CN101522682A

CN101522682A - 作为抗炎剂的杂环化合物

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Publication number: CN101522682A
Application number: CNA2007800383596A
Authority: CN
Inventors: S·费罗; F·格利克曼; C·勒布朗; C·里奇; D·肖; N·J·施蒂夫尔; P·菲雷; P·因巴赫; F·施陶费尔; H-G·卡普拉罗; F·热西耶; C·高尔; P·A·阿尔博格; G·肖浦克
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2006-10-30
Filing date: 2007-10-29
Publication date: 2009-09-02
Also published as: RU2009120389A; CA2667962A1; MX2009004715A; EP2089393A1; KR20090075714A; JP2010508315A; WO2008052734A1; BRPI0718266A2; US20100041662A1; AU2007315234A1

Abstract

用于治疗通过ALK－5和/或ALK－4受体介导的疾病的游离或盐或溶剂化物形式的式Ia或Ib化合物，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R²⁰、R²⁴、R²⁵、X、Y和Z具有本说明书所指出的含义。这些化合物用于治疗通过Pi3k受体、JAK－2受体和TRK受体介导的疾病。还描述了含有所述化合物的药物组合物和制备所述化合物的方法。

Description

作为抗炎剂的杂环化合物

本发明涉及有机化合物及其作为药物、特别是用于治疗炎性或阻塞性气道疾病诸如肺动脉高压、肺纤维化、肝纤维化；癌症；肌肉疾病诸如肌萎缩和肌营养不良以及全身性骨骼障碍诸如骨质疏松症的药物的用途。

在一方面，本发明提供了游离或盐或溶剂化物形式的式Ia或Ib化合物：

其中：

X为O或NH；

Y为CR¹³或N；

R¹选自H、CN、卤素、-C(O)NR⁷R⁸和

R²选自H、CN、吗啉代、任选被以下基团取代的四唑：C₁-C₃烷基、-S(O)₂NH₂、-C(O)NR⁷R⁸和CH₂OH，

条件是R¹和R²不都是H，且当R²不是H时，R¹为H或卤素；且当R¹不是H时，R²为H；或者R¹和R²连同它们连接的碳原子形成包含至少一个选自N、O和S的杂原子的6元杂环，所述杂环任选地被C₁-C₃烷基或氧代基基团取代；

R³选自H、Me和CH₂OH；

R⁴为H或C₁-C₃烷基；

R⁵为H或卤素；

R⁷为H或C₁-C₃烷基；

R⁸独立地选自H、C₁-C₆烷基、(CH₂)_mhet和(CH₂)_nNR⁹R¹⁰；或者

R⁷和R⁸连同它们连接的氮原子形成任选地包含另外的选自N、O和S的杂原子的5或6元杂环，所述环任选地被C₁-C₃烷基或NR¹¹R¹²取代；

R⁹、R¹⁰、R¹¹和R¹²各自独立地选自H和C₁-C₃烷基；

R¹³为H或卤素；

m和n各自独立地为0、1或2；

het为包含一个或两个选自N、O和S的杂原子5或6元杂环，所述环任选地被C₁-C₃烷基取代；

Z为N或CR²⁶；

R²⁰选自H、环丙基和R²¹，条件是当Z为N时，R²⁰不为H；

R²¹选自

和

R²²和R²³各自独立地选自H和C₁-C₃烷基；

R²⁴选自H和OH；

R²⁵选自H、OH和CH₂OH；条件是当R²⁴为H时，R²⁵为OH或CH₂OH；且当R²⁴为OH时，R²⁵为H；且

R²⁶选自H和R²¹，条件是当R²⁰不为H时，R²⁶为H；且当R²⁰为H时，R²⁶为R²¹。

说明书中所用的术语具有以下含义：

如本文所用的“任选在一个、两个或三个位置上被......取代”表示所指的基团可以在一个或两个或三个位置上被其中所列的基团中的任意一个或任意组合所取代。

如本文所用的“卤代基”或“卤素”表示属于元素周期表的第17族(以前为第VII族)的元素，它可以例如是氟、氯、溴或碘。

如本文所用的“C₁-C₈-烷基”表示含有1至8个碳原子的直链或支链烷基。如果具体指明碳原子的不同数量，例如C₆或C₃，那么所述的定义作相应的改变。

“4、5、或6元杂环基团”，是指包含至少一个选自氮、氧和硫的环杂原子的4、5或6元杂环，其可以是饱和的或部分饱和的。这类杂环基团的实例包括但不限于：氮杂环丁烷、吡咯烷、吡咯啉、哌啶、哌嗪、吡咯烷酮、吗啉、噁嗪、四氢呋喃、四氢噻吩、四氢噻喃、四氢吡喃、1，4-二噁烷和1，4-氧硫杂环己烷，所述杂环基团可以是未取代或取代的。

“C₃-C₁₀-环烷基”表示具有3至10个环碳原子的完全饱和的碳环，例如单环基团诸如环丙基、环丁基、环戊基或环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者二环基团诸如二环庚基或二环辛基。如果具体指明碳原子的不同数量，例如C₆或C₈，那么所述的定义作相应的改变。

如本文所用的“C₁-C₈-卤代烷基”表示被一个或多个卤素原子、优选一个、两个或三个卤素原子取代的如上文定义的C₁-C₈-烷基。如果具体指明碳原子的不同数量，例如C₆或C₃，那么所述的定义作相应的改变。

如本文所用的“C₁-C₈-烷基氨基”和“二(C₁-C₈-烷基)氨基”表示分别被一个或两个如上文定义的C₁-C₈-烷基取代的氨基，所述的C₁-C₈-烷基可以相同或不同。如果具体指明碳原子的不同数量，例如C₆或C₃，那么所述的定义作相应的改变。

如本文所用的“C₁-C₈-烷氧基”表示含有1至8个碳原子的直链或支链烷氧基。如果具体指明碳原子的不同数量，例如C₆或C₃，那么所述的定义作相应的改变。

在本说明书通篇和在随后的权利要求中，除非上下文另有要求，词语“包含”应当理解为表示包括所述的整数或步骤或者整数或步骤的集合，但不排除任何其它整数或步骤或者整数或步骤的集合。

在如上文任意处所定义的本发明的实施方案中，R¹选自H、CN、卤素、-C(O)NR⁷R⁸和

且R²选自H、CN、吗啉代、任选被以下基团取代的四唑：C₁-C₃烷基、-S(O)₂NH₂、-C(O)NR⁷R⁸和CH₂OH，

条件是R¹和R²不都是H，且当R²不是H时，R¹为H；且当R¹不是H时，R²为H。

在如上文任意处所定义的本发明的实施方案中，R⁴为H或Me。

在如上文任意处所定义的本发明的实施方案中，R⁵为H或F。

在如上文任意处所定义的本发明的实施方案中，R⁷为H或Me。

在如上文任意处所定义的本发明的实施方案中，R¹³为H。

在如上文任意处所定义的本发明的实施方案中，R²⁴为H。

在本发明的进一步的实施方案中，根据式Ia或Ib的化合物选自：

4-(3-[2，4’]联吡啶-4-基-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基)-环己醇；

4-{3-[2-(5-甲基-噻吩-2-基)-吡啶-4-基]-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基}-环己醇；

4-[3-(2-呋喃-3-基-吡啶-4-基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇；

4-{3-[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-吡啶-4-基]-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基}-环己醇；

4-[3-(4-吡唑-1-基-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇；

4-[3-(2-环丙基-吡啶-4基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇；

4-[3-(3-吡唑-1-基-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇；

4-[3-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇；

{4-[3-(4-吡唑-1-基-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己基}-甲醇；

{4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮；

4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-N-(2-吗啉-4-基-乙基)-苯甲酰胺；

{4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯基}-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-甲酮；

{4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯基}-吗啉-4-基-甲酮；

{3-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-N-(四氢-吡喃-4-基)-苯甲酰胺；

4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-N-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-苯甲酰胺；

4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-N-(四氢-吡喃-4-基)-苯甲酰胺；

4-[6-(3-氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯磺酰胺；

4-[6-(3-氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯甲酰胺；

4-{6-[(R或S)-1-(3-氟-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基}-苄腈；

3-{6-[(R)-1-(3-氟-苯基)-乙基氨基]-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基}-苄腈；

{4-[6-(3-氟-苄基氧基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯基}-甲醇；和

四氢-吡喃-4-甲酸{3-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯基}-酰胺。

根据式Ia或Ib，如本文任意处所定义的本发明的实施方案可独立地、整合地或以任意组合的方式加入。

含有碱性中心的式Ia或Ib化合物能够形成酸加成盐、特别是可药用的酸加成盐。式Ia或Ib化合物的可药用的酸加成盐包括无机酸和有机酸的那些，所述的无机酸例如有氢卤酸如氢氟酸、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、硫酸、磷酸；所述的有机酸例如有脂肪族一元羧酸、例如甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸和丁酸、辛酸、二氯乙酸、马尿酸，脂肪族羟酸、例如乳酸、枸橼酸、酒石酸或苹果酸、葡糖酸、扁桃酸，二元羧酸、例如马来酸或琥珀酸、己二酸、门冬氨酸、富马酸、谷氨酸、丙二酸、癸二酸，芳香族羧酸、例如苯甲酸、对氯苯甲酸、烟酸、二苯基乙酸或三苯基乙酸，芳香族羟酸、例如邻羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、1-羟基萘-2-甲酸或3-羟基萘-2-甲酸，以及磺酸、例如甲磺酸或苯磺酸、乙磺酸、乙烷-1，2-二磺酸、2-羟基-乙磺酸、(+)樟脑-10-磺酸、萘-2-磺酸、萘-1，5-二磺酸或对甲苯磺酸。这些盐可以由式Ia或Ib化合物通过已知的成盐方法来制备。可药用的溶剂化物通常是水合物。

含有酸性基团如羧基的式Ia或Ib化合物也能够与碱、特别是可药用的碱、例如本领域众所周知的那些形成盐；适宜的这类盐包括金属盐、特别是碱金属或碱土金属盐、例如钠、钾、镁或钙盐，或者与氨或可药用的有机胺或杂环碱、例如乙醇胺、苄胺或吡啶、精氨酸、苯乙苄胺、苄星盐(benzathine)、二乙醇胺、4-(2-羟基乙基)吗啉、1-(2-羟基乙基)吡咯烷、N-甲基葡糖胺、哌嗪、三乙醇胺或氨基丁三醇的盐。这些盐可以由式I化合物通过已知的成盐方法来制备。含有酸性基团如羧基的式Ia或Ib化合物还可以作为具有季铵中心的两性离子而存在。

可以以常规方式将游离形式的式Ia或Ib化合物转化为盐形式，反之亦然。游离或盐形式的化合物可以以水合物或含有用于结晶的溶剂的溶剂化物的形式而得到。式Ia或Ib化合物可以从反应混合物中回收并以常规方式纯化。异构体、例如对映异构体可以以常规方式、例如通过分步结晶或不对称合成由相应不对称取代的、例如具有旋光活性的原料得到。

本发明的许多化合物含有至少一个不对称碳原子，因此它们以单独的具有旋光活性的异构形式或作为其混合物、例如作为外消旋混合物而存在。在其中存在另外的不对称中心的情况中，本发明还包括单独的具有旋光活性的异构体以及其混合物、例如非对映异构混合物。

本发明包括所有这类形式、特别是纯异构形式。可以通过常规方法来使不同的异构形式相互分离或拆分开，或者可以通过常规合成方法或者通过立体有择或不对称合成来得到任意给定的异构体。因为本发明的化合物用于药物组合物，所以应当容易理解，它们各自优选以基本上纯的形式、例如至少60％纯、更适宜地至少75％纯、优选至少85％纯、尤其是至少98％纯(％是根据重量来计算的)来提供。化合物的不纯的制备物可以用于制备用于药物组合物的更纯的形式；化合物的这些较不纯的制备物应当含有至少1％、更适宜地至少5％、优选10至59％的本发明化合物。

本发明包括式Ia或Ib化合物的全部药物可接受的同位素标记化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子序数的原子替换，但原子质量或质量数与自然界中通常所见的原子质量或质量数不同。适于包含在本发明的化合物中的同位素的实例包括氢的同位素，例如，²H和³H，碳例如¹¹C、¹³C和¹⁴C，氯例如³⁶Cl，氟例如¹⁸F，碘例如，¹²³I和¹²⁵I，氮例如，¹³N和¹⁵N，氧例如¹⁵O、¹⁷O和¹⁸O，和硫例如³⁵S。

式Ia或Ib的某些同位素标记的化合物，例如加入放射性同位素的那些，用于药物和/或底物的组织分布研究。放射性同位素氚(³H)和碳-14(¹⁴C)考虑到其易于加入和现成的检测方法，特别用于此目的。重同位素的取代诸如氘(²H)可提供某些治疗优点，这是由于其有更好的代谢稳定性，例如延长的体内半衰期或降低的剂量需要，且因此在一些情况下更优选。正电子发射同位素的取代，诸如¹¹C、¹⁸F、¹⁵O和¹³N可用于检查底物受体占有率的正电子发射断层显像(PET)研究。

式Ia或Ib的同位素标记化合物可一般地通过本领域技术人员已知的传统技术或所附的实施例中描述的那些相似的方法使用适宜的同位素标记试剂替换从前使用的非标记的试剂而制备。

依照本发明的药物可接受的溶剂合物包括其中结晶的溶剂可被同位素取代的那些，例如D₂O、d₆-丙酮或d₆-DMSO。

尤其优选的具体的本发明化合物是下文在实施例中描述的那些。

本发明亦提供了用于制备游离形式或盐或溶剂合物形式的式Ia和Ib的化合物的方法。它们可通过包含以下步骤的方法进行制备：

(i)(A)将式IIa化合物与式IIIa或IIIb化合物反应

其中Q表示上文式Ia和Ib中所定义的相关基团，即：

或

其中X、R³、R⁴、R⁵、R²⁴和R²⁵如上文任意处所定义，且X¹为卤素，

其中T表示上文式Ia和Ib中所定义的相关基团，即：

或

其中Y、Z、R¹、R²和R²⁰如上文任意处所定义，且R^x和R^y独立地为氢或C₁-C₈-烷基；

(B)用于式Ia或Ib的化合物的制备，其中Q包括氮连接基团，将式IV化合物与式V化合物反应

其中T如上文的定义，且X²为卤素，

其中R^a表示上文式Ia和Ib中所定义的相关基团，即：

或

且其中R³、R⁴、R⁵、R²⁴和R²⁵如上文任意处所定义；

(C)用于式Ia或Ib化合物的制备，其中Q包括氮连接基团或氧连接基团，且T如上文所定义，将式VI化合物与式VIIa或VIIb化合物反应

其中Q如上文所定义，K为6元杂芳基团，且X³为卤素

其中U为-R¹、-R²或-R²⁰且R^x和R^y独立地为氢或C₁-C₈-烷基；或者

(D)用于制备其中Q包括氧连接基团的式Ia化合物，将T为上文所定义且X²为卤素的式IV化合物与式VIII化合物反应

HO—R^c VIII

其中R^c为符合式Ia所定义的化合物的取代的苄基基团；并且

(ii)回收生成的游离形式或盐或溶剂合物形式的式Ia或Ib化合物。

方法变体(A)可使用已知的用于将卤化杂环基团与芳基/杂芳基硼酸反应的方法进行，或与下文实施例中所述相似的方法进行。所述反应可在有机溶剂中、例如二噁烷与水的混合物中方便地进行，优选在催化剂例如双三苯基膦二氯化钯、和无机碱例如碳酸钠存在下进行。适合的反应温度为升高的温度，例如从100℃至150℃，优选通过微波在约100℃下进行，例如约120分钟。

