BR112021004003A2

BR112021004003A2 - inibidores de trk úteis como drogas anticâncer

Info

Publication number: BR112021004003A2
Application number: BR112021004003-0A
Authority: BR
Inventors: Boyu Zhong; Tony Yantao Zhang; Yiju Cao; Guangming Chen
Original assignee: Tyligand Bioscience (Shanghai) Limited
Priority date: 2018-09-03
Filing date: 2019-09-03
Publication date: 2021-05-25
Also published as: EP3848365A1; KR20210054548A; JP2021536503A; JP7443373B2; CN112739691A; CN112739691B; AU2019335450A1; US11952364B2; CA3111105A1; US20220388983A1; EP3848365A4; WO2020048455A1

Abstract

INIBIDORES DE TRK ÚTEIS COMO DROGAS ANTICÂNCER. A presente divulgação se refere a um grupo de inibidores de receptor de tropomiosina relacionado à quinase compreendendo um fragmento de estrutura amido- fenoxi-indazol. Estes compostos mostram efeitos inibitórios potentes em várias quinases oncogênicas, especialmente TRK, e, portanto, podem ser usados para tratar tumores ou cânceres.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção Para: “INIBIDORES DE TRK ÚTEIS COMO DROGAS ANTICÂNCER” Campo Técnico

[001] A presente divulgação se refere a um grupo de compostos com novas estruturas, composições farmacêuticas que compreendem esses compostos, métodos para preparar estes compostos e uso destes compostos no tratamento de cânceres.

Especificamente, a presente divulgação refere-se a um grupo de compostos com uma estrutura de "fenil-piridona-amido- fenoxi (substituído com pirazol) indazol", que exibe atividade inibidora de Trk e, portanto, pode ser usado para tratar cânceres.

Fundamentos

[002] A família de receptores de tropomiosina quinase, também conhecida como Trk, inclui três receptores, TrkA, TrkB e TrkC, codificados pelos genes do receptor de tirosina quinase neurotrófico NTRK1, NYRK2 e NTRK3, respectivamente.

Trk é um tipo de receptor de fator neurotrófico (NT), que pode ser encontrado em uma variedade de tecidos e pode ser ativado por fatores neurotróficos. Entre esses fatores neurotróficos, estão o fator de crescimento nervoso (NGF) que pode ativar o TrkA, o fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) e o NT-4/5 que pode ativar o TrkB e o NT3 que pode ativar o TrkC.

[003] O fator neurotrófico se liga à proteína Trk para induzir a dimerização e fosforilação do receptor e ativar a amplificação do sinal a jusante e a condução de PI3K, RAS/MAPK/ERK e PLC-gama. Assim, o Trk está intimamente relacionado à proliferação, diferenciação, metabolismo e apoptose. Especificamente, eles estão envolvidos no desenvolvimento dos neurônios, incluindo o crescimento e a função das sinapses neuronais, a formação e manutenção da memória e a proteção dos neurônios após isquemia e outros tipos de lesão. Foi revisto em WO2010/033941 que, os estudos mostraram que os inibidores da via do fator Trk/neurotrófico são eficazes numa variedade de modelos pré-clínicos de dor; a superexpressão, ativação, amplificação e/ou mutação de Trk estão relacionadas a muitos cânceres; consequentemente, alguns inibidores de Trk de moléculas pequenas demonstraram inibir o crescimento do tumor e prevenir metástases tumorais em modelos pré-clínicos e clínicos de câncer; inibir a via Trk/fator neurotrófico também se mostrou eficaz no tratamento de doenças inflamatórias (como doença pulmonar inflamatória, cistite intersticial, doença inflamatória do intestino e doença inflamatória da pele), doenças neurodegenerativas (como esclerose múltipla, doença de Parkinson, doença de Alzheimer ), doenças relacionadas ao desequilíbrio da remodelação óssea (como osteoporose, artrite reumatóide e metástases ósseas).

[004] Especificamente, em termos da relação entre o tratamento do câncer e Trk, a proteína Trk pode se ligar a fatores neurotróficos para induzir a dimerização e fosforilação dos receptores Trk e ativar a amplificação do sinal a jusante e a condução de PI3K, RAS/MAPK/ERK e PLC-

gama.

As alterações na via do Trk incluem principalmente fusão gênica, superexpressão de proteínas e mutações de nucleotídeo único.

Essas mudanças estão relacionadas à patogênese de muitos cânceres.

Entre eles, a fusão do gene

NTRK é de longe o evento carcinogênico mais claro (Stransky

N et al., The Landscape of kinase fusions in cancer, Nature

Communications, setembro de 2014, 10:1-10). Estudos demonstraram que quando as mutações cromossômicas sofrem fusão do gene NTRK, isso pode levar à ativação excessiva de sinais a jusante de Trk, o que pode levar a ou promover o desenvolvimento de uma variedade de cânceres (Vaishnavi et al., TRKing Down an Old Oncogene in a New Era of Targeted

Therapy, Cancer Discovery 2015; 5:25-34). Esses cânceres incluem, mas não estão limitados a, neuroblastoma, câncer de ovário, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pâncreas, câncer de glândula salivar, mieloma múltiplo,

astrocitoma e meduloblastoma, neuroglioma, melanoma, câncer de tireóide, adenocarcinoma de pulmão, tumores neuroendócrinos de células grandes, câncer colorretal,

câncer de cabeça e pescoço, sarcoma (especialmente câncer de fibrossarcoma infantil), colangiocarcinoma intra-hepático,

glioblastoma, glioma, carcinoma secretório da mama, carcinoma secretório mamário, leucemia mieloide aguda, nefroma mesoderma congênito, fibrossarcoma congênito, leucemia linfoblástica aguda, adenocarcinoma de cólon, tumor estromal gastrointestinal, etc. Entre eles, a fusão do gene NTRK1 demonstrou ser uma mutação impulsora para adenocarcinoma de pulmão, colangiocarcinoma, câncer colorretal, câncer papilar de tireoide, tumor spitzoid e glioblastoma; A fusão do gene NTRK2 demonstrou ser uma mutação impulsora de sarcoma, astrocitoma, adenocarcinoma de pulmão e câncer de cabeça e pescoço; foi demonstrado que a fusão do gene NTRK3 é uma mutação impulsionadora em glioma de baixo grau, câncer de mama secretor, câncer papilar de tireoide, leucemia mieloide aguda, nefroma mesoderma congênito, fibrossarcoma congênito, leucemia linfoblástica aguda, adenocarcinoma de cólon, câncer de tireoide, melanoma de pele, cabeça e câncer de pescoço e glioma pediátrico (Vaishnavi et al., 2015). Portanto, os compostos que têm como alvo o Trk e inibem a atividade catalítica do Trk devem se tornar opções de tratamento eficazes para esses tipos de câncer.

[005] Vários tipos de inibidores de pequenas moléculas de Trk para o tratamento de cânceres foram relatados. Os pedidos de patente internacional WO2006/115452 e WO2006/087538 descrevem vários compostos de pequenas moléculas denominados inibidores de Trk que podem ser usados para tratar dores e cânceres.

[006] WO2010/011538 descreve um grupo de compostos amidofenoxindazol que podem ser usados como inibidores de C- Met. Relatórios de pesquisa recentes (Bruce W. Konicek et al., Merestinibe (LY2801653) inibe a quinase do receptor neurotrófico (NTRK) e suprime o crescimento de tumores com fusão de NTRK, Oncotarget, 2018, Vol. 9, (No. 17), pp: 13796- 13806), o inibidor de multiquinase oral Meretinib (LY2801653), que tem como alvo várias quinases oncogênicas MET, AXL, RON e MKNK1/2, demonstrou inibir a quinase do receptor neurotrófico (NTRK) e inibir o crescimento de tumores portadores de fusões do gene NTRK.

[007] Atualmente, vários compostos direcionados a NTRK estão em desenvolvimento clínico, como LOXO-101 (Larotrectinibe), Entrectinibe, Carbozantinibe, Merestinibe, DS-6051b, PLX7486, TSR-011, etc. Os resultados da pesquisa clínica de LOXO-101 (Larotrectinibe) são muito encorajadores. Os tumores dos pacientes testados são distribuídos em mais de dez tipos diferentes, incluindo câncer de tireoide, câncer colorretal, câncer de pulmão, melanoma, fibrossarcoma infantil, adenoma salivar, câncer do ducto biliar, GIST, etc. A taxa de resposta geral do paciente (TRGP) atingiu 75%, dos quais 62% foi uma resposta parcial e 13% foi uma resposta completa. Após 1 ano de tratamento,

71% dos pacientes ainda respondiam ao tratamento e 55% dos pacientes não apresentavam progressão da doença (Drilon A et al., Efficacy of Larotrectinib in TRK Fusion-Positive Cancers in Adults and Children, N Engl J Med. 22 de fevereiro de 2018; 378 (8):731-739).

[008] No entanto, em vista dos excelentes efeitos antitumorais dos inibidores de Trk direcionados, ainda há uma necessidade de compostos mais potentes que direcionem o Trk. Espera-se que esses compostos tenham propriedades físico-químicas melhoradas, propriedades drogáveis e/ou menos interações medicamentosas.

[009] A presente divulgação fornece novos compostos de amidofenoxindazol especificamente substituídos com atividade inibidora de Trk. Estes compostos, especialmente os compostos preferidos da presente divulgação, têm um padrão de substituição melhorado em comparação com aqueles na técnica anterior, que não apenas retêm uma atividade inibitória de Trk considerável e até mesmo aumentada, mas também podem reduzir a produção de intermediários ativos no corpo; propriedades físicas e químicas, como a solubilidade, são significativamente melhoradas, proporcionando assim boas propriedades farmacêuticas, por exemplo, mais fácil de desintegrar e absorver no corpo; ao mesmo tempo, o efeito inibitório sobre o sistema enzimático do citocromo p450 é enfraquecido, reduzindo, assim, as interações medicamentosas. Além disso, o composto da presente divulgação, especialmente o composto preferido da presente divulgação, também exibe excelente atividade antitumoral em comparação com os inibidores de Trk existentes na técnica anterior e pode ser enriquecido em tecidos tumorais e plasma em um nível superior concentração, ao mesmo tempo, também mostra estabilidade metabólica significativamente melhorada com meia-vida metabólica mais longa e menor taxa de depuração inerente, o que pode fornecer eficácia duradoura ou reduzir a dosagem necessária do medicamento. Em particular, o composto contendo a estrutura tricíclica da presente divulgação confere atividade inibidora de Trk na molécula, um espectro de atividade diferente e melhor drogabilidade “druggability” (tal como menor inibição das enzimas do citocromo p450, melhor estabilidade metabólica in vivo, etc.).

Resumo da divulgação

[0010] Os inventores descobriram por meio de pesquisa que certos compostos indazol-fenoxi-aminoacil-di- hidropiridil especificamente substituídos são inibidores de Trk, podem ser usados para tratar ou prevenir doenças ou distúrbios em que a atividade de Trk desempenha um papel ou está envolvida, ou podem ser tratados pela inibição de Trk, especialmente pode ser usado para tratar ou prevenir tumores ou cânceres pela inibição de Trk, mais especialmente tumores ou cânceres causados pela fusão do gene NTRK.

[0011] O primeiro aspecto da presente divulgação fornece um composto de fórmula I, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis, R3

O O N

N N R1 H R5 NH N O N R2 R4

I Onde R1 é alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, -ORa, alquila C1-6 ou amino; R5 é H, halogênio, -ORa ou alquila C1-6 opcionalmente substituído, e o substituinte é selecionado a partir de um ou mais halogênios, -ORa, alquila C1-6 ou amino; ou R1 e R5 juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam uma estrutura cíclica da seguinte fórmula:

N R6 X R9 (a) onde X é -CR7R8-, =CR7-, -CR7R8-CR7R8- ou -CR7=CR8-; R6, R7, R8 e R9 são independentemente selecionados a partir de H, halogênio, -ORa, alquila C1-6 opcionalmente substituído ou cicloalquila C 3-6, em que o substituinte é selecionado a partir de um ou mais halogênios, -ORa, alquila C1-6 ou amino; ou R6 e R9 ou R7 e R8 ligados ao mesmo átomo de carbono podem formar =O ou =S juntos, ou formar um grupo cicloalquila C3-6 juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados; R2 é alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, alquila C 1-6, alcoxi C1-6 ou amino; cicloalquila C3-6 ou grupo heterocíclico C 3-6, opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, -ORa, alquila C1-6 ou amino; nitro, ciano, acila, halogênio, mercapto, alquiltio C1-6, alquilsulfonila C1-6, alquilsulfinila C1-6 ou carboxi; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H, halogênio, nitro, ciano, acila ou carboxi; Ra é selecionado a partir de H ou alquila C 1-6; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo,

[0012] Em uma modalidade do composto de fórmula I, R1 é alquila C1-6, tal como, mas não limitado a, metila, etila, propila, isopropila, butila, sec-butila, isobutila, terc- butila, N-pentila, isopentila, neopentila, n-hexila, 2- metilpentila, 3-metilpentila, 2,3-dimetilbutila, 2,2- dimetilbutila, 2-etilbutila, de um modo preferido metila, etila ou isopropila, opcionalmente substituído por 1, 2 ou 3 halogêneos (de um modo preferido flúor), hidroxila, alcoxi

C1-6 (de um modo preferido metoxi ou etoxi) ou amino.

[0013] Em uma modalidade do composto de fórmula I, R 1 é cicloalquila C3-6, de preferência ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila, opcionalmente substituído por 1, 2 ou 3 halogênios (de preferência flúor), hidroxi, alquila C1-6 (de preferência metila, etila ou isopropila), alcoxi C 1- 6 (de preferência metoxi ou etoxi) ou amino, tal como, mas não limitado a 2-fluoro ciclopropila, 2- e/ou 3- fluorociclobutila, 2- e/ou 3-fluorociclopentila, 2-, 3- e/ou 4-fluorociclohexila, ou estes grupos substituídos nas posições correspondentes por hidroxila, metila, etila, isopropila, metoxila, etoxila ou amina.

[0014] Em uma modalidade do composto de fórmula I, R 5 é H.

[0015] Em uma modalidade do composto de fórmula I, R 5 é halogênio, hidroxi, alcoxi C 1-6 ou alquila C1-6, tal como, mas não se limitando a, flúor, cloro, bromo, iodo, hidroxi, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, metila, etila, propila, isopropila, etc., opcionalmente substituído por 1, 2 ou 3 halogênios (de um modo preferido F), alcoxi C 1-6 (de um modo preferido metoxi ou etoxi), alquila C 1-6 (de um modo preferido metila, etila) ou amino.

[0016] Em uma modalidade do composto de fórmula I, R 1 e R5 juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam uma estrutura de fórmula (a), em que R 6 e R9 são, cada um, independentemente H, halogênio, hidroxi, alquila C 1-6 ou cicloalquila C3-6, e X é -CR7R8- ou - CR7R8-CR7R8-, em que R7 e R8 são cada um independentemente H, halogênio, hidroxi, alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, De preferência, R6 e R9 são cada um independentemente H, halogênio ou cicloalquila C 3-6, e X é - CR7R8- ou - CR7R8-CR7R8-, em que R7 e R8 são cada um independentemente H, halogênio ou cicloalquila C 3-6,

[0017] Nesta modalidade, é também preferido que um de R6 e R9 e/ou um de R7 e R8 seja um grupo cicloalquila C3-6, tal como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila.

[0018] Nesta modalidade, também é preferido que um ou ambos de R6 e R9 e/ou um ou ambos de R7 e R8 sejam halogênio, de um modo preferido flúor.

[0019] Nesta modalidade, é mais preferido que R 6 e R9 sejam ambos H, e X seja -CR7R8-, em que R7 e R8 sejam ambos H; também é mais preferido que R 6 e R9 sejam ambos H, e X seja -CHF- ou-CF2-; também é mais preferido que R 6 e R9 sejam ambos H, e X seja -CR7R8-CR7R8-, em que R7 e R8 sejam ambos H; também é mais preferido que R 6 e R9 sejam ambos H, e X seja -CH2-CF2- ou-CHF-CHF-.

[0020] Em uma modalidade do composto de fórmula I, R 1 e R5 juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam uma estrutura de fórmula (a), em que R 6 e R9 são, cada um, independentemente H, halogênio, hidroxi, alquila C 1-6 ou cicloalquila C3-6, e X é =CR7- ou -CR7 =CR8-, em que R7 e R8 são cada um independentemente H, halogênio, alquila C 1-6 ou cicloalquila C3-6, Mais preferencialmente, R 6 e R9 são cada um independentemente H, halogênio (de preferência flúor) ou cicloalquila C3-6, e X é =CR7- ou -CR7=CR8-, em que R7 e R8 são cada um independentemente H, halogênio (de um modo preferido flúor) ou Cicloalquila C 3-6,

[0021] Nesta modalidade, é também preferido que um de R6 e R9 e/ou um de R7 e R8 seja um grupo cicloalquila C 3-6, tal como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila.

[0022] Em uma modalidade do composto de fórmula I, R 1 e R5 juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam a estrutura de fórmula (a), em que X é -CR7R8- ou - CR7R8-CR7R8-, em que R6 e R9 ou R7 e R8 ligado ao mesmo átomo de carbono em conjunto formam =O ou =S, ou formam ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados; de um modo preferido R7 e R8 ligados ao mesmo átomo de carbono formam ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila.

[0023] Em uma modalidade do composto de fórmula I, R 2 é alquila C1-6, tal como, mas não se limitando a, metila, etila, propila, isopropila, butila, sec-butila, isobutila, terc- butila, n-pentila, isopentila, neopentila , n-hexilo, 2-

metilpentila, 3-metilpentila, 2,3-dimetilbutila, 2,2- dimetilbutila, 2-etilbutila; de um modo preferido metila, etila, isopropila, opcionalmente substituído por 1, 2 ou 3 halogêneos (de um modo preferido flúor), alquila C1-6 (de um modo preferido metila, etila ou isopropila)), alcoxila C 1-6 (de um modo preferido metoxila ou etoxila) ou amino; mais de um modo preferido metila, etila, isopropila ou trifluorometila.

[0024] Em uma modalidade do composto de fórmula I, R 2 é cicloalquila C3-6 ou heterociclila C3-6, tal como, mas não se limitando a, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila, ou tetra-hidrofurano, tetra-hidrotiofeno, azetidina, acridina, tetra-hidropirrol, tiazolidina, oxazolidina, piperidina, piperazina, morfolina, tiomorfolina, tiazina; de um modo preferido ciclopropila; eles são opcionalmente substituídos por 1, 2 ou 3 halogênios (de um modo preferido flúor), hidroxila, alquila C1-6 (de um modo preferido metila, etila ou isopropila), C1-6 alcoxi (de um modo preferido metoxi ou etoxi) ou amino.

[0025] Em uma modalidade do composto de fórmula I, R 3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H ou halogênio, de um modo preferido F, Cl, Br ou I; mais de um modo preferido F.

[0026] O composto de fórmula I da presente divulgação abrange as modalidades acima, independentemente, em combinação ou quaisquer combinações ou subcombinações, e também abrange modalidades resultantes de qualquer combinação de qualquer modalidade preferida, mais preferida ou mais preferida conforme definido acima.

[0027] Uma modalidade do composto de fórmula I no primeiro aspecto da presente divulgação é um composto de fórmula I-a, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis, R3

O O N

N N R1 H NH O N R2

N R4 I-a Onde R1 é alquila C1-6; R2 é alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído com um ou mais halogênios; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H ou halogênio; e desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0028] O primeiro aspecto da presente divulgação também fornece, de preferência, um composto de fórmula I-b, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis, R3

O O N

N N R6 X H 9 NH O N R2

R N R4 I-b Onde R2 é alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído com um ou mais halogênios; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H ou halogênio; R6 e R9 são cada um independentemente H, halogênio, hidroxi, alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, e X é -CR7R8- ou -CR7R8-CR7R8-, em que R7 e R8 são, cada um, independentemente H, halogênio, hidroxi, alquila C 1-6 ou cicloalquila C3-6, ou R7 e R8 ligados ao mesmo átomo de carbono em conjunto para formar um grupo cicloalquila C 3-6; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0029] O primeiro aspecto da presente divulgação também fornece um composto de fórmula II, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis,

II Onde R1 é alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, que é opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, -ORa, -SRa, alquila C1-6 ou amino; R5 é H, halogênio, -ORa, -SRa ou alquila C1-6 opcionalmente substituído, e o substituinte é selecionado a partir de um ou mais halogênios, -ORa, -SRa, alquila C1-6 ou amino; ou R1 e R5 juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam uma estrutura cíclica com a seguinte fórmula geral:

N R6 X R9 (a) onde X é -CR7R8-, =CR7-, -CR7R8-CR7R8- ou -CR7=CR8-; R6, R7, R8 e R9 são, cada um, independentemente H, halogênio, -ORa, -SRa, alquil C1-6 opcionalmente substituído ou cicloalquila C3-6, em que o substituinte é selecionado a partir de um ou mais halogênios, -ORa, -SRa, C1-6 alquila ou amino; ou

R6 e R9 ou R7 e R8 ligados ao mesmo átomo de carbono podem formar =O ou =S juntos, ou formar um grupo cicloalquila

C3-6 juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados;

R2 é alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, alquila C 1-6, C1-6 alcoxi, alquiltio C1-6 ou amino; cicloalquila C 1-6 ou heterociclila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, -ORa, -SRa, C1-6 alquila ou amino substituído; nitro, ciano, acila,

halogênio, -SRb, -SO2Rb, -SORb, C(O)Rb ou CO2Rb; ou R2 é -

NRaRb ou -ORb;

R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H, halogênio, nitro, ciano, acila ou carboxi;

R10 é hidrogênio, halogênio, ciano, nitro, -NRaRb, -ORb,

-SRb, C(O)Rb, CO2Rb; alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila

C2-6, cicloalquila C3-6, heterocicloalquila C 3-6, arila de 6 a 10 membros, heteroarila de 5 a 10 membros; Alquila C1-6 ou alquenila C2-6 ou alquinila C2-6, opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, alquila C 1-6, alcoxi C1-6,

alquiltio C1-6 ou amino; cicloalquila C3-6 ou heterocicloalquila C3-6, opcionalmente substituído por um ou mais hidroxi, halogênio, alquila C 1-6, alcoxi C1-6, alquiltio

C1-6 ou amino; Arila de 6 a 10 membros ou heteroarila de 5 a

10 membros, opcionalmente substituído por um ou mais hidroxi,

halogênio, alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou amino; Ra e Rb são, cada um, independentemente H, C 1-6 alquila opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, CN ou nitro, ou C3-6 cicloalcano opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, CN ou nitro, ou R a e Rb juntamente com o N para os quais eles ligados formam um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou mais halogênios, CN ou nitro; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0030] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R 1 é alquila C1-6, tal como, mas não se limitando a, metila, etila, propila, isopropila, butila, sec-butila, isobutila, terc-butila, n-pentila, isopentila, neopentila, n-hexila, 2- metilpentila, 3-metilpentila, 2,3-dimetilbutila, 2,2- dimetilbutila, 2-etilbutila; de um modo preferido metila, etila ou isopropila, eles são opcionalmente substituídos por 1, 2 ou 3 halogênios (de preferência flúor), hidroxila, alcoxi C1-6 (de um modo preferido metoxi ou etoxi), mercapto, alquiltio C1-6 (de um modo preferido metiltio ou etiltio), ou amino, mais preferencialmente metila.

[0031] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R 1 é cicloalquila C3-6, de preferência ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila, que são opcionalmente substituídos por 1, 2 ou 3 halogênios (de preferência fluoro), hidroxi, alquila C1-6 (de preferência metila, etila ou isopropila), alcoxi C1-6 (de um modo preferido metoxi ou etoxi), mercapto, alquiltio C1-6 (de um modo preferido metiltio ou etiltio) ou amino, tal como, mas não limitado a 2-fluorociclopropil, 2- e/ou 3 - fluorociclobutil, 2- e/ou 3-fluorociclopentil, 2-, 3 e/ou 4- fluorociclohexil, ou estes grupos substituídos por hidroxila, mercapto, metila, etila, isopropila, metoxi, etoxi, metiltio, etiltio ou amino em as posições correspondentes.

[0032] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R 5 é H, halogênio, hidroxi, alcoxi C 1-6, mercapto, alquiltio C1- 6 ou alquila C1-6, tal como, mas não limitado a H, flúor, cloro, bromo, iodo, hidroxila, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, metila, etila, propila, isopropila, mercapto, metiltio, etiltio, propiltio, isopropiltio, etc., opcionalmente substituído por 1, 2 ou 3 halogênios (de preferência F), alcoxi C 1-6 (de um modo preferido metoxi ou etoxi), alquiltio C1-6 (de um modo preferido metiltio ou etiltio), alquila C1-6 (de um modo preferido metila, etila) ou amino; mais de um modo preferido R5 é H.

[0033] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R 1 e R5 juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam uma estrutura de fórmula (a), em que R6 e R9 são cada um independentemente H, halogênio, hidroxila, mercapto, alquila C1-6 , alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou cicloalquila C3-

6, e X é -CR7R8- ou -CR7R8-CR7R8-, em que R7 e R8 são cada um independentemente H, halogênio, hidroxila, mercapto, alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou cicloalquila C3-6, De preferência, R6 e R9 são, cada um, independentemente H, halogênio, alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, e X é -CR7R8- ou -CR7R8-CR7R8-, em que R7 e R8 são, cada um, independentemente H, halogênio, alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6,

[0034] Nesta modalidade, é também preferido que um de R6 e R9 e/ou um de R 7 e R8 seja um grupo cicloalquila C 3-6, tal como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclo- hexila.

[0035] Nesta modalidade, também é preferido que um ou ambos de R6 e R9 e/ou um ou ambos de R7 e R8 sejam halogênio, de um modo preferido flúor.

[0036] Nesta modalidade, é mais preferido que R 6 e R9 sejam ambos H, e X seja -CR7R8-, em que R7 e R8 sejam ambos H; também é mais preferido que R 6 e R9 sejam ambos H, e X seja -CHF- ou-CF2-; também é mais preferido que R 6 e R9 sejam ambos H, e X seja -CR7R8-CR7R8-, em que R7 e R8 sejam ambos H; também é mais preferido que R 6 e R9 sejam ambos H, e X seja -CH2-CF2-, -CH2-CHF-, -CHF-CHF- ou -CF2-CF2-.

[0037] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R 1 e R5 juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam uma estrutura de fórmula (a), em que R 6 e R9 são, cada um, independentemente H, halogênio, hidroxila, mercapto,

alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou cicloalquila C3- 6, e X é =CR7- ou -CR7=CR8-, em que R7 e R8 são cada um independentemente H, halogênio, alquila C1-a ou cicloalquila C3-6, Mais preferencialmente, R6 e R9 são cada um independentemente H, halogênio (de preferência flúor), alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, e X é =CR7- ou -CR7=CR8-, em que R7 e R8 são cada um Independentemente H, halogênio (de um modo preferido flúor), alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6,

[0038] Nesta modalidade, é também preferido que um de R6 e R9 e/ou um de R7 e R8 seja um grupo cicloalquila C 3-6, tal como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclo- hexila.

[0039] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R 1 e R5 juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam uma estrutura de fórmula (a), em que X é -CR7R8- ou - CR7R8-CR7R8-, em que R6 e R9 ou R7 e R8 ligado ao mesmo átomo de carbono em conjunto formam =O ou =S, ou juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila; de um modo preferido R7 e R8 ligados ao mesmo átomo de carbono juntos formam ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila.

[0040] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R 2 é -NRaRb, em que Ra e Rb são, cada um, independentemente selecionados a partir de H, alquila C 1-6 opcionalmente substituído com um ou mais halogênios (de preferência flúor), ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído com um ou mais halogênios (de preferência flúor), ou Ra e Rb juntamente com o N ao qual eles estão ligados formam um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência flúor, Ra e Rb são de um modo preferido selecionados independentemente a partir de H ou alquila C1- 6, R2 específico inclui mas não está limitado a -NH2, -NH- Me, -NH-Et, -NH-nPr, -NH-iPr, -NH-cPr, -NH-nBu, -NH-sec-Bu, -NH-iBu, -NH-tBu, -NH-cBu, -NH-pentila, -NH-isopentila, -NH- neopentila, -NH-ciclopentila, -NH-hexila, -NH-(2- ou 3- etila)butila, -NH-(2,3-dimetila)butila, Grupos -NH-(2- propila)propila, -N(Me)2, -N(Me)(Et), -N(Et)2, -N(Pr)2 e estes grupos correspondentes em que os grupos alquila ou cicloalquila nestes grupos amino substituídos são substituídos por um ou mais halogéneos, tais como flúor, etc., é mais preferível que R a e Rb sejam H ao mesmo tempo.

[0041] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R2 é -SRb, em que Rb é selecionado de H, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios (de preferência flúor), ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios (de um modo preferido flúor), de um modo preferido alquila C1-6 opcionalmente substituído por halogênios (de um modo preferido flúor) ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por halogênios

(de um modo preferido flúor), R2 específico inclui, mas não está limitado a -SH, -S-Me, -S -Et, -S-nPr, -S-iPr, -S-cPr, -S-nBu, -S-sec-Bu, -S-iBu, - S-tBu, -S-cBu, -S-pentil, -S- isopentila, -S-neopentila, -S-ciclopentila, -S-hexila, -S- (2- ou 3- etila) butila, -S-(2,3-dimetil) butil, -S-(2- propila)propila, -SCF3, -SCF2H, -SCH2CF3, -SCH2CH2F, - SCH2CHF2, -S-cPrF, etc., de preferência R 2 é -SMe.

[0042] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R 2 é -ORb, em que Rb é selecionado a partir de H, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por halogênios (de preferência flúor) ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por halogênios (de um modo preferido flúor), de preferência alquila C1-6 opcionalmente substituído por halogênios (de preferência flúor) ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por halogênios (de preferência flúor), R2 específico inclui, mas não está limitado a -OH, - OMe, -OEt, -O-nPr, -O- iPr, -O-cPr, -O-nBu, -O-sec-Bu, -O-iBu, -O-tBu, -O-cBu, -O-pentila, -O-isopentila, -O-neopentila, - O- hexila, -O- (2- ou 3-etila)butila, -O-(2,3-dimetila)butila, -O-(2-propila)propila, -OCF3, -OCF2H, -OCH2CF3, -O -cPrF, etc., de um modo preferido R2 é -OH、 -OMe、 -OEt、 -O-nPr、 -O-iPr、 -O-cPr、 -OCF3、 -OCF2H、 -OCH2CF3, e mais de um modo preferido R2 é -OMe.

[0043] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R 2 é -SO2Rb ou -SORb, em que Rb é selecionado a partir de H, alquila C1-6 opcionalmente substituído por halogênios (de preferência flúor), ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por halogênios (de preferência flúor), de preferência alquila C 1-6 opcionalmente substituído por halogênios (de preferência flúor), tal como, mas não limitado a -SO2H, -SOMe, -SO2Me, -SOEt, -SO2Et, -SO-nPr, - SO2-nPr, - SO-iPr, -SO2-iPr, -SO-cPr, -SO2-cPr, -SO-nBu, -SO2-nBu, -SO- sec -Bu, -SO2-sec-Bu, -SO-iBu, -SO2-iBu, -SO-tBu, -SO2-tBu, -SO-cBu, -SO2-cBu, -SO-pentila, -SO2-pentila, -SO- isopentila, -SO2-isopentila, -SO-neopentila, -SO2- neopentila, -SO-hexila, -SO2-hexila, -SOCF3, -SO2CF3, - SOCF2H, -SO2CF2H, -SOCH2CF3, -SO2CH2CF3, -SO2CH2CF3, -SO2 -cPrF, -SO2-cPrF, etc., de um modo preferido R2 é -SOMe, -SO-Et, - SO2-Me, -SO2-Et, -SOCF3, -SO2CF3,

[0044] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R 2 é -C(O)Rb ou -CO2Rb, em que Rb é conforme definido acima para Rb em -SO2Rb ou -SORb.

[0045] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R 2 é alquila C1-6, tal como, mas não se limitando a, metila, etila, propila, isopropila, butila, sec-butila, isobutila, terc-butila, n-pentila, isopentila, neopentila, n-hexila, 2- metilpentila, 3-metilpentila, 2,3-dimetilbutila, 2,2- dimetilbutila, 2-etilbutila; de um modo preferido metila, etila, isopropila, opcionalmente substituído por 1, 2 ou 3 halogênios (de um modo preferido flúor), alquila C1-6 (de um modo preferido metila, etila ou isopropila)), C 1-6 alcoxi (de um modo preferido metoxi ou etoxi), C1-6 alquiltio (de um modo preferido metiltio ou etiltio) ou amino; mais de um modo preferido metila, etila, isopropila, trifluorometila ou ciclopropila.

[0046] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R 2 é cicloalquila C3-6 ou heterociclila C3-6, tal como, mas não se limitando a, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila, ou tetra-hidrofurano, tetra-hidrotiofeno, azetidina, acridina, tetra-hidropirrol, tiazolidina, oxazolidina, piperidina, piperazina, morfolina, tiomorfolina, tiazina, imidazolidina, etc .; de um modo preferido ciclopropila; qualquer um deles é opcionalmente substituído por 1, 2 ou 3 halogênios (de preferência flúor), hidroxila, mercapto, alquil C 1-6 (de preferência metila, etila ou isopropila), alcoxi C 1-6 (de um modo preferido metoxi ou etoxi), alquiltio C 1-6 (de um modo preferido metiltio ou etiltio) ou amino.

[0047] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R 3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H ou halogênio, de um modo preferido F, Cl, Br ou I; mais preferencialmente F.

[0048] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R 10 é hidrogênio, halogênio, ciano, nitro; -NRaRb, -ORb, -SRb,

C(O)Rb, CO2Rb, alquila C1-6, cicloalquila C3-6, heterociclila C3-6, conforme definido acima para R 2; Alcenila C2-6, alcinila C2-6, arila de 6 a 10 membros, heteroarila de 5 a 10 membros; C2-6 alquenil ou C2-6 alquinil opcionalmente substituído por um ou mais hidroxi, halogênio, alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou amino; Arila de 6 a 10 membros ou heteroarila de 5 a 10 membros opcionalmente substituído por um ou mais hidroxi, halogênio, alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou amino.

