PT988304E - Analogos de nucleosidos tais como os antivirais que contem inibidores de transcritase reversa retroviral e de adn-polimerase do virus da hepatite b (hbv) - Google Patents

Analogos de nucleosidos tais como os antivirais que contem inibidores de transcritase reversa retroviral e de adn-polimerase do virus da hepatite b (hbv) Download PDF

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Description

86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ
DESCRICÀO “Análogos de nucleósidos, tais como os antivirais que contêm inibidores de transcritase reversa retroviral e de ADN-polimerase do vírus da hepatite B (HBV)”
Campo técnico
Este invento refere-se ao campo dos análogos de nucleósidos, tais como antivirais que incluem inibidores de transcritase reversa retroviral e da ADN-polimerase do Vírus da Hepatite B (HBV). O invento proporciona novos compostos com parâmetros farmacêuticos favoráveis, métodos para a sua preparação, composições farmacêuticas que compreendem esses compostos e métodos que os utilizam para a inibição de doenças neoplásticas e virais incluindo HBV e HIV.
Antecedentes do invento O Pedido de Patente Internacional N.° WO 88/00050 descreve a actividade anti-retrovirótica e anti-HBV de uma série de nucleósidos com flúor em 3’, incluindo os compostos 2’,3’-didesoxi, 3’-fluoroguanosina (FLG) e 3’-desoxi-3’-fluorotimidina (FLT). O último composto foi submetido a avaliação clínica como agente anti-HIV e, embora a sua actividade antivirótica e a sua farmacocinétíca fossem boas, apresentou uma inesperada toxicidade (Flexer et al, J Inf Dis 170(6) 1394-403 (1994)). Embora o primeiro composto FLG seja muito activo in vitro, os presentes inventores detectaram que a sua bio-disponibilidade é tão pobre - cerca de 4% - que a utilidade in vivo do composto tem-se limitado, até aqui, a modelos animais administrados intraperitoneal ou subcutaneamente. A Patente US 4963662 apresenta, genericamente, uma série de nucleósidos com flúor em 3’ e trifosfatos correspondentes e descreve, especificamente, a preparação do derivado 5’-0-palmitoílo de FLT, sem denunciar qualquer melhoria na bio-disponibilidade. O Pedido de Patente Internacional WO 93/13778 descreve derivados de FLG modificados na posição 6 da base, especialmente com /z-propoxi, ciclobutoxi, ciclopropanilamino, piperidino ou pírrolidino. O Pedido de Patente Internacional N.° 93 14103 descreve derivados de FLG onde se substituiu o oxigénio da posição 6 da guanina por amino, éter, halogéneo ou sulfonato. A Patente EP-A 0 694 547, publicada no início de 1996, apresenta os diastereómeros do éster de L-monovalina de 2-(2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-purin-9-il)metoxi-l,3- 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 2
propanodiol (e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis). Descrevem-se os compostos como exibindo uma actividade antivirótica.
Em WO 97/27194 descreve-se um processo de dois passos para preparar estes compostos, isto é, os derivados de purina que são o éster de L-valina de 2-(2-amino-l,6-di-hidro-6-oxo-purin-9-il)metoxi-l,3-propanodiol e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Em US 4957924 revelam-se. por fim, ésteres de aminoácidos específicos de aciclovir e seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Descrevem-se os compostos como sendo úteis no tratamento de infecções pelo vírus de herpes.
Breve descrição do invento
Para compreender o presente invento parece útil introduzir o leitor especializado no campo das prodrogas de análogos de nucleósidos. Em geral, esses compostos podem ter a fórmula I: OI!
F onde:
Ri é seleccionado de
Hidroxi, amino ou carboxi; possuindo opcionalmente um ácido gordo ou álcool C4-C22 saturado ou insaturado, esterificado/ ligado a esse por amida, opcionalmente substituído, ou um L-aminoácido alifático; R.2 é o resíduo de um L-aminoácido alifático; L| é um grupo ligante trifuncional:
Lj é inexistente ou é um grupo ligante bifuncional; incluindo os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
As composições farmacêuticas que compreendem os compostos e sais de fónnula I e transportadores ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis, para esse fim, podem ser facilmente preparadas. Deste modo, proporcionam-se métodos para a inibição de HBV e retrovírus como 0 HIV, que compreendem promover 0 contacto entre o composto ou sal de
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ fórmula I e ο retrovírus ou HBV, administrando, por exemplo, uma quantidade eficaz do composto ou sal a um indivíduo atormentado por um retrovírus ou HBV. Os compostos ou sais de fórmula I podem, portanto, ser úteis em terapia, por exemplo, na preparação de um medicamento para o tratamento de infecções provocadas por retrovírus ou HBV.
No tratamento de estados causados por retrovírus tais como HIV, ou HBV, administram-se preferencialmente os compostos ou sais de fórmula I numa quantidade de 50 a 1500 mg, uma, duas ou três vezes ao dia. especialmente de 100 a 700 mg, duas ou três vezes, diariamente. E desejável que se atinjam níveis de metabolito activo no soro de 0,01 a 100 pg/ml, especialmente, de 0,1 a 5 pg/ml.
Quando R| é um resíduo de ácido gordo, este tem, de preferência, no total, um número par de átomos de carbono, com vantagem para decanoílo (Cio), lauroílo (C12), miristoílo (C14), palmitoílo (Cu,), estearoílo (Cjg), eicosanoílo (C20) ou benoílo (C22). O ácido gordo tem, de preferência, no total 10 a 22 átomos de carbono, com maior preferência, 16 a 20, especialmente 18. O ácido gordo pode ser insaturado e possuir de uma a três ligações duplas, especialmente uma ligação dupla. Os ácidos gordos insaturados pertencem preferencialmente às séries n-3 ou n-6. Os grupos Ri insaturados convenientes incluem os que derivam dos ácidos mono-insaturados, ácidos miristoleico, miristelaídico, palmitoleico, palmitelaídico, n6-octadecenóico. oleico, elaídico, gandóico, erúcico, brassídico ou dos ácidos gordos multi-insaturados, tais como os ácidos linoleico, γ-linolénico, aracidónico e o ácido α-linolénico. No entanto, R| como ácido gordo é preferencialmente saturado, uma vez que esses compostos tendem a ter estabilidade e vida em armazenagem superiores. O Ri como resíduo de álcool gordo corresponde, de preferência, a um dos ácidos gordos acima descritos. Em alternativa, 0 álcool gordo pode compreender resíduos de álcoois mais pequenos, tais como metanol, etanol ou propanol. O Ri como álcool ou ácido gordo saturado ou insaturado pode opcionalmente estar substituído com até 5 substituintes, semelhantes ou diferentes, seleccionados independentemente do grupo que consiste em hidroxi, alquilo C|-Cò, alcoxi Ci-C6, alquilo C|-C6alcoxi Ci-C(„ alcanoílo C|-C(„ amino, halogéneo, ciano, azido. oxo, mercapto e nitro, e outros semelhantes.
Os aminoácidos alifáticos adequados para R2 e, se estiver presente, Ri, incluem L-alanina, L-leucina, L-isoleucina e com maior preferência L-valina. Para facilidade de síntese, é preferível que tanto R2 como R| sejam resíduos de aminoácidos alifáticos, de preferência o mesmo resíduo. 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 4
A expressão “trifuncional” no contexto do primeiro ligante Li significa que o ligante tem pelo menos três grupos funcionais, incluindo pelo menos dois grupos funcionais que derivam dos respectivos grupos hidroxi, amina ou carboxilo, encontrando-se a(s) função(s) amina e hidroxi disponível(s) para esterificação/ ligação amida com as funções carboxi de Ri e R.2 enquanto se encontra disponível uma função carboxi, no ligante, para ligação amida com a função α-amina livre de R2, ou R|, dependendo do caso, ou esterificação com Rt, na forma de álcool gordo. Quando 0 R| defme ele próprio um grupo hidroxi, amina ou carboxi, sendo 0 grupo hidroxi presentemente 0 favorecido dos três. uma das ditas funções no ligante trifuncional compreende simplesmente este grupo hidroxi, amina ou carboxi. O ligante trifuncional compreende ainda um terceiro grupo funcional para ligação com o segundo grupo ligante opcional L2, ilustrado com mais detalhe em baixo, ou com o grupo hidroxi na posição 5’ do nucleósido mãe, tal como Ifó^didesoxi-S^fluoroguanosina. Os terceiros grupos funcionais apropriados dependerão da natureza da função cooperante no grupo ligante opcional L2, se presente, e podem incluir amino, hidroxi, carbonilo, sulfonilo, fosforilo, fosfonilo, carbamoílo e outros semelhantes. Se L2 estiver ausente, este terceiro grupo funcional no primeiro ligante Li compreenderá tipicamente uma função carboxilo que pode esterificar com 0 grupo 5’-O do análogo de nucleósido.
De preferência, os grupos funcionais no ligante trifuncional que coopera com Rt e R2 são funções hidroxi e a união é uma ligação éster com as funções carboxilo de um ácido gordo Ri, se presente, e R2. Uma concretização ainda preferida compreende um grupo hidroxi livre como Rt e uma função hidroxilo no ligante esterifícado com a função carboxi de R2. Uma concretização alternativa compreende um grupo carboxilo (opcionalmente protegido) como R\ e uma função hidroxilo 110 ligante esterifícado com uma função carboxi em R?. O grupo trifuncional L\ útil especialmente para esterificar directamente com o nucleósido inclui ligantes da fórmula lia ou Ilb:
lia onde A e A’ definem uma respectiva união éster entre um hidroxi no ligante e o carboxi em Ri ou R2 ou uma união éster entre um carboxi no ligante e o hidroxi em Ri como um álcool
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ gordo, ou uma união amida entre uma amina no ligante e um carboxi em Ri ou R2, ou uma união amida entre um carboxi no ligante e uma amina em Ri ou R2, ou um de A e A’ é como se definiu e 0 outro é hidroxi, amino ou carboxi na eventualidade de R| ser ele próprio um grupo hidroxi, amino ou carboxi livre.
Rs é H ou alquilo C1-C3; T é uma ligação, -O- ou -NH-;
Alk é ausente, alquilo C1-C4 ou alcenilo C2-C4, opcionalmente substituído como se descreve acima; e men são independentemente 0, 1 ou 2.
Prefere-se que os grupos Ri ou R2 sejam, cada um, esterificados com um grupo respectivo dos grupos funcionais hidroxi mais à esquerda (viz A e A’) de Fórmula lia, enquanto que a porção cabonilo à direita seja esterificada, opcionalmente via um segundo grupo ligante L2, com o grupo 5’-O- do nucleósido.
Em alternativa, 0 grupo L| pode compreender um ligante da fórmula Ilb:
Ilb onde
Ar é, de preferência, um carbo- monocíclico ou heterocíclico, saturado ou insaturado, com 5 ou 6 átomos no anel: e A, A’, T, Alk, men são como se definiu acima.
Na fórmula Ilb, Ar é preferencialmente um grupo aromático como a piridina ou especialmente fenilo, tal como as porções aromáticas onde os braços portadores dos grupos Ri e R2 são, respectivamente, para e orto, meta e orto, ambos orto, ou preferencialmente para e meta, ambos para ou ambos meta para a restante parte dos ligantes.
Nas fórmulas lia e Ilb, são presentemente favorecidas as seguintes combinações de m. n e Alk: 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ
m n Alk 1 0 Metileno 1 0 Et i leno 1 1 Ausente 1 1 Metileno 1 1 Etileno 1 1 Propileno l 2 Ausente 1 2 Metileno 1 1 Etileno 1 1 propileno
Como Ri e R2 podem ter diferentes estruturas, será obvio que muitos grupos Li, em particular os de fórmula lia, definirão estmturas quirais.
Um grupo particularmente preferido de ligantes trifuncionais compreende os derivados de glicerol da fórmula IIc
A—O A'
IIc onde A é hidrogénio, o resíduo acilo de um éster de L-ammoácido alifático ou resíduo acilo de um éster de ácido gordo, A’ é o resíduo acilo de um resíduo aminoácido alifático e D é um resíduo de ácido dicarboxílico C2-Cf„ saturado ou insaturado. Os ligantes trifuncionais da fórmula IIc encontram-se hidrolizados ou, caso contrário, quebrarão in vivo para libertar os compostos de natureza idêntica, glicerol, o ácido L-aminoácido, o ácido gordo (se presente) e o ácido dicarboxílico, cada um dos quais é, geralmente, metabolizado e/ou excretado, de forma segura, pelo corpo. De preferência, A e A’ são ambos resíduos de um aminoácido alifático, com maior preferência o mesmo resíduo, especialmente resíduos de L-valina ou L-isoleucina.
Na eventualidade da porção ácido dicarboxílico no derivado de fórmula IIc estar esterificada directamente com a função 5’-hidroxi (ou equivalente) no nucleósido, uma análise alternativa seria definir a porção glicerol como ligante trifiincional L, e a porção ácido dicarboxílico como ligante bifuncional L?.
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Resíduos de ácido carboxílico particularmente preferidos incluem os que derivam de ácidos oxálico, malónico, tartarónico, succínico, maleico, fumárico, málico, tartárico, glutárico, glutacónico, citracónico, itacónico, etidino-malónico, mesacónico, adípico, alilmalónico, propilidenomalónico, hidromucónico, pirocincónico e mucónico e outros semelhantes. O resíduo de ácido dicarboxílico pode ser opcionaimente substituído, por exemplo, com os sustituintes listados acima relativamente ao Ri como ácido gordo. Os substituintes hidroxi podem, por sua vez, ser esterificados ainda com um resíduo L-aminoácido ou ácido gordo.
Alguns dos ácidos dicarboxílicos supramencionados podem, eles próprios, definir um ligante trifuncional. Por exemplo, ácidos dicarboxílicos substituídos em hidroxi tais como ácido tartárico ou ácido málico oferecem inúmeras configurações. Tomando como exemplo o ácido tartárico, encontra-se disponível uma função carboxilo para a esterificação com a função 5’-hidroxilo de um nucleósido (opcionalmente via ligante bifuncional L2). As funções hidroxi estão disponíveis para a esterificação com as respectivas funções carboxilo de R? e um ácido gordo ou aminoácido Ri enquanto que 0 grupo carboxilo que resta pode estar livre, ou opcionalmente protegido, por exemplo, com um éster convencional farmaceuticamente aceitável tal como 0 éster de metilo ou de etilo. Em alternativa, a protecção opcional da função carboxi livre pode ela própria compreender um éster com um álcool gordo R*, com uma ou ambas as funções hidroxilo esterificadas com R2: R- R2 HO-
O 0
OJL O— nuc
O
O R.
O—nuc
Os ligantes favorecidos das séries de ácido tartárico acima podem ser genericamente representadas como Fórmula lie: 1
R
O R-0
0
P
T-0rO lie
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ e isómeros onde Ri e R2 estão invertidos, onde R| e R2 são da forma apresentada acima, p, q e r são cada um, independentemente, de 0 a 5, de preferência de 0 a 1 e Ry é o ácido livre, um éster de R\ ou um grupo protector de carboxi, convencional, farmaceuticamente aceitável, tal como o éster de metilo, benzilo ou especificamente o de etilo.
Os ligantes favorecidos da série málica possuem a fórmula Hf:
0q
Ilf onde Ry, p, q e R2 são como se definiu acima, de preferência aqueles onde p e q são zero.
Os compostos preferidos deste tipo incluem assim: 5 ’-0-[3-metoxicarbonil-2-valiloxi-propionil]-2’,3 ’-didesoxi-3 ’-fluoroguanosina; S^O-p-benziloxicarbonil-Z-valiloxi-propionilj-lO^didesoxiO^fluoroguanosina; S^O-p-metoxicarbonil-Z-isoleucoxi-propionilj-ZO^didesoxi-O^fluoroguanosina; S^O-p-benziloxicarbonil-l-isoleuciloxi-propionilJ-ZO^didesoxi-j^fluoroguanosina; 5,-0-[4-metoxicarbonil-2,3-/7/5-valiloxi-butiril]-2’.3,-didesoxi-3’-fluoroguanosina; 5'-0-[4-benziloxicarbonil-2.3-/v5-valÍloxi-butiril]-2,,3,-didesoxi-3’-fluoroguanosina; 5,-0-[4-metoxicarbonil-2,3-èw-isoleuciloxi-butiril]-2,,3’-didesoxi-3,-fluoroguanosina; 5,-0-[4-benziloxicarbonil-2,3-/7/5-isoleuciloxi-butiril]-2’.3’-didesoxi-3’-fluoroguanosina; particularmente os que derivam de ácido L-málico e ácido L-tartárico; e os respectivos derivados que utilizam ésteres convencionais farmaceuticamente aceitáveis na função carboxi terminal.
Os compostos particularmente favorecidos incluem: 5’-0-[3-etoxicarbonil-2-valiloxi-propionil]-2\3’-didesoxi-3’-fluoroguanosina; 5,-0-[3-etoxicarbonil-2-isoleuciloxi-propionil]-2,,3,-didesoxi-3’-fluoroguanosina; 5,-0-[4-etoxicarbonil-2,3-/rá-valiloxi-butiril]-2\3’-didesoxi-3,-fluoroguanosina; 5,-0-[4-etoxicarbonil-2,3-ó/x-isoleuciloxi-butinl]-2’,3’-didesoxi-3,-fluoroguanosina; especialmente os isómeros que derivam do ácido L-málico e L-tartárico. 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 9
Compostos alternativos relacionados são aqueles em que um de Ri e R2 são omitidos. Os compostos representativos incluem os da fórmula Ia:
O
F la onde Alk é alquilo C1-C4 ou alcenilo C2-C4 opcionalmente substituído e R2 é o resíduo éster de um L-aminoácido alifático ou de um ácido gordo como se definiu para R| e R? acima. Esses ligantes são convenientemente preparados a partir de ácidos a-hidroxi-co-carboxílicos, tais com ácido carbónico, ácido glicólico, ácido hidroxipropanóico, ácido hidroxibutírico, ácido hidroxivalérico ou ácido hidroxicapróico.
Os compostos representativos de Fórmula Ia incluem: 2\3’-didesoxi-3’-fluoro-5'-0-[3-(L-valiloxi)-propionil]guanosina; 2’,3,-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-[5-(L-valiloxi)-pentanoíl]guanosina; 2\3’-didesoxi-3,-fluoro-5’-0-[6-(L-valiloxi)-hexanoíl]guanosina; 2’.3’-didesoxi-3,-fluoro-5,-0-[3-(L-isoleuciloxi)-propionil]guanosina; ddS^didesoxio^fluoro-S^O-fS-lL-isoleuciloxii-pentanoíljguanosina; 2,,3,-didesoxi-3’-íluoro-5’-0-[6-(L-isoleuciloxi)-hexanoíl]guanosina; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Os compostos particularmente favorecidos de fórmula Ia incluem: 2’3’-didesoxi-3,-fIuoro-5’-0-[4-(L-valiloxi)-butiril]guanosina; e 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-[4-(L-isoleuciloxi)-butiril]guanosina; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Nestes compostos, a hidrólise e remoção do grupo R2 in vivo deixa um radical terminal reactivo que tenderá a ciclificar e induzir a libertação efectiva do nucleósido mãe. O presente invento proporciona compostos de fórmula I, onde tanto os ligantes Li como os L2 estão ausentes eoR| como resíduo de ácido gordo é ele próprio utilizado como ligante, com a esterificação do resíduo L-aminoácido alifático de L2 com uma função hidroxi 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 10
na cadeia alquilo do ácido gordo, por exemplo, no carbono β. Numa concretização, o ácido gordo R, é esterificado directamente na função 5’-hidroxi (ou equivalente) do nucleósido, geralmente com o grupo R2 já esterificado no ácido gordo de R|. Em alternativa, 0 ácido gordo funcionalizado (estando a função hidroxi devidamente protegida) pode primeiro ser esterificado com o nucleósido e desprotegido antes da união com 0 R2. Os compostos em conformidade com 0 presente invento possuem a fórmula Ig:
onde O-nuc é 0 resíduo de um mono-hidroxilo portador de um análogo de D- ou L-nucleósido; R2 é o resíduo de um L-aminoácido alifático, p é 0, 1 ou 2-20 (incluindo opcionalmente uma ligação dupla) e q é 0-5.
Os compostos representativos e preferidos incluem compostos como os definidos nas reivindicações de 2 a 4. Os compostos particularmente preferidos são: 2’,3’-didesoxi-3,-fluoro-5-0-[2-(L-valiloxi)-butiril]guanosina; 2\3,-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(L-valiloxi)-hexanoíl]guanosina; 2’.3’-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(L-valiloxi)-octanoíl]guanosina; 2·\3'-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(L-valiloxi)-decanoíl]guanosina; 2 ’ ,3 ’ -didesoxi-3 ’-fluoro-5-0-[2-(L-valiloxi)-dodecanoíl]guanosina; 2\3’-didesoxi-3’-fluaro-5-0-[2-(L-valiloxi)-rniristoíl]guanosina; 2\3,-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(L-valiloxi)-palmitoíl]guanosina; 2’,3’-didesoxi-3,-fluoro-5-0-[2-(L-valiloxi)-estearoíl]guanosina; 2\3,-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(L-valiloxi)-docosanoíl]guanosina; 2\3,-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(L-valiloxi)-eicosanoí ljguanosina; 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(L-isoleuciloxi)-butiril]guanosina; 2 \3 ’ -didesoxi-3 ’ -fluoro-5-0-[2-(L-isoleuciloxi)-hexanoí 1] guanosina; 2\3,-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(L-isoleuciloxi)-octanoíl]guanosina; 2\3’-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(L-isoleuciloxi)-decanoíl]guanosina; 2\3,-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(L-isoleuciloxi)-dodecanoíl]guanosina; 2\3’-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(L-isoleuciloxi)-miristoíl]guanosina; 2\3’-didesoxi-3,-fluoro-5-0-[2-(L-isoleuciloxi)-palmitoíl]guanosina; 2\3’-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(L-isoleuciloxi)-estearoíl]guanosina; 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 11
2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(L-isoleuciloxi)-docosanoíl]guanosina; 2\3,-didesoxi-3,-fluoro-5-0-[2-(L-isoleuciloxi)-eicosanoíl]guanosina; e os respectivos análogos mono-insaturados n-3 e n-6, tais como os derivados 6 ou 9 de octanoílo.
Na fórmula Ig, p e q são, de preferência, 0, definindo assim os derivados de ácido láctico, de preferência, os derivados de ácido L-láctico, tais como: 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(L-valiloxi)-propionil]guanosina; e 2,,3’-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2“(L-isoleuciloxi)-propionil]guanosina; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, como produtos de cisão, o ácido láctico e o aminoácido são ambos fisiologicamente bem aceites. A expressão “bifuncional” no contexto do segundo grupo ligante Li significa que o ligante possui duas funções que lhe permitem actuar como espaçador ou ponte entre o primeiro grupo ligante Li e o grupo 5’-0 do nucleósido. Por exemplo, o grupo opcional Lz pode compreender um ligante da fórmula Illa:
ti -O-pO-P- oR4’ h
Illa onde R4 e IV são hidrogénio ou alquilo C1-C4. Na fórmula Illa, R4 é, de preferência, hidrogénio, metilo, etilo ou isopropilo e íLf é hidrogénio. Os ligantes de fórmula Illa são adequados como muitos nucleósidos tal como o composto mãe FLG deve ser primeiro fosforilado por enzimas celulares antes de conseguir inibir a polimerase virai. Uma hidrólise inicial ou sequencial de tais compostos pode libertar um nucleósido monofosforilado in vivo que está disponível para conversão imediata no di- e trifosfato.
Em alternativa, 0 grupo ligante bifuncional opcional Li pode compreender uma estrutura da fórmula:
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 12 Ο —ο- R4 Ό—^—ο— lllb onde R_t e Rf são, independentemente, H ou alquilo C1-C4.
Ainda um outro grupo de ligantes bifuncionais possui a fórmula IIIc: —0- R4' IIIc
Como foi descrito atrás, um grupo preferido de ligantes bifuncionais compreende derivados alquilo C2-C0 α,ω-dicarboxílicos, tal como o ácido succínico, que estão opcionalmente substituídos (por exemplo, com os substituintes definidos acima para Rt na forma de ácido gordo) e/ou opcionalmente mono ou poli-insaturados, tais como mono-insaturados n-3 ou n-6. As porções preferidas desta classe estão listadas acima.
Embora a exposição acima se tenha concentrado nos grupos Li glicerol em conjugação com grupos L2 dicarboxílicos, apreciar-se-á que uma vasta variedade de ligantes trifuncionais se adequam aos grupos L2 dicarboxílicos, por exemplo, as estruturas da fórmula lia e Ilb acima em que lhe falta o carbonilo mais à direita.
