ES2509042T3 - Nuevos compuestos de miméticos de giro inverso y el uso de los mismos (1) - Google Patents

Abstract

Un compuesto que tiene la estructura de fórmula (III):**Fórmula** en la que: R1 es seleccionado del grupo que consiste en 2-metil-2H-indazolilo, 1-metil-5 1H-indazolilo, 3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolilo, 1-hidroxietil-1H-indazolilo, 1H- indazolilo, 2-ciclopropilmetil-2H-indazolilo, 3-amino-1H-indazolilo, 1-bencil-1H-indazolilo, 3-cloro-1H-indazolilo, 6- cloro-1H-indazolilo, 3-fenil-1H-indazolilo, 1-bencil-3-fenil-1H-indazolilo, 1-nitrobencil-1H-indazolilo, 1-aminobencil-1H-indazolilo, 2-metil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolilo, 1-metil-3-aminocarbonil-1H-indazolilo, carbonil-indazolilo, 2-isopropil-2H-indazolilo, 2-aminocarbonilmetil-2H-indazolilo, 1-cianometil-3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolilo, 2-cianometil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolilo, 1-morfolinil-N-etil-1H-indazolilo, 2-morfolinil-N-etil-2H-indazolilo, 2-dimetilaminocarbonilmetil-2H-indazolilo, 2-metoxietilpropionamida-2H-indazolilo, 1-etoxicarbonilmetil-1H-indazolilo, 2-etoxicarbonilmetil-2H-indazolilo y 1-acetoxietil-1H-indazolilo; R4 es alilo; R6 es fenilo o fenilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: halógeno, hidroxilo, ciano, alquilo C1-6, acetilenilo y alcoxi C1-6; o piridilo o piridilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: Halógeno, hidroxilo, ciano, alquilo C1-6 y alcoxi C1-6; X1 es hidrógeno, hidroxilo o halógeno; y cada uno de X2 y X3 es, de forma independiente, hidrógeno, hidroxilo, fosfato, dimetilaminoacetato, (2-dimetilaminoetil)carbamato, dietilfosfonoacetamido o halógeno).

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DESCRIPCIÓN

Nuevos compuestos de miméticos de giro inverso y el uso de los mismos (1)

Campo de la técnica

La presente invención se refiere, en general, a nuevos compuestos de miméticos de giro inverso que se pueden aplicar en el tratamiento de afecciones médicas, por ejemplo enfermedades cancerosas, y a composiciones farmacéuticas que comprenden los miméticos.

Técnica anterior

Durante muchos años se ha realizado la exploración aleatoria de moléculas por su posible actividad como agentes terapéuticos y ha tenido como resultado una serie de descubrimientos farmacológicos importantes. Aunque los avances en biología molecular y química computacional han conducido a un mayor interés en lo que se ha denominado "diseño racional de fármacos", no se ha demostrado que dichas técnicas sean tan fiables o tan rápidas como se predijo inicialmente. Por tanto, en los últimos años se ha producido un renovado interés y un retorno a la exploración aleatoria de fármacos. Con este fin se han dado pasos concretos en nuevas tecnologías basadas en el desarrollo de bibliotecas de química combinatoria y la exploración de dichas bibliotecas en búsqueda de miembros biológicamente activos.

Inicialmente, las bibliotecas de química combinatoria se limitaban generalmente a miembros de origen peptídico o núcleotídico.

Aunque las bibliotecas combinatorias que contienen miembros de origen peptídico y nucleotídico tienen un valor significativo, sigue existiendo la necesidad en la técnica de bibliotecas que contienen miembros de origen diferente. Por ejemplo, las bibliotecas tradicionales de péptidos en gran medida simplemente varían la secuencia de aminoácidos para generar miembros de la biblioteca. Aunque está bien reconocido que las estructuras secundarias de los péptidos son importantes para la actividad biológica, dichas bibliotecas peptídicas no imparten una estructura secundaria forzada a sus miembros.

Con este fin, algunos investigadores han ciclado péptidos con puentes disulfuro en un intento de proporcionar una estructura secundaria más forzada (Tumelty et al., J. Chem. Soc. 1067-68, 1994; Eichler et al., Peptide Res. 7:300-306, 1994). Sin embargo, dichos péptidos ciclados generalmente todavía son bastante flexibles y están escasamente biodisponibles y, por lo tanto, sólo han presentado un éxito limitado

Mas recientemente, se han desarrollado compuestos no peptídicos que reproducen más estrechamente la estructura secundaria de los giros inversos hallados en proteínas o péptidos biológicamente activos. Por ejemplo, la patente de EE.UU. nº 5.440.013 concedida a Kahn y las solicitudes PCT publicadas nº WO94/03494, PCT WO01/00210A1 y PCT WO01/16135A2 concedidas a Kahn divulgan cada una compuestos no peptídicos de conformación forzada que reproducen la estructura tridimensional de los giros inversos. Además, la patente de EE.UU. No. 5.929.237 y su continuación en parte, patente de EE.UU. nº 6.013.458, ambas concedidas a Kahn, divulgan compuestos de conformación forzada que reproducen la estructura secundaria de las regiones de giros inversos de péptidos y proteínas biológicamente activos. La síntesis e identificación de miméticos de giro inverso de conformación forzada y su aplicación a enfermedades los ha revisado bien Obrecht (Advances in Med. Chem., 4, 1-68, 1999).

Aunque se han realizado avances significativos en la síntesis y la identificación de compuestos miméticos de giro inverso de conformación forzada, existe en la técnica la necesidad de moléculas pequeñas que reproduzcan la estructura secundaria de los péptidos. También existe en la técnica la necesidad de bibliotecas que contengan dichos miembros, así como de técnicas para sintetizar y explorar los miembros de las bibliotecas frente a dianas de interés, particularmente a dianas biológicas, para identificar miembros bioactivos de las bibliotecas.

Entretanto, un protooncogén es un gen normal que se ha convertido en oncogén debido a mutaciones o a un incremento de la expresión. Se sabe que c-Myc (MYC) es uno de los protooncogenes y la alteración de su regulación se considera una de una serie de acontecimientos oncogénicos necesarios para la tumorigénesis de mamíferos (Pelengaris S, Khan M. The many faces ofc-MYC. Arch Biochem Biophys. 2003; 416:129-136). La alteración de la regulación de MYC a través de varios mecanismos también estaba relacionada con leucemias mieloides (Hoffman B, Amanullah A, Shafarenko M, Liebermann DA. The proto-oncogene c-Myc in hematopoietic development and leukemogenesis. Oncogene. 2002; 21: 3414-3421). Además, se descubrió que c-Myc inducía rápidamente leucemia mieloide aguda (Hui Luo et al. "c-myc induce rápidamente leucemia mieloide aguda en ratones sin indicios de mutaciones antiapoptóticas asociadas con linfomas" " Blood, 1 October 2005, volume 106, Number 7, pp 2452-2461).

Como c-Myc puede regularse por aumento en la leucemia mieloide aguda, se ha estudiado la función oncogénica de c-Myc y se ha estudiado su función exacta e la leucemogénesis mieloide. Recientemente, algunos científicos han comprobado que Myc estimulaba preferentemente el crecimiento de células progenitoras mieloides en metilcelulosa y han demostrado que Myc es un efector cadena abajo crucial de la leucemogénesis mieloide (cita anterior).

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El hallazgo de que c-Myc desempeña un papel crucial en la leucemogénesis mieloide indica que al inhibir la activación de la proteína c-Myc se puede curar o prevenir una leucemia mieloide aguda.

Por otro lado, las enzimas de la superfamilia citocromo P450 (CYP) son los principales determinantes de la semivida y ejecutan efectos farmacológicos de muchos fármacos terapéuticos. La superfamilia del citocromo P450 (CYP)3A humano, incluye el CYP3A4, que es más abundante en el hígado humano (-40%) y metaboliza más del 50% de los fármacos clínicamente usados (Shimada et al 1994; Rendic y Di Carlo 1997). Debido a la función clave del CYP3A4 en el metabolismo de los fármacos, una inactivación significativa de esta enzima podría tener como resultado interacciones farmacológicas farmacocinéticas marcadas. La inhibición de CYP3A4 puede producir una toxicidad farmacológica grave por la exposición aumentada a fármacos coadministrados (Dresser et al 2000). Por ejemplo, cuando se coadministran inhibidores irreversibles de CYP344, tales como eritromicina o claritromicina, con terfenadina, astemizol o pimozida, los pacientes pueden experimentar Torsades de pointes (una arritmia ventricular potencialmente mortal asociada con prolongación del QT) (Spinler et al 1995; Dresser et al 2000). Los pacientes de cáncer, a veces, son sometidos a varios regímenes terapéuticos, lo que incrementa el riesgo de interacciones farmacológicas y de reacciones adversas a los fármacos.

Por tanto, a la hora de desarrollar agentes terapéuticos, especialmente cuando se van a administrar en combinación con otros fármacos, existe la necesidad de proporcionar compuestos que tengan una actividad inhibidora del CYP3A4 menor.

Divulgación de la invención

Problema técnico

El objeto de la presente invención es proporcionar compuestos nuevos que reproduzcan la estructura secundaria de las regiones de giro inverso de proteínas y péptidos biológicamente activos y que tengan actividad biológica, tal como un efecto anticanceroso.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar compuestos nuevos que inhiban la señalización de Wnt.

Otro objeto más de la presente invención es proporcionar compuestos nuevos que se puedan usar como productos farmacéuticos, en particular que tengan una actividad inhibidora de CYP3A4 menor (CI50 mayor).

Otro objeto más de la presente invención es proporcionar compuestos nuevos para un tratamiento o una prevención de la leucemia mieloide aguda a través de la regulación por disminución de la expresión de c-Myc.

Solución técnica

La presente invención está dirigida a un nuevo tipo de compuestos de conformación forzada y derivados, incluidos profármacos de los mismos, que reproducen la estructura secundaria de las regiones de giro inverso de péptidos y proteínas biológicamente activos. La presente invención también divulga bibliotecas que contienen dichos compuestos, así como la síntesis y exploración de los mismos.

Los compuestos de la presente invención tienen la siguiente Fórmula general (III):

imagen1

en la que R1, R4, R6, X1, X2 y X3 se definen en la siguiente descripción detallada.

En el presente documento también se describen profármacos que usan las bibliotecas que contienen uno o más compuestos de fórmula (III). Un profármaco normalmente está diseñado para liberar el fármaco activo en el cuerpo durante o después de la absorción mediante hidrólisis enzimática y/o química. El abordaje mediante profármacos es un medio eficaz de mejorar la biodisponibilidad oral o la administración i.v. de fármacos poco hidrosolubles mediante derivatización química o compuestos más hidrosolubles. El abordaje con profármacos más usado para incrementar la

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solubilidad acuosa de fármacos que contienen un grupo hidroxilo es producir ésteres que contienen un grupo ionizable; por ejemplo, un grupo fosfato, un grupo carboxilato, un grupo alquilamino (Fleisher et al., Advanced Drug Delivery Reviews, 115-130, 1996; Davis et al., Cancer Res., 7247-7253, 2002, Golik et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1837-1842, 1996).

Ejemplos del grupo funcional que se pueden liberar en el organismo pueden incluir fosfato,

imagen2

pero se puede usar cualquier otro grupo funcional que se usan convencionalmente como grupo ionizable en un profármaco.

Los profármacos descritos en el presente documento tienen la siguiente fórmula general (IV):

(III)-R7 (IV)

en la que (III) es la fórmula (III) como se ha descrito anteriormente; uno de R1, R4, R6, X1, X2, and X3 está unido a través de Y; Y es un oxígeno, azufre o nitrógeno en R1, R4, o R6, o un oxígeno en X1, X2, o X3; y R7 es hidroxialquilo, glicosilo, fosforiloximetiloxicarbonilo, piperidincarboniloxi sustituido o no sustituido, o una sal de los mismos; o Y-R7 es un residuo de aminoácidos, una combinación de residuos de aminoácidos, fosfato, hemimalato, hemisuccinato, dimetilaminoalquilcarbamato, dimetilaminoacetato o una sal de los mismos; y cuando no está unido a R7: R1, R4, R6, X1, X2 y X3 se definen en la siguiente descripción detallada.

En determinadas realizaciones, los profármacos descritos en el presente documento pueden servir como sustrato para una fosfatasa, carboxilasa u otras enzimas y de este modo se convierten en compuestos que tienen la fórmula general (III). En el presente documento también se describen bibliotecas que contienen uno o más compuestos de la fórmula

(III) anterior, así como procedimientos para sintetizar dichas bibliotecas y procedimientos para explorar los mismos para identificar compuestos biológicamente activos. En un aspecto relacionado, la presente invención proporciona adicionalmente compuestos nuevos que tienen menos actividad inhibidora del CYP3A4. La presente invención también proporciona nuevos compuestos que poseen actividad de inhibición contra la señalización de Wnt. La presente invención también proporciona nuevos compuestos que se pueden usar para la preparación de un medicamento para un tratamiento o una prevención de la leucemia mieloide aguda.

Efectos ventajosos

La presente invención proporciona nuevos compuestos de miméticos de giro inverso. Los compuestos de la presente invención exhiben menos actividad inhibidora de CYP3A4 (CI50 mayor), que permite los compuestos como posibles productos farmacéuticos, especialmente cuando se administran en combinación con otros fármacos. Los compuestos de la presente invención mostraron una fuerte actividad de inhibición contra la señalización de Wnt. Los compuestos inhibieron el crecimiento de las células cancerosas de LMA y se pueden usar en el tratamiento o prevención de una leucemia mieloide aguda.

Breve descripción de las figuras

A continuación se hará referencia con detalla a la realización preferida de la presente invención, cuyos ejemplos se ilustran en las figuras adjuntas en el presente documento. Las realizaciones de describen más adelante para explicar la presente invención en referencia a las figuras.

La Figura 1 proporciona un esquema de síntesis general para preparar miméticos de giro inverso (no solo de acuerdo con la invención). La Figura 2 muestra un efecto de los compuestos de ensayo (compuestos A, B y C) sobre la actividad de CYP3A4. El gráfico se basa en la medición de la CI50 para los compuestos de la presente invención del ensayo de inhibición de CYP3A4, en el que la inhibición de la actividad de CYP3A4 se midió a varias concentraciones del compuesto para obtener el valor de CI50. En el ejemplo 1 se divulgan procedimientos detallados. La Figura 3 muestra los resultados de la medición de la CI50 del compuesto D para células SW480 en el ensayo TopFlash Reporter Gene Bioassay. La Figura 4 muestra inhibición del crecimiento de las células cancerosas de LMA por los compuestos de ensayo de acuerdo con la concentración de los compuestos de ensayo (compuestos A y C).

