CN104220071A - 抑制转接物关联激酶1以治疗疼痛 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及通过抑制转接物关联激酶1(adaptor associated kinase1)(AAK1)来治疗疼痛。公开了大量AAK1抑制剂。

Description

抑制转接物关联激酶1以治疗疼痛
本申请要求2012年3月9日提交的美国临时专利申请号61/608,849的优先权，所述临时专利申请的全部内容通过参考并入本文。
技术领域
本发明涉及通过抑制转接物关联激酶1(adaptor associated kinase1)(AAK1)来治疗疼痛的方法。
背景技术
疼痛一般可以分成三种不同类型：急性、炎性和神经病理性。从最本质上来说，急性疼痛一般持续时间短且强烈。另一方面，炎性疼痛可能持续长得多的时间段，并且其强度分成更多级别。炎症可能因许多原因而发生，包括组织损伤、自体免疫应答和病原体侵入。第三类疼痛是神经病理性的，并推测涉及引起神经元蛋白和回路重新组构的神经损伤，产生病理性“敏化”状态，其可以产生持续数年的长期疼痛。使用现存的疗法，这种疼痛类型特别难以治疗。
疼痛、尤其是神经病理性和难治性疼痛，是巨大的、尚未满足的医疗需求。数百万个体苦于不能通过当前疗法充分地控制的严重疼痛。当前用于治疗疼痛的药物包括NSAID、COX2抑制剂、鸦片类药物、三环抗抑郁剂和抗惊厥剂。神经病理性疼痛特别难以治疗，因为它不能良好地对鸦片类药物响应，除非达到高的剂量。加巴喷丁目前是用于治疗神经病理性疼痛的偏好的治疗剂，尽管它仅在60％的患者中起效，它在所述患者中显示出中等效能。
转接物关联激酶1(AAK1)是丝氨酸/苏氨酸激酶的Ark1/Prk1家族的成员。AAK1mRNA以被称为短和长的两种剪接形式存在。长形式占优势并在脑和心脏中高表达(Henderson和Conner，Mol.Biol.Cell.2007,18,2698-2706)。AAK1富集在突触体制备物中，并且在培养的细胞中与细胞内吞性结构共定位。AAK1介导网格蛋白(clatherin)包被的细胞内吞作用，这是一种在突触小泡循环利用和受体介导的细胞内吞中重要的过程。AAK1与AP2复合体这种将受体运载物连接到网格蛋白包被的异源四聚体结合。网格蛋白与AAK1的结合刺激AAK1激酶活性(Conner等，Traffic 2003,4,885-890；Jackson等，J.Cell.Biol.2003,163,231-236)。AAK1将AP-2的mu-2亚基磷酸化，其促进mu-2与运载物受体上的含酪氨酸分拣基序的结合(Ricotta等，J.Cell Bio.2002,156,791-795；Conner和Schmid，J.Cell Bio.2002,156,921-929)。Mu2磷酸化对于受体摄入来说不是必需的，但磷酸化提高内化效率(Motely等，Mol.Biol.Cell.2006,17,5298-5308)。
AAK1已被鉴定为是在PC12细胞中的神经调节蛋白-1/ErbB4信号传导的抑制剂。通过RNA干扰介导的基因沉默或用激酶抑制剂K252a(其抑制AAK1激酶活性)处理使AAK1表达丧失，导致神经调节蛋白-1诱导的神经突过度生长的增强。这些处理引起ErbB4表达增加和ErbB4在细胞质膜中或其附近积累(Kuai等，Chemistry and Biology2011,18,891-906)。NRG1和ErbB4是推测的精神分裂症易感性基因(Buonanno,Brain Res.Bull.2010,83,122-131)。已将两个基因中的SNP与多个精神分裂症内表型相关联(Greenwood等，Am.J.Psychiatry2011,168,930-946)。神经调节蛋白1和ErbB4KO小鼠模型已显示出精神分裂症相关的形态变化和行为表型(Jaaro-Peled等，Schizophrenia Bulletin 2010,36,301-313；Wen等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2010,107,1211-1216)。此外，已将AAK1基因的内含子中的单核苷酸多态性与帕金森氏病的发作年龄相关联(Latourelle等，BMC Med.Genet.2009,10,98)。
发明概述
本发明是基于AAK1的抑制能够减轻疼痛这一本申请人的创新发现，以及随后多种类型的AAK1抑制剂的发现。
本发明本身涵盖了治疗或管理疼痛的方法，所述方法包括在需要的患者中抑制AAK1活性。具体的疼痛是神经病理性疼痛，例如纤维肌痛或外周神经病(例如糖尿病性神经病)。
附图说明
本发明的情况示出在图1中，该图示出了使用AAK1纯合(-/-)敲除小鼠和它们的野生型(+/+)同窝仔畜，从福尔马林疼痛模型获得的结果。AAK1纯合(-/-)敲除小鼠与它们的野生型(+/+)同窝仔畜相比，显示出急性和强直性疼痛响应两者的明显减轻。
发明概述
本发明部分是基于AAK1敲除小鼠对疼痛表现出高抗性这一本申请人的发现。该发现促使的研究最终导致发现了可用于疼痛的治疗和管理的广范围的AAK1抑制剂。简短来说，本发明提供了可以治疗或管理疼痛的全新机制以及可用于其中的化合物。
定义
除非另有指明，否则短语“本发明的化合物”、“本公开的化合物”等是指本文中公开的化合物。
除非另有指明，否则术语“烃基”是指具有全碳骨架并由碳和氢原子构成的脂族或脂环族组成部分。烃基的实例包括具有1-20、1-12、1-6和1-4个碳原子的烃基(分别被称为C1-20烃基、C1-12烃基、C1-6烃基和C1-4烃基)。具体实例包括烷基、烯基、炔基、芳基、苯甲基、环烷基、环烯基、环烷基烷基、环烯基烷基、萘基、苯基和苯乙基。
烷基组成部分的实例包括具有1-20、1-12、1-6、1-4和1-3个碳原子的直链和支链组成部分(分别被称为C1-20烷基、C1-12烷基、C1-6烷基、C1-4烷基和C1-3烷基)。具体实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚基、4,4-二甲基戊基、辛基、2,2,4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基和十二烷基。
烯基组成部分的实例包括直链和支链C2-20、C2-12和C2-6烯基。具体实例包括乙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、1-辛烯基、2-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、2-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、2-癸烯基和3-癸烯基。
炔基组成部分的实例包括直链和支链C2-20、C2-12和C2-6炔基。具体实例包括乙炔基和2-丙炔基(炔丙基)。
芳基组成部分的实例包括蒽基、甘菊环基、芴基、茚满、茚基、萘基、苯基和菲基。
环烷基组成部分的实例包括C3-12、C3-7、C4-6和C6环烷基。具体实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和金刚烷基。
除非另有指明，否则术语“卤素”涵盖氟、氯、溴和碘。
除非另有指明，否则术语“杂烃基”是指具有由一个或多个碳原子和一个或多个杂原子构成的骨架的组成部分。具体的杂原子是氮、氧和硫。杂烃基组成部分可以被认为是其中至少一个碳原子、CH、CH2或CH3基团被一个或多个杂原子以及满足价数所必需数目的氢原子替换的烃基组成部分。杂烃基的实例包括2-20、2-12、2-8、2-6和2-4元杂烃基组成部分，其中所述数目范围是指组成部分中碳、氮、氧和/或硫原子的总和。因此，术语“2-12元杂烃基”是指具有总共2-12个碳、氮、氧和/或硫原子的杂烃基组成部分。具体的杂烃基组成部分包括直链和支链杂烷基、杂烯基和杂炔基，以及杂环和杂芳基。