方法变体(B)可使用已知的用于将卤化物、特别是卤素取代的杂环化合物与胺反应的方法进行，或者与下文实施例中所述相似的方法进行。所述反应可在在有机溶剂中、例如N-甲基-吡咯烷酮(NMP)中、任选在无机碱、例如碳酸钠存在下方便地进行。适合的反应温度为从100℃至250℃，优选地在120℃至220℃之间，特别地在约180℃下，例如通过微波辐射加热进行，例如约90分钟。

方法变体(C)可使用已知的用于将卤化杂环基团与芳基/杂芳基硼酸反应的方法进行，或与下文实施例中所述的相似的方法进行。所述反应可在以下条件下方便地进行，在有机溶剂中，例如二噁烷和水的混合物中，优选在催化剂例如双三苯基膦二氯化钯、和无机碱例如碳酸钠存在下进行。适合的反应温度为升高的温度，例如从100℃至150℃，优选用微波辐射在120℃下进行，例如约120分钟。

方法变体(D)可使用已知的用于将卤化物、特别是卤化的杂环基团与伯醇反应的方法进行，或者如下文实施例中所述的相似的方法进行。所述反应可在有机溶剂中、例如二甲基亚砜中方便地进行，优选在碱例如氢化钠存在下进行。适合的反应温度为从10℃至40℃，但优选为室温。

式IIa化合物可通过式IX化合物与式XX化合物反应而制备

其中X¹和X⁴各自为卤素，

Q—H X

其中Q为上文所定义，或与下文实施例中所述类似。

所述反应可在有机溶剂、例如N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)中方便地进行，优选在无机碱、例如碳酸氢钠(NaHCO₃)存在下进行。适当的反应温度为升高的温度，例如从100℃至200℃，优选地用微波辐射在约180℃下进行，例如约40分钟。

式IIIa或IIIb的化合物可商购获得，或可通过已知方法进行制备。

式IV化合物可通过式XI化合物与式IIIa或IIIb化合物反应而制备

其中X²和X⁵各自为卤素，

其中T如上文所定义，且R^x和R^y独立地为氢或C₁-C₈-烷基或与下文实施例中所述的类似。所述反应可在在有机溶剂例如二噁烷和水的混合物中方便地进行，优选在催化剂例如双三苯基膦二氯化钯、和无机碱例如碳酸钠存在下进行。适合的反应温度为升高的温度，例如从100℃至150℃，优选通过微波在约100℃下进行，例如约120分钟。

式V化合物可商购获得，或可通过已知方法进行制备。

式VI化合物可通过Q为上文所定义、且X¹为卤素的式IIa化合物与式XIIa或XIIb化合物反应而制备

其中X³为卤素，K为上文所定义，且R^x和R^y独立地为氢或C₁-C₈-烷基，或与下文实施例中所述类似。所述反应可在有机溶剂、例如二噁烷和水的混合物中方便地进行，优选在催化剂例如双三苯基膦二氯化钯和无机碱例如碳酸钠的存在下进行。适合的反应温度为升高的温度，例如从100℃至150℃，优选通过微波在约100℃下进行，例如约120分钟。

式VIIa或VIIb、VIII、IX、X、XI、XIIa或XIIb化合物可商购获得，或可通过已知方法制备。

药学上可接受的盐形式的式Ia和Ib化合物是下文所指的“本发明的药物”。这些化合物用作药物。

本发明的物质用作激活素样激酶(“ALK”)-5抑制剂。至少许多这些化合物也用作ALK-4抑制剂。

TGF-β1是包括TGF-β、激活素、抑制素、骨形态发生蛋白和苗勒(Mullerian)抑制物质在内的细胞因子家族的原型成员，这些细胞因子通过单跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体家族进行信号传导。这些受体可以分成两类：I型或激活素样激酶(ALK)受体和II型受体。ALK受体与II型受体的区别在于：ALK受体(a)没有富含丝氨酸/苏氨酸的胞内尾区，(b)具有在I型受体之间非常同源的丝氨酸/苏氨酸激酶结构域，和(c)共享共同的称为GS结构域的序列基元，该GS结构域由富含甘氨酸和丝氨酸残基的区域所组成。GS结构域位于细胞内激酶结构域的氨基末端，它对于由II型受体激活而言是关键的。数项研究已经表明TGF-β信号传导既需要ALK也需要II型受体。特别地，在TGF-β的存在下II型受体使TGF-β的I型受体ALK5的GS结构域磷酸化。ALK5从而使在两个羧基末端丝氨酸处的胞质蛋白Smad2和Smad3磷酸化。磷酸化的Smad蛋白易位到核中并激活促使产生细胞外基质的基因。因此，本发明的优选的化合物是选择性的，它们抑制I型受体。

激活素以类似于TGF-β的方式转导信号。激活素与丝氨酸/苏氨酸激酶激活素II型受体(ActRIIB)结合，激活的II型受体使ALK4的GS区域中的丝氨酸/苏氨酸残基超磷酸化。激活的ALK4从而使Smad2和Smad3磷酸化。随后形成含有Smad4的异Smad复合物，导致激活素引起的基因转录的调节。

TGF-β1轴的激活和细胞外基质的扩张是慢性肾脏疾病和血管疾病发生和进展的早期和持续性的引起者。Border W.A.等人，N.Engl.J.Med.，1994；331(19)，1286-92。此外，TGF-β1还通过由TGF-β1受体ALK5引起的Smad3磷酸化的作用而在纤维结合素和纤溶酶原激活物抑制剂-1(硬化沉积物的组分)的形成中起作用。Zhang Y.等人，Nature，1998；394(6696)，909-13；Usui T.等人，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，1998；39(11)，1981-9。

肾和心血管系统中的进行性纤维化是患病和死亡的主要原因并且是医疗费用的重要引起者。TGF-β1已经参与了多种肾脏纤维化障碍。BorderW.A.等人，N.Engl.J.Med.，1994；331(19)，1286-92。TGF-β1在急性和慢性肾小球肾炎(Yoshioka K.等人，Lab.Invest.，1993；68(2)，154-63)、糖尿病性肾病(Yamamoto，T.等人，1993，PNAS 90，1814-1818)、同种异体移植物排斥、HIV肾病和血管紧张素引起的肾病(Border W.A.等人，N.Engl.5J.Med.，1994；331(19)，1286-92)中升高。在这些疾病中，TGF-β1表达的水平与细胞外基质的产生一致。三条证据提示TGF-β1和基质产生之间具有因果关系。第一条，外源性TGF-β1可以在体外引起正常的肾小球、肾小球膜细胞和非肾细胞产生细胞外基质蛋白并抑制蛋白酶活性。第二条，抗TGF-β1的中和抗体可以阻止肾炎大鼠的细胞外基质聚积。第三条，TGF-β1转基因小鼠或TGF-β1基因向正常大鼠肾脏中的体内转染导致肾小球硬化症迅速发展。Kopp J.B.等人，Lab.Invest.，1996；74(6)，9911003。因此，抑制TGF-β1活性表明可作为慢性肾脏疾病的治疗介入。

TGF-β1及其受体在受损的血管中增加并且在气囊血管成形术后的新内膜形成中有显示(Saltis J.，等人，Clin.Exp.Pharmacol.Physiol.，1996；23(3)，193-200)。此外，TGF-β1还是平滑肌细胞(＂SMC＂)体外迁移的有效刺激物，动脉壁中SMC的迁移是动脉粥样硬化和再狭窄发病的起作用因素。而且，在抗总胆固醇的内皮细胞产物的多变量分析中，TGF-β受体ALK5与总胆固醇相关(P<0.001)(Blann A.D.等人，Atherosclerosis，1996；120(1-2)，221-6)。此外，来自人粥样硬化病变的SMC所具有的ALK5/TGF-β II型受体之比增加。因为TGF-β1在纤维增殖性血管性损伤中被过度表达，所以受体-I变体细胞将被允许以缓慢的但失控的方式生长而同时超量产生细胞外基质组分(McCaffrey T.A.等人，Jr.，J.Clin.；Invest.，1995；96(6)，2667-75)。TGF-β1在其中发生活性基质合成的粥样硬化病变中被免疫定位到非泡沫状巨噬细胞，这提示非泡沫状巨噬细胞可以通过TGF-β-依赖性机制在动脉粥样硬化重塑中参与调节基质基因表达。因此，抑制TGF-β1对ALK5的作用还表明可用于动脉粥样硬化和再狭窄。

肝纤维化是响应于被各种物质如乙型和丙型肝炎病毒、酒精或药物以及自身免疫性疾病引发的慢性肝损伤的失衡创伤愈合响应的结果。最终，肝纤维化可导致威胁生命的肝硬变和肝癌(参见“Gressner等人(2006)J.Cell.Mol.Med.2006，10(1)：76-99”的综述文章)。

已知有数条细胞信号传导途径在慢性肝损伤中被改变。有许多文件证明TGFβ信号传导、其受体和相关的Smad信号传导蛋白存在于参与纤维形成的细胞型中。已经发现TGFβ的循环水平在包括肝纤维化在内的纤维化疾病的多种动物模型中升高。具有TGFβ1过度表达的转基因小鼠在多个器官、包括肝、肾、肺和心脏中发展出纤维化。显然，升高的TGFβ信号传导参与包括肝纤维化在内的所有类型的纤维化疾病。该观点已经在使用TGFβ抑制剂的数项研究中在纤维化模型中被进一步证实。TGFβ通过与两种ser/thr激酶受体TGFβRII和ALK5结合而介导其信号。表达显性负调控的TGFβRII在二甲基亚硝胺引起的肝纤维化的大鼠模型中显示出有利的作用(参见：Qi等人(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.96：2345-9和Nakamura等人(2000)Hepatology32：247-55)。使用反义方法抑制TGFβ表达也减少了由胆道结扎引起的肝纤维化(参见：Arias等人(2003)BMC Gastroenterol.3：29)。近来，ALK5的小分子抑制剂GW6604当治疗性地给予大鼠时在治疗二甲基亚硝胺引起的肝纤维化中具有显著的作用。相当显著的是，GW6604防止了40％的死亡率并且抑制了60％的细胞外基质沉积(纤维化的关键度量)。重要的是，在用GW6604进行的3周治疗的过程中没有发现明显的副作用(参见：De Gouville等人(2005)Br.J.Pharmacol.145：166-77)。联系起来看，这些研究提示抑制TGFβ信号传导可以是对肝纤维化疾病的有效治疗。

TGF-β1还表明可用于创伤修复。已经在多种模型中使用了TGF-β1的中和抗体来说明TGF-β1信号传导的抑制通过在愈合过程中限制过多的瘢痕形成有益于损伤后的功能恢复。例如，在大鼠中，TGF-β1和TGF-β2的中和抗体通过减少单核细胞和巨噬细胞的数量以及减少皮肤纤维结合素和胶原沉积而减少了瘢痕形成并改善了新真皮的细胞结构(Shah M.,J.Cell.Sci.，1995，108，985-1002)。而且，TGF-β抗体还可改善兔角膜创伤的愈合(Moller-Pedersen T.，Curr.Eye Res.，1998，17，736-747)和加速大鼠胃溃疡的创伤愈合(Ernst H.，Gut，1996，39，172-175)。这些数据有力地表明限制TGF-β的活性将有益于多种组织，并提示具有TGF-β长期升高的任何疾病将通过抑制Smad2和Smad3信号传导途径而受益。

TGF-β还参与腹膜粘连(Sand G.M.等人，Wound Repair Regeneration，1999年11-12月，7(6)，504-510)。因此，ALK5的抑制剂将有益于阻止手术操作后腹膜和皮下纤维化粘连。

TGF-β还参与皮肤的光老化(参见：Fisher GJ.Kang SW.Varani J.Bata-Csorgo Z.Wan YS.Data S.Voorhees JJ.，“光老化和按时间顺序的皮肤老化的机制”(Mechanisms of photoaging and chronological skin ageing)，Archives of Dermatology，138(11)：1462-1470，2002年11月和Schwartz E.Sapadin AN.Kligman LH.“在通过25外用维甲酸的裸鼠皮肤调节中紫外B照射增加细胞因子和整联蛋白的稳态mRNA水平”(UItraviolet B radiationincreases steady state mRNA levels for cytokines and integrins in hairlessmouse skin-modulation by 25 topical tretinoin)，Archives of DermatologicalResearch，290(3)：137-144，1998年3月)。

TGF-β信号传导还参与肺障碍、特别是肺动脉高压和肺纤维化的发生(参见：Morrell NW，Yang X，Upton PD，Jourdan KB，Morgan N，ShearesKK，Trembath RC.，“来自原发性肺动脉高压患者的肺动脉平滑肌细胞对转化生长因子-β(1)和骨形态发生蛋白的改变的生长应答”(Altered growthresponses of pulmonary artery smooth muscle cells from patients withprimary pulmonary hypertension to transforming growth factor-beta(1)and bone morphogenetic proteins)，Circulation.2001年8月14日；104(7)：790-5.Bhatt N，Baran CP，Allen J，Magro C，Marsh CB，Promisingpharmacologic innovations in treating pulmonary fibrosis，Curr OpinPharmacol.2006年4月28日)。

TGF-β1水平在肺动脉高压的动物模型中增加(Mata-Greenwood E，Meyrick B，Steinhorn RH，Fineman JR，Black SM.“具有肺血流增加的肺动脉高压的羔羊中TGF-β1表达的变化”(Alterations in TGF-beta1expression in lambs with increased pulmonary blood flow and pulmonaryhypertension)，Am.J.Physiol.Lung Cell Mol.Physiol.2003年7月；285(1)：L209-21)。其它研究已经提示，肺内皮细胞衍生的TGF-β1可以刺激肺血管平滑肌细胞的生长，这可以成为在患有肺动脉高压的个体的肺血管系统中观察到的肌化增强的基础(Sakao S，Taraseviciene-Stewart L，Wood K，Cool CD，Norbert VF.“肺微血管内皮细胞的细胞凋亡刺激血管平滑肌细胞生长”(Apoptosis of pulmonary microvascular endothelial cells stimulatesvascular smooth muscle cell growth)，Am.J.Physiol.Lung Cell Mol.Physiol.2006年4月14日)。因此，抑制TGF-β1对ALK5的作用表明可作为肺动脉高压的治疗介入。

