FI86362B - Foerfarande foer separering av proteiner fraon mjoelk och dess derivat. - Google Patents

Description

86362

Menetelmä maidossa ja sen johdannaisissa esiintyvien proteiinien erottamiseksi Förfarande för separering av proteiner frän mjölk och dess derivat 5

Keksinnön kohteena on menetelmä maidossa tai sen johdannaisissa esiintyvien proteiinien erottamiseksi, joiden proteiinien isoelektrinen pH-arvo on suurempi kuin 7,5.

10

Sopivia proteiineja, joiden isoelektrinen pH on yli 7,5, ovat esim. laktoferriini, laktoperoksIdaasi ja vastaavat.

On hyvin tunnettua, että tällaisilla proteiineilla, kuten laktoferriin-15 illä ja laktoperoksidaasilla, on lukuisia käyttösovellutuksia elintarvikealalla tai lääkintäalalla.

Näiden proteiinien jatkuvasti kasvavan kysynnän johdosta olisi ilmeisen toivottavaa, että käytettävissä olisi yksi menetelmä, jota voitaisiin 20 soveltaa erilaisten väliaineiden ja erilaisten proteiinien tapauksessa, mikä ei tällä hetkellä yleisesti ottaen ole mahdollista.

Näin ollen ranskalaisessa patenttijulkaisussa 2 505 615 on jo ehdotettu ‘ '. · erästä menetelmää kahden tietyn proteiinin talteenottamiseksi maidosta, ·· 25 mutta tämä menetelmä edellyttää erityisesti maidon pH-arvon muuttamis ta. Tämän lisäksi tässä patenttijulkaisussa kuvatussa menetelmässä käytetään absorboivista mineraaleista, kuten silikasta, saatuja jauheita, jotka on saatettu makrohuokosia käsittäviksi mikroskooppisiksi helmiksi, mikä puolestaan edellyttää sitä, että työskentely tapahtuu 30 kaseiinia ja lipidejä sisältämättömissä väliaineissa hartsin nopean tukkeutumisen välttämiseksi.

Alalla on jo samoin ehdotettu ioninvaihtohartseja soveltavia menetel-·”; miä, näiden ioninvaihtohartsien partikkeleiden ollessa karkeampikokoi- —: 35 siä kuin mineraalijauheesta valmistetut helmet, mutta joiden makrohuokosia käsittävän rakenteen haittana on kuitenkin samoin niiden nopea tukkeutuminen.

2 86362

Edelleen, absorboivaksi materiaaliksi on ehdotettu titaanioksidista valmistettuja helmiä, joiden halkaisija voi vaihdella 50 mikronista muutamaan senttimetriin. Tämän tyyppisen materiaalin käyttö edellyttää kuitenkin maidon ja/tai heran esikäsittelemistä sen ionivahvuuden alen-5 tamiseksi, mistä näin ollen syntyy ylimääräisiä toimenpiteitä, ja mikä johtaa väliaineen muuntamiseen.

Näin ollen olisi toivottavaa, että käytössä olisi menetelmä, jonka avulla proteiinit saataisiin helposti otetuksi talteen niinkin mutkik-10 kaasta väliaineesta kuin kokomaidosta, joka sisältää erityisesti rasvoja, lipidipisaroita ja kaseiinimisellejä, ja jonka menetelmän haittana ei olisi edellä mainittu tukkeutuminen, ja joka ei edellyttäisi väliaineen esikäsittelemistä.

15 Tämän keksinnön tavoitteena on saada aikaan tällainen menetelmä.

Tämän patenttihakemuksen laatija on todennut, että maidossa esiintyvien erilaisten proteiinien erottaminen ja puhdistaminen on mahdollista käyttämällä happamia geeliytyviä polysakkarideja sopivissa olosuhteis-20 sa.

Tämä keksintö kohdistuu menetelmään proteiinien puhdistamiseksi ja erottamiseksi käsittelemällä niitä sopivissa olosuhteissa happamalla — geeliytyvällä polysakkaridilla.

25 Tämän keksinnön tavoitteena on samoin tällainen menetelmä proteiinien puhdistamiseksi, tämän menetelmän johtamatta kuitenkaan sen väliaineen, josta mainitut proteiinit otetaan talteen, merkittävään muuttumiseen.

