-2-isopropyl-8H,10H-oxazolo[3,2-a]thiazoio [4,3-c]pyrazin-3(2H),6(5H)-dion-hydrochlorid ein und rührt das Reaktionsgemisch 1 Stunde zwischen - 10 ° bis 0 ° weiter.

Zur Aufarbeitung verdünnt man mit 2 00 ml Methylenchlorid und schüttelt mit 100 ml 2N-Soda-Lösung gut durch. Die wässrige Phase wird noch dreimal mit je 100 ml Methylenchlorid nachextrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird an 250 g Kieselgel chromatographiert,

όIlÖ

- 34 -

100-5632

wobei mit 2 % Methanol in Methylenchlorid reines 9' -Thia-ct-ergokryptinin eluiert wird, das aus Methanol kristallisiert. Smp. 228 - 230 ° (Zers.)i

20
[α] = + 281 ° (c = 0,8 in Dimethylformamid).

Mit 3 % Methanol in Methylenchlorid werden zuerst

Mischfraktionen, dann das reine 9'-Thia-a-ergokryptin eluiert, das aus Aether kristallisiert. Smp. 20 3 205 ° (Zers.); [α]^° = + 46 ° (c = 0,7 in Dimethylformamid) .

10 Beispiel 3 (Verfahren b):

9'-Thia-ergotamin und 9'-Thia-ergotaminin

1. Züchtung des Stammes NRRL 12043 a) Vorkultur

Die Konidien einer Schrägagarkultur des Claviceps

9 purpurea Stammes NRRL 1204 3 (etwa 10 ) werden in 10 ml sterilem Wasser suspendiert. Mit 1 ml dieser Konidien-Suspension werden 2 00 ml eines Vorkulturmediums folgender Zusammensetzung

Saccharose	4 H₂
ProfIo
	0

Ammoniumoxalat	O
Ca (NO₃) ₂.	0
KH₂PO₄
MgSO₄. 7H₂
KCl
FeSO₄. 7H₂
ZnSO . 7H₂

destilliertes Wasser

g/Liter 100

10

0,25 0,25 0,125 0,0166 0,0068 1 Liter

100-5632

welches sich in 500 ml Erlenmeyerkolben befindet, angeimpft j das pH wird mit NH₄OH auf 6,5 eingestellt. Das Medium wird 20 Minuten bei 120° sterilisiert. Diese Vorkultur wird bei 24° rotierend 5 Tage geschüttelt (180 UpM, 5 cm Kreis)- Am Ende des Wachstums hat die Kultur ein pH von 5,3 und ein Myceltrockengewicht von 22 g/L.

b)

Mit 10 ml der Vorkultur werden 50 ml eines Hauptkulturmediums folgender Zusammensetzung

g/Liter 24 0

Saccharose Ammoniumoxalat

Ca (NO	₃)₂. 4H₂O
MgSO₄.	7H₂O
KH₂PO₄
KCl
FeSO₄.	7H₂O
ZnSO..	7H₂O

destilliertes Wasser

ad

9,6

2,5

0,625 0,625 0,312 0,0252 0,0102 1 Liter

welches sich in 500 ml Erlenmeyerkolben befindet, angeimpft; das pH wird mit NH.OH-25%ig auf 6,2 eingestellt. Das Medium wird 20 Minuten bei 110° sterilisiert .

Diese Kultur wird bei 24° auf einer Rundschüttelmaschine (180 UpM, 5 cm Kreis) inkubiert. Nach 4 Tagen Bebrütungszeit werden pro Kultur 90 mg L-Thiazolidin-4-carbonsäure zugegeben. Die Kulturen werden noch 10 Tage auf der Rundschüttelmaschine inkubiert. Nach beendeter Fermentation werden die Kulturen abfiltriert. Das Mycelium wird schonend getrocknet. Das Trockenmycelgewicht der Hauptkultur beträgt 85 g/L. Der Alkaloidgehalt beträgt

- 36 - 100-5632

12 mg/g. Der Anteil an 9'-Thia-ergotamin + 9'-Thia-ergotaminin beträgt 10 % des Gesamtalkaloidgehaltes.

2. Isolierung der Titelverbindungen

500 g Trockenmycel werden zweimal mit je 16 00 ml Methanol + 2 % konz. Ammoniak sowie zweimal mit je 1200 ml Methanol während je 5 Minuten mit einem ültra-Turrax-Gerät homogenisiert und die vereinigten FiI-träte im Vakuum bei max. 40° Badtemperatur eingedampft (ca. 50g weinroter Rückstand). Dieser Rückstand wird in 500 ml Methanol gelöst und in einem Chromatographie-Rohr von 10 cm Durchschnitt durch 500 g Aluminiumoxid der Aktivitätsstufe II (Woelm) filtriert, mit 2000 ml Methanol nachgewaschen und das gesamte Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft (25 g gelber Schaum). Dieser Rückstand wird nun an der 200-fachen Menge Kieselgel 60 (Merck) in Methylenchlorid + 2 % Methanol chromatographisch aufgetrennt. Die Fraktions-Rückstände werden dünnschicht-chromatographisch untersucht und diejenigen Fraktionen, welche nur Substanzflecke entsprechend 9' -Thia-ergotamin enthielten (vgl. Rf-Werte in Tabelle 1), vereinigt.

