CN108136004A - 癌症的组合疗法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗人类VEGFR2抗体(优选雷莫芦单抗)和N‑(3‑氟‑4‑(1‑甲基‑6‑(1H‑吡唑‑4‑基)‑1H‑吲唑‑5‑基氧基)苯基)‑1‑(4‑氟苯基)‑6‑甲基‑2‑氧代‑1,2‑二氢吡啶‑3‑甲酰胺的组合，和使用该组合治疗某些病症(诸如胃癌)的方法。

Description

癌症的组合疗法
本发明涉及抗人类VEGFR2抗体(优选雷莫芦单抗(ramucirumab))与N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的组合，和使用该组合治疗某些病症(诸如胃癌)的方法。
本发明在胃癌的治疗的领域中。
MKN45胃癌细胞具有高水平的MET的基因组扩增，这导致MET途径的组成型活化。
雷莫芦单抗(Cyramza®)是针对血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的完全人类单克隆抗体。雷莫芦单抗和制造和使用该化合物(包括用于治疗肿瘤性疾病(诸如实体和非实体肿瘤))的方法公开于WO2003/075840中。雷莫芦单抗被美国F.D.A.批准作为单一药剂，或与紫杉醇(paclitaxel)组合用于治疗患有晚期或转移性胃或胃食道(GE)结合部腺癌并在先前的含有氟嘧啶或铂的化学疗法期间或之后疾病恶化的患者；与多西他赛组合用于治疗患有转移性非小细胞肺癌(NSCLC)并在基于铂的化学疗法期间或之后疾病恶化的患者；和与FOLFIRI(伊立替康、亚叶酸和5-氟尿嘧啶)化学疗法组合用于治疗患有转移性结肠直肠癌(mCRC)并在用贝伐单抗、奥沙利铂和氟嘧啶的先前疗法期间或之后疾病恶化的患者。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺具有针对MET的活性。N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺和制造和使用该化合物(包括用于治疗癌症且更具体地用于治疗胃癌)的方法公开于WO2010/011538中。此外，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺在美国目前正在在晚期癌症的I期临床试验中进行研究(A Phase 1 Study of LY2801653 in Patients WithAdvanced Cancer, NCT01285037)。该研究的一部分的目标是确定LY2801653在与雷莫芦单抗一起服用时可安全给予患有胃癌的参与者的推荐2期剂量。
。
胃癌仍然难以治愈且需要可证明对治疗胃癌有效的更多的和不同的疗法。
尽管本领域中已考虑VEGFR2抑制剂和MET抑制剂的组合，但令人惊讶地，本发明公开通过使用抗VEGFR2 Ab和N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的组合作为特定治疗方案的一部分治疗胃癌的方法，所述治疗方案提供与任一药剂单独提供的疗效相比来自这些治疗剂的组合活性的增强和/或意外的有益疗效。
根据本发明的第一个方面，呈现治疗患者的胃癌的方法，其包括向需要此治疗的胃癌患者施用有效量的抗体和下式化合物或其药学上可接受的盐
，
所述抗体包含SEQ ID NO: 1的轻链可变区(LCVR)氨基酸序列和SEQ ID NO: 2的重链可变区(HCVR)氨基酸序列，其中所述抗体结合VEGFR2。
本发明的另一个方面是包含抗体和下式化合物或其药学上可接受的盐的药剂盒
，
所述抗体包含SEQ ID NO: 1的轻链可变区(LCVR)氨基酸序列和SEQ ID NO: 2的重链可变区(HCVR)氨基酸序列，其中所述抗体结合VEGFR2，所述药剂盒用于治疗胃癌。
本发明的另一个方面是药剂盒，其包含雷莫芦单抗以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，和N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，所述药剂盒用于治疗胃癌。
在本发明的一个优选方面，所述化合物是N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺。
在本发明的另一优选方面，所述抗体包含SEQ ID NO: 3的轻链氨基酸序列和SEQID NO: 4的重链氨基酸序列且抗体结合VEGFR2。
在本发明的另一优选方面，所述抗体是雷莫芦单抗。
在本发明的另一优选方面，所述化合物或其盐以约80mg/天至约120mg/天之间的剂量施用。
在本发明的另一优选方面，雷莫芦单抗以约6mg/kg至约12mg/kg之间的剂量每3周施用1次。
在本发明的另一优选方面，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐是片剂。
在本发明的另一优选方面，所述片剂通过喷雾干燥分散来配制。
本发明的另一个方面是组合，其包含抗VEGFR2抗体(优选雷莫芦单抗)和N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其同时、分开或依次用于治疗胃癌。在本发明的优选方面，所述化合物或其盐以约80mg/天至约120mg/天之间的剂量施用。在本发明的另一优选方面，雷莫芦单抗以约6mg/kg至约12mg/kg之间的剂量每3周施用1次。
本发明的另一个方面是抗VEGFR2抗体，其用于与N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐同时、分开或依次治疗，用于治疗胃癌。
本发明的另一个方面是N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其用于与抗VEGFR2抗体同时、分开或依次治疗，用于治疗胃癌。
在本发明的另一优选方面，抗VEGFR2抗体是雷莫芦单抗。
本发明的另一个方面是雷莫芦单抗，其用于与N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐同时、分开或依次治疗，用于治疗胃癌。
本发明的另一个方面是N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其用于与雷莫芦单抗同时、分开或依次治疗，用于治疗胃癌。
本发明的另一个方面是抗VEGFR2抗体在制造用于治疗胃癌的药剂中的用途，其中抗VEGFR2抗体与N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐同时、分开或依次施用。
本发明的另一个方面是N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐在制造用于治疗胃癌的药剂中的用途，其中N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐与抗VEGFR2抗体同时、分开或依次施用。