此外，失调的TGF-β信号传导还已经参与了特发性肺纤维化的发生。ALK5的激活可引起Smad3激活以及在纤维化过程中有牵连的基因如纤溶酶原激活物抑制剂-1、原胶原3A1和结缔组织生长因子的表达的下游调节。已经证明了TGF-β1及其下游促纤维化介质的水平在取自特发性肺纤维化患者的支气管肺泡灌洗液中(Hiwatari N，Shimura S，Yamauchi K，Nara M，Hida W，Shirato K.“来自特发性肺纤维化患者的支气管肺泡灌洗液的原胶原-III-肽和转化生长因子-β水平升高的重要性”(Significance of elevatedprocollagen-III-peptide and transforming growth factor-beta levels ofbronchoalveolar lavage fluids from idiopathic pulmonary fibrosis patients)，Tohoku J.Exp.Med.1997年2月；181(2)：285-95)和在特发性肺纤维化的动物模型中(Westergren-Thorsson G，Hernnas J，Sarnstrand B，Oldberg A，Heinegard D，Malmstrom A.“在大鼠中发展博来霉素诱导的肺纤维化中的小蛋白聚糖、胶原和转化生长因子-β1的改变的表达”(Altered expression ofsmall proteoglycans，collagen，and transforming growth factor-beta 1 indeveloping bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats)，J.Clin.Invest.1993年8月；92(2)：632-7)被向上调节。

使用腺病毒载体介导的基因转移使鼠肺中活性TGF-β1瞬时过表达在野生型小鼠中导致了进行性肺纤维化，而在Smad3敲除小鼠的肺中直至TGF-β1攻击后28天没有观察到纤维化(Khalil N，Parekh TV，O′ConnorRN，Gold LI.“通过博来霉素诱导的肺损伤中的肺细的转化生长因子βI型和II型受体的差异表达：与修复和纤维化的相关性”(Differential expressionof transforming growth factor-betatype I and II receptors by pulmonarycells in bleomycin-induced lung injury：correlation with repair and fibrosis，Exp.Lung.Res.2002年4-5月；28(3)：233-50)。因此，抑制ALK5的TGF-β1激活还表明可用于肺纤维化。

激活素信号传导和激活素的过表达与涉及如下的病理性障碍相关：细胞外基质聚积和纤维化(例如Matsuse，T.等人，Am.J.Respir Cell Mol.Biol.13：17-24(1995)；Inoue，S.等人，Biochem.Biophys.Res.Comn.205：441-448(1994)；Matsuse，T.等人，Am.J.Pathol.148：707-713(1996)；De Bleser等人，Hepatology 26：905-912(1997)；Pawlowski，J.E.等人，J.Clin.Invest.100：639-648(1997)；Sugiyama，M.等人，Gastroenterology 114：550-558(1998)；Munz，B.等人，EMBO J.18：5205-5215(1999))、炎症应答(例如Rosendahl，A.等人，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.25：60-68(2001))、恶病质或消耗(Matzuk7M.M.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：8817-8821(1994)；Coerver，K.A.等人，Mol.Endocrinol.10：531543(1996)；Cipriano，S.C.等人，Endocrinology 141：2319-2327(2000))、中枢神经系统疾病或病理性应答(例如Logan，A.等人，Eur.J.Neurosci.11：2367-2374(1999)；Logan，A.等人，Exp.Neurol.159：504-510(1999)；Masliah，E.等人，Neurochem.Int.39：393-400(2001)；De Groot，C.J.A.等人，J.Neuropathol.Exp.Neural.58：174-187(1999)；John，G.R.等人，Nat.Med.8：1115-1121(2002))和高血压(例如Dahly，A.J.等人，Am.J.Physiol.Regul.Integr Comp.Physiol.283：R757-767(2002))。研究已经表明TGF-β和激活素可以协同地起作用来引起细胞外基质产生(例如Sugiyama，M.等人，Gastroerterology 114；550-558(1998))。

因此，由此得出结论，通过本发明的化合物抑制Smad2和Smad3的ALK5和/或ALK4磷酸化可以用于治疗和预防涉及这些信号传导途径的障碍。

激活素信号传导还参与肺障碍、特别是肺动脉高压和肺纤维化的发生。例如，激活素A在来自间质性肺纤维化患者的肺样品中的表达证明激活素A在化生性上皮、增生性平滑肌细胞、脱屑的细胞和肺泡巨噬细胞上有强表达。来自原发性或继发性肺动脉高压患者的肺动脉表明在平滑肌细胞上有大量的免疫反应性激活素A。这些发现提示，这种生长因子激活素A在与间质性肺纤维化和肺动脉高压有关的肺组织重塑的发病机理中具有潜在的作用(Matsuse T，Ikegami A，Ohga E，Hosoi T，Oka T，Kida K，Fukayama M，Inoue S，Nagase T，Ouchi Y，Fukuchi Y.“免疫反应性激活素A蛋白质在与间质性肺纤维化有关的重塑损伤中的表达”(Expression of immunoreactiveactivin A protein in remodeling lesions associated with interstitialpulmonary fibrosis)，Am.J.Pathol.1996年3月；148(3)：707-13)。成纤维细胞和相关结缔组织的增加是肺纤维化和肺动脉高压的特征。已经证明了激活素A可调节人肺成纤维细胞(HFL1)活性、特别是在增殖及分化为肌成纤维细胞方面，因此激活素A对肺成纤维细胞的增殖及分化为肌成纤维细胞具有潜在的作用，它可以促使在肺纤维化和肺动脉高压中观察到的结构重塑(Ohga E，Matsuse T，Teramoto S，Katayama H，Nagase T，Fukuchi Y，Ouchi Y.“激活素A对人肺成纤维细胞的增殖和分化的作用”(Effects ofactivin A on proliferation and differentiation of human lung fibroblasts)，Biochem.Biophys.Res.Commun.1996年11月12；228(2)：391-6)。在大鼠中由博来霉素攻击介导的肺纤维化的引起可使肺中浸润的巨噬细胞中的激活素A的表达被向上调节，并且在聚积于纤维化区域中的成纤维细胞中被检测到。将滤泡抑素(激活素信号传导的拮抗剂)施用于博来霉素治疗的大鼠显著减少了支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞和嗜中性粒细胞的数量并降低了蛋白质含量。滤泡抑素显著减少了浸润细胞的数量、改善了肺结构的破坏并减弱了肺纤维化(Aoki F，Kurabayashi M，Hasegawa Y，Kojima I.“滤素抑素减弱博来霉素诱导的肺纤维化”(Attenuation of bleomycin-inducedpulmonary fibrosis by follistatin)，Am.J.Respir.Crit.Care Med.2005 Sep15；172(6)：713-20)。

因此，通过ALK4抑制来抑制激活素信号传导还可以有益于治疗肺纤维化和肺动脉高压。

近来已经证明，减少通过其效应物Smad3进行的TGF-β信号传导可提高骨基质的机械性能和矿物浓度以及骨量，使骨能够更好地抵抗折断。这些结果表明TGF-β信号传导的减少可以被认为是治疗骨障碍的治疗靶标。(Balooch G等人.Proc.Natl.Acad.Sci.U S A.2005年12月27；102(52)：18813-8)。因此，抑制ALK5的TGF-β1激活还表明可用于增加骨的矿物密度强度和含量并且可以用于治疗多种病症、例如包括骨质减少、骨质疏松症、骨折和其中低骨矿物密度是疾病特征的其它障碍。

考虑到它们对ALK-5和/或ALK-4受体的抑制，本发明的活性剂可用于治疗由ALK-5和/或ALK-4受体介导的病症。本发明的治疗可以是症状性的或预防性的。

因此，根据另外的方面，本发明提供了本发明的活性剂在制备用于治疗或预防受ALK-5抑制或ALK-4抑制介导的疾病或病症的药物中的用途。

受ALK-5抑制或ALK-4抑制介导的疾病或病症包括肾小球肾炎、糖尿病性肾病、狼疮性肾炎、高血压引起的肾病、肾间质性纤维化、由药物接触的并发症引起的肾纤维化、与HIV有关的肾病、移植肾病(necropathy)、由所有病因引起的肝纤维化、可由感染引起的肝功能障碍、酒精诱发的肝炎、胆系障碍、肺纤维化、肺动脉高压、急性肺损伤、成人呼吸窘迫综合征、特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺病、由传染物或毒性物引起的肺部疾病、梗塞后心纤维化、充血性心力衰竭、扩张型心肌病、心肌炎、血管狭窄、再狭窄、动脉粥样硬化、眼瘢痕形成、角膜瘢痕形成、增殖性玻璃体视网膜病变、在由创伤或外科伤口引起的创伤愈合过程中发生的真皮中过多或肥厚性瘢痕或者瘢痕瘤形成、腹膜和皮下粘连、硬皮病、纤维硬化、进行性全身性硬化症、皮肌炎、多发性肌炎、关节炎、溃疡、神经系统功能受损、男性勃起机能障碍、阿尔茨海默病、雷诺综合征、纤维化癌、肿瘤转移生长、辐射诱发的纤维化、血栓形成以及与钙耗竭或吸收增加有关的或者其中刺激骨形成和骨中钙固定是期望的骨病症如骨质减少和骨质疏松症。

受ALK-5抑制介导的疾病或病症特别包括慢性肾脏疾病、急性肾脏疾病、创伤愈合、关节炎、骨质疏松症、肾脏疾病、充血性心力衰竭、炎性或阻塞性气道疾病、肺动脉高压、溃疡(包括糖尿病性溃疡、慢性溃疡、胃溃疡和十二指肠溃疡)、眼疾病、角膜创伤、糖尿病性肾病、神经系统功能受损、阿尔茨海默病、动脉粥样硬化、腹膜和皮下粘连、其中纤维化是主要组成的任意疾病、包括但不限于肾纤维化、肺纤维化和肝纤维化，例如乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、酒精诱发的肝炎、血色素沉着病、原发性胆汁性肝硬化、再狭窄、腹膜后纤维化、肠系膜纤维化、子宫内膜异位症、瘢痕瘤、癌症、骨功能异常、炎性障碍、皮肤瘢痕形成和光老化。

本发明适用的炎性或阻塞性气道疾病包括任何类型或起因的哮喘，包括内源性(非过敏性)哮喘和外源性(过敏性)哮喘。哮喘的治疗还应当理解为包含对个体的治疗，例如小于四或五岁、显示喘鸣症状并被诊断为或可诊断为“喘鸣婴幼儿”的个体，这是一种受到较大医学关注的已建立的患者类别，现在通常定义为初期或早期哮喘患者。(为方便起见，此特定的哮喘病症被称为“喘鸣婴幼儿综合征”)。

在哮喘治疗中的预防有效性由以下效果来证明：症状发作如急性哮喘或支气管收缩发作的频率或严重性减少或降低、肺功能改善或者气道高反应性改善。其还可通过对其它对症治疗的需求减少来证明，所谓对症治疗即当症状发作发生时用于或意欲用于对其进行限制或中止的治疗，例如抗炎性(例如皮质类固醇)或支气管扩张性治疗。哮喘的预防益处对易于“晨间发作(morning dipping)”的患者尤其明显。“晨间发作”是公认的哮喘症状，常见于很大百分比的哮喘，以例如在凌晨约4-6点间(即在与任何以前所施用的对症哮喘治疗通常间隔很长时间的时间内)哮喘发作为特征。

适用本发明的其它炎性或阻塞性气道疾病和病症包括成人/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、慢性阻塞性肺或气道疾病(COPD或COAD)(包括与之相关的慢性支气管炎或呼吸困难)、气肿，以及因其它药物治疗、尤其是其它吸入药物治疗导致的气道高反应性的恶化。本发明还适用于治疗任何类型或病因的支气管炎，包括例如急性、花生仁吸入性、卡他性、格鲁布性、慢性或结核性支气管炎。本发明适用的其它炎性或阻塞性气道疾病包括任何类型或病因的尘肺病(一种炎性、通常是职业性的肺病，无论是慢性或还是急性常伴有气道阻塞，由反复吸入灰尘引起)，包括肺矾土沉着病、碳末沉着病、石棉沉着病、石末沉着病、鸵鸟毛尘肺、肺铁末沉着病、矽肺、烟草尘肺和棉屑沉着病。

优选受ALK-5抑制或ALK-4抑制介导的疾病或病症是肺动脉高压、肺纤维化、肝纤维化或骨质疏松症。

根据本发明所治疗的肺动脉高压包括：原发性肺动脉高压(PPH)；继发性肺动脉高压(SPH)；家族性PPH；散发性PPH；前毛细血管肺动脉高压；肺动脉高血压(PAH)；肺动脉血压过高；特发性肺动脉高压；血栓性肺动脉病(TPA)；致丛性肺动脉病(plexogenic pulmonary arteriopathy)；功能性I至IV级肺动脉高压；以及伴有如下状况的、与如下状况相关的或继发于如下状况的肺动脉高压：左心室功能障碍、二尖瓣瓣膜病、缩窄性心包炎、主动脉狭窄、心肌病、纵隔纤维化、异常肺静脉引流、肺静脉闭塞性疾病、胶原血管病、先天性心脏病、HIV病毒感染、药物和毒素如芬氟拉明、先天性心脏病、肺静脉高压、慢性阻塞性肺病、间质性肺病、睡眠障碍性呼吸、肺泡换气不足障碍、长期暴露于高海拔、新生儿肺病、肺泡毛细血管发育不良、镰状细胞病、其它凝血障碍、慢性血栓栓塞、结缔组织疾病、狼疮、血吸虫病、结节病或肺毛细血管血管瘤病。

根据本发明所治疗的肺动脉高压最特别是伴有呼吸系统障碍和/或低氧血的肺动脉高压，所述的呼吸系统障碍和/或低氧血包括慢性阻塞性肺病、间质性肺病、睡眠障碍性呼吸、肺泡换气不足障碍、长期暴露于高海拔、新生儿肺病和肺泡毛细血管发育不良，但尤其是慢性阻塞性肺病。

肺纤维化特别包括特发性肺纤维化。

本发明的化合物还可以用于治疗肌肉疾病，包括肌萎缩(例如废用)、肌营养不良(例如迪谢纳肌营养不良、贝克肌营养不良、肢带型肌营养不良、面-肩-肱型肌营养不良)、少肌症和恶病质。

肌肉疾病、例如肌肉萎缩和营养不良的治疗是很大程度上未满足的医学需要。只有很少的化合物被批准用于各种肌肉障碍、主要用于癌症引起的和HIV肌肉萎缩或恶病质范围，少数更多的药物在药品核准标示外(off-label)用于这些适应症。此外，这些药物中的大部分仅解决重量减轻而不特定地影响肌肉的生长和功能。因此，需要有有效的疗法来治疗伴有与恶病质(例如在癌症、HIV和COPD中)、废用性萎缩、少肌症和营养不良有关的肌肉疾病的功能缺损。

