ES2562215T3

ES2562215T3 - Inhibidores de la tirosina quinasa de Bruton

Info

Publication number: ES2562215T3
Application number: ES08744513.6T
Authority: ES
Inventors: Lee Honigberg; Erik Verner; Joseph J. Buggy; David Loury; Wei Chen
Original assignee: Pharmacyclics LLC
Current assignee: Pharmacyclics LLC
Priority date: 2007-03-28
Filing date: 2008-03-27
Publication date: 2016-03-03
Anticipated expiration: 2028-03-27
Also published as: IL266741A; SG10201508035TA; IL257017A; CA2874756C; EP2139487B1; BRPI0810086B1; AU2008232762B2; MX2019005150A; EP2560007A1; EP2139487A4; IL201176A0; IL295053A; BRPI0810086A2; EP2548558A1; EP2954900A1; EA200901313A1; EP2561875A3; CN101674834B; IL239155A0; JP5347202B2

Abstract

Un compuesto de Fórmula (I),**Fórmula** en la que: La es O; Ar es fenilo; Y es alquilenheterocicloalquileno; Z es C(>=O), NHC(>=O), NRaC(>=O), o NRaS(>=O)x, 10 en el que x es 1 ó 2, y Ra es H, alquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido; y: R6 y R8 son H; y R7 es H, alquiloC1-C4 sustituido o no sustituido, heteroalquiloC1-C4 sustituido o no sustituido, alquilaminoalquiloC1-C8, hidroxialquilaminoalquiloC1-C8, alcoxialquilaminoalquiloC1-C8, cicloalquiloC3-C6 sustituido o no sustituido, alquilC1- C8cicloalquiloC3-C6 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, alquilC1-C4(arilo), alquilC1-C4(heteroarilo), heterocicloalquiloC2-C8sustituido o no sustituido, alquiléteresC1-C8, alquilamidasC1-C8, o alquilC1-C4(heterocicloalquiloC2-C8); o una sal farmacéuticamente aceptable de éste.

Description

imagen1

imagen2

imagen3

imagen4

imagen5

imagen6

5

10

15

20

25

30

imagen7

en el que indica el punto de unión entre el inhibidor y la tirosina quinasa. En una realización adicional, el inhibidor está unido covalentemente a un residuo de cisteína en la tirosina quinasa.

En un aspecto adicional, en la presente memoria se proporciona un compuesto según se reivindica para uso en un método para tratar una enfermedad autoinmune mediante la administración a un sujeto que lo necesita de una composición que contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto que tiene la estructura de cualquiera de Fórmula (A1-A6), Fórmula (B1-B6), Fórmula (C1-C6), Fórmula (D1-D6), Fórmula (I), o Fórmula (VII). En una realización, la enfermedad autoinmune es artritis. En otra realización, la enfermedad autoinmune es lupus. En algunas realizaciones, la enfermedad autoinmune es enfermedad inflamatoria del intestino (incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa), artritis reumatoide, artritis psoriásica, osteoartritis, enfermedad de Still, artritis juvenil, lupus, diabetes, miastenia grave, tiroiditis de Hashimoto, tiroiditis de Ord, enfermedad de Graves, síndrome de Sjögren, esclerosis múltiple, síndrome de Guillain-Barré, encefalomielitis aguda diseminada, enfermedad de Addison, síndrome de opsoclonus-mioclonus, espondilitis anquilosante, síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, anemia aplásica, hepatitis autoinmune, enfermedad celíaca, síndrome de Goodpasture, púrpura trombocitopénica idiopática, neuritis óptica, escleroderma, cirrosis biliar primaria, síndrome de Reiter, arteritis de Takayasu, arteritis temporal, anemia hemolítica caliente autoinmune, granulomatosis de Wegener, psoriasis, alopecia universalis, enfermedad de Behçet, fatiga crónica, disautonomía, endometriosis, cistitis intersticial, neuromiotonía, escleroderma, o vulvodinia.

En un aspecto adicional, en la presente memoria se proporciona un compuesto según se reivindica para uso en un método para tratar una afección o enfermedad heteroinmune. En algunas realizaciones, la afección o enfermedad heteroinmune es enfermedad de injerto frente a huésped, trasplante, transfusión, anafilaxis, alergia, hipersensibilidad tipo I, conjuntivitis alérgica, rinitis alérgica, o dermatitis atópica.

En un aspecto adicional, en la presente memoria se proporciona un compuesto según se reivindica para uso en un método para tratar una enfermedad inflamatoria. En algunas realizaciones, la enfermedad inflamatoria es asma, enfermedad inflamatoria del intestino (incluyendo enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa), apendicitis, blefaritis, bronquiolitis, bronquitis, bursitis, cervicitis, colangitis, colecistitis, colitis, conjuntivitis, cistitis, dacrioadenitis, dermatitis, dermatomiositis, encefalitis, endocarditis, endometritis, enteritis, enterocolitis, epicondilitis, epididimitis, fasciitis, fibrositis, gastritis, gastroenteritis, hepatitis, hidradenitis supurativa, laringitis, mastitis, meningitis, mielitis miocarditis, miositis, nefritis, ooforitis, orquitis, osteitis, otitis, pancreatitis, parotitis, pericarditis, peritonitis, faringitis, pleuritis, flebitis, neumonitis, neumonía, proctitis, prostatitis, pielonefritis, rinitis, salpingitis, sinusitis, estomatitis, sinovitis, tendonitis, amigdalitis, uveitis, vaginitis, vasculitis, o vulvitis.