Outros compostos adequados são prodrogas duplas compreendendo derivados L1L2 de R,(R2) de prodrogas convencionais FLG, cujas prodrogas convencionais libertam FLG in vivo, tais como derivados de prodroga nas posições 2 e 6 da base guanina do FLG. Exemplos de tais prodrogas FLG convencionais incluem compostos da fórmula IV: 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 13
onde Ri, R2, Li e L2 se definiram acima; e R3 é H, N2, NH2, ou OH ou um seu éter ou éster farmaceuticamente aceitável; e R3’ é uma ligação aromática ou hidrogénio;
Potenciais ésteres farmaceuticamente aceitáveis para R3 incluem ácidos gordos descritos em relação ao R\ acima, tais como os de estearoílo, oleoílo, etc., ou ésteres mais pequenos tais como os de acetilo ou butirilo. Outros potenciais ésteres incluem derivados aminoácidos de R2 ou ésteres de ácido fosfórico, tais como monofosfato. Esteres alternativos incluem os respectivos ésteres de ácido gordo ou alquilarilcarbonato, de carbamato ou sulfónico.
Os éteres, farmaceuticamente aceitáveis, adequados para Rj incluem alquilo C1-C0, cicloalquilo, alcarilo C(,-C|2 tais como benzilo ou metilpiridilo, dos quais qualquer um pode ser opcionalmente substituído como para 0 R| acima. Os eteres convenientes incluem os descritos na supramencionada WO 93/13778, tal como /?-propoxi, ciclobutoxi, ciclopropanilamino, piperidino ou pirrolidino e outros semelhantes.
Os nucleósidos representativos em conformidade com 0 presente invento incluem análogos acíclicos de nucleósidos, tais como aciclovir e análogos cíclicos de nucleósidos, tais como ddl (didanosina), ddC (zalcitabina), d4T (estavudina), FTC, lamivudina (3TC), 1592U89 (4-[2-amino-6-(ciclopropilamino)-9H-purin-9-il]-2-ciclopenteno-l-metanol), AZT (zidovudina), DAPD (D-2,6-diaminopurina-dioxolano), F-ddA e outros semelhantes, sendo cada um dos quais bastante conhecido na arte dos nucleósidos. Encontram-se, em desenvolvimento, inúmeros L-nucleósidos mono-hídricos e o invento terá também utilidade nesses compostos. Os compostos, neste aspecto do invento, terão utilidade nas respectivas indicações para os compostos mãe, por exemplo, infecções por vírus de herpes para derivados de aciclovir, HIV para ddl, estavudina, ddC, lamivudina, AZT&1592U89, HBV para lamivudina, FTC etc. 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 14
Um subgrupo favorecido de análogos de nucleósidos compreende os derivados de nucleósidos mono-hídricos da fórmula Ic’:
onde A, A’, Alk e O-nuc sào como se definiram acima. A fórmula Ic’ acima representa compostos onde A e A’ dependem das posições 1 e 3 da porção glicerol e L2 depende da posição 2 do glicerol. Em alternativa, os isómeros A e A’ dependem de 1 e 2 ou 2 e 3 e L2 de 2 ou 3, respectivamente.
Os compostos representativos neste subgrupo incluem: 4’-0-[3-((2,3-ò/s-L-valiloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]aciclovir; 4’-0-[3-((2-hidroxi-3-L-valiloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]aciclovir; 4’-0-[3-((2,3-òz's-L-isoleuciloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]aciclovir; 4’-0-[3-((2-hidroxi-3-L-isoleuciloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]aciclovir; 4’-0-[3-((l,3-óA-L-valiloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]aciclovir; 4’-0-[3-((l-hidroxi-3-L-valiloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]aciclovir; 4’-0-[3-((1.3-ó/5-L-isoleuciloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]aciclovir; 4’-0-[3-((l-hidroxi-3-L-isoleuciloxi)-2-propiloxicarbonil)piOpionil]aciclovir; 5’-0-[3-((2,3-òA-L-valiloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]lamivudina; 5’-0-[3-((2-hidroxi-3-L-valiloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]lamivudina; 5,-0-[3-((2,3-ó/5-L-isoleuciloxi)-l-propiloxicarbonil)piOpionil]lamivudina; 5,-0-[3-((2-hidroxi-3-L-isoleuciloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]lamivudina; 5’-0-[3-((l,3-/?zs-L-valiloxi)-2-propiloxicarboml)propionil]lamivudina; 5’-0-[3-((l-hidroxi-3-L-valiloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]lamivudina; 5’-0-[3-((l,3-èw-L-isoleuciloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]lamivudina; 5,-0-[3-((l-hidroxi-3-L-isoleuciloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]lamivudina; 5’-0-[3-((2,3-òw-L-valiloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]DAPD; 5,-0-[3-((2-hidroxi-3-L-valiloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]DAPD; 5’-0-[3-((2,3-óís-L-isoleuciloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]DAPD; 5’-0-[3-((2-hidroxi-3-L-isoleuciloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]DAPD; 5’-0-[3-((l,3-èw-L-valiloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]DAPD; 5’-0-[3-((l-hidroxi-3-L-valiloxi)-2-propiloxicarbonil)propíonil]DAPD; 5’-0-[3-((l,3-ów-L-isoleuciloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]DAPD;
86 327
EP 0 988 304 / PT 15 5’-0-[3-((l-hidroxi-3-L-isoleuciloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]DAPD; 5’-0-[3-((2,3-te-L-valiloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]-2\3’-didesoxi-inosina; 5,-0-[3-((2-hidroxi-3-L-valiloxi)-l-propiloxicarbonil)propíonil]-2’,3,-didesoxi-inosina; U\ Ui 5 ’ -0-[3-((2,3-Ws-L-isoleuciloxi)-1 -propiloxicarbonil)propionil]-2’ ,3 ’ -didesoxi-inosina; 5’-0-[3-((2-hidroxi-3-L-isoleuciloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]-2\3’-didesoxi-inosina; 5!-0-[3-((l,3-te-L-valiloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]-2\3’-didesoxi-inosina; 5’-0-[3-((l-hidroxi-3-L-valiloxi)-2-propiloxicarbonil)propioml]-2,,3,-didesoxi-inosina; '-0-[3-((l,3-ò/5-L-isoleuciloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]-2’,3,-didesoxi-inosina; ’-0-[3-((l-hidroxi-3-L-isoleuciloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]-2’,3'-didesoxi-inosina; 5'-0-[3-((2,3-b;s-L-valiloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]estavudma; 5 ’-0-[3-((2-hidroxi-3-L-valiloxi)-1 -propiloxicarbonil)propionil]estavudina; 5’-0-[3-((2,3-fe'-L-isoleuciloxi)-l-propiloxicarbonil)propionil]estavudina; 5 ’ -0-[3-((2-hidroxi-3-L-isoleuciloxi)-1 -propiloxicarbonil)propionil]estavudina; 5’-0-[3-((l,3-tò-L-valiloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]estavudina; 5’-0-[3-((l-hidroxi-3-L-valiloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]estavudina; 5’-0-[3-((l,3-òis-L-isoleuciloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]estavudina; 5,-0-[3-((l-hidroxi-3-L-isoleuciloxi)-2-propiloxicarbonil)propionil]estavudina; os respectivos derivados de 4-[2-amino-6-(ciclopropilamino)-9//-purin-9-il]-2-ciclopenteno- 1-metanol, e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Um subconjunto alternativo de compostos compreende os da fórmula Id:
O
Rz —O— Alk—Μ— O— nuc
Id onde Rz e Alk são como se definiu para a fórmula Ia e O-nuc é como se definiu acima.
Os compostos representativos de fórmula Id incluem: 4’-0-[4-(L-valiloxi)-propionil]aciclovir; 4’-0-[5-(L-valiloxi)-pentanoíl]aciclovir; 4’-0-[6-(L-valiloxi)-hexanoíl]aciclovir; 4’-0-[4-(L-isoleuciloxi)-propionil]aciclovir; 4’-0-[5-(L-isoleuciloxi)-pentanoíl]aciclovir; 4’-0-[6-(L-isoleuciloxi)-hexanoíl]aciclovir; 5’-0-[4-(L-valiloxi)-propionil]ddI; 5’-0-[5-(L-valiloxi)-pentanoíl]ddI;
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 5’-0-[6-(L-valiloxi)-hexanoíl]ddI; 5’-0-[4-(L-isoleuciloxi)-propionil]ddI; 5’-0-[5-(L-isoleuciloxi)-pentanoíl]ddI; 5’-0-[ó-(L-isoleuciloxi)-hexanoíl]ddI; 5’-0-[4-(L-valiloxi)-propionil]estavudina; 5’-0-[5-(L-valiloxi)-pentanoíl]estavudina; 5’-0-[6-(L-valiloxi)-hexanoíl]estavudina; 5’-0-[4-(L-isoleuciloxi)-propionil]estavudina; 5’-0-[5-(L-isoleuciloxi)-pentanoíl]estavudina; 5’-0-[6-(L-isoleuciloxi)-hexanoíl]estavudina; 5'-0-[4-(L-valiloxi)-propionil]DAPD; 5’-0-[5-(L-valiloxi)-pentanoíl]DAPD; 5’-0-[6-(L-valiloxi)-hexanoíl]DAPD; 5'O-[4-(L-isoleuciloxi)-propionil]DAPD; 5’-0-[5-(L-isoleuciloxi)-pentanoíl]DAPD; 5’-0-[6-(L-isoleuciloxi)-hexanoíl]DAPD; 5,-0-[4-(L-valiloxi)-propionil]lamiviidina; 5’-0-[5-(L-valiloxi)-pentanoíl]lamivudina; 5’-0-[6-(L-valiloxi)-hexanoíl]lamivudina; 5'-0-[4-(L-isoleuciloxi)-propionil]lamivudina; 5,-0-[5-(L-isoleuciloxi)-pentanoíl]lamivudina; 5,-0-[6-(L-isoleuciloxi)-hexanoíl]lamivudina; e os respectivos derivados de 4-[2-amino-6-(ciclopropilamino)-9//-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-1 -metanol.
Os compostos particularmente preferidos da fórmula Id incluem: 4’-0-[4-(L-valiloxi)-butiril]aciclovir; 4’-0-[3-(L-isoleuciloxi)-butiril]aciclovir; 5’-0-[4-(L-valiloxi)-butiril]ddI; 5’-0-[3-(L-isoleuciloxi)-butiril]ddI; 51-0-[4-(L-valiloxi)-butiril]estavudina; 5’-0-[3-(L-isoleuciloxi)-butiril]estavudina; 5’-0-[4-(L-valiloxi)-butiril]DAPD: 5’-0-[3-(L-isoleuciloxi)-butiril]DAPD; 5,-0-[4-(L-valiloxi)-butiril]lamivudina; 5’-0-[3-(L-isoleuciloxi)-butiril]lamivudina;
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 17 e os respectivos derivados de 4-[2-amino-6-(ciclopropilamino)-9//-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-1-metanol; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Nestes compostos, a hidrólise e remoção do grupo R2 in vivo deixa um radical terminal reactivo que tenderá a ciclificar e a induzir a libertação eficaz do nucleósido mãe.
De modo semelhante, outros nucleósidos são compostos de fórmula If: ?1
O O R“0T~ Op ^ 0q I 0r ^ O nuc ° ? R2 If onde Ri, R2, Ry, p, q, r e O-nuc são como se definiu acima.
Os compostos favoritos de fórmula If incluem: 5'-0-[3-etoxicarbonil-2-valiloxi-propionil]ddI; 5’-0-[3-etoxicarbonil-2-isoleuciloxi-propionil]ddI; 5’-0-[4-etoxicarbonil-2,3-òw-valiloxi-butiril]ddI; 5’-0-[4-etoxicarbonil-2,3-6A-isoleuciloxi-butiril]ddI; 4, -0-[3-etoxicarbonil-2-valiloxi-propionil]aciclovir; 4’-0-[3-etoxicarbonil-2-isoleuciloxi-propionil]aciclovir; 4'-0-[4-etoxicarbonil-2,3-ò/s-valiloxi-butiril]aciclovir; 4’-0-[4-etoxicarbonil-2,3-/v'5-isoleuciloxi-butinl]aciclovir; 5’-0-[3-etoxicarbonil-2-valiloxi-propionil]DAPD; 5’-0-[3-etoxicarbonil-2-isoleuciloxi-propionil]DAPD; 5 ’ -0-[4-etoxicarbonil-2,3-bis-valiloxi-butiri 1]D APD; 5, -0-[4-etoxicarbonil-2,3-ó;.s-isoleuciloxi-butiril]DAPD; 5’-0-[3-etoxicarbonil-2-valiloxi-propionil]estavudina; 5’-0-[3-etoxicarbonil-2-isoleuciloxi-propionil]estavudina; 5’-0-[4-etoxicarbonil-2,3-^A-valiloxi-butiril]estavudina; 5’-0-[3-etoxicarbonil-2-valiloxi-propionil]lamivudina; 5'-0-[3-etoxicarbonil-2-isoleuciloxi-propionil]lamivudina; 5’-0-[4-etoxicarbonil-2,3-/?A-valiloxi-butiril]lamivudina; 5’-0-[4-etoxicarbonil-2,3-b/.s-isoleuciloxi-butiril]lamivudina;
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 18 e os respectivos derivados málicos e tartáricos de 4-[2-amino-6-(ciclopropilamino)-9//-purin-9-il]-2-ciclopenteno-l-metanol; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis; preferindo-se em cada caso os isómeros resultantes de derivados de L-tartarato e L-malato. O presente invento estende-se a compostos da fórmula Ig O -Μ— O—nuc
O H3C- Op—1—Oq
Ig onde R2, p, q e O-nuc são como se definiu acima.
Os compostos de fórmula Ig, preferidos, incluem: 4’-0-[2-(L-valiloxi)-propionil]aciclovir; 4’-0-[2-(L-isoleuciloxi)-propionil]aciclovir; 5’-0-[2-(L-valiloxi)-propionil]ddI; 5’-0-[2-(L-isoleuciloxi)-propionil]ddI; 5’-0-[2-(L-valiloxi)-propionil]estavudina; 5'-0-[2-(L-isoleuciloxi)-propionil]estavudina; 5’-0-[2-(L-valiloxi)-propionil]lamivudina; 5‘-0-[2-(L-isoleuciloxi)-propionil]lamivudina; 5’-0-[2-(L-valiloxi)-propionil]DAPD; 5'-0-[2-(L-isoleuciloxi)-propionil]DAPD; e os respectivos derivados de 4-[2-amino-6-(ciclopropilamino)-9//-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-1-metanol; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Os produtos de cisão desses compostos, o ácido láctico e o aminoácido, são ambos fisiologicamente bem aceites.
Os compostos do invento podem formar sais que constituem um outro aspecto do invento. Os sais adequados farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula Ig incluem sais de ácidos orgânicos, em especial ácidos carboxílicos, incluindo mas não se limitando a acetatos, trifluoroacetatos, lactatos, gluconatos, citratos, tartaratos, maleatos, malatos, pento-tenatos, isotionatos, adipatos, alginatos, aspartatos, benzoatos, butiratos, digluconatos, ciclopentanatos, gluco-heptanatos, glicerofosfonatos, oxalatos, heptanoatos, hexanoatos, fumaratos, nicotinatos, palmoatos, pectinatos, 3-fenilpropionatos, picratos, pivalatos,
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ propionatos, lactobionatos, canforatos, undecanoatos, e succinatos, de ácidos orgânicos sulfónicos tais como metanossulfonatos, etanossulfonatos, 2-hidroxietano-sulfonatos, canfor-sulfonatos, 2-naftalenossulfonatos, benzenossulfonatos, /7-clorobenzenosulfonatos e /?-tolue-nossulfonatos; e de ácidos inorgânicos tais como cloridratos, bromidratos, iodidratos, sulfatos, bissulfatos, hemissulfatos, tiocianatos, persulfatos, ácidos fosfórico e sulfónico. Os compostos de fórmula Ig podem, em certos casos, ser isolados na forma de hidrato. O termo “grupo protector de N” ou “protegido em N” aqui utilizado refere-se aos grupos destinados a proteger o N terminal de um aminoácido ou péptido ou a proteger um grupo amina contra reacções indesejáveis durante os procedimentos de síntese. Os grupos protectores de N vulgarmente utilizados são apresentados em Greene, “Protective Groups in Organic Synthesis" (John Wiley & Sons, New York, 1981), que aqui se inclui como referência. Os grupos protectores de N incluem grupos acilo, tais como formilo, acetilo, propionilo, pivaloílo, r-butilacetilo, 2-cloroacetilo, 2-bromoacetilo, trifluoroacetilo, tricloroacetilo, ftalilo, o-nitrofenoxiacetilo, α-clorobutirilo, benzoílo, 4-clorobenzoílo, 4-bromobenzoílo, 4-nitrobenzoílo, e outros semelhantes; grupos sulfonilo, tais como benzenossulfonilo, y>-toluenossulfonilo, e outros semelhantes, grupos que formam carbamato, tais como benziloxicarbonilo, /;-clorobenziloxicarbonilo, /7-metoxibenziloxi-carbonilo, /?-nitrobenziloxicarbonilo, 2-nitrobenziloxicarbonilo, /7-bromobenziloxicarbonilo, 3,4-dimetoxibenziloxicarbonilo. 4-metoxibenziloxicarbonilo, 2-nitro-4,5-dimetoxibenziloxi-carbonilo, 3,4,5-trimetoxibenziloxicarbonilo, l-(/>bífenilil)-l-metiletoxicarbonilo, α,α-di-metil-3,5-dimetoxibenziloxicarbonilo, benzidriloxicarbomlo, í-butoxicarbonilo, di-isopropil-metoxicarbonilo, isopropiloxicarbonilo, etoxicarbonilo. metoxicarbonilo, aliloxicarbonilo, 2.2,2-tricloroetoxicarbonilo, fenoxicarbonilo, 4-nitrofenoxicarbonilo, fluorenil-9-metoxicarbonilo, ciclopentiloxicarbonilo, adamantiloxicarbonilo, ciclo-hexiloxicarbonilo, feniltiocarbonilo, e outros semelhantes; grupos aralquilo. tais como benzilo, trifenilmetilo, benziloximetilo e outros semelhantes; e grupos sililo. tais como trimetilsililo e outros semelhantes. Os grupos protectores de N favoritos incluem formilo, acetilo, alilo, F-moc, benzoílo, pivaloílo, /-butilacetilo. fenilsulfonilo, benzilo, /-butoxicarbonilo (BOC) e benziloxicarbonilo (Cbz).
Os grupo protectores de hidroxi e/ou carboxi são também extensivamente revistos na mesma obra de Greene e incluem éteres, tais como metilo, éteres de metilo substituído, tais como metoximetilo, metiltiometilo, benziloximetilo, r-butoximetilo, 2-metoxietoximetilo e outros semelhantes, éteres de sililo, tais como trimetilsililo (TMS), t-butildimetilsililo (TBDMS), tribenzilsililo. trifenilsililo, z-butildifenilsililo, tri-isopropilsililo e outros semelhantes, éteres de etilo substituído, tais como l-etoximetilo, 1-metil-l-metoxietilo, r-butilo, alilo, benzilo p-metoxibenzilo, difenilmetilo, trifenilmetilo e outros semelhantes,
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 20 grupos aralquilo, tais como tritilo, e pixilo (derivados de 9-hidroxi-9-fenilxantano, especialmente os cloretos). Os grupos éster protectores de hidroxi incluem ésteres como o formato, benzilformato, cloroacetato, metoxiacetato, fenoxiacetato, pivaloato, adamantoato, mesitoato, benzoato e outros semelhantes. Os grupos carbonato protectores de hidroxi incluem metilo, vinilo, alilo, cinamilo, benzilo, e outros semelhantes.
Em harmonia com a prática usual com inibidores retrovirais e de HBV é vantajoso co-administrar um a três ou mais antivirais adicionais, tais como AZT, ddl, ddC, d4T, 3TC, H2G, foscamet, ritonavir, indinavir, saquinavir, nevirapino, delaviridino, Vertex VX 478 ou Agouron AG 1343 e outros semelhantes, no caso de HIV, ou lamivudina, interferão, famciclovir etc., no caso de HBV. Esses antivirais adicionais serão normalmente administrados em dosagens relativas entre si que reílectem largamente os seus respectivos valores terapêuticos. Razões molares de 100:1 a 1:100, em especial de 25:1 a 1:25, relativamente ao composto ou sal de fórmula Ig serão frequentemente convenientes. A administração de antivirais adicionais é geralmente menos comum com os nucleósidos antivirais que se destinam a tratar infecções de herpes.
Embora seja possível administrar o agente activo sozinho, é preferível faze-lo como parte de uma formulação farmacêutica. Uma dessas formulações compreenderá o agente activo definido acima junto com um ou mais transportadores/excipientes aceitáveis e, opcionalmente, outros componentes terapêuticos. O(s) transportador(s) devem ser aceitáveis no sentido de serem compatíveis com os outros componentes da formulação e não serem pemicioso(s) para o recipiente.
As formulações incluem as adequadas para administração rectal, nasal, tópica (incluindo bocal e sublingual), vaginal ou parentérica (incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa e intradérmica), mas a formulação é preferencialmente uma formulação para administração oral. As formulações podem ser convenientemente apresentadas numa forma de dosagem unitária, por exemplo, comprimidos ou cápsulas de libertação prolongada, e podem ser preparadas por quaisquer métodos bem conhecidos na arte de farmácia.
Esses métodos incluem o passo de promover a associação do agente activo definido acima com o transportador. Em geral, as formulações são preparadas associando, uniforme e intimamente, o agente activo com transportadores líquidos ou transportadores sólidos fmamente divididos, ou ambos, e depois, se necessário, dando forma ao produto. O invento estende-se a métodos para preparar uma composição que compreende fazer a associação ou junção de um composto de fórmula Ig ou um seu sal farmaceuticamente aceitável com um transportador ou veículo farmaceuticamente aceitável. Se o fabrico das formulações
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 21 farmacêuticas implicar a mistura intima de excipientes farmacêuticos e de componente activo na forma de sal, então prefere-se, com frequência, usar excipientes que sejam de natureza não básica, isto é, ou acídicos ou neutros.
As formulações para a administração oral no presente invento podem ser apresentadas como unidades discretas, tais como cápsulas, pílulas ou comprimidos, contendo cada uma quantidade pré-determinada do agente activo; na forma de pó ou grânulos; na forma de solução ou suspensão do agente activo num líquido aquoso ou num líquido não aquoso; ou na forma de emulsão líquida de óleo em água ou de emulsão líquida de água em óleo e na forma de pílula grande, etc.
No que diz respeito a composições para administração oral (por exemplo, comprimidos e cápsulas), o termo “transportador adequado” inclui veículos, tais como os excipientes comuns, por exemplo, agentes aglomerantes, por exemplo, xarope, acácia, gelatina, sorbitol, tragacanta, polivinilpirrolidona (Povidona), metilcelulose, etilcelulose, carboximetilcelulose de sódio, hidroxipropilmetilcelulose, sacarose e amido; cargas e transportadores, por exemplo, amido de milho, gelatina, lactose, sacarose, celulose microcristalina, caulino, manitol, fosfato dicálcico, cloreto de sódio e ácido algínico; e lubrificantes, tais como estearato de magnésio, estearato de sódio e outros estearas metálicos, ácido esteárico de estearato de glicerol, fluido de silicone. talco, ceras, óleos e sílica coloidal. Pode-se utilizar agentes aromatizantes, tais como hortelã pimenta, óleo de pírola, aroma de cereja ou outros do género. Pode ser desejável adicionar um agente corante para tomar a forma de dose facilmente identificável. Os comprimidos podem também ser revestidos por métodos bem conhecidos na arte.
Um comprimido pode ser produzido por compressão ou moldagem, opcionalmente, com um ou mais componentes acessórios. Os comprimidos de compressão podem ser preparados comprimindo, numa máquina adequada, o agente activo numa forma que flui livremente, tal como pó ou grânulos, opcionalmente misturado com um aglomerante, lubrificante, diluente inerte, conservante, agente tensioactivo ou de dispersão. Os comprimidos de moldagem podem ser produzidos moldando uma mistura do composto em pó humidificado com um diluente líquido inerte, numa máquina adequada. Os comprimidos podem ser, opcionalmente, revestidos ou gravados e podem ser formulados de forma a proporcionar a libertação lenta ou controlada do agente activo.
Outras formulações adequadas para a administração oral incluem rebuçados que compreendem o agente activo numa base aromatizada, normalmente sacarose e acácia ou tragacanta; pastilhas que compreendem o agente activo numa base inerte como a gelatina e 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 22
glicerina, ou sacarose e acácia; e elixires para a boca que compreendem o agente activo num transportador líquido adequado.
Os compostos de fórmulas I ou Ic são preparados por um método que compreende a acilação do nucleósido, aqui representado por FLG, Fórmula V, tipicamente no grupo hidroxi de 5’:
na qual Ri(R2)L]X representa um ácido activado. tal como os derivados carboxílicos de Fórmula lia ou Ilb, onde R|, R2 e Li são como se definiu acima ou os seus derivados protegidos.
