RS65239B1

RS65239B1 - Derivati 4-fluoro-1h-pirazolo[3,4-c]piridina kao selektivni inhibitori brutonove tirozin kinaze (btk) za lečenje b-ćelijskih limfoma i autoimunih bolesti

Info

Publication number: RS65239B1
Application number: RS20240245A
Authority: RS
Inventors: Chunli Shen; Xiawei Wei; Chengde Wu; Guoping Hu; Ning Jiang; Wei Zheng; Jian Li; Shuhui Chen
Original assignee: Jumbo Drug Bank Co Ltd
Priority date: 2019-09-26
Filing date: 2020-09-25
Publication date: 2024-03-29
Also published as: PT4036095T; HUE065965T2; MX2022003707A; WO2021057893A1; PL4036095T3; EP4036095A4; KR20220061262A; US11739090B2; AU2020355845B2; EP4036095A1; CN114450289B; US20220324864A1; JP7213604B2; KR102500569B1; CN114450289A; HRP20240283T1; AU2020355845A1; FI4036095T3; DK4036095T3; ES2972813T3

Description

Opis

[0001] Predmetna patentna prijava zahteva pravo prvenstva od

CN 201910919180.6, sa datumom podnošenja: 26. septembar 2019;

CN 202010330226.3, sa datumom podnošenja: 24. april 2020.

Oblast tehnike

[0002] Predmetni pronalazak se odnosi na klasu jedinjenja inhibitora BTK kinaze sa visokom aktivnošću i visokom selektivnošću i na jedinjenja za upotrebu u postupku za lečenje bolesti povezanih sa ciljnim molekulima za BTK. Konkretno, ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenje predstavljeno formulom (I), njegov stereoizomer ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

Osnov pronalaska

[0003] BTK je ključna kinaza u signalnom putu B-ćelijskog antigenog receptora (BCR). Ireverzibilni BTK inhibitori inhibiraju aktivnost BTK tako što se kovalentno vezuju za aktivno mesto kinaze, Cys-481, čime efikasno inhibiraju prekomernu proliferaciju B ćelija i ostvaruju anti-tumorske ili anti-inflamatorne efekte.

[0004] Među lekovima koji su trenutno prisutni na tržištu, ibrutinib, ireverzivilni inhibitor BTK razvijen zajednički od strane kompanija Pharmacyclis i Johnson & Johnson, odobren je od strane FDA, za lečenje limfoma ćelija plašta, hronične limfocitne leukemije, Valdenstromove makroglobulinemije, hronične bolesti kalem-protiv-domaćina, itd. Međutim, pored BTK, irutinib takođe ima jake inhibitorne efekte na druge kinaze, posebno na kinaze kao što su EGFR, ITK i TEC, što može da dovede do ozbiljnih neželjenih reakcija kao što su osip, dijareja i krvarenje. Stoga u stanju tehnike postoji potreba da se razvije nova klasa BTK inhibitora sa visokom aktivnošću i dobrom selektivnošću, za lečenje srodnih bolesti.

[0005] WO2015095099 opisuje jedinjenja Btk inhibitora prema formuli I:

[0006] WO2018033091 opisuje fuzionisano biciklično jedinjenje koje ima efekat u inhibiciji aktivnosti tirozin kinaze,

[0007] CN105399756 opisuje jedinjenje BTK inhibitora koje ima s strukturu predstavljenu formulom (I),

[0008] CN110272416 opisuje jedinjenje predstavljeno formulom I, i jedinjenje može da se koristi za pripremanje lekova za prevenciju ili lečenje heteroimunih bolesti, autoimunih bolesti ili kancera,

[0009] CN105017256 opisuje polifluorisano jedinjenje inhibitora Brutonove tirozin kinaze prikazano u formulama (I) i (II),

[0010] WO2017156495 opisuje jedinjenja i postupke za modulisanje Brutonove tirozin kinaze,

ili

Sadržaj predmetnog pronalaska

[0011] Predmetno otkriće obezbeđuje jedinjenje prikazano formulom (I), njegov stereoizomer ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,

pri čemu,

T1je nezavisno izabran od N i CH;

R2je nezavisno izabran od H, C1-6alkila, C2-6alkenila i C2-6alkinila, pri čemu, svaki C1-

6alkil, C2-6alkenil i C2-6alkinil je nezavisno i opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 Ra;

prsten A je izabran od fenila i heteroarila sa 5 do 6 članova;

M je nezavisno izabran od C3-6cikloalkila i heterocikloalkila sa 3 do 6 članova, pri čemu, svaki C3-6cikloalkil i heterocikloalkil sa 3 do 6 članova je nezavisno i opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 Rb;

svaki R1i R3je nezavisno izabran od F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN;

svaki n i m je nezavisno izabran od 0, 1, 2 ili 3, i n i m nisu istovremeno 0;

svaki L1i L2je nezavisno izabran od -CH2-, -CH2CH2-, -O-, -C(=O)- i - C(=O)-NH-;

Raje nezavisno izabran od H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, C1-3alkila, C1-3alkoksi i C1-

3alkilamino, pri čemu, svaki C1-3alkil, C1-3alkoksi i C1-3alkilamino je nezavisno i opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 R;

Rbje izabran od F, Cl, Br, I, CH3;

R je izabran od H, F, Cl, Br, I;

svaki heteroaril sa 5 do 6 članova i heterocikloalkil sa 3 do 6 članova nezavisno sadrži 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma ili grupe heteroatoma nezavisno izabrane od -NH-, -O-, -S-, -C(=O)-, -S(=O)- i N.

[0012] Predmetno otkriće opisuje jedinjenje prikazano formulom (I), njegov stereoizomer ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,

pri čemu,

T1je nezavisno izabran od N i CH;

prsten A je izabran od fenila i heteroarila sa 5 do 6 članova;

M je nezavisno izabran od C3-6cikloalkila i heterocikloalkila sa 3 do 6 članova, pri čemu je svaki C3-6cikloalkil i heterocikloalkil sa 3 do 6 članova nezavisno i opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 Rb;

svaki R1i R3je nezavisno izabran od F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN;

n i m su 0, 1, 2 ili 3, i n i m nisu istovremeno nula 0;

svaki L1i L2je nezavisno izabran od -CH2-, -CH2CH2-, -O-, -C(O)- i - C(O)-NH-;

Rbje izabran od F, Cl, Br, I, CH3;

R je izabran od H, F, Cl, Br, I;

[0013] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuti Raje nezavisno izabran od H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, CH3, OCH3, NH(CH3) i N(CH3)2, i druge promenljive su kao što su definisane u predmetnom otkriću.

[0014] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuti R2je nezavisno izabran od H, C1-3alkila, C2-4alkenila i C2-4alkinila, pri čemu je svaki C1-3alkil, C2-

4alkenil i C2-4alkinil nezavisno i opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 Ra, i druge promenljive su kao što su definisane u predmetnom otkriću.

[0015] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuti R2je nezavisno izabran od H, CH3, vinila i propinila, i druge promenljive su kao što su definisane u predmetnom otkriću.

[0016] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuti M je nezavisno izabran od ciklopropila, ciklobutila, ciklopentila, cikloheksila, azetidinila, oksetanila, piperidila i morfolinila, pri čemu je svaki ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, azetidinil, oksetanil, piperidil, morfolinil nezavisno i opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 Rb, i druge promenljive su kao što su definisane u predmetnom otkriću.

[0017] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuti M je izabran od ciklopropila, ciklobutila, ciklopentila, cikloheksila, azetidinila, oksetanila, piperidila i morfolinila, pri čemu je svaki ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, azetidinil, oksetanil, piperidil, morfolinil nezavisno i opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 Rb, i druge promenljive su kao što su definisane u predmetnom otkriću.

[0018] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuti M je nezavisno izabran od piperidila i morfolinila, i druge promenljive su kao što su definisane u predmetnom otkriću.

[0019] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuti M je izabran od piperidila i morfolinila, i druge promenljive su kao što su definisane u predmetnom otkriću.

[0020] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuti L1je izabran od -O- i -C(O)NH-, i druge promenljive su kao što su definisane u predmetnom otkriću.

[0021] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuti L1je izabran od -O- i -C(=O)-NH-, i druge promenljive su kao što su definisane u predmetnom otkriću.

[0022] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuti L2je izabran from -C(=O)- i -C(=O)-NH-, i druge promenljive su kao što su definisane u predmetnom otkriću.

[0023] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuti L2je izabran from -C(O)- i -C(O)NH-, i druge promenljive su kao što su definisane u predmetnom otkriću.

[0024] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuti prsten A je izabran od fenila i piridila, i druge promenljive su kao što su definisane u predmetnom otkriću.

[0025] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuta strukturna jedinica je

izabrana od

i druge promenljive su kao što su definisane u predmetnom otkriću.

[0026] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuta strukturna jedinica

je izabrana od

i druge promenljive su kao što su definisane u predmetnom otkriću.

[0027] Drugi primeri izvođenja prema predmetnom otkriću su generisani bilo kojom kombinacijom prethodno pomenutih promenljivih.

[0028] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuto jedinjenje, njegov stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so je izabrana od

pri čemu,

n, m, R1, R2, R3, L1, L2su kao što su definisani u predmetnom otkriću.

[0029] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuto jedinjenje, njegov stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so je izabrana od

pri čemu,

n, m, R1, R2, R3, L1, L2su kao što su definisani u predmetnom otkriću.

[0030] Predmetno otkriće takođe obezbeđuje jedinjenje kao što je prikazano sledećim formulama, njegov stereoizomer ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so,

[0031] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuto jedinjenje, njegov stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so je izabrana od

[0032] Predmetno otkriće takođe obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži terapeutski efikasnu količinu prethodno pomenutog jedinjenja, njegovog stereoizomera ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, kao aktivni sastojak, i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0033] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, prethodno pomenuto jedinjenje, njegov stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili upotreba prethodno pomenute farmaceutske kompozicije za upotrebu kao lek srodan inhibitorima BTK.

[0034] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, lek srodan BTK inhibitoru je lek za lečenje hematološkog tumora i autoimune bolesti.

[0035] U nekim primerima izvođenja prema predmetnom otkriću, lek srodan BTK inhibitoru je lek za lečenje difuznog B-krupnoćelijskog limfoma.

Tehnički efekti

[0036] Jedinjenja prema predmetnom otkriću, kao klasa inhibitora BTK kinaze sa visokom aktivnošću i visokom selektivnošću, imaju velike izglede za primenu u lečenju tumora i pokazuju dobar efekat inhibicije tumora prilikom lečenja raka. Jedinjenja prema predmetnom otkriću pokazuju bolju aktivnost inhibicije kinaze, i poželjno, jedinjenja imaju snažnu aktivnost inhibicije kinaze (IC50< 100 nM). Jedinjenja prema predmetnom otkriću pokazuju bolju selektivnost za EGFR, ITK i TEC kinaze. Jedinjenja prema predmetnom otkriću imaju kratak poluživot, široku distribuciju izvan krvne plazme i umerenu bioraspoloživost.

Definicija i opis

[0037] Osim ako nije drugačije navedeno, sledeći termini i fraze koji se ovde koriste imaju sledeća značenja. Određeni termin ili frazu ne treba smatrati nepouzdanim ili nejasnim osim ako nije posebno definisano, već ih treba razumeti u njihovom uobičajenom značenju. Kada se ovde pojavljuje ime prisutno na tržištu, ono se odnosi na odgovarajuću robu ili njen aktivni sastojak.

[0038] Termin „farmaceutski prihvatljiv“, kako se ovde koristi, odnosi se na ona jedinjenja, materijale, kompozicije i/ili oblike doziranja, koji su, u okviru razumne medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa ljudskim i životinjskim tkivima, bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijske reakcije ili drugih problema ili komplikacija, što je u skladu sa razumnim odnosom koristi i rizika.

[0039] Izraz „farmaceutski prihvatljiva so“ odnosi se na so jedinjenja prema predmetnom otkriću, koja je pripremljena od jedinjenja koje ima specifične supstituente koji se nalaze u ovom otkriću, sa relativno netoksičnim kiselinama ili bazama. Kada jedinjenja prema predmetnom otkriću sadrže relativno kisele funkcionalne grupe, bazne adicione soli se mogu dobiti dovođenjem u kontakt ovih jedinjenja sa dovoljnom količinom baze, bilo u čistom rastvoru ili u pogodnom inertnom rastvaraču. Farmaceutski prihvatljive bazne adicione soli uključuju soli natrijuma, kalijuma, kalcijuma, amonijaka, organskog amina ili magnezijuma ili slične soli. Kada jedinjenja prema predmetnom otkriću sadrže relativno bazne funkcionalne grupe, kisele adicione soli se mogu dobiti dovođenjem u kontakt ovih jedinjenja sa dovoljnom količinom kiseline, bilo u čistom rastvoru ili pogodnom inertnom rastvaraču. Primeri farmaceutski prihvatljivih kiselih adicionih soli uključuju soli neorganskih kiselina, koje uključuju, na primer, hlorovodoničnu kiselinu, bromovodoničnu kiselinu, azotnu kiselinu, ugljenu kiselinu, bikarbonat, fosfornu kiselinu, monohidrogen fosfat, dihidrogen fosfat, sumpornu kiselinu, hidrogensulfat, jodovodičnu kiselinu i fosforne kiseline; i soli organskih kiselina, koje uključuju, na primer, sirćetnu kiselinu, propionsku kiselinu, izobuternu kiselinu, maleinsku kiselinu, malonsku kiselinu, benzojevu kiselinu, ćilibarnu kiselinu, suberinsku kiselinu, fumarnu kiselinu, mlečnu kiselinu, bademovu kiselinu, ftalnu kiselinu, benzensulfonsku kiselinu, p-toluensulfonska kiselina, limunsku kiselinu, vinsku kiselinu i metansulfonsku kiselinu; i takođe uključuju soli aminokiselina (kao što je arginin) i soli organskih kiselina kao što je glukuronska kiselina. Određena specifična jedinjenja prema predmetnom otkriću sadrže bazne i kisele funkcionalne grupe i stoga se mogu konvertovati u bilo koju baznu ili kiselu adicionu so.

