JP2001524931A - プロテアーゼおよびキナーゼのインヒビターとしてならびに転写因子のインヒビターとしてのβシート模倣物の使用 - Google Patents

プロテアーゼおよびキナーゼのインヒビターとしてならびに転写因子のインヒビターとしてのβシート模倣物の使用

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Abstract

(57)【要約】 β-シート模倣物およびこれに関連する方法が開示される。β-シート模倣物は、プロテアーセインヒビターおよびキナーゼインヒビター、ならびに転写因子のインヒビターとしての有用性を有する。本発明の方法は、β-シート模倣物を投与すること、または標的化されたプロテアーゼ、キナーゼ、および/または転写因子に関連する種々の症状の処置のための医薬品を製造するためのβ-シート模倣物の使用を包含する。

Description

【発明の詳細な説明】 プロテアーゼおよびキナーゼのインヒビターとしてならびに転写因子の インヒビターとしてのβシート模倣物の使用技術分野 本発明は、一般にβシート模倣物（mimetic）に関し、より詳細には生物学的 に活性なペプチドおよびタンパク質を阻害するβシート模倣物に関する。発明の背景 βシートコンホメーション（β鎖コンホメーションともいう）は、多くのポリ ペプチド中に存在する２次構造である。βシートコンホメーションは、隣接する アミノ酸間の軸距離が約3.5Åで、ほぼ完全に伸長している。βシートは、異な るポリペプチド鎖中のNH基とCO基との間の水素結合により安定化される。さらに 、ペプチド結合の双極子は、βシートに本質的な安定性を与える鎖にそって交互 になる。βシート中の隣接する鎖は、同一方向に伸び得る（すなわち、平行βシ ート）か、または反対方向に伸び得る（すなわち、逆平行βシート）。２つの形 態は二面角がわずかに異なるが、両方とも立体的には好ましい。βシートコンホ メーションの伸長したコンホメーションにより、βシートの交互の面に突き出る アミノ酸側鎖が生じる。 ペプチドおよびタンパク質中のβ-シートの重要性は十分に確立されている（ 例えば、Richardson，Nature268:495-499，1977;Halversonら，J．Am．Chem．So c．113:6701-6704，1991;Zhang，J．Biol．Chem．266:15591-15596，1991;Madde nら，Nature 353:321-325，1991）。β-シートは、多くの生物学的タンパク質− タンパク質認識事象（プロテアーゼとこれらの基質との間の相互作用、プロテイ ンキナーゼおよびこれらの基質またはインヒビター、タンパク質含有SH2ドメイ ンの、タンパク質標的を含有するこれらの同系（cognate）ホスホチロシンへの 結合、そのタンパタ質基質へのファルネシルトランスフェラーゼ、ならびにMHC IおよびIIおよびこれらの抗原ペプチドを含む）において重要であり、そし て多くの疾患状態に関係する。 生物学的に活性なタンパク質またはペプチドのβ-シート構造を模倣するイン ヒビターは、広範な種々の状態の処置に有用である。例えば、Ras（rasオンコジ ーンのタンパク質産物）は、細胞の分裂および増殖を調節するシグナル伝達に関 連する膜結合タンパク質である。ras遺伝子中の変異は、最も一般的な遺伝子異 常のなかでも、ヒトのガンに関連する（Barbacid，M．「ras genes,」56:779-82 7，1987）。これらの変異は、増殖シグナルを生じ、これが常に「オン（on）」 の状態になって、ガン細胞を導く。細胞膜に局在化するため、Rasは、ファルネ シルトランスフェラーゼ（FTase）による、そのC-末端CaaX配列内のシステイン のプレニル化を必要とする。（配列CaaXにおいて、「ａ」は疎水性側鎖を有する アミノ酸として定義され、そして「Ｘ」は、別のアミノ酸である。）この翻訳後 修飾はその活性に不可欠である。CaaX配列を有するFTaseのペプチジルインヒビ ターは、細胞培養物および全動物において腫瘍の増殖をブロックするか、または 遅らせることが示されている（Kohlら、「ファルネシルトランスフェラーゼイン ヒビターによるras依存性形質転換の選択的阻害（Selective inhibition of ras -dependent taransformation by a farnesyltransferase inhibitor）」、Scien ce 260:1934-1937，1993;Buss，J．E.およびMarsters，Jr.，J．C.,「ファルネ シルトランスフェラーゼインヒビター：新しいクラスの潜在的ガン治療剤の成功 と意外性（Farnesyl transferase inhibitors:the successes and surprises of a new class of potential cancer chemotherapeutics）」、Chemistry and Bi ology 2:787-791，1995）。 SH2ドメイン（元来、PTKのsrcサブファミリー中で同定される）は、非触媒性 配列であり、そして種々のシグナルを伝達するタンパク質間で保存されている約 100個のアミノ酸からなる（Cohenら，Cell 80:237-248，1995）。SH2ドメインは 、ホスホチロシン結合モジュールとして機能し、そして重要なタンパク質−タン パク質の会合を媒介する（Pawson，Nature 573-580，1995）。特に、SH2ドメイ ンの役割は、レセプターチロシンキナーゼに対する重要なシグナルトランスデュ ーサーとして明確に定義される（EGF-R、PDGF、インスリンレセプターなどのよ うなRTK）。自己リン酸化RTK上のホスホチロシン含有部位は、SH2タンパク質に 対 する結合部位として作用し、それによって、生化学的シグナル経路の活性化を媒 介する（Carpenter，G.，FAESEB J．6:3283-3289，1992;Sierke，S.およびKolan d，J.，Biochem．32:10102-10108，1993）。SH2ドメインは、活性化増殖因子レ セプターを細胞応答（遺伝子発現、細胞増殖、細胞骨格構造および代謝の変化を 包含する）と結び付ける原因である。 少なくとも20の細胞質タンパク質は、SH2ドメインを含みかつ細胞内シグナル において機能すると認められている。SH2ドメインの分布は、特定のタンパク質 ファミリーに制限されないが、タンパク質、タンパク質キナーゼ、脂質キナーゼ 、タンパク質ホスファターゼ、ホスホリパーゼ、Ras制御タンパク質およびいく つかの転写因子のいくつかのクラスにおいて見出される。多くのSH2含有タンパ ク質は、公知の酵素活性を有するが、他のもの（Grb2およびCrk）は、細胞表面 レセプターと下流のエフェクター分子との間の「リンカー」および「アダプター 」として機能する（Marengere，L.ら、Nature 369:502-505,1994）。酵素活性（ シグナル伝達において活性化される）を有するSH2ドメインを含有するタンパク 質の例としては、タンパク質チロシンキナーゼのsrcサブファミリー（src(pp60c -src )、abl、lck、fyn、fgrなど）、ホスホリパーゼ-C-γ（PLC-γ）、ホスファ チジルイノシルトール3-キナーゼ（P1-3-キナーゼ）、P21-ras GTPase活性化タ ンパク質（GAP）およびSH2含有タンパク質チロシンホスファターゼ（SH-PTPase ）が挙げられるが、それらに限定されない（Songyangら、Cell 72:767-778，199 3）。表面レセプターが、増殖因子レセプター、サイトカインレセプター、イン スリンレセプター、およびＴ細胞レセプターまたはＢ細胞レセプターを介する抗 原媒介シグナルに対する多様なリガンドに関与する場合、細胞内のチロシンはリ ン酸化される。チロシン残基でのタンパク質のリン酸化は、細胞シグナル伝達、 新生物形質転換および細胞周期の制御において重要である。その中心的な役割に よって、これらの種々のSH2タンパク質は、活性化細胞表面レセプターからさら なる分子相互作用のカスケードへの伝達シグナルに従事して、これが最終的に、 細胞応答を規定するための特定のSH2−タンパク質結合をブロックするインヒビ ターが、種々の潜在的な治療用途のための薬剤として所望される。 チロシンリン酸化およびSH2結合の阻害が薬物の開発のための標的を表す疾患 の領域は、以下を包含する： ガン：シグナルを媒介するSH2ドメインは、オンコジーンおよびプロトオンコ ジーンチロシンキナーゼ活性および細胞増殖の調節において明らかに重要な要素 である（Carpenter，Fed．Am．Soc．Exp．Biol．J．6:3283-3289，1992）。SH2 ドメインは、活性化RTKがシグナルを媒介し、そして非レセプターチロシンキナ ーゼがRTKと会合し、それゆえに、抗ガン剤開発の標的を認識する基質の重要な セットを規定する。模倣インヒビターを用いて、RTKとSH2含有基質との相互作用 をブロックする能力は、シグナルを伝達無効にし、それによってオンコジーン活 性を除去する手段を提供する。その生物学的な重要性はまた、v-crkオンコジー ン、SHドメインのほぼ全体を構成するタンパク質によって示され、ホスホチロシ ン含有タンパク質との相互作用により細胞性形質転換を引き起こし得る。上記の ように、インヒビターがSH2ドメインを介して他のタンパク質に結合するv-crkを ブロックする能力は、抗ガン剤として有効であると期待される。 免疫調節：多くの免疫応答の調節は、SH2ドメインを含有するチロシンキナー ゼを経てシグナルを伝達するレセプターを介して媒介される。抗原特異性Ｔ細胞 レセプター（TCR）によるＴ細胞の活性化は、リンホカイン分泌および細胞増殖 を導くシグナル伝達カスケードを開始する。TCR活性化の後の初期の生化学的応 答の１つはチロシンキナーゼ活性の増加である。特に、Ｔ細胞活性化および増殖 は、P56lckおよびp59fynチロシンキナーゼのＴ細胞レセプター媒介活性、ならび にSH2ドメインを含有するZAP-70およびSyk（WeissおよびLitman，Cell 76.263-2 74，1994）によって制御される。さらなる証拠は、いくつかのscr-ファミリーキ ナーゼ（lck、blk、fyn）が、Ｂ細胞抗原レセプターから導かれるシグナル伝達 経路に関与し、したがって、いくつかの独立したレセプター構造から受ける刺激 を統合するために作用し得る。したがって、これらのSH2ドメインキナーゼとこ れらの同系レセプターとの相互作用をブロックするインヒビターは、自己免疫疾 患、移植拒絶における有効性を有する免疫抑制剤として、または抗炎症剤および リンパ性白血病の場合における抗ガン剤として作用し得る。 さらに、SH2ドメインを含有する非膜貫通PTPaseが知られており、そして命名 法により、これらをSH-PTP1およびSH-PTP2という（Neel，Cell Biology 4:419-4 32，1993）。SH-PTP1は、PTP1C、HCP、またはSHPと同一であり、そしてSH-PTP2 はまた、PTP1DまたはPTP2Cとしても知られる。SH-PTP1は、分化の全ての系列お よび全てのステージの造血細胞において高レベルで発現される。SH-PTP1遺伝子 は、motheaten（me）マウス表現型の原因であると認識されたので、これは、そ の細胞性基質との相互作用をブロックするインヒビターの効果を予測するための 基礎を提供する。したがって、SH-PTP1機能の阻害は、マイトジェン刺激に対す る弱められたＴ細胞応答、低減したNK細胞機能、および上記のような潜在的な治 療適用を有するＢ細胞前駆体の涸渇を引き起こすことが予想される。 糖尿病：タイプ２（インスリン非依存性）糖尿病において、活性化されたイン スリンレセプターキナーゼの効果を相殺するチロシンホスファターゼ（SH-PTP2 ）は、重要な薬物標的を表し得る。インビトロ実験は、PTPaseの注入が、内因性 タンパク質上のチロシル残基のインスリン刺激リン酸化をブロックすることを示 す。したがって、インヒビターは、糖尿病におけるインスリン作用を調節するた めに働く。 神経再生：グリア増殖細胞はリガンドであり、これはチロシンリン酸化および シュワン細胞のマイトジェン応答を促進するためのerb-B2レセプターチロシンキ ナーゼ（p185erbB2）の特定のアクチベーターである。したがって、神経損傷後 のシュワン細胞の活性を改変することによるチロシンリン酸化の調節は、重要な 治療ストラテジーであり得る。ebr-2シグナル活性のインヒビターは、グリア細 胞起源の腫瘍の処置において重要な役割を有し得る。 β-シート模倣物の別のクラスは、プロテインキナーゼのインヒビターであり 、これはタンパク質チロシンキナーゼおよびセリン／トレオニンキナーゼを含む 。 固有のチロシンキナーゼ活性を有するポリペプチド増殖因子レセプターについ て、広範な種々の細胞基質を、ここで特徴付けした。レセプターチロシンキナー ゼ（RTK）ファミリーの多くのメンバー間には非常に多くの多様性が存在するが 、これらのレセプターによって使用されるシグナル機構は多くの共通の特徴を共 有する。生化学的および分子遺伝学的研究は、リガンドとRTKの細胞外ドメイン との結合が、細胞内ドメインの固有のチロシンキナーゼ触媒活性を急速に活性化 することを示している。増加した活性は、多くの細胞内基質（共通配列モチーフ を 含む）のチロシン特異的リン酸化を引き起こす。結果として、このことは、多く の下流シグナル分子、ならびにリン脂質代謝、アラキドン酸代謝、タンパク質リ ン酸化（他のプロテインキナーゼを包含する）、カルシウム動員および転写調節 を調節する細胞内経路のカスケードの活性化を引き起こす。RTK細胞質ドメイン の増殖因子依存性チロシンキナーゼ活性は、複数の細胞応答を開始する細胞内シ グナルの発生のための主要な機構である。したがって、チロシンキナーゼ活性の 副次的基質（alternate substrate）またはインヒビターとして作用するインヒ ビターは、このシグナルをブロックする能力を有する。 RTKサブファミリーの多くは、触媒性ドメインにおける構造類似性および細胞 外リガンド結合領域における特有のモチーフに基づいて認識され得る。これらの 構造的配慮に基づいて、RTKのいくつかのサブファミリー（それぞれがいくつか のメンバーを含む）を規定する命名法が開発されている（Hanks，Curr．Opin．S truc．Biol．1:369-383，1991;Ullrich，A.およびSchlessinger，J．Cell 61.20 3-212，1990）。それらのプロトタイプメンバーに基づいて呼ばれるレセプター サブファミリーの例として、以下が挙げられる：EGFレセプター、インスリンレ セプター、血漿板誘導性増殖因子（PDGF-レセプター）、線維芽細胞増殖因子レ セプター（FGFR）、TRKレセプター、およびEPH/ECKレセプター。これらのサブフ ァミリーのそれぞれにおけるメンバーは、チロシンキナーゼ活性をブロックし、 そして細胞内シグナル伝達を防止する模倣インヒビターの開発のための、分子標 的を表す。いくつかの治療領域（この中において、これらの標的は価値を有する ）は、以下で認識される。 ガン：正常な細胞増殖の媒介に加えて、RTKのEGFRファミリーのメンバーは、 種々の侵襲性上皮ガンにおいて頻繁に過剰発現され、そして悪性腫瘍の発達に直 接寄与すると考えられている。多くの研究は、特定のタイプの腫瘍（グリア芽細 胞腫、扁平上皮ガンおよび脳腫瘍を含む）においてEGFRが頻繁に増幅されること を示している（Wongら，Proc．Natl．Acad Sci USA 84:6899-6903，1987）。さ らに、HER2/p185erbB2（あるいは、ラットにおいて「neu」と呼ばれる）、HER3/ P160erbB3、HER4/p160erbB4（Plowman，G．ら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90 :1746-1750(1993)）は３つのRTKである。これらは、EGFRに対して広範なア ミノ酸配列相同性を有する。HER2/p185erbB2は、ヒト乳ガンおよび卵巣ガンにお いて、頻繁に増幅されそして過剰発現し（Wongら、Proc，Natl，Acad．Sci．USA 84:6899-6903，1987）、そしてこの増幅は、患者の不良な（poor）予後に相関 する。p185neuおよびEGFRの同時過剰発現は齧歯類線維芽細胞を相乗的に形質転 換し、そしてこの状態はしばしばヒトガンに観察される。最後に、HER3発現は、 種々のヒト腺ガンにおいて増幅される。いくつかのインヒビターは、インビトロ でのEGFRに対する阻害活性を示し、そしてEFG依存性細胞増殖をブロックするこ と（これは、この活性を有する化合物の治療可能性を示す）が知られている。さ らに、ヒト慢性骨髄性白血病において、チロシンキナーゼ活性の増強は、細胞性 c-ab1プロトオンコジーンの活性化の結果として疾患を引き起こす。インヒビタ ーは、抗ガン剤として機能する。 