CN105517552A - 基于咪唑并[1,2-b]哒嗪的化合物、包含它们的组合物及其使用方法 - Google Patents

基于咪唑并[1,2-b]哒嗪的化合物、包含它们的组合物及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了具有下式的基于咪唑并[1,2-b]哒嗪的化合物,其中R1、R2和R3在本文中定义。还公开了包含所述化合物的组合物以及使用它们治疗、控制和/或预防由衔接物关联激酶1活性介导的疾病和障碍的方法。

Description

基于咪唑并[1,2-b]哒嗪的化合物、包含它们的组合物及其使用方法
技术领域
本发明涉及可用作衔接物关联激酶1(adaptorassociatedkinase1)(AAK1)的抑制剂的基于咪唑并[1,2-b]哒嗪的化合物、包含它们的组合物及其使用方法。
背景技术
衔接物关联激酶1(AAK1)是丝氨酸/苏氨酸激酶的Ark1/Prk1家族的成员。AAK1mRNA以被称为短和长的两种剪接形式存在。长形式占优势并在脑和心脏中高表达(Henderson和Conner,Mol.Biol.Cell.2007,18,2698-2706)。AAK1富集在突触体制备物中,并且在培养的细胞中与细胞内吞性结构共定位。AAK1介导网格蛋白包被的细胞内吞作用,这是一种在突触小泡循环和受体介导的细胞内吞中重要的过程。AAK1与AP2复合体这种将受体运载物连接到网格蛋白包被的异源四聚体结合。网格蛋白与AAK1的结合刺激AAK1激酶活性(Conner等,Traffic2003,4,885-890;Jackson等,J.Cell.Biol.2003,163,231-236)。AAK1将AP-2的mu-2亚基磷酸化,其促进mu-2与运载物受体上的含酪氨酸分拣基序的结合(Ricotta等,J.CellBio.2002,156,791-795;Conner和Schmid,J.CellBio.2002,156,921-929)。Mu2磷酸化对于受体摄入来说不是必需的,但磷酸化提高内化效率(Motely等,Mol.Biol.Cell.2006,17,5298-5308)。
AAK1已在PC12细胞中被鉴定为神经调节蛋白-1/ErbB4信号传导的抑制剂。通过RNA干扰介导的基因沉默或用激酶抑制剂K252a(其抑制AAK1激酶活性)处理使AAK1表达丧失,导致神经调节蛋白-1诱导的神经突过度生长的增强。这些处理引起ErbB4表达增加和ErbB4在细胞质膜中或其附近积累(Kuai等,ChemistryandBiology2011,18,891-906)。NRG1和ErbB4是推测的精神分裂症易感性基因(Buonanno,BrainRes.Bull.2010,83,122-131)。已将这两个基因中的SNP与多个精神分裂症内表型相关联(Greenwood等,Am.J.Psychiatry2011,168,930-946)。神经调节蛋白1和ErbB4KO小鼠模型已显示出精神分裂症相关的形态变化和行为表型(Jaaro-Peled等,SchizophreniaBulletin2010,36,301-313;Wen等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2010,107,1211-1216)。此外,已将AAK1基因的内含子中的单核苷酸多态性与帕金森氏病的发作年龄相关联(Latourelle等,BMCMed.Genet.2009,10,98)。这些结果表明,AAK1活性的抑制可能在精神分裂症、精神分裂症中的认知缺陷、帕金森氏症、双相型障碍和阿兹海默氏病的治疗中有用。
发明概述
本发明部分涉及具有下式的AAK1抑制剂及其可药用盐:
其中:R1是R1A或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个R1A取代;每个R1A独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基、卤素或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个R1B取代;每个R1B独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基或卤素;每个R1C独立地是氢或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代;R2是通过其碳原子之一连接到C5的任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个R2C取代;每个R2C独立地是–OR2D、–N(R2D)2、-C(O)R2D、-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2、-N(R2D)C(O)OR2D、氰基、卤素、氧代或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素、羟基或R2D取代;每个R2D独立地是氢或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素或羟基取代;并且R3是氢或任选被一个或多个氰基、卤素或羟基取代的C1-6烷基。
本发明的一个实施方式涵盖了包含本文公开的化合物(即本发明的化合物)的药物组合物和剂型。
本发明的另一个实施方式涵盖了在体外和体内两种情况下抑制衔接物关联激酶1(AAK1)的方法,所述方法包括将AAK1与本发明的化合物进行接触。
另一个实施方式涵盖了治疗和控制由AAK1活性介导的疾病和障碍的方法。这样的疾病和障碍的实例据信包括阿兹海默氏病、双相型障碍、疼痛、帕金森氏症和精神分裂症(包括精神分裂症中的认知缺陷)。
附图简述
本发明的情况在图1中进行说明,该图示出了使用AAK1纯合(-/-)敲除小鼠和它们的野生型(+/+)同窝仔畜从福尔马林疼痛模型获得的结果。AAK1纯合(-/-)敲除小鼠与它们的野生型(+/+)同窝仔畜相比显示出急性和强直性疼痛响应两者的明显减轻。
发明详述
本发明部分是基于AAK1敲除小鼠对疼痛表现出高抗性这一发现。该发现促使的研究最终导致发现了AAK1抑制剂、包含它们的组合物及其使用方法。
5.1定义
除非另有指明,否则短语“本发明的化合物”、“本公开的化合物”等是指本文中公开的化合物。
除非另有指明,否则术语“烃基”是指具有全碳骨架并由碳和氢原子构成的脂族或脂环族组成部分。烃基的实例包括具有1-20、1-12、1-6和1-4个碳原子的烃基(分别被称为C1-20烃基、C1-12烃基、C1-6烃基和C1-4烃基)。具体实例包括烷基、烯基、炔基、芳基、苯甲基、环烷基、环烯基、环烷基烷基、环烯基烷基、萘基、苯基和苯乙基。
烷基组成部分的实例包括具有1-20、1-12、1-6、1-4和1-3个碳原子的直链和支链组成部分(分别被称为C1-20烷基、C1-12烷基、C1-6烷基、C1-4烷基和C1-3烷基)。具体实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚基、4,4-二甲基戊基、辛基、2,2,4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基和十二烷基。
烯基组成部分的实例包括直链和支链的C2-20、C2-12和C2-6烯基。具体实例包括乙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、1-辛烯基、2-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、2-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、2-癸烯基和3-癸烯基。
炔基组成部分的实例包括直链和支链的C2-20、C2-12和C2-6炔基。具体实例包括乙炔基和2-丙炔基(炔丙基)。
芳基组成部分的实例包括蒽基、甘菊环基、芴基、茚满、茚基、萘基、苯基和菲基。
环烷基组成部分的实例包括C3-12、C3-7、C4-6和C6环烷基。具体实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和金刚烷基。
除非另有指明,否则术语“卤素”涵盖氟、氯、溴和碘。
除非另有指明,否则术语“杂烃基”是指具有由一个或多个碳原子和一个或多个杂原子构成的骨架的组成部分。具体的杂原子是氮、氧和硫。杂烃基组成部分可以被认为是其中至少一个碳原子、CH、CH2或CH3基团被一个或多个杂原子以及满足价数所必需数目的氢原子替换的烃基组成部分。杂烃基的实例包括2-20、2-12、2-8、2-6和2-4元杂烃基组成部分,其中所述数目范围是指所述组成部分中碳、氮、氧和/或硫原子的总和。因此,术语“2-12元杂烃基”是指具有总共2-12个碳、氮、氧和/或硫原子的杂烃基组成部分。具体的杂烃基组成部分包括直链和支链杂烷基、杂烯基和杂炔基,以及杂环和杂芳基。
杂烷基组成部分的实例包括2-8元、2-6元和2-4元杂烷基组成部分。具体实例包括烷氧基、酰基(例如甲酰基、乙酰基、苯甲酰基)、烷基氨基(例如二(C1-3-烷基)氨基)、芳基氨基、芳基肟、氨基甲酸酯、羧酰胺、烷基羰基、芳基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、烷基硫烷基、芳基硫烷基、烷基亚硫酰基、芳基亚硫酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷基磺酰基氨基和芳基磺酰基氨基。
除非另有指明,否则术语“杂环”是指环状(单环或多环)杂烃基组成部分,其可以是芳香族、部分芳香族或非芳香族的。杂环包括杂芳基。实例包括4-10元、4-7元、6元和5元杂环。具体实例包括苯并[1,3]间二氧杂环戊烯基、2,3-二氢-苯并[1,4]二噁英基、噌啉基、呋喃基、海因基、吗啉基、氧杂环丁基、氧杂环丙基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢硫苯基、四氢硫代吡喃基和戊内酰胺基。由于术语“杂环”是指环,单独情况下它不涵盖例如噁唑烷酮和咪唑烷酮的组成部分:这样的组成部分被认为是取代的杂环,即用氧代取代的杂环。
杂芳基组成部分的实例包括吖啶基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并异噻唑基、苯并异噁唑基、苯并喹唑啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、酞嗪基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、间二氮苯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、四唑基、噻唑基和三嗪基。
除非另有指明,否则术语“包括”具有与“包括但不限于”相同的意义。同样地,术语“例如”具有与术语“例如但不限于”相同的意义。
除非另有指明,否则术语“控制”涵盖了在已经患有特定疾病或障碍的患者中防止所述疾病或障碍的复发,和/或延长已患有所述疾病或障碍的患者处于缓解期的时间。所述术语涵盖调节所述疾病或障碍的阈值、发展和/或持续时间,或改变患者对所述疾病或障碍的响应方式。
除非另有指明,否则化合物的“治疗有效量”是足以在疾病或病症的治疗或控制中提供治疗益处,或延迟或最小化与所述疾病或病症相关的一种或多种症状的量。化合物的“治疗有效量”意味着单独或与其他疗法组合的治疗剂的在疾病或病症的治疗或控制中提供治疗益处的量。术语“治疗有效量”可以涵盖改进总体疗法、减轻或避免疾病或病症的症状或病因、或增强另一种治疗剂的治疗效能的量。
除非另有指明,否则术语“治疗”设想了在患者患有指定疾病或障碍时发生的,降低所述疾病或障碍的严重性或延迟或减缓所述疾病或障碍的进展的行动。
除非另有指明,否则紧邻一系列名词之前的一个或多个形容词应该被解释为应用于每个所述名词。例如,短语“任选取代的烷基、芳基或杂芳基”具有与“任选取代的烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基”相同的意义。
5.2化合物
本发明涵盖了具有下式的化合物及其可药用盐:
其中:R1是R1A或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个R1A取代;每个R1A独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基、卤素或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个R1B取代;每个R1B独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基或卤素;每个R1C独立地是氢或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代;R2是通过其碳原子之一连接到C5的任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个R2C取代;每个R2C独立地是–OR2D、–N(R2D)2、-C(O)R2D、-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2、-N(R2D)C(O)OR2D、氰基、卤素、氧代或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素、羟基或R2D取代;每个R2D独立地是氢或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素或羟基取代;并且R3是氢或任选被一个或多个氰基、卤素或羟基取代的C1-6烷基。术语“C5”是指上面图示的核心结构上用“5”标记的碳原子。
本发明的一些化合物是下式的化合物:
其中:A是环状C1-12烃基或4-7元杂环;D是通过其碳原子之一连接到C5的环状C1-12烃基或4-7元杂环;n是1-3;并且m是0-3。
一些化合物是下式的化合物:
其中X是CH或N。
一些化合物是下式的化合物:
一些化合物是下式的化合物:
一些化合物是下式的化合物:
其中R2C是-C(O)R2D、-C(O)OR2D或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素、羟基或R2D取代。
一些化合物是下式的化合物:
其中R2C是-C(O)R2D、-C(O)OR2D或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素、羟基或R2D取代。
一些化合物是下式的化合物:
其中R2C是-C(O)R2D、-C(O)OR2D或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素、羟基或R2D取代。
一些化合物是下式的化合物:
一些化合物是下式的化合物:
一些化合物是下式的化合物:
对于本文中公开的各个不同结构式来说,本发明的实施方式涵盖了满足一个或多个下述条件的化合物:
-D是哌嗪或吡咯烷
-n是2
-m是1
-A是吡啶基、噻吩或咪唑
-R1是R1A
-R1是任选取代的C1-12烃基
-R1是任选取代的苯基
-R1是任选取代的2-12元杂烃基(例如2-8元杂烃基、2-6元杂烃基、2-6元杂烃基)
-R1是任选取代的吡啶基、噻吩或咪唑
-R1A是卤素
-R1A是–OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C或-C(O)N(R1C)2
-R1A是-OR1C
-R1B是-N(R1C)2、-OR1C、卤素
-R1C是氢
-R1C是C1-12烃基(例如C1-6烃基、C1-4烃基例如甲基、乙基、丙基)
-R2是6元杂环
-R2是C1-6烃基
-R2C是C1-12烃基
-R2D是卤素
-R2D是任选取代的C1-12烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素、羟基取代
-R2D是包含至少一个氮原子的2-12元杂烃基
-R3是氢。
在本文示出的结构中,用实线和虚线描绘的键是单键或双键。因此,组成部分
涵盖了下列两者:
