FI90764B

FI90764B - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 25-hydroksi-vitamiinin D-johdannaisten valmistamiseksi

Info

Publication number: FI90764B
Application number: FI890283A
Authority: FI
Inventors: Enrico Giuseppe Baggiolini; Bernard Michael Hennessy; Shian-Jan Shiuey; Gary Arthur Truitt; Milan Radoje Uskokovic
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1988-01-20
Filing date: 1989-01-19
Publication date: 1993-12-15
Also published as: NO175429B; DK169945B1; AR247551A1; BG60530B2; GR3004786T3; JPH0764806B2; MC1998A1; KR960009119B1; PT89486A; YU47298B; DE58901056D1; FI90764C; NO890239D0; NO890239L; KR890011838A; EP0325279B1; CA1337529C; YU11789A; ES2033467T3; ZA8923B

Description

90764

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 25-hydroksi-vitamiinin D-johdannaisten valmistamiseksi

Keksintö koskee menetelmää kaavan I mukaisten yh-5 disteiden valmistamiseksi fv»

I I

15 jossa R on vety tai hydroksi ja A on -CsC-, -CH=CH-, jolla on E-konfiguraatio tai -CH2-CH2-. Nämä yhdisteet ovat käyttökelpoisia hyperproliferatiivisten ihotautien kuten psoriasiksen hoidossa, ja neoplastisten sairauksien kuten 20 leukemian hoidossa.

Esimerkkejä sellaisista C^-alkyyliryhmistä, joihin on viitattu jäljempänä, ovat metyyli, etyyli, propyy-li, isopropyyli, butyyli ja t-butyyli. Esimerkkejä aryyli-C1.4-alkyyliryhmistä ovat bentsyyli, fenyylietyyli ja fe-25 nyylipropyyli. Esimerkkejä aryyliryhmistä ovat fenyyli ja p-tolyyli. Halogeeni merkitsee bromia, klooria, fluoria tai jodia.

Tämän keksinnön mukaisia, kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat seuraavassa määritellyt yhdisteet A - F: 30 A: 1,25-dihydroksi-16-dehydrokolekalsiferoli; B: 25-hydroksi-16-dehydrokolekalsiferoli; C: 1,25-dihydroksi-16,23E-bisdehydrokolekalsi- feroli; D: 25-hydroksi-16,23E-bisdehydrokolekalsiferoli; 2 E: 1,25-dihydroksi-16-dehydro-23-didehydrokolekal-siferoli; ja F: 25-hydroksi-16-dehydro-23-didehydrokolekalsi- feroli; 5 joista 1,25-dihydroksyloidut yhdisteet A, C ja E ovat edullisia.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että vastaava kaavan I mukainen yhdiste, joka sisältää kahden tai kolmen hydroksiryhmän sijasta kaksi tai kolme 10 suojattua hydroksiryhmää, joilla on kaava —OSi ( R2, R2, R3) jossa Rx ja R3 merkitsevät C^-alkyyliä ja R2 on C^alkyyli, aryyli tai aryyli-C1.4-alkyyli, saatetaan reagoimaan aineen kanssa, joka pystyy poistamaan suojaavat ryhmät.

Kaavio 1 90764 3 f' 5 Γ ΤΛ 1 cs·—

O II

10 ///////^NS'NN\v

CP

- Λ- r1’ " I I I *· R’ ^ I I | I O-Si—s2 SI-o

RJ I I

iva R> *J

20

CfcPY- riTY-

£ T

25 or rV

HO··· Γ CH MO..-k^ k b 30 jossa A on edellä määritelty ja ja merkitsevät toisistaan riippumatta Cj ^-alkyyliä ja R2 on muista riippumatta C^_^-alkyyli, aryyli tai aryyli-C^^-alkyyli.

4

Kaavio 2 Λ __

HC

V

ίιΛ I CH

--- HO

11 H V! I

O VI

20

1 jT p OH

^H~~ flj 25 J vm llb Φ " 0 11 a jossa , R2 ja Rg ovat edellä määritellyt.

ii 35

Kaavio 3 90764 5 "‘Y^OTs rH ' s , yP ·>—* I S H . H3 S,

IX

10 Γτ^Υ tcb r

Rj-H

1 XI

Rj 15 20 25

G

~ ςέΓ^Ί- T"c 0 jossa R^, R2 ja R^ ovat edellä määritellyt, X .on kloori, bromi tai jodi ja .Ts on tosyyli.

6

Kaavan II mukaiset välituotteet, joihin kuuluvat kaavojen Ha, Hb ja Ile mukaiset välituotteet, ovat uusia ja osa tätä keksintöä.

Kaaviossa 1 kaavan II mukainen yhdiste muutetaan 5 kaavan IVa tai IVb mukaiseksi yhdisteeksi reaktiolla vastaavan yhdisteen kanssa, jolla on kaava |j^pOPh2

10 Γ kX

r3 jossa Ph on fenyyli; R^ on H tai -OSifR^, R£, Rg) ja 15 R2 ja Rg ovat edellä määritellyt.

Reaktio toteutetaan -60 - 90°C:ssa, edullisesti -75°C:ssa, polaarisessa aproottisessa orgaanisessa liuot-timessa, esim. kuivassa eetterissä tai edullisesti kuivassa tetrahydrofuraanissa (THF), kun läsnä on vahva emäs, 20 kuten alkyylilitium, esim. butyylilitium.

Kaavan IVa tai IVb mukaisen yhdisteen suojaryhmät poistetaan reaktiolla fluorisuolan kanssa, esim. tetra-butyyliammoniumfluoridin kanssa polaarisessa orgaanisessa liuottimessa, esim. eetterissä tai edullisesti THF:ssa, 25 jolloin saadaan vastaavan kaavan Ia tai Ib mukainen yhdiste.

Kaaviossa 2 kaavan V mukainen yhdiste hapetetaan kaavan VI mukaiseksi yhdisteeksi käsittelemällä sitä ha-pettimella, esim. 2,2'-bipyridiniumkloorikromaatilla tai 30 edullisesti pyridiniumkloorikromaatilla aproottisessa orgaanisessa liuottimessa kuten metyleenikloridissa.

Kaavan VI mukainen yhdiste muutetaan kaavan Hb mukaiseksi yhdisteeksi reaktiolla esim. (trialkyylisilyy-li )imidatsolin kuten (trimetyylisilyyli )imidatsolin kanssa

II

7 90764 aproottisessa orgaanisessa liuottimessa kuten THF:ssa tai edullisesti metyleenikloridissa.

Kaavan V mukainen yhdiste voidaan myös osittain hydrata kaavan VII mukaiseksi yhdisteeksi reaktiolla pel-5 kistimen kanssa, esim. litiumalumiinihydridin kanssa, edullisesti alkalimetallialkoksidin, esim. natriummetok-sidin läsnä ollessa aproottisessa orgaanisessa liuottimessa esim. eetterissä tai edullisesti THF:ssa palautusjääh-dytyslämpötilassa (noin 68°C THF:11a) noin 10 - 20 tunnin 10 aikana.

Saatu kaavan VII mukainen yhdiste hapetetaan kaavan VIII mukaiseksi yhdisteeksi käsittelemällä sitä hapetti-mella kuten edellä on kuvattu kaavan V mukaisen yhdisteen hapetuksessa kaavan VI mukaiseksi yhdisteeksi.