血管形成：現在、多様な群の生物学的応答（血管形成を誘導する能力を含む ）を媒介する、少なくとも７つのFGFRメンバーが存在する。さらに、７つのlgL を有するRTKのグループは、別々のサブファミリーを表すと提案されている。そ の既知のメンバー、FLT1、FLK1、およびFLT4は、構造および発現の類似性を示す 。これらのレセプターは、血管内皮増殖因子（VEGF）の作用を媒介する。証拠の いくつかのライン（line）は、この増殖因子レセプターのサブファミリーが血管 の形成において重要な役割を果たすことを示す。血管形成は、これらの細胞に酸 素を供給するために、腫瘍によって再活性化されるプロセスであるので、これら の増殖因子キナーゼ活性を阻害するβ-らせん模倣物は、血管形成の阻害によっ て腫瘍増殖を抑制するように作用し得る。 再狭窄：PDGFレセプターは、冠動脈バルーン血管形成術後の再狭窄において、 およびアテローム性動脈硬化においてもまた重要な役割を果たすと考えられるの で、心臓血管領域での阻害に対する標的として非常に興味がある。血管の傷害表 面での血小板によるPDGFの放出は、平滑筋細胞（結果として新生血管内膜肥大（ neointimal thickening））上でのPDGFレセプターの刺激を生じる。キナーゼ活 性の模倣インヒビターは、増殖を妨害し、そしてこの外科手術手順からより好結 果を導く。 シグナル伝達経路の多くの構成要素は、タンパク質基質のセリン／トレオニン （ser/thr）残基のリン酸化に関係する。これらの基質のいくつかは、それら自 身のプロテインキナーゼ（その活性はリン酸化によって調節される）である。２ つの主要なser/thr特異的プロテインキナーゼ（サイクリックAMP依存性プロテイ ンキナーゼＡ（PKA）およびプロテインキナーゼＣ（PKCファミリー））は、シグ ナル伝達に関して中心的な役割を果たす。他の多くのセリン／トレオニン特異的 キナーゼ（マイトジェン活性化タンパク質（MAP）キナーゼのファミリーを含む ）は、増殖因子レセプターまたはサイトカインレセプターシグナリングのいずれ かにおいて活性化される、重要なシグナル伝達タンパク質として働く。細胞内シ グナルに重要な他のタンパク質ser/thrキナーゼは、カルシウム依存性プロテイ ンキナーゼ（CaM-キナーゼII）およびc-raf-プロトオンコジーンである。 PKCは、種々の生理学的プロセスを制御するために、細胞−表面シグナル伝達 に関して重要な役割を果たし（Nishizuka，Nature 334:661-665，1988）、それ らの構造および異なる組織中での発現、ならびにそれらの基質特異性の異なるイ ソ酵素の大きなファミリーを表す（HugおよびSarre，Biochem J．291:329-343， 1993）。分子クローニングは、少なくとも８つのイソ酵素を示している。この多 様性および差次的な発現のために、個々のイソ酵素の活性化は、異なる細胞特異 的応答を生じる：増殖の刺激、分化の阻害、または分化の誘導。その細胞増殖を 刺激する能力のために、それは抗ガン剤開発のための標的を示す（Powis，Trend s in Pharm．Sci．12:188-194，1991）。哺乳動物細胞中のPKCイソ酵素の過剰発 現は、初期のプロトオンコジーン（例えば、c-jun、c-fos、c-myc）発現の増強 と相関し、そして１つの過剰発現細胞株はヌードマウスにおいて腫瘍を引き起こ す。 抗原によるＴ細胞の活性化はPKCの活性化に関係するので、免疫調節の分野で の治療適用は明白である。活性化されたPKCは、続いて、NF-κBの転写活性化、I L-2の産生、そして最終的にＴ細胞増殖に必要なシグナルカスケードの分枝を活 性化する。この分枝経路を介するシグナルをブロックするインヒビターは、Ｔ細 胞活性化を防ぐことが示されている。したがって、Ｔ細胞中のPKCのインヒビタ ーとして機能する模倣物は、シグナルをブロックし、そして移植拒絶において有 用な可能性のある免疫抑制剤としてか、またはリンパ性白血病に対する抗ガン剤 として働く。PKCのアクチベーターは、マウスの皮膚における浮腫および炎症を 生じ（Henningsら，Carcinogcncsis 8:1342-1346，1987）、したがって、インヒ ビターもまた、強力な抗炎症性化合物として働くと期待される。このような抗炎 症性アクチベーター（activates）は、喘息、関節炎および他の炎症媒介プロセ スにおける用途が見出される。さらに、スタウロスポリンおよびそのアナログ（ UCN01およびCGP4125、これらは、インビトロにおける強力なPKCインヒビターと して特徴づけられている）は、動物モデルにおける抗腫瘍活性を有し（Powis，T rends in Pharm．Sci．12:188-194，1991）、そして関連化合物は、臨床試験が 考慮されている。 プロテアーゼ阻害に関して、カテプシンＢは、プロ酵素プロセシングおよびタ ンパク質の代謝回転に通常関連するリソソームシステインプロテアーゼである。 活性レベルの上昇は、腫瘍転移（Sloane，B.F.ら、「カテプシンＢおよびその内 生インヒビター：腫瘍悪性度におけるその役割」Cancer Metastasis Rev．9:333 -352，1990）、慢性関節リウマチ（Werb，Z．「プロテイナーゼおよびマトリク ス分解」Textbook of Rheumatology，Keller，W.N．;Harris，W.D.;Ruddy，S.;S ledge，C.S.編、1989，W.B．Saunder Co.，Philadelphia，PA，300-321頁）、お よび筋ジストロフィー（Katunuma N.およびKominami E.，「筋肉消耗性疾患にお けるリソソーム性システインプロテイナーゼの異常発現」Rev．Physiol．Bioche m．Pharmacol．108:1-20，1987）に関係している。 カルパインは、細胞質性または膜結合性のCa++活性化プロテアーゼであり、こ れは細胞内のカルシウムレベルの変化に応答して細胞骨格タンパク質の分解を担 う。これらは、関節炎および筋ジストロフィーにおける組織分解に寄与する（Wa ng K.K.およびYuen P.W.，「カルパイン阻害：その治療上の可能性の概要」Tren ds Pharmacol．Sci．15:412-419，1994を参照のこと）。 インターロイキン変換酵素（ICE）は、プロIL-1βを炎症の重要なメディエー ターであるIL-1βに切断し、それゆえICEのインヒビターは関節炎の処置に有用 であると証明され得る（例えば、Miller B.E.ら、「マウスマクロファージにお ける成熟IL-1β産生物の阻害およびWIN 67694による炎症のマウスモデル、IL-1 β変換酵素のインヒビター」J．Immunol．154:1331-1338，1995を参照のこと） 。 ICEまたはICE様プロテアーゼもまた、アポトーシス（プログラムされた細胞死） において作用し得、それゆえガン、AIDS、アルツハイマー病、および調節されて いないアポトーシスが関係する他の疾患において役割を果たす（Barr，P.J.;Tom ei，L.D.，「ヒト疾患におけるアポトーシスおよびその役割」Biotechnol．12:4 87-493，1994を参照のこと）。 HIVプロテアーゼは、HIV（AIDSウイルス）の生活環において重要な役割を果た す。ウイルス成熟の最終段階において、HIVプロテアーゼは、ポリタンパク質前 駆体を切断し、ビリオンコアの機能酵素および構造タンパク質にする。HIVプロ テアーゼインヒビターは、AIDSに対する優れた治療標的として迅速に同定され（ Huff，J.R.，「HIVプロテアーゼ：AIDSに対する新規な化学療法の標的」J．Med ．Chem．34:2305-2314を参照のこと）、そしてリトナビル（ritonavir）、クリ クシバン（Crixivan）、およびサクイナビル（Saquinavir）の近年のFDA認可に より証明されるように、既にその処置において有用であると証明されている。 アンジオテンシン変換酵素（ACE）は、血圧の調節において中心的役割を果た すレニン−アンジオテンシン系の一部である。ACEは、アンジオテンシンＩをそ の血管収縮活性により強力な昇圧剤であるオクタペプチドアンジオテンシンIIに 切断する。ACEの阻害は、高血圧の処置において治療的に有用であると証明され た（Williams，G.H.，「高血圧の処置における変換酵素インヒビター」N．Engl ．J．Med．319:1517-1525，1989）。 コラゲナーゼは、細胞外マトリクス（例えば、結合組織、皮膚、血管）の主要 な構成要素であるコラーゲンを切断する。コラゲナーゼ活性の上昇は、関節炎（ Krane S.M．ら、「慢性関節リウマチにおけるマトリクス分解の機構」Ann．N．Y ．Acad．Sci．580:340-354，1990）、腫瘍転移（Flug M.およびKopf-Maier P.， 「最下部膜およびそのガン細胞侵入における関連」Acta Anat.Basel 152:69-84 ，1995）、および結合組織の分解に関係する他の疾患に寄与する。 トリプシン様セリンプロテアーゼは、止血／凝固（Davie，E.W.およびK．Fuji kawa，「血液凝固における基礎的機構」Ann．Rev．799-829，1975）および補体 活性化（Muller-Eberhard，H.J.，「補体」Ann．Rev．Biochem．44:697-724，19 75）に関係する大きくかつ高度に選択的な酵素のファミリーを形成する。これ らのプロテアーゼの配列決定は、特異性を改変するアミノ酸挿入を有する相同の トリプシン様コアの存在を示し、これは一般に他の高分子成分との相互作用の原 因である（Magnussonら、「タンパク質分解および生理学的調節」Miami Winter Symposia 11:203-239，1976）。 トリプシン様セリンプロテアーゼであるトロンビンは、フィブリノーゲンから のフィブリンの発生および血小板レセプターの活性化の両方において限定された タンパク質分解（preoloysis）を提供するように作用し、したがって血栓症およ び止血において重要な役割を果たす（Mann，K.G.，「膜上における血液凝固複合 体のアセンブリ」Trends Biochem．Sci．12:229-233，1987）。トロンビンは、 フィブリノーゲンにおける181個のArg-またはLys-Xaaの配列のうちのわずか２個 のArg-Gly結合の選択的切断を介するフィブリノーゲンのフィブリノペプチドＡ およびＢの除去において顕著な選択性を示す（Blomback，H.，Blood Clotting E nzymology，Seeger，W.H.（編）、Acadcmic Press，New York，1967，143-215頁 ）。 多くの重大な疾患状態は、急性冠状動脈症候群（coronary syndrome）を含む 異常止血に関する。アスピリンおよびヘパリンは、急性冠状動脈症候群を有する 患者の処置に広く使用される。しかし、これらの薬剤は、いくつかの本質的な制 限を有する。例えば、アテローム性動脈硬化プラークの破裂を併発する血栓症は 、アスピリンおよびヘパリンによる阻害に対して比較的抵抗性であるトロンビン 媒介の血小板依存的プロセスである傾向がある（Fusterら、「冠状動脈疾患の病 原体および急性冠状動脈症候群」N．Engl．J．Med．326242-50，1992）。 トロンビンインヒビターは、インビボでの血管損傷部位での血栓形成を防止す る。さらに、トロンビンはまた、冠状動脈における機械的損傷部位での平滑筋細 胞増殖を開始する強力な成長因子でもあるので、インヒビターは、この増殖性の 平滑筋細胞応答をブロックし、そして再狭窄を減少させる。トロンビンインヒビ ターはまた、血管壁細胞における炎症性応答を減少させる（Harkerら、Am．J．C ardiol 75:12B-16B，1995）。 さらに、少なくとも２つの十分に定義された転写因子、核因子(NF)κBおよび アクチベータータンパク質(AP)-1、は、細胞内還元−酸化（酸化還元）状態によ って調節される。酸化還元状態による遺伝子の発現の調節は、有望な治療的関連 を保持する。例えば、酸化還元調節された転写因子NF-κBおよびAP-1の結合部位 は、AIDS、ガン、アテローム性動脈硬化、および糖尿病合併症のような疾患の病 原に直接関連する多くの種々の遺伝子のプロモーター領域に位置する（Senおよ びPacker，FASEB Journal 10:709-720，1996）。より詳細には、NF-κBおよびAP -1のような転写因子のDNAのコンセンサス部位への結合は、特にチオール−ジス ルフィド平衡によって酸化剤−抗酸化剤ホメオスタシスによって駆動される。 NF-κBの場合には、NF-κB機能の調節に重要な役割を果たす生理学的に関連す るチオールは、還元されたチオレドキシン（thioredoxin）である。チオレドキ シンは、抗酸化剤機能を有する重要なタンパク質酸化還元酵素である。チオレド キシンは、活性化されたNF-κBのDNA結合をアップレギュレートすることが見い だされており、したがって遺伝子発現を増大する（Schenkら，Proc．Natl．Acad ．Sci．USA 91:1672-1676，1994）。チオレドキシンは、活性化された細胞質NF- κBを還元すること（特にcys-62の還元）に関連しており、したがって核転座お よびDNA結合に寄与し得る（Hayashlら，J．Biol．Chem．268:11380-11388，1993 ）。 AP-1複合体におけるFosおよびJunのDNA結合性はまた、酸化還元状態によって 調節されることが見いだされている（Abateら，Science 249:1157-1162，1990） 。各タンパク質は、そのDNA結合ドメイン中の（リジンおよびアルギニンに隣接 する）単一の保存されたシステインを含む。このチオールは、ジスルフィド結合 の一部ではないようであり、そしてその酸化された形態でスルフェン酸（sulfen ic acid）またはスルフィン酸として存在し得る。Ref-1は、エンドヌクレアーゼ DNA修復活性も有する二官能性核タンパク質であり、この調節システインの還元 によってAP-1 DNA結合を刺激する。重要なシステインがセリンと置換されている Fos変異体は、AP-1 DNA結合活性の３倍の上昇を誘起し、そしてもはや酸化還元 コントロールを受けなかった（Okunoら，Oncogene 8:695-701，1993）。したが って、fosファミリーの少なくとも４つのメンバー、３つのjunファミリー、およ び少なくとも４つのATF/CREBファミリーの転写因子はすべて、この保存されたシ ステインを含むので、転写因子の酸化還元コントロールは広範なようである。 上記のように、NF-κBおよびAP-1のような転写因子の調節は、重要な治療的関 連を有する。例えば、AP-1は、腫脹産生の重要なメディエーターである（Yoshio kaら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 924972-4976，1995）。したがって、AP-1転 写活性を抑制する化合物は、ガンの処置において有用性を有する。さらに、炎症 性サイトカインおよびエンドトキシンに対する応答を調節することにおける直接 的役割のため、NF-κBの活性化は、慢性関節リウマチのような慢性疾患および敗 血症性ショックのような急性症状の発現に重要な役割を果たす。全身性エリテマ トーデス（SLE）のような自己免疫疾患、およびアルツハイマー病はまた、NF-κ Bの活性化に関連すると考えられる。同様に、NF-κBは、HIV遺伝子発現の活性化 に重要な役割を果たす。NF-κBに関連すると考えられるさらなる症状には、flu 、アテローム性動脈硬化、発ガン、および血管拡張性失調症（AT）が挙げられる 。 PDZドメインを含むタンパク質は、β-シート模倣物に追加の潜在的標的を与え る。80〜100アミノ酸残基のこれらのドメインは、タンパク質のまさにカルボキ シル末端でコンセンサスX-Ser/Thr-X-Val配列に結合することによって、タンパ ク質−タンパク質相互作用を媒介する。内部（または非Ｃ末端）であるPDZドメ インを介するタンパク質相互作用の例もある。リガンド化されたおよびリガンド 化されていないPDZドメインの結晶構造が決定されており、そしてβ-シートコン ホメーションによってコンセンサス認識ポリペプチド配列を結合する６つのβ鎖 および２つのαヘリックス構造を示す。したがって、適切なβ-シート模倣物の スクリーニングは、PDZドメイン含有タンパク質を標的にするための有効なスト ラテジーを証明すべきである。PDZドメイン含有タンパク質の標的は、変化する がシグナル伝達に重要である。PSD-95は、膜結合グアニル酸キナーゼであり、こ れは３つのPDZドメイン、Shaker型K+チャンネルを標的するもののうちの２つ、 およびその機能に必要とされるクラスター形成を生じるN-メチル-D-アスパラギ ン酸（NMDA）レセプターを含む。PTPL1/FAP1は、タンパク質チロシンホスファタ ーゼであり、これは、５つのPDZドメイン、Fasと相互作用するもののうちの２つ 、腫瘍壊死因子レセプターファミリーの膜貫通タンパク質を有し、これは多くの 細胞タイプでアポトーシスを媒介する。