En otro aspecto más, en la presente memoria se proporciona un compuesto según se reivindica para uso en un método para tratar un cáncer. En una realización, el cáncer es un trastorno proliferativo de células B, por ejemplo,

8

5

15

25

35

45

55

linfoma de células B grandes difuso, linfoma folicular, linfoma linfocítico crónico, leucemia linfocítica crónica, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmacítico/macroglobulinemia de Waldenström, linfoma de la zona esplénica marginal, mieloma de células plasmáticas, plasmacitoma, linfoma de células B de la zona extranodal marginal, linfoma de células B de la zona nodal marginal, linfoma de células del manto, linfoma de células B grandes del mediastino (tímico), linfoma de células B grandes intravascular, linfoma de efusión primaria, linfoma/leucemia de Burkitt, o granulomatosis linfomatoide. En algunas realizaciones, en las que el sujeto padece un cáncer, se administra un agente anti-cáncer al sujeto además de uno de los compuestos mencionados anteriormente. En una realización, el agente anti-cáncer es un inhibidor de la señalización de la proteína quinasa activada por mitógeno, por ejemplo, U0126, PD98059, PD184352, PD0325901, ARRY-142886, SB239063, SP600125, BAY 43-9006, wortmanina, o LY294002.

En otro aspecto, en la presente memoria se proporciona un compuesto según se reivindica para uso en un método para tratar un trastorno tromboembólico. En algunas realizaciones, el trastorno tromboembólico es infarto de miocardio, angina de pecho, reoclusión después de angioplastia, restenosis después de angioplastia, reoclusión después de bypass aortocoronario, restenosis después de bypass aortocoronario, ictus, isquemia transitoria, un trastorno oclusivo arterial periférico, embolismo pulmonar, o trombosis venosa profunda.

En otro aspecto, en la presente memoria se proporciona un compuesto según se reivindica para uso en un método para tratar una mastocitosis.

En otro aspecto más, en la presente memoria se proporciona un compuesto según se reivindica para uso en un método para tratar una osteoporosis o trastornos de resorción ósea.

En un aspecto adicional, en la presente memoria se proporciona un compuesto según se reivindica para uso en un método para tratar lupus. En una realización, el compuesto forma un enlace covalente con la forma activada de la tirosina quinasa de Bruton. En realizaciones adicionales o alternativas, el compuesto inhibe irreversiblemente la tirosina quinasa de Bruton a la que se une covalentemente. En una realización adicional o alternativa, el compuesto forma un enlace covalente con un residuo de cisteína en la tirosina quinasa de Bruton.

En un aspecto adicional, en la presente memoria se proporciona un compuesto según se reivindica para uso en un método para tratar una afección o enfermedad heteroinmune. En una realización, el compuesto forma un enlace covalente con la forma activada de la tirosina quinasa de Bruton. En realizaciones adicionales o alternativas, el compuesto inhibe irreversiblemente la tirosina quinasa de Bruton a la que se une covalentemente. En una realización adicional o alternativa, el compuesto forma un enlace covalente con un residuo de cisteína en la tirosina quinasa de Bruton.

En un aspecto adicional, en la presente memoria se proporciona un compuesto según se reivindica para uso en un método para tratar una enfermedad inflamatoria. En una realización, el compuesto forma un enlace covalente con la forma activada de la tirosina quinasa de Bruton. En realizaciones adicionales o alternativas, el compuesto inhibe irreversiblemente la tirosina quinasa de Bruton al que se une covalentemente. En una realización adicional o alternativa, el compuesto forma un enlace covalente con un residuo de cisteína en la tirosina quinasa de Bruton.

En un aspecto adicional, en la presente memoria se proporciona un compuesto según se reivindica para uso en un método para tratar linfoma de células B grandes difuso, linfoma folicular o leucemia linfocítica crónica. En una realización, el compuesto forma un enlace covalente con la forma activada de la tirosina quinasa de Bruton. En realizaciones adicionales o alternativas, el compuesto inhibe irreversiblemente la tirosina quinasa de Bruton a la que se une covalentemente. En una realización adicional o alternativa, el compuesto forma a enlace covalente con un residuo de cisteína en la tirosina quinasa de Bruton.

En otro aspecto más, en la presente memoria se proporciona un compuesto según se reivindica para uso en un método para tratar mastocitosis mediante la administración a un sujeto que lo necesita de una composición que contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que forma un enlace covalente con una cadena lateral de cisteína de una tirosina quinasa de Bruton u homólogo de tirosina de Bruton. En una realización, el compuesto forma un enlace covalente con la forma activada de la tirosina quinasa de Bruton. En realizaciones adicionales o alternativas, el compuesto inhibe irreversiblemente la tirosina quinasa de Bruton a la que se une covalentemente. En una realización adicional o alternativa, el compuesto forma un enlace covalente con un residuo de cisteína en la tirosina quinasa de Bruton.

En otro aspecto, en la presente memoria se proporciona un compuesto según se reivindica para uso en un método para tratar una osteoporosis o trastornos de resorción ósea mediante la administración a un sujeto que lo necesita de una composición que contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que forma un enlace covalente con una cadena lateral de cisteína de una tirosina quinasa de Bruton u homólogo de tirosina de Bruton. En una realización, el compuesto forma un enlace covalente con la forma activada de la tirosina quinasa de Bruton. En realizaciones adicionales o alternativas, el compuesto inhibe irreversiblemente la tirosina quinasa de Bruton a la que se une covalentemente. En una realización adicional o alternativa, el compuesto forma un enlace covalente con un residuo de cisteína en la tirosina quinasa de Bruton.

9

imagen8

imagen9

imagen10

imagen11

imagen12

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

R6 es H, alquiloC1-C4 sustituido o no sustituido, heteroalquiloC1-C4 sustituido o no sustituido, alcoxialquiloC1-C6, alquilaminoalquiloC1-C8, hidroxialquilaminoalquiloC1-C8, alcoxialquilaminoalquiloC1-C8, cicloalquiloC3-C6 sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquiloC2-C8 sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, alquilC1-C4(arilo), alquilC1-C4(heteroarilo), alquilC1-C4(cicloalquiloC3-C8), o alquilC1-C4(heterocicloalquiloC2-C8); y metabolitos farmacéuticamente activos, o solvatos farmacéuticamente aceptables, sales farmacéuticamente aceptables, o profármacos farmacéuticamente aceptables de éstos.