Em alternativa, o ácido activado pode compreender um composto de fórmula Ri(R2)glicerol-D-X, onde R|, R2 e D são como se definiu na fórmula IIc ou um derivado de Rz-0-Alk-C(=0)X activado no caso de compostos de fórmula Ia. Nos últimos casos, os ligantes podem ser sequencialmente construídos efectuando primeiro a esterificação de um ácido D ou ω-hidroxicarboxílico, devidamente protegido, com um nucleósido, desprotegendo a função hidroxi ou carboxi terminal e esterificando, neste, a porção Rz ou glicerol devidamente protegida. O derivado activado utilizado na acilação pode compreender, por exemplo, o halogeneto ácido, anidrido ácido, éster de ácido activado ou o ácido na presença de reagente de ligação, por exemplo, diciclo-hexilcarbodi-imida. Os derivados de ácido activados representativos incluem o ácido clorídrico, anidridos resultantes de halogenetos de alcoxicarbonilo, tais como o cloreto de isobutiloxicarbonilo e outros semelhantes, ésteres que resultam de N-hidroxisuccinamida, ésteres que resultam de N-hidroxiftalimida, ésteres que resultam de N-hidroxi-5-norbomeno-2,3-dicarboxamida, ésteres que resultam de 2,4,5-triclorofenol e outros semelhantes. Ácidos activados incluem ainda aqueles em que X na fórmula RX representa uma porção OR’ onde R é R2 como aqui se definiu, e R’ é, por exemplo, COCH3, COCH2CH3 ou COCF3 ou onde X é benzotriazolo.
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 23 A respectiva metodologia será aplicável quando estão para ser preparados outros nucleósidos com mono-hidroxilo, ou seja, o derivado activado é respectivamente esterificado com o hidroxi 5’ livre (ou equivalente) dos nucleósidos mono-hídricos, tais como aciclovir, ddl, FTC, lamivudina, 1592U89, DAPD, F-ddA e outros semelhantes.
Os intermediários utilizados nos métodos acima definem eles próprios novos compostos, especialmente os de fórmula IIc’
A—O—i O O
—O-N—Alk—^—X A’—O—* IIc’ onde A, A’ e Alk são como se definiu acima (estando A e A’ opcionalmente protegidos com grupos protectores convencionais) e X representa o ácido livre ou ácido activado como se ilustrou acima.
Os compostos representativos da fórmula IIc’ incluem: 2.3- 6A-(L-valiloxi)-propiléster do ácido malónico; 2.3- /7f5'-(N-CBZ-L-valiloxi)-propiléster do ácido malónico; 2.3- /A?-(N-Fmoc-L-valiloxi)-propiléster do ácido malónico; 2.3- /?/5,-(N-Boc-L-valiloxi)-propiléster do ácido malónico; 2.3- òA-(L-isoleuciloxi)-propiléster do ácido malónico; 2.3- òís-(N-CBZ-L-isoleuciloxi)-propiléster do ácido malónico; 2.3- /7A-(N-Fmoc-L-isoleuciloxi)-propiléster do ácido malónico; 2.3- òA-(N-Boc-L-isoleuciloxi)-propiiéster do ácido malónico; 2.3- í>/.s-(L-valiloxi)-propiléster do ácido succínico; 2.3- ôA-(N-CBZ-L-valiloxi)-propiléster do ácido succínico; 2.3- /bw-(N-Fmoc-L-valiloxi)-propiléster do ácido succínico; 2.3- te-(N-Boc-L-valiloxi)-propiléster do ácido succínico; 2.3- te-(L-isoleuciloxi)-propiléster do ácido succínico; 2.3- Ò7s-(N-CBZ-L-isoleuciloxi)-propiléster do ácido succínico; 2.3- òA-(N-Fmoc-L-isoleuciloxi)-propiléster do ácido succínico; 2.3- fe-(N-Boc-L-isoleuciloxi)-propiléster do ácido succínico; 2.3- tó-(L-valiloxi)-propiléster do ácido glutárico; 2.3- è?is-(N-CBZ-L-valiloxi)-propiléster do ácido glutárico; 2.3- òis-(N-Fmoc-L-valiloxi)-propiléster do ácido glutárico; 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 24
2.3- òw-(N-Boc-L-valiloxi)-propiléster do ácido giutárico; 2.3- òzs-(L-isoleuciloxi)-propiléster do ácido giutárico; 2.3- tó-(N-CBZ-L-isoleuciloxi)-propiléster do ácido giutárico; 2.3- 6/s-(N-Fmoc-L-isoleuciloxi)-propiléster do ácido giutárico; 2.3- è/5-(N-Boc-L-isoleuciloxi)-propiléster do ácido giutárico; e os respectivos halogenetos ácidos, em particular cloreto, anidridos ácidos e diésteres de cada um dos acima, por exemplo: 2.3- &z'.y-(N-CBZ-L-valiloxi)-propiléster, 4-metoxibenziléster do ácido succínico; 2.3- tó-(N-CBZ-L-valiloxi)-propiléster, 1,1-dimetiletiléster do ácido succínico; etc.
Um grupo de intermediários preferidos compreende ainda os da fórmula lia’:
m lia’ onde Rx, Alk, m, n e T são como se descreveu acima, A e A’ representam resíduos acilo de L’-aminoácidos alifáticos (protegidos em N se necessário) esterifícados com funções hidroxi no ligante ou um de A e A’ é o resíduo acilo e o outro é um grupo hidroxi livre, e X representa o ácido livre ou um ácido activado como se ilustrou acima. A e A’ são, de preferência, o mesmo resíduo aminoácido.
Outros intermediários novos incluem os precursores de ácido livre ou activado de compostos da fórmula Ia, tais como: Acido 3-N-Boc-L-valiloxipropanóico, ácido 3- N-Fmoc-L-valiloxipropanóico, ácido 3-N-CBZ-L-valiloxipropanóico, ácido 3-N-Boc-L-isoleuciloxipropanóico, ácido 3-N-Fmoc-L-isoleuciloxipropanóico, 3-N-CBZ-L-isoleuciloxi-propanóico, ácido 4-N-Boc-L-valiloxibutírico, ácido 3-N-Fmoc-L-valiloxibutírico, ácido 4- N-CBZ-L-valiloxibutírico, ácido 4-N-Boc-L-isoleuciloxibutírico, ácido 3-N-Fmoc-L-isoleuciloxibutírico, ácido 3-N-CBZ-L-isoleuciloxibutírico e outros semelhantes; e os derivados activados, tais como halogenetos ácidos.
Os novos intermediários incluem ainda precursores de compostos da fórmula lie e Hf acima, especialmente os que resultam de configurações “naturais”, tais como o ácido L-málico e o ácido L-tartárico; por exemplo: Ácido 3-etoxicarbonil-2-valiloxi-propiónico; 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 25
Acido 3-etoxicarbonil-2-isoleuciloxi-propiónico;
Acido 4-etoxicarbonil-2,3-èw-valiloxi-butírico; Ácido 4-etoxicarbonil-2,3-tó-isoleuciloxi-butírico; Ácido 3-benziloxicarbonil-2-valiloxi-propiónico; Ácido 3-benziloxicarbonil-2-isoleuciloxi-propiónico; Ácido 4-benziloxicarbonil-2,3-/?A-v.aliloxi-butírico; Ácido 4-benziloxicarbonil-2,3-/?A-isoleuciloxi-butírico; e outros semelhantes; e os respectivos derivados activados, tais como os halogenetos de ácidos.
Os intermediários novos incluem ainda outros precursores que correspondem à estrutura Ild, tais como: ácido 2-(L-valiloxi)propanóico, ácido 2-(N-Boc-L-valiloxi)-propanóico, ácido 2-(N-Fmoc-L-valiloxi)propanóico, ácido 2-(N-CBZ-L-valiloxi)-propanóico, ácido 2-(L-isoleuciloxi)propanóico, ácido 2-{N-Boc-L-isoleuciloxi)propanóico, ácido N-(Fmoc-L-isoleuciloxi)propanóico, ácido N-(CBZ-L-isoleuciloxi)propanóico, ácido 2-(L-valiloxi)butírico, ácido 2-(N-Boc-L-valiloxi)butírico, ácido 2-(N-Fmoc-L-valiloxi)-butírico, ácido 2-(N-CBZ-L-valiloxi)butírico, ácido 2-(L-isoleuciloxi)butírico, ácido 2-(N-Boc-L-isoleuciloxi)butírico, ácido N-(Fmoc-L-isoleuciloxi)butírico, ácido N-(CBZ-L-isoleuciloxi)butírico, e outros semelhantes; e os seus derivados activados, tais como halogenetos de ácidos. A preparação de 3’-fluoronucleósidos como os de fórmula V foi extensamente revista por Herdiwijn et al. em Nucleosides and Nucleotides 8 (1) 65-96 (1989). A preparação de outros nucleósidos mono-hídricos, tais como aciclovir, ddl (didanosina), ddC (zalcitabina), d4T (estavudina), FTC, lamivudína (3TC), 1592U89 (4-[2-amino-6-(ciclopropilamino)-9/-/-purin-9-il]-2-ciclopenteno-l-metanol), AZT (zidovudina), DAPD (D-2,6-diaminopurina-dioxolano), F-ddA e outros semelhantes são bastante conhecidos e extensamente descritos na literatura.
Os derivados reactivos dos grupos R|(R2)L|L2X podem ser pré formados ou produzidos in situ pela utilização de reagentes como a diciclo-hexilcarbodi-imida (DDC) ou O-(lH-benzotriazol-l-il) tetrafluoroborato de Ν,Ν,Ν’,Ν’-tetrametilurónio (TBTU). Quando se utiliza um halogeneto ácido, como o ácido clorídrico, pode-se adicionar à mistura de reacção um catalisador de amina terciária, tal como a trietilamina, a N,N’-dimetilanilina, piridina ou dimetilaminopiridina, para ligar o ácido “halogenidrato” liberado.
As reacções são, de preferência, efectuadas num solvente não reactivo, tal como N,N-dimetilformamida. tetra-hidrofurano, dioxano, acetonitrilo, ou um hidrocarboneto halogenado. tal como diclorometano. Se for desejável, pode-se utilizar qualquer um dos
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 26 catalisadores de amina terciária supracitados como solvente, tendo o cuidado de ter um excesso adequado. A temperatura de reacção pode variar tipicamente entre 0°C e 60°C, mas será mantida preferencialmente entre 5°C e 50°C. Normalmente, após um período de 1 a 60 horas, a reacção estará essencialmente terminada. O decorrer da reacção pode ser verificado utilizando cromatografía de camada fina (TLC) e sistemas adequados de solventes. Em geral, quando a reacção termina, como se determina por TLC. o produto é extractado com um solvente orgânico e purificado por cromatografía e/ou recristalização a partir de um sistema adequado de solventes.
Os produtos secundários onde ocorreu acilaçào na base de nucleósido podem ser separados por cromatografía, mas essa má acilaçào pode ser minimizada por condições controladas de reacção. Essas condições controladas podem ser conseguidas, por exemplo, manipulando as concentrações de reagente ou a velocidade de adição, em especial do agente de acilaçào, baixando a temperatura ou escolhendo o solvente. A reacção pode ser acompanhada por TLC para verificar as condições controladas. Pode ser conveniente proteger o grupo 6-oxo na base e especialmente o 2 amino com grupos protectores convencionais para prevenir más acilações.
Os compostos de Fórmula IV nos quais R; é hidrogénio podem ser preparados por activação em 6 do respectivo composto de guanina de Fórmula I (onde a função amina exposta do resíduo aminoácido de Ri está opcionalmente protegida com grupos protectores de N convencionais) com um grupo activante como o halogeneto. A 6-purina assim activada é subsequentemente reduzida a purina, por exemplo, com um catalisador de paládio, e desprotegida para o composto desejado de Fórmula IV ou Fórmula V.
Os compostos em que R; é um R| ou outro éster podem ser preparados por esterificação convencional (análoga à esterifícação acima descrita) do respectivo composto hidroxi de Fórmula I ou Fórmula V, opcionalmente após a protecção de N convencional da função amina exposta do resíduo aminoácido de Ri e/ou R-». Os compostos em que R3 é um éter podem ser preparados de forma análoga ao processo apresentado na WO 93 13778 supramencionada, de novo conjuntamente com a protecção de N opcional de grupos amina expostos. Os compostos em que R3 é uma azida podem ser preparados como se descreve em WO 97 09052.
Os intermediários da fórmula Ild são convenientemente preparados por acilação de um ácido hidroxialcanóico com 0 carboxi protegido, tipicamente um ácido 2-hidroxi-1-alcanóico, com o derivado Ri activado e protegido em N adequado, tal como N-CBZ-valilo ou -isoleucilo juntamente com um agente de ligação convencional, tal como 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 27
DMAP/DCC ou com halogeneto de aminoácido. O grupo protector do carboxi é então removido, por exemplo, com hidrólise ácida, e o intermediário resultante é activado como se descreveu acima ou o ácido livre é usado juntamente com um reagente de ligação para esterificar o nucleósido em condições de esterifícação convencionais.
Os compostos da fórmula Ia são também convenientemente preparados pela metodologia apresentada no parágrafo imediatamente anterior, nomeadamente por esterifícação de um ácido a-hidroxi,cr>-carboxi com o carboxi protegido, tal como o ácido glicólico, ácido láctico, ácido hidroxibutírico, etc., com o derivado R2 adequado protegido em N, quer na forma de ácido livre juntamente com um agente de ligação, quer activado, por exemplo, no respectivo halogeneto ácido. O grupo protector de carboxi é removido e o intermediário resultante é esterificado com o nucleósido com a metodologia acima descrita.
Os compostos que compreendem uma estrutura da fórmula lie ou Hf são preparados protegendo o carboxi dos grupos carboxi terminais do respectivo ácido dicarboxílico, tais como ácido L-tartárico ou ácido L-málico, com grupos protectores de carboxi convencionais, tais como benzoílo. 0(s) grupo(s) hidroxi livre(s) são então esterificados com técnicas de esterifícação convencionais, tais como DMAP & DCC em DMF com o aminoácido R2 adequado, protegido em N, tais como N-Boc-L-valilo ou N-Boc-L-isoleucilo. Retiram-se os grupos benzoílo protectores de carboxi e esterifica-se o produto resultante com a função 5’-hidroxi de um nucleósido mono-hídrico, usando condições convencionais, tais como as dos exemplos concomitantes. Finalmente, a função carboxi livre é esterificada com um grupo Rj ou, mais preferencialmente, com um éster convencional farmaceuticamente aceitável, tal como o etiléster.
Os compostos que compreendem uma porção fosforilada III podem ser preparados fazendo reagir 2\3’-didesoxi-3,-fluoroguanina-5-monofosfato com um composto de fórmula
Via
R4' Via onde Ha é halogéneo, tal como cloro, iodo ou bromo, em condições análogas às descritas em US 4337201, US 5227506, WO 94/13682 & WO 94/13324, Starret et al. J. Med. Chem. 37 1857-1864 (1994) e Iyer et al., Tetrahedron Lett 30 7141-7144 (1989). O monofosfato pode ser preparado por fosforilação convencional de FLG, como descrito, por exemplo, na mesma 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 28
obra de Herdwyn et al. A respectiva metodologia aplicar-se-á aos monofosfatos de outros nucleósidos mono-hídricos.
Em alternativa, esta esterifícação ao éster de fosfato podia ocorrer em dois passos compreendendo uma primeira reacção entre o FLG-monofosfato e um composto da fórmula
VII
PGO—O--OH
VII onde R4 e Ra’ são como se definiu acima e PG é um grupo protector de hidroxi convencional como os descritos acima, seguida pela desprotecção e esterifícação a um grupo Li ligante cuja terceira função, a mais à direita, é um grupo hidroxi. Dois exemplos desse grupo ligante L\ são apresentados no Esquema 1 abaixo (os penúltimos compostos em cada série). Nesta concretização o carbonilo mais à esquerda de fórmula Va é sinónimo do grupo carbonilo do grupo ligante do ligante de Fórmula lia.
Os compostos que compreendem um ligante L? opcional podem também ser preparados por um processo de dois passos. Em particular, um composto de fórmula C1C(=0)0C(R4)(R4’)C1 pode reagir com o 5'-hidroxi de FLG (opcionalmente protegido na base com grupos protectores convencionais) como se conhece na arte das cefalosporinas. O resultante cloreto de FLG-5’-0-C(=0)0C(R4)(R4’) reage então com um ligante trifuncional portador de Ri e R2 no qual a terceira função compreende uma função carboxilo, tal como o sal de potássio.
Será analisado que os grupos L\ trifuncionais de fórmula lia onde nem são 1 e Alk está ausente podem ser preparados a partir de glicerol por esterifícação regio-selectiva como se representa abaixo no esquema 1 como referência a uma combinação estearoílo/L-valilo. Resumidamente, Ri e R2 são esterificados por regio-selectividade para as posições 1 e 3 do glicerol e a posição 2 é depois convertida no grupo -T-C(=0)- adequado, que é depois esterificado para a posição 57 do fluoronucleósido ou para uma função cooperante em L2 (não representada). Em alternativa, 0 hidroxi na posição 2 do derivado de glicerol pode ser esterificado com um grupo L2 contendo uma função carbonilo cooperante na sua extremidade do lado esquerdo. 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 29
Os grupos L| de fórmula lia onde m é 1, n é 0 e Alk é metileno podem também ser preparados, a partir de glicerol, por regio-selectividade esterifícando Ri e R2 para as posições 1 e 2 do glicerol, como também se representa abaixo no esquema 1, seguida pela conversão do hidroxi na posição 3 para o grupo -T-C(=0) adequado. As séries de reacções mais à esquerda no Esquema 1 mostram a situação em que Rt é esterificado para a posição 1 do glicerol e R2 é esterificado para a posição 2. O arranjo que corresponde àquele em que Ri é esterificado para a posição 2 e R2 para a posição 1 pode ser conseguido tratando primeiro o glicerol com CBz-L-valina/DCC/DMAP/DMF e depois protegendo a posição 3 com cloreto de pixilo antes de esterificar o ácido gordo de R·, na posição 2 do glicerol, desprotegendo e convertendo a posição 3, conforme o necessário. (Segue Esquema 1) 30 8Ó327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ
ESQUEMA I j—ΟΗ —ΟΗ —ΟΗ ρΟΗ cloreto de estearoílo _q|_j —O— estearoíl
piridina/DMF
CBz-L-valina DCC DMP CH2C12/DMF pO— L-valil-CBz '—OH —O— estearoíl i cloreto de pixilo y piridina pO —Px —OH —O-estearoíl fosgénio r I—O— L-valil-CBz I ^—-O— estearoíl O ci-L0 ; CBz-L-valina v dcc;dmap/ch2c!2 —O—Px —O— L-valil-CBz —O-estearoíl c; 2ch-cc:
H T CHiCh/pirrolo
!—OH j—O— L-valil-CBz ^—O-estearoíl v fosgénio
esterificação com FLG
O
—1C! — L-valil-CBz -estearoíl 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 31
Embora ο Esquema I fosse ilustrado por referência a uma combinação onde Ri é estearoílo e R2 é L-valilo, será verificado que este esquema básico também é aplicável a outros aminoácidos, quando presentes outros ácidos gordos, ou usando grupos protectores convencionais, em combinações de R2 como derivado de aminoácido e R| como hidroxi. Os ligantes onde T compreende um grupo -NH- podem ser preparados por esterifícação regio-selectiva análoga seguida de conversão do hidroxi livre numa amina, redução a azida e reacção com fosgénio para formar o respectivo clorocarbamato.
Uma variação do Esquema I permite a preparação de ligantes da fórmula IIc. Nesta variação, o passo de fosgénio apresentado acima é substituído pela reacção com um ácido dicarboxílico activado, tal como anidrido succínico. Isto resulta num triéster de glicerol (compreendendo o éster R\ (opcionalmente protegido), o éster R? protegido e o éster do ácido dicarboxílico) e o carboxi livre no ácido dicarboxílico é então activado e esterificado para o nucleósido de uma maneira convencional. Em alternativa, os ligantes de fórmula IIc podem ser produzidos in situ no nucleósido. Nesta variante, o ácido dicarboxílico é esterificado num derivado de glicerol devidamente protegido. Este succinilmonoéster é então esterificado para a função 5’-hidroxi do nucleósido de uma forma convencional. Finalmente, um ou ambos dos grupos protectores na porção glicerol é substituído pelo éster de L-aminoácido, e, se presente, o grupo protector que resta é substituído por um éster de ácido gordo ou removido para deixar um grupo hidroxi livre. Isto é representado no Esquema IA que ilustra um exemplo em que o nucleósido é aciclovir (FLG apresentado a sombreado), o ácido dicarboxílico é de succinilo e R| e R2 são ambos valilo protegido em CBZ, mas será obviamente aplicável a outras variações de fórmula Ic. Em cada caso, as condições de união denotam as condições padrão de esterifícação, tais como reagentes de ligação DMAP, DCC etc. ou, em alternativa, a conversão da função carboxi relevante a um derivado activado, tal como o cloreto ácido ou a porção succínica activada pode também compreender o anidrido. (Segue Esquema Ia) 32 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ ESQUEMA ΙΑ
Ο
ΟΗ
ι t V - - - *
G
N-CBZ-valil O N-CBZ-valil—O—1
OH
\ 1. hidrólise ácida de Ra i 2. 1,3-bis-CBZ-valilglicerol. ▼ condições de ligação 3. desprotecção valil
O \glicerol protegido em 1.3. condições de ligação R3-Q—^ o
—O R4-0—
O 1. desprotecção Rb, Rc 2. N-CBz-valina, condições de ligação T 3. hidrólise de Ra 1. nucleósido, condições de ligação 2. desprotecção
i 0 —3 1 i valil guanina °>d
\ I
Numa variação do Esquema IA, o anidrido succínico reage directamente com o nucleósido, evitando assim os primeiros passos de protecção e desprotecção. Uma outra alternativa é esteriílcar regio-selectivamente a porção glicerol com a(s) porção(s) de aminoácido protegido(s) em N, geralmente conjugando com a protecção da função hidroxi destinada à ligação com o nucleósido, seguida pela desprotecção desse hidroxi e unindo ao nucleósido. 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ
ESQUEMA II
DMAP DCC BOCVal C82Val
| DMAP DCC CH2C!2 T N-tritiiVal
TrVai—O HO
estearoíl-Cl estearoíl-Cl CEbCh/piridina
CSzVal —O
estearoíl —O
TrVai —O estearoíl —O
KMnO^/QBr
OsOVpiridina T INaO„
C3zVal—O estearoíl—O
i rVai estearoíl
=0
Br de BOCMe-trifenil-fosfónio 0
esterificação com FLG
OBn
TrVai —O
estearoíl—O
ligação, podem ser preparados como se demonstra no Esquema II acima. Outras permutações de m, n, Alk e as várias funções no grupo ligante trifuncional Li de fórmula lia pode ser preparado de forma análoga à acima com os respectivos materiais reagentes, tais como 1,2,4-tri-hidroxibutano (número de registo CA 3968-00-6), ácido 3,4-di-hidroxi-butanóico (1518-61-2 & 22329-74-4), ácido (S)-3,4-di-hidroxibutanóico (51267-44-8), ácido (R) -3,4-di-hidroxibutanóico (158800-76-1), 1,2,5-pentanotriol (51064-73-4 & 14697-46-2), (S) -l,2,5-pentanotriol (13942-73-9), (R)-1,2,5-pentanotriol (171335-70-9), ácido 4,5-di- hidroxipentanóico (66679-29-6 & 129725-14-0), l,3,5-pentanotriol (4328-94-3) e 3-(2-hidroxietil)-l,5-pentanodiol (53378-75-9). A preparação de cada um destes materiais reagentes está descrita nas referências aos respectivos números de registo. Ohsawa et al. em Citem Pharm Buli 41 (11) 1906-1909 (1993) e Terão et al., Chem Pharm. Buli. 39(3) 823-825 (1991) descrevem o controlo da estereoquímica de grupos ligantes trifimcionais com lipase P. O derivado de aminoácido de R2 e, se presente, R|, podem ser, em alternativa, esterificados ao grupo ligante com a metodologia de 2-oxa-4-aza-cicloalcano-l,3-diona descrita no Pedido de Patente Internacional N.° WO 94/29311. A união da função carboxi de R| e/ou R2 a um grupo amina no derivado do ligante procede-se pela química de péptidos convencional, geralmente em conjugação com a protecção da α-amina com grupos protectores de N convencionais. A formação de uma ligação anrida entre uma função carboxilo no ligante e o grupo α-amina de R2 também se processa por química de péptidos convencional, geralmente em conjugação com a protecção da função α-carboxi. A esterifícaçao de R] como álcool gordo para uma função carboxi no ligante processa-se de forma análoga, mas de forma oposta, para a esterifícaçao acima de Ri como ácido gordo.
