JPH05331172A - 生物活性プソイロチンａおよびｄ、アスペルギルス・フミガタスから得られる新規な代謝産物、その調製方法およびその使用 - Google Patents
生物活性プソイロチンａおよびｄ、アスペルギルス・フミガタスから得られる新規な代謝産物、その調製方法およびその使用Info
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- JPH05331172A JPH05331172A JP4324546A JP32454692A JPH05331172A JP H05331172 A JPH05331172 A JP H05331172A JP 4324546 A JP4324546 A JP 4324546A JP 32454692 A JP32454692 A JP 32454692A JP H05331172 A JPH05331172 A JP H05331172A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 生物活性プソイロチンＡおよびＤ、Aspergil
lus fumigatusから得られる新規な代謝産物、その調製
方法およびその使用に関する。 【構成】 Aspergillus fumigatusを用いることにより
下記式の新規な生物活性代謝産物が調製される。 【化１】 プソイロチンＡおよびＤは、特にアポモルヒネ拮抗剤と
して用いられる。
lus fumigatusから得られる新規な代謝産物、その調製
方法およびその使用に関する。 【構成】 Aspergillus fumigatusを用いることにより
下記式の新規な生物活性代謝産物が調製される。 【化１】 プソイロチンＡおよびＤは、特にアポモルヒネ拮抗剤と
して用いられる。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は生物活性プソイロチンＡおよび
Ｄ、Aspergillus fumigatus（アスペルギルス・フミガ
タス）から得られる新規な代謝産物、その調製方法およ
びその使用に関する。
Ｄ、Aspergillus fumigatus（アスペルギルス・フミガ
タス）から得られる新規な代謝産物、その調製方法およ
びその使用に関する。
【０００２】カビから得られる二次代謝産物は長年にわ
たり知られており、大規模に治療用途に使用されてい
る。生物活性プソイロチン（Ａ−Ｅ）は子嚢菌Pseudeir
otiumovalisの生物学的不活性代謝産物として記載され
ている(Fungal Metabolite 2,W. B. Turner, Academic
Pross, 1983)。最近、Aspergillus fumigatus株SANK 10
588から得られるシネラゾールが報告された(O. Ando
等., J. Antibiotics 44,383, 1991)。構造の点から、
この代謝産物はプソイロチン群に分類することもでき、
抗真菌活性を有している。更に、Aspergillus fumigatu
s Freseniusから得られる物質（Ｃ22Ｈ22ＮＯ6）が抗
腫瘍活性を有するものとして報告されている(Mizogami
等., IP 0,310,680）。
たり知られており、大規模に治療用途に使用されてい
る。生物活性プソイロチン（Ａ−Ｅ）は子嚢菌Pseudeir
otiumovalisの生物学的不活性代謝産物として記載され
ている(Fungal Metabolite 2,W. B. Turner, Academic
Pross, 1983)。最近、Aspergillus fumigatus株SANK 10
588から得られるシネラゾールが報告された(O. Ando
等., J. Antibiotics 44,383, 1991)。構造の点から、
この代謝産物はプソイロチン群に分類することもでき、
抗真菌活性を有している。更に、Aspergillus fumigatu
s Freseniusから得られる物質（Ｃ22Ｈ22ＮＯ6）が抗
腫瘍活性を有するものとして報告されている(Mizogami
等., IP 0,310,680）。
【０００３】今回Aspergillus fumigatusが発酵中に生
物活性代謝産物プソイロチンＡ（式Ｉ）およびＤ（式I
I）を産生することが解った。プソイロチンＡおよびＤ
は薬理学的作用、即ち、治療効果を有し、相当する薬理
