ES2239779T3 - Derivados de pirimidina y procedimientos para la preparacion de los mismos. - Google Patents

Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A DERIVADOS DE 4 - AMINO - 1H PIRAZOLO[3,4 - D]PIRIMIDINA DE FORMULA (I), DONDE LOS SUSTITUYENTES SE DEFINEN EN LA REIVINDICACION 1. DICHOS COMPUESTOS INHIBEN LA ACTIVIDAD TIROSINA QUINASA DEL RECEPTOR DEL FACTOR DE CRECIMIENTO EPIDERMICO (EGF) Y LA QUINASA C-ERBB2, Y SE PUEDEN UTILIZAR COMO AGENTES ANTITUMORALES.

Description

Derivados de pirimidina y procedimientos para la preparación de los mismos.

La invención se refiere a derivados y productos intermedios de 4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina y a procedimientos para la preparación de los mismos y a formulaciones farmacéuticas que comprenden tales derivados.

La invención se refiere a derivados de 4-amino-1H-pirazolo[3,4-]pirimidina de fórmula I

1

en la que m es un número entero desde 0 hasta e incluyendo 3,

v es 0 o 1,

R es hidrógeno o alquilo inferior,

R_{1} es halógeno, ciano, amino, (alcanoil inferior)-amino, (alquil inferior)-amino, N,N-di-(alquil inferior)-amino, hidroxilo, alcoxilo inferior, (alcanoil inferior)-oxilo, carboxilo, (alcoxi inferior)-carbonilo, carbamoilo, N-(alquil inferior)-carbamoilo, N,N-di-(alquil inferior)-carbamoilo o alquilo inferior que no está sustituido o está sustituido por halógeno, ciano, amino, (alcanoil inferior)-amino, (alquil inferior)-amino, N,N-di-(alquil inferior)-amino, hidroxilo, alcoxilo inferior, (alcanoil inferior)-oxilo, carboxilo, (alcoxi inferior)-carbonilo, carbamoilo, N-(alquil inferior)-carbamoilo o por N,N-di-(alquil inferior)-carbamoilo, siendo posible, cuando varios sustituyentes fenilo R_{1} están presentes para esos sustituyentes, que éstos sean idénticos o diferentes entre sí, y

a) R_{2} es hidrógeno y R_{3} es

\alpha)

un radical de fórmula II

2

en la que Y es oxígeno o azufre y

R_{4} es

\alpha\alpha)

un radical alquilo que no está sustituido o está sustituido por amino, (alcanoil inferior)-amino, benzoilamino, benciloxicarbonilamino, (alcoxi inferior)-carbonilamino, fenilamino o por bencilamino y que contiene, incluyendo los sustituyentes, desde 4 hasta 20 átomos de carbono,

\alpha\beta)

fenilamino, bencilamino, naftilamino, piridilmetilamino o alquilamino que tiene desde 4 hasta 11 átomos de carbono, o

\alpha\gamma)

fenilo o heterociclilo monocíclico unido por medio de un átomo de carbono y que tiene 5 o 6 miembros de anillo y desde 1 hasta 4 heteroátomos de anillo, seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre, estando sustituido o no estando sustituido cualquier radical fenilo presente en el radical R_{4} por uno o más radicales seleccionados de nitro, amino, (alcanoil inferior)-amino, (alquil inferior)-amino, di-(alquil inferior)-amino, halógeno, ciano, trifluorometilo, hidroxilo, alcoxilo inferior, (alcanoil inferior)-oxilo, carboxilo, (alcoxi inferior)-carbonilo, carbamoilo, N-(alquil inferior)-carbamoilo, metilendioxilo y alquilo inferior, siendo posible, cuando varios sustituyentes fenilo están presentes para aquellos sustituyentes, que éstos sean idénticos o diferentes entre sí,

\beta)

alquilo inferior sustituido por

\beta\alpha)

heterociclilo monocíclico no sustituido o sustituido por alquilo inferior que tiene 5 o 6 miembros de anillo y desde 1 hasta 4 heteroátomos de anillo seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre,

\beta\beta)

fenilo sustituido por

i)

fenilo,

ii)

fenoxilo sustituido por cloro o no sustituido o

iii)

heterociclilo monocíclico no sustituido o sustituido por alquilo inferior, que tiene 5 o 6 miembros de anillo y desde 1 hasta 4 heteroátomos de anillo seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre,

\beta\gamma)

naftilo,

\beta\delta)

cicloalquilo que tiene desde 3 hasta 8 miembros de anillo que no está sustituido o está sustituido por alquilo inferior o por (alcoxi inferior)-carbonilo, o

\beta\varepsilon)

amino, (alquil inferior)-amino, di-(alquil inferior)-amino, (alcanoil inferior)-amino, benciloxicarbonilamino, (alcoxi inferior)-carbonilamino, benzoilamino, fenilamino, bencilamino, ureido, N^{3}-fenil-ureido, N^{3}-(alquil inferior)-ureido, N^{3},N^{3}-di-(alquil inferior)-ureido, amino-(alcanoil inferior)-amino, ((alcoxi inferior)-carbonilamino-alcanoil inferior)-amino, (benciloxicarbonilamino-(alcanoil inferior))-amino, prolil-amino, (N-(alcoxi inferior)-carbonil-prolil)-amino, N^{3}-(alquil inferior)-tioureido, N^{3}-fenil-tioureido, ciano, guanidino, amidino, toluenosulfonilamino, (alcano inferior)-sulfonilamino o heterociclilcarbonilamino monocíclico no sustituido o sustituido por alquilo inferior, que tiene 5 o 6 miembros de anillo y desde 1 hasta 4 heteroátomos de anillo seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre,

radicales mencionados en la sección \beta\varepsilon) que contienen un radical fenilo que no está sustituido o está sustituido en el radical fenilo por halógeno, ciano, nitro, amino, (alcanoil inferior)-amino, (alquil inferior)-amino, N,N-di-(alquil inferior)-amino, hidroxilo, alcoxilo inferior, (alcanoil inferior)-oxilo, carboxilo, (alcoxi inferior)-carbonilo, carbamoilo, N-(alquil inferior)-carbamoilo, N,N-di-(alquil inferior)-carbamoilo o por alquilo inferior, o

\gamma)

un radical de fórmula III

\vskip1.000000\baselineskip

3

en la que R_{5} es carboxilo-(alcanoil inferior)-amino, benciloxicarbonilamino, ureido, N^{3}-fenil-ureido, N^{3}-(clorofenil)-ureido, N^{3}-((alcoxi inferior)-fenil)-ureido, N^{3}-(alquil inferior)-ureido, N^{3},N^{3}-di-(alquil inferior)-ureido, N^{3}-(alquil inferior)-tioureido, amino-(alcanoil inferior)-amino, ((alcoxi inferior)carbonila- mino-(alcanoil inferior))-amino, (benciloxicarbonilamino-alcanoil inferior)-amino, prolil-amino, (N-(al-coxi inferior)-carbonil-prolil)-amino, hidroxi- (alcanoil inferior)-amino, di-(alquil inferior)-amino-metilenamino, succinimido, ftalimido, guanidino o amidino,

\delta)

heterociclilo monocíclico no sustituido o sustituido por alquilo inferior, unido por medio de un átomo de carbono del anillo y que tiene 5 o 6 miembros de anillo y desde 1 hasta 4 heteroátomos de anillo seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre, o

\varepsilon)

(alcano inferior)-sulfonilo o bencenosulfonilo no sustituido o sustituido por alquilo inferior, o

b) R_{2} y R_{3} juntos son

di-(alquil inferior)-amino-metilenamino, 1,2-etileno, propano-1,3-diilo, butano-1,4-diilo, pentano-1,5-diilo, 3-(3-amino-propionil)-3-aza-pentano-1,5-diilo, 2-amino-butano-1,4-diilo, 1-aminometil-butano-1,4-diilo, 1-hidroximetilbutano-1,4-diilo, 3-hidroxi-pentano-1,5-diilo, 1-hidroxi-hexano-1,5-diilo, 3-(2-amino-etil)-pentano-1,5-diilo, 3-aza-pentano-1,5-diilo (-CH_{2}-CH_{2}-NH-CH_{2}-CH_{2}-), 3-aza-2,4-dimetil-pentano-1,5-diilo (-CH_{2}-CH[CH_{3}]-NH-CH[CH_{3}]-CH_{2}-), 3-amino-3-aza-pentano-1,5-diilo (-CH_{2}-CH_{2}-N[NH_{2}]-CH_{2}-CH_{2}-), 1-aza-pentano-1,5-diilo, 1-aza-1-toluilaminocarbonil-pentano-1,5-diilo, 1-aza-1-(metilamino-tiocarbonil)-pentano-1,5-diilo, 1-aza-1-(terc-butilamino-carbonil)-pentano-1,5-diilo, 1-aza-1-{ciclohexilami-no-carbonil)-pentano-1,5-diilo, 3-aza-i-hidroxi-heptano-3,7-diilo, 3-aza-1-ciano-heptano-3,7-diilo, 1-amino-3-aza-heptano-3,7-diilo, 3-(2-amino-etil)-3-aza-pentano-1,5-diilo (-CH_{2}-CH_{2}-N[-CH_{2}-CH_{2}-NH_{2}]-CH_{2}-CH_{2}-), 1-carbamoil-butano-1,4-diilo, 2-formilamino-pentano-1,4-diilo, 2-aza-butadieno-1,4-diilo (-CH=CH-N=CH-), 2-aza-3-hidroximetil-butadieno-1,4-diilo (-CH=C[CH_{2}OH]-N=CH-), 2-aza-1-hidroxi-1-(4-metoxi-fenil-amino)-heptano-2,7-diilo {-(CH_{2})_{4}-N[-CH(OH)-NH-C_{6}H_{4}-OCH_{3}]-}, 3-oxa-pentano-1,5-diilo, N-(alcoxi inferior)-carbonil-3-aza-pentano-1,5-diilo, N-(alcano(C_{1}-C_{12})-il)-3-aza-pentano-1,5-diilo, N-benzoil-3-aza-pentano-1,5-diilo o N-(pirid-2-il-carbonil)-3-aza-pentano-1,5-diilo, y sales, solvatos y tautómeros de los mismos.

Los términos generales utilizados anteriormente y más adelante en el presente documento tienen preferiblemente los siguientes significados dentro del alcance de la presente solicitud:

El término "inferior" indica un radical que tiene hasta e incluyendo un máximo de 7, especialmente hasta e incluyendo un máximo de 4, y más especialmente de 1 o 2 átomos de carbono.

Cuando m es 0, el anillo fenilo no lleva ningún sustituyente R_{1}. Preferiblemente, m es un número entero desde 0 hasta e incluyendo 2. Cuando m es 1, el sustituyente fenilo R_{1} está principalmente en la posición 4, es decir, en la posición para, o especialmente en la posición 3, es decir, en la posición meta. Cuando m es 2, los dos sustituyente fenilo R_{1} están preferiblemente en las posiciones 3 y 4.

Cuando v es 0, el radical fenilo (R_{1})_{m} está unido directamente al átomo de nitrógeno en la posición 4 del derivado de 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina.

El halógeno R_{1} es flúor, bromo, yodo o preferiblemente cloro.

El alcoxilo inferior R_{1} es, por ejemplo, metoxilo.

El (alcanoil inferior)-oxilo R_{1} es, por ejemplo, acetoxilo.

El (alcoxi inferior)-carbonilo R_{1} es, por ejemplo, metoxicarbonilo.

El N-(alquil inferior)-carbamoilo R_{1} es, por ejemplo, N-metil-carbamoilo.

El alquilo inferior R_{1} sustituido por amino o ciano es, por ejemplo, -(CH_{2})_{x}-NH_{2} o -(CH_{2})_{x}-CN, respectivamente, en el que x es, en cada caso, desde 1 hasta 4.

El heterociclilo monocíclico no sustituido o sustituido por alquilo inferior que tiene 5 o 6 miembros de anillo y desde 1 hasta 4 heteroátomos de anillo seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre está preferiblemente unido por medio de un átomo de carbono del anillo, por ejemplo, piridilo, tal como 2, 3 o 4-piridilo, (alquil inferior)-piridilo, tal como 2-metil-pirid-6-ilo, (alquil inferior)-piridinio-ilo, tal como N-metil-piridinio-4-ilo, tienilo, tal como 3-tienilo, tiazolilo, tal como 2 o 5-tiazolilo, pirrolilo, tal como 2-pirrolilo, N-(alquil inferior)-pirrolilo, tal como N-(alquil inferior)-pirrol-2-ilo, imidazolilo, tal como 2 o 4-imidazolilo, furilo, tal como 2 o 3-furilo, tetrazolilo, tal como 5-tetrazolilo, o (alquil inferior)-tetrazolilo, tal como 2-(alquil inferior)-tetrazol-5-ilo.

El heterociclilcarbonilamino monocíclico no sustituido o sustituido por alquilo inferior que tiene 5 o 6 miembros de anillo y desde 1 hasta 4 heteroátomos de anillo seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre contiene preferiblemente uno de los radicales de heterociclilo anteriormente mencionados y es, por ejemplo, furoilamino, tal como especialmente 2-furoilamino.

Amidino es un radical de fórmula -C(=NH)-NH_{2}.

Guanidino es un radical de fórmula -NH-C(=NH)-NH_{2}.

Ureido es un radical de fórmula -NH-C(=O)-NH_{2}.

N^{3}-(alquil inferior)-ureido es un radical de fórmula -NH-C(=O)-NH-(alquil inferior), preferiblemente N^{3}-etil-ureido.

N^{3},N^{3}-di-(alquil inferior)-ureido es un radical de fórmula -NH-C(=O)-N(alquil inferior)_{2}.

N^{3}-fenil-ureido es un radical de fórmula -NH-C(=O)-NH-fenil.

N^{3},N^{3}-difenil-ureido es un radical de fórmula -NH-C(=O)-(fenil)_{2}.

Tioureido es radical de fórmula -NH-C(=S)-NH_{2}.

N^{3}-(alquil inferior)-tioureido es un radical de fórmula -NH-C(=S)-NH-alquil inferior), preferiblemente N^{3}-metil-tioureido.

N^{3},N^{3}-di-(alquil inferior)-tioureido es un radical de fórmula -NH-C(=S)-N(alquil inferior)_{2}.

(Alcoxi inferior)-carbonilamino es, por ejemplo, metoxicarbonilamino, etoxicarbonilamino, isopropiloxicarbonilamino o 2-metil-propiloxicarbonilamino.

Morfolina-4-carbonilo se denomina también en lo sucesivo morfolinocarbonilo.

4-(Alquil inferior)-piperazina-1-carbonilo es preferiblemente 4-metil-piperazina-1-carbonilo.

(Alquilo inferior)-sulfonilamino es preferiblemente metilsulfonilamino, etilsulfonilamino o isopropil-sulfonilamino.

El radical de fórmula -N=C-N(CH_{3})_{2} se denomina en lo sucesivo di-(alquil inferior)-amino-metilenamino. Los radicales correspondientes que contienen, en lugar del radical di-(alquil inferior)-amino, piperidino, 4-(alquilo inferior)-piperazino o morfolino, se denominan en lo sucesivo radicales (piperidino etc.)-metilenamino, por ejemplo piperidino-metilenamino.

(Alcanoil inferior)-amino es, por ejemplo, formilamino o acetilamino.

Debido a que los compuestos de fórmula I tienen propiedades básicas, las sales de estos compuestos son sales de adición de ácidos con ácidos orgánicos o inorgánicos, especialmente las sales no tóxicas, farmacéuticamente aceptables. Ácidos inorgánicos adecuados son, por ejemplo, ácido carbónico (preferiblemente en la forma de carbonatos o hidrogenocarbonatos); haluros de hidrógeno, tales como ácido clorhídrico; ácido sulfúrico; o ácido fosfórico. Ácidos orgánicos adecuados son, por ejemplo, los ácidos carboxílico, fosfónico, sulfónico o sulfámico, por ejemplo ácido acético, ácido propiónico, ácido octanoico, ácido decanoico, ácido dodecanoico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido 2-hidroxibutírico, ácido glucónico, ácido glucosamonocarboxílico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido adípico, ácido pimélico, ácido subérico, ácido azelaico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido glucárico, ácido galactárico, aminoácidos, tales como ácido glutámico, ácido aspártico, N-metilglicina, ácido acetilaminoacético, N-acetilasparagina o N-acetilcistina, ácido pirúvico, ácido acetoacético, fosfoserina, ácido 2- o 3-glicerofosfórico, ácido glucosa-6-fosfórico, ácido glucosa-1-fosfórico, ácido fructosa-1,6-bis-fosfórico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido metilmaleico, ácido ciclohexanocarboxílico, ácido adamantanocarboxílico, ácido benzoico, ácido salicílico, ácido 1- o 3-hidroxinaftil-2-carboxílico, ácido 3,4,5-trimetoxibenzoico, ácido 2-fenoxibenzoico, ácido 2-acetoxibenzoico, ácido 4-aminosalicílico, ácido ftálico, ácido fenilacético, ácido mandélico, ácido cinámico, ácido nicotínico, ácido isonicotínico, ácido glucurónico, ácido galacturónico, ácido metano o etanosulfónico, ácido 2-hidroxietanosulfónico, ácido etano-1,2-disulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido 2-naftalenosulfónico, ácido 1,5-naftaleno-disulfónico, ácido 2-, 3- o 4-metilbencenosulfónico, ácido metilsulfúrico, ácido etilsulfúrico, ácido dodecilsulfúrico, ácido N-ciclohexilsulfámico, ácido N-metil, N-etil o N-propil-sulfámico, u otros ácidos protónicos orgánicos, tales como ácido ascórbico.

Con fines de aislamiento o purificación, también es posible utilizar sales farmacéuticamente no aceptables, por ejemplo picratos o percloratos. Sólo las sales que son farmacéuticamente aceptables y no tóxicas (a las dosis apropiadas) se usan terapéuticamente y por tanto, se prefieren esas sales.

En determinadas condiciones, por ejemplo, cuando están disueltos en diversos disolventes, es posible que los compuestos de fórmula I y los productos intermedios usados para su preparación que contienen un resto pirazol, estén presentes hasta cierto punto en una forma tautomérica en la que el átomo de hidrógeno normalmente localizado en el átomo de nitrógeno en posición 1 se localiza en otro átomo de nitrógeno adecuado, por ejemplo, el nitrógeno en posición 2, 5 o 7. La invención también se refiere a estos tautómeros.

Los compuestos de fórmula I tienen propiedades farmacológicamente útiles y valiosas. En particular, muestran actividades inhibidoras específicas que son de interés farmacológico. Son eficaces especialmente como inhibidores de la proteína tirosina cinasa y/o (además) como inhibidores de la proteína serina/treonina cinasa; muestran, por ejemplo, una potente inhibición de la actividad tirosina cinasa del receptor para el factor de crecimiento epidérmico (EGF) y de cinasa c-erbB2. Estas actividades enzimáticas específicas del receptor desempeñan un papel clave en la transmisión de la señal en un gran número de células de los mamíferos, incluyendo células humanas, especialmente células epiteliales, células del sistema inmunitario y células del sistema nervioso central y periférico. Por ejemplo, en varios tipos de células, la activación inducida por EGF de la proteína tirosina cinasa asociada al receptor (EGF-R-PTK) es un requisito previo para la división celular y por tanto, para la proliferación de la población celular. La administración de los inhibidores de la tirosina cinasa específicos para el receptor de EGF inhibe por tanto la proliferación de las células. Lo mismo se aplica de manera análoga a las otras proteínas cinasas mencionadas anteriormente y más adelante en el presente documento.

La inhibición de la proteína tirosina cinasa específica para el receptor de EGF (EGF-R-PTK) puede demostrarse usando métodos conocidos, por ejemplo, usando el dominio intracelular recombinante del receptor de EGF (EGF-R ICD; véase, por ejemplo, E. McGlynn et al., Europ. J. Biochem. 207, 265-275 (1992)). Comparado con el control sin inhibidor, los compuestos de fórmula I inhiben la actividad enzimática al 50% (CI_{50}), por ejemplo en una concentración de desde 0,0005 hasta 5 mM, especialmente desde 0,001 hasta 0,1 mM.

También en el intervalo micromolar, los compuestos de fórmula I muestran, por ejemplo, inhibición del crecimiento celular de las líneas celulares dependientes de EGF, por ejemplo la línea celular epidermoide de queratinocitos de ratón BALB/c (véase Weissmann, B.A., y Aaronson, S.A., Cell 32, 599 (1983)) o la línea celular A431, que se reconocen como fuentes habituales útiles de células epiteliales dependientes de EGF (véase Carpenter, G., y Zendegni, J. Anal. Biochem. 153,279-282 (1985)). En un método de prueba conocido (véase Meyer et al., Int. J. Cancer 43, 851 (1989)), la actividad inhibidora de los compuestos de fórmula I se determina brevemente como sigue: se transfieren células BALB/MK (10 000/ pocillo de placa de microtitulación) a placas de microtitulación de 96 pocillos. Los compuestos de prueba (disueltos en DMSO) se añaden en una serie de concentraciones (series de dilución) de tal manera que la concentración final de DMSO no sea superior al 1% (v/v). Tras la adición, las placas se incuban durante tres días, durante los que los cultivos de control sin compuesto de prueba pueden experimentar al menos tres ciclos de división celular. El crecimiento de las células MK se mide por medio de tinción con azul de metileno: tras la incubación, las células se fijan con glutaraldehído, se lavan con agua y se tiñen con un 0,05% de azul de metileno. Tras una etapa de lavado, el tinte se eluye con un 3% de HCl y se mide la densidad óptica por pocillo de la placa de microtitulación usando un Titertek multiskan a 665 nm. Los valores de CI_{50} se determinan mediante un sistema asistido por ordenador que utiliza la fórmula:

IC_{50}=[(OD_{prueba}-OD_{inicio})/(OD_{control}-OD_{inicio})] \ x \ 100.

El valor de CI_{50} en estos experimentos es aquella concentración del compuesto de prueba en cuestión que da como resultado un recuento celular que es un 50% inferior al obtenido usando el control sin inhibidor. Los compuestos de fórmula I muestran actividad inhibidora en el intervalo micromolar, por ejemplo una CI_{50} de aproximadamente desde 0,1 hasta 10 mM, especialmente desde 0,4 hasta 4 mM.

Los compuestos de fórmula I también muestran inhibición del crecimiento de células tumorales in vivo, como se muestra, por ejemplo, mediante la prueba descrita a continuación: la prueba se basa en la inhibición del crecimiento del carcinoma epidermoide humano A431 (ATCC nº CRL 1555; Colección estadounidense de cultivos tipo, Rockville, Maryly, EE.UU.; véase Santon, J.B., et al., Cancer Research 46, 4701-4705 (1986) y Ozawa, S., et al., Int. J. Cancer 40, 706-710 (1987)), que se trasplanta en un ratón atímico BALB/c hembra (Bomholtgard, Dinamarca). Ese carcinoma muestra un crecimiento que se corresponde con la magnitud de la expresión del receptor de EGF. En el experimento, los tumores cultivados in vivo que tienen un volumen de aproximadamente 1 cm^{3} se extirpan quirúrgicamente de los animales experimentales en condiciones estériles. Los tumores se trituran y se suspenden en 10 volúmenes (p/v) de solución salina tamponada con fosfato. La suspensión se inyecta por vía subcutánea (0,2 ml/ratón en solución salina tamponada con fosfato) en el ijar izquierdo de los animales. Alternativamente, pueden inyectarse 1 x 10^{6} células de un cultivo in vitro en 0,2 ml de solución salina tamponada con fosfato. El tratamiento con los compuestos de prueba de fórmula I se empezó 5 o 7 días antes del trasplante, cuando los tumores habían alcanzado un diámetro de 4-5 mm. El compuesto de prueba en cuestión se administra (en diferentes dosis para diferentes grupos de animales) una vez al día durante 15 días sucesivos. El crecimiento del tumor se determina midiendo el diámetro de los tumores a lo largo de tres ejes que son perpendiculares entre sí. Los volúmenes de los tumores se calculan usando la conocida fórmula p x L x D^{2}/6 (véase Evans, B.D., et al., Brit. J. Cancer 45, 466-468 (1982)). Los resultados se dan como porcentajes de tratamiento/control (T/C x 100 = % de T/C). A una dosis de desde 3 hasta 50 mg/kg de principio activo, se encuentra una clara inhibición del crecimiento del tumor, por ejemplo valores de % de T/C inferiores a 10, lo que indica una fuerte inhibición del crecimiento del tumor.

