JPS589686A - ス−パ−オキサイドジスムタ−ゼの精製法 - Google Patents
ス−パ−オキサイドジスムタ−ゼの精製法Info
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- JPS589686A JPS589686A JP10438781A JP10438781A JPS589686A JP S589686 A JPS589686 A JP S589686A JP 10438781 A JP10438781 A JP 10438781A JP 10438781 A JP10438781 A JP 10438781A JP S589686 A JPS589686 A JP S589686A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、スーパーオキサイド・ジスムター（”（以下
８．０．Ｄと略す）の新規な分離精製法に関する。
８．０．Ｄと略す）の新規な分離精製法に関する。
８、０． Ｄは、 １９６９年、フリートピッチとマツ
コード等によりキチンテンオキシダーぞの研究に於いて
、その中間生成物のスーパーオキサイド（０１）を分解
する酵素として、最初に見出された。その後、８．０．
Ｄは、生体の酸素毒性防御機構という観点から注目され
、現在は、抗炎症剤として慢性関節リウマチ、変形性関
節症、放射線照射による副作用、ある種の泌尿器疾患な
どの治療に用いられている。
コード等によりキチンテンオキシダーぞの研究に於いて
、その中間生成物のスーパーオキサイド（０１）を分解
する酵素として、最初に見出された。その後、８．０．
Ｄは、生体の酸素毒性防御機構という観点から注目され
、現在は、抗炎症剤として慢性関節リウマチ、変形性関
節症、放射線照射による副作用、ある種の泌尿器疾患な
どの治療に用いられている。
従来、８．０．Ｄの精製法としては、加熱処理、硫安塩
析をはじめとして、ＤＩＢ−セルロース（Ｊｏｕ ｒｎ
ａｌｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｌｒｙ
ｅ ２４４ （２２） ６０４９（１９６９）、 ）ｅ
ＤＢｋＥ−セファデックス、セファデックスＧ−１００
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、
８５．１３９７（１９７９）＊ ） ｅ ＣＭ−セル
ロース、ＣＭ−セファデックス、 セファデックスＧ
−７５（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｃｈｅｍｌ−１ｒｙ ２４ Ｂ（１０）３５８２（
１９７３）、 ）、 ハイドロキシアパタイト（Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ、 ２５２（１Ｂ）６４２１（１９７７）、
）等を用いて精製する方法が知られている。
析をはじめとして、ＤＩＢ−セルロース（Ｊｏｕ ｒｎ
ａｌｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｌｒｙ
ｅ ２４４ （２２） ６０４９（１９６９）、 ）ｅ
ＤＢｋＥ−セファデックス、セファデックスＧ−１００
（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、
８５．１３９７（１９７９）＊ ） ｅ ＣＭ−セル
ロース、ＣＭ−セファデックス、 セファデックスＧ
−７５（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｃｈｅｍｌ−１ｒｙ ２４ Ｂ（１０）３５８２（