学的利点を有するアポモルヒネ拮抗剤として好都合に使
用できる。
物活性代謝産物プソイロチンＡ（式Ｉ）およびＤ（式I
I）を産生することが解った。プソイロチンＡおよびＤ
は薬理学的作用、即ち、治療効果を有し、相当する薬理
学的利点を有するアポモルヒネ拮抗剤として好都合に使
用できる。
【０００４】従って本発明は： １．下記式：
【化２】 の化合物； ２．培養液中ＩおよびIIの化合物が蓄積するまで栄養培
地中Aspergillus fumigatusを培養する式ＩおよびIIの
化合物の調製方法； ３．薬理学的活性物質として、特にアポモルヒネ拮抗剤
としての式ＩおよびIIの化合物の使用；に関する。
地中Aspergillus fumigatusを培養する式ＩおよびIIの
化合物の調製方法； ３．薬理学的活性物質として、特にアポモルヒネ拮抗剤
としての式ＩおよびIIの化合物の使用；に関する。
【０００５】特に好ましい実施態様において以下に本発
明を詳述する。更に本発明は請求範囲の記載事項により
決定される。
明を詳述する。更に本発明は請求範囲の記載事項により
決定される。
【０００６】本発明の化合物はAspergillus fumigatu
s、好ましくはAspergillus fumigatusDSM 6598を用いて
調製する。菌株はネコの皮膚試料より単離した。Asperg
illusfumigatus DSM 6598は１９９１年５月７日に、ブ
タペスト条約の規定に従って、German Collection of M
ikrooganisms and Cell Cultures GmbHに上記した番号
で寄託した。
s、好ましくはAspergillus fumigatusDSM 6598を用いて
調製する。菌株はネコの皮膚試料より単離した。Asperg
illusfumigatus DSM 6598は１９９１年５月７日に、ブ
タペスト条約の規定に従って、German Collection of M
ikrooganisms and Cell Cultures GmbHに上記した番号
で寄託した。
【０００７】菌株DSM 6598の代わりに、これらの化合物
を合成できる限り、突然変異株や変異型も当然使用でき
る。このような突然変異株は物理的なそれ自体知られた
方法で製造でき、例えば、紫外線またはＸ線等の照射、
または化学的変異原性物質、例えばエチルメタンスルホ
ネート（ＥＭＳ）、２−ヒドロキシ−４−メトキシベン
ゾフェノン（ＭＯＢ）またはＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ
−Ｎ−ニトログアニジン（ＭＮＮＧ）を用いて行ってよ
い。
を合成できる限り、突然変異株や変異型も当然使用でき
る。このような突然変異株は物理的なそれ自体知られた
方法で製造でき、例えば、紫外線またはＸ線等の照射、
または化学的変異原性物質、例えばエチルメタンスルホ
ネート（ＥＭＳ）、２−ヒドロキシ−４−メトキシベン
ゾフェノン（ＭＯＢ）またはＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ
−Ｎ−ニトログアニジン（ＭＮＮＧ）を用いて行ってよ
い。
【０００８】式ＩおよびIIの化合物を合成する突然変異
株および変異型のスクリーニングは以下り方法で行う。
株および変異型のスクリーニングは以下り方法で行う。
【０００９】 − 発酵後の菌糸体の除去 − ポリスチレン吸着樹脂上の培養濾液の吸着 − ５０％メタノールによる溶離 − 濃縮およびシリカゲルプレート上の薄層クロマトグ
ラフィーによる分析；溶離剤としてクロロホルム−メタ
ノール混合物（９：１）使用 − テトラゾリウムブルーの噴霧による検出(ドイツDarm
stadt, Merck社製等)
ラフィーによる分析；溶離剤としてクロロホルム−メタ
ノール混合物（９：１）使用 − テトラゾリウムブルーの噴霧による検出(ドイツDarm
stadt, Merck社製等)
【００１０】Aspergillus fumigatus DSM 6598は白色の
空気中菌糸体と緑色の分生子を有する。これは分生子胞
子を形成し、これは、Aspergillus fumigatusに特徴的
であり、長い平行な分生子鎖を有する。
空気中菌糸体と緑色の分生子を有する。これは分生子胞
子を形成し、これは、Aspergillus fumigatusに特徴的
であり、長い平行な分生子鎖を有する。