在本发明的又另一优选方面，抗VEGFR2抗体是雷莫芦单抗。
本发明的另一个方面是抗VEGFR2抗体，其与N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐组合同时、分开或依次使用来治疗胃癌。
本发明的另一个方面是N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其与抗VEGFR2抗体组合同时、分开或依次使用来治疗胃癌。
如本文中所用，化合物N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺公开于WO2010/011538中且是指具有以下结构的化合物：
该化合物的CAS登记号是1206799-15-6。化合物名称包括：N-[3-氟-4-[[1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基]氧基]苯基]-1-(4-氟苯基)-1,2-二氢-6-甲基-2-氧代-3-吡啶甲酰胺（3-Pyridinecarboxamide, N-[3-fluoro-4-[[1-methyl-6-(1H-pyrazol-4-yl)-1H-indazol-5-yl]oxy]phenyl]-1-(4-fluorophenyl)-1,2-dihydro-6-methyl-2-oxo-）；N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺；N-(3-氟-4-{[1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基]氧基}苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺；和LY2801653。
LY2801653的代谢物包括：
1-(4-氟苯基)-N-[3-氟-4-[[6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基]氧基]苯基]-6-甲基-2-氧代-吡啶-3-甲酰胺，和，
N-[3-氟-4-[1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)吲唑-5-基]氧基-苯基]-1-(4-氟苯基)-6-(羟基甲基)-2-氧代-吡啶-3-甲酰胺。
如本文中所用，术语“VEGFR2”是指本领域已知的血管内皮生长因子受体2。VEGFR2也称为KDR。
如本文中所用，术语“抗VEGFR2 Ab”是指包含以下的抗体：轻链可变区(LCVR)，其氨基酸序列是SEQ ID NO: 1中给出的氨基酸序列；和重链可变区(HCVR)，其氨基酸序列是SEQ ID NO: 2中给出的氨基酸序列，其中抗VEGFR2 Ab以足够亲和力和特异性结合VEGFR2。在一些实施方案中，抗VEGFR2 Ab是包含以下的抗体：轻链，其氨基酸序列是SEQ ID NO: 3中给出的氨基酸序列；和重链，其氨基酸序列是SEQ ID NO: 4中给出的氨基酸序列，且所述抗体以足够亲和力和特异性结合VEGFR2。在本发明的其他实施方案中，抗VEGFR2 Ab是雷莫芦单抗。所选抗体将具有对VEGFR2足够强的结合亲和力。例如，抗体通常将以约100nM-约1pM之间的Kd值结合VEGFR2。抗体亲和力可通过例如以下测定法来测定：基于表面等离子共振的测定法(例如BIAcore测定法，其描述于PCT申请公开号WO2005/012359中)；酶联免疫吸附测定法(ELISA)；和竞争测定法(例如放射性标记的抗原结合测定法(RIA))。在一个实施方案中，Kd通过利用抗VEGFR2 Ab、优选雷莫芦单抗进行的RIA来测量。
如本文中所用，术语“雷莫芦单抗”(也称为Cyramza®、IMC-1121b，CAS登记号947687-13-0)是指抗VEGFR2 Ab，其包含：两条轻链，其氨基酸序列各自为SEQ ID NO: 3中给出的氨基酸序列；和两条重链，其氨基酸序列各自为SEQ ID NO: 4中给出的氨基酸序列。
如本文中所用，术语“DC101”是指针对小鼠VEGFR2的大鼠单克隆抗体，其可在实验中在小鼠中用作抗VEGFR2 Ab、优选雷莫芦单抗的替代物。参见，例如，Witte L., 等人Cancer Metastasis Rev., 17, 155-161, 1998。
除非另有指示，否则术语“抗体”是指包含通过二硫键互连的两条重链(HC)和两条轻链(LC)的免疫球蛋白分子。每条链的氨基末端部分包括约100个至约110个氨基酸的可变区，其经由其中所含的互补决定区(CDR)主要负责抗原识别。每条链的羧基末端部分定义主要负责效应子功能的恒定区。
如本文中所用，术语“轻链可变区”或“LCVR”是指抗体分子轻链的包括CDR和FR的氨基酸序列的部分。
如本文中所用，术语“重链可变区”、“HCVR”是指抗体分子重链的包括CDR和FR的氨基酸序列的部分。
如本文中所用，术语“药剂盒”是指包含至少两个单独容器的包装，其中第一容器含有N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐，且第二容器含有抗VEGFR2Ab。“药剂盒”也可包括将这些第一和第二容器的内容物的全部或一部分施用于癌症患者、优选胃癌患者的说明书。
如本文中所用，术语“治疗(treating、to treat或treatment)”是指抑制、减缓、停止、减轻、减小现有症状、病症、病况或疾病的恶化或加重、维持稳定疾病或逆转现有症状、病症、病况或疾病的恶化或加重。
如本文中所用，术语“患者”是指哺乳动物、优选人类。
如本文中所用，术语“癌症”和“癌性的”是指或描述患者的通常特征在于不受控制的细胞增殖的生理性病况。该定义中包括良性和恶性癌症。“早期癌症”或“早期肿瘤”意指这样的癌症，所述癌症不是晚期或转移性的或者所述癌症被分类为0期、I期或II期癌症。癌症的实例包括，但不限于，胃癌。
本发明的组合治疗的主要优点在于能够在患者中产生显著抗癌效应，而不引起显著毒性或不利效应，使得患者总体上受益于组合治疗方法。本发明的组合治疗的功效可通过常用于评估癌症治疗中的各种终点来测量，所述终点包括，但不限于，肿瘤消退、肿瘤重量或大小缩小、恶化时间、总生存期、无进展生存期、总体反应率、反应持续时间和生活质量。本发明中所使用的治疗剂可引起转移性扩散的抑制，但不使原发性肿瘤缩小，可诱导原发性肿瘤的缩小，或可仅发挥肿瘤抑制效应(tumoristatic effect)。因为本发明涉及独特抗肿瘤剂的组合的用途，可任选地采用新颖方法来测定本发明的任何具体组合疗法的功效，所述方法包括例如测量血管生成的血浆或尿液标记物和通过放射性成像测量反应。