15 Kaavan VIII mukainen yhdiste muutetaan kaavan Ha mukaiseksi yhdisteeksi reaktiolla (trialkyylisilyyli )imid-atsolin kanssa kuten edellä on kuvattu kaavan VI mukaisen yhdisteen muuttamisessa kaavan Hb mukaiseksi yhdisteeksi.

Kaaviossa 3 kaavan X mukainen yhdiste saatetaan 20 reagoimaan eetterissä, edullisesti THF:ssa palautusjääh-dytyslämpötilassa magnesiumin kanssa, saatua Grignard-liuosta käsitellään kupari(I)jodidilla ja sen jälkeen lisätään kaavan IX mukaista yhdistettä.

Saatu kaavan XI mukainen yhdiste saatetaan reagoi-25 maan fluoridisuolan kanssa, esim. tetrabutyyliammonium-fluoridin kanssa eetterissä tai edullisesti THFrssa.

Saatu kaavan XII mukainen yhdiste voidaan hapettaa kuten edellä on kuvattu kaavan V mukaisen yhdisteen hapetuksessa kaavan VI mukaiseksi yhdisteeksi.

30 Saatu kaavan XIII mukainen yhdiste muutetaan kaavan

Ile mukaiseksi yhdisteeksi reaktiolla (trialkyylisilyyli )imidatsolin kanssa kuten edellä on kuvattu kaavan VI mukaisen yhdisteen muuttamisessa kaavan Hb mukaiseksi yhdisteeksi.

8

Valmistettaessa kaavan IX mukainen yhdiste, jolla on kaava

CH

f xrv

1 H

HO

(Tetrahedron 40, 1984, 2283) voidaan saattaa reagoimaan 10 tosyloivan aineen kuten p-tolueenisulfonyylihalogenidin, esim. -kloridin, kanssa orgaanisessa emäksessä, esim. kol-lidiinissa tai edullisesti pyridiinissä. Saatu yhdiste, jolla on kaava 15 v^ots xv T h

HO

20 muutetaan sen jälkeen kaavan IX mukaiseksi yhdisteeksi reaktiolla trialkyylisilyylikloridin kanssa, esim. tri-metyylisilyylikloridin kanssa imidatsolin läsnä ollessa ja aproottisessa orgaanisessa liuottimessa, esim. THFtssa tai metyleenikloridissa.

25 Valmistettaessa kaavan X mukainen yhdiste, jolla on kaava

x-ch2ch2coch3 XVI

voidaan muuttaa yhdisteeksi, jolla on kaava

x-ch2ch2c(ch3)2-oh XVII

30 jossa X on edellä määritelty, saattamalla se reagoimaan metyyli-Grignard-reagenssin kanssa kuten metyylimagnesium-bromidin kanssa eetterissä. Kaavan XVII mukainen yhdiste muutetaan kaavan X mukaiseksi yhdisteeksi saattamalla se reagoimaan trialkyylisilyylikloridin kanssa kuten edellä il 9 90764 on kuvattu kaavan XV mukaisen yhdisteen muuttamisessa kaavan IX mukaiseksi yhdisteeksi.

Valmistettaessa kaavan V mukainen yhdiste edellä esitetty kaavan XV mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan 5 syanidia muodostavan aineen kanssa, esim. natriumsyanidin kanssa aproottisessa orgaanisessa liuottimessa, esim. di-metyylisulfoksidissa (DMSOrssa) lämpötilavälillä 80 -100°C 1-5 tuntia, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava

10 V^CN

XVIII

HO H

15 Tämä muutetaan yhdisteeksi, jolla on kaava £

CHO

XIX

20 T H

HO

saattamalla se reagoimaan pelkistimen kanssa, esim. di-isobutyylialumiinihydridin kanssa, ja sen jälkeen hydrolysoimalla esim. mineraalihapolla kuten vetykloridihapolla.

25 Pelkistys toteutetaan aproottisessa orgaanisessa liuottimessa, esim. metyleenikloridissa noin -10 - +10eC:ssa 20 - 90 minuutin aikana. Kaavan XIX mukainen yhdiste muutetaan yhdisteeksi, jolla on kaava

, H

30 i V*

Br XX

HO H

10 saattamalla se reagoimaan seoksen kanssa, jossa on tri-fenyylifosfiinia, hiilitetrabromidia ja sinkkipölyä, ap-roottisessa orgaanisessa liuottimessa, esim. metyleenik-loridissa, noin 1-30 tunnin ajan.

5 Kaavan XX mukainen yhdiste muutetaan yhdisteeksi, jolla on kaava 10 C5 h xxi HO ” saattamalla se reagoimaan vahvan emäksen kanssa, esim. butyylilitiumin kanssa polaarisessa aproottisessa liuot-15 timessa, esim. THF:ssa noin -80 - -70eC:ssa noin 1-3 tunnin ajan. Kaavan XXI mukainen yhdiste muutetaan yhdisteeksi, jolla on kaava *

--- XXII

Me3SiO

25 saattamalla se reagoimaan (trimetyylisilyyli)imidatsolin kanssa aproottisessa orgaanisessa liuottimessa, esim. THF:ssa tai metyleenikloridissa. Tämä yhdiste muutetaan yhdisteeksi, jolla on kaava

30 VX

ICH XXIII

Me3SiO

35 11 90764 saattamalla se reagoimaan vahvan emäksen kanssa, esim. butyylilitiumin kanssa ja sen jälkeen asetonin kanssa. Reaktio toteutetaan aproottisessa orgaanisessa liuottimes-sa, esim. THFissa noin -80 - -60®C:ssa. Kaavan XXIII mu-5 kaisesta yhdisteestä poistetaan suojaryhmä saattamalal se reagoimaan fluorisuolan kanssa, esim. tetrabutyyliammo-niumfluoridin kanssa orgaanisessa liuottimessa, esim. eetterissä tai THF:ssa, jolloin saadaan kaavan V mukainen yhdiste (kaavio 2).

10 Kaavan I mukaiset yhdisteet stimuloivat ihmisen keratinosyyttien erikoistumista ja vähentävät niiden jakaantumista. Siten ne ovat käyttökelpoisia hyperprolife-ratiivisten ihosairauksien kuten psoriasiksen, perussolu-karsinoomien,sarveistushäiriöiden ja sarveiskalvon tuleh-15 duksen hoitoon käytettävinä aineina. Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat myös käyttökelpoisia neoplastisten sairauksien kuten leukemian hoitoon käytettävinä aineina.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden aktiivisuus hyper-proliferatiivisten ihosairauksien hoitoon käytettävinä 20 aineina voidaan osoittaa esim. alalla tunnetuilla koeme-nettelyillä, jollaisia on kuvattu julkaisussa The Society for Investigative Darmatology 1986, 709 - 714. Edellä esitettyjen yhdisteiden A - F vaikutukset viljeltyjen ihmisen keratinosyyttien morfologiseen erikoistumiseen ver-25 rattuna 1,25-dihydroksikolekalsiferolin (yhdisteen X) vaikutukseen on ilmaistu jäljempänä taulukoissa 1-4 vijel-mässä olevien ihmisen keratinosyyttien lukumääränä 4 (x 10 ). Yhdiste, joka aiheuttaa perussolujen erikoistumista suomumaisiksi soluiksi ja kuorisoluiksi (envelope 30 cells) on käyttökelpoinen ihosairauksien hoitoon käytettävänä aineena, joille sairauksille ovat tunnusomaisia sarveistushäiriöt, kuten psoriasiksen hoitoon.