Fraktionen, die nach dünnschichtchromatographischer Analyse und entsprechend ihrem Rf-Wert nur 9'-Thia-ergotamin enthalten, werden in Essigester gelöst, durch eine Talkschicht

- 37 - 100-5632

blankfiltriert und nach Konzentrierung im Vakuum mit wenig Hexan versetzt, wobei das Alkaloid auskristallisiert, ümkristallisation aus dem gleichen Lösungsmittel liefert reine Kristalle von weisser bis gelblicher Farbe. Smp.: ab 199° langsame Zersetzung; [CC]₁. ~ -165° (c = 0,5 in Chloroform).

mg

9'-Thia-ergotamin werden in wenig Aethanol gelöst und mit einer alkoholischen Lösung, enthaltend 29 mg Methansulfonsäure, versetzt, wobei das Alkaloid als Methansulfonat auskristallisiert, ümkristallisation aus Methanol liefert ein reines, weisses Salz. Smp. : ab 2.
Methanol).

20

Smp.: ab 211° Zersetzung; [«K = + 76° (c = 0,51 in

21z?i?i§r§H22t§5}iSiSi ^Die Chr oma togrammfrakt ionen mit dünnschichtchromatographisch einheitlichem Fleck und Rf-Wert (siehe Tabelle 1) werden in Essigester gelöst, vereinigt und durch eine Talkschicht klarfiltriert. Die konzentrierte Lösung wird mit wenig Hexan versetzt, wobei das Alkaloid in weisser kristalliner Form ausfällt, ümkristallisation aus dem gleichen Lösungsmittel ergibt die reine Verbindung. Smp.: ab 199°

20
Zersetzung; 1>]_D = +343° (c = 0,55 in Chloroform).

Tabelle 1

Dünnschicht-chromatographische Rf-Werte im Vergleich zu Ergotamin (Et) und Ergotaminin (Et-in).

- 38 -

100-5632

10

15

Schicht und Pliessmittel	Thia- Et	Et	Thia- Et-in	Et-in .
Alox¹⁾
Essigester/sec.Butanol 9:1	0,44	0,34	0,68	0,59
Toluol/iso-Propanol 9:1	0,58	0,50	0,69	0,63
Toluol/iso-Propanol 19:1	0,30	0,24	0,58	0,46
Kieselgel²*
Toluol/iso-Propanol 85:15	0,15	0,11	0,43	0,31
CH-Cl„/MeOH 93:7 ^Δ	0,25	0,22	0,65	0,52

2)

Aluminiumoxid-Fertigplatten Merck F 254 (Typ E) Kieselgel-Fertigplatten Merck F 254.

20

Auf Dünnschichtplatten erscheinen die Substanzflecke im UV-Licht 254 nm als blauviolette und bei 366 nm als hellblaue Flecke. Auch können sie mit Joddämpfen als braune Flecke erkannt werden.

25

• Das für die Ergotpeptine typische van ürk-Reagens bewährt sich ausgezeichnet zur Detektion der Substanzflecke, Nach dem Besprühen erscheinen diese Verbindungen mit blauvioletter Farbe, die durch Einwirkung des Tageslichtes oder durch Ueberströmen mit einem Hauch Königswasserdämpfen intensiviert werden.

■-=-· Γ: β

- 39 - 100-5632

Beispiel 4 (Verfahren b); 9¹-Thia~ergocristin und 9'-Thia-ergocristinin

1. Züchtung des Stammes NRRI. 12044

Der Stamm NRRL 12044 wird analog zu Beispiel 3 gezüchtet. Das Trockenmycelgewicht der Hauptkultur beträgt 80 g/L. Der Alkaloidgehalt beträgt 10 mg/g. Der Anteil an Titelverbindungen beträgt 8 % des Gesamtalkaloidgehaltes.