30 Edelleen, tämän keksinnön tavoitteena on tällainen menetelmä proteii- nien talteenottamiseksi, jonka menetelmän avulla proteiinien erottaminen voidaan suorittaa huomattavasti nopeammin kuin muilla menetelmillä, jolloin samalla vältytään hartsin tukkeutumiselta sekä väliaineen kaikkinaiselta esikäsittelemiseltä.

. 35 3 86362 Tämän keksinnön tavoitteena on samoin tällainen puhdistusmenetelmä, jolla voidaan käsitellä maidon proteiineja, joiden isoelektrinen pH on yli 7,5.

5 Tämän keksinnön mukainen menetelmä maidossa esiintyvien proteiinien, joiden isoelektrinen pH on suurempi kuin 7,5, erottamiseksi on tunnettu siitä, että (1) kyseistä proteiinia sisältävä väliaine johdetaan geelin muodossa olevasta happamasta, geeliytyvästä polysakkaridista muodostettujen partikkeleiden yli, joiden partikkeleiden pienin ulottuvuus ei 10 ole alle 0,5 mm, tämän happaman polysakkaridin pitoisuuden tässä geelissä ollessa alueella 1-8 paino-%, ja tämän käytettävän geelin osuuden ollessa 1-20 paino-% sellaisessa liuoksessa, johon tämä geeli ei liukene; ja (2) polysakkaridipartikkeleille absorboituneet proteiinit otetaan talteen eluoimalla sellaisen suolan liuoksella, jota suolaa käyte-15 tään geeliytyvän polysakkaridin pitämiseksi geelin muodossa, jossa suolaliuoksessa ionipitoisuus on yli 0,05 paino-% tilavuudesta.

Tämän patenttihakemuksen laatija on nyt odottamattomasti todennut, että edellä mainittujen proteiinien puhdistaminen ja erottaminen oli mahdol-20 lista ainoastaan siinä tapauksessa, ettei tästä happamasta, geeliytyvästä polysakkaridista muodostuvien partikkelien pienin ulottuvuus ole . alle 0,5 mm.

···· Tämä on vieläkin odottamattomampaa, sillä aikaisemmin käytettyjen hart- 25 sien tapauksessa absorption ominaispinta-alan tuli olla mahdollisimman ... suuri, jopa 700 m2/g, jotta proteiinien talteenottaminen voitiin toteut taa hyvin.

Tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä käytettävät, happamien, gee-30 liytyvien polysakkaridien avulla muodostetut geelit läpäisevät proteiineja ainoastaan vähän, mistä johtuen absorptio rajoittuu pinnalle, mikä alentaa huomattavasti geelin ominaispinta-alaa, joka voi olla alueella 2 x 10'3-0,2 m2/g.

35 Tässä keksinnössä käytettävät happamat, geeliytyvät polysakkaridit valitaan alginaattien ja karrageenien joukosta.

4 86362 Nämä happamat polysakkaridit geeliytyvät, kun ne saatetaan kosketuksiin kationeja käsittävän liuoksen kanssa, joista kationeista mainittakoon erityisesti alkali- ja maa-aikaiimetailien kationit, rautasarjan kationit sekä samoin ammonium-kationi.

5 Tämän patenttihakemuksen laatija on samoin todennut yllättävästi, että kyseiset proteiinit voidaan absorboida tällaisesta happamasta polysakkaridista muodostuvan geelin pinnalle.

10 Samoin ollaan todettu, että tästä happamasta polysakkaridista muodostuvan geelin valmistustapa on hyvin tärkeä tämän keksinnön mukaisen menetelmän onnistumiselle.

Mikäli happamaksi polysakkaridiksi valitaan alginaatti, niin tällöin 15 tällainen geeli valmistetaan tavallisesti käyttämällä alginaatin liukoisen suolan, tavallisesti natriumsuolan, vesiliuosta, joka saatetaan kosketuksiin jonkin vastaionin kanssa geelin muodostamiseksi. Tavallisesti käytetään suolan CaCl2 liuosta.

