NL8600231A - Werkwijze voor het zuiveren van proteinen uit melk en uit de derivaten ervan. - Google Patents

Description

*v % . t -1-

Werkwijze voor het zuiveren van proteïnen uit melk en uit de derivaten ervan.

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor het zuiveren van proteïnen die aanwezig zijn in melk of in de derivaten daarvan, zoals melkwei. In het bijzonder heeft de onderhavige uitvinding betrekking op een 5 werkwijze voor het zuiveren of extraheren van proteïnen door hen te behandelen onder geschikte omstandigheden in aanwezigheid van een zuur polysaccharide dat kan worden gegeleerd met metaalionen. Nog meer in het bijzonder heeft de onderhavige uitvinding betrekking op het extraheren of zuiveren, onder 10 toepassing van deze werkwijze, van proteïnen die aanwezig zijn in melk of in de derivaten ervan, waarvan de iso-elek-trische pH groter is dan 7,5, zoals in het bijzonder lacto-ferrin, lactoperoxydase en andere analoga.

Het is bekend, dat proteïnen zoals lactoferrin en lacto-15 peroxydase veel toepassingen hebben op het gebied van de voeding of op therapeutisch gebied.

Als gevolg van een steeds toenemende behoefte in het duidelijk wenselijk toegang te hebben tot een afzonderlijke werkwijze die kan worden toegepast op uiteenlopende media en 20 op uiteenlopende proteïnen, hetgeen op het huidige ogenblik gewoonlijk niet het geval is.

Zo is in het Franse octrooischrift 2.505.615 al voorgesteld een werkwijze voor het extraheren van twee afzonderlijke proteïnen uit melk, deze werkwijze vereist in het bij-25 zonder dat de pH van melk wordt veranderd. Bovendien maakt de in het octrooischrift beschreven werkwijze gebruik van poeders van anorganische absorberende stoffen zoals silicium-oxyde, die worden gebruikt in de vorm van macroporeuze en microscopische korrels, die het noodzakelijk maken te werken 30 in een medium, dat vrij is van caseïne en van vetten, ter vermijding van snelle blokkering van de hars.

Werkwijzen zijn ook voorgesteld die gebruik maken van ionuitwisselingsharsen waarvan de deeltjes minder fijn zijn dan de organische poederkorrels, maar die ook het nadeel 35 hebben dat zij snel worden geblokkeerd ten gevolge van de macroporeuze structuur daarvan.

De toepassing van titaanoxydekorrels, waarvan de dia- : rt *2 ’ -? ij- '* i -2- 3 -¾ ί * meter kan variëren tussen 50 micron en verscheidene centimeters, als een absorberend materiaal, is ook voorgesteld. Een materiaal van dit type vereist echter, dat de melk en/of de melkwei vooraf wordt behandeld teneinde de ionconcentra-5 tie te verminderen, hetgeen bijgevolg aanvullende bewerkingen en een verandering van het medium betekent.

Het zou daarom wenselijk zijn, toegang te hebben tot een werkwijze die het mogelijk maakt dat proteïnen gemakkelijk worden geëxtraheerd uit een medium dat complex is als 10 volle melk, dat in het bijzonder omvat vetten, vetbolletjes en caseïnemicellen, zonder dat deze werkwijzen de bovenvermelde nadelen hebben van blokkering, of vereisen dat het medium wordt voorbehandeld.

Het oogmerk van de onderhavige uitvinding is het ont-15 wikkelen van een dergelijke werkwijze.

De aanvraagster vennootschap heeft nu gevonden dat de toepassing van zure polysacchariden die kunnen worden ge-geleerd onder geschikte omstandigheden, isolering en zuivering van uiteenlopende proteïnen uit de melk mogelijk 20 maakt.

Het voorwerp van de onderhavige uitvinding is een werkwijze voor het zuiveren en voor het isoleren van proteïnen door een behandeling in de aanwezigheid van een zuur polysaccharide dat onder geschikte omstandigheden kan wor-25 den gegeleerd.

Een ander voorwerp van de onderhavige uitvinding is een dergelijke werkwijze voor het zuiveren van proteïne zonder dat dit daardoor leidt tot een verandering van betekenis in het medium waaruit de proteïnen worden geëxtraheerd.