如本文中所用，术语“有效量”是指在诊断或治疗下的患者中提供有效反应的N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐的量或剂量和抗VEGFR2 Ab的量或剂量。
如本文中所用，术语患者对用药剂的组合治疗的“有效反应”或患者对用药剂的组合治疗的“反应性”是指在施用N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐和抗VEGFR2 Ab后赋予患者的临床或治疗益处。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐的每天剂量通常落在约80mg/天至120mg/天范围内。
雷莫芦单抗的每三周周期的剂量通常落在约6mg/kg至12mg/kg范围内、优选约8mg/kg至约10mg/kg且最优选约10mg/kg。
当与抗VEGFR2 Ab组合给予时，例如，在21天周期内，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐每天在约80mg/天至约120mg/天范围内施用，且抗VEGFR2Ab、优选雷莫芦单抗在第1天在约6mg/kg至12mg/kg范围内施用。
游离碱N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺是优选的。然而，技术人员将理解，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺可与多种无机和有机酸中的任一者反应以形成药学上可接受的酸加成盐。此类药学上可接受的酸加成盐和用于制备其的常见方法是本领域众所周知的。参见，例如，P. Stahl, 等人, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties,Selection and Use (VCHA/Wiley-VCH, 2002); L.D. Bighley, 等人, Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, 453-499 (1995); S.M. Berge, 等人, Journal of Pharmaceutical Sciences, 66, 1, (1977)。盐酸盐和甲磺酸盐是优选盐。甲磺酸盐是特别优选的盐。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐可通过本领域中已知的各种程序来制备(参见，例如，WO2010/011538)。雷莫芦单抗可例如根据WO2003/075840中的公开内容来制备。
施用途径可以任何方式改变，其受药物的物理性质和患者和护理者的便利性限制。优选地，抗VEGFR2 Ab、优选雷莫芦单抗被配制用于肠胃外施用，诸如静脉内或皮下施用。优选地，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐被配制用于经口或肠胃外施用，包括静脉内或皮下施用。
例如，可将N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺配制成片剂。此片剂可从20% N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺：醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)中级(M)(HPMCAS-M)喷雾干燥分散物(SDD)的组合物制备。20% N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺：HPMCAS-MSDD从含有以下的喷雾溶液组合物(wt%)制备：N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(1%)、HPMCAS-M (4%)和丙酮(85.5%)和纯净水(9.5%)。添加聚合物之前确保N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺完全溶解于丙酮/水溶液中。在起始喷雾干燥来制备SDD组合物之前，目视确定聚合物溶解。所得SDD组合物是20% N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺：HPMCAS-M SDD (mg/g)与N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺(200mg/g)和HPMCAS-M (800mg/g)。如果需要，可调整药物的量以考虑药物的测定。如果需要维持质量平衡，可根据药物测定中的微小变化调整HPMCAS-M的重量。在处理期间将丙酮和纯净水去除至残留水平。制剂组合物可含有例如SDD N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺和其他赋形剂，诸如稀释剂(例如微晶纤维素和甘露醇)、崩解剂(例如交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂(例如十二烷基硫酸钠)、助流剂(例如syloid二氧化硅)和/或润滑剂(例如硬脂富马酸钠)。片剂的制备涉及喷雾干燥以产生N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的SDD，随后碾压并压制成片剂。然后用基于HPMC的颜色混合物将片剂膜包衣。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺SDD膜包衣片剂的单位配方的实例片剂(40mg剂量强度)描述于图表1中。
图表1
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6- 甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺片剂(40mg)的实例单位配方
1.如果需要，则将调整SDD的量以考虑分散剂的测定。
2.除非另有说明，否则对于每种赋形剂允许±10%的合理变化。
3.为了适应SDD效力变化并维持总片剂重量，如果需要，可调整微晶纤维素的重量。
4.在处理期间将纯净水去除至残留水平。
如本文中所用，短语“与......组合”是指施用N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐和抗VEGFR2 Ab。
以下实施例说明抗VEGFR2 Ab(包括，但不限于，雷莫芦单抗)(经由在小鼠中用作雷莫芦单抗的替代物的大鼠抗小鼠单克隆抗体DC101)和N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的组合的出乎意料的改善。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺与DC101的组合在胃癌的小鼠异种移植模型MKN45中的抗肿瘤效应
