TW201716085A - 癌症之組合療法 - Google Patents

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安東尼Ｓ 費希利
維多利亞Ｌ 皮克
理查Ａ 渥倫
秀慈 殷
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Abstract

本發明係關於抗人類VEGFR2抗體(較佳係雷莫蘆單抗(ramucirumab))與N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之組合，及使用該組合治療某些病症(例如胃癌)之方法。

Description

癌症之組合療法
本發明係關於抗人類VEGFR2抗體(較佳雷莫蘆單抗(ramucirumab))與N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之組合，及使用該組合治療某些病症(例如胃癌)之方法。
本發明屬胃癌之治療之領域。
MKN45胃癌細胞具有高程度之MET之基因體擴增，此導致MET路徑之組成型活化。
雷莫蘆單抗(Cyramza®)係針對血管內皮生長因子受體2(VEGFR2)之全人類單株抗體。雷莫蘆單抗及製造及使用此化合物(包括用於治療腫瘤性疾病(例如實體及非實體腫瘤))之方法揭示於WO2003/075840中。雷莫蘆單抗經美國F.D.A.核准作為單一藥劑或與太平洋紫杉醇(paclitaxel)組合用於治療患有晚期或轉移性胃或胃食道(GE)結合部腺癌且在先前含氟嘧啶或含鉑化學療法期間或之後疾病惡化之患者；與多西他賽(docetaxel)組合用於治療患有轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)且在基於鉑之化學療法期間或之後疾病惡化之患者；及與FOLFIRI(伊立替康(irinotecan)、亞葉酸及5-氟尿嘧啶)化學療法組合用於治療患有轉移性結腸直腸癌(mCRC)且在利用貝伐單抗(bevacizumab)、奧沙利鉑(oxaliplatin)及氟嘧啶之先前療法期間或之後疾病惡化之患者。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺具有抗MET活性。N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺及製造及使用此化合物(包括用於治療癌症且更特定而言用於治療胃癌)之方法揭示於WO2010/011538中。此外，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺在美國目前正於晚期癌症之I期臨床試驗中進行研究(A Phase 1 Study of LY2801653 in Patients With Advanced Cancer,NCT01285037)。本研究之一個部分之目標係確定LY2801653在與雷莫蘆單抗一起服用時可安全給予患有胃癌之參與者的推薦2期劑量。(https：//clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT01285037？term=LY2801653&rank=2)。
胃癌仍無法治癒且需要可證明對治療胃癌有效之更多不同療法。
儘管業內已涵蓋VEGFR2抑制劑與MET抑制劑之組合，但令人驚訝地，本發明揭示藉由使用抗VEGFR2 Ab及N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之組合作為特定治療方案之一部分治療胃癌之方法，該治療方案提供來自該等治療劑之組合活性的與任一藥劑單獨提供之治療效應相比增強及/或意外之有益治療效應。
根據本發明之第一態樣，呈現治療患者之胃癌之方法，其包含向需要該治療之胃癌患者投與有效量之抗體及下式化合物或其醫藥上可接受之鹽，該抗體包含SEQ ID NO：1之輕鏈可變區(LCVR)胺基酸序列及SEQ ID NO：2之重鏈可變區(HCVR)胺基酸序列，其中該抗體與VEGFR2結合
本發明之另一態樣係包含抗體及下式化合物或其醫藥上可接受之鹽之套組，該抗體包含SEQ ID NO：1之輕鏈可變區(LCVR)胺基酸序列及SEQ ID NO：2之重鏈可變區(HCVR)胺基酸序列，其中該抗體與VEGFR2結合
該套組用於治療胃癌。
本發明之另一態樣係套組，其包含雷莫蘆單抗以及一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑，及N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽以及一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑，該套組用於治療胃癌。
在本發明之較佳態樣中，化合物係N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺。
在本發明之另一較佳態樣中，抗體包含SEQ ID NO：3之輕鏈胺基 酸序列及SEQ ID NO：4之重鏈胺基酸序列且抗體與VEGFR2結合。
在本發明之另一較佳態樣中，抗體係雷莫蘆單抗。
在本發明之另一較佳態樣中，化合物或其鹽係以介於約80mg/天至約120mg/天之間之劑量投與。
在本發明之另一較佳態樣中，雷莫蘆單抗係以介於約6mg/kg至約12mg/kg之間之劑量每3週投與1次。
在本發明之另一較佳態樣中，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽係錠劑。
在本發明之另一較佳態樣中，錠劑係藉由噴霧乾燥分散物調配。