2. Isolierung der Titelverbindungen

500 g Trockenmycel werden zweimal mit je 1500 ml Methanol + 2 % konz. Ammoniak und zweimal mit je 1500 ml Methanol mit einem Ultraturrax-Gerät je 5 Minuten homogenisiert. Die vereinigten Filtrate werden im Vakuum bei max. 40 ° Badtemperatur eingedampft (190 g weinroter Rückstand). Nach dem Lösen in 900 ml Methanol wird durch eine 10 cm hohe Schicht aus 600 g Aluminiumoxid (basisch, Aktivi'tätsstufe 2) filtriert, mit 2000 ml Methanol nachgewaschen und das Filtrat im Vakuum zur Trockene eingedampft (108 g).

Dieser Rückstand wird nun in Methanol an 3000 g Sephadex LH-20 aufgetrennt und Fraktionen zu 200 ml aufgefangen und eingedampft. Die Fraktionsrückstände, die dunnschichtchromatographisch die neuen Thia-ergotpeptide enthielten, werden vereinigt (526 mg) und nochmals an 120 g Sephadex LH-20 in Methanol chromatographiert, woraus 156 mg reines Gemisch von 9'-Thiaergocristin/-cristinin erhalten werden. Die Trennung dieser beiden Verbindungen erfolgte durch bekannte chromatographische Methoden an Kieselgel (Merck) mit Methylenchlorid + 2 % Methanol.

- 40 - 100-5632

Fraktionsrückstände, die nach dünnschichtchromatographischer Analyse und entsprechend ihrem Rf-Wert (vgl. Tabelle 2) nur 9'-Thia-ergocristin enthalten_/ werden vereinigt und aus Benzol kristallisiert (28 mg). Smp. : 146 °

20 sintern unter langsamer Zersetzung; [α] = - 176 (c = 0,5 in Chloroform).

2 Chromatogramm-

fraktionen, die sich dünnschichtchromatographisch einheitlich zeigen und den Substanzfleck mit den entsprechenden Rf-Werten (siehe Tabelle 2) aufweisen, werden vereinigt und aus Aethanol-Essiqester kristallisiert. Schmelzpunkt: 209 - 210 ° unter Zersetzung; ^[a]D = + 344 ° (c = 0,51 in CHCl₃).

100-5632

Tabelle 2

Dünnschicht-chromatographisehe Rf-Werte im Vergleich zu Ergocristin (Ec) und Ergocristinin (Ec-in).

Schicht und Fliessmittel	Thia- Ec	Ec	Thia- Ec-in	Ec-in
Alox¹^
Essigester/see. Butanol 9:1	0,68	0,63	0,78	0,70
Toluol/iso-Propanol 9:1	0,68	0,62	0,69	0,66
Toluol/iso-Propanol 19:1	0,50	0,42	0,58	0,47
Kieselgel²*
Toluol/iso-Prooanol 85:15	0,37	0,28	0,56	0,48
CH₉Cl₉/MeOH 93:7 ^z	0,47	0,41	0,70	0,60

2)

Zur Detektion der Substanζflecken, siehe Beispiel 3.

- 42 - 100-5632

Beispiel 5

Analog zu Beispiel 1 können auch folgende Verbindungen hergestellt werden:

a) das 9,10-Dihydro-2-methyl-9'-thia-a-ergokryptin, Smp.: 176 - 180 ° (Zers.); t«]^⁰ = - 1/25 ° (c = 0,6 in Dimethylformamid)

b) das 9,10-Dihydro-6-nor-6-äthyl-9'~thia-a-ergo-

20 kryptin, Smp.: 212 - 214 ° (Zers.); [a]*^υ => +7,9° (c = 0,5 in Dimethylformamid)

c) das 9,10-Dihydro-9'-thia-ergotamin. Smp.: 235 237 °f t^a]ß - ~ 23,6 ° (c = 0,5 in Dimethylformamid)

Analog zu Beispiel 2 können auch das 9'-Thiaergotamin, das 9¹-Thia-ergotaminin, das 9'-Thiaergocristin, das 9'-Thia-ergocristinin sowie folgende Verbindung hergestellt werden:

d) das 2-Brom-9 '-thia-ot-ergokryptin, Smp.: 170-173 °, (Zers.)? [<*]q° = + 16,4 °(c=O,7 in Dimethylformamid) und das 2-Brom-^t9'-thia-a~ergokryptinin, Smp.: 198-200 ° (Zers.); t«]^⁰ - + 355 ° (c -O in Dimethylformamid) .

Analog zu Beispiel 3 oder 4 können auch das 9'-Thiaa-ergokryptin und das 9'-Thia-a-ergokryptinin hergestellt werden, indem man einen Ergokryptin/Ergokryptinin produzierenden Stamm verwendet.

Claims

SANDOZ-PATENT-GMBH 7850 Lörrach Case 100-5632 Ergopeptinderivate, Verfahren zu deren Herstellung, diese enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen und ihre Anwendung in der therapeutischen Behandlung Patentansprüche:

1.J-. Ein cyclisches 9 '-Thia-peptidergotalkaloid in Form der freien Base oder eines Säureadditionssalzes.