Breve descrição dos desenhos
Os vários aspectos do invento serão agora descritos por meio de exemplos, apenas como referência aos seguintes Exemplos e aos desenhos concomitantes nos quais: A Figura 1 representa os níveis de ADN virai no soro em patos infectados com DHBV, tratados e não tratados, em função do tempo, como se descreve no Exemplo Biológico 3;
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 35 A Figura 2 representa ο ganho de peso, em função do tempo, em patos infectados com DHBV, tratados como se descreve no Exemplo Biológico 3.
Exemplo 1
Acido 2-(estearoíloximetil)-2-(N-(fluorenilmetoxicarbonil)-L-valiloximetil)- propiónico
Adicionou-se hidróxido de potássio (11,78 g; 210 mmol) a uma solução de ácido 2,2-te(hidroximetil)propiónico (28,16 g; 210 mmol) em água (50 ml). Após 5 minutos, evaporou-se a solução sob vácuo e co-evaporou-se o resíduo com DMF seco, por três vezes. Dissolveu-se então o resíduo em DMF (500 ml), e adicionou-se brometo de benzilo (3,57 ml, 30 mmol) à solução. Após agitação durante 30 minutos, filtrou-se a mistura de reacção através de Celite, deitou-se para solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio e extractou-se com diclorometano. Recolheu-se a fase orgânica e depois lavou-se com solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio. Esta evaporou-se, depois, in vacuo para proporcionar 2,2-óA(hidroximetil)propionato de benzilo (4,37 g). 'H-RMN (CDC13): 7,35 (s, 5H); 5,20 (d; 2H); 3,91-3,71 (m, 4H); 1,10 (s, 3H).
Adicionou-se, gota a gota. durante 40 minutos, cloreto de estearoílo (4,13 g; 13,6 mmol) em diclorometano, a uma solução de 2,2-/?A(hidroximetil)proprionato de benzilo (4.37 g; 19,5 mmol) em piridina (58 ml). Depois, manteve-se a reacção durante 16 horas e depois deitou-se numa solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio e extractou-se com diclorometano. Recolheu-se a fase orgânica e evaporou-se sob vácuo. Isolou-se o produto benzil-2-(hidroximetil)-2-(estearoíloximetil)proprionato por cromatografia de coluna em sílica gel (1,97 g). 'H-RMN (CDCh): 7,34 (s, 5H); 5,17 (d; 2H); 4,28 (dd, 2H); 3,69 (dd, 2H); 2,24 (t, 2H); 1,57 (m, 2H); 1,25 (s, 28H); 1,22 (s,3H); 0,87 (t, 3H).
Dissolveu-se benzil-2-(hidroximetil)-2-(estearoíloximetil)proprionato (1,86 g; 3,8 mmol) em pindina (30 ml).Adicionou-se, à solução, ácido toluenossulfónico (73 mg; 0,39 mmol), N-fluorenilmetoxicarbonil-L-valina (3,94 g; 11,6 mmol), e DCC (3,58 g; 17,4 mmol). Manteve-se a reacção a 4°C durante 16 horas e filtrou-se através de Celite. Deitou-se o filtrado em solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio e extractou-se com diclorometano. Recolheu-se a fase orgânica e evaporou-se em vácuo. Isolou-se o produto 2-(N-(fluorenilmetoxicarbonil)-L-valiloximetil)-2-(estearoíloximetil)proprionato de benzilo por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendeu 2,38 g.
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 36 H-RMN (CDCh): 7,78-7,25 (m, 13H); 5,29 (m; 1H); 5,15 (d, 2H); 4,38-4,23 (m, 7H); 2,19 (t, 2H); 2,10 (m, 1H); 1,55 (m, 2H); 1,24 (m, 31H); 0,94-0,83 (m, 9H).
Adicionou-se, a uma solução de 2-(N-(fluorenilmetoxicarbonil)-L-valiloxi-metil)-2-(estearoíloximetil)proprionato de benzilo (1,86 g; 3,8 mmol) numa mistura de solventes de THF/ metanol (16 ml/ 8 ml), formato de amónio (376 mg; 6 mmol), ácido fórmico (1,87 ml), e negro de paládio (40 mg). Manteve-se a reacção à temperatura ambiente durante 16 horas, e depois filtrou-se através de Celite. Após a evaporação, isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendeu 1,05 g.
Exemplo 2 l-Q-estearoíl-2-Q-(N-CBz-L-valil)glicerol a) Preparação de 1-O-estearoílglicerol
Adicionou-se, gota a gota, cloreto de estearoílo (10 g; 33 mmol) dissolvido em DMF (100 ml) a uma mistura de glicerol (30 g; 326 mmol) e piridina (25 ml) dissolvidos em DMF (300 ml). Arrefeceu-se a mistura num banho de gelo até se terminar a adição, após o que se manteve a reacção durante a noite em atmosfera de N?. Após 15 horas, adicionou-se CH2CI2 (300 ml) e NaHCCh (aq) saturado. Separaram-se as fases e lavou-se a fase orgânica com água (50 ml) e secou-se com Na2S04. Evaporou-se o solvente e qualquer piridina, sob vácuo. Submeteu-se 0 produto bruto a cromatografia numa coluna de sílica (CFECB-MeOH; 20:1) e a recristalização (CFbCL-éter) para se obter cerca de 7 gramas. bí Preparação de cloreto de pixilo
Adiciona-se cloreto de acetilo (150 ml; 2,1 mol) a uma suspensão de 9-hidroxi-9-fenilxanteno (20 g; 72 mmol) em benzeno (100 ml), com agitação magnética. Obtém-se uma solução homogénea vermelho forte. Agita-se a solução durante 30 minutos a 20°C. Removem-se os voláteis a pressão reduzida. Neutraliza-se o excesso de AcCl adicionando cuidadosamente etanol. Co-evapora-se 0 resíduo com tolueno (2x30 ml) e com ciclo hexano (2x30 ml) para se obter um resíduo cristalino que se armazena sem ar. Em alternativa, o cloreto de pixilo é disponibilizado pela Aldrich. c) Preparação de l-O-estearoíl-3-O-pixilglicerol
Misturou-se 0 produto resultante de a) acima (2,28 g) e piridina (25 ml) e aqueceu-se até se dissolver. Após arrefecimento, num banho de gelo, adicionou-se o cloreto de pixilo (1,92 g) do passo b). Manteve-se a mistura com agitação e em atmosfera de árgon num banho de gelo durante meia hora e depois à temperatura ambiente durante 1,5 h.
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Evaporou-se a piridina em vácuo, dissolveu-se o resíduo em CH2CI2 (70 ml) e lavou-se com ácido cítrico 0,5 M para remover os restos de piridina. Secou-se o resíduo com Na2SC>4, evaporou-se e submeteu-se a cromatografia (éter/ hexano; 1:3) para produzir 1,25 g de produto puro com um Rt- de TLC de cerca de 0,2. d) Preparação de l-Q-estearoíl-2-0-fN-CBz-L-valil)3-0-pixilglicerol Dissolveu-se em CHLCL (4 ml) 0 produto de passo c) (237 mg; 0,39 mmol), CBz-L-valina (116 mg; 0,46 mmol), DCC (96 mg; 0,46 mmol) e DMAP (4,7 mg; 0,04 mmol). Manteve-se a mistura com agitação numa atmosfera de azoto, durante a noite. Após 18 horas, filtrou-se a mistura através de um filtro de vidro e submeteu-se a cromatografia numa coluna de sílica gel (éter/ hexano; 1:4) para produzir 230 mg com um Rt- de TLC de 0.2. e) Preparação de l-Q-estearoíl-2-0-(N-CBz-L-valil)glicerol
Removeu-se 0 grupo pixilo no produto do passo d) por desprotecção selectiva através do método descrito no Exemplo 3, passo d) para produzir 0 composto do título. 'H-RMN (CDCI3): δ 7,35 (m, 5H); 5,3-4,9 (m; 4H); 4,35-4,25 (m, 3H); 3,8-3,6 (m, 2H); 2,31-2,25 (m, 2H); 2,20-2.10 (m, 1H); 1,60 (m, 2H); 1,02-0,86 (m, 9H).
Exemplo 3 l-0-(N-CBz-L-valil)-2-0-estearoílglicerol a) Preparação de l-O-lN-CBz-L-valiQglicerol
Adicionou-se CBz-L-valina (4,35 g; 17,3 mmol) a glicerol cinco vezes em excesso (8 ml; 86,9 mmol) junto com diciclo-hexilcarbodi-imida (4,29 g; 20.8 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (0,212 g) à temperatura ambiente. Após agitação, durante a noite, filtrou-se a suspensão e removeu-se sob vácuo 0 DMF do filtrado. Dissolveu-se novamente o resíduo em CH2CI2, lavou-se sucessivamente com NaHCCh saturado, salmoura, e água e depois secou-se. Submeteu-se 0 material bruto a cromatografia em sílica gel com 4/1 de EtOAc/ hexano como eluente para produzir 2,465 g.
Rf (EtOAc/ hexano; 4/1) 0,17; (CH2C12/ metanol; 20/1) 0,12. b) Preparação de 1-0-(N-CBz-L-valilV3-0-pixilglicerol
Dissolveu-se 0 produto do passo a) (0,672 g; 20,1 mmol) em piridina seca (3,5 ml) sob atmosfera de azoto. Adicionou-se 9-cloro-9-fenilxantano (cloreto de pixilo; 0,65 g; 22,0 mmol; 1,1 eq. - preparado como acima) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1,5 h. Adicionou-se MeOH (1,5 ml) e submeteu-se a mistura a partição por 10 ml de
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Et20 e 10 ml de NaHCCh saturado. Extractou-se a camada aquosa com mais éter. Combinaram-se as camadas orgânicas, secaram-se e concentraram-se várias vezes com tolueno para produzir um sólido branco. Submeteu-se o material bruto a cromatografia em sílica gel com hexano/ EtOAc a 3/1 como eluente para produzir 0,681 g.
Em alternativa, pode-se colocar o grupo pixilo pelo procedimento descrito por Gaífney et al., Tetrahedron Lett 1997, 38, 2539-2542 usando PxOH e ácido acético. c) Preparação de l-Q-(N-CBz-L-valil)-2-0-estearoíl-3-0-pixilglicerol Adicionou-se, gota a gota, cloreto de estearoílo (496 ml; 1,3 eq.) em 1,5 ml de CH2CI2 a uma solução de produto do passo b) (0,658 g; 1,13 mmol) em 11 ml de piridina com agitação em atmosfera de N2 num banho de gelo. Após 15 minutos, agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante a noite. Diluiu-se a mistura com 20 ml de Et20 e lavou-se com 10 ml de NaHCOj saturado. Extractou-se a camada aquosa com mais Et20. Combinaram-se as camadas orgânicas, lavaram-se com salmoura (20 ml), secaram-se em Na2S04 e concentraram-se várias vezes com tolueno. Submeteu-se o material bruto (1,37 g) a cromatografia em 130 g de sílica gel com hexano/ EtOAc a 6/1. Tomou-se uma fracção inicial de 500 ml seguida por fracçòes de 100 ml. O material desejado eluiu nas fracções 2-5, rendendo 0,748 g. d) Preparação de l-Q-(N-CBz-L-valil)-2-0-estearoílglicerol
Adicionou-se pirrolo (16,5 mol eq.) e ácido dicloroacético (5,5 mol eq.) a uma solução do produto do passo c) (0,748 g; 0,872 mmol) dissolvido em 35 ml de CH2C12 (para fazer 0,025 M). Após 5 minutos, a TLC revelou 0 fim da reacção. Diluiu-se a mistura com 300 ml de CH2C12 e lavou-se com 30 ml de NaHCCh saturado. Extractou-se a camada aquosa com mais CH2CI2. Combinaram-se as fases orgânicas, lavaram-se com salmoura (30 ml), secaram-se em Na2S04 e concentraram-se. Submeteu-se 0 material bruto a cromatografia em sílica gel com hexano/ EtOAc (com ácido acético a 0,3%) como eluente para produzir 0,363 g com Rf (hexano/ EtOAc; 2/1) 0.21. ‘H-RMN (CDCfi): ô ppm 0,86-0,99 (m, 9H); 1,25 (s, 28H); 1,61 (m, 2H);. 2,16 (m, 1H); 2,32 (m, 2H); 3,74 (s lg„ 2H); 4,28-4,44 (m, 3H); 5,09 (m, 1H); 5,11 (s; 2H); 5,22 (d, 1H); 7,36 (m, 5H).
Exemplo 4 l-Q-estearoíl-3-Q-(N-CBz-L-valil)glicerol
Dissolveu-se em CH2C12 (60 ml) e DMF (6 ml) 0 produto do Exemplo 2, parte a) (2,86 g; 7,99 mmol), DCC (0,9 g; 4,36 mmol), 4-(N,N-dimetil)aminopiridina (DMAP) (0,048 mg; 0,39 mmol) e N-CBz-L-valina (1 g; 3,98 mmol). Deixou-se a reacção à
86 327 ΕΡ Ο 988 304/ΡΤ 39 temperatura ambiente durante 18 horas e depois filtrou-se. Evaporou-se o solvente a pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em CH2CI2 (100 ml) e filtrou-se. Purificou-se 0 composto bruto do título por cromatografia [Si02; éter/hexano (1:2)] para produzir 1,3 g do produto desejado. Pode-se recuperar 0 1-estearoílglicerol que não reagiu eluindo com CH2CI2/ MeOH (20:1). 'H-RMN (CDCI3): δ 5,25 (d; 1H); 5,11 (s, 2H); 4,30-4,05 (m, 6H); 2,65 (d, 1H); 2,35 (t, 2H); 2,06 (m, 1H); 1,62 (m,2H); 1,26 (s, 28H); 1,00-0,84 (m, 9H).
Exemplo 5
CBZ-valil —O estearoíl —O
Cl A uma solução, arrefecida em gelo, de cloro formato de 1-cloroetilo (1,89 g; 13,2 mmol) em CH2CI2 seco (5 ml), adicionou-se o composto do Exemplo 4 em CH2CI2 (20 ml) seguido por piridina seca (1,2 ml; 29,6 mmol). Agitou-se a mistura de reacção com arrefecimento em atmosfera de árgon até a TLC (éter/hexano, 1:2) indicar 0 consumo do material reagente. Após 1,5 h, lavou-se a mistura com água (3x5ml), NaHCO;, sat. (5 ml) e secou-se (Na2S04). A purificação por cromatografia [Si02; éter/hexano (1:2)] produziu o composto do título (4,0 g). 'H-RMN (CDCI3): δ 7,36-7,32 (m, 5H); 6,40 (m, IH); 5,24 (m, 1H); 5,11 (s; 2H); 4,30 (m, 6H); 2,32 (m, 2H); 2,15 (m, 1H); 1,82 (m, 3H); 1,60 (m,2H); 1,25 (s lg., 28H); 0,97 (m, 3H); 0,86 (m, 6H).
Exemplo 6
CBZ-valil —O
O
O
o
estearoíl O 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 40
Adicionou-se iodeto de sódio (3,65 g; 24,3 mmol) a uma solução do composto do Exemplo 5 (3,4 g; 4,87 mmol) em acetonitrilo seco (47 ml). Fez-se refluxar a solução obtida em atmosfera de árgon até o RMN indicar o consumo do material reagente. Após 4,5 h, adicionou-se éter (50 ml) e filtrou-se a mistura. Removeu-se o solvente por evaporação e dissolveu-se o produto bruto em éter (50 ml). Lavou-se a solução de éter com água (2x10 ml) e secou-se (Na2S04) e evaporou-se a pressão reduzida. A purificação por cromatografia [SiCb; éter/hexano (1:2)] produziu o composto do título (2,15 g). 'H-RMN (CDCIj): δ 7,37 (m, 5H); 6,75 (m, 1H); 5,22 (m, 1H); 5,15 (s; 1H); 4,3 (m, 6H); 2,32 (m, 1H); 2,22 (m, 2H); 1,6 (m,2H); 1,25 (s, 28H); 0,95 (m, 9H).
Exemplo 7
3 0—Cl
G
C 1 estearoíl
—OH CBZ-valil —O—
Arrefeceu-se, em banho de gelo, com agitação, em árgon, uma solução do composto do Exemplo 3 (810 mg; 1,37 mmol) em 2,2 ml de diclorometano seco. Adicionou-se cloroformato de 1-cloroetilo (298 μΐ; 2,74 mmol), seguido pela adição, gota a gota, de piridina (665 μΐ; 8,22 mmol) em 2,5 ml de diclorometano. Após 2,5 h, diluiu-se a mistura com 25 ml de diclorometano e lavou-se sucessivamente com 10 ml de água e 10 ml de salmoura. Secou-se a fase orgânica em sulfato de sódio anidro e concentrou-se várias vezes com tolueno para produzir um óleo amarelo. A purificação por cromatografia flash de coluna em sílica gel com diclorometano/éter dietílico 40/1 produziu o composto do título na forma de óleo (96 mg; rendimento quantitativo). ’Η-RMN (CDCI3): δ ppm 0,85-0,98 (m, 9H); 1,25 (s, 28H); 1,60 (m, 2H);. 1,83 (d, 3H, /=5,8 Hz); 2,17 (m, 1H); 2,31 (t, 2H); 4,19-4,48 (m, 5H); 5,11 (s, 2H); 5,22 (d, 1H); 5,27 (m, 1H); 6,38-6,43 (m, 1H); 7,36 (m, 5H).
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Exemplo 8
estearoíl Ο CBZ-valil —0-^
Fez-se refluxar a 80°C, em atmosfera de azoto, uma solução do composto do Exemplo 7 (1,896 g; 2,71 mmol) e iodeto de sódio (1.80 g; 12,0 mmol) em acetonitrilo (27 ml). Após 4,5 h, dissolveu-se a mistura de reacção com 100 ml de hexano/éter dietílico 1/1 e lavou-se com 25 ml de água. Extractou-se a fase aquosa com mais solvente (25 ml). Combinaram-se as fases orgânicas, lavaram-se sucessivamente com solução aquosa de tiossulfato de sódio a 5% (25 ml) e salmoura (25 ml), secou-se em sulfato de sódio anidro, e concentrou-se in vacuo. A purificação por cromatogralia flash de coluna em sílica gel com diclorometano/metanol, 80/1, como eluente, produziu um óleo (1,45 g) que continha 90% do composto do título com 10% do composto do Exemplo 7. ‘H-RMN (CDC13): δ ppm 0,85-0,99 (m, 9H); 1,25 (s. 28H); 1,60 (m, 2H);. 2,17 (m, 1H); 2,23 (d, 3H, J=6 Hz); 2,31 (t, 2H); 4,16-4,49 (m, 5H); 5,10 (s, 2H); 5,20-5,29 (m, 2H); 6,69-6,79 (m, 1H); 7,36 (m, 5H).
Exemplo 9 4-Benziloxi-2-(N-tritil-L-valiloximetil)-1 -estearoíloxibutano a) Síntese de dietil-2-(2-benziloxietil)malonato
Adicionou-se uma solução de dietilmalonato (6,4 g; 40 mmol) em 10 ml de etanol a uma solução de sódio (0,95 g; 41,4 mmol) acabada de preparar em 50 ml de etanol e agitou-se a mistura durante 15 minutos. Depois, adicionou-se, gota a gota, uma solução de 2-benziloxi-l-iodoetano (11,5 g; 41,35 mmol). Fez-se refluxar a mistura durante quatro horas e depois evaporou-se em vácuo. Adicionou-se 100 ml de água e extractou-se a mistura, três vezes, com porções de 50 ml de dietiléter. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio seco e evaporou-se sob vácuo e isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 8,6 g. 'H-RMN (CDC13): δ 1,26 (m, 6H); 2.26 (m, 2H); 3,54 (m, 3H); 4,16 (m, 4H); 4,57 (s, 2H); 7,32 (m, 5H).
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 42 b) Síntese de 4-benziloxi-2-hidroximetil-butanol-l Adicionou-se, gota a gota, uma solução de dietil-2-(2-benziloxietil)malonato (8,5 g; 28,8 mmol) em 20 ml de dietiléter, a cerca de 15°C, a uma suspensão de hidreto de alumínio-lítio (3,0 g; 80 mmol) em 100 ml de dietiléter. Fez-se refluxar a mistura durante 2 horas. Adicionou-se, gota a gota, cerca de 4 ml de água durante o arrefecimento. Filtrou-se a mistura e lavou-se com dioxano. Evaporou-se o filtrado a pressão reduzida e isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 3,4 g. 'H-RMN (CDCl;,): δ 1,60 (m, 2H); 1,82 (m, 1H); 3,00 (m, 2H); 3,66 (t, 2H); 3,69 (m, 4H); 4,50 (s, 2H); 7,32 (m, 5H). c) Síntese de 4-benziloxi-2-(N-tritil-L-valiloximetil)-butanol-l
Adicionou-se DCC (3,0 g; 14,5 mmol) e DMAP (0,18 g; 1,45 mmol) a uma solução de N-tritil-L-valina (4,66 g; 13 mmol) e 4-benziloxi-2-hidroximetil-butanol-l (3,3 g; 15,6 mmol) em 50 ml de diclorometano e agitou-se a mistura durante três dias. Arrefeceu-se a mistura até 5°C e filtrou-se o uretano. Evaporou-se a solução a pressão reduzida e isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 2,5 g. 'H-RMN (CDCh): δ 1,00 (m, 6H); 1,55 (m. 4H); 1,72 (m, 1H); 2,18 (m, 1H); 2,70 (m. 1H); 3,27 (m, 2H); 3,43 (m, 3H); 4,50 (s, 2H); 7.26 (m, 20H). d) Síntese de 4-benziloxi-2-(N-tritil-L-valiloximetil~)-1 -estearoíloxibutano Adicionou-se piridina (1,72 g; 21,7 mmol) a uma solução de 4-benziloxi- 2-(N-tritil-L-valiloximetil)-butanol-l (2,4 g; 4,35 mmol) em 50 ml de diclorometano. Arrefeceu-se a solução até 10°C e adicionou-se, gota a gota, entre 10°C e 15°C, uma solução de cloreto de estearoílo (2,64 g; 8,7 mmol) em 10 ml de diclorometano. Agitou-se a mistura durante a noite à temperatura ambiente. Adicionou-se 100 ml de solução de hidrogeno-carbonato de sódio a 5% e agitou-se a mistura durante 30 minutos. Separou-se a fase orgânica e extractou-se duas vezes a fase da água com diclorometano. Secou-se as fases orgânicas com sulfato de sódio e concentrou-se sob vácuo. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 3.0 g. 'H-RMN (CDCfi): δ 0,98 (m, 9H); 1,26 (m, 28H); 1,54 (m, 2H);. 1,94 (m, 1H); 2,25 (m, 2H); 3,23 (m, 2H); 3,44 (m, 2H); 3,58 (m, 1H); 3,91 (m, 2H); 4,10 (m, 1H); 4,47 (s, 2H); 7,28 (m, 20H).
