FI112080B - 2-(2-amino-1,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metoksi-3-hydroksi-1-propanyyli-L-valinaatti - Google Patents

Description

x 112080 2-(2-amino-1,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metoksi-3-hyd-roksi-l-propanyyli-L-valinaatti Tämä keksintö koskee uutta virusten vastaista lää-5 kettä, erityisesti puriinijohdannaisen aminohappoesteriä ja erityisimmin esteriä, joka on johdettu gansikloviirista ja L-valiinista, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja. Keksintö koskee myös välituoteyhdisteitä, synteesimenetelmiä virusten vastaisen lääkkeen valmistamiseksi, 10 niitä varten tarkoitettuja farmaseuttisia koostumuksia ja niiden käyttöä virusten vastaisessa ja sen kaltaisen sairauden hoidossa.

Tarkemmin sanottuna keksintö koskee L-monovaliini-esteriä, joka on johdettu 2-(2-amino-1,6-dihydro-6-oksopu-15 rin-9-yyli)metoksi-1,3-propaanidiolista, ja sen farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja.

GB-patentissa 1 523 865 kuvataan virusten vastaisia puriinijohdannaisia, joiden 9-asemassa on asyklinen ketju. Näistä johdannaisista 2 -(2-amino-1,6-dihydro-6-okso-1,6-20 dihydropurin-9-yyli)metoksietanolilla, jonka INN-nimi on asikloviiri, on todettu olevan hyvä aktiivisuus herpesviruksia, kuten ihorokahtumaa, vastaan. Vaikka asikloviirin on todettu olevan hyvin tehokas paikallisessa tai parente-raalisessa antamisessa, se absorboituu oraalisessa antami- » 1 · • · 25 sessa vain kohtalaisesti.

t · · US-patentissa nro 4 355 032 esitetään yhdiste ; ; 9-[ (2-hydroksi-1-hydroksimetyylietoksi)metyyli]guaniini •;;(: tai 2-(2-amino-1,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metoksi-1,3- '·’ ’ propaanidioli, jonka INN-nimi on gansikloviiri. Gansiklo- 30 viiri on erittäin tehokas herpes-ryhmän viruksia vastaan, : esimerkiksi ihorokahtumaa ja sytomegalovirusta vastaan.

: ' Sillä on oraalisesti annettuna suhteellisen alhainen ab- < t » ;·, sorboituvuus ja sitä täytyy käyttää suurina annostuksina tällä tavalla annettuna. Gansikloviiri annetaan tavaili-35 simmin laskimonsisäisellä infuusiolla. Tällä antotavalla

’ I

, 11/080 on se haittapuoli, että se on hyvin hankala potilaalle, koska se vaatii lääkärin, hoitajan tai muun terveydenhoitoalan ammattilaisen palveluksia. On myös olemassa tietty infektiovaara, joka on erityisen ongelmallinen immunoalt-5 tiille potilaille, jotka saavat hoitoa gansikloviirilla ja joilla voi olla vähäinen vastustuskyky infektioita vastaan. Sen vuoksi on ollut erittäin toivottavaa aikaansaada gansikloviiri, jolla on parempi oraalinen absorptiopro-fiili.

10 GB-patenttihakemuksessa nro GB 2 122 618 esitetään 9-(2-hydroksietoksimetyyli)guaniinin johdannaiset, joilla on yleinen kaava R1 15 k JLX> CH2XCHCH2Cm3 20 r2 jossa X on happi- tai rikkiatomi, R1 on hydroksi- tai ami- noryhmä, R2 on vetyatomi tai kaavan -CH2OR3a mukainen ryhmä : ja R3 ja R3a voivat olla samat tai erilaiset ja merkitsevät f*;*> kumpikin aminohappoasyyliradikaalia, ja niiden fysiologi- » * · . 25 sesti hyväksyttävät suolat. Nämä yhdisteet ovat käyttökel- poisia virusinfektioiden hoitoon ja niillä on suuri vesi- * · · ·' ·* liukoisuus, mikä tekee ne arvokkaiksi vesipitoisten farma- » : seuttisten valmisteiden formulaatiossa. Vaikka GB-patent- V · tihakemuksen yleinen kaava käsittää yhdisteet, joissa R2 on 30 ryhmä -CH2OR3a, tämän ryhmän spesifisiä yhdisteitä ei ole ; * : esitetty. Patenttihakemuksessa myös esitetään, että formu- * » laatioita, joita käytetään näiden paremman vesiliukoisuuden omaavien yhdisteiden kanssa, ovat mm. oraaliset, rek-taaliset, nenä-, paikalliset, emätin- tai parenteraaliset r · ’ *; * 35 formulaatiot.

• > · 3 112080 GB-patenttihakemuksessa 2 104 070 esitetään virusten vastaiset yhdisteet, joilla on kaava

R

5 n^Vn>

H 2 N N J

ch2xchch2oh ! ch2oh 10 jossa R on hydroksi- tai aminoryhmä ja X on happi- tai rikkiatomi, ja fysiologisesti hyväksyttävät suolat ja esterit. Yleinen kaava käsittää gansikloviirin ja fysiologisesti hyväksyttävät suolat ja esterit. Esterit käsittävät 15 esterit, jotka sisältävät formyylioksiryhmä-, C1.16- (esimerkiksi Ci.g-) alkanoyylioksi- (esim. asetoksi- tai propio-nyylioksi- ), mahdollisesti substituoidun aralkanoyylioksi-(esim. fenyyli-C1.4-alkanoyylioksi-, kuten fenyyliasetoksi-) tai mahdollisesti substituoidun aroyylioksi- (esim. bent-20 soyylioksi- tai naftoyylioksi-) esteriryhmittymän yleisen kaavan mukaisten yhdisteiden 9-sivuketjun toisessa tai molemmissa pääteasemissa. Edellä mainitut aralkanoyyliok-: si- tai aroyylioksiesteriryhmät voivat olla substituoitu- ja esimerkiksi yhdellä tai usemmalla halogeenilla (esim.

.' . 25 kloori- tai bromiatomeilla) tai amino-, nitriili- tai • · · “V sulfamidoryhmillä, jolloin ryhmittymän aryyliosa sisältää • · i • edullisesti 6-10 hiiliatomia.

· EP-hakemusjulkaisussa nro 375 329 esitetään lääke- '.· ’ esiasteyhdisteet, joilla on seuraava kaava ... 30 e .···. ch2ochch2or

CH20R

• * * » 1

* I

4 112080 jossa R ja R1 on valittu toisistaan riippumatta ryhmästä, jonka muodostavat vetyatomi ja aminoasyyliryhmä, edellyttäen että ainakin toinen radikaaleista R ja R1 on aminohap-poasyyliryhmä ja B on ryhmä, jolla on kaavat 5 NH2 q2 η,ν-^ν^ν

I 2 I

10 jolloin R2 on haarautumaton C1-6-ketju, haarautunut C3.6-ket-ju tai syklinen C3_6-alkoksiryhmä tai hydroksi- tai amino-ryhmä tai vetyatomi, ja niiden fysiologisesti hyväksyttävät suolat. Näillä lääke-esiasteyhdisteillä kuvataan ole-15 van oraalisella tavalla annettuina edullinen biosaatavuus, mikä johtaa alkuperäisen yhdisteen suuriin pitoisuuksiin kehossa.

EP-hakemusjulkaisussa nro 375 329 esimerkissä 3b) esitetään gansikloviirin bis( L-isoleusinaatti )esterin val-20 mistus valkoisena vaahtona. Esimerkissä 4 b) esitetään gansikloviirin bis(glysinaatti)esterin valmistus valkoisena kiinteänä aineena. Esimerkissä 5b) esitetään gansiklo- ,· : viirin bis(L-valinaatti)esterin valmistus kiinteänä ainee- » « * na. Esimerkissä 6 b) esitetään gansikloviirin bis(L-alani- • * ♦ .’ . 25 naatti)esterin valmistus siirappina, joka sisältää 90 % !*’,* bis-esteriä ja 10 % monoesteriä. Kuvatut bis-esterit ovat * » * | ·’ ei-kiteisiä aineita, jotka on vaikea prosessoida oraalis- » * » ten farmaseuttisten annostusmuotojen valmistusta varten.

’.· * GB-patenttihakemuksessa nro 8829571 esitetään yh- 30 disteiden aminohappoesterit, joilla yhdisteillä on kaava r

Li')

··;.· 35 H2N N N

>111) H 0-/ :/.1 5 119Π8Γ.

(jossa R on hydroksi- tai aminoryhmä tai vetyatomi), ja niideri fysiologisesti hyväksyttävät suolat. Esimerkkejä edullisista aminohapoista ovat mm. alifaattiset hapot, esim. hapot, jotka sisältävät enintään 6 hiiliatomia, ku-5 ten glysiini, alaniini, väliini ja isoleusiini. Aminohap-poesterit käsittävät sekä mono- että diesterit. Kuitenkaan tässä patenttihakemuksessa eikä EP-hakemusjulkaisussa nro 375 329, eikä US-patentissa 5 043 339 esitetä monoesterien valmistusta eikä myöskään mitään tuloksia, jotka viittai-10 sivat niiden käyttökelpoisuuteen.

Julkaisussa Jensen et ai., Acta Pharm. Nord. 3(4) 243 - 247 (1991) esitetään gansikloviirin N-substituoitu-jen 4-(aminometyyli)bentsoaattidiesterilääke-esiasteiden synteesi, entsymaattinen hydrolyysi ja fysikaaliskemialli-15 set ominaisuudet, joilla lääke-esiasteilla on kaava /χ">

20 I 0 CH20R

C H 2 CH\Ch20P

. jossa R voi olla » »

/* ' 25 Q

i '* 0 CCH2—N( C2H5) 2 30 o •v c-^-ch2-ncc3h7d2 * »

^CHrO

> * » 6

112 O 8 C

Nämä esterit syntetisoidaan ja arvioidaan gansi-kloviirin anto-ominaisuuksien parantumisen avulla. Esterit hydrolysoituvat entsymaattisesti ihmisen plasman vaikutuksesta alkuperäiseksi lääkkeeksi, jolloin hydrolyysi etenee 5 vastaavan monoesterin muodostuksen kautta. Kirjoittajat arvioivat näitä estereitä niiden entsymaattisen hydrolyy-sin nopeuden, lipofiilisyyden avulla ja päättelivät, että näiden esterien ominaisuudet tekevät diestereistä lupaavan lääke-esiastetyypin gansikloviiriä varten lisäten sen an-10 to-ominaisuuksia, esim. parenteraalista antamista varten.

Julkaisussa Martin et ai., J. Pharm. Sei. 76(2), 180 - 184 (1987) esitetään gansikloviirin mono- ja diasyy- liesterit, joiden biosaatavuus tutkittiin oraalisen antamisen jälkeen. Kirjoittajat osoittavat, että dipropionaat-15 tiesteri on noin 42 % biosaatavampi kuin gansikloviiri itse.

EP-hakemusjulkaisussa nro 158 847 esitetään muun muassa, että 6-deoksiasikloviiri ja 6-deoksigansikloviiri voivat helposti muuttua in vivo entsyymien vaikutuksesta 20 asikloviiriksi ja vastaavasti gansikloviiriksi. Rottako keiden perusteella keksijät totesivat, että näiden 6-deok-silääke-esiasteiden oraalinen antaminen johtaa alkuperäis-;*·,· ten lääkkeiden tehokkaaseen absorptioon gastrointestinaa- liselta alueelta ja suuriin pitoisuuksiin plasmassa.

; 25 Julkaisussa Maudgal et ai., Arch. Ophthalmol. 102, • · · ••V 140 - 142 (1984) esitetään asikloviirin glysiiniesterin » · ! ! olevan tehokas pintakudoksen ja peruskudoksen ihorokahtu-

f I I

masarveiskalvontulehduksen ja siihen liittyvän värikal-* vontulehduksen paikallisessa hoidossa, kun sitä annetaan 30 l-%:isena silmätippaformulaationa kaneille. Kirjoittajat : ’.* esittävät asikloviirin glysiini-, alaniini-, β-alaniini- ja sukkinyyliesterit ja osoittavat, että glysiiniesterin liukoisuus on noin 30 kertaa suurempi kuin itse asiklovii-,···, rin liukoisuus, mikä mahdollistaa glysiiniesterin käytön 35 silmätippoihin jopa 6 %:n pitoisuuksina, kun taas itse * * » * » * t i % 7 112080 asikloviiriä käytetään salvana, joka on tuskin tehokas peruskudossairaudessa tai värikalvontulehduksessa.

Julkaisussa Colla et ai., J. Med. Chem. 98, 602 -604 (1983) esitetään useita asikloviirin vesiliukoisia 5 esterijohdannaisia ja niiden suoloja asikloviirin lääke- esiasteina. Kirjoittajat osoittavat, että asikloviiriä ei voida antaa silmätippoina tai lihaksensisäisinä injektioina sen rajoitetun vesiliukoisuuden vuoksi, ja ovat sen vuoksi syntetisoineet asikloviirin johdannaisia, jotka 10 liukenevat veteen paremmin kuin alkuperäinen yhdiste. Kirjoittajat esittävät glysyyliesterin vetykloridisuolan, alanyyliesterin vetykloridisuolan, β-alanyyliesterin vetykloridisuolan, sukkinyyliesterin natriumsuolan ja atsido-asetaattiesterin. Tutkittaessa primäärisissä kanin munuai-15 sen soluviljelmissä ihorokahtumavirustyypin 1 ja -tyypin 2 kantoja vastaan kirjoittajien mukaan neljä ensimmäistä esteriä osoittautui lähes yhtä tehokkaiksi kuin asiklovii-ri itse. Kirjoittajat antavat ymmärtää, että nämä asiklo-viiriesterit olisivat kliiniseen käyttöön käyttökelpoisem-20 pia kuin alkuperäinen yhdiste sellaisten herpes-virusinfektioiden paikallista hoitoa varten silmätippoina ja systeemistä hoitoa varten, jotka reagoivat hyvin laskimonsi- - säiseen asikloviirihoitoon. Päinvastoin kuin asikloviiri, nämä esterit voitaisiin antaa paljon pienempinä määrinä ja ,* 25 sen vuoksi lihaksensisäisillä injektioilla.

• · · · Julkaisussa Beauchamp et ai., Antiviral Chemistry & • Chemotherapy 3, 157 - 164 (1992) esitetään herpeksen vas- ; : I täisen lääkkeen asikloviirin kahdeksantoista aminohappoes- v - teriä ja niiden tehokkuudet asikloviirin lääke-esiasteina 30 arvioituina rotissa mittaamalla asikloviirin palautuminen virtsasta. Kymmenellä lääke-esiasteella saatiin suuremmat alkuperäisen lääkkeen määrät virtsassa kuin asikloviiril-lä itse: glysyyli-, D,L-alanyyli-, L-alanyyli-, L-2-amino-butyraatti-, D,L-valyyli-, L-valyyli-, DL-isoleusyyli-, 35 L-isoleusyyli-, L-metionyyli- ja L-propyyliesterillä.

β 11?Π8Π L-aminohappoesterit olivat parempia lääke-esiasteita kuin vastaavat D- tai D,L-isomeerit, mikä viittaa stereoselek-tiivisen kuljettajan mukaan liittymiseen. Julkaisun taulukosta 1, jossa esitetään kahdeksantoista aminohappoesterin 5 kemialliset tulokset ja oraalinen biosaatavuus, ilmenee, että D-aminohappoestereillä on pienempi oraalinen biosaatavuus kuin itse asikloviirillä. Siten, koska D-aminohappoestereillä ei ole etua asikloviiriin nähden, ne eivät ole käyttökelpoisia asikloviirin lääke-esiasteina. Asiklo-10 viirin akiraalisella glysyyliesterillä kuitenkin on suurempi oraalinen biosaatavuus kuin asikloviirillä (virtsasta palautumisen kokeessa 30 % asikloviiristä glysyylieste-rinä annettuna saatiin takaisin, kun taas asikloviiriä antamalla saatiin takaisin 19 % asikloviiristä). Kirjoit-15 tajien mukaan asikloviirin L-valyyliesteri oli tutkituista estereistä paras lääke-esiaste.

EP-hakemusjulkaisussa nro 308 065 esitetään, että asikloviirin väliini- ja isoleusiiniestereillä, edullisesti L-muodossa, on paljon suurempi absorptio suolesta oraa-20 lisen antamisen jälkeen verrattuna muihin estereihin ja asikloviiriin.

• · Tällä hetkellä tärkein lääke sytomegalovirusinfek- tion hoitoon on gansikloviiri. Sen hyvin rajoitettu oraa-, linen biosaatavuus ja lääkkeen hitaan päivittäisen laski- ·;· · 25 monsisäisen infuusion (tai intravitreaalisten injektioiden ·' ·' tai siirrännäisten) tarve kuitenkin osoittavat paremman ; biosaatavuuden omaavan oraalisen annostusmuodon kiireelli- '/· : sen tarpeen.

Tämä keksintö tarjoaa gansikloviirin stabiilin lää-30 ke-esiasteformulaation, jolla on parannettu oraalinen ab-“ . sorptio ja alhainen toksisuus. Tällaiset ominaisuudet ovat erityisen arvokkaita herpes-infektioiden estämiseen immu-noalttiissa potilaissa, kun oraalinen antaminen terapeut-.* tisesti on edullinen valinta. Lisäksi aktiivisilla aine- > 35 osilla on farmakopeallisia ominaisuuksia, jotka mahdollis-

, 119U8G

tavat niiden paremman karakterisoinnin ja farmaseuttisen käsittelyn. Yllättäen todettiin, että gansikloviirin L-monovaliiniesterillä ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävillä suoloilla on nämä toivotut ominaisuudet.

