ES2269217T3 - Compuestos especificos para los receptores a1, a2a y a3 de adenosina y sus usos. - Google Patents
Compuestos especificos para los receptores a1, a2a y a3 de adenosina y sus usos. Download PDFInfo
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Abstract
Un compuesto que tiene la estructura, en la que R1 es y R2 es un átomo de hidrógeno; o NR1R2 son conjuntamente, en la que R3 es un grupo fenilo sustituido o sin sustituir, un grupo pirrol, un grupo tiofe- no, un grupo furano, un grupo tiazol, un grupo imidazol, un grupo triazol, un grupo pi- razol, un grupo piridina, un grupo 2(1H)-piridona, un grupo 4(1H)-piridona, un grupo pirazina, un grupo pirimidina, un grupo piridazina, un grupo isotiazol, un grupo isoxa- zol, un grupo oxazol, un grupo tetrazol, un grupo naftilo, un grupo tetralina, un grupo benzofurano, un grupo benzotiofeno, un grupo 2, 3-dihidroindol, un grupo 1H-indol, un grupo indolilo, un grupo benzopirazol, un grupo 1, 3-benzodioxol, un grupo benzoxazol, un grupo purina, un grupo cumarina, un grupo cromona, un grupo quinolilo, un grupo tetrahidroquinolina, un grupo isoquinolina, un grupo benzimidazol, un grupo quinazoli- na, un grupo pteridina, un grupo 2(1H)-quinolona, un grupo 1(2H)-isoquinolona, un grupo 1, 4-benzisoxazina,un grupo benzotiazol, un grupo quinoxalina, un grupo quino- lina-N-óxido, un grupo isoquinolina-N-óxido, un grupo quinoxalina-N-óxido, un grupo quinazolina-N-óxido, un grupo benzoxazina, un grupo ftalazina o un grupo cinolina; en la que R5 es un átomo de H, un grupo CH3, un grupo alquilo sustituido o sin sustituir, un grupo arilo o un grupo fenilo.
Description
Compuestos específicos para los receptores
A_{1}, A_{2a} y A_{3} de adenosina y sus usos.
A lo largo de esta solicitud se hace referencia
a compuestos que específicamente se enlazan a: i) receptores A_{1}
de la adenosina, ii) receptores A_{2a} de la adenosina y
receptores A_{3} de la adenosina.
La adenosina es un agente modulador ubicuo de
numerosas actividades fisiológicas, particularmente dentro de los
sistemas cardiovascular y nervioso. Los efectos de la adenosina
parece que están mediados por proteínas receptoras específicas de la
superficie celular. La adenosina modula diversas funciones
fisiológicas que incluyen la inducción de sedación, vasodilatación,
supresión del ritmo cardíaco y de la contractibilidad cardiaca,
inhibición de la agregación de las plaquetas, estimulación de la
gluconeogénesis e inhibición de la lipolisis. Además de sus efectos
sobre la adenilato ciclasa, se ha mostrado que la adenosina abre los
canales del potasio, reduce el flujo a través de los canales del
calcio, e inhibe o estimula la producción de fosfoinositida por
medio de mecanismos mediados por receptores (véase por ejemplo, C.E.
Muller y B. Stein "Adenosine Receptor Antagonists: Structures and
Potencial Therapeutic Applications", Current Pharmaceutical
Design, 2:501 (1996) y C.E. Muller
"A_{1}-Adenosine Receptor Antagonists",
Exp. Opin. Ther. Patents 7(5): 419 (1997)).
Los receptores de la adenosina pertenecen a la
superfamilia de los receptores purinérgicos que actualmente se
subdividen en receptores P_{1} (adenosina) y P_{2} (ATP, ADP y
otros nucleótidos). Hasta ahora se han clonado cuatro subtipos de
receptores del nucleósido adenosina a partir de varias especies que
incluyen los seres humanos. Dos subtipos de receptores (A_{1} y
A_{2a}) exhiben afinidad por la adenosina a escala nanomolar
mientras que los otros dos subtipos conocidos A_{2b} y A_{3} son
receptores de baja afinidad, estando la afinidad por la adenosina en
la escala micromolar baja. La activación de los receptores A_{1} y
A_{3} de la adenosina puede conducir a una inhibición de la
actividad de la adenilato ciclasa, mientras que la activación de
A_{2a} y A_{2b} provoca la estimulación de la adenilato
ciclasa.
Se han desarrollado unos pocos agentes
antagonistas de los receptores A_{1} para el tratamiento de la
enfermedad cognitiva, el fallo renal y las arritmias cardiacas. Se
ha sugerido que los agentes antagonistas de los receptores A_{2a}
pueden ser beneficiosos para pacientes que padecen la enfermedad de
Parkinson. Particularmente, en vista del potencial para el
suministro local, los agentes antagonistas de los receptores de la
adenosina pueden ser valiosos para el tratamiento de la inflamación
alérgica y del asma. La información disponible (por ejemplo, Nyce
& Metzger "DNA antisense Therapy for Asthma in an Animal
Model" Nature (1997) 385: 721-5) indica
que en este contexto patofisiológico, los agentes antagonistas de
los receptores A_{1} pueden bloquear la contracción del músculo
liso que se extiende debajo del epitelio respiratorio, mientras que
los agentes antagonistas de los receptores A_{2b} o A_{3} pueden
bloquear la desgranulación de las células cebadas mitigando la
liberación de la histamina y de otros agentes mediadores
inflamatorios. Se han descubierto receptores A_{2b} a lo largo del
tracto gastrointestinal, especialmente en el colon y en el epitelio
intestinal. Se ha sugerido que los receptores A_{2b} median la
respuesta al cAMP (Strohmeir et al., J. Bio. Chem.
(1995) 270:2387-94).
También se ha mostrado que los receptores de la
adenosina existen en las retinas de varias especies de mamíferos que
incluyen la especie bovina, porcina, monos, ratas, cobayas, ratones,
conejos y seres humanos (véase Blazynski et al., Discrete
Distributions of Adenosine Receptors in Mammalian Retina, Journal of
Neurochemistry, volumen 54, páginas 648-655
(1990); Woods et al., Characterization of Adenosine
A_{1}-Receptor Binding Sites in Bovine Retinal
Membranes, Experimental Eye Research, volumen 53, páginas
325-331 (1991); y Braas et al., Endogenous
adenosine and adenosine receptors localized to ganglion cells of the
retina, Proceedings of the Nacional Academy of Science, volumen
84, páginas 3906-3910 (1987)). Recientemente,
Williams informó sobre la observación de sitios para el transporte
de adenosina en un linaje celular retinal cultivado de ser humano
(Williams et al., Nucleoside Transport Sites in a Cultured Human
Retinal Cell Line Established By SV-40 T Antigen
Gene, Current Eye Research, volumen 13, páginas
109-118 (1994)).
Müller et al., Journal of Medicinal
Chemistry, vol. 39, 1996, p. 2482-2491,
describen derivados de
pirrolo[2,3-d]pirimidina como agentes
antagonistas de los receptores de la adenosina.
Dooley M.J. et al., Bioorganic &
Medicinal Chemistry, vol. 4, nº 6, 1996, p.
923-934, describen estudios teóricos de actividad -
estructura de ligandos de los receptores A_{1} de la adenosina, en
particular con respecto a los requisitos para la afinidad a los
receptores.
Müller et al., Journal of Medicinal
Chemistry, vol. 33, 1990, p. 2822-2828,
describen las relaciones estructura - actividad de potentes agentes
antagonistas de los receptores de la adenosina selectivos de los
receptores A_{1}, en particular de
7-deaza-2-feniladeninas.
Previamente, se han sugerido compuestos que
regulan la absorción de la adenosina como agentes terapéuticos
potenciales para el tratamiento del daño retinal y de la cabeza del
nervio óptico. En la Patente de EE.UU. nº 5.780.450 de Shade, Shade
discute el uso de agentes inhibidores de la absorción de la
adenosina para el tratamiento de trastornos de los ojos. Shade no
describe el uso de agentes inhibidores específicos de los receptores
A_{3}.
Se necesitan agentes antagonistas adicionales de
los receptores de la adenosina como herramientas farmacológicas y
son de considerable interés como fármacos para las enfermedades y/o
estados clínicos anteriormente referenciados.
La presente invención se basa en compuestos que
se enlazan selectivamente a un receptor A_{1} de la adenosina,
tratando de este modo una enfermedad asociada con el receptor
A_{1} de la adenosina en un sujeto administrando una cantidad
terapéuticamente efectiva de tales compuestos. La enfermedad a
tratar está asociada con una enfermedad cognitiva, el fallo renal,
las arritmias cardiacas, el epitelio respiratorio, la liberación de
transmisores, la sedación, la vasoconstricción, la bradicardia, la
inotropia y la dromotropia cardiacas negativas, la
broncoconstricción, la quimiotaxis de neutrófilos, una enfermedad de
reflujo o una enfermedad ulcerante.
La presente invención se basa, al menos en
parte, en el descubrimiento de que ciertas
7-deazapurinas N-6 sustituidas,
descritas más adelante, pueden usarse para tratar un estado que
responde a las 7-deazapurinas N-6
sustituidas. Ejemplos de tales estados incluyen aquellos en los que
se acrecienta la actividad de los receptores de la adenosina, por
ejemplo, la bronquitis, los trastornos gastrointestinales o el asma.
Estos estados pueden caracterizarse porque la activación de los
receptores de la adenosina puede conducir a la inhibición o a la
estimulación de la actividad de la adenilato ciclasa. Las
composiciones y los métodos de la invención incluyen
7-deazapurinas N-6 sustituidas
enantiómera o diastereómeramente puras. Las
7-deazapurinas N-6 sustituidas
preferidas incluyen las que tienen un resto acetamida, un resto
carboxamida, un resto ciclohexilo sustituido, por ejemplo
ciclohexanol, o un resto urea unido al nitrógeno N-6
por medio de una cadena de alquileno.
La presente invención está relacionada con el
uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de una
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6 para modular a un o unos receptores de la
adenosina en un mamífero tal que se produzca la modulación de la
actividad del o de los receptores de la adenosina. Los receptores de
la adenosina adecuados incluyen las familias de los receptores
A_{1}, A_{2} o A_{3}. En una realización preferida, la
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6 es un agente antagonista de los receptores de la
adenosina.
La invención se relaciona además con el uso de
una cantidad terapéuticamente efectiva de una
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6 para tratar trastornos con una
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6, por ejemplo asma, bronquitis, rinitis alérgica,
enfermedad obstructiva pulmonar crónica, trastornos renales,
trastornos gastrointestinales y trastornos oculares, en un mamífero,
tal que se produzca el tratamiento del trastorno en el mamífero. Las
7-deazapurinas N-6 sustituidas
adecuadas incluyen las ilustradas por la fórmula general I:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R_{1}
es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y R_{2} es un átomo de hidrógeno;
o
NR_{1}R_{2} son conjuntamente
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R_{3} es un grupo
fenilo sustituido o sin sustituir, un grupo pirrol, un grupo
tiofeno, un grupo furano, un grupo tiazol, un grupo imidazol, un
grupo triazol, un grupo pirazol, un grupo piridina, un grupo
2(1H)-piridona, un grupo
4(1H)-piridona, un grupo pirazina, un grupo
pirimidina, un grupo piridazina, un grupo isotiazol, un grupo
isoxazol, un grupo oxazol, un grupo tetrazol, un grupo naftilo, un
grupo tetralina, un grupo benzofurano, un grupo benzotiofeno, un
grupo 2,3-dihidroindol, un grupo
1H-indol, un grupo indolilo, un grupo benzopirazol,
un grupo 1,3-benzodioxol, un grupo benzoxazol, un
grupo purina, un grupo cumarina, un grupo cromona, un grupo
quinolilo, un grupo tetrahidroquinolina, un grupo isoquinolina, un
grupo benzimidazol, un grupo quinazolina, un grupo pteridina, un
grupo 2(1H)-quinolona, un grupo
1(2H)-isoquinolona, un grupo
1,4-benzisoxazina, un grupo benzotiazol, un grupo
quinoxalina, un grupo quinolina-N-óxido, un grupo
isoquinolina-N-óxido, un grupo
quinoxalina-N-óxido, un grupo
quinazolina-N-óxido, un grupo benzoxazina, un grupo
ftalazina o un grupo
cinolina;
en la que R_{5} es un átomo de H, un grupo
CH_{3}, un grupo alquilo sustituido o sin sustituir, un grupo
arilo o un grupo fenilo, o un grupo
y en la que R_{6} es un átomo de
H, un grupo CH_{3}, un grupo alquilo sustituido o sin sustituir,
un grupo
cicloalquilo,
o una de sus sales farmacéuticamente
aceptables,
en la que cuando R_{1} es un grupo
R_{3} es un grupo fenilo;
R_{5} es un grupo
y R_{6} es un átomo de
H;
en la que X es un átomo de O ó un átomo de S;
y
en la que cuando R_{1} es un grupo
R_{3} es un grupo fenilo;
R_{5} es un grupo fenilo, y
R_{6} es un átomo de H;
en la que cuando R_{1} es un grupo
R_{3} es un grupo
4-clorofenilo;
R_{5} y R_{6} son cada uno un átomo de
H;
en la que cuando R_{1} es un grupo
R_{5} y R_{6} son cada uno
independientemente un átomo de H o un grupo alquilo;
en la que cuando R_{1} es un grupo
R_{3} es un grupo fenilo; y
R_{5} y R_{6} son ambos un átomo de H, o
R_{3} es un grupo fenilo;
R_{5} es un grupo
y R_{6} es un átomo de H,
o
R_{3} es un grupo
4-piridilo;
R_{5} es un grupo CH_{3} y R_{6} es un
grupo
Además, la invención se relaciona con
composiciones farmacéuticas para tratar en un mamífero un estado que
responde a una 7-deazapurina N-6
sustituida, por ejemplo asma, bronquitis, rinitis alérgica,
enfermedad pulmonar obstructiva crónica, trastornos renales,
trastornos gastrointestinales y trastornos oculares. La composición
farmacéutica incluye una cantidad terapéuticamente efectiva de una
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La presente invención también se relaciona con
composiciones farmacéuticas envasadas para tratar en un mamífero un
estado que responde a una 7-deazapurina
N-6 sustituida. La composición farmacéutica envasada
incluye un recipiente que contiene una cantidad terapéuticamente
efectiva de al menos una 7-deazapurina sustituida en
la posición N-6 e instrucciones para usar la
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6 para tratar en un mamífero un estado que
responde a una 7-deazapurina sustituida en la
posición N-6.
Las deazapurinas de la presente invención pueden
ser ventajosamente agentes antagonistas selectivos de los receptores
A_{3}. Estos compuestos pueden ser útiles para numerosos usos
terapéuticos tales como, por ejemplo, el tratamiento el asma, el
fallo renal asociado con el fallo cardiaco, y el glaucoma. En una
realización particularmente preferida, la deazapurina es un
profármaco soluble en agua que es capaz de ser metabolizado in
vivo para dar un fármaco activo mediante, por ejemplo,
hidrólisis catalizada por una esterasa.
En un aspecto, la invención incorpora un método
para inhibir en una célula in vitro la actividad de un
receptor de la adenosina (por ejemplo, A_{3}) poniendo en contacto
la célula con una 7-deazapurina sustituida en la
posición N-6 (por ejemplo, preferiblemente, un
agente antagonista de los receptores de la adenosina).
En otro aspecto, la invención incorpora el uso
de una cantidad efectiva de una 7-deazapurina
sustituida en la posición N-6 de fórmula I para
tratar el daño en el ojo de un mamífero (por ejemplo, un ser
humano). Preferiblemente, la 7-deazapurina
sustituida en la posición N-6 es un agente
antagonista de los receptores A_{3} de la adenosina en células del
animal. El daño es a la retina o a la cabeza del nervio óptico y
puede ser agudo o crónico. El daño puede ser el resultado de, por
ejemplo, glaucoma, edema, isquemia, hipoxia o traumatismo.
La invención también incorpora una composición
farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I sustituido en
la posición N-6. Preferiblemente, la preparación
farmacéutica es una formulación oftálmica (por ejemplo, una
formulación para inyección periocular, retrobulbar o intraocular,
una formulación sistémica o una disolución para la irrigación
quirúgica).
La invención se relaciona además con un método
para inhibir en una célula in vitro la actividad de un
receptor de la adenosina (por ejemplo, un receptor A_{2b} de la
adenosina) poniendo en contacto la célula con un compuesto de la
invención. Preferiblemente, el compuesto es un agente antagonista
del receptor.
La invención también se relaciona con el uso de
una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I (por ejemplo, un
agente antagonista de los receptores A_{2b}) para tratar un
trastorno gastrointestinal (por ejemplo, diarrea) o un trastorno
respiratorio (por ejemplo, rinitis alérgica, enfermedad pulmonar
obstructiva crónica) en un animal. Preferiblemente, el animal es un
ser humano.
Esta invención también incorpora un método para
inhibir en una célula in vitro la actividad de un receptor
A_{1} de la adenosina, el cual comprende poner en contacto dicha
célula con los compuestos anteriormente mencionados.
Las características y otros detalles de la
invención se describirán ahora más particularmente y se señalarán en
las reivindicaciones. Se entenderá que las realizaciones
particulares de la invención se muestran a modo de ilustración y no
como limitaciones de la invención. Las características de los
principios de esta invención pueden emplearse en varias
realizaciones sin apartarse del alcance de la invención.
La presente invención se relaciona con el uso de
una cantidad terapéuticamente efectiva de una
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6 descrita más adelante, para tratar en un
mamífero un estado que responde a la 7-deazapurina
sustituida en la posición N-6.
Se pretende que la expresión "estado que
responde a una 7-deazapurina sustituida en la
posición N-6" incluya un estado enfermizo o
enfermedad caracterizada por su sensibilidad al tratamiento con una
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6 de la invención que se describe más adelante,
por ejemplo, el tratamiento incluye una disminución significativa de
al menos un síntoma o efecto del estado logrado con una
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6 de la invención. Típicamente, tales estados
están asociados con un aumento de adenosina dentro de un huésped tal
que el huésped experimenta con frecuencia síntomas fisiológicos que
incluyen, pero no se limitan a, liberación de toxinas, inflamación,
coma, retención de agua, ganancia o pérdida de peso, pancreatitis,
enfisema, artritis reumatoide, osteoartritis, fallo orgánico
múltiple, síndrome de insuficiencia respiratoria en niños y adultos,
rinitis alérgica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica,
trastornos oculares, trastornos gastrointestinales, promoción de
tumores de la piel, inmunodeficiencia y asma. (Véase por ejemplo,
C.E. Muller y B. Stein "Adenosine Receptor Antagonists:
Structures and Potencial Therapeutic Applications", Current
Pharmaceutical Design, 2:501 (1996) y C.E. Muller
"A_{1}-Adenosine Receptor Antagonists",
Exp. Opin. Ther. Patents 7(5):419 (1997) e I.
Feoktistove, R. Polosa, S.T. Holgate e I. Biaggioni "Adenosine
A_{2b} receptors: a novel therapeutic target in asthma?" TiPS
19; 148 (1998)). Los efectos con frecuencia asociados con
tales síntomas incluyen, pero no se limitan a, fiebre, falta de
aire, nausea, diarrea, debilidad, dolor de cabeza e incluso muerte.
En una realización, un estado sensible a una
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6 incluye los estados enfermizos que están
mediados por la estimulación de receptores de la adenosina, por
ejemplo, los receptores A_{1}, A_{2a}, A_{2b}, A_{3}, etc.,
tal que se modulen las concentraciones de calcio en las células y/o
la activación de la PLC (fosfolipasa C). En una realización
preferida, un estado enfermizo sensible a una
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6 está asociado con un o unos receptores de la
adenosina, por ejemplo, la 7-deazapurina sustituida
en la posición N-6 actúa como un agente antagonista.
Ejemplos de estados sensibles adecuados que pueden tratarse con los
compuestos de la invención, por ejemplo, subtipos de receptores de
la adenosina que median efectos biológicos, incluyen efectos del
sistema nervioso central (SNC), efectos cardiovasculares, efectos
renales, efectos respiratorios, efectos inmunológicos, efectos
gastrointestinales y efectos metabólicos. La cantidad relativa de
adenosina en un sujeto puede asociarse con los efectos listados más
adelante; es decir, concentraciones elevadas de adenosina pueden
activar un efecto, por ejemplo, una respuesta fisiológica no
deseada, por ejemplo, un ataque asmático.
Los efectos sobre el SNC incluyen una liberación
de transmisores reducida (A_{1}), sedación (A_{1}), actividad
locomotriz disminuida (A_{2a}), actividad anticonvulsiva,
estimulación de quimiorreceptores (A_{2}) e hiperalgesia. Las
aplicaciones terapéuticas de los compuestos de la invención incluyen
el tratamiento de la demencia, de la enfermedad de Alzheimer y la
potenciación de la memoria.
Los efectos cardiovasculares incluyen
vasodilatación (A_{2a}), (A_{2b}) y (A_{3}), vasoconstricción
(A_{1}), bradicardia (A_{1}), inhibición de las plaquetas
(A_{2a}), inotropia y dromotropia cardiacas negativas (A_{1}),
arritmia, taquicardia y angiogenesis. Las aplicaciones terapéuticas
de los compuestos de la invención incluyen, por ejemplo, la
prevención del deterioro del corazón inducido por la isquemia y
cardiotónicos, protección del tejido miocardial y restauración de la
función cardiaca.
Los efectos renales incluyen GFR disminuida
(A_{1}), contracción de las células mesangiales (A_{1}),
antidiuresis (A_{1}) e inhibición de la liberación de la renina
(A_{1}). Las aplicaciones terapéuticas adecuadas de los compuestos
de la invención incluyen el uso de los compuestos de la invención
como agentes diuréticos, natriuréticos, ahorradores de potasio, de
protección del riñón/prevención del fallo agudo renal,
antihipertensores, antiedematosos y antinefríticos.
Los efectos respiratorios incluyen
broncodilatación (A_{2}), broncoconstricción (A_{1}), enfermedad
pulmonar obstructiva crónica, rinitis alérgica, secreción de moco y
depresión respiratoria (A_{2}). Las aplicaciones terapéuticas
adecuadas de los compuestos de la invención incluyen aplicaciones
antiasmáticas, tratamiento de enfermedades pulmonares después del
transplante y trastornos respiratorios.
Los efectos inmunológicos incluyen
inmunosupresión (A_{2}), quimiotaxis de neutrófilos (A_{1}),
generación de radicales superóxido por neutrófilos (A_{2a}) y
desgranulación de células cebadas (A_{2b} y A_{3}). Las
aplicaciones terapéuticas de los agentes antagonistas incluyen
inflamación alérgica y no alérgica, por ejemplo, liberación de
histamina y de otros agentes mediadores inflamatorios.
Los efectos gastrointestinales incluyen la
inhibición de la secreción de ácidos (A_{1}), la aplicación
terapéutica puede incluir estados clínicos de reflujo o ulcerantes.
Los efectos gastrointestinales también incluyen enfermedades del
colon, intestinales y diarrea, por ejemplo, diarrea asociada con
inflamación intestinal (A_{2b}).
Los trastornos oculares incluyen lesiones
retinales y de la cabeza del nervio óptico y trastornos relacionados
con traumatismos (A_{3}). En una realización preferida, el
trastorno ocular es glaucoma.
Otras aplicaciones terapéuticas de los
compuestos de la invención incluyen el tratamiento de la obesidad
(propiedades lipolíticas), hipertensión, tratamiento de la
depresión, sedación, agentes ansiolíticos, como agentes antilépticos
y como agentes laxantes, por ejemplo, que producen motilidad sin
provocar diarrea.
Se pretende que la expresión "estado
enfermizo" incluya las enfermedades provocadas por o asociadas
con concentraciones o valores no deseados de adenosina, actividad de
adenilil ciclasa, actividad fisiológica acrecentada asociada con la
estimulación aberrante de receptores de adenosina y/o un aumento de
cAMP. En una realización, el estado enfermizo es, por ejemplo, asma,
enfermedad pulmonar obstructiva crónica, rinitis alérgica,
bronquitis, trastornos renales, trastornos gastrointestinales o
trastornos oculares. Ejemplos adicionales incluyen bronquitis
crónica y fibrosis cística. Ejemplos adecuados de enfermedades
inflamatorias incluyen leucemia no linfocítica, isquemia miocardial,
angina, infarto, isquemia cerebrovascular, claudicación
intermitente, isquemia crítica del limbo, hipertensión venosa, venas
varicosas, ulceración venosa y arteriosclerosis. Los estados de
reperfusión deteriorados incluyen, por ejemplo, cualquier
traumatismo posquirúrgico, tal como la cirugía reconstructiva, la
trombolisis o la angioplastia.
Se pretende que las expresiones "tratamiento
de un estado sensible a una 7-deazapurina sustituida
en la posición N-6" o "que trata un estado
sensible a una 7-deazapurina sustituida en la
posición N-6" incluyan cambios en un estado
enfermizo o en un estado clínico, como se describieron
anteriormente, tal que se puedan disminuir o minimizar
significativamente los síntomas fisiológicos en un mamífero. Las
expresiones también incluyen el control, la prevención o la
inhibición de síntomas o efectos fisiológicos asociados con una
cantidad aberrante de adenosina. En una realización preferida, el
control del estado enfermizo o clínico es tal que se erradica el
estado enfermizo o clínico. En otra realización preferida, el
control es selectivo tal que se controlan los niveles aberrantes de
actividad de los receptores de la adenosina mientras que no son
afectados otros sistemas y parámetros fisiológicos.
La expresión "7-deazapurina
sustituida en la posición N-6" está reconocida en
la técnica y se pretende que incluya los compuestos que tienen la
fórmula I:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La expresión "7-deazapurina
N-sustituida" incluye sus sales farmacéuticamente
aceptables.
La expresión "cantidad terapéuticamente
efectiva" de una 7-deazapurina sustituida en la
posición N-6, descrita más adelante, es la cantidad
de un compuesto terapéutico necesaria o suficiente para realizar su
función pretendida dentro de un mamífero, por ejemplo tratar en un
mamífero un estado o estado enfermizo sensible a una
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6. La cantidad efectiva del compuesto terapéutico
puede variar según factores tales como la cantidad del agente
causante ya presente en el mamífero, la edad, el sexo y el peso del
mamífero, y la capacidad de los compuestos terapéuticos de la
presente invención para afectar en el mamífero al estado sensible a
una 7-deazapurina sustituida en la posición
N-6.
Un experto en la técnica sería capaz de estudiar
los factores anteriormente mencionados y realizar una determinación
con respecto a la cantidad efectiva del compuesto terapéutico sin
experimentación excesiva. Para determinar la "cantidad
efectiva" de los compuestos terapéuticos de más adelante también
puede usarse un ensayo in vitro o in vivo. Los
expertos seleccionarían una cantidad apropiada del compuesto
terapéutico para usar en el ensayo anteriormente mencionado o como
un tratamiento terapéutico.
La cantidad terapéuticamente efectiva disminuye
preferiblemente al menos un síntoma o efecto asociado con el estado
o enfermedad sensible a una 7-deazapurina sustituida
en la posición N-6 que se está tratando en al menos
aproximadamente 20% (más preferiblemente en al menos aproximadamente
40%, incluso más preferiblemente en al menos aproximadamente 60% y
aún más preferiblemente en al menos aproximadamente 80%) con
relación a los sujetos no tratados. Un experto en la técnica puede
diseñar ensayos para medir la disminución de tales síntomas y/o
efectos. Se pretende que cualquier ensayo reconocido en la técnica
capaz de medir tales parámetros esté incluido como parte de esta
invención. Por ejemplo, si el estado que se trata es el asma,
entonces puede medirse el volumen de aire expelido por los pulmones
de un sujeto antes y después del tratamiento para la medida del
aumento del volumen usando una técnica reconocida en la técnica.
Asimismo, si el estado que se trata es una inflamación, entonces
puede medirse el área que está inflamada antes y después del
tratamiento para la medida de la disminución del área inflamada
usando una técnica reconocida en la técnica.
El término "célula" incluye tanto a las
células procariotas como a las eucariotas.
El término "animal" incluye cualquier
organismo con receptores de la adenosina o cualquier organismo
susceptible a un estado sensible a una 7-deazapurina
sustituida en la posición N-6. Ejemplos de animales
incluyen levaduras, mamíferos, reptiles y pájaros. También incluye
animales transgénicos.
El término "mamífero" está reconocido en la
técnica y se pretende que incluya un animal, más preferiblemente un
animal de sangre caliente, mucho más preferiblemente ganado vacuno,
ovejas, cerdos, caballos, perros, gatos, ratas, ratones y seres
humanos. Por ejemplo, están incluidos como parte de esta invención
los mamíferos susceptibles a un estado sensible a una
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6, a la inflamación, al enfisema, al asma, a
estados clínicos del sistema nervioso central o al síndrome de
insuficiencia respiratoria aguda.
En otro aspecto, la presente invención se
relaciona con el uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de
una 7-deazapurina sustituida en la posición
N-6 para modular en un mamífero a uno o a unos
receptores de la adenosina. Los receptores de la adenosina adecuados
incluyen las familias A_{1}, A_{2} o A_{3}. En una realización
preferida, la 7-deazapurina sustituida en la
posición N-6 es un agente antagonista de los
receptores de la adenosina.
Se pretende que la expresión "que modula a un
receptor de la adenosina" incluya los casos en los que un
compuesto interacciona con uno o unos receptores de la adenosina,
provocando una actividad fisiológica acrecentada, disminuida o
anormal asociada con un receptor de la adenosina o una cascada
subsiguiente de efectos que resultan de la modulación del receptor
de la adenosina. Las actividades fisiológicas asociadas con los
receptores de la adenosina incluyen la inducción de sedación,
vasodilatación, supresión del ritmo y de la contractilidad cardiaca,
inhibición de la agregabilidad de las plaquetas, estimulación de la
gluconeogénesis, inhibición de la lipolisis, apertura de los
canales del calcio, reducción del flujo de los canales del calcio,
etc.
Se pretende que los términos "modular",
"que modula" y "modulación" incluyan la prevención,
erradicación o inhibición del aumento resultante de la actividad
fisiológica no deseada asociada con la estimulación anormal de un
receptor de la adenosina, por ejemplo, en el contexto de los métodos
terapéuticos de la invención. En otra realización, el término
"modular" incluye efectos antagonistas, por ejemplo la
disminución de la actividad o de la producción de agentes mediadores
de la alergia y de la inflamación alérgica que se produce por la
sobreestimulación del o de los receptores de la adenosina. Por
ejemplo, las deazapurinas terapéuticas de la invención pueden
interaccionar con un receptor de la adenosina para, por ejemplo,
inhibir la actividad de la adenilato ciclasa.
Se pretende que la expresión "estado clínico
caracterizado por una actividad aberrante de un receptor de la
adenosina" incluya las enfermedades, trastornos o estados
clínicos que están asociados con la estimulación aberrante de un
receptor de la adenosina, porque la estimulación del receptor
provoca una cadena de sucesos bioquímicos o fisiológicos que está
directa o indirectamente asociada con la enfermedad, trastorno o
estado clínico. Esta estimulación de un receptor de la adenosina no
tiene que ser el único agente causante de la enfermedad, trastorno o
estado clínico, sino simplemente ser responsable de provocar algunos
de los síntomas típicamente asociados con la enfermedad, trastorno o
estado clínico que se trata. La estimulación aberrante del receptor
puede ser el único factor o al menos algún otro agente puede estar
involucrado en el estado que se trata. Ejemplos de estados clínicos
incluyen los estados enfermizos listados anteriormente, que incluyen
las inflamaciones, los trastornos gastrointestinales y los síntomas
manifestados por la presencia de una actividad acrecentada del
receptor de la adenosina. Ejemplos preferidos incluyen los síntomas
asociados con asma, rinitis alérgica, enfermedad pulmonar
obstructiva crónica, enfisema, bronquitis, trastornos
gastrointestinales y glaucoma.
Se pretende que la expresión "que trata o
tratamiento de un estado clínico caracterizado por una actividad
aberrante de un receptor de la adenosina" incluya el alivio o la
disminución de al menos un síntoma típicamente asociado con el
estado clínico. El tratamiento también incluye el alivio o la
disminución de más de un síntoma. Preferiblemente, el tratamiento
cura, por ejemplo, elimina sustancialmente, los síntomas asociados
con el estado clínico.
La presente invención se relaciona con
compuestos, 7-deazapurinas N-6
sustituidas, que tienen la fórmula I:
en la que R_{1}
es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y R_{2} es un átomo de hidrógeno;
o
NR_{1}R_{2} son conjuntamente
en la que R_{3} es un grupo
fenilo sustituido o sin sustituir, un grupo pirrol, un grupo
tiofeno, un grupo furano, un grupo tiazol, un grupo imidazol, un
grupo triazol, un grupo pirazol, un grupo piridina, un grupo
2(1H)-piridona, un grupo
4(1H)-piridona, un grupo pirazina, un grupo
pirimidina, un grupo piridazina, un grupo isotiazol, un grupo
isoxazol, un grupo oxazol, un grupo tetrazol, un grupo naftilo, un
grupo tetralina, un grupo benzofurano, un grupo benzotiofeno, un
grupo 2,3-dihidroindol, un grupo
1H-indol, un grupo indolilo, un grupo benzopirazol,
un grupo 1,3-benzodioxol, un grupo benzoxazol, un
grupo purina, un grupo cumarina, un grupo cromona, un grupo
quinolilo, un grupo tetrahidroquinolina, un grupo isoquinolina, un
grupo benzimidazol, un grupo quinazolina, un grupo pteridina, un
grupo 2(1H)-quinolona, un grupo
1(2H)-isoquinolona, un grupo
1,4-benzisoxazina, un grupo benzotiazol, un grupo
quinoxalina, un grupo quinolina-N-óxido, un grupo
isoquinolina-N-óxido, un grupo
quinoxalina-N-óxido, un grupo
quinazolina-N-óxido, un grupo benzoxazina, un grupo
ftalazina o un grupo
cinolina;
\newpage
en la que R_{5} es un átomo de H, un grupo
CH_{3}, un grupo alquilo sustituido o sin sustituir, un grupo
arilo o un grupo fenilo, o un grupo
y en la que R_{6} es un átomo de
H, un grupo CH_{3}, un grupo alquilo sustituido o sin sustituir,
un grupo
cicloalquilo,
o una de sus sales farmacéuticamente
aceptables,
en la que cuando R_{1} es un grupo
R_{3} es un grupo fenilo;
R_{5} es un grupo
y R_{6} es un átomo de
H;
en la que X es un átomo de O ó un átomo de S;
y
en la que cuando R_{1} es un grupo
R_{3} es un grupo fenilo;
R_{5} es un grupo fenilo, y
R_{6} es un átomo de H;
en la que cuando R_{1} es un grupo
R_{3} es un grupo
4-clorofenilo;
R_{5} y R_{6} son cada uno un átomo de
H;
en la que cuando R_{1} es un grupo
R_{5} y R_{6} son cada uno
independientemente un átomo de H o un grupo alquilo;
en la que cuando R_{1} es un grupo
\vskip1.000000\baselineskip
R_{3} es un grupo fenilo; y
R_{5} y R_{6} son ambos un átomo de H, o
R_{3} es un grupo fenilo;
R_{5} es un grupo
y R_{6} es un átomo de H,
o
R_{3} es un grupo
4-piridilo;
R_{5} es un grupo CH_{3} y R_{6} es un
grupo
Los compuestos de la invención pueden comprender
profármacos solubles en agua que se describen en el documento WO
99/33815, la Solicitud Internacional nº PCT/US98/04595, presentada
el 9 de Marzo de 1998 y publicada el 8 de Julio de 1999. El
contenido completo del documento WO 99/33815 se incorpora
expresamente a la presente memoria por referencia. Los profármacos
solubles en agua se metabolizan in vivo para dar un fármaco
activo, por ejemplo mediante una hidrólisis catalizada por una
esterasa. Ejemplos de profármacos potenciales incluyen deazapurinas
con, por ejemplo, R_{1} como un grupo cicloalquilo sustituido con
un grupo -OC(O)(Z)NH_{2}, en el que Z es una cadena
lateral de un aminoácido que se encuentra o no en la naturaleza, o
uno de sus análogos, un \alpha, \beta, \gamma o \omega
aminoácido, o un dipéptido. Las cadenas laterales preferidas de
aminoácidos incluyen las de glicina, alanina, valina, leucina,
isoleucina, lisina, \alpha-metilalanina, ácido
aminociclopropanocarboxílico, ácido
azetidina-2-carboxílico,
\beta-alanina, ácido
\gamma-aminobutírico,
alanina-alanina o
glicina-alanina.
En una realización, la deazapurina es
4-(cis-3-hidroxiciclopentil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
En otra realización, la deazapurina es la sal de
4-(cis-3-(2-aminoacetoxi)ciclopentil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
del ácido trifluoroacético.
En aún otra realización, la invención incorpora
un método para inhibir la actividad de un receptor de la adenosina
(por ejemplo, A_{3}, A_{2A}, A_{2B}, o, preferiblemente
A_{3}) en una célula in vitro, poniendo en contacto a la
célula con una 7-deazapurina sustituida en la
posición N-6 (por ejemplo, preferiblemente, un
agente antagonista de los receptores de la adenosina).
En otro aspecto, la invención incorpora el uso
de una cantidad efectiva de una 7-deazapurina
sustituida en la posición N-6 para tratar el daño al
ojo de un animal (por ejemplo, un ser humano). Preferiblemente, la
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6 es un agente antagonista de los receptores
A_{3} de la adenosina en células del animal. El daño es a la
retina o a la cabeza del nervio óptico y puede ser agudo o crónico.
El daño puede ser el resultado de, por ejemplo, glaucoma, edema,
isquemia, hipoxia o traumatismo.
En otra realización, la invención se refiere a
una composición farmacéutica que contiene una
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6 de la invención y un vehículo farmacéuticamente
aceptable.
