SK278809B6 - Inklúzny komplex 3-morfolinosydnonimínu alebo jeho - Google Patents

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka inklúznych komplexov 3-morfolinosydnonimínu (SIN-1) alebo jeho solí, alebo jeho tautomémej formy s otvoreným reťazcom A (SIN-1A: N-nitrózo-N-morfolino-aminoacetonitril), vytvorených s derivátmi cyklodextrínu, spôsobu ich prípravy a farmaceutických prostriedkov, ktoré ich obsahujú ako účinnú látku. Forma s otvoreným kruhom A má významnú úlohu, jej vytváranie je dominantné na uvoľnenie NO (nitricoxid) radikálu.

Doterajší stav techniky

Molsidomín (N-ctoxykarbony 1-3 -morfolinosydnonimin, SIN-10) je dobre známe antianginálne činidlo. V terapii sa v širokej miere používa na ošetrovanie alebo prevenciu angíny v prípadoch srdečnej nedostatočnosti, v stave srdečného infarktu. Terapeutické pôsobenie Molsidomínu sa môže prirátať hlavne jeho prvému aktívnemu metabolitu 3-morfolinosydnonimínu, ktorý vzniká najmä v pečeni enzymatickou hydrolýzou a následným pôsobením dekarboxylázového enzýmu. Preto má SIN-1 terapeutické výhody v porovnaní s Molsidomínom, pretože je jeho pôsobenie rýchlejšie a oveľa presnejšie.

Jeho nevýhodou je však, že sa môže podávať jedine formou intravenózneho zavádzania.

Sydnonimínové deriváty sú mimoriadne citlivé na svetlo. Rýchlo sa rozkladajú pôsobením ožiarenia umelým alebo prírodným svetlom i za krátky čas. V priebehu fotolýzy vznikajú farmaceutický neúčinné, ale škodlivé rozkladné produkty, napríklad morfolín, amoniak, etylalkohol, oxid uhličitý. Zámerom niektorých patentových spisov je fotostabilizácia derivátov sydnonimínu pridávaním rôznych prísad (európsky patentový spis číslo 206 219 a patentový spis NSR číslo 3 346 638).

Citlivosti na svetlo sa môže obstojne predchádzať v suchom stave a v prípade roztokov vhodným skladovaním (v dobre uzatvorenej tmavej fľaši obalenej čiernym papierom).

Všeobecne sa uvádza, že deriváty sydnonimínu sú citlivé na extrémne hodnoty pH a že sa rýchlo rozkladajú. Konečným produktom chemického a metabolického rozkladu Molsidomínu je SIN 1C (kyanometylénaminomorfolín), čo je neúčinný metabolit. Pri použití SIN 1 ako lieku sa uplatňujú problémy s jeho chemickou stálosťou. Látka sa rýchlo rozkladá v neutrálnom vodnom roztoku, je citlivá k hodnote pH a je stála iba v silne kyslom prostredí (hodnota pH l až 2). Nad hodnotu pH 2 sa rýchlo rozkladá na neúčinný metabolit SIN 1 C, čo je spojené so stratou terapeutickej účinnosti. Transformácia

SIN 1 -> SIN 1C je výsledkom zásadito katalyzovaného hydrolytického rozkladu. Proces je prísne závislý od hodnoty pH, napríklad k dosiahnutiu rozkladu 10 % (SIN 1C) dochádza za 53 sekúnd pri hodnote pH 8, za 15 hodín pri hodnote pH 6 a za 67 dní pri hodnote pH 4 a za 13 rokov pri hodnote pH 1 až 2 (Chem. Pharm. Bull. 19/6, 1079, 1971).

SIN 1 sa tiež rozkladá v riedenom vodnom roztoku uloženom za difúzneho osvetlenia už za 1 až 3 dni. Rozklad sa môže priamo sledovať pomocou UV spektra. Hodnota absorpčného maxima sa posúva postupne z 291 ± 1 nm na 278 ± 1, zatiaľ čo hodnota absorpcie kon tinuálne narastá, čo je v zhode s údajmi v literatúre: λ max. hodnota SIN 1 je 291 ± 1 nm, koeficient špecifickej absorpcie A^l%j^e 520, zatiaľ čo pre SIN 1C λ max je 278 ± 1 nm a koeficient molámej absorpcie ε = 17 000 A^1%= 1 220. 1 cm

SIN 1 podávaný orálne je neúčinný, pri hodnote pH 1 až 2 je SIN 1 pravdepodobne v silne ionizovanom stave, priaznivom pre chemickú stálosť, ktorý' však nie je priaznivý na resorpciu v žalúdku a v črevnom trakte. Pri postupe zo žalúdku v zásaditej šom prostredí so zreteľom na uvedené, dochádza rýchlo k premene na neúčinný SIN 1C metabolit. Nízka podávaná dávka SIN 1 je priaznivá na túto transformáciu, pretože hydrolytický rozklad pri nízkej koncentrácii (μ/ml rádu) je výraznejší.