[0040] Farmaceutski prihvatljive soli prema predmetnom otkriću mogu da se sintetišu iz matičnog jedinjenja koje sadrži kisele radikale ili bazne radikale konvencionalnim hemijskim metodama. Uopšteno, postupak za dobijanje ovih soli obuhvata: u vodi ili organskom rastvaraču ili smeši oba, reagovanje ovih jedinjenja u oblicima slobodnih kiselina ili baza, sa stehiometrijskom količinom pogodne baze ili kiseline za dobijanje soli.

[0041] U pogledu leka ili farmakološki aktivnog agensa, termin „efikasna količina“ ili „terapeutski efikasna količina“, odnosi se na netoksičnu, ali dovoljnu količinu leka ili agensa za postizanje željenog efekta. Što se tiče oralnih doznih oblika prema predmetnom otkriću, „efikasna količina“ jedne aktivne supstance u kompoziciji se odnosi na količinu koja je potrebna za postizanje željenog efekta kada se koristi u kombinaciji sa drugom aktivnom supstancom u kompoziciji. Određivanje efikasne količine varira kod svakog pojedinca, u zavisnosti od starosti i opšteg stanja receptora, a takođe i u zavisnosti od specifičnih aktivnih supstanci, a odgovarajuću efektivnu količinu u pojedinačnom slučaju može da odredi stručnjak oblasti na osnovu konvencionalnih eksperimenata.

[0042] Izraz „aktivni sastojak", „terapeutsko sredstvo“, „aktivna supstanca“ ili „aktivno sredstvo“, odnosi se na hemijski entitet koji može efikasno da leči ciljne poremećaje, bolesti ili stanja.

[0043] Struktura jedinjenja prema predmetnom otkriću može da se potvrdi konvencionalnim metodama koje su dobro poznate stručnjaku u oblasti. Ako se predmetno otkriće odnosi na apsolutnu konfiguraciju jedinjenja, apsolutna konfiguracija se može potvrditi konvencionalnim tehničkim sredstvima u oblasti. Na primer, monokristalna rendgenska difrakcija (SXRD) koristi Bruker D8 venture difraktometar za prikupljanje podataka o intenzitetu difrakcije kultivisanog monokristala, sa izvorom svetlosti CuKα zračenja i režimom skeniranja φ/ω skeniranja. Nakon što se prikupe povezani podaci, direktna metoda (Shelxs97) se dalje koristi za razrešenje kristalne strukture, tako da se apsolutna konfiguracija može potvrditi.

[0044] Jedinjenja prema predmetnom otkriću mogu da postoje u specifičnim stereoizomernim oblicima. Predmetno otkriće razmatra sva takva jedinjenja, uključujući cis i trans izomere, (-)- i (+)-enantiomere, (R)- i (S) enantiomere, dijastereoizomere, (D)-izomere, (L)-izomere, i njihove racemske smeše i druge smeše, kao što su enantiomerno ili dijastereoizomerno obogaćene smeše, koje sve spadaju unutar obima predmetnog otkrića. Dodatni asimetrični atomi ugljenika mogu da bude prisutni u supstituentu kao što je alkil grupa. Svi ovi stereoizomeri i njihove smeše su uključeni u obim ovog otkrića.

[0045] Osim ako nije drugačije navedeno, termin „enantiomer“ ili „optički izomer“ se odnosi na stereoizomere koji su slika u ogledalu jedan drugom.

[0046] Osim ako nije drugačije navedeno, termin „cis-trans izomer” ili „geometrijski izomer” je uzrokovan činjenicom da dvostruke veze ili jednostruke veze atoma ugljenika koji formiraju prsten ne mogu slobodno da rotiraju.

[0047] Osim ako nije drugačije navedeno, izraz "dijastereoizomer" se odnosi na stereoizomere u kojima molekuli imaju dva ili više hiralnih centara i nisu jedan drugom sliak u ogledalu.

[0048] Osim ako nije drugačije navedeno, „(+)“ predstavlja desno, „(-)“ predstavlja levo, i "(±)" znači racemski.

[0049] Osim ako nije drugačije navedeno, klinasta puna veza ( ) i klinasta tačkasta veza ( ) predstavljaju apsolutnu konfiguraciju stereoskopskog centra; ravna puna veza ( ) i ravna tačkasta veza ( ) predstavljaju relativnu konfiguraciju stereoskopskog centra; talasasta linija ( ) predstavlja klinastu punu vezu ( ) ili klinastu tačkastu vezu ( ); ili talasasta linija ( ) predstavlja ravnu punu vezu ( ) ili ravnu tačkastu vezu ( ).

[0050] Optički aktivni (R)- i (S)-izomeri i D i L izomeri mogu se dobiti upotrebom hiralne sinteze ili hiralnih reagenasa ili drugih konvencionalnih tehnika. Ako je poželjan određeni enantiomer jedinjenja prema ovom pronalasku, on se može pripremiti asimetričnom sintezom ili derivatizacijom sa hiralnom pomoćnom supstancom, pri čemu se rezultujuća dijastereoizomerna smeša razdvaja, a pomoćne grupe se cepaju kako bi se dobili čisti željeni enantiomeri. Alternativno, kada molekul sadrži baznu funkcionalnu grupu (kao što je amino grupa) ili kiselu funkcionalnu grupu (kao što je karboksilna grupa), dijastereoizomerne soli se mogu formirati sa odgovarajućom optički aktivnom kiselinom ili bazom, nakon čega sledi razdvajanje dijastereoizomera korišćenjem konvencionalnih metoda dobro poznatih u tehnici, i naknadnim izdvajanjem čistih enantiomera. Pored toga, razdvajanje enantiomera i dijastereoizomera se često postiže korišćenjem hromatografije, koja koristi hiralne stacionarne faze, opciono u kombinaciji sa metodama hemijske derivatizacije (npr. formiranje karbamata iz amina).

[0051] Jedinjenja predmetnog otkrića mogu da sadrže ne-prirodne proporcije atomskih izotopa na jednom ili više atoma koji čine jedinjenje. Na primer, jedinjenja mogu da budu radioaktivno obeležena radioaktivnim izotopima, kao što su tricijum (<3>H), jod-125 (<125>I) ili C-14 (<14>C). Kao drugi primer, vodonik može da bude zamenjen teškim vodonikom kako bi se formirali deuterisani lekovi. Veza koju formiraju deuterijum i ugljenik je jača od veze koju formiraju običan vodonik i ugljenik. U poređenju sa nedeuterisanim lekovima, deuterisani lekovi imaju smanjene toksične neželjene efekte, povećanu stabilnost leka, poboljšanu efikasnost, produženi biološki poluživot lekova i druge prednosti. Predviđeno je da sve izotopske varijacije jedinjenja prema predmetnom otkriću, bez obzira da li su radioaktivne ili ne, budu obuhvaćene obimom predmetnog otkrića.

[0052] Termin „opciono“ ili „izborno“ znači da se potom opisani događaj ili okolnost može, ali ne mora nužno dogoditi, i da opis uključuje slučajeve u kojima se navedeni događaj ili okolnost dešavaju i slučajeve u kojima se navedeni događaj ili okolnost ne dešavaju.

[0053] Termin „supstituisan“ znači da je bilo koji jedan ili više atoma vodonika na naznačenom atomu supstituisan supstituentom, koji može da uključuje teški vodonik i varijante vodonika, pod uslovom da je valentno stanje naznačenog atoma normalno, a supstituisano jedinjenje stabilno. Tamo gde je supstituent kiseonik (tj. =O), to znači da su dva atoma vodonika supstituisana. Zamena kiseonika se ne dešava na aromatičnim grupama. Termin „opciono supstituisan“ znači da može ili ne mora biti supstituisan. Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, tip i broj supstituenata mogu da budu proizvoljni na osnovu toga da li mogu da se postignu hemijski.

[0054] Kada se bilo koja promenljiva (kao što je R) pojavljuje više puta u kompoziciji ili strukturi jedinjenja, njena definicija je u svakom slučaju nezavisna. Tako, na primer, ako je grupa supstituisana sa 0-2 R, grupa može opciono da bude supstituisana sa najviše dva R, a R u svakom slučaju ima nezavisne opcije. Pored toga, kombinacije supstituenata i/ili njihovih varijanti su dozvoljene samo ako takve kombinacije daju stabilna jedinjenja.

[0055] Kada je broj vezujuće grupe 0, kao što je -(CRR)0-, to znači da je vezujuća grupa jednostruka veza.

[0056] Kada je broj supstituenta 0, to znači da supstituent ne postoji. Na primer, -A-(R)0znači da je struktura zapravo -A.

[0057] Kada je supstituent upražnjen, to znači da supstituent ne postoji. Na primer, kada je X upražnjen u A-X, to znači da je struktura zapravo A.

[0058] Kada je jedna od promenljivih izabrana od jednostuke veze, to znači da su dve grupe sa kojima je povezana direktno povezane. Na primer, kada L predstavlja jednostruku vezu u A-L-Z, to znači da je struktura zapravo A-Z.

[0059] Kada veza supstituenta može da bude unakrsno povezana sa više od dva atoma na prstenu, supstituent može da bude povezan sa bilo kojim atomom na prstenu, na primer, strukturna jedinica

označava da supstituent R može da se nalazi na bilo kojoj poziciji na cikloheksilu ili cikloheksadienu. Kada navedeni supstituenti ne označavaju preko kog atoma su vezani sa supstituisanom grupom. takvi supstituenti mogu da budu povezani preko bilo kojih svojih atoma, na primer, piridil kao supstituent može da bude povezan sa supstituisanom grupom preko bilo kog atoma ugljenika na piridinskom prstenu.

[0060] Kada navedena vezujuća grupa nema naznačen smer svog vezivanja, smer vezivanja je proizvoljan, na primer, vezujuća grupa L je -M-W- u

u ovoj situaciji, -M-W- može da poveže prsten A i prsten B u smeru koji je isti kao i redosled čitanja s leva na desno, kako bi se formirao

i takođe može da poveže prsten A i prsten B u smeru suprotnom od smera čitanja s leva na desno, kako bi se formiralo

Kombinacije vezujućih grupa, supstituenata, i/ili njihovih varijanti su dozvoljene samo ako takve kombinacije rezultuju stabilnim jedinjenjima.

[0061] Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, kada grupa ima jedno ili više mesta koja mogu da se povezuju, svako to jedno mesto, ili više mesta u grupi, može da bude povezano sa drugim grupama preko hemijskih veza. Kada vezujući modalitet hemijske veze nije pozicioniran, i na mestu koje može da se povezuje postoji H atom, broj H atoma na tom mestu će se smanjivati u skladu sa brojem hemijskih veza povezanih tako da postaju grupa sa odgovarajućom valencom kada je hemijska veza povezana. Hemijske veze između mesta i drugih grupa mogu da se

predstave ravnom punom linijom ( ), ravnom isprekidanom linijom ( ), ili talasastom linijom ( ). Na primer, ravna puna linija u -OCH3znači da je grupa povezana sa drugim grupama preko atoma kiseonika u grupi; ravna isprekidana veza u

znači da je grupa povezana sa drugim grupama preko dva kraja atoma azota u grupi; talasasta linija u

znači da je grupa povezana sa drugim grupama preko atoma ugljenika 1 i 2 u fenil grupi;

znači da bilo koje moguće vezujuće mesto na piperidinilu može da bude povezano sa drugim grupama preko jedne hemijske veze, uključujući najmanje četiri modaliteta vezivanja:

čak i ako je H atom nacrtan na -N-,

i dalje uključuje grupu sa modalitetom vezivanja

ali će se H na tom mestu smanjivati na odgovarajući način, za po jedan, i postaće odgovarajući monovalentni piperidinil kada se formira jedna hemijska veza.

[0062] Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, broj atoma u prstenu se obično definiše kao broj članova prstena. Na primer, “prsten sa 5 do 7 članova” označava “prsten” sa 5-7 atoma raspoređenih u krug.

[0063] Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, termin alkil" se koristi za predstavljanje linearne ili razgranate zasićene ugljovodonične grupe koja se sastoji od 1 do 6 atoma ugljenika. C1-6alkil uključuje C1-5, C1-4, C1-3, C1-2, C2-6, C2-4, C6i C5alkil; i može da bude monovalentan (kao što je metil), dvovalentan (kao što je metilen) ili multivalentan (kao što je metin). Primeri C1-6alkila uključuju, ali nisu ograničeni na, metil (Me), etil (Et), propil (uključujući n-propil i izopropil), butil (uključujući n-butil, izobutil, s-butil i t-butil), pentil (uključujući n-pentil, izopentil i neopentil) i heksil.

