FI91032C - Menetelmä laktoperoksidaasin ja laktoferriinin puhtaiden fraktioiden talteenottamiseksi maitoseerumista - Google Patents

Menetelmä laktoperoksidaasin ja laktoferriinin puhtaiden fraktioiden talteenottamiseksi maitoseerumista Download PDF

Info

Publication number
FI91032C
FI91032C FI902562A FI902562A FI91032C FI 91032 C FI91032 C FI 91032C FI 902562 A FI902562 A FI 902562A FI 902562 A FI902562 A FI 902562A FI 91032 C FI91032 C FI 91032C
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
lactoperoxidase
lactoferrin
milk serum
milk
whey
Prior art date
Application number
FI902562A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI902562A0 (fi
FI91032B (fi
Inventor
Hans Burling
Original Assignee
Svenska Mejeriernas Riksforeni
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Svenska Mejeriernas Riksforeni filed Critical Svenska Mejeriernas Riksforeni
Publication of FI902562A0 publication Critical patent/FI902562A0/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI91032B publication Critical patent/FI91032B/fi
Publication of FI91032C publication Critical patent/FI91032C/fi

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; PREPARATION THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/14—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment
    • A23C9/146—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by ion-exchange
    • A23C9/1465—Chromatographic separation of protein or lactose fraction; Adsorption of protein or lactose fraction followed by elution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; PREPARATION THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/14—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment
    • A23C9/142—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by dialysis, reverse osmosis or ultrafiltration
    • A23C9/1425—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by dialysis, reverse osmosis or ultrafiltration by ultrafiltration, microfiltration or diafiltration of whey, e.g. treatment of the UF permeate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A23J1/20—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey
    • A23J1/205—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey from whey, e.g. lactalbumine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/814—Enzyme separation or purification
    • Y10S435/815—Enzyme separation or purification by sorption

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)