30 Een ander voorwerp van de onderhavige uitvinding is een dergelijke werkwijze voor het extraheren van proteïnen die het mogelijk maakt dat de isolering van de proteïnen veel sneller wordt uitgevoerd dan met toepassing van andere werkwijzen, terwijl de blokkering van harsen en voorts elke 35 voorbehandeling van het medium wordt vermeden.

Een ander voorwerp van de onderhavige uitvinding is een dergelijke zuiveringswerkwijze, die het mogelijk maakt de proteïnen uit melk met een iso-elektrische pH groter dan 7,5 te behandelen.

40 De werkwijze van de onderhavige uitvinding voor het ^ ; ^ *; j y ,; -3- zuiveren van proteïnen uit melk waarvan de iso-elektrische pH groter is dan 7,5 wordt gekenmerkt doordat (1) het medium bevattende de vereiste proteïne, wordt geleid over deeltjes van een geleerbaar zuur polysacchariden dat wordt 5 gebruikt in geïvorm, welke deeltjes afmeting in de kortste afmeting ervan niet minder is dan 0,5 mm, het gehalte van zuur polysaccharide in de gel tussen 1 en 8 gew.% is, de gel wordt gebruikt in een percentage van 1 tot 20 gew.% in een oplossing waarin hij onoplosbaar is en (2) de proteïnen wor-10 den gewonnen in een zoutoplossing waarin de concentratie van ionen groter is dan 0,05 gew.%/volume (hierna uitgedrukt als gewicht/volume.

De aanvraagster vennootschap heeft nu onverwachterwij-ze gevonden dat het mogelijk was de bovengenoemde proteïnen 15 te zuiveren en te isoleren alleen dan, wanneer de deeltjes van geleerbaar zuur polysaccharide een afmeting hebben van niet minder dan 0,5 mm in de kortste afmeting daarvan.

Dit is des te onverwachter, omdat de eerder gebruikte harsen een specifiek oppervlak voor absorptie moesten hebben, 20 die zo groot mogelijk was, liggend in een traject tot ten hoogste 700 m2/g teneinde de extractie van de proteïnen te bereiken.

Nu hebben bij de werkwijze van de uitvinding de gels die bereid zijn uit de geleerbare zure polysacchariden 25 slechts lage proteïne doorlaatbaarheid en als een gevolg hiervan wordt de absorptie in oppervlak beperkt, hetgeen het specifiek oppervlak van de gel, dat kan liggen tussen 2 x 10 en 0,2 m2/g, aanzienlijk vermindert.

De geleerbare zure polysacchariden die bij de onderha-30 vige uitvinding worden gebruikt, zijn gekozen uit alginaten en carragenins.

Deze zure polysacchariden geleren wanneer zij in aanraking worden gebracht met een oplossing bevattende kationen zoals in het bijzonder alkalimetaal en aardalkalimetaalkatio-35 nen, die van de ijzerreeks en ook van het ammoniumkation.

De aanvraagster vennootschap heeft ook onverwachterwi j ze gevonden, dat de vereiste proteïnen konden worden geadsorbeerd aan de zure polysaccharidegel.

Voorts werd gevonden, dat de werkwijze voor het be- 40 reiden van de zure polysaccharidegel van groot belang was . i - * * 'ψ -4- voor het succes van de werkwijze volgens de uitvinding.

Wanneer het gekozen zure polysaccharide een alginaat is, wordt'de gel gewoonlijk bereid door een waterige oplossing van een oplosbaar alginaatzout, gewoonlijk het natrium-5 zout, te nemen, dat daarna in aanraking wordt gebracht met een tegenion teneinde gelvorming teweeg te brengen. Een CaCl2 oplossing wordt gewoonlijk gebruikt.

Opgemerkt werd echter, dat ter verkrijging van een gel dat kan worden gebruikt bij de werkwijze volgens de uit-10 vinding, de alginaatconcentratie in de gel moet liggen tussen goed gedefinieerde grenzen, tussen 1 en 8 gew.% in het onderhavige geval, waarbij de rest uit water bestaat.

Wanneer de 'alginaatconcentratie in de gel beneden bij benadering 1% ligt, wordt de gelstabiliteit aanzienlijk ver-15 minderd ten gevolge van de overmaat water, hetgeen hem nutteloos maakt voor het zuiveren van proteïnen. Anderzijds wordt bij een concentratie boven 8% ook een viscositeits-toeneming waargenomen, die het niet langer toelaat, dat het medium gemakkelijk wordt verwerkt, zodat het praktisch on-20 mogelijk wordt gemaakt de gel te bereiden.