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Mejor modo para llevar a cabo la invención

Como se usa en la memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, a menos que se especifique lo contrario, los términos siguientes tienen el significado indicado:

“Amino” hace referencia al radical -NH2. “Amidino” hace referencia al radical -C(=NH)-NH2. Uno o ambos hidrógenos del grupo amino del amidino pueden estar sustituidos por uno o dos grupos alquilo, como se define en el presente documento. Los radicales amidino derivados de alquilo también se denominan “alquilamidino” y "dialquilamidino”, respectivamente. “Ciano” hace referencia al radical –CN. “Carboxi” hace referencia al radical –COOR, en el que R es hidrógeno o alquilo, como se define en el presente documento. “Acilo” hace referencia al radical –COR, en el que R es alquilo, arilo, cicloalquilo, heterociclilo, como se define en el presente documento. Por ejemplo, R puede ser metilo, butenilo, ciclopropilo y similares. El alquilo o arilo pueden estar opcionalmente sustituidos por los sustituyentes como se ha descrito para un grupo alquilo o uno arilo, respectivamente. Ejemplos de grupos acilo incluyen, sin limitaciones, fenilacilo, bencilazilo, acilo C1-6 (p. ej., acetilo) y similares. “Alquilsulfonato” hace referencia al radical -S(O)2-OR, en el que R es alquilo, como se define en el presente documento. “Amidosulfonato” hace referencia al radical -OS(O)2-NR2, siendo cada R de forma independiente hidrógeno o alquilo. Ejemplos de amidosulfonatos incluyen -OS(O)2NH2, -OS(O)2NHMe. “Aminocarbonilo” hace referencia al radical -C(O)NR2, cada R es de forma independiente hidrógeno, alquilo, amino, cicloalquilalquilo, heterociclilo, alcoxialquilo, hidroxialquilo, hidroxilo, alcoxi, arialalquilo, heterociclilalquilo, o dos R junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un heterociclilo, como se define en el presente documento. Cuando uno de los R es hidrógeno, el otro R s alquilo C1-4, aminocarbonilo puede estar representado por "alquilformamidilo C1-4”, “N-formamidilo” hace referencia al radical -NHC(O)H. “Fenilsulfonilo” hace referencia al radical -S(O)2-R, en el que R es enilo, el fenilo puede estar sustituido además por alquilo o cloro. “Fenilsulfonato” hace referencia al radical -S(O)2-R, en el que R es enilo, el fenilo puede estar sustituido además por alquilo o cloro. “Alquilsulfonilo” hace referencia al radical -S(O)2-R, en el que R es alquilo, como se define en el presente documento. Ejemplos de radicales alquilsulfonilo incluyen metilsulfonilo. “Alquiltio” hace referencia al radical –SR, en el que R es alquilo, como se define en el presente documento. “Ariltio” hace referencia al radical –SR, en el que R es arilo, como se define en el presente documento. El grupo arilo del ariltio puede además estar sustituido por alquilo o cloro. “Ariloxi” hace referencia al radical –OR, en el que R es arilo, como se define en el presente documento. El grupo arilo puede además estar sustituido por alquilo, alcoxi y similares. “Aciloxialquilo” hace referencia al radical -R'-OC(O)-R, en el que R es alquilo, arilo, cicloalquilo, heterociclilo, como se define en el presente documento; y R' es un alquilo. “Guanidino” hace referencia al radical -NH-C(=NH)-NH2. Uno o ambos hidrógenos del grupo amino del guanidino pueden estar sustituidos por uno o dos grupos alquilo, como se define en el presente documento. Los radicales guanidina derivados de alquilo también se denominan “alquilguanidino” y "dialquilguanidino”, respectivamente. “Nitro” hace referencia al radical -NO2. “Alquilo” hace referencia a un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que consiste únicamente en átomos de carbono y de hidrógeno. Un alquilo puede estar saturado (que contiene carbonos unidos entre sí únicamente por enlaces sencillos) o insaturado (Que contiene carbonos unidos entre sí por al menos un doble enlace o un triple enlace). Un alquilo que tiene de uno a doce átomos de carbono también se denomina “restos de alquilo de cadena inferior” y se pueden presentar mediante “alquilo C1-12”. En otras realizaciones, un alquilo puede comprender de uno a cuatro átomos de carbono y estar representados por “alquilo C14”. En otras realizaciones, un alquilo puede comprender de dos a cinco átomos de carbono y estar representados por “alquilo C2-5”. Un alquilo está unido al resto de la molécula mediante un enlace sencillo. Ejemplos de alquilos saturados incluyen, entre otros, metilo, etilo, n-propilo, 1-metiletil(isopropilo), n-butilo, n-pentilo, 1,1-dimetiletil(t-butilo), 3-metilhexilo, 2-metilhexilo y similares. Ejemplos de alquilos insaturados incluyen, entre otros, etenilo (es decir, vinilo), proa-1-enilo (es decir, alilo), but-1-enilo, pent-1-enilo, penta-1,4-dienilo, etinilo (es decir, acitilenilo), prop-1-inilo y similares.

Un alquilo puede también ser un radical de anillo de hidrocarburo monocíclico o bicíclico, que puede incluir sistemas anulares fusionados o unidos en puentes. Un alquilo cíclico también se denomina “cicloalquilo”. En determinadas realizaciones, un cicloalquilo puede comprender de tres a seis átomos de carbono y estar representado por “cicloalquilo C3-6”. Entre los ejemplos de radicales cicloalquilo monocíclicos incluyen, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo. Un cicloalquilo insaturado contiene un doble enlace interno (es decir, un doble enlace en el anillo). Ejemplos de cicloalquilo insaturado incluyen ciclohexenilo. Ejemplos de radicales cicloalquilo bicíclicos incluyen, por ejemplo, norbomilo (es decir, biciclo[2.2.1]heptil), 7,7-dimetil-biciclo[2.2.1]heptilo y similares.

A menos que se indique específicamente lo contrario en la memoria descriptiva, con el término “alquilo” se pretende

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incluir tanto alquilo como “alquilo sustituido”, que hace referencia a un radical alquilo en el que uno o más átomos de hidrógeno están sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: acilo, amidino, alquilamidino, dialquilamidino, alcoxi, arilo, ciano, cicloalquilo, guanidino, alquilguanidino, dialquilguanidino, halo, heterociclilo, hidrazinilo, hidroxilo, nitro, -OC(O)-R11 , -N(R11)2, -C(O)OR11 , -C(O)N(R11)2, -N(R11)C(O)OR11 , -N(R11)C(O)R11, -N(R11)S(O)tR11 (donde t es 1 o 2), -S(O)tOR11 (donde t es 1 o 2), -S(O)pR11 (donde p es 0, 1 o 2), y -S(O)tN(R11)2 (donde t es 1 o 2) en el que cada R11 es de forma independiente hidrógeno, alquilo, arilo, arialalquilo, heterociclilo o heterociclilalquuilo, como se ha definido en el presente documento.

“Alcoxi” hace referencia a un radical representado por la fórmula alquil-O-, en la que alquilo es como se ha definido en el presente documento. La porción alquilo puede estar sustituido adicionalmente por uno o más halógenos. Un alcoxi puede estar representado también por el número de carbonos en el grupo alquilo, por ejemplo alcoxi C1-6 o alcoxi C1-3.

“Arilo” hace referencia a un radical derivado de un sistema de anillo aromático monocíclico o bicíclico eliminando un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono del anillo. El sistema de anillo de hidrocarburo aromático monocíclico o bicíclico comprende de seis a doce átomos de carbono (es decir, arilo C6-12) en la que al menos uno de los anillos en el sistema de anillo está completamente insaturado, es decir contiene un sistema de electrones π (4 n + 2) deslocalizados de acuerdo con la teoría de Hückel. Opcionalmente, uno o dos átomos de anillo del arilo pueden ser heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxigeno o azufre. Ejemplos de radicales arilo incluyen, entre otros, fenilo y naftilo. A menos que se indique específicamente lo contrario en la memoria descriptiva, con el término “arilo” se pretende incluir tanto arilo como “arilo sustituido”, que hace referencia a un radical arilo en el que uno o más átomos de hidrógeno están sustituidos por uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: Alquilo, acilo, amidino, amidosulfonato, alcoxi, arilo, ariloxi, ciano, cicloalquilo, guanidino, alquilguanidino, dialquilguanidino, halo, hidrazinilo, hidroxilo, nitro, heterociclilo, -OC(O)-R11 , -N(R11)2, -C(O)OR11 , -C(O)N(R11)2, -N(R11)C(O)OR11 , -N(R11)C(O)R11 , -N(R11)S(O)tR11 (donde t es 1 o 2), -S(O)tOR11 (donde t es 1 o 2), -S(O)pR11 (donde p es 0, 1 o 2), y -S(O)tN(R11)2 (donde t es 1 o 2) en el que cada R11 es de forma independiente hidrógeno, alquilo, arilo, arialalquilo, heterociclilo o heterociclilalquilo.

“Arilalquilo” hace referencia a un radical alquilo en el que uno o más hidrógenos del alquilo están sustituidos por uno o más grupos arilo, como se define en el presente documento. En varias realizaciones, arilalquilos incluyen de 7 a 15 carbonos y pueden estar representados por arilalquilo C7-15. En determinadas realizaciones, arilalquilo es arilalquilo C1-4, en la que el alquilo C1-4 está sustituido por un arilo o dos grupos arilo, denominándose el último también “diarilalquilo” o “bisarilalquilo”. Ejemplos de arilalquilo C1-4 incluyen, entre otros, arilmetilo, ariletilo, arilpropilo, arilbutilo, bisarilmetilo, bisariletilo, bisarilpropilo, bisarilbutilo. Ejemplos de radicales arilalquilo incluyen, entre otros, bencilo, naftilmetilo, difenilmetilo, 3,3-bisfenilpropilo y similares. A menos que se indique lo contrario específicamente en la memoria descriptiva, con el término "arilalquilo" se pretende incluir arilalquilo y "arilalquilo sustituido", en el que la parte alquilo y/o la parte arilo del radical arilalquilo pueden estar sustituidas como “e describe en el presente documento para el radical alquilo y radical arilo, respectivamente.

“Cicloalquilalquilo” hace referencia a un radical alquilo en el que uno o más hidrógenos del alquilo están sustituidos por uno o más grupos c, como se define en el presente documento. En determinadas realizaciones, cicloalquilalquilo es cicloalquil C1-2alquilo, tal como cicloalquilmetilo, cicloalquiletilo y similares. Ejemplos de radicales cicloalquilalquilo incluyen, entre otros, ciclohexilalquilo (p. ej., ciclohexilmetilo y ciclohexiletilo) y ciclopentilalquilo (p. ej., ciclopentilmetilo y ciclopentiletilo) y similares. A menos que se indique lo contrario específicamente en la memoria descriptiva, con el término "cicloalquilalquilo" se pretende incluir cicloalquilalquilo y "cicloalquilalquilo sustituido", en el que la parte alquilo y/o la parte cicloalquilo del radical cicloalquilalquilo pueden estar sustituidas como “e describe en el presente documento para el radical alquilo y radical cicloalquilo, respectivamente.

"Glicosilo” hace referencia a un radical mediante eliminación del grupo hemiacetal hidroxilo de una forma cíclica de un monosacárido (p. ej., glucosa), disacárido, oligosacárido (que comprende de tres a diez monosacáridos) o polisacárido (que comprende más de diez monosacáridos).

“Halo” o “halógeno” se refiere a los radicales flúor, cloro, bromo o yodo.

“Haloalquilo” hace referencia a un radical alquilo, como se define en el presente documento, que está sustituido por uno o más radicales halo, como se define en el presente documento. Ejemplos de haloalquilos incluyen, entre otros: trifluorometilo, difluorometilo, triclorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 1-fluorometil-2-fluoroetilo, 3-bromo-2-fluoropropilo, 1-bromometil-2-bromoetilo y similares. Un alquilo sustituido con uno o más fluoros también se denomina “perfluoroalquilo”, por ejemplo “perfluoroalquilo C1-4." La parte alquilo del radical haloalquilo puede estar sustituido opcionalmente como se define en el presente documento para un grupo alquilo.

“Heterociclilo” hace referencia a un radical anillo heterocíclico estable que comprende de dos a once átomos de carbono y de uno a tres heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre. En determinadas realizaciones, el heterociclilo contiene uno o dos heteroátomos. A menos que se indique específicamente lo contrario en la memoria descriptiva, el radical heterociclilo puede ser un sistema de anillo monocíclico o bicíclico que puede incluir sistemas de anillo fusionado o en puente. En determinadas realizaciones, el heterociclilo puede ser un anillo monocíclico de 5, 6 o 7 miembros. En otras realizaciones, el heterociclilo puede ser un anillo bicíclico fusionado de 8, 9, 10, 11 o 12 miembros. Los heteroátomos en el radical heterociclilo pueden estar opcionalmente oxidados. Uno o más átomos de

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nitrógeno, si están presentes, pueden estar opcionalmente cuaternizados. El radical heterociclilo puede ser no aromático o aromático (es decir, al menos un anillo en el radical heterociclilo tiene un sistema de electrones π (4n + 2) deslocalizados de acuerdo con la teoría de Hückel). EL heterociclilo puede estar unido al resto de la molécula a través de cualquier átomo del o los anillos. Ejemplos de radicales heterociclilo no aromáticos incluyen, entre otros, dioxolanilo, decahidroisoquinolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, isothiazolidinilo, isoxazolidinilo, morpholinilo, octahidroindolilo, octahidroisoindolilo, 2-oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxopirrolidinilo, oxazolidinilo, piperidinilo (también denominado "piperidilo"), piperazinilo, 4-piperidonilo, 3-pirrolinilo, pirrolidinilo, pirazolidinilo, quinuclidinilo, tiazolidinilo, tetrahidrofurilo, tritianilo, tetrahidropiranilo, tiomorfolinilo y tiamorfolinilo. Ejemplos de radicales heterociclilo aromáticos incluyen, entre otros, azepinilo, acridinilo, bencimidazolilo, bencindolilo, 1,3-benzodioxolilo, benzofuranilo, benzooxazolilo, benzoisoxazolilo, benzo[d]tiazolilo, benzotiadiazolilo, benzo[b][1,4]dioxepinilo, benzo[b][1,4]oxazinilo, 1,4-benzodioxanilo, benzoxazolilo, benzodioxolilo, benzodioxinilo, benzopiranilo, benzopirazolilo, benzofuranilo, benzofuranonilo, benzotienilo (benzotiofenilo), benzotieno[3,2-d]pirimidinilo, benzotriazolilo, carbazolilo, cromona, cinnolinilo, ciclopenta[d]pirimidinilo, dibenzofuranilo, dibenzotiofenilo, furanilo, furanonilo, furo[3,2-c]piridinilo, isotiazolilo, imidazolilo, indazolilo, indolilo, indazolilo, isoindolilo, indolinilo, isoindolinilo, isoquinolilo, indolizinilo, isoxazolilo, 5,8-metano-5,6,7,8-tetrahidroquinazolinilo, naftiridinilo, 1,6-naftiridinonilo, oxadiazolilo, 2-oxoazepinilo, oxazolilo, oxiranilo, 5,6,6a,7,8,9,10,10a-octahidrobenzo[h]quinazolinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxazinilo, ftalazinilo, pteridinilo, purinilo, pirrolilo, pirazolilo, pirazolo[3,4-d]pirimidinilo, piridinilo (también denominado piridilo), pirido[3,2-d]pirimidinilo, pirido[3,4-d]pirimidinilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, tetrahidroquinolinilo, 1,2,3,4-tetrahidrocarbazolilo, 5,6,7,8-tetrahidroquinazolinilo, tiazolilo, tiadiazolilo, triazolilo, tetrazolilo, triazin-2-ilo, tieno[2,3-d]pirimidinilo, tieno[3,2-d]pirimidinilo, tieno[2,3-c]piridinilo y tiofenilo (es decir, tienilo). A menos que se indique específicamente lo contrario en la memoria descriptiva, con el término “heterociclilo” se pretende incluir heterociclilo y “heterociclilo sustituido”, que hce referencia a un radical heterociclilo sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados de alquilo, acilo, oxo (p. ej., piridinonilo, pirrolidonilo), arilo, arilalquilo, aciloxialquilo, amidino, alcoxi, ciano, guanidino, alquilguanidino, dialquilguanidino, halo, heterociclilo, hidrazinilo, hidroxilo, nitro, -OC(O)-R11 , -N(R11)2, -C(O)OR11 , -C(O)N(R11)2, -N(R11)C(O)OR11, -N(R11)C(O)R11, -N(R11)S(O)tR11 (donde t es 1 o 2), -S(O)tOR11 (donde t es 1 o 2), -S(O)pR11 (donde p es 0, 1 o 2), y -S(O)tN(R11)2 (donde t es 1 o 2) en el que cada R11 es de forma independiente hidrógeno, alquilo, arilo, arialalquilo, heterociclilo o heterociclilalquilo.

“Heterociclilalquilo” hace referencia a un radical alquilo en el que uno o más hidrógenos del alquilo están sustituidos por uno o más grupos heterociclilo, como se define en el presente documento. Si el heterociclilo es un heterociclilo que contiene nitrógeno, el heterociclilo puede estar unido al radical alquilo en el átomo de nitrógeno. En determinadas realizaciones, la parte alquilo del heterociclilalquilo contiene 1-4 átomos de carbono y puede estar representado por heterociclilalquilo C1-4. Ejemplos de radicales heterociclilalquilo incluyen, entre otros, morfolinilalquilo tal como morfolinilmetilo, piperidilalquilo tal como piperidilmetilo, imidazolidinilalquilo tal como imidazolidinilmetilo y similares. Ejemplos adicionales de radicales heterociclilalquilo, en el que la parte heterociclilo es aromática, incluyen, entre otros: piridilmetilo, piridiletilo, piridilpropilo, piridilbutilo, quinolinilmetilo, quinoliniletilo, quinolinilpropilo, quinolinilbutilo, indazolilmetilo, indazoliletilo, indazolilpropilo, indazolilbutilo, benzpirazolilmetilo, benzpirazoliletilo, benzpirazolilpropilo, benzpirazolilbutilo, isoquinolinilmetilo, isoquinoliniletilo, isoquinolinilpropilo, isoquinolinilbutilo, benzotriazolilmetilo, benzotriazoliletilo, benzotriazolilpropilo, benzotriazolilbutilo y similares. A menos que se indique lo contrario específicamente en la memoria descriptiva, con el término "heterociclilalquilo" se pretende incluir heterociclilalquilo y "heterociclilalquilo sustituido", en el que la parte alquilo y/o la parte heterociclilo del radical heterociclilalquilo pueden estar sustituidas como se describe en el presente documento para el radical alquilo y radical heterociclilo, respectivamente.

Los compuestos, o sus sales farmacéuticamente aceptables, pueden contener uno o más centros asimétricos y pueden, por tanto, dar lugar a enantiómeros, diastereómeros y otras formas estereoisoméricas que pueden definirse en términos de estereoquímica absoluta como (R) o (S) o como (D) o (L), para aminoácidos. Cuando los compuestos descritos en la presente memoria descriptiva contienen enlaces dobles olefínicos u otros centros de asimetría geométrica y a menos que se especifique lo contrario, se pretende que los compuestos incluyan ambos isómeros geométricos E-y Z-(p. ej., cis o trans). Asimismo, se pretende incluir todos los posibles isómeros, así como sus formas racémicas y ópticamente puras, y todas las formas tautoméricas.