12

Taulukko 1 5 Yhdiste Annos Solujen lukumäärä (x io4) ·' (M) suomu- yhteen- perus- maisia kuori-sä so— solu- solu- solu- lu3a ia ja ja 10 Vertailu- 13315 Ϊ1814 15il 18±2 koe X ΙΟ"10 12214 103 ±2 19 + 2 23±1 10-8 112±6 8912 23l4 3013 10-6 9517 6416 31±1 3412 A 10-10 13218 11517 17il 2712

Iq-S 128110 1061B 2212 3312 10-6 10117 7115 30+2 3912 15 B ΙΟ"10 13316 115+5 18±1 2511 10-8 13114 10912 22l2 2912 10-6 10414 7413 30il 33tl 20

Taulukko 2

Yhdiste Annos Solujen lukumäärä (xlO4): 25 (M) suomu- yhteen- perus- maisia kuori-sä so— solu- solu- solu- luja ja ja ja

Vertailu- "· 123i7 105 + 6 1BH 74t7 koe 30 X 10”10 11619 9518 21ll 9114 U 10-8 lOlllO 7518 2612 122H1 ΙΟ”6 8315 5714 26±1 146ll6 C 10~10 11714 9212 25±2 103t6 10-8 10813 8012 28tl 128l3 ΙΟ"6 8017 5416 26±1 153tl D 10*1° 11317 9316 20±1 104H0 ΙΟ"8 11117 8613 25±2 12815 35 ΙΟ”6 9413 6811 26t2 14417 90764 13

Taulukko 3 4 5 Yhdiste Annos Solujen lukumäärä (x 10 ): (M) suomu- yhteen- perus- maisia kuori-sä so- solu- solu- solu- luja ja ja ja 10 _______

Vertailu- 108*10 93±8 15±2 88±8 koe X 10-10 106±7 86*6 18±1 100±9 10-8 84*8 61±5 2 3 ±3 122±8 10-6 73 ±7 51±5 22 ±2 142*11 E ΙΟ-10 86*4 63*2 23*2 114*5 ΙΟ"8 82*3 53*2 29*1 141*5 15 10-6 78*3 41*1 27*2 147*4 F 10“10 103*5 81*3 22*2 103*4 ΙΟ"8 97*3 67*2 29*1 121*6 ΙΟ"6 84*4 55*2 29*1 137*7 20

Kaavan I mukaisten yhdisteiden aktiivisuus hyper-proliferatiivisten ihosairauksien hoitoon käytettävinä aineina voidaan osoittaa myös määrittämällä kasvaneiden ihmisen keratinosyyttien lukumäärä ja muodostuneiden kuo-25 risolujen lukumäärä sekä viljelmissä kasvaneiden suomu-maisten karsinoomasolulinjojen (SCC-115) lukumäärä mainittujen yhdisteiden läsnä ollessa. Tulokset on annettu taulukoissa 4 ja 5: 14

Taulukko 4 5

Keratinosyyt- Kuorisolu-

Hoito Annos tien luku- jen luku- (M) määrä määrä (XlO4) (XlO2) 10

Vertai- 189,49122,3 858,28+185.70 lukoe (0,1 % etanoli)

Yhdis- 10'12 187,3 6ll5, 3 3 1136,63+ 383 T66 te E 10"10 175,34110,19 1444,871 312.47 15 7 7 r f 10"8 145 j79±15,66 2113,62±1049,33 10-6 41,951 7,53 1916,831 887,66

Vertai- 148.73ll6.23 2193.7+ 921.9 lukoe 20 (0,1% etanoli)

Yhdis- 10~12 114,91110,95 1662;2± 420,1 te A 10~10 130,37+24,32 3973,81 126,99 10~8 120,67116,87 7235,21 55,5 10"6 109,22115,87 8323.51 157,6 25 ’ f ' 11 90764 15

Taulukko 5

Hoito Annos Solulinjojen (SCC-15) 5 (M) lukumäärä (XlO-5)

Sokeakoe 7,3511,75 10 -12

Yhdiste E 10 6*9811,68 -10 10 5,8911,58 10-8 5.7611.53 -6 ' 10 0,4010,98 15 -6

Yhdiste A 10 0,4910,13 20

Edellä olevat tulokset osoittavat, että kaavan I mukaiset yhdisteet aiheuttavat ihosolujen erikoistumista ja ovat siten käyttökelpoisia hyperproliferatiivisten ihosairauksien kuten psoriasiksen hoidossa.

25 Kaavan I mukaisten yhdisteiden aktiivisuuden ha vainnollistamiseksi neoplastisten sairauksien hoitoon käytettävinä aineina tutkittiin yhdisteiden A - F ja ihmisen promyelosyyttisten HL-60 kasvainsolujen solujen jakaantumista estävät (AP) ja erikoistumista aiheuttavat (DI) vai- 30 kutukset. Taulukossa 6 on annettu yhdisteen AP-vaikutus solujen lukumäärän pienenemisprosentteina ja ID5g-pitoi-suutena, joka pienensi solujen lukumäärää 50 %:lla. DI-vaikutus on ilmaistu prosentteina erikoistuneita soluja ja yhdisteiden ED^Q-pitoisuutena, joka aiheutti 50 %:lle 35 soluista erikoistumista.

Taulukko 6 16

Solujen lu- Erikois- 5 kumäärän pie- tuneita

Pitoisuus neneminen soluja ED5Q

(xlO 8M) (%) (x10“8M) (%) (x10-8M)

Yhdiste X

10 0;01 6 3

0,1 5 H

1 16 2 19 2 10 66 68 15 100 84 98

Yhdiste A

0,01 10 3 20 °Γ 1 33 16 1 84 0,2 92 0,2 10 85 97 100 85 98

2g Yhdiste B

0^1 10 5 1 8 4 10 14 35 6 32 30 100 82 93 1000 95 95 17 90764

Yhdiste C

, e 3 0.01 18 5 o,1 20 19

l 81 O-3 92 V

97 10 85 ÖC 99 100 86

10 Yhdiste D

0,1 12 1 7 2 1 12 10 17 150 i 17 200 15 100 46 31

Ior 97 95 ·- 20 , 9 0.01 6 Γ 50 0.1 59 ' I O 07 96 0,1 1 80 υ,υ/ 7 98 10 I 81

25 „ I

Yhdiste F

4 0.1 13 7 12 1 1° · . 70 31 70 30 10° 58 91 1000 I 95 Nämä tiedot osoittavat, että kaikki kyseessä olevat yhdisteet hillitsevät ihmisen promyelosyyttisten solujen 35 jakaantumista in vitro, eivätkä ne ole kuitenkaan soluille 18 myrkyllisiä. Lisäksi solut erikoistuvat kehittyneemmiksi fenotyypeiksi samoilla annoksilla, jotka ehkäisevät solu-jakaantumista. Näistä tuloksista voidaan nähdä, että jokainen tutkittu yhdiste on käyttökelpoinen neoplastisten 5 sairauksien kuten leukemian hoidossa käytettävänä aineena. Pehmeän kudoksen kalkkeutumismalli Tämän testin tarkoituksena oli määrittää keksinnön mukaisten yhdisteiden vaikutus pehmeän kudoksen kalkkeutumiseen. Rottia leimattiin antaamlla niille kokeen ensim-10 mäisenä päivänä ihon alle 40 pCi 45Ca. Yhdisteitä annettiin joko ihon alle tai paikallisesti neljänä peräkkäisenä päivänä. Rotat tapettiin hiilidioksidilla 24 tuntia viimeisen injektion jälkeen. Sydämet ja munuaiset poistettiin ja ne laitettiin lasisiin tuikeastioihin ja annettiin digeroida 15 24 tuntia 2,0 ml:ssa typpihappoa. Määrätilavuus (0,2 ml) digerointiliuoksesta lisättiin 9,8 ml:aan Aquasolia ja laskettiin tuikelaskimessa.

