SU721100A1

SU721100A1 - Способ получени гемоглобина

Info

Publication number: SU721100A1
Application number: SU782652827A
Authority: SU
Inventors: Любовь Григорьевна Богомолова; Марина Михайловна Великина; Ирина Михайловна Быстрова; Гарик Яковлевич Гдалевский
Priority date: 1978-08-09
Filing date: 1978-08-09
Publication date: 1980-03-15

Description

(54)

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕМОГЛОБИНА

. t .

, Изобретение относитс к гематологии , а именно к способу получени .нативного гемоглобина.

Известен способ получени гемоглобина из эритроцитарной массы путем ее отмывки, и гемолиза с последующей очисткой гемолйзата от балластных веществ , отделени осадка и стабилизации полученного раствора гемоглобина 1 .

Однако известный способ не обеспечизвает достаточной чистоты конечного продукта вследствие образовани метгемоглобина и попадани в раствор фосфолипидов, повышакадих прокоагул нтную активность. Кроме того, по этому способу невозможно получить концентрированный раствор гемоглобина , так как происходит заметное нарастание прокоагул нтной активности препарата.

Цель изобретени - повышение концентрации и чистоты целевого продукта .

Цель достигаетс тем, что очистку гемолйзата от балластных веществ ведут обработкой его смесью бентонита и коллоидной кремниевой кислоты , вз тых в соотношении 7:1, и затем пропускают раствор гемоглобина

через колонку с катионитом в натриевой форме.

Способ осуществл ют следующим образом. К эритроЦитарной массе, отмытой раствором хлористого натри , добавл ют охлажденную (О + ) дистиллированную воду, гемолиз ведут в течение 30-40 IVMH. Полученный гемолиз ат обрабатывают смесью бентони0 та и коллоидной кремниевой кислоты, вз тых в соотношении 7:1, и центрифугируют . Образовавшийс pacTEfbp гемоглобина пропускают через колонку с катионитом в натриевой форме.

5

Пример. 2л эритроцитарной массы, оставшихс после отделени стромы, смешивают с 8 л 1,6% хлорида натри . Смесь перемешивают и содержимое внос т в сепаратор Сатурн-2,

Claims

0 где происходит отделение эритроцитов от более легкой части (воды). Полученный 1-1,2 л отмытых эритроцитов вливают в бутыль, содержащую 4 л охлажденной до 2°С дистиллиро5 ванной воды. Гемолиз происходит в течение 40 мин при перемешивании. В ту бутыль к 5 л гемолйзата добавл ют 400 г смеси бентонита и коллоидной кремниевой кислоты, вз тых в соотно0 шении 7:1. Содержимое размешивают при плавном вращении ее в гориэон ёШ йОМйапра1шёййй в течение l ч. После чего смесь гемолизата с сорбен том центрифугируют в центрифуге ЦЛРв течение 30 мин при 3000 об/мин и температуре 2С 3 л полученного супернатанта (раствор гемоглобина) пропускают под давлением 0,6-0,8 атм через асбестовые пластины (типа СФ) фильтра Сальникова, затем - через ко лонку с катионитом КУ-2 в натриевой форме, содержа1аую 1рр г катионита. К фильтрату (около 3 л) добавл ют 90 г порошкообразной глюкоза, рН рас вора довод т до 7,2-7,4, 4J 10%йЬгб гйдрокарбоната натри ТнаНСОд ) . Стерилизуют раствор посредством фильтрации через фильтры Миллипор с Диаметром пор 0,22 ммк. Фильтрат разливают во флаконы емкостью 250 или 500 МП,замораживают при теМпера туре не выше и затем подвергаю лиофилиз адии, Хранитс препарат в сухом состо нии при в темном. Препарат гемоглобина, полученный предложенным способом, содержит в ср нем в 2 раза меньше ьютгемоглобина и обладает меньшей ПрОкОагул нтноЙ активностью при большей (в 2 раза) концентрации гемоглобина в растворе. Способ позвол ет повысить выход гемоглобина, а также получить препарат его, свободный от стромы и растворимых фосфолипидов, повЕлшающих прокоагул нтную активность. Формула изобретени Способ получени гемоглобина из эритроцитарной массы путем ее отмывки и .а с последующей очист-кой гёкюлизата от балластных веществ, отделени осадка и стабилизации полученного раствора гемоглобина, отличающий с тем, что, с целью повышени выхода и чистоты целевого продукта, очистку гемолизата от балластных веществ ведут обработкой его смесью .бентонита и коллоидной кремниевой кислоты, вз тых в соотношении 7:1, и затем пропускают раствор гемоглобина через колонку с кафионитом в натриевой форме. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Великина М.М. Получение и экспериментальное изучение гемоглобинсодержащего продукта (эригем), автореферат диссертации кандидатской, Л., 1967, с. 18.