【００１１】炭素源、窒素源および通常の無機塩類を含
有する栄養培地中では、Aspergillus fumigatusは式Ｉ
およびIIの化合物を産生する。Aspergillus fumigatus
DSM 6598は特に大量に式ＩおよびIIの化合物を産生す
る。
有する栄養培地中では、Aspergillus fumigatusは式Ｉ
およびIIの化合物を産生する。Aspergillus fumigatus
DSM 6598は特に大量に式ＩおよびIIの化合物を産生す
る。
【００１２】好気的発酵のための適当な好ましい炭素源
は同化できる炭水化物および糖アルコール、例えばグル
コース、ラクトースまたはＤ−マンニトール並びに炭水
化物含有天然産物、例えば麦芽エキスである。考えられ
る窒素含有栄養物は、アミノ酸、ペプチドおよび蛋白な
らびにそれらの分解生成物、例えばペプトンまたはトリ
プトンであり、また肉エキス、種子類、例えば、トウモ
ロコシ、小麦、豆類、大豆または綿花、アルコールを生
産する際の蒸留残渣、肉粉または酵母エキス、さらにア
ンモニウム塩および硝酸塩である。栄養溶液が含有でき
る無機塩類は、例えば、アルカリ金属またはアルカリ土
類金属、鉄、亜鉛、コバルトおよびマンガンの塩化物、
炭素塩、硫酸塩またはリン酸塩である。
は同化できる炭水化物および糖アルコール、例えばグル
コース、ラクトースまたはＤ−マンニトール並びに炭水
化物含有天然産物、例えば麦芽エキスである。考えられ
る窒素含有栄養物は、アミノ酸、ペプチドおよび蛋白な
らびにそれらの分解生成物、例えばペプトンまたはトリ
プトンであり、また肉エキス、種子類、例えば、トウモ
ロコシ、小麦、豆類、大豆または綿花、アルコールを生
産する際の蒸留残渣、肉粉または酵母エキス、さらにア
ンモニウム塩および硝酸塩である。栄養溶液が含有でき
る無機塩類は、例えば、アルカリ金属またはアルカリ土
類金属、鉄、亜鉛、コバルトおよびマンガンの塩化物、
炭素塩、硫酸塩またはリン酸塩である。
【００１３】式ＩおよびIIの化合物の生成は、栄養溶液
の総重量を基にして、麦芽エキス約０.２〜５％、好ま
しくは１〜４％、および酵母エキス０.０２〜０.５％、
好ましくは０.１〜０.４％、並びにグルコース０.２〜
５.０％、好ましくは０.５〜２％および(ＮＨ4)2ＨＰＯ
4 ０.０４〜０.０６％を含有する栄養溶液中で特に良好
に進行する。培養は好気的に行い、例えば、振盪フラス
コまたは発酵器内で振盪または撹拌しながら、場合によ
り空気または酸素を導入しながら、液中で行う。これは
温度範囲約１５〜３０℃、好ましくは約２０〜３０℃、
特に２３〜２８℃で行う。pH領域は１〜７、好都合には
２.５〜４.５である。微生物はこれらの条件下で、一般
的には２４〜３００時間、好ましくは３６〜１４０時間
の期間に渡り培養する。好都合には、培養は数段階、即
ち、１回以上の予備培養をまず液体栄養培地中で行い、
そしてこれらを次に実際の産生培地、即ち本培養培地
に、例えば容量比１：１０で接種する。予備培養は、例
えば、胞子形成した菌糸体を栄養溶液に接種し、約３６
〜１２０時間、好ましくは４８〜７２時間生育させるこ
とにより得られる。胞子形成した菌糸体は、例えば、菌
株を約３〜４０日間、好ましくは４〜１０日間、固体ま
たは液体の栄養培地上、例えば酵母麦芽寒天上またはジ
ャガイモデキストロース寒天上で生育させることにより
得られる。
の総重量を基にして、麦芽エキス約０.２〜５％、好ま
しくは１〜４％、および酵母エキス０.０２〜０.５％、
好ましくは０.１〜０.４％、並びにグルコース０.２〜
５.０％、好ましくは０.５〜２％および(ＮＨ4)2ＨＰＯ
4 ０.０４〜０.０６％を含有する栄養溶液中で特に良好
に進行する。培養は好気的に行い、例えば、振盪フラス
コまたは発酵器内で振盪または撹拌しながら、場合によ
り空気または酸素を導入しながら、液中で行う。これは
温度範囲約１５〜３０℃、好ましくは約２０〜３０℃、
特に２３〜２８℃で行う。pH領域は１〜７、好都合には
２.５〜４.５である。微生物はこれらの条件下で、一般
的には２４〜３００時間、好ましくは３６〜１４０時間
の期間に渡り培養する。好都合には、培養は数段階、即
ち、１回以上の予備培養をまず液体栄養培地中で行い、
そしてこれらを次に実際の産生培地、即ち本培養培地
に、例えば容量比１：１０で接種する。予備培養は、例
えば、胞子形成した菌糸体を栄養溶液に接種し、約３６
