KR20160048807A

KR20160048807A - 과증식성 질병의 치료에서 사용하기 위한 mek 억제제 및 erk 억제제의 조합

Info

Publication number: KR20160048807A
Application number: KR1020167005716A
Authority: KR
Inventors: 마시아 벨빈; 존 모팻; 마크 머천트
Original assignee: 에프. 호프만-라 로슈 아게
Priority date: 2013-09-05
Filing date: 2014-09-04
Publication date: 2016-05-04
Also published as: CA2916619A1; PE20160529A1; ZA201600091B; AU2014317119B2; AU2014317119A1; AR097556A1; EP3041471A1; PH12016500270A1; TW201605477A; UA120423C2; SG11201600989VA; EA201690513A1; JP2019031517A; MX370417B; CN105517548B; EA034872B1; WO2015032840A1; JP2016531139A; HK1218072A1; IL243251B

Abstract

본 발명은 MEK 억제제(예컨대 GDC-0973 또는 GDC-0623) 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 및 ERK 억제제(예컨대 GDC-0994)를 포함하는 조합을 제공한다. 상기 조합은 과증식성 장애, 예컨대 암의 치료에 특히 유용하다.

Description

과증식성 질병의 치료에서 사용하기 위한 MEK 억제제 및 ERK 억제제의 조합{COMBINATION OF A MEK INHIBITOR AND AN ERK INHIBITOR FOR USE IN TREATMENT OF HYPERPROLIFERATIVE DISEASES}

본 발명은 일반적으로 과증식성 장애, 예컨대 암에 대한 활성을 갖는 MEK 억제제(MEKi) 및 ERK 억제제(ERKi)의 약학적 조합에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 포유동물의 치료를 위한 상기 화합물의 사용 방법에 관한 것이다.

RAS/RAF/MEK/ERK 경로는 가장 통상적으로 K-ras 암유전자의 돌연변이 및 BRAF의 돌연변이를 통해 30% 초과의 인간 암에서 활성화된다. 따라서, 경로는 치료적 표적 또는 암으로서 주요 관심을 불러일으킨다(문헌[P. J. Roberts and C.J. Der, Oncogene 2007 26:3291-310]). RAS를 직접 표적화하는 노력은 현재까지 성공적이지 않았으나, BRAF 및 미토겐-활성화된 세포외 신호-조절된 키나제(MEK) 억제제를 사용한 최근 임상 실험은 이들 다운스트림 RAS 효과기의 표적화가 경로에서 발암 돌연변이가 잠복한 암의 치료를 보장함을 제안하였다(문헌[K. T. Flaherty et al., Curr. Opin. Oncol. 2010 22:178-83]). 임상적 응답 및 항종양 활성이 특히 BRAF 돌연변이체 흑색종에서 BRAF 억제제에 대해 인상적일 수 있으나, 다수의 환자는 궁극적으로 임상적 저항성 및 진행성 질병을 발달시킨다(문헌[Flaherty, supra; D.B. Solit and N. Rosen, N. Engl. J. Med. 2011 364:772-4]). 전임상 연구는 RAF 동형단백질 사이의 스위칭(문헌[J. Villaneuva et al., Cancer Cell 2010 18:683-95]), RTK 또는 NRAS 신호화의 상향조절(문헌[R. Nazarian et al., Nature 2010 468:973-7]), COT 활성화를 통한 미토겐-활성화된 키나제(MAPK) 신호화의 재활성화(문헌[C.M. Johannessen et al., Nature 2010 468:968-72]) 또는 돌연변이를 활성화시키는 MEK 키나제(문헌[N. Wagle et al., J. Clin. Oncol. 2011 29:3085-96])를 비롯한, BRAF 억제제에 대해 획득한 저항성의 다중 메커니즘을 확인하였다. 유사하게 전임상 연구는 돌연변이체 BRAF의 증폭(문헌[R.B. Corcorran et al., Sci. Signal 2011 3:ra84]), STAT3 상향조절(문헌[B. Dai et al., Cancer Res. 2011 71:3658-68]) 또는 억제제의 MEK 키나제 활성에 대한 직접 연결을 가능하게 하는 MEK의 알로스테릭 포켓에서의 돌연변이(문헌[H. Wang et al., Cancer Res. 2011 71:5535-45]; 및 [C.M. Emery et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 2009 106:20411-6])를 비롯한, 세포가 MEK 억제에 대한 저항성을 획득하는 구별되는 메커니즘을 확인하였다. MEK 돌연변이는 MEK(상기 Emera의 문헌) 또는 BRAF(상기 Wagle의 문헌) 억제제로 치료받은 환자의 종양 샘플에 형성되었다.

RAF 및 MEK 억제제와 비교해 볼 때, 선택적 ERK1/2 억제제가 보고되고 현재 임상적 개발 중인 반면에, MEK의 다운스트림에 직접 작용하는 ERK1/2에 대한 소분자 억제제의 확인 및 개발은 뒤처졌다.

본 발명은 일반적으로 조합으로 투여되어 암 세포의 성장을 억제하는, 항암 활성을 갖는 MEK 억제제 및 ERK 억제제의 상승작용성 조합에 관한 것이다. 본 발명의 조합 및 방법은 과증식성 장애, 예컨대 암의 치료에 유용할 수 있다. 조성물은 포유동물에서 종양 성장을 억제할 수 있고 인간 암 환자의 치료에 유용할 수 있다.

한 양상에서, 본 발명은 조합된 제형으로서 또는 교대로서 치료적 조합을 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는 과증식성 장애의 치료 방법을 포함하되, 상기 치료적 조합은 치료적 유효량의 MEKi 화합물 및 치료적 유효량의 ERKi를 포함한다. 본 발명의 한 양상에서, ERK 억제제는 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온(화학식 Ia의 화합물, GDC-0994), 4-(3-((에틸다이메틸실릴)메틸)-[1,2,4]트라이아졸로[4,3-a]피리딘-7-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민(화학식 Ib의 화합물), (S)-4-(3-(2-(4-클로로페닐)-2-메톡시에틸)-[1,2,4]트라이아졸로[4,3-b]피리다진-7-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민(화학식 Ic의 화합물) 또는 (S)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-(3-(2-메틸부틸)-[1,2,3]트라이아졸로[1,5-a]피리딘-6-일)피리미딘-2-아민(화학식 Id의 화합물)으로부터 선택되고, MEK 억제제는 코비메티닙(화학식 II의 화합물, GDC-0973) 또는 5-((2-플루오로-4-요오도페닐)아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드(화학식 IIa의 화합물, GDC-0623)이다. 본 발명의 또다른 양상에서, MEK 억제제는 하기 화학식 II의 화합물이고, ERK 억제제는 GDC-0994(하기 화학식 Ia의 화합물)이다.

[화학식 Ia]

[화학식 II]

본 발명의 또다른 양상은 유효량의 화학식 Ia, Ib, Ic 또는 Id의 화합물 및 화학식 II 또는 IIa의 화합물을 이를 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, RAS/RAF/MEK/ERK 키나제에 의해 조절되는 과증식성 질병 또는 장애의 치료 방법을 제공한다. 화학식 Ia, Ib, Ic 또는 Id의 화합물 및 화학식 II 또는 IIa의 화합물은 투여를 위해 약학적 조성물로서 조합으로 공통-제형화될 수 있거나, 이들은 개별적으로 치료적 조합으로서 교대로(순차적으로) 투여될 수 있다.

본 발명의 또다른 양상은 유효량의 화학식 Ia, Ib, Ic 또는 Id의 화합물, 화학식 II(GDC-0973) 또는 IIa의 화합물, 및 또다른 화학치료제를 이를 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는 과증식성 장애의 치료 방법을 제공한다.

본 발명의 또다른 양상은 화학식 Ia, Ib, Ic 또는 Id의 화합물, 화학식 II(GDC-0973) 또는 IIa의 화합물, 용기 및 임의적으로 치료를 지시하는 패키지 부속품 또는 라벨을 포함하는 제조 물품 또는 키트를 포함한다.

본 발명의 또다른 양상은 a) MEKi 및 ERKi의 치료적 조합을 Kras 돌연변이를 갖는 생체외 종양 세포주에 투여하는 단계, 및 b) 상승효과 또는 비-상승효과를 측정하는 단계를 포함하는 암의 치료를 위한 조합에 사용될 화합물을 결정하는 방법을 포함한다.

도 1은 GDC-0994, 또는 화학식 Ib, Ic 또는 Id의 화합물; 및 GDC-0973을 개별적으로 투여하거나 실시예 6의 프로토콜을 사용하여 GDC-0994, 또는 화학식 Ib, Ic 또는 Id의 화합물을 GDC-0973과 조합으로 투여시 비-소세포 폐암(NSCLC) 세포의 세포 증식을 보여준다. 세포를 3-배 희석 시리즈를 사용하여 지시된 최대 약물 농도를 사용하여 항온처리하였다. 세포 생존능을 셀티터-글로(CellTiter-Glo, 등록상표) 분석(CTG)을 사용하여 결정하였다.
도 2는 GDC-0994, 또는 화학식 Ib, Ic 또는 Id의 화합물; 및 GDC-0973의 투여량을 개별적으로 투여하거나 GDC-0973과 조합된 GDC-0994, 또는 화학식 Ib, Ic 또는 Id의 화합물의 투여량을 투여시 A549 비-소세포 폐암(NSCLC) 세포의 세포 증식 및 세포 사멸의 정도를 보여준다. 세포 증식을 BrdU 분석을 사용하여 결정하였다. 세포 사멸을 nucELISA 분석을 사용하여 측정하였다.
도 3은 MEK 및 ERK 억제제의 조합을 단독으로 또는 조합으로 사용한 치료의 약역학적 결과를 보여준다. ERK에 의한 RSK의 인산화가 억제된다. 세포 주기 진행은 사이클린 D1의 감소 및 p27의 증가에 의해 입증된 바와 같이 상당히 감소된다. 증가된 세포사(세포 사멸)는 분할된 PARP의 증가된 수준에 의해 입증된다.
도 4는 384-웰 플레이트에서 지시된 농도의 각각의 약물로 세포를 48시간 동안 처리함으로써 결정된 비동시적 기하급수적으로-성장하는 A549 세포의 DNA의 억제를 묘사하는 블리스 과잉(Bliss excess) 표면이다. 처리의 최종 2시간 동안, 세포를 1 uM 5-에틴일-2'-데옥시우리딘(EdU)으로 처리하여 새로이 합성된 DNA를 라벨링하였다. 이어서, 세포를 고정하고 30분 동안 2% 파라폼알데하이드 및 0.02% 트리톤(Triton) X-100의 첨가로 성장 배지에 대해 투과성이 되게 한 후에, 제조업자(미국 오리건주 유진 소재의 라이프 테크놀로지스(Life Technologies))의 설명에 따라 혼입된 EdU를 알렉사-플루오르(Alexa-Fluor) 635 아지드로 형광 라벨링하고, 훽스트(Hoechst) 33342로 DNA를 대비염색시켰다.
형광 현미경 이미지를 펄킨 엘머 오페라 고-콘텐츠 이미지화 시스템(Perkin Elmer Opera high-content imaging system)을 사용하여 획득하였다. 세포의 총 개수에 비례하는 EdU-라벨링된 세포의 분획을 아카펠라(Acapella) 이미지-분석 소프트웨어를 사용하여 결정하였다.
약물 치료 사이의 가능한 상호작용을 결정하기 위해, 블리스 가성성(F_a _+b=F_a+F_b-F_a*F_b, 이때 F_a 및 F_b는 제제 a 및 b의 단편적 효과임)을 근거로 2개의 상호작용하지 않는 제제에 대한 각각의 농도 쌍에 대한 관찰된 응답을 예상된 응답과 비교하였다. 관찰된 단편적 효과 및 예상된 단편적 효과 사이의 차이는 블리스 과잉으로 지칭된다.
도 5는 NSCLC 세포를 MEKi(GDC-0973) 및 ERKi(GDC-0994) 억제제의 조합으로 처리함을 보여준다. 시험된 19/29 세포주는 ERK+MEK를 사용한 일부 조합 효과를 보여준다. 모든 비-Q61H Kras 돌연변이주는 조합에 대한 일부 민감성을 보여준다. 패널에서 2개의 Braf 돌연변이주에서 조합 효과 없음을 관찰하였다.
도 6은 MCT 비히클(0.5% 메틸셀룰로스/0.2% 트윈(Tween) 80), 60 mg/kg 화학식 Ia의 화합물(GDC-0994) 및 5 mg/kg 화학식 II의 화합물(GDC-0973)로 매일 투여되거나(도 6a); 60 mg/kg 화학식 Ia의 화합물(GDC-0994)로 매일 및 15 mg/kg 화학식 II의 화합물(GDC-0973)로 3일 마다(Q3D, 즉, 간헐적 투여) 투여된(도 6b), NCI-H2122 비-소세포 폐암(NSCLC) 종양 이종이식된 타코닉(Taconic) 암컷 nu/nu(누드) 마우스에서 시간이 지남에 따른 평균 종양 부피 변화의 플롯을 보여준다. 마우스는 경구 위관 영양법에 의해 투여받았다. 약역학적 마커는 H2122 KRAS NSCLC 제노그래프 분석6에서 사이클린 D1 및 Ki67 의 수준의 감소에 의해 입증된 감소된 세포 성장(도 6c 및 6d) 및 분할된 카스파제 3의 증가에 의해 입증된 증가된 세포 사멸(도 6e)를 입증한다.
도 7은 MCT 비히클(0.5% 메틸셀룰로스/0.2% 트윈 80), 100 mg/kg GDC-0994 및 5 mg/kg GDC-097으로 매일 투여되거나(도 7a); 100 mg/kg GDC-0994 및 4 mg/kg GDC-0973으로 매일 투여되거나(도 7b); 100 mg/kg GDC-0994로 매일 및 15 mg/kg GDC-0973으로 3일 마다(Q3D, 즉, 간헐적 투여) 투여된(도 7c) NCI-H2122 비-소세포 폐암(NSCLC) 종양 이종이식된 타코닉 암컷 nu/nu(누드) 마우스에서 시간이 지남에 따른 평균 종양 부피 변화의 플롯을 보여준다. 마우스는 경구 위관 영양법에 의해 투여받았다.
도 8은 MCT 비히클 (0.5% 메틸셀룰로스/0.2% 트윈 80), 60 mg/kg GDC-0994 및 5 mg/kg GDC-0973으로 매일 투여되거나(도 8a); 60 mg/kg GDC-0994로 매일 및 15 mg/kg GDC-0973으로 3일 마다(Q3D, 즉, 간헐적 투여) 투여된(도 8b) A549 비-소세포 폐암(NSCLC) 종양 이종이식된 타코닉 암컷 nu/nu(누드) 마우스에서 시간이 지남에 따른 평균 종양 부피 변화의 플롯을 보여준다. 마우스는 경구 위관 영양법에 의해 투여받았다.
도 9는 종양 성장 억제에 따라 표현된 조합 효험 연구에서 HCT 116 대장암 세포주에서 GDC-0994 및 GDC-0973의 다양한 투여량의 효험의 요약을 보여준다. 회색으로 나타낸 세포는 내성 양생법에 대한 최상의 효험을 지시한다. 흑색으로 나타낸 세포는 용인되지 않았다. 매일(QD) 경구 위관 영양법(PO)으로 투여되었다.
도 10은 췌장 도관 선암종(PDAC)의 KRAS 돌연변이체 GEM 모델에서 코비메티닙 및 GDC-0994의 강한 항종양 활성을 묘사한다.
종양-함유 Kras 돌연변이체 GEM 모델을 비히클, GDC-0973(5 mg/kg, PO, QD), GDC-0994(60 mg/kg, PO, QD) 또는 GDC-0973 및 GDC-0994의 조합으로 처리하였다. 도 10a는 비히클(흑색, n=8), 코비메티닙(녹색, n=8), GDC-0994(청색, n=8) 및 조합(적색, n=9)으로 처리한지 7일 후 PDAC 모델로서 초음파 이미지화를 기준으로 베이스라인으로부터 종양 부피 변화율을 묘사하는 폭포형 플롯(waterfall plot)을 나타낸다. 도 10b는 비히클(흑색, n=13), 젬시타빈(주황색, n=10), 화학식 IIb의 화합물(녹색, n=9), GDC-0994 청색, n=8) 및 GDC-0994 및 GDC-0973의 조합(적색, n=13)을 사용한 처리 집단의 PDAC 모델로부터의 전체 생존의 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 플롯을 나타낸다. 조합 처리는 비히클(**p<0.0001) 및 젬시타빈(*p=0.0159)(로그-랭크)에 비해 유의하였다.
도 11a는 증가된 MAPK 경로 억제에 기인한 GDC-0973, GDC-0994, 및 GDC-0994 및 GDC-0973의 조합의 존재하에 KRAS^G12D, p16/19^FL ^/ ^FL PDX-CRE-유래된 세포주의 생존능을 보여준다. 도 11b는 GDC-0973, GDC-0994, 및 GDC-0994 및 GDC-0973의 조합의 존재하에 KRAS^G12D, p16/19^FL ^/ ^FL PDX-CRE-유래된 세포주에서 PD 마커를 보여준다.
도 12는 개발 중인 GDC-0994 및 다중 MEK 억제제의 조합을 사용하여 관찰된 세포 성장 활성을 보여준다.
도 13은 DNA 합성의 상승작용성 억제의 평가를 보여준다. 기하급수적으로 성장하는 HCT116(도 13a, 13b, 13c 및 13d) 및 A549(도 13e, 13f, 13g 및 13h) 세포를 지시된 농도의 GDC-0994 및 GDC-0973으로 47시간 동안 처리한 후에, 5-에틴일-2'-데옥시우리딘(EdU)을 60분 동안 첨가하고, 이어서 파라폼알데하이드 고정을 수행하고 EdU-함유 DNA를 알렉사 플루오르 647 아지드(미국 위스콘신주 매디슨 소재의 라이프 테크놀로지스)로 라벨링하였다. 훽스트 33542-라벨링된 핵 및 EdU-라벨링된 핵의 분획의 총 개수를 자동화된 형광 현미경 관찰법, 및 펄킨 엘머 오페라 기구 및 아카펠라 소프트웨어를 사용하는 이미지 분석에 의해 결정하였다.
도 13a 및 13e는 이소볼로그램(Isobologram) 플롯을 보여준다. 선은 2개의 약물의 상이한 조합에 의해 수득된 DNA 합성의 동등한 억제의 지점을 연결한다. 화합물 조합이 뢰베(Loewe) 모델(문헌[N.Geary, Understanding synergy. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2012. doi:10.1152/ajpendo.00308.2012])에 따른 단순한 가성성을 나타내는 경우 굵은 점선으로 된 대각선은 예상된 50% 억제 이소볼(isobole)을 보여준다.
도 13b, 13c, 13d, 13f, 13g 및 13h는 투여량 매트릭스 상승효과 분석을 보여준다. 도 13b 및 13f는 DMSO-처리된 대조군과 비교한 EdU-양성 세포의 분획에서 관찰된 변화율을 보여준다; 도 13c 및 13g는 단일 제제 투여량 응답 곡선에 적용된 뢰베 가성성 모델을 기초로 한 약물 조합의 예상된 효과를 보여준다; 도 13d 및 13h는 관찰된 데이터 및 예상된 첨가제 효과 사이의 차이를 보여준다. 0 미만의 수는 첨가제 약물에 대해 예상치 보다 큰 DNA 합성의 억제를 지시한다.
데이터를 진데이터 스크리너(Genedata Screener, 바젤 소재의 진데이터 아게(Genedata AG))의 화합물 상승효과 확대 모듈을 사용하여 분석하였다.