SIN 1 je na trhu vo forme svojej hydrochloridovej soli, na intravenózne podávanie je vo forme lyofilizovaného prášku v ampulke obsahujúcej 2 mg účinnej látky a 40 mg sorbitu. Obsah ampulky sa potom rozpustí pred použitím v 1 ml destilovanej vody.

Úlohou vynálezu je príprava takého nového prostriedku, pri ktorom by sa zabránilo transformácii

SIN 1 —> SIN 1C v neutrálnom vodnom roztoku a zostávala by teda zachovaná jeho hodnota pri fyziologickej hodnote pH.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je teda inklúzny komplex 3-morfolinosydnonimínu alebo jeho solí alebo, tautomérneho izoméru s derivátom cyklodextrínu.

Je známe, že komplexácia s cyklodextrínom je vhodná na stabilizáciu rôznych činidiel proti pôsobeniu tepla, svetla a zásaditej alebo kyslej hydrolýzy (Szejtli: Cyclodextrin Technology - Technológie cyklodextrínu - Kluwer, Dordrecht, 1988, str. 211 až 217).

Pri výskumných prácach sa zistilo, že sú cyklodextríny účinné na stabilizáciu zriedených vodných roztokov, získaných zo SIN 1 vstrekovateľných kompozícií.

Vzájomné pôsobenie medzi SIN 1 a cyklodextrínmi sa dokladá nasledujúcimi skúškami.

Zo vstrekovateľného SIN 1 sa pripraví vodný roztok s koncentráciou približne 10 pg/ml a v tomto roztoku sa za miešania rozpustí 20 až 40 mg cyklodextrínu alebo derivátu cyklodextrínu.

Roztoky sa skladujú pri teplote miestnosti (20 až 22 °C) v difúznom svetle a za určité obdobie (denne sa zaznamenáva UV spektrum roztokov v intervale 220 až 250 nm). Na porovnanie sa používa iba vodný roztok a 0,05 N roztok chlorovodíkovej kyseliny. Stanovuje sa hodnota pH cyklodextrínových roztokov so zistením, že cyklodextrín a jeho prípadne používané deriváty nemenia výrazne hodnotu pH vody. Hodnoty pH použitých najkoncentrovanejších cyklodextrínových roztokov sa odlišujú iba o ± 0,2 jednotky od hodnoty pH destilovanej vody. Zistilo sa, že posunu UV spektra sa nápadne bráni CDPSI, čo je iónovo rozpustný β-cyklodextrínový polymér (so strednou molekulovou hmotnosťou 3 500, s obsahom β-CD 54 %, s obsahom COO' 4,2 %) (maďarský patentový spis číslo 191101). K po sunu spektra nedochádza ani po dvoch týždňoch skladovania, zatiaľ čo vodný roztok, podobne skladovaný, sa prakticky v priebehu dvoch až troch dní transformuje na SIN 1C.

Zabránenie rozkladu DIMEB (2,6-di-O-metyl-C-cyklodextrín) je výrazné; v prítomnosti 20 mg/ml DIMEB vykazuje spektrum roztoku posun v rámci 1 nm pri šesťdennom skladovaní. Zistilo sa tiež stabilizačné pôsobenie TRIMEB (2,3,6-tri-O-metyl-fi-cyklodextrín) γ-CD, β-CD a hydroxypropyl-B-CD. Sled účinnosti, odvodený od UV spektra, je nasledujúci

CDPSI > DIMEB > TRIMEB > BCD > HP β CD

Z pôsobenia na hydrolytický rozklad SIN 1 rôznych cyklodextrínov možno usudzovať na výborné charakteristiky CDPSI.

Pri uvedených skúškach cyklodextrínov sa ich deriváty pridávajú v extrémne veľkom množstve (10 pg/1) SIN 1 na približne 20 mg/ml cyklodextrínu).

Skúšobný rad sa opakuje tak, že sa CDPSI používa iba v desaťnásobnom a 20-násobnom nadbytku, čo zodpovedá hmotnostnému pomeru SIN 1 ; CDPSI v komplexe obsahujúcom 10 %, prípadne 5 % účinnej látky. Nízka terapeutická dávka SIN 1 umožňuje i podávanie komplexu obsahujúceho menej ako 5 % účinnej látky, čo zodpovedá molámemu pomeru približne 1 : 2 SIN 1 : CDPSI. V takom odbore koncentrácie spektrometrické meranie nedáva opisujúci obraz, a preto sa stupeň rozkladu stanovuje chromatografiou v tenkej vrstve nasledujúcim spôsobom:

Z roztokov sa po kvapkách vnesie 10 pl na kremelinovú doštičku 60 F₂₅4 (10 x 10 cm, Merck). Používa sa zmes cyklohexán : etylacetát v pomere 1:1. Trubica sa ponechá 30 minút na nasýtenie. Na doštičku sa tiež po kvapkách nanesie referenčný roztok SIN 1C. Doštička s kvapkami sa vysuší prúdom studeného vzduchu pri ochrane pred svetlom a ponechá sa príjmu až do výšky 15 cm. V priebehu tejto operácie sa rúrka udržiava na tmavom mieste. Po odparení rozpúšťadla sa doštička hodnotí vizuálne v UV svetle pri 254 nm. SIN 1 sám má hodnotu 0,05 R_fa SIN 1C hodnotu R_f0,36. Vo všetkých prípadoch je zistené, že v prípade roztokov obsahujúcich CDPSI je intenzita škvrny SIN 1C viditeľne menšia ako v prípade vodných roztokov.