〜１２０時間、好ましくは４８〜７２時間生育させるこ
とにより得られる。胞子形成した菌糸体は、例えば、菌
株を約３〜４０日間、好ましくは４〜１０日間、固体ま
たは液体の栄養培地上、例えば酵母麦芽寒天上またはジ
ャガイモデキストロース寒天上で生育させることにより
得られる。
【００１４】発酵の過程は培養液のpHまたは菌糸体の容
量、並びにクロマトグラフィーを用いる方法、例えば薄
層クロマトグラフィー、または高速液体クロマトグラフ
ィー等によりモニターできる。式ＩおよびIIの化合物は
菌糸体および培養濾液の双方に含有される。
量、並びにクロマトグラフィーを用いる方法、例えば薄
層クロマトグラフィー、または高速液体クロマトグラフ
ィー等によりモニターできる。式ＩおよびIIの化合物は
菌糸体および培養濾液の双方に含有される。
【００１５】培養液から上記化合物を単離するには、生
成物の化学的、物理的および生物学的特性を考慮しなが
ら知られた方法で行う。培養液中または個々の単離段階
における代謝産物の濃度を測定するためには、例えば、
溶離剤としてブタノール／氷酢酸／水または酢酸エチル
／メタノール／水混合物を用いたシリカゲル上の薄層ク
ロマトグラフィーを用いることができる。薄層クロマト
グラフィー分離における検出は、例えば、ＵＶ消光およ
び染色剤、例えばアニスアルデヒドまたはテトラゾリウ
ムブルーを用いて行うことができ、形成した物質の量は
標準溶液に好都合に匹敵する。
成物の化学的、物理的および生物学的特性を考慮しなが
ら知られた方法で行う。培養液中または個々の単離段階
における代謝産物の濃度を測定するためには、例えば、
溶離剤としてブタノール／氷酢酸／水または酢酸エチル
／メタノール／水混合物を用いたシリカゲル上の薄層ク
ロマトグラフィーを用いることができる。薄層クロマト
グラフィー分離における検出は、例えば、ＵＶ消光およ
び染色剤、例えばアニスアルデヒドまたはテトラゾリウ
ムブルーを用いて行うことができ、形成した物質の量は
標準溶液に好都合に匹敵する。
【００１６】式ＩおよびIIの化合物の単離のためには、
培養ブロスおよび菌糸体を先ず、例えば濾過または遠心
分離により分離する。培養濾液を吸着樹脂、例えばAmbe
rliteのXAD吸着剤に適用し、これに式Ｉの化合物を結合
させ、これより溶媒／水混合物、例えば、メタノール／
水４：１で溶離させる。
培養ブロスおよび菌糸体を先ず、例えば濾過または遠心
分離により分離する。培養濾液を吸着樹脂、例えばAmbe
rliteのXAD吸着剤に適用し、これに式Ｉの化合物を結合
させ、これより溶媒／水混合物、例えば、メタノール／
水４：１で溶離させる。
【００１７】式ＩおよびIIの化合物の混合物の分離は当
業者に知られた方法により、シリカゲルカラム（標準圧
力クロマトグラフィー）を用いて行う。クロロホルム−
メタノール混合物（１：１）を溶離剤とする。プソイロ
チンＡがまず溶出し、次にプソイロチンＤが溶出する。
この分離は薄層クロマトグラフィーにより再度調べるこ
とができる。
業者に知られた方法により、シリカゲルカラム（標準圧
力クロマトグラフィー）を用いて行う。クロロホルム−
メタノール混合物（１：１）を溶離剤とする。プソイロ
チンＡがまず溶出し、次にプソイロチンＤが溶出する。
この分離は薄層クロマトグラフィーにより再度調べるこ
とができる。
【００１８】式ＩおよびIIの化合物の純粋なものを単離
するためには、適当な物質、好ましくはシリカゲル、酸
化アルミニウム、イオン交換剤または吸着樹脂上のクロ
マトグラフィーを行い、その後、有機、極性溶媒または
溶媒混合物、例えば、酢酸アルキルエステル、酢酸アル
キルエステルと低級アルカノールとの混合物、クロロホ
ルムまたは塩化メチレンまたはこれらの溶媒と低級アル
カノールとの混合物、場合により水との混合物を用いて
溶離するか、イオン交換樹脂に適するpH勾配または塩勾
配、例えば塩化ナトリウムまたはトリス−（ヒドロキシ
メチル）−アミノメタン塩酸塩（トリス緩衝液）を用
い、そして生物学的に活性な画分を合わせる。
するためには、適当な物質、好ましくはシリカゲル、酸
化アルミニウム、イオン交換剤または吸着樹脂上のクロ
マトグラフィーを行い、その後、有機、極性溶媒または
溶媒混合物、例えば、酢酸アルキルエステル、酢酸アル
キルエステルと低級アルカノールとの混合物、クロロホ
ルムまたは塩化メチレンまたはこれらの溶媒と低級アル
カノールとの混合物、場合により水との混合物を用いて