将N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺配制为10% PEG 400/90%(H2O中的20% Captisol®)中的溶液，并在每周给予时新鲜制备。在每周给予时将DC101稀释于磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。
获得MKN45细胞并在37℃和5% CO2下使其维持在补充有10% FBS的Dulbecco氏改良的Eagle氏培养基(DMEM)中。将PBS中的约5 x 106个细胞与相等体积的Matrigel (BDBioscience, Franklin Lakes, NJ)混合并皮下植入动物的侧腹中。在植入后第18天将动物随机分成9只一组。经由经口管饲以12mg/kg施用N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺且以20mg/kg经由腹膜内注射施用DC101。对于N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺以每天一次时间表且对于DC101以每周两次时间表连续给予26天。在本研究的过程中总共施用7个剂量的DC101。每两周测量肿瘤体积和体重。在研究结束时，使用CO2和颈脱位法将动物处死。
将肿瘤体积转变为对数标度以平衡时间和治疗组间的方差。使用SAS®软件(9.3版)中的MIXED程序用对时间和治疗的方差的双因子重复测量分析来分析对数体积数据。用于重复测量的相关模型是空间幂次(spatial power)。在每个时间点将治疗组与对照组进行比较。对于每个治疗组还分开使用MIXED程序以计算每个时间点的调整平均值和标准误差。两种分析均解释每个动物内的自相关和在研究结束之前移除或丢失动物时所发生的数据丢失。针对每个治疗组相比于时间绘制经调整的平均值和标准误差。还针对两种治疗的组合的超过累加性的效应增加的统计学证据(“s.e.”)来分析这些数据。该分析使用SAS®软件(9.3版)通过测试使用媒介物、每种单一药剂和每种单一药剂组的组合的2 x 2相互作用对于对数体积的效应的显著性来进行。该分析用于评价效应的协同作用。
体重测量提供各种治疗的耐受性的指示。用治疗未观察到统计学显著的体重损失。媒介物对照组中的一个动物由于溃疡肿瘤而进行安乐死。在该研究中未报告治疗相关的死亡。
作为单一疗法，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺展现统计学显著的抗肿瘤活性，其中在测量的最后一天(第42天)T/C(治疗组/对照组)值为4.4% (p<0.001)。DC101展现单一药剂抗肿瘤活性，其中T/C值为15.0% (p<0.001)。任一单独药剂的低T/C值指示用任一单独药剂的治疗与媒介物对照相比有效地减缓肿瘤生长。在该胃肿瘤模型中，用这些药剂中的任一者单独治疗的动物在癌症治疗中实现“稳定疾病”的临床等效反应。Therasse等人New guidelines to evaluate the response to treatment in solid tumors. J NatlCancer Inst. 2000;92:205-216. Eisenhauer等人 New response evaluation criteriain solid tumours: revised RECIST guideline (1.1版). Eur J Cancer. 2009;45:228-247。
与媒介物对照相比，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺与DC101的组合导致肿瘤消退(28.5%)(p<0.001)，且该活性大于作为单一疗法施用的任一分子。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺与DC101的组合是累加的(表1)，且与每一单一疗法相比统计学不同(表2)。因此，发现这两种药剂的组合在实体肿瘤类型诸如胃癌中的治疗是累加的且与单独每种单一药剂相比具有进一步抗肿瘤效应。更重要地，与对照相比，由N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺与DC101的组合治疗所导致的28.5%的肿瘤消退(肿瘤缩小)效应是出乎意料且治疗有益的。在胃实体肿瘤模型中用这两种药剂的组合的体内治疗导致肿瘤缩小/消退并且是治疗有益的。
表1 N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺和DC101的相互作用检验-肿瘤体积
天 %减小 LY2801653 %减小 DC101 %减小 LY2801653+ DC101 如果累加的话的预期值 估计值 (对数标度) s.e. p值
7 -4.076 13.612 -0.753 10.091 0.025 0.0441 0.577
11 -3.942 5.119 2.517 1.379 -0.003 0.0441 0.955
14 -7.287 7.305 10.166 0.550 -0.022 0.0441 0.618
18 -8.375 -1.160 1.929 -9.631 -0.024 0.0441 0.585
20 18.997 18.490 28.749 33.974 0.017 0.0441 0.709
25 49.694 35.365 54.508 67.485 0.073 0.0441 0.102
28 58.139 41.880 62.634 75.670 0.093 0.0441 0.038*
32 63.836 53.652 72.374 83.239 0.109 0.0441 0.016*
39 73.832 63.572 81.314 90.468 0.146 0.0444 0.001*
42 75.070 66.791 84.667 91.721 0.134 0.0445 0.004*
*统计学显著的。
表2 在测量的最后一天(第42天)的治疗比较-对数标度
天 治疗 治疗2 差异(治疗1-治疗2) s.e. p值
42 媒介物 LY2801653 0.603 0.0634 <0.001*
42 媒介物 DC101 0.479 0.0634 <0.001*
42 媒介物 DC101/ LY2801653 0.814 0.0634 <0.001*
42 LY2801653 DC101/ LY2801653 0.211 0.0624 0.001*
42 DC101 DC101/ LY2801653 0.336 0.0624 <0.001*
*统计学显著的。
雷莫芦单抗和N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的组合治疗减少内皮细胞出芽
