JP7096667B2 - Gpc3標的治療剤が有効である患者に投与されるgpc3標的治療剤 - Google Patents
Gpc3標的治療剤が有効である患者に投与されるgpc3標的治療剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7096667B2 JP7096667B2 JP2017526441A JP2017526441A JP7096667B2 JP 7096667 B2 JP7096667 B2 JP 7096667B2 JP 2017526441 A JP2017526441 A JP 2017526441A JP 2017526441 A JP2017526441 A JP 2017526441A JP 7096667 B2 JP7096667 B2 JP 7096667B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- gpc3
- heavy chain
- light chain
- represented
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
- A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
- G01N2800/7023—(Hyper)proliferation
- G01N2800/7028—Cancer
Description
〔1〕患者における肝癌に対するGPC3標的治療剤の有効性を決定する方法であって、当該患者から単離された生物学的試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量を測定することを含む、方法。
〔2〕前記生物学的試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である場合に、GPC3標的治療剤が有効であると決定することをさらに含む、〔1〕に記載の方法。
〔3〕前記生物学的試料が肝癌組織試料である、〔1〕または〔2〕に記載の方法。
〔4〕前記1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量がIQD Cell Scoreで表される、〔1〕から〔3〕のいずれかに記載の方法。
〔5〕前記GPC3標的治療剤が、前記患者の血中トラフ値で200μg/ml以上となるように投与される、〔1〕から〔4〕のいずれかに記載の方法。
〔6〕前記GPC3標的治療剤が、抗GPC3抗体を有効成分として含む治療剤である、〔1〕から〔5〕のいずれかに記載の方法。
〔7〕前記抗GPC3抗体が、抗体依存性細胞傷害(ADCC)活性および/または補体依存性細胞傷害(CDC)活性を有する抗体である、〔6〕に記載の方法。
〔8〕前記抗GPC3抗体が、以下の(1)から(5)のいずれか:
(1) 配列番号:4、配列番号:5、および配列番号:6でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:7、配列番号:8、および配列番号:9でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
(2) 配列番号:12、配列番号:13、および配列番号:14でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:15、配列番号:16、および配列番号:17でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
(3) 配列番号:20、配列番号:21、および配列番号:22でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:23、配列番号:24、および配列番号:25でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
(4) 配列番号:28、配列番号:29、および配列番号:30でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:31、配列番号:32、および配列番号:33でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;もしくは
(5) 配列番号:36、配列番号:37、および配列番号:38でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:39、配列番号:40、および配列番号:41でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
を含む抗GPC3キメラ抗体またはヒト化抗GPC3抗体である、〔6〕または〔7〕に記載の方法。
〔9〕前記抗GPC3抗体が、以下の(1)から(6)のいずれか:
(1) 配列番号:44、配列番号:45、配列番号:46、配列番号:47、配列番号:48、配列番号:49、および配列番号:50で表される重鎖可変領域の群から選択される重鎖可変領域、ならびに配列番号:51で表される軽鎖可変領域;
(2) 配列番号:44、配列番号:45、配列番号:46、配列番号:47、配列番号:48、配列番号:49、および配列番号:50で表される重鎖可変領域の群から選択される重鎖可変領域、ならびに配列番号:52、配列番号:53、配列番号:54、配列番号:55、配列番号:56、配列番号:57、配列番号:58、配列番号:59、配列番号:60、配列番号:61、配列番号:62、配列番号:63、配列番号:64、配列番号:65、および配列番号:66で表される軽鎖可変領域の群から選択される軽鎖可変領域;
(3) 配列番号:67で表される重鎖可変領域、および配列番号:68で表される軽鎖可変領域;
(4) 配列番号:69で表される重鎖可変領域、および配列番号:70で表される軽鎖可変領域;
(5) 配列番号:71で表される重鎖可変領域、および配列番号:72で表される軽鎖可変領域;もしくは
(6) 配列番号:71で表される重鎖可変領域、および配列番号:73で表される軽鎖可変領域;
を含む抗体である、〔6〕から〔8〕のいずれかに記載の方法。
〔10〕前記抗GPC3抗体が、細胞傷害物質が連結された抗体である、〔6〕に記載の方法。
〔11〕前記GPC3標的治療剤が、1または2以上の抗がん剤と同時または別々に投与される、〔1〕から〔10〕のいずれかに記載の方法。
〔12〕前記抗がん剤がソラフェニブである、〔11〕に記載の方法。
〔13〕GPC3標的治療剤を有効成分として含む薬剤であって、患者から単離された生物学的試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である患者に投与するための薬剤。
〔14〕前記患者が、当該患者から単離された生物学的試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値であると決定された患者である、〔13〕に記載の薬剤。
〔15〕前記患者が、当該患者から単離された生物学的試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値であることによりGPC3標的治療剤が有効であると決定された患者である、〔13〕に記載の薬剤。
〔16〕前記1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量がIQD Cell Scoreで表される、〔13〕から〔15〕のいずれかに記載の薬剤。
〔17〕前記患者が肝癌患者である、〔13〕から〔16〕のいずれかに記載の薬剤。
〔18〕前記肝癌が、GPC3標的治療剤が有効である肝癌である、〔17〕に記載の薬剤。
〔19〕前記GPC3標的治療剤が有効である肝癌が、前記患者から単離された生物学的試料におけるIQD Cell Scoreで表されるGPC3の発現量が所定の値であることによって特徴付けられる、〔18〕に記載の薬剤。
〔20〕前記生物学的試料が肝癌組織試料である、〔13〕から〔19〕のいずれかに記載の薬剤。
〔21〕前記GPC3標的治療剤が、前記患者の血中トラフ値で200μg/ml以上となるように投与される、〔13〕から〔20〕のいずれかに記載の薬剤。
〔22〕前記GPC3標的治療剤が、抗GPC3抗体を有効成分として含む治療剤である、〔13〕から〔21〕のいずれかに記載の薬剤。
〔23〕前記抗GPC3抗体が、抗体依存性細胞傷害(ADCC)活性および/または補体依存性細胞傷害(CDC)活性を有する抗体である、〔22〕に記載の薬剤。
〔24〕前記抗GPC3抗体が、以下の(1)から(5)のいずれか:
(1) 配列番号:4、配列番号:5、および配列番号:6でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:7、配列番号:8、および配列番号:9でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
(2) 配列番号:12、配列番号:13、および配列番号:14でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:15、配列番号:16、および配列番号:17でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
(3) 配列番号:20、配列番号:21、および配列番号:22でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:23、配列番号:24、および配列番号:25でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
(4) 配列番号:28、配列番号:29、および配列番号:30でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:31、配列番号:32、および配列番号:33でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;もしくは
(5) 配列番号:36、配列番号:37、および配列番号:38でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:39、配列番号:40、および配列番号:41でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
を含む抗GPC3キメラ抗体またはヒト化抗GPC3抗体である、〔22〕または〔23〕に記載の薬剤。
〔25〕前記抗GPC3抗体が、以下の(1)から(6)のいずれか:
(1) 配列番号:44、配列番号:45、配列番号:46、配列番号:47、配列番号:48、配列番号:49、および配列番号:50で表される重鎖可変領域の群から選択される重鎖可変領域、ならびに配列番号:51で表される軽鎖可変領域;
(2) 配列番号:44、配列番号:45、配列番号:46、配列番号:47、配列番号:48、配列番号:49、および配列番号:50で表される重鎖可変領域の群から選択される重鎖可変領域、ならびに配列番号:52、配列番号:53、配列番号:54、配列番号:55、配列番号:56、配列番号:57、配列番号:58、配列番号:59、配列番号:60、配列番号:61、配列番号:62、配列番号:63、配列番号:64、配列番号:65、および配列番号:66で表される軽鎖可変領域の群から選択される軽鎖可変領域;
(3) 配列番号:67で表される重鎖可変領域、および配列番号:68で表される軽鎖可変領域;
(4) 配列番号:69で表される重鎖可変領域、および配列番号:70で表される軽鎖可変領域;
(5) 配列番号:71で表される重鎖可変領域、および配列番号:72で表される軽鎖可変領域;もしくは
(6) 配列番号:71で表される重鎖可変領域、および配列番号:73で表される軽鎖可変領域;
を含む抗体である、〔22〕から〔24〕のいずれかに記載の薬剤。
〔26〕前記抗GPC3抗体が、細胞傷害物質が連結された抗体である、〔22〕に記載の薬剤。
〔27〕1または2以上の抗がん剤を有効成分としてさらに含む、〔13〕から〔26〕のいずれかに記載の薬剤。
〔28〕1または2以上の抗がん剤と同時にまたは別々に投与される、〔13〕から〔26〕のいずれかに記載の薬剤。
〔29〕前記抗がん剤がソラフェニブである、〔27〕または〔28〕に記載の薬剤。
〔30〕肝癌に罹患した患者群からGPC3標的治療剤が有効な患者 を選別する方法であって、当該患者から単離された生物学的試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である場合に、GPC3標的治療剤が有効な患者であると決定する工程を含む、方法。
〔31〕前記GPC3標的治療剤が、抗GPC3抗体を有効成分として含む治療剤である、〔30〕に記載の方法。
〔32〕患者における肝癌に対するGPC3標的治療剤の有効性を決定するためのキットであって、当該患者から単離された生物学的試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量を測定するための試薬を含むキット。
〔33〕前記生物学的試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である場合に、GPC3標的治療剤が有効であると決定することを記載した指示書をさらに含む、〔32〕に記載のキット。
〔34〕GPC3標的治療剤をさらに含む、〔32〕または〔33〕に記載のキット。
〔35〕前記GPC3標的治療剤が、抗GPC3抗体を有効成分として含む治療剤である、〔32〕から〔34〕のいずれかに記載のキット。
〔36〕GPC3標的治療剤、および患者から単離された生物学的試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である患者に当該GPC3標的治療剤を投与することが記載された指示書を含む製剤。
〔37〕前記GPC3標的治療剤が、抗GPC3抗体を有効成分として含む治療剤である、〔36〕に記載の製剤。
〔38〕次の要素を含む、肝癌の治療用キット:
(1)GPC3標的治療剤;および
(2)患者から単離された生物学的試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である患者に当該GPC3標的治療剤が有効であると決定することを記載した指示書。
〔39〕前記GPC3標的治療剤が、抗GPC3抗体を有効成分として含む治療剤である、〔38〕に記載のキット。
本明細書において別段の定義がない限り、本発明に関連して用いられる化学的用語および技術的用語は、当業者によって一般的に理解されている意味を有するものとする。
「一つの(a)」および「一つの(an)」という不定冠詞は、本発明において、一つのまたは二つ以上の(すなわち少なくとも一つの)その不定冠詞の文法上の対象をいう。例えば「一つの(a)要素」は、一つの要素または二つ以上の要素を意味する。