Además de o en vez de inhibir la proteína tirosina cinasa del receptor de EGF, los compuestos de fórmula I también inhiben otras proteínas tirosina cinasas que están implicadas en la transmisión de señales mediadas por factores tróficos, por ejemplo, cinasa abl, cinasas de la familia de las cinasas src, especialmente cinasa c-src (CI_{50}, por ejemplo, de desde 1 hasta 10 mM) y cinasa c-erbB2 (HER-2), además de serina/treonina cinasas, por ejemplo proteína cinasa C, participando todas en la regulación del crecimiento y en la transformación en células de mamíferos, incluyendo células humanas.

La inhibición de la tirosina cinasa c-erbB2 (HER-2) puede determinarse, por ejemplo, de manera análoga al método usado para EGF-R-PTK (véase C. House et al., Europ. J. Biochem. 140, 363-367 (1984)). La cinasa c-erbB2 puede aislarse y su actividad puede determinarse por medio de protocolos en sí conocidos, por ejemplo según T. Akiyama et al., Science 232, 1644 (1986).

Por tanto, los compuestos de fórmula I que inhiben la actividad tirosina cinasa del receptor para el factor del crecimiento epidérmico (EGF) o también de las otras proteínas tirosina cinasas mencionadas son útiles, por ejemplo, en el tratamiento de tumores benignos o malignos. Pueden lograr una remisión tumoral y prevenir la formación de metástasis tumorales y el crecimiento de micrometástasis. Pueden utilizarse especialmente en el caso de hiperproliferación epidérmica (psoriasis), en el tratamiento de neoplasia de carácter epitelial, por ejemplo, carcinomas mamarios, y en leucemias. Además, los compuestos de fórmula I pueden utilizarse en el tratamiento de trastornos tumorales de los pulmones, el intestino y la piel y en el tratamiento de trastornos del sistema inmunitario, en tanto que están involucradas varias o, especialmente, proteínas tirosina cinasas y/o (además) proteínas serina/treonina cinasas individuales; estos compuestos de fórmula I también pueden utilizarse en el tratamiento de trastornos del sistema nervioso central o periférico, en tanto que en la transmisión de señales está(n) involucrada(s) varias o, especialmente, una sola proteína tirosina cinasa(s) y/o (además) proteína serina/treonina cinasa(s).

En general, la presente invención también se refiere al uso de los compuestos de fórmula en la inhibición de las proteínas cinasas mencionadas.

Los compuestos según la invención pueden utilizarse tanto solos como en combinación con otros compuestos farmacológicamente activos, por ejemplo, junto con inhibidores de las enzimas de la síntesis de poliaminas, inhibidores de la proteína cinasa C, inhibidores de otras tirosina cinasas, citocinas, reguladores negativos del crecimiento, por ejemplo TGF-\beta o IFN-\beta, inhibidores de aromatasa, agentes antiestrogénicos y/o citostáticos.

En el caso de los objetos preferidos de la invención mencionados más adelante, las definiciones generales pueden sustituirse por las definiciones más específicas dadas al principio, cuando sean apropiadas y convenientes.

Se da la mayor preferencia a los compuestos de fórmula I descritos en los ejemplos y a sus sales farmacéuticamente aceptables y a solvatos de las mismas.

Los compuestos de fórmula I y sus sales, solvatos y tautómeros pueden prepararse de una manera en sí conocida.

El procedimiento de preparación según la invención es como sigue:

a) un compuesto de fórmula IV

4

en la que R_{7} es hidrógeno o metilo, R_{6} es alcoxilo que tiene desde 1 hasta 3 átomos de carbono o nitro, r es un número entero desde 0 hasta 2, y los otros sustituyentes y símbolos son como se definieron anteriormente, se trata con un ácido de Lewis adecuado, o

b) un compuesto de fórmula V

5

en la que los símbolos son como se definieron anteriormente, se hace reaccionar con una amina de fórmula VI

6

en la que v es 1 y los otros símbolos son como se definieron anteriormente, o con una sal de la misma, en presencia de ácido fórmico, o

c) un compuesto de fórmula V

7

en la que los símbolos son como se definieron anteriormente, se hace reaccionar con un derivado de formamida de fórmula VII

8

en la que v es 1 y los otros símbolos son como se definieron anteriormente, o

d) un compuesto de fórmula VIII

9

en la que los símbolos son como se definieron anteriormente, se hace reaccionar con una amina de fórmula VI

10

en la que v es 0 o 1 y los otros símbolos son como se definieron anteriormente, o con una sal de la misma, o

e) un compuesto de fórmula IX

11

en la que v es 0 y los otros símbolos son como se definieron anteriormente, se somete a las condiciones de un reordenamiento de Dimroth, y, si se desea, un compuesto de fórmula I que puede obtenerse según uno cualquiera de los procedimientos a) a e) se convierte en su sal, o una sal resultante de un compuesto de fórmula I se convierte en el compuesto libre.

Otras rutas posibles para preparar compuestos de fórmula I se ilustran por medio de ejemplos en la sección de los ejemplos y serán evidentes para el experto en la técnica mediante generalización de los ejemplos y el uso del conocimiento experto.

El procedimiento para llevar a cabo estas variantes de procedimiento y preparación de los materiales de partida se describe más detalladamente a continuación:

Comentarios generales: si es necesario, los grupos funcionales interferentes en los materiales de partida se protegen de una manera en sí conocida, antes de la reacción, mediante grupos protectores que pueden eliminarse fácilmente, que se eliminan de nuevo una vez que se ha terminado la reacción.

Procedimiento a): si R_{7} es hidrógeno, un ácido de Lewis adecuado es especialmente cloruro de aluminio. La reacción se lleva a cabo en un disolvente orgánico inerte, por ejemplo un hidrocarburo, tal como preferiblemente un hidrocarburo aromático, tal como especialmente benceno o tolueno, a una temperatura de desde temperatura ambiente (aproximadamente 20ºC) hasta +200ºC, si es necesario, bajo gas protector, tal como argón, y/o presión elevada, preferiblemente a la temperatura de ebullición del disolvente usado, es decir, a reflujo. Si R_{7} es metilo, la mezcla de reacción se lleva a ebullición preferiblemente con ácido polifosfórico.

El material de partida de fórmula IV se obtiene como sigue: en primer lugar, un compuesto de fórmula X

\vskip1.000000\baselineskip

12

se hace reaccionar con un derivado de hidracina de fórmula XI

13

en la que R_{7} es hidrógeno o metilo, R_{6} es alcoxilo que tiene desde 1 hasta 3 átomos de carbono o nitro y r es un número entero desde 0 hasta 2, o con una sal del mismo, para formar un derivado de pirazol de fórmula XII

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en la que los sustituyentes son como se definieron anteriormente. Por ejemplo, se utiliza como material de partida una solución metanólica de un derivado de hidracina de fórmula XI en forma de diclorhidrato a la que se añade en primer lugar, con enfriamiento, por ejemplo con hielo, una solución metanólica de metanolato de sodio y después, a temperatura ambiente, una solución de un compuesto de fórmula X en un alcohol anhidro adecuado, tal como etanol absoluto. La mezcla de reacción se calienta después a reflujo durante varias horas.

El compuesto resultante de fórmula XII se hace reaccionar con ácido fórmico, con formación del anillo de pirimidina, para formar un compuesto de fórmula XIII

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en la que los sustituyentes son como se definieron anteriormente. Preferiblemente, un compuesto de fórmula XII se calienta a reflujo durante varias horas en ácido fórmico acuoso al 85%.

A partir de un compuesto de fórmula XIII se obtiene con cloruro de fosforilo (oxicloruro de fósforo, POCl_{3}) o tricloruro de fósforo (PCl_{3}), con sustitución del grupo hidroxilo por cloro, un compuesto de fórmula XIV

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en la que los sustituyentes son como se definieron anteriormente. Preferiblemente, un compuesto de fórmula XIII se calienta a reflujo durante varias horas en cloruro de fosforilo bajo gas protector, tal como argón.

El compuesto de fórmula XIV se hace reaccionar después con un derivado de anilina de fórmula XV

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en la que los símbolos son como se definieron anteriormente, preferiblemente en un disolvente adecuado, tal como un alcohol adecuado, por ejemplo etanol, bajo gas protector, tal como nitrógeno, a elevada temperatura, por ejemplo a reflujo, para formar el material de partida deseado de fórmula IV.

El material de partida de fórmula X se obtiene, por ejemplo, por reacción de 3,3-bis-metil-mercapto-2-ciano-acrilonitrilo de fórmula XVI

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con una amina de fórmula XVII

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en la que los símbolos son como se definieron anteriormente. El 3,3-bis-metilmercapto-2-ciano-acrilonitrilo de fórmula XVI anteriormente mencionado se describe bajo el nombre "2,2-bis-metilmercapto-1-ciano-acrilonitrilo" por R. Gompper y W. Töpel, Chem. Ber. 95, 2861-2870, especialmente en la página 2868, en el centro, y puede prepararse a una temperatura de desde 5 hasta 20ºC mediante una reacción de adición entre dinitrilo de ácido malónico de fórmula CH_{2}(CN)_{2} y disulfuro de carbono en presencia de metanolato de sodio en metanol, seguido de metilación del producto intermedio así obtenido con sulfato de dimetilo.

Procedimiento b): el material de partida de fórmula VI puede utilizarse en forma de una sal, por ejemplo en forma de acetato. Además de ácido fórmico, también es posible añadir más ácidos, tales como ácido acético glacial. La reacción se lleva a cabo a temperatura elevada, preferiblemente a desde 100 hasta 250ºC, tal como especialmente a 200ºC.

El material de partida de fórmula V se obtiene a partir de un compuesto de fórmula X por reacción con hidracina en un disolvente adecuado, tal como un alcanol adecuado, tal como especialmente metanol, por ejemplo a temperatura de reflujo.

Procedimiento c): la reacción se lleva a cabo a temperatura elevada, preferiblemente a desde 100 hasta 250ºC, tal como especialmente a 200ºC, en presencia de o, cuando sea posible, en ausencia de un disolvente, es decir, que el derivado de formamida de fórmula VII puede actuar simultáneamente como disolvente.

Procedimiento d): la reacción se lleva a cabo a temperatura elevada, preferiblemente a desde 50 hasta 180ºC, tal como especialmente a 120ºC, en presencia de o, cuando sea posible, en ausencia de un disolvente, es decir, que el derivado de amina de fórmula VI puede actuar simultáneamente como disolvente. Cuando v es 0, el derivado de amina de fórmula VI se utiliza preferiblemente en forma de una sal, por ejemplo, en forma del clorhidrato. Cuando v es 1, el derivado de amina de fórmula VI se utiliza preferiblemente en forma de la amina libre.

El material de partida de fórmula VIII se obtiene a partir de un compuesto de fórmula V por reacción con un dimetilformamida-acetal adecuado, tal como N,N-dimetilformamida-dietil-acetal, en un disolvente adecuado, tal como un hidrocarburo aromático adecuado, tal como especialmente tolueno, a temperatura elevada, preferiblemente a desde 50 hasta 180ºC, tal como especialmente a reflujo.

Procedimiento e): el reordenamiento de Dimroth se lleva a cabo a temperatura elevada, por ejemplo a desde 70 hasta 200ºC, preferiblemente a desde 80 hasta 150ºC, por ejemplo a reflujo, en una mezcla de disolventes adecuada que contiene agua, por ejemplo una mezcla de agua y un éter adecuado, tal como un éter cíclico, por ejemplo dioxano, por ejemplo una mezcla dioxano/agua en una razón en volumen de 1:1.

La imina de fórmula IX se obtiene, por ejemplo, a partir de un compuesto de fórmula V en dos etapas como sigue:

En la primera etapa, un compuesto de fórmula V se hace reaccionar con ortoformiato de trietilo de fórmula HC(OC_{2}H_{5})_{3} para formar un compuesto de etoximetilenamino de fórmula XVIII

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en la que los símbolos son como se definieron anteriormente.

La reacción se lleva a cabo a temperatura elevada, preferiblemente a desde 50 hasta 180ºC, como especialmente a 120ºC, actuando simultáneamente el ortoformiato de trietilo como disolvente. El etanol formado por la reacción se elimina continuamente por destilación de la mezcla de reacción.

En la segunda etapa, el compuesto resultante de fórmula XVIII se hace reaccionar con una amina de fórmula VI, en la que v es 0 o 1 y los otros símbolos son como se definieron anteriormente, para formar la imina deseada de fórmula IX. Esta reacción se lleva a cabo en un disolvente adecuado, tal como un alcohol adecuado, por ejemplo un alcanol, tal como especialmente etanol, a temperatura elevada, preferiblemente a desde 50 hasta 180ºC, como especialmente a desde 70 hasta 120ºC, por ejemplo a temperatura de reflujo.

Alternativamente, la imina de fórmula IX se obtiene directamente a partir de un compuesto de fórmula VIII por reacción con una amina de fórmula VI [de manera similar al procedimiento d)] en mezcla con el producto final de fórmula I. Esta reacción se lleva a cabo en un disolvente adecuado, tal como un alcohol adecuado, por ejemplo un alcanol, tal como especialmente etanol, a temperatura elevada, preferiblemente a desde 50 hasta 180ºC, como especialmente a desde 70 hasta 120ºC, por ejemplo a temperatura de reflujo.

Las sales de adición de ácidos de los compuestos de fórmula I se obtienen de una manera en sí conocida, por ejemplo por tratamiento con un ácido o un reactivo de intercambio aniónico adecuado.

Las sales de adición de ácidos pueden convertirse de manera habitual en compuestos libres, por ejemplo por tratamiento con un agente básico adecuado.

Las mezclas de isómeros pueden separarse en los isómeros individuales de una manera en sí conocida, por ejemplo por cristalización fraccionada, cromatografía, etc.

El siguiente esquema de reacción ilustra algunas rutas posibles para sintetizar diversos compuestos de fórmula I:

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Condiciones del procedimiento general:

Los compuestos libres de fórmula I que tienen propiedades formadoras de sales, que pueden obtenerse según el procedimiento, pueden convertirse en sus sales de una manera en sí conocida, por ejemplo por tratamiento con ácidos o derivados adecuados de los mismos, por ejemplo por la adición del ácido en cuestión al compuesto de fórmula I disuelto en un disolvente adecuado, por ejemplo un éter, tal como un éter cíclico, especialmente dioxano o más especialmente tetrahidrofurano.

Las mezclas de isómeros que pueden obtenerse según la invención pueden separarse en los isómeros individuales de una manera en sí conocida: los racematos, por ejemplo, mediante la formación de sales con reactivos ópticamente puros formadores de sales y separación de la mezcla diastereoisomérica que puede obtenerse así, por ejemplo, por medio de cristalización fraccionada.

Las reacciones anteriormente mencionadas pueden llevarse a cabo en condiciones de reacción en sí conocidas, en ausencia o, normalmente, en presencia de disolventes o diluyentes, preferiblemente aquellos disolventes o diluyentes que son inertes con respecto a los reactivos utilizados y que son disolventes para los mismos, en ausencia o en presencia de catalizadores, agentes de condensación (por ejemplo, pentóxido de fósforo) o agentes neutralizadores, por ejemplo bases, especialmente bases de nitrógeno, tales como clorhidrato de trietilamina, dependiendo de la naturaleza de la reacción y/o los reactivos, a temperatura reducida, normal o elevada, por ejemplo en un intervalo de temperatura de desde aproximadamente -80ºC hasta aproximadamente 200ºC, preferiblemente desde aproximadamente -20ºC hasta aproximadamente 150ºC, por ejemplo a la temperatura de ebullición del disolvente usado, a presión atmosférica o en un recipiente cerrado, opcionalmente a presión y/o en una atmósfera inerte, por ejemplo, bajo una atmósfera de nitrógeno.

Se prefieren las condiciones de reacción indicadas específicamente en cada caso.

Los disolventes y diluyentes son, por ejemplo, agua, alcoholes, por ejemplo, hidróxidos de alquilo inferior, tales como metanol, etanol, propanol o especialmente butanol, dioles, tales como etilenglicol, trioles, tales como glicerol, o alcoholes arílicos, tales como fenol, amidas ácidas, por ejemplo, amidas de ácidos carboxílicos, tales como dimetilformamida, dimetilacetamida o 1,3-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(1H)-pirimidinona (DMPU), ácidos carboxílicos, especialmente ácido fórmico o ácido acético, amidas de ácidos inorgánicos, tales como triamida del ácido hexametilfosfórico, éteres, por ejemplo éteres cíclicos, tales como tetrahidrofurano o dioxano, o éteres acíclicos, tales como dietil éter o etilenglicol dimetil éter, hidrocarburos halogenados, tales como halógeno-(alcanos inferiores), por ejemplo cloruro de metileno o cloroformo, cetonas, tales como acetona, nitrilos, tales como acetonitrilo, anhídridos ácidos, tales como anhídrido acético, ésteres, tales como acetato de etilo, bisalcano-sulfinas, tales como dimetilsulfóxido, heterociclos de nitrógeno, tales como piridina, hidrocarburos, por ejemplo alcanos inferiores, tales como heptano, o compuestos aromáticos, tales como benceno, tolueno o xileno(s), o mezclas de estos disolventes, siendo posible seleccionar cualquier disolvente que sea adecuado para las reacciones anteriormente
mencionadas.

Se utilizan métodos habituales para el tratamiento final de los compuestos de fórmula I o de sus sales que pueden obtenerse, por ejemplo por solvólisis de los reactivos en exceso; recristalización; cromatografía, por ejemplo, cromatografía de reparto, iónica o en gel; reparto entre una fase de disolvente inorgánica y una orgánica; extracción simple o múltiple, especialmente tras la acidificación o tras aumentar la basicidad o el contenido en sales; secado sobre sales higroscópicas; digestión; filtración; lavado; disolución; concentración por evaporación (si es necesario, a vacío o a alto vacío; destilación; cristalización, por ejemplo, de los compuestos resultantes en forma de aceite o de las aguas de cristalización, siendo también posible llevar a cabo la siembra con un cristal del producto final; o una combinación de dos o más de las etapas de tratamiento final mencionadas, que también pueden utilizarse repetidamente, etc.

Los materiales de partida y los productos intermedios pueden utilizarse en forma pura, por ejemplo tras el tratamiento final, como se mencionó inmediatamente arriba, en forma parcialmente purificada o alternativamente sin tratamiento adicional, por ejemplo en forma del producto bruto.

Los compuestos, incluyendo sus sales, también pueden obtenerse en forma de hidratos, o sus cristales pueden incluir, por ejemplo, el disolvente usado para la cristalización. La presente invención también se refiere a tales hidratos o solvatos de los compuestos de fórmula I y de los materiales de partida descritos como parte constituyente de la invención.

Como consecuencia de la relación intima entre los compuestos de fórmula I en forma libre y en forma de sus sales, anteriormente y más adelante en el presente documento, cualquier referencia a los compuestos libres o a sus sales, cuando sea apropiada y conveniente, debe entenderse como que también incluye las sales o los compuestos libres respectivamente, con tal que los compuestos contengan grupos formadores de sales. Lo mismo se aplica de manera análoga a los hidratos y solvatos.

En el procedimiento de la presente invención prefiere utilizarse aquellos materiales de partida que dan como resultado los novedosos compuestos de fórmula I descritos al principio por ser especialmente valiosos.

La invención también se refiere a aquellas formas del procedimiento en las que un compuesto que puede obtenerse como producto intermedio en cualquier etapa del procedimiento se utiliza como material de partida y se llevan a cabo las etapas del procedimiento restantes, o en las que un material de partida se forma en las condiciones de reacción o se utiliza en forma de un derivado, por ejemplo una sal del mismo.

Composiciones farmacéuticas, la preparación de las mismas y el uso según la invención de compuestos de fórmula I y composiciones que comprenden esos compuestos como principio activo.

La presente invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden uno de los compuestos de fórmula I como principio activo y que pueden utilizarse especialmente en el tratamiento de las enfermedades mencionadas al principio. Se da especial preferencia a las composiciones para administración enteral, tal como nasal, bucal, rectal o especialmente oral, y administración parenteral, tal como intravenosa, intramuscular o subcutánea, a animales de sangre caliente, especialmente a los seres humanos. Las composiciones comprenden el principio activo solo o preferiblemente junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable. La dosificación del principio activo depende de la enfermedad que debe tratarse, y de la especie, edad, peso y condición individual, condiciones farmacocinéticas individuales y la forma de administración.

La invención también se refiere a composiciones farmacéuticas para su uso en un método para el tratamiento terapéutico del organismo humano o animal y a un procedimiento para la preparación de las mismas (especialmente como agentes en el tratamiento de tumores).

Se da preferencia a una composición farmacéutica adecuada para la administración a un animal de sangre caliente, especialmente a un ser humano, que padece una enfermedad que responde a la inhibición de una proteína cinasa, especialmente psoriasis o un tumor, que comprende un compuesto de fórmula I, o una sal del mismo, en el que los grupos formadores de sal están presentes en una cantidad eficaz en la inhibición de la proteína cinasa, junto con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Las composiciones farmacéuticas comprenden desde aproximadamente el 1% hasta aproximadamente el 95% de principio activo, las formas de administración en forma de dosis única comprenden preferiblemente desde aproximadamente el 20% hasta aproximadamente el 90% de principio activo y las formas de administración que no son en forma de dosis única comprenden preferiblemente desde aproximadamente el 5% hasta aproximadamente el 20% de principio activo. Las formas de dosis unitaria son, por ejemplo, grageas, comprimidos, ampollas, viales, supositorios o cápsulas. Otras formas de administración son, por ejemplo, pomadas, cremas, pastas, espumas, tinturas, lápices labiales, gotas, aerosoles, dispersiones, etc. Ejemplos son cápsulas que comprenden desde aproximadamente 0,05 g hasta aproximadamente 1,0 g del principio activo.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se preparan de una manera en sí conocida, por ejemplo por medio de procedimientos de mezclado, granulado, confección, disolución o liofilización convencionales.

Se utilizan preferiblemente las soluciones del principio activo, y también las suspensiones o dispersiones, especialmente las soluciones, dispersiones o suspensiones acuosas isotónicas, siendo posible que tales soluciones, suspensiones o dispersiones puedan prepararse antes de su uso, por ejemplo, en el caso de composiciones liofilizadas que contienen el principio activo solo o junto con un excipiente, por ejemplo manitol. Las composiciones farmacéuticas pueden esterilizarse y/o pueden comprender excipientes, por ejemplo conservantes, estabilizadores, agentes humectantes y/o emulsionantes, solubilizantes, sales para regular la presión osmótica y/o tampones, y se preparan de una manera en sí conocida, por ejemplo por medio de procedimientos de disolución o liofilización convencionales. Dichas soluciones o suspensiones pueden comprender sustancias que aumentan la viscosidad, tales como carboximetilcelulosa de sodio, carboximetilcelulosa, dextrano, polivinilpirrolidona o gelatina.

