CZ300757B6 - Nukleosidové analogy, jako jsou antivirální cinidla obsahující inhibitory retrovirální reverzní transkriptázy a DNA polymerázy viru hepatitidy B (HBV) - Google Patents

Nukleosidové analogy, jako jsou antivirální cinidla obsahující inhibitory retrovirální reverzní transkriptázy a DNA polymerázy viru hepatitidy B (HBV) Download PDF

Info

Publication number
CZ300757B6
CZ300757B6 CZ20000449A CZ2000449A CZ300757B6 CZ 300757 B6 CZ300757 B6 CZ 300757B6 CZ 20000449 A CZ20000449 A CZ 20000449A CZ 2000449 A CZ2000449 A CZ 2000449A CZ 300757 B6 CZ300757 B6 CZ 300757B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
dideoxy
valyloxy
fluoro
guanosine
mmol
Prior art date
Application number
CZ20000449A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2000449A3 (cs
Inventor
Zhou@Xiao-Xiong
Johansson@Nils-Gunnar
Wähling@Horst
Original Assignee
Medivir Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from SE9702957A external-priority patent/SE9702957D0/xx
Priority claimed from SE9704147A external-priority patent/SE9704147D0/xx
Priority claimed from SE9800452A external-priority patent/SE9800452D0/xx
Application filed by Medivir Ab filed Critical Medivir Ab
Publication of CZ2000449A3 publication Critical patent/CZ2000449A3/cs
Publication of CZ300757B6 publication Critical patent/CZ300757B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/79—Acids; Esters
    • C07D213/80—Acids; Esters in position 3
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/84—Nitriles
    • C07D213/85—Nitriles in position 3
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/20—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/56—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
    • C07D473/18—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 one oxygen and one nitrogen atom, e.g. guanine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
    • C07H17/08—Hetero rings containing eight or more ring members, e.g. erythromycins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures

Abstract

Sloucenina obecného vzorce Ig, ve kterém O-nuc predstavuje zbytek monohydroxyl nesoucí analog D- nebo L-nukleosidu, R.sub.2.n. predstavuje zbytek alifatické L-aminokyseliny, p je 0, 1 nebo 2-20, poprípade obsahuje dvojnou vazbu a q je 0-5, a jejich farmaceuticky prijatelných solí, které mají výhodné farmakologické vlastnosti a antivirální úcinek.