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Exemplo 10
Acido 5-(N-tritil-L-valiloximetil)-6-estearoíloxi-hexanóico a) Preparação de 2-alil-1,3-propanodiol
Adicionou-se, gota a gota, alilmalonato de dietilo (20 ml; 101 mmol) em éter anidro (100 ml) a uma solução agitada de hidreto de alumínio-lítio (9,6 g; 253 mmol) a 0°C. Aqueceu-se a reacção até à temperatura ambiente e manteve-se durante 5 horas. Arrefeceu-se até 0°C e adicionou-se cuidadosamente, gota a gota, água (12 ml). Depois de se agitar durante 30 minutos, filtrou-se a mistura através de Celite e depois lavou-se com etanol (2x500 ml). Secou-se a solução sob vácuo produzindo 9,5 g de produto. 'H-RMN (CDCh): δ 5,78 (m, 1H); 5,03 (m; 2H); 3,78 (m. 2H); 3,69 (m, 2H); 2,06 (t. 2H); 1,87 (m,lH). b) Preparação de l-0-(N-tritil-L-valil)-2-alil-l.3-propanodiol
Adicionou-se DCC (3,5 g; 16,7 mmol) a uma solução de N-tritil-L-valina (5,5 g; 15,2 mmol), 2-alil-1,3-propanodiol (4,4 g; 38 mmol), N,N-dimetilaminopiridina (183 mg; 1,5 mmol) em diclorometano (120 ml). Manteve-se a reacção a refluxar durante a noite. Após a filtração através de Celite, lavou-se a fase orgânica com solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio e secou-se. A cromatografia de coluna em sílica gel produziu 4,6 g do composto intermediário l-0-(N-tritil-L-valil)-2-alil-l,3-propanodiol. c) Preparação de l-Q-(N-tritil-L-valil)-2-alil-3-estearoíl-l.3-propanodiol A uma solução de l-0-(N-tritil-L-valil)-2-alil-l.3-propanodiol (1,83 g; 4 mmol) em diclorometano (40 ml) e piridina (3,2 ml, 40 mmol) a 0°C adicionou-se, gota a gota, cloreto de estearoílo (3,62 g; 12 mmol) em diclorometano. Aqueceu-se a solução até à temperatura ambiente, e manteve-se durante 3 horas. Depois, lavou-se com solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio e secou-se. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. 1,9 g. 'H-RMN (CDC13): δ 7,30 (m, 15H); 5.70 (m, 1H); 4,99 (m, 2H); 3,93 (m; 2H); 3,55 (m, 1H); 3,27 (m, 2H); 2,68 (m, 1H); 2,30 (m, 2H); 2.23 (m, IH); 2,01 (m, 2H); 1,85 (m, 1H); 1,62 (m,2H); 1,3 (m, 28H); 0,98 (dd, 6H); 0,91 (t. 3H). d) Preparação de 3-(N-tritil-L-valiloximetil)-4-estearoíloxi-butiraldeído
Dissolveu-se, em dioxano (5 ml), l-0-(N-tritil-L-valil)-2-alil-3-estearoíl-l,3-propanodiol (580 mg; 0,8 mmol). Adicionou-se, à solução, tetraóxido de ósmio (20 mg; 0,08 mmol) e piridina (0,05 ml; 0,64 mmol). Adicionou-se uma solução de periodato de sódio em água (3,5 ml) à mistura de reacção. Manteve-se a reacção durante a noite e depois arrefeceu-se até 0°C. Adicionou-se uma solução aquosa de hidrogenossulfito de sódio e
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 44 extractou-se a mistura com diclorometano. Secou-se a fase orgânica e purificou-se por cromatografía de coluna em sílica gel. Rendimento: 250 mg. 'H-RMN (CDC13): δ 9,68 (s, 1H); 7,25 (m, 15H); 3,92 (m; 2H); 3,58 (m, 1H); 2,32 (m, 2H); 2,68 (m, 1H); 2,34 (m. 7H); 1,58 (m, 2H); 1,53 (m, 28H); 0,96 (dd, 6H); 0,86 (t, 3H). e) Preparação de 3-(N-tritil-L-valiloximetil)-4-estearoíloxi-hexen-2-oato de benzilo Adicionou-se brometo de (benziloxicarbonilmetil)trifenilfosfónio (10,7 g; 21,8 mmol) e trietilamina (2,21 g; 21,8 mmol) a uma solução de 3-(N-tritil-L-valiloxi-metil)-4-estearoíloxi-butiraldeído (15,8 g; 21,8 mmol) em diclorometano. Manteve-se a reacção à temperatura ambiente, durante a noite, e evaporou-se a mistura. Adicionou-se éter dietílico (200 ml) ao resíduo e manteve-se a 4°C durante duas horas. Filtrou-se então e evaporou-se o filtrado e purificou-se o produto por cromatografía de coluna em sílica gel. Rendimento: 10 g. 'H-RMN (CDCI3): δ 7,30 (m, 20H); 6,89 (m, 1H); 5,88 (d, 1H); 5,19 (d, 2H); 3,95 (m; 2H); 3,57 (m, 1H); 3,29 (m, 2H); 2,68 (m, 1H); 2,23 (m, 5H); 1,93 (m, 1H); 1,60 (m,2H); 1,32 (m, 28H); 0,95 (dd, 6H); 0,89 (t, 3H). f) Preparação de 3-(N-tritil-L-valiloximetilV4-estearoíloxi-hexenoato Adicionou-se hidrogenocarbonato de sódio (10 mg) e negro paládio (20 mg) a uma solução de 3-(N-tritil-L-valiloximetil)-4-estearoíloxi-hexen-2-oato de benzilo (70 mg; 0,08 mmol) em metanol (3 ml) e acetato de etilo (1 ml). Manteve-se a reacção em atmosfera de hidrogénio, à pressão atmosférica, durante 2 h. Filtrou-se e evaporou-se a mistura. Dissolveu-se o resíduo em diclorometano e lavou-se sucessivamente com solução aquosa de EDTA e solução aquosa cítrica a 2% fria. Evaporou-se a fase orgânica para originar 61 mg de produto. 'H-RMN (CDCU): Ô 7,30 (m, 15H); 3,93 (m, 2H); 3,57 (m, 1H); 3,25 (m, 2H); 2,30 (dt. 4H); 2,20 (m, 1H); 1,70 (m, 1H); 1,62 (m, 4H); 1.30 (m, 28H); 0,95 (dd, 6H); 0,87 (t, 3H).
Exemplo 11 Ácido 3-(N-benziloxicarbonil-L-valiloximetil)-4-estearoíloxi-butírico a) Preparação de l-0-(N-benziloxicarbonil-L-valil)-2-alilil-l,3-propanodiol Adicionou-se dimetilaminopiridina (244 mg; 2 mmol), e DCC (4,5 g; 22 mmol) a uma solução de 2-alilil-l,3-propanodiol (4,6 g; 40 mmol) e N-benziloxicarbonilvalina (5,02 g; 20 mmol) em diclorometano. Após duas horas, filtrou-se a mistura através de Celite,
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 45 evaporou-se e isolou-se ο produto l-0-(N-benziloxicarbonil-L-valil)-2-alilil-l,3-propano-diol, para render 5,01 g. ‘H-RMN (CDC13): δ 7,36 (m, 5H); 5,78 (m, 1H); 5,26 (d, 1H); 5,11 (s, 2H); 5,06 (d, 2H); 4,22 (m, 3H); 3,59 (m, 2H); 2,13 (m, 3H); 1,98 (m, 2H); 0,94 (dd, 6H). b) Preparação de l-Q-(N-benziloxicarbonil-L-valil)-2-alilil-3-0-estearoíl-1,3-propanodiol
Adicionou-se cloreto de estearoílo (7,8 g; 26 mmol) a uma solução de l-0-(N-benziloxicarbonil-L-valil)-2-alilil-l,3-propanodiol (4,46 g; 12,7 mmol) em diclorometano (70 ml) e piridina (6,1 ml; 76 mmol) em banho de gelo. Aqueceu-se a mistura de reacção até à temperatura ambiente e manteve-se durante uma hora. Depois, deitou-se em solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio, secou-se a fase orgânica e purificou-se o produto l-0-(N-benziloxicarbonil-L-valil)-2-alilil-3-0-estearoíl-l,3-propanodiol por cromatografia de coluna em sílica gel. 6,7 g. 'H-RMN (CDCfi): δ 7,34 (m, 5H); 5,30 (d, 1H); 5.11 (s, 2H); 5,08 (d, 2H); 4,34 (m, 1H); 4,10 (m, 4H); 2,29 (t, 2H); 2.13 (m, 4H); 1,62 (m, 3H); 1,25 (m, 28H); 0,90 (m, 9H). c) Preparação de ácido 3-(N-benziloxicarbonil-L-valiloximetil)-4-estearoíloxi-butírico
Dissolveu-se permanganato de potássio (756 mg; 4,8 mmol) em água (7,5 ml). Manteve-se a solução com agitação vigorosa durante 10 minutos. Adicionou-se uma solução de l-0-(N-benziloxicarbonil-L-valil)-2-alilil-3-0-estearoíl-1.3-propanodiol (1 g; 1,6 mmol) e brometo de tetrabutilamónio (77 mg; 0,24 mmol) em benzeno (5 ml). Agitou-se a lama durante 1,5 h, e adicionou-se diclorometano. Adicionou-se. à lama, solução aquosa de bissulfito de sódio até que a mistura descolorou. Acidificou-se a fase orgânica com ácido acético e lavou-se com água. Depois de se evaporar, isolou-se o produto, o ácido 3-(N-benziloxicarbonil-L-valiloximetil)-4-estearoíloxi-butírico (390 mg), por cromatografia de coluna em sílica gel. 'H-RMN (CDC13): δ 7,33 (m, 5H); 5,38 (d, 1H); 5,11 (s, 2H); 4,14 (m, 5H); 2,60 (m, 1H); 2,45 (m, 2H); 2,29 (t, 2H); 2,18 (m, 1H); 1.58 (m, 2H); 1,25 (m, 28H); 0,90 (m, 9H).
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Exemplo 12 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-r5-(L-valiloximetiD-6-estearoíloxi-hexanoínguanosina a) Preparação de 2,.3,-didesoxi-3,-fluoro-5’-0-r5-(N-tritil-L-valiloximetil)-6-estear oíloxi-hexanoíl] guanosina
Adicionou-se dimetilaminopiridina (7 mg; 0,06 mmol), e DCC (136 mg; 0,66 mmol) a uma solução de ácido 5-(N-tritil-L-valiloximetil)-6-estearoíloxi-hexanóico (462 mg; 0,6 mmol) e 2\3’-didesoxi-3’-fluoroguanosina (340 mg; 1,25 mmol) em DMF (3 ml). Manteve-se a reacção à temperatura ambiente durante a noite, e depois a 40°C durante duas horas. Filtrou-se a mistura através de Celite, deitou-se em diclorometano, e lavou-se com solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio. O produto 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-[5-(N-tritil-L-valiloximetil)-6-estearoíloxi-hexanoíl]guanosina foi isolado por cromatografia de coluna em sílica gel. (93 mg). ’Η-RMN (DMSO δ-6): δ 7,88 (s, 1H); 7,29 (m, 15H); 6,52 (s, 2H); 6,17 (dd, 1H); 5,45 (m, 1H); 4,35 (m, 1H); 4,20 (m, 2H); 3,82 (m, 2H); 3,50-2,60 (m, 5H); 2,30 (m, 4H); 2,10 (m, 1H); 1,70 (m, 1H); 1,50 (m, 4H); 1,22 (m, 28H); 0,85 (m, 9H). b) Preparação de 2,.3’-didesoxi-37-fluoro-5,-Q-['5-(L-valiloximetiD-6-estearoíloxi-hexanoill guanosina
Desprotegeu-se em N o composto do passo b) (90 mg, 0,088 mmol) por tratamento com ácido acético a 80% (5 ml) à temperatura ambiente durante 30 minutos. Evaporou-se e purificou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel para produzir 72 mg do composto do título. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 7,88 (s, 1H); 6,54 (s, 2H); 6,18 (dd, 1H); 5,48 (dd, 1H); 4,27 (dt, 1H); 4,19 (m, 2H); 3,98 (m, 4H); 3,17-2,55 (m, 4H); 2,29 (m, 4H); 1,95 (m, 1H); 1.75 (m, 1H); 1,50 (m, 4H); 1,21 (m. 28H); 0,84 (m. 9H).
Exemplo 13 2’.3'-didesoxi-3,-fluoro-5,-Q-f3-('L-valiloximetil)-4-estearoiloxi-butanoínguanosina a) Preparação de 2\3,-didesoxi-3’-fluoro-5’-Q-r3-fN-benziloxicarbonil-L-valiloxi)-4-estearoíloxi-butanoí 11 guanosina
Adicionou-se dimetilaminopiridina (3 mg; 0,02 mmol), e DCC (52 mg; 0,25 mmol) a uma solução de 2\3’-didesoxi-3’-fluoroguanosina (113 mg; 0,42 mmol) e ácido 3-(N-benzilcarbonil-L-valiloximetil)-6-estearoíloxi-butírico (140 mg; 0,21 mmol) em DMF (2 ml). Após dois dias, adicionou-se diclorometano (10 ml) e algumas gotas de ácido acético e filtrou-se a fase orgânica através de Celite. Lavou-se o filtrado com solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio e o produto 2’,3’-didesoxi-3,-tluoro-5’-0-[3-(N-benziloxi-
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 47 carbonil-L-valiloximetil)-4-estearoíloxi-butanoíl]guanosina foi isolado por cromatografia de coluna em sílica gel para produzir 51 mg. 'H-RMN (CDCIj): δ 7,79 (d, 1H); 7,26 (m, 5H); 6,38 (s, 2H); 6,23 (t, 1H); 5,44 (m, 2H); 5,08 (s, 2H);4,50-4,10 (m, 8H); 3,15-2,40 (m, 5H); 2.30 (t, 2H); 2,14 (m, 1H); 1,58 (m, 2H); 1,24 (m, 28H); 0,87 (m. 9H). b) Preparação de 2\3’-didesoxi-3’-fhioro-5,-0-r3-(L-valiloximetil)-4-estearoíloxi-butanoí 11 guanosina
Dissolveu-se o produto do passo a) (76 mg; 0,084 mmol) numa mistura de solventes de metanol (3 ml), acetato de etilo (0,5 ml) e ácido acético (0,01 ml). Adicionou-se negro de paládio (10 mg) à solução. Após 3 horas, filtrou-se e evaporou-se a mistura. Dissolveu-se o resíduo em diclorometano e lavou-se com solução aquosa de EDTA. Secou-se a fase orgânica e co-evaporou-se com tolueno para produzir o composto do título na forma de sal de acetato. Rendimento 65 mg. 'H-RMN (DMSO Ô-6 + D20): δ 7,87 (s, 1H); 5,16 (dd, 1H); 5,37 (dd, 1H); 4,24 (m, 3H); 4,01 (m, 4H); 3,10-2,60 (m, 3H); 2,40 (m, 2H); 2,24 (t, 2H); 1,70 (m, 1H); 1,48 (m, 2H); 1,25 (m, 28H), 0,82 (m, 9H).
Exemplo 14
Cloroformato de 3-ri-(N-CBz-L-valil)-2-estearoíllpropilo
Dissolveu-se l-(N-CBz-L-valil)-2-estearoíl)glicerol (300 mg; 0,5 mmol) em fosgénio a 20% em tolueno (15 ml). Após 18 horas, evaporou-se a solução e co-evaporou-se o resíduo com tolueno, várias vezes, produzindo-se o produto do título num rendimento quantitativo. Este produto forma um carbonato com o nucleósido alvo usando metodologia padrão, por exemplo, fazendo reagir numa solução DMF/ piridina a 10:1 a 0°C durante um período de 3 a 24 horas, deitando em solução de NaHCOj e extractando-a com diclorometano. Desprotege-se o aminoácido, por exemplo, com negro de paládio numa solução de metanol, acetato de etilo, ácido acético para produzir o nucleósido-0-[l-(L-valil)-2-estearoíl-3-propiloxicarbonilo], 'H-RMN (CDCIj): δ 7,40 (m, 5H); 5,28 (m, 2H); 5,10 (s, 2H); 4,35 (m, 5H); 2,35 (m, 2H); 2,17 (m, 1H); 1,56 (m, 2H); 1,30 (m, 28H); 0,95 (m, 9H).
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Exemplo 15
Acido 5-(N-FMOC-L-valiloxiy4-estearoíloxi-pentanóico a) 4,5-di-hidroxi-2-pentanoato de benzilo
Fez-se refluxar, durante a noite, uma mistura de D,L-glicerinaldeído (4,5 g; 50 mmol) e (benziloxicarbonilmetil)-trifenilfosfoniobrometo (24,57 g; 50 mmol) em 100 ml de 1,2-epoxibutano. Evaporou-se a mistura sob vácuo e isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 8 g = 71%. ‘H-RMN (CDCh): δ 2,50 (s, 1H); 2,96 (s, 1H); 3.54 (m, 1H); 3,70 (m, 1H); 4,38 (m, 1H); 5,12 (s, 2H); 6,14 (m, 1H); 6,90 (m, 1H); 7,30 (m, 5H). b) 5-(N-FMOC-L-valiloxi)-4-hidroxi-2-pentanoato de benzilo
Arrefeceu-se, até cerca de 10°C, uma mistura de 4,5-di-hidroxi-2-pentenoato de benzilo (4,4 g; 20 mmol), N-FMOC-L-valina (5,8 g; 17 mmol) e DMAP (0,21 g; 1,7 mmol) em 100 ml de diclorometano. Adicionou-se, gota a gota, uma solução de DCC (4,2 g; 20 mmol) em 25 ml de diclorometano à mesma temperatura e agitou-se a mistura durante a noite à temperatura ambiente. Arrefeceu-se a mistura até 5°C e filtrou-se o uretano. Evaporou-se o filtrado a pressão reduzida e isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 6,6 g = 71%. ‘H-RMN (CDC1;,): δ 0,91 (m, 6H); 2,12 (m, 1H); 4,38 (m. 5H); 5,14 (s, 2H); 5,24 (m, 1H); 6,20 (m, 1H); 6,92 (m, 1H); 7,30 (m, 13H). c) 5-(N-FMOC-L-valiloxi)-4-estearoíloxi-2-pentanoato de benzilo
Adicionou-se, gota a gota, uma solução de estearoílcloreto (4,55 g; 15 mmol) em 25 ml de diclorometano a uma solução de 5-(N-FMOC-L-valiloxi)-4-hidroxi-2-pentanoato de benzilo (6.5 g; 12 mmol) e piridina (2,0 g; 25 mmol) em 100 ml de diclorometano a 10°C. Agitou-se a mistura durante a noite. Adicionou-se 100 ml de uma solução de hidrogenocarbonato de sódio a 5% e agitou-se a mistura durante 30 minutos. Separou-se a fase orgânica e extractou-se a fase da água, duas vezes, com diclorometano. Secaram-se as fases orgânicas combinadas com sulfato de sódio e concentrou-se sob vácuo. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 7,8 g = 80%. 'H-RMN (CDCI3): δ 0,88 (m, 9H); 1,25 (m, 28H); 1,58 (m, 2H); 2,14 (m, 1H); 2,32 (m, 2H); 4.22 (m, 5H); 5,19 (s, 2H); 5,25 (m, 1H); 6,12 (m, 1H); 6,85 (m, 1H); 7,35 (m, 13H). d) Acido 5-(N-FMOC-L-valiloxi)-4-estearoíloxi-pentanóico
Hidrogenou-se uma solução de 5-(N-FMOC-L-valiloxi)-4-estearoíloxi-2-pentanoato de benzilo (3,8 g; 4,69 mmol) em 50 ml de acetato de etilo com 10% de paládio em carvão
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 49 (0,5 g) a pressão normal, durante cinco horas, à temperatura ambiente. Filtrou-se o catalisador e lavou-se com acetato de etilo e 1,4-dioxano. Evaporou-se a solução a pressão reduzida. Rendimento: 3,3 g = 99%. 'H-RMN (CDCh): δ 0,92 (m, 9H); 1,25 (m, 28H); 1,54 (m, 2H); 1,98 (m, 2H); 2,18 (m, 1H); 2,28 (m, 2H); 2,41 (m, 2H); 4,32 (m, 5H); 5,13 (m, 1H); 5,33 (m, 1H); 7,50 (m. 8H).
Exemplo 16
Acido 3-(N-FMOC-L-valiloxi)-2-estearoiloxi-propiónico a) 2.3-di-hidroxipropionoato de benzilo
Agitou-se, a óO°C, durante a noite, uma mistura de ácido D,L-glicérico, di-hidrato de sal de cálcio (2,9 g; 10 mmol) e benzilbrometo (3,8 g; 22 mmol) em 25 ml de DMF. Evaporou-se a mistura a pressão reduzida e isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 4 g = 100%. 'H-RMN (CDC13): δ 3,26 (s, 1H); 3,90 (m. 2H): 4,32 (m, 1H); 5,25 (s, 2H); 7,28 (m, 5H). b) 3-(N-FMOC-L-valiloxi)-2-hidroxipropionato de benzilo
Arrefeceu-se, até cerca de 10°C, uma solução de 2.3-di-hidroxi-propionato de benzilo (4,0 g; 20 mmol), N-FMOC-L-valina (5,4 g; 16 mmol) e DMAP (0,2 g; 1,6 mmol) em 80 ml de diclorometano. Adicionou-se. gota a gota, uma solução de DCC (4,12 g; 20 mmol) em 25 ml. à mesma temperatura, e agitou-se a mistura, durante a noite, à temperatura ambiente. Arrefeceu-se a mistura até 5°C e filtrou-se o uretano.
Evaporou-se o filtrado a pressão reduzida e isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 4,7 g = 45%. 'H-RiMN (CDCI3): δ 0,88 (m, 6H); 2.05 (m, 1H); 4,40 (m, 6H); 5,23 (m, 3H); 7,50 (m, 13H). c) 3-(N-FMOC-L-valiloxi)-2-estearoíloxipropionato de benzilo
Adicionou-se, gota a gota, uma solução de estearoílcloreto (3,64 g; 12 mmol) em 20 ml de diclorometano a uma solução agitada de 3-(N-FMOC-L-valiloxi)-2-hidroxi-propionato de benzilo (4,6 g; 8,89 mmol) e piridina (1,41 g; 17,8 mmol) em 80 ml de diclorometano e agitou-se a mistura, durante a noite, à temperatura ambiente. Adicionou-se 100 ml de solução de hidrogenocarbonato de sódio a 5% e agitou-se a mistura durante 30 minutos. Separou-se a fase orgânica e extractou-se a fase da água, duas vezes, com diclorometano. Secaram-se as fases orgânicas combinadas com sulfato de sódio e
86 327 EP 0 988 304 / PT 50 concentrou-se sob vácuo. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 6,1 g = 87%. 'H-RMN (CDClí): Ô 0,88 (m, 9H); 1,26 (m, 28H); 1,56 (m, 2H); 2,06 (m, 1H); 2,34 (m, 2H); 4,36 (m, 6H); 5,19 (s, 2H); 5,32 (m, 1H); 7,50 (m, 13H). d) Ácido 3-(N-FMOC-L-valiloxi)-2-estearoíloxi-propiónico
Hidrogenou-se uma solução de 3-(N-FMOC-L-vaiiloxi)-2-estearoíloxipropionato de benzilo (0,78 g; 1 mmol) em 20 ml de acetato de etilo com paládio a 10%, em carvão (0,2 g), a pressão normal, durante três horas, à temperatura ambiente. Filtrou-se o catalisador e lavou-se com acetato de etilo e 1,4-dioxano. Evaporou-se a solução a pressão reduzida. Rendimento: 0,63 g = 90%. 'H-RMN (CDClj): δ 0,88 (m, 9H); 1,24 (m, 28H); 1,40 (m, 2H); 2,12 (m, 3H); 4,30 (m, 5H); 5,16 (m, 1H); 5,60 (m, 1H); 7,40 (m, 8H).
Exemplo 17
Cloreto de l-(N-Benziloxicarbonil-L-valiloximetiB-2-estearoíloxicarbonilo
Adicionou-se, com agitação, carbonato de /7/5(triclorometilo) (160 mg; 0,54 mmol) a uma solução de l-(N-benziloxicarbonil-L-valil)-3-estearoílglicerol; l-(N-benziloxicarbonil-L-valiloxi)-3-estearoíloxi-2-propanol (660 mg; 1,12 mmol) e trietilamina (200 mg; 2,0 mmol) em diclorometano (5 ml), à temperatura ambiente. Após 1 hora, adicionou-se /z-hexano (10 ml) e separou-se o cloridrato de trietilamina precipitado, por filtração, através de uma pequena coluna de sílica gel, o produto eluiu ainda com uma quantidade de //-hexano, o solvente evaporou sob vácuo para produzir 650 mg (89%) do composto do título. ,3C-RMN (CDCh; 62,975 Hz): δ 172,8 (estear-COO); 171,2 (Val-COO); 155,9 (CONH); 154,1 (COC1); 136,0 (Ph-Çl-Val); 128,1-127,7 (Ph); 67,2 (CHOH); 66,7 (PhCHo); 63,1 (ValCOOÇH2); 61,8 (estear-COOÇH2); 58,7 (Val-aC); 33,7 (estear-C2); 31,6 (esteari-C16); 31,0 (Val-βΟ; 29,3-28,8 (estear-C4-15); 24,5 (estear-C3); 18,6 e 17,1 (Val2CH3); 13,8 (estear-C18).
Exemplo 18 3-(N-CBz-L-valiloximetilV4-estearoíloxibutilcloro formato a) 3-(N-CBz-L-valil·oximetill-4-estearoíl·oxi-butanol
Adicionou-se, em pequenas porções, boro-hidreto de sódio (0,6 g; 16 mmol) a uma solução agitada de 4-estearoíloxi-3-(N-CBz-L-valiloximetil)butiraldeído (preparado de forma análoga ao exemplo preparativo 6, passo d) usando valina protegida com CBz) (2,0 g; 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 51
3,2 mmol) em 25 ml de metanol a 10°C. Agitou-se a mistura durante 30 minutos e depois acidificou-se com ácido acético. Diluiu-se a mistura com água e extractou-se, três vezes, com diclorometano. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e concentrou-se sob vácuo. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 1,5 g = 75%. 'H-RMN (CDCIj): δ 0,88 (m, 9H); 1,25 (m, 28H); 1,52 (m, 4H); 2,24 (m, 3H); 3,68 (m, 2H); 4,12 (m, 4H); 4,24 (m, IH); 5,08 (s, 2H); 5,22 (m, 1H); 7,36 (m, 5H). hl 3-(N-CBz-L-valiloximetil)-4-estearoíloxibutilcloroformato
Agitou-se, durante a noite, uma solução do intermediário do passo a) em 20 ml de uma solução a 20% de fosgénio em tolueno. Evaporou-se a mistura a pressão reduzida para produzir o composto do título. Rendimento: 1,5 g = 97%. ‘H-RMN (CDCfi): δ 0,88 (m, 9H); 1,28 (m, 28H); 1,58 (m, 2H); 1,72 (m, 2H); 2,15 (m. 1H); 2,31 (m, 2H); 4,08-4,42 (m, 5H); 5,10 (s, 2H); 5,22 (m, 1H); 7,36 (m, 5H).