溶離するか、イオン交換樹脂に適するpH勾配または塩勾
配、例えば塩化ナトリウムまたはトリス−（ヒドロキシ
メチル）−アミノメタン塩酸塩（トリス緩衝液）を用
い、そして生物学的に活性な画分を合わせる。
【００１９】式ＩおよびIIの化合物は固体状態およびpH
３〜８、特に５〜７の溶液状態で安定であり、その結
果、通常の薬学低組成物に配合できる。
３〜８、特に５〜７の溶液状態で安定であり、その結
果、通常の薬学低組成物に配合できる。
【００２０】本発明の化合物は、アポモルヒネ拮抗剤と
して活性を有するという点で生物学的活性を有する。
して活性を有するという点で生物学的活性を有する。
【００２１】本発明は同様に式ＩおよびIIの化合物の薬
学的組成物にも関する。生物学的に活性を有するプソイ
ロチンＡおよびＤは神経弛緩剤、即ち精神薬剤に属す
る。
学的組成物にも関する。生物学的に活性を有するプソイ
ロチンＡおよびＤは神経弛緩剤、即ち精神薬剤に属す
る。
【００２２】薬剤の調製においては、薬学的に許容され
る担体、例えば希釈剤および／または賦形剤も活性成分
とともに用いることができる。生理学的に許容される物
質は、本明細書では活性化合物と混合後、これを投与に
適する形態にするような物質という意味である。
る担体、例えば希釈剤および／または賦形剤も活性成分
とともに用いることができる。生理学的に許容される物
質は、本明細書では活性化合物と混合後、これを投与に
適する形態にするような物質という意味である。
【００２３】適する固体または液体の薬学的形態は、例
えば、錠剤、糖衣錠、粉末、カプセル、坐剤、シロッ
プ、乳濁液、懸濁液、ドロップまたは注射用溶液ならび
に活性成分の遅延放出が可能な製品である。多く用いら
れる賦形剤または希釈剤の例は、例えば、種々の糖類ま
たは殿粉の形態、セルロース誘導体、炭酸マグネシウ
ム、ゼラチン、動物性および植物性の油、ポリエチレン
グリコール、水または他の適当な溶媒、例えば水含有緩
衝剤であり、これらはグルコースまたは塩の添加により
等張液にできる。
えば、錠剤、糖衣錠、粉末、カプセル、坐剤、シロッ
プ、乳濁液、懸濁液、ドロップまたは注射用溶液ならび
に活性成分の遅延放出が可能な製品である。多く用いら
れる賦形剤または希釈剤の例は、例えば、種々の糖類ま
たは殿粉の形態、セルロース誘導体、炭酸マグネシウ
ム、ゼラチン、動物性および植物性の油、ポリエチレン
グリコール、水または他の適当な溶媒、例えば水含有緩
衝剤であり、これらはグルコースまたは塩の添加により
等張液にできる。
【００２４】更に、界面活性剤、着色剤およびフレーバ
ー剤、安定剤および保存料も適宜本発明の薬学的組成物
中の添加物として使用できる。薬理学的に許容される重
合体賦形剤、例えばポリビニルピロリドン、または他の
薬学的に許容される添加剤、例えばシクロデキストリン
または他糖類も使用できる。
ー剤、安定剤および保存料も適宜本発明の薬学的組成物
中の添加物として使用できる。薬理学的に許容される重
合体賦形剤、例えばポリビニルピロリドン、または他の
薬学的に許容される添加剤、例えばシクロデキストリン
または他糖類も使用できる。
【００２５】製品は経口、経腸または非経腸的に投与す
ることができる。好ましくは製品は投与単位で調製でき
る。特に、錠剤および坐剤は適切な投与単位である。
ることができる。好ましくは製品は投与単位で調製でき
る。特に、錠剤および坐剤は適切な投与単位である。
【００２６】放出を遅延させたり、放出を長時間に延長
するために経口投与のための投与単位は、適切な重合
体、ワックス等で粒状の形態の活性化合物をコーティン
グまたは包埋することにより、適宜マイクロカプセル化
することができる。
するために経口投与のための投与単位は、適切な重合
体、ワックス等で粒状の形態の活性化合物をコーティン
グまたは包埋することにより、適宜マイクロカプセル化
することができる。
【００２７】非経腸投与は液体剤形、例えば、筋肉注射
または皮下注射用の滅菌溶液および懸濁液を用いて行う
ことができる。このような剤形は、例えば水性または油
性の媒体のような適当な生物学的に許容される希釈剤中
に活性成分の計量された量を溶解または懸濁し、場合に
より溶液または懸濁液を滅菌し、適当な安定剤、乳化剤
および／または保存料および／または抗酸化剤を使用す
ることにより調製する。
または皮下注射用の滅菌溶液および懸濁液を用いて行う
ことができる。このような剤形は、例えば水性または油
