RU2163139C1

RU2163139C1 - Способ получения препарата альфа-фетопротеина

Info

Publication number: RU2163139C1
Application number: RU2000104564A
Authority: RU
Inventors: В.В. Стариков; С.Ю. Родионов
Original assignee: Родионов Сергей Юрьевич; Стариков Виктор Васильевич
Priority date: 2000-02-23
Filing date: 2000-02-23
Publication date: 2001-02-20

Abstract

Изобретение относится к медицине и биотехнологии и может быть использовано для получения препарата альфа-фетопротеина (АФП) человеческого. Сущность изобретения: аффинную смолу, содержащую не менее 1 г/л антител к АФП, смешивают с разбавленной в 4 раза сывороткой крови крупного рогатого скота и выдерживают при перемешивании. Жидкость декантируют, а в смолу добавляют разбавленную в 4 раза абортную сыворотку человека, смесь выдерживают при перемешивании, смолу переносят в хроматографическую колонку, где ее промывают 1,5 М р-ром MgCI₂. АФП снимают со смолы 4 М р-ром MgCI₂; полученный раствор подвергают ультрафильтрации на волокнах ПА-50 до замены солевого состава на физраствор. Получают концентрат с содержанием АФП не менее 90%, в который вводят полисахарид, и осуществляют фасовку в ампулы и лиофильное высушивание. Технический результат: упрощение и удешевление способа при высокой чистоте и качестве получаемого продукта. 1 з.п. ф-лы.

Description

Изобретение относится к медицине и биотехнологии, и может быть использовано в медицине для изготовления лекарственной формы АФП-человеческого, используемого для лечения заболеваний с аутоиммунными нарушениями.

Известен способ получения альфа-фетопротеина путем осветления исходного сырья центрифугированием и хроматографической очисткой целевого продукта на афинном сорбенте в две стадии: сначала на сорбенте, содержащем комплекс антител против белков крови человека, причем в качестве аффинного сорбента используют Br-CN-сефарозу, активированную глутаровым альдегидом. (Патент РФ N 2100031, опубл. 27.12.97. бюл. N 36).

Недостатки: способ сложен и предполагает использование дорогих реактивов.

Изобретение направлено на решение задачи: упрощение и удешевление способа при высокой чистоте и качестве получаемого продукта.

Указанная задача достигается путем получения альфа-фетопротеина (АФП): аффинную смолу, содержащую не менее 1 г/л антител к АФП смешивают с разбавленной в 4 раза сывороткой крови крупного рогатого скота и выдерживают при перемешивании 30 мин при 37^oC, жидкость декантируют, а в смолу добавляют разбавленную в 4 раза абортную сыворотку человека (АСЧ), смесь выдерживают при перемешивании, смолу переносят в хроматографическую колонку, где ее промывают 1,5-молярным раствором MgCl₂. АФП снимают со смолы 4-молярным раствором MgCl₂; полученный раствор подвергают ультрафильтрации на волокнах ПА-50 до минимального объема и замены солевого состава на физраствор. Полученный концентрат представляет собой АФП с чистотой не ниже 90%.

Способ осуществляют следующим образом: аффинную смолу, содержащую не менее 1 г/л антител к АФП смешивают с разбавленной в 4 раза сывороткой крови крупного рогатого скота (1 л смолы + 2 л разбавленной в 4 раза сыворотки крупного рогатого скота) и выдерживают при перемешивании в течение 30 мин при 37^oC. Жидкость декантируют, а в смолу добавляют разбавленную в 4 раза абортную сыворотку человека (1 л смолы + 10 л разбавленной в 4 раза АСЧ). Смесь выдерживают при перемешивании в течение 30 мин при 37^oC. Жидкость декантируют, а смолу переносят в хроматографическую колонку. Затем смолу в колонке промывают 1,5-молярным раствором MgCl₂ до исчезновения белка в промывочном растворе. АФП снимают со смолы 4-молярным раствором MgCl₂ в объеме 2-х объемов смолы в колонке. Полученный раствор подвергают ультрафильтрации на волокнах ПА-50 до минимального объема и, заменяют солевой состав на физраствор. Концентрат представляет собой АФП с чистотой не ниже 90%. Далее в целевой продукт вводят полисахарид - реополиглюкин или альбумин в количестве 3-10 мг на 75 мкг ФАП. Раствор разводят физраствором до концентрации 75 мкг АФП в 1 мл, стерилизуют фильтрацией, расфасовывают по 1 мл в ампулы или флаконы и лиофильно высушивают.

Способ позволяет упростить и удешевить получение препарата АФП, сохранив при этом высокое качество, чистоту и стабильность целевого продукта.

Claims

1. Способ получения препарата альфа-фетопротеина из абортной сыворотки человека, включающий хроматографическую очистку целевого продукта на аффинном носителе, отличающийся тем, что 1 л аффинной смолы, содержащей не менее 1 г/л антител к АФП, смешивают с 2 л разбавленной в 4 раза сыворотки крови крупного рогатого скота, выдерживают при перемешивании при 37^oC в течение 30 мин, жидкость декантируют, а в смолу добавляют 10 л разбавленной в 4 раза абортной сыворотки человека, смесь выдерживают при перемешивании в течение 30 мин при 37^oC, жидкость декантируют, смолу переносят в хроматографическую колонку и промывают в ней 1,5-молярным раствором MgCl₂ до исчезновения белка в промывочном растворе, альфа-фетопротеин снимают со смолы 4-молярным раствором MgCl₂ в объеме двух объемов смолы в колонке, полученный раствор подвергают ультрафильтрации на волокнах ПА-50 до минимального объема и замены солевого состава на физраствор, получают концентрат с содержанием АФП не менее 90%, в который вводят полисахарид в количестве 3 - 10 мг на 75 мкг альфа-фетопротеина, раствор разводят до концентрации 75 мкг АФП в 1 мл и осуществляют фасовку в ампулы или флаконы и лиофильное высушивание.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве полисахарида используют реополиглюкин или альбумин.