Kalkkeutumissuhde on laskettu kyseessä oleville yhdisteille ja määritetty seuraavasti.

20 1,25 (OH)2D3 cpm - kontrolli cpm

Kalkkeutumissuhde = -

Yhdiste cpm - kontrolli cpm

Saadut kalkkeutumissuhteet useille vitamiini D-ana-25 logeille ovat:

Yhdiste Ihonalaisesti Paikallisesti 1.25 (OH)2D3 Xl 1 1.25 (ΟΗ)2-16Δϋ3 A 486 30 25 (OH)-16AD3 B 5 1.25 (OH)2-16A-23-yyniD3 E 47 <1 25 (OH)-16A-23-yyniD3 F >1400 >34 25 (OH)-l6A-23-eeniD3 D >1400 >34 35 Yllä olevien tulokset osoittavat että keksinnön mukaiset yhdisteet aiheuttavat vähemmän pehmeän kudoksen

II

90764 19 kalkkeutumista kuin yhdiste X. Pehmeän kudoksen kalkkeutuminen on ei-toivottu sivuvaikutus yhdisteellä, joka käytetään hyperproliferatiivisten ihosairauksien ja neoplastis-ten sairauksien hoidossa.

5 Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan antaa oraali sesti neoplastisten sairauksien hoidossa tai hyperproliferatiivisten ihosairauksien hoidossa lämminverisille eläimille, jotka tarvitsevat tällaista hoitoa, esim. aikuiselle ihmiselle 0,1 - 10 pg:n annoksina päivässä.

10 Hyperproliferatiivisten ihosairauksien hoidossa kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan antaa myös paikallisesti lämminverisille eläimille, jotka tarvitsevat tällaista hoitoa, annostuksella 1-1 000 pg/g paikallisesti käytettävää formulaatiota päivässä.

15 Kaavan I mukaisten yhdisteiden oraalisiin annostus- muotoihin voivat kuulua esim. kapselit tai tabletit, joissa on farmaseuttisesti hyväksyttäviä katajia. Esimerkkejä sellaisista kantaja-aineista, joita voidaan käyttää kapseleissa, ovat sideaineet kuten traganttikumi tai gelatii-20 ni, täyteaineet kuten dikalsiumfosfaatti, hajottavat aineet kuten maissitärkkelys, luistoa lisäävät aineet kuten magnesiumstearaatti, makeutusaineet kuten sakkaroosi ja aromiaineet kuten piparminttu. Tabletit voidaan päällystää sellakalla, sokerilla tai molemmilla. Siirappi tai elik-25 siiri voi sisältää makeutusainetta, metyyli- ja propyyli-parabeenejä säilöntäaineina, väriainetta ja aromiainetta.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden paikalliset annos-tusmuodot käsittävät salvat ja voiteet, joihin kuuluvat formulaatiot, joissa on öljyinen, adsorboiva, veteen liu-30 keneva tai emulsiotyyppinen pohja, kuten lanoliini ja po-lyetyleeniglykolit. Paikalliset annostusmuodot käsittävät myös geelit, liuokset, jauheet ja aerosolit. Paikallisia koostumuksia voidaan myös käyttää ihon tai limakalvojen 20 tulehdusten hoidossa, esim. suun tai paksusuolen limakalvojen tulehdusten hoidossa.

Liuokset eli nestemäiset valmisteet, jotka vaihte-levat yksinkertaisista liuoksista vesipitoisiin hydroalko-5 holivalmisteisiin, jotka sisältävät hienojakoisia aineksia, voivat sisältää suspendoivia tai dispergoivia aineita kuten selluloosan johdannaisia, esim. etyyli- tai metyyli-selluloosaa, gelatiinia tai kumeja, jotka sisältävät aktiivisen ainesosan vedestä, alkoholista tai glyseriinistä 10 valmistetussa väliaineessa. Geelit ovat puolijähmeitä valmisteita, jotka on tehty hyytelöimällä liuosta tai suspensiota, jossa on aktiivista ainesosaa kantajaväliaineessa. Väliaineet, jotka voivat sisältää vettä tai olla vedettömiä, hyytelöidään käyttäen hyytelöivää ainetta, esim. 15 karboksipolymetyleeniä, ja neutraloidaan sopivaksi geeli-mäiseksi koostumukseksi käyttäen emäksiä, esim. natrium-hydroksidia tai amiineja kuten polyetyleenikookosamiinia.

Esimerkki 1 a) Seosta, jossa on 3,24 g [l(R*),3aR*~ 20 ( 3ap,4a,7aa)]-3a,4,5,6,7,7a-heksahydro-4-hydroksi^,7a- dimetyyli-3H-indeeni-l-etanolia, 30 ml pyridiiniä ja 3,51 g p-tolueenisulfonyylikloridia, sekoitetaan 0°C:ssa 18 h. Kun seokseen on lisätty jäätä ja se on laimennettu vedellä, sitä uutetaan metyleenikloridilla. Orgaaninen 25 faasi pestään IN I^SO^rlla, kylläisellä NAHCO^illa, sen jälkeen kuivataan ja haihdutetaan. Jäännös kromatografoi-daan silikageelillä eluoiden etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella (1:1:5), jolloin saadaan 4,61 g (82 %) [ 1 (R* ), 3aR*-(3ap, 4a, 7aa) ] -3a, 4,5, 6,7,7a-heksahydro-4-hydr-30 oksi-β, 7a-dimetyyli-3H-indeeni-l-etanoli-4-metyylibentsee-nisulfonaattia, [a]^p +31,9° (c 0,53, CHCl^).

b) Liuokseen, jossa on 4,61 g kohdan a) tuotetta 22 ml:ssa DMS0:a, lisätään 1,10 g natriumsyanidia ja seosta kuumennetaan 90eC:ssa 2 tuntia. Kun seos on jäähdytetty 35 huoneen lämpötilaan, seosta pumpataan liuottimen poista-