本発明における「抗体」は、抗体の全体分子に限られず、抗体の断片又はその修飾物であってもよく、二価抗体も一価抗体も含まれる。例えば、抗体の断片としては、Fab、F(ab')2、Fv、1個のFabと完全なFcを有するFab/c、またはH鎖若しくはL鎖のFvを適当なリンカーで連結させたシングルチェインFv(scFv)が挙げられる。具体的には、抗体を酵素、例えばパパイン、ペプシンで処理し抗体断片を生成させるか、または、これら抗体断片をコードする遺伝子を構築し、これを発現ベクターに導入した後、適当な宿主細胞で発現させる(例えば、Co, M. S. et al., J. Immunol. (1994) 152, 2968-2976, Better, M. & Horwitz, A. H. Methods in Enzymology (1989) 178, 476-496, Academic Press, Inc., Plueckthun, A. & Skerra, A. Methods in Enzymology (1989) 178, 476-496, Academic Press, Inc., Lamoyi, E., Methods in Enzymology (1989) 121, 652-663, Rousseaux, J. et al., Methods in Enzymology (1989) 121, 663-669, Bird, R. E. et al., TIBTECH (1991) 9, 132-137 参照)。
scFvは、抗体のH鎖V領域とL鎖V領域とを連結することにより得られる。このscFvにおいて、H鎖V領域とL鎖V領域は、リンカー、好ましくはペプチドリンカーを介して連結される(Huston, J. S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1988)85, 5879-5883)。scFvにおけるH鎖V領域およびL鎖V領域は、本明細書に抗体として記載されたもののいずれの由来であってもよい。V領域を連結するペプチドリンカーとしては、例えばアミノ酸12~19残基からなる任意の一本鎖ペプチドが用いられる。
scFvをコードするDNAは、前記抗体のH鎖またはH鎖V領域をコードするDNA、およびL鎖またはL鎖V領域をコードするDNAのうち、それらの配列のうちの全部又は所望のアミノ酸配列をコードするDNA部分を鋳型とし、その両端を規定するプライマー対を用いてPCR法により増幅し、次いで、さらにペプチドリンカー部分をコードするDNA、およびその両端が各々H鎖、L鎖と連結されるように規定するプライマー対を組み合せて増幅することにより得られる。
また、一旦scFvをコードするDNAが作製されると、それらを含有する発現ベクター、および該発現ベクターにより形質転換された宿主を常法に従って得ることができ、また、その宿主を用いることにより、常法に従ってscFvを得ることができる。
これら抗体の断片は、前記と同様にしてその遺伝子を取得し発現させ、宿主により産生させることができる。本発明における「抗体」にはこれらの抗体の断片も包含される。
さらに、本発明で使用される抗体は、二重特異性抗体(bispecific antibody)であってもよい。二重特異性抗体は2種類の抗体のHL対を結合させて作製することもできるし、異なるモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを融合させて二重特異性抗体産生融合細胞を作製し、得ることもできる。さらに、遺伝子工学的手法により二重特異性抗体を作製することも可能である。
本明細書において、たとえば、Ala/A、Leu/L、Arg/R、Lys/K、Asn/N、Met/M、Asp/D、Phe/F、Cys/C、Pro/P、Gln/Q、Ser/S、Glu/E、Thr/T、Gly/G、Trp/W、His/H、Tyr/Y、Ile/I、Val/Vと表されるように、アミノ酸は1文字コードまたは3文字コード、またはその両方で表記されている。
抗原結合分子のアミノ酸配列中のアミノ酸の改変のためには、部位特異的変異誘発法(Kunkelら(Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1985) 82, 488-492))やOverlap extension PCR等の公知の方法が適宜採用され得る。また、天然のアミノ酸以外のアミノ酸に置換するアミノ酸の改変方法として、複数の公知の方法もまた採用され得る(Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. (2006) 35, 225-249、Proc. Natl. Acad. Sci.U.S.A. (2003) 100 (11), 6353-6357)。例えば、終止コドンの1つであるUAGコドン(アンバーコドン)の相補的アンバーサプレッサーtRNAに非天然アミノ酸が結合されたtRNAが含まれる無細胞翻訳系システム(Clover Direct(Protein Express))等も好適に用いられる。
本発明で使用されている方法によると、抗体のCDRとFRに割り当てられるアミノ酸位置はKabatにしたがって規定される(Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institute of Health, Bethesda, Md., 1987年および1991年)。本明細書において、抗原結合分子が抗体または抗原結合断片である場合、可変領域のアミノ酸はKabatナンバリングにしたがって表される。定常領域のアミノ酸は、前出のKabat(Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institute of Health, Bethesda, Md., 1987年および1991年)で報告されている「EUナンバリング」または「EUインデックス」で表される。
本発明は、患者に対するGPC3標的治療剤の有効性を決定する方法であって、当該患者から単離された生物学的試料中の1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量を測定する工程を含む方法に関する。
本発明において「生物学的試料」とは、対象から単離される組織または流体の試料をいう。そのような試料の非限定な一態様として、例えば血漿、血清、髄液、リンパ液、皮膚、気道、腸管、および尿生殖路の外部切片、涙、唾液、痰、乳、全血またはあらゆる血液画分、血液誘導体、血球、腫瘍、神経組織、器官またはあらゆるタイプの組織、洗浄により得られるあらゆる試料(例えば気管支系のもの)、ならびにインビトロでの細胞培養物の構成成分の試料が含まれる。
好ましい態様においては、ホルマリン固定により抗体との反応性が減弱した抗原の反応性を賦活化する。本発明においては、プロテアーゼ抗原賦活化法(PIER法)を適用することも可能であるし、熱誘導抗原賦活化法(HIER法)を適用することも可能である。また、非限定な一態様では、下記で示されるように調製される「同視され得る二つの組織標品」のうち一の標品に対して、PIER法を適用し、他方の標品に対して、HIER法を適用し、抗体と反応させたときの両者間の染色程度の相違を数値化することも可能である。
熱誘導抗原賦活化法による抗原賦活化処理が施された組織標品および/またはプロテアーゼ抗原賦活化法による抗原賦活化処理が施された組織標品に対して、後述される抗GPC3抗体を一次抗体として反応させる。当該反応は抗GPC3抗体が抗原中のエピトープを認識して抗原抗体複合体を形成するのに適切な条件下で実施される。通常、当該反応は4℃にて終夜、または37℃にて1時間実施されるが、反応条件は、抗体が抗原中のエピトープを認識して抗原抗体複合体を形成するのに適切な範囲で適宜変更され得る。例えば、反応温度は4℃から50℃の範囲内で変更され得るし、反応時間は1分から7日の間で変更され得る。低温での反応が実施される場合には長い時間反応させることが好ましい。一次抗体反応が終了した後、組織標品は洗浄用緩衝液によって洗浄される。洗浄用緩衝液はPBS(Phosphate buffer saline)が好適に用いられる他、Tris塩酸緩衝液も好適に使用され得る。通常、洗浄条件としては室温にて5分間の洗浄を3回実施する方法が採用されるが、洗浄の時間および温度は適宜変更され得る。
本発明は、上記の方法によって検出された組織標品中のGPC3から、当該組織標品中の腫瘍組織における、単位面積あたりのGPC3発現量または1腫瘍細胞あたりのGPC3発現量を算出することにより、GPC3発現量を数値化する方法を提供する。組織標本中の腫瘍組織は、当業者に公知の方法で適宜特定することができる。組織標品中の腫瘍組織における単位面積あたりのGPC3発現量は、組織標本中の腫瘍組織から検出された染色強度または蛍光強度等の総量を当該検出に用いた領域中の腫瘍組織の面積で割ることにより算出することができる。組織標品中の1腫瘍細胞あたりのGPC3発現量は、組織標本中の腫瘍組織から検出された染色強度または蛍光強度等の総量を当該検出に用いた腫瘍組織内に存在する細胞の数(すなわち腫瘍細胞の数)で割ることにより算出することができる。上記検出に用いた腫瘍組織内の細胞の数は、当該腫瘍組織内に存在する細胞核の数により算定することができる。すなわち、組織標品中の1腫瘍細胞あたりのGPC3発現量は、腫瘍細胞内および腫瘍細胞膜上のGPC3の存在量を腫瘍細胞数(または腫瘍細胞核数)で除して求められた数値である。
WO2009116659に記載された方法にしたがって、表1に示す基準に従って算出された、陽性細胞率(Positive cell rate: PR)、細胞質または細胞膜におけるGPC3発現量は、検出された染色強度(Staining intensity of cytoplasm: SI-cp, Staining intensity of cell membrane: SI-cm)および細胞膜染色パターン(Staining pattern of cell membrane: Sp-cm)の各々のスコアを式1および式2の計算式にもとづいて加算して得られるスコアが、本発明の非限定なGPC3の組織免疫染色スコア(便宜的に、「複合評価スコア1」と呼ぶ)として例示される。
IHC total = PR + SI-Cp + SI-Cm + Sp-Cm
IHC cm = PR + SI-Cm + Sp-Cm
腫瘍細胞の密度は、組織標品中の、腫瘍組織における単位面積当たりの細胞数(すなわち腫瘍細胞数)をカウントすることにより決定することができる。また、腫瘍細胞のサイズは、組織標品中の、腫瘍組織の面積を、当該腫瘍組織内に存する細胞数(すなわち腫瘍細胞数)で除することにより決定することができる。GPC3を発現する腫瘍細胞の密度は、組織標品中の腫瘍組織における単位面積当たりのGPC3発現細胞数(すなわちGPC3を発現する腫瘍細胞数)をカウントすることにより決定することができる。また、GPC3を発現する腫瘍細胞のサイズは、組織標品中の、腫瘍細胞の面積の総和をGPC3発現細胞数(すなわちGPC3を発現する腫瘍細胞数)で除することにより決定することができる。この態様において、対象は、GPC3標的治療剤未治療例の患者とすることができる。
本明細書では、「免疫蛍光デジタルスライド」とは、蛍光標識された二次抗体が反応した免疫組織学像であって、コンピュータに取り込まれた画像を意味する。デジタル化してコンピュータに保存することにより破損や退色などの心配がないスライド(デジタルスライド)として、蛍光像を保存することができることが知られている。デジタルスライドでは、染色像の保存性の高さおよび染色度合いの定量性の高さから、非蛍光の染色組織像を保存することできる。本明細書では、デジタルスライドを「バーチャルスライド」と呼ぶことがある。本発明の好ましい態様においては、二次抗体反応が施された組織標品が免疫蛍光デジタルスライド(Immnoflorescent quantification digital slide、IQD)により評価され、当該組織標品中の腫瘍組織における単位面積あたりのGPC3発現量または1腫瘍細胞あたりのGPC3発現量が算出される。免疫蛍光デジタルスライドによる評価においては、二次抗体反応が施された組織標品を上記バーチャルスライドスキャナでスキャンし、組織標品からバーチャルスライドを作製する。作製されたバーチャルスライド(IQDイメージ)からGPC3の発現量を測定するために適した領域を選択し、当該領域における腫瘍組織の蛍光強度を測定する。蛍光強度の測定に用いるソフトウェアとしては、ViwePlus software(浜松ホトニクス)等が好適に用いられる。
本発明の非限定な一態様では、上記の方法によって検出された生物学的試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量の測定に加えて、対象となる患者がFcγ受容体の遺伝子多型を有するかどうかを確認する工程を含む方法も提供される。本発明において、対象となる患者がFcγ受容体の遺伝子多型を有するかどうか確認する方法は、特に限定されない。例えば、対象となる患者から生物学的試料を採取し、採取した試料からゲノム遺伝子を単離してFcγ受容体に該当する遺伝子の塩基配列を決定することによって確認することができる。具体的には例えば、Journal of Clinical Oncology, vol.21, No.21 (2003) pp3940-3947に記載の方法に従って測定することができる。ここで採取される生物学的試料は、患者由来のゲノム遺伝子を取得することのできる試料であれば特に限定されず、例えば、末梢血、皮膚切片などが挙げられる。
本発明の非限定な一態様では、上記の方法によって検出された生物学的試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量の測定に加えて、GPC3標的治療剤を投与される前の患者および/またはGPC3標的治療剤を投与された患者から単離された生物学的試料中の遊離GPC3濃度を測定する工程を含む方法も提供される。「GPC3標的治療剤を投与される前の患者」とは、癌であると診断された患者であって、GPC3標的治療剤を投与された経歴のない患者をいい、さらに、当該患者は、上述の組織における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量からGPC3標的治療剤が有効であると決定されていてもよい。また、「GPC3標的治療剤を投与された患者」とは、GPC3標的治療剤を投与された経歴を有する患者をいう。
本発明において「GPC3標的治療剤」という用語は、GPC3により媒介されるシグナル経路を含めた、GPC3の生物学的活性の遮断、抑制、阻害、または低減をもたらす、またはGPC3を発現する細胞に対する細胞傷害をもたらすあらゆる分子をいう。「標的治療」という用語は、生物学的作用のある特定のメカニズムも示唆するものではなく、GPC3の薬理学的、生理学的、および生化学的相互作用のうち可能性のある作用をすべて含む概念である。GPC3標的治療剤の例として、(1)GPC3に結合するリガンドに対するGPC3の結合の拮抗阻害剤または非拮抗阻害剤、よってGPC3とそのリガンドとの結合に干渉する作用物質、(2)GPC3とそのリガンドとの結合には干渉しないが、その代わり、GPC3によるそのリガンドに対する結合によって生じる活性を阻害または減少させる作用物質、(3)GPC3の発現を減少させる作用物質、(4)GPC3を発現する細胞に対して細胞傷害活性を誘起することが可能な作用物質、が含まれる。リガンドの非限定な一態様として、wnt(Cancer Res. (2005) 65, 6245-6254)、IGF-II(Carcinogenesis (2008) 29 (7), 1319-1326)またはFibroblast Growth Factor 2(Int. J. Cancer (2003) 103 (4), 455-465)等が例示され得る。このような作用物質の非限定な一態様として、抗体(その抗原結合ドメインまたは断片を含む)、核酸分子(アンチセンスまたはRNAi分子等)、ペプチド、非ペプチド低分子有機物、免疫細胞等が含まれ得る。