Description

91032
Menetelmå laktoperoksidaasin ja laktoferriinin puhtaiden fraktioiden talteenottamiseksi maitoseerumista Forfarande for utvinning av rena fraktioner av laktoper-5 oxidas och laktoferrin ur mjolkserum 10
Esillå oleva keksinto koskee menetelmåå laktoperoksidaasin ja laktoferriinin puhtaiden fraktioiden talteenottamiseksi maitoseerumista. Maitoseerumilla tarkoitetaan sekå kuorittua maitoa etta heraa.
15 Juuston valmistuksessa saadaan suuria maaria heraa sivutuotteena. Heran kuiva-ainepitoisuus on noin 6 %, jonka kuiva-aineen koostumus on suunnilleen seuraava: paino-%
Laktoosia 4,6 20 Proteiinia 0,6 josta
Laktoperoksidaasia 0,0020
Laktoferriinia 0,0030
Rasvaa 0,05 (erotuksen jålkeen) 2^ Suoloja 0,7
Kuiva-aine noin 6,0
Proteiinifraktio, joka on noin 10-12 % KA-pitoisuudesta, koostuu joukosta erilaisia proteiinikomponentteja. Suurimmat ovat B-laktoglobuliini, α-laktalbumiini ja 30 harånseerumialbumiini. Proteiinifraktioon kuuluu myos joukko bioaktiivisia kom-ponentteja, esim. immunoglobuliineja, laktoperoksidaasia, laktoferriinia ja lysotsyy-mia.
Sekå laktoperoksidaasilla ettå laktoferriinillå on mikrobin vastaisia ominaisuuk- 2 sia. Suurta kiinnostusta esiintyy luonnollisten mikrobivastaisten aineiden talteenotta-miseksi nåiden kåyttåmiseksi uusissa yhteyksissa elintarviketekniikan, kemian tekniikan ja låaketieteen alueilla.
5 Nåiden aineiden pitoisuudet kuoritussa maidossa vast, herassa (myos alkuperåisesså maidossa) ovat pienet. Laktoperoksidaasia ja laktoferriiniå esiintyy pitoisuuksissa 15-50 mg/1, riippuen lehmån laktaatiovaiheesta. Suuria mååriå heraa (maitoa) on siis suodatettava, jotta voitaisiin talteenottaa kilogrammamååriå nåistå bioaktiivisista komponenteista.
10
Laktoperoksidaasin, vastaavasti laktoferriinin eriståmisen prosessitekniset edellytykset maidosta/herasta perustuvat siihen, ettå nåiden molempien proteiinien isoelektrinen piste (pi) on noin 9,5, kun taas heraproteiinien pååosan isoelektriset pisteet on noin 5,1-5,4 ja kaseiinin noin 4,6. Periaatteessa sopiva menetelmå laktoperoksidaasin, 15 vastaavasti laktoferriinin eriståmiseksi on siksi saattaa maito/hera kontaktiin kat-jonivaihtajan kanssa pH-arvossa >6 selektiivisesti adsorptioksi, jolloin kåytetåån hyvåksi laktoperoksidaasin ja laktoferriinin positiivista nettolatausta, joka erottuu muista maitoproteiineista, joiden lataus on negatiivinen tåsså pH-arvossa.
20 Perinteinen tapa eriståå pieniå mååriå laktoperoksidaasia ja laktoferriinia tutkimustar-koituksiin on kåyttåå saostustekniikkaa ja jonivaihtokromatografiaa, usein yhdistettynå geelisuodatukseen, kts. Morrison, M., Hamilton, H-B, Stotz, E., J. Biol. Chem. 228; 767 (1957); ja Morrison, M., Hultquist, P-E., J. Biol. Chem. 238-2847 (1963). Nåmå menetelmåt eivåt ole tarkoitettu kyseisten bioaktiivisten komponenttien suurien 25 måårien esiinottamiseksi taloudellisesti puolustettavalla tavalla.
US-patenttijulkaisusta 4 436 658 (Pevrouset) on tunnettua adsorboida laktoferriiniå kaseiinittomasta maitoseerumista (herasta) piikolonnin avulla. Maitoseeru-min pH-arvo såådetåån alueelle 7,7-8,2 ennen kolonnilla tapahtuvaa adsorptiota. 30 Kolonniin tarttuu immunoglobuliineja, laktoferriiniå ja laktoperoksidaasia. Adsorptiovaiheen jålkeen eluoidaan laimealla suolaliuoksella pH-arvossa <4. Adsorboitujen proteiinien selektiivistå eluointia ei saada, varsinkaan laktoperok- li 3 91032 sidaasin suhteen. Kolonni, johon mahtuu noin 5 g piiyhdistetta, voi kåsitella 1 litran heraa. Tåtå tunnettua meneteimåa voidaan pitaa våhemman sopivana sovellettavaksi teollisuusmittakaavassa.