정의

명세서 및 청구상에 사용시 단어 "포함하다", "포함하는", "수반하다" 및 "수반하는"은 언급된 특징, 정수, 구성성분 또는 단계의 존재를 명시하는 것으로 의도되나, 이들은 하나 이상의 다른 특징, 정수, 구성성분, 단계 또는 이들의 군의 존재 또는 첨가를 불가능하게 하지는 않는다.

용어 "치료하다" 및 "치료"는 치료적 치료를 의미하되, 그 목적은 바람직하지 않은 생리학적 변화 또는 장애, 예컨대 암의 성장, 발달 또는 확산을 예방하거나 속도를 늦추는(줄이는) 것이다. 본 발명의 목적을 위해, 유익하거나 바람직한 임상적 결과는 비제한적으로 검출가능성에 관계없이 증상의 완화, 질병의 정도의 축소, 질병의 안정화된 상태(즉, 악화되지 않음), 질병 진행의 지연 또는 둔화, 질병 상태의 개선 또는 경감, 및 차도를 포함한다. 또한, "치료"는 치료를 받지 않은 경우 예상된 생존과 비교하여 연장된 생존을 의미한다. 치료가 필요한 대상은 질환 또는 장애를 이미 가진 대상, 예를 들어 암 환자를 포함한다.

"억제"하는 것은 기준과 비교하여 활성, 기능 및/또는 양을 감소시키거나 줄이는 것이다.

어구 "치료적 유효량"은 (i) 특정 질병, 질환 또는 장애를 치료하는 양, (ii) 특정 질병, 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 약화시키거나 개선하거나 제거하는 양, 또는 (iii) 본원에 기재된 특정 질병, 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 개시를 예방하거나 지연시키는 양을 의미한다. 암의 경우, 치료적 유효량은 암 세포의 수를 감소시킬 수 있고/있거나; 종양 크기를 감소시킬 수 있고/있거나; 말초 장기로의 암 세포 침윤을 억제(예를 들어 어느 정도 감속시키고 바람직하게 정지)할 수 있고/있거나; 종양 전이를 억제(예를 들어 어느 정도 감속시키고 바람직하게 정지)할 수 있고/있거나; 종양 성장을 어느 정도 억제할 수 있고/있거나; 암에 관련된 증상 중 하나 이상을 어느 정도 완화시킬 수 있다. 조합이 성장을 예방하고/하거나 존재하는 암 세포를 사멸시킬 수 있는 범위 내에서, 이는 세포 분열 억제성이고/이거나 세포 독성일 수 있다. 암 요법에 대해, 효험은 예를 들어 질병 진행 시간(TTP)을 재고/재거나 응답 속도(RR)를 결정함으로써 측정될 수 있다.

제시된 과증식성 장애에 대한 개선된 치료를 제공하는 것 이외에, 본 발명의 특정 조합의 투여는 상이한 치료를 받은 동일한 환자가 겪을 삶의 질에 비교하여 환자의 삶의 질을 개선할 수 있다. 예를 들어, 환자에게 조합을 투여하는 것은 요법으로서 개별적 제제 중 단지 하나만을 제공받는 경우 동일한 환자가 경험할 삶의 질과 비교하여 개선된 삶의 질을 제공할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 조합을 사용하는 조합된 용법은 필요한 치료제의 투여량을 감소시킬 수 있다. 또한, 조합 요법은 화학치료제 사용의 필요 및 고-투여량 화학치료제에 관련된 부작용(예를 들어, 구역질, 구토, 탈모증, 발진, 감소된 식욕, 체중 감소 등)을 감소시키거나 제거할 수 있다. 또한, 조합은 감소된 종양 부하 및 관련된 부작용, 예컨대 통증, 장기 기능장애, 체중 감소 등을 야기할 수 있다. 따라서, 본 발명의 한 양상은 과증식성 장애에 대해 본원에 기재된 제제로 치료받은 환자의 삶의 질을 개선하기 위한 치료적 용도를 위한 조합을 제공한다.

용어 "암" 및 "암성"은 전형적으로 조절되지 않은 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물에서의 생리학적 질환을 의미하거나 기재한다. "종양"은 하나 이상의 암성 세포를 포함한다. 암의 예는 비제한적으로 암종, 림프종, 아세포종, 육종, 및 백혈병 또는 악성 림프종을 포함한다. 이러한 암의 보다 특정한 예는 편평 세포암(예를 들어 편평상피 세포암), 폐암(소세포 폐암, 비-소세포 폐암("NSCLC"), 폐의 선암종 및 폐의 편평 암종 포함), 복막암, 간세포암, 위암(위장암 포함), 췌장암, 교아 세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 직장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 침샘 암종, 신장암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 간 암종, 항문 암종, 음경 암종, 뿐만 아니라 두경부암을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 위암은 위의 임의의 부분에서 발생할 수 있고 위 및 다른 장기(특히 식도, 폐, 림프절 및 간) 도처에 확산될 수 있다.

용어 "포유동물"은 비제한적으로 인간, 마우스, 래트, 기니피그, 원숭이, 개, 고양이, 말, 소, 돼지, 양 및 가금류를 포함한다. 용어 환자는 포유동물을 의미하고, 한 실시양태에서, 환자는 인간 남성 또는 인간 여성이다.

본원에 사용된 용어 "상승작용성"은 2개 이상의 단일 제제의 가성적 효과보다 효과적인 치료적 조합을 의미한다. 상승작용성 상호작용의 결정은 당분야에 공지된 분석으로부터 수득된 결과를 기초로 할 수 있다. 이들 분석의 결과는 초우(Chou) 및 탈라레이(Talalay) 조합 방법, 및 조합 지수를 수득하기 위한 CalcuSyn 소프트웨어를 사용하는 투여량-효과 분석(Dose-Effect Analysis)를 사용하여 분석될 수 있다(문헌[Chou and Talalay, Adv. Enzyme Regul.1984 22:27-55]). 본원에 제공된 조합은 항암제 사이의 상승작용, 가성작용 및 길항작용의 정량화를 위한 표준 프로그램을 활용하여 분석될 수 있다. 프로그램의 예는 문헌[Chou and Talalay, "New Avenues in Developmental Cancer Chemotherapy," Academic Press, 1987, Chapter 2]에 기재되어 있다. 0.8 미만의 조합 지수 값은 상승효과를 지시하고, 1.2 초과의 값은 길항작용을 지시하고, 0.8 내지 1.2의 값은 가성효과를 지시한다. 조합 요법은 "상승효과"를 제공할 수 있고 "상승작용성", 즉, 활성 성분을 함께 사용시 수득된 효과가 화합물을 개별적으로 사용시 결과인 효과의 합보다 크다는 것을 입증할 수 있다. 상승효과는 활성 성분이 (1) 공동-제형화되고 단위 투여량 제형으로 조합으로 동시에 투여되거나 전달되는 경우; (2) 개별적 제형으로서 교대로 또는 병렬적으로 전달되는 경우; 또는 일부 다른 양생법에 의해 전달되는 경우 획득할 수 있다. 교대 요법으로 전달시, 상승효과는 화합물이 예를 들어 개별적 주사기로 상이한 주사에 의해 순차적으로 투여되거나 전달되는 경우 획득될 수 있다. 일반적으로, 교대 요법 동안, 각각의 활성 성분의 효과적인 투여량은 순차적으로, 즉 연속적으로 투여되는 반면에, 조합 요법에서는, 2개 이상의 활성 성분의 효과적인 투여량이 함께 투여된다. 조합 효과는 블리스(BLISS) 독립 모델 및 최고의 단일 제제(the highest single agent, HSA) 모델 둘다를 사용하여 평가되었다(문헌[Lehar et al. 2007, Molecular Systems Biology 3:80]). 단일 제제의 강화작용의 블리스 스코어 정량화도 및 양성 블리스 스코어(0 초과)는 단순한 가성성보다 큰 것을 의미한다. 250 초과의 누적된 양성 블리스 스코어는 시험된 농도 범위 내에서 관찰된 강한 상승효과로 생각된다. HAS 스코어(0 초과)는 상응하는 농도에서의 단일 제제 응답의 최대보다 큰 조합 효과를 의미한다.

