HRP20020838A2 - Inhibitors of human phosphatidyl-inositol 3-kinase delta - Google Patents

Inhibitors of human phosphatidyl-inositol 3-kinase delta Download PDF

Info

Publication number
HRP20020838A2
HRP20020838A2 HRP20020838A HRP20020838A2 HR P20020838 A2 HRP20020838 A2 HR P20020838A2 HR P20020838 A HRP20020838 A HR P20020838A HR P20020838 A2 HRP20020838 A2 HR P20020838A2
Authority
HR
Croatia
Prior art keywords
quinazolin
purin
ylsulfanylmethyl
methyl
chlorophenyl
Prior art date
Application number
Other languages
English (en)
Inventor
Chanchal Sadhu
Ken Dick
Jennifer Treiberg
C Gregory Sowell
Edward A Kesicki
Amy Oliver
Original Assignee
Icos Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Icos Corp filed Critical Icos Corp
Publication of HRP20020838A2 publication Critical patent/HRP20020838A2/hr
Publication of HRP20020838B1 publication Critical patent/HRP20020838B1/xx

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
    • C07D473/16—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
    • C07D473/24—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 one nitrogen and one sulfur atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/28—Oxygen atom
    • C07D473/30—Oxygen atom attached in position 6, e.g. hypoxanthine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom
    • C07D473/34—Nitrogen atom attached in position 6, e.g. adenine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/36—Sulfur atom
    • C07D473/38—Sulfur atom attached in position 6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/40—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with halogen atoms or perhalogeno-alkyl radicals directly attached in position 2 or 6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)