5 Zagulski et al. julkaisussa Prace i Materialy Zootechniczne 20, s. 87-103 (1979) kuvaa ei-jatkuvaa meneteimåa laktoferriinin esiinottamiseksi, jolloin kåytetaan heikkoa katjonivaihtajaa, joka sekoitetaan maitoon. Kun tasapaino on saavutettu, jonivaihtaja siirretåån kolonniin adsorboitujen proteiinien eluoimiseksi suolaliuoksella. Menetelmå perustuu siis ei-jatkuvaan menetelmåån ja jotta saataisiin hyvin puhdasta 10 laktoferriinia, se pitåå puhdistaa vielå toisessa jonivaihtovaiheessa.
Samantapaista menetelmåå kuvataan BE-patenttijulkaisussa 901 672 (J.P. Prieels ja R. Peipper, Oleofma S.A.). Tåmån patenttijulkaisun mukaan kåytetåån kalsiumalginaat-tiin perustuvaa joninvaihtajaa, jossa joninvaihtotoiminta on saatu sekoittamalla 15 zirkonium-, titaani-, kvartsi- tai alumiinioksideja. Maito/hera saatetaan kontaktiin jonivaihtajan kanssa tiiviisså kolonnissa tai sekoittamalla såilidsså, jolloin ne prote-iinit, joiden isoelektrinen piste on >7,5 adsorboituu. Tasapainon jålkeen geeli erote-taan mekaanisesti ja siirretåån laitteeseen pesua ja eluointia vårten kalsiumklori-diliuoksella. Kaikkien nesteiden, jotka tulevat kontaktiin kalsiumalginaattigeelin 20 kanssa, on sisållettåvå ainakin 0,1 % CaCl2, jotta geeli ei liukenisi. Laktoperoksidaa-sin ja laktoferriinin fraktiointia ei saada eluoinnissa, vaan tåmå tehdåan erillisessa puhdistusvaiheessa.
Syyksi siihen, etta ei kåytetå kaupallisesti tunnettua jonivaihtotekniikkaa kolonni-25 menetelmållå ilmoitetaan mainitussa BE-patenttijulkaisussa ne voittamattomat vaikeudet, jotka liittyvåt jonivaihtajan lataukseen riippuen kaikkialla esiintyvista rasvahiukkasista ja proteiiniaggregaateista våliaineessa.
GB-patenttijulkaisusta 2 179 947 on tunnettu menetelmå laktotransferriinin uuttami-30 seksi maidosta. Menetelmå tapahtuu niin, ettå hera låpikåy ultrasuodattamisen, jolloin heran proteiinisisalto (mukaanlukien laktotransferriini) våkevoidåån noin 5 kertaa, jonka jålkeen sen pH-arvo ja jonivahvuus såådetåån. Nåin kåsitelty maitoseerumi saa
___ _ HT
4 kulkea hyvin pienenå virtana (noin 0,03 petitilavuutta/min) joninvaihtokolonnin låpi, ensisijaisesti heikon katjonivaihtajan låpi. Kolonni eluoidaan, yhå kåyttåmållå pientå virtaa, liuoksella, jonka jonivaihtogradientti saavuttaa arvon 0,4 M, kun laktotransfer-riinia eluoidaan. Tåmå on pienen mittakaavan menetelmå, joka ei sovellu laktoferrii-5 nin teolliseksi valmistamiseksi. Kåyttåmållå heikkoa katjoninvaihtajaa saadaan huono kapasiteetti. Suuruusluokkaa 100 petitilavuutta heraa, laskettuna luonnollisena kuiva-ainepitoisuutena, voi kulkea jonivaihtokolonnin låpi jokaisen eluoinnin vålisså. Joni-vaihtosuodattimentukkeutumisongelmaa, jokajohtuu rasva- ja proteiinihiukkasista, ei ole ratkaistu tåsså tunnetussa menetelmåsså.
10
Seuraavia vaatimuksia voidaan asettaa teollisesti kåytettåvålle menetelmålle laktope-roksidaasin ja laktoferriinin taloudelliseksi talteenottamiseksi herasta /kuoritusta maidosta: 15 1) Adsorptiomassan korkea selektiivinen kapasiteetti. Koska laktoperoksidaasin /laktoferriinin pitoisuudet ovat pieniå maitoseerumissa, pitåå kåsiteltåvån maitoseerumin tilavuudet jokaista eluointia kohden olla suuret.