したがって、PDZドメインを含むタンパ ク 質を標的する化合物は、抗ガン剤として有用であることを証明し得る。 βシートが果たす重要な生物学的役割の観点から、天然に存在するか、または 合成のペプチド、タンパク質、もしくは分子の本質的なβシート構造を安定化し 得る化合物が、当該分野で必要とされる。安定なβシート構造の作製、ならびに このような安定化された構造を使用してβシート構造を含む生物学的認識事象を もたらすか、または改変することもまた当該分野で必要とされる。本発明は、こ れらの必要を満たし、そしてさらなる関連した利点を提供する。発明の要旨 簡単に述べると、本発明は、β-シート模倣物、および、１つ以上のプロテア ーゼ阻害、キナーゼ阻害、および／または転写因子の調節による、温血動物中に おける治療効果を達成するための医薬品の製造の使用を含むβ-シート模倣物の 使用に関する。治療効果は、治療的有効量のβ-シート模倣物（二環式系を含む ）を温血動物に投与することによって生じる。ここで、β-シート化合物は、以 下の一般構造(I)（その薬学的に受容可能な塩を含む）を有する：ここで、 Ａは、-C(=O)-、-(CH2)0-4-、-C(=O)(CH2)1-3-、-(CH2)1-2O-、および-(CH2)1 -2 S-から選択され； Ｂは、ＮおよびCHから選択され； Ｃは、-C(=O)-、-C(=O)(CH2)1-3-、-(CH2)0-3-、-O-、-S-、-O-(CH2)1-2-、お よび-S(CH2)1-2-から選択され； Ｄは、NおよびC(R4)から選択され； Ｆは、任意のカルボニル部分であり； R1、R2'、およびR4は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択 され； R2は、アミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択されるか、あるいはＣとひ とまとめにして融合された置換されたまたは置換されていないホモ環式環または ヘテロ環式環を形成し； R3は、アミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択されるか、あるいはＣとひ とまとめにして-(CH2)1-2-、-O-、および-S-から選択される架橋部分を形成し； ＹおよびＺは、分子の残り（remainder）を表し；そして 二環式環の任意の２つの隣接するCH基は、二重結合を形成し得る。 Ｆ（すなわち、任意のカルボニル部分）が存在しそしてＥが-N(Z)-である１つ の実施態様では、本発明の化合物は以下の構造(II)を含む：ここで、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、R2、R2'、R3、Ｙ、およびＺは構造(I)に関して上で定 義されたとおりである。 この実施態様の好ましい局面では、Ａは、-C(=O)-または-(CH2)-のいずれかで あり、そしてＣは、-(CH2)2-であり、以下の構造(IIa)および(IIb)で表される： この実施態様では、六員環は、飽和されているかまたは不飽和（芳香族を含む） であり得る。例えば、構造(IIa)および(IIb)のＢおよびＤが両方とも-CH-である （そしてしたがって二重結合を形成し得る隣接CH基を構成する）場合、本発明の 化合物は以下の芳香族構造(IIc)および(IId)を含む： 同様に、構造(IIe)および(IIf)を有する以下の不飽和化合物はまた、構造(IIa) および(IIb)の化合物の代表例である： Ｆが存在しそしてＥが-C(R1)(NHZ)-である他の実施態様では、本発明の化合物 は、以下の構造(III)を含む： ここで、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、R1、R2、R2'、R3、Ｙ、およびＺは構造(I)に関して上 で定義されたとおりである。 この実施態様の好ましい局面では、Ａは、-C(=O)-または-(CH2)-のいずれかで あり、そしてＣは、-(CH2)2-であり、以下の構造(IIIa)および(IIIb)で表される ： この実施態様では、六員環は、飽和されているかまたは不飽和（芳香族を含む） であり得る。例えば、構造(IIIa)および(IIIb)のＢおよびＤが両方とも-CH-であ る（そしてしたがって二重結合を形成し得る隣接CH基を構成する）場合、本発明 の化合物は以下の芳香族構造(IIIc)および(IIId)を含む： 同様に、構造(IIIe)および(IIIf)を有する以下の不飽和化合物はまた、構造(III a)および(IIIb)の化合物の代表例である： この実施態様の他の局面では、Ａは-(CH2)0-であり、ＤはＮであり、そして 任意のカルボニル部分Ｆが存在し、以下の構造(IIIg)で表される： ここで、Ｂ、Ｃ、R1、R2、R3、Ｙ、およびＺは上で定義されたとおりである。 この実施態様のさらなる局面では、Ａは-(CH2)-であり、Ｃは-(CH2)0であり、 ＤはＮであり、そしてＦが存在し、以下の構造(IIIh)によって表される： さらなる実施態様では、Ｆが存在しそしてＥが-C(R1)(Z)-である場合、本発明 の化合物は以下の構造(IV)を含む： ここで、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、R1、R2、R2'、R3、Ｙ、およびＺは構造(I)に関して上 で定義されたとおりである。 この実施態様の好ましい局面では、Ａは、-C(=O)-または-(CH2)-のいずれかで あり、そしてＣは、-(CH2)2-であり、以下の構造(IVa)および(IVb)で表される： この実施態様では、六員環は、飽和されているかまたは不飽和（芳香族を含む ）であり得る。例えば、構造(IVa)および(IVb)のＢおよびＤが両方とも-CH-であ る（そしてしたがって二重結合を形成し得る隣接CH基を構成する）場合、本発明 の化合物は以下の芳香族構造(IVc)および(IVd)を含む： 同様に、構造(IVe)および(IVf)を有する以下の不飽和化合物はまた、構造(IVa) および(IVb)の化合物の代表例である： さらなる実施態様では、Ｆが存在せず、そしてＥが-N(Z)-、-C(R1)(NHZ)-、ま たは-C(R1)(Z)-である場合、本発明の化合物は以下の構造(V)、(VI)、および(VI I)を含む：ここで、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、R1、R2、R2'、R3、Ｙ、およびＺは構造(I)に関して上 で定義されたとおりである。 さらなる実施態様では、ＣとひとまとめになったR3が架橋部分を形成する場合 、本発明の化合物は以下の構造(VIII)を含む： ここで、Ｘは-(CH2)1-2-、-O-、および-S-から選択される架橋部分であり、そし てＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、R2、R2'、Ｙ、およびＺは構造(I)に関して上で定義 されたとおりである。 この実施態様の１つの局面では、Ｆが存在し、Ａは-C(=O)-であり、Ｃは-(CH2 )2-であり、そしてＥは-N(Z)-または-C(R1)(NHZ)-のいずれかである場合、本発 明の化合物は以下の構造(VIIIa)および(VIIIb)の化合物を含む： なおさらなる実施態様では、ＣとひとまとめになったR2は、構造(IX)によって 表される融合した環を形成する：ここで、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、R2、R2'、およびR3およびＹは上で定義されたと おりである。 この実施態様の１つの局面では、ひとまとめになったR2およびＣは、構造(IXa )および(IXb)によって表される融合された五、六、または七員環を形成する： ここで、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、R2'、R3、およびＹは上で定義されたとおりである。 本発明のこれらおよび他の局面は、以下の詳細な説明に関して明らかになる。発明の詳細な説明 上記のように、β-シートは、多くの生物学的認識事象に重要な構造構成成分 である。本発明のβ-シート模倣物は、天然または合成のペプチド、タンパク質 、あるいは分子のβ-シート構造を与えおよび／または安定化するために役立ち 、特にコンホメーションの安定性について役立つ。さらに、本発明のβ-シート 模倣物は、タンパク質分解性の分解により抵抗性であり、したがって、ペプチド 、タンパク質、またはこれらを含む分子を分解に対してより抵抗性にする。β- シート模倣物は、タンパク質、ペプチド、または分子のＣ末端またはＮ末端のい ずれかに配置され得、あるいはタンパク質、ペプチド、または分子自体の内部に 位 置され得、そして本発明の１つより多くのβ-シート模倣物は、タンパク質、ペ プチドまたは分子に組み込まれ得る。 本発明のβ-シート模倣物は、一般的に、上記の構造(I)、ならびに、構造(II) 〜(IX)により示されるより特定の実施態様により示される。本発明のβ-シート 模倣物は、天然に存在するL-アミノ酸を含むβ-シートの３次元コンホメーショ ン、ならびに１つ以上のD-アミノ酸を含むβ-シートの構造を模倣するように構 築され得る。したがって、構造(I)のβ-シート模倣物のすべての立体コンホメー ションは、本発明の範囲内である。 例えば、構造(II)のβ-シート模倣物は、以下の構造(II')および(II")を含む ： 同様に、構造(III)のβ-シート模倣物は、以下の構造(III')〜(III"")を含む： 構造(IV)のβ-シート模倣物は、これらの同じ立体コンホメーションを含むが 、構造(III')〜(III"")の「Z-NH」部分は「Z」部分で置換される。 本明細書で用いられる場合、（R1、R2、R2'、R3、およびR4部分を定義するた めに使用されるような）用語「アミノ酸側鎖部分」は、天然に存在するタンパク 質中にある任意のアミノ酸側鎖部分を表し、以下の表１で同定される天然に存在 するアミノ酸側鎖部分を含む（しかしこれらに限定されない）。本発明の他の天 然に存在する側鎖部分には、3,5-ジブロモチロシン、3,5-ジヨードチロシン、ヒ ドロキシリジン、ナフチルアラニン、チエニルアラニン、γ-カルボキシグルタ メート、ホスホチロシン、ホスホセリン、およびグリコシル化アミノ酸（例えば 、-グリコシル化セリン、グリコシル化アスパラギン、およびグリコシル化トレ オニン）の側鎖部分が含まれる（しかしこれらに限定されない）。 天然に存在するアミノ酸側鎖部分の他に、本発明のアミノ酸側鎖部分はまた、 それらの種々の誘導体を含む。本明細書で用いられるように、アミノ酸側鎖部分 の「誘導体」には、天然に存在するアミノ酸側鎖部分へのすべての改変および／ または変更が含まれる。例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、 フェニルグリシン、およびフエニルアラニンのアミノ酸側鎖部分は、一般的に低 級鎖アルキル、アリール、またはアラルキル部分として分類され得る。アミノ酸 側鎖部分の誘導体には、他の直鎖または分岐、輿式または非臭式、置換または非 置換、飽和または不飽和の、低級鎖アルキル、アリール、またはアラルキル部分 が含まれる。 本明細書で用いられるように、「低級鎖アルキル部分」は１〜12炭素原子を含 み、「低級鎖アリール部分」は６〜12炭素原子を含み、そして「低級鎖アラルキ ル部分」は７〜12炭素原子を含む。したがって、１つの実施態様において、アミ ノ酸側鎖誘導体は、Ｃ1-12アルキル、Ｃ6-12アリール、およびＣ7-12アラルキル から選択され、そしてより好ましい実施態様では、Ｃ1-7アルキル、Ｃ6-10アリ ール、およびＣ7-11アラルキルから選択される。 本発明のアミノ酸側鎖誘導体は、さらに、低級鎖アルキル、アリール、および アラルキル部分の置換された誘導体を含み、ここで、置換基は以下の化学部分の １つ以上から選択される（しかしこれらに限定されない）：-OH、-OR、-COOH、- COOR、-CONH2、-NH2、-NHR、-NRR、-SH、-SR、-SO2R、-SO2H、-SOR、およびハロ ゲン（F、Cl、Br、およびIを含む）、ここで、Rの各存在は独立して低級鎖アル キル、アリール、またはアラルキル部分から選択される。さらに、本発明の環式 低級鎖アルキル、アリール、およびアラルキル部分には、ナフタレンならびに複 素環式化合物（例えば、チオフェン、ピロール、フラン、イミダゾール、オキサ ゾール、チアゾール、ピラゾール、3-ピロリン、ピロリジン、ピリジン、ピリミ ジン、プリン、キノリン、イソキノリン、およびカルバゾール）が含まれる。ア ミノ酸側鎖誘導体は、さらに、低級鎖アルキルおよびアラルキル部分のアルキル 部分のヘテロアルキル誘導体を含み、アルキルおよびアラルキルのホスホネート およびシランを含む（しかしこれらに限定されない）。 本発明の文脈で使用されるように、用語「分子の残り（remainder）」（Ｙお よびＺによって表されるように）は、任意の化学部分であり得、上で定義される ようなアミノ酸側鎖部分およびその誘導体を含む（しかし、これらに限定されな い）。例えば、β-シート模倣物がペプチドまたはタンパク質の長さ内に位置さ れる場合、ＹおよびＺはペプチドまたはタンパク質のアミノ酸を表し得る。ある いは、２つ以上のβ-シート模倣物が結合している場合、第１のβ-シート模倣物 のＹ部分は、第２のβ-シート模倣物を表し得、逆に、第２のβ-シート模倣物の Ｚ部分は、第１のβ-シート模倣物を表す。 β-シート模倣物がペプチドまたはタンパク質の末端に位置する場合、あるい はβ-シート模倣物がペプチドまたはタンパク質と会合されない場合、Ｙおよび ／またはＺは適切な終結部分を表し得る。例えば、Ｚ部分についての代表的な終 結部分には、-H、-OH、-R、-C(=O)R、および-SO2R（ここでRは、低級鎖アルキル 部分、低級鎖アリール部分、および低級鎖アラルキル部分から選択される）（こ れらに限定されない）が含まれ、あるいはBOC、FMOC、およびCBZ（すなわち、そ れぞれ、tert-ブチルオキシカルボニル、9-フルオレニルメトキシカルボニル、 およびベンジルオキシカルボニル）のようなタンパク質合成に適切な保護基であ り得る。 同様に、Ｙ部分についての代表的な終結部分には、-H、-OH、 （ここで、X'は、Cl、F、Br、またはIであり、そしてRの各存在は、独立して低 級鎖アルキル部分、低級鎖アリール部分、および低級鎖アラルキル部分から選択 される）、あるいはピリジン、ピラン、チオファン、ピロール、フラン、チオフ ェン、チアゾール、ベンズチアゾール、オキサゾール、ベンズオキサゾール、イ ミダゾール、およびベンズイミダゾールのようなヘテロ環式部分が含まれる（し かし、これらに限定されない）。 上記の構造(I)に関して、二環式環の任意の２つの隣接CH基は、二重結合を形 成し得る。このような二重結合は、単離してまたは芳香族環系を含む１つ以上の 追加の二重結合との結合で存在し得る。例えば、代表的な単離された二重結合に は、上記の構造(IIe)、(IIf)、(IIIe)、(IIIf)、(VIe)、(IVf)、(VIIa)、および (VIIb)の化合物が含まれる。結合された二重結合を生じる代表的な芳香族化合物 は、構造(IIc)、(IId)、(IIIc)、(IIId)、(IVc)、および(IVd)によって表される 。 本発明の特定の実施態様内で、上記の構造(II)を有するβ-シート模倣物が開 示され、ここで、Ａは-C(=O)-であり、ＢはNであり、Ｃは-(CH2)2-または-C(=O) CH2-であり、ＤはNであり、そして任意のカルボニル部分Ｆが存在し、以下の構 造(IIg)、(IIh)、および(IIh')によって表される： 同様に、ＢおよびＤが両方ともCHである場合、本発明の代表的なβ-シート模倣 物は、以下の構造(IIi)、(IIj)、および(IIj')の化合物を含む： 本発明の他の特定の実施態様では、上記の構造(III)を有するβ-シート模倣物 が開示される。この実施態様の１つの局面では、ＤはNであり、そして化合物は 以下の構造(IIIi)を有する： ここで、Ａは-C(=O)-、-(CH2)0-4-、および-C(=O)(CH2)1-3から選択され；ＢはN およびCHから選択され；Ｃは-C(=O)-および-(CH2)0-3-から選択され；そして二 環式環系は飽和される（すなわち、二環式環系の隣接CH基間に二重結合を含まな い）。 ＢがCHでありそしてR3が水素であるこの実施態様では、以下の構造(IIIj)、(I IIk)、および(IIIl)を有する化合物が開示される： ＢがNでありそしてR3が水素である構造(IIIi)の実施態様では、以下の構造(II Im)、(IIIn)、および(IIIo)を有する化合物が開示される： 本発明のこの局面の好ましい実施態様では、以下の構造(IIIp)、(IIIq)、(III r)、および(IIIr')を有する化合物が開示される： 上記の構造(IIIi)の他の実施態様では、以下の構造(IIIs)を有する化合物が開 示される： ここで、Ａは-(CH2)0-4-、-(CH2)1-2O-、および-(CH2)1-2S-から選択され；Ｃは -(CH2)0-3-、-O-、-S-、-O(CH2)1-2-、および-S(CH2)1-2-から選択され；そして 二環式環系は飽和される。 