本发明的化合物可以具有一个或多个不对称中心。除非另有指明,否则本发明涵盖所述化合物的所有立体异构体及其混合物。化合物的单个立体异构体,可以从含有手性中心的可商购的起始原料合成制备,或通过制备对映异构体产物的混合物,然后进行分离例如转变成非对映异构体的混合物,随后进行分离或重结晶、层析技术,或者在手性层析柱上直接分离对映异构体,来制备。特定立体化学的起始化合物可以商购,或者可以通过本领域中已知的技术来制造和拆分。
本公开的某些化合物也可以以可能可分离的不同的稳定构象形式存在。由于围绕不对称单键的旋转受限、例如由于空间位阻或环应变造成的扭转不对称,可以允许分离不同的构象异构体。本公开包括这些化合物的每种构象异构体及其混合物。
本公开打算包括本发明的化合物中出现的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但具有不同质量数的原子。作为一般性实例而不是限制性的,氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括13C和14C。同位素标记的本发明的化合物一般可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本文中所描述的类似的方法,使用适合的同位素标记的试剂代替原本使用的未标记的试剂来制备。这样的化合物可能具有各种潜在用途,例如在测定生物学活性中作为标准品和试剂。在稳定同位素的情况下,这样的化合物可能具有有利地修改生物学、药理学或药物动力学性质的潜力。
本公开的化合物可以作为可药用盐存在。当在本文中使用时,术语“可药用盐”表示本发明的化合物的可溶于或可分散于水或油中的盐或两性离子形式,其在合理的医学判断范围内,适合用于与患者的组织相接触而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或与合理的利益/风险比相称的其他问题或并发症,并且可有效地用于其目标用途。所述盐可以在化合物的最终分离和纯化期间制备,或者单独地通过将适合的氮原子与适合的酸进行反应来制备。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、二氢溴酸盐、二盐酸盐、二氢碘酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、均三甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。可用于形成可药用加成盐的酸的实例包括无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸以及有机酸例如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。
碱加成盐可以在化合物的最终分离和纯化期间,通过将羧基与适合的碱例如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐,或与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺进行反应来制备。可药用盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁和铝,以及无毒性的季铵阳离子例如铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己胺、普鲁卡因、二苯甲基胺、N,N-二苯甲基苯乙基胺和N,N’-二苯甲基乙二胺。可用于形成碱加成盐的其他代表性的有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶和哌嗪。
当在下面实施例中描述的P81过滤板测定法中测量时,本发明的特定化合物以低于0.1、0.01或0.001μM的IC50抑制AAK1。当在下面实施例中描述的基于HEK281细胞的测定法中测量时,本发明的特定化合物以低于0.1、0.01或0.001μM的IC50抑制AAK1。
5.3合成方法
本发明的化合物可以使用本领域技术人员已知的方法来制备。具体化合物是具有下列通式的化合物:
其中R1、R2和R3在本文中定义。这些化合物可以通过下面概述的方法来制备。
反应路线1示出了可用于制备其中R2如本文中所定义的本发明的化合物的方法。在这里,化合物1与适合的硼酸或酯[R3B(OR)2]的Suzuki偶联提供2。2的溴化产生中间体3。第二个Suzuki偶联给出化合物4。
反应路线1
反应路线2示出了可用于制备其中R2是烃基并且R’是R2C、R2D或其前体的本发明的化合物的方法。在这里,化合物10与适合的硼酸或酯[R3B(OR)2]的Suzuki偶联提供11。11的Sonogashira或其它偶联反应产生炔类似物12。12中的炔的还原给出化合物13。
反应路线2
不可商购的起始原料1和10可以通过反应路线3中概述的方法来制备。用2,4-二甲氧基苯胺从7置换一个氯产生8的位置异构体混合物,并将其分离。移除2,4-二甲氧基苯甲基产生9。9用氯乙醛的环化给出1’。1’的溴化产生10。
反应路线3
5.4使用方法
本发明的一个实施方式涵盖在体外和体内两种情况下抑制衔接物关联激酶1(AAK1)的方法,所述方法包括将AAK1与本发明的化合物进行接触。
另一种实施方式涵盖治疗和控制由AAK1活性介导的疾病和障碍的方法。由AAK1活性介导的疾病和障碍是其至少一种症状、严重性或表现受AAK1活性影响的疾病和障碍。这样的疾病和障碍的实例据信包括阿兹海默氏病、双相型障碍、疼痛、帕金森氏症和精神分裂症(包括精神分裂症中的认知缺陷)。具体方法包括向需要的患者(人类或其他哺乳动物)给药治疗或预防有效量的AAK1抑制剂(例如本文中公开的化合物)。
本发明的另一个实施方式涵盖一种治疗或控制疾病或障碍的方法,所述方法包括向需要的患者给药治疗或预防有效量的AAK1抑制剂,其中所述疾病或障碍是阿兹海默氏病、双相型障碍、疼痛、帕金森氏症或精神分裂症(包括精神分裂症中的认知缺陷)。疼痛的具体类型包括慢性疼痛、急性疼痛和神经性疼痛。神经性疼痛的具体类型包括纤维肌痛和周围神经病(例如糖尿病性神经病)。
当用于治疗或控制疾病或障碍时,本发明的化合物优选地作为包含一种或多种可药用载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物的一部分给药。
药物组合物或配方可以以每单位药剂含有预定量活性成分的单位剂型存在。在用于预防和治疗疾病的单药治疗中,本公开的化合物的剂量水平通常在每天约0.01至约250毫克每千克(“mg/kg”)体重之间,优选在每天约0.05至约100mg/kg体重之间。通常,本公开的药物组合物每天给药约1次至约5次,或者作为连续输注进行给药。这种给药可以用作慢性或急性疗法。可以与载体材料合并以产生单一剂型的活性成分的量,将随着待治疗的病症、所述病症的严重性、给药时间、给药途径、所使用的化合物的排泄速率、治疗的持续时间、患者的年龄、性别、体重和状况而变。优选的单位剂量配方是含有活性成分的如上文中所叙述的每日剂量或分剂量或其适合的分数的单位剂型。治疗可以从显著低于化合物的最适剂量的小剂量开始。随后,以小的增量提高剂量直至在所述情况下达到最适效果。一般来说,化合物最理想地以普遍提供有效结果而不引起任何伤害或有害副作用的浓度水平给药。
本发明的化合物可以与一种或多种其他治疗或预防药剂相组合给药。例如,当用于治疗疼痛时,可能的其他药剂包括免疫抑制性药剂和消炎药。
适合用于本发明的方法和组合物的免疫抑制剂包括本领域中已知的免疫抑制剂。实例包括氨基蝶岭、硫唑嘌呤、环孢菌素A、D-青霉胺、金盐、羟氯喹、来氟米特、甲氨蝶呤、米诺环素、雷帕霉素、柳氮磺吡啶、他克莫司(FK506)及其可药用盐。一种具体的免疫抑制剂是甲氨蝶呤。
其他实例包括抗TNF抗体例如阿达木单抗、聚乙二醇化赛妥珠单抗、依那西普和英夫利昔单抗。其他实例包括白介素-1阻断剂例如阿那白滞素。其他实例包括抗B细胞(CD20)抗体例如利妥昔单抗。其他实例包括T细胞活化阻断剂例如阿巴西普。
其他实例包括肌苷一磷酸脱氢酶抑制剂例如吗替麦考酚酯和霉酚酸
适用于本发明的方法和组合物的消炎药包括本领域中已知的消炎药。实例包括糖皮质激素和NSAID。
糖皮质激素的实例包括醛固酮、倍氯米松、倍他米松、可的松、去氧皮质甾酮、地塞米松、氟氢可的松、氢化可的松、甲基强的松龙、强的松龙、强的松、曲安奈德及其可药用盐。
NSAID的实例包括水杨酸酯(盐)(例如阿司匹林、amoxiprin、贝诺酯、胆碱水杨酸镁、二氟尼柳、faislamine、水杨酸甲酯、水杨酸镁、水杨酸水杨酸酯及其可药用盐)、芳基链烷酸(例如双氯芬酸、乙酰氯芬酸、阿西美辛、溴芬酸、依托度酸、吲哚美辛、萘丁美酮、舒林酸、托美汀及其可药用盐)、芳基丙酸(例如布洛芬、卡洛芬、芬布芬、非诺洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、酮咯酸、洛索洛芬、萘普生、奥沙普秦、噻洛芬酸、舒洛芬及其可药用盐)、芳基邻氨基苯甲酸(例如甲氯芬那酸、甲芬那酸及其可药用盐)、吡唑烷衍生物(例如阿扎丙宗、安乃近、羟布宗、保泰松、磺吡酮(sulfinprazone)及其可药用盐)、昔康类(例如氯诺昔康、美洛昔康、吡罗昔康、替诺昔康及其可药用盐)、COX-2抑制剂(例如塞来昔布、依托考昔、罗美昔布、帕瑞昔布、罗非昔布、伐地昔布及其可药用盐)和苯磺酰胺类(例如尼美舒利及其可药用盐)。
用于治疗疼痛(包括但不限于神经病性和炎性疼痛)的其他药剂包括诸如普瑞巴林、利多卡因、度洛西汀、加巴喷丁、卡马西平、辣椒素和其他血清素/去甲肾上腺素/多巴胺再摄取抑制剂和阿片类(例如奥施康定、吗啡和可待因)的药剂。
在由已知疾病或病症例如糖尿病、感染(例如带状疱疹或HIV感染)或癌症引起的疼痛的治疗中,本发明的化合物可以与针对潜在疾病或病症的一种或多种其他治疗或预防药剂组合给药。例如,当用于治疗糖尿病性神经病时,本发明的化合物可以与一种或多种抗糖尿病药剂、抗高血糖药剂、降血脂/降脂药、抗肥胖药剂、抗高血压药剂和食欲抑制剂组合给药。抗糖尿病药剂的实例包括双胍类(例如二甲双胍、苯乙双胍)、葡萄糖苷酶抑制剂(例如阿卡波糖、米格列醇)、胰岛素类(包括胰岛素促分泌素和胰岛素增敏剂)、美格替奈类(例如瑞格列奈)、磺酰脲类(例如格列美脲、格列本脲、格列齐特、氯磺丙脲和格列吡嗪)、双胍/格列本脲组合(例如Glucovance)、噻唑烷二酮类(例如曲格列酮、罗格列酮和吡格列酮)、PPAR-α激动剂、PPAR-γ激动剂、PPARα/γ双重激动剂、糖原磷酸化酶抑制剂、脂肪酸结合蛋白的抑制剂(aP2)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)或GLP-1受体的其他激动剂、二肽基肽酶IV(DPP4)抑制剂和钠-葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂(例如达格列净、坎格列净和LX-4211)。
5.5药物组合物
药物配方可以被改变以适应于通过任何适合的途径给药,例如通过口腔(包括颊或舌下)、直肠、鼻、表面(包括颊、舌下或透皮)、阴道或肠胃外(包括皮下、皮内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、静脉内或真皮内注射或输注)途径给药。这样的配方可以通过药物学领域已知的任何方法来制备,例如通过将活性成分与载体或赋形剂相结合来制备。口服给药或通过注射给药是优选的。
适合于口服给药的药物配方可以作为离散的单元出现,例如胶囊或片剂、粉剂或颗粒剂、在水性或非水性液体中的溶液或悬液、可食用泡沫或搅打物(whips)或水包油液体乳液或油包水乳液。
例如,对于采取片剂或胶囊形式的口服给药来说,可以将活性药物组分与口服无毒性可药用惰性载体例如乙醇、甘油、水等合并。粉剂通过将化合物研碎到适合的细小尺寸并与同样研碎的药物载体例如可食用糖类如淀粉或甘露糖醇混合,来制备。调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂也可以存在。
胶囊通过如上所述制备粉剂混合物并装填成型明胶壳来制造。在装填操作之前可以向粉剂混合物添加助流剂和润滑剂例如胶体二氧化硅、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇。也可以添加崩解剂或增溶剂例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠,以提高在摄入胶囊时药物的可利用性。
此外,当需要或必需时,也可以将适合的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂并入到混合物中。适合的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖类例如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶例如阿拉伯胶、黄耆树胶或藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇等。在这些剂型中使用的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂通过例如制备粉剂混合物、成粒或成丸、添加润滑剂和崩解剂并压制成片来配制。粉剂混合物如下制备:将适合地研碎的化合物与如上所述的稀释剂或基料并任选地与粘合剂例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮、溶液迟滞剂例如石蜡、再吸收加速剂例如季铵盐和/或吸收剂例如膨润土、高岭土或磷酸二钙混合。粉剂混合物可以通过用粘合剂例如糖浆、淀粉糊、阿拉伯胶黏液或纤维素质或聚合材料的溶液润湿并迫使其通过筛网来成粒。作为成粒的可替选方案,可以将粉剂混合物通过制片机,结果是成型不完美的丸粒,其破碎成颗粒。可以通过添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油来润滑颗粒,以防止粘结到片剂成型模具。然后将润滑过的混合物压制成片剂。也可以将本公开的化合物与自由流动的惰性载体合并并直接压制成片剂,而不通过成粒或成丸步骤。可以提供由虫胶密封包衣、糖衣或聚合材料构成的透明或不透明的保护性包衣和蜡抛光包衣。可以向这些包衣添加染料以分辨不同的单元剂型。
可以将口服流体例如溶液、糖浆和酏剂制备成单元剂型,以使给定的量包含预定量的化合物。糖浆可以通过将化合物溶解在适当调味的水性液体中来制备,而酏剂通过使用无毒性介质来制备。也可以添加增溶剂和乳化剂例如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚、防腐剂、调味添加剂例如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其他人造甜味剂等。
在适合时,可以将用于口服给药的剂量单元配方微包胶。配方也可以被制备成延长或持续释放,例如通过将颗粒状材料包衣或包埋在聚合物、蜡等中。
式(I)的化合物及其可药用盐也可以以脂质体递送系统例如小单层脂囊、大单层脂囊和多层脂囊的形式给药。脂质体可以从各种不同磷脂例如胆甾醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱形成。
式(I)的化合物及其可药用盐也可以通过使用单克隆抗体作为与化合物分子偶联的单独载体来递送。化合物也可以与作为可定向药物载体的可溶性聚合物偶联。这样的聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚或用棕榈酰基残基取代的聚氧化乙烯聚赖氨酸。此外,可以将化合物偶联到一类在实现药物的受控释放中有用的生物可降解聚合物,例如聚乳酸、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。
适合于透皮给药的药物配方可以作为分立的贴片存在,所述贴片旨在与接受者的表皮保持长时间密切接触。例如,活性成分可以通过离子电渗从贴片递送,正如在PharmaceuticalResearch1986,3(6),318中一般性描述的。
适合于表面给药的药物配方可以配制成软膏、霜剂、悬液、乳液、粉剂、溶液、糊剂、凝胶、喷剂、气溶胶或油。
适合于直肠给药的药物配方可以作为栓剂或作为灌肠剂存在。