Description

Područje izuma
Ovaj izum odnosi se općenito na fosfatidilinozitol 3-kinaza (PI3K) enzime, te konkretno na selektivne inhibitore aktivnosti PI3K te metode korištenja takvih tvari.
Stanje tehnike
Stanično signaliziranje putem 3’-fosforiliranih fosfoinozitida je uključeno u različitim staničnim procesima, npr. malignoj pretvorbi, signaliziranju čimbenika rasta, upali te imunosti (vidi Rameh et al., J. Biol Chem, 274:8347-8350 (1999) za pregled). Enzim koji je odgovoran za generiranje ovih fosforiliranih signalih produkata, fosfatidilinozitol 3-kinaza (PI 3-kinaza; PI3K), izvorno je identificirana kao aktivnost koja je povezana s virusnim onkorpoteinima i tirozin kinaza receptorom čimbenika rasta koji fosforilira fosfatidilinozitol (PI) i njegove fosforilirane derivate na 3'-hidroksilu inozitolskog prstena (Panayotou et al., Trends Cell Biol 2:358-60 (1992)).
Razine fosfatidilinozitol-3,4,5-trifosfata (PIP3), primarnog produkta aktiviranja PI 3-kinaze, povećavaju se nakon tretiranja stanica različitim agonistima. Aktiviranje PI 3-kinaze, prema tome, vjeruje se da je uključeno u cijelom nizu staničnih odgovora uključujući stanični rast, diferenciranje i apoptozu (Parker et al., Current Biology, 5:577-99 (1995); Yao et al., Science, 267:2003-05 (1995)). Premda nizvodne mete fosforiliranih lipida koje su aktivirane nakon aktiviranja PI 3-kinaze nisu dobro karakterizirane, postojeći dokazi ukazuju da su plekstrin-homologna domena i FYVE-prst domena koja sadrži proteine aktivirane tijekom vezanja različitih fosfatidil-inozitol lipida (Sternmark et al., J Cell Sci, 112:4175-83 (1999); Lemmon et al., Trends Cell Biol, 7:237-42 (1997)). In vitro, neke izoforme protein kinaze C (PKC) izravno su aktivirane pomoću PIP3, pa se pokazalo da je PKC-srodna protein kinaza, PKB, aktivirana pomoću PI 3-kinaze (Burgering et al., Nature, 376:599-602 (1995)).
Trenutačno, familija PI 3-kinaza enzima dijeli se u tri klase, temeljem supstratnih specifičnosti. Klasa I PI3Ks može fosforilirati fosfatidilinozitol (PI), fosfatidil-inozitol-4-fosfat, te fosfatidilinozitol-4,5-bifosfat (PIP2) da se dobiju fosfatidilinozitol-3-fosfat (PIP), fosfatidilinozitol-3,4-bifosfat, odnosno fosfatidilinozitol-3,4,5-trifosfat. Klasa II PI3Ks fosforilira PI i fosfatidilinozitol-4-fosfat, dok klasa III PI3Ks može fosforilirati samo PI.
Početno pročišćavanje i molekularno kloniranje PI 3-kinaze pokazalo je da se radi o heterodimeru koji se sastoji od podjedinica p85 i p110 (Otsu et al., Cell, 65:91-104 (1991); Hiles et al., Cell, 70:419-29 (1992)). Od tada, identificirane su četiri različite klase I PI3Ks, koje su označene PI3K α, β, δ i γ, a svaka se sastoji od različitih 110 kDa katalitičkih podjedinica i regulacijskih podjedinica. Konkretnije, tri su katalitičke podjedinice, tj. p110α, p110β i p110δ, u interakciji s istom regulacijskom podjedinicom, p85; dok je p110γ u interakciji s drugom regulacijskom podjedinicom, p101. Kao što je niže opisano, načini ekspresije svake od ovih PI3K u humanim stanicama i tkivima međusobno se razlikuje. Bez obzira na obilje informacija koje su sakupljene posljednjih godina o staničnim funkcijama PI 3-kinaza općenito, uloga pojedinih izoforma većinom je nepoznata.
Opisano je kloniranje volovskog p110α. Ovaj protein identificiran je kao protein srodan proteinu Saccharomyces cerevisiae: Vps34p, proteinu koji je uključen u obradi proteina vakuola. Za rekombinantni p110α produkt se također pokazalo da je povezan s p85α, tako da se aktivnost PI3K prenosi COS-1 stanicama. Vidi Hiles et al., Cell, 70, 419-29 (1992).
Kloniranje druge humane p110 izoforme, koja je označena p110β, opisali su Hu et al., Mol Cell Biol, 13:7677-88 (1993). Za ovu izoformu se kaže da je povezana s p85 u stanicama, i može biti sveprisutno izražena, budući da je p110β mRNA nađena u brojnim humanim i mišjim tkivima, kao i u humanim endotelnim stanicama umbilikalne vene, Jurkatovim humanim leukemijskim T stanicama, bubrežnim stanicama 293 humanog zametka, mišjim 3T3 fibroblastim, HeLa stanicama i stanicama karcinoma mokraćnog mjehura NBT2 štakora. Ovakva široka ekspresija ukazuje na to da je ova izoforma vrlo značajna u signalnim putovima.
Identificiranje p110δ izoforme PI 3-kinaze opisano je u Chantry et al., J Biol Chem, 272:19236-41 (1997). Uočeno je da je humana p110δ izoforma izražena na tkivno ograničeni način. Jako je izražena u limfocitima i limfoidnim tkivima, što ukazuje na to da protein može imati značajnu ulogu u signaliziranju, kojim u imunološkom sustavu upravlja PI 3-kinaza. Pojedinosti koje se odnose na P110δ izoformu mogu se također naći u američkim patentima br. 5,858,753; 5,822,910 i 5,985,589. Vidi također Vanhaesebroeck et al., Proc Natl Acad Sci USA, 94:4330-5 (1997), te međunarodnu publikaciju WO 97/46688.
U svakom od PI3Kα, β i δ podtipova, p85 podjedinica djeluje na lokaliziranju PI 3-kinaze za plazma membranu interakcijom njezine SH2 domene s fosforiliranim tirozinskim reziduama (koje se nalaze u odgovarajućom sekvencijskom kontekstu) u ciljanim proteinima (Rameh et al., Cell, 83:821-30 (1995)). Identificirane su dvije izoforme p85, p85α, koja je izražena svagdje, te p85β koja se primarno nalazi u mozgu i u limfoidnim tkivima (Volinia et al., Oncogene, 7:789-93 (1992)). Povezivanje p85 podjedinice za PI 3-kinazu p110α, β ili δ katalitičkih podjedinica čini se da je neophodna za katalitičku aktivnost i stabilnost ovih enzima.
Nadalje, vezanje Ras proteinima također upravlja aktivnost PI 3-kinaze.
Kloniranje p110γ pokazalo je daljnju složenost unutar PI3K familije enzima (Stoyanov et al., Science, 269:690-93 (1995)). p110γ izoforma je blisko povezana s p110α i p110β (45-48% identitet u katalitičkoj domeni), ali kao što je navedeno ne omogućuje uporabu p85 kao ciljne podjedinice. Umjesto toga, p110γ sadrži jednu dodatnu domenu koja je nazvana “plekstrin homologna domena” blizu njenih amino završetaka. Ova domena omogućuje inerakciju p110γ s 3γ podjedinice heterotrimetrijskih G proteina i čini se da ova interakcija određuje njegovu aktivnost.
p101 regulacijska podjedinica za PI3K-gama je izvorno klonirana u svinje, nakon čega je identificiran humani ortolog (Krugmann et al., J Biol Chem, 274:17152-8 (1999)). Interakcija između N-terminalnog područja p101 s N-terminalnim područjem p110γ čini se da je kritična za PI3Kγ aktiviranje putem gore navedenog Gβγ.
Konstitutivno aktivan PI3K polipeptid opisan je u međunarodnoj publikaciji WO 96/25488. U ovoj publikaciji opisano je priređivanje kimernog fuzijskog proteina u kojem je fragment od 102 rezidue p85 koji je poznat kao inter-SH2 (iSH2) sjedinjuje veznim područjem za N-terminal mišjeg p110. p85 iSH2 domena čini se sposobnom da aktivira PI3K aktivnost na način koji je usporediv s intaktnim p85 (Klippel et al., Mol Cell Biol, 14:2675-85 (1994)).
Dakle, PI 3-kinaze mogu biti identificirane bilo identitetom aminokiselina ili njihovom aktivnošću.
Dodatni članovi ove rastuće genske familije uključuju manje srodne lipidne i proteinske kinaze uključujući Vps34 TORI, te TOR2 od Saccharomyces cerevisiae (te njihove homologe u sisavaca kao što su FRAP i mTOR), genski produkt ataxia telangiectasia (ATR) i katalitičku podjedinicu DNA-ovisne protein kinaze (DNA-PK). Vidi općenito, Hunter, Cell, 83: 1-4 (1995).
PI 3-kinaza čini se da je uključena u određenom broju aspekata leukocitnog aktiviranja. Aktivnost PI 3-kinaze koja je povezana s p85 pokazalo se da je fizički povezana s citoplazmatskom domenom CD28, koja je značajna kostimulacijska molekula za aktiviranje T-stanica kao odgovor T-stanica na antigen (Pages et al., Nature, 369:321-29 (1994); Rudd, Immunity, 4:527-34 (1996)). Aktiviranje T stanica pomoću CD28 snižava prag aktiviranja pomoću antigena i povećava raspon i trajanje proliferacijskog odgovora. Ovi učinci povezani su s povećanjem transkripcije određenog broja gena, uključujući interleukin-2 (IL2), značajan T stanični čimbenik rasta (Fraser et al., Science, 251:313-16 (1991)). Mutiranje CD28 koje je takvo da on ne može više biti u interakciji s PI 3-kinazom vodi do nemogućnosti da se potakne proizvodnja IL2, što ukazuje na značajnu ulogu PI 3-kinaze u T staničnom aktiviranju.
Specifični inhibitori za pojedine članove obitelji enzim je neprocjenjivo pomagalo za odgonetavanje funkcije svakog enzima. Dva spoja, LY294002 i vortmanin, široko se koriste kao inhibitori PI 3-kinaze. Ovi spojevi, međutim, su nespecifični PI3K inhibitori, budući da oni ne prave razliku među četiri člana PI 3-kinaza klase I. Primjerice, vrijednosti IC50 vortmanina u odnosu na svaku od različitih PI 3-kinaza klase I su u rasponu 1-10 nM. Slično, vrijednosti IC50 za LY294002 u odnosu na svaku od ovih PI 3-kinaza je oko 1 μM (Fruman et al., Ann Rev Biochem, 67:481-507 (1998)). Dakle, korisnost ovih spojeva u proučavanju uloge pojedinih PI 3-kinaza klase I je ograničena.
Temeljem istraživanja s vortmaninom, postoji dokaz da je funkcija PI 3-kinaza neophodna u nekim aspektima leukocitne signalizacije putem G-protein vezanih receptora (Thelen et al., Proc Natl Acad Sci USA, 91:4960-64 (1994)). Štoviše, pokazalo se da vortmanin i LY294002 blokiraju neutrofilnu migraciju i otpuštanje superoksida. Međutim, Bez obzira na to što vosi spojevi ne razlikuju međusobno različte izoforme PI3K, ostaje nejasno koje su konkretne izoforme PI3K uključene u ovim fenomenima.
[image]
LY294002
[image]
vortmanin
U svjetlu gore navedenog razmatranja, jasno je da je postojeće znanje nedovoljno u svezi strukturnih i funkcionalnih svojstava enzima PI3-kinaze, uključujući podstanično lokaliziranje, aktivacijska stanja, supstratni afinitet i slično. Štoviše, ostaje da se rasvijetle funkcije koje ovi enzimi vrše u normalnom i bolesnom tkivu. Konkretno, funkcija PI3Kδ u leukocitima prije nije bila određena, pa je znanje koje se odnosi na funkciju u humanoj fiziologiji ograničeno. Koekspresija u ovim tkivima drugih PI3K izoformi je dakle sjedinila napore da se povežu aktivnosti svakog enzima. Nadalje, razdvajanje aktivnosti različitih PI3K izoenzima nije moguće bez identificiranja inhibitora koji pokazuju svojstva selektivnog inhibiranja. Zaista, prijavitelji nisu našli da su demonstrirani takvi selektivni ili specifičniji inhibitori PI3K izozima.
Dakle, postoji potreba u tehnici za daljnjom strukturnom karakterizacijom PI3Kδ polipeptida. Također, postoji potreba za funkcionalnom karakterizacijom PI3Kδ. Nadalje, naše razumijevanje PI3Kδ zahtijeva daljnje elaboriranje strukturnih interakcija p110δ, sa svojom regulacijskom podjedinicom i s ostalim proteinima u stanici. Također ostaje potreba za selektivnim ili specifičnim inhibitorima PI3K izozima, da bi funkcije svakog izozima bile bolje karakterizirane. Konkretno, selektivni ili specifični inhibitori PI3Kδ poželjni su za istraživanje uloge ovog izozima i za razvijanje farmaceutika za moduliranje aktivnosti izozima.
Jedan aspekt ovog izuma je dobivanje spojeva koji inhibiraju biološku aktivnost humanog PI3Kδ. Drugi aspekt ovog izuma je dobivanje spojeva koji inhibiraju PI3Kδ selektivno uz relativno slabu snagu inhibiranja u odnosu na druge PI3K izoforme. Sljedeći aspekt ovog izuma je definiranje metoda za karakteriziranje funkcije humane PI3Kδ. Sljedeći aspekt ovog izuma je definiranje metoda za selektivno moduliranje aktivnosti humane PI3Kδ, te unaprjeđenje medicinskog tretmana bolesti za koje je medijator disfunkcija PI3Kδ. Ostali aspekti i prednosti ovog izuma bit će razumljivi osobi koja prosječno poznaje ovo područje.
Sažetak izuma
Otkriveno je da se ovi i drugi aspekti mogu postići ovim izumom koji je, u jednom svom aspektu, metoda za narušavanje leukocitne funkcije, što obuhvaća dovođenje u dodir leukocita sa spojem koji selektivno inhibira aktivnost fosfatidilinozitol 3-kinaze delta (PI3Kδ) u leukocitima. Sukladno toj metodi, leukociti mogu uključivati stanice koje su odabrane iz skupa kojega sačinjavaju neutrofili, B limfociti, T limfociti i bazofili.
Primjerice, u slučajevima kada leukociti sadrže neutrofile, metoda može obuhvaćati narušavanje bar jedne funkcije neutrofila koja je odbrana iz skupa kojega sačinjavaju stimulirano otpuštanje superoksida, stimulirana eksocitoza i kemotaktična migracija. Poželjno, metoda bitno ne narušava bakterijsku fagocirozu ili uništavanje bakterija pomoću neutrofila. U slučajevima kada leukociti sadrže B limfocite, metoda može obuhvaćati narušavanje proliferacije B limfocita ili proizvodnje antitijela pomoću B limfocita. U slučajevima kada leukociti sadrže T limfocite, metoda može obuhvaćati narušavanje proliferacije T limfocita. U slučajevima kada leukociti sadrže bazofile, metoda može obuhvaćati narušavanje otpuštanja histamina što ga vrše bazofili. U metodama ovog izuma, kada se koristi selektivni inhibitor PI3Kδ, poželjno je da spoj bude bar 10-struko selektivan za inhibiranje PI3Kδ reativno prema ostalim PI3K izoformmama tipa I u staničnoj analizi. Poželjnije, spoj je bar 20-struko selektivan za inhibiranje PI3Kδ relativno prema drugim PI3K izoformama tipa I u staničnoj analizi. Još poželjnije, spoj je bar oko 50-struko selektivan za inhibiranje PI3Kδ relativno u odnosu na ostale izoforme PI3K tipa I u biokemijskoj analizi.
Poželjni selektivni spojevi koji su korisni sukladno navedenim metodama imaju sljedeću strukturu (I):
[image]
gdje je
A proizvoljno supstituiran monociklički ili biciklički prstenasti sustav koji sadrži bar dva atoma dušika, pri čemu je bar jedan prsten aromatski;
X je odabran iz skupa kojega sačinjavaju CHRb, CH2CHRb, te CH=C(Rb);
Y je odabran iz skupa kojega sačinjavaju ništa, S, SO, SO2, NH, O, C(=O), OC(=O), C(=O)O, te NHC(=O)CH2S;
R1 i R2, neovisno, odabrani su iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, aril, heteroaril, halogen, NHC(=O)C1-3alkilenN(Ra)2, NO2, ORa, OCF3, N(Ra)2, CN, OC(=O)Ra, C(=O)Ra, C(=O)ORa, arilORb, Het, NRaC(=O)C1-3alkilenC(=O)ORa, arilOC1-3alkilenN(Ra)2, arilOC(=O)Ra, C1-4alkilenC(=O)ORa, OC1-4alkilenC(=O)ORa, C1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORa, C(=O)NRaSO2Ra, C1-4alkilenN(Ra)2, C2-6alkenilenN(Ra)2, C(=O)NRaC1-4alkilenORa, C(=O)NRaC1-4alkilenHet, OC2-4alkilenN(Ra)2, OC1-4alkilenCH(ORb)CH2N(Ra)2, OC1-4alkilenHet, OC2-4alkilenORa, OC2-4alkilenNRaC(=O)ORa, NRaC1-4alkilenN(Ra)2, NRaC(=O)Ra, NRaC(=O)N(Ra)2, N(SO2C1-4alkil)2, NRa(SO2C1-4alkil), SO2N(Ra)2, OSO2CF3, C1-3alkilenaril, C1-4alkilenHet, C1-6alkilenOR13, C1-3alkilenN(Ra)2, C(=O)N(Ra)2, NHC(=O)C1-C3alkilen-aril, C3-8cikloalkil, C3-8heterocikloalkil, aril-OC1-3alkilenN(Ra)2, arilOC(=O)Rb, NHC(=O)C1-3alkilen-C3-8heterocikloalkil, NHC(=O)C1-3alkilenHet, OC1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORb, C(=O)C1-4alkilenHet, te NHC(=O)haloC1-6alkil; ili
R1 i R2 zajedno čine 3- ili 4-članu alkilensku ili alkenilensku lančastu komponentu 5- ili 6-članog prstena, koja proizvoljno sadrži bar jedan heteroatom;
R3 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju proizvoljno supstituirani vodik, C1-6alkil, C3-8ciklo-alkil, C3-8heterocikloalkil, C1-4alkilencikloalkil, C2-6alkenil, C1-3alkilenaril, arilC1-3alkil, C(=O)Ra, aril, heteroaril, C(=O)ORa, C(=O)N(Ra)2, C(=S)N(Ra)2, SO2Ra, SO2N(Ra)2, S(=O)Ra, S(=O)N(Ra)2, C(=O)NRaC1-4alkilenORa, C(=O)NRaC1-4alkilenHet, C(=O)C1-4alkilenaril, C(=O)C1-4alkilenheteroaril, C1-4alkilenaril proizvoljno supstituiran s jednim ili više atoma halogena, SO2N(Ra)2, N(Ra)2, C(=O)ORa, NRaSO2CF3, CN, NO2, C(=O)Ra, ORa, C1-4alkilenN(CRa)2 te OC1-4alkilenN(Ra)2, C1-4-alkilenheteroaril, C1-4alkilenHet, C1-4alkilenC(=O)C1-4alkilenaril, C1-4alkilenC(=O)C1-4alkilenheteroaril, C1-4alkilenC(=O)Het, C1-4alkilenC(=O)N(Ra)2, C1-4alkilenORa, C1-4alkilenNRaC(=O)Ra, C1-4alkilenO-C1-4alkilenORa, C1-4alkilenN(Ra)2, C1-4alkilenC (=O)-ORa, te C1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORa;
Ra je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, C3-8cikloalkil, C3-8heterociklo-alkil, C1-3alkilenN(Ra)2, aril, arilC1-3alkil, C1-3-alkilenaril, heteroaril, heteroarilC1-3alkil, ted C1-3alkilenheteroaril;
ili dvije Ra skupine uzete zajedno sačinjavaju 5- ili 6-člani prsten, koji proizvoljno sadrži bar jedan heteroatom;
Rb je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, aril, heteroaril, arilC1-3alkil, heteroarilC1-3alkil, C1-3alkilenaril, te C1-3alkilenheteroaril;
Het je 5- ili 6-člani heterociklički prsten, zasićen ili djelomično ili potpuno nezasićen, koji sadrži bar jedan heteroatom koji je odabran iz skupa kojega sačinjavaju kisik, dušik i sumpor, te koji je šproizvoljno supstituiran s C1-4alkil ili C(=O)ORa;
te njihove farmaceutski prihvatljive soli i solvati (npr. hidrati),
pri čemu spoj ima bar oko 10-struko selektivno inhibiranje PI3Kδ relativno prema ostalim PI3K izoformama tipa I u analizi stanica.
U drugoj realizaciji, izum se odnosi na metodu tretiranja zdravstvenog stanja kojemu su medijatori neutrofili, a koja se sastoji u primjeni životinji kojoj je to potrebno učinkovite količine spoja koji selektivno inhibira aktivnost fosfatidilinozitol 3-kinaze delta (PI3Kδ) u neutrofilima. Primjeri zdravstvenih stanja koji se sukladno ovoj metodi mogu tretirati su ona stanja koja su karakterizirana određenom nepoželjnom funkcijom neutrofila koja je odabrana iz skupa kojega sačinjavaju stimulirano otpuštanje superoksida, stimulirana egzocitoza, te kemotaktična migracija. Poželjno je, sukladno ovoj metodi, praktički potpuno neinhibiranje fagocitične aktivnosti ili uništavanja bakterija od strane neutrofila.
U sljedećoj realizaciji, izum se odnosi na metodu narušavanja funkcije osteoklasta, što obuhvaća kontakt osteoklasta sa spojem ovog izuma koji selektivno inhibira aktivnost fosfatidilinozitol 3-kinaze delta (PI3Kδ) u osteoklastima. Sukladno metodi ovog izuma, spoj može sadržavati speciju koja se preferentno veže za kost.
U drugoj realizaciji, izum se odnosi na metodu uklanjanja poremećaja resorpcije kostiju u životinje kojoj je to potrebno, što obuhvaća primjenu životinji kojoj je to potrebno učinkovite količine spoja koji inhibira aktivnost fosfatidilinozitol 3-kinaze delta (PI3Kδ) u osteoklastima životinje. Poremećaj koji se za tretiranje sukladno metodi ovog izuma može smatrati poželjnim je osteoporoza.
U sljedećoj realizaciji, izum se odnosi na metodu za inhibiranje rasta ili proliferacije stanica karcinoma hematopoetskog porijekla, što obuhvaća kontakt stanica karcinoma sa spojem koji selektivno inhibira aktivnost fosfatidilinozitol 3-kinaze delta (PI3Kδ) u stanicama karcinoma. Metoda može imati prednosti u inhibiranju rasta ili proliferacije karcinoma koji je odabran iz skupa kojega sačinjavaju limfomi, multipli mijelomi, te leukemije.
U sljedećoj realizaciji, izum je metoda inhibiranja aktivnosti kinaze fosfatidilinozitol 3-kinaza delta (PI3Kδ) polipeptida, što obuhvaća kontakt PI3Kδ polipeptida sa spojem koji ima generičku strukturu (I).
Poželjni spojevi sukladno metodi ovog izuma odabrani su iz skupa kojega sačinjavaju:
[image]
gdje je
Y odabran iz skupa kojega sačinjavaju ništa, S i NH;
R4 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju H, halogen, NO2, OH, OCH3, CH3 i CF3;
R5 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju H, OCH3 i halogen; ili
R4 i R5 zajedno s C-6 i C-7 kinazolinskim prstenastim sustavom definiraju 5- ili 6-člani aromatski prsten koji proizvoljno sadrži jedan ili više O, N ili S atoma;
R6 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju C1-C6alkil, fenil, halofenil, alkoksifenil, alkil-fenil, bifenil, benzil, piridinil, 4-metilpiperazinil, C(=O)OC2H5 i morfolinil;
Rd, neovisno, je odabran iz skupa kojega sačinjavaju NH2, halogen, C1-3alkil, S(C1-3alkil), OH, NH(C1-3alkil), N(C1-3alkil)2, NH(C1-3alkilenfenil), i
[image] ; i
q je 1 ili 2,
pod uvjetom da bar jedan od R4 i R5 nije H kada je R6 fenil ili 2-klorfenil.
Poželjnije, spoj je odbran iz skupa kojega sačinjavaju:
[image]
(III)
gdje je
Y odabran iz skupa kojega sačinjavaju ništa, S i NH;
R7 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju H, halogen, OH, OCH3, CH3 i CF3;
R8 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju H, OCH3 i halogen; ili
R7 i R8 zajedno s C-6 i C-7 kinazolinskim prstenastim sustavom definiraju 5- ili 6-člani aromatski prsten koji proizvoljno sadrži jedan ili više O, N ili S atoma;
R9 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju C1-C6alkil, fenil, halofenil, alkoksifenil, alkil-fenil, bifenil, benzil, piridinil, 4-metilpiperazinil, C(=O)OC2H5 i morfolinil;
Rd, neovisno, odabran je iz skupa kojega sačinjavaju NH2, halo, C1-3alkil, S(C1-3alkil), OH, NH(C1-3alkil), N(C1-3alkil)2, NH(C1-3alkilenfenil); i
q je 1 ili 2,
pod uvjetom da se bar jedan od R7 i R8 razlikuje od 6-halogena ili 6,7-dimetoksi skupina, te da se R9 razlikuje od 4-klorfenil.
U drugoj realizaciji, izum je metoda narušavanja funkcije leukocita, što obuhvaća kontakt leukocita sa spojem opće formule (I).
U sljedećoj realizaciji, izum je klasa spojeva za koju je uočeno da inhibira PI3Kd aktivnost u biokemijskim i staničnim analizama, te se očekuje da pokaže terapeutski boljitak u zdravstvenim stanjima u kojima je aktivnost PI3Kd prevelika ili nepoželjna. Dakle, izumom se dobiva klasa spojeva koja ima strukturu (II).
Poželjno, spojevi imaju opću strukturu (IV)
[image]
(IV)
gdje je
Y odabran iz skupa kojega sačinjavaju ništa, S i NH;
R10 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju H, halogen, OH, OCH3, CH3 i CF3;
R11 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju H, OCH3 i halogen; ili
R10 i R11 zajedno s C-6 i C-7 kinazolinskog prstenastog sustava definiraju 5- ili 6-člani aromatski prsten koji proizvoljno sadrži jedan ili više O, N ili S atoma;
R12 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju C1-C6alkil, fenil, halofenil, alkilfenil, bifenil, benzil, piridinil, 4-metilpiperazinil, C(=O)C2H5 i morfolinil ;
Rd, neovisno, je odabran iz skupa kojega sačinjavaju NH2, halo, C1-3alkil, S(C1-3alkil), OH, NH(C1-3alkil), N(C1-3alkil)2, NH(C1-3alkilenfenil) i
q je 1 ili 2,
pod uvjetom da:
(a) bar jedan od R10 i R11 razlikuje se od 6-halogen ili 6,7-dimetoksi skupina;
(b) R12 razlikuje se od 4-klorfenil; i
(c) bar jedan od R10 i R11 razlikuje se od H kada je R12 fenil ili 2-klorfenil i X je S.
Ova i druga svojstva i prednosti ovog izuma bit će razumljivi iz detaljnog opisa i primjera koji su ovdje navedeni. Detaljan opis i primjeri dani su da se poveća razumljivost izuma, ali nisu namijenjeni da se ograniči doseg ovog izuma.
Sažet opis crteža
Slika 1 pokazuje učinak selektivnog PI3Kδ inhibitora ovog izuma na aktivnost triju PI3K izoformi.
Slika 2 pokazuje učinak selektivnog PI3Kδ inhibitora na nastajanje superoksida pomoću humanih neutrofila u prisutnosti TNF ili IgG.
Slika 3 pokazuje učinak selektivnog PI3Kδ inhibitora na nastajanje superoksida pomoću humanih neutrofila u prisutnosti TNF ili fMLP.
Slika 4 pokazuje učinak selektivnog PI3Kδ inhibitora na elastaznu eksocitozu u prisutnosti fMLP pomoću humanih neutrofila.
Slika 5 pokazuje učinak selektivnog PI3Kδ inhibitora na fMLP-izazvanu kemotaksiju pomoću humanih neutrofila.
Slika 6 pokazuje da selektivni PI3Kδ inhibitor ne djeluje na fagocitozu i uništavanje S. aureus pomoću neutrofila.
Slika 7 pokazuje učinak selektivnog PI3Kδ inhibitora na proliferaciju i proizvodnju antitijela pomoću humanih B limfocita.
Slika 8 pokazuje učinak selektivnog PI3Kδ inhibitora na anti-IgM stimuliranu proliferaciju B limfocita mišje slezene.
Slika 9 pokazuje učinak selektivnog PI3Kδ inhibitora na elastaznu eksocitozu u životinjskom modelu.
Opis poželjnih realizacija izuma
Ovim izumom dobivaju se spojevi koji selektivno inhibiraju aktivnost PI3Kδ. Izumom su također definirane metode za inhibiranje aktivnosti PI3Kδ, uključujući metode za selektivno moduliranje aktivnosti FI3Kδ izozima u stanicama, posebice leukocita, osteoklasta i stanica akrcinoma. Metodama su obuhvaćene primjene in vitro, in vivo, te ex vivo.
Povoljan učinak ovih metoda odnosi se na selektivno moduliranje aktivnosti PI3Kd u kliničkim uvjetima da bi se suzbila bolest ili poremećaji kojima je medijator aktivnost PI3Kδ. Dakle, tretiranje bolesti ili poremećaja koji su karakterizirani prekomjernom ili neodgovarajućom aktivnošću PI3Kδ može se, sukladno ovom izumu, izvršiti korištenjem selektivnih modulatora PI3Kδ.
Ostale metode ovog izuma obuhvaćaju omogućavanje daljnje karakterizacije fiziološke uloge izozima. Štoviše, izumom se dobivaju farmaceutski kompoziti koji sadrže selektivne inhibitore PI3Kδ. Njime se također dobivaju proizvodi koji sadrže spoj za selektivno inhibiranje PI3Kδ (ili farmaceutsku smjesu u kojoj je sadržan takav spoj) te uputstvo za korištenje spoja. Sada će biti opisane pojedinosti ovih i drugih upotrebljivih realizacija.
Metode koje su ovdje opisane koriste pozitivan učinak spojeva koji selektivno inhibiraju, te poželjno specifično inhibiraju PI3Kδ u stanicama, uključujući stanice in vitro, in vivo, ili ex vivo. Stanice koje su korisne u metodama obuhvaćaju one koje vrše ekspresiju endogenog PI3Kδ, gdje endogenost označuje da stanicama koje vrše ekspresiju PI3Kδ nedostaje rekombinantno uvođenje u stanice jednog ili više polinukleotida koji kodiraju PI3Kδ polipeptid ili njegov biološki aktivan fragment. Metode također obuhvaćaju uporabu stanica koje vrše ekspresiju endogenog PI3Kδ, gdje jedna ili više polinukleotida koji kodiraju PI3Kδ ili njegov biološki aktivan fragment, ulaze u stanicu rekombinantnim postupcima.
Osobita prednost sastoji se u tome što stanice mogu biti in vivo, tj. u živom biću, primjerice životinji ili čovjeku, dok se inhibitor PI3Kδ može koristiti kao terapija da bi se inhibirala aktivnost PI3Kδ tog bića. Alternativno, stanice se mogu izdvojiti kao diskretne stanice ili dio tkiva, za ex vivo ili in vitro metode. In vitro metode također mogu obuhvaćati stupanj dovođenja u kontakt PI3Kδ enzima ili njegova biološki aktivna fragmenta s inhibitorskim spojem ovog izuma.
PI3Kδ enzim može sadržavati pročišćeni i izdvojeni enzim, pri čemu je enzim izdvojen iz prirodnog izvora (npr. stanice ili tkiva koji normalno vrše ekspresiju PI3Kδ polipeptida bez modificiranja rekombinantnim tehnikama) ili koji su izdvojeni iz stanica koje su modificirane rekombinantnim tehnikama da se izvrši ekspresija egzogenog enzima.
Pojam “selektivni PI3Kδ inhibitor” kako se ovdje rabi odnoi se na spoj koji inhibira PI3Kδ izozim učinkovitije nego drugi izozimi PI3K familije. Za spoj koji je “selektivni PI3Kδ inhibitor” podrazumijeva se da je selektivniji za PI3Kδ nego spojevi koji su standardno i generički označeni kao PI3K inhibitori, npr. vortmanin ili LY294002. Usput, vortmanin i LY2.94002 smatraju se “neselektivnim PI3K inhibitorima”. Spojevi bilo kojeg tipa koji selektivno negativno reguliraju ekspresiju ili aktivnost PI3Kδ mogu se koristiti kao selektivni inhibitori PI3Kδ u metodama ovog izuma. Štoviše, spojevi bilo kojeg tipa koji selektivno negativno reguliraju ekspresiju ili aktivnost PI3Kδ i koji su prihvatljivih farmakoloških svojstava, mogu se koristiti kao selektivni inhibitori PI3Kδ u terapeutskim metodama ovog izuma.
Relativne učinkovitosti spojeva kao inhibitora anzimske aktivnosti (ili druge biološke aktivnosti) mogu se utvrditi određivanjem koncentracija pri kojima spoj inhibira aktivnost do unaprijed određenog dosega te zatim uspoređivanjem rezultata. Tipično, poželjan parametar je koncentracija koja inhibira 50% aktivnosti u biokemijkoj analizi, tj. 50% inhibitorska koncentracija ili “IC50.” Određivanja IC50 mogu se provesti korištenjem standardnih tehnika koje su poznate u tehnici. Općenito, vrijednost IC50 može se odrediti mjerenjem aktivnosti danom enzima u prisutnosti niza koncentracija inhibitora koji se ispituje. Eksperimentalno dobivene vrijednosti enzimske aktivnosti zatim se nanose u odnosu na korištene koncentracije inhibitora. Ona koncentracija inhibitora koja pokazuje 50% enzimke aktivnosti (u odnosu na aktivnost bez ikakvog inhibitora), uzima se kao vrijednost IC50. Analogno, druge inhibitorske koncentracije mogu se definirati odgovarajućim određivanjem aktivnosti. Primjerice, u nekim slučajevima može biti poželjno određivanje koncentracije za 90% inhibiranja, tj. vrijednosti IC90, itd.
Prema tome, “selektivni PI3Kδ inhibitor” alternativno se može smatrati kao spoj koji pokazuje koncentraciju 50% inhibiranja (IC50) u odnosu na PI3Kδ koja je bar 10 puta, poželjno bar 20 puta, te poželjnije bar 30 puta manja od vrijednosti IC50 u odnosu na neku drugu ili na sve članove klase I PI3K familije. Pojam “specifični PI3Kδ inhibitor” može se smatrati da označuje spoj za selektivno inhibiranje PI3Kδ koji pokazuje vrijednost IC50 u odnosu prema PI3Kδ koja je bar 50 puta, poželjno bar 100 puta, još poželjnije bar 200 puta, te najpoželjnije bar 500 puta manja od vrijednosti IC50 u odnosu na neke ili na sve članove klase I PI3K familije.
Između ostalog, ovim izumom definirane su metode inhibiranja funkcije leukocita. Konkretno, ovaj izum definira metode inhibiranja ili supresije funkcija neutrofila i T i B limfocita. Glede neutrofila, iznenađujuće je nađeno da inhibiranje aktivnosti PI3Kδ inhibira funkcije neutrofila. Primjerice, uočeno je da spojevi ovog izuma pokazuju inhibiranje klasičnih funkcija eutrofila kao što je stimulirano otpuštanje superoksida, stimulirana egzocitoza i kemotaktična migracija. Međutim, također je uočeno da metode ovog izuma omogućuju supresiju određenih funkcija neutrofila, dok značajno ne pogađaju ostale funkcije ovih stanica. Primjerice, uočeno je da fagocitoza bakterija pomoću neutrofila nije značajno inhibirana spojevima ovog izuma koji su selektivni inhibitori PI3Kδ.
Dakle, ovim izumom su također obuhvaćene metode za inhibiranje neutrofilnih funkcija, bez značajnog inhibiranja fagocitoze bakterija. Neutrofilne funkcije koje su sukladno ovom izumu pogodne za inhibiranje obuhvaćaju bilo koju funkciju kojom upravlja aktivnost ili ekspresija PI3Kδ. Takve funkcije obuhvaćaju, bez ograničenja, stimulirano otpuštanje superoksida, stimuliranu egzocitozu ili degranuliranje, kemotaktičnu migraciju, adheziju za krvožilni endotelij (npr. sputavanje/otpuštanje neutrofila, poticanje aktivnosti neutrofila i/ili vezanje neutrofila za endotelij), transmuralnu diapedezu ili prolaz kroz endotelij prema perifernim tkivima. Općenito, ove funkcije mogu se zajednički nazvati “upalnim funkcijama”, jer su tipično povezane za odgovor neutrofila u upali. Upalne funkcije neutrofila mogu se razlikovati od funkcija uništavanja bakterija koje pokazuju ove stanice, npr. fagocitoze i uništavanja bakterija. Sukladno tome, izum također obuhvaća metode za tretiranje bolesnih stanja u kojima je jedna ili više funkcija neutrofila nenormalna ili nepoželjna.
Također je utvrđeno ovim izumom da PI3Kδ ima određenu ulogu u stimuliranoj proliferaciji limfocita, uključujući B stanice i T stanice. Štoviše, PI3Kδ čini se da ima određenu ulogu u stimuliranom izlučivanju antitijela pomoću B stanica. Spojevi ovog izuma koji selektivno inhibiraju PI3Kδ korišteni su da se utvrdi da se ovi fenomeni mogu otkloniti inhibiranjem PI3Kδ. Dakle, izum također obuhvaća metode inhibiranja proliferacije limfcita, te metode inhibiranja proizvodnje antitijela pomoću B limfocita. Ostale metode koje su definriane ovim izumom obuhvaćaju metode za tretiranje bolesnih stanja u kojima je jedna ili više funkcija limfocita nenormalno ili nepoželjno.
Utvrđeno je da se aktivnost PI3Kδ može inhibirati selektivno ili specifično da se olakša tretiranje bolesti kojima upravlja PI3Kδ��uz smanjenje ili uklanjanje komplikacija kojesu normalno povezane s uspitnim inhibiranjem aktivnosti drugih PI 3-kinaza klase I. Za ilustraciju ovog izuma, metode ovog izuma mogu se primijeniti korištenjem članova klase spojeva za koju je nađeno da pokazuje selektivno inhibiranje PI3Kδ relativno prema drugim izoformama PI3K.
Metode ove realizacije mogu se izvršiti sa spojevima koji imaju opću strukturu (III). Poželjne metode koriste spojeve za koje je empirijski određeno da pokazuju bar 10-struko selektivno inhibiranje PI3Kδ relativno u odnosu na ostale PI3Kδ izoforme. Primjerice, metode se mogu izvršiti korištenjem sljedećih spojeva:
3-(2-izopropilfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-il-sulfanilmetil)-3H-guinazolin-4-on;
5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on;
5-klor-3-(2-fluorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-fluorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-metoksifenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2,6-diklorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-6-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
5-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(3-metoksifenil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-benzil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-butil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-7-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-morfolin-4-il-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on, acetatna sol;
8-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-6,7-difluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-metoksifenil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
6-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(3-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-piridin-4-il-3H-kinazolin--4-on ;
3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-trifluormetil-3H-kinazolin-4-on;
3-benzil-5-fluor-2 -(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on, acetatna sol;
3-(2-klorfenil)-6-hidroksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
etilni ester [5-fluor-4-okso-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-4H-kinazolin-3-il]octene kiseline;
3-(2,4-dimetoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-bifenil-2-il-5-klor-2 -(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-izopropilfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-guinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin- 9-ilmetil)-3-bifenil-2-il-5-klor-3H-kinazolin-4-on;
5-klor-3-(2-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;.
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-fluorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-fluorfenil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-8-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-fluor-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-benzil-5-fluor-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-butil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-morfolin-4-il-3H-kinazolin-4-on ;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-7-fluor-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-fenil-2-(9H-purin--6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-izopropil-fenil)-3H-kinazolin-4-on; i
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on.
Također je utvrđeno da se metode ovog izuma mogu uspješno primijeniti korištenjem članova klase spojeva koji pokazuju aktivnost inhibiranja PI3Kδ, čime je olakšano inhibiranje aktivnosti PI3Kδ u bolestima koje su njime upravljane. Primjericem u ovoj realizaciji, metode ovog izuma mogu se primijeniti korištenjem spojeva koji imaju opću strukturu (I).
[image]
gdje je
A proizvoljno supstituirani monociklički ili biciklički prstenasti sustav koji sadrži bar dva atoma dušika, te bar jedan prstenasti sustav koji je aromatski;
X je odabran iz skupa kojega sačinjavaju CHRb, CH2CHRb i CH=C(Rb);.
Y je odabran iz skupa kojega sačinjavaju ništa, S, SO, SO2, NH, O, C(=O), OC(=O), C(=O)O i NHC(=O)CH2S;
R1 i R2 neovisno, odabrani su iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, aril, heteroaril, halo, NHC(=O) C1-3alkilenN(Ra)2, NO2, ORa, OCF3, N(Ra)2, CN, OC(=O)Ra, C(=O)Ra, C(=O)ORa, arilORb, Het, NRaC(=O)C1-3alkilenC(=O)ORa, arilOC1-3alkilen-N(Ra)2, arilOC(=O)Ra, C1-4alkilenC(=O)OR3, OC1-4alkilenC(=O)ORa, C1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORa, C(=O)-NRaSO2Ra, C1-4alkilenN(Ra)2, C2-6alkenilenN(Ra)2, C(=O)NRaC1-4alkilenORa, C(=O)NRaC1-4alkilenHet, OC2-4alkilenN(Ra)2, OC2-6alkilenCH(ORb)CH2N(Ra), OC1-4alkilenHet, OC2-4alkilenORa, OC2-4alkilen-NRaC(=O)ORa, NRaC1-4alkilenN(Ra)2, NRaC(=O)Ra, NRaC(=O)N(Ra)2, N(SO2C1-4alkil)2, NRa(SO2C1-4alkil), SO2N(Ra)2, OSO2CF3, C1-3alkilenaril, C1-4alkilenHet, C1-6alkilenORb, C1-3alkilenN(Ra)2, C(=O)N(Ra)2, NHC(=O)C1-C3alkilenaril, C3-8cikloalkil, C3-8hetero-cikloalkil, arilOC1-3alkilenN(Ra)2, arilOC(=O)Rb, NHC(=O)C1-3alkilenC3-8heterocikloalkil, NHC(=O)C1-3-alkilenHet, OC1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORb, C(=OC)C1-4alkilenHet, i NHC(=O)haloC1-6alkil; ili
R1 i R2 mogu zajedno sačinjavati 3- ili 4-članu alkilensku ili alkenilensku lančastu komponentu 5- ili 6-članog prstena, koji proizvoljno sadrži bar jedan heteroatom;
R3 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju proizvoljno supstituirani vodik, C1-6alkil, C3-8ciklo-alkil, C3-8heterocikloalkil, C3-8alkilencikloalkil, C2-6alkenil, C1-3alkilenaril, arilC1-3alkil, C(=O)Ra, aril, heteroaril, C(=O)ORa, C(=O)N(Ra)a, C(=S)N(Ra)2, SO2Ra, SO2N(Ra)2, S(=O)Ra, S(=O)N(Ra)2, C(=O)NRaC1-4-alkilenOR3, C(=O)NRaC1-4alkilenHet, C(=O)C1-4alkilenaril, C(=O)C1-4alkilenheteroaril, C1-4alkilenaril proizvoljno supstituiran s jednim ili više između halogena, SO2N(Ra)2, N(Ra)2, C(=O)ORa, NRaSO2CF3, CN, NO2, C(=O)Ra, ORa, C1-4alkilenN(Ra)2 i OC1-4alkilenN(Ra)2, C1-4alkilenheteroaril, C1-4alkilenHet, C1-4alkilenC(=O)C1-4alkilenaril, C1-4alkilenC (=O)C1-4alkilen-heteroaril, C1-4alkilenC(=O)Het, C1-4alkilenC(=O)-N(Ra)2, C1-4alkilenOR3, C1-4alkilenNRaC(=O)Ra, C1-4alkilenOC1-4alkilenORa, C1-4alkilenN(Ra)2, C1-4alkilenC(=O)ORa, te C1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORa;
Ra je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, C3-8cikloalkil, C3-8heterocikloalkil, C1-3alkilenN(Ra)2, aril, arilC1-3alkil, C1-3alkilnaril, heteroaril, heteroarilC1-3alkil, te C1-3alkilenheteroaril; ili
dvije Ra skupine zajedno mogu sačinjavati 5- ili 6-člani prsten, koji proizvoljno sadrži bar jedan heteroatom;
Rb je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, aril, heteroaril, arilC1-3alkil, heteroarilC1-3alkil, C1-3alkilenaril, te C1-3alkilenheteroaril;
Het je 5- ili 6-člani heterociklički prsten, zaskićen ili djelomično nezasićen, koji sadrži bar jedan heteroatom koji je odabran iz skupa kojega sačinjavaju kisik, dušik i sumpor, te koji je proizvoljno supstituiran s C1-4alkil ili C(=O)ORa;
te njihove farmaceutske prihvatljive soli i solvati (npr. hidrati).
Primjerice, metode ovog izuma mogu koristiti spojeve koji posjeduju aktivnost inhibiranja PI3Kδ, kao što su sljedeći:
3-(2-izopropilfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-il-sulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-o'-tolil-3H-kinazolin-4-on;
5-klor-3-(2-fluorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-fluorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfan-ilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-tnethoksifenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2,6-diklorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-6-fluor-2-(9h-purin-€-ilsulfanilmetil)-3h-kinazolin-4-on;
5-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
.'3-(2-klorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)- 3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-benzil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-butil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-7-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-morfolin-4-il-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on, acetatna sol;
8-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-6,7-difluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(3-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
6-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(3-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-piridin-4-il-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-trifluormetil-3H-quiiiazolin-4-on;
3-benzil-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulf anilmetil)-3H-kinazolin-4-on; .
3-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on, acetatna sol;
3-(2-klorfenil)-6-hidroksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
etilni ester [5-fluor-4-okso-2-(9H-purin-6-ilsulfanilrnethyl)-4H-kinazolin-3-il]octene kiseline;
3-bifenil-2-il-5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
5-klor-3-(2-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-izopropilfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-bifenil-2-il-t-klor-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-fluorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-fluorfenil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-8-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-fluor-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-benzil-5-fluor-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-butil-3H-kinazolin-4-on ;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-morfolin-4-il-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-7-fluor-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-fenil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-quin-azolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-'(2-klor-fenil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(4-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-6,7-dimetoksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H--kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-7-nitro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(S-aminopurin-9-ilmetil)-6-brom-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-6,7-dimetoksi-3H-kinazolin-4-on;
6-brom-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanil-metil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-benzo[g]kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; i
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-metoksi-fenil)-3H-kinazolin-4-on.
Izumom se nadalje dobivaju spojevi koji su selektivni inhibitori aktivnosti PI3Kδ. Spojevi pokazuju inhibiranje PI3Kδ u biokemijskim analizama, te selektivno narušavaju funkcioniranje stanica koje vrše ekspresiju PI3Kδ�u stanično orijentiranim analizama. Kao što je ovdje prije opisano, spojevi ovog izuma pokazali su da inhibiraju određene funkcije neutrofila i drugih leukocita, kao i funkcije osteoklasta.
Općenito, spojevi koji se dobivaju ovim izumom imaju opću strukturu (I), kao i njihove farmaceutski prihvatljive soli ili prolijekovi:
[image]
gdje je
A proizvoljno supstituiran monociklički ili biciklički prstenasti sustav koji sadrži bar dva atoma dušika, dok je bar jedan prstenaasti sustav aromatski;
X je odabran iz skupa kojega sačinjavaju CHRb, CH2CHRb, and CH=C (Rb);
Y je odabran iz skupa kojega sačinjavaju ništa, S, SO, SO2, NH, O, C(=O), OC(=O), C(=O)O i NHC(=O)CH2S;
R1 i R2, neovisno, odabrani su iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, aril, heteroaril, halo, NHC(=O)C1-3alkilenN(Ra)2, NO2, ORa, OCF3, N(Ra)2, CN, OC(=O)Ra, C(=O)Ra, C(=O)ORa, arilORb, Het, NRaC(=O)C1-3alkilenC(=O)ORa, arilOC1-3alkilenN(Ra)2, arilOC(=O)Ra, C1-4alkilenC(=O)ORa, OC1-4alkilenC(=O)ORa, C1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORa, C(=O)NRaSO2Ra, C1-4alkilenN(Ra)2, C2-6alkenilenN(Ra)2, C(=O)NRaC1-4alkilenORa, C(=O)NRaC1-4alkilenHet, OC2-4alkilenN(Ra)2, OC2-4alkilenCH(ORb)CH2N(Ra)2, OC1-4alkilenHet, OC2-4alkilenORa, OC2-4alkilen-NRaC(=O)ORa, NRaC1-4alkilenN(Ra)2, NRaC(=O)Ra,NRaC(=O)N(Ra)2, N(SO2C1-4alkil)2, NRa(SO2C1-4alkil), SO2N(Ra)2, OSO2CF3, C1-3alkilenaril, C1-4alkilenHet, C1-6alkilenORb, C1-3alkilen(Ra)2, C(=O)N(Ra)2, NHC(=O)C1-C3alkilenaril, C3-8cikloalkil, C3-8heterocikloalkil, arilOC1-3alkilenN(Ra)2, arilOC(=O)Rb, NHC(=O)C1-3alkilenC3-8heterocikloalkil, NHC(=O)C1-3-alkilenHet, OC1-4alkilenOC1-4alkilenC (=O)ORb, C(=O)C1-4alkilenHet i NHC (=O)haloC1-6alkil; ili
R1 i R2 zajedno mogu sačinjavati 3- ili 4-člani alkilensku ili alkenilensku lančastu komponentu 5- ili 6-članog prstena, koja proizvoljno sadrži bar jedan heteroatom;
R3 je odabranb iz skupine koju sačinjavaju proizvoljno supstituirani vodik, C1-6alkil, C3-8ciklo-alkil, C3-8heterocikloalkil, C1-4alkilencikloalkil, C2-6alkenil, C1-3alkilenaril, arilC1-3alkil, C(=O)Ra, aril, heteroaril, C(=O)ORa, C(=O)N(Ra)2, C(=S)N(Ra)2,SO2Ra, SO2N(Ra)2, S(=O)Ra, S(=O)N(Ra)2, C (=O) NRaC1-4-alkilenORa, C(=O)NRaC1-4alkilenHet, C(=O) C1-4alkil-enearil, C(=O) C^alkilenheteroaril, C1-4alkilenaril proizvoljno supstituiran s jednim ili više halogen, SO2N(Ra)2, N(Ra)2, C(=O)ORa, NRaSO2CF3, CN, NO2, C(=O)Ra, ORa, C1-4alkilenN(Ra)2, i OC1-4alkilenN(Ra)2, C1-4-alkilenheteroaril, C1-4alkilenHet, C1-4alkilenC(=O)-C1-4alkilenaril, C1-4alkilenC(=O)C1-4alkilenhetero-aril, C1-4alkilenC (=O)Het, C1-4alkilenC(=O)N(Ra)2, C1-4alkilenORa, Ci-4alkilenNRa, (=O)Ra, C1-4alkilenO-C1-4alkilenORa, C1-4alkilenN(Ra)2, C1-4alkilenC(=O)ORa i C1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORa;
Ra je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, C3-8cikloalkil, C3-8heterociklo-alkil, C1-3alkilenN(Ra)2, aril, arilC1-3alkil, C1-3alkilenaril, heteroaril, heteroarilC1-3alkil i C1-3alkilenheteroaril; ili
dvije Ra skupine zajedno sačinjavaju 5- ili 6-člani prsten, koji proizvoljno sadrži bar jedan heteroatom;
Rb je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, aril, heteroaril, arilC1-3alkil, heteroarilC1-3alkil, C1-3alkilenaril i C1-3alkilenheteroaril;
Het je 5- ili 6-člani heterociklički prsten, zasićeni ili djelomično ili potpuno nezasićen, koji sadrži bar jedan heteroatom koji je odabran iz skupa kojega sačinjavaju kisik, dušik i sumpor, te koji je proizvoljno supstituiran s C1-4alkil ili C(=O)ORa;
te njegove farmaceutski prihvatljive soli i solvati (npr. hidrati).
Kako se ovdje rabi, pojam “alkil” obuhvaća ravnolančaste ili razgranate ugljikovodikove skupine koje sadrže naznačeni broj atoma ugljika, tipično metil, etil, te ravnolančaste ili razgranate propilne i butilne skupine. Ugljikovodikova skupina može sadržavati do 16 atoma ugljika, poželjno od jedan do osam atoma ugljika. Pojam ”alkil” obuhvaća “premošteni alkil,” tj. C5-C16 bicikličku ili policikličku ugljikovodikovu skupinu, primjerice norborn-il, adamantil, biciklo[2.2.2]oktil, biciklo[2.2.1]heptil, biciklo[3.2.1]oktil ili dekahidronaftil.
Pojam “cikloalkil” definiran je kao ciklička C3-C8 ugljikovodikova skupina, npr. ciklopropil, ciklobutil, cikloheksil i ciklopentil.
Pojam “alkenil” definiran je identično pojmu “alkil,” osim što sadrži dvostruku vezu ugljik-ugljik. “Cikloalkenil”' definiran je slično pojmu cikloalkil, osim što se u prstenu nalazi dvostruka veza ugljik-ugljik.
Pojam “alkilen” odnosi se na alkilnu skupinu koja ima supstituent. Primjerice, pojam “C1-3alkilenaril” odnosi se na alkilnu skupinu koja sadrži od jedan od tri atoma ugljika, te koja je supstituirana s arilnom skupinom.
Pojam “halo” ili “halogen” kako je ovdje definiran obuhvaća fluor, brom, klor i jod.
Pojam “haloalkil” ovdje je definiran kao alkilna skupina koja je supstituirana s jednim ili više halogenih supstituenat, bilo fluor, klor, brom, jod ili njihovu kombinaciju. Slično, pojam “halocikloalkil” definiran je kao cikloalkilna skupina koja sadrži jedan ili više halogenih supstituenata.
Pojam “aril,” sam ili u kombinaciji, ovdje je definiran kao mociklička ili policiklička aromatska skupina, poželjno monociklička ili biciklička aromatska skupina, npr. fenil ili naftil. Ako nije drugačije navedeno, “arilna” skupina može biti nesupstituirana ili supstituirana, primjerice jednim ili više, te konkretno jednim do tri halogena, alkil, fenil, hidroksialkil, alkoksi, alkoksialkil, haloalkil, nitro, amino, alkilamino, acilamino, alkiltio, alkilsulfinil i alkilsulfonil. Primjeri arilnih skupina obuhvaćaju fenil, naftil, bifenil, tetrahidronaftil, klorfenil, fluorfenil, amino-fenil, metilfenil, metoksifenil, trifluor-metilfenil, nitrofenil, karboksifenil i slično. Pojmovi “arilC1-3alkil” i “heteroaril-C1-3alkil” definirani su kao arilna ili heteroarilna skupina koja ima C1-3alkilni supstituent.
Pojam “heteroaril” definiran je ovdje kao monociklički ili biciklički prstenasti sustav koji sadrži jedan ili dva aromatska prstena koji sadrže bar jedan atom kisika, dušika ili sumpora u aromatskom prstenu, te koji može biti nesupstituiran ili supstituiran, primjerice jednim ili više, te konkretno jednim do tri supstituenta kao što su halogen, alkil, hidroksi, hidroksialkil, alkoksi, alkoksialkil, haloalkil, nitro, amino, alkilamino, acilamino, alkiltio, alkilsulfinil i alkilsulfonil. Primjeri heteroarilnih skupina obuhvaćaju tienil, furil, piridil, oksazolil, kinolil, izokinolil, indolil, triazolil, izotiazolil, izoksazolil, imidizolil, benzotiazolil, pirazinil, pirimidinil, tiazolil i tiadiazolil.
Pojam “Het,” definiran je kao monociklička, biciklička ili triciklička skupina koja sadrži jedan ili više heteroatoma koji su odabrani iz skupa kojega sačinjavaju kisik, dušik i sumpor. “Het” skupina može također sadržavati okso skupinu (=O) koja je vezana za prsten.
Neograničavajući primjeri Het skupine obuhvaćaju 1,3-dioksolan, 2-pirazolin, pirazolidin, pirolidin, piperazin, pirolin, 2H-piran, 4H-piran, morfolin, tiofolin, piperidin, 1,4-ditian i 1,4-dioksan.
Pojam “hidroksi” definiran je kao -OH.
Pojam “alkoksi” definiran je kao -OR, gdje je R alkil.
Pojam “alkoksialkil” definiran je kao alkilna skupina u kojoj je vodik zamijenjen alkoksi skupinom.
Pojam “(alkiltio)alkil” definiran je slično kao alkoksialkil, osim što atom sumpora zamjenjuje atom kisika.
Pojam “hidroksialkil” definiran je kao hidroksilna skupina koja je dodana alkilnoj skupini.
Pojam “amino” definiran je kao –NH2, dok je pojam “alkilamino” definiran kao -NR2, gdje je bar jedan R alkil, a drugi R je alkil ili vodik.
Pojam “acilamino” definiran je kao RC(=O)N, gdje je R alkil ili aril.
Pojam “alkiltio” definiran je kao -SR, gdje je R alkil.
Pojam “alkilsulfinil” definiran je kao R-SO2, gdje je R alkil.
Pojam “amino” definiran je kao -NH2, dok je pojam “alkilamino” definiran kao -NR2, gdje je bar jedan R alkil, a drugi R je alkil ili vodik.
Pojam “acilamino” definiran je kao RC(=O)N, gdje je R alkil ili aril.
Pojam “alkiltio” definiran je kao -SR, gdje je R alkil.
Pojam “alkilsulfinil” definiran je kao R-SO2, gdje je R alkil.
Pojam “alkilsulf onil” definiran je kao R-SO3, gdje je R alkil.
Pojam “nitro” definiran je kao -NO2.
Pojam “trifluormetil” definiran je kao -CF3.
Pojam “trifluormetoksi” definiran je kao -OCF3.
Pojam “cijano” definiran je kao -CN.
U poželjnim realizacijama, X je odabran iz skupa kojega sačinjavaju CH2, CH2CH2, CH=CH, CH(CH3), CH2CH(CH3) i C(CH3)2. U daljnjim poželjnim realizacijama, Y je odabran iz skupa kojega sačinjavaju ništa, S i NH.