TGI의 측정 방법은 당분야에 공지되어 있다. 한 예시적 방법에서, 평균 종양 부피는 치료 전후 환자로부터 결정되고 비교된다. 종양 부피는 당분야의 임의의 방법, 예를 들어 울트라칼(UltraCal) IV 캘리퍼(프레드 브이. 포울러 컴패니(Fred V. Fowler Company))를 사용하거나 PET(양전자 방출 단층 촬영법)에 의해서나 일부 다른 방법에 의해 2개의 치수(길이 및 너비)로 측정될 수 있다. 수학식 "종양 부피 (mm³) = (길이 x 너비²) x 0.5"이 사용될 수 있다. 다중 기간에 걸친 종양 부피 측정은 혼합된-모델링 선형 혼합된 효과(Linear Mixed Effects: LME) 접근법(Pinheiro et al. 2009)을 사용하여 수행될 수 있다. 이들 접근법은 모든 반복된 측정(및 다수의 환자)을 다룬다. 입방 회귀 스플라인(cubic regression spline)이 비선형 프로필을 각각의 투여량 수준에서의 시간 경과의 종양 부피의 대해 정합시키는데 사용될 수 있다. 이어서, 이들 비선형 프로필은 혼합된 모델 내에서 투여량에 대해 관계될 수 있다. 비히클의 백분율로서의 종양 성장 억제는 하기 수학식을 사용하여, 비히클과 비교된 1일 당 정합된 곡선 아래의 퍼센트 면적(AUC)으로 계산될 수 있다:

이러한 화학식을 사용했을 때, 100%의 TGI 값은 종양 정체를 지시하고, 약 1% 초과 내지 약 100% 미만은 종양 성장 억제를 지시하고, 약 100% 초과는 종양 퇴행을 지시한다.

MEK 억제제

[화학식 II]

[화학식 IIa]

본 발명은 MEK 억제제, 및 HER3 및 EGFR 억제제를 사용한 조합 요법에서 이들의 용도에 관한 것이다. MAK 억제제는 널리 검토되었다(문헌[S. Price, Putative Allosteric MEK1 and MEK 2 inhibitors, Expert Opin. Ther. Patents, 2008 18(6):603]; [J.I. Trujillo, MEK Inhibitors: a patent review 2008-2010 Expert Opin. Ther. Patents 2011 21(7):1045]). 바람직하게 MEK 억제제는 GDC-0973(코비메티닙), GDC-0623, AZD6244(셀루메티닙), AZD8330, BAY 86-9766(레파메티닙), GSK-1120212(트라메티닙), ARRY-162, MSC1936369, MK162, TAK733 및 PD-325901로부터 선택될 수 있다. 가장 바람직하게 MEK 억제제는 GDC-0973(코비메티닙) 또는 GDC-0623이다.

코비메티닙(GDC-0973, 본원에서 "화합물 II"로도 지칭됨)은 경구적으로 이용가능하고 강하고 매우 선택적인 MEK1 및 MEK2의 억제제, RAS/RAF 경로의 주요 구성성분이고, 다중 인간 암 모델에서 단일 제제 항종양 활성을 갖는다. GDC-0973은 화학명 [3,4-다이플루오로-2-[(2-플루오로-4-요오도페닐)아미노]페닐][3-하이드록시-3-[(2S)-2-피페리딘일]-1-아제티딘일]메탄온을 갖는다. 코비메티닙은 CAS 등록 번호 934660-93-2를 갖는다.

GDC-0623(본원에서 화합물 IIa로도 지칭됨)은 경구적으로 이용가능하고 강하고 매우 선택적인 MEK1 및 MEK2의 억제제, RAS/RAF 경로의 주요 구성성분이고, 다중 인간 암 모델에서 단일 제제 항종양 활성을 갖는다. GDC-0623은 화학명 5-[(2-플루오로-4-요오도페닐)아미노]-N-(2-하이드록시에톡시)-이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드를 갖고, CAS 등록 번호 1168091-68-6을 갖는다.

ERK 억제제

Erk 억제제는 암 및 과증식성 질병을 치료하는데 사용된다. 화합물 Ia, Ib, Ic 또는 Id는 ERK1 및 ERK2 인산화를 억제하고 다중 인간 암 모델에서 단일 제제 항종양 활성을 갖는다. ERK는 MEK1 및 MEK2에 대해 유일하게 공지된 기질이다. ERK의 인산화는 핵으로의 전좌를 야기하되, 여기서 이는 핵 표적을 인산화시키고 다양한 세포 과정, 예컨대 증식, 분화 및 세포 주기 진행을 조절한다(문헌[J. L. Yap et al., Chem. Med. Chem. 2011 6:38]).

ERK 억제제는 검토되었다(문헌[K. Burkhard et al., Curr. Top. Med. Chem. 2009 9(8):678-689]). 또한, 피라졸 및 인다졸 ERK 억제제가 개시되었다(WO 2012/094313(D. Fairfax et al.); WO 2012/087772(G.W. Shipps, Jr. et al); WO 2012/036997(G.W. Shipps, Jr. et al.) 및 WO 2012/030685(Y. Deng et al.); 문헌[A. M. Aronov et al., J. Med. Chem. 2009 52:6362-68]).

[화학식 Ia]

[화학식 Ib]

[화학식 Ic]

[화학식 Id]

초기에 개발한 질병의 역사를 바꾼 표적화된 치료법의 발견을 야기하는 최근의 인간 종양 자료 수집 및 소분자 및 대분자 약물 설계에서의 진보에도 불구하고, 종양학에서의 표적화된 제제의 전체적 성공률은 여전히 낮고, 이는 불필요한 다중 경로 및 많은 분자 경로들 간의 크로스-토크(cross-talk)를 포함하는, 표적이 작용하는 복합 경로뿐만 아니라 많은 암의 이질성에 의해 부분적으로 설명될 수 있다.

이러한 문제점에 접근하는 한 방법은 표적화된 제제의 조합 또는 표적화된 제제 및 화학치료제의 조합으로 종양을 처리하는 것이다. 이는 독립적으로 및 함께 많은 종양에서 증식을 추진하는 다중 경로를 표적화하는 접근법 시도이고, 일반적으로 많은 게놈의 사건에 의해 종양에서 활성화된다. 이들 접근법은 이중 유익성을 갖는다: 다중 발암 사건에 의해 추진된 종양에서의 초기 응답 속도를 증가시키는 잠재력을 가질 뿐만 아니라, 각각의 제제를 단독으로 사용하여 발생할 수 있는 획득된 저항성을 감소시키는 잠재력을 갖는다. 이는 활성화 보상 경로의 억제 때문이고, 이는 각각의 제제 단독에 의해 확인된 활성에 대한 조합의 활성을 연장시킬 수 있다.

네이브 K-ras 돌연변이체 세포를 MEK 및 ERK 억제제를 사용하여 조합 치료하는 것은 내성 세포의 결과를 억제하는 반면에, 획득된 MEK 억제제 저항성을 사용한 ERK 억제제의 처리는 효과적으로 증식을 차단한다(문헌[G Hatzivassiliou et al., Mol. Cancer Ther. 2012 11:1143-1154]). 본원에서, 동일한 경로에서 2개의 키나제의 동시적 억제는 세포의 개선된 억제를 야기한다는 것을 입증하였다.

GDC-0994 및 GDC-0973의 조합은 성장 A549 KRAS NSCLC 세포의 상승작용성 억제를 야기하였다(도 5). MEKi 및 ERKi의 조합은 세포 주기의 약화(감소된 사이클린 D1 및 증가된 p27 수준) 및 세포 사멸의 증가(증가된 분할된 PARP 및 nucELISA 분석)를 야기하였다(도 2 및 3). 2개의 제제의 공동 투여는 감소된 DNA 합성에 의해 측정된 세포 증식의 상승제 감소를 야기하는 상승효과를 야기하였다(도 4). 또한, 억제는 H2122 NSCLC(세포 증식의 상당한 감소 및 세포 사멸의 증가를 보여줌)(도 6c 내지 6e) 및 A549 NSCLC 세포(도 6a, 6b, 7a, 7b 및 7c)를 사용한 제노그래프에서 생체내 관찰되었다. 또한, 상승효과는 KRAS 돌연변이체 췌장 도관 선암종을 사용하는 GEMM 모델에서 입증되되(도 10a 및 10b), 동일한 약역학적 마커가 분명하였다(도 11a 및 11b).

상승효과는 GDC-0994와 공동 투여된 모든 MEKi 억제제(도 12) 및 GDC-0973과 공동 투여된 모든 ERKi(도 1)를 사용하여 관찰되었다.

본 발명의 한 양상은 MEK 억제제 및 ERK 억제제 , 또는 둘 중 하나의 약학적으로 허용되는 염의 투여를 포함하는 조합 요법을 사용하여 이를 필요로 하는 환자에서의 암의 치료 방법을 제공한다.

한 실시양태에서, 조합 요법의 MEK 억제제는 GDC-0973 또는 GDC-0623이다. GDC-0973 및 GDC-0623은 MEK 1/2의 강하고 매우 선택적인 소분자 알로스테릭 억제제, ERK 1/2를 활성화시키는 키나제이다. MEK 1/2의 억제는 MEK/ERK 경로에서 이상 신호화에 의존적인 종양의 성장을 제어하는 전략이다. 전임상 연구는 둘다의 억제제가 이러한 모델에서 보다 활성을 보이는 GDC-0973을 사용한, 많은 종양 유형에 관련된 활성화 B-RAF 돌연변이를 함유하는 종양 세포의 성장을 억제에서 효과적임을 입증하였다. 전임상 연구는 이러한 모델에서 보다 활성을 보이는 GDC-0623을 사용하여 많은 종양 유형에 관련된 활성화 Ras 돌연변이를 가졌다. MEK 억제제의 투여는 ERK 억제제와 조합된다. 구체적 실시양태에서, ERK 억제제는 화학식 Ia, Ib, Ic 또는 Id의 화합물로부터 선택된다.

또한, 조합 요법은 MEK 억제와 함께 관찰된 RAS/RAF/MEK/ERK 경로의 활성화에 기인하는 고유하거나 획득된 저항성을 예방하거나 지연하는 역할 및 RAS 경로 활성화를 통해 매개된 고유하거나 획득된 저항성을 예방하거나 지연하는 역할을 할 수 있다.

조합은 종양, 암 및 신생물성 조직을 비롯한 과증식성 질병 또는 장애와 함께 전암성 및 비-신생물성 또는 비-악성 과증식성 장애의 치료를 위한 화학치료제와 조합으로 사용될 수 있다.

특정 실시양태에서, 조합은 조합 요법으로서 투여 양생법에서 항-과증식성 특성을 갖거나 과증식성 장애의 치료에 유용한 또다른 화합물과 조합된다. 투여 양생법의 추가적 화합물은 바람직하게 조합에 대한 보상 활성을 갖고, 서로 악영향을 주지 않는다. 이러한 화합물은 의도된 목적을 위해 효과적인 양으로 투여될 수 있다.

한 실시양태에서, 치료적 조합은 투여 양생법에 의해 투여되되, 치료적 유효량의 MEK 억제제 화합물(예컨대 GDC-0973 또는 GDC-0623) 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 3주 동안 1일 1회 또는 3주 동안 3일 마다 투여되고, 치료적 유효량의 화학식 Ia, Ib, Ic 또는 Id의 화합물은 3주 동안 1일 1회 투여된다.

조합 요법은 동시적 또는 순차적 양생법으로 투여될 수 있다. 순차적으로 투여되는 경우, 조합은 2개 이상의 투여로 투여될 수 있다. 조합 투여는 개별 제형화를 사용하는 공동 투여 및 각각의 순서로 연이은 투여를 포함하되, 바람직하게 둘다의(또는 모든) 활성 제제가 동시에 이들의 생물학적 활성을 행사하는 동안의 기간이 존재한다.

본 발명의 한 실시양태에서, 과증식성 장애는 암이다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, 암은 돌연변이체 KRAS를 발현시킨다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, MEKi는 GDC-0973(화학식 II의 화합물)이다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, MEKi는 GDC-0623(화학식 IIa의 화합물)이다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, MEKi는 GSK-1120212(트라메티닙)이다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, MEKi는 AZD-6244(셀루메티닙)이다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, MEKi는 BAY 86-9766(레파메티닙)이다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, ERKi는 화학식 Ia의 화합물이다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, ERKi는 화학식 Ib의 화합물이다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, ERKi는 화학식 Ic의 화합물이다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, ERKi는 화학식 Id의 화합물이다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, MEKi 및 ERKi의 조합으로 암을 치료하는 방법이 제공되되, 상기 암 또는 과증식성 장애는 선종, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 상피 암종, 여포상 암종, 요생식로암, 교아 세포종, 호지킨병(Hodgkin's disease), 두경부암, 간암, 간질극 세포종, 신장암, 대세포 암종, 백혈병, 폐 선암종, 폐암, 림프성 장애, 흑색종 및 비-흑색종 피부암, 골수 이형성 증후군, 신경아 세포종, 비-호지킨 림프종, 난소암, 유두 암종, 췌장암, 전립선암, 직장암, 육종, 소세포 암종, 고환암, 기형 암종, 갑상선암 및 미분화 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, MEKi 및 ERKi의 조합으로 암을 치료하는 방법이 제공되되, 상기 암은 대장암, 폐암, 중피종, 유방암, 췌장암, 신경 교종, 위암, 신장암, 난소암, 자궁내막암, 방광암 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, MEKi(화합물 II) 및 ERKi(화합물 Ia)의 조합으로 암을 치료하는 방법이 제공되되, 상기 암 또는 과증식성 장애는 선종, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 상피 암종, 여포상 암종, 요생식로암, 교아 세포종, 호지킨병, 두경부암, 간암, 간질극 세포종, 신장암, 대세포 암종, 백혈병, 폐 선암종, 폐암, 림프성 장애, 흑색종 및 비-흑색종 피부암, 골수 이형성 증후군, 신경아 세포종, 비-호지킨 림프종, 난소암, 유두 암종, 췌장암, 전립선암, 직장암, 육종, 소세포 암종, 고환암, 기형 암종, 갑상선암 및 미분화 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, MEKi(화합물 II) 및 ERKi(화합물 Ia)의 조합으로 암을 치료하는 방법이 제공되되, 상기 암은 대장암, 폐암, 중피종, 유방암, 췌장암, 신경 교종, 위암, 신장암, 난소암, 자궁내막암, 방광암 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, MEKi(화합물 IIa) 및 ERKi(화합물 Ia)의 조합으로 암을 치료하는 방법이 제공되되, 상기 암 또는 과증식성 장애는 선종, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 상피 암종, 여포상 암종, 요생식로암, 교아 세포종, 호지킨병, 두경부암, 간암, 간질극 세포종, 신장암, 대세포 암종, 백혈병, 폐 선암종, 폐암, 림프성 장애, 흑색종 및 비-흑색종 피부암, 골수 이형성 증후군, 신경아 세포종, 비-호지킨 림프종, 난소암, 유두 암종, 췌장암, 전립선암, 직장암, 육종, 소세포 암종, 고환암, 기형 암종, 갑상선암 및 미분화 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, MEKi(화합물 IIa) 및 ERKi(화합물 Ia)의 조합으로 암을 치료하는 방법이 제공되되, 상기 대장암, 폐암, 중피종, 유방암, 췌장암, 신경 교종, 위암, 신장암, 난소암, 자궁내막암, 방광암 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

또다른 실시양태에서, 화합물 II 또는 IIa 및 화합물 Ia의 조합을 동시 투여하여 암을 치료하는 방법이 제공된다.