适合于鼻部给药的载体是固体的药物配方包括粒径在例如20至500微米范围内的过程粉剂,其以获取鼻烟的方式给药,即从举近到鼻的粉剂容器通过鼻道快速吸入。载体是液体的适合于作为鼻喷剂或滴鼻液给药的配方包括活性成分的水性或油溶液。
适合于通过吸入给药的药物配方包括细小粒子尘或雾,其可以利用各种不同类型的计量的药剂加压气溶胶、喷雾器或吹入器来产生。
适合于阴道给药的药物配方可以作为阴道栓、卫生棉条、霜剂、凝胶、糊剂、泡沫或喷剂配方存在。
适合于肠胃外给药的药物配方包括水性和非水性无菌注射溶液,其可以含有抗氧化物、缓冲剂、抑菌剂和赋予配方以与目标接受者的血液等渗的溶质;以及水性和非水性无菌悬液,其可以包含悬浮剂和增稠剂。配方可以存在于单元药剂或多药剂容器的例如密封安瓿和小瓶中,并且可以储存在冷冻干燥(冻干)状态下,只需在即将使用之前添加无菌液体载体例如注射用水。临时用注射溶液和悬液可以从无菌粉剂、颗粒剂和片剂制备。
应该理解,除了上面具体提到的成分之外,配方还可以包括本领域中常规的与所讨论的配方类型有关的其他药剂,例如适用于口服给药的配方可以包括调味剂。
5.6实施例
本发明的某些方面可以从下面的实施例理解。
5.6.1AAK1敲除小鼠
对AAK1基因的破坏纯合(-/-)的小鼠通过两种方法来制备:基因捕获和同源重组。
基因捕获是一种随机插入突变方法,其使用编码报告基因或可选择标志物基因的DNA片段作为诱变剂。已经设计了以允许细胞剪接机制将载体编码的外显子剪接到细胞mRNA中的方式整合到内含子或基因中的基因捕获载体。通常,基因捕获载体含有可选择标志物序列,其前方带有强的剪接受体序列并且没有启动子。因此,当这样的载体整合到基因中时,细胞剪接机制将来自于被捕获的基因的外显子剪接在可选择标志物序列的5’末端上。通常,这样的可选择标志物基因只有在编码所述基因的载体已整合到内含子中时才能表达。得到的基因捕获事件随后通过选择能够在选择性培养基中存活的细胞来鉴定。
胚胎干细胞(来自于衍生的鼠类株系A129的Lex-1细胞)通过包括将至少一部分遗传工程改造的载体序列插入到目标基因中的过程来突变,将突变的胚胎干细胞微注射到胚囊中,随后使用已建立的方法将所述胚囊导入到假孕的雌性宿主中并养育到分娩。参见例如《小鼠诱变》(MouseMutagenesis),1998,Zambrowicz等主编,LexiconPress,TheWoodlands,TX。随后繁育得到的嵌合动物,以产生能够对在目标基因中含有工程化突变的等位基因进行种系传递的后代。
AAK1基因破坏的小鼠也通过同源重组来制造。在这种情形中,通过本领域中已知的方法移除鼠类AAK1基因的第二个编码外显子(参见GenBank登记号NM_177762)。参见例如美国专利号5,487,992、5,627,059和5,789,215。
将对AAK1基因的破坏纯合(-/-)的小鼠与对AAK1基因的破坏杂合(+/-)的小鼠和野生型(+/+)同窝仔畜联合进行研究。在这一分析期间,使用被设计用于评估哺乳动物受试者中主要器官系统的功能的医学诊断程序的集成套件,对小鼠进行医学病情检查。将纯合的(-/-)“敲除”小鼠与它们的杂合(+/-)和野生型(+/+)同窝仔畜联合进行研究。AAK1基因的破坏通过Southern分析来验证。通过RT-PCR来检测AAK1的鼠类同源物在鼠大脑、脊髓、眼、胸腺、脾、肺、肾、肝、骨骼肌、骨、胃、小肠和结肠、心、脂肪、哮喘的肺、LPS肝、血液、捆绑的心脏、主动脉树、前列腺和乳腺(5周处女鼠、成熟处女鼠、12DPC、分娩后3天(泌乳)、哺乳期后3天(早期退化)和哺乳期后7天(晚期退化))中的表达。
AAK1纯合(-/-)和它们的野生型(+/+)同窝仔畜使用福尔马林爪试验来测试,以便评估它们的急性和强直性伤害感受响应。对于这些试验来说,使用自动化伤害感受分析仪(AutomaticNociceptionAnalyzers)(购自UniversityofCalifornia,SanDiego的Ozaki实验室)。在试验前30分钟,将金属带置于每只小鼠的左后爪周围。在30分钟的适应期后,将20μl5%福尔马林皮下注射到左后爪的背侧表面中。将小鼠单个饲养在圆柱形仓室中45分钟。通过电磁场,用计算机记录每分钟退缩数、阶段I(急性阶段=前8分钟)的总退缩数和阶段II(强直阶段=20-40分钟之间的时间)的总退缩数。参见YakshTL,OzakiG,McCumberD,RathbunM,SvenssonC,MalkmusS,YakshMC.,用于福尔马林伤害感受生物测定法的自动退缩检测系统(Anautomatedflinchdetectingsystemforuseintheformalinnociceptivebioassay),JApplPhysiol.,2001;90:2386-402。
如图1中所示,使用纯合(-/-)雌性小鼠(n=16)、野生型雌性(n=15)、纯合(-/-)雄性小鼠(n=9)和野生型雄性(n=18)获得了阶段1和阶段2的数据。在所有组中和两个阶段中,AAK1纯合(-/-)小鼠与它们的野生型(+/+)同窝仔畜相比表现出明显更少的记录到的爪退缩。
5.6.2.4-[3-(5-乙酰基-噻吩-2-基)-咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基]-苯甲腈的合成
部分A.4-咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基-苯甲腈
向包含在125mL圆底烧瓶中的6-氯-咪唑并[1,2-b]哒嗪[6775-78-6](1.23g,8.0mmol)、(4-氰基苯基)硼酸[126747-14-6](1.4g,9.7mmol)、单水磷酸三钾[27176-10-9](3.4g,16.0mmol)和用二氯甲烷络合的[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)[95464-05-4](0.7g,0.8mmol)的混合物加入30%(v/v)水在1,2-二甲氧基乙烷中的溶液(80mL)和磁力搅拌棒。给反应罐装配回流冷凝器,放低到环境温度油浴中,并在快速搅拌的同时使系统经历10次排空/充N2循环。将快速搅拌的充有N2的反应加热到85℃的油浴温度17h,然后冷却并在盐水与乙酸乙酯之间分配。将相分离的萃取物干燥(MgSO4)、蒸发、快速层析(硅胶,用10%(v/v)2-丙醇/乙酸乙酯洗脱)并从乙酸乙酯/庚烷重结晶,以分离1.0g灰色粉末,mp.193-194℃。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm7.89(d,J=9.70Hz,2H)8.04(d,J=8.60Hz,2H)8.24-8.33(m,3H)8.42(br.s.,1H)。13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δppm112.43,116.17,117.59,118.45,126.18,127.69,132.91,134.72,139.26,149.51。LRMS(ESI)m/z221.1[(M+H)]+,对C13H8N4的计算值:220.24。
部分B.4-(3-溴-咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-苯甲腈
向搅拌的室温的4-咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基-苯甲腈(955.9mg,4.3mmol)和乙酸钠[127-09-3](784.6mg,9.6mmol)在冰乙酸(44mL)中的溶液缓慢加入溴[7726-45-6](0.3mL,5.3mmol)。在10分钟内形成固体沉淀物以产生充分搅拌的悬液,然后将该混合物倾倒在300mL搅拌的冰和水中。搅拌混合物直至冰融化,然后通过过滤分离产物,将其用水洗涤并干燥,得到1.7g黄色粉末。LRMS(ESI)m/z299.0/301.0(M+H)+,对C13H7BrN4的计算值299.13。
部分C.4-[3-(5-乙酰基-噻吩-2-基)-咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基]-苯甲腈
向包含在50mL圆底烧瓶中的4-(3-溴-咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-苯甲腈(504.2mg,1.7mmol)、5-乙酰基-2-噻吩基硼酸[206551-43-1](345.2mg,2.0mmol)、单水磷酸三钾[27176-10-9](780.1g,3.4mmol)和用二氯甲烷络合的[1,1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)(141.7mg,0.2mmol)的混合物加入30%(v/v)水在1,2-二甲氧基乙烷中的溶液(17mL)和磁力搅拌棒。给反应罐装配回流冷凝器,放低到环境温度油浴中,并在快速搅拌的同时使系统经历10次排空/充N2循环。将快速搅拌的充有N2的反应加热到85℃的油浴温度17h,然后冷却并在盐水与乙酸乙酯之间分配。将相分离的萃取物干燥(MgSO4)、蒸发、快速层析(硅胶,用100%乙酸乙酯洗脱)并从乙酸乙酯/庚烷重结晶,以分离123.9mg作为黄色粉末的4-[3-(5-乙酰基-噻吩-2-基)-咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基]-苯甲腈,mp.224-225℃。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.56(s,3H)7.91(d,J=4.04Hz,1H)7.94-8.00(m,2H)8.06(d,J=8.59Hz,2H)8.31(d,J=8.34Hz,2H)8.34(d,J=9.60Hz,1H)8.52(s,1H)。13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δppm26.51,112.82,116.25,118.37,123.16,125.10,126.52,127.65,133.01,133.92,134.69,136.35,138.76,139.39,142.04,149.96,190.65。LRMS(ESI)m/z345.0(M+H)+,对C19H12N4OS的计算值:344.40。
5.6.3.1-(5-(6-(戊-1-炔-1-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)噻吩-2-基)乙酮的合成
部分A.1-(5-(6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)噻吩-2-基)乙酮
将3-溴-6-氯-咪唑并[1,2-b]哒嗪(1.0g,4.3mmol)、5-乙酰基-2-噻吩基硼酸(0.95g,5.6mmol)、K2CO3(1.48g,10.7mmol)和二氯双(三苯基-膦)钯(II)(180mg,0.26mmol)在MeCN/水(16ml/4mL)中的混合物在微波炉中在140℃加热30min。将反应混合物过滤并除去MeCN。将水层用水稀释并用DCM萃取。将合并的DCM在MgSO4上干燥并浓缩。对残留物进行ISCO(DCM中的0-5%MeOH)以给出标题化合物(330mg)。
部分B.1-(5-(6-(戊-1-炔-1-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)噻吩-2-基)乙酮
在25ml烧瓶中装入1-(5-(6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)噻吩-2-基)乙酮(160mg,0.58mmol)、二氯双(三苯基膦)钯(II)(24mg,0.034mmol)、CuI(12mg,0.06mmol)、TEA(5mL)、DMF(5mL)和1-戊炔(0.17mL,1.74mmol)。将烧瓶用N2快速吹扫三次,并将混合物在100℃加热24h。将反应混合物过滤并浓缩。将残留物用水稀释并用DCM萃取。将合并的DCM在MgSO4上干燥并浓缩。对残留物进行ISCO(己烷中的10-60%EtOAc)以给出标题化合物(80mg)。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm1.15(t,J=7.45Hz,3H)1.71-1.80(m,2H)2.56-2.62(m,2H)2.63(s,3H)7.46(d,J=9.35Hz,1H)7.92-7.96(m,2H)8.13(d,J=9.60Hz,1H)8.43(br.s.,1H)。LRMS(ESI)m/z310.1(M+H)+,对C17H15N3OS的计算值:309.39。
5.6.4.1-(5-(6-戊基咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)噻吩-2-基)乙酮的合成
将1-(5-(6-(戊-1-炔-1-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)噻吩-2-基)乙酮(80mg,0.25mmol)和Pd/C(5%,50mg)在EtOH中的混合物在室温在H2下搅拌过夜。将混合物过滤并将滤液浓缩。对残留物进行制备HPLC以给出标题化合物(48.7mg)。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm0.93-0.99(m,3H)1.47(dq,J=7.20,3.58Hz,4H)1.89-1.97(m,2H)2.61(s,3H)3.00(t,J=7.58Hz,2H)7.28(d,J=9.35Hz,1H)7.83-7.90(m,2H)7.99(d,J=9.35Hz,1H)8.24(s,1H)。LRMS(ESI)m/z314.1(M+H)+,对C17H19N3OS的计算值:313.42。
5.6.5.4-(6-(戊-1-炔-1-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)苯甲基氨基甲酸叔丁酯的合成
部分A.4-(6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)苯甲基氨基甲酸叔丁酯
将3-溴-6-氯-咪唑并[1,2-b]哒嗪(1.0g,4.3mmol)、(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苯基)硼酸(1.08g,4.3mmol)、K2CO3(1.48g,10.7mmol)和二氯双(三苯基膦)钯(II)(150mg,0.21mmol)在MeCN/水(16ml/4mL)中的混合物在微波炉中在140℃加热35min。加入另外的(4-(((叔丁氧基羰基)氨基)-甲基)苯基)硼酸(0.54g)和二氯双(三苯基膦)-钯(II)(50mg)并再次在微波炉中在140℃加热30min。将反应混合物过滤并除去MeCN。将水层用水稀释并用DCM萃取。将合并的DCM在MgSO4上干燥并浓缩。对残留物进行ISCO(在己烷中的0-80%)以给出标题化合物(250mg)。
部分B.4-(6-(戊-1-炔-1-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)苯甲基氨基甲酸叔丁酯
在25ml烧瓶中装入4-(6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)苯甲基氨基甲酸叔丁酯(250mg,0.7mmol)、二氯双(三苯基膦)钯(II)(30mg,0.04mmol)、CuI(14mg,0.07mmol)、TEA(6mL)、DMF(6mL)和1-戊炔(0.2mL,2.1mmol)。将烧瓶用N2快速吹扫三次,并将混合物在100℃加热24h。将反应混合物过滤并浓缩。将残留物用DCM稀释并用NaHCO3洗涤。将EtOAc在MgSO4上干燥并浓缩。对残留物进行ISCO(己烷中的5-60%EtOAc)以给出标题化合物(250mg)。通过制备HPLC获得分析样品(10.2mg)。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm1.12(t,J=7.33Hz,3H)1.49(s,9H)1.68-1.77(m,2H)2.53(t,J=7.07Hz,2H)4.32(s,2H)7.28(d,J=9.35Hz,1H)7.44(d,J=8.34Hz,2H)8.00(d,J=9.35Hz,1H)8.05-8.13(m,3H)。LRMS(ESI)m/z391.1(M+H)+,对C23H26N4O2的计算值:390.49。