20 Huomautettakoon kuitenkin, että tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä käyttökelpoisen geelin saamiseksi alginaatin pitoisuuden geelissä tulisi olla tarkoin määrätyllä alueella, kyseisessä tapauksessa alueella 1-; 8 paino-%, loppuosan geelistä ollessa vettä.

25 Mikäli alginaatin pitoisuus geelissä on alhaisempi kuin noin 1 %, niin tällöin geelin stabiilisuus on alentunut huomattavasti liiallisen vesimäärän seurauksena, jolloin geeliä ei voida käyttää proteiinien puhdistamiseen. Toisaalta alginaatin pitoisuuden ollessa yli 8 % havaitaan samoin geelin viskositeetin kohoaminen, mikä estää väliaineen helpon 30 käsittelemisen, joten geelin valmistaminen on käytännöllisesti katsoen ··. mahdotonta.

Saatua geeliä voidaan käyttää asianmukaisissa olosuhteissa kuulina, helminä, nauhoina, lankoina, kuituina, tai jopa kankaana.

: 35 5 86362 Tämän keksinnön erään suoritusmuodon mukaisesti menetelmässä käytetään natriumalginaatin vesiliuosta, ja se saostetaan CaCl2-ioneilla.

Tämän jälkeen toivotussa muodossa saatu geeli laitetaan CaCl2-liuokseen 5 siten, että se on koko ajan kosketuksissa geeliytymisestä huolehtivan ionin kanssa.

Tämän keksinnön erään suoritusmuodon mukaisesti kalsiumpitoisuus käsiteltävässä maidossa tai herassa riittää stabiloimaan alginaattigeelin.

10

Mikäli happamaksi polysakkaridiksi valitaan karrageeni, niin tällöin geeli valmistetaan tavallisesti käyttämällä liukoista karrageenisuolaa vesiliuoksena. Tavallisesti käytetään natriumsuolaa, joka saatetaan kosketuksiin vastaionin kanssa geelin muodostamiseksi. Tavallisesti 15 käytetään KC1-, NH*CL- tai RbCl-liuosta.

Huomautettakoon, että tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä käyttökelpoisen geelin saamiseksi karrageenin pitoisuuden geelissä tulisi olla tarkoin määrätyllä alueella, tässä tapauksessa alueella 20 1-8 %, loppuosan geelistä ollessa vettä.

Mikäli karrageenin pitoisuus geelissä on alhaisempi kuin noin 1 %, niin tällöin geelin stabiilisuus on alentunut huomattavasti liiallisen vesi-·. | määrän seurauksena, jolloin geeliä ei voida käyttää proteiinien puh- : 25 distamiseen. Toisaalta karrageenin pitoisuuden ollessa yli 8 % havai- : taan samoin geelin viskositeetin kohoaminen, mikä estää väliaineen helpon käsittelemisen, jolloin geelin valmistaminen on käytännöllisesti katsoen mahdotonta.

.. 30 Saatua geeliä voidaan käyttää asianmukaisissa olosuhteissa kuulina, helminä, nauhoina, lankoina, kuituina tai jopa kankaana.

Tämän keksinnön eräässä suoritusmuodossa käytetään natriumkarrageenin vesiliuosta, ja se geeliytetään KC1-liuoksella.

35 6 86362 Tämän jälkeen toivotussa muodossa saatu geeli laitetaan KCl-liuokseen siten, että se on koko ajan kosketuksissa geeliytymisestä huolehtivan ionin kanssa.

5 Käytettiinpä geelin muodostamiseksi mitä tahansa hapanta polysakkaridia, siihen voidaan joka tapauksessa sisällyttää metallioksidia, joka ei liukene käytettävissä olosuhteissa. Käyttökelpoisista oksideista mainittakoon erityisesti titaani-, zirkonium-, pii-, alumiinioksidit, sepioliitti ja muut vastaavat. Sisällytetty oksidimäärä ei tavallisesti 10 ylitä 3 painoprosenttia. Suurempiakin määriä voidaan kuitenkin käyttää, jolloin mitään merkittävää vaikutusta ei kuitenkaan saavuteta.

Tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä täten saatua geeliä käytetään sellaisessa liuoksessa, johon geeli ei liukene, geelimäärän ollessa 1-15 20 % proteiineja sisältävän liuoksen tilavuudesta.

Niiden proteiinien, jotka voidaan erottaa tämän keksinnön mukaisella menetelmällä, isoelektrisen pH-arvon on oltava vähintään 7,5. Esimerkkeinä sellaisista maidon proteiineista, jotka voidaan erottaa ja puh-20 distaa tämän keksinnön mukaisella menetelmällä, mainittakoon erityisesti laktoferriini, laktoperoksidaasi, tietyt immunoglobuliinit sekä muut samankaltaiset proteiinit. Happaman polysakkaridin avulla muodostetun . geelin pinnalle absorboituneet proteiinit on tämän jälkeen otettava talteen.

25

On selvää, että tämän keksinnön mukaista menetelmää voidaan myös käyt-tää muiden, mahdollisesti muissa väliaineissa esiintyvien proteiinien : : erottamiseksi olosuhteissa, jotka alan asiantuntijan on selvitettävä.

30 Siinä tapauksessa, että tässä menetelmässä käytetään alginaattigeeliä, niin tämän geelin pinnalle absorboituneet proteiinit voidaan eluoida ,···. CaCl2-liuosta käyttäen, mikäli geeli on kalsiumalginaattia, tai riittä vän määrän CaCl2-suolaa sisältävää ioniseosta.

: 35 Sen suolaliuoksen, jota käytetään proteiinien eluoimiseen alginaatti- : .*. geelin pinnalta, pitoisuus ei ole kriittinen; se riippuu käytetystä 7 86362 suolasta, proteiineista ja liuoksen pH-arvosta. Mikäli käytetään CaCl2-liuosta, niin tällöin käytetään pitoisuutta, joka on vähintään 0,1 paino-% tilavuudesta.

5 Suola, jota käytetään proteiinin eluoimiseen geelistä, voi mahdollisesti olla sitä samaa suolaa, jota käytettiin proteiinin adsorptioon. Mikäli käytetään kahta eri suolaa, on selvää, että niiden tulee olla yhteensopivia, toisin sanoen ne eivät saa reagoida keskenään sakkaa muodostaen.

10

Tavallisesti, ennen uuden eluution aloittamista vastaanottava astia ja alginaattigeeli pestään sellaisella suolaliuoksella, jonka pitoisuus on niin suuri, ettei se heikennä geelin stabiilisuutta. Tavallisimmin käytetään CaCl2-liuosta, jonka pitoisuus on 0,1 paino-% tilavuudesta.

15 Tämän keksinnön mukainen menetelmä proteiinien erottamiseksi ja puhdistamiseksi voidaan toteuttaa joko jatkuvana tai epäjatkuvana menetelmänä.

20 Eräässä tämän keksinnön mukaisen menetelmän epäjatkuvassa suoritusmuodossa valmistetaan geeli kalsiumalginaatin avulla, tämä geeli laitetaan mihin tahansa astiaan proteiiniliuoksen kanssa, tätä seosta sekoitetaan ajanjakso, jonka pituus on 10 min - 24 tuntia, aina toivottavan prosenttisen talteenottoasteen mukaisesti, ja riippuen liuoksen sisältämän — 25 taiteenotettavan proteiinin pitoisuudesta sekä kontaminoivien aineiden luonteesta ja pitoisuudesta. Geeli pestään CaCl2-liuoksella, jonka pitoisuus on vähintään 0,1 paino-% tilavuudesta, ja tämän jälkeen alginaattigeeli eluoidaan CaCl2-liuoksella, jonka pitoisuus on yli 0,1 paino-% tilavuudesta, jolloin proteiini saadaan talteen liuoksena.

30 ____ Eräässä tämän keksinnön mukaisen menetelmän jatkuvassa suoritusmuodossa valmistetaan geeli kalsiumalginaatista, ja geeli siirretään mieluiten kiinteänä petinä tai leijupetinä toimivaan kolonniin, ja panoksen annetaan kulkea kolonnin läpi siten, että sen nopeus tunnissa, LMSV (Liquid 35 Hourly space velocity), on alueella 0,1-3.