[0064] Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, termin alkil“ se koristi za predstavljanje linearne ili razgranate zasićene ugljovodonične grupe koja se sastoji od 1 do 3 atoma ugljenika. C1-3alkil uključuje C1-2alkil, C2-3alkil, itd.; i može da bude monovalentan (kao što je metil), dvovalentan (kao što je metilen) ili multivalentan (kao što je metin). Primeri C1-3alkila uključuju, ali nisu ograničeni na, metil (Me), etil (Et), propil (uključujući n-propil i izopropil), itd.

[0065] Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, termin „halo“ ili „halogen“, sam ili kao deo drugog supstituenta, označava atom fluora, hlora, broma ili joda.

[0066] Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, cikloalkil“ označava zasićenu cikličnu ugljovodoničnu grupu koja se sastoji od 3 do 6 atoma ugljenika, koji sadrže monociklični i biciklični sistem prstenova, pri čemu atomi ugljenika mogu da budu opciono oksidovani (tj. C=O). C3-6cikloalkil uključuje C3-5cikloalkil, C4-5cikloalkil, C5-6cikloalkil, itd.; i može da bude monovalentan, dvovalentan ili multivalentan. Primeri C3-6cikloalkila uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, itd.

[0067] Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, alkenil“ se koristi za predstavljanje linearne ili razgranate ugljovodonične grupe koja se sastoji od 2 do 6 atoma ugljenika koji sadrže najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik-ugljenik, pri čemu dvostruka veza ugljenik-ugljenik može da bude locirana na bilo kojoj poziciji u grupi. C2-6alkenil uključuje C2-4alkenil, C2-3alkenil, C4alkenil, C3alkenil, C2alkenil, itd.; i može da bude monovalentan, dvovalentan ili multivalentan. Primeri C2-6alkenila uključuju, ali nisu ograničeni na, vinil, propenil, butenil, pentenil, heksenil, butadienil, piperilen, heksadienil, itd.

[0068] Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, alkenil“ se koristi za predstavljanje linearne ili razgranate ugljovodonične grupe koja se sastoji od 2 do 4 atoma ugljenika koji sadrže najmanje jednu dvostruku vezu ugljenik-ugljenik, pri čemu dvostruka veza ugljenik-ugljenik može da bude locirana na bilo kojoj poziciji u grupi. C2-4alkenil uključuje C2-3alkenil, C4alkenil, C3alkenil, C2alkenil, itd.; i C2-4alkenil može da bude monovalentan, dvovalentan ili multivalentan. Primeri C2-4alkenila uključuju, ali nisu ograničeni na, vinil, propenil, butenil, butadienil, itd.

[0069] Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, alkinil“ se koristi za predstavljanje linearne ili razgranate ugljovodonične grupe koja se sastoji od 2 do 6 atoma ugljenika koji sadrže najmanje jednu trostruku vezu ugljenik-ugljenik, pri čemu trostruka veza ugljenik-ugljenik može da bude locirana na bilo kojoj poziciji u grupi. C2-6alkinil uključuje C2-4alkinil, C2-3alkinil, C4alkinil, C3alkinil, C2alkinil, itd.; i može da bude monovalentan, dvovalentan ili multivalentan. Primeri C2-6alkinila uključuju, ali nisu ograničeni na, etinil, propinil, butinil, pentinil, itd.

[0070] Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, alkinil" se koristi za predstavljanje linearne ili razgranate zasićene ugljovodonične grupe koja se sastoji od 2 do 4 atoma ugljenika koji sadrže najmanje jednu trostruku vezu ugljenik-ugljenik, pri čemu trostruka veza ugljenikugljenik može da bude locirana na bilo kojoj poziciji u grupi. C2-4alkinil uključuje C2-3alkinil, C4alkinil, C3alkinil, C2alkinil, itd.; i može da bude monovalentan, dvovalentan ili multivalentan. Primeri C2-4alkinila uključuju, ali nisu ograničeni na, na etinil, propinil, butinil, itd.

[0071] Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, termin alkoksi" označava one alkil grupe koje sadrže 1 do 3 atoma ugljenika koji su povezani sa ostatkom molekula preko jednog atoma kiseonika. C1-3alkoksi uključuje C1-2alkoksi, C2-3alkoksi, C3alkoksi, C2alkoksi itd. Primeri C1-3alkoksi uključuju, ali nisu ograničeni na, metoksi, etoksi, propoksi (uključujući npropoksi i izopropoksi), itd.

[0072] Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, termin alkilamino" označava one alkil grupe koje sadrže 1 do 3 atoma ugljenika koji su povezani sa ostatkom molekula preko amino grupe. C1-3alkilamino uključuje C1-2, C3, C2alkilamino itd. Primeri C1-3alkilamino uključuju, ali nisu ograničeni na -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCH2CH3, -N(CH3)CH2CH3, -NHCH2CH2CH3, -NHCH2(CH3)2, itd.

[0073] Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, termin „heterocikloalkil sa 3 do 6 članova“, sam ili u kombinaciji sa drugim terminima respektivno predstavlja zasićenu cikličnu grupu koja se sastoji od 3 do 6 atoma u prstenu, od kojih su 1, 2, 3 ili 4 atoma u prstenu heteroatomi nezavisno izabrani od O, S i N, a ostatak su atomi ugljenika, pri čemu je atom azota opciono kvaternizovan, a heteroatomi azota i sumpora mogu da budu opciono oksidovani (tj. NO i S(O)p, gde je p 1 ili 2). On obuhvata monociklični i biciklični sistem prstenova, pri čemu biciklični sistem uključuje spiro prsten, fuzionisani prsten i premošćeni prsten. Pored toga, u smislu "3- do 6-članog heterocikloalkila", heteroatom može da zauzme poziciju na kojoj je heterocikloalkil povezuje sa ostatkom molekula. Heterocikloalkil sa 3 do 6 članova uključuje heterocikloalkil sa 4 do 6 članova, 5 do 6 članova, 4 člana, 5 članova, 6 članova, itd. Primeri heterocikloalkila sa 3 do 6 članova uključuju, ali nisu ograničeni na, azetidinil, oksetanil, tiatanil, pirolidinil, pirazolidinil, imidazolidinil, tetrahidrotienil (uključujući tetrahidrotien-2-il, tetrahidrotien-3-il, itd.), tetrahidrofuranil (uključujući tetrafuran-2-il, itd.), tetrahidropiranil, piperidinil (uključujući 1-piperidinil, 2-piperidinil, 3-piperidinil, itd.), piperazinil (uključujući 1-piperazinil, 2-piperazinil, itd.), morfolinil (uključujući 3-morfolinil, 4-morfolinil, itd.), dioksanil, ditianil, izoksazolidinil, izotiazolidinil, 1,2-oksazinil, 1,2-tiazinil, heksahidropiridazinil, homopiperazinil ili homopiperidinil.

[0074] Osim ako nije specifično naznačeno drugačije, termini „heteroaril prsten sa 5 do 6 članova“ i „heteroaril sa 5 do 6 članova" prema predmetnom otkriću, mogu se koristiti naizmenično, a termin „heteroaril sa 5 do 6 članova“ predstavlja monocikličnu grupu koja ima konjugovani π-elektronski sistem i koja se sastoji od 5 do 6 atoma u prstenu, od kojih su 1, 2, 3 ili 4 atoma u prstenu heteroatomi nezavisno izabrani od O, S i N, a ostatak su atomi ugljenika, pri čemu je atom azota opciono kvaternizovan, a heteroatomi ugljenika, azota i sumpora mogu da budu opciono oksidovani (tj. C=O, NO i S(O)p, gde je p 1 ili 2). Heteroaril sa 5 do 6 članova može da bude povezan sa ostatkom molekula preko heteroatoma ili atoma ugljenika. Heteroaril sa 5 do 6 članova uključuje heteroaril sa 5 članova i sa 6 članova. Primeri heteroarila sa 5 do 6 članova uključuju, ali nisu ograničeni na, pirolil (uključujući N-pirolil, 2-pirolil, 3-pirolil, itd.), pirazolil (uključujući 2-pirazolil, 3-pirazolil, itd. ), imidazolil (uključujući N-imidazolil, 2-imidazolil, 4-imidazolil, 5-imidazolil, itd.), oksazolil (uključujući 2-oksazolil, 4-oksazolil, 5-oksazolil, itd.), triazolil (1H-1,2,3-triazolil, 2H-1,2,3-triazolil, 1H-1,2,4-triazolil, 4H-1,2,4-triazolil, itd.), tetrazolil, izoksazolil (uključujući 3-izoksazolil, 4-izoksazolil, 5-izoksazolil, itd.), tiazolil (uključujući 2-tiazolil, 4-tiazolil, 5-tiazolil, itd. .), furil (uključujući 2-furanil, 3-furanil, itd.), tienil (uključujući 2-tienil, 3-tienil, itd.), piridil (uključujući 2-piridil, 3-piridil, 4-piridil, itd. ), pirazinil ili pirimidinil (uključujući 2-pirimidil, 4-pirimidil, itd.).

[0075] Rastvarači koji se koriste u predmetnom otkriću su komercijalno dostupni.

[0076] Predmetno otkriće koristi sledeće skraćenice: aq predstavlja vodu; ekv. predstavlja ekvivalent; DCM predstavlja dihlorometan; PE predstavlja petroleum etar; DMF predstavlja N,N-dimetilformamid; DMSO predstavlja dimetil sulfoksid; EtOAc predstavlja etil acetat; EtOH predstavlja etanol; MeOH predstavlja metanol; Cbz predstavlja benziloksikarbonil, koji je zaštitna grupa za amin; Boc predstavlja tercbutoksikarbonil, koji je zaštitna grupa za amin; HOAc predstavlja sirćetnu kiselinu; THF predstavlja tetrahidrofuran; LDA predstavlja litijum diizopropilamid.

[0077] Jedinjenja su imenovana u skladu sa konvencionalnim principima imenovanja u oblasti ili pomoću ChemDraw<®>softvera, a komercijalno dostupna jedinjenja su imenovana korišćenjem imena iz kataloga dobavljača.

Detaljan opis poželjnih primera izvođenja

Primer 1

[0078]

Sintetski put:

[0079]

Preparacije jedinjenja 1-10:

[0080] U rastvor fenola (8,18 g, 86,92 mmol, 7,64 mL, 1 ekv.) u tetrahidrofuranu (100 mL) dodati su kalijum terc-butoksid (11,70 g, 104,27 mmol, 1,2 ekv.) i jedinjenje 1-9 (10 g, 86,90 mmol, 7,94 mL, 1 ekv.). Dobijeni reakcioni rastvor je reagovao na sobnoj temperaturi (30 °C) tokom 6 sati. Reakcioni rastvor je polako sipan u vodu (150 mL), i ekstrahovan etil acetatom (100 mL*3). Organska faza je isprana sukcesivno sa 1 N vodenim rastvorom natrijum hidroksida (150 mL) i zasićenim fiziološkim rastvorom (200 mL), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 1-10.<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8,02 (q, J=8,0Hz, 1H), 7,50-7,41 (m, 2H), 7,31-7,24 (m, 1H), 7,21-7,14 (m, 2H), 6,90 (ddd, J=1,8,7,8, 14,2Hz, 2H). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 190.3.

Preparacije jedinjenja 1-6:

[0081] Na -78 °C, pod zaštitom azotom, u rastvor jedinjenja 1-10 (0.67 g, 3,54 mmol, 1 ekv.) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (15 mL) dodat je u kapima n-butil litijum (2,5 M, 1,6 mL, 1,13 ekv.). Dobijeni reakcioni rastvor je reagovao na -78 °C tokom 1 sata. Zatim je dodat triizopropilborat (866 mg, 4,60 mmol, 1,06 mL, 1,3 ekv.), i smeša je reagovala na -78 °C tokom 1 sata. U reakcioni rastvor dodat je zasićeni vodeni rastvor amonijum hlorida (30 mL), i smeša je ekstrahovana etil acetatom (20 mL*3). Organska faza je isprana zasićenim fiziološkim rastvorom (30 mL), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 1-6.<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8,15 (t, J=8,5Hz, 1H), 7,52-7,39 (m, 2H), 7,32-7,22 (m, 1H), 7,17 (brd, J=7,8Hz, 2H), 6,87 (dd, J=1,6, 7,9Hz, 1H), 1,36-1,14 (m, 1H), 0.87-0.55 (m, 1H). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 234,1.

Preparacije jedinjenja 1-3:

[0082] Preparacije LDA rastvora: pod zaštitom azotom, na -78 °C, u rastvor diizopropilamina (1,70 g, 16,80 mmol, 2,37 mL, 1,05 ekv.) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (30 mL), dodat je u kapima n-butil litijum (2,5 M, 7,04 mL, 1,1 ekv.). Dobijena smeša je zagrejana do 0 °C, reagovala je tokom 0.5 sati i ponovo je ohlađenja na -78 °C da bi se kasnije koristila.

[0083] Na -78 °C, pod zaštitom azotom, prethodno pomenuti LDA rastvor dodat je u kapima u rastvor jedinjenja 1-1 (1,84 g, 15,99 mmol, 1 ekv.) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (5 mL). Dobijena smeša je reagovala na -78 °C tokom 1 sata. U reakcioni rastvor dodat je u kapima rastvor jedinjenja 1-2 (3,41 g, 15,99 mmol, 1 ekv.) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (5 mL). Dobijena smeša je postepeno zagrevana do sobne temperature (24 °C), i reagovala je dodatnih 16 sati. U sistem je dodat rastvor zasićenog amonijum hlorida, i etil acetat (20 mL). Tečnost je odvojena i ekstrahovana. Organska faza je isprana zasićenim fiziološkim rastvorom (10 mL), zatim osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 1-3. LCMS: MS(ESI)m/z(M-56+H)<+>: 272,9.