Ａが-(CH2)0-4-である構造(IIIs)の実施態様では、以下の構造(IIIf)を有する 化合物が開示される： Ａが-(CH2)1-2O-または-(CH2)1-2S-である構造(IIIs)の実施態様では、以下の 構造(IIIu)および(IIIv)を有する化合物が開示される： Ｃが-(CH2)1-3-である構造(IIIs)の実施態様では、以下の構造(IIIw)を有する 化合物が開示される：ここで、Ａは-(CH2)1-4-、-(CH2)1-2O-、および-(CH2)1-2S-から選択される。 Ｃが-O-または-S-である構造(IIIs)の実施熊様では、以下の構造(IIIx)および (IIIy)を有する化合物が開示される： Ｃが-O(CH2)1-2-または-S(CH2)1-2-である構造(IIIs)の実施態様では、以下の 構造(IIIz)および(IIIza)を有する化合物が開示される： 本発明のさらなる実施態様内では、上記の構造(IV)を有するβ-シート模倣物 が開示される。この実施態様の１つの局面では、Ａは-C(=O)-であり、ＢはCHま たはNであり、Ｃは-(CH2)2-または-C(=O)CH2-であり、ＤはNであり、そして任意 のカルボニル部分が存在し、以下の構造(IVg)、(IVg')、(IVh)、および(IVh')に よって表される： Ｆが存在しない本発明の実施態様では、構造(V)、(VI)、および(VII)を有する 化合物が開示される。構造(V)の化合物については、Ａが-C(=O)-であり、Ｂおよ びＤが両方ともCHまたはNであり、そしてＣが-(CH2)2-である場合、本発明の代 表的化合物は、以下の構造(Va)、(Vb)、および(Vc)を含む： 同様に、構造(VI)では、Ａが-C(=O)-であり、ＢおよびＤが両方ともCHまたはN であり、そしてＣが-(CH2)2-である場合、本発明の代表的化合物は、以下の構造 (VIa)、(VIb)、および(VIc)を含む： 構造(VII)については、Ａが-C(=O)-であり、ＢおよびＤが両方ともCHまたはN- であり、そしてＣが-(CH2)2-である場合、本発明の代表的化合物は、以下の構造 (VIIa)、(VIIb)、および(VIIc)を含む： 構造(VIII)の化合物に関して、１つの実施態様では、構造(VIIIa)および(VIII b)のＢおよびＤは両方ともCHまたはNであり、そしてＸは-S-、-O-、または-(CH 2 )2-であり、構造(VIIIc)、(VIIId)、(VIIIe)、および(VIIIf)の化合物を得る： 構造(IX)の実施態様では、Ａは-C(=O)-であり、ＢおよびＤは両方ともNであり 、Ｅは-N(Z)-、-C(R1)(NHZ)-、または-C(R1)(Z)-であり、そしてＦが存在する場 合、本発明の化合物は構造(IXc)〜(IXh)を含む。 本発明のβ-シート模倣物は、公知の有機合成技法によって当業者によって合 成され得る。例えば、構造(I)の種々の実施態様は、以下の反応スキームに従っ て合成され得る。 構造(III)の代表的化合物は、以下の反応スキームによって合成され得る（こ こで、n＝0〜4、p＝0〜3、そしてm＝0〜2）：反応スキーム(1) 反応スキーム(2) 構造(IIIk)は以下の反応スキームにより合成され得る： 反応スキーム(3) 構造(IIIl')を有する構造(IIIl)の代表的化合物は、以下の反応スキームによ り合成され得、ここで、スキーム(3)における構造(IIIl")は二環式環系中に二重 結合を有する本発明の代表的構造である： さらに、構造(IIIl")を有する構造(IIIl)の代表的化合物は、以下の反応スキ ームにより合成され得、そして、構造(IIIl)のAが-C(=O)(CH2)1-3-である場合、 関連化合物（以下で(IIIl')と命名される）は以下の反応スキームにより合成さ れ得る： 反応スキーム(4) 以下の構造(IIIm')および(IIIm")（ここでR3は水素である）を有する構造(III m)の代表的化合物は、以下の反応スキームにより合成され得る（HolmesおよびNe el、Tet．Lett．31:5567-70，1990を参照のこと）： 構造(IIIi)の代表的化合物（ここでR3はアミノ酸側鎖部分またはその誘導体で ある）はまた、上記のスキーム(4)に従って調製され得る。反応スキーム(5) 構造(IIIn')を有する構造(IIIn)の代表的化合物は、以下の反応スキームによ り合成され得る： 反応スキーム(6) 構造(IIIo)は、以下の反応スキームにより合成され得る： 反応スキーム(7) 以下に示される構造(IIIp')および(IIIp")を有する構造(IIIp)の代表的化合物 は、以下の反応スキームにより合成され得る： 反応スキーム(8) 構造(IIIq')および(IIIq")を有する構造(IIIq)の代表的化合物は、以下の反応 スキームにより合成され得る（JungheimおよびSigmund、J．Org．Chem．52:4007 -4013，1987を参照のこと）： 反応スキーム(9) 構造(IIIr)は、以下の反応スキームにより合成され得る（Perkln、J．Chem．S oc．Perk．Trans．1:155-164，1984を参照のこと）： 反応スキーム(10) 構造(IIIt)は、以下の反応スキームにより合成され得る： 反応スキーム(11) 構造(IIIu)および(IIIv)は、以下の反応スキームにより合成され得る： 反応スキーム(12) 構造(IIIw)は、以下の反応スキームにより合成され得る： 反応スキーム(13) 構造(IIIx)および(IIIy)は、以下の反応スキームにより合成され得る： 反応スキーム(14) 構造(IIIz)および(IIIza)は、以下の反応スキームにより合成され得る： 上記構造(I)の定義によれば、二環式環系は隣接するCH基を含み得る（すなわ ち、二環式環系は、少なくとも一部は-CH-CH-基により形成され得る）。-CH-CH- 基が-C=C-に置換されるような化合物もまた、構造(I)の範囲内に含まれる（すな わち、二環式環の任意の２つの隣接するCH基が一緒に二重結合を形成し得る）。 反応スキーム(15)、(16)、および(17)は、構造(III)の代表的化合物を調製す るための合成方法論をさらに例示する。反応スキーム(15) 反応スキーム(16) 反応スキーム(17) 構造(IV)の代表的化合物は、以下の反応スキーム(18)〜(21)によって調製され 得る。 反応スキーム(18) 反応スキーム(19) MillerおよびWatkins，J．Am．Chem．Soc．90:1515，1976の方法による出発物質 。 あるいは、構造(IVc)および(IVd)は、反応スキーム(19-1)によって作成され得 る。反応スキーム（19ー1） 反応スキーム(20) 反応スキーム(21) あるいは、構造(IVf)は、以下の反応スキーム(21-1)によって作成され得る。反応スキーム(21-1) 構造(VIII)の代表的化合物は、反応スキーム(22)および(23)によってウラゾー ルまたはプラゾリジンジオンのいずれかから合成され得る。反応スキーム(22) 構造(VIIIc)は、以下の反応スキームによってウラゾールから合成され得る： 反応スキーム(23) 構造(VIIId)は、以下の反応スキームによってピラゾリジンジオンから合成さ れ得る： あるいは、ピラゾリジンジオン出発物質は、以下の反応スキームによって合成 され得る： 構造(II)の代表的化合物は、以下の反応スキーム(24)によって合成され得る：反応スキーム(24) 構造(II)のさらなる代表的化合物は、以下の反応スキーム(25)によって作成さ れ得る： 反応スキーム(25)： 構造(III)のさらなる代表的化合物は、以下の反応スキーム(26)によって作成 され得る： 反応スキーム(26)： 構造(V)、(VI)、および(VII)の化合物は、それぞれの前駆体中間体がＦ位にカ ルボニル部分を含まないことを除いて、構造(II)、(III)、および(IV)の化合物 について上で開示されたものと同じ一般的技法によって作成され得る。 さらに、構造(IX)の化合物は、反応スキーム(27)に従って調製され得る：反応スキーム(27) 構造(IIe)の代表的化合物は、以下の反応スキーム(28)によって作成され得る ： 本発明のβ-シート模倣物の１つの実施態様では、Ｙ基は以下の構造を有する ： ここで、好ましい立体化学は： 好ましいR4基は、約２〜約10個の炭素原子および少なくとも１つの窒素原子を 有する有機アミン部分である。適切な有機アミン部分は、化学式C2-10H4-20N1-6 O0-2を有し；そして、好ましくは、化学式C3-7H7-14N1-4O0-1を有する。本発明 の典型的な有機アミン部分は以下のものである（ここで、Ｒは、水素、ハロゲン （例えば、フッ素）、低級鎖アルキル（例えば、メチル）、およびヒドロキシ低 級鎖アルキル（例えば、ヒドロキシメチル）から選択され；そしてＸは、CH2、N H、S、およびOから選択される）： 上記の構造において、R5は、(a)１〜約12個の炭素原子のアルキル、必要に応 じて１〜４のハライド、C1-5アルコキシ、およびニトロで置換されている、(b)- C(=O)NH-C1-5アルキル、ここでアルキル基は必要に応じてハライドまたはC1-5ア ルコキシで置換されている、(c)-C(=O)NH-C1-10アラルキル、ここでアリール基 は、ニトロ、ハライド、-NH-(C=O)C1-5アルキル、-NH-(C=O)C6-10アリール、C1- 5 アルキル、およびC1-5アルコキシから独立して選択される５つまでの基で必要 に応じて置換され得る、および(d)４〜約11個の環原子の単環式および二環式ヘ テロアリール、ここで環原子は炭素およびヘテロ原子（酸素、窒素、および硫黄 ）から選択され、そしてヘテロアリール環は、約４つまでのハライド、C1-5アル キル、C1-5アルコキシ、-C(=O)NHC1-5アルキル、-C(=O)NHC6-10アリール、アミ ノ、-C(=O)OC1-5アルキル、および-C(=O)OC6-10アリールで必要に応じて置換さ れ得る、から選択される。 好ましいR5基は、以下のものである： ここで、R6は、水素、ニトロ、ハライド、NH-C(=O)-C1-5アルキル、NH-C(=O)-C6 -10 アリール、C1-C5アルキル、およびC1-C5アルコキシである； ここで、Xはハライドである； ここで、Eは、-O-、-NH-、または-S-であり、そしてR7およびR8は、水素、C1-5 アルキル、-C(=O)OC1-5アルキル、-C(=O)OC6-10アリール、-C(=O)NHC1-5アルキ ル、および-C(=O)NHC6-10アリールから独立して選択される；および ここで、EおよびR6は、すでに定義されているとおりである。 本発明のβ-シート模倣物は、自動化固相ペプチド合成を含む標準的なペプチ ド合成プロトコルに使用され得る。ペプチド合成は、段階的プロセスであり、こ こでペプチドは単一のアミノ酸の段階的付加によるペプチド鎖の伸長によって形 成される。アミノ酸は、ペプチド（アミド）結合の形成によりペプチド鎖に連結 される。ペプチド連結は、ペプチドのアミノ基をアミノ酸のカルボン酸基にカッ プリングすることにより形成される。このように、ペプチドはカルボキシル末端 からアミノ末端へ合成される。アミノ酸付加の個々の工程は、所望の長さおよび アミノ酸配列のペプチド（またはタンパク質）が合成されるまで繰り返される。 上記のようなペプチド（あるいはタンパク質または分子）合成を完了するため に、ペプチドに付加すべきアミノ酸のアミノ基は、アミノ酸とペプチドとの間の ペプチド結合形成（すなわち、アミノ酸のカルボキシル基の、ペプチドのアミノ 基へのカップリング）を妨害すべきではない。このような妨害を防ぐために、ペ プチド合成に使用されるアミノ酸のアミノ基は適切な保護基で保護される。代表 的なアミノ保護基は、例えば、BOCおよびFMOC基を含む。したがって、本発明の １つの実施態様では、本発明のβ-シート模倣物は遊離のカルボン酸基および保 護されたアミノ基を有し、そしてこのように、標準的な合成技法によるペプチド への組込みに適切である。 本発明のβ-シート模倣物は、固体支持体上で、代表的には適切なリンカーを 介して、合成され得る。β-シート模倣物は、次いで、例えばアミノ分解により 固体支持体から切断され、適切な薬剤（例えば、発色基質BAPNA（ベンジロイル アルギニン(benzyoylarginine)パラニトロアナリド）に対する競合基質としてス クリーニングされ得る（EichlerおよびHoughten、Biochemistry 32:11035-11041 ,1993を参照のこと）（本明細書に参考として援用される）。あるいは、適切な リンカー部分を用いることにより、β-シート模倣物が固体支持体にまだ付着さ れている間に、このようなスクリーニングが行われ得る。 上記速度論的分析により基質が選択されると、β-シート模倣物は、C-末端へ の改変により−すなわち、Ｙ部分への改変により−インヒビターへ変換され得る 。例えば、末端Ｙ部分は、-CH2Cl、-CF3、-H、または-C(O)NHRで置換され得る。 適切なR部分は、基質のライブラリーを用いて、あるいは、WassermanおよびHoの 手順の改変を用いて生成されるインヒビターのライブラリーを用いて選択され得 る（J．Org．Chem．59:4364-4366，1994）（本明細書に参考として援用される） 。 β-鎖テンプレートを含む化合物のライブラリーは、基質認識または結合に対 する最適配列を決定するために構築され得る。このようなライブラリーを使用す るための代表的なストラテジーを以下に議論する。 代表的なβ-シート模倣物基質ライブラリーは以下のように構築され得る。以 下が、β-シート模倣物基質ライブラリーを調製するために使用され得る方法論 の例示であること、および他のライブラリーが類似の方法で調製され得ることが 理解されるべきである。 第１の工程において、以下のタイプのライブラリー： R1、R3、R＝アミノ酸側鎖部分またはその誘導体；Y＝H、Ac、SO2R；そして 、 丸で囲まれた「P」は固体支持体を表す。 が固体支持体上で構築され得る（PEGA樹脂、Meldal，M.、Tetrahedron Lett．33 :3077-80，1992；制御された細孔ガラス、Singhら、J．Med．Chem．38:217-19,1 995）。次いで、固体支持体は、適切な緩衝液中で酵素（例えばプロテアーゼ） とともに透析バッグ（Bednarskis，J．Am．Chem．Soc．109:1283-5，1987）中に 置かれ得る。次いで、このバッグは大量の緩衝液とともにビーカー中に置かれる 。酵素反応はHPLCによる時間の関数としてモニターされ、そしてポリマーから切 断された物質はMS/MSにより分析される。このストラテジーは、特定の標的に対 する最良の基質に関する情報を提供する。 β-シート模倣物の合成は次に示す逆合成手順により説明される： この技法により生成されるライブラリーの複雑性は、(R1)(R3)(R)(Y)である。 R1、R3、およびRが天然に存在するアミノ酸側鎖部分から選択されると仮定する と、nは定数であり、そして、Yは上で定義したようにH、Ac、または-SO2Rであり 、24,000メンバーのオーダーを有するライブラリー［(20)(20)(20)(3)］が生成 される。 特定の標識（例えば、酵素）に対するライブラリーをスクリーニングした後、 次に、ライブラリーは回収され、そして第２の標的などでスクリーニングされ得 る。 さらに、インヒビターのライブラリーが構築され、そして標準的な色素原アッ セイにおいてスクリーニングされ得る。例えば、ライブラリーは以下のように構 築され得る。ここで、以下の実施例は、以下に提供される特定の実施例に類似の 方法で調製され得るインヒビターライブラリーの代表例にすぎない。 セリンまたはシステイニル プロテアーゼのインヒビター （Wassermanら、J．Org．Chem．59:4364-6，1994を参照のこと）。 さらなる他のストラテジーは、以下に示すように側鎖R基を介してライブラリ ーを連結することである。 アスパラギン酸プロテアーゼインヒビターのライブラリーは、以下の例示の構 造を有するように構築され得、そして次いで樹脂から切断され、そしてスクリー ニングされる： 同様に、メタロプロテアーゼについては、以下に示す例示の構造を有するライ ブラリーが構築され得、次いで樹脂から切断されてヒドロキサム酸のライブラリ ーを提供する： 本発明のβ-シート模倣物の活性は、多くの生物学的に活性なペプチドを挙げ る表２を参照することによりさらに説明され得る。特に、表２のペプチドは、基 質またはインヒビターとしての生物学的活性を有することが公知である。 より一般的には、本発明のβ-シート模倣物は、R2、R2'、R3、F、Y、およびZ 部分（ならびに、構造(I)自体のA、B、C、D、およびE部分）の適切な選択により 任意の数の生物学的活性ペプチドを模倣するために合成され得る。