肌肉生长抑制因子(转化生长因子β(TGFβ)家族的成员)是骨骼肌量的关键的负调节物。在双肌牛和具有骨骼肌肥厚的人体中检测到在肌肉生长抑制因子基因中发生了不同突变(McPherron等人(1997)Nature387：83-90；Schuelke等人(2004)N.Engl.J.Med.350：2682-2688)。在多项体内和体外研究中证实了肌肉生长抑制因子对骨骼肌生长和障碍的重要作用。例如，小鼠中肌肉生长抑制因子的肌肉特异性过表达可引起肌肉量损失(Reisz-Porszasz等人(2003)AJP-Endo.285：876-888)，而没有肌肉生长抑制因子的小鼠的骨骼肌量增加并且体脂肪减少(Lin等人(2002)Biochem.Biophys.Res.Comm.291：701-706)。因此，全身施用肌肉生长抑制因子可引起恶病质(Zimmers等人(2002)Science 296：1486-1488)，而抑制肌肉生长抑制因子、例如通过肌肉生长抑制因子中和抗体JA16抑制肌肉生长抑制因子可增加野生型和营养不良mdx小鼠的肌肉量和强度(Bogdanovich等人(2002)Nature 420：418-421.2002；Wagner等人(2002)Ann.Neurol.52：832-836；Wolfman等人(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.100(26)：15842-15846)。此外，还已经在实验和临床肌肉萎缩中、例如在患有人免疫缺陷病毒(HIV)、癌症或肝硬变的患者中以及在老年和处于糖皮质激素治疗下的少肌症中观察到了肌肉生长抑制因子水平升高(Ma等人(2003)Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab.285：E363-371；Gonzales-Cadavid等人(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.95：14938-14943；还参见：Reisz-Porszasz等人(2003)AJP-Endo.285：876-888和Jespersen等人(2006)Scand.J.Med.Sci.Sports.16：74-82)。这些发现表明肌肉生长抑制因子抑制剂作为对肌萎缩和营养不良的治疗具有高潜能。

肌肉生长抑制因子的作用方式仍然在研究中。相对充分认可的是肌肉生长抑制因子通过Smad2/3进行信号传导(Lee S.J.(2004)Ann.Rev.Dev.Biol.20：61-86)。此外，已经表明成熟的肌肉生长抑制因子通过脂肪细胞中的激活素IIb型和激活素受体样激酶(ALK)受体而起作用(Rebbarpragada等人(2003)Mol.Cell.Biol.23：7230-7242)。但是，没有描述骨骼肌细胞中的各发现。据信肌肉生长抑制因子通过ALK信号传导而抑制分化和引起萎缩。此外，ALK信号传导的抑制可促进skMC分化和引起skMC肥厚。

骨质疏松症是以低骨量和骨组织微结构劣化、随后骨脆性和骨折危险性增加为特征的全身性骨骼障碍。骨质疏松综合征是多面性的，包括原发性障碍如绝经后或与年龄有关的骨质疏松症以及伴随疾病状态或给药出现的继发性病症。骨基质的机械性能和组成以及骨量和结构是骨抵抗折断能力的关键性决定因素。

因此，在另外的方面，本发明包括预防或治疗与钙耗竭或吸收增加有关的或者其中刺激骨形成和骨中钙固定是期望的骨病症的方法，其中将有效量的本发明活性剂或其在药学上可接受的和可裂解的酯或酸加成盐施用于需要该治疗的患者。

在另外的方面，本发明包括预防或治疗与钙耗竭或吸收增加有关的或者其中刺激骨形成和骨中钙固定是期望的骨病症的药物组合物，其包含与可药用赋形剂、稀释剂或载体混合的本发明活性剂或其在药学上可接受的和可裂解的酯或酸加成盐。

下文实施例的化合物通常具有的IC₅₀值在1μM以下。例如，实施例1.1、1.2、1.3、1.4、1.6和1.7的化合物具有的IC₅₀值分别为0.042、0.036、0.005、0.150、0.015和0.005μM。

ALK5的激酶活性可通过测定通用底物酪蛋白中放射标记的磷酸盐[33P]的掺入来评价。将人ALK5的激酶结构域(氨基酸200-503)与N-末端组氨酸标记物融合。ALK5的激酶活性通过在氨基酸204的点突变(苏氨酸改变为天冬氨酸，ALK5 T204D)被给予组成性，激酶构建体被基因工程化以从昆虫细胞中的杆状病毒表达构建体中被表达。将纯化的重组表达的组氨酸标记的ALK5 T204D蛋白以5.4mg/ml溶解在50mM Tris-HCl pH8.0、150mM NaCl、5mM DTT中。在使用当天用测定缓冲液(测定缓冲液：20mMTris-HClp H7.4、10mM MgCl₂、2mM MnCl₂)将ALK5 T204D溶解至2.5μg/ml。

将受试化合物和参考化合物溶解在不含DTT而含5％(v/v)DMSO的测定缓冲液中。将受试和参考化合物的储备液用含DTT(1.25mM)且含有4.5％(v/v)DMSO的测定缓冲液稀释。将10μl受试或参考化合物加入到96孔U形底的板的适宜的孔中。通过在没有ALK5激酶抑制剂参考化合物的存在下测定ALK5 T204D活性来测定总酶活性。通过在ALK5激酶抑制剂参考化合物的存在下测定ALK5 T204D的活性来测定非特异性结合(NSB)。每孔加入10μl脱磷酸化的酪蛋白储备液(将脱磷酸化的酪蛋白以20mg/ml溶解在ddH₂O中)(200μg/孔最终测定浓度)。每孔加入20μl ALK5 T204D(2.5μg/ml溶液)(50ng/孔最终测定浓度)。将板于室温孵育10分钟。

将10μl ATP混合物加入到孔中以引发反应(0.66nM[³³P]ATP/1μM未标记的ATP/孔最终测定浓度)。ATP混合物如下制备：将未标记的ATP(3mM)溶解在ddH₂O中，将pH调至7.4。[³³P]ATP的储备浓度为10μCi/μl。将适宜体积的[³³P]ATP加入到未标记的ATP溶液中以使每孔的最终测定浓度为0.1μCi。加入ATP混合物后，将板于室温孵育50分钟。加入50μL终止缓冲液(20mM Tris-HCl pH7.4、10mM EDTA)使激酶反应终止。

将75μl/孔从反应板中转移到Multiscreen-IP板中(通过每孔加入50μL70％(v/v)乙醇并于室温孵育5分钟来制备MultiScreen-IP板)。通过MultiScreen HTS真空歧管部件(密理博公司(Millipore)，目录号：MSVMHT500)进行抽吸而移去乙醇。通过加入200μl ddH₂O/孔将板洗涤2次。将MultiScreen-IP板于室温孵育30分钟以使酪蛋白与板结合。通过加入200μl 100mM磷酸溶液/孔将MultiScreen-IP板洗涤3次，从MultiScreen-IP板的背部将衬垫小心取出，将板在干燥箱中干燥30分钟。将MultiScreen-IP板进行背部密封，加入50μL Microscint^TM20，然后将板进行顶部密封，在TopCount^TM板读数器上使用³³P闪烁方案对放射标记的酪蛋白进行检测和定量。

本发明的活性剂还可用作与其它药物物质如抗炎药物物质、支气管扩张药物物质、抗组胺药物物质、减充血药物物质或镇咳药物物质组合使用的共用治疗活性剂，例如特别是在治疗阻塞性或炎性气道疾病、例如上文提到的那些中，例如作为这类药物的治疗活性的增强剂或者作为减少这类药物的所需剂量或潜在副作用的手段。本发明的活性剂可以与一种或多种其它药物物质混合在固定的药物组合物中，或者它可以单独、在其它药物物质之前、与之同时或在其它药物物质之后施用。

这类抗炎药包括：类固醇，特别是糖皮质激素、例如布地奈德、倍氯米松双丙酸酯、氟替卡松丙酸酯、环索奈德或莫米松糠酸酯或者在WO02/88167、WO 02/12266、WO 02/100879、WO 02/00679[诺瓦提斯](尤其是实施例3、11、14、17、19、26、34、37、39、51、60、67、72、73、90、99和101的那些)、WO 03/35668、WO 03/48181、WO 03/62259、WO03/64445、WO 03/72592、WO 04/39827和WO 04/66920中描述的类固醇；以及非甾体类固醇激动剂、例如在DE 10261874、WO 00/00531、WO02/10143、WO 03/82280、WO 03/82787、WO 03/86294、WO 03/104195、WO 03/101932、WO 04/05229、WO 04/18429、WO 04/19935、WO 04/26248和WO 05/05452中描述的那些；LTB4拮抗剂，诸如BIIL 284、CP-195543、DPC11870、LTB4乙醇酰胺、LY 293111、LY 255283、CGS025019C、CP-195543、ONO-4057、SB 209247和SC-53228，以及在US 5451700和WO04/108720中描述的那些；LTD4拮抗剂，诸如孟鲁司特、普仑司特、扎鲁司特、安可来、SR2640、Wy-48，252、ICI198615、MK-571、LY-171883、Ro24-5913和L-648051；多巴胺受体激动剂，例如卡麦角林、溴隐亭、罗匹尼罗和4-羟基-7-[2-[[2-[[3-(2-苯基-乙氧基)-丙基]-磺酰基]乙基]氨基]乙基]-2(3H)-苯并噻唑酮及其可药用盐(盐酸盐是

-阿斯利康(AstraZeneca)公司)；PDE4抑制剂，例如西洛司特(

葛兰素史克(GlaxoSmithKline)公司)、罗氟司特(百克顿(Byk Gulden)公司)、V-11294A(纳普(Napp)公司)、BAY19-8004(拜耳(Bayer)公司)、SCH-351591(先灵葆雅(Schering-Plough)公司)、阿罗茶碱(艾美罗医用药物有限公司(AlmirallProdesfarma))、PD189659/PD168787(帕克戴维(Parke-Davis)公司)、AWD-12-281(爱斯达药厂(Asta Medica))、CDC-801(赛基(Celgene)公司)、SelCID(TM)CC-10004(赛基(Celgene)公司)、VM554/UM565(维纳利斯(Vernalis)公司)、T-440(田边制药株式会社(Tanabe))、KW-4490(协和发酵工业株式会社(Kyowa Hakko Kogyo))、GRC 3886(Oglemilast，格兰美(Glenmark)公司)，以及在WO 92/19594、WO 93/19749、WO 93/19750、WO 93/19751、WO 99/16766、WO 01/13953、WO 03/104204、WO03/104205、WO 04/00814、WO 04/00839和WO 04/05258(默克公司(Merck))、WO 04/18450、WO 04/18451、WO 04/18457、WO 04/18465、WO 04/18431、WO 04/18449、WO 04/18450、WO 04/18451、WO 04/18457、WO 04/18465、WO 04/019944、WO 04/19945、WO 04/45607、WO 04/37805、WO 04/63197、WO 04/103998、WO 04/111044、WO 05/12252、WO05/12253、WO 05/13995、WO 05/30212、WO 05/30725、WO 05/87744、WO 05/87745、WO 05/87749和WO 05/90345以及在WO 98/18796和WO03/39544中描述的那些；A2a激动剂，例如在EP 409595A2、EP 1052264、EP 1241176、WO 94/17090、WO 96/02543、WO 96/02553、WO 98/28319、WO 99/24449、WO 99/24450、WO 99/24451、WO 99/38877、WO 99/41267、WO 99/67263、WO 99/67264、WO 99/67265、WO 99/67266、WO 00/23457、WO 00/77018、WO 00/78774、WO 01/23399、WO 01/27130、WO 01/27131、WO 01/60835、WO 01/94368、WO 02/00676、WO 02/22630、WO 02/96462、WO 03/86408、WO 04/39762、WO 04/39766、WO 04/45618和WO 04/46083中描述的那些；以及A2b拮抗剂，例如在WO 02/42298和WO 03/42214中描述的那些。

这类支气管扩张药包括β-2肾上腺素受体激动剂。适宜的β-2肾上腺素受体激动剂包括：阿布叔醇(沙丁胺醇)、奥西那林、特布他林、沙美特罗、非诺特罗、丙卡特罗和尤其是福莫特罗、卡莫特罗(carmoterol)、GSK159797及其可药用盐，以及WO 00/75114(该文件引入本文作为参考)的式I化合物(游离或盐或溶剂化物形式)、优选其实施例的化合物、尤其是下式化合物及其可药用盐，

以及WO 04/16601的式I或WO 04/087142的式I化合物(游离或盐或溶剂化物形式)，进一步适宜的β-2肾上腺素受体激动剂包括下列的化合物诸如下列所述的那些亦包括EP 147719、EP 1440966、EP 1460064、EP 1477167、EP 1574501、JP 05025045、JP 2005187357、US 2002/0055651、US2004/0242622、US 2004/0229904、US 2005/0133417、US 2005/5159448、US 2005/5159448、US 2005/171147、US 2005/182091、US 2005/182092、US 2005/209227、US 2005/256115、US 2005/277632、US 2005/272769、US2005/239778、US 2005/215542、US 2005/215590、US 2006/19991、US2006/58530、WO 93/18007、WO 99/64035、WO 01/42193、WO 01/83462、WO 02/66422、WO 02/70490、WO 02/76933、WO 03/24439、WO 03/42160、WO 03/42164、WO 03/72539、WO 03/91204、WO 03/99764、WO 04/16578、WO 04/22547、WO 04/32921、WO 04/33412、WO 04/37768、WO 04/37773、WO 04/37807、WO 04/39762、WO 04/39766、WO 04/45618、WO 04/46083、WO 04/80964、WO 04/087142、WO 04/89892、WO 04/108675、WO04/108676、WO 05/33121、WO 05/40103、WO 05/44787、WO 05/58867、WO 05/65650、WO 05/66140、WO 05/70908、WO 05/74924、WO 05/77361、WO 05/90288、WO 05/92860、WO 05/92887、WO 05/90287、WO 05/95328、WO 05/102350、WO 06/56471、WO 06/74897或WO 06/8173的化合物。

这类支气管扩张药还包括：其它抗胆碱能或抗毒蕈碱剂，特别是异丙托溴铵、氧托溴铵、噻托铵盐、格隆铵、CHF 4226(凯西(Chiesi)公司)和SVT-40776，以及在EP 424021、US 3714357、US 5171744、US 2005/171147、US 2005/182091、WO 01/04118、WO 02/00652、WO 02/51841、WO02/53564、WO 03/00840、WO 03/33495、WO 03/53966、WO 03/87094、WO 04/18422、WO 04/05285、WO 04/96800、WO 05/77361和WO 06/48225中描述的那些。

适宜的双重抗炎和支气管扩张药包括双重β-2肾上腺素受体激动剂/毒蕈碱拮抗剂，例如在US 2004/0167167、US 2004/0242622、US 2005/182092、US 2005/256114、US 2006/35933、WO 04/74246、WO 04/74812、WO04/89892和WO 06/23475中公开的那些。

适宜的抗组胺药物物质包括：盐酸西替利嗪、左西替利嗪、乙酰氨基酚、富马酸氯马斯汀、异丙嗪、氯雷他定、地氯雷他定、苯海拉明、盐酸非索非那定、activastine、阿司咪唑、氮革斯汀、dimetinden、依巴斯汀、依匹斯汀、左卡巴斯汀、咪唑斯汀和特芬那定(tefenadine)，以及在WO03/099807、WO 04/026841和JP 2004107299中公开的那些。

根据本发明的另外的实施方案，本发明的活性剂可以用作其它治疗的辅助剂或佐剂，所述的其它治疗例如有使用骨吸收抑制剂的治疗、例如如在骨质疏松症治疗中，特别是采用如下药物的治疗：钙、降钙素或其类似物或衍生物、例如鲑鱼、鳗鱼或人降钙素，类固醇激素、例如雌激素、部分雌激素激动剂或雌激素-孕激素联合，SERM(选择性雌激素受体调节剂)、例如雷洛昔芬、拉索昔芬、TSE-424、FC1271、替勃龙(利维爱(Livial)A)、维生素D或其类似物，或者PTH、PTH片段或PTH衍生物、例如PTH(1-84)、PTH(1-34)、PTH(1-36)、PTH(1-38)、PTH(1-31)NH2或PTS893。