Pretože je transformácia SIN 1 na neúčinný metabolit značne závislá od hodnoty pH, vykonáva sa merame vo fosfátovom pufre s hodnotou pH 6,4; 7,0 a 7,6 v súhlase s liekopisom. Vo všetkých prípadoch sa porovnávajú roztoky obsahujúce pufer a pufrované roztoky obsahujúce 20 mg/ml CDPSI, pričom sa vždy vykonávajú UV spektrofotometrické merania po vhodnom vodno-alkoholickom zriedení a skúša sa intenzita rozkladu SIN 1 produktu chromatografíou v tenkej vrstve.

Výsledky spektrofotometrických meraní sú uvedené v tabuľke I.

Tabuľka I

Zmena hodnoty λ max v závislosti od času (1 mg/ml S1N 1 + 20 mg/ml CDPSI)

Čas (dm) pri príprave	Ämax
pH 6,4 pufer + CDPSI	pH 7,0 pufer + CDPSI	pH 7,6 pufer + CDPSI
0	291,5	291,9	290,6	291,0	291,2 290,9
1	289,0	290,5	280,4	285,5	276,4 278,8
4	284,9	288,5			-
6	279,8	283,9	277,3	278,8	277,6 277,9

Pokles maxima UV vlnovej dĺžky s približne 13 nm (z 291 nm na 278 nm) znamená totálny rozklad SIN 1 na SIN 1C.

Pri pufri s hodnotou pH 6,4 v prítomnosti CDPSI i po šiestich dňoch je Δλ 7 nm na rozdiel od kontrolnej vzorky, kedy je hodnota Δλ 12 nm. Reprodukovateľnosť UV maxima za daných podmienok je ± 0,5 nm, takže je možné pokladať rozdiel za významný. Po jednom dni skladovania je rozdiel Δλ stále merateľný, naopak pri hodnote pH 7,6 stabilizačné pôsobenie CDPSI pretrváva vzácnejšie.

V prípade skúšobných roztokov molárny pomer SIN 1 : CDPSI je približne 1 : 2, čo je nutné minimum na komplexáciu v roztoku. Stabilizačný efekt v roztoku s 10-násobným nadbytkom (10 mg/ml) zodpovedajúci molárnemu pomeru komplexu 1 : 1, CDPSI pretrváva vzácnejšie. Stupeň rozkladu sa môže sledovať chromatografíou v tenkej vrstve. Škvrna SIN 1 je intenzívna pri hodnote R_f 0,36 v pH 6,4 pufri a značne sa odlišuje už po jednom týždni skladovania, v pufri pH 7 a 7,6 jeden deň skladovania vykazuje zreteľný rozdiel intenzity škvrny SIN 1 pri hodnote Rf0,04. V pufri pH 7 je stále zreteľná SIN 1, nezmenená, v pufri 7,6 je prakticky nezistiteľná.

V roztoku sa rovnováha disociácie komplexu môže posunúť pri použití nadbytku cyklodextrínu. Pri použití extrémne vysokého nadbytku CDPSI (1 000, 2 000-násobku) vykazuje vstrekovateľný roztok iba spektrálny posun Δλ ± 1 nm v destilovanej vode po jednom týždni, zatiaľ čo porovnávací roztok vykazuje prakticky úplný rozklad.

Kvantitatívne meranie stupňa rozkladu sa -vykonáva HPLC chromatografíou.

Podmienky merania HPLC na oddelenie SIN 1 - SIN 1C.

Zariadenie: Bechman 114 M rozpúšťadlo uvoľňujúce modul, 165 detektor variabilnej vlnovej dĺžky, Hewlett - Packard 3396 A integrátor

Stĺpec:	ultragulôčkový ODS t x 150 nm, 5 pm	inalytický stĺpec 4,6
Eluant:	0,05 M octan sodný	700 ml
	acetonitril	300 ml
	tetrahydroíurán	2 ml
	rýchlosť toku	1,0 ml/min
	tlak	12 MPa
	meraná vlnová dĺžka	278, 290 nm
	objem vzorky	20 pl
	citlivosť	0,1 AU
	rýchlosť	0,5 cm/min.
	retenčná doba	tRSIN 1:2,9 min. tR SIN 1C: 4,2 min.