１９７３）、 ）、 ハイドロキシアパタイト（Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ、 ２５２（１Ｂ）６４２１（１９７７）、
）等を用いて精製する方法が知られている。
しかしながら、これらの方法では、処理工程中に脱塩処
理を必要としたり、吸着剤に吸着するのに長時間要し、
かつ吸着剤のメズマリ等の問題があるため、工業的に有
利な方法とは言い難い。本発明者等は、これらの問題を
解決するため鋭意研究の結果９本発明を完成した。
理を必要としたり、吸着剤に吸着するのに長時間要し、
かつ吸着剤のメズマリ等の問題があるため、工業的に有
利な方法とは言い難い。本発明者等は、これらの問題を
解決するため鋭意研究の結果９本発明を完成した。
すなわち１本発明は粗製８． Ｏ，Ｄ溶液をフェニール
基またはオクチル基の結合した架橋アガロースゲルに接
触させ、吸着した８、 ０． Ｄを溶離採取することを
特徴とする８、 ０． Ｄ精製法に関するものである。
基またはオクチル基の結合した架橋アガロースゲルに接
触させ、吸着した８、 ０． Ｄを溶離採取することを
特徴とする８、 ０． Ｄ精製法に関するものである。
本発明に使用するフェニール基またはオクチル基の結合
した架橋アガロースゲルは、ファルマシア・ファイン・
ケミカル社より「フェニールセファロースＣＬ−４ＢＪ
及び「オクチル自セファロースＣＬ−４ＢＪの商品名で
市販さ収ているものが使用出来る。
した架橋アガロースゲルは、ファルマシア・ファイン・
ケミカル社より「フェニールセファロースＣＬ−４ＢＪ
及び「オクチル自セファロースＣＬ−４ＢＪの商品名で
市販さ収ているものが使用出来る。
これらフェニールセファロースＣＬ−４Ｂまたはオクチ
ル・セファロースＣＬ−４Ｂを製造するために用いられ
ているマトリックスとしてのセファロースＣＬ−４Ｂは
アガロースを、２，３ジブロモ・プロパツールで架橋し
、更に、還元条件で、アルカリ加水分解して脱硫酸した
ものである。フェニール基またはオクチル基は、セファ
ロースＣＬ−４Ｂと相当するグリシティールエーテル反
応させて、それぞれマトリックスに結合させたものであ
る。
ル・セファロースＣＬ−４Ｂを製造するために用いられ
ているマトリックスとしてのセファロースＣＬ−４Ｂは
アガロースを、２，３ジブロモ・プロパツールで架橋し
、更に、還元条件で、アルカリ加水分解して脱硫酸した
ものである。フェニール基またはオクチル基は、セファ
ロースＣＬ−４Ｂと相当するグリシティールエーテル反
応させて、それぞれマトリックスに結合させたものであ
る。
本発明で用いる出発原料の粗製８．０． Ｄは、生物界
書ユおいて非常に広い範囲にわたり分布しているものを
適宜利用することが出来、特に起源を限定するものでは
ないが９通常、ヒト、ウシ、ニワトリ、ウサギ、サル、
ラット等の血液又は胎盤より公知の方法で予備精製した
物が好ましい。特に好ましいのは、ヒト、又はクシの血
液の赤血球又は胎盤より次のいずれかの方法で予備精製
した物が好ましい。すなわち新鮮なヒト又はウシの血液
を。
書ユおいて非常に広い範囲にわたり分布しているものを
適宜利用することが出来、特に起源を限定するものでは
ないが９通常、ヒト、ウシ、ニワトリ、ウサギ、サル、
ラット等の血液又は胎盤より公知の方法で予備精製した
物が好ましい。特に好ましいのは、ヒト、又はクシの血
液の赤血球又は胎盤より次のいずれかの方法で予備精製
した物が好ましい。すなわち新鮮なヒト又はウシの血液
を。
クエン酸ソーダ等血液凝固阻害物質の共存する状態で採
取し、冷却遠心して、上溝の血漿を除き。
取し、冷却遠心して、上溝の血漿を除き。
沈殿物の赤血球を、生理食塩水で２〜３回洗浄して採取
する。このものは更に１次の何れかの方法により処理し
て本発明の出発原料として使用するのが好ましい。即ち
■超音波処理又は、サポニン処理等で溶血後、 ＤＥＡ