杂烷基组成部分的实例包括2-8元、2-6元和2-4元杂烷基组成部分。具体实例包括烷氧基、酰基(例如甲酰基、乙酰基、苯甲酰基)、烷基氨基(例如二(C1-3-烷基)氨基)、芳基氨基、芳基肟、氨基甲酸酯、羧酰胺、烷基羰基、芳基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、烷基硫烷基、芳基硫烷基、烷基亚硫酰基、芳基亚硫酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷基磺酰基氨基和芳基磺酰基氨基。
除非另有指明，否则术语“杂环”是指环状(单环或多环)杂烃基组成部分，其可以是芳香族、部分芳香族或非芳香族的。杂环包括杂芳基。实例包括4-10元、4-7元、6元和5元杂环。具体实例包括苯并[1,3]间二氧杂环戊烯基、2,3-二氢-苯并[1,4]二氧杂芑基、邻二氮杂萘基、呋喃基、海因基、吗啉基、氧杂环丁基、氧杂环丙基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基、四氢噻喃基和戊内酰胺基。由于术语“杂环”是指环，单独情况下它不涵盖组成部分例如噁唑烷酮和咪唑烷酮：这样的组成部分被认为是取代的杂环，即用氧基取代的杂环。
杂芳基组成部分的实例包括吖啶基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并异噻唑基、苯并异噁唑基、苯并喹唑啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、酞嗪基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、四唑基、噻唑基和三嗪基。
除非另有指明，否则术语“包括”具有与“包括但不限于”相同的意义。同样地，术语“例如”具有与术语“例如但不限于”相同的意义。
除非另有指明，否则术语“管理”涵盖了在已经患有特定疾病或障碍的患者中防止所述疾病或障碍的复发，和/或延长已患有所述疾病或障碍的患者处于缓解期的时间。所述术语涵盖调节所述疾病或障碍的阈值、发展和/或持续时间，或改变患者对所述疾病或障碍的响应方式。
除非另有指明，否则化合物的“治疗有效量”是足以在疾病或病症的治疗或管理中提供治疗益处，或延迟或最小化与所述疾病或病症相关的一种或多种症状的量。化合物的“治疗有效量”是指单独或与其他疗法组合的治疗剂的在疾病或病症的治疗或管理中提供治疗益处的量。术语“治疗有效量”可以涵盖改进总体疗法、减轻或避免疾病或病症的症状或病因，或增强另一种治疗剂的治疗效能的量。
除非另有指明，否则术语“治疗”设想了在患者患有指定疾病或障碍时发生的，降低所述疾病或障碍的严重性或延迟或减缓所述疾病或障碍的进展的行动。
除非另有指明，否则紧邻一系列名词之前的一个或多个形容词应该被解释为适用于每个所述名词。例如，短语“任选被取代的烷基、芳基或杂芳基”具有与“任选被取代的烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基”相同的意义。
化合物
可用于抑制AAK1的化合物公开在2012年3月9日提交的美国临时专利申请号61/608,758、61/608,765和61/608,737中，以及在2013年2月26日提交的美国专利申请号13/777,144、2013年3月5日提交的13/785,271以及也在2013年3月5日提交的13/785,355中。
本发明的化合物可以具有一个或多个不对称中心。除非另有指明，否则本发明涵盖所述化合物的所有立体异构体及其混合物。化合物的单个立体异构体，可以从含有手性中心的可商购的起始原料合成地制备，或通过制备对映异构体产物的混合物，然后进行分离例如转变成非对映异构体的混合物，随后进行分离或重结晶、层析技术，或者在手性层析柱上直接分离对映异构体，来制备。特定立体化学的起始原料可以商购或者可以通过本领域中已知的技术来制造和拆分。
本公开的某些化合物也可以以可能可分离的不同的稳定构象形式存在。由于围绕不对称单键的旋转受限、例如由于空间位阻或环应变造成的扭转不对称，可以允许分离不同的构象异构体。本公开包括这些化合物的每种构象异构体及其混合物。
本公开打算包含本发明的化合物中出现的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但具有不同质量数的原子。作为一般性实例而不是限制性的，氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括13C和14C。同位素标记的本发明的化合物一般可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本文中所描述的类似的方法，使用适合的同位素标记的试剂代替原本使用的未标记的试剂来制备。这样的化合物可能具有各种潜在用途，例如在测定生物学活性中作为标准品和试剂。在稳定同位素的情况下，这样的化合物可能具有有利地修改生物学、药理学或药物动力学性质的潜力。
本公开的化合物可以作为可药用盐存在。当在本文中使用时，术语“可药用盐”表示本发明的化合物的可溶于或可分散于水或油中的盐或两性离子形式，其在合理的医学判断范围内，适合用于与患者的组织相接触而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或与合理的利益/风险比相称的其他问题或并发症，并且可有效地用于其目标用途。盐可以在化合物的最终分离和纯化期间制备，或者单独地通过将适合的氮原子与适合的酸进行反应来制备。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、二氢溴酸盐、二盐酸盐、二氢碘酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、均三甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。可用于形成可药用加成盐的酸的实例包括无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸以及有机酸例如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。
碱加成盐可以在化合物的最终分离和纯化期间，通过将羧基与适合的碱例如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，或与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺进行反应来制备。可药用盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁和铝，以及无毒性的季铵阳离子例如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己胺、普鲁卡因、二苯甲基胺、N,N-二苯甲基苯乙基胺和N,N’-二苯甲基乙二胺。可用于形成碱加成盐的其他代表性的有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
当在下面实施例中描述的P81过滤板测定法中测量时，特定化合物以低于0.1、0.01或0.001μM的IC50抑制AAK1。当在下面实施例中描述的基于HEK281细胞的测定法中测量时，特定化合物以低于0.1、0.01或0.001μM的IC50抑制AAK1。
基于咪唑并[1,2-b]哒嗪的抑制剂
可用于本发明的实施方式的一类化合物公开在2013年3月5日提交的题为“基于咪唑并[1,2-b]哒嗪的化合物、包含它们的组合物及其使用方法”(Imidazo[1,2-b]pyridazine-based Compounds,CompositionsComprising Them,and Methods of Their Use)的美国专利申请号13/785,271中。所述申请涵盖了下式的化合物及其可药用盐：