Como se usa en el presente documento, con “aminoácido” se pretende incluir á-aminoácidos de origen natural y/o aminoácidos no naturales, tales como β-aminoácidos y homoaminoácidos. Ejemplos de los aminoácidos incluyen, entre otros: alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutámico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina, valina, fosfoserina, fosfotreonina, fosfotirosina, 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, demosina, isodemosina, gamma-carboxiglutamato, ácido hipúrico, ácido octahidroindol-2-carboxílico, estatina, 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-3-carboxílico, penicilamina, ornitina, 3-metilhistidina, norvalina, beta-alanina, ácido gamma-aminobutílico, citrulina, homocisteína, homoserina, metil-alanina, para-benzoilfenilalanina, fenilglicina, propargilglicina, sarcosina, metioninasulfona, terc-butilglicina, 3,5-dibromotirosina y 3,5-diyodotirosina.

“Residuo de aminoácido” o “resto de cadena lateral de aminoácido” hace referencia a una porción de un aminoácido que permanece después de perder una molécula de agua (o alcohol) cuando el aminoácido se condensa con una molécula. Normalmente. Un aminoácido se condensa con una molécula, incluido un compuesto de cualquiera de las

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fórmulas (I) – (IV) formando un enlace peptídico. En determinadas realizaciones, el grupo funcional amino del aminoácido se puede condensar con un grupo de ácido carboxílico o su equivalente reactivo (p. ej., anhídrido carboxílico) de la molécula. En otras realizaciones, el grupo funcional ácido carboxílico del aminoácido se puede condensar con un grupo amina de la molécula. Normalmente, una molécula de agua se pierde durante la formación del 5 enlace peptídico. Ejemplos de los “residuos aminoácido” o “resto de cadena lateral de aminoácido” incluyen, entre otros, residuos de alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutámico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina, valina, fosfoserina, fosfotreonina, fosfotirosina, 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, demosina, isodemosina, gamma-carboxiglutamato, ácido hipúrico, ácido octahidroindol-2-carboxílico, estatina, 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-3-carboxílico, penicilamina, ornitina,

10 3-metilhistidina, norvalina, beta-alanina, ácido gamma-aminobutílico, citrulina, homocisteína, homoserina, metil-alanina, para-benzoilfenilalanina, fenilglicina, propargilglicina, sarcosina, metioninasulfona, terc-butilglicina, 3,5-dibromotirosina, 3,5-diyodotirosina, treonina glicosilada, serina glicosilada y asparagina glicosilada.

Un “derivado de cadena lateral aminoácido” hace referencia a un derivado de cualquiera de los restos de cadena lateral de aminoácido como se describe en la Tabla 1. En determinadas realizaciones, el derivado de la cadena lateral

15 amino es alquilo, acilo, alcoxi, arilo, arilalquilo, hetrociclilo o heterociclilalquilo, como se define en el presente documento.

[TABLA 1]

Resto de cadena lateral de aminoácido Aminoácido

-H glicina -CH3 Alanina -CH(CH3)2 Valina -CH2CH(CH3)2 Leucina -CH(CH3)CH2CH3 Isoleucina -(CH2)4NH3+ Lisina -(CH2)3NHC(NH2)NH2+ Arginina

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Histidina

-CH2COO-Ácido aspártico -CH2CH2COO-Ácido glutámico -CH2CONH2 Asparagina -CH2CH2CONH2 Glutamina

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Fenilalanina

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-CH2SH Cisteína -CH2CH2SCH3 Metionina 5

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(continuación) Resto de cadena lateral de aminoácido Aminoácido

-CH2OH Serina -CH(OH)CH3 Treonina

Prolina

Hidroxiprolina

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Un “estereoisómero” hace referencia a un compuesto formado por los mismos átomos unidos por los mismos enlaces pero que tienen diferentes estructuras tridimensionales que no son intercambiables. Por tanto, se contempla que varios estereoisómeros y mezclas de los mismos e incluye "enantiómeros", que hace referencia a dos estereoisómeros cuyas moléculas no son imágenes especulares superpuestas una de otra.

Un “tautómero” hace referencia a un desplazamiento de protones de un átomo de una molécula a otro átomo de la misma molécula.

Con “profármacos” se pretende indicar un compuesto que se puede convertir en condiciones fisiológicas o mediante solvolisis en un compuesto biológicamente activo descrito en el presente documento. Por tanto, el término “profármaco” hace referencia a un precursor de un compuesto biológicamente activo que es farmacéuticamente aceptable. Un profármaco puede ser inactivo cuando se administra a un sujeto pero se convierte in vivo en un compuesto activo mediante, por ejemplo, hidrólisis. El compuesto profármaco a menudo ofrece ventajas de solubilidad, compatibilidad de tejidos o liberación retardada en un organismo mamífero (véase Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985), pp. 7-9, 21-24 (Elsevier, Amsterdam).

En T. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems (1987) 14 of the A.C.S. Symposium Series, y en Bioreversible Carriers in Drug Design, (1987) Edward B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association and Pergamon Press., se proporciona una discusión sobre profármacos.

El término “profármaco” también quiere decir cualquier vehículo covalentemente unido que libera el compuesto activo in vivo cuando dicho profármaco se administra a un sujeto mamífero. Los profármacos de un compuesto activo, como se describe en el presente documento, se puede preparar preparan modificando grupos funcionales presentes en el compuesto de un modo tal que las modificaciones se escinden, bien en manipulación rutinaria in vivo, en el compuesto activo parental. Los profármacos incluyen compuestos en los que un grupo hidroxilo, amino o mercapto están unidos a cualquier grupo que, cuando el profármaco del compuesto activo se administra a un sujeto mamífero, se escinde para formar un grupo hidroxilo libre, amino libre o mercapto libre, respectivamente. Ejemplos de los profármacos incluyen, entre otros, derivados acetato succinato, fosfato, hemisuccinato, malato, hemimalato, formiato y benzoato de grupos funcionales alcohol o amina en los compuestos activos y similares. Otros ejemplos de los profármacos incluyen, entre otros, derivados aminoácidos de grupos funcionales alcohol o amina en los compuestos activos y similares.

La presente invención está dirigida a compuestos de conformación forzada que reproducen la estructura secundaria de regiones de giro inverso de péptidos y proteínas biológicamente activos (también denominados en el presente documento “miméticos de giro inverso”) y también está dirigida a bibliotecas químicas relacionadas con los mismos.

Las estructuras miméticas de giro inverso de la presente invención son útiles como agentes bioactivos, incluyendo (entre otros) el uso como agentes diagnósticos, profilácticos y/o terapéuticos. Las bibliotecas de estructuras de miméticos de giro inverso descritas en el presente documento son útiles en la identificación de agentes bioactivos que tienen dichos usos. En la práctica, las bibliotecas pueden contener de decenas a cientos a miles (o más) de estructuras de giro inverso individuales (también denominados en el presente documento “miembros”).

Se divulga una estructura mimética de giro inverso que tiene la fórmula (I) siguiente (no de acuerdo con la invención):

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en la que E es -ZR3-o -(C=O)-, en la que Z es CH o N; W es -(C=O)-, -(C=O)NH-, -(C=O)O-, -(C=O)S-, -S(O)2-o un enlace; y cada uno de R1, R2, R3, R4 y R5 es igual o diferente y de forma independiente un resto de cadena lateral aminoácido o un derivado de la cadena lateral de aminoácido. El compuesto mimético de giro interno puede estar presente como un estereoisómero aislado o una mezcla de estereoisómeros o como una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En determinadas realizaciones no pertenecientes a la invención, el R1 de los compuestos de fórmula (I) es indazolilo o indazolilo sustituido.

En determinadas realizaciones no pertenecientes a la invención de los compuestos descritos en el párrafo precedente, el R1 de los compuestos de fórmula (I) puede ser indazolilo o indazolilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de alquilo C1-7, arilo C6-12, arilalquilo C7-15, arilalquilo C7-15 sustituido, cicloalquilalquilo, hidroxialquilo, acilo C1-1, amino, halógeno, nitro, aciloxialquilo C2-10, aminocarbonilo, aminocarbonilalquilo, dialquilaminocarbonilalquilo, dialquilaminocarbonilalquilo, alcoxicarbonilalquilo, hidroxialquilo, cianoalquilo C1-3, morfolinilalquilo C1-3, alcoxialquilamida y cicloalquilcarbonilo.

En determinadas realizaciones no pertenecientes a la invención, los R2, R4 y R5 de los compuestos de fórmula (I) son seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en:

alquilo C1-12 o alquilo C1-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de: Halógeno, ciano, alcoxi C1-6, amino, guanidino, alquil C1-4guanidino, dialquil C1-4guanidino, amidino, alquil C1-4amidino, dialquil C1-4amidino, alquil C1-5amino, dialquil C1-5amino, aminocarbonilo, morfolinilo, metilpiperazinilo, fenilo e hidroxilo; alquenilo C2-12 o alquenilo C2-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, guanidino, alquil C1-4guanidino, dialquil C1-4guanidino, amidino, alquil C1-4amidino, dialquil C1-4amidino, alquil C1-5amino, dialquil C1-5amino e hidroxilo; arilo C6-12 o arilo C6-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: halógeno, amino, guanidino, alquil C1-4guanidino, dialquil C1-4guanidino, amidino, alquil C1-4amidino, dialquil C1-4amidino, alquil C1-5amino, dialquil C1-5amino e hidroxilo; alcoxi C1-6; dialquil C1-5amino; heterociclilalquilo C6-13, que tiene de 1 a 2 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno o azufre, o heterociclilalquilo C6-13 sustituido que tiene de 1 a 2 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno o azufre y tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: Halógeno, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, ciano e hidroxilo; y arilalquilo C7-13 o arilalquilo C7-13 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4amino, dialquil C14amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-6, alcoxi C1-6, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, acetilenilo e hidroxilo, y R3 es seleccionado del grupo que consiste en:

hidrógeno; alquilo C1-12 o alquilo C1-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de: halógeno, ciano, alcoxi C1-6, amino, guanidino, alquil C1-4guanidino, dialquil C1-4guanidino, amidino, alquil C1-4amidino, dialquil C1-4amidino, alquil C1-5amino, dialquil C1-5amino e hidroxilo; alquenilo C2-12 o alquenilo C2-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, guanidino, alquil C1-4guanidino, dialquil C1-4guanidino, amidino, alquil C1-4amidino, dialquil C1-4amidino, alquil C1-5amino, dialquil C1-5amino e hidroxilo; arilo C6-12 o arilo C6-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: halógeno, amino, guanidino, alquil C1-4guanidino, dialquil C1-4guanidino, amidino, alquil C1-4amidino, dialquil C1-4amidino, alquil C1-5amino, dialquil C1-5amino e hidroxilo; alcoxi C1-6; heterociclilalquilo C6-13, que tiene de 1 a 2 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno o azufre, o heterociclilalquilo C6-13 sustituido que tiene de 1 a 2 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno o azufre y tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: halógeno, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, ciano e hidroxilo; y arilalquilo C7-13 o arilalquilo C7-13 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4, dialquil C14amino, halógeno,

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perfluoroalquilo C1-6, alcoxi C1-6, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo.

En determinadas realizaciones no pertenecientes a la invención, los R2, R4 y R5 de los compuestos de fórmula (I) son seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en:

aminoalquil C2-5, guanidinoalquil C2-5, alquil C1-4guanidinoalquil C2-5, dialquil C14guanidino-alquilo C2-5; amidinoalquilo C2-5, alquil C1-4amidinoalquilo C2-5; dialquil C14amidinoalquilo C2-5; alcoxi C1-3; alquilo C1-12; arilo C6-12; arilalquilo C6-12; alquenilo C2-12; fenilo o fenilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4amino, dialquil C14amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-4 alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; naftilo o naftilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4amino, dialquil C14amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-4 alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; bencilo o bencilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4amino, dialquil C14amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, alquilo C1-4, acetilenilo e hidroxilo; bisfenilmetilo o bisfenilmetilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4, dialquil C14amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-6, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; piridilo o piridilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4, dialquil C1-4amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; alquil C1-12piridilo o alquil C1-12piridilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4, dialquil C14amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; pirimidil alquilo C1-12 o pirimidil alquilo C1-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4 amino, dialquil C1-4amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; triazin-2-ilalquilo C1-4 o triazin-2-ilalquilo C1-4 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4 amino, dialquil C1-4amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; imidazolilalquilo C1-4 o imidazolilalquilo C1-4 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C14 amino, dialquil C1-4amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; N-amidinopiperazinil-N-alquilo C0-4, N-amidinopiperidinilalquilo C1-4; y 4-aminociclohexilalquilo C0-2; y R3 es seleccionado del grupo que consiste en: hidrógeno, aminoalquil C2-5, guanidinoalquil C2-5, alquil C1-4guanidinoalquil C2-5, dialquil C14guanidino-alquilo C2-5; amidinoalquilo C2-5, alquil C1-4amidinoalquilo C2-5; dialquil C14amidinoalquilo C2-5; alcoxi C1-3; alquilo C1-12; arilo C6-12; arilalquilo C6-12; alquenilo C2-12; fenilo o fenilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4amino, dialquil C14amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-4 alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; naftilo o naftilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4amino, dialquil C14amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-4 alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; bencilo o bencilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4, dialquil C1-4amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; bisfenilmetilo o bisfenilmetilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4, dialquil C14amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-6, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; piridilo o piridilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4, dialquil C1-4amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; alquil C1-12piridilo o alquil C1-12piridilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4, dialquil C14amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; pirimidil alquilo C1-12 o pirimidil alquilo C1-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4 amino, dialquil C1-4amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; triazin-2-ilalquilo C1-4 o triazin-2-ilalquilo C1-4 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4 amino, dialquil C1-4amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo;

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imidazolilalquilo C1-4 o imidazolilalquilo C1-4 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4 amino, dialquil C1-4amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; N-amidinopiperazinil-N-alquilo C0-4, N-amidinopiperidinilalquilo C1-4; y 4-aminociclohexilalquilo C0-2.

En determinadas realizaciones no pertenecientes a la invención, el R1 de los compuestos de Fórmula (I) es indazolilo o indazolilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de metilo; isopropilo, ciclopropilmetilo; hidroxietilo; ciclo-propilcarbonilo; aminocarbonilo; cianometilo; morfoliniletilo; aminocarbonilmetilo; dimetilaminocarbonilmetilo; metoxietilpropionamide; etoxicarbonilmetilo; acetoxietilo; fenilo; bencilo; y arilalquilo C7-15 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de amino y nitro.

En determinadas realizaciones no pertenecientes a la invención, el R1 de los compuestos de Fórmula (I) es seleccionado del grupo que consiste en 2-metil-2H-indazolilo, 1-metil-1H-indazolilo, 3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolilo, 1-hidroxietil-1H-indazolilo, 1H-indazolilo, 2-ciclopropilmetil-2H-indazolilo, 3-amino-1H-indazolilo, 1-bencil-1H-indazolilo, 3-cloro-1H-indazolilo, 6-cloro-1H-indazolilo, 3-fenil-1H-indazolilo, 1-bencil-3-fenil-1H-indazolilo, 1-nitrobencil-1H-indazolilo, 1-aminobencil-1H-indazolilo, 2-metil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolilo, 1-metil-3-aminocarbonil-1H-indazolilo, carbonil-indazolilo, 2-isopropil-2H-indazolilo, 2-aminocarbonilmetil-2H-indazolilo, 1-cianometil-3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolilo, 2-cianometil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolilo, 1-morfolinil-N-etil-1H-indazolilo, 2-morfolinil-N-etil-2H-indazolilo, 2-dimetilaminocarbonilmetil-2H-indazolilo, 2-metoxietilpropionamida-2H-indazolilo, 1-etoxicarbonilmetil-1H-indazolilo, 2-etoxicarbonilmetil-2H-indazolilo y 1-acetoxietil-1H-indazolilo.