La invención también se relaciona con el uso de
una cantidad terapéuticamente efectiva de una deazapurina de la
invención para tratar en un animal un estado sensible a una
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6 tal que se produzca en el animal el tratamiento
de un estado sensible a una 7-deazapurina sustituida
en la posición N-6. Ventajosamente, el estado
enfermizo puede ser un trastorno mediado por adenosina. Ejemplos de
estados enfermizos preferidos incluyen: trastornos del sistema
nervioso central, trastornos cardiovasculares, trastornos renales,
trastornos inflamatorios, trastornos alérgicos, trastornos
gastrointestinales, trastornos oculares y trastornos
respiratorios.
La expresión "grupo alquilo" se refiere al
radical de grupos alifáticos saturados, que incluyen grupos alquilo
de cadena lineal, grupos alquilo de cadena ramificada, grupos
cicloalquilo (alicíclicos), grupos cicloalquilo sustituidos con
grupos alquilo y grupos alquilo sustituidos con grupos cicloalquilo.
La expresión grupo alquilo incluye además grupos alquilo que además
incluyen átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre o fósforo reemplazando
a uno o más átomos de carbono de la cadena principal hidrocarbonada,
por ejemplo átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre o fósforo. En las
realizaciones preferidas, un grupo alquilo de cadena lineal o
ramificada tiene 30 ó menos átomos de carbono en su cadena principal
(por ejemplo, C_{1}-C_{30} para una cadena
lineal, C_{3}-C_{30} para una cadena ramificada)
y más preferiblemente 20 ó menos. Asimismo, los grupos cicloalquilo
preferidos tienen 4-10 átomos de carbono en su
estructura de anillo, y más preferiblemente tienen 5, 6 ó 7 átomos
de carbono en la estructura del anillo.
Por otra parte, se pretende que la expresión
grupo alquilo como se usa a lo largo de esta memoria descriptiva y
reivindicaciones incluya tanto "grupos alquilo no sustituidos"
como "grupos alquilo sustituidos", la última de las cuales se
refiere se refiere a restos alquilo que tienen sustituyentes que
reemplazan a un átomo de hidrógeno en uno o más átomos de carbono de
la cadena principal hidrocarbonada. Tales sustituyentes pueden
incluir, por ejemplo, un átomo de halógeno, un resto hidroxilo, un
resto alquilcarboniloxi, un resto arilcarboniloxi, un resto
alcoxicarboniloxi, un resto ariloxicarboniloxi, un resto
carboxilato, un resto alquilcarbonilo, un resto alcoxicarbonilo, un
resto aminocarbonilo, un resto alquiltiocarbonilo, un resto
alcoxilo, un resto fosfato, un resto fosfonato, un resto fosfinato,
un resto ciano, un resto amino (que incluye un resto alquilamino, un
resto dialquilamino, un resto arilamino, un resto diarilamino y un
resto alquilarilamino), un resto acilamino (que incluye un resto
alquilcarbonilamino, un resto arilcarbonilamino, un resto carbamoilo
y un resto ureido), un resto amidino, un resto imino, un resto
sulfidrilo, un resto alquiltio, un resto ariltio, un resto
tiocarboxilato, un resto sulfato, un resto sulfonato, un resto
sulfamoilo, un resto sulfonamido, un resto nitro, un resto
trifluorometilo, un resto ciano, un resto azido, un resto
heterociclilo, un resto alquilarilo o un resto aromático o
heteroaromático. Los expertos en la técnica entenderán que, si es
apropiado, los restos sustituidos en la cadena hidrocarbonada pueden
ellos mismos estar sustituidos. Por ejemplo, los grupos cicloalquilo
pueden además estar sustituidos con los sustituyentes descritos
anteriormente. Un resto "alquilarilo" es un grupo alquilo
sustituido con un grupo arilo (por ejemplo, un grupo fenilmetilo
(bencilo)). La expresión "grupo alquilo" también incluye grupos
alifáticos insaturados análogos en longitud y posible sustitución a
los grupos alquilo descritos anteriormente, pero que al menos
contienen un doble o triple enlace, respectivamente.
La expresión "grupo arilo" como se usa en
la presente memoria se refiere al radical de grupos arilo, que
incluyen grupos aromáticos de un único anillo de 5 y 6 miembros que
pueden incluir de cero a cuatro heteroátomos, por ejemplo, benceno,
pirrol, furano, tiofeno, imidazol, benzoxazol, benzotiazol, triazol,
tetrazol, pirazol, piridina, piridazina y pirimidina, y semejantes.
Los grupo arilo también incluyen grupos aromáticos policíclicos
fundidos tales como los grupos naftilo, quinolilo, indolilo, y
semejantes. Los grupos arilo que tienen heteroátomos en la
estructura del anillo también pueden denominarse "aril
heterociclos", "heteroarilos" o "hetereoaromáticos". El
anillo aromático puede estar sustituido en una o más posiciones del
anillo con sustituyentes tales como los descritos anteriormente,
como por ejemplo, un átomo de halógeno, un resto hidroxilo, un resto
alcoxi, un resto alquilcarboniloxi, un resto arilcarboniloxi, un
resto alcoxicarboniloxi, un resto ariloxicarboniloxi, un resto
carboxilato, un resto alquilcarbonilo, un resto alcoxicarbonilo, un
resto aminocarbonilo, un resto alquiltiocarbonilo, un resto fosfato,
un resto fosfonato, un resto fosfinato, un resto ciano, un resto
amino (que incluye un resto alquilamino, un resto dialquilamino, un
resto arilamino, un resto diarilamino y un resto alquilarilamino),
un resto acilamino (que incluye un resto alquilcarbonilamino, un
resto arilcarbonilamino, un resto carbamoilo y un resto ureido), un
resto amidino, un resto imino, un resto sulfidrilo, un resto
alquiltio, un resto ariltio, un resto tiocarboxilato, un resto
sulfato, un resto sulfonato, un resto sulfamoilo, un resto
sulfonamido, un resto nitro, un resto trifluorometilo, un resto
ciano, un resto azido, un resto heterociclilo, un resto alquilarilo
o un resto aromático o heteroaromático. Los grupos arilo también
pueden estar fundidos o unidos por puentes con anillos alicíclicos o
heterocíclicos que no sean aromáticos, para formar un grupo
policiclo (por ejemplo, tetralina).
Las expresiones "grupo alquenilo" y
"grupo alquinilo" se refieren a grupos alifáticos insaturados
análogos en longitud y posible sustitución a los grupos alquilo
descritos anteriormente, pero que al menos contienen un doble o
triple enlace, respectivamente. Por ejemplo, la invención contempla
grupos ciano y propargilo.
A menos que de cualquier manera se especifique
el número de átomos de carbono, cuando se usa en la presente memoria
"grupo alquilo inferior" quiere decir un grupo alquilo como se
definió anteriormente, pero que tiene de uno a diez átomos de
carbono, más preferiblemente de uno a seis átomos de carbono en su
estructura de la cadena principal, incluso más preferiblemente de
uno a tres átomos de carbono en su estructura de la cadena
principal. Asimismo, un "grupo alquenilo inferior" y un
"grupo alquinilo inferior" tienen longitudes de cadena
similares.
Las expresiones "grupo alcoxialquilo",
"grupo poliaminoalquilo" y "grupo tioalcoxialquilo" se
refieren a grupos alquilo, como se describieron anteriormente, que
además incluyen átomos de oxígeno, nitrógeno o azufre que reemplazan
a uno o más átomos de carbono de la cadena principal hidrocarbonada,
por ejemplo átomos de oxígeno, nitrógeno o azufre.
Las expresiones "grupo policiclilo" o
"radical policíclico" se refieren al radical de uno o más
anillos cíclicos (por ejemplo, grupos cicloalquilo, cicloalquenilo,
cicloalquinilo, arilo y/o heterociclilo) en los que dos o más átomos
de carbono son comunes a dos anillos adyacentes, por ejemplo los
anillos son "anillos fundidos". Los anillos que están unidos a
través de átomos no adyacentes se denominan anillos
"puenteados". Cada uno de los anillos del policiclo puede estar
sustituido con sustituyentes tales como los descritos anteriormente,
como por ejemplo un átomo de halógeno, un resto hidroxilo, un resto
alquilcarboniloxi, un resto arilcarboniloxi, un resto
alcoxicarboniloxi, un resto ariloxicarboniloxi, un resto
carboxilato, un resto alquilcarbonilo, un resto alcoxicarbonilo, un
resto aminocarbonilo, un resto alquiltiocarbonilo, un resto
alcoxilo, un resto fosfato, un resto fosfonato, un resto fosfinato,
un resto ciano, un resto amino (que incluye un resto alquilamino, un
resto dialquilamino, un resto arilamino, un resto diarilamino y un
resto alquilarilamino), un resto acilamino (que incluye un resto
alquilcarbonilamino, un resto arilcarbonilamino, un resto carbamoilo
y un resto ureido), un resto amidino, un resto imino, un resto
sulfidrilo, un resto alquiltio, un resto ariltio, un resto
tiocarboxilato, un resto sulfato, un resto sulfonato, un resto
sulfamoilo, un resto sulfonamido, un resto nitro, un resto
trifluorometilo, un resto ciano, un resto azido, un resto
heterociclilo, un resto alquilo, un resto alquilarilo o un resto
aromático o heteroaromático.
Cuando se usa en la presente memoria, el término
"heteroátomo" quiere decir un átomo de cualquier elemento
diferente de un átomo de carbono o de hidrógeno. Los heteroátomos
preferidos son nitrógeno, oxígeno, azufre y fósforo.
El término "aminoácidos" incluye los
aminoácidos que se encuentran o no en la naturaleza encontrados en
proteína, tales como glicina, alanina, valina, cisteína, leucina,
isoleucina, serina, treonina, metionina, ácido glutámico, ácido
aspártico, glutamina, asparagina, lisina, arginina, prolina,
histidina, fenilalanina, tirosina y triptófano. Los compuestos
análogos de aminoácidos incluyen aminoácidos con cadenas laterales
de mayor o menor longitud o con cadenas laterales variantes con
grupos funcionales apropiados. Los aminoácidos también incluyen
estereoisómeros D y L de un aminoácido cuando la estructura del
aminoácido admite formas estereoisómeras. El término
"dipéptido" incluye dos o más aminoácidos unidos conjuntamente.
Preferiblemente, los dipéptidos son dos aminoácidos unidos vía una
unión peptídica. Los dipéptidos particularmente preferidos incluyen,
por ejemplo, alanina-alanina y
glicina-alanina.
Se advertirá que la estructura de algunos de los
compuestos de esta invención incluye átomos de carbono asimétricos y
así se encuentran como racematos o mezclas racémicas, enantiómeros
únicos, mezclas de diastereómeros y diastereómeros individuales.
Todas tales formas isómeras de estos compuestos están expresamente
incluidas en esta invención. Cada átomo de carbono estereogénico
puede estar en la configuración R o S. Por consiguiente, a menos que
se indique lo contrario, se ha de entender que los isómeros que
surgen de tal asimetría (por ejemplo, todos los enantiómeros y
diastereómeros) están incluidos dentro del alcance de esta
invención. Tales isómeros pueden obtenerse en forma
sustancialmente pura mediante técnicas de separación clásicas y mediante síntesis estereoquímicamente controlada.
sustancialmente pura mediante técnicas de separación clásicas y mediante síntesis estereoquímicamente controlada.
La invención se relaciona además con
composiciones farmacéuticas para tratar en un mamífero un estado
sensible a una 7-deazapurina sustituida en la
posición N-6, por ejemplo, trastornos respiratorios
(por ejemplo, asma, bronquitis, enfermedad pulmonar obstructiva
crónica y rinitis alérgica), trastornos renales, trastornos
gastrointestinales y trastornos oculares. La composición
farmacéutica incluye una cantidad terapéuticamente efectiva de una
7-deazapurina sustituida en la posición
N-6, descrita anteriormente, y un vehículo
farmacéuticamente aceptable. Se ha de entender que todas las
deazapurinas anteriormente descritas están incluidas para
tratamiento terapéutico. Se ha de entender además que las
deazapurinas de la invención pueden usarse solas o en combinación
con otras deazapurinas de la invención o en combinación con
compuestos terapéuticos adicionales, tales como por ejemplo agentes
antibióticos, antiinflamatorios o anticancerígenos.
El término "antibiótico" está reconocido en
la técnica y se pretende que incluya a las sustancias producidas
haciendo crecer microorganismos y a sus derivados sintéticos, los
cuales eliminan o inhiben el crecimiento de patógenos y son
selectivamente tóxicos para el patógeno mientras que no producen
ningún efecto o producen efectos dañinos mínimos en el sujeto
huésped infectado. Ejemplos adecuados de antibióticos incluyen, pero
no se limitan a, las clases principales de aminoglicósidos,
cefalosporinas, cloramfenicoles, ácidos fuscídicos, macrólidos,
penicilinas, polimixinas, tetraciclinas y estreptomicinas.
La expresión "agente antiinflamatorio" está
reconocida en la técnica y se pretende que incluya los agentes que
actúan sobre los mecanismos corporales, sin antagonizar directamente
con el agente causante de la inflamación, tales como
glucocorticoides, aspirina, ibuprofeno, NSAIDS, etc.
La expresión "agente anticancerígeno" está
reconocida en la técnica y se pretende que incluya los agentes que
disminuyen, erradican o impiden el crecimiento de células
cancerígenas sin, preferiblemente, afectar adversamente a otras
funciones fisiológicas. Ejemplos representativos incluyen cisplatina
y ciclofosfamida.
Cuando los compuestos de la presente invención
se administran como compuestos farmacéuticos a seres humanos y a
mamíferos, pueden darse per se o como una composición
farmacéutica que contenga, por ejemplo, 0,1 a 99,5% (más
preferiblemente, 0,5 a 90%) de ingrediente activo en combinación con
un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Cuando se usa en la presente memoria, la frase
"vehículo farmacéuticamente aceptable" quiere decir un
material, composición o vehículo farmacéuticamente aceptable, tales
como una carga líquida o sólida, un agente diluyente, un excipiente,
un disolvente o un material encapsulante, involucrado en llevar o
transportar un o unos compuestos de la presente invención dentro de
o al sujeto tal que puede realizar su pretendida función.
Típicamente, tales compuestos se llevan o transportan desde un
órgano, o una porción del cuerpo, a otro órgano, o porción del
cuerpo. Cada vehículo tiene que ser "aceptable" en el sentido
de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no
ser dañinos para el paciente. Algunos ejemplos de materiales que
pueden servir como vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen:
azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones, tales
como almidón de maíz y almidón de patata; celulosa y sus derivados,
tales como carboximetilcelulosa de sodio, etilcelulosa y acetato de
celulosa; tragacanto en polvo; malta; gelatina; talco; excipientes,
tales como mantequilla de coco y ceras para supositorios; aceites,
tales como aceite de cacahuete, aceite de semillas de algodón,
aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz
y aceite de soja; glicoles, tales como propilenglicol; polioles,
tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; ésteres,
tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes
amortiguadores del pH, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido
de aluminio; ácido algínico; agua exenta de pirógenos; disolución
salina isotónica; disolución de Ringer; alcohol etílico;
disoluciones amortiguadoras del pH basadas en fosfatos; y otras
sustancias no tóxicas compatibles empleadas en formulaciones
farmacéuticas.
Como se expuso anteriormente, ciertas
realizaciones de los presentes compuestos pueden contener un grupo
funcional básico, tal como un grupo amino o alquilamino, y son, por
tanto, capaces de formar sales farmacéuticamente aceptables con
ácidos farmacéuticamente aceptables. A este respecto, la expresión
"sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a las sales de
adición de ácidos orgánicos e inorgánicos relativamente no tóxicas
de compuestos de la presente invención. Estas sales pueden
prepararse in situ durante el aislamiento y la purificación
final de los compuestos de la invención o separadamente haciendo
reaccionar un compuesto purificado de la invención en su forma de
base libre con un ácido orgánico o inorgánico adecuado, y aislando
la sal así formada. Las sales representativas incluyen sales de
hidrobromuro, hidrocloruro, sulfato, bisulfato, fosfato, nitrato,
acetato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, benzoato,
lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato,
tartrato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactobionato y
laurilsulfonato y sales semejantes. (Véase, por ejemplo, Berge et
al. (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci.
66:1-19).
En otros casos, los compuestos de la presente
invención pueden contener uno o más grupos funcionales ácidos y, por
tanto, son capaces de formar sales farmacéuticamente aceptables con
bases farmacéuticamente aceptables. En estos casos, la expresión
"sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a las sales de
adición de bases orgánicas e inorgánicas relativamente no tóxicas de
compuestos de la presente invención. Estas sales pueden asimismo
prepararse in situ durante el aislamiento y la purificación
final de los compuestos o separadamente haciendo reaccionar el
compuesto purificado en su forma de ácido libre con una base
adecuada, tal como el hidróxido, carbonato, o bicarbonato de un
catión de un metal farmacéuticamente aceptable, o con amoníaco, o
con una amina primaria, secundaria o terciaria farmacéuticamente
aceptable. Las sales alcalinas o alcalino-térreas
representativas incluyen las sales de litio, sodio, potasio, calcio,
magnesio y aluminio y semejantes. Las aminas orgánicas
representativas útiles para la formación de sales de adición de
bases incluyen etilamina, dietilamina, etilenodiamina, etanolamina,
dietanolamina, piperazina y aminas semejantes.
La expresión "ésteres farmacéuticamente
aceptables" se refiere a productos esterificados relativamente no
tóxicos de los compuestos de la presente invención. Estos ésteres
pueden prepararse in situ durante el asilamiento y la
purificación final de los compuestos, o separadamente haciendo
reaccionar el compuesto purificado en su forma de ácido libre o
hidroxilo con un agente esterificante adecuado. Los ácidos
carboxílicos pueden convertirse en ésteres vía tratamiento con un
alcohol en presencia de un catalizador. Los derivados que contienen
grupos hidroxilo pueden convertirse en ésteres vía tratamiento con
un agente esterificante tal como haluros de alcanoilo. Además, se
pretende que la expresión incluya grupos hidrocarburos inferiores
capaces de solvatarse en condiciones fisiológicas, por ejemplo
ésteres de alquilo, ésteres de metilo, etilo y propilo. (Véase, por
ejemplo, Berge et al., anteriormente).
La invención contempla además el uso de
profármacos que se convierten in vivo en los compuestos
terapéuticos de la invención (véase, por ejemplo, R.B. Silverman,
1992, "The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action",
Academic Press, capítulo 8). Tales profármacos pueden usarse para
alterar la biodistribución (por ejemplo, permitir compuestos que
típicamente no entrarían en el sitio reactivo de la proteasa) o la
farmacocinética del compuesto terapéutico. Por ejemplo, puede
esterificarse un grupo ácido carboxílico, por ejemplo con un grupo
metilo o un grupo etilo, para dar un éster. Cuando el éster se
administra a un sujeto, el éster se escinde, enzimática o no
enzimáticamente, reductiva o hidrolíticamente, para revelar el grupo
aniónico. Puede esterificarse un grupo aniónico con restos (por
ejemplo, ésteres de aciloximetilo) que se escindan para revelar un
compuesto intermedio que subsiguientemente se descompone para dar el
compuesto activo. En otra realización, el profármaco es una forma
reducida de un sulfato o sulfonato, por ejemplo un tiol, el cual se
oxida in vivo al compuesto terapéutico. Además, puede
esterificarse un resto aniónico para dar un grupo que es activamente
transportado in vivo, o que sea selectivamente absorbido por
los órganos diana. El éster puede seleccionarse para permitir la
dirección específica de los restos terapéuticos a sitios reactivos
particulares, como se describe más adelante para restos
portadores.
También pueden estar presentes en las
composiciones agentes humectantes, agentes emulsionantes y agentes
lubricantes, tales como laurilsulfato de sodio y estearato de
magnesio, así como agentes colorantes, agentes de liberación,
agentes de revestimiento, agentes edulcorantes, agentes saborizantes
y agentes perfumantes, agentes conservantes y agentes
antioxidantes.
Ejemplos de agentes antioxidantes
farmacéuticamente aceptables incluyen agentes antioxidantes solubles
en agua, tales como ácido ascórbico, hidrocloruro de cisteína,
bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio y
semejantes; agentes antioxidantes solubles en aceites, tales como
palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno
butilado (BHT), lecitina, galato de propilo,
alfa-tocoferol, y semejantes; y agentes quelantes de
metales, tales como ácido cítrico, ácido etilenodiaminatetraacético
(EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico y semejantes.
Las formulaciones de la presente invención
incluyen las adecuadas para la administración oral, nasal, tópica,
transdérmica, bucal, sublingual, rectal, vaginal y/o parenteral. Las
formulaciones pueden presentarse convenientemente en una forma de
dosificación unitaria y pueden prepararse por cualquiera de los
métodos bien conocidos en la técnica de la farmacia. La cantidad de
ingrediente activo que puede combinarse con un material vehículo
para producir una forma de dosificación unitaria será generalmente
la cantidad del compuesto que produce un efecto terapéutico. En
general, de cada cien por cien, esta cantidad variará de
aproximadamente 1 por ciento hasta aproximadamente noventa y nueve
por ciento de ingrediente activo, preferiblemente de aproximadamente
5 por ciento a aproximadamente 70 por ciento, más preferiblemente de
aproximadamente 10 por ciento a aproximadamente 30 por ciento.
Métodos para preparar estas formulaciones o
composiciones incluyen la etapa de poner en asociación un compuesto
de la presente invención con el vehículo y, opcionalmente, uno o más
ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan
poniendo en asociación uniforme e íntimamente un compuesto de la
presente invención con vehículos líquidos, o vehículos sólidos
finamente divididos, o ambos, y a continuación, si es necesario,
conformando el producto.
Las formulaciones de la invención adecuadas para
la administración oral pueden estar en la forma de cápsulas,
saquitos, píldoras, comprimidos, pastillas (que usan una base
saborizante, usualmente sacarosa y acacia o tragacanto), polvos,
gránulos o como una disolución o una suspensión en un líquido acuoso
o no acuoso, o como una emulsión líquida aceite en agua o agua en
aceite, o como un elixir o un jarabe, o como pastillas (usando una
base inerte, tal como gelatina o glicerina, o sacarosa y acacia) y/o
como enjuagues bucales y semejantes, conteniendo cada una como un
ingrediente activo una cantidad predeterminada de un compuesto de la
presente invención. También puede administrase un compuesto de la
presente invención como un bolo, un electuario o una pasta.
En las formas de dosificación sólidas de la
invención para la administración oral (cápsulas, comprimidos,
píldoras, grageas, polvos, gránulos y semejantes), el ingrediente
activo se mezcla con uno o más vehículos farmacéuticamente
aceptables, tales como citrato de sodio o fosfato dicálcico, y/o
cualquiera e los siguientes: cargas o agentes de extensión, tales
como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y/o ácido
silícico; agentes ligantes, tales como, por ejemplo,
carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona,
sacarosa y/o acacia; agentes humectantes, tales como glicerina;
agentes desintegrantes, tales como agar-agar,
carbonato de calcio, almidón de patata o de tapioca, ácido algínico,
ciertos silicatos y carbonato de sodio; agentes retardantes de la
disolución, tales como parafina; agentes acelerantes de la
absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes
humectantes, tales como, por ejemplo, alcohol cetílico y
monoestearato de glicerina; agentes absorbentes, tales como caolín y
arcilla de bentonita; agentes lubricantes, tales como talco,
estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles
sólidos, laurilsulfato de sodio, y sus mezclas; y agentes
colorantes. En el caso de cápsulas, comprimidos y píldoras, las
composiciones farmacéuticas también pueden comprender agentes
amortiguadores del pH. También pueden emplearse composiciones
sólidas de un tipo similar como cargas en cápsulas de gelatina
blandas y duras usando excipientes tales como lactosa o azúcares de
leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular, y
semejantes.
Puede fabricarse un comprimido por compresión o
moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Pueden
prepararse comprimidos prensados usando un agente ligante (por
ejemplo, gelatina o hidroxipropilmetilcelulosa), un agente
lubricante, un agente diluyente inerte, un agente conservante, un
agente desintegrante (por ejemplo, almidón-glicolato
de sodio o carboximetilcelulosa de sodio reticulada), un agente
tensioactivo o un agente dispersante. Pueden fabricarse comprimidos
moldeados moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto
en polvo humedecida con un agente diluyente líquido inerte.
Los comprimidos y otras formas sólidas de
dosificación de las composiciones farmacéuticas de la presente
invención, tales como grageas, cápsulas, píldoras y gránulos, pueden
opcionalmente prepararse con revestimientos y vainas, tales como
revestimientos entéricos y otros revestimientos bien conocidos en la
técnica de la formulación farmacéutica. También pueden formularse
para proporcionar una liberación lenta o controlada del ingrediente
activo del mismo usando, por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa en
proporciones variables para dar el perfil de liberación deseado,
otras matrices de polímeros, liposomas y/o microesferas. Pueden
esterilizarse mediante, por ejemplo, filtración a través de un
filtro que retenga las bacterias, o incorporando agentes
esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que
puedan disolverse inmediatamente antes de su uso en agua estéril o
algún otro medio estéril inyectable. Estas composiciones también
pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y pueden ser de
una composición tal que sólo liberen el o los ingredientes activos,
o preferencialmente, en una cierta porción del tracto
gastrointestinal, opcionalmente de manera retardada. Ejemplos de
composiciones para embeber que pueden usarse incluyen sustancias
polímeros y ceras. Si es apropiado, el ingrediente activo también
puede estar en forma microencapsulada con uno o más de los
excipientes anteriormente descritos.
Las formas de dosificación líquidas para la
administración oral de los compuestos de la invención incluyen
emulsiones, microemulsiones, disoluciones, suspensiones, jarabes y
elixires farmacéuticamente aceptables. Además del ingrediente
activo, las formas de dosificación líquidas pueden contener agentes
diluyentes inertes comúnmente usados en la técnica, tales como, por
ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y agentes
emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico,
carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de
bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, aceites
(en particular, aceites de semillas de algodón, de nuez, de maíz, de
germen, de oliva, de ricino y de sésamo), glicerina, alcohol
tetrahidrofurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de
sorbitán, y sus mezclas.
Además de agentes diluyentes inertes, las
composiciones orales también pueden incluir compuestos auxiliares
tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y agentes de
suspensión, agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes
colorantes, agentes perfumantes y agentes conservantes.
Las suspensiones, además de los compuestos
activos, pueden contener agentes de suspensión como, por ejemplo,
alcoholes de isoestearilo etoxilados, ésteres de sorbitol y de
sorbitán polioxietilenados, celulosa microcristalina, metahidróxido
de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, y
sus mezclas.
Las formulaciones de las composiciones
farmacéuticas de la invención para la administración rectal o
vaginal pueden presentarse como un supositorio, el cual puede
prepararse mezclando uno o más compuestos de la invención con uno o
más agentes excipientes o vehículos adecuados no irrigantes que, por
ejemplo, comprenden mantequilla de coco, polietilenglicol, una cera
para supositorios o un salicilato, y que sea sólido a temperatura
ambiente pero líquido a la temperatura del cuerpo y, por lo tanto,
funda en el recto o en la cavidad vaginal y libere el compuesto
activo.
Las formulaciones de la presente invención que
son adecuadas para la administración vaginal también incluyen
pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones
para pulverizar que contienen vehículos tales que en la técnica se
sabe son apropiados.
Las formas de dosificación para la
administración tópica o transdérmica de un compuesto de esta
invención incluyen polvos, pulverizaciones, ungüentos, pastas,
cremas, lociones, geles, disoluciones, parches e inhaladores. El
compuesto activo puede mezclarse en condiciones estériles con un
vehículo farmacéuticamente aceptable y con cualquier agente
conservante, agente amortiguador del pH o agente propulsante que
pueda requerirse.
Los ungüentos, pastas, cremas y geles pueden
contener, además de un compuesto activo de esta invención,
excipientes tales como grasas animales y vegetales, aceites, ceras,
parafinas, almidón, tragacanto, derivados de celulosa,
polietilenglicoles, siliconas, bentonitas, ácido silícico, talco y
óxido de cinc, o sus mezclas.
Los polvos y pulverizaciones pueden contener,
además de un compuesto de esta invención, excipientes tales como
lactosa, talco, ácido silícico, hidróxido de aluminio, silicatos de
calcio y polvo de poliamidas, o mezclas de estas sustancias. Las
pulverizaciones pueden contener adicionalmente propulsantes usuales,
tales como clorofluorohidrocarburos e hidrocarburos volátiles no
sustituidos, tales como butano y propano.
Los parches transdérmicos tienen la ventaja
añadida de dar al cuerpo un suministro controlado de un compuesto de
la presente invención. Tales formas de dosificación pueden
fabricarse disolviendo o dispersando el compuesto en el medio
apropiado. También pueden usarse agentes potenciadotes de la
absorción para aumentar el flujo del compuesto a través de la piel.
El caudal de tal flujo puede regularse proporcionando una membrana
que regule el caudal o dispersando el compuesto activo en una matriz
o en un gel de un polímero.
Dentro del alcance de esta invención, también
están contempladas las formulaciones oftálmicas, ungüentos, polvos,
disoluciones oculares y formulaciones semejantes. Preferiblemente,
la preparación farmacéutica es una formulación oftálmica (por
ejemplo, una formulación para inyección periocular, retrobulbar o
intraocular, una formulación sistémica o una disolución irrigante
quirúrgica).
Las formulaciones oftálmicas de la presente
invención pueden incluir una o más deazapurinas y un vehículo
farmacéuticamente aceptable. Pueden usarse varios tipos de
vehículos. En general, los vehículos serán de naturaleza acuosa. En
general, se prefieren las disoluciones acuosas basadas en la
capacidad del paciente para administrar fácilmente tales
composiciones por medio de instilar una o dos gotas de las
disoluciones en los ojos afectados. Sin embargo, las deazapurinas de
la presente invención también pueden incorporarse fácilmente en
otros tipos de composiciones, tales como suspensiones, geles
viscosos o semiviscosos u otros tipos de composiciones sólidas o
semisólidas. Las composiciones oftálmicas de la presente invención
también pueden incluir otros ingredientes varios, tales como agentes
amortiguadores del pH, agentes conservantes, cosolventes y agentes
conformantes de la viscosidad.
Para impedir la deriva del pH en condiciones de
almacenamiento puede añadirse un sistema amortiguador del pH
apropiado (por ejemplo, fosfato de sodio, acetato de sodio o borato
de sodio).
Los productos oftálmicos se envasan típicamente
en forma de múltiples dosis. Por tanto, se requieren agentes
conservantes para impedir la contaminación microbiana durante el
uso. Los agentes conservantes adecuados incluyen: cloruro de
benzalconio, timerosal, clorobutanol, metilparabén, propilparabén,
alcohol feniletílico, edetato de disodio, ácido sórbico,
poliquaternium-1 u otros agentes conocidos por los
expertos en la técnica. Típicamente, tales agentes conservantes se
emplean en una concentración de 0,001 a 1,0% peso/volumen ("%
p/v").
Cuando las deazapurinas de la presente invención
se administran durante procedimientos quirúrgicos intraoculares,
tales como a través de inyección retrobulbar o periocular y
perfusión o inyección intraocular, se prefiere más el uso como
vehículos de disoluciones salinas irrigantes equilibradas. La
disolución irrigante estéril BSS® y la disolución irrigante estéril
intraocular BSS Plus® (Alcon Laboratories, Inc., Fort Worth, Tejas,
EE.UU.) son ejemplos de disoluciones irrigantes intraoculares
fisiológicamente equilibradas. El último tipo de disolución se
describe en la Patente de EE.UU. nº 4.550.022 (Garabedian et
al.), cuyo contenido completo se incorpora de esta manera a la
presente memoria descriptiva por referencia. Las inyecciones
retrobulbar y periocular son conocidas por los expertos en la
técnica y se describen en numerosas publicaciones que incluyen, por
ejemplo, Ophthalmic Surgery: Principles of Practice, Ed., G.
L. Spaeth, W.B. Sanders Co., Philadelphia, Pa., EE.UU., páginas
85-87 (1990).
Como se indicó anteriormente, el uso de
diazapurinas para impedir o reducir el daño a los tejidos retinal y
de la cabeza del nervio óptico a nivel celular es un aspecto
particularmente importante de una realización de la invención. Las
enfermedades oftálmicas que pueden tratarse incluyen, pero no se
limitan a, retinopatías, degeneración macular, isquemia ocular,
glaucoma y daño asociado con lesiones a los tejidos oftálmicos,
tales como lesiones de isquemia por reperfusión, lesiones
fotoquímicas y lesiones asociadas con cirugía ocular,
particularmente lesiones a la retina o a la cabeza del nervio óptico
por exposición a la luz o a instrumentos quirúrgicos. Los compuestos
también pueden usarse como compuestos auxiliares para la cirugía
oftálmica, tal como mediante inyección vitreal o subconjuntival tras
la cirugía oftálmica. Los compuestos pueden usarse para el
tratamiento agudo de estados clínicos temporales, o pueden
administrarse crónicamente, especialmente en el caso de una
enfermedad degenerativa. Los compuestos también pueden usarse
profilácticamente, especialmente antes de la cirugía ocular o de
procedimientos oftálmicos no invasivos, u otros tipos de
cirugía.
Las composiciones farmacéuticas de esta
invención adecuadas para la administración parenteral comprenden uno
o más compuestos de la invención en combinación con una o más
disoluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones isotónicas
estériles acuosas o no acuosas farmacéuticamente aceptables, o
polvos estériles que puedan reconstituirse en disoluciones o
dispersiones inyectables estériles justo antes de su uso, que pueden
obtener agentes antioxidantes, agentes amortiguadores del pH,
agentes bacteriostáticos, solutos que vuelven la formulación
isotónica con la sangre del receptor pretendido, o agentes de
suspensión o espesantes.
Ejemplos de vehículos acuosos y no acuosos
adecuados que pueden emplearse en las composiciones farmacéuticas de
la invención incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerina,
propilenglicol, polietilenglicol, y semejantes), y sus mezclas
adecuadas, aceites vegetales, tales como aceite de oliva, y ésteres
orgánicos inyectables, tales como oleato de etilo. La fluidez
apropiada puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de
materiales de revestimiento, tales como lecitina, mediante el
mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de
dispersiones y mediante el uso de tensioactivos.
Estas composiciones también pueden contener
compuestos auxiliares tales como agentes conservantes, agentes
humectantes, agentes emulsionantes y agentes dispersantes. La
prevención de la acción de microorganismos puede asegurarse mediante
la inclusión de varios agentes antibacterianos y antifúngicos, por
ejemplo parabén, clorobutanol, ácido fenolsórbico, y semejantes.
También puede ser deseable incluir en las composiciones agentes
isotónicos, tales como azúcares, cloruro de sodio y semejantes.
Además, la absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable
puede hacerse realidad mediante la inclusión de agentes que retrasen
la absorción tales como monoestearato de aluminio y gelatina.
En algunos casos, con el fin de prolongar el
efecto de un fármaco, es deseable ralentizar la absorción del
fármaco desde la inyección subcutánea o intramuscular. Esto puede
lograrse mediante el uso de una suspensión líquida de un material
amorfo o cristalino que tenga una mala solubilidad en agua. La
velocidad de absorción del fármaco depende entonces de su velocidad
de disolución la cual, a su vez, puede depender del tamaño del
cristal y de la forma cristalina. Alternativamente, la absorción
retardada de un fármaco administrado parenteralmente se logra
disolviendo o suspendiendo el fármaco en un vehículo tipo
aceite.
Pueden fabricarse formas inyectables depósito
conformando matrices microencapsuladas de los compuestos objeto en
polímeros biodegradables tales como
polilactida-poliglicólido. Dependiendo de la
relación de fármaco a polímero y de la naturaleza del polímero
particular empleado, puede regularse la velocidad de liberación del
fármaco. Ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen
poli(ortoésteres) y poli(anhídridos). Las
formulaciones inyectables depósito también se preparan atrapando el
fármaco en liposomas o en microemulsiones que sean compatibles con
el tejido corporal.
Las preparaciones de la presente invención
también pueden darse oral, parenteral, tópica o rectalmente. Desde
luego, se dan mediante formas adecuadas para cada ruta de
administración. Por ejemplo, se administran en forma de comprimidos
o de cápsulas, por inyección, inhalación, loción ocular, ungüento,
supositorio, etc., administración por inyección, infusión o
inhalación; tópica mediante loción o ungüento; y rectal mediante
supositorios. Se prefiere la administración oral.
Las frases "administración parenteral" y
"parenteralmente administrado" que se usan en la presente
memoria quieren decir modos de administración diferentes de la
administración entérica y tópica, usualmente por inyección e
incluyen, sin limitación, la inyección e infusión intravenosa,
intramuscular, intra-arterial, intratecal,
intracapsular, intraorbital, intracardiaca, intradérmica,
intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular,
intra-articular, subcapsular, subaracnoide,
intraespinal e intraesternal.
Las frases "administración sistémica",
"sistémicamente administrado", "administración periférica"
y "periféricamente administrado" que se usan en la presente
memoria quieren decir la administración de un compuesto, fármaco u
otro material por un medio diferente a la administración directa en
el sistema nervioso central, por ejemplo, administración subcutánea,
tal que entre en el sistema del paciente y, así, sea sometido a
metabolismo y otros procedimientos semejantes.
Estos compuestos pueden administrase a seres
humanos y a otros animales para terapia por cualquier ruta de
administración adecuada, incluyendo oral, nasal, como por ejemplo
con una pulverización, rectal, intravaginal, parenteral,
intracisternal y tópicamente, como mediante polvos, ungüentos o
gotas, incluyendo bucal o sublingualmente.
Independientemente de la ruta de administración
seleccionada, los compuestos de la presente invención, que pueden
usarse en una forma hidratada adecuada, y/o las composiciones
farmacéuticas de la presente invención, se formulan en formas de
dosificación farmacéuticamente aceptables mediante métodos
convencionales conocidos por los expertos en la técnica.