本発明のGPC3標的治療剤は、1または2以上の抗がん剤を、同一の製剤または別々の製剤で、同時または別々に投与して併用してもよい。本発明のGPC3標的治療剤と併用するのに適当な抗がん剤は化学療法剤であり、好ましくはマルチキナーゼ阻害剤であり、さらに好ましくは、ソラフェニブまたはスニチニブである。抗GPC3標的治療剤と併用される抗がん剤は当該抗GPC3標的治療剤とは結合されていない。抗GPC3標的治療剤と抗がん剤は、両者がともに含有される配合剤の形で提供されてもよいし、両者が別々に提供され、同時に、別々に、または順次に使用されてもよい。さらに、GPC3標的治療剤と抗がん剤から構成されるキットとして提供されてもよい。
本発明のGPC3標的治療剤として使用される抗GPC3抗体の非限定な一態様として、(BioMosaic社よりカタログ番号B0134Rのもとに販売されている)1G12抗体(WO2003/100429)に細胞傷害性物質が連結された抗体薬物複合体(Antibody drug conjugate(ADC))(WO2007/137170)、または抗GPC3一本鎖抗体(single chain variable fragment; scFv)(CN103833852)等が例示され得る。
本発明の抗GPC3抗体として、細胞傷害活性を有する抗GPC3抗体が例示される。本発明において細胞傷害活性の非限定な例として、例えば抗体依存性細胞介在性細胞傷害(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity:ADCC)活性、補体依存性細胞傷害(complement-dependent cytotoxicity:CDC)活性およびT細胞による細胞傷害活性等が挙げられる。本発明において、CDC活性とは補体系による細胞傷害活性を意味する。一方ADCC活性とは、標的細胞の細胞膜に発現された膜型分子に結合する抗原結合ドメインを含む抗原結合分子のFc領域に、免疫細胞等が当該免疫細胞に発現したFcγレセプターを介して結合し、当該免疫細胞が標的細胞に傷害を与える活性を意味する。目的の抗原結合分子がADCC活性を有するか否か、又はCDC活性を有するか否かは公知の方法により測定され得る(例えば、Current protocols in Immunology, Chapter7. Immunologic studies in humans、Coliganら編(1993)等)。
(1)エフェクター細胞の調製
CBA/Nマウスなどから摘出された脾臓から、RPMI1640培地(Invitrogen)中で脾臓細胞が分離される。10%ウシ胎児血清(FBS、HyClone)を含む同培地で洗浄された当該脾臓細胞の濃度を5×106/mLに調製することによって、エフェクター細胞が調製され得る。
10% FBS含有培地(Invitrogen)によってBaby Rabbit Complement(CEDARLANE)を10倍に希釈することによって、補体溶液が調製され得る。
抗原を発現する細胞を0.2 mCiの51Cr-クロム酸ナトリウム(GEヘルスケアバイオサイエンス)とともに、10% FBS含有DMEM培地中で37℃にて1時間培養することにより該標的細胞が放射性標識され得る。放射性標識後、10% FBS含有RPMI1640培地にて3回洗浄された細胞の濃度を2×105/mLに調製することによって、当該標的細胞が調製され得る。
また、本発明の抗GPC3抗体の非限定な一態様として、細胞傷害性物質が連結された抗GPC3抗体も例示される。そのような抗GPC3-抗体薬物複合体(Antibody drug conjugate(ADC))はWO2007/137170等に具体的に開示されているがこれに限定されない。すなわち、細胞傷害性物質としては、以下に例示される化学療法剤であってもよく、またAlleyら(Curr. Opin. Chem. Biol. (2010) 14, 529-537)やWO2009/140242に開示されている化合物であってもよく、これらの化合物が適切なリンカー等で抗原結合分子に結合される。
シュードモナスエキソトキシン(Pseudomonas Exotoxin)(Nature Medicine (1996) 2, 350-353);
リシンA鎖(Ricin A Chain)(Fultonら(J. Biol. Chem. (1986) 261, 5314-5319)、Sivamら(Cancer Res. (1987) 47, 3169-3173)、Cumberら、(J. Immunol. Methods (1990) 135,15-24、Wawrzynczakら(Cancer Res. (1990) 50, 7519-7562)、およびGheeiteら(J. Immunol.Methods (1991) 142,223-230));
無糖鎖リシンA鎖(Deglycosylated Ricin A Chain)(Thorpeら(Cancer Res. (1987) 47, 5924-5931));
アブリンA鎖(Abrin A Chain)(Wawrzynczakら(Br. J. Cancer (1992) 66, 361-366)、Wawrzynczakら(Cancer Res. (1990) 50, 7519-7562)、Sivamら(Cancer Res. (1987) 47, 3169-3173)、およびThorpeら(Cancer Res. (1987) 47, 5924-5931));
ゲロニン(Gelonin)(Sivamら(Cancer Res. (1987) 47, 3169-3173)、Cumberら(J. Immunol. Methods (1990) 135, 15-24)、Wawrzynczakら(Cancer Res., (1990) 50, 7519-7562)、およびBolognesiら(Clin. exp. Immunol. (1992) 89, 341-346));
ポークウイード抗ウィルス蛋白(PAP-s; Pokeweed anti-viral protein fromseeds)(Bolognesiら(Clin. exp. Immunol. (1992) 89, 341-346));
ブリオジン(Bryodin)(Bolognesiら(Clin. exp. Immunol. (1992) 89, 341-346));
サポリン(Saporin)(Bolognesiら(Clin. exp. Immunol. (1992) 89, 341-346));
モモルジン(Momordin)(Cumberら(J. Immunol. Methods (1990) 135, 15-24);Wawrzynczakら(Cancer Res. (1990) 50, 7519-7562)、およびBolognesiら(Clin. exp. Immunol. (1992) 89, 341-346));
モモルコキン(Momorcochin)(Bolognesiら(Clin. exp. Immunol. (1992) 89, 341-346));
ジアンシン32(Dianthin 32)(Bolognesiら(Clin. exp. Immunol. (1992) 89, 341-346));
ジアンシン30(Dianthin 30)(Stirpe F., Barbieri L.(FEBS letter (1986) 195, 1-8));
モデッシン(Modeccin)(Stirpe F., Barbieri L.(FEBS letter (1986) 195, 1-8));
ビスカミン(Viscumin)(Stirpe F., Barbieri L.(FEBS letter (1986) 195, 1-8));
ボルケシン(Volkensin)(Stirpe F., Barbieri L.(FEBS letter (1986) 195, 1-8));
ドデカンドリン(Dodecandrin)(Stirpe F., Barbieri L.(FEBS letter (1986) 195, 1-8));
トリチン(Tritin)(Stirpe F., Barbieri L.(FEBS letter (1986) 195, 1-8));
ルフィン(Luffin)(Stirpe F., Barbieri L.(FEBS letter (1986) 195, 1-8));および
トリコキリン(Trichokirin)(Casellasら(Eur. J. Biochem. (1988) 176, 581-588)、およびBolognesiら(Clin. exp. Immunol., (1992) 89, 341-346))。
本発明の抗GPC3抗体に含まれる定常領域に含まれるFc領域は、ヒトIgGから取得され得るが、IgGの特定のサブクラスに限定されるものでもない。Fc領域とは、EUナンバリングで表されるおよそ216位のアミノ酸における、パパイン切断部位のヒンジ領域のN末端から、当該ヒンジ、CH2およびCH3ドメインを含める抗体の重鎖定常領域をいう。当該Fc領域の好適な例として、後述されるようにFcγレセプターに対する結合活性を有するFc領域が挙げられる。そのようなFc領域の非限定な一態様として、ヒトIgG1(配列番号:74)、IgG2(配列番号:75)、IgG3(配列番号:76)、またはIgG4(配列番号:77)で表される定常領域に含まれるFc領域が例示される。
Fcγレセプター(FcγRとも記載される)とは、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4モノクローナル抗体のFc領域に結合し得るレセプターをいい、実質的にFcγレセプター遺伝子にコードされるタンパク質のファミリーのいかなるメンバーをも意味する。ヒトでは、このファミリーには、アイソフォームFcγRIa、FcγRIbおよびFcγRIcを含むFcγRI(CD64);アイソフォームFcγRIIa(アロタイプH131およびR131を含む。 即ち、FcγRIIa (H)およびFcγRIIa (R))、FcγRIIb(FcγRIIb-1およびFcγRIIb-2を含む)およびFcγRIIcを含むFcγRII(CD32);およびアイソフォームFcγRIIIa(アロタイプV158およびF158を含む。即ち、FcγRIIIa (V)およびFcγRIIIa (F))およびFcγRIIIb(アロタイプFcγRIIIb-NA1およびFcγRIIIb-NA2を含む)を含むFcγRIII(CD16)、ならびにいかなる未発見のヒトFcγR類またはFcγRアイソフォームまたはアロタイプも含まれるが、これらに限定されるものではない。FcγRは、ヒト、マウス、ラット、ウサギおよびサルを含むが、これらに限定されるものではない、いかなる生物由来でもよい。マウスFcγR類には、FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)、FcγRIII(CD16)およびFcγRIII-2(FcγRIV、CD16-2)、並びにいかなる未発見のマウスFcγR類またはFcγRアイソフォームまたはアロタイプも含まれるが、これらに限定されない。こうしたFcγレセプターの好適な例としてはヒトFcγRI(CD64)、FcγRIIa(CD32)、FcγRIIb(CD32)、FcγRIIIa(CD16)及び/又はFcγRIIIb(CD16)が挙げられる。ヒトFcγRIのポリペプチド配列は配列番号:78(NP_000557.1)に、ヒトFcγRIIa(アロタイプH131)のポリペプチド配列は配列番号:79(AAH20823.1)に(アロタイプR131は配列番号:79の166番目のアミノ酸がArgに置換されている配列である)、FcγRIIbのポリペプチド配列は配列番号:80(AAI46679.1)に、FcγRIIIaのポリペプチド配列は配列番号:81(AAH33678.1)に、およびFcγRIIIbのポリペプチド配列は、配列番号:82(AAI28563.1)に記載されている(カッコ内はRefSeq等のデータベース登録番号を示す)。Fcγレセプターが、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4モノクローナル抗体のFc領域に結合活性を有するか否かは、FACSやELISAフォーマットのほか、ALPHAスクリーン(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay)や表面プラズモン共鳴(SPR)現象を利用したBIACORE法等の公知の方法によって確認され得る(Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (2006) 103 (11), 4005-4010)。
前述されるように、本発明の抗GPC3抗体に含まれるFc領域として、Fcγレセプターに対する結合活性を有するFc領域が挙げられる。そのようなFc領域の非限定な一態様として、ヒトIgG1(配列番号:74)、IgG2(配列番号:75)、IgG3(配列番号:76)、またはIgG4(配列番号:77)で表される定常領域に含まれるFc領域が例示される。Fcγレセプターが、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4モノクローナル抗体のFc領域に結合活性を有するか否かは、FACSやELISAフォーマットのほか、ALPHAスクリーン(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay)や表面プラズモン共鳴(SPR)現象を利用したBIACORE法等の公知の方法によって確認され得る(Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (2006) 103 (11), 4005-4010)。
本発明の抗GPC3抗体が含むFc領域として、ヒトIgG1(配列番号:74)、IgG2(配列番号:75)、IgG3(配列番号:76)、またはIgG4(配列番号:77)で表される定常領域に含まれるFc領域のほかに、天然型ヒトIgGのFc領域のFcγレセプターに対する結合活性よりもFcγレセプターに対する結合活性が高いFcγR結合改変Fc領域も適宜使用され得る。本明細書において、「天然型ヒトIgGのFc領域」とは、配列番号:74、75、76または77で例示されるヒトIgG1、IgG2、IgG3またはIgG4の定常領域に含まれるFc領域のEUナンバリング297位に結合した糖鎖がフコース含有糖鎖であるFc領域を意味する。そのようなFcγR結合改変Fc領域は、天然型ヒトIgGのFc領域のアミノ酸を改変することによって作製され得る。FcγR結合改変Fc領域のFcγRに対する結合活性が、天然型ヒトIgGのFc領域のFcγRに対する結合活性より高いか否かは、前記のFACSやELISAフォーマットのほか、ALPHAスクリーン(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay)や表面プラズモン共鳴(SPR)現象を利用したBIACORE法等の公知の方法を用いて適宜実施され得る。
221位のアミノ酸がLysまたはTyrのいずれか、
222位のアミノ酸がPhe、Trp、GluまたはTyrのいずれか、
223位のアミノ酸がPhe、Trp、GluまたはLysのいずれか、
224位のアミノ酸がPhe、Trp、GluまたはTyrのいずれか、
225位のアミノ酸がGlu、LysまたはTrpのいずれか、
227位のアミノ酸がGlu、Gly、LysまたはTyrのいずれか、
228位のアミノ酸がGlu、Gly、LysまたはTyrのいずれか、
230位のアミノ酸がAla、Glu、GlyまたはTyrのいずれか、
231位のアミノ酸がGlu、Gly、Lys、ProまたはTyrのいずれか、
232位のアミノ酸がGlu、Gly、LysまたはTyrのいずれか、