本發明之另一態樣係組合，其包含抗VEGFR2抗體(較佳雷莫蘆單抗)及N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽，其同時、分開或依序用於治療胃癌。在本發明之較佳態樣中，化合物或其鹽係以介於約80mg/天至約120mg/天之間之劑量投與。在本發明之另一較佳態樣中，雷莫蘆單抗係以介於約6mg/kg至約12mg/kg之間之劑量每3週投與1次。
本發明之另一態樣係抗VEGFR2抗體，其用於與N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽一起以同時、分開或依序治療之方式治療胃癌。
本發明之另一態樣係N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽，其用於與抗VEGFR2抗體一起以同時、分開或依序治療之方式治療胃癌。
在本發明之另一較佳態樣中，抗VEGFR2抗體係雷莫蘆單抗。
本發明之另一態樣係雷莫蘆單抗，其用於與N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽一起以同時、分開或依序治療之方式治療胃癌。
本發明之另一態樣係N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽，其用於與雷莫蘆單抗一起以同時、分開或依序治療之方式治療胃癌。
本發明之另一態樣係抗VEGFR2抗體之用途，其用於製造用來治療胃癌之藥劑，其中抗VEGFR2抗體係與N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽同時、分開或依序投與。
本發明之另一態樣係N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用來治療胃癌之藥劑，其中N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽係與抗VEGFR2抗體同時、分開或依序投與。
在本發明之另一較佳態樣中，抗VEGFR2抗體係雷莫蘆單抗。
本發明之另一態樣係抗VEGFR2抗體，其與N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽同時、分開或依序組合使用來治療胃癌。
本發明之另一態樣係N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲 醯胺或其醫藥上可接受之鹽，其與抗VEGFR2抗體同時、分開或依序組合使用來治療胃癌。
如本文中所用，化合物N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺揭示於WO2010/011538中且係指具有以下結構之化合物：
此化合物之CAS登記號係1206799-15-6。化合物名稱包括：N-[3-氟-4-[[1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基]氧基]苯基]-1-(4-氟苯基)-1,2-二氫-6-甲基-2-側氧基-3-吡啶甲醯胺；N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺；N-(3-氟-4-{[1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基]氧基}苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺；及LY2801653。
LY2801653之代謝物包括：
1-(4-氟苯基)-N-[3-氟-4-[[6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基]氧基]苯基]-6-甲基-2-側氧基-吡啶-3-甲醯胺，及，
N-[3-氟-4-[1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)吲唑-5-基]氧基-苯基]-1-(4-氟苯基)-6-(羥基甲基)-2-側氧基-吡啶-3-甲醯胺。
如本文中所用，術語「VEGFR2」係指業內已知之血管內皮生長因子受體2。VEGFR2亦稱為KDR。
如本文中所用，術語「抗VEGFR2 Ab」係指包含以下之抗體：輕鏈可變區(LCVR)，其胺基酸序列於SEQ ID NO：1中給出；及重鏈可變區(HCVR)，其胺基酸序列於SEQ ID NO：2中給出，其中抗VEGFR2 Ab以足夠親和力及特異性與VEGFR2結合。在一些實施例中，抗VEGFR2 Ab係包含以下之抗體：輕鏈，其胺基酸序列於SEQ ID NO：3中給出；及重鏈，其胺基酸序列於SEQ ID NO：4中給出，且該抗體以足夠親和力及特異性與VEGFR2結合。在本發明之其他實施例中，抗VEGFR2 Ab係雷莫蘆單抗。所選抗體將具有對VEGFR2足夠強之結合親和力。舉例而言，抗體通常將以介於約100nM-約1pM之 間之Kd值結合VEGFR2。抗體親和力可藉由(例如)以下分析來測定：基於表面電漿共振之分析(例如BIAcore分析，其闡述於PCT申請公開案第WO2005/012359號中)；酶聯免疫吸附分析(ELISA)；及競爭分析(例如經放射性標記之抗原結合分析(RIA))。在一個實施例中，Kd係藉由利用抗VEGFR2 Ab、較佳雷莫蘆單抗實施之RIA來量測。
如本文中所用，術語「雷莫蘆單抗」(亦稱為Cyramza®、IMC-1121b，CAS登記號947687-13-0)係指抗VEGFR2 Ab，其包含：兩條輕鏈，其各自胺基酸序列於SEQ ID NO：3中給出；及兩條重鏈，其各自胺基酸序列於SEQ ID NO：4中給出。
如本文中所用，術語「DC101」係指針對小鼠VEGFR2之大鼠單株抗體，其可在實驗中在小鼠中用作抗VEGFR2 Ab、較佳雷莫蘆單抗之替代物。例如，參見Witte L.等人，Cancer Metastasis Rev.,17,155-161,1998。