ｍセルロースで精製したものを使用するか、又は■水を
加えて、溶血後、上横法処理〔ツチパレ法；パイオヘミ
ッシエ・ツアイトシュリフト１４０．６３（１９２３）
） により（エタノール＋クロロホルム＋水）を加え
て攪拌し、遠心分離でヘモグロビンを沈降除去し、に、
ＨＰＯ４を加えて再度遠心分離して得た上溝液に０．７
５ 容量のアセトンを加えて沈殿を生じさせ、この沈殿
を水に溶かして、粗製８． Ｕ、 Ｄとして用いる。本
発明に於いて、フェニール・セファロースＣＬ−４Ｂま
たはオクチル・セファロースＣＬ−４Ｂと接触させる粗
製Ｓ、 Ｕ、 Ｄは、あらかじめ１．３〜１．５Ｍ濃度
の塩類を加えα２Ｍリン酸第１カリウム又は、リン酸第
２カリウムでｐＨ５〜９．好ましくは、６．５〜７．５
に調整して使用する。
する。このものは更に１次の何れかの方法により処理し
て本発明の出発原料として使用するのが好ましい。即ち
■超音波処理又は、サポニン処理等で溶血後、 ＤＥＡ
ｍセルロースで精製したものを使用するか、又は■水を
加えて、溶血後、上横法処理〔ツチパレ法；パイオヘミ
ッシエ・ツアイトシュリフト１４０．６３（１９２３）
） により（エタノール＋クロロホルム＋水）を加え
て攪拌し、遠心分離でヘモグロビンを沈降除去し、に、
ＨＰＯ４を加えて再度遠心分離して得た上溝液に０．７
５ 容量のアセトンを加えて沈殿を生じさせ、この沈殿
を水に溶かして、粗製８． Ｕ、 Ｄとして用いる。本
発明に於いて、フェニール・セファロースＣＬ−４Ｂま
たはオクチル・セファロースＣＬ−４Ｂと接触させる粗
製Ｓ、 Ｕ、 Ｄは、あらかじめ１．３〜１．５Ｍ濃度
の塩類を加えα２Ｍリン酸第１カリウム又は、リン酸第
２カリウムでｐＨ５〜９．好ましくは、６．５〜７．５
に調整して使用する。
ここで用いられる塩類は、陰イオンとしで。
ＰＯ： 、 ８０ｉ−、ＣＨ，ＣＯＯ−、ＣＬ−、Ｂｒ
−、ＮＯ，−、ＣＬＯ，−、Ｉ−。
−、ＮＯ，−、ＣＬＯ，−、Ｉ−。
５ＯＮ−、等陽イオンとして、 ＮＨ，’、 Ｒｂ”、
Ｋ”、 Ｎａ”、 Ｃｓ”。
Ｋ”、 Ｎａ”、 Ｃｓ”。
Ｌｉ”、 Ｍｇ”、 Ｃａ”、 ＢａＮ６等を適宜組合
ワセタモノカ代表例として上げられるが９通常、硫酸ア
ンモンリン酸カリ、リン酸ナトリウム、リン酸アンモニ
ウム、塩化アンモニウム、塩化カリ、塩化ナトリウム等
が適当である。
ワセタモノカ代表例として上げられるが９通常、硫酸ア
ンモンリン酸カリ、リン酸ナトリウム、リン酸アンモニ
ウム、塩化アンモニウム、塩化カリ、塩化ナトリウム等
が適当である。
吸着剤のゲルは、８．０．Ｄ２３００〜４６００単位／
−の割合で使用するのが適当であり、吸着工程及び洗浄
工程に於ける流液の比速度（１時間当りの流量／ペッド
ボリウム）は１．５以下が好ましい。
−の割合で使用するのが適当であり、吸着工程及び洗浄
工程に於ける流液の比速度（１時間当りの流量／ペッド
ボリウム）は１．５以下が好ましい。
８、．０．Ｄの溶離はｐＨ７〜９の水又は１．３〜１％
５Ｍ硫安−水の濃度勾配法により、比速度α５以下で行
うのが適当である。使用済みゲルは水洗後、１２０℃。
５Ｍ硫安−水の濃度勾配法により、比速度α５以下で行
うのが適当である。使用済みゲルは水洗後、１２０℃。
１５分処理するか、又は０．１Ｍカセイソーダ、水洗。
０．１Ｍ酢酸ソーダ洗浄を２〜３回、繰り返し、再使用
できる。
できる。
本発明の精製法の特徴は次のごとくである。
■ ゲルは安定性が良いので、１２０℃でのオートクレ
ーブによる滅菌が出来、かつ繰り返し使用が可能である
。
ーブによる滅菌が出来、かつ繰り返し使用が可能である
。
■ ゲルへの８．０． Ｄの選択的吸着性が大きいので
。
。
作業時間が短かく済み、８．０．Ｄの活性低下がみられ
ない。
ない。
■ 高塩濃度で吸着させることが出来るため、処理が容
