KR101486490B1

KR101486490B1 - α-헬릭스 유사체 및 암 줄기세포의 치료에 관한 방법

Info

Publication number: KR101486490B1
Application number: KR1020087013755A
Authority: KR
Inventors: 마이클 칸
Original assignee: 제이더블유중외제약 주식회사
Priority date: 2005-11-08
Filing date: 2006-11-08
Publication date: 2015-01-27
Also published as: US20070129353A1; WO2007056593A3; WO2007056593A2; CA2629136C; ES2570994T3; AU2006311433A1; CA2629136A1; JP5536336B2; US20100069333A1; JP2009515890A; EP1957516A2; KR20080070060A; US8293743B2; EP1957516B1; AU2006311433B2

Abstract

본 발명은 전체적으로 알파-유사체 구조물 및 그에 관한 화학 라이브러리를 제공한다. 부가적으로, 본 발명은 알파-유사체 화합물들이 암 줄기세포를 치료하기 위하여 사용되는 방법을 제공한다.

알파-헬릭스, 암, 줄기세포

Description

α-헬릭스 유사체 및 암 줄기세포의 치료에 관한 방법{α-HELIX MIMETICS AND METHOD RELATING TO THE TREATMENT OF CANCER STEM CELLS}

본 발명은 전체적으로 α-헬릭스 유사체 구조물 및 그에 관한 화학 라이브러리에 관한 것이다. 본 발명은 구체적으로 암 및 특히, 암 줄기세포의 치료에서의 응용 및 상기 α-헬릭스 유사체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

많은 암들의 클론 기원(clonal origin)에도 불구하고, 대부분의 주요 종양들은 주목할 만한 정도의 세포 이질성을 나타낸다. 현대 화학요법들은 종양 내에서 대다수의 세포들을 죽이지만, 암 줄기세포가 종종 살아남는다는 것은 증거에 의해 명백하게 나타나고 있다. 상기 암 줄기세포 가설은 종양들 내의 매우 희박한 수의 세포들만이, 무한한 자가재생(self-renewal) 능력을 갖는 종양 세포들임을 가정한다. 이 개념은 중요한 치료적 암시를 갖으며, 왜 종양이 더 이상 검출되지 않을 때까지 많은 암들을 치료하는 것이 가능하며, 그럼에도 불구하고 그 암들이 재발하는지를 설명할 수 있다. 환자로부터 암 줄기세포를 억제, 감소, 및/또는 제거할 조성물 및 방법이 이 기술분야에서 필요하다.

본 발명은 또한, 이러한 필요성을 충족하고, 생물학적으로 활성이 있는 펩티드 및 단백질의 α-헬릭스 영역의 2차 구조와 유사하며, 특히 선택적으로, β-카테 닌/CBP 상호작용을 중단시키는 구조적으로 제한된(constrained) 화합물을 제공함으로써 추가의 관련된 이점을 제공한다.

본 출원은 2005년 11월 8일에 출원된 미국 가출원 번호 제60/734,655호에 대하여 우선권을 주장하며, 또한, 인용에 의하여 상기 출원의 전체가 여기에 삽입된다.

발명의 요약

본 발명은 다음의 일반식(I)을 갖는 화합물, 그의 입체이성질체, 그의 염, 및 그의 프로드럭을 제공한다:

상기 식에서 A는 -(C=O)-CHR₃- 또는 -(C=O)-이고, B는 N-R₅- 또는 -CHR₆-이고, D는 -(C=O)-(CHR₇)- 또는 -(C=O)-이고, E는 -(ZR₈)- 또는 -(C=O)-이고, G는 -(XR₉)n-, -(CHR₁₀)-(NR₆)-, -(C=O)-(XR₁₂)-, -(C=N-W-R₁)-, -(C=O)-, X-(C=O)-R₁₃, X-(C=O)-NR₁₃R₁₄, X-(SO₂)-R₁₃, 또는 X-(C=O)-OR₁₃이고, W는 -Y(C=O)-, -(C=O)NH-, -(SO₂)-, -CHR₁₄, (C=O)-(NR₁₅)-, 치환 또는 비치환된 옥사디아졸, 치환 또는 비치환된 트리아졸, 치환 또는 비치환된 티아디아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로옥사졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로티아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로이미다졸, 또는 부존재(nothing)이고, Y는 산소 또는 황이고, X 및 Z은 독립적으로 질소 또는 CH이고, n은 0 또는 1이고; 그리고 R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃, R₁₄ 및 R₁₅는 동일하거나 상이하고, 아미노산 측쇄 부분(moiety) 또는 그의 유도체, 상기 분자의 잔여부분(remainder), 링커(linker) 및 고체 지지체(solid support)로부터 독립적으로 선택되며, 단, 상기에서 B가 CHR₆ 이고 W가 -Y(C=O)-, -(C=O)NH-, -(SO₂)-, -CHR₁₄, 또는 (C=O)-(NR₁₅)-인 경우에, G는 CHR₉, NR₉, (C=O)-CHR₁₂, (C=O)-NR₁₂, 또는 전혀 원자가 부존재하는 것이 될 수 없다.

또한, 본 발명은 상기 R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃, R₁₄및 R₁₅는 아미노C₂ _- ₅알킬, 구아니디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₄알킬구아니디노C₂ _- ₅알킬, 디C₁ _- ₄알킬구아니디노C_2- ₅알킬, 아미디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₄알킬아미디노C₂ _- ₅알킬, 디C₁ _- ₄알킬아미디노C_2- ₅알킬, C₁ _- ₃알콕시, 페닐, 치환된 페닐(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 벤질, 치환된 벤질(여기서 벤질 상의 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 나프틸, 치환된 나프틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 비스-페닐 메틸, 치환된 비스-페닐 메틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜, 치환된 피리딜(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜C₁ _- ₄알킬, 치환된 피리딜C_1-4알킬(여기서 피리딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C_1-4알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리미딜C₁ _- ₄알킬, 치환된 피리미딜C₁ _-4알킬(여기서 피리미딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 트리아진-2-일-C₁ _- ₄알킬, 치환된 트리아진-2-일-C₁ _-4알킬(여기서 트리아진 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C_1-4알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸C₁ _- ₄알킬, 치환된 이미다졸 C₁ _-4알킬(여기서 이미다졸 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴, 히드록실 또는 메틸 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸리닐C₁ _- ₄알킬, N-아미디노피페라지닐-N-C₀ _- ₄알킬, 히드록시C₂ _- ₅알킬, C_1-5알킬아미노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₅디알킬아미노C₂ _- ₅알킬, N-아미디노피페리디닐C₁ _- ₄알킬 및 4-아미노사이클로헥실C₀ _- ₂알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 일반식(I)의 화합물, 그의 염, 및 그의 프로드럭을 제공한다.

더 나아가서, 본 발명은 상기 A는 -(CHR₃)-(C=O)-이고, B는 -(N-R₄)-이고, D는 -(C=O)-이고, E는 -(ZR₆)-이고, G는 -(C=O)-(XR₉)-이고, 다음 일반식(III)을 갖는 일반식(I)의 화합물, 그의 염, 및 그의 프로드럭을 제공한다:

상기 식에서, R₁, R₂, R₄, R₆, R₉, W 및 X는 상기 일반식(I)에서 정의한 바와 같으며, Z는 질소 또는 CH(Z가 CH일 때, X는 질소이다)이다.

또한, 본 발명은 상기 A는 -0-CHR₃-이고, B는 -NR₄-이고, D는 -(C=O)-이고, E는 -(ZR₆)-이고, G는(XR₇)_n-이고, 본 발명의 α-헬릭스 유사체 화합물이 다음 일반식(IV)를 갖는 일반식(I)의 화합물, 그의 염, 및 그의 프로드럭을 제공한다:

상기 식에서, R₁, R₂, R₄, R₆, R₇, R₈,W, X 및 n은 상기 정의한 바와 같으며, Y는 -C=O, -(C=O)-O-, -(C=O)-NR₈,-SO₂-, 또는 부존재이고, Z는 질소 또는 CH(Z가 질소일 때, n은 0이고, Z가 CH일 때, X는 질소이고 n은 0이 아니다.)이다. 바람직한 구체예에서, R₁, R₂, R₆, R₇ 및 R₈은 그 상기 화합물의 잔여부분(remainder)을 나타내고, R₄는 아미노산 측쇄 부분(moiety)으로부터 선택된다. 이 경우에, Z과 X가 각각 CH일때, R₆ 또는 R₇은 아미노산 측쇄 부분(moiety)으로부터 선택될 수 있다.

더 나아가서, 본 발명은 상기 A는 -(C=O)-이고, B는 -(CHR₆)-이고, D는 -(C=O)-이고, E는 -(ZR₈)-이고, G는 -(NH)- 또는 -(CH₂)-이고, W는 치환 또는 비치환된 옥사디아졸, 치환 또는 비치환된 트리아졸, 치환 또는 비치환된 티아디아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로옥사졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로티아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로이미다졸이고, 본 발명의 α-헬릭스 유사체 화합물이 다음 일반식(V)를 갖는 일반식(I)의 화합물, 그의 염, 및 그의 프로드럭을 제공한다:

상기 식에서 K는 질소, 산소, 또는 황이고, L은 질소, 산소, -(CH)-, 또는 -(CH₂)-이고, J는 질소, 산소, 또는 황이고, Z는 질소 또는 CH이고, R₁, R₂, R₆, R₈ 및 R₁₃은 아미노산 측쇄 부분(moiety)으로부터 선택된다.

또한, 본 발명은 다음 일반식(VI)을 갖는 화합물, 그의 입체이성질체, 그의 염, 및 그의 프로드럭을 제공한다:

상기 식에서 B는 -(CHR₂)- 또는 -(NR₂)-이고, E는 -(CHR₃)-이고, V는 -(XR₄)- 또는 부존재이고, W는 -(C=O)-(XR₅R₆), -(SO₂)-, 치환 또는 비치환된 옥사디아졸, 치환 또는 비치환된 트리아졸, 치환 또는 비치환된 티아디아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로옥사졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로티아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로이미다졸이고, X는 독립적으로 질소, 산소, 또는 CH이고, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, 및 R₆는 아미노산 측쇄 부분(moiety) 또는 그의 유도체, 상기 분자의 잔여부분(remainder), 링커(linker) 및 고체 지지체(solid support)로부터 선택된다.

더 나아가서, 본 발명은 상기 R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃, R₁₄ 및 R₁₅는 아미노C₂ _- ₅알킬, 구아니디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₄알킬구아니디노C₂ _- ₅알킬, 디C₁ _- ₄알킬구아니디노C₂ _- ₅알킬, 아미디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₄알킬아미디노C₂ _- ₅알킬, 디C₁ _- ₄알킬아미디노C_2- ₅알킬, C₁ _- ₃알콕시, 페닐, 치환된 페닐(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 벤질, 치환된 벤질(여기서 벤질 상의 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 나프틸, 치환된 나프틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 비스-페닐 메틸, 치환된 비스-페닐 메틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C_1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜, 치환된 피리딜(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜C₁ _- ₄알킬, 치환된 피리딜C₁ _-4알킬(여기서 피리딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리미딜C₁ _- ₄알킬, 치환된 피리미딜C₁ _-4알킬(여기서 피리미딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 트리아진-2-일-C₁ _- ₄알킬, 치환된 트리아진-2-일-C₁ _-4알킬(여기서 트리아진 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C_1-4알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸C₁ _- ₄알킬, 치환된 이미다졸 C₁ _-4알킬(여기서 이미다졸 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴, 히드록실 또는 메틸 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸리닐C₁ _- ₄알킬, N-아미디노피페라지닐-N-C₀ _- ₄알킬, 히드록시C₂ _- ₅알킬, C_1-5알킬아미노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₅디알킬아미노C₂ _- ₅알킬, N-아미디노피페리디닐C₁ _- ₄알킬 및 4-아미노사이클로헥실C₀ _- ₂알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 일반식(I)의 화합물, 그의 염, 및 그의 프로드럭을 제공한다. 더 나아가서, 본 발명은 상기 B는 -(CH)-(CH₃)이고, E는 -(CH)-(CH₃)이고, V는 -(XR₄)- 또는 부존재이고, W는 치환 또는 비치환된 옥사디아졸, 치환 또는 비치환된 트리아졸, 치환 또는 비치환된 티아디아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로옥사졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로티아졸, 또는 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로이미다졸이고, X는 독립적으로 질소 또는 CH이고, 다음 일반식(VII)을 갖는 화합물, 그의 염, 및 그의 프로드럭을 제공한다:

상기 식에서 K는 질소, 산소, 또는 황이고, L은 질소, 산소, -(CH)-, 또는 -(CH₂)-이고, J는 질소, 산소, 또는 황이고, R₅는 아미노C₂ _- ₅알킬, 구아니디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₄알킬구아니디노C₂ _- ₅알킬, 디C₁ _- ₄알킬구아니디노C₂ _- ₅알킬, 아미디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₄알킬아미디노C_2- ₅알킬, 디C₁ _- ₄알킬아미디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₃알콕시, 페닐, 치환된 페닐(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 벤질, 치환된 벤질(여기서 벤질 상의 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 나프틸, 치환된 나프틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 비스-페닐 메틸, 치환된 비스-페닐 메틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜, 치환된 피리딜(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C_1-4알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜C₁ _- ₄알킬, 치환된 피리딜C₁ _-4알킬(여기서 피리딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리미딜C_1- ₄알킬, 치환된 피리미딜C₁ _-4알킬(여기서 피리미딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 트리아진-2-일-C₁ _- ₄알킬, 치환된 트리아진-2-일-C₁ _-4알킬(여기서 트리아진 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸C₁ _- ₄알킬, 치환된 이미다졸 C₁ _-4알킬(여기서 이미다졸 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C_1-4알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴, 히드록실 또는 메틸 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸리닐C₁ _- ₄알킬, N-아미디노피페라지닐-N-C₀ _- ₄알킬, 히드록시C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₅알킬아미노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₅디알킬아미노C₂ _- ₅알킬, N-아미디노피페리디닐C₁ _- ₄알킬 및 4-아미노사이클로헥실C₀ _- ₂알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.

본 발명은 다음의 일반식(I)의 화합물, 그의 입체이성질체, 그의 염, 및 그의 프로드럭, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다:

상기 식에서 A는 -(C=O)-CHR₃- 또는 -(C=O)-이고, B는 N-R₅- 또는 -CHR₆-이고, D는 -(C=O)-(CHR₇)- 또는 -(C=O)-이고, E는 -(ZR₈)- 또는 -(C=O)-이고, G는 -(XR₉)n-, -(CHR₁₀)-(NR₆)-, -(C=O)-(XR₁₂)-, -(또는 부존재)-, -(C=O)-, X-(C=O)-R₁₃, X-(C=O)-NR₁₃R₁₄, X-(SO₂)-R₁₃, 또는 X-(C=O)-OR₁₃이고, W는 -Y(C=O)-, -(C=O)NH-, -(SO₂)-, -CHR₁₄, (C=O)-(NR₁₅)-, 치환 또는 비치환된 옥사디아졸, 치환 또는 비치환된 트리아졸, 치환 또는 비치환된 티아디아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로옥사졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로티아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로이미다졸, 또는 부존재(nothing)이고, Y는 산소 또는 황이고, X 및 Z은 독립적으로 질소 또는 CH이고, n은 0 또는 1이고; 그리고 R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃, R₁₄ 및 R₁₅는 동일하거나 상이하고, 아미노산 측쇄 부분(moiety) 또는 그의 유도체, 상기 분자의 잔여부분(remainder), 링커(linker) 및 고체 지지체(solid support)로부터 독립적으로 선택된다.

또한, 본 발명은 상기 R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃, R₁₄및 R₁₅는 아미노C₂ _- ₅알킬, 구아니디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₄알킬구아니디노C₂ _- ₅알킬, 디C₁ _- ₄알킬구아니디노C_2- ₅알킬, 아미디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₄알킬아미디노C₂ _- ₅알킬, 디C₁ _- ₄알킬아미디노C_2- ₅알킬, C₁ _- ₃알콕시, 페닐, 치환된 페닐(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 벤질, 치환된 벤질(여기서 벤질 상의 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 나프틸, 치환된 나프틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 비스-페닐 메틸, 치환된 비스-페닐 메틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜, 치환된 피리딜(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜C₁ _- ₄알킬, 치환된 피리딜C_1-4알킬(여기서 피리딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C_1-4알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리미딜C₁ _- ₄알킬, 치환된 피리미딜C₁ _-4알킬(여기서 피리미딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 트리아진-2-일-C₁ _- ₄알킬, 치환된 트리아진-2-일-C₁ _-4알킬(여기서 트리아진 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C_1-4알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸C₁ _- ₄알킬, 치환된 이미다졸 C₁ _-4알킬(여기서 이미다졸 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴, 히드록실 또는 메틸 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸리닐C₁ _- ₄알킬, N-아미디노피페라지닐-N-C₀ _- ₄알킬, 히드록시C₂ _- ₅알킬, C_1-5알킬아미노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₅디알킬아미노C₂ _- ₅알킬, N-아미디노피페리디닐C₁ _- ₄알킬 및 4-아미노사이클로헥실C₀ _- ₂알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 일반식(I)의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 더 나아가서, 본 발명은 상기 A는 -(CHR₃)-(C=O)-이고, B는 -(N-R₄)-이고, D는 -(C=O)-이고, E는 -(ZR₆)-이고, G는 -(C=O)-(XR₉)-이고, 다음 일반식(III)의 구조를 갖는 일반식(I)의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다:

상기 식에서, Z는 질소 또는 CH(단 Z가 CH일 때, X는 질소이다)이다.

또한, 본 발명은 A는 -0-CHR₃-이고, B는 -NR₄-이고, D는 -(C=O)-이고, E는 -(ZR₆)-이고, G는(XR₇)_n-이고, 상기 α-헬릭스 유사체 화합물이 다음 일반식(IV)를 갖는 일반식(I)의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다:

상기 식에서, R₁, R₂, R₄, R₆, R₇, R₈, W, X 및 n은 상기 정의한 바와 같으며, Y는 -(C=O)-, -(C=O)-O-, -(C=O)-NR₈, -SO₂-, 또는 부존재(nothing)이고, Z는 질소 또는 CH(Z가 질소일 때 n은 0이고, Z가 CH일 때 X는 질소이고 n은 0이 아니다.). 바람직한 구체예에서, R₁, R₂, R₆, R₇, 및 R₈은 상기 화합물의 잔여부분(remainder)을 나타내고, R₄는 아미노산 측쇄 부분(moiety)으로부터 선택된다. 이 경우에, Z과 X가 각각 CH₃일때, R₆ 및 R₇은 아미노산 측쇄 부분(moiety)으로부터 선택될 수 있다. 또한, 본 발명은 상기 A는 -(C=O)-이고, B는 -(CHR₆)-이고, D는 -(C=O)-이고, E는 -(ZR₈)-이고, G는 -(NH)- 또는 -(CH₂)-이고, W는 치환 또는 비치환된 옥사디아졸, 치환 또는 비치환된 트리아졸, 치환 또는 비치환된 티아디아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로옥사졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로티아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로이미다졸이고, 본 발명의 α-헬릭스 유사체 화합물이 다음 일반식(V)를 갖는 약제학적 조성물을 제공한다.