根据上文，本发明还提供了治疗阻塞性或炎性气道疾病的方法，该方法包括给需要其的个体、特别是人类个体施用如上文所述的本发明活性剂或者其可药用盐或溶剂化物。在另一方面，本发明提供了用于制备治疗阻塞性或炎性气道疾病的药物的如上文所述的本发明活性剂或者其可药用盐或溶剂化物。

本发明的活性剂可以通过任意适宜的途径来施用，例如，经口服、例如以片剂或胶囊剂的形式施用；经胃肠道外、例如经静脉内施用；局部施用于皮肤，例如用于治疗银屑病；经鼻内施用，例如用于治疗枯草热；或者优选经吸入施用，特别是用于治疗阻塞性或炎性气道疾病。特别地，本发明的活性剂可以作为用于治疗COPD和哮喘的可吸入制剂进行递送。

在另外的方面，本发明还提供了药物组合物，其包含游离形式或者其可药用盐或溶剂化物形式的本发明活性剂以及任选的用于此的可药用稀释剂或载体。这类组合物可以使用常规的稀释剂或赋形剂以及盖仑领域中已知的技术来制备。因此，口服剂型可以包括片剂和胶囊剂。用于局部施用的制剂可以采取乳膏剂、软膏剂、凝胶剂或透皮传递系统如贴片的形式。用于吸入的组合物可以包含气雾剂或者其它可雾化的制剂或干粉制剂。

当活性成分的可吸入形式是气雾剂组合物时，吸入装置可以是提供有适于传递定量、例如10至100μl如25至50μl组合物的阀的气雾剂瓶，即称为定量吸入器的装置。适宜的这类气雾剂瓶和用于在其中包含处于压力下的气雾剂组合物的方法是吸入治疗领域技术人员众所周知的。例如，气雾剂组合物可以从例如如EP-A-0642992中描述的包被罐(coated can)中施用。当活性成分的可吸入形式是可雾化的水性、有机或水性/有机分散液时，吸入装置可以是已知的喷雾器、例如常规的气动喷雾器如空气喷射喷雾器或超声喷雾器，它们可以例如含有1至50ml、通常为1至10ml的分散液；或者是手提式喷雾器、有时称为软雾或软喷雾吸入器，例如电子控制装置如AERx(阿地格(Aradigm)公司，美国)或Aerodose(阿若基(Aerogen)公司)，或机械装置、例如允许有比常规喷雾器小得多的喷雾体积如10至100μl的RESPIMAT(勃林殷格翰国际公司(Boehringer Ingelheim))喷雾器。当活性成分的可吸入形式是细分的颗粒形式时，吸入装置可以例如是适于从含有干粉(包含剂量单位的(A)和/或(B))的胶囊或泡罩中传递干粉的干粉吸入装置，或者适于每喷传递例如3-25mg干粉(包含剂量单位的(A)和/或(B))的多剂量干粉吸入(MDPI)装置。干粉组合物优选含有稀释剂或载体如乳糖以及帮助防止由水分引起产品性能变坏的化合物如硬脂酸镁。适宜的这类干粉吸入装置包括在US 3991761(包括AEROLIZER^TM装置)、WO 05/113042、WO 97/20589(包括CERTIHALER^TM装置)、WO 97/30743(包括TWISTHALER^TM装置)和WO 05/37353(包括GYROHALER^TM装置)中公开的装置。

本发明还包括：(A)可吸入形式的游离形式的如上文所述的本发明活性剂或者其可药用盐或溶剂化物；(B)包含该可吸入形式的化合物以及可吸入形式的可药用载体的可吸入药物；(C)包含该可吸入形式的化合物以及吸入装置的药物产品；和(D)含有该可吸入形式的化合物的吸入装置。

在实施本发明中所用的本发明活性剂的剂量当然将例如根据所治疗的具体病症、所需的作用和施用方式而改变。通常，适于通过吸入施用的日剂量为0.0001至30mg/kg的级别，通常为0.01至10mg/患者，而对于口服施用，适宜的日剂量为0.01至100mg/kg的级别。

十分超乎预期地，已发现式Ia和Ib化合物具有优越的药理学性质并且抑制酪氨酸激酶的活性。

已充分确立各种酪氨酸激酶抑制剂可用于癌症的治疗，但是，特异性化合物与用于特异类型癌症治疗的特异性酪氨酸激酶受体相匹配是不明显的。TRK受体(NTRK基因)是通过受体或其配体(神经营养因子NGF、BDNF或NT3/4)的量的增加而与癌症的发展与进展相关。高表达的TPK见于肾胚胎瘤、前列腺癌和胰腺癌。TRKC的高表达是癌症的标记。在神经母细胞瘤中，高TRKB表达是与攻击性的、无法治疗的肿瘤相关并且对标准的细胞毒治疗耐受。在癌转移的小鼠模型中，NTRK2基因(TRKB蛋白)可诱导转移，并除去逆转该转移能力的基因。大量的证据提示TRK酶的抑制作用将阻断涉及到TRK的各种癌的生长与扩散。此外，TRK的激活突变存在于7％的癌症中。因此，其为TRK抑制剂的本发明化合物可用于癌症、特别是上文提及的具体癌症的治疗。

另外的研究已发现导致在人体中受体酶活性的部分丧失的TRKB的突变。该遗传区段(legion)导致食欲的增加和肥胖(摄食过度的肥胖)。相似的结果已在小鼠模型中获得，因此强化了降低TRKB活性可用于调节摄食行为的假说，并将用于诸如厌食症的障碍的治疗。

十分超乎预期地，亦已发现式Ia和Ib化合物抑制FLT-3和ROS，FLT-3和ROS亦是关于急性淋巴癌和胶质母细胞瘤的癌症治疗的有用的靶标。

数个证据已牵涉NTRK1(TrkA)且在癌症的发展与进展中其密切涉及家族成员NTRK2(TrkB)和NTRK3(TrkC)，这些可能是通过受体、其配体(神经生长因子、脑源性神经营养因子、神经营养因子)的上调或二者共同的上调。因此，本发明的化合物通过抑制癌症的发展和/或进展用于癌症的治疗。

Trk家族激酶受体促进肿瘤发生的机制仅被部分地理解。已显示Trk激酶受体能够控制肿瘤细胞生长与存活以及分化、迁移和转移。最近已证实NTRK2是失巢凋亡(由细胞与其骨架的粘附的丧失诱导的细胞凋亡)有效的抑制剂。通过激活磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路，NTRK2显示出促进非转化的上皮细胞在3-维培养物中的存活，并诱导这些细胞无免疫应答小鼠中的肿瘤形成和转移。

数个研究提示Trk家族成员，特别是NTRK1和NTRK2在胰腺癌中的作用：i)Trk家族的不同成员及其同源配体的高表达已被显示在胰腺癌患者的组织样本中。ii)NTRK2的过度表达最近已与恶性、高度转移表型的胰腺癌相联系。iii)高表达的NTRK1/NGF已与PC患者中提高的增殖作用、浸润行为和疼痛相关。iv)神经生长因子已显示提高胰腺癌细胞系的浸润能力。最近的研究提示TrkA在胰腺癌中的过度表达可能是由于在TrkA启动子区域中负性调节的AP-1位点的甲基化引起的。

涉及NTRK1的基因重排是乳头状甲状腺癌亚群的标记。甲状腺特异性TPK致癌基因是通过由三种不同的活化基因即TPR、TPM3和TFG的NTRK1基因重排产生的。

TrkA的数种功能突变的丧失与无汗症(CIPA)对疼痛的先天不敏感有关，无汗症是特征为缺少疼痛感和无汗的一种障碍。最近，拮抗性TrkA抗体已显示对炎性和神经性疼痛的动物模型有效。另外，TrkA和NGF与诱发癌症相关的疼痛相关。已显示NGF由肿瘤细胞分泌，并且肿瘤侵犯的巨噬细胞分泌直接刺激位于周围疼痛纤维的TrkA的NGF。使用在小鼠和大鼠二者中的各种肿瘤模型证实了用单克隆抗体中和NGF以与最高耐受剂量的吗啡相似或更高的程度抑制癌症相关的疼痛。因此，TrkA的选择性抑制剂可用于与癌症相关的疼痛的治疗。

Trk抑制剂的其他非肿瘤适应症包括特应性皮炎和牛皮癣。

将本发明的化合物与亲代BaF3细胞相比进行测定，以衡量其通过与Tel(ETV6)转录因子的二聚化结构域以及共表达全长rTrkA和mNGF的BaF3融合而选择性抑制表达活化的TrkA、B或C的Ba/F3细胞的细胞增殖作用的能力。

细胞TrkA/B/C依赖性增殖作用的抑制

用Tel-TrkA/B/C或TrkA/NGF将萤光素酶表达的Ba/F3小鼠祖B细胞加以转化。细胞保存在补以青霉素50μg/mL、链霉素50μg/mL和L-谷氨酰胺200mM的RPMI/10％胎牛血清(RPMI/FCS)中。未转化的Ba/F3细胞以加入小鼠重组IL3的相似条件保存。细胞分至384-孔板中，每孔5000个分散在50μL培养介质中的细胞。将本发明的化合物溶解并稀释于二甲基亚砜(DMSO)中。制备DMSO中的十二点1：3系列稀释液，以制备范围从10mM至0.05μM的浓度梯度。细胞中加入50nL的稀释的化合物并在细胞培养孵育器中孵育48小时。在加入Bright glo

(Promega)萤光素酶底物后测定发光信号。通过每种化合物在12个浓度下的百分抑制作用的线性回归计算IC₅₀值。

Upstate Kinase Profiler^TM-放射-酶学过滤器结合测定

评价本发明化合物抑制各种激酶(激酶的部分非限定性例子包括：Abl、Aurora、cSrc、TPR-Met、Tie2、MET、FGFR3、Axl、Bmx、BTK、c-kit、CHK2、Flt3、MST2、p70S6K、PDGFR、PKB、PKCα、Raf、ROCK-II、Rskl、SGK、TrkA、TrkB和TrkC)的能力。按照该通用方案以10μM的最终浓度一式两份地测试化合物。激酶缓冲液组合物和底物随包括在“Upstate Kinase Profiler^TM”中激酶的不同而进行变化。按照该通用方案以10μM的最终浓度一式两份地测试化合物。在置于冰上的eppendorf中混合激酶缓冲液(2.5μL，10倍浓度，需要时含有MnCl₂)、活性激酶(0.001-0.01单位；2.5μL)、存在于激酶缓冲液中的特异性或多聚(Glu4-Tyr)肽(5-500μM或0.01mg/ml)以及激酶缓冲液(50μM；5μl)。加入Mg/ATP混合物(10μL；67.5(或33.75)mM MgCl₂、450(或225)μM ATP和1μCi/μl[γ-³²P]-ATP(3000Ci/mmol))并在约30℃下将反应产物保温约10分钟。将反应混合物(20μl)点在2cm x 2cm P81(磷酸纤维素，用于带正电的肽底物)或Whatman No.1(用于多聚(Glu4-Tyr)肽底物)方形纸上。用0.75％磷酸洗涤该方形纸4次，每次5分钟，然后用丙酮洗涤一次，洗涤5分钟。将该方形纸转移到闪烁管中，加入5ml闪烁混合液并用Beckman闪烁计数器测定掺入肽底物中的³²P(cpm)。计算每个反应的抑制百分数。

例如实施例化合物3.1至3.7全部呈现低于1μM的IC₅₀。

现在已经出人意料地发现，式Ia和Ib化合物具有有利的药理学性质，抑制脂激酶如PI3-激酶和/或PI3-激酶相关性蛋白激酶家族(还称为PIKK，包括DNA-PK、ATM、ATR、hSMG-1和mTOR)的成员、如DNA蛋白激酶的活性，可用于治疗依赖于所述激酶活性的疾病或障碍。

磷脂酰肌醇-3’-OH激酶(PI3K)途径是中枢信号传导途径之一，它对多种细胞功能、包括细胞周期发展、增殖、机动性、代谢和存活发挥其作用。受体酪氨酸激酶的激活可引起PI3K使磷脂酰肌醇-(4，5)-二磷酸磷酸化，产生膜结合的磷脂酰肌醇-(3，4，5)-三磷酸。后者可通过磷脂酰肌醇-(3，4，5)-三磷酸与激酶的血小板白细胞C激酶底物同源性(PH)结构域结合而促进多种蛋白激酶从细胞质向质膜转移。为PI3K的关键下游靶标的激酶包括磷酸肌醇-依赖性激酶1(PDK1)和AKT(还称为蛋白激酶B)。然后这类激酶的磷酸化可使多种其它途径、包括介质如GSK3、mTOR、PRAS40、FKHD、NF-κB、BAD、胱天蛋白酶-9等激活或失活。PI3K途径的重要的负反馈机制是PTEN，它是催化磷脂酰肌醇-(3，4，5)-三磷酸脱磷酸为磷酸化的磷脂酰肌醇-(4，5)-二磷酸的磷酸酶。在超过60％的所有实体瘤中，PTEN突变为无活性的形式，使PI3K途径组成性激活。由于大部分癌症为实体瘤，所以这类观察提供了如下证据：PI3K本身或在PI3K途径中单独的下游激酶的靶标作用可提供有希望的方法来减轻或甚至消除多种癌症中的失控并由此恢复正常的细胞功能和行为。但是，这不排除其它机制可以引起PI3K活性调节剂、例如在本发明中的那些的有益作用。

考虑到它们对磷脂酰肌醇3-激酶的抑制作用，游离或可药用盐形式的式Ia或Ib化合物可用于治疗通过PI3激酶家族的一个或多个成员、尤其是PI3激酶的激活(包括正常活性或尤其是活性过度)所介导的病症，如增殖性病症、炎性病症或过敏性病症、阻塞性气道疾病和/或者通常伴随移植发生的障碍。

本发明的“治疗”可以是治疗性的(如对症治疗)和/或预防性的。优选治疗温血动物、尤其是人。

本发明的一个方面提供了用于治疗增殖性疾病的式Ia或Ib化合物或其在治疗增殖性疾病中的用途，所述的增殖性疾病选自良性或恶性肿瘤、脑癌、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳房癌、胃癌、胃肿瘤、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、阴道癌或甲状腺癌、肉瘤、成胶质细胞瘤、多发性骨髓瘤或胃肠癌，尤其是结肠癌或结肠直肠癌或者头和颈肿瘤、表皮过度增殖、银屑病、前列腺增生、瘤形成、上皮特征的瘤形成、淋巴瘤、乳癌或白血病。其它疾病包括考登综合征、莱尔米-杜伯斯(Lhermitte-Dudos)疾病和Bannayan-Zonana综合征或其中PI3K/PKB通路被异常激活的疾病。

根据化合物可用于治疗炎性或阻塞性气道(呼吸道)疾病，从而例如减轻组织损害，呼吸道炎症，支气管高反应性，重构或疾病发展。本发明适于治疗的炎性或阻塞性呼吸道道疾病包括各种类型或起因的哮喘，包括内源性(非过敏性)哮喘和外源性(过敏性)哮喘，例如轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、支气管哮喘、运动诱发的哮喘、职业性哮喘和包括细菌感染后诱发的哮喘。哮喘的治疗还应理解为包括对例如小于4或5岁的个体的治疗，这些个体表现出喘鸣症状且被诊断为或可诊断为“喘鸣婴儿(wheezyinfants)”，这是一种已确立的医学上十分关注的患者类别，现在通常鉴定为初期或早期哮喘。(为方便起见，将这种特定的哮喘疾病称作“喘鸣婴儿综合征”。)