これはさらに 、表３により説明される。表３は、生物学的に活性な化合物を得るために構造(I )のβ-シート模倣物への、作成され得る種々の改変を開示する。表３において、 R2およびR3は、「R2/R3」カラム下に示される原子または基の中から独立して選 択される。 本発明のβ-シート模倣物が生物学的に活性なペプチドの１つまたはそれより 多いアミノ酸に対して置換される場合、得られるβ-シート改変ペプチドの構造 （PAMのような固体支持体からの切断の前）は以下の図式により表され得、ここ でAA1からAA3は同じまたは異なるアミノ酸を表す： 正確なβ-シート模倣物は、コンピュータモデリングを含む任意の種々の技法、 無作為化技法（randomization technique）、および／または天然基質選択アッ セイを用いることにより選択され得る。β-シート模倣物はまた、β-シート模倣 物のライブラリーを合成し、そしてこのようなライブラリーメンバーをスクリー ニングして上で開示したように活性なメンバーを同定することにより生成され得 る。 一旦、最適化されたβ-シート模倣物が選択されると、次いで、改変がそこに 付着した種々のアミノ酸に対して行われ得る。種々のアミノ酸置換を有する一連 のβ-シート改変ペプチドは、次いで、固体支持体から切断され、そして好まし い基質を同定するためにアッセイされる。このような基質の生成が多くのβ-シ ート改変ペプチドの合成およびスクリーニングを含み得ることが理解されるべき である。ここで、各β-シート改変ペプチドは、種々の異なるβ-シート模倣物と 組み合わせた種々のアミノ酸置換を有する。さらに、固体支持体からのβ-シー ト改変ペプチドの切断の後、上記図式においてZ部分がAA3でありそしてY部分がA A2およびAA1であることもまた認識されるべきである。（この図式は例示のため に示されるが、付加的なアミノ酸またはより少数のアミノ酸がβ-シート模倣物 に連結され得る−すなわち、AA3は存在しなくてもよいかあるいは付加的なア ミノ酸がそこに連結され得る；そしてAA2および／またはAA1は省略され得るかあ るいは付加的なアミノ酸はそこに連結され得る。） 一旦、好ましい基質が上で開示された手順により同定されると、基質は公知の 技法によって、容易にインヒビターに変換され得る。例えば、Ｃ末端アミノ酸（ この場合にはAA1）は、基質に対するインヒビター活性を与えることが公知であ る多くの部分の付加により改変され得る。これには、-CF3（公知の可逆的セリン プロテアーゼインヒビター）、-CH2Cl（公知の非可逆的セリンプロテアーゼイン ヒビター）、-CH2N2 +および-CH2S(CH3)2 +（公知のシステイニルプロテアーゼイ ンヒビター）、-NHOH（公知のメタロプロテアーゼインヒビター）、 （公知のシステイニルプロテーゼインヒビター）、ならびに （公知のアスパルチルプロテアーゼインヒビター）を含む（しかしこれらに限定 されない）。 本発明のβ-シート模倣物の有用性は特定の実施態様に関して開示されている が、本発明のβ-シート模倣物を含む広範な種類およびタイプの化合物が作製さ れ得ることが理解される。例えば、本発明のβ-シート模倣物はペプチドまたは タンパク質の２つまたはそれより多くのアミノ酸に置換され得る。ペプチドまた はタンパク質のβ-シート構造を改善および／または改変することに加えて、特 にコンフォメーションの安定性に関して、本発明のβ-シート模倣物はまたタン パク質分解性の分解を阻害するために役立つ。これは、本発明のβ-シート模倣 物の組み込みのため、タンパク質分解性の分解がより少なくなる傾向があるペプ チドまたはタンパク質の付加的利点を生じる。 より詳細には、本発明のβ-シート模倣物は、天然に存在するか、または合成 のペプチド、タンパク質、および分子において広い有用性を有する。例えば、ペ プチド、タンパク質、および分子。例えば、本明細書で開示されるβ-シート模 倣物は、キナーゼおよびプロテアーゼのインヒビターとしての活性を有し、なら びにMHC IIインヒビターとしての有用性を有する。例えば、本発明のβ-シート 模倣物は、P'置換物としてアルギニンまたはリジンを好ましくするものを含む、 トリプシン様セリンプロテアーゼの大きなファミリーのインヒビターとしての活 性を有する。これらの酵素は止血に関連し、そしてこれらには、第VIIa因子、第 IXa因子、第Xa因子、第XIa因子、トロンビン、カリクレイン、ウロキナーゼ（こ れはまたがん転移に関連する）、およびプラスミンが挙げられる（しかし、これ らに限定されない）。関連酵素のトリプターゼは、炎症応答に関連する。したが って、これらの酵素を選択的に阻害する能力は、心臓血管疾患、炎症性疾患、お よび腫瘍に関する治療的適用に広い有用性を有する。 例えば、以下の構造の化合物は、第VIIa因子およびトロンビンインヒビターに 関する本発明のさらなる実施態様を表す。第VIIaインヒビター： トロンビンインヒビター： 別の局面では、本発明は、貯蔵または投与のために調製された薬学的組成物を 包含し、この組成物は、薬学的に受容可能なキャリア中に、治療的有効量の本発 明のβ-シート模倣物または化合物を含む。抗凝血療法は、種々の血栓症状態、 特に冠動脈および脳血管疾患の処置および予防が必要とされる。この分野で経験 を積んだものは、抗凝血療法を必要とする状況に容易に気づく。 本発明の化合物の「治療的有効量」は、投与経路、処置される温血動物のタイ プ、および検討中の特定の動物の身体的特徴に依存する。この量を決定するため のこれらの因子およびそれらの関係は、医療分野の当業者に周知である。この量 および投与方法は、最適の有効性を達成するために適合され得るが、体重、食餌 、併用薬物のような因子、および医療分野の有名な当業者が認識するような他の 因子に依存する。 本発明の化合物の「治療的有効量」は、所望の影響および治療徴候に依存する 広い範囲をとり得る。代表的には、用量は、約0.01mg/kg体重と100mg/kg体重と の間、好ましくは約0.01mg/kg体重と10mg/kg体重との間である。 治療的使用のための「薬学的に受容可能なキャリア」は、薬学の当業者に周知 であり、そして、例えば、Remingtons Pharmaceutical Sciences，Mack Publish ing Co．(A.R．Gennaro編、1985)に記載されている。例えば、滅菌生理食塩水お よび生理学的pHのリン酸緩衝化生理食塩水が使用され得る。保存剤、安定化剤、 染料、および着香剤（flavoring agent）さえも薬学的組成物中に提供され得る 。例えば、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、およびp-ヒドロキシ安息香酸エス テルが保存剤として添加され得る。さらに、抗酸化剤および懸濁剤が使用され得 る。 トロンビン阻害は、血栓症状態を有する個体の抗凝血療法に有用であるだけで なく、貯蔵した全血の凝血を防止するためおよびテストまたは貯蔵用の他の生物 学的試料中の凝血を防止するためのような、血液凝固の阻害が必要とされるとき はいつでも有用である。したがって、トロンビンインヒビターは、トロンビンを 含むかまたは含むことが疑われる任意の媒体に添加または接触され得、そしてそ の媒体中で血液凝固が阻害されることが所望される（例えば、血管移植片、幹、 整形外科的補綴物、心臓補綴物、および体外循環系からなる群より選択される物 質に哺乳動物の血液を接触させる場合）。 トロンビンインヒビターは、種々の血管病理の処置における相乗的効果を達成 するために適切な抗凝血剤または血栓溶解剤（例えば、プラスミノーゲンアクチ ベーターまたはストレプトキナーゼ）とともに同時投与され得る。例えば、トロ ンビンインヒビターは、組織プラスミノーゲンアクチベーター媒介血栓溶解性再 潅流の効能を増強する。トロンビンインヒビターは、血栓形成後に最初に投与さ れ得、そしてその後、組織プラスミノーゲンアクチベーターまたは他のプラスミ ノーゲンアクチベーターが投与される。それらはまた、ヘパリン、アスピリン、 またはワルファリンと組み合わされ得る。 本発明のトロンビンインヒビターは、錠剤、カプセル剤（それぞれは徐放また は時間放出（timed release）処方を含む）、丸剤、粉剤、顆粒剤、エリキシル 剤（elixer）、チンキ剤、懸濁剤、シロップ剤、および乳剤のような経口形態で 投与され得る。同様に、それらは、静脈内（ボーラスまたは注入）、腹腔内、皮 下、または筋肉内形態で、これらはすべて薬学の分野の当業者に周知の形態を用 いて投与され得る。有効であるが無毒性の量の所望の化合物は、抗凝集剤として またはフィブリンから構築される眼を処置するように用いられ得る。これらの化 合物は、眼内にまたは局所的に、ならびに経口または非経口で投与され得る。 トロンビンインヒビターは、蓄積注入または移植調製物の形態で投与され得る 。これらは、活性成分の徐放を可能にするような様式で処方され得る。活性成分 は、ペレットまたは小シリンダー中に圧縮され得、そして蓄積注入または移植物 として皮下または筋肉内に移植され得る。移植物は、生分解性ポリマーまたは合 成シリコーンのような不活性物質（例えば、シラスティック(Silastic)、シリコ ーンゴム、またはDow-Corning Corporationにより製造された他のポリマー）を 使用し得る。 トロンビンインヒビターはまた、小さな単層小胞、大きな単層小胞、および多 層小胞のようなリポソーム送達系の形態で投与され得る。リポソームは、コレス テロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンのような種々のリン 脂質から形成され得る。 トロンビンインヒビターはまた、化合物分子が結合されている個々のキャリア としてのモノクローナル抗体の使用により送達され得る。トロンビンインヒビタ ーはまた、標的可能な薬物キャリアとしての可溶性ポリマーに結合され得る。こ のようなポリマーには、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロ キシ-プロピル-メタクリルアミド-フェノール、ポリヒドロキシエチル-アスパル タルニド-フェノール（polyhydroxyethyl-aspartarnide-phenol）、またはパル ミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド-ポリリジンが含まれ得る。さ らに、トロンビンインヒビターは、薬物の制御された放出を達成するために有用 な生分解性ポリマーのクラス（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸 とポリグリコール酸とのコポリマー、ポリε-カプロラクトン、ポリヒドロキシ 酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン（polydibldr opyran）、ポリシアノアクリレート、および架橋したまたは両親媒性のヒドロゲ ルのブロックコポリマー）に結合され得る。 投与量および投与の方法は、最適効能を達成するように調整され得るが、体重 、食餌、併用薬物のような因子、および医療分野の当業者が認識するような他の 因子に依存する。投与が毎日の非経口（例えば、静脈内）であるべき場合、注入 可能な薬学的組成物は、液体の溶液または懸濁液として、注入前の液体中での溶 液または懸濁液に適切な固体形態として、あるいは乳剤としてのいずれかの通常 の形態で調製され得る。 本発明の活性化合物の経口投与に適切な錠剤は、以下のように調製され得る： 量−mg 活性化合物 25.0 50.0 100.0 微結晶性セルロース 37.25 100.0 200.0 改変食用コーンスターチ 37.25 4.25 8.5 ステアリン酸マグネシウム 0.50 0.75 1.5 すべての活性化合物、セルロース、およびコーンスターチの一部を混合し、そ して10％コーンスターチペーストに顆粒化する。得られた顆粒をふるいにかけ、 乾燥し、そして残りのコーンスターチおよびステアリン酸マグネシウムと混合す る。次いで、得られた顆粒を、１錠剤につきそれぞれ25.0、50.0、および100.0m gの活性成分を含む錠剤に圧縮する。 上に示した活性化合物の静脈内投与形態は、以下のように調製され得る： 活性化合物 0.5〜10.0mg クエン酸ナトリウム ５〜50mg クエン酸 １〜15mg 塩化ナトリウム １〜８mg 注射用水(USP) 適量を加えて１mlとする 上記の量を利用すると、活性化合物は、注射用水中の塩化ナトリウム、クエン 酸、およびクエン酸ナトリウムの予め調製された溶液に、室温で溶解される(US P、United States Pharmacopoeia/National Formulary for 1995、United State s Pharmacopoeia Convention，Inc.，Rockville，Marylandにより出版、1994の 版権の1636ページを参照のこと）。 本発明の化合物は、開示されたように製造および選択された場合、インビトロ およびインビボでトロンビンの強力なインヒビターとして有用である。このよう に、これらの化合物は、血液の凝固を防止するためのインビトロ診断試薬として 、および異常血栓症により特徴づけられる症状を有すると疑われる哺乳動物にお ける血栓症を予防するためのインビボ薬学的薬剤として有用である。 本発明の化合物は、血液吸引チューブ中の凝血を阻害するためのインビトロ診 断試薬として有用である。静脈穿刺により得られた血液をチューブ中に吸引する 手段として、その中が真空である、栓をしたテストチューブを使用することは、 医療分野では周知である（Kasten，B.L.、「Specimen Collection」、Laborator y Test Handbook、第２版、Lexi-Comp Inc.,Cleveland 16〜17頁、Jacobs，D.S. ら編、1990）。血液からの、哺乳動物の血清の単離に有用である場合、このよう な真空チューブは凝血阻害添加剤を含んでいなくてもよい。あるいは、血液から の、哺乳動物の血漿の単離に有用である場合、これらは凝血阻害添加物（例えば 、ヘパリン塩、EDTA塩、クエン酸塩、またはシュウ酸塩）を含んでいてもよい。 本発明の化合物は、第Xa因子またはトロンビンの強力なインヒビターであり、そ してこのように、血液採取チューブに吸引する哺乳動物の血液の凝血を防止する ために、血液採取チューブに組み入れられ得る。 転写因子の調節に関して、本発明の化合物は、DNAに結合する能力が細胞性酸 化還元酵素によるシステイン残基の還元によって制御される転写因子を調節する 。１つの実施態様では、転写因子はNF-κBでありそして細胞性酸化還元酵素はチ オレドキシンである。この実施態様では、本発明の化合物は、免疫および／また は炎症性応答のメディエーターとしての活性を有し、または細胞増殖を制御する ために役立つ。別の実施態様では、転写因子はAP-1であり、そして細胞性酸化還 元酵素はref-1である。この実施態様では、本発明の化合物は、抗炎症および／ または抗ガン剤としての活性を有する。なおさらなる実施態様では、転写因子は 、mybおよび糖質コルチコイド応答エレメント（FRE）から選択され、そして酸化 還 元酵素はグルタレドキシンを含む。 本発明の方法の実施において、治療的有効量の本発明の化合物は、それが必要 な温血動物に投与される。例えば、本発明の化合物は、クローン病、喘息、慢性 関節リウマチ、虚血、再潅流傷害、移植片対宿主病（GVHD）、筋萎縮性側索硬化 症（ALS）、アルツハイマー病、同種移植拒絶、および成人Ｔ細胞白血病から選 択される症状と診断されている、またはこの症状を発症する危険のある温血動物 に投与され得る。 本発明の化合物は、血液採取チューブ中で、単独で、本発明の他の化合物と組 み合わせて、または他の公知の凝血のインヒビターと組み合わせて使用される。 このようなチューブに添加すべき量は、哺乳動物の血液がチューブ中に吸引され るときに凝血の形成を阻害するに十分な量である。このようなチューブへの化合 物の添加は、それらの液体組成物の導入によるような当該分野で周知の方法によ り、それらの固体組成物として、または固体へ凍結乾燥される液体組成物として 達成され得る。本発明の化合物は、２〜10mLの哺乳動物の血液と合わされる場合 、このような化合物の濃度は血餅形成を阻害するに十分である量で血液採取チュ ーブに添加される。代表的には、必要とされる濃度は、約１〜10,000nMであり、 10〜1000nMが好ましい。 以下の実施例は例示のために提供されるが、限定のために提供されるものでは ない。 実施例 実施例１ 代表的なβシート模倣物の合成 本実施例は、本発明の代表的なβシート模倣物の合成を例示する。 構造(1)の合成： フェニルアラニンベンズアルジミン［構造（1）］を、次のようにして合成し た。室温のCH2Cl2（150ml）中で撹拌したL-フェニルアラニンメチルエステルヒ ドロクロリド（7.19g，33.3mmol）とベンズアルデヒド（3.4ml，33.5mmol）との 混合物に、トリエチルアミン（7.0ml，50mmol）を加えた。