通过体外基于细胞的测定法测量体外内皮细胞出芽的减少。使用该测定法来测量N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺和雷莫芦单抗对内皮细胞出芽的效应。
在37℃下于5% CO2中在培养瓶(Corning编号356486)的补充有SingleQuots试剂盒(Lonza编号CC-4147)和进一步补充FBS至最终10% FBS的EBM2培养基(Lonza编号CC-3156)中培养HUVEC (Lonza编号C2519A)，并在第2-5代使用。从培养瓶收获HUVEC，将其用Hyclone™ Dulbecco氏PBS (DPBS)(Fisher Scientific，编号SH3026402)、随后用TypeLEExpress(Gibco编号12605-010)冲洗，并悬浮于5mL温热培养基中。使用Vi-Cell细胞计数器(Beckman)来测定活细胞计数。在37℃下于5% CO2中在Corning培养瓶的补充有SingleQuots试剂盒(Lonza编号CC-4126)和进一步补充FBS (Hyclone™编号SH3061102)至最终10% FBS的FBM培养基(Lonza编号CC-3131)中培养CAF(肺癌相关的成纤维细胞)(Astrand, 60093A，为Lilly专门制备)，并在第3-7代使用。从培养瓶收获CAF，将其用Hyclone™ DPBS (Fisher Scientific，编号SH3026402)、随后用TypeLE Express (Gibco编号12605-010)冲洗，并用5mL温热培养基再悬浮。使用Vi-Cell细胞计数器(Beckman)来测定活细胞计数。
将0.5g的干燥Cytodex®珠粒(Sigma-Aldrich®，目录号C3275)在室温下在50mLHyClone™ DPBS pH 7.4 (Fisher Scientific，目录号SH3026402)中水化(hydrated)至少3小时。每0.5小时颠倒含有珠粒的管(Falcon，目录号352098)以轻轻混合。弃去上清液。用新鲜PBS将珠粒洗涤3次并再悬浮于50mL PBS中，以产生约~20,000个珠粒/mL。将珠粒悬浮液在115℃下高压灭菌15分钟并储存于4℃下直至使用。
轻轻混合珠粒并将0.5mL(约10,000个珠粒)悬浮液转移至50mL管(Falcon，目录号352098)中。在10mL温热EBM2培养基(Lonza目录号CC-3156)加SingleQuots™ (Lonza目录号CC-4147)中将珠粒洗涤2次。在最后一次洗涤后小心地去除培养基。将洗涤的珠粒与8百万个HUVEC细胞混合，总体积为20mL。将含有珠粒和HUVEC细胞的管在孵育器中在37℃和5%CO2下放置4小时，且每20分钟通过颠倒管几次来轻轻混合。在孵育后，将珠粒与HUVEC细胞一起转移至T25烧瓶(Nunc™ 目录号156499)中并在37℃和5% CO2下孵育过夜。
将纤维蛋白原(Sigma目录号F4883)以2mg/mL溶解于HyClone™ DPBS中。将抑肽酶(Sigma目录号A3428)以0.15单位/mL的浓度添加至纤维蛋白原溶液中并轻轻混合。通过经0.22μ过滤器(Millipore编号SCGP00525)过滤将溶液除菌并立即使用。
将T25烧瓶中的HUVEC涂覆的珠粒转移至50mL管并使用10mL温热EBM2培养基加SingleQuots (Lonza编号CC-4147)洗涤2次。轻轻去除培养基。将HUVEC涂覆的珠粒(约10,000个)再悬浮于50mL含有2百万个CAF的无菌纤维蛋白原溶液中。用无菌水将凝血酶(Sigma编号T4393)重构至50单位/ml。24孔板(In Vitro Scientific目录号P24-1.5H-N)的每孔添加0.6单位(12μl)的凝血酶溶液，随后添加500μl/孔纤维蛋白原/珠粒/CAF溶液。使溶液在室温下形成纤维蛋白凝胶15分钟且然后在37℃和5% CO2下进行1小时。将0.5mL温热EBM2培养基加SingleQuots(Lonza编号CC-4147)添加至每个孔中的纤维蛋白凝胶的顶部且每3至4天进行更换直至实验结束。
对于新生模式出芽测定，向每个孔添加以指示浓度稀释的测试化合物。在37℃和5% CO2下孵育板且每3至4天更换含有测试化合物的培养基直至完成测定。
对于确立模式出芽测定，所述方法与上文针对新生模式出芽测定所述相同，除了在添加测试化合物之前将纤维蛋白凝胶中的HUVEC涂覆的珠粒培养3至7天。测试化合物处理持续7天。每3至4天更换含有测试化合物的培养基，直至完成测定。
在结束测定之后，在4℃下将板于0.5mL 4% PFA(Electron Microscopy Sciences编号15710)中固定过夜，在PBS中洗涤1次，在4℃下用0.5mL 0.5% Triton™ X-100(Sigma-Aldrich目录号T9284)/PBS渗透10分钟，随后在室温下在100mM甘氨酸(Bio-Rad目录号161-0718)/PBS中洗涤3次。用1ml/孔含有PBS中的0.1% BSA(gibco目录号15260-037)、0.2% Triton™ X-100、0.05% Tween-20(Thermo Scientific目录号28320)的IF缓冲液加10%山羊血清(Invitrogen编号16210)封闭板。在IF缓冲液和10%山羊血清中用以1：100重构于500mL PBS中的绵羊抗人类CD31抗体(R&D Systems编号BAF806)对内皮细胞进行染色。用以1：200于IF缓冲液加10%山羊血清中的抗α平滑肌肌动蛋白抗体Cy3抗体(Sigma，目录号C6198)对SMA阳性细胞进行染色。将染色溶液以500μL/孔添加至每个孔中。将板在4℃下保持过夜。在第二天去除染色溶液，并使用IF缓冲液将板洗涤3次，每次0.5mL。添加以1：200稀释于IF缓冲液加10%山羊血清中的二抗Alexa Fluor® 488驴抗绵羊IgG (H+L)(MolecularProbes编号A-11015)，在室温下孵育1小时。使用IF缓冲液将板洗涤3次以去除任何未结合的二抗。将5mg/mL的DAPI (4',6-二脒基-2-苯基吲哚，二盐酸盐)(Invitrogen编号D1306)以1：10000稀释于PBS中并向每孔添加0.5mL，在室温下孵育1小时。将板用PBS洗涤2次，并通过在CellInsight (Thermo Scientific)仪器上使用2×物镜扫描板来使CD31阳性内皮芽的总长度和SMA阳性细胞成像。图像数据直接来自CellInsight (CD31，绿色；SMA，红色)并在JMP(SAS)中分析数字数据。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺处理减少VEGF-A依赖性和VEGF-A非依赖性内皮出芽且具有统计学显著性。