Prsten A ring može biti monociklički ili biciklički. Monociklički A prstenasti sustavi su aromatski. Bicoiklički A prstenasti sustavi sadrže bar jedan aromatski prsten, ali i oba prstena mogu biti aromatska. Primjeri A prstenastih sustava obuhvaćaju, ali nisu ograničeni na imidazolil, pirazolil, 1,2,3-triazolil, piridizinil, pirimidinil, pirazinil, 1,3,5-triazinil, purinil, cinolinil, ftalazinil, kinazolinil, kinoksalinil, 1,8-naftiridinil, pteridinil, 1H-indazolil i benzimidazolil.
U poželjnoj skupini spojeva formule (I), A je označen kao proizvoljno supstituiran prstenasti sustav koji je odabran iz skupa kojega sačinjavaju
[image]
[image]
A prstenasti sustav može biti proizvoljno supstituiran s jednim do tri, poželjno jednim do dva supstituenta koji su odabrani iz skupa kojega sačinjavaju N(Ra)2, halogen, C1-3alkil, S(C1-3alkil), ORa, i
[image]
Specifični supstituenti uključuju, ali nisu ograničeni na NH2, NH(CH3), N(CH3)2, NHCH2C6H5, NH(C2H5), Cl, F, CH3, SCH3, OH i
[image]
U drugoj poželjnoj skupini spojeva formule (I), R1 i R2, neovisno, označuju vodik, ORa, halogen, C1-6alkil, CF3, NO2, N(Ra)2, NRaC1-3alkilenN(Ra)2, te OC1-3alkilenOR3. Specifični supstituenti uključuju, ali nisu ograničeni na H, OCH3, Cl, Br, F, CH3, CF3, NO2, OH, N(CH3)2,
[image]
i O(CH2)2OCH2C6H5. R1 i R2 također mogu zajedno činiti prsten, primjerice fenilni prsten.
U poželjnoj realizaciji, R3 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju proizvoljno supstituirani C1-6alkil, aril, heteroaril, C3-8cikloalkil, C3-8hetero-cikloalkil, C(=O)ORa, C1-4alkilenHet, C1-4alkilen-cikloalkil, C1-4alkilenaril, C1-4alkilenC(=O)C1-4-alkilenaril, C1-4alkilenC(=O)ORa, C1-4alkilen-C(=O)N(Ra)2, C1-4alkilenC(=O)Het, C1-4alkilenN(Ra)2 i C1-4alkilenNRaC(=O)Ra. Specifične R3 skupine uključuju, ali nisu ograničene na
[image]
[image]
R3 skupina može biti supstituirana s jednim do tri supstituenta, primjerice to su halogen, ORa, C1-6alkil, aril, heteroaril, NO2, N(Ra)2, NRaSO2CF3, NRaC(=O)Ra, C(=O)ORa, N(Ra)C1-4alkilen(Ra)2, SO2N(Ra)2, CN, C(=O)Ra, C1-4alkilenN(Ra)2 i OC1-4alkilenN(Ra)2. Specifični supstituenti za R3 skupinu uključuju, ali nisu ograničeni na Cl, F, CH3, CH(CH3)2, OCH,, C6H5, NO2, NH2, NHC(=O)CH3, CO2H i N(CH3)CH2CH2N(CH3)2.
Struktura kinazolinskog prstena i numeracija u prstenu je sljedeća:
[image]
Struktura purinskog prstena i numeracija u prstenu je sljedeća:
[image]
Primjeri spojeva koji se dobivaju ovim izumom su sljedeći:
3-(2-izopropilfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on;
5-klor-3-(2-fluorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-fluorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-metoksifenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2,6-diklorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-6-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
5-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-benzil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-butil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-7-fluor-2 -(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-morfolin-4-il-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on, acetatna sol;
8-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-6,7-difluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(3-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
6-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(3-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H--kinazolin-4-on ;
2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-piridin-4-il-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-8-trifluormetil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-benzil-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfaniltmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on, acetatna sol;
3-(2-klorfenil)-6-hidroksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
etilni ester [5-fluor-4-okso-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-4H-kinazolin-3-il]octene kiseline;
3-(2-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-bifenil-2-il-5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanil metil)-3H-kinazolin-4-on;
5-klor-3-(2-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-izopropilfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H- kinazolin-4-on;
. 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-bifenil-2-il-5-klor-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-fluorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-fluorfenil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-8-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on;
2 -(6-aminopurin-9-ilmetil)-3 -(2 -klorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-fluor-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-benzil-5-fluor-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-butil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-morfolin-4-il-3H- kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-7-fluor-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-6-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(4-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-6,7-dimetoksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-7-nitro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-6-brom-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on;
2 -(6-aminopurin-9-ilmetil)-3 -(2-klorfenil)-6,7-dimetoksi-3H-kinazolin-4-on;
6-brom-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-benzo[g]kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; i
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-metoksi-fenil)-3H-kinazolin-4-on.
Poželjni spojevi koji se dobivaju ovim izumom imaju strukturu (IV), a primjeri su sljedeći:
3-(2-izopropilfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on;
5-klor-3-(2-fluorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-fluorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2,6-diklorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-6-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
5-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-5-metil-2-(9H-purin- 6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-benzil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-butil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-7-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-morfolin-4-il-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on, acetatna sol;
8-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-6,7-difluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
6-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
3-(3-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-piridin-4-il-3H-kinazolin-4-on;
3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-trifluormetil-3H-kinazolin-4-on;
3-benzil-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil-3H-kinazolin-4-on;
3-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-guinazolin-4-on, acetatna sol;
3-(2-klorfenil)-6-hidroksi-2-(9H-purin-6-ilsulfailimetil)-3H-kinazolin-4-on;
etilni ester [5-fluor-4-okso-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-4H-kinazolin-3-il]octene kiseline;
3-bifenil-2-il-5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-izopropilfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4 -on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-bifenil-2-il-5-klor-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-fluorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-fluor-fenil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-8-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-fluor-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-benzil-5-fluor-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-butil-3H-kinazolin-4-on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-morfolin-4-il-3H-kinazolin-4 -on;
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-7-fluor-3H-kinazolin-4-on; i
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on.
Pojam “prolijek” ovdje se koristi za označavanje spojeva koji se brzo transformiraju in vivo u spoj koji ima strukturnu formulu (I), primjerice hidrolizom. Oblikovanje prolijeka općenito je razmotreno u Hardma et al. (Eds.), Goodman and Oilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th ed., str. 11-16 (199S). Iscrpna diskusija moiže se naći u Higuchi et al., Prodrugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, ASCD Symposium Series, te u Roche (ed.), Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association i Pergamon Press (1987). Ukratko, vrši se primjena lijeka pa zatim njegovo uklanjanje iz tijela ili se on biološki transformira, čime se biološka aktivnost lijeka smanjuje ili uklanja. Alternativno, proces biološke transformacije može voditi do metaboličkih sporednih produkata, koji su sami aktivniji ili jednako aktivni, u usporedbi s lijekom koji se početno primjenjuje. Bolje poznavanje ovih procesa biološke pretvorbe omogućuje oblikovanje tzv. “prolijekova”, koji nakon biološke pretvorbe postaju biološki aktivniji u svom promijenjenom stanju. Prolijekovi, dakle, obuhvaćaju farmakološki neaktivne spojeve koji se prevode u biološki aktivne metabolite.
Kao ilustracija, prolijekovi se mogu prevesti u farmakološki aktivan oblik hidrolizom, primjerice esterske ili amidne veze, čime se uvodi ili izlaže funkcionalna skupina na rezultantnom produktu. Prolijek se može oblikovati da reagira s endogenim spojem tako da oblikuje u vodi topljivi konjugat koji dodatno pojačava farmakološka svojstva produkta, šrimjerice povećava poluvrijeme cirkulacije. Alternativno, prolijekovi mogu se oblikovati da budu podvrgnuti kovalentnoj modifikaciji s, primjerice, glukuronskom kiselinom, sulfatom, glutationom, aminokiselinama ili acetatom. Nastali konjugat može se inaktivirati i izlučiti u urin, ili može ostati aktivniji od matičnog spoja. Konjugati visoke molekulske mase također se mogu izlučiti u žuč, podvrgnuti enizimskom cijepanju, te vratiti u cirkulaciju, čime se učinkovito povećava biološko poluvrijeme izvorno primijenjenog spoja.
Metode identificiranje negativnih regulatora PI3Kδ aktivnosti
PI3Kδ protein, kao i njegovi fragmenti koji su biološki aktivni, mogu se koristiti za screening potencijalno negativnih regulacijskih spojeva u cijelom nizu tehnika za screening lijekova. Negativni regulator PI3Kδ je spoj koji otklanja ili poništava sposobnost PI3Kδ u izvršavanju bilo koje biološke funkcije. Primjer takvih spojeva je sredstvo koje smanjuje sposobnost PI3Kδ polipeptida da fosforilira fosfatidilinozitol ili da pogodi odgovarajuće strukture u stanici. Selektivnost spoja koji negativno regulira PI3Kδ activity može se procijeniti uspoređivanjem aktivnosti na PI3Kδ s njegovom aktivnošću na drugim proteinima. Selektivni negativni regulatori obuhvaćaju, primjerice, antitijela i druge proteine ili peptide koji se specifično vežu za PI3Kδ polipeptid, oligonukleotide koji se specifično vežu za PI3Kδ polipeptide, te druge nepeptidne spojeve (npr. izdvojene ili sintetske organske molekule) koji su u specifičnoj interakciji s PI3Kδ polipeptidima. Negativni regulatori također obuhvaćaju spojeve kao što su gore opisani, ali koji su u interakciji sa specifičnim vezujućim sudionikom PI3Kδ polipeptida.
Trenutačno poželjni ciljevi za razvoj selektivnih negativnih regulatora PI3Kδ uključuju, primjerice:
(1) citoplazmatska područja PI3Kδ polipeptida koji su u dodiru s drugim proteinima i/ili lokaliziraju PI3Kδ unutar stanice;
(2) područja PI3Kδ polipeptida koja vežu specifične vezujuće entitete;
(3) područja PI3Kδ polipeptida koja vežu supstrat;
(4) alosterička regulacijska mjesta PI3Kδ polipeptida koja mogu ili ne mogu izravno biti u interakciji s aktivnim mjestom nakon regulacijskog signala;
(5) područja PI3Kδ polipeptida koja mogu upravljati multimerizacijom.
Primjerice, jedan cilj za razvoj modulatora je identificiranje regulacijske interakcije p85 s p110δ, koji može biti uključen u aktiviranju, i/ili podstanično lokaliziranje p110δ vrste. Drugi selektivni modulatori obuhvaćaju one koji prepoznaju specifičnu regulacijske ili PI3Kδ-kodirajuće nukleotidne sekvencije. Modulatori aktivnosti PI3Kδ mogu biti terapeutski korisni u tretiranju cijelog niza bolesti i fizioloških stanja koja obuhvaćaju nenormalnu PI3Kδ aktivnost.
Sukladno tome, izumom se definiraju metode za karakteriziranje jačine testnog spoja kao inhibitora PI3Kδ polipeptida, pri čemu navedena metoda obuhvaća sljedeće stupnjeve: (a) mjerenje aktivnosti PI3Kδ polipeptida u prisutnosti testnog spoja; (b) uspoređivanje aktivnosti PI3Kδ polipeptida u prisutnosti testnog spoja s aktivnošću PI3Kδ polipeptida u prisutnosti ekvivalentne količine referentnog spoja (npr. PI3Kδ inhibitor spoja ovog izuma), pri čemu manja aktivnost PI3Kδ polipeptida u prisutnosti testnog spoja nego u prisutnosti reference označuje da je testni spoj jači inhibitor nego referentni spoj; i veću aktivnost PI3Kδ polipeptida u prisutnosti testnog spoja nego u prisutnosti reference ukatuje na to da je testni spoj inhibitor manje jačine nego referentan spoj.
Izumom su nadalje definirane metode za karakteriziranje jačine testnog spoja kao inhibitora PI3Kδ polipeptida, što obuhvaća sljedće stupnjeve: (a) određivanje količine kontrolnog spoja (npr. PI3Kδ inhibitorskog spoja izuma kao što je ovdje opisano); koji inhibira aktivnost PI3Kδ polipeptida za referentan postotak inhibiranja, čime je definirana referentna inhibtorska količina za kontrolni spoj, čime je deifinirana referentna inhibitorska količina kontrolnog spoja; (b) određivanje količine testnog spoja koji inhibira aktivnost PI3Kδ polipeptida za referentan postotak inhibiranja, čime je definirana referentna inhibitorska količina za testni spoj; (c) uspoređivanje referentne inhibitorske količine testnog spoja prema referentnoj inhibitorskoj količini za kontrolni spoj, pri čemu manja referentna inhibitorska količina za testni spoj u odnosu n kontorlni spoj znači da je spoj jači inhibitor nego kontrolni spoj, dok veća količina testnog spoja u odnosu na kontrolni spoj znači da je spoj slabiji inhibitor nego kontrolni spoj. U jendom aspektu, metoda koristi referentnu inhibitorsku količinu što je ona količina spoja koja inhibira aktivnost PI3Kδ polipeptida za 50%, 60%, 70% ili 80%. U drugom aspektu, metoda koristi referentnu inhibitorsku količinu, dakle onu količinu spoja koji inhibira aktivnost PI3Kδ polipeptida za 90%, 95% ili 99%. Ove metode obuhvaćaju određivanje referentne inhibitorske količine spoja u in vivo biokemijskoj analizi, te u in vitro staničnoj (citološkoj) analizi, ili in vivo analizi.
Ovim izumom su nadalje definirane metode identificiranja negativnog regulatora aktivnosti PI3Kδ, što obuhvaća sljedeće stupnjeve: (i) mjerenje aktivnosti PI3Kδ polipeptida u prisutnosti ili dosutnosti testnog spoja, te (ii) identificiranje kao negativnog regulatora testnog spoja koji smanjuje PI3Kδ aktivnost i koji kompetira sa spojem ovog izuma u vezanju za PI3Kδ. Nadalje, izumom su definirane metode za identificiranje spojeva koji inhibiraju aktivnost PI3Kδ, što obuhvaća sljedeće stupnjeve: (i) kontakt PI3Kδ polipeptida sa spojem ovog izuma u prisutnosti ili odsutnosti testnog spoja, i (ii) identificiranje testnog spoja kao negativnog regulatora aktivnosti PI3Kδ pri čemu spoj kompetira sa spojem ovog izuma u vezanju za PI3Kδ. Izumom je nadalje definirana metoda za “screening” kandidata negativnog regulatora aktivnosti PI3Kδ i/ili za potvrdđivanje načina djelovanja kandidata kao negativnih regulatora. Takve metode mogu se koristiti u odnosu na ostale izoforme PI3K paralelno, da se utvrdi komparativna aktivnost testnog spoja za pojedine izoforme i/ili relativno prema spoju ovog izuma.
U ovim metodama, PI3Kδ polipeptid može biti fragment p110δ koji pokazuje aktivnost kinaze, tj. fragment koji obuhvaća katalitičko mjesto p110δ. Alternativno, PI3Kδ polipeptid može biti fragmentiran iz p110δ-vezujuće domene p85 i omogućuje metodu za identificiranje alosteričkih modulatora PI3Kδ. Ove metode mogu se koristiti u stanicama koje vrše ekspresiju stanica koje vrše ekspresiju PI3Kδ ili njegovih podjedinica, bilo endogenih ili egzogenih. Prema tome, polipeptid koji se rabi u takvim metodama može biti u otopini slobodan, vezan za čvrsti nosač, modificiran da bude na staničnoj površini ili smješten unutar stanice. Moduliranje aktivnosti ili stvaranje vezujućeg kompelksa između PI3Kδ polipeptida i sredstva je ispitano i može se mjeriti.
Humani PI3K polypeptidi omogućuju biokemijsku analizu ili stanično-orijentiran brzi “screening” (HTS), sukladno metodama koje su poznate u tehnici, uključujući melanoforne analitičke sustave za istraživanje interakcija receptor-ligand, analitičke sustave koji se izvode iz gljivica, te ekspresijskih sustava stanica sisavaca. Za pregled, vidi, Jayawickreme and Kost, Curr Opin Biotechnol, 8:629-34 (1997). Automatizirane i minijaturizirane HTS analize su sažeto opisane u, primjerice, Houston and Banks, Curr Opin Biotechnol, 8:734-40 (1997).
Takve HTS analize se koriste za pregled biblioteka spojeva da bi se identificirali određeni spojevi koji posjeduju željeno svojstvo. Može se koristiti bilo koja biblioteka spojeva, uključujući kemijske biblioteke, biblioteke prirodnih spojeva, te kombinatorne biblioteke koje sadrže slučajne ili oblikovane oligopeptide, oligonukleotide ili druge organske spojeve. Kemijske biblioteke mogu sadržavati poznate spojeve, pripadne strukturne analoge poznatih spojeva ili spojeve koji su identificirani pregledom prirodnih spojeva.
Biblioteke prirodnih produkata su zbirke materijala koji su izdvojeni iz prirodnih izvora, tipično mikroorganizama, životinja, biljki i morskih organizama. Prirodni produkti su izdvojeni iz svojih izvora fermentiranjem mikroorganizama pa zatim izdvajanjem i ekstrahiranjem hranjive juhe ili izravnim ekstrahiranjem iz samih mikroorganizama ili tkiva (biljaka ili životinja). Biblioteke prirodnih produkata obuhvaćaju poliketide, neribosomne peptide i njihove varijante (uključujući varijante koje nisu prirodne). Za pregled, vidi Carie et al., Science, 282:63-68 (1998).
Kombinacijske bibilioteke sastavljene su od velikog broja srodnih spojeva, kao što su peptidi, oligonukleotidi ili drugi organski spojevi kao smjesa. Takvi spojevi se razmjerno izravno oblikuju i dobivaju tradicionalnim automatiziranim sintetskim postupcima, PCR, kloniranjem i odgovarajućim sintetskim metodama. Od osobita su interesa biblioteke peptida i oligonukleotidne kombinacijske biblioteke.
Druge biblioteke koje su od interesa obuhvaćaju peptide, proteine, peptidomimetičke, multiparalelne sintetske zbirke, rekombinacijske i polipeptidne biblioteke. Za pregled kombinatorne kemije i biblioteka koje su načinjene, vidi Myers, Curr Opin Biotechnol, 8:701-07 (1997).
Kada se jednom identificiraju spojevi kao oni koji pokazuju aktivnost kao negativni regulatori funkcije PI3K, može se izvršiti program optimiziranja da bi se pojačala jakost i/ili selektivnost aktivnosti. Ova analiza odnosa struktura-aktivnost (SAR) tipično obuhvaća iteracijsku seriju selektivnih modifikacija strukture spoja i njihove korelacije s biokemijskom ili biološkom aktivnošću. Mogu se načiniti familije srodnih spojeva koji svi pokazuju željenu aktivnost, pri čemu se određeni članovi familije, oni koji posjeduju odgovarajuće farmakološke profile, smatraju potencijalnim terapeutskim kandidatima.
Terapeutska uporaba inhibitora PI3Kδ aktivnosti
Ovim izumom je definirana metoda za selektivno inhibiranje PI3Kδ terapeutski ili profilaktički. Metoda obuhvaća primjenu selektivnog ili specifičnog inhibitora aktivnosti PI3Kδ u količini koja je djelotvorna da se ona postigne. Ova metoda može se koristiti za tretiranje ljudi ili životinja, koji jesu ili mogu biti zahvaćeni bilo kojim stanjem čiji simptomi ili patologija su upravljani ekspresijom ili aktivnošću PI3Kδ.
Pojam “tretiranje”, kako se ovdje rabi, odnosi se na sprječavanje pojave poremećaja u životinja koje su s predispozicijom za takav poremećaj, ali za koje još nije dijagnosticirano da ga imaju; inhibiranje poremećaja, tj. zaustavljanje njegova napredovanja, promjenu smjera napredovanja poremećaja, tj. izazivanja njegove regresije ili kontrole poremećaja, tj. smanjenje uznapredovalosti simptoma koji su povezani s poremećajem. “Poremećaj” obuhvaća zdravstvene poremećaje, bolesti, stanja, sindrome i slično, bez ograničenja.
Metode ovog izuma obuhvaćaju različite načine tretiranja životinja, poželjno sisavaca, poželjnije primata, a najpoželjnije čovjeka. Među životinjama koje su sisavci i koje se mogu tretirati su, primjerice, kućne životinje (ljubimci), uključujući pse i mačke; gospodarske životinje, uključujući goveda, konje, ovce, svinje i koze; laboratorijske životinje, uključujući štakore, miševe, kuniće, guinea svinje, te primate koji nisu ljudi, te zoološke životinje. Životinje koje nisu sisavci uključuju, primjerice, ptice, ribe, gmazove i vodozemce.
U jednom aspektu, metoda ovog izuma može se koristiti za tretiranje subjekata terapeutski ili profilaktički, koji su zahvaćeni ili mogu biti zahvaćeni upalnim poremećajem. Jedan aspekt ovog izum uključuje uključenje PI3Kδ pri upravljanju aspektima upalnog procesa. Bez namjere da se vežemo s teorijom, smatra se da, budući d aje upalni proces tipično upravljan leukocitnim (npr. neutrofilima, limfocitima itd.) aktiviranjem i kemotaktičnim migriranjem, te budući da PI3Kδ može upravljati takvim fenomenima, antagonisti PI3Kδ mogu se koristiti za supresiju ozljeda koje su povezane s upalom.
“Upalni poremećaj”, kako se ovdje rabi, odnosi se na bilo koju bolest, poremećaj ili sindrom u kojem prkeomjerni ili neregulirani upalni odgovor dovodi do intenzivnih simptoma upale, oštećenja tkiva domaćina i gubitka funkcije tkiva. Pojam “upalni poremećaj” također se odnosi na patološko stanje kojim upravlja ulazni fluks leukocita i/ili neutrofilna kemotaksija.
Pojam “upala” kako se ovdje rabi odnosi se na lokalizirani, zaštitni odgovor koji je izavan ozljedom ili ošteenjem tkiva, koji služi uništavanju, razrijeđenju ili sekvestraciji i sredstva koje izaziva ozljedu i oštećenog tkiva. Upala je povezana s ulaznih fluksom leukocita i/ili neutrofilnom kemotaksijom. Upala može biti rezultat infekcije s patogenim organizmima i virusima ili neinfekcije kao što je trauma ili reperfuzija nakon infarkta miokarda ili moždanog udara, imunog odgovora na strano tijelo i autoimunog odgovora. Prema tome, upalni poremećaji koji se odnose na izum obuhvaćaju poremećaje koji su povezani s reakcijama specifičnog obrambenog sustava kao i reakcijama nespecifičnog obrambenog sustava.
Kako se ovdje rabi, pojam “specifičan, obrambeni sustav” odnosi se na komponentu imunološkog sustava koja reagira na prisutnost specifičnih antigena. Primjeri upala koje su rezultat odgovora specifičnog obrambenog sustava obuhvaćaju klasičan odgovor na strane antigene, autoimune bolesti i odgođeni tip hiperosjetljivosti kojima upravljaju T-stanice. Kronične upalne bolesti, odbacivanje čvrstog transplantiranog tkiva i organa, npr. presađenog bubrega ili presađene koštane srži, te bolesti gost-domaćin (GVHD), daljnji su primjeri upalnih reakcija specifičnog obrambenog sustava.
Pojam “nespecifičan obrambeni sustav” kako se ovdje rabi odnosi se na upalne poremećaje kojima upravljaju leukociti koji ne raspolažu imunološkim pamćenjem (npr. granulociti i makrofagi). Primjeri upala koje su rezultat, bar djelomično, reakcije nespecifičnog obrambenog sustava obuhvaćaju upale koje su povezane sa stanjima kao što su sindrom akutnog respiratornog distresa (ARDS) ili sindromi višestrukih ozljeda tkiva; reperfuzijska ozljeda; akutni glomerulonefritis; reaktivni artritis; dermatoze s akutnim upalnim komponentama; akutni purulentni meningitis ili drugi upalni poremećaji središnjeg živčanog sustava kao što je moždani udar; toplinske ozljede; upalna trbušna bolest; sindromi koji su povezani s transfuzijom granulocita, te toksičnost izazvana citokinom.
Pojam “autoimuna bolest” kako se ovdje rabi, odnosi se na bilo koju skupinu poremećaja u kojima je ozljeda tkiva povezana s humoralnim ili stanično-upravljanim odgovorima na vlastite tjelesne konstituente. Pojam “alergijska bolest” kako se ovdje rabi odnosi se na bilo koje simptome, ozljedu tkiva ili gubitak funkcije tkiva kao rezultat alergije. Pojam “atritična bolest” kako se ovdje rabi odnosi se na bilo koju bolest koja je karakterizirana upalnim ozljedama zglobova što se može pripisati cijelom nizu etiologija. Pojam “dermatitis” kako se ovdje rabi odnosi se na neku od velikog broja familija bolesti kože koja je karakterizirana upalom kože koja se može pripisati cijelom nizu etiologija. Pojam “odbacivanje transplantata” kako se ovdje rabi odnosi se na imunološku reakciju koja je usmjerena protiv presađenog tkiva, kao što su organi ili stanice (npr. koštana srž), što je karakterizirano gubitkom funkcije presađenog i okolnog tkiva, boli, oteklinom, leukocitozom i trombocitopenijom.
Terapeutske metode ovog izuma obuhvaćaju metode za tretiranje poremećaja koji su povezani s upalnim staničnim aktiviranjem. Pojam “upalno stanično aktiviranje” odnosi se na induciranje pomoću stimulansa (uključujući, ali bez ograničenja, citokine, antigene ili auto-antitijela) ili proliferacijski stanični odgovor, proizvodnju topljivih medijatora (uključujući, bez ograničenja, citokine, kisikove radikale, enzime, prostanoide ili vazoaktivne amine), ili površinsku staničnu ekspresiju novih ili medijatora povećanog broja (uključujući, bez ograničenja, većinu histokompatibilnih antigena ili molekula stanične adhezije) u upalnim stanicama (uključujući, bez ograničenja, monocite, makrofage, T limfocite, B limfocite, granulocite (tj. polimofonuklearne leukocite kao što su neutrofili, bazofili i eozinofili), mastocitne stanice, dendritične stanice, Langerhansove stanice i endotelne stanice). Osobe koje poznaju ovo područje znaju da jedna ili kombinacija ovih fenotipova u ovim stanicama može doprinjeti početku, produžetku ili egzacerbaciji upalnog poremećaja.
Za spojeve ovog izuma je utvrđeno da inhibirau otpuštanje superoksida pomoću neutrofila. Superoksid se otpušta pomoću neutrofila kao odgovor na jedan od niza stimulansa, uključujući signal infekcije, kao mehanizam za uništavanje stanica. Primjerice, otpuštanje superoksida je poznato da izaziva čimbenik alfa tumorske nekroze (TNFα), kojega otpuštaju makrogafi, mastocitne stanice, te limfociti nakon kontakta s komponentama bakterijskih staničnih stijenki kao što su lipopolisaharidi (LPS). TNFα je izvanredno jak i promiskuitetni aktivator upalnih procesa, koji je uključen u aktiviranju neutrofila i različitih drugih tipova stanica, izazivanju leukocit/andeotelne stanične adhezije, pireksije, pojačanju proizvodnje MHC klase I, te stimuliranju angiogeneze. Alternativno, otpuštanje superoksida može biti stimulirano pomoću formil-Met-Leu-Phe (fMLP) ili drugih peptida koji su blokirani na N-terminalu pomoću formiliranog metionina. Takvi peptidi se normalno ne nalaze u aukariotima, ali su temeljna značajka bakterija, te signaliziraju prisutnost bakterija imunološkom sustavu. Leukocitna ekspresija fMLP receptora, npr. neutrofila i makrofaga, stimulirana je na migraciju ovih peptida (tj. kemotaksiju) prema mjestu upale. Kao što je ovdje pokazano, spojevi ovog izuma inhibiraju stimulirano otpuštanje superoksida pomoću neutrofila kao odgovor bilo na TNFα ili fMLP. Ostale funkcije neutrofila, uključujući stimuliranu egzocitozu i usmjerenu kemotaktičnu migraciju, također su inhibirane pomoću inhibitora PI3Kδ ovog izuma. Prema tome, za spojeve ovog izuma se očekuje da su korisni u tretiranju poremećaja, kao što su upalni poremećaji, kojima upravljaju neke ili sve ove funkcije neutrofila.
Ovaj izum omogućuje metode za tretiranje takvih bolsti kao što su artritične bolesti, kao što je reumatoidni artritis, monoartrikularni artritis, osteoartritis, gihtičan artritis, spondilitis; Behcetova bolest; sepsa, septički šok, endotoksični šok, gram negativna sepsa, gram pozitivna sepsa te sindrom toksičnog šoka; sindrom višestrukog oštećenja organa nakon speticemije, traume ili hemoragije; oftlamološke bolesti kao što su alergijski konjuktivitis, vernal konjunktivitis, uveitis, sa štitnjačom povezana oftalmopatija, eozinofilni granulom, plućne ili respiratorne bolesti kao što su astma, kronični bronhitis, alergijski rinitis, ARDS, kronična plućna upalna bolest (npr. kronična opstrukcijska plućna bolest), silikoza, plućna sarkoidoza, alveolitis, vaskulitis, emfizem, upala pluća, broniektaza, te plućna kisikova toksičnost, reperfuzijska ozljeda mikoarda, mozga i ekstremiteta, fibroze kao što je cistična fibroza, nastajanje keloida ili nastajanje ožiljnog tkiva, ateroskleroza, autoimune bolesti kao što je eritrematozni lupus (SLE), autoimuni tiroiditis, multipla skleroz, neki oblici šećerne bolsti, te Reynaud-ov sindrom, poremećaji s odbacivanjem presađenog tkiva kao što je GVHD i odbacivanje organa, kronični glomerulonefritis, upalna trbušna bolest kao što je kronična trbušna upalna bolest (CIBD), Crohnova bolest, ulcerativni kolitis, te nekrotizirajući enterokolitis, upalne dermatoze kao što je kontaktni dermatitis, atopički dermatitis, psorijaza ili urtikarija, groznica i mialgije zbog infekcije, upalni poremećaji središnjeg i perifernog živčanog sustava kao što su meningitis, encefalitis, te ozljeda mozga ili kralježnice zbog trume, Sjogrenov sindrom, bolesti koje obuhvaćaju leukocitnu diapedezu, alkoholni hepatitis, bakterijsku upalu pluća, bolesti kojima upravlja kompleks antigen-antitijelo, hipovolemički šok, šećerna bolest tipa I, akutna i produžena hiperosjetljivost, stanja bolesti zbog leukocitne diskrasije i metastaza, toplinska ozljeda;
sindromi koji su povezani s transfuzijom granulocita; te toksičnost koja je izazvana citokinom.
Metoda se pokazala korisnom u tretiranju subjekata koji jesu ili bi mogli biti zahvaćeni reperfuzijskom ozljedom, tj. ozljedom koja je posljedica situacije u kojoj je tkivo ili organ određeno vrijeme u ishemiji, a zatim reperfuziji. Pojam “ishemija” odnosi se na lokaliziranu anemiju tkiva zbog poremećaja ulaska arterijske krvi. Prolazna ishemija, pa zatim reperfuzija, karakeristično rezultiraju neutrofilnim aktiviranjem i prolaskom kroz endotelij krvnih žila u zahvaćenom području. Nakupljanje aktiviranih neutrofila opet rezultira stvaranjem reaktivnih kisikovih metabolita, koji ozljeđuju komponente koje su sadržane u tkivu ili organu. Ovaj fenomen “reperfuzijske ozljede” općenito je povezan sa stanjem kao što je krvožilni udar (uključujući globalnu i fokalnu ishemiju), hemoragijski šok, ishemija ili infarkt miokarda, presađivanje organa ili spazam moždanih krvnih žila. Kao ilustracija, reperfuzijska ozljeda dolazi pri kraju postupka srčane premosnice ili tijekom srčanog zastoja kad srce, koje nije primalo krv, počinje reperfuzijom. Očekuje se da će inhibiranje aktivnosti PI3Kδ rezultirati smanjenim reperfuzijskim ozljedama u takvim slučajevima.
Glede živčanog sustava, do globalne ishemije dolazi kada određeno vrijeme nema dotoka krvi u mozak. Globalna ishemija može biti rezultat srčanog zastoja. Do fokalne ishemije dolazi kada normalni dotok krvi nema samo dio mozga. Fokalna ishemija može biti rezultat tromboembolijske okluzije u cerebralnom prostoru, traume glave, edema ili tumora mozga. Čak i ako su prolazne, i globalna i fokalna ishemija mogu biti uzrok većeg živčanog oštećenja. Premda do oštećenja živčanog tkiva može doći satima ili čak danima nakon pojave ishemije, do nekih trajnih oštećenja tkiva može doći tijekom prvih minuta nakon prestanka dotoka krvi u mozak.
Ishemija se može dogoditi i u srcu pri infarktu miokarda, te drugih kardiovaskularnih poremećaja u kojima dolazi do opstrukcije srčanih arterija kao rezultat ateroskleroze, ugruška ili grča. Prema tome, vjeruje se da je ovaj izum koristan pri tretiranju oštećenja tkiva, posebice oštećenja koje je rezultat srčane ishemije ili reperfuzijskog oštećenja u sisavaca.
U drugom aspektu, selektivnih inhibitori aktivnosti PI3Kδ, kao što su spojevi ovog izuma, mogu se koristiti u metodama za tretiranja bolesti kostiju, posebice bolesti u kojima je funkcija osteoklasta nenormalna ili nepoželjna. Kao što je pokazno u primjeru 6, spojevi ovog izuma inhibiraju funkciju osteoklasta in vitro. Sukladno tome, korištenje takvih spojeva i drugih selektivnih inhibitora može biti korisna u tretiranju osteoporoze, Pagetove bolesti, te drugih srodnih bolesti resorpcije kostiju.
U sljedećem aspektu, ovim izumom su obuhvaćene metode korištenja spojeva za inhibiranje PI3Kδ da bi se inhibirao rast ili proliferacija tumorskih stanica hematopoetskih organa, preferentno stanice karcinoma limfoidnih organa, te preferentnije stanice karcinoma koje se odnose ili su izvedene iz B limfocita ili B limfocitnih progenitora. Karcinomi koji se mogu tretirati korištenjem metode ovog izuma obuhvaćaju, bez ograničenja, limfome, npr. maligne neoplazme limfoidnih i retikuloendotelnih tkiva, kao što je Burkittov limfom, Hodgkinov limfom, ne-Hodgkinovi limfomi, limfocitni limfomi i slično; višestruki mijelomi; kao i leukemije kao što su limfocitne leukemije, kronične mijeloidne (mijelogene) leukemije, te slično. U poželjnoj realizaciji, spojevi koji inhibiraju PI3Kδ mogu se koristiti za inhibiranje ili kontrolu rasta ili proliferacije kroničnih mijeloidnih (mijelogenih) leukemijskih stanica.
U drugom aspektu, ovaj izum obuhvaća metodu za supresiju funkcije bazofila i/ili mastocitnih stanica, te time omogućuje tretiranje bolesti ili poremećaja koji su karakterizirani prekomjernom ili nepoželjnom aktivnošću bazofila i/ili mastocitnih stanica. Sukladno ovoj metodi, spoj ovog izuma može se koristiti za selektivno inhibiranje ekspresije ili aktivnosti fosfatidilinozitol 3-kinaze delta (PI3Kδ) u bazofilima i/ili mastocitnim stanicama. Poželjno, ova metoda koristi inhibitor PI3Kδ inhibitor u količini koja je dovoljna da se inhibira stimulirano otpuštanje histamina pomoću bazofila i/ili mastocitnih stanica. Prema tome, uporaba takvih spojeva i drugih selektivnih inhibitora PI3Kδ može se pokazati korisnom u tretiranju bolesti koje su karakterizirane otpuštanjem histamina, tj. alergijskih poremećaja, uključujući poremećaje kao što su kronična opstrukcijska bolest pluća (COPD), astma, ARDS, emfizem i srodne bolesti.
Farmaceutske smjese inhibitora PI3Kδ aktivnosti
Spoj ovog izuma može se primijeniti kao nerazrijeđena kemikalija, ali se tipično preferira da se primijeni u obliku farmaceutske smjese ili formulacije. Sukladno tome, ovim izumom dobiva se farmaceutska smjesa koja sadržava kemijski ili biološki spoj (“sredstvo”) koji je aktivan kao modulator aktivnosti PI3Kδ te biološki sukladan farmaceutski nosač ili adjuvant. Smjesa može sadržavati kao jedinu vrstu ili u kombinaciji s drugim sredstvima, kao što su oligo- ili polinukleotidi, oligo- ili polipeptid, lijekovi ili hormoni pomiješani s ekscipijentima ili drugim farmaceutski prihvatljivim nosačima. Nosači i ostali sastojci mogu se smatrati farmaceutski prihvatljivim sve dok su sukladni s drugim sastojcima formulacije i dok nisu štetni za samog primatelja.
Tehnike formuliranja i primjene farmaceutskih smjesa mogu se naći u Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co, Easton, PA, 1990. Farmaceutske smjese ovog izuma mogu se formulirati standardnom metodom, npr. mijšanjem, otapanjem, granuliranjem, izradom dražeja, usitnjavanjem, emulgiranjem, kapsuliranjem, zatvaranjem, taljenjem, sušenjem ili liofiliziranjem. Međutim, optimalna farmaceutska formulacija može se odrediti od strane onog koji poznaje ovo područje ovisno o načinu primjene i željenom doziranju. Takve formulacije mogu utjecati na fizičko stanje, stabilnost, brzinu in vivo otpuštanja, te brzinu in vivo klirensa primijenjenog sredstva. Ovisno o stanju koje se tretira, ove farmaceutske smjese mogu se formulirati i primijeniti sistemski ili lokalno.
Farmaceutske smjese su formulirane da sadrže pogodan, farmaceutski prihvatljiv nosač, te mogu proizvoljno sadržavati ekscipijente i pomoćne tvari da olakšaju obradu aktivnih spojeva u pripravke koji se mogu farmaceutski koristiti. Način primjene će općenito odrediti priroda nosača. Primjerice, formulacije za parenteralnu primjenu mogu sadržavati vodene otopine aktivnih spojeva u obliku koji je topljiv u vodi. Nosači koji su pogodni za parenteralnu primjenu mogu se odabrati između otopine soli, puferirane otopine soli, dekstroze, vode i drugih fiziološki usklađenih tekućina. POželjni nosači za parenteralnu primjenu su fiziološki usklađeni puferi kao što su Hankova otopina, Ringerova otopina ili puferirana fiziološka otopina. Za tkivnu ili staničnu primjenu, u formulaciji se koriste penetranti koji mogu svladati određenu zapreku. Taka sredstva su općenito poznata u tehnici. Za pripravke koji sadrže proteine, formulacija može uključivati stvari za stabiliziranje, kao što su polioli (npr. saharoza) i/ili površinski aktivne tvari (npr. anionski surfaktanti), ili slično.
Alternativno, formulacije za perenteralnu uporabu mogu sadržavati disperzije ili suspenzije aktivnih spojeva koje su priređene kao odgovarajuće uljaste suspenzije za injiciranje. Odgovarajuća lipofilna otapala ili nosači mogu sadržavati masna ulja, kao što su sezamovo ulje, te sintetske estere masnih kiselina, kao što su etil oleat ili trigliceridi, ili liposomi. Vodene injekcije suspenzija mogu sadržavati tvari koje povećavaju viskoznost suspenzije, kao što su natrijeva karboksimetil celuloza, sorbitol ili dekstran. Proizvoljno, suspenzija može također sadržavati pogodne stabilizatore ili sredstva koja povećavaju topljivost spojeva da bi se mogli dobiti pripravci koncentriranih otopina. Vodeni polimeri koji kojima se postiže topljivost koja ovisi o pH i/ili odgođeno otpuštanje aktivnog sredstva mogu se također koristiti kao prevlake ili kao matrična struktura, npr. metakrilni polimeri, kao što je EUDRAGIT® serija od Rohm America Inc. (Piscataway, NJ). Emulzije, npr. disperzije ulje-u-vodi ili voda-u-ulju, također se mogu koristiti, uz proizvoljno stabiliziranje sa sredstvom za emulgiranje ili disperziju (npr. površinski aktivna tvar, surfaktant). Suspenzije mogu sadržavati sredstva za suspendiranje kao što su etoksilirani izostearilni alkoholi, poloksi-etilen sorbitol i sorbitan esteri, mikrokristalna celuloza, aluminijev metahidroksid, bentonit, agar-agar, gumi tragacanth, te njihova smjesa.
Liposomi koji sadrže aktivno sredstvo mogu se također koristiti za parenteralnu primjenu. Liposomi se općenito izvode iz fosfolipida i drugih lipidnih tvari. Smjese u liposomnom obliku mogu također sadržavati ostale ingredijente, kao što su stabilizatori, konzervansi, ekscipijenti i slično. Poželjni lipidi obuhvaćaju fosfolipide i fosfatidil koline (lecitine), prirodne i umjetne. Metode za dobivanje liposoma su poznate u tehnici. Vidi, npr. Prescott (Ed.), Methods in Cell Biology, Vol. XIV, str. 33, Academic Press, New York (1976).
Farmaceutske smjese koje sadrže sredstvo u doziranju koje je pogodno za oralnu primjenu mogu biti formulirane korištenjem farmaceutski odgovarajućih nosača koji su poznati u tehnici. Pripravci koji su formulirani za oralnu primjenu mogu biti u obliku tableta, pilula, kapsula, dražeja, lozenga, tekućina, gelova, sirupa, sluzavih tvorbi, eliksira, suspenzija ili prašaka. Za ilustraciju, farmaceutski pripravci za oralnu uporabu mogu se dobiti kombiniranjem aktivnih spojeva s čvrstim ekscipijentom, proizvoljno usitnjavanjem dobivene smjese, te obradom smjese granula, po želji nakon dodatka odgovarajućih pomoćnih tvari, da se dobije jezgra tableta ili dražeja. Oralne formulacije mogu koristiti tekuće nosače koji su slični tipom onima koji su opisani za parenteralnu primjenu, npr. puferirane vodene otopine, suspenzije i slično.
Poželjne oralne formulacije uključuju tablete, dražeje i želatinske kapsule. Ovi pripravci mogu sadržavati jedan ili više ekscipijenata, koji obuhvaćaju, bez ograničenja:
a) razrjeđivala, kao što su šećeri, uključujući laktozu, dekstrozu, saharozu, manitol ili sorbitol;
b) veziva, kao što su magnezijev aluminijev silikat, škrob kukuruza, pšenice, riže, krumpira itd.;
c) celulozne tvari kao što su metilceluloza, hidroksipropil metilceluloza, te natrijeva karboksimetilceluloza, polivinilpirolidon, gume, kao što su gumiarabika i tragakant guma, te proteini, kao što su želatina i kolagen;
d) sredstva za razgrađivanje ili stabiliziranje kao što su poprečno vezani polivinilpirolidon, škrob, agar, alginska kiselina ili njihove soli, kao što su natrijev alginat or effervescent compositions;
e) lubrikanti, kao što su silika-gel, talk, stearinska kiselina ili njihove magnezijeve ili kalcijeve soli, te polietilen glikol;
f) sredstva za poboljšanje okusa i sladila;
g) bojila ili pigmenti, npr. za identificiranje produkta ili za karakteriziranje količine (doze) aktivnog spoja; i
h) ostali dodaci, kao što su konzervansi, stabilizatori, sredstva za bubrenje, sredstva za emulgiranje, sredstva za poboljšanje topljivosti, soli za reguliranje osmotskog tlaka, te puferi.
Želatinske kapsule obuhvaća one koje su načinjene od želatine kao i meke, zatvorene kapsule koje su načinjene od želatine s prevlakom kao što je glicerol ili sorbitol. Kapsule otvorenog tipa mogu sadržavati aktivne sastojke pomiješane s punilima, vezivima, lubrikantima i/ili stabilizatorima. U mekim kapsulama, aktivni spojevi mogu biti otopljeni ili suspendirani u pogodnim tekućinama, kao što su masna ulja, tekući parafin ili tekući polietilen glikol sa ili bez stabilizatora.
Na jezgre dražeja može se dodati odgovarajuća prevlaka kao što je otopina koncentriranog šećera, koja može također sadržavati gumiarabiku, talk, polivinil pirolidon, polietilen glikol i/ili titanov dioksid, otopinu za visoki sjaj, te odgovarajuća organska otapala ili smjese otapala.
Farmaceutska smjesa može se načiniti kao sol aktivnog sredstva. Soli nastoje biti topljivije u vodi ili drugim protonskim otapalima nego njihovi odgovarajući slobodni kiseli ili bazični oblici. Farmaceutski prihvatljive soli dobro su poznate u tehnici. Spojevi koji sadrže kisele kemijske entitete mogu stvarati farmaceutski prihvatljive soli s pogodnim kationima. Pogodni farmaceutski prihvatljivi kationi uključuju, primjerice, alkalne metale (npr. natrij ili kalij) i zemnoalkalne katione (npr. kalcij ili magnezij).
Spojevi strukturne formule (I) koji sadrže bazične kemijske entitete mogu stvarati farmaceutski prihvatljive kisele adicijske soli s odgovarajućim kiselinama. Primjerice, Berge et al. opisuje iscrpno farmaceutski prihvatljive soli u J Pharm Sci, 66:1 (1977). Soli se mogu prirediti in situ tijekom završnog izdvajanja i pročišćavanja spojeva ovog izuma ili odvojeno, reakcijom slobodne baze s odgovarajućom kiselinom.
Reprezentativne kisele adicijske soli uključuju, ali nisu ograničene na acetat, adipat, alginat, citrat, aspartat, benzoat, benzenesulfonat, bisulfat, butirat, kamforat, kamforol-sulfonat, diglukonat, glicerofosfat, hemisulfat, heptanoat, heksanoat, fumarat, hidroklorid, hidrobromid, hidrojodid, 2-hidroksietan-sulfonat (isotionat), laktat, maleat, metanesulfonat ili sulfat, nikotinat, 2-naftalen-sulfonat, oksalat, pamoat, pektinat, persulfat, 3-fenilpropionat, pikrat, pivalat, propionat, sukcinat, tartrat, tiocijanat, fosfat ili hidrofosfat, glutamat, bikarbonat, toluenesulfonat i undekanoat. Primjeri kiselina koje se mogu koristiti za stvaranje farmaceutski prihvatljivih kiselih adicijskih soli obuhvaćaju, bez ograničenja, takve anorganske kiseline kao što su klorovodična kiselina, bromovodična kiselina, sumporna kiselina i fosforna kiselina, te organske kiseline kao što su oksalna kiselina, maleinska kiselina, jantarna kiselina i limunska kiselina.
U svjetlu iznesenoga, bilo koja referenca na spojeve ovog izuma obuhvaća spojeve strukturne formule (I)-(V), kao i njihove farmaceutski prihvatljive soli i solvate, kao i njihove prolijekove.
Bazične adicijske soli mogu se prirediti in situ tijekom završnog izdvajanja i pročišćavanja spojeva ovog izuma ili odvojeno, reakcijskom kemijske vrste koja sadrži karboksilnu kiselinu s odgovarajućom bazom kao što je hidorksid, karbonat ili bikarbonat farmaceutski prihvatljivog metalnog kationa, ili s amonijakom ili primarnim, sekundarnim ili tercijarnim aminom. Farmaceutski prihvatljive bazične adicijske soli obuhvaćaju, ali nisu ograničene na katione alkalnih metala ili zemnoalkalnih metala kao što su litij, natrij, kalij, kalcij, magnezij ili slumijeve soli ili slično, te netoksične kvarterne amonijeve i aminske katione uključujući amonij, tetrametilamonij, tetraetilamonij, metilamonij, dimetilamonij, trimetilamonij, atilamonij, dietilamonij, trietilamonij i slične. Ostali reperezentativni organski amini koji su korisni za stvaranje bazičnih adicijskih soli uključuju etilendiamin, etanolamin, dietanolamin, piperidin, piperazin i slično.
Bazične skupine koje sadrže dušik mogu se kvarternizirati s takvim sredsatvima kao što su niži alkil halogenisi kao što su metil, etil, propil i butil kloridi, bromidi i jodidi; dialkil sulfati kao što su dimetil, dietil, dibutil i diamil sulfati; dogolančani alkil halogenisi kao što su decil, lauril, miristil i stearil kloridi, bromidi i jodidi, aril-alkil halogenidi kao što su benzil i fenetil bromidi te ostali. Tako se dobivaju produkti koji imaju promijenjenu topljivost ili disperzibilnost.
Smjese koje sadrže spoj ovog izuma formulirane u farmaceutski prihvatljivom nosaču mogu se prirediti, staviti u odgovarajući spremnik, te označiti za tretiranje naznačenog stanja. Sukladno tome, također se kao dio proizvoda smatra spremnik koji sadrži dozirajući oblik spoja ovog izuma te oznaku s uputama za korištenje spoja. Za pribore se također smatra da su obuhvaćeni izumom. Primjerice, pribor može sadržavati dozirajući oblik farmaceutske smjese i uputstvo za uporabu s opisom korištenja smjese u tretiranju određenog zdravstvenog stanja. U svakom slučaju, stanja koja su navedena na naljepnici mogu uključivati tretiranje upalnih bolesti, karcinoma itd.
Metode primjene inhibitora aktivnosti PI3Kδ
Farmaceutske smjese koje sadrže inhibitor aktivnosti PI3Kδ mogu se subjektu primijeniti bilo kojom standardnom metodom, uključujući parenteralne i enteričke tehnike. Načini parenteralne primjene uključuju one u kojima se smjesa primjenjuje načinom koji je uključuje probavni sustav, primjerice intravenskom, intraarterijskom, intraperitonealnom, intramedularnom, intramuskularnom, intratekalnom i intraventrikularnom injekcijom. Enterički načini primjene uključuju, primjerice, oralnu (uključujuću bukalni i sublingvalni) i rektalnu primjenu. Transepitelni način primjene obuhvaća, primjerice, transmukoznu i transdermalnu primjenu. Transmukozna primjena obuhvaća, primjerice, enteričku primjenu kao i nazalnu primjenu, inhaliranje te duboku plućnu primjenu; vaginalnu i rektalnu primjenu. Transdermalna primjena obuhvaća aktivan i pasivan način transdermalne i transkutane primjene, uključujući flastere i ionoforetske uređaje, kao i topičku primjenu krema, pomasti i pomada. Parenteralna primjena može se također izvršiti pomoću visokotlačne tehnike, npr. POWDERJECT®.
Kirurške tehnike obuhvaćaju implantiranje depot (rezervoar) kompozita, osmotskih pumpi i slično. Poželjan put primjene za tretiranje upale može biti lokalno ili topičko unošenje za lokalizirane bolesti kao što su artritis, ili sistemsko unošenje za difuzne bolesti, npr. intravensko unošenje za oštećenje reperfuzije ili za sistemska stanja kao što su septicemia. Za ostale bolesti, uključujući one dišnog sustava, npr. kronične opstruktivne plućne bolesti, astmu i emfizem, primjena se može izvršiti inhaliranjem ili dubokim plućnim unosom sprejeva, aerosoli, prašaka i slično.
Za tretiranje neoplastičnih bolesti, posebice leukemija i drugih disperznih karcinoma, tipično se primjenjuje parenteralna primjena. Poželjne su formulacije spojeva da bi ih se optimiziralo za biološku raspodjelu nakon parenteralne primjene. Spojevi za inhibiranje PI3Kδ mogu se primijeniti prije, tijekom ili nakon primjene kemoterapije, radioterapije i/ili kirurške terapije.
Štoviše, terapeutski indeks spojeva za inhibiranje PI3Kδ može se povećati promjenom ili derivatiziranjem spojeva da bi se postiglo ciljano unošenje u stanice karcinoma sa ekspresijom obilježivača koji identificira stanicu kao takvu. Primjerice, spojevi se mogu vezati za antitijelo koje prepoznaje obilježivač koji je selektivan ili specifičan za stanice karcinoma, tako da se spojevi mogu unijeti u okolinu stanica koje lokalno pokazuju djelovanje, kao što je prije opisano (vidi primjerice, Pietersz et al., Immunol Rev, 129:57 (1992); Trail et al., Science, 261:212 (1993); te Rowlinson-Busza et al., Curr Opin Oncol, 4:1142 (1992)). Tumorski usmjereno unošenje ovih spojeva pojačava terapeutski boljitak, između ostalog, minimiziranjem potencijalnih nespecifičnih toksičnosti koje mogu biti rezultat radijacijske obrade ili kemoterapije. U drugoma spektu, spojevi koji inhibiraju PI3Kδ te radioaktivni izotopi i kemoterapeutska sredstva mogu se konjugirati za identično anti-tumorsko antitijelo.
Za tretiranje poremećaja resorpcije kosti ili poremećaja kojima upravljaju osteoklasti, inhibitori PI3Kδ mogu se unijeti bilo kojom pogodnom metodom. Može biti poželjna fokalna primjena, primjerice intraartikularnom injekcijom. U nekim slučajevima, može biti poželjno vezanje spojeva za vrstu kojom se može spoj unijeti na ciljano mjesto. Primjerice, inhibitor PI3Kδ može se vezati za spojeve koji imaju visoki afinitet za hidroksiapatit, koji je glavni konstituent kostiju. To se može izvršiti, primjerice, prilagođenjem teraciklin-vezujuće metode koja je razvijena za ciljani unos estrogena u kost (Orme et al., Bioorg Med Chem Lett, 4 (11):1375-80 (1994)).
Da bi bili terapeutski učinkoviti u moduliranju ciljeva u središnjem živčanom sustavu, sredstva koja se koriste u metodama ovog izuma trebala bi lako prolaziti kroz moždanu krvnu barijeru kada se periferno primijene. Spojevi koji ne mogu proći kroz moždanu krvnu barijeru, međutim, ipak se mogu primijeniti intravenski.
Kao što je prije navedeno, svojstva samog sredstva i formulacija sredstva mogu djelovati na fizičko stanje, stabilnost, brzinu in vivo otpuštanja, brzinu in vivo klirensa primijenjenog sredstva. Takve farmakokinetičke i farmakodinamičke informacije mogu se sakupiti prekliničkim in vitro i in vivo istraživanjima, što je kasnije potvrđeno u ljudi koji su bili podvrgnuti kliničkom istraživanju. Dakle, za bilo koji spoj koji se koristi u metodi ovog izuma, terapeutski učinkovita doza može se početno procijeniti iz biokemijskih i staničnih analiza. Zatim, doziranje može biti formulirano u animalnim modelima da se dosegne željena cirkulirajuća koncentracija koja modulira ekspresiju ili aktivnost PI3Kδ. Budući da je provedeno istraživanje s ljudima, informacije koje slijede odnose na odgovarajuću razinu doziranja i trajanje tretmana za različite bolesti i stanja.