5 Ensimmäisessä aspektissä tämä keksintö tarjoaa yh disteen, jolla on kaava:

OH

k O

(I) r H 11 H 0 ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat. Yhdistettä 10 kutsutaan jäljempänä 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metoksi-3-hydroksi-1-propanyyli-L-valinaatiksi tai .·, : mono-L-valiinigansikloviiriksi .

.·;/ Toisessa aspektissa tämä keksintö tarjoaa farma- • > · . seuttisen koostumuksen, joka sisältää gansikloviirin mono- • < · 15 L-valiiniesteriä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää • * · | ·’ suolaa tai diastereomeeriä, edullisesti seoksena yhden tai ··: · useamman sopivan täyteaineen tai kantajan kanssa, virusten ·.· ’ vastaisessa ja niiden kaltaisten sairauksien hoidossa käyttöä varten.

iv: 20

» I

* I

» ίο 112U80

Neljännessä aspektissa tämä keksintö tarjoaa yhdisteet, jotka ovat käyttökelpoisia välituotteita valmistettaessa mono-L-valiinigansikloviiriä ja sen farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja, joilla on kaava:

5 OH

k O

H, N N

(II) 10 P-^Ae/0-7 H 11 H 0 15 jossa Px on vety tai hydroksin suojaryhmä ja P2 on aminon suojaryhmä.

Tämän keksinnön neljännen aspektin muodostaa menetelmä keksinnön mukaisen lääke-esiasteyhdisteen ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi.

20 Tämä menetelmä käsittää gansikloviirin ja sen johdannaisten esteröinnin, suojaryhmien poiston gansikloviiristä, ,· : joka on esteröity L-valiinilla, gansikloviiri-bis-L-valii- .* niesterin osittaisen hydrolyysin kaavan I mukaiseksi mono- , L-valiiniesteriksi, guaniinin kondensaation substituoidun · 25 glyserolin kanssa, kaavan I mukaisen yhdisteen optisen : * resoluution ja kaavan I mukaisen lääke-esiasteen suolojen : muodostamisen. Menetelmän yksityiskohdat on kuvattu jäl- :,: >' j empänä.

Ellei toisin ole ilmoitettu, selityksessä ja pa-; 30 tenttivaatimuksissa käytetyillä seuraavilla termeillä on *" : alla esitetyt merkitykset: "Alkyyli" tarkoittaa haarautumatonta tai haarautu- • ‘ nutta tyydyttynyttä hiilivetyradikaalia, jossa on hiili- ·.·’ atomeja yhdestä ilmoitettuun määrään. Esimerkiksi C^-al- : “· 35 kyyli on alkyyli, jossa on vähintään yksi, mutta enintään

11 11208C

seitsemän hiiliatomia, esim. metyyli, etyyli, i-propyyli, n-propyyli, n-butyyli, n-pentyyli, n-heptyyli ja niiden kaltaiset.

"Alempi alkyyli" tarkoittaa alkyyliä, jossa on 1 -5 6 hiiliatomia.

"Aryyli" tarkoittaa orgaanista radikaalia, joka on johdettu aromaattisesta hiilivedystä poistamalla yksi vetyatomi. Edullisissa aryyliradikaaleissa on 6 - 12 hiili-atomia aromaattisen hiilivedyn rengashiiliatomeina.

10 "Aralkyyli" tarkoittaa orgaanista radikaalia, joka on johdettu aralkaanista, jossa alkyylivetyatomi on korvattu edellä määritellyllä aryyliryhmällä.

"Asyyli" tarkoittaa orgaanista radikaalia, joka on johdettu orgaanisesta haposta poistamalla hydroksyyliryh-15 mä; esim. CH3C0- on CH3C00H;n asyyliradikaali, tai asetyy- li. Muita esimerkkejä tällaisista asyyliryhmistä ovat pro-pionyyli tai bentsoyyli jne. Termi "asyyli" käsittää termin "alkanoyyli", joka on orgaaninen radikaali RCO-, jossa R on alkyyliryhmä, kuten edellä on määritelty.

20 "Alempi alkoksi", "(alempi alkyyli)amino", "di- (alempi alkyyli)amino" , "(alempi alkanoyyli)amino" ja nii-: den kaltaiset termit tarkoittavat alkoksia, alkyyliaminoa, dialkyyliaminoa, alkanoyyliaminoa, jne., joissa kukin ai- * 1 · .1 . kyyliradikaali on "alempi alkyyli", kuten edellä on ku- 25 vattu.

• 1 » t 1 · : >’ "Halogeeni" tarkoittaa fluoria, klooria, bromia tai : jodia.

V 1 Julkaisun Hackh, Chemical Dictionary, McGraw-Hill

Book Company, 1969, mukaan yhdisteen "johdannainen" tar-:’· : 30 koittaa yhdistettä, joka on saatavissa alkuperäisestä yh- disteestä yksinkertaisella kemiallisella menetelmällä.

Yhdisteen "aktivoitu johdannainen" tarkoittaa alku->( peräisen yhdisteen reaktiivista muotoa, joka tekee yhdis- teen aktiiviseksi halutussa kemiallisessa reaktiossa, jos-r! 35 sa alkuperäinen yhdiste on vain kohtalaisen reaktiivinen » 1 1 12 11908Γ; tai ei-reaktiivinen. Aktivoituminen aikaansaadaan muodostamalla johdannainen tai molekyylin sisäinen kemiallinen ryhmittymä, jolla on suurempi vapaan energian määrä kuin alkuperäisellä yhdisteellä, mikä tekee aktivoidun muodon 5 alttiimmaksi reagoimaan toisen reagenssin kanssa. Tämän keksinnön yhteydessä karboksiryhmän aktivointi erityisen tärkeä, ja vastaavia aktivointiaineita tai ryhmittymiä, jotka aktivoivat karboksiryhmän, on kuvattu yksityiskohtaisemmin jäljempänä. Esimerkkinä L-valiinin aktivoidusta 10 johdannaisesta on yhdiste, jolla on kaava: y o

P 3 H M /Kc-A (“K

15 =

H

jossa P2 on aminon suojaryhmä ja A on karboksin aktivointiryhmä, esimerkiksi halogeeni tai alempi asyylioksiryhmä. Toinen esimerkki on aminohappoanhydridi, joka on aminoha-20 pon aktivoitu muoto, joka tekee aminohapon (erityisesti L-valiinin) alttiiksi esteröinnille. Vielä erään esimerkin ,·, j muodostavat UNCA:t, jotka on kuvattu yksityiskohtaisemmin jäljempänä.

I I I

, "Suojaryhmä" tarkoittaa kemiallista ryhmää, joka ;')· · 25 (a) estää reaktiivisen ryhmän osallistumasta ei-toivotta- • · · ·* ·* vaan kemialliseen reaktioon; ja joka (b) voidaan helposti

• I

: poistaa, kun reaktiivisen ryhmän suojausta ei enää tarvi- ·* ta. Esimerkiksi bentsyyliryhmä on primäärisen hydroksyyli- funktionaalisuuden suojaryhmä.

• ; 30 "Aminon suojaryhmä" tarkoittaa suojaryhmää, joka : ; suojaa reaktiivisen aminoryhmän, joka muuten muuttuisi tiettyjen kemiallisten reaktioiden vaikutuksesta. Määritelmä käsittää formyyliryhmän tai alemmat alkanoyyliryh-mät, joissa on 2-4 hiiliatomia, erityisesti asetyyli-: · ·: 35 tai propionyyliryhmän, trityyli- tai substituoidut trityy- i t x3 1 120 80 liryhmät, kuten monometoksitrityyliryhmän, dimetoksitri-tyyliryhmät, kuten 4,4'-dimetoksitrityyli- tai 4,4'-dime-toksitrifenyylimetyyliryhmän, trifluoriasetyylin ja N-(9-fluorenyylimetoksikarbonyyli)- tai "FMOC"-ryhmän, allyyli-5 oksikarbonyyliryhmän tai muut suojaryhmät, jotka on johdettu halogeenikarbonaateista, kuten C6.12-aryyli( alempi alkyyli)karbonaatit (kuten bentsyylikloorikarbonaatista johdetun N-bentsyylioksikarbonyyliryhmän), tai jotka on johdettu bifenyylialkyylihalogeenikarbonaateista, tai ter-10 tiääriset alkyylihalogeenikarbonaatit, kuten tertiääribu-tyylihalogeenikarbonaatit, erityisesti tertiääributyyli-kloorikarbonaatin, tai di(alempi alkyyli)dikarbonaatit, erityisesti di(t-butyyli)dikarbonaatin, ja ftalyyliryhmän.

"Hydroksin suojaryhmä" tarkoittaa suojaryhmää, joka 15 suojaa hydroksiryhmän, joka muuten muuttuisi tiettyjen kemiallisten reaktioiden vaikutuksesta. Sopivia hydroksin suojaryhmiä ovat mm. eetterin muodostavat ryhmät, jotka voidaan poistaa helposti sen jälkeen, kun kaikki muut reaktiovaiheet ovat menneet loppuun, kuten bentsyyli- tai 20 trityyliryhmä, joiden fenyylirengas on mahdollisesti subs-tituoitu. Muita sopivia hydroksin suojaryhmiä ovat mm.

• . alkyylieetteriryhmät, tetrahydropyranyyli-, silyyli-, tri- alkyylisilyylieetteriryhmät ja allyyliryhmä.

» « t , "Poistuva ryhmä" tarkoittaa labiilia ryhmää, joka • « · ‘ 25 korvautuu kemiallisessa reaktiossa toisella ryhmällä. Esi- • « · .* merkkejä poistuvista ryhmistä ovat halogeeni, mahdollises- ; ti substituoitu bentsyylioksiryhmä, isopropyylioksiryhmä, V ·’ mesyylioksiryhmä, tosyylioksiryhmä ja asyylioksiryhmä.

Kaikkien kaavan I mukaisen yhdisteen valmistuksessa 30 käytettävien aktivointi- ja suojaryhmien täytyy täyttää . seuraavat vaatimukset: (1) niiden liittymisen täytyy ta pahtua kvantitatiivisesti ja ilman L-valiinikomponentin rasemisoitumista; (2) halutun reaktion aikana läsnä olevan >' suojaryhmän pitäisi olla stabiili käytettävissä reaktio- ··;·‘| 35 olosuhteissa; ja (3) ryhmä täytyy voida poistaa helposti

i4 112U8C

olosuhteissa, joissa esterisidos on stabiili ja joissa esterin L-valiinikomponentin rasemisoitumista ei tapahdu.

Termi "kiraalisuus" tarkoittaa molekyylille kuuluvaa kiertosuuntaominaisuutta, joka kuvaa molekyylin sym-5 metriaelementtejä (tai symmetriaelementtien puuttumista). Molekyylit, joissa ei ole symmetriaelementtejä, ovat "ki-raalisia". Kiraalista molekyyliä, josta puuttuvat kaikki symmetriaelemenit, mukaan lukien myös yksinkertaisen akselin, kutsutaan "asymmetriseksi".

10 Termi "akiraalinen" tarkoittaa ainakin yhden sym- metriaelementin, kuten yksinkertaisen akselin, läsnäoloa molekyylissä.

"Isomeria" viittaa yhdisteisiin, joilla on sama atomimassa ja järjestysluku, mutta jotka eroavat yhden tai 15 useamman fysikaalisen tai kemiallisen ominaisuuden suhteen. Erilaisia isomeerityyppejä ovat mm. seuraavat: "Stereoisomeeri" viittaa kemialliseen yhdisteeseen, jolla on sama moolimassa, kemiallinen koostumus ja rakenne kuin toisella, mutta atomit ryhmittyneinä eri tavalla. 20 Toisin sanoen tietyt identtiset kemialliset ryhmät ovat orientoituneina eri tavalla avaruudessa ja sen vuoksi ,,· niillä on puhtaina kyky kiertää polaroituneen valon tasoa.

; Kuitenkin joillakin puhtailla stereoisomeereillä voi olla l optinen rotaatio, joka on niin lievä, että sitä ei voida :v. 25 todeta nykyisillä laitteilla.

; t· "Optinen isomeeri" kuvaa yhdentyyppistä stereoiso- meriaa, joka ilmenee rotaationa, jota isomeeri, joko puh-‘ taana tai liuoksessa, aikaansaa polaroituneen valon tason.

Sen aiheuttaa monissa tapauksissa neljän erilaisen kemial-- ·' 30 lisen atomin tai ryhmän kiinnittyminen ainakin yhteen mo- lekyylin hiiliatomeista tai vaihtoehtoisesti ilmaistuna edellä kuvattu molekyylin kiraalisuus.

. Stereoisomeerejä tai optisia isomeerejä, jotka ovat • toistensa peilikuvia, kutsutaan "enantiomeereiksi" ja nii- 35 den voidaan sanoa olevan enantiomeerisiä. Kiraaliryhmiä, is 112u8l jotka ovat toistensa peilikuvia, kutsutaan enantiomeeri-siksi ryhmiksi.

Enantiomeerit, joiden absoluuttisia konfiguraatioita ei tunneta, voidaan erottaa oikealle kiertäviin (etu-5 liite +) tai vasemmalle kiertäviin (etuliite -) riippuen suunnasta, jossa ne tarkoin määrätyissä koeolosuhteissa kiertävät polaroituneen valon tasoa.

Kun enantiomeerisiä molekyylejä on läsnä yhdessä yhtä suurina määrinä, tuotetta kutsutaan raseemiseksi 10 riippumatta siitä, onko se kiteinen, nestemäinen tai kaasumainen. Homogeenista kiinteää faasia, joka koostuu ekvi-molaarisista määristä enantiomeerisiä molekyylejä, kutsutaan raseemiseksi yhdisteeksi. Erillisinä kiinteinä faaseina läsnä olevien enantiomeeristen molekyylien ekvimo-15 laaristen määrien seosta kutsutaan raseemiseksi seokseksi. Mitä tahansa homogeenista faasia, joka sisältää ekvimolaa-riset määrät enantiomeerisiä molekyylejä, kutsutaan rase-maatiksi.

Yhdisteillä, joissa on kaksi asymmetristä hiiliato- 20 mia (kiraalikeskusta), on neljä stereoisomeeriä, jotka muodostavat kaksi enantiomeeriparia. Kun parin enantiomee- ;*·,· rit ovat toistensa peilikuvia, kahden eri parin enantio- • « ·.*;. meerit eivät ole toistensa peilikuvia ja niitä kutsutaan : "diastereomeereiksi". Diastereomeereillä on samankaltaiset » · * ;iV 25 mutta ei identtiset kemialliset ominaisuudet ja niillä on ! ! erilaiset fysikaaliset ominaisuudet, esim. sulamispisteet,

• » I

• » · liukoisuus, jne.

• i · ‘ Nämä optisesti aktiiviset yhdisteet voidaan nimetä useilla tavoilla; so. Cahnin ja Prelogin R- ja S-sekvens-

• » I

• 30 sisäännöillä; erytro- ja treo-isomeereinä; D- ja L-isomee- • tii: reinä; d- ja 1-isomeereinä; ja ( + )- ja (-)-isomeereinä, \ mikä osoittaa, että kemiallinen rakenne, joko puhtaana tai ... liuoksessa, kiertää polaroituneen valon tason suuntaa.

Nämä tavat ovat alalla hyvin tunnettuja ja ne kuvataan ·’ · 35 yksityiskohtaisesti julkaisussa E.L. Eliel, Stereochemis-

i6 112' O 8 G

try of Carbon Compounds, julkaisija McGraw Hill Book Company, Inc., New York, 1962 ja siinä mainituissa viitteissä. Siten nämä isomeerit voidaan kuvata d-, 1- tai d,l-pa-rina; tai D-, L- tai D,L-parina; tai R-, S- tai R,S-pari-5 na; käytettävästä nimeämissysteemistä riippuen. Yleisesti tässä hakemuksessa käytetään nimitystä (D), (L) ja (D,L) aminohapolle (väliini) ja nimitystä (R), (S) ja (R,S) gan-sikloviiriryhmän asymmetriselle hiilelle näiden kahden erottamiseksi.

10 Kaavan I mukaisessa yhdisteessä ja kaavan II mukai sissa yhdisteissä on kaksi asymmetristä keskusta (2 hiili-atomia), yksi valiinikomponentissa ja toinen gansiklovii-rikomponentin alifaattisessa sivuketjussa. Jälkimmäinen on propanyyliradikaalin hiiliatomi 2. Sen vuoksi kaavan I mu-15 kainen yhdiste ja kaavan II mukaiset yhdisteet esiintyvät diastereomeereinä ja diastereomeerien seoksina. Mitä tulee keksinnön mukaisiin yhdisteisiin, voidaan käyttää mitä tahansa diastereomeeriä tai diastereomeerien seosta, ja patenttivaatimusten tarkoitetaan kattavan yksittäiset dia-20 stereomeerit ja niiden seokset, ellei toisin ole rajoitettu. Kaava I käsittää kaksi kaavan I mukaista diastereomee-riä sekä niiden seokset.