Preparacije jedinjenja 1-4:

[0084] Na 0 °C, Dess-martin perjodinan (7,84 g, 18,47 mmol, 5,72 mL, 1,2 ekv.) dodat je u rastvor jedinjenja 1-3 (5,07 g, 15,44 mmol, 1 ekv.) u anhidrovanom dihlorometanu (300 mL). Smeša je postepeno zagrevana do sobne temperature (26 °C) i reagovala je tokom 3 sata. U sistem je dodat zasićeni rastvor natrijum hidrogen karbonata (200 mL) i dihlorometan (400 mL). Smeša je filtrirana, i filtrat je razdvojen. Organska faza je isprana zasićenim fiziološkim rastvorom (100 mL), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 1-4. LCMS: MS(ESI)m/z(M-56+H)<+>: 270.9.

Preparacije jedinjenja 1-5:

[0085] U jedinjenje 1-4 (5,94 g, 18,20 mmol, 1 ekv.) u 1,4-dioksanu (500 mL) i etanolu (100 mL) dodati su natrijum hidrogen karbonat (1,72 g, 20.51 mmol, 797,50 µL, 1,13 ekv.) i hidrazin hidrat (2,32 g, 45,35 mmol, 2,25 mL, 2,49 ekv.). Dobijena smeša je zagrejana do 75 °C i reagovala je tokom 16 sati. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom, emulgovan sa dihlorometan/metanolom (110 mL, zap./zap. = 10/1) i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 1-5. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 321,4.

Preparacije jedinjenja 1-7:

[0086] U suspenziju jedinjenja 1-5 (500 mg, 1,56 mmol, 1 ekv.) i jedinjenja 1-6 (600 mg, 2,58 mmol, 1,65 ekv.) u dihloroetanu (20 mL), dodati su bakar acetat (600 mg, 3,30 mmol, 2,12 ekv.), piridin (600 mg, 7,59 mmol, 612,24 µL, 4,86 ekv.) i molekulsko sito 4A (500 mg). Dobijena smeša je tri puta zamenjena kiseonikom, i zagrejana do 70 °C i ragovala je 40 sati pod atmosferom balona sa kiseonikom. Reakcioni rastvor je filtriran, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dsu dihlorometan (100 mL), voda (20 mL) i vodeni amonijak (30% čistoća, 15 mL). Tečnost je odvojena i ekstrahovana. Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni, kako bi se dobilo jedinjenje 1-7. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 508,1,

Preparacije jedinjenja 1-8:

[0087] U jedinjenje 1-7 (250 mg, 492,58 µmol, 1 ekv.) u dihlorometanu (4 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (1,54 g, 13,51 mmol, 1 mL, 27,42 ekv.). Dobijena smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (31 °C) tokom 0.5 sati. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 1-8 (sirovo, trifluoroacetat). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 408,0.

Preparacije jedinjenja 1A i 1B:

[0088] U jedinjenje 1-8 (200 mg, 383,55 µmol, 1 ekv., trifluoroacetat) i natrijum karbonat (200 mg, 1,89 mmol, 4,92 ekv.) u tetrahidrofuranu (3 mL) i vodi (3 mL), dodat je akriloil hlorid (40 mg, 441,95 µmol, 36,04 µL, 1,15 ekv.) u tetrahidrofuranu (0.1 mL). Dobijena smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (31 °C) tokom 10 minuta. U reakcioni rastvor je dodat dihlorometan (50 mL). Tečnost je odvojena i ekstrahovana. Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen sukcesivno hromatografijom na koloni i visoko-efikasnom tečnom hromatografijom (alkalnom); proizvod je detektovan superkritičnom fluidnom hromatografijom (hromatografska kolona: Chiralcel OJ-3150 × 4,6 mmI.D, 3 µm; mobilna faza: A: superkritični ugljen-dioksid, B: rastvor 0.05% dietilamina u etanolu; gradijent: B, od 5% do 40% za 5 minuta, zadržavanje na 40% tokom 2,5 min, nazad na 5% i ekvilibracija tokom 2,5 minuta; brzina protoka: 2,5 mL/min; temperatura kolone: 35 °C; talasna dužina: 220 nm) i analiziran kao racemsko jedinjenje, koje je razdvojeno kako bi se dobili hiralni izomeri, jedinjenje 1A i jedinjenje 1B sa vremenom zadržavanja od 5,091 min i 5,687 min, redom.

[0089] Jedinjenje 1A:<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9,43-9,42(m, 1H)8,51-8,49(m, 1H), 7,51-7,47(m, 4H), 7,31-7,25(m, 3H), 6,85-6,83(m, 1H), 6,13-6,08(m, 1H), 5,68-5,63(m, 1H), 4,62-4,58(m, 1H), 4,32-3,95(m, 2H), 3,65-3,55(m, 1H), 2,30-2,20(m, 1H), 2,05-1,80(m, 3H), 1,60-1,50(m, 1H). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 462,2.

[0090] Jedinjenje 1B:<1>H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 9,43-9,41(m, 1H), 8,49(s, 1H), 7,51-7,47(m, 4H), 7,32-7,25(m, 3H), 6,85-6,83(m, 1H), 6,12-6,08(m, 1H), 5,70-5,64(m, 1H), 4,614,58(m, 1H), 4,29-3,95(m, 2H), 3,65-3,55(m, 1H), 2,28-2,20(m, 1H), 2,05-1,80(m, 3H), 1,60-1,50(m, 1H). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 462,0.

Primer 2

[0091]

Sintetski put:

[0092]

Preparacije jedinjenja 2-3:

[0093] Jedinjenje 2-2 (30 g, 149,38 mmol, 2,16 ekv.) dodato je u rastvor jedinjenja 2-1 (9 g, 69,18 mmol, 1 ekv.) u dihloroetanu (500 mL), i zatim su sukcesivno dodati piridin (17,64 g, 223,01 mmol, 18,00 mL, 3,22 ekv.), molekulsko sito 4A (9 g) i bakar acetat (25,20 g, 138,74 mmol, 2,01 ekv.). Smeša je zamenjena tri puta sa kiseonikom, i zagrejana do 60 °C i reagovala je tokom 16 sati pod atmosferom balona sa kiseonikom. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 2-3.

Preparacije jedinjenja 2-4:

[0094] Bis(pinakolato)diboron (9,79 g, 38,55 mmol, 2 ekv.), kalijum acetat (3,78 g, 38,56 mmol, 2 ekv.) i [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum (1,43 g, 1,95 mmol, 1,01 e-1 ekv.) sukcesivno su dodati u jedinjenje 2-3 (5,5 g, 19,29 mmol, 1 ekv.) u anhidrovanom 1,4-dioksanu (150 mL). Smeša je zagrejana do 110 °C i reagovala je tokom 16 sati pod zaštitom azotom. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature, i zatim filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 2-4.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7,78-7,76(m, 2H), 7,16-7,14(m, 1H), 7,04-7,01(m, 2H), 6,99-6,91(m, 2H), 1,33(s,12H).

Preparacije jedinjenja 2-5:

[0095] Jedinjenje 2-4 (2 g, 6,02 mmol, 1 ekv.) je rastvoreno u tetrahidrofuranu (40 mL) i vodi (10 mL), i zatim je dodat natrijum perjodat (3,86 g, 18,06 mmol, 1,00 mL, 3 ekv.). Smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (26 °C) tokom 0.5 sati, i zatim je dodata hlorovodonična kiselina (2 M, 2,00 mL, 6,64 e-1 ekv.). Smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (26 °C) dodatnih 16 sati. U reakcioni rastvor dodat je etil acetat (20 mL*3). Tečnost je odvojena i ekstrahovana. Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 2-5.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8,16-8,14(m, 2H), 7,71-7,69(m, 1H), 7,21-7,18(m, 1H), 7,07-6,96(m, 3H).

Preparacije jedinjenja 2-6:

[0096] Jedinjenje 1-5 (400 mg, 1,25 mmol, 1 ekv.) dodato je u rastvor jedinjenja 2-5 (624,31 mg, 2,50 mmol, 2 ekv.) u dihloroetanu (15 mL), i sukcesivno su dodati piridin (321,44 mg, 4,06 mmol, 328 µL, 3,25 ekv.), molekulsko sito 4A (500 mg) i bakar acetat (468 mg, 2,58 mmol, 2,06 ekv.). Smeša je zamenjena tri puta sa kiseonikom, i zagrejana do 60 °C i reagovala je 16 sati pod atmosferom balona sa kiseonikom. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i rastvoren u dihlorometanu (5 mL), i dodata je voda (3 mL). Tečnost je odvojena i ekstrahovana. Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 2-6. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 525,3.

Preparacije jedinjenja 2-7:

[0097] Trifluorosirćetna kiselina (4,62 g, 40.52 mmol, 3,00 mL, 70.84 ekv.) je dodata u rastvor jedinjenja 2-6 (300 mg, 571,94 µmol, 1 ekv.) u anhidrovanom dihlorometanu (2 mL). Smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (25 °C) tokom 0.5 sati. Reakcioni rastvor je direktno koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren dodavanjem dihlorometana (20 mL), i zatim ponovo koncentrovan pod sniženim pritiskom, kako bi se dobilo jedinjenje 2-7 (sirovo, trifluoroacetat). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 425,0.

Preparacije jedinjenja 2A i 2B:

[0098] Jedinjenje 2-7 (200 mg, 371,44 µmol, 1 ekv., trifluoroacetat) je rastvoreno u tetrahidrofuranu (2 mL) i vodi (2 mL); dodat je natrijum karbonat (50.00 mg, 471,74 µmol, 1,27 ekv.), i rastvor akriloil hlorida (26 mg, 287,27 µmol, 23,42 µL, 7,73 e-1 ekv.) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (0.5 mL) dodat je u kapima. Smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (26 °C) tokom 10 minuta. Reakcioni rastvor je podešen na pH = 7 sa hlorovodoničnom kiselinom (1 M), i zatim su dodati voda (5 mL), dihlorometan (10 mL) i metanol (1 mL). Tečnost je odvojena i ekstrahovana. Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen visoko-efikasnom tečnom hromatografijom (alkalnom); proizvod je detektovan superkritičnom fluidnom hromatografijom (hromatografska kolona: Chiralpak AD-350 × 3 mmI.D, 3 µm; mobilna faza: A: superkritični ugljen-dioksid, B: rastvor 0.05% dietilamina u etanolu; gradijent: B, od 5% do 40% za 2,5 minuta, zadržavanje na 40% tokom 0.35 min, nazad na 5% i ekvilibracija tokom 0.15 minuta; brzina protoka: 2,8 mL/min; temperatura kolone: 40 °C; talasna dužina: 220 nm) i analiziran kao racemsko jedinjenje, koje je razdvojeno kako bi se dobili hiralni izomeri, jedinjenje 2A i jedinjenje 2B sa vremenom zadržavanja od 2,205 min i 2,504 min, redom.

[0099] Jedinjenje 2A:<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8,94(s, 1H), 8,21-8,19(m, 1H), 7,64-7,62 (m, 2H), 7,22-7,05(m, 5H), 6,69-6,62(m, 1H), 6,30-6,26(m, 1H), 5,70-5,65(m, 1H), 5,01-4,98(m, 0.5H), 4,65-4,62(m, 0.5H), 4,33-4,30(m, 0.5H), 4,09-4,06(m, 0.5H), 3,52-3,41(m, 1,5H) , 3,20-3,17(m, 1H), 2,89-2,86 (m, 0.5H), 2,35-2,32(m, 1H), 2,07-2,04 (m, 2H), 1,96-1,70(m, 1H). LCMS: MSm/z(M+H)<+>: 479,5.

[0100] Jedinjenje 2B:<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8,94(s, 1H), 8,21-8,19(m, 1H), 7,64-7,62 (m, 2H), 7,22-7,05(m, 5H), 6,68-6,62(m, 1H), 6,30-6,26(m, 1H), 5,73-5,65(m, 1H), 5,01-4,98(m, 0.5H), 4,65-4,62(m, 0.5H), 4,33-4,30(m, 0.5H), 4,09-4,06(m, 0.5H), 3,54-3,41(m, 1,5H) , 3,21-3,17(m, 1H), 2,92-2,89 (m, 0.5H), 2,35-2,32(m, 1H), 2,07-2,03 (m, 2H), 1,96-1,70(m, 1H). LCMS: MSm/z(M+H)<+>: 479,1.

Primer 3

[0101]

Sintetski put:

[0102]

Preparacije jedinjenja 3-9:

[0103] Cezijum karbonat (46,25 g, 141,95 mmol, 2 ekv.) je dodat u rastvor jedinjenja 3-8 (10 g, 70.87 mmol, 7,52 mL, 1 ekv.) i jedinjenja 2-2 (11,25 g, 86,48 mmol, 1,22 ekv.) u anhidrovanom N,N-dimetilformamidu (500 mL). Smeša je reagovala na 140 °C tokom 16 sati. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature i zatim koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se uklonio rastarač; ostatak je rastvoren tako što je dodat etil acetat (500 mL), i zatim voda (200 mL). Rastvor je razdvojen. Organska faza je isprana zasićenim fiziološkim rastvorom (200 mL), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 3-9.