더 나아가서, 본 발명은 다음 일반식(VI)을 갖는 화합물, 그의 입체이성질체, 그의 염, 및 그의 프로드럭을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다:

상기 식에서 B는 -(CHR₂)- 또는 -(NR₂)-이고, E는 -(CHR₃)-이고, V는 -(XR₄)- 또는 부존재이고, W는 -(C=O)-(XR₅R₆), -(SO₂)-, 치환 또는 비치환된 옥사디아졸, 치환 또는 비치환된 트리아졸, 치환 또는 비치환된 티아디아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로옥사졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로티아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로이미다졸이고, X는 독립적으로 질소, 산소, 또는 CH이고, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, 및 R₆는 아미노산 측쇄 부분(moiety) 또는 그의 유도체, 상기 분자의 잔여부분(remainder), 링커(linker) 및 고체 지지체(solid support)로부터 선택된다. 이 약제학적 조성물에서, 상기 R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃, R₁₄ 및 R₁₅는 아미노C₂ _- ₅알킬, 구아니디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₄알킬구아니디노C₂ _- ₅알킬, 디C₁ _- ₄알킬구아니디노C₂ _- ₅알킬, 아미디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₄알킬아미디노C₂ _- ₅알킬, 디C_1-4알킬아미디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₃알콕시, 페닐, 치환된 페닐(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 벤질, 치환된 벤질(여기서 벤질 상의 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 나프틸, 치환된 나프틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 비스-페닐 메틸, 치환된 비스-페닐 메틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜, 치환된 피리딜(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜C_1- ₄알킬, 치환된 피리딜C₁ _-4알킬(여기서 피리딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리미딜C₁ _- ₄알킬, 치환된 피리미딜C_1-4알킬(여기서 피리미딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C_1-4알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 트리아진-2-일-C₁ _- ₄알킬, 치환된 트리아진-2-일-C₁ _-4알킬(여기서 트리아진 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸C₁ _- ₄알킬, 치환된 이미다졸 C₁ _-4알킬(여기서 이미다졸 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴, 히드록실 또는 메틸 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸리닐C₁ _- ₄알킬, N-아미디노피페라지닐-N-C₀ _- ₄알킬, 히드록시C_2- ₅알킬, C₁ _- ₅알킬아미노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₅디알킬아미노C₂ _- ₅알킬, N-아미디노피페리디닐C_1- ₄알킬 및 4-아미노사이클로헥실C₀ _- ₂알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 어떤 구체예들에서, 상기 B는 -(CH)-(CH₃)이고, E는 -(CH)-(CH₃)이고, V는 -(XR₄)- 또는 부존재이고, W는 치환 또는 비치환된 옥사디아졸, 치환 또는 비치환된 트리아졸, 치환 또는 비치환된 티아디아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로옥사졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로티아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로이미다졸이고, X는 독립적으로 질소 또는 CH이고, 그 화합물은 다음 일반식(VII)을 갖는다:

상기 식에서 K는 질소, 산소, 또는 황이고, L은 질소, 산소, -(CH)-, 또는 -(CH₂)-이고, J는 질소, 산소, 또는 황이고, R₅는 아미노C₂ _- ₅알킬, 구아니디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₄알킬구아니디노C₂ _- ₅알킬, 디C₁ _- ₄알킬구아니디노C₂ _- ₅알킬, 아미디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₄알킬아미디노C_2- ₅알킬, 디C₁ _- ₄알킬아미디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₃알콕시, 페닐, 치환된 페닐(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 벤질, 치환된 벤질(여기서 벤질 상의 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 나프틸, 치환된 나프틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 비스-페닐 메틸, 치환된 비스-페닐 메틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜, 치환된 피리딜(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _-4알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜C₁ _- ₄알킬, 치환된 피리딜C₁ _-4알킬(여기서 피리딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리미딜C_1- ₄알킬, 치환된 피리미딜C₁ _-4알킬(여기서 피리미딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 트리아진-2-일-C₁ _- ₄알킬, 치환된 트리아진-2-일-C₁ _-4알킬(여기서 트리아진 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸C₁ _- ₄알킬, 치환된 이미다졸 C₁ _-4알킬(여기서 이미다졸 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C_1-4알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴, 히드록실 또는 메틸 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸리닐C₁ _- ₄알킬, N-아미디노피페라지닐-N-C₀ _- ₄알킬, 히드록시C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₅알킬아미노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₅디알킬아미노C₂ _- ₅알킬, N-아미디노피페리디닐C₁ _- ₄알킬 및 4-아미노사이클로헥실C₀ _- ₂알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.

본 발명은 화합물 1~2217로 이루어지는 군으로부터 선택되는 화합물, 및 화합물 1~2217 중의 적어도 하나를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 상기 약제학적 조성물은 상기 화합물의 유효량 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화합물은 암 치료에서 병리적 줄기세포를 근절하기 위한 의약의 제조에 사용될 수 있다. 상기 줄기세포는 백혈병의 줄기세포이며, 상기 줄기세포는 고형 종양으로부터 유래될 수 있으며, 상기 고형 종양은 유방, 뇌, 폐, 결장(colon), 간, 및 장(intestine)로부터 유래될 수 있다.

세포사(cell death)를 일으키거나 증식을 억제하고 고형 종양이나 백혈병에서 줄기세포의 분화를 일으키기 위하여 충분한 양인 상기 화합물의 치료학적 유효량이 제공된다. 본 발명의 화합물은 암 치료에서 CBP/카테닌 전사로부터 p300/카테닌 전사로의 전환을 일으키는 것에 의하여 병리적 줄기세포의 분화를 달성하기 위한 의약의 제조에 사용될 수 있다. 상기 카테닌은 β-카테닌 또는 γ/p120-카테닌일 수 있다.

본 발명의 상기 화합물은, 암 줄기세포에서 CBP/카테닌 신호를 억제함으로써, 그것에 의해 암줄기세포의 분화를 유도하며, 적어도 하나의 특이적 경로 억제제에 의해 유도되는 세포자멸(apoptosis)에 암 줄기세포를 더욱 민감하도록 하는 것과 같이, 암 줄기세포에서 CBP/카테닌 신호를 억제할 수 있다. 상기 특이적 경로는 EGFR 경로; 허셉틴(Herceptin), Abl 또는 Kit 티로신 키나아제(Kit tyrosine kinase) 경로(이마티닙)로부터 선택될 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물은 경구, 경피, 정맥내, 국소(topically), 흡입, 또는 직장으로 피험자에게 전달되며; 전달은 지속 방출(sustained release)에 의한 것일 수도 있다. 상기 약제학적 조성물은 캡슐, 정제, 분말, 과립제, 시럽, 주사가능한 유체, 크림, 연고, 친수성 연고, 흡입성 유체(inhalable fluids), 및 좌약으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법에 의해 투여될 수 있다.

더 나아가서, 본 발명의 적어도 하나의 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여하는 것에 의해 암성 병태(cancerous condition)를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 암성 병태는급성림프성백혈병, 급성비림프성백혈병, 부신피질암, 방광암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 만성림프성백혈병, 만성골수성백혈병, 결장직장암, 피부 T 세포림프종, 자궁내막암, 식도암, 유잉 육종((Ewing's sarcoma), 쓸개암, 유모세포 백혈병(hairy cell leukaemia), 두경부암, 호지킨 림프종(hodgkin's lymphoma), 카포지 육종(Kaposi's sarcoma), 신장암, 간암, 폐암(소세포 및/또는 비소세포(small and/or non-small cell)), 악성복막삼출(malignant peritoneal effusion), 악성흉막삼출(malignant pleural effusion), 흑색종, 중피종, 다발골수종, 신경모세포종, 비호지킨 림프종(non-hodgkin's lymphoma), 골육종, 난소암, 난소(배아세포)암, 췌장암, 음경암, 전립선암, 망막모세포종, 피부암, 연조직 육종(soft-tissue sarcoma), 편평세포암종, 위암, 고환암, 갑상선암, 영양모아세포성종양(trophoblastic neoplasms), 자궁암, 질암, 음문암(cancer of the vulva), 및 윌름즈종양(Wilm's tumor)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나이다.

더 나아가서, 본 발명은 CBP-β-카테닌 상호작용을 억제하고, 그것에 의해 줄기세포의 분화를 일으키는 본 발명의 적어도 하나의 화합물로 줄기세포 배양물을 배양하는 것을 포함하여, 포유류 피험자에게 이식하기 전에 기형종 형성 줄기세포(teratoma-forming stem cells)를 제거하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 암 치료에서 병리적 줄기세포를 근절하기 위한 의약의 제조에 사용되는 약제학적 조성물을 제공한다.

도 1A-Z은 화합물 1~200의 화학적 구조를 나타낸다.

도 2A-2AD는 화합물 201~400의 화학적 구조를 나타낸다.

도 3A-3AC는 화합물 401~600의 화학적 구조를 나타낸다.

도 4A-4Y는 화합물 601~800의 화학적 구조를 나타낸다.

도 5A-5Y는 화합물 801~1000의 화학적 구조를 나타낸다.

도 6A-6Y는 화합물 1001~1200의 화학적 구조를 나타낸다.

도 7A-7Z는 화합물 1201~1400의 화학적 구조를 나타낸다.

도 8A-8AC는 화합물 1401~1600의 화학적 구조를 나타낸다.

도 9A-9AE는 화합물 1601~1800의 화학적 구조를 나타낸다.

도 10A-10AA는 화합물 1801~2000의 화학적 구조를 나타낸다.

도 11A-11AA는 화합물 2001~2200의 화학적 구조를 나타낸다.

도 12A-12C는 화합물 2203~2217의 부분입체이성질체 및 거울상입체이성질체의 화학적 구조를 나타낸다.

도 13A-C. 도 13A는 화합물 ASN 06387747의 구조를 나타낸다. 도 13B는 화합물 ICG-001(적색)의 구조를 나타낸다. 도 13C는 중첩된(superimposed) ASN 06387747(녹색) 및 ICG-001(적색)의 구조를 나타낸다. 본 발명의 어떤 구체예들에 있어서, 각 화합물은 세 개의 약물작용발생단(pharmacophore) 환을 갖는다. 각 약물작용발생단 환의 중앙으로부터 측정된 거리는 플렉서블 얼라인먼트 계 산(flexible alignment calculations)에 의해 산출된 입체형태(conformation)를 기초로 할 수 있다. 이 도면에서 보이는 것처럼, F1과 F4 사이의 거리는 대략적으로 9.6Å이며, F1과 F6 사이의 거리는 대략적으로 9.2Å이며, 그리고 F4과 F6 사이의 거리는 대략적으로 10.3Å이다.

도 14A-C는 약물 민감성 카운터파트(counterparts)와 비교된 것으로서 세포질 및 핵의 β-카테닌의 수준을 면역블로팅(immunoblotting)에 의해 측정된 것(도 14A), 면역형광현미경검사(immunofluoresence microscopy)에 의하여 측정된 것(도 14B)을 나타낸다. 증가된 핵의 β-카테닌은 우성음성(dominant negative) TCF4 구성체의 사용에 의하여 차단되었다(도 14C).

도 15A-E는 MES-SA 세포에서, Wnt5a가 아닌 Wnt3a가 우성음성(dominant negative) TCF4 구성체와의 코트랜스펙션(cotransfection)에 의해 차단된 루시페라아제(luciferase) 활성을 증가시킴을 보여준다(도 15A). Wnt5a 조절 배지는 MDR-1/루시페라아제 리포터 구성체의 발현 증강을 나타내지 않는다(도 15B). MDR-1 야생형(Wild-type) HCT-116 세포 및 Hβ18(KO/*) 세포는 도 15C(MDR-1/루시페라아제 활성) 및 도 15D(RT-PCR)에 나타내진다. MDR-1 프로모터로의 TCF4 및 β-카테닌의 모집(recruitment)은 도 15E에 나타내진다.

도 16A-E는 MES-SA 세포에서 MDR-1 유전자의 전사 조절에 대한 ICG-001의 효과를 나타낸다: MDR-1/루시페라아제 활성(16A); 면역형광법(16B) 및 면역블로팅(16C)에 의한 MDR-1 단백질 발현; MES-SA/Dx5 세포(16D) 및 K562 세포(16E)에서 RT-PCR에 의한 메시지 수준.

도 17A-C는 HCT116 세포주에서의 MDR-1 전사 조절을 나타낸다: MDR-1/루시페라아제 발현(17A); ICG-001의 효과(17B); 및 CBP에 의한 MDR-1 프로모터의 점유 차단(17C).

도 18A-E는 p300과 비교한 내인성(endogenous) CBP 코액티베이터의 mRNA 수준을 나타낸다(도 18A); CBP의 수준(도 18B); p300과 β-카테닌의 결합(association)(도 18C); p300의 수준(도 18D); 및 p300 siRNA의 효과(도 18E).

도 19A-F는 K562 세포와 MES-SA/Dx5 세포를 비교한다: 성장률(19A, 19B); 설비빈(survivin) 및 사이클린(cyclin) D1에 대한 메시지 수준(19C, 19D); 및 설비빈 및 사이클린 D1에 대한 단백질 수준(19E, 19F).

도 20. RT-PCR은 MES-SA/Dx5 세포 및 K562 세포에서 Oct4, hTert, Bmi-1 및 ABCG-2의 증가된 발현을 나타낸다. Oct4 및 CD133에 대한 단백질 수준은 이들 세포주에서 증가되었다.

도 21A-D. 도 21A는 각각의 화학요법제와 조합한 ICG-001가 세포 증식/생존능력을 감소시키는데 있어서, 상기 화학요법제 단독 또는 ICG-001 단독보다 더 효과적임을 나타낸다. 도 21B는: ICG-001은 CD34+ 정상 조혈세포(hematopoeitic cells)에 효과가 없다. 도 21C는: ICG-001* aka PRI-004는 500nM 농도에서 집락형성(colony formation)을 완전히 차단한다. 도 21D는 ICG-001 및 이마티닙(Imatinib)의 조합치료는 어느 한쪽의 단독 약물치료보다 집락형성 단위를 감소시켰다는 것을 나타낸다.

도 22A-E. 이마티닙(Imatinib)과 함께하거나 이마티닙이 없는, 다른 투여량 에서의 ICG-001의 효과는 도 22A 및 22B에 나타내진다. 도 22C 및 22D: 이마티닙(Imatinib)을 투약하지 않은 CML 아세포 발증(blast crisis) 환자의 골수로부터 분리된 CD34+ 세포에 있어서 β-카테닌, BMI-1, MDR-1, ABCG1, 설비빈, 및 설비빈 스플라이스 변형 델타 Ex3에 대한 RT-PCR 분석. 레퍼런스는 동일한 환자로부터 얻은 CD34- 세포이다. 도 22D: 이마티닙을 투약하지 않은 아세포 발증(blast crisis) CML 환자로부터 얻은 CD34+ 세포를 사용하여 집락형성을 평가한다. 도 22E: CD34+ 모세포(blasts)에 대한 헤마톡시린 및 에오신 염색은 0.5 μM 이마티닙 단독(위) 또는 0.5 μM 이마티닙과 ICG-001 5 μM을 조합하여 처리했다.

도 23. 도 23은 다른 농도를 사용하는 반복 실험에서 테스트된 것으로서 ICG-001에 대한 IGROV-1(도 23A), A2780(도 23B), 및 CP70(도 23C)의 민감성을 나타낸다.

도 24. 도 24는 ICG-001에 대한 난소 세포주 A2780 및 CP70의 민감성을 나타낸다.

도 25. 도 25는 ICG-001과 비교된 것으로서, SW480 세포에 대한 화합물 PRI-001, PRI-002, PRI-003, PRI-004, PRI-005, 및 PRI-006의 증가하는 농도는 효과적임을 나타낸다.

도 26. 도 26은 다양한 농도의 ICG-001, PRI-003, 및 PRI-004로 처리된 SW480 세포에서 pluc-6270 발현(루시페라아제)을 나타낸다.

도 27은 화합물 2203~2217의 화학적 구조를 나타낸다.

발명의 상세한 설명

본 발명은 암세포, 특히 암 줄기세포 같이 상당한 자가재생(self-renewal) 가능성을 갖는 암세포의 억제 및/또는 근절을 위한 생물학적 펩티드 및 단백질의 α-헬릭스 영역의 2차 구조(또한, 여기에서 "α-헬릭스 유사체"로서 언급됨)와 유사한 구조적으로 제한된(constrained) 화합물 및 그것에 관한 화학 라이브러리에 관한 것이다.

만성기 CML의 치료를 위한 이마티닙(IGleevec) 같은 암에 대한 분자표적 약물의 개발에 있어서는 상당한 진전이 있었지만, 종국적으로 이러한 약물들은 자주 실패한다. 새로운 약물에 암 줄기세포를 근절시키는 것, 즉 문제의 뿌리를 근절하는 것이 요구되는 것은 분명하다.