II

90764 21 miseksi ja laimennetaan sen jälkeen vedellä. Seosta uutetaan eetterillä. Orgaaninen faasi pestään kylläisellä suolaliuoksella, kuivataan ja haihdutetaan. Jäännös kroma-tografioidaan silikageelillä eluoiden metyleenikloridin, 5 heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella (86:7:7), jolloin saadaan 2,52 g (91 %) [l(R*),3aR*-(3ap,4a,7aa)]- 3a,4,5,6,7,7a-heksahydro-4-hydroksi~3,7a-dimetyyli-3H-in-deeni-l-propaaninitriiliä, [a]^p +29,2° (c 0,65, CHCl^).

c) Seokseen, jossa on 6,85 ml di-isobutyylialumii-10 nihydridiä heksaanissa ja 5,2 ml metyeenikloridia -6eC:ssa, lisätään 0,430 g kohdan b) tuotetta liuotettuna 10 ml:aan metyleenikloridia. Seosta sekoitetaan -6°C:ssa 55 minuuttia. Kun seokseen on lisätty kylläistä ammonium-kloridia, se hydrolysoidaan 3N HCl:n ja eetterin seoksella 15 (2:1). Vesipitoista kerrosta uutetaan eetterillä. Orgaani set kerrokset pestään kylläisellä suolaliuoksella, kuivataan ja haihdutetaan. Jäännös kromatografoidaan silikageelillä eluoiden etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella (1:2), jolloin saadaan 260 mg (60 %) [l(R*),3aR*- 20 ( 3ββ,4α,7aa)]-3a,4,5,6,7,7a-heksahydro-4-hydroksi-p,7a- 22 dimetyyli-3H-indeeni-l-propanaalia, [a] Q +43,l°(c 0,32, CHClg).

d) Seosta, jossa on 1,77 g trifenyylifosfiinia, 2,23 g hiilitetrabromidia, 441 mg sinkkipölyä ja 23 ml 25 metyleenikloridia, sekoitetaan 25°C:ssa 31 h. Tähän seokseen lisätään liuos, jossa on 0,430 g kohdan c) tuotetta 38 ml:ssa metyleenikloridia, ja seosta sekoitetaan 18 tuntia. Seos laimennetaan pentaani811a ja liukenematon aine suodatetaan. Liukenematon fraktio liuotetaan metyleeni-30 kloridiin ja liuos laimennetaan jälleen pentaanilla. Suodattamisen jälkeen yhdistetyt suodokset haihdutetaan. Jäännös puhdistetaan käyttäen silikageeliä eluoiden etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella (1:4), jolloin saadaan 0,490 g (67 %) [l(R*),3aR*-(3ap,4a,7aa))-l-(4,4-dibromi-35 22 l-metyyli-3-butenyyli)-3a,4,5,6,7,7a-heksahydro-7a-metyy-li-3H-inden-4-olia, [a]22 +14,4° (c 0,55, CHC13).

e) Liuokseen, jossa on 0,680 g kohdan d) tuotetta 31 ml:ssa THF:a -75eC:ssa, lisätään tipoittain 3,77 ml 5 1,6M butyylilitiumin heksaaniliuosta. Seosta sekoitetaan -75eC:ssa 1 tunti ja 25°C:ssa 1 h. Kun seokseen on lisätty kylläistä suolaliuosta, se laimennetaan kylläisellä NaHCO^in vesiliuoksella ja sitä uutetaan eetterillä. Orgaaninen faasi pestään kylläisellä suolaliuoksella, kuiva-10 taan ja haihdutetaan. Jäännös kromatografoidaan silikagee-lillä eluoiden etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella (1:4), jolloin saadaan 0,350 g (89 %) [l(R*),3aR*- (3ap,4a,7aa)]-3a,4,5,6,7,7a-heksahydro-7a-metyyli-l-(1- 22 metyyli-3-butynyyli)-3H-inden-4-olia, [a] D +30,7° ] 15 (c 0,42, CHC13).

f) Liuokseen, jossa on 1,29 g kohdan e) tuotetta 80 ml:ssa metyleenikloridia, lisätään 3,59 g l-(trimetyy-lisilyyli)imidatsolia. Seosta sekoitetaan 25’C:ssa 3 tuntia. Kun seokseen on lisätty 40 ml vettä ja sitä on sekoi- 20 tettu 20 minuuttia, sitä uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi pestään vedellä ja kylläisellä suolaliuoksella, kuivataan ja haihdutetaan. Jäännös puhdistetaan silikageelillä eluoiden etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella (1:15), jolloin saadaan 1,70 g (99 %) [l(R*),3aR*-25 (3a£, 4a,7aa)]-3a,4,5,6,7,7a-heksahydro-7a-metyyli-l-(1- metyyli-3-butynyyli )-4- [ (trimetyylisilyyli Joksi] -3H-indee-niä, [a]2° +39,7° (c 0,30, CHC13).

g) Liuokseen, jossa on 1,70 g kohdan f) tuotetta 48 ml:ssa THF:a -75°C:ssa, lisätään tipoittain 6,01 ml 30 1,6M butyylilitiumin heksaaniliuosta. Kun seosta on sekoi tettu 40 minuuttia, siihen lisätään 3,05 ml asetonia ja sitä sekoitetana -75°C:ssa 20 minuuttia ja 25°C:ssa 75 minuuttia. Lisätään 40 ml 2M KHC03:n ja IM kaliumnatrium-tartraatin seosta (1:1), ja sen jälkeen seosta sekoitetaan 35 20 minuuttia ja sitten uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaa-

II

90764 23 ninen faasi pestään kylläisellä suolaliuoksella, kuivataan ja haihdutetaan. Jäännös kromatografoidaan silikageelillä eluoiden etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella (1:5), jolloin saadaan 1,62 g (89 %) [l(R*),3aR*-(3ap,4a,7aa)]~ 5 6-( 3a, 4,5,6,7,7a-heksahydro-7a-metyyli-4-[ (trimetyylisi- lyyli Joksi]-3H-inden-l-yyli)-2-metyyli-3-heptyn-l-olia, [a]2° +39,7° (c 0,30, CHClg).

h) Liuokseen, jossa on 1,62 g kohdan g) tuotetta 53 ml:ssa THF:a, lisätään 15,5 ml IM tetrabutyyliammonium-10 fluoridin THF-liuosta. Seosta sekoitetaan 50 minuuttia.

Kun seos on laimennettu puolikylläisellä NaHC0^:lla, sitä haihdutetaan, niin että suurin osa liuottimesta poistuu ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi pestään puolikylläisellä suolaliuoksella, kuivataan ja haihdute-15 taan. Jäännös kromatografoidaan silikageelillä eluoiden etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella (1:1), jolloin saadaan 1,17 g (82 %) [l(R*),3aR*-(3ap,4a,7aa)]- 3a,4,5,6,7,7a-heksahydro-l-(1,5-dimetyyli-5-hydroksi-3-heksynyyli)-7a-metyyli-3H-inden-4-olia, sp. 105 - 107*C.