En determinadas realizaciones no pertenecientes a la invención, los R2, R4 y R5 de los compuestos de fórmula (I) son seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en:

alquilo C1-12 o alquilo C1-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de acilo, carboxi, ariltio, aminocarbonilo, morfolinilo, metilpiperazinilo, fenilo, ciano, alquil C1-5 amino, dialquil C1-5 amino, alcoxi C1-6 y fenilsulfonilo; alquenilo C2-12 o alquenilo C2-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de acilo, carboxi, alquiltio y fenilsulfonilo; arilo C6-12 sustituido con amidosulfonato; arilaquilo C1-4 o arilaquilo C1-4 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4 amino, dialquil C1-4amino, cicloalquilo C3-6, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-6, acetilenilo, alcoxi C13, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, alquiloxi C1-6 acilo C1-6, morforlinilalquilo C16, arilo, ariloxi, (alquil)(arilalquil)amino, heterociclilo, acilo, amidosulfonato, aminocarbonilo, alquilosulfonato, alquilsulfonilo, alquiltio, ariltio, fenilsulfonato, fenilsulfonilo, morforlinilalcoxi C1-3, N-formamidilo y pirrolidonilo; heterociclilo o heterociclilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4, dialquil C14amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; heterociclilalquilo C1-4 o heterociclilalquilo C1-4 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C14 amino, dialquil C1-4amino, cicloalquilo C3-6, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-6, alcoxi C13, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, alquiloxi C1-6acilo C1-6, morfolinilalquilo C16, arilalquilo, arilo, heterociclilo, acilo, fenilsulfonilo, cicloalquilalquilo, aciloxialquilo, aminocarbonilo y alquil C1-4formamidilo; cicloalquilo o cicloalquilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4 amino, dialquil C1-4amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-6, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; y cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4amino, dialquil C14 amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-6, alquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo, y R3 es seleccionado del grupo que consiste en:

hidrógeno; alquilo C1-12 o alquilo C1-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de acilo, carboxi, alquiltio y fenilsulfonilo; alquenilo C2-12 o alquenilo C2-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de acilo, carboxi, alquiltio y fenilsulfonilo; arilo C6-12 sustituido con amidosulfonato; arilaquilo C1-4 o arilaquilo C1-4 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4amino, dialquil C1-4amino, cicloalquilo C3-6, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-6, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, hidroxilo, alquiloxi C1-6 acilo C1-6, morfolinilalquilo C1-6, arilo, ariloxi (alquil)(arilalquil)amino, heterociclilo, acilo, amidosulfonato, aminocarbonilo, alquilsulfonato, alquilsulfonilo, alquiltio, arilitio, fenilsulfonato, fenilsulfonilo, morfolinilalcoxi C1-3, N-formamidilo y pirrolidonilo; heterociclilo o heterociclilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4, dialquil

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C1-4amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; heterociclilalquilo C1-4 o heterociclilalquilo C1-4 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C14 amino, dialquil C1-4amino, cicloalquilo C3-6, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-6, alcoxi C13, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo,

5 hidroxilo, alquiloxi C1-6acilo C1-6, morfolinilalquilo C16, arilalquilo, arilo, heterociclilo, acilo, fenilsulfonilo, cicloalquilalquilo, aciloxialquilo, aminocarbonilo y alquil C1-4formamidilo; cicloalquilo o cicloalquilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4 amino, dialquil C1-4amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-6, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo; y

10 cicloalquilalquilo o cicloalquilalquilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4, dialquil C14amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-4, alquilo C1-4, alcoxi C1-3, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo;

En determinada realización no perteneciente a la invención de los compuestos descritos en el párrafo anterior, arilalquilo C1-4 es bencilo, acetilenilbencilo, alcoxibencilo C1-4, hidroxibencilo, bisfenilmetilo, naftilmetilo o

15 3,3-bisfenilpropilo; y heterociclilalquilo C1-4 es benzotriazolilalquilo C1-4, benzopirazolilalquilo C1-4, indazolilalquilo C1-4, isoquinolilalquilo C1-4, benzotiazolilalquilo C1-4, quinolinilalquilo C1-4, imidazolinilalquilo C1-4, tienilalquilo C1-4, tetrahidrofuranilalquilo C1-4, piridinilalquilo C1-4, bencimidazolilalquiloC1-4 o indolilalquilo C1-4.

En la realización no perteneciente a la invención en la que E es CHR3, el compuesto mimético de giro inverso de la presente invención tiene una estructura de fórmula (II):

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en la que W es -(C=O)-, -(C=O)NH-,-(C=O)O-, -(C=O)S-, -S(O)2-o un enlace; y cada uno de R1, R2, R3, R4 y R5 es igual

o diferente y de forma independiente un resto de cadena lateral aminoácido o un derivado de la cadena lateral de aminoácido.

En determinadas realizaciones no pertenecientes a la invención, el R1 de los compuestos de fórmula (II) es indazolilo o

25 indazolilo sustituido y puede ser indazolilo o indazolilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de alquilo C1-7, arilo C6-12, arilalquilo C7-15, arilalquilo C7-15 sustituido, cicloalquilalquilo, hidroxialquilo, acilo C1-1, amino, halógeno, nitro, aciloxialquilo C2-10, aminocarbonilo, aminocarbonilalquilo, dialquilaminocarbonilalquilo, dialquilaminocarbonilalquilo, alcoxicarbonilalquilo, hidroxialquilo, cianoalquilo C1-3, morfolinilalquilo C1-3, alcoxialquilamida y cicloalquilcarbonilo; R2, R4 y R5 son seleccionados de forma independiente

30 del grupo que consiste en:

alquilo C1-12 o alquilo C1-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de: halógeno, ciano, alcoxi C1-6, amino, guanidino, alquil C1-4guanidino, dialquil C1-4guanidino, amidino, alquil C1-4amidino, dialquil C1-4amidino, alquil C1-5amino, dialquil C1-5amino, aminocarbonilo, morfolinilo, metilpiperazinilo, fenilo e hidroxilo; alquenilo C2-12 o alquenilo C2-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma

35 independiente de: amino, guanidino, alquil C1-4guanidino, dialquil C1-4guanidino, amidino, alquil C1-4amidino, dialquil C1-4amidino, alquil C1-5amino, dialquil C1-5amino e hidroxilo; arilo C6-12 o arilo C6-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: halógeno, amino, guanidino, alquil C1-4guanidino, dialquil C1-4guanidino, amidino, alquil C1-4amidino, dialquil C1-4amidino, alquil C1-5amino, dialquil C1-5amino e hidroxilo; alcoxi C1-6; dialquil C1-5amino;

40 heterociclilalquilo C6-13, que tiene de 1 a 2 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno o azufre, o heterociclilalquilo C6-13 sustituido que tiene de 1 a 2 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno o azufre y tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: halógeno, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, ciano e hidroxilo; y arilalquilo C7-13 o arilalquilo C7-13 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4amino, dialquil C14 amino,

45 halógeno, perfluoroalquilo C1-6, alcoxi C1-6, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo, alquilo C14, acetilenilo, hidroxilo, fosfato, dimetilaminoacetato, dimetilaminoalquilcarbamato y dietilfosfonoacetamido; y R3 es seleccionado del grupo que consiste en:

hidrógeno; alquilo C1-12 o alquilo C1-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de: halógeno, ciano,

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alcoxi C1-6, amino, guanidino, alquil C1-4guanidino, dialquil C1-4guanidino, amidino, alquil C1-4amidino, dialquil C1-4amidino, alquil C1-5amino, dialquil C1-5amino e hidroxilo; alquenilo C2-12 o alquenilo C2-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, guanidino, alquil C1-4guanidino, dialquil C1-4guanidino, amidino, alquil C1-4amidino, dialquil C1-4amidino, alquil C1-5amino, dialquil C1-5amino e hidroxilo; arilo C6-12 o arilo C6-12 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: halógeno, amino, guanidino, alquil C1-4guanidino, dialquil C1-4guanidino, amidino, alquil C1-4amidino, dialquil C1-4amidino, alquil C1-5amino, dialquil C1-5amino e hidroxilo; alcoxi C1-6; heterociclilalquilo C6-13, que tiene de 1 a 2 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno o azufre, o heterociclilalquilo C6-13 sustituido que tiene de 1 a 2 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno o azufre y tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: halógeno, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, ciano e hidroxilo; y arilalquilo C7-13 o arilalquilo C7-13 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: amino, amidino, guanidino, hidrazino, alquil C1-4, dialquil C14amino, halógeno, perfluoroalquilo C1-6, alcoxi C1-6, nitro, carboxi, ciano, sulfurilo e hidroxilo.

En determinadas realizaciones no pertenecientes a la invención de los compuestos descritos en el párrafo precedente, el R1 de los compuestos de Fórmula (II) puede ser indazolilo o indazolilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de metilo; isopropilo, ciclopropilmetilo; hidroxietilo; ciclopropilcarbonilo; aminocarbonilo; cianometilo; morfoliniletilo; aminocarbonilmetilo; dimetilaminocarbonilmetilo; metoxietilpropionamide; etoxicarbonilmetilo; acetoxietilo; fenilo; bencilo; y arilalquilo C7-15 sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de amino y nitro; y ejemplos específicos de R1 pueden incluir, entre otros

2-metil-2H-indazolilo, 1-metil-1H-indazolilo, 3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolilo, 1-hidroxietil-1H-indazolilo, 1Hindazolilo, 2-ciclopropilmetil-2H-indazolilo, 3-amino-1H-indazolilo, 1-bencil-1H-indazolilo, 3-cloro-1H-indazolilo, 6cloro-1H-indazolilo, 3-fenil-1H-indazolilo, 1-bencil-3-fenil-1H-indazolilo, 1-nitrobencil-1H-indazolilo, 1-aminobencil-1H-indazolilo, 2-metil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolilo, 1-metil-3-aminocarbonil-1H-indazolilo, carbonil-indazolilo, 2-isopropil-2H-indazolilo, 2-aminocarbonilmetil-2H-indazolilo, 1-cianometil-3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolilo, 2-cianometil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolilo, 1-morfolinil-N-etil-1H-indazolilo, 2-morfolinil-N-etil-2H-indazolilo, 2-dimetilaminocarbonilmetil-2H-indazolilo, 2-metoxietilpropionamida-2H-indazolilo, 1-etoxicarbonilmetil-1H-indazolilo, 2-etoxicarbonilmetil-2H-indazolilo y 1-acetoxietil-1H-indazolilo;

En determinadas realizaciones no pertenecientes a la invención de los compuestos descritos en el párrafo precedente, R2 y R5 son, de forma independiente, alquilo C1-12, arilo C6-12, arilalquilo C7-12, heterociclilalquilo C611, hidroxibencilo o bencilo sustituido que tiene un sustituyente seleccionado de fosfato, dimetilaminoacetato, (2-dimetilamino-etil)-carbamato y dietilfosfonoacetamido; R3 es hidrógeno o alquilo C1-12; y R4 es alquilo C1-12, arilalquilo C7-12 o alquenilo C2-12.

Estos compuestos se pueden preparar usando moléculas componentes de partida adecuadas (en lo sucesivo en el presente documento denominadas "piezas componentes"). En resumen, en la síntesis de estructuras miméticas de giro inverso descritas en al presente documento, las estructuras miméticas de giro inverso se pueden preparar mediante acoplamiento secuencial de las piezas componentes individuales de forma escalonada en solución o mediante síntesis en fase sólida como habitualmente se practica en la síntesis de péptidos en fase sólida, seguido de ciclado para dar las estructuras miméticas de giro inverso de la presente invención. Como alternativa, las piezas componentes primera y segunda se acoplan para formar un intermedio primero-segundo combinado, en caso necesario, las piezas componentes tercera y/o cuarta acoplan para formar un intermedio tercero-cuarto combinado (o, si está disponible comercialmente, se puede usar un único tercer intermedio), el intermedio primero-segundo combinado y el intermedio tercero-cuarto combinado (o tercer intermedio) se acoplan después para proporcionar un primero-segundo-tercero-cuarto intermedio (o primero-segundo-tercer intermedio), que se cicla para dar las estructuras miméticas de giro inverso de la presente invención.

En la Figura 1 se ilustran piezas componente específicas y el montaje de las mismas para preparar compuestos descritos en el presente documento. Por ejemplo, una “pieza primer componente” puede temer la siguiente fórmula S1:

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en la que R1 es como se ha definido anteriormente y R es un grupo protector adecuado para usar en la síntesis peptídica, cuando este grupo de protección puede estar unido a un soporte polimérico para permitir la síntesis en fase sólida. Los grupos R adecuados incluyen grupos alquilo y, en una realización preferida, R es un grupo metilo. En la Figura 1, uno de los grupos R es un soporte polimérico (sólido), indicado por “Pol” en la Figura. Dichas primeras piezas componente se pueden sintetizar fácilmente mediante afinación reductora de H2N-C-R1 con CH(OR)2-CHO, o mediante una reacción de desplazamiento entre H2N-C-R1 y CH(OR)2-CH2-LG (en la que LG hace referencia a un

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grupo saliente, por ejemplo un grupo halógeno (Hal)). Una “segunda pieza componente” puede tener la siguiente fórmula S2:

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en la que P es un grupo protector amino adecuado para usar en la síntesis peptídica, L1 es un grupo de activación hidroxilo o carboxilo y R2 es como se ha definido anteriormente. Grupos de protección preferidos incluyen t-butildimetilsililo (TBDMS), t-butiloxicarbonilo (BOC), metiloxicarbonilo (MOC), 9H-fluorenilmetiloxicarbonilo (FMOC) y aliloxicarbonilo (Alloc). Los aminoácidos N-protegidos están disponibles comercialmente; por ejemplo, los aminoácidos FMOC están disponibles de diversas fuentes. Con el fin de que la segunda pieza componente sea reactiva con la primera pieza componente, L1 es un grupo de activación de carboxilo y la conversión de los grupos carboxilo en grupos carboxilo activados puede conseguirse fácilmente mediante procedimientos conocidos en la técnica para la activación de grupos carboxilo. Grupos de ácido carboxílico activado adecuados incluyen haluros ácidos, en los que L1 es un haluro tal como cloro o bromo, anhídridos ácidos en los que L1 es un grupo acilo, tal como acetilo, ésteres reactivos tales como ésteres de N-hidroxisuccinimida y ésteres de pentafluorofenilo, y otros intermedios activados tales como el intermedio activo formado en una reacción de acoplamiento usando una carbodiimida tal como diciclohexilcarbodiimida (DCC). De acuerdo con lo anterior, los aminoácidos N-protegidos disponibles comercialmente se pueden convertir en formas carboxílicas activadas por medios conocidos para el experto en la técnica.

En el caso del derivado azido de un aminoácido que sirve como segunda pieza componente, dichos compuestos se pueden preparar a partir del correspondiente aminoácido mediante la reacción divulgada por Zaloom et al. (J. Org. Chem. 46:5173-76, 1981).

Una “tercera pieza componente” de la presente invención puede temer la siguiente fórmula S3:

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en el que, R4, E y L1 son como se ha definido con anterioridad. Terceras piezas componente adecuadas están disponibles comercialmente de una diversidad de fuentes o se pueden preparar mediante procedimientos bien conocidos en la química orgánica.

La Figura 1 ilustra la preparación de compuestos de Fórmula (I).

Por tanto, como se ha ilustrado anteriormente, los compuestos miméticos de giro inverso de fórmula (I) se pueden sintetizar haciendo reaccionar una primera pieza componente con una segunda pieza componente para dar un intermedio primero-segundo combinado, seguido de la reacción del intermedio primero-segundo combinado con las terceras piezas componente secuencialmente para proporcionar un intermedio primero-segundo-tercero-cuarto y, después, ciclar este intermedio para dar la estructura mimética de giro inverso.

Las síntesis de las piezas componente representativas de la presente invención se describen en los Ejemplos de Preparación.

Las estructuras miméticas de giro inverso de las fórmulas (I) y (II) se pueden fabricar mediante técnicas análogas a la síntesis del componente modular divulgada anteriormente pero con las modificaciones adecuadas en las piezas componente.

Las estructuras miméticas de giro inverso de la presente invención son útiles como agentes bioactivos, tales como agentes diagnósticos, profilácticos y/o terapéuticos. Por ejemplo, las estructuras miméticas de giro inverso de la presente invención se pueden usar para modular péptidos relacionados con un factor de transcripción de señalización celular en un animal de sangre caliente mediante un procedimiento que comprende administrar al animal una cantidad eficaz del compuesto de fórmula (III).

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Adicionalmente, las estructuras miméticas de giro inverso de la presente invención también pueden ser eficaces para inhibir la unión del péptido a dominios PTB en un animal de sangre caliente; para modular el receptor acoplado a proteína G (GPCR) y los canales de iones en un animal de sangre caliente; para modular las citocinas en un animal de sangre caliente.

Se ha comprobado que los compuestos de la fórmula (III) son eficaces para inhibir o tratar trastornos modulados por la vía de señalización de Wnt, tal como el cáncer.

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En la Fórmula (III), R1 es seleccionado del grupo que consiste en 2-metil-2H-indazolilo, 1-metil-1H-indazolilo, 3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolilo, 1-hidroxietil-1H-indazolilo, 1H-indazolilo, 2-ciclopropilmetil-2H-indazolilo, 3-amino-1H-indazolilo, 1-bencil-1H-indazolilo, 3-cloro-1H-indazolilo, 6-cloro-1H-indazolilo, 3-fenil-1H-indazolilo, 1-bencil-3-fenil-1H-indazolilo, 1-nitrobencil-1H-indazolilo, 1-aminobencil-1H-indazolilo, 2-metil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolilo, 1-metil-3-aminocarbonil-1H-indazolilo, carbonil-indazolilo, 2-isopropil-2H-indazolilo, 2-aminocarbonilmetil-2H-indazolilo, 1-cianometil-3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolilo, 2-cianometil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolilo, 1-morfolinil-N-etil-1H-indazolilo, 2-morfolinil-N-etil-2H-indazolilo, 2-dimetilaminocarbonilmetil-2H-indazolilo, 2-metoxietilpropionamida-2H-indazolilo, 1-etoxicarbonilmetil-1H-indazolilo, 2-etoxicarbonilmetil-2H-indazolilo y 1-acetoxietil-1H-indazolilo;

R4 es alilo;

R6 es fenilo o fenilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: halógeno, hidroxilo, ciano, alquilo C1-6, acetilenilo y alcoxi C1-6; o piridilo o piridilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: halógeno, hidroxilo, ciano, alquilo C1-6 y alcoxi C1-6;

X1 es hidrógeno, hidroxilo o halógeno; y

cada uno de X2 y X3 es, de forma independiente, hidrógeno, hidroxilo, fosfato, dimetilaminoacetato, (2-dimetilaminoetil)carbamato, dietilfosfonoacetamido o halógeno.