Description

Nuldeosidové analogy, jako jsou antivirální činidla obsahující inhibitory retrovirální reverzní transkríptázy a DNA polymerázy viru hepatitidy B (HBV)
Oblast techniky
Předložený vynález se týká oblastí nukleosidových analogů, jako jsou protivirové látky, v to počítaje inhibitory retrovirální reverzní transkriptáza a DNA polymeráza víru hepatitidy B (HBV). Předložený vynález se týká nových sloučenin s dobrými farmaceutickými parametry, způsobů jejich přípravy, farmaceutických kompozic obsahujících tyto sloučeniny a způsobů jejích použití pro inhibici virových a neoplastických onemocnění zahrnujících HBV a HIV.
Dosavadní stav techniky
Mezinárodní patentová přihláška WO 88/00050 popisuje antiretrovirální a anti-HBV aktivitu řady 3'-fluorovaných nukleosidů, zahrnující sloučeniny 2',3'-dideoxy,3'-fluorguanosin (FLG) a 3'-fluorthymidin (FLT). Posledně jmenovaná sloučenina podstoupila klinické hodnocení jako činidlo proti HIV a ačkoliv jeho protivirální aktivita a farmakokinetika byly dobré, vykázalo neočekávanou toxicitu (Flexner a kol, J. Inf. Dis. 170(6) 1394-403 (1994)). Předcházející sloučenina FLG je velmi účinná in vitro, avšak přihlašovatelé zjistili, že její biologická dostupnost je tak špatná - okolo 4 % - že použitelnost této sloučeniny in vivo byla omezena na intraperitoneální nebo subkutánní podávání zvířecím modelům.
Patent US 4 963 662 popisuje genericky řadu 3'-fluorovaných nukleosidů a odpovídajících trifosfátů a konkrétně popisuje přípravu 5'-0-palmitoylového derivátu FLT, bez popisu jakéhokoli zlepšení biologické dostupnosti. Mezinárodní patentová přihláška WO 93/13778 popisuje deriváty FLG modifikované v poloze 6 báze, konkrétně substituenty n-propoxy, cyklobutoxy, cyklopropanylamino, piperidíno nebo pyrrolidino. Mezinárodní patentová přihláška WO 93/14103 popisuje deriváty FLG, ve kterých kyslíkový atom v poloze 6 guaninu je nahrazen aminovou nebo etherovou skupinou, atomem halogenu nebo sulfonátem.
Podstata vynálezu
Stručný popis vynálezu
Jedním z předmětů předloženého vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I:
ve kterém:
Ri je zvolen ze souboru zahrnujícího skupiny hydroxy, amino nebo karboxy; popřípadě na sobě nesoucí esterifikovanou/amidově vázanou C4-C22 nasycenou nebo nenasycenou, popřípadě substituovanou mastnou kyselinu nebo alkohol, nebo alifatickou L-aminokyselinu;
R2 představuje zbytek alifatické L-aminokyseliny;
Li představuje trifunkční vazebnou skupinu;
L2 není přítomen nebo představuje bifunkční vazebnou skupinu; a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Předložený vynález se dále týká farmaceutických kompozic obsahujících sloučeniny a soli obecného vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelné nosiče nebo ředidla. Další předměty předloženého vynálezu se týkají způsobů inhibice HBV a retrovirů jako je HIV, zahrnující uvedení sloučeniny nebo soli obecného vzorce I do kontaktu s retrovirem nebo HBV, například podáváním účinného množství sloučeniny nebo solí individuu postiženému retrovirem nebo HBV. Předložený vynález se také týká použití sloučenin nebo soli obecného vzorce I v terapii, například při přípravě léčiva pro léčbu retrovirálních nebo HBV infekcí.
Při léčbě stavů způsobených retroviry jako je HIV nebo HBV se sloučeniny nebo soli obecného vzorce I výhodně podávají v množství 50 až 1500 mg jednou, dvakrát nebo třikrát denně, obzvláště 100 až 700 mg dvakrát nebo třikrát denně. Je žádoucí dosáhnout hladiny aktivního metabolitu v séru ve výši 0,01 až 100 pg/ml, obzvláště 0,1 až 5 pg/ml.
Pokud R| představuje zbytek mastné kyseliny, pak má výhodně sudý počet atomů uhlíku, výhodně dekanoyl (Cio), lauryl (C)2), myristoyl (CJ4), palmitoyl (C|6), stearoyl (C)8), eikosanoyl (C2o) nebo behenoyl (C22). Mastná kyselina má výhodně celkově 10 až 22 a výhodněji 16 až atomů uhlíku, obzvláště 18. Mastná kyselina může být nenasycená a mít jednu až tři dvojné vazby, obzvláště jednu dvojnou vazbu. Nenasycené mastné kyseliny výhodně patří do řady n-3 nebo n-6. Vhodné nenasycené Ri skupiny zahrnují ty, které jsou odvozeny od mononenasycených kyselin, jako jsou kyselina myristolová, myristelaidová, palmitolejová, palmitelaidová, n6-oktadecenová, olejová, elaidová, gandoová, eruková, brasidová nebo vícenásobně nenasycené mastné kyseliny jako je kyselina linoleová, γ-linolenová, arachidonová a kyselina a-linolenová. Výhodně však Ri jako mastná kyselina je nasycená kyselina, neboť tyto sloučeniny mají tendenci mít vyšší stabilitu a skladovatelnost.
Ri jako zbytek mastného alkoholu výhodně odpovídá jedné z výše popsaných mastných kyselin. Alternativně mastný alkohol může obsahovat zbytky kratších alkoholů, jako je methanol, ethanol nebo propanol.
Ri jako nasycená nebo nenasycená mastná kyselina nebo alkohol může být popřípadě substituo40 vána až pěti podobnými nebo různými substituenty nezávisle na sobě zvolenými ze souboru, zahrnujícího skupiny hydroxy, Ci~C6-alkyl, C|-CÉ-alkoxy, C|-C6-alkoxy-Ci-C6-alkyl, C|-C6alkanoyl, amino, atom halogenu, skupiny kyano, azído, oxo, merkapto a nitro a podobně.
Vhodné alifatické aminokyseliny jako substituent R2 a pokud je přítomen i Ri, zahrnují L-alanin,
L-leucin, L-isoleucin a nejvýhodněji L-valin. Pro usnadnění syntézy je výhodné aby jak R2, tak i R| byly zbytky alifatických aminokyselin, výhodně tentýž zbytek.
Výraz trifunkční ve významu první vazebné skupiny L| znamená, že vazebná skupina nese alespoň dvě funkční skupiny odvozené od odpovídajících hydroxylových, aminových nebo karboxy50 lových skupin, přičemž aminová a hydroxylová funkční skupina nebo skupiny jsou dostupné pro esterifikaci/amidovou vazbu s karboxylovými funkčními skupinami Ri a R2, zatímco karboxylová funkční skupina nebo skupiny vazebné skupiny je dostupná pro amidovou vazbu s volnou funkční skupinou R2 na aminu nebo R] podle případu nebo pro esterifikaci pro Ri jako mastný alkohol. Pokud R] sám o sobě definuje skupinu hydroxy, amino nebo karboxy, přičemž hydroxy skupina je mezi těmito třemi preferována, jedna z uvedených funkčních skupin na trifunkční vazebné skupině prostě zahrnuje tuto hydroxylovou, aminovou nebo karboxylovou skupinu.
Trifunkční vazebná skupina dále zahrnuje třetí funkční skupinu pro vazbu buď s případnou dru5 hou vazebnou skupinou L?, která bude detailněji popsána dále, nebo hydroxy skupinou v poloze 5' základního nukleosidu, jako je 2',3'-dideoxy-3'-fIuorguanosín. Vhodné trifunkční skupiny závisí na povaze spolupracující funkční skupiny na případné vazebné skupině L·, pokud tato je přítomna a mohou zahrnovat skupiny amino, hydroxy, karbonyl, sulfonyl, fosforyl, fosfonyl, karbamoyl a podobně. Pokud L2 není přítomna, tato třetí funkční skupina na první vazebné to skupině L, typicky obsahuje karboxylovou funkční skupinu, která může esterifikovat se skupinou
5'-0 nukleosidového analogu.
Výhodně funkční skupiny na trifunkční vazebné skupině, které kooperují s Rt a Rj představují hydroxylové funkční skupiny a vazba je esterová vazba s karboxylovými funkčními skupinami
Rt mastné kyseliny, pokud je přítomna, a R2. Další výhodné provedení zahrnuje volnou hydroxy skupinu jako R) a hydroxylovou funkční skupinu na vazebné skupině esterifikovanou k karboxylové funkční skupině R2. Alternativní provedení zahrnuje (popřípadě chráněnou) karboxylovou skupinu jako Ri a hydroxylovou funkční skupinu na vazebné skupině esterifikovanou ke karboxylové funkční skupině na R2.
Použitelné trifunkční Li skupiny, obzvláště pro esterifikaci přímo na nukleosid zahrnují vazebné skupiny obecného vzorce Ha nebo lib:
ve kterých A a A' definují odpovídající esterové vazby mezi hydroxylem vazebné skupiny 25 a karboxylovou skupinou na Ri nebo R2 nebo esterovou vazbu mezi karboxylovou skupinou vazebné skupiny a hydroxylem na R| představujícím mastný alkohol nebo amidovou vazbu mezi aminem vazebné skupiny a karboxylovou skupinou R| nebo R2, nebo amidovou vazbu mezi karboxylovou skupinou vazebné skupiny a aminem na R( nebo R2, nebo je jeden ze symbolů A a A' tak, jak byl definován a druhý představuje skupinu hydroxy, amino nebo karboxy v případě, že Ri sám je volná hydroxylová, aminová nebo karboxylová skupina.
Rx představuje H nebo C]-C3 alkyl,
T představuje vazbu, -O- nebo -NH-;
Alk není přítomen nebo představuje C|-C4 alkyl nebo Cr-C4 alkenyl, popřípadě substituovaný výše popsaným způsobem; a m a n se nezávisle na sobě rovnají 0,1 nebo 2.
Ve výhodném provedení tohoto předmětu předloženého vynálezu jsou skupiny R] nebo R2 každá esterifikována k odpovídající z nejlevějších funkčních hydroxylových skupin (viz A a A') obecného vzorce Ila, zatímco karbonylová část vpravo je esterifikována, popřípadě přes druhou vazebnou skupinu skupina L2, ke skupině 5'-O-nukleosidu.
Alternativně může skupina Li obsahovat vazebnou skupinu obecného vzorce lib:
— A—() n\
A—()/
Ar —Alk—Τ(lib) ve kterém Ar představuje nasycený nebo nenasycený, výhodně monocyklický uhlovodíkový nebo 5 heterocyklický systém s 5 nebo 6 atomy v kruhu; a
A, A', T, Alk, man mají výše uvedený význam.
V obecném vzorci Hb představuje Ar výhodně aromatickou skupinu jako je pyridin nebo ío obzvláště fenyl, jako jsou aromatické skupiny, ve kterých vazby přidržující skupiny R| a R2 jsou para respektive ortho, meta a ortho, obě ortho, nebo výhodně para a meta, obě para nebo obě meta vzhledem ke zbývající části vazebné skupiny.
V obecných vzorcích Ha a lib jsou výhodné následující kombinace m, n a Alk:
m n Alk 1 0 methylen
0 ethylen
1 nepřítomen
1 1 methylen
1 ethylen
1 propylen
2 nepřítomen
2 methylen
1 1 ethenylen
1 propeny len
Jelikož Ri a R2 mohou mít odlišné struktury, je zřejmé, že mnoho L| skupin, obzvláště skupiny obecného vzorce Ha, definují chírální struktury a předložený vynález zahrnuje všechny jejich enantiomery, jako racemáty nebo jako preparáty obsahující >80 %, výhodně >95 % enantiomericky čisté sloučeniny.
Obzvláště výhodné třídy trifunkčních vazebných skupin zahrnují glycerolové deriváty obecného vzorce Hc
A—O-i
-O— D
A“ Ove kterém A představuje atom vodíku, acylový zbytek esteru alifatické L-ami noky sel iny nebo acylový zbytek esteru mastné kyselina. A' představuje acylový zbytek zbytku alifatické aminokyseliny a D představuje C;-C<, nasycený nebo nenasycený zbytek dikarboxylové kyseliny. Trifunkční vazebné skupiny obecného vzorce líc se hydrolyzují nebo jiným způsobem štěpí in vivo pro uvolňování jejich přirozených identických glycerolů, Laminokyseliny, mastné kyseliny (jestliže je přítomna) a dikarboxylové kyseliny, přičemž každá z těchto složek je bezpečně metabolizována a/nebo vylučována tělem. Výhodně A a A' jsou oba zbytky alifatické aminokyseliny, nejvýhodněji stejné zbytky, obzvláště zbytky L-valinu nebo L-isoleucinu.
V případě, že dikarboxylová kyselá funkční skupina v derivátu obecného vzorce líc je přímo esterifikována na 5' hydroxy funkční skupinu (nebo její ekvivalent) na nukleosidu, alternativní analýzou by bylo definovat glycerolovou skupinu jako trifunkční vazebnou skupinu Lt a dikarboxylovou kyselou skupinu jako bifunkční vazebnou skupinu L2.
io Obzvláště výhodné dikarboxylové kyselé zbytky zahrnují zbytky odvozené od kyseliny šťavelové, maionové, tartronové, jantarové, maleinové, filmařové, malonové, vinné, glutarové, glutakonové, citrakonové, itakonové, ethidinmalonové, mesakonové, adipové, allylmalonové, propylidenmalonové, hydromukonové, pyrocinchonové a mukonové a podobně. Dikarboxylové kyselé zbytky mohou být popřípadě substituovány, například substituenty uvedenými výše v souvislosti se zbytkem R| jako mastnou kyselinou. Hydroxy substituenty mohou být zase esterifikovány dalším L-aminokyselinovým zbytkem nebo zbytkem mastné kyseliny.
Několik z výše uvedených dikarboxylových kyselin může samo definovat trifunkční vazebnou skupinu. Tak například hydroxy-substituované dikarboxylové kyseliny jako je kyselina vinná nebo kyselina malonová nabízejí řadu konfigurací, které spadají do rozsahu předmětu předloženého vynálezu. Kyselina vinná může být příkladem karboxylové funkční skupiny pro esterifikací s 5'-hydroxylovou funkční skupinou nukleosidu (popřípadě prostřednictvím bifunkční vazebné skupiny L2). Hydroxylové funkční skupiny jsou dostupné pro esterifikací s odpovídajícími karboxylovými funkčními skupinami R2 a mastnými kyselinami Ri nebo aminokyselinami, zatímco zbývající karboxylová skupina může být volná nebo popřípadě chráněná, například pomoct obvyklých farmaceuticky přijatelných esterů jako je methylester nebo ethylester. Alternativně může případná ochrana volné karboxylové funkční skupiny sama zahrnovat ester s mastným alkoholem Rb s tím že jedna nebo obě hydroxylové funkční skupiny jsou esterifikovány s R2:
O ηο-π-L-t O o o
-M—O— nuc R1”°“TT o
II
O—nuc
O
I
Re
Výhodné vazebné skupiny řady kyseliny vinné uvedené výše mohou být obecně znázorněny obecným vzorcem Ile:
R2 (Ile) a ízomery, kde R| a R2 jsou obráceny, kde Ri a R2 mají výše uvedený význam, p, q a r jsou nezávisle na sobě rovny 0 až 5, výhodně 0 nebo 1 a Ry představuje volnou kyselinu, Rj ester nebo obvyklou farmaceuticky přijatelnou karboxy chránící skupinu jako je methylester, benzylester nebo obzvláště ethylester.
c
Výhodné vazebné skupiny řady kyseliny malonové mohou být obecně znázorněny obecným vzorcem Uf:
R^-0
(Uf) ve kterém Ry, p, q a R2 mají výše uvedený význam, výhodně ty, ve kterých p a q jsou rovny nule.
Výhodné sloučeniny spadající do tohoto předmětu předloženého vynálezu tedy zahrnují:
-O-[3-methoxykarbonyl-2-valyloxy-propionyl]-2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluorguanosin, '-0-[3-benzyloxykarbonyl-2-valyloxy-propíonyl]“2',3 -dideoxy-3 '-fluorguanosin, io 5'-O-[3-methoxykarbonyl-2-isoleukoxy-propionyl]-2',3 -dideoxy-3 -fluorguanosin,
-O-[3-benzyloxykarbony 1—2—isoleucy loxy-propionyl]-2' ,3 '-dideoxy-3 '-fluorguanos in, 5'-0-[4-methoxykarbonyl-2,3-bis-vaiyloxy-butyryl] -2',3'-dideoxy-3'-fluorguanosin, 'R)-[4-benzyloxykarbonyl-2,3-bis-valyloxy-butyryl]-2',3 '-dideoxy-3 '-fluorguanosin, '-O-[4-methoxykarbonyl-2,3-bis-isoleucyloxy-butyryl]-2',3 '-dideoxy-3 '-fluorguanosin,
5 '^O-[4-benzyloxykarbonyl-2,3-bis-isoleucyloxy-butyryl]-2', 3 '-dideoxy-3 '-fluorguanosin;
obzvláště ty, které jsou odvozeny od kyseliny L-malonové a kyseliny L-vinné; a odpovídající deriváty používající obvyklé farmaceuticky přijatelné estery na terminální karboxyfové funkční skupině.
Obzvláště výhodné sloučeniny zahrnují:
5'-0-[3-ethoxykarbonyl-2-valyloxy-propionyl]-2',3 '-dideoxy-3'-fluorguanosin, ’-0-[3-ethoxykarbonyl-2-isoleucyloxy-propionyl]-2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluorguanosin,
5 -O-[4-ethoxykarbonyl-2,3-bis-valyloxy-butyryl]-2',3'-dideoxy-3 '-fluorguanosin, '-0-[4-ethoxykarbonyl-2,3-bis-isoleucyloxy-butyry l]-2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluorguanosin, obzvláště izomery odvozené od kyseliny L-malonové a kyseliny L-vinné.
Ve vztahujícím se alternativním provedení předloženého vynálezu je jeden za substituentů Rj aR2 vynechán. Reprezentativní sloučeniny tohoto provedení předloženého vynálezu zahrnují sloučeniny obecného vzorce Ia:
Rz—O— Alk
(la), kde Alk představuje popřípadě substituovaný C|-C4 alkyl nebo Cr-C4-alkenyl a Rz představuje esterový zbytek alifatické L-aminokyseliny nebo mastné kyseliny, jak je definováno výše pro Ri a R2. Vazebné skupiny tohoto provedení předloženého vynálezu se výhodně připraví z a5 hydroxy ω-karboxylových kyselin jako je kyselina uhličitá, kyselina glykolová, kyselina hydroxypropanová, kyselina hydroxymáselná, kyselina hydroxyvalerová nebo kyselina hydroxykapronová.
Reprezentativní sloučeniny obecného vzorce Ia zahrnují:
',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[3-(L-valyloxy)-propionyl]guanosin, ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-0-[5-(L-valy!oxy)-pentanoyljguanosin, ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-[6-(L-valyloxy)-hexanoyl]guanosÍn,
2',3 '-dideoxy-3 -fluor-5-0-[3-(L-isoleucyloxy)“propÍonyl]guanosin,
2' ,3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-[5-(L-isoleucyloxy)-pentanoyl]guanosin,
2',3 -dideoxy-3 '-fluor-5 -O-[6-(L-Ísoleucyloxy)-hexanoyl]guanosin, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Obzvláště výhodné sloučeniny obecného vzorce Ia zahrnují:
',3 -dideoxy-3 -fluor-5 -O-[4-(L-valyloxy)-butyTy ljguanosin; a 2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-[4-(L-isoleucyloxy)-butyryl]guanosin a jejich farmaceuticky přijatelné soli. U těchto sloučenin hydrolýza a odstranění skupiny R2 in vivo ponechává reaktivní koncový zbytek, který má tendenci cyklizovat a podporovat efektivní uvolňování matečného nukleosidu.
Ve vztahujícím se alternativním provedení předloženého vynálezu, je Ri jako zbytek mastné kyseliny sám o sobě použit jako vazebná skupina, přičemž alifatický L-aminokyselinový zbytek R2 je esterifikován/amidově vázán k funkční skupině amino, hydroxy nebo karboxy na alkylovém řetězci mastné kyseliny, například na β-uhlíku. V tomto provedení mastná kyselina substituentu Ri je esterifikována přímo na 5'-hydroxy (nebo ekvivalentní) funkční skupinu nukleosidu, obecně se skupinou R2 již na ní esterifikovanou/amidově vázanou. Alternativně funkcionalizovaná mastná kyselina (karboxy/hydroxy/aminová funkční skupina je přitom vhodným způsobem chráněna) může být nejprve esterifikována k nukleosidu a zbavena ochrany před kopulací s R2. Vazebné skupiny, které jsou v souladu s tímto výhodným provedením mají obecný vzorec fld:
_ 7 _ h3c- Ο,Γ“1—0q— (Hd), ve kterém R2 je zbytek alifatické L-aminokyseliny a p se rovná 0, I nebo 2-20 (popřípadě se zahrnutím dvojné vazby) a q je rovno 0-5, výhodně 0. Reprezentativní sloučeniny zahrnují:
s 2 ',3 '-dideoxy-3 -fluor-5-0-[2-(L-valyloxy)-butyry ljguanosin,
2',3'-dideoxy-3'-fluor-5-O-[2-(L-valyloxy)-hexanoyl]guanosin, ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-vaIyloxy)-oktanoyl]guanosin, ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-O-[2-(L-valy loxy)-dekanoyl]guanosin, ',3 '-dideoxy-3 '~fluor-5-0-[2-(L-valyloxy)-dodekanoyl]guano$in, io 2,3'-dideoxy-3'-fluor-5-O-[2-(L-valyloxy)-myristoyl]guanosin, ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-valyloxy)-palmitoyl]guanosin, ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-O-[2-(L-valy loxy)-stearoyl]guanosin, ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-valyloxy)-dokosanoyl jguanosin, ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-valyloxy)-eikosanoyl]guanosin
2',3'-dideoxy-3'-fluor-5~0-[2-(L-isoleucyloxy)-butyryl]guanosin,
2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-isoleucyloxy)-hexanoyl]guanosin,
2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-isoleucyloxy)-oktanoyl]guanosin, ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-isoleucyloxy)-dekanoyI]guanosin, ',3 '-dideoxy-3 '-fIuor-5-0-[2-(L-isoleucyIoxy)-dodekanoyl]guanosin,
2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-isoleucyloxy)-myrÍstoyl]guanosin, ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-isoleucyloxy)-palmitoy ljguanosin,
2',3 '-dideoxy-3 '-fíuor-5-0-[2-(L-isoleucyloxy)-stearoyl]guanosin,
2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-Ísoleucyloxy)-dokosanoyl]guanosin, ',3 -dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-Ísoleucyloxy)-eikosanoy ljguanosin, a odpovídající n-3 a n-6 mononenasycené analogy, jako jsou 6 nebo 9 oktadecenoylové deriváty.
V obecném vzorci lid jsou p a q výhodně rovny 0, takže jsou tím definovány deriváty kyseliny mléčné, výhodně deriváty kyseliny L-mléčné, jako je
2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-valyloxy)-propionyl]guanosin; a 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-O-[2-(L-isoleucy loxy)-propionyljguanosin a jejich farmaceuticky přijatelné soli, jelikož produkty rozpadu, kyselina mléčná a aminokyseliny jsou dobře fyziologicky přijatelné.
Výraz bifunkční ve významu druhé vazebné skupiny L2 znamená, že vazebná skupina má dvě funkční skupiny, které ji umožňují působit jako oddělovač nebo můstek mezi první vazebnou skupinou L| a 5'-O skupinou nukleosidu. Případná skupina L2 může například zahrnovat vazebnou skupinu obecného vzorce lila:
O ti o-p— i
s (lila).
ve kterém R* a R/ představují atom vodíku nebo Cj-C4 alkyl. V obecném vzorci IHa představuje 5 R4 výhodně atom vodíku, methyl, ethyl nebo isopropyl a R/ představuje atom vodíku. Vazebné skupiny obecného vzorce lila jsou výhodné neboť mnohé nukleostdy jako například základní sloučenina FLG musí nejprve být fosforylovány buněčnými enzymy než mohou inhibovat virální polymerázu. Počáteční nebo sekvenční hydrolýza sloučenin podle předloženého vynálezu může in vivo uvolnit monofosforylovaný nukleosid, který je dostupný pro okamžitou přeměnu na di-a trifosfát.
Alternativně případná bifunkční vazebná skupina L2 může obsahovat strukturu obecného vzorce Illb:
FL
O(Hlb), ve kterém R4 a R4' nezávisle na sobě představují H nebo C1-C4 alkyl. Ještě další tvar bifunkčních vazebných skupin má obecný vzorec nic:
Rz
-OR4 (Hic).
Jak bylo popsáno výše výhodné bifunkční vazebné skupiny zahrnují α,ω-dikarboxylové C2-C6 alkylové deriváty jako je kyselina jantarová, které jsou popřípadě substituovány (například substituenty definovanými výše pro význam Ri jako mastná kyselina) a/nebo jsou popřípadě mono nebo polynenasycené, jako například n-3 nebo n-6 mononenasycené. Výhodné skupiny v této třídě jsou uvedeny výše.
Ačkoliv výše popsaný vynález se zaměřuje na glycerolové Lt skupiny ve spojení s dikarboxylovými L2 skupinami, je zřejmé, že s dikarboxylovýmí L2 skupinami může být použita široká škála trifunkčních vazebných skupin, například struktury obecného vzorce Ha a lib uvedené výše, které postrádají karbonylovou skupinu zcela vpravo.
Předložený vynález se dále týká dvojitých prekurzorů zahrnujících Ri(R2) L]L2-deriváty obvyklých prekurzorů FLG, které uvolňují FLG in vivo, jako jsou prekurzorové deriváty v poloze 2 a 6 guaninové báze FLG. Příklady takových obvyklých prekurzorů FLG zahrnují sloučeniny obecného vzorce IV:
ve kterém Rh R2, Lt a L2 mají výše uvedený význam; a R3 představuje H, N3, NH2 nebo OH nebo jejich farmaceuticky přijatelný ether nebo ester; a R3' představuje aromatickou vazbu nebo atom vodíku.
Potenciální farmaceuticky přijatelné estery pro R3 zahrnují mastné kyseliny popsané výše v souvislosti s Rb jako je stearolyl, oleoyl a podobně nebo kratší estery jako je acetyl nebo butyryl. Další potenciální estery zahrnují aminokyselinové deriváty R2 nebo estery kyseliny fosforečné, jako je monofosfát. Alternativní estery zahrnují odpovídající estery mastné kyseliny nebo alky 1io arylkarbonáty, karbamáty nebo sulfonové estery.
Vhodné farmaceuticky přijatelné ethery pro R3 zahrnují C]-C6 alkyl, cykloalkyl, C6-C|2 alkaryl jako je benzyl nebo methylpyridyl, přičemž kterýkoli v nich může být popřípadě substituován jako bylo uvedeno výše pro Rb Vhodné ethery zahrnují ty, které byly popsány ve výše uvedeném dokumentu WO 93/13778, jako je n-propoxy, cyklobutoxy, cyklopropanylamino, piperidino nebo pyrrolidino a podobně.
Předložený vynález byl dosud popisovaný popsaný s odvoláním na monohydroxylované nukleosidové FLG, avšak je zřejmé, že mohou být připraveny odpovídající deriváty dalších mono20 hydroxylovaných nukleosidových analogů, obzvláště těch, jejichž monohydroxylová skupina odpovídá 5-hydroxy funkční skupině nukleosidu. Další předmět tohoto předloženého vynálezu se týká sloučenin obecného vzorce Ic:
Rf / L^g-O-nuc (Ic), ve kterém Rh R2, L| a L2 mají výše uvedený význam a O-nuc představuje zbytek mono25 hydroxylu nesoucího D- nebo L-nukleosidový analog. Reprezentativní nukleosidy podle tohoto předmětu předloženého vynálezu zahrnují acyklické nukleosidové analogy jako je acyklovir acyklické nukleosidové analogy jako je ddl (didanosin), ddC (zalcitabin), d4T (stavudin), FTC, lamivudin (3TC), 1592U89 (4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyk1openten-l-methanol), AZT (zidovudin), DAPD (D-2,6-dianrinopurin díoxotan), F-ddA a po30 dobně, přičemž každý z nich je známý v oboru nukleosidů. Řada jednosytných L-nukleosidů je ve vývoji a předložený vynález je použitelný také pro tyto sloučeniny. Sloučeniny spadající pod tento předmět předloženého vynálezu budou použitelné v odpovídajících indikacích základních sloučenin, například infekce herpes virem u acyklovirových derivátů, HIV v případě ddl, stavudinu, ddC, lamivudinu, AZT & 1592U89, HBV u lamivudinu, FTC a podobně.
* Λ
Výhodná podskupina v rámci obecného vzorce Ic zahrnuje deriváty jednosytných nukleosidu obecného vzorce Ic':
A—O— O O —O—— Alk —^~O—nuc
A’—O— (IC), ve kterém A, A', Alk a O-nuc mají výše uvedený význam. Obecný vzorec Ic' uvedený výše zachycuje sloučeniny, ve kterých A a A' se nachází v polohách 1 a 3 glycerolové částí a L2 se nachází v poloze 2 glycerolu. U alternativních izomerů A a A' se nachází v polohách 1 a 2 nebo 2 a 3 a L2 v poloze 3 nebo 2.
Reprezentativní sloučeniny tohoto provedení předloženého vynálezu zahrnují: io '-O-[3-((2,3-bis-L-valy loxy)-1 -propy loxykarbony l)propionyl]acyklov ir, 4'-0-[3-((2~hydroxy-3-L-valyloxy)-t-propyloxykarbonyl)propionyl]acyklovir, ’-0-[3-{(2,3-bis-L-isoleucyloxy)-1 -propyloxykarbonyl)propionyl]acyklovir, '-O-[3-((2~hydroxy-3-L-isoleucy loxy)-1 -propy loxykarbony I )propiony 1] acyklovir,
4 '-O-[3-(( 1,3-bis-L-valy loxy)-2-propy loxykarbonyl)propionyl]acyklovir,
4'-0-[3-{(l-hydroxy-3-L-valyloxy)-2-propyIoxykarbonyl)propionyl]acyklovir,
4O—[3—((1,3-bis-L-iso leucy loxy)-2-propy loxykarbony l)propíony ljacyklovir, 4'-0-[3-((l-hydroxy-3-L-isoleucyloxy)-2-propyloxykarbonyl)propionyl]acyklovir, '-O-[3-{(2,3-bis-L-valyloxy)-1 -propyloxykarbonyl)propionyl]lamivudín,
5 '-O-[3-((2-hydroxy-3-L-valy loxy)-1 -propy loxykarbony l)propionyl] lamivudin,
5'-0-[3-((2,3-bis-L-isoleucyloxy)-l-propyloxykarbonyl)propionyl]lamivudin, '-O-[3-((2-hydroxy-3-L-i soleucy loxy)-1 -propy loxykarbony l)propiony 1] lamivudi n, '-O-[3-(( 1,3-bis-L-valyloxy}-2-propyloxykarbonyl)propionyl] lamivudin,
5O-[3—((1 -hydroxy-3-L-valyloxy)-2-propy loxykarbonyl)propiony 1] lamí vudin,
5O—[3—((1,3-bis-L-isoleucy loxy)-2-propyloxykarbony l)propionyl] lamivudin,
5'-0-[3-((l-hydroxy-3-L-isoleucyloxy)-2-propyloxykarbonyl)propionyl]lamivudin,
5'-0-[3-((2,3-bis-L·-valyloxy)-l-propyloxykarbonyl)propionyI]DAPD,
-O-[3-((2-hydroxy~3-L-valyloxy)-l -propyloxykarbonyI)propíonyl]DAPD, 5'-0-[3-((2,3-bis-L-isoleucyloxy)-l-propyloxykarbonyl)propionyl]DAPD,
5'-0-[3-{(2-hydroxy-3-L-isoIeucyloxy)-l-propyloxykarbonyl)propionyl]DAPD,
5O—[3—((1,3-bis~L-valyloxy)-2-propyloxykarbonyl)propiony 1]DAPD, 5'-0-[3-((l-hydroxy-3-L-vaIyloxy)-2-propyloxykarbonyl)propionyl]DAPD, '-O-[3-((l,3-bis-L-isoleucyloxy)-2-propyloxykarbonyl)propionyljDAPD. 5'-0-[3-((l-hydroxy-3-L-isoleucyfoxy)-2-propyloxykarbonyl)propionyl]DAPD,
5'-0-[3-((2,3-bis-L-valyloxy)-l-propyIoxykarbonyl)propionyl]-2',3'-dideoxyinosin,
5'-0-[3-((2-hydroxy~3-L-valyloxy)-l-propyloxykarbonyl)propíonyl]-2',3'-dideoxyinosin, . 1 1
5'-O-[3-((2,3-bis-L-isoleucyloxy)-l-propyloxykarbonyl)propionyl]-2',3 -dideoxyinosin,
5'-0-[3-((2-hydroxy-3-L-isoleucyloxy)-l-propyloxykarbonyl)propionyl]-2',3'-dideoxyinosín,
5'-0-[3-((],3-bis-L-valyloxy)-2-propyloxykarbonyl)propionyl]-2',3 '-dideoxyinosin,
5'-0-[3-((1-hydroxy“3-L-valyloxy)-2-propyloxykarbonyl)propÍonyi]-2',3'-dideoxyinosin,
5-0-[3-((l,3-bÍs-L-Ísoleucyloxy)-2-propyloxykarbonyl)propionyl]-2',3'-dideoxyinosin,
5'-0-[3-((l-hydroxy-3-L-isoleucyloxy)-2-propyloxykarbonyl)propionyl]-2',3 '-dideoxyinosin,
5'-0-[3-((2,3-bis-L-valyloxy)-l-propyloxykarbonyl)propionyl]stavudin, io 5'-0-[3-((2-hydroxy-3-L-valyloxy)-l-propyloxykarbonyl)propionyl]stavudin,
5'-0-(3-((2,3-bis-L-isoleucyloxy)-l-propyloxykarbonyl)propionyl]stavudÍn,
5'-0-[3-((2-hydroxy-3-L-isoleucyloxy)-l-propyIoxykarbonyl)propionyl]stavudin, '-O-[3-(( 1,3-bis-L-valy loxy)-2-propyloxykarbonyl)propionyl]stavudin,
-O-[3-(( 1 -hydroxy-3-L-valyloxy)-2-propyloxykarbonyl)propiony l]stavudin,
5'-0-[3-((l,3-bis-L-isoleucyloxy)-2-propyloxykarbonyl)propíonyl]stavudin,
5'-0-[3-((l-hydroxy-3-L-isoleucyloxy)-2-propyloxykarbonyl)propionyl]stavudin, odpovídající deriváty 4-[2-amino-6-(cyklopropylanuno)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-lmethanolu a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Alternativní podtřída sloučenin podle tohoto předmětu předloženého vynálezu zahrnuje sloučeniny obecného vzorce Id:
O
Bz —O— Alk—O— nuc (Id), ve kterém Rz a Alk jsou definovány stejně jako v případě obecného vzorce Ia a O-nuc má výše definovaný význam.
Reprezentativní sloučeniny obecného vzorce Id zahrnují:
4'-0-[4-(L-valyloxy)-propionyl3acyklovir,
4'-0-[5-(L-valyloxy)-pentanoyl]acyklovir,
4'-0-[6-(L-valyloxy)-hexanoyl]acyklovir,
4'-0-[4-(L-isoleucyloxy)-propionyl]acyklovir,
4'-O-[5-(L-isoleucyloxy)-pentanoyl]acyklovir,
4'-0-[6-(L-isoleucyloxy)-hexanoyl]acyklovir,
5 '-O-[4-(L-valy loxy)-propionyl]ddl,
-0-[5-{L-valyloxy)-pentanoyl]ddI, '~O-[6-( L-valy loxy)-hexanoy 1] ddl,
5-0-(4-(L-isoleucyloxy)-propionyl]ddI,
5'-O-[5-(L“Ísoleucyloxy)-pentanoyl]ddI,
-O-[6-(L-isoleucy loxyý-hexanoyljddl, '-0-[4-(L_valyloxy)“propiony 1] stavudin,
5'-0-[5-(L-valyloxy)-pentanoyl]stavudin,
5 '-O-[6-(L-valyloxy)-hexanoy 1] stavudin,
5'-O-[4-(L-isoleucyloxy)-propionyl]stavudin,
5'-O-[5-(L-ísoleucyloxy)-pentanoyl]stavudin,
-O-[6-(L-i soleucy loxy)-hexanoy 1] stavudin,
-0-[4-(L-valyloxy)-propionyl]DAPD, ío 5 --0-[5-(L-valyloxy)-pentanoyl ]DAPD, '-O-[6-(L-valyloxy)-hexanoyl]DAPD,
5'-O-[4-(L-isoleucyloxy)-propionyl]DAPD,
5'-O-[5-(L-isoleucyloxy)-pentanoyl]DAPD,
-O-[6—(L-isoleucyloxy)-hexanoy 1]DAPD,
5 -O-[4-(L-valy loxy)-propionyl] lamivudin, '-0-[5-{L-valy loxy)-pentanoy I] lamivudin, '-O-[6-(L-valy loxyý-hexanoy 1] lamivudin,
5'-0-[4-(L-isoleucyloxy)-propionyl]íamivudin, '-O-[5-(L-isoleucy loxy)-pentanoyl] lamivudin,
5 '-0-[6-(L-ísoleucyloxy)-hexanoyl]lamivudin, a odpovídající deriváty 4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)_9H—purin_9-yl]-2-cyklopenten-l“ methanolu.