8 86362 Tämä geeli pestään CaCl2-liuoksella, jonka pitoisuus on vähintään 0,1 paino-% tilavuudesta. Tämän jälkeen alginaattigeeliä eluoidaan sellaisella CaCl2-liuoksella, jonka pitoisuus on yli 0,1 paino-% tilavuudesta, jolloin proteiini saadaan talteen liuoksena.

5

Siinä tapauksessa, että menetelmässä käytetään karrageenigeeliä, tämän geelin pinnalle adsorboituneet proteiinit voidaan eluoida käyttämällä minkä tahansa orgaanisen suolan tai veteen liukenevan mineraalin vesi-liuosta. Mieluiten käytetään kuitenkin KC1- tai NH4Cl-liuosta, mikäli 10 geeli on kalium- tai ammoniumkarrageenia, tai riittäviä määriä KCl-tai NH4C1-suoloja sisältäviä ioniseoksia.

Sen suolaliuoksen, jota käytetään proteiinien eluoimiseen karrageeni-geelistä, pitoisuus ei ole kriittinen; se riippuu käytetystä suolasta, 15 proteiinista sekä liuoksen pH-arvosta. Mikäli käytetään KCl-liuosta, niin tällöin käytetään pitoisuutta, joka on vähintään 0,1 %.

Se suola, jota käytetään proteiinin eluoimiseen geelistä, voi mahdollisesti olla sitä samaa suolaa, jota käytettiin proteiinin adsorptioon.

20 Mikäli käytetään kahta eri suolaa, on selvää, että niiden tulee olla yhteensopivia, toisin sanoen ne eivät saa reagoida keskenään sakkaa muodostaen.

Tavallisesti, ennen uuden eluution aloittamista käytetty astia ja kar-25 rageenigeeli pestään sellaisella suolaliuoksella, jonka pitoisuus on niin suuri, ettei se heikennä tämän geelin stabiilisuutta. Useimmiten käytetään KCl-liuosta, jonka pitoisuus on 0,1 paino-% tilavuudesta.

Tämän keksinnön mukainen menetelmä proteiinien erottamiseksi ja puhdis-30 tamiseksi voidaan toteuttaa joko jatkuvana tai epäjatkuvana menetelmänä. Eräässä tämän keksinnön mukaisen menetelmän epäjatkuvassa suoritusmuodossa valmistetaan geeli kaliumkarrageenista, geeli siirretään mihin tahansa astiaan, joka sisältää proteiiniliuoksen, tätä seosta sekoitetaan ajanjakso, jonka pituus on 10 minuuttia - 24 tuntia, aina toivot-35 tavan prosenttisen talteenottoasteen mukaisesti ja riippuen liuoksen sisältämän, talteenotettavan proteiinin pitoisuudesta sekä konta- » 86362 minoivien aineiden luonteesta ja pitoisuudesta. Geeli pestään KC1-liuoksella, jonka pitoisuus on vähintään 0,1 paino-% tilavuudesta, jonka jälkeen karrageenigeeliä eluoidaan KC1-liuoksella, jonka pitoisuus on suurempi kuin 0,1 paino-% tilavuudesta, jolloin proteiini saada talteen 5 liuoksena.

Eräässä tämän keksinnön mukaisen menetelmän jatkuvassa suoritusmuodossa valmistetaan geeli kaliumkarrageenista, ja se laitetaan mieluiten kiin-teänän petinä tai leijupetinä toimivaan kolonniin, ja panoksen annetaan 10 kulkea kolonnin läpi siten, että sen nopeus tunnissa, IHSV (- Liquid

Hourly Space Velocity), on alueella 0,1-3. Geeli pestään KC1- tai NH4C1-liuoksella, jonka pitoisuus on vähintään 0,1 paino-% tilavuudesta.

Tämän jälkeen tätä karrageenigeeliä eluoidaan KC1-liuoksella, jonka pitoisuus on suurempi kuin 0,1 paino-% tilavuudesta, jolloin proteiini 15 saadaan talteen liuoksena.

Seuraavien esimerkkien tarkoituksena on havainnollistaa paremmin tämän keksinnön mukaista menetelmää, niiden rajoittamatta kuitenkaan tätä keksintöä millään tavalla.