Los profármacos derivados de compuestos que tienen la fórmula general (III) también se divulgan en el presente documento. Los profármacos generalmente aumentan la solubilidad acuosa y, por tanto, la biodisponibilidad de los compuestos que tienen la fórmula general (III). Los profármacos descritos en el presente documento tienen la siguiente fórmula general (IV):

(III)-R7 (IV)

en la que uno de R1, R4, R6, X1, X2, and X3 están unidos a R7 a través de Y, en la que: Y es un oxígeno, azufre o nitrógeno en R1, R4, o R6, o un oxígeno en X1, X2, o X3; y R7 es hidroxialquilo, glicosilo, fosforiloximetiloxicarbonilo, piperidincarboniloxi sustituido o no sustituido o una sal de los mismos; o Y-R7 es un residuo de aminoácido, una combinación de residuos de aminoácidos, fosfato, hemimalato, hemisuccinato, dimetilaminoalquilcarbamato, dimetilaminoacetato o una sal del mismo; y cuando no está unido a R7: R1, R4, R6, X1, X2 y X3 se definen como están en la Fórmula (III). Las bibliotecas que contienen estructuras miméticas de giro inverso de la presente invención también se divulgan en el presente documento. Una vez montadas, las bibliotecas se pueden explorar para identificar miembros individuales que tienen bioactividad. Dicha exploración de las bibliotecas para los miembros bioactivos puede implicar, por ejemplo, evaluar la actividad de unión de los miembros de la biblioteca o evaluar el efecto que los miembros de la biblioteca tienen sobre un ensayo funcional. La exploración normalmente se realiza poniendo en contacto los miembros de la biblioteca (o una subpoblación de miembros de la biblioteca) con una diana de interés, tal como, por ejemplo, un anticuerpo, una enzima, un receptor o una línea celular. Los miembros de la biblioteca que pueden interaccionar con la diana de interés se denominan en el presente documento "miembros de la biblioteca bioactivos” o “miméticos bioactivos”. Por ejemplo, un mimético bioactivo puede ser un miembros de la biblioteca que es capaz de unirse a un anticuerpo o receptor o que es capaz de inhibir una enzima o que es capaz de

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provocar o antagonizar una respuesta funcional asociada con, por ejemplo, una línea celular. En otras palabras, la exploración de las bibliotecas determina qué miembros de la biblioteca son capaces de interaccionar con una o más dianas biológicas de interés. Adicionalmente, cuando se produce la interacción, el mimético (o miméticos) bioactivo se puede identificar después de los miembros de la biblioteca. La identificación de un único (o un número limitado) de mimético(s) bioactivo(s) de la biblioteca da estructuras miméticas de giro inverso que son en sí mismos biológicamente activos y, por tanto, son útiles como agentes diagnósticos, profilácticos o terapéuticos, y además se pueden usar para una identificación significativamente avanzada de los principales compuestos en estos campos.

La síntesis de los miméticos peptídicos de la biblioteca se puede conseguir usando técnicas de síntesis peptídica conocidas, en combinación con las piezas componente primera, segunda y tercera de la presente invención. Más específicamente, cualquier secuencia de aminoácidos se puede añadir a los extremos y/o C del mimético de giro inverso de conformación forzada. Con este fin, los miméticos se pueden sintetizar sobre un soporte sólido (tal como resina PAM) mediante técnicas conocidas (véase, por ejemplo, John M. Stewart y Janis D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 1984, Pierce Chemical Comp., Rockford, Ill.) o en una resina unida a sililo mediante unión de alcohol (véase Randolph et al., J. Am Chem. Soc. 117:5712-14, 1995).

Además, una combinación de técnicas de síntesis en solución y en fase sólida se puede usar para sintetizar los miméticos peptídicos de la presente invención. Por ejemplo, se puede usar un soporte sólido para sintetizar la secuencia peptídica lineal hasta el punto de que se añade el giro inverso de conformación forzada a la secuencia. Una estructura mimética de giro inverso de conformación forzada adecuada que se ha sintetizado previamente mediante técnicas de síntesis en solución se puede añadir como el siguiente “aminoácido” a la síntesis en fase sólida (es decir, el mimético de giro inverso de conformación forzada, que tiene tanto un extremo N como un extremo C, se puede usar como el siguiente aminoácido a añadir al péptido lineal). Tras la incorporación de las estructuras miméticas de giro inverso de conformación forzada en la secuencia, se pueden añadir aminoácidos adicionales para completar el péptido unido al soporte sólido. Como alternativa, las secuencias peptídicas lineales protegidas en el extremo N y el extremo C se pueden sintetizar sobre un soporte sólido, eliminar del soporte y después acoplar a las estructuras miméticas de giro inverso de conformación forzada en solución usando técnicas de acoplamiento en solución conocidas.

En el presente documento también se divulgan procedimientos para construir las bibliotecas. Las técnicas de química combinatoria tradicionales (véase, por ejemplo, Gallop et al., J. Med. Chem. 37:1233-1251, 1994) permiten la rápida preparación de un gran número de compuestos mediante la combinación secuencial de reactivos con un armazón molecular básico. Las técnicas combinatorias se han usado para construir bibliotecas peptídicas derivadas de los aminoácidos de origen natural. Por ejemplo, tomando 20 mezclas de 20 aminoácidos protegidos adecuadamente y diferentes y acoplando cada uno con uno de los 20 aminoácidos se crea una biblioteca de 400 (es decir, 202) dipéptidos. Repitiendo el procedimiento siete veces da lugar a la preparación de una biblioteca peptídica compuesta por aproximadamente 26 billones (es decir, 208) de octapéptidos.

Específicamente, la síntesis de los miméticos peptídicos de la biblioteca descritos en el presente documento se puede realizar usando técnicas de síntesis peptídica conocidas, por ejemplo, el Esquema general de la biblioteca de miméticos de giro inverso, del siguiente modo:

imagen12

La síntesis de los miméticos peptídicos de las bibliotecas se realizó usando un FlexChem Reactor Block que tiene placas de 96 pocillos mediante técnicas conocidas. En el esquema anterior, “Pol” representa una resina de

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bromoacetal (Advanced ChemTech) y un procedimiento detallado se ilustra a continuación.

Etapa 1

Una resina de bromoacetal (37 mg, 0,98 mmol/kg) y una solución de R1-amina en DMSO (1,4 ml) se introdujeron en un bloque de Robbins (FlexChem) que tiene placas de 96 pocillos. La mezcla de reacción se agitó a 60 ºC usando un 5 horno rotatorio [Robbins Scientific] durante 12 horas. La resina se lavó con DMF, MeOH y después con DCM.

Etapa 2

A la resina se añadió una solución en DMF de Fmoc-NH-CH(R2)-COOH (4 equiv.), PyBob (4 equiv.), HOAt (4 equiv.), y DIEA (12 equiv.) disponibles comercialmente. Después de agitar la mezcla de reacción durante 12 horas a temperatura ambiente, la resina se lavó con DMF, MeOH, y después con DCM.

10 Etapa 3

A la resina hinchada con DMF antes de la reacción se añadió 25% de piperidina en DMF y la mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Esta etapa de desprotección se repitió de nuevo y la resina se lavó con DMF, metanol y después con DCM. A la resina se añadió una solución de hidracina ácida (4 equiv.), HOBt (4 equiv.) y DIC (4 equiv.) en DMF y la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente. La resina

15 se lavó con DMF, MeOH y después con DCM.

Etapa 4

La resina obtenida en la etapa 3 se trató con ácido fórmico (1,2 ml cada pocillo) durante 18 horas a temperatura ambiente. Después de eliminar la resina mediante filtración, el filtrado se condensó a presión reducida usando SpeedVac [SAVANT], para dar el producto como un aceite. El producto se diluyó con 50% de agua/acetonitrilo y

20 después se liofilizó después de congelar.

Para generar estas bibliotecas de bloques, los ácidos de hidracina intermedios clave se sintetizaron de acuerdo con el procedimiento ilustrado en el Ejemplo de Preparación 1.

La Tabla 2 muestra los compuestos que se prepararon, siendo los compuestos 1 -28, 30 -33 y 35 -48 de los mismos de acuerdo con la presente invención, cuya preparación representativa se proporciona en los ejemplos de preparación.

25 [Tabla 2]

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Nº

Estructura P.M. Fórmula M+H

1

579,65 C32H33N7O4 580

2

579,65 C32H33N7O4 580

3

579,65 C32H33N7O4 580

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Nº

Estructura P.M. Fórmula M+H

4

imagen13 621,73 C35H39N7O4 622

5

594,66 C32H34N8O4 595

6

684,79 C39H40N8O4 685

7

636,70 C34H36N8O5 637

8

imagen14 636,7 C34H36N8O5 637

9

669,77 C39H39N7O4 670

10

745,87 C45H43N7O4 746

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Nº

Estructura P.M. Fórmula M+H

11

665,74 C36H39N7O6 666

12

647,72 C36H37N7O5 648

13

661,75 C37H39N7O5 662

14

633,74 C36H39N7O4 634

15

614,09 C32H32ClN7O4 615

16

imagen15 614,09 C32H32ClN7O4 615

17

623,70 C34H37N7O5 624

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Nº

Estructura P.M. Fórmula M+H

18

593,68 C33H35N7O4 594

19

593,68 C33H35N7O4 594

20

imagen16 714,77 C39H38N8O6 715

21

655,75 C38H37N7O4 656

22

imagen17 759,64 C36H38IN7O4 760

23

703,59 C32H32N7Na2O7P 704

24

593,68 C33H35N7O4 594

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Nº

Estructura P.M. Fórmula M+H

25

580,64 C31H32N8O4 581

26

577,68 C33H35N7O3 578

27

657,76 C38H39N7O4 658

28

imagen18 658,73 C32H34N8O6S 659

29

782,69 C37H37N8Na2O7P 783

30

imagen19 717,62 C33H34N7Na2O7P 718

31

imagen20 757,68 C36H38N7Na2O7P 758

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Nº

Estructura P.M. Fórmula M+H

32

579,65 C32H33N7O4 580

33

703,59 C32H32N7Na2O7P 704

34

596,68 C32H36N8O4 597

35

738,04 C32H31ClN7O7P 739

36

869,81 C45H42N7Na2O7P 870

37

622,67 C33H34N8O5 624

38

686,76 C38H38N8O5 688

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Nº

Estructura P.M. Fórmula M+H

39

686,76 C38H38N8O5 688

40

725,8 C40H39N9O5 727

41

593,68 C33H35N7O4 595

42

717,62 C33H34N7Na2O7P 719

43

692,82 C38H44N8O5 694

44

692,82 C38H44N8O5 694

45

664,76 C36H40N8O5 666

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Nº

Estructura P.M. Fórmula M+H

46

694,79 C37H42N8O6 696

47

665,76 C36H39N7O6 667

48

665,75 C36H39N7O6 667

49

517,58 C27H31N7O4 519

50

567,64 C31H33N7O4 569

51

567,64 C31H33N7O4 569

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Nº

Estructura P.M. Fórmula M+H

52

568,62 C31H32N6O5 570

53

593,68 C33H35N7O4 595

54

582,65 C32H34N6O5 584

55

569,61 C30H31N7O5 571

56

569,61 C30H31N7O5 571

57

569,61 C30H31N7O5 571

58

imagen21 581,67 C32H35N7O4 583

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Nº

Estructura P.M. Fórmula M+H

59

552,62 C31H32N6O4 554

60

566,65 C32H34N6O4 568

61

580,68 C33H36N6O4 582

62

594,70 C34H38N6O4 596

63

524,61 C30H32N6O3 526

64

538,64 C31H34N6O3 540

65

552,67 C32H36N6O3 554

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Nº

Estructura P.M. Fórmula M+H

66

556,69 C33H38N6O3 558

67

610,71 C33H38N8O4 612

68

610,66 C32H34N8O5 612

69

609,72 C34H39N7O4 611

70

609,68 C33H35N7O5 611

71

595,73 C34H41N7O3 597

72

imagen22 595,69 C33H37N7O4 597

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Nº

Estructura P.M. Fórmula M+H

73

652,74 C35H40N8O5 654

74

665,78 C36H43N9O4 667

75

581,67 C32H35N7O4 583

76

623,70 C34H37N7O5 625

77

636,74 C35H40N8O4 638

78

592,69 C34H36N6O4 594

79

imagen23 594,26 C33H34N6O5 596

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Nº

Estructura P.M. Fórmula M+H

80

578,70 C34H38N6O3 580

81

578,66 C33H34N6O4 580

82

564,68 C33H36N6O3 566

83

imagen24 579,65 C32H33N7O4 581

84

imagen25 607,70 C34H37N7O4 609

85

621,73 C35H39N7O4 623

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(continuación)

BIBLIOTECA DE MIMÉTICOS DE GIRO INVERSO

Nº

Estructura P.M. Fórmula M+H

86

610,71 C33H38N8O4 612

87

624,73 C34H40N8O4 626

88

624,69 C33H36N8O5 626

89

imagen26 606,67 C33H34N8O4 608

90

625,72 C34H39N7O5 627

91

611,69 C33H37N7O5 613

A continuación se exponen los datos de RMN de algunos de los compuestos preparados de acuerdo con el procedimiento anterior:

(6S,9aS)-8-((1H-indazol-7-il)metil)-2-alil-N-bencil-6-(4-hidroxi-bencil)-4,7-dioxo-hexahidro-2H-pirazino[2, 1-c][1,2,4]triazin-1(6H)-carboxamida (Compuesto nº 3 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 8,09 (s, 1H), δ 7,73 (d, J = 3,0 Hz, 1H), δ 7,37~7,22 (m, 5H), δ 7,11-7,03 (m, 2H),

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

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δ 6,90 (d, J= 9,0 Hz, 1H), δ 6,74 (d, J= 6,0 Hz, 1H), δ 6,57 (d, J= 6,0 Hz, 2H), δ 5,65-4,56 (m, 1H), δ 5,48-5,35 (m, 1H), δ 5,31 (t, J = 3,0 Hz, 1H), δ 5,16-4,95 (m, 3H), δ 4,55 (d, J = 15,0 Hz, 1H), δ 4,40-4,12 (m, 2H), δ 3,46-3,23 (m, 8H)

(6S,9aS)-2-alil-N-bencil-6-(4-hidroxi-bencil)-8-((1-(3-nitrobencil)-1H-indazol-7-il)metil)-4,7-dioxo-hexahid ro-2H-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1(6H)-carboxamida (Compuesto nº 20 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 8,24 (s, 1H), δ 8,09 (d, J= 9,0 Hz, 1H), δ 7,83~7,12 (m, 3H), δ 7,10 (t, J= 9,0 Hz, 1H), δ 7,32-7,17 (m, 4H), δ 7,10 (t, J= 9,0 Hz, 1H), δ 6,92-6,83 (m, 3H), δ 6,61 (d, J= 9,0 Hz, 1H), δ 5,79-5,68 (m, 1H), δ 5,41-5,36 (m, 1H), δ 5,12-4,88 (m, 4H), δ 4,65 (d, J= 18,0 Hz, 1H), δ 4,28-4,18 (m, 2H), δ 3,55-3,40 (m, 4H), δ 3,25-3,07 (m, 3H), δ 2,85 (dd, J= 3,0 Hz, J= 12,0 Hz,1H)

(6S,9aS)-2-alil-8-((1-(3-aminobencil)-1H-indazol-7-il)metil)-N-bencil-6-(4-hidroxi-bencil)-4,7-dioxohexahi dro-2H-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1(6H)-carboxamida (Compuesto nº 6 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 8,09 (s, 1H), δ 7,73-7,68 (m, 1H), δ7,38~7,21 (m, 5H), δ 7,11 (t, J= 9,0 Hz, 1H), δ 7,00-6,95 (m, 4H), δ 6,69-6,64 (m, 3H), δ 6,44 (d, J= 9,0 Hz, 1H), δ 6,23-6,18 (m, 2H), δ 5,71 (s, 2H), δ 5,59-5,49 (m, 1H), δ 5,41-5,34 (m, 1H), δ 5,18-5,13 (m, 2H), δ 5,04 (d, J= 9,0 Hz, 1H), δ 4,84 (t, J = 15,0 Hz, 2H), δ 4,45-4,25 (m, 2H), δ3,44-3,22 (m, 6H), δ 2,99-2,95 (m, 2H)