Preparacije jedinjenja 3-10:

[0104] Vlažni paladijum ugljenik (4,5 g, 10% čistoća) dodat je u jedinjenje 3-9 (9 g, 35,83 mmol, 1 ekv.) u anhidrovanom metanolu (250 mL). Smeša je zamenjena tri puta vodonikom i reagovala je na sobnoj temperaturi (15 °C) pod balonom atmosfere vodonika tokom 3 sata. Reakcioni rastvor je filtriran (kroz celit), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 3-10. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 221,7.

Preparacije jedinjenja 3-4:

[0105] Hlorovodonična kiselina (600 mL, koncentrovana hlorovodonična kiselina) je dodata u jedinjenje 3-10 (19 g, 85,89 mmol, 1 ekv.), i smeša je ohlađena do 0 °C. Rastvor natrijum nitrita (11,85 g, 171,79 mmol, 2 ekv.) u vodi (200 mL) dodat je u kapima u prethodno pomenuti reakcioni rastvor. Smeša je reagovala na 0 °C tokom 1 sata, i u kapima je dodata smeša kalaj hlorid dihidrata (79,47 g, 352,17 mmol, 4,1 ekv.) i hlorovodonične kiseline (200 mL, koncentrovana hlorovodonična kiselina). Nakon što je dodavanje u kapima završeno, smeša je reagovala na 0 °C tokom 3 sata. Reakcioni rastvor je podešen na pH=12 natrijum hidroksidom (6 M), i dodat je dihlorometan (2000 mL). Tečnost je odvojena. Organska faza je isprana zasićenim fiziološkim rastvorom, osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 3-4.<1>HNMR (400MHz, CDCl3) δ 7,27(s, 1H), 7,11-7,00(m, 2H), 6,98-6,90(m, 2H), 6,88-6,76(m, 2H), 5,08(s, 1H), 3,56(s, 2H).

Preparacije jedinjenja 3-2:

[0106] U rastvor jedinjenja 3-1 (10 g, 43,24 mmol, 1 ekv.) u dihlorometanu (120 mL) dodat je N,N'-karbonildiimidazol (7,71 g, 47,57 mmol, 1,1 ekv.). Dobijeni reakcioni rastvor je reagovao na 10 °C tokom 1 sata, i dodat je N,O-dimetil hidroksilamin hidrohlorid (4,72 g, 48,37 mmol, 1,12 ekv.). Dobijeni reakcioni rastvor je reagovao na 10 °C tokom 16 sati. U reakcioni rastvor su dodati dihlorometan (100 mL) i voda (60 mL). Tečnost je odvojena i ekstrahovana. Organska faza je isprana sukcesivno 1 N vodenim rastvorom hlorovodonične kiseline (50 mL), 1 N vodenim rastvorom natrijum hidroksida (50 mL) i zasićenim fiziološkim rastvorom (80 mL), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 3-2. LCMS: MS(ESI)m/z(M-56+H)<+>: 218,9.

Preparacije jedinjenja 3-3:

[0107] Preparacije LDA rastvora: na -78 °C, pod zaštitom azotom, u rastvor diizopropilamina (1,49 g, 14,74 mmol, 2,08 mL, 1,62 ekv.) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (30 mL), dodat je u kapima n-butil litijum (2,5 M, 6,0 mL, 1,65 ekv.). Dobijena smeša je zagrejana do 0 °C, reagovala je tokom 0.5 sati i ponovo je ohlađena na -78 °C kako bi se kasnije koristila.

[0108] Na -78 °C, pod zaštitom azotom, u prethodno pomenuti LDA rastvor dodat je u kapima rastvor jedinjenja 1-1 (2,5 g, 9,11 mmol, 1 ekv.) i 3-2 (1,26 g, 10.94 mmol, 2,98 mL, 1,2 ekv.) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (20 mL). Dobijena smeša je postepeno zagrevana do sobne temperature (15 °C), i reagovala je dodatnih 16 sati. Reakcija je ugašena dodavanjem zasićenog amonijum hlorida (100 mL). Zatim je najveći deo rastvora iz smeše rastvora podvrgnut evaporaciji putem centrifugiranja pod sniženim pritiskom, i tečnost je odvojena i ekstrahovana etil acetatom (150 mL). Organska faza je isprana zasićenim fiziološkim rastvorom (150 mL), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 3-3. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 328,9.

Preparacije jedinjenja 3-5:

[0109] Na 10 °C, rastvor pomešanog jedinjenja 3-3 (270 mg, 822,39 µmol, 1 ekv.), jedinjenja 3-4 (540.00 mg, 2,29 mmol, 2,78 ekv.), serćetne kiseline (2,10 g, 34,97 mmol, 2 mL, 42,52 ekv.) i etanola (10 mL) je reagovao tokom 1 sata. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 3-5. LCMS: MS(ESI)m/z(M-56+H)<+>: 491,0.

Preparacije jedinjenja 3-6:

[0110] U eprivetu za mikrotalasnu rernu dodato je jedinjenje 3-5 (720 mg, 1,32 mmol, 1 ekv.), cezijum karbonat (1,29 g, 3,96 mmol, 3 ekv.) i N,N-dimetilformamid (1,5 mL). Dobijeni raeakcioni rastvor je zagrejan na 150 °C i reagovao je tokom 30 minuta pod mikrotalasima. Reakcioni rastvor je filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 3-6. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 527,1,

Preparacije jedinjenja 3-7:

[0111] U rastvor jedinjenja 3-6 (0.4 g, 759,73 µmol, 1 ekv.) u dihlorometanu (8 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (3,08 g, 27,01 mmol, 2 mL, 35,56 ekv.). Dobijeni reakcioni rastvor je reagovao na 10 °C tokom 0.5 sati. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 3-7 (sirovo, trifluoroacetat). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 427,0.

Preparacije jedinjenja 3A i 3B:

[0112] U rastvor jedinjenja 3-7 (420 mg, 985,01 µmol, 1 ekv., trifluoroacetat) u tetrahidrofuranu (8 mL) dodati su natrijum karbonat (521 mg, 4,92 mmol, 4,99 ekv.) i voda (4 mL); zatim je rastvor akriloil hlorida (180 mg, 1,99 mmol, 162,16 µL, 2,02 ekv.) u tetrahidrofuranu (0.2 mL) dodat u kapima. Dobijeni reakcioni rastvor je reagovao na 10 °C tokom 0.5 sati. U reakcioni rastvor su dodati dihlorometan /metanol (50 mL, 10/1) i vodi (50 mL). Tečnost je odvojena. Organska faza je isprana zasićenim fiziološkim rastvorom (50 mL), osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni; proizvod je detektovan superkritičnom fluidnom hromatografijom (hromatografska kolona: Chiralpak AD-350 × 4,6 mmI.D, 3 µm; mobilna faza: A: superkritični ugljen-dioksid, B: rastvor 0.05% dietilamina u etanolu; gradijent: B, od 5% do 40% za 2 minuta, zadržavanje na 40% tokom 1,2 min, nazad na 5% i ekvilibracija tokom 0.8 minuta; brzina protoka: 4 mL/min; temperatura kolone: 35 °C; talasna dužina: 220 nm) i analiziran kao racemsko jedinjenje, koje je razdvojeno kako bi se dobili hiralni izomeri, jedinjenje 3A i jedinjenje 3B sa vremenom zadržavanja od 1,979 min i 2,083 min, redom.

[0113] Jedinjenje 3A:<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9,11(brs, 1H), 8,37(brs, 1H), 7,85(brd, J=8,5Hz, 2H), 7,51-7,33(m, 3H), 7,22(brd, J=8,5Hz, 2H), 6,88(brdd, J=10.3, 16,6Hz, 1H), 6,18(brt, J=13,3Hz, 1H), 5,83-5,66(m, 1H), 5,10-4,91(m, 1H), 4,67(brd, J=13,1Hz, 0.5H), 4,42-4,21(m, 1H), 4,18-3,92(m, 2H), 3,86-3,63(m, 2H), 3,09(brs, 0.5H). LCMS:MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 481,1,

[0114] Jedinjenje 3B:<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9,15(brs, 1H), 8,41(brs, 1H), 7,89(brd, J=8,8Hz, 2H), 7,54-7,37(m, 3H), 7,25(brd, J=8,8Hz, 2H), 6,91(brdd, J=10.7, 16,4Hz, 1H), 6,29-6,14(m, 1H), 5,85-5,68(m, 1H), 5,12-4,95(m, 1H), 4,71(brd, J=12,8Hz, 0.5H), 4,46-4,23(m, 1H), 4,22-3,91(m, 2H), 3,90-3,67(m, 2H), 3,14(brd, J=10.8Hz, 0.5H). LCMS:MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 481,1,

Primer 4

[0115]

Sintetski put:

[0116]

Preparacije jedinjenja 4-2:

[0117] Cezijum karbonat (14,78 g, 45,36 mmol, 2 ekv.) je dodat u rastvor jedinjenja 3-8 (3,2 g, 22,68 mmol, 2,41 mL, 1 ekv.) i jedinjenja 4-1 (4 g, 27,01 mmol, 1,19 ekv.) u anhidrovanom N,N-dimetilformamidu (100 mL). Smeša je reagovala na 100 °C tokom 2,5 sata. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren dodavanjem etil acetata (200 mL), i zatim je dodata voda (200 mL). Rastvor je razvojen. Organska faza je isprana zasićenim fiziološkim rastvorom (100 mL), zatim osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 4-2.

Preparacije jedinjenja 4-3:

[0118] Vlažni paladijum ugljenik (4 g, 10% čistoća) dodat je u jedinjenje 4-2 (4 g, 14,86 mmol, 1 ekv.) u anhidrovanom metanolu (150 mL). Smeša je zamenjena tri puta i reagovala je na sobnoj temperaturi (10 °C) pod balonom atmosfere vodonika (15 psi) tokom 16 sati. Reakcioni rastvor je filtriran (kroz celit), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 4-3. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 239,8.

Preparacije jedinjenja 4-4:

[0119] Hlorovodonična kiselina (200 mL, koncentrovana hlorovodonična kiselina) je dodata u jedinjenje 4-3 (6,5 g, 27,17 mmol, 1 ekv.), i smeša je ohlađena do 0 °C. Rastvor natrijum nitrita (3,75 g, 54,35 mmol, 2 ekv.) u vodi (70 mL) dodat je u kapima u prethodno pomenuti reakcioni rastvor. Smeša je reagovala na 0 °C tokom 1 sata, a zatim je smeša kalaj hlorid dihidrata (24,53 g, 108,70 mmol, 4 ekv.) i hlorovodonične kiseline (70 mL, koncentrovana hlorovodonična kiselina) dodata u kapima. Nakon što je dodavanje u kapima završeno, smeša je reagovala na 0 °C tokom 3 sata, postepeno je zagrejana do sobne temperature (10 °C) i reagovala je dodatnih 16 sati. pH vrednost je podešena na oko 12 natrijum hidroksidom (6 M), i dodat je dihlorometan (500 mL*3). Tečnost je odvojena i ekstrahovana. Organska faza je isprana zasićenim fiziološkim rastvorom, osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 4-4. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 255,0.

Preparacije jedinjenja 4-5:

[0120] U rastvor jedinjenja 1-5 (0.5 g, 1,53 mmol, 1 ekv.) i jedinjenje 4-4 (1,00 g, 3,93 mmol, 2,57 ekv.) u etanolu (15 mL), dodata je sirćetna kiselina (3,15 g, 52,38 mmol, 3 mL, 34,24 ekv.). Smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (20 °C) tokom 16 sati. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 4-5. LCMS: MS(ESI)m/z(M-56+H)<+>: 507,3.

Preparacije jedinjenja 4-6:

[0121] U rastvor jedinjenja 4-5 (1,59 g, 2,83 mmol, 1 ekv.) u N,N-dimetilformamidu (20 mL) dodat je cezijum karbonat (2,76 g, 8,48 mmol, 3 ekv.). Smeša je zagrejana do 135 °C i reagovala je tokom 1,5 sati. Reakcioni rastvor je filtriran (kroz celit), i filterski kolač je opran N,N-dimetilformamidom (20 mL). Kombinovani filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 4-6. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 543.3.

Preparacije jedinjenja 4-7:

[0122] U rastvor jedinjenja 4-6 (110 mg, 196,92 µmol, 1 ekv.) u dihlorometanu (4 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (1,54 g, 13,51 mmol, 1 mL, 68,59 ekv.). Smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (20 °C) tokom 0.5 sati. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 4-7 (sirovo, trifluoroacetat). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 443.1,

Preparacije jedinjenja 4A i 4B:

[0123] U rastvor jedinjenja 4-7 (677 mg, 1,22 mmol, 1 ekv., trifluoroacetat) u tetrahidrofuranu (10 mL) i vodi (10 mL) dodat je natrijum karbonat (1 g, 9,43 mmol, 7,75 ekv.), i u reakcioni rastvor dodat je u kapima rastvor akriloil hlorida (63 mg, 696,07 µmol, 56,76 µL, 5,72 e-1 ekv.) u tetrahidrofuranu (1 mL). Smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (25 °C) tokom 1 sata i u nju je dodat rastvor acil hlorida (35 mg, 386,71 µmol, 31,53 µL, 3,18 e-1 ekv.) u tetrahidrofuranu (1 mL), i dobijeni rastvro je reagovao na sobnoj temperaturi (25 °C) dodatnih 0.5 sati. Reakcioni rastvor je podešen na pH od oko 5 sa 1 N hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovan dihlorometanom (10 mL*3). Kombinovana organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni; proizvod je detektovan superkritičnom fluidnom hromatografijom (hromatografska kolona: Chiralpak AD-350 × 4,6 mmI.D, 3 µm; mobilna faza: A: superkritični ugljen-dioksid, B: rastvor 0.05% dietilamina u metanolu; gradijent: B, od 5% do 40% za 2 minuta, zadržavanje na 40% tokom 1,2 min, nazad na 5% i ekvilibracija tokom 0.8 minuta; brzina protoka: 4 mL/min; temperatura kolone: 35 °C; talasna dužina: 220 nm) i analiziran kao racemsko jedinjenje, koje je razdvojeno kako bi se dobili hiralni izomeri, jedinjenje 4A i jedinjenje 4B, sa vremenom zadržavanja od 2,134 min i 2,518 min, redom.