除非另有指示，否則術語「抗體」係指包含藉由二硫鍵互連之兩條重鏈(HC)及兩條輕鏈(LC)之免疫球蛋白分子。每一條鏈之胺基末端部分包括約100個至約110個胺基酸之可變區，其經由其中所含之互補決定區(CDR)主要負責抗原識別。每一鏈之羧基末端部分界定主要負責效應物功能之恆定區。
如本文中所用，術語「輕鏈可變區」或「LCVR」係指抗體分子輕鏈之包括CDR及FR之胺基酸序列的部分。
如本文中所用，術語「重鏈可變區」、「HCVR」係指抗體分子重鏈之包括CDR及FR之胺基酸序列的部分。
如本文中所用，術語「套組」係指包含至少兩個單獨容器之包裝，其中第一容器含有N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽，且第二容器含有抗VEGFR2 Ab。「套組」 亦可包括將該等第一及第二容器中之內容物之全部或一部分投與癌症患者、較佳胃癌患者之說明書。
如本文中所用，術語「治療(treating、to treat或treatment)」係指遏止、減緩、停止、減輕、縮小、維持穩定疾病或逆轉現有症狀、病症、病狀或疾病之惡化或嚴重程度。
如本文中所用，術語「患者」係指哺乳動物、較佳人類。
如本文中所用，術語「癌症」及「癌性」係指或闡述患者之通常特徵在於細胞增殖未經調控之生理性病狀。此定義中包括良性及惡性癌症。「早期癌症」或「早期腫瘤」意指非晚期或轉移性癌症或分類為0期、I期或II期癌症。癌症之實例包括(但不限於)胃癌。
本發明之組合治療之主要優點在於能夠在患者中產生顯著抗癌效應，而不產生顯著毒性或有害效應，以使得患者總體上受益於組合治療方法。本發明之組合治療之療效可藉由常用於評估癌症治療中之各種終點來量測，該等終點包括(但不限於)腫瘤消退、腫瘤重量或大小萎縮、惡化時間、總體存活、無惡化存活、總體反應率、反應持續時間及生活品質。本發明中所使用之治療劑可抑制轉移性擴散，但不使原發性腫瘤萎縮、可誘導原發性腫瘤萎縮、或可僅發揮腫瘤抑制效應。由於本發明係關於獨特抗腫瘤劑之組合之用途，因此可視情況採用新穎方法來測定本發明之任何具體組合療法之療效，該等方法包括(例如)量測血管生成之血漿或尿液標記物及經由放射性成像量測反應。
如本文中所用，術語「有效量」係指在處於診斷或治療下之患者中提供有效反應之N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽之量或劑量及抗VEGFR2 Ab之量或劑量。
如本文中所用，術語患者對利用藥劑之組合治療之「有效反 應」或患者對利用藥劑之組合治療的「反應性」係指在投與N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽及抗VEGFR2 Ab後賦予患者之臨床或治療益處。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽之每天劑量通常在約80mg/天至120mg/天範圍內。
雷莫蘆單抗之每三週週期之劑量通常在約6mg/kg至12mg/kg範圍內、較佳約8mg/kg至約10mg/kg且最佳約10mg/kg。
當與抗VEGFR2 Ab組合給予時，例如，在21天週期內，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽係每天在約80mg/天至約120mg/天範圍內投與，且抗VEGFR2 Ab、較佳雷莫蘆單抗係在第1天在約6mg/kg至12mg/kg範圍內投與。
游離鹼N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺較佳。然而，熟習此項技術之讀者將理解，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺可與多種無機及有機酸中之任一者反應形成醫藥上可接受之酸加成鹽。該等醫藥上可接受之酸加成鹽及用於製備其之常見方法為業內所熟知。例如，參見P.Stahl等人，Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection and Use(VCHA/Wiley-VCH,2002)；L.D.Bighley等人，Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,453-499(1995)；S.M.Berge等人，Journal of Pharmaceutical Sciences,66,1,(1977)。鹽酸鹽及甲磺酸鹽係較佳鹽。甲磺酸鹽係尤佳鹽。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽可藉由業內已知之各種程序來製備(例如，參見WO2010/011538)。雷莫蘆單抗可例如根據WO2003/075840中之揭示內容製得。
投與途徑可以任何方式改變，其受藥物之物理性質及患者及護理人員之便利性限制。較佳地，抗VEGFR2 Ab、較佳雷莫蘆單抗經調配用於非經腸投與，例如靜脈內或皮下投與。較佳地，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽經調配用於經口或非經腸投與，包括靜脈內或皮下投與。