其中：R1是R1A或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R1A取代；每个R1A独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R1B取代；每个R1B独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基或卤素；每个R1C独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；R2是–NR2AR2B，其中R2A是氢并且R2B是任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R2C取代；或者R2A和R2B合在一起形成任选被一个或多个R2C取代的4-7元杂环；每个R2C独立地是–OR2D、–N(R2D)2、-C(O)R2D、-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2、-N(R2D)C(O)OR2D、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R2D取代；每个R2D独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；并且R3是氢或任选被一个或多个氰基、卤素或羟基取代的C1-6烷基。
在特定化合物中，R1是R1A。在特定化合物中，R1是任选被取代的C1-12烃基。在特定化合物中，R1是任选被取代的苯基。在特定化合物中，R1是任选被取代的2-12元杂烃基(例如2-8元杂烃基、2-6元杂烃基、2-6元杂烃基)。在特定化合物中，R1是任选被取代的吡啶基、噻吩或咪唑。
在特定化合物中，R1A是卤素。在某些化合物中，R1A是–OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C或-C(O)N(R1C)2。在某些化合物中，R1A是-OR1C。在某些化合物中，R1B是-N(R1C)2、-OR1C、卤素。
在特定化合物中，R2A和R2B合在一起形成任选被一个或多个R2C取代的4-7元杂环。
在特定化合物中，R1C是氢。在某些化合物中，R1C是C1-12烃基(例如C1-6烃基、C1-4烃基例如甲基、乙基、丙基)。
在特定化合物中，R2C是-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2或-N(R2D)C(O)OR2D。
在特定化合物中，R2D是氢。在某些化合物中，R2D是C1-12烃基(例如C1-6烃基、C1-4烃基例如甲基、乙基、丙基)。
在特定化合物中，R3是氢。
本发明的一种实施方式涵盖了下式的化合物及其可药用盐：
其中：A是环C1-12烃基或4-7元杂环；D是4-7元杂环；每个R1A独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R1B取代；每个R1B独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基或卤素；每个R1C独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；每个R2C独立地是–OR2D、–N(R2D)2、-C(O)R2D、-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2、-N(R2D)C(O)OR2D、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R2D取代；每个R2D独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；n是1-3；并且m是0-3。
在特定化合物中，R2C不是羟基或任选被取代的苯基或吡啶基。
在特定化合物中，当D是二氮杂环庚烷并且A是吡啶基时，R2C不是-C(O)O-叔丁基。
在特定化合物中，当D是哌嗪、A是苯基并且R1A是氯时，R2C不是-C(O)O-叔丁基。
在特定化合物中，当D是哌啶基、A是吡啶基并且R1A是氯时，R2C不是-NHC(O)O-叔丁基。
在特定化合物中，当D是哌啶基、A是吡啶基并且R1A是-NHCH2CH2CH(CH3)2时，R2C不是NH2。
本发明的一种实施方式涵盖下式的化合物及其可药用盐：
其中：A是环C1-12烃基或4-7元杂环；D是4-7元杂环；每个R1A独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R1B取代；每个R1B独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基或卤素；每个R1C独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；每个R2C独立地是–OR2D、–N(R2D)2、-C(O)R2D、-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2、-N(R2D)C(O)OR2D、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R2D取代；每个R2D独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；n是1-3；并且m是0-3。
在这一实施方式所涵盖的具体化合物中：1)R2C不是羟基或任选被取代的苯基或吡啶基；2)当D是二氮杂环庚烷并且A是吡啶基时，R2C不是-C(O)O-叔丁基；3)当D是哌嗪、A是苯基并且R1A是氯时，R2C不是-C(O)O-叔丁基；4)当D是哌啶基、A是吡啶基并且R1A是氯时，R2C不是-NHC(O)O-叔丁基；并且5)当D是哌啶基、A是吡啶基并且R1A是-NHCH2CH2CH(CH3)2时，R2C不是NH2。
在特定化合物中，D是哌嗪或吡咯烷。
在特定化合物中，n是1。
在特定化合物中，m是1。
在特定化合物中，A是吡啶基、噻吩或咪唑。
本发明的特定化合物是下式的化合物：
其中X是CH或N。
本发明的一种实施方式涵盖下式的化合物及其可药用盐：
其中：X是CH或N；每个R1A独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R1B取代；每个R1B独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基或卤素；每个R1C独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；每个R2C独立地是–OR2D、–N(R2D)2、-C(O)R2D、-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2、-N(R2D)C(O)OR2D、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R2D取代；每个R2D独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；并且m是0-3。
在这一实施方式的某些化合物中，R2C不是任选被取代的苯基或吡啶基。
本发明的特定化合物是下式的化合物：
本发明的特定化合物是下式的化合物：
本发明的特定化合物是下式的化合物：
本发明的一种实施方式涵盖下式的化合物及其可药用盐：