En un aspecto adicional, en la presente memoria se proporciona un compuesto para uso en un método para tratar un trastorno proliferativo de células B o un trastorno proliferativo de mastocitos mediante la administración a un sujeto que lo necesita de una composición de inhibidor de proteína quinasa de ensayo que contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que forma un enlace covalente (incluyendo un enlace covalente irreversible y/o selectivo) con Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk. En una realización, el compuesto forma un enlace covalente con la forma activada de Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk. En realizaciones adicionales o alternativas, el compuesto inhibe irreversiblemente Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk al que se une covalentemente. En una realización adicional o alternativa, el compuesto forma un enlace covalente (incluyendo un enlace covalente irreversible y/o selectivo) con un residuo de cisteína en Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk.

En aspecto adicional, en la presente memoria se proporciona un compuesto para uso en un método para tratar artritis reumatoide mediante la administración a un sujeto que lo necesita de una composición de inhibidor de proteína quinasa de ensayo que contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que forma un enlace covalente (incluyendo un enlace covalente irreversible y/o selectivo) con Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk. En una realización, el compuesto forma un enlace covalente con la forma activada de Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk. En realizaciones adicionales o alternativas, el compuesto inhibe irreversiblemente Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk al que se une covalentemente. En una realización adicional o alternativa, el compuesto forma un enlace covalente (incluyendo un enlace covalente irreversible y/o selectivo) con un residuo de cisteína en Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk.

En un aspecto adicional, en la presente memoria se proporciona un compuesto para uso en un método para tratar una enfermedad caracterizada por células B hiperactivas o mastocitos hiperactivos o tanto células B hiperactivas como mastocitos hiperactivos mediante la administración a un sujeto que lo necesita de una composición de inhibidor de proteína quinasa de ensayo que contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que forma un enlace covalente (incluyendo un enlace covalente irreversible y/o selectivo) con Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk. En una realización, el compuesto forma un enlace covalente con la forma activada de Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk. En realizaciones adicionales o alternativas, el compuesto inhibe irreversiblemente Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk al que se une covalentemente. En una realización adicional o alternativa, el compuesto forma un enlace covalente (incluyendo un enlace covalente irreversible y/o selectivo) con un residuo de cisteína en Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk.

En cualquiera de los aspectos mencionados anteriormente son realizaciones que comprenden administraciones únicas de la cantidad efectiva de la formulación farmacéutica, incluyendo realizaciones adicionales en las que (i) las formulaciones farmacéuticas se administran una vez; (ii) las formulaciones farmacéuticas se administran al mamífero una vez al día; (iii) las formulaciones farmacéuticas se administran al mamífero múltiples veces a lo largo de un día;

(iv): constantemente; o (v) continuamente.

En la presente memoria también se describe un método para identificar un inhibidor irreversible de una quinasa seleccionada de Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk que comprende:

(1): poner en contacto una multiplicidad de quinasas seleccionadas de Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk con un compuesto que comprende un resto aceptor de Michael;

(2): poner en contacto al menos una molécula no quinasa que tiene al menos un grupo SH accesible con el compuesto que comprende un resto aceptor de Michael; y

(3): determinar la unión covalente del compuesto que comprende un aceptor de Michael con la multiplicidad de quinasas y la al menos una molécula no quinasa; y

repetir las etapas (1), (2), y (3) para al menos un otro compuesto que comprende un resto aceptor de Michael.

En la presente memoria se describe además método para identificar un inhibidor irreversible de una quinasa seleccionada de Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk que comprende:

(1) poner en contacto una multiplicidad de quinasas seleccionadas de Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk con un compuesto que comprende un resto aceptor de Michael;

15

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

(3): determinar la unión covalente del compuesto que comprende el aceptor de Michael con la multiplicidad de quinasas y la al menos una molécula no quinasa; y

repetir las etapas (1), (2), y (3) para al menos un otro compuesto que comprende un resto aceptor de Michael; y

(4): comparar la unión covalente del compuesto que comprende un aceptor de Michael con la multiplicidad de quinasas y la al menos una molécula no quinasa; y

repetir las etapas (1), (2), (3) y (4) para al menos un otro compuesto que comprende un resto aceptor de Michael.

En una realización la al menos una molécula no quinasa que tiene al menos un grupo SH accesible incluye glutatión y/o hemoglobina. En otra realización el inhibidor irreversible deseado es selectivo para una quinasa particular respecto a otras quinasas, glutatión y hemoglobina.

En algunas realizaciones, los métodos, ensayos y sistemas para identificar un inhibidor irreversible de una quinasa comprenden poner en contacto cada quinasa con una Sonda de Actividad. En realizaciones adicionales, los métodos, ensayos y sistemas para identificar un inhibidor irreversible de una quinasa comprenden además un panel de quinasas que comprende al menos dos quinasas seleccionadas de Btk, un homólogo de Btk, y un homólogo de cisteína de la quinasa Btk. En realizaciones adicionales, el panel de quinasas comprende al menos tres de dichas quinasas, al menos cuatro de dichas quinasas, al menos cinco de dichas quinasas, al menos seis de dichas quinasas, al menos siete de dichas quinasas, al menos ocho de dichas quinasas, al menos nueve de dichas quinasas, o al menos diez de dichas quinasas.

En una realización las etapas (1) y (2) del método para identificar un inhibidor irreversible de una quinasa seleccionada de Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk se lleva a cabo in vivo. En otra realización la etapa (3) del método para identificar un inhibidor irreversible de una quinasa seleccionada de Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk se lleva a cabo en parte usando una Sonda de Actividad.