使用如在Mabry, R, 等人, MAbs. 2010 Jan-Feb;2(1):20-34和Nakatsu, MN,Meth Enzymol. 2008;443:65-82)中所述的使用HUVEC(人类脐静脉内皮细胞)和CAF细胞(培养的与肺癌相关的成纤维细胞)的修改的体外共培养血管生成测定来评估N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺对内皮细胞出芽的效应。将CAF和包被有HUVEC的cytodex珠粒包埋于纤维蛋白凝胶中以形成覆盖有平滑肌肌动蛋白(SMA)阳性周细胞的内皮芽。对于1周时段，内皮细胞经历一系列表型变化，其产生覆盖有SMA阳性细胞的内皮芽的稳定互连的网络。在培养基中内皮出芽依赖于CAF衍生的VEGF-A至多7-10天，其后芽伸长和稳定性较少依赖于VEGF-A。
在测定开始时(新生模式，第0-7天)用雷莫芦单抗(10μg/ml)抑制VEGF-A信号传导导致内皮出芽的显著抑制(4倍降低)。为了模拟对血管生成的治疗性抑制，在形成内皮芽和周细胞覆盖后在第7天(确立模式)开始用雷莫芦单抗治疗。用雷莫芦单抗(10μg/ml)治疗预先形成的芽不太有效，且仅使内皮出芽降低1.4倍。类似于VEGFR2抑制，在测定开始时(新生模式，第0-7天) N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的添加以剂量依赖性方式有效地抑制内皮出芽。在最高测试浓度300nM下，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺使内皮出芽降低7.5倍。用N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺治疗对VEGFR2抑制显著较不敏感的预先形成的芽(确立模式)导致内皮出芽的显著降低(2.7倍)。这些结果展现，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺有效地抑制VEGF-A依赖性和VEGF-A非依赖性内皮出芽。MET特异性抑制剂PF04217903 (LSN2900296)当在测定开始时(新生模式，此时出芽是VEGF-A依赖的，第0-7天)添加，在抑制内皮出芽中活性较低；和当添加至预先形成的芽(确立模式，此时芽伸长和稳定性较不依赖于VEGF-A，第7-14天)时，PF04217903在抑制内皮出芽中无活性。这些数据表明，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的抗血管生成活性不是MET依赖的。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺抑制出芽至第14天，而雷莫芦单抗抑制出芽最多仅至第7天。对照(PF4217904)无作用。
雷莫芦单抗是特异性VEGFR2抑制剂且如预期，当出芽是VEGF-A依赖的时，在该测定中前7天展现内皮出芽减少。在该测定中，MET特异性抑制剂PF4217903在该测定的整个14天显示极小作用或无作用，这指示MET在该血管模型中不起作用且MET是N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的肿瘤激酶(oncokinase)靶标之一。来自该测定的数据表明，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的一个或多个其他靶标(诸如Tie2(也称TEK)、AXL、PDGFRA和MERTK)在该血管生成测定的整个14天中引起内皮出芽的抑制。因此，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的抗血管生成活性与雷莫芦单抗不同并在癌症治疗中支持该两种药剂的组合以提供其他治疗益处。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺抑制新生模式和确立模式中的索形成
根据Falcon等人, J Hematol Oncol. 2013;6:31，在微量滴定板上进行VEGF-A诱导的索形成(cord formation)测定。该测定作为新生模式(新生血管生成脂肪衍生的干细胞(“ADSC”)和人类内皮集落形成细胞(“ECFC”)共培养索形成测定)和确立模式(确立的ADSC和ECFC共培养索形成测定)来进行。
对于新生模式测定，用AngioKit™优化的培养基(Cell Systems Biology)共培养ADSC和ECFC。将ADSC在100μL中以40-50K个细胞/孔铺板于96孔板中并在37℃、5% CO2下孵育过夜。第二天，去除培养基并将50-100μL培养基中的每孔4-5K个ECFC铺板于ADSC单层的顶部并在37℃、5% CO2下孵育3-6小时，然后添加20ng/mL VEGF-A和测试化合物。使共培养物生长7天，在此时将细胞固定、染色并在扫描装置中成像。定量索区域。
对于确立模式测定，如上文针对新生模式测定所述铺板ADSC和ECFC共培养物。在容许ECFC附着后，使用20ng/mL VEGF-A来刺激并建立索网络。在第4天，更换培养基以使其在所示浓度的测试化合物存在或不存在的情况下含有新鲜VEGF-A。在添加测试化合物后，容许培养物额外生长3-4天，之后如上文所述将细胞固定、染色并成像以研究网络破坏或索消退。
已显示，雷莫芦单抗在该测定的新生模式中(IC50 =0.48μg/mL(S.D. 0.30, n=3)[0.48μg/mL=3.2nM])、但非确立模式中(IC50 >10μg/mL)是有效的。参见Falcon等人, JHematol Oncol. 2013;6:31。已显示，舒尼替尼(具有抗VEGFR2活性的小分子多激酶抑制剂)在该测定的新生模式中(IC50 =0.038μM；S.D. 0.013, n=3)、但非确立模式中是有效的。参见Falcon等人, J Hematol Oncol. 2013;6:31。
N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺在新生模式(IC50 =0.013μM；S.D. 0.007, n=5)和确立模式(IC50 =0.016μM；S.D. 0.011, n=4)两者中均展现有效活性。
在该测定中评估对照MET特异性抑制剂。对照MET特异性抑制剂在新生模式中仅显示轻微活性(IC50 =5.61μM；S.D. 1.80, n=2)并在确立模式中显示无活性(IC50 >10μM；n=2)。这表明N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的抗血管生成活性不是由于其对MET的活性所导致。