20 ESIMERKKI 1

Alginaattigeeli valmistetaan lankoina, joiden pituus on suurin piirtein 5 cm ja halkaisija noin 1 mm, joka on pienin ulottuvuus, suulakepuris-25 tamalla homogeenista vesiliuosta, joka sisältää 30 g/1 natriumalginaat-tia ja 20 g/1 titaanioksidia, vesiliuokseen, joka sisältää CaCl2-suolaa, pitoisuutena 30 g/1.

Edelleen, happamatonta, pastöroimatonta heraa valmistettiin koaguloi-30 maila hitaasti 32°C:n lämpötilassa tuoretta maitoa käyttämällä — 0,03 tilavuus-% renniiniä, jonka voimakkuus oli 7000. Tämän heran tun nusomaisina piirteinä oli pH-arvo, joka 20°C:n lämpötilassa oli 6,6, sekä se, että se sisälsi A % laktoosia, 0,35 % lipidejä ja 0,7 % proteiineja (mukaan lukien 0,001 % laktoperoksidaasia ja 0,003 % laktofer-35 riiniä).

ίο 8 6 3 6 2

Sen jälkeen, kun 5 litraan tätä heraa oli lisätty 200 g alginaattigee-liä, tätä seosta sekoitettiin 4°C:n lämpötilassa 18 tuntia. Geeli erotetaan herasta suodattamalla seos metallisuodattimen läpi, jonka jälkeen geeli pestiin kolmasti 5 litralla CaCl2-suolan vesiliuosta, jonka pitoi-5 suus oli 3 g/1.

Tähän geeliin kiinnittyneen aineet saadaan talteen pesemällä geeli kahteen kertaan 1 litralla CaCl2-suolan vesiliuosta, jonka pitoisuus on 50 g/1, sekoittamalla geeliä tässä liuoksessa 4°C:n lämpötilassa 2 tun-10 nin ajan.

Täten saatu 2 litraa liuosta sisältää suurin piirtein 250 mg proteiineja, joista 130 mg on laktoferriiniä ja 20 mg laktoperoksidaasia.

15 ESIMERKKI 2

Ensin valmistetaan vesiliuos, joka sisältää 30 g/1 alginaattia.

3 litraa tätä liuosta sumutetaan CaCl2-liuokseen, jonka pitoisuus on 20 30 g/1, jolloin saadaan kalsiumalginaattigeelistä muodostuvia helmiä, joiden keskimääräinen halkaisija on noin 1,2 mm. Tämän absorboivan materiaalin ominaispinnan ala oli 2xl0'3 m2/g· 200 millilitraa näitä helmiä laitettiin kolonniin, jonka halkaisija oli — 25 5 cm, jolloin saatiin aikaan 11 senttimetrin korkuinen geelihelmistä muodostunut peti.

Tällä kolonnilla käsiteltiin 13-kertainen tilavuus maitoa, eli 2575 litraa kokomaitoa, joka sisälsi suurin piirtein 5 % laktoosia, 4 % 30 lipidejä, 0,9 % suoloja, sekä 3,3 % proteiineja, joista suurin piirtein — 0,008 % oli laktoferriiniä ja 0,003 % laktoperoksidaasia.

Maito johdettiin geelikolonnin läpi siten, että sen nopeus tunnissa, LHSV (- Liquid Hourly Space Velocity), oli 1,5.

35 il 86362

Sen jälkeen, kun maito oli kulkenut kolonnin läpi, geeli siirrettiin astiaan, jossa se pestiin peräkkäin 5 kertaa käyttäen kulloinkin 300 ml CaC12-suolan vesiliuosta, jonka pitoisuus oli 3 g/1. Kunkin kerran jälkeen geeli erotettiin dekantoimalla ja suodattamalla se nylon-suo-5 dattimen läpi.

Geeliin absorboituneet proteiinit otetaan talteen pesemällä geeli kahdesti 300 millilitrassa CaC12-suolan 3 % vesiliuosta, jossa geeliä sekoitetaan 4°C:n lämpötilassa 2 tunnin ajan.