舉例而言，可將N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺調配成錠劑。該錠劑可自20% N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺：乙酸琥珀酸羥基丙基甲基纖維素(HPMCAS)中級(M)(HPMCAS-M)噴霧乾燥分散物(SDD)之組合物製得。20% N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺：HPMCAS-M SDD係自含有以下各項之噴霧溶液組合物(wt%)製得：N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺(1%)、HPMCAS-M(4%)及丙酮(85.5%)及純化水(9.5%)。添加聚合物之前確保N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺完全溶解於丙酮/水溶液中。在起始噴霧乾燥來製造SDD組合物之前，目視確定聚合物溶解。所得SDD組合物係含有N-(3-氟-4-(1- 甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺(200mg/g)及HPMCAS-M(800mg/g)之20% N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺：HPMCAS-M SDD(mg/g)。若需要，可調整藥物物質之量以慮及藥物物質之分析。若需要維持質量平衡，可根據藥物物質分析中之微小變化調整HPMCAS-M之重量。在處理期間將丙酮及純化水去除至殘留量。調配物組合物可含有(例如)SDD N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺及其他賦形劑，例如稀釋劑(例如微晶纖維素及甘露醇)、崩解劑(例如交聯羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑(例如月桂基硫酸鈉)、助流劑(例如syloid二氧化矽)及/或潤滑劑(例如硬脂基富馬酸鈉)。製造錠劑涉及噴霧乾燥以產生N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之SDD，隨後碾壓並壓縮成錠劑。然後用基於HPMC之顏色混合物將錠劑膜包衣。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺SDD膜包衣錠劑之單位配方之實例錠劑(40mg劑量強度)闡述於圖表1中。
圖表1 N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺錠劑(40mg)之實例性單位配方
1.若需要，則將調整SDD之量以慮及分散劑之分析。
2.除非另有說明，否則對於每一賦形劑容許±10%之合理變化。
3.為適應SDD效力變化並維持總錠劑重量，若需要，可調整微晶纖維素之重量。
4.在處理期間將純化水去除至殘留量。
如本文中所用，片語「與......組合」係指投與N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側 氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽及抗VEGFR2 Ab。
以下實例說明抗VEGFR2 Ab(包括(但不限於)雷莫蘆單抗，經由在小鼠中用作雷莫蘆單抗之替代物之大鼠抗小鼠單株抗體DC101)與N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之組合之出乎意料之改良。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺與DC101之組合在胃癌之小鼠異種移植模型MKN45中之抗腫瘤效應
將N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺調配為於10% PEG 400/90%(於H2O中之20% Captisol®)中之溶液，且在每週投用時新鮮製備。在每週投用時將DC101稀釋於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中。
獲得MKN45細胞並在37℃及5% CO2下使其維持在補充有10% FBS之達爾伯克氏改良伊格爾培養基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium(DMEM))中。將PBS中之約5×106個細胞與相等體積之Matrigel(BD Bioscience,Franklin Lakes,NJ)混合並皮下植入動物之側腹中。在植入後第18天將動物隨機分成9隻一組。經由經口管飼投與12mg/kg之N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺且經由腹膜內注射投與20mg/kg之DC101。對於N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺以每天一次時間表且對於DC101以每週兩次時間表連續投用26天。在本研究之過程中總共投與7個劑量之DC101。每兩週量 測腫瘤體積及體重。在研究結束時，使用CO2及頸椎脫位法殺死動物。
將腫瘤體積轉變為對數標度以均衡時間及治療組之間之方差。使用SAS®軟體(9.3版)中之MIXED程序利用對時間及治療之方差的二因子重複量測分析來分析對數體積數據。用於重複量測之相關模型係空間冪次(spatial power)。在每一時間點比較治療組與對照組。對於每一治療組亦單獨使用MIXED程序以計算每一時間點處之調整平均值及標準誤差。兩種分析均解釋每一動物內之自相關及在研究結束之前動物移除或丟失時所發生之數據丟失。針對每一治療組繪製調整平均值及標準誤差對時間之曲線。亦針對兩種治療之組合之超過加和性之效應增加之統計學證據(「s.e.」)來分析該等數據。此分析係使用SAS®軟體(9.3版)藉由測試使用媒劑、每一單一藥劑及每一單一藥劑組之組合之2×2相互作用效應對於對數體積之顯著性來進行。此分析用於評價效應之協同性。