得られた溶液に無水 硫酸マグネシウム（2g）を加え、その混合物を14時間撹拌した後、セライトの１ インチパッドを通してCH2Cl2で濾過した。その濾液を減圧下で最初の容積の約半 分まで濃縮した後、等容積のヘキサンで希釈した。その混合物を飽和NaHCO3水溶 液、H2Oおよびブラインで2回抽出した後、無水Na2SO4で乾燥し、そして濾過した 。その濾液を真空下で濃縮して、無色のオイル8.32g（収率93%）を得た。1H NMR 分析は、ほぼ純粋（＞95%）なフェニルアラニンベンズアルジミンを示した。そ の粗生成物をさらに精製することなく使用した。構造(2)の合成： α-アリルフェニルアラニンベンズアルジミン［構造（2）］を、次のようにし て合成した。−78℃のTHF（150mL）中で撹拌したジイソプロピルアミン（4.3ml ，33mmol）の溶液に、n-ブチルリチウムの溶液（2.5Mヘキサン溶液13ml，33mmol ）を滴下した。得られた溶液を20分間撹拌した後、THF（30ml）中のフェニルア ラニンベンズアルジミン（7.97g，29.8mmol）の溶液をゆっくりと加えた。得ら れた暗赤橙色溶液を15分間撹拌した後、臭化アリル（3.1ml，36mmol）を加えた 。その淡黄色溶液を−78℃で30分間撹拌した後、室温に加温し、さらに1時間撹 拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、その混合物を酢酸エチルに注いだ 。有機相を分離し、水およびブラインで洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥 し、そして濾過した。その濾液を真空下で濃縮して、粘稠な黄色オイル8.54gを 得た。カラムクロマトグラフィーによる精製で、α-アリルフェニルアラニンベ ンズアルジミン7.93g（87%）を粘稠な無色オイルとして得た。 構造(3)の合成： α-アリルフェニルアラニンヒドロクロリド［構造（3）］を、次のようにして 合成した。メタノール（50ml）中で撹拌したα-アリルフェニルアラニンベンズ アルジミン（5.94g，19.3mmol）の溶液に、5%塩酸水溶液（10ml）を加えた。そ の溶液を室温で2時間撹拌した後、真空下で濃縮して、橙褐色のカラメル質にし た。その粗生成物をCHCl3（10ml）に溶解し、その溶液を加熱沸騰させた。ヘキ サン（約150ml）を加え、わずかに濁ったその混合物を冷却した。結晶化した固 体から液体をデカンテーションして取り除いた後、その固体をヘキサンで濯ぎ、 そして回収した。残存溶媒を真空下で除去して、純粋なα-アリルフェニルアラ ニンヒドロクロリド3.56g（72%）を白色結晶性固体として得た。 構造(4)の合成： N-tert-ブチルオキシカルボニル-α-ア-リルフェニルアラニン［構造（4）］ を、次のようにして合成した。THF（15ml）と水（5ml）との混合物中で撹拌した D,Lα-アリルフェニルアラニンヒドロクロリド(565mg，2.21mmol）の溶液に、ジ -tert-ブチルジカーボネートを加え、次いで固形重炭酸ナトリウムを注意深く少 しずつ添加した。得られた二相混合物を室温で2日間激しく撹拌した後、酢酸エ チルで希釈した。その有機相を分離し、水およびブラインで洗浄した後、無水硫 酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。濾液を真空下で濃縮して無色のオイル を得て、それをカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の5〜10％EtOAc勾配で溶 出）で精製することにより、N-tert-ブチルオキシカルボニル-α-アリルフェニ ルアラニン596mg（86%）を得た。 TLC Rf＝0.70(シリカ、ヘキサン中20% EtOAc)； 構造(5)の合成： 構造（5）のアルデヒドを、次のようにして合成した。CH2Cl2（50mL）とメタ ノール（15ml）との混合物中−78℃で撹拌した構造（4）のオレフィン2.10g（6. 57mmol）の溶液に、その溶液がはっきりと青色になるまでオゾンを通気した。そ の溶液をさらに15分間撹拌した後、硫化ジメチルをゆっくりと加えた。得られた 無色の溶液を−78℃で10分間撹拌した後、室温に加温し、そして6時間撹拌した 。その溶液を真空下で濃縮して、粘稠な淡黄色オイル2.72gを得、それをカラム クロマトグラフィー（ヘキサン中の10〜20％EtOAc勾配で溶出）で精製すること により、純粋なアルデヒド1.63gを粘稠な無色オイルとして得た。 TLC Rf＝0.3(シリカ、ヘキサン中20% EtOAc)； 構造(6)の合成： 構造（6）のヒドラゾンを、次のようにして合成した。室温のTHF（50ml）中で 撹拌した構造（5）のアルデヒド（1.62g，5.03mmol）の溶液に、ヒドラジン水和 物（0.32ml，6.5mmol）を加えた。得られた溶液を室温で10分間撹拌した後、3日 間加熱還流した。その溶液を室温に冷却した後、真空下で濃縮して、1.59g（粗 収率105%）の無色泡状物にした。このヒドラゾン粗生成物［構造（6）］を精製 することなく使用した。 TLC Rf＝0.7(ヘキサン中50% EtOAc)； 構造(7)の合成： 構造（7）の環状ヒドラジドを、次のようにして合成した。構造（6）の粗ヒド ラゾン（55mg，0.18mmol）と酸化白金（5mg，0.02mmol）とをメタノール中に取 り、そのフラスコに、ゴム風船を付けた三方コックを装着した。そのフラスコに 水素ガスを3回フラッシュし、風船を水素で膨らませ、その混合物を水素雰囲気 下で17時間、激しく撹拌した。その混合物をセライトを通して酢酸エチルで濾過 し、その濾液を真空下で濃縮して、白色泡状物にした。その白色泡状物をフラッ シュクロマトグラフィーで精製して、構造（7）の純粋な環状ヒドラジド44mgを 得た（80%）。 構造(8)の合成： 構造（8）を次のようにして合成した。90℃のアクリル酸エチル（200ml）中で 撹拌した構造（7）の環状ヒドラジド（4.07g，13.32mmol）の溶液に、ホルムア ルデヒド（37%水溶液1.2ml）を加えた。その混合物を15時間加熱還流した後、室 温に冷却し、真空下で濃縮して白色泡状物にした。その生成物をカラムクロマト グラフィー（5%アセトン/クロロホルムの後、10%アセトン/クロロホルム）で分 離することにより、二環式エステルの最も極性の低いジアステレオマー［構造（ 8b）］0.851gと、より極性の高いジアステレオマー（8a）を得た。不純な画分を 第２のクロマトグラフィーにかけて、より純粋な構造（8b）を得た（合計の収率 25%）。 構造(9b)の合成： 構造（9b）を次のようにして合成した。THF（1ml）中で撹拌した最も極性の低 いエチルエステル（すなわち構造（8b））（31mg，0.074mmol）の溶液に、水酸 化リチウム水溶液（1M，0.15ml）を加えた。得られた混合物を室温で2時間撹拌 した後、反応を5%クエン酸水溶液でクエンチした。その混合物を酢酸エチル（2 ×）で抽出した後、合わせた抽出物を水およびブラインで洗浄した。その有機層 を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して無色のガラス状物に した。その粗製酸［構造（9b）］をさらに精製することなく以降の実験に使用し た。構造(10b)の合成： 構造（10b）を次のようにして合成した。構造（9b）の粗製酸（30mg，0.074mm ol）、HArg（PMC）pNA（41mg，0.074mmol）およびH0Bt（15mg，0.098mmol）をTH F（1ml)に溶解した後、ジイソプロピルエチルアミン（0.026ml，0.15mmol）を加 え、次いでEDC（16mg，0.084mmol）-を加えた。得られた混合物を室温で4時間撹 拌した後、酢酸エチルで希釈し、5%クエン酸水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶 液、水およびブラインで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過 し、そして真空下で濃縮して、淡黄色ガラス状物54mgを得た。生成物をカラムク ロマトグラフィーで分離することにより、カップリングした（すなわち保護され た）生成物［構造（10b）］のジアステレオマーの混合物33mg（50%）を得た。MS （CI+，NH3）m/z 566.6（M＋H+）。構造(11b)の合成： 構造（11b）のβシート模倣物を次のようにして合成した。TFA 5ml中のH2O 0. 25ml、1,2-エタンジチオール0.125mlおよびフェノール360mgの溶液を調製し、こ の溶液2mlに構造（10b）の保護生成物（33mg，0.035mmol）を溶解した。得られ た溶液を室温で3時間撹拌した後、減圧下で濃縮した。その濃縮物にエーテルを 加え、得られた沈殿物を遠心分離によって集めた。その沈殿物をエーテルで粉末 化し、さらに2回遠心分離した後、真空デシケーター中で14時間乾燥した。その 粗生成物（14mg）をHPLCクロマトグラフィーで精製することにより、構造（11b ）のβシート模倣物を得た。MS（CI+，NH3）m/z 954.8（M+Na+）。 構造(12b)の合成： 構造（12b）を次のようにして合成した。−50℃のTHF（1ml）中で撹拌した構 造（9b）の粗製酸（24mg，0.062mmol）とN-メチルモルホリン（0.008ml）との溶 液に、イソブチルクロロホルメートを加えた。得られた濁った混合物を10分間撹 拌した後、N-メチルモルホリン0.016ml（0.14mmol）を加え、次いでTHF（0.5ml ）中のHArg（Mtr）CH2Cl（50mg，0.068mmol）の溶液を加えた。その混合物を20 分間、−50℃で維持した後、1時間で室温まで加温した。その混合物を酢酸エチ ルで希釈し、5%クエン酸水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液およびブラインで 抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して、 49mgの無色ガラス状物［構造（12）］を得た。カラムクロマトグラフィーによる 分離で、より極性の低いジアステレオマー12mgと、より極性の高いジアステレオ マー16mgとを得た。 構造(13b)の合成： 構造（13b）のβシート模倣物を次のようにして合成した。構造（12b）のより 極性の高いジアステレオマー（16mg，0.021mmol）を95% TFA/H2O（1ml）に溶解 し、得られた溶液を室温で6時間撹拌した後、真空下で濃縮して11mgの粗製物を 得た。その粗生成物をエーテルで粉末化し、沈殿物をエーテルで2回洗浄した後 、高真空下で14時間乾燥した。1H NMR分析は、完全に脱保護された生成物とMtr 保護基を含有する生成物との1:1混合物を示した。その混合物を95% TFA/H2Oに溶 解して2日間撹拌し、生成物を上記のようにして回収した。HPLCによる生成物の 精製で、構造（13b）の純粋な化合物5mgを得た。MS（EI+）m/z 477.9（M+）。 実施例２ 代表的なβシート模倣物の合成 本実施例は、本発明のさらなる代表的なβシート模倣物の合成を例示する。 構造(14)の合成： N,O-ジメチルヒドロキサメート［構造（14）］を次のようにして合成した。室 温のTHF（150ml）中で撹拌したBoc-Ng-4-メトキシ-2,3,6-トリメチルベンゼンス ルホニル-L-アルギニン（8.26g，14.38mmol）、N,O-ジメチルヒドロキシルアミ ンヒドロクロリド（2.78g，28.5mmol）および1-ヒドロキシベンゾトリアゾール 水和物（2.45g，16.0mmol）の混合物に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン（7.5 ml，43mmol）を加え、次いで固体EDC（3.01g，15.7mmol）を加えた。得られた溶 液を16時間撹拌した後、酢酸エチル（200ml）で希釈し、5%クエン酸水溶液、飽 和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで順次抽出した。その有機溶液を 無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。その濾液を真空下で濃縮して白 色泡状物7.412gを得た。 構造(15)の合成： 構造（15）を次のようにして合成した。室温のジクロロメタン（150ml）中で 撹拌した上記アルギニンアミド（7.412g，13.99mmol）の溶液に、N,N-ジイソプ ロピルエチルアミン（2.9ml，17mmol）を加え、次いでジ-tert-ブチルジカーボ ネート（3.5ml，15.4mmol）とN,N-ジメチルアミノピリジン（0.175g，1.43mmol ）とを加えた。得られた溶液を1.5時間撹拌した後、水に注いだ。水層を分離し 、ジクロロメタン各100mlで2回抽出した。合わせた抽出物をブラインと共に振と うした後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。濾液を真空下で濃縮 して白色泡状物を得、それをフラッシュクロマトグラフィーで精製して白色泡状 物8.372gを得た。 構造(16)の合成： アルギナール［構造（16）］を次のようにして合成した。乾燥アルゴン雰囲気 下−78℃のトルエン中で撹拌したアルギニンアミド［構造（15）］の溶液に、水 素化ジイソブチルアルミニウムのトルエン溶液（1.0M，7.3ml）を15分間かけて 滴下した。得られた溶液を30分間撹拌した後、さらに水素化ジイソブチルアルミ ニウム（3.5ml）を加え、撹拌を15分間続けた。メタノール（3ml）を滴下し、そ の溶液を−78℃で10分間撹拌した後、室温に加温した。その混合物を酢酸エチル （100ml）で希釈し、飽和酒石酸カリウムナトリウム水溶液50mlと共に2.5時間激 しく撹拌した。水層を分離し、酢酸エチル（2×100ml）で抽出した。その抽出物 を元の有機溶液と合わせ、ブラインと共に振とうした後、無水硫酸ナトリウムで 乾燥し、そして濾過した。その濾液を真空下で濃縮して白色泡状物を得、それを フラッシュクロマトグラフィーで分離することにより、上記アルデヒド1.617gを 白色泡状物として得た。 構造(17)の合成： ヒドロキシベンゾチアゾール［構造（17）］を次のようにして合成した。乾燥 アルゴン雰囲気下−78℃の無水ジエチルエーテル（60ml）中で撹拌したベンゾチ アゾール（1.55ml，14mmol）の溶液に、n-ブチルリチウム溶液（ヘキサン中2.5M ，5.6ml，14mmol）を10分間かけて滴下した。得られた橙色溶液を45分間撹拌し た後、ジエチルエーテル（5ml）中のアルギナール［構造（16）］（1.609g，2.8 19mmol）の溶液をゆっくりと加えた。その溶液を1.5時間撹拌した後、飽和塩化 アンモニウム水溶液を加え、その混合物を室温に加温した。その混合物を酢酸エ チル（3×100ml）で抽出し、合わせた抽出物を水およびブラインで抽出した後、 無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。その濾液を真空下で濃縮して黄 色オイルを得、それをフラッシュクロマトグラフィー（溶離液、30%酢酸エチル/ ヘキサンの後、40%酢酸エチル/ヘキサン）で精製することにより、ヒドロキシベ ンゾチアゾール（ジアステレオマーの約2:1混合物）1.22gを白色泡状物として得 た。 そのヒドロキシベンゾチアゾールの混合物（1.003g，1.414mmol）を室温のCH2 Cl2（12ml）中で撹拌し、トリフルオロ酢酸（3ml）を加えた。得られた溶液を1. 5時間撹拌した後、減圧下で濃縮して、ベンゾチアゾリルアルギノールトリフ ルオロ酢酸塩1.22gを黄色泡状物として得た。 MS（EI+）：m/z 506.2（M+M+）。 構造(18b)の合成： 二環式化合物［構造（18b）］を次のようにして合成した。実施例1からの構造 （9b）の二環式酸（151mg，0.387mmol）とHOBt水和物（71mg，0.46mmol）とをTH F（5ml）に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（0.34ml，1.9mmol）を加え、 次いでEDC（89mg，0.46mmol）を加えた。10分間撹拌した後、THF（1ml）中のベ ンゾチアゾリルアルギノールトリフルオロ酢酸塩［構造（17）］（273mg，0.372 mmol）の溶液を、THF（0.5ml）すすぎ液(rinse)と共に加えた。その混合物を室 温で15時間撹拌した後、酢酸エチルで希釈し、5%クエン酸水溶液、飽和重炭酸ナ トリウム水溶液、水およびブラインで順次抽出した。その有機溶液を無水硫酸ナ トリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して、297mgの黄色ガラス状物とした 。