[0124] Jedinjenje 4A:<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9,11(s, 1H), 8,34(s, 1H), 7,87(d, J=8,8Hz, 2H), 7,48-7,39(m, 1H), 7,35(d, J=8,8Hz, 2H), 7,14-7,03(m, 1H), 6,94-6,75(m, 1H), 6,09(t, J=16,3Hz, 1H), 5,73-5,55(m, 1H), 4,72(d, J=12,0Hz, 0.5H), 4,31(t, J=14,8Hz, 1H), 4,08(d, J=13,3Hz, 0.5H), 3,55-3,43(m, 0.5H), 3,32-3,13(m, 1,5H), 3,13-2,90(m, 1H), 2,27-2,17(m, 1H), 2,06-1,81(m, 2H), 1,65-1,49(m, 1H). LCMS:MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 497,2.

[0125] Jedinjenje 4B:<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9,12(s, 1H), 8,36(s, 1H), 7,89(d, J=8,8Hz, 2H), 7,52-7,40(m, 1H), 7,37(d, J=9,0Hz, 2H), 7,16-7,06(m, 1H), 6,94-6,74(m, 1H), 6,10(t, J=16,6Hz, 1H), 5,75-5,56(m, 1H), 4,73(d, J=11,5Hz, 0.5H), 4,32(t, J=15,1Hz, 1H), 4,10(d, J=13,1Hz, 0.5H), 3,58-3,44(m, 0.5H), 3,32-3,13(m, 1,5H), 3,15-2,92(m, 1H), 2,27-2,17(m, 1H), 2,09-1,82(m, 2H), 1,65-1,49(m, 1H). LCMS:MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 497,2.

Primer 5

[0126]

Sintetski put:

[0127]

Preparacije jedinjenja 5-2:

[0128] Mešani rastvor jedinjenja 3-8 (5,16 g, 36,57 mmol, 3,88 mL, 1 ekv.), jedinjenja 5-1 (5,32 g, 40.89 mmol, 7,54 mL, 1,12 ekv.), cezijum karbonata (23,83 g, 73,14 mmol, 2 ekv.) i N,N-dimetilformamida (60 mL) je zagrejan na 80 °C i mešan tokom 2 sata. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 5-2.<1>HNMR (400MHz, CDCl3) δ 8,24-8,26(m, 2H), 6,99-7,17(m, 5H).

Preparacije jedinjenja 5-3:

[0129] U rastvor jedinjenja 5-2 (4,5 g, 17,92 mmol, 1 ekv.) u metanolu (60 mL) dodat je vlažni paladijum ugljenik (2,3 g, 10% čistoća). Smeša je zamenjena tri puta vodonikom, i zatim mešana na 15 °C pod balonom atmosfere vodonika tokom 16 sati. Reakcioni rastvor je filtriran (kroz celit). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 5-3.<1>HNMR (400MHz, CDCl3) δ 6,79-6,83(m, 4H), 6,64-6,53(m, 3H), 3,54(brs, 2H). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 222,1

Preparacije jedinjenja 5-4:

[0130] Na 0 °C, u rastvor jedinjenja 5-3 (5,5 g, 24,86 mmol, 1 ekv.) u hlorovodoničnoj kiselini (150 mL, koncentrovana hlorovodonična kiselina) dodat je u kapima rastvor natrijum nitrita (3,43 g, 49,73 mmol, 2 ekv.) u vodi (50 mL), i smeša je reagovala na 0 °C tokom 1 sata. Zatim je u reakcioni rastvor dodat u kapima rastvor kalaj hlorid dihidrata (23,00 g, 101,94 mmol, 4,1 ekv.) u hlorovodoničnoj kiselini (50 mL, koncentrovana hlorovodonična kiselina), i smeša je reagovala na 0 °C tokom 3 sati. Reakcioni rastvor je podešen na pH od oko 13 rastvorom natrijum hidroksida (6 N), i ekstrahovana dihlorometanom (200 mL*3). Kombinovana organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 5-4. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 237,1.

Preparacije jedinjenja 5-5:

[0131] U rastvor jedinjenja 1-5 (500 mg, 1,53 mmol, 1 ekv.) i jedinjenje 5-4 (1,00 g, 4,23 mmol, 2,76 ekv.) u etanolu (25 mL) dodata je sirćetna kiselina (5,25 g, 87,43 mmol, 5 mL, 57,06 ekv.), i smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (25 °C) tokom 16 sati. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 5-5. LCMS: MS(ESI)m/z(M-56+H)<+>: 489,1.

Preparacije jedinjenja 5-6

[0132] U rastvor jedinjenja 5-5 (1,9 g, 3,49 mmol, 1 ekv.) u N,N-dimetilformamidu (30 mL) dodat je cezijum karbonat (3,45 g, 10.57 mmol, 3,03 ekv.). Smeša je zagrejana do 135 °C i reagovala je tokom 1 sata. Reakcioni rastvor je filtriran (kroz celit), i filterski kolač je opran N,N-dimetilformamidom (30 mL). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 5-6. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 525,3.

Preparacije jedinjenja 5-7:

[0133] U jedinjenje 5-6 (585 mg, 1,12 mmol, 1 ekv.) u dihlorometanu (16 mL) dodata je u kapima trifluorosirćetna kiselina (6,16 g, 54,02 mmol, 4 mL, 48,44 ekv.), i smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (30 °C) tokom 0.5 sati. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 5-7 (sirovo, trifluoroacetat). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 425,2.

Preparacije jedinjenja 5A i 5B:

[0134] U rastvor jedinjenja 5-7 (1,36 g, 2,53 mmol, 1 ekv., trifluoroacetat) u tetrahidrofuranu (10 mL) i vodi (10 mL) dodat je natrijum karbonat (1,15 g, 10.85 mmol, 4,30 ekv.), i u reakcioni rastvor dodat je u kapima rastvor akriloil hlorida (130 mg, 1,44 mmol, 117,12 µL, 5,69 e-1 ekv.) u tetrahidrofuranu (1 mL). Smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (25 °C) tokom 1 sata. Reakcioni rastvor je podešen na pH od oko 5 sa 1 N hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovan dihlorometanom (10 mL*3). Kombinovana organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni; proizvod je detektovan superkritičnom fluidnom hromatografijom (hromatografska kolona: Cellulose 2 150 × 4,6 mml.D, 5 µm; mobilna faza: A: superkritični ugljen-dioksid, B: rastvor 0.05% dietilamina u etanolu; gradijent: B, od 5% do 40% tokom 5 minuta, zadržavanje na 40% tokom 2,5 min, nazad na 5% i ekvilibracija tokom 2,5 minuta; brzina protoka: 2,5 mL/min; temperatura kolone: 35 °C; talasna dužina: 220 nm) i analiziran kao racemsko jedinjenje, koji je razdvojen kako bi se dobili hiralni izomeri, jedinjenje 5A i jedinjenje 5B sa vremenom zadržavanja od 6,616 min i 6,971 min, redom.

[0135] Jedinjenje 5A:<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9,09(s, 1H), 8,33(s, 1H), 7,85(d, J=9,0Hz, 2H), 7,39-7,22(m, 4H), 7,16-7,05(m, 1H), 6,92-6,76(m, 1H), 6,09(t, J=16,1Hz, 1H), 5,72-5,57(m, 1H), 4,72(d, J=12,3Hz, 0.5H), 4,31(t, J=13,7Hz, 1H), 4,17-4,00(m, 0.5H), 3,53-3,44(m, 0.5H), 3,33-3,14(m, 1,5H), 3,12-3,02(m, 0.5H), 3,01-2,89(m, 0.5H), 2,27-2,16(m, 1H), 2,05-1,80(m, 2H), 1,66-1,46(m, 1H). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 479,2.

[0136] Jedinjenje 5B:<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9,09(s, 1H), 8,33(s, 1H), 7,85(d, J=8,8Hz, 2H), 7,40-7,23(m, 4H), 7,14-7,04(m, 1H), 6,94-6,75(m, 1H), 6,10(t, J=16,1Hz, 1H), 5,72-5,52(m, 1H), 4,73(d, J=12,5Hz, 0.5H), 4,32(t, J=12,7Hz, 1H), 4,09(d, J=13,1Hz, 0.5H), 3,57-3,44(m, 0.5H), 3,33-3,15(m, 1,5H), 3,12-3,03(m, 0.5H), 3,03-2,88(m, 0.5H), 2,27-2,16(m, 1H), 2,05-1,79(m, 2H), 1,68-1,49(m, 1H). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 479,2.

Primer 6

[0137]

Sintetski put:

[0138]

Preparacije jedinjenja 6-2:

[0139] U rastvor jedinjenja 6-1 (19 g, 134,66 mmol, 14,29 mL, 1 ekv.) i jedinjenja 3-8 (20.22 g, 155,43 mmol, 1,15 ekv.) u N,N-dimetilformamidu (400 mL), dodat je cezijum karbonat (84 g, 257,81 mmol, 1,91 ekv.). Smeša je zagrejana do 80 °C i reagovala je tokom 16 sati. Reakcioni rastvor je filtriran (kroz celit), i filterski kolač je opran N,N-dimetilformamidom (30 mL). Kombinovani filtrat je sipan u 2 L vode tokom reakcije. Zatim je smeša reagovala na sobnoj temperaturi (20 °C) dodatnih 10 minuta, i zatim je filtrirana. Filterski kolač je opran vodom (20 mL*5), i dobijeni filterski kolač je rastvoren u 150 mL dihlorometana. Rastvor je opran sa 20 mL zasićenog fiziološkog rastvora. Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 6-2.<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8,28-8,25(m, 2H), 7,56-7,52(m, 1H), 7,45-7,30(m, 1H), 7,25-7,19(m, 3H).

Preparacije jedinjenja 6-3:

[0140] U rastvor jedinjenja 6-2 (8 g, 31,85 mmol, 1 ekv.) u metanolu (90 mL) dodat je vlažni paladijum ugljenik (4 g, 10% čistoća). Smeša je zamenjena tri puta i reagovala je na sobnoj temperaturi (25 °C) pod balonom atmosfere vodonika (15 psi) tokom 16 sati. Reakcioni rastvor je filtriran (kroz celit), i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 6-3. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 222,1.

Preparacije jedinjenja 6-4:

[0141] Na 0 °C, u rastvor jedinjenja 6-3 (6,00 g, 27,12 mmol, 1 ekv.) u hlorovodoničnoj kiselini (180 mL, koncentrovana hlorovodonična kiselina) dodat je u kapima rastvor natrijum nitrita (3,74 g, 54,25 mmol, 2 ekv.) u vodi (60 mL), i smeša je reagovala na 0 °C tokom 1 sata. Zatim je u reakcioni rastvor dodat u kapima rastvor kalaj hlorid dihidrata (25,09 g, 111,21 mmol, 4,1 ekv.) u hlorovodoničnoj kiselini (60 mL, koncentrovana hlorovodonična kiselina), i smeša je reagovala na 0 °C tokom 5 sati. Reakcioni rastvor je podešen na pH od oko 12 6 N rastvorom natrijum hidroksida i ekstrahovan dihlorometanom (150 mL*3). Kombinovana organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 6-4. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 237,1.

Preparacije jedinjenja 6-5:

[0142] U rastvor jedinjenja 1-5 (500 mg, 1,53 mmol, 1 ekv.) i jedinjenja 6-4 (1 g, 4,23 mmol, 2,76 ekv.) u etanolu (20 mL) dodata je sirćetna kiselina (4,20 g, 69,94 mmol, 4 mL, 45,65 ekv.). Smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (25 °C) tokom 16 sati. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 6-5. LCMS: MS(ESI)m/z(M-56+H)<+>: 489,3.

Preparacije jedinjenja 6-6:

[0143] U rastvor jedinjenja 6-5 (800 mg, 1,47 mmol, 1 ekv.) u N,N-dimetilformamidu (15 mL) dodat je cezijum karbonat (1,5 g, 4,60 mmol, 3,13 ekv.). Smeša je zagrejana do 150 °C pod mikrotalasima i reagovala je tokom 0.5 sati. Reakcioni rastvor je filtriran (kroz celit), i filterski kolač je opran N,N-dimetilformamidom (20 mL). Kombinovani filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni kako bi se dobilo jedinjenje 6-6. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 525,3.

Preparacije jedinjenja 6-7:

[0144] U rastvor jedinjenja 6-6 (330 mg, 629,13 µmol, 1 ekv.) u dihlorometanu (8 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (3,08 g, 27,01 mmol, 2 mL, 42,94 ekv.). Smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (25 °C) tokom 0.5 sati. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 6-7 (sirovo, trifluoroacetat). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 425,2.