體重量測提供各種治療之耐受性之指示。伴隨治療未觀察到統計學上顯著之體重損失。媒劑對照組中之一個動物因潰瘍腫瘤而施以安樂死。在此研究中未報告與治療有關之死亡。
作為單一療法，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺展現統計學上顯著之抗腫瘤活性，其中在量測之最後一天(第42天)T/C(治療組/對照組)值為4.4%(p<0.001)。DC101展現單一藥劑抗腫瘤活性，其中T/C值為15.0%(p<0.001)。任一單獨藥劑之低T/C值指示利用任一單獨藥劑之治療與媒劑對照相比有力地減緩腫瘤生長。在此胃腫瘤模型中，經該等單獨藥劑中之任一者治療之動物在癌症治療中達成「穩定疾病」之臨床等效反應。Therasse等人，New guidelines to evaluate the response to treatment in solid tumors.J Natl Cancer Inst. 2000；92：205-216。Eisenhauer等人，New response evaluation criteria in solid tumours：revised RECIST guideline(1.1版).Eur J Cancer.2009；45：228-247。
與媒劑對照相比，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺與DC101之組合使得腫瘤消退(28.5%)(p<0.001)，且此活性大於作為單一療法投與之任一分子。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺與DC101之組合係加和的(表1)，且與每一單一療法相比在統計學上不同(表2)。因此，發現該兩種藥劑之組合在諸如胃癌等實體腫瘤類型中之治療係加和的且較每一單一單獨藥劑具有進一步抗腫瘤效應。更重要的是，與對照相比，自N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺與DC101之組合治療所產生之28.5%之腫瘤消退(腫瘤萎縮)效應出乎意料且具治療益處。在胃實體腫瘤模型中利用該兩種藥劑之組合之活體內治療造成腫瘤萎縮/消退且具治療益處。
雷莫蘆單抗及N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之組合治療減少內皮細胞發芽
藉由基於細胞之活體外分析量測活體外內皮細胞發芽之減少。使用該分析來量測N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺及雷莫蘆單抗對內皮細胞發芽之效應。
在37℃下於5% CO2中在培養瓶(Corning編號356486)上補充有SingleQuots套組(Lonza編號CC-4147)及進一步補充FBS至最終10% FBS之EBM2培養基(Lonza編號CC-3156)中培養HUVEC(Lonza編號C2519A)，且使用第2-5代。自培養瓶收穫HUVEC，用HycloneTM達爾 伯克氏PBS(DPBS)(Fisher Scientific，編號SH3026402)、之後用TypeLE Express(Gibco編號12605-010)沖洗，並懸浮於5mL溫的培養基中。使用Vi-Cell細胞計數器(Beckman)來測定活細胞計數。在37℃下於5% CO2中在Corning培養瓶上補充有SingleQuots套組(Lonza編號CC-4126)及進一步補充FBS(HycloneTM編號SH3061102)至最終10% FBS之FBM培養基(Lonza編號CC-3131)中培養CAF(與肺癌相關之成纖維細胞)(Astrand,60093A，為Lilly專門製備)，且使用第3-7代。自培養瓶收穫CAF，用HycloneTM DPBS(Fisher Scientific，編號SH3026402)、之後用TypeLE Express(Gibco編號12605-010)沖洗，並用5mL溫的培養基再度懸浮。使用Vi-Cell細胞計數器(Beckman)來測定活細胞計數。
將0.5g乾燥Cytodex®珠粒(Sigma-Aldrich®，目錄號C3275)在室溫下於50mL HyCloneTM DPBS pH 7.4(Fisher Scientific，目錄號SH3026402)中水化至少3小時。每0.5小時顛倒含有珠粒之管(Falcon，目錄號352098)以輕輕混合。棄掉上清液。用新鮮PBS將珠粒洗滌3次並再度懸浮於50mL PBS中，以產生約20,000珠粒/mL。將珠粒懸浮液於115℃下高壓滅菌15分鐘並儲存於4℃下直至使用。
輕輕混合珠粒並將0.5mL(約10,000個珠粒)懸浮液轉移至50mL管(Falcon，目錄號352098)中。在10mL溫EBM2培養基(Lonza目錄號CC-3156)加SingleQuotsTM(Lonza目錄號CC-4147)中將珠粒洗滌2次。在最後一次洗滌後小心地去除培養基。經洗滌之珠粒與8百萬HUVEC細胞混合，總體積為20mL。將含有珠粒及HUVEC細胞之管於培育箱中於37℃及5% CO2下放置4小時，且每20分鐘藉由顛倒管若干次來輕輕混合。在培育後，將珠粒與HUVEC細胞一起轉移至T25燒瓶(NuncTM目錄號156499)中並在37℃及5% CO2下培育過夜。
將纖維蛋白原(Sigma目錄號F4883)以2mg/mL溶解於HyCloneTM DPBS中。將抑肽酶(Sigma目錄號A3428)以0.15單位/mL之濃度添加至纖維蛋白原溶液中並輕輕混合。藉由經0.22μ過濾器(Millipore編號SCGP00525)過濾將溶液除菌並立即使用。