Las concentraciones reales de dosificación de
los ingredientes activos en las composiciones farmacéuticas de esta
invención pueden variarse para obtener una cantidad del ingrediente
activo que sea efectiva para conseguir la respuesta terapéutica
deseada para un paciente, composición y modo de administración
particulares, sin que sean tóxicas para el paciente.
La concentración de dosificación seleccionada
dependerá de una variedad de factores que incluyen la actividad del
compuesto particular de la presente invención empleado, o de sus
ésteres, sales o amidas, la ruta de administración, el tiempo de
administración, la velocidad de excreción del compuesto particular
que se emplee, la duración del tratamiento, otros fármacos,
compuestos y/o materiales usados en combinación con el compuesto
particular empleado, la edad, sexo, peso, estado clínico, salud
general e historia médica previa del paciente a tratar, y de
factores semejantes bien conocidos en las técnicas médicas.
Un médico o un veterinario que tenga una
destreza normal en la técnica pueden determinar y prescribir
fácilmente la cantidad efectiva requerida de la composición
farmacéutica. Por ejemplo, el médico o veterinario podría comenzar
con dosis de los compuestos de la invención empleados en la
composición farmacéutica en concentraciones menores que la requerida
con el fin de conseguir el efecto terapéutico deseado, y aumentar
gradualmente la dosificación hasta que se logre el efecto
deseado.
En general, una dosis diaria adecuada de un
compuesto de la invención será la cantidad del compuesto que sea la
menor dosis efectiva para producir un efecto terapéutico. En
general, tal dosis efectiva dependerá de los factores descritos
anteriormente. En general, las dosis intravenosas y subcutáneas de
los compuestos de esta invención para un paciente, cuando se usan
para los efectos analgésicos indicados, variarán de aproximadamente
0,0001 a aproximadamente 200 mg por kilogramo de peso corporal por
día, más preferiblemente de aproximadamente 0,01 a aproximadamente
150 mg por kg por día, y aún más preferiblemente de aproximadamente
0,2 a aproximadamente 140 mg por kg por día.
Si se desea, la dosis diaria efectiva del
compuesto activo puede administrase como dos, tres, cuatro, cinco,
seis o más subdosis administradas separadamente a intervalos
apropiados a lo largo del día, opcionalmente en formas de
dosificación unitarias.
Aunque es posible que un compuesto de la
presente invención sea administrado solo, es preferible administrar
el compuesto como una composición farmacéutica.
La presente invención también se relaciona con
composiciones farmacéuticas envasadas para tratar en un mamífero un
estado sensible a una 7-deazapurina sustituida en la
posición 6, por ejemplo una actividad acrecentada indeseable de los
receptores de la adenosina. Las composiciones farmacéuticas
envasadas incluyen un recipiente que contiene una cantidad
terapéuticamente efectiva de al menos una deazapurina que se
describió anteriormente e instrucciones para usar la deazapurina
para tratar en el mamífero el estado sensible a la deazapurina.
Las deazapurinas de la invención pueden
prepararse usando métodos estándar de síntesis orgánica. Las
deazapurinas pueden purificarse por HPLC de fase inversa,
cromatografía, recristalización, etc., y sus estructuras confirmarse
por análisis espectral de masas, análisis elemental, espectroscopía
de IR y/o de RMN.
Típicamente, la síntesis de los compuestos
intermedios así como de las deazapurinas de la invención se realiza
en disolución. La adición y la separación de uno o más grupos
protectores también es una práctica típica y es conocida por los
expertos en la técnica. Los esquemas sintéticos típicos para la
preparación de compuestos intermedios tipo deazapurinas de la
invención se trazan más adelante en el Esquema I.
La invención se relaciona además con un
compuesto que tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R_{3} es según se
definió anteriormente; en la que R_{5} y R_{6} son
independientemente un átomo de H o un grupo
alquilo.
En una realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
En una realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto 1500, el
compuesto tiene la estructura:
\newpage
En una realización adicional del compuesto, el
compuesto tiene la estructura:
Esta invención también proporciona un compuesto
que tiene la estructura:
Esta invención proporciona además un compuesto
que tiene la estructura:
en la que R_{3} es según se
definió anteriormente; en la que R_{5} y R_{6} son
independientemente un átomo de H o un grupo
alquilo.
En una realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
Esta invención también proporciona un compuesto
que tiene la estructura:
en la que R_{3} es según se
definió anteriormente; en la que X es un átomo de oxígeno o un átomo
de
azufre.
En una realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
Esta invención también proporciona un compuesto
que tiene la estructura:
en la que R_{3} es según se
definió anteriormente; en la que X es un átomo de oxígeno o un átomo
de
azufre.
En una realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
Esta invención se relaciona además con el uso de
una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que tiene la
fórmula VI, VII, VIII, IX o X, para la fabricación de un medicamento
para tratar en un sujeto una enfermedad asociada con un receptor
A_{1} de la adenosina.
En una realización, el sujeto es un mamífero. En
otra realización, el mamífero es un ser humano.
En otra realización, el receptor A_{1} de la
adenosina está asociado con una enfermedad cognitiva, un fallo
renal, arritmias cardiacas, el epitelio respiratorio, la liberación
de transmisores, la sedación, la vasoconstricción, la bradicardia,
la inotropia y la dromotropia cardiacas negativas, la
broncoconstricción, la quimiotaxis de neutrófilos, una enfermedad de
reflujo o una enfermedad ulcerante.
La invención también proporciona un profármaco
soluble en agua de un compuesto que tiene las estructuras VI, VII,
VIII, IX o X, en la que dicho profármaco soluble en agua se
metaboliza in vivo para dar un fármaco activo que inhibe
selectivamente a un receptor A_{1} de la adenosina.
En una realización del profármaco, dicho
profármaco se metaboliza in vivo mediante una hidrólisis
catalizada por una esterasa.
\newpage
Esta invención también proporciona una
composición farmacéutica que comprende el profármaco y un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
Esta invención proporciona además un método para
inhibir la actividad de un receptor A_{1} de la adenosina en una
célula in vitro, que comprende poner en contacto a dicha
célula con un compuesto que tiene las estructuras VI, VII, VIII, IX
o X.
En una realización del método, el compuesto es
un agente antagonista de dicho receptor A_{1} de la adenosina.
Esta invención también se refiere al uso de una
cantidad efectiva de un compuesto que tiene las estructuras VI, VII,
VIII, IX o X, para la fabricación de un medicamento para tratar un
trastorno gastrointestinal en un sujeto.
En una realización, dicho trastorno es
diarrea.
En otra realización, el sujeto es un ser
humano.
En otra realización, el compuesto es un agente
antagonista de los receptores A_{1} de la adenosina.
Esta invención también se refiere al uso de una
cantidad efectiva de un compuesto que tiene las estructuras VI, VII,
VIII, IX o X, para la fabricación de un medicamento para tratar un
trastorno respiratorio en un sujeto.
En una realización, dicho trastorno es asma,
enfermedad pulmonar obstructiva crónica, rinitis alérgica o
trastorno del tracto respiratorio superior.
En otra realización, el sujeto es un ser
humano.
En otra realización, dicho compuesto es un
agente antagonista de los receptores A_{1} de la adenosina.
Esta invención se refiere además al uso de una
cantidad efectiva de un compuesto que tiene las estructuras VI, VII,
VIII, IX o X, para la fabricación de un medicamento para tratar el
daño al ojo de un sujeto.
En una realización, dicho daño comprende daño
retinal o de la cabeza del nervio óptico.
En otra realización, dicho daño es agudo o
crónico.
En otra realización, dicho daño es el resultado
de glaucoma, edema, isquemia, hipoxia o traumatismo.
En otra realización, el sujeto es un ser
humano.
En otra realización, el compuesto es un agente
antagonista de los receptores A_{1} de la adenosina.
Esta invención también se proporciona una
composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente
efectiva de un compuesto que tiene las estructuras VI, VII, VIII, IX
o X, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha cantidad terapéuticamente efectiva es efectiva
para tratar un trastorno respiratorio o un trastorno
gastrointestinal.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicho trastorno gastrointestinal es diarrea.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicho trastorno respiratorio es asma, rinitis alérgica
o enfermedad pulmonar obstructiva crónica.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación
oftálmica.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación para
inyección periocular, retrobulbar o intraocular.
En aún otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación
sistémica.
En otra realización de la preparación
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una disolución
irrigante quirúrgica.
Esta invención también proporciona una
composición farmacéutica envasada para tratar en un sujeto una
enfermedad asociada con un receptor A_{1} de la adenosina, que
comprende: (a) un recipiente que contiene una cantidad
terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto específico de los
receptores A_{1} de la adenosina; y (b) instrucciones para usar
dicho compuesto para tratar en un sujeto dicha enfermedad.
Cuando se usa en la presente memoria, "un
compuesto es selectivo de un receptor A_{1} de la adenosina"
quiere decir que un compuesto tiene una constante de enlace al
receptor A_{1} de la adenosina de al menos diez veces mayor que la
de los receptores A_{2a}, A_{2b} o A_{3}.
Esta invención también proporciona un método
para preparar el compuesto que tiene la estructura I, que comprende
las etapas de:
a) hacer reaccionar
para
dar
en donde P es un grupo protector
separable;
b) tratar el producto de la etapa a) en
condiciones de ciclación para dar
c) tratar el producto de la
etapa b) en condiciones adecuadas para
dar
y
d) tratar el producto clorado de la
etapa c) con NH_{2}R_{1} para dar
en donde R_{1}, R_{3}, R_{5}
y R_{6} son según se definieron
anteriormente.
Los compuestos representados por las fórmulas
VI, VII y VII pueden sintetizarse por cualquiera de los Esquemas
I-VIII. Los compuestos representados por las
fórmulas IX y X pueden prepararse mediante el Esquema IX.
La invención se ilustra adicionalmente mediante
los siguientes Ejemplos que de ninguna manera deben interpretarse
como que además son limitantes. Los contenidos de todas las
referencias, solicitudes pendientes de patente y solicitudes
publicadas de patentes, citadas a lo largo de esta solicitud,
incluyendo las referenciadas en la sección de antecedentes, se
incorporan de esta manera a la presente memoria por referencia. Debe
entenderse que los modelos usados a lo largo de los ejemplos son
modelos aceptados y que la demostración de la eficacia en estos
modelos es predictiva de la eficacia en seres humanos.
Esta invención se entenderá mejor a partir de
los detalles experimentales que siguen. Sin embargo, un experto en
la técnica se dará cuenta fácilmente que los métodos y los
resultados específicos discutidos son simplemente ilustrativos de la
invención como se describe más completamente en las reivindicaciones
que siguen posteriormente.
Las deazapurinas de la invención pueden
prepararse usando métodos estándar de síntesis orgánica. Las
deazapurinas pueden purificarse por HPLC de fase inversa,
cromatografía, recristalización, etc., y sus estructuras confirmarse
por análisis espectral de masas, análisis elemental, espectroscopía
de IR y/o de RMN.
Típicamente, la síntesis de los compuestos
intermedios así como de las deazapurinas de la invención se realiza
en disolución. La adición y la separación de uno o más grupos
protectores también es una práctica típica y es conocida por los
expertos en la técnica. Los esquemas sintéticos típicos para la
preparación de compuestos intermedios tipo deazapurinas de la
invención se trazan más adelante en el Esquema I.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
I
en el que R_{3}, R_{5} y
R_{6} son como se definieron
anteriormente.
En general, puede tratarse un compuesto
2-amino-3-cianopirrol
protegido con un haluro de acilo para formar un compuesto
carboxiamido-3-cianopirrol, el cual
puede tratarse con metanol acidificado para efectuar el cierre del
anillo para dar un compuesto
pirrolo[2,3d]pirimidina-4(3H)-ona
(Muller, C.E. et al. J. Med. Chem. 40:4396 (1997)). La
separación del grupo protector pirrolo seguido por tratamiento con
un reactivo clorante, por ejemplo, oxicloruro de fósforo, produjo
4-cloro-7H-pirrolo[2,3d]pirimidinas
sustituidas o sin sustituir. El tratamiento de la cloropirimidina
con aminas dio 7-deazapurinas.
Por ejemplo, como se muestra en el Esquema I, se
trató un compuesto
N-(1-dl-feniletil)-2-amino-3-cianopirrol
con un haluro de acilo en piridina y diclorometano. El
N-(1-dl-feniletil)-2-fenilcarboxiamido-3-cianopirrol
resultante se trató con una mezcla de metanol/ácido sulfúrico 10:1
para efectuar el cierre del anillo, dando lugar a una
dl-7H-7-(1-feniletil)pirrolo[2,3d]pirimidina-4(3H)-ona.
La separación del grupo feniletilo por tratamiento de la pirimidina
con ácido polifosfórico (PPA) seguido por POCl_{3} dio un
compuesto intermedio clave, la
4-cloro-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
Tratamiento adicional de la
4-cloro-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
con varias aminas listadas en la Tabla 1 da compuestos de fórmula
(I).
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Un enfoque general para preparar pirroles
6-sustituidos se representa en el siguiente esquema
(Esquema II).
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
II
en el que R_{1} a R_{5} son
como se definieron
anteriormente.
La transesterificación y la alquilación de
cianoacetato de etilo con una \alpha-halocetona da
un cetometiléster. La protección de la cetona seguida por
tratamiento con un hidrocloruro de amidina (por ejemplo, alquil,
aril o alquilarilo) produjo la pirimidina resultante protegida con
un cetal. La separación del grupo protector, seguida por ciclación y
tratamiento con oxicloruro de fósforo dio el cloruro intermedio que
pudo tratarse adicionalmente con una amina para dar un pirrol
sustituido en la posición 6 con un grupo amina. Adicionalmente, la
alquilación del nitrógeno del pirrol puede conseguirse en
condiciones reconocidas en la técnica.
\newpage
En el siguiente esquema (Esquema III) se
representa un enfoque general para preparar pirroles
5-sustituidos.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
III
en el que R_{1} a R_{6} se
definen como anteriormente y R es un grupo protector
separable.
La condensación de malonitrilo y de un exceso de
una cetona seguida por bromación del producto dio una mezcla del
material de partida, productos monobromados y dibromados, que se
trató con una alquilamina, arilamina o alquilarilamina. El producto
amina resultante se aciló con un cloruro de ácido y el pirrol
monoacilado se cicló en presencia de un ácido para dar la
correspondiente pirimidina. El grupo protector del pirrol se separó
con ácido polifosfórico y se trató con oxicloruro de fósforo para
producir un producto clorado. El pirrol clorado pudo tratarse
subsiguientemente con una amina para producir un pirrol sustituido
en la posición 5 con un grupo amino. La alquilación del nitrógeno
del pirrol puede lograrse en condiciones reconocidas en la
técnica.
Los Esquemas IV y V representan métodos según la
invención para preparar las deazapurinas 1 y 2.
en las que R_{5} y R_{6} son
como se describieron anteriormente, por ejemplo un grupo
CH_{3}.
La reacción clave hacia
6-metilpirrolopirimidinas (1) [R_{5} = CH_{3}]
fue la ciclación de un cianoacetato con benzamidina para dar una
pirimidina. Se creyó que el cianoacetato de metilo se ciclaría más
eficientemente con benzamidina para dar una pirimidina que el
correspondiente éster de etilo. Por lo tanto, la transesterificación
y la alquilación de cianoacetato de etilo en presencia de NaOMe y un
exceso de un resto \alpha-haloacetilo, por ejemplo
cloroacetona, dio el éster de metilo deseado (3) con un rendimiento
de 79% (Esquema IV). El cetoéster (3) se protegió como el acetal (4)
con un rendimiento de 81%. Se consiguió un nuevo método de ciclación
a la pirimidina (5) con un hidrocloruro de amidina, por ejemplo
hidrocloruro de benzamidina, con 2 equivalentes de DBU para dar el
compuesto 5 con un rendimiento aislado de 54%. Este método mejora el
rendimiento de 20% usando las condiciones publicadas, el cual usa
NaOMe durante la ciclación con guanidina. La ciclación a la
pirrolpirimidina (6) se consiguió con un rendimiento de 78% vía
desprotección del acetal en HCl acuoso. La reacción de (6) con
oxicloruro de fósforo a reflujo dio el correspondiente
4-cloro derivado (7). La copulación con
trans-aminociclohexanol en dimetilsulfóxido a 135°C
dio (1) a partir de (7) con un rendimiento de 57%. Un experto en la
técnica se dará cuenta que la selección de reactivos permite una
gran flexibilidad para escoger el sustituyente R_{5} deseado.
Esquema
IV
La condensación de Knoevengel de malonitrilo y
un exceso de una cetona, por ejemplo acetona en benceno a reflujo,
dio 8 con un rendimiento de 50% después de destilar. La bromación de
8 con N-bromosuccinimida en presencia de peróxido de
benzoilo en cloroformo dio una mezcla del material de partida y
productos mono (9) y dibromados (5/90/5) después de destilar (70%).
La mezcla se hizo reaccionar con una
\alpha-metilalquilamina o una
\alpha-metilarilamina, por ejemplo
\alpha-metilbencilamina, para suministrar el
aminopirrol (10). Después de pasar a través de una columna corta de
gel de sílice, la amina parcialmente purificada (rendimiento 31%) se
aciló con un cloruro de ácido, por ejemplo cloruro de benzoilo para
suministrar pirroles mono (11) y diacilados (12), los cuales se
separaron por cromatografía súbita. La hidrólisis ácida del pirrol
disustituido (12) generó un rendimiento combinado de 29% del
acilpirrol (11). La ciclación en presencia de ácido sulfúrico
concentrado y DMF dio (13) (23%), el cual se desprotegió con ácido
polifosfórico para dar (14). La reacción de (14) con oxicloruro de
fósforo a reflujo dio el correspondiente 4-cloro
derivado (15). La copulación con
trans-4-aminociclohexanol en
dimetilsulfóxido a 135°C dio (2) [R_{6} = CH_{3}] a partir de
(14) con un rendimiento de 30% (véase el Esquema V). Un experto en
la técnica se dará cuenta que la selección de reactivos permite una
gran flexibilidad para escoger el sustituyente R_{6} deseado.
Esquema
V
Esta ruta alternativa a pirroles
R_{6}-sustituidos, por ejemplo
5-metilpirrolopirimidinas, supone la
transesterificación y alquilación de cianoacetato de etilo para dar
(16) (Esquema VI). La condensación de (16) con hidrocloruro de
benzamidina con 2 equivalentes de DBU da la pirimidina (17). La
ciclación a la pirrol-pirimidina (14) se logrará vía
desprotección del acetal en HCl acuoso. La reacción de (14) con
oxicloruro de fósforo a reflujo dio el correspondiente
4-cloro derivado (15). La copulación con
trans-4-aminociclohexanol en
dimetilsulfóxido a 135°C da 2. Este procedimiento reduce el número
de reacciones sintéticas al compuesto diana (2) de 9 a 4 etapas. Por
otra parte, se mejora drásticamente el rendimiento. De nuevo, un
experto en la técnica se dará cuenta que la selección de reactivos
permite una gran flexibilidad para escoger el sustituyente R_{6}
deseado.
Esquema
VI
Un enfoque general para preparar
des-metilpirrol se representa en el siguiente
esquema (Esquema VII).
\newpage
Esquema
VII
en el que R_{1} a R_{3} se
definen como
anteriormente.
La alquilación de un cianoacetato de alquilo con
dietilacetal en presencia de una base dio un cianodietilacetal que
se trató con una sal de amidina para producir un precursor
metilpirrolopirimidina. El precursor se cloró y se trató con una
amina para formar el compuesto diana
des-metilpirrolopirimidina como se mostró
anteriormente.
\newpage
Por ejemplo, el Esquema VIII representa la
síntesis del compuesto (18).
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
VIII
Se alquiló cianoacetato de metilo comercialmente
disponible con bromoacetaldehído dietilacetal en presencia de
carbonato de potasio y NaI para dar (19). La ciclación a la
pirimidina (20) se logró en dos etapas. Inicialmente, el
pirimidina-acetal se formó vía la reacción de (19)
con hidrocloruro de benzamidina con 2 equivalentes de DBU. El
pirimidina-acetal resultante se desprotegió sin
purificación con HCl acuoso 1 N y el aldehído resultante se cicló a
la pirrolo-pirimidina (20), que se aisló por
filtración. La reacción de (20) con oxicloruro de fósforo a reflujo
dio el correspondiente 4-cloro derivado (21). La
copulación del cloro derivado con
trans-4-aminociclohexanol en DMSO a
135°C dio el compuesto (18) a partir del compuesto (21).
Los Esquemas II-VIII demuestran
que es posible funcionalizar la posición 5 y la 6 del anillo de
pirrolopirimidina. Mediante el uso de diferentes reactivos de
partida y ligeras modificaciones de los anteriores esquemas de
reacción pueden introducirse varios grupos funcionales en las
posiciones 5 y 6 de la fórmula (I). La Tabla 2 ilustra algunos
ejemplos.
\vskip1.000000\baselineskip
Un experto sabrá que, en un sujeto, el
metabolismo de los compuestos descritos en la presente memoria
produce ciertos metabolitos biológicamente activos que pueden servir
como fármacos.
La invención se ilustra adicionalmente mediante
los siguientes Ejemplos que de ninguna manera deben interpretarse
que además son limitantes. Debe entenderse que los modelos usados a
lo largo de los Ejemplos son modelos aceptados y que la demostración
de la eficacia en estos modelos es predictiva de la eficacia en
seres humanos.
Preparación
1
Se usó una modificación del método de
alquilación de Seela y Lüpke^{1}. A una disolución enfriada en
hielo (0ºC) de cianoacetato de etilo (6,58 g, 58,1 mmol) en MeOH (20
mL) se añadió lentamente una disolución de NaOMe (25% p/v; 58,1
mmol). Después de 10 min, se añadió lentamente cloroacetona (5 mL;
62,8 mmol). Después de 4 h, se separó el disolvente. El aceite
marrón se diluyó con EtOac (100 mL) y se lavó con H_{2}O (100 mL).
La fracción orgánica se secó, se filtró y se concentró para dar un
aceite marrón (7,79 g; 79%). El aceite (3) (Esquema IV) fue una
mezcla de productos de los ésteres metílico y etílico (9/1), y se
usó sin más purificación. ^{1}H-RMN (200 MHz,
CDCl_{3}) \delta 4,24 (q, J = 7,2 Hz, OCH_{2}), 3,91 (dd, 1H,
J = 7,2, 7,0 Hz, CH), 3,62 (s, 3H, OCH_{3}), 3,42 (dd, 1H, J =
15,0, 7,1 Hz, 1 x CH_{2}); 3,02 (dd, 1H, J = 15,0, 7,0 Hz, 1 x
CH_{2}); 2,44 (s, 3H, CH_{3}), 1,26 (t, J = 7,1 Hz,
éster-CH_{3}).
^{1}Seela, F.; Lüpke, U. Chem.
Ber. 1977, 110,
1462-1469.
Preparación
2
Se usó el procedimiento de Seela y Lüpke^{1}.
Así, la protección de la cetona (3) (Esquema IV; 5,0 g, 32,2 mmol)
con etilenglicol (4 mL, 64,4 mmol) en presencia de TsOH (100 mg) dio
(4) como un aceite (Esquema IV; 5,2 g, 81,0) después de
cromatografía súbita (SiO_{2}; EtOAc/Hex 3/7, R_{f} 0,35).
Todavía contiene \sim 5% del éster etílico:
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 4,24 (q,
J = 7,2 Hz, OCH_{2}), 3,98 (s, 4H, 2 x
acetal-CH_{2}), 3,79 (s, 3H, OCH_{3}), 3,62 (dd,
1H, J = 7,2, 7,0 Hz, CH), 2,48 (dd, 1H, J = 15,0, 7,1 Hz, 1 x
CH_{2}); 2,32 (dd, 1H, J = 15,0, 7,0 Hz, 1 x CH_{2}); 1,35 (s,
3H, CH_{3}), 1,26 (t, J = 7,1 Hz, éster-CH_{3});
MS (ES): 200,1 (M^{-}+1).
^{1}Seela, F.; Lüpke, U. Chem.
Ber. 1977, 110,
1462-1469.
\newpage
Preparación
3
Se calentó a 85°C durante 15 h una disolución
del acetal (4) (Esquema IV, 1 g, 5,02 mmol), benzamidina (786 mg,
5,02 mmol) y DBU (1,5 mL, 10,04 mmol) en DMF seco (15 mL). La mezcla
se diluyó con CHCl_{3} (30 mL) y se lavó con NaOH 0,5 N (10 mL) y
H_{2}O (20 mL). La fracción orgánica se secó, se filtró y se
concentró para dar un aceite marrón. Se intentó la cromatografía
súbita (SiO_{2}; EtOAc/CH_{2}Cl_{2} 1/9, R_{f} 0,35), pero
el material cristalizaba en la columna. El gel de sílice se lavó con
MeOH. Las fracciones que contenían el producto (5) (Esquema IV) se
concentraron y se usaron sin posterior purificación (783 mg, 54,3%).
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,24 (m,
2H, Ar-H), 7,45 (m, 3H, Ar-H), 5,24
(s ancho, 2H, NH_{2}), 3,98 (s, 4H, 2 x
acetal-CH_{2}), 3,60-3,15 (m, 2H,
CH_{2}), 1,38 (s, 3H, CH_{3}); MS (ES): 288,1 (M^{-}+1).
Preparación del compuesto (20) (Esquema VIII):
se calentaron a 85ºC durante quince horas una disolución del acetal
(19) (4,43 g, 20,6 mmol), hidrocloruro de benzamina (3,22 mg, 20,6
mmol) y DBU (6,15 mL, 41,2 mmol) en DMF seco (20 mL). La mezcla se
diluyó con 100 mL de CHCl_{3}, y se lavó con H_{2}O (2 x 50 mL).
La fracción orgánica se secó, se filtró y se concentró para dar un
aceite marrón oscuro. El aceite marrón oscuro se agitó en HCl 1 N
(100 mL) durante 2 horas a temperatura ambiente. La suspensión
resultante se filtró dando la sal de HCl de (20) como un sólido
marrón (3,60 g, 70,6%): ^{1}H-RMN (200 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 11,92 (s, 1H), 8,05 (m, 2H,
Ar-H), 7,45 (m, 3H, Ar-H), 7,05 (s,
1H, pirrol-H); MS (ES): 212,1 (M^{-}+1).
Preparación
4
Se agitó durante 2 h a temperatura ambiente una
disolución del acetal (5) (700 mg, 2,44 mmol) en HCl 1 N (40 mL). La
suspensión resultante se filtró dando la sal de HCl de
2-fenil-6-metil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona
como un sólido marrón (498 mg, 78,0%): ^{1}H-RMN
(200 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 11,78 (s, 1H), 8,05
(m, 2H, Ar-H), 7,45 (m, 3H, Ar-H),
6,17 (s, 1H, pirrol-H), 2,25 (s, 3H, CH_{3}); MS
(ES): 226,1 (M^{-}+1).
Preparación
5
Se usó una modificación del método de ciclación
de Chen et al.^{1}. A una disolución enfriada en hielo
(0ºC) del bromuro (9), (Esquema V; 20,0 g, 108 mmol; 90% puro) en
alcohol isopropílico (60 mL) se añadió lentamente una disolución de
\alpha-metilbencilamina (12,5 mL, 97,3 mmol). Se
permitió que la disolución negra se calentara a temperatura ambiente
durante 15 h. La mezcla se diluyó con EtOac (200 mL) y se lavó con
NaOH 0,5 N (50 mL). La fracción orgánica se secó, se filtró y se
concentró para dar un alquitrán negro (19,2 g; 94%). El residuo se
purificó parcialmente por cromatografía súbita (SiO_{2};
MeOH/CH_{2}Cl_{2} 4/96, R_{f} 0,35) para dar un sólido negro
(6,38 g, 31%) como el compuesto
dl-1-(1-feniletil)-2-amino-3-ciano-4-metilpirrol:
MS(ES): 226,1 (M^{-} + 1).
^{1}Chen, Y.L.; Mansbach, R.S.;
Winter, S.M.; Brooks, E.; Collins, J.; Corman, M.L.; Dunaiskis,
A.R.; Faraci, W.S.; Gallaschun, R.J.; Schmidt, A.; Schulz, D.W.
J. Med. Chem. 1997, 40,
1749-1754.
Preparación
6
Se añadió cloruro de benzoilo (9,37 g, 66,7
mmol) a 0ºC a una disolución de
dl-1-(1-feniletil)-2-amino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol^{1}
(14,9 g, 62,5 mmol) y piridina (10,0 mL) en diclorometano (50,0 mL).
Después de agitar a 0ºC durante 1 h, se añadió hexano (10,0 mL) para
ayudar a la precipitación del producto. El disolvente se separó a
vacío y el sólido se recristalizó en EtOH/H_{2}O para dar 13,9 g
(65%) de
dl-1-(1-feniletil)-2-fenilcarbonilamino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol.
P.f. 218-221ºC; ^{1}H-RMN (200
MHz, CDCl_{3}) \delta 1,72 (s, 3H), 1,76 (d, J = 7,3 Hz, 3H),
1,98 (s, 3H), 5,52 (q, J = 7,3 Hz, 1H), 7,14-7,54
(m, 9H), 7,68-7,72 (dd, J = 1,4 Hz, 6,9 Hz, 6,9 Hz,
2H), 10,73 (s, 1H); MS (ES): 344,4 (M^{-}+1).
^{1}Liebigs Ann. Chem. 1986,
1485-1505.
Los siguientes compuestos se obtuvieron de una
manera similar.
Preparación
6A
dl-1-(1-Feniletil)-2-(3-piridil)carbonilamino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,83 (d,
J = 6,8 Hz, 3H), 2,02 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 5,50 (q, J = 6,8 Hz,
1H), 7,14-7,42 (m, 5H), 8,08 (m, 2H), 8,75 (m, 3H);
MS (ES): 345,2 (M^{-}+1).
dl-1-(1-Feniletil)-2-(2-furil)carbonilamino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,84 (d,
J = 7,4 Hz, 3H), 1,92 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 5,49 (q, J = 7,4 Hz,
1H), 6,54 (dd, J = 1,8 Hz, 3,6 Hz, 1H), 7,12-7,47
(m, 7H); MS (ES): 334,2 (M^{-}+1), 230,1.
dl-1-(1-Feniletil)-2-(3-furil)carbonilamino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,80 (d,
J = 7 Hz, 3H), 1,89 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 5,48 (q, J = 7 Hz, 1H),
6,59 (s, 1H), 7,12-7,40 (m, 6H), 7,93 (s, 1H); MS
(ES): 334,1 (M^{-}+1), 230,0.
\newpage
dl-1-(1-Feniletil)-2-ciclopentilcarbonilamino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,82 (d,
J = 7,4 Hz, 3H), 1,88 (s, 3H), 2,05 (s, 3H),
1,63-1,85 (m, 8H), 2,63 (m, 1H), 5,43 (q, J = 7,4
Hz, 1H), 6,52 (s, 1H), 7,05-7,20 (m, 5H); MS (ES):
336,3 (M^{-}+1).
dl-1-(1-Feniletil)-2-(2-tienil)carbonilamino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,82 (d,
J = 6,8 Hz, 3H), 1,96 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 5,49 (q, J = 6,8 Hz,
1H), 7,05-7,55 (m, 8H); MS (ES): 350,1 (M^{-}+1),
246,0.
dl-1-(1-Feniletil)-2-(3-tienil)carbonilamino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,83 (d,
J = 7,0 Hz, 3H), 1,99 (s, 3H), 2,12 (s, 3H), 5,49 (q, J = 7,0 Hz,
1H), 6,90 (m, 1H), 7,18-7,36 (m, 6H), 7,79 (m, 1H);
MS (ES): 350,2 (M^{-}+1), 246,1.
dl-1-(1-Feniletil)-2-(4-fluorofenil)carbonilamino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,83 (d,
J = 7,4 Hz, 3H), 1,96 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 5,51 (q, J = 7,4 Hz,
1H), 7,16-7,55 (m, 9H); MS (ES): 362,2 (M^{-}+1),
258,1.
dl-1-(1-Feniletil)-2-(3-fluorofenil)carbonilamino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,83 (d,
J = 7,4 Hz, 3H), 1,97 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 5,50 (q, J = 7,4 Hz,
1H), 7,05-7,38 (m, 7H), 7,67-7,74
(m, 2H); MS (ES): 362,2 (M^{-}+1), 258,1.
dl-1-(1-Feniletil)-2-(2-fluorofenil)carbonilamino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,85 (d,
J = 7,2 Hz, 3H), 1,94 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 5,50 (q, J = 7,2 Hz,
1H), 7,12-7,35 (m, 6H), 7,53 (m, 1H), 7,77 (m, 1H),
8,13 (m, 1H); MS (ES): 362,2 (M^{-}+1), 258,0.
dl-1-(1-Feniletil)-2-isopropilcarbonilamino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,19 (d,
J = 7,0 Hz, 6H), 1,82 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,88 (s, 3H), 2,06 (s,
3H), 2,46 (m, 1H), 5,39 (m, J = 7,2 Hz, 1H), 6,64 (s, 1H),
7,11-7,36 (m, 5H); MS (ES): 310,2 (M^{-}+1),
206,1.
En el caso de acilación de
dl-1-(1-feniletil)-2-amino-3-ciano-4-metilpirrol
se obtuvieron
dl-1-(1-feniletil)-2-benzoilamino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol
monoacilado y
dl-1-(1-feniletil)-2-benzoilamino-3-ciano-4-metilpirrol
diacilado. Pirrol monoacilado: ^{1}H-RMN (200 MHz,
CDCl_{3}) \delta 7,69 (d, 2H, J = 7,8 Hz, Ar-H),
7,58-7,12 (m, 8H, Ar-H), 6,18 (s,
1H, pirrol-H), 5,52 (q, 1H, J = 7,2 Hz,
CH-CH_{3}), 2,05 (s, 3H,
pirrol-CH_{3}), 1,85 (d, 3H, J = 7,2 Hz,
CH-CH_{3}); MS (ES): 330,2 (M^{-}+1); Pirrol
diacilado: ^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3})
\delta 7,85 (d, 2H, J = 7,7 Hz, Ar-H), 7,74 (d,
2H, J = 7,8 Hz, Ar-H), 7,52-7,20 (m,
9H, Ar-H), 7,04 (m, 2H, Ar-H), 6,21
(s, 1H, pirrol-H), 5,52 (q, 1H, J = 7,2 Hz,
CH-CH_{3}), 1,77 (d, 3H, J = 7,2 Hz,
CH-CH_{3}), 1,74 (s, 3H,
pirrol-CH_{3}); MS (ES): 434,1 (M^{-}+1).
Preparación
7
Se añadió ácido sulfúrico concentrado (1,0 mL) a
0ºC a una disolución de
dl-1-(1-feniletil)-2-fenilcarboxiamino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol
(1,0 g, 2,92 mmol) en metanol (10,0 mL). La mezcla resultante se
mantuvo a reflujo durante 15 h y se enfrió a temperatura ambiente.
El precipitado se filtró para dar 0,48 g (48%) de
dl-5,6-dimetil-2-fenil-7H-7-(1-feniletil)pirrolo[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,02 (d,
J = 7,4 Hz, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 6,25 (q, J = 7,4 Hz,
1H), 7,22-7,50 (m, 9H), 8,07-8,12
(dd, J = 3,4 Hz, 6,8 Hz, 2H), 10,51 (s, 1H); MS (ES): 344,2
(M^{-}+1).
Los siguientes compuestos se obtuvieron de una
manera similar al de la Preparación 7:
dl-5,6-Dimetil-2-(3-piridil)-7H-7-(1-feniletil)pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,03 (d,
J = 7,2 Hz, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,42 (s, 3H), 6,24 (q, J = 7,2 Hz,
1H), 7,09-7,42 (m, 5H), 8,48 (m, 2H), 8,70 (m, 3H);
MS (ES): 345,1 (M^{-}+1).
dl-5,6-Dimetil-2-(2-furil)-7H-7-(1-feniletil)pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,98 (d,
J = 7,8 Hz, 3H), 1,99 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 6,12 (q, J = 7,8 Hz,
1H), 6,48 (dd, J = 1,8 Hz, 3,6 Hz, 1H), 7,17-7,55
(m, 7H), 9,6 (s, 1H); MS (ES): 334,2 (M^{-}+1).
dl-5,6-Dimetil-2-(3-furil)-7H-7-(1-feniletil)pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,99 (d,
J = 7 Hz, 3H), 2,02 (s, 3H), 2,42 (s, 3H), 6,24 (q, J = 7 Hz, 1H),
7,09 (s, 1H), 7,18-7,32 (m, 5H), 7,48 (s, 1H), 8,51
(s, 1H); MS (ES): 334,2 (M^{-}+1).
dl-5,6-Dimetil-2-ciclopentil-7H-7-(1-feniletil)pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,95 (d,
J = 7,4 Hz, 3H), 2,00 (s, 3H), 2,33 (s, 3H),
1,68-1,88 (m, 8H), 2,97 (m, 1H), 6,10 (q, J = 7,4
Hz, 1H), 7,16-7,30 (m, 5H), 9,29 (s, 1H); MS (ES):
336,3 (M^{-}+1).
dl-5,6-Dimetil-2-(2-tienil)-7H-7-(1-feniletil)pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,02 (d,
J = 7,2 Hz, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 6,13 (q, J = 7,2 Hz,
1H), 7,12 (dd, J = 4,8, 2,8 Hz, 1H), 7,26-7,32 (m,
5H), 7,44 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 11,25 (s,
1H); MS (ES): 350,2 (M^{-}+1).
dl-5,6-Dimetil-2-(3-tienil)-7H-7-(1-feniletil)pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,00 (d,
J = 7,4 Hz, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 6,24 (q, J = 7,4 Hz,
1H), 7,24-7,33 (m, 5H), 7,33-7,39
(m, 1H), 7,85 (m, 1H), 8,47 (m, 1H), 12,01 (s, 1H); MS (ES): 350,2
(M^{-}+1).
dl-5,6-Dimetil-2-(4-fluorofenil)-7H-7-(1-feniletil)pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,01 (d,
J = 6,8 Hz, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,42 (s, 3H), 6,26 (q, J = 6,8 Hz,
1H), 7,12-7,36 (m, 7H), 8,23-8,30
(m, 2H), 11,82 (s, 1H); MS (ES): 362,3 (M^{-}+1).
dl-5,6-Dimetil-2-(3-fluorofenil)-7H-7-(1-feniletil)pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,02 (d,
J = 7,4 Hz, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,44 (s, 3H), 6,29 (q, J = 7,4 Hz,
1H), 7,13-7,51 (m, 7H), 8,00-8,04
(m, 2H), 11,72 (s, 1H); MS (ES): 362,2 (M^{-}+1).
dl-5,6-Dimetil-2-(2-fluorofenil)-7H-7-(1-feniletil)pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,00 (d,
J = 7,2 Hz, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,38 (s, 3H), 6,24 (q, J = 7,2 Hz,
1H), 7,18-7,45 (m, 8H), 8,21 (m, 1H), 9,54 (s, 1H);
MS (ES): 362,2 (M^{-}+1).
dl-5,6-Dimetil-2-isopropil-7H-7-(1-feniletil)pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,30 (d,
J = 6,8 Hz, 3H), 1,32 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 2,01 (s, 3H), 2,34 (s,
3H), 2,90 (m, 1H), 6,13 (m, 1H), 7,17-7,34 (m, 5H),
10,16 (s, 1H); MS (ES): 310,2 (M^{-}+1).