Preparacije jedinjenja 6A i 6B:

[0145] U rastvor jedinjenja 6-7 (780 mg, 1,45 mmol, 1 ekv., trifluoroacetat) u tetrahidrofuranu (10 mL) i vodi (10 mL) dodat je natrijum karbonat (1,19 g, 11,23 mmol, 7,75 ekv.), i rastvor akriloil hlorida (70 mg, 773,41 µmol, 63,06 µL, 5,34 e-1 ekv.) u tetrahidrofuranu (1 mL) dodat je u kapima. Smeša je reagovala na sobnoj temperaturi (25 °C) tokom 1 sata. Reakcioni rastvor je podešen na pH od oko 5, sa 1 N hlorovodoničnom kiselinom, i ekstrahovan dihlorometanom (10 mL*3). Kombinovana organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen hromatografijom na koloni; proizvod je detektovan superkritičnom fluidnom hromatografijom (hromatografska kolona: Chiralpak IG-350 × 4,6 mmI.D, 3 µm; mobilna faza: A: superkritični ugljen-dioksid, B: rastvor 0.05% dietilamina u etanolu; gradijent: B, od 5% do 40% za 2 minuta, zadržavanje na 40% tokom 1,2 min, nazad na 5% i ekvilibracija tokom 0.8 minuta; brzina protoka: 4 mL/min; temperatura kolone: 35 °C; talasna dužina: 220 nm) i analiziran kao racemsko jedinjenje, koje je razdvojeno kako bi se dobili hiralni izomeri, jedinjenje 6A i jedinjenje 6B sa vremenom zadržavanja od 2,820 min i 3,128 min, redom.

[0146] Jedinjenje 6A:<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9,10(s, 1H), 8,34(s, 1H), 7,85(d, J=8,8Hz, 2H), 7,56-7,47(m, 1H), 7,31-7,20(m, 3H), 7,19-7,11(m, 1H), 6,92-6,74(m, 1H), 6,09(t, J=16,2Hz, 1H), 5,75-5,58(m, 1H), 4,73(d, J=12,0Hz, 0.5H), 4,41-4,23(m, 1H), 4,09(d, J=13,1Hz, 0.5H), 3,54-3,44(m, 0.5H), 3,34-2,90(m, 2,5H), 2,30-2,16(m, 1H), 2,07-1,81(m, 2H), 1,67-1,48(m, 1H). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 479,3.

[0147] Jedinjenje 6B:<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9,10(s, 1H), 8,35(s, 1H), 7,86(d, J=8,8Hz, 2H), 7,56-7,47(m, 1H), 7,35-7,23(m, 3H), 7,19-7,11(m, 1H), 6,93-6,74(m, 1H), 6,10(t, J=16,3Hz, 1H), 5,76-5,57(m, 1H), 4,73(d, J=12,5Hz, 0.5H), 4,32(t, J=14,1Hz, 1H), 4,10(d, J=13,1Hz, 0.5H), 3,55-3,45(m, 0.5H), 3,34-2,88(m, 2,5H), 2,30-2,16(m, 1H), 2,07-1,82(m, 2H), 1,68-1,46(m, 1H). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 479,3.

Referentni primer 7

[0148]

Sintetski put:

[0149]

Preparacije jedinjenja 7-2:

[0150] U jedinjenje 7-1 (6,47 g, 28,22 mmol, 1 ekv.) u dihlorometanu (90 mL) dodat je N,N'-karbonildiimidazol (5,64 g, 34,78 mmol, 1,23 ekv.). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi(25 °C) tokom 1 sata, i dodat je N,O-dimethil hidroksilamin hidrohlorid (3,12 g, 31,99 mmol, 1,13 ekv.). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi (25 °C) tokom 16 sati. Reakcioni rastvor je sukcesivno ispiran sa 1 M hlorovodoničnom kiselinom (80 ml) i zasićenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata (80 ml), i tečnost je odvojena i ekstrahovana. Organska faza je isprana zasićenim fiziološkim rastvorom (50 ml), zatim osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirana, i koncentrovana do suva pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 7-2. LCMS: MS(ESI)m/z(M-56+H)<+>: 217,1.

Preparacije jedinjenja 7-4:

[0151] Na -65 °C, pod zaštitom azotom, u rastvor jedinjenja 7-3 (3,81 g, 28,96 mmol, 1,54 ekv.) u THF (40 mL) dodat je u kapima n-butil litijum (2,5 M, 11 mL, 1,46 ekv.), i smeša je reagovala na -65 °C tokom 1 sata. Zatim je dodat rastvor jedinjenja 7-2 (5,12 g, 18,80 mmol, 1 ekv.) u THF (40 mL), i smeša je reagovala na -65 °C tokom 2 sata, polako zagrevana do normalne temperature (25 °C) i zatim reagovala još 16 sati. Reakcija je ugašena dodavanjem u reakcioni rastvor zasićenog rastvora amonijum hlorida (15 ml), u kapima, i koncentrovano je do suva pod sniženim pritiskom. Dobijeni koncentrovani ostatak je razblažen etil acetatom (150 ml) i vodom (40 ml), i tečnost je odvojena i ekstrahovana. Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan do suva pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak prečišćen pomoću silika gel kolone, kako bi se dobilo jedinjenje 7-4. LCMS: MS(ESI)m/z(M-56+H)<+>: 287,1.

Preparacije jedinjenja 7-5:

[0152] U mešani rastvor jedinjenja 7-4 (7,43 g, 21,67 mmol, 1 ekv.) u 1,4-dioksanu (56 mL) i etanolu (28 mL) sukcesivno su dodati natrijum karbonat (1,83 g, 21,78 mmol, 847,22 uL, 1 ekv.) i hidrazin hidrat (1,51 g, 25,57 mmol, 1,46 mL, 1,18 ekv., čistoća 85%). Smeša je zagrejana do 70 °C i regovala je tokom 16 sati. Reakcioni rastvor je koncentrovan do suva, i zatim je ostatak prečišćen silika gel kolonom kako bi se dobilo jedinjenje 7-5. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 337,2.

Preparacije jedinjenja 7-7:

[0153] U suspenziju dihlorometana (100 mL) i molekulskog sita 4A (4,86 g) dodati su jedinjenje 7-5 (4,78 g, 14,19 mmol, 1 ekv.), jedinjenje 7-6 (4,88 g, 22,80 mmol, 1,61 ekv.), bakar acetat (3,78 g) i piridin (2,25 g, 28,50 mmol, 2,3 mL, 2,01 ekv.). Dobijena smeša je tri puta zamenjena kiseonikom, zagrejana do 60 °C i reagovala je tokom 16 sati pod atmosferom balona sa kiseonikom, sa dodatkom 7-6 (4,88 g, 22,80 mmol, 1,61 ekv.) i zatim je reagovala na 60 °C pod atmosferom kiseonika još 16 sati. Reakcioni rastvor je filtriran, i filtrat je koncentrovan do suva pod sniženim pritiskom. Etil acetat (200 ml) i voda (60 ml) su dodati, i tečnost je odvojena i ekstrahovana. Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan do suva pod sniženim pritiskom. Zatim je ostatak prečišćen silika gel kolonom kako bi se dobilo jedinjenje 7-7. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 505,3.

Preparacije jedinjenja 7-9:

[0154] U jedinjenje 7-8 (7,77 g, 46,47 mmol, 7 mL, 14,21 ekv.) dodati su jedinjenje 7-7 (1,65 g, 3,27 mmol, 1 ekv.) i natrijum karbonat (540 mg, 6,43 mmol, 250.00 uL, 1,97 ekv.). Smeša je reagovala na 130 °C tokom 16 sati. U reakcioni rastvor je dodata voda (40 ml), i tečnost je odvojena i ekstrahovana etil acetatom (50 ml*2). Kombinovana organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtrirana. Filtrat je koncentrovan do suva pod sniženim pritiskom. Zatim je ostatak prečišćen silika gel kolonom kako bi se dobilo jedinjenje 7-9. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 636,5.

Preparacije jedinjenja 7-10:

[0155] U jedinjenje 7-9 (805 mg, 1,27 mmol, 1 ekv.) su dodati dihlorometan (35 mL) i trifluorosirćetna kiselina (5,39 g, 47,27 mmol, 3,50 mL, 37,33 ekv.). Smeša je reagovala na 0 °C tokom 0.5 sati. Reakcioni rastvor je koncentrovan do suva pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 7-10 (sirovo, trifluoroacetat). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 536,4.

Preparacije jedinjenja 7-11:

[0156] Na 0 °C, u rastvor jedinjenja 7-10 (1,15 g, 1,77 mmol, 1 ekv., TFA) i natrijum karbonata (625 mg, 5,90 mmol, 3,33 ekv.) u tetrahidrofuranu (30 mL) i vodi (30 mL), dodat je u kapima akriloil hlorid (307 mg, 3,39 mmol, 276,58 uL, 1,92 ekv.). Smeša je reagovala na 0 °C dodatnih 0.5 sati. U reakcioni rastvor su dodati dihlorometan (50 ml) i voda (20 ml), i tečnost je odvojena i ekstrahovana. Organska faza je osušena preko anhidrovanog natrijum sulfata i filtriran. Filtrat je koncentrovan do suva pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje 7-11. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 590.4.

Preparacije jedinjenja 7-12:

[0157] U TFA (15 mL) je dodato jedinjenje 7-11 (511,16 mg, 866,84 µmol, 1 ekv.). Smeša je mešana na 60 °C tokom 2 sata. Reakcioni rastvor je koncentrovan do suva pod sniženim pritiskom, i zatim je ostatak odvojen i prečišćen sukcesivno hromatografijom na koloni i visokoefikasnom tečnom hromatografijom, kako bi se dobilo jedinjenje 7-12. LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 440.3.

Preparacije jedinjenja 7A i 7B:

[0158] Jedinjenje 7-12 (44 mg, 100.11 µmol, 1 ekv.) je detektovano pomoću SFC (hromatografska kolona: ChiralpakAD-350 × 4,6 mml.D., 3 µm; mobilna faza: A: superkritični ugljen-dioksid, B: rastvor 0.05% dietilamina u izopropanolu; gradijent: 40% B; brzina protoka: 4 mL/min; temperatura kolone: 35 °C; talasna dužina: 220 nm) i pokazalo je nejednoznačnu konfiguraciju. Proizvod je podvrgnut hiralnom razdvajanju kako bi se dobila jedinjenja 7A i 7B sa vremenima zadržavanja 1,199 min i 2,095 min redom.

[0159] Jedinjenje 7A:<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 7,70-7,68(m, 1H), 7,52-7,43(m, 2H), 7,45-7,43(m, 2H), 7,21-7,16(m, 5H), 6,86-6,84(m, 2H), 6,15-6,08(m, 1H), 5,71-5,68(m, 2H), 5,02-5,64(m, 1H), 4,22-4,11(m, 1H), 3,52-3,44(m, 1H), 3,24-3,21(m, 2H), 3,18-2,90(m, 1H), 2,15-2,11(m, 1H), 1,93-1,86(m, 2H), 1,56-1,52(m, 1H). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 440.3,

[0160] Jedinjenje 7B:<1>HNMR (400MHz, DMSO-d6) δ 7,70-7,68(m, 1H), 7,52-7,43(m, 2H), 7,47-7,45(m, 2H), 7,22-7,15(m, 5H), 6,87-6,83(m, 2H), 6,14-6,08(m, 1H), 5,73-5,69(m, 2H), 5,02-5,65(m, 1H), 4,23-4,12(m, 1H), 3,51-3,44(m, 1H), 3,24-3,20(m, 2H), 3,19-2,90(m, 1H), 2,16-2,13(m, 1H), 1,94-1,87(m, 2H), 1,57-1,54(m, 1H). LCMS: MS(ESI)m/z(M+H)<+>: 440.2.

Eksperimentalni primer 1: Testiranje BTK kinaze

[0161]

1. Uslovi reakcije:

uslovi pufera: 20 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0.02% Brij35, 0.02 mg/mL BSA, 0.1 mm Na3VO4, 2 mm DTT, 1% DMSO.

2. Reakciona procedura:

2.1. Priprema indikatorskog supstrata u sveže pripremljenom reakcionom puferu

2.2. Dostavljanje željenog kofaktora u prethodno navedeni rastvor supstrata

2.3. Dostavljanje naznačene kinaze u rastvor supstrata i njegovo pažljivo mešanje

2.4. Dostavljanje jedinjenja u DMSO u reakcionu smešu kinaze korišćenjem akustične tehnologije (Echo550)

2.5. Inicijacija reakcije (finalna koncentracija ATP: 5 µM) isporukom<33>P-ATP (finalna specifična aktivnost: 0,01 µci/µL) u reakcionu smešu

2.6. Inkubiranje reakcije kinaze na sobnoj temperaturi 120 minuta

2.7. Beleženje reakcije na papiru za jonsku izmenu P81 (Whatman#3698-915)

2.8. Obilno ispiranje filtera sa 0,75% fosfornom kiselinom

2.9. Merenje radioaktivnog fosforilisanog supstrata zaostalog na filter papiru.

3. Analiza podataka: podaci o aktivnosti kinaze se izražavaju kao procenat zaostale aktivnosti kinaze u testiranom uzorku, u poređenju sa reakcijom sa nosačem (dimetil sulfoksid), a IC50vrednosti i fitovanje krive se dobijaju korišćenjem softvera Prism4 (GraphPad).