233位のアミノ酸がAla、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
234位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
235位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
236位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
237位のアミノ酸がAsp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
238位のアミノ酸がAsp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
239位のアミノ酸がAsp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
240位のアミノ酸がAla、Ile、MetまたはThrのいずれか、
241位のアミノ酸がAsp、Glu、Leu、Arg、TrpまたはTyrのいずれか、
243位のアミノ酸がLeu、Glu、Leu、Gln、Arg、TrpまたはTyrのいずれか、
244位のアミノ酸がHis、
245位のアミノ酸がAla、
246位のアミノ酸がAsp、Glu、HisまたはTyrのいずれか、
247位のアミノ酸がAla、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Thr、ValまたはTyrのいずれか、
249位のアミノ酸がGlu、His、GlnまたはTyrのいずれか、
250位のアミノ酸がGluまたはGlnのいずれか、
251位のアミノ酸がPhe、
254位のアミノ酸がPhe、MetまたはTyrのいずれか、
255位のアミノ酸がGlu、LeuまたはTyrのいずれか、
256位のアミノ酸がAla、MetまたはProのいずれか、
258位のアミノ酸がAsp、Glu、His、SerまたはTyrのいずれか、
260位のアミノ酸がAsp、Glu、HisまたはTyrのいずれか、
262位のアミノ酸がAla、Glu、Phe、IleまたはThrのいずれか、
263位のアミノ酸がAla、Ile、MetまたはThrのいずれか、
264位のアミノ酸がAsp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、TrpまたはTyrのいずれか、
265位のアミノ酸がAla、Leu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
266位のアミノ酸がAla、Ile、MetまたはThrのいずれか、
267位のアミノ酸がAsp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
268位のアミノ酸がAsp、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、ValまたはTrpのいずれか、
269位のアミノ酸がPhe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
270位のアミノ酸がGlu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、TrpまたはTyrのいずれか、
271位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
272位のアミノ酸がAsp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
273位のアミノ酸がPheまたはIleのいずれか、
274位のアミノ酸がAsp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
275位のアミノ酸がLeuまたはTrpのいずれか、
276位のアミノ酸が、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
278位のアミノ酸がAsp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、ValまたはTrpのいずれか、
279位のアミノ酸がAla、
280位のアミノ酸がAla、Gly、His、Lys、Leu、Pro、Gln、TrpまたはTyrのいずれか、
281位のアミノ酸がAsp、Lys、ProまたはTyrのいずれか、
282位のアミノ酸がGlu、Gly、Lys、ProまたはTyrのいずれか、
283位のアミノ酸がAla、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、ArgまたはTyrのいずれか、
284位のアミノ酸がAsp、Glu、Leu、Asn、ThrまたはTyrのいずれか、
285位のアミノ酸がAsp、Glu、Lys、Gln、TrpまたはTyrのいずれか、
286位のアミノ酸がGlu、Gly、ProまたはTyrのいずれか、
288位のアミノ酸がAsn、Asp、GluまたはTyrのいずれか、
290位のアミノ酸がAsp、Gly、His、Leu、Asn、Ser、Thr、TrpまたはTyrのいずれか、
291位のアミノ酸がAsp、Glu、Gly、His、Ile、GlnまたはThrのいずれか、
292位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Pro、ThrまたはTyrのいずれか、
293位のアミノ酸がPhe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
294位のアミノ酸がPhe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
295位のアミノ酸がAsp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
296位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、ThrまたはValのいずれか、
297位のアミノ酸がAsp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
298位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
299位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
300位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、ValまたはTrpのいずれか、
301位のアミノ酸がAsp、Glu、HisまたはTyrのいずれか、
302位のアミノ酸がIle、
303位のアミノ酸がAsp、GlyまたはTyrのいずれか、
304位のアミノ酸がAsp、His、Leu、AsnまたはThrのいずれか、
305位のアミノ酸がGlu、Ile、ThrまたはTyrのいずれか、
311位のアミノ酸がAla、Asp、Asn、Thr、ValまたはTyrのいずれか、
313位のアミノ酸がPhe、
315位のアミノ酸がLeu、
317位のアミノ酸がGluまたはGln、
318位のアミノ酸がHis、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、ValまたはTyrのいずれか、
320位のアミノ酸がAsp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
322位のアミノ酸がAla、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Pro、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
323位のアミノ酸がIle、
324位のアミノ酸がAsp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Arg、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
325位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
326位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Gly、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
327位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
328位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
329位のアミノ酸がAsp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
330位のアミノ酸がCys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
331位のアミノ酸がAsp、Phe、His、Ile、Leu、Met、Gln、Arg、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
332位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
333位のアミノ酸がAla、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Ser、Thr、ValまたはTyrのいずれか、
334位のアミノ酸がAla、Glu、Phe、Ile、Leu、ProまたはThrのいずれか、
335位のアミノ酸がAsp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Val、TrpまたはTyrのいずれか、
336位のアミノ酸がGlu、LysまたはTyrのいずれか、
337位のアミノ酸がGlu、HisまたはAsnのいずれか、
339位のアミノ酸がAsp、Phe、Gly、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、SerまたはThrのいずれか、
376位のアミノ酸がAlaまたはValのいずれか、
377位のアミノ酸がGlyまたはLysのいずれか、
378位のアミノ酸がAsp、
379位のアミノ酸がAsn、
380位のアミノ酸がAla、AsnまたはSerのいずれか、
382位のアミノ酸がAlaまたはIleのいずれか、
385位のアミノ酸がGlu、
392位のアミノ酸がThr、
396位のアミノ酸がLeu、
421位のアミノ酸がLys、
427位のアミノ酸がAsn、
428位のアミノ酸がPheまたはLeuのいずれか、
429位のアミノ酸がMet、
434位のアミノ酸がTrp、
436位のアミノ酸がIle、もしくは
440位のアミノ酸がGly、His、Ile、LeuまたはTyrのいずれか、
の群から選択される少なくともひとつ一つ以上のアミノ酸の改変が挙げられる。また、改変されるアミノ酸の数は特に限定されず、一箇所のみのアミノ酸が改変され得るし、二箇所以上のアミノ酸が改変され得る。二箇所以上のアミノ酸の改変の組合せとしては、例えば表3(表3-1~表3-3)に記載されるような組合せが挙げられる。また、天然型ヒトIgGのFc領域のFcγレセプターに対する結合活性よりもFcγレセプターに対する結合活性が高いFcγR結合改変Fc領域(FcγR結合改変Fc領域)を含む抗GPC3抗体の具体的な例が、WO2007/047291に記載されている。
前記したように、活性型Fcγレセプターとしては、FcγRIa、FcγRIbおよびFcγRIcを含むFcγRI(CD64)、 FcγRIIaならびにアイソフォームFcγRIIIa(アロタイプV158およびF158を含む)およびFcγRIIIb(アロタイプFcγRIIIb-NA1およびFcγRIIIb-NA2を含む)を含むFcγRIII(CD16)が好適に挙げられる。また、FcγRIIb(FcγRIIb-1およびFcγRIIb-2を含む)が抑制型Fcγレセプターの好適な例として挙げられる。
本発明が提供する抗GPC3抗体に含まれるFc領域として、Fc領域に結合した糖鎖の組成がフコース欠損糖鎖を結合したFc領域の割合が高くなるように、またはバイセクティングN-アセチルグルコサミンが付加したFc領域の割合が高くなるように修飾されたFc領域も含まれ得る。抗体Fc領域に結合するN -グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN -アセチルグルコサミンからフコース残基を除去すると、FcγRIIIaに対する親和性が増強されることが知られている(Satoら(Expert Opin. Biol. Ther. (2006) 6 (11), 1161-1173))。こうしたFc領域を含むIgG1抗体は、上記ADCC活性が増強されていることが知られていることから、当該Fc領域を含む抗原結合分子は、本発明の医薬組成物に含まれる抗原結合分子としても有用である。抗体Fc領域に結合するN -グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN -アセチルグルコサミンからフコース残基が除去された抗体としては、例えば、次のような抗体;-グリコシル化が修飾された抗体(国際公開WO1999/054342等)、-糖鎖に付加するフコースが欠損した抗体(国際公開WO2000/061739、WO2002/031140、WO2006/067913等)、が挙げられる。また、Fc領域に結合した糖鎖の組成がフコース欠損糖鎖を結合したFc領域の割合が高くなるように、またはバイセクティングN-アセチルグルコサミンが付加したFc領域の割合が高くなるように修飾されたFc領域を含む抗GPC3抗体の具体的な例が、WO2006/046751およびWO2009/ 041062に記載されている。
本発明で使用される抗GPC3抗体の非限定な一態様として、その等電点(pI)が変化するように、抗GPC3抗体のアミノ酸残基が改変されている抗GPC3抗体も例示される。本発明が提供する抗GPC3抗体における「アミノ酸残基の電荷の改変」の好適な例としては以下のものが挙げられる。pI値を増加させる改変としては、例えば、配列番号:50で表される抗GPC3抗体の重鎖可変領域中のKabatナンバリングで表される43位のQのKへの置換、52位のDのNへの置換、105位のQのRへの置換から選択される少なくとも一つの置換を行うことができ、例えば配列番号:67で表されるアミノ酸配列に改変される。また、例えば、配列番号:51または配列番号:66で表される抗GPC3抗体の軽鎖可変領域中のKabatナンバリングで表される17位のEのQへの置換、27位のQのRへの置換、105位のQのRへの置換から選択される少なくとも一つの置換を行うことができ、例えば配列番号:68で表されるアミノ酸配列に改変される。一方、pI値を減少させる改変としては、配列番号:50で表される抗GPC3抗体の重鎖可変領域中のKabatナンバリングで表される19位のKのTへの置換、43位のQのEへの置換、61位のGのEへの置換、62位のKのSへの置換、64位のKのQへの置換、65位のGのDへの置換から選択される少なくとも一つの置換を行うことができ、例えば配列番号:69、配列番号:71で表されるアミノ酸配列に改変される。また、例えば、配列番号:51または配列番号:66で表される抗GPC3抗体の軽鎖可変領域中のKabatナンバリングで表される24位のRのQへの置換、27位のQのEへの置換、74位のKのTへの置換、77位のRのSへの置換、107位のKのEへの置換から選択される少なくとも一つの置換を行うことができ、例えば配列番号:70、配列番号:72、配列番号:73で表されるアミノ酸配列に改変される。さらに、pI値を減少させる改変としては、配列番号:74で表される重鎖定常領域中においてEUナンバリングで表される268位、274位、355位、356位、358位、419位から選択されるアミノ酸の少なくとも一つの置換が挙げられる。これらの置換は、例えば、配列番号31で表される重鎖定常領域の、EUナンバリングで表される268位のHのQへの置換、274位のKのQへの置換、355位のRのQへの置換、356位のDのEへの置換、358位のLのMへの置換、419位のQのEへの置換、から選択される少なくとも一つの置換が好適な例として挙げられ得る。これらの置換の結果、ヒト抗体のIgG1の定常領域とIgG4の定常領域とのキメラ体が構築される。すなわち、当該置換によって、改変された抗体の免疫原性に影響を及ぼすことなく、所望のpIを有する抗体の作製が可能となる。