"Mahdollinen" tai "mahdollisesti" tarkoittaa, että : ,·. kuvattu tapahtuma tai seikka voi toteutua tai olla toteu- • # · 25 tumatta ja että kuvaus käsittää tapaukset, joissa mainittu • » ! ! tapahtuma tai seikka toteutuu, ja tapaukset, joissa se ei ;;/ toteudu. Esimerkiksi "mahdollisesti substituoitu fenyyli" *’ * tarkoittaa, että fenyyli voi olla substituoitu tai substi- tuoimaton ja että kuvaus käsittää sekä substituoimattoman : 30 fenyylin että fenyylin, jossa on substituointi; "minkä jälkeen vapaa emäs mahdollisesti muutetaan happoadditio- ;·. suolaksi" tarkoittaa, että mainittu konversio voidaan to- ,···, teuttaa tai jättää toteuttamatta, jotta kuvattu prosessi * » *” kuuluisi keksinnön piiriin, ja keksintö käsittää ne pro-

* * I

17 112080 sessit, joissa vapaa emäs muutetaan happoadditiosuolaksi, ja ne prosessit, joissa sitä ei muuteta.

"Farmaseuttisesti hyväksyttävä" tarkoittaa sellaista, mikä on käyttökelpoista farmaseuttisen koostumuksen 5 valmistuksessa, mikä on yleensä turvallista ja ei-toksista ja käsittää sellaisen, mikä on hyväksyttävää eläinlääketieteelliseen käyttöön sekä ihmisten farmaseuttiseen käyttöön.

"Farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat" tarkoitta-10 vat suoloja, joilla on haluttu farmakologinen aktiivisuus ja jotka eivät ole biologisesti eivätkä muuten ei-toivot-tavia. Tällaisia suoloja ovat mm. happoadditiosuolat, jotka ovat muodostuneet epäorgaanisten happojen kanssa, kuten vetykloridihapon, vetybromidihapon, rikkihapon, typpiha-15 pon, ortofosforihapon ja niiden kaltaisten kanssa; tai orgaanisten happojen kanssa, kuten etikkahapon, propioni-hapon, heksaanihapon, heptaanihapon, syklopentaanipropio-nihapon, glykolihapon, palorypälehapon, maitohapon, malo-nihapon, meripihkahapon, omenahapon, maleiinihapon, fumaa-20 rihapon, viinihapon, sitruunahapon, bentsoehapon, o-(4- hydroksibentsoyyli)bentsoehapon, kanelihapon, manteliha-:\j pon, metaanisulfonihapon, etaanisulfonihapon, 1,2-etaani-

• I

disulfonihapon, 2-hydroksietaanisulfonihapon, bentseeni- ; ,·, sulfonihapon, p-klooribentseenisulfonihapon, 2-naftaleeni- • · · 25 sulfonihapon, p-tolueenisulfonihapon, kamferisulfonihapon, • » \ j 4-metyylibisyklo[2.2.2]okt-2-eeni-l-karboksyylihapon, glu- " koheptonihapon,4,4'-metyleenibis(3-hydroksi-2-naftoiini)- * · » *·* * hapon, 3-fenyylipropionihapon, trimetyylietikkahapon, ter- tiääributyylietikkahapon, lauryylirikkihapon, glukoniha-• *,· 30 pon, glutamiinihapon, hydroksinaftoiinihappojen, salisyy- lihapon, steariinihapon, mukonihapon ja niiden kaltaisten kanssa. Edullisia farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja ovat suolat, jotka ovat muodostuneet vetykloridihapon, rikkihapon, ortofosforihapon, etikka- tai metaanisulfo-35 nihapon, etaanisulfonihapon, 1,2-etaanidisulfonihapon, ie 11208Γ; 2-hydroksietaanisulfonihapon, bentseenisulfonihapon, p-klooribentseenisulfonihapon ja 2-naftaleenisulfonihapon, p-tolueenisulfonihapon, kamferisulfonihapon kanssa.

"Eläin" käsittää ihmiset, muut nisäkkäät kuin ihmi-5 set (kuten koirat, kissat, kanit, nautakarjan, hevoset, lampaat, vuohet, siat ja hirvieläimet) ja ei-nisäkkäät, kuten linnut, kalat ja niiden kaltaiset.

"Sairaus" käsittää spesifisesti eläimen tai sen osan minkä tahansa sairaalloisen tilan. Siten "sairaus" 10 käsittää tässä minkä tahansa virus- tai sen kaltaisen sairauden, joka on hoidettavissa mono-L-valiinigansiklovii-rilla tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävillä suoloilla.

"Hoito" tarkoittaa mitä tahansa sairauden hoitoa eläimessä ja se käsittää: 15 (1) sairauden esiintymisen ennaltaehkäisyn eläimes sä, joka voi olla altistunut sairaudelle, mutta joka ei vielä koe tai osoita sairauden oireita; esim. kliinisten oireiden puhkeamisen ennaltaehkäisyn; (2) sairauden estämisen, esim. sen kehittymisen 20 pysäyttämisen; tai (3) sairauden lievittämisen, esim. sairauden oirei- ;'. j den regression aiheuttamisen.

"Tehokas määrä" sairauden hoitoon tarkoittaa sitä j määrää, joka sen tarpeessa olevalle eläimelle annettuna 1!Y 25 riittää tämän sairauden edellä määritellyn hoidon toteut- ) ; tamiseen.

·;; · Ellei nimenomaisesti ole toisin mainittu, tässä '·* kuvatut reaktiot tapahtuvat atmosfäärin paineessa lämpö tila-alueella 5 - 170 °C (edullisesti 10 - 50 °C; edulli-I ',· 30 simmin "huoneen-" tai "ympäristön" lämpötilassa, esim.

: 20-30 °C:ssa). On kuitenkin selvästi joitakin reaktioi ta, joissa kemiallisessa reaktiossa käytettävä lämpötila-... alue on näiden lämpötila-alueiden ylä- tai alapuolella.

Y Edelleen, ellei toisin ole nimenomaisesti mainittu, reak- * 35 tioaikojen ja olosuhteiden tarkoitetaan olevan likimääräi- Λ Λ Ο Γ; Ο ί 19 Μ / 1.ίθ' .

siä, esim. tapahtuvan suunnilleen atmosfäärin paineessa lämpötila-alueella noin 5 - noin 100 °C (edullisesti noin 10 - noin 50 °C; edullisimmin noin 20 °C:ssa) noin 1 -noin 100 tunnin (edullisesti noin 5-60 tunnin) aikana.

5 Esimerkeissä annettujen parametrien tarkoitetaan olevan spesifisiä, ei likimääräisiä.

Tässä kuvattujen yhdisteiden ja välituotteiden eristäminen ja puhdistaminen voidaan toteuttaa haluttaessa millä tahansa sopivalla erotus- tai puhdistusmenetel-10 mällä, kuten esimerkiksi suodattamalla, uuttamalla, kiteyttämällä, pylväskromatografiällä, ohutkerroskromatogra-fialla tai paksukerroskromatografiällä tai näiden menetelmien yhdistelmällä. Sopivien erotus- ja eristysmenetelmien spesifisiä esimerkkejä voidaan saada viittaamalla esimerk-15 keihin jäljempänä. Muita vastaavia erotus- tai eristysme-netelmiä kuitenkin voidaan tietenkin myös käyttää.

Kaavan I mukainen yhdiste tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat valmistetaan erilaisilla menetelmillä. Synteettiset tavat ilmenevät merkityistä pisteviivois-20 ta [(a) - (f)] kaavassa I alla. Pisteviivat osoittavat kaavamaisesti vastaaviin reaktiokohtiin ja seuraavassa taulukossa esitetään lyhyt kuvaus eri menetelmistä, jotka • t kuvataan yksityiskohtaisemmin jäljempänä. Kirjainsymbolit : .·. sulkeissa viittaavat vastaavaan vaiheeseen menetelmäku- • · · 25 vauksessa/patenttivaatimuksessa (patenttivaatimuksissa):

: OH

n^v-n

Ca)-- X !0> : V 30 ''k (O,(e) ..

*......(d) ;···., γ : ·; I o-' \ (a) ,(6) - —► H2N-^i\C ^ v ''(f) 35 * I' ’· 0 cc) y r » 20

112U8L

Tapa Menetelmä (a) Suojauksen poisto (b) Suolan muodostus (c) Esteröinti 5 (d) Kondensaatio (e) Osittainen hydrolyysi (f) Optinen resoluutio / diastereomeerin ero tus

Siten menetelmä kaavan I mukaisen yhdisteen tai sen 10 farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi käsittää yhden tai useampia seuraavista vaiheista: (a) aminon ja/tai hydroksin suojaryhmä poistetaan yhdisteestä, jolla on kaava: 20 Y (IV) :7: P2HN ^

!:0 25 h II

: . O

• · • * · ’ jossa P1 on hydroksin suojaryhmä tai vety, P2 on aminon

’·’ * suojaryhmä ja P3 on vety tai P2, jolloin saadaan kaavan I

mukainen yhdiste; tai • ’.* 30 (b) kaavan I mukainen yhdiste muutetaan farmaseut- : : tisesti hyväksyttäväksi suolakseen; tai (c) 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)me- * » · "... toksi-1,3-propaanidioli (gansikloviiri) tai sen suola es- teröidään L-valiinin aktivoidulla johdannaisella; tai * » » * » t » 21 1 12080 (d) mahdollisesti substituoidulle guaniinille, jolla on kaava:

OH

5 N<Kr"N\ L jL > (v) ρ3ην^'ν'^·ν

H

suoritetaan kondensaatio mahdollisesti persilyloidussa 10 muodossa, jossa kaavassa P3 on vety tai aminon suojaryhmä, 2-substituoidun glyserolin kanssa, jolla on kaava:

γ1 —\ O Z

y (vi) Y2 -f 15 jossa Y1 ja Y2 merkitsevät toisistaan riippumatta halogeenia, alempaa asyylioksia, alempaa alkyylioksia tai aral-kyylioksiryhmiä ja Z on poistuva ryhmä, joka on valittu ryhmästä, jonka muodostavat alempi asyylioksi, metoksi, 20 isopropyylioksi, bentsyylioksi, halogeeni, mesyylioksi ja tosyylioksi ja niiden kaltaiset; mahdollisesti Lewis-hap- ,·, ; pokatalyytin läsnä ollessa, jolloin saadaan kaavan I mu- • * * kainen yhdiste; tai * * * , (e) bis-esteri-2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin- * * * * « » ;iY 25 9-yyli)metoksi-l,3-propaanidiyyli-bis(L-valinaatille) tai ; ;* sen suolalle suoritetaan osittainen hydrolyysi, jolloin ♦ * t * · saadaan kaavan I mukainen monoesteri; tai ‘ (f) kaavan (I) mukaiselle yhdisteelle suoritetaan optinen resoluutio tai diastereomeerinen erotus.

' ! 30 Kaavan I mukaisella yhdisteellä ja sen farmaseuttiin : sesti hyväksyttävillä suoloilla on farmaseuttinen aktiivi- * suus ja erityisesti virusten vastainen aktiivisuus. Sel laisina yhdiste ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ovat käyttökelpoisia hoidettaessa useita erilaisia ; 35 tiloja eläimissä, erityisesti ihmisissä.

i i > f ’ i

• I

22 11215 8 r.

Esimerkkejä tiloista, joita voidaan hoitaa käyttäen tämän keksinnön mukaista yhdistettä tai sen suoloja, ovat mm. herpes-infektiot, kuten herpestyypit 1, 2 ja 6, varicella Zoster, Eppstein-Barr-virus ja erityisesti sytomega-5 lovirus ja hepatiitti-B ja sen kaltaiset virukset, ihmisissä tai muissa eläimissä kuin ihmisissä, erityisesti ihmisissä. Esimerkkejä kliinisistä tiloista, joita nämä virukset aiheuttavat, ovat herpeettinen sarveiskalvontu-lehdus, herpeettinen aivotulehdus, kylmähaavat, genitaali-10 infektiot (ihorokahtuman aiheuttamat), vesirokko, vyöruusu (varicella Zosterin aiheuttama), CMV-keuhkokuume ja -verk-kokalvontulehdus, erityisesti immunoalttiissa potilaissa, joihin kuuluvat siirrännäisen saajat (esimerkiksi sydän-, munuais- ja luuydinsiirrännäiset) ja potilaat, joilla on 15 hankittu immunokato-oireyhtymä (AIDS), Eppstein-Barr-vi- ruksen aiheuttama mononukleoosi. Keksinnön mukainen yhdiste on myös käyttökelpoinen hoidettaessa tiettyjä syöpiä tai imukudoskasvaimia, jotka ovat virusinfektioiden aiheuttamia tai liittyvät niihin, kuten nenänielusyöpää, 20 immunoblastista imukudoskasvainta, Burkittin imukudoskas- vainta ja hiusleucoplaciaa.

·,*·· Eläimen (edullisesti ihmisen) hoitamiseksi, jolla : : on sairaustila, johon edellä mainittu virusinfektio liit- : tyy, tai eläimen ennalta ehkäiseväksi hoitamiseksi, jolle 25 eläimelle hoitava lääkäri tai eläinlääkäri ennakoi täl- j laista virusinfektiota, mono-L-valiinigansikloviiriä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja annetaan terapeuttisesti tehokas määrä tällaiselle eläimelle. Yhdisteen . tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen terapeut- • · 30 tisesti tehokas määrä on määrä, joka on tehokas tilan, so. sairauden, hoidossa. Tarkka annettava määrä voi vaihdella ; suuresti riippuen hoidettavan spesifisen tilan vakavuusas- teestä, kohteen iästä ja painosta, kohteen suhteellisesta * » « » » » * #

23 112U8C

terveydestä ja muista tekijöistä (kuten formulaatiotyypis-tä). Oraalisen formulaation kyseessä ollessa terapeuttisesti tehokas määrä voi vaihdella noin 1:stä 250 mg:aan kg:aa kohti kehon painosta vuorokaudessa, edullisesti noin 5 7:stä 100 mg:aan kg:aa kohti kehon painosta vuorokaudessa.

Edullisimmin terapeuttisesti tehokas määrä on noin 10 -50 mg/kg/vrk, erityisesti CMV-verkkokalvontulehduksen ja keuhkokuumeen hoitoa varten. Siten 70 kg:iselle ihmiselle terapeuttisesti tehokas määrä on noin 70 mg/vrk - noin 10 7 g/vrk, edullisesti noin 500 mg/vrk - noin 5 g/vrk, edul lisimmin 700 mg/vrk - 3,5 g/vrk. Intravitreaalisen siirrännäisen kyseessä ollessa lääke-esiasteen annos on kuitenkin välillä 0,5 - 25 mg, edullisesti 5-10 mg siirrännäistä kohti. Alan ammattimies ymmärtää hyvin, että kek-15 sinnön mukaisten lääke-esiasteiden eri annostusmuodot vaativat erilaisia annostusalueita.

Gansikloviiri on tutkittu virusten vastainen lääke. Tämän keksinnön mukaisen gansikloviirilääke-esiasteen käyttökelpoisuus on todettu määrittämällä gansikloviirin 20 pitoisuustasot veressä koe-eläimissä (rotta ja apina) lääke-esiasteen oraalisen antamisen jälkeen. Pitoisuustasot veren plasmassa määritettiin esimerkeissä 9 ja 10 kuvattu-jen menetelmien mukaisesti ja ne ovat menetelmiä, jotka on | .*, modifioitu julkaisuissa Sommadossi et ai., REVIEWS OF

j\\ 25 INFECTIOUS DISEASES 10(3), S507 (1988) ja Journal of Chro- | matography, Biomedical Applications 414, 429 - 433 (1987) • i · kuvatuista menetelmistä.

• * · • Tämän keksinnön mukainen yhdiste tai sen farmaseut tisesti hyväksyttävät suolat voidaan antaa millä tahansa ! ’ 30 tavallisilla ja hyväksyttävillä tavoilla, joita alalla tunnetaan, joko yksittäin tai yhdistelmänä toisen tera-peuttisen aineen kanssa. Yleensä tämän keksinnön mukai-··, nen yhdiste ja suolat annetaan farmaseuttisena koostumuk- ’* sena farmaseuttisesti hyväksyttävän täyteaineen kanssa ja t 35 ne annetaan oraalisesti, systeemisesti (esim. ihon läpi 24 112080 vaikuttavasti tai peräpuikkona) tai parenteraalisesti (esim. lihaksensisäisesti [im], laskimonsisäisesti [iv], ihonalaisesti [se]) tai intravitreaalisesti siirrännäisen avulla. Keksinnön mukainen yhdiste voidaan siten antaa 5 koostumuksessa, joka on puolikiinteä, jauhe, aerosoli, liuos, suspensio tai muu sopiva koostumus, kuten jäljempänä on esitetty. Oraaliset farmaseuttiset koostumukset ovat edullisia.

Farmaseuttinen koostumus sisältää kaavan I mukaista 10 yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja edullisesti yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävän täyteaineen kanssa. Tällainen täyteaine on sellainen, että se on ei-toksinen. Tällainen täyteaine voi olla kiinteä, nestemäinen, puolikiinteä, kaasumainen (aerosolin tapaukses-15 sa) täyteaine, joka on yleensä alan ammattimiehen saatavissa ja joka ei vaikuta haitallisesti aktiivisen aineen aktiivisuuteen.