Obzvláště výhodné sloučeniny obecného vzorce íd zahrnují:
4'-0-[4-(L-valyloxy)-butyryl]acyklovir, '-0-[3-(L-isoleucyloxy)-butyry 1] acy klovir, '-O-[4-(L-valyloxy)-butyryl]ddI,
5 '-O-[3-(L-isoleucyloxy)_butyryl]ddI, '-0-[4-(L-valyloxy)-butyryl]stavudin,
5'-G-[3-(L-ísoleucyloxy)-butyryl]stavudin, '-O-[4-(L-valyloxy)-butyryl]DAPD, '-O-[3-(L-isoleucyloxy)-butyryl]DAPD,
5 '-O-[4-(L-valyloxy)-butyryl] lamivudin,
5'-0-[3-{L-isoleucyloxy)-butyryIyl]lamivudin, a odpovídající deriváty 4-[2-amino-ó-(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-lmethanolu; a jejich farmaceuticky přijatelné solí. U těchto sloučenin hydrolýza a odstranění skupiny R2 in vivo ponechává reaktivní koncový radikál, který má tendenci cyklizovat a posilovat účinné uvolňování základního nukleosidů.
-Λ
Podobě se předložený vynález vztahuje i na sloučeniny obecného vzorce If:
ΎθΊΓ“ θρ Oq-T“ θΓ
(IQ, ve kterém Rh R2, Ry, p, q, r a O-nuc mají výše uvedený význam.
Výhodné sloučeniny podle tohoto předmětu předloženého vynálezu zahrnují:
5'-0-[3-ethoxykarbonyl-2-valyloxy-propionyl]-ddI,
5'-O-[3-ethoxy karbony l-2-isoleucyloxy-propionyl]-ddl, '-0-[4-ethoxykarbony 1-2,3-bi s-valyloxy-butyry I]—ddl, ío 5 '-0-[4-ethoxykarbonyl-2,3-bis-isoleucyloxy-butyryl]-ddI, 4'-0-[3-ethoxykarbonyl-2-valyloxy-propionyl]-acyk.lovir,
4'-O-[3~ethoxv karbony l-2-isoleucyloxy-propionyl]-acy klov i r,
4'-0-[4-ethoxykarbonyI-2,3-bis-valyloxy-butyryl]-aciclovir,
4'-0-[4-ethoxykarbonyl-2,3-bis-isoleucyloxy-butyryl]-aciclovir,
5 '-O-[3-ethoxy karbony 1-2-valy loxy-propionyl]-DAPD,
5'-0-[3-ethoxykarbonyl-2-isoleucyloxy-propionyl]-DAPD, 5'-O-[4-ethoxykarbonyl-2,3-bis-valyloxy-butyryl]-DAPD, 5'~0-[4-ethoxykarbonyl-2,3-bÍs-isoleucyloxy-butyryl]-DAPD, 5'-O-[3-ethoxykarbonyl-2-valyloxy-propionyl]-stavudin,
5 -0-[3-ethoxykarbonyl-2-isoleucyloxy-propionyl]-stavudin,
5'-O-[4-ethoxykarbonyl-2,3-bis-valyloxy-butyryl]-stavudin, 5'-0-[3-ethoxykarbonyl-2-valyloxy-propionyl]-lamivudin, 5'-0-[3-ethoxykarbonyl-2-isoleucyloxy-propionyl]-lamivudin, 5'-0-[4-ethoxykarbonyl-2,3-bis-valyloxy-butyry]]-lamivudin,
5 '-0-[4-ethoxykarbonyl-2,3-bis-isoleucyloxy-butyryl]-lamivudin, a odpovídající deriváty kyseliny malonové a vinné 4-[2-amino-6-(cyklopropylamino)-9Hpurín-9-y 1 ]-2-cyklopenten-1 -methanolu a jejich farmaceuticky přijatelné soli; v každém případě jsou výhodné izomery odvozené od Lvínanu a L maleátu.
Předložený vynález se také týká sloučenin obecného vzorce Ig h3c “0ř
O
JL 'Oč
O—nuc (ig), ve kterém R2, p, q a O-nuc mají výše uvedený význam.
Výhodné sloučeniny obecného vzorce Ig zahrnují:
4'-O-[2-{ L-valy loxy )-propiony ljacyklovir,
4'-O-[2-(L-isoleucyloxy)-propionyl]acyklovir, '-O-[2-(L-valy loxy)-propionyl]ddl,
5'-G-[2-(L-isoleucyloxy)-propionyl]ddI, ío 5 '-0-[2-(L-valyloxy)-propionyl]stavudm,
5'-G-[2-(L-isoleucyloxy)-propionyl]stavudin, '-O-[2-( L-valy ioxy)-propiony IJlamivudin,
5'^0-[2-(L-isoleucyloxy)-propionyl]lamivudin, '-0-[2-(L-valyloxy)-propionyI]DAPD,
5 '-O-[2-<L-isoleucyloxy)-propiony 1JDAPD a odpovídající deriváty 4~[2-amino-6—(cyklopropylamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyklopenten-lmethanolu; a jejich farmaceuticky přijatelné soli. Produkty rozpadu takových sloučenin, kyselina mléčná a aminokyselina, jsou oba dobře fyziologicky přijatelné.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou vytvářet soli, které představují další předmět předloženého vynálezu. Vhodné farmaceuticky přijatelné soli sloučenin obecného vzorce I zahrnují soli organických kyselin, obzvláště karboxylových kyselin, a zahrnují, aniž by tím byly omezeny, octan, trifluoracetát, mléčnan, glukonát, citronan, vínan, maleinan, malonan, pantothenát, isethionát, adipát, alginát, aspartát, benzoát, máselnan, diglukonát, cyklopentanát, glukoheptanát, glycerofosfát, šťavelan, heptanoát, hexanoát, fumaran, nikotinát, palmoát, pektinát, 3-fenylpropionát, pikrát, pivalát, proprionát, vínan, laktobionát, pivo lát, kafroát, undekanoát a jantaran, organických sulfonových kyselin jako je methansulfonát, ethansulfonát, 2-hydroxyethansulfonát, kafrsulfonát, 2-naftalensulfonát, benzensulfonát, p-chlorbenzensulfonát a p-toluensulfonát;
a anorganických kyselin jako je hydrochlorid, hydrobromtd, hydrojodid, síran, hydrogensíran, dvojsíran, thiokyanát, perohodvojsíran a soli kyselin fosforu a sulfonových kyselin. Sloučeniny obecného vzorce I mohou být v některých případech izolovány jako hydráty.
Výraz „N-ochranná skupina“ nebo „N-chráněný“, jak je zde používán, se vztahuje ke skupinám, použitým pro ochranu N-konce aminokyseliny nebo peptidu nebo pro ochranu aminové skupiny proti nežádoucím reakcím během syntetických procedur. Běžně používané N-ochranné skupiny jsou popsány v monografii Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis“ {John Wiley & Sons, New York, 1981), která je zde zahrnuta jako reference. N-ochranné skupiny zahrnují acylové skupiny jako je formyl, acetyl, propionyl, pivaloyl, t-butylacetyl, 2-chloracetyt, 2-brom40 acetyl, trifluoracetyl, trichloracetyl, ftalyl, o-nitrofenoxyacetyl, α-chlorbutyryl, benzoyl, 4-chlorbenzoyf, 4-brombenzoyl, 4-nitrobenzoyl, a podobně; sulfonylové skupiny jako je benzensulfonyl, p-toluensulfonyl, a podobně, karbamáty vytvářející skupiny jako je benzy loxy karbony 1, p-chlorbenzyloxykarbonyl, p-methoxybenzyloxykarbonyl, p-nitrobenzyloxykarbonyl, 2-nitrot benzyloxykarbonyl, p-brombenzyloxykarbonyl, 3,4-dimethoxybenzyloxykarbonyi, 4-methoxybenzyloxykarbonyl, 2-nitro-4,5-dimethoxybenzyloxykarbonyl, 3,4,5-trimethoxybenzyloxykarbony 1, 1 —(p—bi feny ly 1)-1 -methy lethoxy karbony 1, α,ω-dimethy 1-3,5-di methoxy benzy loxykarbonyt, benzhydryloxykarbonyl, t-butoxykarbonyI, diisopropylmethoxykarbonyl, isopropyl5 oxykarbonyl, ethoxykarbonyl, methoxykarbonyl, allyloxykarbonyl, 2,2,2-trichlorethoxykarbonyl, fenoxykarbonyl, 4-nitrofenoxykarbonyl, fluorenyl-9-methoxykarbonyl, cyklopentyloxykarbonyl, adamantyloxykarbonyl, cyklohexyloxykarbonyl, fenylthiokarbonyl, a podobně; alkylové skupiny jako je benzyl, trifenylmethyl, benzyloxymethyl a podobně; a silylové skupiny jako je trimethylsilyl a podobně. Výhodné N-ochranné skupiny zahrnuji formyl, acetyl, allyl, Γιο moc, benzoyl, pivaloyl, t-butylacetyl, fenylsulfonyl, benzyl, t-butoxykarbonyl (BOC) a benzyloxykarbonyl (Cbz).
Hydroxylové a/nebo karboxylové ochranné skupiny jsou také podrobně popsány v monografii Greene uvedené výše a zahrnují ethery jako je methyl, substituované methylethery jako je methoxymethyl, methylthiomethyl, benzyloxymethyl, t-butoxymethyi, 2-methoxyethoxymethyl a podobně, silylethery jako je trimethylsilyl (TMS), t—butyldimethyIsílyl (TBDMS), tribenzylsilyl, trifenylsilyl, t-butyldifenylsilyl triisopropyl silyl a podobně, substituované ethylethery jako je 1-ethoxymethyl, 1-methyl-l-methoxyethyl, t-butyl, allyl, benzyl, p-methoxybenzyl, difenylmethyl, trifenylmethyl a podobně, aralkylové skupiny jako je trityl a pixyl-(9-hydroxy-9-fenyl20 xanthenové deriváty, obzvláště chlorid). Esterové hydroxy ochranné skupiny zahrnují estery jako je mravenčan, benzylmravenčan, chloracetát, methoxyacetát, fenoxyacetát, pivaloát, adamantoát, mesitoát, benzoát a podobně. Karbonátové hydroxy ochranné skupiny zahrnují methylvinyl, allyl, cinnamyl, benzyl a podobně.
Přidržujíce se obvyklé praxe v případě retrovirálních a HBV inhibitorů, je výhodné současně podávat jedno až tři nebo více dodatečných protivirálních činidel, jako je AZT, ddl, ddC, d4T, 3TC, H2G, foscamet, ritonavir, indinavir, sakvinavir, nevirapin, delavíridin, Vertex VX 478 nebo Agouron AG1343 a podobně v případě HIV nebo lamivudin, interferon, famcyklovir a podobně v případě HBV. Taková dodatečná protivirální činidla se normálně podávají v dávkováních jedno vzhledem k druhému, která širokým způsobem odrážejí jejich terapeutické hodnoty. Molámí poměry 100:1 až 1:100, obzvláště 25:1 až 1:25, vzhledem ke sloučenině nebo soli obecného vzorce I jsou často výhodné. Podávání dodatečných protivirálních činidel je méně obvyklé v případě protivirálních nukleosidů zamýšlených pro léčbu infekcí typu herpes.
I když je možné, aby účinná látka byla podávána samotná, je vhodněji používat jako součást farmaceutického přípravku. Takový přípravek zahrnuje výše uvedenou účinnou látku spolu s jedním nebo více přijatelnými nosiči/excipienty a popřípadě dalšími terapeutickými složkami. Nosič nebo nosiče musí být přijatelné ve smyslu slučitelnosti s dalšími složkami přípravku a nesmí být škodlivé pro příjemce.
Přípravky zahrnují ty, které jsou vhodné pro podávání cestou rektální, nasální, topickou (v to počítaje bukální a sublingvální), vaginální nebo parenterální (v to počítaje podávání subkutánní, intramuskulámí, intravenózní a intradermální), ale výhodně je přípravek orálně podávaný přípravek. Přípravky mohou být výhodně prezentovány jako jednotná dávková forma, například jako tablety a kapsle se zpožděným uvolňováním a mohou být připraveny libovolným ze způsobů, který je dobře znám ze stavu techniky v oboru farmakologie.
Takové způsoby zahrnují krok přivedení výše uvedené účinné látky do kontaktu s nosičem. Obecně se přípravky připravují stejnoměrným a důkladným spojením účinné látky s tekutými nosiči nebo jemně rozptýlenými pevnými nosiči nebo obojím a následně, je-li to nutné, tvarování produktu. Předložený vynález se vztahuje i na způsoby přípravy farmaceutických kompozic, které zahrnují uvedení sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo vehikulem. Jestliže výroba farmaceutického přípravku zahrnuje důkladné míchání farmaceutických excipientů a účinné složky ve formě soli, potom je často výhodné používat excipienty, které jsou svojí povahou nebazické, to jest buďto kyselé, nebo neutrální.
Přípravek pro orální podávání podle předloženého vynálezu může být prezentován ve formě diskrétních jednotek jako jsou kapsle, oplatky nebo tablety, které každá obsahuje předem určené množství účinné látky; jako prášek nebo granule; jako roztok nebo suspenze účinné látky ve vodné kapalině nebo v bezvodé kapalině; nebo jako kapalná emulze typu olej ve vodě nebo jako kapalná emulze typu voda v oleji a jako bolus a podobně.
Vzhledem ke kompozicím pro orální podávání (například tablety a kapsle), výraz vhodný nosič zahrnuje vehikula jako jsou obvyklé excipienty, například vazebná činidla, například sirup, arabská guma, želatina, sorbitol, tragakant, polyvinylpyrrolidon (Povidone), methylcelulóza, ethylcelulóza, sodná karboxymethylcelulóza, hydroxypropylmethylcelulóza, sacharóza a škrob; plnidla a nosiče, například kukuřičný škrob, želatina, laktóza, sacharóza, mikrokiystalická celulóza, kaolin, mannitol, fosforečnan vápenatý, chlorid sodný a kyselina alginová; a lubrifikanty jako je stearan horečnatý, stearan sodný a další stearany kovů, glycerol stearan, kyselina stearová, silikonové tekutiny, talkové vosky, oleje a koloidální křemičitany. Mohou být také použita ochucující činidla jako je pepermint, libavkový olej, cheny a podobně. Může být žádoucí přidat barvivo pro usnadnění identifikace dávkové formy. Tablety mohou také být potahovány způsoby dobře známými ze stavu techniky.
Tableta může být vytvořena lisováním nebo litím, popřípadě s jednou nebo více doplňujícími složkami. Lisované tablety mohou být připraveny lisováním účinné látky v sypké formě jako je prášek nebo granule ve vhodném stroji, popřípadě smíchané s vazebným činidlem, lubrifikantem, inertním ředidlem, konzervačním činidlem, povrchově aktivním nebo dispergujícím činidlem. Lité tablety mohou být vyrobeny litím ve vhodném strojí ze směsi práškové sloučeniny zvlhčené inertním kapalným ředidlem. Tablety mohou být popřípadě potahovány a mohou být připraveny tak, aby zajišťovaly pomalé nebo řízené uvolňování účinné látky.
Další přípravky vhodné pro orální podávání zahrnují pastilky zahrnující účinnou látku s ochucenou bází, obvykle sacharózou a arabskou gumou nebo tragacantem; pastilky obsahující účinnou látku v inertní bázi jako je želatina a glycerin nebo sacharóza a arabská guma; a ústní vody zahrnující účinnou látku ve vhodném kapalném nosiči.
Ještě dalším předmětem předloženého vynálezu je způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I nebo 1c zahrnující acylaci nukleosidu, představovaného zde sloučeninou FLG, obecný vzorec V, typicky v 5' hydroxy skupině:
ve které Ri(R2)L]X představuje aktivovanou kyselinu, jako jsou karboxylové deriváty obecného 40 vzorce Ila nebo lib, kde Rb R2, a L| mají výše uvedený význam nebo jejich chráněné deriváty.
Alternativně aktivovaná kyselina může obsahovat sloučeninu obecného vzorce Ri(R2)glycerolD-X, kde Rb R2 a D mají stejný význam jako v obecném vzorci líc nebo aktivovaný Rz-O-AlkC(=O)X derivát v případě sloučenin obecného vzorce la. V posledních případech vazebné skupiny mohou být vytvořeny postupně nejprve esterifikací vhodně chráněné D nebo to-hydroxy karboxylové kyselina k nukleosidu, odstranění ochrany koncové karboxylové nebo hydroxylové funkční skupiny a esterifikací vhodně chráněné glycerolové nebo Rz skupiny na tuto látku.
Aktivovaný derivát použitý pro acylaci může zahrnovat například halogenid kyseliny, anhydrid kyseliny, aktivovaný ester kyseliny nebo kyselinu v přítomnosti kopulačního reagentu, například dicyklohexylkarbodiimidu. Reprezentativní aktivované deriváty kyselin zahrnují chloridy kyselin, anhydridy odvozené od alkoxykarbonylhalogenidů jako je isobutyloxykarbonylchlorid a podobně, estery odvozené od N-hydroxysukcinamidu, estery odvozené od N-hydroxyftalimidu, estery odvozené od N-hydroxy-5-norbomen-2,3-dikarboxamidu, estery odvozené od 2,4,5-tri10 chlorfenolu a podobně. Další aktivované kyseliny zahrnují ty sloučeniny, ve kterých X v obecném vzorci RX představuje skupinu OR', kde R má stejný význam jako R2 definované výše a R' představuje například COCH3, COH2CH3 nebo COCF3 nebo kde X představuje benzotriazol.
Odpovídající metodologie je aplikovatelná pokud předložený vynález je použit na další mono15 hydroxylované nukleosidy, to znamená aktivovaný derivát je odpovídajícím způsobem esterifikován k volné skupině 5' hydroxy (nebo jejímu ekvivalentu) jednosytných nukleosidu jako je acyklovir, ddl, FTC, lamivudin, 1592U89, DAPD, F-ddA a podobně.
Meziprodukty použité ve výše uvedených způsobech samy o sobě definují nové sloučeniny, obzvláště sloučeniny obecného vzorce Ilc'
A—O—1 O O _0_ll—Alk—Q—χ
A'“O—1 (Ilc*), ve kterém A, A' a Alk mají výše uvedený význam (A a A' jsou popřípadě chráněny obvyklými ochrannými skupinami) a X představuje volnou kyselinu nebo aktivovanou kyselinu, jak bylo ilustrováno výše.
Reprezentativní sloučeniny obecného vzorce líc' zahrnují:
2.3- bis-(L-valyloxy)-propylester kyseliny malonové,
2.3- bis-(N-CBZ-L-valyloxy)-propylester kyseliny malonové,
2,3-bis-(N-Fmoc-L-valyloxy)-propylester kyseliny malonové,
2.3- bis-(N-Boc-L-valyloxy)-propylester kyseliny malonové,
2.3- bÍs-(L-isoleucyloxy)-propylester kyseliny malonové,
2.3- bis-(N-CBZ-L-isoleucyloxy)-propylester kyseliny malonové,
2.3- bís-(N-Fmoc-L-isoleucyloxy)-propytester kyseliny malonové,
2,3-bis-(N-Boc-L-isoleucyloxy)-propylester kyseliny malonové,
2.3- bis-(L-valy1oxy)-propylester kyseliny jantarové,
2.3- b i s-(N-C BZ-L-valy Ioxy )-propy lester kysel i ny j antarové,
2.3- bis-(N-Fmoc-L-valyloxy)-propylester kyseliny jantarové,
2.3- bis-(N-Boc-L-valyloxy)-propy lester kyseliny jantarové,
2,3-bis-(L-isoleucyloxy)-propylester kyseliny jantarové,
2.3- bis-(N-CBZ-L-Ísoleucyloxy)-propylester kyseliny jantarové,
2.3- bis-(N-Fmoc-L~isoleucyloxy)-propylester kyseliny jantarové,
2.3- bis-(N-Boc-L-Ísoleucyloxy)-propylester kyseliny jantarové,
2.3- bis~(L-valyloxy)-propylester kyseliny glutarové,
2.3- bis-(N-CBZ-L-valyloxy)-propylester kyseliny glutarové,
2.3- bis-(N-Fmoc-L-valyloxy)-propylester kyseliny glutarové,
2,3-bis-(N-Boc-L-valyloxy)-propylester kyseliny glutarové,
2.3- bis-(L-isoleucyloxy)-propylester kyseliny glutarové,
2.3- bis-(N-CBZ-L-isoleucyloxy)-propylester kyseliny glutarové,
2.3- bis-(N-Fmoc-L-isoleucyloxy)-propylester kyseliny glutarové,
2.3- bis-(N-Boc-L-isoleucyloxy)-propy lester kyseliny glutarové, a odpovídající halogenidy kyselin, obzvláště chlorid, anhydridy kyselin a diestery každé z výše uvedených sloučenin, například
2.3- bis-(N-jCBZ-L-valyloxy)-propylester, 4-methoxybenzy lester kyseliny jantarové,
2,3-bis-(N-CBZ-L-valyloxy)-propylester, 1,1-dimethyl-ethylester kyseliny jantarové, a podobně.
Další výhodný soubor meziproduktů zahrnuje meziprodukty obecného vzorce Ha':
(Ha'), ve kterém Rx, Alk, m, n a T mají význam popsaný výše, A a A' představují kyselé zbytky L'-alifatických aminokyselin (N-chráněné pokud je to nutné) esterifikované k hydroxylovým funkčním skupinám na vazebné skupině nebo jedna ze skupin A a A' je kyselý zbytek a druhá představuje volnou hydroxylovou skupinu, a X představuje volnou kyselinu nebo aktivovanou kyselinu jak bylo uvedeno výše. Výhodně A a A' představují tentýž aminokyselinový zbytek.
Další nové meziprodukty zahrnují volné nebo aktivované prekurzory kyselin sloučenin obecného vzorce Ia jako jsou:
3-N-Boc-L-valyloxypropanová kyselina,
3—N-Fmoc-L-valyloxypropanová kyselina,
3-N-CBZ-L-valyloxypropanová kyselina,
3-N-Boc-L-isoleucyloxypropanová kyselina,
3- N-Fmoc-L-isoleucyloxypropanová kyselina,
3-N-CBZ-L-isoleucyloxypropanová kyselina,
4- N-Boc-L-valyloxymáselná kyselina,
3- N-F moc-L-valyloxymáse lná kysel ina,
4- N-CBZ-L-valyloxymáselná kyselina, f\
4-N-Boc-L-isoleucyloxymáselná kyselina,
3-N-Fmoc-L-isoleucyloxymáselná kyselina,
3-N-CBZ-L-isoleucyloxymáselná kyselina a podobně; a aktivované deriváty, jako jsou halogenidy kyselin.
Další nové meziprodukty zahrnují prekurzory sloučenin obecného vzorce Ile a Uf uvedených výše, obzvláště ty, které jsou odvozeny od „přirozených“ konfigurací jako je kyselina L-maleinová a L-vinná; například:
3- ethoxykarbonyl-2-valyloxy-propionová kyselina 3~ethoxykarbonyl-2-isoleucyloxy-propionová kyselina,
4- ethoxykarbony|-2,3-bis-valyloxy-máselná kyselina, 4-ethoxykarbonyl-2,3-bis-isoleucyloxy-máselná kyselina,
3-benzyloxykarbonyl-2-valyloxy-propionová kyselina
3- benzyloxykarbonyl-2-isoleucyloxy-propionová kyselina,
4- benzyloxykarbonyl-2,3-bis-valyloxy-máselná kyselina, 4-benzyloxykarbonyl-2,3-bis-isoleucyloxy-máselná kyselina, a podobně;
a odpovídající aktivované deriváty jako jsou halogenidy kyselin.
Ještě další nové meziprodukty zahrnují prekurzory odpovídající struktuře dané obecným vzorcem lid, jako jsou
2-(L-valyloxy)propanová kyselina,
2-(N-Boc-L-valyloxy)propanová kyselina 2-(N-F moc-L-valy loxy )propanová kysel ina,
2-(N-CBZ-L-valyloxy)propanová kyselina,
2-(L-isoleucyloxy)propanová kyselina
2-(N-Boc-L-isoleucyloxy)propanová kyselina,
N-(Fmoc-L-isoleucyloxy)propanová kyselina,
N-(CBZ-L-i sole ucy loxy)propanová kysel ina,
2-(L-valyloxy)máselná kyselina,
2-(N-Boc-L-valyloxy)máselná kyselina
2-(N-Fmoc-L-valyloxy)máselná kyselina 2-(N-CBZ-L-valyloxy)máselná kyselina,
2-(L-isoleucyloxy)máselná kyselina,
2-(N-Boc-L-isoleucyloxy)máselná kyselina,
N-(Fmoc-L-isoleucyloxy)máselná kyselina
N-(CBZ-L-isoleucyloxy)máselná kyselina a podobně; a jejich aktivované deriváty, jako jsou halogenidy kyselin.
Příprava 3-fluomukleosidú jako je látka obecného vzorce V byla podrobně popsána v Herdiwijn a kol. v Nucleosides and Nucleotides 8 (1) 65-96 (1989), která je zde zahrnuta jako reference. Příprava dalších jednosytných nukleosidů jako je acyklovir, ddl (didanosin), ddC (zalcitabín), d4T (stavudin), FTC, lamivudin (3TC), 1592U89 (4-[2-amino-6-(cyklopropylamÍno)-9H5 purin-9-yl]-2-cyklopenten-l-methanol), AZT (zidovudin), DAPD (D-2,6-diaminopurin dioxolan), F-ddA a podobně jsou dobře známy a podrobně popsány v literatuře.
Reaktivní deriváty skupiny Ri(R2)LiL2X mohou být vytvořeny předem nebo in šitu použitím reagentů jako je dicyklohexylkarbodiimid (DCC) nebo O-(lH-benzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'io tetramethyluronium tetrafluorboritan (TBTU). Pokud je použit halogenid kyseliny, jako je chlorid kyseliny, může být do reakční směsi přidán katalyzátor představovaný terciálním aminem, jako je triethylamin, Ν,Ν'-dimethylanilin, pyridin nebo dimethylaminopyridin pro vazbu uvolňované halogenovodíkové kyseliny.
Reakce se výhodně provádí v nereaktivním rozpouštědlo jako je Ν,Ν-dimethylformamid, tetrahydrofuran, dioxan, acetonitril nebo halogenovaný uhlovodík, jako je dichlormethan. Je-li to požadováno, kterýkoli z výše uvedených terciálních aminových katalyzátorů může být použit jako rozpouštědlo, přičemž je třeba zajistit, aby byl přítomen dostatečný přebytek. Reakční teplota se typicky může měnit v rozmezí od 0 a 60 °C, ale výhodně se udržuje v rozmezí od 5 a 50 °C.
Po uplynutí doby od 1 do 60 hodin je reakce obvykle v zásadě ukončena. Postup reakce může být sledován použitím chromatografie na tenké vrstvě (thin layer chromatography - TLC) a vhodných systémů rozpouštědel. Obecně pokud reakce je ukončena, jak je určeno pomocí TLC, produkt se extrahuje organickým rozpouštědlem a čistí se chromatografii a/nebo re krys táli žací z vhodného systému rozpouštědel.
Vedlejší produkty, pokud dochází k acylaci na nukleosidové bázi, mohou být separovány chromatografií, ale taková nežádoucí acylace může být minimalizována řízenými reakčními podmínkami. Tyto řízené podmínky mohou být dosaženy například manipulací koncentracemi reagentů nebo rychlostí přidávání, obzvláště acylačního činidla, snížením teploty nebo volbou rozpouštěd30 la. Reakce může být sledována pomocí TLC pro monitorování řízených podmínek. Může také být výhodné chránit 6-oxo skupinu báze a obzvláště 2-amino skupinu obvyklými ochrannými skupinami pro zamezení nežádoucí acylace.
Sloučeniny obecného vzorce IV ve kterých R3 představuje atom vodíku mohou být připraveny
6-aktivací odpovídající guaninové sloučeniny obecného vzorce I (kde vystavená amino funkční skupina aminokyselinového rezidua R2 se popřípadě chrání obvyklými N-ochrannými skupinami) aktivující skupinou jako je atom halogenu. Takto aktivovaný 6-purin se následně redukuje na purin, například paládiovým katalyzátorem a zbavena ochrany pro získání požadované sloučeniny obecného vzorce IV nebo obecného vzorce V.
Sloučeniny ve kterých R3 je Ri nebo jiný ester mohou být připraveny obvyklou esterifikací (analogickou esterifikaci popsané výše) odpovídající hydroxylové sloučeniny obecného vzorce I nebo obecného vzorce V, popřípadě po obvyklé N-ochraně vystavené aminové funkční skupiny aminokyselinového zbytku R2 a/nebo R3. Sloučeniny ve kterých R3 je ether mohou být připra45 vény analogicky způsobům popsaným ve výše uvedeném dokumentu WO 93 13778, znovu spolu s případnou N-ochranou vystavených aminových skupin. Sloučeniny ve kterých R3 je azid mohou být připraveny způsobem, popsaným v WO 97 09052.
Meziprodukty obecného vzorce lid se vhodně připraví acylaci karboxy-chráněné hydroxyalkano50 vé kyseliny, typicky 2-hydroxy-l-alkanové kyseliny, s vhodným aktivovaným a N-chráněným R2 derivátem, jako je N-CBZ valyl nebo isoleucyl spolu s obvyklým kopulačním reagentem jako je DMAP/DCC nebo halogenidem aminokyseliny. Karboxy chránící skupina se potom odstraní, například kyselou hydrolýzou a výsledný meziprodukt se aktivuje jak je popsáno výše nebo se použije volná kyselina spolu s kopulačním reagentem pro esterifikaci nukleosidu za obvyklých esterifíkačních podmínek.
Sloučeniny obecného vzorce la se také výhodně připraví způsobem uvedeným v bezprostředně předcházejícím odstavci, totiž esterifikací karboxy chráněné a-hydroxy, ω-karboxy kyseliny, jako je kyselina glykolová, kyselina mléčná, kyselina hydroxymáselná a podobně s vhodným
N-chráněným R2 derivátem, bud’ ve formě volné kyseliny spolu s kopulačním činidlem, nebo v aktivované formě, například jako odpovídající halogenid kyseliny. Karboxy ochranná skupina se odstraní a výsledný meziprodukt se esterifikuje s nukleosidem použitím způsobu popsaného výše.
Sloučeniny zahrnující strukturu obecného vzorce Ile nebo Uf se připraví karboxy ochranou koncových karboxylových skupin odpovídající dikarboxylové kyseliny, jako je kyselina L-vinná nebo kyselina L-malonová, s použitím obvyklých karboxy ochranných skupin jako je benzoyl. Volná hydroxy skupina nebo skupiny se potom esterifikují obvyklými esterifikačními technikami, jako je DMAP a DCC v DMF s odpovídající N-chráněnou R2 aminokyselinou, jako je N-Boc-L-valyl nebo N-Boc-L-isoleucyl. Benzoylové karboxy ochranné skupiny se odstraní a výsledný produkt se esterifikuje na 5'-hydroxy funkční skupinu jednosytného nukleosidu, používajíce obvyklých podmínek, jako jsou podmínky popsané v doprovázejících Příkladech. Nakonec se volná karboxylová funkční skupina esterifikuje s Ri skupinou nebo, výhodněji, obvyklým farmaceuticky přijatelným esterem, jako je ethylester.
Sloučeniny zahrnující fosforylovanou součást III mohou být připraveny reakcí 2',3'-dideoxy-3'fluorguanin-5-monofosfátu se sloučeninou obecného vzorce Via R1\ R4
X
Ha (Via), ve kterém Ha představuje atom halogenu, jako je atom chloru, atom jodu nebo atom bromu, za 25 podmínek analogických podmínkám popsaným v dokumentech US 4 337 201, US 5 227 506,
WO 94/13682 a WO 94/13324, Starret a kol., J. Med. Chem. 37 1857-1864 (1994) a Iyer a kol., Tetrahedron Lett. 30 7141-7144 (1989), které jsou zde zahrnuty jako reference, Monofosfát může být připraven obvyklou fosforylací FLG jak je popsáno například v Herdwyn a kol, viz výše. Odpovídající metodologie je použitelná i na monofosfáty dalších jednosytných nukleosidů.
Alternativně tato esterifikace fosfátový ester může probíhat ve dvou krocích zahrnujících nejprve reakci mezi FLG-monofosfátem a sloučeninou obecného vzorce VII
R,
PGOOH (VII), ve kterém R4 a R4' mají výše uvedený význam a PG je obvyklá hydroxy ochranná skupina jako je 35 skupina popsaná výše, která je následována deprotekcí a esterifikací s vazebnou skupinou L| jejíž třetí, nejvíce napravo se nacházející funkční skupina je hydroxylová skupina. Dva příklady takových vazebných skupin Li jsou znázorněny ve Schématu 1 uvedeném níže (předposlední sloučeniny v každé sérii). V tomto provedení je nejvíce vlevo se nacházející karbonyl obecného vzorce
Va synonomem pro karbonyl vazebné skupiny ve vazebné skupině obecného vzorce Ila.
Sloučeniny zahrnující případnou vazebnou skupinu L2 mohou být také připraveny způsobem skládajícím se ze dvou etap. Konkrétně sloučenina obecného vzorce CIC(=O) OC (R4) (R/) Cl může reagovat s 5'-hydroxy v FLG (popřípadě s ochranou použitím obvyklých ochranných skupin) tak jak je to známo v oboru chemie cefalosporinů. Výsledný FLG-5'-O~C(=0) OC (R4) (R/) chlorid se potom nechá reagovat s R, a R2 nesoucími trifunkční vazebnou skupinu, kde třetí funkční skupina obsahuje karboxy lovou funkční skupinu, jako je draselná sůl.
Je zřejmé, že trifunkční Li skupiny obecného vzorce Ha ve kterém n a m jsou rovny I a Alk není přítomen mohou být připraveny z glycerolu regioselektivní esterifikací jak je znázorněno níže ve schématu 1 s referencí na kombinaci stearoyl/L-valyl. Stručně řečeno se R] a R2 regioselektivně esterifikují na polohy 1 a 3 glycerolu a poloha 2 se potom přemění na vhodnou -T-C(=O)- skupinu, které se potom esterifikuje na polohu 5' fluomukleosidu nebo na kooperující funkční skupinu na L2 (není znázorněna). Alternativně může být hydroxy v poloze 2 glycerolového derivátu esterifikována se L2 skupinou obsahující kooperující karbony lovou funkční skupinu na své levé straně.
Skupiny Li obecného vzorce Ha ve kterém m je rovno 1, n je rovno 0 a Alk představuje methylen mohou být také připraveny z glycerolu regioselektivní esterifikací Ri a R2 na polohy 1 a 2 glycerolu, jak je také znázorněno níže ve schématu 1, po čemž následuje přeměna hydroxy v poloze 3 na vhodnou skupinu -T-C(=O)-. Posloupnost reakcí zcela vlevo ve Schématu 1 znázorňuje situaci, kdy Rt se esterifikuje na polohu 1 glycerolu a R2 se esterifikuje na polohu 2. Odpovídající uspořádání, ve kterém R, se esterifikuje na polohu 2 a R2 na polohu I může být dosaženo tak, že se nejprve působí na glycerol pomocí CBz-L-valin/DCC/DMAP/DMF a potom se chrání poloha 3 pixylchloridem před esterifikací mastné kyseliny R| na polohu glycerolu, deprotekci a přemě25 nou polohy 3 je-li to nutné.
A
SCHÉMA I
OH -OH —OH
SCHEMEI stearoylchlorid pyridin/DMF
CBz-L-valin . DCC DMP X
CH2CI2/DMňr
O—L-valyl-CBz OH
O—stearoyl | fosgen O—L-valyl-CBz
O—stearoyl
EOH OH
O—stearoyl
Ipixylchlorid pyridin
EO—Px OH
O—stearoyl í CBz-L-vaiin I dcc/dmap/ch2ci2
EO—Px
O— L-valyl-CBz O—stearoyl esterifikace
FLG
I ci2ch-co2h ▼ CH2Cl2/pyrrol —OH —O— L-valyl-CBz *“O—stearoyl fosgen
O
I—o—Cl —O—L-valyl-CBz L—O—stearoyl
I když Schéma 1 bylo ilustrováno s odvoláním na kombinaci ve které R| představuje stearoyl a R2 představuje L-valyl, je zřejmé, že toto základní schéma je také možno aplikovat na jiné aminokyseliny, s přítomností jiných mastných kyselin nebo s použitím obvyklých ochranných skupin, na kombinace R2 jako aminokyselinový derivát a R| jako skupina hydroxy. Vazebné skupiny, ve kterých T zahrnuje skupinu -NH- mohou být připraveny analogickou regioselektivní esterifikací následovanou přeměnou volného hydroxylu na amin, redukcí na azid a reakcí s fosgenem pro vytvoření odpovídajícího chlorkarbamátu.
io Variace schématu I umožňuje přípravu vazebných skupin obecného vzorce líc. V této variaci je fosgenový krok ukázaný výše nahrazen reakcí s aktivovanou dikarboxylovou kyselinou, jako je anhydrid kyseliny jantarové. To vede k vytvoření glycerol triesteru (zahrnující (popřípadě chráněný) Ri ester, chráněný R2 ester a ester dikarboxylové kyseliny) a volný karboxyl dikarboCZ 300757 B6 xylové kyseliny se potom aktivuje a esterifikuje na nukleosíd obvyklým způsobem. Alternativně vazebné skupiny obecného vzorce líc mohou být vytvořeny in sítu na nukleosidu. V této variantě se dikarboxylová kyselina estenfikuje na vhodně chráněný glycerolový derivát. Tento monoester kyseliny jantarové se potom esterifikuje na 5'-hydroxy funkční skupinu nukleosidu obvyklým způsobem. Nakonec jedna nebo obě ochranné skupiny na glycerolové skupině se nahradí esterem L-aminokyseliny a, jestliže je přítomna, zbývající ochranná skupina se nahradí esterem mastné kyseliny nebo odstraní a tím zanechá volnou hydroxylovou skupinu. To je znázorněno ve Schématu IA, které ilustruje příklad, ve kterém nukleosíd v acykloviru (FLG znázorněno stínované), dikarboxylová kyselina je kyselina jantarová a Rj a R2 představují oba CBZ-chráněný valyl, io avšak toto schéma je pochopitelně aplikovatelné na další obměny obecného vzorce Ic. V každém případě kopulační podmínky znamenají standardní esterifikační podmínky jako jsou kopulační reagenty DMAP, DCC a podobně nebo alternativně přeměnu relevantní karboxylové funkční skupiny na aktivovaný derivát jako je chlorid kyseliny nebo aktivovaná skupina kyseliny jantarové může také zahrnovat anhydrid.
Schéma IA
O
OH
1,3-chráněný glycerol, kopulační podmínky
vajyl
1. kyselá hydrolýza Ra 2.1,3-bis-CBZ-valylglycerol, kopulační podmínky 3. deprotekce
1.
2.
v 3.
N-CBZvafyi —O—
N-CBZvalyl —O—1
Y uanin deprotekce Rb, Rc N-CBZ-valin, kopulační podmínky hydrolýza Ra
O
-O
OH
1. nukleosíd, kopulační podmínky
2. deprotekce
V obměně Schématu IA reaguje anhydrid kyseliny jantarové přímo s nukleosidem, čímž je 20 možno vyloučit první krok ochrany a deprotekce. Další alternativou je regioselektivně esterifíkovat glycerolovou skupinu N-chráněnou aminokyselinovou skupinou nebo skupinami, obvykle ve spojení s ochranou hydroxylové funkční skupiny určené pro kopulaci k nukleosidu, následovanou deprotekcí této hydroxylové skupiny a kopulací k nukleosidu.
SCHÉMA II
DMAP DCC BOCVal
DMAP DCC CHgClg < ► N-tritytVal
CBzVal—O
HO
stearoylCI
StearoylCI
CHgCIg/pyrídin
CBzVal —O stearoyh-0
TrVal —O stearoyl—O
OH
OBn
Vazebné skupiny, ve kterých man jsou rovny 1, Alk představuje alkylen nebo alkenylen a T představuje vazbu mohou být připraveny jak je znázorněno ve Schématu II uvedeném výše. Další permutace m, n, Alk a různých funkční skupin ve trifunkční vazebné skupině Li obecného vzorce Ha mohou být připraveny analogicky k výše uvedenému způsobu odpovídajícími výchozími materiály, jako je 1,2,4-trihydroxybutan (CA registrační číslo 3968-00-6), 3,4-dihydroxybutanová kyselina (1518-61-2 a 22329—74—4), (S)-3,4-dihydroxybutanová kyselina (51267—44-8), (R)-3,4—dihydroxy butanová kyselina (158800-76-1), 1,2,5-pentantriol (51064—73-4 a 1469746-2), (S)-l,2,5-pentantriol (13942-73- 9), (R)-1,2,5-pentantriol (171335-70-9), 4,5-dihydroxypentanová kyselina (66679-29-6 & 129725-14-0), 1,3,5-pentantriol (4328-94-3) a 3(2-hydroxyethyl)-l,5-pentandiol (53378-75-9), Příprava každého z těchto výchozích materiálů je popsána v referencích k odpovídajícímu registračnímu číslu. Ohsawa a kol. v Chem. Pharm. Bull. 41 (11) 1906-1909 (1993) a Terao a kol, Chem. Pharm. Bull. 39(3) 823-825 (1991) popisují řízení stereochemie trifunkčních vazebných skupin lipázou P.
Aminokyselinový derivát R2 a, jestliže je přítomen, Ri mohou být alternativně esterifikovány io k vazebné skupině pomocí 2-oxa-4-aza-cykloalkan-l,3-dionové metodologie popsané v mezinárodní patentové přihlášce WO 94/29311, jejíž obsah je zde zahrnut jako reference.
Vazba karboxylové funkční skupiny R, a/nebo R2 k aminové skupině derivátu vazebné skupiny se provádí postupem obvyklým v peptidové chemii, obecně spolu s ochranou α-aminu obvyk15 lými N-ochrannými skupinami. Vytváření amidové vazby mezi karboxylovou funkční skupinou vazebné skupiny a α-aminovou skupinou R2 také postupuje způsobem obvyklým v peptidové chemii, obecně spolu s ochranou α-karboxylové funkční skupiny. Esterifikace Rj jako mastného alkoholu na karboxylovou funkční skupinu vazebné skupiny se provádí analogicky, avšak opačně vzhledem k výše uvedené esterifikaci R| jako mastné kyseliny.
Přehled obrázků na výkresech
Různá provedení předloženého vynálezu budou nyní popsány ve formě příkladů pouze s odvolá25 ním na následující Příklady a doprovázející vyobrazení.
Obr. 1 představuje hladiny sérové virální DNA u ošetřených a neošetřených kachen infikovaných DHBV jako funkci času, jak je popsáno v Biologickém Příkladu 3;
Obr. 2 znázorňuje přírůstek hmotnosti u ošetřených kachen infikovaných DHBV jako funkci času, jak je popsáno v Biologickém Příkladu 3.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
2-(stearoyloxymethyl)-2-(N-(fluorenylmethoxykarbonyl)-L-valyIoxymethyl)-propionová kyselina
Do roztoku 2,2-bis(hydroxymethyl)propionové kyseliny (28,16 g, 210 mmol) ve vodě (50 ml), byl přidán hydroxid draselný (11,78 g, 210 mmol). Po uplynutí 5 minut byl roztok odpařen ve vakuu a residuum bylo třikrát spoluodpařeno s bezvodým DMF. Residuum bylo potom rozpuště45 no v DMF (500 ml) a do roztoku byl přidán benzylbromid (3,57 ml, 30 ml). Po míchání po dobu 30 minut byla reakční směs filtrována přes vrstvu Celitu, vlita do vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahována dichlormethanem. Organická fáze byla shromážděna a potom promývána vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Potom byla odpařena ve vakuu a tím se získal benzyl-2,2-bis(hydroxymethyl)propionát (4,37 g).
‘H-NMR (CDC13): 7,35 (s, 5H), 5,20 (d, 2H), 3,91-3,71 (m, 4H), 1,10 (s, 3H).
Do roztoku benzyl-2,2-bis(hydroxymethyl)propionátu (4,37 g, 19,5 mmol) v pyridinu (58 ml) byl přidán po kapkách stearoylchlorid (4,13 g, 13,6 mmol) v dichlormethanu v průběhu 40 minut.
Reakční směs byla potom udržována po dobu 16 hodin a potom vlita do vodného roztoku hydroCZ 300757 B6 genuhličitanu sodného a extrahována dichlormethanem. Organická fáze byla shromážděna a odpařena ve vakuu. Produkt, benzyl-2-(hydroxymethyl)-2-(stearoyloxymethyl)propionát byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií, (1,97 g), 'H-NMR (CDCG): 7,34 (s, 5H), 5,17 (d, 2H), 4,28 (dd, 2H) 3,69 (dd, 2H), 2,24 (t, 2H), 1,57 (m, 2H, 1,25 (s, 28H, 1,22 (s, 3H), 0,87 (t, 3H).
Benzyl-2-(hydroxymethyl)-2-(stearoyloxymethyl)propionát (1,86 g, 3,8 mmol) byl rozpuštěn v pyridinu (30 ml). Do roztoku byly přidány toluensulfonová kyselina (73 mg, 0,39 mmol),
N-fluorenylmethoxykarbonyl-L-valin (3,94 g, 11,6 mmol) a DCC (3,58 g, 17,4 mmol). Reakční směs byla udržována při teplotě 4 °C po dobu 16 hodin a potom filtrována přes vrstvu Celitu. Filtrát byl vlit do vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahován dichlormethanem. Organická fáze byla shromážděna a odpařena ve vakuu. Produkt, benzyl-2-(N-fluorenylmethoxykarbonyl)-L-valyloxymethyl)-2-(stearoyloxymethyl)propionát, byl izolován silikagelo15 vou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 2,38 g.
'H-NMR (CDCI3): 7,78-7,25 (m, 13H), 5,29 (m, !H), 5,15 (d, 2H), 4,38 - 4,23 (m, 7H), 2,19 (t, 2H), 2,10 (m, 1H), 1,55 (m, 2H), 1,24 (m, 31H), 0,94 - 0,83 (m, 9H).
Do roztoku benzyl 2-(N-(f1uorenylmethoxykarbonyl)-L-valyloxymethyl)-2-(stearoyloxymethyl)propionatu (1,86 g, 3,8 mmol) ve smíšeném rozpouštědle THF/methanol (16ml/8ml) byly přidány mravenčan amonný (376 mg, 6 mmol), kyselina mravenčí (1,87 ml) a paládiová čerň (40 mg). Reakční směs byla udržována při teplotě okolí po dobu 16 hodin a potom filtrována přes vrstvu Celitu. Po odpaření byl produkt izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií. Výtěžek: 1,05 g.
Příklad 2
-O-stearoyl-2-O-(N-C Bz-L-valy I)glycerol
a) Příprava 1-O-stearoylglycerolu
Do směsi glycerolu (30 g, 326 mmol) a pyridinu (25 ml) rozpuštěných v DMF (300 ml) byl přidán po kapkách stearoylchlorid (10 g, 33 mmol) rozpuštěný v DMF 100 ml. Směs byla ochlazena v ledové lázni dokud přidávání nebylo ukončeno, a poté byla reakční směs udržována pod atmosférou N2 přes noc. Po uplynutí 15 hodin byl přidán CHjCh (300 ml) a nasycený NaHČCh (vodný). Fáze byly separovány a organická fáze byla promývána vodou (50 ml) a sušena s NaiSO.j. Rozpouštědlo a všechen pyridin byly odpařeny za vakua. Surový produkt byl chromatografován na koloně oxidu křemičitého (CH2C12 - MeOH, 20 : 1) a rekrystalizován (CH2CI2 - ether) a tím se získalo zhruba 7 gramů.
b) Příprava pixylchloridu
Acetylchloride (150 ml, 2,1 mol) byl přidán do magneticky míchané suspenze 9-hydroxy-9fenylxanthenu (20 g, 72 mmol) v benzenu (100 ml). Získal se homogenní tmavě červený roztok.
Roztok byl míchán po dobu 30 minut při teplotě 20 °C. Těkavé látky byly odstraněny za sníženého tlaku. Přebytek AcCl byl neutralizován opatrným přidáním ethanolu. Residuum bylo spoluodpareno s toluenem (2 x 30 ml) a s cyklohexanem (2 x 30 ml) pro získání krystalického residua, které se uchovává bez přístupu vzduchu. Pixylchlorid je alternativně dostupný od společnosti Aldrich.
c) Příprava 1-O-stearoyl, 3-O-pixylglycerolu
Produkt z bodu a) uvedeného výše (2,28 g) a pyridinu (25 ml) byly smíchány a zahřívány do rozpuštění. Po ochlazení v ledové lázni byl přidán pixylchlorid (1,92 g) z kroku b). Směs byla udržo5 vána za míchání a v argonové atmosféře v ledové lázni po dobu půl hodiny a potom při teplotě okolí po dobu 1,5 hodin. Pyridin byl odpařen za vakua, residuum bylo rozpuštěno vCH2Cl2 (70 ml) a promýváno 0,5 M kyselinou citrónovou pro odstranění zbývajícího pyridinu. Residuum bylo sušeno pomocí Na2SO4, odpařeno a chromatografováno (ether-hexan 1:3) a tím se získalo 1,25 g čistého produktu s TLC Rf okolo 0,2.
d) Příprava 1-O-stearoyl, 2-O-(N-CBz-L-valyl), 3-O-pixylglycerolu
Produkt kroku c) (237 mg, 0,39 mmol), CBz-L-valin (116 mg, 0,46 mmol), DCC (96 mg, 0,46 mmol) a DMAP (4,7 mg, 0,04 mmol) byl rozpuštěn v CH2CI2 (4 ml). Směs byla udržována za míchání v dusíkové atmosféře přes noc. Po uplynutí 18 hodin směs byla filtrována přes skleněný filtr a chromatografována na silikagelové koloně (ether - hexan 1:4) a tím se získalo 230 mg sTLCRf=0,2
e) Příprava l-0-stearoyl-2-0-(N-CBz-L-valyl)glycerolu
Pixylová skupina produktu kroku d) byla odstraněna selektivní deprotekci způsobem popsaným v Příkladu 3, krok d) a tím se získala sloučenina z názvu.
'H-NMR (CDClj): δ 7,35 (m, 5H), 5.3-4,9 (m, 4H), 4,35-4,25 (m, 3H), 3,8-3,6 (m, 2H),
2,31-2,25 (m, 2H), 2,20-2,10 (m, 1H), 1,60 (m, 2H), 1,02-0,86 (m, 9H).
Příklad 3
I -0-(N-CBz-L-valyl)-2-0-stearoylglycerol
a) Příprava l-0-(N-CBz-L-valyl)glycerolu
CBz-L-valin (4,35 g, 17,3 mmol) byl přidán do pětinásobného přebytku glycerolu (8 ml,
86,9 mmol) spolu s dicyklohexylkarbodiimidem (4,29 g 20,8 mml) a 4-dimethylaminopyridinem (0,212 g) při teplotě okolí. Po míchání přes noc byla suspenze filtrována a DMF byl odstraněn ve vakuu z filtrátu. Residuum bylo znovu rozpuštěno v CH2CI2, promýváno postupně nasyceným NaHCCh, solankou a vodou a potom sušeno. Surový materiál byl chromatografován na silikagelu s 4/1 EtOAc - hexan jako vymývacím rozpouštědlem a tím se získalo 2,465 g. Rf (4/1 EtOAc 40 hexan) 0,17, (20/1 CH2C12 - methanol) 0,12.
b) Příprava l-O-(N-CBz-L-valyl)“3-O-pixylglycerolu
Produkt kroku a) (0,672 g, 20,1 mmol) byl rozpuštěn v bezvodém pyridinu (3,5 ml) pod dusíko45 vou atmosférou. Byl přidán 9-chlor-9-fenylxanthen (pixylchlorid, 0,65 g, 22,0 mmol, 1,1 ekviv. - připraven jak bylo uvedeno výše) a směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 1,5 hodiny. Byl přidán MeOH (1,5 ml) a směs byla rozdělena mezi 10 ml Et2O a 10 m3 nasyceného NaHCO3. Vodná vrstva byla extrahována dalším etherem. Organické vrstvy byly sloučeny, sušeny a koncentrovány několikrát s toluenem a tím se získala bílá pevná látka. Surový materiál byl chroma50 tografován na silikagelu se směsí 3/1 hexan - EtOAc jako vymývacím rozpouštědlem a tím se získalo 0,681 g. Alternativně pixylová skupina může být přidána procedurou, kterou popsali Gaffney a kol., Tetrahedron Lett. 1997,38,2539-2542 použitím PxOH a kyseliny octové.
c) Příprava l-O-(N-CBz-L-valyl)-2-O-stearoyl-3-O-pÍxylglycerolu
Stearoylchlorid (496 ml, 1,3 ekviv.) v 1,5 ml CH2CI2 byl přidán po kapkách do roztoku produktu z kroku b) (0,658 g, 1,13 mmol) v 11 ml pyridinu s mícháním pod atmosférou N2 v ledové lázni.
Po uplynutí 15 minut byla směs míchána při teplotě okolí přes noc. Směs byla zředěna 20 ml Et2O a promývána 10 ml nasyceného NaHCO3. Vodná vrstva byla extrahována dalším Et2O. Organické vrstvy byly sloučeny, promývány solankou (20 ml), sušeny nad Na2SO4 a koncentrovány několikrát s toluenem. Surový materiál (1,37 g) byl chromatografován na 130 g silikagelu se směsí 6/1 hexan -EtOAc. Počáteční frakce 500 ml byla odebrána, následována 100 ml frakcemi. Požadovaný materiál se vymýval v frakcích 2-5, které daly 0,748 g.
d) Příprava l-O-(N-CBz-L-valyl)-2-O-stearoylglycerolu
Do roztoku produktu kroku c) (0,748 g, 0,872 mmol) rozpuštěného v 35 ml CH2C12 pro získání
0,025 M) byl přidán pyrrol (16,5 mol ekviv.) a kyselina dichloroctová (5,5 mol ekviv.) při teplotě okolí. TLC po uplynutí 5 minut ukázala ukončení reakce. Směs byla zředěna 300 ml CH2C12 a promývána 30 ml nasyceného NaHCO3, Vodná vrstva byla extrahována dalším CH2CI2, Organické fáze byly sloučeny, promývány solankou (30 ml), sušeny nad Na2SO4 a koncentrovány. Surový materiál byl chromatografován na silikagelu se směsí 2/1 hexan - EtOAc (s 0,3% kyselinou octovou) jako vymývacím rozpouštědlem a tím se získalo 0,363 g s Rf (2/1 hexan EtOAc) 0,21.
‘H-NMR (CDC13) δ ppm 0,86-0,99 (m, 9H), 1,25 (s, 28H), 1,61 (m, 2H), 2,16 (m, 1H), 2,32 (m, 2H), 3,74 (br s, 2H), 4,28-4,44 (m, 3H), 5,09 (m, 1H), 5,11 (s, 2H), 5,22 (d, 1H), 7,36 (m, 5H)
Příklad 4 l-O-stearoyl-3^O-(NCBz-L-valyl)glycerol
Produkt Příkladu 2, část a) (2,86 g, 7,99 mmol), DCC (0,9 g, 4,36 mmol) 4-(N,N-dimethyl)aminopyridin (DMAP) (0,048 mg, 0,39 mmol) a N-CBz-L-valin (Ig, 3,98 mmol) byly rozpuštěny v CH2C12 (60 ml) a DMF (6 ml). Reakční směs byla ponechána při teplotě okolí po dobu
18 hodin a potom filtrována. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Residuum bylo rozpuštěno v CH2C12 (100 ml) a filtrováno. Surová sloučenina z názvu byla čištěna chromatografií [SiO2, ether/hexan (1:2)] a tím se získalo 1,3 g požadovaného produktu. Nezreagovaný 1-stearoylglycerol může být získán vymýváním směsí CH2Cl2/MeOH (20:1).
'H-NMR (CDClj): δ 5,25 (d, 1H), 5,11 (s, 2H), 4,3(M,05 (m, 6H), 2,65 (d, 1H), 2,35 (t, 2H), 2,06 (m, 1H), 1,62 (m, 2H), 1,26 (s, 28H), 1,00-0,84 (m, 9H).
Příklad 5
CBz-vaJyt—O stearoyl —O
Do ledem ochlazeného roztoku 1-chlorethylchlormravenčanu (1,89 g, 13,2 mmol) v bezvodém CH2C12 (5 ml) byla přidána sloučenina z Příkladu 4 v CH2CI2 (20 ml) následovaná bezvodým pyridinem (1,2 ml, 29,6 mmol). Reakční směs byla míchána s chlazením pod argonovou atmosférou dokud TLC (ether/hexan, 1:2) neukázala spotřebování výchozího materiálu. Po uplynutí
1,5 hodin byla směs promývána vodou (3x5 ml), nasyceným NaHCOj (5 ml) a sušena (Na2SO4). Čištění chromatografií [SiO2 (ether - hexan (1:2)] dalo sloučeninu z názvu (4,0 g).
'H-NMR (CDCb): δ 7,36-7,32 (tn, 5H), 6,40 (m, 1H), 5,24 (m, 1H), 5,11 (s, 2H), 4,30 (m, 6H), 5 2,32 (m, 2H), 2,15 (m, 1H), 1,82 (m, 3H), 1,60 (m, 2H), 1,25 (br s, 28H), 0,97 (m, 3H), 0,86 (m, 6H).
Příklad 6 io
CBz-valyl—O stearoyl θ >0 |
Do roztoku sloučeniny z Příkladu 5 (3,4 g, 4,87 mmol) v bezvodém acetonitrilu (47 ml), byl přidán jodid sodný (3,65 g, 24,3 mmol). Získaný roztok byl zahříván na teplotu zpětného toku pod argonovou atmosférou, dokud NMR neukázalo spotřebování výchozího materiálu. Po uplynutí 4,5 hodin byl přidán ether (50 ml) a směs byla filtrována. Rozpouštědlo bylo odstraněno odpařením a surový produkt byl rozpuštěn v etheru (50 ml). Etherický roztok byl promýván vodou (2 x 10 ml) a sušen (Na2SO4) a odpařen za sníženého tlaku. Čištění chromatografií [SiO2, ether hexan (1:2)] dalo sloučeninu z názvu (2,15 g).
‘H-NMR (CDC13): δ 7,37 (m, 5H), 6,75 (m, 1H), 5,22 (m, 1H), 5,15 (s, 1H), 4,3 (m, 6H), 2,32 (m, 1H), 2,22 (m, 2H), 1,6 (m, 2H), 1,25 (s, 28H), 0,95 (m, 9H).
Příklad 7
O CHg o_lLo—Lq stearoyl — O—
CBz-valyl— O—
Roztok sloučeniny z Příkladu 3 (810 mg, 1,37 mmol) v 2,2 ml bezvodého dichlormethanu byl ochlazen v ledové lázni s mícháním pod argonovou atmosférou. Byl přidán 1-chlorethyl chlormravenčan (298 μΐ, 2,74 mmol), následovaný po kapkách přidávaným pyridinem (665 μΙ, 8,22 mmol) v 2,5 ml dichlormethanu. Po uplynutí 2,5 hodin byla směs zředěna 25 ml dichlormethanu a promývána postupně 10 ml vody a 10 ml solanky. Organická fáze byla sušena nad bezvodým síranem sodným a koncentrována několikrát s toluenem a tím se získal žlutý olej. Čištění mžikovou sloupcovou chromatografií na silikagelu směsi 40/1 dichlormethan-díethylether dalo sloučeninu z názvu ve formě oleje (96 mg, kvantitativní výtěžek).
‘H-NMR (CDCb): δ ppm 0,85=0,98 (m, 9H), 1,25 (s, 28H), 1,60 (m, 2H), 1,83 (d, 3H, J = 5,8
Hz) 2,17 (m, 1H), 2,31 (t, 2H), 4,19-4,48 (m, 5H), 5,11 (s, 2H), 5,22 (d, 1H), 5,27 (m, 1H), 6,386,43 (m, 1H), 7,36 (m, 5H).
Příklad 8 o CH, 0JLq_J_ i stearoyl— O—
CBz-valyl—O—
Roztok sloučeniny z Příkladu 7 (1,896 g, 2,71 mmol) a jodidu sodného (1,80 g, 12,0 mmol) v acetonitrilu (27 ml) byl zahříván na teplotu zpětného toku při teplotě 80 °C pod dusíkovou atmosférou. Po uplynutí 4,5 hodin reakční směs byla zředěna 100 ml směsi 1/1 hexan-diethylether a promývána 25 ml vody. Vodná fáze byla extrahována dalším rozpouštědlem (25 ml). Organické fáze byly sloučeny, promývány postupně 5% vodným roztokem thiosíranu sodného (25 ml) a solankou (25 ml), sušeny nad bezvodým síranem sodným a koncentrovány za vakua. Čištění mžikovou sloupcovou chromatografií na silikagelu směsí 80/1 díchlormethan-methanol io jako vymývacím rozpouštědlem dalo olej (1,45 g) obsahující 90 % sloučeniny z názvu s 10 % sloučeniny z Příkladu 7.
'H-NMR (CDC13): δ ppm 0,85-0,99 (m, 9H), 1,25 (s, 28H), 1,60 (m, 2H), 2,17 (m, 1H), 2,23 (d, 3H, J = 6 Hz) 2 31 (t, 2H), 4,16-4,49 (m, 5H), 5,10 (s, 2H), 5,20-5,29 (m, 2H), 6,69-6,79 (m, 1H), 7,36 (m, 5H).
Příklad 9
4-Benzyloxy-2-(N-trityl-L-valyloxymethyl)-l-stearoyloxybutan
a) Syntéza diethyl-2-(2-benzyloxyethyl)malonátu
Do čerstvě připraveného roztoku sodíku (0,95 g, 41,4 mmol) v 50 ml ethanolu byl přidán roztok 25 diethylmalonátu (6,4 g, 40 mmol) v 10 ml ethanolu a směs byla míchána po dobu 15 minut.
Potom byl přidán po kapkách roztok 2-benzyloxy-l-jodethanu (11,5 g, 41,35 mmol). Směs byla zahřívána na teplotu zpětného toku po dobu čtyř hodin a potom odpařena ve vakuu. Bylo přidáno 100 ml vody a směs byla extrahována třikrát 50 ml dávkami diethyletheru. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena ve vakuu a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 8,6 g lH-NMR (CDC13) 1,26 (m, 6H) 2,26 (m, 2H) 3,54 (m, 3H) 4,16 (m, 4H) 4,57 (s, 2H) 7,32 35 (m, 5H)
b) Syntéza 4-benzyloxy-2-hydroxymethyl-butanol-l
Do míchané suspenze hydridu lithno-h Hnitého (3,0 g, 80 mmol) v 100 ml diethyletheru byl 40 přidán po kapkách roztok diethyl-2-(2-benzyloxyethyl)malonátu (8,5 g, 28,8 mmol) v 20 ml diethyletheru při teplotě zhruba 15 °C. Směs byla zahřívána na teplotu zpětného toku po dobu dvou hodin. Přibližně 4 ml vody bylo po kapkách přidáno s chlazením. Směs byla filtrována a promývána dioxanem. Filtrát byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 3,4 g 'H-NMR (CDCla) 1,60 (m, 2H) 1,82 (m, 1H) 3,00 (m, 2H) 3,56 (t, 2H) 3,69 (m, 4H) 4,50 (s, 2H) 7,32 (m, 5H)
c) Syntéza 4-benzyloxy-2-(N-trityl-L-valyloxymethyl}-butanol-l
Do roztoku N-trityl-L-valinu (4,66 g, 13 mmol) a 4-benzyloxy-2-hydroxymethyl-butanol-l (3,3 g, 15,6 mmol) v 50 ml dichlormethanu byl přidán DCC (3,0 g, 14,5 mmol) a DMAP (0,18 g, 1,45 mmol) a směs byla míchána po dobu tří dní. Směs byla ochlazena na teplotu 5 °C a urethan byl filtrován. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován silikagelovou slouplo covou chromatografií.
Výtěžek: 2,5 g 'H-NMR (CDC13) 1,00 (m, 6H) 1,55 (m, 4H) 1,72 (m, 1H) 2,18 (m, 1H) 2,70 (m, 1H) 3,27 (m, 2H) 3,43 (m, 3H) 4,50 (s, 2H) 7,26 (m, 20H)
d) Syntéza 4-benzyloxy-2-(N-trityl-L-valyloxymethyl)-l-stearoyloxybutanu
Do roztoku 4-benzyloxy*-2-(N-trityl-l-valyloxymethyl)-butanol-l (2,4 g, 4,35 mmol) v 50 ml dichlormethanu byl přidán pyridin (1,72 g, 21,7 mmol). Roztok byl ochlazen na teplotu 10 °C a po kapkách byl přidán roztok stearoylchloridu (2,64 g, 8,7 mmol) v 10 ml dichlormethanu při teplotě mezi 10 °C a 15 °C. Směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Bylo přidáno 100 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs byla míchána po dobu 30 minut. Organická fáze byla separována a vodná fáze byla extrahována dvakrát dichlormethanem. Sloučené organické fáze byly sušeny síranem sodným a koncentrovány za vakua. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 3,0 g 'H-NMR (CDC13) 0,98 (m, 9H) 1,26 (m, 28H) 1,54 (m, 2H) 1,94 (m, 1H) 2,25 (m, 2H) 3,23 (m, 2H) 3,44 (m, 2H) 3,58 (m, IH) 3,91 (m, 2H) 4,10 (m, 1H) 4,47 (s, 2H) 7,28 (m, 20H)
Příklad 10
Kyselina 5-(N-trityl-L-valyloxymethyl)-6-stearoyloxyhexanová a) Příprava 2-allyl 1,3-propanediolu
Diethyl allylmalonát (20 ml, 101 mmol) v bezvodém etheru (100 ml) byl přidán po kapkách do míchaného roztoku hydridu lithno—hlinitého (9,6 g, 253 mmol) při teplotě 0 °C. Reakční směs byla zahřátá na teplotu okolí a uchovávána po dobu 5 hodin. Potom byla ochlazena na teplotu 0 °C a voda (12 ml) byla opatrně přidána po kapkách. Po míchání po dobu 30 minut byla směs filtrována přes vrstvu Celitu a potom promývána ethanolem (2 x 500 ml). Roztok byl sušen za vakua a tím se získalo 9,5 g produktu.
'H-NMR (CDC13): 5,78 (m, 1H), 5,03 (m, 2H), 3,78 (m, 2H), 3,69 (m, 2H), 2,06 (t, 2H), 1,87 (m, 1H).
b) Příprava l-0-(N-trityl-L-valyl)-2-allyl-l,3-propandiolu
Do roztoku N-trityl-L-valinu (5,5 g, 15,2 mmol), 2-allyl-l,3-propandiolu (4,4 g, 38 mmol), Ν,Ν-dimethylaminopyridinu (183 mg, 1,5 mmol) v dichlormethanu (120 ml) byl přidán DCC (3,5 g, 16,7 mmol). Reakční směs byla udržována za zpětného toku přes noc. Po filtraci přes vrst55 vu Celitu byla organická fáze promývána vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a sušeCZ 300757 B6 na. Silikagelová sloupcová chromatografie dala 4,6 g meziproduktu l-O-(N-trityl-L-valyl)-2ally 1-1,3-propandiolu.
c) Příprava I-0~(N-trityI-L-valyl)-2-allyl-3-stearoyl-l ,3-propandiolu
Do roztoku l-0-(N-trityi-L-valyl)-2-allyl-l,3-propandiolu (1,83 g, 4 mmol) v dichlormethanu (40 ml) a pyridinu (3,2 ml, 40 mmol) při teplotě 0 °C byl přidán po kapkách stearoylchlorid (3,62 g, 12 mmol) v dichlormethanu. Roztok byl zahřát na teplotu okolí a uchováván po dobu 3 hodin. Potom byl promýván vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a sušen. Produkt ío byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 1,9 g 'H-NMR (CDCla): 7,30 (m, 15H), 5,70 (m, 1H), 4,99 (m, 2H), 3,93 (m, 2H), 3,55 (m, 1H), 3,27 (m, 2H), 2,68 (m, 1H), 2,30 (m, 2H), 2,23 (m, 1H), 2,01 (m, 2H), 1,85 (m, 1H), 1,62 (m, 2H), 1,3 (m, 28H), 0,98 (dd, 6H), 0,91 (t, 3H),
d) Příprava 3-(N-trityl-L-valyloxymethyl)-4-stearoyloxybutyraldehydu l-O-(N-trityl-L-valyl)-2-allyl-3-stearoyl-l,3-propandÍol (580 mg, 0,8 mmol) byl rozpuštěn v dioxanu (5 ml). Do roztoku byly přidány oxid osmičelý (20 mg, 0,08 mmol) a pyridin (0,05 ml, 0,64 mmol). Do reakční směsi byl přidán roztok jodistanu sodného ve vodě (3,5 ml). Reakční směs byla udržována přes noc a potom ochlazena na teplotu 0 °C. Byl přidán vodný roztok hydrogensiřičitanu sodného a směs byla extrahována dichlormethanem. Organická fáze byla sušena a čištěna silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 250 mg lH-NMR (CDClj): 9,68 (s, 1H), 7,25 (m, 15H), 3,92 (m, 2H), 3,58 (m, 1H), 2,32 (m, 2H), 2,68 (m, 1H), 2,34 (m, 7H), 1,58 (m, 2H), 1,53 (m, 28H), 0,96 (dd, 6H), 0,86 (t, 3H).
f) Příprava benzyl 3-(N-tΓityl-L·-valyloxymethyl)-4-stearoyloxyhexen-2~oátu
Do roztoku 3-(N-trÍtyl-L-vaIyloxymethyl)-4-stearoyloxybutyraldehydu (15,8 g, 21,8 mmol) v dichlormethanu byly přidány (benzyloxykarbonylmethyl)trifenylfosfonium bromid (10,7 g, 21,8 mmol) a triethylamin (2,21 g, 21,8 mmol), Reakční směs byla udržována přes noc při teplotě okolí a potom byla směs odpařena. Do resídua byl přidán diethylether (200 ml) a uchováván při teplotě 4 °C po dobu dvou hodin. Potom residuum byla filtrována a filtrát byl odpařen a produkt byl čištěn silikagelovou sloupcovou chromatografií,
Výtěžek: 10 g ‘H-NMR (CDC13): 7,30 (m, 20H), 6,89 (m, 1H), 5,88 (d, 1H), 5,19 (d, 2H), 3,95 (m, 2H), 3,57 (m, 1H), 3,29 (, 2H), 2,68 (m, 1H), 2,23 (m, 5H), 1,93 (m, 1H), 1,60 (m, 2H), 1,32 (m, 28H), 0,95 (dd, 6H), 0,89 (t, 3H).
g) Příprava 3-(N-trityl-L-valyloxymethyI)-4-stearoyloxyhexanoátu
Do roztoku benzyI-3~(N-trityl-L-valyloxymethyl)-4-stearoy]oxyhexen-2-oátu (70 mg,
0,08 mmol) v methanolu (3 ml) a ethylacetátu (1 ml) byl přidán hydrogenuhlíěitan sodný (10 mg) a paládiová čerň (20 mg). Reakční směs byla udržována pod atmosférou vodíku při atmosférickém tlaku po dobu 2 hodin. Směs byla filtrována a odpařena. Residuum bylo rozpuštěno v dichlormethanu a promýváno postupně vodným roztokem EDTA a studeným vodným 2% roztokem kyseliny citrónové. Organická fáze byla odpařena a tím se získalo 61 mg produktu.
‘H-NMR (CDC13): 7,30 (m, 15H), 3,93 (m, 2H), 3,57 (m, 1H), 3,25 (m, 2H), 2,30 (dt, 4H), 2,20 (m, 1H), 1,70 (m, 1H), 1,62 (m, 4H), 1,30 (m, 28H), 0,95 (dd, 6H),
Příklad 11
Kyselina 3-(N-benzyloxykarbonyl-L-valyloxymethyl)-4-stearoy)oxy-máselná
a) Příprava l-O-(N-benzyloxykarbonyl-L-valyl)-2-allylyl-l,3-propandiolu
Do roztoku 2-aIlyl-l,3-propandiolu (4,6 g, 40mmol) a N-benzyloxykarbonylvalinu (5,02 g, 20 mmol) v dichlormethanu byl přidán dimethylaminopyridin (244 mg, 2 mmol) a DCC (4,5 g, 22 mmol). Po uplynutí dvou hodin byla směs filtrována přes vrstvu Celitu, odpařena a produkt, l-0-(N-benzyloxykarbonyl-L-valyl)-2-allylyl-l ,3-propandiol, byl izolován a tím se získalo
5,01 g.
‘H-NMR (CDC13): 7,36 (m, 5H), 5,78 (m, 1H), 5,26 (d, 1H), 5,11 (s, 2H), 5,06 (d, 2H), 4,22 (m, 3H), 3,59 (m, 2H), 2,13 (m, 3H), 1,98 (m, 2H), 0,94 (dd, 6H).
b) Příprava l-0-(N-benzyloxykarbonyl-L-valyl)-2-allylyl-3-0-stearoyl-l,3-propandiolu
Do roztoku l-O-(N-benzyloxykarbonyl-L-valyl)-2-allylyl-l,3-propandiolu (4,46 g, 12,7 mmol) v dichlormethanu (70 ml) a pyridinu (6,1 ml, 76 mmol) v ledové lázni byl přidán stearoylchlorid (7,8 g, 26 mmol). Reakční směs byla zahřátá na teplotu okolí a uchovávána po dobu jedné hodiny. Potom byla vlita do vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, organická fáze byla sušena a produkt, l-0-(N-benzyIoxykarbonyl-L-valyl)-2-allylyl-3A)-stearoyl-l,3propandiol, byl čištěn silikagelovou sloupcovou chromatografii.
Výtěžek: 6,7 g 'H-NMR (CDC13): 7,34 (m, 5H), 5,77 (m, 1H), 5,30 (d, 1H), 5,11 (s, 2H), 5,08 (d, 2H), 4,32 (m, 1H), 4,10 (m, 4H), 2,29 (t, 2H), 2,13 (m, 4H), 1,62 (m, 3H), 1,25 (m, 28H), 0,90 (m, 9H).
c) Příprava kyseliny 3-(N-benzyloxykarbonyl-L-valyloxymethyl)-4-stearoyloxy-máselné
Manganistan draselný (756 mg, 4,8 mmol) byl rozpuštěn ve vodě (7,5 ml). Roztok byl udržován za silného míchání po dobu 10 min. Byl přidán roztok l-O-(N-benzyloxykarbonyl-L-valyl)-2allylyl-3-O-stearoyl-l, 3-propandiolu (1 g, 1,6 mmol) a tetrabutylammonium bromidu (77 mg, 0,24 mmol) v benzenu (5 ml). Kaše byla míchána po dobu 1,5 hodiny a byl přidán dichlormethan.
Do kaše byl přidán vodný roztok hydrogensiřičitanu sodného, dokud se směs neodbarvila. Organická fáze byla okyselena kyselinou octovou a promývána vodou. Po odpaření byl produkt, kyselina 3-(N-benzyloxykarbonyl-L-valyloxymethyl)-4-stearoyloxy-máselná, (390 mg) izolován silikagelovou sloupcovou chromatografii.
'H-NMR (CDC13): 7,33 (m, 5H), 5,38 (d, 1H), 5,11 (s, 2H), 4,14 (m, 5H); 2,60 (m, 1H), 2,45 (m, 2H), 2,29 (t, 2H), 2,18 (m, 1H), 1,58 (m, 2H), 1,25 (m, 28H), 0,90
Příklad 12
2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-D-[5-(L-valyloxymethyl)-6-stearoyloxyhexanoylJguanosin
a) Příprava 2',3'-dideoxy-3'-fluor-5'-O-(5-(N-trityl-L-valyloxymethyl)-6-stearoyloxyhexanoyljguanosinu
Do roztoku kyseliny 5-(N-trityl-L-valyloxymethyl)-6-stearoyloxyhexanové (462 mg, 0,6 mmol) a 2 ,3'-dideoxy-3-fluorguanosinu (340 mg, 1,25 mmol) v DMF (3 ml) byly přidány io dimethylaminopyridin (7 mg, 0,06 mmol) a DCC (136 mg, 0,66 mmol). Reakční směs byla udržována při teplotě okolí přes noc a potom při teplotě 40 °C po dobu dvou hodin. Reakční směs byla fdtrována přes vrstvu Celitu a vlita do dichlormethanu a promývána vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Produkt, 2',3-dideoxy-3'-fluor-5-O-[5-{N-trityl-L-valyloxymethyl)-6-stearoyloxyhexanoyl]guanosin, byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatogra15 fií. (93 mg) 1 H-NMR (DMSO 5-6): 7,88 (s, 1H), 7,29 (m, 15H), 6,52 (s, 2H), 6,17 (dd, 1H), 5,45 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,20 (m, 2H), 3,82 (m, 2H), 3,50 - 2,60 (m, 5H), 2,30 (m, 4H), 2,10 (m, 1H), 1,70 (m, 1H), 1,50 (m, 4H), 1,22 (m, 28H), 0,85 (m, 9H).
b) Příprava 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-[5-(L-valy loxymethy l)-6-stearoy!oxyhexanoyl]guanosinu
Sloučenina z kroku b) (90 mg, 0,088 mmol) byla N-deprotektována působením 80 % kyselinou 25 octovou (5 ml) při teplotě okolí po dobu 30 minut. Potom byla odpařena a produkt byl čištěn silikagelovou sloupcovou chromatografií a tím se získalo 72 mg sloučeniny z názvu.
’Η-NMR (DMSO 5-6): 7,88 (s, 1H), 6,54 (s, 2H), 6,18 (dd, 1H), 5,48 (dd, 1H), 4,27 (dt, 1H), 4,19 (m, 2H), 3,98 (m, 4H), 3,17 - 2,55 (m, 4H), 2,29 (m, 4H), 1,95 (m, 1H), 1,75 (m, 1H), 1,50 (m, 4H), 1,21 (m, 28H), 0,84 (m, 9H).
Příklad 13
2 ',3 '-Dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-[3-(L-valyloxymethy l)-4-stearoyloxy-butanoy l]guanosin
a) Příprava 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-0-[3-(N-benzyloxykarbonyl-L-valy loxy)-4-stearoyloxy-butanoyljguanosinu
Do roztoku 2',3'-dideoxy-3'-fluorguanosinu (113 mg, 0,42 mmol) a kyseliny 3-(N-benzyloxykarbonyl-L-valyloxymethyl)-4—stearoyloxy-máselné (140 mg, 0,21 mmol) v DMF (2 ml) byly přidán dimethylaminopyridin (3 mg, 0,02 mmol) a DCC (52 mg, 0,25 mmol). Po uplynutí dvou dní byly přidány dichlormethan (10 ml) a několik kapek kyseliny octové a organická fáze byla filtrována přes vrstvu Celitu. Filtrát byl promýván vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodné45 ho a produkt, 2',3'-<lideoxy-3'-fluor-5'“0-[3-(N-benzyloxykarbonyl-L-valyloxymethyl)-4stearoyloxy-butanoyl]guanosin, byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií a tím se získalo 51 mg.
’Η-NMR (CDC13): 7,79 (d, 1H), 7,26 (m, 5H), 6,38 (s, 2H), 6,23 (t, 1H), 5,44 (m, 2H), 5,08 (s, 2H), 4,50-4,10 (m, 8H), 3,15-2,40 (m, 5H), 2,30 (t, 2H), 2,14 (m, 1H), 1,58 (m, 2H), 1,24 (m, 28H), 0,87 (m, 9H).
b) Příprava 2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-0-[3-(L-valyloxymethyl)-4-stearoyloxy-butanoyl]guanosínu
Produkt kroku a) (76 mg, 0,084 mmol) byl rozpuštěn v rozpouštědle tvořeném směsi methanolu 5 (3 ml), ethylacetátu (0,5 ml) a kyseliny octové (0,01 ml). Do roztoku byla přidána paládiová čerň (10 mg). Po uplynutí 2 hodin bylo přidáno dalších 10 mg paládiové černi. Po uplynutí 3 hodin byla směs filtrována a odpařena. Residuum bylo rozpuštěno v dichlormethanu a promýváno vodným roztokem EDTA. Organická fáze byla sušena a společně odpařena s toluenem a tím se získala sloučenina z názvu ve formě acetátové soli.
io
Výtěžek 65 mg.
'H-NMR (DMSO δ-6 + D2O): 7,87 (s, 1H), 5,16 (dd, 1H), 5,37 (dd, 1H), 4,24 (m, 3H), 4,01 (m, 4H), 3,10-2,60 (m, 3H), 2,40 (m, 2H), 2,24 (t, 2H), 1,70 (m, 1H), 1,48 (tn, 2H), 1,25 (m, 28H), 0,82 (m, 9H).
Příklad 14
3-[l-(N-CBz-L-valyl)-2-stearoyI]propyl chlormravenčan l-(N-CBz-L-valyl)-2-stearoyl)glycerol (300 mg, 0,5 mmol) byl rozpuštěn v 20 % fosgenu v toluenu (15 ml). Po uplynutí 18 hodin byl roztok odpařen a residuum bylo několikrát společně odpařeno s toluenem a tím se získal produkt z názvu v kvantitativním výtěžku. Tento produkt vytváří karbonát s cílovým nukleosidem za použití standardní metodologie, například reakcí v 10:1 DMF/pyridinovém roztoku při teplotě 0°C po dobu 3 až 24 hodin, vlitím do roztoku NaHCO3 a extrakcí díchlonnethanem. Aminokyselina se zbavila ochrany, například paládiovou černí v roztoku methanolu, ethylacetátu, kyseliny octové a tím se získal nukleosid-O-[l-(Lvalyl)-2-stearoyl]-3-propyloxy karbonyl], ‘H-NMR (CDC13): 7,40 (m, 5H), 5,28 (m, 2H), 5,10 (s, 2H), 4,35 (m, 5H), 2,35 (m, 2H), 2,17 (m, 1H), 1,56 (m,2H), 1,30 (m, 28H), 0,95 (m, 9H).
Příklad 15
Kysel ina 5-(N-FMOC-L-valy loxy f-4-stearoy loxy-pentanová
a) Benzyl-4,5-dÍhydroxy-2-pentenoát 40
Směs DL-glycerinaldehydu (4,5 g, 50 mmol) a (benzyloxykarbonylmethyl)-trifenyl-fosfoniumbromidu (24,57 g, 50 mmol) v 100 ml 1,2-epoxybutanu byla zahřívána na teplotu zpětného toku přes noc. Směs byla odpařena za vakua a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 8 g = 71 % 'H-NMR (CDCI3) 2,50 (s, 1H) 2,96 (s, 1H) 3,54 (m, 1H) 3,70 (m, 1H) 4,38 (m, 1H) 5,12 (s, 2H) 6,14 (m, 1H) 6,90 (m, 1H) 7,30 (m, 5H)
b) Benzyl—5-{N-FMOC-L-valyloxy)—4—hydroxy-2-pentenoát
Směs benzyl—4.5-dihydroxy-2-pentenoátu (4,4 g, 20 mmol), N-FMOC-L-valinu (5,8 g, 17 mmol) a DMAP (0,21 g, 1,7 mmol) v 100 ml dichlormethanu byla ochlazena na teplotu přibližně 10 °C. Roztok DCC (4,2 g, 20 mmol) v 25 ml dichlormethanu byl přidán po kapkách za 'I stejné teploty a směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Směs byla ochlazena na teplotu 5 °C a urethan byl filtrován. Filtrát byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 6,6 g = 71 % 'H-NMR (CDCh) 0,91 (tn, 6H) 2,12 (m, 1H) 4,38 (m, 5H) 5,14 (s, 2H) 5,24 (m, 1H) 6,20 (m, 1H) 6,92 (m, 1H) 7,30 (m, 13H) ío c) Benzyl-5-(N-FMOC-L-valyloxy)-4-stearoyloxy-2-pentenoát
Do roztoku benzyl-5-(N-FMOC-L-valyloxy)-4—hydroxy-2-pentenoátu (6,5 g, 12 mmol) a pyridinu (2,0 g, 25 mmol) v 100 ml dichlormethanu při teplotě 10 °C byl přidán po kapkách roztok stearoylchloridu (4,55 g, 15 mmol) v 25 ml dichlormethanu. Směs byla míchána přes noc,
Bylo přidáno 100 ml 5% roztoku hydrogenuhlicitanu sodného a směs byla míchána po dobu 30 minut. Organická fáze byla separována a vodná fáze byla extrahována dvakrát dichlormethanem. Sloučené organické fáze byly sušeny síranem sodným a koncentrovány za vakua. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 7,8 g = 80 % 'H-NMR (CDC13) 0,88 (m, 9H) 1,25 (m, 28H) 1,58 (m, 2H) 2,14 (m, 1H) 2,32 (m, 2H) 4,22 (m, 5H) 5,19 (s, 2H) 5,25 (m, 1H) 6,12 (m, 1H) 6,85 (m, 1H) 7,35 (m, 13H).
d) Kyselina 5-(N-FMOC-L-valyloxy)-4-stearoyloxy-pentanová
Roztok benzyl-5-(N-FMOC-L-valyloxy)-4-stearoyloxy-2-pentenoátu (3,8 g, 4,69 mmol) v 50 ml ethylacetátu byl hydrogenován 10% paládiem na uhlí (0,59) za normálního tlaku po dobu pěti hodin při teplotě okolí. Katalyzátor byl filtrován a promýván ethylacetátem a 1,4—dioxanem.
Roztok byl odpařen za sníženého tlaku.
Výtěžek: 3,3 g = 99 % 'H-NMR (CDCb) 0,92 (m, 9H) 1,25 (m, 28H) 1,54 (m, 2H) 1,98 (m, 2H) 2,18 (m, 1H) 2,28 (m, 2H) 2,41 (m, 2H) 4,32 (m, 5H) 5,13 (m, 1H) 5,33 (m, 1H) 7,50 (m, 8H)
Příklad 16
3-(N-FMOC-L-valyloxy)-2-stearoyloxypropÍonová kyselina
a) Benzyl-2,3-dihydroxypropionát
Směs kyseliny D,L-glycerové, dihydrát, vápenná sůl, (2,9 g, 10 mmol) a benzylbromidu (3,8 g, 45 22 mmol) v 25 ml DMF byla míchána při teplotě 60 °C přes noc. Směs byla odpařena za sníženého tlaku a produkt byl izolován silikagelovou chromatografií.
Výtěžek: 4 g = 100 % 'H-NMR(CDCb) 3,26 (s, 1H) 3,90 (m, 2H) 4,32 (m, 1H) 5,25 (s, 2H) 7,28 (m, 5H).
b) Benzyl-3-(N-FMOC-L-valyloxy)-2-hydroxypropionát
Roztok benzyl-2,3-dihydroxypropionátu (4,0 g, 20 mmol), N-FMOC-L-valinu (5,4 g, 16 mmol) 55 a DMAP (0,2 g, 1,6 mmol) v 80 ml dichlormethanu byl ochlazen na teplotu přibližně 10 °C. RozCZ 300757 B6 tok DCC (4,12 g, 20 mmol) v 25 ml byl přidán po kapkách za stejné teploty a směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Směs byla ochlazena na teplotu 5 °C a urethan byl filtrován. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován silikagelovou chromatografií.
s Výtěžek: 4,7 g = 45 % 'H-NMR (CDClj) 0,88 (m, 6H) 2,05 (m, 1H) 4,40 (m, 6H) 5,23 (m, 3H) 7,50 (m, 13H)
c) Benzyl-3-(N-FMOC-L-valyloxy)-2-stearoyloxypropionát io
Do míchaného roztoku benzyl-3-(N-FMOC-L-valyloxy)-2-hydroxypropionátu (4,69, 8,89 mmol) a pyridinu (1,41 g, 17,8 mmol) v 80 ml dichlormethanu byl přidán po kapkách roztok stearoylchloridu (3,64 g, 12 mmol) v 20 ml dichlormethanu a směs byla míchán přes noc při teplotě okolí. Bylo přidáno 100 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs byla míchána po dobu 30 minut. Organická fáze byla separována a vodná fáze byla extrahována dvakrát dichlormethanem. Sloučené organické fáze byly sušeny síranem sodným a koncentrovány za vakua. Produkt byl izolován silikagelovou chromatografií.
Výtěžek: 6,1 g = 87% 'H-NMR (CDClj) 0,88 (m, 9H) 1,26 (m, 28H) 1,56 (m, 2H) 2,06 (m, 1H) 2,34 (m, 2H) 4,36 (m, 6H) 5,19 (s, 2H) 5,32 (m, 1H) 7,50 (m, 13H)
d) 3-(N-FMOC-L-valyloxy)-2-stearoyloxypropionová kyselina.
Roztok benzyl-3-(N-FMOC-L-valyloxy)-2-stearoyloxypropÍonátu (0,78 g, 1 mmol) v 20 ml ethylacetátu byl hydrogenován 10% paládiem na uhlí (0,2 g) za normálního tlaku po dobu tři hodin při teplotě okolí. Katalyzátor byl filtrován a promýván ethylacetátem a 1,4-dioxanem. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku.
Výtěžek: 0,63 g = 90% 'H-NMR (CDClj) 0,88 (m, 9H) 1,24 (m, 28H) 1,40 (m, 2H) 2,12 (m, 3H) 4,30 (m, 5H) 5,16 (m, IH) 5,60 (m, 1H) 7,40 (m, 8H)
Příklad 17 l-(N-Benzyloxykarbonyl-L-valyIoxymethyl)-2-stearoyloxyethoxykarbonylchlorid
Bis (trichlormethyl) karbonát (160 mg; 0,54 mmol) byl přidán s mícháním do roztoku 1-(Nbenzyloxykarbonyl-L-valyl)-3-stearoylglycerolu; l-(N-benzyloxykarbonyl-L-vaIyloxy)-3stearoyloxy-2-propanolu; preparativní příklad 4; (660 mg; 1,12 mmol) a triethylaminu (200 mg; 2,0 mmol) v dichlormethanu (5 ml) při teplotě okolí. Po uplynutí jedné hodiny byl přidán n45 hexan (10 ml) a precipitovaný hydrochlorid triethylaminu byl odfiltrován přes krátkou kolonu silikagelu, produkt byl vymyt další dávkou n-hexanu a rozpouštědlo bylo odpařeno za vakua a tím se získalo 650 mg (89%) sloučeniny z názvu.
I3C-NMR (CDClj, 62,975 MHz): δ 172,8 (stear-COO); 171,2 (Val-COO); 155,9 (CONH); 154,1 (COC1); 136,0 (Ph-Cl-Val); 128,1-127,7 (Ph); 67,2 (CHOH); 66,7 (PhCH2); 63,1 (ValCOOCHi); 61,8 (stear-COOCH2); 58,7 (Val-aC); 33,7 (stear-C2); 31,6 (stear-Cl6); 31,0 (Val-BC); 29,3-28,8 (stear-C4-l 5); 24,5 (stear-C3); 18,6 a 17,1 (Val 2 CHj); 13,8 (stear-C18).
Příklad 18
3-(N-CBz-L-valyloxymethyl)-4-stearoyloxybutyl-chlormravenčan
a) 3-(N-CBz-L-valyloxymethyl)-4-stearoyloxy-butanol
Do míchaného roztoku 4-stearoyloxy-3-(N-CBz-L-valyloxymethylbutyraldehydu (přípraven analogicky jako v preparativním příkladu 6, krok d) použitím CBz-chráněného valinu) (2,0 g, 3,2 mmol) v 25 ml methanolu při teplotě 10 °C byl přidán borohydrid sodný (0,6 g, 16 mmol) to v malých dávkách. Směs byla míchána po dobu 30 minut a potom byla okyselena kyselinou octovou. Směs byla zředěna vodou a extrahována třikrát dichlormethanem. Organická fáze byla sušena síranem sodným a koncentrována za vakua. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 1,5 g = 75 %.
'H-NMR (CDC13) 0,88 (m, 9H) 1,25 (m, 28H) 1,52 (m, 4H) 2,24 (m, 3H) 3,68 (m, 2H) 4,12 (m, 4H) 4,24 (m, 1H) 5,08 (s, 2H) 5,22 (m, 1H) 7,36 (m, 5H)
b) 3-(N-CBz-L-valyloxymethyl)-4_stearoyloxybutyl chlormravenčan
Roztok meziproduktu z kroku a) v 20 ml 20% roztoku fosgenu v toluenu byl míchán přes noc. Směs byla odpařena za sníženého tlaku a tím se získala sloučenina z názvu. Výtěžek 1,5 g = 97 %.
'H-NMR (CDCla) 0,88 (m, 9H) 1,28 (m, 28H) 1,58 (m, 2H) 1,72 (m, 2H) 2,15 (m, 1H) 2,31 (m, 2H) 4,08 - 4,42 (m, 5H) 5,10 (s, 2H) 5,22 (m, 1H) 7,36 (m, 5H)
Příklad 19 ,3'-dideoxy-3 -fluor-5'-O-[l-(L-valyloxy)“2-stearoyloxy-3-propyloxy karbonyljguanosin
a) Syntéza 2',3 '-dideoxy-3 -fluor-5 -O-[l-(N-CBz-L-vaIyloxy)-2-stearoyloxy-3-propy135 oxy karbonyljguanosinu
Do roztoku 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-guanosinu (210 mg, 1 mmol) v DMF (10 ml) a pyridinu (1 ml) byl přidán 3-{l-(N-CBz-L~valyl)-2-stearoyl}propyl chlormravenčan (619 mg, 0,5 mmol) při teplotě 0 °C. Po uplynutí 3 hodin byla reakční směs vlita do roztoku hydrogen40 uhličitanu sodného a extrahována dichlormethanem. Organická fáze byla sušena ve vakuu a 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-[ l-(N-CBz-L-valyloxy)-2-stearoyloxy-3-propy loxy karbonyljguanosin byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií (195 mg).
1 H-NMR (CDCb): 7,69 (s, 1H), 7,31 (m, 5H), 6,50 (m, 2H), 6,32 (m, 1H), 5,3 (m, 2H), 5,09 (m, 2H), 4,35 (m, 7H), 2,60 (m, 2H), 2,31 (t, 2H), 2,20 (m, 1H), 1,58 (m, 2H), 1,23 (m, 28H),
0,92 (m, 9H).
b) Syntéza 2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-0-[l-(L-vaIyloxy)-2-stearoyloxy-3-propyloxy karbonyljguanosinu ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 -O-[ 1 -(N-CBz-L-valyloxy)-2-stearoyloxy-3-propyloxy karbony 1]guanosin (190 mg) byl rozpuštěn v směsí rozpouštědel tvořené methanolem (6 ml), ethylacetátem (2 ml) a kyselinou octovou (1 ml). Do roztoku byla přidána paládiová čerň (30 mg) a reakční směs byla uchovávána pod atmosférou vodíku po dobu 2 hodin. Potom byla filtrována a filtrát byl odpařen a sloučenina z názvu byla izolována v silikagelové koloně.
Výtěžek: 110 mg.
‘H-NMR (DMSO-56): 7,86 (ds, 1H), 6,51 (s, 2H), 6,17 (dd, 1H), 5,48 (m, 1H), 5,20 (m, 1H), 5 4,25 (m, 7H), 2,70 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 1,72 (m, 1H), 1,47 (m, 2H), 1,22 (m, 28H), 0,84 (m, 9H).
Příklad 20 ',3'-dideoxy-3'-fluor-5 -0-[5-(L-valyloxy)-4-stearoyloxy-pentanoyl]guanosin
Do roztoku 2', 3'-dideoxy-3'-fluorguanos inu (0,27 g, 1 mmol) a kyseliny 5-(N-FMOC-Lva!yloxy)-4-stearoyloxypentanové (0,94 g, 1,3 mmol) v 30 ml DMF byl přidán DMAP (16 mg,
0,13 mmol), HOBT (0,176 g, 1,3 mmol) a DCC (0,248 g, 1,2 mmol). Směs byla míchána po dobu tří dní při teplotě okolí. 4 g silikagelu byly přidán a směs byla odpařena ve vakuu. Produkt, 2',
-d ideoxy-3 -fluor-5 -O-[5-(FMOC-L-valyloxy)-4-stearoyloxy-pentanoyl]-guanosin, byl separován silikagelovou chromatografíí.
Výtěžek: 0,45 g ‘H-NMR (DMSO8-6) 0,88 (m, 9H) 1,20 (m, 28H) 1,45 (m, 2H) 1,78 (m, 2H) 2,18 (m, 2H) 2,36 (m, 1H) 2,62 (m, 2H) 3,88 (m, 1H) 4,22 (m, 6H) 4,92 (m, 1H) 5,45(m, 1H) 6,19 (m, 1H) 6,52 (s, 2H) 7,26-7,88 (m, 8H).
Chráněný meziprodukt byl zbaven ochrany jak bylo ukázáno výše a tím se získala sloučenina z názvu.
Příklad 20 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-0-[3-(N-FMOC-L-valyloxy}-2-stearoyloxypropanoyl]guanosin
Do míchané směsi kyseliny 3-(N-FMOC-L-valyloxy)-2-stearoyloxypropanové (0,61 g, 35 0,88 mmol) v 5 ml bezvodého diethyletheru byla přidána jedna kapka DMF a thionyl chlorid (0,52 g, 4,4 mmol). Směs byla zahřívána na teplotu zpětného toku po dobu dvou hodin a potom odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl rozpuštěn v bezvodém dichlormethanu a přidán po kapkách do roztoku 2',3-dideoxy-3-fluorguanisinu (0,215 g, 0,8 mmol) a pyridinu (0,35 g, 4,4 mmol) v 20 ml DMF. Roztok byl míchán přes noc. Dva gramy silikagelu byly přidán a směs byla odpařena ve vakuu. Produkt byl izolován silikagelovou chromatografíí.
Výtěžek: 0,199 = 25 % ‘H-NMR (CDC13) 0,88 (m, 9H) 1,25 (m, 28H) 1,62 (m, 2H) 2,12(m, 1H) 2,38 (m, 2H) 2,58 45 (m, 2H) 4,12 - 4,76 (m, 6H) 5,32 (m, 2H) 6,12 (m, 1H) 6,26 (m, 1H) 6,44 (m, 1H) 7,12-7,78 (m, 8H).
Příklad 21 l-(N-CBz-L-valyl)-3-stearoyl-2-propyl, monoester kyseliny jantarové l-(N-CBz-L-valyl)-3-stearoyl-glycerol (886 mg, 1,5 mmol) a anhydrid kyseliny jantarové (450 mg, 4,5 mmol) byly rozpuštěn v ve směsi rozpouštědel, tvořené DMF (15 ml) a pyridinem (1 ml). Reakční směs byla udržována při teplotě okolí po dobu 3 hodin a potom při teplotě 60 °C po dobu 5 hodin. Reakční směs byla vlita do roztoku kyseliny octové a vody a extrahována dichlormethanem. Organická fáze byla promývána vodou a odpařena a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií a tím se získalo 900 mg látky.
s 'H-NMR (CDCh): 7,43 (m, 5H), 5,27 (m, 1H), 5,09 (m, 2H), 4,21 (m, 5H), 2,54 (m, 4H), 2,29 (t, 2H), 2,13 (m, 1H), 1,59 (m, 2H), 1,25 (m, 28H), 0,90 (m, 9H).
Příklad 22
2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-{3-[ t-f L-valyloxy)-3-stearoyloxy-2-propyloxy karbonyl)propanoyl}guanosin
Do roztoku 2',3'-dideoxy-3'-fluor-guanosinu (351 mg, 1,3 mmol) a l-(N-CBz-L-valyl)-315 stearoyl-2-propylu jako monoesteru kyseliny jantarové (900 mg, 1,3 mmol) v DMF (15 ml) byly přidány dimethylaminopyridin (24 mg, 0,2 mmol), I-hydroxybenzotriazol (175 mg, 1,3 mmol), DCC (321 mg, 1,56 mmol). Po uplynutí 48 hodin byla reakční směs filtrována. Filtrát byl vlit do roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahován dichlormethanem. Produkt, 2',3'-dideoxy-3'fluor-5'-0-{3-[l-(N-CBz-L-valyl)-3-stearoyl-glyceroloxy-karbonyl]propanoyl}guanosin byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 780 mg 'H-NMR (DMSO-d6): 7,89 (s, 1H), 7,34 (m, 5H), 6,50 (s, 2H), 6,17 (dd, 1H), 5,46 (m, 1H),
5,38 (m, 1H), 5,02 (s, 2H), 4,22 (m, 7H), 3,32 (s, 4H), 2,80 (m, 2H), 2,57 (m, 2H), 2,31 (t, 2H),
2,05 (m, 1H), 1,48 (m, 2H), 1,21 (m, 28H), 0,84 (m, 9H).
Do roztoku 2 ,3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 -O-{3-[ 1 -(N-CBz-L-valy l)-3-stearoy 1-2-propyloxykarbonyl]propanoyl}guanosinu (460 mg, 0,5 mmol) ve směsi rozpouštědel, tvořené methanolem (10 ml), ethylacetátem (3 ml) a kyselinou octovou (2 ml) byla přidána paládiová čerň (50 mg).
Po reakci pod atmosférou vodíku po dobu 2 hodin byla směs filtrována a filtrát byl sušen. Sloučenina z názvu byla izolována silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 360 mg.
'H-NMR (DMSO-d6): 7,89 (s, 1H), 6,51 (s, 2H), 6,16 (dd, 1H), 5,48 (m, 1H), 5,17 (m, 1H), 4,28 (m, 7H), 2,90 (m, 2H), 2,58 (m, 4H), 2,28 (t, 2H), 1,85 (m, 1H), 1,49 (m, 2H), 1,22 (m, 28H), 0,85 (m, 9H).
Příklad 23
HO
O—stearoyl
O—valyl-N-CBz
Roztok stearoylchloridu (12,1 g, 40 mmol, 1,0 ekviv.) v CH2C12 (100 m3) byl pomalu (1 hodina) přidán do roztoku kyseliny 2,2-bis(hydroxymethyl)propionové (26,8 g, 200 mmol, 5,0 ekviv.) v pyridinu (400 ml) při teplotě okolí. Reakční směs byla míchán při teplotě okolí přes noc a poté koncentrována (100 ml) za vakua. Reakční směs byla pomalu zpracována nasyceným NaHCOi (400 ml) a následně extrahována CH2C12 (3x300 ml). Organické vrstvy byly sloučeny, promývány solankou, sušeny nad Na2SO4 a koncentrovány ve vakuu. Surový materiál byl chromatografován na silikagelu (500 g) se směsi 19/1 až 4/1 CH2Cl2-MeOH jako vymývacím rozpouštědlem a tím se získal monostearoylester, Rf (9/1 CH2Cl2-MeOH) 0,33.
Výtěžek: 12,5 g (78%).
Roztok N-Cbz-L-valinu (18,85 g, 75 mmol, 2,4 ekviv.) a DMAP (855 mg, 7 mmol, 0,22 ekviv.) 5 v CH2C12 (800 ml) byl ochlazen na teplotu 0 °C a zpracován pomocí DCC (14,4 g, 70 mmol,
2,2 ekviv.). Reakční směs byla míchána při teplotě okolí po dobu 30 min a poté pomalu (1 hodina) zpracováván roztokem výše uvedeného monostearoylesteru (12,5 g, 31,2 mmol, 1 ekviv.) v CHCL3 (200 ml, prostý ethanolu). Po míchání přes noc suspenze byla filtrována a filtrát byl promýván solankou, sušen Na2SO4 a koncentrován ve vakuu. Surový materiál byl chromatoio grafován na silikagelu (500 g) se směsí 19/1 až 4/1 CHjClz-MeOH jako vymývacím rozpouštědlem a tím se získal výše uvedený diester, Rf (9/1 CH2Clr-MeOH) 0,46,13,8 g (70 %).
‘H-NMR (250 MHZ, CDCb): 5 7,35-7,3 (m, 5H, ArH), 5,32 (d, 1H, CH), 5,10 (s, 2H, CH2Ph),
4,33-4,18 (m, 4H, CH2), 2,28 (t, 2H, CH2), 2,22-2,05 (m, 1H, CH), 1,65 - 1,50 (m, 2H, CH2) 15 1,35-1,15 (m, 31H), 1,00-0,82 (m, 9H, Me).
Příklad 24
2 ',3 '-Dideoxy-3 '-fluor-5 '-0-[5-(L-valyloxy)-4-stearoy loxy-pentanoyl]guanosin.
a) Syntéza 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 -O-[ 5-(N-FMOC-L-vaIy loxy)-4-stearoy loxypentanoyl] guanosinu
Směs 2',3'-dideoxy-3'-fluorguanosinu (269 mg, 1,0 mmol), kyseliny 5-(N-FMOC-L-valyloxy)-4-stearoyloxy-pentanové (940 mg, 1,3 mmol), DMAP (16 mg, 0,13 mmol) a HOBT (176 mg, 1,3 mmol) byla společně odpařena dvakrát s DMF a redukována na přibližně 30 ml. DCC (248 mg, 1,2 mmol) byl přidán a směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Směs byla filtrována a roztok byl odpařen za sníženého tlaku. Byl přidán ethylacetát (50 ml) a organická fáze byla promývána dvakrát 5% kyselinou octovou, 5% hydrogenuhličitanem sodným a vodou. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 450 mg ‘H-NMR (DMSO d-6) 0,88 (m, 9H) 1,22 (m, 28H) 1,45 (m, 2H) 1,83 (m, 2H) 2,21 (m, 2H) 2,37 (m, 1H) 3,90 (m, 1H) 5,36-S,58 (m, 1H) 6,18 (m, 1H) 6,50 (s, 2H) 7,28-7,91 (m, 10H)
b) Syntéza 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-[5-(L-valy loxy)-4-stearoyloxy-pentanoyí]40 guanosinu
Směs 2',3'-dideoxy-3'-fluor-5 '-0-[5-(N-CBZ-L-valyloxy)-4-stearoyloxy-pentanoyl]guanosinu (300 mg, 0,308 mmol) v 5 ml Ν,Ν-diisopropylethylaminu a 5 ml DMF byl míchán po dobu tří dní při teplotě okolí. Kyselina octová (5 ml) byla přidána a směs byla odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl izolován ve formě acetátové soli silikagelovou sloupcovou chromatografií. Výtěžek: 90 mg ‘H-NMR(DMSO d-6) 0,88 (m, 9H) 1,24 (m, 28H) 1,55 (tn, 2H) 1,91 (m, 2H) 2,31 (m, 2H) 2,44 (m, 1H) 2,56-3,08 (m, 2H) 3,15 (m, 1H) 4,00-4,49 (m, 5H) 5,08 (m, 1H) 5,40-5,62 (m, 1H) 6,24 (m, 1H)6,54 (s, 2H) 7,96 (s, 1H).
Příklad 25 ',3 -Dideoxy-3 '-fluor-5'-0-[3-(L-valyloxy)-2-stearoyloxy-propanoyl]guanosin
a) Syntéza 2',3'-dideoxy-3-fluor-5-O-[3-(N-CBZ-L-valyloxy)-2-stearoyloxypropanoyljguanosinu
Směs 2',3'-dideoxy-3'-fluorguanos inu (404 mg 1,5 mmol), kyseliny 3-(N-CBZ-L-valyloxy)2-stearoyloxy-propanové (1,06 g, 1,75 mmol), DMAP (24 mg 0,2 mmol) a HOBT (264 mg io 1,82 mmol) byla společně odpařena dvakrát s DMF a redukován na přibližně 30 ml. Byl přidán
DCC (372 mg 1,8 mmol) a směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Směs byla filtrována a roztok byl odpařen za sníženého tlaku. Byl přidán ethylacetát (50 ml) a organická fáze byla promývána dvakrát 5% kyselinou octovou, 5% hydrogenuhličitanem sodným a vodou. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byt izolován silikagelo15 vou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 0,73 g ‘H-NMR (DMSO d-6) 0,82 (m, 9H) 1,22 (m, 28H) 1,48 (m, 2H) 2,31 (m, 2H) 2,50 - 3,00 20 (m,2H) 3,91 (m, 1H) 4,18^4.52 (m, 5H) 5,00 (s, 2H) 5,30-5,61 (m, 2H) 6,16 (m, 1H) 6,50 (s, 2H) 7,32 (m, 5H) 7,71 (m, 1H) 7,92 (s, 1H) 10,18 (s, 1H)
b) Syntéza 2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-0-[3-(L-valyloxy)-2-stearoyloxy-propanoyl]guanosinu
Roztok 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-[3-(N-CBZ-L-valyloxy)-2-stearoy loxy-propanoyl]guanosinu (350 mg 0,4 mmol) v ethylacetátu (25 ml), methanolu (5 ml) a kyseliny octové (5 ml) byl hydrogenován s paládiovou černí (300 mg) za normálního tlaku po dobu tří hodin. Katalyzátor byl filtrován a promýván ethylacetátem a methanolem. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován ve formě acetátové soli silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 120 mg 'H-NMR (DMSO d-6) 0,84 (m, 9H) 1,22 (m, 28H) 1,50 (m, 2H) 2,32 (m, 2H) 2,50-3,00 35 (m, 2H) 3,07 (m, 1H) 4,21-4,59 (m, 5H) 5,38-5,59 (m, 2H) 6,17 (m, 1H) 6,0 (s, 2H) 7,90 (s, 1H)
Příklad 26
2',3 '-Dideoxy-3 '-fluor-5'-0-[3,3-bis(L-valyloxymethyl)~propionová kyselina]guanosin
a) Syntéza 4,4-bis(N-CBZ-L-valyloxymethyl)-but-l-enu
Do roztoku 2-allyl-l,3-propandiolu (2,32 g, 20 mmol), N-CBZ-L-valinu (10,06 g, 40 mmol) 45 a DMAP (0,488 g, 4 mmol) v 120 ml dichlormethanu byl přidán DCC (9,08 g, 44 mmol) po částech a směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Směs byla ochlazena na teplotu 5 °C a urethan byl filtrován. Filtrát byl odpařen a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 9,0 g 'H-NMR (CDCb) 0,89 (m, 12H) 5,11 (s, 2H) 5,73 (m, 1H)
b) Syntéza kyseliny 3,3-bis(N-CBZ-L-valyloxymethyl)-propionové
Do ochlazeného roztoku 4,4-bís(N-CBZ-L-valyloxymethyl)-but-l-enu (14,6g, 25 mmol) a tetrabutylammoniumbromidu (1,3 g, 4 mmol) v 120 ml benzenu bylo přidáno 100 ml vody.
Za silného míchání byl po částech přidán manganistan draselný (15,8 g, 100 mmol) a smés byla míchána po dobu 2 hodin při teplotě mezi 15 a 20 °C. Do kaše byl přidán vodný roztok hydrogensiřičitanu sodného, dokud směs nebyla odbarvena. Směs byla okyselena 2N kyselinou chlorovodíkovou a extrahován čtyřikrát ethylacetátem. Organická fáze byla promývána dvakrát vodou, sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou slouplo covou chromatografií.
Výtěžek: 7,5 g lH-NMR (CDClj) 0,89 (m, 12H) 2,05 (m, 2H) 2,46 (m, 2H) 2,62 (m, 1H) 4,20 (m, 6H) 5,11 (s, 4H) 5,30 (m, 2H) 7,35 (m, 10H).
c) Syntéza 2',3 '-dideoxy-3'-fluor-5'-O-[3,3-bis(N-CBZ-L-valyloxymethyl)-propionyl]guanosinu
Roztok 2',3'-dideoxy-3'-fluorguanosinu (1,35 g, 5 mmol), kyseliny 3,3-bís(N-CBZ-L-vaIyloxymethyl)-propionové (3,6 g, 6 mmol), DMAP (0,061 g, 0,5 mmol) a HOBT (0,81 g, 6 mmol) byl společně odpařen dvakrát s DMF a redukován na přibližně 120 ml. Byl přidán DCC (1,24 g, 6 mmol) a směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Směs byla filtrována a roztok byl odpařen za sníženého tlaku. Byl přidán ethylacetát (200 ml) a organická fáze byla promývána dvakrát 5% kyselinou octovou, 5% hydrogenuhličitanem sodným a vodou. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 2,7 g ’Η-NMR (DMSO d-6) 0,88 (m, 12H) 2,00 (m, 2H) 2,50-3,00 (m, 2H) 3,90-^1,43 (m, 10H) 5,08 (s, 4H) 5,32-5,59 (m, 1H) 6,17 (m, 1H) 6,50 (s, 2H) 7,28 (m, 10H) 7,72 (m, 2H) 7,90 (s, 1H)
d) Syntéza 2',3'-dideoxy-3'-fluor-5'-0-[3,3-bís(L-valyloxymethyl)-propionová kyselina]35 guanosinu
Roztok 2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-0-[3,3-bis(N-CBZ-L-valyloxymethyl)-propionyí]guanosinu (2,6 g, 3,1 mmol) v 80 ml ethylacetátu, 20 ml methanolu a 20 ml kyseliny octové byl hydrogenován s paládíovou černí (0,39) po dobu dvou hodin za normálního tlaku. Katalyzátor byl filtrován a promýván ethylacetátem a methanolem. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován ve formě diacetátové soli silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 1,2 g 'H-NMR (DMSO d-6) 0,90 (m, 12H) 1,78 (m, 2H) 2,50-3,00 (m, 2H) 3,09 (m, 2H) 4,02-4,45 (m, 8H) 5,34-5,59 (m, 1H) 6,17 (m, 1H) 6,62 (s, 2H) 7,88 (s, 1H).
Příklad 27 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-0-[3-(L-valyloxymethyl)-4-stearoyloxy-butoxykarbony ljguanosin
a) Syntéza 2',3'-dideoxy-3'-fluor-5'-O-[3-(N-CBZ-L—vály loxymethyl )-4-stearoy loxybutoxy karbony 1] guanos inu
Do roztoku 2',3'-dideoxy-3'-fluorguanosinu (269 mg, 1,0 mmol) v absolutním DMF byly přidány pyridin (198 mg, 2,5 mmol) a roztok 3-(N-CBZ-L-valyloxymethyl)-4-stearoyIoxy-butoxyio karbonylchloridu (750 mg, 1,1 mmol) v 5 ml dichlormethanu. Směs byla míchána po dobu tří dní při teplotě okolí. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 120 mg ‘H-NMR (DMSO d-6) 0,88 (m 9H) 1,24 (m, 28H) 5,08 (s, 2H) 6,24 (m, 1H) 8,00 (s, 1H)
b) Syntéza 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-0-[3-(L-valyloxymethyl)-4-stearoyloxy-butoxykarbonyl]guanosínu
Směs 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[3-(N-CBZ-L-valyloxymethy l)-4-stearoyloxy-butoxykarbonyljguanosinu v 15 ml ethylacetátu, 2 ml methanolu a 2 ml kyseliny octové byl hydrogenován s paládiovou černí (40 mg) za normálního tlaku po dobu dvou hodin. Katalyzátor byl filtrován a promýván ethylacetátem a methanolem. Roztok byl odpařen a produkt byl izolován ve for25 mě acetátové solí silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 78 mg ‘H-NMR (DMSO d-6) 0,87 (m, 9H) 1,22 (m, 28H) 1,48 (m, 2H) 1,68 (m, 2H) 2,12 (m, 1H) 2,26 (m, 2H) 2,50-3,00 (m, 2H) 4,00-4,42 (m, 10H) 5,34-5,58 (m, 1H) 6,18 (m, 1H) 6,52 (s, 2H) 7,82 (s, 1H).
Příklad 28
2',3 -dideoxy-3 '-fluor-5'-0-[2-{L-valyloxy)stearoyl]guanosin a) Syntéza benzyl-2-hydroxystearátu
Do míchaného roztoku kyseliny DL-2-hydroxystearové (3,0 g, 10 mmol) v 20 ml bezvodého DMF byl přidán terc-butoxid draselný (1,23 g, 11 mmol) a směs byla míchána po dobu jedné hodiny při teplotě 60 °C. Byl přidán benzylbromid (2,14 g, 12,5 mmol) a směs byla míchána po dobu šesti hodin při teplotě 80 °C. Směs byla odpařena za sníženého tlaku a bylo přidáno 100 ml ethylacetátu. Organická fáze byla separována a promývána Čtyřikrát vodou. Organická fáze byla sušena síranem sodným a koncentrována za vakua. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 3,3 g ‘H-NMR (CDCb) 0,88 (m, 3H) 1,26 (m, 28H) 1,62 (m, 2~) 4,20 (m, 1H) 5,20 (s, 2H) 7,36 (m, 5H)
b) Syntéza benzyl-2-(N-FMOC-L-valyloxy)stearátu.
Do roztoku benzyl-2-hydroxystearátu (3,2 g, 8,2 mmol), N-FMOC-L-vaíinu (3,4 g, 10 mmol) a DMAP (0,12 g, 1 mmol) v 80 ml dichlormethanu byl přidán roztok DCC (2,5 g, 12 mmol) a směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Směs byla ochlazena na teplotu 5 °C a urethan byl filtrován. Filtrát byl odpařen a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií. Výtěžek: 4,5 g io ‘H-NMR (CDC13) 0,90 (m, 6H) 1,26 (m, 6H) 1,82 (m, 2H) 2,16 (m, 1H) 4,21 (m, 1H) 4,36 (m, 2H) 5,10 (m, 1H) 5,18 (s, 2H) 5,28 (m, 1H) 7,20 - 7,80 (m, 13H)
c) Syntéza kyseliny 2-(N-FMOC-L-valyloxy)stearové
Roztok benzyl-2-(N-FMOC-L-valyloxy)stearátu (4,4 g, 6,2 mmol) v 50 ml ethylacetátu byl hydrogenován 10% paládiem na uhlí (0,59) za normálního tlaku po dobu dvou hodin. Katalyzátor byl filtrován a promýván ethylacetátem a 1,4-dioxanem. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 3,4 g 'H-NMR (CDC13): 0,88 (m, 6H) 1,26 (m, 28H) 1,82 (m, 2H) 2,28 (m, 1H) 4,20 (m, 1H) 4,40 (m, 2H) 5,00 (m, 1H) 5,41 (m, 1H) 7,26 - 7,82 (m, 8H)
d) Syntéza 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 ’-O-[2-(N-FMOC-L- valyloxy)stearoyl]guanosinu
Směs 2',3'-dideoxy-3'-fluorguanosinu (404 mg, 1,5 mmol), kyseliny 2-(N-FMOC-L-valyloxy)stearové (1,24 g, 2 mmol), DMAP (24 mg 0,2 mmol) a HOBT (264 mg 1,95 mmol) byl společně odpařen dvakrát s DMF a redukován na přibližně 30 ml. Byl přidán DCC (372 mg
1,8 mmol) a směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Směs byla filtrována a roztok byl odpařen za sníženého tlaku. Byl přidán ethylacetát (50 ml) a organická fáze byla promývána dvakrát 5% kyselinou octovou, 5% hydrogenuhličitanem sodným a vodou. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl izolován ve formě acetátové soli silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 1,2 g 'H-NMR (DMSO d-6) 0,80-0,90 (m, 9H) 1,22 (m, 28H) 2,12 (m, 1H) 2,50-3,00 (m, 2H) 3,98 (m, 1H) 4,96 (m, 1H) 6,17 (m, 1H) 6,50 (s, 2H) 7,32-7,95 (m, 10H)
e) Syntéza 2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-0-[2-(L-valyloxy)-stearoyl]guanosinu
Do roztoku 2',3'-dideoxy-3'-fluor-5'-O-[2-(N-FM0C-L-valyloxy) stearoyl]guanosinu (800 mg, 0,89 mmol) v 15 ml DMF byl přidán DBU (1,35 g, 8,9 mmol) a směs byla míchán po dobu 5 minut při teplotě okolí. Byla přidána kyselina octová (2 ml) a směs byla odpařena za sníženého tlaku. Byla přidána voda (20 ml) a směs byla extrahována třikrát dichlormethanem. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 165 mg 'H-NMR (DMSO d-6) 0,87 (m, 9H) 1,22 (m, 28H) 1,70 (m, 2H) 1,88 (m, 1H) 2,50-3,00 (m, 2H) 3,20 (m, 1H) 4,32 (m, 3H) 4,94 (m, 1H) 5,32-5,54 (m, 1H) 6,14 (m, 1H) 6,49 (s, 2H) 7,89 (s, 1H).
Příklad 29
2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 ’-O-3-[l ,3-bis-(L-valyloxy)-2-propyloxykarbonylpropanoyl]5 guanosín
a) Syntéza 1,3-dibenzyloxy-2-propylu jako monoesteru kyseliny jantarové
Roztok l,3-dibenzyloxypropan-2-olu (6,8 g, 25 mmol) a anhydridu kyseliny jantarové (7,5 g, ío 75 mmol) a DMAP (12,2 g, 100 mmol) byl míchán po dobu jedné hodiny při teplotě 60 °C. Směs byla odpařena za sníženého tlaku, okyselena 2N HC1 a extrahována dvakrát ethylacetátem.
Sloučené organické fáze byly promývány třikrát vodou, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografíí.
í5 Výtěžek: 7,8 g
b) Syntéza 2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-[3-( 1,3-dibenzyloxy-2-propyloxykarbony 1)propanoy ljguanosin u
Směs 2',3'-dideoxy-3'-fluorguanosinu (1,61 g, 6 mmol), HOBT (0,972 g, 7,2 mmol), DMAP (73,3 mg 0,6 mmol) a 1,3-dibenzyloxy-2-propylu jako monoesteru kyseliny jantarové (2,68 g, 7,2 mmol) byly společně odpařeny dvakrát s DMF a redukovány na přibližně 150 ml. Byl přidán DCC (1,55 g, 7,5 mmol) a směs byla míchána 72 hodin při teplotě okolí. Směs byla filtrována a roztok byl odpařen za sníženého tlaku. Byl přidán ethylacetát (200 ml) a organická fáze byla promývána dvakrát 5% kyselinou octovou, 5% hydrogenuhličitanem sodným a vodou. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografíí.
Výtěžek: 3,3 g
c) Syntéza 2',3'-dideoxy-3'-fluor-5'-O-[3-(l,3-dihydroxy-2-propyloxy karbonyl)propanoyljguanosinu
Roztok 2 ',3 -dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-[3-( 1,3-dibenzyloxy-2-propyloxy karbonyl)propanoyI]35 guanosinu (3,2 g, 5,13 mmol) v 50 ml ethylacetátu, 50 ml methanolu a 10 ml kyseliny octové byl hydrogenován s paládiovou Černí (0,69) za tlaku 40 psi přes noc. Katalyzátor byl filtrován a promýván methanolem, roztok byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografíí.
Výtěžek: 1,64 g
d) Syntéza 2',3 -dideoxy-3'-fluor-5'-0-{3-[l,3-bis(N-CBZ-L~valyloxy)-2-propyloxykarbonyljpropanoyl) guanosinu
Směs 2',3'-dideoxy-3-fluor-5-0-[3-(l,3-dihydroxy-2-propyloxy karbonylý-propanoyl]guanosinu (1,93 g, 2,93 mmol), N-CBZ-L-valinu (1,76 g, 7 mmol), HOBT (0,95 g, 7 mmol) a DMAP (85,5 mg 0,7 mmol) byla společně odpařena dvakrát s DMF a redukována na přibližně 60 ml. Byl přidán DCC (1,55 g, 7,5 mmol) a směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Směs byla zahřívána po dobu čtyř hodin na teplotu 60 °C a potom ochlazena na teplotu přibližně 10 °C.
Směs byla filtrována a roztok byl redukován za sníženého tlaku. Byl přidán ethylacetát (150 ml) a organická fáze byla promývána dvakrát 5% kyselinou octovou, 5% hydrogenuhličitanem sodným a vodou. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografíí.
Výtěžek: 1,69.
e) Syntéza 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-{ 3-[ 1,3-bis-(L-valyloxy)-2-propy loxykarbony l]propanoyl} guanosinu s Roztok 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-{3-[ 1,3-bis-(N-CBZ-L-valyloxy)-2-propyloxykarbonyl)propanoyl}guanosinu (1,6 g, 1,75 mmol) v 80 ml ethylacetátu, 20 ml methanolu a 20 ml kyseliny octové byl hydrogenován s paládiovou černí (0,3 g) po dobu dvou hodin při teplotě okolí a za normálního tlaku. Katalyzátor byl filtrován a promýván methanolem. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován jako diacetátová sůl silikagelovou sloupcovou ío chromatografií.
Výtěžek: 1,02 g
H-NMR (DMSO d-6) 0,84 (m, 12H) 1,85 (m, 2H) 2,58 (m, 4H) 2,60-3,10 (m, 2H) 3,11 (m, 2H) 3,61-4,39 (m, 7H) 5,19 (m, 1H) 5,35-5,56 (m, 1H) 6,16 (m, 1H) 6,62 (s, 2H) 7,89 (s, 1H).
Příklad 30 ',3 '-dideoxy-3 -fluor-5 '-O-{3-[ 1-(L-valyloxy)-3-hydroxy-2-propyloxy karbonyljpropanoyl} guanosin
a) Syntéza 2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-{3-[ l-(N-CBZ-L-valyloxy)-3-hydroxy-2-propyl25 oxy karbonylj-propanoyl} guanos inu
Směs 2',3 -dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-[3-( 1,3-dihydroxy-2-propyloxy karbonyl)-propanoyI] guanosinu (1,3 g, 2,93 mmol), N-CBZ-L-valinu (l,00g, 4 mmol), HOBT (0,54 g, 4 mmol) a DMAP (48,8 mg 0,4 mmol) byla společně odpařena dvakrát s DMF a redukována na přibližně
60 ml. Byl přidán DCC (0,91 g, 4,4 mmol) a směs byla míchána po dobu 72 hodin při teplotě okolí. Směs byla filtrována a roztok byl odpařen za sníženého tlaku. Byl přidán ethylacetát (150 ml) a organická fáze byla promývána dvakrát 5% kyselinou octovou, 5% hydrogenuhličitanem sodným a vodou. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 0,99 g
b) Syntéza 2 ',3 -dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-{ 3-[ 1 -(L-valy loxy )-3-hydroxy-2-propy loxykarbony l]-propanoyl} guanosinu
Roztok 2',3'-dideoxy-3'-fluor-5'-0-{3-[l-(N-CBZ-L-valyloxy)-3-hydroxy-2-propyloxykarbonylý-propanoyl}guanosinu (0,82 g, 1,21 mmol) v 30 ml ethylacetátu, 15 ml methanolu a 15 ml kyseliny octové byl hydrogenován s paládiovou černí (0,159) po dobu dvou hodin při teplotě okolí a za normálního tlaku. Katalyzátor byl filtrován a promýván methanolem. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován ve formě acetátové soli silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 0,5 g 'H-NMR (DMSO d-6) 0,84 (m, 6H) 1,86 (m, 1H) 2,58 (m, 4H) 2,63-3,02 (m, 2H) 3,KM,38 (m, 9H) 5,34-5,55 (m, 1H) 6,16 (m, 1H) 6,56 (s, 2H) 7,90 (s, 1H).
Příklad 31
-L-valyl-2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluorguanosin
Do roztoku 2',3 '-dideoxy-3 '-fluorguanosinu (810 mg, 3 mmol) a 4-dimethylaminopyridinu (73 mg, 0,6 mmol), N-CBz-L-valinu (1,5 g, 6 mmol) a 1-hydroxybenzotriazolu (810 mg, mmol) v DMF (20 ml) byl přidán DCC (1,36 g, 6,6 mmol). Po uplynutí 72 hodin byla reakční směs filtrována a koncentrována za vakua. 5 ~(N-CBz-L-valyl)-2',3-dideoxy-3'-fluorguanosin byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií (1,15 g).
Tento meziprodukt (503 mg, 1 mmol) byl rozpuštěn ve směsi rozpouštědel, tvořené ethylacetátem (10 ml), methanolem (20 ml) a kyselinou octovou (2 ml). Do směsi byla přidána paládiová čerň (100 mg) a reakční směs byla uchovávána pod atmosférou vodíku při atmosférickém tlaku po dobu 3 hodin. Po ukončení filtrace a koncentrace byla sloučenina z názvu izolována silikage15 lovou sloupcovou chromatografií (370 mg).
'H-NMR (DMSO d-6): 7,94 (s, 1H), 6,52 (s, 2H), 6,17 (dd, 1H), 5,47 (dd, 1H), 4,15 (m, 3H), 3,15 (d, 1H), 3,01-2,62 (m,2Fl). 1,80(111,1H), 0,82(dd,6H).
Příklad 32
2',3 -dideoxy-3-fluor-5-0-[2-(-L-valyloxy)-propionyl]guanosÍn
a) Syntéza 4-methoxybenzyl-2-hydroxypropionátu
Do míchaného roztoku kyseliny DL-2-hydroxypropionové (9,0 g, 100 mmol) v 100 ml bezvodého DMF byl přidán terc-butoxid draselný (12,34 g, 110 mmol) a směs byla míchána po dobu jedné hodiny při teplotě 60 °C. Byl přidán 4-methoxybenzylchlorid (18,89 120 mmol) a směs byla míchána po dobu osmi hodin při teplotě 60 °C. Směs byla odpařena za sníženého tlaku a bylo přidáno 250 ml ethylacetátu. Organická fáze byla promývána čtyřikrát vodou. Organická fáze byla sušena síranem sodným a koncentrován za vakua.
Výtěžek: 16,8 g
Ή-NMR (CDC13) 1,40 (m, 3H) 3,81 (s, 3H) 4,26 (m, 1H) 5,14 (s, 2H) 6,90 (d, 2H) 7,28 (d, 2H)
b) Syntéza 4-methoxybenzyl-2-(N-CBZ-L·-valyloxy)propionátu
Do roztoku 4-methoxybenzyl-2-hydroxypropionátu (4,2 g, 20 mmol), N-CBZ-L-valinu (5,02 g, 20 mmol) a DMAP (0,24 g, 2 mmol) v 100 ml dichlormethanu byl přidán roztok DCC (4,54 g, 22 mmol) a směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Směs byla ochlazena na teplotu 5 °C a urethan byl filtrován. Filtrát byl odpařen a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 7,9 g 'H-NMR (CDCh) 0,88 (m, 6H) 1,50 (m, 3H) 2,26 (m, 1H) 3,81 (s, 3H) 4,34 (m, 1H) 5,04-5,30 (m, 6H) 6,88 (d, 2H) 7,26 (m, 7H)
c) Syntéza kyseliny 2-(N-CBZ-L-valyloxy)-propionové
Do roztoku 4-methoxyben2^1-2-(N~CBZ-L-valyloxy)-propionátu (7,8 g, 17,5 mmol) v dichlormethanu (100 ml) byla přidána kyselina trifluoroctová (10 ml) a roztok byl míchán po dobu jedné hodiny při teplotě okolí. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 5,0 g 'H-NMR (CDC13) 0,94 (m, 6H) 1,56 (d, 3H) 2,30 (m, 1H) 4,42 (m, 1H) 5,12-5,30 (m, 4H) 7,28 (m, 5H)
d) Syntéza 2',3 -dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(N-CBZ-L-valyloxy)-propionyl]guanosÍnu
Směs 2',3'-dideoxy-3'-fluorguanosinu (404 mg 1,5 mmol), kyseliny 2-(N-CBZ-L-valyloxy}propionové (0,582 g, 1,8 mmol), DMAP (22 mg 0,18 mmol) a HOBT (243 mg 1,8 mmol) byla společně odpařena dvakrát s DMF a redukována na přibližně 30 ml. Byl přidán DCC (412 mg 2,0 mmol) a směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Směs byla filtrována a roztok byl odpařen za sníženého tlaku. 100 ml ethylacetát bylo přidáno a organická fáze byla promývána dvakrát 5% kyselinou octovou, 5% hydrogenuhliěitanem sodným a vodou. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 0,72 g 'H-NMR (DMSO d-4) 0,92 (m, 6H) 1,40 (d, 3H) 2,10 (m, 1H) 2,50-3,06 (m, 2H) 4,03 (m, 1H) 4,20-4,44 (m, 3H) 5,04 (s, 2H) 5,12 (m, 1H) 5,44-5,58 (m, 1H) 6,18 (ζ 1H) 6,52 (s, 2H) 7,36 (m, 5H) 7,70 (d, 2H) 7,92 (s, 1H)
e) Syntéza 2',3 '-dideoxy-3 -fluor-5-0-[2-(L-valyloxy)-propanoyl]guanosinu
Roztok 2',3'-dideoxy-3-fluor-5-O-[2-(N-CBZ-L-valyloxy)-propanoyl] guanosinu (0,6 g, 1,04 mmol) v 20 ml ethylacetátu, 10 ml methanolu a 10 ml kyseliny octové byl hydrogenován s paládiovou černí (0,1 g) po dobu dvou hodin při teplotě okolí a za normálního tlaku. Katalyzátor byl filtrován a promýván methanolem. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a tím se získalo sloučenina z názvu ve formě acetátové soli.
Výtěžek: 0,5 g 'H-NMR (DMSO d-6) 0,88 (m, 6H) 1,40 (d, 3H) 1,92 (m, 4H) 2,52-3,04 (m, 2H) 3,18 (m, 1H) 4,18-4,42 (m, 3H) 5,06 (m, 1H) 5,32-5,58 (m, 2H) 6,18 (m, 1H) 6,52 (s, 2H) 7,90 (s, 1H)
Příklad 33 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-3-[2,3-bis-(L-valy loxy)-1 -propy loxykarbony IJpropanoy 1guanosin
a) Syntéza 4-methoxybenzylujakomonoesteru kyseliny jantarové
Do směsi anhydridu kyseliny jantarové (75 g, 750 mmol) a 4-methoxybenzylalkoholu (69, u 500 mmol) v 1,4-dioxanu (300 ml) byl přidán pyridin (79,1 g, 1000 mmol) a směs byla míchána po dobu pěti hodin při teplotě 80 °C. Směs byla odpařena za sníženého tlaku a bylo přidáno
600 ml ethylacetátu a 60 ml kyseliny octové. Organická fáze byla promývána třikrát vodou, sušen síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl rekrystalizován z toluenu.
Výtěžek: 104 g.
'H-NMR (DMSO d-6) 2,48 (m, 4H) 3,72 (s, 3H) 5,00 (s, 2H) 6,90 (d, 2H) 7,28 (d, 2H)
b) Syntéza 2,3-dihydroxy-propylesteru, 4-methoxybenzylesteru kyseliny jantarové
Do roztoku glycerolu (23,0 g, 250 mmol), 4-methoxybenzylmonoesteru kyseliny jantarové (5,96 g, 25 mmol) a DMAP (0,36 g, 3 mmol) v DMF (200 ml) byl přidán DCC (6,29 30 mmol) a směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Směs byla odpařena za sníženého tlaku a bylo přidáno 150 ml dichlormethanu. Směs byla filtrována a roztok byl promýván dvakrát vodou. Vodná fáze byla extrahována dvakrát dichlormethanem a sloučené organické fáze byly sušeny síranem sodným. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován silikagelovou io sloupcovou chromatografií.
Výtěžek; 3,0 g 'H-NMR (CDClj) 2,65 (m, 4H) 3,61 (m, 2H) 3,80 (s, 3H) 3,90 (m, 1H) 4,18 (m, 2H) 5,05 (s, 2H)
6,89 (d, 2H) 7,26 (d, 2H)
c) Syntéza 2,3-bis-(N-CBZ-L-valyloxy)-propylesteru, 4-methoxybenzylesteru kyseliny jantarové
Do míchaného roztoku 2,3-dihydroxy-propylesteru, 4-methoxybenzylesteru kyseliny jantarové (2,9 g, 9,28 mmol), N-CBZ-L-valinu (5,03 g, 20 mmol) a DMAP (0,244 g, 2 mmol) v dichlormethanu (60 ml) byl přidán DCC (4,5 g, 22 mmol) a směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Směs byla filtrována a roztok byl odpařen za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 2,5 g 'H-NMR (CDClj) 0,90 (m, 12H) 2,16 (m, 2H) 2,62 (m, 4H) 3,80 (s, 3H) 4,32 (m, 4H) 5,05-5,52 (m, 9H) 6,89 (d, 2H) 7,30 (m, 12H).
d) Syntéza 2,3-bis-(N-CBZ-L-valyloxy)propylesteru kyseliny jantarové
Do roztoku výše uvedeného meziproduktu (2,3 g, 2,95 mmol) v dichlormethanu (25 ml) byla přidána kyselina trifluoroctová (2,5 ml) a roztok byl míchán po dobu dvou hodin při teplotě okolí.
Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 1,8 g 'H-NMR (CDClj) 0,92 (m, 12H) 2,12 (m, 2H) 2,64 (m, 4H) 4,32 (m, 4H) 5,10 (s, 4H) 5,22-5,50 (m, 3H) 7,34 (m, 10H)
e) Syntéza 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluoro-5 '-0-{3-[2,3-bis(N-CBZ-L-valyloxy)-l-propyloxykarbony 1 ] propanoy I} guanosinu
Směs 2',3'-dideoxy-3'-fluorguanosinu (0,538 g, 2 mmol), HOBT (0,327 g, 2,42 mmol), DMAP (29,3 mg, 0,24 mmol) a 2,3-bis-(N-CBZ-L-valyloxy)-l-propyIesteru kyseliny jantarové (1,6 g, 2,42 mmol) byla společně odpařena dvakrát s DMF a redukován na přibližně 50 ml. Byl přidán DCC (0,536 g, 2,6 mmol) a směs byla míchán 72 hodin při teplotě okolí. Směs byla filtrován a roztok byl odpařen za sníženého tlaku. Bylo přidáno 100 ml ethylacetátu a organická fáze byla promývána dvakrát 5% kyselinou octovou, 5% hydrogenuhličitanem sodným a vodou. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 0,65 g.
'H-NMR (DMSO-d6) 0,88 (m, 12H) 2,08 (m, 2H) 2,58-3,04 (m, 6H) 3,92 (m, 2H) 4,10-4,46 (m, 7H) 5,00 (s, 4H) 5,22 (m, 1H) 5,32-5,56 (m, 1H) 6,17 (m, 1H) 6,50 (s, 2H) 7,32 (m, 10H) 7,70 (d, 2H)7,92 (s, 1H)
Syntéza 2',3'-dideoxy-3 -fluor-5'-O-{3-[2,3-bis-(L-valyloxy)-l-propyloxykarbonyl]propanoy I} guanosinu
Roztok bezprostředně předcházejícího meziproduktu (0,57 g, 0,626 mmol) v 20 ml ethylacetátu, io 10 ml methanolu a 10 ml kyseliny octové byl hydrogenován s paládiovou černí (0,1 g) po dobu dvou hodin při teplotě okolí a za normálního tlaku. Katalyzátor byl filtrován a promýván methanolem. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií. Produkt byl rozpuštěn v dichlormethanu a byl přidán 1M chlorovodík v etheru (1,1 ml). Směs byla odpařena za sníženého tlaku a sušena ve vakuu a tím se získala sloučenina 15 z názvu ve formě dihydroch loridové sol i.
Výtěžek: 0,37 g ’Η-NMR (DMSO d-6) 0,92 (m, 12H) 2,12 (m, 2H) 2,58-3,04 (m, 6H) 3,75 (m, 2H) 4,16-4,50 20 (m, 7H) 5,19-5,60 (m, 2H) 6,18 (m, 1H) 6,76 (s, 2H) 7,92 (s, 1H)
Příklad 34
2' ,3 -dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-3-[l ,3-bis-CL-valyloxy)-2-propyloxykarbonyl]propanoylguanosin, dihydrochloridová sůl
a) Syntéza l,3-dibrom-2-propylesteru, 4-methoxybenzyl esteru kyseliny jantarové
Do roztoku l,3-dibrompropan-2-olu (21,8 g, 100 mmol), 4-methoxybenzylesteru kyseliny jantarové (28,69,120 mmol) a DMAP (1,22 g, 10 mmol) v dichlormethanu (400 ml) byl přidán DCC (24,8 g, 120 mmol) po částech při teplotě přibližně 10 °C. Směs byla míchána přes noc při teplotě okolí a ochlazena na teplotu přibližně 5 °C. Směs byla filtrována a roztok byl odpařen za sníženého tlaku. Bylo přidáno 600 ml ethylacetátu a organická fáze byla promývána dvakrát 5% kyselinou octovou, 5% hydrogenuhličitanem sodným a vodou. Roztok byl sušen síranem sodným a odpařen za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií. Výtěžek: 34,8 g ’Η-NMR (CDCb) 2,69 (m, 4H) 3,57 (m, 4H) 3,81 (s, 3H) 5,07 (s, 2H) 5,14 (m, 1H) 6,88 (d, 2H) 7,26 (d, 2H).
b) Syntéza I,3-bis-(N-CBZ-L-valyloxy)-2-propylesteru, 4-methoxybenzylesteru kyseliny jantarové
Do roztoku N-CBZ-L-valin (58,5 g, 232,8 mmol) v bezvodém DMF (300 ml) byl přidán tercbutoxid draselný (24,68 g, 220 mmol) a směs byla míchána po dobu jedné hodiny při teplotě okolí. Byl přidán roztok l,3-dibrom-2-propylesteru, 4-methoxybenzylesteru kyseliny jantarové (34 g, 77,6 mmol) v bezvodém DMF (50 ml) a směs byla míchána po dobu osmnácti hodin při teplotě 60 °C. Bromid draselný byl filtrován a roztok byl odpařen za sníženého tlaku. Bylo přidáno 600 ml ethylacetátu a organická fáze byla promývána dvakrát 5% hydrogenuhličitanem sodným a vodou. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 45 g 1 H-NMR (CDCI,) 0,90 (m, !2H) 2,16 (m, 2H) 2,61 (m, 4H) 3,80 (s, 3H) 4,12 - 4,42 (m, 6H) 5,02 (s, 2H) 5,10 (s, 4H) 5,43 (m, 3H) 6,88 (d, 2H) 7,32 (m, 12H)
c) Syntéza l,3-bis-(N-CBZ-L-valyloxy)-2-propylesteru kyseliny jantarové
Do ochlazeného roztoku bezprostředně předcházejícího meziproduktu (44,5 g, 57,1 mmol) v dichlormethanu (500 ml) byla přidána kyselina trifluoroctová (50 ml) při teplotě mezi 5 a 10 °C a roztok byl míchán po dobu dvou hodin při teplotě 10 °C. Roztok byl odpařen za sníženého tlaio ku a dvakrát společně odpařen s toluenem. Bylo přidáno 400 ml ethanolu a směs byla míchána po dobu 30 minut při teplotě 40 °C. Směs byla ochlazena a biprodukt byl filtrován. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku a produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografíí.
Výtěžek: 33 g 'H-NMR (DMSO-d6) 0,88 (m, 12H) 2,04 (m, 2H) 2,46 (m, 4H) 3,94-4,40 (m, 6H) 5,02 (s, 4H) 5,18 (m, 1H) 7,32 (m, 1 OH) 7,74 (d, 2H).
d) Syntéza 2',3'-dideoxy-3 '-fluor-5 '—O—{3—[ 1 ,3-bis-(N-CBZ-L-valyloxy)-2-propyloxy20 karbony Ijpropanoyljguanosinu
Směs 2',3 '-dideoxy-3'-fluorguanosinu (17,8 g, 66 mmol), HOBT (10,64 g, 78,8 mmol), 1,3bis-(N-CBZ-L-valyloxy)-2-propylesteru kyseliny jantarové (52 g, 78,8 mmol) a DMAP (0,96 g, 7,88 mmol) byla společně odpařena dvakrát s DMF a redukována na přibližně 500 ml.
Byl přidán DCC (17,3 g, 84 mmol) a směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Směs byla zahřívána po dobu šesti hodin při teplotě 60 °C a potom ochlazena na teplotu přibližně 10 °C. Směs byla filtrována a roztok byl redukován za sníženého tlaku. Bylo přidáno 1200 ml ethylacetátu a organická fáze byla promývána dvakrát 5% kyselinou octovou, 5% hydrogenuhličitanem sodným a vodou. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografií.
Výtěžek: 42 g 'H-NMR (DMSO-d6) 0,90 (m, 12H) 2,02 (m, 2H) 2,5-3,02 (m, 6H) 3,94 (m, 2H) 4,22 (m, 7H)
5,02 (s, 4H) 5,18 (m, 1H) 5,22-5,50 (m, 1H) 6,16 (m, 1H) 6,50 (s, 2H) 7,32 (m, 10H) 7,72 (d, 2H)7,92(s, 1H).
e) Syntéza 2',3 -dideoxy-3'-fluor-5 -O-{3-[l,3-bis-(L-valyloxy)-2-propyloxykarbonyl]propanoyljguanosinu, dihydrochloridové soli
Roztok 2',3 '-dideoxy-3 -fluor-5 -O-{3-[ 1,3-bís-<N-CBZ-L~valyloxy)-2-propyloxy karbonyl]propanoyl}guanosinu (5,0, 5,9 mmol) v 75 ml ethylacetátu a 75 ml methanolu byl hydrogenován s paládiem na aktivním uhlí 10% Pd (1 g) jednu hodinu při teplotě okolí a za normálního tlaku. Katalyzátor byl filtrován a promýván methanolem. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku.
Produkt byl rozpuštěn v dichlormethanu a za chlazení byl přidán roztok 1M chlorovodíku v etheru (6 ml). Směs byla odpařena za sníženého tlaku.
Výtěžek: 3,5 g ‘H-NMR (DMSO d-6) 0,94 (m, 12H) 2,18 (m, 2H) 2,5-3,04 (m, 6H) 4,20-4,54 (m, 7H) 5,24 (m, 1H) 5,34-5,64 (m, 1H) 6,22 (m, 1H) 6,92 (s, 2H) 8,30 (s, 1H) 8,62 (s, 6H),
Příklad 35
Alternativní syntéza 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-3-[ 1,3-bis-(L-valyloxy)-2-propyloxykarbonyljpropanoylguanosinu
a) Syntéza 1,3-dibrom-2-propylesteru, 1,1-dimethylethylesteru kyseliny jantarové
Do roztoku l,3-dibrompropan-2-olu (10,9 g, 50 mmol), 1,1-dimethylethylesteru kyseliny jantarové (J. Org. Chem 59 (1994) 4864) (10,45 g, 60 mmol) a DMAP (0,61 g, 5 mmol) v dichlorio methanu (180 ml) byl po částech přidán DCC (12,4 g, 60 mmol) při teplotě přibližně 10 °C. Směs byla míchána přes noc při teplotě okolí a ochlazena na teplotu přibližně 5 °C. Směs byla filtrována a roztok byl odpařen za sníženého tlaku. Bylo přidáno 250 ml ethylacetátu a organická fáze byla promývána dvakrát 5% kyselinou citrónovou, 5% hydrogenuhličitanem sodným a vodou.
Roztok byl sušen síranem sodným a odpařen za sníženého tlaku. Produkt byl destilován ve vakuu, (teplota varu 0,5 135 až 140 °C).
Výtěžek: 16,8 g
Ή-NMR (CDCh) 1,45 (s, 9H) 2,58 (m, 41-1) 3,61 (m, 4H) 5,12 (m, 1H).
b) Syntéza l,3-bis-(N-CBZ-L~valyloxy)-2-propylesteru, 1,1-dimethylethylesteru kyseliny jantarové
Do roztoku N-CBZ-L-valinu (18,85 g, 75 mmol) v bezvodém DMF (100 ml) byl přidán terc-butoxid draselný (7,85 g, 70 mmol) a směs byla míchána po dobu jedné hodiny při teplotě okolí. Byl přidán roztok l,3-dibrom-2-propylesteru, 1,1-dimethylethylesteru kyseliny jantarové (9,35 g, 25 mmol) v bezvodém DMF (20 ml) a směs byla míchána po dobu osmnácti hodin při teplotě 60 °C. Bromid draselný byl filtrován a roztok byl odpařen za sníženého tlaku. Bylo přidáno 300 ml ethylacetátu a organická fáze byla promývána dvakrát 5% hydrogenuhličitanem sod30 ným a vodou. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Produkt byl izolován silikagelovou sloupcovou chromatografii.
Výtěžek: 14 g 'H-NMR (CDCh) 0,90 (m, 12H) 1,42 (s, 9H) 2,14 (m, 2H) 2,52 (m, 4H) 4,32 (m, 6H) 5,10 (s, 4H) 5,32 (m, 3H) 7,26 (m, 10H)
c) Syntéza 1,3-bis-(N-CBZ-L-valyloxy)-2-propylmonoesteru kyseliny jantarové.
Do ochlazeného roztoku l,3-bis-(N-CBZ-L-valyloxy)-2-propylesteru, 1,1-dimethylethylesteru kyseliny jantarové (13 g, 18,18 mmol) v dichlormethanu (100 ml) byla přidána kyselina trifluoroctová (20 ml) a roztok byl míchán po dobu šesti hodin při teplotě okolí. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku. Bylo přidáno 200 ml ethylacetátu a organická fáze byla promývána 5% hydrogenuhličitanem sodným a vodou. Roztok byl odpařen za sníženého tlaku.
Výtěžek: 11,7 g 1 H-NMR (DMSO-Ó6) 0,88 (m, 12H) 2,04 (m, 2H) 2,46 (m, 4H) 3,94-Á,40 (m, 6H) 5,02 (s, 4H) 5,18 (m, 1H) 7,32 (m, 10H) 7,74 (d, 2H)
CZ 300757 Bó
d) Syntéza 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5 '-O-3-[ 1,3-bis-(L-valyloxy)-2-propyloxykarbonyl]propanoylguanosinu
Meziprodukt z kroku c) byl esterifikován na FLG způsobem podle Příkladu 34, krok d) a N5 ochranné skupiny valyiové části byly odstraněny obvyklými způsoby, jako je uvedeno v Příkladu 35, krok e) nebo Příkladu 29, krok e).
Biologický přiklad 1 to
Farmakokinetika
Potvrzení skutečnosti, že orálně podávané prekurzory podle předloženého vynálezu uvolňují FLG in vivo bylo získáno v krysím modelu, který je uznáván jako užitečný model pro testování farma15 kokinetických parametrů nukleosidových analogů. Orální kompozice se podávají ve farmaceutickém vehikulu, které zahrnuje propylenglykol, nebo v případě rozpustnějších sloučenin, jako je sloučenina z Příkladu 26 nebo Příkladu 34, ve vodě, duplikovaným hladovým zvířatům v dávce odpovídající 0,1 mmol/kg. Pro srovnání byl soubor krys dávkován 0,01 mmol/kg metabolitu 2',3'-dideoxy-3'-fluorguanosinu. Sérové hladiny metabolitu se potom monitorují v séru, které je odebíráno v intervalech od jednotlivých zvířat od 0,5 až do 12 hodin následujících po podávání (5 minut až 6 hodin pro FLG).
Metabolit byl analyzován HPLC s UV detekcí při vlnové délce 254 nm, způsobem, analogickým proceduře, kterou popsali Stahle a kol. 1995, J. Pharm. Biomed. Anal. 13, 369-376. HPLC sys25 tém může být založen na 0,05M amoniumdihydrogenfosfátovém pufru s 1,2% 2-propanolovým rozpouštědlem, pufrovaným na pH 4,5 nebo 30 mM sodném dihydrogenfosfátovém pufru s 2% acetonitrilovým rozpouštědlem, pufrovaným na pH 7,0. Kolona může být 100 x 2,1 mm BAS Cl8 s velikostí částic 5 pm a s 7 pm C18 ochrannou kolonou nebo kolona Zorbax SB-CN C18 150 x 4,6 mm, 5 pm. Proteinová vazba sloučenin podle předloženého vynálezu a stejně tak i metabolitu je zanedbatelná a ultrafíltrace přes filtry Amicon nebo Microcon 30 je vhodná pro vzorky séra. Výhodně se hlavní pík podrobí další sloupcové chromatografií pro lepší rozlišení FLG v komponentách séra s malou hmotností. Intravenózní hladiny jsou násobeny deseti pro získání hodnot AUC pro srovnání s orálními hodnotami. Absolutní orální biologická dostupnost se určí jako poměr mezi ^AUC1V a ^AUCnraini·
Tabulka 1
6 h absolutní biologická dostupnost % 12 h absolutní biologická dostupnost %
FLG 9 %**
Příklad 22 39 % >80 %*
Příklad 13 37 %
Příklad 12 29 %
Příklad 25 81,5 %
Příklad 28 47,5 %
Příklad 24 60,5 %
Příklad 26 67,5 %
Příklad 29 51 %
* odhad ** hodnota z literatury
Sloučeniny podle předloženého vynálezu tedy poskytují významně zlepšenou orální biologickou dostupnost ve srovnání s metabolity 2',3'-dideoxv-3'-fluorguanos inu. Za povšimnutí stojí, že sloučeniny jsou uvolňovány do krve relativně trvalým způsobem a nikoliv v okamžité Špičce, io To znamená, že účinné množství účinného metaboiitu je v krvi přítomno po dobu mnoha hodin což napomáhá podávání v jedné denní dávce. Kromě toho trvalé uvolňování odstraňuje problémy s akutní toxicitou, které jsou pozorovány u sloučenin s rychlejším uvolňováním.
I když krysy jsou obecně uznávány jako dobrý model pro předpovídání lidské biologické dostup15 nosti nukleosidových analogů, druhově nezávislá biologická dostupnost sloučeniny podle předloženého vynálezu (Příklad 34) byla potvrzena u přibližně 11,5 kg samce a samice psa beagle při podávání orálně s dávkou 0,05 mmol/kg (38 mg/kg) sloučeniny ve vodě nebo intravenózně 0,005 mmol/kg (1,35 mg/kg) metaboiitu ve vodě. Odebírání plasmy a analýza byly prováděny způsobem uvedeným výše.
Samec psa 12 h absol. biologická dostupnost 51%
Samice psa 12 h absol. biologická dostupnost 74 %
Biologický příklad 2 Protivirální aktivita - Retroviiy
Jak bylo demonstrováno způsobem podle Biologického příkladu 1, sloučeniny podle předloženého vynálezu uvolňují in vivo metabolit 2',3'-dideoxy-3-fluorguanosin. In vitro měření protivirální aktivity tohoto metaboiitu bude tedy odrážet de facto aktivitu sloučenin podle předloženého vynálezu.
V testu XTT přijmu barviva, který popsali Koshida a kol. Antimicrob. Agents. Chemother. 33 778-780, 1989), používajícím buňky MT4 vykázal metabolit měřený v Biologickém příkladu 1 uvedeném výše následující in vitro působení proti retrovirům:
Tabulka 2
HIV nebo retrovirální kmen IC50’
HIV-I111b 1 μ9/πι1
HIV-12”1 AZTr 1 gg/ml
HIV-Iiub TIBO1 1 gg/ml
HIV-l29^ 0,7 gg/ml
HIV-23BI,e$$9 2 μg/πιl
SIVSM 1 μg/ml
* Koncentrace metabolitu indukující 50% inhibici virální replikace io Je tedy zřejmé, že podávání sloučenin podle předloženého vynálezu vytváří silný protivirální účinek proti retrovirům HIV-1, H1V-2 a SIV. Stojí také za povšimnutí, že z výsledků pro HIV-l2441 AZTr a HIV—1 inB TIBO1 plyne, že protivirální aktivita sloučenin podle předloženého vynálezu nevykazuje krizovou rezistanci proti kmenům HIV, které se staly rezistentní k ostatním HIV činidlům jako je nukleosidový analog AZT nebo nenukleosidový inhibitor reverzní tran15 skriptázy TIBO,
Biologický příklad 3
Protivirální aktivita - HBV
Účinek protivirálních činidel na kachní virus hepatitidy B (DHBV) u kachen je uznáván jako zvířecí model pro ověřování in vivo aktivity na hepatitis B u člověka. Aktivita in vivo metabolitu měřená v Biologickém Příkladu 2 uvedeném výše byla testována v DHBV modelu, který popsali
Sherker a kol. (1986) Gastroenterology 91, str. 818-824. Výsledky jsou znázorněny na Obr. 1 a 2. Stručně řečeno, 4 kontrolní kachny byly ošetřeny fosfátově pufrovaným fyziologickým roztokem (PBS) a 4 kachny 5 mg/kg/den aktivního metabolitu. Kachny byly dva dny staré, když jim byl naočkován DHBV a 18 dní staré, když započalo ošetření. Metabolit a PBS (kontrola) byly podávány intraperitoneálně po dobu 10 dní ve formě injekcí dvakrát denně v 8 hodin dopoledne a
4 hodiny odpoledne. Ošetření trvalo 33 dní a zvířata byla sledována 5 týdnů po ukončení ošetřování.
Účinnost ošetření byla sledována dot-blot hybridizací DHBV DNA v séru použitím radioaktivní sondy a množství DHBV bylo měřeno jako množství hybridizované radioaktivit. Obr. 1 znázor35 ňuje množství DHBV DNA v séru v různých časových okamžicích před, během a po ukončení ošetřování.
Jak je možno vidět na Obr, 1, nedochází k žádnému poklesu množství DHBV v séru v průběhu ošetřování PBS (kontrola, plná čára). Zvířata, kterým byl podáván metabolit měřený v Biolo40 gickém příkladu 2 (přerušovaná čára) vykazují dramatický pokles množství DHBV v séru během prvních 10 dní ošetřování, zatímco po zbytek ošetření byla úroveň DHBV DNA pod detekčním limitem při dávce 5 mg/kg/den. Opakované experimenty s dávkami 30 a 3 mg/kg/den a s kongen i tál ně infikovanými kachnami (není znázorněno) také daly podobné výsledky, totiž dramatický pokles séra DHBV DNA pod práh detekce. Dokonce při velmi malé dávce 0,3 mg/kg/den metabolit způsoboval značnou inhibicí DHBV in vivo. Po ukončení ošetřování se virus znovu objevil v séru, jak je znázorněno na Obr. 1. Opětovný výskyt HBV po krátkodobém ošetřování obvyklými protivirálními činidly byl pozorován dříve jak u lidských, tak i u zvířecích jedinců s chronickou infekcí hepatitidou B.
Jak je možno vidět na Obr. 2, hmotnost kachen vzrostla stejným způsobem jako u kontrolních io zvířat (ošetřených PBS). Vzrůst hmotnosti ze zhruba 270 g na přibližně 800 g, který byl pozorován během ošetřování, je tak velký, že pokud by docházelo k toxickému působení, bylo by snadno pozorovatelné na změně rychlosti růstu. Podobné křivky růstu byly také pozorovány pro kachny, které dostávaly vyšší dávku 30 mg/kg/den. Tento metabolit je tedy zřetelně netoxický. Jelikož sloučeniny podle předloženého vynálezu se hydrolyzují in vivo a tím se získá tento metabolit, jak je uvedeno v Příkladu 2 uvedeném výše a vzhledem k povaze identické a tudíž snadno metabolizovatelné mastné kyseliny lze tedy vyvodit, že při podávání sloučenin podle předloženého vynálezu může být předpokládáno, že nedojde k problémům s dlouhodobou toxicitou. Nepřítomnost akutní (krátkodobé) toxicity sloučenin podle předloženého vynálezu, pokud jsou podávány orálně, byla prokázána v Biologickém Příkladu 2, který byl uveden výše.
Příklad farmaceutického přípravku 1
Tablety
Následující složky byly prosívány pres síto velikosti 0,15 mm a smíchány za sucha
10 g 2',3 '-dideoxy-3 -fluor-5 '-O-3-[ 1,3-bis-(L-valyloxyý-2-propyloxykarbony 1 propanoyljguanosin
30 40 g laktóza
49 g krystalická celulóza
1 g stearan horečnatý
Tabletovací stroj byl použit pro lisování směs na tablety obsahující 250 mg účinné složky.
Příklad farmaceutického přípravku 2
Enterické potahované tablety 40
Tablety podle Příkladu 1 potahovány postřikem použitím roztoku následujícího složení
120 g ethylcelulóza g propylenglykol
10 g sorbitan monooleát do 1000 ml destilovaná voda
Λ
Příklad farmaceutického přípravku 3
Přípravek s řízeným uvolňováním g
g 4,5 g
2',3 '-dideoxy-3'-fluor-5'-0-[5-(L-valyloxymethyl)-6-stearoyloxyhexanoy!]guanosinu hydroxypropylmethylcelulózy (Methocell K15) laktózy io se smíchá za sucha a granuluje s vodnou pastou povídonu. Přidá se stearan horečnatý (0,5 g) a směs se lisuje na tabletovacím stroji na tablety o průměru 13 mm, které obsahují 500 mg účinné látky.
Příklad farmaceutického přípravku 4 Měkké kapsle
250 g 2',3'-dideoxy-3'-fluor-5 -0-[5-(L-valyloxymethyl)-6-stearoyloxyhexanoyl]20 guanosinu
100 g lecitinu
100 g podzemnicového oleje
Sloučenina podle předloženého vynálezu se disperguje v lecitinu a podzemnicovém oleji a plní se do měkkých želatinových kapslí.

Claims (13)

PATENTOVÉ NÁROKY
1. Sloučenina obecného vzorce Ig (Ig),
35 ve kterém O-nuc představuje zbytek monohydroxyl nesoucí analog D- nebo L-nukleosidu, R.2 představuje zbytek alifatické L-aminokyseliny, p je 0,1 nebo 2-20, popřípadě obsahuje dvojnou vazbu a q je 0-5, ve kterém R2 představuje zbytek alifatické L-aminokyseliny,
2',3'-dideoxy-3'-fluor-5-O-[2-(L-valyloxy)-propionyl]guanosin, ve které propionylová skupina představuje derivát kyseliny L-mléčné a její farmaceuticky přijatelné soli.
2',3 '-dideoxy-3'-fluor-5-O-[2-(L-valyloxy)-propÍonyl]guanosin; nebo 2 ,3 '-dideoxy-3'-fluor-5-O-[2-(L-isoleucyloxy)-propionyl]guanosin ajejich farmaceuticky přijatelné soli, ve kterých propionylová skupina představuje derivát kyseliny L-mtéčné.
2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-isoleucyloxy)-eÍkosanoyl]guanosin, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
2',3 '-dideoxy-3 -fluor-5-0-[2-(L-isoleucyloxy)-dokosanoyl]guanosin,
2',3 '-dideoxy-3 -fluor-5-O-[2-(L-isoleucyloxy)-stearoyl]guanosin,
2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-O-[2-(L-isoleucyloxy)-palmitoyl]guanosin,
2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-isoleucyloxy)-dodekanoyl]guanosin,
30 2',3'-dideoxy-3 '-fluor-5-O-[2-(L-isoleucyloxy)-myristoyl]guanosin,
2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5^O-[2-(L-isoleucyloxy)-dekanoyl]guanosin,
2 ,3'-dideoxy-3 -fluor-5-C-[2-(L-isoleucyloxy)-hexanoyl]guanosin, 2',3'-4ideoxy-3'-fluor-5-0-[2-(L-isoleucyloxy)-oktanoyl]guanosÍn,
2',3 '-dideoxy-3'-fluor-5-0-[2-(L-valyloxy)-eikosanoyl]guanosin
25 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-isoleucy loxy)-butyryl]guanosin,
2',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-valyloxy)-dokosanoyl]guanosin,
2',3 '-dideoxy-3 -fluor-5-0-[2-(L-valyloxy)-stearoyl]guanosin,
2',3 '-dideoxy-3 -fluor-5-O-[2-{L-valyloxy)-palmitoyl]guanosin,
2 ',3 '-dideoxy-3 -fluor-5-0-[2-(L-valyloxy)-dekanoyl]guanosin, 2',3'-dideoxy-3'-fiuor-5-0-[2-(L-valyloxy)-dodekanoyl]guanosin,
20 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-valyloxy)-myristoyl]guanosin,
2 ',3 -dideoxy-3 -fluor-5-0-[2-{L-valyloxy)-oktanoyl]guanosÍn,
2 ',
3'-dideoxy-3 -fluor-5-0-[2-(L-valyloxy)-hexanoyl]guanosin,
3. Sloučenina podle nároku 1 nebo 2, ve které q představuje 0.
4'-0-[2-(L-isoleucyloxy)-propionyl]acyklovir,
4'-0-[2-(L-valyloxy)-propionyl]acyklovir,
4. Sloučenina podle nároků 1,2 nebo 3, kde R2 je isoleucin nebo výhodně derivát vatinu
5'-0-[2-(L-isoleucyloxy)-propionyl]DAPD;
a odpovídající deriváty 4-[2-amino-6-(cyclopropylamino)-9H-purÍn-9-ylj-2-cyklopenten-lmethanolu;
ajejich farmaceuticky přijatelné soli.
5'-0-[2-(L~isoleucyloxy)-propionyl]lamivudin,
35 5'-0-[2-(L-valyloxy)-propionyI]DAPD,
5'-O-[2-(L-valyloxy)-propionyl]lamivudin,
5'-0-[2-(L-isoleucyloxy)-propionyl]stavudin,
5'~0-[2-(L-valyloxy)-propionyl]stavudin,
5 -0-[2-(L-valyloxy)-propionyl]ddI,
30 5'-0-[2-(L-isoleucyloxy)-propÍonyl] ddl,
5. Sloučenina podle nároku 1, zvolená ze souboru:
15 2 ',3 '-dideoxy-3 '-fluor-5-0-[2-(L-valyloxy)“butyryl]guanosin,
5 p představuje 0,1 nebo 2-20, popřípadě obsahuje dvojnou vazbu a q je 0-5.
6. Sloučenina podle nároků 1, 2 nebo 3 ve které p a q představují 0.
7. Sloučenina podle nároku 6, kterou je:
8. Sloučenina podle nároku 6, kterou je:
9. Sloučenina podle nároků 1, 3,4 nebo 6, ve které O-Nuc představuje zbytek analogů acyklic20 kých nukleosidů jako je acyklovir nebo a analog cyklického nukleosidu jako je ddl (didanosin), ddC (zalcitabin), d4T (stavudin), FTC, lamivudin (3TC), 1592U89 (4-[2-amino-6-(cyklopropyíamino)-9H-purin-9-yl]-2-cyclopenten-l-methanol), AZT (zidovudin), DAPD (D-2,6diaminopurin dioxolan), F-ddA nebo monohydrický L-nukleosid.
25
10. Sloučenina podle nároku 9, zvolená ze souboru;
11. Sloučenina podle kteréhokoliv z předcházejících nároků pro použití v terapii.
45
12. Použití sloučeniny podle nároků 1 až 10 pro výrobu léčiva pro prevenci a léčení virálních infekcí.
13. Použití podle nároku 12, kdy virální infekce je způsobena HBV nebo retrovirem.
CZ20000449A 1997-08-15 1998-08-14 Nukleosidové analogy, jako jsou antivirální cinidla obsahující inhibitory retrovirální reverzní transkriptázy a DNA polymerázy viru hepatitidy B (HBV) CZ300757B6 (cs)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE9702957A SE9702957D0 (sv) 1997-08-15 1997-08-15 Antivirals
SE9704147A SE9704147D0 (sv) 1997-11-12 1997-11-12 Nucleosides
SE9800452A SE9800452D0 (sv) 1998-02-13 1998-02-13 Antivirals