De onder goede omstandigheden verkregen gel kan worden gebruikt in de vorm van korrels, parels, stroken, filamenten, vezels of zelfs doek.

In overeenstemming met een uitvoeringsvorm van de on-25 derhavige uitvinding wordt natriumalginaat gebruikt in een waterige oplossing en wordt neergeslagen met CaC^·

De in de vereiste vorm verkregen gel wordt daarna gebracht in een CaC^ oplossing, zodat het steeds in de aanwezigheid is van het ion, dat verantwoordelijk is voor het 30 geleren.

In overeenstemming met een uitvoeringsvorm van de werkwijze van de uitvinding heeft de behandelde melk of melkwei een calciumconcentratie die voldoende is om de stabilisatie van de alginaatgel te verzekeren.

35 Wanneer carragenin als het zure polysaccharide wordt gekozen, wordt de gel gewoonlijk bereid door een oplosbaar carrageninzout in een waterige oplossing te gebruiken. Het natriumzout wordt gewoonlijk gebruikt en wordt in aanraking gebracht met een tegenion teneinde de gelvorming te weeg 40 te brengen. Een oplossing van KC1, NH^Cl of RbCl wordt ge- -5- »s.

* woonlijk gebruikt.

Opgemerkt werd, dat ter verkrijging van een gel dat kan worden gebruikt bij de werkwijze volgens de uitvinding, de concentratie van carragenaat in de gel moet liggen tus-5 sen goed gedefinieerde grenzen, tussen 1 en 8% in het onderhavige geval, waarbij de rest bestaat uit water.

Wanneer de carragenaatconcentratie in de gel beneden ongeveer 1% ligt, wordt de stabiliteit van de gel aanzienlijk verminderd ten gevolge van de overmaat water, die de 10 gel nutteloos maakt voor het zuiveren van proteïnen. Anderzijds wordt bij een concentratie boven 8% ook een viscosi-teitstoeneming waargenomen, die het niet langer toelaat dat het medium gemakkelijk wordt verwerkt, zodat het praktisch onmogelijk wordt gemaakt dat de gel wordt bereid.

15 De onder goede omstandigheden verkregen gel kan worden gebruikt in de vorm van korrels, parels, strippen, filamenten, vezels of zelfs doek.

Volgens een uitvoeringsvorm van de uitvinding wordt natriumcarragenaat gebruikt in een waterige oplossing en 20 wordt gegeleerd met KC1.

De in de vereiste vorm verkregen gel wordt daarna gebracht in een KC1 oplossing, zodat hij steeds in de aanwezigheid is van het ion dat verantwoordelijk is voor het geleren.

25 Wat het zure polysaccharide ook is dat wordt gebruikt voor het vormen van de gel, deze laatste kan ook een metaal-oxyde opnemen dat onoplosbaar is onder de gebruiksomstandigheden. Titaan, zircoon, silicium en aluminiumoxyde, sepio-liet, en andere analoga kunnen in het bijzonder worden ver-30 meld als voorbeelden van oxyden die kunnen worden gebruikt.

De hoeveelheid toegevoegd oxyde overschrijdt gewoonlijk niet 3 gew.%. Niettemin kunnen echter grotere hoeveelheden worden gebruikt, hetgeen bijdraagt tot een effect van betekenis.

Volgens de werkwijze van de uitvinding wordt de aldus 35 verkregen gel gebruikt in een oplossing waarin hij onoplosbaar blijft, een hoeveelheid vormt die ligt tussen 1 en 20 vol.% ten opzichte van de proteïneoplossing. Deze hoeveelheid hangt ook af van de concentratie van de te absorberen proteïne .

40 Voor zover het gaat om de proteïnen die onder toepas- _' --/3 * Ό -6- sing van de werkwijze volgens de uitvinding kunnerfjworden gescheiden, moeten deze een isoelektrische pH van tenminste 7,5 hebben. Van de voorbeelden van melkproteïnen die kunnenworden geïsoleerd en gezuiverd onder toepassing van de werkwijze 5 · volgens de uitvinding, zijn die welke in het bijzonder kunnen worden vermeld, lactoferrin, lactoperoxydase, bepaalde immunoglobulinen, en soortgelijke proteïnen. De proteïnen die worden geadsorbeerd aan de zure polysaccharidegel moeten daarna worden teruggewonnen.