체 줄기 세포(somatic stem cells) 및 암 줄기세포 사이에 몇 가지의 유사점을 발견할 수 있다(Pardal et al. Nat. Rev. Cancer. 3, 895, 2003). 체 줄기세포 및 암 줄기세포 둘다 자가재생 및 분화 능력이 부여되어 있다. 그러나, 중요한 차이는 존재한다. 체 줄기세포가 정상조직으로 분화하는 반면, 암 줄기세포는 비정상적으로 분화한다(Reya et al, Nature 2001, 414, 105-111). 많은 암의 클론 기원(clonal origin)에도 불구하고, 대부분의 주요 종양들은 주목할 만한 정도의 세포 이질성을 나타낸다. 그러므로, 현대 화학요법들이 종양 내에서 대다수의 세포들을 죽이지만, 암 줄기세포가 자주 잔존한다는 것으로 믿어지고 있다. ATP-결합 카세트(ABC) 복합약물내성(MDR) 전달체는 화학요법으로부터 암 줄기세포의 보호에 있어서 중요한 역할을 하는 것으로 믿어진다(Dean et al, Nat. Rev. Cancer 5, 275, 2005). P-글리코프로테인(Pgp)의 과발현, 화학요법제의 다양한 에너지-의존 유출 펌프(efflux pumps), 복합약물내성 종양 세포로의 귀착은 20년 전 이전에 처음으로 설명되었다(Ling V. Cancer Chemother. Pharm. 40, S3-8, 1997; Sharom, F.J.J. Membr. Biol. 160, 161-175, 1997). MDR1은 "TATA-less" 유전자이며, 유전자의 인접 프로모터 부위(proximal promoter region) 내의 교감 TATA 박스(a censensus TATA box)가 결핍된 단백질의 그룹에 속한다(Cornwell, M.M. Cell Growth Differ. 1, 607-615, 1990). 약물에 대한 세포 내성을 위하여 선택되는 세포는 MDR1의 구조성 과발현을 자주 나타낸다. 또한, 보통 마우스의 조혈 세포로부터 Hoechst 33342의 유출은 원시전구세포에 대하여 풍성해진 음성 염색 세포(negatively staining cells)의 "부 집단(side population(SP(+))"을 증명한다(Feuring-Buske M., et al., Blood, 15:3882-9, 2001).

유전성 및 산발성 직장결장 암의 대다수에서 일반적으로 초기에 일어나는 유전자 APC(adenomatous polyposis coli)에서의 돌연변이는 전사 인자들의 T-세포 인자(TCF)/림프계 증강 인자(LEF-1) 패밀리의 구성원들과 복합체를 형성하는 β-카테닌의 핵 축적을 유도한다(8). 전사적으로 활성인 복합체를 발생시키기 위해서, β-카테닌은 기본적인 전사 장치(transcription machinery)들의 다른 구성요소들뿐만 아니라, 전사적 코액티베이터 Creb-결합 단백질(CBP) 또는 그것의 밀접하게 관련된 상동체, p300(9, 10)을 모집한다. 상기 MDR1 프로모터는 포지션-275 및 -1813 사이에 몇 개의 TCF/LEF 결합 사이트를 함유한다. TCF/β-카테닌 유도 전사에 의한 APC 돌연변이 및 증강된 MDR-1 발현 사이의 관련은 기술되어 있다(Yamada T., et al. Cancer Res. 60, 4761 -4766, 2000).

CBP 및 p300 높은 정도의 상동성 및 발현의 유사한 패턴에도 불구하고, 그들이 유전자 조절에서 독특하고 전혀 다른 역할을 한다는 것은 분명해지고 있다. 여기에 개시된 데이터는 siRNA, ChIP 분석 및 화학유전학 도구(chemogenomic tool) ICG-001을 이용하여 얻어졌으며, 상기 ICG-001은 선택적으로 β-카테닌/CBP 상호작용을 방해하지만, 상응하는(corresponding) β-카테닌/p300 의 상호작용을 방해하지는 않아서(Emami et al PNAS, 2004), 그것에 의해 설비빈(survivin)을 포함하는 Wnt/β-카테닌에 의해 조절되는 유전자 발현의 서브세트에 간섭한다(Ma et al Oncogene 2005). 본 개시는 TCF/β-카테닌/CBP 유도 유전자 발현이 MDR-1 전사를 위해 필수적이라는 것을 증명한다. 더 나아가서, 더 넓은 배경에서, 상기 개시는 CBP/β-카테닌 유도 전사 카세트는 "암 줄기세포-유사(cancer stem cell-like)" 프로파일(profile)의 발현에 결정적이라는 것을 나타낸다.

배아 줄기세포는 시험관내 및 생체내에서 즉시 증식할 수 있다. 생체내에서(In vivo), 만약 그들이 피하, 근육내, 또는 고환으로 주사된다면 그들은 성숙한 쥐에서 기형암종-유사체 종양을 형성할 수 있다(Thomson, J.A., et al., Science 282:1145-7:1998; Odorico, J.S., Stem Cells 19:193- 204, 2001; Chung, Y., et al., Nature 439:216-9, 2006). 따라서, hES 세포-기반 치료는 원하지 않는 종양 형성을 유도할 수 있다.

잔류 미분화 ES 세포를 가지고 있는 이식물질의 오염을 제거하기 위하여, 두 개의 다른 접근이 보고되었다. 하나의 경우에, 미분화 ES 세포에 유독한 화합물로 제조된 세포 주(engineered cell lines)에서 ES 세포-특이적 발현이 이용되며 상기 배양조건은 발현을 허락하도록 변경된다. 이 접근은 이식 전에 혼합된 세포 개체군으로부터 마우스 ES 세포를 제거하기 위해(Billon, N., et al., J Cell Sci, 115: 3657- 65, 2002), 그리고 이식한 다음에 상기 분화된 줄기세포에서 자살 유전자를 발현시키기 위하여 사용되었다(Schuldiner, M., J., Stem Cells 21:257-65, 2003). 다른 접근에서, 혼합된 세포 개체군은 ES 세포의 세포자멸(apoptosis)을 선택적으로 유도하기 위하여 세라마이드 유사물 N-올레오일 세리놀(ceramide analogue N-oleoyl serinol)(S18)로 처리된다(Bieberich, E., et al., J Cell Biol. 167:723-34, 2004). 이 경우에, ES 줄기 및 ES-유래 신경 줄기세포를 둘다 함유한 혼합 개체군의 이식 후에 수반하는 기형암종의 형성은 방해되었다(Bieberich, E., et al., J Cell Biol 167:723- 34, 2004).

여기에서 개시된 화합물과 방법은 이식 전에 기형종-형성 줄기 세포를 제거하기 위한 다른 옵션을 제공한다. 유리한 점은 그 치료가 사용될 투여량에서 인간에게 독성이 없는 미량을 사용했다는 것이다.

그 합성 및 구조적으로 제한된(constrained) α-헬릭스 유사체 및 그들의 질환에 대한 적용의 확인은 Walensky, L.D. et al Science 305, 1466, 2004; and Klein, C. Br . J, Cancer . 91, 1415, 2004에서 논의된다. 이 발표는, 다른 화학요법제와 조합하여, CBP/β-카테닌 상호작용을 길항하는 것에 의하여 암 줄기세포를 약물 표적화(targeting)하는 것은, 설비빈(survivin) 같은 항-세포자멸 유전자의 전사를 감소시키는 것에 의하여 보통의 화합요법제에 내성이 있는 암 줄기세 포를 제거할 뿐만 아니라, 화학요법제에 정상적으로 민감한 다른 암세포를 죽이는 것에 대한 부가적인 효과도 갖는다는 것을 더 증명한다.

실시예들에서 상세하게 나타낸 바와 같이, 여기에 개시된 화합물 ICG-001은 독소루빈-내성 난소 육종주 MES-SA/Dx5 및 CML 유도 세포주 K562에서 MDR-1/루시페라아제 활성을 감소시켰다. 이들 세포주에서, 세포질 및 핵의 β-카테닌의 수준 증가가 있다. 이 활성화된 Wnt/β-카테닌 경로는 세포주에서 다중 내성 유전자의 활성화를 두 배로 유도한다.

MDR-1/루시페라아제 활성을 감소시키는 것에 의해, ICG-001은 환자 CML 세포에 대한 테스트를 위한 하나의 후보였다. 그 실시예들은 이마티닙과 조합된 ICG-001은 어느 한쪽의 약물 단독과 비교하여 총 집락형성 단위(colony forming units)를 감소시킨다는 것을 더 나타낸다. 형태학상의 시험은 치료된 집락들은 분화가 증가된 상태를 갖는다는 것을 나타냈다.

난소 육종 및 CML 유도 세포에 대하여 효과적인 것에 더하여, ICG-001은 다른 난소 세포주 및 흑색종 B16 세포를 얻기 위한 세포에서 줄기세포 마커들(markers)을 감소시켰다. ICG-001 및 PRI-001, PRI-002, PRI-003, PRI-004, PRI-005, 및 PRI-006을 포함하는 몇 개의 다른 화합물들은 SW480 세포, 장(관)의 암종(intestinal carcinoma)으로부터 유도된 세포주에서 CBP와 β-카테닌 상호작용을 억제하였다.

여기에 개시된 화합물로 치료를 받을 수 있는 암의 넓은 범위는 몇 개의 암-관련 성과에서 β-카테닌의 역할과 일치한다. 이들은 설비빈의 발현, MDR-1의 발 현, 및 암 줄기세포 개체군의 유지를 포함한다.

그러므로, 여기서 화합물 및 방법은 급성림프성백혈병, 급성비림프성백혈병, 부신피질암, 방광암, 뇌암, 유방암, 자궁경부암, 만성림프성백혈병, 만성골수성백혈병, 결장직장암, 피부 T 세포림프종, 자궁내막암, 식도암, 유잉 육종(Ewing's sarcoma), 쓸개암, 유모세포 백혈병(hairy cell leukaemia), 두경부암, 호지킨 림프종(hodgkin's lymphoma), 카포지 육종(Kaposi's sarcoma), 신장암, 간암, 폐암(소세포 및/또는 비소세포), 악성복막삼출(malignant peritoneal effusion), 악성흉막삼출(malignant pleural effusion), 흑색종, 중피종, 다발골수종, 신경모세포종, 비호지킨 림프종(non-hodgkin's lymphoma), 골육종, 난소암, 난소(배아세포)암, 췌장암, 음경암, 전립선암, 망막모세포종, 피부암, 연조직 육종(soft-tissue sarcoma), 편평세포암종, 위암, 고환암, 갑상선암, 영양모아세포성종양(trophoblastic neoplasms), 자궁암, 질암, 음문암(cancer of the vulva), 및 윌름즈종양(Wilm's tumor)을 포함하는(이에 제한되지 않는다) 암의 치료용으로 적절하다.

본 발명의 α-헬릭스 유사체 구조물은 진단제, 예방제 및/또는 치료제로서의 용도(이에 한정되지 않는다)를 포함한 생체활성제로서 유용하다. 본 발명의 α-헬릭스 유사체 구조물 라이브러리는 이러한 생체활성제의 확인에서 유용하다. 본 발명의 실시에서, 라이브러리는 수십으로부터 수백 내지 수천(또는 그 이상)에 이르는 개개의 α-헬릭스 구조(또한, 여기에서 "구성원"이라 불린다)를 함유할 수 있다.

본 발명의 하나의 실시양상에서, 다음 일반식(I)을 갖는 α-헬릭스 유사체 구조 및 그의 입체이성질체가 개시된다:

상기 식에서 A는 -(C=O)-CHR₃- 또는 -(C=O)-이고, B는 N-R₅- 또는 -CHR₆-이고, D는 -(C=O)-(CHR₇)- 또는 -(C=O)-이고, E는 -(ZR₈)- 또는 -(C=O)-이고, G는 -(XR₉)n-, -(CHR₁₀)-(NR₆)-, -(C=O)-(XR₁₂)-, -(C=N-W-R₁)-, -(C=O)-, X-(C=O)-R₁₃, X-(C=O)-NR₁₃R₁₄, X-(SO₂)-R₁₃, 또는 X-(C=O)-OR₁₃이고, W는 -Y(C=O)-, -(C=O)NH-, -(SO₂)-, -CHR₁₄, (C=O)-(NR₁₅)-, 치환 또는 비치환된 옥사디아졸, 치환 또는 비치환된 트리아졸, 치환 또는 비치환된 티아디아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로옥사졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로티아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로이미다졸, 또는 부존재(nothing)이고, Y는 산소 또는 황이고, X 및 Z은 독립적으로 질소 또는 CH이고, n은 0 또는 1이고; 그리고 R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃, R₁₄ 및 R₁₅는 동일하거나 상이하고, 아미노산 측쇄 부분(moiety) 또는 그의 유도체, 상기 분자의 잔여부분(remainder), 링커(linker) 및 고체 지지체(solid support)로부터 독립적으로 선택된다.

보다 구체적으로, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃, R₁₄ 및 R₁₅는 아미노C₂ _- ₅알킬, 구아니디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₄알킬구아니디노C₂ _- ₅알킬, 디C₁ _- ₄알킬구아니디노C_2- ₅알킬, 아미디노C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₄알킬아미디노C₂ _- ₅알킬, 디C₁ _- ₄알킬아미디노C_2-5알킬, C₁ _- ₃알콕시, 페닐, 치환된 페닐(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 벤질, 치환된 벤질(여기서 벤질 상의 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 나프틸, 치환된 나프틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 비스-페닐 메틸, 치환된 비스-페닐 메틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C_1-4알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적 으로 선택된다), 피리딜, 치환된 피리딜(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜C₁ _- ₄알킬, 치환된 피리딜C_1-4알킬(여기서 피리딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리미딜C₁ _- ₄알킬, 치환된 피리미딜C₁ _-4알킬(여기서 피리미딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 트리아진-2-일-C₁ _- ₄알킬, 치환된 트리아진-2-일-C₁ _-4알킬(여기서 트리아진 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸C₁ _- ₄알킬, 치환된 이미다졸 C₁ _-4알킬(여기서 이미다졸 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C₁ _- ₄알킬아미노, C₁ _- ₄디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₄알킬, C₁ _- ₃알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴, 히드록실 또는 메틸 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸리닐C_1- ₄알킬, N-아미디노피페라지닐-N-C₀ _- ₄알킬, 히드록시C₂ _- ₅알킬, C₁ _- ₅알킬아미노C_2- ₅알킬, C₁ _- ₅디알킬아미노C₂ _- ₅알킬, N-아미디노피페리디닐C₁ _- ₄알킬 및 4-아미노사이클로헥실C_0- ₂알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.

하나의 구체예에서, E의 R₁, R₂ 및 R₆ 및 G의 R₇, R₈ 및 R₉은 같거나 또는 다르고 상기 화합물의 잔여부분을 나타내고, A의 R₃, B의 R₄, 또는 D의 R₅는 아미노산 측쇄 부분 또는 그의 유도체로부터 선택된다. 여기에서 사용된 것처럼, 상기 용어 "상기 화합물의 잔여부분"은 R₁, R₂, R₅, R₆, R₇, R₈ 및/또는 R₉ 위치에서 상기 α-헬릭스 유사체 구조에 공유결합된 어떠한 부분, 약물(agent), 화합물, 지지체, 분자, 링커, 아미노산, 펩타이드, 또는 단백질을 의미한다. 이 용어는 또한 아미노산 측쇄 부분 및 그의 유도체를 포함한다.

여기에서 사용된 용어 "아미노산 측쇄 부분"은 표 1에서 확인되는 천연 아미노산 측쇄 부분을 포함한(이에 한정되지는 않는다) 천연 단백질에 존재하는 어떠한 아미노산 측쇄 부분을 나타낸다. 본 발명의 다른 아미노산 측쇄 부분은 3,5-디브로모티로신, 3,5-디요오도티로신, 히드록시리신, γ-카르복시글루타메이트, 포스포티로신 및 포스포세린의 측쇄 부분을 포함한다(이에 한정되지 않는다). 또한, 당화된 트레오닌, 세린 및 아스파라긴을 포함하는(이에 한정되지 않는다) 당화된 아미노산 측쇄가 또한 본 발명의 실시에서 사용될 수 있다.

아미노산 측쇄 부분
아미노산 측쇄 부분	아미노산
-H	글리신
-CH₃	알라닌
-CH(CH₃)₂	발린
-CH₂CH(CH₃)₂	류신
-CH(CH₃)CH₂CH₃	이소류신
-(CH₂)₄NH₃ ⁺	리신
-(CH₂)₃NHC(NH₂)NH₂ ⁺	아르기닌
	히스티딘
-CH₂COO^-	아스파르트산
-CH₂CH₂COO^-	글루타민산
-CH₂CONH₂	아스파라긴
-CH₂CH₂CONH₂	글루타민
	페닐알라닌
	티로신
	트립토판
-CH₂SH	시스테인
-CH₂CH₂SCH₃	메티오닌
-CH₂OH	세린
-CH(OH)CH₃	트레오닌
	프롤린
	히드록시프롤린

천연 아미노산 측쇄 부분에 더하여, 본 발명의 아미노산 측쇄 부분은 또한 다양한 그의 유도체들을 포함한다. 여기에서 사용된 아미노산 측쇄 부분의 "유도체"는 천연 아미노산 측쇄 부분의 변형 및/또는 변화를 포함한다. 예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신 및 페닐알라닌의 아미노산 측쇄 부분은 일반적으로 저급 알킬, 아릴, 또는 아릴알킬 부분(moieties)로 분류될 수 있다. 아미노산 측쇄 부분의 유도체는 다른 직쇄 또는 분지쇄의, 사이클릭 또는 비사이클릭, 치환된 또는 비치환된, 포화된 또는 포화되지 않은 저급 알킬, 아릴, 또는 아릴알킬 부분을 포함한다.

여기에서 사용된 "저급 알킬 부분"은 1-12개의 탄소원자를 포함하고, "저급 아릴 부분"은 6-12개의 탄소원자를 포함하고 "저급 아랄킬 부분"은 7-12개의 탄소원자를 포함한다. 그러므로, 하나의 구체예에서, 아미노산 측쇄 유도체는 C₁ _-12알킬, C₆ _-12아릴 및 C₇ _-12아릴알킬로부터 선택되고, 더욱 바람직한 구체예에서는 C₁ _-7알킬, C₆ _-10아릴 및 C₇ _-11 아릴알킬로부터 선택된다.

본 발명의 아미노산 측쇄 유도체는 추가로 저급 알킬, 아릴, 및 아릴알킬 부분의 치환 유도체를 포함하고, 여기서 치환기는 다음의 화학적 부분 중 하나 이상으로부터 선택된다(이에 한정되지 않는다): -OH, -OR, -COOH,-COOR, -CONH₂, -NH₂, -NHR, -NRR, -SH, -SR, -SO₂R, -SO₂H, -SOR 및 할로겐(F, Cl, Br 및 I 포함), 여기서, 각 R의 존재는 직쇄 또는 분지쇄의, 사이클릭 또는 비사이클릭, 치환된 또는 비치환된, 포화된 또는 포화되지 않은 저급 알킬, 아릴 또는 아랄킬 부분(moiety)으로부터 독립적으로 선택된다. 더욱이, 본 발명의 사이클릭 저급 알킬, 아릴, 및 아릴알킬 부분은 티오펜, 피롤, 푸란, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 피라졸, 3-피롤린, 피롤리딘, 피리딘, 피리미딘, 푸린, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 및 카바졸과 같은 헤테로사이클릭 화합물뿐만 아니라, 나프탈렌을 포함한다. 아미노산 측쇄 유도체는 추가로 알킬 및 아랄킬 포스포네이트 및 실란을 포함하는(이에 한정되지 않는다) 저급 알킬 및 아랄킬 부분의 알킬 부분의 헤테로알킬 유도체를 포함한다.