4-(((6S,9aS)-8-((1H-indazol-7-il)metil)-2-alil-1-(bencilcarbamoil)-4,7-dioxo-octahidro-1Hpirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-6-il)metil)fenilfosfato sódico (Compuesto nº 23 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 8,08 (s, 1H), δ 7,72 (t,J= 6,0 Hz, 1H), δ 7,34~7,09 (m, 6H), δ 7,00-6,92 (m, 3H), δ 5,56-5,47 (m, 1H), δ 5,40-5,36 (m, 1H), δ 5,18 (t, J = 6,0 Hz, 1H), δ 4,92-4,57 (m, 5H), δ 4,33-4,14 (m, 2H), δ 3,61-3,48 (m, 2H), δ 3,28-3,14 (m, 5H)

Bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-6-(4-hidroxi-bencil)-8-(1H-indazol-4-ilmetil) -4,7-dioxo -hexahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico (Compuesto nº 2 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 9,23 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,80 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 7,17-7,48 (m, 8H), 6,85 (t,J= 8,4 Hz, 3H), 6,65 (d,J= 8,4 Hz, 2H), 5,72-5,77 (m, 1H), 5,36-5,41 (dd, J= 3,6 Hz, 10,8 Hz, 1H), 4,89-5,09 (m, 5H), 4,64 (d, J= 15 Hz, 1H), 4,13-4,22 (m, 2H), 3,39-3,60 (m, 2H), 3,02-3,25 (m, 8H)

(6S,9aS)-2-alil-N-bencil-6-(4-hidroxi-bencil)-8-((2-metil-2H-indazol-7-il)metil)-4,7-dioxo-hexahidro2H-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1(6H)-carboxamida (Compuesto nº 18 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 7,88 (s, 1H), 8 7,59 (d, J = 9,0 Hz, 1H), δ 7,38-7,22 (m, 4H), δ 7,12-7,03 (m, 2H), δ 6,94 (d, J= 9,0 Hz, 2H), δ 6,71 (t,J= 6,0 Hz, 1H), δ 6,58 (d, J= 6,0 Hz, 2H), δ 5,61-5,49 (m, 2H), δ 5,35 (t, J = 6,0 Hz, 1H), δ 5,11-4,91 (m, 1H), δ 4,40-4,34 (m, 2H), δ 4,17 (s, 3H), δ 3,40-3,25 (m, 6H)

Bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-6-(4-hidroxi-bencil)-8-(1-metil-1H-indazol-4-ilmetil)-4,7-dioxo -hexahidropirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico (Compuesto nº 19 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 8,08 (s, 1H), 7,21-7,38 (m, 8H), 6,99 (d, J= 8,4 Hz), 6,89-6,94 (m, 1H), 6,62-6,69 (m, 3H), 5,40-5,59 (m, 2H), 5,34 (t, J= 5,4 Hz, 1H), 5,17-5,23 (m, 1H), 5,07 (d, J= 10,5 Hz, 1H), 4,67-4,96 (m, 2H), 4,26-4,45 (m, 1H), 4,08 (s, 3H), 3,23-3,44 (m, 9H)

Sal disódica de éster mono-{4-[(6S, 9aS) 2-alil-1-bencilcarbamoil-8-(1-metil-1H-indazol-4-ilmetil)-4,7-dioxo-octahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-6-ilmetil]-fenil} de ácido fosfórico

RMN de 1H (D2O, 300 MHz) δ 7,99 (s, 1H), 7,09-7,44 (m, 12H), 6,91 (d, J= 6,3 Hz, 1H), 5,58-5,61 (m, 2H), 5,32 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 4,96-5,01 (m, 2H), 4,63-4,77 (m, 2H), 4,23-4,46 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 3,52-3,82 (m, 3H), 3,25-3,37 (m, 6H)

Bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-8-(2-ciclopropilmetil-2H-indazol-7-ilmetil)-6-(4-hidroxi-bencil) -4,7-dioxo-hexahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico (Compuesto nº 14 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3): δ 8,041 (s, 1H), 7,641-7,599 (d, J=12,6Hz, 1 H), 7,371-6,957 (m, 9 H), 6,723~6,669 (t, J =12,3 Hz, 1 H), 6,613~6,585 (d, J =8,4 Hz, 2 H), 5,652~5,561 (dt, J = 3,9 Hz, J = 10,5 Hz, 2 H), 5,162~4,853 (m, 4 H), 4,444~4,287 (dt, J = 6,0 Hz, J = 15,0 Hz, 2 H), 4,266~4,242 (d, J = 7,2 Hz, 2 H), 3,682~3,537 (m, 8 H)

Sal disódica de éster mono-{4-[(6S, 9aS) 2-alil-1-bencilcarbamoil-8-(2-ciclopropil-metil-2H-indazol -7-ilmetil)-4,7-di-oxo-octahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-6-ilmetil]-fenil} de ácido fosfórico (Compuesto nº 31 en la Tabla 2)

RMN de 1H (D2O): δ 8,179 (s, 1 H), 7,629~7,604 (d, J =7,5 Hz, 1 H), 7,341~7,002 (m, 11 H), 5,666~5,433 (m, 2 H), 5,298~5,257 (t, J =6,6 Hz, 1 H) 5,070~5,019 (d, J =15,3 Hz, 1 H), 4,834~4,723 (m, 1 H), 4,517~4,460 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 4,419~4,367 (d, J = 15,6 Hz, 1 H), 4,245~4,136 (m, 3 H), 3,656~3,598 (d, J =17,4 Hz, 1 H), 3,539~3,463 (f, J = 11,7 Hz, 1 H), 3,384~3,151 (m, 6 H), 1,330~1,239 (tt, J = 7,5 Hz, J = 2,4 Hz, 1 H), 0,546~0,323 (m, 4 H),

Sal disódica de éster mono-{4-[(6S, 9aS) 2-alil-1-bencilcarbamoil-8-(1H-indazol-4-ilmetil)-4,7-dioxo-octahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-6-ilmetil]-fenil} de ácido fosfórico (Compuesto nº 33 en la Tabla 2)

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

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RMN de 1H (D2O, 300 MHz) δ 8,18 (s, 1H), 7,67 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,31-7,52 (m, 6H), 7,06-7,14 (m, 6H), 5,53-5,65 (m, 2H), 5,34 (t, J= 5,1 Hz, 1H), 5,01-5,16 (m, 2H), 4,67-4,90 (m, 3H), 4,28-4,47 (m, 2H), 3,57-3,75 (m, 2H), 3,32-3,43 (m, 7H)

Bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-8-(3-amino-1H-indazol-7-ilmetil)-6-(4-hidroxi-bencil) -4,7-dioxo-hexahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico (Compuesto nº 5 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 7,60 (d, J= 8,1 Hz, 1H), δ 7,53~7,25 (m, 5H), δ 7,13 (d, J= 6,9 Hz, 1H), δ 7,01 (t, J = 7,5 Hz, 1H), δ 6,84 (d, J= 8,1 Hz, 2H), δ 6,65 (t, J = 5,7 Hz, 1H), δ 6,57 (d, J= 8,1 Hz, 2H), δ 5,70~5,61 (m, 1H), δ 5,28 (t, J = 5,7 Hz, 1H), δ 5,21 (d, J= 10,2 Hz, 1H), δ 5,09 (d, J= 17,1 Hz, 1H), δ 4,95~4,91 (m, 2H), δ 4,55 (d, J= 14,4 Hz, 1H), δ 4,45 (dd, J= 6,3 Hz, J= 14,7 Hz, 1H), δ 4,34 (dd, J = 6,0 Hz , J= 15,0 Hz, 1H), δ 3,52~3,27 (m, 7H)

Éster 2-{7-[(6S, 9aS) 2-alil-1-bencilcarbamoil-6-(4-hidroxi-bencil)4,7-dioxo-octahidro –pirazino [2,1-c][1,2,4]triazin-8-ilmetil]-indazol-1-il}-etílico de ácido acético (Compuesto nº 11 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 8,05 (s, 1H), 7,71 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,22-7,38 (m, 6H), 7,12 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 6,97-7,03 (m, 3H), 6,68-6,71 (m, 3H), 5,30-5,56 (m, 4H), 4,99-5,06 (m, 2H), 4,75-4,88 (m, 3H), 4,27-4,47 (m, 4H), 3,25-3,47 (m, 9H), 1,91 (s, 3H)

Bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-6-(4-hidroxi-bencil)-8-[1-(2-hidroxi-etil) -1H-indazol-7-ilmetil] -4,7-dioxo-hexahidropirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico (Compuesto nº 17 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 8,04 (s, 1H), 7,70 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 7,21-7,38 (m, 5H), 6,99-7,12 (m, 5H), 6,66-6,69 (m, 3H), 5,44-5,55 (m, 3H), 5,35 (t, J= 5,1 Hz, 1H), 4,90-5,01 (m, 2H), 4,56-4,77 (m, 3H), 4,24-4,44 (m, 2H), 4,03-4,11 (m, 2H), 3,17-3,48 (m, 8H), 3,02 (t, J = 5,7 Hz, 1H)

Bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-8-(3-cloro-1H-indazol-7-ilmetil)-6-(4-hidroxi-bencil)4,7-dioxo-hexahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico (Compuesto nº 15 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3): δ 11,506 (s, 1 H), 7,697~7,670 (d, J =8,1 Hz, 1 H), 7,392~7,096 (m, 8 H), 6,912~6,884 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 6,738~6,698 (t, J = 6, 0 Hz, 1 H), 6,556~6,529 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 5,682~5,549 (dt, J = 6,3 Hz, J = 10,2 Hz, 1 H), 5,366~5,291 (m, 2 H),), 5,187~5,153(d, J = 10,2 Hz, 1 H), 5,075~5,039 (d, J = 10,8 Hz, 1 H), 5,028~4,982 (d, J = 13,8 Hz, 1 H), 4,572~4,4,524 (d, J = 14,4 Hz, 1 H), 4,462~4,294 (dt, J = 6,0 Hz, J = 15,0 Hz, 2 H), 3,439~3,253 (m, 8 H)

Sal disódica de éster mono-{4-[(6S, 9aS) 2-alil-1-bencilcarbamoil-8-(3-cloro-1H-indazol-7-ilmetil)-4,7-dioxo-octahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-6-ilmetil]-fenil} de ácido fosfórico (Compuesto nº 35 en la Tabla 2)

RMN de 1H (D2O): δ 7,604~7,574 (t, J = 9,0Hz, 1 H) 7,369~7,166 (m, 7 H), 7,071~6,991 (q, J =6,0Hz, 4 H), 5,640~5,447 (m, 2 H), 5,262~5,223 (t, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,965~4,931 (d, J = 10,2 Hz, 1 H), 4,894~4,683 (m, 3 H), 4,392~4,183 (dd, J = 15,6 Hz, J = 47,4 Hz, 2 H), 3,678~3,250 (m, 8 H)

Bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-8-(1-bencil-3-fenil-1H-indazol-7-ilmetil)-6-(4-hidroxi-bencil)4,7-dioxo-hexahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico (Compuesto nº 10 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3): δ 7,538~7,186 (m, 17 H), 7,110~6,951 (m, 3 H), 6,979~6,951 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 6,738~6,697 (t, J = 6,0 Hz, 1 H), 6,622~6,593 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 5,676~5,499 (m, 4 H), 5,367~5,329 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 5,120~4,984 (q, J = 15,0 Hz, 2 H), 5,059~5,034 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 4,984~4,884 (d, J = 30 Hz, 1 H), 4,478~4,303 (dt, J = 6,0 Hz, J = 15,0 Hz, J = 26,3 Hz, 2 H), 3,766~3,601 (m, 2 H), 3,452~3,224 (m, 6 H)

Bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-6-(4-hidroxi-bencil)-4,7-dioxo-8-(3-fenil-1H-indazol -7-ilmetil)-hexahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico (Compuesto nº 21 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3): δ 8,037~8,012 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 7,997~7,973 (d, J = 7,2 Hz, 2 H), 7,522~7,472 (t, J = 7,2 Hz, 2 H), 7,522~7,100 (m, 10 H), 6,926~6,898 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 6,726~6,686 (t, J = 6,0 Hz, 1 H), 6,557~6,529 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 5,690~5,539 (dt, J = 6,0 Hz, J = 10,2 Hz, 1 H), 5,374~5,292 (m, 2 H), 5,175~5,141 (d, J = 10,5 Hz, 1 H), 5,110~5,062 (d, J = 14,4 Hz, 1 H), 5,027~4,970 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 4,614~4,566 (d, J = 14,4 Hz, 1 H), 4,458~4,284 (ddd, J = 6,0 Hz, J = 14,7 7 Hz J = 20,7 Hz, 2 H), 3,491~3,228 (m, 8 H)

Bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-8-(1-bencil-1H-indazol-3-ilmetil)-6-(4-hidroxi-bencil)-4,7dioxo-hexahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico (Compuesto nº 9 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3): δ 7,984~7,957 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,397~7,129 (m, 14 H), 6,938~6,910 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 6,695~6,654 (t, J = 6,0 Hz, 1 H), 6,480~6,452 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 5,688~5,538 (dt, J = 6,6 Hz, J = 16,8 Hz, 1 H), 5,405~5,356 (dd, J = 5,1 Hz, J = 9,6 Hz, 1 H), 5,326~5,287 (t, J = 6, 0 Hz, 1 H), 5,174~5,126 (d, J = 14,4 Hz, 1 H), 5,115~5,079 (d, J = 10,8 Hz, 1 H), 4,996~4,938 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 4,890~4,841 (d, J = 14,7 Hz, 1 H), 4,459~4,283 (ddd, J = 6,3 Hz, J = 15, 0 Hz J = 31,8 Hz, 2 H), 3,550~3,212 (m, 8 H)

Bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-8-(5-cloro-1H-indazol-7-ilmetil)-6-(4-hidroxi-bencil)-4,7dioxo-hexahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico (Compuesto nº 16 en la Tabla 2)

RMN de 1H (CDCl3): δ 8,064 (s, 1 H), 7,735-7,730 (d, J =1,5 Hz, 1 H), 7,404-7,245 (m, 8 H), 7,124-7,119 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 6,932-6,904 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 6,730-6,690 (t, J = 6,0 Hz, 1 H), 6,578-6,550 (d, J = 8,4 Hz, 2 H),

5

10

15

20

25

30

35

40

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5,708-5,575 (dt, J = 6,3 Hz, J = 12, 6 Hz, 1 H), 5,393-5,300 (m, 2 H), 5,230-5,197 (d, J = 9,9 Hz, 1 H), 5,064-5,005 (d, J = 17,7 Hz, 2 H), 4,563-4,516 (d, J = 14,1 Hz, 1 H), 4,474-4,297 (ddd, J = 6,0 Hz, J = 14,7 Hz, J = 20, 7 Hz, 2 H), 3,458-3,255 (m, 8 H)

Bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-8-(3-ciclopropanocarbonol-1H-indazol-7-ilmetil)-6(4-hidroxi-bencil)-4,7-dioxo-hexahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico (Compuesto nº 12 en la Tabla 2)

RMN de 1H (300MHz, CDCl3) δ 8,32-8,29(dd, J=2,0Hz, J=2,0Hz, 1H) 8 7,34-7,14(m, 8H) 8 6,84(d, J=8,3Hz, 2H) 8 6,70(t, J=5,9Hz, 1H) 8 6,49(d, J=8,4Hz, 2H) 8 5,60-5,49(m, 1H) 8 5,34-5,24(m, 2H) 8 5,12(d, J=10,3Hz , 2H) 8 4,93(d, J=17,1Hz , 1H) 8 4,42-4,25(m, 2H) 8 3,35(d, J=7,8Hz, 2H) 8 3,31-3,27(m, 2H) 8 3,25-3,17(m, 2H) 8 1,28-1,15(m, 3H) 8 1,04-0,97(m, 2H)

Bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-6-(4-hidroxi-bencil)-8-(1H-indazol-3-ilmetil) -4,7-dioxo –hexahidro -pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico (Compuesto nº 1 en la Tabla 2)

RMN de 1H (300 MHz, CDCl3) δ 10,55 (s, 1H), 8,00 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,18-7,36 (m, 8H), 6,80 (d, J= 8,4 Hz, 2H), 6,68 (t, J= 6,0 Hz, 1H), 6,35 (d, J= 8,4 Hz, 2H), 5,58-5,68 (m, 1H), 5,02-5,31 (m, 5H), 4,75 (d, J= 14,7 Hz, 1H), 4,23-4,40 (m, 2H), 3,27-3,57 (m, 8H)

Sal disódica de éster mono-{4-[(6S, 9aS) 2-alil-1-bencilcarbamoil-8-(1-bencil-2-fenil-1H-indazol -3-ilmetil)-4,7-di-oxo-octahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-6-ilmetil]-fenil} de ácido fosfórico (Compuesto nº 36 en la Tabla 2)

RMN de 1H (300 MHz, CDCl3): δ 3,02-3,36(m, 1H), 3,28-3,36(m, 4H), 3,48(d, J=17,1Hz, 1H), 3,62(dd, J=11,3 Hz, J=21,7 Hz, 2H), 3,80(dd, J=3,6 Hz, J=11,5 Hz , 1H), 4,25(dd, J=4,7 Hz, J=15,2 Hz, 1H), 4,33-4,38(m, 1 H), 4,40(dd, J=6,7 Hz, J=15,1 Hz, 1H), 4,83(d, J=14,8 Hz, 1 H), 4,98(d, J=14,8 Hz, 1H), 5,11(t, J=10,5 Hz , 2H), 5,18(dd, J=2,6 Hz, J=6,3 Hz , 1H), 5,46-5,58(m, 2H), 6,69(t, J=6,4 Hz , NH), 6,79(d, J=8,4 Hz, 2H), 6,92-6,95(m, 4H), 7,12-7,29(m, 10H), 7,42-7,55(m, 6H).