20 i) Liuokseen, jossa on 0,720 g kohdan h) tuotetta 44 ml:ssa metyleenikloridia, lisätään 1,59 g natriumase-taattia ja 3,18 g 2,2 *-bipyridiniumkloorikromaattia. Seosta sekoitetaan 2 tuntia. Sen jälkeen lisätään vielä 1,59 g 2,2'-bipyridiniumkloorikromaattia ja sekoitusta 25 jatketaan 2 tuntia. Sen jälkeen kun seokseen on lisätty 6 ml 2-propanolia, se laimennetaan vedellä ja sitä uutetaan eetterin ja etyyliasetaatin seoksella (1:1). Orgaaninen faasi pestään vedellä IN ^SO^lla, kylläisellä NaHCO^Ha ja kylläisellä suolaliuoksella. Kuivaamisen jälkeen liuos 30 haihdutetaan ja jäännös kromatografoidaan silikageelillä eluoiden etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella (1:1), jolloin saadaan 0,560 g (78 %) [l(R*),3aR*-(3ap,7aa)]~ 3,3a,5,6,7,7a-heksahydro-l-(5-hydroksi-l,5-dimetyyli-3- 20 heksynyyli)-7a-metyyli-4H-inden-4-onia, [a] D +35,3° 35 (c 0,36, CHC13).

24 j) Liuokseen, jossa on 0,552 g esimerkin kohdan i) tuotetta 70 ml:ssa metyleenikloridia, lisätään 2,00 g l-(trimetyylisilyyli)imidatsolia. Kun seosta on sekoitettu 17 tuntia ja siihen on lisätty 22 ml vettä, sitä uutetaan 5 etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi pestään vedellä ja kylläisellä suolaliuoksella ja sen jälkeen kuivataan ja haihdutetaan. Jäännös kromatografoidaan silikageelllä eluoiden etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella (1:4), jolloin saadaan 0,693 g (99 %) [l(R*),3aR*-(3ap,7aa)]- 10 3,3a,5,6,7,7a-heksahydro-l-(1,5-dimetyyli-5-[(trimetyyli- silyyli)oksi]-3-heksynyyli)-7a-metyyli-4H-inden-4-onia, [a]2° +29,5° (c 0,20, CHClg).

k) Liuokseen, jossa on 2,00 g [3S-(lZ,3a, 5β)]-[2-[3,5-bis[ [ (1,1-dimetyyli )dimetyylisilyyli]oksi] -2-metylee-15 nisykloheksylideeni] etyyli]difenyylifosfiinioksidia 45 ml:ssa THF:a -75eC:ssa, lisätään tipoittain 1,87 ml 1,6M butyylilitiumin heksaaniliuosta. Kun seosta on sekoitettu 6 minuuttia, siihen lisätään tipoittain liuosta, jossa on 0,693 g kohdan j) tuotetta 26 ml:ssa THF:a. Kun seosta on 20 sekoitettu -75°C:ssa 70 minuuttia ja siihen on lisätty IM kaliumnatriumtartraatin ja 2M KHCO^in seosta (1:1), sitä uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi pestään kylläisellä suolaliuoksella, kuivataan ja haihdutetaan. Jäännös kromatografoidaan silikageelillä eluoiden etyyliase-25 taatin ja heksaanmin seoksella (1:15), jolloin saadaan 1,23 g (87 %) (Ια,3β,5Z,7E)-1,3-bis[[1,1-dimetyylietyyli)-dimetyylisilyyli]oksi-25-[ (trimetyylisilyyli Joksi]-9,10-secokolesta-5,7,10(19),16-tetraen-3-yyniä, [a]22 +47,1° (c 0,21, CHC13).

30 1) Liuokseen, jossa on 0,228 g kohdan k) tuotetta 11 ml:ssa THF:a, lisätään 1,92 ml IM tetrabutyyliammonium-fluoridin THF-liuosta. Seosta sekoitetaan 16 tuntia. Kun seos on laimennettu vedellä, sitä uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi pestään puolikylläisellä suola-35 liuoksella ja kylläisellä suolaliuoksella, kuivataan ja

II

90764 25 haihdutetaan. Jäännös puhdistetaan silikageelillä eluoiden etyyliasetaatin ja heksanin seoksella (3:1), jolloin saadaan 0,126 g (96 %) l,25-dihydroksi-16-dehydro-23-didehyd-rokolekalsiferolla, [a]2* +21,5° (c 0,20, MeOH).

5 Esimerkki 2 a) Menetellään kuten esimerkissä lk) on kuvattu, mutta lähtöaineina käytetään 0,343 g [5S-(1Z)]-[2-[5-[[(1,1-dimetyylietyyli)dimetyylisilyyli]oksi-2-metyleeni-sykloheksylideeni)etyyli]difenyylifosfiinioksidia ja 10 0,186 g esimerkin 1 j) tuotetta, jolloin saadaan 0,205 g (80 %) (3β,5Z,7E)-3-[[(1,1-dimetyylietyyli)dimetyylisilyy-li]oksi]-25-[(trimetyylisilyyli)oksi]-9,10-secokolesta-5,7,10(19),16-tetraen-23-yyniä, MS m/e 580 (M+).

b) Käsittelemällä 0,248 g kohdan a) tuotetta kuten 15 esimerkissä 11) on kuvattu, saadaan 0,153 g (91 %) 25- 21 hydroksi-16-dehydro-23-didehydrokolekalsiferolia, [a] D +99,6° (c 0,25, MeOH).

Esimerkki 3 a) Seokseen, jossa on 0,146 g litiumalumiinihydri-20 diä, 0,211 g natriummetoksidia ja 6,5 ml THF:a 0°C:ssa, lisätään tipoittain liuosta, jossa on 0,180 g esimerkin lh) tuotetta 13 ml:ssa THF:a. Seosta kuumennetaan 68*C:ssa 16 tuntia ja jäähdytetään jälleen 0°C:seen. Kun seos on laimennettu 13 ml:11a eetteriä ja siihen on lisätty 0,30 25 ml vettä ja 0,26 ml 10-prosenttista Na0H:n vesiliuosta, sitä sekoitetaan huoneen lämpötilassa 1 tunti ja se suodatetaan. Kiinteät aineet trituroidaan eetterillä ja suodatetaan. Yhdistetyt suodokset haihdutetaan ja kromatogra-foidaan silikageelillä eluoiden etyyliasetaatin ja heksaa-30 nin seoksella (1:2), jolloin saadaan 0,179 g (99 %) [1(R*),1(3E),3ap,4a,7aa)]-(3a,4,5,6,7,7a-heksahydro-l-(5-hydroksi-1,5-dimetyyli-3-heksenyyli)-7a-metyyli-lH-inden- 4-olia, [a]2J +11,5° (c 0,33, CHCI3).

b) Liuokseen, jossa on 0,120 g kohdan a) tuotetta 35 10 ml:ssa metyleenikloridia, lisätään 0,500 g pyridinium- 26 dikromaattia ja 25 mg pyridinium-p-tolueenisulfonaattia. Seosta sekoitetaan 135 minuuttia. Kun seokseen on lisätty 40 ml eetteriä, sitä sekoitetaan 5 minuuttia ja se suodatetaan. Kiinteät aineet trituroidaan eetterillä ja suoda-5 tetaan. Yhdistetyt suodokset pestään kylläisellä CuSO^in vesiliuoksella, vedellä, puolikylläisellä NaHCOgtn vesi-liuoksella ja kylläisellä suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivataan ja haihdutetaan. Jäännös kromatografoidaan silikageelillä eluoiden 35 % etyyliasetaatin ja heksaanin 10 seoksella, jolloin saadaan 90 mg (76 %) [ 1 (R*), 1 (3E),(3ββ,7aa)]-3,3a,5,6,7,7a-heksahydro-l- ( 5-hydroksi-1,5-dimetyyli-3-heksenyyli)-7a-metyyli-4H-inden- 4-onia, [a]2^ +30,6° (c 0,17, CHClg).