5.6.6.(4-(6-(戊-1-炔-1-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)苯基)甲胺的合成
向4-(6-(戊-1-炔-1-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)苯甲基氨基甲酸叔丁酯(70mg)在DCM(2mL)中的溶液加入TFA(0.5mL)。将混合物在室温搅拌1h,然后浓缩。对残留物进行制备HPLC以给出作为AcOH盐的标题化合物(10mg)。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm1.06(t,J=7.39Hz,3H)1.61-1.70(m,2H)1.86(s,3H)2.47(t,J=7.06Hz,2H)4.08(s,2H)7.26(d,J=9.48Hz,1H)7.54(d,J=8.16Hz,2H)7.98(d,J=9.26Hz,1H)8.10-8.17(m,3H)。LRMS(ESI)m/z291.1(M+H)+,对C18H18N4的计算值:290.37。
5.6.7.(4-(6-戊基咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)苯基)甲胺的合成
将(4-(6-(戊-1-炔-1-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)苯基)甲胺HOAc盐(200mg)和Pd/C(5%,50mg)在含有几滴TFA的MeOH中的混合物在室温和H2下搅拌2h。将混合物过滤并将滤液浓缩。对残留物进行制备HPLC以给出作为AcOH盐的标题化合物(8mg)。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm0.91-0.99(m,3H)1.39-1.47(m,4H)1.85(m,2H)1.94(s,3H)2.94(t,J=7.58Hz,2H)4.18(s,2H)7.24(d,J=9.35Hz,1H)7.60(d,J=8.34Hz,2H)7.98(d,J=9.35Hz,1H)8.09(s,1H)8.26(d,J=8.34Hz,2H)。LRMS(ESI)m/z295.1[(M+H)]+,对C18H18N4的计算值:294.4。
5.6.8.1-(3-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酮的合成
部分A.1-(3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酮
向5mL可微波加热的小瓶加入150mg(0.79mmol)6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪、155mg(0.95mmol)(3-乙酰基苯基)硼酸、327mg(2.37mmol)K2CO3、55mg(0.08mmol)PdCl2(PPh3)2,然后加入3mLDME和1mL水。用氮气驱替空气,然后在140℃微波加热0.25hr。将它用EtOAc稀释,用盐水洗涤,在MgSO4上干燥,浓缩,并在ISCO上纯化,使用12克柱并用35-100%EtOAc/己烷洗脱,获得180.4mg(96%)目标产物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm2.72(s,3H)7.56(d,J=9.48Hz,1H)7.63-7.70(m,1H)7.84(d,J=1.32Hz,1H)8.05-8.15(m,3H)8.18-8.25(m,1H)8.58(t,J=1.65Hz,1H)。
部分B.1-(3-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酮
向溶解在10mLAcOH中的140mg(0.591mmol)1-(3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酮加入溴(142mg,0.890mmol),并在室温搅拌0.33hr。将整个反应烧瓶在旋转蒸发仪上浓缩,将固体残留物悬浮在乙醚中,过滤掉上清液,以93%的得率获得目标产物的AcOH盐(207mg,黄色固体)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm2.73(s,3H)7.63-7.70(m,2H)7.84(s,1H)8.07(d,J=9.48Hz,1H)8.12(dt,J=7.72,1.32Hz,1H)8.29-8.35(m,1H)8.62(t,J=1.76Hz,1H);LRMS(ESI)m/z316(M+H)+,(在318处双线),对C14H10BrN3O的计算值:315。
5.6.9.1-(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酮的合成
向可微波加热小瓶中的50mg(0.16mmol)1-(3-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酮加入35mg(0.19mmol)(4-(氨基甲基)苯基)硼酸、66mg(0.46mmol)K2CO3、11mg(0.016mmol)PdCl2(PPh3)2、3mLDME和1mL水。用氮气驱替空气,并在140℃微波加热0.5hr。将它用EtOAc稀释,用盐水洗涤,在MgSO4上干燥,浓缩,并在PREPHPLC上在中性条件下纯化,以获得目标产物的单铵甲酸盐(59%得率)。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm2.73(s,3H)4.21(s,2H)7.65(d,J=8.34Hz,2H)7.72(t,J=7.83Hz,1H)7.93(d,J=9.60Hz,1H)8.16-8.24(m,3H)8.31-8.36(m,3H)8.55(s,1H);LRMS(ESI)m/e343.0(M+H)+,对C21H18N4O的计算值:342.0。
5.6.10.4-(6-(3-乙酰基苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)苯甲酰胺的合成
使用实施例5.6.9中描述的Suzuki过程,以57%的得率获得目标产物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.73(s,3H)7.78(t,J=7.71Hz,1H)8.02-8.09(m,4H)8.15(dt,J=7.96,1.33Hz,1H)8.37-8.44(m,5H)8.45(s,1H)8.69(t,J=1.52Hz,1H)。LRMS(ESI)m/z357(M+H)+,对C21H16N4O2的计算值:356。
5.6.11.1-(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)-4-甲基戊-1-酮的合成
部分A.1-(3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)-4-甲基戊-1-酮
向237mg(1.0mmol)1-(3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)乙酮加入2-甲基丙-1-醇(370mg,5.0mmol)、三苯基膦(314mg,1.2mmol)、KOH(84mg,1.5mmol)、双(1,5-环辛二烯)二铱(I)二氯化物(67mg,0.1mmol)和15mL二噁烷。将该混合物在室温搅拌过夜。将它冷却,用EtOAc稀释并用盐水洗涤。然后将它浓缩并在硅胶上纯化,用20-100%EtOAc/己烷洗脱,以获得197mg(67%)产物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.00(d,J=6.32Hz,6H)1.63-1.78(m,3H)3.01-3.13(m,2H)7.56(d,J=9.60Hz,1H)7.65(t,J=7.71Hz,1H)7.84(d,J=1.26Hz,1H)8.04-8.13(m,3H)8.17-8.22(m,1H)8.57(t,J=1.64Hz,1H)。
部分B.1-(3-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)-4-甲基戊-1-酮
向溶解在12mLAcOH中的190mg1-(3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)-4-甲基戊-1-酮(0.648mmol)加入311mg(0.1mL)溴,并将得到的混合物在室温搅拌。0.33hr后,LCMS显示反应完成。将它在旋转蒸发仪上浓缩至干,上样到12克硅胶柱并在ISCO上使用15-100%EtOAc/己烷纯化,以获得207mg(86%得率)目标产物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.01(d,J=6.32Hz,6H)1.66-1.78(m,3H)3.03-3.13(m,2H)7.64(d,J=9.35Hz,1H)7.68(t,J=7.83Hz,1H)7.84(s,1H)8.06(d,J=9.35Hz,1H)8.12(dt,J=7.77,1.29Hz,1H)8.26-8.33(m,1H)8.62(t,J=1.77Hz,1H)。
部分C.1-(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)-4-甲基 戊-1-酮
向可微波加热小瓶中的55mg(0.15mmol)1-(3-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)-4-甲基戊-1-酮加入33mg(0.18mmol)(4-(氨基甲基)苯基)硼酸、61mg(0.44mmol)K2CO3、10mg(0.015mmol)PdCl2(PPh3)2、3mLDME和1mL水。用氮气驱替空气,并在135℃微波加热0.25hr。将它用EtOAc稀释,用盐水洗涤,在MgSO4上干燥,浓缩,并在PREPHPLC上纯化,以获得作为TFA盐的目标产物(58%得率)。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm1.00(d,J=6.32Hz,6H)1.63-1.75(m,3H)3.10-3.20(m,2H)4.25(s,2H)7.70(d,J=8.34Hz,2H)7.75(t,J=7.83Hz,1H)8.13(d,J=9.60Hz,1H)8.22(d,J=7.83Hz,1H)8.30-8.40(m,5H)8.69-8.77(m,1H);LRMS(ESI)m/e399.0(M+H)+,对C25H26N4O的计算值:398.0。
5.6.12.3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-N-异丁基苯甲酰胺的合成
部分A.N-异丁基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲酰胺
向500mg(2.02mmol)3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲酸加入295mg(4.04mmol)2-甲基丙-1-胺,然后加入982mg(2.22mmol)苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐(CAS#56602-33-6)、0.7mL(5.05mmol)三乙胺和25mLDMF。将得到的混合物搅拌过夜,并在第二天早晨将它用EtOAc稀释,用盐水洗涤两次,在MgSO4上干燥并浓缩。获得的材料(486mg)的纯度足以不纯化直接用于下一步骤。LRMS(ESI)m/z304[(M+H)]+,对C17H26BNO3的计算值:303。
部分B.3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-N-异丁基苯甲酰胺
向可微波加热小瓶中的480mg(1.58mmol)N-异丁基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲酰胺加入292mg(1.90mmol)6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪、654mg(4.74mmol)K2CO3、111mg(0.16mmol)PdCl2(PPh3)2、12mLDME和4mL水。用氮气驱替空气,并在135℃微波加热0.25hr。将它用EtOAc稀释,用盐水洗涤,在MgSO4上干燥,浓缩,并在ISCO上纯化,使用40克柱并用35-100EtOAc/己烷洗脱,以获得321mg产物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.04(d,J=6.82Hz,6H)1.97(dquin,J=13.47,6.74,6.74,6.74,6.74Hz,1H)3.37(t,J=6.57Hz,2H)7.52-7.58(m,1H)7.62(t,J=7.71Hz,1H)7.84(s,1H)7.89(d,J=7.83Hz,1H)8.06(t,J=4.67Hz,2H)8.12(dd,J=7.83,1.01Hz,1H)8.38-8.45(m,1H)。LRMS(ESI)m/z295(M+H)+,对C17H18N4O的计算值:294。
部分C.3-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-N-异丁基苯甲酰胺
使用用于1-(3-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)-4-甲基戊-1-酮的溴化过程(实施例5.6.11,部分B),以获得88%的目标产物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.05(d,J=6.57Hz,6H)1.98(dquin,J=13.55,6.72,6.72,6.72,6.72Hz,1H)3.37(dd,J=6.69,6.19Hz,2H)6.31(br.s.,1H)7.60-7.68(m,2H)7.83(s,1H)7.89(dt,J=7.83,1.39Hz,1H)8.04(d,J=9.60Hz,1H)8.21-8.27(m,1H)8.47(t,J=1.64Hz,1H)。LRMS(ESI)m/z373[(M+H)]+,(在375处双线),对C17H17BrN4O的计算值:372。
部分D.3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-N-异丁基苯甲酰胺
使用在实施例5.6.11中描述的过程获得作为甲酸盐的标题化合物。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm1.03(d,J=6.82Hz,6H)2.00(dt,J=13.45,6.79Hz,1H)3.28(d,J=7.07Hz,2H)4.22(s,2H)7.64-7.72(m,3H)7.93(d,J=9.60Hz,1H)7.98-8.02(m,1H)8.19-8.23(m,2H)8.27(d,J=7.83Hz,1H)8.34(d,J=8.34Hz,2H)8.59(t,J=1.77Hz,1H)。LRMS(ESI)m/z400[(M+H)]+,对C24H25N5O的计算值:399。
5.6.13.5-(3-(4-(氨基甲基)苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-N-异丁基烟酰胺的合成
部分A.5-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)烟酸