[0049] Nesta modalidade, R10 é de preferência um grupo heteroarila de 5 a 6 membros, incluindo, mas não se limitando a pirazol, piridina, pirimidina, piridazina, pirazina, pirrol, imidazol, oxazol, isoxazol, triazolil, tetrazol, oxadiazol, tiazol, isotiazol, tiadiazol, furano, tiofeno e formas saturadas e parcialmente insaturadas destes grupos heteroarila, tais como piperidina, piperazina, pirrolidina, imidazolidina, oxazolidina, tiazolidina, tetra-hidrofurano, etc.; morfolina, -amino; alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, incluindo, mas não se limitando a metila, etila, n-propila, isopropila, ciclopropila, n-butila, isobutila, sec-butila, tert-butila, ciclobutila, n-pentila, isopentila, neopentila, ciclopentila, n-hexila, (2- ou 3-etil)butila, (2,3- dimetila)butila, (2-propila)propila, ciclohexila; Alcenila C2-6 ou alcinila C2-6, incluindo mas não se limitando a vinila, 2-propenila, 1, 2 ou 3-butenila, etinila, 2-

propinila, 1, 2 ou 3-butinila; mais preferencialmente pirazol, piridina, -NH2, morfolina; R10 é mais preferencialmente 1H-pirazol-4-ila.

[0050] Uma modalidade do composto de fórmula II no primeiro aspecto da presente divulgação é um composto de fórmula II-a, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis, II-a Onde R1 é C1-6 alquila; R2 é halogênio, ciano, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios; ou R 2 é -NRaRb, -SRb ou -ORb; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H ou halogênio; R10 é -NRaRb, um grupo C3-6 heterocíclico opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, ou um heteroarila de 5 a 10 membros opcionalmente substituído por um ou mais halogênios; Ra e Rb são, cada um, independentemente H, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios ou C 3-6 cicloalquila opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, ou Ra e Rb juntamente com N estão ligados para formar um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou mais halogênios; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0051] Numa modalidade preferida do composto de fórmula II-a, R1 é alquila C1-6, de um modo preferido metila; R 2 é alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, ou cicloalquila C3- 6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, ou -ORb; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio; R 10 é um grupo heteroarila de 5 a 6 membros, de um modo preferido piridila ou pirazolila; Rb é selecionado a partir de alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido F ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido F; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0052] Em outra modalidade preferida do composto de fórmula II-a, R1 é alquila C1-6, de um modo preferido metila; R2 é -ORb, em que Rb é selecionado a partir de alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência F, ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência flúor, R 2 é de um modo preferido metoxi, etoxi, propoxi, ciclopropoxi, isopropoxi, trifluoroetoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio, de um modo preferido flúor; R10 é um grupo heteroarila de 5 a 6 membros, de um modo preferido piridila ou pirazolila; desde que R 1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0053] Em outra modalidade preferida do composto de fórmula II-a, R1 é alquila C1-6, R2 é -ORb, em que Rb é selecionado a partir de alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência F, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência flúor, R2 é de um modo preferido metoxi, etoxi, propoxi, ciclopropoxi, isopropoxi, trifluoroetoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi; R 3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio, de um modo preferido flúor; R10 é -NRaRb ou C3-6 heterociclila, em que Ra ou Rb são, cada um, independentemente selecionados a partir de H, C 1-6 alquila opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência flúor, ou R a e Rb juntamente com o N ao qual estão ligados formam um anel de 3 a 6 membros, R10 é de preferência -NH2 ou morfolinila; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0054] Uma modalidade do composto de fórmula II no primeiro aspecto da presente divulgação é um composto de fórmula II-b, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis, II-b Onde X é -CR7R8-, =CR7-, -CR7R8-CR7R8- ou -CR7=CR8-; R6 e R9 são cada um independentemente H, halogênio, - OH, alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6; R7 e R8 são, cada um, independentemente H, halogênio, - OH, alquila C1-6 opcionalmente substituído com um ou mais halogênios ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído com um ou mais halogênios, ou R 7 e R8 juntamente com o C ao qual estão ligados formar um grupo cicloalquila C 3-6; R2 é halogênio, ciano, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios; ou R 2 é -NRaRb, -SRb ou -ORb;

R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H ou halogênio; R10 é -NRaRb, um grupo C3-6 heterocíclico opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, ou um heteroarila de 5 a 10 membros opcionalmente substituído por um ou mais halogênios; Ra e Rb são, cada um, independentemente H, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, ou Ra e Rb juntamente com o N ao qual eles estão ligados, formam um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou mais halogênios; desde que R1 e R2 não sejam metil ao mesmo tempo. desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0055] Numa modalidade preferida do composto de fórmula II-b, X é -CR7R8- ou -CR7R8-CR7R8-; R2 é alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, ou -ORb; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio; R 10 é um grupo heteroarila de 5 a 6 membros, de um modo preferido piridila ou pirazolila; Rb é selecionado a partir de alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido F, ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido F; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0056] Em outra modalidade preferida do composto de fórmula II-b, X é -CR7R8- ou -CR7R8- CR7R8-; R2 é -ORb, em que Rb é selecionado a partir de alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência flúor ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência flúor, R2 é de um modo preferido metoxi, etoxi, propoxi, ciclopropoxi , isopropoxi, trifluoroetoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi; R 3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio, de um modo preferido flúor; R 10 é um grupo heteroarila de 5-6 membros, de um modo preferido piridila ou pirazolila; desde que R1 e R2 não sejam metil ao mesmo tempo.

[0057] Em outra modalidade preferida do composto de fórmula II-b, X é -CR7R8- ou -CR7R8-CR7R8-; R2 é -ORb, em que Rb é selecionado a partir de alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência F, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência flúor, R2 é de um modo preferido metoxi, etoxi, propoxi, ciclopropoxi, isopropoxi, trifluoroetoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi; R 3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio, de um modo preferido flúor; R10 é -NRaRb ou heterociclila C3-6, em que Ra e Rb são, cada um,

independentemente selecionados a partir de H, alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência flúor, ou R a e Rb juntamente com o N ao qual estão ligados formam um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, R10 é de um modo preferido -NH2 ou morfolinila; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0058] Numa modalidade preferida de um composto de fórmula II-b, X é =CR7- ou -CR7=CR8-; R2 é um grupo alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido com flúor, ou -ORb; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio; R10 é um grupo heteroarila de 5 a 6 membros, de um modo preferido piridila ou pirazolila; Rb é selecionado a partir de alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido F, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0059] Em outra modalidade preferida do composto de fórmula II-b, X é =CR7- ou -CR7=CR8-; R2 é -ORb, em que Rb é selecionado a partir de alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência F, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência flúor, R2 é de um modo preferido metoxi, etoxi, propoxi, ciclopropoxi, isopropoxi, trifluoroetoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi; R 3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio, de um modo preferido flúor; R 10 é um grupo heteroarila de 5 a 6 membros, de um modo preferido piridila ou pirazolila; desde que R 1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0060] Em outra modalidade preferida do composto de fórmula II-b, X é X é =CR7- ou -CR7 = CR8-; R2 é -ORb, em que Rb é selecionado a partir de alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência F, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, R2 é de um modo preferido metoxi, etoxi, propoxi, ciclopropoxi, isopropoxi, trifluoroetoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi; R 3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio; R10 é -NRaRb ou heterociclila C3-6, em que Ra e Rb são, cada um, independentemente selecionados a partir de H, alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, ou R a e Rb juntamente com o N ao qual estão ligados, formam um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, R 10 é de um modo preferido -NH2 ou morfolino; desde que R 1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0061] Em cada modalidade preferida do composto de fórmula II-b como acima, R6 e R9 são cada um independentemente H, halogênio, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência flúor, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência flúor, e R 7 e R8 são cada um independentemente H, halogênio, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência flúor, ou R 7 e R8 juntamente com o átomo de C ao qual estão ligados formam um cicloalquila C3-6,

[0062] O composto de fórmula II da presente divulgação abrange as modalidades acima, independentemente, em combinação ou quaisquer combinações ou subcombinações, bem como modalidades resultantes de qualquer combinação de qualquer definição preferida, mais preferida ou mais preferida como acima.

[0063] O primeiro aspecto da presente divulgação também fornece um composto de fórmula III, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis,

III Onde R1 é alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, -ORa, -SRa, alquila C1-6 ou amino; R5 é H, halogênio, -ORa, -SRa ou alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, -ORa, - SRa, alquila C1-6 ou amino; ou R1 e R5 juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam uma estrutura cíclica com a seguinte fórmula geral:

N R6 X R9 (a) onde X é -CR7R8-, =CR7-, -CR7R8-CR7R8- ou -CR7=CR8-; R6, R7, R8 e R9 são, cada um, independentemente H, halogênio, -ORa, -SRa, alquila C1-6 opcionalmente substituído ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído, em que o substituinte é selecionado a partir de um ou mais halogênios,

-ORa, -SRa, alquila C1-6 ou amino; ou

R6 e R9 ou R7 e R8 ligados ao mesmo átomo de carbono juntos formam =O ou =S, ou juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um grupo cicloalquila C 3-6;

R2 é -NRaRb ou -ORb;

R10 é hidrogênio, halogênio, ciano, nitro, -NRaRb, -ORb,

-SRb, C(O)Rb, CO2Rb; Alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila

C2-6, cicloalquila C3-6, heterocicloalquila C 3-6, arila de 6 a 10 membros, heteroarila de 5 a 10 membros; alquila C 1-6 ou alquenila C2-6 ou alquinila C2-6, opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, alquila C 1-6, alcoxi C1-6, C1-6 alquiltio ou amino; cicloalquila C 3-6 ou heterocicloalquila

C3-6, opcionalmente substituído por um ou mais hidroxi,

halogênio, alquila C1-6, C1-6 alcoxi, alquiltio C1-6 ou amino;

Arila de 6 a 10 membros ou heteroarila de 5 a 10 membros,

opcionalmente substituído por um ou mais hidroxi, halogênio,

alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou amino;

Ra e Rb são, cada um, independentemente H, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, CN ou nitro, ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, CN ou nitro, ou R a e Rb juntamente com o

N ao qual eles estão ligados, formam um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou mais halogênios, CN ou nitro; desde que R1 e R2 não sejam metil ao mesmo tempo.

[0064] Em uma modalidade do composto de fórmula III, R 1 é alquila C1-6, tal como, mas não se limitando a, metila, etila, propila, isopropila, butila, sec-butila, isobutila, terc-butila, n-pentila, isopentila, neopentila, n-hexila, 2- metilpentila, 3-metilpentila, 2,3-dimetilbutila, 2,2- dimetilbutila, 2-etilbutila; de um modo preferido metila, etila ou isopropila, opcionalmente substituído por 1, 2 ou 3 halogênios (de preferência flúor), hidroxila, alcoxi C 1-6 (de um modo preferido metoxi ou etoxi), mercapto, alquiltio C1-6 (de um modo preferido metiltio ou etiltio) ou amino, a maioria de preferência metila.

[0065] Em uma modalidade do composto de fórmula III, R 1 é cicloalquila C3-6, de preferência ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila, opcionalmente substituído por 1, 2 ou 3 halogênios (de preferência fluoro), hidroxi, alquila C1-6 (de preferência metila, etila ou isopropila), alcoxi C 1-6 (de preferência metoxi ou etoxi), mercapto, alquiltio C1-6 (de preferência metiltio ou etiltio) ou amino, tal como, mas não limitado a 2-fluorociclopropila, 2- e/ou 3-fluorociclobutila, 2- e/ou 3-fluorociclopentila, 2-, 3 e/ou 4-fluorociclohexila, ou estes grupos substituídos por hidroxila, mercapto, metila, etila, isopropila, metoxi, etoxi, metiltio, etiltio ou amino nas posições correspondentes.

[0066] Em uma modalidade do composto de fórmula III, R 5 é H, halogênio, hidroxila, alcoxi C1-6, mercapto, alquiltio C1-6 ou alquila C1-6, tal como, mas não limitado a H, flúor, cloro, bromo, iodo, hidroxila, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, metila, etila, propila, isopropila, mercapto, metiltio, etiltio, propiltio, isopropiltio, etc., opcionalmente substituído por 1, 2 ou 3 halogênios (de preferência F), alcoxi C1-6 (de um modo preferido metoxi ou etoxi), alquiltio C1-6 (de um modo preferido metiltio ou etiltio), alquila C1-6 (de um modo preferido metila, etila) ou amino; mais preferencialmente R 5 é H.

[0067] Em uma modalidade do composto de fórmula III, R 1 e R5 juntamente com os átomos aos quais estão ligados formam uma estrutura de fórmula (a), em que R 6 e R9 são, cada um, independentemente H, halogênio, hidroxila, mercapto, alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou cicloalquila C3-6, e X é -CR7R8- ou -CR7R8-CR7R8-, em que R7 e R8 são, cada um, independentemente H, halogênio, hidroxila, mercapto, alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou cicloalquila C3-6, De preferência, R6 e R9 são, cada um, independentemente H, halogênio, alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, e X é -CR7R8- ou -CR7R8-CR7R8-, em que R7 e R8 são, cada um, independentemente H, halogênio, alquila C 1-6 ou cicloalquila C3-6,

[0068] Nesta modalidade, também é preferido que um de

R6 e R9 e/ou um de R7 e R8 seja uma cicloalquila C 3-6, tal como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila.

[0069] Nesta modalidade, também é preferido que um ou ambos de R6 e R9 e/ou um ou ambos de R7 e R8 sejam halogênio, de um modo preferido flúor.

[0070] Nesta modalidade, é mais preferido que R 6 e R9 sejam ambos H, e X seja -CR7R8-, em que R7 e R8 sejam ambos H; também é mais preferido que R 6 e R9 sejam ambos H, e X seja -CHF- ou-CF2-; também é mais preferido que R 6 e R9 sejam ambos H, e X seja -CR7R8-CR7R8-, em que R7 e R8 sejam ambos H; também é mais preferido que R 6 e R9 sejam ambos H, e X seja -CH2-CF2-, -CH2-CHF-, -CHF-CHF- ou -CF2-CF2-.

[0071] Em uma modalidade do composto de fórmula III, R 1 e R5 juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam uma estrutura de fórmula (a), em que R 6 e R9 são, cada um, independentemente H, halogênio, hidroxila, mercapto, alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou cicloalquila C3- 6, e X é =CR7- ou -CR7=CR8-, em que R7 e R8 são cada um independentemente H, halogênio, alquila C 1-6 ou cicloalquila C3-6, Mais preferencialmente, R6 e R9 são cada um independentemente H, halogênio (de preferência flúor), alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, e X é =CR7- ou -CR7=CR8-, em que R7 e R8 são cada um independentemente H, halogênio (de um modo preferido flúor), alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6,

[0072] Nesta modalidade, também é preferido que um de

R6 e R9 e/ou um de R7 e R8 seja um cicloalquila C 3-6, tal como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila.

[0073] Em uma modalidade do composto de fórmula III, R 1 e R5 juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam uma estrutura de fórmula (a), em que X é -CR7R8- ou - CR7R8-CR7R8-, em que R6 e R9 ou R7 e R8 ligado ao mesmo átomo de carbono em conjunto formam =O ou =S, ou juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila; de um modo preferido R7 e R8 ligados ao mesmo átomo de carbono juntos formam ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila.

[0074] Em uma modalidade do composto de fórmula III, R 2 é -NRaRb, em que Ra e Rb são, cada um, independentemente selecionados a partir de H, alquila C 1-6 opcionalmente substituído com um ou mais halogênios (de um modo preferido flúor) ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios (de um modo preferido flúor), ou Ra e Rb juntamente com o N ao qual eles estão ligados formam um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, Ra e Rb são cada um independentemente selecionados a partir de H ou alquila C1- 6, R2 específico inclui, mas não está limitado a -NH2, -NH- Me, -NH-Et, -NH-nPr, -NH-iPr, -NH-cPr, -NH-nBu, -NH-sec- Bu, -NH-iBu, -NH-tBu, -NH-cBu, -NH-pentila, -NH-isopentila, -NH-

neopentila, -NH-ciclopentila, -NH-hexila, -NH- (2- ou 3- etila) butila, -NH-(2,3-dimetila)butila, -NH-(2-propila) propila, -N(Me)2, -N(Me)(Et), -N(Et)2, -N(Pr)2, e os grupos correspondentes em que os grupos alquila ou cicloalquila substituídos no grupo amino são substituídos por um ou mais halogênios, como flúor, etc., É mais preferível que R a e Rb sejam H ao mesmo tempo.

[0075] Em uma modalidade do composto de fórmula III, R 2 é -ORb, em que Rb é selecionado a partir de H, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios (de um modo preferido flúor), ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios (de um modo preferido flúor), de um modo preferido alquila C1-6 opcionalmente substituído por halogênio (de um modo preferido flúor) ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por halogênio (de um modo preferido flúor), R 2 específico inclui, mas não está limitado a -OH, -OMe, -OEt, - O-nPr, -O-iPr, -O-cPr, -O-nBu, -O-sec-Bu, -O-iBu, -O-tBu, -O-cBu, -O-pentila, -O-isopentila , -O-neopentila, -O-hexila, -O-(2- ou 3-etila) butila, -O- (2,3-dimetila) butila, -O- (2-propila) propila, -OCF3, - OCF2H, -OCH2CF3, -O-cPrF, etc, o R2 preferido é -OH, -OMe, - OEt, -O-nPr, -O-iPr, -O-cPr, -OCF3, -OCF2H, -OCH2CF3, a maioria preferencialmente R 2 é -OMe.

[0076] Em uma modalidade do composto de fórmula III, R 3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H ou halogênio, de um modo preferido F, Cl, Br ou I; mais de um modo preferido F.

[0077] Em uma modalidade do composto de fórmula II, R10 é hidrogênio, halogênio, ciano, nitro; -NRaRb, -ORb, -SRb, C(O)Rb, CO2Rb, alquila C1-6, cicloalquila C3-6, heterociclila C3-6, como especificamente definido acima na definição de R2 para o composto de fórmula II; Alcenila C 2-6, alcinila C2-6, arila de 6 a 10 membros, heteroarila de 5 a 10 membros; alquenila C2-6 ou alquinila C2-6, opcionalmente substituído por um ou mais hidroxi, halogênio, alquila C 1-6, alcoxi C1- 6, alquiltio C1-6 ou amino; Arila de 6 a 10 membros ou heteroarila de 5 a 10 membros, opcionalmente substituído por um ou mais hidroxi, halogênio, alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou amino.

[0078] Nesta modalidade, R10 é de preferência uma heteroarila de 5 a 6 membros, incluindo, mas não se limitando a pirazol, piridina, pirimidina, piridazina, pirazina, pirrol, imidazol, oxazol, isoxazol, triazolil, tetrazol, oxadiazol, tiazol, isotiazol, tiadiazol, furano, tiofeno e as formas saturadas e parcialmente insaturadas destes grupos heteroarila, tais como piperidina, piperazina, pirrolidina, imidazolidina, oxazolidina, tiazolidina, tetra-hidrofurano, etc.; morfolina, -amino; alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, incluindo, mas não se limitando a metila, etila, n-propila, isopropila, ciclopropila, n-butila, iso-butila, sec-butila,

terc-butila, ciclobutila, n-pentila, isopentila, neopentila, ciclopentila, n-hexila, (2- ou 3-etila) butila, (2,3- dimetila)butila, (2-propila)propila, ciclohexila; Alcenila C2-6 ou alcinila C2-6, incluindo mas não se limitando a vinila, 2-propenila, 1, 2 ou 3-butenila, etinila, 2- propinila, 1, 2 ou 3-butinila; mais preferencialmente pirazol, piridina, -NH2, morfolina; R10 é mais preferencialmente 1H-pirazol-4-ila.

[0079] Uma modalidade do composto de fórmula III no primeiro aspecto da presente divulgação é um composto de fórmula III-a, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis, R3

O O N

N N R1 H NH O N R2

N R4 III-a Onde R1 é alquila C1-6; R2 é -NRaRb ou -ORb; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H ou halogênio; Ra e Rb são, cada um, independentemente selecionados a partir de H, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, ou R a e Rb juntamente com o N ao qual eles estão ligados formam um Anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou mais halogênios; e desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0080] Numa forma de realização preferida do composto de fórmula III-a, R1 é alquila C1-6, de um modo preferido metila; R2 é -ORb, em que Rb é selecionado a partir de alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência F, ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência F, R 2 é de um modo preferido metoxi, etoxi, propoxi, ciclopropoxi, isopropoxi, trifluoro-etoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi; R 3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio, de um modo preferido flúor; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0081] Em outra modalidade preferida do composto de fórmula III-a, R1 é alquila C1-6, de um modo preferido metila; R2 é -NRaRb, em que Ra e Rb são, cada um, independentemente selecionados dentre H, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência flúor, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, ou R a e Rb juntamente com o N ao qual eles estão ligados formam um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio, de um modo preferido flúor; desde que R 1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0082] Uma modalidade do composto de fórmula III no primeiro aspecto da presente divulgação é um composto de fórmula III-b, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis, R3

O O N

N N R6 X H 9 NH O N R2

R N R4 III-b Onde R2 é -NRaRb ou -ORb; X é -CR7R8-, =CR7-, -CR7R8-CR7R8- ou -CR7=CR0-; R6 e R9 são cada um independentemente H, halogênio, - OH, alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6; R7 e R8 são, cada um, independentemente H, halogênio, - OH, alquila C1-6 opcionalmente substituído com um ou mais halogênios, ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído com um ou mais halogênios, ou R 7 e R8 ligados ao mesmo átomo de carbono juntos formam uma cicloalquila C3-6; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H ou halogênio; Ra e Rb são, cada um, independentemente H, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, ou Ra e Rb juntamente com o N ao qual eles estão ligados formam um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído por um ou mais halogênios; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0083] Numa forma de realização preferida de um composto de fórmula III-b, X é -CR7R8- ou -CR7R8-CR7R8-; R2 é -ORb, em que Rb é selecionado a partir de alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência F, ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência F, R 2 é de um modo preferido metoxi, etoxi, propoxi, ciclopropoxi, isopropoxi, trifluoro-etoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi; R 3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio, de um modo preferido flúor; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0084] Em outra modalidade preferida do composto de fórmula III-b, X é -CR7R8- ou -CR7R8-CR7R8-; R2 é -NRaRb, em que Ra e Rb são cada um independentemente H, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente, um ou mais halogênios, de preferência flúor, ou R a e Rb junto com o N ao qual eles estão ligados formam um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio, de um modo preferido flúor; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0085] Numa modalidade preferida de um composto de fórmula III-b, X é =CR7- ou -CR7=CR8-; R2 é -ORb, em que Rb é selecionado a partir de alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência F, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência F, R 2 é de um modo preferido metoxi, etoxi, propoxi, ciclopropoxi, isopropoxi, trifluoro- etoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi; R 3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio, de um modo preferido flúor; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0086] Em outra modalidade preferida do composto de fórmula III-b, X é =CR7- ou -CR7=CR8-; R2 é -NRaRb, em que Ra e Rb são, cada um, independentemente H, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, ou cicloalquila C 3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, ou Ra e Rb juntos com o N ao qual eles estão ligados e formam um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor; R 3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio, de um modo preferido flúor; desde que R 1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

[0087] Em cada modalidade preferida do composto de fórmula III-b acima, R6 e R9 são cada um independentemente H, halogênio, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de preferência flúor, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogéneos, de preferência flúor; e R 7 e R8 são cada um independentemente H, halogênio, alquila C 1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido flúor, ou R 7 e R8 ligados ao mesmo átomo de carbono juntos formam um grupo cicloalquila C3-6,

[0088] O composto de fórmula III da presente divulgação abrange as modalidades acima individualmente, em combinação ou quaisquer combinações ou subcombinações, e também abrange essas modalidades resultantes de qualquer combinação de quaisquer definições preferidas, mais preferidas ou mais preferidas como acima.

[0089] Os compostos preferidos de fórmula I são selecionados a partir da seguinte lista de estruturas ou seus isômeros, ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

[0090] Os compostos mais preferidos da presente divulgação são selecionados a partir dos seguintes compostos:

[0091] A presente divulgação abrange sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula I, II,

III e modalidades preferidas dos mesmos, isto é, um sal de compostos da presente divulgação que é não tóxico,

biologicamente tolerável ou de outra forma biologicamente adequado para administração a um tema.

Os compostos acima mencionados de fórmula I, II e III da presente divulgação são compostos de amina e, portanto, podem reagir com vários ácidos inorgânicos ou orgânicos para formar sais farmaceuticamente aceitáveis, tais como, mas não limitados a sais formados com ácido clorídrico, ácido sulfúrico , ácido fosfórico, ácido bromídrico, ácido nítrico, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido maleico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido benzóico, benzenossulfônico ácido, ácido p- toluenossulfônico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido salicílico, etc. Tais sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis e seus métodos de preparação comuns são bem conhecidos na técnica, geralmente referem-se a, por exemplo, S. M. Berge et. al., "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci., 1977, 66:1-19, e "Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, Selection, and Use", editado por Stahl e Wermuth, Wiley-VCH e VHCA, Zurique, 2002,

[0092] Os sais farmaceuticamente aceitáveis preferidos dos compostos de fórmula I, II e III da presente divulgação são sais formados com ácido p-toluenossulfônico, ácido benzenossulfônico e ácido metanossulfônico.

[0093] Deve ser entendido que os compostos aqui descritos, a menos que especificado de outra forma, abrangem e incluem todos os isômeros e variantes isotópicas estáveis dos compostos da presente divulgação, tais como compostos deuterados. Todas as variantes isotópicas dos compostos fornecidos nesta divulgação, sejam radioativos ou não, devem ser incluídas no escopo da presente divulgação.

[0094] Também deve ser entendido que os compostos de fórmula I, II e III ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser isolados na forma de solvatos, de modo que tais solvatos estão incluídos no escopo da presente divulgação.

Quando apropriado ou praticável, os compostos de fórmula I, II e III também podem existir na forma de seus pró-fármacos.

Os pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula I, II e III têm grupos cliváveis química ou metabolicamente; e por solvólise ou no corpo em condições fisiológicas, torna-se um composto de fórmula I, II e III com atividade farmacológica, que pode ser formado de forma convencional e por meio do grupo funcional do composto.

[0095] O termo "alquila C1-6", tal como aqui utilizado, refere-se a um grupo de cadeia linear saturada ou cadeia monovalente ramificada com 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono, de preferência 1 a 4 átomos de carbono, mais preferencialmente 1 a 3 átomos de carbono átomos. Exemplos incluem, mas não estão limitados a, metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, iso-butila, sec-butila, tert-butila, n-pentila, isopentila, neopentila, n-hexila, 2-metilpentila,

3-metilpentila, 2,3-dimetilbutila, 2,2-dimetilbutila, 2- etilbutila.

[0096] O termo "alcoxi C1-6", conforme aqui utilizado, refere-se a um grupo alquila -O-C1-6, em que alquila C1-6 é como definido acima.

[0097] O termo "alquiltio C1-6", conforme aqui utilizado, refere-se a um grupo alquila -S-C1-6, em que alquila C1-6 é como definido acima.

[0098] O termo "halogéneo" conforme aqui utilizado refere-se a flúor, cloro, bromo e iodo, de preferência flúor ou cloro.

[0099] O termo "amino", conforme aqui utilizado, refere-se a -NH2, alquila -NH-C1-6 ou -N-(alquila C1-6)2, em que alquila C1-6 é como definido acima.

[00100] O termo "cicloalquila C 3-6", conforme aqui utilizado, refere-se a um grupo alquila cíclico saturado contendo 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono no anel. Os exemplos incluem, mas não estão limitados a, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila. O grupo cicloalquila é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em hidroxi ou amino, alquila C1-6, alcoxi C1-6 ou halogênio como definido acima.

[00101] O termo " heterociclila C 3-6", conforme aqui utilizado, refere-se a um grupo alquil cíclico saturado contendo 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono no anel, que, além de pelo menos um átomo de carbono, também contém pelo menos um, tal como 1 -3 ou por exemplo 1 ou 2 heteroátomos selecionados de O, S e N. O ponto de ligação do grupo heterocíclico C3-6 pode estar em um heteroátomo ou em um átomo de carbono. Exemplos de grupos heterocíclicos incluem, mas não estão limitados a, tetra-hidrofurano, tetra- hidrotiofeno, azetidina, acridina, tetra-hidropirrol, tiazolidina, oxazolidina, piperidina, piperazina, morfolina, tiomorfolina, tiazina etc. O grupo heterocíclico C3-6 é opcionalmente substituído ou um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em amino, alquila C1-6, alcoxi C1-6 ou halogênio como definido acima.

[00102] O termo "arila", conforme aqui utilizado, refere-se a um sistema de anel carbocíclico aromático monovalente, monocíclico ou bicíclico, contendo 6 a 10 átomos de carbono no anel. Exemplos de porções arila incluem fenila e naftila. O fenila é o grupo arila preferido. O grupo arila é opcionalmente substituído por um grupo hidroxila ou um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em amino, alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou halogênio como definido acima.

[00103] O termo "heteroarila de 5 a 10 membros", conforme aqui utilizado, significa um sistema de anel monocíclico ou bicíclico aromático monovalente com 5 a 10 átomos no anel, que contém 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos selecionados de N, O e S, o outro os átomos do anel são de carbono.

O ponto de ligação do grupo heteroarila pode estar em um heteroátomo ou em um átomo de carbono.

Exemplos de porções heteroarila incluem, mas não estão limitados a,

pirrolil, furil, tienil, imidazolil, oxazolil, tiazolil,

triazolil, oxadiazolil, tiadiazolil, tetrazolil, piridil,

pirazinil, pirazolil, piridazinil, pirimidinil, triazinil,

azepinil, diazepinil, isoxazolil, benzofuranil, isotiazolil,

benzotienil, indolil, isoindolil, isobenzofuranil,

benzimidazolil, benzoxazolil, benzisoxazolil,

benzotiazolil, benzisotiazolil, benzoxadiazolil,

benzotiadiazolil, benzotriazolil, purinil, quinolinil,

isoquinolinil, quinazolinil ou quinoxalinil; de um modo preferido um anel monocíclico aromático monovalente de sistema de 5 a 6 átomos de anel compreendendo 1-3 heteroátomos selecionados de N, O e S, e os átomos de anel restantes são carbono.

Exemplos de porções heteroarila de 5-

6 membros preferidas incluem, mas não estão limitados a,

pirrolil, furil, tienil, imidazolil, oxazolil, tiazolil,

piridil, pirazinil, pirazolil, piridazinil, pirimidina ou isoxazolil.

O grupo heteroarila mencionado anteriormente é opcionalmente substituído por um grupo hidroxila ou um substituinte selecionado a partir do grupo que consiste em amino, alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou halogênio como definido acima.

[00104] O termo "nitro" conforme aqui utilizado refere-se ao grupo -NO2,

[00105] O termo "ciano", conforme aqui utilizado, refere-se ao grupo -CN.

[00106] O termo "acila", conforme aqui utilizado, refere-se a -C(O)R, em que R refere-se a alquila C1-6 como definido acima.

[00107] O termo "mercapto" conforme aqui utilizado refere-se ao grupo -SH.

[00108] O termo " alquilsulfonila C 1-6", conforme aqui utilizado, refere-se a alquila -S(O)2-C1-C6,

[00109] O termo "alquilsulfinila C1-6", conforme aqui utilizado, refere-se a -S(O)-alquila C1-C6,

[00110] O termo "carboxi", conforme aqui utilizado, refere-se ao grupo -C(O)-OH.

[00111] O termo "solvato", conforme aqui utilizado, refere-se a uma forma de adição de solvente contendo solventes estequiométricos ou não estequiométricos, incluindo qualquer forma solvatada dos compostos da presente divulgação, incluindo, por exemplo, solvatos com água, tais como hidratos, ou solvatos com solventes orgânicos solventes, tais como metanol, etanol ou acetonitrila, nomeadamente metanolato, etanolato ou composto de acetonitrila, respectivamente; ou na forma de qualquer polimorfo. Deve ser entendido que tais solvatos dos compostos da presente divulgação também incluem solvatos de sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da presente divulgação.

[00112] O termo "isômero", tal como aqui utilizado, abrange qualquer "estereoisômero", "racemato", "isômero geométrico" e/ou "tautômeros" possivelmente existentes para os compostos de fórmulas I, II, III da presente divulgação e os métodos para determinar a estereoquímica dos isômeros e métodos para separar os mesmos são bem conhecidos pelos técnicos no assunto, de modo que a presente divulgação abrange todas as formas isoméricas possíveis dos compostos de fórmula I, conforme definido acima, e seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

[00113] A divulgação também abrange "variantes isotópicas" dos compostos aqui definidos. O termo "variante isotópica", conforme aqui utilizado, refere-se a um composto que contém proporções não naturais de isótopos em um ou mais dos átomos que constituem o composto. Por exemplo, uma "variante isotópica" de um composto pode conter um ou mais isótopos não radioativos, como deutério ( 2H ou D), carbono- 13(13C), nitrogênio-15 (15N), etc. Deve ser entendido que em compostos contendo tais substituintes isotópicos, os seguintes átomos podem ser alterados se eles existirem. Por exemplo, qualquer hidrogênio pode ser 2H/D, qualquer carbono pode ser 13C ou qualquer nitrogênio pode ser 15N. A presença de tais átomos e seu arranjo são determinados pelos técnicos no assunto. Da mesma forma, a presente divulgação inclui a preparação de variantes isotópicas do composto da presente divulgação contendo um radioisótopo, caso em que, por exemplo, o composto obtido pode ser usado como um medicamento e/ou para estudo de distribuição de substrato no tecido. Os radioisótopos trítio (isto é, 3H) e carbono-14 (isto é, 14C) podem ser particularmente usados para este fim porque são fáceis de combinar e têm métodos de detecção estabelecidos.

Além disso, compostos substituídos por isótopos emissores de pósitrons (como 11C, 18F, 15O e 13N) podem ser preparados, os quais podem ser usados em estudos de tomografia por emissão de pósitrons (PET) para detecção de ocupação de receptor de substrato.

[00114] Os compostos de fórmula I, II e III definidos na presente divulgação são inibidores de Trk. Conforme mostrado na seção de exemplo de atividade abaixo, os compostos de fórmula I, II e III da presente divulgação, especialmente os compostos dos exemplos da presente divulgação, mostraram efeitos inibitórios em múltiplas fusões gênicas de NTRK nos ensaios de células mostrados, com IC50 de intervalo de 0,1 nM ~ 10 μM, de preferência intervalo de 0,1 nM~0,5 μM. Portanto, os compostos da presente divulgação podem ser usados para tratar ou prevenir doenças ou distúrbios que podem ser tratados pela inibição de Trk ou doenças ou distúrbios em que a atividade de Trk desempenha um papel ou estão envolvidos, especialmente usados para tratar ou prevenir tumores ou cânceres por inibição de Trk, especialmente utilizado para o tratamento direcionado de pacientes com tumor ou câncer com fusão do gene NTRK.