En una realización, la puesta en contacto de una multiplicidad de quinasas seleccionadas de Btk, un homólogo de Btk, o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk con un compuesto que comprende un resto aceptor de Michael se lleva a cabo in vivo. En otra realización la puesta en contacto de al menos una molécula no quinasa que tiene al menos un grupo SH accesible con el compuesto que comprende un resto aceptor de Michael se lleva a cabo in vivo. En una realización adicional la determinación de la unión covalente del compuesto que comprende un aceptor de Michael con la multiplicidad de quinasas y la al menos una molécula no quinasa se lleva a cabo en parte usando una Sonda de Actividad. En una realización adicional la etapa de determinación usa espectrometría de masa. En más realizaciones adicionales la etapa de determinación usa fluorescencia.

En realizaciones adicionales de métodos y ensayos para identificar un inhibidor irreversible de una quinasa, incluyendo una proteína quinasa, incluyendo una tirosina quinasa, un panel de quinasas se pone en contacto con al menos un inhibidor irreversible. En una realización adicional, el panel de quinasas también se pone en contacto con una Sonda de Actividad. En una realización adicional, la unión de un inhibidor irreversible a una quinasa se determina a partir de la unión de la Sonda de Actividad a la quinasa. En una realización adicional, la unión de la Sonda de Actividad a una quinasa se determina usando una técnica de fluorescencia. En métodos y ensayos adicionales o alternativos, la Sonda de Actividad es compatible con citometría de flujo. En realizaciones adicionales, la unión del inhibidor irreversible a una quinasa se compara con la unión del inhibidor irreversible al menos a una otra quinasa. En cualquiera de las realizaciones mencionadas anteriormente, el panel de quinasas se selecciona de Btk, homólogos de Btk, y homólogos de cisteína de la quinasa Btk. En una realización adicional o alternativa, la unión de un inhibidor irreversible a una quinasa se determina por espectrometría de masa.

En la presente memoria también se describen sondas de actividad de tirosina quinasa de Bruton (Btk), homólogos de Btk, y homólogos de cisteína de la quinasa Btk (colectivamente "Sondas de Actividad"). Se describen además Sondas de Actividad que incluyen un inhibidor irreversible de Btk, un homólogo de Btk y/o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk; un resto conector; y un resto informador. Se describen además Sondas de Actividad que incluyen un resto aceptor de adición de Michael en la estructura de la Sonda de Actividad. Se describen además Sondas de Actividad que forman un enlace covalente con un residuo de cisteína en Btk, un homólogo de Btk y/o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk. En la presente memoria también se describen Sondas de Actividad que forman un enlace no covalente con un residuo de cisteína en Btk, un homólogo de Btk y/o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk. En la presente memoria también se describen métodos para sintetizar dichas Sondas de Actividad, métodos para usar dichas Sondas de Actividad en el estudio de la actividad de Btk, un homólogo de Btk y/o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk, métodos para usar dichas Sondas de Actividad en el estudio de inhibidores (incluyendo el desarrollo de nuevos inhibidores) de Btk, un homólogo de Btk y/o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk, y métodos para usar dichas Sondas de Actividad en el estudio de la farmacodinámica de inhibidores de Btk, un homólogo de Btk y/o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk.

16

imagen13

5

10

15

20

25

30

35

inhibidor potencial de Btk, homólogo de Btk y/o homólogo de cisteína de la quinasa Btk al mamífero, administrar la Sonda de Actividad descrita en la presente memoria al mamífero o a células aisladas del mamífero; medir la actividad del resto informador de la Sonda de Actividad, y comparar la actividad del resto informador con un estándar.

En otro aspecto es un compuesto para uso en un método para evaluar la farmacodinámica de un inhibidor de Btk, homólogo de Btk y/o homólogo de cisteína de la quinasa Btk en un mamífero, que comprende administrar un inhibidor de Btk, homólogo de Btk y/o homólogo de cisteína de la quinasa Btk al mamífero, administrar la Sonda de Actividad presentada en la presente memoria al mamífero o a células aisladas del mamífero, y medir la actividad del resto informador de la Sonda de Actividad a diferentes puntos de tiempo después de la administración del inhibidor.

En un aspecto adicional es un compuesto para uso en un método para marcar in vitro Btk, un homólogo de Btk y/o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk que comprende poner en contacto Btk, homólogo de Btk y/o homólogo de cisteína de la quinasa Btk activa con la Sonda de Actividad descrita en la presente memoria. En una realización es un método para marcar in vitro Btk, un homólogo de Btk y/o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk en el que la etapa de puesta en contacto comprende incubar la Btk, homólogo de Btk y/o homólogo de cisteína de la quinasa Btk activa con la Sonda de Actividad presentada en la presente memoria.

En otro aspecto es un compuesto para uso en un método para marcar in vitro Btk, un homólogo de Btk y/o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk que comprende poner en contacto células o tejidos que expresan Btk, homólogo de Btk y/o homólogo de cisteína de la quinasa Btk con una Sonda de Actividad descrita la presente memoria.

En un aspecto es un compuesto para uso en un método para detectar una Btk, homólogo de Btk y/o homólogo de cisteína de la quinasa Btk marcado que comprende separar proteínas, las proteínas que comprenden Btk, un homólogo de Btk y/o un homólogo de cisteína de la quinasa Btk marcadas por una Sonda de Actividad descrita en la presente memoria, por electroforesis y detectar la Sonda de Actividad por fluorescencia.

En realizaciones adicionales el inhibidor irreversible de una quinasa comprende además un resto de unión a sitio activo. En más realizaciones adicionales el inhibidor irreversible de una quinasa comprende además un resto conector que une el resto aceptor de Michael con el resto de unión activo.