10 Het is duidelijk dat de werkwijze volgens de uitvinding kan worden toegepast voor het isoleren van andere proteïnen, die aanwezig kunnen zijn in andere media, onder toepassing van omstandigheden die door de deskundige kan worden bepaald.

In het geval dat een alginaatgel wordt gebruikt, kun-15 nen de proteïnen die op deze wijze aan de gel zijn geadsorbeerd, worden geëlueerd met CaC^ wanneer de gel calcium-alginaat is, of met een mengsel van ionen bevattende CaCl2 in voldoende hoeveelheden.

De zoutconcentratie in de oplossing die gebruikt wordt 20 voor het elueren voor de proteïnen uit de alginaatgel is niet kritisch; zij hangt af van het gebruikte zout, van de proteïnen en van de pH van de oplossing. Zo wordt, wanneer CaCl2 wordt gebruikt, een concentratie van tenminste 0,1% gew./-volume gebruikt.

25 Het zout dat wordt gebruikt ter eluering van de prote ïne uit de gel kan maar niet hetzelfde zijn als datgene wat wordt gebruikt ter adsorbering daarvan. Het is duidelijk dat, wanneer twee verschillende zouten worden gebruikt, zij verenigbaar moeten zijn, dat wil zeggen zij mo-gen niet zelf 30 reageren ter vorming van een neerslag.

Gewoonlijk wordt, voordat weer een nieuwe eluering begint, de opvangbek en de alginaatgel gewassen met een zoutoplossing, waarvan de concentratie voldoende is om de gel niet te destabiliseren. In de meeste gevallen wordt een CaCl2 35 oplossing met de concentratie van 0,1% gew./volume gebruikt.

De werkwijze volgens de uitvinding voor het isoleren en zuiveren van proteïnen kan continu of niet continu worden uitgevoerd.

Volgens een uitvoeringsvorm van de werkwijze van de 40 onderhavige uitvinding in niet continue vorm wordt de calcium- -7- ·# s alginaatgel bereid en wordt ingeleid met de proteïneoplos-sing in een opvangbak, en het geheel wordt gedurende een periode van 10 min. tot 24 uur geroerd, afhankelijk van het vereiste extractiepercentage, en als een funktie van de 5 concentratie van de te extraheren proteïne in de oplossing, en van de concentratie en de aard van de verontreinigende materialen. De gel wordt gewassen met een CaC^ oplossing en een concentratie van tenminste 0,1% gew./volume, de algi-naatgel wordt daarna geëlueerd met een CaG^ oplossing bij 10 een concentratie boven 0,1% gew./volume, en de proteïne wordt zo teruggewonnen als een oplossing.

Volgens een uitvoeringsvorm van de werkwijze volgens de uitvinding in een continue vorm wordt de calciumalginaat-gel bereid en wordt bij voorkeur ingeleid in een kolom be-15 vattende een vast bed of een gefluïdiseerd bed, en de lading wordt geleid door een LHSV van tussen 0,1 en 3.

De gel wordt gewassen met een CaC^ oplossing bij een concentratie van tenminste 0,1% gew./volume. De alginaatgel wordt daarna geëlueerd met een CaC^ oplossing bij een con-20 centratie boven 0,1 % gew./volume en de proteïne wordt zo teruggewonnen als een oplossing.

In het geval dat een carrageningel wordt gebruikt, kunnen de aldus aan deze gel geadsorbeerde proteïnen worden geëlueerd onder toepassing van een waterige oplossing van 25 een in water oplosbaar organisch of anorganisch zout. Wanneer de gel een K of carrageniaat is, heeft het echter de voorkeur KC1 of NH^Cl, of een mengsel van ionen bevattende KC1 of NH^Cl in voldoende hoeveelheden, te gebruiken.

De zoutconcentratie van de gebruikte oplossing ter 30 eluering van de proteïnen uit de carrageningel is niet kritisch; zij hangt af van het gebruikte zout, van de proteïne en van de pH van de oplossing. Zo wordt, wanneer KC1 wordt gebruikt, een concentratie van tenminste 0,1% gebruikt.