10 Täten saatu 600 ml liuosta sisältää suurin piirtein 260 mg proteiineja, joista 31 mg on laktoperoksidaasia ja 125 mg on laktoferriiniä. Erotusmenetelmän saanto oli tällöin 72 %.

15 Vertailun vuoksi tämä sama kolonni täytettiin polyakryyliamidin avulla ristisitoutuneella agarhartsilla, jota tavallisesti käytetään proteiinin erottamiseen.

Tämän hartsin läpi johdettiin kokomaitoa, jonka koostumus on esitetty 20 edellä, toimintaolosuhteiden ollessa samat kuin edellä, ja alle 1 tunnin kestäneen toiminnan jälkeen tämä kolonni oli täysin tukkeutunut.

ESIMERKKI 3 ·— 25 Ensin valmistettiin alginaattigeeli lankoina, joiden pituus oli suurin piirtein 10 cm, ja joiden halkaisija oli noin 1,5 mm, joka oli lankojen pienin ulottuvuus, suulakepuristamalla 30 g/1 natriumalginaattia ja 5 g/1 titaanioksidia sisältävää homogeenista vesiliuosta vesiliuokseen, joka sisälsi CaC12-suolaa pitoisuutena 30 g/1.

30 ____ Tällä geelillä käsiteltiin kokomaitoa, jonka koostumus on esitetty esimerkissä 2, ja joka sisälsi erityisesti 3,3 % proteiineja, joista 0,008 % oli laktoferriiniä ja 0,003 % oli laktoperoksidaasia.

35 Sen jälkeen, kun 20 litraan tätä kokomaitoa oli lisätty 100 g alginaat-tia, tätä seosta sekoitetaan 10°C:n lämpötilassa 8 tunnin ajan. Geeli i2 86362 erotetaan suodattamalla seos metailisuodattimen läpi, jonka jälkeen se pestään kolmasti 500 millilitralla CaCl2-liuosta, jonka pitoisuus on 1 g/1.

5 Geeliin kiinnittyneet materiaalit saadaan talteen pesemällä geeli kahdesti 300 millilitrassa vesiliuosta, joka sisältää 10 g/1 CaCl2-suolaa ja 40 g/1 NaCl-suolaa, sekoittamalla geeliä tässä liuoksessa 10°C:n lämpötilassa 30 minuutin ajan.

10 Täten saatu 600 ml liuosta sisältää noin 3 g proteiineja, joista 1 g on laktoferriiniä ja 125 mg on laktoperoksidaasia, tämän liuoksen sisältäessä samoin noin 0,5 g rasvoja.

15

Claims (14)

1. Menetelmä maidossa tai sen johdannaisissa esiintyvien proteiinien erottamiseksi, joiden proteiinien isoelektrinen pH-arvo on suurempi 5 kuin 7,5, tunnettu siitä, että (1) kyseistä proteiinia sisältävä väliaine johdetaan geelin muodossa olevasta happamasta, geeliy-tyvästä polysakkaridista muodostettujen partikkeleiden yli, joiden partikkeleiden pienin ulottuvuus ei ole alle 0,5 mm, tämän happaman polysakkaridin pitoisuuden tässä geelissä ollessa alueella 1-8 paino-%, 10 ja tämän käytettävän geelin osuuden ollessa 1-20 paino-% sellaisessa liuoksessa, johon tämä geeli ei liukene; ja (2) polysakkaridipartikke-leille absorboituneet proteiinit otetaan talteen eluoimalla sellaisen suolan liuoksella, jota suolaa käytetään geeliytyvän polysakkaridin pitämiseksi geelin muodossa, jossa suolaliuoksessa ionipitoisuus on yli 15 0,05 paino-% tilavuudesta.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että happamana geeliytyvänä polysakkaridina käytetään alginaattia tai karrageenia. 20

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hapan, geeliytyvä polysakkaridi geeliytetään saattamalla se kosketuksiin kationeja sisältävän liuoksen kanssa, jolloin nämä kationit on valittu alkalimetallien K+,Rb+,Cs+ muodostamien kationien, ja maa-ai- 25 kalimetallien muodostamien kationien, rautasarjan kationien ja am-monium-kationin joukosta.