[00115] Além de exibir atividade inibidora de Trk, os compostos de fórmula I, II e III da presente divulgação e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, especialmente os compostos dos exemplos, devido às suas modificações estruturais, também mostram, em comparação com o Trk anterior inibidores, distribuição melhorada do alvo ativo e indicações e efeitos anticâncer; propriedades de dissolução e dispersão melhoradas, que são vantajosas na preparação de formulações mais simples e econômicas; atividades inibitórias de P450 melhoradas (como 2C8 e 2C9, etc.), tendo assim menos interações medicamentosas potenciais; estabilidade metabólica melhorada; reduzindo a formação de intermediários metabolicamente ativos (M1 e/ou M2, Oncotarget, 2018, 9(17), 13796-13806), reduzindo assim os efeitos colaterais tóxicos e proporcionando um desempenho de medicamento mais amigável.

[00116] Além disso, os presentes inventores também investigaram a atividade inibidora dos compostos da presente divulgação em várias outras quinases, e os resultados mostraram que os compostos da presente divulgação como aqui definidos, além de inibir as atividades de TRKA, TRKB e TRKC quinases, também inibem outros alvos de quinase confirmados, em pesquisa e emergentes de drogas anticâncer (ROS1, RAF1, PDGFRB, CSF1R, LCK, IKK a, IKKb, PLK, AXL, TIE, LOK, TIE1, DDR) e os alvos de drogas anticâncer em aplicação e seus alvos mutantes resistentes a drogas (FLT3, FLT3 (N841I), FLT3 (K663Q), FLT3 (D835V),FLT3 (ITD), KIT, KIT (L576P), KIT (V559D), KIT (V559D, T670I), MET, MET (Y1235D), MET (Y1250T), RET, RET (M918T), etc., mostrando> 90% de atividade inibitória contra muitas quinases, incluindo o acima nos ensaios de atividade de quinase. Para obter detalhes, consulte a Tabela 10 na seção Exemplo de atividade abaixo.

Portanto, espera-se que os compostos da presente divulgação exibam um efeito anticâncer de amplo espectro em aplicações clínicas.

[00117] Portanto, o segundo aspecto da presente divulgação fornece os compostos de fórmula I, II, III definidos acima, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para uso como drogas, especialmente como inibidores de Trk.

[00118] O segundo aspecto da presente divulgação também fornece os compostos de fórmula I, II, III definidos acima, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis para uso como drogas, especialmente como inibidores das quinases listadas na

Tabela 10,

[00119] Em uma modalidade específica, a presente divulgação fornece os compostos de fórmula I, II, III definidos acima, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis que são usados como drogas anticâncer pela inibição de Trk.

[00120] O terceiro aspecto da presente divulgação fornece um método para tratar ou prevenir tumores ou cânceres em mamíferos, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz do(s) composto(s) acima definido(s) de fórmula I, II, III, seus isômeros, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis ou solvatos, ou uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz do(s) composto(s) acima definido(s) de fórmula I, II, III, seus isômeros, ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis, para um mamífero em necessidade dos mesmos.

[00121] O quarto aspecto da presente divulgação fornece uma composição farmacêutica para o tratamento ou prevenção de tumores ou cânceres, compreendendo o(s) composto(s) de fórmula I, II, III definido (s) acima, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis e produtos farmacêuticos veículos, diluentes ou excipientes.

[00122] O quinto aspecto da presente divulgação fornece o uso dos compostos de fórmula I, II e III definidos acima, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis na fabricação de um medicamento para tratar ou prevenir doenças ou condições em que o atividade Trk desempenha um papel ou está envolvida. De um modo preferido, a presente divulgação fornece o uso dos compostos de fórmula I, II e III definidos acima, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis na fabricação de um medicamento para tratar ou prevenir tumores ou cânceres, especialmente aqueles tumores ou cânceres conforme definidos abaixo pela inibição de Trk; especificamente, o câncer carrega a fusão do gene NTRK.

[00123] O quinto aspecto da presente divulgação também fornece o uso dos compostos de fórmula I, II e III definidos acima, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis na fabricação de um medicamento para tratar ou prevenir doenças ou condições em que as quinases listadas na Tabela 10 aqui desempenham um papel ou estão envolvidas. De um modo preferido, a presente divulgação fornece o uso dos compostos de fórmula I, II e III definidos acima, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis na fabricação de um medicamento para tratar ou prevenir tumores ou cânceres, especialmente aqueles tumores ou cânceres conforme definidos abaixo, mediando as quinases conforme listado na Tabela 10 aqui.

[00124] O sexto aspecto da presente divulgação fornece uma combinação farmacêutica compreendendo os compostos de fórmula I, II, III, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis da presente divulgação, administrados concomitantemente ou sequencialmente com um ou mais outros medicamentos funcionando através de mecanismos iguais ou diferentes.

Exemplos de outras drogas incluem, mas não estão limitados a, outros inibidores de Trk, inibidores de quinase, drogas antiinflamatórias, analgésicos, opióides, quimioterápicos anticâncer e drogas de anticorpos.

[00125] Em uma modalidade preferida, o "Trk" em relação aos compostos, composições, métodos e usos da presente divulgação é qualquer um de TrkA, TrkB ou TrkC; em uma modalidade mais preferida, o "Trk" em relação aos compostos, composições, métodos e usos da presente divulgação é TrkA, TrkB ou TrkC, ou pelo menos dois deles.

[00126] Para os compostos acima mencionados da presente divulgação para uso como um medicamento, os métodos da presente divulgação, a composição farmacêutica, a combinação farmacêutica ou o uso, o composto de fórmula I é de preferência

R3

O O N

N N R1 H NH O N R2

N R4 I-a Onde R1 é alquila C1-6; R2 é alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, opcionalmente substituído com um ou mais halogênios; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H ou halogênio; e desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo; ou seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis; ou R3

O O N

N N R 6

X H NH O N R2 R9 N R4 I-b Onde R2 é alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, opcionalmente substituído com um ou mais halogênios; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H ou halogênio; R6 e R9 são cada um independentemente H, halogênio, hidroxi, alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, e X é -CR7R8- ou -CR7R8-CR7R8-, em que R7 e R8 são, cada um, independentemente H, halogênio, hidroxi, alquila C 1-6 ou cicloalquila C3-6, ou R7 e R8 ligados ao mesmo átomo de carbono juntos formam um grupo cicloalquila C 3-6; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo; ou seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

[00127] Para os compostos da presente divulgação para uso como um medicamento, o método da presente divulgação, a composição farmacêutica, a combinação farmacêutica ou o uso, também são preferidos direcionados aos compostos de fórmula II-a, II-b, III-a, III-b e suas modalidades preferidas; mais preferidos são os compostos específicos listados acima, nomeadamente Composto 1 ~ Composto 50; os mais preferidos são os "compostos mais preferidos da presente divulgação" listados acima, seus isômeros ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

[00128] O termo "câncer" ou "tumor", conforme usado acima, refere-se ao crescimento e proliferação de células neoplásicas, malignas ou benignas, e todas as células pré-

cancerosas e células e tecidos cancerígenos. Para os compostos, métodos, composições farmacêuticas e usos da presente divulgação, o câncer ou tumor inclui, mas não se limita a sarcoma (especialmente carcinoma de fibrossarcoma infantil), câncer de pele, neuroblastoma, câncer de ovário, câncer de mama, câncer de próstata, câncer pancreático, salivar câncer de glândula, mieloma múltiplo, astrocitoma e meduloblastoma, neuroglioma, melanoma, câncer de tireóide, adenocarcinoma de pulmão, tumor neuroendócrino de grandes células, câncer de cabeça e pescoço e câncer colorretal, colangiocarcinoma, glioblastoma, glioma, câncer de mama secretório, carcinoma secretor de mama, leucemia mieloide aguda fibrossarcoma congênito, leucemia linfoblástica aguda, adenocarcinoma do cólon, tumores estromais gastrointestinais. Para os compostos, métodos, composições farmacêuticas e usos da presente divulgação, o câncer ou tumor é de preferência adenocarcinoma de pulmão, colangiocarcinoma intra-hepático, câncer colorretal, câncer papilar de tireoide, tumor spitzoide, glioblastoma, sarcoma, astrocitoma, câncer de cabeça e pescoço, baixo glioma de grau, câncer de mama secretório, leucemia mieloide aguda, nefroma mesoderma congênito, fibrossarcoma congênito, leucemia linfoblástica aguda, adenocarcinoma de cólon, câncer de tireoide, melanoma de pele e glioma pediátrico.

[00129] Para os compostos, métodos, composições farmacêuticas e usos da presente divulgação, de preferência, o câncer ou tumor é um câncer ou tumor no qual a atividade de Trk desempenha um papel ou está envolvida, ou um câncer ou tumor que pode ser tratado com um inibidor de Trk , ou um câncer ou tumor causado pela fusão do gene NTRK, incluindo, mas não se limitando aos tipos de tumor mencionados acima e seus intervalos preferidos.

[00130] O termo "tratamento" ou "tratando", conforme aqui utilizado, refere-se à administração de um ou mais dos compostos de fórmula I, II e III aqui descritos, ou seus isômeros, ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis, a um mamífero tal como um ser humano que sofre da doença ou apresenta sintomas da doença, para uso para curar, suavizar, aliviar ou afetar a doença ou os sintomas da doença. Em uma modalidade da divulgação, a doença é um tumor ou câncer conforme definido acima.

[00131] O termo "prevenção" ou "prevenção", tal como aqui utilizado, é bem conhecido na técnica e refere-se à administração de um ou mais dos compostos de fórmula I, II, III aqui descritos, ou seus isômeros, ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis deste, a um mamífero tal como um ser humano suspeito de sofrer de, ou suscetível aos cânceres ou tumores conforme definidos acima, para reduzir o risco de sofrer das doenças definidas. O termo "prevenção" ou "prevenção" abrange o uso dos compostos da presente divulgação antes do diagnóstico ou determinação de quaisquer sintomas clínicos e/ou patológicos.

[00132] O termo "quantidade eficaz", conforme aqui utilizado, refere-se a uma quantidade ou dose que é geralmente suficiente para produzir um efeito terapêutico benéfico em um paciente com tumor em necessidade do tratamento. Os técnicos no assunto podem determinar a quantidade ou dosagem eficaz do ingrediente ativo na presente divulgação por métodos convencionais em combinação com fatores de influência convencionais.

[00133] O termo "mamífero", conforme aqui utilizado, inclui, mas não está limitado a porquinhos-da-índia, cães, gatos, ratos, camundongos, hamsters e primatas, incluindo humanos.

[00134] A composição farmacêutica mencionada acima, da presente divulgação, pode ser formulada por técnicas conhecidas dos técnicos no assunto, tais como as técnicas divulgadas na 20ª Edição de "Remington's Pharmaceutical Sciences". A composição farmacêutica da presente divulgação pode ser usada por qualquer via conveniente e em qualquer forma de administração conveniente. Por exemplo, pode ser administrado via trato gastrointestinal, via nariz, via pulmão, via músculo ou vasculatura ou via pele. A forma de administração pode ser comprimidos, pós, cápsulas, soluções, dispersões, suspensões, xaropes, sprays, supositórios, géis,

emulsões, adesivos, etc. Estas composições farmacêuticas podem conter ingredientes convencionais em preparações farmacêuticas, tais como diluentes, transportadores, ajustadores de pH, adoçantes, desintegrantes e semelhantes.

[00135] O composto da presente divulgação pode ser administrado como o único ingrediente ativo ou pode ser administrado em combinação com outro medicamento ou terapia, que pode ter ou produzir os mesmos ou diferentes efeitos farmacológicos. Por exemplo, as drogas adicionais incluem, mas não estão limitadas a outros inibidores de Trk, inibidores de quinase, drogas de anticorpos, imunoterapêuticos, outros agentes anticâncer, drogas anti- inflamatórias, analgésicos, drogas cardiovasculares, drogas hipolipemiantes, agentes antibacterianos, agentes antivirais, antidiabéticos, agentes antiproliferativos, agentes antiangiogênicos ou antialérgicos, etc. Estas drogas e terapias são conhecidas dos técnicos no assunto.

[00136] Quando os compostos de fórmula I, II e III são administrados em combinação com outras drogas, a dosagem de outras drogas co-administradas irá, claro, variar dependendo do tipo de droga co-usada, da droga específica usada, da condição para ser tratada, a saúde geral do paciente, o julgamento do médico ou veterinário.

[00137] Os compostos da presente divulgação também podem ser combinados com terapias antitumorais, incluindo,

mas não se limitando a cirurgia, radioterapia, transplante (por exemplo, transplante de células-tronco, transplante de medula óssea), imunoterapia tumoral e quimioterapia e semelhantes.

[00138] O(s) medicamento(s) usado(s) em combinação com o(s) composto(s) da presente divulgação, ou seja, os medicamentos co-usados, podem ser administrados simultaneamente, separadamente ou sequencialmente com o(s) composto(s) da presente divulgação por meio do mesmo ou diferentes vias de administração. Eles podem estar contidos na mesma composição farmacêutica, ou em formas separadas, como um produto de combinação, de preferência na forma de um kit. Eles podem ser fabricados e/ou formulados pelos mesmos fabricantes ou por fabricantes diferentes. Além disso, o(s) composto(s) da presente divulgação e o(s) medicamento(s) adicional(is) podem ser adicionados à terapia de combinação em conjunto(i) antes de dispensar o produto combinado aos médicos (por exemplo, no caso de um kit contendo o composto(s) da presente divulgação e o(s) medicamento(s) adicional(is)); (ii) pelo próprio médico (ou sob a orientação do médico) imediatamente antes da administração; (iii) pelo próprio paciente, por exemplo, durante a administração sequencial do (s) composto (s) da presente divulgação e droga(s) adicional(is).

[00139] O sétimo aspecto da presente divulgação fornece um método de preparação do composto de fórmula I da presente divulgação, que compreende: (a) reagir o composto de fórmula A

HOOC O N R2 R4

B

A com o composto de fórmula B na presença de um reagente de condensação, R3

O

N N NH2 R1 R5

N N Boc

B para formar uma amida, obtendo o composto de fórmula C, R3

O O N

N N R1 H R5 N N Boc O N R2 R4 C, ou (a') reação do composto de fórmula A

HOOC O N R2 R4

B com o composto de fórmula D na presença de um reagente de condensação, R3

O

N N Br NH2 R1 R5

D para formar uma amida, obtendo o composto de fórmula E, R3

O O

N N Br N R1 5 H

R O N R2 R4 E, em seguida, submeter o composto de fórmula E a uma reação de acoplamento de Suzuki, para obter o composto de fórmula C; e (b) desproteger o composto de fórmula C para obter o composto de fórmula I,

R3

O O N

N N R1 H R5 NH N O N R2 R4 I, onde R1 a R5 são conforme definidos acima.

Nas etapas (a) e (a'), a reação de formação de amida pode ser realizada sob condições de reação de condensação conhecidas na técnica, por exemplo, pode ser realizada sob condições de reação de acoplamento de peptídeo conhecidas na técnica.

[00140] De preferência, nas etapas (a) e (a'), a reação de formação de amida pode ser realizada na presença de EDCI, HCl, HOBT e DIPEA em um solvente adequado (por exemplo, DMF).

[00141] O composto de fórmula A pode ser preparado da seguinte forma: (1) reação do composto de fórmula 1 NH2 R4

I com o composto de fórmula 2,

O NC

OH 2 para obter o composto de fórmula 3,

O CN

HN R4 3 (2) reagir o composto de fórmula 3 com o composto de fórmula 4,

O R2 OMe 4 para obter o composto de fórmula 5,

NC O N R2 R4 5, (3) adicionar H2SO4/H2O concentrado ao composto de fórmula 5 e reagir para obter o composto de fórmula A,

HOOC O N R2 R4

A onde R2 e R4 são conforme definidos acima.

[00142] O composto de fórmula A também pode ser preparado na forma de fórmula A-2 como segue: (1) reagir o composto de fórmula A-2-1 com o composto de fórmula A-1-1 para obter o composto de fórmula A-2-2, (2) reagir o composto de fórmula A-2-2 com o composto de fórmula A-2-3,

para obter o composto A-2-4,

(3) reagir o composto A-2-4 com o composto A-2-5,

para obter o composto A-2-6,

(4) redução do composto A-2-6, tal como redução de hidrogenação, para remover o grupo metiltio, para obter o composto A-2-7

(5) hidrolisar o composto A-2-7 para obter o composto A-2-8, (6) converter o grupo amino do composto A-2-8 em halogênio, para obter o composto A-2-9, (7) submeter o halogênio do composto A-2-9 à substituição nucleofílica, por exemplo, com o reagente nucleofílico R11X-Na (X pode ser O, S, C, N, etc.) para obter o composto A-2, em que R4 é conforme definido acima, e R15 é selecionado de alquila C1-6, benzila, α-metilbenzila éster ou p- metoxibenzila éster e semelhantes, etc. R11 é selecionado de H, alquila C1-6 substituído com um ou mais halogênios ou cicloalquila C3-6 substituído com um ou mais halogênios.

[00143] O composto de fórmula A também pode ser preparado da seguinte forma:

(1) Reagir o composto de fórmula A-3-1 com o composto de fórmula Z-R2, tal como R2I, R2Br, R2Cl,

R2B(OH)2, R2NH, R2OH, R2SH, reagente de Togni, reagente de difluorocarbeno, tal como, mas não limitado a substituição,

condensação, reação de acoplamento, para obter o composto A-

3-2,

(2) oxidar o composto A-3-2, por exemplo, com um peróxido, para obter o composto A-3-3,

(3) submeter o composto A-3-3 a um rearranjo, para obter o composto A-3-4,

(4) reagir o composto A-3-4 com o composto A-3-5,

como reação de Chen-Lam, reação de Ullmann,

Z 'é B (OH) 2, I ou Br, para obter o composto A-3-6,

(5) hidrolisar o composto A-3-6 para obter o composto A-3,

em que R2 e R4 são conforme definidos acima, R 15 é selecionado a partir de alquila C1-6, benzila ou benzila substituída, etc.; O reagente de Togni é 1-(trifluorometil)-

3,3-dimetil-1,2-benziodoxol (número CAS:887144-97-0), e o reagente difluorocarbeno é selecionado a partir de tais reagentes bem conhecidos pelos técnicos no assunto, incluindo mas não limitado a reagentes de organossilício, como TMSCF2X (X é selecionado a partir de halogênio, como flúor, cloro, bromo e iodo) e ácido 2,2-difluoro-2- fluorossulfonilacético.

[00144] Quando R5 no composto de fórmula B é H, o composto de fórmula B é um composto de fórmula B-1: R3

O

N N NH2 R1

N N Boc

B B-1, O composto de fórmula B-1 pode ser preparado da seguinte forma, incluindo: (1) submeter o composto de fórmula 6 à reação de bromação,

OH H

O 5 6 para obter o composto de fórmula 7

OH Br

H Br O 6 7, (2) reagir o composto de fórmula 7 com o composto de fórmula 8, R3 O2N F 7 8 para obter o composto de fórmula 9 NO2

O Br R3

H Br O 9, (3) reagir o composto de fórmula 9 com R1-NHNH2 para obter o composto de fórmula 10 NO2

O Br R3

H Br N R1

N

H 9 10, (4) submeter o composto de fórmula 10 a uma reação de ciclização para obter o composto de fórmula 11, R3

O

N N Br NO2 R1 1011, (5) submeter o composto de fórmula 11 à reação de acoplamento de Suzuki para obter o composto de fórmula 12, R3

O

N N NO2 R1

N N Boc 11 12, (6) hidrogenar o composto de fórmula 12, por exemplo na presença de paládio sobre carbono, para obter o composto de fórmula B-1, R3

O

N N NH2 R1

N N Boc

B B-1 em que R1 e R3 são conforme definidos acima.

[00145] Quando R5 no composto de fórmula D é H, o composto de fórmula D é um composto de fórmula D-1: R3

O

N N Br NH2 R1

D-1

[00146] O composto de fórmula D-1 pode ser preparado por hidrogenação do composto de fórmula 11, por exemplo, por reação na presença de paládio sobre carbono.

[00147] Quando R5 no composto de fórmula B não é H, o composto de fórmula B pode ser um composto de fórmula B-2: R3

O

N N NH2 6 R R 7

N R9 R 8 N Boc B-2 O composto de fórmula B-2 pode ser preparado da seguinte forma, incluindo: (1) conversão do composto de fórmula 16

O H 2N Br 16 à indolequinona de fórmula 17, por exemplo, reagindo o composto de fórmula 16 com tricloroacetaldeído e hidroxilamina sob a catálise de ácido clorídrico e, em seguida, sob a ação de ácido sulfúrico concentrado ou ácido de Lewis (como trifluoreto de boro, etc.), para obter o composto de fórmula 17,

O HN Br

O O 17, (2) submeter o composto de fórmula 17 a uma reação de redução seletiva, tal como com hidrato de hidrazina ou com tetracloreto de titânio e zinco metálico, para obter o composto de fórmula 18,

O HN Br

O 18, (3) reagir o composto de fórmula 18 com R 7X e R8X sucessivamente, em que X é halogênio (de preferência bromo ou iodo), para obter o composto de fórmula 19 (em que R 7 e R8 são conforme definido acima, e cada um, independentemente, é uma alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituída); ou reagindo com DAST (trifluoreto de dietilaminoenxofre) para obter o composto de fórmula 19 (em que R7 e R8 são flúor),

O HN Br R7 O R8 19, (4) reduzir o composto de fórmula 19, por exemplo,

na presença de hidreto de alumínio e lítio ou borano, para obter o composto de fórmula 20,

O HN Br 7

R R8 20, em seguida, submeter o composto de fórmula 20 a uma reação de diazotização antes da ciclização, para obter o composto de fórmula 21, por exemplo, reagir o composto de fórmula 20 com um reagente de diazotização (tal como nitrito de sódio) na presença de um ácido forte ( tal como ácido tetrafluorobórico), e então realizar a reação de ciclização na presença de acetato de potássio, 18-coroa-6 e um solvente adequado (tal como clorofórmio), para obter o composto de fórmula 21 (em que R6 e R9 são ambos H);

O

N N Br R6 R7 R9 R8 21, ou (4') ① reagindo o composto de fórmula 19 com o reagente de Lawesson para converter o composto de carbonila em um composto tiocarbonila, ou reagindo o composto de fórmula 19 com um composto organometálico contendo porções R6 e R9 (tal como usando o reagente de Grignard) para introduzir os fragmentos estruturais R 6 e R9, ou procedendo diretamente para a etapa ②; ② submeter o produto obtido na etapa ① ou submeter diretamente o composto de fórmula 19 a reação de diazotização e, em seguida, ciclização, para obter o composto de fórmula 21, por exemplo, reagir o produto obtido na etapa ① ou o composto de fórmula 19 com um reagente de diazotização (como nitrito de sódio) na presença de um ácido forte (tal como ácido tetrafluorobórico) e, em seguida, realizar a reação de ciclização na presença de acetato de potássio, 18-coroa-6 e um solvente adequado (tal como clorofórmio), para obter o composto de fórmula 21 (em que R 6 e R9 ligados ao mesmo átomo de carbono juntos formam =S; ou R6 e R9 são conforme definidos acima, e cada um, independentemente, é uma alquila C 1-6 opcionalmente substituída ou cicloalquila C 3-6; ou R6 e R9 ligados ao mesmo átomo de carbono juntos formam =O), (5) submeter o composto de fórmula 21 a uma reação de desmetilação, por exemplo, na presença de tribrometo de boro, para obter o composto de fórmula 22,

OH

N N Br R6 R7 R9 R8 22, (6) reagir o composto de fórmula 22 com o composto de fórmula 8, por exemplo, na presença de carbonato de potássio em um solvente adequado, R3 O2N F 8 para obter o composto de fórmula 23 R3

O

N N Br NO2 R6 R7 R9 R8 23, (7) submeter o composto de fórmula 23 à reação de acoplamento de Suzuki para obter o composto de fórmula 24, R3

O

N N NO2 6 R R 7

N R 9 R8 N Boc 24, hidrogenar o composto de fórmula 24, por exemplo, na presença de paládio sobre carbono, para obter o composto de fórmula B-2, R3

O

N N NH2 R6 R7 N R9 R 8 N Boc B-2,

em que R3, R6, R7, R8 e R9 são conforme definidos acima, a menos que o contexto tenha indicado especificamente ou seja quimicamente irrealizável.

[00148] O composto de fórmula B-2 também pode ser preparado como o composto de fórmula B-2-18 e B-2-19 como segue: (1) reação do composto de fórmula B-2-1 com tricloroacetaldeído e hidroxilamina sob catálise ácida, para obter o composto B-2-2, (2) submeter o composto B-2-2 ao fechamento do anel sob condições ácidas, como sob a ação de ácido sulfúrico, para obter o composto B-2-3, (3) hidrolisar e descarboxilar o composto B-2-3 para obter o composto B-2-4,

(4) esterificando o composto B-2-4 para obter o composto B-2-5, Br O

O OR12 NH2 B-2-5 (5) tratar o composto B-2-5 com um nitrito ou um éster, para obter o composto indazol B-2-6, Br O CO2R12

NH

N B-2-6 (6) proteger o indazol do composto B-2-6, por exemplo, com THP, para obter o composto B-2-7, Br O CO2R12 13

N R

N B-2-7 (7) reduzir o composto B-2-7 para obter o composto B-2-8,

Br

O

OH 13

N R

N B-2-8 (8) ativação do grupo hidroxila no composto B-2-8 para obter o composto B-2-9, Br

O OR14 13

N R

N B-2-9 (9) reagir o composto B-2-9 com TMS-CN para obter o composto B-2-10, Br

O

CN 13

N R

N B-2-10 (10) reduzindo seletivamente o composto B-2-10 para obter o aldeído B-2-11, Br

O O 13

N R

N B-2-11 (11) continuando a reduzir o composto B-2-11 para o álcool B-2-12,

Br

O OH 13

N R

N B-2-12 (12) ativar o grupo hidroxila no composto B-2-12 enquanto remove o grupo protetor R 13, para obter o composto B-2-13, Br

O X NH

N B-2-13 (13) submeter o composto B-2-13 ao fechamento do anel sob a ação de uma base, para obter o composto B-2-14, (14) desmetilar o composto B-2-14 sob a ação de um ácido, para obter o fenol B-2-15, (15) reagir o composto B-2-15 com o composto 8 sob uma condição básica,

para obter o composto B-2-16,

(16) acoplamento do composto B-2-16, tal como acoplamento com um reagente organoboro sob catálise de paládio, para obter o composto B-2-17,

(17) reduzir o grupo nitro no composto B-2-17 para obter o composto B-2-18,

(18) submeter qualquer produto das etapas 13-17 acima a aromatização oxidativa, e o composto B-2-19 pode ser obtido de acordo com a mesma via sintética descrita acima, (19) em que R3 é como definido acima; em que R 12 é selecionado a partir de alquila C 1-6, tal como metil; R13 é um grupo de proteção N, tal como, mas não limitado a THP; R14 é um grupo de ativação OH, tal como, mas não limitado a Ms; X é um grupo de grupo removível, como OMs, OTs, cloro, bromo, de preferência cloro.

[00149] Quando R5 no composto de fórmula D não é H, o composto de fórmula D pode ser um composto de fórmula D-2: R3

O

N N Br NH2 R6 R7 R9 R8 D-2。 O composto de fórmula D-2 pode ser preparado por hidrogenação do composto de fórmula 23, por exemplo, por reação na presença de paládio sobre carbono.

[00150] Os compostos de fórmula II e os compostos de fórmula III da presente divulgação podem ser preparados de forma semelhante por técnicos no assunto com referência às vias sintéticas acima. A menos que especificamente indicado, as matérias-primas ou intermediários usados nas vias sintéticas acima podem ser obtidos comercialmente por técnicos no assunto ou convencionalmente obtidos por métodos conhecidos na técnica.

[00151] A reação de acoplamento de Suzuki aqui descrita é fazer reagir um hidrocarboneto aromático halogenado (tal como hidrocarbonetos aromáticos bromados) com um reagente de boro orgânico (tal como borato de arila ou ácido arila borônico) na presença de um catalisador de paládio (de preferência PdCl 2 (dppf) ou PdCl2Di-t-BPF) sob as condições de reação de acoplamento Suzuki conhecidas. O borato de arila é de um modo preferido O Boc

N B O N .

[00152] Os reagentes organoboro usados aqui são preparados por métodos conhecidos na técnica.

[00153] O termo "agente de condensação", tal como aqui utilizado inclui, mas não está limitado a agentes de condensação de carbodiimida, tais como 1-etil-(3- dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI), diciclohexila carbodiimida(DCC), diisopropilcarbodiimida (DIC), derivados de fosgênio, tais como N, N'-carbonildiimidazol (CDI) ou cloroformato de isobutila, compostos de fósforo, tais como anidrido n-propano fosfônico (PPA), cianofosfonato dietílico, difenilfosforil azida (DPPA), cloreto de bis(2- oxo-3-oxazolidinil)fosforil, hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi tri(dimetilamino)fosfônio ou hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi tris (pirrolidinil)fosfônio hexafluorofosfato (PyBOP), compostos de urônio-azotria, como O-(7)-1-il)-N,N,N'N'- tetrametilurônio hexafluorofosfato (HATU), O-(benzotriazol- 1-il)-N,N,N',N'-tetrametilurônio hexafluorofosfato (HBTU), O-(1H-6-clorobenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrafluoroborato de tetrametilurônio (TCTU), 2-(2-oxo-1-(2H)-piridil)- 1,1,3,3-tetrametilurônio tetrafluoroborato (TPTU), qualquer um dos reagentes é opcionalmente usado em combinação com outros adjuvantes, como 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) ou N- hidroxissuccinimida (HOSu), e uma base, como carbonatos de metal alcalino, como carbonato de sódio ou carbonato de potássio, ou bases de amina terciária, como trietilamina, N, N-diisopropiletilamina, N-metilmorfolina (NMM), N- metilpiperidina (NMP), piridina ou 4-N,N- dimetilaminopiridina (DMAP). A preparação dos compostos de fórmula I é mais detalhada nos seguintes métodos sintéticos gerais e exemplos.

Métodos sintéticos gerais

[00154] Os compostos de fórmula I, II e III da presente divulgação ou seus solvatos ou sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados por uma variedade de métodos, incluindo os métodos dados abaixo, os métodos dados nos exemplos ou métodos semelhantes. O seguinte ilustra esquemas sintéticos gerais para a síntese dos compostos da presente divulgação. As condições de reação adequadas para cada etapa de reação são conhecidas dos técnicos no assunto ou podem ser determinadas rotineiramente. As matérias-primas e reagentes usados na preparação destes compostos estão geralmente disponíveis comercialmente, ou podem ser preparados pelos métodos descritos abaixo, métodos semelhantes aos dados abaixo ou métodos conhecidos na técnica. Se necessário, as matérias- primas e intermediários no processo de reação de síntese podem ser separados e purificados por técnicas convencionais, incluindo, mas não se limitando a, filtração, destilação, cristalização, cromatografia, etc. Os materiais podem ser caracterizados por métodos convencionais, incluindo constantes físicas e dados espectrais.

[00155] Os técnicos no assunto podem reconhecer se existem estereocentros nos compostos de fórmula I, II e III.

Em todos os estágios da reação, a mistura resultante de isômeros pode ser separada em isômeros individuais, como diastereômeros ou enantiômeros, ou em qualquer mistura desejada de isômeros, como para misturas de racematos ou diastereômeros, ver por exemplo " Stereochemistry of Organic

Compounds" by E. L. Eliel, S. H. Wilen, and L.N. Mander (Wiley-Interscience, 1994).

[00156] As etapas do processo utilizadas para sintetizar os compostos da presente divulgação podem estar sob condições de reação conhecidas per se (incluindo aquelas especificamente mencionadas), na ausência ou geralmente na presença de um solvente ou diluente (incluindo, por exemplo, aqueles solventes ou diluentes que são inertes aos reagentes usados e podem dissolver os reagentes usados), na ausência ou presença de catalisadores, agentes de condensação ou agentes de neutralização (por exemplo, trocadores de íons, como trocadores de cátions, como a forma H+), dependendo das propriedades da reação e/ou dos reagentes a uma temperatura reduzida, normal ou elevada (por exemplo, cerca de -100°C a cerca de 190°C, incluindo, por exemplo, cerca de -78°C a cerca de 150°C, por exemplo, cerca de 0°C a cerca de 125°C, temperatura ambiente, -20 a 40°C ou temperatura de refluxo), sob pressão atmosférica ou em um recipiente fechado, sob pressão quando apropriado e/ou sob uma atmosfera inerte, como argônio ou nitrogênio.

[00157] Salvo indicação em contrário na descrição do método, os solventes adequados para qualquer reação particular incluem: aqueles especificamente mencionados, ou, por exemplo, água; ésteres, tais como ésteres de alquila inferior de ácido alcanóico inferior, tais como acetato de etila; éteres, tais como éteres alifáticos, tais como éter dietílico, ou éteres cíclicos, tais como tetra-hidrofurano ou dioxano; hidrocarbonetos aromáticos líquidos, tais como benzeno ou tolueno; álcoois, tais como metanol, etanol ou 1- ou 2-propanol; nitrilas, como acetonitrila; hidrocarbonetos halogenados, tais como diclorometano ou clorofórmio; amidas, tais como dimetilformamida ou dimetilacetamida; bases, tais como bases de nitrogênio heterocíclicas, tais como piridina ou N-metil pirrolidin-2-ona; anidridos de ácido carboxílico, como anidridos de ácido alcanóico inferior, como anidrido acético; hidrocarbonetos cíclicos, lineares ou ramificados, tais como ciclohexano, hexano ou isopentano; ou misturas destes solventes, tais como soluções aquosas. Essas misturas de solventes também podem ser utilizadas para processamento, por exemplo, por cromatografia ou partição.

[00158] A presente divulgação também se refere a um método de preparação em que um composto que pode ser obtido na forma de um intermediário em cada um dos métodos de preparação descritos acima e qualquer etapa nos processos a seguir é usado como um material de partida e as etapas restantes do processo são realizadas, ou em que os materiais de partida são formados in situ sob as condições de reação ou são usados na forma de derivados, por exemplo, na forma protegida ou na forma de sal, ou os compostos obtidos de acordo com o método da divulgação são produzidos sob a condições do método e são posteriormente processados in situ.