또다른 실시양태에서, 화합물 II 또는 IIa 및 화합물 Ia의 조합을 순차적으로 투여하여 암을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, GDC-0973(화합물 II) 또는 GDC-0623(화합물 IIa) 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 화합물 Ia, Ib, Id 또는 Id로부터 선택된 ERK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 함유하는, 암의 치료를 위한 조성물이 제공된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, GDC-0973(화합물 II) 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 화합물 Ia, Ib, Id 또는 Id로부터 선택된 ERK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 함유하는, 암의 치료를 위한 조성물이 제공된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, GDC-0973(화합물 II) 또는 GDC-0623(화합물 IIa) 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 및 화합물 Ia, Ib, Id 또는 Id로부터 선택된 ERK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 함유하는, 암의 치료를 위한 조성물이 제공되되, 상기 암은 대장암, 폐암, 중피종, 유방암, 췌장암, 신경 교종, 위암, 신장암, 난소암, 자궁내막암, 방광암 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, GDC-0973(II) 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 화합물 Ia, Ib, Id 또는 Id로부터 선택된 ERK 억제제 또는 약학적으로 허용되는 염을 함유하는, 암의 치료를 위한 조성물이 제공되되, 상기 암은 대장암, 폐암, 중피종, 유방암, 췌장암, 신경 교종, 위암, 신장암, 난소암, 자궁내막암, 방광암 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, 암 또는 과증식성 질병의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 화학식 II의 MEKi 및 화학식 Ia의 ERK 억제제의 용도가 제공된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, 암의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 화학식 II의 MEKi 및 화학식 Ia의 ERK 억제제의 용도가 제공된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, GDC-0973 또는 GDC-0623, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염; GDC-0994 또는 이의 약학적으로 허용되는 염; 용기; 및 GDC-0973 또는 GDC-0623, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 GDC-0994의 투여를 지시하는 패키지 부속품 또는 라벨을 포함하는, 암의 치료를 위한 키트가 제공된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, 임의 치료에서 개별적, 동시적 또는 순차적 사용을 위한 조합된 제제로서 GDC-0973 또는 GDC-0623, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 GDC-0994 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 제품이 제공된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, 암의 치료적 치료를 위한 GDC-0973 또는 GDC-0623, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 ERK 억제제의 조합이 제공된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, GDC-0973 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 GDC-0623 또는 이의 약학적으로 허용되는 염; 및 GDC-0994가 단위 투여량 형태 당 약 1 내지 약 1000 mg의 양으로 각각 투여되는, 암 또는 과증식성 질병의 치료 방법이 제공된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, GDC-0973 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 28일 주기의 제1일 내지 제21일에 60 mg의 투여량으로 투여되고, GDC-0994 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 단위 투여량 형태 당 약 1 내지 약 1000 mg의 양으로 투여되는, 암 또는 과증식성 질병의 치료 방법이 제공된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서, GDC-0973 및 GDC-0994의 조합을 사용하는 암 또는 과증식성 질병의 치료 방법이 제공되되, GDC-0973은 4주 주기의 3주 동안 1일 1회 또는 2회 3 내지 7.5 mg/kg의 투여량으로 투여되고, GDC-0994는 4주 주기의 3주 동안 1일 1회 또는 2회 25 내지 75 mg/kg의 투여량으루 투여된다.

약학적 조성물

본 발명의 약학적 조성물 또는 제형은 본원에 기재된 조합을 포함한다.

또한, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 상이한 호변 이성질성 형태로 존재할 수 있고, 모든 이러한 형태는 본 발명의 범주내에 포괄된다. 용어 "호변 이성질체" 또는 "호변 이성질성 형태"는 낮은 에너지 장벽을 통해 호환가능한 상이한 에너지의 구조적 이성질체를 의미한다. 예를 들어, 양성자 호변 이성질체(양성자성 호변 이성질체로서도 공지됨)는 양성자의 이주를 통한 호환, 예컨대 케토-엔올 및 이민-엔아민 이성질화를 포함한다. 밸런스 호변 이성질체는 결합 전자의 일부의 개편에 의한 호환을 포함한다.

약학적 조성물는 벌크 조성물, 및 임의의 약학적 불활성 부형제, 희석제, 담체 또는 활주제와 함께 하나 초과(예를 들어 2개)의 약학적 활성 제제를 포함하는 개별적 투여 단위 둘다를 포함한다. 벌크 조성물 및 각각의 개별적 투여 단위는 고정된 양의 상기 약학적 활성 제제를 함유할 수 있다. 벌크 조성물은 개별적 투여 단위로 아직 형성되지 않은 물질이다. 예시적 투여 단위는 경우 투여 단위, 예컨대 정제, 환약, 캡슐 등이다. 또한, 유사하게, 본원에 기재된 본 발명의 약학적 조성물을 투여함으로써 환자를 치료하는 방법은 벌크 조성물 및 개별적 투여 단위의 투여를 포함하는 것으로 의도된다.

화합물의 약학적으로 허용되는 염은 인간(예컨대 인간 남성 또는 여성)을 비롯한 포유동물에서 과증식성 장애(예컨대 암, 예컨대 삼중 음성 유방암)의 치료적 치료를 위한 치료적 조합에서 사용하기 위한 표준 약학 관례에 따라 제형화된다. 본 발명은 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 활주제, 희석제 또는 부형제와 결합된 본원에 기재된 조합을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

적합한 담체, 희석제 및 부형제는 당업자에게 주지되어 있고, 물질, 예컨대 탄수화물, 왁스, 수용성 및/또는 팽윤성 중합체, 친수성 또는 소수성 물질, 젤라틴, 오일, 용매, 물 등을 포함한다. 사용된 특정 담체, 희석제 또는 부형제는 본 발명의 화합물이 적용되고 있는 수단 및 목적에 의존적일 것이다. 용매는 일반적으로 포유동물에게 투여시 안전한 것으로서 당업자에게 인식되는(GRAS) 용매를 기반으로 선택된다. 일반적으로, 안전한 용매는 비독성 수성 용매, 예컨대 물, 및 물에 가용성이거나 혼화성인 다른 비독성 용매이다. 적합한 수성 용매는 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜(예를 들어 PEG 400, PEG 300) 등, 및 이들의 혼합물을 포함한다. 또한, 제형은 하나 이상의 완충제, 안정화제, 계면활성제, 습윤제, 윤활제, 유화제, 현탁화제, 방부제, 항산화제, 불투명화제, 활주제, 가공 보조제, 착색제, 감미제, 방향제, 향미제, 및 약물(즉, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적 조성물)의 우수한 제시를 제공하거나 약학적 제품(즉, 약제)의 제조를 보조하는 다른 공지된 첨가물을 포함할 수 있다.

투여를 위한 약학적 조성물(또는 제형)은 약물의 투여에 사용하기 위한 방법에 따른 다양한 방법으로 패키징될 수 있다. 일반적으로, 유통을 위한 물품은 적절한 형태로 약학적 제형이 그 안에 증착된 용기를 포함한다. 적합한 용기는 당업자에게 주지되어 있고, 물질, 예컨대 병(플라스틱 및 유리), 샤쉐, 앰플, 비닐 봉지, 금속 실린더 등을 포함한다. 또한, 용기는 패키지의 내용물에 대한 무분별한 접근을 방지하기 위해 쉽게 조작할 수 없는 조립체를 포함할 수 있다. 또한, 용기는 그 위에 증착된, 내용물을 기재하는 라벨을 갖는다. 또한, 라벨은 적절한 경고를 포함할 수 있다.

약학적 제형은 양호한 의료 행위에 부합하는 방식으로, 예를 들어 투여의 양, 농도, 일정, 코스, 비히클 및 경로로 투약 및 투여될 것이다. 이러한 맥락에서 고려할 인자는 치료될 특정 장애, 치료받을 특정 포유동물, 개별적 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 전달 부위, 투여의 방법, 투여의 일정 및 개업의에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 투여될 "치료적 유효량"은 이러한 고려사항에 의해 좌우될 것이고, 이는 응고 인자 매개된 장애를 예방, 개선 또는 치료하는데 필요한 최소량이다. 이러한 양은 바람직하게 숙주에게 독성이거나 숙주를 상당히 출혈에 대해 보다 취약하게 만드는 양 미만이다.

경구 투여에 적합한 조합의 제형은 각각 미리 결정된 양의 GDC-0973 및 GDC-0623, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염; 및 화학식 Ia, Ib, Ic 또는 Id의 ERK 억제제를 함유하는 별개의 단위, 예컨대 환약, 경질 또는 연질, 예컨대 젤라틴 캡슐, 카시에, 트로키, 로렌지, 수성 또는 오일 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 유화액, 시럽 또는 엘릭서로서 제조될 수 있다. GDC-0973 또는 GDC-0623, 및 화학식 Ia, Ib, Ic 또는 Id의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 양은 조합된 제형으로서 환약, 캡슐, 용액 또는 현탁액으로 제형화될 수 있다. 대안적으로, 조합은 개별적으로 교대 투여를 위한 환약, 캡슐, 용액 또는 현탁액으로 제형화될 수 있다.

제형은 약학적 조성물의 제조에 대한 분야에 공지된 임의의 방법에 따라 제조돌 수 있고, 이러한 조성물은 맛있는 제제의 제공을 위해 감미제, 향미제, 착색제 및 방부제를 비롯한 하나 이상의 제제를 함유할 것이다. 압축된 정제는 적합한 기계에서 활성 성분을 임의적으로 결합제, 윤활제, 불활성 희석제, 방부제, 계면활성제 또는 분산제와 혼합된 자유 유동형 형태, 예컨대 예컨대 분말 또는 과립으로 압축함으로써 제조될 수 있다. 성형된 정제는 불활성 액체 희석제로 보습된 분말화된 활성 성분의 혼합물을 적합한 기계에서 성형함으로써 제조될 수 있다. 정제는 임의적으로 코팅되거나 스코어링될 수 있고, 임의적으로 활성 성분의 저속 방출 또는 제어 방출을 제공하도록 제형화된다. 약학적 제형의 정제 부형제는 정제 제조 동안 분말화된 약물의 벌크 부피를 증가시키는 충전제(또는 희석제); 섭취시 정제를 소단편, 이상적으로 개별적 약물 부분으로 쪼개는 것을 조장하고 약물의 신속한 용해 및 흡수를 촉진하는 붕해제; 과립 및 정제가 필요한 기계적 강도를 가질수 있음을 보장하고 압축 후에 정제와 함께 묶어두어 패키징, 운반 및 통상적 취급 동안 이의 구성성분 분말로 쪼개짐을 예방하는 결합제; 제조 동안 정제를 이루는 분말의 유동성을 개선하는 활주제; 분말을 정제화하는 것이 제조 동안 정제를 압박하는데 사용되는 기구에 부착되지 않음을 보장하는 윤활제(이들은 기구로부터 마감된 정제를 배출시 마찰 및 파손을 압박하고 최소화함을 통해 분말 믹스의 유동을 개선함); 정제를 이루는 분말 및 제조 동안 정제의 모양을 찍어내는데 사용되는 기계 사이의 부착을 감소시키는 활주제와 유사한 기능을 갖는 부착방지제; 정제에 혼입되어 정제에 보다 쾌적한 맛을 제공하고 불쾌한 맛을 차폐하는 향미제; 및 식별 및 환자의 수용 상태를 보조하는 착색제를 포함할 수 있다.

정제의 제조에 적합한 비독성 약학적으로 허용되는 부형제와 혼합된 활성 성분을 함유하는 정제가 허용가능하다. 이들 부형제는 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대 탄산 칼슘 또는 탄산 나트륨, 락토스, 인산 칼슘 또는 인산 나트륨; 과립화제 및 붕해제, 예컨대 옥수수 전분 또는 알긴산; 결합제, 예컨대 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제, 예컨대 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 또는 활석일 수 있다. 정제는 코팅되지 않을 수 있거나, 마이크로캡슐화를 비롯한 공지된 기술에 의해 코팅되어 위장관에서 붕해 및 흡수를 지연시켜 보다 긴 기간 동안 지속된 작용을 제공할 수 있다. 예를 들어, 시간 지연 물질, 예컨대 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 다이스테아레이트를 단독으로 또는 왁스와 함께 사용할 수 있다.

본 발명의 유화액의 오일상은 하나 이상의 유화제, 및 지방 또는 오일, 또는 지방 및 오일 둘다의 혼합물을 포함하여 공지된 성분으로 공지된 방법으로 구성될 수 있다. 바람직하게, 친수성 유화제는 안정화제로서 작용하는 친유성 유화제와 함께 포함될 수 있다. 동시에, 안정화제와 함께 또는 안정화제 없이 유화제는 유화 왁스를 구성하고, 왁스는 오일 및 지방과 함께 유화 연고 기재를 구성하고, 이는 크림 제형의 분산된 오일상을 형성한다. 제형에 사용하기에 적합한 유화제 및 유화액 안정화제는 트윈(등록상표) 60, 스판(Span, 등록상표) 80, 세토스테아릴 알코올, 벤질 알코올, 미스티릴 알코올, 글리세릴 모노스테아레이트 및 나트륨 라우릴 설페이트를 포함한다.