Exemplo 19 2,.3,-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-ri-(L-valiloxil-2-estearoíloxi-carbonillguanosina al Síntese de 2’.3’-didesoxi-3,-fluoro-5,-Q-n-(N-CBz-L-valiloxi)-2-estearoíloxi-3-propiloxicarbonillguanosina
Adicionou-se cloroformato de 3-{ l-(N-CBz-L-valil)-2-estearoíl}propilo (619 mg; 0.5 mmol) a 0°C a uma solução de 2,,3’-didesoxi-3’-fluoiOguanosina (270 mg; 1 mmol) em DMF (10 ml). Após 3 horas, deitou-se a mistura de reacção em solução de hidrogenocarbonato de sódio e extractou-se com diclorometano. Secou-se a fase orgânica em vácuo e isolou-se 2,,3,-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-[l-(N-CBz-L-valiloxi)-2-estearoíloxi-3-propiloxicarbonil]guanosina por cromatografia de coluna em sílica gel para (195 mg). 'H-RMN (CDCh): δ 7,69 (s, 1H); 7,31 (m, 5H); 6,32 (m, 1H); 5,3 (m, 2H); 5,09 (m, 2H); 4.35 (m, 7H); 2,60 (m. 2H); 2,31 (t, 2H); 2,20 (m, 1H); 1,58 (m, 2H); 1,23 (m, 28H); 0,92 (m, 9H). b) Síntese de 2’.3,-didesoxi-3’-fluoro-5,-Q-n-(L-valiloxi')-2-estearoíloxi-3-propiloxicarbonillguanosina
Dissolveu-se 2’,3,-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-[l-(N-CBz-L-valiloxi)-2-estearoíloxi-3-propiloxicarboniljguanosina (190 mg) numa mistura de solventes de metanol (6 ml), acetato de etilo (2 ml) e ácido acético (1 ml). Adicionou-se negro de paládio (30 mg) à solução e manteve-se a mistura de reacção em atmosfera de hidrogénio, durante 2 horas. Depois filtrou-se e evaporou-se o filtrado e isolou-se o produto do título por coluna de sílica gel. 110 mg.
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 52 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 7,86 (ds, 1H); 6,51 (s, 2H); 6,17 (dd, 1H); 5,48 Çii, 1Η)Γ 5,20 (m, 1H); 4,25 (m, 7H); 2,70 (m, 2H); 2,27 (m, 2H); 1,72 (m, 1H); 1,47 (m, 2H); 1,22 (m, 28H), 0,84 (m, 9H).
Exemplo 20 2’.3,-didesoxi-3,-fluoro-5’-0-[5-('L-valiloxi)-4-estearoíloxi-pentanoíllguanosina
Adicionou-se DMAP (16 mg; 0,13 mmol), HOBT (0,176 g; 1,3 mmol); e DCC (0,248 g; 1,2 mmol) a uma solução de 2’,3’-didesoxi-3’-fluotOguanosina (0,27 g; 1 mmol) e ácido 5-(N-FMOC-L-valiloxi)-4-estearoíloxi-pentanóico (0,94 g; 1,3 mmol) em 30 ml de DMF. Agitou-se a mistura, por três dias, à temperatura ambiente. Adicionou-se 4 g de sílica gel e evaporou-se a mistura sob vácuo. Separou-se o produto 2\3,-didesoxi-3,-fluoro-5’-0-[5-(FMOCL-valiloxi)-4-estearoíloxi-pentanoíl]guanosina por cromatografia de sílica gel. Rendimento: 0,45 g. 'H-RMN (DMSO Ô-6): δ 0,88 (m, 9H); 1,20 (m, 28H); 1,45 (m, 2H); 1,78 (m, 2H); 2,18 (m, 2H); 2,36 (m. 1H); 2,62 (m, 2H); 3,88 (m, 1H); 4,22 (m, 6H); 4,92 (m, 1H); 5,45 (m, 1H); 6,19 (m, 1H); 6,52 (s, 2H); 7,26-7,88 (m, 5H).
Desprotege-se o intermediário, como se mostrou atrás para proporcionar o composto do título.
Exemplo 20a 2,.3,-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-r3-(N-FMOC-L-valiloxil-2-estearoíloxi-propanoíll- guanosina
Adicionou-se uma gota de DMF e cloreto de tionilo (0,52 g; 4,4 mmol) a uma mistura agitada de ácido 3-(N-FMOC-L-valiloxi)-2-estearoíloxipropanóico (0,61 g; 0,88 mmol) em 5 ml de éter dietílico seco. Fez-se refluxar a mistura durante 2 horas e depois evaporou-se a pressão reduzida. Dissolveu-se o produto em diclorometano seco e adicionou-se, gota a gota, a uma solução de 2\3,-didesoxi-3’-fluoroguanosina (0,215 g; 0,8 mmol) e piridina (0,35 g; 4,4 mmol) em 20 ml de DMF. Agitou-se a solução durante a noite. Adicionou-se duas gramas de sílica gel e evaporou-se a mistura sob vácuo. Isolou-se o produto por cromatografia em sílica gel. Rendimento: 0,19 g = 25%. 'H-RMN (CDC13): Ô 0,88 (m, 9H); 1,25 (m, 28H); 1,62 (m, 2H); 2,12 (m, 1H); 2,38 (m, 2H); 2,58 (m, 2H); 4,12-4,76 (m, 6H); 5,32 (m, 2H); 6,12 (m, 1H); 6,26 (m, 1H); 6,44 (m, 1H); 7,12-7,78 (m, 8H).
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ
Exemplo 21
Monoéster 1 -(N-CBz-L-valil)-3-estearoíl-2-propilsuccinato
Dissolveu-se numa mistura de solventes de DMF (15 ml) e piridina (1 ml), 1- (N-CBz-L-valil)-3-estearoíl-glicerol (886 mg; 1,5 mmol) e anidrido succínico (450 mg; 4,5 mmol). Manteve-se a reacção à temperatura ambiente durante 3 h, e depois a 60°C, durante 5 horas. Deitou-se a mistura de reacção numa solução de ácido acético e água e extractou-se com diclorometano. Lavou-se a fase orgânica com água e evaporou-se, e isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel para produzir 900 mg. 'H-RMN (CDC13): δ 7,43 (m, 5H); 5,27 (m, 1H); 5,09 (m, 2H); 4,21 (m, 5H); 2,54 (m, 4H); 2,29 (t, 2H); 2,13 (m, 1H); 1,59 (m, 2H); 1,25 (m, 28H); 0,90 (m, 9H).
Exemplo 22 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5’-Q-í3-[ l-(L-valiloxi)-3-esteaiOÍloxi-2-propiloxicarbonil~|-propanoíl I guanosina
Adicionou-se dimetilaminopiridina (24 mg; 0,2 mmol), 1-hidroxibenzotriazolo (175 mg; 1,3 mmol), DCC (321 mg; 1,56 mmol), a uma solução de 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-guanosina (351 mg; 1,3 mmol) e monoéster l-(N-CBz-L-valil)-3-estearoíl- 2- propilsuccinato (900 mg; 1,3 mmol) em DMF (15 ml). Após 48 horas, filtrou-se a mistura de reacção. Deitou-se 0 filtrado em solução de hidrogenocarbonato de sódio e extractou-se com diclorometano. isolou-se o produto 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-{3-[l-(N-CBz-L-valil)-3-estearoíl-gliceroloxicarbonil]propanoíl}guanosina por cromatografia de coluna em sílica gel. 780 mg. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 7,89 (s, 1H); 7,34 (m. 5H); 6.50 (s, 2H); 6,17 (dd, 1H); 5,46 (m, 1H); 5,38 (m, 1H); 5,02 (s, 2H); 4,22 (m, 7H); 3,32 (s. 4H); 2,80 (m, 2H); 2.57 (m, 2H); 2,31 (m, 2H); 2,05 (m, 1H); 1,48 (m. 2H); 1,21 (m, 28H), 0.84 (m, 9H).
Adicionou-se negro de paládio (50 mg) a uma solução de 2’,3 ’-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-{3-[l-(N-CBz-L-valil)-3-estearoíl-2-propiloxicarbonil]propanoíl}guanosina (460 mg; 0,5 mmol) numa mistura de solventes de metanol (10 ml), acetato de etilo (3 ml) e ácido acético (2 ml). Depois de reagir em atmosfera de hidrogénio durante 2 h, filtrou-se a mistura e secou-se 0 filtrado. Isolou-se o produto do título por cromatografia de coluna em sílica gel. 360 mg.
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 54 ’Η-RMN (DMSO δ-6): δ 7,89 (s, 1H); 6,51 (s, 2H); 6,16 (dd, 1H); 5,48 (m, 1H); 5,17 (m, 1H); 4,28 (m, 7H); 2,90 (m, 2H); 2,58 (m, 4H); 2,28 (t, 2H); 1,85 (m, 1H); 1,49 (m, 2H); 1,22 (m, 28H), 0,85 (m, 9H).
Exemplo 23
O— estearoíl O— valil-N-CBz
Adicionou-se lentamente (lh) uma solução de cloreto de estearoílo (12,1 g; 40 mmol) em CH2C12 (100 ml) a uma solução de ácido 2,2-/>A(hidroximetil)propiónico (26,8 g; 200 mmol; 5,0 eq.) em piridina (400 ml) à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura de reacção, à temperatura ambiente, durante a noite, e a seguir concentrou-se (100 ml) sob vácuo. Tratou-se, lentamente, a mistura de reacção com NaHCOj saturado (400 ml) e depois extractou-se com CH2C12 (3x300 ml). Combinaram-se as camadas orgânicas, lavaram-se com salmoura, secaram-se em Na2SC>4 e concentraram-se em vácuo. Submeteu-se o material bruto a cromatografia em sílica gel (500 g) com CEECT-MeOH de 19/1 a 4/1, como eluente, para produzir 0 monoestearoíléster, Rt- (CH2Cl2-MeOH a 9/1) 0,33. 12,5 g (78%).
Arrefeceu-se, até 0°C, uma solução de N-Cbz-L-valina (18,85 g; 75 mmol; 2,4 eq.) e DMAP (855 mg; 7 mmol; 0,22 eq.) em CEbCl? (800 ml) e tratou-se com DCC (14,4 g; 70 mmol; 2,2 eq.). Agitou-se a mistura de reacção, à temperatura ambiente, durante 30 minutos e depois tratou-se lentamente (1 h) com uma solução do menoestearoíloéster acima (12,5 g; 31,2 mmol; 1 eq.) em CHCI3 (200 ml; isento de etanol). Depois de se ter agitado durante a noite, filtrou-se e lavou-se 0 filtrado com salmoura, secou-se com Na2S04 e concentrou-se em vácuo. Submeteu-se 0 material bruto a cromatografia em sílica gel (500 g) com CEbCE-MeOH de 19/1 a 4/1, como eluente, para produzir 0 diéster representado acima. Rt· (CH2Cl2-MeOH a 9/1) 0,46. 13,8 g (70%). ’Η-RMN (CDCI3): 5 7,35-7,3 (m, 5H, ArH); 5,32 (d, 1H, CH); 5,10 (s, 2H, CH2Ph); 4,33-4,18 (m, 4H, CH2); 2,28 (t, 2H, CH2); 2,22-2,05 (m, 1H, CH); 1,65-1,50 (m, 2H, CH2); 1,35-1,15 (m, 31H); 1,00-0,82 (m, 9H, Me).
Exemplo 24 2’.3’-didesoxi-3,-fluoro-5,-0-r5-(,L-valiloxi)-4-estearoíloxi-pentanoíllguanosina a) Síntese de 2’,3’-didesoxi-3,-fluoro-5’-Q-r5-(N-FMOC-L-valiloxi)-4-estearoíl-oxipentanoí 11 guanosina
Co-evaporou-se, duas vezes, com DMF, e reduziu-se até cerca de 30 ml, uma mistura de 2’,3,-didesoxi-3’-fluoroguanosina (269 mg; 1,0 mmol), ácido 5-(N-FMOC-L-valiloxi)-4-estearoíloxi-pentanóico (940 mg; 1,3 mmol), DMAP (16 mg; 0,13 mmol) e HOBT (176 mg; 1,3 mmol). Adicionou-se DDC (248 mg; 1,2 mmol) e agitou-se a mistura, durante a noite, à temperatura ambiente. Filtrou-se a mistura e evaporou-se a solução a pressão reduzida. Adicionou-se acetato de etilo (50 ml) e lavou-se a fase orgânica, duas vezes, com ácido acético a 5%, com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e com água. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 450 mg. ’Η-RMN (DMSO δ-6): δ 0,88 (m, 9H); 1,22 (m, 28H); 1,45 (m, 2H); 1,83 (m, 2H); 2,21 (m, 2H); 2,37 (m, 1H); 5,36-5,58 (m. 1H); 6,18 (m, IH); 6,50 (s, 2H); 7,28-7,91 (m, 10H). b) Síntese de 2’.3’-didesoxi-3’-fluoro-5’-Q-í5-(L-valiloxi)-4-estearoíloxipentanoíl1-guanosina
Agitou-se, durante três dias, à temperatura ambiente, uma mistura de 2\3,-didesoxi-3,-fluoro-5’-0-[5-(N-CBz-L-valiloxi)-4-estearoíloxipentanoíl]guanosina (300 mg; 0,308 mmol) em 5 ml de N.N-di-isopropiletilamina e 5 ml de DMF. Adicionou-se ácido acético (5 ml) e evaporou-se a mistura a pressão reduzida. Isolou-se o produto na forma de sal de acetato por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 90 mg. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 0.88 (m, 9H); 1,24 (m. 28H); 1,55 (m, 2H); 1,91 (m, 2H); 2,31 (m, 2H); 2,44 (m, 1H); 2,56-3,08 (m, 2H); 3,15 (m, 1H); 4.00-4,49 (m, 5H); 5,08 (m, 1H); 5,40-5,62 (m, 1H); 6,24 (m, 1H); 6,54 (s, 2H); 7,96 (s, 1H).
Exemplo 25 2,,3’-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-r3-(L-valiloxiV2-estearoíloxi-propanoíl1guanosina a) Síntese de 2’.3’-didesoxi-3,-fluoro-5’-Q-[3-(N-CBz-L-valiloxi)-2-estearoíloxi-propanoíll guanosina
Co-evaporou-se, duas vezes, com DMF, e reduziu-se até cerca de 30 ml, uma mistura de 2’,3’-didesoxi-3’-fluoroguanosina (404 mg; 1,5 mmol), ácido 3-(N-CBz-L-valiloxi)-2-estearoíloxi-propanóico (1,06 g; 1,75 mmol), DMAP (24 mg; 0.2 mmol) e HOBT (264 mg; 1,82 mmol). Adicionou-se DDC (372 mg; 1,8 mmol) e agitou-se a mistura, durante a
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 56 noite, à temperatura ambiente. Filtrou-se a mistura e evaporou-se a solução a pressão reduzida. Adicionou-se acetato de etilo (50 ml) e lavou-se a fase orgânica, duas vezes, com ácido acético a 5%, com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e com água. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia em coluna de sílica gel. Rendimento: 0,73 g. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 0,82 (m, 9H); 1,22 (m. 28H); 1,48 (m, 2H); 2,31 (m, 2H); 2.50- 3,00 (m, 2H); 3,91 (m, 1H); 4,18-4,52 (m, 5H); 5,00 (s, 2H); 5,30-5,61 (m, 2H); 6,16 (m. 1H); 6,50 (s, 2H); 7,32 (m, 5H); 7,71 (m, 1H); 7,92 (s, 1H); 10,18 (s, 1H). b) Síntese de 2’.3’-didesoxi-3,-fluoro-5'-0-f3-(L-valiloxi)-2-estearoíloxipropanoíri-guanosina
Hidrogenou-se com negro de paládio (300 mg), com pressão normal, durante três horas, uma solução de 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-[3-(N-CBz-L-valiloxi)-2-estearoíloxi-propanoíljguanosina (350 mg; 0,4 mmol) em acetato de etilo (25 ml), metanol (5 ml) e ácido acético (5 ml). Filtrou-se o catalisador e lavou-se com acetato de etilo e metanol. Evaporou-se a solução a pressão reduzida e isolou-se o produto na forma de sal de acetato por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 120 mg. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 0,84 (m, 9H); 1,22 (m. 28H); 1,50 (m, 2H); 2,32 (m, 2H); 2.50- 3,00 (m, 2H); 3,07 (m, 1H); 4,21-4,59 (m, 5H); 5.38-5,59 (m, 2H); 6,17 (m, 1H); 6,0 (s. 2H); 7,90 (s, 1H).
Exemplo 26 2,,3,-didesoxi-3’-fluoro-5'-0-íácido 3,3-/v8(L-valiloximetil)propiónicolguanosina a) Síntese de d.d-fr/sfN-CBz-L-valiloximetilVbut-1 -eno
Adicionou-se DCC (9,08 g; 44 mmol), em porções, a uma solução de 2-alil-l,3-propandiol (2,32 g; 20 mmol), N-CBz-L-valina (10,06 g; 40 mmol) e DMAP (0,488 g; 4 mmol) em 120 ml de diclorometano e agitou-se a mistura durante a noite à temperatura ambiente. Arrefeceu-se a mistura até 5°C e filtrou-se o uretano. Evaporou-se o filtrado e isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 9,0 g. ‘H-RMN (CDC13): δ 0,89 (m, 12H); 5,11 (s, 2H); 5,73 (m, 1H). b) Síntese de ácido 3.3-to(N-CBz-L-valiloximetil)-propiónico
Adicionou-se 100 ml de água a uma solução fria de 4,4-6í's(N-CBz-L-valiloxi-metil)-but-l-eno (14,6 g; 25 mmol) e brometo de tetrabutilamónio (1,3 g; 4 mmol) em 120 ml de benzeno. Adicionou-se, em porções, sob forte agitação, permanganato de potássio (15,8 g; 100 mmol), e agitou-se a mistura durante 2 horas entre 15°C e 20°C. Adicionou-se uma solução aquosa de bissulfito de sódio à lama até que a mistura descorou. Acidificou-se a
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 57 mistura com ácido clorídrico 2N e extractou-se quatro vezes com acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica, duas vezes, com água, secou-se com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 7,5 g. 'H-RMN (CDCh): δ 0,89 (m, 12H); 2,05 (m, 2H); 2,46 (m, 2H); 2,62 (m, 1H); 4,20 (m, 6H); 5,11 (s, 4H); 5,30 (m, 2H); 7,35 (m, 10H). c) Síntese de 2,.3,-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-í'3.3-/7/'s'(N-CBz-L-valiloximetil')propio-nillguanosina
Co-evaporou-se, duas vezes, com DMF, e reduziu-se até cerca de 120 ml, uma mistura de 2,,3,-didesoxi-3’-fluoroguanosina (1,35 g; 5 mmol), ácido 3,3-6A(N-CBz-L-valiloximetil)propiónico (3,6 g; 6 mmol), DMAP (0,061 g; 0,5 mmol) e HOBT (0,81 g; 6 mmol). Adicionou-se DDC (1,24 g; 6 mmol) e agitou-se a mistura durante a noite, à temperatura ambiente. Filtrou-se a mistura e evaporou-se a solução a pressão reduzida. Adicionou-se acetato de etilo (200 ml) e lavou-se a fase orgânica, duas vezes, com ácido acético a 5%, com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e com água. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia em coluna de sílica gel. Rendimento: 2,7 g. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 0,88 (m, 12H); 2,00 (m, 2H); 2,50-3,00 (m, 2H); 3,90-4,43 (m, 10H); 5,08 (s, 4H); 5,32-5,59 (m, 1H); 6,17 (m, 1H); 6,50 (s, 2H); 7,28 (m, 10H); 7,72 (m, 2H); 7,90 (s, 1H). d) Síntese de 2\3’-didesoxi-3’-fluoro-5,-Q-rácido 3.3-6A(L-valiloximetil)-propiónicolguanosina
Hidrogenou-se com negro de paládio (0,3 g), durante duas horas, a pressão normal, uma solução de 2,,3,-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-[3,3-6A(N-CBz-L-valiloximetil)propionil]-guanosina (2,6 g; 3,1 mmol) em 80 ml de acetato de etilo. 20 ml de metanol e 20 ml de ácido acético. Filtrou-se o catalisador e lavou-se com acetato de etilo e metanol. Evaporou-se a solução a pressão reduzida e isolou-se o produto na forma de sal de ó/sacetato por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 1,2 g. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 0,90 (m, 12H); 1,78 (m, 2H); 2,50-3,00 (m, 2H); 3,09 (m, 2H); 4,02-4,45 (m, 8H); 5,34-5,59 (m, 1H); 6,62 (s, 2H); 7,88 (s, 1H).
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Exemplo 27 2\3,-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-f3-(L-valiloximetil)-4-estearoíloxi-butoxicarbonill- guanosina a) Síntese de 2’.3’-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-í3-(N-CBz-L-valiloximetilV4-estearoíl-oxibutoxicarbonillguanosina
Adicionou-se piridina (198 mg; 2,5 mmol) e uma solução de cloreto de 3-(N-CBz-L-valiloximetil)-4-estearoíloxi-butoxicarbonilo (750 mg; 1,1 mmol) em 5 ml de diclorometano a uma solução de 2’,3’-didesoxi-3’-fluoroguanosina (269 mg; 1,0 mmol em DMF absoluto 10 ml) em 5 ml de diclorometano. Agitou-se a mistura, durante 3 dias, à temperatura ambiente. Evaporou-se a solução a pressão reduzida e isolou-se por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento 120 mg. 'H-RMN (DMSO d-6): δ 0,88 (m, 9H); 1,24 (m, 28H); 5,08 (s, 2H); 6,24 (m, 1H); 8,00 (s, 1H). b) Síntese de 2’.3’-didesoxi-3,-fluoro-5,-Q-í3-(L-valiloxi)-4-estearoíloxi-butoxi-carbonill guanosina
Hidrogenou-se com negro de paládio (40 mg), a pressão normal, durante duas horas, uma mistura de 2\3’-didesoxí-3’-fluoro-5’-0-[3-(N-CBz-L-valiloximetil)-4-estearoíloxi-butoxicarboniljguanosina em 15 ml de acetato de etilo. 2 ml de metanol e 2 ml de ácido acético. Filtrou-se o catalisador e lavou-se com acetato de etilo e metanol. Evaporou-se a solução e isolou-se o produto na forma de sal de acetato por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 78 mg. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 0,87 (m, 9H); 1,22 (m. 28H); 1,48 (m, 2H); 1,68 (m, 2H); 2,12 (m, 1H); 2,26 (m, 2H); 250.3,00 (m, 2H); 4,00-4,42 (m, 10H); 5,34-5,58 (m, 1H); 6,18 (m, 1H); 6,52 (s, 2H); 7.82 (s, 1H).
Exemplo 28 T ,3 ’ -didesoxi-3 ’ -fluoro-5 ’ -O-Γ 2-( L-valiloxi)estearoíll guanosina a) Síntese de 2-hidroxiestearato de benzilo
Adicionou-se í-butoxi de potássio (1,23 g; 11 mmol) a uma solução agitada de ácido D,L-2-hidroxiesteárico (3,0 g; 10 mmol) em 20 ml de DMF seco e agitou-se a mistura, durante uma hora, a 60° .Adicionou-se brometo de benzilo (2,14 g; 12,5 mmol) e agitou-se a mistura durante seis horas a 80° . Evaporou-se a mistura a pressão reduzida e adicionou-se 100 ml de acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica e lavou-se quatro vezes com água. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e concentrou-se sob vácuo. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 3,3 g.