配列番号:74、75、76または77で表されるIgGの定常領域におけるEUナンバリングで表される446位のGlyおよび447位のLysが欠損したIgG定常領域も本発明の抗GPC3抗体に含まれる定常領域として使用され得る。これらのアミノ酸を両方欠損させることにより、抗体の重鎖定常領域の末端に由来するヘテロジェニティーを低減することが可能である。
ポリペプチドの翻訳後修飾とは、ポリペプチドの生合成において翻訳されたポリペプチドに対する化学修飾をいう。抗体の一次構造はポリペプチドから形成されるため、本発明の抗GPC3抗体には、抗GPC3抗体の一次構造であるポリペプチドの翻訳後修飾を受けた修飾物も含まれる。ポリペプチドの翻訳後修飾には大きく、官能基付加、ポリペプチドまたはペプチドの付加(ISG化、SUMO化、ユビキチン化)、アミノ酸の化学的性質の変換(シリル化または脱アミン、脱アミド)、および構造変換(ジスルフィド化、プロテアーゼ分解)に分類することができる。本発明における翻訳後修飾の非限定な一態様として、ポリペプチドの形成単位であるアミノ酸残基に対するペプチド付加または官能基付加が挙げられる。かかる修飾として具体的には、リン酸化(セリン、スレオニン、チロシン、アスパラギン酸等)、グルコシル化(セリン、スレオニン、アスパラギン酸等)、アシル化(リシン)、アセチル化(リシン)、ヒドロキシル化(リシン、プロリン)、プレニル化(システイン)、パルミトイル化(システイン)、アルキル化(リシン、アルギニン)、ポリグルタミル化(グルタミン酸)、カルボキシル化(グルタミン酸)、ポリグリシル化(グルタミン酸)、シトルリン化(アルギニン)、スクシンイミド形成(アスパラギン酸)等を挙げることができる。例えば、N末端のグルタミンのピログルタミル化によるピログルタミン酸への修飾を受けた抗GPC3抗体も当然のことながら本発明の抗GPC3抗体に含まれる。また、例えば、二個の硫黄原子の間に形成される共有結合を意味する「ジスルフィド結合」によって重鎖と軽鎖、または重鎖同士が連結された抗GPC3抗体の翻訳後修飾物も、本発明の抗GPC3抗体に含まれる。アミノ酸のシステインに含まれるチオール基は、第二のチオール基とジスルフィド結合または架橋を形成することができる。一般的にIgG分子では、CH1およびCL領域がジスルフィド結合によって連結され、重鎖を形成する二つのポリペプチドは、EUナンバリングで表される226位および229位のシステイン残基間のジスルフィド結合によって連結される。こうしたジスルフィド結合によって連結された抗GPC3抗体の翻訳後修飾物も、本発明の抗GPC3抗体に含まれる。
「癌に対するGPC3標的治療剤の有効性」または「癌に対するGPC3標的治療剤が有効である」という用語は、癌であると診断された患者において、GPC3標的治療剤が、所望のまたは有益な効果を生じさせることをいう。所望のまたは有益な効果には、(1)癌細胞のさらなる成長または拡散の阻害、(2)癌細胞の死滅、(3)癌の再発の阻害、(4)癌に関連する症候(痛みなど)の緩和、低減、軽減、阻害、もしくは前記症候の頻度の低減、または(5)患者の生存率の改善が含まれ得る。癌の再発の阻害には、放射線、化学療法、外科手術、または他の技術によりこれまでに治療されている、癌の原発部位および周辺組織での癌の成長の阻害、ならびに新たな遠位部位での癌の成長の不存在が含まれる。所望のまたは有益な効果は、患者により知覚されるものまたは他覚的なもののいずれかであり得る。例えば、患者がヒトである場合、ヒトは、改善または療法に対する応答の、患者により知覚される兆候として、気力もしくは活力の改善または痛みの減少を認識し得る。あるいは、臨床医は、身体的検査、実験的パラメーター、腫瘍マーカー、またはX線撮影による所見に基づいて、腫瘍サイズまたは腫瘍組織量の減少に気付き得る。治療に対する応答について臨床医が観察し得るいくつかの実験的兆候には、白血球数、赤血球数、血小板数、赤血球沈降速度、および様々な酵素レベルなどの、試験結果の正常化が含まれる。さらに、臨床医は、検出可能な腫瘍マーカーの減少を観察し得る。あるいは、他覚的な改善を評価するために、超音波診断、核磁気共鳴試験、および陽電子放出試験などの他の試験を用いることができる。
本発明の非限定な一態様では、GPC3標的治療剤を投与される前の患者から単離された生物学的試料中の1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量を測定し、当該発現量が所定の値である場合に当該GPC3標的治療剤が有効であると決定する方法が提供される。「GPC3標的治療剤を投与される前の患者」とは、癌であると診断された患者であって、上述のGPC3標的治療剤を投与された経歴のない患者をいい、さらに、当該患者は、上述の腫瘍組織におけるGPC3の総発現量または単位面積あたりの発現量からGPC3標的治療剤が有効であると決定されていてもよいし、上述の腫瘍組織におけるGPC3の総発現量または単位面積あたりの発現量からGPC3標的治療剤が有効でないと決定されていてもよい。本発明のある態様では、例えば、GPC3標的治療剤が有効でないと決定された患者から、1腫瘍細胞あたりのGPC3発現量を併せて考慮することにより、現実にはGPC3標的治療剤が有効である患者を抽出することが可能である。GPC3標的治療剤の投与経路は、投与されるGPC3標的治療剤の性状等に併せて好適な投与経路が適宜選択され得る。例えば、投与経路の例として非経口投与が例示される。非経口投与のさらなる例として、例えば、注射投与、経鼻投与、経肺投与、経皮投与が例示される。例えば、注射投与のさらなる例として、静脈内注射投与、筋肉内注射投与、腹腔内注射投与、皮下注射投与などによる全身または局部的な投与が例示される。
上記の、当該1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である場合に、当該GPC3標的治療剤が有効であると決定する際に、さらに、遊離GPC3濃度を併せて考慮することも可能である。すなわち、GPC3標的治療剤を投与される前の患者から単離された生物学的試料中の遊離GPC3濃度を測定し、当該遊離GPC3濃度が所定の値である場合に当該GPC3標的治療剤が有効であると決定することも含まれる。
本発明における患者の選別方法は、上述の方法により、患者から単離された生物学的試料中の1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である場合にGPC3標的治療剤が有効な患者であると決定する工程を含む。本発明の非限定な一態様において、上記の患者の選別方法は、さらに、患者から単離された生物学的試料中の遊離GPC3濃度が所定の値である場合にGPC3標的治療剤が有効な患者であると決定する工程を含むこともできる。また、別の異なる非限定な一態様において、上記の患者の選別方法は、さらに、GPC3標的治療剤を投与される前の患者および/またはGPC3標的治療剤を投与された患者から単離された生物学的試料中の遊離GPC3濃度をモニタリングし、当該遊離GPC3濃度が所定の値である場合に当該GPC3標的治療剤の投与の継続を決定する工程を含むこともできる。
本発明において治療剤とは、通常、疾患の治療もしくは予防、または検査・診断のための薬剤をいう。また、本発明において、「GPC3標的治療剤を投与される前の癌患者から単離された生物学的試料中の1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である患者(のみ)に投与するためのGPC3標的治療剤」との用語は、「GPC3標的治療剤を受ける前の癌患者から単離された生物学的試料中の1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である患者(のみ)にGPC3標的治療剤を投与することを含む癌の治療方法」と言い換えることも可能であるし、「癌を治療するための医薬の製造における、GPC3標的治療剤を投与される前の癌患者から単離された生物学的試料中の1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である患者(のみ)に投与するためのGPC3標的治療剤の使用」と言い換えることも可能である。この文脈において、用語「患者のみ」とは、生物学的試料中の1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である患者には投与するが、所定の値でない患者には投与しないことを意味する。本発明の好ましいある特定の態様では、例えば、GPC3標的治療剤を投与される前の癌患者から単離された生物学的試料中の1腫瘍細胞あたりのGPC3発現量が所定の値である患者にはGPC3標的治療剤を投与するが、所定の値ではない患者に対しては投与しないことができる(例えば、生物学的試料中の1腫瘍細胞あたりのGPC3発現量が一定値以上であれば投与するが、一定値未満の場合には投与しない)。
本発明の製剤には、GPC3標的治療剤を投与される前の癌患者から単離された生物学的試料中の1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である患者(のみ)に投与する旨の指示書が含まれる。また、本発明における肝癌の治療用キットには、GPC3標的治療剤、およびGPC3標的治療剤を投与される前の癌患者から単離された生物学的試料中の1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である患者(のみ)に投与する旨の指示書が含まれる。この文脈において、用語「患者のみ」とは、生物学的試料中の1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量が所定の値である患者には投与するが、所定の値でない患者には投与しないことを意味する。本発明の好ましいある特定の態様では、指示書は、例えば、GPC3標的治療剤を投与される前の癌患者から単離された生物学的試料中の1腫瘍細胞あたりのGPC3発現量が所定の値である患者には投与するが、所定の値ではない患者に対しては投与しないという趣旨の記載がなされた指示書とすることができる(例えば、1腫瘍細胞あたりのGPC3発現量が一定値以上であれば投与するが、一定値未満の場合には投与しないという趣旨の記載としてもよい)。
本発明の診断キットには、GPC3標的治療剤を投与される前の癌患者から単離された生物学的試料中の1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量を測定するための試薬が含まれる。
GC33は、ヒトGPC3に高い親和性をもって結合する遺伝子組換えヒト化IgG1モノクローナル抗体である(WO2006/006693)。また、GC33とキナーゼ阻害剤であるソラフェニブとの併用効果がヒト肝癌細胞株を用いた非臨床試験において見出されている(Ishiguro T et al., Anti-Glypican 3 antibody as a potential antitumor agent for human liver cancer. Cancer Res. (2008) 68, 9832-9838. またはWO2009/122667)。
Ishiguroらに従い、GPC3を強発現するヒト細胞株HepG2を用いたマウス移植モデルにおいてGC33、ag-GC33(重鎖Fc領域のN型糖鎖結合部位である297位のアスパラギン残基をアラニン残基に置換し、糖鎖を結合しなくすることでADCC活性をなくしたGC33の改変体:Ishiguro T et al., Anti-Glypican 3 antibody as a potential antitumor agent for human liver cancer. Cancer Res. (2008) 68, 9832-9838)もしくはソラフェニブ単剤、またはGC33およびag-GC33とソラフェニブとの併用における抗腫瘍効果に加え、マウス血漿中の可溶型GPC3の変化を検討した。
GC33またはag-GC33は、HepG2移植後18日目より5 mg/kgで週1回、計3回尾静脈より投与され、ソラフェニブは、同じくHepG2移植後18日目より5 mg/kgで週5回、3週間経口投与された。各投与群での腫瘍体積の推移を図1に示す。
GC33投与群においては抗腫瘍効果が発揮され、対照群に比べ腫瘍の増大が抑制された。一方で、ADCC活性をなくしたag-GC33では腫瘍増大抑制効果は見られなかった。ソラフェニブ投与群では、腫瘍増大抑制効果がGC33より弱かった。GC33及びソラフェニブ併用群においては、腫瘍増大抑制効果が最も高かった。
ELISAにおけるsGPC3-Nの検出およびsGPC3-Cの検出は、具体的には、以下のように行った。まず、96ウェルマイクロプレート(Meso Scale Discovery社製、Multi-array 96-well plate)に1 μg/mLとなるようにCarbonate-Bicarbonateバッファー(SIGMA社製)にて希釈したGT30抗体、または128 μg/mLとなるように同様に調製したM3C11抗体を50 μLずつ加え、室温で1時間撹拌した。次いで、マイクロプレートを洗浄液(SIGMA社製、PBS Buffered Saline with Tween 20, pH 7.4)で5回洗浄後、ブロッキング溶液(Roche社製Bovine Serum Albumin Fraction Vを2.5または5.0%ふくむPBS Buffered Saline with Tween 20, pH 7.4)を100 μLずつ加え、室温で1時間撹拌した。さらに、マイクロプレートを洗浄液で3回洗浄後、検量線用標準品を希釈液(Bovine Serum Albumin Fraction Vを0.05または1.0%ふくむPBS Buffered Saline with Tween 20, pH 7.4)にて段階希釈した後、さらに希釈液で5倍希釈したコントロールマウス血漿を等用量で混合した検量線用標準品溶液または希釈液で10倍希釈したマウス血漿を50 μLずつ加え、室温で1時間撹拌した。洗浄液で5回洗浄後、検出抗体溶液としてビオチン標識したGT607抗体(1 μg/mL)、またはビオチン標識したGT96抗体(8 μg/mL)を50μLずつ加え、室温で1時間撹拌した。洗浄液で5回洗浄後、希釈液にて500倍希釈したSULFO-TAG Streptavidin(Meso Scale Discovery社製)を25μLずつ加え、室温で1時間撹拌した。洗浄液で5回洗浄後、基質溶液(MSD社製、MSD Read Buffer T (4x) with Surfactant)を100μLずつ加え、電気化学発光免疫測定器(ECL:Meso Scale Discovery社製、SECTOR imager 2400)にてシグナルを測定した。測定結果をもとに、検量線よりマウス血漿中のsGPC3-NまたはsGPC3-C濃度が算出された。なお、検量線用標準品としては、ヘパラン硫酸糖鎖が結合しないように495位ならびに509位のセリン残基がアラニン残基に置換されたリコンビナントGPC3(Hippoら(Cancer Res.(2004) 64, 2418-2423))が用いられた。