Yleensä tämän keksinnön mukainen farmaseuttinen koostumus sisältää terapeuttisesti tehokkaan määrän yhdis-20 tettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja yhdessä ainakin yhden täyteaineen kanssa. Formulaatiotyypis-: ,j tä, yksikköannostuksen koosta, täyteaineiden laadusta ja farmaseuttisten tieteiden alan ammattimiehen tuntemista • muista tekijöistä riippuen tämän keksinnön mukaisen yhdis- • * « · 25 teen määrä voi vaihdella koostumuksessa suuresti. Yleensä : ,·, lopullinen koostumus sisältää noin 1 - noin 99,5 paino-% ’!!.* keksinnön mukaista yhdistettä, jolloin jäljelle jäävä osa on täyteainetta tai täyteaineita. Aktiivisen yhdisteen määrä on edullisesti noin 10,0 - noin 99 paino-% ja edul-: ·’ 30 lisimmin noin 50 - noin 99 paino-%, jolloin jäljelle jäävä • * t osa on sopivaa täyteainetta tai täyteaineita. Näiden far-maseuttisten koostumusten valmistusta varten käyttökelpoi-set farmaseuttiset täyteaineet voivat olla kiinteitä, puo-• likiinteitä, nestemäisiä tai kaasumaisia. Siten koostumuk- »Iti* 35 set voivat olla tablettien, pillerien, kapselien, jauhei- 25 11?Η8! den, peräpuikkojen, ihon läpi vaikuttavien laastarien, jatkuvan vapautumisen formulaatioiden, intravitreaalisten siirrännäisten, liuosten, erityisesti laskimonsisäisten liuosten, suspensioiden, eliksiirien, aerosolien ja niiden 5 kaltaisten muodossa. Kiinteitä farmaseuttisia täyteaineita ovat mm. tärkkelykset, kuten maissitärkkelys, selluloosa, talkki, glukoosi, laktoosi, sakkaroosi, gelatiini, mallas, riisi, vehnäjauho, liitu, silikageeli, magnesiumstearaat-ti, natriumstearaatti, steariinihappo, glyserolimonostea-10 raatti, natriumkloridi, kuivattu kuorittu maito ja niiden kaltaiset. Nestemäiset ja puolikiinteät täyteaineet voidaan valita ryhmästä, jonka muodostavat vesi, etanoli, glyseroli, propyleeniglykoli, erilaiset öljyt, petroli-, eläin-, kasvi- tai synteettistä alkuperää olevat mukaan 15 lukien, esimerkiksi maapähkinäöljy, soijapapuöljy, mineraaliöljy, seesamiöljy ja niiden kaltaiset. Vesi, suolaliuos, vesipitoinen dekstroosi ja glykolit ovat edullisia nestemäisiä kantajia, erityisesti injektoitavia liuoksia varten. Muita sopivia farmaseuttisia täyteaineita ja kan-20 tajia ja niiden formulaatioita on kuvattu julkaisussa "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania (1980), E.W. Martin, joka • · sisällytetään tähän viittauksella.

: .·. Farmaseuttinen koostumus annetaan edullisesti yk- * · · • · · t 25 sittäisenä yksikköannostusmuotona, edullisemmin oraalisena j annostusmuotona, jatkuvaa hoitoa varten tai yksittäisenä 'II,* yksikköannostusmuotona rajoittamatta, kun vaaditaan eri- * « · ' ’ tyisesti oireiden lievitystä.

Vaikka tämän keksinnön laajin määritelmä on esitet- • » * : 30 ty edellä kaavan I mukaisena yhdisteenä ja sen farmaseut-

• > I

tisesti hyväksyttävinä suoloina, (R,S)-seos ja tietyt suo-lat ovat edullisia.

,···, Seuraavat hapot ovat edullisia farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen muodostuksessa kaavan I mukaisten ' : 35 yhdisteiden kanssa: vetykloridi-, rikki-, ortofosfori-, 26 11?08(.

etikka-, metaanisulfoni-, etaanisulfoni-, 1,2-etaanidi- sulfoni-, 2-hydroksietaanisulfoni-, bentseenisulfoni-, p-klooribentseenisulfoni-, 2-naftaleenisulfoni-, p-toluee-nisulfoni-ja kamferisulfonihappo. Edullisimpia ovat vahvat 5 epäorgaaniset hapot, kuten vetykloridi-, rikki- tai orto-fosforihappo.

Edullisimpia yhdisteitä ovat 2-(2-amino-l,6-dihyd-ro-6-oksopurin-9-yyli )metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaattivetykloridi ja -asetaatti. Nämä yhdisteet voi-10 daan valmistaa kiteisinä aineita ja sen vuoksi ne voidaan helposti valmistaa stabiileiksi oraalisiksi formulaatioik-si. Oraaliset ja laskimonsisäiset formulaatiot ovat edullisia. Oraalisilla formulaatioilla on se etu, että niillä on korkea biosaatavuus; laskimonsisäisillä formulaatioilla 15 on se etu, että keksinnön mukainen lääke-esiaste, toisin kuin laskimonsisäiset gansikloviiriformulaatiot, voidaan valmistaa käyttäen fysiologisesti hyväksyttävämpää pH:ta (4 - 6). Gansikloviirin laskimonsisäinen formulaatio vaatii pH-arvon 11, joka aiheuttaa ärsytystä.

20 Ymmärretään, että nämä yhdisteet ovat erityisen käyttökelpoisia farmaseuttisissa koostumuksissa ja tämän keksinnön mukaisissa hoitomenetelmissä.

• ·

Missä tahansa tässä kuvatuista viimeisen vaiheen

I · I

: prosesseista viittaus kaavaan I, II, III, IV, V tai VI

i t « 25 viittaa sellaisiin kaavoihin, joissa P1, P2 ja P3, A, Y1, ! ! Y2 ja Z on määritelty edellä esitetyissä laajimmissa mää- ritelmissään, jolloin prosesseja sovelletaan erityisesti * * # • tässä edullisiin toteutusmuotoihin.

Tämän keksinnön mukaiset edulliset farmaseuttiset 30 koostumukset sisältävät kaavan I mukaisen lääke-esiasteen ’...· farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa. Siten, jos farma- :\ seuttisten formulaatioiden valmistus käsittää farmaseut- • #· ,*··, tisten täyteaineiden ja suolamuodossaan olevan aktiivisen aineosan perusteellisen sekoituksen, on edullista käyttää « » 27 11208C.

farmaseuttisia täyteaineita, jotka ovat luonteeltaan ei-emäksisiä, so. joko happamia tai neutraaleja.

Yleisesti edullinen menetelmä kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamiseksi käsittää vaiheen (a), joka to-5 teutetaan edullisesti niin, että samanaikaisesti muodostuu kaavan I mukaisen yhdisteen suola, tai vaiheen (c) tai vaiheiden (a) ja (c) yhdistelmän. (Katso vaiheiden III ja IV kuvaus jäljempänä.) Monoesterin valmistuksessa vaiheen (a) mukaisesti vaaditaan, että toinen gansikloviirin 10 tai sen johdannaisen kahdesta primäärisestä hydroksyyli-funktionaalisuudesta suojataan selektiivisesti. Tämä voi yleensä käsittää tai olla käsittämättä guaniiniemäksen 2-aseman aminoryhmän suojauksen (katso vaiheiden I - III yksityiskohtainen kuvaus jäljempänä siinä tapauksessa, 15 että menetelmä toteutetaan suojatulla aminoryhmällä). Lisäksi ennen kuin toteutetaan esteröinti (vaihe III), ami-nohapporeagenssin aminoryhmän täytyy olla suojattu, jotta vältetään sen sekaantuminen (amidin muodostus) esteröinti-reaktioon. Aminoryhmän suojaus on kuvattu jäljempänä.

20 Yleensä, kun toteutetaan tämän keksinnön mukainen menetelmä, niiden amino-, hydroksi- tai karboksyyliryh-: ·,: mien, jotka eivät osallistu synteesireaktioon, täytyy olla suojattuja, kunnes (1) joko suojauksen poistolla saadaan | lopullinen tuote; tai (2) spesifisen suojatun ryhmän on 25 tarkoitus sisältyä seuraavaan synteesi vaiheeseen; tai (3) . \ suojaamattoman ryhmän läsnäolo seuraavissa lopputuottee- seen johtavissa reaktiovaiheissa ei muuta aiottua reaktio- * · · sarjaa. Esimerkkinä vaatimuksen (1) täyttämisestä on bent- syyliryhmä tämän keksinnön mukaisten monoesterien valmis- t » » ·’ ·1 30 tuksessa, joka bentsyyliryhmä suojaa gansikloviirin yhden ’...· primäärisen hydroksyylifunktionaalisuuden, kunnes se pois- • 1>(t tetaan suojauksenpoistovaiheessa. Esimerkkinä vaatimuksen ,··, (2) täyttämisestä on toinen bent syy li ryhmä, joka suojaa · > 35 suuden, joka bentsyyliryhmä poistetaan juuri ennen este- gansikloviirin toisen primäärisen hydroksyylifunktionaali- 28 11208Γ röintivaihetta. Esimerkkinä vaatimuksen (3) täyttämisestä on asetyyliryhmä tai trityyli- tai monometoksitrityyliryh-mä, joka suojaa gansikloviirin guaniinirengassysteemin aminoryhmän, koska suojaamaton aminoryhmä ei häiritse es-5 teröintiä (vaihe III).

Yleisesti mahdollisten suoja-aineiden vaatimuksia, jotka tekevät ne sopiviksi kaavan I mukaisen yhdisteen valmistuksessa käyttöä varten, ovat: (1) niiden liittämisen pitäisi tapahtua kvantita- 10 tiivisesti ja vaikeuksitta ilman L-valiinin rasemisoitu- mista; (2) suojatun välituotteen täytyy olla stabiili käytettävissä reaktioiden olosuhteissa, kunnes vaaditaan suo-jaryhmän poisto; 15 (3) suojaryhmän täytyy olla helposti poistettavissa olosuhteissa, jotka eivät muuta jäljelle jäävän molekyylin kemiallista luonnetta tai aiheuta L-valiinikomponentin rasemisoitumista.

Kaikki lähtöaineet (gansikloviiri ja L-valiini) ja 20 suojaavat ja karboksyyliryhmän aktivoivat reagenssit, joita käytetään kaavan I mukaisen yhdisteen valmistukseen, ovat tunnettuja. Myös erilaiset aminosuojatut L-valiini- • · johdannaiset, kuten N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valiini, : ,·. BOC-L-valiini ja FMOC-L-valiini, N-formyyli-L-valiini ja V 25 N-bentsyylioksikarbonyyli-N-karboksi-L-valiinianhydridi, ! I jotka ovat kaikki kaupallisesti saatavissa olevia väli- » » · t « · tuotteita tai jotka on kuvattu kirjallisuudessa, kuten • » * N-allyylioksikarbonyyli-L-valiini, ovat tunnettuja.

Edullinen suojattu gansikloviirilähtöaine keksinnön ;30 mukaisen edullisen yhdisteen valmistusta varten on N2-ase-« * · ·,,,; tyyli-bis-O-bentsyyligansikloviiri (N2-asetyyli-2-( 2-ami- :v no-1,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli )metoksi-l, 3-bis( bentsyy- ... lioksi )propaani ), joka on kuvattu US-patentissa 4 355 032.

Muita edullisia suojattuja gansikloviirilähtöaineita ovat ‘ ’ "* 35 N2-trityyli-9-[(3-hydroksi-2-propoksi-l-trityylioksi)metyy- 29 11?ι)8Γ li]guaniini [N2-trityyli-2-( 2-amino-l, 6-dihydro-6-oksopu-rin-9-yyli)metoksi-l-trityylioksipropan-3-oli] ja N2-mono-metoksitrityyli-9- [ (3-hydroksi-2-propoksi-l-monometoksi-trityylioksi)metyyli]guaniini, joiden valmistus on kuvattu 5 julkaisusssa J. Pharm. Sci. 76(2), 180 - 184 (1987), joka sisällytetään tähän viittauksella. 2-(2-amino-l,6-dihydro- 6-oksopurin-9-yyli)metoksi-l,3-propaanidiyyli-bis(L-vali-naatti), joka on lähtöaine osittaishydrolyysivaihetta varten, on kuvattu EP-hakemusjulkaisussa nro 375 329.

10 Ennen vaiheen III (esteröintivaiheen) toteuttamista L-valiinin aminoryhmä täytyy suojata, jotta vältettäisiin sen sekaantuminen esteröintiin ei-toivottavalla amidin muodostuksella. Seuraavat aminon suojaryhmät ovat käyttökelpoisia: halogeenikarbonaatit, kuten C6_12-aryyli( alempi 15 alkyyli)karbonaatit (kuten bentsyylioksikarbonyyliryhmä, joka on johdettu bentsyylikloorikarbonaatista), tai bife-nyylialkyylihalogeenikarbonaatit tai tertiäärialkyylihalo-geenikarbonaatit, kuten tertiääributyylihalogeenikarbonaa-tit, erityisesti tertiääributyylikloorikarbonaatti, tai 20 di(alempi alkyyli)dikarbonaatit, erityisesti di(t-butyy-li)dikarbonaatti, trifenyylimetyylihalogenidit, kuten tri-fenyylimetyylikloridi, ja trif luorietikkahappoanhydridi.

• ·

Suojausvaihe toteutetaan liuottamalla tai suspendoimalla j .*. L-valiini alkaliseen vesipitoiseen liuokseen, joka voi • * · * 25 käsittää alemman alkanolin. Reaktioseos jäähdytetään sa- • » ; maila, kun lisätään suojausreagenssi, kuten halogeenikar- • » · bonaatti, edullisesti vesipitoisessa tai alemman alkanolin * > · * * · ’ liuoksessa, samanaikaisesti pieninä erinä. Tämän lisäyksen aikana reaktioseos pidetään 0-30 °C:ssa, edullisesti 0 -! 30 5 °C:ssa, useita tunteja, kunnes se saavuttaa huoneenläm- t I | pötilan. Reaktioseos haihdutetaan kuiviin ja jäännöstä |‘= jakouutetaan orgaanisella faasilla ja vedellä. Vesipitoi- ,·*, nen kerros tehdään happamaksi ja uutetaan orgaanisella liuottimena suojattua aminohappoa varten. Orgaaninen faa-35 si pestään vedellä ja sen jälkeen suolaliuospesuliuoksilla I · » ; * 30 1 · 1 ja kuivataan magnesiumsulfaatilla ennen kuin haihdutetaan kuiviin, ja N-suojattu aminohappo eristetään ja puhdistetaan tavanomaisilla eristys- ja puhdistusmenetelmillä. Mono-L-valiinigansikloviirin valmistus 5 Vaihe I: Gansikloviirista, jossa on mahdollisesti suojattu 2-aminoryhmä ja molemmat primääriset hydroksyyli-funktionaalisuudet suojattuina, osittain poistetaan suojaus, esimerkiksi hydraamalla gansikloviiriksi, jossa 2-aminoryhmä jää suojattuun muotoon ja jossa on yksi suo-10 jattu primäärinen hydroksyylifunktionaalisuus. Sopivia aminon suojaryhmiä ovat alemmat alkanoyyliryhmät, joissa on 2-4 hiiliatomia, erityisesti asetyyli- tai propionyy-liryhmä. Muita sopivia aminon suojaryhmiä ovat trityyli-tai substituoidut trityyliryhmät, kuten monometoksitrityy-15 liryhmä ja 4,4'-dimetoksitrityyliryhmä.

Sopivat hydroksin suojaryhmät ovat joko eetterin muodostavia ryhmiä, jotka voidaan poistaa helposti kaikkien muiden reaktiovaiheiden mentyä loppuun. Näitä hydroksin eetterisuojaryhmiä ovat mm. bentsyyli- tai trityyli-20 ryhmä. Näiden ryhmien fenyylirengas voi olla substituoitu. Muita sopivia hydroksin suojaryhmiä ovat mm. allyylieette-ri, tetrahydropyranyyli, silyyli, trialkyylisilyylieette- • » rit, jotka voidaan poistaa vetyfluoridilla alan ammatti- : ,·, miehen hyvin tuntemalla tavalla.

• * * / 25 Hydraus toisen hydroksin suojaryhmän poistamiseksi ! ! toteutetaan edullisesti liuottamalla suojattu gansiklovii- * * *, * ri liuotinsysteemiin, joka vapauttaa vedyn katalyytin, ku- • » · '·’ * ten palladiumyhdisteen, erityisesti palladiumhydroksidin, läsnä ollessa siirtohydrauksella tai muilla tavanomaisilla * · » * 30 hydrausmenetelmillä. Muita sopivia hydrauskatalyyttejä ovat hydrauskatalyytit yleensä, kuten Pd, Pd hiilellä ja ;·, homogeeniset hydrauskatalyytit. Liuotinsysteemi käsittää *>.. alemman alkanolin, kuten metanolin tai etanolin, ja syklo- * » hekseenin. Yleensä reaktio toteutetaan lämpötiloissa, jot- > 35 ka ovat huoneenlämpötilasta liuotinsysteemin refluksointi- 3i 1 1208(, lämpötilaan, esimerkiksi refluksoituvassa etanolissa ja syklohekseenissä inertissä atmosfäärissä ja sulkemalla happi tai ilma pois, edullisesti typpiatmosfäärissä. Katalyytti otetaan talteen suodattamalla. Suodoksen tilavuutta 5 voidaan pienentää haihduttamalla ylimääräinen liuotin. Saatu raakatuotereaktioseos sisältää yleensä muuttumatonta lähtöainetta ja 2-aminosuojattua gansikloviiria, jossa yksi alifaattinen hydroksiryhmä on suojattu, päätuotteina. Näiden kahden tuotteen erotus suoritetaan tavallisesti 10 alalla tunnetuilla eristysmenetelmillä, usein kromatografisilla menetelmillä, edullisesti silikageelillä, minkä jälkeen eluoidaan sopivilla eluenteilla, kuten alemman alkanolin ja halogenoidun alemman alkaanin (edullisesti etanolin ja dikloorimetaanin) seoksilla, jolloin saadaan 15 2-aminosuojattu gansikloviiri, jonka yksi alifaattinen hydroksiryhmä on suojattu.