Preparación
8
Se agitó con ácido sulfúrico concentrado (1,0
mL) en DMF (13 mL) a 130ºC durante 48 h una disolución de
dl-1-(1-feniletil)-2-benzoilamino-3-ciano-4-dimetilpirrol
(785 mg, 2,38 mmol). La disolución negra se diluyó con CHCl_{3}
(100 mL) y se lavó con NaOH 1 N (30 mL) y salmuera (30 mL). La
fracción orgánica se secó, se filtró, se concentró y se purificó por
cromatografía súbita (SiO_{2}; EtOAc/Hex 8/2, R_{f} 0,35) para
dar un sólido marrón (184 mg, 24%) como
dl-5-metil-2-metil-7H-7-(1-feniletil)pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,18 (m,
2H, Ar-H), 7,62-7,44 (m, 3H,
Ar-H), 7,40-7,18 (m, 5H,
Ar-H), 6,48 (s, 1H, pirrol-H), 6,28
(q, 1H, J = 7,2 Hz, CH-CH_{3}), 2,18 (s, 3H,
pirrol-CH_{3}), 2,07 (d, 3H, J = 7,2 Hz,
CH-CH_{3}); MS (ES): 330,2 (M^{+} +
1).
Preparación
9
Se mantuvo a reflujo durante 5 h una mezcla de
dl-1-(1-feniletil)-2-amino-3-ciano-4,5-dimetilpirrol
(9,60 g, 40,0 mmol) y de ácido fórmico (50,0 mL, 98%). Después de
enfriar a temperatura ambiente y arañar los lados del matraz se
formó un copioso precipitado y se filtró. El material se lavó con
agua hasta que los lavados mostraron pH neutro para dar
dl-5,6-dimetil-7H-7-(1-feniletil)pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,96 (d,
J = 7,4 Hz, 3H), 2,00 (s, 3H), 2,38 (s, 3H), 6,21 (q, J = 7,4 Hz,
1H), 7,11-7,35 (m, 5H), 7,81 (s, 1H), 11,71 (s, 1H);
MS (ES): 268,2 (M^{+} + 1).
Preparación
10
Se suspendió
dl-5,6-dimetil-2-fenil-7H-7-(1-feniletil)pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona
(1,0 g, 2,91 mmol) en ácido polifosfórico (30,0 mL). La mezcla se
calentó a 100ºC durante 4 h. La suspensión caliente se vertió sobre
agua con hielo, se agitó vigorosamente para dispersar la suspensión
y se basificó a pH 6 con KOH sólido. El sólido resultante se filtró
y se recogió para dar 0,49 g (69%) de
5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,17 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 7,45 (ancho, 3H), 8,07 (ancho,
2H), 11,49 (s, 1H), 11,82 (s, 1H); MS (ES): 344,2 (M^{-} + 1).
Los siguientes compuestos se obtuvieron de una
manera similar al de la Preparación 10:
5-Metil-2-fenil-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
MS (ES): 226,0 (M^{-} + 1).
5,6-Dimetil-2-(3-piridil)-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
MS (ES): 241,1 (M^{-} + 1).
5,6-Dimetil-2-(2-furil)-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,13 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 6,39 (dd, J = 1,8, 3,6 Hz, 1H),
6,65 (dd, J = 1,8 Hz, 3,6 Hz, 1H), 7,85 (dd, J = 1,8, 3,6 Hz, 1H),
11,45 (s, 1H), 11,60 (s, 1H); MS (ES): 230,1 (M^{-} + 1).
5,6-Dimetil-2-(3-furil)-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,14 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 6,66 (s, 1H), 7,78 (s, 1H),
8,35 (s, 1H), 11,3 (s, 1H), 11,4 (s, 1H); MS (ES): 230,1 (M^{-} +
1).
5,6-Dimetil-2-ciclopentil-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 1,57-1,91 (m, 8H), 2,12 (s, 3H), 2,16 (s,
3H), 2,99 (m, 1H), 11,24 (s, 1H), 11,38 (s, 1H); MS (ES): 232,2
(M^{-} + 1).
5,6-Dimetil-2-(2-tienil)-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,14 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 7,14 (dd, J = 3,0, 5,2 Hz, 1H),
7,70 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 11,50 (s, 1H);
MS (ES): 246,1 (M^{-} + 1).
5,6-Dimetil-2-(3-tienil)-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,17 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 7,66 (m, 1H), 7,75 (m, 1H),
8,43 (m, 1H), 11,47 (s, 1H), 11,69 (s, 1H); MS (ES): 246,1 (M^{-}
+ 1).
\newpage
5,6-Dimetil-2-(4-fluorofenil)-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,17 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 7,31 (m, 2H), 8,12 (m, 2H),
11,47 (s, 1H); MS (ES): 258,2 (M^{-} + 1).
5,6-Dimetil-2-(3-fluorofenil)-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,18 (s, 3H), 2,21 (s, 3H), 7,33 (m, 1H), 7,52 (m. 1H),
7,85-7,95 (m, 2H), 11,56 (s, 1H), 11,80 (s, 1H); MS
(ES): 258,1 (M^{-} + 1).
5,6-Dimetil-2-(2-fluorofenil)-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,18 (s, 3H), 2,22 (s, 3H), 7,27-7,37 (m,
2H), 7,53 (m, 1H), 7,68 (m, 1H), 11,54 (s, 1H), 11,78 (s, 1H); MS
(ES): 258,1 (M^{-} + 1).
5,6-Dimetil-2-isopropil-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 1,17 (d, J = 6,6 Hz, 6H), 2,11 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,81
(m, 1H), 11,20 (s, 1H), 11,39 (s, 1H); MS (ES): 206,1 (M^{-} +
1).
5,6-Dimetil-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,13 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 7,65 (s, 1H); MS (ES): 164,0
(M^{-} + 1).
Preparación
11
Se mantuvo a reflujo durante 6 h una disolución
de
5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidin-4(3H)-ona
(1,0 g, 4,2 mmol) en oxicloruro de fósforo (25,0 mL) y a
continuación se concentró a vacío hasta sequedad. Se añadió agua al
residuo para inducir cristalización y el sólido resultante se filtró
y se recogió para dar 0,90 g (83%) de
4-cloro-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,33 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 7,46-7,49 (m,
3H), 8,30-8,35 (m, 2H), 12,20 (s, 1H); MS (ES):
258,1 (M^{-} + 1).
Los siguientes compuestos se obtuvieron de una
manera similar al de la Preparación 11:
4-Cloro-5-metil-2-fenil-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidina.
MS (ES): 244,0 (M^{-} + 1).
4-Cloro-6-metil-2-fenil-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidina.
MS (ES): 244,0 (M^{-} + 1).
4-Cloro-2-fenil-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 8,35 (s, 3H), 7,63 (s ancho, 1H), 7,45 (m, 3H), 6,47 (s
ancho, 1H); MS (ES): 230,0 (M^{-} + 1).
4-Cloro-5,6-dimetil-2-(3-piridil)-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina.
MS (ES): 259,0 (M^{-} + 1).
4-Cloro-5,6-dimetil-2-(2-furil)-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,35 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 6,68 (dd, J = 1,8, 3,6 Hz, 1H),
7,34 (dd, J = 1,8 Hz, 3,6 Hz, 1H), 7,89 (dd, J = 1,8, 3,6 Hz, 1H);
MS (ES): 248,0 (M^{-} + 1).
4-Cloro-5,6-dimetil-2-(3-furil)-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,31 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 6,62 (s, 1H), 7,78 (s, 1H),
8,18 (s, 1H), 12,02 (s, 1H); MS (ES): 248,1 (M^{-} + 1).
4-Cloro-5,6-dimetil-2-ciclopentil-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 1,61-1,96 (m, 8H), 2,27 (s, 3H), 2,27 (s,
3H), 3,22 (m, 1H), 11,97 (s, 1H); MS (ES): 250,1 (M^{-} + 1).
4-Cloro-5,6-dimetil-2-(2-tienil)-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,29 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 7,14 (dd, J = 3,1, 4,0 Hz, 1H),
7,33 (dd, J = 4,9 Hz, 1H), 7,82 (dd, J = 3,1 Hz, 1H), 12,19 (s, 1H);
MS (ES): 264,1 (M^{-} + 1).
4-Cloro-5,6-dimetil-2-(3-tienil)-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,32 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 7,62 (dd, J = 3,0, 5,2 Hz, 1H),
7,75 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 3,0 Hz, 1H); MS (ES): 264,0
(M^{-} + 1).
4-Cloro-5,6-dimetil-2-(4-fluorofenil)-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,33 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 7,30 (m, 2H), 8,34 (m, 2H),
12,11 (s, 1H); MS (ES): 276,1 (M^{-} + 1).
4-Cloro-5,6-dimetil-2-(3-fluorofenil)-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,31 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 7,29 (m, 1H), 7,52 (m, 1H),
7,96 (m, 1H), 8,14 (m, 1H), 11,57 (s, 1H); MS (ES): 276,1 (M^{-} +
1).
4-Cloro-5,6-dimetil-2-(2-fluorofenil)-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,34 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 7,33 (m, 2H), 7,44 (m, 1H),
7,99 (m, 1H), 12,23 (s, 1H); MS (ES): 276,1 (M^{-} + 1).
4-Cloro-5,6-dimetil-2-isopropil-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 1,24 (d, J = 6,6 Hz, 6H), 2,28 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 3,08
(q, J = 6,6 Hz, 1H), 11,95 (s, 1H); MS (ES): 224,0 (M^{-} +
1).
4-Cloro-5,6-dimetil-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,31 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 8,40 (s, 1H); MS (ES): 182,0
(M^{-} + 1).
dl-4-Cloro-5,6-dimetil-2-fenil-7H-7-(1-feniletil)pirrolo-[2,3d]pirimidina.
Preparación
12
A una disolución de
dl-1,2-diaminopropano (1,48 g, 20,0
mmol) y carbonato de sodio (2,73 g, 22,0 mmol) en dioxano (100,0 mL)
y agua (100,0 mL) se añadió a temperatura ambiente
di-terc-dicarbonato (4,80 g, 22,0
mmol). La mezcla resultante se agitó durante 14 h. El dioxano se
separó a vacío. El precipitado se separó por filtración y el
filtrado se concentró a vacío hasta sequedad. El residuo se trituró
con EtOAc y a continuación se filtró. El filtrado se concentró a
vacío hasta sequedad para dar una mezcla de
dl-1-amino-2-(1,1-dimetiletoxi)carbonilamino-propano
y
dl-2-amino-1-(1,1-dimetiletoxi)carbonilaminopropano
que no se pudieron separar por el método de cromatografía normal. La
mezcla se usó para la reacción del Ejemplo 8.
Preparación
13
A una disolución de
Fmoc-\beta-Ala-OH
(1,0 g, 3,212 mmol) y cloruro de oxalilo (0,428 g, 0,29 mL, 3,373
mmol) en diclorometano (20,0 mL) se añadieron unas pocas gotas de
N,N-dimetilformamida a 0ºC. La mezcla se agitó a
temperatura ambiente durante 1 h seguido por la adición de
ciclopropilmetilamina (0,229 g, 0,28 mL, 3,212 mmol) y trietilamina
(0,65 g, 0,90 mL, 6,424 mmol). Después de 10 min, la mezcla se trató
con ácido clorhídrico 1 M (10,0 mL) y la mezcla acuosa se extrajo
con diclorometano (3 x 30,0 mL). La disolución orgánica se
concentró a vacío hasta sequedad. El residuo se trató con una
disolución de piperidina al 20% en
N,N-dimetilformamida (20,0 mL) durante 0,5 h.
Después de la separación del disolvente a vacío, el residuo se trató
con ácido clorhídrico 1 M (20,0 mL) y acetato de etilo (20,0 mL). La
mezcla se separó y la capa acuosa se basificó con hidróxido de sodio
sólido hasta pH = 8. El precipitado se separó por filtración y la
disolución acuosa se pasó por una columna de intercambio de iones
eluida con piridina al 20% para dar 0,262 g (57%) de
N-ciclopropilmetil \beta-alanina
amida. ^{1}H-RMN (200 MHz, CD_{3}OD) \delta
0,22 (m, 2H), 0,49 (m, 2H), 0,96 (m, 2H), 2,40 (t, 2H), 2,92 (t,
2H), 3,05 (d, 2H); MS (ES): 143,1 (M^{-} + 1).
Preparación
14
Se disolvió
trans-1,4-ciclohexildiamina (6,08 g,
53,2 mmol) en diclorometano (100 mL). Se añadió vía una cánula una
disolución de carbonato de
di-t-butilo (2,32 g, 10,65 mmol en
40 mL de diclorometano). Después de 20 horas, la reacción se
repartió entre CHCl_{3} y agua. Las capas se separaron y la capa
acuosa se extrajo con CHCl_{3} (3x). Las capas orgánicas
combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se
concentraron para dar 1,20 g de un sólido blanco (53%).
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta
1,0-1,3 (m, 4H), 1,44 (s, 9H),
1,8-2,1 (m, 4H), 2,62 (m ancho, 1H), 3,40 (s ancho,
1H), 4,37 (s ancho, 1H); MS (ES): 215,2 (M^{-} + 1).
Se disolvió
N-terc-butoxicarbonil-trans-1,4-ciclohexildiamina
(530 mg, 2,47 mmol) en diclorometano (20 mL). Se añadió gota a gota
anhídrido acético (250 mg, 2,60 mmol). Después de 16 h, la reacción
se diluyó con agua y CHCl_{3}. Las capas se separaron y la capa
acuosa se extrajo con CHCl_{3} (3x). Las capas orgánicas
combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se
concentraron. La recristalización (EtOH/H_{2}O) dio 190 mg de
cristales blancos (30%). ^{1}H-RMN (200 MHz,
CDCl_{3}) \delta 0,9-1,30 (m, 4H), 1,43 (s, 9H),
1,96-2,10 (m, 7H), 3,40 (s ancho, 1H), 3,70 (s
ancho, 1H), 4,40 (s ancho, 1H), 4,40 (s ancho, 1H); MS (ES): 257,2
(M^{-} + 1), 242,1 (M^{-} - 15), 201,1 (M^{-} - 56).
\newpage
Se disolvió en diclorometano (5 mL)
4-(N-acetil)-N-terc-butoxicarbonil-trans-1,4-ciclohexildiamina
(190 mg, 0,74 mmol) y se diluyó con TFA (6 mL). Después de 16 h, la
reacción se concentró. En un matraz se combinaron el sólido bruto,
DMSO (2 mL), NaHCO_{3} (200 mg, 2,2 mmol) y
4-cloro-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
(35 mg, 0,14 mmol) y se calentaron a 130ºC. Después de 4,5 horas, la
reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc y
agua. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc
(3x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se
filtraron y se concentraron. La cromatografía (placa de sílice
preparativa; CHCl_{3}:EtOH 20:1) dio 0,3 mg de un sólido marrón
(rendimiento 1%). MS (ES): 378,2 (M^{-} + 1).
Se disolvió
trans-1,4-ciclohexildiamina (530 mg,
2,47 mmol) en diclorometano (20 mL) y se diluyó con piridina (233
mg, 3,0 mmol). Se añadió gota a gota cloruro de metanosulfonilo (300
mg, 2,60 mmol). Después de 16 h, la reacción se diluyó con agua y
CHCl_{3}. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con
CHCl_{3} (3x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre
MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. La recristalización
(EtOH/H_{2}O) dio 206 mg de cristales blancos (29%).
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta
1,10-1,40 (m, 4H), 1,45 (s, 9H),
2,00-2,20 (m, 4H), 2,98 (s, 3H),
3,20-3,50 (s ancho, 2H), 4,37 (s ancho, 1H); MS
(ES): 293,1 (M^{+} + 1), 278,1 (M^{-} - 15), 237,1 (M^{-} -
56).
Se disolvió
4-(N-sulfonil)-N-terc-butoxicarbonil-trans-1,4-ciclohexildiamina
(206 mg, 0,71 mmol) en diclorometano (5 mL) y se diluyó con TFA (6
mL). Después de 16 h, la reacción se concentró. En un matraz se
combinaron la mezcla de reacción bruta, DMSO (2 mL), NaHCO_{3}
(100 mg, 1,1 mmol) y
1-cloro-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
y se calentaron a 130ºC. Después de 15 horas, la reacción se enfrió
a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc (3x). Las capas
orgánicas se separaron y se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y
se concentraron. La cromatografía (placa de sílice preparativa;
CHCl_{3}:EtOH 20:1) dio 2,6 mg de un sólido marrón (rendimiento
5%). MS (ES): 414,2 (M^{-} + 1).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de Referencia
1
Se calentó a 130ºC durante 5 h una disolución de
4-cloro-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
(0,50 g, 1,94 mmol) y
4-trans-hidroxiciclohexilamina (2,23
g, 19,4 mmol) en metilsulfóxido (10,0 mL). Después de enfriar a
temperatura ambiente, se añadió agua (10,0 mL) y la disolución
acuosa resultante se extrajo con EtOAc (3 x 10,0 mL). La disolución
de EtOAc combinada se secó (MgSO_{4}) y se filtró, el filtrado se
concentró a vacío hasta sequedad, el residuo se sometió a
cromatografía sobre gel de sílice para dar 0,49 g (75%) de
4-(4-trans-hidroxiciclohexil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
P.f. 197-199°C; ^{1}H-RMN (200
MHz, CDCl_{3}) \delta 1,25-1,59 (m, 8H), 2,08
(s, 3H), 2,29 (s, 3H), 3,68-3,79 (m, 1H),
4,32-4,38 (m, 1H), 4,88 (d, J = 8 Hz, 1H),
7,26-7,49 (m, 3H), 8,40-8,44 (dd, J
= 2,2, 8 Hz, 2H), 10,60 (s, 1H); MS (ES): 337,2 (M^{-} + 1).
Los siguientes compuestos se obtuvieron de una
manera similar al del Ejemplo de Referencia 1:
^{1}H-RMN (200 MHz,
CDCl_{3}) \delta 1,58-1,90 (ancho, 6H), 2,05 (s,
3H), 2,29 (s, 3H), 4,48-4,57 (m, 1H),
4,91-5,01 (m, 2H), 7,35-7,46 (m,
3H), 8,42-8,47 (m, 2H), 10,11 (s, 1H); MS (ES):
323,2 (M^{-} + 1).
^{1}Para la preparación de
3-trans-hidroxiciclopentilamina,
véase el documento
EP-A-322242.
^{1}H-RMN (200 MHz,
CDCl_{3}) \delta 1,82-2,28 (ancho, 6H), 2,02 (s,
3H), 2,30 (s, 3H), 4,53-4,60 (m, 1H),
4,95-5,08 (m, 1H), 5,85-5,93 (d,
1H), 7,35-7,47 (m, 3H), 8,42-8,46
(m, 2H), 10,05 (s, 1H); MS (ES): 323,2 (M^{-} + 1).
^{1}Para la preparación de
3-cis-hidroxiciclopentilamina, véase
el documento
EP-A-322242.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de Referencia
2
Se añadió
4-(4-trans-hidroxiciclohexil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidina
(0,05 g, 0,149
mmol) a una suspensión agitada de trifenilfosfina (0,047 g, 0,179 mmol) y ácido benzoico (0,022 g, 0,179 mmol) en THF (1,0 mL) enfriada a 0ºC. A continuación, se añadió gota a gota en 10 minutos azodicarboxilato de dietilo (0,028 mL, 0,179 mmol). A continuación, se permitió que la reacción se calentara a temperatura ambiente. Después que la reacción hubo finalizado por TLC, la mezcla de reacción se trató con bicarbonato de sodio acuoso (3,0 mL). La fase acuosa se separó y se extrajo con éter (2 x 5,0 mL). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron y se concentraron a vacío hasta sequedad. Al residuo se añadieron éter (2,0 mL) y hexano (5,0 mL), tras lo cual la masa del óxido de trifenilfosfina se separó por filtración. La concentración del filtrado dio un aceite viscoso que se purificó por cromatografía en columna (hexano:acetato de etilo = 4:1) para dar 5,0 mg (7,6%) de 4-(4-cis-benzoiloxiciclohexil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina. MS (ES): 441,3 (M^{-} + 1). La reacción también produjo 50,0 mg (84%) de 4-(3-ciclohexenil)-amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina. MS (ES): 319,2 (M^{-} + 1).
mmol) a una suspensión agitada de trifenilfosfina (0,047 g, 0,179 mmol) y ácido benzoico (0,022 g, 0,179 mmol) en THF (1,0 mL) enfriada a 0ºC. A continuación, se añadió gota a gota en 10 minutos azodicarboxilato de dietilo (0,028 mL, 0,179 mmol). A continuación, se permitió que la reacción se calentara a temperatura ambiente. Después que la reacción hubo finalizado por TLC, la mezcla de reacción se trató con bicarbonato de sodio acuoso (3,0 mL). La fase acuosa se separó y se extrajo con éter (2 x 5,0 mL). Los extractos orgánicos se combinaron, se secaron y se concentraron a vacío hasta sequedad. Al residuo se añadieron éter (2,0 mL) y hexano (5,0 mL), tras lo cual la masa del óxido de trifenilfosfina se separó por filtración. La concentración del filtrado dio un aceite viscoso que se purificó por cromatografía en columna (hexano:acetato de etilo = 4:1) para dar 5,0 mg (7,6%) de 4-(4-cis-benzoiloxiciclohexil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina. MS (ES): 441,3 (M^{-} + 1). La reacción también produjo 50,0 mg (84%) de 4-(3-ciclohexenil)-amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina. MS (ES): 319,2 (M^{-} + 1).
Ejemplo de Referencia
3
A una disolución de
4-(4-cis-benzoiloxiciclohexil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
(5,0 mg, 0,0114 mmol) en etanol (1,0 mL) se añadieron 10 gotas de
hidróxido de sodio 2 M. Después de 1 h, la mezcla de reacción se
extrajo con acetato de etilo (3 x 5,0 mL) y la capa orgánica se
secó, se filtró y se concentró a vacío hasta sequedad. El residuo se
sometió a cromatografía en columna (hexano:acetato de etilo = 4:1)
para dar 3,6 mg (94%) de
4-(4-cis-hidroxiciclohexil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
MS (ES): 337,2 (M^{-} + 1).
Ejemplo de Referencia
4
Se disolvió en ácido
trifluoroacético:diclorometano (1:1, 5,0 mL)
4-(3-terc-butiloxi-3-oxopropil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
(70,0 mg, 0,191 mmol)). La disolución resultante se agitó a
temperatura ambiente durante 1 h y a continuación se mantuvo a
reflujo durante 2 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la
mezcla se concentró a vacío hasta sequedad. El residuo se sometió a
cromatografía de capa fina preparativa (EtOAc:hexano:AcOH =
7:2,5:0,5) para dar 40,0 mg (68%) de
4-(3-hidroxi-3-oxopropil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, CD_{3}OD) \delta 2,32 (s,
3H), 2,38 (s, 3H), 2,81 (t, 2H), 4,01 (t, 2H), 7,55 (m, 3H), 8,24
(m, 2H); MS (ES): 311,1 (M^{-} + 1).
Ejemplo de Referencia
5
Se disolvió
4-(3-hidroxi-3-oxopropil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidina
(50,0 mg, 0,161
mmol) en una mezcla de N,N-dimetilformamida (0,50 mL), dioxano (0,50 mL) y agua (0,25 mL). A esta disolución se añadió metilamina (0,02 mL, 40% en peso en agua, 0,242 mmol), trietilamina (0,085 mL) y tetrafluoroborato de N,N,N',N'-tetrametiluronio (61,2 mg, 0,203 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 10 min, la disolución se concentró y el residuo se sometió a cromatografía de capa fina preparativa (EtOAc) para dar 35,0 mg (67%) de 4-(3-N-metil-3-oxopropil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina. ^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,92 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,65 (t, 2H), 4,08 (t, 2H), 5,90 (t, 1H), 6,12 (m, 1H), 7,45 (m, 3H), 8,41 (m, 2H), 10,68 (s, 1H); MS (ES): 311,1 (M^{-} + 1).
mmol) en una mezcla de N,N-dimetilformamida (0,50 mL), dioxano (0,50 mL) y agua (0,25 mL). A esta disolución se añadió metilamina (0,02 mL, 40% en peso en agua, 0,242 mmol), trietilamina (0,085 mL) y tetrafluoroborato de N,N,N',N'-tetrametiluronio (61,2 mg, 0,203 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 10 min, la disolución se concentró y el residuo se sometió a cromatografía de capa fina preparativa (EtOAc) para dar 35,0 mg (67%) de 4-(3-N-metil-3-oxopropil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina. ^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,92 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,65 (t, 2H), 4,08 (t, 2H), 5,90 (t, 1H), 6,12 (m, 1H), 7,45 (m, 3H), 8,41 (m, 2H), 10,68 (s, 1H); MS (ES): 311,1 (M^{-} + 1).
Ejemplo de Referencia
6
Una mezcla de
4-cloro-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
(0,70 mg, 2,72 mmol) y 1,2-diaminoetano (10,0 mL,
150 mmol) se mantuvo a reflujo en atmósfera inerte durante 6 h. La
amina en exceso se separó a vacío, y el residuo se lavó
secuencialmente con éter y hexano para dar 0,75 g (98%) de
4-(2-aminoetil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
MS (ES): 282,2 (M^{-} + 1), 265,1 (M^{-} - NH_{3}).
Ejemplo de Referencia
7
Se añadió cloruro de propionilo (25,6 mg, 0,024
mL, 0,274 mmol) a una disolución de
4-(2-aminoetil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
(70 mg, 0,249 mmol) y trietilamina (50,4 mg, 0,498 mmol) en
diclorometano (2,0 mL) a 0ºC. Después de 1 h, la mezcla se concentró
a vacío y el residuo se sometió a cromatografía de capa fina
preparativa (EtOAc) para dar 22,0 mg (26%) de
4-(2-propionilaminoetil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo-[2,3d]pirimidina.
MS (ES): 338,2 (M^{-} + 1).
Los siguientes compuestos se obtuvieron de una
manera similar al del Ejemplo de Referencia 7:
4-(2-N'-Metilureaetil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 2,13 (s,
3H), 2,32 (s, 3H), 3,53 (d, 3H), 3,55 (m, 2H), 3,88 (m, 2H), 4,29
(m, 1H), 5,68 (t, 1H), 5,84 (m, 1H), 7,42 (m, 3H), 8,36 (dd, 2H),
9,52 (s, 1H); MS (ES): 339,3 (M^{-} + 1).
Ejemplo de Referencia
8
Se añadió
4-(2-aminoetil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
(55,0 mg, 0,196 mmol) a una disolución de hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(41,1 mg, 0,215 mmol), dimetilaminopiridina (2,4 mg, 0,020 mmol) y
ácido pirúvico (18,9 mg, 0,015 mL, 0,215 mmol) en diclorometano (2,0
mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. El
tratamiento usual de la masa de reacción y la cromatografía en
columna (EtOAc) dieron a continuación 10,0 mg (15%) de
4-(2'-piruvilamidoetil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
MS (ES): 352,2 (M^{-} + 1).
Ejemplo de Referencia
9
Se añadió
N-trimetilsililisocianato (43,3 mg, 0,051 mL, 0,320
mmol) a una disolución de
4-(2-aminoetil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
(60,0 mg, 0,213 mmol) en diclorometano (2,0 mL). La mezcla se agitó
a temperatura ambiente durante 3 h seguido por la adición de una
disolución acuosa de bicarbonato de sodio. Después de filtrar a
través de una pequeña cantidad de gel de sílice, el filtrado se
concentró a vacío hasta sequedad para dar 9,8 mg (14%) de
4-(2-ureaetil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
MS (ES): 325,2 (M^{-} + 1).
Ejemplo de Referencia
10
La reacción de
4-cloro-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
con la mezcla de
dl-1-amino-2-(1,1-dimetiletoxi)carbonilamino-propano
y
dl-2-amino-1-(1,1-dimetiletoxi)carbonilamino-propano
se realizó de una manera similar a la del Ejemplo 1. La reacción dio
una mezcla de
dl-4-(1-metil-2-(1,1-dimetiletoxi)carbonilamino)-etilamino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
y
dl-4-(2-metil-2-(1,1-dimetiletoxi)carbonilamino)etilamino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
que se separaron por cromatografía en columna (EtOAc:hexanos = 1:3).
La primera fracción fue
dl-4-(1-metil-2-(1,1-dimetiletoxi)carbonilaminoetil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta
1,29-1,38 (m, 12H), 1,95 (s, 3H), 2,31 (s, 3H),
3,34-3,43 (m, 2H), 4,62-4,70 (m,
1H), 5,36-5,40 (d, J = 8 Hz, 1H), 5,53 (ancho, 1H),
7,37-7,49 (m, 3H), 8,37-8,44 (m,
2H), 10,75 (s, 1H). MS 396,3 (M^{-} + 1); la segunda fracción fue
dl-4-(2-(1,1-dimetiletoxi)carbonilaminopropil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta
1,26-1,40 (m, 12H), 2,00 (s, 3H), 2,31 (s, 3H),
3,60-3,90 (m, 2H), 3,95-4,10 (m,
1H), 5,41-5,44 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,65 (ancho,
1H), 7,40-7,46 (m, 3H), 8,37-8,44
(m, 2H), 10,89 (s, 1H); MS (ES): 396,2 (M^{-} + 1).
Ejemplo de Referencia
11
Se trató
dl-4-(1-metil-2-(1,1-dimetiletoxi)carbonilaminoetil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
(60,6 mg, 0,153 mol) con ácido trifluoroacético (0,5 mL) en
diclorometano (2,0 mL) durante 14 h. El disolvente orgánico se
separó a vacío hasta sequedad. El residuo se disolvió en
N,N-dimetilformamida (2,0 mL) y trietilamina (2,0
mL). A la disolución a 0ºC se añadió anhídrido acético (17,2 mg,
0,016, 0,169 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura
ambiente durante 48 h y a continuación se concentró a vacío hasta
sequedad. El residuo se sometió a cromatografía de capa fina
preparativa (EtOAc) para dar 27,0 mg (52%) de
dl-4-(1-metil-2-acetilaminoetil).-amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta
1,38-1,42 (d, J = 8 Hz, 3H), 1,69 (s, 3H), 2,01 (s,
3H), 2,32 (s, 3H), 3,38-3,60 (m, 2H),
4,65-4,80 (m, 1H), 5,23-5,26 (d, J =
6 Hz, 1H), 7,40-7,51 (m, 3H),
8,37-8,43 (m, 2H), 10,44 (s, 1H). MS 338,2 (M^{-}
+ 1).
Ejemplo de Referencia
12
Se trataron con trietilamina (0,726 g, 7,175
mmol) y anhídrido acético (0,325 g, 3,18 mmol) en
N,N-dimetilformamida (10,0 mL) a temperatura
ambiente durante 2 h
(R,R)-4-(2-aminociclohexil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
preparada de una manera similar a la del Ejemplo de Referencia 1 a
partir de
4-cloro-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
(0,15 g, 0,583 mmol) y (1R,
2R)-(-)-1,2-diaminociclohexano (0,63
g, 5,517 mmol). Después de la separación del disolvente a vacío se
añadieron al residuo acetato de etilo (10,0 mL) y agua (10,0 mL). La
mezcla se separó y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2
x 10,0 mL). La disolución combinada de acetato de etilo se secó
(MgSO_{4}) y se filtró. El filtrado se concentró a vacío hasta
sequedad y el residuo se sometió a cromatografía en columna
(EtOAc:Hexano = 1:1) para dar 57,0 mg (26%) de
(R,R)-4-(2-acetilaminociclohexil)-amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,43 (m,
4H), 1,60 (s, 3H), 1,84 (m, 2H), 2,22 (s, 3H), 2,30 (m, 2H), 2,33
(s, 3H), 3,72 (br, 1H), 4,24 (ancho, 1H), 5,29 (d, 1H),
7,43-7,48 (m, 3H), 8,35-8,39 (m,
2H), 8,83 (s, 1H); MS 378,3 (M^{-} + 1).
Ejemplo de Referencia
13
A una disolución de
4-(2-hidroxietil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
(40,0 mg, 0,141 mmol) en piridina (1,0 mL) se añadió anhídrido
acético (0,108 g, 1,06 mmol) a 0ºC. La mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante 4 h y el disolvente se separó a vacío. El residuo
se sometió a cromatografía de capa fina preparativa (EtOAc:hexano =
1:1) para dar 32,3 mg (71%) de
4-(2-acetiloxietil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,90 (s,
3H), 2,08 (s, 3H), 2,31 (s, 3H), 4,05 (m, 2H), 4,45 (t, 2H), 5,42
(m, 1H), 7,41-7,49 (m, 3H), 8,42 (m, 2H), 11,23 (s,
1H).
Ejemplo de Referencia
14
Se agitó a 0ºC durante 1 h una disolución de
Fmoc-\beta-Ala-OH
(97,4 mg, 0,313 mmol) y cloruro de oxalilo (39,7 mg, 27,3 \muL,
0,313 mmol) en diclorometano (4,0 mL) con 1 gota de
N,N-dimetilformamida, seguido por adición de
4-(2-aminoetil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina
(80,0 mg, 0,285 mmol) y trietilamina (57,6 mg, 79,4 \muL, 0,570
mmol) a 0ºC. Después de 3 h, la mezcla se concentró a vacío y el
residuo se trató con una disolución de piperidina al 20% en
N,N-dimetilformamida (2,0 mL) durante 0,5 h. Después
de la separación del disolvente a vacío, el residuo se lavó con éter
dietílico:hexano (1:5) para dar 3,0 mg (3%) de
4-(6-amino-3-aza-4-oxohexil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
MS (ES): 353,2 (M^{-} + 1).
Ejemplo de Referencia
15
Se agitó a temperatura ambiente durante 4 h una
disolución de
4-(2-aminoetil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
(70,0 mg, 0,249 mmol) y anhídrido succínico (27,0 mg, 0,274 mmol) en
diclorometano (4,0 mL) con 1 gota de
N,N-dimetilformamida. La mezcla de reacción se
extrajo con hidróxido de sodio al 20% (3 x 5,0 mL). La disolución
acuosa se acidificó con ácido clorhídrico 3 M hasta pH = 7,0. La
mezcla completa se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 mL). La
disolución orgánica combinada se secó (MgSO_{4}) y se filtró. El
filtrado se concentró a vacío hasta sequedad para dar 15,0 mg (16%)
de
4-(7-hidroxi-3-aza-4,7-dioxoheptil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina.
MS (ES): 382,2 (M^{-} + 1).
Ejemplo
16
Se añadieron 700 mg de
4-cis-3-hidroxiciclopentilamino-2-fenil-5,6-dimetil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
a 10 mL de dimetilformamida (DMF) a temperatura ambiente, seguidos
por 455 mg de N-Boc-glicina, 20 mg
de N,N-dimetilaminopiridina (DMAP), 293 mg de
hidroxibenzotriazol (HOBT) y 622 mg de hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(EDCl). La mezcla de reacción se dejó agitando durante toda la
noche. A continuación, la DMF se separó a presión reducida y la
mezcla de reacción se repartió entre 20 mL de acetato de etilo y 50
mL de agua. La porción acuosa se extrajo adicionalmente con 2 x 20
mL de acetato de etilo y las porciones orgánicas combinadas se
lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se
filtraron y se concentraron. La purificación sobre gel de sílice,
eluyendo con acetato de etilo/hexano dio 410 mg del producto
deseado:
4-(cis-3-(N-t-butoxicarbonil-2-aminoacetoxi)ciclopentil)amino-2-fenil-5,6-dimetil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina.
MS (ES) (M^{-} + 1) = 480,2. A continuación, el éster se trató con
5 mL de ácido trifluoroacético al 20% en diclorometano a temperatura
ambiente, se dejó toda la noche y a continuación se concentró. La
trituración con acetato de etilo dio 300 mg de un sólido blanco
apagado; la sal de
4-(cis-3-(2-aminoacetoxi)ciclopentil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
del ácido trifluoroacético, MS (ES) (M^{-} + 1) = 380,1.
Un experto en la técnica se dará cuenta que,
mediante los métodos descritos anteriormente, pueden sintetizarse
los siguientes compuestos:
4-(cis-3-hidroxiciclopentil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]-pirimidina,
MS (ES) (M^{-} + 1) = 323,1.
Sal de
4-(cis-3-(2-aminoacetoxi)ciclopentil)amino-5,6-dimetil-2-fenil-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina
del ácido pirimidinatrifluoroacético, MS (ES) (M^{-} + 1) =
380,1.