대표적인 R₁, R₂, R₅, R₆, R₇, R₈, 및 R₉ 부분은 특히 -OH, -OR, -COR, -COOR, -CONH₂, CONR, -CONRR, -NH₂, -NHR, -NRR, -SO₂R 및 -COSR을 포함하고(이에 한정되지 않는다), 여기서 각 R의 존재는 상기에서 정의한 바와 같다.

또 다른 구체예에서, 아미노산 측쇄 부분 또는 그의 유도체(또는 R₁, R₂, R₅, R₆, R₇, R₈, 및 R₉의 경우 상기 화합물의 잔여부분)가 되는 것에 더해, R₁, R₂, R₅, R₆, R₇, R₈, 또는 R₉은 다른 부분 또는 화합물에 상기 화합물의 결합을 촉진시키는 링커가 될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 진단 또는 스크리닝 분석을 위한 비오틴과 같은 하나 이상의 공지된 화합물과 결합될 수 있다. 더 나아가서, R₁, R₂, R₅, R₆, R₇, R₈, 또는 R₉은 고체지지체(예를들어, 고체상 펩타이드 합성에서 사용되는 지지체)에 화합물을 결합시키는 링커가 되거나, 선택적으로 지지체 자체가 될 수 있다. 이러한 구체예에서, 또 다른 부분 또는 화합물, 또는 고체 지지체에 대한 결합은 R₁, R₂, R₇ 또는 R₈ 위치가 바람직하고, R₁ 또는 R₂ 위치가 더욱 바람직하다.

상기 구체예에 있어서, A는 -(C=O)-(CHR₃)-이고, B는 -N-R₄이고, D는 -(C=O)-이고, E는 -(ZR₆)-이고, G는 -(C=O)-(XR₉)-이고, 본 발명의 α-헬릭스 유사체 화합물은 다음 일반식(III)을 갖는다:

상기 식에서, R₁, R₂, R₄, R₆, R₇, R₈,W 및 X는 상기 정의한 바와 같으며, Y는 -(C=O)-, -(C=O)-O-, -(C=O)-NR₈, -SO₂-, 또는 부존재(nothing)이고, Z는 질소 또는 CH(Z가 CH일 때, X는 질소이다)이다. 하나의 바람직한 구체예에서, 상기 R₁, R₂, R₆, R₇, 및 R₈은상기 화합물의 잔여부분(remainder)을 나타내며, R₄는 아미노산 측쇄 부분(moiety)으로부터 선택된다. 보다 특정한 구체예에서, 상기 A는 -0-CHR₃-이고, B는 -NR₄-이고, D는 -(C=O)-이고, E는 -(ZR₆)-이고, G는(XR₇)_n-이고, 본 발명의 α-헬릭스 유사체 화합물은 다음 일반식(IV)를 갖는다:

상기 식에서, R₁, R₂, R₄, R₆, R₇, W, X 및 n은 상기 정의한 바와 같으며, Z는 질소 또는 CH(Z가 질소일 때, n은 0이고, Z가 CH일 때, X는 질소이고 n은 0이 아니다.). 하나의 바람직한 실시태양에서, R₁, R₂, R₆, 및 R₇은 그 상기 화합물의 잔여부분(remainder)을 나타내고, R₄는 아미노산 측쇄 부분(moiety)으로부터 선택된다. 이 경우에, Z과 X가 각각 CH 일때, R₆ 및 R₇은 아미노산 측쇄 부분(moiety)으로부터 선택될 수 있다.

구조(I)의 구체예에서, 상기 A는 -(C=O)-이고, B는 -(CHR₆)-이고, D는 -(C=O)-이고, E는 -(ZR₈)-이고, G는 -(NH)- 또는 -(CH₂)-이고, W는 치환 또는 비치환된 옥사디아졸, 치환 또는 비치환된 트리아졸, 치환 또는 비치환된 티아디아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로옥사졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로티아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로이미다졸이고, 본 발명의 α-헬릭스 유사체 화합물은 다음 일반식(V)를 갖는다:

본 발명의 선택적인 구체예는 다음 일반식(VI)을 갖는 화합물 및 그의 입체이성질체에 관한 것이다:

상기 식에서 B는 -(CHR₃)- 또는 -(NR₃)-이고, E는 -(CHR₄)-이고, V는 -(XR₅)- 또는 부존재이고, W는 -(C=O)-(XR₆R₇), -(SO₂)-, 치환 또는 비치환된 옥사디아졸, 치환 또는 비치환된 트리아졸, 치환 또는 비치환된 티아디아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로옥사졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로티아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로이미다졸이고, X는 독립적으로 질소, 산소, 또는 CH이고, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, 및 R₇은 아미노산 측쇄 부분(moiety) 또는 그의 유도체, 상기 분자의 잔여부분(remainder), 링커 및 고체 지지체로부터 독립적으로 선택된다.

일반식(VI)의 구체예에서, 상기 V는 -(XR₅)- 또는 부존재이고, W는 치환 또는 비치환된 옥사디아졸, 치환 또는 비치환된 트리아졸, 치환 또는 비치환된 티아디아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로옥사졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로티아졸, 치환 또는 비치환된 4,5 디하이드로이미다졸이고, X는 독립적으로 질소 또는 CH이고, 그 화합물은 다음 일반식(VII)을 갖는다:

상기 식에서 K는 질소, 산소, 또는 황이고, L은 질소, 산소, -(CH)-, 또는 -(CH₂)-이고, J는 질소, 산소, 또는 황이고, R₂ 및R₅는 상기 정의한 바와 같다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 구조 I 내지 VII에서 R₂는 일차 또는 이차 아민 같은 기본 부분으로 치환된 페닐 또는 나프틸 그룹 같은 방향족 환 치환체를 포함한다. 그 방향족 환 치환체는 또한, 푸린 또는 인돌 같은 헤테로 사이클일 수 있다. 또한, 본 발명의 몇몇 구체예는 하나 또는 두개의 할로겐 부분으로 치환될 수 있는 방향족 환 치환체를 제공한다.

많은 α-헬릭스 유사체 화합물의 특징은 "최적화된 화학적 공간"으로 언급되는, 특정(specific)의, 공간적으로 한정된 배향(spatially-defined oriention)의 약물작용발생단 환(pharmacophore rings)으로 언급될 수 있는 세 개의 소수성 작용기가 위치한 스캐폴딩(scaffolding)을 제공하는 것이다. 상기 최적화된 화학적 공간은 삼각형의 세 꼭지점을 형성하는 세 개의 작용기의 중심을 갖는 삼각형일 수 있다. 최적화된 화학적 공간의 하나의 예는 상기 삼각형의 세 변의 길이가 약 9.6±0.5 옹스트롬(이하에서 "Å"로 나타냄), 9.2±0.5 Å, 및 10.3±0.5 Å인 것이다. 도 13은 공간에서 삼각형을 형성하는 그러한 약물작용발생단 환 세 개를 갖는 두 개의 겹쳐진 구조를 나타낸다. 다수의 다른 화합물들이 이러한 최적화된 화학적 공간을 나타내며, 이러한 화합물들은 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 고려될 수 있다.

본 발명의 일반식(I)의 화합물은 그의 치환체에 의존하는 하나 이상의 비대칭 탄소(asymmetric carbons)를 갖는다. 예를 들면, 일반식(I)의 화합물이 하나 이상의 비대칭 탄소를 함유하는 경우에, 비대칭 탄소의 수가 1일 때 두 종류의 광학 이성질체가 존재하며, 그리고 비대칭 탄소의 수가 2일 때, 4 종류의 광학 이성질체 및 2 종류의 부분입체이성질체 존재한다. 광학이성질체 및 부분입체이성질체를 포함하는 순수 입체이성질체, 임의의 혼합물, 라세미체(racemates), 및 입체이성질체 같은 것은 모두 본 발명의 범위에 속한다. 라세미체 같은 혼합물은 때때로 생산을 위한 용이성의 관점에서 바람직할 수 있다.

본 발명의 일반식(I)의 화합물이 아미노기 같은 기초 작용기를 함유할 때, 또는 본 발명의 일반식(I)의 화합물이 그 자체로 염기성을 갖는 방향족 환(예를 들면, 피리딘 환)을 함유하는 경우, 그 화합물은 공지의 방법에 의해 약제학적으로 허용가능한 염(염산 및 황산 같은 무기산 염 또는 초산 및 시트릭산 같은 유기산염)으로 전환될 수 있다. 본 발명의 일반식(I)의 화합물이 카르복실기 또는 페놀릭 히드록실기(phenolic hydroxyl group) 같은 산성 작용기를 함유하는 경우, 그 화합물은 공지의 방법에 의해 약제학적으로 허용가능한 염(나트륨, 암모니아 등의 무기염, 또는 트리에틸아민 등의 유기염)으로 전환될 수 있다. 본 발명의 일반식(I)의 화합물이 페놀릭 히드록실기(phenolic hydroxyl group) 같은 전구약물 이 될 수 있는(prodrugable) 작용기를 함유하는 경우, 그 화합물은 공지의 방법에 의해 전구약물(예를 들면, 아세틸레이트 또는 포스포네이트)로 전환될 수 있다. 어떠한 약제학적으로 허용가능한 염 및 전구물질이라도 모두 본 발명의 범위에 속한다.

본 발명에 의해 개시된 다양한 화합물은 재결정 및 다양한 크로마토그래피 기술(컬럼 크로마토그래피, 플래시 컬럼 크로마토그래피, 박막 크로마토그래피, HPLC(high performance liquid chromatography)) 같은 공지의 방법에 의해 정제될 수 있다.

본 발명의 α-헬릭스 유사체 구조물은 적절한 출발 성분 분자들(이하에서 "구성 단편들"로 불린다)을 사용하는 것에 의해 제조될 수 있다. 요컨대, 일반식(II)를 갖는 α-헬릭스 유사체 구조물의 합성에 있어서, 제1 및 제2 구성 단편을 짝지어서 결합된 제1-제2 중간체를 형성하고, 필요에 따라, 제3 및/또는 제4 구성 단편을 짝지어서 결합된 제3-제4 중간체(또는 상업적으로 입수 가능한 경우, 단일 제3 중간체가 사용될 수 있음)를 형성하고, 결합된 제1-제2 중간체 및 제3-제4 중간체(또는 제3 중간체)를 짝지어서, 본 발명의 α-헬릭스 유사체 구조물을 수득하기 위하여 폐환된 제1-제2-제3-제4 중간체(또는 제1-제2-제3 중간체)를 제공한다. 선택적으로, 일반식(II)의 상기 α-헬릭스 유사체 구조물은 개개의 구성 단편들을 용액 중에서 단계별로 순차적으로 짝짓거나 또는 고체상 펩티드 합성에서 통상 실시되는 고체상 합성에 의하여 제조될 수 있다.

본 발명 전후 관계 내에서, "제1 구성 단편"은 다음 일반식 S1을 갖는다:

상기 식에서, R₂는 상기 정의한 바와 같고, R은 펩티드 합성에 사용하기에 적절한 보호그룹이다. 적합한 R그룹은 알킬 그룹을 포함하며, 바람직한 구체예에서, R은 메틸 그룹이다. 이러한 제 1 구성 단편은 환원적 아민화 또는 CH(OR)₂-CHO 또는 CH(OR)₂-CH₂-Hal(여기서, Hal은 할로겐 원자를 의미한다)로부터 H₂N-R₂의 치환에 의한 치환반응에 의해 쉽게 합성될 수 있다.

본 발명의 "제 2 구성 단편"은 다음 일반식(S2)를 갖는다:

상기 식에서, L₁은 할로겐 원자와 같은 카르복실-활성화 기이고, R₃, R₄는 상기 정의한 바와 같고, P는 펩타이드 합성에서 사용되기 위한 적절한 아미노 보호기이다. 바람직한 보호기는 t-부틸 디메틸실릴(TBDMS), t-부틸옥시카르보닐(BOC), 메틸로시카르보닐(MOC), 9H-플루오레닐메틸옥시카르보닐(FMOC), 및 알릴옥시카르보닐(Alloc)을 포함한다. L이 -C(O)NHR일 때, -NHR은 카르복실 보호기일 수 있다. N-보호 아미노산은 상업적으로 시판되고 있다. 예를 들면, FMOC 아미노산은 다양한 공급원으로부터 시판된다. 이러한 화합물의 본 발명의 제2 구성 단편으로의 전환은 상기 N-보호 아미노산의 카르복실산 기를 활성화시키는 것에 의하여 용이하게 달성될 수 있다. 적절히 활성화된 카르복실산 기는 X가 클로라이드 또는 브로마이드 같은 할로겐화물인 산 할로겐화물(acid halide), X가 아세틸과 같은 아실기인 산무수물, N-히드록시 숙신이미드 에스테르 및 펜타플루오로페닐 에스테르와 같은 반응성 에스테르, 및 디사이클로헥실카르보디이미드(DCC) 같은 카르보디이미드를 사용하여 커플링 반응에서 형성된 활성 중간체 같은 기타 활성화된 중간체를 포함한다.

제2 구성 단편으로 작용하는 아미노산의 아지도(azido) 유도체의 경우에, 이러한 화합물은 잘룸(Zaloom)등(J. Org . Chem . 46:5173-76, 1981)에 개시된 반응에 의해 상응하는 아미노산으로부터 제조될 수 있다.

본 발명의 "제 3 구성 단편"은 다음 일반식(S3)를 갖는다:

상기식에서, G,E 및 L₁은 상기 정의한 바와 같다. 적절한 제 3 구성 단편은 다양한 공급원으로부터 시판되거나 유기화학에서 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다.

더욱 상세하게, 일반식(II)의 본 발명의 α-헬릭스 유사체 구조물은 제1 구성 단편을 제2 구성 단편과 반응시켜서 결합된 제1-제2 중간체를 얻고, 다음 결합된 제1-제2 중간체를 제3 구성 단편과 순차적으로 반응시켜서 결합된 제1-제2-제3-제4 중간체를 만들고, 이 중간체를 고리화시켜서 α-헬릭스 유사체 구조물 수득함으로써 합성된다.

구조 I'을 갖는 α-헬릭스의 일반적인 합성은 다음의 기술에 의해서 수행될 수 있다. 하기 도시된 바와 같이, 제1 구성 단편(1)을 포스겐(phosgene)과 같은 결합 시약을 사용하여 제2 구성 단편(2)과 결합시켜서, N-탈보호 후에, 결합된 제 1-제2 중간체(1-2)를 수득한다.

상기 식에서, R₁, R₂, R₄, R₇,Fmoc, Moc 및 X는 상기 정의한 바와 같으며, Pol은 중합체 지지체를 나타낸다.

본 발명의 대표적인 구성 단편들의 합성은 실시예에 기재되어 있다.

일반식(III) 및(IV)의 α-헬릭스 유사체 구조물은 상기 구성 단편들을 적절히 변형하는 것을 제외하고는 상기 기술된 단위 구성 요소의 합성과 유사한 기술에 의해 제조될 수 있다.

상기한 바와 같이, 칸(Kahn)등의 USP 6,013,458호의 리버스-턴 유사체는 진단제, 예방제 및 치료제와 같은 생체활성제로서 유용하다. 대표적인 리버스-턴 유사체들의 아편 수용체 결합 활성은 상기 USP 6,013,458호의 실시예 9에 나타나 있는데, 여기에서 이러한 발명의 리버스-턴 유사체들은 방사성 표지 엔케팔린(radiolabeled enkephalin) 유도체가 δ 및 μ 아편 수용체에 결합하는 것을 효과적으로 억제하는 것으로 밝혀졌고, 그의 데이터는 수용체 효능제 및 잠재적인 진통제로서의 이러한 리버스-턴 유사체의 유용성을 입증한다.

본 발명의 α-헬릭스 유사체 구조물은 진단제, 예방제 및 치료제와 같은 생체활성제로서 유용하다.

그러므로, 본 발명에 따른 화합물들은 α-헬릭스 유사체 구조이기 때문에, 일반식(I)의 화합물의 유효량을 온혈동물에게 투여하는 것을 포함하여, 온혈동물에서 세포 신호전달 전사 인자 관련 펩티드를 조절하는데 유용할 수 있다. 인간의 치료에 유용한 것 외에, 본 발명의 화합물은 또한, 개, 고양이, 말, 소, 양, 및 돼지(이에 한정되지 않음) 같은 애완용 동물 및 농장 동물을 포함하여 포유동물의 수의 치료(veterinary treatment)에 유용하다.

더 나아가서, 본 발명의 α-헬릭스 유사체 구조물은 또한, 전사 인자/코액티베이터(coactivator) 및 전사 인자 코리프레서(corepressor) 상호작용을 억제하는데에 효과적일 수 있다.

본 발명의 다른 양태에서, 본 발명의 α-헬릭스 유사체 구조를 함유하는 라이브러리들이 개시된다. 일단 조립되면, 본 발명의 라이브러리들은 생체활성을 갖는 개별적인 구성원들을 확인하도록 스크리닝 될 수 있다. 생체활성 구성원들에 대한 라이브러리의 이러한 스크리닝은, 예를 들어, 라이브러리의 구성원들의 결합 활성을 평가하거나 또는 라이브러리 구성원들이 기능성 평가에 대하여 갖는 영향을 평가하는 것을 수반할 수 있다. 스크리닝은 라이브러리 구성원(또는 라이브러리 구성원들의 서브셋)을, 예를 들어, 항체, 효소, 수용체 또는 세포주와 같은 관심의 표적에 접촉시킴으로써 정상적으로 달성된다. 관심의 표적과 상호작용할 수 있는 라이브러리 구성원들은 여기에서 "생체활성 라이브러리 구성원들" 또는 "생체활성 유사체"로 언급한다. 예를 들면, 생체활성 유사체는 항체 또는 수용체에 결합할 수 있거나, 효소를 억제할 수 있거나, 또는 예를 들어, 세포주와 관련된 기능적인 반응을 이끌어내거나 길항할 수 있는 라이브러리 구성원이다. 다시 말해서, 본 발명의 라이브러리들의 스크리닝은 어느 라이브러리 구성원들이 하나 이상의 생물학적 관심 표적과 상호작용할 수 있는 지를 결정한다. 또한, 상호작용이 일어나면, 생체활성 유사체(또는 유사체들)가 라이브러리 구성원들로부터 확인될 수 있다. 라이브러리로부터 단일(또는 제한된 수)의 생체활성 유사체(들)의 확인에 의해, 그 자체로 생물학적으로 활성이어서 진단제, 예방제 또는 치료제로서 유용한 α-헬릭스 유사체 구조물이 수득되고, 이는 또한 이 분야에서 선도 화합물의 확인을 상당히 진보시키기 위해 사용될 수 있다.