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 59 'H-RMN (CDCh): δ 0,88 (m, 3H); 1,26 (m, 28H); 1,62 (m, 2H); 4,20 (m, 1H); 5,20 (s, 2H); 7,36 (m, 5H). b) Síntese de 2-(N-FMOC-L-valiloxi)estearato de benzilo
Adicionou-se uma solução de DCC (2,5 g; 12 mmol) a uma solução de 2-hidroxi-estearato de benzilo (3,2 g; 8,2 mmol), N-FMOC-L-valina (3,4 g; 10 mmol) e DMAP (0,12 g; 1 mmol) em 80 ml de diclorometano e agitou-se a mistura, durante a noite, à temperatura ambiente. Arrefeceu-se a mistura até 5°C e filtrou-se o uretano. Evaporou-se o filtrado e isolou-se o produto por cromatografía de coluna em sílica gel. Rendimento: 4,5 g. 'H-RMN (CDClj): δ 0,90 (m, 6H); 1,26 (m, 1H); 1,82 (m, 2H); 2,16 (m, 1H); 4,21 (m, 1H); 4,36 (m, 2H); 5,10 (m, 1H); 5,18 (s, 2H); 5,28 (m, 1H); 7,20-7,80 (m, 13H). cl Síntese de ácido 2-(N-FMOC-L-valiloxi)esteárico
Hidrogenou-se uma solução de benzil-2-(N-FMOC-L-valiloxi)estearato (4,4 g; 6,2 mmol) em 50 ml de acetato de etilo com paládio a 10%, em carvão (0,5 g), a pressão normal, durante duas horas. Filtrou-se o catalisador e lavou-se com acetato de etilo e 1,4-dioxano. Evaporou-se a solução a pressão reduzida e isolou-se o produto por cromatografía de coluna em sílica gel. Rendimento: 3,4 g. 'H-RMN (CDC13): δ 0,88 (m, 6H); 1,26 (m, 28H); 1,82 (m, 2H); 2,28 (m, 1H); 4,20 (m, 1H); 4,40 (m, 2H); 5,00 (m, 1H); 5,41 (m, 1H); 7,26-7.82 (m, 8H). d) Síntese de 2,.3’-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-f2-(N-FMOC-L-valiloxi)estearoíll-guanosina
Co-evaporou-se, duas vezes, com DMF, e reduziu-se até cerca de 30 ml, uma mistura de 2\3’-didesoxi-3’-fluoroguanosina (404 mg; 1,5 mmol), ácido 2-(N-FMOC-L-valiloxi)-esteánco (1.24 g; 2 mmol), DMAP (24 mg; 0,2 mmol) e HOBT (264 mg; 1,95 mmol). Adicionou-se DDC (372 mg; 1,8 mmol) e agitou-se a mistura durante a noite, à temperatura ambiente. Filtrou-se a mistura e evaporou-se a solução a pressão reduzida. Adicionou-se acetato de etilo (50 ml) e lavou-se a fase orgânica, duas vezes, com ácido acético a 5%, com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e com água. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto na forma de sal acetato por cromatografía de coluna em sílica gel. Rendimento: 1,2 g. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 0,80-0,90 (m, 9H); 1,22 (m, 28H); 2,12 (m, 1H); 2,50-3,00 (m, 2H); 3,98 (m, 1H); 4,96 (m, 1H); 6,17 (m, 1H); 6,50 (s, 2H); 7,32-7,95 (m, 10H). e) Síntese de 2’.3,-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-r2-(L-valiloxi)estearoíllguanosina
Adicionou-se DBU (1,35 g; 8,9 mmol) a uma solução de 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro- 5'-0-[2-(N-FMOC-L-valiloxi)estearoíl]guanosina (800 mg; 0,89 mmol) em 15ml de DMF e
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 60 agitou-se a mistura durante 5 minutos à temperatura ambiente. Adicionou-se ácido acético (2 ml) e evaporou-se a mistura a pressão reduzida. Adicionou-se água (20 ml) e extractou-se a mistura, três vezes, com diclorometano. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 165 mg. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 0,87 (m, 9H); 1,22 (m, 28H); 1,70 (m, 2H); 1,88 (m, 1H); 2,50-3,00 (m, 2H); 3,20 (m, 1H); 4,32 (m, 3H); 4,94 (m, IH); 5,32-5,54 (m, 1H); 6,14 (m, 1H); 6,49 (s, 2H); 7,89 (s, 1H).
Exemplo 29 2’3’-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-3-ri,3-/?A(L-valiloxi)-2-propiloxicarbonilpropanoíll- guanosina a) Síntese do monoéster l,3-dibenziloxi-2-propilsuccinato
Agitou-se, durante uma hora. a 60°C, uma solução de l,3-dibenziloxipropan-2-ol (6,8 g; 25 mmol) e anidrido succínico (7,5 g; 75 mmol) e DMAP (12,2 g; 100 mmol). Evaporou-se a mistura a pressão reduzida, acidificou-se com HC1 2N e extractou-se duas vezes com acetato de etilo. Lavou-se, três vezes, com água, a fase orgânica combinada, secou-se com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 7,8 g. b) Síntese de 2’,3’-όί065θχί-3’-ί]ηοΓθ-5’-0-13-( 1 -3-dibenziloxi-2-propiloxi-carboniDpropanoínguanosina
Co-evaporou-se, duas vezes, com DMF, e reduziu-se até cerca de 150 ml, uma mistura de 2\3’-didesoxi-3’-fluoroguanosina (1,61 g; 6 mmol), HOBT (0,972 g; 7,2 mmol), DMAP (73,3 mg; 0,6 mmol) c monoéster l,3-dibenziloxi-2-propilsuccinato (2,68 g; 7,2 mmol). Adicionou-se DDC (1,55 g; 7,5 mmol) e agitou-se a mistura durante 72 horas, à temperatura ambiente. Filtrou-se a mistura e evaporou-se a solução a pressão reduzida. Adicionou-se acetato de etilo (200 ml) e lavou-se a fase orgânica, duas vezes, com ácido acético a 5%, com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e com água. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 3,3 g. cl Síntese de 2’.3,-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-f3-( 1.3-di-hidroxi-2-propiloxicarbonil)-propanoíllauanosina
Hidrogenou-se uma solução de 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-[3-(l,3-dibenziloxi-2-propiloxicarbonil)propanoíl]guanosina (3,2 g; 5,13 mmol) em 50 ml de acetato de etilo, 50 ml de metanol e 10 ml de ácido acético, com negro de paládio (0,6 g), durante duas horas, a
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 61 40 psi. Filtrou-se ο catalisador e lavou-se com metanol. Evaporou-se a solução a pressão reduzida e isolou-se o produto por cromatografía de coluna em sílica gel. Rendimento: 1,64 dl Síntese de 2’.3’-didesoxi-3,-0uoro-5'-O-!3-n.3-6/i'(N-CBz-L-valiloxi)-2-propil-oxicarboniOpropanoíl] I auanosina
Co-evaporou-se, duas vezes, com DMF, e reduziu-se até cerca de 60 ml, uma mistura de 2\3,-dÍdesoxi-3’-fluoro-5’-0-[3-(l,3-dÍ-hidroxi-2-propiloxicarbonil)propanoíl]guanosina (1,93 g; 2,93 mmol), N-CBz-L-valina (1,76 g; 7 mmol), HOBT (0,95 g; 7 mmol) e DMAP (85,5 mg; 0,7 mmol). Adicionou-se DDC (1,55 g; 7,5 mmol) e agitou-se a mistura durante a noite, à temperatura ambiente. Aqueceu-se a mistura durante 4 horas a 60°C e depois arrefeceu-se até cerca de 10HC. Filtrou-se a mistura e reduziu-se a solução a pressão reduzida. Adicionou-se acetato de etilo (150 ml) e lavou-se a fase orgânica, duas vezes, com ácido acético a 5%, com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e com água. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografía de coluna em sílica gel. Rendimento: 1,6 g. e) Síntese de 2’.3,-didesoxi-3’-fluoro-5’-Q-i 3-Γ1.3-to(L-valiloxi)-2-propiloxi-carboniPpropanoíH I guanosina
Hidrogenou-se uma solução de 2’,3’-didesoxi-3'-fluoro-5'-0-{3-[l,3-tó(N-CBz-L-valiloxi)-2-propiioxicarbonil)propanoíl]}guanosina (1,6 g; 1,75 mmol) em 80 ml de acetato de etilo, 20 ml de metanol e 20 ml de ácido acético, com negro de paládio (0,3 g), durante duas horas, à temperatura ambiente, a pressão normal. Filtrou-se o catalisador e lavou-se com metanol. Evaporou-se a solução a pressão reduzida e isolou-se o produto na forma de sal diacetato por cromatografía de coluna em sílica gel. Rendimento: 1,02 g. ‘H-RMN (DMSO ô-6): ô 0,84 (m, 12H); 1,85 (m. 2H); 2,58 (m, 4H); 2,60-3,10 (m, 2H); 3,11 (m, 2H); 3,61-4,39 (m, 7H); 5,19 (m, 1H); 5.35-5,56 (m, 1H); 6,16 (m, 1H); 6.62 (s, 2H); 7,89 (s, 1H).
Exemplo 30 223’ -didesoxi-3 ’ -fluoro-5 ’ -Ο- í 3-11 -(L-valiloxi>3-hidroxi-2-propiloxicarbonil)- propanoíll 1 guanosina al Síntese de 2E3’-didesoxi-3’-fhioro-5,-0-l3-n-(N-CBz-L-valiloxi)-3-hidroxi-2-propiloxicarboniDpropanoín < guanosina
Co-evaporou-se, duas vezes, com DMF, e reduziu-se até cerca de 60 ml, uma mistura de 2\3’-didesoxi-3,-fluoro-5’-0-[3-(l,3-di-hidroxi-2-propiloxicarbonil)propanoíl]guanosina (1,3 g; 2,93 mmol), N-CBz-L-valina (1,00 g; 4 mol), HOBT (0.54 g; 4 mmol) e DMAP
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 62 (48,8 mg; 0,4 mmol). Adicionou-se DDC (0,91 g; 4,4 mmol) e agitou-se a mistura durante 72 horas, à temperatura ambiente. Filtrou-se a mistura e evaporou-se a solução a pressão reduzida. Adicionou-se acetato de etilo (150 ml) e lavou-se a fase orgânica, duas vezes, com ácido acético a 5%, com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e com água. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 0,99 g. b) Síntese de 2’.3,-didesoxi-3>-fluoro-5’-Q-i 3-ri-(L-valiloxi)-3-hidroxi-2-propiloxicarboniDoropanoíll 1 guanosina
Hidrogenou-se uma solução de 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-{3-[l-(N-CBz-L-valiloxi)-3-hidroxi-2-propiloxicarbonil)propanoíl]}guanosina (0,82 g; 1,21 mmol) em 30 ml de acetato de etilo, 15 ml de metanol e 15 ml de ácido acético, com negro de paládio (0,15 g), durante duas horas, à temperatura ambiente e pressão normal. Filtrou-se o catalisador e lavou-se com metanol. Evaporou-se a solução a pressão reduzida e isolou-se o produto na forma de sal acetato por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 0,5 g. 'H-RMN (DMSO 6-6): Ó 0,84 (m, 6H); 1,86 (m, 1H); 2,58 (m, 4H); 2,63-3,02 (m, 2H); 3,10-4,38 (m, 9H); 5,34-5,55 (m. 1H); 6,16 (m, 1H); 6,56 (s, 2H); 7,90 (s, 1H).
Exemplo 31 5 ’-L-valil-2 ’.3 ’-didesoxi-3 ^fluoroguanosina
Adicionou-se DCC (1,36 g; 6,6 mmol) a uma solução de 2\3,-didesoxi-3’-fluoro-guanosina (810 mg; 3 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (73 mg; 0,6 mmol), N-CBz-L-valina (1,5 g; 6 mmol) e 1-hidroxibenzotnazolo (810 mg; 6 mmol) em DMF (20 ml). Após 72 h, filtrou-se a mistura de reacção e concentrou-se in vacao. Isolou-se 5’-(N-CBz-L-valil)-2\3,-didesoxi-3’-fluoroguanosína por cromatografia de coluna em sílica gel (1,15 g).
Dissolveu-se este intermediário (503 mg; 1 mmol) numa mistura dos solventes acetato de etilo (10 ml), metanol (20 ml) e ácido acético (2 ml). Adicionou-se negro de paládio (100 mg) e manteve-se a mistura de reacção em hidrogénio à pressão atmosférica durante 3 h. Após filtração e concentração, isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel (370 mg). ’Η-RMN (DMSO 6-6): 6 7,94 (s, 1H); 6,52 (s, 2H); 6,17 (dd, 1H); 5,47 (dd, 1H); 4,15 (m, 3H); 3,15 (d, 1H); 3,01-2.62 (m, 2H); 1,80 (m, 1H); 0,82 (dd, 6H).
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Exemplo 32 2 ’ .3 ’-didesoxi-3 ’-Αιιογο-5-0-Γ 2-(L-valiloxi)propioni 11 guanosina a) Síntese de 4-metoxibenzil-2-hidroxipropionato
Adicionou-se r-butoxi de potássio (12,34 g; 110 mmol) a uma solução agitada de ácido D,L-2-hidroxipropiónico (9,0 g; 100 mmol) em 100 ml de DMF seco e agitou-se a mistura, durante uma hora, a 60° .Adicionou-se cloreto de 4-metoxibenzilo (18,8 g; 120 mmol) e agitou-se a mistura durante oito horas a 60°. Evaporou-se a mistura a pressão reduzida e adicionou-se 250 ml de acetato de etilo. Secou-se a fase orgânica e lavou-se quatro vezes com água. Secou-se o produto com sulfato de sódio e concentrou-se sob vácuo. Rendimento: 16,8 g. 'H-RMN (CDCU): δ 1,40 (m, 3H); 3,81 (s, 3H); 4,26 (m, 1H); 5,14 (s, 2H); 6,90 (d, 2H); 7,28 (d, 2H). b) Síntese de 4-metoxibenzil-2-(N-CBZ-L-valiloxi)propionato Adicionou-se uma solução de DCC (4,54 g; 22 mmol) a uma solução de 4-metoxibenzil-2-hidroxi-propionato (4,2 g; 20 mmol), N-CBz-L-valina (5,02 g; 20 mmol) e DMAP (0,24 g; 2 mmol) em 100 ml de diclorometano e agitou-se a mistura, durante a noite, à temperatura ambiente. Arrefeceu-se a mistura até 5°C e filtrou-se o uretano. Evaporou-se o filtrado e isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 7,9 g. 'H-RMN (CDC13): δ 0,88 (m, 6H); 1,50 (m, 3H); 2,26 (m, 1H); 3,81 (s, 3H); 4,34 (m, 1H); 5,04-5,30 (m, 6H); 6,88 (d, 2H); 7,26 (m, 7H). c) Síntese de ácido 2-(N-CBZ-L-valiloxi)propiónico
Adicionou-se ácido trifluoroacético (10 ml) a uma solução de 4-metoxibenzil-2-(N-CBZ-L-valiloxi)propionato (7,8 g; 17,5 mmol) em diclorometano (100 ml) e agitou-se a solução, durante uma hora, à temperatura ambiente. Evaporou-se a solução a pressão reduzida e isolou-se 0 produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 5,0 g. 'H-RMN (CDCU): δ 0,94 (m, 6H); 1,56 (d, 3H); 2,30 (m, 1H); 4,42 (m, 1H); 5.12-5,30 (m, 4H); 7,28 (m, 5H). d) Síntese de 2,.3’-didesoxi-3’-fluoro-5-Q-í2-(N-CBZ-L-valiloxi)propionil1-guanosina
Co-evaporou-se, duas vezes, com DMF, e reduziu-se até cerca de 30 ml, uma mistura de 2’,3,-didesoxi-3’-íluoroguanosina (404 mg; 1,5 mmol), ácido 2-(N-CBZ-L-valiloxi)-propiónico (0,582 g; 1,8 mmol), DMAP (22 mg; 0,18 mmol) e HOBT (243 mg; 1,8 mmol). Adicionou-se DDC (412 mg; 2,0 mmol) e agitou-se a mistura durante a noite, à temperatura
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 64 ambiente. Filtrou-se a mistura e evaporou-se a solução a pressão reduzida. Adicionou-se 100 ml de acetato de etilo e lavou-se a fase orgânica, duas vezes, com ácido acético a 5%, com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e com água. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 0,72 g. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 0,92 (m, 6H); 1,40 (d, 3H); 2,10 (m, 1H); 2,50-3,06 (m. 2H); 4,03 (m, 1H); 4,20-4,44 (m, 3H); 5,04 (s, 2H); 5,12 (m, 1H); 5,44-5,58 (m, 1H); 6,18 (t, 1H); 6,52 (s, 2H); 7,36 (m, 5H); 7,70 (d, 2H); 7,92 (s, 1H). e) Síntese de 2,.3’-didesoxi-3’-fluoro-5-0-r2-(L-valiloxi)prooanoíllguanosina Hidrogenou-se uma solução de 2,,3’-didesoxi-3’-fluoro-5-0-[2-(N-CBZ-L-valiloxi)propionil]guanosina (0.6 g; 1,04 mmol) em 20 ml de acetato de etilo, 10 ml de metanol e 10 ml de ácido acético, com negro de paládio (0,1 g), durante duas horas, à temperatura ambiente e pressão normal. Filtrou-se o catalisador e lavou-se com metanol. Evaporou-se a solução a pressão reduzida para produzir o produto do título na forma de sal acetato. Rendimento: 0,5 g. 'H-RMN (DMSO δ-6): 5 0,88 (m, 6H); 1,40 (d, 3H); 1,92 (m, 4H); 2,52-3,04 (m, 2H); 3,18 (m, 1H); 4,18-4,42 (m, 3H); 5,06 (m, 1H); 5,32-5,58 (m, 2H); 6,18 (m, 1H); 6,52 (s, 2H); 7,90 (s, 1H).
Exemplo 33 2*.3 ’-didesoxi-3 ’-fluoro-5 ’-Ο-3-Γ 1,3-6/.v(L-valiloxi)-1 -propiloxicarbonillpropanoíl-auanosina a) Síntese do monoéster 4-metoxibenzil-succinato
Adicionou-se piridina (79,1 g; 1000 mmol) a uma mistura de anidrido succínico (75 g; 750 mmol) e álcool 4-metoxibenzílico (69.1 g; 500 mmol) em 1,4-dioxano (300 ml) e agitou-se a mistura, durante cinco horas, a 80°C,. Evaporou-se a mistura a pressão reduzida e adicionou-se 600 ml de acetato de etilo e 60 ml de ácido acético. Lavou-se, três vezes, com água, a fase orgânica, secou-se com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Recristalizou-se o produto de tolueno. Rendimento: 104 g. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 2,48 (m, 4H); 3,72 (s, 3H); 5,00 (s, 2H); 6,90 (d, 2H); 7,28 (d, 2H). b) Síntese de 273’-di-hidroxipropiléster.4-metoxibenziléster de ácido succínico Adicionou-se DDC (6,2 g; 30 mmol) a uma solução de glicerol (23,0 g; 250 mmol), monoéster 4-metoxibenzilsuccinato (5,96 g; 25 mmol) e DM AP (0,36 g; 3 mmol) em DMF (200 ml) e agitou-se a mistura durante a noite, à temperatura ambiente. Evaporou-se a
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 65 mistura a pressão reduzida e adicionou-se 150 ml de diclorometano. Filtrou-se a mistura e lavou-se a solução, duas vezes, com água. Extractou-se, duas vezes, a fase da água, com diclorometano e secaram-se as fases orgânicas combinadas com sulfato de sódio. Evaporou-se a solução a pressão reduzida e isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 3,0 g. 'H-RMN (DMSO δ-6): Ô 2,65 (m, 4H); 3,61 (m. 2H); 3,80 (s, 3H); 3,90 (m, 1H); 4,18 (m, 2H); 5,05 (s, 2H); 6,89 (d, 2H); 7,26 (d, 2H). c) Síntese de 2’.3,-bis-(N-CBZ-L-valiloxi)propiléster. 4-metoxibenziléster de ácido succínico
Adicionou-se DDC (4,5 g; 22 mmol) a uma solução de 2’,3’-di-hidroxipropiléster, 4-metoxibenziléster de ácido succínico (2,9 g; 9,28 mmol), N-CBZ-L-valina (5,03 g; 20 mmol) e DMAP (0,244 g; 2 mmol) em diclorometano (60 ml) e agitou-se a mistura durante a noite, à temperatura ambiente. Filtrou-se a mistura e evaporou-se a solução a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 2,5 g. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 0.90 (m, 12H); 2,16 (m. 2H); 2.62 (m, 4H); 3,80 (s, 3H); 4,32 (m, 4H); 5,05-5,52 (m, 9H); 6,89 (d, 2H); 7,30 (m, 12H). d) Síntese do 2’.3’-6i3>(N-CBz-L-valiloxi)propiloxicarbonil)propiléster de ácido succínico
Adicionou-se ácido trifluoroacético (2,5 ml) a uma solução do intermediário acima (2,3 g; 2,95 mmol) em diclorometano (25 ml) e agitou-se a solução, durante duas horas, à temperatura ambiente. Evaporou-se a solução a pressão reduzida e isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 1,8 g. 'H-RMN (CDC13): δ 0,92 (m, 12H); 2,12 (m, 2H); 2,64 (m, 4H); 4,32 (m, 4H); 5,10 (s, 4H); 5,22-5,50 (m, 3H); 7,34 (m, 10H). e) Síntese de 2’.3’-didesoxi-3>-fluoro-5’-Q-! 3-r2.3-6;s(N-CBZ-L-valiloxi)-l-propil-oxicarbonillpropanoíll 1 guanosina
Co-evaporou-se, duas vezes, com DMF, e reduziu-se até cerca de 50 ml, uma mistura de 2’,3’-didesoxi-3’-fluoroguanosina (0,538 g; 2 mmol), HOBT (0,327 g; 2,42 mmol), DMAP (29,3 mg; 0,24 mmol) e 2’,3’- A/'s(N-CBz-L-valiloxi)-l-propiléster de ácido succínico (1,6 g; 2,42 mmol),. Adicionou-se DDC (0,536 g; 2,6 mmol) e agitou-se a mistura durante 72 horas, à temperatura ambiente. Filtrou-se a mistura e evaporou-se a solução a pressão reduzida. Adicionou-se 100 ml de acetato de etilo e lavou-se a fase orgânica, duas vezes, com ácido acético a 5%, com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e com água. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 0,65 g.
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 66 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 0,88 (m, 12H); 2,08 (m, 2H); 2,58-3,04 (m, 6H); 3,92 (m, 2H); 4,10-4,46 (m, 7H); 5,00 (s, 4H); 5,22 (m, IH); 5,32-5,56 (m, 1H); 6,17 (m, 1H); 6,50 (s, 2H); 7,32 (m, 10H); 7,70 (d, 2H); 7,92 (s, 1H). f) Síntese de 2’.3’-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-1 3-í23-bis(L-valiloxi)- 1-propiloxi-carboniDpropanoíll} guanosina
Hidrogenou-se uma solução do intermediário imediatamente acima (0,57 g; 0,626 mmol) em 20 ml de acetato de etilo, 10 ml de metanol e 10 ml de ácido acético, com negro de paládio (0,1 g), durante duas horas, à temperatura ambiente e pressão normal. Filtrou-se o catalisador e lavou-se com metanol. Evaporou-se a solução a pressão reduzida e isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Dissolveu-se o produto em diclorometano e adicionou-se ácido clorídrico 1M em éter (1,1 ml). Evaporou-se a mistura a pressão reduzida e secou-se em vácuo para produzir o composto do título na forma de sal di-cloridrato. Rendimento: 0,37 g. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 0,92 (m, 12H); 2,12 (m, 2H); 2,58-3,04 (m, 6H); 3,75 (m, 2H); 4,16-4,50 (m, 7H); 5,19-5,60 (m, 2H); 6,18 (m, 1H); 6,76 (s, 2H); 7,92 (s, 1H).