Ejemplo de Referencia
17
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
IX
\vskip1.000000\baselineskip
Se protegió el nitrógeno del pirrol del
compuesto (7) (Esquema IX) con dicarbonato de
t-butilo en condiciones básicas para dar el
carbamato correspondiente (22). La bromación radical de (22)
transcurrió regioselectivamente para dar el bromuro (23). En
general, el compuesto (23) sirvió como un compuesto electrófilo
clave de varios compuestos de copulación nucleófilos posibles. El
desplazamiento del bromuro de alquilo con fenolato de sodio
trihidrato dio el compuesto (24). El desplazamiento subsiguiente del
cloruro de arilo y la separación del grupo protector carbamato de
t-butilo se produjo en una etapa dando el compuesto
(25) deseado.
A una disolución que contenía el compuesto (7)
(1,50 g, 6,15 mmol) y piridina (30 mL) se añadieron dicarbonato de
di-t-butilo (5,37 g, 24,6 mmol) y
dimetilaminopiridina (1,13 g, 9,2 mmol). Después de 20 h, la
reacción se concentró y el residuo se repartió entre
CH_{2}Cl_{2} y agua. La capa de CH_{2}Cl_{2} se separó, se
secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró para dar un sólido
negro. La cromatografía súbita (SiO_{2}; EtOAc/hexanos 1/9,
R_{f} 0,40) dio 1,70 g (80%) de un sólido blanco (22).
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,50 (m,
2H, Ar-H), 7,45 (m, 3H, Ar-H), 6,39
(s, 1H, pirrol-H), 2,66 (s, 3H,
pirrol-CH_{3}), 1,76 (s, 9H,
carbamato-CH_{3}); MS, M + 1 = 344,1; p.f.
175-177ºC.
A una disolución que contenía el compuesto (22)
(935 mg, 2,71 mmol) y CCl_{4} (50 mL) se añadieron
N-bromosuccinimida (508 mg, 2,86 mmol) y AIBN (112
mg, 0,68 mmol). La disolución se calentó a reflujo. Después de 2 h,
la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a vacío
para dar un sólido blanco. La cromatografía súbita (SiO_{2};
CH_{2}Cl_{2}/Hexanos 1/1, R_{f} 0,30) dio 960 mg (84%) de un
sólido blanco (23). ^{1}H-RMN (200 MHz,
CDCl_{3}) \delta 8,52 (m, 2H, Ar-H), 7,48 (m,
3H, Ar-H), 6,76 (s, 1H, pirrol-H),
4,93 (s, 2H, pirrol-CH_{2}Br), 1,79 (s, 9H,
carbamato-CH_{3}); MS, M + 1 = 423,9; p.f.
155-157ºC.
Se añadió fenóxido de sodio trihidrato (173 mg,
1,02 mmol) en una porción a una disolución del bromuro (23) (410 mg,
0,97 mmol) disuelto en CH_{2}Cl_{2} (5 mL) y DMF (10 mL).
Después de 2 h, la disolución de reacción se repartió entre
CH_{2}Cl_{2} y agua. La capa acuosa se extrajo con
CH_{2}Cl_{2}. Las capas de CH_{2}Cl_{2} combinadas se
lavaron con agua, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se
concentraron para dar un sólido amarillo. La cromatografía súbita
(SiO_{2}; EtOAc/Hexanos 1/6, R_{f} 0,30) dio 210 mg (50%) de un
sólido blanco (24). ^{1}H-RMN (200 MHz,
CDCl_{3}) \delta 8,53 (m, 2H, Ar-H), 7,48 (m,
3H, Ar-H), 7,34 (m, 2H, Ar-H), 7,03
(m, 3H, Ar-H), 6,83 (s, 1H,
pirrol-H), 5,45 (s, 2H, ArCH_{2}O), 1,76 (s, 9H,
carbamato-CH_{3}); MS, M^{+} = 436,2.
Se calentó a 100ºC una disolución que contenía
el compuesto (24) (85 mg, 0,20 mmol),
N-acetiletilenodiamina (201 mg, 1,95 mmol) y DMSO (3
mL). Después de 1 h, la temperatura se elevó a 130ºC. Después de 3
h, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se repartió entre
EtOAc y agua. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2x). Las capas de
EtOAc combinadas se lavaron con agua, se secaron sobre MgSO_{4},
se filtraron y se concentraron. La cromatografía súbita (SiO_{2};
EtOH/CHCl_{3} 1/10, R_{f} 0,25) dio 73 mg (93%) de un sólido
blanco esponjoso (25). ^{1}H-RMN (200 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 11,81 (s ancho, 1H,
N-H), 8,39 (m, 2H, Ar-H), 8,03 (t
ancho, 1H, N-H), 7,57 (t ancho, 1H,
N-H), 7,20-7,50 (m, 5H,
Ar-H), 6,89-7,09 (m, 3H,
Ar-H), 6,59 (s, 1H, pirrol-H), 5,12
(s, 2H, ArCH_{2}O), 3,61 (m, 2H, NCH_{2}), 3,36 (m, 2H,
NCH_{2}), 1,79 (s, 3H, COCH_{3}); MS, M + 1 = 402,6.
Ejemplo de Referencia
18
El compuesto 1319 y el compuesto 1320 (Tabla 13
de más adelante) pueden sintetizarse por los procedimientos
generales de la presente memoria.
Compuesto 1319 (81%).
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta
1,37 (m, 4H), 1,93 (m, 2H), 2,01 (m, 2H), 4,11 (s ancho, 1H), 4,61
(d, 1H, J = 4,4 Hz), 6,59 (m, 1H), 7,09 (m, 1H), 7,21 (m, 2H), 7,49
(dd, 1H, J = 8 Hz, 14 Hz), 8,03 (m, 1H), 8,18 (d, 1H, J = 8 Hz),
11,55 (s ancho, 1H). MS (ES): 327,0 (M^{-} + 1).
Compuesto 1320 (31%) MS (ES): 353,1 (M^{-} +
1).
Ejemplo de Referencia
19
El compuesto 1321 (Tabla 13 de más adelante)
puede sintetizarse por los procedimientos generales dados más
adelante.
El compuesto 28 (10,93 g, 50,76 mmol) se
disolvió en DMF (67 mL). Se añadieron secuencialmente hidrocloruro
de 4-amidinopiridina (8,0 g, 50,76 mmol) y DBU (15,4
g, 101,5 mmol) y la reacción se calentó a 85ºC. Después de 22 horas,
la reacción se enfrió a temperatura ambiente y la DMF se separó a
vacío. El aceite oscuro se diluyó con HCl 2 M (80 mL). Se permitió
que la reacción reposara. Después de 2 horas, la disolución se
enfrió a 10ºC y se filtró. El sólido se lavó con agua fría y se secó
para dar 7,40 g de un sólido amarillo, el compuesto 29 (69%).
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 6,58 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 8,53 (d, 2H, J = 5,6), 9,00 (d,
2H, J = 5,2 Hz), 12,35 (s ancho, 1H). MS (ES): 212,8 (M^{-} +
1).
El compuesto 29 (7,4 mmol, 29,8 mmol) se diluyó
con POCl_{2} y se calentó a 105ºC. Después de 18 horas, la
reacción se enfrió a temperatura ambiente y el POCl_{2} se separó
a vacío. El aceite oscuro viscoso se diluyó con MeOH (75 mL) seguido
por éter (120 mL). El sólido rojo amorfo se filtró y se lavó con
éter para dar 3,82 g de un sólido rojo. El sólido bruto es 80% puro
aproximadamente y se usa en la siguiente reacción sin más
purificación. MS (ES): 230,7 (M^{-} + 1).
Compuesto 1321 (15%).
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 1,38 (m, 4H), 1,92 (s ancho, 2H), 2,02 (s ancho, 2H), 3,44
(s ancho, 1H), 4,14 (s ancho, 1H), 4,56 (d, 1H, J = 4 Hz), 6,63 (m,
1H), 7,15 (m, 1H), 7,32 (d, 1H, J = 6,2 Hz), 8,20 (d, 2H, J = 4,4
Hz), 8,65 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 11,67 (s ancho, 1H). MS (ES): 310,2
(M^{-} + 1).
Compuesto 1501 (Tabla 15 de más adelante).
^{1}H-RMN (200 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,84 (s,
3H), 3,52 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 3,83 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 6,51 (d,
1H, J = 3,4 Hz), 7,06 (d, 1H, J = 3,8 Hz), 7,42 (m, 3H), 8,36 (m,
2H). MS (ES): 296,0 (M^{-} + 1).
Compuesto 1502 (Tabla 15 de más adelante). MS
(ES): 345,0 (M^{-} + 1).
Compuesto 1500 (Tabla 15 de más adelante).
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta
1,40-1,80 (m, 6H), 1,85-2,10 (m,
2H), 2,18 (s, 3H), 2,33 (s, 3H), 2,50 (d, 3H),
3,90-4,10 (m, 2H), 4,76 (m, 1H), 5,50 (d, 1H), 6,03
(m, 1H), 7,40 (m, 3H), 8,37 (m, 2H), 9,15 (s ancho, 1H). MS (ES):
393,3 (M^{-} + 1).
Ejemplo
20
El compuesto 1504 (Tabla 15 de más adelante)
puede sintetizarse por los procedimientos generales dados más
adelante.
El compuesto 31 (200 mg, 0,47 mmol) se disolvió
en DCM (4 mL). Se añadieron secuencialmente trietilamina (51 mg, 0,5
mmol) y tiomorfolina (52 mg, 0,5 mmol). La disolución se mezcló
durante varios minutos y se permitió que reposara durante 72 horas.
La reacción se diluyó con DCM y H_{2}O y las capas se separaron.
La capa acuosa se extrajo con DCM. Las capas de DCM combinadas se
secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. Se añadió
éter etílico a la muestra bruta y el sólido resultante se filtró
para dar 100 mg de un sólido blanco, 32 (62%).
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,76 (s,
9H), 2,66 (s ancho, 2H), 2,79 (s ancho, 2H), 3,86 (s, 2H), 7,46 (m,
3H), 8,50 (m, 2H).
El compuesto 32 se combinó con DMSO (3 mL) y
trans-4-aminociclohexanol (144 mg,
1,25 mmol) y se calentó a 130ºC durante 4 horas. La reacción se
enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con EtOAc y H_{2}O. Las
capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2x). Las
capas orgánicas combinadas se lavaron con H_{2}O y salmuera, se
secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. La
cromatografía (sílice, CHCl_{3}/EtOH 8:1) dio 32 mg de un aceite
marrón. Se añadió éter etílico y el sólido resultante se filtró para
dar 5 mg de un sólido blanco (9%). OSIC-148265:
^{1}H-RMN (200 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,44 (m
ancho, 4H), 2,03 (m ancho, 2H), 2,21 (m ancho, 2H), 2,70 (m ancho,
8H), 3,63 (m, 4H), 3,92 (m, 1H), 4,26 (s ancho, 1H), 6,42 (s, 1H),
7,42 (m, 3H), 8,33 (m, 2H).
Ejemplo
21
El compuesto 1503 (Tabla 15 de más adelante)
puede sintetizarse por los procedimientos generales dados más
adelante.
El bromuro, compuesto 31 (220 mg, 0,47 mmol) se
disolvió en DMF:diclorometano 1:1 (5 mL). A esto se añadió
K_{2}CO_{3} (71 mg, 0,52 mmol) y morfolina (0,047 mL, 0,47
mmol). Se permitió que la mezcla se mantuviera en agitación a
temperatura ambiente durante toda la noche. Los disolventes se
separaron a vacío y el residuo se repartió entre H_{2}O y
diclorometano. La capa orgánica se secó con MgSO_{4}, se filtró y
se concentró para dar un sólido blanco apagado que tras la
trituración con éter/hexanos dio 175 mg de un sólido blanco, 33
(84%). ^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta
1,9 (9H, s), 2,54 (4H, s), 3,65 (4H, s), 3,85 (1H, s), 6,59 (1H, s),
7,45 (3H, m), 8,5 (2H, m).
El compuesto 33 (50 mg, 0,11 mmol) y
trans-4-aminociclohexanol (105 mg,
0,91 mmol) se recogieron en DMSO (2 mL). La disolución resultante se
roció con N_{2} y a continuación se calentó a 100ºC en un baño de
aceite y se agitó durante toda la noche. La mezcla de reacción bruta
se vertió sobre agua y se extrajo dos veces con acetato de etilo (50
mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con H_{2}O. Después
de secar con MgSO_{4} y filtrar, la capa orgánica se concentró a
vacío para dar un sólido naranja. La cromatografía (sílice,
CH_{3}OH al 10% en CH_{2}Cl_{2}) dio 15 mg (33%).
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,24 -
1,62 (4H, m), 1,85 (2H, m), 2,10 (2H, m), 2,26 (4H, m), 3,53 (4H,
m), 4,22 (1H, m), 4,73 (1H, m), 5,85 (1H, d), 6,15 (1H, s), 7,25
(3H, m), 8,42 (2H, m), 10,0 (1H, s). MS (ES): 408 (M^{-} + 1).
Los compuestos 1500, 1501 y 1502 pueden
sintetizarse usando etapas de preparación similares del Ejemplo 20
tratando el compuesto 32 con una amina apropiadamente
sustituida.
Ensayos con el gen reportero de la
\beta-galactosidasa de levadura respecto a los
receptores A_{1} y A_{2a} de adenosina en ser humano: Cepas
de levadura (S. cerevisiae) se transformaron con el receptor
A_{1} de adenosina en ser humano (A_{1}R; cepa CADUS CY12660) o
con el receptor A_{2a} de adenosina en ser humano (A_{2a}; cepa
CADUS CY8362) y la adición de un gen reportero lacZ
(\beta-galactosidasa) para utilizarlo como un
lector funcional. Una completa descripción de las transformaciones
se lista más adelante (véase cepas de levadura). En todos los
ensayos se usó como ligando NECA
(5'-N-etilcarboxamidoadenosina), un
potente agente agonista de los receptores de la adenosina con
similar afinidad por los receptores A_{1} y A_{2a}. Los
compuestos de ensayo se examinaron en 8 concentraciones
(0,1-10.000 nM) respecto a su capacidad para inhibir
la actividad de la \beta-galactosidasa inducida
por NECA mediante CY12660 o CY8362.
Preparación de cultivos madre de levadura: Cada
una de las respectivas cepas de levadura, CY12660 y CY8362, se
extendieron en estría sobre una placa LT de agar y se incubaron a
30ºC hasta que se observaron colonias. Las levaduras de estas
colonias se añadieron a líquido LT (pH 6,8) y se hicieron crecer
durante toda la noche a 30ºC. A continuación, cada una de las cepas
de levadura se diluyó hasta un valor de DO_{600} =
1,0-2,0 (aproximadamente 1-2 x
10^{7} células/mL), que se determinó espectrofotométricamente
(Molecular Devices VMAX). Por cada 6 mL de cultivo de líquido de
levadura se añadieron 4 mL de glicerina al 40% (1:1,5 vol:vol)
("disolución madre levadura/glicerina"). A partir de esta
disolución madre de levadura/glicerina se prepararon diez partes
alícuotas de 1 mL y se almacenaron a -80ºC hasta que se requirieron
para ensayar.
Ensayo A_{1}R y A_{2a}R en levadura: Se
congeló un vial de cada una de las disoluciones madre
glicerina/cepas de levadura CY8362 y CY12660 y se usaron para
inocular un medio líquido LT suplementado, pH 6,8 (92 mL de líquido
LT, al que se añadieron: 5 mL de glucosa al 40%, 0,45 mL de KOH 1 M
y 2,5 mL de Pipes, pH 6,8). Los cultivos líquidos se hicieron crecer
16-18 h (durante toda la noche) a 30ºC. A
continuación, partes alícuotas de los cultivos mantenidos toda la
noche se diluyeron en medio LT que contenía 4 U/mL de adenosina
desaminasa (tipo VI o VII de mucosa intestinal de ternero, Sigma)
para obtener una DO_{600} = 0,15 (1,5 x 10^{6} células/mL) para
CY8362 (A_{2a}R) y DO_{600} = 0,50 (5 x 10^{6} células/mL)
para CY12660 (A_{1}R).
Los ensayos se llevaron a cabo con un volumen
final de 100 \muL en placas de microtitulación de 96 pocillos, tal
que en todos los pocillos se logró una concentración final de 3% de
DMSO. Para la exploración primaria se usaron 1-2
concentraciones de compuestos de ensayo (10 \muM, 1 \muM). Para
perfilar los compuestos se ensayaron 8 concentraciones (10000, 1000,
500, 100, 50, 10, 1 y 0,1 nM). A cada placa de microtitulación se
añadieron 10 \muL de DMSO al 20% a los pocillos "Testigo" y
"Total" mientras que a los pocillos "Desconocido" se
añadieron 10 \muL de compuesto de ensayo (en DMSO al 20%).
Subsiguientemente, se añadieron 10 \muL de NECA (5 \muM para
A_{1}R, 1 \muM para A_{2a}R) a los pocillos "Total" y
"Desconocido"; a los pocillos "Testigo" se añadieron 10
\muL de PBS. En la adición final, se añadieron a todos los
pocillos 80 \muL de cepa de levadura, CY8362 o CY12660. A
continuación, se agitaron todas las placas
brevemente (agitador orbital LabLine, 2-3 min) y se permitió que incubaran durante 4 h a 30ºC en un horno seco.
brevemente (agitador orbital LabLine, 2-3 min) y se permitió que incubaran durante 4 h a 30ºC en un horno seco.
La actividad de la
\beta-galactosidasa puede cuantificarse usando
sustratos colorimétricos (por ejemplo, ONPG,
CPRG), luminiscentes (por ejemplo, Galacton-Star) o fluorométricos (por ejemplo, FDG, Resorufin). Actualmente, se prefiere la detección por fluorescencia sobre la base de su superior relación señal:ruido, libertad relativa de interferencia y bajo coste. Se añadió fluoresceína digalactopiranósido (FDG, Molecular Probes o Marker Gene Technologies), un sustrato fluorescente de \beta-galactosidasa, a todos los pocillos en una concentración de 20 \muL/pocillo (concentración final = 80 \muM). Las placas se agitaron durante 5-6 s (agitador orbital LabLine) y a continuación se incubaron a 37ºC durante 90 min (incubador con O_{2} 95%/CO_{2} 5%). Al final de período de incubación de 90 min, la actividad de \beta-galactosidasa se paró usando 20 \muL/pocillo de Na_{2}CO_{3} 1 M y todas las placas se agitaron durante 5-6 s. A continuación, las placas se agitaron durante 6 s y se determinó la intensidad relativa de fluorescencia usando un fluorómetro (Tecan Spectrafluor; excitación = 485 nm, emisión = 535 nm).
CPRG), luminiscentes (por ejemplo, Galacton-Star) o fluorométricos (por ejemplo, FDG, Resorufin). Actualmente, se prefiere la detección por fluorescencia sobre la base de su superior relación señal:ruido, libertad relativa de interferencia y bajo coste. Se añadió fluoresceína digalactopiranósido (FDG, Molecular Probes o Marker Gene Technologies), un sustrato fluorescente de \beta-galactosidasa, a todos los pocillos en una concentración de 20 \muL/pocillo (concentración final = 80 \muM). Las placas se agitaron durante 5-6 s (agitador orbital LabLine) y a continuación se incubaron a 37ºC durante 90 min (incubador con O_{2} 95%/CO_{2} 5%). Al final de período de incubación de 90 min, la actividad de \beta-galactosidasa se paró usando 20 \muL/pocillo de Na_{2}CO_{3} 1 M y todas las placas se agitaron durante 5-6 s. A continuación, las placas se agitaron durante 6 s y se determinó la intensidad relativa de fluorescencia usando un fluorómetro (Tecan Spectrafluor; excitación = 485 nm, emisión = 535 nm).
Cálculos: Los valores relativos de fluorescencia
de los pocillos "Testigo" se interpretaron como el fondo y se
sustrajeron de los valores "Total" y "Desconocido". Los
perfiles de los compuestos se analizaron vía transformación
logarítmica (eje x: concentración del compuesto) seguida por el
ajuste de la curva de competición en un sitio para calcular los
valores IC_{50} (GraphPad Prism).
Cepas de levadura: Se desarrollaron cepas de
Saccharomyces cerevisiae CY12660 [far1*1442
tbt1-1 fus1-HIS3 can1
ste14::trp1;LYS2 ste3*1156
gpa1(41)-G\alphai3 lis2 ura3 leu2 trp1:
his3; LEU2
PGKp-Mf\alpha1Líder-hA1R-PHO5term
2mu-orig REP3 Ampr] y CY8362
[gpa1p-rG\alphasE10k far1*1442
tbt1-1 fus1-HIS3 can1
ste14::trp1:LIS2 ste3*1156 lis2 ura3 leu2 trp1: his3; LEU2
PGKp-hA2aR 2mu-ori REP3 Ampr].
Medio LT: El medio LT (Leu-Trp
suplementado) está compuesto de 100 g de base nitrogenada de
levadura DIFCO, suplementada con lo siguiente: 1,0 g de valina, 1,0
g de ácido aspártico, 0,75 g de fenilalanina, 0,9 g de lisina, 0,45
g de tirosina, 0,45 g de isoleucina, 0,3 g de metionina, 0,6 g de
adenina, 0,4 g de uracilo, 0,3 g de serina, 0,3 g de prolina, 0,3 g
de cisteína, 0,3 g de arginina, 0,9 g de histidina y 1,0 g de
treonina.
En este Ejemplo, se describe la construcción de
cepas de levadura que expresan un receptor A_{1} de adenosina en
ser humano funcionalmente integrado en la ruta del sistema de
feromonas de levaduras.
Para construir un vector de expresión en
levaduras del receptor A_{1} de adenosina de ser humano, se obtuvo
el cDNA del receptor A_{1} de la adenosina mediante el método PCR
con transcriptasa inversa (reacción en cadena de la polimerasa con
transcriptasa inversa) de mRNA de hipocampo de ser humano usando
cebadores diseñados basados en la secuencia publicada del receptor
A_{1} de adenosina de ser humano y técnicas estándar. El producto
PCR se subclonó en sitios NcoI y XbaI del plásmido de expresión
pMP15 de levadura.
El plásmido pMP15 se creó a partir de pLPXt como
sigue: el sitio XbaI de YEP51 (Broach, J.R. et al. (1983)
"Vectors for high-level, inducible expression of
cloned genes in yeast", pp. 83-117 en M. Inouye
(ed.), Experimental Manipulation of Gene Expression. Academic Press,
Nueva York) se eliminó por digestión, tratamiento de empaste por un
extremo (en inglés "end-fill") y religamento
para crear Yep51NcoDXba. Se creó otro sitio XbaI en el sitio BamHI
por digestión con BamHI, empaste por un extremo, ligamento con un
agente de acoplamiento (New England Biolabs, nº 1081), digestión
XbaI y religamento para generar YEP51NcoXt. Este plásmido se digirió
con Esp31 y NcoI y se ligó a los fragmentos Leu2 y PGKp generados
por PCR. El producto de PCR Leu2 de 2 kb se generó por
amplificación de YEP51Nco usando cebadores que contenían sitios
Esp31 y BglII. El producto de PCR PGKp de 660 pares de bases se
generó por amplificación de pPGK\alphas (Kang, Y.S. et al.
(1990) Mol. Cell. Biol. 10:2582-2590) con cebadores
de PCR que contenían sitios BglII y NcoI. El plásmido resultante se
llama pLPXt. Se modificó pLPXt insertando la región codificante del
factor-a líder pre-pro en el sitio
NcoI. El líder pre-pro se insertó para que el sito
clonante NcoI se mantuviera en el extremo 3' del líder, pero no se
regenerara en el extremo 5'. De esta forma, pueden clonarse
receptores por digestión del plásmido con NcoI y XbaI. El plásmido
resultante se llama pMP15.
El plásmido pMP15 en el que se insertó el cDNA
del receptor A_{1} de adenosina en ser humano se designó p5095. En
este vector, el cDNA receptor se funde con el extremo 3' del líder
prepro factor \alpha de levadura. Durante la maduración de la
proteína, las secuencias del péptido prepro se escinden para generar
un receptor maduro de longitud completa. Esto se produce durante el
procesado del receptor a través de la ruta secretora de la levadura.
Este plásmido se mantiene por selección Leu (es decir, crecimiento
en medio que carece de leucina). Se determinó la secuencia de la
región codificante clonada y se encontró que era equivalente a la de
la publicada en la bibliografía (números de acceso en el GenBank
S45235 y S56143).
Para crear una cepa de levadura que exprese el
receptor A_{1} de adenosina de ser humano, se usó como cepa
parenteral de partida la cepa de levadura CY7967. El fenotipo de
CY7967 es como sigue:
MAT\alpha gpaD1163
gpa1(41)G\alphai3 far1D1442 tbt-1
FUS1-HIS3 can1 ste14::trp1::LYS2 ste3D1156 lys2
ura3 leu2 trp1 his3
\newpage
Los marcadores genéticos se revisan más
adelante:
Se transformaron dos plásmidos en la cepa CY7967
por electroporación: el plásmido p5095 (que codifica al receptor
A_{1} de adenosina de ser humano, anteriormente descrito) y el
plásmido p1584 que es un plásmido del gen reportero
FUS1-\beta-galactosidasa. El
plásmido p1584 se derivó del plásmido pRS426 (Christianson, T.W.
et al. (1992) Gene 110:119-1122). El
plásmido pRS426 contiene un sitio poliacoplador (en inglés
"polylinker") en los nucleótidos 2004-2016.
Para crear el plásmido p1584, en los sitios de restricción EagI y
XhoI se insertó una fusión entre el promotor FUS1 y el gen de la
\beta-galactosidasa. El plásmido p1584 se mantiene
por selección Trp (es decir, crecimiento en un medio que carece de
leucina).
La cepa resultante que porta los plásmidos p5095
y p1584, denominada CY12660, expresa el receptor A_{1} de
adenosina en ser humano. Para hacer crecer esta cepa en un líquido o
sobre placas de agar, se usó medio mínimo que carecía de leucina y
de triptófano. Para realizar un ensayo de crecimiento en placas
(ensayando FUS1-HIS3), las placas estaban a pH 6,8 y
contenían
3-amino-1,2,4-triazol
0,5-2,5 mM y carecían de leucina, triptófano e
histidina. Como testigo de la especificidad, en todos los
experimentos se incluyó una comparación con una o más exploraciones
de otros receptores caracterizados por siete dominios
transmembranales basados en levaduras.
En este Ejemplo, se describe la construcción de
cepas de levadura que expresan un receptor A_{2a} de adenosina de
ser humano funcionalmente integrado en la ruta del sistema de
feromonas de levaduras.
Para construir un vector de expresión en
levaduras del receptor A2a de adenosina en ser humano, se obtuvo el
cDNA del receptor A2a de adenosina en ser humano del Dr. Phil Murria
(NIH). Tras la recepción de este clon, se secuenció el inserto del
receptor A_{2a} y se encontró que era idéntico a la secuencia
publicada (nº de acceso del GenBank S46950). El cDNA del receptor se
extirpó del plásmido por PCR con polimerasa VENT y se clonó en el
plásmido pLBX, que dirige la expresión del receptor mediante un
promotor constitutivo fosfoglicerato quinasa (PGK) en levadura. La
secuencia del inserto completo se secuenció una vez más y se
encontró que era idéntica a la secuencia publicada. Sin embargo, en
virtud de la estrategia de clonación empleada hubo tres aminoácidos
anexionados al grupo carboxi terminal del receptor, GlySerVal.
Para crear una cepa de levadura que exprese el
receptor A2a de adenosina en ser humano, se usó como cepa parenteral
de partida la cepa de levadura CY8342. El fenotipo de CY8342 es como
sigue:
MAT\alpha far1D1442 tbtl-1
lys2 ura3 leu2 trp1 his3 fus1-HIS3 can1
ste3D1156 gpaD1163 ste14::trp1::LYS2
gpa1p-rG_{\alpha s}E10K (o
gpa1p-rG_{\alpha s}D229S o
gpa1p-rG_{\alpha s}E10K+D229S).
Los marcadores genéticos son como se
describieron en el Ejemplo 1, excepto para la variación de la
proteína G. Para la expresión del receptor A_{2a} de ser humano se
usaron cepas de levadura en las que se había suprimido la subunidad
GPA1 endógena de la proteína G de levadura y reemplazado por una
G_{\alpha s} de mamífero. Se usaron tres mutantes G_{\alpha s}
de rata. Estas variantes contienen una o dos mutaciones puntuales
que las convierten en proteínas que se acoplan eficientemente con
\beta\gamma de levadura. Se identifican como G_{\alpha s}E10K
(en la que el ácido glutámico de la posición diez está reemplazado
con lisina), G_{\alpha s}D229S (en la que el ácido aspártico de la
posición 229 está reemplazado con serina) y G_{\alpha s}E10K+D229S
(que contiene ambas mutaciones puntuales).
La cepa CY8342 (que porta una de las tres
proteínas G_{\alpha s} mutantes de rata) se transformó con el
vector parenteral pLPBX (receptor^{-}) o con
pLPBX-A_{2a} (receptor^{+}). Para evaluar la
magnitud de la activación de la ruta de respuesta a las feromonas se
añadió un plásmido con el promotor FUS1 fundido con secuencias que
codifican la \beta-galactosidasa (descritas
anteriormente).
En este Ejemplo se describe el desarrollo de un
ensayo de exploración funcional en levadura para agentes moduladores
del receptor A_{1} de adenosina en ser humano.
Para el desarrollo de este ensayo se usaron
adenosina, un agente agonista natural de este receptor, así como
otros dos agentes agonistas sintéticos. En una subserie de
experimentos se usaron adenosina, de la que se ha informado que
tiene un EC_{50} de aproximadamente 75 nM, y
(-)-N6-(2-fenilisopropil)adenosina
(PIA) de la que se ha informado una afinidad de aproximadamente 50
nM. En todos los ensayos de crecimiento se usó
5'-N-etilcarboxamidoadenosina
(NECA). Para impedir la transmisión de señales debida a la presencia
de adenosina en el medio de crecimiento, se añadió adenosina
desaminasa (4 U/mL) a todos los ensayos.
La capacidad del receptor A_{1} de adenosina
en ser humano para acoplarse funcionalmente en un sistema heterólogo
de levadura se evaluó introduciendo el vector de expresión del
receptor A_{1} (p5095, anteriormente descrito) en una serie de
cepas de levadura que expresaban diferentes subunidades de la
proteína G. la mayoría de estos transformantes expresaban
subunidades G_{\alpha} del subtipo G_{\alpha i} o G_{\alpha
o}. También se ensayaron proteínas G_{\alpha} adicionales
respecto a la posible identificación de copulaciones promiscuas
receptor-proteína G_{\alpha}. En varias cepas, se
integró en el genoma de la levadura el gen STE18 o un constructo
quimera STE18-G\gamma2. Las cepas de levadura
abrigaban un gen HIS3 defectuoso y una copia integrada de
FUS1-HIS3, permitiendo de este modo la selección en
un medio selectivo que contenía
3-amino-1,2,4-triazol
(ensayado en concentraciones de 0,2, 0,5 y 1,0 mM) y que carecía de
histidina. Se aislaron los transformantes y se prepararon monocapas
en un medio que contenía
3-amino-1,2,4-triazol,
4 U/mL de adenosina desaminasa y que carecía de histidina. Se
aplicaron cinco microlitros de varias concentraciones de ligando
(por ejemplo, NECA en concentraciones 0, 0,1, 1,0 y 10 mM). El
crecimiento se monitorizó durante 2 días. De esta manera se ensayó
la respuesta del crecimiento dependiente del ligando en las diversas
cepas de levadura. Los resultados se sumarizan más adelante en la
Tabla 1. El símbolo (-) indica que no se detectó la activación del
receptor dependiente del ligando, mientras que (+) indica una
respuesta dependiente del ligando. El término "LIRMA" indica
una activación mediada por el receptor independiente del
ligando.
Como se indica en la Tabla 3, se encontró que la
transmisión de señales más robusta se producía en una cepa de
levadura que expresaba la quimera
GPA_{1}(41)-G_{\alpha i3}.
Para caracterizar más completamente la
activación de la ruta de respuesta a las feromonas, se midió la
síntesis de \beta-galactosidasa por medio de
fus1LacZ en respuesta a la estimulación de un agente agonista. Para
realizar el ensayo de la \beta-galactosidasa se
añadieron concentraciones crecientes de ligando a un cultivo en fase
de crecimiento semi-logarítmica del receptor A_{1}
de adenosina en ser humano expresado en una cepa de levadura que
coexpresaba una quimera Ste18-G\gamma2 y
GPA_{41}-G_{\alpha i3}. Se aislaron
transformantes y se hicieron crecer durante toda la noche en
presencia de histidina y 4 U/mL de adenosina desaminasa. Después de
cinco horas de incubación con 4 U/mL de adenosina desaminasa y
ligando, se midió la inducción de
\beta-galactosidasa usando CPRG como sustrato de
\beta-galactosidasa. Se usaron 5 x 10^{5}
células por ensayo.
Los resultados obtenidos con estimulación con
NECA indicaron que a una concentración de NECA de 10^{-8} M se
consiguió aproximadamente duplicar la estimulación de la actividad
de \beta-galactosidasa. Por otra parte, a una
concentración de NECA de 10^{-5} M se observó un índice de
estimulación de aproximadamente 10 veces.
La utilidad de este ensayo se extendió mediante
la validación de la actividad de agentes antagonistas sobre esta
cepa. Se ensayaron dos conocidos agentes antagonistas de la
adenosina, XAC y DPCPX, respecto a su capacidad para competir con
NECA (a 5 mM) respecto a la actividad en el ensayo de la
\beta-galactosidasa. En estos ensayos, la
inducción de \beta-galactosidasa se midió usando
FDG como sustrato y 1,6 x 10^{5} células por ensayo. Los
resultados indicaron que tanto XAC como DPCPX sirvieron como
potentes agentes antagonistas del receptor A_{1} de la adenosina
expresado en levaduras, con valores IC_{50} de 44 nM y 49 nM,
respectivamente.
Con el fin de determinar si este efecto
inhibidor era específico del subtipo A_{1} se realizaron una serie
de experimentos complementarios con el ensayo del receptor A_{2a}
basado en levaduras (descrito en el Ejemplo 4). Los resultados
obtenidos con el ensayo del receptor A_{2a} basado en levaduras
indicaron que XAC era un agente antagonista del receptor A_{2a}
relativamente efectivo, consistente con los informes publicados. En
contraste, DPCPX fue relativamente inerte a este receptor, como se
esperaba por los informes publicados.
El ensayo del receptor A_{1} de la adenosina
se caracterizó además mediante la medida de los parámetros de enlace
del receptor a radioligandos. El desplazamiento del enlace de
[^{3}H]CPX por varios compuestos de referencia de los
receptores de la adenosina, XAC, DPCPX y CGS, se analizó usando
membranas preparadas a partir de levaduras que expresaban el
receptor A1 de adenosina en ser humano. Para examinar la
especificidad de enlace, los resultados con membranas de levaduras
que expresaban el receptor A_{1} de adenosina en ser humano se
compararon con los de membranas de levaduras que expresaban el
receptor A_{2a} de adenosina en ser humano o el receptor A_{3}
de ser humano de adenosina. Para realizar el ensayo, se incubaron
cincuenta mg de membranas con [^{3}H]CPX 0,4 nM y
concentraciones crecientes de ligandos de receptores de adenosina.
La incubación fue en Tris-HCl 50 mM, pH 7,4, EDTA 1
mM, MgCl_{2} 10 mM, BSA al 0,25% y 2 U/mL de adenosina desaminasa
en presencia de agentes inhibidores de proteasas, durante 60 minutos
a temperatura ambiente. El enlace se terminó por adición de
Tris-HCl 50 mM enfriado en hielo, pH 7,4 más
MgCl_{2} 10 mM, seguido por filtración rápida por filtros GF/B
previamente empapados con polietienimina al 0,5%, usando un
cosechador Packard de 96 pocillos. Los datos se analizaron mediante
el procedimiento de ajuste no lineal de curvas por mínimos cuadrados
usando un paquete informático Prism 2,01. Los valores IC_{50}
obtenidos en este experimento se sumarizan más adelante en la Tabla
4:
| IC_{50} [nM] | |||
| Compuesto | hA1R | hA2aR | hA3R |
| XAC | 6,6 | 11,7 | 53,1 |
| DPCPX | 8,5 | 326,4 | 1307,0 |
| CGS-15943 | 13,1 | 15,8 | 55,5 |
| NECA | 215,5 | 294,9 | 34,9 |
| R-PIA | 67,6 | 678,1 | 23,6 |
| IB-MECA | 727,7 | 859,4 | 3,1 |
| Aloxacina | 1072,0 | 1934,0 | 8216,0 |
Estos datos indican que los compuestos de
referencia tienen afinidades consistentes con las referidas en la
bibliografía. Los datos indican además que los ensayos basados en
levaduras son de suficiente sensibilidad para discriminar la
especificidad de los subtipos de receptores.
En este Ejemplo se describe el desarrollo de un
ensayo de exploración funcional en levadura para agentes moduladores
del receptor A_{2a} de adenosina en ser humano.
Para el estudio del receptor de ser humano
A_{2a} funcionalmente expresado en levaduras se usaron el ligando
natural adenosina así como otros ligandos completamente
caracterizados y comercialmente disponibles. En el establecimiento
de este ensayo se han usado tres ligandos. Incluyen:
| Ligando | Ki reportada | Función |
| Adenosina | 500 nM | Agonista |
| 5'-N-etilcarboxamidoadenosina (NECA) | 10-15 nM | Agonista |
| (-)-N6-(2-fenilisopropil)adenosina (PIA) | 100-125 nM | Agonista |
Para impedir la transmisión de señales debida a
la presencia de adenosina en el medio de crecimiento, se añadió
adenosina desaminasa (4 U/mL) a todos los ensayos.
Los agentes agonistas del receptor A_{2a} se
ensayaron respecto a la capacidad para estimular la ruta de
respuesta a las feromonas en una levadura transformada con el
plásmido de expresión del receptor A_{2a} y que expresaba
G_{\alpha s}E10K, G_{\alpha s}D229S o G_{\alpha s}E10K+D229S.