[00159] O Esquema 1 abaixo ilustra uma via sintética geral que pode ser usada para preparar os compostos de fórmula I. Cada variável da fórmula geral no seguinte processo tem o mesmo significado que acima, a menos que indicado de outra forma. Em que, quando R 4 no composto de fórmula A é F, o composto de fórmula A é um composto de fórmula A-1, Esquema 1 HOOC R3 R3 R3

O O O O O N

N + O N R2 EDCI HCl N

N N TFA N

N N NH2 R1 H R1 H HOBt, DIPEA R5 R5 R1 R5 N N O N R2 N NH O N R2 N Boc N Boc DMF 4

R B A O Boc C I N R4 R4

B

O N PdCl2(dppf) THF/H2O, 45oC, o/n HOOC R3 R3 O

O O O N R2 EDCI HCl N

N

N + HOBt, DIPEA R1

N R5 Br N

H Br NH2 O N R2 R1 R5 DMF R4

D A E R4

[00160] Os seguintes esquemas 2 a 5 ilustram a via sintética do composto de fórmula A durante a síntese do composto de fórmula I e a síntese dos intermediários aí utilizados.

Esquema 2

Esquema 3

Esquema 4

Esquema 5

[00161] Os seguintes esquemas 6 a 8 ilustram as vias sintéticas dos compostos de fórmula B-1, fórmula D-1 e fórmula B-2 e suas modalidades específicas B-2-18 e B-2-19 no processo de síntese do composto de fórmula I, e a síntese de intermediários aí utilizados.

Esquema 6 R3 NO2 NO2 OH OH O2N F Br O R1 NHNH2 O CuCl, K2CO3 Br2 8 R3 Br Br R3 H DCM, rt, H K2CO3, DMF DMF, 100oC, 3h o/n H H O Br O 50oC Br O Br N R1 6 7 9 10 N

H Boc O N R3 R3 R3 B O N O Pd/C

O O N N

N N N PdCl2(dppf) NO2 EtOAc, 40oC NH2 N Br NO2 R1 R1 R1 o N 100% N THF/H2O, 45 C, o/n N Boc N Boc 11 12 B-1 R3

O N D-1 N Br NH2 1

R Esquema 7

Esquema 8

[00162] O composto de fórmula II e o composto de fórmula III da presente divulgação podem ser preparados de forma semelhante por técnicos no assunto com referência aos procedimentos acima mencionados.

[00163] Nos métodos de preparação da presente divulgação e nos processos mencionados acima, quando necessário, por exemplo, o material de reação contém um grupo funcional que é instável ou reativo sob as condições de reação da etapa de reação, então um método conhecido na técnica pode ser aplicado antes da etapa crítica, para introduzir um grupo de proteção adequado (TW Greene e PGM Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 5ª edição, Wiley, New York 2014). Esses grupos de proteção podem ser removidos em um estágio posterior da síntese usando métodos padrão conhecidos na técnica. Exemplos de grupos de proteção de amino incluem Boc(terc-butoxicarbonila), Pmb(p- metoxibenzila), Fmoc(9-fluorenilmetoxicarbonila) e Cbz (benziloxicarbonila).

[00164] Os materiais experimentais e reagentes usados nos métodos e procedimentos de síntese acima, a menos que especificado de outra forma, podem ser obtidos a partir de canais comerciais, preparados de acordo com os métodos da técnica anterior, ou preparados de acordo com métodos semelhantes aos divulgados nesta divulgação. As condições sintéticas usadas nos métodos e procedimentos sintéticos acima, a menos que especificado de outra forma, podem ser rotineiramente determinadas por técnicos no assunto.

[00165] Os termos técnicos e científicos usados neste documento que não são especificamente definidos têm os significados comumente compreendidos por técnicos no assunto aos quais pertence a presente divulgação.

[00166] As definições gerais ou preferenciais de características designadas em várias modalidades enumeradas da presente divulgação podem ser combinadas com definições gerais ou preferidas de outras características designadas para obter modalidades adicionais da presente divulgação. É como se as soluções obtidas as combinando mutuamente fossem listadas especificamente e uma a uma neste artigo, a menos que o contexto mostre claramente o contrário.

[00167] A menos que haja um erro óbvio na fórmula estrutural, quando o nome químico de qualquer composto da presente divulgação for inconsistente com a fórmula estrutural dada, a fórmula estrutural deve prevalecer.

[00168] Nesta especificação, várias publicações anteriores são citadas. Estas publicações não são consideradas relevantes para a patenteabilidade da presente divulgação, mas todo o seu conteúdo é incorporado aqui por referência. A referência a qualquer publicação anterior (ou informação derivada dela) nesta especificação não é e não deve ser considerada como confirmação ou reconhecimento ou qualquer forma de inspiração, isto é, a publicação anterior correspondente (ou informação derivada dela) constitui conhecimento comum no campo técnico envolvido nesta especificação.

Descrição das figuras

[00169] Figura 1: Atividade antitumoral dos compostos da presente divulgação em um modelo de xenoenxerto KM12 de camundongo. A Figura 1-A mostra o efeito dos compostos da presente divulgação no volume do tumor; A Figura 1-B mostra as concentrações dos compostos da presente divulgação no plasma e tecido tumoral 12 dias após a administração; A Figura 1-C mostra as concentrações dos compostos da divulgação no plasma e tecido tumoral.

[00170] Figura 2: Comparação do perfil de atividade do composto do Exemplo 12 da presente divulgação e o composto de Merestinibe da técnica anterior.

Exemplos

[00171] A presente divulgação será ainda ilustrada em conjunto com os exemplos a seguir. Deve-se notar que os exemplos a seguir não podem ser reconhecidos como uma limitação ao escopo de proteção da presente divulgação.

[00172] Os métodos experimentais que não indicam condições específicas nos exemplos a seguir geralmente seguem as condições convencionais para este tipo de reação ou as condições recomendadas pelo fabricante. Salvo indicação em contrário, as percentagens e partes são percentagens em peso e partes em peso. A menos que especificado de outra forma, as proporções do líquido são em volume.

[00173] Os materiais experimentais e reagentes usados nos exemplos a seguir podem ser obtidos de canais comerciais, preparados de acordo com os métodos da técnica anterior, ou preparados de acordo com um método semelhante ao divulgado no presente pedido, a menos que especificado de outra forma.

[00174] Nos exemplos a seguir, os espectros de 1H-NMR são registrados com instrumentos de ressonância magnética nuclear Bruker 400 MHz NMR e Agilent 500 MHz NMR, e os desvios químicos são expressos em δ (ppm); a espectroscopia de massa é registrada usando cromatografia líquida Agilent 1290+ instrumento de espectrometria de massa LCMS 6120B.

Abreviação

[00175] ACN (MeCN) acetonitrila Ar argônio BBr3 tribrometo de boro tBuONO nitrito de terc-butila CDCl3 clorofórmio deuterado Cs2CO3 carbonato de césio CuCl cloreto cuproso DCM diclorometano DIBAL-H hidreto de diisobutil alumínio

DIPEA N,N-diisopropiletilamina

DMF dimetilformamida

DMF-DMA N,N-dimetilformamida dimetil acetal

DMSO dimetilsulfóxido

DMSO-d6 dimetilsulfóxido deuterado

ESI ionização por electrospray

EA(EtOAc) acetato de etila

EDCI 1-etil-(3-dimetilaminopropil)

carbodiimida

EtOH etanol

FaSSGF fluidos gástricos simulados em jejum

FaSSIF fluido intestinal simulado em jejum

FeSSIF fluido intestinal simulado em estado alimentado

H hora

Hatu O-(7-azabenzotriazol-1-il) -

N,N,N',N'-tetrametilurônio hexafluorofosfato

Hcl ácido clorídrico ou cloreto de hidrogênio

HOBt 1-hidroxibenzotriazol

HPLC cromatografia líquida de alta performance

H2O água

K3PO4 Fosfato de potássio

LCMS cromatografia líquida-

espectrometria de massa liOH hidróxido de lítio

MeOH metanol

MHz megahertz

MS espectrometria de massas

MsCl cloreto de metanossulfonil

NaH hidreto de sódio

NaHCO3 bicarbonato de sódio

NaOH hidróxido de sódio

NaOMe metóxido de sódio

Na2SO4 sulfato de sódio

NMR ressonância magnética nuclear

PE éter de petróleo

Pc/C paládio/carbono

PdCl2(dbpf) [1,1’-bis(tert-

butilfosfino)ferroceno]dicloreto de paládio

PdCl2(dppf) [1,1’-

bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloreto de paládio o/n durante a noite rt temperatura ambiente

SOCL2 cloreto de Tionila

SiO2 sílica, gel de sílica

TBAF fluoreto de tetra-n-butilamônio

TEA trietilamina TEMPO óxido de nitrogênio de tetrametilpiperidina TFA ácido trifluoroacético TMS-CN cianeto de trimetilsilil TFAA anidrido trifluoroacético THF tetrahidrofurano TLC cromatografia em camada fina TMSCHN2 trimetilsilildiazometano Exemplos de Síntese

[00176] Cada abreviação nos seguintes exemplos de síntese tem o significado comumente entendido por um técnico no assunto. Salvo indicação em contrário, todas as temperaturas são fornecidas em graus Celsius; todos os reagentes estão disponíveis comercialmente e são usados sem purificação adicional.

Preparação do intermediário 1: 2,4-dibromo-5- hidroxibenzaldeído

[00177] Bromo (6,72 g, 84 mmol) foi adicionado lentamente gota a gota a uma solução de 3-hidroxibenzaldeído (4,48 g, 40 mmol) em diclorometano (80 mL) a 20°C. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas e, em seguida, solução aquosa de tiossulfato de sódio a 15% (40 mL) foi adicionada a 40°C para extinguir a reação. O produto precipitado foi lavado com água e seco para obter 4,6 g de sólido. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,17 (s,1H), 10,16-10,06 (m,1H), 8,01 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 7,41 (d, J= 2,2 Hz, 1H). MS [M+H] +: 279,0, Preparação do intermediário 2: 2,4-dibromo-5-(2-fluoro- 4-nitrofenoxi)benzaldeído

[00178] A uma solução de 2,4-dibromo-5- hidroxibenzaldeído (Intermediário 1, 4,5 g, 16 mmol) em N, N-dimetilformamida (50 mL) foi adicionado pó de carbonato de potássio (3,26 g, 24 mmol) e 1,2-difluoro-4-nitrobenzeno (2,68 g, 16,9 mmol), a mistura de reação resultante foi agitada a 50°C durante 6 horas, TLC mostrou que a reação estava completa. A mistura reacional foi extraída três vezes com acetato de etila (30 mL de cada vez), lavada com água cinco vezes, seca e evaporada sob pressão reduzida para remover o solvente para obter 5,6 g de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10,18 (s,1H), 8,08 (dd, J= 10,1, 2,5 Hz, 1H), 7,99 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 6,95 (t, J= 8,4 Hz, 1H).

Preparação do intermediário 3:(E)-1-(2,4-dibromo-5-(2- fluoro-4-nitrofenoxi)benzilideno)-2-isopropilhidrazina

[00179] A uma solução de 2,4-dibromo-5-(2-fluoro-4- nitrofenoxi) benzaldeído (Intermediário 2, 2,2 g, 5,3 mmol) em N, N-dimetilformamida (50 mL) foi adicionada isopropilhidrazina (0,641 g, 5,8 mmol), e a mistura de reação resultante foi agitada a 20°C durante 0,5 horas. TLC mostrou que a reação estava completa. A mistura de reação foi extraída três vezes com acetato de etila (30 mL de cada vez), lavada com água 5 vezes, seca e evaporada sob pressão reduzida para remover o solvente para obter 2,4 g de um sólido amarelo, que foi usado diretamente na próxima reação.

Preparação do intermediário 4: 6-bromo-5-(2-fluoro-4- nitrofenoxi)-1-isopropila-1H-indazol

[00180] Para uma solução N2 protegida de (E)-1-(2,4- dibromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)benzilideno)-2- isopropilhidrazina (Intermediário 3, 2,4 g, 5 mmol) em N, N -dimetilformamida foi adicionado pó de carbonato de potássio (1,1 g, 8 mmol) e cloreto cuproso (0,08 g, 0,8 mmol), a mistura de reação resultante foi agitada a 100 o C por 3 horas, TLC mostrou que a reação estava completa. A mistura de reação foi resfriada à temperatura ambiente e extraída três vezes com acetato de etila (30 mL de cada vez), lavada com água cinco vezes, seca e evaporada sob pressão reduzida para remover o solvente. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica eluída com acetato de etila/éter de petróleo (1:20 a 1:10) para obter 0,7 g de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,13 (d, J=10,3 Hz, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,83 (s,1H), 7,45 (s, 1H), 6,74 (t, J= 8,5 Hz , 1H), 4,83 (dt, J= 13,0, 6,5 Hz, 1H), 1,64 (d, J= 6,6 Hz, 6H). MS [M + H] +: 394,0, Preparação do intermediário 5: 6-bromo-5-(2-fluoro-4-

nitrofenoxi)-1-metila-1H-indazol

[00181] O intermediário foi preparado de acordo com a via sintética do Intermediário 4, usando o Intermediário 2 e a metil-hidrazina. MS[M+H]+: 366,0,, Preparação do intermediário 6: 6-bromo-5-(2-fluoro-4- nitrofenoxi)-1-etila-1H-indazol

[00182] O intermediário foi preparado de acordo com a via sintética do Intermediário 4, usando o Intermediário 2 e etil-hidrazina. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,98 (dd, J= 10,3, 2,5 Hz, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,79 (d, J= 9,1 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 6,58 (t, J =8,5 Hz, 1H), 4,30 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,42 (t, J =7,2 Hz, 3H).

Preparação do intermediário 7: N-(4-fluorofenila)-2- cianoacetamida

[00183] A uma solução de 4-fluoroanilina (6,6 g, 56 mmol) em diclorometano (200 mL) foi adicionado HATU (25 g, 75 mmol), N,N-diisopropiletilamina (21,6 g, 166 mmol) e ácido 2-cianoacético (5,6 g, 75 mmol), a mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas, depois lavada com solução aquosa saturada de cloreto de amônio e seca. O produto bruto obtido por concentração foi purificado em coluna de gel de sílica e eluído com acetato de etila-éter de petróleo (1:5 a 2:1) para obter 5 g de um sólido branco. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,38 (s, 1H), 7,56 (dd, J= 8,8 Hz, 4,9 Hz, 2H), 7,18 (t, J= 8,8 Hz,

2H), 3,90 (s, 2H) MS [M+H] +: 179,1, Preparação do intermediário 8: 1-trimetilsilila-pent- 1-in-3-ona

[00184] A uma solução de bistrimetilsililacetileno (5,6 g, 35 mmol) em diclorometano a 0 o C foi adicionado cloreto de propionila (2,79 g, 30 mmol). A mistura de reação resultante foi agitada por 10 minutos e então adicionada com tricloreto de alumínio (4,8 g, 36 mmol), adicionalmente agitada a 0o C por 2 horas, então naturalmente aquecida à temperatura ambiente e agitada por mais 2 horas. A mistura reacional foi despejada numa solução de ácido clorídrico a 10% (70 mL) em água gelada e agitada durante 10 minutos.

Depois que as duas fases foram separadas, a fase aquosa foi extraída três vezes com diclorometano (25 mL de cada vez), seca e evaporada sob pressão reduzida para remover o solvente para obter um produto de óleo marrom bruto, que foi usado diretamente na próxima reação.

Preparação do intermediário 9: (E)-1-metoxi-pent-1-en- 3-ona

[00185] A uma solução de 1-trimetilsilil-pent-1-in- 3-ona (Intermediário 8, todos os produtos em bruto) em metanol (20 mL) foi adicionado lentamente 1,4-diazabiciclo [2,2,2]octano (6,72 g , 60 mmol), a mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos e depois concentrada, depois diluída com acetato de etila (20 mL), lavada duas vezes com salmoura saturada (10 mL de cada vez), seca e evaporada sob pressão reduzida para remover o solvente. O produto bruto foi purificado por uma coluna de gel de sílica e eluído com acetato de etila-éter de petróleo (1:10) para obter 2,1 g do produto. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,62 (d, J= 12,7 Hz, 1H), 5,60 (d, J= 12,7 Hz, 2,4 Hz, 1H), 3,71 (q, J= 7,8 Hz, 3H), 1,11 (t, J= 7,8 Hz, 3H).

Preparação do intermediário 10: (E)-1-metoxi-4-metila- pent-1-en-3-ona

[00186] O intermediário foi preparado a partir de cloreto de isobutirila de acordo com a rota sintética do Intermediário 9, 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,61 (d, J= 12,5, 1H), 5,62 (d, J= 12,5, 1H), 2,72 - 2,56 (m, 1H), 1,12-1,09 (d, 6H).

Preparação do intermediário 11: (E)-1-ciclopropil-3- metoxi-prop-2-en-1-ona

[00187] O intermediário foi preparado a partir de cloreto de ciclopropilformila de acordo com a rota sintética do Intermediário 9, 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7,64 (d, J= 12,6 Hz, 1H), 5,72 (d, J= 12,6 Hz, 1H), 3,72 (d, J= 4,7 Hz, 3H), 1,93 (d, J= 4,5 Hz, 1H), 1,10-1,02 (m, 2H), 0,91-0,81 (m, 2H).

Preparação do intermediário 12: 1-(4-fluorofenila)-6- metila-3-ciano-2-oxo-1,2-di-hidropiridina

[00188] A uma solução de N-(4-fluorofenil)-2- cianoacetamida (Intermediário 7, 1 g, 5,6 mmol) em dietilenoglicol monoetila éter (20 mL) foi adicionado 1,4- diazabiciclo [2,2,2] octano (0,62 g, 5,6 mmol) e (E)-1- metoxi-but-1-en-3-ona (0,84 g, 8,4 mmol), a mistura de reação resultante foi agitada a 120°C durante 14 horas. Após resfriamento até à temperatura ambiente, foi lavado com ácido clorídrico 1N e solução aquosa saturada de cloreto de sódio.

O produto bruto foi purificado com uma coluna de gel de sílica e eluído com acetato de etila-éter de petróleo (1:1) para obter 0,7 g de produto sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,81 (d, J= 7,4 Hz, 1H), 7,26 (t, J= 7,7 Hz, 2H), 7,22-7,16 (m, 2H), 6,27 (d, J= 7,4 Hz , 1H), 2,09 (s, 3H).

MS [M+H]+: 229,1, Preparação do intermediário 13: ácido 1-(4- fluorofenil)-6-metila-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxílico

[00189] A 1-(4-fluorofenil)-6-metila-3-ciano-2-oxo- 1,2-di-hidropiridina (Intermediário 12, 0,7 g) foi adicionado ácido sulfúrico concentrado/água (1 mL/1 mL), o resultante a mistura reacional foi agitada a 100°C durante 15 horas, resfriada à temperatura ambiente e extraída com acetato de etila três vezes (20 mL de cada vez) e depois lavada com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio.

Após o solvente ter sido evaporado sob pressão reduzida, o produto bruto foi dissolvido em etanol (2 mL), adicionado com solução de hidróxido de sódio 2N e lavado duas vezes com acetato de etila (10 mL de cada vez). A solução aquosa foi acidificada com ácido clorídrico 1N, precipitada, filtrada e seca para obter 0,5 g do produto. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,43 (d, J= 7,5 Hz, 1H), 7,54 (dd, J= 8,8 Hz, 5,1 Hz, 2H), 7,46 (t, J= 8,7 Hz, 2H), 6,82 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 2,11 (s, 3H). MS [M+H]+: 248,1, Preparação do intermediário 14: ácido 1-(4-fluorofenil) -6-etil-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3-carboxílico

[00190] O intermediário foi preparado de acordo com a rota sintética do Intermediário 13 usando o Intermediário 7 e o Intermediário 9, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14,23 (s, 1H), 8,45 (dd, J= 7,7, 2,6 Hz, 1H) , 7,58 - 7,49 (m, 2H), 7,45 (t, J= 10,0 Hz, 2H), 6,76 (dd, J= 7,8, 2,5 Hz, 1H), 2,31 (q, J= 7,4 Hz, 2H), 1,05 ( t, J= 7,4 Hz, 3H). MS [M+H]+: 262,3, Preparação do intermediário 15: ácido 1-(4- fluorofenil)-6-isopropil-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxílico

[00191] O intermediário foi preparado de acordo com a rota sintética do Intermediário 13 usando o Intermediário 7 e o Intermediário 10, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,47 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 7,58 (dd, J= 8,8, 4,9 Hz, 2H), 7,46 (t, J= 8,7 Hz, 2H), 6,86 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 2,46 (m, 1H), 1,13 (t,

J = 7,2 Hz, 6H). MS [M+H] +: 276,3, Preparação do intermediário 16: ácido 1-(4- fluorofenila)-6-ciclopropila-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxílico

[00192] O intermediário é preparado de acordo com a rota sintética do Intermediário 13 usando o Intermediário 7 e o Intermediário 11, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,37 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 4,3 Hz, 2H), 7,45 (t, J= 8,6 Hz, 2H), 6,54 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 1,35 (m, 1H), 0,93 (m, 2H), 0,85 (m, 2H). MS [M+H] +: 274,3, Preparação do intermediário 17: ácido 1-(4- fluorofenila)-6-trifluorometila-2-oxo-1,2-dihidropiridina- 3-carboxílico

[00193] Este intermediário é preparado de acordo com a rota sintética do Intermediário 13, usando o Intermediário 7 e (E) -1-metoxi-4,4,4-trifluoro-1-buten-3-ona (obtido por um método semelhante à síntese de Intermediário 9). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,66 (s, 1H), 8,42 (d, J= 7,4 Hz, 1H), 7,60 - 7,51 (m, 2H), 7,42 (t, J= 8,7 Hz, 2H) , 7,25 (d, J= 7,5 Hz, 1H). MS [M+H] +: 302,1, Preparação do intermediário 18: 6-bromo-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-isopropila-1H-indazol

[00194] Em um balão de fundo redondo de 100 mL foi adicionado 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-isopropila- 1H-indazol (Intermediário 4, 0,2 g, 0,5 mmol), 10% de paládio sobre carbono (0,1 g) e acetato de etila. O gás no frasco foi substituído por hidrogênio 5 vezes e, em seguida, agitado durante a noite à temperatura ambiente. TLC e LCMS mostraram que a reação estava completa para obter um único produto. O catalisador de paládio/carbono foi removido por filtração, a torta de filtro foi enxaguada com acetato de etila (25 mL) e o produto obtido foi usado diretamente na próxima reação.

MS [M+H]+: 364,0, Preparação do intermediário 19: N-(3-fluoro-4-(1- isopropila-6-bromo-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6-metila-2- oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-dihidropiridina-3-carboxamida

[00195] Em um balão de fundo redondo de 25 mL foi adicionado 6-bromo-5-(2-fluoro-4-aminofenoxi)-1-isopropila- 1H-indazol (Intermediário 18, 0,2 g, 0,5 mmol), 1-(4- fluorofenila) Ácido-6-metila-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxílico (Intermediário 13, 0,15 g, 0,6 mmol), cloridrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (0,215 g, 1,12 mmol) , 1-hidroxibenzotriazol (0,105 g, 0,75 mmol), N,N-diisopropiletila amina (0,325 g, 2,5 mmol) e N,N- dimetilformamida (4,5 mL), a mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, em seguida, distribuída em acetato de etila (25 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL). A fase orgânica foi separada e lavada quatro vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL de cada vez), a fase aquosa foi extraída três vezes com acetato de etila (25 mL de cada vez), a fase orgânica combinada foi seca, concentrada e a o produto bruto foi purificado com uma coluna de gel de sílica, eluído com acetato de etila-éter de petróleo (1:5 a 1:3) para obter um produto sólido amarelo. MS [M+H] +: 593,1, Preparação do intermediário 20: N-(3-fluoro-4-(1- isopropila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-metila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida

[00196] Em um balão de fundo redondo de 25 mL foi adicionado N-(3-fluoro-4-(1-isopropila-6-bromo-1H-indazol- 5-iloxi)fenila)-6-metila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2- dihidropiridina-3-carboxamida (Intermediário 19, 0,5 mmol), fosfato tripotássico (0,223 g, 1,05 mmol), éster de pinacol de ácido 1-Boc-pirazol-4-borônico (0,182 g, 0,62 mmol) , di- terc-butila dicarbonato (0,022 g, 0,1 mmol), [1,1'-bis (difenilfosfino) ferroceno] dicloreto de paládio (0,005 g, 0,0075 mmol), água (1 mL) e tetrahidrofurano (15 mL), a mistura foi substituída por nitrogênio 8 vezes e, em seguida, agitada a 45°C durante a noite. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o produto em bruto foi purificado com uma coluna de gel de sílica, eluída com acetato de etila-éter de petróleo (1:3 a 1:2) para obter 0,263 g de um produto sólido amarelo. MS [M+H]+: 680,2, Preparação do intermediário 21: N-(3-fluoro-4-(1-etila-

6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6-metil- 2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamida

[00197] O intermediário 21 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 20, usando o intermediário 6 (6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1- etila-1H-indazol) e o intermediário 13 (1-(4-ácido fluorofenila)-6-metila-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxílico). MS [M+H] +: 667,2, Preparação do intermediário 22: N-(3-Fluoro-4-(1- isopropila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-isopropil-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida

[00198] O intermediário 22 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 20, usando o intermediário 4 (6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1- isopropil-1H-indazol)e o intermediário 15 (1-(4-fluorofenila Ácido)-6-isopropila-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxílico).

Preparação do intermediário 23: N-(3-fluoro-4-(1- isopropila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-trifluorometila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)- 1,2-di-hidropiridina-3-carboxamida

[00199] O intermediário 23 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 20, usando o intermediário 4 (6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-

isopropil-1H-indazol) e o intermediário 17 (1-(4-ácido fluorofenila)-6-trifluorometila-2-oxo-1,2-di-hidropiridina- 3-carboxílico).

Preparação do intermediário 24: 6-(1-Boc-pirazol-4-il) -5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metil-1H-indazol

[00200] Em um balão de fundo redondo de 100 mL foi adicionado 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1-metila-1H- indazol (Intermediário 5, 2,334 g, 6,37 mmol), fosfato tripotássico (2,84 g, 13,4 mmol), éster de pinacol de ácido 1-Boc-pirazol-4-borônico (2,81 g, 9,6 mmol), dicarbonato de di-terc-butila (0,278 g, 1,27 mmol), dicloreto de [1,1'-bis (difenilfosfino)ferroceno]paládio (0,25 g, 0,383 mmol), água (10 mL) e tetra-hidrofurano (150 mL), a mistura foi substituída por nitrogênio 8 vezes e, em seguida, agitada a 45o C durante a noite. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o produto em bruto foi purificado com uma coluna de gel de sílica, eluída com acetato de etila-éter de petróleo (1:3 a 1:2) para obter 3,78 g de um produto sólido amarelo. MS [M+H]+: 454,2, Preparação do intermediário 25: 6-(1-Boc-pirazol-4-il) -5-(2-fluoro-4-aminofenoxi)-1-metila-1H-indazol

[00201] Em um balão de fundo redondo de 250 mL foi adicionado 6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- nitrofenoxi)-1-metila-1H-indazol (Intermediário 24, 1,89 g, 4,17 mmol), paládio/carbono a 10% (1 g) e acetato de etila

(75 mL), substituiu o gás no frasco por hidrogênio 5 vezes e, em seguida, agitou-se a 40°C durante 1 hora. TLC e LCMS mostraram que a reação estava completa com um único produto.

O paládio/carbono foi removido por filtração, e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para obter 1,2 g do produto que foi usado diretamente na próxima reação. MS [M+H]+: 424,2, Preparação do intermediário 26: N-(3-fluoro-4- (1- metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- etila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3- carboxamida

[00202] Em um balão de fundo redondo de 25 mL foi adicionado 6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-metila-1H-indazol (Intermediário 25, 0,212 g, 0,5 mmol), ácido 1-(4-fluorofenila)-6-etila-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxílico (Intermediário 14, 0,131 g, 0,5 mmol), cloridrato de carbodiimida 1-etila-3-(3- dimetilaminopropila) (0,215 g, 1,12 mmol), 1- hidroxibenzotriazol (0,105 g, 0,75 mmol), N,N- diisopropiletilamina (0,325 g, 2,5 mmol) e N,N- dimetilformamida (4,5 mL), a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, e depois distribuído em acetato de etila (25 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL). a fase orgânica foi separada e lavada quatro vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL de cada vez), a fase aquosa foi extraída três vezes com acetato de etila (25 mL de cada vez), a fase orgânica combinada foi seca e concentrada, e o produto bruto foi purificado com coluna de gel de sílica, eluído com acetato de etila-éter de petróleo (1:1 a 2:1) para obter um produto sólido amarelo. MS [M+H] +: 667,2, Preparação do intermediário 27: N-(3-fluoro-4-(1- metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- isopropila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3- carboxamida

[00203] O intermediário 27 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 25 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-metila-1H-indazol ) e Intermediário 15 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-isopropila-2-oxo-1,2-di-hidropiridina- 3-carboxílico). MS [M+H]+: 681,2, Preparação do intermediário 28: N-(3-Fluoro-4-(1-metil- 6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- ciclopropila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina- 3-carboxamida

[00204] O intermediário 28 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 25 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-metila-1H-indazol ) e intermediário 16 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-ciclopropila-2-oxo-1,2-di-

hidropiridina-3-carboxílico). MS [M+H] +: 679,2, Preparação do intermediário 29: N-(3-fluoro-4-(1- metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- trifluorometila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida

[00205] O intermediário 29 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 25 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-metila-1H-indazol ) e Intermediário 17 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-trifluorometil-2-oxo-1,2-di- hidropiridina-3-carboxílico). MS [M+H] +: 707,2, Preparação do intermediário 30: éster etílico de ácido 3-((4-fluorofenila)amino)-3-oxo-propiônico

[00206] A mistura de malonato de monoetila (10 g, 8,93 mL, 75,69 mmol), 4-fluoroanilina (7,17 mL, 75,69 mmol), EDCI HCl (14,51 g, 75,69 mmol), HOBt (10,23 g, 75,69 mmol), TEA (21,04 mL) , 151,38 mmol) e DCM (120 mL) foi agitado à temperatura ambiente durante 16 horas. A reação foi extinta com água (200 mL), acidificada a pH = 7 com ácido clorídrico concentrado e extraída com acetato de etila (3×200 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura saturada (200 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. Após filtração e concentração, foi obtido um sólido branco (17,2 g, 75,7% de rendimento). O produto bruto foi usado diretamente na próxima reação sem purificação. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9,26 (s, 1H), 7,54 -

7,50 (m, 2H), 7,03 (dd, J= 11,9, 5,4 Hz, 2H), 4,26 (q, J= 7,1 Hz, 2H), 3,47 (s, 2H), 1,33 (t, J= 7,2 Hz, 3H). MS-ESI [M+H]+: 226,2, Preparação do intermediário 31: etila 3-dimetilamino-2 -((4-fluorofenila)carboxamido)acrilato

[00207] A uma solução de éster etílico do ácido 3- ((4-fluorofenila)amino)-3-oxo-propiônico (3 g, 13,32 mmol) em tolueno (50 mL) foi adicionado DMF-DMA (2,65 mL, 19,98 mmol). A mistura foi agitada a 90°C durante 2 horas. Depois que a mistura de reação foi concentrada, o produto bruto foi recristalizado com acetato de etila/éter de petróleo (1:10, 22 mL) para obter um sólido branco (1,71 g, 45,8% de rendimento). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,03 (s, 1H), 7,65- 7,62 (m, 2H), 7,50 - 7,43 (m, 1H), 7,11 (t, J= 8,8 Hz, 2H), 4,07 (q, J= 6,9 Hz, 2H), 2,99 (s, 6H), 1,17 (t, J= 7,0 Hz, 3H). MS-ESI [M+H]+: 281,2, Preparação do intermediário 32: éster etílico de ácido 6-amino-1-(4-fluorofenila)-5-(metiltio)-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxílico

[00208] A uma solução de brometo de cianometila dimetilsulfônio (16,29 g, 89,48 mmol) em DMSO (250 mL) foi adicionado Cs2CO3 (72,88 g, 223,69 mmol) e agitado à temperatura ambiente durante 0,5 hora e, em seguida, foi adicionado etila 3-dimetilamino-2-((4- fluorofenila)carboxamido) acrilato. A mistura foi aquecida a 100 °C e agitada durante 16 horas. A reação foi extinta pela adição de água (300 mL), filtrada, lavada com água (2×100 mL) e o produto em bruto foi recristalizado com acetato de etila/éter de petróleo (1:2, 90 mL) para obter um sólido branco (18 g, rendimento de 74,9%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,15 (s, 1H), 7,39 - 7,31 (m, 2H), 7,30-7,26 (m, 2H), 7,00 (br, 2H), 4,09 (q, J= 7,1 Hz, 2H), 2,20 (s, 3H), 1,19 (t, J= 7,2 Hz, 3H). MS-ESI [M+H]+: 323,0, Preparação do intermediário 33: etila 6-amino-1-(4- fluorofenila)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxilato

[00209] Para uma solução de éster etílico de ácido 6- amino-1-(4-fluorofenila)-5-(metiltio)-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxílico (1g, 3,1mmol) em THF (30 mL) adicionou-se PdCl2 (55 mg, 0,31 mmol) e trietilsilano (0,99 mL, 6,20 mmol) e agitou-se à temperatura ambiente durante 16 horas. Após filtração e concentração, a reação foi lavada com acetato de etila (2×10 mL) para obter um sólido branco 33 (0,5 g, 58,3% de rendimento). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,92 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,40 - 7,35 (m, 2H), 7,28 - 7,25 (m, 2H), 6,92 (br, 2H), 5,61 ( d, J= 8,8 Hz, 1H), 4,07 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,18 (t, J= 7,2 Hz, 3H). MS-ESI [M+H]+: 277,2, Preparação do intermediário 34: etila 6-cloro-1-(4- fluorofenila)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxilato

[00210] Para uma mistura de éster etílico de ácido 6-

amino-1-(4-fluorofenila)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxílico (6 g, 21,7 mmol) e CuCl (2,6 g, 26,1 mmol) em ACN (50 mL) foi adicionado t-BuONO (4,8 mg, 35,8 mmol) gota a gota e agitado durante a noite à temperatura ambiente.