Vaihe II: Gansikloviirille, jossa on suojattu 2-aminoryhmä ja yksi alifaattinen hydroksiryhmä suojattuna, suoritetaan aminoryhmän suojauksen poisto. Jos tässä 20 vaiheessa aminon suojaryhmä on alempi alkanoyyliryhmä, käytetään emäksisiä olosuhteita (pH välillä 9-14) suoja-. , ryhmän poistamiseksi. Esimerkiksi N2-asetyylimono-0-bent- • I * syyligansikloviiria käsitellään alkalisella reagenssilla, i t | / / kuten ammoniumhydroksidilla, natrium- tai kaliumkarbonaa- * * » : 25 tiliä tai natrium- tai kaliumhydroksidilla, kunnes asetyy- • * I » I * ί liryhmän poisto on suoritettu. Yleensä tämä reaktio suori- ·,* * tetaan sopivan liuottimen, kuten alemman alkanolin, läsnä » » » V 1 ollessa. Lähtöaine liuotetaan edullisesti metanoliin ja lisätään stoikiometrinen ylimäärä ammoniumhydroksidia. 30 Reaktiolämpötila pidetään 0-50 °C:ssa, edullisesti huo-neenlämpötilassa. Kun reaktio on mennyt loppuun (mikä voidaan määrittää TLC:n avulla), voidaan lisätä toista liuotinta tuotteen erottamisen helpottamiseksi, josta tuot-teestä on poistettu suojaus, kuten etyylieetteriä, mikä ; j 35 aiheuttaa de-asyloidun tuotteen saostumisen, joka tuote * i * ·« * » f 32 112^8(.

voidaan suodattaa ja erottaa käyttäen tavanomaisia erotusmenetelmiä.

Vaihe III: Tässä vaiheessa kaavan III mukaisen aminosuojatun L-valiinin aktivoitu johdannainen esteröi-5 dään vaiheessa II saadun suojatun gansikloviirijohdannaisen kanssa. Sopivia aminon suojaryhmiä L-valiinille ovat N-bentsyylioksikarbonyyliryhmä, ftalyyliryhmä, tertiääri-butyylioksikarbonyyliryhmä ja N-(9-fluorenyylimetoksikar-bonyyli) tai "FMOC"-ryhmä.

10 Alusta lähtien pitäisi käyttää ainakin yhtä ekviva lenttia suojattua aminohappoa ja yhtä ekvivalenttia sopivaa kytkentäainetta tai dehydratointiainetta, esimerkiksi 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä tai tällaisten di-imi-dien suoloja, joissa on emäksisiä ryhmiä. Muita karbodi-15 imidejä, kuten N,N'-karbonyylidi-imidatsolia, voidaan myös käyttää. Muita käyttökelpoisia dehydratointiaineita ovat trifluorietikkahappoanhydridi, seka-anhydridit, happoklo-ridit, 1-bentsotriatsolyylioksi-tris (dimetyyliamino) fosfo-niumheksafluorifosfaatti, PYBOP, 1-hydroksibentsotriatso-20 li, l-hydroksi-4-atsabentsotriatsoli, l-hydroksi-7-atsa- bentsotriatsoli, N-etyyli-N'-(3-(dimetyyliamino )propyyli) -karbodi-imidivetykloridi, 3-hydroksi-3,4-dihydro-4-okso-; / 1,2,3-bentsotriatsiini, 0-(bentsotriatsol-l-yyli )-1,1,3,3- ’· ’ tetrametyyliuroniumheksafluorifosfaatti, 0-(7-atsabentso- : 25 triatsol-l-yyli )-l, 1,3,3-tetrametyyliuroniumheksafluori- i .· fosfaatti, 0-(7-atsabentsotriatsol-l-yyli)-1,1,3,3-tetra- ·, j metyyliuroniumtetrafluoriboraatti. O-(lH-bentsotriatsol- : ; : 1-yyli)-1,1,3,3-bis(tetrametyleeni)uroniumheksafluorifos- faatti tai 0-(7-atsabentsotriatsol-l-yyli)-1,1,3,3-bis-•V. 30 (tetrametyleeni)uroniumheksafluorifosfaatti. Näiden kyt- kentäaineiden kuvaus voidaan löytää julkaisusta J. Am. Chem. Soc. 115, 4397 - 4398 (1993). Tähän tarkoitukseen käyttökelpoisia ovat myös uretaanisuojatut aminohappo-N-,,· karboksianhydridit (UNCA:t), jotka on kuvattu julkaisussa 35 Fuller et ai., J. Am. Chem. Soc. 112, 7414 - 7416 (1990), t 11?:'·Ρί.

33 ' ** ' joka sisällytetään tähän viittauksella. Yhteenvetona mitä tahansa muuta reagenssia, jolla saadaan anhydridi tai muu suojatun aminohapon aktivoitu johdannainen miedoissa olosuhteissa, voidaan käyttää kytkentäaineena.

5 Aminosuojattu aminohappo liuotetaan inerttiin liuottimeen, kuten halogenoituun alempaan alkaaniin, edullisesti dikloorimetaaniin, inertissä atmosfäärissä, esimerkiksi typessä, ja lisätään kytkentäaine (edullisesti 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidi). Reaktioseosta sekoite-10 taan lämpötiloissa, jotka ovat välillä 0-50 °C, edullisesti noin huoneenlämpötilassa. Reaktioseos suodatetaan ja reaktiotuote (suojatun aminohapon anhydridi) eristetään. Saatu tuote liuotetaan kuivaan inerttiin liuottimeen, kuten kuivaan dimetyyliformamidiin (DMF) ja laitetaan typpi-15 atmosfääriin. Edellä mainittuun anhydridin liuokseen lisätään liuos, jonka muodostaa ekvivalentti määrä vaiheen II tuotetta inertissä liuottimessa. Reaktio suoritetaan välillä 0-50 °C, edullisesti suunnilleen huoneenlämpötilassa, 5-90 tunnin aikana. Reaktiotuote voidaan eristää 20 ja puhdistaa käyttäen tavanomaisia menetelmiä, kuten kro-matografointia. Tuote sisältää tavallisesti reagoimatonta . , N-suojattua aminohappoa, joka voidaan poistaa käsittele- ; mällä tuotteen veteen sekoittumatonta liuosta (orgaanista * faasia) vesipitoisella alkalilla, kuten natriumbikarbonaa- : 25 tiliä, natriumkarbonaatilla, suolaliuoksella ja niiden • seoksilla. Orgaanisesta faasista voidaan erottaa ja puh- • f distaa gansikloviiri-L-valiiniesteri, jossa on suojattu : alifaattinen hydroksiryhmä ja N-suojattu aminohappo, käyt täen tavanomaisia erotus- ja puhdistusmenetelmiä.

30 Vaihe IV (lopullinen suojauksen poisto, jolloin saadaan kaavan I mukainen tuote): Vaiheen III tuotteen kaksi suojaryhmää poistetaan suojauksenpoistoreaktioilla, edullisesti happamassa väliaineessa tai liuottimessa, edullisimmin hydraamalla. Suojauksen poisto happamissa 35 olosuhteissa on edullinen, koska tällä varmistetaan, että 34 11208(.

suojauksenpoistoreaktiossa vapautuva aminoryhmä protonoi-tuu eli että vähintään stoikiometrinen määrä läsnä olevaa happoa sitoo kaavan I mukaisen emäksen sellaisena kuin se muodostuu suojauksenpoistoreaktiossa. Kaavan I mukaisen 5 yhdisteen eristäminen happoadditiosuolana suojaa kaavan I mukaisen yhdisteen halutun stereokonfiguraation. Sen vuoksi jäljempänä esitetyissä esimerkeissä, joissa esitetään suojauksenpoistovaihe (a), esitetään myös samanaikainen suolanmuodostusvaihe (b).

10 Suojauksenpoistoreaktio toteutetaan liuottamalla esteröintivaiheen tuote inerttiin liuottimeen, edullisesti happamaan liuottimeen, käyttäen hydrauskatalyyttiä, kuten palladiumia hiilellä, platinaa, käyttäen korotettua vety-painetta, joka on 6,9 - 13 800 kPa (1-2 000 psi), edul-15 lisesti 138 - 1 380 kPa (20 - 200 psi). Reaktion menemistä loppuun voidaan tarkkailla käyttäen tavanomaista ohutker-roskromatografia (TLC) -analyysiä. Hydrausta jatketaan, kunnes konversio on täydellinen, tarvittaessa lisäten vielä hydrauskatalyyttiä. Katalyytti poistetaan ja pestään. 20 Suodatuksesta saadut suodokset ja pesuliuokset väkevöidään ja lyofilisoidaan gansikloviiri-L-valiiniesterin eristämi-. . seksi. Tuotteen puhdistus ja kiteisen esterin eristys to- teutetaan uudelleenkiteytyksellä tai muilla puhdistusmene- • * i *·’ ‘ telmillä, kuten nestekromatografiamenetelmillä.

: 25 Jos aminon suojaryhmänä on tarkoitus käyttää ter- • tiääributyylioksikarbonyyliryhmää, sen poisto suoritetaan • · : hapolla, kuten HCl:lla, ja isopropanolilla liuottimena tai trifluorietikkahapolla puhtaana.

Vaihtoehtoisesti, jos esteröintivaihe on toteutettu 30 trityyli tai (substituoitu trityyli) -suojatulla gansiklo-viirijohdannaisella, tällaiset suojaryhmät voidaan poistaa käsittelemällä vesipitoisella alkaanihapolla tai trifluo- : “ rietikka- tai vetykloridihapolla lämpötiloissa, jotka ovat I · » ‘välillä -20 - 100 °C, esimerkiksi vesipitoisella etikkaha-35 polla.

‘ » • » 35 1

Allyyliryhmät poistetaan isomerisoinnilla vinyyli-eettereiksi käyttäen rodium- tai palladiumkatalyyttejä, minkä jälkeen suoritetaan hapan vesipitoinen hydrolyysi.

Muut valmistusmenetelmät [Vaiheet (b), (d) ja (e)] 5 Alan ammattimies ymmärtää myös, että kaavan I mu kainen yhdiste voidaan valmistaa happoadditiosuolana tai vastaavana vapaana emäksenä. Jos yhdiste valmistetaan happoadditiosuolana, se voidaan muuttaa vapaaksi emäkseksi käsittelemällä sopivalla emäksellä, kuten ammoniumhydrok-10 sidiliuoksella, natriumhydroksidilla, kaliumhydroksidilla tai niiden kaltaisilla. On kuitenkin tärkeää huomata, että kaavan I mukainen vapaa emäs on vaikeampi karakterisoida kuin sen happoadditiosuolat. Kun vapaa emäs muutetaan hap-poadditiosuolaksi, yhdiste saatetaan reagoimaan sopivan 15 orgaanisen tai epäorgaanisen hapon kanssa (kuvattu aikaisemmin). Nämä reaktiot toteutetaan käsittelemällä vähintään stoikiometrisella määrällä sopivaa happoa (happoaddi-tiosuolan valmistuksen tapauksessa) tai emästä (kaavan I mukaisen vapaan yhdisteen vapauttamisen tapauksessa). Tä-20 män keksinnön mukaisessa suolanmuodostusvaiheessa vapaa emäs tavallisesti liuotetaan polaariseen liuottimeen, ku- . , ten veteen tai alempaan alkanoliin (edullisesti isopropa- • · · ; · noliin) ja niiden seoksiin, ja happo lisätään tarvittavana '·' * määränä vedessä tai alemmassa alkanolissa. Reaktiolämpöti- • · i 25 la pidetään tavallisesti noin 0-50 °C:ssa, edullisesti • *,· noin huoneenlämpötilassa. Vastaava suola saostuu spontaa- ·.· ? nisti tai se voidaan saada esiin liuoksesta lisäämällä :T; vähemmän polaarista liuotinta, poistamalla liuotinta haih duttamalla tai tyhjössä tai jäähdyttämällä liuosta.

30 Kondensaatiovaiheen (d) reaktio-olosuhteet on ku- ,··. vattu EP-hakemusjulkaisussa nro 187 297. Tämä kondensaa- ·” tiovaihe on eräs edullisista menetelmistä monoesterin dia- • '* stereomeerien valmistamiseksi. Tässä kondensaatiovaiheessa guaniini, jossa on edullisesti suojattu 2-aminoryhmä, saa- ;..j 35 tetaan reagoimaan glyseroli johdannaisen kanssa. Glyseroli- » t 1 1 Ο ί ; Q Γ 36 I li-‘.'O·.- johdannainen, kuten l-halogeeni-3-bentsyylioksi-2-asyyli-oksimetoksiglyseroli, saatetaan reagoimaan guaniinin tai substituoidun guaniinijohdannaisen kanssa aproottisessa hiilivetyliuottimessa (kuten bentseenissä tai tolueenissa 5 tai ksyleeneissä) tai DMF:ssa heksa(alempi alkyyli)silat-saanin, esimerkiksi heksametyylisilatsaanin, heksaetyyli-silatsaanin tai niiden kaltaisten, kanssa ja käyttäen katalyyttiä lämpötiloissa, jotka ovat 30 °C:sta refluksoin-tilämpötilaan. Katalyytti on Lewis-happosuola, kuten tri-10 alkyylisilyylisuola, kuten sulfaatti tai trifluorialkyyli-sulfonaatti, kloorisilaani tai ammoniumsulfaatti ja pyri-diini. Kondensaatiovaiheen (d) reaktio-olosuhteiden yksityiskohtaisempaa kuvausta varten katso selitys EP-hakemus-julkaisusta nro 187 297, joka sisällytetään tähän viit-15 tauksella. Yleensä Y1 ja Y2 täytyy valita niin, että kaavan I mukaisen mono-L-valiiniesterin obtentio on mahdollinen. Y1 voi olla aminosuojattu L-valinyyliryhmä tai ryhmä, joka on muutettavissa L-valinyyliryhmäksi.

Tämän keksinnön mukainen yhdiste voidaan myös val-20 mistaa 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metoksi- 1,3-propaanidiyyli-bis(L-valinaatista), joka on kuvattu . . EP-hakemusjulkaisussa nro 375 329. Konversio 2-(2-amino- ; / 1,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli )metoksi-3-hydroksi-l-pro- '·' ‘ panyyli-L-valinaatiksi toteutetaan L-valiiniesteriryhmän * » t M : 25 osittaisella hydrolyysillä [vaihe (e)] kontrolloiduissa ; ,· olosuhteissa, joilla saadaan vain yhden aminohappoasyyli- ·,; j ryhmän edullinen lohkeaminen. 2-( 2-amino-l, 6-dihydro-6-ok- so-9H-purin-9-yyli )metoksi-l, 3-propaanidiyyli-bis-L-vali-naatin suola, edullisesti bisasetaattisuolana, liuotetaan 30 deionisoituun veteen ja osittain neutraloidaan heikolla ,··1. emäksellä, kuten laimealla ammoniumhydroksidiliuoksella.

Seosta pidetään huoneenlämpötilassa yhdestä vuorokaudesta : " useisiin vuorokausiin, edullisesti 48 - 72 tuntia.

',,,· Vaihtoehtoisesti voidaan myös käyttää entsymaattis- 35 ta hydrolyysiä esteraasin, kuten sian esteraasin, tai pep- t Λ Λ nc\ Q ( 37 I 1 1; u ' ' tidaasin, kuten karboksipeptidaasin, kanssa osittaisen hydrolyysin toteuttamiseksi.

Monoesteri voidaan erottaa bisesteristä preparatii-visella kromatografiällä heikoissa happamissa olosuhteissa 5 (pH 3 - 5, edullisesti pH:ssa 4). Kromatografiseen erotukseen käytetty liuotin poistetaan ja 2-(2-amino-l,6-dihyd-ro-6-okso-9H-purin-9-yyli )metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaattisuola eristetään kahden diastereomeerin seoksena.

10 Stereoisomeerien eristäminen

Kaavasta (I) ilmenee, että keksinnön mukaisella yhdisteellä on yksi asymmetrinen hiiliatomi (kiraalikeskus) propanyyliketjussa L-valiinin asymmetrisen hiiliatomin lisäksi. Sen vuoksi on kaksi diastereomeeristä muotoa, (R)-15 ja (S)-muoto, Cahnin et ai. sääntöjen avulla määritettynä.

Voidaan käyttää useita menetelmiä, jotka ovat sopivia diastereomeerien erotukseen, mutta edullisissa menetelmissä käytetään tekniikoita, joissa käytetään hyväksi kahden diastereomeerin erilaisia fysikaalisia ominaisuuk-20 siä. Yleensä diastereomeerit erotetaan kromatografoinnil-la, mutta edullisia ovat erotus/resoluutiotekniikat, jotka , , perustuvat liukoisuuseroihin, kuten jakokiteytys.