본 발명의 다른 양태에 있어서, 라이브러리들을 구축하기 위한 방법이 개시된다. 전통적인 조합의 화학 기술들(Gallop 등, J. Med . Chem . 37:1233-1251, 1994 참조)은 엄청난 수의 화합물들이 기본적인 분자 골격에 대한 시약들의 순차적인 결합에 의해서 빠르게 준비될 수 있게 한다. 천연 아미노산들로부터 유래된 펩타이드 라이브러리들을 구축도하도록 조합기술들이 사용되었다. 예를 들면, 20개의 적당히 보호된 상이한 아미노산들의 20개의 혼합물을 취하고 각각을 20개의 아미노산 중 하나와 결합시키는 것에 의해, 400(즉, 20²)개의 디펩타이드 라이브러리가 만들어진다. 상기 절차를 7회 반복하면, 약 260억(즉, 20⁸)개의 옥타펩타이드로 이루어진 펩타이드 라이브러리가 준비된다.

특히, 본 발명의 라이브러리의 펩타이드 유사체들의 합성은 공지된 펩타이드 합성 기술, 예를 들면 다음과 같은 [4,4,0] α-헬릭스 유사체 라이브러리의 일반적인 반응식을 사용하여 달성될 수 있다:

본 발명의 라이브러리들의 펩타이드 유사체들의 합성은 96개의 웰 플레이트를 갖는 플렉스켐 리액터 블록(FlexChem Reactor Block)을 사용하여 공지된 기술들에 의해서 달성되었다. 상기 반응식에서 'Pol'은 브로모아세탈 수지(Advanced ChemTech)를 나타내며, 상세한 절차는 아래에서 설명된다.

단계 1

브로모아세탈 수지(37mg, 0.98 mmol/g) 및 DMSO(1.4mL)중의 R₂-아민의 용액을 96개의 웰플레이트를 갖는 로빈스 블록(Robbins block, FlexChem)에 넣었다. 반응 혼합물을 회전 오븐[Robbins Scientific]을 사용하여 60℃에서 12 hr 동안 진탕시켰다. 수지는 DMF, MeOH에 이어 DCM으로 세척하였다.

단계 2

DMF 중의 입수 가능한 Fmoc 히드라진 아미노산(4 equiv.), PyBop(4 equiv.), HOAt(4 equiv.), 및 DIEA(12 equiv.)의 용액을 상기 수지에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12 hr 동안 진탕시킨 후, 수지를 DMF, MeOH에 이어DCM으로 세척하였다.

단계 3

반응 전에 DMF에 의해 팽윤된 수지에 DMF 중의 25% 피페리딘을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분동안 진탕시켰다. 이러한 탈보호 단계를 다시 반복하고, 상기 수지를 DMF, MeOH에 이어 DCM으로 세척하였다. DMF 중의 히드라진산(4 equiv.), HOBt(4 equiv.), 및 DIC(4 equiv.)의 용액을 수지에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 12 hr 동안 진탕시켰다. 수지를 DMF, MeOH에 이어 DCM으로 세척하였다.

단계 4a(여기에서, 히드라진산은 MOC 카바메이트이다)

단계 3에서 얻은 수지를 실온에서 18 hr 동안 포름산(각각의 웰에 대하여 1.2 mL)으로 처리하였다. 여과에 의해 수지를 제거한 후에, 여과액을 감압하에서 스피드백(SpeedVac, SAVANT)을 사용하여 농축시켜서, 오일 형태의 생성물을 수득하였다. 생성물을 50% 물/아세토니트릴을 사용하여 희석한 후, 동결 건조시켰다.

단계 4b(여기에서, 이소시아네이트를 통해서 우레아를 만들기 위해 Fmoc 히드라진산이 사용된다)

반응 전에 DMF에 의해 팽윤된 수지에 DMF 중의 25% 피페리딘을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 진탕시켰다. 이러한 탈보호 단계를 다시 반복하고, 수지를 DMF, MeOH에 이어 DCM으로 세척하였다. 반응 전에 DCM에 의해 팽윤된 수지에 DCM 중의 이소시아네이트(5 equiv.)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 진탕시킨 후, 수지를 DMF, MeOH에 이어 DCM으로 세척하였다. 상기 수지를 실온에서 18 hr 동안 포름산(각각의 웰에 대하여 1.2 mL)으로 처리하였다. 여과에 의해서 상기 수지를 제거한 후에, 여과액을 감압하에서 스피드백(SpeedVac, SAVANT)을 사용하여 농축시켜서, 오일 형태의 생성물을 수득하였다. 생성물을 50% 물/아세토니트릴을 사용하여 희석하고 동결건조시켰다.

단계 4c(여기에서, 활성 카바메이트를 통해서 우레아를 만들기 위해서 Fmoc-히드라진산이 사용된다)

반응전에 DMF에 의해 팽윤된 수지에 DMF중의 25% 피페리딘을 첨가하고, 반응 혼합물은 실온에서 30 min 동안 진탕시켰다. 이러한 탈보호 단계를 다시 반복하고, 수지를 DMF, MeOH에 이어 DCM으로 세척하였다. 반응전에 DCM에 의해 팽윤된 수지에 DCM 중의 p-니트로페닐 클로로포르메이트(5 equiv.)과 디이소프로필 에틸아민(5 equiv.)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12 hr 동안 진탕시킨 후에, 수지를 DMF, MeOH에 이어 DCM으로 세척하였다. 상기 수지에 DCM 중의 1차 아민을 실온에서 12시간 동안 첨가하고, 수지를 DMF, MeOH에 이어 DCM으로 세척하였다. 반응후에, 상기 수지를 실온에서 18 hr 동안 포름산(각각의 웰에 대하여 1.2 mL)으로 처리하였다. 여과에 의해서 상기 수지를 제거한 후에, 여과액을 감압하에서 스피드백(SpeedVac, SAVANT)을 사용하여 농축시켜서, 오일 형태의 생성물을 수득하였다. 생성물을 50% 물/아세토니트릴을 사용하여 희석하고 동결 건조시켰다.

이들 블록 라이브러리들(block libraries)을 생성하기 위하여, 핵심이 되는 중간체 히드라진산은 실시예들에서 설명된 절차에 따라 합성되었다.

투약 및 투여량

본 발명의 화합물은 이 분야의 당업자에게 알려진 모든 수단에 의해 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 경구, 비경구, 흡입 스프레이, 국소, 직장 투여, 비강, 협측(buccally), 질, 또는 매식 저장소(implanted reservoir)를 통하여 투여될 수 있다. 여기에서 사용되는 "비경구적"이란 용어는 피하, 정맥내, 근육내, 복막내, 수막강내, 심실내(intraventricular), 흉골내(intrasternal), 두개내(intracranial), 및 골내 주사(intraosseous injection) 및 주입 기술을 포함한다. 정확한 투여 프로토콜은 환자의 연령, 체중, 전반적인 건강상태(general health), 성별, 및 식이(diet)를 포함하는 다양한 인자에 의존하여 변경되며; 특정한 투여 절차의 결정은 이 분야의 당업자에게 일상적일 것이다.

본 발명의 화합물은 일회량, 다중 분할 투여량(multiple discrete doses), 또는 연속 주입에 의해 투여될 수 있다. 펌프 수단, 특히, 피하 펌프 수단은 연속 주입에 유용하다.

본 발명의 화합물의 약 0.001 mg/kg/d 내지 약 100 mg/kg/d에 속하는 투여량 수준은 본 발명의 방법을 위하여 유용하다. 하나의 구체예에서, 상기 투여량 수준은 약 0.1 mg/kg/d 내지 약 100 mg/kg/d이다. 다른 구체예에서, 상기 투여량 수준은 약 1 mg/kg/d 내지 약 10 mg/kg/d이다. 어느 특별한 환자를 위한 특정한 투여량 수준은 사용되는 특정 화합물의 활성 및 가능한 독성; 환자의 연령, 체중, 전반적 건강 상태(general health), 성별, 및 식이(diet); 투여 시간; 배출 속도; 약물 조합; 질병의 심각성; 및 투여의 형태를 포함하는 다양한 인자에 의존하여 변경될 것이다. 전형적으로, 시험관내의 용량-효과 결과는 환자 투약을 위한 적당한 투여량에 대한 유용한 가이드라인을 제공한다. 또한, 동물 모델에서 연구는 유용하다. 적당한 투여량 수준을 결정하기 위하여 고려할 사항들은 이 분야에 잘 알려져 있으며, 일반적인 의사가 갖는 기술에 속한다.

시간을 규칙적이 되게 하며 약물 전달의 연속을 위하여 공지된 모든 투약 요법은 본 발명의 방법에 있어서 효과적인 치료에 필요한 것으로서 사용되고 재경험될 수 있다. 상기 요법은 전처리(pretreatment) 및/또는 추가적인 치료제(들)과의 복합투여를 포함할 수 있다.

본 발명의 화합물은 단독으로 또는 동시적, 개별적, 또는 연속적인 사용을 위하여, 하나 이상의 추가적인 치료제와 조합하여 투여될 수 있다. 추가적인 치료제의 예들은, 제한 없이, 본 발명의 화합물; 스테로이드(예: 메틸프레드니솔론(methylprednisolone)과 같은 하이드로코르티손); 항염증제 또는 메토트렉세이트(methotrexate), 아자티오푸린(azathioprine), 사이클로포스파마이드, 또는 사이클로스포린 A 같은 면역억제제 ; 인터페론-β; 항-CD4 항체 같은 항체; 화학요법제; 면역요법 조성물; 전자기방사선민감물질(electromagnetics radiosensitizer); 및 몰핀을 포함한다. 본 발명의 화합물들은 하나 이상의 추가적인 치료제와 (i)단일제형 내에 함께 또는 (ii)각각의 활성 약물이 최적의 방출속도를 갖도록 디자인된 개별적인 제형에 의해서 독립적으로 복합투여될 수 있다.

상기 약제학적 조성물은 CBP/카테닌 상호작용을 차단하는 것 이외의 메카니즘에 의해 작용하는 적어도 하나의 암 화학요법제와 조합하여 여기에 개시된 적어도 하나의 화합물을 포함할 수 있다. 상기 암 화학요법은 시스-플레티넘(cis-platinum), 레티노산, 보리노스탯(vorinostat, SAHA) 같은 히스톤 디아세틸레이즈(HDAC) 억제제, 및 이마티닙으로(이에 한정되지 않는다) 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

상기 약제학적 조성물은 적어도 하나의 Her1/Her2 억제제; 노치(Notch) 억제제; 헤치혹(Hedgehog) 억제제; EGF 억제제: 및 P13K 경로 억제제 같은 경로-특이적 억제제를 포함할 수 있다. 상기 노치 억제제는 감마 세크레타제(gamma secretase) 억제제일 수 있으며, 상기 헤치혹 억제제는 사이클로파민(cyclopamine)일 수 있으며, 상기 EGF 억제제는 이레사(Iressa)일 수 있으며, 상기 P13K 경로 억제제는 라파마이신(rapamycin)일 수 있다.

약제학적 조성물

본 발명은 또한, (i)일반식 Ⅰ, Ⅱ, 또는 Ⅲ의 화합물의 유효량; 및 (ii)약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 하나 이상의 습윤제(wetting agent), 완충제, 현탁화제, 윤활제(lubricationg agent), 에멀젼화제, 붕해제, 흡수제, 보존제, 계면활성제, 착색제, 풍미제(flavorant), 감미제(sweetener), 및 추가적인 치료제를 제한 없이 포함하는, 하나 이상의 추가적인 약제학적으로 허용가능한 성분을 포함할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 다음의 것들을 위하여 고체 또는 액체 형태로 제형화될 수 있다: (1)예를들어, 드랜치(drench, 수성 또는 비수성 용액 또는 현탁액), 정제(예를 들어, 협측(buccal), 설하, 또는 전신흡수를 위하여 표적화된), 거환(bolus), 분말, 과립, 혀에 적용하기 위한 페이스트, 경질 젤라틴 캡슐, 연질 젤라틴 캡슐, 구강 스프레이, 에멀젼, 및 마이크로에멀젼 같은 경구 투여; (2)예를 들어, 피하, 근육내, 예를 들어, 무균 용액, 현탁액 같은 정맥내 또는 경막외 주사, 또는 지속 방출 제형 같은 비경구투여; (3)예를 들어, 크림, 연고, 또는 피부에 적용되는 조절-방출 패취 또는 스프레이 같은 국소 적용; (4)예를 들어, 페서리(pessary), 크림, 또는 포말(foam) 같은 질내 또는 직장내 투여; (5)설하 투여; (6)안구 투여; (7)경피 투여; 또는 (8)비강 투여.

여기에 기재된 실시예들과 구체예들은 단지 설명 목적을 위한 것이며, 그들의 관점에서 다양한 변형 및 변경이 이 분야의 당업자에게 시사될 수 있으며, 그러한 변형 및 변경은 본 출원의 정신 및 범위 내에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.

실시예 1

중간체 합성

2- Boc -아미노- 벤조티아졸일 -4-메틸아민의 합성

단계-1 (2-Boc-아미노-4-메틸벤조티아졸)

건조 THF 456 mL 중의 2-아미노-4-메틸벤조티아졸(25.0 g, 152 mmol) 용액을 20℃에서 Et₃N(42 mL, 300 mmol), (Boc)₂O(40.0 g, 183 mmol), 및 DMAP(3.7 g, 30 mmol)로 처리하고, 30℃에서 12 hr 동안 교반하였다. 상기에서 얻어진 용액을 진공 하에서 농축하고, EtOAc(200 mL)로 희석하고, EtOAc(200 mL)로 세척한 유리필터(Celite)를 통하여 여과하였다. 상기 여과액을 NaHCO₃(포화 수용액, 100 mL) 및 NaCl(포화 수용액, 100 mL)로 세척하고, MgSO₄로 건조하고, 진공 하에서 농축하였다. 상기 잔사를 톨루엔:Et₂O(15:l 내지 8:1)을 사용하여 용출시키는 실리카겔 플러그(plug)(플래시 컬럼 크로마토그래피)를 통하여 여과하여 무색 오일, 2-Boc-아미노-4-메틸벤조티아졸(41.4 g, quant.)을 수득하였다. R _f =0.4S(톨루엔:Et₂O=10:l); ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 9.75(1H, br s), 7.61(1H, d, J= 7.8 Hz), 7.19(3H, m), 2.64(3H, s), 1.47(9H, s).

단계-2 (2-Boc-아미노-4-브로모메틸벤조티아졸)

건조 CCl₄ 456 mL 중의 2-Boc-아미노-4-메틸벤조티아졸(152 mmol) 용액을 20℃에서 NBS(27.1 g, 152 mmol) 및 AIBN(3.2 g, 20 mmol)로 처리하고, 80℃에서 3.5 hr 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 NBS(7.2 g, 41 mmol) 및 AIBN(0.84 g, 5.1 mmol)로 다시 처리하고, 80℃에서 11 hr 동안 교반하였다. 상기에서 얻어진 혼합물을 20℃로 냉각하고 Et₂O(200 mL)로 세척한 유리필터(Celite)를 통하여 여과하였다. 상기 여과액을 진공 하에서 농축하였다. 상기 잔사를 톨루엔:Et₂O(20:l 내지 10:1)을 사용하여 용출시키는 실리카겔 컬럼(플래시 컬럼 크로마토그래피)를 통하여 여과하여 황색을 띠는 오일, 2-Boc-아미노-4-브로모메틸벤조티아졸(46.7 g, 136 mmol, 90%)을 수득하였다. R _f =0.51(톨루엔:Et₂O=15:l); ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 8.27(1H, br s), 7.72(1H, d, J= 8.2 Hz), 7.43(1H, d, J= 7.2 Hz), 7.24(1H, dd, J= 8.2, 7.2 Hz), 4.91(2H, s), 1.56(9H, s).

단계-3 (2-Boc-아미노-4-아지도메틸벤조티아졸)

건조 DMF 205 mL 중의 2-Boc-아미노-4-브로모메틸벤조티아졸(46.7 g, 136 mmol) 용액을 15℃에서 NaN₃(8.80 g, 136 mmol)로 처리하고, 20℃에서 45 min 동안 교반하였다. 상기에서 얻어진 혼합물을 Et₂O(400 mL)로 희석하고, 0℃에서 NaCl(H₂O 150 mL 중의 1 g)을 첨가하여 반응을 중단시켰다. 상기 용액을 Et₂O(100 mL)로 추출하였다. 상기 유기상을 NaCl(H₂O 100 mL 중의 2 g)로 두번 세척하고, MgSO₄ 로 건조하고, 진공 하에서 농축하였다. 상기 잔사를 톨루엔:Et₂O(100:0 내지 10:1)을 사용하여 용출시키는 실리카겔 플러그(plug)(플래시 컬럼 크로마토그래피)를 통하여 여과하여 무색 오일, 2-Boc-아미노-4-아지도메틸벤조티아졸(33.2 g, 109 mmol, 80%)을 수득하였다. R _f =0.48(톨루엔:Et₂O=10:l); ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 7.75(1H, d, J= 8.2 Hz), 7.37(1H, d, J= 7.2 Hz), 7.27(1H, m), 4.74(2H, s), 1.52(9H, s); ¹³C NMR(99.5MHz, CDCl₃) δ 159.8, 151.9, 147.6, 132.5, 127.6, 125.8, 123.5, 121.3, 83.4, 51.4, 28.1.

단계-4 (2-Boc-아미노-벤조티아졸일-4-메틸아민)

MeOH 183 mL 중의 2-Boc-아미노-4-아지도메틸벤조티아졸(11.6 g, 38.0 mmol) 용액을 Pd(OH)₂(탄소에 대하여 20%, 2.9 g)로 처리하고, 수소 분위기 하에 넣고, 20℃에서 1.5 hr 동안 교반하였다. 상기에서 얻어진 혼합물을 MeOH:NH₄OH(100:3, 100 mL)로 세척한 셀라이트(Celite)로 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 상기에서 얻어진 황색을 띤 고체를 톨루엔(35 mL)과 함께 분말화하고, 여과하여 무색 분말, 2-Boc-아미노-벤조티아졸일-4-메틸아민(6.90 g, 24.7 mmol, 65%)을 수득하였다. R _f = 0.32(CHCl₃:MeOH:NH₄OH=100:25:l); ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 7.67(1H, d, J= 7.7 Hz), 7.25-7.15(2H, m), 4.85(2H, br s), 1.58(9H, s); ¹³C NMR(99.5MHz, CDCl₃) δ 160.0, 152.8, 148.0, 134.5, 132.7, 124.4, 123.1, 120.0, 82.4, 44.3, 28.3; LC/MS [ESI+](m/z) 280.2(M+l)⁺.