Las suspensiones en aceite comprenden como componente de aceite los aceites vegetales, sintéticos o semisintéticos habituales para fines de inyección. Deben mencionarse como tales especialmente los ésteres de ácidos grasos líquidos que contienen como componente ácido un ácido graso de cadena larga, que tiene desde 8 hasta 22, especialmente desde 12 hasta 22 átomos de carbono, por ejemplo ácido láurico, ácido tridecílico, ácido mirístico, ácido pentadecílico, ácido palmítico, ácido margárico, ácido esteárico, ácido araquídico, ácido behénico o ácidos insaturados correspondientes, por ejemplo ácido oleico, ácido elaídico, ácido erúcico, ácido brasídico o ácido linoleico, si se desea con la adición de antioxidantes, por ejemplo vitamina E, \beta-caroteno o 3,5-di-terc-butil-4-hidroxitolueno. El componente de alcohol de estos ésteres de ácido graso tiene un máximo de 6 átomos de carbono y es un alcohol mono o polihidroxilado, por ejemplo, mono, di o trihidroxilado, por ejemplo, metanol, etanol, propanol, butanol o pentanol o los isómeros de los mismos, pero especialmente glicol y glicerol. Por tanto, deben mencionarse los siguientes ejemplos de ésteres de ácidos grasos: oleato de etilo, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, "Labrafil M 2375" (trioleato de polioxietilenglicerol, Gattefossé, Paris), "Labrafil M 1944 CS" (glicéridos poliglicosilados insaturados preparados mediante alcohólisis de aceite de semilla de albaricoque y que consisten en éster de glicéridos y de polietilenglicol; Gattefossé, Francia), "Labrasol" (glicéridos poliglicosilados saturados preparados mediante alcohólisis de TCM y que consisten en éster de glicéridos y de polietilenglicol; Gattefossé, Francia) y/o "Miglyol 812" (triglicérido de ácidos grasos saturados con una longitud de cadena de C_{8} a C_{12}, Hüls AG, Alemania), pero especialmente aceites vegetales, tales como aceite de algodón, aceite de almendra, aceite de oliva, aceite de ricino, aceite de sésamo, aceite de soja y más especialmente aceite de cacahuete.

Las composiciones para inyección se preparan de manera habitual en condiciones estériles; se aplica lo mismo también a la introducción de composiciones, por ejemplo, en ampollas o viales y al cierre de los envases.

Las composiciones farmacéuticas para administración oral pueden obtenerse, por ejemplo, mediante combinación del principio activo con uno o más vehículos sólidos, si se desea, granulando una mezcla resultante y procesando la mezcla o los gránulos, si se desea, y si es necesario mediante la adición de excipientes adicionales, para formar comprimidos o núcleos de grageas.

Los excipientes adecuados son especialmente cargas, tales como azúcares, por ejemplo lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol, preparaciones de celulosa y/o fosfatos de calcio, por ejemplo, fosfato de tricalcio o hidrogenofosfato de calcio, y también aglutinantes, tales como almidones, por ejemplo almidón de maíz, de trigo, de arroz o de patata, metilcelulosa, hipromelosa, carboximetilcelulosa y/o polivinilpirrolidona de sodio, y/o, si se desea, disgregantes, tales como los almidones anteriormente mencionados, también almidón de carboximetilo, polivinilpirrolidona reticulada o ácido algínico o una sal del mismo, tal como alginato de sodio. Excipientes adicionales son especialmente fluidificadores y lubricantes, por ejemplo, ácido silícico, talco, ácido esteárico o sales de los mismos, tales como estearato de magnesio o calcio, y/o polietilenglicol, o derivados de los mismos.

Los núcleos de grageas pueden dotarse de recubrimientos adecuados, opcionalmente entéricos, utilizándose, entre otros, soluciones de azúcares concentradas que pueden contener goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, o soluciones de recubrimiento en disolventes orgánicos o mezclas de disolventes adecuados, o para la producción de recubrimientos entéricos, soluciones de preparaciones de celulosa adecuadas, tales como ftalato de acetilcelulosa o ftalato de hipromelosa. Pueden añadirse colorantes o pigmentos a los recubrimientos de los comprimidos o grageas, por ejemplo con fines de identificación o para indicar diferentes dosis de principio activo.

Las composiciones farmacéuticas que pueden administrarse por vía oral también incluyen cápsulas duras compuestas de gelatina, y también cápsulas blandas, herméticamente cerradas, compuestas de gelatina y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas duras pueden contener el principio activo en forma de gránulos, por ejemplo, mezclado con cargas, tales como almidón de maíz, aglutinantes y/o deslizantes, tales como talco o estearato de magnesio, y opcionalmente estabilizantes. En las cápsulas blandas, el principio activo está preferiblemente disuelto o suspendido en excipientes líquidos adecuados, tales como ácidos grasos, aceite de parafina o polietilenglicoles líquidos o ésteres de ácidos grasos de etilen o propilenglicol, a los que también pueden añadirse estabilizantes y detergentes, por ejemplo del tipo éster de ácido graso de polioxietilensorbitano.

Otras formas orales de administración son, por ejemplo, jarabes preparados de manera habitual, que comprenden el principio activo, por ejemplo, en forma suspendida y en una concentración de aproximadamente del 5% al 20%, preferiblemente aproximadamente del 10%, o en una concentración similar que proporciona una dosis única adecuada, por ejemplo, cuando se administra en cantidades de 5 o 10 ml. También son adecuados, por ejemplo, concentrados en polvo o líquidos para la preparación de batidos, por ejemplo, en leche. Tales concentrados también pueden envasarse en cantidades de dosis única.

Las composiciones farmacéuticas adecuadas que pueden administrarse por vía rectal son por ejemplo supositorios, que consisten en una combinación del principio activo y una base de supositorio. Bases de supositorios adecuadas son, por ejemplo, triglicéridos naturales o sintéticos, hidrocarburos parafínicos, polietilenglicoles o alcanoles
superiores.

Para la administración parenteral hay soluciones acuosas especialmente adecuadas de un principio activo en forma soluble en agua, por ejemplo, en forma de sal soluble en agua, o suspensiones para inyecciones acuosas que contienen sustancias que aumentan la viscosidad, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, sorbitol y/o dextrano, y, si se desean, estabilizantes. El principio activo, opcionalmente junto con excipientes, también puede estar en formar de un producto liofilizado y puede ponerse en una solución antes de la administración parenteral mediante la adición de disolventes adecuados.

La invención también da a conocer un procedimiento o un método para el tratamiento de los estados patológicos anteriormente mencionados, especialmente aquellas enfermedades que responden a la inhibición de proteínas cinasas. Los compuestos de fórmula I pueden administrarse de manera profiláctica o terapéutica como tales o en forma de composiciones farmacéuticas, preferiblemente en una cantidad eficaz contra dichas enfermedades, a un animal de sangre caliente, por ejemplo un ser humano, que necesita tal tratamiento, usándose los compuestos especialmente en forma de composiciones farmacéuticas. En tal tratamiento, a un individuo de aproximadamente 70 kg de peso corporal se le administra una dosis diaria de desde aproximadamente 0,1 g hasta aproximadamente 5 g, preferiblemente desde aproximadamente 0,5 g hasta aproximadamente 2 g, de un compuesto de fórmula I.

Los siguientes ejemplos sirven para ilustrar la invención.

A menos que se indique lo contrario, la razón de disolventes entre sí se da en partes por volumen (v/v).

Los nombres abreviados y las abreviaturas usadas tienen los siguientes significados:

Gradientes de HPLC:

grad_{20-100/20}

20% \rightarrow 100% de a) en b) durante 20 min.

grad_{20-100}

20% \rightarrow 100% de a) en b) durante 13 min. + 5 min. al 100% de a).

grad_{5-40}

5% \rightarrow 40% de a) en b) durante 7,5 min. + 7 min. al 40% de a).

eluyente a): acetonitrilo + 0,05% de TFA; eluyente b): agua + 0,05% de TFA.

Columna (250 x 4,6 mm) rellena con material de fase inversa nucleosil C18 (5 mm de tamaño promedio de partícula, gel de sílice derivatizado de manera covalente con octadecilsilanos, Macherey & Nagel, Düren, FRG). Detección por absorción UV a 254 nm. Los tiempos de retención (t_{Ret}) se dan en minutos. Velocidad de flujo: 1 ml/min.

Abreviaturas:

abs.

absoluto (anhidro)

Boc

terc-butiloxicarbonilo

salmuera

solución saturada de cloruro de sodio

DIBAL-H

hidruro de diisobutilaluminio, 1,00 M en cloruro de metileno

DIPE

diisopropil éter

DMEU

1,3-dimetil-2-imidazolidinona

DMF

dimetilformamida

ESI-MS

Espectroscopía de masas por ionización por electrospray

HV

alto vacío

min.

minuto(s)

FAB-MS

Espectroscopía de masas por bombardeo de átomos rápidos

NMM

N-metilmorfolina

TA

temperatura ambiente

RV

evaporador rotatorio

sat.

saturado

TFA

ácido trifluoroacético

THF

tetrahidrofurano (destilado sobre sodio/benzofenona).

A menos que se indique lo contrario, los productos intermedios y los productos finales cristalinos (p.f. > aproximadamente 80ºC) mencionados en los siguientes ejemplos se secan a alto vacío a desde 60ºC hasta un máximo de 120ºC, durante desde 6 horas hasta un máximo de 24 horas.

Ejemplo 1

Con la exclusión de humedad, se añaden 171 \mul (0,84 mmol) de anhídrido piválico a 0ºC a 200 mg (0,767 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo-[3,4-d]pirimidina en 4 ml de piridina/ cloruro de metileno (1:1) y se agita a TA durante 3 días. Se filtra la suspensión espesa resultante. El residuo se lava con cloruro de metileno y se seca, produciendo 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(2,2-dimetil-propionil-amino)-1H-pirazolo-[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20}) = 15,0; FAB-MS: (M+H)^{+} = 345.

El material de partida se obtiene como sigue:

Etapa 1.1

Se añaden 43,6 ml (400 mmol) de bencilamina a una suspensión de 68,4 g (400 mmol) de 3,3-bis(metilsulfanil)-2-ciano-acrilonitrilo (Maybridge) en 400 ml de acetato de etilo. La solución transparente se calienta lentamente hasta 70ºC (\rightarrow evolución de MeSH), se agita a esa temperatura durante 1,5 horas, se enfría a TA y se concentra por evaporación, produciendo 3-bencilamino-3-metilsulfanil-2-ciano-acrilonitrilo cristalino; ^{1}H-RMN: (CD_{3}OD) 7,36 (m, 5H), 4,77 (s, 2H), 2,59 (s, 3H).

Etapa 1.2

Se añaden gota a gota 24 ml (0,48 mol) de hidracina hidratada a una solución de 92 g (0,4 mol) de 3-bencilamino-3-metilsulfanil-2-ciano-acrilonitrilo en 400 ml de metanol, aumentándose la temperatura hasta 40ºC. La mezcla de reacción se calienta lentamente hasta ebullición (\rightarrow evolución de MeSH!), se lleva a ebullición durante 2 horas, se enfría a TA y se concentra por evaporación hasta un volumen residual de = 200 ml. La dilución con dietil éter, la filtración y el lavado con dietil éter producen 5-amino-3-bencilamino-1H-pirazolo-4-carbonitrilo (Spectrochimica Acta, 47A, 1635 (1991)]; p.f. 150-152ºC; CCF: R_{f} = 0,41 (acetato de etilo).

Etapa 1.3

Bajo una atmósfera de nitrógeno, se lleva a ebullición a reflujo una suspensión de 74,3 g (348 mmol) de 5-amino-3-bencilamino-1H-pirazolo-4-carbonitrito en 1,0 litro de tolueno durante 2 horas con 70,1 ml (95%; 409 mmol) de N,N-dimetilformamida-dietil-acetal. El enfriamiento a TA, la filtración con succión y el lavado con dietil éter producen N'-(3-bencilamino-4-ciano-1H-pirazol-5-il)-N,N-dimetil-formamidina; p.f. 197-200ºC; CCF: R_{f} = 0,50 (acetato de etilo).

Etapa 1.4

Se disuelven 60 g (0,47 mol) de 3-cloro-anilina en 255 ml (0,56 mol) de HCl metanólico 2,2N. La concentración y la agitación del residuo en dietil éter producen, tras filtración y secado, clorhidrato de 3-cloro-anilina.

Etapa 1.5

Con la exclusión de humedad, se suspendieron 79,2 g (295 mmol) de N'-(3-bencilamino-4-ciano-1H-pirazol-5-il)-N,N-dimetil-formamidina en 700 ml de metanol; se añaden 60,6 g (369 mmol) de clorhidrato de 3-cloro-anilina y la mezcla se lleva a ebullición a reflujo durante 22 horas. La solución de reacción de color amarillo resultante se enfría
a \approx 50ºC y se vierte en 2 litros de agua helada, 200 ml de solución de NaHCO_{3} sat. y 1 litro de acetato de etilo. La fase acuosa se separa y se extrae dos veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas se lavan dos veces con agua, solución de NaHCO_{3} sat., agua y salmuera, se secan (Na_{2}SO_{4}) y se concentran por evaporación hasta un volumen residual = 1,5 litros. El sembrado y la dilución con 300 ml de dietil éter producen 3-bencilamino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo(3,4-d)pirimidina cristalino; p.f. 214-217ºC; CCF: R_{f} = 0,29 (acetato de etilo:hexano = 1:1).

Etapa 1.6

Partiendo de una suspensión de 75,8 g (216 mmol) de 3-bencilamino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina en 1,5 litros de benceno, se separa parte del disolvente por destilación con el fin de eliminar el agua residual. Después, con la exclusión de humedad, se añade la suspensión a 84 g de cloruro de aluminio (Fluka, Buchs/ Suiza) en 500 ml de benceno y se calienta a 80ºC durante 2,5 horas. La mezcla de reacción se enfría hasta TA, la fase de benceno sobrenadante se vierte en 2 kg de agua helada (dejando atrás un residuo aceitoso de color verde), y el sólido que se separa se extrae por filtración con succión y se lava a fondo con agua (\rightarrow K_{1}). Usando un evaporador rotatorio, el benceno se separa por evaporación del filtrado y la fase acuosa que se deja atrás se añade al residuo aceitoso de color verde, junto con 1 kg de hielo y se hidroliza a 40ºC durante 2 horas. El producto cristalino se separa por filtración con succión y se lava con agua (\rightarrow K_{2}). K_{1} y K_{2} se recogen en 1 litro de metanol, se acidifican con HCl acuoso 4N y se concentran parcialmente por evaporación. Se añade agua y el metanol se separa completamente por evaporación. Los cristales se separan por filtración y se lavan con agua. Se repite el mismo procedimiento de purificación usando una solución de Na_{2}CO_{3} semisaturada/metanol y agua/metanol. La agitación a 50ºC en metanol, la precipitación con dietil etil, la filtración y el secado producen 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 232-234ºC; CCF: R_{f} = 0,50 (acetato de etilo).

Ejemplo 2

De manera análoga al ejemplo 1, se añaden 197 mg (0,84 mmol) de anhídrido benzoico a 0ºC a 200 mg (0,767 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina (véase etapa 1.6) en 4 ml de piridina/cloruro de metileno (1:1) y se dejan reaccionar durante 6 horas a 0ºC y finalmente durante 16 horas a TA para formar 3-benzoilamino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20})=14,7; FAB-MS: (M+H)^{+} =
365.

Ejemplo 3

Con la exclusión de aire, se añaden 83 \mul (0,84 mmol) de cloruro de ácido 2-furancarboxílico a 0ºC a 200 mg (0,767 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) en 4 ml de piridina/cloruro de metileno (1:1) y se agita a 0ºC durante 1 hora. La mezcla de reacción se vierte en 30 ml de agua helada y se extrae con una gran cantidad (poca solubilidad) de cloruro de metileno/metanol/etanol. Las fases orgánicas se lavan con agua y salmuera, se secan (Na_{2}SO_{4}) y se concentran por evaporación. La agitación en 2 ml de etanol caliente y la filtración producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(fur-2-il-carbonil-amino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20/100/20})=12,7; FAB-MS: (M+H)^{+} = 355.

Ejemplo 4

De manera análoga al ejemplo 1, se hacen reaccionar 200 mg (0,767 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) en 4 ml de piridina/cloruro de metileno 1:1 a 0ºC con 251 mg (1,05 mmol) de anhídrido de tiofeno-2-carboxílico. La precipitación de una solución en 2 ml de DMSO con 200 ml de solución de ácido cítrico (0,5 g/200 ml) produce 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(tien-2-il-carbonilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20})=14,4; FAB-MS: (M+H)^{+} =371.

Ejemplo 5

Bajo una atmósfera de nitrógeno, se añaden 337 \mul (3,07 mmol) de NMM y 219 \mul (1,68 mmol) de cloroformiato de isobutilo a -20ºC a 189 mg (1,53 mmol) de ácido picolínico en 3,2 ml de THF (\rightarrowsuspensión blanca) y después se agita durante 30 min. Se añaden después 400 mg (1,53 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y se deja que la mezcla de reacción suba hasta temperatura ambiente y se agita durante 1 hora para completar la reacción. La mezcla de reacción se vierte en 100 ml de agua y el producto bruto se separa por filtración y se lava con agua. La agitación a 100ºC en 5 ml de DMSO, la adición de 25 ml de etanol y la filtración da como resultado 4-(3-clorofenilamino)-3-(pirid-2-il-carbonilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 276-279ºC; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20}) =15,2; FAB-MS: (M+H)^{+} = 366.

Ejemplo 6

Bajo una atmósfera de nitrógeno, se añaden 320 \mul (2,9 mmol) de NMM y 210 \mul (1,6 mmol) de cloroformiato de isobutilo a -20ºC a 250 mg (1,5 mmol) de ácido 2,3-metilendioxibenzoico [para la preparación véase: Chem. Ber. 104 (1971) 2347] en 3,2 ml de THF y después se agita durante 45 min. Se añaden después 378 mg (1,45 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo-[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y se deja que la mezcla de reacción suba hasta TA y se agita durante 1 hora para completar la reacción. La mezcla de reacción se vierte en 100 ml de agua y se agita durante 1 hora y el producto bruto se separa por filtración y se lava con agua y etanol. La disolución en 3 ml de DMSO a \approx 110ºC, el enfriamiento, el filtrado y el lavado con etanol producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(2,3-metilendioxi-benzoilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20})=16,5; FAB-MS: (M+H)^{+} = 409.

Ejemplo 7

De manera análoga al ejemplo 5, se activan 263 mg (1,53 mmol) de ácido piperonílico (Fluka; Buchs/Suiza) en 3,4 ml de THF y 337 \mul (3,07 mmol) de NMM con 219 \mul (1,68 mmol) de cloroformiato de isobutilo y después se hacen reaccionar con 400 mg (1,53 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6). La cristalización en una mezcla caliente de 2 ml de DMSO y 16 ml de etanol produce 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(3,4-metilendioxi-benzoilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 304-305ºC; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20})=14,8; FAB-MS: (M+H)^{+} =409.

Ejemplo 8

De manera análoga al ejemplo 5, se activan 386 mg (1,53 mmol) de N-benciloxicarbonil-(D,L)-valina en 3,2 ml de THF y 337 \mul (3,07 mmol) de NMM con 219 \mul (1,68 mmol) de cloroformiato de isobutilo y después se hacen reaccionar con 400 mg (1,53 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6). La mezcla de reacción se concentra por evaporación; se añade acetato de etilo al residuo y la suspensión de acetato de etilo se lava con solución de HCl 2N, solución de NaHCO_{3} sat. y salmuera y finalmente el producto bruto insoluble se separa por filtración. La cristalización en una mezcla caliente de 1,1 ml de DMSO y 10 ml de etanol producen rac.-3-([N-benciloxicarbonil-valil]-amino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20})=14,9; FAB-MS: (M+H)^{+}=494.

Ejemplo 9

De manera análoga al ejemplo 5, se activan 514 mg (2,3 mmol) de N-benciloxicarbonil-(D/L)-alanina en 4,8 ml de THF y 506 \mul (4,6 mmol) de NMM con 349 \mul (2,6 mmol) de cloroformiato de isobutilo y después se hace reaccionar con 600 mg (2,3 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6). La disolución del producto bruto en 2 ml de DMSO a 100ºC, la adición de 30 ml de etanol y el enfriamiento producen rac.-3-{(N-benciloxicarbonil-alanil)-amino}-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 238-240ºC; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20})=13,5; FAB-MS: (M+H)^{+} = 466.

Ejemplo 10

De manera análoga al ejemplo 5, se activan 436 mg (2,3 mmol) de N-etoxicarbonil-(D/L)-valina [preparado a partir de (D/L)-valina como se describe en J. Org. Chem. 60,7256 (1995)] en 4,8 ml de THF y 506 \mul (4,6 mmol) de NMM con 349 \mul (2,6 mmol) de cloroformiato de isobutilo y se hacen reaccionar con 600 mg (2,3 mmol) de 3-amino-4-(3-clorofenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6). La disolución en DMSO (2 ml) a 100ºC, la adición de 25 ml de etanol y el enfriamiento producen rac.-4-(3-cloro-fenilamino)-3-{(N-etoxi-carbonil-valil)-amino}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20})=13,2; FAB-MS: (M+H)^{+} = 432.

Ejemplo 11

De manera análoga al ejemplo 5, se activan 180 mg (1,03 mmol) de N-metoxicarbonil-(D/L)-valina [preparado a partir de (D/L)-valina como se describe en Chem. Lett. 705 (1980)] en 3,2 ml de THF y 260 \mul (2,4 mmol) de NMM con 156 \mul (1,13 mmol) de cloroformiato de isobutilo y se hacen reaccionar con 268,5 mg (1,03 mmol) de 3-amino-4-(3-clorofenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6). La agitación en DMSO (1 ml) a 100ºC, la adición de 7 ml de etanol y 7 ml de DIPE y el enfriamiento producen rac.-4-(3-cloro-fenilamino)-3-{(N-metoxicarbonil-valil)-amino}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 12,4; FAB-MS: (M+H)^{+} = 418.

Ejemplo 12

En 4 ml de THF/DMEU 1:3, se hidrogenan 40 mg (0,08 mmol) de rac.-3-([N-benciloxicarbonil-valil]-amino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase ejemplo 8) en presencia de 10 mg de Pd/C (10%) y 10 \mul de 1,2-dicloro-benceno. El catalizador se separa por filtración y el filtrado se concentra parcialmente por evaporación en un evaporador rotatorio, se vierte en 30 ml de agua y se filtra de nuevo, y el filtrado se concentra por evaporación a alto vacío, primero a TA y finalmente a 50ºC para producir rac.-4-(3-cloro-fenilamino)-3-(valil-amino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 9,2; FAB-MS: (M+H)^{+} = 360.

Ejemplo 13

(S)-3-[3-(dimetilamino-carbonilamino-metil)-fenilamino]-4-(1-fenil-etilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina se
obtiene según los procedimientos descritos en este texto.