Depois que a solução de reação foi concentrada, o produto em bruto foi purificado com uma coluna de gel de sílica, eluída com um gradiente de 0-20% de acetato de etila/diclorometano para obter 34 como um sólido amarelo (1,6 g, 25% de rendimento). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,122 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,46 - 7,39 (m, 4H), 6,70 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 4,22 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,25 (t, J= 7,2 Hz, 3H). MS-ESI [M+H]+: 295,9, Preparação do intermediário 35: ácido 1-(4- fluorofenila)-6-metoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxílico

[00211] A uma mistura de éster etílico de ácido 6- cloro-1-(4-fluorofenila)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxílico (0,5 g, 1,69 mmol) em THF (20 mL) foi adicionado NaOMe (915 mg, 16,9 mmol) e agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A solução de reação foi extinta com HCl 1N (100 mL) e extraída com acetato de etila (2x100 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura saturada (100 mL) e seca sobre sulfato de sódio anidro. Após filtração e concentração, o produto bruto foi preparado por HPLC. Foi obtido um sólido branco (0,178 g, rendimento de 40%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-

d6) δ 13,77 (s, 1H), 8,48 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,47 - 7,36 (m, 4H), 6,43 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H). MS-ESI [M+H]+: 264,1, Preparação do intermediário 36: ácido 1-(4- fluorofenila)-6-etoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxílico

[00212] O intermediário 36 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 35, a partir do intermediário 34 (éster etílico de ácido 6-cloro-1-(4- fluorofenil)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico) e etóxido de sódio. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,80 (s, 1H), 8,46 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 7,48 - 7,39 (m, 4H), 6,43 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 4,29 (q, J= 6,8 Hz, 2H), 1,16 (t, J= 7,0 Hz, 3H). MS-ESI [M+H]+: 278,1, Preparação do intermediário 37: ácido 1-(4- fluorofenila)-6-ciclopropoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxílico

[00213] O intermediário 37 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 35, a partir do intermediário 34 (éster etílico de ácido 6-cloro-1-(4- fluorofenil)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico) e hidreto de sódio e ciclopropanol. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,78 (s, 1H), 8,52 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,44 - 7,37 (m, 4H), 6,65 (d, J= 8,4 Hz, 1H) , 4,23 - 4,18 (m, 1H), 0,831 (t, J= 6,4 Hz, 2H), 0,371 (t, J= 6,4 Hz, 7,2 Hz, 2H). MS-ESI

[M+H]+: 290,0, Preparação do intermediário 38: ácido 1-(4- fluorofenila)-6-isopropoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxílico

[00214] O intermediário 38 foi preparado de acordo com a rota sintética do intermediário 35, a partir do intermediário 34 (éster etílico de ácido 6-cloro-1-(4- fluorofenila)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico) e hidreto de sódio e isopropanol. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,801 (s, 1H), 8,436 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,442 - 7,354 (m, 4H), 6,468 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 4,967 - 4,876 (m, 1H), 1,180 (d, J= 8,8 Hz, 6H). MS-ESI [M+H]+: 292,0, Preparação do intermediário 39: ácido 1-(4- fluorofenila)-6-(2,2,2-trifluoroetoxi)-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxílico

[00215] O intermediário 39 foi preparado de acordo com a rota sintética do intermediário 35, a partir do intermediário 34 (éster etílico de ácido 6-cloro-1-(4- fluorofenila)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico) e hidreto de sódio e 2,2,2-trifluoroetanol. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,68 (s, 1H), 8,52 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,54 - 7,32 (m, 4H), 6,51 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 5,05 (q, J= 8,4 Hz, 2H). MS-ESI [M+H]+: 332,0, Preparação do intermediário 40: ácido 1-(4- fluorofenila)-6-metiltio-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-

carboxílico

[00216] O intermediário 40 foi preparado de acordo com a rota sintética do Intermediário 35, a partir do Intermediário 34 (éster etílico de ácido 6-cloro-1-(4- fluorofenila)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico) e tiometoxido de sódio. O produto bruto foi usado diretamente na próxima reação. MS-ESI [M+H]+: 280,0, Preparação do intermediário 41: ácido 6-amino-1-(4- fluorofenila)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico

[00217] Para éster etílico de ácido 6-amino-1-(4- fluorofenila)-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3-carboxílico (1,0 g, 3,62 mmol) e etanol (15 mL) foi adicionado NaOH (2,90 g, 72,39 mmol) e água (8 mL), e agitada a 60°C durante 24 horas.

A solução de reação foi concentrada e dissolvida em água (30 mL) e extraída com DCM (3×50 mL). A solução aquosa foi neutralizada a pH 6,0 com HCl concentrado e extraída com acetato de etila (3x50 mL). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada para obter um sólido amarelo (0,450 g, rendimento de 50%). O produto bruto foi usado diretamente na próxima reação. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,75 (s, 1H), 8,00 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,45 (s, 2H), 7,43 (d, J= 3,0 Hz, 2H), 7,22 (dd, J= 50,1, 31,4 Hz, 2H), 5,95 (d, J= 8,8 Hz, 1H). MS-ESI [M+H]+: 249,0, Preparação do intermediário 42: ácido 1-(4- fluorofenila)-6-cloro-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-

carboxílico

[00218] Para uma mistura de ácido 6-amino-1-(4- fluorofenila)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico (0,45 g, 1,81 mmol) e CuCl (0,179 g, 1,81 mmol) em MeCN (10 mL) foi adicionado t-BuONO (0,62 mL, 2,99 mmol) gota a gota e agitado à temperatura ambiente durante 3 dias. A reação foi extinta com HCl aquoso (1N, 20 mL) e extraída com acetato de etila (5x30 mL). Após a fase orgânica ser seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada, o produto em bruto foi submetido a HPLC para obter um sólido amarelo (0,080 g, rendimento de 16,5%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 13,31 (s, 1H), 8,55 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,32 - 7,27 (m, 4H), 6,80 (d, J= 7,9 Hz, 1H). MS -ESI [M+H]+: 267,9, Preparação do intermediário 43: 6-(Boc-amino)-1-(4- fluorofenila)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico éster etílico

[00219] A uma mistura de etila 6-amino-1-(4- fluorofenila)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxilato (0,32 g, 1,16 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado TEA (0,32 mL, 2,32 mmol) e Boc2O (0,53 mL, 2,32 mmol) gota a gota e agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A reação foi extinta com água (10 mL) e extraída com acetato de etila (3×20 mL).

Depois que a fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada, o produto em bruto foi purificado com uma coluna de gel de sílica, eluída com um gradiente de 1/10 a 1/5 a 1/2 acetato de etila/diclorometano para obter um amarelo sólido (1,6 g, rendimento de 25%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,32 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 7,34 - 7,26 (m, 4H), 7,12 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 6,17 (s, 1H), 4,33 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,35 (t, J= 7,1 Hz, 3H). MS-ESI [M+H]+: 377,1, Preparação do intermediário 44: ácido 6-(Boc-amino)-1- (4-fluorofenila)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico

[00220] Para uma mistura de éster etílico de ácido 6- (Boc-amino)-1-(4-fluorofenila)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxílico (0,18 g, 0,48 mmol) em EtOH (2 mL) adicionou-se NaOH (0,382 mL, 9,56 mmol) e água (2 mL) gota a gota e agitou-se à temperatura ambiente durante 64 horas. A solução de reação foi diluída com água (10 mL) e extraída com DCM (2×10 mL). A fase aquosa foi acidificada com HCl concentrado até pH 6 e, em seguida, extraída com acetato de etila (4x10 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura saturada (10 mL), seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada para obter um sólido amarelo (0,12 g, 72% de rendimento). O produto bruto foi usado diretamente na próxima reação sem purificação. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 13,36 (br s, 1H), 8,56 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,44 - 7,39 (m, 3H), 7,35 - 7,28 (m, 2H), 6,29 (s , 1H), 1,46 (s, 9H). MS-ESI [M+H]+: 349,1, Preparação do intermediário 45: ácido 6-

(metilsulfóxido)-1-(4-fluorofenila)-2-oxo-1,2-di- hidropiridina-3-carboxílico

[00221] A uma mistura de éster etílico de ácido 6- (metiltio)-1-(4-fluorofenila)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxílico (0,15 g, 0,54 mmol) em MeCN (3 mL) foi adicionado 30 % H2O2 (0,12 mL, 1,08 mmol) e HCl concentrado (0,06 mL) gota a gota, e agitado à temperatura ambiente durante 16 horas. Depois que a solução de reação foi concentrada, ela foi submetida a HPLC para obter um sólido branco (0,08 g, 50,4% de rendimento). MS-ESI [M+H]+: 296,0, Preparação do intermediário 46: (E)-N-(5-bromo-4- metoxi-2-metilfenila)-2-oxima acetamida

[00222] Uma mistura de hidrato de tricloroacetaldeído (11,0 g, 66,6 mmol), sulfato de sódio (16,0 g, 113 mmol), 5- bromo-4-metoxi-2-metilanilina (13 g, 51,8 mmol), ácido clorídrico concentrado (8 mL), cloridrato de hidroxilamina (13,4 g, 195 mmol) e água (500 mL) foram agitados a 100°C por 6 horas, depois resfriados a 0°C. O precipitado resultante foi recolhido por filtração, lavado com água e seco para obter um sólido castanho (9,0 g, rendimento de 61%). MS-ESI [M+H]+: 286,9, Preparação do intermediário 47: 4-bromo-5-metoxi-7- metilindolina-2,3-diona

[00223] Uma mistura de (E)-N-(5-bromo-4-metoxi-2- metilfenila)-2-oxima cetamida (9,0 g, 31 mmol) e ácido sulfúrico concentrado (26 mL) foi aquecida a 80°C e agitada durante 2 horas , em seguida resfriado à temperatura ambiente, lentamente vertido em gelo e agitado por 1 hora.

O precipitado resultante foi recolhido por filtração, disperso em etanol (100 mL) a 80°C e agitado durante 1 hora.

Após resfriamento à temperatura ambiente, um sólido precipitou, filtrou e secou para obter um sólido vermelho (6,3 g, 75% de rendimento). MS-ESI [M+H]+: 269,9, Preparação do intermediário 48: ácido 2-amino-6-bromo- 5-metoxi-3-metilbenzoico

[00224] A 80°C, à solução de 4-bromo-5-metoxi-7- metilindolina-2,3-diona (6,0 g, 22 mmol) em NaOH 3N (0,7 mL) foi adicionado lentamente 30% de H2O2 aquoso (6 mL) gota a gota e mantido em agitação durante 2 horas. Em seguida, a reação foi resfriada à temperatura ambiente, ajustada a solução para pH 3-5 com ácido clorídrico concentrado e agitada por mais 1 hora à temperatura ambiente. O precipitado resultante foi recolhido por filtração e seco para obter um sólido castanho claro (4,5 g, rendimento de 78%). MS-ESI [M+H]+: 259,9, Preparação do intermediário 49: metila 2-amino-6-bromo- 5-metoxi-3-metilbenzoato

[00225] A uma solução de ácido 2-amino-6-bromo-5- metoxi-3-metilbenzoico (4,5 g, 17 mmol) em THF/MeOH (4:1, 50 mL) foi adicionada gota a gota solução de trimetila silício diazometano (2M em hexano, 34 mL) à temperatura ambiente e mantida em agitação durante 2 horas. Em seguida, a reação foi tratada com 3 mL de ácido acético glacial, o solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com éter de petróleo/acetato de etila 3:1, para obter um sólido amarelo claro (3,0 g, Rendimento de 63%). MS-ESI [M+H]+: 273,9, Preparação do intermediário 50: metila 6-bromo-5- metoxi-1H-indazol-7-carboxilato

[00226] A uma mistura de metila 2-amino-6-bromo-5- metoxi-3-metilbenzoato (3,0 g, 10,98 mmol) e ácido acético glacial (50 mL) foi adicionada uma solução de NaNO2 (0,91 g, 13 mmol) em água (10 mL), aquecida a 50°C e mantida em agitação por 16 horas. O solvente foi evaporado e o resíduo foi lavado com água e seco in vacuo para obter um sólido amarelo pálido (2,84 g, 91% de rendimento). MS-ESI [M+H]+: 285,0, Preparação do intermediário 51: metila 6-bromo-5- metoxi-1-(tetrahidro-2H-pirani-2-il)-1H-indazol-7- carboxilato

[00227] Metila 6-bromo-5-metoxi-1H-indazol-7- carboxilato (10 g, 35,2 mmol) e DHP (20 mL, 70,4 mmol) foram dissolvidos em THF/CHCl3 (1:2, 240 mL) e TsOH (1,0 g, 5,26 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada a 50°C durante a noite. Após resfriamento até a temperatura ambiente, foi concentrado e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com um gradiente de 0-20% de acetato de etila/éter de petróleo, para obter um sólido amarelo (10 g, 77% de rendimento). MS-ESI [M+H]+: 369,1, Preparação do intermediário 52: 6-bromo-5-metoxi-1- (tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-7-metanol

[00228] A -20°C, a uma solução de tolueno de metila 6-bromo-5-metoxi-1-(tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol- 7-carboxilato (10 g, 27,1 mmol) foi adicionado DIBAL-H (70 mL, 108,4 mmol, 1,5 M em tolueno). A mistura foi aquecida lentamente até à temperatura ambiente e mantida em agitação durante 1 hora. A reação foi extinta com água e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi lavada com água, salmoura saturada, seca sobre Na 2SO4 anidro e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com um gradiente de 0-20% de acetato de etila/éter de petróleo, para obter um sólido branco (9 g, 97% de rendimento). MS-ESI [M+H]+: 341,0, Preparação do intermediário 53: (6-bromo-5-metoxi-1- (tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-7-metila metanossulfonato

[00229] A 0°C, a uma solução de 6-bromo-5-metoxi-1- (tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-7-metanol (10,0 g, 29,4 mmol) em DCM (200 mL) foram adicionado TEA (16 mL, 117,6 mmol) e MsCl (0,45 mL, 5,88 mmol). A mistura foi aquecida lentamente até à temperatura ambiente e agitada durante 1 hora. A reação foi extinta com água e extraída com DCM. A fase orgânica foi lavada com água, salmoura saturada, seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada. O produto bruto foi usado diretamente na próxima reação. MS-ESI [M+H]+: 356,9, Preparação do intermediário 54: 2-(6-bromo-5-metoxi-1- (tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-7-il)acetonitrila

[00230] A uma solução de (6-bromo-5-metoxi-1- (tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-7- il)metanossulfonato de metila (10,0 g, 29,4 mmol) em ACN (20 mL) foram adicionados TMS-CN (5,9 mL, 44,1 mmol) e TBAF (1M, 44 mL, 117,6 mmol). Após a mistura ter sido agitada à temperatura ambiente durante 3 horas, a reação foi diluída com água e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi lavada com água, salmoura saturada, seca sobre Na 2SO4 anidro e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com um gradiente de 0-20% de acetato de etila/éter de petróleo, para obter um sólido branco (3,5 g, 35% de rendimento). MS- ESI [M+H]+: 350,1, Preparação do intermediário 55: 2-(6-bromo-5-metoxi-1- (tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-7-il)acetaldeído

[00231] A 0°C, a uma solução de 2-(6-bromo-5-metoxi- 1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-7-il) acetonitrila (2,50 g, 10 mmol) em tolueno (35 mL) foi adicionado DIBAL-H

(7,16 mL, 15 mmol, 1,5 M em tolueno). A mistura foi aquecida lentamente até à temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. A reação foi extinta com água, extraída com acetato de etila, a fase orgânica foi lavada com água, salmoura saturada, seca sobre Na2SO4 anidro e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com um gradiente de 0-20% de acetato de etila/éter de petróleo, para obter um sólido branco (1,5 g, 59% de rendimento). MS-ESI [M+H]+: 269,0, Preparação do intermediário 56: 2-(6-bromo-5-metoxi-1- (tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-7-il)etanol

[00232] A uma solução de 2-(6-bromo-5-metoxi-1- (tetrahidro-2H-pirano-2-il)-1H-indazol-7-il) acetaldeído (1,5 g, 2,6 mmol) em metanol (30 mL) foi adicionado NaBH 4 (0,66 g, 5,2 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A reação foi extinta com água, extraída com DCM, a fase orgânica foi lavada com água, salmoura saturada, seca sobre Na 2SO4 anidro e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com um gradiente de 0-20% de acetato de etila/éter de petróleo, para obter um sólido branco (1,3 g, 86% de rendimento). MS-ESI [M+H]+: 255,0, Preparação do intermediário 57: 6-bromo-7-(2- cloroetila)-5-metoxi-1H-indazol

[00233] A 0o C, a uma solução de 2-(6-bromo-5-metoxi-

1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-1H-indazol-7-il)etanol (0,35 g, 0,99 mmol) em ACN (35 mL) foram adicionados DMF (2 gotas) e SOCl2 (3,5 mL). A mistura foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante 48 horas. A solução de reação foi concentrada para obter o produto bruto como um sólido marrom, que foi usado diretamente na próxima reação. MS-ESI [M+H]+: 291,0, Preparação do intermediário 58: 5-bromo-4-metoxi-6,7- di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol

[00234] À temperatura ambiente, a uma solução de 6- bromo-7-(2-cloroetila)-5-metoxi-1H-indazol (0,6 g, 2,07 mmol) em DMF (60 mL) foi adicionado Cs 2CO3 (3,38 g, 10,36 mmol). A mistura foi aquecida a 100°C e agitada durante 4 horas. A mistura de reação foi filtrada e concentrada, e o produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com um gradiente de 0-40% de acetato de etila/éter de petróleo para obter um sólido amarelo 58 (0,11 g, 44% de rendimento em duas etapas) MS-ESI [M+H]+: 255,0, Preparação do intermediário 59: 5-bromo-6,7-di- hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-4-ol

[00235] A 0 o C, a uma solução de 5-bromo-4-metoxi- 6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol (0,15 g, 0,592 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionada Solução BBr 3 (17 % em peso em DCM, 5,93 mL, 10 mmol). A mistura foi aquecida à temperatura ambiente e agitada durante 12 horas. A reação foi extinta com água gelada e extraída com DCM. A fase orgânica foi concentrada para obter o produto bruto como um sólido castanho. MS-ESI [M+H]+: 241,1, Preparação do intermediário 60: 5-bromo-4-(2-fluoro-4- nitrofenoxi)-6,7-di-hidropirrolo [3,2,1-hi]-indazol

[00236] A uma solução de 5-bromo-6,7-dihidropirrol [3,2,1-hi]-indazol-4-ol (0,25 g) em DMF (10 mL) foram adicionados NaHCO3 (0,263 g, 3,14 mmol) e 1, 2-difluoro-4- nitrobenzeno (0,166 g, 1,05 mmol). A mistura foi aquecida a 60°C e agitada durante 12 horas. A mistura de reação foi filtrada e concentrada, e o produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com um gradiente de 0-30% de acetato de etila/éter de petróleo para obter um sólido (0,08 g, 36% de rendimento em duas etapas).

MS-ESI [M+H]+: 380,0, Preparação do intermediário 61: terc-butila 4-(4-(2- fluoro-4-nitrofenoxi)-6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]- indazol-5-il)-1H-pirazol-1-carboxilato

[00237] A uma solução de 5-bromo-4-(2-fluoro-4- nitrofenoxi)-6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol (60 mg, 0,158 mmol) em THF (6 mL) e água (0,6 mL) foram adicionados K3PO4 (67 mg, 0,316 mmol) e Pd (dbpf) Cl2 (4,9 mg, 0,08 mmol). A mistura foi aquecida a 60°C e agitada durante 12 horas. A solução de reação foi lavada com água, extraída com acetato de etila, a fase orgânica foi concentrada e o produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica, eluído com um gradiente de 0-50% de acetato de etila/éter de petróleo, para obter um sólido (40 mg, rendimento de 54%). MS-ESI [M+H]+: 466,2, Preparação do intermediário 62: terc-butila 4-(4-(4- amino-2-fluorofenoxi)-6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]- indazol-5-il)-1H-pirazol-1-carboxilato

[00238] A uma solução de ácido 4-(4-(2-fluoro-4- nitrofenoxi)-6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-5-il)- 1H-pirazol-1-carboxílico éster tert-butílico (50 mg, 0,1 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado Pd/C (10%, 30 mg). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas sob atmosfera de hidrogênio. O intermediário de hidroxilamina foi detectado por LCMS, a mistura de reação foi filtrada, adicionado Pd/C adicional (10%, 30 mg) e agitado por mais 8 horas à temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogênio, filtrado e concentrado para dar o produto em bruto como um sólido (68 mg). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 13,31 (s, 1H), 8,55 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,32 - 7,27 (m, 4H), 6,80 (d, J= 7,9 Hz, 1H). MS -ESI [M+H]+: 267,9, Preparação do intermediário 63: 6-(1-Boc-pirazol-4-il) -5-(2-fluoro-4-aminofenoxi)-1-etila-1H-indazol

[00239] O intermediário 63 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 25 a partir do intermediário 14 6-bromo-5-(2-fluoro-4-nitrofenoxi)-1- etila-1H-indazol. MS-ESI [M+H]+: 438,3, Preparação do intermediário 64: N-(3-fluoro-4-(1- metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- cloro-2-oxo-1-(4-fluorofenil)-1,2-di-hidropiridina-3- carboxamida

[00240] O intermediário 64 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 25 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-metila-1H-indazol) e Intermediário 42 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-cloro-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 673,3, Preparação do intermediário 65: N-(3-fluoro-4-(1- metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- (Boc amino)-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina- 3-carboxamida

[00241] O intermediário 65 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 25 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-metila-1H-indazol ) e Intermediário 44 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-(Boc amino)-2-oxo-1,2-di- hidropiridina-3-carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 754,3, Preparação do intermediário 66: N-(3-fluoro-4-(1- metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- metiltio-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3-

carboxamida

[00242] O intermediário 66 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 25 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-metila-1H-indazol ) e Intermediário 40 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-metiltio-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 685,2, Preparação do intermediário 67: N-(3-fluoro-4-(1- metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- metilsulfóxido-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidro piridina-3-carboxamida

[00243] O intermediário 67 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 25 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-metila-1H-indazol ) e Intermediário 45 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-metilsulfóxido-2-oxo-1,2-di- hidropiridina-3-carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 701,2, Preparação do intermediário 68: N-(3-fluoro-4-(1- metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- metoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3- carboxamida

[00244] O intermediário 68 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 25 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-metila-1H- indazol) e Intermediário 35 (ácido

1-(4-fluorofenila)-6-metoxi-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 669,1, Preparação do intermediário 69: N-(3-fluoro-4-(1- metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- etoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3- carboxamida

[00245] O intermediário 69 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 25 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-metila-1H-indazol) e intermediário 36 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-etoxi-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 683,2, Preparação do intermediário 70: N-(3-fluoro-4-(1- metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- ciclopropoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina- 3-carboxamida

[00246] O intermediário 70 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 25 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-metila-1H-indazol ) e intermediário 37 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-ciclopropoxi-2-oxo-1,2-di- hidropiridina-3-carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 695,2, Preparação do intermediário 71: N-(3-fluoro-4-(1- metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- isopropoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3-

carboxamida

[00247] O intermediário 71 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 25 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-metil-1H-indazol) e intermediário 38 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-isopropoxi-2-oxo-1,2-di-hidropiridina- 3-carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 697,2, Preparação do intermediário 72: N-(3-fluoro-4-(1- metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- (2,2,2-trifluoroetoxi)-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2- dihidropiridina-3-carboxamida

[00248] O intermediário 72 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 25 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-metila-1H-indazol) e Intermediário 39 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-(2,2,2-trifluoroetoxi)-2-oxo-1,2-di- hidropiridina-3-carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 737,1, Preparação do intermediário 73: N-(3-fluoro-4-(1-etila- 6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6-etila- 2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamida

[00249] O intermediário 73 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 63 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-etila-1H-indazol) e intermediário 14 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-etila-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3-

carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 681,0, Preparação do intermediário 74: N-(3-fluoro-4-(1-etila- 6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- ciclopropila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina- 3-carboxamida

[00250] O intermediário 74 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 63 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-etila-1H-indazol) e intermediário 16 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-ciclopropila-2-oxo-1,2-di- hidropiridina-3-carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 693,0, Preparação do intermediário 75: N-(3-fluoro-4-(1-etila- 6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6-cloro- 2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamida

[00251] O intermediário 75 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 63 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-etila-1H-indazol) e Intermediário 42 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-cloro-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 687,1, Preparação do intermediário 76: N-(3-fluoro-4-(1-etila- 6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6-Boc amino-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3- carboxamida

[00252] O intermediário 76 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 63 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-etila-1H-indazol) e intermediário 44 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-Bocamino-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 766,4, Preparação do intermediário 77: N-(3-fluoro-4-(1-etila- 6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- metiltio-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3- carboxamida

[00253] O intermediário 75 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 63 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-etila-1H-indazol) e intermediário 40 (ácido 1-(4-fluorofenil)-6-metiltio-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 699,1, Preparação do intermediário 78: N-(3-fluoro-4-(1-etila- 6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6-metoxi- 2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamida

[00254] O intermediário 78 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 63 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-etila-1H-indazol) e Intermediário 35 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-metoxi-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 683,3, Preparação do intermediário 79: N-(3-fluoro-4-(1-etila-

6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6-etoxi- 2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamida

[00255] O intermediário 79 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 63 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-etila-1H-indazol ) e Intermediário 36 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-etoxi-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 697,3, Preparação do intermediário 80: N-(3-fluoro-4-(1-etila- 6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- ciclopropoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina- 3-carboxamida

[00256] O intermediário 80 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 63 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-etila-1H-indazol) e Intermediário 37 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-ciclopropoxi-2-oxo-1,2-di- hidropiridina-3-carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 709,1, Preparação do intermediário 81: N-(3-fluoro-4- (1- etila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- isopropoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3- carboxamida

[00257] O intermediário 81 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 63 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4-

aminofenoxi)-1-etila-1H-indazol) e intermediário 38 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-isopropoxi-2-oxo-1,2-di-hidropiridina- 3-carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 711,3, Preparação do intermediário 82: N-(3-fluoro-4-(1-etila- 6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6-(2,2,2- trifluoroetoxi)-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2- dihidropiridina-3-carboxamida

[00258] O intermediário 82 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 63 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-etila-1H-indazol ) e intermediário 39 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-(2,2,2-trifluoroetoxi)-2-oxo-1,2-di- hidropiridina-3-carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 751,2, Preparação do intermediário 83: terc-butila 4-(4-(2- fluoro-4-(1-(4-fluorofenila)-6-metila-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxamido)fenoxi)-6,7-di-hidropirrolo [3,2,1-hi]-indazol-3-il)-1H-pirazol-1-carboxilato

[00259] O intermediário 83 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 62 (terc-butila 4-(4-(4-amino-2-fluorofenoxi) -6,7-di-hidropirrolo [3,2,1-hi]-indazol-5-il)-1H-pirazol-1- carboxilato) e intermediário 13 (ácido 1-(4-fluorofenila)- 6-metila-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 665,5, Preparação do intermediário 84: terc-butila 4-(4-(2-

fluoro-4-(1-(4-fluorofenila)-6-metoxi-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxamido)fenoxi)-6,7-di-hidropirrolo [3,2,1-hi]-indazol-3-il)-1H-pirazol-1-carboxilato

[00260] O intermediário 84 foi preparado de acordo com a rota sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 62 (terc-butila 4-(4-(4-amino-2-fluorofenoxi) -6,7-di-hidropirrolo [3,2,1-hi]-indazol-5-il)-1H-pirazol-1- carboxilato) e intermediário 35 (ácido 1-(4-fluorofenila)- 6-metoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 681,2, Preparação do intermediário 85: terc-butila 4-(4-(2- fluoro-4-(1-(4-fluorofenila)-6-etoxi-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxamido)fenoxi)-6,7-di-hidropirrolo [3,2,1-hi]-indazol-3-il)-1H-pirazol-1-carboxilato

[00261] O intermediário 85 foi preparado de acordo com a rota sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 62 (terc-butila 4-(4-(4-amino-2-fluorofenoxi) -6,7-di-hidropirrolo [3,2,1-hi]- indazol-5-il)-1H-pirazol- 1-carboxilato) e intermediário 36 (ácido 1-(4-fluorofenila) -6-etoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 695,2, Preparação do intermediário 86: terc-butila 4-(4-(2- fluoro-4-(1-(4-fluorofenila)-6-ciclopropoxi-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxamido)fenoxi)-6,7-di-hidropirrolo [3,2,1-hi]-indazol-3-il)-1H-pirazol-1-carboxilato

[00262] O intermediário 86 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 62 (terc-butila 4-(4-(4-amino-2-fluorofenoxi) -6,7-di-hidropirrolo [3,2,1-hi]-indazol-5-il)-1H-pirazol-1- carboxilato) e intermediário 37 (ácido 1-(4-fluorofenila)- 6-ciclopropoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico).

MS-ESI [M+H]+: 707,2, Preparação do intermediário 87: terc-butila 4-(4-(2- fluoro-4-(1-(4-fluorofenila)-6-isopropoxi-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxamido)fenoxi)-6,7-di-hidropirrolo [3,2,1-hi]-indazol-3-il)-1H-pirazol-1-carboxilato

[00263] O intermediário 87 foi preparado de acordo com a rota sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 62 (terc-butil 4-(4-(4-amino-2-fluorofenoxi) -6,7-di-hidropirrolo [3,2,1-hi]-indazol-5-il)-1H-pirazol-1- carboxilato) e intermediário 38 (ácido 1-(4-fluorofenila)- 6-isopropoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico). MS- ESI [M+H]+: 709,3, Preparação do intermediário 88: 6- difluorometoxinicotinato de metila

[00264] A uma solução de 6-hidroxinicotinato de metila (1,5 g, 9,8 mmol) em ACN (50 mL) foi adicionado NaH (0,979 g, 24,49 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 0,5 horas, foi adicionado ácido 2,2-difluoro-2- fluorossulfonilacético (2,62 g, 14,69 mmol). A mistura de reação foi agitada a 25°C durante 2 horas, extinta com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (5x50 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura saturada (50 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. Após filtração e concentração, o produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica, eluída com um gradiente de 0-10% de acetato de etila/éter de petróleo, para obter um sólido branco (1,70 g, 85,4% de rendimento).

1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,84 (d, J= 2,3 Hz, 1H), 8,32 (dd, J= 8,6, 2,3 Hz, 1H), 7,53 (t, J= 72,3 Hz, 1H), 6,95 (d , J= 8,6 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H). MS (m/z): 204,0 [M+H].

Preparação do intermediário 89: 6-difluorometoxi-5- metoxicarbonilpiridina-1-N-óxido

[00265] A uma solução de metila 6- difluorometoxinicotinato (0,8 g, 3,94 mmol) em DCM (40 mL) foi adicionado ureia-peróxido de hidrogênio (3,70 g, 39,38 mmol) e TFAA (5,5 mL, 39,38 mmol). A mistura de reação foi agitada a 25°C durante 16 horas, extinta com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (5x50 mL). A fase orgânica foi lavada sequencialmente com tiossulfato de sódio saturado (50 mL), NaHCO3 saturado (3×50 mL) e salmoura saturada (50 mL) e seca sobre Na2SO4 anidro. Após filtração e concentração, o produto bruto foi obtido como um sólido branco (0,735 g, 85% de rendimento), que foi utilizado diretamente na reação seguinte. MS (m/z): 220,0 [M+H].

Preparação do intermediário 90: éster metílico de ácido

6-difluorometoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico

[00266] A uma solução de 6-difluorometoxi-5- metoxicarbonilpiridina-1-N-óxido (0,5 g, 2,28 mmol) em THF (20 mL) foram adicionados TFAA (1,29 mL, 9,13 mmol) e TEA (1,27 mL, 9,13 mmol). A mistura reacional foi agitada a 25°C durante 2 horas. Após concentração, o produto bruto foi purificado por uma coluna de gel de sílica, eluída com um gradiente de 0-5% de acetato de etila/éter de petróleo, para obter um sólido branco (0,360 g, 72% de rendimento). MS (m/z): 220,0 [M+H].

Preparação do intermediário 91: éster metílico do ácido 6-difluorometoxi-1-(4-fluorofenila)-2-oxo-1,2-di- hidropiridina-3-carboxílico

[00267] Sob a proteção de Ar, a uma solução de metila 6-difluorometoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxilato (150 mg, 0,684 mmol) em 1,4-dioxano (3 mL) foi adicionado 4- fluorofenilborônico ácido (95,8 mg, 0,684 mmol), acetato de cobre (248,7 mg, 1,36 mmol), TEMPO (128,4 mg, 0,821 mmol) e piridina (541,7 mg, 6,84 mmol). A mistura de reação foi agitada a 80°C durante 0,5 horas, LCMS mostrou 10% do produto. Ácido 4-fluorofenilborônico (0,5 equivalente) foi adicionado à mistura de reação a cada meia hora, no total 8 vezes, e o rendimento de LCMS atingiu 69%. Após filtração e concentração, o produto em bruto foi purificado por uma coluna de gel de sílica, eluída com THF/éter de petróleo

(1:10), para obter 1,0 g de um sólido amarelo, que foi posteriormente purificado por HPLC preparativa de fase reversa para obter um sólido (50 mg, rendimento de 23%). MS (m/z): 314,0 [M+H].

Preparação do intermediário 92: ácido 6-difluorometoxi- 1-(4-fluorofenila)-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3-carboxílico

[00268] Para uma solução de éster metílico de ácido 6-difluorometoxi-1-(4-fluorofenila)-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxílico (150 mg, 0,477 mmol) em THF/água (4 mL/0,8 mL) foi adicionado LiOH H 2O (22 mg, 0,525 mmol) a 0°C, a mistura de reação foi agitada durante a noite à temperatura ambiente sob a proteção de Ar. Em seguida, a reação foi ajustada para pH 3-4 com HCl 1N, extraída com acetato de etila (3x20 mL). A fase orgânica foi lavada com salmoura saturada (3x50 mL), seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. O produto bruto foi recristalizado de éter de petróleo para obter um sólido branco (100 mg, rendimento de 70%). 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 13,16 (s, 1H), 8,37 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,35 (s, 0,28 H), 7,26-7,22 (m, 4H), 7,17 (s, 0,49 H), 6,99 (s, 0,23H), 6,85 (d, J= 8,4 Hz, 1H). MS-ESI [M+H]+: 300,0, Preparação do intermediário 93: terc-butila 4-(4-(2- fluoro-4-(1-(4-fluorofenila)-6-(2,2,2-trifluoroetoxi)-2- oxo-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamido)fenoxi)-6,7-di- hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-3-il)-1H-pirazol-1-

carboxilato

[00269] O intermediário 93 foi preparado de acordo com a rota sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 62 (terc-butila 4-(4-(4-amino-2-fluorofenoxi) -6,7-di-hidropirrolo [3,2,1-hi]-indazol-5-il)-1H-pirazol-1- carboxilato) e intermediário 39 (1-(4-fluorofenila)-6- (2,2,2-trifluoroetoxi)-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-ácido carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 749,2, Preparação do intermediário 94: N-(3-fluoro-4-(1- metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- difluorometoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-hidro piridina-3-carboxamida

[00270] O intermediário 94 foi preparado de acordo com a via sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 25 (6-(1-Boc-pirazol-4-il)-5-(2-fluoro-4- aminofenoxi)-1-metil-1H-indazol) e intermediário 92 (ácido 1-(4-fluorofenila)-6-difluorometoxi-2-oxo-1,2-di- hidropiridina-3-carboxílico). MS-ESI [M+H]+: 705,2, Preparação do intermediário 95: terc-butila 4-(4-(2- fluoro-4-(1-(4-fluorofenila)-6-difluorometoxi-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxamido)fenoxi)-6,7-di-hidropirrolo [3,2,1-hi]-indazol-3-il)-1H-pirazol-1-carboxilato

[00271] O intermediário 95 foi preparado de acordo com a rota sintética do intermediário 26, a partir do intermediário 62 (terc-butila 4-(4-(4-amino-2-fluorofenoxi)

-6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-5-il)-1H-pirazol-1- carboxilato) e intermediário 92 (ácido 1-(4-fluorofenila) - 6-difluorometoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxílico).