易である。
易である。
■ 溶出が水又は水性溶媒であるので濃縮が簡単であり
、かつ後処理で脱塩工程を入れる必要がない。
、かつ後処理で脱塩工程を入れる必要がない。
本発明に於いて、８．０．Ｄの活性測定はキサンテンと
キチンテンオキシダーゼの反応により生じたスーパーオ
キサイド（０１）による酸化型チトクロームＣの還元を
Ｓ、 Ｕ、 Ｄが阻害することを利用したマツコード及
びフリートピッチ法にもとづいて行った。溶出の各分画
は２６５ｍμと２８０ｍμ の吸光度を測定し、吸光度
比０Ｄ２６５１０ｆ）２ｓｏ＞”を目安として、８．０
．Ｄ区分を選択した。〔ジェー・エム・マツコードと）
ｙ−ドビッテ；ジャーナルーオプ・バイオロジカル・ケ
ミストリー、２４４（２２）６０４９（１９６９））、
蛋白質の定量はローリ−法〔ローリ−・オー・ニップ；
ジャーナル・オブーパイオロジカル・ケミストリー、
１９３．２６５（１９５１））によった。
キチンテンオキシダーゼの反応により生じたスーパーオ
キサイド（０１）による酸化型チトクロームＣの還元を
Ｓ、 Ｕ、 Ｄが阻害することを利用したマツコード及
びフリートピッチ法にもとづいて行った。溶出の各分画
は２６５ｍμと２８０ｍμ の吸光度を測定し、吸光度
比０Ｄ２６５１０ｆ）２ｓｏ＞”を目安として、８．０
．Ｄ区分を選択した。〔ジェー・エム・マツコードと）
ｙ−ドビッテ；ジャーナルーオプ・バイオロジカル・ケ
ミストリー、２４４（２２）６０４９（１９６９））、
蛋白質の定量はローリ−法〔ローリ−・オー・ニップ；
ジャーナル・オブーパイオロジカル・ケミストリー、
１９３．２６５（１９５１））によった。
以下１本発明の出発原料として好適に使用出来る粗□製
８．０． Ｄを調製するための予備精製法を参考例で示
す。
８．０． Ｄを調製するための予備精製法を参考例で示
す。
参考例り
新鮮な牛血液２ｔを、３．８％クエン酸ナトリウムｌｔ
中に採取し、２℃、 ２５００ＸＧ、 ２０分、遠心分
離する。上溝液を除去後、沈降した赤血球を生理食塩水
で３回洗浄し、この赤血球沈殿ｌ容に水１容を加えて、
溶血させる。この全量を上横法にしたがい・エチルアル
コール０．２５ 容、クロロホルム０．１５容、水０．
１容を加えて、十分混合し。
中に採取し、２℃、 ２５００ＸＧ、 ２０分、遠心分
離する。上溝液を除去後、沈降した赤血球を生理食塩水
で３回洗浄し、この赤血球沈殿ｌ容に水１容を加えて、
溶血させる。この全量を上横法にしたがい・エチルアル
コール０．２５ 容、クロロホルム０．１５容、水０．
１容を加えて、十分混合し。
さらに５℃、２０分間、攪拌し、黒褐色の混合物を２５
００ＸＧ、 ２０分間遠心し、ヘモグロビン等を除去
後、上清にリン酸第２カリウムを０．３ ｔ ／ｄの割
合で加え十分混合し、１５分間室温に静置し、２層に分
離した淡褐色上層を＋ ２５００ｘＧ。
００ＸＧ、 ２０分間遠心し、ヘモグロビン等を除去
後、上清にリン酸第２カリウムを０．３ ｔ ／ｄの割
合で加え十分混合し、１５分間室温に静置し、２層に分
離した淡褐色上層を＋ ２５００ｘＧ。
２０分間遠心し、淡黄色上清を得る。これに冷アセトン
０．７５容混合し、２５００ＸＧ、１０分間冷却遠心し
て、白色沈殿物を得、これを洗浄赤血球の約暑。容の水
で溶かし、１００ＯＯＸＧ、２０分間冷却遠心して、透
明な上清９５−を得た。この物は８、０． Ｄ ３４７
２単位／−（比活性４１７単位／ダ蛋白）の粗製８．０
． Ｄであり１本発明方法により、精製するための出発
原料として好適に使用出来る。
０．７５容混合し、２５００ＸＧ、１０分間冷却遠心し
て、白色沈殿物を得、これを洗浄赤血球の約暑。容の水
で溶かし、１００ＯＯＸＧ、２０分間冷却遠心して、透
明な上清９５−を得た。この物は８、０． Ｄ ３４７