La capacidad del ligando para estimular la ruta de respuesta a las
feromonas de una manera dependiente del receptor era indicada por
una alteración en el fenotipo de levadura. La activación del
receptor modificaba el fenotipo de auxotrofia para la histidina a
prototrofia para la histidina (activación de
fus1-HIS3). Se aislaron tres transformantes
independientes y se hicieron crecer durante toda la noche en
presencia de histidina. Las células se lavaron para separar la
histidina y se diluyeron hasta 2 x 10^{6} células/mL. Se
extendieron en forma de puntos 5 \muL de cada transformante sobre
un medio no selectivo (que incluía histidina) o un medio selectivo
(AT 1 mM) en ausencia o presencia de 4 U/mL de adenosina desaminasa.
Las placas se hicieron crecer a 30ºC durante 24 horas. En presencia
de histidina fueron capaces de crecer tanto las cepas con
receptor^{+} (R^{+}) como con receptor^{-} (R^{-}). Sin
embargo, en ausencia de histidina sólo crecieron las células
R^{+}. Puesto que no se había añadido ningún ligando a estas
placas, dos explicaciones eran posibles para este resultado. Una
posible interpretación fue que la levadura que porta el receptor
tenía una ventaja de crecimiento debida a la activación mediada por
el receptor independiente del ligando (LIRMA). Alternativamente, la
levadura pudo haber estado sintetizando la adenosina ligando. Para
distinguir entre estas dos posibilidades se añadió a la levadura en
crecimiento y a las placas una enzima, adenosina desaminasa (ADA),
que degrada el ligando. En presencia de adenosina desaminasa, las
células R^{+} no crecieron en ausencia de histidina, lo que indicó
que la levadura realmente sintetizaba el ligando.
Esta interpretación se confirmó mediante un
ensayo de crecimiento del receptor A_{2a} en un líquido. En este
experimento, una levadura R^{+} (una cepa G_{\alpha s}E10K que
expresa el receptor A_{2a}) se inoculó en tres densidades (1 x
10^{6} células/mL; 3 x 10^{5} células/mL; ó 1 x 10^{5}
células/mL) en presencia o ausencia de adenosina desaminasa (4
U/mL). La rigurosidad del ensayo se aumentó con concentraciones
crecientes (0, 0,1, 0,2 ó 0,4 mM) de
3-amino-1,2,4-triazol
(AT), un agente antagonista competitivo de la
imidazolglicerol-P deshidratasa, la proteína
producto del gen HIS3. En presencia de adenosina desaminasa y
3-amino-1,2,4-triazol
la levadura creció menos vigorosamente. Sin embargo, en ausencia de
3-amino-1,2,4-triazol,
la adenosina desaminasa tuvo poco efecto. Así, la adenosina
desaminasa por sí misma no tuvo ningún efecto directo en la ruta de
respuesta a las feromonas.
Un enfoque alternativo para medir el crecimiento
y que puede miniaturizarse para realizar ensayos de exploración de
alta productividad es un ensayo de extensión en forma de puntos de
ligandos de los receptores A_{2a}. Se hizo crecer durante toda la
noche una cepa G_{\alpha s}E10K que expresaba el receptor A_{2a}
(A_{2a}R+) o que carecía del receptor (R-) en presencia de
histidina y de 4 U/mL de adenosina desaminasa. Las células se
lavaron para separar la histidina y se diluyeron hasta 5 x 10^{6}
células/mL. Se extendieron 1 x 10^{6} células/mL sobre placas
selectivas que contenían 4 U/mL de adenosina desaminasa y
3-amino-1,2,4-triazol
(AT) 0,5 ó 1,0 mM y se permitió que secaran durante 1 hora. A la
monocapa se aplicaron 5 \muL de los siguientes reactivos:
adenosina 10 mM, histidina 38,7 mM, dimetilsulfóxido (DMSO), PIA 10
mM o NECA 10 mM. Las células se hicieron crecer durante 24 horas a
30ºC. Los resultados mostraron que las células sin receptor sólo
pudieron crecer cuando se añadió histidina al medio. En contraste,
las células R^{+} sólo crecieron en áreas en las que se habían
extendido en puntos los ligandos PIA y NECA del receptor A_{2a}.
Puesto que las placas contenían adenosina desaminasa, la falta de
crecimiento en la que se había extendido adenosina en forma de
puntos confirmó que la adenosina desaminasa era activa.
Para cuantificar la activación de la ruta de
aparejamiento de la levadura se midió la síntesis de
\beta-galactosidasa por medio de fus1LacZ. Se
transformaron cepas de levadura que expresaban G_{\alpha s}E10K,
G_{\alpha s}D229S o G_{\alpha s}E10K+D229S con un plásmido que
codificaba el receptor de ser humano A_{2a} (R+) o con un plásmido
que carecía del receptor (R-). Se aislaron transformantes y se
hicieron crecer durante toda la noche en presencia de histidina y de
4 U/mL de adenosina desaminasa. Se diluyeron 1 x 10^{7} células/mL
hasta 1 x 10^{6} células/mL y se expusieron a concentraciones
crecientes de NECA durante 4 horas, seguido por la determinación de
la actividad de \beta-galactosidasa en las
células. Los resultados demostraron que esencialmente no se detectó
ninguna actividad de \beta-galactosidasa en las
cepas R-, mientras que en las cepas R+ que expresaban G_{\alpha
s}E10K, G_{\alpha s}D229S o G_{\alpha s}E10K+D229S se
detectaron cantidades crecientes de
\beta-galactosidasa conforme aumentaba la
concentración de NECA, lo que indicó un aumento dependiente de la
dosis en unidades de \beta-galactosidasa
detectadas en respuesta a la exposición a una concentración
acrecentada de ligando. Esta dependencia de la dosis sólo se observó
en células que expresaban el receptor A_{2a}. Además, el
constructo de G_{\alpha s} más potente del receptor A_{2a} fue
G_{\alpha s}E10K. El constructo G_{\alpha s}D229S fue el segundo
constructo de G_{\alpha s} más potente del receptor A_{2a},
mientras que el constructo G_{\alpha s}E10K+D229S fue el menos
potente de los tres constructos de G_{\alpha s} ensayados, aunque
incluso el constructo G_{\alpha s}E10K+D229S estimulaba fácilmente
cantidades detectables de actividad de
\beta-galactosidasa.
Para una descripción adicional de los ensayos
identificados véase la Solicitud de Patente de EE.UU. nº de Serie
09/088985, titulada "Functional Expression of Adenosine Receptors
in Yeast", presentada el 2 de Junio de 1998 (nº de expediente
CPI-093), cuyo contenido completo se incorpora de
esta manera a la presente memoria por
referencia.
referencia.
\vskip1.000000\baselineskip
Materiales.
[^{3}H]-DPCPX
[ciclopentil-1,3-dipropilxantina,
8-[dipropil-2,3-^{3}H(N)]
(120,0 Ci/mmol); [^{3}H]-CGS
21680, [carboxietil-^{3}H(N)] (30 Ci/mmol) y [^{125}I]-AB-MECA ([^{125}I]-4-aminobencil-5'-N-metilcarboxamidoadenosina) (2200 Ci/mmol) se compraron a New England Nuclear (Boston, MA). XAC (congénere de xantina amina); NECA (5'-N-etilcarboxamidoadenosina); e IB-MECA de Research Biochemicals International (RBI, Natick, MA). La adenosina desaminasa y los comprimidos de cóctel completo de inhibidores de las proteasas se compraron a Boehringer Mannheim Corp. (Indianápolis, IN). Las membranas de células HEK-293 que expresan establemente, respectivamente, los subtipos de receptores de ser humano adenosina 2a [RB-HA2a]; adenosina 2b [RB-HA2b] o adenosina 3 [RB-HA-3] se compraron a Receptor Biology (Beltsville, MD). Los reactivos para los cultivos celulares fueron de Life Technologies (Grand Island, NY) excepto el suero que fue de Hyclone (Logan, UT).
21680, [carboxietil-^{3}H(N)] (30 Ci/mmol) y [^{125}I]-AB-MECA ([^{125}I]-4-aminobencil-5'-N-metilcarboxamidoadenosina) (2200 Ci/mmol) se compraron a New England Nuclear (Boston, MA). XAC (congénere de xantina amina); NECA (5'-N-etilcarboxamidoadenosina); e IB-MECA de Research Biochemicals International (RBI, Natick, MA). La adenosina desaminasa y los comprimidos de cóctel completo de inhibidores de las proteasas se compraron a Boehringer Mannheim Corp. (Indianápolis, IN). Las membranas de células HEK-293 que expresan establemente, respectivamente, los subtipos de receptores de ser humano adenosina 2a [RB-HA2a]; adenosina 2b [RB-HA2b] o adenosina 3 [RB-HA-3] se compraron a Receptor Biology (Beltsville, MD). Los reactivos para los cultivos celulares fueron de Life Technologies (Grand Island, NY) excepto el suero que fue de Hyclone (Logan, UT).
Cepas de levadura: Se desarrollaron como
se describió anteriormente cepas de levadura Sccharomyces
cerevisiae CY12660 [far1*1442 tbt1-1
fus1-HIS3 can1 ste14::trp1;LYS2 ste3*1156
gpa1(41)-G\alphai3 lis2 ura3 leu2 trp1:
his3; LEU2
PGKp-Mf\alpha1Líder-hA1R-PHO5term
2mu-orig REP3 Ampr] y CY8362
[gpa1p-rG\alphasE10k far1*1442
tbt1-1 fus1-HIS3 can1
ste14::trp1:LIS2 ste3*1156 lis2 ura3 leu2 trp1 his3; LEU2
PGKp-hA2aR 2mu-ori REP3
Ampr].
Ampr].
Cultivo de levadura: La levadura
transformada se hizo crecer en medio Leu-Trp (LT)
(pH 5,4) suplementado con glucosa al 2%. Para la preparación de
membranas se inocularon 250 mL de medio LT con un título de inicio
de 1-2 x 10^{6} células/mL a partir de un cultivo
de 30 mL realizado durante la noche y se incubaron a 30ºC con
oxigenación permanente por rotación. Después de 16 h de crecimiento,
las células se cosecharon por centrifugación y las membranas se
prepararon como se describe más adelante.
Cultivos de tejidos de mamíferos: Las
células HEK-293 que expresan establemente el subtipo
de receptor de ser humano adenosina 2a (clon Cadus nº 5) se hicieron
crecer en medio esencial mínimo de Dulbeco (DMEM) suplementado con
suero fetal de bovino al 10% y 1X penicilina/estreptomicina a
presión selectiva usando 500 mg/mL de antibiótico G418, a 37ºC en
una atmósfera humificada de CO_{2} al 5%.
Preparaciones de membranas de células de
levadura: Se cosecharon por centrifugación a 2000 x g en una
centrífuga Sorvall RT6000 cultivos de 250 mL después de incubar
durante toda la noche. Las células se lavaron con agua enfriada con
hielo, se centrifugaron a 4ºC y el pelet se resuspendió en un tampón
de lisis [Tris-HCl 5 mM, pH 7,5; EDTA 5 mM; y EGTA 5
mM] enfriado con hielo, suplementado con comprimidos de un cóctel de
agentes inhibidores de las proteasas (1 comprimido por 25 mL de
tampón). Se añadieron a la suspensión bolas de vidrio (17 g; malla
400-600; Sigma) y las células se rompieron por
agitación vigorosa formando vórtice a 4ºC durante 5 min. El
homogeneizado se diluyó con 30 mL adicionales de tampón de lisis más
agentes inhibidores de las proteasas y se centrifugó a 3000 x g
durante 5 min. Subsiguientemente, las membranas se paletizaron a
36000 x g (Sorvall RC5B, rotor tipo SS34) durante 45 min. El pelet
de membranas resultantes se resuspendió en 5 mL de tampón de
membranas [Tris-HCl 5 mM, pH 7,5; EDTA 0,6 mM; y
MgCl_{2} 5 mM] suplementado con comprimidos de un cóctel de
agentes inhibidores de las proteasas (1 comprimido por 50 mL de
tampón) y se almacenó a -80ºC para experimentos posteriores.
\newpage
Preparaciones de membranas de células de
mamífero: Se prepararon membranas de células
HEK-293 como se describió previamente (Duzic E.
et al.; J. Biol. Chem., 267, 9844-9851,
1992). Brevemente, las células se lavaron con PBS y se cosecharon
con un rascador de caucho. Las células se paletizaron a 4ºC y 200 x
g en una centrífuga Sorvall RT6000. El pelet se resuspendió en 5
mL/plato de tampón de lisis (Tris-HCl 5 mM, pH 7,5;
EDTA 5 mM; y EGTA 5 mM; fluoruro de fenilmetilsulfonilo 0,1 mM;
pepstatina A 10 mg/mL; y aprotinina 10 mg/mL) a 4ºC y se homogeneizó
en un homogeneizador Dounce. A continuación, el lisado celular se
centrifugó a 36000 x g (Sorvall RC5B, rotor tipo SS34) durante 45
min y el pelet se resuspendió en 5 mL de tampón de membranas
(Tris-HCl 50 mM, pH 7,5; EDTA 0,6 mM; MgCl_{2} 5
mM; fluoruro de fenilmetilsulfonilo 0,1 mM; pepstatina A 10 mg/mL; y
aprotinina 10 mg/mL) y se almacenó a -80ºC para experimentos
posteriores.
Para determinar la concentración total de
proteínas en membranas de levadura y de mamífero se usaron los kits
de ensayo de proteínas Bio-Rad, basados en el
procedimiento de enlace a colorantes de Bradford (Bradford, M.;
Anal. Biochem. 72:248 (1976)).
Ensayos de enlace de saturación y competición
del subtipo 1 de receptor de adenosina con radioligandos: Los
ensayos de enlace de saturación y competición en membranas de
células de levadura transformadas con el subtipo de receptor A_{1}
de ser humano se llevaron a cabo usando el agente antagonista
[^{3}H]DPCPX como ligando radioactivo. Las membranas se
diluyeron en tampón de enlace [Tris-HCl 50 mM, pH
7,4; que contenía MgCl_{2} 10 mM; EDTA 1,0 mM; BSA 0,25%; 2 U/mL
de adenosina desaminasa y 1 comprimido de cóctel de agentes
inhibidores de las proteasas/50 mL) en una concentración de 1,0
mg/mL.
En el ensayo de enlace de saturación, las
membranas (50 \mug/pocillo) se incubaron con concentraciones
crecientes de [^{3}H]DPCPX (0,05-25 nM) en
un volumen final de 100 \muL de tampón de enlace a 25ºC durante 1
h en ausencia y presencia de XAC sin marcar 10 \muM en una placa
de microtitulación de 96 pocillos.
En el ensayo de enlace de competición, las
membranas (50 \mug/pocillo) se incubaron con [^{3}H]DPCPX
(1,0 nM) en un volumen final de 100 mL de tampón de enlace a 25ºC
durante 1 h en ausencia y presencia de XAC sin marcar 10 \muM o
concentraciones crecientes de compuestos competidores en una placa
de microtitulación de 96 pocillos.
Ensayo del enlace de competición del subtipo
2a de receptor de adenosina con radioligandos: Los ensayos del
enlace de competición en membranas de células HEK293 que expresaban
establemente el subtipo de receptor A2a de ser humano se llevaron a
cabo usando el agente agonista
[^{3}H]CGC-21680 como ligando radioactivo.
Las membranas se diluyeron en tampón de enlace
[Tris-HCl 50 mM, pH 7,4; que contenía MgCl_{2} 10
mM; EDTA 1,0 mM; BSA 0,25%; 2 U/mL de adenosina desaminasa y 1
comprimido de cóctel de agentes inhibidores de las proteasas/50 mL)
en una concentración de 0,2 mg/mL. Las membranas (10 \mug/pocillo)
se incubaron con [^{3}H]CGS-21680 (100 nM)
en un volumen final de 100 mL de tampón de enlace a 25ºC durante 1 h
en ausencia y presencia de NECA sin marcar 50 \muM o
concentraciones crecientes de compuestos competidores en una placa
de microtitulación de 96 pocillos.
Ensayo del enlace de competición del subtipo
3 de receptor de adenosina con radioligandos: Los ensayos del
enlace de competición en membranas de células HEK293 que expresaban
establemente el subtipo de receptor A3 de ser humano se llevaron a
cabo usando el agente agonista
[^{125}I]AB-MECA como ligando radioactivo.
Las membranas se diluyeron en tampón de enlace
[Tris-HCl 50 mM, pH 7,4; que contenía MgCl_{2} 10
mM; EDTA 1,0 mM; BSA 0,25%; 2 U/mL de adenosina desaminasa y 1
comprimido de cóctel de agentes inhibidores de las proteasas/50 mL)
en una concentración de 0,2 mg/mL. Las membranas (10 \mug/pocillo)
se incubaron con [^{125}I]AB-MECA (0,75 nM)
en un volumen final de 100 \muL de tampón de enlace a 25ºC durante
1 h en ausencia y presencia de IB-MECA sin marcar 10
\muM o concentraciones crecientes de compuestos competidores en
una placa de microtitulación de 96 pocillos.
Al final de la incubación, los ensayos de enlace
con radioligandos de los subtipos de receptores A_{1}, A_{2a} y
A_{3} se terminaron mediante la adición de tampón
Tris-HCl (pH 7,4) 50 mM enfriado con hielo,
suplementado con MgCl_{2} 10 mM, seguido por filtración rápida por
filtros de fibra de vidrio (UniFilters GF/B de 96 pocillos, Packard)
previamente preempapados en polietilenimina al 0,5% en un cosechador
de células Filtermate 196 (Packard). Las placas filtrantes se
secaron revestidas con 50 \muL/pocillo de fluido de centelleo
(MicroScint-20, Packard) y se contaron en un
TopCount (Packard). Los ensayos se realizaron por triplicado. El
enlace no específico fue 5,6 \pm 0,5%, 10,8 \pm 1,4%, y 15,1
\pm 2,6% del enlace total en un ensayo de enlace A1R, A2aR y A3R,
respectivamente.
Ensayo del enlace de competición del subtipo
2b de receptor de adenosina con radioligandos: Los ensayos del
enlace de competición en membranas de células HEK293 que expresaban
establemente el subtipo de receptor A2b de ser humano se llevaron a
cabo usando el agente antagonista de los receptores A_{1}
[^{3}H]DPCPX como ligando radioactivo. Las membranas se
diluyeron en tampón de enlace [Hepes-KOH 10 mM, pH
7,4; que contenía EDTA 1,0 mM; Benzamidina 0,1 mM y 2 U/mL de
adenosina desaminasa) en una concentración de 0,3 mg/mL. Las
membranas (15 \mug/pocillo) se incubaron con [^{3}H]DPCPX
(15 nM) en un volumen final de 100 \muL de tampón de enlace a 25ºC
durante 1 h en ausencia y presencia de XAC sin marcar 10 \muM o
concentraciones crecientes de compuestos competidores en una placa
de microtitulación de 96 pocillos. Al final de la incubación, el
ensayo se terminó mediante la adición de tampón de
Hepes-KOH 10 mM (pH 7,4) enfriado en hielo seguido
por filtración rápida por filtros de fibra de vidrio (UniFilters
GF/C de 96 pocillos, Packard) previamente preempapados en
polietilenimina al 0,5% en un cosechador de células Filtermate 196
(Packard). Las placas filtrantes se secaron revestidas con 50
\muL/pocillo de fluido de centelleo
(MicroScint-20, Packard) y se contaron en un
TopCount (Packard). Los ensayos se realizaron por triplicado. El
enlace no específico fue 14,3 \pm 2,3% del enlace total.
El enlace específico de [^{3}H]DPCPX;
[^{3}H]CGS-21680 y
[^{125}I]AB-MECA se definió como la
diferencia entre el enlace total y el no específico. Se calculó el
porcentaje de inhibición de los compuestos frente al enlace total.
Los datos de competición se analizaron por ajuste iterativo de
curvas a un modelo de un sitio, y los valores de K_{I} se
calcularon a partir de los valores de IC_{50} (Cheng y Prusof,
Biochem. Pharmacol. 22, 3099-3109, 1973) usando un
paquete informático GraphPad Prism 2,01.
\vskip1.000000\baselineskip
Una función primaria de ciertos receptores de la
superficie celular es reconocer a los ligandos apropiados. Por
consiguiente, los presentes inventores determinaron las afinidades
de enlace con ligandos para establecer la integridad funcional del
subtipo 1 de receptores de la adenosina expresado en levadura. Las
membranas brutas preparadas a partir de Saccharomyces
cerevisiae transformadas con un constructo del subtipo 1 de
receptores de la adenosina de ser humano exhibieron un enlace
saturable específico de [^{3}H]DPCPX con una K_{D} de 4,0
\pm 0,19 nM. Los valores de K_{D} y de \beta_{max} se
calcularon a partir de la isoterma de saturación y la transformación
de Scatchard de los datos indicó una única clase de sitios de
enlace. Las densidades de los sitios de enlace a la adenosina en las
preparaciones de membranas de levadura se estimaron como 716,8 \pm
43,4 fmol/mg de proteína de membrana.
Las características farmacológicas de los
subtipos de las células recombinantes de levadura transformadas con
el subtipo de receptores A_{1} de ser humano se investigaron con
ligandos de adenosina selectivos del subtipo (XAC, DPCPX;
CGS-15943); compuesto 600; compuesto 1002; NECA,
(R)-PIA; IB-MECA y aloxacina) que
compitieron con [^{3}H]DPCPX en el orden de jerarquía
esperado. Las curvas de desplazamiento registradas con estos
compuestos muestran el típico grado de inclinación con todos los
ligandos, y los datos para cada uno de los ligandos pudieron
modelarse mediante un ajuste de un sitio. Las constantes de
disociación aparentes para el compuesto individual estimadas a
partir de las curvas (Tabla 5) son consistentes con el valor
publicado para el receptor, obtenido de otras
fuentes.
fuentes.
\vskip1.000000\baselineskip
| Ligandos | K_{I} (nM) | |
| XAC | 5,5 | |
| DPCPX | 7,1 | |
| CGS-15943 | 10,8 | |
| NECA | 179,6 | |
| (R)-PIA | 56,3 | |
| IB-MECA | 606,5 | |
| Aloxacina | 894,1 | |
| Compuesto 600 | 13,9 | |
| Compuesto 1002 | 9,8 |
\vskip1.000000\baselineskip
Las Tablas 6 a 12 demuestran la eficacia y los
perfiles de estructura - actividad de deazapurinas de la invención.
Las Tablas 13 y 14 demuestran que puede conseguirse selectividad
para sitios receptores de adenosina de ser humano por modulación de
la funcionalidad alrededor de la estructura de la deazapurina. La
Tabla 14 también demuestra el sorprendente descubrimiento de que los
compuestos puestos de manifiesto en la misma tienen actividad a
escala subnanomolar y mayor selectividad para el receptor A_{2b}
en comparación con los compuestos de la Tabla 13.
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\newpage
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*Al menos 10 veces más selectivo que los otros
tres subtipos
\newpage
La presente invención también se basa en
compuestos que se enlazan selectivamente al receptor A_{2a} de la
adenosina, tratando de este modo en un sujeto una enfermedad
asociada con un receptor A_{2a} de la adenosina administrando al
sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de tales compuestos.
La enfermedad a ser tratada está asociada con, por ejemplo, un
trastorno del sistema nervioso central, un trastorno cardiovascular,
un trastorno renal, un trastorno inflamatorio, un trastorno
gastrointestinal, un trastorno ocular, un trastorno alérgico o un
trastorno respiratorio.
Esta invención también incorpora un compuesto
que tiene la estructura:
en la que NR_{1}R_{2} es un
grupo (D)-2-aminocarbonil
N-pirrolidinilo, un grupo
(D)-2-hidroximetil
N-pirrolidinilo, un grupo
(D)-2-hidroximetil-trans-4-hidroxi
N-pirrolidinilo, o un grupo
N-piperazinilo;
en la que R_{3} es como se definió
anteriormente;
en la que R_{5} es un átomo de H, un grupo
fenilo o un grupo
en la que R_{6} es un átomo de H,
un grupo alquilo o un grupo cicloalquilo; y un compuesto de la
anterior
estructura,
en la que NR_{1}R_{2} es un grupo
3-hidroximetil N-pirrolidinilo;
en la que R_{3} es un grupo
4-piridilo; en la que R_{5} es un átomo de H o un
grupo alquilo; y
en la que R_{6} es un átomo de H o un grupo
alquilo.
Esta invención también incorpora un método para
inhibir la actividad de un receptor A_{2a} de la adenosina en una
célula in vitro, que comprende poner en contacto dicha célula
con los compuestos anteriormente mencionados.
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Todavía en otra realización del compuesto, el
compuesto tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Esta invención proporciona además un compuesto
que tiene la estructura (V):
en la que R_{5} es un átomo de H
o un grupo
metilo.
En una realización del compuesto V, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto V, el
compuesto tiene la estructura:
Esta invención también se refiere al uso de una
cantidad terapéuticamente efectiva de los compuestos IV o V para la
fabricación de un medicamento para tratar en un sujeto una
enfermedad asociada con un receptor A_{2a} de la adenosina.
En una realización, el compuesto trata dichas
enfermedades estimulando a la adenilato ciclasa.
En otra realización, el sujeto es un
mamífero.
En otra realización, el mamífero es un ser
humano.
En otra realización del método, dicho receptor
A_{2a} de la adenosina está asociado con la enfermedad de
Parkinson y enfermedades asociadas con la actividad locomotriz,
vasodilatación, inhibición de las plaquetas, generación del radical
superóxido por los neutrófilos, trastorno cognitivo o demencia
senil.
Las enfermedades asociadas con los receptores
A_{1}, A_{2a}, A_{2b} y A_{3} de la adenosina se describen
en los documentos WO 99/06053 y WO-09822465,
WO-09705138, WO-09511681,
WO-09733879, JP-09291089,
PCT/US98/16053 y en la Patente de EE.UU. nº 5.516.894, cuyos
contenidos completos se incorporan completamente a la presente
memoria por referencia.
Esta invención también proporciona un profármaco
soluble en agua de los compuestos IV o V; en la que dicho profármaco
soluble en agua se metaboliza in vivo para producir un
fármaco activo que inhibe selectivamente al receptor A_{2a} de la
adenosina.
En una realización del profármaco, dicho
profármaco se metaboliza in vivo por hidrólisis catalizada
por una esterasa.
Esta invención también proporciona una
composición farmacéutica que comprende el profármaco y un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
Esta invención también proporciona un método
para inhibir la actividad de un receptor A_{2a} de la adenosina en
una célula in vitro, que comprende poner en contacto a dicha
célula con los compuestos IV o V.
En una realización del método, el compuesto es
un agente antagonista de dicho receptor A_{2a} de la
adenosina.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación
oftálmica.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación para
inyección periocular, retrobulbar o intraocular.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación
sistémica.
Esta invención también se refiere al uso de una
cantidad efectiva de los compuestos IV o V para la fabricación de un
medicamento para tratar en un sujeto un trastorno
gastrointestinal.
En una realización, dicho trastorno es
diarrea.
En otra realización, el sujeto es un ser
humano.
En otra realización, el compuesto es un agente
antagonista de los receptores A_{2a} de la adenosina.
Esta invención se refiere además al uso de una
cantidad efectiva de los compuestos IV o V para la fabricación de un
medicamento para tratar en un sujeto un trastorno respiratorio.
En una realización, dicho trastorno es asma,
enfermedad pulmonar obstructiva crónica, rinitis alérgica o un
trastorno respiratorio o trastorno del tracto respiratorio
superior.
En otra realización, el sujeto es un ser
humano.
En otra realización, dicho compuesto es un
agente antagonista de los receptores A_{2a} de la adenosina.
Esta invención también se refiere al uso de una
cantidad efectiva de los compuestos IV o V para la fabricación de un
medicamento para tratar el daño en el ojo de un sujeto.
En una realización, dicho daño comprende daño
retinal o de la cabeza del nervio óptico.
En otra realización, dicho daño es agudo o
crónico.
En otra realización, dicho daño es el resultado
de glaucoma, edema, isquemia, hipoxia o traumatismo.
En otra realización, el sujeto es un ser
humano.
En otra realización, el compuesto es un agente
antagonista de los receptores A_{2a} de la adenosina.
Esta invención también proporciona una
composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente
efectiva de los compuestos IV o V, y un vehículo farmacéuticamente
aceptable.
En una realización de la composición
farmacéutica, dicha cantidad terapéuticamente efectiva es efectiva
para tratar la enfermedad de Parkinson y enfermedades asociadas con
la actividad locomotriz, vasodilatación, inhibición de las
plaquetas, generación del radical superóxido por los neutrófilos,
trastorno cognitivo o demencia senil.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación
oftálmica.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación para
inyección periocular, retrobulbar o intraocular.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación
sistémica.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una disolución para
irrigación quirúrgica.
Esta invención también proporciona una terapia
de combinación para la enfermedad de Parkinson que comprende
compuestos IV y V, y cualquiera de los agentes potenciadotes de la
dopamina.
Esta invención también proporciona una terapia
de combinación para el cáncer que comprende compuestos IV y V, y
cualquiera de los agentes citotóxicos.
Esta invención también proporciona una terapia
de combinación para el glaucoma que comprende compuestos IV o V, y
un agente agonista de las prostaglandinas, un agente agonista
muscarínico o un agente antagonista \beta-2.
Esta invención también proporciona una
composición farmacéutica envasada para tratar en un sujeto una
enfermedad asociada con un receptor A_{2a} de la adenosina, que
comprende: (a) un recipiente que contiene una cantidad
terapéuticamente efectiva de los compuestos IV o V; y (b)
instrucciones para usar dicho compuesto para tratar en un sujeto
dicha enfermedad.
Esta invención proporciona un método para
preparar el compuesto IV, que comprende las etapas de:
a) hacer reaccionar
para
dar
en donde P es un grupo protector
separable;
b) tratar el producto de la etapa a) en
condiciones de ciclación para dar
c) tratar el producto de la
etapa b) en condiciones adecuadas para
dar
\vskip1.000000\baselineskip
y
d) tratar el producto clorado de la
etapa c) con NHR_{1}R_{2} para dar
en donde R_{1}, R_{3}, R_{5}
y R_{6} son según se definieron
anteriormente.
Esta invención también proporciona un método
para preparar un compuesto que tiene la estructura V, que comprende
las etapas de:
a) hacer reaccionar
para
dar
en donde P es un grupo protector
separable;
b) tratar el producto de la etapa a) en
condiciones de ciclación para dar
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
c) tratar el producto de la
etapa b) en condiciones adecuadas para
dar
y
d) tratar el producto clorado de la
etapa c) primero con dimetilamina y formaldehído, a continuación con
N-metilbencilamina y finalmente con NH_{2}R_{1}
para dar
en donde R_{1} es un grupo
acetamido etilo; en donde R_{3} es un grupo
4-piridilo; en donde R_{5} es un átomo de H o un
grupo metilo; en donde R_{6} es un grupo
N-metil-N-bencilaminometilo.
Cuando se usa en la presente memoria, "un
compuesto es A_{2a} selectivo" quiere decir que un compuesto
tiene una constante de enlace al receptor A_{2a} de la adenosina
de al menos cinco veces más que a los receptores A_{1}, A_{2b} o
A_{3} de la adenosina.
La invención se ilustra adicionalmente mediante
los siguientes Ejemplos que de ninguna manera deben interpretarse
como que además son limitantes. Los contenidos de todas las
referencias, solicitudes pendientes de patente y solicitudes
publicadas de patentes, citadas a lo largo de esta solicitud,
incluyendo las referenciadas en la sección de antecedentes, se
incorporan a la presente memoria por referencia. Debe entenderse que
los modelos usados a lo largo de los Ejemplos son modelos aceptados
y que la demostración de la eficacia en estos modelos es predictiva
de la eficacia en seres humanos.
Esta invención se entenderá mejor a partir de
los detalles experimentales que siguen. Sin embargo, un experto en
la técnica se dará cuenta fácilmente que los métodos y los
resultados específicos discutidos son simplemente ilustrativos de la
invención como se describe más completamente en las reivindicaciones
que siguen posteriormente.
Ejemplo
22
Se disolvió el compuesto 26 (10,93 g, 50,76
mmol) en DMF (67 mL). Se añadieron secuencialmente hidrocloruro de
4-aminopiridina (8,0 g, 50,76 mmol) y DBU (15,4 g,
101,5 mmol) y la reacción se calentó a 85ºC. Después de 22 horas, la
reacción se enfrió a temperatura ambiente y la DMF se separó a
vacío. El aceite oscuro se diluyó con HCl 2 M (80 mL). Se permitió
que la reacción reposara. Después de 2 horas, la disolución se
enfrió a 10ºC y se filtró. El sólido se lavó con agua fría y se secó
para dar 7,40 g de un sólido amarillo, el compuesto 27 (69%).
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 6,58 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 8,53 (d, 2H, J = 5,6 Hz), 9,00
(d, 2H, J = 5,2 Hz), 12,35 (s ancho, 1H). MS (ES): 212,8 (M^{+} +
1).
El compuesto 27 (7,4 g, 29,8 mmol) se diluyó con
POCl_{3} y se calentó a 105ºC. Después de 18 horas, la reacción se
enfrió a temperatura ambiente y el POCl_{3} se separó a vacío. El
aceite oscuro espeso se diluyó con MeOH (75 mL) seguido por éter
(120 mL). El sólido rojo amorfo se filtró y se lavó con éter para
dar 3,82 g de un sólido rojo. El sólido bruto, compuesto 28, es
aproximadamente 80% puro y se usa sin más purificación en la
siguiente reacción. ^{1}H-RMN (200 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 6,58 (s, 1H), 7,27 (s, 1H),
8,53 (d, 2H, J = 5,6 Hz), 9,00 (d, 2H, J = 5,2 Hz), 12,35 (s ancho,
1H). MS (ES): 212,8 (M^{+} + 1).
Compuesto
1601
Se añadieron DMSO (5 mL) y
D-prolinol (500 mg, 4,94 mmol) al compuesto 28 (500
mg, 2,17 mmol). La reacción se calentó a 120ºC. Después de 18
horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con
EtOAc y H_{2}O. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo
con EtOAc (2x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con
H_{2}O (2x), salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y
se concentraron para dar 200 mg de un sólido marrón. El sólido se
recristalizó en EtOAc para dar 82 mg de un sólido marrón (13%).
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 2,05 (m, 4H), 3,43 (m, 1H), 3,70-4,00 (m,
3H), 4,50 (s ancho, 1H), 4,92 (s ancho, 1H), 6,62 (m, 1H), 7,22 (m,
1H), 8,22 (d, 2H, J = 6,0 Hz), 6,64 (d, 2H, J = 6,2 Hz). MS (ES):
296,0 (M^{+} + 1), p.f. = 210-220ºC
(descomposición).
Compuesto
1602
La cromatografía (sílice, CHCl_{3}/MeOH 9:1)
dio 10 mg de un sólido marrón (2%). ^{1}H-RMN
(DMSO-d_{6}) \delta 2,00-2,50
(m, 4H), 4,50 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 6,71 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 7,18
(d, 1H, J = 3,2 Hz), 8,37 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 8,56 (d, 2H, J = 5,0
Hz). MS (ES): 309,1 (M^{+} + 1).
Compuesto
1603
La cromatografía (sílice, hexanos/EtOAc 20:1)
dio 135 mg de un sólido marrón (53%). ^{1}H-RMN
(DMSO-d_{6}) \delta 2,00 (m, 4H), 3,43 (s ancho,
1H), 3,74 (s ancho, 2H), 3,87 (s ancho, 1H), 4,49 (s ancho, 1H),
4,93 (m, 1H), 6,56 (m, 1H), 7,12 (m, 1H), 7,40 (m, 3H), 8,34 (m,
2H), 11,62 (s ancho, 1H). MS (ES): 295,1 (M^{+} + 1).
Compuesto
1605
En un matraz de fondo redondo de 50 mL se
disolvieron 60 mg de la sal de HCl de
2-(4'-piridil)-4-cloropirimidinopirrol
en 2 mL de DMSO anhidro. Se añadieron al mismo sal de TFA de
3-(R)-hidroxi-(D)-prolinol (380 mg)
y 500 mg de bicarbonato de sodio. A continuación, la mezcla se purgó
con gas nitrógeno durante 5 min y se calentó a 130ºC. Después de 2
horas, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y el DMSO se
separó a vacío. El residuo se repartió entre EtOAc (15 mL) y una
disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (15 mL). La capa
orgánica se separó y se lavó con salmuera (15 mL) y se secó sobre
Na_{2}SO_{4}. Después de la separación del disolvente, el
producto bruto se purificó por TLC preparativa
(CH_{2}Cl_{2}/MeOH = 95/5) para dar 35 mg (50%).
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta
2,3-2,5 (1H), 3,4-3,8 (1H),
4,4-4,6 (2H), 6,4 (1H), 7,1 (1H), 8,2 (d, 2H), 8,7
(d, 2H), 11,0 (1H). MS (ES): 312 (M^{+} + 1).
Ejemplo
23
El compuesto 28 (200 mg) se trató con DMF (30
mL), éster metílico de (-)dimetilglicina (73 mg de la sal de HCl en
2 mL de agua) y 500 mg de bicarbonato de sodio. Después de 18 horas,
la a DMF se separó a vacío. El residuo se repartió entre repartió
entre EtOAc (30 mL) y una disolución acuosa saturada de bicarbonato
de sodio (15 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (15 mL) y se
secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. La
cromatografía (sílice, hexanos/EtOAc 10:4) dio 150 mg de producto
puro, compuesto 29 (69%). ^{1}H-RMN (200 MHz,
CDCl_{3}) \delta 1,4 (s, 6H), 3,8 (s, 3H), 3,9 (s, 2H), 6,4 (s,
1H), 7,4-7,5 (m, 3H), 8,4 (m, 2H), 9,8 (s, 1H).