c) Käsittelemällä 0,099 g kohdan b) tuotetta kuten 15 esimerkissä 1j) on kuvattu saadaan 0,111 g (89 %) [1(R*),1(3E), (3ap,7aa)]-3,3a,5,6,7,7a-heksahydro-l-(l,5-dimetyyli-5-[(trimetyylisilyyli Joksi]-3-heksenyyli)-7a-metyyli-4H-inden-4-onia, [a]2^ +26,4® (c 0,22, CHClg).

d) Menetellään kuten esimerkissä lk) on kuvattu, 20 mutta lähtöaineina käytetään 0,265 g [3S-(1Z,3α,5β)]- [2- [3,5-bis[ [ (1,1-dimetyyli )dimetyylisilyyli]oksi]-2-me-tyleenisykloheksylideeni] etyyli ]difenyyli f osfiinioksidia ja 0,095 g kohdan c) tuotetta, jolloin saadaan 0,162 g (83 %) (1β,3a,5Z,7E,23E)-1,3-bis[[(1,1-dimetyylietyyli)- 25 dimetyylisilyyli]oksi]-25-[(trimetyylisilyyli)oksi]-9,10-secokolesta-5,7-10(19),16,23-pentaeeniä, MS m/e 712 (M+).

e) Käsittelemällä 0,159 g kohdan d) tuotetta kuten esimerkissä 11) on kuvattu saadaan 0,077 g (84 %) 1,25- 24 dihydroksi-16,23E-bisdehydrokolekalsiferolia, [a] D+46,5° 30 (c 0,20, MeOH).

Esimerkki 4 a) Menetellään kuten esimerkissä lk) on kuvattu, mutta käytetään lähtöaineina 0,225 g [5S-(lZ)]-[2-[5-[ [ (1,1-dimetyylietyyli )dimetyylisilyyli]oksi] -2-metyleeni-35 sykloheksylideeni]etyyli]difenyylifosfiinioksidia ja

II

90764 27 0,110 g esimerkin 3c) tuotetta, jolloin saadaan 0,150 g (81 %) (3β,5Z,7E,23E)-3-[[1,1-dimetyylietyyli)-dimetyyli-silyyli] oksi] -25- [ (trimetyylisilyyli )oksi] -9,10-secokoles-ta-5,7,10(19),16,23-pentaeeniä, [a]2* +68,3° (c 0,18, 5 CHClg).

b) Käsittelemällä 0,144 g kohdan a) tuotetta kuten esimerkissä 11) on kuvattu saadaan 0,076 g (78 %) 25-hyd-roksi-16,23E-bisdehydrokolekalsiferolia, [a]22 +62,5° (c 0,20, MeOH).

10 Esimerkki 5 a) Liuokseen, jossa on 6,25 g etyyli-3-bromipro-pionaattia 28 ml:ssa THF:a -20°C:ssa, lisätään 28,8 ml 2,8M metyylimagnesiumbromidin eetteriliuosta. Seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 170 minuuttia. Kun seokseen 15 on lisätty 15 ml kylläistä ammoniumkloridin vesiliuosta ja 42 ml IN HCl:a, orgaaninen faasi erotetaan ja vesipitoista faasia uutetaan eetterillä. Orgaaniset uutteet pestään kylläisellä suolaliuoksella, kuivataan ja haihdutetaan. Jäännös kromatografoidaan silikageelillä eluoiden 20 30 % etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella, jolloin saa daan 2,57 g (45 %) 4-bromi-2-metyyli-2-butanolia, MS m/e 151 (M+-CH3).

b) Liuokseen, jossa on 2,56 g 4-bromi-2-metyyli- 2-butanolia ja 4,86 g imidatsolia 15 ml:ssa N,N-dimetyyli- 25 formamidia 0°C:ssa, lisätään 6,48 g klooritrietyylisilaa-nia. Seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 200 minuuttia. Kun seokseen on lisätty jäätä, se laimennetaan vedellä ja sitä uutetaan pentaanilla. Orgaaninen faasi pestään vedellä ja kylläisellä suolaliuoksella, kuivataan ja haih- 30 dutetaan. Jäännös kromatografoidaan silikageelillä eluoiden pentaanilla, jolloin saadaan 4,02 g (93 %) (3-bromi- 1,1-dimetyylipropoksi)trietyylisilaania, MS m/e 265 (m+-ch3).

c) Liuokseen, jossa on 0,930 g [l(R*),3aR*- 35 (3ap,4a,7aa)]-3a,4,5,6,7,7a-heksahydro-4-hydroksi-p,7a- 28 dimetyyli-3H-indeeni-l-etanoli-4-metyyli-bentseenisulfo-naattia ja 1,10 g imidatsolia 73 ml:ssa metyleenikloridia 0°C:ssa, lisätään 0,580 g klooritrietyylisilaania. Seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia. Kun seokseen 5 on lisätty jäätä, se laimennetaan vedellä ja sitä sekoitetaan 20 minuuttia. Orgaanista kerrosta uutetaan metyleeni-kloridilla. Uutteet pestään vedellä, IN N2S04:lla, kylläisellä NaHCO^n vesiliuoksella ja kylläisellä suolaliuoksella. Kuivaamisen ja haihduttamisen jälkeen jäännös puh-10 distetaan silikageelillä eluoiden etyyliasetaatin ja hek-saanin seoksella (1:5), jolloin saadaan 1,22 g (100 %) [1(R*),3aR*-(3ap,4a,7a)]-3a,4,5,6,7,7a-heksahydro-4- [ (trietyylisilyyli )oksi]-β,7a-dimetyyli-3H-indeeni-l- 20 etanoli-4-metyylibentseenisulfonaattia, [a] D +46,1° 15 (c 0,31, CHC13).

d) Liuokseen, jossa on 3,08 g (3-bromi-l,1-di-metyylipropoksi)trietyylisilaania 31 ml:ssa THFra, lisätään 0,282 g magnesiumia. Seosta kuumennetaan 68eC:ssa 3,5 tuntia. Sen jälkeen seosta, jossa on 0,686 g kupari(I)jo- 20 didia ja edellä mainittua Grignard-liuosta, sekoitetaan 3eC:ssa 30 minuuttia. Tähän seokseen lisätään 1,02 g kohdan c) tuotetta ja seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 40 minuuttia. Kun seokseen on lisätty jään ja veden seosta, sitä uutetaan eetterillä. Orgaaninen faasi pestään IN 25 t^SO^zlla ja kylläisellä NaHCO^n vesiliuoksella, kuivataan ja haihdutetaan. Jäännös kromatografoidaan silikageelillä eluoiden etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella (1:15), jolloin saadaan 1,80 g [l(R*),3aR*-(3ap,4a,7aa)]-3a, 4, 5,6,7,7a-heksahydro-l - [1,5-dimetyyli-5- [ (trietyyli-30 silyyli Joksi]heksyyli]-4-[(trietyylisilyyli)oksi]-7a-metyyli-3H-indeeniä, MS m/e 479 (M+-Et).