２単位／−（比活性４１７単位／ダ蛋白）の粗製８．０
． Ｄであり１本発明方法により、精製するための出発
原料として好適に使用出来る。
参考例２
娩出されたヒトの胎盤の外側を充分水洗してボリエデレ
ン袋に入れ直ちに凍結したちのＩＫｇを径５層以上の粗
大片を認めなくなるまでくだき、０．９−食塩水２ｔを
加え、５℃で一夜攪拌抽出し。
ン袋に入れ直ちに凍結したちのＩＫｇを径５層以上の粗
大片を認めなくなるまでくだき、０．９−食塩水２ｔを
加え、５℃で一夜攪拌抽出し。
２５’００ＸＧ、 ２０分間遠心分離して固形物を除
き上清を得る。以下参考例１に倣りて上横法処理。
き上清を得る。以下参考例１に倣りて上横法処理。
アセトン処理、冷却遠心等により透明な上清５〇−を得
た。この物は８．０．Ｄ３５００単位／−（比活性＝７
５０単位／ｗ９蛋白）の粗製８．０． Ｄであり本発明
方法により精製するための出発原料として好適に使用出
来る。
た。この物は８．０．Ｄ３５００単位／−（比活性＝７
５０単位／ｗ９蛋白）の粗製８．０． Ｄであり本発明
方法により精製するための出発原料として好適に使用出
来る。
実施例１
参考例１で得た粗製８．０． Ｄに硫安１７．１ Ｆを
加えて溶かし、０．２Ｍリン酸第−カリウムでｐＨ６，
８゜に修正する。この溶液をあらかじめｐ）１６．８の
緩衝液（１，４Ｍ硫安＋０．０５Ｍリン酸）で、平衡化
したフェニールセファロースＣＬ−４１３８０ｄを充５
′＊シたカラム（径Ｚ Ｏａｍ ｅ高さ２５．５層ｍ）
に流速１２０−７時間で通過させて、８．０．Ｄを吸着
させる。ＰＨ６，８の緩衝液（１，４Ｍ硫安＋０．０５
Ｍリン酸カリ）８０ｄで洗浄し、ついで、ｐＨ９の水（
０，１ＭカセイソーダでｐＨ９に調整）で流速４ｏｗｔ
７’時間で溶出する。
加えて溶かし、０．２Ｍリン酸第−カリウムでｐＨ６，
８゜に修正する。この溶液をあらかじめｐ）１６．８の
緩衝液（１，４Ｍ硫安＋０．０５Ｍリン酸）で、平衡化
したフェニールセファロースＣＬ−４１３８０ｄを充５
′＊シたカラム（径Ｚ Ｏａｍ ｅ高さ２５．５層ｍ）
に流速１２０−７時間で通過させて、８．０．Ｄを吸着
させる。ＰＨ６，８の緩衝液（１，４Ｍ硫安＋０．０５
Ｍリン酸カリ）８０ｄで洗浄し、ついで、ｐＨ９の水（
０，１ＭカセイソーダでｐＨ９に調整）で流速４ｏｗｔ
７’時間で溶出する。
この溶出パターンは第一図に示す。Ｓ、 ０． Ｄ活性
の高い区分（Ｆｒ １４〜Ｆｒ １９ ）から得た８、
０． Ｄの比活性は、７２００単位／′ＩＩ９蛋白で
あり、粗製８．０．Ｄからの活性収率は９５嘩であった
。
の高い区分（Ｆｒ １４〜Ｆｒ １９ ）から得た８、
０． Ｄの比活性は、７２００単位／′ＩＩ９蛋白で
あり、粗製８．０．Ｄからの活性収率は９５嘩であった
。
実施例２
フェニルセファロースＣＬ−４Ｂの代りにオクチルセフ
ァロースＣＬ−４Ｂを使用する外は実施例１と同一の操
作を行い比活性６８００単位／ダ蛋白のＳ、Ｏ，Ｄを活
性収率９６チで得た。
ァロースＣＬ−４Ｂを使用する外は実施例１と同一の操
作を行い比活性６８００単位／ダ蛋白のＳ、Ｏ，Ｄを活
性収率９６チで得た。
実施例λ
クエン酸デキストリン共存状態で２〜３日、５℃に保存
したヒト血液１ｔを用いて参考例１に倣って、粗製８．
０．Ｄ４０ｍｇ（２５００単位／−９比活性６６７単位
／Ｗ９蛋白）を得た。次にこの粗製Ｓ、 ０． Ｄに硫
安７．２ ｆを溶かし、 ｐ）１６．８に調整後、あら
かしめｐＨ６，８の緩衝液（１，４Ｍ硫安＋０．０５Ｍ
リン酸カリ）で平衡化したフェニールセファロースＣＬ
−４Ｂ。
したヒト血液１ｔを用いて参考例１に倣って、粗製８．
０．Ｄ４０ｍｇ（２５００単位／−９比活性６６７単位
／Ｗ９蛋白）を得た。次にこの粗製Ｓ、 ０． Ｄに硫
安７．２ ｆを溶かし、 ｐ）１６．８に調整後、あら