各マウスにおけるsGPC3-Nの測定結果のプロット図を図2に、sGPC3-Cの測定結果のプロット図を図3に示す。
GC33投与群においては、対照群に比べsGPC3-Nが少ないことが見出された。一方で、ADCC活性をなくしたag-GC33では、sGPC3-Nは対照群と同程度であった。ソラフェニブ投与群では、sGPC3-N値はGC33と同程度であった。
sGPC3-Cに関しては、sGPC3-Nと異なり、GC33投与群で対照群、ag-GC33ならびにソラフェニブ群に比べ高値であり、GC33のADCC活性による抗腫瘍効果がsGPC-3の上昇をもたらすことが示唆された。
GC33およびソラフェニブ併用時の、進行および/または再発性肝細胞癌(HCC)患者におけるDose Limiting Toxicity(DLT)を確認するため、多施設において第I相臨床試験が実施された(GC-002US試験)。進行および/または再発性HCC患者における安全性および/または忍容性の確認、GC33の薬物動態プロファイル、抗腫瘍効果、およびバイオマーカー探索を目的とする本試験では、HCC患者にGC33が週1回(2.5 mg/kg体重、5 mg/kg体重、10 mg/kg体重もしくは1,600 mg)、または2週に1回(1,600 mg)、点滴を用いた静脈注射によって投与された。ソラフェニブは最初のGC33投与の次の日から投薬が開始され、400 mgを1日2回、毎日服薬され、添付文書に従い減薬または休薬された。
投与が検討されたHCC患者は、ソラフェニブ治療歴のない組織学的または細胞学的に確認された、外科手術および/または治癒的治療に適していない進行性または転移性のHCCを有していた。適格患者は少なくとも18歳であり、3ヶ月以上の生存が見込まれ、米国東海岸癌臨床試験グループ・パフォーマンスステータスが0または1で、かつChild-Pugh(チャイルドピュー指数) AまたはBクラス(なお、試験途中よりChild-Pugh Aクラスのみに変更)であった。また、固形腫瘍の治療効果基準(RECIST)に従い少なくとも1つの評価可能な病変を有していた。他の基準としては、GPC3免疫組織染色(GPC3-IHC)に用いられるHCC腫瘍組織(針生検標本)が提供可能であることのほか、適切な造血機能(絶対好中球数≧1500/μl、血小板≧75,000 /μl(なお、試験途中より100,000/μLに変更))、適切な肝機能(総ビリルビン≦正常の3 倍(なお、試験途中より≦正常の1.5倍)、アスパルギン酸アミノトランスフェラーゼおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ≦正常の5倍、PT-INR≦2.0)、および適切な腎機能(血清クレアチニン≦正常の2倍)が定められた。経口服薬困難な患者、妊婦、授乳婦または妊娠検査陽性(妊娠検査は登録日から12カ月以内に月経のあった女性を対象とする)の患者、適切な避妊法を用いる意思のない患者、HIV抗体陽性の患者、HBVまたはHCVを除く治療を要する活動性の感染症を有する患者、無病期間が5年未満の他の活動性悪性腫瘍を有する患者、移植の既往歴を有する患者、管理不能な併存疾患を有する患者、症状を伴う脳転移が認められる患者、同意または治験実施の理解に支障をきたす中枢神経系障害または他の精神障害を有する患者、管理不能な高血圧症を有する患者、癌に関連のない血栓塞栓症、GPC3標的治療剤投与前の4週間以内に重度の肺出血や生命を脅かす他の出血の既往がある患者、重度な治癒していない創傷または潰瘍、骨折、針生検による影響が残る患者を有する患者、GPC3標的治療剤投与前の2週間以内に抗凝固薬や血栓溶解剤、全身用抗ウイルス薬、輸血を受けた患者、他の抗体医薬品またはCHO細胞によって製造された医薬品に対する既知の過敏性を示した患者、CYP3A4を誘導する薬剤の治療を受けている患者は、登録の除外対象となった。また、GPC3標的治療剤投与前の4週間以内に主要な外科手術、放射線療法、その他の化学療法を含めた治療を受けた患者は、GPC標的治療剤の登録の除外対象となる所定期間のwash-out以降にGPC3標的治療がなされた。プロトコルは、医薬品の臨床試験の実施の基準のガイドラインに従って実施され、それぞれの参加する治験倫理審査委員会により認可された。全ての患者は、登録の前に、書面のインフォームドコンセントに署名した。患者へのGC33投与は、週1回投与の場合は4回投与を1サイクル、2週に1回投与の場合は2回投与を1サイクルとし、疾患の進行または許容不可能な毒性が発現しない限り、GC33およびソラフェニブの投与が継続された。腫瘍の評価はベースラインで実施し、疾患が進行するまで2サイクルごとに反復して評価された。疾患の状態は治験責任医師によって評価された。
主目的として安全性・忍容性の評価が、副次目的として、PK解析、効果評価、バイオマーカー探索、第II相臨床試験に向けた至適用量の検討がなされた。効果評価としては、肝細胞癌マーカーとして知られるαフェトプロテイン(AFP)のベースラインからの変化、ならびに無増悪生存期間(PFS:Progression free survival)、増悪までの期間(TTP:Time-to-progression)が求められた。
HCC腫瘍組織におけるGPC3タンパク質の発現はGPC3組織免疫染色(GPC3-IHC)によって評価された。HCC患者に対するGC33およびソラフェニブの投与開始前に、各病院によって針生検により当該HCC患者からHCC腫瘍組織が摘出され、フォルマリン固定およびパラフィン法埋された腫瘍ブロックが作製された。当該腫瘍ブロックより調製されたHCC腫瘍組織の未染色スライドのGPC3-IHCは、BenchMark自動染色装置(Ventana Medical Systgem社製)を用い、anti-glypican 3 Mouse GC33 Monoclonal Primary Antibody(Ventana Medical System Inc.)添付の指示書に従って中央測定がなされた。Ventana Medical Systemにて実施されたGPC3-IHCのスコアは、染色後の腫瘍細胞の細胞膜、または細胞質内の染色強度を0~3に分類し、それぞれの染色強度を示す細胞の割合を基に算出するHスコア(文献:KS. McCarty Jr. et al., Use of a monoclonal anti-Estrogen receptor antibody inthe immunohistochemical evaluation of human tumors. Cancer Res. Suppl. (1986) 46, 4244s-4248s)を用い下記計算式により算出され、図4に示す分布が得られた。
Hスコア = 1×(染色強度が弱陽性の細胞の割合(%)) + 2×(染色強度が中陽性の細胞の割合(%)) + 3×(染色強度が強陽性の細胞の割合(%))
IQD法によるスコアとして、非癌部の蛍光強度を差し引いた腫瘍部位の蛍光強度の合算値としてのintensityスコア(GPC3のIQD Intensity Score)、または腫瘍細胞あたりの蛍光強度を示すCellスコア(GPC3のIQD Cell Score)がそれぞれ各サンプルの平均値として算出され、図5に示す分布が得られた。
それぞれのGC33投与量ならびにGPC3-IHCまたはGPC3-IQDにて評価された症例数を表4に示す。
GC33が投与された患者の血清中の遊離GPC3の濃度が測定された。実施例1と同様にGT30とGT607の組合せを用いてsGPC3-Nを測定し、GT96とM3C11の組合せを用いてsGPC3-Cの濃度を測定した。GT30とGT607の組合せに関しては、Haruyamaらの方法(Haruyama Y et al., High preoperative levels of serum glypican-3 containing N-terminal subunit are associated with poor prognosis in patients with hepatocellular carcinoma after partial hepatectomy. (2015) in press)に従い遊離GPC3の濃度が測定され、GT96とM3C11の組合せに関しても、M3C11と抗体結合磁性粒子を結合させ、GT96とアルカリフォスファターゼを結合させたものを用いたほかは、Haruyamaらの方法に従い遊離GPC3の濃度が測定された。
GC33およびソラフェニブ投与前の患者血清中の測定値をベースライン値とし、投与後に採血された血清の測定値との変化が算出され、最良変化率、すなわちsGPC3-Nについては最小変化率、sGPC3-Cについては最大変化率が求められた。
GC33およびソラフェニブ投与による抗腫瘍効果として、前述の通りsGPC3-N最小変化率、sGPC3-C最大変化率、AFP最小変化率、TTPならびにPFSをそれぞれ用い、腫瘍組織におけるGPC3の発現との関連性が調べられた。GPC3の発現評価としてGPC3-IHCによる膜Hスコアおよび細胞質Hスコア、GPC3のIQD Cell ScoreおよびIQD Intensity Scoreをそれぞれ用い、これらのスコアとsGPC3-N最小変化率、sGPC3-C最大変化率およびAFP最小変化率との関連性を、回帰分析のパラメーター推定量についてのt検定またはSpearmanの相関係数を用いてそれぞれ検討した。その結果、表5に示すように、GPC3のIQD Cell Scoreにおいて、sGPC3-C最大変化率との有意な関係性が示された。また、各GPC3スコアの変化、すなわちGPC3-IHCによる膜Hスコア、細胞質Hスコア、GPC3のIQD Intensity Scoreについてはそれぞれのスコアが10変化する毎、GPC3のIQD Cell Scoreについてはスコアが100,000変化する毎でのTTPまたはPFSについてハザード比を検討した。その結果、表5に示すように、従来の手法(例えば、GPC3-IHCや単位面積あたりの蛍光強度IQD Intensity Score)ではPFSとの高い相関は見られなかったが、意外にも、GPC3の1腫瘍細胞あたりの存在量(IQD Cell Score)においてのみPFSと予想外の高い相関が見られた。
続いて、今回の評価においてPFSとの高い相関がみられなかった各種GPC3評価法、すなわちGPC3-IHC膜Hスコア、又は細胞質Hスコア、若しくはGPC3-IQD Intensity Scoreを用いた評価法において、各スコアの値がそれぞれの中央値より高い値を示す症例のみに絞った上で、腫瘍組織の単位面積(μm2)あたりの腫瘍細胞サイズの平均値をもとに中央値を算出し、中央値よりも腫瘍細胞サイズが小さい群と、大きい群の2群に分類した。それぞれのスコアにおいて、腫瘍細胞サイズで2群間のGPC3値の平均値はほぼ変わりはなく、いずれにおいても有意差が見られなかった(表6)。
Claims (18)
- 肝臓癌患者におけるGPC3発現肝臓癌に対するGPC3標的治療剤の有効性を決定するための方法であって、当該患者から単離された肝癌組織試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量を測定することと、前記1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量がIQD Cell Scoreが13000から22000の範囲の閾値より高いか否かを決定することとを含み、IQD Cell Scoreが当該閾値より高い場合に当該GPC3標的治療剤が有効であることが示される、方法{但し、ヒトに対する診断を除く}。
- 前記GPC3標的治療剤が、前記患者の血中トラフ値で200μg/ml以上となるように投与されるものである、請求項1に記載の方法。
- 前記GPC3標的治療剤が、抗GPC3抗体を有効成分として含む治療剤である、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記抗GPC3抗体が、抗体依存性細胞傷害(ADCC)活性および/または補体依存性細胞傷害(CDC)活性を有する抗体である、請求項3に記載の方法。
- 前記抗GPC3抗体が、以下の(1)から(5)のいずれか:
(1) 配列番号:4、配列番号:5、および配列番号:6でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:7、配列番号:8、および配列番号:9でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
(2) 配列番号:12、配列番号:13、および配列番号:14でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:15、配列番号:16、および配列番号:17でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
(3) 配列番号:20、配列番号:21、および配列番号:22でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:23、配列番号:24、および配列番号:25でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
(4) 配列番号:28、配列番号:29、および配列番号:30でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:31、配列番号:32、および配列番号:33でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;もしくは
(5) 配列番号:36、配列番号:37、および配列番号:38でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:39、配列番号:40、および配列番号:41でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
を含む抗GPC3キメラ抗体またはヒト化抗GPC3抗体である、請求項3または請求項4に記載の方法。 - 前記抗GPC3抗体が、以下の(1)から(6)のいずれか:
(1) 配列番号:44、配列番号:45、配列番号:46、配列番号:47、配列番号:48、配列番号:49、および配列番号:50で表される重鎖可変領域の群から選択される重鎖可変領域、ならびに配列番号:51で表される軽鎖可変領域;
(2) 配列番号:44、配列番号:45、配列番号:46、配列番号:47、配列番号:48、配列番号:49、および配列番号:50で表される重鎖可変領域の群から選択される重鎖可変領域、ならびに配列番号:52、配列番号:53、配列番号:54、配列番号:55、配列番号:56、配列番号:57、配列番号:58、配列番号:59、配列番号:60、配列番号:61、配列番号:62、配列番号:63、配列番号:64、配列番号:65、および配列番号:66で表される軽鎖可変領域の群から選択される軽鎖可変領域;