MS-ESI [M+H]+: 717,2, Exemplo 1: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-metila-6-(1H- pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)- Monometanossulfonato de 6-trifluorometila-2- oxo-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamida

F O O N N N

H O N CF3

N NH F

[00272] Para uma solução de N-(3-fluoro-4-(1-metila- 6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-6- trifluorometil-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2- dihidropiridina-3-carboxamida (intermediário 29, 255 mg, 0,33 mmol) em diclorometano (15 mL) foi adicionado ácido trifluoroacético (3 mL), a mistura de reação resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora, e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O produto bruto foi dissolvido em acetato de etila (50 mL), neutralizado pela adição de solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (25 mL), depois lavado duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL de cada vez), seco e concentrado para obter base sólida livre 200 mg conforme mostrado pela estrutura química acima.

[00273] A base livre acima foi dissolvida em metanol anidro (5 mL) e diclorometano (5 mL), e uma solução de metanol (5 mL) de ácido metanossulfônico (32 mg, 0,33 mmol) foi adicionada. Depois de misturar bem, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida e seco para obter cerca de 230 mg de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,56 (s, 1H), 8,55 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 8,04 (s, 2H), 7,94 (s, 1H), 7,90 (dd, J= 13,2, 2,5 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,51 (dd, J= 8,6, 4,9 Hz, 2H), 7,35 (t, J= 8,6 Hz, 2H), 7,30- 7,20 (m, 3H), 6,79 (t, J= 9,1 Hz, 1H), 4,73 (s, b, 2H), 4,01 (s, 3H), 2,29 (s, 3H). MS [M+H] +: 607,1, Exemplo 2: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-metila-6-(1H- pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-ciclopropil-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxamida

F O O N N N H O N N NH F

[00274] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 28 (N- (3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol)-5- iloxi)fenila)-6-ciclopropila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-

di-hidropiridina-3-carboxamida). MS [M+H]+: 579,2 1H NMR (500 MHz, clorofórmio-d) δ 11,82 (s, 1H), 8,62 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 8,23 (s, 2H), 7,89 (dd, J= 12,7, 2,5 Hz, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,34 - 7,28 (m, 4H), 7,20 (d, J= 9,1 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H ), 6,88 (t, J= 8,8 Hz, 1H), 6,22 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 4,11 (s, 3H), 3,54 (s, b, 3H), 2,95 (s, 3H), 1,41 - 1,13 (m, 2H), 1,00 - 0,64 (m, 2H).

Exemplo 3: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-etila-6-(1H- pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-metila-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

F O O N N N H O N N NH F

[00275] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 21 (N- (3-fluoro-4-(1-etila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-metila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,87 (s, 1H), 8,40 (d, J= 7,5 Hz, 1H), 8,06 (s, 2H), 7,97 (s, 1H), 7,90 (dd, J= 13,4, 2,4 Hz, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,52 - 7,27 (m, 4H), 7,25 - 7,10 (m, 2H), 6,80 (t, J= 9,1 Hz, 1H), 6,63 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 5,29 (s, b, 2H), 4,40 (q, J=

7,2 Hz, 2H), 2,30 (s, 4H), 2,00 (s, 3H), 1,35 (t, J= 7,2 Hz, 3H). MS [M+H]+: 567,2, Exemplo 4: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-isopropila- 6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-metila-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

F O O N N N H O N N NH F

[00276] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 20 (N- (3-fluoro-4-(1-isopropila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H- indazol-5-iloxi)fenila)-6-metila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)- 1,2-di-hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 11,87 (s, 1H), 8,40 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 8,06 (s, 2H), 7,98 (s, 1H), 7,90 (dd, J= 13,3, 2,5 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,47 - 7,29 (m, 4H), 7,23 - 7,10 (m, 2H), 6,79 (t, J= 9,1 Hz, 1H), 6,63 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 5,07 (s, b, 2H), 5,01 (h, J= 6,7 Hz, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,43 (d, J= 6,5 Hz , 6H). MS [M+H]+: 581,2, Exemplo 5: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-metila-6-(1H- pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-etila-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3-

carboxamida

F O O N N N H O N N NH F

[00277] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 26 (N- (3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-etila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,94 (s, 1H), 8,52 (d, J= 7,7 Hz, 1H), 8,12 (s, 2H), 8,01 (s, 1H), 7,97 (dd, J= 13,2, 2,4 Hz, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,58 - 7,34 (m, 4H), 7,30 - 7,16 (m, 2H), 6,86 (t, J= 9,1 Hz, 1H), 6,67 (d, J= 7,7 Hz, 1H), 5,27 (s, b, 2H), 4,08 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,30 (q, J= 7,4 Hz, 2H), 1,05 (t, J= 7,4 Hz , 3H). MS [M+H]+: 567,2, Exemplo 6: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-metila-6-(1H- pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-isopropil-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

F O O N N N H O N N NH F

[00278] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do Intermediário 27 (N- (3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-isopropila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,86 (s, 1H), 8,46 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 8,05 (s, 2H), 7,94 (s, 1H), 7,90 (dd, J= 13,5, 2,4 Hz, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,46 (dd, J= 8,7, 4,9 Hz, 2H), 7,36 (t, J= 8,6 Hz, 2H), 7,19 (d, J= 7,7 Hz, 2H), 6,79 (t, J= 9,1 Hz, 1H), 6,69 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 5,05 (s, b, 2H), 4,01 (s, 3H), 2,39 (h, 1H), 2,29 (s, 3H), 1,05 (d, J= 6,8 Hz, 6H). MS [M+H] +: 581,2, Exemplo 7: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-isopropila- 6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-isopropila-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

[00279] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do Intermediário 22 (N- (3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5 - iloxi)fenila)-6-isopropila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (500 MHz, clorofórmio-

d) δ 11,85 (s, 1H), 8,69 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 8,49 (s, 2H), 7,93 - 7,85 (m, 2H), 7,63 (s, 1H), 7,31 (t, J= 8,4 Hz, 2H), 7,30 - 7,21 (m, 3H), 7,12 (s, 1H), 6,97 (t, J= 8,7 Hz, 1H), 6,56 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 6,12 (s, b, 2H), 4,88 (s, 1H), 2,96 (s, 3H), 2,60 (hept, J= 6,8 Hz, 1H), 1,61 (d, J= 4,7 Hz, 6H ), 1,18 (d, J= 6,8 Hz, 6H).

Exemplo 8: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-isopropila- 6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-trifluorometila-2-oxo-1,2-di-hidropiridina- 3-carboxamida

[00280] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 23 (N- (3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-isopropila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (500 MHz, clorofórmio- d) δ 11,62 (s, 1H), 8,78 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 8,53 (s, 2H), 7,89 (s, 1H), 7,88 (dd, J= 10,1 Hz, 2,5 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,33 - 7,22 (m, 5H), 7,14 (s, 1H), 7,09 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 6,98 (t, J= 8,8 Hz, 1H), 5,60 (s, b, 2H), 4,88 (hept, J= 6,7 Hz, 1H), 2,95 (s, 3H), 1,61 (d, J= 6,6 Hz, 6H).

Exemplo 9: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-metila-6-(1H- pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-cloro-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

[00281] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 64 (N- (3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-cloro-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,97 (s, 1H), 11,57 (s, 1H), 8,51 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 8,15 (s, 1H), 8,02 (s, 1H) , 8,00 (s, 1H), 7,95 (d, J= 14,5 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,56 (s, 2H), 7,44 (t, J= 8,5 Hz, 2H), 7,28 (s, 2H), 7,01 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 6,85 (t, J= 9,1 Hz, 1H), 4,07 (s, 3H). MS-ESI [M+H]+: 573,1, Exemplo 10: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-metila-6- (1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-amino-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

[00282] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 65 (N- (3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-(Bocamino)-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,67 (s, 1H), 11,73 (s, 1H), 8,15 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 8,10 (s, 2H), 7,98 (s, 1H) , 7,94 (dd, J= 13,6, 2,4 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 0,6 Hz, 1H), 7,41 (d, J= 1,8 Hz, 2H), 7,40 (s, 2H), 7,21 (s, 1H), 7,14 (d, J= 10,0 Hz, 1H), 6,84 (t, J= 9,2 Hz, 1H), 5,88 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 4,07 (s, 3H). MS-ESI [M+H]+: 554,2, Exemplo 11: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-metila-6- (1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-metiltio-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

[00283] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 66 (N- (3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-metiltio-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11,66 (s, 1H), 8,62 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 8,32 (s, 2H), 7,90 (dd, J= 12,4, 2,4 Hz, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,30 - 7,27 (m, 4H), 7,25 - 7,20 (m, 1H), 7,14 (s, 1H), 6,94 (t, J= 8,8 Hz, 1H), 6,33 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 4,11 (s, 3H), 2,47 (s, 3H). MS-ESI [M+H]+: 585,1, Exemplo 12: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-metila-6- (1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-metoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

[00284] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 68 (N- (3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-metoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,95 (br s, 1H), 11,69 (s, 1H), 8,56 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 8,09 (br s, 2H), 7,99 (s, 1H), 7,95 (dd, J= 13,4, 2,4 Hz,

1H), 7,91 (s, 1H), 7,46 - 7,33 (m, 4H), 7,25 (s, 1H), 7,23 (d, J= 9,0 Hz, 1H ), 6,86 (t, J= 9,1 Hz, 1H), 6,34 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 4,07 (s, 3H), 3,90 (s, 3H). MS-ESI [M+H]+: 569,1, Exemplo 13: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-metila-6- (1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-metilsulfóxido-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

[00285] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 67 (N- (3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-metilsulfóxido-2-oxo-1-(4-fluorofenila)- 1,2-di-hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 12,96 (br, 1H), 11,71 (s, 1H), 8,75 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 8,06 (br, 2H), 8,00 (s, 1H) , 7,99 - 7,94 (m, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,77 - 7,71 (m, 1H), 7,67 (d, J= 5,0 Hz, 1H), 7,46 (t, J= 8,8 Hz, 2H), 7,30 (d, J= 9,8 Hz, 2H), 7,22 (d, J= 7,7 Hz, 1H), 6,86 (t, J= 9,1 Hz, 1H), 4,07 (s, 3H), 2,60 (s, 3H).

MS-ESI [M+H]+: 601,0, Exemplo 14: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-metila-6-

(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-etoxi-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxamida

[00286] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, partindo do intermediário 69 (N- (3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol- 5- iloxi)fenila)-6-etoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,94 (br s, 1H), 11,70 (s, 1H), 8,53 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 8,09 (br s, 2H), 7,99 (s, 1H), 7,95 (d, J= 13,5 Hz, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,46 - 7,33 (m, 4H), 7,27 - 7,17 (m, 2H), 6,85 (t, J= 9,2 Hz, 1H ), 6,33 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 4,30 - 4,20 (q, J= 6,4 Hz, 2H), 4,07 (s, 3H), 1,14 (t, J= 6,3 Hz, 3H).

MS-ESI [M+H]+: 583,1,

[00287] Exemplo 15: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1- metila-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1- (4-fluorofenila)-6-ciclopropoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina- 3-carboxamida

[00288] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 70 (N- (3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-ciclopropoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2- di-hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11,62 (s, 1H), 8,72 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 8,27 (br s, 2H), 7,89 (dd, J= 12,8, 2,0 Hz, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,24 - 7,09 (m, 6H), 6,91 (t, J= 8,8 Hz, 1H), 6,35 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 4,11 (s , 3H), 3,93 - 3,90 (m, 1H), 0,90 - 0,85 (m, 2H), 0,76 - 0,72 (m, 2H). MS-ESI [M+H]+: 595,2, Exemplo 16: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-metila-6- (1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-isopropoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

[00289] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 71 (N-

(3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-isopropoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11,60 (s, 1H), 8,68 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 8,15 (br s, 2H), 7,88 (dd, J= 12,8, 2,2 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,22 (d, J= 8,2 Hz, 2H), 7,20 - 7,12 (m, 4H), 6,84 (t, J= 8,9 Hz, 1H), 5,96 (d , J= 8,8 Hz, 1H), 4,73 -4,67 (m, 1H), 4,10 (s, 3H), 1,27 (d, J= 6,0 Hz, 6H). MS-ESI [M+H]+: 597,2, Exemplo 17: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-metila-6- (1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-(2,2,2-trifluoroetoxi)-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxamida

[00290] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 72 (N- (3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-(2,2,2-trifluoroetoxi)-2-oxo-1-(4- fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,63 (s, 1H), 8,59 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 8,09 (s, 2H), 7,99 (s, 1H), 7,95 (dd, J= 13,2, 2,4 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,46 - 7,35 (m, 4H), 7,28 - 7,21 (m, 2H), 6,86

(t, J= 9,1 Hz, 1H), 6,45 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 5,02 (q, J= 8,4 Hz, 2H), 4,07 (s, 3H). MS-ESI [M+H]+: 637,0, Exemplo 18: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-etila-6-(1H- pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4-fluorofenila) -6-etila-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamida

[00291] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 73 (N- (3-fluoro-4-(1-etila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-etila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,58 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 8,10 (s, 2H), 7,93 - 7,81 (m, 3H), 7,41 - 7,28 (m, 4H), 7,23 ( s, 1H), 7,17 - 7,11 (m, 1H), 6,86 (t, J= 9,0 Hz, 1H), 6,67 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 4,49 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 2,39 (q, J= 7,4 Hz, 2H), 1,49 (t, J= 7,2 Hz, 3H), 1,14 (t, J= 7,4 Hz, 3H). MS-ESI [M+H]+: 581,3, Exemplo 19: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-etila-6-(1H- pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-ciclopropila-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxamida

[00292] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 74 (N- (3-fluoro-4-(1-etila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-ciclopropila-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2- di-hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, Metanol- d4) δ 8,54 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 8,20 (s, 2H), 7,89 (s, 2H), 7,86 (dd, J= 12,8, 2,4 Hz, 1H) , 7,43 - 7,30 (m, 4H), 7,24 (s, 1H), 7,18 - 7,14 (m, 1H), 6,88 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 6,43 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 4,50 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,47 (t, J= 7,2 Hz, 3H), 1,45-1,41 (m, 1H), 0,92-0,89 (m, 4H). MS-ESI [M+H]+: 593,2, Exemplo 20: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-etila-6- (1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-cloro-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

[00293] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 75 (N- (3-fluoro-4-(1-etila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-cloro-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,96 (br s, 1H), 11,57 (s, 1H), 8,51 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 8,02 (br s, 3H), 7,96 (dd, J= 13,2, 2,5 Hz, 1H), 7,93 (d, J= 0,8 Hz, 1H), 7,61 - 7,52 (m, 2H), 7,49 - 7,40 (m, 2H), 7,31 - 7,24 (m, 2H), 7,01 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,01-6,86 (m, 1H), 4,47 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,42 (t, J= 7,2 Hz, 3H). MS-ESI [M+H]+: 587,2, Exemplo 21: Preparação de N-(3-Fluoro-4-(1-etila-6-(1H- pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-amino-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

[00294] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 76 (N- (3-fluoro-4-(1-etila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-Boc-amino-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,89 (br s, 1H), 11,72 (s, 1H), 8,16 (d, J= 8,8 Hz, 1H),

8,10 (br s, 2H), 8,01 (s, 1H), 7,94 (dd, J= 13,6, 2,4 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,42 -7,40 (m, 4H), 7,21 (s, 1H), 7,13 (d, J= 10,0 Hz, 1H ), 6,85 (t, J= 9,2 Hz, 1H), 5,88 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 4,46 (q, J= 7,1 Hz, 2H), 1,42 (t, J= 7,2 Hz, 3H). MS-ESI [M+H]+: 568,2, Exemplo 22: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-etila-6-(1H- pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-metiltio-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

[00295] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 77 (N- (3-fluoro-4-(1-etila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-metiltio-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,95 (br s, 1H), 11,70 (s, 1H), 8,43 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 8,09 (br, 2H), 8,02 (s, 1H) )), 7,95 (d, J= 15,2 Hz, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,55 - 7,46 (m, 2H), 7,42 (t, J= 8,8 Hz, 2H), 7,24 (d, J= 12,8 Hz, 2H), 6,85 (t, J= 9,2 Hz, 1H), 6,61 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 4,46 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 2,50 (s, 3H), 1,42 (t, J= 7,2 Hz, 3H). MS-ESI [M+H]+: 599,1,

Exemplo 23: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-etila-6-(1H- pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4-fluorofenila) -6-metoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-carboxamida

[00296] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 78 (N- (3-fluoro-4-(1-etila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-metoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,94 (br s, 1H), 11,69 (s, 1H), 8,56 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 8,09 (br s, 2H), 8,02 (s, 1H), 7,96 (dd, J= 13,4, 2,4 Hz, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,47 - 7,33 (m, 4H), 7,25 (s, 1H), 7,22 (d, J= 10,1 Hz, 1H ), 6,86 (t, J= 9,2 Hz, 1H), 6,34 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 4,47 (q, J= 7,1 Hz, 2H), 3,90 (s, 3H), 1,42 (t, J= 7,2 Hz, 3H). MS-ESI [M+H]+: 583,1, Exemplo 24: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-etila-6-(1H- pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-etoxi-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxamida

[00297] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 79 (N- (3-fluoro-4-(1-etila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-etoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,97 (br s, 1H), 11,70 (s, 1H), 8,53 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 8,09 - 8,04 (m, 2H), 8,01 (s , 1H), 7,95 (dd, J= 13,4, 2,3 Hz, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,48 - 7,32 (m, 4H), 7,25 (s, 1H), 7,21 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 6,86 (t, J= 9,2 Hz, 1H), 6,32 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,46 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 4,25 (q, J= 7,2 Hz, 2H) , 1,42 (t, J= 7,0 Hz, 3H), 1,14 (t, J= 7,0 Hz, 3H).

MS-ESI [M+H]+: 597,1, Exemplo 25: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-etila-6-(1H- pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-ciclopropoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

[00298] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 80 (N-

(3-fluoro-4-(1-etila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-

iloxi)fenila)-6-ciclopropoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-

di-hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ

12,95 (br s, 1H), 11,69 (s, 1H), 8,59 (d, J= 8,4 Hz, 1H),

8,09 (br s, 2H), 8,02 (s, 1H), 7,96 (dd, J= 13,3, 2,4 Hz,

1H), 7,92 (s, 1H), 7,43 - 7,31 (m, 4H), 7,27 - 7,18 (m, 2H),

6,86 (t, J= 9,1 Hz , 1H), 6,56 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 4,47 (q,

J = 7,2 Hz, 2H), 4,17 - 4,13 (m, 1H), 1,42 (t, J= 7,2 Hz,

3H), 0,84 - 0,76 (m, 2H), 0,69 - 0,60 (m, 2H). MS-ESI [M+H]+:

609,1,

Exemplo 26: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-etila-6-(1H-

pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4-

fluorofenila)-6-isopropoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3-

carboxamida

[00299] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 81 (N-

(3-fluoro-4-(1-etila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-

iloxi)fenila)-6-isopropoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)-1,2-di-

hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ

12,96 (br, 1H), 11,71 (s, 1H), 8,52 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 8,09

(br s, 2H), 8,02 (s, 1H) ), 7,96 (dd, J= 13,4, 2,4 Hz, 1H),

7,92 (s, 1H), 7,43 - 7,30 (m, 4H), 7,25 (s, 1H), 7,21 (d, J=

8,9 Hz, 1H) , 6,86 (t, J= 9,1 Hz, 1H), 6,37 (d, J= 8,8 Hz,

1H), 4,89 -4,84 (m, 1H), 4,47 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,42 (t,

J= 7,2 Hz, 3H), 1,17 (d, J= 6,0 Hz, 6H). MS-ESI [M+H]+:

611,2,

Exemplo 27: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-etila-6-

(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4-

fluorofenila)-6-(2,2,2-trifluoroetoxi)-2-oxo-1,2-

dihidropiridina-3-carboxamida

[00300] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 82 (N-

(3-fluoro-4-(1-etila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-

iloxi)fenila)-6-(2,2,2-trifluoroetoxi)-2-oxo-1-(4-

fluorofenila)-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR

(400 MHz, DMSO-d6) δ 11,63 (s, 1H), 8,59 (d, J= 8,4 Hz, 1H),

8,09 (s, 2H), 8,02 (s, 1H), 7,96 (dd, J= 13,3, 2,4 Hz, 1H),

7,92 (s, 1H), 7,48 - 7,35 (m, 4H), 7,24 (d, J= 11,9 Hz, 2H),

6,86 (t, J= 9,1 Hz, 1H), 6,45 ( d, J= 8,4 Hz, 1H), 5,02 (q,

J= 8,4 Hz, 2H), 4,47 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,42 (t, J= 7,2 Hz,

3H). MS-ESI [M+H]+: 651,1,

Exemplo 28: Preparação de N-(4-((3-(1H-pirazol-4-il)-

6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-4-il)oxi)-3-

fluorofenila)-1-(4-fluorofenila)-6-metoxi-2-oxo-1,2-

dihidropiridina-3-carboxamida

[00301] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 84 (terc-butila 4-(4-(2-fluoro-4-(1-(4-fluorofenil)-6-metoxi- 2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamido)fenoxi)-6,7-di- hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-3-il)-1H-pirazol-1- carboxilato). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,65 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 8,07 (s, 2H), 7,86 - 7,69 (m, 2H), 7,19 (m, 4H), 7,06 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 6,96 (s, 1H), 6,76 (t, J= 8,8 Hz, 1H), 5,99 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 4,71 (t, J= 6,4 Hz, 2H), 4,04 (t, J= 6,4 Hz, 2H), 3,88 (s, 3H). MS-ESI [M+H]+: 581,1, Exemplo 29: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-metila-6- (1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-hidroxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

[00302] Para uma solução do Exemplo 9 (N-(3-fluoro- 4-(1-metila-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)- 1-(4-fluorofenila)-6-cloro-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida) (0,130 g, 0,19 mmol) em THF (2 mL) foram adicionados NaOH (0,076 g, 1,90 mmol) e água (0,8 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas,

depois diluída com água (5 mL), neutralizada a pH 7 com HCl concentrado e extraída com acetato de etila (5x10 mL). A fase orgânica foi seca e concentrada e purificada por HPLC para obter um sólido amarelo (3 mg, 2,8% de rendimento). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,95 (br s, 1H), 12,19 (s, 1H), 8,14 - 8,06 (m, 2H), 8,00 - 7,92 (m, 2H), 7,91 - 7,87 (m, 2H), 7,27 - 7,16 (m, 3H), 7,15 - 7,03 (m, 3H), 6,95 (s, 1H), 6,85 (t, J= 9,2 Hz, 1H), 5,34 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 4,06 (s, 3H). MS-ESI [M+H]+: 553,1, Exemplo 30: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-etila-6-(1H- pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-hidroxi-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3- carboxamida

[00303] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 29, a partir do Exemplo 20 (N-(3- fluoro-4-(1-etila-6-(1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-1-(4-fluorofenila)-6-cloro-2-oxo-1,2-di- hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,94 (br s, 1H), 12,19 (s, 1H), 8,11 (br s, 2H), 7,99-7,92 (m, 2H), 7,90 (s, 1H), 7,83 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,26 - 7,08

(m, 6H), 6,95 (s, 1H), 6,85 (t, J= 9,2 Hz, 1H), 5,49 (d, J= 9,1 Hz, 1H ), 4,46 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,41 (t, J= 7,2 Hz, 3H). MS-ESI [M+H]+: 567,1, Exemplo 31: Preparação de N-(4-((3-(1H-pirazol-4-il)- 6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-4-il)oxi)-3- fluorofenila)-1-(4-fluorofenila)-6-metila-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxamida

[00304] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 83 (terc-butila 4-(4-(2-fluoro-4-(1-(4-fluorofenila)-6-metila- 2-oxo-1 , 2-di-hidropiridina-3-carboxamido)fenoxi)-6,7-di- hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-3-il)-1H-pirazol-1- carboxilato). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11,63 (s, 1H), 8,62 - 8,46 (m, 1H), 8,05 - 7,28 (m, 6H), 7,21 (s, 2H), 7,04 - 6,73 (m, 2H), 6,45 (d, J= 4,3 Hz, 2H), 4,71 (s, 2H), 4,06 (s, 2H), 2,08 (s, 3H). MS-ESI [M+H]+: 565,3, Exemplo 32: Preparação de N-(4-((3-(1H-pirazol-4-il)- 6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-4-il)oxi)-3- fluorofenila)-6-etoxi-1-(4-fluorofenila)-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxamida

[00305] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 85 (terc-butila 4-(4-(2-fluoro-4-(1-(4-fluorofenila)-6-etoxi- 2-oxo-1 , 2-di-hidropiridina-3-carboxamido) fenoxi) -6,7-di- hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-3-il)-1H-pirazol-1- carboxilato). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,66 (s, 1H), 8,52 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 8,02 - 7,90 (m, 3H), 7,82 (s, 1H), 7,45 - 7,32 (m, 4H), 7,14 (d, J= 9,3 Hz, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,73 (t, J= 9,2 Hz, 1H), 6,32 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 4,71 ( t, J= 6,5 Hz, 2H), 4,24 (q, J= 7,0 Hz, 2H), 4,07 (t, J= 6,6 Hz, 2H), 1,13 (t, J= 7,0 Hz, 3H). MS-ESI [M+H]+: 595,2, Exemplo 33: Preparação de N-(4-((3-(1H-pirazol-4-il)- 6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-4-il)oxi)-3- fluorofenila)-6-ciclopropoxi-1-(4-fluorofenila)-2-oxo-1,2- di-hidropiridina-3-carboxamida

[00306] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 86 (terc-butila 4-(4-(2-fluoro-4-(1-(4-fluorofenila)-6- ciclopropoxi-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamido) fenoxi)-6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-3-il)-1H- pirazol-1-carboxilato). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ11,65 (s, 1H), 8,57 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 8,00 - 7,89 (m, 3H), 7,82 (s, 1H), 7,44 - 7,28 (m, 4H), 7,21 - 7,12 (m, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,73 (t, J= 9,2 Hz, 1H), 6,55 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 4,71 (t, J= 6,6 Hz, 2H), 4,14 (dd, J= 6,0, 3,2 Hz, 1H), 4,07 (t, J= 6,5 Hz, 2H), 0,88 - 0,81 (m, 2H), 0,64 (s, 2H). MS-ESI [M+H]+: 607,2, Exemplo 34: Preparação de N-(4-((3-(1H-pirazol-4-il)- 6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-4-il)oxi)-3- fluorofenila)-1-(4-fluorofenila)-6-isopropoxi-2-oxo-1,2- dihidropiridina-3-carboxamida

[00307] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 87 (terc-butila 4-(4-(2-fluoro-4-(1-(4-fluorofenila)-6- isopropoxi-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamido) fenoxi)-6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-3-il)-1H-

pirazol-1-carboxilato). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,67 (s, 1H), 8,50 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 8,03 - 7,88 (m, 3H), 7,82 (s, 1H), 7,45 - 7,30 (m, 4H), 7,20 - 7,10 (m, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,73 (t, J= 9,2 Hz, 1H), 6,36 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 4,93 - 4,79 (m , 1H), 4,71 (t, J= 6,5 Hz, 2H), 4,07 (t, J= 6,6 Hz, 2H), 1,16 (d, J= 6,1 Hz, 6H). MS-ESI [M+H]+: 609,2 Exemplo 35: Preparação de N-(4-((3-(1H-pirazol-4-il)- 6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-4-il)oxi)-3- fluorofenila)-1-(4-fluorofenila)-2-oxo-6-(2,2,2- trifluoroetoxi)-1,2-dihidropiridina-3-carboxamida

[00308] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 93 (terc-butila 4-(4-(2-fluoro-4-(1-(4-fluorofenila)-2-oxo-6- (2,2,2-trifluoroetoxi)-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamido) fenoxi)-6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-3-il)-1H- pirazol-1-carboxilato). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,03 (s, 1H), 11,60 (s, 1H), 8,57 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 7,94 (dd, J= 13,4, 2,6 Hz, 3H) , 7,83 (s, 1H), 7,50 - 7,32 (m, 4H), 7,21 - 7,13 (m, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,74 (t, J= 9,2 Hz, 1H), 6,44 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 5,00 (t, J= 8,5 Hz, 2H), 4,71 (t, J= 6,6

Hz, 2H), 4,07 (t, J= 6,6 Hz, 2H). MS-ESI [M+H]+: 649,1, Exemplo 36: Preparação de N-(3-fluoro-4-(1-metila-6- (1H-pirazol-4-il)-1H-indazol-5-iloxi)fenila)-1-(4- fluorofenila)-6-difluorometoxi-2-oxo-1,2-dihidropiridina-3- carboxamida

[00309] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir do intermediário 94 (N- (3-fluoro-4-(1-metila-6-(1-Boc-pirazol-4-il)-1H-indazol-5- iloxi)fenila)-6-difluorometoxi-2-oxo-1-(4-fluorofenila)- 1,2-di-hidropiridina-3-carboxamida). 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ10,53 (s, 1H), 8,24 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 8,09 (s, 2H), 7,99 (s, 1H), 7,92-7,84 (m, 2H), 7,44-7,18 (m, 7H), 7,07- 6,88 (m, 2H), 4,07 (s, 3H). MS-ESI [M+H]+: 605,1, Exemplo 37: Preparação de N-(4-((3-(1H-pirazol-4-il)- 6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-4-il)oxi)-3- fluorofenila)-6-(difluorometoxi)-1-(4-fluorofenila)-2-oxo- 1,2-dihidropiridina-3-carboxamida

[00310] Este composto foi preparado de acordo com a via sintética do Exemplo 1, a partir de intermediário 95 (terc-butila4-(4-(2-fluoro-4-(1-(4-fluorofenila)-6- (difluorometoxi)-2-oxo-1,2-di-hidropiridina-3-carboxamido) fenoxi)-6,7-di-hidropirrolo[3,2,1-hi]-indazol-3-il)-1H- pirazol-1-carboxilato). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,03 (s, 1H), 10,47 (s, 1H), 8,23 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,84 (d, J= 12,2 Hz, 4H), 7,44 - 7,16 (m, 6H), 7,04 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 6,91 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 6,84 (t, J= 9,2 Hz, 1H), 4,72 (t, J= 6,6 Hz, 2H), 4,07 (t, J= 6,5 Hz, 2H). MS-ESI [M+H]+: 617,1,

[00311] Os seguintes compostos foram feitos essencialmente por um método semelhante ao do Exemplo 37 acima.

Dados de Número do Exemplo Estrutura

MS Exemplo 38 623,2 Exemplo 39 635,2 Exemplo 40 564,2 Exemplo 41 576,2 Exemplo 42 563,2

Exemplo 43 579,2

Exemplo 44 593,2

Exemplo 45 605,2

Exemplo 46 607,2

Exemplo 47 615,2

Exemplo 48 633,2 Exemplo 49 647,2 Exemplo 50 574,2 Exemplos de atividades Exemplo 1: Atividade inibidora dos compostos da presente divulgação na proliferação de células KM12

[00312] KM12 é uma linha de células de câncer de cólon humano em que NTRK1 é altamente expresso e a fusão gênica ocorre com TPM3 para formar TPM3-NTRK1,

[00313] [Método de teste]: O kit de Ensaio de viabilidade celular luminescente CellTiter-Glo® da Promega foi usado para avaliar a atividade inibitória dos compostos na proliferação de células KM12,

[00314] [Instrumento]: Leitor multifuncional de microplacas Spectramax M3 da Molecular Devices.

[00315] [Materiais de teste]: linha celular KM12 (ATCC, item número CRL-12496), placa de cultura de células de parede preta de fundo plano transparente de 96 poços (Corning, item número 3603), meio RPMI-1640 (GE, cat#SH30027 .01), Soro Fetal Bovino FBS (Thermo Fisher, cat#10099-141), kit de Ensaio de viabilidade celular luminescente da CellTiter-Glo® (Promega, cat#G7572), PBS (Solarbio, cat#P1020), Tripsina (Thermo Fisher, cat#25200072), DMSO (Sigma, cat#D2650).

[00316] [Procedimento experimental]: Ao ressuscitar as células KM12, o tubo de congelamento foi agitado rapidamente em banho-maria a 37°C para derreter em 1 minuto.

A suspensão de células descongeladas foi misturada uniformemente com meio RPMI1640 contendo 10% de FBS, centrifugada a 1000 rpm por 5 minutos e o sobrenadante descartado. 5 mL de meio completo (meio RPMI1640 com 10% de FBS) foram retirados para ressuspender os pellets de células, carregados em um frasco de cultura de células com uma área de fundo de 25 cm2 e incubados em uma incubadora de células a 37°C, 95% de umidade e 5% CO2, As células foram autorizadas a passar quando a taxa de confluência celular atingiu cerca de 80%. Para a passagem das células, o meio antigo foi descartado e as células foram lavadas duas vezes com PBS, e

0,5 mL de tripsina foi adicionado para digerir as células.

Após a dispersão em células individuais e esfoliação do fundo do frasco de cultura de células, 4,5 mL de novo meio completo foram adicionados para terminar a digestão. Após pipetar a suspensão de células uniformemente, 1/5 da suspensão de células foi mantido e adicionado com 4 mL do novo meio completo e, após pipetar uniformemente, o frasco de células foi colocado na incubadora de células para posterior cultura.

O plaqueamento celular foi realizado quando a taxa de confluência celular atingiu cerca de 80% novamente. Para o plaqueamento de células, 1/5 da suspensão de células foi mantido para cultura adicional como no método de passagem de células, e os 4/5 restantes da suspensão de células foram colocados em um tubo de centrífuga de 15 mL, detectado quanto à viabilidade celular por exclusão de azul de tripano método para garantir que a viabilidade celular estava acima de 90%.

Uma suspensão de células com uma densidade de 3,33×104 células viáveis/mL foi preparada com meio completo, e 90 µL dessa suspensão de células foram adicionados a uma placa de cultura de células de 96 poços para obter uma densidade celular de 3,000 células viáveis/mL na placa de cultura de células. Foi estabelecido um grupo de controle sem células, sem composto e apenas meio completo (ou seja, controle de meio de cultura) e um grupo de controle sem composto, mas contendo células (ou seja, controle de células). A placa de células foi colocada em uma incubadora de células durante a noite.