Het zout dat gebruikt wordt ter eluering van de proteï-35 ne uit de gel kan, maar hoeft niet, hetzelfde te zijn als datgene watwordt gebruikt ter absorbering ervan. Het is duidelijk, dat, wanneer twee verschillende zouten worden gebruikt, zij veieiigbaar moeten zijn, dat wil zeggen, dat zij niet zelf mogen reageren ter vorming van een neerslag.

40 Gewoonlijk worden voordat een nieuwe eluering weer be- V , ''v -8- gint, de opvangbek en de carrageningel gewassen met een zoutoplossing waarvan de concentratie voldoende is om de gel niet te destabiliseren. In de meeste gevallen wordt een KC1 oplossing met een concentratie van 0,1% gew./volume gebruikt.

5 De werkwijze volgens de uitvinding voor het isoleren en zuiveren van proteïnen kan continu of niet continu worden uitgevoerd. Volgens een uitvoeringsvorm van de werkwijze volgens de uitvinding in een niet-continue vorm wordt een kaliumcarragenaatgel bereid en uitgegoten in een opvangbak 10 die de proteïneoplossing bevat, en het geheel wordt geroerd gedurende een periode van 10 min. tot 24 uur, afhankelijk van het vereiste extractiepercentage en als funktie van de concentratie van de proteïne die moet worden geëxtraheerd in de oplossing en van de concentratie en de aard van de 15 verontreinigende materialen. De gel wordt gewassen met een KC1 oplossing bij een concentratie van tenminste 0,1% gew./-volume, de carrageningel wordt daarna geëlueerd met een KCl oplossing waarvan de concentratie boven 0,1% gew./volume is, en de proteïne wordt zo teruggewonnen als een oplossing.

20 In overeenstemming met een uitvoeringsvorm van de werkwijze volgens de uitvinding in een continue vorm wordt een K carragenaatgel bereid en wordt bij voorkeur ingeleid in een kolom bevattende een vast bed of een gefluïdiseerd bed, en de lading wordt geleid door een LHSV tussen 0,1 en 3. 25 De gel wordt gewassen met een KCl of NH^Cl oplossing met een concentratie van tenminste 0,1% gew./volume. De carragenaatgel wordt daarna geëlueerd met een KCl oplossing, waarvan de concentratie boven 0,1% gew./volume is, en de proteïne wordt zo teruggewonnen als een oplossing.

30 De volgende voorbeelden worden gegeven teneinde de werk wijze volgens de uitvinding beter toe te lichten, maar zonder de reikwijdte daardoor te beperken.

Voorbeeld I

Een alginaatgel werd bereid in de vorm van filamenten 35 met een lengte van bij benadering 5 cm en met een diameter van bij benadering 1 mm als de kortste afmeting, door een homogene waterige oplossing bevatten 30 g/1 natriumalginaat en 20 g titaanoxyde te extruderen in een waterige oplossing bevattende 30 g/1 CaC^.

40 Afzonderlijk werd zoete ongepasteuriseerde melkwei - ./ i • · t -9- bereid onder toepassing van langzame coagulering van verse melk bij 32°C in de aanwezigheid van 0,03 vol.% leb met een sterkte van 7000. Deze melkwei was gekenmerkt door een pH van 6,6 bij 20°C en door concentraties van 4% lactose, 5 0,35% lipiden en 0,7% proteïnen (insluitend 0,001% lactoper- oxydase en 0,003% lactoferrin).

Na toevoeging van 200 g alginaatgel aan 5 1 melkwei, werd het mengsel 18 uur lang bij 4°C geroerd . De gel werd afgescheiden door filtratie via een metaalzeef en werd 10 daarna 3 maal gewassen, elke keer met 5 1 van een waterige oplossing bevattende 3g/l CaCl2·

De door de gel gehechte stoffen werden teruggewonnen door de gel twee maal te wassen in 1 liter van een waterige oplossing bevattende 50 g/1 CaCl2, waarbij 2 uur lang bij 15 4°C werd geroerd.

De 2 liter oplossing die op deze manier is verkregen bevat bij benadering 250 mg proteïnen, insluitend 130 mg lactoferrin en 20 mg lactoperoxydase.