其中：X是CH或N；每个R1A独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R1B取代；每个R1B独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基或卤素；每个R1C独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；每个R2C独立地是–OR2D、–N(R2D)2、-C(O)R2D、-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2、-N(R2D)C(O)OR2D、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R2D取代；每个R2D独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；并且m是0-3。
在这一实施方式的某些化合物中，当X是CH、m是1并且R1A是氯时，R2C不是叔丁基。
在这一实施方式的某些化合物中，R2C不是任选被取代的苯基或吡啶基。
本发明的具体的化合物是下式的化合物：
本发明的具体的化合物是下式的化合物：
在特定化合物中，R1A是-OR1C。
在特定化合物中，R1C是任选被取代的C1-12烃基(例如C1-6烃基、C1-4烃基)。
在特定化合物中，R2C是-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2或-N(R2D)C(O)OR2D。
在特定化合物中，每个R2D独立地是氢或C1-12烃基(例如C1-6烃基、C1-4烃基)。
基于吡唑并[1,5-a]嘧啶的抑制剂
可以在本发明的实施方式中使用的另一类化合物公开在2013年3月5日提交的题为“基于吡唑并[1,5-a]嘧啶的化合物、包含它们的组合物以及它们的使用方法”(Pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-based Compounds,Compositions Comprising Them,and Methods of Their Use)的美国专利申请号13/785,355中。该申请涵盖了下式的化合物及其可药用盐：
其中：R1是R1A或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R1A取代；每个R1A独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R1B取代；每个R1B独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基或卤素；每个R1C独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；R2是–NR2AR2B，其中R2A是氢并且R2B是任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R2C取代；或者R2A与R2B合在一起形成任选被一个或多个R2C取代的4-7元杂环；每个R2C独立地是–OR2D、–N(R2D)2、-C(O)R2D、-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2、-N(R2D)C(O)OR2D、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R2D取代；每个R2D独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；并且R3是氢或任选被一个或多个氰基、卤素或羟基取代的C1-6烷基。
在特定化合物中，R1是R1A。在某些化合物中，R1是任选被取代的C1-12烃基。在某些化合物中，R1是任选被取代的苯基。在某些化合物中，R1是任选被取代的2-12元杂烃基(例如2-8元杂烃基、2-6元杂烃基、2-6元杂烃基)。在某些化合物中，R1是任选被取代的吡啶基、噻吩或咪唑。
在特定化合物中，R1A是卤素。在某些化合物中，R1A是–OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C或-C(O)N(R1C)2。在某些化合物中，R1A是-OR1C。
在特定化合物中，R1B是-N(R1C)2、-OR1C、卤素。
在特定化合物中，R2A与R2B合在一起形成任选被一个或多个R2C取代的4-7元杂环。
在特定化合物中，R1C是氢。在某些化合物中，R1C是C1-12烃基(例如C1-6烃基、C1-4烃基例如甲基、乙基、丙基)。在某些化合物中，R2C是-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2或-N(R2D)C(O)OR2D。
在特定化合物中，R2D是氢。
在特定化合物中，R2D是C1-12烃基(例如C1-6烃基、C1-4烃基例如甲基、乙基、丙基)。
在特定化合物中，R3是氢。
本发明的一种实施方式涵盖下式的化合物及其可药用盐：
其中：A是环C1-12烃基或4-7元杂环；D是4-7元杂环；每个R1A独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R1B取代；每个R1B独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基或卤素；每个R1C独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；每个R2C独立地是–OR2D、–N(R2D)2、-C(O)R2D、-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2、-N(R2D)C(O)OR2D、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R2D取代；每个R2D独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；n是1-3；并且m是0-3。
在特定化合物中，D不是哌啶基。
在特定化合物中，R2C不是–N(R2D)2。
在特定化合物中，A不是苯基。
在特定化合物中，m是1。
在特定化合物中，R2D不是乙基。
在特定化合物中，当D是哌啶基、A是苯基并且R2C是–N(R2D)2时，R2D不是乙基。
在特定化合物中，D是哌嗪或吡咯烷。
在特定化合物中，n是1。
在特定化合物中，m是1。
在特定化合物中，A是吡啶基、噻吩或咪唑。
具体的化合物是下式的化合物：
其中X是CH或N。
本发明的另一种实施方式涵盖下式的化合物及其可药用盐：
其中：X是CH或N；每个R1A独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R1B取代；每个R1B独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基或卤素；每个R1C独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；每个R2C独立地是–OR2D、–N(R2D)2、-C(O)R2D、-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2、-N(R2D)C(O)OR2D、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R2D取代；每个R2D独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；并且m是0-3。
在特定化合物中，R2C不是任选被取代的苯基或吡啶基。
具体的化合物是下式的化合物：
具体的化合物是下式的化合物：
具体的化合物是下式的化合物：
本发明的另一种实施方式涵盖下式的化合物及其可药用盐：