2) Suuri virtaus adsorptiovaiheessa. (Normaaleissa kromatografiamenetelmisså 20 kåytetåån tavallisimmin pieniå virtoja, 0,01-0,10 petitilavuutta/min. Syy tåhån on osittain se, ettå peti aiheuttaa pienen raekoon seurauksena suuria paineenpudotuksia ja osittain se, ettå adsorptiomenetelmån reaktiokinetiikka asettaa tåmån vaatimuksen.) 25 3) Prosessin on oltava hyvin hygieeninen, mikå tarkoittaa sitå, ettå adsorp tiomassan on siedettåvå ainakin yhden lipeåkåsittelyn pH-arvossa 13-14.
Esillå olevan keksinnon tavoitteena on aikaansaada menetelmå, joka tåyttåå edellå olevat vaatimukset laktoperoksidaasin ja laktoferriinin puhtaiden fraktioiden talteenot-30 tamiseksi maitoseerumista (herasta) suuressa mittakaavassa ja alhaisilla kustannuksilla.
Esillå olevan keksinnon kohteena on menetelmå laktoperoksidaasin ja laktoferriinin 5 91032 puhtaiden fraktioiden talteenottamiseksi maitoseerumista, joka menetelma on tunnettu siitå, ettå maitoseerumi mikrosuodatetaan, saatetaan kulkemaan vahvan katjonivaihta-jan lapi suurena virtana laktoperoksidaasin ja laktoferriinin selektiiviseksi adsorboimi-seksi ja laktoperoksidaasi ja laktoferriini eluoidaan peråkkåin selektiivisesti suolali-5 uoksilla, joiden pitoisuudet ovat erilaiset.
Keksinnon ansiosta aikaansaadaan menetelma kahden eri seerumiproteiinin puhtaiden fraktioiden esiinottamiseksi yhdesså ainoassa jonivaihtovaiheessa. Tata ei aikaisemmin ole saatu aikaan teollisessa mittakaavassa. Aikaisemmin tunnetut menetelmat naiden 10 proteiinien talteenottamiseksi teollisessa mittakaavassa on tarkoittanut kahta tai kolmea puhdistusvaihetta.
Edelia mainitut jonivaihtajan tukkeutumisongelmat, kuten sellaisten hiukkasten esiintyminen, kuten rasvapallot ja proteiiniaggregaatit, seerumissa tai herassa ratkais-1S taan keksinnon avulla niin, etta maitoseerumi (hera) mikrosuodatetaan, esimerkiksi ns.
cross-flow -menetelmålla, ennen kontaktia jonivaihtopetiin. Mikrosuodattimen huokoskoon sopivalla valinnalla tukkeutumista aiheuttavia rasva- ja proteiiniaggre-gaattihiukkasia voidaan eliminoida. Sopivan mikrosuodattimen huokoshalkaisija on 0,10-2 pm, ensisijaisesti 0,4-1,5 pm.
20 Låhtokohtana keksinnon mukaiselle menetelmalle kåytetåån maitoseerumia (heraa), ts. maitoa, josta rasva ja kaseiini on poistettu. Maitoseerumi kåsitellåån ensin mik-rosuodattamalla rasva- ja proteiiniaggregaattihiukkasten jåannosten poistamiseksi, sopivimmin nk. cross-flow -menetelmålla. Mikrosuodatettu maitoseerumi johdetaan 25 sen jålkeen suurena virtana (noin 1-1,5 petitilavuutta /min) kolonnin lapi, joka on ladattu vahvalla katjonivaihtajalla, joka selektiivisesti adsorboi laktoperoksidaasia ja laktoferriinia. Tåmån katjonivaihtajan virtaus- ja adsorptiokineettiset ominaisuudet ovat åarimmåisen hyvåt ja sen kapasiteetti on noin 1000 petitilavuutta maitoseerumia. Tåmå tarkoittaa sitå, etta noin 1000 petitilavuutta maitoseerumia voi kulkea ennen-30 kuin laktoperoksidaasi, joka on heikoimmin sidottu pååsee låpi, ts. joninvaihtomassa on kyllåstetty nåillå proteiineilla. Ainoastaan merkitykseton paineenalennuksen lisåys tapahtuu adsorptiovaiheen alun ja lopun vålillå.
____ τζ.___ 6
Jonivaihtomassan eluointi aloitetaan kolonnissa olevan maitoseerumin uloshuuh-telemisella puskurilla, joka sopivimmin on fosfaattipuskuri maitoseerumin omassa pH-arvossa, 6,5. Sen jålkeen mahdolliset epåpuhtaudet eluoidaan puskuriliuoksen avulla, joka sisaltaa heikon suolaliuoksen, sopivasti epaorgaanisen alkali-, maa-alkali- tai 5 ammoniumsuolan suolaliuos, esim. 0,0075 M NaCl.