벤조티아졸일 -4-메틸아민의 합성

단계-1 (4-메틸벤조티아졸)

1,4-디옥산 745 mL 중의 2-아미노-4-메틸벤조티아졸(24.5 g, 149 mmol) 용액을 20℃에서 이소아밀나이트릴(40.0 mL, 300 mmol)로 처리하고, 70℃에서 0.5 hr 동안 교반하였다. 질소 방출이 진정된 후에, 상기 혼합물을 동일 온도에서 1.5 hr 동안 교반하고 진공 하에서 농축하였다. 상기 잔사를 용출액으로 헥산:Et₂O(3:1 내지 2:1)를 사용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피하여 황색을 띠는 오일, 4-메틸벤조티아졸(16.0 g, 107 mmol, 72%)을 수득하였다. R _f =0.45(톨루엔:Et₂O=10:l); ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 8.98(1H, s), 7.79(1H, d, J= 6.8 Hz), 7.33(2H, m), 2.80(3H, s).

단계-2 (4-브로모메틸벤조티아졸)

CCl₄ 535 mL 중의 4-메틸벤조티아졸(16.0 g, 107 mmol)용액을 20℃에서 NBS(19.0 g, 107 mmol) 및 AIBN(2.28 g, 13.9 mmol)로 처리하고, 70℃에서 2.5 hr 동안 교반하였다. 상기에서 얻어진 혼합물을 Et₂O(150 mL)로 세척한 셀라이트(Celite)로 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 상기 잔사를 용출액으로 톨루엔:Et₂O(50:3 내지 50:5)를 사용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피하여 황색을 띠는 고체, 4-브로모메틸벤조티아졸(20.4 g, 89.9 mmol, 84%)을 수득하였다. R _f =0.61(톨루엔:Et₂O=10: 1); ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 9.07(1H, s), 7.90(1H, d, J= 7.5 Hz), 7.55(1H, d, J= 7.5 Hz), 7.41(1H, t, J= 7.5 Hz), 5.08(2H, s); ¹³C NMR(99.5MHz, CDCl3) δ 154.1, 151.4, 134.3, 132.6, 127.0, 125.6, 122.3, 29.5.

단계-3 (4-아지도메틸벤조티아졸)

건조 DMF 272 mL 중의 4-브로모메틸벤조티아졸(20.4 g, 89.9 mmol) 용액을 20℃에서 NaN₃(7.00 g, 108 mmol)로 처리하고, 동일 온도에서 5 min 동안 교반하였다. 상기에서 얻어진 혼합물을 0℃에서 NaCl(H₂O 150 mL 중 5 g)를 첨가하여 반응을 중단시키고, Et₂O(200 mL)로 희석하고, Et₂O(200 mL X 6)로 추출하였다. 상기 유기상을 NaCl(H₂O 100 mL 중 2 g)로 두번 및 염수(brine, 100 mL)로 세척하였다. 상기에서 얻어진 용액을 MgSO₄로 건조하고 진공 하에서 농축하였다. 상기 잔사를 용출액으로 톨루엔:Et₂O(50:3 내지 50:5)를 사용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피하여 무색 오일, 4-아지도메틸벤조티아졸(15.5 g, 81.5 mmol, 91%)을 수득하였다. R _f =0.48(톨루엔:Et₂O=10:l); ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 9.03(1H, s), 7.95(1H, d, J= 7.7 Hz), 7.49(2H, m), 5.01(2H, s); ¹³C NMR(99.5MHz, CDCl3) δ 154.2, 151.7, 134.3, 130.6, 126.0, 125.7, 122.1, 51.6.

단계-4 (벤조티아졸-4-메틸아민)

MeOH 243 mL 중의 4-아지도메틸벤조티아졸(15.4 g, 81.0 mmol) 용액에 Pd(OH)₂(탄소에 대하여 20%, 3.1 g)를 첨가하고, 20℃에서 수소분해반응(hydrogenolysis)을 시켰다. 1.5 hr 후에, 추가적으로 Pd(OH)₂(탄소에 대하여 20%, 0.87 g)를 첨가하고, 수소분해반응을 시켰다. 1.5 hr 후에, 추가적으로 Pd(OH)₂(탄소에 대하여 20%, 1.27 g)를 첨가하고, 1 hr 동안 수소분해반응을 시켰다. 상기에서 얻어진 혼합물을 N₂와 함께 다시 넣고 MeOH:NH₄OH(25:1, 260 mL)로 세척한 셀라이트를 통하여 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 상기 잔사를 용출액으로 CHCl₃:MeOH:NH₄OH(100:0:0 내지 20:5:1)를 사용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피하고, 톨루엔과 함께 분쇄하여 흰색 고체, 4-아미노메틸벤조티아졸(10.5 g, 63.9 mmol, 79%)를 수득하였다. R _f =0.49(CHCl₃:MeOH:NH₄OH=100:25:l); ¹H NMR(400MHz, CD₃OD) δ 9.23(1H, s), 7.97(1H, d, J= 7.7 Hz), 7.46(2H, m), 4.30(2H, s); ¹³C NMR(99.5MHz, CD₃OD) δ 184.2, 180.1, 165.3, 163.5, 154.9, 154.1, 150.1, 72.0; LC/MS [ESI+](m/z) 165.4(M+l)⁺.

4-벤질-3- Boc -2- 메틸세미카바지딜아세트산 합성

단계- 1 (4-벤질-2-메틸세미카바지드)

CHCl₃ 7.5 mL 중의 벤질 이소시아네이트(1.85 mL, 15.0 mmol) 용액을 0℃에서 메틸 히드라진(795 μL, 15.0 mmol)으로 처리하고, 동일 온도에서 2 hr 동안 교반하였다. 상기에서 얻어진 혼합물을 1N HCl(200 mL)에 용해시키고, 상기 용액을 CHCl₃(50 mL X 3)로 세척하였다. 상기 수상을 2 M NaOHaq를 사용하여 pH 12로 조절하고, CHCl₃(100 mL X 3)으로 추출하였다. 상기 유기상을 Na₂SO₄로 건조하고 진공 하에서 농축하였다. 상기 잔사를 헥산-CHCl₃에서 재결정하여 무색 결정(1.7 g, 9.5 mmol, 63%)을 수득하였다. R _f =0.44 (CHCl₃:MeOH=9:l); ¹H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 7.28-7.19(5H, m), 4.47(2H, s), 4.20(2H, d, J= 6.3 Hz), 2.96(3H, s); ¹³C NMR(99.5MHz, DMSO-d6) δ 159.3, 141.1, 128.1, 127.1, 126.5, 43.1, 37.8; LC/MS [ESI+](m/z) 180.3(M+l)^+.

단계-2 (에틸 4-벤질-2-메틸세미카바지딜아세테이트)

톨루엔(58 mL) 중의 4-벤질-2-메틸세미카바지드(5.24 g, 29.2 mmol) 용액에 DIPEA(7.63 mL, 43.8 mmol) 및 에틸 브로모아세테이트(4.86 mL, 43.8 mmol)를 첨가하고, 85℃에서 24 hr 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 두고, 그 다음에 EtOAc(100 mL)로 희석하였다. 상기 혼합물을 H₂O(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조, 여과, 및 농축하였다. 상기 비정제물(crude)을 용출액으로 Hex:EtOAc(l:1 내지 1:9)를 사용하여 실리카겔(250 g) 크로마토그래피하여 엷은 황색 오일(5.75 g, 21.7 mmol, 74%)를 수득하였다. R _f = 0.36(Hex:EtOAc=l:3); ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 7.34- 7.21(5H, m), 6.88(1H, br s), 4.40(2H, d, J= 5.8 Hz), 4.18(2H, q, J= 7.2 Hz), 3.69(1H, br t, J = 4.8 Hz), 3.58(2H, d, J= 4.8 Hz), 3.08(3H, s), 1.26(3H, t, J= 7.2 Hz); ¹³C NMR(99.5MHz, CDCl₃) δ 170.8, 159.3, 139.9, 128.6, 127.6, 127.1, 61.4, 50.1, 44.4, 33.1, 14.2; LC/MS [ESI+](m/z) 266.3(M+l)⁺.

단계-3 (에틸 4-벤질-3-Boc-2-메틸세미카바지딜아세테이트)

CH₂Cl₂(43 mL) 중의 에틸 4-벤질-2-메틸세미카바지딜아세테이트(5.70 g, 21.5 mmol) 용액에 DIPEA(7.5 mL, 43 mmol), DMAP(1.1 g, 8.6 mmol), 및 (Boc)₂O(9.4 g, 43 mmol)을 첨가하고 실온에서 1 hr 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 농축하고, 용출액으로 Hex:EtOAc(7:1 내지 1:2)를 사용하여 SiO₂(250 g) 컬럼 크로마토그래피하여 엷은(pale) 황색 오일 생성물(2.58 g, 7.06 mmol, 33%)을 수득하고, 출발물질(2.80 g, 10.6 mmol, 49%)을 회수하였다. R _f = 0.76(Hex:EtOAc =1:3); ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 7.54(1H, br s), 7.33-7.20(5H, m), 4.59-4.46(2H, m), 4.27-4.19(4H, m), 3.72(1H, br d, J= 17 Hz), 3.03(3H, br s), 1.39(9H, s), 1.26(3H, t, J= 7.2 Hz); ¹³C NMR(99.5MHz, CDCl₃) δ 170.7, 158.3, 139.8, 128.3, 127.6, 126.9, 82.7, 62.0, 51.6, 44.3, 34.4, 28.0, 14.1; LC/MS [ESI+](m/z) 366.3(M+l)⁺.

단계-4 (4-벤질-3-Boc-2-메틸세미카바지딜아세트산)

THF/MeOH/H₂O(2/3/1, 24mL) 중의 에틸 4-벤질-3-Boc-2-메틸세미카바지딜아세테이트(2.30 g, 6.29 mmol) 용액에 0℃에서 LiOH H₂O(528 mg, 12.6 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 lhr 동안 교반한 후에, 상기 반응 혼합물을 0℃에서 EtOAc(40 mL) 로 희석하였다. 상기 혼합물을 1N HCl로 산성화하고, EtOAc로 추출하였다. 상기 혼합 추출물(combined extracts)을 H₂O(30 mL) 및 염수(30 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조하고, Et₃N(2mL)를 첨가하고, 여과 및 농축하였다. 상기 비정제물(crude)을 용출액으로 CHCl₃:MeOH(= 100:0 내지 85:15)를 사용하여 SiO₂ 크로마토그래피하여 엷은 황색의 끈적거리는 오일, 4-벤질-3-Boc-2-메틸세미카바지딜아세트산 Et₃N 염(1.99 g, 4.56 mmol, 72%)을 수득하였다. ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 8.45(1H, br s), 7.32-7.18(5H, m), 4.58-4.22(3H, m), 3.71-3.57(1H, m), 3.08 및 3.01(3H, br s), 2.82(2.4H, q, J= 7.3 Hz, Et₃N), 1.40(9H, br s), 1.08(3.6H, t, J= 7.3 Hz, Et₃N); ¹³C NMR(99.5MHz, CDCl₃) δ 174.2, 159.2, 154.1, 140.1, 128.2, 127.4, 12.7, 81.8, 52.2, 45.1(Et₃N), 44.1, 34.5, 28.1, 8.3(Et₃N); LC/MS [ESI+](m/z) 338.3(M+l)⁺.

4-벤질-3- Boc -2- 알릴세미카바지딜아세트산의 합성

단계- 1 (4-벤질-2-알릴세미카바지드)

CHCl₃ 7.5 mL 중의 알릴 히드라진(1.55 mL, 15.0 mmol) 용액에 0℃에서 천천히 벤질 이소시아네이트(1.85 mL, 15.0 mmol)를 첨가하고, 동일 온도에서 2 hr 동안 교반하였다. 상기에서 얻어진 혼합물을 1N HCl(200 mL)에 용해시키고, 상기용액을 CHCl₃(50 mL X 3)로 세척하였다. 상기 수상을 2 M NaOHa를 사용하여 pH 12로 조절하고, CHCI₃(100 mL X 3)로 추출하였다. 상기 유기상을 Na₂SO₄로 건조하고, 진공 하에서 농축하였다. 상기 잔사를 헥산-CHCl₃에서재결정하여 무색 결정(2.20 g, 10.7 mmol, 70%)을 수득하였다. R _f =0.50(CHCl₃:MeOH = 9:1); ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 7.34-7.23(5H, m), 6.77(1H, br s), 5.77(1H, ddt, J= 16.9, 10.1, 6.3 Hz), 5.28(1H, d, J= 10.1 Hz), 5.22(1H, dd, J = 16.9, 1.5 Hz), 4.42(2H, d, J= 6.3 Hz), 4.14(2H, d, J= 6.3 Hz), 3.47(2H, s); ¹³C NMR(99.5MHz, CDCl₃) 5159.0, 139.9, 132.7, 128.6, 127.6, 127.2, 119.2, 52.8, 44.3; LC/MS [ESI+](m/z) 206.3(M+l)⁺.

단계-2 (에틸 4-벤질-2-알릴세미카바지딜아세테이트)

톨루엔(50 mL) 중의 4-벤질-2-알릴세미카바지드(8.60 g, 41.9 mmol) 용액에 DIPEA(14.6 mL, 83.8 mmol) 및 에틸 브로모아세테이트(8.1 mL, 73 mmol)를 첨가하고, 95℃에서 39 hr 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 두고, 그 다음에 EtOAc(150 mL)로 희석하였다. 상기 혼합물을 H₂O(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 상기 비정제물(crude)을 용출액으로 Hex:EtOAc(2:1 내지 1:1)를 사용하여 실리카겔(250 g) 컬럼 크로마토그래피하여 엷은 황색 오일(7.60 g, 26.1 mmol, 62%)을 수득하였다. Rf= 0.30(Hex:EtOAc = 2:3); ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 7.32-7.23(5H, m), 7.02(1H, br,s), 5.78(1H, ddt, J= 17.4, 10.1, 6.3 Hz), 5.25(2H, m), 4.42(2H, d, J= 5.8 Hz), 4.16(3H, q 및 br m, J= 7.2 Hz), 3.98(1H, t, J= 4.8 Hz), 3.55(2H, d, J= 4.8 Hz), 1.25(3H, t, J= 7.2 Hz); ¹³C NMR(99.5MHz, CDCl₃) δ 170.5, 158.9, 139.8, 132.5, 128.5, 127.6, 127.1, 119.2, 61.3, 50.0, 46.7, 44.3, 14.1; LC/MS [ESI+](m/z) 292.3(M+l)⁺.

단계-3 (에틸 4-벤질-3-Boc-2-알릴세미카바지딜아세테이트)

CH₂Cl₂(50 mL) 중의 에틸 4-벤질-2-알릴세미카바지딜아세테이트(7.10 g, 24.4 mmol) 용액에 DIPEA(8.5 mL, 49 mmol), DMAP(1.19 g, 9.76 mmol) 및 (Boc)₂O(10.6 g, 48.8 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 3.5 hr 동안 교반한 후에, 추가적으로 DIPEA(2.12 mL, 12.2 mmol) 및 (Boc)₂O(2.66 g, 12.2 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 추가적으로 6 hr 동안 교반하고, 상기 혼합물을 CH₂Cl₂(100 mL)로 희석하고, 그리고나서, 0℃에서 포화 NaHCO₃(50 mL)를 첨가하였다. 상기 분리된 수상을 CH₂Cl₂(100 mL X 2)로 추출하였다. 상기 혼합된 유기상을 H₂O(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 상기 비정제물(crude)을 용출액으로 Hex:EtOAc(7:1 내지 1:1)를 사용하여 SiO₂(300 g) 컬럼 크로마토그래피하여 엷은 황색 오일(6.61 g, 16.9 mmol, 69%) 생성물을 수득하였다. Rf= 0.57(Hex:EtOAc = 1:1); ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 7.77(1H, br s), 7.34-7.21(5H, br m), 5.88(1H, br m), 5.20(2H, br m), 4.62-4.46(3H, m), 4.37-4.13(3H, m), 3.92-3.65(2H, m), 1.48 및 1.38(9H, s), 1.26(3H, t, J= 7.2 Hz); ¹³C NMR(99.5MHz, CDCl3) δ 170.8, 157.8, 154.1, 139.8, 128.4, 127.6, 127.0, 119.6, 82.7, 62.0, 51.2, 44.3, 30.9, 28.0, 14.1; LC/MS [ESI+](m/z) 392.4(M+l)⁺.

단계-4 (4-벤질-3-Boc-2-알릴세미카바지딜아세트산)

THF/MeOH/H₂O(2/3/1, 25 mL) 중의 에틸 4-벤질-3-Boc-2-알릴세미카바지딜아세테이트(3.20 g, 8.17 mmol) 용액에 0℃에서 LiOH·H₂O(685 mg, 16.3 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 40 min 동안 교반한 후에, 상기 반응 혼합물을 0℃에서 CH₂Cl₂(50 mL)로 희석하였다. 상기 혼합물을 1N HCl로 산성화하고, CH₂Cl₂로 추출하였다. 상기 혼합 추출물을 H₂O(30 mL) 및 염수(3OmL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조하고, Et₃N(3 mL)를 첨가하고, 여과 및 농축하였다. 상기 비정제물(crude)을 용출액으로 CHCl₃:MeOH(100:0 내지 85:15)를 사용하여 SiO₂ 컬럼 크로마토그래피하여 오랜지색의 끈적거리는 오일 4-벤질-3-Boc-2-알릴세미카바지딜아세트산 Et₃N 염(3.66 g, 7.87 mmol, 96%)을 수득하였다. ¹H NMR(400MHz, CDCl₃, rotamer) δ 9.44 및 9.34(1H, br s), 7.35-7.18(5H, m), 5.91(1H, m), 5.17(2H, m), 4.58 및 4.87(2H, dd, J= 15.5, 6.3 및 14.5, 5.8 Hz), 4.39-4.23(2H, m), 3.89 및 3.80(1H, dd, J= 14.0, 8.2 및 14.5, 8.2 Hz), 3.58 및 3.52(1H, d, J= 17.4 및 16.9 Hz), 2.81(5H, q, J= 7.2 Hz, Et3N), 1.44 및 1.42(9H, s), 1.11(7.5H, t, J= 7.2 Hz, Et₃N); ¹³C NMR(99.5MHz, CDCl₃) δ 158.9, 154.3, 153.6, 140.6, 134.2, 128.1, 127.4, 126.5, 118.8, 81.1, 55.6, 51.4, 44.9(Et₃N), 44.2, 28.2, 8.3(Et₃N); LC/MS [ESI+](m/z) 364.3(M+l)⁺.