Toksičnost i terapeutska učinkovitost takvih spojeva može se odrediti standardnim postupcima u staničnim kulturama ili eksperimentalnim životinjama, primjerice za određivanje LD50 (doza koja je letalna za 50% populacije) i ED50 (doza koja je terapeutski učinkovita za 50% populacije). Dozni odnos toksičnog učinka i terapeutskog učinka je “terapeutski indeks” koji se tipično izražava kao odnos LD50/ED50. Poželjni su spojevi koji imaju velike indekse, dakle njihova toksična doza je bitno veća od učinkovite doze. Podaci koji su dobiveni analizom stanične kulture mogu se koristiti pri formuliranju raspona doziranja za humanu primjenu. Doziranje takvih spojeva poželjno je unutar raspona cirkulirajućih koncentracija što uključuje ED50 s malenom ili nikakvom toksičnošću.
Za metode ovog izuma, može se koristiti bilo koji režim učinkovite primjene koji regulira vrijeme i sekvenciju doziranja. Doze sredstva poželjno obuhvaćaju jedinični dozirajući oblik koji sadrži učinkovitu količinu spoja. Kako se ovdje rabi, pojam “učinkovita količina” odnosi se na količinu koja je dovoljna za moduliranje ekspresije ili aktivnosti PI3Kδ i/ili koja izvodi mjerljivu promjenu fiziološkog parametra u osobe primjenom jedne ili više dozirajućih jedinica.
Primjeri dozirajućih razina za čovjeka je u rasponu od oko 0,001 miligrama aktivne tvari po kilogramu tjelesne mase (mg/kg) do oko 100 mg/kg. Tipično, dozirajuće jedinice aktivnog sredstva sadrže od oko 0,01 mg do oko 10 000 mg, poželjno od oko 0,1 mg do oko 1 000 mg, što ovisi o indikaciji, putu primjene itd. Ovisno o putu primjene, pogodna doza može se izračunati prema tjelesnoj težini, tjelesnoj površini ili veličini organa. Konačni režim doziranja može odrediti nadležni liječnik u smislu dobre medicinske prakse, razmatranjem različitih čimbenika koji mijenjaju djelovanje lijeka, npr. specifične aktivnosti određenog sredstva, identitet i uznapredovalost bolesti, kooperativnost bolesnika, starost, stanje, tjelesnu težinu, spol i ishranu bolesnika, te uznapredovalost infekcije. Dodatni čimbenici koji mogu biti uzeti u obzir uključuju vrijeme i učestalost primjene, kombiniranje lijeka, reakcijsku osjetljivost te toleranciju/odgovor na terapiju. Daljnje utočnjavanje doziranja koje je odgovarajuće za tretman koji obuhvaća bilo koju navedenu formulaciju, vrši se rutinski od strane liječnika bez nepotrebnog eksperimentiranja, posebice u svjetlu informacije o doziranju i opisanim analizama, kao i farmakokinetičkih podataka koji su uočeni u kliničkim istraživanjima s ljudima. Odgovarajuće doziranje može se postići korištenjem provjerenih analiza za određivanje koncentracije sredstva u tjelesnoj tekućini ili drugom uzorku zajedno s podacima o doznom odgovoru.
Učestalost doziranja ovisit će o farmakokinetičkim svojstvima primijenjenog sredstva i putu primjene. Doziranje i primjena mogu se ugoditi da se dobiju dovoljne razine aktivne specije ili da se zadrži željeni učinak.
Dakle, farmaceutske smjese mogu se primijeniti kao jedna doza, više diskretnih doza, kontinuiranom infuzijom, depoi s produženim otpuštanjem ili njihova kombinacija, što je potrebno da se zadrži željena minimalna razina sredstva. Farmaceutske smjese kratkog djelovanja (tj. kratkog poluvremena) mogu se primijeniti jednom dnevno ili više puta dnevno (npr. dva, tri ili četiri puta dnevno). Farmaceutske smjese dugog djelovanja mogu se primijeniti svakih 3 do 4 dana, svakog tjedna ili jednom svaka dva tjedna. Pumpe, kao što su one supkutane, intraperitonealne ili subduralne pumpe, mogu biti preferentne za kontinuiranu infuziju.
Primjeri koji slijede su dodani da bi dodatno pomogli razumijevanju izuma, te pretpostavljaju razumijevanje standardnih metoda koje su dobro poznate osobama s prosječnim znanjem tehnike u području kojem pripadaju primjeri, npr. konstrukcija vektora i plazmida, ubacivanje genskih kodirajućih polipeptida u takve vektore i plazmide, ili uvođenje vektora ili plazmida u stanice domaćina. Takve metode su opisane detaljno u brojnim publikacijama uključujući, primjerice, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989), Ausubel et al. (Eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994); te Ausubel et al. (Eds.), Short Protocols in Molecular Biology, 4th ed., John Wiley & Sons, Inc. (1999). Konkretni materijali i stanja su ovdje opisani i namjena im je da pojasne konkretne aspekte izuma i ne treba ih smatrati njihovim ograničenjem.
PRIMJER 1
Priređivanje i pročišćavanje rekombinantnog P13Kα, β i δ
Rekombinantni PI3K heterodimerni kompleksi koji se sastoje od p110 katalitičkih podjedinica i p85 regulacijskih podjedinica su pre-ekspresije korištenjem sustava ekspresije BAC-TO-BAC® HT bakulovirusa (GIBCO/-BRL), pa je zatim pročišćen za uporabu u biokemijskim analizama. Četiri klase I PI 3-kinaza su klonirane u vektore bakulovirusa na sljedeći način:
p110δ: FLAG®-označena verzija humanog p110δ (sekvencijski id. broj: 1) (vidi Chantry et al., J Biol Chem, 272:19236-41 (1997)) je subklonirana pomoću standardnih rekombinantnih DNA tehnika u BamH1-Xba1 mjestu insektne stanice vektora ekspresije pFastbac HTb (Life Technologies, Gaithersburg, MD), tako da je klon u okviru s His tagom vektora. FLAG® sustav opisan je u američkim patentima br. 4,703,004; 4,782,137; 4,851,341 i 5,011,912, a reagensi se mogu nabaviti od Eastman Kodak Co.
p110α: Slično metodi koja je korištena za p110δ, što je prije opisano, FLAG®-označena verzija p110α (vidi Volinia et al., Genomics, 24 (3):427-477 (1994)) je subklonirana u BamH1-HindIII mjestima pFastbac HTb (Life Technologies) tako da je klon bio u okviru s His tagom vektora.
p110β: p110β (vidi Hu et al., Mol Cell Biol, 13:7677-88 (1993)) klon je pojačan iz humane MARATHON® Ready cDNA biblioteke slezene (Clontech, Palo Alto CA), sukladno protokolu proizvođača uz sljedeće početne sekvencije:
5' početna sekvencija
5'-GATCGAATTCGGCGCCACCATGGACTACAAGGACGACGATGACAAGTGCTTC AGTTTCATAATGCCTCC-3' (sekvencijski id. br: 3)
3' početna sekvencija
5'-GATCGCGGCCGCTTAAGATCTGTAGTCTTTCCGAACTGTGTG-3' (sekvencijski id. br: 4)
5' početna sekvencija sagrađena je da sadrži FLAG® oznaku u okviru s p110β sekvencijom. Nakon pojačanja, FLAG®-p110β sekvencija je subklonirana korištenjem standardne rekombinantne tehnike u EcoR1-Not1 mjestima pFastbac HTa (Life Technologies), tako da je klon u okviru s His tagom vektora.
p110γ: p110γ cDNA (vidi Stoyanov et al., Science, 269:690-93 (1995)) je pojačan iz humane Marathon Ready cDNA biblioteke slezene (Clontech) sukladno uputstvu proizvođača korištenjem sljedećih početnih sekvencija:
5' početna sekvencija
5'-AGAATGCGGCCGCATGGAGCTGGAGAACTATAAACAGCCC-3'
(sekvencijski id. br: 5)
3' početna sekvencija
5'-CGCGGATCCTTAGGCTGAATGTTTCTCTCCTTGTTTG-3'
(sekvencijski id. br: 6)
FLAG® tag je nakon toga vezan za 5’ kraj p110γ sekvencije i kloniran je u BamH1-Spel mjestima pFastbac HTb (Life Technologies) korištenjem standardnih rekombinantnih DNA tehnika, s FLAG®-110γ sekvencijskim unutrašnim prozorom s His tagom vektora.
p85α: Bam7H1-EcoR1 fragment FLAG®-označene p85 cDNA (vidi Skolnik et al., Cell, 55:83-89 (1991)) je podkloniran u BamH1-EcoR1 mjestima vektora pFastbac dual (Life Technologies).
Rekombinantni bakulovirusi koji sadrže gore navedene klonove su generirani korištenjem protokola kojega je preporučio proizvođač (Life Technologies). Bakulovirusi koji vrše ekspresiju His-označenih p110α, p110β ili p110δ katalitičku podjedinicu i p85 podjedinicu su koinficirani u Sf21 insektne stanice. Da se obogati heterodimerni enzimski kompleks, prekomjerna količina bakulovirusa koji vrši ekspresiju p85 podjedinice je inficirana, pa je His-označena p110 katalitička podjedinica koja je kompleksirana s p85 pročišćena na nikalnoj afinitetnoj koloni. Budući da se p110γ povezuje s p85, Sf21 stanice su inficirane s rekombinantnim virusom koji vrši ekspresiju samo His-označenog p110γ. U alternativnom pristupu, p101 može se klonirati u bakulovirus, da se omogući koekspresija s preferentnim vezujućim partnerom p110γ.
72 sata nakon infekcije, Sf21 stanice (3 litre) su sakupljene i homogenizirane u hipotoničkom puferu (20 mM HEPES-KOH, pH 7,8, 5 mM KCl, kompletni proteaza inhibitorski koktel (Roche Biochemicals, Indianapolis, IN), pomoću Bounce homogenizatora. Homogenati su centrifugirani na 1000 g tijekom 15 min. Supernatanti su nakon toga centrifugirani na 10000 g tijekom 20 min, a nakon toga ultracentrifugirani na 100000 g tijekom 60 min. Topljiva frakcija je nakon toga nanesena na 10 mL HITRAP® nikalnu afinitetnu kolonu (Pharmacia, Piscataway, NJ) koja je uravnotežena s 50 mL pufera A (50 mM HEPES-KOH, pH 7,8, 0,5 M NaCl, 10 mM imidazol). Kolona je dobro isprana s puferom A, te je eluirana s linearnim gradijentom 10-500 mM imidazol. Slobodna p85 podjedinica je uklonjena s kolone tijekom stupnja ispiranja i samo je heterodimerni kompleks eluiran s 250 mM imidazola. Alikvoti nikalne frakcije su analizirani pomoću 10% SDS-poliakrilamidne gel elektroforeze (SDS-PAGE), koja je obojena sa SYPRO® Red (Molecular Probes, Inc., Eugene, OR), te kvantificirana sa STORM® PhosphoImager (Molecular Dynamics, Sunnyvale, CA). Aktivne frakcije su spojene i nanesene izravno na 5 mL Hi-trap heparinsku kolonu koja je prethodno uravnotežena s puferom B koji sadrži 50 mM HEPES-KOH, pH 7,5; 50 mM NaCl, 2 mM ditiotreitol (DTT). Kolona je isprana s 50 mL pufera B i eluirana s linearnim gradijentom 0,05-2 M NaCl. Jedan pik koji sadrži PI3K enzimski kompleks eluiran je na 0,8 M NaCl. Analiza SDS-poliakrilamidna analiza pokazala je da pročišćene PI3K enzimske frakcije sadrže 1:1 stehiometrijski kompleks p110 i p85 podjedinica.
Proteinski profil enzimskog kompleksa tijekom heparinske kromatografije odgovara onom aktivnosti lipidne kinaze. Sakupljene su aktivne frakcije i zamrznute u tekućem dušiku.
PRIMJER 2
Analiza selektivnosti i analiza PI3Kδ pomoću “high throughput” mreže (HTS)
“High throughput” mreža odgovarajuće kemijske biblioteke provedena je da se identificiraju kandidatski inhibitori aktivnosti PI3Kδ. PI3Kδ katalizira fosfoprijelaz sa γ-[32P]ATP na -PIP2/PS liposome u položaju D3' PIP2 lipidnog inozitolskog prstena. Ova reakcija ovisi o MgCl2 i zaustavlja se kalijevim fosfatnim puferom visoke molarnosti pH 8,0 koji sadrži 30 mM EDTA. U ovoj mreži, ova reakcija se provodi u prisutnosti ili odsutnosti bibliotečnih spojeva. Reakcijski produkti (i svi neobilježeni produkti) preneseni su u 96 jažica, prethodno navlaženu PVDF filtersku ploču, filtrirani i isprani kalijevim fosfatom visoke molarnosti. Osušenim jažicama dodan je scintilant i izmjerena je vezana radioaktivnost.
Većina operacija analize izvršena je korištenjem BIOMEK® 1000 robotske radne stanice (Beckman) i sve ploče su očitane korištenjem protokola za očitanje u Wallac tekućen scintilacijskom brojaču ploča.
3X šarže za analizu supstrata i enzima su načinjene i pohranjene u žlijebnoj ploči (za robotsku analizu) ili u polipropilenskoj ploči s 96 jažica, V-dna (za ručnu analizu). Reagensi su bili postojani tijekom bar 3 sata na sobnoj temperaturi.
3X supstrat za HTS sadržavao je 0,6 mM Na2ATP, 0,10 mCi/mL γ-[32P]ATP (NEN, Pittsburgh, PA), 6 μM PIP2/PS liposome (Avanti Polar Lipids, Inc., Atlanta, GA), u 20 mM HEPES, pH 7,4.
3X enzimska šarža za HTS sadržavala je 1,8 nM PI3Kδ, 150 ug/mL konjskog IgG (korišten samo kao stabilizator), 15 mM MgCl2, 3 mM DTT u 20 mM HEPES, pH 7,4.
Bibliotečni uzorci za kemijsku visokoučinkovitu screening analizu (HTS) (svaki sadrži skup od 22 spoja) u dimetil sulfoksidu (DMSO) razrijeđeni su na 18,75 μM ili 37,8 μM u redestiliranoj vodi, te su razrijeđenja od 20 μL stavljena u jažice polipropilenske ploče s 96 jažica za analizu. Kontrola negativnog inhibiranja (ili pozitivna enzimske kontrola) bio je DMSO razrijeđen u vodi, te su pozitivne inhibitorske kontrole korištene u koncentracijama LY294002 koje su dovoljne da se dobije 50% i 100% inhibiranje.
Razrijeđenjima od 20 μL sjedinjene kemijske biblioteke, dodano je 20 μL 3X supstrata. Reakcija je započeta s 20 μL 3X enzima, te je vrđeno inkubiranje na sobnoj temperaturi u trajanju od 10 minuta. Ovim razrjeđivanjem postignuta je konačna koncentracija od 200 μM ATP u reakcijskom volumenu. Reakcija je zaustavljena s 150 μL pufera za zaustavljanje reackije (1,0 M kalijev fosfat pH 8,0, 30 mM EDTA). Dio otopine za zaustavljanje reakcije (180 μL) zatim je prenesen na PVDF filtersku ploču (Millipore #MAIP NOB koji je prethodno navlažen uzastopnim 200 μL ispiranjima sa 100% metanolom, vodom, te najzad s 1,0 M kalijevim fosfatom pH 8,0 puferom za ispiranje).
Ploča PVDF filtera je aspirirana pod umjerenim vakuumom (2-5 mm Hg), isprana s 5×200 μL pufera za ispiranje, te je osušena usisavanjem. Na filter je stavljen uzorak, ostavljen je da se potpuno osuši, te je uložen u Wallac brojačku kasetu s 50 μL Ecoscint scintilacijskog koktela po jažici. Izmjerena je vezana aktivnost, te su analizirani podaci, nakon normaliziranja prema enzimskoj pozitivnoj kontroli (uzeta je kao 100%), da bi se odredilo presjecište krivulje na 50% vrijednosti inhibiranja za procjenu vrijednosti IC50 za inhibitore.
Za dekonvoluciju odabrano je ukupno 57 sjedinjenih “master” jažica, temeljem kombiniranih kriterija <42% ostatne aktivnosti za ispitanu koncentraciju, te općenito prihvaćenom brzinom koja nije veća od 0,2%. Za 22 spoja po jažici, identificirano je ukupno 1254 spojeva ovom dekonvolucijskoom i pojedinačnom analizom, za 1X koncentraciju od 27,7 μM da bi se odredili spojevi koji pokazuju željenu aktivnost. Iz ovih analiza, odabrana su 72 spoja za daljnju analizu da se razviju krivulje IC50. Iz rezultata IC50 krivulja, za analizu selektivnosti u odnosu na PI3Kα i PI3Kβ odabrana su 34 spoja (vidi protokol analize u Primjeru 11).
Sukladno načinjenim analizama selektivnosti, jedan spoj, 3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (spoj D-000), odabran je ako relativno jak i selektivan. Kataloško pretraživanje i selektivnost analiza za mnoge analogne spojeve glede jačine i/ili selektivnosti dalo je samo jedan spoj koji je bio aktivan i selektivan analog D-000. Ovaj spoj nabavljen je od Contract Services Corporation (Catalog #7232154) i od D-000 razlikuje se supstitucijom fenilne skupine umjesto 2-klorfenilne skupine u D-000.
[image]
Kao što je prije opisano, inhibitor PI 3-kinaze LY294002 (Calbiochem, La Jolla, CA) nema izraženiju selektivnost među ostalim ispitanim izoformama PI 3-kinaze. U našim uvjetima analize, LY294002 inhibirao je sve tri izoforme PI 3-kinaza s vrijednošću IC50 od 0,3 do 1 μM. Međutim, kada je spoj D-000 ispitan u odnosu na identične izoforme PI 3-kinaze, uočena je različita selektivnost. Specifično, kao što je prikazano na slici 1, D-000 inhibira aktivnost δ izoformi PI3K s vrijednošću IC50 od približno 0,3 μM, dok u sličnim uvjetima nije inhibirao aktivnost α i β izoformi s granicom od 100 μM spoja. Ovi rezultati pokazuju da D-000 selektivno inhibira aktivnost PI3Kδ.
PRIMJERI 3-7
Budući je PI3Kδ izražen u značajnim razinama samo u leukocitima, bitno je proučiti učinke selektivnog inhibitora PI3Kδ�na funkcije leukocita. Sukladno tome, ispitani su učinci inhibiranja PI3Kδ za nekoliko tipova leukocita. Neutrofili su ispitani da se utvrdi učinak koji može doći sa selektivnim inhibiranjem PI3Kδ (primjer 3, niže). Iznenađujuće je nađeno da je selektivno inhibiranje aktivnosti PI3Kδ po svemu sudeći povezano s inhibiranjem nekih, ali ne svih funkcija koja se karakteristične za aktivirane neutrofile. Nadalje, također su ispitani učinci inhibiranja PI3Kδ na funkciju B stanica i T stanica (primjeri 4-5, niže). Štoviše, PI3Kδ također je izražen u osteoklastima, pa je ispitan učinak inhibiranja PI3Kδ na funkciju ovih specijaliziranih stanica (primjer 6, niže).
PRIMJER 3
Određivanje uloge PI3Kδ u funkciji neutrofila
Ispitano je djelovanje inhibitora PI3Kδ ovog izuma, tj. D-000, na funkcije neutrofila kao što su stvaranje superoksida, elastazna egzocitoza, kemotakcija i uništavanje bakterija.
A. Priređivanje neutrofila iz humane krvi
Alikvoti (8 mL) heparinizirane krvi zdravih dragovoljaca naneseni su na podlogu 3 mL 7,3% FICOLL® (Sigma, St. Louis, MO) i 15,4% HYPAQUE® (Sigma) te centrifugirani na 900 rpm tijekom 30 min na sobnoj temperaturi u stolnoj centrifugi (Beckman). Vrpce bogate neutrofilima su upravo iznad sloja FICOLL®-HYPAQUE® pa su sakupljene i isprane s Hanks-ovom uravnoteženom otopinom (HBSS) koja sadrži 0,1% želatine. Ostatni eritrociti uklonjeni su s hipotoničnim lizinom s 0,2% NaCl. Pripravak neutrofila ispran je dva puta s HBSS koji sadrži 0,1% želatine i odmah korišten.
B. Mjerenje proizvodnje superoksida u neutrofila
Stvaranje superoksida je jedan od učinaka aktiviranja enutrofila. Cijeli niz aktivatora pojačava stvaranje superoksida pomoću neutrofila. Mjereno je djelovanje inhibitora PI3Kδ D-000 na stvaranje superoksida pomoću tri različita agonista: TNF1α, IgG i fMLP, pri čemu svaki predstavlja odvojenu klasu aktivatora. Superoksid koji je nastao pomoću neutrofila izmjeren je praćenjem promjene apsorbancije nakon reduciranja citokroma C modifikacijom metode koju su opisali Green i suradnici (str. 14.5.1-14.5.11 u Supp. 12, Curr Protocols Ircmunol (Eds., Colligan et al.) (1994)), na sljedeći način. Pojedinačne ploče na ploči s 96 jažica su prevučene preko noći na 4°C s 50 μL otopine 2 mg/mL humanog fibrinogena ili IgG. Jažice su isprane s PBS i u jažicu su dodani sljedeći reagensi: 50 μL HBSS ili superoksid dismutaze (1 mg/mL), 50 μL HBSS ili TNF1α (50 ng/mL), 50 μL citokroma C (2,7 mg/mL) i 100 μL suspenzije pročišćenog humanog neutrofila (2×105 stanica/mL). Ploča je centrifugirana 2 min na 200 rpm i praćena je apsorbancija na 550 nm tijekom 2 sata. Da se izmjeri relativna količina nastalog superoksida, vrijednosti koje su dobivene za jažicu koja sadrži superoksid dismutazu su oduzete od svih, te su normalizirane prema vrijednostima koje su dobivene za jažice bez ikakvog inhibitora.
Kao što je prikazano na slici 2, inhibitor PI3Kδ D-000 inhibira pomoću neutrofila TNF-izazvano stvaranje superoksida na način koji ovisi o koncentraciji. Stvaranje superoksida koje je izazvano pomoću TNF smanjeno je na polovinu maksimalne vrijednosti pri oko 3 μM D-000. Slika 2 također pokazuje da stvaranje superoksida koje je izazvano s IgG nije značajno inhibirano s D-000. Ustvari, čak pri 10 μM ovaj inhibitor PI3Kδ nije pokazao nikakav učinak na stvaranje superoksida koje je izazvano sa IgG.
Zatim, ispitano je djelovanje D-000 na stvaranje superoksida koje je potaknuto pomoću drugog jakog izazivača, bakterijskog peptida, formiliran-Met-Leu-Phe (fMLP). Kao i TNF-izazvanon stvaranje superoksida, fMLP-izazvano stvaranje superoksida također je inhibirano pomoću D-000 (Slika 3). Ovi rezultati pokazuju da inhibitor PI3Kδ D-000 može spriječiti stimulans specifično induciranje stvaranje superoksida pomoću neutrofila, što ukazuje na to da je PI3Kδ uključen u ovaj proces.
C. Mjerenje eksocitoze elastaze u neutrofila
Uz nastajanje superoksida, aktivirani neutrofili također odgovaraju otpuštanjem nekoliko proteaza koje su odgovorne za uništavanje tkiva i hrskavice tijekom upale. kao indikacija otpuštanja preoteaze, mjeren je učinak D-000 na elastaznu eksocitozu. Elastazna eksocitoza je kvantificirana modificiranjem postupka kojega su opisali Ossanna i suradnici (J Clin Invest, 77:1939-1951 (1986)), na sljedeći način. Pročišćeni humani neutrofili (0,2×105) (tretirani bilo s DMSO ili serijsko razrjeđenje D-000 u DMSO) stimulirani su s fMLP u PBS koji sadrži 0,01 mg/mL citochalasina B, 1,0 μM natrijeva azida (NaN3), 5 μg/mL L-metionina i 1 μM fMLP tijekom 90 min na 37°C u ploči s 96 jažica. Na kraju perioda inkubiranja, ploča je centrifugirana 5 min na 1000 rpm, pa je 90 μL supernatanta preneseno na 10 μL 10 mM otopine elastaza supstratnog peptida, MeO-suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA, pri čemu MeO-suc = metoksi-sukcinil; pNA = p-nitroanilid (Calbiochem, San Diego, CA). Apsorbancija na 410 nm praćena je 2 sata u čitaču ploča s 96 jažica. Da se izmjeri relativna količina ekscitozirane elastaze, sve vrijednosti apsorbancije su normalizirane na vrijednosti bez bilo kakvog inhibitora. kao što je prikazano na slici 4, inhibitor PI3Kδ D-000 značajno inhibira fMLP-induciranu elastaznu eksocitozu, i to tako da to ovisi o dozi. Inhibiranje je bilo u polovini maksimuma pri koncentraciji oko 2-3 μM D-000.
D. Mjerenje humane neutrofilne migracije izazavane s fMLP
Neutrofili imaju intrinzički kapacitet da prolaze kroz tkivam pa su to jedni od prvih staničnih tipova koji dolaze na mjesto upale ili oštećenja tkiva. Mjereno je djelovanje D-000 na neutrofilnu migraciju prema koncentracijskom gradijentu fMLP. Analize su načinjene dan prije migracije, ploče sa 6 jažica su prevučene s rekombinantnim ICAM-1/Fc fuzijskim proteinom (Van der Vieren et al., Immunity, 3:683-690 (1995')) (25 μg/mL u bikarbonatnom puferu, pH 9,3) te ostavljene preko noći na 4°C. Nakon ispiranja, 1% otopina agaroze u RPMI-1640 s 0,5% volovskim serum albuminom (BSA), dodana je jažicama sa ili bez inhibitora, te su ploče stavljene u hladnjak prije bušenja rupa u geliranoj agarozi da se stvore plakovi (1 središnja šupljina okružena sa 6 vanjskih šupljina po jažici).
Humani neutrofili su dobiveni kao što je prije opisano, te su resuspendirani u RPMI mediju kojemu je dodano 0,5% BSA za 5×105 stanica/mL. Nakon kombiniranja jednakih volumena neutrofilne suspenzije i medija (bilo s DMSO ili serijsko razrjeđenje testnog spoja u DMSO), neutrofili su alikvorno razdijeljeni u periferne šupljine, pri čemu je središnja primila fMLP (5 μM). Ploče su inkubirane na 37°C u prisutnosti 5% CO2 tijekom 4 h, pa je zatim terminirana migracija dodatkom 1% otopine glutaraldehida u D-PBS. Nskon uklanjanja agaroznog sloja, jažice su isprane s destiliranom vodom i osušene.
Analiza migracije neutrofila izvršena je na Nikon DIAPHOT® invertiranom mikroskopu (1x objektiv) - video radnoj stanici korištenjem NIH 1.61 programa. Pomoću programa Microsoft Excel i Table Curve 4 (SSPS Inc., Chicago IL), dobiven je migracijski indeks za svako ispitano stanje. Migracijski indeks definiran je kao površina pod krivuljom što predstavlja broj migriranih neutrofila u odnosu na udaljenost migracije po stanici.
Kao što je prikazano na slici 5, inhibitor PI3Kδ D-000 ima jak utjecaj na migraciju neutrfila, te inhibira ovu aktivnost na način koji ovisi o dozi. Vrijednost EC50 ovog spoja za inhibiranje migracije neutrofila u ovoj analizi bio je oko 1 μM. Vizualnim pregledom zabilježenih putanja stanica u ovoj analizi, čini se da na ukupnu dužinu puta neutrofila nije značajnije djelovao ispitani spoj. Umjesto toga, spoj je djelovao na orijentaciju neutrofila ili smisao usmjerenja, tako da umjesto migriranja duž osi kemoatrakcijskog gradijenta, stanice su migrirale na neusmjereni ili manje usmjereni način.
E. Mjerenje baktericidnog kapaciteta neutrofila
Budući da inhibitor PI3Kδ inhibitor D-000 djeluje na određene funkcije neutrofila što je prije navedeno, od interesa je vidjeti djeluje li spoj na uništavanje bakterija kojima upravlja neutrofil. Učinak D-000 na uništavanje Staphylococcus aureus kojim upravlja neutrofil ispitano je metodom koji su opisali Clark i Nauseef (str. 7.23.4-7.23.6 u Vol. 2, Supp. 6, Curr Protocols Immunol (Eds., Colligan et al.) (1994)). Pročišćeni humani neutrofili (5×105 stanica/mL) (tretirani bilo s DMSO ili serijsko razrjeđenje D-000 u DMSO) pomiješani su s autolognim serumom. Nakon rasta preko noći stanice S. aureus su isprane, resuspendirane u HBSS, te dodane serum-opsoniranim neutrofilima u odnosu 10:1. Neutrofili su ostavljeni da internaliziraju bakterije fagocitozom inkubiranjem na 37°C tijekom 20 min. Neinternilizirane bakterije su uništene pomoću 10 jedinica/mL lizostafinom na 37°C tijekom 5 min pa je cjelokupna smjesa rotirana na 37°C. U različitim vremenima su uzeti uzorci sve do 90 minuta i neutrofili su lizirani razrjeđenjem u vodi. Viabilne bakterije su izbrojane na ploči nanošenjem odgovarajućih razrjeđenja na ploču triptikaza-soja-agar te brojanjem kolonija S. aureus nakon rasta preko noći.
Kao što je prikazano na slici 6, uništavanje bakterija S. aureus kojim upravljaju neutrofili slično je uzorcima koji su tretirani s DMSO (kontrola) i s D-000. Ovi rezultati ukazuju da inhibitor PI3Kδ inhibitor ne djeluje značajno na sposobnost neutrofila da unište S. aureus, što pokazuje da PI3Kδ nije uključen u ovom putu funkcije neutrofila.
PRIMJER 4
Određivanje uloge PI3Kδ u funkciji B limfocita
Učinci PI 3-kinaza inhibitora na funkcije B stanica obuhvaća klasične indekse kao što je proizvodnja antitijela i proliferacija koja je izazvana specifičnim stimulatorom, također su ispitani.
A. Priređivanje i stimuliranje B stanica iz humane periferne krvi
Heparinizirana krv (200 μL) zdravih dragovoljaca pomiješana je s jednakim volumenom D-PBS, nanesena na 10×10 mL FICOLL-PAQUE® (Pharmacia), te je centrifugirana na 1600 rpm tijekom 30 min na sobnoj temperaturi. Mononuklearne stanice periferne krvi (PBMC) sakupljene su iz FlCOLL®/serum međusloja, stavljene na 10 mL seruma volovskog fetusa (FBS) te centrifugirane na 800 rpm tijekom 10 min da se uklone trombociti. Nakon ispiranja, stanice su inkubirane s DYNAL® mješavinom antitijela (pribor B stanica) (Dynal Corp., Lake Success, NY) tijekom 20 min na 4-8°C. Nakon uklanjanja nevezanog antitijela, PBL je pomiješan s anti-mišjim IgG prevučenim magnetskim kuglicama (Dynal) tijekom 20 min na 4-8°C uz blago potresivanje, a zatim su uklonjene obilježene stanice koje nisu B stanice na magnetskom separatoru. Postupak je još jednom ponovljen. B stanice su resuspendirane u RPM1-1640 s 10% FBS, te su držane na ledu do uporabe.
B. Mjerenje proizvodnje antitijela pomoću humanih B stanica
Da se istraži proizvodnja antitijela, B stanice su s alikvotom 50-75×103 stanica/jažica stavljene na ploču s 96 jažica sa ili bez inhibitora, čemu su dodani IL-2 (100 U/mL) i PANSORBIN® (Calbiochem) Staphylococcus aureus cells (1:90 000). Dio medija uklonjen je nakon 24-36 sati, pa je dodan svježi medij (sa ili bez inhibitora) i IL-2. Kulture su inkubirane na 37°C, u prisutnosti CO2 inkubatora sljedećih 7 dana. Uzorci su za svako stanje (u triplikatu) uklonjeni, te analizirani na IgG i IgM, što je mjereno ELISA analizom. Ukratko, IMMULON® 4 ploče s 96 jažica prevučene su (50 μL/jažica) bilo s 150 ng/mL magarećeg antihumanog IgG (H+L) (Jackson ImmunoResearch, West Grove PA), ili 2 μg/mL magarećeg antihumanog IgG+IgM (H+L) (Jackson ImmunoResearch) u bikarbonatnom puferu, te su ostavljene preko noći na 4°C. Nakon 3 ispiranja s fosfatno puferiranom fiziološkom otopinom koja sadrži 0,1% TWEEN®-80 (PBST) (350 μL/jažica), te blokiranja s 3% kozjim serumom u PBST (100 μL/jažica) tijekom 1 hr na sobnoj temperaturi, dodani su uzorci (100 μL/jažica) B stanica starog medija razrijeđeni u PBST. Za IgG ploče, raspon razrjeđenja bio je 1:500 do 1:10000, te za IgM 1:50 do 1:1000. Nakon 1 sat, ploče su izložene biotin-konjugiranom antihumanom IgG (100 ng/rnL) ili antihumanom IgM (200 ng/mL) (Jackson ImmunoResearch) tijekom 30 min, zatim streptavidin-HRP (1:20000) tijekom 30 min, te nazad TMB otopini (1:100) s H2O2 (1:10000) tijekom 5 min, s 3 PBST ispiranja između pojedinih stupnjeva. Razvijanje boje zaustavljeno je s H2SO4 otopinom, pa su ploče zatim očitane u ELISA čitaču ploča. Kao što je prikazano na slici 7, D-000 je značajno inhibirao proizvodnju antitijela. IgM proizvodnja je promijenjena više nego IgG proizvodnja: polumaksimum inhibiranja proizvodnje IgM uočen je na oko 1 μM, u odnosu prema 7 μM za usporedivo inhibiranje proizvodnje IgG.
C. Mjerenje proliferacije B stanica kao odgovor na površinsko stanično IgM stimuliranje
U gore navedenom eksperimentu, B stanice su stimulirane pomoću PANSORBIN®. Djelovanje D-000 na B staničnu proliferaciju kada je ona stimulirana preko stanične površine IgM korištenjem anti-IgM antitijela je također izmjereno. Mišji splenociti (Balb/c) stavljeni su na mikrototitarske ploče s 96 jažica za 2×105 stanica po jažici u 10% FBS/RPMI. Odgovarajuća razrjeđenja ispitanog inhibitora u cjelovitom mediju dodana su stanicama i ploče su inkubirane tijekom 30-60 minuta prije dodatka stimulansa. Nakon preinkubiranja s testnim inhibitorom dodan je jažicama pripravak F(ab')2 kozjeg antitijela koje je specifično na μ-lanac mišjeg IgM s konačnim koncentracijom 25 μg/mL. Ploče su inkubirane na 37°C tijekom 3 dana i u svaku jažicu je dodano 1 μCi [3H]-timidina za završna četiri sata uzgajanja. Ploče su stavljene na vlaknaste filtere, isprane, i pomoću beta-brojača izmjerena je razina vezane radioaktivnosti (Matrix 96, Packard Instrument Co., Downers Grove, IL) te je izražena u obliku impulsa u minuti (CPM).
Slika 8 pokazuje učinak D-000 na anti-IgM stimuliranu proliferaciju B stanica. Spoj je inhibirao anti-IgM-stimuliranu B staničnu proliferaciju na način koji ovisi o dozi. Na oko 1 μM, proliferaciju je smanjena na polovinu maksimalne vrijednosti.
Budući da spoj D-000 inhibira proliferaciju B stanica, pretpostavljeno je da se ovaj spoj i drugi PI3Kδ inhibitori mogu koristiti za supresiju nepoželjne proliferacije B stanica u kliničkim uvjetima. Primjerice, pri malignost B stanica, B stanice u različitim stupnjevima diferenciranja pokazuju nereguliranu proliferaciju. Temeljem rezultata koji su prije prikazani, može se zaključiti da se PI3Kδ selektivni inhibitori mogu koristiti za kontrolu, ograničenje ili inhibiranje rasta takvih stanica.
PRIMJER 5
Određivanje uloge PI3Kδ u funkciji T limfocita
Mjerena je T stanična proliferacija kao odgovor na kostimuliranje CD3+CD28. T stanice su pročišćene iz krvi zdravih ljudi negativnim selekcioniranjem pomoću antitijelom prevučenih magnetskih kuglica sukladno postupku proizvođača (Dynal) i resuspendiranjem u RPMI. Stanice su zatim tretirane bilo s DMSO ili serijskim razrijeđenjem D-000 u DMSO te stavljanjem na ploču 1×105 stanica/jažica na ploču s 96 jažica koja je prethodno prevučena s kozjim antimišjim IgG. Mišja monoklonska anti-CD3 i anti-CD28 antitijela su zatim dodana u svaku jažicu za 0,2 ng/mL, odnosno 0,2 μg/mL. Ploča je zatim inkubirana na 37°C tijekom 24 sata i dodan je [3H]-timidin (1 μCi/jažica). Nakon daljnjim 18 sati inkubiranja, stanice su sakupljene sa staničnim sakupljačem, isprane, te je izmjerena vezana radioaktivnost.
Premda PI3Kδ inhibitor D-000 inhibira anti-CD3- i anti-CD28-izazvanu proliferaciju T stanica, njegov učinak nije tako jak kao njegov učinak na B stanice ili na neke funkcije neutrofila. Polu-maksimalno inhibiranje ugradnje timidina nije doseglo najveću ispitivanu koncentraciju, tj. 10 μM D-000.
PRIMJER 6
Određivanje uloge PI3Kδ u funkciji osteoklasta
Da se prouči učinak PI3Kδ inhibitora D-000 na osteoklaste, mišje stanice koštane srži su izdvojene i diferencirane prema osteoklastima tretiranjem stanica sa stimulirajućim čimbenikom kolonije makrofaga (mCSF-1) te osteoprotegerinskim ligandom (OPGL) u mediju koji sadrži serum (ocMEM s 10% toplinkom neaktiviranim FBS; Sigma) tijekom 3 dana. Četvrtog dana, kada su se razvili osteoklasti, uklonjen je medij i sakupljene su stanice. Osteoklasti su stavljeni na dentinske ploče s 105 stanica/jažica u mediju za rast, tj. aMEM koji sadrži 1% serum i 2% BSA s 55 μg/mL OPGL i 10 ng/mL mCSF-1. Nakon 3 sata medij je promijenjen na 1% serum i 1% BSA, sa ili bez osteopontina (25 μg/mL) te PI3K inhibitora (100 nM). Medij je mijenjan svakih 24 sata sa svježim osteopontinom i inhibitorima. Nakon 72 sata, medij je uklonjen i dentinske površine su isprane vodom da se uklone stanični ostaci te su obojane kiselim hematoksilinom. Suvišak boje je ispran i dubina brazda je kvantificirana konfokalnom mikroskopijom.
Kao što je prikazano u tablici 1, u dva eksperimenta, inhibitori PI 3-kinaze imali su inhibitorski učinak na funkciju osteoklasta. I nespecifični inhibitori LY294002 i vortmanin su inhibirali aktivnost osteoklasta. Međutim, PI3Kδ inhibitor D-000 imao je najveći učinak, budući da je za 100 nM ovaj spoj pokazao potpuno inhibiranje aktivnosti osteoklasta.
[image]
PRIMJER 7
Određivanje uloge PI3Kδ u funkciji bazofila
Procjena učinka spoja ovog izuma na bazofilnu funkciju je ispitana pomoću standardnog histaminskog otpuštanja, što je općenito sukladno metodi koju su opisali Miura i suradnici, J Immunol, 162:4198-206 (1999). Ukratko, obogaćeni bazofili su prethodno inkubirani s testnim spojem u nekoliko koncentracija od 0,1 nM do 1 000 nM, tijekom 10 min na 37°C. Zatim je dodan poliklonski kozji antihumani IgE (0,1 μg/mL) ili fMLP, te je ostavljeno inkubiranje daljnjih 30 minuta. U supernatant otpušteni histamin mjeren je tehnikom automatizirane fluorimetrije. Ispitana su dva spoja, prikazana niže.
[image]
D-026
[image]
D-999
Smanjenje otpuštanja histamina koje ovisi o dozi uočeno je za 3-(2-klorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-026) kada su bazofili stimulirani s anti-igE. Supresija otpuštanja histamina je ustavi 100% za 1000 nM, s EC50 oko 25 nM. Drugi spoj, 3-(2-klorfenil)-2-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-999), u kojem je građa purinskog prstena promijenjena, manje je učinkovit u inhibiranju otpuštanja histamina. Nijedan spoj nije pokazao neki učinak kada su bazofili bili stimulirani s fMLP. Za usporedbu, neselektivni PI3K inhibitor LY294.002 koji je ispitan za 0,1 nM i 10000 nM, pokazao je gotovo 100% inhibiranje otpuštanja histamina pri najvećoj koncentraciji.
Ovi podaci pokazuju da se inhibitori PI 3-kinaze delta aktivnosti mogu koristiti za supresiju otpuštanja histamina, koji je jedna od medijatora alergije. Budući da je aktivnost različitih PI 3-kinaza neophodna za promet proteina, izlučivanje i eksocitozu u mnogim tipovima stanica, gore navedeni podaci pokazuju da otpuštanje histamina pomoću drugih stanica, mora također biti narušeno pomoću PI 3-kinaza delta selektivnim inhibitorima.
PRIMJERI KEMIJSKIH SINTEZA
U nastavku dani su specifični neograničavajući primjeri spojeva ovog izuma. U tehnici se podrazumijeva da se zaštitne skupine mogu koristiti tamo gdje je to potrebno, suklando općim načelima organske kemije. Ove zaštitne skupine uklanjaju se u završnim stupnjevima sinteze u bazičnim, kiselim ili hidrogenolitičkim uvjetima, što je očigledno za osobu koja poznaje ovo područje. Odgovarajućim rukovanjem i zaštitom nekih kemijskih funkcionalnih skupina, sinteza spojeva strukturne formule (I) koji nisu specifično anvedeni, može se provesti korištenjem metoda koje su analogne niže navedenim shemama.
Osim ako nije drukčije navedeno, sve polazne tvari su dobivene od komercijalnih dobavljača i korištene su bez daljnjeg pročišćavanja. Sve reakcijske smjese i kromatografske frakcije analizirane su tankoslojnom kromatografijom (TLC) na 250 mm pločama silika-gela, uz vizualiziranje ultraljubičastim (UV) svjetlom ili jodnim (I2) obojenjem. Produkti i reakcijski intermedijeri pročišćeni su “flash” kromatografijom ili reverzno-faznom HPLC.
U primjerima sinteze korištene su sljedeće kratice: aq (vodena otopina), H2O (voda), CHC13 (klorform), HCl (klorovodična kiselina), MeOH (metanol), NaOH (natrijev hidroksid), NaOMe (natrijev metoksid), TFA (trifluoroctena kiselina), K2CO3 (kaliev karbonat), SOC12 (tionil klorid), CH2C12 (metilen klorid), EtOAC (etilacetat), DMF (dimetilformamid), EtOH (etanol), DMSO (dimetil sulfoksid), NaHCO3 (natrijev bikarbonat), TLC (tankoslojna kromatografija), HPLC (“high performance” tekućinska kromatografija), HOBT (hidroksibenzotriazol), EDC (etildietilaminopropilkarbodiimid), DIEA (diizopropiletilamin) i HOAc (octena kiselina).
Opći postupci
Postupak A
Tionil klorid je dodan uz energično miješanje otopini antranilne kiseline ili benzojeve kiseline u benzenu, te je smjesa miješana pod refluksom 5 do 18 sati. Reakcijska smjesa je koncentrirana u vakuumu, te sakupljena dva puta s benzenom. Dobiveno ulje je otopljeno u CHC13 pa je toj otopini dodana odgovarajuća količina anilina. Reakcijska smjesa je grijana pod refluksom i miješana dok nije završena reakcija, što je određeno pomoću TLC nakon čega je reakcijska smjesa ohlađena na temperaturu okoline. Talog je uklonjen filtriranjem, pa je filtrat koncentriran u vakuumu. Sirovi produkt je pročišćen kromatografiranjem i/ili rekristaliziranjem iz MeOH da se dobiju amidi 1a-1r.
Postupak B
Uz enegično miješanje, suspenziji amida u glacijalnoj octenoj kiselini dodan je kloracetil klorid. Reakcijska smjesa je grijana na 120°C, pa je na toj temperaturi miješana sve do završetka reackije, što je određno pomoću TLC. Nakon kratkog hlađenja, reakcijska smjesa je koncentrirana u vakuumu. Sirove rezidue su pročišćene ekstrahiranjem, kromatografijom i/ili rekristaliziranjem, da se dobiju kloridi 2a-2r.
Postupak C
Smjesa klorida, te nukleofila bilo dušika ili sumpora, primjerice merkaptopurin monohidrata ili adenina, te K2CO3 u DMF miješana je na sobnoj temperaturi tijekom 15-72 sata. Nastala suspenzija je stavljena u vodu, te je držana na 4°C nekoliko sati. Sirova krutina je filtrirana, isprana vodom i pročišćena kromatografiranjem ili rekristaliziranjem da se dobije konačni produkt.
PRIMJER 8
Priređivanje intermedijernih spojeva: Amidi
2-Amino-N-(2-klorfenil)-4,5-dimetoksibenzamid (1a)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 4,5-dimetoksiantranilne kiseline (5,0 g, 25,4 mmol) i SOC12 (5,5 mL, 76,1 mmol) u benzenu (100 mL), pa zatim 2-kloranilina (6,7 mL, 63,5 mmol) i CHC13 (75 mL). Produkt je ispran vodenom otopinom NaHCO3 (2×25 mL) i HCl (0,5 M, 75 mL) i pročišćen kromatografiranjem u CH2C12 da se dobije 4,3 g smeđe pjene (55%).
1H NMR (CDC13) δ: 8,42 (dd, J=1.5, 8.3 Hz, 1H); 8,32 (br s, 1H); 7,40 (dd, J=1.4, 8.0 Hz, 1H); 7,31 (dt, J=1.4, 7.9 Hz, 1H); 7,05 (dt, J=1.5, 7.7 Hz, 1H); 7,03 (s, 1H); 6,24 (s, 1H); 3,88 (s, 3H); 3,87 (s, 3H).
MS (ES): m/z 307,0 (M+).
2-Amino-5-brom-N-(2-klorfenil)benzamid (1b)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 2-amino-5-brombenzojeve kiseline (5,0 g, 23,1 mmol) i SOC12 (7,0 mL, 95,9 mmol) u benzenu (50 mL), pa zatim 2-kloranilina (7,3 mL, 69,3 mmol) i CHC13 (50 mL). Produkt je pročišćen s dva kromatografiranja u CH2C12 da se dobije 1,48 g žutonarančaste krutine (20%).
1H NMR (CDC13) δ: 8,36 (dd, J=1.2, 8.2 Hz, 1H); 8,20 (br s, 1H); 7,62 (d, J=2.1 Hz, 1H); 7,42 (dd, J=l,3, 8.0 Hz, 1H); 7,34 (dd, J=2.2, 8.8 Hz, 1H); 7,28-7,33 (m, 1H); 7,09 (dt, J=1.4, 7.7 Hz, 1H); 6,62 (d, J=8.7 Hz, 1H); 5,57 (br s, 2H).
2-Amino-N-(2-klorfenil)-4-fluorbenzamid (1c)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 2-amino-4-fluorbenzojeve kiseline (1,15 g, 7,41 mmol) i SOC12 (1,4 mL, 18,5 mmol) u benzenu (25 ml.), pa zatim 2-kloranilina (1,6 mL, 14,8 mmol) i CHC13 (25 mL). Produkt je kromatografiran u CH2C2, pa razmuljen s heksanom da se dobije 1,02 g prljavobijele krutine (52%).
1H NMR (CDC13) δ: 12,91 (br s, 1H); 8,72 (dd, J=2.7, 12 Hz, 1H); 8,34 (dd, J=6.4, 9.2 Hz, 1H); 8,29 (dd, J=5.9, 8.8 Hz, 1H); 7,81 (dd, J=6.2, 8.8 Hz, 1H); 7,28 (dt, J=2.4, 8.4 Hz, 1H); 7,21 (dd, J=2.4, 9.0 Hz, 1H); 6,92 (ddd, J=2.4, 7.3, 9.1 Hz, 1H); 6,54 (ddd, J=2.4, 7.8, 8.8 Hz, 1H); 6,45 (dd, J=2.4, 11 Hz,. 1H); 5.93 (br s, 2H).
MS (ES): m/z 265,0 (M+).
2-Amino-5-klor-N-(2-klorfenil)benzamid (1d)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 2-amino-5-klorbenzojeve kiseline (2,0 g, 11,7 tnmol) i SOC12 (2,2 mL, 29,.2 mmol) u benzenu (50 mL), pa zatim 2-kloranilina (2,5 mL, 23,3 mmol) i CHC13 (50 mL). Produkt je pročišćen rekristaliziranjem iz MeOH da se dobije 1,72 g tamnožute krutine (52%).
1H NMR (CDC13) δ: 8,37 (dd, ,J=1.5, 8.3 Hz, 1H); 8,22 (br s, 1H); 7,48 (d, J=2,3 Hz, 1H); 7,42 (dd, J=1.5, 8,1 Hz, 1H); 7,31 (dt, J=1.4, 7.8 Hz, 1H); 7,22 (dd, J=2.4, 8.8 Hz, 1H); 7,09 (dt, J=1.5, 7.7 Hz, 1H); 6,67 (d, J=8.8 Hz, 1H); 5,56 (br s, 2H)..
2-Amino-N-(2-klorfenil)-6-fluorbenzamid (1e)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 2-amino-6-fluorbenzojeve kiseline (2,0 g, 12,9 mmol) i SOC12 (2,3 mL, 32,2 mmol) u benzenu (50 mL), pa zatim 2-kloranilina (2,7 mL, 25,8 mmol) i CHC13 (50 mL). Produkt je pročišćen kromatografiranjem iz EtOAc/heksana da se dobije 2,06 g blijedonarančaste krutine (60%).
1H NMR (CDC13) δ: 9,00 (d, J=17 Hz, 1H); 8,47 (d, J=8.3 Hz, 1H); 7,41 (d, J=8.0 Hz, 1H); 7,30 (t, J=7.9 Hz, 1H); 7,10-7,20 (m, 1H); 7,07 (t, J=7.7 Hz, 1H); 6,49 (d, J=8.3 Hz, 1H); 6,03 (br s, 2H).
MS (ES): m/z 265,0 (M+).
2-Amino-6-klor-N-(2-klorfenil)benzamid (1f)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 2-amino-6-klorbenzojeve kiseline (2,5 g, 14,6 mmol) i SOC12 (2,7 mL, 36,4 mmol) u benzenu (75 mL), pa zatim 2-kloranilina (3,1 mL, 29,1 mmol) i CHC13 (75 mL). Produkt je kromatografiran u CH2Cl2 da se dobije 1,05 g blijedonarančaste krutine (26%).
1H NMR (CDC13) δ: 8,54 (d, J=8.1 Hz, 1H); 8,30 (br s, 1H); 7,41 (dd, J=1.5, 8.0 Hz, 1H); 7,33 (t, J=7.8 Hz, 1H); 7,10 (t, J=8,l Hz, 1H); 7,09 (dt, J=1.6, 7.8 Hz, 1H); 6,78 (dd, J=0.4, 7.9 Hz, 1H); 6,63 (dd, J=0.9, 8.2 Hz, 1H); 4,69 (br s, 2H).
MS (ES) : m/z 303,0 (M+22), 281,0 (M+).
2-Amino-N-(2-klorfenil)-6-metilbenzamid (1g)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 2-amino-6-metilbenzojeve kiseline (2,5 g, 16,5 mmol) i SOC12 (3,0 mL, 41,3 mmol) u benzenu (75 mL), pa zatim 2-kloranilina (3,5 mL, 33,0 mmol) i CHC13 (75 mL). Produkt je kromatografiran u CH2C12 da se dobije 2,19 g smeđeg ulja (51%).
1H NMR (CDC13) δ: 8,58 (d, J=8.1 Hz, 1H); 7,99 (br s, 1H); 7,40 (dd, J=1.4, 8.0 Hz, 1H); 7,34 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7,11 (t, J=7.8 Hz, 1H); 7,09 (dt, J=1.5, 7.7 Hz, 1H); 6.64 (d, J=7.5 Hz, 1H); 6,59 (d, J=8.1 Hz, 1H); 4,29 (br s, 2H); 2,45 (s, 3H).
MS (ES): m/z 283,0 (M+22).
2-Amino-3-klor-N-(2-klorfenil)benzamid (1h)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 2-amino-3-klorbenzojeve kiseline (1,0 g, 5,82 mmol) i SOC12 (1,1 mL, 14,6 mmol) u benzenu (25 mL), pa zatim 2-kloranilina (1,2 mL, 11,7 mmol) i CHC13 (25 mL). Produkt je rekristaliziran iz MeOH da se dobije 1,29 g žute krutine (78%).
1H NMR (CDC13) δ: 8,43 (dd, J=1.4, 8.3 Hz, 1H); 8,30 (br s, 1H); 7,47 (dd, J=1.1, 8.0 Hz, 1H); 7,42 (d, J=8.0 Hz, 2H); 7,33 (dt, J=1.4, 7.9 Hz, 1H); 7,09 (dt, J=1.5, 7.7 Hz, 1H); 6,68 (t, J=7.9 Hz, 1H); 6,13 (br s, 2H).
MS (ES): m/z 281,0 (M+).
2-Amino-N-bifenil-2-il-6-klorbenzamid (1i)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 2-amino-6-klorbenzojeve kiseline (2,0 g, 11,7 rnmol) i SOC12 (2,1 mL, 29,3 mmol) u benzenu (60 mL), pa zatim 2-aminobifenilamina (4,15 g, 24,5 mmol) i CHC13 (60 mL). Produkt je kromatografiran u CH2C12 da se dobije 2,16 g pjenaste tamnojantarne rezidue (57%).
1H NMR (CDC13) δ: . 8,48 (d, J=8.2 Hz, 1H); 7,79 (br s, 1H); 7,34-7,46 (m, 6H); 7,20-7,30 (m, 2H); 7,00 (t, J=8.1 Hz, 1H); 6,63 (dd, J=0.6, 7,9 Hz, 1H); 6,54 (d, J=8.3 Hz, 1H); 4,58 (br s, 2H).
MS (ES): m/z 323,1 (M+).
2-Amino-6-klor-N-o-tolilbenzamid (1j)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 2-amino-6-klorbenzojeve kiseline (1,0 g, 5,83 mmol) i SOC12 (1,1 mL, 14,6 mmol) u benzenu (30 mL), pa zatim o-toluidina (1,4 mL, 12,8 mmol) i CHC13 (30 mL). Produkt je kromatografiran u CH2C12 da se dobije 840 mg uljaste žute krutine (55%).
1H NMR (CDC13) δ: 7.96 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7,60 (br s, 1H); 7,23-7,30 (m, 2H); 7,14 (t, J=7.5 Hz, 1H); 7.11 (t, J=8.3 Hz, 1H); 6,78 (d, J=7.9 Hz, 1H); 6,64 (d, J=8.2 Hz, 1H); 4,73 (br s, 2H); 2,35 (s, 3H). MS (ES): m/z 261,0 (M+).
2-Amino-6-klor-N-(2-fluorfenil)benzamid (1k)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 2-amino-6-klorbenzojeve kiseline (2,0 g, 11,7 mmol) i SOC12 (2,1 mL, 29,1 mmol) u benzenu (60 mL), pa zatim 2-fluoranilina (2,3 mL, 23,4 mmol) i CHC13 (60 mL). Produkt je kromatografiran u CH2C12 da se dobije 1,05 g žute krutine (34%).
1H NMR (CDC13) δ: 8.45 (t, J=8.0 Hz, 1H); 8,01 (br s, 1H); 7,02-7,22 (m, 4H); 6,78 (dd, J=0.5, 7.9 Hz, 1H); 6,64 (dd, J=0.8, 8.2 Hz, 1H); 4,73 (br s, 2H).
MS (ES): m/z 265,0 (M+).
2 -Amino- 6-klor-N-(2 -metoksifenil)benzamid (1l)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 2-amino-6-klorbenzojeve kiseline (2,0 g, 11,7 mmol) i SOC12 (2,1 mL, 29,1 mmol) u benzenu (60 mL), pa zatim o-anisidina (2,6 mL, 23,4 mmol) i CHC13 (60 mL). Produkt je kromatografiran u CH2C12 da se dobije 2,61 g tamnožutog ulja (81%).
1H NMR (CDC13) δ: 8,53 (dd, J=1.7, 7.9 Hz, 1H); 8,39 (br .S, 1H); 7,11 (dt, J=1.6, 7.8, Hz, 1H); 7,09 (t, J=8 ,1 Hz, 1H); 7,02 (dt, J=1.4, 7.8 Hz, 1H); 6,92 (dd, J=1.4, 8.0 Hz, 1H); 6.62 (dd, J=0.9, 8.2 Hz, 1H); 4,66 (br s, 2H); 3,87 (s, 3H).
MS (ES): m/z 277.0 (M+).
2-Amino-N-(2-klorfenil)-3-trifluormetilbenzamid (1m)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 3-trifluormetilantranilne kiseline (2,0 g, 9,75 mmol) i SOC12 (1,8 mL, 24,4 mmol) u benzenu (50 mL), pa zatim 2-kloranilina (2,1 mL, 19,5 mmol) i CHC13 (50 mL). Produkt je pročišćen rekristaliziranjem iz MeOH da se dobije 2,38 g žutih kristala (78%).
1H NMR (CDC13) δ: 8,40 (dd, J=1.4, 8.3 Hz, 1H); 8,25 (br s, 1H); 7,71 (d, J=7.8 Hz, 1H); 7,60 (d, J=7.8 Hz, 1H); 7,43 (dd, J=1.4, 8.0 Hz, 1H); 7,34 (dt, J=1.3, 7.9 Hz, 1H); 7,11 (dt, J=1.5, 7.7 Hz, 1H); 6,77 (t, J=7.8 Hz, 1H); 6,24 (br s, 2H).
MS (ES): m/z 315,0 (M+).
3-Aminonaftalen-2-karboksilna kiselina (2-klorfenil) amid (1n)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 3-amino-2-naftoične kiseline (2,0 g, 10,7 mmol) i SOC12 (1,9 mL, 26,7 mmol) u benzenu (50 mL), pa zatim 2-kloranilina (2,3 mL, 21,4 mmol) i CHCl3 (50 mL). Produkt je rekristaliziran iz MeOH da se dobije 1,71 g smeđe krutine (54%).
1H NMR (CDCl3) δ: 10,88 (br s, 1H); 9,21 (s, 1H); 8,91 (s, 1H); 8,70 (dd, J=1.0, 8.3 Hz, 1H); 7,95-8,01 (m, 1H); 7,87-7,94 (m, 1H); 7,60-7,68 (m, 2H).; 7,41 (dd, J=1.3, 8.0 Hz, 1H); 7,34 (dt, J=1.2, 7.8 Hz, 1H); 7,07 (dt, J=1.4, 7.7 Hz, 1H).
MS (ES): m/z 297,1 (M+).
2-Amino-N-(2-klorfenil)-4-nitrobenzamid (1o)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 4-nitroantranilne kiseline (5,0 g, 27,5 mmol) i SOC12 (5,0 mL, 68,6 mmol) u benzenu (150 mL), pa zatim 2-kloranilina (5,8 mL, 55,0 mmol) i CHC13 (150 mL). Produkt je pročišćen kromatografiranjem u CH2C12 pa zatim rekristalizirnajem iz MeOH da se dobije 2,20 g narančastosmeđe krutine (31%).
1H NMR (CDC13) δ: 8,41 (dd, J=1.3, 8.3 Hz., 1H); 8,31 (br s, 1H); 7,67 (d, J=8.6 Hz, 1H); 7,57 (d, J=2.1 Hz, 1H); 7,52 (dd, J=2.2, 8.5 Hz, 1H); 7,44 (dd, J=1.3, 8.1 Hz, 1H); 7,35 (dt, J=1.3, 7.9 Hz, 1H); 7,13 (dt, J=1,4, 7.8 Hz, 1H); 5,88 (br s, 2H).
MS (ES): m/z 292,0 (M+).
2-Amino-N-(2-klorfenil)-5-hidroksibenzamid (1p)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 2-amino-5-hidroksibenzojeve kiseline (5,0 g, 32,7 mmol) i SOC12 (6,0 mL, 81,6 mmol) u benzenu (150 mL), pa zatim 2-kloranilina (6,9 mL, 65,4 mmol) i CHC13 (150 mL). Produkt je pročišćen s dva kromatografiranja u MeOH/CH2Cl2 da se dobije 990 mg smeđe krutine (12%).
1H NMR (MeOH-d4) δ: 7.92 (dd, J=1.6, 8.1 Hz, 1H); 7,48 (dd, J=1.5, 7.7 Hz, 1H); 7,34 (dt, J=1.5, 7.7 Hz, 1H); 7,20 (dt, J=1.7, 7.7 Hz, 1H); 7,16 (d, J=2.7 Hz, 1H); 6,83 (dd, J=2.7, 8.7 Hz, 1H); 6,76 (d, J=8.7 Hz, 1H); 6,24 (br s, 2H)).
MS (ES): m/z 263,0 (M+).
2-Amino-N-(2-klorfenil)-4,5-difluorbenzamid
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 4,5-difluorantranilne kiseline (2,0 g, 11,6 mmol) i SOC12 (2,1 mL, 28,9 mmol) u benzenu (60 mL), pa zatim 2-kloranilina (2,4 mL, 23,2 mmol) i CHC13 (60 mL). Produkt je pročišćen s dva kromatografiranja u CH2C12 i EtOAc/heksan da se dobije 769 mg žute krutine (23%).
1H NMR (CDC13) δ: 8,69-8,82 (m, 1H); 8,00 (dd, J=8.4, 9.0 Hz, 1H); 7,90 (dd, J=8.9, 12 Hz, 1H); 7,39 (dd, J=6.8, 10 Hz, 1H); 6,53 (dd, J=6.6, 12 Hz, 1H); 6,41 (br s, 2H); 5,79 (br s, 1H).
MS (ES): m/z 283,1 (M+).
2-Amino-N-(2-klorfenil)-5-fluorbenzamid (1r)
Priređen je sukladno postupku A korištenjem 2-amino-5-fluorbenzojeve kiseline (1,0 g, 6,45 mmol) i SOC12 (1,2 mL, 16,1 mmol) u benzenu (30 mL), pa zatim 2-kloranilina (1,4 mL, 12,9 mmol) i CHC13 (30 mL). Produkt je izlučen iz CH2C12 da se dobije 985 mg krutine boje senfa (58%).
1H NMR (CDC13) δ: 7,66 (dd, J=2.9, 8.7 Hz, 1H); 7,52-7,55 (m, 1H); 7,32-7,37 (m, 3H); 7,09 (dt, J=3.0, 8.5 Hz, 1H); 6,71 (dd, J=4.3, 8.7 Hz, 1H).
MS (ES): m/z 305,0 (M+40).
PRIMJER 9
Priređivanje intermedijernih spojeva; Kloridi
2-Klormetil-3-(2-klorfenil)-6,7-dimetoksi-3H-kinazolin-4-on (2a)
Priređen je sukladno postupku B s 1a (2,95 g, 9,63 mmol) i kloracetil kloridom (2,3 mL, 28,9 mmol) u octenoj kiselini (30 mL). Pročišćen je ekstrahiranjem iz vodene otopine K2CO3 i rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 1,61 g smeđe kristalne krutine (46%).
1H NMR (CDC13) δ: 7,59-7,66 (m, 2H); 7,45-7,56 (m, 3H); 7,20 (s, 1H); 4,37 (d, J=12 Hz, 1H), 4,08 (d, J=12 Hz, 1H); 4,04 (s, 3H); 4,00 (s, 3H).
MS (ES) : m/z 365,0 (M+)
6-Brom-2-klormetil-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on (2b)
Priređen je sukladno postupku B s 1b (500 mg, 1,54 mmol) i kloracetil kloridom (0,37 mL, 4,61 mmol) u octenoj kiselini (10 mL). Pročišćen je rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 490 mg prljavobijele krutine (83%).
1H NMR (CDC13) δ: 8,43 (d, J=2.3 Hz, 1H); 7,91 (dd, J=2.3, 8.7 Hz, 1H); 7,67 (d, J=8.7 Hz, 1H); 7,60-7,65 (m, 1H); 7,47-7,56 (m, 2H); 7,52 (t, J=5.3 Hz, 1H); 7,47-7,56 (m, 1H); 4,37 (d, J=12 Hz, 1H), 4,06 (d, J=12 Hz, 1H).
MS (ES) : m/z 385,0 (M+).
2-Klormetil-3-(2-klorfenil)-7-fluor-3H-kinazolin-4-on (2c)
Priređen je sukladno postupku B s 1c (500 mg, 1,89 mmol) i kloracetil kloridom (0,45 mL, 5,67 mmol) u octenoj kiselini (10 mL). Pročišćen je ekstrahiranjem s vodenom otopinom K2CO3, pa zatim rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 501 mg of a žute kristalne krutine (82%).
1H NMR (CDC13) δ: 8.32 (dd, J=6.0, 8.9 Hz, 1H); 7,59-7,66 (m, 1H); 7,50-7,55 (m, 3H); 7,44 (dd, J=2.4, 9.4 Hz, 1H); 7,27 (dt, J=2.5, 8.5 Hz, 1H); 4,37 (d, J=12 Hz, 1H), 4,07 (d, J=12 Hz, 1H).
MS (ES): m/z 323,0 (M+).
6-Klor-2-klormetil-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on (2d)
Priređen je sukladno postupku B s 1d (500 mg, 1,78 mmol) i kloracetil kloridom (0,42 mL, 5,33 mmol) u octenoj kiselini (10 mL). Pročišćen je rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 555 mg žute krutine (92%).
1H NMR (CDC13) δ: 8.27 (d, J=1.9 Hz, 1H); 7,74-7,78 (m, 2H); 7,60-7,66 (m, 1H); 7,4.8-7,57 (m,: 3H); 4,37 (d, J=12 Hz, 1H), 4,07 (d, J=12 Hz, 1H).
MS (ES) : m/z 339,0 (M+).
2-Klormetil-3-(2-klorfenil)-5-fluor-3H-kinazolin-4-on (2e)
Priređen je sukladno postupku B s 1e (500 mg, 1,89 mmol) i kloracetil kloridom (0,45 mL, 5,67 mmol) u octenoj kiselini (10 mL). Pročišćen je ekstrahiranjem iz vodene otopine K2CO3 i rekristaliziranjem iz izopropanola i rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 430 mg prljavobijele kristalne krutine (70%).
1H NMR (CDC13) δ: 7,76 (dt, J=5.3, 8.2 Hz, 1H); 7,56-7,65 (m, 2H); 7,47-7,56 (m, 3H); 7,16-7,25 (m, 1H); 4,35 (d, J=12 Hz, 1H), 4,07 (d, J=12 Hz, 1H).
MS (ES) : m/z 323,0 (M+).
5-Klor-2-klormetil-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on (2f)