Tåmån valmistavan eluoinnin jålkeen eluoidaan sitten halutut proteiinit selektiivisesti puskuriliuoksilla, jotka sisåltåvåt suolaliuoksia, jotka on valittu edellå olevista suoloista ja joiden konsentraatio on erilainen. Laktoperoksidaasin eluointi tapahtuu 10 siis suolapitoisuudessa, joka on alueella 0,10-0,4 M ja laktoferriinin suolapitoisuudes-sa 0,5-2 M.
Tåmån kåsittelyn jålkeen kyseiset proteiinit on våkevoity noin 500 kertaa.
15 Puhtaat proteiinifraktiot keråtåån ja sen jålkeen suoritetaan sopivimmin vielå yksi vakevoiminen ultrasuodattamalla, jonka jålkeen seuraa suolanpoisto ja kylmåkuivaus kauppatavaran aikaansaamiseksi, joka koostuu noin 90 %:sen puhtaista proteiinifrakti-oista.
20 Yhden kilon laktoperoksidaasin j a yhden kilogramman laktoferriinin tuotantoon kuluu 65 vastaavasti 45 m3 heraa.Talteenotettujen komponenttien puhtaus on yli 90 %. Tåmå aikaansaadaan jonivaihtajan sopivalla valinnalla ja adsorptio- ja eluointiolosuh-teiden tarkalla valinnalla, jossa pH-arvo ja suolan konsentraatiot ovat tårkeitå tekijoita.
25
Keksintoå kuvataan nyt låhemmin alia olevien esimerkkien ja oheisten piirustusten avulla.
Kuvio 1 esittåå kaaviollisesti keksinnon mukaisen menetelmån edullista suoritus-30 muotoa.
Kuvio 2 esittåå UV-adsorptiospektrin laktoperoksidaasin ja laktoferriinin eluoimiseksi 7 91032 jonivaihtokolonnista.
Kuvio 3 esittaa kromatogrammia, joka esittaa laktoperoksidaasin vast, laktoferriinin puhtauden keksinnon mukaisen fraktioinnin jalkeen.
5 8
Esimerkki 100 1 pastorisoitua ja lietesentrifugoitua makeata heraa, jonka pH 6,5, mik-rosuodatettiin "cross-flow" -menetelmållå låmpotilassa 50 °C. Mikrosuodatuksen 5 avulla poistettiin rasvapallojen jåånnoksiå yhdesså esiintyvien proteiiniaggregaat-tien kanssa. Mikrosuodattimen huokoskoko oli 1,4 μιη.
Jååhdytyksen jålkeen hera sai kulkea jonivaihtokolonnin låpi, joka oli tåytetty 80 ml erikoiskåsiteltyå vahvaa katjonivaihtajaa (S-Sepharose, nopea virta, Pharma-10 cia) agaroosiin perustuen. Pedin korkeus oli noin 4,1 cm ja virtaus kolonnin låpi 100 ml/min, joka vastaa virtausta 1,25 petitilavuutta/min. Paineenalennus ennen kolonnia oli ajon alussa 0,26 baaria. 15 h myohemmin virtaus oli yhå 100 ml/min ja paineenalennus 0,28 baaria. Laktoperoksidaasin låpimurto tuli, kun noin 80-90 1 heraa oli kulkenut kolonnin låpi, ts. noin 1000 petitilavuutta.
15
Sen jålkeen heravirtaus keskeytettiin ja eluointivaihe aloitettiin huuhtomalla pois hera kolonnista fosfaattipuskurilla, 0,01 M KH2P04, pH 6,5, jonka jålkeen seurasi epåpuhtauksien eluointi jonivaihtajasta fosfaattipuskurin avulla, joka sisålsi 0,07 M NaCl (kuvio 1). Laktoperoksidaasi eluoitiin fosfaattipuskurilla, 20 joka sisålsi 0,3 M NaCl ja sen jålkeen laktoferriini fosfaattipuskurilla, joka sisålsi 0,9 M NaCl (kts kuvio 2).
Fraktioiden kerååmisen jålkeen nåistå poistettiin suola geelisuodattamalla Sephadex-kolonnissa ja kylmåkuivattiin lopulta.
25
Jonivaihtokolonni puhdistettiin låpihuuhtoamalla ensin 2,0 M NaCl liuoksella ja sen jålkeen 1,0 M NaOH liuoksella, jonka jålkeen se oli valmis seuraavaa ajoa vårten.
30 - Laktoperoksidaasin saanti jonivaihdon jålkeen: 96,5 %.
- Keråtyn fraktion puhtaus eluoinnin jålkeen: Α412/Α2β0= 0,84* - Prosessin kokonaissaanti kylmåkuivauksen jålkeen aktiivisuutena laskettuna: 90 % 9 91032 - Kylmåkuivatun valmisteen puhtaus: ΑΑ412/Α2Θ0 = 0,87* * 0,92 on maksimaalinen jako 100 %:n puhtaudelle.
Vastaava saanti ja puhtaus saatiin laktoferriinin tapauksessa (kts kuvio 3).
5