Compuesto
1606
El procedimiento es el mismo que para el
compuesto 1605 (72%). ^{1}H-RMN (200 MHz,
CDCl_{3}) \delta 1,3 (s, 6H), 1,7-1,9 (m, 2H),
2,05-2,30 (m, 2H), 3,6-4,1 (m, 11H),
4,8-4,95 (m, 1H), 6,4 (s, 1H),
7,4-7,6 (m, 3H), 8,3-8,4 (d, J = 8,5
Hz, 2H), 10 (s, 1H). MS (ES): 424,0 (M^{+} + 1).
Los siguientes compuestos pueden sintetizarse de
la misma manera.
Compuesto
1600
(51%). MS (ES): 326,0 (M^{+} + 1).
\newpage
Compuesto
1607
^{1}H-RMN (200 MHz,
CDCl_{3}) \delta 1,40-1,80 (m, 5H),
2,80-3,50 (m, 3H), 4,60-4,80 (m,
3H), 6,66 (d, 1H, J = 6,2 Hz), 7,26 (m, 1H), 8,21 (d, 2H, J = 6,3
Hz), 8,65 (d, 2H, J = 5,8 Hz), 11,90 (s, 1H). MS (ES): 310,1
(M^{+} + 1).
Compuesto
1608
^{1}H-RMN (200 MHz,
DMSO-d_{6}) \delta 1,75 (s, 3H), 2,11 (s, 3H),
2,29 (s, 3H), 3,56 (m, 6H), 7,23-7,41 (m, 5H), 8,00
(s ancho, 1H), 8,23 (d, 2H, J = 6,0 Hz), 8,63 (d, 2H, J = 5,4 Hz),
8,82 (s ancho, 1H), 11,56 (s ancho, 1H). MS (ES): 444,0 (M^{-} +
1).
Compuesto
1604
^{1}H-RMN (200 MHz,
CD_{3}OD) \delta 3,40 (m, 4H), 4,29 (m, 4H), 6,99 (s, 1H),
7,5-7,2 (m, 3H), 7,90 (d, 2H), 8,39 (d, 2H), 8,61
(d, 2H). MS (ES): 357,0 (M^{+} + 1).
* Al menos 5 veces más selectivo que los otros
tres subtipos
La presente invención se basa también en
compuestos que se enlazan selectivamente a un receptor A_{3} de la
adenosina, que de este modo tratan en un sujeto una enfermedad
asociada con un receptor A_{3} de la adenosina administrando al
sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de tales compuestos.
Las enfermedades a tratar están asociadas, por ejemplo, con el asma,
hipersensibilidad, rinitis, fiebre del heno, enfermedad del suero,
vasculitis alérgica, dermatitis atópica, dermatitis, psoriasis,
eczema, fibrosis pulmonar idiopática, colecistitis eosinófila,
inflamación crónica de las vías respiratorias, síndromes
hipereosinófilos, gastroenteritis eosinófila, edema, urticaria,
enfermedad miocardial eosinófila, angioedema episódico con
eosinofilia, enfermedad inflamatoria de los intestinos, colitis
ulcerante, granulomatosis alérgica, carcinomatosis, granuloma
eosinófilo, histiocitosis familiar, hipertensión, desgranulación de
las células cebadas, tumores, hipoxia cardiaca, isquemia cerebral,
diuresis, fallo renal, trastorno neurológico, trastorno mental,
trastorno cognitivo, isquemia miocardial, broncoconstricción,
artritis, enfermedad autoinmune, enfermedad de Crohn, enfermedad de
Grave, diabetes, esclerosis múltiple, anemia, psoriasis, trastornos
de la fertilidad, lupus eritematoso, lesiones por reperfusión,
diámetro de las arteriolas del cerebro, liberación de agentes
mediadores alérgicos, escleroderma, apoplejía, isquemia global,
trastornos del sistema nervioso central, trastornos
cardiovasculares, trastornos renales, trastornos inflamatorios,
trastornos gastrointestinales, trastornos oculares, trastornos
alérgicos, trastornos respiratorios o trastornos inmunológicos.
Esta invención también incorpora un compuesto
que tiene la estructura:
en la que R_{1}
es
R_{5} y R_{6} son independientemente un
átomo de H, un grupo alquilo sustituido o sin sustituir o un grupo
arilo,
en donde cuando R_{1} es un grupo
R_{5} es un grupo
y R_{6} es un átomo de H; y un
compuesto que tiene la
estructura:
en la que R_{1}, R_{2} y el
átomo de nitrógeno son
conjuntamente
y
en la que R_{5} y R_{6} son
independientemente un átomo de H, un grupo alquilo sustituido o sin
sustituir o un grupo
arilo,
en la que cuando R_{1}, R_{2} y el átomo de
nitrógeno son conjuntamente
R_{5} es un grupo fenilo y R_{6} es un átomo
de H;
en la que cuando R_{1}, R_{2} y el átomo de
nitrógeno son conjuntamente
R_{5} es un grupo
y R_{6} es un átomo de H;
y
en la que cuando R_{1}, R_{2} y el átomo de
nitrógeno son conjuntamente un grupo
R_{5} y R_{6} son ambos un átomo de H.
Esta invención también incorpora un método para
inhibir en una célula in vitro la actividad de un receptor
A_{3} de la adenosina, el cual comprende poner en contacto a dicha
célula con los compuestos anteriormente mencionados.
En una realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En una realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En una realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
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En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
\newpage
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
\newpage
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
En otra realización del compuesto, el compuesto
tiene la estructura:
Esta invención también se refiere al uso de una
cantidad terapéuticamente efectiva de cualquiera de los compuestos
anteriormente mencionados para la fabricación de un medicamento para
tratar en un sujeto una enfermedad asociada con un receptor A_{3}
de la adenosina.
En una relación el sujeto es un mamífero.
En otra realización, el mamífero es un ser
humano.
En otra realización, dicho receptor A_{3} de
la adenosina está asociado con un trastorno del sistema nervioso
central, un trastorno cardiovascular, asma, hipersensibilidad,
rinitis, fiebre del heno, enfermedad del suero, vasculitis alérgica,
dermatitis atópica, dermatitis, psoriasis, eczema, fibrosis pulmonar
idiopática, colecistitis eosinófila, inflamación crónica de las vías
respiratorias, síndromes hipereosinófilos, gastroenteritis
eosinófila, edema, urticaria, enfermedad miocardial eosinófila,
angioedema episódica con eosinofilia, enfermedad inflamatoria de los
intestinos, colitis ulcerante, granulomatosis alérgica,
carcinomatosis, granuloma eosinófilo, histiocitosis familiar,
hipertensión, desgranulación de las células cebadas, tumores,
hipoxia cardiaca, isquemia cerebral, diuresis, fallo renal,
trastornos neurológicos, trastornos mentales, trastornos cognitivos,
isquemia miocardial, broncoconstricción, artritis, enfermedad
autoinmune, enfermedad de Crohn, enfermedad de Grave, diabetes,
esclerosis múltiple, anemia, psoriasis, trastornos de la fertilidad,
lupus eritematoso, lesiones por reperfusión, diámetro de las
arteriolas del cerebro, liberación de agentes mediadores alérgicos,
escleroderma, apoplejía, isquemia global, trastornos del sistema
nervioso central, trastornos cardiovasculares, trastornos renales,
trastornos inflamatorios, trastornos gastrointestinales, trastornos
oculares, trastornos alérgicos, trastornos respiratorios o
trastornos inmunológicos.
Las enfermedades asociadas con los receptores
A_{1}, A_{2a}, A_{2b} y A_{3} de la adenosina se describen
en los documentos WO 99/06053 y WO-09822465,
WO-09705138, WO-09511681,
WO-09733879, JP-09291089,
PCT/US98/16053 y en la Patente de EE.UU. nº 5.516.894, cuyos
contenidos completos se incorporan completamente a la presente
memoria por referencia.
Esta invención también proporciona un profármaco
soluble en agua de cualquiera los compuestos mencionados
anteriormente; en la que dicho profármaco soluble en agua se
metaboliza in vivo para producir un fármaco activo que inhibe
selectivamente al receptor A_{3} de la adenosina.
En una realización del profármaco, dicho
profármaco se metaboliza in vivo por hidrólisis catalizada
por una esterasa.
Esta invención también proporciona una
composición farmacéutica que comprende el profármaco y un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
Esta invención también proporciona un método
para inhibir la actividad de un receptor A_{3} de la adenosina en
una célula in vitro, que comprende poner en contacto a dicha
célula con cualquiera de los compuestos mencionados
anteriormente.
En una realización del método, el compuesto es
un agente antagonista de dicho receptor A_{3} de la adenosina.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación
oftálmica.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación para
inyección periocular, retrobulbar o intraocular.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación
sistémica.
Esta invención también se refiere al uso de una
cantidad efectiva de cualquiera de los compuestos mencionados
anteriormente para la fabricación de un medicamento para tratar en
un sujeto un trastorno gastrointestinal.
En una realización, dicho trastorno es
diarrea.
En otra realización, el sujeto es un ser
humano.
En otra realización, el compuesto es un agente
antagonista de los receptores A_{3} de la adenosina.
Esta invención se refiere además al uso de una
cantidad efectiva de cualquiera de los compuestos mencionados
anteriormente para la fabricación de un medicamento para tratar en
un sujeto un trastorno respiratorio.
En una realización, dicho trastorno es asma,
enfermedad pulmonar obstructiva crónica, rinitis alérgica o un
trastorno respiratorio del tracto respiratorio superior.
En otra realización, el sujeto es un ser
humano.
En otra realización, dicho compuesto es un
agente antagonista de los receptores A_{3} de la adenosina.
Esta invención también se refiere al uso de una
cantidad efectiva de cualquiera de los compuestos mencionados
anteriormente para la fabricación de un medicamento para tratar el
daño en el ojo de un sujeto.
En una realización, dicho daño comprende daño
retinal o de la cabeza del nervio óptico.
En otra realización, dicho daño es agudo o
crónico.
En otra realización, dicho daño es el resultado
de glaucoma, edema, isquemia, hipoxia o traumatismo.
En otra realización, el sujeto es un ser
humano.
En otra realización, el compuesto es un agente
antagonista de los receptores A_{3} de la adenosina.
Esta invención también proporciona una
composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente
efectiva de cualquiera de los compuestos mencionados anteriormente,
y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En una realización de la composición
farmacéutica, dicha cantidad terapéuticamente efectiva es efectiva
para tratar un trastorno respiratorio o un trastorno
gastrointestinal.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicho trastorno gastrointestinal es diarrea.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicho trastorno respiratorio es asma, rinitis alérgica
o enfermedad pulmonar obstructiva crónica.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación
oftálmica.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación para
inyección periocular, retrobulbar o intraocular.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una formulación
sistémica.
En otra realización de la composición
farmacéutica, dicha composición farmacéutica es una disolución para
irrigación quirúrgica.
Esta invención también proporciona una
composición farmacéutica envasada para tratar en un sujeto una
enfermedad asociada con un receptor A_{3} de la adenosina, que
comprende: (a) un recipiente que contiene una cantidad
terapéuticamente efectiva de cualquiera de los compuestos
mencionados anteriormente; y (b) instrucciones para usar dicho
compuesto para tratar en un sujeto dicha enfermedad.
El compuesto de esta invención puede
sintetizarse mediante los esquemas I-IX.
Cuando se usa en la presente memoria, "un
compuesto es selectivo del receptor A_{3} de la adenosina"
quiere decir que un compuesto tiene una constante de enlace al
receptor A_{3} de la adenosina de al menos diez veces mayor que la
de los receptores A_{1}, A_{2a} o A_{2b}.
La invención se ilustra adicionalmente mediante
los siguientes Ejemplos que de ninguna manera deben interpretarse
como que además son limitantes. Los contenidos de todas las
referencias, solicitudes pendientes de patente y solicitudes
publicadas de patentes, citadas a lo largo de esta solicitud,
incluyendo las referenciadas en la sección de antecedentes, se
incorporan a la presente memoria por referencia. Debe entenderse que
los modelos usados a lo largo de los Ejemplos son modelos aceptados
y que la demostración de la eficacia en estos modelos es predictiva
de la eficacia en seres humanos.
Un experto en la técnica sabrá que, en un
sujeto, el metabolismo de los compuestos descritos en la presente
memoria produce ciertos metabolitos biológicamente activos que
pueden servir como fármacos.
Esta invención se entenderá mejor a partir de
los detalles experimentales que siguen. Sin embargo, un experto en
la técnica se dará cuenta fácilmente que los métodos y los
resultados específicos discutidos son simplemente ilustrativos de la
invención como se describe más completamente en las reivindicaciones
que siguen posteriormente.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
24
Compuesto 1700 (Tabla 17, más adelante): MS
(ES): 366,1 (M^{+} + 1).
Compuesto 1710 (Tabla 17, más adelante): MS
(ES): 381,1 (M^{+} + 1).
Compuesto 1316 (Tabla 17, más adelante): MS
(ES): 353,2 (M^{+} + 1).
Compuesto 1703 (Tabla 17, más adelante): MS
(ES): 357,1 (M^{+} + 1).
Compuesto 1719 (Tabla 17, más adelante):
^{1}H-RMN (200 MHz, DMSO-d_{6})
\delta 1,75 (m, 2H), 3,11 (m, 2H), 3,35 (s, 3H), 3,59 (m, 2H),
5,72 (m, 1H), 5,96 (m, 1H), 6,55 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,49 (m,
2H), 8,32 (m, 2H).
Compuesto 1704 (Tabla 17, más adelante): MS
(ES): 367,0 (M^{+} + 1).
Compuesto 1706 (Tabla 17, más adelante):
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,22 (m,
2H), 1,60-2,40 (m, 4H), 4,53 (m, 1H), 4,94 (m, 1H),
5,70 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 6,35 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 6,97 (d, 1H, J =
2,0 Hz), 7,50 (m, 3H), 8,40 (m, 2H), 10,83 (s ancho, 1H).
Compuesto 1707 (Tabla 17, más adelante): MS
(ES): 347,0 (M^{+} + 1).
Compuesto 1708 (Tabla 17, más adelante): MS
(ES): 399,0 (M^{-} + 1).
Compuesto 1709 (Tabla 17, más adelante): MS
(ES): 385,9 (M^{-} + 1).
Compuesto 1710 (Tabla 17, más adelante): MS
(ES): 434,0 (M^{-} + 1).
Compuesto 1711 (Tabla 17, más adelante):
^{1}H-RMN (200 MHz, CD_{3}OD) \delta 3,95 (d,
1H, J = 5,8 Hz), 4,23-4,31 (m, 2H), 4,53 (t, 2H, J =
8,8 Hz), 6,30 (d, 1H, J = 3,0 Hz), 6,98 (d, 1H, J = 3,0 Hz),
7,45-7,48 (m, 3H), 7,83-8,42 (m,
2H), 9,70 (s ancho, 1H). MS (ES): 281,1 (M^{-} + 1).
\newpage
Compuesto 1712 (Tabla 17, más adelante):
^{1}H-RMN (200 MHz, CD_{3}OD) \delta 3,02 (m,
2H), 3,92 (m, 2H), 5,09 (s, 2H), 6,53 (s, 1H),
6,90-7,04 (s ancho, 1H), 6,92 (m, 2H), 7,02 (m, 1H),
7,21 (dd, 1H, J = 8,2 Hz), 7,40 (m, 3H), 7,50-7,80
(s ancho, 1H), 8,33 (m, 2H). MS (ES): 445,1 (M^{-} + 1).
Compuesto 1713 (Tabla 17, más adelante):
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta
1,65-1,80 (m, 7H), 1,88-2,00 (m,
1H), 2,10-2,40 (m, 1H), 2,70-3,05
(m, 3H), 3,09-3,14 (m, 2H),
3,16-3,38 (m, 1H), 3,45 (d, 1H, J = 14 Hz),
3,53-3,60 (m, 2H), 3,84-3,92 (m,
2H), 3,97 (d, 1H, J = 14 Hz), 5,55 (t, 1H, J = 5,8 Hz), 6,17 (s,
1H), 6,55-6,59 (m, 2H), 6,64-6,71
(m, 1H), 7,11-7,19 (m, 2H),
7,43-7,46 (m, 3H), 8,38-8,42 (m,
2H). MS (ES): 484,0 (M^{+} + 1).
Compuesto 1714 (Tabla 17, más adelante): MS
(ES): 471,0 (M^{+} + 1).
Compuesto 1715 (Tabla 17, más adelante): MS
(ES): 505,0 (M^{+} + 1).
Compuesto 1716 (Tabla 17, más adelante):
^{1}H-RMN (200 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,65 (m,
1H), 2,18 (m, 1H), 2,49 (d ancho, 2H, J = 6,2 Hz), 2,64 (m, 1H),
3,38 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,72 (m, 1H), 3,93 (m, 1H), 4,10 (m,
1H), 5,06 (s, 2H), 6,58 (s, 1H), 6,92 (m, 2H), 7,02 (m, 1H), 7,23
(dd, 1H, J = 8,1 Hz), 7,39 (m, 3H), 8,32 (m, 2H). MS (ES): 477,1
(M^{+} + 1).
Compuesto 1717 (Tabla 17, más adelante):
^{1}H-RMN (200 MHz, CD_{3}OD) \delta 1,69 (m,
1H), 2,26 (m, 1H), 2,42 (d, 2H, J = 7,4 Hz), 2,72 (m, 1H), 3,53 (m,
1H), 3,83 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 4,14 (dd, 1H, J = 10,6, 7,0 Hz),
5,14 (s, 2H), 6,69 (s, 1H), 6,96 (m, 2H), 7,06 (m, 1H), 7,25 (dd,
1H, J = 8,0 Hz), 7,39 (m, 3H), 8,35 (m, 2H). MS (ES): 462,2 (M^{+}
+ 1).
Compuesto 1718 (Tabla 17, más adelante):
^{1}H-RMN (200 MHz, CD_{3}OD) \delta
1,40-2,00 (m, 5H), 3,52 (d, 2H, J = 7,6 Hz),
3,80-4,00 (m, 1H), 4,00-4,20 (m,
3H), 4,50 (m, 2H), 6,36-6,50 (m, 2H), 6,54 (s, 1H),
6,84-6,92 (m, 1H), 7,05 (t, 1H, J = 8,2 Hz),
7,30-7,45 (m, 3H), 8,24 (d, 2H, J = 9,8 Hz). MS
(ES): 449,0 (M^{+} + 1).
\vskip1.000000\baselineskip
* Al menos 10 veces más selectivo que los otros
tres subtipos.
Esta invención también proporciona un compuesto
que tiene la estructura:
Esta invención proporciona además un compuesto
que tiene la estructura:
Esta invención proporciona además un compuesto
que tiene la estructura:
Esta invención proporciona además un compuesto
que tiene la estructura:
En otra realización, la invención proporciona el
uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de los compuestos
1506, 1507, 1509 ó 1512 para la fabricación de un medicamento para
tratar en un sujeto una enfermedad asociada con un receptor A_{1}
de la adenosina.
En otra realización, la invención proporciona el
uso anterior, en el que el sujeto es un mamífero.
En otra realización, la invención proporciona el
uso anterior, en el que el mamífero es un ser humano.
En otra realización, la invención proporciona el
uso anterior, en el que dicho receptor A_{1} de la adenosina está
asociado con la enfermedad cognitiva, el fallo renal, las arritmias
cardiacas, el epitelio respiratorio, la liberación de transmisores,
la sedación, la vasoconstricción, la bradicardia, la inotropia y la
dromotropia cardiacas negativas, la broncoconstricción, la
quimiotaxis de neutrófilos, la enfermedad de reflujo o la enfermedad
ulcerante.
En otra realización, la invención proporciona un
profármaco soluble en agua de los compuestos 1506, 1507, 1509 ó
1512, en la que dicho profármaco soluble en agua se metaboliza in
vivo para producir un fármaco activo que inhibe selectivamente
al receptor A_{1} de la adenosina.
En otra realización, la invención proporciona un
profármaco, en la que dicho profármaco se metaboliza in vivo
mediante una hidrólisis catalizada por una esterasa.
En otra realización, la invención proporciona
una composición farmacéutica que comprende el profármaco anterior y
un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En otra realización, la invención proporciona un
método para inhibir la actividad de un receptor A_{1} de la
adenosina en una célula in vitro, que comprende poner en
contacto a dicha célula con los compuestos 1506, 1507, 1509 ó
1512.
En otra realización, la invención proporciona el
método anterior para inhibir la actividad de un receptor A_{1} de
la adenosina en una célula in vitro, en la que el compuesto
es un agente antagonista de un receptor A_{1} de la adenosina.
En otra realización, la invención proporciona el
método anterior para inhibir la actividad de un receptor A_{1} de
la adenosina en una célula in vitro, en la que la célula es
una célula de ser humano.
En otra realización, la invención proporciona el
método anterior para inhibir la actividad de un receptor A_{1} de
la adenosina en una célula in vitro, en la que el compuesto
es un agente antagonista de receptores A_{1} de la adenosina.
En otra realización, la invención se refiere al
uso de un agente antagonista de receptores A_{1} de la adenosina
para la fabricación de un medicamento para tratar en un sujeto una
enfermedad asociada con un receptor A_{1} de la adenosina, en la
que dicha enfermedad es asma, enfermedad pulmonar obstructiva
crónica, rinitis alérgica o un trastorno del tracto respiratorio
superior.
En otra realización, el sujeto es un ser
humano.
En otra realización, la invención proporciona
una terapia de combinación para el asma que comprende el compuesto
1506, 1507, 1509 ó 1512, y un esteroide, un agente agonista
\beta2, un glucocorticoide, un agente antagonista leucotrieno o un
agente agonista anticolinérgico.
En otra realización, la invención proporciona
una composición farmacéutica que comprende una cantidad
terapéuticamente efectiva de los compuestos 1506, 1507, 1509 ó 1512,
y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En otra realización, la invención proporciona un
método para tratar un trastorno respiratorio con los compuestos
1506, 1507, 1509 ó 1512, en la que dicho trastorno respiratorio es
asma, rinitis alérgica o enfermedad pulmonar obstructiva
crónica.
En otra realización, la invención proporciona
la(s) anterior(es) composición(es)
farmacéutica(s), en la que dicha(s)
composición(es) farmacéutica(s) es(son) una
formulación para inyección periocular, retrobulbar o
intraocular.
En otra realización, la invención proporciona
la(s) anterior(es) composición(es)
farmacéutica(s), en la que dicha(s)
composición(es) farmacéutica(s) es una formulación
sistémica.
En otra realización, la invención proporciona
la(s) anterior(es) composición(es)
farmacéutica(s), en la que dicha(s)
composición(es) farmacéutica(s) es una disolución
irrigante quirúrgica.
En otra realización, la invención proporciona
una composición farmacéutica envasada para tratar en un sujeto una
enfermedad asociada con un receptor A_{1} de la adenosina, que
comprende:
- (a)
- un recipiente que contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de los compuestos 1506, 1507, 1509 ó 1512; y
- (b)
- instrucciones para usar dicho compuesto para tratar dicha enfermedad en un sujeto.
En otra realización, la invención proporciona
una sal farmacéuticamente aceptable de los compuestos 1506, 1507,
1509 ó 1512.
En otra realización, la invención proporciona la
sal farmacéuticamente aceptable anterior, en la que la sal
farmacéuticamente aceptable del compuesto 1509 contiene un catión
seleccionado del grupo que consiste en sodio, calcio y amonio.
En aún otra realización, la invención se refiere
al uso de los compuestos anteriormente mencionados para la
fabricación de un medicamento para tratar en un sujeto una
enfermedad asociada con un receptor A_{1} de la adenosina, en la
que el receptor A_{1} de la adenosina está asociado con el fallo
cardiaco congestivo.
Ejemplo de Referencia
21
El compuesto 1505 se sintetizó de una manera
similar a la del Ejemplo 17 usando el Esquema de síntesis IX con
L-prolinamida y
4-fenilpiperidin-4-ol,
para obtener:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
^{1}H-RMN (200
MHz, DMSO-d_{6}) \delta 1,53 (s, 1H), 1,60 (s,
1H), 1,84-2,30 (m, 6H), 2,66 (m, 2H), 3,60 (s, 2H),
3,88 (m, 1H), 4,02 (m, 1H), 4,66 (d, 1H, J = 6,8 Hz), 4,73 (s, 1H),
6,44 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 7,12-7,50 (m, 10H), 8,35
(m, 2H), 11,6 (s ancho, 1H); MS (ES): 305,1 (M^{+} + 1); p.f. =
234 -
235ºC.
Ejemplo
22
El compuesto 1506 se sintetizó usando el Esquema
de síntesis VII con L-prolinamida, para obtener:
^{1}H-RMN (200
MHz, DMSO-d_{6}) \delta 2,05 (m, 4H), 3,85 (m,
1H), 4,05 (m, 1H), 4,70 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,58 (s ancho, 1H),
6,95 (s ancho, 1H), 7,15 (d, 1H, J = 3,4 Hz), 7,40 (m, 3H), 7,50 (s
ancho, 1H), 8,40 (m, 2H), 11,6 (s ancho, 1H); MS (ES): 308,3
(M^{+} + 1); p.f. =
236-238ºC.
Ejemplo
23
El compuesto 1507 se sintetizó usando el
compuesto precursor 23 del Esquema de síntesis IX, para obtener:
Se disuelve el bromuro 23 (4,23 g, 10 mmol) en
metanol anhidro (60 mL) y DCM (120 mL) y se trata con
AgO_{2}CCF_{3} en atmósfera de N_{2} a temperatura ambiente
durante 1 h. El sólido se separa por filtración y se lava con DCM (2
x 20 mL). El filtrado se concentra a vacío. El residuo se redisuelve
en DCM (80 mL). A continuación, la disolución resultante se lava con
una disolución saturada de NaHCO_{3} y salmuera, se seca sobre
MgSO_{4}, se filtra y se concentra para dar 3,71 g (4, 99%) de un
sólido blanco apagado. ^{1}H-RMN (CDCl_{3})
\delta 1,75 (s, 9H), 3,51 (s, 3H), 4,83 (s, 2H), 6,70 (s, 1H),
7,47 (m, 3H), 8,52 (m, 2H).
Se combinan y calientan a 120ºC en atmósfera de
nitrógeno el cloruro de arilo 4 (2,448 g, 6,55 mmol),
L-prolinamida (4,0 g, 35,0 mmol) y NaHCO_{3} (2,9
g). Después de 4 h, la reacción se enfría a temperatura ambiente y
se diluye con agua (60 mL). La suspensión resultante se extrae con
DCM (10x). Las capas orgánicas combinadas se lavan con una
disolución saturada de NaHCO_{3} y salmuera, se secan sobre
MgSO_{4}, se filtran y se concentran para dar 2,48 g de un sólido
marrón. El producto puro (1,86 g, 81%) se obtiene como un sólido
blanco después de cromatografía súbita en columna. Se logran
cristales blancos en THF/hexano. P.f. = 213-215ºC.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 2,15 (m, 3H), 2,52
(m, 1H), 3,26 (s, 3H), 3,92 (m, 1H), 4,10 (m, 1H), 4,42 (s, 2H),
5,08 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 5,49 (s ancho, 1H), 6,48 (s, 1H), 7,08 (s
ancho, 1H), 7,42 (m, 3H), 8,38 (m, 2H), 9,78 (s ancho, 1H). MS (ES):
352,2 (M^{+} + 1).
Ejemplo de Referencia
24
El compuesto 1508 se obtuvo con el Esquema de
síntesis VII usando
cis-hidroxi-prolinamida, para
obtener:
^{1}H-RMN
(DMSO-d_{6}) \delta 1,90 (m, 1H), 3,85 (d, 1H, J
= 9,2 Hz), 4,08 (m, 1H), 4,37 (s, 1H), 4,67 (dd, 1H, J = 8,8, 4,0
Hz), 5,30 (s, 1H), 6,55 (s, 1H), 7,15 (s, 2H), 7,37 (m, 3H), 7,64
(s, 1H), 8,37 (m, 2H), 11,65 (s ancho, 1H); MS (ES): 324,2 (M^{+}
+ 1); p.f. = 268 -
271ºC.
Ejemplo
25
El compuesto 1509 se obtuvo usando el compuesto
precursor 23 del Esquema de síntesis IX, para obtener:
Se combinan y calientan a 50ºC en atmósfera de
argón durante aproximadamente 3,5 h el bromuro de arilo 23 protegido
con un grupo terc-butoxicarbonilo (4,0 g, 9,5 mmol),
DMSO seco (25 mL), NaH_{2}PO_{4} (454 mg, 3,79 mmol) y
Na_{2}HPO_{4} (1,62 g, 11,4 mmol). A continuación, la mezcla se
vertió sobre agua (200 mL) y se extrajo con tres porciones de 100 mL
de EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron exhaustivamente
con agua, salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se
concentraron para dar un sólido amarillo que se purificó por
trituración con etanol para dar 1,55 g de un sólido amarillo pálido
(7). Las aguas madres se purificaron por cromatografía súbita (EtOAc
al 10% en hexano) para dar 454 mg adicionales (60%).
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 1,77 (s, 9H), 7,25
(s, 1H), 7,48 (m, 3H), 8,52 (m, 2H), 10,39 (s, 1H); p.f. = 156ºC
(descompone).
Se disolvió en THF seco (20 mL) el aldehído 7
(600 mg, 1,7 mmol) y se enfrió a 0ºC en atmósfera de argón. A esto
se añadió gota a gota a 0ºC a través de una cánula una disolución de
(terc-butoxicarbonilmetileno)trifenilfosforano
(694 mg, 1,8 mmol) en 10 mL de THF seco. Después de 3 h, la mezcla
se concentró y purificó por trituración con etanol para dar 565 mg
(73%) de un sólido blanco (8). ^{1}H-RMN
(CDCl_{3}) \delta 1,58 (s, 9H), 1,79 (s, 9H), 6,46 (d, 1H), 6,95
(s, 1H), 7,48 (m, 3H), 7,48 (m, 3H), 8,09 (d, 1H), 8,56 (m, 2H).
Se diluyó hasta 100 mL con EtOAc una disolución
del compuesto 8 (565 mg, 1,2 mmol) en 5 mL de THF. Después de añadir
600 mg de catalizador (Pd al 5% en peso, H_{2}O 50%) y purgar con
argón, la mezcla se hidrogenó a presión atmosférica. Después de 8 h,
la mezcla se filtró, se concentró y se purificó por cromatografía
súbita (EtOAc al 10% en hexano) para aislar 200 mg (35%) de 9 como
un aceite transparente que cristalizó durante el reposo.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 1,42 (s, 9H), 1,75
(s, 9H), 2,65 (t, 2H), 3,32 (t, 2H), 6,41 (s, 1H), 7,45 (m, 3H),
8,51 (m, 2H).
Se combinaron y calentaron a 85ºC en atmósfera
de argón el cloruro de arilo 9 (200 mg, 0,44 mmol), DMSO (10 mL) y
L-prolinamida (440 mg, 4,4 mmol). Después de 14 h,
la mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y se reparte
entre agua y acetato de etilo. Las capas se separaron y la capa
acuosa se lavó con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se
lavaron exhaustivamente con agua (3x), salmuera, se secaron sobre
MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para dar 10 de una
película amarilla que se purificó por cromatografía súbita (MeOH al
2,5% en CH_{2}Cl_{2}). 185 mg (97%). MS (ES): 435,8 (M^{+} +
1).
El éster 10 (30 mg) se hidrolizó en 5 mL de
dioxano añadiendo 0,5 mL de HCl concentrado. Después de 3 horas, la
mezcla se concentró a vacío y se recristalizó en EtOH/EtOAc para
obtener el compuesto 1509 como un sólido blanco (20 mg, 61%). MS
(ES): 380 (M^{+} + 1).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de Referencia
26
El compuesto 1510 se obtuvo usando el compuesto
precursor 23 del Esquema de síntesis IX, para obtener:
Se agitan en glicolato de metilo anhidro (5,8 g,
60 mmol) y DCM (40 mL) el bromuro 23 (1,27 g, 3 mmol) y un tamiz
molecular (5 g). La disolución se trata con AgOTf en atmósfera de
N_{2} y se permite que se mantenga en agitación durante 3 h. El
sólido se separa por filtración y se lava con DCM (2 x 20 mL). El
filtrado se concentra a vacío. El residuo se redisuelve en DCM (80
mL). A continuación, la disolución resultante se lava con agua, una
disolución saturada de NaHCO_{3} y salmuera, se seca sobre
MgSO_{4}, se filtra y se concentra para dar 1,35 g (99%) de un
sólido blanco apagado (12). ^{1}H-RMN (CDCl_{3})
\delta 1,75 (s, 9H), 3,80 (s, 3H), 5,0 (s, 2H), 6,78 (s, 1H), 7,47
(m, 3H), 8,52 (m, 2H).
Se combinan y calientan a 120ºC en atmósfera de
nitrógeno el cloruro de arilo 12 (177 mg, 0,41 mmol), DMSO (10 mL),
L-prolinamida (466 mg, 4 mmol) y NaHCO_{3} (500
mg). Después de 4 h, la reacción se enfría a temperatura ambiente y
se diluye con agua (60 mL). La suspensión resultante se extrae con
DCM (5 x 30 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavan con una
disolución saturada de NaHCO_{3} y salmuera, se secan sobre
MgSO_{4}, se filtran y se concentran para dar un sólido marrón. El
producto puro (154 mg, 92%) se obtiene como un sólido blanco (13)
después de cromatografía súbita en columna.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 2,15 (m, 3H), 2,52
(m, 1H), 3,55 (s, 3H), 4,58 (s, 2H), 5,08 (s, 1H), 5,85 (s ancho,
1H), 6,48 (s, 1H), 7,08 (s ancho, 1H), 7,42 (m, 3H), 8,40 (m, 2H),
10,58 (s ancho, 1H). MS (ES): 410,1 (M^{+} + 1).
Se disuelve en HOCH_{3} (15 mL) el éster de
metilo 13 (124 mg, 0,3 mmol). Se borbotea amoníaco a través de la
disolución durante 0,5 h. A continuación, la mezcla de reacción se
agita durante otras 3 h a temperatura ambiente. Después de la
separación del disolvente se obtienen 111 mg de un sólido blanco
(1510, 93%). ^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 1,82
(m, 3H), 2,20 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 3,10 (m, 1H), 3,63 (dd, 2H,
J_{1} = 13,8 Hz, J_{2} = 19, Hz), 3,87 (m, 1H), 4,07 (m, 1H),
4,97 (m, 1H), 5,96 (m, 2H), 6,35 (s, 1H), 6,86 (s ancho, 1H), 7,11
(s ancho, 1H), 7,37 (m, 3H), 8,28 (m, 2H), 11,46 (s ancho, 1H); MS
(ES): 394,8 (M^{+} + 1).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de Referencia
27
El compuesto 1511 se sintetizó usando el
compuesto precursor 15 del Esquema de síntesis VII, para
obtener:
A una suspensión de hidruro de sodio (780 mg de
una suspensión al 60% en un aceite, 19,5 mmol) en DMF seca (20 mL),
enfriada mediante un baño de hielo/agua, se añade, en atmósfera de
nitrógeno, una disolución de la pirrolopirimidina 15 (2,00 g, 7,52
mmol) en DMF (10 mL) en 5 min. Después de 15 min, se añade cloruro
de bencenosulfonilo (1,2 mL, 9,40 mmol) y a continuación se separa
el baño de refrigeración. Después de 4 h, la mezcla de reacción se
vierte sobre una mezcla de hielo y una disolución saturada de
NaHCO_{3}, el precipitado sólido se separa por filtración y se
tritura con acetona (3) y metanol (2), dando 2,37 g de un sólido
beige. Este sólido (16) contiene aproximadamente DMF al 10% en moles
(basado en un rendimiento de 83%) y puede usarse en la siguiente
etapa; puede obtenerse una muestra pura por cromatografía sobre gel
de sílice usando acetona como eluyente. ^{1}H-RMN
(CDCl_{3}) \delta 6,70 (d, J = 4,2 Hz, 1H),
7,47-7,68 (m, 6H), 7,76 (d, J = 4,2 Hz, 1H),
8,24-8,32 (m, 2H), 8,48-8,56 (m,
2H); IR (sólido): n = 3146 cm^{-1}, 1585, 1539, 1506, 1450, 1417,
1386, 1370, 1186, 1176, 1154, 1111, 1015, 919, 726, 683, 616, 607;
MS (ES): 372/370 (MH^{+}); p.f. = 226-227ºC.
Se añade LDA.THF (1,0 mL, disolución 1,5 M en
ciclohexano, 1,5 mmol) a una disolución de compuesto 16
N-sulfonilo (337 mg, 0,911 mmol) en THF seco (34
mL), enfriada en hielo seco/acetona. Después de 45 min, se borbotea
dióxido de carbono por la disolución durante 5 min y a continuación
se separa el baño de refrigeración. Cuando la disolución ha
alcanzado la temperatura ambiente los disolventes se evaporan dando
398 mg de la sal 17, que contenía 0,5 equivalentes de
(iPr)_{2}NCO_{2}Li, como un sólido amarillo. La sal se
usa sin purificación en la siguiente etapa.
^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) \delta
6,44 (s, 1H), 7,50-7,75 (m, 6H),
8,33-8,40 (m, 2H), 8,53 (dd, J = 8,0, 1,6 Hz,
2H).
Se calienta en atmósfera de nitrógeno a 80ºC
durante 15,5 h una disolución de la sal de litio 17 (50 mg) y
L-prolinamida (122 mg, 1,07 mmol) en DMSO (1,5 mL).
A la disolución enfriada se añade ácido acético acuoso al 4% (10
mL), y la mezcla se extrae con EtOAc (5 x 10 mL). Las capas
orgánicas combinadas se lavan con ácido acético acuoso al 4% (10
mL), agua (10 mL) y salmuera (10 mL) y se secan sobre MgSO_{4}. La
filtración y la concentración dan 40 mg de 18 como un sólido
amarillento, que se usa sin purificación en la siguiente etapa.