哮喘治疗中的预防功效可以通过例如急性哮喘或支气管收缩这类症状发作的频率或严重程度的降低、肺功能的改善或呼吸道高反应性的改善而得到证实。这种功效可以进一步通过对其它对症疗法的需求的减少而得到证实，所述的其它对症疗法即用于或旨在用于在症状发生时限制症状发作或使其停止的疗法，例如消炎药(例如皮质类固醇)或支气管扩张药。预防哮喘的有益作用在倾向于“早间肺功能下降(morning dipping)”的个体中特别明显。“早间肺功能下降”是一种公认的哮喘综合征，在相当大比例的哮喘中非常常见且特征在于在例如约早上4至6点的几小时之间哮喘发作，即哮喘在通常离任何预先施用的对症哮喘疗法都相当远的时间点发作。

本发明适用的可用式Ia或Ib治疗的其它炎性或阻塞性呼吸道疾病和病症包括：急性肺损伤(ALI)、成人/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、慢性阻塞性肺病、呼吸道或肺疾病(COPD、COAD或COLD)，其包括慢性支气管炎或与之相关的呼吸困难、肺气肿以及由于其它药物疗法、特别是其它吸入药物疗法导致的呼吸道高反应性加剧。

本发明还适用于治疗任何类型或起因的支气管炎，包括例如急性支气管炎、花生仁吸入性支气管炎、卡他性支气管炎、格鲁布性支气管炎、慢性支气管炎或结核性支气管炎。此外，本发明适用于治疗的其它炎性或阻塞性呼吸道疾病包括任何类型或起因的肺尘埃沉着病(无论是慢性的还是急性的，该疾病常伴随有呼吸道阻塞且因反复吸入尘埃引起，是一种炎性且通常为职业性的肺病)，例如包括矾土肺、炭肺、石棉肺、石末肺、囊性纤维化、鸵鸟毛尘肺、肺铁末沉着病、硅肺、烟尘肺和棉尘肺。

考虑到本发明化合物的抗炎活性、特别是与抑制嗜酸性粒细胞活化有关的抗炎活性，本发明的化合物还适用于治疗与嗜酸性粒细胞有关的障碍，例如嗜酸性粒细胞增多，特别是与嗜酸性粒细胞有关的呼吸道障碍(例如包括嗜酸性粒细胞对肺组织的病态浸润)，包括影响呼吸道和/或肺的嗜酸细胞过多症以及例如作为勒夫勒综合征、嗜酸细胞性肺炎、寄生虫(特别是后生动物)感染(包括热带嗜酸性粒细胞增多症)、支气管肺曲霉病、结节性多动脉炎(包括丘-施综合征)、嗜酸细胞肉芽肿的结果或与之同时发生的与嗜酸性粒细胞有关的呼吸道疾病和因药物反应引起的侵害呼吸道的与嗜酸性粒细胞有关的障碍。

本发明的化合物还可用于治疗炎性或过敏性皮肤病症，例如银屑病、接触性皮炎、特应性皮炎、斑秃、多型红斑、疱疹样皮炎、硬皮病、白癜风、变应性血管炎、荨麻疹、大疱性类天疱疮、红斑狼疮、天疱疮、后天性大疱性表皮松解和其它炎性或过敏性皮肤病症。

本发明的化合物还可用于预防或治疗其它疾病或病症，特别是涉及炎性成分的疾病或病症，例如用于治疗眼睛的疾病和病症，如结膜炎、干燥性角膜结膜炎和春季结膜炎，包括过敏性鼻炎的影响鼻子的疾病，和其中涉及自身免疫反应或者具有自身免疫性组分或病原学的炎性疾病，包括自身免疫性血液学障碍(例如溶血性贫血、再生障碍性贫血、单纯红细胞性贫血、自发性血小板减少症)、全身性红斑狼疮、多软骨炎、硬皮病、韦格纳肉芽肿、皮肌炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、斯-琼氏综合征、自发性口炎性腹泻、自身免疫性炎性肠疾病(例如溃疡型结肠炎和克罗恩氏病)、内分泌性眼病、格雷斯夫病、肉样瘤病、牙槽炎、慢性超敏性肺炎、多发性硬化、原发性胆汁性肝硬化、葡萄膜炎(前房和后房)、干燥性角膜结膜炎和春季结膜炎、间质性肺纤维化、银屑病关节炎和肾小球性肾炎(伴有和不伴有肾病综合征，例如包括特发性肾病综合征或微小病变肾病)。

此外，本发明提供了本文定义的化合物或其可药用盐或其水合物或溶剂合物在制备用于治疗增殖性疾病、炎性疾病、阻塞性呼吸系统疾病或者通常伴随移植发生的障碍的药物中的用途。

本发明尤其涉及式Ia和Ib化合物(或包含式Ia和Ib化合物的药物制剂)在治疗一种或多种上下文提到的疾病中的用途，其中所述疾病对抑制PI3-激酶相关性蛋白激酶家族中的一种或多种激酶、最尤其是PI3激酶(PI3K)有响应(以有益的方式，例如通过部分或完全消除一种或多种其症状直至完全治愈或缓解)，尤其是其中激酶显示出(在其它调节机制的情况下)不够高的活性或更优选高于正常(例如组成性)活性。

无论术语“用途”或“使用”在何处被提到，这均意欲包括用于预防性和/或治疗性治疗温血动物、尤其是人的疾病、优选一种或多种上文或下文提到的疾病的式Ia和Ib化合物、包括将式Ia和Ib化合物以预防性和/或治疗性治疗如上下文提到的疾病的有效量施用于需要该治疗的人的使用方法或治疗方法、用于预防性和治疗性治疗上下文提到的疾病的药物制剂的制备或制备方法、尤其包括将式Ia和Ib化合物(作为治疗活性成分)与至少一种可药用载体材料混合、包括使其容易用于该治疗(例如加入说明插页(如包装页等)、配制、适宜的制备、适于特殊用途、用户化等)和式Ia和Ib化合物在这类制备中的用途和/或上文或下文提到的所有其它预防性或治疗性用途。所有这些方面均是本发明的实施方案。

式Ia和Ib化合物及其盐作为PI3激酶抑制剂的有效性可如下证明：

在COSTAR(96孔板)的一半区域以50μl/孔的终体积进行激酶反应。分析中ATP和磷脂酰肌醇的终浓度分别为5μM和6μg/mL。加入PI3激酶p110β引发反应。每孔如下加入测定的组分：

·第2-1栏，每孔10μL受试化合物在5％ DMSO中的溶液。

·在第1栏的前4个孔和第12栏的后4个孔中加入10μL 5％vol/volDMSO来测定总活性。

·在第1栏的后4个孔和第12栏的前4个孔中加入10μM对照化合物来测定本底。

·每块板制备2ml“测定混合物”：

1.912ml HEPES测定缓冲液

8.33μL 3mM ATP储备液，给出5μM/孔的终浓度

1μL[³³P]ATP，活性数据给出0.05μCi/孔

30μL 1mg/mL PI储备液，给出6μg/mL/孔的终浓度

5μL 1M MgCl₂储备液，给出1mM/孔的终浓度

·每孔加加入20μL测定混合物。

·每块板制备2ml“酶混合物”(x＊μL PI3激酶p110β在2ml激酶缓冲液中)。在向测定板加入期间将“酶混合物”在冰上放置。

·每孔加入20μl“酶混合物”以开始反应。

·然后将板于室温温育90分钟。

·每孔加入50μL WGA-SPA珠(小麦胚凝集素包被的亲近闪烁测定珠)混悬液终止反应。

·采用TopSeal-S(聚苯乙烯微量培养板的热密封剂，德国珀金埃尔默LAS有限公司(PerkinElmer LAS(Deutschland)GmbH)，Rodgau，德国)密封测定板，于室温温育至少60分钟。

·然后采用Jouan台式离心机(捷安公司(Jouan Inc.)，法国南特市)将测定板于1500rpm离心2分钟。

·采用Packard TopCount将测定板计数，每孔计数20秒。

＊酶体积将取决于所用批次的酶活性。

一些化合物显示出一定水平的针对不同的共生同源(paralogs)PI3Kα、β、γ和δ的选择性。

DNA-PK生物化学测定的描述：

在纯化的酶制备物和细胞核提取物中采用来自普洛麦格(Promega)公司的对DNA-依赖性蛋白激酶活性进行定量的试剂盒V7870(SignaTECT

DNA-依赖性蛋白激酶系统，包含DNA-PK、生物素化肽底物和其它成分，普洛麦格公司，麦迪逊，威斯康辛州，USA)进行测定。DNA-PK是对活性而言需要双链DNA(dsDNA)的核丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。dsDNA与酶的结合导致形成活化酶，并且还使得底物更接近于酶，从而允许进行磷酸化反应。

将DNA-PK X5反应缓冲液(250mM HEPES，500mM KCl，50mMMgCl₂，1mM EGTA，0.5mM EDTA，5mM DTT，用KOH使pH为7.5)在去离子水中1/5稀释，加入BSA(储备液＝10mg/ml)至终浓度为0.1mg/ml。

活化缓冲液由100μg/ml小牛胸腺DNA在对照缓冲液(10mM Tris-HCl(pH7.4)，1mM EDTA(pH8.0))中制成。每支试管中，反应混合物由如下物质组成：2.5μl活化或对照缓冲液、5μl X 5反应缓冲液、2.5μl p53-衍生的生物素化肽底物(储备液＝4mM)、0.2μl BSA(于10mg/ml储备)和5μl[γ-³²P]ATP(5μl 0.5mM冷ATP+0.05μl Redivue[γ-³²P]ATP＝安玛西亚(Amersham)AA0068-250μCi，3000Ci/mmol，10μCi/μl(目前的GE健康生命科学公司(GE Gealthcare Biosciences AB)，Uppsala，瑞典)。

将DNA-PK酶(普洛麦格(Promega)V5811，浓度＝100U/μL)以1/10在X1反应缓冲液中稀释，在冰上放置备用。将10.8μl稀释的酶与1.2μl 100μM化合物(由在净DMSO中的10mM储备液在水中以1/100稀释)一起于室温温育10分钟。在此期间，向在Perspex玻璃后的螺帽试管中加入15.2μl反应混合物。然后将9.8μl酶转移至含有反应混合物的试管中，于30℃孵育5分钟后，加入12.5μl终止缓冲液(7.5M盐酸胍)终止反应。

在充分混合后，每管取10μl等分试样在生物素捕获膜(普洛麦格(Promega)公司，麦迪逊，威斯康辛州，USA)上点样，将其放置干燥数分钟。然后将膜充分洗涤以除去过量的游离[γ-³²P]ATP和未生物素化的蛋白质：在200ml2M NaCl中一次30秒，在200ml 2M NaCl中3次、每次2分钟，在2M NaCl在 1％ H₃PO₄中的溶液中4次、每次2分钟，和在100ml去离子水中2次、每次30秒。然后将膜于室温放置风干30至60分钟。

采用镊子和剪刀将膜剪成正方形，放入闪烁小瓶中，然后加入8ml闪烁液(Flo-Scint 6013547，来自珀金埃尔默公司(Perkin-Elmer))。然后通过液体闪烁计数测定掺入DNA-PK生物素化肽底物中的³²P的量。

本发明的化合物在阻断PI3K/PKB通路的活化中的功效可以在如下细胞设置中进行证明：

通过Elisa检测U87MG细胞中磷酸-PKB的方案

使U87MG细胞(人成胶质细胞瘤，ATCC号HTB-14)受胰蛋白酶消化，在CASY细胞计数器(

系统，

，德国)中计数，用新鲜的完全DMEM高葡萄糖培养基稀释至每孔装载含有4×10⁴个细胞的150μL细胞混悬液，将试验板孵育18小时。平行地，将在PBS/O中的所需浓度的50μL包被抗体装载到ELISA板的各孔中，于室温将板保持2小时。该ELISA试验在用板密封剂(卡西达-康宁(Costar-Corning)公司，查询号：3095)密封的黑色平底96孔板(Microtest^TM，法康贝迪公司(FalconBecton-Dickinson)，查询号：353941)中进行。将板中的培养基弃去，用含有0.1％ DMSO或0.1％抑制剂(滴度(7)在10mM至0.156mM(在DMSO中)之间)的完全DMEM高葡萄糖培养基替换。接触30分钟后，通过抽吸将培养基迅速移去，然后将板置于冰上，立即将细胞用70μL溶解缓冲液溶解。平行地，将用包被抗体(在PBS/O中以1/250稀释的抗-Akt1C-20(羊)，圣达克鲁兹(Santa-Cruz)-1618，圣达克鲁兹生物技术公司，圣达克鲁兹，加利福尼亚州，美国)制备的96孔板用含有0.05％吐温20和0.1％

(明胶的衍生物，可阻断表面上的非特异性结合部位；西格玛-奥尔德里奇(Sigma-Aldrich)化学公司，福鲁卡(Fluka)，Buchs，瑞士，查询号：37766)的PBS/O洗涤3次、每次1分钟，于室温用含有3％Top

的200μL PBS将剩余的蛋白结合部位阻断2小时以阻止非特异性相互作用。将孔内容物用来自经处理细胞的50μL样品替换，于4℃将板孵育3小时。ELISA试验总是使用以下对照一式6份平行地进行：U87MG(未经处理的对照)或单独的溶解缓冲液(LB)。洗涤3×15分钟后，所有孔接受50μL二级抗体(在3％ top block中以1/250稀释的抗-S473P-PKB(兔)，细胞信号传导(Cell Signaling)-9271，细胞信号传导技术公司(Cell SignalingTechnologies Inc.)，Danvers，马萨诸塞州，美国)，于4℃孵育16小时。洗涤3次后，于室温将板与三级和共轭抗体(在3％ top block中以1/1000稀释的抗兔(HRP)，杰克逊免疫研究(Jackson Immuno Research)公司111-035-144)孵育2小时。最后，将免疫复合物用PBS/O/吐温20/top block洗涤2次、每次15秒，用200μl水洗涤1次，最后各试验孔中剩下200μl水，然后在暗处孵育45分钟。然后用(

ELISA皮克化学发光底物，皮尔斯(Pierce)，查询号：27070，皮尔斯生物技术公司，罗克福德，伊利诺斯州，美国)对板进行测定。加入100μL底物，将板振摇1分钟。立即在Top-Count NXT(帕卡德生物科学(Packard Bioscience)公司)发光计上读取发光。