かしめｐＨ６，８の緩衝液（１，４Ｍ硫安＋０．０５Ｍ
リン酸カリ）で平衡化したフェニールセファロースＣＬ
−４Ｂ。
４０ｍを充填したカラム（径２．０ ｃｍ ｅ高さ１２
．．７ｃＷ１）に流速６ｏｗｔ／時間で９通塔させる。
．．７ｃＷ１）に流速６ｏｗｔ／時間で９通塔させる。
ついで、前記ｐＨ６，８の緩衝液的４０−で洗浄後、同
緩衝液２０〇−と水２００−との濃度勾配で、流速２０
−７時間で溶出させる。溶出液の８．０． Ｄの比活性
は７４００単位／ダ蛋白であり、粗製８．０． Ｄから
の活性収率は９７チであった。
緩衝液２０〇−と水２００−との濃度勾配で、流速２０
−７時間で溶出させる。溶出液の８．０． Ｄの比活性
は７４００単位／ダ蛋白であり、粗製８．０． Ｄから
の活性収率は９７チであった。
実施倒毛
フェニルセファロースＣＬ−４Ｂの代りにオクチルセフ
ァロースＣＬ−４Ｂを使用する外は実施例３と同一の操
作を行い比活性８０００単位／ｑ蛋白のＳ、 ０． Ｄ
を活性収率９９−で得た。
ァロースＣＬ−４Ｂを使用する外は実施例３と同一の操
作を行い比活性８０００単位／ｑ蛋白のＳ、 ０． Ｄ
を活性収率９９−で得た。
ノ
なお、参考例１で得た粗製８．０． Ｄについて。
ＤＥＡＲセルロース、及び０Ｍセルロースを使用する公
知方法と１本発明の実施例１・−４の方法について８．
０． Ｄの精製効果を比較した結果は第１表の通りであ
り９本発明方法によれば、公知のいずれの方法に比べて
も、収率、純度共に優れている。
知方法と１本発明の実施例１・−４の方法について８．
０． Ｄの精製効果を比較した結果は第１表の通りであ
り９本発明方法によれば、公知のいずれの方法に比べて
も、収率、純度共に優れている。
第１表、各種吸着剤による精製効果の比較実施例＆
参考例２で得た粗製８． Ｏ，Ｄに硫安９．Ｏｆを溶か
した液をｐＨ６，８に調整後、あら′かじめｐＨａ ８
の緩衝液（１，４Ｍ硫安＋０．０５Ｍ！Ｊン酸）で平衡
化されたフェニールセファロースＣＬ−４８４０−を充
填したカラム、（径Ｚ Ｏｅｘｓ ｅ高さＩ Ｚ ７
ｏｎ ）Ｈ流速６〇−７時間で通塔させる。ついで同一
緩衝液４０−で洗浄後、ｐＨ９の水で、流速２０−７時
間で溶出させる。溶出液の８．０． Ｄの比活性は７５
００単位／ｗＩｇ蛋白であり、粗製８．０． Ｄからの
活性収率は９６．５％であった。
した液をｐＨ６，８に調整後、あら′かじめｐＨａ ８
の緩衝液（１，４Ｍ硫安＋０．０５Ｍ！Ｊン酸）で平衡
化されたフェニールセファロースＣＬ−４８４０−を充
填したカラム、（径Ｚ Ｏｅｘｓ ｅ高さＩ Ｚ ７
ｏｎ ）Ｈ流速６〇−７時間で通塔させる。ついで同一
緩衝液４０−で洗浄後、ｐＨ９の水で、流速２０−７時
間で溶出させる。溶出液の８．０． Ｄの比活性は７５
００単位／ｗＩｇ蛋白であり、粗製８．０． Ｄからの
活性収率は９６．５％であった。
実施例６゜
フェニルセファロースＣＬ−４Ｂの代りにオクチルセフ
ァロースＣＬ−４Ｂを使用する外は、実施例５と同一の
操作を行い比活性７６５０単位／ｗ９蛋白の８．０．
Ｄを活性収率９８−で得た。
ァロースＣＬ−４Ｂを使用する外は、実施例５と同一の
操作を行い比活性７６５０単位／ｗ９蛋白の８．０．
Ｄを活性収率９８−で得た。
第１図は９本発明による溶出パターンを示すものである
。縦軸は８．０． Ｄ−１％性（単位／−）及び。 ２６５ｍμと２８０ｍμの吸光度を示し、横軸は溶出フ
ラグｉ／ −ａ ７ （Ｉ Ｆｒ ＝ ６ｍｇ ）を示
す。 特許出願人 わかもと製薬株式会社 、、 （ｅ） Ｔ燈郁°９ マ ゛
。縦軸は８．０． Ｄ−１％性（単位／−）及び。 ２６５ｍμと２８０ｍμの吸光度を示し、横軸は溶出フ
ラグｉ／ −ａ ７ （Ｉ Ｆｒ ＝ ６ｍｇ ）を示
す。 特許出願人 わかもと製薬株式会社 、、 （ｅ） Ｔ燈郁°９ マ ゛
Claims (1)