약학적 제형의 수성 현탁액은 수성 현탁액의 제조에 적합한 부형제와 혼합된 활성 물질을 함유한다. 이러한 부형제는 현탁화제, 예컨대 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 크로스카멜로스, 포비돈, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈, 트래가칸트 검 및 아카시아 검, 및 분산제 또는 습윤제, 예컨대 자연적으로 발생한 포스파티드(예를 들어 레시틴), 알킬렌 옥사이드와 지방산의 축합 생성물(예를 들어 폴리옥시에틸렌 스테아레이트), 에틸렌 옥사이드와 장쇄 지방족 알코올의 축합 생성물(예를 들어 헵타데카에틸렌옥시세탄올), 에틸렌 옥사이드와 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 부분적 에스터의 축합 생성물(예를 들어 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노올레에이트)을 포함한다. 또한, 수성 현탁액은 하나 이상의 방부제, 예컨대 에틸 또는 n-프로필 p-하이드록시벤조에이트, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 향미제 및 하나 이상의 감미제, 예컨대 수크로스 또는 사카린을 함유할 수 있다.

담체 물질과 조합되어 단일 투여 형태를 생성할 수 있는 활성 성분의 양은 치료받을 숙주 및 투여의 특정 모드에 따라 변할 것이다. 예를 들어, 인간 경구 투여용 시간-지연 제형은 약 1 내지 1000 mg의 활성 물질 화합물을 총 조성물의 약 5 내지 약 95%(중량:중량)에서 변할 수 있는 적절하고 편리한 양의 담체 물질과 함께 함유할 수 있다. 약학적 조성물은 투여를 위해 용이하게 측정가능한 양을 제공하도록 제조될 수 있다. 예를 들어, 정맥내 주입용 수성 용액은, 적절한 부피의 주입이 약 30 mL/시간의 속도로 발생할 수 있도록 1 ml의 용액 당 약 3 내지 500 μg의 활성 성분을 함유할 수 있다.

제조 물품

본 발명의 또다른 실시양태에서, 상기에 기재된 질병 및 장애의 치료에 유용한 조합을 함유하는, 제조 물품 또는 "키트"가 제공된다. 한 실시양태에서, 키트는 용기 및 본원에 기재된 조합을 포함한다.

키트는 용기 위에 또는 용기에 결합된, 라벨 또는 패키지 부속품을 추가로 포함할 수 있다. 용어 "패키지 부속품"는 이러한 치료 제품의 사용과 관련된 지시, 용법, 투여량, 투여, 사용 금지 사유 및/또는 경고에 대한 정보를 함유하는 치료 제품의 상업적 패키지에 통상적으로 포함되는 설명을 나타내는데 사용된다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 주사기, 블리스터 팩 등을 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 용기는 질환을 치료하는데 효과적인 조합 또는 이의 제형을 수용할 수 있고, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫는 스토퍼를 가지는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있다). 라벨 또는 패키지 부속품은 조성물이 선택된 질환, 예컨대 암을 치료하는데 사용됨을 지시한다. 한 실시양태에서, 라벨 또는 패키지 부속품은 조합을 포함하는 조성물이 비정상적 세포 성장으로부터 야기된 장애를 치료하는데 사용될 수 있음을 지시한다. 또한, 라벨 또는 패키지 부속품은 조성물이 다른 장애를 치료하는데 사용될 수 있음을 지시한다. 대안적으로 또는 부가적으로, 제조 물품은 약학적으로 허용되는 완충제, 예컨대 주사용 정세균성 물(BWFI), 포스페이트-완충된 염수, 링거(Ringer) 용액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 완충제, 희석제, 여과기, 바늘 및 주사기를 포함하는 상업적 및 이용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.

키트는 조합, 및 존재하는 경우 제2약학적 제형의 투여에 대한 지시서를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 키트가 GDC-0973 또는 GDC-0623, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 제1조성물, 및 ERK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 제2약학적 제형을 포함하는 경우, 키트는 제1약학적 조성물 및 제2약학적 조성물의, 이를 필요로 하는 환자에게의 동시적, 순차적 또는 개별적 투여에 대한 지시서를 추가로 포함할 수 있다.

또다른 실시양태에서, 키트는 조합의 고체 경구 형태, 예컨대 정제 또는 캡슐의 전달에 적합하다. 이러한 키트는 바람직하게 많은 단위 투여량을 포함한다. 이러한 키트는 이의 의도된 사용 순서로 배향된 투여량을 갖는 카드를 포함할 수 있다. 이러한 키드의 예는 "블리스터 팩"이다. 블리스터 팩은 패키징 산업에 주지되어 있고, 약학적 단위 투여량 형태를 패키징하는데 널리 사용된다. 필요에 따라, 투여량이 투여될 수 있는 치료 일정의 날짜를 지정하는, 숫자, 문자 또는 다른 표시의 형태로 또는 캘린더 인서트와 함께 기억 보조물이 제공될 수 있다.

한 실시양태에 따라, 키트는 (a) GDC-0973 또는 GDC-0623을 갖는 제1용기, (b) ERK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 함유된 제2용기, 및 (c) 제3약학적 제형을 함유하는 제3용기를 포함할 수 있되, 제3약학적 제형은 항-과증식성 활성을 갖는 또다른 화합물을 포함한다. 대안적으로 또는 부가적으로, 키트는 약학적으로 허용되는 완충제, 예컨대 주사용 정세균성 물(BWFI), 포스페이트-완충된 염수, 링거 용액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제3용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 완충제, 희석제, 여과기, 바늘 및 주사기를 포함하는 상업적 및 이용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.

키트가 GDC-0973 또는 GDC-0623, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 ERK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 조성물을 포함하는 경우, 키트는 별개의 조성물을 함유하기 위한 용기, 예컨대 분리된 병 또는 분리된 호일 패킷을 포함할 수 있되, 별개의 조성물은 단일의 분리되지 않은 용기 내에 포함될 수도 있다. 전형적으로, 키트는 별개의 구성성분의 투여에 대한 지시서를 포함할 수 있다. 별개의 구성성분이 바람직하게 상이한 투여 형태(예를 들어 경구 및 비경구)로 상이한 투여 간격으로 투여되는 경우, 또는 개별적 구성성분의 적정이 담당 의사에 의해 요구되는 경우, 키트 형태가 특히 유리하다.

본원에 사용된 어구 "약학적으로 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 약학적으로 허용되는 유기 염 또는 무기 염을 의미한다. 예시적 염은 비제한적으로 설페이트, 시트레이트, 아세테이트, 옥살레이트, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 니트레이트, 바이설페이트, 포스페이트, 산 포스페이트, 이소니코티네이트, 락테이트, 살리실레이트, 산 시트레이트, 타르트레이트, 올레에이트, 탄네이트, 판토테네이트, 바이타르트레이트, 아스코르베이트, 석시네이트, 말레에이트, 젠티시네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 사카레이트, 포메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄설포네이트 "메실레이트", 에탄설포네이트, 벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트 및 파모에이트(즉, 1,1'-메틸렌-비스-(2-하이드록시-3-나프토에이트)) 염을 포함한다. 약학적으로 허용되는 염은 또다른 분자, 예컨대 아세테이트 이온, 석시네이트 이온 또는 다른 상대 이온의 내포를 수반할 수 있다. 상대 이온은 모 화합물의 전하를 안정화시키는 임의의 유기 또는 무기 잔기일 수 있다. 또한, 약학적으로 허용되는 염은 하나 초과의 대전된 원자를 그 구조에 가질 수 있다. 다중 대전된 원자가 약학적으로 허용되는 염의 일부인 사례는 다수의 상대 이온을 가질 수 있다. 그러므로, 약학적으로 허용되는 염는 하나 이상의 대전된 원자 및/또는 하나 이상의 상대 이온을 가질 수 있다.

참조 실시예 1

(S)-(3,4- 다이플루오로 -2-((2- 플루오로 -4- 요오도페닐 )아미노) 페닐 )(3- 하이드록시 -3-(피페리딘-2-일) 아제티딘 -1-일) 메탄온 ( GDC -0973)

표제 화합물을 문헌[K. D. Rice, et al., ACS Med. Chem. Lett. 2012 3:416-421 in Example 22 of WO 2007/044515]에 기재된 바와 같이, 또는 대안적으로 문헌[K. D. Rice et al., Novel Carboxamide-Based Allosteric MEK inhibitors: Discovery and Optimization Efforts toward XL518 (GDC-0973), Med. Chem. Lett. 2012 3:416]에 기재된 바와 같이 제조할 수 있다.

참조 실시예 2

5-[(2- 플루오로 -4- 요오도페닐 )아미노]-N-(2- 하이드록시에톡시 )- 이미다조[1,5 -a]피리딘-6- 카복스아미드 (화학식 IIa 의 화합물)

표제 화합물을 WO 2009/085983의 실시예 5에 기재된 바와 같이 제조할 수 있다.

참조 실시예 3

(S)-1-(1-(4- 클로로 -3- 플루오로페닐 )-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1- 메틸 -1H-피라졸-4-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온

4-(2-( 메틸티오 )피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온

단계 1: 다이옥산/H₂O(100 mL; 1:1) 중의 4-브로모-2-(메틸티오)피리미딘(7.00 g, 34.1 mmol), 2-플루오로피리딘-4-일보론산(5.05 g, 35.8 mmol), Na₂CO₃(10.9 g, 102 mmol) 및 Pd(dppf)Cl₂ CH₂Cl₂(1.40 g, 1.71 mmol)의 현탁액을 85℃로 Ar 벌룬하에 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트(200 mL) 및 물(100 mL)로 희석하였다. 층을 분리하고, 수층을 에틸 아세테이트(1X)로 추출하였다. 유기물을 건조하고 여과하고 농축하였다. 미가공 생성물 헥산/에틸 아세테이트(3:1)로 용리하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 4-(2-플루오로피리딘-4-일)-2-(메틸티오)피리미딘(6.83 g, 90%)을 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, (CD₃)₂SO) δ 8.85 (d, J=5.2 Hz, 1H), 8.46 (d, J=5.2 Hz, 1H), 8.11 (m, 1H), 7.96 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 2.62 (s, 3H); m/z (APCI-pos) M+1 = 222.1.

단계 2: 2 N HCl(100 mL) 중의 4-(2-플루오로피리딘-4-일)-2-(메틸티오)피리미딘(6.83 g, 30.9 mmol)의 현탁액을 가열하여 2시간 동안 환류하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 빙욕에 두었다. pH를 2 N NaOH(약 100 mL)를 사용하여 약 7로 조절하였다. 생성된 고체를 여과로 수집하고 물로 세척하고 건조하여 4-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온(5.07 g)을 고체로 수득하였다. 이 물질을 속슬레(Soxhlet) 기구의 팀블에 두고, 에틸 아세테이트(500 mL)로 충전된 1 L 플라스크에 부착하였다. 물질을 3일 동안 연속적하여 추출하였다. 에틸 아세테이트 층으로부터 생성된 백색 침전물을 여과에 의해 수집하였다(3.3 g, 49% 수율). ¹H NMR (400 MHz, (CD₃)₂SO) δ 11.85 (br, s, 1H), 8.75 (d, J=5.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J=5.0 Hz, 1H), 7.54 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.86 (d, J=7.0 Hz, 1H), 2.58 (s, 3H); m/z (APCI-pos) M+1 = 220.0.

(R)-2-( tert - 부틸다이메틸실릴옥시 )-1-(4- 클로로 -3- 플루오로페닐 )에틸 메탄설포네이트

단계 1: 수소화 나트륨(8.549 g, 213.7 mmol, 미네랄 오일 중 60% 현탁액)을 THF(400 mL) 중의 4-클로로-3-플루오로벤즈알데하이드(26.07 g, 164.4 mmol) 및 메틸트라이페닐포스포늄 브로마이드(70.48 g, 197.3 mmol)의 찬(0℃) 용액에 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 밤새 가온하였다. 고체를 여과로 제거하고, 필터 케이크를 에터로 세척하였다. 여과액을 농축하고(수욕 약 20℃), 잔사를 헥산에 현탁화하고 30분 동안 교반하였다. 고체(대부분 PPh₃O)를 여과로 제거하고, 필터 케이크를 헥산으로 세척하였다. 여과액을 농축하고, 미가공 생성물을 헥산/에틸 아세테이트(25:1)로 용리하는 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1-클로로-2-플루오로-4-비닐벤젠(12.1 g, 47%)을 오일로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.33 (m, 1H), 7.18 (m, 1H), 7.10 (m, 1H), 6.63 (m, 1H), 5.74 (d, J=17.4 Hz, 1H), 5.32 (d, J=10.8 Hz, 1H).

단계 2: 1-클로로-2-플루오로-4-비닐벤젠(12.1 g, 77.3 mmol)을 t-BuOH/H₂O(600 mL; 1:1)중의 AD-믹스-β(108 g, 139 mmol)의 찬(0℃) 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온으로 밤새 가온하였다. 다음날, 반응 생성물을 빙욕에 두고 고체 Na₂SO₃(114 g)로 켄칭하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반한 후에, 에틸 아세테이트(3 X 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 건조하고 여과하고 농축하여 (R)-1-(4-클로로-3-플루오로페닐)에탄-1,2-다이올을 오일로 수득하였다. 미가공 생성물을 정제없이 후속 단계에 사용하였다.