可以发现式实施例化合物1.5、1.8和1.9的IC₅₀值分别为0.106、0.666和0.753μM。

也存在可证明式(I)化合物的体内抗肿瘤活性的实验。

例如，皮下移植人成胶质细胞瘤U87MG肿瘤的雌性Harlan(印第安纳波利斯，印地安那州，USA)无胸腺nu/nu小鼠可以用于测定PI3激酶抑制剂的抗肿瘤活性。第0天，将动物经口服(1-氯-2，2，2-三氟乙基二氟甲基醚，雅培(Abbot)，威斯巴登，德国)进行麻醉，将大约25mg肿瘤碎片置于动物左胁皮肤下，用缝合夹关闭小的切开伤口。当肿瘤达到体积为100mm³时，将小鼠随机分组，每组6-8只动物，开始治疗。治疗进行2-3周，按照所规定的剂量经口、静脉内或腹膜内施用在适宜介质中的式(I)化合物，每天施用一次(或更低频率)。用卡尺对肿瘤每周测量两次，计算肿瘤的体积。

作为细胞系U87MG的替代选择，也可以以相同方式使用其它细胞系，例如：

·MDA-MB 468乳腺癌细胞系(ATCC No.HTB 132；还参见In Vitro14，911-15[1978])；

·MDA-MB 231乳癌细胞系(ATCC No.HTB-26；还参见In Vitro 12，331[1976])；

·MDA-MB 453乳癌细胞系(ATCC No.HTB-131)；

·Colo 205结肠癌细胞系(ATCC No.CCL 222；还参见Cancer Res.38，1345-55[1978])；

·DU145前列腺癌细胞系DU 145(ATCC No.HTB 81；还参见Cancer Res.37，4049-58[1978])，

·PC-3前列腺癌细胞系PC-3(尤其优选；ATCC No.CRL 1435；还参见Cancer Res.40，524-34[1980])和PC-3M前列腺癌细胞系；

·A549人肺腺癌(ATCC No.CCL 185；还参见Int.J.Cancer 17，62-70[1976])，

·NCI-H596细胞系(ATCC No.HTB 178；还参见Science 246，491-4[1989])；

·胰腺癌细胞系SUIT-2(参见Tomioka等人，Cancer Res.61，7518-24[2001])。

本发明的化合物亦用作Janus激酶(包括JAK-2和JAK-3)的酪氨酸激酶活性、以及磷脂酰肌醇3-激酶的脂质激酶活性的抑制剂。因此，本化合物可用于增殖性疾病诸如肿瘤疾病、白血病、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、和伴随髓样化生的骨髓纤维化的治疗。通过JAK-3激酶的抑制作用，本发明的化合物亦具有作为免疫抑制剂的效用，例如用于诸如器官移植排异、狼疮、多发性硬化症、类风湿性关节炎、牛皮癣、皮炎、克罗恩病、1-型糖尿病和1-型糖尿病并发症等疾病的治疗。

如上文所提及，本发明化合物可单独施用或与一种或多种其他治疗剂组合施用，可能的组合治疗采取固定组合的形式或者本发明化合物与一种或多种其他治疗剂交错或彼此独立地给予，或者固定组合与一种或多种其他治疗剂的组合施用。

在Janus激酶抑制活性的背景下，式Ia或Ib化合物可此外或另外施用，与化疗、放疗、免疫治疗、手术干预或这些方法的组合，组合地特别施用于肿瘤治疗。在如上文所述的其他治疗策略背景下的长期治疗与辅助治疗是同样可能的。其他可能的治疗是在肿瘤消退后以保持患者状态的治疗，或甚至是例如在处于危险的患者中的化学保护性治疗。

可能组合的治疗剂特别地为抗增殖、细胞静止或细胞毒化合物的一种或多种，例如选自以下类别中的一种或数种药物，包括但不限于，多胺生物合成抑制剂，蛋白激酶抑制剂，特别地丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂，诸如蛋白激酶C，或酪氨酸蛋白激酶，诸如EGF受体酪氨酸激酶的抑制剂，例如Iressa，VEGF受体酪氨酸激酶的抑制剂，例如PTK787或或PDGF受体酪氨酸激酶抑制剂，例如STI571

，细胞因子、负生长调节剂，诸如TGF-β或IFN-β，芳香酶抑制剂，例如来曲唑

或阿那曲唑，SH2结构域与磷酸化蛋白的相互作用的抑制剂，抗雌激素、拓扑异构酶I抑制剂，诸如伊立替康，拓扑异构酶II抑制剂，微管活性剂，例如紫杉醇或埃博霉素(epothilone)，烷化剂、抗增殖剂、抗代谢剂，诸如吉西他滨或卡培他滨、铂化合物，诸如卡铂或顺铂，双膦酸盐类，例如

或

，和单克隆抗体，例如抗HER2，诸如曲妥珠单抗。

以编号、通用名或商品名识别的活性剂的结构可取自当前版的标准手册“默克索引”的或数据库，例如Patents International(例如IMS WorldPublications)。其相应内容本文引用作为参考。

JAK/TYK-激酶家族性质试验

本发明的化合物作为JAK/TYK激酶活性抑制剂的效能可以如下证明：

使用JAK/TYK-激酶家族的所有4种激酶作为含有活性激酶结构域的纯化的重组GST-融合蛋白。表达GST-JAK1(866-1154)、GST-JAK3(811-1124)和GST-TYK2(888-1187)并通过亲和色谱法纯化。GST-JAK2(808-1132)购自英杰(Invitrogen)公司(Carlsbad，美国，#4288)。

激酶试验以使用LabChip 3000系统的Caliper迁移率变动分析为基础。该技术类似于毛细管电泳，它使用微流芯片中底物和产物的电荷传动分离。

所有激酶反应均在384孔微量滴定板中进行，总反应体积为18μl。如“化合物稀释物的制备”部分中所述制备每孔含有0.1μl适当试验浓度的受试化合物的试验板。通过将9μl底物混合物(包含肽和ATP)和9μl激酶稀释物合并引发反应。将反应物于30℃孵育60分钟，加入70μl终止缓冲液(100mMHepes，5％ DMSO，0.1％涂布试剂(Coating reagent)，10mM EDTA，0.015％苄泽35)终止反应。

在所有反应中均使用荧光标记的合成肽作为底物。衍生自IRS-1的序列的肽(IRS-1肽，FITC-Ahx-KKSRGDYMTMQIG-NH₂)用于JAK1和TYK2，称为JAK3肽的肽(FITC-GGEEEEYFELVKKKK-NH₂)用于JAK2和JAK3。具体的试验条件描述于表1中：

表1：各激酶试验的试验条件

将终止的反应物转移到Caliper LabChip 3000读数器中，通过测定底物/产物之比测定各反应的周转(turnover)。

已发现实施例化合物2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6和2.7分别具有0.016、0.008、0.014、0.020、0.021、0.011和0.013μM的JAK2 IC₅₀值。

化合物稀释物的制备

将受试化合物溶解在DMSO(10mM)中，将其转移到通过各化合物插孔带有独特的2D矩阵芯片的1.4mL平底或V形Matrix管中。这些芯片的编号有针对地与各化合物识别编号联系。如果不立即使用，则将储备液于-20℃保存。对于试验操作，将小瓶解冻并通过扫描仪识别，由此产生指导随后工作步骤的工作图。

化合物稀释物在96孔板中制备。该模式能够进行8种浓度(单点)、最多40份的各受试化合物、包括4份参考化合物的试验。稀释方案包括制备预稀释板、主平板和试验板：

预稀释板：使用96孔聚丙烯板作为预稀释板。制备总共4块预稀释板，包括各自在板A1-A10位置上的10份受试化合物、在A11上的一份标准化合物和在A12上的一份DMSO对照。所有稀释步骤在Hamilton STAR自动机上进行。

主平板：将4块“预稀释板”的100μL各化合物稀释物、包括标准化合物和对照转移到384孔“主平板”中，分别包括在90％ DMSO中的以下浓度：1’820、564、182、54.6、18.2、5.46、1.82和0.546μM。

试验板：然后通过将主平板的100nL各化合物稀释物吸取到384孔“试验板”中制备等同的试验板。下面，将化合物与9μL试验组分+9μL酶混合对应1∶181稀释步骤混合，使得最终浓度分别为10、3.0、1.0、0.3、0.1、0.03、0.01和0.003μM。主平板的制备通过Matrix PlateMate Plus自动机操作，试验板的复制通过HummingBird自动机操作。

根据这些研究，本发明的化合物显示出尤其是对抗依赖于蛋白激酶的障碍、尤其是由JAK/TYK激酶活性所介导的增殖性疾病的治疗效能。

本发明通过以下实施例进行了说明。

实施例中使用的缩略词具有以下含义：

AcOH 乙酸

DCM 二氯甲烷

DIPEA N，N-二异丙基乙胺

DME 1，2-二甲氧基乙烷

DMF N，N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亚砜

Et₃N 三乙胺

Et₂O 二乙醚

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

h 小时

HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟-磷酸酯

HCl 盐酸

HPLC 高效液相色谱

MeOH 甲醇

min 分钟

ml 毫升

MS 质谱

MS-ES 电喷雾质谱

MW 微波

NaBH(OAc)₃三乙酰氧基硼氢化钠

Na₂CO₃ 碳酸钠

N₂H₄ 肼

NaHCO₃ 碳酸氢钠

NaN₃ 叠氮化钠

NaOH 氢氧化钠

Na₂SO₄ 硫酸钠

NBS N-溴代琥珀酰亚胺

NH₃ 氨

NMM N-甲基吗啉

NMP 1-甲基-2-吡咯烷酮

NMR 核磁共振

PdCl₂(PPh₃)₂ 二氯双(三苯基膦)-钯(II)

Pd(PPh₃)₄ 四(三苯基膦)钯

PPh₃ 三苯基膦

prep-HPLC制备型高效液相色谱，Water系统。柱：反相SunFire^TM Prep

(100 x 30mm)，C18 OBD，5μM。梯度洗脱(CH₃CN/水加0.1％

TFA)，通常冻干后得到的产物为TFA盐的形式。

R_F 保留因子

R_f TLC中的前沿比

RT 室温

SCX 强阳离子交换

SiO₂ 硅胶

t_R 保留时间

TBME 叔-丁基-甲醚

TFA 三氟醋酸

Ti(OiPr)₄ 钛(IV)异丙醇盐

TLC 薄层色谱法

UV 紫外

W 瓦

实施例

本发明的实施例包括式IIb的化合物

其中Q和T如下列的表1、2和3所示。制备的方法如下所述。

表1

表2

表3

在具有Waters Xterra MS C184.6×1005μM柱的Agilent 1100LC系统上记录LCMS，以5-95％ 10mM碳酸氢铵水溶液在乙腈中2.5分钟(具有负离子电喷雾离子化)洗脱；或者以5-95％水+0.1％ TFA在乙腈中(具有正离子电喷雾)洗脱。亦可在正/负离子电喷雾离子化条件下获得质谱，以5％至95％乙腈-水在0.1％甲酸存在下LC梯度洗脱。[M+H]⁺和[M-H]^-是指单一同位素的分子量。Biotage Optimizer^TM微波合成仪与EmryOptimizer微波炉用于交付的标准配置中。

中间体与最终化合物的制备

实施例1.1

4-(3-[2，4’]联吡啶-4-基-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基)-环己醇

步骤1：6-氯-咪唑并[1，2-b]哒嗪

在室温下向溴代乙醛(2eq，101mmol，12g)在二甲氧基乙烷(200ml)中的溶液中加入3-氨基-6-氯-哒嗪(1eq，51mmol，7g)。将反应搅拌24小时。过滤收集粗品并溶于水(15ml)中。然后将水溶液用碳酸氢钠处理至pH＝8并冷却过夜，过滤收集产物6-氯-咪唑并[1，2-b]哒嗪，¹H nmr(MeOD)8.15(1H，s)，8.05(1H，d，J＝9.58Hz)，7.80(1H，s)和7.32(1H，d，J＝9.58Hz)。

步骤2：3-溴-6-氯-咪唑并[1，2-b]哒嗪

在惰性气氛下向在乙酸(10ml)中的6-氯-咪唑并[1，2-b]哒嗪(1eq，17mmol，2.4g)中滴加溴(1eq，17mmol，0.82ml)。在室温下搅拌4小时后，过滤反应混合物并真空干燥得到3-溴-6-氯-咪唑并[1，2-b]哒嗪，¹H nmr(MeOD)8.42(1H，d，J＝9.81Hz)，8.07(1H，s)和7.91(1H，d，J＝9.48Hz)。

步骤3：4-(3-溴-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基)-环己醇

向反式-4-氨基环己醇(5eq，2.5g，21.5mmol)和NaHCO₃(1eq，361mg，4.3mmol)在N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)(2ml)中的溶液中加入3-溴-6-氯-咪唑并[1，2-b]哒嗪(1eq，1.0g，4.3mmol)。该反应在微波中180℃下加热40分钟。混合物用水(20ml)稀释并用EtOAc萃取。合并的有机部分用盐水洗涤，然后干燥(MgSO₄)并真空浓缩。通过闪式色谱(10％ EtOAc/MeOH)纯化得到4-(3-溴-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基)-环己醇。

步骤4：4-[3-(2-氯-吡啶基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇

在惰性气氛下向4-(3-溴-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基)环己醇(1eq，8.7mmol，2.7g)、3-氯代吡啶-4-基硼酸(1.5eq，13mmol，2.05g)、Na₂CO₃(2eq，17.4mmol，1.84g)在二噁烷(6.0ml)和水(3ml)中的溶液中加入双三苯基膦钯(II)氯化物(0.1eq，0.87mmol，609mg)。该反应混合物在微波80℃下加热2小时。混合物用H₂O(50ml)稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机相部分用盐水洗涤，然后干燥(MgSO₄)并真空浓缩。残留物用硅胶色谱以2-10％EtOAc在MeOH中的溶液洗脱纯化得到所需的最终化合物4-[3-(2-氯-吡啶基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇；[M+H]⁺345，347。

步骤5：4-(3-[2，4’]联吡啶-4-基-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基)-环己醇

在惰性气氛下向在二噁烷(1ml)和H₂O(0.33ml)中的4-[3-(2-氯-吡啶-4-基)-咪唑并[1，2-b]-哒嗪-6-基氨基]-环己醇(1eq，100mg，0.29mmol)、4-吡啶硼酸(1.5eq，0.43mmol，54mg)、Na₂CO₃(2eq，0.58mmol，62mg)中加入双三苯基膦钯(II)氯化物(0.1eq，0.029mmol，21mg)。反应在80℃下微波加热2小时。混合物用水H₂O(5ml)稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机部分用盐水洗涤，然后干燥(MgSO₄)并真空浓缩。残留物用硅胶色谱以20％EtOAc在MeOH中的溶液洗脱纯化得到最终化合物4-(3-[2，4’]联吡啶-4-基-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基)-环己醇；[M+H]⁺387。

实施例1.2至1.4

这些化合物即

4-{3-[2-(5-甲基-噻吩-2-基)-吡啶-4-基]-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基}-环己醇(实施例1.2)，

4-[3-(2-呋喃-3-基-吡啶-4-基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇(实施例1.3)和

4-{3-[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-吡啶-4-基]-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基}-环己醇(实施例1.4)

使用与制备实施例1.1化合物所使用的相似的方法进行制备。

实施例1.5

4-[3-(4-吡唑-1-基-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇

将4-(3-溴-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基)-环己醇(150mg；0.463mmol)(实施例1.1步骤3)溶于DMF(3ml)中并在RT、氩气氛下用[4-(1H-吡唑-1-基)苯基]硼酸(137mg；0.649mmol)、碳酸钾(1M在H₂O中的溶液；2.1ml)和双三苯基膦钯(II)一氯化物(16.6mg；0.023mmol)处理。将深黄色反应混合物在300W EmryOptimizer微波炉中120℃下搅拌20min。减压下从溶剂中游离出深棕色混悬液，并色谱纯化(40g Redisep，ISCOSg-100；用CH₂Cl₂/CH₃OH 95:5洗脱)，接着从EtOAc中重结晶，得到白色晶体状的标题化合物；[M+H]⁺375。