(3) 配列番号:67で表される重鎖可変領域、および配列番号:68で表される軽鎖可変領域;
(4) 配列番号:69で表される重鎖可変領域、および配列番号:70で表される軽鎖可変領域;
(5) 配列番号:71で表される重鎖可変領域、および配列番号:72で表される軽鎖可変領域;もしくは
(6) 配列番号:71で表される重鎖可変領域、および配列番号:73で表される軽鎖可変領域;
を含む抗体である、請求項3から請求項5のいずれかに記載の方法。 - 前記GPC3標的治療剤が、1または2以上の抗がん剤と同時または別々に投与されるものである、請求項1から請求項6のいずれかに記載の方法。
- 前記抗がん剤がソラフェニブである、請求項7に記載の方法。
- 抗GPC3抗体を有効成分として含む薬剤であって、肝臓癌患者から単離された肝癌組織試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量がIQD Cell Score が13000から22000の範囲の閾値より高い肝臓癌患者に投与するための薬剤。
- 前記患者が、当該患者から単離された腫瘍組織試料における1腫瘍細胞あたりのGPC3の発現量がIQD Cell Score が13000から22000の範囲の閾値より高いことによりGPC3標的治療剤が有効であると決定された患者である、請求項9に記載の薬剤。
- 前記肝癌が、抗GPC3抗体が有効である肝癌である、請求項9または請求項10に記載の薬剤。
- 前記抗GPC3抗体が、前記患者の血中トラフ値で200μg/ml以上となるように投与される、請求項9から請求項11のいずれかに記載の薬剤。
- 前記抗GPC3抗体が、抗体依存性細胞傷害(ADCC)活性および/または補体依存性細胞傷害(CDC)活性を有する抗体である、請求項9から請求項12のいずれかに記載の薬剤。
- 前記抗GPC3抗体が、以下の(1)から(5)のいずれか:
(1) 配列番号:4、配列番号:5、および配列番号:6でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:7、配列番号:8、および配列番号:9でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
(2) 配列番号:12、配列番号:13、および配列番号:14でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:15、配列番号:16、および配列番号:17でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
(3) 配列番号:20、配列番号:21、および配列番号:22でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:23、配列番号:24、および配列番号:25でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
(4) 配列番号:28、配列番号:29、および配列番号:30でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:31、配列番号:32、および配列番号:33でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;もしくは
(5) 配列番号:36、配列番号:37、および配列番号:38でそれぞれ表される重鎖CDR1、重鎖CDR2および重鎖CDR3、ならびに配列番号:39、配列番号:40、および配列番号:41でそれぞれ表される軽鎖CDR1、軽鎖CDR2および軽鎖CDR3;
を含む抗GPC3キメラ抗体またはヒト化抗GPC3抗体である、請求項9から請求項13のいずれかに記載の薬剤。 - 前記抗GPC3抗体が、以下の(1)から(6)のいずれか:
(1) 配列番号:44、配列番号:45、配列番号:46、配列番号:47、配列番号:48、配列番号:49、および配列番号:50で表される重鎖可変領域の群から選択される重鎖可変領域、ならびに配列番号:51で表される軽鎖可変領域;
(2) 配列番号:44、配列番号:45、配列番号:46、配列番号:47、配列番号:48、配列番号:49、および配列番号:50で表される重鎖可変領域の群から選択される重鎖可変領域、ならびに配列番号:52、配列番号:53、配列番号:54、配列番号:55、配列番号:56、配列番号:57、配列番号:58、配列番号:59、配列番号:60、配列番号:61、配列番号:62、配列番号:63、配列番号:64、配列番号:65、および配列番号:66で表される軽鎖可変領域の群から選択される軽鎖可変領域;
(3) 配列番号:67で表される重鎖可変領域、および配列番号:68で表される軽鎖可変領域;
(4) 配列番号:69で表される重鎖可変領域、および配列番号:70で表される軽鎖可変領域;
(5) 配列番号:71で表される重鎖可変領域、および配列番号:72で表される軽鎖可変領域;もしくは
(6) 配列番号:71で表される重鎖可変領域、および配列番号:73で表される軽鎖可変領域;
を含む抗体である、請求項9から請求項14のいずれかに記載の薬剤。 - 1または2以上の抗がん剤を有効成分としてさらに含む、請求項9から請求項15のいずれかに記載の薬剤。
- 1または2以上の抗がん剤と同時にまたは別々に投与される、請求項9から請求項15のいずれかに記載の薬剤。
- 前記抗がん剤がソラフェニブである、請求項16または請求項17に記載の薬剤。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015133076 | 2015-07-01 | ||
JP2015133076 | 2015-07-01 | ||
PCT/JP2016/069493 WO2017002934A1 (ja) | 2015-07-01 | 2016-06-30 | Gpc3標的治療剤が有効である患者に投与されるgpc3標的治療剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2017002934A1 JPWO2017002934A1 (ja) | 2018-06-07 |
JP7096667B2 true JP7096667B2 (ja) | 2022-07-06 |
Family
ID=57608235
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017526441A Active JP7096667B2 (ja) | 2015-07-01 | 2016-06-30 | Gpc3標的治療剤が有効である患者に投与されるgpc3標的治療剤 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11376326B2 (ja) |
EP (1) | EP3318879B1 (ja) |
JP (1) | JP7096667B2 (ja) |
WO (1) | WO2017002934A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109385403B (zh) * | 2017-08-04 | 2024-03-08 | 恺兴生命科技(上海)有限公司 | 靶向gpc3的car nk细胞 |
WO2019149279A1 (zh) * | 2018-02-02 | 2019-08-08 | 科济生物医药(上海)有限公司 | 细胞免疫治疗的组合 |
WO2020066043A1 (ja) * | 2018-09-28 | 2020-04-02 | オリンパス株式会社 | 顕微鏡システム、投影ユニット、及び、画像投影方法 |
CN112175085B (zh) * | 2019-06-14 | 2022-11-04 | 厦门大学 | 抗gpc3抗体及其用途 |
CN116669772A (zh) * | 2020-11-19 | 2023-08-29 | 艾迪健公司 | Gpc3结合剂、其缀合物以及使用它们的方法 |
Family Cites Families (53)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5322678A (en) | 1988-02-17 | 1994-06-21 | Neorx Corporation | Alteration of pharmacokinetics of proteins by charge modification |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
ES2251723T3 (es) | 1994-08-12 | 2006-05-01 | Immunomedics, Inc. | Inmunoconjugados y anticuerpos humanizados especificos para linfoma de celulas b y celulas de leucemia. |
US6617156B1 (en) | 1997-08-15 | 2003-09-09 | Lynn A. Doucette-Stamm | Nucleic acid and amino acid sequences relating to Enterococcus faecalis for diagnostics and therapeutics |
US6528624B1 (en) | 1998-04-02 | 2003-03-04 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
AU776790B2 (en) | 1999-02-12 | 2004-09-23 | Lexigen Pharmaceuticals Corporation | Methods for treatment of tumors and metastases using a combination of anti-angiogenic and immuno therapies |
ES2527754T3 (es) | 2000-04-25 | 2015-01-29 | Icos Corporation | Inhibidores de la isoforma delta de la fosfatidilinositol 3-quinasa humana |
NZ505538A (en) | 2000-07-03 | 2004-12-24 | Malaghan Inst Of Medical Res | A vaccine comprising immunogenic acyl glyceryl phosphatidylinositol manno-oligosaccharide (PIM); and the use of PIM for inducing an immune response in a patient effective in the prevention or treatment of Th2-mediated diseases or disorders such as asthma |
US6436411B1 (en) | 2000-10-23 | 2002-08-20 | The Center For The Improvement Of Human Functioning, Int'l., Inc. | Cancer treatment method |
AU2002226930A1 (en) | 2000-11-17 | 2002-05-27 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Reduction of the nonspecific animal toxicity of immunotoxins by mutating the framework regions of the fv to lower the isoelectric point |
JP4281869B2 (ja) | 2001-06-22 | 2009-06-17 | 中外製薬株式会社 | 抗グリピカン3抗体を含む細胞増殖抑制剤 |
JP4063769B2 (ja) | 2001-12-28 | 2008-03-19 | 中外製薬株式会社 | タンパク質安定化方法 |
US20040110226A1 (en) | 2002-03-01 | 2004-06-10 | Xencor | Antibody optimization |
US7317091B2 (en) | 2002-03-01 | 2008-01-08 | Xencor, Inc. | Optimized Fc variants |
US20040132101A1 (en) | 2002-09-27 | 2004-07-08 | Xencor | Optimized Fc variants and methods for their generation |
WO2004022597A1 (ja) | 2002-09-04 | 2004-03-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Gpc3の血中可溶化n端ペプチドに対する抗体 |
RU2319969C2 (ru) | 2002-05-23 | 2008-03-20 | Саннибрук Энд Вуменз Колледж Хелс Сайнсиз Сентре | Способ диагностики гепатоцеллюлярной карциномы |
AU2002330482A1 (en) | 2002-09-04 | 2004-03-29 | Perseus Proteomics Inc. | Method of diagnosing cancer by detecting gpc3 |
AU2002328429A1 (en) | 2002-09-04 | 2004-03-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | CONSTRUCTION OF ANTIBODY USING MRL/lpr MOUSE |
ATE541857T1 (de) | 2002-09-27 | 2012-02-15 | Xencor Inc | Optimierte fc-varianten und herstellungsverfahren dafür |
US20090010920A1 (en) | 2003-03-03 | 2009-01-08 | Xencor, Inc. | Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb |
US20080008710A1 (en) | 2003-09-04 | 2008-01-10 | Hiroyuki Aburatani | Therapeutic Agent And Diagnostic Agent For Cholangiocarcinoma |
US7691586B2 (en) | 2004-04-28 | 2010-04-06 | Perseus Proteomics Inc. | Method for predicting and judging the recurrence of liver cancer after treating liver cancer |
JP4331227B2 (ja) | 2004-07-09 | 2009-09-16 | 中外製薬株式会社 | 抗グリピカン3抗体 |