性の媒体のような適当な生物学的に許容される希釈剤中
に活性成分の計量された量を溶解または懸濁し、場合に
より溶液または懸濁液を滅菌し、適当な安定剤、乳化剤
および／または保存料および／または抗酸化剤を使用す
ることにより調製する。
【００２８】医薬生成物は一般に慣用的な方法で製造す
る。投与方法は患者の性質、年齢、体重、性別および臨
床状態により変化する。
る。投与方法は患者の性質、年齢、体重、性別および臨
床状態により変化する。
【００２９】以下の実施例において本発明を更に詳述す
る。パーセントは特段の記載が無い限り重量によるもの
である。
る。パーセントは特段の記載が無い限り重量によるもの
である。
【００３０】
１．ａ） 産生菌株の胞子懸濁液の調製 ５００ml容の滅菌三角フラスコ中の栄養溶液１００ml
（水道水１リットル中麦芽エキス２０ｇ、酵母エキス２
ｇ、グルコース１０ｇ、(ＮＨ3)2ＨＰＯ4 ０.５ｇ、滅
菌前pH６.０）に菌株DSM 6598を接種し、回転振盪器上
で２５℃１４０rpmで７２時間インキュベートした。そ
の後、培養液２０mlを、栄養培地（ジャガイモ注入４.
０ｇ／リットル〔水１０００ml中ジャガイモ２００ｇか
ら注入〕、Ｄ−グルコース２０.０ｇ／リットル、滅菌
前pH５.６）の入った滅菌５００ml容三角フラスコ中均
一に分散し、これに、寒天１５ｇ／リットルを添加して
固化し、デカンテーションした。培養液は２５℃で１０
〜１４日間インキュベートした。この時間の後に生じた
胞子を、市販の非イオン性界面活性剤（例えばServaの
トリトンR X100)１滴を含有する脱イオン水５００mlで
フラスコから洗い出し、さらにすぐに使用するか５０％
グリセロール中−２２℃で保存した。
（水道水１リットル中麦芽エキス２０ｇ、酵母エキス２
ｇ、グルコース１０ｇ、(ＮＨ3)2ＨＰＯ4 ０.５ｇ、滅
菌前pH６.０）に菌株DSM 6598を接種し、回転振盪器上
で２５℃１４０rpmで７２時間インキュベートした。そ
の後、培養液２０mlを、栄養培地（ジャガイモ注入４.
０ｇ／リットル〔水１０００ml中ジャガイモ２００ｇか
ら注入〕、Ｄ−グルコース２０.０ｇ／リットル、滅菌
前pH５.６）の入った滅菌５００ml容三角フラスコ中均
一に分散し、これに、寒天１５ｇ／リットルを添加して
固化し、デカンテーションした。培養液は２５℃で１０
〜１４日間インキュベートした。この時間の後に生じた
胞子を、市販の非イオン性界面活性剤（例えばServaの
トリトンR X100)１滴を含有する脱イオン水５００mlで
フラスコから洗い出し、さらにすぐに使用するか５０％
グリセロール中−２２℃で保存した。
【００３１】ｂ） 三角フラスコ中の産生菌株の培養液
または予備培養液の調製 上記ａ）に記載した栄養溶液１００mlの入った滅菌５０
０ml容三角フラスコに傾斜で生育した培養物または胞子
懸濁液０.２mlを接種し、１４０rpm２５℃で振盪器上で
インキュベートした。式ＩおよびIIの化合物の最大産生
は約１２０時間後に達成された。同じ栄養溶液から得た
７２時間齢の液中培地（接種量約５％）は１０リットル
および１００リットルの発酵器に接種するのに十分であ
った。
または予備培養液の調製 上記ａ）に記載した栄養溶液１００mlの入った滅菌５０
０ml容三角フラスコに傾斜で生育した培養物または胞子
懸濁液０.２mlを接種し、１４０rpm２５℃で振盪器上で
インキュベートした。式ＩおよびIIの化合物の最大産生
は約１２０時間後に達成された。同じ栄養溶液から得た
７２時間齢の液中培地（接種量約５％）は１０リットル
および１００リットルの発酵器に接種するのに十分であ
った。
【００３２】２．一般式ＩおよびIIの化合物の調製 １０リットル容の発酵器を下記条件下で操作した。
【００３３】 栄養培地： ２０ｇ／リットル 麦芽エキス １０ｇ／リットル グルコース ２ｇ／リットル 酵母エキス ０.５ｇ／リットル (ＮＨ4)2ＨＰＯ4 pH６.０ （滅菌前） インキュベーション時間： １２０時間 インキュベーション温度： ３５℃ 撹拌器速度： ２００rpm 通気： ２１空気／分
【００３４】エタノール性ポリオール溶液数滴を反復添
加することにより発泡を防止することができる。最大産
生は約９６時間後に達成された。採取時のpHは約３.５
であった。収量は約１０mg／リットルの範囲であった。
加することにより発泡を防止することができる。最大産