Claims (5)

1. Menetelmå laktoperoksidaasin ja laktoferriinin puhtaiden fraktioiden tal-teenottamiseksi maitoseerumista, tunnettu siitå, ettå maitoseerumi 5 mikrosuodatetaan, sen annetaan kulkea vahvan katjonivaihtajan pedin låpi suurella virtausnopeudella noin 1-1,5 petitilavuutta/min laktoperoksidaasin ja laktoferriinin selektiiviseksi adsorboimiseksi, ja sen jålkeen selektiivisesti eluoidaan peråkkåin laktoperoksidaasi suolaliuoksella, jonka konsentraatio on 0,10-0,4 M pH:ssa noin 6,5 ja laktoferriini suolaliuoksella, jonka konsentraatio 10 on 0,5-2 M.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmå, tunnettu siitå, ettå ennen laktoperoksidaasin eluoimista katjonivaihtaja eluoidaan suolaliuoksella, jonka konsentraatio on 0,01-0,15 M, edullisesti epåorgaanisella alkali-, maa-alkali- tai 15 ammoniumsuolaliuoksella.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmå, tunnettu siitå, ettå maitoseerumin pH såådetåån arvoksi 5,9-9,0, edullisesti noin 6,5, ennenkuin sen annetaan kulkea katjonivaihtajan låpi. 20
4. Yhden tai useamman edellisen patenttivaatimuksen mukainen menetelmå, tunnettu siitå, ettå mikrosuodatus suoritetaan mikrosuodattimella, jonka huokoshalkaisija on 0,10-2 μπι, edullisesti 0,4-1,5 Mm.
5. Yhden tai useamman edellå olevan patenttivaatimuksen mukainen menetelmå, tunnettu siitå, ettå suolaliuokset yhdesså eluoidun laktoperoksidaasin ja laktoferriinin kanssa våkevoidåån, mistå poistetaan suola ja ne kylmåkuivataan. 91032
FI902562A 1987-11-27 1990-05-23 Menetelmä laktoperoksidaasin ja laktoferriinin puhtaiden fraktioiden talteenottamiseksi maitoseerumista FI91032C (fi)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8704719 1987-11-27
SE8704719A SE458818B (sv) 1987-11-27 1987-11-27 Foerfarande foer utvinning av rena fraktioner av laktoperoxidas och laktoferrin ur mjoelkserum
SE8800643 1988-11-25
PCT/SE1988/000643 WO1989004608A1 (en) 1987-11-27 1988-11-25 Process for extracting pure fractions of lactoperoxidase and lactoferrin from milk serum