Priređen je sukladno postupku E s 1f (1,00 g, 3,56 mmol) i kloracetil kloridom (0,85 mL, 10,7 mmol) u octenoj kiselini (15 mL). Pročišćen je rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 791 mg prljavobijele kristalne krutine (65%).
1H NMR (CDCL3) δ: 7,70 (s, 1H); 1,68 (d, J=3.8 Hz, 1H); 7,61-7,65 (m, 1H); 7,55 (dd, J=2.7, 6.4 Hz, 1H); 7,51 (d, J=3.1 Hz, 1H); 7,50 (s, 2H); 4,35 (d, J=12 Hz, 1H), 4,05 (d, J=12 Hz, 1H).
MS (ES): m/z 339,0 (M+).
2-Klormetil-3-(2-klorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on (2g)
Priređen je sukladno postupku B s Ig (2,18 g, 8,36 mmol) i kloracetil kloridom (2,0 mL, 25,1 mmol) u octenoj kiselini (40 mL). Pročišćen je s dvije kromatografije u CH2C12 i EtOAc/heksanu, pa zatim rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 638 mg prljavobijele kristalne krutine (24%).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 7,73-7,80 (m, 3H); 7,58-7,64 (m, 3H); 7,41 (d, J=7.4 Hz, 1H); 4,40 (d, J=12 Hz, 1H), 4,26 (d, J=12 Hz, 1H); 2,74 (s, 3H).
MS (ES): m/z 319,0 (M+).
8-Klor-2-klormetil-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on (2h)
Priređen je sukladno postupku B s 1h (500 mg, 1,78 mmol) i kloracetil kloridom (0,49 mL, 6,13 mmol) u octenoj kiselini (10 mL). Pročišćen je ekstrahiranjem iz vodene otopine K2CO3, pa zatim rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 448 mg žute krutine (74%).
1H NMR (CDC13) δ: 8.23 (dd, J=1.4, 8.0 Hz, 1H); 7,90 (dd, J=1.4, 7.8 Hz, 1H); 7,61-7,66 (m, 1H); 7,51-7,55 (m, 3H); 7,47 (t, J=8.0 Hz, 1H); 4,48 (d, J=12 Hz, 1H), 4,12 (d, J=12 Hz, 1H).
MS (ES) : m/z 339,0 (M+).
3 -Bifenil-2-il-5-klor-2-klormetil-3H-kinazolin-4-on (2i)
Priređen je sukladno postupku B s 1i (2,0 g, 6,20 mmol) i kloracetil kloridom (1,5 mL, 18,6 mmol) u octenoj kiselini (30 mL). Pročišćen je kromatografiranjem u CH2Cl2, pa zatim rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 1,44 g prljavobijele krutine (61%).
1H NMR (CDC13) δ: 7,61-7,64 (m, 1H); 7,58-7,59 (m, 1H); 7,54-7,57 (m, 2H); 7,52-7,53 (m, 1H); 7,45-7,52 (m; 2H); 7,24 (s, 5H); 3,92-4,03 (m, 2H).
MS (ES): m/z 381,0 (M+).
5-Klor-2 -klormetil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (2j)
Priređen je sukladno postupku B s 1j (750 mg, 2,88 mmol) i kloracetil kloridom (0,69 mL, 8,63 mmol) u octenoj kiselini (15 mL). Pročišćen je kromatografiranjem u CH2C12, pa zatim rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 340 mg bijele krutine (37%).
1H NMR (CDC13) δ: 7,69 (d, J=2.1 Hz, 1H); 7,68 (q, J=7.4 Hz, 1H); 7,54 (dd, J=2.2, 7.0 Hz, 1H); 7,35-7,47 (m, 3H); 7,21-7,25 (m, 1H); 4,27 (d, J=12 Hz, 1H); 4,11 (d, J=12 Hz, 1H); 2,18 (s, 3H).
MS (ES) : m/z 319,0 (M+).
5-Klor-2-klormetil-3-(2'-fluorfenil)-3H-kinazolin-4-on (2k)
Priređen je sukladno postupku B s 1k (1,0 g, 3,78 mmol) i kloracetil kloridom (0,90 mL, 11,3 mmol) u octenoj kiselini (20 mL). Pročišćen je kromatografirajem u CH2C12 da se dobije 484 mg blijede ružičaste krutine (40%).
1H NMR (CDC13) d: 7,69 (s, 1H); 7,68 (d, J=3.2 Hz, 1H); 7,56 (d, J=3.0 Hz, 1H); 7,54 (d, J=3.0 Hz, 1H); 7,40-7,47 (m, 1H); 7,35-7,38 (m, 1H); 7,27-7,32 (m, 1H); 4,35 (d, J=12-Hz, 1H); 4,18 (d, J=12 Hz, 1H).
MS (ES): m/z 323,0 (M+).
5-Klor-2-klormetil-3-(2-metoksifenil)-3H-kinazolin-4-on (2l)
Priređen je sukladno postupku B s 1l (2,6 g, 9,41 mmol) i kloracetil kloridom (2,2 mL, 28,2 mmol) u octenoj kiselini (40 mL). Pročišćen je kromatografiranjem u CH2C12, pa zatim rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 874 mg blijedožute krutine (28%).
1H NMR (CDC13) δ: 7,55-7,74 (m, 2H); 7,47-7,54 (m, 2H); 7,34 (dd, J=1.7, 7.8 Hz, 1H); 7,13 (dt, J=1.2, 7.7 Hz, 1H); 7,08 (dd, J=1.0, 8.4 Hz, 1H); 4,29 (d, J=12 Hz, 1H); 4,11 (d, J=12 Hz, 1H); 3,80 (s, 3H).
MS (ES): m/z 335,0 (M+).
2-Klormetil-3-(2-klorfenil)-8-trifluormetil-3H-kinazolin-4-on (2m)
Priređen je sukladno postupku B s 1m (500 mg, 1,59 mmol) i kloracetil kloridom (0,38 mL, 4,77 mmol) u octenoj kiselini (10 mL). Pročišćen je rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 359 mg bijele kristalne krutine (61%).
1H NMR (CDC13) δ: 8,51 (dd, J=1.0, 8.0 Hz, 1H); 8,14 (d, J=7.3 Hz, 1H); 7,65 (dd, J=2.5, 5.6 Hz, 1H); 7,62 (d, J=3.9 Hz, 1H); 7,48-7,60 (m, 3H); 4,44 (d, J=12 Hz, 1H), 4,12 (d, J=12 Hz, 1H).
MS (ES): m/z 373,0 (M+).
2-Klormetil-3-(2-klorfenil)-3H-benzo[g]kinazolin-4-on (2n)
Priređen je sukladno postupku B s 1n (500 mg, 1,68 mmol) i kloracetil kloridom (0,40 mL, 5,05 mmol) u octenoj kiselini (10 mL). Pročišćen je kromatografiranjem u CH2C12 pa zatim rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 232 mg svijetlosmeđe krutine (39%).
1H NMR (CDC13) δ: 8.92 (s, 1H); 8,29 (s, 1H); 8,81 (d, J=8.3, 1H), 8,32 (d, J=8.3 Hz, 1H); 7,51-7,69 (m, 4H); 7,55 (d, J=5.2 Hz, 1H); 7,53 (d, J=3.8 Hz, 1H); 4,43 (d, J=12 Hz, 1H), 4,12 (d, J=12 Hz, 1H).
MS (ES) : m/z 355,0 (M+).
2-Klormetil-3-(2-klorfenil)-7-nitro-3H-kinazolin-4-on (2o)
Priređen je sukladno postupku B s 1o (500 mg, 1,71 mmol) i kloracetil kloridom (0,41 mL, 5,14 mmol) u octenoj kiselini (10 mL). Pročišćen je ekstrahiranjem iz vodene otopine K2CO3, pa zatim s dva kromatografiranja u CH2C12 da se dobije 338 mg žutog ulja (56%).
1H NMR (CDC13) δ: 8,64 (d, J=2.2 Hz, 1H); 8,48 (d, J=8.8 Hz, 1H); 8,32 (dd, J=2 .2, 8.7 Hz, 1H); 7,66 (dd, J=2.5, 6.0 Hz, 1H); 7,52-7,59 (m, 3H); 4,41 (d, J=12 Hz, 1H), 4,10 (d, J=12 Hz, 1H).
MS (ES): m/z 350,0 (M+).
Ester 2-klormetil-3-(2-klorfenil)-4-okso-3,4-dihidro-kinazolin-6-il octene kiseine (2p)
Priređen je sukladno postupku B s 1p (670 mg, 2,55 mmol) i kloracetil kloridom (0,61 mL, 7,65 mmol) u octenoj kiselini (10 mL). Pročišćen je kromatografiranjem u 0-3% MeOH/CH2Cl2/ pa zatim rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 523 mg acetata u obliku kristala boje breskve (57%).
1H NMR (CDC13) δ: 8,00 (d, J=2.7 Hz, 1H); 7,82 (d, J=8.8 Hz, 1H); 7,60-7,66 (m, 1H); 7,56 (dd, J=2.7, 8.8 Hz, 1H); 7,51 (t, J=4.7 Hz, 2H); 7,50 (s, 1H); 4,38 (d, J=12 Hz, 1H), 4,08 (d, J=12 Hz, 1H); 2,36 (s, 3H).
MS (ES): m/z 363,0 (M+).
2-Klormetil-3-(2-klorfenil)-6,7-difluor-3H-kinazolin-4-on (2q)
Priređen je sukladno postupku B s 1q (700 mg, 2,48 mmol) i kloracetil kloridom (0,60 mL, 7,43 mmol) u octenoj kiselini (12 mL). Pročišćen je kromatografiranjem u CH2C12, pa zatim rekristaliziranjem iz izopropanola da se dobije 219 mg žute kristalne krutine (26%).
1H NMR (CDC13) δ: 8.07 (dd, J=8.5, 9.7 Hz, 1H); 7,64 (dd, J=2.5, 5.6 Hz, 1H); 7,60 (dd, J=3.5, 11 Hz, 1H); 7,55 (q, J=2.9 Hz, 3H); 7,52 (d, J=1.9 Hz, 1H); 7,49-7,51 (m, 1H); 4,36 (d, J=12 Hz, 1H), 4,06 (d, J=12 Hz, 1H).
MS (ES) : m/z 341,0 (M+).
2-Klormetil-3-(2-klorfenil)-6-fluor-3H-kinazolin-4-on (2r)
Priređen je sukladno postupku B s 1r (850 mg, 3,21 mmol) i kloracetil kloridom (0,77 mL, 9,63 mmol) u octenoj kiselini (15 mL). Pročišćen je ekstrahiranjem iz vodene otopine K2CO3, pa zatim kromatografiranjem iz EtOAc/heksan. Drugo kromatografiranje u smjesi aceton/heksan dalo je 125 mg bijele krutine (12%).
1H NMR (CDC13) δ: 7.95 (dd, J=2.9, 8.2 Hz, 1H); 7,81 (dd, J=4.8, 9.0 Hz, 1H); 7,61-7,66 (m, 1H); 7,57 (dd, J=2.7, 8.6 Hz, 1H); 7,57 (dd, J=2.7, 8.6 Hz, 1H); 7,52 (dd, J=3.2, 6.9 Hz, 1H); 7,52 (br s, 2H); 4,38 (d, J=12 Hz, 1H), 4,08 (d, J=12 Hz, 1H).
MS (ES): m/z 323,0 (M+).
PRIMJER 10
Priređivanje PI3Kd inhibitorskih spojeva
Spoj D-001
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-6,7-dimetoksi-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2a (200 mg, 0,546 mmol), adenina (81 mg, 0,601 mmol), K2CO3 (83 mg, 0,601 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz etanola (EtOH) da se dobije 164 mg krutine bež boje (65%), talište 281,5-282,7°C (raspad).
1H NMR (DMSO-d6) d: 8,06 (s, 1H); 8.04 (s, 1H); 7,76-7.81 (m, 1H); 7,70-7,76 (m, 1H); 7,60-7.67 (m, 2H); 7,45 (s, 1H); 7,22 (s, 2H); 6,90 (s, 1H); 5,08 (d, J=17 Hz, 1H); 4,91 (d, J=17 Hz, 1H); 3,87 (s, 3H); 3,87 (s, 3H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 159,9; 156,2; 155,4; 152,9; 150,0; 149,7; 149,4; 143,0; 141,9; 133,7; 132,1; 131,9; 131,2; 130,8; 129,3; 118,4; 113,6; 108,4; 105,8; 56,5; 56,1; 44,7.
MS (ES): m/z 464,1 (M+).
Analitički izračunato za C22H1BC1N7O3⋅0,1C2H6O⋅0,05KC1: C, 56,47; H, 3,97; Cl, 7,88; N, 20,76. Nađeno: C, 56,54; H, 4,05; Cl, 7,77; N, 20,55.
Spoj D-002
2-(6-Aminopurin-o-ilmetil)-6-brom-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2b (100 mg, 0,260 tnmol), adenina (39 mg, 0,286 tnmol), K2CO3 (40 mg, 0,286 mmol) i DMF (2 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 52 mg prljavobijele krutine (41%), talište 284,2-284,7°C (raspad).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,24 (d, J=2.0 Hz, 1H); 8,05 (s, 1H); 8,03 (s, 1H); 7,98 (dd, J=1.9, 8.6 Hz, 1H); 7,74-7,83 (m, 2H); 7,59-7,68 (m, 2H); 7,46 (d, J=8.7 Hz, 1H); 7,22 (s, 2H); 5,12 (d, J=17 Hz, 1H); 4,94 (d, J=17 Hz, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 159,5; 156,2; 152,9; 152,0; 150,1; 145,8; 141,8; 138,4; 133,1; 132,2; 131,9; 131,1; 130,9; 130,1; 129,4; 128,9; 122,4; 120,4; 118,4; 45,0.
MS (ES): m/z 482,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H13ClBrN7O⋅0,1KCl: C, 49,01; H, 2,67; Cl, 7,96; N, 20,00. Nađeno: C, 48,82; H, 2,82; Cl, 8,00; N, 19,79.
Spoj D-003
2-(6-Aminopurin-o-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-7-fluor-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2c (100 mg, 0,310 mmol), adenina (46 mg, 0,340 mmol), K2CO3 (47 mg, 0,340 mmol) i DMF (1 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 57 mg krutine bež boje (44%), talište 216,8-217,2°C.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,22 (dd, J=6.3, 8.7 Hz, 1H); 8,05 (s, 1H); 8,03 (s., 1H); 7,78-7,80 (m, 2H); 7,61-7,64 (m, 2H); 7,46 (dt, J=2.1, 8.6 Hz, 1H); 7,32 (d, J=9.8 Hz, 1H); 7,22 (s, 2H); 5,13 (d, J=17 Hz, 1H); 4,95 (d, J=17 Hz, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 166,1 (d, J=253 Hz); 159,6; 155,8; 152,5; 149,7; 148,6 (d, J=14 Hz); 141,4; 132,8; 131,8; 131,6; 130,8; 130,5; 129,8 (d, J=ll Hz); 129,0; 118,1; 117,4; 116,2 (d, J=24 Hz); 112,7 (d, J=22 Hz); 44,6.
MS (ES) : m/z 422,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H13ClFN7O⋅0,1H2O⋅0,15KC1: C, 55,25; H, 3,06; Cl, 9,38; N, 22,55. Nađeno: C, 55,13; H, 2,92; Cl, 9,12; N, 22,30.
Spoj D-004
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-6-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2d (100 mg, 0,294 mmol), adenina (44 mg, 0,323 mmol), K2CO3 (45 mg, 0,323 mmol) i DMF (1 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 50 mg žute krutine (39%), talište 294,5-294,8°C (raspad).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,10 (d, J=2.2 Hz, 1H); 8,05 (s, 1H); 8,03 (s, 1H); 7,86 (dd, J=2.4, 8.8 Hz, 1H); 7,75-7,82 (m, 2H); 7,59-7,67 (m, 2H); 7,53 (d, J=8.7 Hz, 1H); 7,22 (br s, 2H); 5,13 (d, J=17 Hz, 1H); 4,95 (d, J=17 Hz, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 159,7; 156,2; 152,9; 151,9; 150,1; 145,5; 141,8; 135,7; 133,1; 132,3; 132,2; 131,9; 131,1; 130,9; 130,0; 129,4; 125,9; 122,0; 118,4; 44,9.
MS (ES): m/z 438,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H13Cl2N7O: C, 54,81; H, 2,99; N, 22,37. Nađeno: C, 54,72; H, 2,87; N, 22,18.
Spoj D-005
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-fluor-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2e (200 mg, 0,619 mmol), adenina (92 mg, 0,681 mmol), K2CO3 (94 mg, 0,680 mmol) i DMP (4 mL). Sirovi produkt je kromatografiran u MeOH/CH2Cl2 da se dobije 168 mg prljavobijele krutine (64%), talište 159-172°C (postepeni raspad).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,10 (s, 1H); 8,08 (s, 1H); 7,73-7,89 (m, 3H); 7,57-7,71 (m,2H); 7,37-7,48 (m, 2H); 7,34 (d, J=11 Hz, 1H); 7,30 (d, J=8.3 Hz, 1H); 5,14 (d, J=17 Hz, 1H); 4,94 (d, J=17 Hz, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 160,8 (d, J=264 Hz); 157,5 (d, J=4.2 Hz); 155,8; 152,4; 152,4; 150,0; 148,7; 142,1; 136,4 (d, J=11 Hz); 133,0; 132,2; 132,1; 131,2; 130,9; 129,4; 123,8 (d, J=3.6 Hz); 118,4; 114,5 (d, J=20 Hz); 110,2 (d, J=6.0 Hz); 44,9.
MS (ES): m/z 422,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H13C1FN70: C, 56,95; H, 3,11; Cl, 8,40; N, 23,24. Nađeno: C, 54,62; H, 3,32; Cl, 9,40; N, 21,29.
Spoj D-006
2-(6-Aminopurin-o-ilmetil)-5-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on ,
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2f (300 mg, 0,883 mmol), adenina (131 mg, 0,972 mmol), K2CO3 (134 mg, 0,972 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt je kromatografiran u MeOH/CH2Cl2 i rekristaliziran iz EtOH da se dobije 188 mg svijetlonarančaste krutine (49%), talište 245,7-246,0°C (počinje se taliti na 220°C).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,06 (s, 1H); 8,04 (s, 1H); 7,76-7,81 (m, 2H); 7,72 (d, J=8.0 Hz, 1H); 7,59-7,66 (m, 3H); 7.41 (d, J=8.1 Hz, 1H); 7,26 (br s, 2H); 5,11 (d, J=17 Hz, 1H); 4,93 (d, J=17 Hz, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 158,5; 156,2; 152,9; 152,2; 150,1; 149,2; 141,8; 135,4; 133,3; 133,2/132,1; 132,0; 131,2; 130,8; 130,4; 129,4; 127,3; 118,4; 117,7; 44,9.
MS (ES): m/z 438,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H13C12N7O⋅0,1C2H6O⋅0,05H2O: C, 54,67; H, 3,11; Cl, 15,98; N, 22,09. Nađeno: C, 54,35; H, 3,00; Cl, 15,82; N, 22,31.
Spoj D-007
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2g (250 mg, 0,783 mmol), adenine (116 mg, 0,862 mmol), K2CO3 (119 mg, 0,862 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 93 mg blijedožute krutine (28%), talište 190,7-190,9°C.
1H NMR (DMSO-d6) 6: 8,05 (s, 1H); 8,03 (s, 1H); 7,76-7,79 (m, 1H); 7,71-7,74 (m, 1H); 7,59-7,67 (m, 1H); 7,34 (d, J=7.4 Hz, 1H); 7,28 (d, J=8.2 Hz, 1H); 7,24 (br s, 2H); 5,07 (d, J=17 Hz, 1H); 4,92 (d, J=17 Hz, 1H); 2,73 (s, 3H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 161,1; 156,2; 152,8; 150,9; 150,1; 148,3; 141,9; 141,0; 134,6; 13,6; 132,2; 131,9; 131,3; 130,8; 130,3; 129,3; 125,9; 119,1; 118,4; 44,8; 22,8.
MS (ES) : m/z 418,1 (M+).
Analitički izračunato za C21H16C1N7O⋅H2O: C, 57,87; H, 4,16; Cl, 8,13; N, 22,49. Nađeno: C, 57,78; H, 3,99; Cl, 8,38; N, 22,32.
Spoj D-008
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-8-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2h (100 mg, 0,294 mmol), adenina (44 :mg, 0,324 mmol), K2CO3 (45 mg, 0,324 mmol) i DMF (1 mL). Sirovi produkt je kromatografiran u MeOH/CH2Cl2 da se dobije 50 mg blijedožute krutine (39%), talište 273,3-273,5°C (obezbojenje).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,11 (dd, J=1.3, 8.0 Hz, 1H); 8,08 (s, 1H); 8.05 (s, 1H); 8,00 (dd, J=1,3, 7.8 Hz, 1H); 7,79-7,83 (m, 2H), 7,63-7,66 (m, 2H); 7,56 (t, J=7. 9 Hz, 1H); 7,21 (br s, 2H); 5,17 (d, J=17 Hz, 1H); 4,97 (d, J=17 Hz, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 160,2; 156,1; 152,8; 152,2; 150,2; 143,3; 142,0; 135,6; 133,1; 132,3; 131,9; 131,1; 131,0; 130,9; 129,4; 128,4; 126,0; 122,5; 118,4; 45,0.
MS (ES): m/z 438,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H13C12N70⋅0,1CH4O⋅0.6H2O⋅0.15KC1: C, 52,09; H, 3,18; N, 21,15. Nađeno: C, 51,85; H, 2,93; N, 21,01.
Spoj D-009
2 -(6-Aminopurin-9-ilmetil)-3-bifenil-2-il-5-klor-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2i (400 mg, 1,05 mmol), adenina (155 mg, 1,15 mmol), K2CO3 (159 mg, 1,15 mmol) i DMF (5 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 344 mg bijele krutine (68%), talište 299,9-300,1°C (obezbojenje).
1HMR (DMSO-d6) δ: 8,08 (s, 1H); 7,89 (s, 1H); 7,58-7.73 (m, 5H); 7,51 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7,46 (d, J=7.5 Hz, 2H); 7,27-7,41 (m, 3H); 7,14-7,27 (m, 3H); 5,14 (d, J=17 Hz, 1H); 4,82 (d, J=17 Hz, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 159,6; 156,2; 152,8; 152,5; 150,0; 149,0; 141,7; 140,2; 137,7; 135,0; 133,3; 133,2; 131,8; 130,7; 130,1; 129,8; 129,5; 128;8; 128,6; 128,4; 127,1; 118,4; 117,6; 45,3.
MS (ES): m/z 480,1 (M+).
Analitički izračunato za C26H18ClN70: C, 65,07; H, 3,78; Cl, 7,39; N, 20,43. Nađeno: C, 64,77; H, 3,75; Cl, 7,43; N, 20,35.
Spoj D-010
5-Klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2j (200 mg, 0,626 mmol), 6-merkaptopurin monohidrata (93 mg, 0,546 mmol), K2CO3 (95 mg, 0,689 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 125 mg prljavobijele krutine (46%), talište 213,9°C.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,53 (br s, 1H); 8.49 (s, 1H); 8,44 (s, 1H); 7,78 (t, J=7.9 Hz, 1H); 7,63 (d, J=8.2 Hz, 1H); 7,59 (d, J=7.7 Hz, 1H); 7,49 (d, J=6.9 Hz, 1H); 7,24-7,41 (m, 3H); 4,32-4,45 (m, 2H); 2,14 (s, 3H).
13C NMR-(DMSO-d6) ppm: 158,9; 157,2; 154,2; 151,5; 149,7; 149,6; 143,5; 136,1; 135,9; 135,1; 133,2; 131,3; 130,3; 130,0; 129,9; 129,1;- 127,6; 127,1; 117,7; 32,4; 17,5.
MS (ES): m/z 438,0 (M+).
Analitički izračunato za C21H1SC1N6OS: C, 58,00; H, 3,48; Cl, 8,15; N, 19,32; S, 7,37. Nađeno: C, 58,05; H, 3,38; Cl, 8,89; N, 18,38; S, 7,00.
Spoj D-011
5-Klor-3-(2-fluorfenil)-2-(9H-purin-6-il-sulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2k (210 mg, 0,650 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (122 mg, 0,715 mmol), K2CO3 (99 mg, 0,715 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 240 mg prljavobijele krutine (84%), talište 244,0°C.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,56 (br s, 1H); 8,50 (s, 1H); 8,45 (s, 1H); 7,81 (t, J=8.0 Hz, 1H); 7,74 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7,67 (d, J=8.1 Hz, 1H); 7,62 (d, J = 7.7 Hz, 1H); 7,46-7.55 (m, 1H); 7,29-7.42 (m, 2H); 4,47-4,59 (m, 2H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 158,4; 157,3 (d, J=249 Hz); 156,4; 153a,8; 151,0; 149,1; 143,2; 135,0; 132,9; 131,8 (d, J=8.0 Hz); 130,8; 129,9; 126,7; 125,3 (d, J=3.5 Hz); 123,6 (d, J=13 Hz); 117,0; 116,2 (d, J=19 Hz); 31,7.
MS (ES) : m/z 439,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H12C1FN6OS: C, 54,74; H, 2,76; Cl, 8,08; N, 19,15; S, 7.31. Nađeno: C, 54,42; H, 2,88; Cl, 8,08; N, 18,87; S, 7,08.
Spoj D-012
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2 fluorfenil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2k (210 tng, 0,650 mmol), adenina (97 mg, 0,715 mmol), K2CO3 (99 mg, 0,715 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 137 mg smeđe krutine (50%), talište 295,6-295,8°C (raspad).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,05 (s, 1H); 8,04 (s, 1H); 7,75 (t, J=7.6 Hz, 1H); 7,74 (t, J=7.9 Hz, 1H); 7,62-7,69 (m, 1H); 7,61 (d, J=7.6 Hz, 1H); 7,47-7,55 (m, 1H); 7,48 (d, J=7.8 Hz, 1H); 7,41 (d, J=8.0 Hz, 1H); 7,24 (br s, 2H); 5,19 (d, J=17 Hz, 1H); 5,03 (d, J=17 Hz, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 158,7; 157,6 (d, J=250 Hz); 156,2; 152,8; 152,4; 150,0; 149,2; 141,8; 135,4; 133,3; 132,5 (d, J=8,0 Hz); 131,0; 130,4; 127,3; 126,2 (d, J=3,5 Hz); 123,1 (d, J=14 Hz); 118,4; 117,6; 117,2 (d, J=19 Hz), 45,1.
MS (ES): m/z 422,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H13ClFN7O⋅0,05C2H6O: C, 56,92; H, 3,16; Cl, 8,36; N, 23,12. Nađeno: C, 56,79; H, 3,20; Cl, 8,46; N, 22,79.
Spoj D-013
3-Bifenil-2 -il-5-klor-2-(9H-purin- 6-ilsulfanil-metil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2i (400 mg, 1,05 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (196 mg, 1,15 mmol), K2CO3 (159 mg, 1,15 mmol) i DMF (5 mL). Sirovi produkt je kromatografiran u MeOH/CH2Cl2 i nakon toga rekristaliziran iz EtOH da se dobije 439 mg blijedožute kristalne tvari (84%), talište 222,0-222,5°C (raspad).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,56 (br s, 1H); 8,55 (s, 1H); 8,45 (s, 1H); 7,73 (t, J=8.0 Hz, 1H); 7,64 (d, J=7.7 Hz, 1H); 7,50-7,59 (m, 4H); 7,41-7,48 (m, 1H); 7,25-7,38 (m, 5H); 4,41 (d, J=16 Hz, 1H); 4,16 (d, J=16 Hz, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 160,2; 157,0; 153,7; 151,5; 149,7; 149,3; 143,5; 139,9; 137,8; 135,1; 134,1; 133,3; 131,5; 130,5; 130,3; 130,0; 129,1; 128,9; 128,4; 128,4; 126,9; 117,5; 32,3.
MS (ES): m/z 497,0 (M+).
Analitički izračunato za C26H17ClN6OS: C, 62,84; H, 3,45; Cl, 7,13; N, 16,91; S, 6,45. Nađeno: C, 62,60; H, 3,47; Cl, 7,15; N, 16,65; S, 6,41.
Spoj D-014
5-Klor-3-(2-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-il-sulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 21 (250 mg, 0,746 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (140 mg, 0,821 mmol), K2CO3 (113 mg, 0,821 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 254 mg prljavobijele krutine (76%), talište 237,0°C (raspad; obezbojenje na 154,6°C).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13.53 (br s, 1H); 8.52 (s, 1H); 8.45 (s, 1H); 7.78 (t, J=7.9 Hz, 1H); 7.64 (d, J=8.0 Hz, 1H); 7.59 (d, J=7.7 Hz, 1H); 7.48 (d, J=7.3 Hz, 1H); 7.42 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7.15 (d, J=8.2 Hz, 1H); 7.03 (t, J=7.5 Hz, 1H); 4.45 (s, 2H); 3.76 (s, 3H)
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 158,9; 157,1; 154,8; 154,7; 151,5; 149,6; 143,6; 135,1; 133,2; 131,3; 130,4; 130,0; 127,0; 124,8; 121,2; 117,8; 112,7; 56,1; 32,0.
MS (ES): m/z 451,0 (M+).
Analitički izračunato za C21H15ClN6O2S⋅0,15C2H6O⋅0,05KCl: C, 55,43; H, 3,47; Cl, 8,07; N, 18,21; S, 6,95. Nađeno: C, 55,49; H, 3,68; Cl, 7,95; N, 17,82; S, 6,82.
Spoj D-015
3-(2-Klorfenil)-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2e (200 mg, 0,619 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (116 mg, 0,681 mmol), K2CO3 (94 mg, 0,681 mmol) i DMF (5 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 152 mg bijele krutine (56%), talište 222,7-223,8°C (obezbojenje).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,56 (br s, 1H); 8,48 (s, 1H); 8.44 (s, 1H); 7,89 (dt, J=5.6, 8.1 Hz, 1H); 7,76 (dd, J=1.6, 7.3 Hz, 1H); 7,67 (d, J=7.4 Hz, 1H); 7,56 (d, J=8.1 Hz, 1H); 7,47 (t, J=7.1 Hz, 1H), 7,41-7,53 (m, 2H); 7,37 (dd, J=8.7, 11 Hz, 1H); 4,38-4,52 (m, 2H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 160,9 (d, J=264 Hz); 157,6; 156,8; 154,1; 151,5; 149,6; 149,0; 143,6; 136,4 (d, J=11 Hz); 133,9; 132,2; 131,7; 131,6; 130,5; 130,2; 128,8; 123,6; 114,4 (d, J=20 Hz); 110,2; 32,0.
MS (ES): m/z 439,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H12C1FNSOS⋅0,5C2HSO: C, 54,61; H, 3,27; Cl, 7,68; N, 18,19; S, 6,94. Nađeno: C, 54,37; H, 3,26; Cl, 7,89; N, 18,26; S, 6,55.
Spoj D-016
3-(2-Klorfenil)-6,7-dimetoksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2a (200 mg, 0,546 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (102 mg, 0,601 mmol), K2CO3 (83 mg, 0,601 mmol) i DMF (5 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 172 mg prljavobijele krutine (65%), talište 160-180°C (postepeni raspad).
1NMR (DMSO-d6) δ: 13,55 (br s, 1H); 8,49 (s, 1H); 8,44 (s, 1H); 7,72 (d, J=6.9 Hz, 1H); 7,66 (d, J=6.9 Hz, 1H) 7,38-7,54 (m, 3H); 7,22 (s, 1H); 4,36-4,52 (m, 2H); 3,94 (s, 3H); 3,89 (s, 3H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 160,1; 155,4; 151,5; 151,1; 149,4; 143,2; 134,6; 132,3; 131,6; 131,5; 130,4; 128,7; 113,6; 108,4; 105,8; 56,5; 56,1; 32,0.
MS (ES): m/z 481,1 (M+).
Analitički izračunato za C22H17C1N6O3S⋅0,5C2H6O⋅0,05KC1: C, 54,41; H, 3,97; Cl, 7,33; N, 16,55; S, 6,32. Nađeno: C, 54,43; H, 3,94; Cl, 7,69; N, 16,69; S, 6,52.
Spoj D-017
6-Brom-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2b (200 mg, 0,519 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (97 mg, 0,570 mmol), K2CO3 (79 mg, 0,572 mmol) i DMF (5 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 123 mg prljavobijele krutine (47%), talište 212-242°C (postepeni raspad).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,07 (br s, 1H); 8,48 (s, 1H); 8,44 (s, 1H); 8,24 (d, J=2.3 Hz, 1H); 8,06 (dd, J=2.3, 8.7 Hz, 1H); 7,76 (dd, J=1.9, 7.4 Hz, 1H); 7,70 (d, J=8.7 Hz, 1H); 7,66 (d, J=8.1 Hz, 1H); 7,51 (dd, J=2.1, 7.9 Hz, 1H); 7,46 (dd, J=1.9, 7.9 Hz, 1H); 4,47 (s, 2H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 159,7; 156,8; 153,6; 151,5; 146,1; 143,6; 138,5; 134,0; 132,1; 131,8; 131,5; 130,5; 130,2; 129,9; 128,9; 128,8; 122,2; 120,3; 32,0.
MS (ES): m/z 499,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H12ClBrN6OS⋅0,2C2H60⋅0,05KCl: C, 47,79; H, 2,59; N, 16,39; S, 6,25. Nađeno: C, 47,56; H, 2,54; N, 16,25; S, 6,58.
Spoj D-018
3-(2-Klorfenil)-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-trifluormetil-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2m (200 mg, 0,536 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (100 mg, 0,588 mmol), K2CO3 (82 mg, 0,593 mmol) i DMF (4 mL). Sirovimprodukt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 148 mg bijele krutine (56%), talište 218,5-219,4°C.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,52 (br s, 1H); 8,48 (s, 1H); 8,44 (s, 1H); 8,43 (d, J=6.0 Hz, 1H); 8,26 (d, J=7.5 Hz, 1H); 7,84 (dd, J=2.5, 6.7 Hz, 1H); 7,70-7,75 (m, 2H); 7,51-7,59 (m, 2H); 4,40-4,55 (m, 2H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 160,0; 157,2; 154,2; 151,4; 149,6; 144,4; 143,4; 133,8; 133,0 (q, J=5.1 Hz); 132,0; 131,9; 131,6; 131,4; 130,6; 129,0; 127,3; 125,2 (q, J=30 Hz); 123,6 (q. J=273 Hz); 121,8; 32,6.
MS (ES): m/z 489,0 (M+).
Analitički izračunato za C21H12ClF3N6OS: C, 51,59; H, 2,47; Cl, 7,25; N, 17,19; S, 6,56. Nađeno: C, 51,51; H, 2,55; Cl, 7,37; N, 17,05; S, 6,38.
Spoj D-019
3-(2-Klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-benzo[g]kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2n (200 mg, 0,563 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (105 mg, 0,619 mmol), K2CO3 (86 mg, 0,619 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 128 mg tamnožute krutine (48%), talište 247,8-254,4°C (raspad).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,56 (br s, 1H); 8,90 (s, 1H); 8,50 (s, 1H); 8,46 (s, 1H); 8,34 (s, 1H); 8,27 (d, J=8.2 Hz, 1H); 8,16 (d, J=8.2 Hz, 1H); 7,81 (dd, J=1.6, 7.3 Hz, 1H); 7,70 (t, J=7.5 Hz, 1H); 7,61-7,74 (m, 2H); 7,49 (t, J=7.5 Hz, 1H); 7,44-7,53 (m, 1H); 4,44-4,56 (m, 2H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 161,3; 151,6; 151,5; 143,9; 142,2; 136,7; 134,4; 132,5; 131,8; 131,6; 130,5; 129,7; 129,3; 128,8; 128,5; 128,3; 128,3; 127,1; 125,2; 119,5; 32,4.
MS (ES): m/z 471,0 (M+).
Analitički izračunato za C24H15ClN6O⋅0,2C2H6O⋅0,05KCl: C, 60,57; H, 3,37; Cl, 7,69; N, 17,37; S, 6,63. Nađeno: C, 60,24; H, 3,46; Cl, 7,50; N, 17,34; S, 6,69.
Spoj D-020
6-Klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2d (200 mg, 0,587 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (110 mg, 0,646 mmol), K2CO3 (90 mg, 0,651 mmol) i DMF (5 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 113 mg žute kristalne krutine (42%), talište 237,1-238,2°C (raspad).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,55 (br s, 1H); 8,48 (s, 1H); 8,44 (s, 1H); 8,11 (s, 1H); 7,94 (d, J=8.3 Hz, 1H); 7,78 (d, J=8.1 Hz, 2H); 7,66 (d, J=6.7 Hz, 1H); 7,48-7.56 (m, 2H); 4,48 (s, 2H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 159,8; 156,8; 153,5; 151,5; 149,6; 145,8; 143,6; 135,7; 134,0; 132,2; 132,1; 131,6; 131,5; 130,5; 130,2; 129,8; 128,8; 125,8; 121,9; 32,0.
MS (ES) : m/z 455,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H12C12NSOS⋅0,1C2H6O⋅0,6H2O⋅0,15KC1: C, 50,34; H, 2,89; Cl, 15,82; N, 17,44; S, 6,65. Nađeno: C, 50,02; H, 2,63;.C1, 15,51; N, 17,39; S, 6,81.
Spoj D-021
8-Klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2h (200 mg, 0,589 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (124 mg, 0,726 mmol), K2CO3 (100 mg, 0,726 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 202 mg bijele krutine (75%), talište 211,9-212,7°C (raspad).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,54 (br s, 1H); 8,47 (s, 1H); 8,44 (s, 1H); 8,12 (d, J=7.9 Hz, 1H); 8,07 (d, J=7.6 Hz, 1H); 7,78 (d, J=1.5 Hz, 1H); 7.67 (d, J=7.1 Hz, 1H); 7,58 (t, J=7.9 Hz, 1H); 7,42-7,54 (m, 2H); 4,52 (s, 2H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 160,3; 156,9; 153,9; 151,5; 149,7; 143,5; 135,7; 134,0; 132,1; 131,8; 131,4; 131,1; 130,5; 130,3; 128,9; 128,3; 126,1; 122,4; 32,5.
MS (ES): m/z 455,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H12C12N6OS: C, 52,76; H, 2,66; Cl, 15,57; N, 18,46; S, 7,04. Nađeno: C, 52,65; H, 2,79; Cl, 15,32; N, 18,47; S, 7,18.
Spoj D-022
3-(2-Klorfenil)-7-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2c (200 mg, 0,619 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (116 mg, 0,681 mmol), K2CO3 (95 mg, 0,687 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 143 mg bijele kristalne krutine (53%), talište 151,4-154,2°C (obezbojenje).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,55 (br s, 1H); 8,.48 (s, 1H); 8,44 (s, 1H); 8,23 (dd, J=6.3, 8.7 Hz, 1H); 7,77 (dd, J=1.7, 7.4 Hz, 1H); 7,64 (d, J=7.4 Hz, 1H); 7,57 (d, J=9.8 Hz, 1H); 7,45-7,52 (m, 3H); 4,48 (s, 2H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 169,0 (d, J=253 Hz); 162,6; 159,3; 157,0; 154,0; 152,2; 151,7 (d, J=13 Hz); 146,1; 136,5; 134,7; 134,2; 134,0; 133,0; 132,6 (d, J=11 Hz); 131,3; 120,2; 118,9 (d, J=24 Hz); 115,3 (d, J=22 Hz); 34,6.
MS (ES): m/z 439.0 (M+).
Analitički izračunato za C20H12ClFN6OS⋅0,4C2H60⋅0,4H2O⋅0,15KCl: C, 52,52; H, 3,22; Cl, 8,57; N, 17,67. Nađeno: C, 52,25; H, 3,11; Cl, 8,20; N, 17,69.
Spoj D-023
3-(2-Klorfenil)-7-nitro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2o (216 mg, 0,617 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (116 mg, 0,681 mmol), K2CO3 (94 mg, 0,680 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 212 mg žute kristalne krutine (74%), talište 218,0-218,3°C (raspad).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,56 (br s, 1H); 8,49 (s, 1H); 8,42 (s, 1H); 8,38-8.45 (m, 2H); 8,31 (d, J=8.4 Hz, 1H); 7,81 (d, J=6.5 Hz, 1H); 7,68 (d, J=6.7 Hz, 1H); 7,43-7,58 (m, 2H); 4,53 (s, 2H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 157,7; 154,4; 153,3; 149,8; 149,3; 147,6; 145,2; 141,4; 131,5; 129,8; 129,7; 129,2; 128,4; 127,1; 126,7; 122,7; 120,3; 119,4; 29,9.
MS (ES): m/z 466,0 (M+).
Analitički izračuato za C20H12ClN7O3S⋅0,4C2H6O⋅0,05KCl: C, 51,19; H, 2,97; Cl, 7,63; N, 20,09; S, 6,57. Nađeno: C, 51,27; H, 2,88; Cl, 7,40; N, 20,04; S, 6,52.
Spoj D-024
3-(2-Klorfenil)-6-hidroksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2p (200 mg, 0,552 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (117 mg, 0,685 mmol), K2CO3 (95 mg, 0,687 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt rekristaliziran je iz EtOH da se dobije 182 mg bijele krutine, smjesa željenog produkta i acetil derivata. Dio ovog materijala (120 mg) bio je suspendiran u smjesi MeOH (2 mL) i vodenoj otopini NaHCO3 (zasićena otopina, 1 mL) te je miješan energično 4 sata. Smjesa je koncentrirana u vakuumu, suspendirana u vodi (10 mL), te pohranjena na 4°C preko noći. Bijela krutina je sakupljena i osušena do 103 mg (66%), talište 186-214°C (postepeni raspad).
1H NMR (DMSO-d6) d: 8,48 (s, 1H); 8,45 (s, 1H); 7,71 (d, J=6.8 Hz, 1H); 7,62-7,64 (m, 2H); 7,43-7,51 (m, 2H); 7,40-7,43 (m, 1H); 7,35 (d, J=8.8 Hz, 1H); 4,39-4,52 (m, 2H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 160,6; 157,1; 156,2; 151,4; 150,8; 149,3; 144,1; 140,2; 134,5; 132,2; 131,6; 131,4; 130,4; 129,3; 128,7; 124,8; 121,7; 109,8; 32,0.
MS (ES): m/z 437,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H13ClN6O2S⋅0,1C2H6O⋅6H2O: C, 49,68; H, 3,88; Cl, 7,26; N, 17,21; S, 6,57. Nađeno: C, 49,43; H, 3,62; Cl, 7,32; N, 17,07; S, 6,58.
Spoj D-025
5-Klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2f (300 mg, 0,883 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (165 mg, 0,972 mmol), K2CO3 (134 mg, 0,972 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 341 mg blijedo narančaste kristalne tvari (85%), talište 233,7-234,4°C (raspad).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,58 (br s, 1H); 8,50 (s, 1H); 8,47 (s, 1H); 7,77-7,85 (m, 2H); 7,68 (d, J=8.1 Hz, 2H); 7,65 (d, J=7.7 Hz, 1H); 7,41-7,56 (m, 2H); 4,45 (d, J=1.2 Hz, 2H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 158,7; 156,8; 153,8; 151,5; 149,6; 149,5; 143,5; 135,4; 134,1; 133,3; 132,2; 131,6; 131,5; 130,5; 130,2; 128,8; 127,1; 117,6; 32,0.
MS (ES) : m/z 455,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H12C12N6OS⋅C2H6O⋅0,3H2O: C, 52,14; H, 3,70; Cl, 13,99; N, 16,58; S, 6,33. Nađeno: C, 52,07; H, 3,37; Cl, 13,40; N, 16,65; S, 6,42.
Spoj D-026
3-(2-Klorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilinmetil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2g (300 mg, 0,940 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (176 mg, 1,03 mmol), K2CO3 (142 mg, 1,03 mmol) i DMF (5 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 324 mg bijele kristalne krutine (79%), talište 227,8-230,1°C (raspad).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,57 (br s, 1H); 8,49 (s, 1H); 8,47 (s, 1H); 7,69-7,.78 (m, 2H); 7,66 (d, J=7.3 Hz, 1H); 7,55 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7,39-7,52 (m, 2H); 7,36 (d, J=6.9 Hz, 1H); 4,38-4,50 (m, 2H); 2,74 (s, 3H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 161,2; 156,3; 152,4; 151,5; 148,6; 143,9; 141,0; 134,6; 134,5; 132,3; 131,7; 131,4; 130,4; 130,2; 128,7; 125,7; 119,0; 32,0; 22,8.
MS (ES) : m/z: 435,0 (M+).
Analitički izračunato za C21H15ClN6OS⋅0,65C2H6O⋅0,1H2O: C, 57,40; H, 4,13; Cl, 7,60; N, 18,01; S, 6,87. Nađeno: C, 57,11; H, 3,96; Cl, 7,45; N, 17,79; S, 6,90.
Spoj D-027
3-(2-Klorfenil)-6,7-difluor-2-(9H-purin-6-il-sulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2q (200 mg, 0,586 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (110 mg, 0,645 mmol), K2CO3 (89 mg, 0,645 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 143 mg blijedožute kristalne krutine (53%), talište 207,8°C (obezbojenje; tali se na 136 (C).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,57 (br s, 1H); 8,49 (s, 1H); 8,46 (s, 1H); 8,11 (t, J=9.4 Hz, 1H); 7,88 (dd, J=7.3, 11 Hz, 1H); 7,77 (dd, J=1.7, 7.3 Hz, 1H); 7,67 (d, J=7.4 Hz, 1H); 7,42-7,55 (m, 2H); 4,48 (s, 2H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 159,5 (d, J=2.5 Hz); 154,6 (dd, J=14.255 Hz); 154,0 (d, J=1.5 Hz); 151,5; 149,3 (dd, J=14.250 Hz); 145,1 (d, J=12 Hz); 143,9; 133,9; 132,1; 131,8; 131,4; 130,5; 128,9; 118,0 (d, J=4.9 Hz); 115,8 (d, J=18 Hz); 114,6 (d, J=20 Hz); 32,0.
MS (ES): m/z 457,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H11C1F2N6OS: C, 52,58; H, 2,43; Cl, 7,76; N, 18,40; S, 7,02. Nađeno: C, 51,81; H, 2,37; Cl, 7,49; N, 18,04; S, 7,55.
Spoj D-028
3-(2-Klorfenil)- 6-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2r (118 mg, 0,365 mmol), 6-merkapto-purin monohidrata (68 mg, 0,402 mmol), K2CO3 (56 mg, 0,402 mmol) i DMF (2 mL). Sirovi produkt je rekristaliziran iz EtOH da se dobije 103 mg prljavobijele kristalne krutine (64%), talište 232,8-233,0°C (objezbojenje).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,56 (br s, 1H); 8,48 (S, 1H); 8,44 (s, 1H); 7,81-7,86 (m, 3H); 7,76 (d, J=7.5 Hz, 1H); 7,67 (d, J=7.5 Hz, 1H); 7,40-7,54 (m, 2H); 4,48 (br s, 2H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 160,8 (d, J=247 Hz); 160,2 (d, J=3.3 Hz'); 156,9; 152,3 (d, J=1.9 Hz); 151,5; 149,7; 144,0; 143,6; 134,1; 132,1; 131,7; 131,5; 130,5; 130,4; 130,2; 128,8; 124,0 (d, J=24 Hz); 122,0 (d, J=8,7 Hz); 111,7 (d, J=24 Hz); 32,0.
MS (ES): m/z 439,0 (M+).
Analitički izračunato za C20H12ClFN6OS⋅0,2C2H6O⋅0,1H2O: C, 54,46; H, 3,00; Cl, 7,88; N, 18,68. Nađeno: C, 54,09; H, 2,73; Cl, 7,80; N, 18,77.
Spoj D-029
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-izopropilfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on
Tionil klorid (2.2 mL, 30 mmol) dodan je uz miješanje otopini 2-amino-6-metilbenzojeve kiseline (1.51 g, 10 mmol) u benzenu (50 mL) te je smjesa grijana pod refluksom 18 h. Kada je jednom ohlađena, otapalo je uklonjeno u vakuumu te isprano dva puta benzenom (25 mL). Rezidue su otopljene u CHC13 (50 mL) i tretirane s 2-izopropilanilinom (2,83 mL, 20 mmol). Kaša je zatim grijana pod refluksom 3 sata. U tom vremenu je TLC (50% EtOAc/heksan) pokazala da je reakcija završena. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcijska smjesa je stavljena na vrh sloja od 4 cm silika-gela, pa isprana s 20% EtOAc/heksan. Frakcije koje sadrže produkt su sjedinjene i koncentrirane u vakuumu. Rezidue su otopljene u HOAc (50 mL) i tretirane s kloraktil kloridom (1,6 mL, 20 mmol) pa je smjesa grijana pod refluksom 18 sati. Reakcijska smjesa je ohlađena i koncentrirana u vakuumu. Preostali HOAc uklonjen je azeotropiranjem s toluenom (25 mL) tri puta. Rezidue su otopljene u toluenu (10 mL) i stavljene na sloj 4 cm silika-gela, te isprane s 20% EtOAc/heksan. Frakcije koje sadrže produkt identificirane su pomoću LCMS (MS (ES) : m/z 327 (M+) ), te koncentrirane u vakuumu da se dobije 975 mg (30%) u obliku bijele prjene. Klorid u obliku bijele pjene (450 mg, 1,36 mmol) otopljen je u DMF (10 mL) i treitran s adeninom (275 mg, 2,04 mmol) te K2CO3 (281 mg, 2,04 mmol) pa je smjesa miješana preko noći na sobnoj temperaturi. Suspenzija je zatim stavljena u 200 mL vode, miješana je na sobnoj temperaturi 30 min i ohlađena i hladnjaku tijekom 30 min. Dobivena krutina sakupljena je filtriranjem u vakuumu i rekristaliziranjem iz EtOH da se dobije 285 mg (49%) prljavobijele krutine, talište 258,0-258,2°C.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,19 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,60 (m, 3H), 7,45 (m, 2H), 7,23 (m, 3H), 5,11 (d, J=17.5 Hz, 1H), 4,71 (d, J=17.5 Hz, 1H), 2,68 (s, 3H), 2,73 (q, J=6.9 Hz, 1H), 1,34 (d, J=6.8 Hz, 3H), 1,13 (d, J=6.8 Hz, 3H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 161,9; 156,2; 152,8; 151,6; 150,1; 148,4; 146,1; 142,2; 140,8; 134,3; 133,7; 130,6; 130,0; 129,0; 127/7; 127,6; 125,'8; 119,2; 118,4; 44,8; 28,3; 24,4; 23,3; 22,9.
MS (ES): m/z 426.4 (M+).
Analitički izračunato za C24H23N7O: C, 67,75; H, 5,45; N, 23,04. Nađeno: C, 67,60; H, 5,45; N, 22,82.
Spoj D-030
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on
Tionil klorid (2,2 mL, 30 mmol) dodan je uz miješanje otopini 2-amino-6-metilbenzojeve kiseline (1,51 g, 10 mmol) u benzenu (50 mL) te je smjesa grijana pod refluksom 18 sati. Nakon hlađenja, otapalo je uklonjeno u vakuumu i talog je sakupljen dva puta benzenom (25 mL). Rezidue su otopljene u CHC13 (5,0 mL) te tretirane s o-toluidinom (2,13 mL, 20 mmol). Kaša je zatim grijana pod refluksom 3 sata. U tom vremenu, TLC (50% EtOAc/heksan) je pokazala da je reakcija završena. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcijska smjesa je stavljena na 4 cm čep silika-gela te je propuštena kroz njega pomoću smjese 20% EtOAc/heksan. Frakcije koje sadrže produkt su sjedinjene i koncentrirane u vakuumu. Rezidue su otopljene u HOAc (50 mL) i tretirane s kloraktil kloridom (1,6 mL, 20 mmol) te je smjesa grijana pod refluksom 18 sati. Reakcijska smjesa je ohlađena i koncentrirana u vakuumu. Preostali HOAc je uklonjen azeotropiranjem s toluenom (25 mL) tri puta. Rezidue su otopljene u toluenu (10 mL) te propuštene kroz čep 4 cm silika-gela, ispiranjem s 20% smjesom EtOAc/heksan. Frakcije koje sadrže produkt identificirane su pomoću LCMS [MS (ES): m/z 299 (M+)), te koncentrirane u vakuumu da se dobije 476 mg (16%) u obliku bijele pjene. KLorid u obliku bijele pjene (470 mg, 1,57 mmol) otopljen je u DMF (10 mL) i tretiran adeninom (423 mg, 3,14 mmol) i K2CO3 (433 mg, 3,14 mmol) pa je smjesa miješana preko noći na sobnoj temperaturi. Suspenzija je zatim stavljena u 200 mL vode, miješana je na sobnoj temperaturi tijekom 30 minuta i hlađena u hladnjaku tijekom 30 min. Dobivena krutina sakupljena je filtriranjem u vakuumu i rekristalizirana iz EtOH da se dobije 123 mg (20%) prljavobijele krutine, talište 281,5-282,7°C (raspad).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8.07 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,61 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,48 (m, 4H), 7,25 (m, 3H), 5,09 (d, J=17.4 Hz, 1H), 4,76 (d, J=17.4 Hz, 1H), 2,73 (s, 3H), 2.18 (s, 3H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 161,3; 156,2; 152,8; 151,4; 150,0; 148,5; 142,2; 140,9; 136,1; 135,4; 134,3; 131,7; 130,1; 130,0; 129,0; 128,0; 125,8; 119,2; 118,5; 44,8; 22,9; 17,4.
MS (ES) : m/z 398.2 (M+).
Analitički izračunato za C22H19N70: C, 66.49; H, 4.82; N, 24.67. Nađeno: C, 66.29; H, 4.78; N, 24.72.
Spoj D-031
3-(2-Fluorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Tionil klorid (2,2 mL, 30 mmol) dodan je uz miješanje otopini 2-amino-6-metil-benzojeve kiseline (1,51 g, 10 mmol) u benzenu (50 mL) i smjesa je grijana pod refluksom 18 sati. Nakon hlađenja, otapalo je uklonjeno u vakumu i ostatak je sakupljen dva puta benzenom (25 mL). Rezidue su otopljene u CHC13 (50 mL) i tretirane s 2-fluoranilinom (1,93 mL, 20 mmol). Kaša je zatim grijana pod refluksom tijekom 3 sata. U tom vremenu TLC (50% EtOAc/heksan) je pokazala da je reakcija završena. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcijska smjesa je stavljena na čep 4 cm silika-gela te propuštena s otopinom 20% EtOAc/heksan. Frakcije koje sadrže produkt su sjedinjene i koncentrirane u vakuumu. Rezidue su otopljene u HOAc (50 mL) pa tretirane s kloraktil kloridom (1,6 mL, 20 mmol) i smjesa je grijana pod refluksom 18 sati. Reakcijska smjesa je ohlađena i koncentrirana u vakuumu. Preostala HOAc uklonjena je azeotropiranjem s toluenom (25 mLtri puta. Rezidue su otopljene u toluenu (10 mL) i propuštene kroz čep 4 cm silika-gela s otopinom 20% EtOAc/heksan. Frakcije koje sadrže produkt identificirane su pomoću LCMS [MS (ES): m/z 303 (M+)), te koncentrirane u vakuumu da se dobije 1,12 g (37%) u obliku bijele pjene. Klorid u obliku bijele pjene (455 mg, 1,50 mmol) otopljen je u DMF (10 mL) i tretiran s 6-merkaptopurin monohidratom (510 mg, 3,0 mmol) i K2CO3 (414 mg, 3,0 mmol) te je smjesa miješana preko noći na sobnoj temperaturi. Suspenzija je ubačena u 200 mL vode, miješana je na sobnoj temperaturi 30 min i hlađena u hladnjaku 30 minuta. Dobivena krutina je sakupljena filtriranjem u vakuumu i rekristaliziranjem iz EtOH da se dobije 487 mg (77%) kao prljavobijela krutina, talište 151,9-152,2°C.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,48 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,70 (m, 2H), 7,48 (m, 2H), 7,33 (m, 3H), 4,55 (d, J=15.1 Hz, 1H), 4,48 (d, J=15.1 Hz, 1H), 2,73 (s, 3H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 161,3; 157,8 (d, J=249.1 Hz); 156,9; 152,8; 151,5; 149,6; 148,'6; 143,6; 140,9; 134,7; 131,9 (d, J=8.0 Hz); 131,4; 130,2; 125,6 (d, J=3.6 Hz); 125,5; 124,4 (d, J=13.5 Hz); 118,8; 116,6 (d, J=19.6 Hz); 56,4; 22,9.
MS (ES): m/z 419,5 (M+).
Analitički izračunato za C21H15FNSOS⋅0,15C2H60: C, 60,14; H, 3,77; F, 4,47; N, 19,76; S, 7,54. Nađeno: C, 59,89; H, 3,88; F, 4,42; N, 19,42; S,7,23.
Spoj D-032
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 2j (200 mg, 0,626 mmol), adenina (93 mg, 0,689 mmol), K2CO3 (95 mg, 0,689 mmol) i DMF (3 mL). Sirovi produkt je kromatografiran u smjesi MeOH/CH2Cl2 da se dobije 101 mg prljavobijele krutine (39%), talište 262,0-266,5°C.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,08 (s, 1H); 8.07 (s, 1H); 7,70 (t, J=8.0 Hz, 1H); 7,58 (dd, J=0.6, 7.9 Hz, 1H); 7,43-7,57 (m, 4H); 7,36 (dd, J=0.7, 8.0 Hz, 1H); 7,26 (br s, 2H); 5,12 (d, J=18 Hz, 1H); 4,78 (d, J=18 Hz, 1H); 2,20 (s, 3H).
13C NMR- (DMSO-d6) ppm: 158,7; 156,2; 152,9; 152,7; 150,0; 149,4; 142,1; 136,1; 135,1; 135,-0; 133,2; 131,8; 130,3; 130,1; 128,9; 128,1; 127,-2; 118,5; 117,9; 44,9; 17,4.
MS (ES) : m/z 418.1 (M+).
Analitički izračunato za C21H16C1N7O⋅0,1H2O⋅0,05KCl: C, 59,57; H, 3,86; Cl, 8,79; N, 23,16. Nađeno: C, 59,65; H, 3,80; Cl, 8,70; N, 22,80.
Spoj D-033
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-metoksi-fenil)-3H-kinazolin-4-on
Priređen je sukladno postupku C korištenjem intermedijera 21 (250 mg, 0,746 mmol), adenina (111 mg, 0,821 mmol), K2CO3 (113 mg, 0,821 mmol) i DMF (4 mL). Sirovi produkt je kromatografiran u smjesi MeOH/CH2Cl2 i rekristaliziran iz EtOH da se dobije 124 mg smeđe krutine (38%), talište 257,0-257,1°C.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,06 (s, 1H); 8,01 (s, 1H); 7,71 (t, J=8.0 Hz, 1H); 7,57 (dd, J=0.9, 7.9 Hz, 1H); 7,52-7,59 (m, 1H); 7,50 (dd, J=1.6, 7.8 Hz, 1H); 7,38 (dd, J=1.1, 8.2 Hz, 1H); 7,27 (dd, J=0.6, 8.3 Hz, 1H); 7,24 (br s, 2H); 7,17 (dt, J=0.9, 7.6 Hz, 1H); 5,07 (d, J=17 Hz, 1H); 4,97 (d, J=17 Hz, 1H); 3,79 (s, 3H).
13C NMR (DMSO-d6) ppm: 158,8; 156,2; 154,7; 153,2; 152,8; 150,1; 149,3; 142,0; 135,1; 133,2; 131,8; 130,1; 130,1; 127,2; 123;8; 121,6; 118,4; 117,9; 113,1; 56,2; 44,8.
MS (ES): m/z 434,0 (M+).
Analitički izračunato za C21H16C1N7O2⋅0,5H2O⋅0,04KCl: C, 56,57; H, 3,84; Cl, 8,27; N, 21,99. Nađeno: C, 56,29; H, 3,75; Cl, 8,21; N, 21,61.
Sljedeći spojevi dobiveni su općenito sukladno gore opisanim metodama i služe za daljnju ilustraciju specifičnih realizacija spojeva ovog izuma:
3-(2,6-diklorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-034)
3-(2-izopropilfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-035)
3-(2-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-036)
3-benzil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-037)
3-butil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-038)
3-morfolin-4-il-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on, acetatna sol (D-039)
3-(3-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-040)
3-(3-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-041)
2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-piridin-4-il-3H-kinazolin-4-on (D-042)
3-benzil-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-043)
3-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on, acetatna sol (D-044)
etilni ester [5-fluor-4-okso-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-4H-kinazolin-3-il]octene kiseline (D-045)
3-(2-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-046)
3-(2-metoksifenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-047)
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-fluorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on (D-048)
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-benzil-5-fluor-3H-kinazolin-4-on (D-049)
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-butil-3H-kinazolin-4-on (D-050)
2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-morfolin-4-il-3H-kinazolin-4-on, acetatna sol (D-051)
3-(4-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-052).
Daljnji spojevi ovog izuma mogu se prirediti sljedećim sintetskim postupcima.
Sljedeći intermedijeri mogu se prirediti gore opisanim postupkom A.
[image]
3a R=ciklopropil
3b R=ciklopropilmetil
3c R=fenetil
3d R=ciklopentil
3e R=3-(2-klor)piridil
3f R=4-(2-metil)benzojeva kiselina
3g R=4-nitrobenzil
3h R=cikloheksil
3i R=E-(2-fenil)ciklopropil
Daljnji spojevi ovog izuma (D-053 do D-070) koji imaju sljedeću strukturu jezgre, razmotreni su u sljedećem eksperimentalnom dijelu. Svi su oni priređeni postupkom C.
Struktura jezgre:
[image]
[image]
[image]
2-(2-Amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-ciklopropil-5-metil-3H-kinazolin-4-on (D-053)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3a (100 mg, 0,4 mmol), 2-amino-6-merkaptopurina (80 mg, 0,48 mmol) i K2CO3 (77 mg, 0,56 mmol). Produkt je dobiven razmuljivanjem iz vode.
1H NMR(DMSO-d6) δ: 7,89 (d, J=0.9 Hz, 1H); 7,54 (t, J=7.4 Hz, 1H); 7,34 (d, J=8.1 Hz, 1H); 7,19 (d, J=7.2 Hz, 1H); 6,28 (s, 2H); 4,94 (s, 2H); 2,70 (s, 3H); 1,24 (d, J=6.5 Hz, 2H); 0,91 (s, 2H).
MS (ES): m/z 380 (M+H), 190.
3-Ciklopropilmetil-5 -metil-2 -(9H-purin-6 -ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-054)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3b (300mg, 1,14 mmol), 6-merkaptopurin monohidrata (214 mg, 1,26 mmol) i K2CO3 (189 mg, 1,37 mmol). Produkt je pročišćen razmuljivanjem iz vode, te rekristaliziranjem iz MeOH.
1H NMR (DMSO-dg) d: 13,60 (br s, 1H); 8,72 (s, 1H); 8,48 (s, 1H); 7.63 (t, J=7.8 Hz, 1H); 7,42 (d, J=8.0 Hz, 1H); 7,28 (d, J=7.3 Hz, 1H); 5,01 (s, 2H); 4,11 (d, J=6.8 Hz, 2H); 2,78 (s, 3H); 1,35 (quint, J=6.2 Hz, 1H); 0,44-0,59 (m, 4H).
MS (ES) : m/z 379 (M+H), 325.
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-3-ciklopropilmetil-5-metil-3H-kinazolin-4-on (D-055)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3b (300 mg, 1,14 mmol), adenina (170 mg, 1,26 mmol) i K2CO3 (189 mg, 1.37 mmol). Produkt je pročišćen razmuljivnajem iz vode, te rekristaliziranjem iz MeOH.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,21 (s, 1H); 8,10 (s, 1H); 7,52 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7,18-7,31 (m, 3H); 7,06 (d, J=8.1 Hz, 1H); 5,68 (s, 2H); 4,14 (d, J=6.8 Hz, 2H); 2,77 (s, 3H); 1,34 (quint, J=6.4 Hz, 1H); 0,45-0,60 (m, 4H).
MS (ES) : m/z 362 (M+H), 308.
2-(2-Amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-ciklo-propilmetil-5-metil-3H-kinazolin-4-on (D-056)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3b (280mg, 1,1 mmol), 2-amino-6-merkaptopurina (200 mg, 1,2 mmol) i K2CO3 (180 mg, 1,3 mmol). Produkt je pročišćen razmuljivanjem iz MeOH.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 12,70 (br s, 1H); 7,95 (s, 1H); 7,64 (t, J=7.8 Hz, 1H); 7,44 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7,28 (d, J=7.4 Hz, 1H); 6,41 (s, 2H); 4,91 (s, 2H); 4,05 (d, J=6.8 Hz, 2H); 2,78 (s, 3H); 1,26-1,43 (m, 1H); 0,36-0,56 (m, 4H).
MS (ES): m/z 394 (M+H), 340.
5-Metil-3-fenetil-2-(9H-purin-6-ilsulfanil -metil)-3H-kinazolin-4-on (D-057)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3c (750 mg, 2,4 mmol), 6-merkaptopurin monohidrata (442 mg, 2,6 mmol) i K2CO3 (398 mg, 2,9 mmol). Produkt je pročišćen razmuljivanjem iz vode.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,61 (s, 1H); 8,71 (s, 1H); 8,48 (s, 1H); 7,65 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7,44 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7,16-7,35 (m, 6H); 4,89 (s, 2H); 4,29 (br t, J=7.9 Hz, 2H); 3,08 (br t, J=7.8 Hz, 2H); 2,81 (s, 3H).
MS (ES): m/z 429 (M+H), 105.
2 -(2 -Amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetil)- 5-metil-3 -fenetil-3H-kinazolin-4-on (D-058)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3c (750 mg, 2,4 mmol), 2-amino-6-merkaptopurina (435 mg, 2,6 mmol) i K2CO3 (398 mg, 2,9 mmol). Produkt je pročišćen razmuljivanjem s vodom.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 12,61 (s, 1H); 7,95 (s, 1H); 7,65 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7,45 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7,14-7,32 (m, 6H); 6,44 (s, 2H); 4,81 (s, 2H); 4,24 (br t, J=7.9 Hz, 2H); 3,04 (br t, J=7.8 Hz, 2H); 2,81 (s, 3H).
MS (ES): m/z 444 (M+H), 340.
3 -Ciklopentil-5-metil-2 -(9H-purin-6-ilsulfanil-metil)-3H-kinazolin-4-on (D-059)
Priređen je suklando postupku C korištenjem 3d (100 mg, 0,36 mmol), 6-merkaptopurin monohidrata (73 mg, 0,43 mmol) i K2CO3 (100 mg, 0,72 mmol). Produkt je pročišćen rekristaliziranjem iz MeOH.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,62 (br s, 1H); 8,77 (s, 1H); 8,48 (s, 1H); 7,62 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7,42 (d, J=7.8 Hz, 2H); 7,26 (d, J=7.4 Hz, 1H); 5,03 (s, 2H); 4,80 (quint, J=8.0 Hz, 1H); 2,76 (s, 3H); 2,12-2,31 (m, 2H); 1,79-2,04 (m, 4H); 1,44-1,58 (m, 2H).
MS (ES): m/z 393 (M+H), 325.