EP2314317A3 (en) * | 2004-07-09 | 2011-06-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anti-glypican 3 antibody |
JP2008510007A (ja) | 2004-08-16 | 2008-04-03 | メディミューン,インコーポレーテッド | 抗体依存性細胞性細胞傷害活性が増強されたEph受容体Fc変異体 |
KR20130103580A (ko) | 2004-08-24 | 2013-09-23 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 항 글리피칸 3 항체를 이용한 어쥬번트 요법 |
US20080003623A1 (en) | 2004-10-05 | 2008-01-03 | Atsushi Nakajima | Monitoring Agent for Seriousness of Hepatitis |
RU2451030C2 (ru) | 2004-10-26 | 2012-05-20 | Чугаи Сейяку Кабусики Кайся | Анти-глипикан 3-антитело, имеющее модифицированную сахарную цепь |
WO2006067847A1 (ja) | 2004-12-22 | 2006-06-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | フコーストランスポーターの機能が阻害された細胞を用いた抗体の作製方法 |
CA2614181A1 (en) | 2005-07-01 | 2007-01-11 | Medimmune, Inc. | An integrated approach for generating multidomain protein therapeutics |
JP2007093274A (ja) | 2005-09-27 | 2007-04-12 | Perseus Proteomics Inc | 癌の診断方法および治療薬 |
US20070087005A1 (en) | 2005-10-14 | 2007-04-19 | Lazar Gregory A | Anti-glypican-3 antibody |
US10155816B2 (en) | 2005-11-28 | 2018-12-18 | Genmab A/S | Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof |
JP2009532336A (ja) | 2006-03-06 | 2009-09-10 | メディミューン,エルエルシー | ヒト化抗cd22抗体、並びに腫瘍、移植及び自己免疫疾患の治療におけるこれらの使用 |
WO2007137170A2 (en) | 2006-05-20 | 2007-11-29 | Seattle Genetics, Inc. | Anti-glypican-3 antibody drug conjugates |
US20100167315A1 (en) | 2006-09-13 | 2010-07-01 | Glycode | Method for investigating the response to a treatment with a monoclonal antibody |
JP5334319B2 (ja) | 2007-09-26 | 2013-11-06 | 中外製薬株式会社 | Cdrのアミノ酸置換により抗体の等電点を改変する方法 |
MY148637A (en) | 2007-09-28 | 2013-05-15 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anti-glypican-3 antibody having improved kinetics in plasma |
MX2010010136A (es) | 2008-03-17 | 2011-02-23 | Univ Miyazaki | Metodo para detectar celulas de cancer de higado usando anticuerpo anti-glipicano 3. |
CL2009000647A1 (es) | 2008-04-04 | 2010-06-04 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Composicion farmaceutica para tratar o prevenir cancer hepatico que comprende una combinacion de un agente quimioterapeutico y un anticuerpo anti-glipicano 3; agente para atenuar un efecto secundario que comprende dicho anticuerpo; metodo para tratar o prevenir un cancer hepatico de un sujeto. |
CN101377506A (zh) | 2008-04-16 | 2009-03-04 | 北京科美东雅生物技术有限公司 | 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 |
CN102276721B (zh) | 2010-06-12 | 2013-12-25 | 上海市肿瘤研究所 | 一种用于肝癌血清学诊断的单克隆抗体及其用途 |
WO2012073992A1 (ja) | 2010-11-30 | 2012-06-07 | 中外製薬株式会社 | 複数分子の抗原に繰り返し結合する抗原結合分子 |
US9206257B2 (en) | 2011-04-19 | 2015-12-08 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Human monoclonal antibodies specific for glypican-3 and use thereof |
CN104204204A (zh) | 2012-02-09 | 2014-12-10 | 中外制药株式会社 | 抗体的Fc区变异体 |
BR112014018374A8 (pt) | 2012-03-02 | 2017-07-11 | Roche Glycart Ag | Método para predizer a resposta d eum paciente com câncer, kit, anticorpo, método para o tratamento do câncer e composição farmacêutica |
WO2013181543A1 (en) | 2012-06-01 | 2013-12-05 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | High-affinity monoclonal antibodies to glypican-3 and use thereof |
CA2876916A1 (en) | 2012-06-18 | 2013-12-27 | National Cancer Center | Kit for diagnosing malignant melanoma |
TWI693073B (zh) * | 2012-12-21 | 2020-05-11 | 日商中外製藥股份有限公司 | 對gpc3標的治療劑療法為有效之患者投與的gpc3標的治療劑 |
CN104140974B (zh) | 2013-05-08 | 2017-09-29 | 科济生物医药(上海)有限公司 | 编码gpc‑3嵌合抗原受体蛋白的核酸及表达gpc‑3嵌合抗原受体蛋白的t淋巴细胞 |
AR100353A1 (es) | 2014-05-08 | 2016-09-28 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Droga de direccionamiento a glipicano 3 (gpc3) que se administra a un paciente que responde a la terapia con drogas de direccionamiento a gpc3 |
-
2016
- 2016-06-30 JP JP2017526441A patent/JP7096667B2/ja active Active
- 2016-06-30 EP EP16818042.0A patent/EP3318879B1/en active Active
- 2016-06-30 WO PCT/JP2016/069493 patent/WO2017002934A1/ja active Application Filing
- 2016-06-30 US US15/741,219 patent/US11376326B2/en active Active
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
HASHIGUCHI A、外3名,Using immunofluorescent digital slide technology to quantify protein expression in archival paraffin-embedded tissue sections,Pathol Int,2010年11月,Vol.60,No.11,Page.720-725 |
IKEDA M、外8名,Japanese phase I study of GC33, a humanized antibody against glypican-3 for advanced hepatocellular carcinoma,Cancer Sci.,2014年04月,Vol.105,No.4,Page.455-462 |
ZHU Andrew X、外7名,First-in-Man Phase I Study of GC33, a Novel Recombinant Humanized Antibody Against Glypican-3, in Patients with Advanced Hepatocellular Carcinoma,Clin. Cancer Res.,2013年,Vol.19,No.4,Page.920-928 |
川井田みほ、外9名,肝細胞癌における Glypican‐3 の細胞内局在ならびに発現量と臨床病理学的検討,日本病理学会会誌,日本,2015年03月23日,Vol.104,No.1, Page.324 |
遠藤美香,切除不能肝細胞癌に対する新規分子標的薬としてのヒト化抗グリピカン3 抗体(GC33),Med. Sci. Digest,2013年08月25日,Vol.39,No.9,Page.440-443 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US11376326B2 (en) | 2022-07-05 |
JPWO2017002934A1 (ja) | 2018-06-07 |
US20180169237A1 (en) | 2018-06-21 |
EP3318879A1 (en) | 2018-05-09 |
WO2017002934A1 (ja) | 2017-01-05 |
EP3318879A4 (en) | 2018-11-21 |
EP3318879B1 (en) | 2020-10-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6359461B2 (ja) | Gpc3標的治療剤療法が有効である患者に投与されるgpc3標的治療剤 | |
JP6827319B2 (ja) | Gpc3標的治療剤療法が有効である患者に投与されるgpc3標的治療剤 | |
JP7096667B2 (ja) | Gpc3標的治療剤が有効である患者に投与されるgpc3標的治療剤 | |
JP6329601B2 (ja) | ヒト化抗Epiregulin抗体および当該抗体を有効成分として含む癌治療剤 | |
WO2014208482A1 (ja) | ヒト化抗Epiregulin抗体を有効成分として含む腺癌以外の非小細胞肺癌の治療剤 | |
WO2012124334A1 (ja) | 抗体、乳がんの治療に用いられる医薬組成物、腫瘍検査方法、及び、腫瘍検査用試薬 | |
EP3557260A1 (en) | Gpc3-targeting drug which is administered to patient responsive to gpc3-targeting drug therapy | |
NZ707774B2 (en) | Gpc3-targeting drug which is administered to patient responsive to gpc3-targeting drug therapy |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180221 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190603 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200511 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20200710 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200908 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20201201 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20210129 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210329 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210615 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20210813 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211012 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211102 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20211227 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220228 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220531 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220624 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7096667 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |