FI104882B - Menetelmä 3-morfolinosydnoni-imiinin tai sen suolan tai tautomeerin ja syklodekstriinin tai syklodekstriinijohdannaisen inkluusiokompleksin valmistamiseksi - Google Patents

Description

104882

Menetelmä 3-morfolinosydnoni-xmiinin tai sen suolan tai tautomeerin ja syklodekstciinin tai syklodekstriini-johdannaisen inkluusiokompleksin valmistamiseksi * 5 Keksintö koskee menetelmää 3-morfolinosydnoni- imiinin (SIN 1) tai sen suolan tai avorenkaista muotoa "A" olevan tautomeerin (SIN IA: N-nitroso-N-morfolinoamino- asetonitriili) ja syklodekstriinin tai syklodekstriini-johdannaisen inkluusiokompleksin valmistamiseksi sekä 10 menetelmää inkluusiokompleksia vaikuttavana aineosana sisältävän farmaseuttisen koostumuksen. Avorenkaisella muodolla "A" on tärkeä osa; sen muodostuminen on ratkaisevassa asemassa NO-radikaalin (typpioksidiradikaalin) vapautumisessa.

15 Molsidomiini (N-etoksikarbonyyli-3-morfolinosydno- ni-imiini, SIN 10) on tunnettu angina pectorista vastaan vaikuttava aine. Sitä käytetään laajasti angina pectorik-sen hoitamiseen ja ehkäisemiseen sydämen vajaatoiminnan tapauksessa ja sydäninfarktitilassa. Molsidomiinin tera-20 peuttisen vaikutuksen voidaan katsoa johtuvan pääasiassa sen ensimmäisestä aktiivisesta metaboliitista, 3-morfoli-nosydnoni-imiinistä, jota syntyy pääasiallisesti maksassa entsymaattisen hydrolyysin ja sitä seuraavan dekarboksy-1aasientsyymin vaikutuksen tuloksena. SIN l:n terapeutti-25 sena etuna molsidomiiniin verrattuna on siten se, että se tehoaa nopeammin ja varmemmin. Sen puutteena on se, että sitä voidaan antaa ainoastaan laskinmonsisäisten ruiskeiden muodossa.

Sydnoni-imiinijohdannaiset ovat erittäin herkkiä 30 valolle. Ne hajoavat nopeasti jo lyhytaikaisenkin keino- • ... tai luonnonvalosäteilytyksen johdosta. Fotolyysin aikana syntyy farmakologisesti inaktiivisia mutta vaarattomia hajoamistuotteita, kuten morfoliinia, ammoniakkia, etyylialkoholia ja hiilidioksidia. Joidenkin patenttijulkaisujen 35 kohteena on sydnoni-imiinijohdannaisten stabilointi eri- 2 104882 laisia lisäaineita lisäämällä (EP-julkaisu 206 219 ja DE-patenttijulkaisu 3 346 638).

Valonherkkyys voidaan välttää hyvin kuivassa olomuodossa ja liuoksessa sopivalla varastoinnilla (hyvin 5 suljetussa tummassa pullossa, joka on kääritty mustaan paperiin).

Yleisesti ottaen voidaan sanoa, että sydnoni-imii-nijohdannaiset ovat herkkiä äärimmäisille pH-arvoille ja hajoavat nopeasti. Molsidomiinin kemiallisen ja metaboli-10 sen hajoamisen lopullinen tuote on inaktiivinen metabo-liitti SIN 1C (syaanimetyleeniaminomorfoliini). Käytettäessä SIN l:tä lääkeaineena etualalle nousevat kemialliseen stabiilisuuteen liittyvät ongelmat. Aine hajoaa nopeasti neutraalissa vesiliuoksessa, se on pH-herkkä ja se 15 on stabiili ainoastaan voimakkaasti happamassa väliaineessa (pH 1 - 2). pH:n 2 yläpuolella se hajoaa nopeasti inaktiiviseksi metaboliitikisi SIN 1C, mihin liittyy terapeuttisen aktiivisuuden häviäminen.

SIN 1 -* SIN 1C -muutos on seurausta emäskatalysoi-20 dusta hydrolyyttisestä hajoamisesta. Prosessi on tiukasti pH:stä riippuvainen, esimerkiksi 10-%:isen hajoamisen (SIN 1C) saavuttamiseksi vaaditaan 53 sekunnin aika pH:ssa 8, 15 tuntia pH:ssa 6, 67 vuorokautta pH:ssa 4 ja 13 vuotta pHissa 1-2 [Chem. Pharm. Bull. 19 (1971), nro 6, 1079]. ·;' 25 SIN 1 hajoaa myös laimeassa vesiliuoksessa, jota säilytetään hajavalossa, jo 1 - 3 vuorokaudessa. Hajoamista voidaan seurata suoraan UV-spektristä. Absorptiohuippu siirtyy vähitellen aallonpituudelta 291 ± 1 nm aallonpituudelle 278 ± 1 nm, samalla kun absorption arvo kasvaa 30 jatkuvasti, mikä on sopusoinnussa kirjallisuudessa annet-·; tujen tietojen kanssa: SIN l:n -xmax-arvo on 291 ± 1 nm, omi- naisabsorptiokerroin Au on 520, kun taas SIN 1C:n χαΛΧ on 278 ± 1 nm, molaarinen absorptiokerroin e on 17 000 ja A1* on 1220 (1 cm).

3 104882

Suun kautta annettuna SIN 1 ei ole tehokas; pH-ar-vojen 1 ja 2 välillä SIN 1 on otaksuttavasti voimakkaasti ionisoituneessa tilassa, jolla on edullinen kemiallinen stabiilisuus mutta joka toisaalta ei ole eduksi ruuansula-5 tuskanavasta imeytymiselle. Liikkuessaan eteenpäin mahalaukusta emäksisemmässä pH:ssa SIN I muuttuu edellä mainittujen seikkojen valossa nopeasti inaktiiviseksi metabo-liitiksi SIN 1C. Pienen SIN 1 -annoksen käyttö on tätä muutosta suosiva, koska hydrolyyttinen hajoaminen on pie-10 nillä ^g/ml-luokkaa olevilla) pitoisuuksilla vielä selvempää .

SIN 1:tä on markkinoilla hydrokloridisuolansa muodossa, joka on laskimonsisäisesti annettavaksi tarkoitettuna kylmäkuivatun jauheampullin muodossa, joka sisältää 15 2 mg vaikuttavaa aineosaa ja 40 mg sorbitolia. Ampullin sisältö täytyy liuottaa ennen käyttöä 1 ml:aan tislattua vettä.

Keksinnön päämääränä oli valmistaa sellainen uusi aine, jonka avulla voidaan estää SIN 1 - SIN 1C -muutos 20 vielä neutraalissakin vesiliuoksessa ja vastaavasti fysiologisessa pH:ssa.

On tunnettua, että kompleksin muodostaminen syklo-dekstriinin kanssa soveltuu erilaisten aineiden stabilointiin lämpöä, valoa ja emäs- tai happohydrolyysiä vastaan ; 25 (Szejtli, Cyclodextrin Technology, Kluwer, Dordrecht, 1988, s. 211 - 217).

Tutkimusten kuluessa havaittin, että syklodeks-triinit osoittautuivat tehokkaiksi injektoitavista SIN 1 -koostumuksista saatujen laimeiden vesiliuosten stabi-30 loinnissa.

* .. Esillä oleva keksintö koskee menetelmää 3-mor- « folinosydnoni-imiinin tai sen suolan tai tautomeerin ja syklodekstriinin tai syklodekstriinijohdannaisen inkluu-siokompleksin valmistamiseksi. Menetelmälle on tunnus-35 omaista, että « 104882 a) 3-morfolinosydnoni-imiini tai sen suola saatetaan reagoimaan syklodekstriinin tai syklodekstriinijohdannaisen kanssa vesipitoisessa väliaineessa, ja kompleksi eristetään liuoksesta dehydratoimalla, tai 5 b) 3-morfolinosydnoni-imiini tai sen suola ja syk lodekstriini tai syklodekstriinijohdannainen jauhetaan suurta energiaa käyttäen.

Keksintö koskee lisäksi menetelmää farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi. Menetelmälle on tunnus-10 omaista, että edellä kuvatulla menetelmällä valmistettu 3-morfolinosydnoni-imiinin tai sen suolan tai tautomeerin ja syklodekstriinin tai syklodekstriinijohdannaisen inkluu-siokompleksi sekoitetaan tavanomaisten farmaseuttisten kantaja- ja muiden apuaineiden kanssa.

15 SIN l:n ja syklodekstriinien välinen vuorovaikutus osoitettiin seuraavalla koesarjalla:

Valmistettiin injektoitavasta SIN 1 -koostumuksesta vesiliuos, jonka väkevyys oli noin 10 μg/ml, ja liuoksiin liuotettiin 20 - 40 mg syklodekstriiniä tai syklodekstrii-20 nijohdannaista samalla sekoittaen. Liuoksia säilytettiin huoneenlämpötilassa (20 - 22 °C) hajavalossa, ja määrätyin ajanjaksoin rekisteröitiin liuosten UV-spektri alueella 220 - 350 nm. Vertailunäytteenä käytettiin pelkästään vesiliuosta ja 0,05 N suolahappoliuosta. Syklo- • 25 dekstriiniliuosten pH-arvo tarkistettiin sen määrittämi- • I .

seksi, että syklodekstriini ja käytettävä johdannainen eivät muuta merkittävästi veden pH-arvoa. Käytettyjen vä-kevimpien syklodekstriiniliuosten pH-arvot poikkesivat vain ± 0,2 yksikköä tislatun veden pH-arvosta. Havaitsim-30 me, että UV-spektrisiirtymän esti huomattavan hyvin CDPSI, ioninen liukoinen β-syklodektriinipolymeeri (jonka keskimääräinen moolimassa on 3 500, β-CD-pitoisuus 54 % ja COO'-sisältö 4,2 %; HU-patenttijulkaisu 191 101). Spektrisiir-tymää ei havaittu edes 2 viikon varastoinnin jälkeen, kun 35 sen sijaan samalla tavalla säilytetyssä vesiliuoksessa 5 104882 tapahtui käytännössä muuttuminen SIN lCrksi 2-3 vuorokaudessa .

Myös DIMEB:n (2,6-di-O-metyyli-β-syklodekstriinin) hajoamista estävä, hidastava, vaikutus on selvä. DIMEB:n 5 ollessa läsnä pitoisuutena 20 mg/ml liuoksen spektrissä on esiintynyt 6 vuorokauden säilytyksen jälkeen ainoastaan siirtymä 1 nm:n sisällä. Testattiin myös TRIMEB:n (2,6-tri-O-metyyli-P-syklodekstriinin), γ-CDrn, β-CDm ja hyd-roksipropyyli-P-CD:n stabiloiva vaikutus. UV-spektrisiir-10 tymän perusteella päätelty tehokkuusjärjestys oli seu-raava:

CDPSI > DIMEB > TRIMEB > β-CD ;> ΗΡ-β-CD

Eri syklodekstriinien ja aivan erityisesti CDPSI:n vaikutuksesta SIN l:n hydrolyyttiseen hajoamiseen voidaan 15 tehdä johtopäätökset kompleksivuorovaikutuksesta.

Edellä kuvatussa koesarjassa syklodekstriinejä tai niiden johdannaisia käytettiin erittäin suurina ylimäärinä (10 μg SIN l:tä/ml suhteessa noin 20 mg:aan syklodekstrii-niä/ml).

20 Koesarja toistettiin niin, että CDPSI:tä käytettiin ainoastaan 10- tai 20-kertaisesti ylimäärin, mikä vastaa SIN l:n ja CDPSI:n massasuhdetta sellaisessa kompleksissa, joka sisältää 10 % tai 5 % vaikuttavaa aineosaa. SIN l:n terapeuttisen annoksen pienuus antaa mahdollisuuden käyt-; 25 tää jopa kompleksia, joka sisältää alle 5 % vaikuttavaa aineosaa, mikä vastaa suunnilleen SIN l:n ja CDPSI:n moo-lisuhdetta 1:2. Sellaisella pitoisuusalueella spektrofoto-metrinen mittaus ei anna selvää kuvaa, minkä vuoksi hajoamisen aste määritettiin ohutkerroskromatografisesti seu-30 raavalla tavalla: 10 μΐ kustakin liuoksesta laitettiin pisaroittain Kieselgel 60 F254 -levylle (10 x 10 cm, Merck) . Kehitysseos i oli sykloheksaani-etyyliasetaattiseos suhteessa 1:1. Kehi- tysastialle annettiin 30 minuuttia aikaa kyllästyä. Levyl-35 le laitettiin pisaroittain myös SIN 1C -vertailuliuosta.

6 104882

Levy kuivattiin tiputustäplän kohdalta kylmässä ilmavirrassa valolta suojattuna, ja se kehitettiin 15 cm:n korkeuteen saakka. Kehitysastia laitettiin kehitysjakson ajaksi pimeään paikkaan. Liuottimen haihdutuksen jälkeen 5 levyä tutkittiin silmämääräisesti UV-valossa aallonpituu della 254 nm. Itse SIN 1 esiintyi kohdassa Rf = 0,05 ja SIN 1C kohdassa Rf = 0,36. Havaittiin kussakin tapauksessa, että CDPSI:tä sisältävien liuosten tapauksessa SIN 1C -täplän intensiteetti on silminnähtävästi heikompi kuin 10 vesiliuosten.

Koska SIN l:n muuttuminen inaktiiviseksi metabolii-tiksi on huomattavassa määrin pH:sta riippuvainen, mittaukset tehtiin farmakopean mukaisissa fosfaattipuskureissa, joiden pH oli 6,4, 7,0 ja 7,6. Kussakin tapauksessa 15 verrattiin puskuriliuoksia ja 20 mg CDPSI:tä/ml sisältäviä puskuriliuoksia, kutakin niistä suorittamalla UV-spektro-fotometrinen mittaus sopivan vesi-alkoholilaimennuksen jälkeen ja tutkimalla SIN l:n hajoamistuotteen intensiteettiä ohutkerroskromatografiän avulla.

20 Yhteenveto spektrofotometristen mittausten tulok sista on esitetty taulukossa I.

Taulukko I

Imax-arvon muutos ajan funktiona (1 mg SIN 1: tä/ . 25 ml + 20 mg CDPSI:tä/ml) /Lmax.

pH 6,4 pH 7,0 pH 7,6

3 0 Aika (pv) puskuri +CDPSI puskuri +CDPSI puskuri +CDPSI

• · - - -- -

Valmistuksessa 0 291,5 291,9 290,6 291,0 291,2 290,9 1 289,0 290,5 280,4 285,5 276,4 278,8 35 4 284,9 288,5 - 6 279,8 283,9 277,3 278,8 277,6 277,9 7 104882 UV-huipun aallonpituuden putoaminen noin 13 nm (291 nm:stä 278 nm:iin) vastaa SIN l:n täydellistä hajoamista SIN lC:ksi.

Puskurissa, jonka pH oli 6,4, CDPSI:n ollessa läsnä ' 5 Δλ oli vielä 6 vuorokauden kuluttua 7 nm, kun sitä vastoin vertailu-AX-arvo oli 12 nm. UV-huipun toistettavuus vakio-olosuhteissa oli ± 0,5 nm, joten eroa voidaan pitää merkittävänä. Δλ-ero voitiin mitata vielä 1 vuorokauden säilytyksen jälkeen; sitä vastoin pHrssa 7,6 CDPSIm stabi-10 loiva vaikutus kestää tuskin yhtään pitempään.

SIN l:n ja CDPSIm moolisuhde oli testatuissa liuoksissa noin 1:2, joka on ehdoton minimi kompleksin muodostumiselle liuoksessa. Liuoksessa, joka sisälsi 10-kertaisen ylimäärän (10 mg/ml), joka vastaa moolisuhdetta 15 1:1 kompleksissa, CDPSI:tä stabiloivaa vaikutusta esiintyi tuskin lainkaan. Hajoamisen astetta voitiin seurata myös ohutkerroskromatografiän avulla. Rf-arvolla 0,36 esiintyvän SIN 1C -täplän intensiteetti poikkesi pH 6,4 -puskurissa vielä 1 viikon säilytyksen jälkeen havaittavasti, ja pH 7 20 ja 7,6 -puskureissa esiintyi 1 vuorokauden säilytyksen jälkeen juuri ja juuri havaittavissa oleva ero SIN 1 -täplän intensiteetissä kohdassa Rf = 0,04. pH 7 -puskurissa oli vielä juuri ja juuri havaittavissa muuttumatonta SIN l:tä, mutta pH 7,6 -puskurissa sitä ei kyetty käytännössä . 25 havaitsemaan.

Kompleksin dissosiaatiotasapainoa voidaan muuttaa liuoksessa käyttämällä syklodekstriiniä ylimäärin. Käytettäessä erittäin suurta (1 000- tai 2 000-kertaista) CDPSI-ylimäärää injektoitavissa olevalla koostumuksella on 30 esiintynyt spektrissä ainoastaan ± 1 nm:n Δλ-siirtymä tis- • « • latussa vedessä 1 viikon jälkeen, kun taas vertailuliuok- sessa tapahtui käytännössä hajoaminen.

. Hajoamisasteen kvantitatiivinen mittaus toteutet tiin myös HPLC-menetelmällä.

104882 SIN 1 - SIN 1C -muutoksen HPLC-mittauksen olosuhteet :

Laitteisto: Beckman 114 M Solvent Delivery Module, 165

Variable Wavelength Detector, Hewlwtt Packard 3396 A In-5 tegrator

Kolonni: Ultrasphere ODS analyysikolonni, 4,6 x 150 nra, 5 μτη.

Eluentti: 0,05 M natriumasetaatti (700 ml), asetonitriili (300 ml), tetrahydrofuraani (2 ml) 10 Virtausnopeus: 1,0 ml/min

Paine: 120 baaria

Mittausaallonpituus: 278 nm, 290 nm Näytteen määrä: 20 μΐ Herkkyys: 0,1 AU 15 Paperin nopeus: 0,5 cm/min

Retentioajat: SIN l:n tR = 2,9 min, SIN lC:n tR = 4,2 min Tulokset: 1. Valolta suojattuja liuoksia, jotka sisälsivät 0,5 mg SIN l:tä/ml fosfosfaattipuskurissa, jonka pH oli 20 6,3, säilytettiin huoneenlämpötilassa. Kompleksi muodos tettiin 50 mg:lla CDPSI:tä/ml (100-kertainen ylimäärä). 5 viikon säilytyksen jälkeen tutkittiin HPLC-kromatogram-mit.

, 25 Määritys:

Vaikuttavan aineosan Vertailunäyte* CDPSI-kompleksi pitoisuus: SIN 1 0,016 0,17 SIN 1C 0,23 0,16 30 *Huomautus: Vertailumittaustiedot koskevat ainoastaan tis lattua vettä, ei puskuria • · CDPSI estää 100-kertaisesti ylimäärin (suunnilleen moolisuhteessa 10:1) käytettynä merkittävästi SIN l:n ha- 9 104882 joamista. Saatu tulos on ohutkerroskromatografiakokeen mukainen.

2. Koe tehtiin myös pH 7 -fosfaattipuskurissa valiten pitoisuusolosuhteet samanlaisiksi (0,5 mg SIN l:tä/ml, 5 50 mg CDPSI:tä/ml). Tutkittiin kromatogrammit, jotka saa tiin 4 vuorokauden säilytyksen jälkeen.

Määritys:

Vaikuttavan aineosan Vertailuliuos CDPSI-kompleksi 10 pitoisuus (mg/ml) SIN 1 0,041 0,23 SIN1C 0,125 0,064

Liuos pH säilytyksen jälkeen:

Vertailuliuos: 6,57 15 CDPSI: 6,2

Voidaan katsoa todistetuksi, että käytettynä pitoisuutena CDPSI estää jota pH:ssa 7 SIN l:n muuttumisen SIN lC:ksi, joka on inaktiivinen metaboliitti.

Testattiin myös SIN 1 -injektiokoostumuksen stabii-20 lisuus laimeana vesiliuoksena.

Kylmäkuivatusta SIN 1 -jauheampullista valmistettiin vesiliuos, jonka väkevyys oli 50 μg/ml, jonka jälkeen lisättiin 20 mg CDPSI:tä/ml. Liuoksia säilytettiin huoneenlämpötilassa ja aika ajoin määritettiin hajoamistuot- : : ' 25 teen SIN 1C määrä.

♦ ♦

Tutkittiin kromatogrammit, jotka saatiin 1, 4 ja 11 vuorokauden jälkeen.

Määritys: 30 Aika päiviä Vertailuliuos CDPSI-kompleksi • *;· alku 0,1 0,1 I päivä 0,8 0,6 4 päivää 3,9 0,94 II päivää 5,6 1,8 35 10 104882

Keksinnön mukaisesti valmistettu SIN 1 -syklodeks-triinijohdannainen on stabiili vettä sisältävässä systeemissä jopa fysiologisessa pHrssa, jolloin muutoksen inaktiiviseksi metaboliitiksi SIN 1C estää käytettävä syk-5 lodekstriinijohdannainen.

Yllättäen havaittiin, että syklodekstriinit, erityisesti SIN l:n kanssa kompleksin muodostanut CDPSI, sisältää kompleksin valmistuksen jälkeen huomattavan määrän välituotetta SIN IA. Tutkittiin myös muutosprosessia SIN 10 1 - SIN IA - SIN 1C syklodekstriinien läsnä ollessa 0,02 M

asetaattipuskurissa, jonka pH oli 5,5. Yllättäen p-CD:n vaikutus oli voimakkain; SIN IA:ta esiintyi p-CD:n ollessa läsnä yli 7 kertaa enemmän kuin vertailuliuoksessa. (SIN IA todettiin HPLC:n avulla.) 15 Keksinnön mukaisesti valmistettujen koostumusten biologista vaikutusta in vivo testattaessa havaittiin, että annoksena 1 mg/kg (p.o.) käytettynä SIN 1 ei aiheuta mitään vaikutusta (kardioprotektiivinen vaikutus rotilla on 11 %) ; SIN 1-CDPSI -kompleksin kardioprotektiivinen 20 vaikutus suun kautta samana annoksena vaikuttavaa aineosaa annettuna on 42,2 %.

SIN 1-CDPSI -kompleksin hyvä biologinen teho kar-dioprotektiivisuustestissä suun kautta antamisen jälkeen voidaan katsoa kiinteässä kompleksissa läsnä olevasta SIN U " 25 lA:sta aiheutuvaksi. Muotoa "A", jolla on ratkaiseva mer kitys biologisen vaikutuksen kannalta, ei voi muodostua mahanesteen pH:ssa; in vitro se voidaan muodostaa SIN 1 -aineesta inkuboimalla sitä emäksisessä pHrssa. Sen sijaan liuotettaessa CDPSI-kompleksi tislattuun veteen vesiliuok-30 sesta voidaan todeta huomattava määrä SIN IA:ta.

*;· Vaikuttaa siltä, että syklodekstriinit edistävät muutosta SIN 1 - SIN IA ja samalla kompleksin muodostuminen stabiloi erittäin epästabiilin, hapelle herkän SIN IA:n, mistä on seurauksena SIN lA:n hitaampi muuttuminen 35 SIN lC:ksi. Vaikutuksen tasaisempi alkaminen ja pitempi 11 104882 kesto aiheutuu siten typpioksidin hidastuneesta vapautumisesta kompleksoituneesta SIN l:stä.

Seuraava taulukko osoittaa esimerkin 2 mukaisesti valmistettujen SIN l:n ja eri syklodekstriinien välisten 5 kompleksien SIN IA -pitoisuuden heti valmistuksen jälkeen HPLCrn avulla mitattuna. Vertailukohtana käytettiin koostumukseltaan samanlaista SIN l:n ja laktoosin fysikaalista seosta, joka valmistettiin samalla tavalla.

10 Taulukko (Näyte) SIN IA -pitoisuus (%)

Kompleksi (SIN 1C -ekvivalettina annettuna) SIN 1 - CDPSI 1,27 SIN 1 - β-CO 0,08 15 SIN 1 - DIMEB 0,06 SIN 1 - HPPCD 0,115 SIN 1 - laktoosivertailunäyte

Tulokset ja johtopäätökset

20 SIN 1 -syklodekstriinikompleksien ja normaalin SIN

l:n relaksoivia vaikutuksia tutkittiin pitoisuuksia 1 ja 2 /imol/1 käyttäen. Kaikki neljä kompleksia relaksoivat ka-liumdepolarisoitujen suikaleiden jatkuvan kontraktion maksimi vaikutuksen ollessa 43 - 53 %. SIN 1 (μΜ) oli hiukan - 25 tehokkaampi; sen aikaansaama relaksaatio oli 58 %. Maksi- · · mirelaksaatio ilmeni SIN 1 -komplekseilla 23 32 minuutin kuluttua antamisesta, kun taas SIN l:n tTOX oli 18 minuuttia. Tämä ero oli tilastollisesti merkittävä. Vaikutuksen kesto t/2:na mitattuna oli syklodekstriinikomplekseilla 30 pitempi (62 - 88 min) kuin SIN l:llä (47 min). Tämäkin ero - ·; oli tilastollisesti merkittävä. SIN 1 -syklodekstriini komplekseilla vaikutuksen alku oli siten tasaisempi ja kesto pitempi kuin normaalilla SIN l:llä.

Koska SIN l:n relaksoivan vaikutuksen arvellaan 35 aiheutuvan hapettumishajoamiprosessissa vapautuvasta typ- 12 104882 pioksidista, voidaan tehdä se johtopäätös, että SIN l:n kompleksointi syklodekstriinien kanssa hidastaa tätä hajoamisprosessia. Vaikutuksen tasaisempi alku ja pitempi kesto aiheutuvat siten todennäköisesti typpioksidin hi-5 dastuneesta vapautumisesta SIN 1 -syklodekstriinikomplek-seista.

Edellä esitettyjen seikkojen mukaisesti keksintö koskee inkluusiokomplekseja, joita 3-morfolinosydnoni-imiini tai sen suolat tai avorenkaista muotoa "A" olevat 10 tautomeeriset muodot muodostavat syklodekstriinijohdannaisten kanssa.

Syklodekstriinijohdannaisena inkluusiokompleksit sisältävät edullisesti ionista vesiliukoista polymeeriä (CDPSI, moolimassa < 10 000), heptakis-2,6-dimetyyli-β- 15 syklodekstriiniä (DIMEB), heptakis-2,3,6-tri-0-metyyli-p-syklodekstriiniä (TRIMEB) tao β- tai γ-syklodekstriiniä.

Kiinteän inkluusiokompleksin valmistamiseen voidaan käyttää myös hydroksipropyyli-β-syklodekstriiniä.

Inkluusiokomplekseja valmistetaan antamalla 3-mor-20 folinosydnoni-imiinin tai sen suolojen reagoida liuottavassa väliaineessa syklodekstriinijohdannaisen kanssa ja haluttaessa kompleksi saadaan talteen liuoksesta poistamalla siitä vesi tai jauhamalla 3-morfolinosydnoni-imiini tai sen suola ja syklodekstriinijohdannainen suurta ener-: : 25 giaa hyväksi käyttäen.

Kompleksi voidaan edullisesti eristää liuoksesta kylmäkuivaamalla, sumutuskuivaamalla, matalassa lämpötilassa alipaineessa haihduttamalla tai alipaineessa kuivaamalla .

30 SIN 1 liuotetaan 1-40 mmol:n kanssa CDPSI:tä tai ·· DIMEB:ä 1 - 500 ml:aan tislattua vettä kutakin 1 millimoo- lia kohden vaikuttavaa aineosaa laskettuna, minkä jälkeen tehdään veden poisto edellä mainitulla tavalla. CDPSI-polymeerin moolisuhde lasketaan β^ϋ:η mukaan. Käytettäessä 35 siis polymeeriä, joka sisältää 50 % β-CDiä ja jonka keski- 13 104882 määräinen moolimassa on 3 500, sellaisen kompleksin koostumus, jossa suhde on 1:1, vastaa noin 8 %:a ja sellaisen, jossa moolisuhde on 2:1, noin 4,5 %:a.

Kompleksivuorovaikutusta liuoksessa valaistiin kal-5 vonläpäisykokeella.

Käytettiin Visking-tyyppiä olevaa sellofaanikalvoa (huokosten keskiläpimitta 240 nm). Väkevyydeltään 1 mg/ml oleva SIN l:n vesiliuos laitettiin luovuttajakennoon, kun taas kalvonläpäisytutkimuksessa käytetyn kennolaitteiston 10 vastaanottajaosaan laitettiin tislattua vettä. Liuoksia sekoitettiin magneettisekoittimilla ja pidettiin lämpötilassa 37 ± 1 °C. Sopivin aikavälein otettiin vastaanotta-jaliuoksesta näytteitä ja mitattiin luovuttajakennosta kalvon läpi päässeen SIN l:n pitoisuus UV-spektrofotomet-15 risesti.

Koe toistettiin niin, että luovuttajakenno-osassa oli läsnä eri syklodekstriinejä erilaisina pitoisuuksina.

Siihen, että 50 % SIN l:stä oli diffundoitunut, erilaisten CDPSI-pitoisuuksien läsnä ollessa vaaditut ajat 20 (t50%) on lueteltu taulukossa.

SIN i:n diffuusiopuoliintumisaika CDPSI:n ollessa läsnä t50% (h) pelkkä SIN 1 0,9 : : - 25 +CDPSI 25 mg/ml 3,5 50 mg/ml 5,0

Keksinnön mukaisesti valmistettuja inkluusiokomp-lekseja voidaan käyttää farmaseuttisten koostumusten (sta-30 hiilien ruiskeina, suun kautta tai paikallisesti käytettä-·; viksi tarkoitettujen yhdistelmien) valmistamiseen.

Inkluusiokompleksien annostus voi vaihdella kohteen iän, ruumiinpainon ja tilan, antotien, antokertojen lukumäärän tai vastaavien seikkojen mukaan mutta on 14 104882 alueella 6 - 800 mg/vuorokausi, edullisesti 10 - 400 mg/-vuorokausi.

Hidastettu vaikutus on vallitsevana siinä tapauksessa, että farmaseuttinen koostumus annetaan kerran vuo-5 rokaudessa otettavien tablettien, mikrokapseleiden tai salvojen muodossa, jotka salvat soveltuvat erittäin hyvin käytettäviksi perkutaanisesti. Farmaseuttiset koostumukset valmistetaan tavanomaisella tavalla. Apu- ja kantaja-aineet ovat sellaisia, joita farmaseuttisten valmisteiden 10 alalla tavallisesti käytetään.

Keksinnön yksityiskohtia valaistaan alla eräin esimerkein rajoittamatta keksintöä kuitenkaan niihin.

Esimerkit 1. S IN 1-CDPSI-kompleksin valmistus kylmäkuivaa- 15 maila 15 g (6,6 mmol) CDPSI-polymeeriä liuotetaan 200 ml:aan tislattua vettä, jonka jälkeen liuokseen lisätään 1,1 g (5,3 mmol) SIN 1 -hydrokloridia. Aineet liukenevat lähes välittömästi ja saadaan puhdas kirkas liuos, 20 joka välittömästi jäädytetään ja siitä poistetaan vesi kylmäkuivaamalla pitäen huolta siitä, että aine on kaik kien prosessien aikana mahdollisimman vähän alttiina valon vaikutukselle. Astia on esimerkiksi tarkoituksenmukaista kietoa liuotettaessa mustan paperin sisään. Saatava tuote : .'· 25 on hyvin kevyttä irtonaista jauhetta, ja vaikuttavan aine osan pitoisuus siinä on spektrofotometrisellä menetelmällä määritettynä 6,5 ± 0,5 %, joka vastaa suunnilleen mooli-suhdetta 1:1.

Koe, joka osoittaa kompleksin todella muodostuneen: 30 TG- (termogravimetria), DSC- (differentiaalinen pyyhkäisy-.. kalometria) ja TEA-kokeet (TEA = lämmönkehitysanalyysi) ovat osoittaneet SIN l:n, SIN l:n ja CDPSI :n fysikaalin seoksen sekä SIN 1-CDPSI-kompleksin karakteristiset erot. Vaikuttavasta aineesta SIN 1:stä poistetaan 60 - 110 °C:n 35 lämpötilassa noin 8 % epäorgaanista ainetta, joka on mah- 15 104882 dollisesti vettä. Hajoaminen alkaa ainetta sulatettaessa 170 - 180 °C:n lämpötilassa räjähdysmäisesti, ja systeemistä poistuu hyvin suppealla lämpötila-alueella 70 % lisätystä aineesta.

5 Hajoaminen hidastuu 220 °C:n ja 230 °C:n välillä; lämpötilaan 350 °C mennessä massan häviöksi kirjataan 87 %. Kompleksoitumattoman vaikuttavan aineosan identifiointiin voidaan käyttää 190 °C:n ja 200 °C:n välillä esiintyvää DSC-huippua ja 190 °C:ssa esiintyvää TEA-huip-10 pua, koska se aiheuttaa jopa argonkaasukehässä eksotermisen entalpian muutoksen.

SIN 1:n ja CDPSIrn juuri ennen mittausta valmistetun fysikaalisen seoksen termisiä käyriä voidaan pitää lähtöaineiden summana.

15 Kompleksin käyrät poikkeavat huomattavasti edellä mainituista; SIN l:n hajoamispiikkejä, joihin viitattiin, ei esiinny, mikä merkitsee sitä, että SIN 1 todella muodostaa kompleksin CDPSIrn kanssa.

Röntgendiffraktiodiagrammi 20 SIN 1-CDPSI -kompleksilla tehtyjen röntgendiffrak- tiotutkimusten mukaan se on rakenteeltaan amorfinen. SIN 1:lie karakteristiset heijastuspiikit ovat hävinneet. CDPSIrn amorfinen rakenne on tunnettu. Samalla tavalla, mutta ilman CDPSIrtä, käsitellyn SIN lm kiteisyysaste on • 25 kyllä pienentynyt, mutta rakenteen muuttaminen täysin amorfiseksi ei ole mahdollista pelkästään kylmäkuivauksel-la. Vapaalle (kompleksoitumattomalle) SIN lrlle karakteristisia 20-heijastuspiikkejä, jotka viittaisivat lievästi kiteiseen muotoon, ei ole havaittavissa kompleksin dia-30 grammissa.

2. SIN 1-CDPSI -kompleksin valmistus kylmäkuivaa- malla

15 g (6,6 mmol) CDPSI-polymeeriä (β-CD-pitoisuus 53 %, COO-sisältö 4,2 %) liuotetaan 200 mlraan tislattua 35 vettä. Saatavaan liuokseen liuotetaan 0,7 g (3,3 mmol) SIN

16 104882 1:tä, minkä jälkeen liuos käsitellään esimerkin 1 mukaisesti .

Vaikuttavan aineosan pitoisuus saatavassa tuotteessa on 4,5 ± 0,2 %, joka vastaa suunnilleen moolisuhdetta 5 1:2.

3. Sellaisen SIN 1-CDPSI -kompleksin valmistus, jonka SIN IA -pitoisuus on suuri ja säädelty

Esimerkin 2 mukaisen prosessin jälkeen saatava kiinteä tuote kuivataan toistamiseen kompleksiin sitoutu-10 neen veden poistamiseksi. Tuotetta kuivattiin 60 °C:ssa alipaineessa 3 tuntia (vakiomassaan). Häviö kuivauksessa: 4,5 ± 0,2 %.

SIN IA -pitoisuus kasvoi kuumennuksen aikana noin 5-kertaiseksi, 1,08 %:sta 5,1 %:iin, samalla kun SIN lA:n 15 ja SIN 1C:n suhde muuttui myös edulliseen suuntaan (10: sta 17:ään). Säilytettäessä kuivattuja komplekseja huoneenlämpötilassa valolta suojattuina yli 3 kuukautta näytteen SIN IA:n pitoisuus sekä SIN lA:n ja SIN lC:n suhde siinä eivät muuttuneet käytännöllisesti katsoen lainkaan.

20 Vertailunäytteen (lämmöllä käsittelemättömän näyt teen) SIN IA -pitoisuus kohosi myös säilytyksen aikana 1,08 %:sta 1,9 %:iin, ja samanaikaisesti SIN lA:n ja SIN 1C:n suhde pieneni (muuttui 10:stä 3:een).

SIN 1-CDPSI -kompleksituote, jonka SIN IA -pitoi-T25 suus on suuri ja jolla on säädelty koostumus, on mahdollista valmistaa käsittelemällä kylmäkuivattu SUB 1-CDPSI -kompleksi lyhyesti lämmöllä.

4. SIN 1-DIMEB -kompleksin valmistus 14 g (10,3 mmol) DIMEB:ä (kosteuspitoisuus 2 %) 30 liuotetaan 100 ml:aan tislattua vettä. Liuokseen lisätään .. 1,03 g (5 mmol) SIN l:tä samalla sekoittaen. Saatava kir kas liuos käsitellään esimerkin 1 mukaisesti valolta suojattuna. Tuote on irtonaista valkeaa jauhetta, ja aktiivisen aineosan pitoisuus siinä on 6,5 ± 0,2 %, joka vastaa 35 suunnilleen SIN l:n ja DIMEB:n moolisuhdetta 1:2.

17 104882 5. Perkutaaniseen käyttöön tarkoitetun salvan valmistus, joka sisältää 10 mg SIN l:tä ja H g salvaa 151 mg esimerkin 3 mukaisesti valmistettua SIN 1-DIMEB -kompleksia (vaikuttavan aineosan pitoisuus 6,5 %) 5 liuotetaan 20 ml:aan tislattua vettä. Valolta suojattuun liuokseen lisätään 50 mg KLUCHEL-HF:ää (hydroksipropyyli-selluloosaa) samalla voimakkaasti sekoittaen. Näin saadaan vaikeasti sekoitettavissa oleva viskoosi liuos, jonka annetaan seistä huoneenlämpötilassa 1 vuorokausi. Näin muo-10 dostuu läpikuultava hyytelö, josta 2 g sisältää 10 mg SIN 1: tä.

6. SIN 1 -tabletti, joka sisältää 2 mg vaikuttavaa aineosaa tablettia kohden 40 mg SIN 1-CDPSI -kompleksia, joka sisältää 2,5 % vaikut-15 tavaa aineosaa, 40 mg maissitärkkelystä, 128 mg maitosokeria ja 2 mg magnesiumstearaattia.

Tabletin kokonaismassa: 250 mg 20 Tabletit valmistetaan sinänsä tunnetulla menetel mällä, suoraan puristamalla.

• «

Claims (4)

1. Menetelmä 3-morfolinosydnoni-imiinin tai sen suolan tai tautomeerin ja syklodekstriinin tai syklodeks- 5 triinijohdannaisen inkluusiokompleksin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) 3-morfolinosydnoni-imiini tai sen suola saatetaan reagoimaan syklodekstriinin tai syklodekstriinijohdannaisen kanssa vesipitoisessa väliaineessa, ja kompleksi 10 eristetään liuoksesta dehydratoimalla, tai b) 3-morfolinosydnoni-imiini tai sen suola ja syklodekstriini tai syklodekstriinijohdannainen jauhetaan suurta energiaa käyttäen.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 15 tunnettu siitä, että syklodekstriini on ioninen vesiliukoinen syklodekstriinipolymeeri (moolimassa < 10 000), hydroksipropyyli-P-syklodekstriini, heptakis- 2,6-0-dimetyyli-P-syklodekstriini, heptakis-2,3,6-tri-0-metyyli-β-syklodekstriini tai β- tai γ-syklodekstriini. 20

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että inkluusiokompleksi eristetään liuoksesta kylmäkuivaamalla, suihkukuivaamalla, matalassa lämpötilassa tyhjössä väkevöimällä tai tyhjökuivaamal-la. ; , 25

4. Menetelmä farmaseuttisen koostumuksen valmista- miseksi, tunnettu siitä, että patenttivaatimuksen 1 mukaisella menetelmällä valmistettu 3-morfolinosydnoni-imiinin tai sen suolan tai tautomeerin ja syklodekstriinin tai syklodekstriinijohdannaisen inkluusiokompleksi sekoi- 30 tetaan tavanomaisten farmaseuttisten kantaja- ja muiden .. apuaineiden kanssa. 19 104882