En una realización el inhibidor irreversible de una quinasa tiene la estructura de Fórmula (VII):

imagen14

en la que:

imagen15

en la que es un resto que se une al sitio activo de una quinasa, incluyendo una tirosina quinasa. incluyendo además un homólogo de cisteína de la quinasa Btk;

Y es un grupo sustituido opcionalmente seleccionado de entre alquileno, heteroalquileno, arileno, heteroarileno, heterocicloalquileno, cicloalquileno, alquilenarileno, alquilenheteroarileno, alquilencicloalquileno, y alquilenheterocicloalquileno;

Z es C(=O), OC(=O), NHC(=O), NCH3C(=O), C(=S), S(=O)x, OS(=O)x, NHS(=O)x, en el que x es 1 ó 2;

18

imagen16

imagen17

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

también abarca la aparición del término "alquilo" en el que no se designa ningún intervalo numérico). El grupo alquilo de los compuestos descritos en la presente memoria puede designarse como "alquiloC1-C4" o designaciones similares. Sólo como ejemplo, "alquiloC1-C4" indica que hay uno a cuatro átomos de carbono en la cadena alquilo, es decir, la cadena alquilo se selecciona de entre metilo, etilo, propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, sec-butilo, y tbutilo. Así, alquilo C1-C4 incluye alquilo C1-C2 y alquilo C1-C3. Los grupos alquilo están sustituidos o no sustituidos opcionalmente. Los grupos alquilo típicos incluyen, pero no están limitados de ninguna manera a, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, butilo terciario, pentilo, hexilo, etenilo, propenilo, butenilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, y semejantes.

El término "alquenilo" se refiere a un tipo de grupo alquilo en el que los dos primeros átomos del grupo alquilo forman un doble enlace que no es parte de un grupo aromático. Esto es, un grupo alquenilo empieza con los átomos -C(R)=C(R)-R, en los que R se refiere a las partes remanentes del grupo alquenilo, que son bien el mismo o diferente. El resto alquenilo está opcionalmente ramificado, de cadena lineal, o cíclico (en cuyo caso, también es conocido como un grupo "cicloalquenilo"). Dependiendo de la estructura, un grupo alquenilo incluye un monoradical

o un diradical (es decir, un grupo alquenileno). Los grupos alquenilo están sustituidos opcionalmente. Los ejemplos no limitativos de un grupo alquenilo incluyen CH=CH2, -C(CH3)=CH2, -CH=CHCH3, -C(CH3)=CHCH3. Los grupos alquenileno incluyen, pero no están limitados a, -CH=CH-, -C(CH3)=CH-, -CH=CHCH2-, -CH=CHCH2CH2-y -C(CH3)=CHCH2-. Los grupos alquenilo tienen opcionalmente 2 a 10 carbonos, y si es un "alquenilo inferior" tiene 2 a 6 átomos de carbono.

El término "alquinilo" se refiere a un tipo de grupo alquilo en el que los dos primeros átomos del grupo alquilo forman un triple enlace. Esto es, un grupo alquinilo empieza con los átomos -C≡C-R, en los que R se refiere a las partes remanentes del grupo alquinilo, que es bien el mismo o diferente. La parte "R" del resto alquinilo puede ser ramificada, de cadena lineal, o cíclica. Dependiendo de la estructura, un grupo alquinilo incluye un monoradical o un diradical (es decir, un grupo alquinileno). Los grupos alquinilo están sustituidos opcionalmente. Los ejemplos no limitativos de un grupo alquinilo incluyen, pero no están limitados a, -C≡CH, -C≡CCH3, -C≡CCH2CH3, -C≡C-, y -C≡CCH2-. Los grupos alquinilo tienen opcionalmente 2 a 10 carbonos, y si es un "alquinilo inferior" tiene 2 a 6 átomos de carbono.

Un grupo "alcoxi" se refiere a un grupo (alquilo)O-, en el que alquilo es como se define en la presente memoria.

"Hidroxialquilo" se refiere a un radical alquilo, como se define en la presente memoria, sustituido con al menos un grupo hidroxi. Los ejemplos no limitativos de un hidroxialquilo incluyen, pero no están limitados a, hidroximetilo, 2hidroxietilo, 2-hidroxipropilo, 3-hidroxipropilo, 1-(hidroximetil)-2-metilpropilo, 2-hidroxibutilo, 3-hidroxibutilo, 4hidroxibutilo, 2,3-dihidroxipropilo, 1-(hidroximetil)-2-hidroxietilo, 2,3-dihidroxibutilo, 3,4-dihidroxibutilo y 2(hidroximetil)-3-hidroxipropilo.

"Alcoxialquilo" se refiere a un radical alquilo, como se define en la presente memoria, sustituido con un grupo alcoxi, como se define en la presente memoria.

El término "alquilamina" se refiere a el grupo -N(alquil)xHy, en el que x e y se seleccionan de entre x=1, y=1 y x=2, y=0. Cuando x=2, los grupos alquilo, tomados conjuntamente con el átomo de N al que están unidos, pueden formar opcionalmente un sistema de anillo cíclico.

"Alquilaminoalquilo" se refiere a un radical alquilo, como se define en la presente memoria, sustituido con una alquilamina, como se define en la presente memoria.

"Hidroxialquilaminoalquilo" se refiere a un radical alquilo, como se define en la presente memoria, sustituido con una alquilamina, y alquilhidroxi, como se define en la presente memoria.

"Alcoxialquilaminoalquilo" se refiere a un radical alquilo, como se define en la presente memoria, sustituido con una alquilamina y sustituido con un alquilalcoxi, como se define en la presente memoria.

Una "amida" es un resto químico con la fórmula -C(O)NHR o -NHC(O)R, en las que R se selecciona de entre alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo (unido a través de un carbono del anillo) y heteroalicíclico (unido a través de un carbono del anillo). En algunas realizaciones, un resto amida forma una unión entre un aminoácido o una molécula de péptido y un compuesto descrito en la presente memoria, formando de esta manera un profármaco. Cualquier amina, o cadena lateral carboxi en los compuestos descritos en la presente memoria puede amidificarse. Los procedimientos y grupos específicos para preparar dichas amidas se encuentran en fuentes tales como Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Síntesis, 3ª Ed., John Wiley & Sons, Nueva York, NY, 1999, que se incorpora en la presente memoria por referencia para esta descripción.