e) Liuokseen, jossa on 1,60 g kohdan d) tuotetta 5 ml:ssa THF:a, lisätään 2,00 ml IM tetrabutyyliammonium-fluoridin THF-liuosta. Seosta kuumennetaan 68°C:ssa 50 35 minuuttia. Kun seos on jäähdytetty huoneen lämpötilaan,

II

90764 29 se laimennetaan vedellä ja sitä uutetaan metyleeniklo-ridilla. Orgaaninen faasi pestään suolaliuoksella, kuivataan ja haihdutetaan. Jäännös puhdistetaan silikageelillä eluoiden etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella (1:1), 5 jolloin saadaan 0,420 g (79 %) [l(R*),3aR*-(3ap,4aa,7aa)j-3a, 4, 5,6,7,7a-heksahydro-4-hydroksi-a, a-£, 7a-tetrametyyli-lH-indeeni-l-pentanolia, [aj^p +12,0° (c 0,25, CHCl^)· f) Liuokseen, jossa on 0,210 g kohdan e) tuotetta 18 ml:ssa metyleenikloridia, lisätään 0,870 g pyridinium- 10 dikromaattia ja 44 mg pyridinium-p-tolueenisulfonaattia. Seosta sekoitetaan 175 minuuttia. Kun seokseen on lisätty 50 ml eetteriä, sitä sekoitetaan 5 minuuttia ja se suodatetaan. Kiinteät aineet pestään kylläisellä CuSo^rn vesi-liuoksella, vedellä, puolikylläisellä NaHCO^rn vesiliuok- 15 sella ja kylläisellä suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivataan ja haihdutetaan. Jäännös kromatografoidaan silikageelillä eluoiden 35 % etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella, jolloin saadaan 0,175 g (84 %) [l(R*),3aR*-(3ββ,7aa)]-3,3a,5,6,7,7a-heksahydro-l-(5-hydroksi-l,5-di- 20 metyyliheksyyli )-7a-metyyli-4H-inden-4-onia, [a]^* +28,2° (c 0,22, CHC13).

g) Käsittelemällä 0,168 g kohdan f) tuotetta kuten esimerkissä 1j) on kuvattu saadaan 0,211 g (100 %) [ 1 (R*),3aR*-(3ap,7aa)]-3,3a,5,6,7,7a-heksahydro-l-(1,5- 25 dimetyyli-5- [ (trimetyylisilyyli Joksi]heksyyli)-7a-metyyli- 4H-inden-4-onia, [a]2° +21,9° (c 0,27, CHClg).

h) Menetellään kuten esimerkissä lk), mutta käytetään lähtöaineina 0,581 g [3S-(1Z,3α,5β)]-[2-[3,5-bis[ [ (1,1-dimetyyli Jdimetyylisilyyli joksi]-2-metyleenisyk- 30 loheksylideeni]etyylijdifenyylifosfiinioksidia ja 0,210 g kohdan g) tuotetta, jolloin saadana 0,358 g (83 %) (Ια, 3β,5Z,7E)-1,3-bis[[(1,1-dimetyylietyyli Jdimetyyli-silyyli joksi] -25- [ (trimetyylisilyyli Joksi]-9,10-secokoles-ta-5,7,10(19),16-tetraeeniä, MS m/e 714 (M+).

30 i) Käsittelemällä 0,350 g kohdan h) tuotetta kuten esimerkissä 11) on kuvattu saadaan 0,168 g (83 %) 1,25- 20 dihydroksi-16-dehydrokolekalsiferolia, [a] D +40,0° (c 0,17, MeOH).

5 Esimerkki 6 a) Menetellään kuten esimerkissä lk), mutta käytetään lähtöaineina 0,383 g [5S-(1Z)]-[2-[5-[[(1,1-di-metyy 1 ietyy 1 i ) dimetyy 1 isilyy 1 i ] oksi ] -2-metyleenisyhklohek-sylideeni]etyyli]difenyylifosfiinioksidia ja 0,188 g esi- 10 merkin 5g) tuotetta, jolloin saadaan 0,245 g (78 %) (3a, 5Z, 7E )-3- [ [1,1-dimetyylietyyli )dimetyylisilyyli]oksi]- 25-[(trimetyylisilyyli)oksi]-9,10-secokolesta- 24 5,7,10(19),16-tetraeeniä, [ou D +67,5° (c 0,20, CHCl^).

b) Käsittelemällä 0,239 g kohdan a) tuotetta kuten 15 esimerkissä 11) on kuvattu saadaan 0,135 g (83 %) 25-hyd- roksi-16-dehydrokolikalsiferolia, [a]2^ +75,4" (c 0,13, MeOH).

Seuraavat esimerkit A ja B valaisevat oraalisesti annettavien pehmeiden gelatiinikapseleiden ja paikallises-20 ti käytettävän voiteen koostumuksia:

Esimerkki A

mg/kapseli

Yhdiste E 0,0001 - 0,010

Butyloitu hydroksitolueeni 0,016 25 Butyloitu hydroksianisoli 0,016

Fraktioitu kookospähkinäöljy 160,0

Esimerkki B

mg/g voidetta

Yhdiste E 0,001 - 1,0 30 Setyylialkoholi 1,5

Stearyylialkoholi 2,5

Sorbitaanimonostearaatti 2,0

Glyseryylimonostearaatti ja polyoksietyleeniglykolistearaatti 4,0 35 Polysorbate 60 1,0 90764 31

Mineraaliöljy 4,0

Propyleeniglykoli 5,0

Propyleeniparabeeni 0,05

Butyloitu hydroksianisoli 0,05 5 Sorbitoliliuos 2,0

Dinatriumedetaatti 0,01

Metyy1iparabeeni 0,18

Tislattu vesi täydennys- 100 g määräksi

Claims

32
1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 25-hydroksi-vitamiini D-johdannaisten valmistamiseksi, jolla 5 on kaava Γ“ΟΗ • 1 15 jossa R on vety tai hydroksi ja A on -C=C-, -CH=CH-, jolla on E-konfiguraatio, tai -CH2-CH2-, tunnettu siitä, että vastaava kaavan I mukainen yhdiste, joka sisältää kahden tai kolmen hydroksiryhmän sijasta kaksi tai kolme 20 suojattua hydroksiryhmää, joilla on kaava —OSi (R3, R2, R3), jossa R3 ja R3 merkitsevät C1.A-alkyyliä ja R2 on C^alkyyli, aryyli tai aryyli-C^-alkyyli, saatetaan reagoimaan aineen kanssa, joka pystyy poistamaan 2 5 suoj aryhmät.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste ryhmästä, jonka muodostavat: 1.25- dihydroksi-16-dehydro-23-didehydrokolekalsife- 30 roli, 1.25- dihydroksi-16,23E-bisdehydrokolekalsiferoli, ja 1.25- dihydroksi-16-dehydrokolekalsiferoli. 90764 33
3. Yhdiste, jolla on kaava T V"Av/ i’ i os;—r2
5. JL/ l o tunnettu siitä, että A on -CH=CH-, jolla on E-kon-figuraatio, -CH2-CH2- tai erityisesti -ChC-, ja R2 ja R3 10 merkitsevät toisistaan riippumatta alempaa alkyyliä, erityisesti metyyliä. 34