其中：X是CH或N；每个R1A独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R1B取代；每个R1B独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基或卤素；每个R1C独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个of氰基、卤素或羟基取代；每个R2C独立地是–OR2D、–N(R2D)2、-C(O)R2D、-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2、-N(R2D)C(O)OR2D、氰基、卤素或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个R2D取代；每个R2D独立地是氢或任选被取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基，所述任选的取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代；并且m是0-3。
具体的化合物是下式的化合物：
具体的化合物是下式的化合物：
在特定化合物中，R1A是-OR1C。
在特定化合物中，R1C是任选被取代的C1-12烃基(例如C1-6烃基、C1-4烃基)。
在特定化合物中，R2C是-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2或-N(R2D)C(O)OR2D。
在特定化合物中，R2D独立地是氢或C1-12烃基(例如C1-6烃基、C1-4烃基)。
基于芳基醚的抑制剂
可以在本发明的实施方式中使用的另一类化合物，公开在2013年2月26日提交的题为“基于芳基醚的激酶抑制剂”(Aryl Ether-BaseKinase Inhibitors)的美国专利申请号13/777,144中。该申请涵盖了下式的化合物及其可药用盐：
其中：R1和R2独立地选自氢、C3-C6环烷基和C1-C3烷基，其中所述C1-C3烷基任选地被一个、两个或三个基团取代，所述基团独立地选自C1-C3烷氧基、C1-C3烷基氨基、氨基、氰基、C1-C3二烷基氨基、卤素和羟基；或者R1和R2一起是氧基；R3是C1-C3烷基-Y或C2-C8烷基，其中所述C2-C8烷基任选地被一个、两个或三个基团取代，所述基团独立地选自C1-C3烷氧基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基氨基、氨基、芳基、卤素、C1-C3卤素烷基氨基、C1-C3卤素烷基羰基氨基、羟基、-NRxRy和C3-C8环烷基，其中所述环烷基进一步任选地被一个、两个或三个基团取代，所述基团独立地选自C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基氨基、氨基、芳基、芳基C1-C3烷基、卤素、C1-C3卤素烷基、C1-C3卤素烷基氨基和羟基；R4选自氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基氨基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷基羰基氨基、氨基、芳基氨基、芳基羰基氨基、C3-C6环烷基氨基、C3-C6环烷基羰基氨基、C3-C6环烷基氧基、卤素、C1-C3卤素烷氧基、C2-C3卤素烷基氨基、C2-C3卤素烷基羰基氨基和羟基；R5选自氢、C1-C3烷基、氰基、C3环烷基和卤素；Rx和Ry与它们所附连的氮原子一起形成3至6元环；并且Y选自
其中R6选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基和C1-C6烷基羰基；n是0、1、2或3；每个R7独立地选自氢、C1-C6烷基、芳基、芳基C1-C3烷基、C3-C6环烷基、卤素和C1-C3卤素烷基；并且每个R8独立地选自氢、C1-C3烷氧基和羟基。
在特定化合物中，R1和R2各为氢。在某些化合物中，R1和R2中的一个是氢，另一个是C1-C3烷基。在某些化合物中，R1和R2中的一个是氢，另一个是C3-C6环烷基。在某些化合物中，R1和R2一起是氧基。
在特定化合物中，R3是任选被氨基取代的C2-C8烷基。在某些化合物中，R3是任选被氨基和芳基取代的C2-C8烷基，其中所述芳基是苯基。
在特定化合物中，R4是氢。在某些化合物中，R4是氨基。在某些化合物中，R4是C1-C3烷基羰基氨基。
在特定化合物中，R5是氢。在某些化合物中，R5是卤素。
使用方法
本发明是基于下述创新发现，即作为遗传突变和通过AAK1抑制剂给药两者的结果的转接物关联激酶1(AAK1)的抑制，能够缓解疼痛。
因此，本发明的一种实施方式涵盖治疗或管理疼痛的方法，所述方法包括在需要的患者中抑制AAK1。疼痛的具体类型包括慢性疼痛、急性疼痛和神经病理性疼痛。神经病理性疼痛的具体类型包括纤维肌痛和外周神经病(例如糖尿病性神经病)。在特定实施方式中，所述抑制通过向患者给药治疗有效量的AAK1抑制剂来实现。
具体实施方式
从下面的实施例，可以理解本发明的某些方面。
AAK1敲除小鼠
对AAK1基因的破坏纯合(-/-)的小鼠通过两种方法来制备：基因捕获和同源重组。
基因捕获是一种随机插入突变方法，其使用编码受体或可选择标志物基因的DNA片段作为诱变剂。已经设计了以允许细胞剪接机制将载体编码的外显子剪接到细胞mRNA中的方式整合到内含子或基因中的基因捕获载体。通常，基因捕获载体含有可选择标志物序列，其前方带有强的剪接受体序列并且没有启动子。因此，当这样的载体整合到基因中时，细胞剪接机制将来自于被捕获的基因的外显子剪接在可选择标志物序列的5'末端上。通常，这样的可选择标志物基因只有在编码所述基因的载体已整合到内含子中时才能表达。得到的基因捕获事件随后通过选择能够在选择性培养基中存活的细胞来鉴定。
胚胎干细胞(来自于衍生的鼠类株系A129的Lex-1细胞)通过包括将至少一部分遗传工程改造的载体序列插入到目标基因中的过程来突变，将突变的胚胎干细胞微注射到胚囊中，随后使用已建立的方法将其导入到假孕的雌性宿主中并养育到分娩。参见例如《小鼠诱变》(Mouse Mutagenesis)，1998,Zambrowicz等主编，Lexicon Press,TheWoodlands,TX。随后繁育得到的嵌合动物，以产生能够对在目标基因中含有工程化突变的等位基因进行种系传递的后代。
AAK1基因破坏的小鼠也通过同源重组来制造。在这种情况下，通过本领域中已知的方法移除鼠类AAK1基因的第二个编码外显子(参见GenBank登记号NM_177762)。参见例如美国专利号5,487,992、5,627,059和5,789,215。
将对AAK1基因的破坏纯合(-/-)的小鼠与对AAK1基因的破坏杂合(+/-)的小鼠和野生型(+/+)同窝仔畜联合进行研究。在这一分析期间，使用被设计用于评估哺乳动物对象中主要器官系统的功能的医学诊断程序的集成套件，对小鼠进行医学病情检查。纯合(-/-)“敲除”小鼠与它们的杂合(+/-)和野生型(+/+)同窝仔畜联合进行研究。AAK1基因的破坏通过Southern分析来验证。通过RT-PCR来检测AAK1的鼠类同源物在鼠大脑、脊髓、眼、胸腺、脾、肺、肾、肝、骨骼肌、骨、胃、小肠和结肠、心、脂肪、哮喘的肺、LPS肝、血液、捆绑的心脏、主动脉树、前列腺和乳腺(5周处女鼠、成熟处女鼠、12DPC、分娩后3天(泌乳)、哺乳期后3天(早期退化)和哺乳期后7天(晚期退化))中的表达。