实施例1.6至1.7

这些实施例即

4-[3-(2-环丙基-吡啶-4基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇(实施例1.6)和

4-[3-(3-吡唑-1-基-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇(实施例1.7)，使用与制备实施例1.5化合物所用的相似的方法进行制备。

实施例1.8

4-[3-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇

步骤1：4-[3-(4-氟-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇

该化合物与实施例1.5相似地制备，将[4-(1H-吡唑-1-基)苯基]硼酸替换为4-氟-硼酸。[M+H]⁺327。

步骤2：4-[3-(4-[1，2，4]三唑-1-基-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇

将4-[3-(4-氟-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇(65.3mg；0.2mmol)溶解于DMF(5ml)中并用1H-[1，2，4]三唑(28mg；0.2mmol)和碳酸钾(56mg；0.2mmol)处理。混合物在EmryOptimizer微波炉(300W)中加热至220℃。冷却至RT后，加入EtOAc(50ml)并用水洗涤两次。有机层在减压下从溶剂中游离出来。闪式色谱(硅胶[0.040-0.063mm]Merck1.09.385.1000]；用94∶6CH₂Cl₂/CH₃OH洗脱)纯化，接着从二噁烷中冻干，得到类白色粉末状的标题化合物；[M+H]⁺376。

实施例1.9

{4-[3-(4-吡唑-1-基-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己基}-甲醇

步骤1：[4-(3-溴-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基)-环己基]-甲醇

本化合物与4-(3-溴-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基)-环己醇(实施例1.1步骤3)相似地制备，将反式-4-氨基环己醇替换为(4-氨基-环己基)-甲醇；[M+H]⁺327。

步骤2：4-[3-(4-吡唑-1-基-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己基}-甲醇

本标题化合物与实施例1.5相似地制备，将4-(3-溴-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基)-环己醇(实施例1.1步骤3)替换为[4-(3-溴-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基)-环己基]-甲醇(实施例1.9步骤1)；[M+H]⁺389。

实施例2.1

{4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮

步骤1：(3-溴-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基)-(2，5-二氟-苄基)-胺

RT下向3-溴-6-氯-咪唑并[1，2-b]哒嗪(1.00g，4.30mmol)[实施例1.1步骤2]和2，5-二氟苄基胺(1.03ml，8.60mmol)的混悬液中加入KF(2.50g，43.0mmol)。反应混合物加热至180℃持续1h。冷却至RT后，将反应混合物用EtOAc稀释并用饱和Na₂CO₃水溶液(3×)和饱和NaCl水溶液(1×)洗涤。干燥有机层(Na₂SO₄)，滤过，并减压浓缩。得到的固体用EtOAc研磨得到类白色固体状的标题化合物。MS-ES：[M+H]⁺341。

步骤2：4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯甲酸

在氩气氛、RT下向(3-溴-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基)-(2，5-二氟-苄基)-胺(400mg，1.14mmol)、4-羧基苯基硼酸(240mg，1.37mmol)和K₂CO₃(2.00ml，4.00mmol，2M在H₂O中)在DME(5ml)中的混悬液中加入PdCl₂(PPh₃)₂(41mg，0.06mmol)。将反应混合物在微波炉中加热至150℃持续20min。冷却至RT后，反应混合物通过Florisil垫滤过。滤垫用EtOAc洗涤，弃去滤液。然后，滤垫用MeOH洗涤，减压浓缩滤液得到粗品的类白色固体状标题化合物(70％纯度)，其无需进一步纯化用于下一步。MS-ES：[M+H]⁺381。

步骤3：{4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯基}-(4-甲基- 哌嗪-1-基)-甲酮

RT下向4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯甲酸(54mg，0.100mmol，70％纯度)在DMF(2ml)中的溶液中加入HATU(50mg，0.130mmol)和NMM(28μl，0.250mmol)。搅拌5min后，加入1-甲基哌嗪(13μl，0.110mmol)，将混合物再搅拌2h。反应混合物用EtOAc稀释，并用饱和NaHCO₃水溶液(2×)和饱和NaCl水溶液(1×)洗涤。干燥有机层(Na₂SO₄)，滤过，减压浓缩。残留物用反相制备型-HPLC(Waters)纯化得到白色固体状的标题化合物(实施例1)(TFA盐)。MS-ES：[M+H]⁺463。

实施例2.2至2.7

这些实施例即，

4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-N-(2-吗啉-4-基-乙基)苯甲酰胺(实施例2.2)，

{4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯基}-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-甲酮(实施例2.3)，

{4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯基}-吗啉-4-基-甲酮(实施例2.4)，

{3-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-N-(四氢-吡喃-4-基)-苯甲酰胺(实施例2.5)，

4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-N-(1-乙基-吡咯烷-2-基甲基)-苯甲酰胺(实施例2.6)和

4-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-N-(四氢-吡喃-4-基)-苯甲酰胺(实施例2.7)

与实施例2.1相似地、在步骤2中使用适当的羧基苯基硼酸、步骤3中使用适当的胺获得。

实施例3.1

4-[6-(3-氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯磺酰胺

步骤1：(3-溴-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基)-(3-氟-苄基)-胺

在封闭的试管中，将3-溴-6-氯-咪唑并[1，2-b]哒嗪(3.7g，15.9mmol)[实施例1.1步骤B]和3-氟代苄胺(4.54ml，39.8mmol)在NMP(16.5ml)中的混合物在180℃下加热并搅拌3h。将反应混合物冷却至RT，倾入水(300ml)中，并用EtOAc萃取。合并的有机相部分用Na₂SO₄干燥，滤过，并挥干。剩余的残留物用Combi-Flash Companion^TM(Isco Inc.)柱色谱(SiO₂；梯度洗脱，DCM/[DCM/MeOH-NH₃ 9:1]95:5→3:7)纯化得到白色固体状的标题化合物。MS-ES[M+H]⁺＝321.0。

步骤2：4-[6-(3-氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯磺酰胺

在封闭的试管中，(3-溴-咪唑并[1，2-b哒嗪-6-基)-(3-氟-苄基)-胺(50mg，0.156mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼戊环-2-基)-苯磺酰胺(52.9mg，0.187mmol)、PdCl₂(PPh₃)₂(5.5mg，0.008mmol)和2M Na₂CO₃水溶液(0.27ml)在DME(1ml)中的混合物在微波炉中150℃下加热17min。将反应混合物冷却至RT，滤过，滤饼用DCM洗涤。将滤液挥干，剩余的残留物用反相制备型-HPLC(Waters系统)纯化得到白色粉末状的标题化合物。MS-ES[M+H]⁺＝398。

实施例3.2至3.5

这些实施例即，

4-[6-(3-氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯甲酰胺

(实施例3.2)

4-{6-[(R或S)-1-(3-氟-苯基)-2-羟基-乙基氨基]-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基}-苄腈(实施例3.3)，

3-{6-[(R)-1-(3-氟-苯基)-乙基氨基]-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基}-苄腈

(实施例3.4)，

{4-[6-(3-氟-苄基氧基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯基}-甲醇

(实施例3.5)，

与实施例3.1相似地、在步骤1中使用适当的苄胺或苄醇、在步骤2中使用适当的硼酸或酯获得。

实施例3.6(未在上表中)

(3-氟-苄基)-{3-[4-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯基]-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基}-胺

步骤1：4-[6-(3-氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苄腈

在封闭的试管中，(3-溴-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基)-(3-氟-苄基)-胺(300mg，0.934mmol)[实施例3.1步骤A]、4-氰基苯基硼酸(165mg，1.12mmol)、PdCl₂(PPh₃)₂(32.8mg，0.047mmol)和2M Na₂CO₃水溶液(1.6ml)在DME(10ml)中的混合物在微波炉中在150℃下加热30min。反应混合物冷却至RT，用AcOEt(100ml)稀释，并用水(30ml)和盐水(30ml)洗涤。将有机相部分用Na₂SO₄干燥，滤过，并挥干。剩余残留物用Combi-FlashCompanion^TM(Isco Inc.)柱色谱(SiO₂；梯度洗脱，DCM/[DCM/MeOH 1:1]98:2→9:1)纯化得到白色固体状的标题化合物(257mg，0.748mmol，80％)。MS-ES[M+1]⁺＝344。

步骤2：(3-氟-苄基)-{3-[4-(2H-四唑-5-基)-苯基]-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基}- 胺

在封闭的试管中，4-[6-(3-氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苄腈(257mg，0.748mmol)、NH₄Cl(134mg，2.25mmol)和NaN₃(146mg，2.25mmol)在DMF(4ml)中的混合物在100℃下加热并搅拌24h。反应混合物冷却至RT，用DCM稀释并滤过。滤液浓缩至干，剩余的残留物在MeOH中研磨。过滤收集得到的固体，用Et₂O洗涤，并真空干燥得到米黄色固体状的粗品标题化合物。MS-ES[M+H]⁺＝387。

步骤3：(3-氟-苄基)-{3-[4-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯基]-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6- 基}-胺

在封闭的试管中，(3-氟-苄基)-{3-[4-(2H-四唑-5-基)-苯基]-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基}-胺(70mg，0.18mmol)、Cs₂CO₃(89.4mg，0.27mmol)和碘甲烷(0.028ml，0.45mmol)在DMF(1ml)中的混合物在50℃下加热搅拌2h。将反应混合物冷却至RT，用EtOAc稀释，并用水洗涤。用Na₂SO₄干燥有机层，滤过，并浓缩至干。剩余的残留物用反相制备型HPLC(Water系统)纯化得到白色粉末状的标题化合物。MS-ES[M+H]⁺＝401。

实施例3.7(未在上表中)

四氢-吡喃-4-甲酸{3-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯基}-酰胺

步骤A：[3-(3-氨基-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基]-(2，5-二氟-苄基)-胺

在封闭的试管中，(3-溴-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基)-(2，5-二氟-苄基)-胺(433mg，1.28mmol)[实施例2.1步骤1]、3-氨基苯基硼酸(210mg，1.53mmol)、Pd(PPh₃)₄(73.7mg，0.064mmol)和2M Na₂CO₃水溶液(2.2ml)在DME(8ml)中的混合物在微波炉中150℃下加热17min。将反应混合物冷却至RT。用EtOAc(100ml)稀释，并用2M Na₂CO₃水溶液和盐水洗涤。有机层用Na₂SO₄干燥，滤过并挥干。剩余的残留物用Combi-Flash Companion^TM(Isco Inc.)柱色谱(SiO₂；梯度洗脱，DCM/[DCM/MeOH-NH₃ 9:1]95:5→7:3)纯化得到橙色固体状的标题化合物。MS-ES[M+H]⁺＝352。

步骤B：四氢-吡喃-4-甲酸{3-[6-(2，5-二氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3- 基]-苯基}-酰胺

RT下向[3-(3-氨基-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基]-(2，5-二氟-苄基)-胺(50mg，0.14mmol)和四氢-吡喃-4-甲酸(22mg，0.17mmol)在DMF(0.5ml)中的溶液中相继加入NMM(0.078ml，0.71mmol)和HATU(82mg，0.21mmol)。反应混合物RT下搅拌3h，然后直接用反相制备型HPLC(Waters系统)纯化得到白色粉末状的标题化合物。MS-ES[M+H]⁺＝464。

Claims

1.游离或盐或溶剂化物形式的式Ia或Ib化合物：

其中：

X为O或NH；

Y为CR¹³或N；

R¹选自H、CN、卤素、-C(O)NR⁷R⁸和

R³选自H、Me和CH₂OH；

R⁴为H或C₁-C₃烷基；

R⁵为H或卤素；

R⁷为H或C₁-C₃烷基；

R⁹、R¹⁰、R¹¹和R¹²各自独立地选自H和C₁-C₃烷基；

R¹³为H或卤素；

m和n各自独立地为0、1或2；

Z为N或CR²⁶；

R²⁰选自H、环丙基和R²¹，条件是当Z为N时，R²⁰不为H；

R²¹选自

和

R²²和R²³各自独立地选自H和C₁-C₃烷基；

R²⁴选自H和OH；

2.根据权利要求1的化合物，其中R¹选自H、CN、卤素、-C(O)NR⁷R⁸和

3.根据权利要求1或权利要求2的化合物，其中R⁴为H或Me。

4.根据前述权利要求中任意项的化合物，其中R⁵为H或F。

5.根据前述权利要求中任意项的化合物，其中R⁷为H或Me。

6.根据前述权利要求中任意项的化合物，其中R¹³为H。

7.根据权利要求1的化合物，其选自：

4-[3-(4-吡唑-1-基-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇；

4-[3-(3-吡唑-1-基-苯基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-6-基氨基]-环己醇；

4-[6-(3-氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯磺酰胺；

4-[6-(3-氟-苄基氨基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯甲酰胺；

4-{6-[(R)-2-(3-氟-苯基)-吡咯烷-1-基]-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基}-苄腈；

{4-[6-(3-氟-苄基氧基)-咪唑并[1，2-b]哒嗪-3-基]-苯基}-甲醇；和

8.用作药物的根据权利要求1至7中任意一项的化合物。

9.与其它药物物质组合的根据权利要求1至7中任意一项的化合物，所述的其它药物物质是抗炎药物物质、支气管扩张药物物质、抗组胺药物物质、减充血药物物质或镇咳药物物质。

10.药物组合物，其包含作为活性成分的根据权利要求1至7中任意一项的化合物和适宜的可药用赋形剂。

11.根据权利要求1至7中任意一项的式Ia或Ib化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗由ALK-5、Pi3K、TRK和JAK2中的一种或多种介导的病症。

12.根据权利要求1至7中任意一项的式Ia或Ib化合物在制备用于治疗通过ALK-4受体介导的病症的药物中的用途。

13.根据权利要求1至7中任意一项的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗肺动脉高压、慢性肾脏疾病、急性肾脏疾病、创伤愈合、关节炎、骨质疏松症、肾脏疾病、充血性心力衰竭、溃疡、眼障碍、角膜创伤、糖尿病性肾病、神经系统功能受损、阿尔茨海默病、动脉粥样硬化、腹膜和皮下粘连、肾纤维化、肺纤维化和肝纤维化、乙型肝炎、丙型肝炎、酒精诱发的肝炎、癌症、血色素沉着病、原发性胆汁性肝硬化、再狭窄、腹膜后纤维化、肠系膜纤维化、子宫内膜异位症、瘢痕瘤、癌症、骨功能异常、炎性障碍、皮肤瘢痕形成和光老化。

14.根据权利要求1至7中任意一项的化合物在制备用于治疗肺动脉高压或肺纤维化的药物中的用途。

15.根据权利要求1至7中任意一项的化合物在制备用于治疗骨质疏松症的药物中的用途。

16.如权利要求1所述的式Ia或Ib的化合物的制备方法，其包括：

(i) (A)将式IIa化合物与式IIIa或IIIb化合物反应