將T25燒瓶中之經HUVEC塗覆之珠粒轉移至50mL管並使用10mL溫EBM2培養基加SingleQuots(Lonza編號CC-4147)洗滌2次。輕輕去除培養基。將經HUVEC塗覆之珠粒(約10,000個)再度懸浮於50mL含有2百萬個CAF之無菌纖維蛋白原溶液中。用無菌水將凝血酶(Sigma編號T4393)重構至50單位/ml。將0.6單位(12μl)之凝血酶溶液添加至24孔板(In Vitro Scientific目錄號P24-1.5H-N)之每一孔中，之後添加500μl/孔纖維蛋白原/珠粒/CAF溶液。對於纖維蛋白凝膠形成，使溶液在室溫下15分鐘且然後在37℃及5% CO2下1小時。將0.5mL溫EBM2培養基加SingleQuots(Lonza編號CC-4147)添加至每一孔中之纖維蛋白凝膠之頂部且每3至4天進行更換直至實驗結束。
對於新生模式發芽分析而言，向每一孔添加以指示濃度稀釋之測試化合物。在37℃及5% CO2下培育板且每3至4天更換含有測試化合物之培養基直至完成分析。
對於已確立模式發芽分析而言，方法與上文針對新生模式發芽分析所闡述相同，只是在添加測試化合物之前將纖維蛋白凝膠中之經HUVEC塗覆之珠粒培養3至7天。測試化合物治療持續7天。每3至4天更換含有測試化合物之培養基直至完成分析。
在分析結束之後，在4℃下將板於0.5mL 4% PFA(Electron Microscopy Sciences編號15710)中固定過夜，於PBS中洗滌1次，在4℃下用0.5mL 0.5% TritonTM X-100(Sigma-Aldrich目錄號T9284)/PBS滲透10分鐘，之後在室溫下於100mM甘胺酸(Bio-Rad目錄號161-0718)/PBS中洗滌3次。用1ml/孔含有PBS中之0.1% BSA(gibco目錄號15260-037)、0.2% TritonTM X-100、0.05% Tween-20(Thermo Scientific目錄號28320)之IF緩衝液加10%山羊血清(Invitrogen編號16210)封阻板。於IF緩衝液與10%山羊血清中用以1：100重構於500mL PBS中之綿羊抗人類CD31抗體(R&D Systems編號BAF806)對內皮細胞進行染色。用以1：200於IF緩衝液加10%山羊血清中之抗α平滑肌肌動蛋白抗體Cy3抗體(Sigma，目錄號C6198)對SMA陽性細胞進行染色。將染色溶液以500μL/孔添加至每一孔中。將板於4℃下保持過夜。在第二天去除染色溶液，並使用IF緩衝液將板洗滌3次，每次0.5mL。添加以1：200稀釋於IF緩衝液加10%山羊血清中之二級抗體Alexa Fluor® 488驢抗綿羊IgG(H+L)(Molecular Probes編號A-11015)，在室溫下培育1小時。使用IF緩衝液將板洗滌3次以去除任何未結合之二級抗體。將5mg/mL之DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚，二鹽酸鹽)(Invitrogen編號D1306)以1：10000稀釋於PBS中並向每孔添加0.5mL，在室溫下培育1小時。用PBS將板洗滌2次，並藉由在CellInsight(Thermo Scientific)儀器上使用2×物鏡掃描板使CD31陽性內皮芽之總長度及SMA陽性細胞成像。影像數據直接來自CellInsight(CD31，綠色；SMA，紅色)且在JMP(SAS)中分析數字數據。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺治療減少VEGF-A依賴性及非VEGF-A依賴性內皮發芽且具有統計學顯著性。
使用如在Mabry,R等人，MAbs.2010年1月-2月；2(1)：20-34及Nakatsu,MN,Meth Enzymol.2008；443：65-82中所述之經修改之活體外共培養血管生成分析使用HUVEC(人類臍靜脈內皮細胞)及CAF細胞(經培養之與肺癌相關之成纖維細胞)來評估N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺對內皮細胞發芽之效應。將CAF及塗覆有HUVEC之cytodex珠粒包埋於纖維蛋白凝膠中以形成覆蓋有平滑肌肌 動蛋白(SMA)陽性周細胞之內皮芽。對於1週之時段，內皮細胞經歷一系列表型變化，產生覆蓋有SMA陽性細胞之內皮芽之穩定互連網絡。在培養基中內皮發芽依賴CAF衍生之VEGF-A至多7-10天，在此之後芽伸長及穩定性較少依賴VEGF-A。
在分析開始時(新生模式，第0-7天)利用雷莫蘆單抗(10μg/ml)抑制VEGF-A信號傳導可顯著抑制內皮發芽(降低至4分之1)。為模擬對血管生成之治療性抑制，在第7天(已確立模式)在內皮芽及周細胞覆蓋形成後開始用雷莫蘆單抗治療。利用雷莫蘆單抗(10μg/ml)治療預先形成之芽不太有效，且僅使內皮發芽降低至1.4分之1。類似於VEGFR2抑制，在分析開始時(新生模式，第0-7天)添加N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺以劑量依賴性方式有力地抑制內皮發芽。在最高測試濃度300nM下，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺使內皮發芽降低至7.5分之1。利用N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺治療對VEGFR2抑制顯著較不敏感之預先形成之芽(已確立模式)使內皮發芽顯著降低(2.7分之1)。該等結果展現，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺有力地抑制VEGF-A依賴性及非VEGF-A依賴性內皮發芽。MET特異性抑制劑PF04217903(LSN2900296)當在分析(新生模式)開始時(其中發芽依賴VEGF-A，第0-7天)添加及當添加至預先形成之芽(已確立模型，芽伸長及穩定性較不依賴VEGF-A，第7-14天)時，在抑制內皮發芽方面活性較低。PF04217903在抑制內皮發芽方面無活性。該等數據表明，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲 基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之抗血管生成活性並不依賴MET。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺抑制發芽直至第14天，而雷莫蘆單抗抑制發芽僅至第7天。對照(PF4217904)無效應。