从500mg(1.81mmol)5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)烟酸乙酯开始,遵照上面用于3-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-N-异丁基苯甲酰胺合成的Suzuki偶联条件,获得428mg目标化合物。LRMS(ESI)m/z241(M+H)+,对C12H8BN4O2的计算值:240。
部分B.5-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-N-异丁基烟酰胺
使用在实施例5.6.12的部分A中描述的过程,以76%的得率获得目标产物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.05(d,J=6.57Hz,6H)1.99(dquin,J=13.48,6.80,6.80,6.80,6.80Hz,1H)3.39(t,J=6.44Hz,2H)6.37(br.s.,1H)7.55(d,J=9.35Hz,1H)7.88(d,J=1.01Hz,1H)8.06-8.15(m,2H)8.72(t,J=2.15Hz,1H)9.08(d,J=2.02Hz,1H)9.34(d,J=2.02Hz,1H)。LRMS(ESI)m/z296[(M+H)]+,对C16H17N5O的计算值:295。
部分C.5-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-N-异丁基烟酰胺
使用在实施例5.6.11的部分B中描述的过程,以91%的得率获得目标产物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.05(d,J=6.57Hz,6H)1.99(dt,J=13.58,6.73Hz,1H)3.40(dd,J=6.82,6.06Hz,2H)6.35(br.s.,1H)7.62(d,J=9.35Hz,1H)7.87(s,1H)8.10(d,J=9.35Hz,1H)8.77(t,J=2.15Hz,1H)9.09(d,J=2.27Hz,1H)9.42(d,J=2.27Hz,1H)。LRMSLRMS(ESI)m/z374(M+H)+,(在376处双线),对C16H16BrN5O的计算值:373。
部分D.5-(3-(4-(氨基甲基)苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-N-异丁基烟酰胺
使用在实施例5.6.11中描述的过程,获得作为甲酸盐的目标产物(71%)。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm1.04(d,J=6.57Hz,6H)2.01(dt,J=13.64,6.82Hz,1H)3.20-3.31(m,2H)4.23(s,2H)7.67(d,J=8.34Hz,2H)7.98(d,J=9.60Hz,1H)8.22-8.35(m,4H)8.91(t,J=2.15Hz,1H)9.13(d,J=2.02Hz,1H)9.41(d,J=2.02Hz,1H);LRMS(ESI)m/e401.0(M+H)+,对C23H24N6O的计算值:400.0。
5.6.14.N-异丁基-3-(3-(吡啶-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰胺的合成
使用在实施例5.6.11中描述的过程获得标题化合物。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm1.03(d,J=6.57Hz,6H)2.01(dquin,J=13.56,6.78,6.78,6.78,6.78Hz,1H)3.29(d,J=7.07Hz,2H)7.74(t,J=7.83Hz,1H)8.00-8.09(m,1H)8.16(d,J=9.60Hz,1H)8.30-8.43(m,2H)8.62(s,1H)8.83-8.93(m,3H)9.02(d,J=6.57Hz,2H)。LRMS(ESI)m/z372(M+H)+,对C22H21N5O的计算值:371。
5.6.15.N-异丁基-3-(3-(3-甲氧基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰胺的合成
使用在实施例5.6.11中描述的过程获得标题化合物。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm1.03(d,J=6.82Hz,6H)2.01(dquin,J=13.64,6.82,6.82,6.82,6.82Hz,1H)3.29(d,J=7.07Hz,2H)4.29(s,3H)7.73(t,J=7.83Hz,1H)8.02-8.07(m,1H)8.19(d,J=9.35Hz,1H)8.32(d,J=8.08Hz,1H)8.39(d,J=9.60Hz,1H)8.61(t,J=1.52Hz,1H)8.66(d,J=6.06Hz,1H)8.74(s,1H)8.88(s,1H)9.49(d,J=6.32Hz,1H)。LRMS(ESI)m/z402(M+H)+,对C23H23N5O2的计算值:401。
5.6.16.N-异丁基-3-(3-(4-(甲基氨甲酰基)苯基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯甲酰胺的合成
使用在实施例5.6.11中描述的过程获得标题化合物。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm1.03(d,J=6.57Hz,6H)2.00(dquin,J=13.47,6.74,6.74,6.74,6.74Hz,1H)2.99(s,3H)3.28(d,J=7.07Hz,2H)7.72(t,J=7.83Hz,1H)8.04(d,J=8.59Hz,3H)8.21(d,J=9.85Hz,1H)8.30-8.35(m,3H)8.39(d,J=9.60Hz,1H)8.44(s,1H)8.60(s,1H)。LRMS(ESI)m/z428(M+H)+,对C25H25N5O2的计算值:427。
5.6.17.1-(3-(3-(3-甲氧基吡啶-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)-4-甲基戊-1-酮的合成
向可微波加热小瓶中的60mg(0.161mmol)1-(3-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)苯基)-4-甲基戊-1-酮加入27mg(0.194mmol)、103mg(0.484mmol)K3PO4、15mg(0.016mmol)Pd(dba)2、3mLMeCN和1mL水。用氮气驱替空气,并在140℃微波加热0.5hr。将它用EtOAc稀释,用盐水洗涤,在MgSO4上干燥,浓缩,并在PREPHPLC上纯化,以获得目标产物。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm1.00(d,J=5.81Hz,6H)1.62-1.75(m,3H)3.13(t,J=7.20Hz,2H)4.12(s,3H)7.72(t,J=7.71Hz,1H)7.98(d,J=9.60Hz,1H)8.16(d,J=7.83Hz,1H)8.23(d,J=9.60Hz,1H)8.32(d,J=7.83Hz,1H)8.36-8.39(m,1H)8.41(s,1H)8.52(s,1H)8.57(d,J=4.55Hz,1H)8.70(s,1H)。LRMS(ESI)m/z401(M+H)+,对C24H24N4O2的计算值:400。
5.6.18.4-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-1-异戊基吡啶-2(1H)-酮的合成
部分A.4-溴-1-异戊基吡啶-2(1H)-酮
在氮气下将4-溴-2-羟基吡啶(600mg,3.4mmol)转移到无水DMF中。加入在油中的60%氢化钠(165mg,4.1mmol)并搅拌30分钟。加入溴化锂(598mg,6.8mmol)并搅拌1小时。加入1-溴-3-甲基丁烷(870uL,6.8mmol)并搅拌过夜。将反应在真空中浓缩并转移到DCM中。将它用水、1NNaOH洗涤,然后在硫酸镁上干燥,过滤并真空浓缩,获得840mg粗产物,将其原样用于下一步骤中。LRMS(ESI)m/z245(M+H)+,对C10H14BrNO的计算值:244.13。
部分B.(1-异戊基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-基)硼酸
在氮气下将4-溴-1-异戊基吡啶-2(1H)-酮(840mg,3.4mmol)转移到10mL无水DMF中。加入双(频哪醇合)二硼烷(1.3g,5.1mmol)、乙酸钾(1.01g,10.2mmol)和Pd(dppf)Cl2二氯甲烷(281mg,0.34mmol),将反应加热至85℃并搅拌过夜。将反应冷却至室温并使用DCM通过硅藻土过滤。将它真空浓缩,转移到1NNaOH中,并用DCM洗涤。然后用1NHCl将水性层调至酸性,并用DCM萃取。将DCM层在硫酸镁上干燥,过滤并真空浓缩,得到600mg粗品用于下一步骤中。LRMS(ESI)m/z210[(M+H)]+,对C10H16BNO3的计算值:209.05。
部分C.4-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-1-异戊基吡啶-2(1H)-酮
将6-氯-咪唑并[1,2-b]哒嗪(370mg,2.4mmol)转移到20mL乙腈和10mL水中。加入(1-异戊基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-基)硼酸(600mg,2.9mmol)、碳酸钾(665mg,4.8mmol)和PD(dppf)Cl2二氯甲烷(197mg,0.24mmol),并将反应混合物在85℃搅拌2小时。然后将反应冷却至室温,使用DCM通过硅藻土柱过滤,并真空浓缩。然后使用DCM将它通过二氧化硅柱,真空干燥并从乙酸乙酯重结晶,得到680mg粗产物,将其原样用于下一步骤。LRMS(ESI)m/z283(M+H)+,对C16H18N4O的计算值:282.3。
部分D.4-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-1-异戊基吡啶-2(1H)-酮
将4-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-1-异戊基吡啶-2(1H)-酮(680mg,2.4mmol)转移到乙腈中。加入N-溴琥珀酰亚胺(429mg,2.4mmol),并将反应搅拌4小时。然后将反应混合物在真空中浓缩并转移到乙酸乙酯中,用水、1NNaOH、盐水和水洗涤。将有机层在硫酸镁上干燥,过滤并真空浓缩,获得653mg粗产物,其被用于进一步反应中。1HNMR(DMSO-d6)δ:8.29(d,J=9.6Hz,1H),8.02(s,1H),7.87-7.97(m,2H),7.17(d,J=1.8Hz,1H),6.94(dd,J=7.2,2.1Hz,1H),3.91-4.02(m,2H),1.51-1.64(m,3H),0.94(d,J=6.3Hz,6H)。LRMS(ESI)m/z361/363[(M+H)]+,对C16H17BrN4O的计算值:361.24。
5.6.19.1-异戊基-4-(3-(2-甲氧基吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡啶-2(1H)-酮的合成
将4-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-1-异戊基吡啶-2(1H)-酮(200mg,0.55mmol)、2-甲氧基吡啶-3-硼酸(169mg,1.1mmol)、碳酸钾(229mg,1.65mmol)、Pd(OAc)2(2.5mg,0.011mmol)和x-Phos(10.5mg,.022mmol)转移到密封管中的2mL二噁烷和1mL水中,并在85℃加热2小时。然后将反应冷却至室温,使用乙腈和DCM通过硅藻土柱过滤,真空浓缩。在Shimadzu中性相制备柱上纯化,冷冻干燥,得到29mg产物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.57(dd,J=7.5,1.9Hz,1H),8.33(d,J=9.6Hz,1H),8.26-8.28(m,1H),8.26(s,1H),7.92(d,J=9.6Hz,1H),7.86(d,J=7.1Hz,1H),7.22(dd,J=7.5,4.9Hz,1H),7.11(d,J=2.0Hz,1H),6.84(dd,J=7.2,2.1Hz,1H),3.98(s,3H),3.90-3.96(m,2H),1.50-1.61(m,3H),0.93(d,J=6.1Hz,6H)。LRMS(ESI)m/z390(M+H)+,对C22H23N5O2的计算值:389.4。
5.6.20.4-(3-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-1-异戊基吡啶-2(1H)-酮的合成
使用在实施例5.6.19中描述的过程获得标题化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ:8.72(dd,J=9.9,3.0Hz,1H),8.40(s,1H),8.38(d,J=9.3Hz,1H),8.26(d,J=3.0Hz,1H),7.97(d,J=9.6Hz,1H),7.93(d,J=7.1Hz,1H),7.14(d,J=2.0Hz,1H),6.86(dd,J=7.1,2.0Hz,1H),4.01(s,3H),3.91-3.99(m,2H),1.48-1.65(m,3H),0.94(d,J=6.3Hz,6H)。LRMS(ESI)m/z408(M+H)+,对C22H22FN5O2的计算值:407.4。
5.6.21.1-异戊基-4-(3-(2-甲氧基-6-甲基吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡啶-2(1H)-酮的合成
使用在实施例5.6.19中描述的过程获得标题化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ:8.42(d,J=7.6Hz,1H),8.33(d,J=9.6Hz,1H),8.21(s,1H),7.91(d,J=9.6Hz,1H),7.88(d,J=7.1Hz,1H),7.12(d,J=1.8Hz,1H),7.09(d,J=7.8Hz,1H),6.85(dd,J=7.1,2.0Hz,1H),3.89-4.01(m,5H),1.56(t,J=6.6Hz,3H),0.94(d,J=6.1Hz,6H)。LRMS(ESI)m/z404(M+H)+,对C23H25N5O2的计算值:403.49。
5.6.22.4-(3-(2-乙氧基吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-1-异戊基吡啶-2(1H)-酮的合成
使用在实施例5.6.19中描述的过程获得标题化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ:8.59(dd,J=7.5,1.9Hz,1H),8.35(d,J=9.6Hz,1H),8.29(s,1H),8.26(dd,J=4.9,1.9Hz,1H),7.95(d,J=9.6Hz,1H),7.88(d,J=7.3Hz,1H),7.22(dd,J=7.5,4.9Hz,1H),7.14(d,J=2.0Hz,1H),6.87(dd,J=7.1,2.0Hz,1H),4.45(q,J=6.9Hz,2H),3.96(t,J=7.2Hz,2H),1.57(t,J=6.6Hz,3H),1.33(t,J=6.9Hz,3H),0.94(d,J=6.1Hz,6H)。LRMS(ESI)m/z404(M+H)+,对C23H25N5O2的计算值:403.49。