Voorbeeld II

20 Een waterige oplossing bevattende 30 g/1 alginaat werd bereid.

3 Liter van deze oplossing werd verspróeid in een oplossing bevattende 30 g/1 CaCl2, zodat calciumalginaat- gelparels met een gemiddelde diameter van bij benadering 25 1,2 mm werden bereid. Het specifiek oppervlak van dit absor- —3 berend materiaal was 2 maal 10 m2/g.

200 Ml parels werden gebracht in een kolom met een diameter van 5 cm, ter vorming van een bed van gel met een hoogte van 11 cm.

30 13 Volumina melk werden behandeld, dat wil zeggen 2,575 liter volle melk bevattende bij benadering 5% lactose, 4% lipide, 0,9% zout en 3,3% proteïnen, insluitend bij benadering 0,008% lactoferrin en 0,003% lactoperoxydase.

De LHSV waarmee de melk werd geleid door de gelkolom 35 was 1,5.

Nadat de melk was doorgeleid, werd de gel overgebracht naar een opvangbak, waar hij 5 maal achtereenvolgens werd gewassen met een 300 ml volume van een waterige oplossing bevattende 3 g/1 CaCl2· De gel werd afgescheiden door elke 40 keer afgieten en filtreren op een nylon filter.

, ' i -10-

v # V

De proteïnen die geadsorbeerd waren aan het gel werden gewonnen door de gel twee maal te wassen in 300 ml van een waterige oplossing bevattende 3% CaCl2, onder roeren gedurende 2 uur bij 4°C.

5 De 600 ml oplossing die op deze wijze was verkregen, bevatte bij benadering 260 mg proteïnen, insluitend 31 mg lactoperoxydase en 125 mg lactoferrin. De extractieopbrengst was 72%.

Ter vergelijking werd dezelfde kolom met een agarhars 10 verknoopt met polyacrylamide, welke hars gewoonlijk wordt gebruikt voor het isoleren van proteïnen.

De volle melk waarvan de samenstelling hierboven is beschreven, werd door deze hars heengeleid onder dezelfde werkomstandigheden en na minder dan 1 uur werking was de 15 kolom volledig geblokkeerd.

Voorbeeld XII

Een alginaatgel werd bereid in de vorm van filamenten met een lengte van bij benadering 10 cm en een diameter van bij benadering 1,5 mm als kortste afmeting, door een homogene 20 waterige oplossing bevattende 30 g/1 natriumalginaat en 5 g/1 titaanoxyde te extruderen in een waterige oplossing bevattende 30 g/1 CaCl2·

De volle melk waarvan de samenstelling in voorbeeld II is gegeven, bevattende in het bijzonder 3,3% proteïnen, 25 insluitend 0,008% lactoferrin en 0,003% lactoperoxydase, werd behandeld.

Na toevoeging van 100 g alginaat aan 20 liter volle melk, werd het mengsel 8 uur lang bij 10°C geroerd. De gel werd afgescheiden door filtreren door eenmetaalzeef en werd 30 daarna 3 maal gewassen met 500 ml van een oplossing bevattende 1 g/1 CaCl2.

De door de gel gehechte materialen werden teruggewonnen door de gel twee maal te wassen in 300 ml van een waterige oplossing bevatten 10 g/1 CaCl2 en 40 g/1 NaCl onder 35 roeren gedurende 30 min. bij 10°C.

De aldus verkregen 600 ml oplossing bevatte bij benadering 3 g proteïnen bevattende 1 g lactoferrin en 125 mg lactoperoxydase, samen met bij benadering 0,5 g vette stof.

-conclusies- - ' " ^ ·. \ -7 1

J

Claims (13)