El término "éster" se refiere a un resto químico con la fórmula -COOR, en la que R se selecciona de entre alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo (unido a través de un carbono del anillo) y heteroalicíclico (unido a través de un carbono del anillo). Cualquier cadena lateral hidroxi, o carboxilo en los compuestos descritos en la presente memoria puede esterificarse. Los procedimientos y grupos específicos para preparar dichos ésteres se encuentran en fuentes tales

21

5

10

15

20

25

30

35

40

como Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Síntesis, 3ª Ed., John Wiley & Sons, Nueva York, NY, 1999, que se incorpora en la presente memoria por referencia para esta descripción.

Tal y como se usa en la presente memoria, el término "anillo" se refiere a cualquier estructura covalentemente cerrada. Los anillos incluyen, por ejemplo, carbociclos (por ejemplo, arilos y cicloalquilos), heterociclos (por ejemplo, heteroarilos y heterociclos no aromáticos), aromáticos (por ejemplo, arilos y heteroarilos), y no aromáticos (por ejemplo, cicloalquilos y heterociclos no aromáticos). Los anillos pueden estar sustituidos opcionalmente. Los anillos pueden ser monocíclicos o policíclicos.

Tal y como se usa en la presente memoria, el término "sistema de anillo" se refiere a uno, o más de un anillo.

El término "anillo con miembros" puede abarcar cualquier estructura cíclica. El término "con miembros" se pretende que indique el número de átomos del esqueleto que constituyen el anillo. Así, por ejemplo, ciclohexilo, piridina, pirano y tiopirano son anillos con 6 miembros y ciclopentilo, pirrol, furano, y tiofeno son anillos con 5 miembros.

El término "fusionado" se refiere a estructuras en las que dos o más anillos comparten uno o más enlaces.

El término "carbocíclico" o "carbociclo" se refiere a un anillo en el que cada uno de los átomos que forman el anillo es un átomo de carbono. Carbociclo incluye arilo y cicloalquilo. El término distingue así carbociclo de heterociclo ("heterocíclico") en el que el núcleo del anillo contiene al menos un átomo que es diferente de carbono (es decir, un heteroátomo). Heterociclo incluye heteroarilo y heterocicloalquilo. Los carbociclos y heterociclos pueden estar sustituidos opcionalmente.

El término "aromático" se refiere a un anillo plano que tiene un sistema de electrones π deslocalizado que contiene 4n+2 π electrones, en el que n es un número entero. Los anillos aromáticos pueden estar formados por cinco, seis, siete, ocho, nueve, o más de nueve átomos. Los aromáticos pueden estar sustituidos opcionalmente. El término "aromático" incluye tanto grupos arilo carbocíclicos (por ejemplo, fenilo) como arilo heterocíclico (o "heteroarilo" o "heteroaromático") (por ejemplo, piridina). El término incluye grupos monocíclicos o policíclicos con anillos fusionados (es decir, anillos que comparten pares adyacentes de átomos de carbono).

Tal y como se usa en la presente memoria, el término "arilo" se refiere a un anillo aromático en el que cada uno de los átomos que forman el anillo es un átomo de carbono. Los anillos arilo pueden estar formados por cinco, seis, siete, ocho, nueve, o más de nueve átomos de carbono. Los grupos arilo pueden estar sustituidos opcionalmente. Los ejemplos de grupos arilo incluyen, pero no están limitados a, fenilo, naftalenilo, fenantrenilo, antracenilo, fluorenilo, e indenilo. Dependiendo de la estructura, un grupo arilo puede ser un monoradical o un diradical (es decir, un grupo arileno).

Un grupo "ariloxi" se refiere a un grupo (arilo)O-, en el que arilo es como se define en la presente memoria.

El término "carbonilo" tal y como se usa en la presente memoria se refiere a un grupo que contiene un resto seleccionado del grupo que consiste en -C(O)-, -S(O)-, -S(O)2-, y -C(S)-, incluyendo, pero no limitado a, grupos que contienen al menos un grupo cetona, y/o al menos un grupo aldehído, y/o al menos un grupo éster, y/o al menos un grupo ácido carboxílico, y/o al menos un grupo tioéster. Dichos grupos carbonilo incluyen cetonas, aldehídos, ácidos carboxílicos, ésteres, y tioésteres. En algunas realizaciones, dichos grupos son una parte de moléculas lineales, ramificadas, o cíclicas.

El término "cicloalquilo" se refiere a un radical monocíclico o policíclico que contiene sólo carbono e hidrógeno, y está opcionalmente saturado, parcialmente insaturado, o completamente insaturado. Los grupos cicloalquilo incluyen grupos que tienen de 3 a 10 átomos en el anillo. Los ejemplos ilustrativos de grupos cicloalquilo incluyen los restos siguientes:

imagen18

22

imagen19

imagen20

imagen21

imagen22

imagen23

imagen24

imagen25

imagen26

imagen27

imagen28

imagen29

imagen30

imagen31

imagen32

imagen33

imagen34

imagen35

imagen36

imagen37

imagen38

imagen39

imagen40

imagen41

imagen42

imagen43

imagen44

imagen45

imagen46

imagen47

imagen48

imagen49

fenoxifenilo)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)acrilamida (Compuesto 23); (E)-1-(R)-3-(4-amino-3-(4-fenoxifenilo)1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)-4-morfolinobut-2-en-1-ona (Compuesto 24); (E)-N-((1s,4s)-4-(4-amino-3(4-fenoxifenilo)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)-4-morfolinobut-2-enamida (Compuesto 25).