*; * Erityisiä erotusmenetelmiä, jotka soveltuvat kaavan * < · V * I mukaisten diastereomeerien valmistukseen, on kuvattu i 25 julkaisussa Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, • V Enantiomers, Racemates and Resolutions, John Wiley & Sons, j · j Inc. (1981), joka sisällytetään tähän viittauksella.

Vaihtoehtoisesti keksinnön mukainen yhdiste voidaan valmistaa käyttäen optisesti aktiivisia reagensseja. Kun , 30 valmistetaan puhtaita mono-L-valiinigansikloviirin diaste- * · ,reomeerejä, kondensaatiovaihe (d) on edullinen synteesime-·' netelmä. Jos on tarkoitus käyttää optisesti aktiivisia ; '* reagensseja, on kuitenkin tärkeää välttää pH-aluetta yli 6, koska korkeammalla pH-alueella tapahtuu kaavan I mukai- ,35 sen vapaan yhdisteen interkonversiota. Esimerkiksi pH-ar- 38 11?ϋ8ί volla 7 ja 40 °C:ssa kaavan I mukaisten diastereomeeristen seosten puoliintumisaika on vähemmän kuin yksi tunti.

Stereokonfiguraatio kaavan I mukaisen yhdisteen toisessa kiraalikeskuksessa voidaan määrätä sirkulaaridi-5 kroismin avulla, edullisesti raskasatomijohdannaisen yksi-kideröntgenanalyysillä, tai korrelaatiolla aineen kanssa, joka on valmistettu kokonaissynteesillä tunnetun konfiguraation omaavasta yksittäisestä glyserolienantiomeeristä.

Kiteisen 2- (2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yy-10 li)metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaatin valmistus

Keksinnön mukainen yhdiste voidaan valmistaa ja on valmistettu kiteisessä muodossa. Tämä on ratkaiseva etu tekniikan tasolla esitettyihin yhdisteisiin nähden, jotka on kuvattu ei-kiteisinä aineina. Etu on siinä, että farma-15 seuttiset formulaatiot voidaan valmistaa helpommin kitei sen aineen kanssa. Kiteinen aine voidaan prosessoida tehokkaasti ja se on helpompi toistuvasti karakterisoida kuin ei-kiteinen aine ja keksinnön mukaisten kiteisten aineiden laatu voidaan todeta helpommin kuin ei-kiteisten 20 aineiden.

Kiteisen aineen valmistamiseksi on edullista käyttää 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaatin suolaa. Edullisia ki-, · teisiä suoloja ovat asetaatti- ja vetykloridisuola. Suolan ·,: < 25 kiteyttäminen on edullista aloittaa liuottamalla vetyklo- • ridi- tai asetaattisuola veteen ja lisäämällä veteen se- i koittuvaa orgaanista liuotinta, kuten metanolia, etano- lia, isopropanolia, tetrahydrofuraania tai asetonitriiliä. Vaihtoehtoisesti vetykloridisuola voidaan kiteyttää vedet-:v. 30 tömästä alemman alkanolin liuoksesta, kuten metanolista, • i >·.1> etanolista, lisäämällä muita orgaanisia liuottimia, kuten '** etyyliasetaattia, isopropanolia, tetrahydrofuraania tai ; ’·· tolueenia.

• : Seuraavat valmistukset ja esimerkit on esitetty, 35 jotka alan ammattimies pystyy paremmin ymmärtämään ja to- 1 1 Γ; ί<φ 39 * ; teuttamaan käytännössä tätä keksintöä. Niitä ei tulisi pitää keksinnön piiriä rajoittavina, vaan ainoastaan sitä valaisevina ja kuvaavina.

Esimerkki 1 5 (S) -2- (2-amino-l, 6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli) me- toksi-3-bentsyylioksipropan-l-olin valmistus A. (R)-(l-kloori-2-asetoksimetoksi-3-bentsyyliok-si)propaani HCl-kaasua (kuivattu viemällä väkevän H2S04:n läpi) 10 kuplitettiin seokseen, jota sekoitettiin ja jonka muodostivat (S)-( + )-bentsyylioksimetyylioksiraani (500 mg, 3,06 mmol) ja paraformaldehydi (201 mg, 6,71 mmol) dikloorime-taanissa (8 ml) 0 °C:ssa, kunnes kaikki kiinteä aine oli liuennut (n. 45 min). Saatua liuosta pidettiin 0 °C:ssa 16 15 tuntia. Kuivattiin magnesiumsulfaatilla, minkä jälkeen liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin (R)-(l-kloori-2-kloorimetoksi-3-bentsyylioksi)propaani. Tämä kloorimetyy-lieetterivälituote liuotettiin asetoniin (3 ml) ja lisättiin tipoittain kaliumasetaatin (2,1 g, 21,4 mmol) seok-20 seen asetonissa (7 ml). Seosta sekoitettiin ympäristön lämpötilassa 16 tuntia. Kiinteä aine suodatettiin ja suo-, , dos väkevöitiin. Jäännös otettiin talteen 20 ml:aan to- lueenia ja liuos pestiin kylläisellä natriumbikarbonaatti-'·’ * liuoksella (10 ml) ja vedellä (2 x 20 ml) . Orgaaninen ker- : 25 ros kuivattiin natriumsulfaatilla. Suodattamisen jälkeen j suodos väkevöitiin ja jäännös puhdistettiin flash-kromato- : grafialla silikageelillä (heksaanit/etyyliasetaatti = 7/1), jolloin saatiin (R) - (l-kloori-2-asetoksimetoksi-3-bentsyylioksi)propaani (810 mg, 2,97 mmol) värittömänä 30 öljynä 97 %:n saannolla (isomeerinen suhde oli 12:1).

B. 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metok-si-l-kloori-3-bentsyylioksipropaani ; '·· Liuos, jonka muodostui persilyloidusta guaniinista (1,09 g, 2,95 mmol) DMF:ssa (3,2 ml), lisättiin 810 mg:aan ,..: 35 (R) - (l-kloori-2-asetoksimetoksi-3-bentsyylioksi) propaania.

40 1 12081

Liuosta sekoitettiin 130 °C:ssa tunti, ennen kuin lisättiin trimetyylisilyylitrifluorimetaanisulfonaattia. Sekoittamista jatkettiin samassa lämpötilassa 4 tuntia. Seos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja jakouutettiin vedellä 5 ja etyyliasetaatilla. Vesipitoista kerrosta uutettiin pe rusteellisesti etyyliasetaatilla. Yhdistetty orgaaninen kerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin. Jäännös puhdistettiin kromatografoimalla si-likageelillä, jolloin saatiin (R)—2—(2-amino-l,6-dihydro-10 6-oksopurin-9-yyli )metoksi-l-kloori-3-bentsyylioksipropaa- ni sekä sen N-7-isomeeri. N-9-isomeerin suhde N-7-isomee-riin oli noin 2,3:1.

C. (R)-2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)-metoksi-l-asetoksi-3-bentsyylioksipropaani 15 Seosta, jonka muodostivat tuote edellisestä vai heesta, kaliumasetaatti (suuri ylimäärä) ja DMF, kuumennettiin palautusjäähdyttäen 5 tuntia. Saatu ruskea seos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja suodatettiin celite-tulpan läpi. Suodatuskerros huuhdottiin metanolilla. Suo-20 dos haihdutettiin ja jäljelle jäänyt DMF poistettiin tyhjössä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla silikageelillä (CH2Cl2-metanoli: 10:1), jolloin saatiin

* I I

*· '·’ (R)-2-( 2-amino-l, 6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli )metoksi-l- • > « V · asetoksi-3-bentsyylioksipropaani vaaleankeltaisena kiin- i 25 teänä aineena.

♦ · « • *: D. (S)-2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)- I metoksi-l-bentsyylioksipropan-3-oli t * i · f;’. Seosta, jonka muodosti (R)-2-(2-amino-l,6-dihydro- 6-oksopurin~9-yyli)metoksi-l-asetoksi-3-bentsyylioksipro-30 pääni 30-%:isessa ammoniakissa/metanolissa (1:2), sekoi- * » tettiin ympäristön lämpötilassa 18 tuntia. Liuotin haihdu- *!’ tettiin ja jäännöstä trituroitiin pienen metanolimäärän ; ’*· kanssa. Vaaleankeltainen kiinteä aine otettiin talteen, ί jolloin saatiin (S)-2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9- 35 yyli )metoksi-l-bentsyylioksipropan-3-oli. Emäliuos väke- » i

5 I

; i * > » 11?η8ί vöitiin ja jäännös uudelleenkiteytettiin kuumasta metano-lista, jolloin saatiin toinen erä tuotetta.

Esimerkki 2 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metoksi-5 l-bentsyylioksipropan-3-olin valmistus A. N2-asetyyli-2-(2-amino-l, 6-dihydro-6-oksopurin- 9- yyli)metoksi-l,3-bis(bentsyylioksi)propaani, 54,2 g (114 mmol), liuotettiin refluksoituvaan etanoliin (815 ml) ja lisättiin syklohekseeniä (610 ml) typpiatmosfäärissä.

10 Reaktioseokseen lisättiin liete, jonka muodosti palla-diumhydroksidi (16 g) etanolissa (50 ml), ja seosta ref-luksoitiin käyttäen typpeä suojakaasuna 1,5 tuntia. Kuuma seos suodatettiin celiten läpi ja suodos väkevöitiin kiertohaihduttimella. Saatu raakatuotereaktioseos kroma-15 tografoitiin silikageelillä. Eluoitiin 8-%:isella metano- lilla / 92-%:isella dikloorimetaanilla ja sen jälkeen 10- %:isella metanolilla / 90-%:isella dikloorimetaanilla, jolloin saatiin N2-asetyyli-2-(2-amino-l,6-dihydro-6-okso-purin-9-yyli)metoksi-l,3-bis(bentsyylioksi)propaani (läh- 20 töaine) (18,6 g, 16 %) ja N2-asetyyli-2-(2-smino-l,6-di-hydro-6-oksopurin-9-yy1i)metoks i-1-bentsyylioksipropan-3-oli (17,6 g, 40 %).

• · B. N2-asetyyli-2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin- V : 9-yyli)metoksi-l-bentsyylioksipropan-3-oli, 21,9 g (56,5 •J f 25 mmol), liuotettiin metanoliin (200 ml) ja lisättiin ammo- i 1 ; niumhydroksidia (101 ml). Seosta sekoitettiin yön yli huo- •neenlämpötilassa. Valkoiseen lietteeseen lisättiin etyyli- * « f » eetteriä (400 ml) ja seos suodatettiin. Sakka pestiin peräkkäin etyylieetterillä (100 ml), vedellä (100 ml) ja .. >t 30 etyylieetterillä (100 ml) ja kuivattiin suurtyhjössä yön ajan, jolloin saatiin 15,9 g (46,13 mmol, 82 %) 2-(2-ami-*;' * no-1,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli )metoksi-l-bentsyylioksi- > ’« propan-3-olia. Haihdutettiin suodos ja saadun sakan sus- ; : pensio etyylieetterissä (200 ml), minkä jälkeen suodatet- •

.f·:, I

»

! I

42 1 1?Π8ί tiin ja kuivattiin suurtyhjössä, jolloin saatiin vielä 2,3 g (6,7 mmol, 12 %) tuotetta.

Analyysi, laskettu yhdisteelle C16H19N504 (345,36): C 55,65; H 5,55; N 20,28. Todettu: C 55,25; H 5,60; N 5 20,12.

Esimerkki 3 2-(2-amino-1,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metoksi- 3-hydroksi-1-propanyyli-L-valinaatin valmistus A. 2-((2-amino-l, 6-dihydro-l,6-dihydro-6-oksopurin-10 9-yyli)metoksi) -3-bentsyylioksi-l-propanyyli-N- (bentsyyli- oksikarbonyyli)-L-valinaatti N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valiini, 43,66 g (0,174 mol, 3 ekvivalenttia), suspendoitiin dikloorimetaaniin, 72 ml, ja lisättiin 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä, 15 14,34 g (69,5 mmol, 1,2 ekvivalenttia). Seosta sekoitet tiin käyttäen typpeä suojakaasuna 48 tuntia. Seos suodatettiin lasisintterin läpi ja valkoinen kiinteä jäännös pestiin dikloorimetaanilla, 75 ml. Yhdistettyä suodosta sekoitettiin käyttäen typpeä suojakaasuna ja lisättiin 20 suspensio, jonka muodosti 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-okso- purin-9-yyli)metoksi-3-bentsyylioksipropan-l-oli, 20 g .· : (57,91 mmol, 1 ekvivalentti), dimetyyliformamidissa, 90 t· •> ml, ja sen jälkeen 4-dimetyyliaminopyridiiniä, 1,77 g , (14,4 mmol, 0,25 ekvivalenttia). Seosta sekoitettiin käyt- 25 täen typpeä suojakaasuna 18 tuntia, kaadettiin veteen, • · \ \ 1 200 ml, ja uutettiin etyyliasetaatin (350 ml) ja toluee- ; ‘ nin (350 ml) seoksella. Vesipitoinen kerros erotettiin ja * f t V · orgaaninen kerros pestiin puolikylläisellä natriumbikarbo naatilla, 600 ml, ja sen jälkeen vedellä (200 ml). Orgaa- : ‘ 30 ninen kerros kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja väkevöi- tiin alipaineessa. Jäännös saostettiin etyyliasetaatin ja sykloheksaanin seoksesta, jolloin saatiin 2-((2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli )metoksi )-3-bentsyylioksi-l-pro- t *;*' panyyli-N-(bentsyylioksikarbonyyli )-L-valinaatti amorfise- 35 na kiinteänä aineena.

43 1 1/Π8ί Β. 2- (2-amino-l, 6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metok-si-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaattivetykloridi 2-( 2-amino-l, 6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli )metoksi )- 3-bentsyylioksi-l-propanyyli-N-(bentsyylioksikarbonyyli)-5 L-valinaatti, 224,8 g (0,39 mol), liuotettiin metanoliin, 1,2 1, ja lisättiin tipoittain väkevää vetykloridihappoa, 32,4 ml (0,39 mol). Seos pantiin typpiatmosfääriin ja lisättiin palladiumia hiilellä, 67,4 g. Seosta hydrattiin Parrin pommilaitteessa vetypaineessa [276 - 689 kPa (40 -10 100 psi), keskimäärin 552 kPa:n (80 psi:n) paine] 48 tun tia. Lisättiin vielä 5 g palladiumia hiilellä ja seosta hydrattiin 689 kPa:n (100 psi:n) paineessa 24 tuntia. Seos suodatettiin celite-kerroksen läpi ja jäännös pestiin me-tanolilla, 1 1. Suodos haihdutettiin kuiviin alipainees-15 sa. Jäännös liuotettiin veteen, 150 ml, ja kuumennettiin 60 °C:seen. Lisättiin hitaasti tipoittain isopropanolia (830 ml) sekoittaen ja samalla pitäen lämpötila välillä 60 - 70 °C. Liuos jäähdytettiin hitaasti ympäristön lämpötilaan 16 tunnin aikana. Saatu kiteinen liuos kuumennet-20 tiin 30 °C:seen ja lisättiin vielä isopropanolia, 220 ml.

Seoksen annettiin hitaasti jäähtyä -11 °C:n lopulliseen : lämpötilaan 4 tunnin aikana. Kiteet eristettiin suodatta- maila ja pestiin 200 ml:11a kylmää 2-%:ista vettä/isopro- * · « • « * .* , panolia, jolloin saatiin 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopu- • * · : 25 rin-9-yyli)metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaattive- » ♦ · • ’ tykloridi (120,5 g, saanto 79 %). Yhdisteelle tapahtuu : faasimuutos 142 °C:ssa ja se hajoaa 175 °C:ssa.

* * · : Esimerkki 4

Kiteisen 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yy-; 30 li)metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaattisuolan val- mistus 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metoksi-' “ 3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaattivetykloridi, 150 g, liuotettiin veteen, 150 ml, ja kuumennettiin 50 - 60 °C:n ;*· 35 lämpötilaan. Lisättiin hitaasti tipoittain isopropanolia 44 112U8!' (830 ml) sekoittaen ja samalla nostaen lämpötilaa hiukan 60 - 70 °C:seen. Liuos jäähdytettiin hitaasti 25 °C:seen 20 tunnin aikana. Saatu kiteinen liuos kuumennettiin 30 °C:seen ja lisättiin vielä isopropanolia, 220 ml. Seok-5 sen annettiin hitaasti jäähtyä -11 °C:n lopulliseen lämpötilaan 6 tunnin aikana. Kiteet eristettiin suodattamalla ja pestiin 200 ml:11a kylmää 2-%:ista vettä/isopropanolia, jolloin saatiin 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yy-li)metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaattivetyklori-10 dikiteitä (135 g, saanto 90 %). Yhdisteelle tapahtuu faasimuutos 142 °C:ssa ja se hajoaa yli 175 °C:ssa.

Samalla tavalla voidaan valmistaa 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metoksi-3-hydroksi-1-propanyy- li-L-valinaattiasetaatti kiteisessä muodossa.