Las bibliotecas de la presente invención se exploraron en busca de bioactividad mediante varias técnicas y procedimientos. En general, el ensayo de exploraciones puede realizar (1) poniendo en contacto los miméticos de una biblioteca con una diana biológica de interés, tal como un receptor, para permitir la unión entre los miméticos de la biblioteca y la diana, y (2) detectando el acontecimiento de unión mediante un ensayo adecuado, tal como el ensayo calorimétrico divulgado por Lam et al. (Nature 354:82-84, 1991) o Griminski et al. (Biotechnology 12:1008-1011, 1994) (ambas incorporadas en el presente documento por referencia). En una realización preferida, los miembros de la biblioteca están en solución y la diana está inmovilizada en una fase sólida. Como alternativa, la biblioteca se puede inmovilizar en una fase sólida y se puede sondar poniéndolo en contacto con la diana en solución.

La actividad de la inhibición contra la señalización de Wnt se midió mediante el indicador TopFlash. El valor menor de CI50 significa la actividad de inhibición más alta. Un compuesto se puede clasificar como activo si la CI50 es 10 µMo inferior. Cuando la CI50 es 5 ∼ 10 µM, el compuesto puede ser un candidato para un producto farmacéutico. Se considera que un compuesto es fuerte si la CI50 es 1 ∼ 5 µM y se considera que un compuesto es muy fuerte si la CI50 1µM o inferior.

La mayoría de los compuestos de la presente invención mostraron CI de 5 µM o inferiores, lo que significa que tiene una actividad de inhibición fuerte contra la señalización de Wnt.

En la Tabla 3 a continuación se muestran los compuestos para el ensayo de bioactividad seleccionado de la biblioteca de la presente invención (no estando el compuesto 10 de acuerdo con la invención) y los valores CI50 de los mismos, que se midieron mediante el ensayo del gen Indicador como se describe en el Ejemplo 2.

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CI50 (µM) MEDIDA MEDIANTE EL ENSAYO DEL GEN INDICADOR TopFlash DE COMPUESTOS DE BIBLIOTECAS SELECCIONADAS

Nº

Estructura P.M. Fórmula RGA, CI50 (µM)

TopF

1

647,72 C36H37N7O5 0,08 ± 0,01

2

655,75 C38H37N7O4 0,11 ± 0,03

3

593,68 C33H35N7O4 0,26 ± 0,057

4

imagen27 614,09 C32H32ClN7O4 0,30 ± 0,40

5

745,87 C45H43N7O4 0,42 ± 0,21

6

703,59 C32H32N7Na2O7P 0,62 ± 0,12

7

614,09 C32H32ClN7O4 0,66 ± 0,07

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CI50 (µM) MEDIDA MEDIANTE EL ENSAYO DEL GEN INDICADOR TopFlash DE COMPUESTOS DE BIBLIOTECAS SELECCIONADAS

Nº

Estructura P.M. Fórmula RGA, CI50 (µM)

TopF

8

579,65 C32H33N7O4 0,68 ± 0,09

9

593,68 C33H35N7O4 0,68 ± 0,18

10

782,69 C37H37N8Na2O7P 0,79 ± 0,4

11

633,74 C36H39N7O4 0,82 ± 0,13

12

869,81 C45H42N7Na2O7P 0,89 ± 0,24

13

717,62 C33H34N7Na2O7P 0,95 ± 0,17

14

703,59 C32H32N7Na2O7P 1,43 ± 0,25

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29-09-2014

CI50 (µM) MEDIDA MEDIANTE EL ENSAYO DEL GEN INDICADOR TopFlash DE COMPUESTOS DE BIBLIOTECAS SELECCIONADAS

Nº

Estructura P.M. Fórmula RGA, CI50 (µM)

TopF

15

636,70 C34H36N8O5 1,56± 0,42

16

759,64 C36H38IN7O4 1,59 ± 0,14

17

594,66 C32H34N8O4 1,62 ± 0,35

18

757,68 C36H38N7Na2O7P 1,68 ± 0,26

19

657,76 C38H39N7O4 1,74 ± 0,16

20

665,74 C36H39N7O6 1,97 ± 0,52

21

738,04 C32H31ClN7O7P 12,72 ± 2,13

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CI50 (µM) MEDIDA MEDIANTE EL ENSAYO DEL GEN INDICADOR TopFlash DE COMPUESTOS DE BIBLIOTECAS SELECCIONADAS

Nº

Estructura P.M. Fórmula RGA, CI50 (µM)

TopF

22

579,65 C32H33N7O4 2,18 ± 0,44

23

imagen28 623,70 C34H37N7O5 4,04 ± 0,74

24

imagen29 596,68 C32H36N8O4 4,51 ± 0,89

25

imagen30 579,65 C32H33N7O4 4,76 ± 0,75

26

580,64 C31H32N8O4 5,87 ± 1,36

27

714,77 C39H38N8O6 7,99 ± 1,12

28

684,79 C39H40N8O4 9,25 ± 1,26

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(continuación)

CI50 (µM) MEDIDA MEDIANTE EL ENSAYO DEL GEN INDICADOR TopFlash DE COMPUESTOS DE BIBLIOTECAS SELECCIONADAS

Nº

Estructura P.M. Fórmula RGA, CI50 (µM)

TopF

29

578,66 C33H34N6O4 3,17 ± 0,56

Se ha hallado de acuerdo con la presente invención que los compuestos de fórmula general (III) tienen menos actividad inhibidora de CYP3A4 (CI50 mayor). Los detalles de la medición menor de la actividad inhibidora de CYP3A4 se divulgan en el ejemplo 1. Menos actividad inhibidora de CYP3A4 significa que los compuestos de la presente invención so más farmacológicamente favorables en términos de reacciones adversas.

La Tabla 4 a continuación muestra los compuestos del ensayo de bioactividad seleccionado de la biblioteca de la presente invención y los valores de CI50 de los mismos, que se midieron mediante la Exploración de la Actividad Inhibidora de P450 CYP3A4 como se describe en el ejemplo 1.

[Tabla 4]

CI50 (µM) MEDIDA MEDIANTE EXPLORACIÓN DE LA ACTIVIDAD INHIBIDORA DE P450 CYP3A4 DE DETERMINADOS COMPUESTOS DE LA BIBLIOTECA

Nº

Estructura P.M. Fórmula Inhibición de CYP3A4, CI50 (µM) Ensayo de fluorescencia

1

593,68 C33H35N7O4 11,6

2

593,68 C33H35N7O4 5,24

3

imagen31 647,72 C36H37N7O5 9,59

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CI50 (µM) MEDIDA MEDIANTE EXPLORACIÓN DE LA ACTIVIDAD INHIBIDORA DE P450 CYP3A4 DE DETERMINADOS COMPUESTOS DE LA BIBLIOTECA

Nº

Estructura P.M. Fórmula Inhibición de CYP3A4, CI50 (µM) Ensayo de fluorescencia

4

623,70 C34H37N7O5 7,13

5

579,65 C32H33N7O4 5,46

6

594,66 C32H34N8O4 25,30

7

636,7 C34H36N8O5 7,02

8

622,67 C33H34N8O5 12,9

9

664,76 C36H40N8O5 4,95

10

694,79 C37H42N8O6 4,52

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La presente invención también está relacionada con procedimientos para prevenir o tratar una leucemia mieloide aguda que comprende administrar al sujeto el compuesto que tiene la fórmula (III) anterior.

En un aspecto, la presente invención proporciona compuestos que inhiben la formación de un complejo de β-catenina, p300 u TCF que se une a la proteína c-Myc y la formación de un complejo de β-catenina, p300 y TCF que se une al 5 promotor de la survivina. En otro aspecto, la presente invención proporciona compuestos que controlan la proteína c-Myc.

Se ha hallado de acuerdo con la presente invención que los compuestos de fórmula general (III) afectan a la proliferación celular e inhiben el crecimiento de las células cancerosas de LMA, como se describe en el Ejemplo 3.

GI50 de MV-4-11 muestra actividad de inhibición del crecimiento celular contra células de cáncer de LMA. El valor

10 menor de GI50 significa mayor actividad de inhibición. Un compuesto se puede clasificar como activo si la GI50 es 10 µM o inferior. Cuando la GI50 es 5 ∼ 10 µM, el compuesto puede ser un candidato para un producto farmacéutico. Un compuesto se considera fuerte si la GI 50 es 1~5 µM, y un compuesto se considera muy fuerte si la GI 50 es 1 µM o inferior.

La mayoría de los compuestos de la presente invención mostraron GI50 de 5 µM o inferiores, lo que significa que tiene 15 una actividad de inhibición fuerte contra las células cancerosas de LMA.

La Tabla 5 a continuación muestra los compuestos del ensayo de bioactividad seleccionado de la biblioteca de la presente invención y los valores de GI50 de los mismos, que se midieron mediante el Ensayo de Inhibición del Crecimiento Celular como se describe en el ejemplo 3.

[Tabla 5]

ACTIVIDAD DE INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO CELULAR (GI50) EN CÉLULAS CANCEROSAS DE LMA O DETERMINADOS COMPUESTOS DE BIBLIOTECA

Nº

Estructura MV-4-11, GI50 (µM)

1

imagen32 0,22

2

0,15

3

0,025

4

1,2

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ACTIVIDAD DE INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO CELULAR (GI50) EN CÉLULAS CANCEROSAS DE LMA O DETERMINADOS COMPUESTOS DE BIBLIOTECA

Nº

Estructura MV-4-11, GI50 (µM)

5

0,24

6

imagen33 0,07

7

imagen34 0,76 ± 0,37

8

0,04

9

6,75 ± 2,89

10

0,12 ± 0,01

11

47,18 ± 12,92

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ACTIVIDAD DE INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO CELULAR (GI50) EN CÉLULAS CANCEROSAS DE LMA O DETERMINADOS COMPUESTOS DE BIBLIOTECA

Nº

Estructura MV-4-11, GI50 (µM)

12

imagen35 0,11 ± 0,01

13

imagen36 0,13

14

imagen37 0,05

15

0,04

16

0,4

17

0,23

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Los siguientes ejemplos no limitantes ilustran los compuestos y el uso de la presente invención.

Ejemplo de preparación 1

Preparación de ácido (N-Fmoc-N'-R4-hidrazino)-acético

imagen38

(1) Preparación de N-Fmoc-N’-Metil Hidrazina

imagen39

Un matraz de 2 l, dos bocas y fondo redondo se equipó con una tapa de vidrio y un tubo de calcio. Una solución de R4hidrazina (20 g, 139 mmol, cuando R4 es metilo) en THF (300 ml) se añadió y se añadió una solución de DiBoc (33 g,

10 153 mmol) en THF. Gota a gota se añadió una solución acuosa de bicarbonato sódico saturado (500ml) mediante un embudo de adición durante 2 horas con agitación enérgica. Tras 6 horas, lentamente se añadió una solución de Fmoc-Cl (39 g, 153 mmol) en THF. La suspensión resultante se agitó durante 6 horas a 0ºC. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (EA, 500 ml) y la capa orgánica se retuvo. La solución se secó con sulfato sódico y se evaporó al vacío. La etapa siguiente procedió sin purificación.

15 Un matraz de 1 l, dos bocas y fondo redondo se equipó con una tapa de vidrio y un tubo de calcio. Se añadió na solución del producto de la etapa anterior en MeOH (300mL) y lentamente se añadió HCl conc. (30 ml, 12 N) mediante un embudo de adición con agitación magnética en agua helada y se agitó durante la noche. La mezcla se extrajo con EA (1000 ml) y la capa orgánica se retuvo. La solución se secó con sulfato sódico y se evaporó al vacío. El residuo se purificó mediante recristalización con n-hexano y EA, dando N-Fmoc-N-metilhidrazina (32,2 g, 83 %). RMN de 1H

20 (DMSO-D6) δ 7,90-7,88 (d, J=6 Hz, 2H,), δ 7,73-7,70 (d, J=9 Hz, 2H,), 7,44~7,31 (m, 4H), 4,52~4,50 (d, J=6 Hz, 2H), 4,31-4,26 (t, J=6 Hz, 1H), 2,69 (s, 1H),

(2) Preparación de éster t-butílico del ácido (N-Fmoc-N'-R4-hidrazino)-acético

imagen40

Un matraz de 1 l, dos bocas y fondo redondo se equipó con una tapa de vidrio y un condensador de reflujo conectado

25 a un tubo de calcio. Se añadió una solución de N-Fmoc-N’-R4 hidrazina (20 g, 75 mmol) en tolueno (300 ml). Lentamente se añadió una solución de acetato de t-butilbromo (22 g, 11 mmol) en tolueno (50 ml). Se añadió Cs2CO3 (49 g, 149 mmol) lentamente. Lentamente se añadió NaI (11 g, 74 mmol) con agitación enérgica. La mezcla de reacción se agitó a reflujo temperatura ambiente durante 1 día. La mezcla del producto se filtró y se extrajo con EA (500 ml). La solución se secó con sulfato sódico y se evaporó al vacío. El producto se purificó mediante cromatografía

30 con hexano: EA = 2 : Para dar él éster t-butílico del ácido (N-Fmoc-N'-metil-hidrazino)-acético (19,8 g, 70 %). RMN de 1H (CDCl3-d) δ 7,78~7,75 (d, J=9 Hz, 2H,), δ 7,61~7,59 (d, J=6 Hz, 2H,), 7,43~7,26 (m, 4H), 4,42~4,40 (d, J=6 Hz, 2H), 4,23 (b, 1H), 3,57 (s, 2H), 2,78 (s, 3H), 1,50 (s, 9H),

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(3) Preparación de ácido (N-Fmoc-N'-metil-hidrazino)-acético

imagen41

Un matraz de 1 l, dos bocas y fondo redondo se equipó con una tapa de vidrio y un condensador de reflujo conectado a un tubo de calcio. Se añadió éster t-butílico del ácido (N-Fmoc-N'-R4-hidrazino)-acético (20 g, 52 mmol). Una 5 solución de HCl (150 ml, 4 M solución en dioxano) se añadió lentamente con agitación enérgica en un baño de agua helada. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 día. La solución se concentró completamente a presión reducida a 40ºC. Se añadió una solución acuosa saturada de NaHCO3 (100 mL) y la capa acuosa se lavó con éter dietílico (100 ml). Gota a gota se añadió lentamente HCl conc. A 0°C (pH 2-3). La mezcla se extrajo y la capa orgánica se retuvo (500 ml, MC). La solución se secó con sulfato sódico y se evaporó al vacío. El

10 residuo se purificó mediante recristalización con n-hexano y acetato de etilo, dando (N-Fmoc-N’-metilhidrazina)-ácido acético (12 g, 72 %). RMN de 1H (DMSO-d6) δ 12,38 (s, 1H), 8,56 (b, 1H), 7,89~7,86 (d, J=9 Hz, 2H,), 7,70~7,67 (d, J=9 Hz, 2H,), 7,43~7,29 (m, 4H), 4,29~4,27 (d, J=6 Hz, 2H), 4,25~4,20 (t, J=6 Hz, 1H), 3,47 (s, 2H), 2,56 (s, 3H),

Ejemplo de preparación 2

Bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-6-(4-hidroxi-bencil)-8-(1-metil-1H-indazol-4-ilmetil)15 4,7-dioxo-hexahidropirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico

imagen42

Para preparar el compuesto del título, se ha realizado el esquema general de la biblioteca de miméticos de giro inverso que se describe en la presente memoria en lo que te antecede mediante el esquema siguiente:

imagen43

En el esquema anterior, “Pol” representa una resina de bromoacetal (Advanced ChemTech) y un procedimiento detallado se ilustra a continuación.

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Etapa 1

Una resina de bromoacetal (37 mg, 0,98 mmol/kg) y una solución de 1-metil-1H-indazol-4-il)metanamina en DMSO (1,4 ml) se introdujeron en un bloque de Robbins (FlexChem) que tiene placas de 96 pocillos. La mezcla de reacción se agitó a 60 ºC usando un horno rotatorio [Robbins Scientific] durante 12 horas. La resina se lavó con DMF, MeOH y

5 después con DCM.

Etapa 2

A la resina se añadió una solución en DMF de Fmoc-Tyr(OtBu)-OH (4 equiv.), PyBob (4 equiv.), HOAt (4 equiv.), y DIEA (12 equiv.) disponibles comercialmente. Después de agitar la mezcla de reacción durante 12 horas a temperatura ambiente, la resina se lavó con DMF, MeOH, y después con DCM.