生は約９６時間後に達成された。採取時のpHは約３.５
であった。収量は約１０mg／リットルの範囲であった。
【００３５】３．一般式ＩおよびIIの化合物の単離 DSM 6598号の発酵の終了の後、培養ブロスを約２％の濾
過助剤（例えばセライトR）を添加して濾過した。処理
は図１に示すフローチャートに従って行った。
過助剤（例えばセライトR）を添加して濾過した。処理
は図１に示すフローチャートに従って行った。
【００３６】プソイロチンＡおよびＤの確認 プソイロチンＡおよびＤは不定型の固体として単離さ
れ、例えばＣＨ2Ｃｌ2、ＣＨＣｌ3、酢酸エチル、アセ
トン、エタノールおよびイソプロパノールに可溶であ
る。プソイロチンＡおよびＤの物理的化学データはそれ
ぞれ、W. Breitenstein等の〔Helvetica Chimica Acta,
Vol. 64, 第２版(1981)、No. 38, p. 379ff〕およびP.
BlochとChr. Tammの〔Helvetica Chimica Acta, Vol.
64., Fassg.1(1981), No. 29, p. 304ff〕に報告されて
いる。
れ、例えばＣＨ2Ｃｌ2、ＣＨＣｌ3、酢酸エチル、アセ
トン、エタノールおよびイソプロパノールに可溶であ
る。プソイロチンＡおよびＤの物理的化学データはそれ
ぞれ、W. Breitenstein等の〔Helvetica Chimica Acta,
Vol. 64, 第２版(1981)、No. 38, p. 379ff〕およびP.
BlochとChr. Tammの〔Helvetica Chimica Acta, Vol.
64., Fassg.1(1981), No. 29, p. 304ff〕に報告されて
いる。
【００３７】プソイロチンＡおよびＤの生物活性試験 アポモルヒネ拮抗剤としての式ＩおよびIIの化合物の活
性をマウスで試験した。この目的のために、アポモルヒ
ネを先ず一回、腹腔内または経口的に、１％溶液の形態
で注射した（希釈剤：Tylose, 例：Hoechst AGのMethoc
el）。用量はマウスの９５％で約３０分間持続する登攀
行動が引出されるように選択した（アポモルヒネ１.５m
g／kgマウス：皮下注射）。アポモルヒネ投与前に既に
一定の登攀行動を示している動物は試験から除外した。
アポモルヒネ投与前３０分または６０分にプソイロチン
Ａおよび／またはＤを投与した（腹腔内または経口）。
記録は４回行った。即ち、アポモルヒネ投与直前および
投与後１０、２０および３０分に行った。各マウスの登
攀挙動を本試験では評価した。
性をマウスで試験した。この目的のために、アポモルヒ
ネを先ず一回、腹腔内または経口的に、１％溶液の形態
で注射した（希釈剤：Tylose, 例：Hoechst AGのMethoc
el）。用量はマウスの９５％で約３０分間持続する登攀
行動が引出されるように選択した（アポモルヒネ１.５m
g／kgマウス：皮下注射）。アポモルヒネ投与前に既に
一定の登攀行動を示している動物は試験から除外した。
アポモルヒネ投与前３０分または６０分にプソイロチン
Ａおよび／またはＤを投与した（腹腔内または経口）。
記録は４回行った。即ち、アポモルヒネ投与直前および
投与後１０、２０および３０分に行った。各マウスの登
攀挙動を本試験では評価した。
【００３８】試験基準はアポモルヒネにより誘発された
登攀挙動の抑制が起こるか否かとした。１０分後にはプ
ソイロチンＡおよび／またはＤで処置したマウスの大部
分は壁上に１本または２本の足のみを載せているのが観
察された。２０分後には、殆ど全ての動物が登攀挙動抑
制の明らかな徴候を示した（四肢４本とも地上）。
登攀挙動の抑制が起こるか否かとした。１０分後にはプ
ソイロチンＡおよび／またはＤで処置したマウスの大部
分は壁上に１本または２本の足のみを載せているのが観
察された。２０分後には、殆ど全ての動物が登攀挙動抑
制の明らかな徴候を示した（四肢４本とも地上）。
【図１】培養ブロスの処理工程を示すフローチャートで
ある。
ある。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 マンフレート・ガライス ドイツ連邦共和国デー−8000ミユンヒエ ン．ヒルダハシユトラーセ11ツエー (72)発明者 アクセル・ツエーク ドイツ連邦共和国デー−3400ゲツテインゲ ン．ブリユーダー−グリム−アレー22 (72)発明者 ジークリト・フイリツプス ドイツ連邦共和国デー−3100ツエレ．ブル シユトラーセ13