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI902562A0 FI902562A0 (fi) 1990-05-23
FI91032B FI91032B (fi) 1994-01-31
FI91032C true FI91032C (fi) 1994-05-10

Family

ID=20370415

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI902562A FI91032C (fi) 1987-11-27 1990-05-23 Menetelmä laktoperoksidaasin ja laktoferriinin puhtaiden fraktioiden talteenottamiseksi maitoseerumista

Country Status (12)

Country Link
US (1) US5149647A (fi)
EP (1) EP0390821B1 (fi)
JP (1) JP2553180B2 (fi)
AT (1) ATE89454T1 (fi)
AU (1) AU613688B2 (fi)
DE (1) DE3881217T2 (fi)
DK (1) DK173642B1 (fi)
FI (1) FI91032C (fi)
NO (1) NO177268C (fi)
NZ (1) NZ227097A (fi)
SE (1) SE458818B (fi)
WO (1) WO1989004608A1 (fi)

Families Citing this family (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4879110A (en) * 1983-10-27 1989-11-07 Stolle Research And Development Corporation Antihypertensive hyperimmune milk, production, composition, and use
ATE193324T1 (de) * 1989-11-03 2000-06-15 Incyte Pharma Inc Rekombinante herstellung von laktoperoxidase
US5756333A (en) * 1989-11-03 1998-05-26 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Recombinant production of lactoperoxidase
JP3035833B2 (ja) * 1991-01-21 2000-04-24 雪印乳業株式会社 シアル酸類含有組成物の製造方法
JP3110078B2 (ja) * 1991-06-21 2000-11-20 森永乳業株式会社 高純度抗菌性ペプチドの大量製造法
EP0595993A4 (en) * 1991-07-25 1994-08-17 Commw Scient Ind Res Org Isolation of charged particles from fluids
ATE129125T1 (de) * 1992-01-15 1995-11-15 Campina Melkunie Bv Verfahren zur isolierung von lactoferrin und lactoperoxidase aus milch und milchprodukten.
JPH05202098A (ja) * 1992-01-29 1993-08-10 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 乳質原料から生理活性物質の製造法
SE470375B (sv) * 1992-05-07 1994-02-07 Alfa Laval Food Eng Ab Sätt att erhålla högvärdiga proteinprodukter ur vassle
US5756680A (en) * 1994-01-05 1998-05-26 Sepragen Corporation Sequential separation of whey proteins and formulations thereof
US5468844A (en) * 1994-01-07 1995-11-21 Protose Technologies Inc. Process for the membrane-filtering of protein solutions
EP0744901B1 (en) * 1994-02-16 2001-12-05 Pharming Intellectual Property BV Isolation of lactoferrin from milk
HUT77043A (hu) * 1994-09-16 1998-03-02 New Zealand Dairy Board Kazein és savófehérjék fizikai elválasztása
JP3112637B2 (ja) * 1994-09-30 2000-11-27 雪印乳業株式会社 骨強化剤
JP2974604B2 (ja) * 1996-01-23 1999-11-10 雪印乳業株式会社 塩基性タンパク質組成物、塩基性ペプチド組成物及びその利用
JP3073439B2 (ja) * 1996-02-08 2000-08-07 雪印乳業株式会社 骨形成促進及び骨吸収防止剤
CA2197515A1 (en) * 1996-07-15 1998-01-16 Reyad Mahmoud Methods of treating milk products
AU3634597A (en) * 1996-07-30 1998-02-20 Shionogi & Co., Ltd. Method for preventing adsorption of lactoferrin
ATE346676T1 (de) 1996-09-06 2006-12-15 Pall Corp Scherkraft trennverfahren und vorrichtung
JP4082782B2 (ja) * 1998-04-30 2008-04-30 雪印乳業株式会社 歯周病予防及び改善剤
US20030040475A1 (en) † 2001-01-16 2003-02-27 Yasuhiro Toba Agents for improving lipid metabolism and reducing high blood pressure
US6875459B2 (en) * 2001-09-10 2005-04-05 Henry B. Kopf Method and apparatus for separation of milk, colostrum, and whey
FR2841747B1 (fr) 2002-07-02 2004-08-20 Cie Laitiere Europeenne Isolat de proteines de lait et procede pour sa preparation
US8017170B2 (en) * 2002-08-29 2011-09-13 University Of Massachusetts Utilization of emulsion interface engineering to produce oxidatively stable lipid delivery systems
US7470779B2 (en) * 2002-09-20 2008-12-30 Pfizer Inc. Process for decreasing aggregate levels of pegylated protein
JP4263932B2 (ja) * 2003-04-01 2009-05-13 雪印乳業株式会社 ラクトフェリンの製造方法
US20040259770A1 (en) * 2003-06-19 2004-12-23 Rush University Medical Center Method for determining leukocyte activation
WO2005041680A2 (en) * 2003-11-03 2005-05-12 Advanced Protein Systems A novel colostral fractionation process
CN100480378C (zh) 2004-02-17 2009-04-22 森永乳业株式会社 生产乳过氧化物酶的方法
WO2005085287A1 (en) * 2004-03-03 2005-09-15 En-N-Tech, Inc. Treatments for contaminant reduction in lactoferrin preparations and lactoferrin-containing compositions
US20070142629A1 (en) * 2004-06-16 2007-06-21 Ciphergen Biosystems, Inc. Multichemistry fractionation
TW200716664A (en) 2005-05-10 2007-05-01 Murray Goulburn Coop Co Ltd Immunoglobulin fraction and process therefor
FR2889068B1 (fr) * 2005-07-29 2012-03-02 Cie Laitiere Europeenne Nouvelles fractions proteiques laitieres et leur utilisation pour la prevention ou le traitement des maladies inflammatoires chroniques
US20070212367A1 (en) * 2006-03-13 2007-09-13 Keech Andrew M Novel immunologically active peptide fragments of a proline-rich polypeptide isolated from colostral mammalian fluids for treatment of viral and non-viral diseases or diseased conditions
CA2696145C (en) 2007-07-10 2016-12-20 Glanbia Nutritionals Method for removing endotoxin from proteins
WO2009057281A1 (ja) * 2007-11-01 2009-05-07 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. 骨芽細胞分化促進及び破骨細胞分化抑制用食品素材
US9055752B2 (en) * 2008-11-06 2015-06-16 Intercontinental Great Brands Llc Shelf-stable concentrated dairy liquids and methods of forming thereof
UA112972C2 (uk) 2010-09-08 2016-11-25 Інтерконтінентал Грейт Брендс ЛЛС Рідкий молочний концентрат з високим вмістом сухих речовин
BR112015010986B1 (pt) 2012-11-15 2021-02-09 Arla Foods Amba método de produção de composição que contém caseinomacropeptídeo que tem um baixo teor de fenilalanina; e composição que contém cmp
CZ2013885A3 (cs) * 2013-11-15 2015-08-19 Univerzita PalackĂ©ho Způsob separace syrovátkových proteinů z mléčného média a zařízení k provádění tohoto způsobu
WO2020176637A1 (en) 2019-02-26 2020-09-03 Pantheryx, Inc. Compositions for management of disorders of the gastrointestinal tract
CN117652565A (zh) * 2023-12-26 2024-03-08 光明乳业股份有限公司 一种高活性蛋白的常温牛奶及其制备方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3896241A (en) * 1971-09-01 1975-07-22 Coca Cola Co Preparation of a whey protein concentrate
FR2505615A1 (fr) * 1981-05-15 1982-11-19 Elf Aquitaine Procede d'extraction de lactoferrine et d'immunoglobulines du lait
JPS61145200A (ja) * 1984-12-19 1986-07-02 Snow Brand Milk Prod Co Ltd ウシラクトフェリンの分離精製法
FR2584727B1 (fr) * 1985-07-11 1988-06-17 Roussel Uclaf Procede d'extraction de proteines du lait, produits, application du procede, et compositions pharmaceutiques
IE61701B1 (en) * 1986-07-17 1994-11-30 Morinaga Milk Industry Co Ltd Process for producing bovine lactoferrin in high purity
FR2616628B1 (fr) * 1987-06-19 1989-09-29 Entremont Sa Procede pour extraire des proteines du lactoserum par adsorption et elution