[00317] A solução estoque de composto 10 mM em DMSO foi primeiro diluída em série com DMSO a um fator de diluição de 3,16 vezes, para obter 9 concentrações, e a 10ª concentração foi estabelecida como controle de DMSO sem composto. Em seguida, o PBS foi usado para diluir as soluções de DMSO de compostos de diferentes concentrações, a um fator de diluição de 100 vezes, de forma que a concentração de DMSO na solução de composto de cada concentração fosse 1%.

Finalmente, 10 µL de cada uma das soluções acima foram adicionados à placa de cultura de células correspondente, de modo que a concentração inicial do composto fosse 10 µM, com as concentrações restantes sendo sucessivamente diluídas a um fator de diluição de 3,16 vezes, e o teor de DMSO na placa de cultura de células foi de 0,1%.

[00318] A placa de células foi colocada em uma incubadora de células e cultivada por 72 horas. Para a detecção de Endpoint, o reagente CellTiter-Glo foi derretido e a placa de células foi movida para a temperatura ambiente para equilibrar por 30 minutos, adicionado com 100 µL de CellTiter-Glo para cada poço e agitado em um agitador orbital por 5 minutos para lisar completamente as células. A placa foi mantida à temperatura ambiente por 20 minutos para estabilizar o sinal de luminescência, e o valor de luminescência de cada poço foi varrido com um leitor de microplacas multifuncional em comprimento de onda completo.

[00319] [Amostras de teste] Os compostos do Exemplo 1 a 6 e Cisplatina (composto de controle positivo) LOXO-101： (Doebele, R. C. et al., Cancer Discov. 2015, 5, 1049- 1057) RXDX-101: (C. Rolfo et al., Expert Opin. Investig. Drugs 2015, 24(11), 1493-1500) Merestinibe

[00320] [Análise de dados] A seguinte fórmula foi usada para calcular a taxa de sobrevivência celular sob a ação de cada concentração dos compostos: Taxa de sobrevivência celular (%): (Lum droga a ser testada- Lum controle controle do meio)/(Lum controle celular-Lum controle do meio)X100% O software GraphPad Prism 5,0 foi usado para analisar os dados, e a regressão não linear da curva S foi usada para ajustar os dados para obter uma curva de dose-resposta, e os valores IC50 foram calculados a partir dela.

Tabela 1, A atividade inibitória dos compostos dos Exemplos 1-6 na proliferação de células KM12 (IC50, μM) Composto KM-12， IC50 (μM) Exemplo 1 0,0156 Exemplo 2 0,0091 Exemplo 3 0,0167 Exemplo 4 0,0310 Exemplo 5 0,0051 Exemplo 6 0,0063 Merestinibe 0,0087 LOXO-101 0,0083 RXDX-101 0,0051 Cisplatina 27,3059 A atividade inibidora dos compostos dos exemplos seguintes na proliferação de células KM12 foi investigada em testes separados em comparação com merestinibe usando métodos experimentais, condições e procedimentos basicamente análogos aos anteriores. Os resultados são apresentados nas tabelas a seguir.

Tabela 1-1 Composto KM-12，IC50 (μM) Merestinibe 0,033 Exemplo 18 0,032 Exemplo 19 0,032 Exemplo 12 0,016 Exemplo 23 0,032 Tabela 1-2 Composto KM-12，IC50 (μM) Merestinibe 0,059 Exemplo 14 0,024 Exemplo 15 0,017 Exemplo 16 0,007 Exemplo 17 0,019 Exemplo 11 0,035 Exemplo 25 0,029 Tabela 1-3 Composto KM-12，IC50 (μM) Merestinibe 0,027 Exemplo 24 0,023 Exemplo 26 0,018 Exemplo 2: Atividade inibidora dos compostos da presente divulgação na proliferação de células Ba/F3 ETV6-

NTRK2

[00321] A célula Ba/F3 ETV6-NTRK2 é uma linha celular transgênica estável construída por KYinno Biotechnology Co., Ltd. em células B primárias de camundongo Ba/F3 em que NTRK2 é altamente expresso e fundido com ETV6 para formar ETV6- NTRK2,

[00322] [Método de teste]: O kit de Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo® da Promega foi usado para avaliar a atividade inibitória dos compostos na proliferação de células Ba/F3 ETV6-NTRK2C.

[00323] [Instrumento]: Leitor multifuncional de microplacas Spectramax M3 da Molecular Devices.

[00324] [Materiais de teste]: linha celular Ba/F3 ETV6-NTRK2 (construída por KYinno Biotechnology Co., Ltd.

(Pequim)), placa de cultura de células de parede preta de fundo plano transparente de 96 poços (Corning, cat#3603), meio RPMI-1640 (GE, cat#SH30027,01), Soro Fetal Bovino FBS (Thermo Fisher, cat#10099-141), kit de Ensaio de viabilidade celular luminescente CellTiter-Glo® (Promega, cat#G7572), PBS (Solarbio, cat#P1020), DMSO (Sigma, cat#D2650).

[00325] [Procedimento experimental]: Ao ressuscitar células Ba/F3 ETV6-NTRK2, o tubo de congelamento foi agitado rapidamente em banho-maria a 37°C para derreter em 1 minuto.

A suspensão de células descongeladas foi misturada uniformemente com meio RPMI1640 contendo 10% de FBS,

centrifugada a 1000 rpm por 5 minutos e o sobrenadante descartado. 5 mL de meio completo (meio RPMI1640 com 10% de

FBS) foram retirados para ressuspender os pellets de células,

carregados em um frasco de cultura de células com uma área de fundo de 25 cm2 e incubados em uma incubadora de células a 37°C, 95% de umidade e 5% CO2, As células foram autorizadas a passar quando o número de células atingiu cerca de 106 células/mL.

Para a passagem das células, a suspensão de células antigas foi pipetada diretamente de maneira uniforme, 1/5 da suspensão de células foi mantida, 4 mL de novo meio completo foram adicionados e, após pipetar uniformemente, o frasco de células foi colocado na incubadora de células para posterior cultura.

O plaqueamento celular foi realizado quando o número de células atingiu cerca de

106 células/mL novamente.

Para o plaqueamento de células,

1/5 da suspensão de células foi mantido para cultura adicional como no método de passagem de células, e os 4/5 restantes da suspensão de células foram colocados em um tubo de centrífuga de 15 mL, detectado quanto à viabilidade celular por exclusão de azul de tripano, método para garantir que a viabilidade celular estava acima de 90%. Uma suspensão de células com uma densidade de 5,56×104 células viáveis/mL foi preparada com meio completo, e 90 µL dessa suspensão de células foram adicionados a uma placa de cultura de células de 96 poços para obter uma densidade celular de 5000 células viáveis/mL na placa de cultura de células. Um grupo de controle sem células, sem composto e apenas meio completo (ou seja, controle de meio de cultura) e um grupo de controle sem composto, mas contendo células (ou seja, controle de células) foram estabelecidos. A placa de células foi colocada em uma incubadora de células durante a noite. A solução estoque de composto 10 mM em DMSO foi primeiro diluída em série com DMSO a um fator de diluição de 3,16 vezes, para obter 9 concentrações, e a 10ª concentração foi estabelecida como controle de DMSO sem composto. Em seguida, o PBS foi usado para diluir as soluções de compostos DMSO de diferentes concentrações, a um fator de diluição de 100 vezes, de forma que a concentração de DMSO na solução de composto de cada concentração fosse 1%. Finalmente, 10 µL de cada uma das soluções acima foram adicionados à placa de cultura de células correspondente, de modo que a concentração inicial do composto fosse 10 µM, com as concentrações restantes sendo sucessivamente diluídas a um fator de diluição de 3,16 vezes, e o teor de DMSO na placa de cultura de células foi de 0,1%.

A placa de células foi colocada em uma incubadora de células e cultivada por 72 horas. Para a detecção de Endpoint, o reagente CellTiter-Glo foi derretido e a placa de células foi movida para a temperatura ambiente para equilibrar por 30 minutos, adicionado com 100 µL de CellTiter-Glo para cada poço e agitado em um agitador orbital por 5 minutos para totalmente lise as células. A placa foi mantida à temperatura ambiente por 20 minutos para estabilizar o sinal de luminescência, e o valor de luminescência de cada poço foi varrido com um leitor de microplacas multifuncional em comprimento de onda completo.

[00326] [Amostra de teste] Compostos do Exemplo 1 a 6 e LOXO-101 (composto de controle positivo), Merestinibe (composto comparativo) [Análise de dados] A seguinte fórmula foi usada para calcular a taxa de sobrevivência celular sob a ação de cada concentração dos compostos: Taxa de sobrevivência celular (%) = (Lum droga a ser testada- Lum controle do meio)/(Lum controle celular-Lum controle do meio)X100% O software GraphPad Prism 5,0 foi usado para analisar os dados, e a regressão não linear da curva S foi usada para ajustar os dados para obter uma curva de dose-resposta, e os valores IC50 foram calculados a partir dela.

Tabela 2, A atividade inibitória dos compostos de exemplo na proliferação de células Ba/F3 ETV6-NTRK2 (IC50, μM) Composto Ba/F3 ETV6-NTRK2， IC50 (μM) Exemplo 1 0,428 Exemplo 2 0,269 Exemplo 3 0,341 Exemplo 4 0,876

Exemplo 5 0,128 Exemplo 6 0,209 Merestinibe 0,211 LOXO-101 0,069 Exemplo 3: Atividade inibidora dos compostos da presente divulgação na proliferação de células Ba/F3 ETV6- NTRK3

[00327] Ba/F3 ETV6-NTRK3 é uma linha celular transgênica estável construída por KYinno Biotechnology Co., Ltd. em células B primárias de camundongo Ba/F3 em que NTRK3 é altamente expresso e fundido com ETV6 para formar ETV6 - NTRK3,

[00328] [Método de teste]: O kit de Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo® da Promega foi usado para avaliar a atividade inibitória dos compostos na proliferação de células Ba/F3 ETV6-NTRK3,

[00329] [Instrumento]: Leitor multifuncional de microplacas Spectramax M3 da Molecular Devices.

[00330] [Materiais de teste]: linha celular Ba/F3 ETV6-NTRK3 (construída por KYinno Biotechnology Co., Ltd.

(Beijing)), placa de cultura de células de parede preta de fundo plano transparente de 96 poços (Corning, cat#3603), meio RPMI-1640 (GE, cat#SH30027,01), Soro Fetal Bovino FBS (Thermo Fisher, cat#10099-141), kit de Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo® (Promega, cat#G7572),

PBS (Solarbio, cat#P1020), DMSO (Sigma, cat#D2650).

[00331] [Procedimento experimental]: Ao ressuscitar células Ba/F3 ETV6-NTRK3, o tubo de congelamento foi agitado rapidamente em banho-maria a 37°C para derreter em 1 minuto.

A suspensão de células descongeladas foi misturada uniformemente com meio RPMI1640 contendo 10% de FBS, centrifugada a 1000 rpm por 5 minutos e o sobrenadante descartado. 5 mL de meio completo (meio RPMI1640 com 10% de FBS) foram retirados para ressuspender os pellets de células, carregados em um frasco de cultura de células com uma área de fundo de 25 cm2 e incubados em uma incubadora de células a 37°C, 95% de umidade e 5% CO2, As células foram autorizadas a passar quando o número de células atingiu cerca de 106 células/mL. Para a passagem das células, a suspensão de células antigas foi pipetada diretamente de maneira uniforme, 1/5 da suspensão de células foi mantida, 4 mL de novo meio completo foram adicionados, após pipetagem uniformemente, o frasco de células foi colocado na incubadora de células para posterior cultura. O plaqueamento celular foi realizado quando o número de células atingiu cerca de 106 células/mL novamente. Para o plaqueamento de células, 1/5 da suspensão de células foi mantido para cultura adicional como no método de passagem de células, e os 4/5 restantes da suspensão de células foram colocados em um tubo de centrífuga de 15 mL, detectado quanto à viabilidade celular por exclusão de azul de tripano, método para garantir que a viabilidade celular estava acima de 90%. Uma suspensão de células com uma densidade de 5,56×104 de células viáveis/mL foi preparada com meio completo, e 90 µL dessa suspensão de células foram adicionados a uma placa de cultura de células de 96 poços para obter a densidade celular de

5000 células viáveis/mL no placa de cultura de células.

Foi estabelecido um grupo de controle sem células, sem composto e apenas meio completo (ou seja, controle de meio de cultura)

e um grupo de controle sem composto, mas contendo células

(ou seja, controle de células). A placa de células foi colocada em uma incubadora de células durante a noite.

A solução estoque de composto 10 mM em DMSO foi primeiro diluída em série com DMSO a um fator de diluição de 3,16 vezes, para obter 9 concentrações, e a 10ª concentração foi estabelecida como controle de DMSO sem composto.

Em seguida,

o PBS foi usado para diluir as soluções de DMSO de compostos de diferentes concentrações, a um fator de diluição de 100 vezes, de forma que a concentração de DMSO na solução de composto de cada concentração fosse 1%. Finalmente, 10 µL de cada uma das soluções acima foram adicionados à placa de cultura de células correspondente, de modo que a concentração inicial do composto fosse 10 µM, com as concentrações restantes sendo sucessivamente diluídas a um fator de diluição de 3,16 vezes, e o teor de DMSO na placa de cultura de células foi de 0,1%. A placa de células foi colocada em uma incubadora de células e cultivada por 72 horas. Para a detecção de Endpoint, o reagente CellTiter-Glo foi derretido e a placa de células foi movida para a temperatura ambiente para equilibrar por 30 minutos, adicionado com 100 µL de CellTiter-Glo para cada poço e agitado em um agitador orbital por 5 minutos para lisar totalmente as células. A placa foi mantida à temperatura ambiente por 20 minutos para estabilizar o sinal de luminescência, e o valor de luminescência de cada poço foi varrido com um leitor de microplacas multifuncional em comprimento de onda completo.

[00332] [Amostras de teste] Compostos de exemplo, LOXO-101 (composto de controle positivo), Merestinibe (composto comparativo) [Análise de dados] A seguinte fórmula foi usada para calcular a taxa de sobrevivência celular sob a ação de cada concentração dos compostos: Taxa de sobrevivência celular (%) = (Lum droga a ser testada- Lum controle do meio)/(Lum controle celular-Lum controle do meio)X100% O software GraphPad Prism 5,0 foi usado para analisar os dados, e a regressão não linear da curva S foi usada para ajustar os dados para obter uma curva de dose-resposta, e os valores IC50 foram calculados a partir dela.

Tabela 3, A atividade inibitória (IC50, μM) dos exemplos na proliferação de células Ba/F3 ETV6-NTRK3

Composto Ba/F3 ETV6-NTRK3，IC50 (μM) Exemplo 1 0,435 Exemplo 2 0,094 Exemplo 3 0,663 Exemplo 4 0,762 Exemplo 5 0,060 Exemplo 6 0,284 Merestinibe 0,684 LOXO-101 0,005 Exemplo 4: Atividade inibidora dos compostos da presente divulgação na proliferação de células Ba/F3 LMNA- NTRK1-G667C

[00333] [Método de teste]: O kit de Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo® da Promega foi usado para avaliar a atividade inibitória dos compostos na proliferação de células Ba/F3 LMNA-NTRK1-G667C.

[00334] [Instrumento]: Leitor multifuncional de microplacas Spectramax M3 da Molecular Devices.

[00335] [Materiais de teste]: linha de células Ba/F3 LMNA-NTRK1-G667C (construída por KYinno Co., Ltd. (Pequim)), placa de cultura de células de parede preta de fundo plano transparente de 96 poços (Corning, cat#3603), Meio RPMI-1640 (GE, cat#SH30027,01), Soro Fetal Bovino FBS (Thermo Fisher, cat#10099-141), kit de Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo® (Promega, cat#G7572), PBS (Solarbio, cat#P1020), DMSO (Sigma, cat#D2650).

[00336] [Procedimento experimental]: Ao ressuscitar células Ba/F3 LMNA-NTRK1-G667C, o tubo de congelamento foi agitado rapidamente em banho-maria a 37°C para derreter em 1 minuto. A suspensão de células descongeladas foi misturada uniformemente com meio RPMI1640 contendo 10% de FBS, centrifugada a 1000 rpm por 5 minutos e o sobrenadante descartado. 5 mL de meio completo (meio RPMI1640 com 10% de FBS) foram retirados para ressuspender os pellets de células, carregados em um frasco de cultura de células com uma área de fundo de 25 cm2 e incubados em uma incubadora de células a 37°C, 95% de umidade e 5% CO2, As células foram autorizadas a passar quando o número de células atingiu cerca de 106 células/mL.

[00337] [Amostras de teste] Compostos de exemplo e LOXO-101 (composto de controle positivo)

[00338] [Análise de dados] A seguinte fórmula foi usada para calcular a taxa de sobrevivência celular sob a ação de cada concentração dos compostos: Taxa de sobrevivência celular (%) = (Lum droga a ser testada- Lum controle do meio)/(Lum controle celular-Lum controle do meio)X100% O software GraphPad Prism 5,0 foi usado para analisar os dados, e a regressão não linear da curva S foi usada para ajustar os dados para obter uma curva de dose-resposta, e os valores IC50 foram calculados a partir dela.

Tabela 4, A atividade inibitória (IC50, μM) dos compostos de exemplo na proliferação de células Ba/F3 LMNA- NTRK1-G667C Composto Ba/F3 LMNA-NTRK1-G667C， IC50 (μM) Exemplo 1 0,0020 Exemplo 2 0,0011 Exemplo 3 0,0016 Exemplo 4 0,0028 Exemplo 5 <0,001 Exemplo 6 0,00066 Merestinibe 0,0011 LOXO-101 2,409 A atividade inibidora de alguns compostos da presente divulgação na proliferação de células Ba/F3 LMNA-NTRK1-G667C foi investigada em testes separados em comparação com merestinibe usando métodos experimentais, condições e procedimentos basicamente análogos aos anteriores. Os resultados são apresentados nas tabelas a seguir.

Tabela 4-1 Composto Ba/F3 LMNA-NTRK1-G667C, IC50 (μM) Merestinibe 0,001 Exemplo 18 0,001 Exemplo 19 0,002 Exemplo 12 <0,001 Exemplo 23 0,001 Tabela 4-2 Composto Ba/F3 LMNA-NTRK1-G667C, IC50 (μM) Merestinibe 0,0141

Exemplo 14 0,0086 Exemplo 15 0,0108 Exemplo 16 0,0107 Exemplo 11 0,0105 Exemplo 24 0,0173 Exemplo 26 0,0175 Exemplo 5: Atividade inibidora dos compostos da presente divulgação na proliferação de células Ba/F3 LMNA- NTRK1-G595R

[00339] Ba/F3 LMNA-NTRK1-G595R é uma linha celular transgênica estável construída por KYinno Biotechnology Co., Ltd. em células B primárias de camundongo Ba/F3 em que NTRK1 é altamente expresso com uma mutação de G na posição 595 para R, e fundida com LMNA para formar LMNA-NTRK1,

[00340] [Método de teste]: O kit de Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo® da Promega foi usado para avaliar a atividade inibitória dos compostos na proliferação de células Ba/F3 LMNA-NTRK1-G595R.

[00341] [Instrumento]: Leitor multifuncional de microplacas Spectramax M3 da Molecular Devices.

[00342] [Materiais de teste]: linha celular Ba/F3 LMNA-NTRK1-G595R (construída por KYinno Biotechnology Co., Ltd. (Pequim)), placa de cultura de células de parede preta de fundo plano transparente de 96 poços (Corning, cat#3603) , Meio RPMI-1640 (GE, cat#SH30027,01), Soro Fetal Bovino FBS (Thermo Fisher, cat#10099-141), kit de Ensaio de Viabilidade

Celular Luminescente CellTiter-Glo® (Promega, cat#G7572), PBS (Solarbio , cat#P1020), DMSO (Sigma, cat#D2650).

[00343] [Procedimento experimental]: Ao ressuscitar células Ba/F3 LMNA-NTRK1-G595R, o tubo de congelamento foi agitado rapidamente em banho-maria a 37°C para derreter em 1 minuto. A suspensão de células descongeladas foi misturada uniformemente com meio RPMI1640 contendo 10% de FBS, centrifugada a 1000 rpm por 5 minutos e o sobrenadante descartado. 5 mL de meio completo (meio RPMI1640 com 10% de FBS) foram retirados para ressuspender os pellets de células, carregados em um frasco de cultura de células com uma área de fundo de 25 cm2 e incubados em uma incubadora de células a 37°C, 95% de umidade e 5% CO 2, As células foram permitidas a passagem quando o número de células atingiu cerca de 106 células/mL. Para a passagem das células, a suspensão de células antigas foi pipetada diretamente de maneira uniforme, 1/5 da suspensão de células foi mantida, 4 mL de novo meio completo foram adicionados, após pipetagem uniformemente, o frasco de células foi colocado na incubadora de células para posterior cultura. O plaqueamento celular foi realizado quando o número de células atingiu cerca de 106 células/mL novamente. Para o plaqueamento de células, 1/5 da suspensão de células foi mantido para cultura adicional como no método de passagem de células, e os 4/5 restantes da suspensão de células foram colocados em um tubo de centrífuga de 15 mL, detectado quanto à viabilidade celular por exclusão de azul de tripano, método para garantir que a viabilidade celular estava acima de 90%. Uma suspensão de células com uma densidade de 5,56×104 células viáveis/mL foi preparada com meio completo, e 90 µL dessa suspensão de células foram adicionados a uma placa de cultura de células de 96 poços para obter a densidade celular de 5000 células viáveis/mL na placa de cultura de células.

Foi estabelecido um grupo de controle sem células, sem composto e apenas meio completo (ou seja, controle de meio de cultura) e um grupo de controle sem composto, mas contendo células (ou seja,

controle de células). A placa de células foi colocada em uma incubadora de células durante a noite.

A solução estoque de composto 10 mM em DMSO foi primeiro diluída em série com

DMSO a um fator de diluição de 3,16 vezes, para obter 9 concentrações, e a 10ª concentração foi estabelecida como controle de DMSO sem composto.

Em seguida, o PBS foi usado para diluir as soluções de DMSO de compostos de diferentes concentrações, a um fator de diluição de 100 vezes, de forma que a concentração de DMSO na solução de composto de cada concentração fosse 1%. Finalmente, 10 µL de cada uma das soluções acima foram adicionados à placa de cultura de células correspondente, de modo que a concentração inicial do composto fosse 10 µM, com as concentrações restantes sendo sucessivamente diluídas a um fator de diluição de 3,16 vezes,

e o teor de DMSO na placa de cultura de células foi de 0,1%.

A placa de células foi colocada em uma incubadora de células e cultivada por 72 horas. Para a detecção de Endpoint, o reagente CellTiter-Glo foi derretido e a placa de células foi movida para a temperatura ambiente para equilibrar por 30 minutos, adicionado com 100 µL de CellTiter-Glo para cada poço e agitado em um agitador orbital por 5 minutos para a lisar totalmente as células. A placa foi mantida à temperatura ambiente por 20 minutos para estabilizar o sinal de luminescência, e o valor de luminescência de cada poço foi varrido com um leitor de microplacas multifuncional em comprimento de onda completo.

[00344] [Amostras de teste] Compostos de exemplo e LOXO-101 (composto de controle positivo)

[00345] [Análise de dados] A seguinte fórmula foi usada para calcular a taxa de sobrevivência celular sob a ação de cada concentração dos compostos: Taxa de sobrevivência celular (%) = (Lum droga a ser testada- Lum controle do meio)/(Lum controle celular-Lum controle do meio)X100%

[00346] O software GraphPad Prism 5,0 foi usado para analisar os dados e a regressão não linear da curva S foi usada para ajustar os dados para obter uma curva de dose- resposta, e os valores de IC50 foram calculados a partir dela.

Tabela 5, A atividade inibitória dos compostos de exemplo na proliferação de células Ba/F3 LMNA-NTRK1-G595R (IC50, μM) Composto Ba/F3 LMNA-NTRK1-G595R， IC50 (μM) Exemplo 1 1,435 Exemplo 2 0,752 Exemplo 3 3,152 Exemplo 4 4,654 Exemplo 5 0,799 Exemplo 6 0,747 Merestinibe 1,015 LOXO-101 3,657 Exemplo 6: Atividade inibidora dos compostos da presente divulgação na proliferação de células Ba / F3 ETV6- NTRK2-G639R

[00347] Ba/F3 ETV6-NTRK2-G639R é uma linha celular transgênica estável construída por KYinno Biotechnology Co., Ltd. em células B primárias de camundongo Ba/F3 em que NTRK2 é altamente expresso com uma mutação de G na posição 639 para R., e fundida com ETV6 para formar ETV6-NTRK2,

[00348] [Método de teste]: O kit de Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo® da Promega foi usado para avaliar a atividade inibitória dos compostos na proliferação de células Ba/F3 ETV6-NTRK2-G639R.

[00349] [Instrumento]: Leitor multifuncional de microplacas Spectramax M3 da Molecular Devices.

[00350] [Materiais de teste]: linha celular Ba/F3

ETV6-NTRK2-G639R (construída por KYinno Biotechnology Co., Ltd. (Pequim)), placa de cultura de células de parede preta de fundo plano transparente de 96 poços (Corning, catálogo#3603), Meio RPMI-1640 (GE, cat#SH30027,01), Soro Fetal Bovino FBS (Thermo Fisher, cat#10099-141), kit de Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo® (Promega, cat#G7572), PBS (Solarbio, cat#P1020), DMSO (Sigma, cat#D2650).

[00351] [Procedimento experimental]: Ao ressuscitar células Ba/F3 ETV6-NTRK2-G639R, o tubo de congelamento foi agitado rapidamente em banho-maria a 37°C para derreter em 1 minuto. A suspensão de células descongeladas foi misturada uniformemente com meio RPMI1640 contendo 10% de FBS, centrifugada a 1000 rpm por 5 minutos e o sobrenadante descartado. 5 mL de meio completo (meio RPMI1640 com 10% de FBS) foram retirados para ressuspender os pellets de células, carregados em um frasco de cultura de células com uma área de fundo de 25 cm2 e incubados em uma incubadora de células a 37°C, 95% de umidade e 5% CO 2, As células foram permitidas a passagem quando o número de células atingiu cerca de 106 células/mL. Para a passagem das células, a suspensão de células antigas foi pipetada diretamente de maneira uniforme, 1/5 da suspensão de células foi mantida, 4 mL de novo meio completo foram adicionados, após pipetagem uniformemente, o frasco de células foi colocado na incubadora de células para posterior cultura.

106 células/mL novamente.

Para o plaqueamento de células,

1/5 da suspensão de células foi mantido para cultura adicional como no método de passagem de células, e os 4/5 restantes da suspensão de células foram colocados em um tubo de centrífuga de 15 mL, detectado quanto à viabilidade celular por exclusão de azul de tripano, método para garantir que a viabilidade celular estava acima de 90%. Uma suspensão de células com uma densidade de 5,56×104 células viáveis/mL foi preparada com meio completo, e 90 µL dessa suspensão de células foram adicionados a uma placa de cultura de células de 96 poços para obter a densidade celular de 5000 células viáveis/mL na placa de cultura de células.

Em seguida, o PBS foi usado para diluir as soluções de DMSO de compostos de diferentes concentrações, a um fator de diluição de 100 vezes, de modo que a concentração de DMSO na solução do composto de cada concentração fosse de 1%. Finalmente, 10 µL de cada uma das soluções acima foram adicionados à placa de cultura de células correspondente, de modo que a concentração inicial do composto fosse 10 µM, com as concentrações restantes sendo sucessivamente diluídas a um fator de diluição de 3,16 vezes, e o teor de DMSO na placa de cultura de células foi de 0,1%.

A placa de células foi colocada em uma incubadora de células e cultivada por 72 horas. Para a detecção de Endpoint, o reagente CellTiter-Glo foi derretido e a placa de células foi movida para a temperatura ambiente para equilibrar por 30 minutos, adicionado com 100 µL de CellTiter-Glo para cada poço e agitado em um agitador orbital por 5 minutos para lisar totalmente as células. A placa foi mantida à temperatura ambiente por 20 minutos para estabilizar o sinal de luminescência, e o valor de luminescência de cada poço foi varrido com um leitor de microplacas multifuncional em comprimento de onda completo.

[00352] [Amostras de teste] Compostos de exemplo e LOXO-101 (composto de controle positivo) [Análise de dados] A seguinte fórmula foi usada para calcular a taxa de sobrevivência celular sob a ação de cada concentração dos compostos: Taxa de sobrevivência celular (%) = (Lum droga a ser testada- Lum controle do meio)/(Lum controle celular-Lum controle do meio)X100%

O software GraphPad Prism 5,0 foi usado para analisar os dados, e a regressão não linear da curva S foi usada para ajustar os dados para obter uma curva de dose-resposta, e os valores IC50 foram calculados a partir dela.

Tabela 6, A atividade inibitória dos compostos de exemplo na proliferação de células Ba/F3 ETV6-NTRK2-G639R (IC50, μM) Composto Ba/F3 ETV6-NTRK2-G639R， IC50 (μM) Exemplo 1 3,116 Exemplo 2 1,878 Exemplo 3 9,866 Exemplo 4 >10 Exemplo 5 2,691 Exemplo 6 2,792 Merestinibe 3,038 LOXO-101 >10 Exemplo 7: Atividade inibidora dos compostos da presente divulgação na proliferação de células Ba/F3 ETV6- NTRK3-G696C

[00353] Ba/F3 ETV6-NTRK3-G696C é uma linha celular transgênica estável construída por KYinno Biotechnology Co., Ltd. em células B primárias de camundongo Ba/F3 em que NTRK3 é altamente expresso com uma mutação de G na posição 639 para C e fundida com ETV6 para formar ETV6-NTRK3,

[00354] [Método de teste]: O kit de Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo® da Promega foi usado para avaliar a atividade inibitória dos compostos na proliferação de células Ba/F3 ETV6-NTRK3-G696C.

[00355] [Instrumento]: Leitor multifuncional de microplacas Spectramax M3 da Molecular Devices.

[00356] [Materiais de teste]: linha celular Ba/F3 ETV6-NTRK3-G696C (construída por KYinno Biotechnology Co., Ltd. (Pequim)), placa de cultura de células de parede preta de fundo plano transparente de 96 poços (Corning, cat#3603), Meio RPMI-1640 (GE, número do produto#SH30027,01), Soro Fetal Bovino FBS (Thermo Fisher, cat#10099-141), kit de Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo® (Promega, cat#G7572), PBS (Solarbio, cat#P1020), DMSO (Sigma, cat#D2650).

[00357] [Procedimento experimental]: Ao ressuscitar células Ba/F3 ETV6-NTRK3-G696C, o tubo de congelamento foi agitado rapidamente em banho-maria a 37°C para derreter em 1 minuto. A suspensão de células descongeladas foi misturada uniformemente com meio RPMI1640 contendo 10% de FBS, centrifugada a 1000 rpm por 5 minutos e o sobrenadante descartado. 5 mL de meio completo (meio RPMI1640 com 10% de FBS) foram retirados para ressuspender os pellets de células, carregados em um frasco de cultura de células com uma área de fundo de 25 cm2 e incubados em uma incubadora de células a 37°C, 95% de umidade e 5% CO 2, As células foram permitidas a passagem quando o número de células atingiu cerca de 106 células/mL.

Para a passagem das células, a suspensão de células antigas foi pipetada diretamente de maneira uniforme, 1/5 da suspensão de células foi mantida, 4 mL de novo meio completo foram adicionados, após pipetagem uniformemente, o frasco de células foi colocado na incubadora de células para posterior cultura.

106 células/mL novamente.

Para o plaqueamento de células,

DMSO a um fator de diluição de 3,16 vezes, para obter 9 concentrações, e a 10ª concentração foi estabelecida como controle de DMSO sem composto. Em seguida, o PBS foi usado para diluir as soluções de DMSO de compostos de diferentes concentrações, a um fator de diluição de 100 vezes, de forma que a concentração de DMSO na solução de composto de cada concentração fosse 1%. Finalmente, 10 µL de cada uma das soluções acima foram adicionados à placa de cultura de células correspondente, de modo que a concentração inicial do composto fosse 10 µM, com as concentrações restantes sendo sucessivamente diluídas a um fator de diluição de 3,16 vezes, e o teor de DMSO na placa de cultura de células foi de 0,1%.

[00358] [Amostras de teste] Compostos de exemplo e LOXO-101 (composto de controle positivo)

[Análise de dados] A seguinte fórmula foi usada para calcular a taxa de sobrevivência celular sob a ação de cada concentração dos compostos: Taxa de sobrevivência celular (%) = (Lum droga a ser testada- Lum controle do meio)/(Lum controle celular-Lum controle do meio)X100% O software GraphPad Prism 5,0 foi usado para analisar os dados, e a regressão não linear da curva S foi usada para ajustar os dados para obter uma curva de dose-resposta, e os valores IC50 foram calculados a partir dela.

Tabela 7, A atividade inibidora de compostos de exemplo na proliferação de células Ba/F3 ETV6-NTRK3-G696C (IC50, μM) Composto Ba/F3 ETV6-NTRK3-G696C， IC50 (μM) Exemplo 1 0,033 Exemplo 2 0,020 Exemplo 3 0,018 Exemplo 4 0,034 Exemplo 5 0,0068 Exemplo 6 0,016 Merestinibe 0,010 LOXO-101 1,891 A atividade inibidora de alguns compostos da presente divulgação na proliferação de células Ba/F3 ETV6-NTRK3-G696C foi investigada em testes separados em comparação com merestinibe usando métodos experimentais, condições e procedimentos basicamente análogos aos anteriores. Os resultados são apresentados nas tabelas a seguir.

Tabela 7-1 Composto Ba/F3 ETV6-NTRK3-G696C, IC50 (μM) Merestinibe 0,013 Exemplo 18 0,012 Exemplo 19 0,014 Exemplo 12 0,003 Exemplo 23 0,011 Tabela 7-2 Composto Ba/F3 ETV6-NTRK3-G696C, IC50 (μM) Merestinibe 0,0017 Exemplo 14 0,0016 Exemplo 15 0,0019 Exemplo 16 0,0012 Exemplo 17 0,0037 Exemplo 11 0,0018 Exemplo 25 0,0063 Exemplo 24 0,0035 Exemplo 27 0,0030 Exemplo 26 0,0031 Exemplo 8: Atividade inibidora dos compostos da presente divulgação na proliferação de células MKN45

[00359] MKN45 é uma linha celular humana de câncer gástrico pouco diferenciada com alta expressão de MET. Os experimentos de proliferação celular foram realizados de acordo com métodos da literatura (Zhang, D. et al. Bioorg.