Výsledky:

L Roztoky 0,5 mg/ml SIN 1, pripravené vo fosfátovom pufri s hodnotou pH 6,3, chránené pred svetlom, sa skladujú pri teplote miestnosti. Komplex sa vytvorí s 50 mg/ml (100-násobné množstvo) CDPSI. Po skladovaní po 5 týždňoch sa hodnotia chromatogramy HPLC.

Hodnotenie

Účinná látka obsah: (mg/ml)	Kontrola	CDPSI komplex
SIN 1	0,016	0,17
SIN 1C	0,23	0,16

* Poznámka: hodnoty kontrolného merania sa vzťahujú na destilovanú vodu, nie na pufer.

SK 278809 Β6

CDPSI, použitý v 100-násobnom hmotnostnom nadbytku (v molámom pomere približne 10:1) bráni významnejšiemu rozkladu SIN 1. Získané výsledky sú v súlade so skúškou chromatografie v tenkej vrstve.

2. Skúška sa vykonáva pri hodnote pH fosfátového pufra 7 s voľbou podobných koncentračných pomerov (0,5 mg/ml SIN 1, 50 mg/ml CDPSI).

Hodnotia sa chromatogramy, získané po 4 dennom skladovaní.

Hodnotenie

Účinná látka obsah: (mg/ml)	Kontrola’	CDPSI komplex
SIN 1	0,041	0,230
SIN 1C	0,125	0,064

Hodnota pH roztokov po skladovaní: kontrola 6,57 CDPSI 6,20.

Je možné pokladať za doložené, že koncentrácia CDPSI bráni i pri hodnote pH 7 prechodu SIN 1 na SIN 1C, ktorý je neúčinným metabolitom.

Ďalej sa skúša stabilita S1N 1 na vstrekovanie v zriedených vodných roztokoch.

Z lyofilizovaného SIN 1 prášku v ampulke sa pripraví vodný roztok s koncentráciou 50 pg/ml a potom sa pridá 20 mg/ml CDPSI. Roztoky sa skladujú pri teplote miestnosti a občas sa stanovuje množstvo rozkladného produktu SIN IC.

Hodnotia sa chromatogramy získané po jednom, štyroch ajedenástich dňoch.

Hodnotenie SIN 1C obsah pg/ml

čas (dni)	Kontrola	CDPSI komplex
východiskový	0,1	o,l
1	0,8	0,6
4	3,9	0,94
11	5,6	1,8

Predmetom vynálezu je teda SIN 1 dextrínový derivát a spôsob jeho prípravy, ktorý je stály vo vodnom systéme i pri fyziologických hodnotách pH a v ktorom sa bráni premene na SIN 1C neúčinný metabolit použitím derivátu cyklodextrínu.

S prekvapením sa totiž zistilo, že cyklodextríny, najmä CDPSI skomplexované so SIN 1, obsahujú značné množstvo medziproduktu SIN 1A po príprave komplexu. Transformačný proces

SIN 1 -> SIN 1A -» SIN 1C v prítomnosti cyklodextrínov bol rovnako skúšaný v 0,02 M acetátovom pufri pri hodnote pH 5,5. Prekvapujúco vplyv β-CD je oveľa výraznejší, viac ako 7-krát viacej SIN 1A bolo nájdené v prítomnosti β-CD ako v kontrolnej vzorke (SIN 1A stanovený chromatografiou HPLC).

Pri skúšaní biologického pôsobenia prostriedkov podľa vynálezu in vivo bolo zistené, že až do nedávna SIN 1, podávaný perorálne v dávke 1 mg/kg nevykazoval účinnosť (kardioprotektívna účinnosť na krysy je 11 %), kardioprotektívne pôsobenie SIN 1 - CDPSI pri perorálnom podaní rovnakého množstva účinnej látky je 42,2 %.

Dobrá biologická účinnosť komplexu SIN 1 - CDPSI v kardioprotektívnych skúškach po orálnom podaní sa môže pripočítať SIN 1A obsiahnutému v pevnom kom plexe. Forma A”, ktorá má kľúčový význam na biologické pôsobenie, sa nemôže vytvoriť za podmienok pH v prostredí žalúdka a môže sa odvodiť in vitro zo substancie SIN 1 inkubáciou za podmienok alkalickej hodnoty pH. Zatiaľ rozpúšťanie CDPSI komplexu v destilovanej vode môže doložiť značné množstvo SIN 1A vo vodnom roztoku.

Zdá sa, že prechod SIN 1 - SIN 1A je promótovaný cyklodextrínmi, pričom sa zároveň veľmi nestály a na kyslík citlivý SIN 1A stabilizuje komplexáciou, čo vedie k pomalej šej transformácii

SIN 1A—>SIN 1C.

Preto je hladšie a dlhšie pôsobenie podmienené spomaleným uvoľňovaním oxidu dusičného z komplexovaného SIN 1.