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-3-ciklopentil-5-metil-3H-kinazolin-4-on (D-060)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3d (100 mg, 0,36 mmol), adenina (58 mg, 0,43 mmol) i K2CO3 (100 mg, 0,72 mmol). Produkt je pročišćen rekristaliziranjem iz MeOH.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,15 (s, 1H); 8,11 (s, 1H); 7,52 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7,16-7,31 (m, 3H); 7,10 (d, J=8.0 Hz, 2H); 5,68 (s, 2H); 4,78 (quint, J=8.3 Hz, 1H);. 2,74 (s, 3H); 2,09-2,32 (m, 2H); 1,86-2,04 (m, 2H); 1,68-1,86 (m/ 2H); 1,43-1,67 (m, 2H).
MS (ES): m/z 376 (M+H), 308, 154.
3-(2-Klor-piridin-3-il)-5-metil-2-(9H-purin-6- ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-061)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3e (500 mg, 1,6 mmol), 6-merkaptopurin monohidrata (289 mg, 1,7 mmol) i K2CO3 (262 mg, 1,9 mmol). Produkt je pročišćen razmuljivanjem s vodom.
MS (ES): m/z 436 (M+H), 200.
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klor-piridin-3-il)-5-metil-3H-kinazolin-4-on (D-062)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3e (500 mg, 1,6 mmol), adenina (230 mg, 1,7 mmol) i K2CO3 (262 mg, 1,9 mmol). Produkt je pročišćen razmuljivanjem s vodom.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,59 (dd, J=1.7, 4.8 Hz, 1H); 8,22 (dd, J=1.7, 7.8 Hz, 1H); 8,025 (s, 1H); 8,017 (s, 1H); 7,60-7,72 (m, 2H); 7,35 (t, J=8.2 Hz, 2H); 7,22 (s, 2H); 5,12 (d, J=17.0 Hz, 1H); 5,02 (d, J=17.0 Hz, 1H); 2,72 (s, 3H).
MS (ES) : m/z 419 (M+H).
3-Metil-4-[5-metil-4-okso-2-(9H-purin-6-ilsulfanil-metil)-4H-kinazolin-3-il]-benzolna kiselina (D-063)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3f (400 mg, 1,17 mmol), 6-merkaptopurin monohidrata (219 mg, 1,29 mmol) i K2CO3 (226 mg, 1,64 mmol). Produkt je pročišćen rekristaliziranjem iz MeOH.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,54 (br s, 1H); 8,44 (s, 1H); 8,42 (s, 1H); 7,80 (s, 2H); 7,71 (t, J=7.7Hz, 1H); 7,59 (d, J=8.6 Hz, 1H); 7,52 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7,34 (d, J=7.4 Hz, 1H); 4,46 (d, J=15.4 Hz, 1H); 4,34 (d, J=15.7 Hz, 1H); 3,17 (d, J=4.4 Hz, 1H); 2,73 (s, 3H); 2,17 (s, 3H).
MS (ES): m/z 459 (M+H).
3 -Ciklopropil-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanil-metil)-3H-kinazolin-4-on (D-064)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3a (100 mg, 0,40 mmol), 6-merkaptopurin monohidrata (90 mg, 0,53 mmol) i K2CO3 (97 mg, 0,7 mmol). Produkt je pročišćen razmuljivanjem s vodom.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,69 (d, J=0.8 Hz, 1H); 8,47 (s, 1H); 7,57 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7,37 (d, J=8.1Hz, 1H); 7,23 (d, J=7.3 Hz, 1H); 5,08 (s, 2H); 3,06-3,18 (m, 1H); 2,74 (s, 3H); 1,14-1,36 (m, 2H); 0,92-1,06 (m, 2H).
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-3-ciklopropil-5-metil-3H-kinazolin-4-on (D-065)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3a (100 mg, 0,40 .mmol), adenina (94 mg, 0,7 mmol) i K2CO3 (121 mg, 0,88 mmol). Produkt je pročišćen razmuljivanjem s vodom.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,19 (d, J=0.9 Hz, 1H); 8,09 (d, J=1.0 Hz, 1H); 7,48 (t, J=7.8 Hz, 1H); 7,13-7,29 (m, 3H); 7,04 (d, J=8.1 Hz, 1H); 5,74 (s, 2H); 3,00-3,13 (m, 1H); 2,73 (s, 3H); 1,18-1,38 (m, 2H); 0,94-1,09 (m, 2H).
5-Metil-3-(4-nitro-benzil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-066)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3g (200 mg, 0.58 mmol), 6-merkaptopurin monohidrata (148 mg, 0,87 mmol) i K2CO3 (160 mg, 1,16 mmol). Pordukt je pročišćen razmuljivanjem s MeOH.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,44 (br s, 1H); 8,50 (s, 1H); 8,31 (s, 1H); 8,03 (d, J=8.6 Hz, 2H); 7,58 (t, J=7.9 Hz, 1H); 7,37 (d, J=8.3 Hz, 3H); 7,22 (d, J=7.5 Hz, 1H); 5,44 (s, 2H); 4,70 (s, 2H); 2,66 (s, 3H).
MS (ES) : m/z 460 (M+H).
3-Cikloheksil-5-metil-2 -(9H-purin-6-ilsulfanil-metil)-3H-kinazolin-4-on (D-067)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3h (150 mg, 0,52 mmol), 6-merkaptopurin monohidrata (97 mg, 0,57 mmol) i K2CO3 (86 mg, 0,62 mmol). Produkt je pročišćen razmuljivanjem s MeOH.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,66 (br s, 1H); 8,82 (s, 1H); 8,50 (s, 1H); 7,62 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7,42 (d, J=8.0 Hz, 1H); 7,26 (d, J=7.3 Hz, 1H); 5,01 (s, 2H); 4,11 (br s, 1H); 2,75 (s, 3H); 2,38-2,65 (m, 2H); 1,58-1,90 (m, 4H); 1,37-1,57 (m, 1H); 0,71-1,26 (m, 3H).
MS (ES): m/z 407 (M+H), 325.
2-(6-Aminopurin-9-ilmetil)-3-cikloheksil-5-metil-3H-kinazolin-4-on (D-068)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3h (150 mg, 0,52 mmol), adenina (77 mg, 0,57 mmol) i K2CO3 (86 mg, 0,62 mmol). Produkt je pročišćen razmuljivanjem s MeOH.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,15 (s, 2H); 7,54 (t, J=7.9 Hz, 1H); 7,06-7,35 (m, 4H); 5,65 (s, 2H); 4,09 (br s, 1H); 2,73 (s, 3H); 1,41-1,90 (m, 6H); 0,99-1,34 (m, 4H).
MS (ES): m/z 390 (M+H), 308.
2-(2-Amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-cikloheksil-5 -metil-3H- kinazolin-4-on (D-069)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3h (150 mg, 0,52 mmol), 2-amino-6-merkaptopurin (95 mg, 0,57 mmol) i K2CO3 (86 mg, 0,62 mmol). Produkt je pročišćen reverzno-faznom HPLC (C18 Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220λ).
MS (ES): m/z 422 (M+H), 340, 170.
5-Metil-3-(E-2-fenil-ciklopropil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-070)
Priređen je sukladno postupku C korištenjem 3i i 6-merkaptopurin monohidrata. Produkt je pročišćen reverzno-faznom HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220λ).
MS (ES): m/z 441.
Slijede ostali spojevi ovog izuma, zajedno sa sintetskim putom za spojeve D-071 do D-118.
[image]
Postupak D: Smjesa amida 4a ili 4b, FMOC-glicil-klorida i glacijalne octene kiseline zagrijana je na 120°C tijekom 1 do 4 sata. Dobivena smjesa je koncentrirana u vakuumu i pročišćena “flash” kromatografijom da se dobije zaštićeni, ciklizirani amin. Ova tvar kombinirana je s 10 ekvivalenata oktantiola i katalitičkom količinom DBU u THF te miješana na temperaturi okoline sve dok nije utrošen početni materijal što je utvrđeno pomoću LCMS. Reakcijska smjesa je stavljena izravno na “flash” kolonu (koja je uravnotežena u CH2C12) te eluirana s 0-5% MeOH/CH2Cl2 da se dobije slobodan amin, 5a ili 5b. Spoj 5c priređen je na analogni način korištenjem (±) FMOC-alanil-klorida umjesto FMOC-glicil klorida.
Postupak E: Ekvimolarne količine 5a ili 5b, odgovarajućeg 6-klorpurina i DIEA su kombinirane s EtOH u malenoj bočici te zagrijane na 80°C. Reakcija je praćena pomoću LCMS i produkt je pročišćen.
Postupak F: Smjesa amida 4b, acetoksiacetil klorida i glacijalne octene kiseline zagrijana je na 120°C i miješana tijekom 2 sata. Ohlađena reakcijska smjesa je filtrirana i krutina je isprana s CH2C12 da se dobije ciklizirani acetat kao bijela krutina. Materijal je kombiniran s K2CO3 u vodenom metnaolu i miješan jedan sat, te koncentriran u vakuumu. Dobivena krutina je razmuljena s vodom da se dobije 6a u obliku bijele krutine.
[image]
3-(2-Klorfenil)-5-fluor-2-[(9H-purin-6-ilamino)-metil]-3H-kinazolin-4-on (D-072)
Priređen je sukladno postupku E korištenjem 5b (50 mg, 0,165 mmol) i 6-klorpurina (26 mg, 0,165 mmol) u 1 mL EtOH. Nakon 5 dana, reakcijska smjesa pročišćena je pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220λ).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 12,99 (br s, 1H); 8,14 (br s, 1H); 8,.12 (s, 1H); 7,85 (dt, J=5.7, 8.1 Hz., 1H); 7,68-7,79 (m, 3H); 7,57 (t, J=6.2 Hz., 1H); 7,57 (d, J=7.7 Hz., 1H); 7,50 (d, J=8 .1 Hz., 1H); 7,35 (dd, J=8.4, 10.7 Hz., 1H); 4,15-4,55 (m, 2H).
MS (ES): m/z 422 (M+H), 211.
[image]
2-[(2-Amino-9H-purin-6-ilamino)metil]-3-(2-klorfenil)-5-fluoro-3H-kinazolin-4-on (D-074)
Priređen je sukladno postupku E korištenjem 5b (50 mg, 0,165 mmol) i 2-amino-6-klorpurina (28 mg, 0,165 mmol) u 1 mL EtOH. Nakon 5 dana, reakcijska smjesa pročišćena je pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220λ).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 12,13 (br s, 1H); 7,86 (dt, J=5.6, 8.2 Hz., 1H); 7,76-7,83 (m, 2H); 7,68 (br s, 1H); 7,61 (t, J=5.7 Hz,1H); 7,61 (d, J=7.2 Hz., 1H); 7,53 (d, J=8.2 Hz, 1H); 7,35 (dd, J=8.2, 10.9 Hz, 1H); 5,66 (br s, 2 H); 4,16-4,50 (m, 1H); 4,09 (q, J=5.3 Hz., 2H).
MS (ES): m/z 437 (M+H), 219.
[image]
5-Metil-2-[(9H-purin-6-ilamino)metil]-3 -o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-071)
Priređen je sukladno postupku E korištenjem 6-klorpurina (11 mg, 0,072 mmol) i 5a (20 mg, 0,072 mmol). Nakon 5 dana, reakcija je zaustavljena dodatkom vode i dobivena suspenzija je filtrirana. Krutina je pročišćena pomoću HPLC (C18 Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220λ).
1H NMR (DMSO-d6) δ: 12,98 (br s, 1H); 8,14 (br s, 1H); 8,10 (s, 1H); 7,58-7,79 (m, 2H); 7,37-7,48 (m, 4H); 7,26-7,36 (m, 2H); 3,93-4,39 (m, 2H); 2,75 (s, 3H); 2,18 (s, 3H).
MS (ES): m/z 398 (M+H), 199.
[image]
2-[2-Amino-9H-purin-6-ilamino) metil]-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-073)
Priređen je sukladno postupku E korištenjem 5a (189 mg, 0,677 mmol) i 2-amino-6-klorpurina (115 mg, 0,677) u 3 mL EtOH. Nakon 3 dana, reakcijska smjesa je filtrirana da se ukloni suvišak purina i filtrat je pročišćen pomoću HPLC (C18 Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220λ) da se dobije 7 mg produkta u obliku TFA soli.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,88 (br s, 1H); 8,21 (s, 1H); 7,71 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7,45-7,56 (m, 2H); 7,38-7,44 (m, 3H); 7,35 (d, J=7.5 Hz, 1H); 7,30 (br s, 1H); 4,40 (dd, J=4.5, 17.5 Hz, 1H); 4,27 (dd, J=5.3, 17.4 Hz, 1H); 2,75 (s, 3H); 2,09 (s, 3H).
MS (ES): m/z 413 (M+H), 207, 163.
[image]
2-[(2-Fluor-9H-purin-6-ilamino)metil] -5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-076)
Priređen je sukladno postupku E korištenjem 5a (20 mg, 0,072 mmol) i 2-fluor-6-klorpurina (16 mg, 0,094 mmol) u 1 mL EtOH. Nakon 18 sati, reakcijska smjesa je pročišćena pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220λ) te nakon toga rekristalizirana iz EtOH da se dobije 14 mg produkta u obliku žute krutine.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,12 (br s, 1H); 8,40 (br s, 1H); 8,15 (s, 1H); 7,66 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7,35-7,49 (m, 4H); 7,31 (d, J=7.2 Hz., 1H); 4,00-4,22 (m, 2H); 3,17 (s, 1H); 2,74 (s, 3H); 2,18 (s, 3H).
MS (ES): m/z 416 (M+H), 208.
[image]
(2-Klorfenil)-dimetilamino-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-075)
D-015 (100 mg, 0,228 mmol) je kombiniran s amonijevim hidroksidom (28-30%, 1 mL) u DMF (2 mL) te zagrijan na 80°C. Nakon 2 dana, reakcijska smjesa je pročišćena pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220λ) da se dobije produkt u obliku žute krutine, ~ 2mg.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 13,52 (br s, 1H); 8,46 (s, 1H); 8,42 (s, 1H); 7,69 (dd, J=2.1, 7.3 Hz, 1H); 7,62 (dd, J=1.6, 7.6 Hz., 1H); 7,61 (t, J=8.0 Hz, 1H); 7,37-7,48 (m, 2H); 7,05 (d, J=7.9 Hz, 1H); 6,96 (d, J=7.8 Hz, 1H); 4,32-4,45 (m, 2H); 2,80 (s, 6H).
MS (ES): m/z 464 (M+H), 232.
[image]
5-(2-Benziloksietoksi)-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-078)
Otopini 2-benziloksietanola (0,3 mL) u DMF (1,0 mL) dodan je NaH (50 mg, 2,08 mmol). Nakon miješanja tijekom 5 minuta, 0,5 mL je dodano otopini IC-87185 (50 mg, 0,114 mmol) u bezvodnom DMF (0,75 mL). Reakcijska smjesa je zagrijana na 50°C i miješana 3 dana. Pročišćavanje pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220λ) dalo je produkt u obliku heterogene krutine, 150 ug.
MS (ES): m/z 571 (M+H), 481.
[image]
6-Aminopurin-9-karboksilna kiselina 3-(2-klorfenil)-5-fluor-4-okso-3,4-dihidro-kinazolin-2-ilmetil ester (D-079)
Otopini 3b (20 mg, 0,066 mmol) u CH2C12 (500 μL) na 0°C dodan je fosgen (2M/toluen, 36 μL, 0,072 mmol), a zatim adenin (10 mg, 0,072 mmol), te DIEA (25 nL, 0,145 mmol). Reakcijska smjesa je ostavljena da poprimi temperaturu okoline i miješana je 8 dana. Pročišćavanje pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220λ) dalo je produkt u obliku smjese.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 11,04 (br s, 1H); 8,61 (s, 1H); 8,40 (s, 1H); 7,85-7,95 (m, 1H); 7,76 (dd, J=5.4, 9.6 Hz, 1H); 7,70-7,78 (m, 1H); 7,52-7,63 (m, 3H); 7,38 (dt, J=8.3, 10.6 Hz, 1H); 4,76-4,89 (m, 2H).
MS (ES): m/z 466 (M+H), 331, 305.
[image]
N-[3-(2-Klorfenil)-5-fluor-4-okso-3,4-dihidro-kinazolin-2-ilmetil]-2-(9H-purin-6-ilsulfanil)-acetamid (D-077)
(9H-Purin-6-ilsulfanil)-octena kiselina (63 mg, 0,296 mmol), 5b (108 mg, 0,355 mmol), EDC (68 mg, 0,355 mmol), HOST (48 mg, 0,355 mmol), DIEA (62 μL, 0,355 mmol) i DMF (1 mL) su pomiješani u tikvici i miješani na temperaturi okoline tijekom 1 sat. Reakcijska smjesa je razrijeđena s EtOAc (20 mL) i isprana razrijeđenom otopinom soli (2×13 mL). Organska faza je koncentrirana u vakuumu i kromatografirana u 5% MeOH/CH2Cl2 da se dobije 91 mg produkta u obliku viskozne pjene boje breskve.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 12,88 (br s, 1H); 8,72 (s, 1H); 8,62 (t, J=5.0 Hz, 1H); 8,49 (s, 1H); 7,88 (dt, J=5.6, 8.2 Hz, 1H); 7,73-7,78 (m, 1H); 7,67-7,72 (m, 1H); 7,57-7,65 (m, 2H); 7,38 (d, J=8.1 Hz, 1H); 7.36 (dd, J=8.3, 11.1 Hz., 1H); 4,11-4,24 (m, 2H); 3,96 (dd, J=5.0, 17.4 Hz, 1H); 3,78 (dd, J=5.2, 17.4 Hz, 1H).
MS (ES): m/z 496 (M+H), 248.
[image]
2-[1-(2-Fluor-9H-purin-6-ilamino)etil]-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-080)
Priređen je sukladno postupku E korištenjem 5c (50 mg, 0,17 mmol) i 2-fluor-6-klorpurina (35 mg, 0,204 mmol) u 1,2 mL EtOH. Pročišćavanje pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220λ) dalo je dva atropizomera u obliku bijele krutine. Podaci za jednog su sljedeći:
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,48 (br d, J=6.4 Hz, 1H); 8,17 (s, 1H); 7,69 (t, J=7.8 Hz, 1H); 7,53 (d, J=7.8 Hz, 1H); 7,44 (d, J=7.8 Hz, 2H); 7,33 (d, J=7.2 Hz, 2H); 7,07 (br t, J=7.2 Hz, 1H); 4,80 (br t, J=6.8 Hz, 1H); 2,74 (s, 3H); 2,09 (s, 3H); 1,38 (d, J=6.7 Hz, 3H).
MS (ES): m/z 430 (M+H), 215.
[image]
5-Metil-2-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-081)
Priređen je sukladno postupku E korištenjem 5c (50 mg, 0,17 mmol) i 6-klorpurina (32 mg, 0,204 mmol) u 1,2 mL EtOH. Pročišćavanje pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220λ) dalo je dva atropizomera kao žutu krutinu. Podaci za jednog od njih su sljedeći:
1H NMR (DMSO-d6) δ: 8,39 (br s, 1H); 8,34 (s, 1H); 8,18 (s, 1H); 7,71 (t, J=7.7 Hz, 1H); 7,56 (d, J=7.9 Hz, 1H); 7,49 (d, J=6.9 Hz, 1H); 7,28-7,43 (m, 3H); 7,20 (br s, 1H); 5,06 (br s, 1H); 2,73 (s, 3H); 2,04 (s, 3H); 1,51 (d, J=6.6 Hz, 3H).
MS (ES): m/z 412 (M+H), 206.
[image]
Sljedeći spojevi ovog izuma (D-082 do D-109) priređeni su kao što je navedeno u postupku C, korištenjem 2-klormetil-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-ona (10 mg), odgovarajućeg nukleofila XH (20 mg, excess), te kalijeva karbonata (10 mg) u DMF (0,25 mL). Reakcijska smjesa je miješana 16 sati na sobnoj temperaturi, reakcija je zaustavljena vodom, te je sirovi čvrsti produkt sakupljen filtriranjem i osušen na zraku. Sirovi materijal je otopljen u 0,5 mL DMSO i pročišćen reverzno-faznom HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitrile 18 min, detektor na 220λ). Odgovarajuće frakcije su koncentrirane u vakuumu da se dobije konačni produkt.
2-(6-Dimetilaminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-082)
[image]
Prinos: 8,1 mg.
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 8,13 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,60 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,54-7,38 (m, 4H), 7,30 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7,20 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5,11 (d, J=17.4 Hz, 1H), 4,76 (d, J=17.4 Hz, 1H), 3,33 (s, 6H), 2,73 (s, 3H), 2,20 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 426 (M+1).
5-Metil-2-(2-metil-6-okso-1,6-dihidro-purin-7-ilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-083)
[image]
Prinos: 3,3 mg
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 12,06 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,60 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,55-7,38 (m, 4H), 7.30 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7,15 (d, J=7.9 Hz, 1H), 5,26 (d, J=17.4 Hz, 1H), 4,94 (d, J=17.4 Hz, 1H), 2,73 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,24 (s, 3H). Alkiliranje na purinskom N7 označeno je proizvoljno temeljem pomaka prema nižem polju metilenskih protona zbog karbonilne skupine.
LRMS (ES pos.) m/z = 413 (M+1).
5-Metil-2-(2-metil-6-okso-1,6-dihidro-purin-9-ilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-084)
[image]
Pročišćeno ou iste reakcijske smjese kao D-083. Prinos: 3,6 mg.
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 12,17 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,63 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,57-7,39 (m, 4H), 7,32 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7,26 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5,08 (d, J=17.2 Hz, 1H), 4,70 (d, J=17.2 Hz, 1H), 2,73 (5, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,17 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 413 (M+1).
2-(Amino-dimetilaminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-085)
[image]
Prinos: 6,7 mg.
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 7,66 (s, 1H), 7,61 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7,55-7,40 (m, 4H), 7,32-7,26 (m, 2H), 6,74 (s, 2H), 4,94 (d, J=17.2 Hz, 1H), 4,63 (d, J=17.2 Hz, 1H), 4,63 (d, J=17.2 Hz, 1H), 2,97 (s, 6H), 2,73 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,08 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 441 (M+1).
2-(2-Amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-086)
[image]
Prinos: 9,5 mg.
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 12,54 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,69 (t, J=7.8 Hz, 1H),. 7,51 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7,51 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7,43 (t, J=3.9 Hz, 1H), 7,34 = 7,26 (m, 4H), 6,16 (s, 2H), 4,32 (AB kvartet, JAB=14.8 Hz, Δn=23.7), 2,74 (s, 3H), 2,09 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 430 (M+1).
2-(4-Amino-l,3,5-triazin-2-ilsulfanilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-087)
[image]
Prinos: 5,8 mg.
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ 8,10 (s, 1H), 7,70 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,52 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7,58-7,26 (m, 6H), 4,08 (s, 2H), 2,73 (s, 3H), 2,09 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 391 (M+1).
5-Metil-2-(7-metil-7H-purin-6-ilsulfanilmetil) o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-088)
[image]
Prinos: 3,1 mg.
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 8,52 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,70 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,50 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7,45 (d, J=7.1 Hz, 1H), 7,35-7,20 (m, 4H), 4,41 (AB kvartet, JAB=15.3 Hz, Δν=19.2 Hz), 4,08 (s, 3H), 2,73 (s, 3H), 2,12 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 406 (M+1).
5-Metil-2-(2-okso-1,2-dihidro-pirimidin-4-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-089)
[image]
Prinos: 2.4 mg.
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 11,49 (s, 1H), 7,70 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,60 (brt, J=6.0 Hz, 1H), 7,53-7,48 (m, 2H), 7,46-7,28 (m, 4H), 6,31 (d, J=6.7 Hz, 1H), 4,05 (s, 2H), 2,73 (s, 3H), 2.12 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 391 (M+1).
5-Metil-2-purin-7-ilmetil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-090)
[image]
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 9,04 (s, 1H), 8,97 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,65-7,54 (m, 2H), 7,53-7,39 (m, 3H), 7,31 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7,13 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17.6 Hz, 1H), 5,16 (d, J-17.6 Hz, 1H), 2,73 (s, 3H), 2.09 (s, 3H). Alkiliranje na purinskom N7 određeno je NOE pojačanjem između purinskog protona na položaju 6 i metilenskih protona na vezniku između purinskih i kinazolinskih skupina.
LRMS (ES pos.) m/z = 383 (M+1).
5-Metil-2-purin-9-ilmetil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-091)
[image]
Iz iste reakcije kojom je dobiven D-090.
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 9,17 (s, 1H), 8,86 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,59 (t, J-7.8 Hz, 1H), 7,55-7,42 (m, 4H), 7,30 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7,13 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5,26 (d, J=17.5 Hz, 1H), 4,92 (d, J=17.5 Hz, 1H), 2,73 (s, 3H), 2.19 (s, 3H). Alkiliranje na purinskom N9 naznačuje odsutnost NOE pojačanja između purinskih protona u položaju 6 i veznih metilenskih protona.
LRMS (ES pos.) m/z = 383 (M+1).
5-Metil-2-(9-metil-9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3 o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-092)
[image]
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) d: 8,52 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,69 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7,50 (d, J=8.0Hz, 1H), 7,44 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7,36-7,27 (m, 4H), 4.38 (AB kvartet, JAB=15.5 Hz, Δν=21.0 Hz), 3,80 (s, 3H), 2,73 (s, 3H), 2,12 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 429 (M+1).
2-(2,6-Diamino-pirimidin-4-ilsulfanilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-093)
[image]
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 7,70 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7,54 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7,45-7,27 (m, 5H), 6.22 (br s, 1H), 5,80 (br s, 1H), 3,99 (AB kvartet, JAB=14.6 Hz, Δν=26.9 Hz, 2H), 2,73 (s, 3H), 2,08 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 405 (M+1).
5-Metil-2-(5-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-094)
[image]
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 8,57 (s, 1H), 7,73 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,55-7,35 (m, 4H), 7,18 (s, 1H), 4,27 (s, 2H), 2.74 (s, 3H), 2,55 (s, 3H), 2,08 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 429 (M+1).
5-Metil-2-(2-metilsulfanil-9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-095)
[image]
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 13,30 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,72 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,54 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7,47 9d, J=6.3 Hz, 1H), 7,38-7,26 (m, 4H), 4,34 (AB kvartet, JAB=16.1 Hz, Δν=23.6 Hz, 2H), 2,74 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,10 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 461 (M+1).
2-(2-Hidroksi-9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-096)
[image]
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 8,08 (s, 1H), 7,69 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,50 (brd, J=7.8 Hz, 2H), 7,33-7,50 (m, 4H), 4,28 (AB kvartet, JAB=15.5 Hz, Δν=21.3 Hz, 2H), 2,74 (s, 3H), 2,12 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 431 (M+1).
5-Metil-2 -(1-metil-1H-imidazol-2-ilsulfanil-metil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-097)
[image]
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 7,69 t, J=7.8 Hz, 1H), 7,46-7,37 (m, 5H), 7,32 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7,20 (d, J=1.0 Hz, 1H), 6,48 (d, J=1.0 Hz), 3,83 (AB kvartet, JAB=15.0 Hz, Δν=18.8 Hz, 1H), 3,55 (s, 3H), 2,73 (s, 3H), 2,09 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 364 (M+1).
5-Metil-3-o-tolil-2-(1H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-098)
[image]
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 13,98 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 7,70 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,49 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7,44-7,31 (m, 5H), 4,04 (AB kvartet, JAB=15.5 Hz, Δν=19.1 Hz, 1H), 2,74 (s, 3H), 2,10 (s, 3H). LRMS (ES pos.) m/z = 364 (M+1).
2-(2-Amino-6-klor-purin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-099)
[image]
LRMS (ES pos.) 432 (M+1).
2-(6-Aminopurin-7-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-100)
[image]
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 8,19 (s, 3.H), 7,66 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,59-7,43 (m, 5H), 7,34 9d, J=7.4 Hz, 1H), 7,23 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6,90 (s, 2H), 5,21 (AB kvartet, JAB=17.4 Hz, Δν=22.1 Hz, 2H), 2,72 (s, 3H), 1,93 (s, 3H). Alkiliranje na purinskom N7 potvrđeno je NOE pojačanjem između sljedećih protona: 1) Egzociklički amin i metilen, protoni; 2) Egzociklički amin i toluil metil protoni.
LRMS (ES pos.) m/z = 398 (M+1).
2-(7-Amino-1,2,3-triazolo[4,5-d]pirimidin-3-il-metil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-101)
[image]
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 8,43 (br s, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,10 (br s, 1H), 7,62 (t, J=7,8 Hz, 1H), 7,49-7,28 (m, 5H), 7,22 (d, J=8.1 Hz, 1H), 5,49 (d, J=17.0 Hz, 1H), 5,19 (d, J=17.0 Hz, 1H), 2,73 (s, 3H), 2,11 (s, 3H). Alkiliranje na purinskom N7 određeno je sličnošću s nmr spektrom D-030.
LRMS (ES pos.) m/z = 399 (M+1).
2-(7-Amino-1,2,3-triazolo[4,5-d]pirimidin-1-il-metil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-102)
[image]
Iz iste reakcijske smjese kao D-101.
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 8,2.7 (s, 1H), 8,20 (br s, 1H), 8.05 (br s, 1H), 7.70 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,47-7,26 (m, 6H), 5.61 (AB kvartet, JAB=16.0 Hz, Δν=20.7 Hz, 2H), 2,75 (s, 3H), 1,98 (s, 3H)).
Alkiliranje na purinskom N7 određeno je sličnošću s nmr spektrom D-1000.
LRMS (ES pos.) m/z = 399 (M+1).
2-(6-Amino-9H-purin-2-ilsulfanilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-103)
[image]
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 12,62 (s, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,69 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7,51 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7,42 (dd, J=7.6, 1.7 Hz, 1H), 7,35-7,15 (m, 6H), 4,12 (AB kvartet, JAB=14.5 Hz, Δν=18.2 Hz, 2H), 2,73 (s, 3H), 2,10 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 430 (M+1).
2-(2-Amino-6-etilamino-pirimidin-4-ilsulfanil-metil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-104)
[image]
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 7,70 (T, J=7.8 Hz, 1H), 7,53 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7,44-7,31 (m, 5H), 6,69 (br s, 1H), 5,83 (br s, 2H), 5,61 (s, 1H), 4.03 (d, J=14.6 Hz, 1H), 3,95 (d, J=14.6 Hz, 1H), 3,22-3,11 (m, 2H), 2,73 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 1,06 (t, J=7.1 Hz, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 433 (M+1).
2-(3-Amino-5-metilsulfanil-1,2,4-triazol-1-il-metil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-105)
[image]
Prinos: 5,0 mg.
1H NMR (300 MHz, d4-MeOH) d: 7,67 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,55-7,37 (m, 4H), 7,35-7,27 (m, 2H), 4,77 (d, J=17.1 Hz, 1H), 4,60 (d, J=17.1 Hz, 1H), 2,80 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 2,14 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 393 (M+1).
1-(5-Amino-3-metilsulfanil-1,2,4-triazol-1-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-106)
[image]
Prinos: 0,6 mg.
Pročišćeno iz iste reakcijske smjese kao D-105.
1H NMR (300 MHz, d4-MeOH) δ: 7,67 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,50-7,24 (m, 6H), 4,83 (d, J=16.5 Hz, 1H), 4,70 (d, J=16.5 Hz, 1H), 2,79 (s, 3H), 2,47 (s, 3H), 2,14 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 393 (M+1).
5-Metil-2-(6-metilaminopurin-9-ilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-107)
[image]
Prinos: 5,0 mg
1H NMR (300 MHz, d4-MeOH) d: 8,17 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,54-7,43 (m 4H), 7,31-7,23 (m, 2H), 5,14 (d, J=17.5 Hz, 1H), 4,90 (d, J=17.5 Hz, 1H), 3,14 (br s, 3H), 2,79 (s, 3H), 2,22 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 412 (M+1).
2-(6-Benzilaminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-108)
[image]
Prinos: 6,7 mg.
1H NMR (300 MHz, d4-MeOH) δ: 8,13 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,58 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,51-7,21 (m, 11H), 5,15 (d, J=17.5 Hz, 1H), 4,91 (d, J=17.5 Hz, 1H), 4,83 (s, 2H, pod H2O pikom), 2,79 (s, 3H), 2,22 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 488 (M+1).
2-(2,6-Diaminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-109)
[image]
Udvostručene su količine svih reaktanata. Prinos: 14 mg.
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 8,53 (br s, 2H), 8,01 (s, 1H), 7,64 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,53-7,40 (m, 4H), 7,33 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7,27 (d, J=7.9 Hz, 1H), 4,96 (d, J=17.5 Hz, 1H), 4,64 (d, J=17.5 Hz, 1H), 2,74 (s, 3H), 2,17 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 413 (M+1).
Spojevi D-110 do D-115, sljedeće opće strukture, priređeni su iz sljedećih intermedijera E-1 do E-3.
[image]
Intermedijer E-1
5-Metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3,1-benzoksazin-4-on
[image]
Stupanj 1. Suspenzija 6-metilantranilne kiseline (2 g, 13,2 mmol) u kloracetil kloridu (12 mL, veliki suvišak) miješana je na 115°C u zatvorenoj bočici tijekom 30 min. Dobivena otopina je ohlađena na sobnu temperaturu i tretirana eterom (~5 mL). Nakon hlađenja na 4°C preko noći, nastali smeđi talog sakupljen je filtriranjem, ispran eterom, te osušen u vakuumu da se dobije klorni intermedijer (1,39 g, 50%).
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 7,67 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,46 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7,35 (d, J=7.6 Hz, 1H), 4,39 (s, 2H), 2,81 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 210 (M+1).
Stupanj 2. Smjesa klornog intermedijera (50 mg, 0,25 mmol), 6-merkaptopurina monohidrata (43 mg, 0.25 mmol) i kalijeva karbonata (25 mg, 0,25 mmol) u suhom DMF (0,5 mL) miješana je na sobnoj temperaturi tijekom 30 min. Smjesa je stavljena u etilacetat (20 mL) pa je sav neotopljen materijal profiltriran i odbačen. Filtrat je koncentriran u vakuumu da se ukloni etilacetat, te su rezidue tretirane eterom, što je dalo svijetlonaranasti talog. Talog je sakupljen filtriranjem, ispran eterom i osušen u vakuumu da se dobije intermedijer E-1 (41 mg, 51%).
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 8,64 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,73 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,44-7,37 (m, 2H), 4,69 (s, 2H), 2,69 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 326 (M+1).
Intermedijer E-2
[image]
Otopina 2-nitroacetanilida (1,0 g, 5,6 mmol) u EtOH isprana je dušikom, tretirana s Pd(OH)2 (20% (tež.) C, 200 mg, kat.), te je potresivana 2 sata pod H2 (20 psi). Katalizator je uklonjen filtriranjem kroz 0,22 μm celuloznu acetatnu membranu (Corning), pa je filtrat koncentriran u vakuumu da se dobije bijeli kristalni produkt (800 mg, 96%).
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 9,12 (s, 1H), 7,14 (dd, J=7.8, 1.3 Hz, 1H), 6,88 (dt, J=7.6, 1.5 Hz, 1H), 6,70 (dd, J=8.0, 1.3 Hz, 1H), 6,52 (dt, J=7.5, 1.4 Hz, 1H), 4,85 (br s, 2H), 2,03 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 151 (M+1).
Intermedijer E-3
[image]
Smjesa 2-fluor-nitrobenzena (1,41 g, 10 mmol) i NaHCO3 u EtOH (20 mL) tretirana je s (N,N,N' -trimetil)-1,2-diaminoetanom (1,1 g, 11 mmol) te je miješana 16 h na 80°C. Otapalo je uklonjeno u vakuumu, rezidue su tretirane s 0,1 M NaOH (120 mL), te je smjesa ekstrahirana etilacetatom (2×50 mL). Organski slojevi su sjedinjeni i isprani s 20 mL vode (1×) i slanom otopinom (2×), osušeni s natrijevim sulfatom, te koncentrirani u vakuumu do narančaste tekućine (2,2 g, 100%; ESMS: m/z = 224, M+l).
Ovaj intermedijer je otopljen u EtOH, otopina je isprana dušikom, tretirana s Pd(OH)2 (20% (tež) na C, 180 mg, kat.), te je mućkana 2 sata pod H2 (50 psi). Katalizator je uklonjen filtriranjem kroz 0,22 μm celuloznu acetatnu membranu (Corning), te je filtrat koncentriran u vakuumu da se dobije crveni tekući produkt E-3 (1,8 g, 95%).
1H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 8,64 (s, 1H), 7,03 (dd, J=8.3, 1.4 Hz, 1H), 6,91 (ddd, J=7.6, 7.2, 1.4 Hz, 1H), 6,73-6,67 (m, 2H), 4,20 (br s, 2H), 2,95 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2,68 (s, 3H), 2,41 (t, J=6.7 Hz, 1H), 2,26 (s, 6H).
LRMS (ES pos.) m/z=194 (M+1).
Spojevi D-110 do D-115 priređeni su na sljedeći način:
5-Metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on (D-110)
[image]
Smjesa intermedijera E-1 (40 mg) i o-toluidina (0,3 mL, veliki suvišak) grijana je na 100°C u zataljenoj bočici tijekom 16 h. Reakcijska smjesa je ohlađena, tretirana s 1N HC1 (2 mL) i eterom (2 mL), pa je nastali sivi talog sakupljen filtriranjem, ispran eterom, te osušen (19 mg sirovog talog). Sirova krutina je otopljena u 0,5 mL DMSO i pročišćena pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220A). Odgovarajuće frakcije su koncentrirane u vakuumu da se dobije konačni produkt u obliku bijele krutine (4 mg).
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 13,52 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,69 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,50 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7,46-7,43 (m, 1H), 7,37-7,25 (m, 4H), 4,37 (AB kvartet, JAB=15.4 Hz, Δν=22.4 Hz, 2H), 2,74 (5, 3H), 2,12 (5, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 415 (M+1).
3 -Izobutil-5-metil-2 -(9H-purin- 6 -ilsulfanilmetil) 3H-kinazolin-4-on (D-111)
[image]
Smjesa intermedijera E-1 (40 mg) id izobutil-amina (0,4 mL, veliki suvišak) grijana je na 120°C u zataljenoj bočici tijekom 16 h. Suvišak izobutilamina je ostavljen da upari, rezidue su otopljene u 1 mL DMSO i pročišćene u dva obroka pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220A). Odgovarajuće frakcije su koncentrirane u vakuumu da se dobije konačni produkt u obliku bijele krutine (4 mg).
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 13,75 (br s, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,63 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7,42 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7,28 (d, J=7.3 Hz, 1H), 4,96 (s, 2H), 4,00 (d, J=7.5 Hz, 2H), 2,77 (s, 3H), 2,30-2,15 (m, 1H), 0,98 (d, J=6.7 Hz, 1H).
LRMS (ES pos.) m/z = 381 (M+1).
N-{2-[5-Metil-4-okso-2-(9H-purin-6-ilsulfanil-metil)-4H-kinazolin-3-il]-fenil}-acetamid (D-112)
[image]
Smjesa intermedijera E-1 (80 mg, 0,25 mmol) i intermedijera E-2 (75 mg, 0,5 mmol, 2 ekv.) grijana je do taljenja u zataljenoj bočici pomoću toplinskog pištolja. Reakcijska smjesa je razmuljena s eterom i krutina je sakupljena filtriranjem. Sirova tvar je otopljena u 1 mL DMSO i pročišćena u dva obroka pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220A). Odgovarajuće frakcije su koncentrirane u vakuumu da se dobije konačan produkt u obliku bijele krutine.
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 13,52 (s, 1H), 9,52 (s, 1H), 8,48 (s, 3H), 8,42 (s, 3H), 8,02 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7,69 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,51 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7,45-7,37 (m, 2H), 7,31 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7,19 (t, J=7.5 Hz, 1H), 4,38 (s, 2H), 2,74 (s, 3H), 1,93 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 458 (M+1).
5-Metil-3-(E-2-metil-cikloheksil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-113)
[image]
Smjesa intermedijera E-1 (80 mg, 0,25 mmol) i trans-2-metil-1-aminociklohsana (0,25 mL, veliki suvišak) grijana je u zataljenoj bočici na 100°C tijekom 16 h. Reakcijska smjesa je razmuljena s eterom i krutina je sakupljena filtriranjem. Sirova tvar je otopljena u 0,5 mL DMSO i pročišćena pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220A). Odgovarajuće frakcije su koncentrirane u vakuumu da se dobije konačan produkt u obliku bijele krutine (1,5 mg).
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 13,5 (br s, 1H), 8,82 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7,63 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7,43 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7,27 (d, J=7.4 Hz,.1H), 5,11 (d, J=14.5 Hz, 1H), 3,78-3,69 (m, 1H), 2,73 (s, 3H), 2,55-2,40 (m, 3H), 1,88-1,46 (m, 4H), 1,31-1,11 (m, 1H), 0,90-0,65 (m, 1H), 0,74 (d, J=6.7 Hz, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 421 (M+1).
2-[5-Metil-4-okso-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-4H-kinazolin-3-il]-benzojeva kiselina (D-114)
[image]
Smjesa intermedijera E-1 (80 mg, 0,25 mmol) metil antranilata (0,25 mL, veliki suvišak) grijana je u zataljenoj bočici na 100°C tijekom 16 h. Reakcijska smjesa je razmuljena s eterom i krutina je sakupljena filtriranjem. Sirova tvar je otopljena u 0,5 mL DMSO i pročišćena pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220A). Odgovarajuće frakcije su koncentrirane u vakuumu da se dobije konačni produkt u obliku bijele krutine (8 mg).
1H NMR (300MHz, d6-DMSO) δ: 13,51 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 8,11 (dd, J=7.4, 1.1 Hz, 1H), 7,88 (dt, J=7.7, 1.4 Hz, 1H), 7,70 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7,57 (t, J=7.2 Hz, 1H), 7,49-7,35 (m, 3H), 4,58 (d, J=15.5 Hz, 1H), 4,35 (d, J=15.5 Hz, 1H), 2,44 (s, 3H).
LRMS (ES pos.) m/z = 445 (M+1).
3-{2-[(2-Dimetilamino-etil)-metil-amino]-fenil}-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-115)
[image]
Smjesa intermedijera E-1 (40 mg, 0,25 mmol) i intermedijera E-3 (0,2 mL, veliki suvišak) grijana je u zataljenoj bočici na 100°C tijekom 16 h. Reakcijska smjesa je razmuljena s eterom i krutine su sakupljene filtriranjem. Sirova tvar je otopljena u 1 mL DMSO i pročišćena pomoću HPLC u dva obroka (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, 0,05% TFA u svim otaplima, detektor na 220A). Odgovarajuće frakcije su koncentrirane u vakuumu da se dobije konačni produkt kao TFA sol (11 mg).
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 13,4 (br s, 1H), 9,27 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,72 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7,53 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7,40-7,33 (m, 4H), 7,10-7,04 (m, 1H), 4,42 (s, 3H), 3,5 (m, 2H), 3,23-3,03 (m, 3H), 2,75 (s, 3H), 2,68-2,56 (m, 8H).
LRMS (ES pos.) m/z = 501 (M+1).
Spojevi D-116 do D-118 priređeni su na sljedeći način:
[image]
3-(2-Klorfenil)-5-metoksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-116)
(R = Me, X = O)
Smjesa D-015 (25 mg) u 0,5 M NaOMe (2 mL u MeOH; veliki uvišak) miješana je na 50°C tijekom 16 h u zataljenoj bočici. Reakcijska smjesa je ohlađena na sobnu temperaturu, tretirana vodom (5 mL), te je nastali talog sakupljen filtriranjem, ispran vodom, te osušen na zraku. Sirovi materijal je otopljen u 0,5 mL DMSO i pročišćen pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220A). Odgovarajuće frakcije su koncentrirane u vakuumu da se dobije konačni produkt u obliku bijele krutine (5,3 mg).
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 13,52 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 8.44 (br s, 1H), 7,77 (t, J=8.2 Hz, 1H), 7,71-7,60 (m, 2H), 7,51-7,34 (m, 2H), 7,23 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7,10 (d, J=8.4 Hz, 1H), 4,39 (AB kvartet, JAB=5.2 Hz, Av=23.2 Hz, 2H), 3,85 (s, 3H).
LRMS (ES positive) m/z = 451 (M+1).
3-(2-Klorfenil)-5-(2-morfolin-4-il-etilamino)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-117)
[image]
Smjesa D-015 (25 mg) i 4-(aminoet-2-il)-morfolina (650 mg, veliki suvišak) miješana je na 50°C tijekom 16 h. Sirova reakcijska smjesa je pročišćena pomoću HPLC (C18 Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril na 18 min, detektor na 220A). Odgovarajuće frakcije su koncentrirane u vakuumu da se dobije konačni produkt.
1H NMR (300 MHz, d6-aceton) δ: 8,57 (br s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,72 (dd, J=7.7, 1.6 Hz, 1H), 7,65 (dd, J=8.0, 1.2 Hz, 1H), 7,57 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7,49 (dt, J=7.7,1.6 Hz, 1H), 7,40 (dt, J=7.7,1.5 Hz, 1H), 6,86 (d, J=7.4 Hz, 1H), 6,82 (d, J=8.3 Hz, 1H), 4,55 (d, J=15.0 Hz, 1H), 4,42 (d, J=15.1 Hz, 1H), 4,05-3,90 (m, 4H), 3,90 (t, J=6.9 Hz, 2H), 3,75-3,4 (m, 4H), 3,54 (t, J=6.9 Hz, 2H).
LRMS (ES positive) m/z = 549 (M+1).
3-Benzil-5-metoksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on (D-118)
[image]
Smjesa D-043 (25 mg) u 0,5 M NaOMe (2 mL u MeOH; veliki suvišak) miješana je na 50°C tijekom 16 h u zataljenoj bočici. Reakcijska smjesa je tretirana s 1 N HC1 (1 mL) i alikvoti ove otopine (0,5 mL svaki) su pročišćeni pomoću HPLC (CIS Luna kolona, 4,6×250 mm, 4,7 mL/min, 10-75% acetonitril/voda tijekom 15 min, 100% acetonitril 18 min, detektor na 220A). Odgovarajuće frakcije su koncentrirane u vakuumu da se dobije konačni produkt u obliku bijele krutine (6,6 mg).
1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ: 13,57 (s, 1H), 8,60 (S, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,72 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7,42-7,30 (m, 2H), 7,30-7.IS (m, 3H), 7,15 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7,06 (d, J=8.3 Hz, 1H), 5,43 (s, 2H), 4,80 (s, 2H), 3.87 (s, 3H).
LRMS (ES positive) m/z = 431 (M+1).
Spoj D-999 (komparativan)
3-(2-Klorfenil)-2-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
Analogni spoj, 3-(2-klorfenil)-2-(1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilsulfanilmetil)-3H-guinazolin-4-on, također je sintetiziran općenito sukladno opisanim metodama, osim što je 4-merkapto-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin zamijenjen s merkaptopurinom u završnom stupnju.
PRIMJER 11
Biokemijske analize PI3K jačine i selektivnosti
A. Biokemijska analiza korištenjem 20 μM ATP
Pomoću metoda koje su opisane u primjeru 2, gore, spojevi ovog izuma ispitani su glede aktivnosti inhibiranja i jačine u odnosu prema PI3Kδ, te glede selektivnosti za PI3Kδ u odnosu na ostale PI3K izozime klase I. U tablici 2 navedene su vrijednosti IC50 (μM) za PI3Kα (“alfa”), PI3Kβ (“beta”), PI3γ (“gama”) i PI3Kδ (“delta”). Da se prikaže selektivnost spojeva, prikazani su odnosi IC50 vrijednosti za spojeve glede PI3Kα, PI3Kβ i PI3Kγ relativno u dnosu prema PI3Kδ, kao odnosi “alfa/delta“, “beta/delta” i “gama/delta”.
Početna selektivnost analiza je učinjena identičnom za protokol analize selektivnosti u primjeru 2, osim što je korišteno 100 μL Ecoscint za detektiranje radioobilježavanja. Kasnija analiza selektivnosti učinjena je slično korištenjem identične 3X supstratne šarže koja sadrži 0,05 mCi/mL Y[32p]ATP i 3 mM PIP2. Kasnije analize selektivnosti također su koristili iste 3X enzimske šarže, osim što su one sada sadržavale 3 nM neke od danih PI3K izoformi.
Za sve analize selektivnosti, testni spoj je dovagnut i otopljen u 10-50 mM “stock” otopini u 100% DMSO (ovisno o konkretnoj topljivosti) te pohranjeni na -20°C. Spojevi su uzeti (na sobnoj temperaturi ili na 37°C), razrijeđeni na 300 μM u vodi iz čega je načinjeno 3-struko razrjeđenje u vodi. Iz ovih razrjeđenja, u jažice za analizu dodano je 20 μL zajendo s vodom kao “blank” uzorkom za enzimsku (pozitivnu) kontorlu i za ne-enzimsku (“background”) kontrolu. Ostatak analize je učinjen u skladu s protokolom za analizu selektivnosti u Primjeru 2.
U onim slučajevima u kojima se u analizi koristi najveća koncentracija, tj. 100 μM, te se ne pokazuje inhibiranje aktivnosti enzima za bar 50%, u tablici je navedena postotoak aktivnosti koja preostaje pri toj koncnetraciji (tj. pri 100 μM). U ovim slučajevima, stvarni odnos aktivnosti za spoj se ne može izračunati, jer nedostaju potrebne vrijednosti IC50. Međutim, da se dobije neki uvid u svojstva ovih spojeva, hipotetski odnos je izračunat korištenjem vrijednosti 100 μM za vrijendost koja nedostaje. U takvim slučajevima, odnos selektivnosti mora ustvari biti veći od hipotetske vrijednosti, što je označeno korištenjem oznake “veće od” (>).
[image] [image] [image]
Spoj D-121 is 3-fenil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on
[image]
B. Biokemijska analiza korištenjem 200 μM ATP
U dijelu A, gore, spojevi ovog izuma testirani su da se utvrdi njihova vrijednost IC50 u inhibiranju alfa, beta, delta i gama izoformi PI3K korištenjem 20 μM ATP. Sljedeći korak je načinjen da se utvrdi vrijednost IC50 za inhibiranje četiri PI3K izoforme uz konačnu koncentraciju 200 μM ATP, 10-struko veću, te znatno bližu normalnim fiziološkim koncentracijama ATP u stanicama. Ovaj protokol selektivnosti identičan je onom koji je gore opisan, osim što je 3X “stock” ATP koncentracija bila 600 μM. Podaci ovih analiza prikazani su u tablici 3, niže. Uočene osjetljivosti na ATP koncentracije ukazuju da se ovi spojevi inhibitori PI3Kδ ponašaju kao ATP kompetitori.
[image] [image]
PRIMJER 12
Podaci o analizi stanica za inhibitore aktivnosti PI3Kδ
Pomoću metoda koje su opisane u primjerima 3-5 gore, spojevi ovog izuma testirani su u svezi inhibitorske aktivnosti i jačine u analizama stimulirane B i T stanične proliferacije, neutrofilne migracije (PMN), te otpuštanja elastaze neutrofila (PMN). Podaci za ove analize navedeni su u Tablici 4, niže. U Tablici 4, prikazane vrijednosti su efektivne koncentracije spoja (EC50; μM). Kada podaci nisu dani, analiza nije izvršena.
[image] [image]
Analiza inhibitora aktivnosti PI3Kδ u stanicama karcinoma
Učinak spojeva ovog izuma na proliferaciju stanica karcinoma procijenjen je ispitivanjem jednog od spojeva prema panelu stanične linije kronične mijeloidne leukemije (CML), uključujući KU812, RWLe.u4, K562, te MEG-01.
Inhibitorska aktivnost spoja (D-000, otopljen u DMSO) određena je na sljedeći način. Ispitani spoj dodan je u nizu koncentracija (0,001 μM do 20 μM) u ploče s 96 jažica sa stanicama (1000 do 5000 stanica/jažica). Ploče su inkubirane tijekom pet dana na 37°C tijekom kojeg vremena su kontrolne kulture bez testiranog spoja mogle izvršiti bar dva ciklusa stanične podjele. Stanični rast izmjeren je ugradnjom [3H]-timidina tijekom osamnaest sati trećeg dana, četvrtog i petog dana. Stanice su prenesene na filter, isprane, te je izmjerena aktivnost pomoću Matrix 96 beta brojača (Packard). Udio staničnog rasta izmjeren je na sljedeći način:
[image]
Vrijednost EC50 u ovim eksperimentima određena je pomoću koncentracije testnog spoja koja rezultira izmjerenom radioaktivnošću koja iznosi 50% od one koja je izmjerena korištenjem kontrole bez inhibitora. Spoj D-000 pokazao je inhibitorsku aktivnost s EC50 od približno 2 μM za KU812 i RWLeu4 linije. Pokazalo se da spoj ne pokazuje djelovanje na K562 i MEG-01 linije.
PI3Kδ inhibitori ovog izuma pokazuju inhibiranje CML stanični rast i prema tome mogu biti korisni u tretiranju benignih ili malignih tumora. PI3Kδ ekspresija nađena je dosad uglavnom u stanicama hematopoetskog porijekla. Međutim, ona se može naći u širem rasponu prolferacijskih stanica. Prema tome, spojevi ovog izuma mogu se koristiti za izazivanje tumorske regresije i za sprječavanje nastajanja tumorskih metastaza u leukemiji i solidnim tumorima ili u proliferaciji netumorskog porijekla. Nadalje, spojevi se mogu koristiti sami i u kombinaciji s drugim farmakološki aktivnim spojevima ili u kombinaciji sa zračenjem kao sredstvo za senzibiliziranje.
PRIMJER 14
Mjerenje elastazne egzocitoze u ispirku vrećice miša
Ispitan je učinak D-030 na leukocitni ulazni fluks i elastaznu egzocitozu neutrofila u životinjskom modelu. Model zračne vrećice šest dana je in vivo model upale koji histološki podsjeća na sinovij zgloba. Linija organiziranih mononuklearnih stanica i fibroblasta se razvija i podsjeća na šupljinu sonovija. Ovaj model predstavlja “akutan model” kronične bolesti (npr. reumatoidni artritis). Ovaj model omogućuje in vivo procjenu sredstava za blokiranje ulaznog toka u zračnoj vrećici pod djelovanjem upalnog stimulansa.
[image]
Ovo ispitivanje je provedeno na sljedeći način: na nulti dan, skupine štakora su obrijane i 10 ml zraka je potkožno injicirano na leđima svakog, što je oblikovalo vrećice. Trećeg dana, 10 ml zraka je ponovo injicirano. Šest sati prije TNF podražaja na šesti dan, jedna skupina štakora (n=6) primila je D-030 (100 mg/kg u PEG 400 nosaču) oralno, dok je druga skupina (n=12) primila oralno samo nosač. Šest sati nakon doziranja, xx air pouches obiju skupina primile su 2,5 mg TNF. Dvanaest sati nakon doziranja, vrećice su isprane slanom otopinom, te je dobiveni tekući ispirak analiziran na broj leukocita i aktivnost elastaze neutrofila. Nadalje, uzeta je krv da se odredi razina D-030 u cirkulaciji. rezultati su bili sljedeći: štakori koji su primili D-030 tijekom dvanaest sati imali su prosjek 8,7 μM spoja u cirkulaciji i imali su 82% smanjenja u ukupnim leukocitima u tekućem ispirku u usporedbi s kontrolama nosača. Smanjenje ukupnog broja leukocita bilo je sljedeće: neutrofili (90%), eozinofili (66%) i limfociti (70%). Kvantificiranje elastaze neutrofila pokazalo je da su štakori koji su bili tretirani s D-030 imali nešto smanjenu razinu (15%) u odnosu na kontrolu nosača. U drugom ispitivanju, područje na leđima miša je obrijano, pa je oblikovana zračna vrećica injiciranjem potkožno 3 ml zraka. Trećeg dana, ponovljeno je injiciranje zraka. Šestog dana, životinje su injicirane bilo s D-030 (32 mg/kg u LABRAFIL®) ili LABRAFIL® samo jedan sat prije i dva sata nakon podražaja s TNF (0,5 ng u 1 ml PBS), ili samo s PBS. PBS je fiziološka otopina s fosfatnim puferom. Četiri sata nakon podražaja, životinje su anestezirane i xx pouches su isprane s 2 mL 0,9% fiziološke otopine s 2 mM EDTA. Ispirci su centrifugirani na 14 000 rpm u mikrocentrifugi. Pedeset mikrolitara supernatanta korišteno je za mjerenje egzocitoze elastaze sukladno postupku koji je prije opisan.
Kao što je prikazano na slici 9, TNF podražaj izazvao je visoku razinu elastazne egzocitoze u usporedbi s životinjama koje su podražene s PBS. Međutim, kada su TNF podražene životinje bile tretirane s D-030, uočeno je značajno smanjenje aktivnosti elastaze u ispircima zračne vrećice.
Sve publikacije i patentni dokumenti koji su citirani u ovoj prijavi su uključeni kao referenca obzirom na sve što opisuju.
Mada je ovaj izum opisan sa specifičnom referencom na određene poželjne realizacije zbog jasnoće i razumljivosti, oni koji poznaju ovo područje znaju da su moguće daljnje promjene i modifikacije unutar dosega ovog izuma, kao što je definirano u patentnim zahtjevima koji slijede. Prema tome, nema nikakvih ograničenja glede izuma osim onih koji su specifično navedeni u patentnim zahtjevima.