단계 3: 이미다졸(13.1 g, 193 mmol)을 DCM(100 mL) 중의 (R)-1-(4-클로로-3-플루오로페닐)에탄-1,2-다이올(14.7 g, 77.1 mmol)의 찬(0℃) 용액에 첨가한 후에, TBSCl(12.8 g, 84.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 후에, 물(50 mL)로 켄칭하였다. 층을 분리하고, 유기물을 건조하고 여과하고 농축하였다. 미가공 생성물을 헥산/에틸 아세테이트(100:1)로 용리하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 여과하여 (R)-2-(tert-부틸다이메틸실릴옥시)-1-(4-클로로-3-플루오로페닐)에탄올(11.0 g, 2개의 단계에 걸쳐 47%)을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.36 (m, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.08 (m, 1H), 4.71 (m, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.49 (m, 1H), 2.96 (d, J=2.6 Hz, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.07 (s, 3H), 0.06 (s, 3H).

단계 4: 트라이에틸아민(2.09 mL, 15.0 mmol)을 DCM(100 mL) 중의 (R)-2-(tert-부틸다이메틸실릴옥시)-1-(4-클로로-3-플루오로페닐)에탄올(3.05 g, 10.0 mmol)의 찬(0℃) 용액에 첨가한 후에, 메탄설폰일 클로라이드(0.929 mL, 12.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 후에, 물(50 mL)로 켄칭하였다. 층을 분리하고, 유기층을 포화 NaHCO₃로 세척하고 건조하고 여과하고 농축하여 미가공 생성물을 수득하였다. 미가공 생성물을 헥산/에틸 아세테이트(25:1)로 용리하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 (R)-2-(tert-부틸다이메틸실릴옥시)-1-(4-클로로-3-플루오로페닐)에틸 메탄설포네이트(3.80 g, 99%)를 오일로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.42 (m, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.12 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 3.91 (m, 1H), 3.80 (m, 1H), 2.98 (s, 3H), 0.88 (s, 9H), 0.05 (s, 3H), 0.04 (s, 3H).

(S)-1-(2-( tert - 부틸다이메틸실릴옥시 )-1-(4- 클로로 -3- 플루오로페닐 )에틸)-4-(2-(메 틸 설폰일)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온

단계 1: THF 중의 용액으로서 1.0 M KHMDS(5.09 mL, 5.09 mmol)를 THF(20 mL) 중의 4-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온(0.93 g, 4.24 mmol)의 찬(0℃) 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반한 후에, (R)-2-(tert-부틸다이메틸실릴옥시)-1-(4-클로로-3-플루오로페닐)에틸 메탄설포네이트(2.44 g, 6.36 mmol)를 THF(5 mL) 중의 용액으로서 첨가하였다. 반응 생성물을 가열하여 30시간 동안 환류한 후에, 실온으로 냉각하고 농축하였다. 잔사를 에틸 아세테이트(200 mL)에 취하고 물로 세척하였다. 유기물을 건조하고 여과하고 농축하였다. 미가공 생성물을 헥산/에틸 아세테이트(4:1)로 용리하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 (S)-1-(2-(tert-부틸다이메틸실릴옥시)-1-(4-클로로-3-플루오로페닐)에틸)-4-(2-(메틸티오)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온(1.35 g, 63%)을 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.66 (d, J=5.0 Hz, 1H), 7.43 (m, 2H), 7.34 (d, J=5.0 Hz, 1H), 7.32-7.28 (m, 2H), 7.16 (m, 1H), 6.85 (m, 1H), 6.24 (m, 1H), 4.35 (m, 1H), 4.23 (m, 1H), 2.65 (s, 3H), 0.88 (s, 9H), 0.03 (s, 3H), -0.03 (s, 3H); m/z (APCI-pos) M+1 = 506.1, 508.1.

단계 2: mCPBA(7.1 g, 29 mmol)를 DCM(100 mL) 중의 (S)-1-(2-(tert-부틸다이메틸실릴옥시)-1-(4-클로로-3-플루오로페닐)에틸)-4-(2-(메틸티오) 피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온(5.8 g, 11 mmol)의 찬(0℃) 용액에 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 Na₂S₂O₃(1X), NaHCO₃(1X)로 세척하고 건조하고 여과하고 증발시켰다. 미가공 생성물을 헥산/에틸 아세테이트(1:1)로 용리하는 컬럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 (S)-1-(2-(tert-부틸다이메틸실릴옥시)-1-(4-클로로-3-플루오로페닐)에틸)-4-(2-(메틸설폰일)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온(5.5 g, 89%)을 고체로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.06 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.91 (d, J=5.4 Hz, 1H), 7.55 (d, J=7.4 Hz, 1H), 7.43 (m, 1H), 7.32 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.27 (m, 1H), 7.15 (m, 1H), 6.93 (m, 1H), 6.22 (m, 1H), 4.35 (m, 1H), 4.24 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 0.88 (s, 9H), 0.03 (s, 3H), -0.03 (s, 3H); m/z (APCI-pos) M+1 = 538.1, 540.0.

참조 실시예 4

4-[3-[[에틸( 다이메틸 )실릴] 메틸 ]-[1,2,4] 트라이아졸로 [4,3-a]피리딘-7-일]-N-(2-메 틸피 라졸-3-일)피리미딘-2-아민

2-( 에틸다이메틸실릴 )아세트산(4)

THF(40 mL)의 용액에 LDA(8.8 ml, 17.5 mmol)를 첨가하고 -78℃로 냉각하였다. 트라이메틸실릴아세테이트(2.0 g, 15.1 mmol)를 서서히 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하였다. 클로로(에틸)다이메틸실란(2.1 g, 17.5 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 염수(10 ml)로 세척한 후에, HCl(10 ml, 1 N)을 서서히 첨가하고, 생성된 용액을 MTBE(3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 추출물을 건조하고 농축하고, 잔사를 EtOAc/헥산(1:10)으로 용리하는 SiO₂ 크로마토그래피로 정제하여 2-(에틸다이메틸실릴)아세트산(1.0 g, 45%)을 무색 오일로 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ = 1.80 (s, 1 H), 0.84 (t, J = 8.0 Hz, 3H), 0.50 (q, J = 8.0 Hz, 2H), 0.00 (s, 6H).

(Z)-2-( 에틸다이메틸실릴 )- N' -(4-(2-((1- 메틸 -1H- 피라졸 -5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)- 일리덴 ) 하세토하이드라지드 (7)

DCM(10 ml) 중의 2-클로로-1-메틸피리딘-1-이움(1.36 g, 5.3 mmol)에 (Z)-4-(2-하이드라조노-1,2-다이하이드로피리딘-4-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민(1.3 g, 4.6 mmol)을 첨가하고, 2-(에틸다이메틸실릴)아세트산(0.67 g, 4.6 mmol)을 첨가한 후에 트라이부틸아민(1.96 g, 10.6 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60 내지 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고, EtOAc용리한 후에 DCM/MeOH(10:1)로 용리하는 SiO₂ 컬럼 상에 정제하여 (Z)-2-(에틸다이메틸실릴)-N'-(4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-일리덴)하세토하이드라지드(1.1 g, 44%)를 황색 고체로 수득하였다.

4-(3-(( 에틸다이메틸실릴 ) 메틸 )-[1,2,4] 트라이아졸로 [4,3-a]피리딘-7-일)-N-(1-메틸-1H- 피라졸 -5-일)피리미딘-2-아민( GNT _ D379 _285-1)

플라스크를 (Z)-2-(에틸다이메틸실릴)-N'-(4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-일리덴)하세토하이드라지드(7)(500 mg, 1.22 mmol) 및 1,2-다이브로모테트라클로로에탄(793 mg, 2.44 mmol)으로 충전한 후에, CH₃CN(20 ml)을 첨가하고, 이어서 PPh₃(798 mg, 3.0 mmol)를 나누어 첨가하였다. 혼합물을 5 내지 7℃ 1시간 동안 교반한 후에, TEA(1.0 ml)를 적가하고, 생성된 혼합물을 5 내지 7℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하고 EtOAc로 용리한 후에 MeOH/DCM(1:20)으로 용리하는 SiO₂ 크로마토그래피로 정제하여 미가공물(200 mg)을 수득하고, 이를 EtOAc 및 MeOH(3회)로 세척하여 4-(3-((에틸다이메틸실릴)메틸)-[1,2,4]트라이아졸로[4,3-a]피리딘-7-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민(GNT_D379_285-1)(73 mg, 15%)을 백색 고체로 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ = 9.58 (s, 1H), 8.60 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.68 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 6.31 (s, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.60 (s, 2H), 0.88 (t, J = 8.0 Hz, 3H), 0.58 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 0.05 (s, 6H); MS [M+H]⁺ = 392.19.

참조 실시예 5

4-[3-(2- 메틸부틸 ) 트라이아졸로 [1,5-a]피리딘-6-일]-N-(2- 메틸피라졸 -3-일)피리미딘-2-아민

1-(5- 브로모피리딘 -2-일)-3- 메틸펜탄 -1-온

톨루엔(30 ml) 중의 2,5-다이브로모피리딘(3.72 g, 15.8 mmol)의 용액을 -40℃로 냉각하고, n-BuLi(6.32 mL, 15.8 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 -40℃에서 1시간 동안 교반한 후에, N-메톡시-N,3-다이메틸펜탄아미드(2.1 g, 13.2 mmol, CASRN 1051483-44-3) 및 톨루엔(5 mL)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 추가적 2시간 동안 교반한 후에, 수성 NH₄Cl(aq)로 켄칭하고 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하였다. 유기상을 건조하고 농축하고 EtOAc/헥산(1:10)으로 용리하는 SiO₂ 컬럼 상에 정제하여 표제 화합물(2 g, 59%)을 황색 오일로 수득하였다.

¹H NMR (400MHz, MeOH-d₄) δ: 8.75 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.13 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.17-3.12 (m, 1H), 2.98-2.92 (m, 1H), 2.02-2.00 (m, 1H), 1.41-1.21 (m, 2H), 0.93-0.89 (m, 6H).

(Z)-5- 브로모 -2-(1- 하이드라조노 -3- 메틸펜틸 )피리딘

1-(5-브로모피리딘-2-일)-3-메틸펜탄-1-온(2.0 g, 6.2 mmol)을 MeOH(50 mL)에 용해시키고, NH₂NH₂(5 ml)를 첨가하였다. 혼합물을 환류에서 4시간 동안 교반하였다. 2 N NaOH(5 mL) 및 H₂O(20 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 EtOAc(3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기상을 건조하고(Na₂SO₄) 여과하고 농축하였다. 잔사를 추가적 정제없이 후속 단계에 직접 사용하였다: MS [M+H]⁺ = 269.7.

6- 브로모 -3-(2- 메틸부틸 )-[1,2,3] 트라이아졸로 [1,5-a]피리딘

CHCl₃(30 mL) 중의 미가공 (Z)-5-브로모-2-(1-하이드라조노-3-메틸펜틸)피리딘(1.9 g, 7.1 mmol)의 용액에 활성 MnO₂(3 g, 35.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 가열하여 환류하고 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축하고 SiO₂ 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(1.6 g)을 수득하였다: MS [M+H]⁺ = 267.7.

3-(2- 메틸부틸 )-6-(4,4,5,5- 테트라메틸 -1,3,2- 다이옥사보로란 -2-일)-[1,2,3]트라이아졸로[ 1,5-a]피리딘

다이옥산(30 mL) 중의 6-브로모-3-(2-메틸부틸)-[1,2,3]트라이아졸로[1,5-a]피리딘(0.8 g, 3 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-바이(1,3,2-다이옥사보로란)(838 mg, 3.3 mmol), KOAc(294 mg, 9 mmol) 및 Pd(dppf)Cl₂(329 mg, 0.45 mmol)의 용액을 100℃에서 교반하면서 N₂하에 3시간 동안 가열하였다. 이어서, 미가공 생성물을 추가적 정제없이 후속 단계에 사용하였다: MS [M+H]⁺ = 233.7.

N-(1- 메틸 -1H- 피라졸 -5-일)-4-(3-(2- 메틸부틸 )-[1,2,3] 트라이아졸로 [1,5-a]피리딘-6-일)피리미딘-2-아민 ( GNT _ D379 _260)

미가공 보론산 에스터 생성물에 4-클로로-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민(755 mg, 3.6 mmol), Pd(dppf)Cl₂(329 mg, 0.45 mmol), Cs₂CO₃(2.9 g, 9 mmol) 및 H₂O(5 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과액을 농축하고 실리카겔 컬럼을 통한 SiO₂ 컬럼 상에 정제한 후에, 분취-HPLC로 정제하여 표제 화합물(250 mg)을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, MeOH-d₄) δ: 9.58 (s, 1H), 8.54 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.00-7.90 (m, 2H), 7.50-7.47 (m, 2H), 6.36 (d, J = 2 Hz, 1H), 3.77(s, 3H), 3.03-2.99 (m, 1H), 2.87-2.81 (m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.46-1.42 (m, 1H), 1.28-1.24 (m, 1H), 0.98-0.91 (m, 6H); MS [M+H]⁺ = 362.9.

(S) 거울상 이성질체를 키랄 지지체 SFC 크로마토그래피로 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, MeOHl-d₄) δ: 9.58 (s, 1H), 8.53 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.00-7.90 (m, 2H), 7.50-7.46 (m, 2H), 6.36 (d, J = 2 Hz, 1H), 3.77(s, 3H), 3.05-2.99 (m, 1H), 2.87-2.81 (m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.46-1.27 (m, 1H), 1.26-1.24 (m, 1H), 0.98-0.91 (m, 6H).

참조 실시예 6

4-[3-[2-(4- 클로로페닐 )-2- 메톡시 -에틸]-[1,2,4] 트라이아졸로 [4,3-b] 피리다진 -7-일]-N-(2- 메틸피라졸 -3-일)피리미딘-2-아민

단계 1: 2-((1- 메틸 -1H- 피라졸 -5-일)아미노)피리미딘-4(3H)-온(6)

Me₃CCO₂H(50 g) 중의 2-(메틸티오)피리미딘-4(3H)-온(10 g, 70 mmol, CASRN 5751-20-2) 및 1-메틸-1H-피라졸-5-아민(10 g, 103 mmol)의 혼합물을 160℃로 48시간 동안 가열하였다. 혼합물을 40 내지 50℃로 냉각하고, DCM(30 ml)을 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후에, 용액을 n-헥산(200 mL)으로 희석하고, 이는 적색 슬러리를 형성하였다. 혼합물을 0.5시간 동안 방치하고, 이후 투명한 유기상 상부를 디켄팅하였다. 적색 슬러리를 DCM(50 ml)에 용해시키고 감압하에 농축하여 미가공 생성물 2(16.5 g)를 수득하고, 이를 임의적 정제없이 후속 단계에 사용하였다.