Exemplo 34
Sal dicloridrato de 2,.3’-didesoxi-3’-fluoro-5’-Q-3-fl,3-to(L-valiloxi)-2-propiloxi- carbonillpropanoílguanosina a) Síntese de l,3-dibromo-2-propiléster, 4-metoxibenziléster de ácido succínico
Adicionou-se, em porções, a cerca de 10°C, DDC (24,8 g; 120 mmol) a uma solução de 1,3-dibromopropano-2-ol (21,8 g; 100 mmol), 4-metoxibenziléster de ácido succínico (28.6 g; 120 mmol) e DMAP (1,22 g; 10 mmol) em diclorometano (400 ml). Agitou-se a mistura durante a noite, à temperatura ambiente, e arrefeceu-se até cerca de 5°C. Filtrou-se a mistura e evaporou-se a solução a pressão reduzida. Adicionou-se 600 ml de acetato de etilo e lavou-se a fase orgânica, duas vezes, com ácido acético a 5%, com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e com água. Secou-se a solução com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 34,8 g. ‘H-RMN (CDCb): δ 2,69 (m, 4H); 3,57 (m, 4H); 3,81 (s, 2H); 5,07 (s, 2H); 5,14 (m. 1H); 6,88 (d, 2H); 7,26 (d, 2H). b) Síntese de 1 J-óA-lN-CBZ-L-valiloxii^-propilésterA-metoxibenziléster de ácido succínico
Adicionou-se r-butoxi de potássio (24,68 g; 220 mmol) a uma solução de N-CBZ-L-valina (58,5 g; 232,8 mmol) em DMF seco (300 ml) e agitou-se a mistura, durante uma hora, à temperatura ambiente .Adicionou-se uma solução de l,3-dibromo-2-propiléster, 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 67
4-metoxibenziléster de ácido succínico (34 g; 77,6 mmol) em DMF seco (50 ml) e agitou-se a mistura durante dezoito horas a 60°C. Filtrou-se o brometo de potássio e evaporou-se a solução a pressão reduzida, adicionou-se 600 ml de acetato de etilo e lavou-se, duas vezes, a fase orgânica com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e com água. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 45 g. 'H-RMN (CDC13): δ 0,90 (m, 12H); 2,16 (m. 2H); 2,61 (m, 4H); 3,80(s, 3H); 4,12-4,42 (m, 6H); 5,02 (s, 2H); 5.10 (s, 4H); 5,43 (m, 3H); 6,88 (d, 2H); 7,32 (m, 12H). cl Síntese de l,3-/;A-(N-CBZ-L-valiloxil-2-propiléster de ácido succínico
Adicionou-se ácido trifluoroacético (50 ml), entre 5HC e 10°C, a uma solução fria do intermediário imediatamente acima (44,5 g; 57,1 mmol) em diclorometano (500 ml) e agitou-se a solução, durante duas horas, a 10°C. Evaporou-se a solução a pressão reduzida e co-evaporou-se com tolueno duas vezes. Adicionou-se 400 ml de etanol e agitou-se a mistura durante 30 minutos a 40°C. Arrefeceu-se a mistura e filtraram-se os produtos secundários. Evaporou-se a solução a pressão reduzida e isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 33 g. ‘H-RMN (DMSO δ-6): δ 0,88 (m, 12H); 2,04 (m, 2H); 2,46 (m, 4H); 3,94-4,40 (m, 6H); 5,02 (s, 4H); 5,18 (m, 1H); 7,32 (m, 10H); 7,74 (d, 2H). dl Síntese de 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5,-Q-i3-11 B-totN-CBZ-L-valiloxil^-propil-oxicarbonillpropanoíl 1 guanosina
Co-evaporou-se, duas vezes, com DMF, e reduziu-se até cerca de 500 ml, uma mistura de 2’,3’-didesoxi-3’-fluoroguanosina (17,8 g; 66 mmol), HOBT (10,64 g; 78,8 mmol), l,3-tó-(N-CBZ-L-valiloxi)-2-propiléster de ácido succínico (52 g; 78,8 mmol) e DMAP (0,96 g; 7,88 mmol). Adicionou-se DDC (17,3 g; 84 mmol) e agitou-se a mistura durante a noite, à temperatura ambiente. Aqueceu-se a mistura durante seis horas, a 60°C, e depois arrefeceu-se até cerca de 10°C. Filtrou-se a mistura e reduziu-se a solução a pressão reduzida. Adicionou-se 1200 ml de acetato de etilo e lavou-se a fase orgânica, duas vezes, com ácido acético a 5%, com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e com água. Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 42 g. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 0,90 (m, 12H); 2,02 (m, 2H); 2,5-3,02 (m, 6H); 3,94 (m, 2H); 4,22 (m, 7H); 5,02 (s, 4H); 5,18 (m, 1H); 5,22-5,50 (m, 1H); 6,16 (m, 1H); 6,50 (s. 2H); 7,32 (m, 10H); 7,72 (d, 2H); 7,92 (s, 1H).
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 68 e) Síntese do Sal di-cloridrato de 2,.3’-didesoxi-3,-fluoro-5’-0-{3-ri,3-to(L-valiloxiV2-propiloxicarboninpropanoíI} mianosina Hidrogenou-se uma solução de 223,-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-{3-[l,3-òz'.s(N-CBZ-L-valiloxi)-2-propiloxicarbonil]propanoíl}guanosina (5,0; 5.9 mmol) em 75 ml de acetato de etilo, 75 ml de metanol, com paládio em carbono activado a 10% (1 g), durante uma hora, à temperatura ambiente e pressão normal. Filtrou-se o catalisador e lavou-se com metanol. Evaporou-se a solução a pressão reduzida. Dissolveu-se o produto em diclorometano e adicionou-se uma solução de ácido clorídrico 1M em éter (ó ml), enquanto arrefecia. Evaporou-se a mistura a pressão reduzida. Rendimento: 3,5 g. 'H-RMN (DMSO δ-6): δ 0,94 (m, 12H); 2,18 (m, 2H); 2,5-3,04 (m, 6H); 4,20-4,54 (m, 7H); 5,24 (m, 1H); 5,34-5,64 (m, 1H); 6,22 (m, 1H); 6,92 (s, 2H); 8,30 (s, 1H); 8,62 (s, 6H).
Exemplo 35 Síntese alternativa de 2,,3,-didesoxi-3,-fluoro-5,-0-3-í 1.3-to(L-valiloxi)-2-propil- oxicarbonillpropanoílguanosina a) Síntese de 1,3-dibromo-2-propiléster, 1,1 -dimetiletiléster de ácido succínico
Adicionou-se DDC (12,4 g; 60 mmol), em porções, a cerca de 10°C, a uma solução de l,3-dibromopropano-2-ol (10.9 g; 50 mmol), 1,1-dimetiletiéster de ácido succínico {J. Org. Chem. 59 (1994) 4864)(10,45 g; 60 mmol) e DMAP (0,61 g; 5 mmol) em diclorometano (180 ml). Agitou-se a mistura durante a noite, à temperatura ambiente, e arrefeceu-se até cerca de 5°C. Filtrou-se a mistura e evaporou-se a solução a pressão reduzida. Adicionou-se 250 ml de acetato de etilo e lavou-se a fase orgânica, duas vezes, com ácido cítrico a 5%, com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e com água. Secou-se a solução com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Destilou-se o produto sob vácuo (P.e. 0,5 135-140°C). Rendimento: 16,8 g. 'H-RMN (CDCU): δ 1,45 (s. 9H); 2,58 (m, 4H); 3.61 (m, 4H); 5,12 (m, 1H). b) Síntese de 1 3-6/5-(N-CBZ-L-valiloxi)-2-propiléster, 1,1 -dimetiletiléster de ácido succínico
Adicionou-se r-butoxi de potássio (7,85 g; 70 mmol) a uma solução de N-CBZ-L-valina (18,85 g; 75 mmol) em DMF seco (100 ml) e agitou-se a mistura, durante uma hora, à temperatura ambiente .Adicionou-se uma solução de 1,3-dibromo-2-propiléster, 1,1-dimetiletiléster de ácido succínico (9,35g; 25 mmol) em DMF seco (20 ml) e agitou-se a mistura durante dezoito horas a 60HC. Filtrou-se o brometo de potássio e evaporou-se a solução a pressão reduzida. Adicionou-se 300 ml de acetato de etilo e lavou-se, duas vezes, a fase orgânica com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e com água.
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 69
Secou-se a fase orgânica com sulfato de sódio e evaporou-se a pressão reduzida. Isolou-se o produto por cromatografia de coluna em sílica gel. Rendimento: 14 g. 'H-RMN (CDCI3): Ô 0,90 (m, 12H); 1,42 (s, 9H); 2,14 (m, 2H); 2,52 (m, 4H); 4,32 (m, 6H); 5,10 (s, 4H); 5,32 (m, 3H); 7,26 (m, 10H). cl Síntese do monoéster l,3-6A-(N-CBZ-L-valiloxi)-2-propilsuccinato
Adicionou-se ácido trifluoroacético (20 ml) a uma solução fria do 1,3-bis-(N-CBZ-L-valiloxi)-2-propiléster,l,l-dimetiletiléster de ácido succínico (13 g; 18,18 mmol) em diclorometano (100 ml) e agitou-se a solução, durante seis horas, à temperatura ambiente. Evaporou-se a solução a pressão reduzida. Adicionou-se 200 ml de acetato de etilo e lavou-se a fase orgânica com hidrogenocarbonato de sódio a 5% e água. Evaporou-se a solução a pressão reduzida. Rendimento: 11,7 g. 'H-RMN (DMSO d6): δ 0,88 (m, 12H); 2,04 (m, 2H); 2,46 (m, 4H); 3,94-4,40 (m, 6H); 5,02 (s, 4H); 5,18 (m, 1H); 7,32 (m, 10H); 7,74 (d, 2H). d) Síntese de 2’,3,-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-i 3-f 1.3-6A(L-valiloxi)-2-propiloxi-carbonillpropanoil) guanosina
Faz-se a esterifícação do intermediário do passo c) a FLG, como se apresentou no exemplo 34, passo d), e removem-se os grupos protectores de N das porções valilo através de técnicas convencionais, como as apresentadas no Exemplo 35, passo e), ou Exemplo 29, passo e).
Exemplo Biológico 1
Farmacocinética A confirmação de que as prodrogas oralmente administradas como aqui se descreveram libertam FLG in vivo é obtida num modelo de rato que se reconhece ser um modelo útil para analisar os parâmetros farmacocinéticos de análogos de nucleósidos. Administram-se as composições orais num veículo farmacêutico compreendendo propilenoglicol, ou no caso de compostos mais solúveis como os do Exemplo 26 ou Exemplo 34, em água, para duplicar animais alimentados numa dosagem correspondente a 0,1 mmol/kg. Para comparação, doseia-se intravenosamente um conjunto de ratos com 0,01 mmol/kg do metabolito 2\3’-didesoxi-3’-fluoroguanosina. Depois, avaliam-se os níveis no soro dos metabolitos em soro colhido individualmente em intervalos de 0,5 a 12 horas de animais a seguir administração (de 5 minutos a 6 horas para o FLG).
Analisa-se 0 metabolito por HPLC com detecção por UV a 254 nm, de forma análoga a Stâhle et ai 1995, J. Pharm. Biomed. Anal. 13, 369-376. Um sistema de HPLC pode-se
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 70 basear num tampão amónio-di-hidrogenofosfato 0,05 M, com solvente 2-propanol a 1,2%, tamponizado para pH 4,5, ou num tampão di-hidrogenofosfato de sódio 30 mM, com solvente acetonitrilo a 2%, tamponizado para pH 7,0. A coluna pode ser uma BAS Cl8 de 100x2,1 mm, com 5 pm de tamanho de partículas, com uma coluna de guarda Cl8, de 7 pm, ou uma coluna Zorbax SB-CN C18 de 150x4,6 mm, 5 pm. A ligação proteica dos compostos aqui descritos é insignificante tal como o é a dos metabolitos e a ultrafiltração através de filtros Amicon ou Microcon 30 é útil para amostras de soro. Submete-se, com vantagens, o pico principal ainda a cromatografia de coluna para ajudar melhor na resolução de FLG sobre os componentes do soro de baixo peso. Multiplicam-se os níveis intravenosos por um factor de dez para se obter valores AUC para comparação com os valores orais. Determina-se a bio-disponibilidade oral absoluta como a razão entre °'c0AUCiV e °'coAUCorai.
Quadro 1 % de bio-disponibilidade absoluta de 6 h % de bio-disponibilidade absoluta de 12 h FLG 9%** Exemplo 22 39% > 80%* Exemplo 13 37% Exemplo 12 29% Exemplo 25 81,5% Exemplo 28 47,5% Exemplo 24 60,5% Exemplo 26 67,5% Exemplo 29 51% * estimado. ** valor da literatura.
Os compostos que aqui se descrevem, incluindo os compostos do invento, proporcionam assim uma bio-disponibilidade oral significativamente maior em relação ao metabolito 2’,3’-didesoxi-3’-fluoroguanosina. Notavelmente, os compostos são libertados para o sangue mais de uma forma relativamente controlada do que num pico imediato. Isto significa que quantidades eficazes do metabolito activo estão disponíveis no sangue durante muitas horas ajudando dosagens únicas diárias. Também, uma libertação controlada evita os problemas de toxicidade aguda verificados em compostos com uma razão de libertação mais rápida.
Embora se reconheça o rato como um bom modelo para predizer a bio-disponibilidade humana para análogos de nucleósidos, confirmou-se a bio-disponibilidade independentemente da espécie de um composto (Exemplo 34) em cães beagle de = 11,5 kg,
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 71 machos e fêmeas, administrados oralmente com 0,05 mmol/kg (38 mg/kg) de composto em água ou intravenosamente com 0,005 mmol/kg (1,35 mg/kg) de metabolito em água, A colheita de plasma e a análise foram como acima. Cão macho bio-disponibilidade absoluta de 12 h 51% Cão fêmea bio-disponibilidade absoluta de 12 h 74%
Exemplo Biológico 2 Actividade antiviral - Retrovírus
Como se pode demonstrar pela metodologia do Exemplo Biológico 1, os compostos testados libertam, in vivo, o metabolito 2\3,-didesoxi-3’-fluoroguanosina. A medição in vitro da actividade anti-viral deste metabolito reflectirá assim a actividade de facto destes compostos.
No ensaio de captação de corante XTT de Koshida et al., Antimicrob Agents Chemother. 33 778-780, 1989, utilizando células MT4, o metabolito doseado no Exemplo Biológico 1 acima apresentou as actividades in vitro contra retrovírus que se seguem:
Quadro 2
Estirpe retroviral ou HIV ÍC50 * HIV-1111B 1 ,ug/ml HIV-12441 AZT1' 1 pg/ml HIV-1 mB TIBO1 1 pg/ml HIV-129/9 0,7 pg/ml HIV-2sbL6669 2 pg/ml SIVsm 1 pg/ml * Concentração de metabolito que induz 50% de inibição da replicação virai.
Será desta forma óbvio que a administração dos compostos do invento, assim como os compostos mencionados neste pedido induzem poderosas actividades antivirais contra os retrovírus HIV-1, HIV-2 e SIV. Deve-se também verificar a partir dos resultados de HIV-12441 AZTr e fflV-llllB TIBO1 que a actividade antiviral destes compostos não apresenta resistência cruzada contra estirpes de HIV que se tomaram resistentes a outros agentes HIV tais como o análogo de nucleósido AZT ou o inibidor de transcritase reversa não-nucleótido TIBO. 72 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ
Exemplo Biológico 3 Actividade antivirótica - HBV A actividade de antivirais no vírus da hepatite B de pato (DHBV) em patos é um modelo animal conhecido para a validação de actividade in vivo de hepatite B em humanos. A actividade do metabolito in vivo doseado no Exemplo Biológico 2 acima, foi analisada no modelo DHBV descrito por Sherker et al (1986), Gastroenterology 91, pp 818-824. Os resultados encontram-se nas Figuras 1 e 2. Em suma, trataram-se 4 patos de controlo com salino tamponizado de fosfato (PBS) e 4 patos com 5 mg/ kg/ dia do metabolito activo. Os patos tinham dois dias de idade quando inoculados com DHBV e 18 dias quando se começou o tratamento. Administraram-se intraperitonealmente o metabolito e o PBS (controlos) durante 10 dias, duas injecções por dia, às 8 a.m. e 4 p.m. O tratamento durou 33 dias e os animais foram examinados 5 semanas após o término do tratamento.
Seguiu-se a eficácia do tratamento por hibridação de coloração de ponto (“dotblot”) de DHBV ADN em soro usando uma sonda radioactiva e uma quantidade de DHBV medida como a quantidade de radioactividade híbrida. A Figura 1 representa a quantidade de DHBV ADN no soro a diferentes pontos temporais antes, durante e após o tratamento.
Como se pode observar na Figura 1, não existe diminuição na quantidade de DHBV no soro durante o tratamento com PBS (controlo, linha sólida). Os animais que tinham o metabolito medido no Exemplo Biológico 2 (linha quebrada) apresentaram uma abrupta diminuição na quantidade de DHBV no soro durante os primeiros 10 dias de tratamento, após o que para o resto do tratamento o nível de DHBV ADN estava abaixo do limite de detecção a esta dosagem de 5 mg/' kg/ dia. As experiências de repetição para as dosagens de 30 e 3 mg/ kg/ dia com patos infectados congenitamente (não apresentados) também produziram resultados semelhantes, ou seja uma quebra dramática no soro de DHBV ADN para baixo do limiar de detecção. Mesmo a dosagens muito baixas de 0,3 mg/ kg/ dia o metabolito causou uma considerável inibição de DHBV in vivo. Após o término do tratamento, o vírus reapareceu no soro, como se mostra na Figura 1. Observou-se mais cedo o reaparecimento de HBV após tratamento de curta duração com antivirais convencionais tanto em humanos como em animais com infecção crónica por hepatite B.
Como se pode observar na Figura 2, o peso dos patos aumentou da mesma forma que nos animais de controlo (tratados com PBS). O aumento de peso, de cerca de 270 g para cerca de 800 g, que se observou durante o período de tratamento foi tão grande que os efeitos tóxicos, caso existissem, deviam ser facilmente visíveis como alteração na velocidade de crescimento. Observaram-se também curvas de crescimento semelhantes para patos a
86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 73 receber a razão de dosagem maior de 30 mg/ kg/ dia. Este metabolismo é portanto claramente não tóxico. A medida que os compostos descritos e os compostos do invento vão sendo hidrolizados in vivo para produzir este metabolito, como se estabeleceu no Exemplo 2 acima, e um ácido gordo de natureza idêntica e portanto facilmente metabolizado, pode-se portanto inferir que nenhum problema de toxicidade a longo termo podem ser esperados, da administração destes compostos. Estabelece-se no Exemplo Biológico 2 acima a ausência de toxicidade aguda (curto prazo) destes compostos quando administrados oralmente.
Exemplo de Formulação 1 Formulação de comprimidos
Peneiram-se os seguintes componentes através de um crivo de 0,15 mm e misturam-se a seco: 10 g 2\3 ’-didesoxi-3’-fluoro-5‘-0-3-[ 1,3-òis-(L-valiloxi)-2-propil-oxicarbonilpropanoíljguanosina 40 g lactose 49 g celulose cristalina 1 g estearato de magnésio
Utiliza-se uma máquina de comprimidos para comprimir a mistura em comprimidos contendo 250 mg do componente activo.
Exemplo de Formulação 2 Comprimidos entéricos revestidos
Revestem-se, por pulverização, os comprimidos de Formulação do Exemplo 1 num revestidor de comprimidos com uma solução compreendendo: 120 g etilcelulose 30 g propilenoglicol 10 g mono-oleato de sorbitano ad 1000 ml de aq. dist.
Exemplo de Formulação 3 Formulação de libertação controlada
Misturam-se a seco: 50 g 2\3,-didesoxi-3,-fluoro-5’-0-[5-(L-valiloximetil)-6-estearoíl-oxi-hexanoíl]guanosina 74 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 12 g hidroxipropilmetilcelulose (Methocell Kl 5) 4,5 g lactose e submetem-se a granulação com uma pasta aquosa de povidona. Adiciona-se estearato de magnésio (0,5 g) e comprime-se a mistura numa máquina de comprimidos para comprimidos de 13 mm de diâmetro contendo 500 mg de agente activo.
Exemplo de Formulação 4 Cápsulas moles 250 g 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-[5-(L-valiloximetil)-6-estearoíl-oxi-hexanoíl]guanosina 100 g lecitina 100 g óleo de amendoim.
Faz-se a dispersão do composto nucleósido na lecitina e no óleo de amendoim e enche-se em cápsulas de gelatina mole.
Lisboa, 30. JUl. 2001
Por MEDIVIRAB O AGENTE OFICIAL -
Eng.° ANTÓNíO JOAO DA CUNHA FERREIRA Ag. 0[. Pr. Ind. Rua das Flores, 74--4.° 1200-196 LISBOA

Claims (14)

  1. 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 1/3 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula Ig R. h3c- ()r U O O—nuc Is onde O-nuc é o resíduo de um mono-hidroxilo portador de um análogo D- ou L-nucleósido; R2 é o resíduo de um L-aminoácido alifático, p é 0, 1 ou 2-20 (incluindo opcionalmente uma ligação dupla) e q é 0-5.
  2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1 de fórmula Ild’ O h3c-0p Oq
    Ild' onde R2, p e q são da forma definida na reivindicação 1.
  3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou com a reivindicação 2, onde q é 0.
  4. 4. Composto de acordo com a reivindicação 1, 2 ou 3, onde R2 define uma isoleucina ou preferencialmente um derivado da valina.
  5. 5. Composto de acordo com a reivindicação 4, que se selecciona a partir de: 2\3’-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-[2-(L-valiloxi)-butiril]guanosina; 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-[2-(L'Valiloxi)-hexanoíl]guanosina; 2’,3,-didesoxi-3,-fluoro-5’-0-[2-(L-valiloxi)-octanoíl]guanosina; 2’,3,-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-[2-(L-valiloxi)-decanoíl]guanosina;
    86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 2/3 2\3’-didesoxi-3,-fluoro-5’-0-[2-(L-valiloxi)-dodecanoíl]guanosina; 2.. 3,-didesoxi-3,-fluoro-5’-0-[2-(L-valiloxi)-miristoíl]guanosina; 2\3,-didesoxi-3,-fluoro-5’-0-[2-(L-valiloxi)-palmitoíl]guanosina; 2’ ,3 ’-didesoxi-3 ’ -fluoro-5 ’ -0-[2-(L-valiloxi)-estearoíl]guanosina; 2\3,-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-[2-(L-valiloxi)-docosanoíl]guanosina; 2’,3 ’-didesoxi-3 ’-fluoro-5 ’-0-[2-( L-valiloxi)-eicosanoíl]guanosina; 2\3,-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-[2-(L-isoleuciloxi)-butiril]guanosina; 2\3,-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-[2-(L-isoleuciloxi)-hexanoíl]guanosina; 2’,3’-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-[2-(L-isoleuciloxi)-octanoíl]guanosina; 2.. 3’-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-[2-(L-isoleuciloxi)-decanoíl]guanosina; 2\3’-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-[2-(L-isoleuciloxi)-dodecanoíl]guanosina; 2\3,-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-[2-(L-isoleuciloxi)-miristoíl]guanosina; 2’,3’-didesoxi-3,-fluoro-5’-0-[2-(L-isoleuciloxi)-palmitoíl]guanosina; 2 ’ ,3 ’ -didesoxi-3 ’ -fluoro-5 ’ -0-[2-(L-isoleuciloxi)-estearoí ljguanosina; 2\3,-didesoxi-3,-fluoro-5,-0-[2-(L-isoleuciloxi)-docosanoíl]guanosina; 2\3,-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-[2-(L-isoleuciloxi)-eicosanoíl]guanosina.
  6. 6. Composto de acordo com as reivindicações 1,2 ou 3 onde p e q são 0.
  7. 7. Composto de acordo com a reivindicação 6 representado por: 2\3,-didesoxi-3,-fluoro-5,-0-[2-(L-valiloxi)-propionil]guanosina; ou 2’.3,-didesoxi-3’-fluoro-5,-0-[2-(L-isoleuciloxi)-propionil]guanosina; onde a porção propionilo define um derivado de ácido L-láctico, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
  8. 8. Composto de acordo com a reivindicação 6 representado por 2\3’-didesoxi-3’-fluoro-5’-0-(2-(L-valiloxi)propionil]guanosina, onde a porção propionil define um derivado de ácido L-láctico, e um seu sai farmaceuticamente aceitável.
  9. 9. Composto de acordo com a reivindicação 1, 3, 4 ou 6, onde O-Nuc é o resíduo de um análogo de nucleósido acíclico tal como aciclovir, ou um análogo de nucleósido cíclico tal como ddl (didanosina), ddC (zalcitabina), d4T (estavudina), FTC, lamivudina (3TC), 1592U89 (4-[2-amino-6-(ciclopropilamino)-9H-purin-9-il]-2-ciclopenteno-l-metanol), AZT (zidovudina), DAPD (D-2,6-diaminopurinadioxolano), F-ddA, ou um L-nucleósido mono-hídrico. 86 327 ΕΡ Ο 988 304 / ΡΤ 3/3
  10. 10. Composto de acordo com a reivindicação 9, seleccionado a partir do grupo: 4’-0-[2-(L-valiloxi)-propionil]aciclovir; 4’-0-[2-(L-isoleuciloxi)-propionil]aciclovir; 5’-0-[2-(L-valiloxi)-propionil]ddI; 5’-0-[2-(L-isoleuciloxi)-propionil]ddI; 5’-0-[2-(L-valiloxi)-propionil]estavudina; 5’-0-[2-(L-isoleuciloxi)-propionii]estavudina; 5'-0-[2-(L-valiloxi)-propionil]lamivudina; 5’-0-[2-(L-isoleuciloxi)-propionil]lamivudina; 5 ’ -0-[2-(L-valiloxi)-propionil]D APD; 5’-0-[2-(L-isoleuciloxi)-propionil]DAPD; e os respectivos derivados de 4-[2-ammo-6-(ciclopropilammo)-9//-purin-9-il]-2-ciclo-penteno-1 -metanol; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
  11. 11. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores para utilização em terapia em medicina humana e veterinária.
  12. 12. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores no fabrico de um medicamento para a profilaxia ou tratamento de infecções virais.
  13. 13. Utilização de acordo com a reivindicação 12, onde a infecção virai é causada por HBV ou um retrovírus. Lisboa,
  14. 30. JUL. 2QU1 Por MEDIVIRAB - O AGENTE OFICIAL -
    DA CUNHA FERREIRA Ag. Of. Pr. |nd. Rua das Flores, 74--4-.° 1200495 LI3BQA |
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