Ejemplo 14

De manera análoga al ejemplo 5, se activan 502 mg (2,86 mmol) de N-isobutiloxicarbonil-glicina en 5,9 ml de THF y 580 \mul (5,3 mmol) de NMM con 375 \mul (2,86 mmol) de cloroformiato de isobutilo y después se hacen reaccionar con 745 mg (2,86 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6). La agitación en 7,5 ml de etanol en ebullición y el filtrado en caliente producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-([N-isobutiloxicarbonil-glicil]-amino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20}) = 12,8; FAB-MS: (M+H)^{+} = 418.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 14.1

Se añaden 4,3 ml de dioxano y 872 \mul (6,66 mmol) de cloroformiato de isobutilo a una solución de 500 mg (6,66 mmol) de glicina en 14 ml de solución NaOH 2N. La mezcla se agita durante la noche a TA y después se extrae con cloruro de metileno. La fase acuosa se acidifica con solución de HCl 4N y se extrae dos veces con cloruro de metileno. El secado (Na_{2}SO_{4}) y la concentración de los extractos por evaporación producen N-isobutiloxicarbonil-glicina; FAB-MS: (M+H)^{+} = 176; ^{1}H-RMN (CDCl_{3}) 8,0 (sa), 6,93 y 5,21 (2m, 1H), 4,02 y 3,88 (2m, cada 2H), 1,93 (m, 1H), 0,94 (d, J=7, 6H).

Ejemplo 15

De manera análoga al ejemplo 5, se activan 283 mg (1,49 mmol) de N-metoxicarbonil-(D/L)-terc-leucina en 3,3 ml de THF y 329 \mul (2,99 mmol) de NMM con 214 \mul (1,64 mmol) de cloroformiato de isobutilo y después se hacen reaccionar con 388 mg (1,49 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) durante 20 horas. La cromatografía en columna (SiO_{2}; tolueno/acetato de etilo = 1:1) produce rac.-4-(3-cloro-fenilamino)-3-([2-metoxicarbonilamino-3,3-dimetil-butiril]-amino)-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20}) = 12,1; FAB-MS: (M+H)^{+} = 432.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 15.1

Se añaden 293 \mul (3,81 mmol) de cloroformiato de metilo a una solución de 0,500 g (3,81 mmol) de (D/L)-terc-leucina en una mezcla de 8 ml de solución de hidróxido de sodio acuoso 2N y 2,5 ml de dioxano y la solución de reacción se calienta a 60ºC durante 14 horas. Tras enfriamiento a TA, la solución de reacción se lava con cloruro de metileno. La fase acuosa se acidifica con ácido clorhídrico acuoso 4N, se satura con cloruro de sodio y se extrae tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinan, se secan (Na_{2}SO_{4}) y se concentran por evaporación para producir N-(metoxicarbonil)-(D/L)-terc-leucina; FAB-MS: (M+H)^{+} = 190.

Ejemplo 16

De manera análoga al ejemplo 5, se activan 365 mg (1,58 mmol) de N-isobutiloxicarbonil-(D/L)-terc-leucina en 3,3 ml de THF y 347 \mul (3,15 mmol) de NMM con 226 \mul (1,73 mmol) de cloroformiato de isobutilo y después se hacen reaccionar con 411 mg (1,58 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) durante 20 horas. La cromatografía en columna (SiO_{2}; tolueno/acetato de etilo 1:1) y la agitación en acetato de etilo/DIPE producen rac.-4-(3-cloro-fenilamino)-3-([2-isobutiloxicarbonilamino-3,3-dimetil-butiril]-amino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 15,5; FAB-MS: (M+H)^{+} = 474.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 16.1

Se añaden 498 \mul (3,81 mmol) de cloroformiato de isobutilo a una solución de 0,500 g (3,81 mmol) de (D/L)-terc-leucina en una mezcla de 8 ml de solución de hidróxido de sodio acuoso 2N y 2,5 ml de dioxano y la solución de reacción se agita durante 14 horas. La solución de reacción se lava después con cloruro de metileno. La fase acuosa se acidifica con ácido clorhídrico acuoso 4N, se satura con cloruro de sodio y se extrae tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos se combinan, se secan (Na_{2}SO_{4}) y se concentran por evaporación para producir N-isobutiloxicarbonil-(D/L)-terc-leucina: FAB-MS: (M+H)^{+} = 232.

Ejemplo 17

De manera análoga al ejemplo 1, se hacen reaccionar 400 mg (1,53 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.,6) en 8 ml de piridina/ cloruro de metileno 1:1 a 0ºC con 401 \mul (1,73 mmol) de anhídrido caproico para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-hexanoilamino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (18 horas a TA): HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100})=12,4; EM: (M)^{+} = 358, 259 (M-C_{6}H_{11}O).

Ejemplo 18

De manera análoga al ejemplo 1, se hacen reaccionar 400 mg (1,53 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) en 8 ml de piridina/ cloruro de metileno 1:1 a 0ºC con 288 \mul (1,68 mmol) de cloruro de ácido octanoico para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-octanoilamino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (18 horas a TA): HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100})=14,5; FAB-MS: (M+H)^{+} = 387.

Ejemplo 19

Con la exclusión de humedad, se añaden 196 mg (1,12 mmol) de anhídrido metanosulfónico a 0ºC a 200 mg (0,767 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) en 4 ml de piridina/ cloruro de metileno 1:1 y la mezcla se agita durante 2 horas en un baño de hielo y durante la noche a TA. Se añaden 9 ml de DIPE y 2 ml de hexano a la solución resultante de color amarillo y el producto que precipita se separa por filtración, se disuelve en 2 ml de etanol en ebullición y se cristaliza por la adición de 1 ml de agua, produciendo 4-(3-cloro-fenilamino)-3-metanosulfonilamino-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 11,3; FAB-MS: (M+H)^{+} = 339.

Ejemplo 20

Con la exclusión de humedad, se añaden 275 mg (0,844 mmol) de anhídrido tolueno-4-sulfónico a 0ºC a 200 mg (0,767 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) en 4 ml de piridina/ cloruro de metileno 1:1 y se agita en un baño de hielo durante 7 horas. Se añaden otros 275 mg de anhídrido tolueno-4-sulfónico y la mezcla de reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente para completar la reacción. La mezcla de reacción se vierte en agua y se extrae con 3 porciones de cloruro de metileno. Las fases orgánicas se lavan con agua y salmuera, se secan sobre Na_{2}SO_{4} y se concentran por evaporación. La cristalización fraccionada en etanol caliente y DMSO/etanol caliente (1:10) produce 4-(3-cloro-fenilamino)-3-toluenosulfonilamino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20})=147; FAB-MS: (M+H)^{+} = 415.

Ejemplo 21

Con la exclusión de humedad, se suspendieron 200 mg (0,767 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) en 3,2 ml de tolueno; se añaden 150 \mul (0,87 mmol) de N,N-dimetilformamida-dietil-acetal en 6 ml de tolueno y la mezcla de reacción se calienta hasta ebullición. Tras 5 horas, se lleva a cabo la filtración, seguida de lavado con tolueno. Se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(dimetilamino-metilenamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 243-245ºC; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20})=97; FAB-MS: (M+H)^{+} = 316.

Ejemplo 22

Con la exclusión de aire, se calientan hasta ebullición 1,86 g (7,49 mmol) de N'-[3-(morfolin-4-il)-4-ciano-1H-pirazol-5-il]-N,N-dimetil-formamidina en 45 ml de metanol con 1,84 g (11,2 mmol) de clorhidrato de 3-cloro-anilina, tiempo durante el que se disuelve temporalmente el sólido. Tras aproximadamente 30 min., se separa de nuevo un precipitado. Tras 8 horas, la mezcla de reacción se enfría, se filtra y se lava con metanol y DIPE. La agitación del producto bruto en una mezcla en ebullición de 40 ml de etanol, 20 ml de cloroformo y 20 ml de dioxano produce 4-(3-cloro- fenilamino)-3-(morfolin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 275-276ºC; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20}) = 11,6.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 22.1

Se calienta una suspensión de 8,51 g (50 mmol) de 3,3-bis(metilsulfanil)-2-ciano-acrilonitrilo (Maybridge) y 4,36 ml (50 mmol) de morfolina en 100 ml de isopropanol a 80ºC bajo una atmósfera de atmósfera de nitrógeno durante 3 horas. El enfriamiento, el filtrado y el lavado con isopropanol y DIPE producen 3-(morfolin-4-il)-3-metilsulfanil-2-ciano-acrilonitrilo; p.f. 140-141ºC; CCF: R_{f} = 0,39 (acetato de etilo/tolueno = 1:1).

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Etapa 22.2

Se añaden 2,78 ml (56 mmol) de hidracina hidratada a una suspensión de 9,8 g (46,8 mmol) de 3-(morfolin-4-il)-3-metilsulfanil-2-ciano-acrilonitrilo en 60 ml de metanol y se calienta hasta ebullición, disolviéndose el sólido. Tras 3,5 horas, la mezcla de reacción se enfría a TA, se concentra por evaporación y se recristaliza a partir de = 70 ml etanol en ebullición, produciendo 5-amino-3-(morfolin-4-il)-1H-pirazolo-4-carbonitrilo: p.f. 199-201ºC; CCF: R_{f} = 0,19 (acetato de etilo/tolueno = 3:1).

Etapa 22.3

Bajo una atmósfera de nitrógeno, se lleva a ebullición a reflujo una suspensión de 4,00 g (20,7 mmol) de 5-amino-3-(morfolin-4-il)-1H-pirazolo-4-carbonitrilo en 85 ml de tolueno durante 5 horas con 4,17 ml (97%; 23,6 mmol) de N,N-dimetilformamida-dietil-acetal, tiempo durante el que se disuelve el sólido. El enfriamiento a TA (\rightarrow cristalización), la filtración con succión y el lavado con tolueno y hexano producen N'-[3-(morfolin-4-il)-4-ciano-1H-pirazol-5-il]-N,N-dimetil-formamidina; p.f. 182-183ºC; CCF: R_{f}= 0,20 (acetato de etilo).

Etapa 22.4

Se disuelven 60 g (0,47 mol) de 3-cloro-anilina en 255 ml (0,56 mol) de HCl (2,2N en metanol). La concentración y la agitación del residuo en dietil éter produce, tras filtración y secado (40ºC, HV), clorhidrato de 3-cloro-anilina.

Ejemplo 23

Con la exclusión de aire, se calientan hasta ebullición 496,6 mg (2,00 mmol) de N'-[3-(morfolino-4-il)-4-ciano-1H-pirazol-5-il]-N,N-dimetil-formamidina en 30 ml de metanol 543 mg (3,00 mmol) de clorhidrato de 3-cloro-4-fluoroanilina. Tras 9 horas, la mezcla de reacción se enfría y se separa por filtración 4-(3-cloro-4-fluoro-fenilamino)-3-(morfolin-4-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina y se lava con metanol y DIPE; p.f. 262-264ºC; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20}) =
11,8.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 23.1

Se disuelven 1,75 g (12 mmol) de 3-cloro-4-fluoro-anilina en 20 ml de metanol y se añaden 3 ml (12 mmol) de HCl (4,0N). La concentración y el secado (40ºC, HV) producen clorhidrato de 3-cloro-4-fluoro-anilina.

Ejemplo 24

Con la exclusión de aire, se calientan hasta ebullición 16,2 g (46,6 mmol) de N'-[3-(4-terc-butoxicarbonil-piperazin-1-il)-4-ciano-1H-pirazol-5-il]-N,N-dimetil-formamidina en 130 ml metanol con 11,47 g (70 mmol) de clorhidrato de 3-cloro-anilina. Tras 9 horas, la mezcla de reacción se enfría, se filtra y se lava con metanol y DIPE. La agitación del producto bruto en etanol en ebullición, el enfriamiento y la filtración producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-terc-butiloxicarbonil-piperazin-1-il)-1H -pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 15,7; IR (KBr) entre otros 1706s, 1631s, 1610s, 1589s, 1508m, 1482s, 1425m, 1364m, 1304m, 1283m, 1245m, 1170m, 1122m.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 24.1

Con la exclusión de aire, se calientan hasta ebullición 7,22 g (42,4 mmol) de 3,3-bis(metilsulfanil)-2-ciano-acrilonitrilo (Maybridge), 7,90 g (42,4 mmol) de terc-butil éster del ácido piperazina-N-carboxílico (Aldrich; Milwaukee/EE.UU.) y 0,24 g (3 mmol) de piridina en 75 ml de isopropanol durante 4 horas. El enfriamiento, la concentración por evaporación y el secado a alto vacío producen 3-(4-terc-butoxicarbonil-piperazin-1-il)-3-metilsulfanil-2-ciano-acrilonitrilo; C_{14}H_{20}N_{4}SO_{2}: calculado C 54,52%, H 6,54%, N 18,17%, S 10,40%: hallado 54,37%, H 6,50%, N 17,85%, S 10,25%.

Etapa 24.2

Con la exclusión de aire, se calientan hasta ebullición 15,0 g (48,7 mmol) de 3-(4-terc-butoxicarbonil-piperazin-1-il)-3-metilsulfanil-2-ciano-acrilonitrilo y 2,93 g (58,4 mmol) de hidracina hidratada en 85 ml de metanol. Tras 5,5 horas, la mezcla de reacción se enfría y se concentra por evaporación para producir 5-amino-3-(4-terc-butoxicarbonil-piperazin-1-il)-1H-pirazolo-4-carbonitrilo; análisis calculado para C_{13}H_{20}N_{6}O_{2} (+ 0,18 de H_{2}O): C 52,83%, H 6,94%, N 28,43%, H_{2}O 1,10%; hallado C 52,64%, H 6,87%, N 28,35%, H_{2}O 1,07%.

Etapa 24.3

Bajo una atmósfera de nitrógeno, se lleva a ebullición a reflujo una suspensión de 12,87 g (44 mmol) de 5-amino-3-(4-terc-butoxicarbonilpiperazin-1-il)-1H-pirazolo-4-carbonitrilo en 150 ml de tolueno durante 6 horas con 18,1 ml (90%; 94 mmol) de N,N-dimetilformamida-dietil-acetal. El enfriamiento, la concentración por evaporación y la agitación en DIPE producen N'-[3-(4-terc-butoxicarbonil)-piperazin-1-il)-4-ciano-1H-pirazol-5-il]-N,N-dimetil-formamidina; análisis calculado para C_{16}H_{25}N_{7}O_{2} (+ 0,07 de H_{2}O): C 55,12%, H 7,27%, N 28,12%, H_{2}O 0,36%; hallado C 55,14%, H 7,24%, N 27,74%, H_{2}O 0,34%.

Ejemplo 25

Bajo una atmósfera de nitrógeno, se agitan 2,0 g (4,65 mmol) de 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-terc-butiloxicarbonil-piperazin-1-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase ejemplo 24) en 80 ml de dioxano y 80 ml de HCl/dioxano (4N) a 60ºC durante 2 horas. El enfriamiento y el filtrado producen diclorhidrato de 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(piperazin-1-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; análisis calculado para C_{15}H_{16}N_{7}Cl \cdot 2HCl (+ 0,14 de H_{2}O + 5% de dioxano): C 44,93%, H 4,78%, N 22,97%, Cl 24,91%, H_{2}O 0,68%; hallado C 45,12%, H 4,73%, N 23,16%, Cl 24,67%, H_{2}O 0,68%; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20}) = 8,0.

Ejemplo 26

Con enfriamiento en hielo, se añade una solución de 48,5 mg (0,37 mmol) de anhídrido propiónico en 10 ml de dioxano a 100 mg (0,248 mmol) de diclorhidrato de 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(piperazin-1-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase ejemplo 25) y 103 mg (0,74 mmol) de carbonato de potasio en 10 ml de agua. La mezcla se calienta lentamente a TA, se agita durante 5 horas, se diluye después con cloruro de metileno y se lava dos veces con agua y salmuera. Las fases inorgánicas se extraen dos veces con cloruro de metileno; las fases orgánicas se secan (Na_{2}SO_{4}) y se concentran por evaporación. La agitación en =10 ml de etanol produce 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-propionil-piperazin-1-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 247,250ºC; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 11,8; FAB-MS: (M+H)^{+}= 366.

Ejemplo 27

De manera análoga al ejemplo 26, se hacen reaccionar 100 mg (0,248 mmol) de diclorhidrato de 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(piperazin-1-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina y 103 mg (0,74 mmol) de carbonato de potasio en 10 ml de agua con 38 mg (0,37 mmol) de anhídrido acético en 10 ml de dioxano para formar 3-(4-acetil-piperazin-1-il)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 10,8; FAB-MS: (M+H)^{+} = 372.

Ejemplo 28

Bajo una atmósfera de nitrógeno, se añaden 57,6 mg (0,41 mmol) de cloruro de benzoilo a 0ºC a 150 mg (0,373 mmol) de diclorhidrato de 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(piperazin-1-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina en 6 ml de cloruro de metileno/piridina (1:1). Tras 17 horas de agitación a 0ºC, se añade 1 equivalente adicional de cloruro de benzoilo y la mezcla de reacción se agita después durante otras 6 horas más. La mezcla se diluye con cloruro de metileno y se lava dos veces con agua y salmuera. Las fases inorgánicas se extraen dos veces con cloruro de metileno; las fases orgánicas se secan (Na_{2}SO_{4}) y se concentran por evaporación. La agitación en una pequeña cantidad de acetato de etilo produce 3-(4-benzoil-piperazin-1-il)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 277-281ºC; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20}) = 13,5; FAB-MS: (M+H)^{+} = 434.

Ejemplo 29

En una ampolla, se añaden 150 mg (1,25 mmol) de cloruro de ácido piválico y 10 mg de 4-dimetilaminopiridina a 150 mg (0,373 mmol) de diclorhidrato de 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(piperazin-1-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina en 6 ml de cloruro de metileno/piridina (1:1). Tras 8 días de agitación a 70ºC, la mezcla de reacción se enfría, se filtra y se lava con cloruro de metileno. El filtrado se concentran por evaporación, y el residuo se disuelve en DMSO y se vierte en agua. La filtración y el lavado con agua dan 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-pivaloil-piperazin-1-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 13,8; FAB-MS: (M+H)^{+} = 414.

Ejemplo 30

De manera análoga al ejemplo 26, se hacen reaccionar 100 mg (0,248 mmol) de diclorhidrato de 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(piperazin-1-il)-1N-pirazolo[3,4-d]pirimidina y 103 mg (0,74 mmol) de carbonato de potasio en 10 ml de agua con 81,5 mg (0,37 mmol) de cloruro de ácido láurico en 10 ml de dioxano y se extrae. La cromatografía en columna (SiO_{2}; cloruro de metileno/acetato de etilo/ácido acético = 50:50:1) produce 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-[n-dodecanoil]-piperazin-1-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 22,6; FAB-MS: (M+H)^{+} = 512.

Ejemplo 31

Bajo una atmósfera de nitrógeno, se añaden 75 mg (0,74 mmol) de NMM y 110 \mul (0,84 mmol) de cloroformiato de isobutilo a 0ºC a 92 mg (0,74 mmol) de ácido picolínico en 4 ml de THF y la mezcla se calienta a TA y después se agita durante 35 min. Después se añaden 100 mg (0,248 mmol) de diclorhidrato de 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(piperazin-1-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina y 103 mg (0,74 mmol) de carbonato de potasio en 20 ml de agua/dioxano (1:1) y la mezcla se agita durante 1 hora para completar la reacción. La mezcla de reacción se vierte en 200 ml de agua y el compuesto deseado se separa por filtración y se lava con agua. Se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-[piridil-2-carbonil]-piperazin-1-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 233-235ºC; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20})= 11,6; FAB-MS: (M+H)^{+} = 435.

Ejemplo 32

Bajo una atmósfera de nitrógeno y con enfriamiento en hielo, se añaden 8 ml (8 mmol) de DIBAL-H a 345 mg de 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(pirid-2-il)-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina en 30 ml de DMEU y la mezcla se agita durante 2 horas, tiempo durante el que se disuelve la suspensión. Se añaden 15 ml de acetato de etilo y la mezcla se agita durante 30 min. y se diluye con 150 ml de metanol. Se añaden 1 ml de agua y 10 g de Na_{2}SO_{4} al precipitado, seguido de agitación durante 15 min. y después filtración. El alcohol metílico se separa por evaporación del filtrado en un evaporador rotatorio. La solución de DMEU resultante se vierte en 400 ml de agua, se agita para completar la reacción y se filtra. El residuo de filtración se recoge en DMSO, se filtra de nuevo y el filtrado se vierte en 200 ml de agua. La filtración y el lavado con agua producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(pirid-2-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 235-239ºC; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20})= 7,9; FAB-MS: (M+H)^{+} = 352.

El material de partida se obtiene como sigue:

Etapa 32.1

Con calentamiento suave, se disuelven 522 mg (2,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 360 mg de ácido acético en 52 ml de metanol. Después, a TA, se añaden 321 mg (3,0 mmol) de piridina-2-carbaldehído y la mezcla de reacción se agita durante la noche para completar la reacción, tiempo durante el que se separa 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(pirid-2-il)-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. El último se separa por filtración, se lava con metanol y se seca a alto vacío; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}; 100ºC) 9,22 (s, 1H), 8,79 (m, 2H), 8,51 (s, 1H), 8,45 (d, J=8, 1H), 8,16 (m, 1H), 8,05 (t, J=8, 1H), 7,70 (d, J=8, 1H), 7,59 (m, 1H), 7,42 (t, J=8, 1H), 7,17 (d, J=8, 1H).

Ejemplo 33

De manera análoga a la etapa 32,1, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 180 mg de ácido acético en 26 ml de metanol y se hacen reaccionar con 161 mg (1,5 mmol) de piridina-4-carbaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(pirid-4-il)-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 25 ml de DMEU con 8 ml (8 mmol) de DIBAL-H de manera análoga al ejemplo 32 y un tratamiento final análogo producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(pirid-4-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20}) = 7,7; FAB-MS: (M+H)^{+} = 352.

Ejemplo 34

Bajo una atmósfera de nitrógeno, se agitan 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6), 161 mg (1,5 mmol) de piridina-3-carbaldehído y 180 mg de ácido acético en 39 ml de DMEU/metanol (1:2) a TA durante 1 hora. Después se añaden 440 mg (7 mmol) de NaCNBH_{3} y la mezcla de reacción se calienta hasta ebullición. Tras 20 horas, se añaden otros 440 mg de NaCNBH_{3} y la mezcla de reacción se agita a la temperatura de ebullición durante 15 horas, después se vierte en 0,6 litros de una solución de K_{2}B_{4}O_{7}\cdot 4H_{2}O acuosa al 1% y se agita durante la noche para completar la reacción. El producto precipitado se separa por filtración y se lava con agua. La recristalización en acetato de etilo en ebullición produce 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(pirid-3-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 204-206ºC; EM (M)^{+} = 351; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 7,6.