^{1}H-RMN (CD_{3}OD): \delta
1,95-2,36 (m, 4H), 3,85-3,95 (m,
1H), 3,95-4,17 (m, 1H), 4,72 (s ancho, 1H), 7,14 (s,
1H), 7,35-7,45 (m, 3H), 7,45-7,70
(m, 3H), 8,33-8,50 (m, 4H).
A una disolución de la pirrolopirimidina 18 (40
mg, 0,081 mmol) en metanol (2 mL) se añade una disolución de
hidróxido de sodio en metanol (1,5 mL, 5 M, 7,5 mmol). Después de 2
h, el pH se ajusta a 5, la mayor parte del metanol se evapora, la
mezcla se extrae con EtOAc (5 x 10 mL), las capas orgánicas
combinadas se lavan con salmuera y se secan con MgSO_{4}. La
filtración y la concentración dan 24 mg de un sólido amarillo
pálido, que se tritura con tolueno/EtOAc/MeOH para dar 15,6 mg (55%)
del ácido 1511 como un sólido ligeramente amarillento.
^{1}H-RMN (CD_{3}OD): \delta
2,05-2,20 (m, 4H), 3,95-4,10 (m,
1H), 4,15-4,25 (m, 1H), 4,85 (s ancho, 1H), 7,14 (s,
1H), 7,35-7,42 (m, 3H), 8,38-8,45
(m, 4H); IR (sólido): n = 3192 cm^{-1}, 2964, 2923, 2877, 1682,
1614, 1567, 1531, 1454, 1374, 1352, 1295, 1262, 1190, 974, 754, 700;
MS (ES): 352 (M^{+} + 1); p.f. = 220ºC (descompone).
\newpage
Ejemplo
28
El compuesto 1512 se sintetizó mediante las
siguientes etapas:
Se combinaron y calentaron a 85ºC en atmósfera
de argón el cloruro de arilo 20 (3 g, 10,7 mmol), DMSO (50 mL), y
(S)-prolinamida. Después de agitar durante toda la
noche (14 h), la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se vertió
sobre 800 mL de agua. Esto se extrajo con tres porciones de 200 mL
de EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron exhaustivamente
con agua (3 x 300 mL), salmuera, se secaron sobre MgSO_{4}, se
filtraron y se concentraron para dar un sólido marrón oscuro. El
sólido se recristalizó dos veces en EtOAc para dar 1,95 g (57%) de
un sólido marrón (1512). ^{1}H-RMN
(DMSO-d_{6}) \delta 1,8-2,2 (m,
4H), 2,3 (s, 3H), 3,8 (m, 1H), 4,0 (m, 1H), 4,6 (d, 1H), 6,2 (s,
1H), 6,9 (s, 1H), 7,2 (m, 3H), 7,3 (s, 1H), 8,4 (m, 2H), 11,5 (s,
1H). MS (ES): 322 (M^{+} + 1).
Ejemplo de Referencia
29
El compuesto 1513 se sintetizó de una manera
similar a la del Ejemplo 17 usando el Esquema de síntesis IX con
L-prolinamida y
etano-1,2-diol, para obtener:
MS (ES): 382 (M^{+} + 1).
Ejemplo de Referencia
30
El compuesto 1514 se sintetizó de una manera
similar a la del Ejemplo 17 usando el Esquema de síntesis IX con
aminociclohexanol en la posición N6 e imidazol, para obtener:
MS (ES): 389 (M^{+} + 1).
Ejemplo de Referencia
31
El compuesto 1515 se sintetizó de una manera
similar a la del Ejemplo 27 usando el Esquema de síntesis IX con
aminociclohexanol en la posición N6, para obtener:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
MS (ES): 353 (M^{+} + 1).
Ejemplo de Referencia
32
El compuesto 1516 se sintetizó de una manera
similar al compuesto 1513 usando el Esquema de síntesis IX con
aminociclohexanol en la posición N6, para obtener:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
MS (ES): 383 (M^{+} + 1).
\newpage
Ejemplo de Referencia
33
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se agitó con yoduro de metilo (0,1 mL, 1,6 mmol)
a 20ºC en atmósfera de nitrógeno durante 3 h una disolución de la
sal de litio 17 (0,13 mg) en DMF seca (4 mL). Se evapora la DMF y
se añade una disolución acuosa de cloruro de amonio (15 mL). La
mezcla se extrae con EtOAc (3 x 15 mL), las capas orgánicas
combinadas se lavan con agua (2 x 10 mL) y salmuera (10 mL) y se
secan sobre MgSO_{4}. La filtración y la concentración dan 21 mg
(38%) del éster metílico 22.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se calienta en atmósfera de nitrógeno a 80ºC
durante 5 h una disolución del éster metílico 22 (24,5 mg, 0,057
mmol) y 4-trans-aminociclohexanol
(66 mg, 0,57 mmol) en DMSO (1,5 mL), a continuación se para el
calentamiento y se continúa la agitación a 20ºC durante 13,5 h. A la
disolución enfriada se añade ácido acético acuoso al 4% (10 mL) y la
mezcla se extrae con EtOAc (3 x 10 mL). Las capas orgánicas
combinadas se lavan con ácido acético acuoso al 4% (10 mL), agua (10
mL), NaOH 2 N (10 mL), agua (10 mL) y salmuera (10 mL) y se secan
sobre MgSO_{4}. A una disolución del material bruto obtenido
después de filtrar y concentrar (^{1}H-RMN indica
una separación del grupo bencenosulfonilo de aproximadamente 50%) en
THF (2 mL) se añade una disolución de NaOH en MeOH (0,5 mL de
disolución 5 M, 2,5 mmol) a temperatura ambiente. Después de 20 min
se añaden agua y una disolución saturada de NaHCO_{3} (5 mL de
cada una) y la mezcla se extrae con EtOAc (4 x 15 mL). Las capas
orgánicas combinadas se lavan con NaOH 2 N (10 mL), agua (10 mL) y
salmuera (10 mL) y se secan sobre MgSO_{4}. La cromatografía sobre
gel de sílice del material bruto obtenido después de filtrar y la
concentrar, eluyendo con hexanos/EtOAc 1:1 ® 1:2 da 8,6 mg (41%) del
compuesto 1517 como un sólido blanco, p.f.
225-227ºC. ^{1}H-RMN (CD_{3}OD):
\delta 1,38-1,62 (m, 4H),
1,95-2,10 (m, 2H), 2,10-2,25 (m,
2H), 3,55-3,70 (m, 1H), 3,91 (s, 3H),
4,20-4,35 (m, 1H), 7,32 (s, 1H),
7,35-7,47 (m, 3H), 8,35-8,42 (m,
2H); IR (sólido): n = 3352 cm^{-1}, 3064, 2935, 2860, 1701, 1605,
1588, 1574, 1534, 1447, 1386, 1333, 1263, 1206, 1164, 1074, 938,
756, 705; MS (ES): 367 (MH^{+}).
\newpage
Ejemplo de Referencia
34
El compuesto 1518 se sintetizó de una manera
similar a la del Ejemplo 26 usando el compuesto precursor 12, para
obtener:
MS (ES): 410 (M^{+} + 1).
Ejemplo de Referencia
35
El compuesto 1519 se sintetizó de una manera
similar al compuesto 1518 en el que el grupo éster de metilo se
hidrolizó con una base, para obtener:
MS (ES): 396 (M^{+} + 1).
Ejemplo de Referencia
40
Se condensa amoníaco gas en una disolución de la
pirrolopirimidina 23 (7,8 mg, 0,021 mmol) en metanol (6 mL),
enfriada en hielo seco/acetona, hasta que se alcanza un volumen
total de 12 mL. Después de agitar durante 10 d a 20ºC, los
disolventes se evaporan y el residuo se purifica por TLC preparativa
sobre gel de sílice, eluyendo con MeOH al 5% en CH_{2}Cl_{2}. El
material así obtenido se tritura con éter para dar 6,5 mg (88%) de
la amida 1520 como un sólido blanco, p.f. 210-220ºC
(descompone). ^{1}H-RMN (CD_{3}OD) \delta
1,40-1,60 (m, 4H), 2,00-2,15 (m,
2H), 2,15-2,25 (m, 2H), 3,55-3,70
(m, 1H), 4,20-4,35 (m, 1H), 7,16 (s, 1H),
7,35-7,47 (m, 3H), 8,34-8,40 (m,
2H); IR (sólido): n = 3358 cm^{-1}, 3064, 3025, 2964, 2924, 2853,
1652, 1593, 1539, 1493, 1452, 1374, 1326, 1251, 1197, 1113, 1074,
1028, 751, 699; MS (ES): 352 (MH^{+}).
Se llevaron a cabo ensayos de enlace de
saturación y competición a radioligandos del subtipo de receptores 1
de la adenosina (A_{1}) para los compuestos 1505, 1506, 1507,
1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 y
1520 como se describe en la presente memoria y, entre otras, en las
páginas 101-102 de esta memoria descriptiva. Todos
los compuestos anteriormente referenciados igualaron o superaron la
afinidad del enlace por los receptores A_{1} de los compuestos de
referencia 1318 ó 1319 que se describen en la presente memoria y,
entre otras, en la Tabla 13, de la página 114 de la memoria
descriptiva.
Se espera que las solubilidades en agua de los
anteriores compuestos listados en la Tabla 18 sean mejores que las
de los compuestos de referencia 1318 ó 1319 debido a sus valores de
cLogP, que se calcularon usando el programa de ordenador CS ChemDraw
Ultra versión 6.0 ©1999, proporcionado por CambridgeSoft
Corporation, 100 Cambridge Park Drive, Cambridge, MA 02140.
Los compuestos específicos de los receptores
A_{1} litados en la Tabla 18 tuvieron valores de cLogP menores,
entre aproximadamente 1,5 y aproximadamente 3,4, en comparación con
los compuestos de referencia 1318 ó 1319, con un valor de cLogP de
aproximadamente 3,8. No se predijo que los compuestos más polares de
los receptores A_{1} listados en la Tabla 18 que tenían menores
valores de cLogP que los compuestos de referencia 131 ó 1319 incluso
retendrían la potencia y la selectividad del enlace con los
receptores A_{1} en comparación con los compuestos de
referencia.
| Compuesto | CLogP |
| Ref. 1505 | 4,1 |
| 1506 | 3,0 |
| 1507 | 2,88 |
| Ref. 1508 | 2,1 |
| 1509 | 2,9 |
| Ref. 1510 | 1,5 |
| Ref. 1511 | 2,7 |
| 1512 | 3,37 |
| Ref. 1513 | 2,4 |
| Ref. 1514 | 2,8 |
| Ref. 1515 | 3,1 |
| Ref. 1516 | 2,8 |
| Ref. 1517 | 3,4 |
| Ref. 1518 | 2,4 |
| Ref. 1519 | 2,2 |
| Ref. 1520 | 2,4 |
Todas las patentes, solicitudes de patente
publicadas y otras referencias descritas en la presente memoria se
incorporan expresamente de esta manera a la presente memoria por
referencia.
Los expertos en la técnica se darán cuenta o
serán capaces de averiguar, usando nada más que experimentación
rutinaria, muchas realizaciones equivalentes a las realizaciones
específicas de la invención descritas específicamente en la presente
memoria. Se pretende que tales realizaciones equivalentes estén
englobadas en el alcance de las siguientes reivindicaciones.
Claims (120)
1. Un compuesto que tiene la
estructura:
en la que R_{1}
es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y R_{2} es un átomo de hidrógeno;
o
NR_{1}R_{2} son conjuntamente
\newpage
en la que R_{3} es un grupo
fenilo sustituido o sin sustituir, un grupo pirrol, un grupo
tiofeno, un grupo furano, un grupo tiazol, un grupo imidazol, un
grupo triazol, un grupo pirazol, un grupo piridina, un grupo
2(1H)-piridona, un grupo
4(1H)-piridona, un grupo pirazina, un grupo
pirimidina, un grupo piridazina, un grupo isotiazol, un grupo
isoxazol, un grupo oxazol, un grupo tetrazol, un grupo naftilo, un
grupo tetralina, un grupo benzofurano, un grupo benzotiofeno, un
grupo 2,3-dihidroindol, un grupo
1H-indol, un grupo indolilo, un grupo benzopirazol,
un grupo 1,3-benzodioxol, un grupo benzoxazol, un
grupo purina, un grupo cumarina, un grupo cromona, un grupo
quinolilo, un grupo tetrahidroquinolina, un grupo isoquinolina, un
grupo benzimidazol, un grupo quinazolina, un grupo pteridina, un
grupo 2(1H)-quinolona, un grupo
1(2H)-isoquinolona, un grupo
1,4-benzisoxazina, un grupo benzotiazol, un grupo
quinoxalina, un grupo quinolina-N-óxido, un grupo
isoquinolina-N-óxido, un grupo
quinoxalina-N-óxido, un grupo
quinazolina-N-óxido, un grupo benzoxazina, un grupo
ftalazina o un grupo
cinolina;
en la que R_{5} es un átomo de H, un grupo
CH_{3}, un grupo alquilo sustituido o sin sustituir, un grupo
arilo o un grupo fenilo,
o un grupo
y en la que R_{6} es un átomo de
H, un grupo CH_{3}, un grupo alquilo sustituido o sin sustituir,
un grupo
cicloalquilo,
en la que el sustituyente, cuando está presente, es un
átomo de halógeno, un grupo hidroxilo, un grupo alcoxi, un grupo
alquilcarboniloxi, un grupo arilcarboniloxi, un grupo
alcoxicarboniloxi, un grupo ariloxicarboniloxi, un grupo
carboxilato, un grupo alquilcarbonilo, un grupo alcoxicarbonilo, un
grupo aminocarbonilo, un grupo alquiltiocarbonilo, un grupo fosfato,
un grupo fosfonato, un grupo fosfinato, un grupo ciano, un grupo
amino, un grupo acilamino, un grupo amidino, un grupo imino, un
grupo sulfidrilo, un grupo alquiltio, un grupo ariltio, un grupo
tiocarboxilato, un grupo sulfato, un grupo sulfonato, un grupo
sulfamoilo, un grupo sulfonamido, un grupo nitro, un grupo
trifluorometilo, un grupo azido, un grupo heterociclilo o un grupo
alquilarilo,
o una de sus sales farmacéuticamente
aceptables,
en la que cuando R_{1} es un grupo
R_{3} es un grupo fenilo;
R_{5} es un grupo
y R_{6} es un átomo de
H;
en la que X es un átomo de O ó un átomo de S;
y
en la que cuando R_{1} es un grupo
R_{3} es un grupo fenilo;
R_{5} es un grupo fenilo, y
R_{6} es un átomo de H;
en la que cuando R_{1} es un grupo
R_{3} es un grupo
4-clorofenilo;
R_{5} y R_{6} son cada uno un átomo de
H;
en la que cuando R_{1} es un grupo
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
R_{5} y R_{6} son cada uno
independientemente un átomo de H o un grupo alquilo;
\newpage
en la que cuando R_{1} es un grupo
R_{3} es un grupo fenilo; y
R_{5} y R_{6} son ambos un átomo de H, o
R_{3} es un grupo fenilo;
R_{5} es un grupo
y R_{6} es un átomo de H,
o
R_{3} es un grupo
4-piridilo;
R_{5} es un grupo CH_{3} y R_{6} es un
grupo
2. El compuesto según la reivindicación
1, que tiene la estructura:
en la que R_{3} es como se
definió en la reivindicación 1; en la que R_{5} y R_{6} son
independientemente un átomo de H o un grupo
alquilo.
\newpage
3. El compuesto según la reivindicación
2, que tiene la estructura:
4. El compuesto según la reivindicación
3, que tiene la estructura:
5. El compuesto según la reivindicación
3, que tiene la estructura:
6. El compuesto según la reivindicación
3, que tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
7. El compuesto según la reivindicación
3, que tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
8. El compuesto según la reivindicación
1, que tiene la estructura:
9. El compuesto según la reivindicación
1, que tiene la estructura:
en la que R_{3} es como se
definió en la reivindicación
1;
en la que R_{5} y R_{6} son
independientemente un átomo de H o un grupo alquilo.
10. El compuesto según la reivindicación
9, que tiene la estructura:
\newpage
11. El compuesto según la reivindicación
1, que tiene la estructura:
en la que R_{3} es como se
definió en la reivindicación 1; en la que X es un átomo de O ó un
átomo de
S.
12. El compuesto según la reivindicación
11, que tiene la estructura:
13. El compuesto según la reivindicación
11, que tiene la estructura:
14. El uso de un compuesto según las
reivindicaciones 2, 8, 9 u 11, para la fabricación de un medicamento
útil para tratar en un sujeto que necesita de tal tratamiento una
enfermedad asociada con un receptor A_{1} de la adenosina.
15. El uso según la reivindicación 14, en
el que dicho receptor A_{1} de la adenosina está asociado con una
enfermedad cognitiva, un fallo renal, arritmias cardiacas, el
epitelio respiratorio, la liberación de transmisores, la sedación,
la vasoconstricción, la bradicardia, la inotropia y la dromotropia
cardiacas negativas, la broncoconstricción, la quimiotaxis de
neutrófilos, la enfermedad de reflujo o una enfermedad
ulcerante.
16. Un método para inhibir la actividad de
un receptor A_{1} de la adenosina en una célula in vitro,
que comprende poner en contacto a dicha célula con un compuesto
según las reivindicaciones 2, 8, 9 u 11.
17. El uso según la reivindicación 14, en
el que dicha enfermedad es asma, enfermedad pulmonar obstructiva
crónica, rinitis alérgica o un trastorno del tracto respiratorio
superior.
18. Una composición farmacéutica, que
comprende el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 2,
8, 9 u 11, un vehículo farmacéuticamente aceptable y al menos uno de
un esteroide, un agente agonista \beta2, un glucocorticoide, un
agente antagonista leucotrieno o un agente agonista
anticolinérgico.
19. Una composición farmacéutica, que
comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto según
las reivindicaciones 2, 8, 9 u 11, y un vehículo farmacéuticamente
aceptable.
20. La composición farmacéutica según la
reivindicación 19, en la que dicha cantidad terapéuticamente
efectiva es efectiva para tratar el asma, la rinitis alérgica o la
enfermedad pulmonar obstructiva crónica.
21. El compuesto según la reivindicación
1, que tiene la estructura:
en la que NR_{1}R_{2} es un
grupo (D)-2-aminocarbonil
N-pirrolidinilo, un grupo
(D)-2-hidroximetil
N-pirrolidinilo, un grupo
(D)-2-hidroximetil-trans-4-hidroxi
N-pirrolidinilo, o un grupo
N-piperazinilo;
en la que R_{3} es como se definió en la
reivindicación 1;
en la que R_{5} es un átomo de H, un grupo
fenilo o un grupo
en la que R_{6} es un átomo de H,
un grupo alquilo o un grupo
cicloalquilo.
22. El compuesto según la reivindicación
1, que tiene la estructura:
en la que NR_{1}R_{2} es un
grupo 3-hidroximetil
N-piperidinilo;
en la que R_{3} es un grupo
4-piridilo;
en la que R_{5} es un átomo de H o un grupo
alquilo; y
en la que R_{6} es un átomo de H o un grupo
alquilo.
23. El compuesto según la reivindicación
21, que tiene la estructura:
24. El compuesto según la reivindicación
21, que tiene la estructura:
25. El compuesto según la reivindicación
21, que tiene la estructura:
\newpage
26. El compuesto según la reivindicación
21, que tiene la estructura:
27. El compuesto según la reivindicación
21, que tiene la estructura:
28. El compuesto según la reivindicación
21, que tiene la estructura:
\newpage
29. El compuesto según la reivindicación
1, que tiene la estructura:
30. El compuesto según la reivindicación
22, que tiene la estructura:
31. El compuesto según la reivindicación
30, que tiene la estructura:
\newpage
32. El compuesto según la reivindicación
30, que tiene la estructura:
33. El compuesto según la reivindicación
1, que tiene la estructura:
en la que R_{5} es un átomo de H
o un grupo
metilo.
34. El compuesto según la reivindicación
33, que tiene la estructura:
35. El compuesto según la reivindicación
33, que tiene la estructura:
36. El uso de un compuesto según las
reivindicaciones 21, 22 ó 33, para la fabricación de un medicamento
útil para tratar en un sujeto que necesita de tal tratamiento una
enfermedad asociada con un receptor A_{2a} de la adenosina.
37. El uso según la reivindicación 36, en
el que dicho receptor A_{2a} de la adenosina está asociado con la
actividad locomotriz, la vasodilatación, la inhibición de las
plaquetas, la generación del radical superóxido por los neutrófilos,
el trastorno cognitivo, la demencia senil o la enfermedad de
Parkinson.
38. El uso según la reivindicación 36, en
el que el compuesto trata dichas enfermedades estimulando a la
adenilato ciclasa.
39. Un método para inhibir la actividad de
un receptor A_{2a} de la adenosina en una célula in vitro,
que comprende poner en contacto a dicha célula con un compuesto
según las reivindicaciones 21, 22 ó 33.
40. Una composición farmacéutica, que
comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto según
las reivindicaciones 21, 22 ó 33, y un vehículo farmacéuticamente
aceptable.
41. La composición farmacéutica según la
reivindicación 40, en la que dicha cantidad terapéuticamente
efectiva es efectiva para tratar la enfermedad de Parkinson y
enfermedades asociadas con la actividad locomotriz, la
vasodilatación, la inhibición de las plaquetas, la generación del
radical superóxido por los neutrófilos, el trastorno cognitivo o la
demencia senil.
42. Una composición farmacéutica, que
comprende cualquiera de los compuestos según las reivindicaciones
21, 22 ó 33, un vehículo farmacéuticamente aceptable y al menos un
agente potenciador de la dopamina.
43. Una composición farmacéutica, que
comprende cualquiera de los compuestos según las reivindicaciones
21, 22 ó 33, un vehículo farmacéuticamente aceptable y al menos un
agente citotóxico.
44. Una composición farmacéutica, que
comprende cualquiera de los compuestos según las reivindicaciones
21, 22 ó 33, un vehículo farmacéuticamente aceptable y al menos uno
de un agente agonista de las prostaglandinas, un agente agonista
muscarínico o un agente antagonista \beta-2.
45. Un método para preparar el compuesto
según la reivindicación 33, que comprende las etapas de:
a) hacer reaccionar
para
dar
en donde P es un grupo protector
separable;
b) tratar el producto de la etapa a) en
condiciones de ciclación para dar
c) tratar el producto de la
etapa b) en condiciones adecuadas para
dar
y
d) tratar el producto clorado de la
etapa c) primero con dimetilamina y formaldehído, a continuación con
N-metilbencilamina y finalmente con NH_{2}R_{1}
para dar
en donde R_{1} es un grupo
acetamido etilo; en donde R_{3} es un grupo
4-piridilo; en donde R_{5} es un átomo de H o un
grupo metilo; en donde R_{6} es un grupo
N-metil-N-bencilaminometilo.
46. El compuesto según la reivindicación
1, que tiene la estructura:
en la que R_{1}
es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
R_{5} y R_{6} son independientemente un
átomo de H, un grupo alquilo sustituido y sin sustituir, o un grupo
arilo,
en la que el sustituyente, cuando está presente, es como
se definió en la reivindicación 1,
\newpage
en la que cuando R_{1} es un grupo
R_{5} es un grupo
y R_{6} es un átomo de
H.
47. El compuesto según la reivindicación
46, que tiene la estructura:
48. El compuesto según la reivindicación
46, que tiene la estructura:
\newpage
49. El compuesto según la reivindicación
46, que tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
50. El compuesto según la reivindicación
46, que tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
51. El compuesto según la reivindicación
46, que tiene la estructura:
52. El compuesto según la reivindicación
46, que tiene la estructura:
53. El compuesto según la reivindicación
52, que tiene la estructura:
54. El compuesto según la reivindicación
52, que tiene la estructura:
55. El compuesto según la reivindicación
52, que tiene la estructura:
56. El compuesto según la reivindicación
52, que tiene la estructura:
57. El compuesto según la reivindicación
46, que tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
58. El compuesto según la reivindicación
1, que tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
59. El compuesto según la reivindicación
46, que tiene la estructura:
60. El compuesto según la reivindicación
46, que tiene la estructura:
61. El compuesto según la reivindicación
46, que tiene la estructura:
62. El compuesto según la reivindicación
46, que tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
63. El compuesto según la reivindicación
62, que tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
64. El compuesto según la reivindicación
46, que tiene la estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
65. El compuesto según la reivindicación
64, que tiene la estructura:
66. El compuesto según la reivindicación
46, que tiene la estructura:
67. El compuesto según la reivindicación
66, que tiene la estructura:
68. El compuesto según la reivindicación
66, que tiene la estructura:
69. El compuesto según la reivindicación
1, que tiene la estructura:
en la que R_{1}, R_{2} y el
átomo de nitrógeno son
conjuntamente
\vskip1.000000\baselineskip
y
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R_{5} y R_{6} son
independientemente un átomo de H, un grupo alquilo sustituido o sin
sustituir, o un grupo
arilo,
en la que el sustituyente, cuando está presente, es como
se definió en la reivindicación 1,
en la que cuando R_{1}, R_{2} y el átomo de
nitrógeno son conjuntamente un grupo
R_{5} es un grupo fenilo y R_{6} es un átomo
de H;
\newpage
en la que cuando R_{1}, R_{2} y el átomo de
nitrógeno son conjuntamente
R_{5} es un grupo
y R_{6} es un átomo de H;
y
en la que cuando R_{1}, R_{2} y el átomo de
nitrógeno son conjuntamente un grupo
R_{5} y R_{6} son ambos un átomo de H.
70. El compuesto según la reivindicación
69, que tiene la estructura:
\newpage
71. El compuesto según la reivindicación
70, que tiene la estructura:
72. El compuesto según la reivindicación
70, que tiene la estructura:
73. El compuesto según la reivindicación
69, que tiene la estructura:
\newpage
74. El compuesto según la reivindicación
69, que tiene la estructura:
75. El compuesto según la reivindicación
74, que tiene la estructura:
76. El compuesto según la reivindicación
74, que tiene la estructura:
\newpage
77. El compuesto según la reivindicación
69, que tiene la estructura:
78. El compuesto según la reivindicación
77, que tiene la estructura:
79. El compuesto según la reivindicación
77, que tiene la estructura:
80. El compuesto según la reivindicación
69, que tiene la estructura:
81. El compuesto según la reivindicación
80, que tiene la estructura:
82. El compuesto según la reivindicación
80, que tiene la estructura:
\newpage
83. El compuesto según la reivindicación
1, que tiene la estructura:
84. El uso de un compuesto según las
reivindicaciones 46, 58, 69 u 83, para la fabricación de un
medicamento útil para tratar en un sujeto que necesite de tal
tratamiento una enfermedad asociada con un receptor A_{3} de la
adenosina.
85. El uso según la reivindicación 84, en
el que dicho receptor A_{3} de la adenosina está asociado con
asma, hipersensibilidad, rinitis, fiebre del heno, enfermedad del
suero, vasculitis alérgica, dermatitis atópica, dermatitis,
psoriasis, eczema, fibrosis pulmonar idiopática, colecistitis
eosinófila, inflamación crónica de las vías respiratorias, síndromes
hipereosinófilos, gastroenteritis eosinófila, edema, urticaria,
enfermedad miocardial eosinófila, angioedema episódico con
eosinofilia, enfermedad inflamatoria de los intestinos, colitis
ulcerante, granulomatosis alérgica, carcinomatosis, granuloma
eosinófilo, histiocitosis familiar, hipertensión, desgranulación de
las células cebadas, tumores, hipoxia cardiaca, isquemia cerebral,
diuresis, fallo renal, trastornos neurológicos, trastornos mentales,
trastornos cognitivos, isquemia miocardial, broncoconstricción,
artritis, enfermedad autoinmune, enfermedad de Crohn, enfermedad de
Grave, diabetes, esclerosis múltiple, anemia, trastornos de la
fertilidad, lupus eritematoso, lesiones por reperfusión, diámetro de
las arteriolas del cerebro, la liberación de agentes mediadores
alérgicos, escleroderma, apoplejía, isquemia global, trastornos del
sistema nervioso central, trastornos cardiovasculares, trastornos
renales, trastornos inflamatorios, trastornos gastrointestinales,
trastornos oculares, trastornos alérgicos, trastornos respiratorios
o trastornos inmunológicos.
86. Un profármaco soluble en agua, en el
que dicho profármaco soluble en agua se metaboliza in vivo
para producir el compuesto según las reivindicaciones, 2, 8, 9, 11,
21, 22, 33, 46, 58, 69 u 83.
87. El profármaco según la reivindicación
86, en la que dicho profármaco se metaboliza in vivo por
hidrólisis catalizada por una esterasa.
88. Una composición farmacéutica, que
comprende el profármaco según la reivindicación 86 y un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
89. La composición farmacéutica según la
reivindicación 88, en la que dicha composición farmacéutica es una
formulación oftálmica.
90. La composición farmacéutica según la
reivindicación 88, en la que dicha composición farmacéutica es una
formulación para inyección periocular, retrobulbar o
intraocular.
91. La composición farmacéutica según la
reivindicación 88, en la que dicha composición farmacéutica es una
formulación sistémica.
92. Un método para inhibir la actividad de
un receptor A_{3} de la adenosina en una célula in vitro,
que comprende poner en contacto a dicha célula con un compuesto
según las reivindicaciones 46, 58, 69 u 83.
93. El método según las reivindicaciones
16, 39 ó 92, en el que la célula es una célula de ser humano.
94. El uso de un compuesto según las
reivindicaciones 46, 58, 69 u 83, para la fabricación de un
medicamento para tratar en un sujeto un trastorno
gastrointestinal.
95. El uso según la reivindicación 94, en
el que dicho trastorno es diarrea.
96. El uso de un compuesto según las
reivindicaciones 46, 58, 69 u 83, para la fabricación de un
medicamento útil para tratar en un sujeto un trastorno
respiratorio.
97. El uso según la reivindicación 96, en
el que dicho trastorno es asma, enfermedad pulmonar obstructiva
crónica, rinitis alérgica o un trastorno respiratorio del tracto
respiratorio superior.
98. El uso de un compuesto según las
reivindicaciones 46, 58, 69 u 83, para la fabricación de un
medicamento útil para tratar el daño en el ojo de un sujeto.
99. El uso según la reivindicación 98, en
el que dicho daño comprende daño retinal o de la cabeza del nervio
óptico.
100. El uso según la reivindicación 98, en
el que dicho daño es agudo o crónico.
101. El uso según la reivindicación 98, en
el que dicho daño es el resultado de glaucoma, edema, isquemia,
hipoxia o traumatismo.
102. El uso según las reivindicaciones 14,
17, 36, 84, 94, 96 ó 98, en el que el sujeto es un ser humano.
103. Una composición farmacéutica, que
comprende cualquiera de los compuestos según las reivindicaciones
46, 58, 69 u 83, un vehículo farmacéuticamente aceptable y al menos
uno de un agente agonista de las prostaglandinas, un agente agonista
muscarínico o un agente antagonista \beta-2.
104. Una composición farmacéutica, que
comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto según
las reivindicaciones 46, 58, 69 u 83, y un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
105. La composición farmacéutica según la
reivindicación 104, en la que dicha cantidad terapéuticamente
efectiva es efectiva para tratar un trastorno respiratorio o un
trastorno gastrointestinal.
106. La composición farmacéutica según la
reivindicación 105, en la que dicho trastorno gastrointestinal es
diarrea.
107. La composición farmacéutica según la
reivindicación 105, en la que dicho trastorno respiratorio es asma,
rinitis alérgica o enfermedad pulmonar obstructiva crónica.
108. La composición farmacéutica según la
reivindicación 40 ó 104, en la que dicha composición farmacéutica es
una formulación oftálmica.
109. La composición farmacéutica según la
reivindicación 19, 40 ó 104, en la que dicha composición
farmacéutica es una formulación para inyección periocular,
retrobulbar o intraocular.
110. La composición farmacéutica según la
reivindicación 19, 40 ó 104, en la que dicha composición
farmacéutica es una formulación sistémica.
111. La composición farmacéutica según la
reivindicación 19, 40 ó 104, en la que dicha composición
farmacéutica es una disolución para irrigación quirúrgica.
112. Un método para preparar el compuesto
según la reivindicación 1, que comprende las etapas de:
a) hacer reaccionar
para
dar
en donde P es un grupo protector
separable;
b) tratar el producto de la etapa a) en
condiciones de ciclación para dar
c) tratar el producto de la
etapa b) en condiciones adecuadas para
dar
y
d) tratar el producto clorado de la
etapa c) con NHR_{1}R_{2} para dar
en donde R_{1}
es
y R_{2} es un átomo de hidrógeno;
o
\newpage
NR_{1}R_{2} son conjuntamente
en donde R_{3} es como se definió
en la reivindicación
1;
en donde R_{5} es un átomo de H, un grupo
CH_{3}, un grupo alquilo sustituido o sin sustituir, un grupo
arilo o un grupo fenilo,
en donde el sustituyente, cuando está presente, es como
se definió en la reivindicación 1,
en donde X es un átomo de O ó un
átomo de
S;
y en donde R_{6} es un átomo de H, un grupo
CH_{3}, un grupo alquilo sustituido o sin sustituir, un grupo
cicloalquilo o un grupo
en donde cuando R_{1} es un
grupo
R_{3} es un grupo fenilo,
R_{5} es un grupo
y R_{6} es un átomo de
H;
en donde X es un átomo de O ó un átomo de S;
en donde cuando R_{1} es un grupo
R_{3} es un grupo fenilo;
R_{5} es un grupo fenilo y R_{6} es un átomo
de H;
en donde cuando R_{1} es un grupo
\vskip1.000000\baselineskip
R_{3} es un grupo
4-clorofenilo;
R_{5} y R_{6} son cada uno un átomo de
H;
\newpage
en donde cuando R_{1} es un grupo
R_{5} y R_{6} son cada uno
independientemente un átomo de H o un grupo alquilo;
en donde cuando R_{1} es un grupo
R_{3} es un grupo fenilo; y
R_{5} y R_{6} son ambos un átomo de H, o
R_{3} es un grupo fenilo;
R_{5} es un grupo
y R_{6} es un átomo de H,
o
R_{3} es un grupo
4-piridilo;
R_{5} es un grupo CH_{3} y R_{6} es un
grupo
113. El uso de un compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 2, 8, 9 u 11, para la fabricación de un
medicamento útil para tratar en un sujeto que necesita de tal
tratamiento una enfermedad asociada con un receptor A_{1} de la
adenosina, en el que la enfermedad asociada con el receptor A_{1}
de la adenosina es antidiuresis, bradicardia, bronquitis,
broncoconstricción, enfermedad de Alzheimer, arritmias cardiacas,
hipoxia cardiaca, hipertensión, inflamación, inotropia y dromotropia
cardiaca negativas, fallo renal, sedación, o está asociada con la
liberación de transmisores, el epitelio respiratorio, la contracción
del músculo liso que se extiende bajo el epitelio respiratorio, la
vasoconstricción o la desgranulación de las células cebadas.
114. El uso de un compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 2, 8, 9 u 11, para la fabricación de un
medicamento útil para potenciar la memoria de un sujeto.
115. El uso de un compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 21, 22 ó 33, para la fabricación de un
medicamento útil para tratar en un sujeto que necesita de tal
tratamiento una enfermedad asociada con un receptor A_{2a} de la
adenosina, en el que la enfermedad asociada con el receptor A_{2a}
de la adenosina es la enfermedad de Parkinson o glaucoma.
116. El compuesto según la reivindicación
21, en el que cuando NR_{1}R_{2} forma conjuntamente un anillo
de 2-aminocarbonilpirrolidina, R_{3} es un grupo
fenilo sustituido o un grupo piridina no sustituido, en el que el
sustituyente es un átomo de halógeno, un grupo hidroxilo, un grupo
alcoxi, un grupo alquilcarboniloxi, un grupo arilcarboniloxi, un
grupo alcoxicarboniloxi, un grupo ariloxicarboniloxi, un grupo
carboxilato, un grupo alquilcarbonilo, un grupo alcoxicarbonilo, un
grupo aminocarbonilo, un grupo alquiltiocarbonilo, un grupo fosfato,
un grupo fosfonato, un grupo fosfinato, un grupo ciano, un grupo
amino, un grupo alquilamino, un grupo dialquilamino, un grupo
arilamino, un grupo diarilamino, un grupo alquilarilamino, un grupo
acilamino, un grupo alquilcarbonilamino, un grupo arilcarbonilamino,
un grupo carbamoilo, un grupo ureido, un grupo amidino, un grupo
imino, un grupo sulfidrilo, un grupo alquiltio, un grupo ariltio, un
grupo tiocarboxilato, un grupo sulfato, un grupo sulfonato, un grupo
sulfamoilo, un grupo sulfonamido, un grupo nitro, un grupo
trifluorometilo, un grupo azido, un grupo heterociclilo o un grupo
alquilarilo.
117. El uso del compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 46, 58, 69 u 83, para la fabricación de un
medicamento útil para tratar en un sujeto que necesita de tal
tratamiento una enfermedad asociada con un receptor A_{3} de la
adenosina, en el que la enfermedad asociada con el receptor A_{3}
de la adenosina es isquemia miocardial, bronquitis o
broncoconstricción.
118. El uso del compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 46, 58, 69 u 83, para la fabricación de un
medicamento útil para tratar en un sujeto la inflamación del ojo
asociada con el receptor A_{3} de la adenosina.
119. El uso del compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 46, 58, 69 u 83, para la fabricación de un
medicamento útil para tratar en un sujeto que necesita de tal
tratamiento una enfermedad asociada con un receptor A_{3} de la
adenosina, en el que la enfermedad asociada con el receptor A_{3}
de la adenosina está asociada con la desgranulación de las células
cebadas.
120. El uso del compuesto según cualquiera
de las reivindicaciones 46, 58, 69 u 83, para la fabricación de un
medicamento útil para tratar en un sujeto que necesita de tal
tratamiento una enfermedad asociada con un receptor A_{3} de la
adenosina, en el que la enfermedad asociada con el receptor A_{3}
de la adenosina es asma, glaucoma, retinopatía, isquemia ocular o
degeneración macular.
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