雷莫芦单抗是特异性VEGFR2抑制剂且如预期，在索形成是VEGF-A依赖的时，展现在新生模式中该索形成测定中的减少。MET特异性抑制剂PF4217903在新生模式或确立模式两者的该测定中显示极小作用或无作用，这指示MET在该血管模型中不起作用且MET是N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的肿瘤激酶靶标之一。来自该测定的数据表明，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的一个或多个其他靶标(诸如Tie2(也称TEK)、AXL、PDGFRA和MERTK)参与抑制新生模式和确立模式中的索形成。因此，N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的抗血管生成活性与雷莫芦单抗不同并在癌症治疗中支持该两种药剂的组合以提供其他治疗益处。
在由VEGF-A诱导的小鼠耳血管模型中N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺和DC101的组合
根据Nagy等人，Methods Enzymol. 2008;444:43-64建立用于评估抗血管生成化合物的小鼠耳血管模型。经由将携带鼠VEGF-A(血管内皮生长因子A)的编码序列的腺病毒载体注射至小鼠耳中通过VEGF-A在小鼠耳中诱导血管。
经由腹膜内注射以40mg/kg每周2次给予DC101。以12mg/kg每天1次经口给予N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺。对于第5天结果，从第1-5天给予化合物或媒介物对照。对于第20天结果，从第10-20天给予化合物或媒介物对照。对于第60天结果，从第50-60天给予化合物或媒介物。将N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺配制为10% PEG 400加90%的（20%Captisol®于H2O）中的溶液并在每周给予时新鲜制备。在每周给予时将DC101稀释于PBS中。媒介物对照是每天1次经口给予的10% PEG 400加90%的（20% Captisol®于H2O）。
评估组合治疗、媒介物对照或每种单一药剂的效应并根据制造商的方案使用QuantiGene Plex 2.0测定试剂盒用50种不同血管标记物的表达来定量。
如果组合与对照显著不同、效应量大(组合-对照和组合-预期累加反应>1.0或<-1.0)且协同作用的p值显著(<0.05)，则确定协同作用。P值与媒介物对照进行比较且进行Bonferroni调整。
受组合治疗协同影响的标记物出现晚(第60天)且针对周细胞的标记物多于针对内皮细胞的(表1)。周细胞的标记物是Acta2、Cspg4 (NG2)、Notch 1和Notch 3和其配体(DLL1、DLL3、Jag2)和PDGFB。这一致之处在于，该组合在减少早期血管形成和重塑早期和后期血管以及稳定正常血管方面显示效应。
表3.受组合协同影响的标记物
^P值与媒介物对照进行比较且进行Bonferroni调整。
如果组合与对照显著不同、效应量大(组合-对照和组合-预期累加反应>1.0或<-1.0)且单一药剂之一与对照无显著不同且与预期累加反应相比组合的p值不显著，则确定累加性。P值与媒介物对照进行比较且进行Bonferroni调整。
不受组合协同影响且受组合累加影响的标记物均匀分布于早期(第5天)和晚期(第60天)之间(表2)。这些标记物也是内皮细胞标记物(例如CD34、PECAM1、vwf、PDGFRB、PDGFRA、VEGR2和其配体VEGFA)和周细胞标记物(例如Acta2、Cspg4 (NG2)、Notch 1和Notch3和其配体(DLL1、DLL3、Jag2))的均匀混合物。这些与贯穿第5-60天的整个研究时段的组合效应一致。
雷莫芦单抗和N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺的组合在小鼠耳VEGF驱动的血管生成模型中产生体内协同抗血管生成活性。
表4.组合对累加的标记物的作用
^p值与媒介物对照进行比较且进行Bonferroni调整。
序列表
<110> Eli Lilly and Company
<120> 癌症的组合疗法
<130> X20687
<150> 62/204088
<151> 2015-08-12
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Asn Trp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Asp Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Lys Ala Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 2
<211> 116
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Thr Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 3
<211> 214
<212> PRT
<213> 智人
<400> 3
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Asn Trp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Asp Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Lys Ala Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 4
<211> 446
<212> PRT
<213> 智人
<400> 4
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Thr Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Leu Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445

Claims (23)

1.治疗患者的胃癌的方法，其包括向需要此治疗的胃癌患者施用有效量的抗体和下式化合物或其药学上可接受的盐：
，
所述抗体包含SEQ ID NO: 1的轻链可变区(LCVR)氨基酸序列和SEQ ID NO: 2的重链可变区(HCVR)氨基酸序列，其中所述抗体结合VEGFR2。
2.权利要求1的方法，其中所述化合物是N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺。
3.权利要求1的方法，其中所述抗体包含SEQ ID NO: 3的轻链氨基酸序列和SEQ IDNO: 4的重链氨基酸序列且所述抗体结合VEGFR2。
4.权利要求3的方法，其中所述抗体是雷莫芦单抗。
5.权利要求1的方法，其中所述化合物或其盐以约80mg/天至约120mg/天之间的剂量施用。