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2000449A3 CZ2000449A3 (cs) 2000-08-16
CZ300757B6 true CZ300757B6 (cs) 2009-08-05

Family

ID=27355886

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20000449A CZ300757B6 (cs) 1997-08-15 1998-08-14 Nukleosidové analogy, jako jsou antivirální cinidla obsahující inhibitory retrovirální reverzní transkriptázy a DNA polymerázy viru hepatitidy B (HBV)

Country Status (24)

Country Link
EP (2) EP0988304B1 (cs)
JP (1) JP3844654B2 (cs)
KR (1) KR100529272B1 (cs)
CN (2) CN1130362C (cs)
AT (2) ATE200900T1 (cs)
AU (1) AU728892B2 (cs)
CA (1) CA2298704C (cs)
CZ (1) CZ300757B6 (cs)
DE (3) DE69800753D1 (cs)
DK (1) DK0988304T3 (cs)
ES (2) ES2239637T3 (cs)
GR (1) GR3036004T3 (cs)
HK (2) HK1032968A1 (cs)
HU (1) HU228060B1 (cs)
IL (2) IL134503A0 (cs)
MY (1) MY116269A (cs)
NZ (1) NZ502837A (cs)
PL (1) PL338643A1 (cs)
PT (1) PT988304E (cs)
SG (1) SG96604A1 (cs)
SI (1) SI0988304T1 (cs)
TR (2) TR200002273T2 (cs)
TW (1) TW580500B (cs)
WO (1) WO1999009031A1 (cs)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6458772B1 (en) * 1909-10-07 2002-10-01 Medivir Ab Prodrugs
FR2794752A1 (fr) * 1999-06-11 2000-12-15 Laphal Sa Lab Nouveaux composes derives de nucleosides, leurs procedes de preparation, et les compositions pharmaceutiques en renfermant
FR2796384A1 (fr) * 1999-07-12 2001-01-19 Laphal Sa Lab Nouveaux esters derives de nucleosides, leurs procedes de preparation et les compositions pharmaceutiques en renfermant
MY141789A (en) 2001-01-19 2010-06-30 Lg Chem Investment Ltd Novel acyclic nucleoside phosphonate derivatives, salts thereof and process for the preparation of the same.
AUPS037002A0 (en) * 2002-02-07 2002-02-28 Melbourne Health Viral variants and uses therefor
EP1610797A1 (en) * 2003-03-27 2006-01-04 Boehringer Ingelheim International GmbH Antiviral combination of nevirapine and a further antiretroviral compound
WO2004087140A1 (en) * 2003-03-27 2004-10-14 Boehringer Ingelheim International Gmbh Antiviral combination of a dipyridodiazepinone and a further antiretroviral compound
WO2004087139A1 (en) * 2003-03-27 2004-10-14 Boehringer Ingelheim International Gmbh Antiviral combination of tipranavir and a further antiretroviral compound
GB0400290D0 (en) 2004-01-08 2004-02-11 Medivir Ab dUTPase inhibitors
GB0513835D0 (en) 2005-07-07 2005-08-10 Medivir Ab HIV inhibitors
CN103347871A (zh) * 2011-02-21 2013-10-09 美迪维尔公司 Flg的合成
EP3353145B1 (en) * 2015-09-23 2022-09-28 XWPharma Ltd. Prodrugs of gamma-hydroxybutyric acid, compositions and uses thereof
CN114686188B (zh) * 2020-12-31 2023-05-02 中石化石油工程技术服务有限公司 一种核苷磷脂钻井液润滑剂及其制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0375329A2 (en) * 1988-12-19 1990-06-27 The Wellcome Foundation Limited Antiviral pyrimidine and purine compounds, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE8602981D0 (sv) * 1986-07-04 1986-07-04 Astra Laekemedel Ab Novel medicinal use
GB8719367D0 (en) * 1987-08-15 1987-09-23 Wellcome Found Therapeutic compounds
DE3883374T2 (de) * 1987-10-28 1993-12-09 Pro Neuron Inc Acylatiertes uridin und cytidin und deren verwendungen.
CA2100655C (en) * 1991-02-08 2004-02-03 Reid W. Von Borstel Oxypurine nucleosides and their congeners, and acyl derivatives thereof, for improvement of hematopoiesis
DE4311801A1 (de) * 1993-04-09 1994-10-13 Hoechst Ag Neue Carbonsäureester von 2-Amino-7-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)purin, deren Herstellung sowie deren Verwendung
PE32296A1 (es) * 1994-07-28 1996-08-07 Hoffmann La Roche Ester de l-monovalina derivado de 2-(2-amino-1,6-dihidro-6-oxo-purin-9-il) metoxi-1,3-propandiol y sus sales farmaceuticamente aceptables
WO1997027194A1 (en) * 1996-01-26 1997-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for preparing purine derivatives
US5869493A (en) * 1996-02-16 1999-02-09 Medivir Ab Acyclic nucleoside derivatives
EP0942916A2 (en) * 1996-11-12 1999-09-22 Medivir Aktiebolag Nucleosides

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0375329A2 (en) * 1988-12-19 1990-06-27 The Wellcome Foundation Limited Antiviral pyrimidine and purine compounds, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them

Also Published As

Publication number Publication date
ATE293112T1 (de) 2005-04-15
AU728892B2 (en) 2001-01-18
TR200002273T2 (tr) 2002-06-21
WO1999009031A1 (en) 1999-02-25
DE69800753T4 (de) 2002-02-21
CA2298704C (en) 2006-07-11
HK1032968A1 (en) 2001-08-10
EP1123935A2 (en) 2001-08-16
DE69829784D1 (de) 2005-05-19
DE69800753T2 (de) 2001-10-25
EP1123935A3 (en) 2001-09-05
CN1130362C (zh) 2003-12-10
EP0988304A1 (en) 2000-03-29
ES2158689T3 (es) 2001-09-01
IL134503A (en) 2010-06-30
GR3036004T3 (en) 2001-09-28
CN1500800A (zh) 2004-06-02
HK1097550A1 (en) 2007-06-29
ATE200900T1 (de) 2001-05-15
NZ502837A (en) 2001-01-26
KR20010022873A (ko) 2001-03-26
MY116269A (en) 2003-12-31
ES2239637T3 (es) 2005-10-01
JP2001515079A (ja) 2001-09-18
KR100529272B1 (ko) 2005-11-17
HUP0100087A3 (en) 2003-01-28
PL338643A1 (en) 2000-11-06
EP0988304B1 (en) 2001-05-02
CN1286845C (zh) 2006-11-29
JP3844654B2 (ja) 2006-11-15
CA2298704A1 (en) 1999-02-25
TW580500B (en) 2004-03-21
HUP0100087A1 (hu) 2002-01-28
SI0988304T1 (en) 2001-08-31
CZ2000449A3 (cs) 2000-08-16
DK0988304T3 (da) 2001-08-20
HU228060B1 (en) 2012-09-28
IL134503A0 (en) 2001-04-30
DE69800753D1 (de) 2001-06-07
CN1275983A (zh) 2000-12-06
EP1123935B1 (en) 2005-04-13
AU8754898A (en) 1999-03-08
TR200000398T2 (tr) 2000-07-21
SG96604A1 (en) 2003-06-16
PT988304E (pt) 2001-10-31
DE69829784T2 (de) 2006-02-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102163611B1 (ko) 항바이러스 베타-아미노산 에스테르 포스포디아미드 화합물
US20030186924A1 (en) Prodrugs
CZ300757B6 (cs) Nukleosidové analogy, jako jsou antivirální cinidla obsahující inhibitory retrovirální reverzní transkriptázy a DNA polymerázy viru hepatitidy B (HBV)
WO2000047561A1 (en) Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors
JP2022525013A (ja) Ｈｉｖ療法において有用な化合物
SK98598A3 (en) Acyclic nucleoside derivatives
AU735438B2 (en) Nucleosides
JP2017057200A (ja) 抗ｄｎａウィルス活性などの生理活性を有するヌクレオシド誘導体
US20170114087A1 (en) Method of preparation of antiviral compounds and useful intermediates thereof
KR100565388B1 (ko) 뉴클레오시드
AU775578B2 (en) Nucleosides analgoues, such as antivirals including inhibitors of retroviral reverse transcriptase and the DNA polymerase of hepatitis B virus (HBV)
NZ508502A (en) Nucleosides analogues, such as antivirals including inhibitors of retroviral reverse transcriptase and the DNA polymerase of hepatitis B virus (HBV)
MXPA00001593A (es) Analogos de nucleosidos, tales como antivirales incluyendo inhibidores de transcriptasa inversa retroviral y la adn-polimerasa del virus de hepatitis b (vhb)
CN100460417C (zh) 用作逆转录病毒的逆转录酶及dna聚合酶抑制剂的抗病毒药的核苷类似物
JP2018203621A (ja) Ｎ−結合型糖鎖修飾アミド化合物
EP1150956A1 (en) Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors
CZ20011145A3 (cs) Antivirové purinové deriváty a jejich použití
MXPA00007903A (en) Nucleosides

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20140814