Los compuestos de cualquiera de Fórmula (I), Fórmula (VII), Fórmula (A1-A6), Fórmula (B1-B6), Fórmula (C1-C6), o

5 Fórmula (D1-D6) inhiben irreversiblemente Btk y se usan opcionalmente para tratar a pacientes que padecen afecciones o enfermedades dependientes de la tirosina quinasa de Bruton o mediadas por la tirosina quinasa de Bruton, incluyendo, pero no limitado a, cáncer, enfermedades autoinmunes y otras enfermedades inflamatorias.

Preparación de Compuestos

Los compuestos de cualquiera de Fórmula (A1-A6), Fórmula (B1-B6), Fórmula (C1-C6), Fórmula (D1-D6), Fórmula

10 (I), o Fórmula (VII) se sintetizan opcionalmente usando técnicas sintéticas estándar o usando dichos métodos conocidos en combinación con métodos descritos en la presente memoria. Además, los disolventes, temperaturas y otras condiciones de reacción se presentan en la presente memoria sólo para ilustración, y no para limitar el alcance de los métodos y composiciones descritas en la presente memoria. Como una guía adicional también pueden utilizarse los métodos sintéticos siguientes.

15 Las reacciones se emplean opcionalmente en una secuencia lineal para proporcionar los compuestos descritos en la presente memoria o se usan para sintetizar fragmentos que se unen posteriormente por los métodos descritos en la presente memoria y/o documentados en otro lugar.

Formación de Uniones Covalentes por Reacción de un Electrófilo con un Nucleófilo

Los compuestos descritos en la presente memoria pueden modificarse usando varios electrófilos o nucleófilos para

20 formar nuevos grupos funcionales o sustituyentes. La Tabla 1 titulada "Ejemplos de Uniones Covalentes y Precursores de Éstos" lista ejemplos seleccionados de uniones covalentes y grupos funcionales precursores que rinden y pueden usarse como una guía para la variedad de combinaciones de electrófilos y nucleófilos disponibles. Los grupos funcionales precursores se muestran como grupos electrofílicos y grupos nucleofílicos.

Tabla 1: Ejemplos de Uniones Covalentes y Precursores de Éstos

Producto de Unión Covalente: Electrófilo Nucleófilo

Carboxamidas: Ésteres activados aminas/anilinas

Carboxamidas: azidas de acilo aminas/anilinas

Carboxamidas: haluros de acilo aminas/anilinas

Ésteres: haluros de acilo alcoholes/fenoles

Ésteres: nitrilos de acilo alcoholes/fenoles

Carboxamidas: nitrilos de acilo aminas/anilinas

Iminas: Aldehídos aminas/anilinas

Hidrazonas: aldehídos o cetonas Hidrazinas

Oximas: aldehídos o cetonas Hidroxilaminas

Alquil aminas: haluros de alquilo aminas/anilinas

Ésteres: haluros de alquilo ácidos carboxílicos

Tioéteres: haluros de alquilo Tioles

Éteres: haluros de alquilo alcoholes/fenoles

54

Producto de Unión Covalente: Electrófilo Nucleófilo

Tioéteres: sulfonatos de alquilo Tioles

Ésteres: sulfonatos de alquilo ácidos carboxílicos

Éteres: sulfonatos de alquilo alcoholes/fenoles

Ésteres: Anhídridos alcoholes/fenoles

Carboxamidas: Anhídridos aminas/anilinas

Tiofenoles: haluros de arilo Tioles

Aril aminas: haluros de arilo Aminas

Tioéteres: Azindinas Tioles

Ésteres boronato: Boronatos Glicoles

Carboxamidas: ácidos carboxílicos aminas/anilinas

Ésteres: ácidos carboxílicos Alcoholes

hidrazinas: Hidrazidas ácidos carboxílicos

N-acilureas o Anhídridos: carbodiimidas ácidos carboxílicos

Ésteres: diazoalcanos ácidos carboxílicos

Tioéteres: Epóxidos Tioles

Tioéteres: haloacetamidas Tioles

Amotriazinas: halotriazinas aminas/anilinas

Éteres de triazinilo: halotriazinas alcoholes/fenoles

Amidinas: imido ésteres aminas/anilinas

Ureas: Isocianatos aminas/anilinas

Uretanos: Isocianatos alcoholes/fenoles

Tioureas: isotiocianatos aminas/anilinas

Tioéteres: Maleimidas Tioles

Ésteres de fosfito: fosforamiditas Alcoholes

Éteres de sililo: haluros de sililo Alcoholes

Alquil aminas: ésteres sulfonato aminas/anilinas

55

imagen50

imagen51

imagen52

imagen53

imagen54

imagen55

imagen56

imagen57

imagen58

imagen59

imagen60

imagen61

imagen62

imagen63

imagen64

imagen65

imagen66

imagen67

imagen68

imagen69

imagen70

imagen71

imagen72

imagen73

imagen74

imagen75

imagen76

imagen77

imagen78

imagen79

imagen80

imagen81

imagen82

imagen83

imagen84

imagen85

imagen86

imagen87

imagen88

imagen89

imagen90

a JAK-3, ITK, y EGFR y significativamente más potencia frente a las quinasas de la familia src 1ck, c-src, FGR, Fyn, Hck, y Lyn y Yes. Así, modificaciones ligeras en el resto conector y el resto aceptor de Michael son importantes para el diseño de inhibidores selectivos de ACK.