Med. Chem. 2013, 21, 6804; Riss, TL; Moravec, RA; Niles, AL;

et al. Cell Viability Assays 2013 1 de maio [Atualizado em 1 de julho de 2016]. In: Sittampalam, GS; Grossman, A.; Brimacombe, K.; et al., Editores. Manual de Orientação do Ensaio [Internet]. Bethesda (MD:Eli Lilly & Company e o Centro Nacional para o Avanço das Ciências Translacionais; 2004-. Disponível em: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK144065/).

Tabela 8, Atividade inibidora de alguns compostos de exemplo na proliferação de células MKN45 (IC50, μM) Composto MKN45，IC50 (μM) Exemplo 12 0,004 Exemplo 14 0,011 Exemplo 16 0,009 Exemplo 17 0,015 Exemplo 11 0,012 Merestinibe 0,019 LOXO-101 >10 Os resultados experimentais mostram que os compostos da presente divulgação têm um efeito inibidor mais eficaz nas células MKN45 que expressam altamente o alvo principal do Merestinibe, isto é, Met.

Exemplo 9: Atividade inibidora de compostos selecionados da presente divulgação na proliferação de células KM12, Ba/F3 LMNA-NTRK1-G667C, Ba/F3 ETV6-NTRK3-G696C

[00360] Usando métodos experimentais e condições análogas aos exemplos de atividade acima 1, 4 e 7, a atividade inibitória dos seguintes compostos selecionados da divulgação em cada uma das linhas de células foi investigada e os resultados são mostrados na seguinte tabela: Tabela 9, Atividade inibidora da proliferação celular (IC50, μM) de alguns compostos de exemplo Composto KM12 Ba/F3 LMNA-NTRK1-G667C Ba/F3 ETV6-NTRK3- G696C Exemplo 28 0,056 0,0198 0,0036 Exemplo 31 0,071 0,0330 0,0053 Exemplo 32 0,067 0,0190 0,0047 Exemplo 34 0,037 0,0237 0,0048 Exemplo 10: Atividade inibidora dos compostos da presente divulgação em outras quinases oncogênicas

[00361] O experimento foi realizado de acordo com o protocolo de determinação de atividade de quinase padrão da Eurofins DiscoverX Corporation (11180 Roselle St. Suite D, San Diego, CA, EUA, www.discoverX.com). Especificamente, o experimento foi conduzido usando a plataforma de triagem KINOMEscanTM, que adota um ensaio de ligação de competição dirigida ao local ativo para medir quantitativamente a interação entre os compostos de teste e mais de centenas de quinases humanas e mutantes relacionados a doenças. O princípio de funcionamento da plataforma de triagem e os métodos de ensaio de quinase são bem conhecidos na técnica, por exemplo, consulte www.discoverX.com.

[00362] O composto Exemplo 12 da presente divulgação mostrou> 90% de atividade inibidora nas quinases listadas na Tabela 10 a uma concentração de 2 μM.

Tabela 10

[00363] Os resultados experimentais mostram que, além de inibir as atividades da TRKA, TRKB e TRKC quinases, os compostos da presente divulgação também inibem outros alvos de quinase de drogas anticâncer confirmados, em pesquisa e emergentes (ROS1, RAF1, PDGFRB, CSF1R, LCK , IKK a, IKKb, PLK, AXL, TIE, LOK, TIE1, DDR), bem como aqueles alvos de drogas anticâncer em aplicações e seus alvos mutantes resistentes a drogas (FLT3, FLT3 (N841I), FLT3 (K663Q), FLT3 (D835V), FLT3 (ITD), KIT, KIT (L576P), KIT (V559D), KIT (V559D,

T670I), MET, MET (Y1235D), MET (Y1250T), RET, RET (M918T)), etc., portanto acredita-se que mostrem um efeito anticâncer de amplo espectro na prática clínica.

Exemplo 11: Atividade antitumoral dos compostos da presente divulgação em um modelo de camundongo de xenoenxerto KM12

[00364] [Instrumento]: API-400-Qtrap Shimadzu 20AC

[00365] [Materiais e condições de teste]: a linha de células KM12 foi fornecida por Via Biotechnology, camundongos nus BALB/c, fêmeas, adquiridos de Shanghai Lingchang Biotechnology Co., Ltd.

[00366] [Procedimento experimental]: camundongos nus fêmeas atímicas de 7 semanas de idade foram injetados subcutaneamente com 5x106 células KM12 no lado direito das costelas. Os tumores foram medidos a cada 3 dias em 3 dimensões para calcular o volume V=D×d×d/2, e os pesos corporais dos camundongos foram medidos ao mesmo tempo.

Quando o tamanho médio do tumor atingiu 180 mm3 cerca de 6 dias após a inoculação do tumor, os camundongos foram dosados por 12 dias (ou 18 dias) antes do sacrifício. Para a análise farmacocinética e farmacodinâmica, as amostras de plasma e de tumor foram retiradas de animais 4 horas e 8 horas após a última dose.

[00367] As amostras de tumor dos animais tratados como acima foram pesadas, 9 volumes de água gelada foram adicionados e o tecido tumoral resultante foi homogeneizado por um homogeneizador de tecido. 50 μL de plasma ou amostra de homogenato de tumor foram transferidos para uma placa de 96 poços e adicionados 250 μL de ACN (contendo 260 ng/ml de dexametasona como padrão interno) para precipitar a proteína. A placa foi centrifugada a 4000 rpm a 4°C por 20 minutos, 150 μL de sobrenadante foram transferidos para outra nova placa de 96 poços, misturados com 150 μL de água FA 0,1% e 10 μL foram injetados em LC-MS/MS para coletar dados.

[00368] [Resultados do experimento] Os dados no 12º dia após a administração mostram que, os compostos de exemplo testados da presente divulgação inibiram significativamente o crescimento de tumores, por exemplo, alguns dos compostos mostraram atividade de inibição do crescimento tumoral superior ao Merestinibe (Figura 1-A). As concentrações de drogas no plasma e tumor testadas no 12º e 18º dias após a administração mostram que os compostos testados da presente divulgação podem ser enriquecidos em plasma e tecido tumoral em uma concentração mais alta do que o Merestinibe (Figura 1-B, Figura 1-C), que se espera que exerça uma atividade antitumoral mais forte.

Exemplo 12: Comparação do perfil de quinase dos compostos da presente divulgação e Merestinibe

[00369] A atividade inibitória do Exemplo 12 da presente divulgação em várias quinases a uma concentração de

2 μM foi comparada com a de Merestinibe. O experimento foi realizado de acordo com o protocolo de determinação de atividade de quinase padrão da Eurofins DiscoverX Corporation (11180 Roselle St. Suite D, San Diego, CA USA, www.discoverX.com). A uma concentração de 2 μM, o Exemplo 12 da presente divulgação mostra uma tendência significativamente diferente no perfil de atividade da quinase, em comparação com Merestinibe, como mostrado na Figura 2 (quinases com uma diferença de taxa de inibição> 20%).

[00370] As propriedades físico-químicas de um composto determinam sua capacidade de drogabilidade. Os parâmetros de propriedade que afetam a drogabilidade de um composto e os métodos experimentais estabelecidos podem se referir a Kerns, Edward H. e Di Li (2008). Propriedades semelhantes a drogas: conceitos, projeto de estrutura e métodos: do ADME à otimização da toxicidade. San Diego: Academic Press. Os resultados experimentais da presente divulgação mostram que o composto da presente divulgação é significativamente superior aos inibidores da técnica anterior, como Merestinibe, em muitas propriedades relacionadas à capacidade de drogar. Os exemplos a seguir ilustram as vantagens significativas da capacidade de droga geral do composto da presente divulgação sobre a técnica anterior pela estabilidade metabólica em microssomas hepáticos, inibição da enzima P450 e solubilidade.

Exemplo 13: Teste de estabilidade metabólica em microssomas hepáticos do composto da presente divulgação

[00371] De acordo com métodos padrões convencionais na técnica para estudos de estabilidade metabólica in vitro, por exemplo, aqueles protocolos descritos em Kerns, Edward H. e Di Li (2008). Propriedades semelhantes a drogas: conceitos, projeto de estrutura e métodos: do ADME à otimização da toxicidade. San Diego: Academic Press; Di, Li et al., Optimization of a Higher Throughput Microsomal Stability Screening Assay for Profiling Drug Discovery Candidates, J. Biomol. Tela. 2003, 8 (4), 453, o teste de estabilidade metabólica em microssomas hepáticos do presente composto foi realizado de forma análoga à seguinte.

[00372] A estabilidade metabólica in vitro do composto em 5 espécies (camundongo, rato, cachorro, macaco e humano) foi avaliada pelo teste de estabilidade microssomal do fígado. Foi preparada uma solução tampão de fosfato de potássio 0,1 M (pH 7,4, contendo EDTA 1,0 mM). O composto de teste e o composto de controle foram preparados em uma solução de DMSO 10 mM e, em seguida, 10 μL da solução de composto DMSO 10 mM foram adicionados a 190 μL de acetonitrila para preparar uma solução de composto de 500 μM. Microssomas de fígado (Sekisui XenoTech, LLC., Microssomas de fígado humano, cat.#H0610; microssomas de fígado de cão Beagle, cat.#D1000; microssomas de fígado de macaco cynomolgus, cat.#P2073; microssomas de fígado de rato, cat.#R1073; microssomas de fígado de camundongo, cat.#M1000) foram retirados e derretidos lentamente em gelo, então 18,75 μL da solução de microssoma do fígado (20 mg/mL) e 1,5 μL de solução de composto 500 μM foram adicionados a 479,75 μL de solução tampão de fosfato de potássio 0,1 M para preparar uma solução de 0,75 mg/mL de solução de trabalho de microssoma de fígado com uma concentração de composto de 1,5μM Foi preparada uma solução aquosa de NADPH 6 mM (SIGMA, cat.#V900362). 0,2 mL de solução estoque padrão interno 2 mg/mL (solução de imipramina em acetonitrila) foram adicionados a 1000 mL de acetonitrila (SIGMA, cat.#271004) para preparar a solução de parada da reação e armazenada a 4°C.

[00373] Seis placas de poços profundos foram marcadas como T0, T5, T15, T30, T45 e NCF60 (controle negativo, sem NADPH). 30 μL de composto de controle 1,5 mM ou solução de composto de teste em solução de trabalho de microssoma de fígado 0,75 mg/mL foram adicionados a cada poço das placas correspondentes. Após serem seladas com filme, todas as microplacas foram colocadas em banho-maria a 37°C para pré- aquecimento por 5 minutos, e solução de NADPH 6 mM foi colocada em banho-maria a 37°C para pré-aquecimento por 5 minutos. Em seguida, 15 μL de solução NADPH foram adicionados a cada célula sucessivamente na ordem de tempo reversa, ou seja, primeiro adicionando a placa T45, 15 minutos depois a placa T30, 15 minutos depois novamente a placa T15 e 10 minutos depois novamente a placa T5, Placa NCF60 não foi adicionada com NADPH, mas 15 μL de água desionizada.

Neste momento, à placa T0 foram adicionados 135 μL de solução de parada de reação resfriada em gelo e 15 μL de solução de

NADPH.

Ao final da reação, 135 μL de solução de parada de reação pré-resfriada com gelo foram adicionados sucessivamente a cada poço das placas T5, T15, T30 e T45,

Todas as amostras foram centrifugadas a 4°C a 600 rpm por 10 minutos e, em seguida, a 5594 g por 15 minutos (Thermo

Multifugex 3R). Seis placas de 96 poços foram respectivamente marcadas e adicionadas 50 μL de água ultrapura (Millipore,

ZMQS50F01) a cada poço, então 50 μL do sobrenadante centrifugado foram adicionados ao poço correspondente da placa correspondente, para LC-MS/MS-014 (API4000), análise

UPLC-MS/MS-11 (API4000), LC-MS/MS-034 (API-6500+). A concentração (C0) do composto de teste no ponto de tempo T0,

foi tomada como 100%, e as concentrações em outros pontos de tempo de incubação foram convertidas em porcentagens de resíduos.

O logaritmo natural da porcentagem de resíduo em cada ponto de tempo foi submetido a regressão linear como um fator de tempo de incubação para obter declive k, e então a taxa de depuração do microssoma hepático CLmic int e meia-vida in vitro (T1/2) foram calculados de acordo com a seguinte fórmula: 1 Ct = C 2 0 ln2 0,693 T1/2 = =

K K

K CLmic int = mg⁄ml proteína microssomal incubada Tabela 11: Comparação dos parâmetros do metabolismo microssomal do fígado entre o Exemplo 12 da presente divulgação e Merestinibe T1/2 (minuto) humano Camundongo Rato Cachorro Macaco Merestinibe 78,95 27,52 52,01 89,91 25,04 Exemplo 12 288,48 39,21 73,39 74,28 55,99 Clint (mL/min/kg) humano Camundongo Rato Cachorro Macaco Merestinibe 22,02 90,26 104,93 38,43 80,96 Exemplo 12 6,03 63,34 74,36 46,51 36,20 O estudo da presente divulgação mostra que os compostos da presente divulgação, como o Exemplo 12, mostraram estabilidade metabólica significativamente melhorada em microssomas hepáticos, uma meia-vida metabólica mais longa e uma taxa de depuração intrínseca mais baixa em comparação com o inibidor da técnica anterior Merestinibe. Portanto, espera-se que forneça um efeito mais duradouro no uso clínico e, correspondentemente, possa reduzir a dose do medicamento necessária para atingir a mesma força terapêutica.

Exemplo 14: Inibição dos compostos da presente divulgação no sistema enzimático do citocromo P450

[00374] De acordo com os métodos padrão convencionais na técnica para o estudo do sistema enzimático do citocromo P450, por exemplo aqueles descritos em Kerns, Edward H. e Di Li (2008). Drug-like Properties: Concepts, Structure Design and Methods: from ADME to Toxicity Optimization. San Diego: Academic Press; Lin, Tong et al., In Vitro Assessment of Cytochrome P450 Inhibition: Strategies for Increasing LC/MS- Based Assay Throughput Using a One-Point IC50 Method and Multiplexing High-Performance Liquid Chromatography; J.

Pharm. Sci. 2007, 96(9),2485.), o efeito inibidor dos compostos da presente divulgação no sistema enzimático do citocromo P450 foi investigado de forma análoga à seguinte.

[00375] Os compostos de teste foram avaliados através da detecção do metabolismo de microssomas de fígado humano para os substratos de diferentes subtipos de Cyp450. Os metabólitos, substratos e inibidores específicos de cada enzima Cyp450 são mostrados na Tabela 10. Os microssomas hepáticos (Sekisui XenoTech, LLC., Microssomas hepáticos humanos, cat.#H0610) foram derretidos lentamente em gelo e 0,482 mL da solução de microssoma hepático (20 mg/mL) foi adicionado a 30 mL de solução de fosfato de potássio 100 mM para preparar uma solução de trabalho de microssoma de fígado com uma concentração de 0,316 mg/mL. O composto de teste e inibidores específicos de diferentes subtipos de Cyp450 (como um controle) foram preparados em soluções de DMSO 10 mM e, em seguida, 20 μL da solução de composto DMSO 10 mM foram adicionados a 180 μL de acetonitrila para obter uma solução de composto 1 mM. 2 μL desse composto de teste ou solução inibidora de 1 mM foram adicionados a 150 μL de solução de trabalho de microssoma de fígado de 0,316 mg/mL para obter uma solução de trabalho de composto de 13,16 μM.

45,3 mg de NADPH (SIGMA, cat.#V900362) foram pesados e adicionados a 13,59 mL de água desionizada para preparar uma solução aquosa de NADPH 4 mM. 0,2 mL de solução estoque padrão interno de 2 mg/mL (dexametasona em acetonitrila) foram adicionados a 1000 mL de acetonitrila (SIGMA, cat.#271004) para preparar uma solução de interrupção da reação e armazenada a 4°C.

Tabela 12: Fontes de metabólitos P450 Subtipo P450 Metabólitos Fornecedor cat# 1A2 Paracetamol Sigma PHR1531 2C9 4'-hidroxidiclofenaco Sigma 32412 2C19 4'-hidroximefenitoína Sigma H146 2D6 Dextrorphan Sigma PHR1974 3A4 1'-hidroximidazolam Caymen 10385

3A4 6'-hidroxitestosterona Sigma H2898

Tabela 13: Fontes de inibidores específicos de P450

Subtipo P450 inibidores específicos Fornecedor cat#

1A2 7-etoxicumarina Sigma E1379

2C9 Sulfafenazol Sigma S0758

2C19 Omeprazol Sigma PHR1059

2D6 Prometazina Sigma PHR1467

3A4 Fluconazol Sigma PHR1160

3A4 cetoconazol Sigma PHR1385

Tabela 14: Fontes de substrato P450 e soluções de substrato (diluídas em solução de fosfato de potássio)

Subtipo Substrato Fornecedor cat# Metanol Sol.

Concentração Concentração

P450 de de sol. final armazenamento funcionante (mg/ml)

(em 4mM

NADPH)

1A2 Fenacetina Sigma V9007 10mM 40uM 10uM

30

2C9 Diclofenac Sigma PHR11 10mM 40uM 10uM o 44

2C19 S- Sigma UC175 40mM 160uM 40uM efenitoína

2D6 Dextrometo Sigma D0740 10mM 40uM 10uM rfano 000

3A4 Midazolam Tocris 2832 3mM 20uM 5uM

3A4 Testostero Tocris 2822 50mM 500uM 125uM na

Tabela 15: Solução de microssoma de fígado humano preparada de acordo com a tabela a seguir (diluída com solução de fosfato de potássio)

Subtipo Con. de proteína da solução funcionante Con.

Final de proteína

P450 (mg/ml) (mg/ml)

1A2 0,133 0,10

2C9 0,0668 0,05

2C19 0,266 0,20

2D6 0,133 010

3A4 0,0668 0,05

3A4 0,133 0,10

150 μL de 0,316 mg/mL de solução de trabalho de microssoma de fígado humano foram adicionados a cada poço de uma placa de 96 poços de profundidade e 2 μL de inibidor específico de 1 mM ou solução de composto de teste foram adicionados aos poços correspondentes e, em seguida,

adicionados a cada poço 50 μL de solução de trabalho pré-

aquecida de cada substrato (em solução NADPH 4mM). Após incubar por 5-40 minutos respectivamente (diferentes enzimas têm diferentes tempos de incubação), 200 μL de solução de parada de reação pré-resfriada foram adicionados.

Todas as amostras foram centrifugadas a 4000 rpm por 20 minutos. 150 μL do sobrenadante centrífugo foram então adicionados a uma nova placa de 96 poços de profundidade e adicionados a cada poço 150 μL de solução aquosa de ácido fórmico 0,1%, para análise por LC/MS/MS (SCI AP4000). Os valores de IC50 de ponto único foram calculados de acordo com a seguinte fórmula.

100% − % de inibição em C0 IC50 = 𝐶0 ∗ % de inibição em C0 (Assumindo declive de Hill = 1) C0 = concentração do composto de teste e solução de inibidor Tabela 16: Comparação da atividade inibidora do Exemplo 12 da presente divulgação e Merestinibe em várias isoenzimas CYP450 IC50 (μM) Enzima P450 1A2 2C9 2C19 2D6 3A4 Controle 6,3 0,7 8,9 3,2 7,3 Merestinibe >10 4,2 >10 >10 >10 Exemplo 12 >10 9,8 >10 >10 >10 (Controle 10 µM, composto de teste 10 µM)

[00376] Entre as isoenzimas CYP450 testadas, a proteína codificada pelo gene P450 2C9 é abundante em microssomas hepáticos humanos, representando cerca de 20% do P450 total. P450 2C9 pode metabolizar muitos medicamentos de diferentes propriedades e desempenha um papel na ativação de pré-carcinogênicos/protoxinas e agentes mutagênicos. Os resultados desta experiência mostram que a atividade inibidora dos compostos da presente divulgação, tais como o Exemplo 12, em 2C9 é significativamente menor do que a do inibidor anterior Merestinibe. Isso indica que o composto da presente divulgação tem um efeito menor no P450 2C9 do que o Merestinibe e, portanto, espera-se que tenha um impacto menor no metabolismo de outros medicamentos coadministrados, ou seja, espera-se que o potencial de interação medicamentosa seja significativamente reduzido.

Exemplo 15: Investigação da solubilidade dos compostos da presente divulgação

[00377] De acordo com os métodos padrão bem conhecidos e convencionais da técnica para determinação da solubilidade, por exemplo aqueles descritos em Kerns, Edward H. e Di Li (2008). Propriedades semelhantes a drogas: conceitos, projeto de estrutura e métodos: do ADME à otimização da toxicidade. San Diego: Academic Press), as propriedades de solubilidade dos compostos da presente divulgação foram investigadas como se segue, em sistemas de teste de FaSSGF (pH 1,6) (biorelevante, fluidos gástricos simulados em jejum), FeSSIF (pH 5,8) (biorelevante, Fluido Intestinal Simulado em Estado alimentado), FaSSIF (pH 6,5) (Biorelevante, Fluido Intestinal Simulado em Estado de Jejum) e tampão PBS (Hyclone, Cat No. SH30256,01B).

[00378] Pesado com precisão, ~1 mg de pó seco do composto de teste foi carregado em uma garrafa de vidro e adicionado um volume apropriado de cada uma das soluções do sistema de teste acima, para preparar uma solução de trabalho de 4 mg/mL. O frasco de amostra foi colocado em um agitador à temperatura ambiente (25°C) e agitado a 1000 rpm durante 1 hora, em seguida, permaneceu durante a noite para equilíbrio. Todas as amostras foram centrifugadas a 12000 rpm a 25°C durante 10 minutos. Soluções de diferentes concentrações para cada composto foram preparadas em DMSO como soluções padrão. 580 μL de solução aquosa de acetonitrila 20% (v/v) (contendo 40 ng/mL de tolbutamida como padrão interno) foram adicionados a cada poço de três microplacas e misturados uniformemente. 20 μL de 4 mg/mL de solução de trabalho ou solução padrão foram adicionados aos poços da primeira microplaca e misturados uniformemente, dos quais 20 μL foram retirados e adicionados ao poço correspondente da segunda microplaca, e misturados uniformemente, dos quais novamente 20 μL foi retirado de cada poço e adicionado aos poços correspondentes da terceira microplaca e misturado uniformemente. A espectrometria de massa foi adotada para analisar as amostras (LC-MS/MS-014, API4000), uma curva padrão foi desenvolvida com base nas concentrações das soluções padrão e a solubilidade do composto de teste foi calculada.

Tabela 17: Comparação da solubilidade do Exemplo 12 da presente divulgação e Merestinibe

Solubilidade (μg/mL) FaSSGF FeSSIF FaSSIF PBS (pH 1,6) (pH 5,8) (pH 6,5) (pH 7,4) Merestinibe 19,28 33,70 3,07 0,02 Exemplo 12 27,66 53,30 5,47 0,01

[00379] Os dados acima mostram que os compostos da presente divulgação, como o Exemplo 12, mostram uma solubilidade significativamente melhorada em comparação com Merestinibe, que poderia fornecer melhores propriedades farmacêuticas e espera-se que tenha uma biodisponibilidade melhorada.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto de fórmula I: R3

O

N

N N R1 5 H

R NH N O N R2 R4

I caracterizado pelo fato de que: R1 é alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, -ORa, alquila C1-6 ou amino; R5 é H, halogênio, -ORa ou alquila C1-6 opcionalmente substituído, e o substituinte é selecionado a partir de um ou mais halogênios, -ORa, alquila C1-6 ou amino; ou R1 e R5 juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam uma estrutura cíclica da seguinte fórmula:

N R6 X R9 (a) onde X é -CR7R8-, =CR7-, -CR7R8-CR7R8- ou -CR7=CR8-; R6, R7, R8 e R9 são independentemente selecionados a partir de H, halogênio, -ORa, alquila C1-6 opcionalmente substituído ou cicloalquila C3-6, em que o substituinte é selecionado a partir de um ou mais halogênios, -ORa, alquila C1-6 ou amino; ou R6 e R9 ou R7 e R8 ligados ao mesmo átomo de carbono podem formar =O ou =S juntos, ou formar um grupo cicloalquila C3-6 juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados; R2 é alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, alquila C1-6, alcoxi C1-6 ou amino; cicloalquila C3-6 ou grupo heterocíclico C3-6, opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, -ORa, alquila C1-6 ou amino; nitro, ciano, acila, halogênio, mercapto, alquiltio C1-6, alquilsulfonila C1-6, alquilsulfinila C1-6 ou carboxi; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H, halogênio, nitro, ciano, acila ou carboxi; Ra é selecionado a partir de H ou alquila C1-6; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo, ou isômeros do mesmo, ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

2. Composto, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é alquila C1-6, de um modo preferido metila, etila ou isopropila, ou R1 é cicloalquila C3-6, de um modo preferido ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclohexila.

3. Composto, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que R5 é H.

4. Composto, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 e R5 juntamente com os átomos aos quais estão ligados formam uma estrutura cíclica de fórmula (a), em que -X- é -CR7R8- ou -CR7R8-CR7R8-, e R6, R7, R8 e R9 são, cada um, independentemente H, halogênio, hidroxi, alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6.

5. Composto, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 e R5 juntamente com os átomos aos quais estão ligados formam uma estrutura cíclica de fórmula (a), em que -X- é =CR7- ou -CR7=CR8-, e R6, R7, R8 e R9 são, cada um, independentemente H, halogênio, alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6.

6. Composto, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 e R5 juntamente com os átomos aos quais estão ligados formam uma estrutura cíclica de fórmula (a), em que R6 e R9 ou R7 e R8 ligados no mesmo átomo de carbono juntos formam =O, =S ou cicloalquila C3-6.

7. Composto, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 6, caracterizado pelo fato de que R2 é alquila C1-6, de um modo preferido metila, etila, isopropila ou trifluorometila.

8. Composto, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 6, caracterizado pelo fato de que R2 é cicloalquila C3-6 ou heterociclila C3-6, de um modo preferido ciclopropila.

9. Composto, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 8, caracterizado pelo fato de que R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H ou halogênio, de um modo preferido F.

10. Composto de fórmula III, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo,

III caracterizado pelo fato de que R1 é alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, -ORa, -SRa, alquila C1-6 ou amino; R5 é H, halogênio, -ORa, -SRa ou alquila C1-6 opcionalmente substituído, e o substituinte é selecionado a partir de um ou mais halogênios, -ORa, -SRa, alquila C1-6 ou amino; ou R1 e R5 juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados formam uma estrutura cíclica da seguinte fórmula:

N R6 X R9 (a) onde X é -CR7R8-, =CR7-, -CR7R8-CR7R8- ou -CR7=CR8-; R6, R7, R8 e R9 são, cada um, independentemente H, halogênio, -ORa, -SRa, alquila C1-6 opcionalmente substituído ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído, em que o substituinte é selecionado a partir de um ou mais halogênios, -ORa, -SRa, alquila C1-6 ou amino; ou R6 e R9 ou R7 e R8 ligados ao mesmo átomo de carbono podem formar =O ou =S juntos, ou formar um grupo cicloalquila C3-6 juntamente com o átomo de carbono ao qual estão ligados; R2 é -NRaRb ou -ORb;

R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H, halogênio, nitro, ciano, acila ou carboxi; R10 é hidrogênio, halogênio, ciano, nitro, -NRaRb, -ORb, -SRb, C(O)Rb, CO2Rb; alquila C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, cicloalquila C3-6, heterocicloalquila C3-6, arila de 6 a 10 membros, heteroarila de 5 a 10 membros; alquila C1-6 ou alquenil C2-6 ou alquinila C2-6, opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou amino; cicloalquila C3-6 ou heterocicloalquila C3-6, opcionalmente substituído por um ou mais hidroxi, halogênio, alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou amino; arila de 6 a 10 membros ou heteroarila de 5 a 10 membros, opcionalmente substituído por um ou mais hidroxi, halogênio, alquila C1-6, alcoxi C1-6, alquiltio C1-6 ou amino; Ra e Rb são, cada um, independentemente H, alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, CN ou nitro, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, CN ou nitro, ou Ra e Rb juntamente com o N aos quais eles estão ligados formam um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, CN ou nitro; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

11. Composto, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de ser de fórmula III-a, R3

O

N

N N R1 H NH O N R2

N R4 III-a em que R1 é alquila C1-6; R2 é -NRaRb ou -ORb; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H ou halogênio; Ra e Rb são, cada um, independentemente selecionados a partir de H, alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, ou Ra e Rb juntamente com o N ao qual eles estão ligados formam um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído por um ou mais halogênios; e desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

12. Composto, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que R1 é alquila C1-6, de um modo preferido metila; R2 é -ORb, em que Rb é selecionado a partir de alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6, opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido F, R2 é de um modo preferido metoxi, etoxi, propoxi, ciclopropoxi, isopropoxi, trifluoroetoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio, de um modo preferido F.

13. Composto de fórmula III, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, de acordo com a reivindicação 10, carcterizado pelo fato de ser de fórmula III-b, R3

O

N

N N R6 X H NH O N R2 R9 N R4 III-b em que: R2 é -NRaRb ou -ORb; X é -CR7R8-, =CR7-, -CR7R8-CR7R8- ou -CR7=CR8-; R6 e R9 são, cada um, independentemente H, halogênio, -OH, alquila C1-6 ou cicloalquila C3-6; R7 e R8 são, cada um, independentemente H, halogênio, -OH, alquila C1-6 opcionalmente substituído com um ou mais halogênios ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído com um ou mais halogênios, ou R7 e R8 ligados ao mesmo átomo de carbono juntos formam um cicloalquila C3-6; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de H ou halogênio; Ra e Rb são, cada um, independentemente selecionados a partir de H, alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, ou Ra e Rb juntamente com N ao qual eles estão ligados formam um anel de 3 a 6 membros opcionalmente substituído com um ou mais halogênios; desde que R1 e R2 não sejam metila ao mesmo tempo.

14. Composto, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que X é -CR7R8- ou -CR7R8-CR7R8-; R2 é -ORb, em que Rb é selecionado a partir de alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido F, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido F, R2 é de um modo preferido metoxi, etoxi, propoxi, ciclopropoxi, isopropoxi, trifluoroetoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio, de um modo preferido F.

15. Composto, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que X é =CR7- ou -CR7=CR8-; R2 é -ORb, em que Rb é selecionado a partir de alquila C1-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido F, ou cicloalquila C3-6 opcionalmente substituído por um ou mais halogênios, de um modo preferido F, R2 é de um modo preferido metoxi, etoxi, propoxi, ciclopropoxi, isopropoxi, trifluoroetoxi, trifluorometoxi, difluorometoxi; R3 e R4 são, cada um, independentemente selecionados a partir de halogênio, de um modo preferido F.

16. Composto, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, caracterizado pelo fato de ser selecionado a partir de:

17. Composto, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o sal farmaceuticamente aceitável é p- toluenossulfonato, benzenossulfonato ou metanossulfonato.

18. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de compreender o composto conforme definido qualquer uma das reivindicações 1 a 17, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo e um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável e, opcionalmente, outros agentes terapeuticamente ativos selecionados a partir de: outros inibidores de Trk, inibidores de quinase, drogas de anticorpos, imunoterapêuticos, agentes anticâncer, drogas anti- inflamatórias, analgésicos, drogas cardiovasculares, drogas hipolipemiantes, agentes antibacterianos, agentes antivirais, agentes antidiabéticos, agentes antiproliferativos, agentes antiangiogênicos ou agentes antialérgicos.

19. Uso do composto conforme definido qualquer uma das reivindicações 1 a 17, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, ou da composição farmacêutica conforme definida na reivindicação 18, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de medicamentos para o tratamento ou prevenção de doenças ou distúrbios em que a atividade de Trk desempenha um papel ou está envolvida ou doenças ou distúrbios em que as quinases mostradas na Tabela 10 do relatório descritivo desempenham um papel ou estão envolvidas.

20. Uso, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que as doenças ou distúrbios são tratados ou prevenidos pela inibição de Trk ou das quinases mostradas na Tabela 10 do relatório descritivo, e as referidas doenças ou distúrbios são tumores ou cânceres, selecionados a partir de sarcoma (especialmente carcinoma fibrossarcoma infantil), câncer de pele, neuroblastoma, câncer de ovário, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de pâncreas, câncer de glândula salivar, mieloma múltiplo, astrocitoma e meduloblastoma, neuroglioma, melanoma, câncer de tireoide, adenocarcinoma de pulmão, tumores neuroendócrinos de grandes células, câncer de cabeça e pescoço e câncer colorretal, colangiocarcinoma, glioblastoma, glioma, câncer secretor da mama, carcinoma secretor mamário, leucemia mieloide aguda, nefroma mesoderma congênito, fibrossarcoma congênito, leucemia linfoblástica aguda, adenocarcinoma do cólon, tumor do estroma gastrointestinal; de um modo preferido adenocarcinoma de pulmão, colangiocarcinoma intra-hepático, câncer colorretal, carcinoma papilar de tireoide, neoplasia de spitzoid, glioblastoma, sarcoma, astrocitoma, câncer de cabeça e pescoço, glioma de baixo grau, câncer de mama secretório, leucemia mieloide aguda, nefroesclerose,

leucemia mesodérmica congênita, adenocarcinoma colorretal, carcinoma da tireoide, melanoma cutâneo e sarcoma glioma pediátrico, câncer de pele, neuroblastoma, câncer de ovário, câncer de mama, câncer de próstata, câncer pancreático, mieloma múltiplo, astrocitoma e meduloblastoma, neuroglioma, melanoma, câncer de tireoide, adenocarcinoma de pulmão, adenocarcinoma neuroendócrino de grandes células, câncer de cabeça e pescoço e câncer colorretal.

21. Método para preparar o composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 17, isômeros do mesmo ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, caracterizado pelo fato de compreender: (a) reagir um composto de fórmula A

HOOC O N R2 R4

B

A com um composto de fórmula B na presença de um reagente de condensação para formar uma amida, R3

O

N N NH2 R1 R5 N N Boc

B para obter um composto de fórmula C R3

O

N

N N R1 H R5 N N Boc O N R2 R4

C ou (a') reagir um composto de fórmula A

HOOC O N R2 R4

B

A com um composto de fórmula D na presença de um reagente de condensação para formar uma amida, R3

O

N N Br NH2 R1 R5

D para obter um composto de fórmula E, R3

O

N N Br N R1 H R5 O N R2 R4

E o composto de fórmula E é submetido a uma reação de acoplamento de Suzuki para obter o composto de fórmula C; e

(b) desproteger o composto de fórmula C para obter o composto de fórmula I R3

O

N

N N R1 5 H

R NH N O N R2 R4

I em que R1 a R5 são como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 17.