雷莫蘆單抗係特異性VEGFR2抑制劑且正如預期，當發芽依賴VEGF-A時，其在此分析中前7天展現內皮發芽減少。在此分析中，MET特異性抑制劑PF4217903在此分析之整個14天中顯示極小或無效應，此指示MET在此血管模型中不起作用且MET係N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之腫瘤激酶(oncokinase)靶標之一。來自此分析之數據表明，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之一或多個其他靶標(例如Tie2(亦稱TEK)、AXL、PDGFRA及MERTK)在此血管生成分析之整個14天中抑制內皮發芽。因此，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之抗血管生成活性與雷莫蘆單抗不同且在癌症治療中支持該兩種藥劑之組合以提供其他治療益處。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺抑制新生及已確立模式中之索形成
根據Falcon等人，J Hematol Oncol.2013；6：31，在微量滴定板上實施VEGF-A誘導之索形成分析。該分析係以新生模式(新生血管生成脂肪衍生之幹細胞(「ADSC」)及人類內皮集落形成細胞(「ECFC」)共培養索形成分析)及已確立模式(已確立之ADSC及ECFC共培養索形成分析)來實施。
對於新生模式分析而言，用AngioKitTM優化之培養基(Cell Systems Biology)共培養ADSC及ECFC。將ADSC以100μL中之40-50K個細胞/孔平鋪於96孔板中並在37℃、5% CO2下培育過夜。第二天，去除培養基並將50-100μL培養基中之4-5K個ECFC/孔平鋪於ADSC單層之頂部並在37℃、5% CO2下培育3-6小時，之後添加20ng/mL VEGF-A及測試化合物。使共培養物生長7天，在此時將細胞固定、染色並在掃描裝置中成像。量化索區域。
對於已確立模式分析而言，如上文針對新生模式分析所述平鋪ADSC及ECFC共培養物。在容許ECFC附著後，使用20ng/mL VEGF-A來刺激並建立索網絡。在第4天，更換培養基以使其在測試化合物存在或不存在下含有所指示濃度之新鮮VEGF-A。在添加測試化合物後，容許培養物繼續生長3-4天，之後如上文所述將細胞固定、染色並成像以研究網絡中斷或索消退。
已顯示，雷莫蘆單抗在此分析之新生模式中(IC50=0.48μg/mL(S.D.0.30,n=3)[0.48μg/mL=3.2nM])而非已確立模式中(IC50>10μg/mL)有效。參見Falcon等人，J Hematol Oncol.2013；6：31。已顯示，具有抗VEGFR2活性之小分子多激酶抑制劑舒尼替尼(sunitinib)在此分析之新生模式中(IC50=0.038μM；S.D.0.013,n=3)而非已確立模式中有效。參見Falcon等人，J Hematol Oncol.2013；6：31。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺在新生模式(IC50=0.013μM；S.D.0.007,n=5)及已確立模式(IC50=0.016μM；S.D.0.011,n=4)兩者中均展現有力活性。
在此分析中評估對照MET特異性抑制劑。對照MET特異性抑制劑在新生模式中僅顯示輕微活性(IC50=5.61μM；S.D.1.80,n=2)且在已確立模式中顯示無活性(IC50>10μM；n=2)。此表明N-(3-氟-4-(1-甲 基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之抗血管生成活性並非因其對MET之活性所致。
雷莫蘆單抗係特異性VEGFR2抑制劑且正如預期，在索形成依賴VEGF-A時，其在呈新生模式之此索形成分析中展現減少。MET特異性抑制劑PF4217903在呈新生模式或已確立模式二者之此分析中顯示極小或無效應，此指示MET在此血管模型中不起作用且MET係N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之腫瘤激酶靶標之一。來自此分析之數據表明，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之一或多個其他靶標(例如Tie2(亦稱TEK)、AXL、PDGFRA及MERTK)參與抑制新生模式中及已確立模式中之索形成。因此，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之抗血管生成活性與雷莫蘆單抗不同且在癌症治療中支持該兩種藥劑之組合以提供其他治療益處。
在經VEGF-A誘導之小鼠耳血管模型中組合N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺及DC101