5.6.23.1-异戊基-4-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡啶-2(1H)-酮的合成
将6-氯-3-甲基-咪唑并[1,2-b]哒嗪(98mg,0.58mmol)、1-(3-甲基-丁基)-2-氧代-1,2-二氢-吡啶-4-硼酸(145mg,0.69mmol)、K2CO3(240mg,1.74mmol)和二氯双(三苯基膦)钯(II)(20mg,0.029mmol)在MeCN/水(3.2ml/0.8mL)中的混合物在微波炉中在150℃加热15分钟。将反应混合物用MeOH(2mL)稀释并过滤。对滤液进行制备HPLC,给出标题化合物(81.5mg)。
1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm0.99(d,J=6.32Hz,6H)1.63-1.73(m,3H)2.61(s,3H)3.96-4.04(m,2H)6.94(dd,J=7.07,2.02Hz,1H)7.12(d,J=2.02Hz,1H)7.36-7.42(m,2H)7.63(s,1H)7.99(d,J=9.35Hz,1H)。LRMS(ESI)m/z297.1(M+H)+,对C17H20N4O的计算值:296.4。
5.6.24.4-(3-乙酰基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-1-异戊基吡啶-2(1H)-酮的合成
将1-(6-氯-咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基-乙酮(113mg,0.58mmol)、1-(3-甲基-丁基)-2-氧代-1,2-二氢-吡啶-4-硼酸(145mg,0.69mmol)、K2CO3(240mg,1.74mmol)和二氯双(三苯基膦)钯(II)(20mg,0.029mmol)在MeCN/水(3.2ml/0.8mL)中的混合物在微波炉中在150℃加热15min。将反应混合物用MeOH(2mL)稀释并过滤。对滤液进行制备HPLC,给出标题化合物(93mg)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.01(d,J=6.06Hz,6H)1.65-1.77(m,3H)2.83(s,3H)4.00-4.06(m,2H)7.03(dd,J=7.07,2.02Hz,1H)7.13(d,J=1.77Hz,1H)7.45(d,J=7.07Hz,1H)7.69(d,J=9.60Hz,1H)8.19(d,J=9.35Hz,1H)8.49(s,1H)。LRMS(ESI)m/z325.0(M+H)+,对C18H20N4O2的计算值:324.4。
5.6.25.4-(3-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-1-异戊基吡啶-2(1H)-酮的合成
将4-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-1-异戊基吡啶-2(1H)-酮(200mg,0.71mmol)转移到乙腈中。加入N-氯琥珀酰亚胺(95mg,0.71mmol),并将反应在75℃搅拌过夜。然后将反应真空浓缩,转移到DCM中,并用水、1NNaOH、盐水和水洗涤。将有机层在硫酸镁上干燥,过滤,真空浓缩,在Shimadzu中性相制备柱上纯化,冷冻干燥,获得28mg产物。1HNMR(DMSO-d6)δ:8.32(d,J=9.6Hz,1H),8.03(d,J=0.8Hz,1H),7.95(d,J=9.6Hz,1H),7.91(d,J=7.1Hz,1H),7.17(d,J=2.0Hz,1H),6.94(dd,J=7.1,1.5Hz,1H),3.88-4.03(m,2H),1.48-1.66(m,3H),0.95(d,J=5.8Hz,6H)。LRMS(ESI)m/z317(M+H)+,对C16H17ClN4O的计算值:316.8。
5.6.26.6-(1-异戊基-1H-吡唑-4-基)-3-(2-甲氧基吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪的合成
部分A.6-(1-异戊基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪
使用在实施例5.6.11中描述的过程获得标题化合物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm0.99(d,J=6.57Hz,6H)1.64(dquin,J=13.39,6.69,6.69,6.69,6.69Hz,1H)1.81-1.88(m,2H)4.20-4.26(m,2H)7.24-7.27(m,1H)7.72-7.76(m,1H)7.92-7.96(m,2H)7.97(s,1H)7.99-8.01(m,1H)。LRMS(ESI)m/z256(M+H)+,对C14H17N5的计算值:255。
部分B.3-溴-6-(1-异戊基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪
使用在实施例5.6.11的部分B中描述的溴化过程获得标题化合物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.00(d,J=6.57Hz,6H)1.60-1.71(m,1H)1.82-1.90(m,2H)4.20-4.28(m,2H)7.31(d,J=9.35Hz,1H)7.74(s,1H)7.91(d,J=9.35Hz,1H)8.03-8.08(m,2H)。LRMS(ESI)m/z334(M+H)+,(在336处双线),对C14H16BrN5的计算值:333。
部分C.6-(1-异戊基-1H-吡唑-4-基)-3-(2-甲氧基吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒
使用在实施例5.6.11中描述的Suzuki过程获得标题化合物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.00(d,J=6.57Hz,6H)1.65(dquin,J=13.39,6.69,6.69,6.69,6.69Hz,1H)1.80-1.88(m,2H)4.09(s,3H)4.19-4.28(m,2H)7.11(dd,J=7.58,5.05Hz,1H)7.30(d,J=9.35Hz,1H)7.92(s,1H)7.98-8.04(m,2H)8.23(dd,J=4.93,1.89Hz,1H)8.29(s,1H)8.74(dd,J=7.58,1.77Hz,1H)。LRMS(ESI)m/z363(M+H)+,对C20H22N6O的计算值:362。
5.6.27.4-(3-(2-甲氧基吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-1H-吡唑-1-甲酸异丙酯的合成
部分A.6-(1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪
向308mg(2.00mmol)6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪加入882mg(3.00mmol)(1-(叔丁氧基羰基)-1H-吡唑-4-基)硼酸,然后加入140mg(0.20mmol)PdCl2(PPh3)2、400mg(4.00mmol)Na2CO3、10mLMeCN和4mLH2O。用氮气驱替空气,并在140℃微波加热0.5hr。观察到在Suzuki期间Boc保护基团丧失。将小瓶的内含物用EtOAc稀释,用盐水洗涤,在MgSO4上干燥,浓缩,并在ISCO上纯化,使用0-10%MeOH/DCM洗脱,以获得209mg目标化合物。LRMS(ESI)m/z186(M+H)+,对C9H7N5的计算值:185。
部分B.4-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-1H-吡唑-1-甲酸异丙酯
向溶解在10mLEtOAc中的137mg(0.741mmol)6-(1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪加入1.48mL(1.48mmol)氯甲酸异丙酯(1M甲苯溶液)和0.31mL(2.22mmol)三乙胺。将得到的混合物在室温搅拌2hr。将它用20mLEtOAc稀释并用5mL水淬灭。将它用盐水洗涤,在MgSO4上干燥,浓缩,并在ISCO上纯化,用10-100%EtOAc/己烷洗脱,以获得146mg目标化合物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.53(d,J=6.32Hz,6H)5.31-5.42(m,1H)7.31(d,J=9.35Hz,1H)7.81(d,J=1.26Hz,1H)7.99-8.04(m,2H)8.31(d,J=0.76Hz,1H)8.67(d,J=0.76Hz,1H)。
部分C.4-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-1H-吡唑-1-甲酸异丙酯
使用在实施例5.6.11的部分B中描述的溴化过程,获得84%的目标产物。LRMS(ESI)m/z350[(M+H)]+,(在352处双线),对C13H12BrN5O2的计算值:349。
部分D.4-(3-(2-甲氧基吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-1H-吡唑-1-甲酸 异丙酯
使用在实施例5.6.11中描述的Suzuki过程获得标题化合物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.53(d,J=6.32Hz,6H)4.10(s,3H)5.37(quin,J=6.25Hz,1H)7.12(dd,J=7.45,4.93Hz,1H)7.35(d,J=9.35Hz,1H)8.08(d,J=9.35Hz,1H)8.23-8.28(m,2H)8.33(s,1H)8.65(d,J=0.51Hz,1H)8.67(dd,J=7.58,2.02Hz,1H)。LRMS(ESI)m/z379(M+H)+,对C19H18N6O3的计算值:378。
5.6.28.(S)-1-(2-氨基-4-甲基戊基)-4-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡啶-2(1H)-酮的合成
部分A.(S)-2-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮
向可微波加热小瓶中的2.20g(14.86mmol)邻苯二甲酸酐加入2.09g(17.84mmol)(s)-(+)亮氨醇、3.1mL(22.30mmol)三乙胺和12mL甲苯。将它在160℃微波加热0.5hr。将它在旋转蒸发仪上浓缩,上样到80克硅胶柱上并在ISCO上纯化,用5-100%EtOAc/己烷洗脱,以获得3.61g(98%)目标产物。LRMS(ESI)m/z248(M+H)+,对C14H17NO3的计算值:247。
部分B.(S)-2-(1-(4-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3- 二酮
向溶解在60mlTHF中的1.14g(6.55mmol)4-溴吡啶-2-醇加入1.70g(6.88mmol)(S)-2-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮,然后加入1.80g(6.88mmol)三苯基膦和1.25g(7.21mmol)偶氮二甲酸二乙酯。将该混合物在室温搅拌过夜。第二天早晨LCMS显示两个质量一致的主峰。将它用EtOAc稀释,用盐水洗涤,在MgSO4上干燥并浓缩。将它在ISCO上纯化,使用40克柱并用10-100%EtOAc/己烷洗脱。第一个主峰是位置异构体(副产物),第二个主峰是目标产物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm0.95(dd,J=6.19,3.16Hz,6H)1.48-1.63(m,2H)2.16(ddd,J=13.26,10.36,4.42Hz,1H)4.26(dd,J=13.39,10.36Hz,1H)4.41(dd,J=13.39,4.04Hz,1H)4.78-4.91(m,1H)6.08-6.14(m,1H)6.76(d,J=2.27Hz,1H)6.92(d,J=7.33Hz,1H)7.72-7.78(m,2H)7.79-7.85(m,2H)。
部分C.(S)-2-(4-甲基-1-(2-氧代-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷- 2-基)吡啶-1(2H)-基)戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮
向可微波加热小瓶中的1.00g(2.48mmol)(S)-2-(1-(4-溴-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮加入1.26g(4.96mmol)双(频哪醇合)-二硼、0.97g(9.93mmol)KOAc,然后加入0.30g(0.15mmol)PdCl2(dppf)2.DCM。将它在130℃微波加热0.5hr。LCMS显示获得的产物似乎主要是目标产物的硼酸。由于硼酸/酯两者都可良好地用于下一步骤,因此得率据推测为理论得率,并将所述材料不经任何萃取也不纯化直接用于下一步骤。
部分D.(S)-2-(1-(4-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲 基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮
向来自于前一步骤的据估计含有2.48mmol硼酸酯(或酸)、足够的KOAc和足够的DME的微波炉小瓶加入0.381g(2.48mmol)6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪、5mL水和另外100mg(0.123mmol)PdCl2(dppf)2.DCM。将混合物在135℃微波加热0.5hr。将它用EtOAc稀释,用盐水洗涤,通过硅藻土垫过滤以便区分有机和水性层。将有机层在MgSO4上干燥,浓缩,上样到80克硅胶柱上并在ISCO上纯化,用0-10%MeOH/DCM洗脱,获得644mg目标产物(两个步骤后得率为59%)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm0.98(dd,J=6.32,2.78Hz,6H)1.49-1.74(m,2H)2.16-2.29(m,1H)4.35(dd,J=13.26,10.48Hz,1H)4.53(dd,J=13.39,4.04Hz,1H)4.88-5.00(m,1H)6.74(dd,J=7.07,2.02Hz,1H)7.05(d,J=1.77Hz,1H)7.20(d,J=7.33Hz,1H)7.41(d,J=9.60Hz,1H)7.70-7.75(m,2H)7.82(d,J=1.01Hz,3H)7.98(s,1H)8.03(d,J=9.60Hz,1H)。
部分E.(S)-1-(2-氨基-4-甲基戊基)-4-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡啶-2(1H)-
向溶解在30mLEtOH中的250mg(0.604mmol)起始原料加入302mg(6.040mmol)一水合肼,并将得到的混合物在搅拌下加热3hr。将它冷却至室温,并过滤掉固体。将滤液浓缩,获得目标产物。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm1.01(d,J=6.57Hz,3H)1.05(d,J=6.57Hz,3H)1.51-1.59(m,2H)1.85(dt,J=13.45,6.79Hz,1H)3.65-3.75(m,1H)4.17(dd,J=14.15,7.83Hz,1H)4.32(dd,J=14.15,3.79Hz,1H)7.18(dd,J=7.20,1.89Hz,1H)7.27(d,J=1.77Hz,1H)7.77-7.84(m,2H)7.87(d,J=1.26Hz,1H)8.16(d,J=9.60Hz,1H)8.27(s,1H)。LRMS(ESI)m/z312(M+H)+,对C17H21N5O的计算值:311。