Ejemplo 35

Bajo una atmósfera de nitrógeno, se agitan 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6), 261 mg (1,5 mmol) de 4-(tetrazol-5-il)-benzaldehído y 180 mg de ácido acético en 39 ml de DMEU/metanol (1:2) a TA durante 1 hora. Después, se añaden 440 mg (7 mmol) de NaCNBH_{3} y la mezcla de reacción se calienta hasta ebullición. Tras 15 horas, se añaden otros 440 mg de NaCNBH_{3} y la mezcla de reacción se agita de nuevo a temperatura de ebullición durante 15 horas, después se vierte en 0,6 litros de una solución de K_{2}B4O_{7} \cdot 4H_{2}O acuosa al 1% y se agita durante la noche para completar la reacción. La mezcla se acidifica hasta pH 3,9 con HCl 2N y el producto que precipita se separa por filtración y se lava con agua. El calentamiento en 20 ml de etanol y la filtración producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(tetrazol-5-il)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 9,8; EM: (M)^{+} = 418.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 35.1

Se añaden 20,0 g (0,47 mol) de cloruro de litio y 20,5 g (0,315 mol) de azida sódica a 41,2 g (0,315 mol) de 4-ciano-benzaldehído en 310 ml de metoxi-etanol y la mezcla se calienta a ebullición durante 6 horas (atmósfera de argón). Cuando se enfría, la mezcla de reacción se vierte en 1 litro de hielo/HCl al 37% (10:1) y se agita a fondo para completar la reacción. La filtración y el lavado con agua producen 4-(tetrazol-5-il)-benzaldehído; p.f. 180-182ºC.

Ejemplo 36

Bajo una atmósfera de nitrógeno, se agitan 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6), 273 mg (1,5 mmol) de bifenil-4-carbaldehído y 180 mg de ácido acético en 39 ml de DMEU/metanol (1:2) a TA durante 1 hora. Después, se añaden 440 mg (7 mmol) de NaCNBH_{3} y la mezcla de reacción se calienta hasta 50ºC. Tras 15 horas, se añaden otros 440 mg de NaCNBH_{3} y la mezcla de reacción se agita a temperatura de ebullición durante 15 horas, después se vierte en 0,6 litros de una solución de K_{2}B4O_{7} \cdot 4H_{2}O acuosa al 1% y se agita durante la noche para completar la reacción. El producto precipitado se separa por filtración y se lava con agua. El calentamiento en 20 ml de etanol y la filtración producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-fenil-bencilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 250-252ºC; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 14,1; FAB-MS: (M+H)^{+} = 427.

Ejemplo 37

De manera análoga al ejemplo 34, se agitan 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6), 282 mg (1,5 mmol) de 4-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)-benzaldehído y 180 mg de ácido acético en 39 ml de DMEU/metanol (1:2) a TA durante 1 hora y después se hacen reaccionar con dos porciones de 440 mg (7 mmol) de NaCNBH_{3}. Se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(2-metil-tetrazol-5-il)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 232-235ºC; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 11,4; FAB-MS: (M+H)^{+} = 433.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 37.1

Con enfriamiento en hielo, se añade gota a gota una solución de 75,5 g (0,434 mol) de 4-(tetrazol-5-il)-benzaldehído (etapa 35.1) en 550 ml de DMF/dioxano (1:1) a 179,7 g (1,30 mol) de K_{2}CO_{3} en 200 ml de DMF/dioxano (1:1); se lleva a cabo agitación durante 30 min. y después se añaden gota a gota 40 ml (0,64 mol) de yoduro de metilo. La mezcla de reacción se agita durante 3 horas en un baño de hielo y finalmente durante 15 horas a TA, se vierte en 2,8 litros de agua helada y se agita durante 10 min., y el compuesto se separa por filtración y se lava con agua, produciendo 4-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)-benzaldehído; p.f. 137-139ºC.

Ejemplo 38

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 180 mg de ácido acético en 26 ml de metanol y se hacen reaccionar con 168 mg (1,5 mmol) de tiofeno-3-carbaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(tien-3-il)-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. La reducción de este producto intermedio en 15 ml de DMEU con 8 ml (8 mmol) de DIBAL-H, el tratamiento final análogo y la digestión en DIPE producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(tien-3-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 11,4; FAB-MS: (M+H)^{+} = 357.

Ejemplo 39

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 180 mg de ácido acético en 26 ml de metanol y se hacen reaccionar con 170 mg (1,5 mmol) de tiazol-2-carbaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(tiazol-2-il)-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 15 ml de DMEU con 8 ml (8 mmol) de DIBAL-H, el tratamiento final análogo y la digestión en DIPE producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(tiazol-2-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20}) = 9,8; FAB-MS: (M+H)^{+} = 358.

Ejemplo 40

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 180 mg de ácido acético en 26 ml de metanol y se hacen reaccionar con 143 mg (1,5 mmol) de pirrol-2-carbaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(1H-pirrol-2-il)-metilenamino]-1H-pirazolo-[3,4-d]pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 15 ml de DMEU con 8 ml (8 mmol) de DIBAL-H, el tratamiento final de manera análoga y la digestión en DIPE producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(1H-pirrol-2-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20})= 8,2; FAB-MS: (M+H)^{+} = 340.

Ejemplo 41

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 180 mg de ácido acético en 26 ml de metanol y se hacen reaccionar con 144 mg (1,5 mmol) de imidazol-2-carbaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(1H-imidazol-2-il)-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 15 ml de DMEU con 8 ml (8 mmol) de DIBAL-H, el tratamiento final análogo y la digestión en etanol producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(1H-imidazo)-2-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 5,8; FAB-MS: (M+H)^{+} = 341.

Ejemplo 42

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 180 mg de ácido acético en 26 ml de metanol y se hacen reaccionar con 144 mg (1,5 mmol) de 3-furaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(fur-3-il)-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 15 ml de DMEU con 8 ml (8 mmol) de DIBAL-H, el tratamiento final análogo y la digestión en DIPE producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(fur-3-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 207-209ºC; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 8,4; EM: (M)^{+} = 340, (M-H)^{+} = 339.

Ejemplo 43

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 180 mg de ácido acético en 26 ml de metanol y se hacen reaccionar con 144 mg (1,5 mmol) de imidazol-4-carbaldehído (para la preparación véase: Ph.D. Stein y St.E. Hall, patente de los EE.UU. 4 977 174, 11 de Diciembre de 1990) para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[1H-(imidazol-4-il)-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 15 ml de DMEU con 8 ml (8 mmol) de DIBAL-H, el tratamiento final análogo y la digestión en acetato de etilo producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[1H-(imidazol-4-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100}) = 5,9; FAB-MS: (M+H)^{+} = 341.

Ejemplo 44

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 180 mg de ácido acético en 26 ml de metanol y se hacen reaccionar con 144 mg (1,5 mmol) de furfural para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(fur-2-il)-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 15 ml de DMEU con 8 ml (8 mmol) de DIBAL-H y el tratamiento final análogo producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(fur-2-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100}) =8,4; EM: (M)^{+} = 340.

Ejemplo 45

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 180 mg de ácido acético en 26 ml de metanol y se hacen reaccionar con 164 mg (1,5 mmol) de 1-metil-pirrol-2-carbaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(1-metil-pirrol-2-il)-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 15 ml de DMEU con 8 ml (8 mmol) de DIBAL-H y el tratamiento final análogo producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(1-metil-pirrol-2-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100})= 6,7; FAB-MS: (M+H)^{+} = 354.

Ejemplo 46

De manera análoga al ejemplo 32, se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(3-fenoxi-bencilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina.

Ejemplo 47

De manera análoga al ejemplo 32, se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(3-(4-cloro-fenoxi)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina.

Ejemplo 48

De manera análoga al ejemplo 32, se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(naft-2-il-metilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina.

Ejemplo 49

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina y 180 mg de ácido acético en 26 ml de metanol y se hacen reaccionar con 182 mg (1,5 mmol) de 6-metil-piridina-2-carbaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(6-metil-pirid-2-il)-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 15 ml de DMEU con 8 ml (8 mmol) de DIBAL-H, el tratamiento final análogo y la digestión en acetato de etilo producen 4-(3-cloro-fenil-amino)-3-[(6-metil-pirid-2-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f.: 231 -233ºC; HPLC: t_{Ret} (grad_{20,100})=6,6; EM: (M)^{+} = 365.

Ejemplo 50

De manera análoga al ejemplo 34, se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(2-etoxicarbonil-cicloprop-1-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina.

Ejemplo 51

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 180 mg de ácido acético en 26 ml de metanol y se hacen reaccionar con 345 mg (1,5 mmol) de 4-(2-terc-butil-tetrazol-5-il)-benzaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[{4-(2-terc-butiltetrazol-5-il)-fen-1-il}-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 15 ml de DMEU con 8ml (8 mmol) de DIBAL-H y el tratamiento final análogo y la digestión en DIPE producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(2-terc-butil-tetrazol-5-il)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 168-170ºC, HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100}) = 10,4; EM: (M)^{+} = 474.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 51.1

En un autoclave, se calientan 5,0 g (28,7 mmol) de 4-(tetrazol-5-il)-benzaldehído (etapa 35,1) en 33 ml de tolueno a 110ºC durante 2 horas con = 2,4 g de isobuteno y 377 \mul de ácido metanosulfónico. Cuando se enfría, la mezcla de reacción se diluye con 50 ml de acetato de etilo, se lava dos veces con solución de NaHCO_{3} sat., una vez con agua y salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}) y se concentra por evaporación. La cristalización en etanol produce 4-(2-terc-butil-tetrazol-5-il)-benzaldehído; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) 10,11 (s, HCO), 8,31 (d, J=8, 2H), 8,11 (d, J=8, 2H), 1,78 (s, 9H).

Ejemplo 52

Con la exclusión de aire, se disuelven, con calentamiento suave, 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina y 180 mg de ácido acético, en 26 ml de metanol y se hacen reaccionar con 419 mg (1,5 mmol) de bencenosulfonato de 4-formil-1-metil-piridinio. Tras 20 horas de agitación a TA, la mezcla de reacción se concentra por evaporación. El residuo se recoge en 15 ml de DMEU, se enfría hasta 0ºC y se añaden 8 ml (8 mmol) de DIBAL-H. Tras 2 horas, se añaden 15 ml de acetato de etilo y la mezcla de reacción se agita durante 1 hora y se diluye con 150 ml de metanol. Se añaden 1 ml de agua y 10 g de Na_{2}SO_{4}, seguido de agitación durante 1 hora y después filtración. El filtrado se concentra por evaporación (RV, HV); el residuo se recoge en 12 ml de metanol/HCl 1N (1:1) y se filtra. La concentración del filtrado por evaporación y la separación por medio de cromatografía de líquidos de alta resolución preparativa (nucleosil C18; agua/acetonitrilo + 0,05% de TFA) producen trifluoroacetato de 4-{[4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-ilamino]-metil}-1-metil-piridinio; HPLC: t_{Ret}(grad_{5-40})=11,6; ^{1}H-RMN (CD_{3}OD) 9,17 (d, J=6, 2H), 8,64 (d, J=6, 2H), 8,41 (s, 1H), 7,85 (sa, 1H), 7,55 (d, J=8, 1 H), 7,35 (t, J=8, 1 H), 7,17 (d, J=8, 1 H), 4,53 (s, 3H).

Ejemplo 53

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 180 mg de ácido acético en 26 ml de metanol y se hacen reaccionar con 168 mg (1,5 mmol) de tiofen-2-carbaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(tien-2-il)-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 15 ml de DMEU con 8 ml (8 mmol) de DIBAL-H, el tratamiento final análogo y la cristalización en acetato de etilo producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(tien-2-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 228-229ºC, HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100}) = 8,9; EM: (M)^{+} = 356.

Ejemplo 54

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 180 mg de ácido acético en 26 ml de metanol y se hacen reaccionar con 293 mg (1:5 mmol) de 4-(pirid-2-il)-benzaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[{4-(pirid-2-il)-fen-1-il}-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 36 ml de DMEU con 9,6 ml (9,6 mmol) de DIBAL-H y el tratamiento final análogo producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(pirid-2-il)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20})= 9,0; FAB-MS: (M+H)^{+} = 428.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 54.1

Se añaden gota a gota 6,93 g (29,9 mmol) de 4-bromo-benzaldehído-dimetil-acetal en 40 ml de THF a una suspensión a 40-50ºC de 0,8 g (31,6 mmol) de virutas de magnesio y una pequeña cantidad de yodo en 10 ml de THF. La mezcla de reacción se calienta hasta 65ºC y se agita a esa temperatura durante aproximadamente 30 min. La mezcla de reacción se enfría a TA y se añade gota a gota el reactivo de Grignard a una solución de 4,46 g (28,2 mmol) de 2-bromo-piridina (Fluka, Buchs, Suiza) y 0,4 g (0,74 mmol) de cloruro de [1,3-bis(difenilfosfino)propano]níquel(II) (DPPP, Fluka, Buchs, Suiza) en 100 ml de THF (ligeramente exotérmica). Cuando se completa la adición gota a gota, la mezcla de reacción se lleva a ebullición a reflujo durante 4 horas, después se deja enfriar y se añaden 100 ml de agua. La mezcla se concentra hasta aproximadamente 50 ml en un evaporador rotatorio, se diluye con acetato de etilo y se extrae con ácido clorhídrico 0,1N (3 veces). Los extractos de HCl combinados se agitan a TA durante 20 min., se hacen básicos con solución de amoniaco conc. y se extraen con cloruro de metileno. Tras eliminar el disolvente, el residuo se somete a cromatografía en gel de sílice (hexano:acetato de etilo = 2:1). Las fracciones que contienen el producto se concentran y 4-(pirid-2-il)-benzaldehído cristaliza espontáneamente; CCF: R_{f} = 0,22 (hexano/acetato de etilo = 2:1).

Ejemplo 55

Con enfriamiento en hielo, se añaden 10,3 ml (10,3 mmol) de DIBAL-H a 550 mg (1,29 mmol) de 4-(3-clorofenilamino)-3-{[4-(pirid-3-il)-fenil]-metilenamino}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina que se ha disuelto en 25 ml de DMEU y la mezcla de reacción se agita durante 60 min. Se añaden 15 ml de acetato de etilo y la mezcla se agita durante 5 min. y se diluye con 300 ml de metanol y 1 ml de agua; se añaden 20 g de Na_{2}SO_{4} y tras 15 min. se filtra la mezcla y el filtrado se concentra por evaporación en un evaporador rotatorio. El residuo se vierte en 0,5 litros de agua y 0,7 litros de acetato de etilo y la fase acuosa se separa y se extrae dos veces más con acetato de etilo. Las fases orgánicas se lavan 20 veces con agua (hasta que estén libres de DMEU) y finalmente con salmuera, se secan (Na_{2}SO_{4}) y se concentran por evaporación. La agitación en metanol y la filtración hasta la transparencia y la agitación en acetato de etilo y dietil éter producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(pirid-3-il)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; CCF: R_{f} = 0,47 (CHCl_{3}/metanol/H_{2}O/ácido acético = 85:13:1,5:0,5); HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100}) = 6,4; FAB-MS: (M+H)^{+} = 428.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 55.1

Se añade gota a gota una solución de 7,05 g (102 mmol) de nitrito de sodio en 16 ml de agua a 5ºC en el transcurso de 30 min. a una suspensión de 11,8 g (0,10 mol) de 4-aminobenzonitrilo en 40 ml de agua y 36,2 ml de HCl conc. La solución de reacción de color amarillo, turbia se añade después gota a gota a 35-40ºC en un periodo de 100 min. a 121 ml de piridina. Tras 45 minutos de agitación a 90ºC, la piridina en exceso se separa por evaporación (RV; 60ºC) y el residuo se recoge en acetato de etilo y se lava con agua y salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}) y se concentra por evaporación. La cromatografía en columna (SiO_{2}; hexano/acetato de etilo 4:1 \rightarrow 3:2 \rightarrow 1:1 \rightarrow acetato de etilo) produce 4-(piridin-2-il)-benzonitrilo, seguido de 4-(pirid-3-il)-benzonitrilo [^{1}H-RMN (CDCl_{3}) 8,86 (dd, J=2, 1, 1H), 8,68 (dd, J=5, 2, 1H), 7,89 (m, 1H), 7,79 (d, J=9, 2H), 7,69 (d, J=9, 2H), 7,43 (dd, J=8, 5, 1H)] y finalmente 4-(piridin-4-il)-benzonitrilo.

Etapa 55.2

En presencia de 1 g de níquel Raney se hidrogenan 783 mg (4,34 mmol) de 4-(pirid-3-il)-benzonitrilo y 2,71 g (10,4 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo-[3,4-d]pirimidina en 200 ml de metanol y 1,87 g de ácido acético (presión normal; TA). La suspensión de color gris resultante se diluye con 0,3 litros de THF, se calienta hasta 50ºC y se filtra. A partir del filtrado se obtiene, tras concentración por evaporación y agitación en acetato de etilo y después en metanol, 4-(3-cloro-fenilamino)-3-{[4-(pirid-3-il)-fenil]-metilenamino}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; CCF: R_{f}= 0,57 (CHCl_{3}/metano/H_{2}O/ácido acético = 85:1,3:1,5:0,5); FAB-MS: (M+H)^{+} = 426.

Ejemplo 56

De manera análoga al ejemplo 55, se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(pirid-4-il)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina a partir de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina y 4-(pirid-4-il)-benzonitrilo (etapa 55.2).

Ejemplo 57

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 521 mg (2,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 343 \mul de ácido acético en 50 ml de metanol y se hacen reaccionar con 567 mg (3,0 mmol) de 4-(tiazol-2-il)-benzaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[{4-(tiazol-2-il)-fen-1-il}-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. El producto intermedio anterior se reduce en 30 ml de DMEU con 16 ml (16 mmol) de DIBAL-H y se somete a tratamiento final de manera análoga. El producto bruto se disuelve en THF/metanol; se añaden 20 g de gel de sílice y la mezcla se seca para dar un polvo. Se aplica en una columna de gel de sílice y se eluye con CH_{2}Cl_{2}/metanol/H_{2}O/ácido acético (85:13:1,5:0,5) para dar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(tiazol-2-il)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 241-243ºC; CCF: R_{f} = 0,44 (CHCl_{3}/metanol/H_{2}O/ácido acético = 85:13:1,5:0,5); HPLC: t_{Ret} (_{grad20-100}) = 9,0; FAB-MS: (M+H)^{+} = 434.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 57.1

Bajo argón, se colocan 9,2 g (379 mmol) de magnesio en 84 ml de THF y se calientan hasta 60ºC. Después, se añade gota a gota una solución de 82,6 g (357 mmol) de 4-bromo-benzaldehído-dimetil-acetal (para la preparación véase J.Org. Chem. 56, 4280 (1991)) en 677 ml de THF a la misma en el transcurso de 30 min. y la mezcla se agita a temperatura de ebullición durante otros 40 min. La solución de Grignard se enfría, se decanta en un embudo de goteo y se añade gota a gota en el transcurso de 30 min. para dar una suspensión rojiza de 31,7 ml (338 mmol) de 2-bromotiazol y 5,39 g (9,95 mmol) de cloruro de 1,3-bis(difenilfosfino)propano-níquel(II) (Aldrich; Milwaukee/EE.UU.) en 1,68 litros de THF. La mezcla de reacción se agita a TA durante 12 horas; se añaden otros 5,39 g de cloruro de 1,3-bis(difenilfosfino)-propano-níquel(II) y se continua la agitación durante otras 7 horas. Se añaden 840 ml de agua, se lleva a cabo la agitación durante 10 min., se separa el THF por evaporación en un evaporador rotatorio y se agita el residuo en 1,0 litro de dietil éter y 340 ml de HCl 2N durante 1,5 horas. La fase acuosa se separa y se extrae dos veces con acetato de etilo. Las fases orgánicas se lavan dos veces con HCl 0,5N, agua, solución de NaHCO_{3} sat., agua y salmuera, se secan (Na_{2}SO_{4}) y se concentran por evaporación. La cromatografía (SiO_{2}; hexano/acetato de etilo =4:1) y la digestión en hexano producen 4-(tiazol-2-il)-benzaldehído; CCF: R_{f}= 0,21 (hexano/acetato de etilo = 3:1); p.f. 91-92ºC.

Ejemplo 58

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 521 mg (2,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 343 \mul de ácido acético en 50 ml de metanol y se hacen reaccionar con 567 mg (3,0 mmol) de 4-(tiazol-5-il)-benzaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[{4-(tiazol-5-il)-fenil}-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 30 ml de DMEU con 16 ml (16 mmol) de DIBAL-H, el tratamiento final análogo y la digestión en dietil éter producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(tiazol-5-il)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 235ºC; CCF: R_{f}= 0,42 (CHCl_{3}/metanol/H_{2}O/
ácido acético = 85:13:1,5:0,5); HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100}) = 8,5; FAB-MS: (M+H)^{+} = 434.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 58.1

En un tubo de cierre hermético se agita una mezcla de 3,7 g (20 mmol) de 4-bromo-benzaldehído, 6,64 ml (93 mmol) de tiazol, 2,94 g de acetato de potasio y 1,16 g (1 mmol) de Pd(PPh_{3})_{4} en 50 ml de dimetilacetamida a 150ºC durante 12 horas. La mezcla de reacción se concentra por evaporación; se añade agua al residuo y la mezcla se extrae tres veces con cloruro de metileno. Las fases orgánicas se filtran a través de relleno de algodón, se concentran por evaporación y se someten a cromatografía (SiO_{2}; hexano/acetato de etilo = 1:2): se obtiene 4-(tiazol-5-il)-benzaldehído; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 11,4.

Ejemplo 59

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 521 mg (2,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 343 \mul de ácido acético en 50 ml de metanol y se hacen reaccionar con 565 mg (3,0 mmol) de 3-(2-metil-tetrazol-5-il)-benzaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[{3-(2-metil-tetrazol-5-il)-fenil}-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 30 ml de DMEU con 16 ml (16 mmol) de DIBAL-H, el tratamiento final análogo y la digestión en metanol producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[3-(2-metil-tetrazol-5-il)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; CCF: R_{f} = 0,51 (CHCl_{3}/metanol/H_{2}O/ácido acético = 85:13:1,5:0,5); HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100}) = 8,7; FAB-MS: (M+H)^{+} = 433.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 59.1

Se añaden 5,8 g (42,1 mmol) de clorhidrato de trietilamina y 6,0 g (92,3 mmol) de azida sódica a una solución de 4,0 g (30,5 mmol) de 3-ciano-benzaldehído en 100 ml de 1-metil-2-pirrolidona y se calientan a 110ºC durante 1,5 horas (atmósfera de argón). Cuando se enfría, la mezcla de reacción se vierte en 0,6 litros de hielo/HCl al 37% (20:1) y se agita a fondo para completar la reacción. La extracción con 3 porciones de acetato de etilo, el lavado de las fases orgánicas con 3x agua y salmuera, el secado (Na_{2}SO_{4}), la concentración por evaporación y la agitación en dietil éter producen 3-(tetrazol-5-il)-benzaldehído; p.f. 185-189ºC; CCF: R_{f} = 0,13 (CHCl_{3}/metanol/H_{2}O/ácido acético = 85:13:1,5:0,5).

Etapa 59.2

Con la exclusión de aire, se añaden 10,0 g (57,4 mmol) de 3-(tetrazol-5-il)-benzaldehído a 23,7 g (172 mmol) de carbonato de potasio en 120 ml de DMF/dioxano (1:1) en un baño de hielo. Se añaden gota a gota 5,37 ml (86 mmol) de yoduro de metilo a la misma y la mezcla de reacción se agita durante 2 horas en el baño de hielo y durante 1 hora a TA. La mezcla de reacción se agita en 0,5 litros de agua y el producto bruto se separa por filtración con succión y se lava con agua. La disolución en 0,3 litros de acetato de etilo, lavado con salmuera, secado (Na_{2}SO_{4}), concentración por evaporación y agitación en dietil éter produce 3-(2-metil-tetrazol-5-il)-benzaldehído; CCF: R_{f}= 0,47 (hexano/acetato de etilo = 3:1).