Claims (43)

1. Metoda za narušavanje funkcije leukocita, naznačena time što obuhvaća kontakt leukocita sa spojem koji selektivno inhibira aktivnost fosfatidil-inozitol 3-kinaze delta (PI3Kδ) u navedenim leukocitima relativno prema ostalim izoformama fosfatidil-inozitol 3-kinaze tipa I (PI3K) u analizi stanica.
2. Metoda prema zahtjevu 1, naznačena time što su navedeni leukociti odabrani iz skupa kojega sačinjavaju neutrofili, B limfociti, T limfociti i bazofili.
3. Metoda prema zahtjevu 1, naznačena time što navedeni leukociti obuhvaćaju neutrofile i što navedena metoda obuhvaća narušavanje bar jedne funkcije neutrofila iz skupa stimuliranog otpuštanja superoksida, stimulirane egzocitoze i kemotaktične migracije.
4. Metoda prema zahtjevu 3, naznačena time što je bakterijska fagocitoza ili uništavanje bakterija pomoću navedenih neutrofila praktički nepromijenjeno.
5. Metoda prema zahtjevu 1, naznačena time što navedeni lukociti obuhvaćaju B limfocite i što navedena metoda obuhvaća narušavanje proliferacije navedenih B limfocita ili proizvodnje antitijela pomoću navedenih limfocita.
6. Metoda prema zahtjevu 6, naznačena time što navedena metoda obuhvaća narušavanje proiliferacije navedenih T limfocita.
7. Metoda prema zahtjevu 1, naznačena time što navedeni leukociti obuhvaćaju bazofile i što navedena metoda obuhvaća narušavanje otpuštanja histamina pomoću bazofila.
8. Metoda prema zahtjevu 1, naznačena time što navedeni spoj pokazuje bar 10-struku selektivnost za inhibiranje PI3Kδ relativno u odnosu na ostale izoforme PI3K tipa I u staničnoj analizi.
9. Metoda prema zahtjevu 8, naznačena time što navedeni spoj pokazuje bar 20-struko inhibiranje PI3Kδ relativno u odnosu na ostale izoforme PI3K tipa I u staničnoj analizi.
10. Metoda prema zahtjevu 9, naznačena time što navedeni spoj pokazuje bar 50-struku selektivnost inhibiranja PI3Kδ u odnosu na ostale izoforme PI3K tipa I u biokemijskoj analizi.
11. Metoda prema zahtjevu 1, naznačena time što navedeni spoj ima sljedeću strukturu: [image] gdje je Y odabran iz skup kojega sačinjavaju ništa, S i NH; R7 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, halogen, OH, OCH3, CH3 i CF3; R8 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, OCH3 i halogen; ili R7 i R8 zajedno s C-6 i C-7 kinazolinskog prstena definiraju 5- ili 6-člani aromatski prsten koji proizvoljno sadrži jedan ili više atoma O, N ili S; R9 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju is selected from the group consisting of C1-C6alkil, fenil, halofenil, alkilfenil, bifenil, benzil, piridinil, 4-metilpiperazinil, C(=O)-OC2H5 i morfolinil; Rd, neovisno, odabran je iz kupa kojega sačinjavaju NH2, halogen, C1-3alkil, S(C1-3alkil), OH, NH(C1-3alkil) , N(C1-3alkil)2, NH(C1-3alkilenfenil); q je 1 ili 2, te njegove farmaceutski prihvatljive soli, pod uvjetom da je bar jedan od R7 i R8 različit od 6-halo ili 6,7-dimetoksi skupina i da je R9 različiti od 4-klorfenil.
12. Metoda prema zahtjevu 11, naznačena time što je spoj odabran iz skupa kojega sačinjavaju: 3-(2-izopropilfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-3-(2-fluorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-fluorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfan-ilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-metoksifenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil-3H-kinazolin-4-on; 3-(2,6-diklorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-6-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(3-metoksifenil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-benzil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-butil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-7-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-morfolin-4-il-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on, acetatna sol; 8-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-6,7-difluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-metoksifenil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 6-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazol in-4-on; 3-(3-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-piridin-4-il-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-trifluormetil-3H-kinazolin-4-on; 3-benzil-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil )-3H-kinazolin-4-on, acetatna sol; 3-(2-klorfenil)-6-hidroksi-2-(9H-purin-6-ilsulfan-ilmetil)-3H-kinazolin-4-on; etilni ester [5-fluor-4-okso-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-4H-kinazolin-3-il]octene kiseline; 3-(2,4-dimetoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-bifenil-2-il-5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-izopropilfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-bifenil-2-il-5-klor-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-3-(2-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-fluorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-fluorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-8-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-fluor-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-benzil-5-fluor-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-butil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-morfolin-4-il-3H-kinazolin-4-on;• 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-7-fluor-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-2-(9H-.purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-fenil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-izopropilfenil)-3H-kinazolin-4-on; i 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on.
13. Metoda narušavanja funkcije leukocita, naznačena time što obuhvaća kontakt leukocita sa spojem sljedeće strukture [image] gdje je A proizvoljno supstituiran monociklički ili biciklički prstenasti sustav koji sadrži bar dva atoma dušika, pri čemu je bar jedan prstenasti sustav aromatski; X je odabran iz skupa kojega sačinjavaju CHRb, CH2CHRb i CH=C(Rb); Y je odabran iz skupa kojega sačinjavaju ništa, S, SO, SO2, NH, O, C(=O), OC (=O), C(=O)O i NHC(=O)CH2S; R1 i R2, neovisno, odabrani su iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, aril, heteroaril, halogen, NHC(=O)C1-3alkilenN(Ra)2, NO2, ORa, OCF3, N(Ra)2, CN, OC(=O)Ra, C(=O)Ra, C(=O)ORa, arilORb, Het, NRaC(=O)C1-3alkilenC(=O)ORa, arilOC1-3alkilenN(Ra)2, arilOC(=O)Ra, C1-4alkilenC(=O)ORa, OC1-4alkilenC(=O)ORa, C1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORa, C(=O)NRaSO2Ra, C1-4alkilenN(Ra)2, C2-6alkenilenN(Ra)2, C(=O)NRaC1-4alkilenORa, C(=O)NRaC1-4alkilenHet, OC2-4alkilenN(Ra)2, OC1-4alkilenCH(ORb)CH2N(Ra)2, OC1-4alkilenHet, OC2-4alkilenORa, OC2-4alkilenNRaC(=O)ORa, NRaC1-4alkilenN(Ra)2, NRaC(=O)Ra, NRaC(=O)N(Ra)2, N(SO2C1-4alkil)2, NRa(SO2C1-4alkil), SO2N(Ra)2, OSO2CF3, C1-3alkilenaril, C1-4alkilenHet, C1-6alkilenOR13, C1-3alkilenN(Ra)2, C(=O)N(Ra)2, NHC(=O)C1-C3alkilen-aril, C3-8cikloalkil, C3-8heterocikloalkil, aril-OC1-3alkilenN(Ra)2, arilOC(=O)Rb, NHC(=O)C1-3alkilen-C3-8heterocikloalkil, NHC(=O)C1-3alkilenHet, OC1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORb, C(=O)C1-4alkilenHet, te NHC(=O)haloC1-6alkil; ili R1 i R2 zajedno čine 3- ili 4-članu alkilensku ili alkenilensku lančastu komponentu 5- ili 6-članog prstena, koja proizvoljno sadrži bar jedan heteroatom; R3 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju proizvoljno supstituirani vodik, C1-6alkil, C3-8ciklo-alkil, C3-8heterocikloalkil, C1-4alkilencikloalkil, C2-6alkenil, C1-3alkilenaril, arilC1-3alkil, C(=O)Ra, aril, heteroaril, C(=O)ORa, C(=O)N(Ra)2, C(=S)N(Ra)2, SO2Ra, SO2N(Ra)2, S(=O)Ra, S(=O)N(Ra)2, C(=O)NRaC1-4alkilenORa, C(=O)NRaC1-4alkilenHet, C(=O)C1-4alkilenaril, C(=O)C1-4alkilenheteroaril, C1-4alkilenaril proizvoljno supstituiran s jednim ili više atoma halogena, SO2N(Ra)2, N(Ra)2, C(=O)ORa, NRaSO2CF3, CN, NO2, C(=O)Ra, ORa, C1-4alkilenN(CRa)2 te OC1-4alkilenN(Ra)2, C1-4-alkilenheteroaril, C1-4alkilenHet, C1-4alkilenC(=O)C1-4alkilenaril, C1-4alkilenC(=O)C1-4alkilenheteroaril, C1-4alkilenC(=O)Het, C1-4alkilenC(=O)N(Ra)2, C1-4alkilenORa, C1-4alkilenNRaC(=O)Ra, C1-4alkilenO-C1-4alkilenORa, C1-4alkilenN(Ra)2, C1-4alkilenC (=O)-ORa, te C1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORa; Ra je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, C3-8cikloalkil, C3-8heterociklo-alkil, C1-3alkilenN(Ra)2, aril, arilC1-3alkil, C1-3alkilenaril, heteroaril, heteroarilC1-3alkil, te C1-3alkilenheteroaril; ili dvije Ra skupine zajedno sačinjavaju 5- ili 6-člani prsten, koji proizvoljno sadrži bar jedan heteroatom; Rb je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, aril, heteroaril, arilC1-3alkil, heteroarilC1-3alkil, C1-3alkilenaril, te C1-3alkilenheteroaril; Het je 5- ili 6-člani heterociklički prsten, zasićen ili djelomično ili potpuno nezasićen, koji sadrži bar jedan heteroatom koji je odabran iz skupa kojega sačinjavaju kisik, dušik i sumpor, te koji je proizvoljno supstituiran s C1-4alkil ili C(=O)ORa; te njihove farmaceutski prihvatljive soli i solvati, u količini koja je dovoljna da inhibira aktivnost fosfatidilinozitol 3-kinaze delta u navedenim leukocitima.
14. Metoda prema zahtjevu 13, naznačena time što je spoj odabran iz skupa kojega sačinjavaju: 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-6,7-dimetoksi-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-o-ilmetil)-6-brom-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-o-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-7-fluor-3H-guinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-6-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-fluor-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-o-ilmetil)-5-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-8-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-bifenil-2-il-5-klor-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-3-(2-fluorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-fluorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 3-bifenil-2-il-5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-3-(2-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-6,7-dimetoksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 6-brom-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-8-trifluormetil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-benzo[g]kinazolin-4-on; 6-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 8-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-7-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-7-nitro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-6-hidroksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-6,7-difluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-6-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-izopropilfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-fluorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-metoksifenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(2-amino-9Jf-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-ciklopropil-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 3-ciklopropilrnetil-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-ciklopropilmetil-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 2-(2-amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-ciklopropilmetil-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-3-fenetil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(2-amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-5-metil-3-fenetil-3H-kinazolin-4-on; 3-ciklopentil-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanil-metil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-ciklopentil-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorpiridin-3-il)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorpiridin-3-il)-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 3-metil-4-[5-metil-4-okso-2-(9H-purin-6-ilsulfanil-metil)-4H-kinazolin-3-il]-benzojeva kiselina 3-ciklopropil-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanil-metil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-ciklopropil-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-3-(4-nitrobenzil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-cikloheksil-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanil-metil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-cikloheksil-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 2-(2-amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-ciklo-heksil-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-3-(E-2-fenilciklopropil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-5-fluor-2-[(9H-purin-6-ilamino)-metil]-3H-kinazolin-4-on; 2-[(2-amino-9H-purin-6-ilamino)metil]-3-(2-klorfenil)-5-fluor-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-2-[(9H-purin-6-ilamino)metil]-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-[(2-amino-9H-purin-6-ilamino)metil]-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-[(2-fluor-9H-purin-6-ilamino)metil]-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; (2-klorfenil)-dimetilamino-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 5-(2-benziloksietoksi)-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-5-fluor-4-okso-3,4-dihidro-kinazolin-2-ilmetil ester 6-aminopurin-9-karboksilne kiseline N-[3-(2-klorfenil)-5-fluor-4-okso-3,4-dihidro-kinazolin-2-ilmetil]-2-(9H-purin-6-ilsulfanil)-acetamid 2-[1-(2-fluor-9H-purin-6-ilamino) etil-]-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-2-[1-(9H-purin-6-ilamino)etil]-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-dimetilaminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-2-(2-metil-6-okso-1,6-dihidro-purin-7-ilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-2-(2-metil-6-okso-1,6-dihidro-purin-9-ilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(amino-dimetilaminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(2-amino-9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(4-amino-1,3,5-triazin-2-ilsulfanilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-2-(7-metil-7H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-2-(2-okso-1,2-dihidro-pirimidin-4-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-2-purin-7-ilmetil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-2-purin-9-ilmetil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-2-(9-metil-9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(2,6-diamino-pirimidin-4-ilsulfanilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3Jf-kinazolin-4-on; 5-metil-2-(5-metil-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidin-7-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-2-(2-metilsulfanil-9H-purin-6-ilsulfanil-metil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(2-hidroksi-9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-2-(1-metil-1H-imidazol-2-ilsulfanil-metil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-3-o-tolil-2-(1H-[1,2,4]triazol-3-ilsulfan-ilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(2-amino-6-klor-purin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-7-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(7-amino-1,2, 3-triazolo [4, 5-d]'pirimidin-3-il-metil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(7-amino-1, 2, 3-triazolo [4, 5-d]-pirimidin-1-il-metil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-amino-9H-purin-2-ilsulfanilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(2-amino-6-etilamino-pirimidin-4-ilsulfanil-metil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(3-amino-5-metilsulfanil-1,2,4-triazol-1-il-metil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(5-amino-3-metilsulfanil-1,2,4-triazol-1-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-2-(6-metilaminopurin-9-illmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-benzilaminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(2,6-diaminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 3-izobutil-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; N-{2-[5-Metil-4-okso-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-4H-kinazolin-3-il]-fenil}-acetamid; 5-metil-3-(E-2-metil-cikloheksil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-[5-metil-4-okso-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-4H-kinazolin-3-il]-benzojeva kiselina 3-{2-[(2-dimetilaminoetil)metilamino]fenil}-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-5-metoksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-5-(2-morfolin-4-il-etilamino)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-benzil-5-metoksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on.
15. Metoda za suzbijanje zdravstvenog stanja kojim upravlja aktivnost PI3Kδ u leukocitima, naznačena time što obuhvaća primjenu životinji kojoj je to potrebno terapeutski učinkovite količine spoja koji selektivno inhibira aktivnost fosfatidil-inozitol 3-kinaze delta u navedenim leukocitima relativno u odnosu na ostale izoforme PI3K tipa I u staničnoj analizi.
16. Metoda prema zahtjevu 15, naznačena time što je navedeno zdravstveno stanje karakterizirano nepoželjnom funkcijom neutrofila koja je odabrana iz skupa kojega sačinjavaju stimulirano otpuštanje superoksida, stimulirana egzocitoza i kemotaktična migracija.
17. Metoda prema zahtjevu 16, naznačena time što su fagocitna aktivnost ili uništavanje bakterija što ih vrše neutrofili, praktički nepromijenjeni.
18. Metoda za narušavanje funkcije osteoklasta, naznačena time što obuhvaća kontakt oteoklasta sa spojem koji selektivno inhibira aktivnost fosfatidilinozitol 3-kinaze delta u navedenim osteoklastima relativno u odnosu na ostale izoforme PI3K tipa I u staničnoj analizi.
19. Metoda prema zahtjevu 18, naznačena time što navedeni spoj ima sljedeću strukturu [image] gdje je Y odabran iz skupa kojega sačinjavaju ništa, S i NH; R7 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, halogen, OH, OCH3, CH3 i CF3; R8 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, OCH3 i halogen; ili R7 i R8 zajedno s C-6 i C-7 kinazolinskog prstenastog sustava definiraju 5- ili 6-člani aromatski prsten koji proizvoljno sadrži jedan ili više atoma O, N ili S; R9 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju C1-C6alkil, fenil, halofenil, alkilfenil, bifenil, benzil, piridinil, 4-metilpiperazinil, C(=O)-OC2H5 i morfolinil; Rd, neovisno, odabran je iz skupa kojega sačinjavaju NH2, halogen, C1-3alkil, S(C1-3alkil), OH, NH(C1-3alkil), N(C1-3alkil)2, NH(C1-3alkilenfenil); q je 1 ili 2, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i solvati, pod uvjetom da je bar jedan od R7 i R8 različit od 6-halo ili 6,7-dimetoksi skupina te uz daljnji uvjet da je R9 različit od 4-klorfenil.
20. Metoda prema zahtjevu 18, naznačena time što navedeni spoj sadrži bar jednu vrstu koja se veže za kost.
21. Metoda za suzbijanje poremećaja resorpcije kostiju u životinje kojoj je to potrebno, naznačena time što obuhvaća primjenu životinji kojoj je to potrebno terapeutski učinkovite količine spoja koji inhibira aktivnost fosfatidilinozitol 3-kinaze delta (PI3Kδ) u osteoklastima životinje realtivno u odnosu na ostale izoforme PI3K tipa I u staničnoj analizi.
22. Metoda prema zahtjevu 21, naznačena time što je poremećaj resorpcije kostiju osteoporoza.
23. Metoda za inhibiranje rasta ili proliferacije kroničnih mijelognih stanica leukemije, naznačena time što obuhvaća kontakt stanica sa spojem koji selektivno inhibira aktivnost fosfatidilinozitol 3-kinaze delta relativno u odnosu na ostale izoforme PI3K tipa I u staničnoj analizi.
24. Metoda prema zahtjevu 23, naznačena time što navedeni spoj ima sljedeću strukturu [image] gdje je R7 odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, halogen, OH, OCH3, CH3 i CF3; R8 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, OCH3 i halogen; ili R7 i R8 zajedno s C-6 i C-7 kinazolinskog prstenastog sustava definiraju 5- ili 6-člani aromatski prsten koji sadrži jedan ili više atoma O, N ili S; R9 is selected from the-group, consisting of C-1-Cgalkil, fenil, halofenil, alkilfenil, biphen-il, benzil, piridinil, 4-metilpiperazinil, acetic acid etil ester i morfolinil; X je NH ili S; i njegove farmaceutski prihvatljive soli i solvati, pod uvjetom da se bar jedan od R7 i R8 razlikuje od 6-halo ili 6,7-dimetoksi skupina i daljnjim uvjetom da se R9 razlikuje od 4-klor-fenil.
25. Metoda za inhibiranje aktivnosti kinaze fosfatidilinozitol 3-kinaze delta polipeptida, naznačena time što obuhvaća kontakt polipeptida sa spojem sljedeće strukture [image] gdje je A proizvoljno supstituiran monociklički ili biciklički prstenasti sustav koji sadrži bar dva atoma dušika, pri čemu je bar jedan prstenasti sustav aromatski; X je odabran iz skupa kojega sačinjavaju CHRb, CH2CHRb i CH=C(Rb); Y je odabran iz skupa kojega sačinjavaju ništa, S, SO, SO2, NH, O, C(=O), OC (=O), C(=O)O i NHC(=O)CH2S; R1 i R2, neovisno, odabrani su iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, aril, heteroaril, halogen, NHC(=O)C1-3alkilenN(Ra)2, NO2, ORa, OCF3, N(Ra)2, CN, OC(=O)Ra, C(=O)Ra, C(=O)ORa, arilORb, Het, NRaC(=O)C1-3alkilenC(=O)ORa, arilOC1-3alkilenN(Ra)2, arilOC(=O)Ra, C1-4alkilenC(=O)ORa, OC1-4alkilenC(=O)ORa, C1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORa, C(=O)NRaSO2Ra, C1-4alkilenN(Ra)2, C2-6alkenilenN(Ra)2, C(=O)NRaC1-4alkilenORa, C(=O)NRaC1-4alkilenHet, OC2-4alkilenN(Ra)2, OC1-4alkilenCH(ORb)CH2N(Ra)2, OC1-4alkilenHet, OC2-4alkilenORa, OC2-4alkilenNRaC(=O)ORa, NRaC1-4alkilenN(Ra)2, NRaC(=O)Ra, NRaC(=O)N(Ra)2, N(SO2C1-4alkil)2, NRa(SO2C1-4alkil), SO2N(Ra)2, OSO2CF3, C1-3alkilenaril, C1-4alkilenHet, C1-6alkilenOR13, C1-3alkilenN(Ra)2, C(=O)N(Ra)2, NHC(=O)C1-C3alkilen-aril, C3-8cikloalkil, C3-8heterocikloalkil, aril-OC1-3alkilenN(Ra)2, arilOC(=O)Rb, NHC(=O)C1-3alkilen-C3-8heterocikloalkil, NHC(=O)C1-3alkilenHet, OC1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORb, C(=O)C1-4alkilenHet, te NHC(=O)haloC1-6alkil; ili R1 i R2 zajedno čine 3- ili 4-članu alkilensku ili alkenilensku lančastu komponentu 5- ili 6-članog prstena, koja proizvoljno sadrži bar jedan heteroatom; R3 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju proizvoljno supstituirani vodik, C1-6alkil, C3-8ciklo-alkil, C3-8heterocikloalkil, C1-4alkilencikloalkil, C2-6alkenil, C1-3alkilenaril, arilC1-3alkil, C(=O)Ra, aril, heteroaril, C(=O)ORa, C(=O)N(Ra)2, C(=S)N(Ra)2, SO2Ra, SO2N(Ra)2, S(=O)Ra, S(=O)N(Ra)2, C(=O)NRaC1-4alkilenORa, C(=O)NRaC1-4alkilenHet, C(=O)C1-4alkilenaril, C(=O)C1-4alkilenheteroaril, C1-4alkilenaril proizvoljno supstituiran s jednim ili više atoma halogena, SO2N(Ra)2, N(Ra)2, C(=O)ORa, NRaSO2CF3, CN, NO2, C(=O)Ra, ORa, C1-4alkilenN(CRa)2 te OC1-4alkilenN(Ra)2, C1-4-alkilenheteroaril, C1-4alkilenHet, C1-4alkilenC(=O)C1-4alkilenaril, C1-4alkilenC(=O)C1-4alkilenheteroaril, C1-4alkilenC(=O)Het, C1-4alkilenC(=O)N(Ra)2, C1-4alkilenORa, C1-4alkilenNRaC(=O)Ra, C1-4alkilenO-C1-4alkilenORa, C1-4alkilenN(Ra)2, C1-4alkilenC (=O)-ORa, te C1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORa; Ra je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, C3-8cikloalkil, C3-8heterociklo-alkil, C1-3alkilenN(Ra)2, aril, arilC1-3alkil, C1-3alkilenaril, heteroaril, heteroarilC1-3alkil, te C1-3alkilenheteroaril; ili dvije Ra skupine zajedno sačinjavaju 5- ili 6-člani prsten, koji proizvoljno sadrži bar jedan heteroatom; Rb je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, aril, heteroaril, arilC1-3alkil, heteroarilC1-3alkil, C1-3alkilenaril, te C1-3alkilenheteroaril; Het je 5- ili 6-člani heterociklički prsten, zasićen ili djelomično ili potpuno nezasićen, koji sadrži bar jedan heteroatom koji je odabran iz skupa kojega sačinjavaju kisik, dušik i sumpor, te koji je proizvoljno supstituiran s C1-4alkil ili C(=O)ORa; te njihove farmaceutski prihvatljive soli i solvati,
26. Metoda prema zahtjevu 25, naznačena time što je R1 odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, halogen, OH, OCH3, CH3 i CF3; i R3 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju C1-6alkil, fenil, halofenil, alkilfenil, bifenil, benzil, piridinil , 4-metilpiperazinil , C(=O)C2H5 i morfolinil; pri čemu je bar jedan od R1 i R2 različiti od 6-halo ili 6, 7-dimetoksi i R3 je različit od 4-klorfenil.
27. Spoj sljedeće strukture, [image] naznačen time što Y je odabran iz skupa kojega sačinjavaju ništa, S i NH; R4 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, halogen, NO2, OH, OCH3, CH3 i CF3; R5 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, OCH3 i halogen; ili R4 i R5 zajedno s C-6 i C-7 kinazolinskog prstenastog sustava definiraju 5- ili 6-člani aromatski prsten koji proizvoljno sadrži jedan ili više atoma O, N ili S; R6 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju C1-C6alkil, fenil, halofenil, alkoksifenil, alkilfenil, bifenil, benzil, piridinil, 4-metilpiperazinil, C(=O)OC2H5 i morfolinil ; Rd, neovisno, odabran je iz skupa kojega sačinjavaju NH2, halogen, C1-3alkil, S(C1-3alkil), OH, NH(C1-3alkil), N(C1-3alkil)2, NH(C1-3alkilenfenil), i [image] q je 1 ili 2; te njegove farmaceutski prihvatljive soli i solvati, pod uvjetom da bar jedan od R4 i R5 nije vodik kada je R6 jednako fenil ili 2-klorfenil.
28. Spoj prema zahtjevu 27, naznačen time što je odabran iz sljedećeg skupa: 3-(2-izopropilfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-3-(2-fluorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-fluorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-metoksifenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2,6-diklorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-6-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-benzil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-butil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-7-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-morfolin-4-il-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on, acetatna sol; 8-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-6,7-difluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(3-tnetoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 6-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(3-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-piridin-4-il-3H-kinazolin-4-on,- 3-(2-klorfenil)-8-trifluormetil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-benzil-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on, acetatna sol; 3-(2-klorfenil)-6-hidroksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; etilni ester [5-fluor-4-okso-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-4H-kinazolin-3-il]octene kiseline; 3-(2-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-bifenil-2-il-5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-3-(2-metoksifenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-izopropilfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-bifenil-2-il-5-klor-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-fluorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-fluorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-8-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-metil-3H-kinazol-in-4-on-; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-fluor-3H-kinazolin-4-on; : 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-benzil-5-fluor-3H-kinazolin-4-on;- 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-butil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-morfolin-4-il-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-7-fluor-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-6-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(4-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-6,7-dimetoksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-7-nitro-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-6-brom-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-6,7-dimetoksi-3H-kinazolin-4-on; 6-brom-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-benzo[g]kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-o-tolil-3H-guinazolin-4-on; and 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-metoksi-fenil)-3H-kinazolin-4-on.
29. Spoj prema zahtjevu 27, naznačen time što je R4 odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, halogen, OH, OCH3, CH3 i CF3; R6 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju C1-C6alkil, fenil, halofenil, alkilfenil, bifenil, benzil, piridinil, 4-metilpiperazinil, C(=O)-OC2H5 i morfolinil; gdje (a) R4 i R5, neovisno, razlikuju se od 6-halo ili 6,7-dimetoksi skupina; (b) R6 se razlikuje od 4-klorfenil; i (c) bar jedan od R4 i R5 razlikuje se od H gdje je R6 jednako fenil ili 2-klorfenil te X je S.
30. Spoj prema zahtjevu 28, naznačen time što je odabran iz skupa kojega sačinjavaju: 3-(2-izopropilfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsul-fanylmetil)-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-3-(2-fluorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-fluorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2,6-diklorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-6-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 5-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-5-metil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-benzil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-butil-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-7-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-morfolin-4-il-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on, acetate salt; 8-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-6,7-difluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 6-klor-3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(3-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3-piridin-4-il-3H-kinazolin-4-on; 3-(2-klorfenil)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-trifluormetil-3H-kinazolin-4-on; 3-benzil-5-fluor-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; 3-(4-metilpiperazin-1-il)-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on, acetatna ol; 3-(2-klorfenil)-6-hidroksi-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-3H-kinazolin-4-on; etilni ester [5-fluor-4-okso-2-(9H-purin-6-ilsulfanilmetil)-4H-kinazolin-3-il]octene kiseline; 3-bifenil-2-il-5-klor-2-(9H-purin-6-ilsulfanil-metil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-izopropilfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-metil-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-bifenil-2-il-5-klor-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-fluorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-fluorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-8-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-(2-klorfenil)-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-metil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-5-fluor-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-benzil-5-fluor-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-butil-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-morfolin-4-il-3H-kinazolin-4-on; 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-3-(2-klorfenil)-7-fluor-3H-kinazolin-4-on; i 2-(6-aminopurin-9-ilmetil)-5-klor-3-o-tolil-3H-kinazolin-4-on.
31. Spoj sljedeće strukturne formule [image] naznačen time što A je proizvoljno supstituiran monociklički ili biciklički prstenasti sustav koji sadrži bar dva atoma dušika, pri čemu je bar jedan prsten sustava aromatski; X je odabran iz skupa kojega sačinjavaju CHRb, CH2CHRb i CH=C(Rb); Y je odabran iz skupa kojega sačinjavaju ništa, S, SO, SO2, NH, O, C(=O), OC(=O), C(=O)O i NHC(=O)CH2S; R1 i R2, neovisno, odabrani su iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, aril, heteroaril, halogen, NHC(=O)C1-3alkilenN(Ra)2, NO2, ORa, OCF3, N(Ra)2, CN, OC(=O)Ra, C(=O)Ra, C(=O)ORa, arilORb, Het, NRaC(=O)C1-3alkilenC(=O)ORa, arilOC1-3alkilenN(Ra)2, arilOC(=O)Ra, C1-4alkilenC(=O)ORa, OC1-4alkilenC(=O)ORa, C1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORa, C(=O)NRaSO2Ra, C1-4alkilenN(Ra)2, C2-6alkenilenN(Ra)2, C(=O)NRaC1-4alkilenORa, C(=O)NRaC1-4alkilenHet, OC2-4alkilenN(Ra)2, OC1-4alkilenCH(ORb)CH2N(Ra)2, OC1-4alkilenHet, OC2-4alkilenORa, OC2-4alkilenNRaC(=O)ORa, NRaC1-4alkilenN(Ra)2, NRaC(=O)Ra, NRaC(=O)N(Ra)2, N(SO2C1-4alkil)2, NRa(SO2C1-4alkil), SO2N(Ra)2, OSO2CF3, C1-3alkilenaril, C1-4alkilenHet, C1-6alkilenORb, C1-3alkilenN(Ra)2, C(=O)N(Ra)2, NHC(=O)C1-C3alkilen-aril, C3-8cikloalkil, C3-8heterocikloalkil, aril-OC1-3alkilenN(Ra)2, arilOC(=O)Rb, NHC(=O)C1-3alkilen-C3-8heterocikloalkil, NHC(=O)C1-3alkilenHet, OC1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORb, C(=O)C1-4alkilenHet, te NHC(=O)haloC1-6alkil; ili R1 i R2 zajedno čine 3- ili 4-članu alkilensku ili alkenilensku lančastu komponentu 5- ili 6-članog prstena, koja proizvoljno sadrži bar jedan heteroatom; R3 je odabran iz skupa kojega sačinjavaju proizvoljno supstituirani vodik, C1-6alkil, C3-8ciklo-alkil, C3-8heterocikloalkil, C1-4alkilencikloalkil, C2-6alkenil, C1-3alkilenaril, arilC1-3alkil, C(=O)Ra, aril, heteroaril, C(=O)ORa, C(=O)N(Ra)2, C(=S)N(Ra)2, SO2Ra, SO2N(Ra)2, S(=O)Ra, S(=O)N(Ra)2, C(=O)NRaC1-4alkilenORa, C(=O)NRaC1-4alkilenHet, C(=O)C1-4alkilenaril, C(=O)C1-4alkilenheteroaril, C1-4alkilenaril proizvoljno supstituiran s jednim ili više atoma halogena, SO2N(Ra)2, N(Ra)2, C(=O)ORa, NRaSO2CF3, CN, NO2, C(=O)Ra, ORa, C1-4alkilenN(CRa)2 te OC1-4alkilenN(Ra)2, C1-4-alkilenheteroaril, C1-4alkilenHet, C1-4alkilenC(=O)C1-4alkilenaril, C1-4alkilenC(=O)C1-4alkilenheteroaril, C1-4alkilenC(=O)Het, C1-4alkilenC(=O)N(Ra)2, C1-4alkilenORa, C1-4alkilenNRaC(=O)Ra, C1-4alkilenO-C1-4alkilenORa, C1-4alkilenN(Ra)2, C1-4alkilenC (=O)-ORa, te C1-4alkilenOC1-4alkilenC(=O)ORa; Ra je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, C3-8cikloalkil, C3-8heterociklo-alkil, C1-3alkilenN(Ra)2, aril, arilC1-3alkil, C1-3alkilenaril, heteroaril, heteroarilC1-3alkil, te C1-3alkilenheteroaril; ili dvije Ra skupine uzete zajedno sačinjavaju 5- ili 6-člani prsten, koji proizvoljno sadrži bar jedan heteroatom; Rb je odabran iz skupa kojega sačinjavaju vodik, C1-6alkil, aril, heteroaril, arilC1-3alkil, heteroarilC1-3alkil, C1-3alkilenaril, te C1-3alkilenheteroaril; Het je 5- ili 6-člani heterociklički prsten, zasićen ili djelomično ili potpuno nezasićen, koji sadrži bar jedan heteroatom koji je odabran iz skupa kojega sačinjavaju kisik, dušik i sumpor, te koji je proizvoljno supstituiran s C1-4alkil ili C(=O)ORa; te njihove farmaceutski prihvatljive soli i solvati, pod uvjetom ako je X-Y jednako CH2S, onda se R3 razlikuje od [image] [image] [image] ako je X-Y jednako CH2S, onda se R3 razlikuje od-CH2CH(OH)CH2OH supstituiranog fenila.
32. Spoj prema zahtjevu 31, naznačen time što je X odabran iz skupa kojega sačinjavaju CH2, CH2CH2, CH=CH, CH(CH3), CH2CH(CH3) i C(CH3)2.
33. Spoj prema zahtjevu 31, naznačen time što je Y odabran iz skupa kojega sačinjavaju ništa, S i NH.
34. Spoj prema zahtjevu 31, naznačen time što je A prstenasti sustav odabran iz skupa kojega sačinjavaju imidazolil, pirazolil, 1,2,3-triazolil, piridizinil, pirimidinil, pirazinil, 1,3,5-triazinil, purinil, cinolinil, ftalazinil, kinazolinil, kinoksalinil, 1,8-naftiridinil, pteridinil, 1H-indazolil i benzimidazolil.
35. Spoj prema zahtjevu 31, naznačen time što je A prstenasti sustav koji je odabran iz skupa kojega sačinjavaju [image] [image]
36. Spoj prema zahtjevu 31, naznačen time što je A prstenasti sustav koji je supstituiran s jednim do tri supstituenta koji su odabrani iz skupa kojega sačinjavaju N(Ra)2, halogen, C1-3alkil, S(C1-3alkil), ORa, halogen, i [image]
37. Spoj prema zahtjevu 31, naznačen time što je A prstenasti sustav koji je supstituiran s jednim do tri supstituenta koji su odabrani iz skupa kojega sačinjavaju NH2, NH(CH3), N(CH3)2, NHCH2C6H5, NH(C2H5), Cl, F, CH3, SCH3, OH, i [image]
38. Spoj prema zahtjevu 31, naznačen time što su R1 i R2, neovisno, odabrani iz skupa kojega sačinjavaju vodik, ORa, halogen, C1-6alkil, CF3, NO2, N(Ra)2, NRC1-3alkilenN(Ra)2 i OC1-3alkilenORa. Specifični supstituenti obuhvaćaju, ali nisu ograničeni na H, OCH3, Cl, Br, F, CH3, CF3, NO2, OH, N(CH3)2, [image] i O(CH2)2OCH2C6H5.
39. Spoj prema zahtjevu 31, naznačen time što R1 i R2 zajedno mogu sačinjavati 5-ili 6-člani prsten.
40. Spoj prema zahtjevu 31, naznačen time što je R3 odabran iz skupa kojega sačinjavaju C1-6alkil, aril, heteroaril, C3-8cikloalkil, C3-8heterocikloalkil, C(=O)ORa, C1-4alkilenHet, C1-4alkilencikloalkil, C1-4alkilenaril, C1-4alkilenC(=O)C1-4alkilenaril, C1-4alkilenC(=O)ORa, C1-4alkilenC (=O)N(Ra)2, C1-4alkilenC(=O)Het, C1-4alkilenN(Ra)2 i C1-4alkilenNRaC(=O)Ra.
41. Spoj prema zahtjevu 31, naznačen time što je R3 odabran iz skupa kojega sačinjavaju ORa, C1-6alkil, aril, heteroaril, NO2, N(Ra)2, NRaC(=O)Ra, C(=O)OC2HS, CH2CH(CH3)2, [image] [image]
42. Spojevi prema zahtjevu 31, naznačeni time što je R3 supstituiran supstituentom koji je odabran iz skupa kojega sačinjavaju halogen, ORa, C1-6alkil, aril, heteroaril, NO2, N(Ra)2, NRaSO2CF3, NRaC(=O)Ra, C(=O)ORa, SO2N(Ra)2, CN, C(=O)Ra, C1-4alkilenN(Ra)2, OC1-4alkilenN(Ra)2 i N(Ra)C1-4alkilenN(Ra)2.
43. Spojevi prema zahtjevu 31, naznačeni time što je R3 supstituiran supstituentom koji je odabran iz skupa kojega sačinjavaju Cl, F, CH3, CH(CH3)2, OCH3, C6H5, NO2, NH2, NHC(=O)CH3, CO2H i N(CH3)CH2CH2N(CH3)2.
HRP20020838 2000-04-25 2002-10-21 Inhibitors of human phosphatidyl-inositol 3-kinase delta HRP20020838A2 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US19965500P 2000-04-25 2000-04-25
US23805700P 2000-10-05 2000-10-05
PCT/US2001/013315 WO2001081346A2 (en) 2000-04-25 2001-04-24 Inhibitors of human phosphatidyl-inositol 3-kinase delta