단계 2: 4- 클로로 -N-(1- 메틸 -1H- 피라졸 -5-일)피리미딘-2-아민(7)

MeCN(200 ml) 중의 2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4(3H)-온(16.5 g, 미가공물)의 용액에 POCl₃(30 ml, 0.33 mol)를 첨가하였다. 혼합물을 가열하여 15분 동안 환류하였다. 혼합물을 얼음물(100 g)로 켄칭하고, pH를 Na₂CO₃ 분말을 사용하여 10으로 조절하였다. 혼합물을 EtOAc(3 x100 mL)로 추출하고 건조하고(Na₂SO₄) 여과하고 감압하에 농축하여 미가공 생성물을 수득하였다. 미가공 생성물을 페트롤륨 에터/EtOAc(1:1)로 용리하는 SiO₂ 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(7.5 g, 2개의 단계에 걸쳐 51%)을 수득하였다. ¹H NMR (MeOH-d₄, 400 MHz) δ: 8.30 (d, J = 5.2, 1H), 7.42 (d, J = 1.6, 1H), 6.90 (d, J = 5.2, 1H), 6.28 (d, J = 1.6, 1H), 3.72 (s, 3H)

단계 3: 2-벤질-5-(2-((1- 메틸 -1H- 피라졸 -5-일)아미노)피리미딘-4-일) 피리다진 -3(2H)-온(9)

다이옥산(300 mL) 중의4-클로로-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민(25.0 g, 119 mmol)의 용액에 Me₃SnSnMe₃(46.9 g, 143.11 mmol) 및 Pd(PPh₃)₄(13.8 g, 11.93 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 125℃에서 N₂ 대기하에 3시간 동안 가열하였다. 상기 용액에 2-벤질-5-요오도피리다진-3(2H)-온(3)(44.7 g, 143.1 mmol, CASRN 825633-93-0), LiCl(10.1 g, 238.5 mmol), CuI(11.4 g, 59.6 mmol) 및 Pd(PPh₃)₄(13.8 g, 11.93 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 125℃에서 N₂ 대기하에 16시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하고 셀라이트(Celite, 등록상표)를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 DCM(3 x 200 mL)으로 세척하였다. DCM과 합한 용액을 농축하고 MeOH/DCM 구배(1-5% MeOH)로 용리하는 SiO₂ 크로마토그래피로 정제하여 화합물 d(34 g, 84%)를 황색 고체로 수득하였다.

단계 4: 5-(2-((1- 메틸 -1H- 피라졸 -5-일)아미노)피리미딘-4-일) 피리다진 -3(2H)-온(10)

무수 톨루엔(500 mL) 및 2-벤질-5-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리다진-3(2H)-온(34 g, 94.6 mmol)의 용액에 AlCl₃(63 g, 473 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 N₂ 대기하에 1시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하고, 상부 투명 층을 디켄팅하였다. 나머지 고체를 얼음물(200 g)에 첨가하고, 초기 고체가 분해되고 황색 고체가 생성될 때까지 실온에서 교반하였다. 고체를 여과하고 얼음물(3 x 100 mL)로 세척하였다. 건조 후에, 황색 고체 생성물(약 35 g)을 수득하였다.

단계 5: 4-(6- 클로로피리다진 -4-일)-N-(1- 메틸 -1H- 피라졸 -5-일)피리미딘-2-아민

교반된 POCl₃(200 mL)에 실온에서 5-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리다진-3(2H)-온(10)(35 g 미가공물, 0.13 mol)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 혼합물을 건조상태로 농축하고 CHCl₃(200 mL)에 용해시킨 후에, 교반하면서 얼음물(500 g)에 부였다. 생성된 혼합물을 약 pH 8로 조절하였다. 혼합물을 DCM(5 x 300 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 농축하고 페트롤륨 에터/EtOAc 구배(1 내지 50% EtOAc)로 용리하는 SiO₂ 크로마토그래피로 용리하여 표제 화합물(13 g, 2개의 단계에 걸쳐 47%)을 황색 고체로 수득하였다. ¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ: 9.80 (s, 1H), 9.74 (s, 1H), 8.70 (d, J = 4.8, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.72 (d, J = 5.2, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.29 (s, 1H), 3.68 (s, 3H).

단계 6: 4-(3-(2-(4- 클로로페닐 )-2- 메톡시에틸 )-[1,2,4] 트라이아졸로 [4,3-b]피리다진-7-일)-N-(1- 메틸 -1H- 피라졸 -5-일)피리미딘-2-아민

IPA(3 mL) 중의 4-(6-클로로피리다진-4-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민(200 mg, 0.758 mmol)의 교반된 용액에 3-(4-클로로페닐)-3-메톡시프로판하이드라지드(200 mg, 0.834 mmol) 및 메탄 설폰산(1.2 mg, 1.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 건조상태로 증발시키고 분취 HPLC(FA)로 정제하여 목적 생성물(40 mg, 7%)을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, MeOH-d₄) δ: 9.24 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.63 (d, J = 5.2, 1H), 7.63 (d, J = 5.2, 1H), 7.51 (d, J = 2.0, 1H), 7.36 (s, 4H), 6.39 (s, 1H), 4.63 (s, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.81-3.74 (m, 1H), 3.59-3.54 (m, 1H), 3.20 (s, 3H); MS [M+H]⁺ =461.9.

(R)-4-(3-(2-(4-클로로페닐)-2-메톡시에틸)-[1,2,4]트라이아졸로[4,3-b]피리다진-7-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민 거울상 이성질체를 SFC로 분해하여 목적 생성물(13.8 mg)을 수득하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.70 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 9.00 (d, J = 2, 1H), 8.67 (d, J = 4.8, 1H), 7.23 (d, J = 4.8, 1H), 7.42-7.35 (m, 4H), 6.33 (s, 1H), 4.93-4.89 (m, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.72-3.64 (m, 1H), 3.50-3.44 (m, 1H), 3.10 (s, 3H) ); MS [M+H]⁺ =461.9.

생물학적 실시예 1

세포 배양 및 생존능 분석

셀티터글로(프로메가(Promega)): A549 세포를 정상 성장 배지(10% 소태아 혈청, 2 mM/L-글루타민 및 100 단위/mL의 페니실린 및 스트렙토마이신을 갖는 로즈웰 파크 메모리얼 인스티튜트(Roswell Park Memorial Institute) 1640(RPMI 1640) 배지)에 1500 세포/웰로 384-웰 투명-바닥 흑색 플레이트에 플레이팅하였다. 다음날, 화합물을 지시된 농도에서 시작하여 연속적으로 1:2 희석한 후에, 세포를 사중으로 첨가하였다. 96시간의 화합물 첨가 후에, 셀티터-글로 발광성 세포 생존능 시약을 제조업자의 프로토콜에 따라 첨가하였다.

BrdU ELISA(로슈(Roche)): A549 세포를 정상 성장 배지에 3000 세포/웰로 96-웰 투명-바닥 흑색 플레이트에 플레이팅하였다. 다음날, 화합물을 CTG 결과를 근거로 지시된 농도에서 삼중 첨가하였다. 48 및 72시간의 화합물 첨가 후에, BrdU 세포 증식 화학 발광 ELISA를 제조업자의 프로토콜에 따라 수행하였다.

세포사 nucELISA(로슈): A549 세포를 정상 성장 배지에 3000 세포/웰로 96-웰 투명-바닥 흑색 플레이트에 플레이팅하였다. 다음날, 화합물을 CTG 결과를 근거로 지시된 농도에서 삼중 첨가하였다. 48 및 72시간의 화합물 첨가 후에, 세포사 검출 ELISA^PLUS를 제조업자의 프로토콜에 따라 수행하였다.

생물학적 실시예 2

종양 이종이식 모델

배양된 NCI-H520.X1 및 EBC1 세포를 배양 조직으로부터 제거하고 행크 완충된 염수 용액(HBSS)에 현탁화하고 마트리겔(Matrigel)(미국 소재의 비디 바이오사이언시즈(BD Biosciences, USA))과 1:1 혼합하고 네이브 암컷 NCR 누드 마우스의 우측 옆구리(미국 뉴욕 허드슨 소재의 타코닉 팜즈(Taconic Farms))에 피하 이식하였다. 약 250 mm³의 평균 부피의 종양을 갖는 마우스를 각각 10 마리의 마우스의 처리 집단으로 나누었다. 마우스는 각각 대조군 및 녹다운(knockdown) 집단에 대해 단지 5% 수크로스 또는 5% 수크로스 + 1 mg/ml 독시사이클린(미국 캘리포니아주 마운틴 뷰 소재의 클론테크(Clontech))을 투여받았다. 모든 물 병을 1주일 당 3회 바꾸었다. 체중 및 종양 부피 측정(캘리퍼를 사용한 길이 및 너비 측정에 의해 수득됨)을 연구 동안 1주일 당 2회 수행하였다. 모든 실험적 절차는 미국 생리학 협회(American Physiology Society)의 지침을 따랐고, 제넨테크의 동물실험윤리위원회(Genentech's Institutional Animal Care and Use Committee)에 의해 승인받았다. 종양 부피를 하기 수학식에 의해 계산하였다: 종양 부피 = 0.5 * (a * b²), 이때, 'a'는 가장 큰 종양 직경이고, 'b'는 수직 종양 직경이다. 종양 부피 결과를 평균 종양 부피 ± 평균의 표준 오차(SEM)로서 제시하였다. 연구의 말(EOS)에서의 성장 억제율(%INH)을 하기와 같이 계산하였다: %INH = 100 [(EOS_비히클-EOS_처리군)/(EOS_비히클)]. 데이터 분석 및 던네트(Dunnett) t-검정을 사용하는 p-값의 생성을 JMP 소프트웨어(미국 노쓰캐롤라이나주 캐리 소재의 에스에이에스 인스티튜트(SAS Institute))를 사용하여 수행하였다.

화학식 Ia의 화합물을 PEG400(폴리에틸렌 글리콜 400)/60%[10% HP-β-CD(하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린)] 중의 다양한 농도(자유 염기 당량으로서 표현됨)의 용액으로서 제조하였다. 비히클 대조군은 40% PEG400/60% (10% HP-β-CD) 또는 MCT이었다. 화학식 II의 화합물을 메틸 셀룰로스 트윈(MCT) 중의 다양한 농도의 현탁액으로서 제조하였다. 화학식 Ia 및 II의화합물 및 비히클 대조군 투여 용액을 3주 동안 1주일 당 1회 제조하였다. 제형을 투여 전에 와류에 의해 완전히 혼합하였다. 시험 물품을 4 내지 7℃ 범위의 온도에서 유지하도록 설정된 냉장고에서 저장하였다.

생물학적 실시예 3

유전적으로 개질된 마우스 모델

하기 기관으로부터 마우스를 수득하였다: Kras^LSL ^- ^G12D 마우스를 타일러 잭스(Tyler Jacks)(매사추세츠 공과대학교)로부터 수득하고, p16/p19^fl ^/ ^fl 마우스를 안톤 베른즈(Anton Berns)(네덜란드 소재의 NKI)로부터 수득하고, p53frt/frt 마우스를 엑셀릭시스 인코포레이티드(Exelixis, Inc.)로부터 수득하고, Pdx1-Cre 마우스를 앤디 로위(Andy Lowy)(오하이오 대학교)로부터 수득하였다. PDAC에 대해 초음파 이미지화 또는 NSCLC 모델에 대해 microCT를 통한 개시된 종양 부하의 확인 후에 투여 개시된 동일한 개수의 수컷 및 암컷 동물을 실험 집단에 사용하였다. 동물은 제넨테크 인코포레이티드의 동물을 동물실험윤리위원회(IACUC)의 가이드라인에 따라 투여하고 모니터링하였다. 모든 선택된 투여 양생법은 GEMM에서 허용되었다. 비침입성 이미지화 및 전체 생존의 평가를 {Singh:2010hv}에 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다. GEM 모델에서, 코비메티닙 및 화학식 Ia의 화합물을 경구 위관 영양법(PO)으로 매일(QD) 5 mg/kg 및 60 mg/kg으로 투여하였다.

카플란-마이어 생존 평가 및 이미지화 데이터 세트로 나타낸 데이터의 통계적 분석을 이전에 기재된 바와 같이 수행하였다(문헌[M. Singh et al., Nature Biotechnol., 2010, 28(6):585-593]). GEM 모델 종양 샘플을 수집하고 RNALater(미국 캘리포니아주 발렌시아 소재의 퀴아젠(Qiagen))에 저장하였다. 총 RNA를 제조업자의 지시에 따라 RNeasy Plus Mini 키트(퀴아젠)로 추출하였다. RNA 정량화를 나온드롭(Naondrop)(미국 매사추세츠주 월탐 소재의 써모 사이언티픽(Thermo Scientific))을 사용하여 결정하였다.

구체적 형태로 또는 개시된 기능을 수행하기 위한 수단의 관점에서 표현된 전술된 설명 또는 하기 특허청구범위에 개시된 특징, 또는 적절하게 개시된 결과를 획득하는 방법 또는 공정은 개별적으로 또는 이러한 특징의 임의의 조합으로 다양한 형태로 본 발명을 실현하는데 활용될 수 있다.

전술된 본 발명은 명확성 및 이해를 위해 예시 및 예로 보다 상세히 기재되었다. 이의 변화 및 변형이 첨부된 청구항의 범주 내에서 실행될 수 있음이 당업자에게 자명할 것이다. 따라서, 상기 설명이 제한적인 것이 아니라 예시적인 것으로 의도됨이 이해되어야 한다. 따라서, 본 발명의 범주는 상기 설명을 참조로 결정되어야 하지만, 대신에 청구항에 인정된 등가물의 전체 범주와 함께 하기 첨부된 청구항을 참조로 결정되어야 한다.