화합물 No .61의 합성

단계-1

200 mL 둥근 바닥 플라스크에 히드록시-관능화 수지(5.0 g, 0.68 mmol/g, NovAblochem)를 넣었다. 1,2- 디클로로메탄(51 mL) 중의 상기 수지 및 PPTS(1.7 g, 6.8 mmol)의 혼합물에 실온에서 브로모아세트알데히드 디에틸아세탈(4.2 mL, 27 mmol)를 첨가하였다 . 4.0 hr 동안 환류 하에 교반한 후에, 상기 혼합물을 여과하고, 상기 수지를 DMF(50 mL X 3), DMSO(50 mL X 3), 1,4-디옥산(50 mL X 3), CH₂Cl₂(50 mL X 3), MeOH(50 mL X 3), Et₂O(50 mL X 3)으로 세척하였다. 상기 수지를 감압하에 밤새도록 건조하여 목적하는 브로모아세탈 수지(5.5 g)를 수득하였다.

단계-2

30 mL 둥근 바닥 플라스크에 브로모아세탈 수지(1.0 g, 0.9 mmol/g)를 넣었다. 상기 수지를 DMF(9.0 mL X 5 min X 1)로 팽윤시키고, 70℃에서 DMSO(9.0 mL) 중의 1-나프틸메틸아민(1.4 g, 9.0 mmol) 용액으로 처리하였다. 12 hr 동안 교반한 후에, 상기 수지를 여과하고, DMSO(9.0 mL X 5 min X 3)로 린스하였다. 상기 수지를 DMF(5.0 mL X 5 min X 3) 및 CH₂Cl₂(5.0 mL X 5 min X 3)로 세척하였다. 상기 수지를 감압하에 건조하여 목적 수지(1.18g)를 수득하였다.

단계-3

20 mL 플라스틱 일회용 주사기에 나프틸메틸아미노 수지(1.18 g, 0.84 mmol/g)를 넣었다. 상기 수지를 DMF(9.0 mL X 5 min X 1)로 팽윤시키고, 실온에서DMF(9.0 mL), Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH(620 mg, 1.35 mrnol), DIPEA(470 μL, 2.70 mmol), 및 HATU(513 mg, 1.35 mmol)를 첨가하였다. 12 hr 동안 진탕한 후에, 카이저 테스트(Kaiser test)가 양성(positive)인 경우, 동일 절차를 반복하였다. 상기 혼합물을 여과하고, 상기 수지를 DMF(10.0 mL X 5 min X 3) 및 CH₂Cl₂(10.0 mL X 5 min X 3)로 세척하였다. 상기 수지를 감압하에 건조하여 목적 수지(1.50 g)를 수득하였다.

단계-4

20 mL 플라스틱 일회용 주사기에 상기 l-나프틸메틸아미노-Fmoc-Tyr(tBu) 수지(1.50 g, 0.61 mmol/g)를 넣었다. 상기 수지를 DMF(10.0 mL) 중에서 팽윤시키고, DMF를 모두 빨아들이게 했다. 상기 수지를 실온에서 20 v/v% 피페리딘/DMF(10.0 mL)으로 처리하였다. 1.0 hr 동안 진탕한 후에, 상기 혼합물을 여과하고, 상기 수지를 DMF(10 mL X 5 min X 3) 및 CH₂Cl₂(10 mL X 5 min X 3)로 세척하였다. 상기 수지를 감압하에 건조하여 목적 수지(1.48 g)을 수득하였다.

단계-5

20 mL 플라스틱 일회용 주사기에 상기 아미노 수지(300 mg, 0.71 mmol/g)를 넣었다. 상기 수지를 DMF(3.0 mL) 중에서 팽윤시키고, DMF를 모두 빨아 들이게 했다. 상기 수지에 실온에서 4-벤질-3-Boc-2-메틸세미카바지딜아세트산(2.5 mL, 0.75 mmol), DIPEA(260 μL, 1.49 mmol), 및 HATU(284 mg, 0.75 mmol)의 0.3 M 저장 CH₂Cl₂ 용액을 첨가하였다. 12 hr 동안 진탕한 후에, 상기 혼합물을 여과하고, 상기 수지를 DMF(5.0 mL X 5 min X 3) 및 CH₂Cl₂(5.0 mL X 5 min X 3)로 세척하였다. 상기 수지를 감압하에 건조하여 목적 수지를 수득하였다.

단계-6

5.0 mL 플라스틱 일회용 주사기에 상기 수지(115 mg, 0.58 mmol/g)를 넣었다. 99% HCO₂H(1.0 mL)를 첨가한 후에, 상기 혼합물을 실온에서 12 hr 동안 진탕하고, 상기 용액을 여과장치로 수집하였다. 상기 수지를 99% HCO₂H(1.5 mL X 5 min X 2)로 세척하였다. 상기 혼합 HCO₂H 용액을 농축하고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피하여 화합물 No.61(7.1 mg, 브로모아세탈 수지로부터 19%)을 수득하였다. Rf= 0.63(CHCl₃:MeOH = 9:1); ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 8.06(1H, d, J= 8.2 Hz), 7.89(1H, m), 7.84(1H, d, J= 8.2Hz), 7.56(2H, m), 7.38(1H, dd, J= 8.2, 7.2 Hz), 7.20(3H, m), 7.12(1H, d, J= 6.8 Hz), 7.05(2H, dd, J= 7.7, 2.9 Hz), 7.02(2H, d, J= 8.2 Hz), 6.88(0.5H, br s), 6.71(2H, d, J= 8.2 Hz), 6.05(1H, t, J= 5.8 Hz), 5.06(2H, ABq, J= 14.5 Hz), 4.80(1H, dd, J= 5.8, 2.5 Hz), 4.23(2H, ABX, J= 14.5, 5.8 Hz), 3.67-3.44(4H, m), 3.21(1H, dd, J= 14.0, 5.8 Hz), 3.12(1H, dd, J= 11.0, 3.9 Hz), 2.86(1H. dd. J= 11.0, 9.1 Hz), 2.59(3H, s); LC/MS [ESI+](m/z) 564.4(M+l)⁺.

화합물 No .71의 합성

단계-1

5 mL 플라스틱 일회용 주사기에 상기 아미노 수지(100 mg, 0.71 mmol/g)를 넣었다. 상기 수지를 DMF(1.0 mL) 중에서 팽윤시키고, DMF를 모두 빨아 들이게 했다. 상기 수지에 실온에서 4-벤질-3-Boc-2-알릴세미카바지딜아세트산(830 μL, 0.25 mmol), DIPEA(87 μL, 0.50 mmol), 및 HATU(95 mg, 0.25 mmol)의 0.3 M 저장 CH₂Cl₂ 용액을 첨가하였다. 12 hr 동안 진탕한 후에, 상기 혼합물을 여과하고, 상기 수지를 DMF(1.0 mL X 5 min X 3) 및 CH₂Cl₂(1.0 mL X 5 min X 3)로 세척하였다. 상기 수지를 감압하에 건조하여 목적 수지를 수득하였다.

단계-2

5.0 mL 플라스틱 일회용 주사기에 상기 수지(100 mg, 0.57 mmol/g)를 넣었다. 99% HCO₂H(1.0 mL)를 첨가한 후에, 상기 혼합물을 실온에서 12 hr 동안 진탕하고 상기 용액을 여과장치로 수집하였다. 상기 수지를 99% HCO₂H(1.5 mL X 5 min X 2)로 세척하였다. 상기 혼합 HCO₂H 용액을 농축하고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피하여 화합물 No.71(11 mg, 브로모아세탈 수지로부터 26%)을 수득하였다. Rf= 0.63(CHCl₃:MeOH = 9:1).

도 1-6에서 나타낸 화합물 1-1200을 얻기 위하여 유사한 합성이 수행되었다.

화합물 No .1273의 합성

단계-1

30 mL 둥근 바닥 플라스크에 브로모아세탈 수지(1.0 g, 0.9 mmol/g)를 넣었다. 상기 수지를 DMF(9.0 mL X 5 min X 1)로 팽윤시키고, 70℃에서 DMSO(9.0 mL) 중의 2-tert-부톡시카보닐아미노벤조티아졸-4-메틸아민(2.5 g, 9.0 mmol)의 1.0 M 현탁액으로 처리하였다. 12 hr 동안 교반한 후에, 상기 수지를 여과하고, DMSO(9.0 mL X 5 min X 3)로 린스하였다. 상기 수지를 DMF(5.0 mL X 5 min X 3) 및 CH₂Cl₂(5.0 mL X 5 min X 3)로 세척하였다. 상기 수지를 감압하에 건조하여 목적 수지(1.16 g)를 수득하였다. .

단계-2

20 mL 플라스틱 일회용 주사기에 2-tert-부톡시카보닐아미노벤조티아졸-4-메틸아미노 수지(1.16 g, 0.76 mmol/g)를 넣었다. 상기 수지를 DMF(9.0 mL X 5 min X 1)로 팽윤시키고, 실온에서 DMF(9.0 mL), Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH(620 mg, 1.35 mmol), DIPEA(470 μL, 2.70 mmol), 및 HATU(513 mg, 1.35 mmol)를 첨가하였다. 12 hr 동안 진탕한 후에, 카이저 테스트(Kaiser test)가 양성(positive)인 경우, 동일 절차를 반복하였다. 상기 혼합물을 여과하고, 상기 수지를 DMF(10.0 mL X 5 min X 3) 및 CH₂Cl₂(10.0 mL X 5 min X 3)로 세척하였다. 상기 수지를 감압하에 건조하여 목적 수지(1.76 g)를 수득하였다.

단계-3

20 mL 플라스틱 일회용 주사기에 2-tert-부톡시카보닐벤조티아졸-4-메틸아미노-Fmoc-Tyr(tBu) 수지(1.76 g, 0.57 mmol/g)를 넣었다. 상기 수지를 DMF(1.0 mL) 중에서 팽윤시키고, DMF를 모두 빨아 들이게 했다. 상기 수지를 실온에서 20 v/v% 피페리딘/DMF(10.0 mL)로 처리하였다. 1.0 hr 동안 진탕한 후에, 상기 혼합물을 여과하고, 상기 수지를 DMF(10 mL X 5 min X 3) 및 CH₂Cl₂(10 mL X 5 min X 3)로 세척하였다. 상기 수지를 감압하에 건조하여 목적 수지(1.42 g)를 수득하였다.

단계-4

20 mL 플라스틱 일회용 주사기에 상기 아미노 수지(350 mg, 0.65 mmol/g)를 넣었다. 상기 수지를 DMF(3.0 mL) 중에서 팽윤시키고 DMF를 모두 빨아 들이게 했다. 상기 수지에 실온에서 4-벤질-3-Boc-2-메틸세미카바지딜아세트산(2.7 mL, 0.80 mmol), DIPEA(277 μL, 1.59 mmol), 및 HATU(302 mg, 0.80 mmol)의 0.3 M 저장 CH₂Cl₂ 용액을 첨가하였다. 12 hr 동안 진탕한 후에, 상기 혼합물을 여과하고, 상기 수지를 DMF(5.0 mL X 5 min X 3) 및 CH₂Cl₂(5.0 mL X 5 min X 3)로 세척하였다. 상기 수지를 감압하에 건조하여 목적 수지를 수득하였다.

단계-5

20 mL 플라스틱 일회용 주사기에 상기 수지(350 mg, 0.65 mmol/g)를 넣었다. 99% HCO₂H(4.0 mL)를 첨가한 후에, 상기 혼합물을 실온에서 12 hr 동안 진탕하여, 상기 용액을 여과장치로 수집하였다. 상기 수지를 99% HCO₂H(4.0 mL X 5 min X 2)로 세척하였다. 상기 혼합 HCO₂H 용액을 농축하고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피하여 화합물 No.1273(9.1 mg, 브로모아세탈 수지로부터 6.8% )을 수득하였다. R _f = 0.47(CHCl₃:Me0H = 9:l).

화합물 No .1285의 합성

단계-1

20 mL 플라스틱 일회용 주사기에 상기 아미노 수지(350 mg, 0.65 mmol/g)를 넣었다. 상기 수지를 DMF(3.0 mL) 중에서 팽윤시키고, DMF를 모두 빨아 들이게 했다. 상기 수지에 실온에서 4-벤질-3-Boc-2-알릴세미카바지딜아세트산(2.7 mL, 0.80 mmol), DIPEA(277 μL, 1.59 mmol), 및 HATU(302 mg, 0.80 mmol)의 0.3 M 저장 CH₂Cl₂ 용액을 첨가하였다. 12 hr 동안 진탕한 후에, 상기 혼합물을 여과하고, 상기 수지를 DMF(5.0 mL X 5 min X 3) 및 CH₂Cl₂(5.0 mL X 5 min X 3)로 세척하였다. 상기 수지를 감압하에 건조하여 목적 수지를 수득하였다.

단계-2

20 mL 플라스틱 일회용 주사기에 상기 수지(350 mg, 0.53 mmol/g)를 넣었다. 99% HCO₂H(4.0 mL)를 첨가한 후에, 상기 혼합물을 실온에서 12 hr 동안 진탕하고 상기 용액을 여과장치로 수집하였다. 상기 수지를 99% HCO₂H(4.0 mL X 5 min X 2)로 세척하였다. 상기 혼합 HCO₂H 용액을 농축하고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피하여 화합물 No. 1285(18 mg, 브로모아세탈 수지로부터 13%)를 수득하였다. R _f = 0.52(CHCl₃:Me0H = 9:l).

도 7-11에 나타낸 것으로서, 화합물 1201-2200을 얻기 위하여 유사한 합성이 수행되었다.

화합물 No . 2201의 합성

THF(500 mL) 중의 화합물 No. 61(18 mg, 0.032 mmol)의 냉각(0℃) 용액에 Et₃N(13.4 μL, 0.096 mmol) 및 POCl₃(14.9 μL, 0.160 mmol)을 첨가하고, 상기 혼합물을 SM이 TLC 상에서 사라지게 될 때까지 교반하였다(4 hr). 상기 혼합물을 H₂O(1mL)로 희석하고, 0℃에서 NaHCO₃를 pH 8이 되도록 첨가하였다. 밤새도록 교반한 후에, 상기 혼합물을 1N HCl을 사용하여 pH 3이되도록 산성화하고, CHCl₃(5 mL X 3)로 추출했다. 상기 혼합 추출물을 Na₂SO₄로 건조하고, 여과 및 농축하여, 엷은 황색 분말 화합물 No. 2201(17.1 mg, 83%)을 수득하였다. TLC: R _f = 0.45 실리카겔 F254,

CHCl₃:MeOH:EtOH:H₂O:AcOH:nBuOH=100:40:10:10:8:5; ¹H NMR(400MHz, CDCl₃) δ 7.98(1H, d, J= 7.7 Hz), 7.83(1H, m), 7.77(1H, d, J= 8.2 Hz), 7.51(2H, m), 7.35(1H, t, J= 7.3 Hz), 7.24-6.93(1OH, m), 6.07(1H, br s), 5.86(3H, br s), 5.34(1H, br d, J= 15.0 Hz), 4.76(2H, m), 4.11(2H, br ABX, J= 15.5, 5.3 Hz), 3.62(2H, m), 3.47 및 3.31(2H, br ABq, J= 15.0 Hz), 3.22(2H, br m), 3.02(1H, br m), 2.77(1H, br t, J= 10.6 Hz), 2.56(3H, s); ³¹P NMR(160.26MHz, CDCl₃) δ -3.57.

화합물 No . 2202의 합성

THF(1.0 mL) 중의 화합물 No. 71(21 mg, 0.036 mmol)의 냉각(0℃) 용액에 Et₃N(14.9 μL, 0.107 mmol) 및 POCl₃(16.6 μL, 0.178 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 SM이 TLC 상에서 사라지게 될 때까지 교반하였다(4 hr). 상기 혼합물을 H₂O(1mL)로 희석하고, 0℃에서 NaHCO₃를 pH 8이 되도록 첨가하였다. 밤새도록 교반한 후에, 상기 혼합물을 1N HCl을 사용하여 pH 3이되도록 산성화하고, CHCl₃(5 mL X 3)로 추출했다. 상기 혼합 추출물을 Na₂SO₄로 건조하고, 여과 및 농축하여, 엷은 황색 분말 화합물 No. 2202(21.0 mg, 88%)을 수득하였다. TLC: R _f = 0.53 실리카겔 F254,

CHCl₃:MeOH:EtOH:H₂O:AcOH:nBuOH=100:40:10:10:8:5.

도 27에서 나타낸 것으로서, 화합물 2203-2217을 얻기 위하여 유사한 합성이 수행되었다. 화합물 2203-2217의 부분입체이성질체 및 거울상입체이성질체가 얻어졌고, 이들을 도 12에 나타냈다.

하기 표 2는 화합물 1-2217에 대한 분자량(M. W.) 및 질량을 나타낸다.

실시예 3

암 세포주에 대한 ICG -001 및 이마티닙의 효과

본 실시예를 위하여, 인간 난소 육종 세포 MES-SA 및 상응하는 독소루비신-내성 세포주 MES-SA/Dx5(Hua J et al Gynecologic Oncol. 2005) 및 CML 유도 세포주 K562 및 동종 이마티닙 메실레이트 내성 K562 세포(Dai Y et al JBC 279, 34227, 2004)를 사용하였다. 상기 양자의 내성(R) 세포주는, 면역블로팅(도 14A) 및 면역형광현미경검사법(도 14B)에 의하여 평가된 것으로서 이들의 약물 민감성 카운터파트와 비교하여 세포질 및 핵 β-카테닌의 극적인 증가 수준을 나타냈다. 상기 증가된 핵 β-카테닌은, 톱플래시 리포터(TOPFLASH reporter)에 의하여 평가된 것으로서 극적으로 증가된 TCF/β-카테닌 전사 활성이 반영되었으며, 그리고 그것은 우성음성(dominant negative) TCF4 구성체를 사용하여 완전히 차단될 수 있었다(도 14C).