10 Etapa 3

A la resina hinchada con DMF antes de la reacción se añadió 25% de piperidina en DMF y la mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Esta etapa de desprotección se repitió de nuevo y la resina se lavó con DMF, metanol y después con DCM. Una solución de hidracina ácida (4 equiv.), HOBt (4 equiv.), y DIC (4 equiv.) en DMF se añadieron a la resina y la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente. La resina se

15 lavó con DMF, MeOH y después con DCM.

Etapa 4

La resina obtenida en la etapa 3 se trató con ácido fórmico (1,2 ml cada pocillo) durante 18 horas a temperatura ambiente. Después de eliminar la resina mediante filtración, el filtrado se condensó a presión reducida usando SpeedVac [SAVANT], para dar el producto como un aceite. El producto se diluyó con 50% de agua/acetonitrilo y

20 después se liofilizó después de congelar. RMN de 1H (CDCl3, 300 MHz) ∼ 8,08 (s, 1H), 7,21-7,38 (m, 8H), 6,99 (d, J= 8,4 Hz), 6,89-6,94 (m, 1H), 6,62-6,69 (m, 3H), 5,40-5,59 (m, 2H), 5,34 (t, J= 5,4 Hz, 1H), 5,17-5,23 (m, 1H), 5,07 (d, J= 10,5 Hz, 1H), 4,67-4,96 (m, 2H), 4,26-4,45 (m, 1H), 4,08 (s, 3H), 3,23-3,44 (m, 9H)

Ejemplo de preparación 3

Preparación de bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-8-(3-ciclopropanocarbonol-1H-indazol-7-ilmetil) 25 -6-(4-hidroxi-bencil)-4,7-dioxo-hexahidro-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico)

imagen44

Para preparar el compuesto del título, se ha realizado el esquema general de la biblioteca de miméticos de giro inverso que se describe en la presente memoria en lo que te antecede mediante el esquema siguiente:

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imagen45

En el esquema anterior, “Pol” representa una resina de bromoacetal (Advanced ChemTech) y un procedimiento detallado se ilustra a continuación.

Etapa 1

5 Una resina de bromoacetal (37 mg, 0,98 mmol/kg) y una solución de 7-(aminometil)3-(ciclopropanoabonil) -1H-indazol-1-cabroxilato de terc-butilo en DMSO (1,4 ml) se introdujeron en un bloque de Robbins (FlexChem) que tiene placas de 96 pocillos.

La mezcla de reacción se agitó a 60 ºC usando un horno rotatorio [Robbins Scientific] durante 12 horas. La resina se lavó con DMF, MeOH y después con DCM.

10 Etapa 2

A la resina se añadió una solución en DMF de Fmoc-Tyr(OtBu)-OH (4 equiv.), PyBob (4 equiv.), HOAt (4 equiv.), y DIEA (12 equiv.) disponibles comercialmente. Después de agitar la mezcla de reacción durante 12 horas a temperatura ambiente, la resina se lavó con DMF, MeOH, y después con DCM.

Etapa 3

15 A la resina hinchada con DMF antes de la reacción se añadió 25% de piperidina en DMF y la mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Esta etapa de desprotección se repitió de nuevo y la resina se lavó con DMF, metanol y después con DCM. Una solución de hidracina ácida (4 equiv.), HOBt (4 equiv.), y DIC (4 equiv.) en DMF se añadieron a la resina y la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente. La resina se lavó con DMF, MeOH y después con DCM.

20 Etapa 4

La resina obtenida en la etapa 3 se trató con ácido fórmico (1,2 ml cada pocillo) durante 18 horas a temperatura ambiente. Después de eliminar la resina mediante filtración, el filtrado se condensó a presión reducida usando SpeedVac [SAVANT], para dar el producto como un aceite. El producto se diluyó con 50% de agua/acetonitrilo y después se liofilizó después de congelar. RMN de 1H (300MHz, CDCl3) δ 8,32~8,29(dd, J=2,0Hz, J=2,0Hz, 1H)

25 δ7,34~7,14(m, 8H) δ 6,84(d, J=8,3Hz , 2H) δ 6,70(t, J=5,9Hz , 1H)δ 6,49(d, J=8,4Hz , 2H) δ 5,60~5,49(m, 1H) δ 5,34~5,24(m, 2H) δ 5,12(d, J=10,3Hz , 2H) δ4,93(d, J=17,1Hz, 1H) δ 4,42~4,25(m,2H) δ 3,35(d, J=7,8Hz , 2H) δ 3,31~3,27(m, 2H) δ 3,25~3,17(m, 2H) δ 1,28-1,15(m, 3H) δ 1,0~0,97(m, 2H)

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Ejemplo de preparación 4

Preparación de Bencilamida de ácido (6S, 9aS) 2-alil-6-(4-hidroxi-bencil)-8-[1-(2-hidroxietil) -1H-indazol -7-ilmetil] -4,7-dioxo-hexahidropirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1-carboxílico

imagen46

Para preparar el compuesto del título, se ha realizado el esquema general de la biblioteca de miméticos de giro inverso que se describe en la presente memoria en lo que te antecede mediante el esquema siguiente:

imagen47

En el esquema anterior, “Pol” representa una resina de bromoacetal (Advanced ChemTech) y un procedimiento detallado se ilustra a continuación.

10 Etapa 1

Una resina de bromoacetal (37 mg, 0,98 mmol/kg) y una solución de carbonato de 2-(7-aminometil)-1H-indazol-1-il)etíilterc-butílico en DMSO (1,4 ml) se introdujeron en un bloque de Robbins (FlexChem) que tiene placas de 96 pocillos. La mezcla de reacción se agitó a 60 ºC usando un horno rotatorio [Robbins Scientific] durante 12 horas. La resina se lavó con .DMF, MeOH, y después con DCM.

15 Etapa 2

A la resina se añadió una solución en DMF de Fmoc-Tyr(OtBu)-OH (4 equiv.), PyBob (4 equiv.), HOAt (4 equiv.), y DIEA (12 equiv.) disponibles comercialmente. Después de agitar la mezcla de reacción durante 12 horas a temperatura ambiente, la resina se lavó con DMF, MeOH, y después con DCM.

Etapa 3

20 A la resina hinchada con DMF antes de la reacción se añadió 25% de piperidina en DMF y la mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Esta etapa de desprotección se repitió de nuevo y la resina se lavó con DMF, metanol y después con DCM. Una solución de hidracina ácida (4 equiv.), HOBt (4 equiv.), y DIC (4 equiv.) en DMF se añadieron a la resina y la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente. La resina se lavó con DMF, MeOH y después con DCM.

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Etapa 4

La resina obtenida en la etapa 3 se trató con ácido fórmico (1,2 ml cada pocillo) durante 18 horas a temperatura ambiente. Después de eliminar la resina mediante filtración, el filtrado se condensó a presión reducida usando SpeedVac [SAVANT], para dar el producto como un aceite. El producto se diluyó con 50% de agua/acetonitrilo y

5 después se liofilizó después de congelar. RMN de 1H (CDCl3, 300 MHz) δ 8,04 (s, 1H), 7,70 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 7,21-7,38 (m, 5H), 6,99-7,12 (m, 5H), 6,66-6,69 (m, 3H), 5,44-5,55 (m, 3H), 5,35 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 4,90-5,01 (m, 2H), 4,56-4,77 (m, 3H), 4,24-4,44 (m, 2H), 4,03-4,11 (m, 2H), 3,17-3,48 (m, 8H), 3,02 (t, J=5,7 Hz, 1H)

Ejemplo de preparación 5

Preparación de 4-((2-alil-1-(bencilcarbamoil)-8-((2-metil-2H-indazol-7-il)metil)-4,7-dioxo-octahidro-1H-pirazino[2,1-c] 10 [1,2,4]triazin-6-il)metil)fenil fosfato disódico (2)

imagen48

A una solución de 2-alil-N-bencil-6-(4-hidroxibencil)-8-((2-metil-2H-indazol-7-il)metil) -4,7-dioxo-hexahidro2H-pirazino[2,1-c][1,2,4]triazin-1(6H)-carboxamida (1) (1.0 eq.) en THF (10ml/mmol se añadió POCl3 (4.0 eq.) y TEA

(3.0 eq.) a 0°C. Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, la solución de NaHCO3 acuosa saturada de

15 1 hora se vertió lentamente y se agitó durante 1 hora. La mezcla resultante se lavó con EtOAc y después se acidificó la capa acuosa con una solución de HCL acuoso 1N a 0ºC y después se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío. El residuo se cristalizó con EtOAc y n-hexano, dando un compuesto intermedio

(2) como un sólido blanco. El sólido se ajustó con una solución de NaOH o,1 N ac. hasta un pH 11,0 y se liofilizó para dar el compuesto deseado (3) (87%).

20 Ejemplo 1

Exploración de la actividad inhibidora de P450 CYP3A4

Compuestos de ensayo:

imagen49

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imagen50

El ensayo se realizó en un volumen de 200 µl en placas de microtitulación de 96 pocillos usando CYP3A4 hepático humano expresado con ADNc (supersome, BD Gentest™ #456202). Se usó 7-benciloxi-4-trifluorometil-coumarina (BFC) como sustrato para CYP3A4. Los artículos de ensayo y el BFC sustrato se disolvieron en 100% de acetonitrilo. 5 El volumen final de acetonitrilo en la mezcla de incubación fue inferior al 1% (volumen/volumen). A cada pocillo se añadieron tampón fosfato potásico (pH 7,4, concentración final, 0,1M), MgCl2 (concentración final, 8,3 mM), EDTA (concentración final, 1,67mM), una solución madre del artículo de ensayo, un supersoma CYP3A4 y NADPH (concentración final, 0.25 mM). La reacción se inició mediante la adición de sustrato (BFC, concentración final, 30 M) tras 10 minutos de preincubación a 37 ºC. Después de 10 minutos de incubación a 37ºC, la reacción se finalizó

10 mediante la adición de 75 µ de acetonitrilo : Tris 0,5M-base =4:1 (volumen/volumen). Después se midió la señal de fluorescencia usando un fluorímetro. Se midió el metabolito BFC, 7-hidroxo-4-trifluoromeril-coumarina, usando una longitud de onda de excitación de 409 nm y una longitud de onda de emisión de 530 nm. La figura 2 muestra la CI50 del compuesto A Del ensayo de inhibición de CYP3A4. Los compuestos A, B y C mostraron una inhibición débil de una enzima de CYP3A4.

15 [Tabla 6]

Valores de CI50 de los compuestos A, B y C contra la actividad de CYP3A4

Compuestos de ensayo CI50 (µM)

Compuesto A 11,6

Compuesto B 25,3

Compuesto C 12,9

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Ejemplo 2

Bioensayo de genes indicadores TopFlash para la medición de la CI50 contra las células SW480 El compuesto de ensayo (Compuesto D) usado en este ejemplo se preparó en el Ejemplo de preparación 3.

imagen51

5 Se transfectaron células SW480 con el uso del reactivo de transfección SuperfectTM (Qiagen, 301307). Las células se digirieron brevemente con tripsina 1 día antes de la transfección y se sembraron en placas de 6 pocillos (5 x 105 células/pocillo) para que presentaran una confluencia de 50-80% el día de la transfección.

Se diluyeron cuatro microgramos (TopFlash) y un microgramo (pRL-null) de ADN en 150 µl de medio exento de suero y se añadieron 30 µl del reactivo de transfección SuperfectTM. Se incubó la mezcla de ADN-Superfect a temperatura

10 ambiente durante 15 minutos y, a continuación, a este complejo se añadió 1 ml de DMEM-FBS al 10% durante 3 horas adicionales de incubación. Mientras se formaban los complejos, las células se lavaron dos veces con PBS sin antibióticos.

Los complejos de ADN-reactivo de transfección SuperfectTM se aplicaron a las células antes de realizar una incubación a 37ºC y en CO2 al 5% durante 3 horas. Después de la incubación, se añadió medio de recuperación con FBS al 10%

15 para llevar el volumen final a 1,18 ml. Después de 3 horas de incubación, se recolectaron las células y se volvieron a sembrar en placas de 96 pocillos (3 x 104 células/pocillo). Después de una incubación durante la noche a 37ºC y en CO2 al 5%, las células se trataron con el compuesto D durante 24 horas. Por último, se analizó la actividad por medio del ensayo de la luciferasa (Promega, E1960). La Figura 3 ilustra los resultados de la medición de la CI50 del compuesto D para las células SW480. La CI50 fue 0,083 ± 0,007 µM.

20 Ejemplo 3

Actividad de inhibición del crecimiento celular en células cancerosas de LMA (ensayo de inhibición del crecimiento celular)

Compuestos de ensayo:

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El ensayo de nhibición del crecimiento celular se realizó con el fin de investigar la velocidad de inhibición de la proliferación celular mediante los compuestos de ensayo. Células MV-4-11 (línea celular de leucemia mieloide aguda

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humana) se cultivaron en medio Dulbecco modificado de Iscove (IMDM) con 10% de suero bovino fetal al10% (FBS), 1x de penicilina/estreptomicina (10.000 unidades/ml de penicilina, 10.000 g/ml de estreptomicina en 0,85% de NaCl). Las células MV-4-11 se recolectaron con medio IMDM y 5 x 104 células/pocillo se transfirieron a cada pocillo de las placas de cultivo de 96 pocillos (Nunc, #167008). Los compuestos se trataron con diluciones en serie y se duplicaron 5 para cada concentración. Para la dilución en serie, los compuestos de ensayo se diluyeron repetidamente con el mismo volumen de media en un bloque de ensayo d e96 pocillos (costar, #3956). Tras la dilución, cada compuesto se añadió a cada pocillo. La absorbancia de fondo también se midió durante el tratamiento de los compuestos de ensayo añadiendo el medio IMDM en sustitución del compuesto de ensayo a la placa control negativo. Las placas se incubaron durante 3 días (72 horas) a 37ºC en el incubador humidificado que contiene CO2 al 5%. El último día se añadieron 20 10 µL de la solución CellTiter 96 Aqueous One Solution (Promega #G3581) al cultivo en cada una de los pocillos y las placas se incubaron durante unas horas a 37ºC en el incubador humidificado que contiene 5% de CO2. Después de la incubación se midió la absorbancia de cada célula a 490 nm usando EnVision (Perkinelmer, EE.UU.). Los valores de GI50 se calcularon usando un programa Prism 3.0. Los resultados mostraron que los compuestos de ensayo afectaban a la proliferación celular e inhibieron el crecimiento de las células cancerosas de LMA. La Figura 4 muestra el resultado 15 de la inhibición del compuesto A. Las GI50 del Compuesto A y el Compuesto C fueron 0,220 µM y 0,037 µM,

respectivamente.

Claims (2)

1. E08839568

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   REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto que tiene la estructura de fórmula (III):

   imagen1

   en la que:

   5 R1 es seleccionado del grupo que consiste en 2-metil-2H-indazolilo, 1-metil-1H-indazolilo, 3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolilo, 1-hidroxietil-1H-indazolilo, 1H-indazolilo, 2-ciclopropilmetil-2H-indazolilo, 3-amino-1H-indazolilo, 1-bencil-1H-indazolilo, 3-cloro-1H-indazolilo, 6-cloro-1H-indazolilo, 3-fenil-1H-indazolilo, 1-bencil-3-fenil-1H-indazolilo, 1-nitrobencil-1H-indazolilo, 1-aminobencil-1H-indazolilo, 2-metil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolilo, 1-metil-3-aminocarbonil-1H-indazolilo, carbonil-indazolilo,

   10 2-isopropil-2H-indazolilo, 2-aminocarbonilmetil-2H-indazolilo, 1-cianometil-3-ciclopropilcarbonil-1H-indazolilo, 2-cianometil-3-ciclopropilcarbonil-2H-indazolilo, 1-morfolinil-N-etil-1H-indazolilo, 2-morfolinil-N-etil-2H-indazolilo, 2-dimetilaminocarbonilmetil-2H-indazolilo, 2-metoxietilpropionamida-2H-indazolilo, 1-etoxicarbonilmetil-1H-indazolilo, 2-etoxicarbonilmetil-2H-indazolilo y 1-acetoxietil-1H-indazolilo; R4 es alilo;

   15 R6 es fenilo o fenilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: halógeno, hidroxilo, ciano, alquilo C1-6, acetilenilo y alcoxi C1-6; o piridilo o piridilo sustituido que tiene uno o más sustituyentes seleccionados de forma independiente de: Halógeno, hidroxilo, ciano, alquilo C1-6 y alcoxi C1-6; X1 es hidrógeno, hidroxilo o halógeno; y cada uno de X2 y X3 es, de forma independiente, hidrógeno, hidroxilo, fosfato, dimetilaminoacetato,

   20 (2-dimetilaminoetil)carbamato, dietilfosfonoacetamido o halógeno.
2. 2. Un uso del compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de una leucemia mieloide aguda.

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