15 Esimerkki 5 (S) -2- (2-amino-l, 6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metoksi- 3-hydroksi-1-propanyyli-L-vaIinaattivetykloridin valmistus A. (S)-2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)-20 metoksi) -3-bentsyylioksi-l-propanyyli-N- (bentsyylioksikar- bonyyli)-L-valinaatti : N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valiini, 437 mg (1,74 ,·;·§ mmol, 3 ekvivalenttia), suspendoidaan dikloorimetaaniin, .' . 1 ml, ja lisätään 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä, 143 25 mg (0,7 mmol, 1,2 ekvivalenttia). Seosta sekoitetaan käyt- • · · • ·* täen typpeä suojakaasuna 48 tuntia. Seos suodatetaan lasi- ’·' : sintterin läpi ja valkoinen kiinteä jäännös pestään di- V* kloorimetaanilla, 1 ml. Yhdistettyä suodosta sekoitetaan käyttäen typpeä suojakaasuna ja lisätään suspensio, jonka 30 muodostaa (R)-2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)- : metoksi-3-bentsyylioksipropan-l-oli, 200 mg (0,58 mmol, 1 ekvivalentti), dimetyyliformamidissa, 1,5 ml, ja sen jälkeen 4-dimetyyliaminopyridiiniä, 18 mg (14,4 mmol, 0,25 ekvivalenttia). Seosta sekoitetaan käyttäen typpeä suoja-! 35 kaasuna 18 tuntia, se kaadetaan veteen, 12 ml, ja uutetaan 45 112 U 81.

etyyliasetaatin (3,5 ml) ja tolueenin (3,5 ml) seoksella. Vesipitoinen kerros erotetaan ja orgaaninen kerros pestään puolikylläisellä natriumbikarbonaatilla, 6 ml, ja sen jälkeen vedellä (2 ml). Orgaaninen kerros kuivataan magne-5 siumsulfaatilla ja väkevöidään alipaineessa. Jäännös seostetaan etyyliasetaatin ja sykloheksaanin seoksesta, jolloin saadaan (S)-2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yy-li )metoksi )-3-bentsyylioksi-l-propanyyli-N-(bentsyylioksi-karbonyyli)-L-valinaatti kiinteänä aineena.

10 B. (S)-2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)- metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaattivetykloridi (S)-2-( 2-amino-l, 6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli )me-toksi )-3-bentsyylioksi-l-propanyyli-N- (bentsyylioksikarbo-nyyli)-L-valinaatti, 225 mg (3,9 mol), liuotetaan metano-15 liin, 12 ml, ja lisätään väkevää vetykloridihappoa, 0,3 ml (3,9 mmol). Seos pannaan typpiatmosfääriin ja lisätään palladiumia hiilellä, 674 mg. Seosta hydrataan Parrin pom-milaitteessa vetypaineessa [276 - 689 kPa (40 - 100 psi), keskimäärin 552 kPa:n (80 psi:n) paine] 48 tuntia. Lisä-20 tään vielä 50 mg palladiumia hiilellä ja seosta hydrataan 689 kPa:n (100 psi:n) paineessa 24 tuntia. Seos suodate-.·. : taan celite-kerroksen läpi ja jäännös pestään metanolilla, 10 ml. Suodos haihdutetaan kuiviin alipaineessa. Jäännös .1 . liuotetaan veteen, 1,5 ml, ja kuumennetaan 60 °C:seen.

• · · • · · 25 Lisätään hitaasti isopropanolia (8 ml) sekoittaen ja sa- 1’ maila pitäen lämpötila välillä 60 - 70 °C. Liuos jäähdyte- • 1 · : tään hitaasti ympäristön lämpötilaan 16 tunnin aikana.

V ’ Saatu liuos kuumennetaan 30 °C:seen ja lisätään vielä isopropanolia, 2 ml. Seoksen annetaan hitaasti jäähtyä : · : 30 -11 °C:n lopulliseen lämpötilaan 4 tunnin aikana. Kiteet eristetään suodattamalla ja pestään 2 ml:11a kylmää 2-pro- » » » senttistä vettä/isopropanolia, jolloin saadaan (S)-2-(2-’,,, amino-1,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli )metoksi-3-hydroksi-l- ; · ‘ propanyyli-L-valinaattivetykloridi.

46 11288(.

Esimerkki 6 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metoksi- 3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaattiasetaatin valmistus 2- (2-amino-l, 6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli) metoksi-1,3-pro-5 paanidiyyli-bis(L-valinaatti)bis-asetaatista 2-((2-amino-l,6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli)me-toksi)-1,3-propaanidiyyli-bis-L-valinaatti-bis-etikkahap-posuola, 100 mg (lyofilisoitu näyte, joka sisälsi 0,6 ekvivalenttia ylimääräistä etikkahappoa, 0,164 mmol [= yh-10 teensä 0,426 mmol etikkahappoa]), liuotettiin deionisoi-tuun veteen, 0,4 ml, ja osittain neutraloitiin lisäämällä 24 ml 0,015 M ammoniumhydroksidiliuosta (= 0,36 mmol). Seos jätettiin huoneenlämpötilaan 67 tunniksi. Näyte injektoitiin kahtena yhtä suurena määränä preparatiiviseen 15 käänteisfaasi-HPLC-kolonniin (YMC-Pack, ODS-ÄM DM-33-5, 2 x 250 mm; YMC Inc.). Erottuminen aikaansaatiin liuotin-systeemillä, jonka muodostivat 10 % metanolia / 90 % 0,1 M ammoniumasetaattia, joka oli puskuroitu pH-arvoon 4 etik-kahapolla, virtausnopeus: 9,5 ml/min ja detektorin asetus 20 256 nm:ksi. Saatiin kaksi piikkiä, jotka edustivat kahta monoesterituotteen diastereomeeriä. Liuotin poistettiin .·. ; suurtyhjössä noin 2 mlrksi ja jäännös lyofilisoitiin kaksi i..‘ kertaa vedestä, joka sisälsi etikkahappoa (0,1 %), pusku- , rin poistamiseksi. Erotettiin 45 mg (0,112 mmol = 68 %) » » t ’ 25 2- ((2-amino-l, 6-dihydro-6-okso-9H-purin-9-yyli)metoksi) -3- « ♦ · ' hydroksi-l-propanyyli-L-valinaattietikkahapposuolaa kahden : diastereomeerin seoksena ja seuraavat NMR-spektrin karak- : teristiset piikit: ^-NMR (300 MHz) DMSO-d6 liuos: fi 7,78 (1H, s, H C-8), 6,48 ja 6,45 (2 br s, 2H, NH2), 5,44 (mAB, 30 J = 11 Hz) ja 5,43 (s, yhteensä 2H, CH2), 1,91 (s, 3H, f”; CH3COO*)/ 0,83 + 0,82 (2d, J = 7 Hz, 3H, CH3), 0,75 + 0,76 ,]·' (2d, J = 7 Hz, 3H, CH3) .

I » 47 ^ '"I ^ ; ' ρ ί

Esimerkki 7 (R, S) -2- (2-amino-l, 6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)me-toksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaatin erotus

Liuos, jonka muodosti (R,S)-2-(2-amino-l,6-dihydro-5 6-oksopurin-9-yyli )metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-vali-naatti (1,66 g) 90 %:ssa 0,1 M ammoniumasetaattia, joka oli tehty happamaksi pH-arvoon 4 etikkahapolla, 10 %:ssa metanolia (9,60 ml), pantiin YMC-Pack ODS-AM HPLC -kolonniin (cat. no. DM-33-5; koko 250 x 20 mm I.D.; partikkeli 10 S-5 mm, 120 A) 48 injektiona, joissa oli 200 μΐ, ja eluoi- tiin nopeudella 9,5 ml/min käyttäen liikkuvaa faasia, jonka muodosti 90 % 0,1 M ammoniumasetaattia, joka oli tehty happamaksi pH-arvoon 4 etikkahapolla, 10 % metanolia. Piikit todettiin käyttäen laitetta Knauer Variable Wavelength 15 Monitor asetuksella 256 nm ja fraktiot otettiin talteen manuaalisesti. Saatiin kolme fraktioryhmää, piikki 1 (re-tentioaika 24,4 min), limittäinen alue piikkien välillä ja piikki 2 (retentioaika 27,8 min). Kunkin ryhmän fraktiot yhdistettiin, haihdutettiin alipaineessa metanolin poista-20 miseksi, sitten lyofilisoitiin jäljelle jääneiden haihtuvien komponenttien poistamiseksi. Jäännös liuotettiin ve-: teen, tehtiin happamaksi pH-arvoon 4 etikkahapolla ja lyo- filisoitiin jälleen, jolloin saatiin piikki 1 (1,57 g) ja , piikki 2 (0,91 g). Tuotteiden HPLC-analyysi, jossa käytet- *;· · 25 tiin YMC-Pack ODS-AM -kolonnia (cat. no. RM-33-5; koko : ·* 250 x 4,6 mm I.D.; partikkeli S-5 mm, 120 A) ja eluoitiin * i ί nopeudella 0,5 ml/min käyttäen liikkuvaa faasia, jonka : : : muodosti 90 % 0,1 M ammoniumasetaattia, joka oli tehty happamaksi pH-arvoon 4 etikkahapolla, 10 % metanolia, • : 30 osoitti, että piikki 1 (retentioaika 24,4 min preparatii- visessa kolonnissa) sisälsi seoksen, jossa oli 70,8 % piikkiä 1 (retentioaika 21,1 min), 26,4 % piikkiä 2 (re- *' tentioaika 24,6 min) ja 2,8 % täysin hydrolysoitunutta tuotetta (retentioaika 12,4 min); ja piikki 2 (retentio- ; 35 aika 27,8 min preparatiivisessa kolonnissa) sisälsi seok- 1 » Λ 1 O I Q < 48 I ; · sen, jossa oli 68,5 % piikkiä 2 (retentioaika 22,0 min), 27,5 % piikkiä 1 (retentioaika 20,2 min) ja 4 % täysin hydrolysoitunutta tuotetta (retentioaika 11,6 min). Piikki 2 (0,91 g) ja piikki 1 (1,57 g) liuotettiin kumpikin 5 90-%:iseen 0,1 M ammoniumasetaattiin, joka oli tehty happamaksi pH-arvoon 4 etikkahapolla, 10-%:iseen metanoliin (3,60 ml), ja puhdistettiin jälleen käyttäen edellä esitettyä systeemiä 18:na 200 ml:n injektiona. Kaksi fraktio-ryhmää, jotka vastasivat piikkejä 1 ja 2, otettiin tallo teen, yhdistettiin, osittain haihdutettiin alipaineessa metanolin poistamiseksi ja jäljelle jäänyt osa lyofilisoi-tiin jäljelle jääneiden haihtuvien komponenttien poistamiseksi. Kunkin fraktioryhmän jäännös liuotettiin veteen, tehtiin varovasti happamaksi pH-arvoon 4 etikkahapolla ja 15 lyofilisoitiin vielä kerran. Fraktioista, jotka vastasivat piikkiä 1, saatiin valkoinen höytäleinen kiinteä aine (0,70 g), joka osoittautui hygroskooppiseksi ilma-altistuksessa; HPLC-analyysi (suoritettiin kuten edellä on esitetty) osoitti tämän olevan seos, joka sisälsi 94,9 % 20 piikkiä 1 (retentioaika 21,1 min), 4,6 % piikkiä 2 (retentioaika 26,7 min) ja 0,5 % täysin hydrolysoitunutta tuo- t. . tetta (retentioaika 11,8 min); ^-NMR-analyysi (d6DMS0, * * * !,,* δ-arvot ilmoitettu suhteessa sisäisenä standardina olevaan ,· tetrametyylisilaaniin) osoitti karakteristiset piikit δ · 25 5,43 (mAB, 2H, JAB = 11,1 Hz, dA 5,44, dB 5,43), 3,02 (d, 1H, i V J = 5,2 Hz), 0,82 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,75 (d, 3H, J = · 6,8 Hz). Fraktioista, jotka vastasivat piikkiä 2, saatiin • * » v * valkoinen höytäleinen kiinteä aine (0,81 g), joka osoit tautui hygroskooppiseksi ilma-altistuksessa; HPLC-analyy-30 si (suoritettiin kuten edellä on esitetty) osoitti tämän olevan seos, joka sisälsi 91,0 % piikkiä 2 (retentioaika ; l t 29,8 min), 8,4 % piikkiä 1 (retentioaika 28,4 min) ja 0,6 % täysin hydrolysoitunutta tuotetta (retentioaika 14,4 min); ^-NMR-analyysi (d6DMS0, δ-arvot ilmoitettu suhtees-i 35 sa sisäisenä standardina olevaan tetrametyylisilaaniin) Λ Λ n : : Q r 49 I · ' U1 - osoitti karakteristiset piikit <3 5,43 (s, 2H), 2,99 (d, 1H, J = 5,2 Hz), 0,83 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,76 (d, 3H, J = 6,8 Hz).

Esimerkki 8 5 A. (R)-2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)- metoksi-3-bentsyylioksi-l-propanyyli-(N-bentsyylioksikar-bonyyli ) -L-valinaatin valmistus

Liuokseen, jonka muodosti N-bentsyylioksikarbonyy-li-L-valiini (327 mg, 1,30 mmol, 3 ekvivalenttia) dikloo-10 rimetaanissa (25 ml) ja jossa käytettiin typpeä suojakaa-suna, lisättiin 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä (134 mg, 0,65 mmol, 1,5 ekvivalenttia) ja reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 13,5 tuntia. Saatu seos suodatettiin liukenemattoman aineen poistamiseksi ja liuotin haih-15 dutettiin alipaineessa käyttäen kiertohaihdutinta. Saatu valkoinen vaahto liuotettiin kuivaan DMFriin (10 ml), lisättiin suoraan (S)-2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metoksi-3-bentsyylioksi-l-propan-l-olin (150 mg, 0,43 mmol, 1 ekvivalentti) liuokseen myös DMF:ssa (10 ml). DMF-20 liuokseen lisättiin 4,4-dimetyyliaminopyridiiniä (13 mg, 0,11 mmol, 0,25 ekvivalenttia) ja reaktioseoksen annettiin <<i . sekoittua huoneenlämpötilassa 27 tuntia, jossa vaiheessa TLC-analyysi osoitti lähtöaineiden kuluneen. Reaktioseos ,* , haihdutettiin alipaineessa ja raakatuote puhdistettiin [;· 25 flash-kromatografiällä käyttäen liikkuvaa faasia, jonka ·* muodostivat 95 % metyleenikloridia ja 5 % metanolia, jol- :.: i loin saatiin otsikon yhdiste amorfisena kiinteänä aineena V : (158 mg, 63 % ).

B. (R)-2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)-; * ; 30 metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaattivetykloridin valmistus (R) - 2-( 2-amino-l, 6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli )me-’ ’ toksi-3-bentsyylioksi-l-propanyyli-(N-bentsyylioksikarbo- nyyli)-L-valinaatti (158 mg, 0,27 mmol) liuotettiin meta-, i 35 noliin (15 ml) ja lisättiin väkevää vetykloridihappoa (24 so 115-8(.

ml, 0,27 mmol). Seos pantiin typpiatmosfääriin ja lisättyiin 10-%:ista palladiumia hiilellä (48 mg). Seosta hyd-rattiin Parr-ravistimessa vetypaineessa [345 kPa:n (50 psi:n) paine] 5 tuntia. Seos suodatettiin celite-kerroksen 5 läpi ja jäännös pestiin metanolilla (25 ml). Yhdistetty suodos ja pesuliuokset haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin otsikon yhdiste (107 mg, 95 %). Tuotteen HPLC-ana-lyysi, jossa käytettiin YMC-Pack ODS-AM -kolonnia (cat. no. RM-33-5; koko 250 x 4,6 mm I.D.; partikkeli S-5 mm, 10 120 A) ja eluoitiin nopeudella 0,5 ml/min käyttäen liikku vaa faasia, jonka muodostivat 90 % 0,1 M ammoniumasetaat-tia, joka oli tehty happamaksi pH-arvoon 4 etikkahapolla, 10 % metanolia, osoitti sen olevan 85:15-suhteinen (R)- ja (S)-diastereomeerien seos.

15 Esimerkki 9

Oraalisen absorption (biosaatavuuden) määrittäminen rotassa

Seuraavaa analyysiä käytettiin kaavan I mukaisen yhdisteen (gansikloviirin L-monovaliiniesterin) ja mui- 20 den gansikloviiriaminohappoesterien oraalisen absorption (oraalisen biosaatavuuden) määrittämiseksi, muut gansiklo-- . viiriesterit ja -eetterit tutkittiin vertailun vuoksi.

• » I

Yhdisteen oraalisen biosaatavuuden mittaamiseksi ,*'/ määritettiin ensin yhdisteen pitoisuus koirasrottien plas- • » t ;·: ! 25 massa yhdisteen yhden oraalisen (po) annoksen jälkeen.