5.6.29.(S)-1-(2-氨基-4-甲基戊基)-4-(3-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡啶-2(1H)-酮的合成
向溶解在10mLDMF中的60mg(0.136mmol)(S)-2-(1-(4-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮加入63mg(0.272mmol)NCS,并将得到的混合物在搅拌下加热到50℃16hr。将它冷却到室温,用EtOAc稀释,用盐水洗涤,在MgSO4上干燥,浓缩,并使用12克柱在ISCO上纯化,用50-100%EtOAc/己烷洗脱,获得43mg目标产物。对该产物进行实施例5.6.28中描述的邻苯二甲酰亚胺去保护过程,获得标题化合物。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm0.99-1.07(m,6H)1.49-1.58(m,2H)1.80-1.90(m,1H)3.62-3.74(m,1H)4.17(dd,J=14.02,7.96Hz,1H)4.33(dd,J=14.15,4.04Hz,1H)7.23(dd,J=7.07,2.02Hz,1H)7.32(d,J=1.77Hz,1H)7.79-7.85(m,1H)7.86-7.92(m,2H)8.20(d,J=9.60Hz,1H)。LRMS(ESI)m/z346(M+H)+,(在348处双线),对C17H20ClN5O的计算值:345。
5.6.30.(S)-1-(2-氨基-4-甲基戊基)-4-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡啶-2(1H)-酮的合成
部分A.(S)-2-(1-(4-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)- 4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮
向溶解在10mLAcOH中的60mg(0.136mmol)(S)-2-(1-(4-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮加入24mg(0.150mmol)溴并搅拌0.25hr。将反应混合物在旋转蒸发仪上浓缩,并在晚些时候在高真空泵上浓缩,以定量得率获得目标产物。LRMS(ESI)m/z520[(M+H)]+,(在522处双线),对C25H22BrN5O3的计算值:519。
部分B.(S)-1-(2-氨基-4-甲基戊基)-4-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡啶-2 (1H)-酮
对(S)-2-(1-(4-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮进行实施例5.6.28中描述的邻苯二甲酰亚胺去保护过程,获得标题化合物。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm1.01(d,J=6.57Hz,3H)1.05(d,J=6.57Hz,3H)1.51-1.59(m,2H)1.85(dt,J=13.45,6.79Hz,1H)3.64-3.73(m,1H)4.16(dd,J=14.02,7.96Hz,1H)4.33(dd,J=14.02,3.92Hz,1H)7.23(dd,J=7.07,1.77Hz,1H)7.32(d,J=1.52Hz,1H)7.81(d,J=7.07Hz,1H)7.87-7.93(m,2H)8.18(d,J=9.60Hz,1H).LRMS(ESI)m/z390[(M+H)]+,(在392处双线),对C17H20BrN5O的计算值:389。
5.6.31.(S)-1-(2-氨基-4-甲基戊基)-4-(3-(2-甲氧基吡啶-3-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡啶-2(1H)-酮的合成
向可微波加热小瓶中的70mg(0.135mmol)(S)-2-(1-(4-(3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮加入31mg(0.202mmol)(2-甲氧基吡啶-3-基)硼酸、37mg(0.269mmol)K2CO3、11mg(0.014mmol)PdCl2(dppf)2.DCM、3mLMeCN和1mL水。将该混合物在140℃微波加热0.25hr。将它用EtOAc稀释,用盐水洗涤,在MgSO4上干燥,浓缩,并在PREPHPLC上纯化,获得40mg目标产物。对该产物进行实施例5.6.28中描述的邻苯二甲酰亚胺去保护过程,获得标题化合物。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm1.05(d,J=6.57Hz,3H)1.02(d,J=6.57Hz,3H)1.50-1.64(m,2H)1.77-1.91(m,1H)3.70-3.81(m,1H)4.24(dd,J=14.27,7.71Hz,1H)4.34(dd,J=14.40,3.54Hz,1H)7.11(dd,J=7.07,1.77Hz,1H)7.17(dd,J=7.58,5.05Hz,1H)7.25-7.32(m,1H)7.79(d,J=7.07Hz,1H)7.88(d,J=9.60Hz,1H)8.20-8.30(m,3H)8.58(dd,J=7.58,1.77Hz,1H)。LRMS(ESI)m/z419[(M+H)]+,对C23H26N6O2的计算值:418。
5.6.32.(S)-1-(2-氨基-4-甲基戊基)-4-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡啶-2(1H)-酮的合成
向可微波加热小瓶中的0.835mmol(S)-2-(4-甲基-1-(2-氧代-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-吡啶-1(2H)-基)戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮加入100mg(0.597mmol)6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪、98mg(0.119mmol)PdCl2(dppf)2.DCM、2mLDME和2mL2MKOAc水溶液。将它在135℃微波加热0.5hr。将它用EtOAc稀释,用盐水洗涤,通过硅藻土垫过滤,以便区分有机和水性层。将有机层在MgSO4上干燥,浓缩,上样到40克硅胶柱上并在ISCO上纯化,用0-10%MeOH/DCM洗脱以获得目标产物。对该产物进行实施例5.6.28中描述的邻苯二甲酰亚胺去保护过程,获得标题化合物。1HNMR(400MHz,甲醇-d4)δppm1.02(d,J=6.57Hz,3H)1.06(d,J=6.57Hz,3H)1.54-1.67(m,2H)1.80-1.91(m,1H)2.66(s,3H)3.79(qd,J=7.24,3.79Hz,1H)4.26(dd,J=14.27,7.71Hz,1H)4.36(dd,J=14.40,3.79Hz,1H)7.23(dd,J=7.20,1.89Hz,1H)7.29(d,J=1.77Hz,1H)7.68(s,1H)7.75-7.83(m,2H)8.11(d,J=9.60Hz,1H)。LRMS(ESI)m/z326[(M+H)]+,对C18H23NO5的计算值:325。
5.6.33.3-溴-6-(1-新戊基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪的合成
部分A.6-(1-新戊基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪
向可微波加热小瓶中的153.6mg(1.00mmol)6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪加入343.2mg(1.30mmol)1-新戊基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡咯,然后加入81.8mg(0.10mmol)PdCl2(dppf)2.DCM、2mLMeCN,然后加入2mL2MKOAc水溶液。将它在135℃微波加热20分钟。将它用EtOAc稀释,用盐水洗涤,在MgSO4上干燥并浓缩。使用40克柱将它在ISCO上进行纯化,用5-100%EtOAc/己烷洗脱,以79%的得率获得目标产物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.04(s,9H)4.00(s,2H)7.26(d,J=9.35Hz,1H)7.74(d,J=1.01Hz,1H)7.90-7.95(m,3H)8.00(s,1H)。
部分B.3-溴-6-(1-新戊基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪
使用在实施例5.6.11的部分B中描述的溴化过程获得标题化合物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.05(s,9H)4.01(s,2H)7.31(d,J=9.60Hz,1H)7.73(s,1H)7.91(d,J=9.35Hz,1H)8.04(s,1H)8.00(s,1H)。LRMS(ESI)m/z334[(M+H)]+,(在336处双线),对C14H16BrN5的计算值:333。
5.6.34.3-(2-甲氧基吡啶-3-基)-6-(1-新戊基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪的合成
使用在实施例5.6.11中描述的Suzuki过程获得标题化合物。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.04(s,9H)4.00(s,2H)4.09(s,3H)7.09(dd,J=7.58,4.80Hz,1H)7.30(d,J=9.35Hz,1H)7.86(s,1H)7.98-8.03(m,2H)8.22(dd,J=5.05,1.77Hz,1H)8.29(s,1H)8.73(dd,J=7.45,1.89Hz,1H)。LRMS(ESI)m/z363[(M+H)]+,对C20H22N6O的计算值:362。
5.6.35.3-氯-6-(1-新戊基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪的合成
向溶解在4mLDMF中的72mg(0.282mmol)6-(1-新戊基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-b]哒嗪加入56mg(0.423mmol)N-氯琥珀酰亚胺,并将得到的混合物在55℃搅拌过夜。第二天早晨,LCMS显示出显著的二氯化副产物。将它冷却至室温,用EtOAc稀释,用盐水洗涤两次,并在MgSO4上干燥。将它在PREPHPLC上纯化,获得目标产物(15%得率)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.04(s,9H)4.01(s,2H)7.31(d,J=9.35Hz,1H)7.68(s,1H)7.93(d,J=9.35Hz,1H)8.00(s,1H)8.04(s,1H)。LRMS(ESI)m/z290(M+H)+,对C14H16ClN5的计算值:289。
5.6.36.1-(3,3-二甲基丁基)-4-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡啶-2(1H)-酮的合成
部分A.4-溴-1-(3,3-二甲基丁基)吡啶-2(1H)-酮
在氮气下将4-溴-2-羟基吡啶(600mg,3.4mmol)转移到无水DMF中。加入油中的60%氢化钠(165mg,4.1mmol)并搅拌30分钟。加入溴化锂(598mg,6.8mmol)并搅拌1小时。加入1-溴-3,3-二甲基丁烷(870uL,6.8mmol)并搅拌3天。将反应真空浓缩并转移到DCM中。将它用水、1NNaOH洗涤,然后在硫酸镁上干燥,过滤并真空浓缩,获得860mg粗产物,将其原样用于下一步骤中。LRMS(ESI)m/z258/260[(M+H)]+,对C11H16BrNO的计算值:258.16。
部分B.(1-(3,3-二甲基丁基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-基)硼酸
在氮气下将4-溴-1-(3,3-二甲基丁基)吡啶-2(1H)-酮(860mg,3.3mmol)转移到10mL无水DMF中。加入双(频哪醇合)二硼烷(1.26g,5mmol)、乙酸钾(985mg,10mmol)和Pd(dppf)Cl2二氯甲烷(272mg,0.33mmol),将反应加热到85℃并搅拌过夜。将反应冷却至室温,用DCM通过硅藻土过滤。将它真空浓缩,转移到1NNaOH中并用DCM洗涤。然后用1NHCl将水性层调至酸性并用DCM萃取。将DCM层在硫酸镁上干燥并真空浓缩,得到740mg粗品,将其用于进一步反应。LRMS(ESI)m/z224[(M+H)]+,对C11H18BNO3的计算值:223.08。
部分C.1-(3,3-二甲基丁基)-4-(3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡啶-2(1H)-
将6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(194mg,1.16mmol)转移到5mL乙腈和1mL水中。加入(1-(3,3-二甲基丁基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-基)硼酸(260mg,1.16mmol)、碳酸钾(480mg,3.48mmol)和Pd(dppf)Cl2二氯甲烷(95mg,0.116mmol),并将反应在85℃搅拌2hrs。冷却至室温,使用DCM通过硅藻土柱过滤并真空浓缩。将残留物在Shimadzu中性相制备柱上纯化,冷冻干燥,得到18mg产物。1HNMR(DMSO-d6)δ:8.18(d,J=9.6Hz,1H),7.89(d,J=7.1Hz,1H),7.78(d,J=9.6Hz,1H),7.70(s,1H),7.12(d,J=1.8Hz,1H),6.92-6.99(m,1H),3.90-4.02(m,2H),2.58(s,3H),1.49-1.63(m,2H),0.98(s,9H)。LRMS(ESI)m/z311(M+H)+,对C18H22N4O的计算值:310.4。
5.6.37.P81过滤板测定法
使用Mutiprobe(PerkinElmer)和BiomekFX(BeckmanCoulter)将化合物在LabcyteLDV板(Labcyte,目录号LP-0200)中连续稀释,使得最高化合物浓度为96μM。然后使用ECHO550液体操作器(Labcyte)将化合物加入(75nL每孔)到Greiner384孔反应板(Greiner,#781076)中。然后向用于阴性对照的第1和13列的每个孔加入总共12μl反应缓冲液(含有Tween和DTT的IMAP缓冲液,来自于MolecularDevices),并向剩余的孔加入12μl2XAAK1(0.2nM全长人类蛋白,NCBI登记号NP_055726.2)。然后将酶与化合物在室温预温育10分钟。在使用Minitrak(PerkinElmer)添加12μl含有2XMu2(0.2μM,全长人类蛋白)、2x冷ATP(2μM)和1.3μCi热33P-ATP的底物混合物后,反应开始。反应在室温进行1小时。同时,将Millipore384孔P81过滤板(Millipore,目录号MZPHN0W10)置于洗板机(ZoomZW,来自于Titertek)上,并用50μl1%磷酸预先润湿。然后在向每个孔添加24μl2%磷酸后停止激酶反应,然后使用Minitrak从每个孔转移40μl到预先润湿的Millipore384孔P81过滤板中。将反应混合物在P81板中在室温温育10分钟,然后使用Zoom过滤板清洗机用100μl/孔的1%磷酸清洗5次。将每个过滤板的底部密封,然后向每个孔加入20μlMicroscint40,用Flashplate盖子密封板的顶部,然后等待1小时,随后在TopCount(PerkinElmer)上读数。