본원에 언급된 특허, 공개특허출원 및 과학적 문헌은 당업자의 지식을 확립하고, 그 전문 내지 각각이 구체적으로 및 개별적으로 참고로 포함되었다고 지시된 것과 동일한 정도로 본원에 참고로 포함된다. 본원에 언급된 임의의 참고문헌 및 본원의 과학적 사상 사이의 임의의 충돌은 후자에 우호적으로 해결한다. 마찬가지로, 본원에 구체적으로 설명된 단어 또는 어구는 후자에 우호적으로 해결한다.

Claims

치료적 유효량의 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 ERK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 조합을 이를 필요로 하는 포유동물에게 조합된 제형으로서 또는 교대로 투여하는 단계를 포함하는 과증식성 장애의 치료 방법.
제1항에 있어서,
과증식성 장애가 암이고, 포유동물이 인간인, 방법.
제2항에 있어서,
암이 KRAS 돌연변이와 관련된, 방법.
제2항 또는 제3항에 있어서,
MEK 억제제가 코비메티닙인, 방법.
제2항 또는 제3항에 있어서,
MEK 억제제가 GDC-0623인, 방법.
제2항 또는 제3항에 있어서,
MEK 억제제가 GSK-1120212(트라메티닙)인, 방법.
제2항 또는 제3항에 있어서,
MEK 억제제가 AZD-6244(셀루메티닙)인, 방법.
제2항 또는 제3항에 있어서,
MEK 억제제가 BAY 86-9766(레파메티닙)인, 방법.
제2항 또는 제3항에 있어서,
ERK 억제제가 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온, 4-(3-((에틸다이메틸실릴)메틸)-[1,2,4]트라이아졸로[4,3-a]피리딘-7-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민, (S)-4-(3-(2-(4-클로로페닐)-2-메톡시에틸)-[1,2,4]트라이아졸로[4,3-b]피리다진-7-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민 또는 (S)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-(3-(2-메틸부틸)-[1,2,3]트라이아졸로[1,5-a]피리딘-6-일)피리미딘-2-아민인, 방법.
제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
ERK 억제제가 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 방법.
제2항에 있어서,
암 또는 과증식성 장애가 선종, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 상피 암종, 여포상 암종, 요생식로암, 교아 세포종, 호지킨병, 두경부암, 간암, 간질극 세포종, 신장암, 대세포 암종, 백혈병, 폐 선암종, 폐암, 림프성 장애, 흑색종 및 비-흑색종 피부암, 골수 이형성 증후군, 신경아 세포종, 비-호지킨 림프종, 난소암, 유두 암종, 췌장암, 전립선암, 직장암, 육종, 소세포 암종, 고환암, 기형 암종, 갑상선암 및 미분화 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
제11항에 있어서,
암이 대장암, 폐암, 중피종, 유방암, 췌장암, 신경 교종, 위암, 신장암, 난소암, 자궁내막암, 방광암 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
제12항에 있어서,
암이 대장암, 비-소세포 폐암, 췌장암 또는 흑색종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
코비메티닙 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염과 조합으로 투여되는, 방법.
제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
5-((2-플루오로-4-요오도페닐)아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염과 조합으로 투여되는, 방법.
제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
코비메티닙 또는 5-((2-플루오로-4-요오도페닐)아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염과 동시에 투여되는, 방법.
제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
코비메티닙 또는 5-((2-플루오로-4-요오도페닐)아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드가 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염과 순차적으로 투여되는 방법.
제10항에 있어서,
코비메티닙 또는 5-((2-플루오로-4-요오도페닐)아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 4-(3-((에틸다이메틸실릴)메틸)-[1,2,4]트라이아졸로[4,3-a]피리딘-7-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민, (S)-4-(3-(2-(4-클로로페닐)-2-메톡시에틸)-[1,2,4]트라이아졸로[4,3-b]피리다진-7-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민 또는 (S)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-(3-(2-메틸부틸)-[1,2,3]트라이아졸로[1,5-a]피리딘-6-일)피리미딘-2-아민으로부터 선택된 ERK 억제제와 함께 투여되는 암의 치료 방법.
포유동물에서 암의 치료를 위한 약제의 제조에서, 코비메티닙 또는 5-((2-플루오로-4-요오도페닐)아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염; 및 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 조합의 용도.
암의 치료를 위한, 코비메티닙 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 용기 및 패키지 부속품 또는 라벨을 포함하는 키트로서, 상기 부속품이 코비메티닙 및 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온의 투여를 지시하는, 키트.
제1항에 있어서,
MEK 억제제가 코비메티닙 또는 5-((2-플루오로-4-요오도페닐)아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이고, ERK 억제제가 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온인, 암의 치료적 치료 방법.
제1항에 있어서,
코비메티닙 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 5-((2-플루오로-4-요오도페닐)아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염; 및 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온이 단위 투여량 형태 당 약 1 내지 약 1000 mg의 양으로 각각 투여되는, 방법.
제22항에 있어서,
코비메티닙 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 28일 주기의 제1일 내지 제21일에 60 mg의 투여량으로 투여되고, (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 단위 투여량 형태 당 약 1 내지 약 1000 mg의 양으로 각각 투여되는, 방법.
ERK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 과증식성 장애의 치료를 위한 약제의 제조에서 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도.
제24항에 있어서,
과증식성 장애가 암이고, 포유동물이 인간인, 용도.
제25항에 있어서,
암이 KRAS 돌연변이와 관련된, 용도.
제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 코비메티닙인, 용도.
제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 GDC-0623인, 용도.
제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 GSK-1120212(트라메티닙)인, 용도.
제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 AZD-6244(셀루메티닙)인, 용도.
제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 BAY 86-9766(레파메티닙)인, 용도.
제24항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서,
ERK 억제제가 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온, 4-(3-((에틸다이메틸실릴)메틸)-[1,2,4]트라이아졸로[4,3-a]피리딘-7-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민, (S)-4-(3-(2-(4-클로로페닐)-2-메톡시에틸)-[1,2,4]트라이아졸로[4,3-b]피리다진-7-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민 또는 (S)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-(3-(2-메틸부틸)-[1,2,3]트라이아졸로[1,5-a]피리딘-6-일)피리미딘-2-아민인, 용도.
제24항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
ERK 억제제가 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 용도.
제24항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서,
과증식성 장애가 선종, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 상피 암종, 여포상 암종, 요생식로암, 교아 세포종, 호지킨병, 두경부암, 간암, 간질극 세포종, 신장암, 대세포 암종, 백혈병, 폐 선암종, 폐암, 림프성 장애, 흑색종 및 비-흑색종 피부암, 골수 이형성 증후군, 신경아 세포종, 비-호지킨 림프종, 난소암, 유두 암종, 췌장암, 전립선암, 직장암, 육종, 소세포 암종, 고환암, 기형 암종, 갑상선암 및 미분화 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된 암인, 용도.
제24항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
과증식성 장애가 대장암, 폐암, 중피종, 유방암, 췌장암, 신경 교종, 위암, 신장암, 난소암, 자궁내막암, 방광암 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암인, 용도.
제24항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
과증식성 장애가 대장암, 비-소세포 폐암, 췌장암 또는 흑색종으로 이루어진 군으로부터 선택된 암인, 용도.
제24항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서,
코비메티닙 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염과 조합으로 투여되는, 용도.
제24항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서,
5-((2-플루오로-4-요오도페닐)아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염과 조합으로 투여되는, 용도.
제24항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서,
코비메티닙 또는 5-((2-플루오로-4-요오도페닐)아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염과 동시에 투여되는, 용도.
제24항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서,
코비메티닙 또는 5-((2-플루오로-4-요오도페닐)아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드가 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염과 순차적으로 투여되는, 용도.
제24항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
코비메티닙 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 5-((2-플루오로-4-요오도페닐)아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염; 및 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온이 단위 투여량 형태 당 약 1 내지 약 1000 mg의 양으로 각각 투여되는, 용도.
제24항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서,
코비메티닙 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 28일 주기의 제1일 내지 제21일에 60 mg의 투여량으로 투여되고, (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 단위 투여량 형태 당 약 1 내지 약 1000 mg의 양으로 각각 투여되는, 용도.
ERK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
제43항에 있어서,
과증식성 장애가 암이고, 포유동물이 인간인, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
제44항에 있어서,
암이 KRAS 돌연변이와 관련된, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 코비메티닙인, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 GDC-0623인, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 GSK-1120212(트라메티닙)인, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 AZD-6244(셀루메티닙)인, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 BAY 86-9766(레파메티닙)인, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
ERK 억제제가 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온, 4-(3-((에틸다이메틸실릴)메틸)-[1,2,4]트라이아졸로[4,3-a]피리딘-7-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민, (S)-4-(3-(2-(4-클로로페닐)-2-메톡시에틸)-[1,2,4]트라이아졸로[4,3-b]피리다진-7-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민 또는 (S)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-(3-(2-메틸부틸)-[1,2,3]트라이아졸로[1,5-a]피리딘-6-일)피리미딘-2-아민인, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
ERK 억제제가 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
제43항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
과증식성 장애가 선종, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 상피 암종, 여포상 암종, 요생식로암, 교아 세포종, 호지킨병, 두경부암, 간암, 간질극 세포종, 신장암, 대세포 암종, 백혈병, 폐 선암종, 폐암, 림프성 장애, 흑색종 및 비-흑색종 피부암, 골수 이형성 증후군, 신경아 세포종, 비-호지킨 림프종, 난소암, 유두 암종, 췌장암, 전립선암, 직장암, 육종, 소세포 암종, 고환암, 기형 암종, 갑상선암 및 미분화 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된 암인, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
제43항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서,
과증식성 장애가 대장암, 폐암, 중피종, 유방암, 췌장암, 신경 교종, 위암, 신장암, 난소암, 자궁내막암, 방광암 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암인, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
제43항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서,
과증식성 장애가 대장암, 비-소세포 폐암, 췌장암 또는 흑색종으로 이루어진 군으로부터 선택된 암인, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
제43항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서,
코비메티닙 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 5-((2-플루오로-4-요오도페닐)아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염; 및 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온이 단위 투여량 형태 당 약 1 내지 약 1000 mg의 양으로 각각 투여되는, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
제43항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
코비메티닙 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 28일 주기의 제1일 내지 제21일에 60 mg의 투여량으로 투여되고, (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 단위 투여량 형태 당 약 1 내지 약 1000 mg의 양으로 각각 투여되는, 과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염과 ERK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 조합.
제58항에 있어서,
과증식성 장애가 암이고, 포유동물이 인간인, 조합.
제58항에 있어서,
암이 KRAS 돌연변이와 관련된, 조합.
제58항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 코비메티닙인, 조합.
제58항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 GDC-0623인, 조합.
제58항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 GSK-1120212(트라메티닙)인, 조합.
제58항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 AZD-6244(셀루메티닙)인, 조합.
제58항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서,
MEK 억제제가 BAY 86-9766(레파메티닙)인, 조합.
제58항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
ERK 억제제가 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온, 4-(3-((에틸다이메틸실릴)메틸)-[1,2,4]트라이아졸로[4,3-a]피리딘-7-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민, (S)-4-(3-(2-(4-클로로페닐)-2-메톡시에틸)-[1,2,4]트라이아졸로[4,3-b]피리다진-7-일)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민 또는 (S)-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-(3-(2-메틸부틸)-[1,2,3]트라이아졸로[1,5-a]피리딘-6-일)피리미딘-2-아민인, 조합.
제58항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서,
ERK 억제제가 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인, 조합.
제58항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서,
과증식성 장애가 선종, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 상피 암종, 여포상 암종, 요생식로암, 교아 세포종, 호지킨병, 두경부암, 간암, 간질극 세포종, 신장암, 대세포 암종, 백혈병, 폐 선암종, 폐암, 림프성 장애, 흑색종 및 비-흑색종 피부암, 골수 이형성 증후군, 신경아 세포종, 비-호지킨 림프종, 난소암, 유두 암종, 췌장암, 전립선암, 직장암, 육종, 소세포 암종, 고환암, 기형 암종, 갑상선암 및 미분화 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된 암인, 조합.
제58항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서,
과증식성 장애가 대장암, 폐암, 중피종, 유방암, 췌장암, 신경 교종, 위암, 신장암, 난소암, 자궁내막암, 방광암 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암인, 조합.
제58항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서,
과증식성 장애가 대장암, 비-소세포 폐암, 췌장암 또는 흑색종으로 이루어진 군으로부터 선택된 암인, 조합.
제58항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서,
코비메티닙 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 5-((2-플루오로-4-요오도페닐)아미노)-N-(2-하이드록시에톡시)이미다조[1,5-a]피리딘-6-카복스아미드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염; 및 (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온이 단위 투여량 형태 당 약 1 내지 약 1000 mg의 양으로 각각 투여되는, 조합.
제58항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서,
코비메티닙 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 28일 주기의 제1일 내지 제21일에 60 mg의 투여량으로 투여되고, (S)-1-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸)-4-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)피리딘-2(1H)-온 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 단위 투여량 형태 당 약 1 내지 약 1000 mg의 양으로 각각 투여되는, 조합.
과증식성 장애의 치료에 사용하기 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염과 ERK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 공동 투여로서, 보다 구체적으로 상기 MEK 억제제가 제61항 내지 제65항 중 어느 한 항에 따라 정의되고, 상기 ERK 억제제가 제66항 또는 제67항에 따라 정의되고, 상기 과증식성 장애가 제68항 내지 제70항 중 어느 한 항에 따라 정의되는, 공동 투여.
과증식성 장애의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 MEK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염과 ERK 억제제 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 조합의 용도로서, 보다 구체적으로 상기 MEK 억제제가 제61항 내지 제65항 중 어느 한 항에 따라 정의되고, 상기 ERK 억제제가 제66항 또는 제67항에 따라 정의되고, 상기 과증식성 장애가 제68항 내지 제70항 중 어느 한 항에 따라 정의되는, 용도.
상기에 기재된 바와 같은 발명.