Also Published As

Publication number Publication date
EP0390821A1 (en) 1990-10-10
WO1989004608A1 (en) 1989-06-01
DE3881217D1 (de) 1993-06-24
FI902562A0 (fi) 1990-05-23
NO177268C (no) 1995-08-16
NO902328D0 (no) 1990-05-25
JP2553180B2 (ja) 1996-11-13
ATE89454T1 (de) 1993-06-15
FI91032B (fi) 1994-01-31
NZ227097A (en) 1991-01-29
SE458818B (sv) 1989-05-16
AU2718088A (en) 1989-06-14
NO902328L (no) 1990-05-25
DK124590D0 (da) 1990-05-18
DK124590A (da) 1990-05-25
EP0390821B1 (en) 1993-05-19
AU613688B2 (en) 1991-08-08
DE3881217T2 (de) 1994-01-05
SE8704719D0 (sv) 1987-11-27
JPH03502921A (ja) 1991-07-04
DK173642B1 (da) 2001-05-14
NO177268B (no) 1995-05-08
US5149647A (en) 1992-09-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI91032C (fi) Menetelmä laktoperoksidaasin ja laktoferriinin puhtaiden fraktioiden talteenottamiseksi maitoseerumista
US6010698A (en) Process for recovering growth factors, or a composition containing one or more growth factors, from milk or a milk derivative
El-Sayed et al. Trends in whey protein fractionation
US5986063A (en) Isolating β-lactoglobulin and α-lactalbumin by eluting from a cation exchanger without sodium chloride
GB2179947A (en) Process for the extraction of proteins from milk
EP0620709A1 (en) METHOD FOR INSULATING LACTOFERRIN AND LACTOPEROXIDASE FROM MILK AND DAIRY PRODUCTS, AND PRODUCTS CONTAINED BY THIS METHOD.
US5194591A (en) Isolation of an immunoglobulin rich fracton from whey
US6001974A (en) Method of separating albumin from serum by ion-exchange chromatography with membrane adsorbers
Konecny et al. Chromatographic purification of immunoglobulin G from bovine milk whey
CN102898516A (zh) 一种用扩张床吸附技术从乳清中提纯乳铁蛋白的方法
US6555659B1 (en) Process for isolating glycomacropeptide from dairy products with a phenylalanine impurity of 0.5% w/w
JP2004307344A (ja) ラクトフェリンの製造方法
CN104513305B (zh) 一种乳清蛋白的纯化方法
WO1997027757A1 (en) Production of an immunoglobulin enriched fraction from whey protein solutions
Aslam et al. Recent Developments in Purifi cation Techniques for Whey Valorization
CN106793793A (zh) 来自含有聚集的酪蛋白的混合物的可溶性蛋白的分离
Fweja et al. Isolation of lactoperoxidase using different cation exchange resins by batch and column procedures
NZ243727A (en) Isolation of charged particles from fluids by ion exchange where the ion exchange medium is disposed on a porous membrane
Stanic et al. Application of ion exchanger in the separation of whey proteins and lactin from milk whey
DK3097788T3 (en) PROCEDURE FOR EXPLORING LACTOFERRIN FROM MILK
JP3946747B2 (ja) ラクトパーオキシダーゼの製造方法
JP2985158B2 (ja) 活性の高いラクテニン画分の回収方法
Wu et al. Isolation and purification of bioactive proteins from bovine colostrum
EP4587455A1 (en) Isolation of osteopontin and glycomacropeptide from whey
AU2018221613B2 (en) Method for purification of whey proteins

Legal Events

Date Code Title Description
BB Publication of examined application
MM Patent lapsed

Owner name: CAMPINA MELKUNIE B.V.