1. 2. Werkwijze volgens conclusie 1., m e t het ken-15 merk, dat een geleerbare zure polysaccharide gekozen uit alginaten en carragenins wordt gebruikt.
2. 3. Werkwijze volgens conclusie 2,met het kenmerk, dat de geleerbare zure polysaccharide wordt ge- 20 geleerd doordat hij in aanraking wordt gebracht met een oplossing bevattende kationen die gekozen zijn uit alkali-metaal of aardalkalimetaalkationen, die van de ijzerreeks, en het ammoniumkation; 25 4.Werkwijze volgens conclusie 2 of 3,met het ken merk, dat het alginaat wordt gegeleerd met een oplossing van CaC^·
3. 5. Werkwijze volgens conclusie 2 of 3, m e t het 30 kenmerk, dat het carragenin wordt gegeleerd met een oplossing van KCl, of van NH^Cl of RbCl.
4. 6. Werkwijze volgens één of meer van de conclusies 1 tot en met 5,met het kenmrk, dat een zure polysaccha- _3 35 ridegel met een specifiek oppervlak tussen 2 maal 10 en 0,2 m2/g wordt gebruikt. _ï Λ kt _·__ - .-*Ji . v r -V -12-
5. 7. Werkwijze volgens één of meer van de conclusies 1 tot en met 6,met het kenmerk, dat een zure poly-saccharidegel wordt gebruikt in de vorm van parels, korrels, strippen, vezels, filamenten of doeken. 5
6. 8. Werkwijze volgens één of meer van de conclusies 1 tot en met 7,met het kenmerk, dat de zure poly-saccharidegel een hoeveelheid bevat die 3 gew.%, berekend op het gewicht van gel, van een metaaloxyde dat onoplosbaar 10 is onder de gebruiksomstandigheden, niet overschrijdt.
7. 9. Werkwijze volgens conclusie 8,met het kenmerk, dat het metaaloxyde gekozen is uit titaan, zircoon, silicium, en aluminiumoxyden, sepioliet, en andere analoga. 15
8. 10. Werkwijze volgens één of meer van de conclusies 1 tot en met 9,met het kenmerk, dat melkproteïnen gekozen uit in het bijzonder lactoferrin, lactoperoxydase, immunoglobulinen en andere analoga, worden behandeld. 20
9. 11. Werkwijze voor het zuiveren van proteïnen uit melk volgens één of meer van de conclusies 1 tot en met 10, m e t het kenmerk, dat een alginaatgel wordt uitgegoten in een geschikte opvangbak bevattende de oplossing van pro- 25 teïnen, het geheel wordt geroerd gedurende een periode van 10 min. tot 24 uur, de gel wordt gewassen met een CaC^ oplossing, de alginaatgel wordt geëlueerd met een CaC^ oplossing, en de proteïnen worden teruggewonnen als een oplossing. 30
10. 12. Werkwijze voor het zuiveren van proteïnen uit melk volgens één of meer van de conclusies 1 tot en met 10, m e t het kenmerk, dat een carrageningel wordt uitgegoten in een geschikte opvangbak bevattende de 'oplossing van 35 proteïnen, het geheel gedurende een periode van 10 min. tot 24 uur wordt geroerd, de gel wordt gewassen met· een oplossing van een zout gekozen uit KC1, NH^Cl of RbCl, de carrageningel wordt geëlueerd met een oplossing van hetzelfde zout en de proteïnen worden gewonnen als een oplossing. ·" ’ .11 -13-
11. 13. Werkwijze voor het zuiveren van proteïnen uit melk volgens één of meer van de conclusies 1 tot en met 10, m e t het kenmerk, dat een alginaatgel wordt uitgegoten' in een kolom bevattende een vast of gefluïdiseerd bed, de 5 proteïnen bevattende lading wordt geleid door de alginaatgel met een LHSV tussen 0,1 en 3, de gel wordt gewassen met een CaC^ oplossing, de alginaatgel daarna wordt geëlueerd met een CaC^ oplossing en de proteïnen worden gewonnen als een oplossing. 10
12. 14. Werkwijze voor het zuiveren van proteïnen volgens één of meer van de conclusies 1 tot en met 10,met het kenmerk , dat de carrageningel wordt uitgegoten in een kolom bevattende een vast of gefluïdiseerd bed, de de ορίσει 5 sing van proteïnen bevattende lading wordt geleid door de carrageningel met een LHSV tussen 0,1 en 3, de gel wordt gewassen met een oplossing van een zoutgekozen uit KC1, NH^Cl of RbCl, de carrageningel daarna wordt geëlueerd met een oplossing van hetzelfde zout en de proteïnen worden gewonnen 20 als een oplossing.
13. 15. Proteïnen uit melk, gekenmerkt , door een pH groter dan 7,5, die zijn geïsoleerd en gezuiverd onder toepassing van de werkwijzen beschreven in één of meer van de 25 voorafgaande conclusies. /- . i WL - ^