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HRP20020838A2 true HRP20020838A2 (en) 2004-12-31
HRP20020838B1 HRP20020838B1 (hr) 2012-12-31

Family

ID=26894992

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HRP20020838 HRP20020838A2 (en) 2000-04-25 2002-10-21 Inhibitors of human phosphatidyl-inositol 3-kinase delta

Country Status (27)

Country Link
US (2) US6518277B1 (hr)
EP (3) EP1278748B1 (hr)
JP (1) JP4642309B2 (hr)
KR (1) KR100785363B1 (hr)
CN (1) CN1440408B (hr)
AT (1) ATE502941T1 (hr)
AU (2) AU5566701A (hr)
BR (1) BRPI0110371B8 (hr)
CA (1) CA2406278C (hr)
CY (1) CY1117672T1 (hr)
DE (1) DE60144277D1 (hr)
DK (3) DK1939203T3 (hr)
EA (1) EA008241B1 (hr)
ES (3) ES2567260T3 (hr)
GE (1) GEP20084317B (hr)
HK (1) HK1053308A1 (hr)
HR (1) HRP20020838A2 (hr)
HU (1) HU230554B1 (hr)
IL (3) IL152275A0 (hr)
IS (1) IS2822B (hr)
MX (1) MXPA02010618A (hr)
NO (2) NO329136B1 (hr)
NZ (1) NZ522076A (hr)
PT (3) PT3029041T (hr)
RS (1) RS51458B (hr)
SI (2) SI3029041T1 (hr)
WO (1) WO2001081346A2 (hr)

Families Citing this family (213)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7230000B1 (en) 1999-10-27 2007-06-12 Cytokinetics, Incorporated Methods and compositions utilizing quinazolinones
US6545004B1 (en) * 1999-10-27 2003-04-08 Cytokinetics, Inc. Methods and compositions utilizing quinazolinones
US7671200B2 (en) 1999-10-27 2010-03-02 Cytokinetics, Inc. Quinazolinone KSP inhibitors
US6667300B2 (en) * 2000-04-25 2003-12-23 Icos Corporation Inhibitors of human phosphatidylinositol 3-kinase delta
US6403588B1 (en) 2000-04-27 2002-06-11 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Imidazopyridine derivatives
US6608053B2 (en) 2000-04-27 2003-08-19 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Fused heteroaryl derivatives
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7829084B2 (en) * 2001-01-17 2010-11-09 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding constructs and methods for use thereof
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
IL149462A0 (en) * 2001-05-09 2002-11-10 Warner Lambert Co Method of treating or inhibiting neutrophil chemotaxis by administering a mek inhibitor
US6689782B2 (en) * 2001-07-16 2004-02-10 Essential Therapeutics, Inc. Fungal efflux pump inhibitors
WO2003027320A2 (en) * 2001-09-24 2003-04-03 University Of Aarhus Methods for diagnosis and treatment of diseases associated with altered expression of pik3r1
US20060067938A1 (en) * 2001-10-26 2006-03-30 Sherif Daouti Methods for the treatment of osteoarthritis and compositions thereof
WO2003039460A2 (en) 2001-11-07 2003-05-15 Merck & Co., Inc. Mitotic kinesin inhibitors
US7009049B2 (en) * 2002-02-15 2006-03-07 Cytokinetics, Inc. Syntheses of quinazolinones
MY156407A (en) 2002-02-28 2016-02-26 Novartis Ag 5-phenylthiazole derivatives and use as p13 kinase inhibitors
US7381730B2 (en) * 2002-03-15 2008-06-03 Bristol-Myers Squibb Company 3-arylquinazoline derivatives as selective estrogen receptor beta modulators
AU2003226252A1 (en) 2002-04-04 2003-10-20 Cv Therapeutics, Inc. Compounds dor increasing abca-1 expression useful for treating coronary artery disease and atherosclerosis
EP1503993A4 (en) * 2002-05-09 2006-05-03 Cytokinetics Inc COMPOUNDS, METHODS AND COMPOSITIONS
EP1553931A4 (en) * 2002-05-09 2006-08-30 Cytokinetics Inc COMPOUNDS, COMPOSITIONS AND METHODS
WO2003103575A2 (en) * 2002-05-23 2003-12-18 Cytokinetics, Inc. Compounds, compositions, and methods
JP2005538062A (ja) * 2002-06-14 2005-12-15 サイトキネティクス・インコーポレーテッド 化合物、組成物、および方法
CA2491555C (en) * 2002-07-10 2012-09-11 Massachusetts Institute Of Technology Solid-phase and solution-phase synthesis of glycosylphosphatidylinositol glycans
AU2003256805A1 (en) * 2002-07-23 2004-02-09 Cytokinetics, Inc. Compounds compositions and methods
WO2004018058A2 (en) * 2002-08-21 2004-03-04 Cytokinetics, Inc. Compounds, compositions, and methods
SI1549652T1 (sl) 2002-09-30 2009-04-30 Bayer Healthcare Ag Kondenzirani azolpirimidinski derivati
US7557115B2 (en) * 2002-09-30 2009-07-07 Cytokinetics, Inc. Compounds, compositions, and methods
US20040132732A1 (en) * 2002-10-21 2004-07-08 Wei Han Quinazolinones and derivatives thereof as factor Xa inhibitors
EP1569653A1 (en) * 2002-12-06 2005-09-07 Warner-Lambert Company LLC Benzoxazin-3-ones and derivatives thereof as inhibitors of pi3k
CA2510851A1 (en) * 2002-12-20 2004-07-08 Warner-Lambert Company Llc Benzoxazines and derivatives thereof as inhibitors of pi3ks
CA2518465A1 (en) 2003-03-25 2004-10-14 Takeda San Diego, Inc. Dipeptidyl peptidase inhibitors
US7429596B2 (en) * 2003-06-20 2008-09-30 The Regents Of The University Of California 1H-pyrrolo [2,3-D] pyrimidine derivatives and methods of use thereof
CA2534405A1 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Ulysses Pharmaceutical Products Inc. Halogenated quinazolinyl nitrofurans as antibacterial agents
CN1867560A (zh) 2003-08-13 2006-11-22 武田药品工株式会社 4－嘧啶酮衍生物及其作为肽基肽酶抑制剂的用途
WO2005016348A1 (en) * 2003-08-14 2005-02-24 Icos Corporation Method of inhibiting immune responses stimulated by an endogenous factor
US20050054614A1 (en) * 2003-08-14 2005-03-10 Diacovo Thomas G. Methods of inhibiting leukocyte accumulation
EP1697342A2 (en) * 2003-09-08 2006-09-06 Takeda Pharmaceutical Company Limited Dipeptidyl peptidase inhibitors
EP1699777B1 (en) * 2003-09-08 2012-12-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Dipeptidyl peptidase inhibitors
US7138401B2 (en) 2003-09-18 2006-11-21 Conforma Therapeutics Corporation 2-aminopurine analogs having HSP90-inhibiting activity
US20050197327A1 (en) * 2003-11-03 2005-09-08 Gustave Bergnes Compounds, compositions, and methods
US20050239809A1 (en) * 2004-01-08 2005-10-27 Watts Stephanie W Methods for treating and preventing hypertension and hypertension-related disorders
UA83416C2 (en) * 2004-02-13 2008-07-10 Баниу Фармасьютикал Ко., Лтд. Fused ring 4-oxopyrimidine derivative
EP1724271A4 (en) * 2004-02-26 2013-01-23 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd PREVENTIVE AND / OR THERAPEUTIC AGENT AGAINST NEUTROPHIC INFLAMMATORY DISEASE
UA85871C2 (uk) 2004-03-15 2009-03-10 Такеда Фармасьютікал Компані Лімітед Інгібітори дипептидилпептидази
NZ551004A (en) 2004-04-02 2010-07-30 Prana Biotechnology Ltd Neurologically-active compounds
EP1755588A1 (en) * 2004-05-06 2007-02-28 Cancer Research Technology Limited Compounds and compositions for treatment of cancer
LT2612862T (lt) * 2004-05-13 2017-01-25 Icos Corporation Chinazolinonai kaip žmogaus fosfatidilinozitol-3-kinazės delta inhibitoriai
CA2566436C (en) * 2004-05-13 2011-05-10 Vanderbilt University Phosphoinositide 3-kinase delta selective inhibitors for inhibiting angiogenesis
CA2567883A1 (en) * 2004-05-25 2005-12-15 Icos Corporation Methods for treating and/or preventing aberrant proliferation of hematopoietic cells
WO2005120511A1 (en) * 2004-06-04 2005-12-22 Icos Corporation Methods for treating mast cell disorders
KR101300546B1 (ko) * 2004-08-24 2013-09-02 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항 글리피칸 3 항체를 이용한 어쥬번트 요법
US20060079573A1 (en) * 2004-10-10 2006-04-13 Jakob Vinten-Johansen Methods and compositions for preventing vasospasm
WO2006068760A2 (en) 2004-11-19 2006-06-29 The Regents Of The University Of California Anti-inflammatory pyrazolopyrimidines
US7872124B2 (en) 2004-12-21 2011-01-18 Takeda Pharmaceutical Company Limited Dipeptidyl peptidase inhibitors
US20080287469A1 (en) * 2005-02-17 2008-11-20 Diacovo Thomas G Phosphoinositide 3-Kinase Inhibitors for Inhibiting Leukocyte Accumulation
CN101351459A (zh) * 2005-07-05 2009-01-21 万有制药株式会社 4(3h)-喹唑啉酮衍生物的制造方法
DK2298815T3 (en) 2005-07-25 2015-06-15 Emergent Product Dev Seattle B-CELL REDUCTION USING CD37 SPECIFIC AND CD20 SPECIFIC BINDING MOLECULES
ES2456000T3 (es) * 2005-08-26 2014-04-21 Merck Serono Sa Derivados de pirazina y su uso como inhibidores de PI3K
NZ566799A (en) 2005-09-14 2011-04-29 Takeda Pharmaceutical Dipeptidyl peptidase inhibitors for treating diabetes
US20070060529A1 (en) * 2005-09-14 2007-03-15 Christopher Ronald J Administration of dipeptidyl peptidase inhibitors
WO2007035629A2 (en) * 2005-09-16 2007-03-29 Takeda Pharmaceutical Company Limited Process for the preparation of pyrimidinedione derivatives
US20070087005A1 (en) 2005-10-14 2007-04-19 Lazar Gregory A Anti-glypican-3 antibody
CA2628039A1 (en) 2005-11-11 2007-05-18 Aeterna Zentaris Gmbh Novel pyridopyrazines and their use as modulators of kinases
EP1790342A1 (de) 2005-11-11 2007-05-30 Zentaris GmbH Pyridopyrazin-Derivate und deren Verwendung als Modulatoren der Signaltransduktionswege
US8217042B2 (en) 2005-11-11 2012-07-10 Zentaris Gmbh Pyridopyrazines and their use as modulators of kinases
ES2612196T3 (es) 2005-12-13 2017-05-12 Incyte Holdings Corporation Pirrolo[2,3-b]piridinas y pirrolo[2,3-b]pirimidinas sustituidas con heteroarilo como inhibidores de quinasas Janus
EP1999108A1 (en) * 2006-03-28 2008-12-10 Takeda Pharmaceutical Company Limited Preparation of (r)-3-aminopiperidine dihydrochloride
NZ571182A (en) * 2006-04-04 2010-09-30 Univ California Pyrazolo[3,4-d]pyrimidines
GB0610242D0 (en) * 2006-05-23 2006-07-05 Novartis Ag Organic compounds
SG172698A1 (en) * 2006-06-12 2011-07-28 Trubion Pharmaceuticals Inc Single-chain multivalent binding proteins with effector function
WO2008018306A1 (fr) * 2006-08-08 2008-02-14 Aska Pharmaceutical Co., Ltd. Dérivé quinazoline
SI2073810T1 (sl) * 2006-09-13 2011-12-30 Takeda Pharmaceutical Uporaba 2-6(3-amino-piperidin-1-il)-3-metil-2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin -1-ilmetil-4-fluoro-benzonitrila za zdravljenje diabetesa, raka, avtoimunskih motenj in infekcije s HIV
US8324383B2 (en) 2006-09-13 2012-12-04 Takeda Pharmaceutical Company Limited Methods of making polymorphs of benzoate salt of 2-[[6-[(3R)-3-amino-1-piperidinyl]-3,4-dihydro-3-methyl-2,4-dioxo-1(2H)-pyrimidinyl]methyl]-benzonitrile
AU2007303846B2 (en) * 2006-10-04 2011-03-10 Pfizer Products Inc. Pyrido[4,3-d]pyrimidin-4(3H)-one derivatives as calcium receptor antagonists
CN101522682A (zh) 2006-10-30 2009-09-02 诺瓦提斯公司 作为抗炎剂的杂环化合物
KR20090087027A (ko) * 2006-11-13 2009-08-14 일라이 릴리 앤드 캄파니 염증 질환 및 암의 치료를 위한 티에노피리미디논
TW200838536A (en) * 2006-11-29 2008-10-01 Takeda Pharmaceutical Polymorphs of succinate salt of 2-[6-(3-amino-piperidin-1-yl)-3-methyl-2,4-dioxo-3,4-dihydro-2H-pyrimidin-1-ylmethy]-4-fluor-benzonitrile and methods of use therefor
US8093236B2 (en) 2007-03-13 2012-01-10 Takeda Pharmaceuticals Company Limited Weekly administration of dipeptidyl peptidase inhibitors
MX342814B (es) 2007-06-13 2016-10-13 Incyte Holdings Corp Sales de inhibidor de janus cinasa (r)-3-(4-7h-pirrolo[2,3-d]pirim idin-4-il)-1h-pirazol-1-il)-3-ciclopentilpropanitrilo.
UY31137A1 (es) * 2007-06-14 2009-01-05 Smithkline Beecham Corp Derivados de quinazolina como inhibidores de la pi3 quinasa
WO2009046448A1 (en) * 2007-10-04 2009-04-09 Intellikine, Inc. Chemical entities and therapeutic uses thereof
US20090131512A1 (en) * 2007-10-31 2009-05-21 Dynavax Technologies Corp. Inhibition of type I in IFN production
AU2008321099A1 (en) * 2007-11-13 2009-05-22 Icos Corporation Inhibitors of human phosphatidyl-inositol 3-kinase delta
MY191407A (en) 2008-01-04 2022-06-27 Intellikine Llc Certain chemical entities, compositions and methods
US8193182B2 (en) 2008-01-04 2012-06-05 Intellikine, Inc. Substituted isoquinolin-1(2H)-ones, and methods of use thereof
RU2513636C2 (ru) * 2008-01-04 2014-04-20 Интелликайн ЭлЭлСи Некоторые химические структуры, композиции и способы
US8637542B2 (en) 2008-03-14 2014-01-28 Intellikine, Inc. Kinase inhibitors and methods of use
US8993580B2 (en) 2008-03-14 2015-03-31 Intellikine Llc Benzothiazole kinase inhibitors and methods of use
ES2368700T3 (es) 2008-04-11 2011-11-21 Emergent Product Development Seattle, Llc Agente inmunoterapéutico para cd37 y combinación con un agente quimioterapéutico bifuncional del mismo.
US10517839B2 (en) * 2008-06-09 2019-12-31 Cornell University Mast cell inhibition in diseases of the retina and vitreous
US20110224223A1 (en) * 2008-07-08 2011-09-15 The Regents Of The University Of California, A California Corporation MTOR Modulators and Uses Thereof
US9096611B2 (en) 2008-07-08 2015-08-04 Intellikine Llc Kinase inhibitors and methods of use
JP5731978B2 (ja) 2008-09-26 2015-06-10 インテリカイン， エルエルシー 複素環キナーゼ阻害剤
DK2358720T3 (en) 2008-10-16 2016-06-06 Univ California Heteroarylkinaseinhibitorer fused-ring
US8476431B2 (en) * 2008-11-03 2013-07-02 Itellikine LLC Benzoxazole kinase inhibitors and methods of use
US9492449B2 (en) 2008-11-13 2016-11-15 Gilead Calistoga Llc Therapies for hematologic malignancies
CN104042618B (zh) 2008-11-13 2018-02-16 吉利德卡利斯托加公司 恶性血液病的治疗
CN102271708A (zh) * 2008-11-13 2011-12-07 新兴产品开发西雅图有限公司 Cd37免疫治疗联合疗法及其用途
CA2745280A1 (en) * 2008-12-04 2010-06-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Departmen T Of Health And Human Services Phosphatidylinositol-3-kinase p110 delta-targeted drugs in the treatment of cns disorders
RU2011137399A (ru) 2009-02-12 2013-03-20 Астеллас Фарма Инк. Гетероциклическое производное
NZ595307A (en) 2009-03-24 2013-11-29 Gilead Calistoga Llc Atropisomers of 2-purinyl-3-tolyl-quinazolinone derivatives and methods of use
EP2411387B1 (en) 2009-03-27 2015-08-19 VetDC, Inc. Pyrimidinyl and 1,3,5-triazinyl benzimidazole sulfonamides and their use in cancer therapy
WO2010110686A1 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Pathway Therapeutics Limited Pyrimidinyl and 1,3,5 triazinyl benzimidazoles and their use in cancer therapy
MX2011011036A (es) * 2009-04-20 2012-01-20 Gilead Calistoga Llc Metodos de tratamiento para tumores solidos.
WO2010129816A2 (en) 2009-05-07 2010-11-11 Intellikine, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
EP2445898A2 (en) * 2009-06-25 2012-05-02 Amgen, Inc 4h-pyrido[1,2-a]pyrimidin-4-one derivatives as pi3k inhibitors
AR080945A1 (es) 2009-07-07 2012-05-23 Pathway Therapeutics Inc Pirimidinil y 1,3,5-triazinil benzimidazoles y su uso en la terapia contra el cancer
WO2011011550A1 (en) 2009-07-21 2011-01-27 Calistoga Pharmaceuticals Inc. Treatment of liver disorders with pi3k inhibitors
BR112012003709B1 (pt) 2009-08-17 2021-05-18 Intellikine Llc compostos heterocíclicos e usos dos mesmos
WO2011047384A2 (en) 2009-10-16 2011-04-21 The Regents Of The University Of California Methods of inhibiting ire1
GB0918249D0 (en) 2009-10-19 2009-12-02 Respivert Ltd Compounds
WO2011049625A1 (en) 2009-10-20 2011-04-28 Mansour Samadpour Method for aflatoxin screening of products
ES2651682T3 (es) 2009-11-05 2018-01-29 Rhizen Pharmaceuticals S.A. Moduladores de cinasa novedosos
RS60680B1 (sr) 2010-03-10 2020-09-30 Incyte Holdings Corp Piperidin-4-il azetidin derivati kao inhibitori jak1
EP2571357B1 (en) 2010-05-21 2016-07-06 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Chemical compounds, compositions and methods for kinase modulation
SG10201503983QA (en) 2010-05-21 2015-06-29 Incyte Corp Topical Formulation for a JAK Inhibitor
US9376664B2 (en) 2010-06-14 2016-06-28 The Scripps Research Institute Reprogramming of cells to a new fate
AU2011290189B8 (en) 2010-08-10 2015-02-19 Astellas Pharma Inc. Heterocyclic compound
WO2012028578A1 (de) 2010-09-03 2012-03-08 Bayer Cropscience Ag Substituierte anellierte pyrimidinone und dihydropyrimidinone
CA2812467A1 (en) 2010-09-24 2012-03-29 Gilead Calistoga Llc Atropisomers of pi3k-inhibiting compounds
WO2012044641A1 (en) 2010-09-29 2012-04-05 Pathway Therapeutics Inc. 1,3,5-triazinyl benzimidazole sulfonamides and their use in cancer therapy
UY33337A (es) 2010-10-18 2011-10-31 Respivert Ltd DERIVADOS SUSTITUIDOS DE 1H-PIRAZOL[ 3,4-d]PIRIMIDINA COMO INHIBIDORES DE LAS FOSFOINOSITIDA 3-QUINASAS
EP2637669A4 (en) 2010-11-10 2014-04-02 Infinity Pharmaceuticals Inc Heterocyclic compounds and their use
TW201249845A (en) 2010-11-19 2012-12-16 Incyte Corp Cyclobutyl substituted pyrrolopyridine and pyrrolopyrimidine derivatives as JAK inhibitors
DK2663309T3 (en) 2011-01-10 2017-06-19 Infinity Pharmaceuticals Inc METHODS FOR PRODUCING ISOQUINOLINONES AND SOLID FORMS OF ISOQUINOLINONES
US9295673B2 (en) 2011-02-23 2016-03-29 Intellikine Llc Combination of mTOR inhibitors and P13-kinase inhibitors, and uses thereof
JP5808826B2 (ja) 2011-02-23 2015-11-10 インテリカイン， エルエルシー 複素環化合物およびその使用
US20140213630A1 (en) 2011-03-08 2014-07-31 Thomas Diacovo Methods and pharmaceutical compositions for treating lymphoid malignancy
KR101940831B1 (ko) 2011-03-28 2019-01-21 메이 파마, 아이엔씨. (알파-치환된 아르알킬아미노 및 헤테로아릴알킬아미노)피리미딘일 및 1,3,5-트라이아진일 벤즈이미다졸, 이들을 함유하는 약학 조성물, 및 증식성 질병의 치료에 사용하기 위한 이들 화합물
CN102731525A (zh) * 2011-04-08 2012-10-17 上海艾力斯医药科技有限公司 苯并吗啉衍生物
EP2518070A1 (en) 2011-04-29 2012-10-31 Almirall, S.A. Pyrrolotriazinone derivatives as PI3K inhibitors
BR112013027774B1 (pt) 2011-05-04 2020-11-17 Rhizen Pharmaceuticals S.A. composto e composição farmacêutica
MY165963A (en) 2011-06-20 2018-05-18 Incyte Holdings Corp Azetidinyl phenyl, pyridyl or pyrazinyl carboxamide derivatives as jak inhibitors
EP2734520B1 (en) 2011-07-19 2016-09-14 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
CN103946226A (zh) 2011-07-19 2014-07-23 无限药品股份有限公司 杂环化合物及其应用
SG11201400310WA (en) 2011-08-29 2014-06-27 Infinity Pharmaceuticals Inc Heterocyclic compounds and uses thereof
CA2846496C (en) 2011-09-02 2020-07-14 The Regents Of The University Of California Substituted pyrazolo[3,4-d]pyrimidines and uses thereof
CN106146506A (zh) 2012-03-05 2016-11-23 吉利德卡利斯托加公司 (s)‑2‑(1‑(9h‑嘌呤‑6‑基氨基)丙基)‑5‑氟‑3‑苯基喹唑啉‑4(3h)‑酮的多晶型物
US8940742B2 (en) 2012-04-10 2015-01-27 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US8828998B2 (en) 2012-06-25 2014-09-09 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Treatment of lupus, fibrotic conditions, and inflammatory myopathies and other disorders using PI3 kinase inhibitors
AU2013285081B2 (en) 2012-07-04 2017-01-12 Rhizen Pharmaceuticals Sa Selective PI3K delta inhibitors
UY34893A (es) 2012-07-10 2014-02-28 Takeda Pharmaceutical Derivados de azaindol
SG10202003090VA (en) * 2012-08-08 2020-05-28 Kbp Biosciences Co Ltd PI3K δ INHIBITOR
MX2015003874A (es) 2012-09-26 2015-12-16 Univ California Modulacion de ire1.
AP2015008328A0 (en) 2012-10-16 2015-03-31 Almirall Sa Pyrrolotriazinone derivatives as pi3k inhibitors
US9737521B2 (en) 2012-11-08 2017-08-22 Rhizen Pharmaceuticals Sa Pharmaceutical compositions containing a PDE4 inhibitor and a PI3 delta or dual PI3 delta-gamma kinase inhibitor
RS62329B1 (sr) 2012-11-15 2021-10-29 Incyte Holdings Corp Dozni oblici ruksolitiniba sa produženim vremenom oslobađanja
US9730940B2 (en) 2012-11-16 2017-08-15 Merck Sharp & Dohme Purine inhibitors of human phosphatidylinositol 3-kinase delta
CA2895782C (en) 2012-12-21 2017-08-22 Gilead Calistoga Llc Substituted pyrimidine aminoalkyl-quinazolones as phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors
NZ708870A (en) 2012-12-21 2016-09-30 Gilead Calistoga Llc Isoquinolinone or quinazolinone phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors
ES2900492T3 (es) 2013-03-06 2022-03-17 Incyte Holdings Corp Procesos y productos intermedios para elaborar un inhibidor de JAK
EP2970194A1 (en) 2013-03-15 2016-01-20 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Salts and solid forms of isoquinolinones and composition comprising and methods of using the same
AR095353A1 (es) 2013-03-15 2015-10-07 Respivert Ltd Compuesto
US9481667B2 (en) 2013-03-15 2016-11-01 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Salts and solid forms of isoquinolinones and composition comprising and methods of using the same
JO3279B1 (ar) 2013-03-15 2018-09-16 Respivert Ltd مشتقات 2-((4- امينو -3- (3- فلورو-5- هيدروكسي فينيل)-h1- بيرازولو [d-3,4] بيرمدين-1-يل )ميثيل )- 3- (2- تراي فلورو ميثيل ) بينزيل ) كوينازولين -4 (h3)- واحد واستخدامها كمثبطات فوسفواينوسيتايد 3- كاينيز
JP6030783B2 (ja) * 2013-06-14 2016-11-24 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ阻害剤
ES2672018T3 (es) 2013-07-02 2018-06-12 Rhizen Pharmaceuticals S.A. Inhibidores de proteína cinasa PI3K, particularmente inhibidores delta y/o gamma
UY35675A (es) 2013-07-24 2015-02-27 Novartis Ag Derivados sustituidos de quinazolin-4-ona
EA201690357A1 (ru) 2013-08-07 2016-07-29 Инсайт Корпорейшн Лекарственные формы с замедленным высвобождением для ингибитора jak1
CA2918938C (en) 2013-09-22 2021-05-18 Calitor Sciences, Llc Substituted aminopyrimidine compounds and methods of use
BR112016007467B1 (pt) 2013-10-04 2022-09-20 Infinity Pharmaceuticals, Inc Compostos heterocíclicos e usos dos mesmos
WO2015051241A1 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
ES2818933T3 (es) 2013-10-10 2021-04-14 Acetylon Pharmaceuticals Inc Inhibidores de la HDAC en combinación con los inhibidores de la pi3k, para el tratamiento del linfoma no Hodgkin
US20160244452A1 (en) 2013-10-21 2016-08-25 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
CA2934531C (en) 2013-12-20 2020-02-25 Gilead Calistoga Llc Process methods for phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors
AU2014364414A1 (en) 2013-12-20 2016-06-30 Gilead Calistoga Llc Polymorphic forms of a hydrochloride salt of (S) -2-(1-(9H-purin-6-ylamino) propyl) -5-fluoro-3-phenylquinazolin-4 (3H) -one
WO2015106014A1 (en) 2014-01-09 2015-07-16 Takeda Pharmaceutical Company Limited Azaindole derivatives
AR099052A1 (es) 2014-01-09 2016-06-29 Takeda Pharmaceuticals Co Derivados de azaindol
JP6701088B2 (ja) 2014-03-19 2020-05-27 インフィニティー ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｐｉ３ｋ−ガンマ媒介障害の治療で使用するための複素環式化合物
WO2015160975A2 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
WO2015168079A1 (en) 2014-04-29 2015-11-05 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine or pyridine derivatives useful as pi3k inhibitors
EP3971188A1 (en) * 2014-05-27 2022-03-23 Rhizen Pharmaceuticals S.A. Pharmaceutical composition comprising a pi3k delta selective inhibitor for use in the treatment of pi3k mediated diseases
CN106458932A (zh) * 2014-06-13 2017-02-22 吉利德科学公司 磷脂酰肌醇3‑激酶抑制剂
EA201692267A1 (ru) 2014-06-13 2017-06-30 Джилид Сайэнс, Инк. Ингибиторы фосфатидилинозитол-3-киназы
AU2015274696B2 (en) 2014-06-13 2018-09-27 Gilead Sciences, Inc. Phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors
JP6383810B2 (ja) 2014-06-13 2018-08-29 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ阻害剤としてのキナゾリノン誘導体
BR112016028814A2 (pt) 2014-06-13 2017-08-22 Gilead Sciences Inc ?composição farmacêutica, métodos de tratamento de uma doença ou condição, de inibição de reações imunitárias ou crescimento excessivo ou destrutivo ou de proliferação de células cancerosas, kit, composto, um sal, um isômero, ou uma mistura farmaceuticamente aceitável do mesmo, e, uso de um composto, de um sal, de um isômero, ou de uma mistura farmaceuticamente aceitável do mesmo?
EA201692487A1 (ru) 2014-06-24 2017-06-30 Джилид Сайэнс, Инк. Ингибиторы фосфатидилинозитол-3-киназы
CU24428B1 (es) 2014-07-04 2019-06-04 Lupin Ltd Derivados de quinolizinona como inhibidores de pi3k
WO2016054491A1 (en) 2014-10-03 2016-04-07 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
JP7096667B2 (ja) 2015-07-01 2022-07-06 中外製薬株式会社 Ｇｐｃ３標的治療剤が有効である患者に投与されるｇｐｃ３標的治療剤
WO2017003723A1 (en) 2015-07-01 2017-01-05 Crinetics Pharmaceuticals, Inc. Somatostatin modulators and uses thereof
US9650393B2 (en) 2015-07-02 2017-05-16 Genentech, Inc. Benzoxazepin oxazolidinone compounds and methods of use
JP6522807B2 (ja) 2015-07-02 2019-05-29 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト ベンゾオキサゼピンオキサゾリジノン化合物及び使用方法
HUE056408T2 (hu) 2015-08-21 2022-02-28 Morphosys Ag Kombinációk és alkalmazásaik
EP3350183A1 (en) 2015-09-14 2018-07-25 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Solid forms of isoquinolinone derivatives, process of making, compositions comprising, and methods of using the same
CA2999138C (en) 2015-09-21 2024-05-21 Aptevo Research And Development Llc Cd3 binding polypeptides
WO2017103825A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 Lupin Limited Quinolizinone derivatives as pi3k inhibitors
WO2017161116A1 (en) 2016-03-17 2017-09-21 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Isotopologues of isoquinolinone and quinazolinone compounds and uses thereof as pi3k kinase inhibitors
US10919914B2 (en) 2016-06-08 2021-02-16 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
WO2017223422A1 (en) 2016-06-24 2017-12-28 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
EP3272348A1 (en) 2016-07-21 2018-01-24 LEK Pharmaceuticals d.d. Pharmaceutical composition comprising idelalisib
WO2018057808A1 (en) 2016-09-23 2018-03-29 Gilead Sciences, Inc. Benzimidazole derivatives and their use as phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors
TW201813963A (zh) 2016-09-23 2018-04-16 美商基利科學股份有限公司 磷脂醯肌醇3-激酶抑制劑
TW201815787A (zh) 2016-09-23 2018-05-01 美商基利科學股份有限公司 磷脂醯肌醇3-激酶抑制劑
TW201825465A (zh) 2016-09-23 2018-07-16 美商基利科學股份有限公司 磷脂醯肌醇3-激酶抑制劑
CA3174865A1 (en) * 2016-12-26 2018-07-05 Institute Of Materia Medica, Chinese Academy Of Medical Sciences Quinazoline compound and preparation method, application, and pharmaceutical composition thereof
CN108239074B (zh) * 2016-12-26 2021-07-06 中国医学科学院药物研究所 喹唑啉类化合物及其制备方法、用途和药物组合物
EP3658560A4 (en) 2017-07-25 2021-01-06 Crinetics Pharmaceuticals, Inc. SOMATOSTAT IN MODULATORS AND USES THEREOF
BR112020001949A2 (pt) * 2017-07-31 2020-07-28 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York composto, composição farmacêutica, e, métodos para tratar um linfoma não hodgkin e para tratar um linfoma ou uma leucemia
WO2019036489A1 (en) 2017-08-14 2019-02-21 Mei Pharma, Inc. COMBINATION THERAPY
AR113922A1 (es) 2017-12-08 2020-07-01 Incyte Corp Terapia de combinación de dosis baja para el tratamiento de neoplasias mieloproliferativas
SG11202007164UA (en) 2018-01-30 2020-08-28 Incyte Corp Processes for preparing (1 -(3-fluoro-2-(trifluoromethyl)isonicotinyl)piperidine-4-one)
WO2019178596A1 (en) 2018-03-16 2019-09-19 Johnson Matthey Public Limited Company Pyridine or n,n-dimethyl acetamide solvated solid state forms of solvated idelalisib, their use and preparation
DK3773593T3 (da) 2018-03-30 2024-05-27 Incyte Corp Behandling af hidradenitis suppurativa under anvendelse af JAK-inhibitorer
WO2020038394A1 (zh) * 2018-08-21 2020-02-27 南京明德新药研发有限公司 吡唑并嘧啶衍生物及其作为pi3k抑制剂的应用
EP3870173A4 (en) 2018-10-24 2022-06-22 Vanderbilt University WDR5 MODULATORS AND INHIBITORS
MX2021004775A (es) 2018-11-05 2021-06-08 Iovance Biotherapeutics Inc Expansion de linfocitos infiltrantes de tumores (tils) usando inhibidores de la via de proteina cinasa b (akt).
CN111269231B (zh) * 2018-12-04 2023-06-09 安徽中科拓苒药物科学研究有限公司 一种选择性PI3Kδ抑制剂及其用途
US20220249511A1 (en) * 2019-03-29 2022-08-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of keloid, hypertrophic scars and/or hyperpigmentation disorders
WO2020247679A1 (en) * 2019-06-04 2020-12-10 Vanderbilt University Wdr5 inhibitors and modulators
US11833155B2 (en) 2020-06-03 2023-12-05 Incyte Corporation Combination therapy for treatment of myeloproliferative neoplasms
CN112830927A (zh) * 2021-03-04 2021-05-25 山西科灜科技有限公司 一种嘌呤喹唑啉酮衍生物及其制备方法

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1249281B (hr) * 1963-05-18
DE2027645A1 (de) * 1970-06-05 1971-12-09 Byk Gulden Lomberg Chemische Fa bnk GmbH, 7750 Konstanz Piperazinylalkyl chinazolon (4) den vate, Verfahren zu deren Herstellung und sie enthaltende Arzneimittel
DE2644265C2 (de) * 1976-09-30 1983-02-10 Bayer Ag, 5090 Leverkusen Chinazoline
US4183931A (en) * 1977-09-08 1980-01-15 Research Corporation 2-Ketoalkyl-4(3H)-quinazolinones
JPS55118918A (en) * 1979-03-06 1980-09-12 Mitsubishi Electric Corp Production of quinazolone ring-containing epoxy resin
JPS55118917A (en) * 1979-03-06 1980-09-12 Mitsubishi Electric Corp Production of quinazolone ring-containing epoxy resin
JPS6017375B2 (ja) * 1979-06-20 1985-05-02 三菱電機株式会社 ポリアミド樹脂の製造方法
US4782137A (en) 1984-01-24 1988-11-01 Immunex Corporation Synthesis of protein with an identification peptide, and hybrid polypeptide incorporating same
US4703004A (en) 1984-01-24 1987-10-27 Immunex Corporation Synthesis of protein with an identification peptide
US4851341A (en) 1986-12-19 1989-07-25 Immunex Corporation Immunoaffinity purification system
US5011912A (en) 1986-12-19 1991-04-30 Immunex Corporation Hybridoma and monoclonal antibody for use in an immunoaffinity purification system
GB9301000D0 (en) * 1993-01-20 1993-03-10 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB9404485D0 (en) * 1994-03-09 1994-04-20 Cancer Res Campaign Tech Benzamide analogues
FI951367A (fi) 1994-03-28 1995-09-29 Japan Energy Corp Puriinijohdannaiset ja tulehdustautien tukahduttajat (suppressantit)
US5480906A (en) 1994-07-01 1996-01-02 Eli Lilly And Company Stereochemical Wortmannin derivatives
CA2197205A1 (en) * 1994-08-12 1996-02-22 Reid W. Vonborstel Methods for treating sepsis or inflammatory diseases with oxypurine nucleosides
US6043062A (en) 1995-02-17 2000-03-28 The Regents Of The University Of California Constitutively active phosphatidylinositol 3-kinase and uses thereof
GB9611460D0 (en) 1996-06-01 1996-08-07 Ludwig Inst Cancer Res Novel lipid kinase
US5858753A (en) 1996-11-25 1999-01-12 Icos Corporation Lipid kinase
DK0958296T3 (da) * 1996-12-31 2003-08-18 Reddys Lab Ltd Dr Heterocykliske forbindelser, fremgangsmåde til deres fremstilling og farmaceutiske præparater, der indeholder dem, og deres anvendelse i behandlingen af diabetes og beslægtede sygdomme
GB9702701D0 (en) 1997-02-01 1997-04-02 Univ Newcastle Ventures Ltd Quinazolinone compounds
PL335418A1 (en) * 1997-02-28 2000-04-25 Pfizer Prod Inc Atropoisomers of 3-aryl 4(3h)-quinazolynones and their application as antagonists of ampa receptors
IL125950A0 (en) * 1997-09-05 1999-04-11 Pfizer Prod Inc Methods of administering ampa receptor antagonists to treat dyskinesias associated with dopamine agonist therapy
US5822910A (en) 1997-10-02 1998-10-20 Shewmake; I. W. Fishing line tensioning device
AU2108299A (en) * 1998-01-08 1999-07-26 University Of Virginia Patent Foundation A2A adenosine receptor agonists
AU1120599A (en) * 1998-04-23 1999-03-08 Dr. Reddy's Research Foundation New heterocyclic compounds and their use in medicine, process for their reparation and pharmaceutical compositions containing them
US6100090A (en) 1999-06-25 2000-08-08 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense inhibition of PI3K p85 expression
US6046049A (en) 1999-07-19 2000-04-04 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of PI3 kinase p110 delta expression
ATE363471T1 (de) 2000-01-24 2007-06-15 Astrazeneca Ab Durch einen morpholinrest substituierte therapeutische verbindungen
WO2001057034A1 (en) 2000-02-07 2001-08-09 Bristol-Myers Squibb Co. 3-aminopyrazole inhibitors of cyclin dependent kinases

Also Published As

Publication number Publication date
EP2223922B1 (en) 2016-03-02
BRPI0110371B1 (pt) 2016-09-27
PT3029041T (pt) 2020-05-13
HK1053308A1 (en) 2003-10-17
EA008241B1 (ru) 2007-04-27
KR20020093077A (ko) 2002-12-12
DE60144277D1 (de) 2011-05-05
EA200200990A1 (ru) 2003-06-26
ES2527754T3 (es) 2015-01-29
NO329136B1 (no) 2010-08-30
BRPI0110371B8 (pt) 2021-05-25
EP3029041B1 (en) 2020-03-04
DK1939203T3 (en) 2015-02-23
IL245146A0 (en) 2016-06-30
US6800620B2 (en) 2004-10-05
HUP0300497A3 (en) 2004-10-28
CN1440408A (zh) 2003-09-03
HUP0300497A2 (hu) 2003-06-28
DK1278748T3 (da) 2011-04-18
EP1278748A2 (en) 2003-01-29
KR100785363B1 (ko) 2007-12-18
MXPA02010618A (es) 2004-05-05
IS6585A (is) 2002-10-21
CA2406278A1 (en) 2001-11-01
ES2788383T3 (es) 2020-10-21
IL231360A0 (en) 2014-04-30
EP2223922A3 (en) 2011-04-27
CN1440408B (zh) 2012-07-18
NZ522076A (en) 2005-08-26
JP4642309B2 (ja) 2011-03-02
YU80402A (sh) 2005-09-19
CY1117672T1 (el) 2017-05-17
HU230554B1 (hu) 2016-12-28
AU2001255667C1 (en) 2016-06-09
BR0110371A (pt) 2003-06-17
JP2003531209A (ja) 2003-10-21
WO2001081346A2 (en) 2001-11-01
IL231360A (en) 2016-04-21
RS51458B (sr) 2011-04-30
AU5566701A (en) 2001-11-07
WO2001081346A3 (en) 2002-03-21
US6518277B1 (en) 2003-02-11
AU2001255667B2 (en) 2006-03-02
GEP20084317B (en) 2008-02-25
EP1278748B1 (en) 2011-03-23
DK2223922T3 (en) 2016-06-06
ES2567260T3 (es) 2016-04-21
EP3029041A1 (en) 2016-06-08
NO20100777L (no) 2002-12-10
US20030195211A1 (en) 2003-10-16
HRP20020838B1 (hr) 2012-12-31
IL152275A0 (en) 2003-05-29
PT1278748E (pt) 2011-03-31
PT1939203E (pt) 2015-02-04
NO20025104D0 (no) 2002-10-24
SI2223922T1 (sl) 2016-04-29
SI3029041T1 (sl) 2020-08-31
IS2822B (is) 2013-02-15
ATE502941T1 (de) 2011-04-15
CA2406278C (en) 2012-06-05
EP2223922A2 (en) 2010-09-01
NO20025104L (no) 2002-12-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10695349B2 (en) Inhibitors of human phosphatidylinositol 3-kinase delta
HRP20020838A2 (en) Inhibitors of human phosphatidyl-inositol 3-kinase delta
AU2002323426A1 (en) Inhibitors of human phosphatidyl-inositol 3-kinase delta
AU2001255667A1 (en) Inhibitors of human phosphatidyl-inositol 3-kinase delta
EP1939203A2 (en) Inhibitors of human phosphatidyl-inositol 3-kinase delta isoform
PL213200B1 (pl) Selektywne inhibitory PI3Kδ, kompozycje je zawierajace oraz ich zastosowania medyczne

Legal Events

Date Code Title Description
A1OB Publication of a patent application
AIPI Request for the grant of a patent on the basis of a substantive examination of a patent application
B1PR Patent granted
ODRP Renewal fee for the maintenance of a patent

Payment date: 20190405

Year of fee payment: 19

ODRP Renewal fee for the maintenance of a patent

Payment date: 20200407

Year of fee payment: 20

PB20 Patent expired after termination of 20 years

Effective date: 20210424