1H NMR分析は、構造（18b）を含む４つのジアステレオ異性アミドの混合物を 示した。 MS（ES+）：m/z 877（M+）。構造(19b)の合成： 構造（19b）を次のようにして合成した。粗ヒドロキシベンゾチアゾール（247 mg，0.282mmol）をCH2Cl2（5ml）に溶解し、Dess-Martinペルヨージナン（perio dinane）（241mg，0.588mmol）を加えた。その混合物を室温で6時間撹拌した後 、酢酸エチルで希釈し、10%チオ硫酸ナトリウム水溶液と共に10分間激しく撹拌 した。有機溶液を分離し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで抽 出した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。その濾液を真空下で 濃縮して黄色ガラス状物252mgを得た。1H NMR分析は、構造（19b）を含む２つの ジアステレオ異性ケトベンゾチアゾールの混合物を示した。 構造(20b)の合成： ケトベンゾチアゾール［構造（20）］を次のようにして合成した。ケトベンゾ チアゾール（19）（41mg，0.047mmol）を95%トリフルオロ酢酸水溶液（0.95ml） に溶解し、チオアニソール（0.05ml）を加えた。得られた暗色溶液を室温で30時 間撹拌した後、真空下で濃縮して暗褐色ゴム状物にした。そのゴム状物をジエチ ルエーテルで粉末化し、遠心分離した。その溶液を除去し、残った固体をさらに 2回、上記のようにして粉末化し、そして回収した。その黄色固体を真空デシケ ーターで2時間乾燥した後、HPLC（Vydac逆相C-4カラム(22×250mm ID)）で精製 した。移動相：A=0.05% TFA/水；B=0.05% TFA/アセトニトリル。流速は10.0mL/ 分とした。使用した勾配は25分間で8% Bから22% Bまでであり、その後、22%の無 勾配溶離とした。目的のピーク（構造（20b））は42分に溶出し、脱保護された 生成物（構造（20b））2.5mgが得た。 MS（ES+）：563.5（M+H+）。実施例３ 代表的βシート模倣物のタンパク質加水分解基質としての活性 この実施例では、トロンビンおよび第VII因子の基質として選択的に機能する 、本発明の代表的βシート模倣物の能力を例示する。前記構造（11b）のβシー ト模倣物を実施例1に開示した手順に従って合成し、さらなる改変なくこの実験 で使用した。 この実験のトロンビンアッセイと第VII因子アッセイは共に、Hitachi UV/Vis 分光光度計（モデルU-3000）を用いて37℃で行った。構造（11b）を脱イオン水 に溶解した。濃度は342nmの吸光度から決定した。8270リットル/mol/cmという吸 光係数を使用した。反応緩衝液に関して9920リットル/mol/cmというp-ニトロア ニリンの吸光係数を用い、405nmにおける吸光度の変化から、構造（11b）の加水 分解速度を決定した。初速度は反応進行曲線の最初の直線部分から計算した。速 度論的パラメーターは、GraFit（バージョン3.0，Erithacus Software Limited ）を用いて、実験データに対する簡単なミカエリス-メンテン式の非加重非線形 最小二乗フィッティングによって決定した。 トロンビンアッセイについては、pH8.4トリス緩衝液（トリス，0.05M；NaCl， 0.15M）中で実験を行った。6.4 NIH単位のウシトロンビン（Sigma製）を10mlの アッセイ緩衝液に溶解して10nMトロンビン溶液を得た。UVキュベットに130〜148 μlの緩衝液と100μlのトロンビン溶液を加え、37℃で２分間プレインキュベー トし、最後に2〜20マイクロリットル（最終体積を250μlにする量）の0.24mM構 造（11b）溶液を加えて反応を開始させた。その反応の最初の二分間を初速度測 定のために記録した。８つの構造（11b）濃度点を集めて速度論的パラメーター を得た。kcatとKMは、それぞれ50秒-1および３μＭと計算された。kcat/KMは1.6 7×107M-1秒-1であることがわかった。 第VII因子アッセイには、pH8.0トリス緩衝液（0.05Mトリス，5mM CaCl2，0.15 M NaCl，0.1％ TWEEN 20，0.1%BSA）を用いた。10μlの20μMヒト第VIIa因子（F VIIa）および22μMヒト組織因子（TF）をアッセイ緩衝液に入れて、それぞれ160 nM FVIIaおよびTF溶液とした。40〜48μlの緩衝液、25μlのFVIIaおよび25μl T F溶液をキュベットに加え、37℃で５分間インキュベートした後、2〜10μlの2.4 mM 構造（11b）溶液をそのキュベットに加えて反応を開始させた（最終体積は100ml とした）。最初の3分間の反応進行曲線を記録した。5つの構造（11b）濃度点を 集めた。その初速度を、GraFitを用いて、構造（11b）の濃度に対して線形最小 二乗フィッティングした。kcat/KMをその勾配から計算したところ、17,500M-1秒-1 であることがわかった。 この実験のトロンビンアッセイと第VII因子アッセイではどちらの場合も、（D ）FPR-PNAをコントロールとした。このコントロールと比較した構造（11b）の活 性は、トロンビンと第VII因子について、それぞれ0.76と1.38だった（第VII因子 ：Kcat/KM＝1.27×104M-1秒-1；トロンビン：Kcat/KM＝2.20×107M-1秒-1）。 実施例４ 代表的βシート模倣物のプロテアーゼインヒビターとしての活性 この実施例では、トロンビン、第VII因子、第X因子、ウロキナーゼ、組織プラ スミノーゲンアクチベーター（t-pA）、プロテインC、プラスミンおよびトリプ シンのプロテアーゼインヒビターとして機能する、本発明の代表的βシート模倣 物の能力を例示する。前記構造（13b）のβシート模倣物を実施例1に開示した手 順に従って合成し、この実験で使用した。 この実験の阻害アッセイはすべて、Bio-Radマイクロプレートリーダー（モデ ル3550）を用いて、96ウェルマイクロプレート中、室温で行った。0.29mgの構造 （13b）を200mlの0.02N塩酸脱イオン水溶液に溶解した。この溶液（2.05mM）を 、全ての阻害アッセイ用のストック溶液とした。発色基質の加水分解を405nmで 監視した。代表的には30秒〜2分間隔で90回プレートを読み取ることにより、反 応進行曲線を記録した。GraFitにおける、一次反応に対する非加重非線形最小二 乗フィッティングにより、初速度を決定した。次に、決定した初速度を、GraFit を用いて構造（13b）の濃度に対して非線形最小二乗フィッティングすることに よりIC50を得た。代表的には、IC50の決定に8つの構造（13b）濃度点を使用した 。 トロンビンアッセイについては、基質として、N-p-トシル-Gly-Pro-Arg-pNA（ Sigma製）を、1%DMSO（v/v）pH8.4トリス緩衝液中、0.5mM濃度で使用した。構 造（13b）ストック溶液から2段階の希釈を行った。先ず、0.02N塩酸塩溶液中に1 :2000希釈、次いでpH8.4トリス緩衝液中に1:100希釈。その構造（13b）の最終希 釈液を第1点（10nM）とした。この第1点から、希釈率2で、7つの連続希釈液を作 成した。各反応ウェルに100μlの10nMトロンビン溶液と50μlの構造（13b）溶液 を加えた。その酵素とインヒビターとの混合物を20分間インキュベートした後、 100μlの0.5mM基質溶液を加えて反応を開始させた。トロンビンに対する構造（1 3b）のIC50は1.2±0.2nMであることがわかった。 第VII因子アッセイでは、基質として、S-2288（Pharmacia製）D-Ile-Pro-Arg- pNAを脱イオン水中20μMで使用した。構造（13b）のストックから、pH8.0トリス 緩衝液中に1:100希釈液を作成した。この希釈液をこのインヒビターの第１点（2 0μM）とした。この濃度点から、希釈率2で、さらに6つの連続希釈液を作成した 。50μlの16nM FVIIaおよびTF複合体溶液と40μlのインヒビター溶液を各ウェル に加え、その混合物を20分間インキュベートした後、10μlの20mM S-2288を加え た。第VII因子に対する構造（13b）のIC50は140±3nMであることがわかった。 第X因子アッセイにおける緩衝液と基質は、トロンビンアッセイに使用したも のと同じである。pH8.4トリス緩衝液中に1:100希釈液を作って、それを第1点と した。希釈率2で、7つの希釈液を作成した。アッセイプロトコルは、トロンビン の代わりにpH8.4トリス緩衝液中の25nMウシの第Xa因子（Sigma製）を使用した点 以外は、トロンビンの場合と同じである。第X因子に対する構造（13b）のIC50は 385±17nMであることがわかった。 ウロキナーセアッセイにおいて、緩衝液は、脱イオン水中のpH8.8 0.05Mトリ スおよび0.05M NaClとした。水中0.5mMのS-2444（Sigma製）pyroGlu-Gly-Arg-pN Aを基質として使用した。第VII因子および第X因子の場合と同じ希釈手順を用い た。アッセイプロトコルは、18.5nMのヒトウロキナーゼ（Sigma製）を使用した 点以外は、トロンビンの場合と同じである。IC50は927±138nMであることがわか った。 組織プラスミノーゲンアクチベーター（t-pA）：緩衝液、基質および構造（13 b）の希釈スキームは、第VII因子アッセイに使用したものと同じとした。 活性化プロテインC（aPC）：緩衝液はトロンビンアッセイで用いたものと同じ とした。アッセイ緩衝液中の1.25mM S-2366を基質として使用した。構造（13b） の希釈はウロキナーゼアッセイの場合と同じであった。 プラスミン：緩衝液（トロンビンアッセイを参照のこと）；アッセイ緩衝液中 1.25mMのS-2551（Pharmacia製）、D-Val-Leu-Lys-pNAを基質として使用した。構 造（13b）の希釈についてはウロキナーゼアッセイを参照のこと。 トリプシンアッセイでは、pH7.8トリス（0.10Mトリスおよび0.02M CaCl2）を 緩衝液として使用した。基質として、BAPNA（Sigma製）を、1%DMSO（v/v）脱イ オン水溶液中、1mg/mlで使用した。第VII因子アッセイの場合と同じ構造（13b） の希釈液を作成した。40μlの50μg/mlウシトリプシン（Sigma製）と20μlの構 造（13b）溶液を反応ウェルに加え、その混合物を5分間インキュベートした後、 40μlの1mg/ml BAPNAを加えて反応を開始させた。トリプシンに対する構造（13b ）のIC50は160±8nMであることがわかった。 前記のアッセイでは、（D）FPR-CH2Cl（「PPACK」）をコントロールとした。 このコントロールと比較して構造（13b）の活性は高かった（表４参照）。 プロトロンビン時間（PT）については、100μlのコントロール血漿（Sigma製 ）を1〜5μlの緩衝液（0.05Mトリス，0.15M NaCl，pH＝8.4）または試験化合物 （すなわちPPACKまたは構造（13b））と共に緩衝液中でインキュベート（37℃で 30分間）することにより、これを決定した。次に、予め温めておいた（37℃で約 10分間）カルシウム入りトロンボプラスチン（Sigma製）200μlを、前記血漿試 料にすばやく加えた。血塊が形成するのに要する時間をストップウォッチを用 いて手動で記録したところ（表5参照）、それがPPACKに匹敵することがわかった 。 実施例５ 代表的βシート模倣物のプロテアーゼインヒビターとしての活性 この実施例では、トロンビン、第VII因子、第X因子、ウロキナーゼ、組織プラ スミノーゲンアクチベーター、活性化プロテインC、プラスミン、トリプターゼ （tryptase）およびトリプシンのインヒビターとして機能する、本発明のさらな る代表的βシート模倣物の能力を例示する。前記構造（20b）のβシート模倣物 を実施例2に開示した手順に従って合成し、この実験に使用した。 Bio-Radマイクロプレートリーダー（モデル3550）を用いて、全ての阻害アッ セイを96ウェルマイクロプレート中、室温で行った。構造（20b）の1mM水溶液を 、全ての阻害アッセイ用のストック溶液とした。発色基質の加水分解を405nmで 監視した。代表的には30秒〜2分間隔で60回プレートを読み取ることにより、反 応進行曲線を記録した。GraFit（Erithacus Software Limited，London，Englan d）における、一次反応に対する非加重非線形最小二乗フィッティングにより、 初速度を決定した。次に、決定した初速度を、GraFitで構造（20b）の濃度に対 して非線形最小二乗フィッティングすることにより、Kiを得た。これらのアッセ イの一般的形式は次の通りである：100mlの基質溶液と100mlの構造（20b）溶液 をマイクロプレートウェルに加えた後、50mlの酵素溶液を加えて反応を開始させ た。通常、Kiの決定には、8つの構造（20b）濃度点を使用した。9種類のセリン プロテアーゼに対する構造（20b）のKi値を表6に示す。 トロンビン：基質として、N-p-トシル-Gly-Pro-Arg-pNA（Sigma製）を1%DMSO （v/v）pH8.0トリス緩衝液（トリス，50mM、TWEEN 20，0.1%、BSA，0.1%、NaCl ，0.15M、CaCl2，5mM）中、0.5mM濃度で使用した。構造（20b）ストック溶液か ら2段階の希釈を行った。まず水中の1:100希釈液を作り、次にpH8.0トリス緩衝 液中の1:50希釈液を作って、それを第1点（200nM）とした。その第1点から、ア ッセイ用に、7つの連続希釈液を作成した。 第VII因子：pH8.0トリス緩衝液（トロンビンアッセイを参照のこと）中2.05mM のS-2288（Pharmacia製）、D-Ile-Pro-Arg-pNAを使用した。構造（20b）のスト ックから、1:100希釈液をトリス緩衝液中に作成した。この濃度点から、アッセ イ用に、さらに7つの連続希釈液を作成した。 第X因子：緩衝液と基質はトロンビンアッセイに用いたものと同じとした。pH8 .0トリス緩衝液中に1:100希釈液を作成し、それを第1点とした。その第1点から 、アッセイ用に、さらに7つの希釈液を作成した。 ウロキナーゼ：緩衝液，50mMトリス、50mM NaCl、pH＝8.8。緩衝液中0.25mMの S-2444（Sigma製）、pyroGlu-Gly-Arg-pNAを基質として使用した。構造（20b） のストックから、第1点として、緩衝液中に1:10希釈液を作成し、その第1点から アッセイ用に、さらに7つの希釈液を作成した。 組織プラスミノーゲンアクチベーター（t-pA）：緩衝液、基質および構造（20 b）の希釈法は、第VII因子アッセイに用いたものと同じとした。 活性化プロテインC（aPC）：緩衝液はトロンビンアッセイで用いたものと同じ とした。アッセイ緩衝液中の1.25mM S-2366を基質として使用した。構造（20b） の希釈液はウロキナーゼアッセイの場合と同じとした。 プラスミン：緩衝液（トロンビンアッセイを参照のこと）；アッセイ緩衝液中 1.25mMのS-2251（Pharmacia製）、D-Val-Leu-Lys-pNAを基質として使用した。構 造（20b）の希釈についてはウロキナーゼアッセイを参照のこと。 トリプターゼ：0.1Mトリス、0.2M NaCl、0.1mg/mlヘパリン、pH＝8.0を緩衝液 として使用した。緩衝液中の0.5mM S-2366（Pharmacia製）、L-pyroGlu-Pro-Arg -pNAを基質として使用した。構造（20b）の1mMストックから、水中に10mM溶液を 作成した後、その10mM溶液から緩衝液中に1mM溶液を作成し、それを第1濃度点と した。この点から、アッセイ用に、さらに7つの希釈液を作成した。 トリプシン：緩衝液、基質および構造（20b）の希釈スキームは、トロンビン に使用したものと同じとした。 前記表6に示すデータによって例示されるように、構造（20b）は、繊維素溶解 酵素に対して良好な特異性を持つ良好なトロンビンインヒビターとして機能した 。実施例６ 代表的βシート模倣物の合成 この実施例では、下記の構造（21）を持つ本発明の代表的βシート模倣物の合 成を例示する： 構造（21）を次のように合成した。CH2Cl2 0.43mL中のNa-FMOC-Ne-Cbz-a-エタ ナール-Lys-Ome［Phe-OMeから構造（5）を調製するために使用した方法と同じ方 法によって、Ne-Cbz-Lys-OMeから合成したもの］48mg（0.859mmol）、Cys-OEt.H Cl 15.9mg（0.0859mmol）およびTEA 13.2μL（0.0945mmol）の溶液をAr下に室温 で2時間撹拌した。ビス（ビス（トリメチルシリル）アミノ）スズ（II）（39.8 μL）を加え、その反応を一夜撹拌した。その反応溶液を10mLのEtOAcで希釈し、 各6mLの10%クエン酸、水およびブラインで洗浄した。その有機層をNa2SO4で乾燥 し、濾過し、濃縮した。