AAK1纯合(-/-)和它们的野生型(+/+)同窝仔畜使用福尔马林爪试验来测试，以便评估它们的急性和强直性伤害感受响应。对于这些试验来说，使用自动化伤害感受分析仪(Automatic NociceptionAnalyzers)(购自University of California,San Diego的Ozaki实验室)。在试验前30分钟，将金属带置于每只小鼠的左后爪周围。在30分钟的适应期后，将20μl 5％福尔马林皮下注射到左后爪的背侧表面中。将小鼠分开饲养在圆柱形仓室中45分钟。通过电磁场，用计算机记录每分钟退缩数、阶段I(急性阶段＝前8分钟)的总退缩数和阶段II(强直阶段＝20-40分钟之间的时间)的总退缩数。参见Yaksh TL,Ozaki G,McCumber D,Rathbun M,Svensson C,Malkmus S,Yaksh MC.，用于福尔马林伤害感受生物测定法的自动退缩检测系统(An automated flinchdetecting system for use in the formalin nociceptive bioassay)，J Appl Physiol.,2001；90:2386-402。
如图1中所示，使用纯合(-/-)雌性小鼠(n＝16)、野生型雌性(n＝15)、纯合(-/-)雄性小鼠(n＝9)和野生型雄性(n＝18)获得了阶段1和阶段2的数据。在所有组中和两个阶段中，AAK1纯合(-/-)小鼠与它们的野生型(+/+)同窝仔畜相比表现出明显更少的记录到的爪退缩。
Caliper测定法
测定法在U型底384孔板中进行。最终测定体积为30μl，其从在测定缓冲液(10mM Tris-HCL pH 7.4，10mM MgCl2，0.01％Tween-20和1.0mM DTT)中添加15μl酶和底物(荧光素化的肽(5-FAM)-Aha-KEEQSQITSQVTGQIGWR-NH2和ATP)和试验化合物来制备。通过将细菌表达的GST-Xa-hAAK1与底物和试验化合物合并来启动反应。将反应在室温温育3小时，并通过向每个样品加入60μl 35mMEDTA缓冲液来终止反应。反应在Caliper LabChip 3000(Caliper,Hopkinton,MA)上，通过荧光底物和磷酸化产物的电泳分离来分析。通过与作为100％抑制的EDTA淬灭的对照反应和作为0％抑制的仅仅介质的反应进行比较，来计算抑制数据。测定体系中试剂的终浓度是ATP，22μM；(5-FAM)-Aha-KEEQSQITSQVTGQIGWR-NH2，1.5μM；GST-Xa-hAAK1，3.5nM；以及DMSO，1.6％。产生剂量响应曲线以确定抑制50％的激酶活性所需的浓度(IC50)。将化合物以10mM浓度溶解在二甲基亚枫(DMSO)中，并在11个浓度下进行评估。IC50值通过非线性回归分析来推衍。
P81过滤板测定法
使用Mutiprobe(PerkinElmer)和Biomek FX(Beckman Coulter)将化合物在Labcyte LDV板(Labcyte，目录号LP-0200)中连续稀释，使得最高化合物浓度为96μM。然后使用ECHO 550液体操作器(Labcyte)将化合物加入(75nL每孔)到Greiner 384孔反应板(Greiner，#781076)中，然后向用于阴性对照的第1和13列的每个孔加入总共12μl反应缓冲液(含有Tween和DTT的IMAP缓冲液，来自于Molecular Devices)，并向剩余的孔加入12μl 2X AAK1(0.2nM全长人类蛋白，NCBI登记号NP_055726.2)。然后将酶与化合物在RT预温育10分钟。在使用Minitrak(PerkinElmer)添加12μl含有2XMu2(0.2μM，全长人类蛋白)、2x冷ATP(2μM)和1.3μCi热33P-ATP的底物混合物后，反应开始。反应在RT进行1小时。同时，将Millipore384孔P81过滤板(Millipore，目录号MZPHN0W10)置于洗板机(ZoomZW，来自于Titertek)上，并用50μl 1％磷酸预先润湿。然后在向每个孔添加24μl 2％磷酸后停止激酶反应，然后使用Minitrak从每个孔转移40μl到预先润湿的Millipore 384孔P81过滤板中。将反应混合物在P81板中在RT温育10分钟，然后使用Zoom过滤板清洗机用100μl/孔的1％磷酸清洗5次。将每个过滤板的底部密封，然后向每个孔加入20μlMicroscint 40，用Flashplate盖子密封板的顶部，然后等待1小时，随后在TopCount(PerkinElmer)上读数。
基于HEK281细胞的测定法
HEK293F细胞培养在含有DMEM(Gibco，目录号11965)、10％FBS(SAFC Biosciences，目录号12103C)、1X GPS(谷氨酰胺、青霉素和链霉素)的培养基中。在第1天，将细胞铺在10cm培养皿上，使得它们在转染时～80％合生。在转染时，10cm培养皿中约有1千2百万个细胞。在第2天，将每个培养皿用48ug DNA和144ulLipofectamine 2000(Invitrogen，目录号11668-019)转染。所述DNA包含含有3ug AAK1/HA/pIRES(全长人类，NCBI登记号NP_055726.2)、45μg Flag/AP2MI/pcDNA(全长人类)和1.5mlOPTI-MEM的混合物(每个10cm培养皿)。所述Lipofectamine 2000由含有144μl Lipofectamine 2000和1.5ml OPTI-MEM的混合物构成(每个10cm培养皿)。将每种混合物转移到单独的15ml管中并在RT温育5分钟，然后将两种混合物合并，并在RT温育20分钟。然后从每个10cm培养皿吸取出生长培养基，并更换为10ml DMEM+10％FBS(无GPS)。最后，向每个10cm培养皿加入3ml DNA/Lipofectamine混合物并轻柔混合，然后将培养皿在37℃和5％CO2下温育过夜。
在第3天，将化合物在100％DMSO中稀释至最终1000X浓度，然后进行3倍连续稀释，获得总共5个试验浓度。每个10cm培养皿试验4种化合物。然后将1ul每种化合物稀释液移取到96孔深孔板中，然后在每个孔中加入500μl DMEM+0.5％FBS，以获得每种化合物的2X终浓度。通过简单的吸取(HEK293细胞在此时容易从培养皿上下来)将细胞重悬浮在10cm培养皿中，然后转移至50ml锥形管中，并通过以1000rpm离心5min沉淀细胞。然后将每个10cm培养皿的细胞沉淀物重悬浮在2.75ml DMEM+0.5％FBS中，并将100μl细胞悬液转移至96孔TC板的每个孔中。最后，将100μl在DMEM+0.5％FBS中稀释的2X化合物加入到含有细胞悬液的孔中，以获得1X终浓度。然后将板在37℃和5％CO2下温育3小时，随后将来自于每个孔的细胞悬液转移至12管PCR条板中。将PCR条板在移液器吸头盒中以1000rpm离心5分钟以沉淀细胞，然后通过移液除去培养基而不扰动细胞沉淀物。
为了准备用于Western印迹分析，将细胞沉淀物重悬浮在40ul 1XLDS-PAGE样品缓冲液(Invitrogen，目录号NP0008)+2X Halt磷酸酶和蛋白酶抑制剂混合物(Thermo Scientific，目录号1861284)中，然后用设置在5的microtip超声仪对每个样品超声8-10秒。向每个样品加入5ul 10X NuPage样品还原试剂(含有50mM DTT)，然后在PCR仪上在70℃热变性10min。将每个样品总共10μl上样到4-20％Tris-甘氨酸Criterion 26孔凝胶(Biorad，目录号345-0034)的每条道中用于phospho-mu2印迹，并将每条道10μl样品上样到4-12％Bis-Tris(+MES缓冲液)NuPAGE 26孔凝胶(Invitrogen，目录号WG1403BX10)中用于mu2印迹。作为对照，将2ng phospho-mu2或20ng mu2/Flag蛋白上样到每块凝胶的最后一个孔中。在SDS-PAGE后，使用iBlot将每块凝胶上的样品转移到PVDF膜，并将膜在TBST+5％奶粉中阻断1小时，然后用TBST清洗3次，每次5-10min。Criterion凝胶用TBST+5％BSA中的兔抗phospho-mu2抗体(1:5000；由NewEngland Peptide生产的兔多克隆抗体，并在Lexicon亲和纯化)探测，而NuPAGE凝胶用TBST+5％奶粉中的小鼠抗Flag抗体(1:500；Sigma，目录号F1804)探测，并将这些第一抗体在振荡器上在4℃温育过夜。