V nasledujúcej tabuľke je ukázaný obsah SIN 1A komplexov SIN 1 s rôznymi cyklodextrínmi, pripravených spôsobom podľa príkladu 2, merané priamo po príprave chromatografiou HPLC. Fyzikálna zmes SIN 1 toho istého zloženia sa pripraví rovnakým spôsobom s laktózou, použitou na porovnávacie účely.

Tabuľka (Vzorka) SIN 1A obsah %

Komplex (dané v SIN 1C ekvivalentu)

SIN 1 - CDPSI1,27

SIN 1 -β-CD0,08

SIN 1 -DIMEB0,06

SIN 1 - HP β CD0,115

SIN 1 - laktóza, porovnávacia vzorka

Výsledky a záver

Skúmalo sa uvoľňovacie pôsobenie komplexov SIN 1 - cyklodextrín a normálneho SIN 1 v koncentrácii 1 alebo 2 μΜ. Všetky štyri komplexy relaxujú podporovanou kontrakciou draslíkom depolarizovaných prúžkov s maximálnym efektom 43 % až 53 %. SIN 1 (1 μΜ) je trochu účinnejší s relaxáciou 58 %.

K maximálnemu uvoľňovaniu (relaxácii) v prípade SIN 1 komplexov dochádza 23 minút až 32 minút po podaní, zatiaľ čo T/max SIN 1 je 18 minút. Tento rozdiel je štatisticky významný. Čas pôsobenia, vyjadrený ako T/2, je dlhší v prípade cyklodextrínového komplexu (62 minút až 88 minút) ako v prípade SIN 1 (47 minút). Tento rozdiel je tiež štatisticky významný. Preto komplexy SIN 1 - cyklodextrín vykazujú hladší začiatok a dlhší čas pôsobenia ako normálny SIN L

Pretože relaxačný efekt SIN 1 je spôsobený uvoľňovaním oxidu dusičného v dôsledku oxidačného rozkladného procesu, je možný predpoklad, že komplexácia SIN 1 s cyklodextrínmi spomaľuje tento rozkladný proces. Preto je hladší začiatok a dlhší čas pôsobenia pravdepodobne spôsobený spomaleným uvoľňovaním oxidu dusičného z komplexu SIN 1 a cyklodextrínu.

So zreteľom na uvedené sa vynález týka inklúznych komplexov 3-morfolínosydnonimínu alebo jeho sol, alebo jeho formy tautomémych izomérov s otvoreným kruhom A, vytvorených s derivátmi cyklodextrínu.

Ako cyklodextrínový derivát obsahuje inklúzny komplex podľa vynálezu výhodne iónový, vo vode rozpustný cyklodextrínový polymér (CDPSI) (molekulová hmotnosť menšia ako 10 000), heptakis-2,6-dimetyl-B-cyklodextrín (Dimeb), heptakis-2,3,6-tri-O-metyl-B-cyklodextrín (Trimeb) a B-cyklodextrín a γ-cyklodextrín.

Na prípravu pevného inklúzneho komplexu sa tiež môže použiť hydropropyl-B-cvklodextrín.

Inklúzny komplex podľa vynálezu sa pripravuje reakciou 3-morfolínosydnonimínu alebo jeho solí v rozpúšťadle s derivátom cyklodextrínu a komplex sa prípadne získa z roztoku dehydratáciou alebo sa komplex získa vysokoenergetickým mletím 3-morfolínosydnonimínu alebo jeho solí a derivátu cyklodextrínu.

Výhodne sa komplex môže izolovať z roztoku lyofilizáciou, rozprašovacím sušením, odparením vo vákuu pri nízkej teplote a vákuovým sušením.

SIN 1 sa rozpúšťa s 1 až 40 mmól CDPS1 alebo Dimeb v 1 až 500 ml destilovanej vody, počítané na 1 mmól účinnej látky a dehydratácia sa vykonáva ako je uvedené. Molámy pomer CDPSI polyméru sa vypočítava so zreteľom na β-CD. Použitie polyméru s približným obsahom 50 % B-CD a so strednou molekulovou hmotnosťou 3 500 vedie ku komplexu so zložením 1 : 1, čo zodpovedá približne 8 % a molárny pomer 2 : 1 zodpovedá 4,5 %.

Vzájomné pôsobenie komplexu v roztoku objasňuje skúška priepustnosti membránou.

Použijú sa celofánové membrány typu Visking (stredný priemer pórov 2,4 nm). Vodný roztok SIN 1 s koncentráciou 1 mg/ml sa vnesie do donorovej bunky, zatiaľ čo destilovaná voda sa vnesie do receptorovej komory zariadenia s priepustnou membránou. Roztoky sa miešajú magnetickým miešadlom a udržiavajú sa na teplote 37 ± 1 °C. Vo vhodných časových intervaloch sa odoberajú vzorky receptorového roztoku a meria sa koncentrácia SIN 1, ktorý prešiel z donorovej bunky, UV spektrometriou.