Ejemplo 60

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 521 mg (2,00 mmol) de 3- amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 343 \mul de ácido acético en 50 ml de metanol y se hacen reaccionar con 691 mg (3,0 mmol) de 3-(2-terc-butil-tetrazol-5-il)-benzaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[{3-(2-terc-butil-tetrazol-5-il)-fenil}-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 30 ml de DMEU con 16 ml (16 mmol) de DIBAL-H, el tratamiento final análogo y la digestión en metanol producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[3-(2-terc-butil-tetrazol-5-il)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; CCF: R_{f}= 0,60 (CHCl_{3}/metanol/H_{2}O/ácido acético = 85:13:1,5:0,5); HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100}) = 10,3.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 60.1

En un autoclave, se calientan 3,2 g (18,4 mmol) de 3-(tetrazol-5-il)-benzaldehído (véase etapa 59.1) en 22 ml de tolueno a 110ºC durante 1,5 horas con =1,5 g de isobuteno y 0,216 ml de ácido metanosulfónico. Cuando se enfría, la mezcla de reacción se diluye con 200 ml de acetato de etilo, se lava cuatro veces con agua y una vez con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}) y se concentra por evaporación. La cromatografía en columna (SiO_{2}; hexano/acetato de etilo = 3:1) y la cristalización en dietil éter/hexano (-15ºC) producen 3-(2-terc-butil-tetrazol-5-il)-benzaldehído; CCF: R_{f}= 0,41 (hexano/acetato de etilo = 3:1); FAB-MS: (M+H)^{+} = 231.

Ejemplo 61

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 521 mg (2,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina y 343 \mul de ácido acético en 50 ml de metanol y se hacen reaccionar con 565 mg (3,0 mmol) de 2-(2-metil-tetrazol-5-il)-benzaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[{2-(2-metil-tetrazol-5-il)-fenil}-etilenami-
no]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. El producto intermedio anterior se reduce en 30 ml de DMEU con 16 ml (16 mmol) de DIBAL-H y la mezcla de reacción se hidroliza de manera análoga. La solución de DMEU se vierte en agua y se extrae con acetato de etilo. Después de lavar siete veces con agua y una vez con salmuera, el secado (Na_{2}SO_{4}), la concentración por evaporación y la digestión en dietil éter, la fase orgánica produce 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[2-(2-metiltetrazol-5-il)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; CCF: R_{f}= 0,47 (CHCl_{3}/metanol/H_{2}O/ácido acético = 85:13:1,5:0,5); HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100}) = 9,0; FAB-MS: (M+H)^{+} = 433.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 61.1

Se añaden 20,3 g (147 mmol) de clorhidrato de trietilamina y 21,0 g (322 mmol) de azida sódica a una solución de 14,0 g (107 mmol) de 2-ciano-benzaldehído en 350 ml de 1-metil-2-pirrolidona y se calientan a 110ºC durante 3 horas (atmósfera de argón). La solución de reacción de color negro se vierte en 0,6 litros de hielo/HCl al 37% (20:1) y se agita a fondo para completar la reacción. La extracción con 3 porciones de acetato de etilo, el lavado de las fases orgánicas con 3x agua y salmuera, el secado (Na_{2}SO_{4}), la concentración por evaporación y la agitación en dietil éter producen 2-(tetrazol-5-il)-benzaldehído; p.f. 130ºC; CCF: R_{f}= 0,10 (CHCl_{3}/metanol/H_{2}O/ácido acético = 85:13:1,5:0,5).

Etapa 61.2

Con la exclusión de aire, se añaden 8,0 g (45,9 mmol) de 2-(tetrazol-5-il)-benzaldehído a 19 g (138 mmol) de carbonato de potasio en 100 ml de DMF/dioxano (1:1) en un baño de hielo. Se añaden gota a gota 4,25 ml (68 mmol) de yoduro de metilo a la misma y la mezcla de reacción se agita en el baño de hielo durante 1 hora y a TA durante 1,5 horas. La mezcla se agita en 1 litro de agua helada y 0,6 litros de acetato de etilo y la fase acuosa se separa y se extrae dos veces más con acetato de etilo. Las fases orgánicas se lavan cuatro veces con agua y con salmuera, se secan (Na_{2}SO_{4}) y se concentran por evaporación. La cromatografía en columna (SiO_{2}; hexano/acetato de etilo = 3:1) y la agitación en hexano producen 2-(2-metil-tetrazol-5-il)-benzaldehído; CCF: R_{f}= 0,41 (hexano/acetato de etilo = 3:1); FAB-MS: (M+H)^{+} = 189.

Ejemplo 62

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 521 mg (2,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 343 \mul de ácido acético en 50 ml de metanol y se hacen reaccionar con 691 mg (3,0 mmol) de 2-(2-terc-butil-tetrazol-5-il)-benzaldehído para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[{2-(2-terc-butil-tetrazol-5-il)-fenil}-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. La reducción del producto intermedio anterior en 30 ml de DMEU con 16 ml (16 mmol) de DIBAL-H y el tratamiento final análogo producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[2-(2-terc-butiltetrazol-5-il)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; CCF: R_{f}= 0,64 (CHCl_{3}/metanol/H_{2}O/ácido acético = 85:13:1,5:0,5); HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100}) = 10,3.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 62.1

En un autoclave, se calientan 6,4 g (36,7 mmol) de 2-(tetrazol-5-il)-benzaldehído (etapa 61,1) en 50 ml de tolueno a 110ºC durante 1,5 horas con = 3 g de isobuteno y 0,432 ml de ácido metanosulfónico. Cuando se enfría, la mezcla de reacción se diluye con 300 ml de acetato de etilo, se lava cuatro veces con agua y una vez con salmuera, se seca (Na_{2}SO_{4}) y se concentra por evaporación. La cromatografía en columna (SiO_{2}; hexano/acetato de etilo =4:1) y la cristalización en hexano con una pequeña cantidad de dietil éter a -20ºC producen 2-(2-terc-butil-tetrazol-5-il)-benzaldehído; CCF: R_{f} = 0,36 (hexano/acetato de etilo = 10:1).

Ejemplo 63

Con calentamiento suave, se disuelven 195 mg (0,75 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) y 135 mg de ácido acético en 20 ml de metanol. Después, a TA, se añade =1,0 mmol de tetrazol-5-carbaldehído y la mezcla de reacción se agita durante la noche para completar la reacción, tiempo durante el que se separa un sólido. La concentración por evaporación hasta aproximadamente la mitad del volumen y la filtración producen 4-(3-clorofenilamino)-3-[(tetrazol-5-il)-metilenamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. Puede recuperarse más material a partir del agua de cristalización por concentración por evaporación y agitación del residuo en isopropanol. Bajo una atmósfera de nitrógeno, se disuelven 208 mg del producto intermedio anterior en 27 ml de DMEU y, con enfriamiento en hielo, se añaden 4,2 ml (4,2 mmol) de DIBAL-H y la mezcla se agita durante 7 horas. Se añaden 13 ml de acetato de etilo y la mezcla se agita durante 30 min. y se diluye con 130 ml de metanol. Se añaden 0,9 ml de agua y 9 g de Na_{2}SO_{4} al precipitado, seguido de agitación durante 30 min. y después filtración. El filtrado se concentra por evaporación (RV, HV) y se somete a cromatografía (SiO_{2}; CH_{2}Cl_{2}/metanol =4:1) y el producto bruto se agita en isopropanol/dietil éter para dar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(tetrazol-5-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina: HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100})=6,7; FAB MS (M+H)^{+} = 343.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 63.1

Con la exclusión de humedad, se añaden 420 g de acetato de sodio a 167 ml de hidroxi-acetonitrilo (70% en agua) y 1,2 litros de dietil éter. Con enfriamiento en hielo, se añaden gota a gota 244 ml de cloruro de acetilo y la mezcla de reacción se agita a TA durante 5 horas. La mezcla se filtra y el filtrado se concentra por evaporación en condiciones suaves. La destilación del residuo produce acetoxi-acetonitrilo; p.e.: 80ºC (30 mbar).

Etapa 63.2

Con la exclusión de humedad, se colocan 70 g (0,7 mol) de acetoxi-acetonitrilo y 146 g (2,25 mol) de azida sódica en 200 ml de THF. En un segundo aparato, con enfriamiento en hielo, se introducen 107 g (0,8 mol) de cloruro de aluminio anhidro en porciones en 1 litro de THF (exotérmica). Esa solución se añade después gota a gota a la solución de acetoxi-acetonitrilo. Después, la mezcla se calienta a ebullición durante 25 horas. A 5ºC, se añaden gota a gota 40 ml de HCl 5N, 300 ml de metanol y otros 300 ml de HCl 5N (a pH = 1 se destruye N_{3}H). Se hace pasar nitrógeno a través del aparato durante 2 horas, seguido de filtración y lavado con metanol. El filtrado se concentra por evaporación y el residuo de evaporación se extrae tres veces con acetato de etilo caliente y una vez con acetona. La concentración parcial de los extractos de acetato de etilo/acetona por evaporación (\Rightarrow cristalización), la filtración y la agitación en dietil éter producen 5-hidroximetil-tetrazol; p.f. 180-181ºC.

Etapa 63.3

Se agitan 15 g (0,15 mol) de 5-hidroximetil-tetrazol y 90 g de dióxido de manganeso (Aldrich; Milwaukee/EE.UU.) en 1,5 litros de acetona a TA durante 13 días. La mezcla de reacción se filtra después a través de Hyflo y el residuo se lava con una gran cantidad de acetona y finalmente con metanol. La concentración del extracto de acetona por evaporación produce tetrazol-5-carbaldehído; ^{1}H-RMN (acetona-d_{6}): 10,26 (s, 1H), 5,02 (s, 1H).

Ejemplo 64

Según los procedimientos descritos en este texto, se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(2-metiltetrazol-5-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina.

Ejemplo 65

Según los procedimientos descritos en este texto, se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(2-terc-butil-tetrazol-5-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina.

Ejemplo 66

Con la exclusión de humedad, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) en 2,5 ml de dioxano y 1 ml de DMEU; se añaden 138 \mul (1,1 mmol) de isocianato de bencilo y la mezcla de reacción se agita a TA durante la noche. El dioxano se separa por evaporación de la mezcla de reacción en un evaporador rotatorio. La solución de color amarilla resultante se vierte en 75 ml de agua y el producto que precipita se separa por filtración. La agitación en acetato de etilo en ebullición produce 3-(bencilamino-carbonilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100}) = 9,5; FAB-MS: (M+H)^{+} =
394.

Ejemplo 67

Con la exclusión de humedad, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) en 2,5 ml de dioxano y 1 ml de DMEU; se añaden 137 \mul (1,1 mmol) de isocianato de 3-cloro-fenilo y la mezcla de reacción se agita durante la noche a TA y finalmente durante 16 horas a 60ºC. Puesto que, según la HPLC, no toda la pirazolo-pirimidina ha reaccionado, se añaden otros 40 \mul de isocianato de 3-cloro-fenilo y la mezcla se agita durante otras 20 horas a 60ºC. El tratamiento final de manera análoga al ejemplo 66 y la agitación en etanol caliente producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(3-cloro-fenil-amino)-carbonilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100}) = 12,4; FAB-MS: (M+H)^{+} = 414.

Ejemplo 68

Con la exclusión de humedad, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) en 2,5 ml de dioxano y 1 ml de DMEU; se añaden 202 mg (1,1mmol) de isotiocianato de 4-cloro-2-metil-fenil (Maybridge) y la mezcla de reacción se agita durante la noche a TA y finalmente durante 16 horas a 80ºC. El tratamiento final de manera análoga al ejemplo 66 y la agitación en DMSO/acetato de etilo producen 3-[(4-cloro-2-metil-fenil-amino)-tiocarbonil-amino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100}) = 12,2; FAB-MS: (M+H)^{+} = 444.

Ejemplo 69

Con la exclusión de humedad, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6) en 2,5 ml de dioxano y 1 ml de DMEU; se añaden 161 \mul (1,1 mmol) de isocianato de 1-naftilo y la mezcla de reacción se agita durante la noche a TA. El tratamiento final de manera análoga al ejemplo 66 produce 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(naf-1-il-amino)-carbonilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100}) = 12,0; FAB-MS: (M+H)^{+} = 430.

Ejemplo 70

Con la exclusión de humedad, se disuelven 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina en 2,5 ml de dioxano y 1 ml de DMEU; se añaden 160 \mul (1,1 mmol) de isocianato n-hexilo y la mezcla de reacción se agita durante la noche a TA. El dioxano se separa después por evaporación en un evaporador rotatorio y se añaden 30 ml de DIPE y 40 ml de hexano al residuo. La filtración con succión y el lavado con DIPE/hexano producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(n-hexil-amino)-carbonil-amino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100}) = 10,3; FAB-MS: (M+H)^{+} =388.

Ejemplo 71

De manera análoga al ejemplo 70, se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[(pirid-3-il-metil-amino)-carbonilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina.

Ejemplo 72

De manera análoga al ejemplo 34, se agitan 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6), 168 mg (1,5 mmol) de ciclo-hexanocarbaldehído y 180 mg de ácido acético en 39 ml de DMEU/metanol (1:2) y después se hacen reaccionar con 440 mg (7 mmol) de NaCNBH_{3}. La agitación en DIPE produce 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(ciclohexil-metil-amino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 188-190ºC; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100/20}) = 12,8; FAB-MS: (M+H)^{+} = 357.

Ejemplo 73

(Ejemplo de referencia)

De manera análoga al ejemplo 34, se agitan 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-clorofenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6), 129 mg (1,5 mmol) de pivaldehído y 180 mg de ácido acético en 39 ml de DMEU/metanol (1:2) y después se hacen reaccionar con 440 mg (7 mmol) de NaCNBH_{3}. Puesto que, según la HPLC, la reacción es incompleta, se añaden 129 mg de pivaldehído, 180 mg de ácido acético y 440 mg de NaCNBH_{3} varias veces hasta que la HPLC indica que toda la pirazolo-pirimidina ha reaccionado. Entre las adiciones individuales, la mezcla de reacción se agita a temperatura de ebullición durante 20 horas cada vez. El tratamiento final análogo y la agitación en hexano producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(2,2-dimetilpropil-amino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 229-231ºC; HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100/20}) = 11,6; FAB-MS: (M+H)^{+} = 331.

Ejemplo 74

(Ejemplo de referencia)

De manera análoga al ejemplo 34, se agitan 261 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-clorofenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase etapa 1.6), 150 mg (1,5 mmol) de capronaldehído y 180 mg de ácido acético en 39 ml de DMEU/metanol (1:2) y después se hacen reaccionar con 440 mg (7 mmol) de NaCNBH_{3}. La agitación en DIPE produce 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(n-hexil-amino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100}) = 9,9; FAB-MS: (M+H)^{+} = 345.

Ejemplo 75

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 260 mg (1,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina y 172 \mul de ácido acético en 25 ml de metanol y se hacen reaccionar con 261 mg (1,5 mmol) de 3-(tetrazol-5-il)-benzaldehído (etapa 59.1) para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-{[3-(tetrazol-5-il)-fenil]-metilenamino}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. Con enfriamiento en hielo, se añaden 8 ml (8 mmol) de DIBAL-H al producto intermedio anterior en 15 ml de DMEU y la mezcla de reacción se agita durante 30 min. Se añaden 15 ml de acetato de etilo y la mezcla se agita durante 15 min., se diluye con 150 ml de metanol y 1 ml de agua y se concentran por evaporación en un evaporador rotatorio. El residuo se vierte en 0,5 litros de agua y 0,5 litros de acetato de etilo, y se acidifica hasta pH = 3 con HCl 1N, y la fase acuosa se separa y se extrae otras 3x con acetato de etilo. Las fases orgánicas se lavan varias veces con agua y finalmente con salmuera, se secan (Na_{2}SO_{4}) y se concentran por evaporación. La agitación en éter produce 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[3-(tetrazol-5-il)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; CCF: R_{f}= 0,13 (CHCl_{3}/metanol/H_{2}O/ácido acético = 85:13:1,5:0,5); HPLC: t_{Ret}(grad_{20-100})= 7,4; FAB-MS: (M+H)^{+} = 419.

Ejemplo 76

De manera análoga al ejemplo 32, se disuelven 521 mg (2,00 mmol) de 3-amino-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina y 343 \mul de ácido acético en 50 ml de metanol y se hacen reaccionar con 523 mg (3,0 mmol) de 2-(tetrazol-5-il)-benzaldehído (etapa 61.1) para formar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-{[2-(tetrazol-5-il)-fenil]-metilenamino}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina. El producto intermedio anterior se reduce en 30 ml de DMEU con 16 ml (16 mmol) de DIBAL-H y la mezcla de reacción se hidroliza de manera análoga. La solución de DMEU se vierte en agua, se ajusta a pH = 3 con HCl 1N y se extrae con acetato de etilo. Después de lavar 10x con agua y 1x con salmuera, el secado (Na_{2}SO_{4}), la concentración por evaporación y la digestión en dietil éter, la fase orgánica produce 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[2-(tetrazol-5-il)-bencilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; CCF: R_{f}= 0,19 (CHCl_{3}/metanol/H_{2}O/ácido acético = 85:13:1,5:0,5); HPLC: t_{Ret} (grad_{20-100}) = 7,7; FAB-MS: (M+H)^{+} = 419.

Ejemplo 77

Se agita una mezcla de 200 mg (0,521 mmol) de 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina hidratada 0,061 ml (0,548 mmol) de isocianato de butilo y 5 ml de THF a 20ºC durante 15 horas y después se concentran por evaporación a vacío. El residuo se digiere en 5 ml de metanol en ebullición, se enfría a 5ºC y se filtra, produciendo 3-[4-(n-butilamino-carbonilamino-metil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 217-218ºC.

El material de partida se obtiene como sigue:

Etapa 77.1

Se calienta a reflujo una mezcla de 86,1 g (505,6 mmol) de 3,3-bis-metilmercapto-2-ciano-acrilonitrilo [para la preparación véase: Chem. Ber. 95, 2861 (1962)], 112,4 g (505,6 mmol) de 4-(N-Boc-aminometil)-anilina [para la preparación véase: documento WO 93/00095] y 750 ml de metanol durante 5 horas y después se concentra a vacío hasta que la cristalización empieza. Tras filtración, se obtiene 3-[4-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-2-ciano-3-metilmercapto-acrilonitrilo; p.f. 154-157ºC; ESI-MS: (M-H)^{-} = 343.

Etapa 77.2

Se calienta a reflujo una mezcla de 117,8 g (342 mmol) de 3-[4-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-2-ciano-3-metilmercapto-acrilonitrilo, 20,54 ml (41,45 mmol) de hidracina hidratada y 750 ml de metanol durante 3 horas y después se concentra por evaporación a vacío a 50ºC, produciendo 5-amino-3-[4-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-4-ciano-pirazol en forma de un residuo amorfo; CCF-R_{f}= 0,28 (cloruro de metileno/metanol [9:1]).

Etapa 77.3

Se calienta a reflujo una mezcla de 117,7 g (341,9 mmol) de 5-amino-3-[4-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-4-ciano-pirazol, 76,3 ml (445,2 mmol) de N,N-dimetilformamida-dietil-acetal y 1200 ml de tolueno durante 5 horas. El enfriamiento a 20ºC, la filtración y el lavado de los cristales con tolueno y dietil éter producen 3-[4-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-4-ciano-5-dimetilamino-metilenamino-pirazol; p.f. 227-228ºC; ESI-MS: (M-H)^{-} = 382.

Etapa 77.4

Se calienta a reflujo una mezcla de 94 g (245,1 mmol) de 3-[4-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-4-ciano-5-dimetilaminometilenamino-pirazol, 44,2 g (269,4 mmol) de clorhidrato de 3-cloro-anilina [para la preparación véase: Justus Liebigs Ann. Chem. 176, 45 (1875)] y 1000 ml de etanol durante 60 horas y después se concentra por evaporación a vacío. El residuo se disuelve en acetato de etilo y la fase orgánica se lava con ácido clorhídrico 0,5N helado, agua y salmuera, se seca sobre sulfato de sodio y se concentra por evaporación a vacío. Tras la recristalización del residuo en acetato de etilo/hexano y en metanol/cloruro de metileno, se obtiene 3-[4-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 196ºC; ESI-MS: (M-H)^{-}= 464.

Etapa 77.5

Se agita una mezcla de 25 g (53,65 mmol) de 3-[4-(N-(terc-butiloxicarbonil)-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina y 350 ml de ácido clorhídrico metanólico 3N a 50ºC durante 30 min. La mezcla de reacción se deja después enfriar a TA y se filtra, y el residuo de filtración se lava con metanol y dietil éter y el residuo de filtración se reparte entre la solución de carbonato de sodio acuosa saturada y el acetato de etilo. La fase orgánica se lava con agua y salmuera, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra y se concentra por evaporación a vacío. Tras recristalización del residuo en metanol/agua, se obtiene 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina en forma monohidratada; p.f. 207-209ºC; ESI-MS: (M+H)^{+} = 366.

Ejemplo 78

Se agita una mezcla de 115 mg (0,3 mmol) de 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina hidratada (véase etapa 77.5), 0,041 ml (0,318 mmol) de isocianato de 3-metoxi-fenil y 4 ml de THF a 20ºC durante 15 horas y después se concentra por evaporación a vacío. Tras recristalización del residuo en acetato de etilo/hexano, se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-{4-[(3-metoxi-fenil-amino)-carbonilamino-metil]-fenilamino}-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina en forma monohidratada; p.f. 157-160ºC; ESI-MS: (M-H)^{-} = 513.

Ejemplo 79

Se agita una mezcla de 150 mg (0,391 mmol) de 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina hidratada (véase etapa 77.5), 34,3 mg (0,483 mmol) de isocianato de etilo y 5 ml de THF a 20ºC durante 15 horas y después se añaden 4 ml de dietil éter. La filtración y el lavado del residuo de filtración con dietil éter producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(etilamino-carbonilamino-metil)-fenilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 0,61%; p.f. 228-230ºC (descomp.); ESI-MS: (M-H)^{-} = 435.

Ejemplo 80

Se agita una mezcla de 150 mg (0,391 mmol) de 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina hidratada (véase etapa 77.5), 31,4 mg (0,429 mmol) de isotiocianato de metilo y 5 ml de THF a 20ºC durante 15 horas. La concentración hasta un volumen de aproximadamente 1 ml, la adición de 5ml de dietil éter al concentrado y la filtración producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(metilamino-tiocarbonilamino-metil)-fenilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 1,22%; p.f. 216-218ºC (descomp.); ESI-MS:
(M-H)^{-} = 437.

Ejemplo 81

Se añade gota a gota una solución de 57,4 mg (0,573 mmol) de anhídrido succínico en 0,5 ml de THF, con agitación, a una suspensión, enfriada hasta 0ºC, de 200 mg (0,521 mmol) de 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-clorofenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina hidratada (véase etapa 77,5) en 3 ml de THF. La mezcla de reacción se agita a TA durante 4 horas y después se añade otra solución de 57,4 mg (0,573 mmol) de anhídrido succínico en 0,5 ml de THF. La mezcla se agita durante otras 3 horas a 40ºC, después se deja enfriar a TA y se filtra, y el residuo de filtración se lava con dietil éter. Se obtiene 3-[4-({3-carboxi-propionil}-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 2,45%; p.f. 205-207ºC; ESI-MS: (M-H)^{-} = 464.