5.6.38.基于HEK281细胞的测定法
HEK293F细胞培养在含有DMEM(Gibco,目录号11965)、10%FBS(SAFCBiosciences,目录号12103C)、1XGPS(谷氨酰胺、青霉素和链霉素)的培养基中。在第1天,将细胞铺在10cm培养皿上,使得它们在转染时~80%合生。在转染时,10cm培养皿中约有1200万个细胞。在第2天,将每个培养皿用48ugDNA和144ulLipofectamine2000(Invitrogen,目录号11668-019)转染。所述DNA包含含有3ugAAK1/HA/pIRES(全长人类,NCBI登记号NP_055726.2)、45μgFlag/AP2MI/pcDNA(全长人类)和1.5mlOPTI-MEM的混合物(每个10cm培养皿)。所述Lipofectamine2000由含有144μlLipofectamine2000和1.5mlOPTI-MEM的混合物构成(每个10cm培养皿)。将每种混合物转移到单独的15ml管中并在室温温育5分钟,然后将两种混合物合并,并在室温温育20分钟。然后从每个10cm培养皿吸取出生长培养基,并更换为10mlDMEM+10%FBS(无GPS)。最后,向每个10cm培养皿加入3mlDNA/Lipofectamine混合物并轻柔混合,然后将培养皿在37℃和5%CO2下温育过夜。
在第3天,将化合物在100%DMSO中稀释至最终1000X浓度,然后进行3倍连续稀释,获得总共5个试验浓度。每个10cm培养皿试验4种化合物。然后将1ul每种化合物稀释液移取到96孔深孔板中,然后在每个孔中加入500μlDMEM+0.5%FBS,以获得每种化合物的2X终浓度。通过简单的吸取(HEK293细胞在此时容易从培养皿上下来)将细胞重悬浮在10cm培养皿中,然后转移至50ml锥形管中,并通过以1000rpm离心5min沉淀细胞。然后将每个10cm培养皿的细胞沉淀物重悬浮在2.75mlDMEM+0.5%FBS中,并将100μl细胞悬液转移至96孔TC板的每个孔中。最后,将100μl在DMEM+0.5%FBS中稀释的2X化合物加入到含有细胞悬液的孔中,以获得1X终浓度。然后将板在37℃和5%CO2下温育3小时,随后将来自于每个孔的细胞悬液转移至12管PCR条板中。将PCR条板在移液器吸头盒中以1000rpm离心5分钟以沉淀细胞,然后通过移液除去培养基而不扰动细胞沉淀物。
为了准备用于Western印迹分析,将细胞沉淀物重悬浮在40ul1XLDS-PAGE样品缓冲液(Invitrogen,目录号NP0008)+2XHalt磷酸酶和蛋白酶抑制剂混合物(ThermoScientific,目录号1861284)中,然后用设置在5的microtip超声仪对每个样品超声8-10秒。向每个样品加入5ul10XNuPage样品还原试剂(含有50mMDTT),然后在PCR仪上在70℃热变性10min。将每个样品总共10μl上样到4-20%Tris-甘氨酸Criterion26孔凝胶(Biorad,目录号345-0034)的每条道中用于phospho-mu2印迹,并将每条道10μl样品上样到4-12%Bis-Tris(+MES缓冲液)NuPAGE26孔凝胶(Invitrogen,目录号WG1403BX10)中用于mu2印迹。作为对照,将2ngphospho-mu2或20ngmu2/Flag蛋白上样到每块凝胶的最后一个孔中。在SDS-PAGE后,使用iBlot将每块凝胶上的样品转移到PVDF膜,并将膜在TBST+5%奶粉中封闭1小时,然后用TBST清洗3次,每次5-10min。Criterion凝胶用TBST+5%BSA中的兔抗phospho-mu2抗体(1:5000;由NewEnglandPeptide生产并在Lexicon亲和纯化的兔多克隆抗体)探测,而NuPAGE凝胶用TBST+5%奶粉中的小鼠抗Flag抗体(1:500;Sigma,目录号F1804)探测,并将这些第一抗体在振荡器上在4℃温育过夜。
在第4天,将Western印迹用TBST清洗三次,每次5-10分钟,用TBST+5%奶粉中的抗兔抗体-HRP(1:2000;BioRad,目录号170-6515)或抗小鼠抗体-HRP(1:2000;Biorad,目录号170-6516)在RT下探测1小时,用TBST清洗3次,每次10分钟,并在Versadoc上用ECL试剂(GEHealthcare,目录号RPN2132)显色。最后,将相机设置成每30秒获取照片共10分钟,并为每个印迹保存没有饱和信号的最佳图像(当信号饱和时,条带将突显为红色)。对每个条带进行体积分析以获得密度值。通过首先对Mu2总表达水平进行归一化,然后与0%和100%对照进行比较,来计算每个样品的抑制百分率。然后使用Excel拟合软件计算IC50值。
5.6.39.体外数据
为本发明的各种化合物获得的体外数据提供在下面的表1中,其中“MW”意味着分子量,“P81测定法”是指上面描述的P81过滤板测定法,“CBA”是指上面描述的基于HEK281细胞的测定法,“--”意味着给定测定法的结果未获得或具有大于1.0μM的值,“*”意味着小于或等于1.0μM,“**”意味着小于或等于0.1μM的值,并且“***”意味着小于或等于0.01μM。
表1
上面引用的所有出版物(例如专利和专利申请)以其全部内容通过参考并入本文。

Claims (53)

1.一种抑制衔接物关联激酶1(AAK1)活性的方法,所述方法包括将AAK1与下式的化合物或其可药用盐进行接触:
其中:
R1是R1A或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个R1A取代;
每个R1A独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基、卤素或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个R1B取代;
每个R1B独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基或卤素;
每个R1C独立地是氢或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代;
R2是通过其碳原子之一连接到C5的任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个R2C取代;
每个R2C独立地是–OR2D、–N(R2D)2、-C(O)R2D、-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2、-N(R2D)C(O)OR2D、氰基、卤素或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素、羟基或R2D取代;
每个R2D独立地是氢或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素或羟基取代;并且
R3是氢或任选被一个或多个氰基、卤素或羟基取代的C1-6烷基。
2.一种治疗或控制由AAK1活性介导的疾病或障碍的方法,所述方法包括向需要的患者给药治疗有效量的下式的化合物或其可药用盐:
其中
R1是R1A或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个R1A取代;
每个R1A独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基、卤素或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个R1B取代;
每个R1B独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基或卤素;
每个R1C独立地是氢或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代;
R2是通过其碳原子之一连接到C5的任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个R2C取代;
每个R2C独立地是–OR2D、–N(R2D)2、-C(O)R2D、-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2、-N(R2D)C(O)OR2D、氰基、卤素或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素、羟基或R2D取代;
每个R2D独立地是氢或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素或羟基取代;并且
R3是氢或任选被一个或多个氰基、卤素或羟基取代的C1-6烷基。
3.权利要求2的方法,其中所述疾病或障碍是阿兹海默氏病、双相型障碍、疼痛、帕金森氏症或精神分裂症。
4.权利要求3的方法,其中所述疼痛是神经性疼痛。
5.权利要求4的方法,其中所述神经性疼痛是纤维肌痛或周围神经病(例如糖尿病性神经病)。
6.前述权利要求任一项的方法,其中R1是R1A
7.前述权利要求任一项的方法,其中R1是任选取代的C1-12烃基。
8.权利要求7的方法,其中R1是任选取代的苯基。
9.前述权利要求任一项的方法,其中R1是任选取代的2-12元杂烃基(例如2-8元杂烃基、2-6元杂烃基、2-6元杂烃基)。
10.权利要求9的方法,其中R1是任选取代的吡啶基、噻吩或咪唑。
11.前述权利要求任一项的方法,其中R1A是卤素。
12.前述权利要求任一项的方法,其中R1A是–OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C或-C(O)N(R1C)2
13.前述权利要求任一项的方法,其中R1A是-OR1C
14.前述权利要求任一项的方法,其中R1B是-N(R1C)2、-OR1C、卤素。
15.前述权利要求任一项的方法,其中R1C是氢。
16.前述权利要求任一项的方法,其中R1C是C1-12烃基(例如C1-6烃基,C1-4烃基例如甲基、乙基、丙基)。
17.前述权利要求任一项的方法,其中R2是C1-12烃基。
18.前述权利要求任一项的方法,其中R2C是-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2或-N(R2D)C(O)OR2D
19.前述权利要求任一项的方法,其中R2C是-C(O)R2D
20.前述权利要求任一项的方法,其中R2D是氢。
21.前述权利要求任一项的方法,其中R2D是C1-12烃基(例如C1-6烃基,C1-4烃基例如甲基、乙基、丙基)。
22.前述权利要求任一项的方法,其中R2D是包含至少一个氮原子的2-12元杂烃基。
23.前述权利要求任一项的方法,其中至少一个R2D是任选取代的C1-12烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素、羟基取代。
24.前述权利要求任一项的方法,其中R2D是包含至少一个氮原子的2-12元杂烃基。
25.前述权利要求任一项的方法,其中R3是氢。
26.权利要求1或2的方法,其中所述化合物是下式的化合物或其可药用盐:
其中:
A是环状C1-12烃基或4-7元杂环;
D是通过其碳原子之一连接到C5的环状C1-12烃基或4-7元杂环;
n是1-3;并且
m是0-3。
27.一种具有下式的化合物或其可药用盐:
其中:
A是环状C1-12烃基或4-7元杂环;
D是通过其碳原子之一连接到C5的环状C1-12烃基或4-7元杂环;
每个R1A独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基、卤素或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个R1B取代;
每个R1B独立地是-OR1C、–N(R1C)2、-C(O)R1C、-C(O)OR1C、-C(O)N(R1C)2、-N(R1C)C(O)OR1C、氰基或卤素;
每个R1C独立地是氢或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氰基、卤素或羟基取代;
每个R2C独立地是–OR2D、–N(R2D)2、-C(O)R2D、-C(O)OR2D、-C(O)N(R2D)2、-N(R2D)C(O)OR2D、氰基、卤素或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素、羟基或R2D取代;
每个R2D独立地是氢或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素或羟基取代;
n是1-3;并且
m是0-3。
28.权利要求27的化合物,其中D是哌嗪或吡咯烷。
29.权利要求27的化合物,其中n是1。
30.权利要求27的化合物,其中m是1。
31.权利要求27的化合物,其中m是2。
32.权利要求27的化合物,其中A是吡啶基、噻吩或咪唑。
33.权利要求27的化合物,其是下式的化合物:
其中X是CH或N。
34.权利要求33的化合物,其中X是N,并且m是1或2。
35.权利要求27的化合物,其是下式的化合物:
36.权利要求27的化合物,其是下式的化合物:
37.权利要求27的化合物,其是下式的化合物:
其中R2C是-C(O)R2D、-C(O)OR2D或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素、羟基或R2D取代。
38.权利要求27的化合物,其是下式的化合物:
其中R2C是-C(O)R2D、-C(O)OR2D或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素、羟基或R2D取代。
39.权利要求27的化合物,其是下式的化合物:
其中R2C是-C(O)R2D、-C(O)OR2D或任选取代的C1-12烃基或2-12元杂烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素、羟基或R2D取代。
40.权利要求39的化合物,其是下式的化合物:
41.权利要求40的化合物,其是下式的化合物:
42.权利要求41的化合物,其是下式的化合物:
43.权利要求27-42任一项的化合物,其中至少一个R1A是卤素。
44.权利要求27-42任一项的化合物,其中至少一个R1A是-OR1C
45.权利要求44的化合物,其中R1C是任选取代的C1-12烃基(例如C1-6烃基、C1-4烃基)。
46.权利要求27-42任一项的化合物,其中R2C是-C(O)OR2D或-C(O)R2D
47.权利要求46的化合物,其中至少一个R2D是任选取代的C1-12烃基,所述任选取代是用一个或多个氨基、氰基、卤素、羟基取代。
48.一种药物组合物,其包含权利要求27-47任一项的化合物和可药用赋形剂或稀释剂。
49.一种抑制AAK1活性的方法,所述方法包括将AAK1与权利要求27-47任一项的化合物进行接触。
50.一种治疗或控制由AAK1活性介导的疾病或障碍的方法,所述方法包括向需要的患者给药治疗有效量的权利要求27-47任一项的化合物或权利要求48的药物组合物。
51.权利要求50的方法,其中所述疾病或障碍是阿兹海默氏病、双相型障碍、疼痛、帕金森氏症或精神分裂症。
52.权利要求51的方法,其中所述疼痛是神经性疼痛。
53.权利要求52的方法,其中所述神经性疼痛是纤维肌痛或周围神经病(例如糖尿病性神经病)。
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