Skúška sa opakuje v prítomnosti rôznych cyklodextrínov pri rôznych koncentráciách v donorovej bunke. Čas, potrebný na difúziu 50 % SIN 1 (T₅₀ %) v prítomnosti CDPSI pri rôznej koncentrácii je uvedený v nasledujúcej tabuľke:

Difúzny polčas SIN 1 v prítomnosti CDPSI T₅₀»_/o/hodiny SIN 1 samotný 0,9 + CDPSI 25 mg/ml 3,5 mg/ml 5,0

Inklúzne komplexy, pripravené spôsobom podľa vynálezu, sa môžu používať na prípravu farmaceutických prostriedkov, zmesí na vstrekovanie, orálne alebo miestne podanie.

Dávky inkluzívneho komplexu podľa vynálezu sa môžu meniť podľa veku, telesnej hmotnosti a stavu ošetrovaného jedinca, podľa spôsobu podávania, podľa počtu podaní alebo podľa podobných faktorov, spravidla sa však podáva 6 až 50 mg podľa telesnej hmotnosti, výhodne 10 až 20 mg podľa telesnej hmotnosti za deň.

Predĺžené pôsobenie prevláda obzvlášť v prípade podávania farmaceutického prostriedku vo forme jednej tabletky na deň, mikropuzdier a mastí vhodných na perkutánne podanie. Farmaceutické prostriedky sa pripravujú známym spôsobom.

Používajú sa pomocné prísady a nosiče bežné pre farmaceutické prostriedky.

Vynález bližšie objasňujú nasledujúce príklady praktického vyhotovenia, ktoré však vynález nijako neobmedzujú.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Príprava komplexu SIN 1 - CDPSI lyofilizáciou

Rozpustí sa 15 g (6,6 mmól) CDPSI polyméru v

200 ml destilovanej vody a potom sa do roztoku pridá 1,1 g (5,3 mmól) SIN 1-hCl. Materiály sa rozpustia takmer okamžite za získania čistého, číreho roztoku, ktorý sa hneď zmrazí a dehydratuje lyofilizáciou, pričom sa dbá, aby v celom procese prípravy' bola látka vystavená čo najmenej pôsobeniu svetla.

Napríklad sa nádoby, kde sa rozpustenie vykonáva, obalia čiernym papierom. Získaný produkt je veľmi ľahký, je to voľný prášok, obsah účinnej látky, stanovený spektrofotometrickým spôsobom, je 6,5 ± 0,5 %, čo zodpovedá molámemu pomeru 1:1.

Vykonáva sa skúška na doloženie, že došlo k vytvoreniu komplexu: termogravimetria (TG), diferenciálna riadkovacia kolorimetria (DRC) a tepelná evolučná analýza (thermal evolution analysis - TEA) dokladajú charakteristické rozdiely medzi SIN 1 fyzikálnou zmesou SIN 1-CDPSI a komplexom SIN 1-CDPSI. Z účinnej látky SIN 1 sa pri teplote 60 až 110 °C odstráni približne 8 % anorganickej látky, pravdepodobne vody. K rozkladu pri tavení látky dochádza pri teplote 170 až 180 °C (začiatok rozkladu) s explozívnou silou a vo veľmi tesnom teplotnom intervale sa 70 % zavedeného činidla odstráni zo systému.

Pri teplote 220 až 230 °C rozklad pomaly klesá až do teploty 350 °C, kedy sa pozoruje 87 % strata hmoty. Na identifikáciu neskomplexovanej účinnej látky sa môže použiť DSC maximum medzi 190 a 200 °C a 190 °C TEA maximum spôsobuje i v argónovom prostredí exotermnú zmenu entalpie.

Tepelné krivky fyzikálnej zmesi SIN 1-CDPSI, pripravené bezprostredne pred zmiešaním, sa môžu pričítať východiskovým látkam.

Krivky komplexu od nich vykazujú významný rozdiel, rozkladný maximum SIN 1 chýba, čo znamená, že SIN 1 vytvoril inklúzny komplex s CDPSI.

Obrazec, získaný práškovou difrakčnou metódou podľa Bragga

Podľa difrakčných skúšok rôntgenovými lúčmi je štruktúra SIN 1-CDPSI amorfná. Charakteristické reflekčné maximá SIN 1 zmiznú. Amorfná štruktúra CDPSI je známa. Kryštalizačný stupeň SIN 1 spracovaný podobne, ale bez CDPSI, síce klesne, ale prechod na totálne amorfnú štruktúru nie je možný, iba lyofilizáciou. Dve<£reflexné maximá naznačujúce mierne kryštalickú formu, charakteristickú na voľný (neskomplexovaný) SIN 1, nie sú na diagrame komplexu.

Príklad 2

Príprava komplexu SIN 1 - CDPSI lyofilizáciou

Rozpustí sa 15 g CDPSI polyméru (6,6 mmól) (obsah B - CD 53 %, obsah COO' 4,2 %) v 200 ml vody destilovanej. V získanom roztoku sa rozpustí 0,7 g (3,3 mmól) SIN 1 a potom sa roztok spracuje spôsobom podľa príkladu 1.