• * * i .' Lääke-esiasteen oraalisen biosaatavuuden mittaamiseksi

I I

* määritettiin ensin aktiivisen yhdisteen, tässä tapauksessa V : gansikloviirin, pitoisuus koirasrottien plasmassa lääke- esiasteen yhden po annoksen jälkeen. Sen jälkeen määrite-30 tään aktiivisen yhdisteen, gansikloviirin, pitoisuus koi-rasrottien plasmassa yhdisteen yhden laskimonsisäisen (iv)

* I I

annoksen jälkeen. Gansikloviirille yksi annos kussakin ’* tapauksessa po ja iv on 10 mg/kg; lääke-esiaste-esterille i (mukaan lukien gansikloviirin L-monovaliiniesterin) yksi i* 35 annos kussakin tapauksessa, oraalisesti ja iv, on annos, 5ΐ 11?Γ'8ί· joka on ekvimolaarinen gansikloviirin 10 mg/kg:n kanssa. Kahdesta mittauksesta po ja iv antamisen jälkeen laskettiin yhdisteen oraalinen biosaatavuus jakamalla pitoisuus vs. ajan käyrän alla oleva kokonaisala p.o. antamisen jäl-5 keen pitoisuus vs. ajan käyrän alla olevalla kokonaisalalla iv antamisen jälkeen, sopivasti korjattuna annokselle, seuraavan yhtälön mukaisesti: F(p.o.) (%) = [AUC(p 0 , / AUC(i.v.,] x [Annos(i v , / Annos(p o )] x 10 100 AUC-arvot (kokonaisala käyrän alla) laskettiin koko aika-alueelle, joka analysoitiin välillä 0-24 tuntia.

Annosvehikkeli oraaliselle ja laskimonsisäiselle 15 antamiselle koostui tavallisesta suolaliuoksesta, joka sisälsi 2 % etikkahappoa. Molemmissa tapauksissa yhdisteen pitoisuus vastasi 4,0 mg/ml:aa gansikloviiria ja annosmäärä vastasi 10 mg/kg:aa (2,5 ml/kg:aa) gansikloviiria. 200 g:n rotta sai 0,5 ml oraalista lääkeliuosta ga-20 vage tai injektiolla häntälaskimoon.

Rottia sopeutettiin laboratorioympäristöön kolmen , , vuorokauden ajan ja niiden annettiin olla ilman ruokaa yön ; yli ennen kokeen aloittamista ja kunnes oli kulunut 4 tun- * » ' tia antamisesta. 4 rotasta otettiin verinäytteet aina seu- • * 25 raavina aikoina: 0 min (ennen annosta), 5 min (vain iv), » » * i V 15 min, 30 min, 1 tunti, 2 tuntia, 3 tuntia, 5 tuntia, ,' J 7 tuntia, 10 tuntia ja 24 tuntia. Veri sentrifugoitiin vä- ; littömästi plasman saamiseksi ja plasmaa pidettiin pakas tettuna -20 °C:ssa analysointiin asti.

*.', 30 Plasman gansikloviirin analyysi , , Plasmaerät (0,50 ml) sekoitettiin 0,020 ml:n kanssa sisäistä standardia (asykloviiri, 15 pg/ml 10-%:isessa me-i ’ tanolissa/vedessä) ja 3,0 ml:n kanssa asetonitriiliä. Seos 1. käsiteltiin vorteksilla ja saatu sakka poistettiin sentri- , : 35 fugoimalla (4 000 g, 10 min). Supernatantti haihdutettiin t 52 1 1?ί:8ί kuiviin käyttäen typpeä suojakaasuna ja saatettiin käyttömuotoon 200 pl:aan HPLCrn liikkuvaa faasia. Erät (0,05 ml) analysoitiin HPLC:llä käyttäen Keystone Hypersil BDS, 250 x 4,6 mm C-18-kolonnia. Liikkuva faasi sisälsi 2 % 5 asetonitriiliä 30 mM natriumfosfaattipuskurissa, joka sisälsi 5 mM heptaanisulfonihappoa, pH 2,0, ja se pumpattiin nopeudella 1,0 ml/min. Gansikloviiri ja sisäinen standardi todettiin ja mitattiin UV-absorbanssilla 254 nm.

10 Oraalinen biosaatavuus

Yhdiste Oraalinen biosaatavuus Viite (F %)

Gansikloviiri (G) 7,9 US 4 355 032 15 {2-(2-amino-l,6-di- hydro- 6 -oksopur in-9 -yyli)metoksi-l,3-propaanidioli} G-bis(propionihap- 17,7 J. Pharm.

20 po)esteri Sei. 76, 180 - 184 ! (1987) : G-bis(L-valiini)es- 52,0 EP 375 329 | . teri ; » 25 G-L-valiiniesteri- ei todettavissa • , bentsyylieetteri G-bis(fenyyliglysii- 8,18 i ni)esteridiasetaatti G-dibentsyylieetteri ei todettavissa i 30 Keksinnön mukainen aminohappoesteri ’ G-L-valinaattiase- 84,0 . i taatti ”, G-L-valinaattivety- 98,1 • kloridi 53 11 ? Γ R:

Esimerkki 10

Oraalisen absorption (biosaatavuuden) määrittäminen Cynomolgus-apinassa

Seuraavaa analyysiä käytettiin kaavan I mukaisen 5 yhdisteen oraalisen absorption (oraalisen biosaatavuuden) määrittämiseksi Cynomolgus-apinassa.

Eläimet, annostus ja näytteenotto Käytettiin urospuolisia cynomolgus-apinoita, jotka painoivat 5-7 kiloa. Eläimiä ruokittiin apinanruualla, 10 hedelmillä ja vedellä ja ylläpidettiin 12 tunnin valosyk-liä. Tutkitut yhdisteet oli formuloitu pitoisuudeksi, joka oli ekvimolaarinen gansikloviirin 10 mg/ml suolaliuoksen kanssa. Oraalinen formulaatio annettiin gavage määränä 1,0 ml/kg lopullista annosta varten, joka oli ekvimolaari-15 nen gansikloviirin 10 mg/kg:n annoksen kanssa. Gansikloviirin iv formulaatio formuloitiin suolaliuokseen, joka sisälsi 0,2 % HCl:a 20 mg/ml:n pitoisuutena, ja annettiin määränä 0,5 mg/kg.

Eläimiä pidettiin ilman ruokaa alkaen illalla ennen 20 annostusta ja kunnes oli kulunut 4 tuntia annostuksesta. Kustakin apinasta otettiin verinäytteet hetkillä 0 (ennen annosta), 5 min (vain iv), 15 min, 30 min, 1 tunti, 2 tun- • t /I’; tia, 3 tuntia, 5 tuntia, 7 tuntia, 10 tuntia ja 24 tuntia : annostuksen jälkeen. Verinäytteet otettiin heparinisoitui- 25 hin ruiskuihin ja plasma eristettiin välittömästi sentri-^ fugoimalla ja pidettiin pakastettuna -20 °C:ssa analysoin- tiin asti.

Plasman gansikloviirin analyysi

Plasmaerät (0,5 ml) sekoitettiin 0,020 ml:n kanssa 30 sisäistä standardia (asykloviiri, 15 pg/ml 10-%:isessa ./ metanolissa/vedessä) ja 3,0 ml:n kanssa asetonitriiliä.

Seos käsiteltiin vorteksilla ja saatu sakka poistettiin •, sentrifugoimalla (4 000 g, 10 min). Supernatantti haihdu- * tettiin kuiviin käyttäen typpeä suojakaasuna ja saatet- ’ ’ 35 tiin käyttömuotoon 200 pl:aan HPLC:n liikkuvaa faasia.

1 1 o i i o r 54 I ! i v O v ·

Erät (0,05 ml) analysoitiin HPLC:llä käyttäen Keystone Hypersil BDS, 250 x 4,6 mm C-18 -kolonnia. Liikkuva faasi sisälsi 2 % asetonitriiliä 30 mM natriumfosfaattipuskuris-sa, joka sisälsi 5 mM heptaanisulfonihappoa, pH 2,0, ja se 5 pumpattiin nopeudella 1,0 ml/min. Gansikloviiri ja sisäinen standardi todettiin ja mitattiin UV-absorbanssilla 254 nm.

Biosaatavuus (F) lasketaan esimerkissä 9 esitetyn yhtälön mukaisesti.

10 Lääke-esiaste2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9- yyli)metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaatin oraalinen biosaatavuus oli 35,7 %. 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-ok-sopurin-9-yyli )metoksi-l, 3-propaanidiyyli-bis-L-valinaatin oraalinen biosaatavuus oli 23,5 %. Gansikloviirin biosaa-15 tavuus oli 9,9 %. Kun samoille apinoille annetaan samaa lääke-esiastetta oraalisesti ja gansikloviiria iv, lääke-esiasteelle saadaan 41,6 %:n keskimääräinen oraalinen biosaatavuus .

Esimerkki 11 20 Ehdotettujen gansikloviiri-L-valiinimonoesterikap- selien seuraavat esimerkit sisältävät täyteaineina povido-: ' : nia, sideainetta; maissitärkkelystä, hajottavaa ainetta; ;’· : ja steariinihappoa, voiteluainetta ja luistoainetta; joil- j ;la täytetään kaksiosainen kovagelatiinikapselikuori. Vesi 25 on granulointineste ja se poistetaan oleellisesti proses-; .·, soinnin aikana.

I 1 · • * * * · * 4 t | » 4

* » I ' I

» I i t 4 1 1 ΟιΊβί 55 Me OCX.·

Gansikloviiri-L-valiinimonoesterikapselien kvantitatiivinen koostumus (yksi kapseli kolme kertaa vuorokaudessa Aineosat Paino kapselia % kohti (mg) paino/paino 5 --------------------------------------------------------

Gansikloviiri-L-valiini- monoesterivetykloridi 390,00 92,75

Povidoni 12,61 3,00

Maissitärkkelys 16,81 4,00 10 Steariinihappo1 1,05 0,25

Vettä2

Kokonaistäyttöpaino 420,47 100,00 (teoreettinen)3

Jauheseoksella täytetään kaksiosaiset kovagelatii-15 nikapselikuoret.

1 Steariinihapon määrä voi vaihdella 0,1 paino-%:ista 5,0 paino-%:iin.

2 Veden määrä voi vaihdella niin, että saadaan hyväksyttävä granulaatti, ja se kuivataan pois.

20 3 Kokonaistäyttömäärä (teoreettinen) ei sisällä jäljelle jäänyttä kosteutta, joka on läsnä lopullisessa tuotteessa.

• I

Gansikloviiri-L-valiinimonoesterikapselien kvantitatiivinen koostumus (kaksi kapselia kolme kertaa vuorokaudessa) 25 Aineosat Paino kapselia % kohti (mg) paino/paino 1 1 ' Gansikloviiri-L-valiini- monoesterivetykloridi 312,00 92,75 ; 30 Povidoni 10,09 3,00 . : Maissitärkkelys 13,45 4,00 ;·’ Steariinihappo1 0, 84 0,25

Vesi2

I I

Kokonaistäyttöpaino 336, 38 100, 00 ”' : 35 (teoreettinen)3 56 112^8(

Jauheseoksella täytetään kaksiosaiset kovagelatii-nikapselikuoret.

1 Steariinihapon määrä voi vaihdella 0,1 paino-%:ista 5,0 paino-%:iin.

5 2 Veden määrä voi vaihdella niin, että saadaan hyväksyttävä granulaatti, ja se kuivataan pois.

3 Kokonaistäyttömäärä (teoreettinen) ei sisällä jäljelle jäänyttä kosteutta, joka on läsnä lopullisessa tuotteessa.

10 Esimerkki gansikloviiri-L-valiinimonoesterikapse- lien valmistusmenetelmästä 1. Sekoita gansikloviiri-L-valiinimonoesteri ja osa maissitärkkelyksestä sopivassa sekoittimessa.

2. Liuota povidoni veteen sekoittaen.

15 3. Lisää (2) (l):een jatkamalla samalla sekoitusta, jolloin muodostuu granulaatti.

4. Jauha märkä granulaatti tarvittaessa.

5. Kuivaa märkä granulaatti kuivaajassa.

5. Vie kuiva granulaatti, jäljelle jäänyt maissi-20 tärkkelys ja steariinihappo myllyn läpi.

7. Sekoita (6) sopivassa sekoittimessa.

8. Koteloi sopiva määrä (7):ä kaksiosaisiin kovage-latiinikapselikuoriin.

Claims (18)

112· 8'

1. Yhdiste 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yy-li)metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaatti tai sen 5 farmaseuttisesti hyväksyttävä suola (R)- tai (S)-diaste- reomeeriensa muodossa tai näiden kahden diastereomeerin seosten muodossa.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että mainittu seos sisältää yhtä suuret 10 määrät (R)- ja (S)-diastereomeerejään.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että farmaseuttisesti hyväksyttävä suola on vetykloridi tai asetaatti.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste kiteises- 15 sä muodossa.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että se on (R)-2-(2-amino-l,6-dihydro- 6-oksopurin-9-yyli )metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-va-linaatti tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tun nettu siitä, että se on (S)-2-(2-amino-l,6-dihydro-* 6-oksopurin-9-yyli )metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-vali- . : . naatti tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

; , , 7. Patenttivaatimuksen 5 tai 6 mukainen yhdiste, t # * ;v. 25 tunnettu siitä, että mainittu suola on vetyklo- • * ! ridi. • I » ‘II,’

8. Patenttivaatimuksen 5 tai 6 mukainen yhdiste, i » t ’ tunnettu siitä, että mainittu suola on asetaatti.

9. Farmaseuttinen koostumus, joka sisältää jonkin ί 30 patenttivaatimuksista 1-8 mukaista yhdistettä ja joka mahdollisesti käsittää farmaseuttisesti hyväksyttävän täy-teaineen tai kantaja-aineen. i t

♦ ’>«, 10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen farmaseuttinen koostumus laskimonsisäista antamista varten. t '· 1 58 112; ;8 ί

11. Yhdiste, jolla on kaava OH jk o h2n^n^n Y Ρ1ογγ^°\ PäHNk\c/0 H 11 H 0 jossa Pi on vety tai hydroksin suojaryhmä ja P2 on aminon suoj aryhmä.

12. Menetelmä yhdisteen 2-(2-amino-l,6-dihydro-6- oksopurin-9-yyli) metoksi-3-hydroksi-1-propanyyli-L-vali-naatti tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan tai sen diastereomeerien valmistamiseksi, tunnettu siitä, että: 10 (a) aminon ja/tai hydroksin suojaryhmä poistetaan yhdisteestä, jolla on kaava OH iV> ; N : Pb— J: P2HN/i'C/° s il i · O » * • * ‘ . jossa P1 on hydroksin suojaryhmä tai vety, P2 on aminon [ J suojaryhmä ja P3 on vety tai P2; jolloin saadaan yhdiste t f * • I 59 1 1 / < * 8 · 2-( 2-amino-l, 6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli )metoksi-3-hyd-roksi-l-propanyyli-L-valinaatti tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola; (b) yhdiste 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-5 yyli)metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaatti muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolakseen; tai (c) 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)me-toksi-1,3-propaanidioli (gansikloviiri) tai sen suola es-teröidään L-valiinin aktivoidulla johdannaisella; tai 10 (d) mahdollisesti substituoidulle guaniinille, jol la on kaava OH 15 ρ’ην^ν^ Η suoritetaan kondensaatio mahdollisesti persilyloidussa muodossa, jossa kaavassa:

20 P3 on vety tai aminon suojaryhmä, 2-substituoidun glyserolin kanssa, jolla on kaava : ! · Y -v o Z . Y'' : 25 jossa: ; Y1 ja Y2 merkitsevät toisistaan riippumatta halo geenia, alempaa asyylioksia, alempaa alkyylioksia tai , aryyli(alempi alkyyli)oksiryhmiä ja Z on poistuva ryhmä, 30 joka on valittu ryhmästä, jonka muodostavat alempi asyyli- t oksi, metoksi, isopropyylioksi, bentsyylioksi, halogeeni, mesyylioksi ja tosyylioksi; mahdollisesti Lewis-happokatalyytin läsnä ollessa, jolloin , , ; saadaan yhdiste 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yy- ; 35 li)metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaatti; tai 11/88( 60 ~ (e) bis-esteri-2-(2-amino-1,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)metoksi-1,3-propaanidiyyli-bis(L-valinaatille) tai sen suolalle suoritetaan osittainen hydrolyysi, jolloin saadaan monoesteri-2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9- 5 yyli)metoksi-3-hydroksi-l-propanyyli-L-valinaatti tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola; tai (f) 2-(2-amino-l,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyligetoksi -3 -hydroksi-l-propanyyli -L-valinaatille suoritetaan diastereomeerinen erotus (R)- ja (S)-diastereomeereikseen.

13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että aminon ja hydroksin suojaryh-mien poisto toteutetaan happamissa olosuhteissa.

14. Patenttivaatimusten 1-8 mukaisen yhdisteen käyttö terapeuttisesti aktiivisena aineena.

15. Patenttivaatimusten 1-8 mukaisen yhdisteen käyttö lääkeaineen valmistamiseksi, joka on käyttökelpoinen virusten vastaisessa ja niiden kaltaisten sairauksien hoidossa.

16. Patenttivaatimuksen 11 mukaisen yhdisteen käyt- 20 tö patenttivaatimusten 1-8 mukaisen yhdisteen valmistukseen.

*· ” 17. Patenttivaatimusten 1-8 mukaisen yhdisteen V ' käyttö farmaseuttisten koostumusten valmistukseen.

:.· : 18. Patenttivaatimusten 1-8 mukaisen yhdisteen • · * • 25 käyttö virusten vastaiseen ja niiden kaltaisten sairauk- : : : sien hoitoon tarkoitettujen farmaseuttisten koostumusten ; | : valmistukseen. t * i * t * ϊ - » * » I 11/1*8 f