根據Nagy等人，Methods Enzymol.2008；444：43-64建立用於評估抗血管生成化合物之小鼠耳血管模型。在小鼠耳中藉由VEGF-A(血管內皮生長因子A)經由將攜帶鼠類VEGF-A之編碼序列之腺病毒載體注射至小鼠耳中來誘導血管。
經由腹膜內注射以40mg/kg每週2次投用DC101。以12mg/kg每天1次經口投用N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺。對於 第5天結果，自第1-5天投用化合物或媒劑對照。對於第20天結果，自第10-20天投用化合物或媒劑對照。對於第60天結果，自第50-60天投用化合物或媒劑。將N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺調配為於10% PEG 400及90%之20% Captisol® H2O溶液中之溶液且在每週投用時新鮮製備。在每週投用時將DC101稀釋於PBS中。媒劑對照係每天1次經口投用之10% PEG 400及90%之20% Captisol® H2O溶液。
評估組合治療、媒劑對照或每一單一藥劑之效應並根據製造商之方案使用QuantiGene Plex 2.0分析套組利用50種不同血管標記物之表現來量化。
若組合與對照顯著不同、效應量較大(組合-對照及組合-預期加和反應>1.0或<-1.0)且協同作用之p值顯著(<0.05)，則測定協同作用。P值與媒劑對照進行比較且經龐費洛尼(Bonferroni)調整。
受組合治療協同影響之標記物出現較晚(第60天)且針對周細胞之標記物多於內皮細胞(表3)。周細胞之標記物係Acta2、Cspg4(NG2)、Notch 1及Notch 3及其配體(DLL1、DLL3、Jag2)及PDGFB。此一致之處在於，該組合在減少早期血管形成及重塑早期及後期血管以及穩定正常血管方面顯示效應。
^P值與媒劑對照進行比較且經龐費洛尼調整。
若組合與對照顯著不同、效應量較大(組合-對照及組合-預期加和反應>1.0或<-1.0)且單一藥劑中之一者與對照無顯著不同且與預期加和反應相比組合之p值不顯著，則確定加和性。P值與媒劑對照進行 比較且經龐費洛尼調整。
不受組合協同影響及受組合加和影響之標記物均勻分佈於早期(第5天)與後期(第60天)之間(表4)。該等標記物亦為內皮細胞標記物(例如CD34、PECAM1、vwf、PDGFRB、PDGFRA、VEGR2及其配體VEGFA)及周細胞標記物(例如Acta2、Cspg4(NG2)、Notch 1及Notch 3及其配體(DLL1、DLL3、Jag2))之均勻混合物。該等標記物與貫穿第5-60天之整個研究時段之組合效應一致。
雷莫蘆單抗與N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺之組合在小鼠耳VEGF驅動之血管生成模型中在活體內產生協同抗血管生成活性。
^p值與媒劑對照進行比較且經龐費洛尼調整
序列表
SEQ ID NO：1
SEQ ID NO：2
SEQ ID NO：3
SEQ ID NO：4
<110> 美國禮來大藥廠
<120> 癌症之組合療法
<130> X20687
<150> 62/204088
<151> 2015-08-12
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
<210> 2
<211> 116
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
<210> 3
<211> 214
<212> PRT
<213> 智人
<400> 3
<210> 4
<211> 446
<212> PRT
<213> 智人
<400> 4

Claims (10)

  1. 一種抗VEGFR2抗體之用途，其用於製造用來治療胃癌之藥劑，其中該抗VEGFR2抗體係與N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽同時、分開或依序投與。
  2. 一種N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用來治療胃癌之藥劑，其中N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽係與抗VEGFR2抗體同時、分開或依序投與。
  3. 一種抗VEGFR2抗體之用途，其用於製造用來治療胃癌之藥劑，其中該抗VEGFR2抗體係與下式化合物： 或其醫藥上可接受之鹽同時、分開或依序投與。
  4. 如請求項1至3中任一項之用途，其中該抗體包含SEQ ID NO：1之輕鏈可變區(LCVR)胺基酸序列及SEQ ID NO：2之重鏈可變區(HCVR)胺基酸序列。
  5. 如請求項1至3中任一項之用途，其中該抗體包含SEQ ID NO：3之輕鏈胺基酸序列及SEQ ID NO：4之重鏈胺基酸序列且該抗體與 VEGFR2結合。
  6. 如請求項1至3中任一項之用途，其中該抗體係雷莫蘆單抗(ramucirumab)。
  7. 如請求項3之用途，其中該化合物係N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺。
  8. 如請求項1至3中任一項之用途，其中該化合物或其鹽係以介於約80mg/天至約120mg/天之間之劑量投與。
  9. 如請求項1至3中任一項之用途，其中該抗體係以介於約6mg/kg至約12mg/kg之間之劑量每3週投與1次。
  10. 一種組合，其包含抗VEGFR2抗體及N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽，其同時、分開或依序用於治療胃癌。
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