Obsah účinnej látky v získanom produkte je 4,5 ± ± 0,2 %, čo zodpovedá molámemu pomeru 1 : 2.

Príklad 3

Príprava komplexu SIN 1 - CDPSI s vysokým a riadeným obsahom SIN 1A

Spôsobom podľa príkladu 2 sa získa pevný produkt, ktorý sa nechá sublimovať na druhé sušenie pre odstránenie komplexne viazanej vody. Produkt sa suší pri teplote 60 °C vo vákuu počas troch hodín, do konštantnej hmotnosti. Strata sušením je 4,5 ± 0,2 %.

Obsah SIN 1A sa zvýši približne päťkrát v priebehu

SK 278809 Β6 sušenia, zvýši sa z 1,08 % na 5,1 %, pričom sa tiež priaznivo mení pomer SIN 1A/SIN 1C; zmena pomeru je z 10 na 17. Pri skladovaní vysušených komplexov pri teplote miestnosti za ochrany pred svetlom počas viac ako tri mesiace sa obsah SIN 1A a pomer SIN 1A/SIN 1C prakticky nemení.

V prípade kontrolnej (tepelne nespracovanej - nesušenej) vzorky sa pri skladovaní obsah SIN 1A tiež zvyšuje, ale z 1,08 % na 1,9 %, pričom zároveň pomer SIN 1A/SIN 1C klesá (zmena z 10 na 3).

Príprava komplexného produktu SIN 1 - CDPSI s vysokým obsahom SIN 1A a s riadeným zložením je možná krátkodobým tepelným spracovaním lyofilizovaného komplexu SIN 1 - CDPSI.

Príklad 4

Príprava komplexu SIN 1 Dimeb

Rozpustí sa 14 g Dimeb (10,3 mmól) (obsah vlhkosti 2 %) v 100 ml destilovanej vody. Za miešania sa do roztoku pridá 1,03 g (5 mmól) SIN 1. Získaný čin’ roztok sa spracováva spôsobom podľa príkladu 1 za chránenia pred svetlom. Produktom je voľný biely prášok s obsahom účinnej látky 6,5 ± 0,2 %, molámy pomer zodpovedá približne 1 : 2 SIN 1 : Dimeb.

Príklad 5

Príprava masti na perkutánne podanie s obsahom SIN 1 10 mg a obsahom masti 1/2 g

Z komplexu SIN 1 - Dimeb, pripraveného spôsobom podľa príkladu 3 (obsah účinnej látky 6,5 %) sa rozpustí 151 mg v 20 ml destilovanej vody. Do roztoku, chráneného pred svetlom, sa pridá za intenzívneho miešania 50 mg hydroxypropylcelulózy (KLUCHEL-HF). Tak sa získa viskózny roztok, veľmi ťažko miešateľný, ktorý sa nechá stáť pri teplote miestnosti počas jedného dňa. Vytvorí sa priesvitný gél, ktorého 2 g obsahujú 10 mg SIN 1.

Príklad 6

Tabletka obsahujúca 2 mg účinnej látky SIN 1

Tabletky sa pripravujú známym spôsobom s použitím nasledujúcich zložiek:

mg komplexu SIN 1 - CDPSI, obsah účinnej látky 2,5 % 40 mg kukuričného škrobu 128 mg mliečneho cukru mg stearátu horečnatého Celková hmotnosť tabletky je 250 mg.

Priemyselná využiteľnosť

Inklúzny komplex 3-morfolinosydnonimínu alebo jeho solí, alebo jeho tautomérneho izoméru so zníženou citlivosťou na svetlo a vhodný na prípravu farmaceutických prostriedkov.

Claims (17)

1. Inklúzny komplex 3-morfolinosydnonimínu alebo jeho soli s derivátom cyklodextrínu.

2. Inklúzny komplex 3-morfolinosydnonimínu alebo jeho soli, podľa nároku 1 vytvorený s iónovo vo vode rozpustným polymérom cyklodextrínu (CDPSI) s molekulovou hmotnosťou menšou ako 10 000.

3. Inklúzny komplex 3-morfolinosydnonimínu alebo jeho soli podľa nároku 1 vytvorený s hydroxypropyl-B-cyklodextrínom.

4. Inklúzny komplex 3-morfolinosydnonimínu alebo jeho soli, podľa nároku 1 s heptakis-2,6-dimetyl-B-cyklodextrínom.

5. Inklúzny komplex 3-morfolinosydnonimínu ale-

5 bo jeho soli, podľa nároku 1 s heptakis-2,3,6-tri-O-metyl-B-cyklodextrínom.

6. Inklúzny komplex 3-morfolinosydnonimínu alebo jeho soli, podľa nároku 1 vytvorený s B-cyklodextrínom alebo s y-cyklodextrínom.