Ejemplo 82

Se añade gota a gota una solución de 0,0503 ml (0,548 mmol) de cloruro de dimetilcarbamoilo en 0,5 ml de THF, con agitación, a una suspensión, enfriada hasta 0ºC, de 150 mg (0,391 mmol) de 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo-[3,4-d]pirimidina hidratada (véase etapa 77.5) en 2,5 ml de THF y 0,079 ml (0,567 mmol) de trietilamina. La mezcla de reacción se agita a TA durante 17 horas y después se filtra, el residuo de filtración se lava consecutivamente con THF, agua, THF y dietil éter. Se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(dimetilamino-carbonilamino-metil)-fenilamino]-1H-pirazolo-[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 1,22%; p.f. 238-240ºC: ESI-MS: (M+H)^{+}= 437.

Ejemplo 83

Se calienta a reflujo una mezcla de 150 mg (0,391 mmol) de 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina hidratada (véase etapa 77.5), 95 mg (1,17 mmol) de cianato de potasio, 3 ml de etanol, 3 ml de agua y 0,0258 ml (0,451 mmol) de ácido acético durante 1 hora. Tras enfriamiento hasta aproximadamente 20ºC, la filtración y la recristalización del residuo de filtración en metanol-agua, se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-{ureido-metil}-fenilamino)- 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. >280ºC; FAB-MS: (M+H)^{+} = 409.

Ejemplo 84

Se agita una mezcla de 300 mg (0,782 mmol) de 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina hidratada (véase etapa 77.5), 223 mg (0,81 mmol) de éster de Boc-glicina-hidroxisuccinimida (Fluka) y 5 ml de THF a 20ºC durante 1,5 horas. La filtración y el lavado del residuo de filtración con THF y dietil éter producen 3-[4-(N-{N-terc-butiloxicarbonil-glicil}-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenil-amino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 1,02%; p.f. 205ºC; ESI-MS: (M-H)^{-} = 521.

Ejemplo 85

Se agita una mezcla de 200 mg (0,521 mmol) de 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina hidratada (véase etapa 77.5), 157 mg (0,548 mmol) de éster de Boc-L-alanil-hidroxisuccinimida (Fluka) y 4 ml de THF a 20ºC durante 1,5 horas. Después, se añaden 2 ml de dietil éter y 5 ml de hexano a la mezcla de reacción y se continúa la agitación a TA durante otras 0,5 horas. Tras filtración y recristalización del residuo de filtración en metanol/dietil éter, se obtiene 3-[4-(N-{N-terc-butiloxicarbonil-L-alanil}-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 5,09%; p.f. 153-155ºC; ESI-MS: (M-H)^{-} = 535; [a]_{D}^{20} = -13,4 \pm 2,1º (c = 0,47%, metanol).

Ejemplo 86

Se agita una mezcla de 250 mg (0,651 mmol) de 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina hidratada (véase etapa 77.5), 214 mg (0,685 mmol) de éster de Boc-L-prolil-hidroxisuccinimida (Fluka) y 5 ml de THF a 20ºC durante 15 horas. Después, se añaden 3 ml de dietil éter y 2,5 ml de hexano a la mezcla de reacción y se continúa la agitación a TA durante aproximadamente 0,5 horas. Tras filtración y recristalización del residuo de filtración en acetonitrilo, se obtiene 3-[4-(N-{N-terc-butiloxicarbonil-L-prolil}-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 1,73%; p.f. 160ºC; ESI-MS: (M- H)^{-} = 561; [a]_{D}^{20} = 30,0 \pm 1,9º (c = 0,527%, metanol).

Ejemplo 87

Se calienta a reflujo una mezcla de 200 mg (0,378 mmol) de 3-[4-(N-{N-Boc-glicil}-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase ejemplo 84), 0,049 ml (0,756 mmol) de ácido metanosulfónico, 5 ml de metanol y 4 ml de agua durante 6 horas y después se concentra por evaporación a vacío. Tras recristalización del residuo en metanol, se obtiene dimesilato de 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(N-glicil-aminometil)-fenilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 4,78%; p.f. 140ºC (descomp.); ESI-MS: (M+H)^{+}=423.

Ejemplo 88

Se agita una mezcla de 100 mg (0,177 mmol) de 3-[4-(N-{N-Boc-L-alanil}-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase ejemplo 85) y 4 ml de ácido clorhídrico metanólico 3N a 20ºC durante 15 horas y después se añaden aproximadamente 5 ml de dietil éter. La filtración y el lavado del residuo de filtración con dietil éter producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(N-{L-alanil}-aminometil)-fenilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina \cdot 1,9 clorhidrato, que tiene un contenido en agua del 6,36%; p.f. 220ºC (descomp.); ESI-MS: (M+H)^{+} = 437; [a]_{D}^{20}= -1,4 \pm 2,0º (c = 0,508%, metanol).

Ejemplo 89

Se agita una mezcla de 110 mg (0,192 mmol) de 3-[4-(N-{N-Boc-L-prolil}-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase ejemplo 86) y 3,5 ml de ácido clorhídrico metanólico 3N a 20ºC durante 3 horas y después se añaden aproximadamente 3,5 ml de dietil éter. La filtración y el lavado del residuo de filtración con dietil éter producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(N-{L-prolil}-aminometil)-fenilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina \cdot 1,6 clorhidrato, que tiene un contenido en agua del 6,1%; p.f. 230 -235ºC (descomp.); ESI-MS: (M+H)^{+}= 463; [a]_{D}^{20} = -28,0 \pm 2,0º (c = 0,49%, metanol).

Ejemplo 90

Se agita una mezcla de 500 mg (1,34 mmol) de 3-(3-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua: 1,79%), 402 mg (2,73 mmol) de N,N-dimetilformamida-dietil-acetal y 5 ml de metanol a 30ºC durante 2 horas y después se concentra por evaporación a vacío. La cristalización del residuo en acetato de etilo, la filtración y el lavado del residuo de filtración con acetato de etilo producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[3-(dimetilamino-metilenamino-metil)-fenilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 1,68%; p.f. 175-177ºC; ESI-MS: (M+H)^{+} = 421.

El material de partida se obtiene como sigue:

Etapa 90.1

Se calienta a reflujo una mezcla de 102,1 g (600 mmol) de 3,3-bis-metilmercapto-2-ciano-acrilonitrilo, 133,3 g (600 mmol) de 3-(N-Boc-aminometil)-anilina (documento WO 93/00095) y 1100 ml de metanol durante 6,5 horas y después se concentra por evaporación a vacío. La cristalización del residuo en acetato de etilo, la filtración y el lavado del residuo de filtración con acetato de etilo producen 3-[3-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-2-ciano-3-metilmercapto-acrilonitrilo; p.f. 150-151ºC.

Etapa 90.2

Se calienta a reflujo una mezcla de 145,4 g (422 mmol) de 3-[3-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-2-ciano-3-metilmercapto-acrilonitrilo, 21,96 ml (443 mmol) de hidracina hidratada y 1000 ml de metanol durante 2 horas y después se concentra por evaporación a vacío, produciendo 5-amino-3-[3-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-4-ciano-pirazol; CCF-R_{f} = 0,28 (cloruro de metileno/metanol [9:1]).

Etapa 90.3

Se agita una mezcla de 138,57 g (422 mmol) de 5-amino-3-[3-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-4-ciano-pirazol, 78,9 ml (460,4 mmol) de N,N-dimetilformamida-dietil- acetal, 1350 ml de tolueno y 150 ml de etanol a 40ºC durante 2 horas. Tras enfriamiento hasta 15ºC, la filtración y el lavado de los cristales con dietil éter, se obtiene 3-[3-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-4-ciano-5-dimetilamino-metilenamino-pirazol; p.f. 182-184ºC.

Etapa 90.4

Se calienta a reflujo una mezcla de 25 g (65,2 mmol) de 3-[3-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-4-ciano-5-dimetilaminometilenamino-pirazol, 10,7 g (65,2 mmol) de clorhidrato de 3-cloro-anilina [para la preparación véase: Justus Liebigs Ann. Chem. 176, 45 (1875)] y 250 ml de metanol durante 15 horas y después se concentra por evaporación a vacío. La purificación del residuo aceitoso se efectúa por medio de cromatografía ultrarrápida en gel de sílice, que tiene un tamaño de partícula de 0,04-0,06 mm, usando acetato de etilo. Las fracciones que contienen el producto se concentran por evaporación y el residuo se recristaliza a partir de metanol, produciendo 3-[3-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo-[3,4-d]pirimidina; p.f. 147-148ºC.

Etapa 90.5

Se agita una mezcla de 12 g (25,75 mmol) de 3-[3-(N-Boc-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina y 200 ml de ácido clorhídrico metanólico 3N a TA durante 15 horas. La mezcla de reacción viscosa se diluye con metanol y se filtra, y el residuo de filtración se lava con dietil éter, produciendo el diclorhidrato bruto del compuesto deseado (p.f. > 260ºC). El diclorhidrato se disuelve en 107 ml de agua y, con agitación a TA, se añaden 80 ml de una solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio en agua a la solución. La mezcla se agita a 20ºC durante otras 1,5 horas y se filtra, y el residuo de filtración se lava con agua. Tras secado a alto vacío a 120ºC, se obtiene 3-(3-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 1,79%; p.f. 212-214ºC.

Ejemplo 91

Se agita una mezcla de 300 mg (0,805 mmol) de 3-(3-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua: 1,79%; véase etapa 90.5), 230 mg (0,845 mmol) de éster de Boc-glicina hidroxisuccinimida (Fluka) y 5 ml de THF a 20ºC durante 1,5 horas. La adición de 5 ml de dietil éter a la mezcla de reacción, la filtración y el lavado del residuo de filtración con dietil éter producen 3-[3-(N-{N-terc-butiloxi-carbonil-glicil}-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina; p.f. 181-183ºC.

Ejemplo 92

Se agita una mezcla de 300 mg (0,574 mmol) de 3-[3-(N-{N-Boc-glicil}-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (véase ejemplo 91) y 10 ml de ácido clorhídrico metanólico 4N a 20ºC durante 5 horas y después se añaden 15 ml de dietil éter. La filtración y el lavado del residuo de filtración con dietil éter producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[3-(N-glicil-aminometil)-fenilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina \cdot 1,8 clorhidrato, que tiene un contenido en agua del 6,33%; p.f. 242-245ºC; ESI-MS: (M+H)^{+} = 423.

Ejemplo 93

Se concentra a vacío por evaporación una mezcla de 200 mg (0,537 mmol) de 3-(3-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua: 1,79%; véase etapa 90.5) y 10 ml de tolueno con el fin de eliminar agua y, tras repetición de esta operación, el residuo se recoge en 10 ml de tolueno. Tras la adición de 59 mg (0,59 mmol) de anhídrido succínico y 0,082 ml (0,59 mmol) de trietilamina, la mezcla de reacción se calienta durante 1 hora a 80ºC y durante 18 horas a reflujo. Se añaden otros 21 mg (0,21 mmol) de anhídrido succínico y 0,041 ml (0,2949 mmol) de trietilamina a la mezcla de reacción, que se calienta durante otras 6 horas a reflujo, después se enfría hasta temperatura ambiente y se añaden 10 ml de dietil éter. La filtración, la purificación del residuo de filtración por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice que tiene un tamaño de partícula de 0,04-0,06 mm; eluyente: acetato de etilo), la concentración de las fracciones que contienen el producto por evaporación a vacío y la recristalización del residuo en metanol producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(3-[succinimido-metil]-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 7,72%; p.f. 140-142ºC; ESI-MS:
(M-H)^{-} = 446.

Ejemplo 94

Se calienta a reflujo una mezcla de 250 mg (0,671 mmol) de 3-(3-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua: 1,79%; véase etapa 90.5), 104 mg (1,282 mmol) de cianato de potasio, 1,4 ml de etanol, 1,4 ml de agua y 0,066 ml (1,154 mmol) de ácido acético durante 15 min. Tras enfriamiento hasta TA, filtración, lavado del residuo de filtración con agua y recristalización en etanol/dietil éter/hexano, se obtiene 4-(3-clorofenilamino)-3-(3-[ureido-metil]-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 1,19%; p.f. >270ºC; ESI-MS: (M+H)^{+} = 409.

Ejemplo 95

Se concentra a vacío una mezcla de 300 mg (0,782 mmol) de 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina hidratada (véase etapa 77.5) y 15 ml de tolueno por evaporación con el fin de eliminar agua y, tras repetición de esta operación, el residuo se recoge en 15 ml de tolueno. Tras la adición de 117 mg (1,169 mmol) de anhídrido succínico y 0,033 ml (0,237 mmol) de trietilamina, la mezcla de reacción se agita a 80ºC durante 1 hora y se calienta durante 22 horas usando un separador de agua. La mezcla de reacción se enfría después hasta TA y se añaden aproximadamente 10 ml de dietil éter; la mezcla se filtra y el residuo de filtración se lava con dietil éter. El residuo de filtración se reparte después entre acetato de etilo y 25 ml de una solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio en agua. Tras lavado de la fase orgánica con agua y salmuera, secado sobre sulfato de sodio, filtración, y concentración del filtrado a vacío, 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-[succinimido-metil]-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina precipita en forma cristalina; p.f. 155-157ºC; FAB-MS: (M+H)^{+} = 448.

Ejemplo 96

De manera análoga al ejemplo 95, partiendo de 300 mg (0,782 mmol) de 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina hidratada (véase etapa 77.5) y 160 mg (1,175 mmol) de anhídrido ftálico, con la adición de 0,033 ml (0,237 mmol) de trietilamina, se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-[ftalimidometil]-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. >275ºC; FAB-MS: (M+H)^{+} = 496.

Ejemplo 97

De manera análoga al ejemplo 95, se hacen reaccionar 300 mg (0,805 mmol) de 3-(3-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidina (contenido en agua: 1,79%; véase etapa 90,5) y 164 mg (1,205 mmol) de anhídrido ftálico, con la adición de 0,034 ml (0,244 mmol) de trietilamina. El producto, que está todavía ligeramente contaminado, se convierte por medio de cromatografía ultrarrápida (gel de sílice que tiene un tamaño de partícula de 0,04-0,06 mm; eluyente: acetato de etilo), de concentración de las fracciones que contienen el producto por evaporación a vacío y de recristalización del residuo en metanol para dar 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(3-[ftalimido-metil]-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina (contenido en agua: 0,9%); p.f. 254-256ºC; ESI-MS:
(M+H)^{+} = 496.

Ejemplo 98

Se agita una mezcla de 300 mg (0,805 mmol) de 3-(3-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua: 1,79%; véase etapa 90,5), 242 mg (0,845 mmol) de éster de Boc-L-alanil-hidroxisuccinimida (Fluka) y 5 ml de THF a 20ºC durante 17 horas. Después, se añaden aproximadamente 5 ml de dietil éter a la mezcla de reacción y se continúa la agitación a TA durante 15 min. La filtración y el lavado del residuo de filtración con dietil éter producen 3-[3-(N-{N-terc-butiloxicarbonil-L-alanil}-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 0,83%; p.f. 150-153ºC; ESI-MS: (M-H)^{-} = 535; [a]_{D}^{20} = -13,0 \pm 1,4º (c = 0,783%, metanol).

Ejemplo 99

Se agita una mezcla de 300 mg (0,554 mmol) de 3-[3-(N-{N-Boc-L-alanil}-aminometil)-fenilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua 0,83%; véase ejemplo 98) y 10 ml de ácido clorhídrico metanólico 4N a 20ºC durante 21 horas y después se concentra por evaporación a vacío. La recristalización del residuo en etanol/dietil éter produce 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[3-(N-{L-alanil}-aminometil)-fenilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina \cdot 1,7 clorhidrato, que tiene un contenido en agua del 6,83%; p.f. 222-225ºC; ESI-MS: (M+H)^{+} = 437;
[a]_{D}^{20} = +1,6 \pm 1,1º (c = 0,893%, metanol).

Ejemplo 100

Se calienta a reflujo una mezcla de 1,65 g (3,86 mmol) de 1-bencil-4-(3-cloro-fenilamino)-3-(3-piridilamino)-pirazolo[3,4-d]pirimidina, 3,1 g (23,25 mmol) de cloruro de aluminio anhidro y 25 ml de tolueno durante 0,5 horas. La mezcla de reacción se concentra después por evaporación a vacío, y el residuo se agita con 40 ml de agua y se filtra, y el residuo de filtración se lava con agua y tolueno. El residuo de filtración se suspende, con calentamiento, en una mezcla de 50 ml de acetato de etilo y 15 ml de etanol, y la suspensión se filtra cuando todavía está caliente y el residuo de filtración se lava con acetato de etilo y se agita en 10 ml de solución de hidróxido de sodio 1N durante aproximadamente 10 min. La filtración, el lavado con agua y la recristalización del residuo de filtración dos veces en alcohol isopropílico producen 4-(3-clorofenilamino)-3-(3-piridilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 3,4%; p.f. 233-234ºC.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 100.1

Se agita una mezcla de 11 g (64,6 mmol) de 3,3-bis-metilmercapto-2-ciano-acrilonitrilo, 6 g (63,75 mmol) de 3-amino-piridina y 50 ml de tolueno a 60ºC durante 18 horas. La filtración de la mezcla de reacción cuando todavía está caliente y el lavado del residuo de filtración con tolueno producen 2-ciano-3-metilmercapto-3-(3-piridilamino)-acrilonitrilo; p.f. 180-181ºC.

Etapa 100.2

Se agita una mezcla de 13,75 g (70,48 mmol) de diclorhidrato de bencilhidracina, 28,2 ml de una solución de metanolato de sodio 5,4 molar y 100 ml de etanol durante 15 min. y se añaden 12,45 g (57,57 mmol) de 2-ciano-3-metilmercapto-3-(3-piridilamino)-acrilonitrilo. La mezcla de reacción se calienta a reflujo durante 12 horas, se enfría hasta temperatura ambiente y se filtra, y el filtrado se concentra por evaporación a vacío. Para la purificación, el residuo se disuelve en cloruro de metileno y la solución se filtra sobre 200 g de gel de sílice; el filtrado se concentra de nuevo por evaporación y el residuo se somete a cromatografía ultrarrápida en gel de sílice, que tiene un tamaño de partícula de 0,035-0,07 mm, usando terc-butil metil éter y terc-butil metil éter/metanol (49:1 y 19:1 y 9:1) como eluyente. Las fracciones que contienen el producto se concentran por evaporación y el residuo se recristaliza a partir 100 ml de alcohol isopropílico. Tras recristalización repetida en alcohol isopropílico, se obtiene 5-amino-1-bencil-4-ciano-3-(3-piridilamino)-pirazol; p.f. 191-192ºC.

Etapa 100.3

Se calienta a reflujo una mezcla de 3 g (10,33 mmol) de 5-amino-1-bencil-4-ciano-3-(3-piridilamino)-pirazol y 60 ml de ácido fórmico acuoso al 98% durante 3 horas y después se concentra por evaporación hasta aproximadamente 1/3 de su volumen original. Tras la adición de una pequeña cantidad de hielo, la mezcla de reacción se ajusta hasta un valor de pH de aproximadamente 9 mediante la adición gota a gota, con agitación vigorosa, de solución de hidróxido de sodio 2N. La filtración y el lavado del residuo de filtración con agua producen 1-bencil-4-hidroxi-3-(3-piridilamino)-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 2,8%; p.f. 150-160ºC.

Etapa 100.4

Se calienta a reflujo una mezcla de 2,5 g (7,63 mmol) de 1-bencil-4-hidroxi-3-(3-piridilamino)-pirazolo[3,4-d]pirimidina y 15 ml de oxicloruro de fósforo durante 2,5 horas y después se concentra por evaporación a vacío. El residuo se disuelve en 15 ml de cloruro de metileno; se añaden 2,5 ml (23,79 mmol) de 3-cloro-anilina a la solución y la mezcla de reacción se agita a 20ºC durante 15 horas. La mezcla se reparte después entre cloruro de metileno y agua y la fase acuosa se hace básica por la adición de solución de carbonato de sodio 1N. El precipitado que se forma en la fase acuosa se separa por filtración y se lava con agua, produciendo una primera carga de 1-bencil-4-(3-cloro-fenilamino)-3-(3-piridilamino)-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 165-167ºC; FAB-MS: (M+H)^{+}= 428.

Se obtiene otro producto mediante concentración de la fase orgánica por evaporación, purificación del residuo por cromatografía ultrarrápida en gel de sílice, que tiene un tamaño de partícula de 0,035-0,07 mm, usando cloruro de metileno y cloruro de metileno/metanol (49:1), concentración de las fracciones que contienen el producto por evaporación y recristalización del residuo en acetato de etilo /hexano.

Ejemplo 101

Se agita una mezcla de 300 mg (0,782 mmol) de 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina hidratada (véase etapa 77.5), 554 mg (6,44 mmol) de \gamma-butirolactona, 6 mg de 4-dimetilamino-piridina y 5 ml de metanol durante 16 horas a 95ºC y, tras otra adición de 277 mg (3,22 mmol) de \gamma-butirolactona y 3 mg de 4-dimetilamino-piridina, durante otras 4 horas a 100ºC. La mezcla de reacción se concentra después por evaporación a vacío; se añaden 5 ml de metanol al residuo y la mezcla se agita a 20ºC durante 5 min. y se filtra, y el residuo de filtración se lava con metanol. Se obtiene 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-({4-hidroxi-butirilamino}-metil)-fenilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que contiene el 0,52% de agua,; p.f. 215ºC.

Ejemplo 102

Se agita una mezcla de 500 mg (1,303 mmol) de 3-(4-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina hidratada (véase etapa 77.5), 229 mg (1,562 mmol) de monoclorhidrato de 1H-pirazolo-1-carbamidina (Fluka), 202 mg (1,563 mmol) de N-etildiisopropilamina y 5 ml de DMF a TA durante 7 horas y después se concentra por evaporación a alto vacío. La cristalización del residuo en metanol, filtración y lavado del residuo de filtración con metanol producen clorhidrato de 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-{guanidino-metil}-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 2,86%; p.f. 254-256ºC.

Ejemplo 103

Se agita una mezcla de 300 mg (0,8054 mmol) de 3-(3-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua 1,79%; véase etapa 90,5), 277 mg (3,22 mmol) de \gamma-butirolactona, 2 mg de 4-dimetilamino-piridina y 5 ml de metanol durante 10 horas a 95ºC y, tras otra adición de 277 mg (3,22 mmol) de \gamma-butirolactona y 4 mg de 4-dimetilamino-piridina, durante otras 16 horas a 100ºC. La mezcla de reacción se concentra después por evaporación a vacío, y el residuo se agita con acetato de etilo y se filtra, y el residuo de filtración se recristaliza en metanol, produciendo 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[3-({4-hidroxi-butiril-amino}-metil)-fenilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 0,67%; p.f. 182-184ºC.

Ejemplo 104

Se agita una mezcla de 200 mg (0,537 mmol) de 3-(3-aminometil-fenilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua: 1,79%; véase etapa 90.5), 79 mg (0,539 mmol) de monoclorhidrato de 1H-pirazolo-1-carbamidina y 2 ml de DMF a TA durante 65 horas y después se concentra por evaporación a alto vacío. La cristalización del residuo en dietil éter, la filtración y el lavado del residuo de filtración con dietil éter producen 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(3-{guanidino-metil}- fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina \cdot 1,05 clorhidrato, que tiene un contenido en agua del 1,76%; p.f. 270ºC (descomp.).