Claims (10)
- 【請求項１】 下記式： 【化１】 の化合物。
- 【請求項２】 薬剤として使用するための式ＩまたはII
の化合物。 - 【請求項３】 式ＩまたはIIの化合物および薬学的賦形
剤を含有する薬剤。 - 【請求項４】 培養液中式ＩまたはIIの化合物が蓄積す
るまで栄養培地中Aspergillus fumigatusを培養する請
求項１記載の式ＩまたはIIの化合物の調製方法。 - 【請求項５】 培養液中式ＩまたはIIの化合物が蓄積す
るまで栄養培地中Aspergillus fumigatus DSM 6598を培
養する請求項１記載の式ＩまたはIIの化合物の調製方
法。 - 【請求項６】 栄養培地が、栄養溶液の総重量に対し、
麦芽エキス０.２〜５％、酵母エキス０.１〜０.５％、
グルコース０.５〜２％および(ＮＨ4)2ＨＰＯ4 ０.０１
〜０.１％を含有する請求項４または５記載の方法。 - 【請求項７】 培養を１８〜３０℃およびpH１〜７で行
う請求項４〜６の１つ以上に記載の方法。 - 【請求項８】 精神疾患に対抗するための薬剤を調製す
るための式ＩまたはIIの化合物の使用。 - 【請求項９】 アポモルヒネ拮抗剤としての式Ｉまたは
IIの化合物の使用。 - 【請求項１０】 Aspergillus fumigatus DSM 6598なら
びに請求項１に記載の式ＩまたはIIの化合物を産生する
限り、その変異型および突然変異株。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4140383:5 | 1991-12-07 | ||
| DE4140383 | 1991-12-07 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05331172A true JPH05331172A (ja) | 1993-12-14 |
Family
ID=6446511
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4324546A Pending JPH05331172A (ja) | 1991-12-07 | 1992-12-04 | 生物活性プソイロチンａおよびｄ、アスペルギルス・フミガタスから得られる新規な代謝産物、その調製方法およびその使用 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0546475A1 (ja) |
| JP (1) | JPH05331172A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013138617A (ja) * | 2011-12-28 | 2013-07-18 | Kirin Holdings Co Ltd | 微生物醗酵による１４−デヒドロエルゴステロールの生産法 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104774774B (zh) * | 2015-05-08 | 2018-01-23 | 黑龙江大学 | 一株产pseurotin A的甘草内生真菌 |
| GB201713763D0 (en) * | 2017-08-28 | 2017-10-11 | Univ Leuven Kath | Treatment of epilepsy |
-
1992
- 1992-12-04 EP EP92120725A patent/EP0546475A1/de not_active Withdrawn
- 1992-12-04 JP JP4324546A patent/JPH05331172A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013138617A (ja) * | 2011-12-28 | 2013-07-18 | Kirin Holdings Co Ltd | 微生物醗酵による１４−デヒドロエルゴステロールの生産法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0546475A1 (de) | 1993-06-16 |
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