4. Eksperimentalni zaključak: rezultati su prikazani u tabeli 1.

Tabela 1 inhibitorna aktivnost BTK kinaze

[0162] Zaključak: jedinjenja prema predmetnom otkriću pokazuju bolju aktivnost inhibicije kinaze, i poželjno, jedinjenja imaju snažnu aktivnost inhibicije kinaze (IC50< 100 nM).

Eksperimentalni primer 2: testiranje EGFR, ITK i TEC kinaze

[0163]

1. Uslovi reakcije:

2. Reakciona procedura:

2.1. Priprema indikatorskog supstrata u sveže pripremljenom reakcionom puferu

2.2. Dostavljanje željenog kofaktora u prethodno navedeni rastvor supstrata

2.5. Inicijacija reakcije (finalna koncentracija ATP: 2 µM, 5 µM i 5 µM redom) isporukom<33>P-ATP (finalna specifična aktivnost: 0,01 µci/µL) u reakcionu smešu 2.6. Inkubiranje reakcije kinaze na sobnoj temperaturi 120 minuta

2.7. Beleženje reakcije na papiru za jonsku izmenu P81 (Whatman#3698-915)

2.8. Obilno ispiranje filtera sa 0,75% fosfornom kiselinom

2.9. Merenje radioaktivnog fosforilisanog supstrata zaostalog na filter papiru.

4. Eksperimentalni zaključak: rezultati su prikazani u tabeli 2.

Tabela 2 Poređenje aktivnosti inhibicije EGFR, ITK i TEC i BTK kinaze

[0164] Zaključak: jedinjenja prema predmetnom otkriću pokazuju bolju selektivnost za EGFR, ITK i TEC kinaze.

Eksperimentalni primer 3: Farmakokinetička studija jedinjenja prema predmetnom otkriću

1. Kratak pregled farmakokinetičke studije jedinjenja prema predmetnom otkriću

[0165] 1.1 Mužjaci CD-1 miševa su korišćeni kao test životinje; LC/MS/MS metoda se koristi za određivanje koncentracija leka u plazmi miševa u različitim vremenskim tačkama nakon intravenske i intragastrične primene testiranih jedinjenja. Proučava se farmakokinetičko ponašanje jedinjenja kod miševa i procenjuju se njihove farmakokinetičke karakteristike.

2. Šema eksperimenta

[0166]

2.1 Eksperimentalni lekovi: testirana jedinjenja.

2.2 Eksperimentalne životinje: 4 zdrava odrasla mužjaka CD-1 miša, koji su podeljeni u 2 grupe po principu slične telesne težine, sa po 2 miša u svakoj grupi. Životinje su kupljene od Shanghai Xipuer-Bikai Experimental Animal Co., Ltd.

2.3 Formulacija leka:

[0167] Izmerena je odgovarajuća količina uzoraka; dodat je rastvarač, i smeša je mešana uz sonifikaciju sve dok nije postignuto bistro stanje, a zatim je korišćena za intravensku primenu.

[0168] Izmerena je odgovarajuća količina uzoraka; dodat je rastvarač; i smeša je mešana uz sonifikaciju sve dok se nije pojavio približno bistar rastvor, a zatim je korišćena za intragastričnu primenu.

2.4 Primena:

[0169] 4 mužjaka CD-1 miša su podeljeni u 2 grupe i ostavljeni bez hrane preko noći. Kod jedne od grupa je primena bila intravenska, a kod druge grupe je primena bila intragastrična.

3. Operacije

[0170] Nakon što su testirana jedinjenja primenjena intravenski kod mužjaka CD-1 miša, 30 µL krvi je sakupljeno na 0,0830, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8 i 24 sata, redom, i stavljeno u komercijalne epruvete koje sadrže EDTA-K2. Nakon što su testirana jedinjenja primenjena intragastrično kod drugih miševa, 30 µL krvi je sakupljeno na 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 i 24 sata, redom, i stavljeno u komercijalne epruvete koje sadrže EDTA-K2. Epruvete su centrifugirane na 3000 g tokom 15 minuta da bi se odvojila plazma i čuvane na -60 °C. 2 sata nakon primene, životinjama je dozvoljeno da jedu.

[0171] Posle intravenske i intragastrične primene, sadržaj jedinjenja koja se ispituju u plazmi miševa je određen LC/MS/MS metodom. Linearni opseg metode je bio od 2,00 do 6000 nmol/L; uzorci plazme su analizirani nakon tretmana acetonitrilom proteina koji precipitiraju.

4. Rezultati farmakokinetičkih parametara

eetrrapae tičkkineko a r fa za akata od pdle regpakrat3 ela ab T

]

72

[01

[0173] Zaključak: jedinjenja prema predmetnom pronalasku imaju kratak poluživot, široku distribuciju izvan krvne plazme i umerenu bioraspoloživost.

Eksperimentalni primer 4: Studija efikasnosti jedinjenja prema predmetnom otkriću na modelima potkožnog ksenotransplantata TMD-8 ćelija humanog limfoma kod CB-17 SCID miševa

[0174] Cilj eksperimenta: anti-tumorski efekti jedinjenja su procenjeni u ovom eksperimentu tako što je korišćen model potkožnog ksenotransplantata TMD-8 ćelija kod CB-17 SCID miševa.

Eksperimentalni rad:

(1) Ćelijska kultura:

[0175] Ćelije humanog limfoma TMD-8 su kultivisane u konfiguraciji monosloja in vitro, sa sledećim uslovima kulture: RMPI-1640 medijum suplementiran sa 10% fetalnog goveđeg seruma, 100 U/mL penicilina i 100 µg/mL streptomicina i na 37 °C, u 5% CO2inkubatoru. Konvencionalni tretman digestije sa pankreatinom-EDTA za pasažiranje je sprovođen dva puta nedeljno. Kada je zasićenost ćelija bila 80% do 90%, a broj dostigao zahtev, ćelije su sakupljene, prebrojane i korišćene za inokulaciju.

(2) Inokulacija tumorskim ćelijama

[0176] Svaki miš je inokulisan sa 0.2 mL (1 × 10<7>ćelija) TMD-8 ćelija (sa dodatkom matrigela u zapreminskom odnosu 1:1) supkutano, na desnoj strani leđa. Grupisanje i primena su započeli kada je prosečna zapremina tumora dostigla oko 113 mm<3>.

(3) Priprema uzoraka za ispitivanje

[0177] Grupa jedinjenja koja se testira: kvantitativna količina testiranog jedinjenja je izmerena u smeđoj bočici za doziranje i dodata je odgovarajuća zapremina rastvarača. Zatim je mešavina promešana vorteksom kako bi se dobila homogena suspenzija ili bistar rastvor.

[0178] Prečnik tumora je meren dva puta nedeljno pomoću kalipera. Formula za izračunavanje zapremine tumora bila je V = 0.5a × b<2>, gde a i b predstavljaju duži i kraći prečnik tumora, redom.

[0179] Anti-tumorska efikasnost jedinjenja je procenjena pomoću TGI (%) ili relativne stope proliferacije tumora T/C (%). Relativna stopa proliferacije tumora T/C (%) = TRTV/CRTV× 100% (TRTV: RTV tretirane grupe; CRTV: RTV negativne kontrolne grupe). Relativna zapremina tumora (RTV) je izračunata je u skladu sa rezultatima merenja tumora. Formula za izračunavanje je bila RTV = Vt/V0, pri čemu je V0prosečna zapremina tumora izmerena na početku grupisanja i primene (tj. D0), a Vt je prosečna zapremina tumora u određenom merenju. TRTVi CRTVdobijeni su iz podataka istog dana.

[0180] TGI (%) odražava stopu inhibicije rasta tumora. TGI (%) = [(1 - (prosečna zapremina tumora na kraju primene u određenoj tretiranoj grupi - prosečna zapremina tumora na početku primene u tretiranoj grupi))/(prosečna zapremina tumora na kraju primene u kontrolnoj grupi tretiranoj rastvaračem – prosečna zapremina tumora na početku primene u kontrolnoj grupi tretiranoj rastvaračem)] × 100%.

[0181] Na kraju eksperimenta je detektovana težina tumora i izračunavan je procenat T/Ctežina, pri čemu Ttežinai Ctežinapredstavljaju težinu tumora grupe kod koje je bilo primene i kontrolne grupe tretirane rastvaračem, redom.

Statistička analiza

[0182] statistička analiza je sprovedena korišćenjem SPSS softvera na osnovu RTV podataka na kraju eksperimenta. Poređenje između tri ili više grupa je analizirano jednosmernom ANOVA analizom. Ako je postojala homogenost varijanse (F vrednost se nije značajno razlikovala), za analizu je korišćen Tukijev test. Ako je postojala heterogenost varijanse (F vrednost je bila značajno drugačija), primenjen je Gejms-Hauel test, p < 0,05 je smatrano značajno različitim.

Zaključak na osnovu eksperimenta: rezultati su prikazani u tabeli 4.

Tabela 4. Efekti jedinjenja prema predmetnom otkriću, na modele potkožnih ksenotransplantata TMD-8 ćelija humanog limfoma

[0184] Zaključak: jedinjenja prema predmetnom otkriću imaju značajne anti-tumorske efekte u poređenju sa kontrolnom grupom tretiranom rastvaračem.

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje prikazano kao formula (I), njegov stereoizomer ili njegova farmaceutski prihvatljiva so,

pri čemu, T1je nezavisno izabran od N i CH; R2je nezavisno izabran od H, C1-6alkila, C2-6alkenila i C2-6alkinila, pri čemu, svaki C1- 6alkil, C2-6alkenil i C2-6alkinil je nezavisno i opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 Ra; prsten A je izabran od fenila i heteroarila sa 5 do 6 članova; M je nezavisno izabran od C3-6cikloalkila i heterocikloalkila sa 3 do 6 članova, pri čemu, svaki C3-6cikloalkil i heterocikloalkil sa 3 do 6 članova je nezavisno i opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 Rb; svaki R1i R3je nezavisno izabran od F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN; svaki n i m je nezavisno izabran od 0, 1, 2 ili 3, i n i m nisu istovremeno 0; svaki L1i L2je nezavisno izabran od -CH2-, -CH2CH2-, -O-, -C(=O)- i - C(=O)-NH-; Raje nezavisno izabran od H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, C1-3alkila, C1-3alkoksi i C1- 3alkilamino, pri čemu, svaki C1-3alkil, C1-3alkoksi i C1-3alkilamino je nezavisno i opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 R; Rbje izabran od F, Cl, Br, I, CH3; R je izabran od H, F, Cl, Br, I; svaki heteroaril sa 5 do 6 članova i heterocikloalkil sa 3 do 6 članova nezavisno sadrži 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma ili grupe heteroatoma nezavisno izabrane od -NH-, -O-, -S-, -C(=O)-, -S(=O)- i N.
2. Jedinjenje prikazano kao formula (I) prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je Ranezavisno izabran od H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, CH3, OCH3, NH(CH3) i N(CH3)2.
3. Jedinjenje prikazano kao formula (I) prema patentnom zahtevu 2, naznačeno time što je R2nezavisno izabran od H, C1-3alkila, C2-4alkenila i C2-4alkinila, i, svaki C1-3alkil, C2-4alkenil i C2-4alkinil je nezavisno i opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 Ra.
4. Jedinjenje prikazano kao formula (I) prema patentnom zahtevu 3, naznačeno time što je R2nezavisno izabran od H, CH3, vinila i propinila.
5. Jedinjenje prikazano kao formula (I) prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je M nezavisno izabran od ciklopropila, ciklobutila, ciklopentila, cikloheksila, azetidinila, oksetanila, piperidila i morfolinila, i, svaki ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, azetidinil, oksetanil, piperidil i morfolinil je nezavisno i opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 Rb.
6. Jedinjenje prikazano kao formula (I) prema patentnom zahtevu 5, naznačeno time što je M nezavisno izabran od piperidila i morfolinila.
7. Jedinjenje prikazano kao formula (I) prema patentnom zahtevu 1, pri čemu, L1je izabran od -O- i -C(=O)-NH-; i/ili, L2je izabran od -C(=O)- i -C(=O)-NH-; i/ili, prsten A je izabran od fenila i piridila.
8. Jedinjenje prikazano kao formula (I) prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je strukturna jedinica

izabrana od
9. Jedinjenje prikazano kao formula (I) prema patentnom zahtevu 8, pri čemu je strukturna jedinica

izabrana od
10. Jedinjenje prikazano kao formula (I) prema bilo kom od patentnih zahteva 1-7, izabrano od:
naznačeno time što, R1i R3su kao što su definisani u patentnom zahtevu 1; svaki n i m je nezavisno izabran od 0, 1, 2 ili 3, i n i m nisu istovremeno 0; R2je kao što je definisan u bilo kom od patentnih zahteva 1, 3 ili 4; L1i L2su kao što su definisani u patentnom zahtevu 1 ili 7. 11. Jedinjenje prikazano kao formula (I) prema patentnom zahtevu 10, izabrano od:
naznačeno time što n, m, R1, R2, R3, L1, L2su kao što su definisani u patentnom zahtevu 10. 12. Jedinjenje prikazano kao formula (I) prema bilo kom od patentnih zahteva 1-11, izabrano od:
13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 12, izabrano od:
14. Farmaceutska kompozicija koja sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja prema bilo kom od patentnih zahteva 1-13 kao aktivni sastojak, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
15. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-13 ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 14, za upotrebu kao lek srodan BTK inhibitorima; lek srodan BTK inhibitorima je opciono lek za lečenje hematološkog tumora i autoimune bolesti; bolest je opciono difuzni B-krupnoćelijski limfom. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5