- フェニール基またはオフデル基の結合した架橋アガロー
スゲルに粗製スーパーオキサイド・ジスムターゼ含有溶
液を接触させ、吸着したスーパーオキサイド・ジスムタ
ーゼを溶離採取することを特徴とするスーパーオキサイ
ド・ジスムターゼの精製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10438781A JPS6012025B2 (ja) | 1981-07-06 | 1981-07-06 | ス−パ−オキサイドジスムタ−ゼの精製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10438781A JPS6012025B2 (ja) | 1981-07-06 | 1981-07-06 | ス−パ−オキサイドジスムタ−ゼの精製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS589686A true JPS589686A (ja) | 1983-01-20 |
| JPS6012025B2 JPS6012025B2 (ja) | 1985-03-29 |
Family
ID=14379334
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10438781A Expired JPS6012025B2 (ja) | 1981-07-06 | 1981-07-06 | ス−パ−オキサイドジスムタ−ゼの精製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6012025B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1985001503A1 (en) * | 1983-10-03 | 1985-04-11 | Chiron Corporation | Superoxide dismutase cloning and expression in microorganisms |
| JPH078856A (ja) * | 1993-06-21 | 1995-01-13 | Masayuki Kanno | 曲面塗装用フィルム及び曲面塗装用フィルムの調製システム |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61276614A (ja) * | 1985-05-31 | 1986-12-06 | Kyocera Corp | 気化器 |
| JPH0262218U (ja) * | 1988-10-25 | 1990-05-09 |
-
1981
- 1981-07-06 JP JP10438781A patent/JPS6012025B2/ja not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1985001503A1 (en) * | 1983-10-03 | 1985-04-11 | Chiron Corporation | Superoxide dismutase cloning and expression in microorganisms |
| JPH078856A (ja) * | 1993-06-21 | 1995-01-13 | Masayuki Kanno | 曲面塗装用フィルム及び曲面塗装用フィルムの調製システム |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6012025B2 (ja) | 1985-03-29 |
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