4. Jonkin patenttivaatimuksen 2 tai 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että alginaatti geeliytetään CaCl2-liuoksella. 30 ____

5. Jonkin patenttivaatimuksen 2 tai 3 mukainen menetelmä, tunne t- t u siitä, että karrageeni geeliytetään KC1-, NH*C1- tai RbCl-liuok-sella. i4 86362

6. Jonkin patenttivaatimuksen 1-5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytettävän happaman polysakkaridigeelin ominaispinnan ala on alueella 2xl0'3 - 0,2 m2/g·

7. Jonkin patenttivaatimuksen 1-6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hapanta polysakkaridigeeliä käytetään helminä, kuulina, nauhoina, kuituina, lankoina tai kankaina.

8. Jonkin patenttivaatimuksen 1-7 mukainen menetelmä, tunnettu 10 siitä, että happamaan polysakkaridigeeliin sisällytetään käytettävissä olosuhteissa liukenematonta metallioksidia määränä, joka ei ylitä 3 paino-%, geelin painosta laskien.

9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, 15 että metallioksidi valitaan ryhmästä, joka käsittää titaani-, zirkonium-, pii- ja alumiinioksidit, sepioliitin ja muut samankaltaiset oksidit.

10. Jonkin patenttivaatimuksen 1-9 mukainen menetelmä, tunnettu 20 siitä, että tällä menetelmällä käsitellään maidon proteiineja, jotka on erityisesti laktoferriiniä, laktoperoksidaasia, immunoglobuliinineja ja muita samankaltaisia proteiineja.

11. Jonkin patenttivaatimuksen 1-10 mukainen menetelmä maidon proteii-25 nien erottamiseksi, tunnettu siitä, että alginaattigeeli kaadetaan asianmukaiseen astiaan, joka sisältää proteiineja käsittävän liuoksen, tätä seosta sekoitetaan ajanjakso, jonka pituus on 10 minuutista 24 tuntiin, geeli pestään CaCl2-liuoksella, tämä alginaattigeeli eluoidaan CaCl2-liuoksella, ja proteiinit saadaan talteen liuoksena. 30 ____

12. Jonkin patenttivaatimuksen 1-10 mukainen menetelmä maidon proteiinien erottamiseksi, tunnettu siitä, että karrageenigeeli kaadetaan asianmukaiseen astiaan, joka sisältää proteiineja käsittävän liuoksen, tätä seosta sekoitetaan ajanjakso, jonka pituus on 10 minuu-35 tista 24 tuntiin, geeli pestään suolaliuoksella, joka valitaan KC1-, is 86362 NH*C1- tai RbCl-liuoksesta, karrageenigeeliä eluoidaan tämän saman suolan liuoksella, ja proteiinit saadaan talteen liuoksena.

13. Jonkin patenttivaatimuksen 1-10 mukainen menetelmä maidon proteii-5 nien erottamiseksi, tunnettu siitä, että alginaattigeeli kaadetaan kiinteänä petinä tai leijupetinä toimivaan kolonniin, proteiineja sisältävän panoksen annetaan kulkea tämän alginaattigeelin läpi siten, että sen nopeus tunnissa, LHSV (- Liquid Hourly Space Velocity), on alueella 0,1-3, geeli pestään CaCl2-liuoksella, tämän jälkeen al- 10 ginaattigeeliä eluoidaan CaCl2-liuoksella, ja proteiinit saadaan talteen liuoksena.

13 86362

14. Jonkin patenttivaatimuksen 1-10 mukainen menetelmä maidon proteiinien erottamiseksi, tunnettu siitä, että karrageenigeeli kaa- 15 detaan kiinteänä petinä tai leijupetinä toimivaan kolonniin, proteiini-liuoksen käsittävän panoksen annetaan kulkea tämän karrageenigeelin läpi siten, että sen nopeus tunnissa, 1HSV (- Liquid Hourly Space Velocity), on alueella 0,1-3, geeli pestään suolaliuoksella, joka valitaan KC1-, NH4C1-, tai RbCl-liuoksesta, tämän jälkeen karrageenigeeliä eluoi-20 daan tämän saman suolan liuoksella, ja proteiinit saadaan talteen liuoksena. i6 86 362