在第4天，将Western印迹用TBST清洗三次，每次5-10分钟，用TBST+5％奶粉中的抗兔抗体-HRP(1:2000；BioRad，目录号170-6515)或抗小鼠抗体-HRP(1:2000；Biorad，目录号170-6516)在RT下探测1小时，用TBST清洗3次，每次10分钟，并在Versadoc上用ECL试剂(GE Healthcare，目录号RPN2132)显色。最后，将相机设置成每30秒获取照片共10分钟，并为每个印迹保存没有饱和信号的最佳图像(当信号饱和时，条带将突显为红色)。对每个条带进行体积分析以获得密度值。通过首先对Mu2总表达水平进行归一化，然后与0％和100％对照进行比较，来计算每个样品的抑制百分率。然后使用Excel拟合软件计算IC50值。
基于咪唑并[1,2-b]哒嗪的抑制剂的体外数据
为本发明的各种化合物获得的体外数据提供在下面的表1中，其中“MW”是指分子量，“P81测定法”是指上面描述的P81过滤板测定法，“CBA”是指上面描述的基于HEK281细胞的测定法，“--”是指未获得给定测定法的结果，“*”是指小于或等于1.0μM，“**”是指小于或等于0.1μM的值，并且“***”是指小于或等于0.01μM。
表1
基于吡唑并[1,5-a]嘧啶的抑制剂的体外数据
为本发明的各种化合物获得的体外数据提供在下面的表1中，其中“MW”是指分子量，“P81测定法”是指上面描述的P81过滤板测定法，“CBA”是指上面描述的基于HEK281细胞的测定法，“--”是指未获得给定测定法的结果，“*”是指小于或等于1.0μM，“**”是指小于或等于0.1μM的值，并且“***”是指小于或等于0.01μM。
表1
基于芳基醚的抑制剂的体外数据
使用上面描述的Caliper和HEK281测定法获得各种基于芳基醚的化合物的体外数据：
其中：a＝<1nM；b＝1-10nM；c＝10-100nM；d＝100-1000nM。
药理学效果
AAK1敲除小鼠的研究显示，正如使用福尔马林爪试验所测量的，AAK1基因的破坏影响疼痛响应。参见上面的实施例5.4.1。同样的试验被用于证实AAK1抑制剂的给药也能影响疼痛响应。
使用自动化伤害感受分析仪(Automatic Nociception Analyzers)(购自University of California,San Diego的Ozaki实验室)测试小鼠的伤害感受。在试验前30分钟，使用强力胶将金属带置于每只小鼠的左后爪周围。在30分钟的适应期后，将20μl 5％福尔马林皮下注射到左后爪的背侧表面中。将小鼠分开饲养在圆柱形仓室中45分钟。通过用蒸馏水稀释甲醛(Formalde-fresh 20％,Fisher Scientific,Fair Lawn,NJ)来制备新鲜的5％福尔马林溶液。在福尔马林注射之前30分钟给药调查的化合物。
通过电磁场，用计算机记录每分钟退缩数、阶段I(急性阶段＝前8分钟)的总退缩数和阶段II(20-40分钟之间的强直阶段)的总退缩数。参见Yaksh TL,Ozaki g，McCumber D,Rathbun M,Svensson C,MalkmusS,Yaksh MC.，用于福尔马林伤害感受生物测定法的自动退缩检测系统(An automated flinch detecting system for use in the formalin nociceptivebioassay)，J Appl Physiol.,2001；90:2386-402。
在不同剂量下试验了本发明的各种化合物。使用加巴喷丁和普瑞巴林作为阳性对照。结果示出在下面的表2中，其中“*”是指等于或大于加巴喷丁在200mpk下的效果的50％的效果，“**”是指等于或大于加巴喷丁在200mpk下的效果的100％的效果，“sc”是指皮下给药，“ip”是指腹膜内给药，“po”是指口服给药。
表2
这些结果证实了AAK1抑制剂可用于治疗疼痛。
上面引用的所有出版物(例如专利和专利申请)以其全部内容通过参考并入本文。

Claims (4)

1.一种治疗或管理疼痛的方法，所述方法包括在需要的患者中抑制转接物关联激酶1(AAK1)活性。
2.权利要求1的方法，其中所述疼痛是神经病理性疼痛。
3.权利要求2的方法，其中所述神经病理性疼痛是纤维肌痛或外周神经病。
4.权利要求3的方法，其中所述外周神经病是糖尿病性神经病。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105683196A (zh) * 2013-09-11 2016-06-15 百时美施贵宝公司 基于芳基醚的激酶抑制剂

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT2834243T (pt) 2012-03-09 2018-08-01 Lexicon Pharmaceuticals Inc Compostos à base de pirazolo[1,5-a]pirimidina, composições que os compreendem e métodos para a sua utilização
CA2866164C (en) * 2012-03-09 2020-07-07 Lexicon Pharmaceuticals, Inc. Imidazo [1, 2 - b] pyridazine - based compounds, compositions comprising them, and uses thereof
US8901305B2 (en) 2012-07-31 2014-12-02 Bristol-Myers Squibb Company Aryl lactam kinase inhibitors
JP2016509066A (ja) 2013-02-22 2016-03-24 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ アダプター関連キナーゼ１（ａａｋ１）の阻害剤としての５ｈ−クロメノ［３，４−ｃ］ピリジン
WO2014175370A1 (ja) * 2013-04-25 2014-10-30 塩野義製薬株式会社 ピロリジン誘導体およびそれらを含有する医薬組成物
JP6434968B2 (ja) * 2013-07-02 2018-12-05 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｒｏｃｋ阻害剤としての三環式ピリド−カルボキサミド誘導体
EP3019475A1 (en) 2013-07-08 2016-05-18 Bristol-Myers Squibb Company Aryl amide kinase inhibitors
AR097543A1 (es) * 2013-09-06 2016-03-23 Lexicon Pharmaceuticals Inc COMPUESTOS BASADOS EN IMIDAZO[1,2-b]PIRIDAZINA, COMPOSICIONES QUE LOS COMPRENDEN Y SUS MÉTODOS DE USO
TW201542550A (zh) 2013-09-06 2015-11-16 Lexicon Pharmaceuticals Inc 吡唑并［１，５－ａ］嘧啶基化合物、包含彼之組合物以及使用彼之方法
JP6473146B2 (ja) * 2013-10-11 2019-02-20 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ ピロロトリアジンキナーゼ阻害剤