2. Eine Verbindung der Formel I,

- 2 - 100-5632

worin

R. eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeutet,

R₂ eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen oder eine Benzylgruppe bedeutet,

R₅ Wasserstoff bedeutet oder, falls R_ für Wasserstoff steht, auch Brom bedeuten kann, Rg und R₇ je für Wasserstoff stehen oder

R, und R_ zusammen eine einfache Bindung bilden ο /

oder

R₆ für Methoxy und R₇ für Wasserstoff stehen und

R„ Wasserstoff, eine Methylgruppe oder ein

Halogenatom mit einer Ordnungszahl von 9 bis

35 bedeutet,

in Form der freien Base oder eines Säureadditionssalzes.

3. Eine Verbindung der Formel Ia,

Ia

- 3 - 100-5632

worin entweder

R, für Methyl steht und R- Isobutyl oder Benzyl

bedeutet oder
R. für Aethyl steht und R_? Benzyl bedeutet

oder
R, für Isopropyl steht und R_ Isopropyl

sek.-Butyl, Isobutyl oder Benzyl bedeutet,

in Form der freien Base oder eines Säureadditionssalzes .

4. Das 9,10-Dihydro-9'-thia-a-ergokryptin in Form der freien Base oder eines Säureadditionssalzes.

. 5. Das 9,10-Dihydro-2-methyl-9'-thia-a-ergokryptin in Form der freien Base oder eines Säureadditionssalzes.

6. Verfahren zur Herstellung eines cyclischen 9'-Thia-peptidergotalkaloids in Form der freien Base oder eines Säureadditionssalzes, dadurch gekennzeichnet, dass man ein entsprechendes reaktives Lysergsäurederivat mit einem Säureadditionssalz eines entsprechenden schwefelhaltigen Aminocyclols kondensiert und die erhaltene , Verbindung gewünschtenfalls in ein Säureadditionssalz überführt.

- 4 - 100-5632

7. Verfahren zur Herstellung eines cyclischen 9'-Thia-peptidergotalkaloids, das von einem fermentativ herstellbaren 9' -Methylen-peptidergotalkaloid abgeleitet ist, in Form der freien Base oder eines Säureadditionssalzes, dadurch gekennzeichnet, dass man einer flüssigen Kultur eines die entsprechende 9'-Methylen-Verbindung produzierenden Stammes L-Thiazolidin-4-carbonsäure oder ein Salz dieser Säure zugibt und die erhaltene Verbindung gewünschtenfalls in ein Säureadditionssalz überführt.

8. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel I gemäss Anspruch 2 und ihren Säureadditionssalzen, dadurch gekennzeichnet, dass man ein Säureadditionssalz einer Verbindung der Formel II oder eines Prekursors davon,

II

worin R, und R„ wie im Anspruch 2 definiert sind, mit einem reaktiven Säurederivat einer Verbindung der.Formel III oder eines Prekursors davon,

COOH

III

- 5 - 100-5632

worin R_, R./ R_c, R,, R_ und R₀ wie im ο 4 b ο / ο

Anspruch 2 definiert sind, kondensiert und die erhaltenen Verbindungen gewünschtenfalls in ihre Säureadditionssalze überführet.

9. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel Ia gemäss Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass man einer flüssigen Kultur eines die entsprechende 9'-Methylen-Verbindung produzierenden Stammes L-Thiazolidin-4-carbonsäure oder ein Salz dieser Säure zugibt.

10. Eine pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend eine Verbindung gemäss einem der Ansprüche 1 bis 5, zusammen mit pharmakologisch indifferenten Stoffen.

11. Eine Verbindung gemäss einem der Ansprüche 1 bis 5, zur Anwendung als Pharmazeutikum.

12. Eine Verbindung der Formel II gemäss Anspruch 3 und ihre Säureadditionssalze.

- 6 - 100-5632

13. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel II gemäss Anspruch 8 und ihrer Säureadditionssalze , dadurch gekennzeichnet, dass man in einer Verbindung der Formel IX,

IX

worin R, und R_? wie im Anspruch 2 definiert sind/ die Azidocarbonylgruppe in eine Aminogruppe überführt und die erhaltenen Verbindungen gewünschtenfalls in ihre Säureadditionssalze überführt.

14. Eine Verbindung der Formel V, VII, VIII, IX oder X wie in der Beschreibung definiert.

15. Ein Ergotamin/Ergotaminin produzierender Stamm von Claviceps purpurea, hinterlegt unter der Nummer NRRL 1204 3.

16. Ein Ergocristin/Ergocristinin produzierender Stamm von Claviceps purpurea, hinterlegt unter der Nummer NRRL 12044.