10

7. Inklúzny komplex 3-morfolinosydnonimínového tautomérneho izoméru podľa nároku 1, vytvorený s derivátom cyklodextrínu výhodne s iónovým vo vode rozpustným polymérom cyklodextrínu CDPSI, s molekulovou hmotnosťou menšou ako 10 000, alebo s hydroxyp15 ropyl-P-cyklodextrínom, s heptakis-2,6-dimetyl-P-cyklodextrínom, s heptakis-2.3.6-tri-metyl-|l-cyklodextrínom. s β-cyklodextrínom, alebo s γ-cyklodextrínom.

8. Spôsob prípravy inklúzneho komplexu 3-morfolinosydnonimínu s derivátom cyklodextrínu podľa nároku laž 6, vyznačujúci sa tým, že sa nechá reagovať 3-morfolinosydnonimín alebo jeho soľ vo vodnom prostredí s teplotou 0 až 90 °C s derivátom cyklodextrínu a komplex sa izoluje z roztoku odstránením vody.

25

9. Spôsob prípravy inklúzneho komplexu 3-morfolinosydnonimínového tautomérneho izoméru, vytvoreného s derivátom cyklodextrínu podľa nároku 7, v y značujúci sa tým, že sa necháva reagovať 3-morfolinosydnonimín alebo jeho soľ vo vodnom prostredí s teplotou 0 až 90 °C s derivátom cyklodextrínu a komplex sa izoluje z roztoku odstránením vody.

10. Spôsob prípravy inklúzneho komplexu 3-morfolinosydnonimínu, alebo jeho soli, alebo tautomérneho izoméru vytvoreného s derivátom cyklodextrínu podľa

35 nároku 1 až 7, vyznačujúci sa tým, že sa vysoko energeticky melie 3-morfolinosydnonimín alebo jeho soľ, alebo tautomér a derivát cyklodextrínu.

11. Spôsob podľa nároku 8, vyznačujúci sa t ý m , že derivátom cyklodextrínu je iónový, vo vode rozpustný polymér cyklodextrínu s molekulovou hmotnosťou nižšou ako 10 000, hydropropyl-P-cyklodextrín, heptakis-2,6-O-dimetyl-B-cyklodextrín, heptakis-2,3,6-tri-O-metyl-B-cyklodextrín alebo fi-cyklodex-

4, trín, alebo γ-cyklodcxtrín v molámom pomere 1 : 1 až 1 :40.

12. Spôsob podľa nároku 8, vyznačujúci sa tým, že sa inklúzny komplex 3-morfolinosydnonimínu alebo jeho soli, vytvorený s derivátom cyklo-

50 dextrínom, izoluje lyofilizáciou, rozprašovacím sušením, vákuovou koncentráciou pri nízkej teplote a vákuovým sušením.

13. Spôsob podľa nároku 8a 10, vyznačujúci sa tým, že sa inklúzny komplex 3-morfo-

55 linosydnonimínového tautomérneho izoméru, vytvorený s derivátom cyklodextrínu, izoluje lyofilizáciou, rozprašovacím sušením, vákuovou koncentráciou pri nízkej teplote vákuovým sušením, alebo vysoko energetickým mletím.

00

14. Farmaceutický prostriedok na ošetrovanie angíny pectoris v prípade srdečnej nedostatočnosti a v stave srdečného infarktu, vyznačujúci sa tým, že obsahuje ako účinnú látku inklúzny komplex 3-morfolinosydnonimínu alebo jeho soli s derivátom 05 cyklodextrínu podľa nároku 1, 2, 3, 4, 5, 6 a 8 a farmaceutický vhodné nosiče a pomocné prísady.

15. Farmaceutický prostriedok na ošetrovanie angíny pectoris v prípade srdečnej nedostatočnosti a v stave srdečného infarktu, vyznačujúci sa tým, že obsahuje ako účinnú látku inklúzny komplex 3-morfolinosydnonimínového taotomémeho izoméru s derivátom cyklodextrínu podľa nároku 7 a farmaceutický vhodné nosiče a pomocné prísady.

16. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 15, vyznačujúci sa tým, že obsahuje ako derivát cyklodextrínu iónový, vo vode rozpustný polymér s molekulovou hmotnosťou menšou ako 10 000, hydroxypropyl-B-cyklodextrín, heptakis-2,6-0-dimetyl-B-cyklodextrín, heptakis-2,3,6-tri-0-metyl-fi-cyklodextrín, β-cyklodextrín alebo γ-cyklodextrín.

17. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 14, vyznačujúci sa tým, že obsahuje ako derivát cyklodextrínu iónový, vo vode rozpustný polymér s molekulovou hmotnosťou menšou ako 10 000, hydroxypropyl-fl-cyklodextrin, heptakis-2,6-O-dimetyl-fi-cyklodextrín, heptakis-2,3,6-tri-O-metyl-B-cyklodextrín, β-cyklodextrín alebo γ-cyklodextrín.