MES-SA 세포에서 MDR -1 발현 활성화를 위하여 Wnt/β-카테닌 경로의 활성화가 중요하다는 것을 확인하기 위하여, 다음의 실험들이 수행되었다. MES-SA 세포들을 톱플래시 또는 폽플래시(fopflash) 리포터와 함께 트랜스펙션(transfection)시키고, 배지 단독, 또는 Wnt3a 또는 Wnt5a가 함께 첨가된 것으로 처리되었다. "비표준적인(non-canonical)" Wnt5a가 아니라 "표준적인" Wnt3a가 루시페라제의 활성을 ~4배 증가시키고, 증가된 활성은 dnTCF4 구성체의 코트랜스펙션(cotransfection)에 의해 완전히 차단되었다(도 15A). 유사하게, Wnt3a 처리에 의한 MDR -1/루시페라제 활성에서 ~2배의 증가가 관찰되었다. 또한, 이러한 활성화는 dnTCF4 구성체의 코트랜스펙션에 의해 완전히 억제되었다. Wnt5a 조절 배지는 MDR-1/루시페라제 리포터 구성체의 발현 증가를 나타내지 않았다(도 15B).

MDR -1 발현을 유도하는데 있어서 핵 β-카테닌의 역할의 중요성을 확인하기 위하여, 유사유전자형(isogenic)의 HCT-116 세포주를 이용하였다(Waldmann 2002). 야생형(Wild-type) HCT-116 세포는 MDR - 1/루시페라제 활성 및 실시간 RT-PCR 모두에 의해 평가된 것으로서 가장 높은 MDR -1 발현을 증명하였다(도 15C, D). β-카테닌의 야생형 대립유전자(allele)가 제거되고 종양발생성 대립유전자(oncogenic allele)가 유지되며, 다소 적은 수준의 핵 β-카테닌을 갖는 Hβl8(ko/*) 세포는 약간 감소된 MDR -1/루시페라제 활성 및 MDR -1 메시지의 감소를 나타냈다(도 15C, D). 야생형 대립유전자는 유지되고 종양발생성 대립유전자는 제거된 Hβ92(wt/ko) 세포는 MDR -1/루시페라제 활성 및 메시지의 훨씬 더 극적인 감소를 나타냈다(도 15C, D).

MES-SA 및 MES-SA/Dx5 세포에서 MDR -1 프로모터로의 TCF/β-카테닌 모집(recruitment)이 조사되었다. 프로모터에서 아세틸화된 히스톤 H3의 수준에 의해 평가된 것으로서 MDR -1이 활발하게 전사 및 발현된 MES-SA/Dx5 세포에서, TCF4 및 β-카테닌의 프로모터로의 명백한 모집이 있었으며, 모체 MES-SA 세포주에서는 존재하지 않았다(도 15E).

MES-SA 세포에서 MDR -1 유전자의 전사 조절에 대한 다른 코액티베이터의 유유용성(usage)을 조사하기 위하여, 화학유전체 도구(chemogenomic tool)인 ICG-001을 사용하였다(Emami et al. 2004). ICG-001는 MES-SA/Dx5 세포에서 MDR -1/루시페라제 활성을 감소시켰는데, IC₅₀은 ~16μM이었다(도 16A). 또한, 용량 의존 방식에서 면역형광법(도 16B) 및 면역블로팅(도 16C)에 의해 평가된 것으로서, MES-SA/Dx5 세포에서 MDR -1 단백질 발현의 수준은 ICG-001에 의해 상당히 감소되었다. 이러한 효과는 MES-SA/Dx5 세포(도 16D) 및 이마티닙 메실레이트 내성 K562 세포(도 16E)에서 실시간 RT-PCR에 의해 평가된 것으로서 메시지 수준에 반영되었다.

또한, 유사유전자형의 HCT116 세포주에서 MDR -1 전사 조절이 조사되었다. 상기 유사유전자형의 HCT116 세포주 전체에서, β-카테닌 및 CBP를 구조적으로 전이시키는 점 돌연변이체(point mutant)의 코트랜스펙션은 MDR -1/루시페라제 발현을 증가시키고(도 17A), 반면, 점 돌연변이체 β-카테닌 단독의 트랜스펙션은 Hβ92(wt/ko) 세포에서 non-트랜스펙션 대조군과 비교하여 루시페라제 활성을 증가시켰으며(도 17A), 그리고 상기 Hβ92(wt/ko) 세포는 매우 제한적인 핵 β-카테닌의 양을 갖는다. p300의 트랜스펙션은 3개의 세포주 모두에서 MDR -1/루시페라제 활성을 대조군의 수준 이하로 감소시켰다(도 17A). ICG-001은 야생형 HCT-116 및 Hβl8(ko/*) 세포주에서 MDR -1/루시페라제 활성을 용량 의존적으로 감소시켰으나, 반면에 Hβ92(wt/ko) 세포에서는 본질적으로 기초 수준 이하로의 더 이상의 감소는 관찰되지 않았으며(도 17B), 이들 세포들에서 β-카테닌/CBP 유도 전사의 결핍과 일치한다(H Ma et al Oncogene 2005).

MES-SA/Dx5 세포에서 ChIP 분석은, 미처리 세포들에서, CBP에 의한 MDR -1 프로모터의 상당한 점유가 있으며, 그것은 ICG-001에 의해 용량 의존적인 방식으로 차단되었음을 증명하였다(도 17C). 반대로, ICG-001이 존재하지 않는 경우에, p300에 의한 MDR -1 프로모터의 최소의 점유가 있었으나, 25μM ICG-001의 처리와 함께 점유는 증가되었다(도 17C). 유사한 ICG-001은 이전에 관찰된 설비빈(survivin) 프로모터로의 p300의 모집을 유도했으며, 그것은 전사 억제(즉, HDAC6 및 PML)와 관련된 단백질의 모집과 관련되어 있었다(H Ma et al. Oncogene 2005). 제안된 비결합 매카니즘은 p300에 의하여 MDR-1 프로모터로의 전사 도구(transcriptional apparatus)의 모집을 억압한다.

MES-SA 세포와 비교하여 MES-SA/Dx5 세포에서 내인성 CBP 코액티베이터의 mRNA 수준은 또한, 상당히 증가되었으나, p300 수준 메시지는 본질적으로 동등하게 남아있었다(도 18A). MES-SA 모세포주와 비교된 MES-SA/Dx5에서의 면역블로팅에서와 같이, 면역형광법은 또한 CBP의 실질적인 증가를 증명하였다(도 18B); p300 단백질 수준은 본질적으로 동등하게 남아있었다(도 18C).

CBP 또는 p300의 복합면역침전법은, MES-SA 세포에 존재하지 않았던 MES-SA/Dx5 세포에서 CBP와 β-카테닌의 강한 결합(association)을 나타냈으며(도 18D), 한편 p300과 β-카테닌의 결합은 어느 쪽의 세포주에서도 실질적으로 검출될 수 없었다. 마지막으로, MES-SA/Dx5 세포에서 CBP나 p300 중 둘 중의 하나를 녹다운(knockdown) 시키기 위해 코액티베이터 특이적 siRNA를 이용하였다(H Ma Oncogene 2005). MDR -1 메시지는 siRNA 대조군 처리된 세포와 비교하여 CBP에 대한 siRNA로 처리하는 것에 의하여 특이적으로 감소되었으나, 반면 p300 siRNA는 대조군과 비교하여 MDR -1 메시지 수준을 증가시켰다(도 18E). 배양에서, MES-SA/Dx5 및 K562 이마티닙 내성 세포는 대응 민감성 세포주 보다 다소 빠른 속도로 성장하였다(도 19A, B). 이전 데이터와(Emami et al PNAS 2004, H. Ma et al Oncogene 2005, 및 J Teo et al 2005) 일치하는 것으로서, 강화된 β-카테닌/CBP 유도 전사는, 민감성 카운터파트와 비교하여, 내성 세포주 둘다에서 설비빈 및 사이클린 Dl 모두에 대한 메시지(도 19C, D) 및 단백질 수준(도 19E, F) 모두에서 반영되었다.

이들 내성 세포주의 "암 줄기 세포" 성질을 더 조사하기 위하여, 줄기세포의 다능성(pluripotency) 및 생존과 관련된 많은 마커들의 발현이 측정되었다. 실시간 RT-PCR은 MES-SA/DX5 및 이마티닙 내성 K562 세포에서 Oct4 , hTert , Bmi -1 및 ABCG-2의 증가된 발현을 이들의 민감성 카운터파트와 비교하여 증명하였다(도 20A). 또한, 양쪽 내성 세포주에서 Oct4 및 줄기세포 표면 마커 CD 133 모두에 대한 단백질 수준은 증가되었다(도 20B).

현대 화학요법이 종양에서 대다수의 세포를 죽이지만, 내성 "암 줄기세포"는 질병의 재발과 상당한 관련이 있는 것으로 믿어지고 있다. MDR 전달체는 화학요법으로부터 암 줄기세포를 보호하는데 있어서 상당히 중요한 역할을 하는 것으로 믿어지고 있다(Dean et al, Nat. Rev. Cancer 5, 275, 2005). 이 현상을 더 연구하기 위하여, 일련의 실험들이 수행되었다. 약물 내성 MES-SA/Dx5 및 K562 이마티닙 내성 세포는 독소루비신 +/-ICG-001 또는 이마티닙 메실레이트 +/- 001로 처리되었다. 도 21A에서 볼 수 있는 바와 같이, 각각의 화합요법제와의 조합한 ICG-001은 세포 증식/생존능력을 감소시키는 것에 있어서 화학요법제 단독 또는 ICG-001 단독보다 상당히 더 효과적이었다. 독소루비신 1 mg/ml나 5 mg/ml 둘 중의 하나로 처리된 MES-SA/Dx5 세포에 ICG-001의 첨가는 카스파제 3/7(caspase 3/7) 활성화를 상당히 증가시켰다.

실시예 4

만성골수 (성) 백혈병( CML )에 대한 ICG -001의 효과

현재까지 이마티닙을 사용하여 CML 환자들에게서 상당한 임상적인 성공이 이루어졌음에도 불구하고, 시기적으로 늦은 상태의 질병에서, 그 반응은 흔히 일시적이고, 환자들은 변함없이 질병의 진행을 격는다(MeIo J Hematology, 2003). 이것은 증가된 TCF/β-카테닌 전사의 증표인 증가된 핵 β-카테닌 수준(Weissman NEJM 2003)에 관련된 백혈병 약물 내성 클론 출현의 결과이다. 단독 또는 이마티닙 메실레이트와의 조합한 ICG-001의 효능은 정상 CD34+ 블라스트 세포(대부분 초기 스템(stem)/프로제니터) 및 CML 환자의 골수(bone barrow)로부터 다양한 진전 단계에서 조사되었다. CD34+ CML 블라스트는 CD34- 세포에 비해, β- 카테닌 , ABCB1 , htert, 설비빈 /변형 Λ Ex3 , 및 BMI -1의 상당히 높은 발현을 나타냈으며, 이러한 결과는 Wnt/카테닌 신호의 구조적인 활성을 나타내며, 이러한 CD34+ CML 블라스트 세포 집단의 "스템/프로제니터-유사" 특징의 증가를 확인시킨다(도 21C)(Jamieson et al, 2004).

ICG-OO1 및 이마티닙 조합처치는 모든 시료들에 있어서 어느 한쪽의 약물단독 처리의 대조군에 비교된 것으로서 총 집락형성단위(CFU)에 있어서 가장 현저한 감소를 나타냈다(도 21D). 더 나아가서, 약물 처리 후에 상기 집락들의 형태학적인 특징들 또한 변경되며; 상기 집락들은 작아지고 분산되었으며, 상기 분산된 집락 표현형들은 조합처치에서 더 심했으며, 이러한 결과는 상기 처리된 집락들이 분화가 증가된 상태를 갖는 것을 나타낸다. 상기 대조군 집락들은 크고 조밀하여 뚜렷한 차이가 있었다. 상기 H&E 염색은 상기 처리된 세포들에서 감소된 핵/세포질 비율을 나타냈다(도 21E). 중요하게는, 정상 CD34+ 세포를 ICG-001로 처리하면 총 세포질(cellularity), CFU-Es 및 BFU-Es에 대하여 극소의 효과가 있었다. ICG-001은 정상 CD34+ 조혈 세포의 집락 형성에 영향이 없었다.

요약하면, 이마티닙 자체는 제한된 효과를 나타내나, 이마티닙과 IGC-001의 조합은 현저한 추가적인 효과를 갖는다. 20μM까지의 ICG-001은 정상 CD34+ 세포에 대하여 심한 부작용을 나타내지 않으며 분화를 유도하나, K562 세포에서 카스파제를 활성화시키지 않았다.

실시예 5

각각 줄기세포 마커 CD133 또는 Prominin -1을 발현하는 배양된 난소 암종 및 흑색종 세포에 대한 ICG -001 및 시스플라틴의 효과

이 실시예는 ICG-001에 대한 난소 암종 세포의 민감도의 측정을 기술한다.

A2780, CP70, IGROV-I 및 B16 세포들로부터 평판배양된 세포를 0.625 ~ 10 μM 범위의 ICG-001의 용량에 노출시켜, 집락 저해 평가를 수행하였다. 대표적인 실험은 표 3에 설명되었다.

표 3에 나타낸 것처럼, 0.625 μM의 ICG-001의 농도에서 조차 대조군(DMSO를 함유하는 배지)과 모든 실험군(DMSO에 용해된 ICG-001를 함유하는 배지) 사이에 통계적으로 현저한 차이가 있었다.

표 4는 ICG-001에 노출된 웰에서 뿐만 아니라 대조군 웰에서 A2780, CP70, IGROV-I 및 B16으로부터 배양된 세포들에 대한 평판배양 효율에 대한 데이터를 나타낸다. 상기 데이터는, 다양한 세포주의 세포배양 효율이 높았고, 21% 및 83% 사이로 다양하였으며, 상기 평판배양된 세포들의 대부분은 CSC의 CD133 마커를 발현하였다는 사실과 잘 맞는다는 것을 나타낸다.

상기 세포들은 0.625 ~ 10 μM 사이의 ICG-001 농도 범위 및 1.25 ~ 20 μM 사이의 시스플라틴의 농도에서 테스트 되었다. 테스트된 모두 세개의 난소 암 세포주(A2780, CP70 및 IGROV-1)는 시스플라틴보다 ICG-001에 더 민감하였다. 상기 시스플라틴-내성 세포주 CP70에 대하여, >90% 억제는, 20 μM의 시스플라틴에 비교되는 것으로서, 5 μM의 ICG-001에서 달성되었다(도 23C). 상기 시스플라틴-민감성 세포주, IGROV-I 및 A2780은 시스플라틴에 대하여 ICG-001에 유사한 민감성을 가졌다(도 23A 및 B). 도 24는 ICG-001 및 시스플라틴에 대한 난소 암종 세포주의 민감성을 비교한 실험들을 나타낸다.

상기 세포들은 0.625 ~ 10 μM 사이의 ICG-001 농도 범위 및 1.25 ~ 20 μM 사이의 시스플라틴의 농도에서 테스트 되었다. 테스트된 모두 세개의 난소 암 세포주(A2780, CP70 및 IGROV-1)는 시스플라틴보다 ICG-001에 더 민감하였다. 상기 시스플라틴-내성 세포주 CP70에 대하여, >90% 억제는, 5 μM의 ICG-001에서 달성되었다.

실시예 6

SW480 세포에서 CBP -β- 카테닌 상호작용의 억제

CBP-β-카테닌 결합에 대한 몇몇 화합물들의 효과는 SW480 세포에서 톱플래시 리포터(TOPFlash reporter) 시스템을 사용하여 시험되었다.

도 25에 나타낸 것처럼, 화합물 PRI-OOl, PRI-002, PRI-003, PRI-004, PRI-005 및 PRI-006의 증가하는 농도는, ICG-001과 비교된 것으로서, 효과적이었다. 도 26은 다양한 농도의 ICG-001, PRI-003, 및 PRI-004로 처리된 SW480 세포에서 pluc-6270 발현(루시페라제)을 나타낸다.

모든 특허들, 특허출원들, 가출원들, 및 여기에서 언급되거나 인용된 발표들은, 모든 도면 및 표를 포함하여, 그들의 전체에서 그들이 이 명세서의 명백한 가르침과 불일치하지 않는 범위로 인용에 의해 편입된다.

Claims

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다음 일반식(VI)을 갖는 화합물 또는 그의 입체이성질체 또는 그의 염:

상기 식에서 B는 -(CHR₂)- 또는 -(NR₂)-이고, E는 -(CHR₃)-이고, V는 -(XR₄)-, W는 -(C=O)-(XR₅R₆), X는 질소 이고, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ 및 R₆는 아미노C_2-5알킬, 구아니디노C_2-5알킬, C_1-4알킬구아니디노C_2-5알킬, 디C_1-4알킬구아니디노C_2-5알킬, 아미디노C_2-5알킬, C_1-4알킬아미디노C_2-5알킬, 디C_1-4알킬아미디노C_2-5알킬, C_1-3알콕시, 페닐, 치환된 페닐(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알킬, C_1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 벤질, 치환된 벤질(여기서 벤질 상의 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알킬, C_1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 나프틸, 치환된 나프틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알킬, C_1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 비스-페닐 메틸, 치환된 비스-페닐 메틸(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알킬, C_1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜, 치환된 피리딜(여기서 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알킬, C_1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리딜C_1-4알킬, 치환된 피리딜C_1-4알킬(여기서 피리딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알킬, C_1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 피리미딜C_1-4알킬, 치환된 피리미딜C_1-4알킬(여기서 피리미딘 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알킬, C_1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 트리아진-2-일-C_1-4알킬, 치환된 트리아진-2-일-C_1-4알킬(여기서 트리아진 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알킬, C_1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸C_1-4알킬, 치환된 이미다졸 C_1-4알킬(여기서 이미다졸 치환체는 아미노, 아미디노, 구아니디노, 히드라지노, 아미드라조닐, C_1-4알킬아미노, C_1-4디알킬아미노, 할로겐, 퍼플루오로C_1-4알킬, C_1-4알킬, C_1-3알콕시, 니트로, 카르복시, 시아노, 설퍼릴 또는 히드록실 중의 하나 이상으로부터 독립적으로 선택된다), 이미다졸리닐C_1-4알킬, N-아미디노피페라지닐-N-C_0-4알킬, 히드록시C_2-5알킬, C_1-5알킬아미노C_2-5알킬, 히드록시C_2-5알킬, C_1-5알킬아미노C_2-5알킬, C_1-5디알킬아미노C_2-5알킬, N-아미디노피페리디닐C_1-4알킬 및 4-아미노사이클로헥실C_0-2알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 것이다.
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하기 화합물 1~2217로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
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