Ejemplo 105

Se calienta a reflujo una mezcla de 35 g (108,9 mmol) de 3-[2-(Boc-amino)-etilamino]-4-ciano-5-dimetilaminometilenamino-pirazol, 17,9 g (109,1 mmol) de clorhidrato de 3-cloro-anilina y 350 ml de metanol durante 30 horas y después se agita a TA durante 15 horas. La filtración y el lavado del residuo de filtración con metanol producen 3-[2-(terc-butiloxi-carbonil-amino)-etilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 2,39%; p.f. 206-208ºC; ESI-MS: (M-H)^{-} = 402.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 105.1

Se agita a reflujo una mezcla de 59,8 g (351,2 mmol) de 3,3-bis-metilmercapto-2-ciano-acrilonitrilo, 56,3 g (351,4 mmol) de N-Boc-etilendiamina [para la preparación véase: J. Org. Chem. 60, 4305 (1995)] y 500 ml de acetato de etilo durante 3 horas y después se concentra a vacío hasta aproximadamente la mitad de su volumen original. La mezcla de reacción se enfría hasta 0ºC; se añaden 300 ml de dietil éter y la mezcla se agita durante otras 0,5 horas y se filtra. Tras lavado del residuo de filtración con dietil éter, se obtiene 3-[2-(Boc-amino)-etilamino]-2-ciano-3-metilmercapto-acrilonitrilo; p.f. 123-125ºC.

Etapa 105.2

Se calienta a reflujo una mezcla de 80,81 g (286,4 mol) de 3-[2-(Boc-amino)-etilamino]-2-ciano-3-metilmercapto-acrilonitrilo, 14,9 ml (300,7 mmol) de hidracina hidratada y 500 ml de metanol durante 4 horas y después se concentra por evaporación a vacío a aproximadamente 50ºC, produciendo 5-amino-3-[2-(Boc-amino)-etilamino]-4-ciano-pirazol; CCF-R_{f} = 0,27 (cloruro de metileno/metanol [9:1]).

Etapa 105.3

Se agita una mezcla de 76,3 g (286,1 mmol) de 5-amino-3-[2-(Boc-amino)-etilamino]-4-ciano-pirazol, 54 ml (315,1 mmol) de N,N-dimetilformamida-dietil-acetal, 850 ml de tolueno y 85 ml de etanol a 100ºC durante 5 horas. Se añaden después otros 24,5 ml (143 mmol) de N,N-dimetilformamida-dietil-acetal a la mezcla de reacción y se continúa la agitación durante otras 3 horas a 100ºC. Tras enfriamiento hasta aproximadamente 10ºC, filtración y lavado del residuo de filtración con tolueno y dietil éter, se obtiene 3-[2-(Boc-amino)-etilamino]-4-ciano-5-(dimetilamino-metilenamino)-pirazol; p.f. 158-160ºC; ESI-MS: (M-H)^{-}= 320.

Ejemplo 106

Se disuelven 15 g (36,25 mmol) de 3-[2-(Boc-amino)-etilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua: 2,39%; véase ejemplo 105) en 250 ml de ácido clorhídrico metanólico 3N y la mezcla de reacción se agita a 20ºC durante 18 horas. La posterior filtración y el lavado del residuo de filtración con metanol y dietil éter producen diclorhidrato de 3-(2-amino-etilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 3,31%; p.f. > 260ºC.

Ejemplo 107

Se agita una mezcla de 300 mg (0,983 mmol) de 3-(2-amino-etilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua: 0,48%), 257 mg (1,136 mmol) de anhídrido benzoico y 5ml de THF a TA durante 1 hora y después se añaden 5 ml de dietil éter. La filtración y el lavado del residuo de filtración con dietil éter producen 3-(2-benzoilamino-etilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 0,32%; p.f. 237-239ºC.

El material de partida se prepara como sigue:

Etapa 107.1

Con agitación intensa, se añaden 35 ml de una solución de carbonato de sodio acuosa saturada y después 75 ml de acetato de etilo a una solución de 9,8 g (25,15 mmol) de diclorhidrato de 3-(2-amino-etilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua: 3,31%; véase ejemplo 106) en 100 ml de agua, precipitando el producto deseado en forma cristalina. La filtración y el lavado del residuo de filtración con acetato de etilo producen 3-(2-amino-etilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, que tiene un contenido en agua del 0,48%; p.f. 200ºC.

Ejemplo 108

Los siguientes compuestos se obtienen de manera análoga a los procedimientos descritos en este texto:

a) clorhidrato de 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-piridil-amino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua
5,68%); p.f. >260ºC; ESI-MS: (M+H)^{+} = 338,

b) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(2-formilamino-etilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

c) 3-(2-acetilamino-etilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 245-247ºC, ESI-MS:
(M+H)^{+} = 346,

d) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[2-(N^{3}-fenil-ureido)-etilaminol-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina,

e) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-{2-[N^{3}-(3-cloro-fenil)-ureido]-etilamino}-1H-pirazolo-[3,4-d]pirimidina; p.f. 205-
208ºC,

f) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-{2-[N^{3}-(4-cloro-fenil)-ureido]-etilamino}-1H-pirazolo-[3,4-d]pirimidina,

g) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[2-(N^{3}-etil-ureido)-etilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua del 0,31%); p.f. > 270ºC, ESI-MS: (M+H)^{+}=375,

h) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[2-(N^{3}-metil-tioureido)-etilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina, p.f. > 260ºC; ESI-MS: (M+H)^{+}=377,

i) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[2-(N^{3}-fenil-tioureido)-etilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina (contenido en agua del 1,6%); p.f. 120-122ºC, ESI-MS: (M+H)^{+}=439,

j) 3-[2-({N-Boc-glicil}-amino)-etilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina (contenido en
agua del 3,72%); p.f. 135ºC, ESI-MS: (M+H)^{+}=461,

k) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[2-(glicil-amino)-etilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina \cdot 1,9 HCl (contenido en agua del 8,33%); p.f. 250ºC (descomp.), ESI-MS: (M+H)^{+}=361,

l) clorhidrato de 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(2-guanidino-etilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en
agua: 4,29%), p.f. 150-153ºC; FAB-MS: (M+H)^{+}=346,

m) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[2-(2-furoilamino)-etilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua:
7,07%), p.f. 234-236ºC, ESI-MS: (M-H)^{-}=396,

n) 3-[3-(Boc-amino)-propilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

o) diclorhidrato de 3-(3-amino-propilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

p) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(3-formilamino-propilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

q) 3-(3-acetilamino-propilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

r) 3-[3-({N-Boc-glicil}-amino)-propilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina,

s) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[3-(glicil-amino)-propilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

t) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[3-(N^{3}-fenil-ureido)-propilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina,

u) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[3-(N^{3}-etil-ureido)-propilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina,

v) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[3-(tolueno-4-sulfonilamino)-propilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

w) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(3-metanosulfonilamino-propilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina,

x) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(3-guanidino-propilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

y) 3-[4-(Boc-amino)-butilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

z) diclorhidrato de 3-(4-amino-butilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

za) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-formilamino-butilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

zb) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-acetilamino-butilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

zc) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(N^{3}-fenil-ureido)-butilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina,

zd) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(N^{3}-etil-ureido)-butilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina,

ze) 3-[4-({N-Boc-glicil}-amino)-butilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina,

zf) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[4-(glicil-amino)-butilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

zg) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-guanidino-butilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

zh) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(4-metanosulfonilamino-butilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina,

zi) 3-(4-benzoilamino-butilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

zj) 3-(3-benzoilamino-propilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

zk) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[2-(4-nitro-benzoilamino)-etilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina; p.f. 243-245ºC, ESI-MS: (M+H)^{+}=453,

zl) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-[2-(3-nitro-benzoilamino)-etilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina (contenido en
agua 0,76%); p.f. 243-245ºC; ESI-MS: (M+H)^{+}=453,

zm) 3-[2-(4-amino-benzoilamino)-etilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina; p.f. 236-
238ºC; ESI-MS: (M+H)^{+}=423,

zn) 3-[2-(3-amino-benzoilamino)-etilamino]-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina (contenido en agua del 3,69%); p.f. 236-238ºC; ESI-MS: (M+H)^{+}=429,

zo) (R)-3-[4-(dimetilamino-carbonilamino-metil)-fenilamino]-4-(1-fenil-etilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina,

zp) (S)-3-[4-(dimetilamino-carbonilamino-metil)-fenilamino]-4-(1-fenil-etilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina, y

zq) (R)-3-[3-(dimetilamino-carbonilamino-metil)-fenilamino]-4-(1-fenil-etilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina.

Ejemplo 109

Los siguientes compuestos se obtienen de manera análoga a los procedimientos descritos en este texto:

22

23

24

para

25

Ejemplo 110

Los siguientes compuestos se obtienen de manera análoga a los procedimientos descritos en este texto:

a) (S)-3-[3-(dimetilamino-carbonilamino-metil)-fenilamino]-4-(1-fenil-etilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina
(véase ejemplo 108zq), y

b) 4-(3-cloro-fenilamino)-3-(2-propionilamino-etilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina; p.f. 240-242ºC; ESI-MS: (M+H)^{+}=360.

Ejemplo 111 4-(3-Cloro-fenilamino)-3-(2-ureido-etilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidina (CGP79331)

Se agita una mezcla de 200 mg (0,655 mmol) de 3-(2-amino-etilamino)-4-(3-cloro-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (contenido en agua: 0,48%), 72 mg (0,887 mmol) de cianato de potasio, 1,2 ml de etanol, 1,2 ml de agua y 46,8 ml (0,819 mmol) de ácido acético a TA durante 15 horas. Se añaden 2 ml de agua a la suspensión resultante y se filtra la mezcla. El lavado del residuo de filtración con agua y una pequeña cantidad de etanol y el secado a vacío (aproximadamente a 100 mbar, 8 horas, 100ºC) producen el compuesto del título que tiene un contenido en agua del 5,54%; p.f. 212-214ºC; ESI-MS: (M+H)^{+}=347

Ejemplo 112 Cápsulas duras

Se preparan 5000 cápsulas, comprendiendo cada una como principio activo 0,25 g de uno de los compuestos de fórmula I mencionados en los ejemplos anteriores, como sigue:

Composición
Principio activo	1250 g
Talco	180 g
Almidón de trigo	120 g
Estearato de magnesio	80 g
Lactosa	20 g

Método de preparación

Las sustancias en polvo enumeradas anteriormente se prensan a través de un tamiz de 0,6 mm de tamaño de malla. Porciones de 0,33 g de la mezcla se introducen en cápsulas de gelatina usando una máquina de relleno de cápsulas.

Ejemplo 113 Cápsulas blandas

Se preparan 5000 cápsulas de gelatina blanda, comprendiendo cada una como principio activo 0,05 g de uno de los compuestos de fórmula I mencionados en los ejemplos anteriores, como sigue:

Composición
Principio activo	250 g
PEG 400	1 litro
Tween 80	1 litro

Método de preparación

El principio activo en polvo se suspende en PEG 400 (polietilenglicol que tiene una M, de desde aproximadamente 380 hasta aproximadamente 420, Fluka, Suiza) y Tween® 80 (monolaurato de polioxietilensorbitano, Atlas Chem. Ind., Inc., EE.UU., suministrado por Fluka, Suiza) y se muelen hasta un tamaño de partícula de aproximadamente de 1 a 3 \mum en un pulverizador húmedo. Después, se introducen porciones de 0,43 g de la mezcla en cápsulas de gelatina blanda usando una máquina de relleno de cápsulas.

Claims (10)

1. Derivado de 4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina de fórmula I

26

en la que m es un número entero desde 0 hasta e incluyendo 3,

v es 0 o 1,

R es hidrógeno o alquilo inferior,

R_{1} es halógeno, ciano, amino, (alcanoil inferior)-amino, (alquil inferior)-amino, N,N-di-(alquil inferior)-amino, hidroxilo, alcoxilo inferior, (alcanoil inferior)-oxilo, carboxilo, (alcoxi inferior)-carbonilo, carbamoilo, N-(alquil inferior)-carbamoilo, N,N-di-(alquil inferior)-carbamoilo o alquilo inferior que no está sustituido o está sustituido por halógeno, ciano, amino, (alcanoil inferior)-amino, (alquil inferior)-amino, N,N-di-(alquil inferior)-amino, hidroxilo, alcoxilo inferior, (alcanoil inferior)-oxilo, carboxilo, (alcoxi inferior)-carbonilo, carbamoilo, N-(alquil inferior)-carbamoilo o por N,N-di-(alquil inferior)-carbamoilo, siendo posible, cuando varios sustituyentes fenilo R_{1} están presentes para esos sustituyentes, que éstos sean idénticos o diferentes entre sí, y

a) R_{2} es hidrógeno y R_{3} es

\alpha)

un radical de fórmula II

27

en la que Y es oxígeno o azufre y

R_{4} es

\alpha\alpha)

un radical alquilo que no está sustituido o está sustituido por amino, (alcanoil inferior)-amino, benzoilamino, benciloxicarbonilamino, (alcoxi inferior)-carbonilamino, fenilamino o por bencilamino y que contiene, incluyendo los sustituyentes, desde 4 hasta 20 átomos de carbono,

\alpha\beta)

fenilamino, bencilamino, naftilamino, piridilmetilamino o alquilamino, que tiene desde 4 hasta 11 átomos de carbono, o

\alpha\gamma)

fenilo o heterociclilo monocíclico unido por medio de un átomo de carbono y que tiene 5 o 6 miembros de anillo y desde 1 hasta 4 heteroátomos de anillo, seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre, no estando sustituido o estando sustituido cualquier radical fenilo presente en el radical R_{4} por uno o más radicales seleccionados de nitro, amino, (alcanoil inferior)-amino, (alquil inferior)-amino, di-(alquil inferior)-amino, halógeno, ciano, trifluorometilo, hidroxilo, alcoxilo inferior, (alcanoil inferior)-oxilo, carboxilo, (alcoxi inferior)-carbonilo, carbamoilo, N-(alquil inferior)-carbamoilo, metilendioxilo y alquilo inferior, siendo posible, cuando varios sustituyentes fenilo están presentes para aquellos sustituyentes, que éstos sean idénticos o diferentes entre sí, y

\beta)

alquilo inferior sustituido por

\beta\alpha)

heterociclilo monocíclico no sustituido o sustituido por alquilo inferior que tiene 5 o 6 miembros de anillo y desde 1 hasta 4 heteroátomos de anillo seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre,

\beta\beta)

fenilo sustituido por

i)

fenilo,

ii)

fenoxilo sustituido por cloro o no sustituido o

iii)

heterociclilo monocíclico no sustituido o sustituido por alquilo inferior, que tiene 5 o 6 miembros de anillo y desde 1 hasta 4 heteroátomos de anillo seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre,

\beta\gamma)

naftilo,

\beta\delta)

cicloalquilo que tiene desde 3 hasta 8 miembros de anillo que no está sustituido o está sustituido por alquilo inferior o por (alcoxi inferior)-carbonilo, o

\beta\varepsilon)

amino, (alquil inferior)-amino, di-(alquil inferior)-amino, (alcanoil inferior)-amino, benciloxicarbonilamino, (alcoxi inferior)-carbonilamino, benzoilamino, fenilamino, bencilamino, ureido, N^{3}-fenil-ureido, N^{3}-(alquil inferior)-ureido, N^{3},N^{3}-di-(alquil inferior)-ureido, amino-(alcanoil inferior)-amino, ((alcoxi inferior)-carbonilamino-(alcanoil inferior))-amino, (benciloxicarbonilamino-(alcanoil inferior))-amino, prolil-amino, (N-(alcoxi inferior)-carbonil-prolil)-amino, N^{3}-(alquil inferior)-tioureido, N^{3}-fenil-tioureido, ciano, guanidino, amidino, toluenosulfonilamino, (alcano inferior)-sulfonilamino o heterociclilcarbonilamino monocíclico no sustituido o sustituido por alquilo inferior, que tiene 5 o 6 miembros de anillo y desde 1 hasta 4 heteroátomos de anillo seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre,

radicales mencionados en la sección \beta\varepsilon) que contienen un radical fenilo que no sustituido o está sustituido en el radical fenilo por halógeno, ciano, nitro, amino, (alcanoil inferior)-amino, (alquil inferior)-amino, N,N-di-(alquil inferior)-amino, hidroxilo, alcoxilo inferior, (alcanoil inferior)-oxilo, carboxilo, (alcoxi inferior)-carbonilo, carbamoilo, N-(alquil inferior)-carbamoilo, N,N-di-(alquil inferior)-carbamoilo o por alquilo inferior, o

\gamma)

un radical de fórmula III

\vskip1.000000\baselineskip

28

en la que R_{5} es carboxi-(alcanoil inferior)-amino, benciloxicarbonilamino, ureido, N^{3}-fenil-ureido, N^{3}-(clorofenil)-ureido, N^{3}-((alcoxi inferior)-fenil)-ureido, N^{3}-(alquil inferior)-ureido, N^{3},N^{3}-di-(alquil inferior)-ureido, N^{3}-(alquil inferior)-tioureido, amino-(alcanoil inferior)-amino, ((alcoxi inferior)carbonilami-no-(alcanoil inferior))-amino, (benciloxicarbonilami-no-(alcanoil inferior))-amino, prolil-amino, (N-(alcoxi inferior)-carbonil-prolil)-amino, hidroxi-(alcanoil inferior)-amino, di-(alquil inferior)-amino-metilenamino, succinimido, ftalimido, guanidino o amidino,

\delta)

heterociclilo monocíclico no sustituido o sustituido por alquilo inferior, unido por medio de un átomo de carbono del anillo y que tiene 5 o 6 miembros de anillo y desde 1 hasta 4 heteroátomos de anillo seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre, o

\varepsilon)

(alcano inferior)-sulfonilo o bencenosulfonilo no sustituido o sustituido por alquilo inferior, o

b) R_{2} y R_{3} juntos son

di-(alquil inferior)-amino-metilenamino, 1,2-etileno, propano-1,3-diilo, butano-1,4-diilo, pentano-1,5-diilo, 3-(3-amino-propionil)-3-aza-pentano-1,5-diilo, 2-amino-butano-1,4-diilo, 1-aminometil-butano-1,4-diilo, 1-hidroximetilbutano-1,4-diilo, 3-hidroxi-pentano-1,5-diilo, 1-hidroxi-hexano-1,5-diilo, 3-(2-amino-etil)-pentano-1,5-diilo, 3-aza-pentano-1,5-diilo (-CH_{2}-CH_{2}-NH-CH_{2}-CH_{2}-), 3-aza-2,4-dimetil-pentano-1,5-diilo (-CH_{2}-CH[CH_{3}]-NH-CH[CH_{3}]-
CH_{2}-), 3-amino-3-aza-pentano-1,5-diilo (-CH_{2}-CH_{2}-N[NH_{2}]-CH_{2}-CH_{2}-), 1-aza-pentano-1,5-diilo, 1-aza-1-toluilaminocarbonil-pentano-1,5-diilo, 1-aza-1-(metilamino-tiocarbonil)-pentano-1,5-diilo, 1-aza-1-(terc-butilamino-carbonil)-pentano-1,5-diilo, 1-aza-1-(ciclohexilamino-carbonil)-pentano-1,5-diilo, 3-aza-1-hidroxi-heptano-3,7-diilo, 3-aza-1-ciano-heptano-3,7-diilo, 1-amino-3-aza-heptano-3,7-diilo, 3-(2-amino-etil)-3-aza-pentano-1,5-diilo (-CH_{2}-CH_{2}-N[-CH_{2}-CH_{2}-NH_{2}]-CH_{2}-CH_{2}-), 1-carbamoil-butano-1,4-diilo, 2-formilamino-pentano-1,4-diilo, 2-aza-butadieno-1,4-diilo (-CH=CH-N=CH-), 2-aza-3-hidroximetil-butadieno-1,4-diilo (-CH=C[CH_{2}OH]-N=CH-), 2-aza-1-hidroxi-1-(4-metoxi-fenil-amino)-heptano-2,7-diilo {-(CH_{2})_{4}-N[-CH(OH)-NH-C_{6}H_{4}-OCH_{3}]-}, 3-oxa-pentano-1,5-diilo, N-(alcoxi inferior)-carbonil-3-aza-pentano-1,5-diilo, N-(alcano(C_{1}-C_{12})-il)-3-aza-pentano-1,5-diilo, N-benzoil-3-aza-pentano-1,5-diilo o N-(pirid-2-il-carbonil)-3-aza-pentano-1,5-diilo,

en lo anteriormente mencionado, el término "inferior" utilizado a lo largo de la reivindicación, define un radical que tiene hasta e incluyendo un máximo de 7 átomos de carbono,

o una sal, solvato y tautómero del mismo.

2. 4-(3-Cloro-fenilamino)-3-(4-{ureido-metil}-fenilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma según la reivindicación 1.

3. 4-(3-Cloro-fenilamino)-3-(3-piridilamino)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma según la reivindicación 1.

4. 4-(3-Cloro-fenilamino)-3-[(pirid-4-il)-metilamino]-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma según la reivindicación 1.

5. Compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de este tipo para su uso en un método para el tratamiento terapéutico del organismo humano o animal.

6. Composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de este tipo, junto con un vehículo farmacéutico.

7. Composición farmacéutica para el tratamiento de tumores en animales de sangre caliente; incluyendo seres humanos, que comprende un compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de ese tipo en una dosis eficaz frente a tumores, junto con un vehículo farmacéutico.

8. Uso de un compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o de una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de este tipo en la producción de composiciones farmacéuticas para su uso en la quimioterapia de tumores.

9. Compuesto de fórmula I según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de este tipo para su uso en la quimioterapia de tumores.

10. Procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula I según la reivindicación 1 o de una sal, solvato o tautómero del mismo, en el que

a) un compuesto de fórmula IV

29

en la que R_{7} es hidrógeno o metilo, R_{6} es alcoxilo que tiene desde 1 hasta 3 átomos de carbono o nitro, r es un número entero desde 0 hasta 2, y los otros sustituyentes y símbolos son como se definieron anteriormente, se trata con un ácido de Lewis adecuado, o

b) un compuesto de fórmula V

30

en la que los símbolos son como se definieron anteriormente, se hace reaccionar con una amina de fórmula VI

31

en la que v es 1 y los otros símbolos son como se definieron anteriormente, o con una sal de la misma, en presencia de ácido fórmico, o

c) un compuesto de fórmula V

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32

en la que los símbolos son como se definieron anteriormente, se hace reaccionar con un derivado de formamida de fórmula VII

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33

en la que v es 1 y los otros símbolos son como se definieron anteriormente, o

d) un compuesto de fórmula VIII

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34

\vskip1.000000\baselineskip

en la que los símbolos son como se definieron anteriormente, se hace reaccionar con una amina de fórmula VI

\vskip1.000000\baselineskip

35

\vskip1.000000\baselineskip

en la que v es 0 o 1 y los otros símbolos son como se definieron anteriormente, o con una sal de la misma, o

e) un compuesto de fórmula IX

36

en la que v es 0 y los otros símbolos son como se definieron anteriormente, se somete a las condiciones de un reordenamiento de Dimroth,

y, si se desea, un compuesto de fórmula I que puede obtenerse según uno cualquiera de los procedimientos a) a e) se convierte en su sal, o una sal resultante de un compuesto de fórmula I se convierte en el compuesto libre.