MX2016009352A (es) * 2014-01-31 2016-10-13 Bristol Myers Squibb Co Inhibidores de quinasa a base de quinolina.
TW201620911A (zh) * 2014-03-17 2016-06-16 雷西肯製藥股份有限公司 銜接子關聯激酶１之抑制劑、包含其之組成物、及其使用方法
US9902722B2 (en) * 2014-04-02 2018-02-27 Bristol-Myers Squibb Company Biaryl kinase inhibitors
CN107108552A (zh) * 2014-08-05 2017-08-29 百时美施贵宝公司 杂环激酶抑制剂
AU2015342887B2 (en) 2014-11-06 2020-09-10 Bial - R&D Investments, S.A. Substituted pyrazolo(1,5-a)pyrimidines and their use in the treatment of medical disorders
US10174044B2 (en) 2015-04-10 2019-01-08 Bristol-Myers Squibb Company Fused pyridines as kinase inhibitors
US10246469B2 (en) 2015-10-01 2019-04-02 Bristol-Myers Squibb Company Biaryl kinase inhibitors
KR20180056765A (ko) 2015-10-01 2018-05-29 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 비아릴 키나제 억제제
WO2017176961A1 (en) 2016-04-06 2017-10-12 Lysosomal Therapeutics Inc. Imidazo [1,5-a]pyrimidinyl carboxamide compounds and their use in the treatment of medical disorders
MX2018012211A (es) 2016-04-06 2019-03-28 Lysosomal Therapeutics Inc Compuestos de pirazol[1,5-a]pirimidinil carboxamida y su uso en el tratamiento de trastornos médicos.
CN109311902B (zh) 2016-05-05 2022-07-15 Bial研发投资股份有限公司 取代的咪唑并[1,2-b]哒嗪、咪唑并[1,5-b]哒嗪、相关化合物及其用途
US11352328B2 (en) 2016-07-12 2022-06-07 Arisan Therapeutics Inc. Heterocyclic compounds for the treatment of arenavirus
KR102590438B1 (ko) * 2020-10-16 2023-10-18 김홍렬 Pmca 억제제를 포함하는 코로나바이러스 감염 또는 감염 질환의 예방 또는 소독용 조성물
KR102590444B1 (ko) * 2020-10-16 2023-10-18 김홍렬 Pmca 억제제를 포함하는 코로나바이러스 감염 또는 감염 질환의 치료용 조성물
WO2023196584A2 (en) * 2022-04-08 2023-10-12 New York University Endocytosis inhibitors and their use for pain treatment

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007025090A2 (en) * 2005-08-25 2007-03-01 Kalypsys, Inc. Heterobicyclic and - tricyclic inhibitors of mapk/erk kinase
WO2008052734A1 (en) * 2006-10-30 2008-05-08 Novartis Ag Heterocyclic compounds as antiinflammatory agents
WO2009140128A2 (en) * 2008-05-13 2009-11-19 Irm Llc Compounds and compositions as kinase inhibitors

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5464764A (en) 1989-08-22 1995-11-07 University Of Utah Research Foundation Positive-negative selection methods and vectors
WO1993004169A1 (en) 1991-08-20 1993-03-04 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
WO2010028005A1 (en) * 2008-09-04 2010-03-11 Anacor Pharmaceuticals, Inc. Boron-containing small molecules

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007025090A2 (en) * 2005-08-25 2007-03-01 Kalypsys, Inc. Heterobicyclic and - tricyclic inhibitors of mapk/erk kinase
WO2008052734A1 (en) * 2006-10-30 2008-05-08 Novartis Ag Heterocyclic compounds as antiinflammatory agents
WO2009140128A2 (en) * 2008-05-13 2009-11-19 Irm Llc Compounds and compositions as kinase inhibitors

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105683196A (zh) * 2013-09-11 2016-06-15 百时美施贵宝公司 基于芳基醚的激酶抑制剂
CN105683196B (zh) * 2013-09-11 2018-12-21 百时美施贵宝公司 基于芳基醚的激酶抑制剂

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Publication number Publication date
DK2822555T3 (en) 2018-02-05
AU2013230066A1 (en) 2014-09-25
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US20140080834A1 (en) 2014-03-20
US20150164899A1 (en) 2015-06-18
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JP2015513557A (ja) 2015-05-14

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