Tabla 1

Quinasa: Compuesto 1 CI50 (nM) Compuesto 9 CI50 (M)

BTK: 0,5 1,0

ITK: 11,7 909,9

Bmx/ETK: 0,8 1,1

TEC: 77,8 108,0

EFGR: 0,5 20,6

HER2: 9,4 1.536,0

HER4: 0,1 3,2

LCK: 2,0 1,0

BLK: 0,5 0,2

C-src: 262,6 14,3

FGR: 2,3 0,4

Fyn: 95,6 7,1

HCK: 3,7 1,0

Lyn: 16,2 1,2

YES: 6,5 0,8

ABL: 86,1 32,3

Brk: 3,3 3,3

CSK: 2,2 2,4

FER: 8.070,0 3.346,0

JAK3: 10,4 878,0

SYK: > 10.000 > 10.000

Ejemplo 4: Modificación de Restos Conector y Aceptor de Michael y Actividad inhibidora in vitro

97

imagen91

#: Estructura del Compuesto BTK CI50 (nM) ITK CI50 (nM) EGFR CI50 (nM) LCK CI50 (nM) JAK3 CI50 (nM) Velocidad Conj Glutatión (nmoles/min) (1/BTK CI50) / Glutatión Proporción DOHH2 GI50 (µM)

3: imagen92 21 imagen93 74,5 imagen94 imagen95 imagen96 imagen97 imagen98

4: imagen99 22,2 imagen100 487,6 imagen101 imagen102 imagen103 imagen104 imagen105

5: imagen106 5,6 imagen107 326,0 imagen108 imagen109 0,004 44,5 imagen110

6: imagen111 3,1 imagen112 60,9 imagen113 imagen114 0,39 0,8 imagen115

7: imagen116 6,3 6.123 268,7 2,6 > 10.000 0,01 15,9 0,317

8: imagen117 1,4 imagen118 83,4 imagen119 imagen120 imagen121 imagen122 imagen123

9: imagen124 1,0 909,9 20,6 1,0 8.278,0 imagen125 imagen126 0,011

10: imagen127 1,31 1.954 44,5 0,88 > 10.000 imagen128 imagen129 <0,03

11: imagen130 0,92 6891 18,85 2,43 > 10.000 0,004525 239,6 >10

99

12: imagen131 1,33 14.290 698,3 5,97 > 10.000 0,004361 172,2 >10

13: imagen132 0,67 3.013 18,75 1,56 12.980 imagen133 imagen134 0,24

14: imagen135 0,39 592,3 2,298 9,24 1.456 imagen136 imagen137 0,37

15: imagen138 4,16 21.100 289,4 5,90 > 10,000 imagen139 imagen140 0,59

16: imagen141 3,14 > 10,000 2.807 3,82 > 10,000 imagen142 imagen143 0,21

17: imagen144 2,00 2.333 435,3 2,07 > 10.000 0,0243 20,6 0,21

18: imagen145 1,38 2,536 22,53 0,76 > 10,000 imagen146 imagen147 <0,03

19: imagen148 1,58 534,6 28,22 6,62 5.997 imagen149 imagen150 0,69

20: imagen151 4,07 7.993 303,60 98,59 > 10.000 imagen152 imagen153 0,39

100

21: imagen154 4,15 > 10.000 6.238,00 1.346 > 10.000 imagen155 imagen156 1,53

22: imagen157 1,57 3.691 156,30 22,12 > 10.000 0,014 45,4 <0,04

23: imagen158 0,32 830 70,49 208,00 3.306,00 imagen159 imagen160 0,11

24: imagen161 0,89 476 383,70 235,40 9.077,00 imagen162 imagen163 0,44

25: imagen164 3,48 > 10.000 272,90 25,81 >10.000 imagen165 imagen166 0,05

Ejemplo 5: Selectividad del Inhibidor de Quinasa Predicha por Dosificación

El Compuesto 1 y Compuesto 12 tienen una vida media corta in vivo. Por el contrario, el Compuesto 7 y Compuesto 8 tienen una vida medio significativamente mayor in vivo (Figura 5). Los Compuestos como 1 y 12 se 5 predice que tienen una selectividad para quinasa aumentada in vivo porque la inhibición sólo se mantendrá para aquellas quinasas que se inhiben irreversiblemente.

Se administró a ratas macho canuladas en la vena yugular una única dosis de todos los compuestos de ensayo a 8mg/kg cada uno, en combinación por sonda oral. Los volúmenes de las dosis se ajustaron tomando como base los datos del peso corporal recogidos inmediatamente antes de la dosificación. Se recogieron muestras de sangre a las10 0,0833 (5 minutos), 0,333 (20 minutos), 1, 3, 6, 9, y 24 horas después de la dosificación de ratas dosificadas oralmente. Las muestras se recogieron en tubos Microtainer separadores de plasma con anticoagulante (heparina litio). Las muestras de plasma se prepararon por centrifugación (5 min a 5.000 x g), y al menos 100 µL se transfirieron a tubos de almacenamiento y se almacenaron congeladas a -80°C. Las muestras de plasma se descongelaron y se transfirieron alicuotas de 75 uL a tubos de centrífuga a los que se añadieron alicuotas de 10 µL

15 de disolución de estándar interno (1 µg/mL). Las muestras no se diluyeron con plasma blanco antes de procesamiento adicional. Las proteínas solubles se precipitaron por la adición de 200 µL de acetonitrilo, seguido de centrifugación (20 min a 16.000 x g). Las muestras se evaporaron a sequedad y se reconstituyeron en 200 µL de agua que contenía 0,2% ácido fórmico y 10% metanol. Todas las muestras se cargaron en un automuestreador mantenido a 6°C y se evaluaron para concentraciones de compuestos de ensayo usando LC-MS/MS.

20 Ejemplo 6: Inhibición de Células B

Una breve exposición al Compuesto 1 in vitro es suficiente para inhibir la activación de las células B en células B humanas normales (Figura 6). Este protocolo mimetiza la exposición predicha de células al Compuesto 1 in vivo y demuestra que la inhibición de células B se mantiene a pesar de eliminar por lavado el Compuesto 1.

Las células B se purificaron de sangre de donantes sanos por selección negativa usando la mezcla de 25 enriquecimiento de células B humanas RosetteSep. Las células se sembraron en placas en medio de crecimiento

101

imagen167

Claims

imagen1

imagen2

imagen3