6.权利要求4的方法，其中雷莫芦单抗以约6mg/kg至约12mg/kg之间的剂量每3周施用1次。
7.用于治疗胃癌的药剂盒，其包含抗体和下式化合物或其药学上可接受的盐
，
所述抗体包含SEQ ID NO: 1的轻链可变区(LCVR)氨基酸序列和SEQ ID NO: 2的重链可变区(HCVR)氨基酸序列，其中所述抗体结合VEGFR2。
8.权利要求7的药剂盒，其中所述抗体包含SEQ ID NO: 3的轻链氨基酸序列和SEQ IDNO: 4的重链氨基酸序列，其中所述抗体结合VEGFR2。
9.权利要求8的药剂盒，其中所述抗体是雷莫芦单抗。
10.权利要求9的药剂盒，其中所述化合物是N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺。
11.用于治疗胃癌的药剂盒，其包含雷莫芦单抗以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，和N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
12.权利要求11的药剂盒，其中N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐是片剂。
13.权利要求12的片剂，其通过喷雾干燥分散来配制。
14.组合，其包含抗VEGFR2抗体和N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其同时、分开或依次用于治疗胃癌。
15.权利要求14的方法，其中所述化合物或其盐以约80mg/天至约120mg/天之间的剂量施用。
16.权利要求14的方法，其中雷莫芦单抗以约6mg/kg至约12mg/kg之间的剂量每3周施用1次。
17.抗VEGFR2抗体，其用于与N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐同时、分开或依次治疗，用于治疗胃癌。
18.N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其用于与抗VEGFR2抗体同时、分开或依次治疗，用于治疗胃癌。
19.权利要求15或16的治疗，其中所述抗VEGFR2抗体是雷莫芦单抗。
20.雷莫芦单抗，其用于与N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐同时、分开或依次治疗，用于治疗胃癌。
21.N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐，其用于与雷莫芦单抗同时、分开或依次治疗，用于治疗胃癌。
22.抗VEGFR2抗体在制造用于治疗胃癌的药剂中的用途，其中所述抗VEGFR2抗体与N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐同时、分开或依次施用。
23.N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐在制造用于治疗胃癌的药剂中的用途，其中N-(3-氟-4-(1-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)-1H-吲唑-5-基氧基)苯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲酰胺或其药学上可接受的盐与抗VEGFR2抗体同时、分开或依次施用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2019511541A (ja) * 2016-04-15 2019-04-25 イーライ リリー アンド カンパニー 結腸直腸癌の処置における使用のためのラムシルマブとメレスチニブとの組み合わせ
EP3848365A4 (en) * 2018-09-03 2022-06-01 Tyligand Bioscience (Shanghai) Limited TRK INHIBITORS AS AN ANTI-CANCER AGENT
CN110721183A (zh) * 2019-11-15 2020-01-24 四川大学 Met和axl双靶点抑制剂在制备防治胃癌的药物中的用途

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN202105462U (zh) * 2011-06-16 2012-01-11 保靖天瑞钒业有限公司 一种搅拌桨

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI365185B (en) * 2008-07-24 2012-06-01 Lilly Co Eli Amidophenoxyindazoles useful as inhibitors of c-met
TW201622744A (zh) * 2014-03-04 2016-07-01 美國禮來大藥廠 癌症之組合療法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN202105462U (zh) * 2011-06-16 2012-01-11 保靖天瑞钒业有限公司 一种搅拌桨

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ELIZABETH C SMYTH等: "Ramucirumab：targeting angiogenesis in the treatment of gastric cancer", 《IMMUNOTYERAPY》 *
HANSJOCHEN WILKE等: "Ramucirumab plus paclitaxel versus placebo plus paclitaxel in patients with previously treated advanced gastric or gastro-oesophageal junction adenocarcinoma (RAINBOW)_ a double-blind, randomised phase 3 trial", 《LANCET》 *
S. BETTY YAN等: "LY2801653 is an orally bioavailable multi-kinase inhibitor with potent activity against MET, MST1R, and other oncoproteins,and displays anti-tumor activities in mouse xenograft models", 《INVEST NEW DRUGS》 *

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