得られた残渣を、40%EtOAc/ヘキサンを用いるシリカゲ ルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、真空乾燥後に、無色の油 状物12.9mg（23%）をジアステレオマーの混合物（1H NMR（CDCl3）による）とし て得た。MS ES（+）m/z 658.2（MH+，30），675.3（M＋Na+，100），696.1（M+K+ ，45）。実施例７ 代表的βシート模倣物の合成 この実施例では、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の合成を例示する。 構造（22）の合成： 構造（22）を次のように合成した。ジクロロメタン（100ml）中でDMAP（270mg ）およびメタノール（3ml）と共に撹拌したCbz-Glu（OBn）-OH（5g，13.5mmol） の溶液に、0℃でEDCI（3g）を加えた。0℃で3時間撹拌した後、その溶液を室温 （rt）で一夜撹拌した。濃縮後、その残渣をEtOAc（100ml）と1N HCl（100ml） に取り出した。水相を分離し、EtOAc（100ml）で抽出した。合わせた有機抽出物 を飽和NaHCO3（100ml）、ブライン（100ml）で洗浄し、乾燥（MgSO4）し、シリ カゲルの短いパッドに通し、濃縮して、4.95gの油状物（95%）を得た。その生成 物は、さらに精製しなくても次の反応に使用できるほど純粋だった。 構造（23）の合成： 構造（23）を次のように合成した：1,4-ジオキサン（40ml）とH2O（20ml）中 でトリエチルアミン（8.4ml，60mmol）と共に撹拌したL-Glu-OH（4.41g，30mmo l）の溶液に、Boc2O（7g，32mmol）を室温で加えた。1.5時間撹拌した後、その 溶液を6N HClで酸性化（pH2）し、EtOAc（3×100ml）で抽出した。合わせた有機 抽出物をH2O（100ml）、ブライン（50ml）で洗浄し、乾燥（Na2SO4）し、濃縮し て、油状物（9.5g）を得た。さらに精製することなく、その油状物を次の反応に 使用した。 1,2-ジクロロエタン（200ml）中の前記油状物（9.5g）とパラホルムアルデヒ ド（5g）およびp-TsOH・H2O（400mg）との混合物を、モレキュラーシーブ4Aを満 たしたディーン-スターク冷却器を用いて6時間加熱還流した。EtOAc（100ml）と 飽和NaHCO3（50ml）を添加した後、その溶液を飽和NaHCO3（3×50ml）で抽出し た。合わせた水性抽出物を6N HClで酸性化（pH2）し、EtOAc（3×100ml）で抽出 した。合わせた有機抽出物をブライン（100ml）で洗浄し、乾燥（Na2SO4）し、 濃縮して油状物を得た。その粗製油状物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキ サン：EtOAc＝80:20→70:30→60:40）で精製することにより、油状物（4.04g，5 2%）を得た。この油状物は静置するとゆっくりと固化した。 構造（24）の合成： 構造（24）を次のように合成した。THF（10ml）中の1,1,1,3,3,3-ヘキサメチ ルジシラザン（2.1ml，10mmol）の撹拌溶液に0℃でn-BuLi（4ml、ヘキサン中2.5 M、10mmol）を加えた。得られた溶液を同じ温度で30分間撹拌した。−78℃に冷 却した後、その撹拌溶液にTHF（10ml）中のカルボン酸（23）（1.02g，3.94mmol ）の溶液を加え、次いでその添加注射器をTHF 5mlで濯いだ。得られた溶液を−7 8℃で1時間撹拌し、PhCH2Br(0.46ml，3.9mmol)を加えた。−30℃で3時間撹拌し た後、その溶液に1N HCl（50ml）を加え、得られた溶液をEtOAc（100ml）で抽出 した。その有機抽出物をブライン（50ml）で洗浄し、乾燥（Na2SO4）し、濃縮し て油状物を得た。その粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：Et OAc＝80:20→60:40→50:50）で精製することにより、泡状の固体（1.35g，98%） を得た。 構造（25）の合成： 構造（25）の合成を次のように行った。乾燥THF（5ml）中のカルボン酸（24） （1.05g，3.0mmol）の撹拌溶液に、室温で1,1'-カルボニルジイミダゾール（500 mg，3.1mmol）を加えた。得られた溶液を室温で30分間撹拌した。そのアシルイ ミダゾールの溶液を精製することなく次の反応に使用した。 一方、THF（5ml）中の1,1,1,3,3,3-ヘキサメチルジシラザン（1.6ml，7.5mmol ）の撹拌溶液にn-BuLi（3ml、ヘキサン中2.5M，7.5mmol）を0℃で加えた。同じ 温度で30分間撹拌した後、その溶液を−78℃に冷却した。その撹拌溶液に、THF （5ml）中のCbz-Glu（OBn）-OMe（1.16g，3mmol）の溶液を加え、次いでその添 加注射器をTHF 2mlで濯いだ。得られた溶液を同じ温度で15分間撹拌した。その 撹拌溶液に、THF 3ml中の前記アシルイミダゾールを加えた。−78℃で30分間撹 拌した後、その溶液に飽和NH4Cl（50ml）を加え、EtOAc（2×75ml）で抽出した 。合わせた有機抽出物を飽和NaHCO3（50ml）、ブライン（50ml）で洗浄し、乾燥 （Na2SO4）し、シリカゲルの短いパッドに通し、濃縮して油状物を得た。その粗 生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：EtOAc＝90:10→80:20→70: 30→60:40）で精製することにより、油状物（1.48g，69%）を得た：MS（ES+）m/ z 734.4（M＋NH4 +）。 構造（26a）の合成： 構造（26a）を次のように合成した。EtOH/AcOH（10/lml）中の前記出発ケトエ ステル（25）（530mg，0.7mmol）の撹拌溶液を、20気圧のH2圧下、10%Pd/C（約1 00mg）で2日間処理した。セライトの短いパッドを通して濾過した後、その濾液 を濃縮して、EtOAc（50ml）に溶解した。その溶液を1N HCl（30ml）、飽和NaHCO3 （30ml）、ブライン（30ml）で洗浄し、乾燥（Na2SO4）し、濃縮して油状物を 得た。その粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン：EtOAc＝80:20 →60:40→50:50→20:80→0:100）で精製することにより、泡状の固体（95mg，34 %）を得た。 立体化学は2D NMRによって帰属した。 構造(27a)の合成： 構造（27a）を次のように合成した。室温のTHF 1ml中で撹拌した二環式エステ ル（26a）28mg（0.070mmol）の溶液に、1.0M水酸化リチウム水溶液0.14mlを加え た。その混合物を20時間激しく撹拌した後、5%クエン酸水溶液（1ml）でクエン チした。その混合物を酢酸エチル（3×25ml）で抽出した後、合わせた抽出物を 水とブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過と、真空下にその 濾液を濃縮することにより、白色泡状物26mgを得て、それをさらに精製すること なく使用した。構造（28a）の合成： 構造（28a）を以下のように合成した。二環式酸（27a）（26mg，0.067mmol） 、ベンゾチアゾリルアルギノール(arginol)トリフルオロ酢酸塩（構造（17）61m g，0.083mmol）、EDC（21mg，0.11mmol）およびHOBt水和物（16mg，0.10mmol） をTHF（5ml）に溶解し、そしてジイソプロピルエチルアミン（0.34ml，1.9mmol ）を添加した。この混合物を室温で15時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、 そして５％クエン酸水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで 順次抽出した。この有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして真 空下で濃縮して、60mgの黄色ガラス状物とした。1H NMR分析により、４つのジア ステレオマーアミドの混合物が示された。MS（ES+）：m/z 898（M＋Na+）。構造（29a）の合成： 構造（29a）のβシート模倣物を以下のように合成した。粗ヒドロキシベンゾ チアゾール（28a）（60mg，0.068mmol）をCH2Cl2（2ml）に溶解し、Dess-Martin ペルヨージナン(periodinane)（58mg，0.14mmol）を添加した。この混合物を室 温で6時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、そして10％チオ硫酸ナトリウム 水溶液と共に10分間激しく撹拌した。この有機溶液を分離し、そして飽和重炭酸 ナトリウム水溶液、水およびブラインで抽出し、次いで無水硫酸ナトリウムで乾 燥し、そして濾過した。この濾液の真空下での濃縮により、42mgの黄色ガラス状 物を得た。1H NMR分析により、２つのジアステレオマーケトベンゾチアゾールの 混合物が示された。 このケトベンゾチアゾール（42mg，0.048mmol）を95％トリフルオロ酢酸水溶 液（0.95ml）に溶解し、そしてチオアニソール（0.05ml）を添加した。得られた 濃色溶液を室温で18時間撹拌し、次いで真空下で濃縮して濃褐色ゴム状物とした 。このゴム状物をジエチルエーテルで粉末化し、そして遠心分離した。溶液を除 去し、残った固体をさらに２回、上記のように粉末化し、そして回収した。黄色 固体を真空デシケーター中で2時間乾燥し、次いでHPLCにより精製して、1.4mgの 脱保護された生成物を得た。MS（ES+）：562.4（M+H+）。HPLC：（tR＝21.17分 ）。構造（26b）の合成： 構造（26b）を以下のように合成した。MeOH/AcOH（10/lml）中の上記出発ケト エステル（25）（615mg，0.86mmol）の撹拌溶液を、３日間20気圧のH2下で、10 ％Pd/C（約60mg）で処理した。Celiteの短いパッドを通して濾過した後、この濾 液を濃縮して油状物を得た。この粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘ キサン：EtOAc＝80:20→60:40→50:50→0:100）により精製して、より極性の高 い画分（50mg）を回収した。Rf 0.12（ヘキサン：EtOAc＝60:40）；MS（ES+）m/ z 433（M＋H+）。 上記油状物を、２日間還流温度で1,2-ジクロロエタン（10ml）中p-TsOH・H2O（ 5mg）で処理した。濃縮後、油状生成物を分取TLC（ヘキサン：EtOAc＝80:20→60 :40）により精製して、油状物（10mg）を得た。 立体化学は2D NMRによって帰属した。構造（28b）の合成： 構造（28b）を以下のように合成した。室温でTHF 1ml中で撹拌した二環式エス テル（26b）12mg（0.030mmol）の溶液に、0.060mlの1.0M水酸化リチウム水溶液 を添加した。この混合物を25時間激しく撹拌し、次いで５％クエン酸水溶液（1m l）でクエンチした。この混合物を酢酸エチル（3×25ml）で抽出し、次いで合わ せた抽出物を水およびブラインで洗浄し、そして無水硫酸ナトリウムで乾燥した 。濾過および濾液の真空下での濃縮により、19mgの白色泡状物を得た。 この泡状物、ベンゾチアゾリルアルギノールトリフルオロ酢酸塩（30mg，0.04 1mmol）、EDC（10mg，0.052mmol）およびHOBt水和物（9mg，0.059mmol）をTHF（ 2ml）中に溶解し、そしてジイソプロピルエチルアミン（0.026ml，0.15mmol）を 添加した。この混合物を室温で30時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、そし て５％クエン酸水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで順次 抽出した。この有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮 して28mgの黄色ガラス状物とした。1H NMR分析により、４つのジアステレオマー アミドの混合物が示された。MS（ES+）：m/z 898（M＋Na+）。構造（29b）の合成： 構造（29b）を以下のように合成した。粗ヒドロキシベンゾチアゾール（28b） （28mg）をCH2Cl2（2ml）に溶解し、そしてDess-Martinペルヨージナン（29mg， 0.071mmol）を添加した。この混合物を室温で18時間撹拌し、次いで酢酸エチル で希釈し、そして10％チオ硫酸ナトリウム水溶液と共に10分間激しく撹拌した。 この有機溶液を分離し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、水およびブラインで抽出 し、次いで無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そじて濾過した。この濾液の真空下で の濃縮により、32mgの黄色ガラス状物を得た。1H NMR分析により２つのジアステ レオマーケトベンゾチアゾールの混合物が示された。 このケトベンゾチアゾール（32mg）を95％トリフルオロ酢酸水溶液（0.95ml） に溶解し、そしてチオアニソール（0.05ml）を添加した。得られた濃色溶液を室 温で20時間撹拌し、次いで真空下で濃縮して濃褐色ゴム状物とした。このゴム状 物をジエチルエーテルで粉末化し、そして遠心分離した。溶液を除去し、残った 固体をさらに２回、上記のように粉末化し、そして回収した。黄色固体を真空デ シケーター中で２時間乾燥し、次いでHPLCにより精製して、1.3mgの脱保護され た生成物を得た。MS（FB+）：562.36（M+H+）；HPLC：tR＝21.51分（勾配 40分 間にわたって0→90％ CH3CN中の0.1％TFA／H2O中の0.1％TFA）。 実施例８ 代表的βシート模倣物のプロテアーゼインヒビターとしての活性 この実施例は、トロンビン、第VII因子、第Ｘ因子、第XI因子およびトリプシ ンのインヒビターとして機能する、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の能 力を例示する。上記構造（29a）および（29b）のβシート模倣物を実施例７に開 示した手順に従って合成し、そしてこの実験で使用した。 プロテイナーゼインヒビターアッセイは、第XI因子について以下に記載した以 外は、実施例５に記載したように行った。結果を表７に示す。 第XI因子。このアッセイにおいては、トロンビンアッセイと同じ緩衝液を利用 した。1mM S-2366（Pharmacia製）、L-pyroGlu-Pro-Arg-pNA水溶液を、基質とし て用いた。構造（29a）または（29b）の1mMストック水溶液から、緩衝液中の1:1 0希釈液を作製した。この100μM溶液から、アッセイ用緩衝液中の７つの連続1:5 希釈液を作製した。 実施例９ 代表的βシート模倣物のプロテアーゼインヒビターとしての活性 この実施例は、トロンビン、第VII因子、第Ｘ因子、第XI因子、トリプターゼ 、aPC、プラスミン、tPA、ウロキナーゼおよびトリプシンのインヒビターとして 機能する、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の能力を例示する。上記構造 （20）および（29b）のβシート模倣物をそれぞれ実施例２および７に開示した 手順に従って合成し、そしてこの実験に使用した。 プロテイナーゼインヒビターアッセイは、第XI因子について実施例８に記載し たように行った以外は、実施例５に記載されているように行った。結果を表８に 記載する。 実施例10 代表的βシート模倣物の合成 この実施例は、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の合成を例示する。構造（30）の合成： 構造（30）を以下のように合成した。n-ブチルリチウム（700μL，1.75mmol， ヘキサン中2.5M）を、−78℃のTHF（1ml）中のトリス（メチルチオ）メタン（25 6μL，1.95mmol）の溶液に５分間にわたって添加した。この混合物を40分間撹拌 し、次いで２mlのTHF中のビス-Boc-アルギニナール(argininal)（実施例２の構 造（16））（100mg，1.75mmol）の溶液を滴下して５分間にわたって処理した。1 .5時間撹拌した後、反応を飽和NH4Cl溶液でクエンチし、そして室温まで加温し た。層を分離し、そして水層をEtOAcで抽出し（３×）、ブラインで洗浄し（1× ）、乾燥し（Na2SO4）、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（EtOA c：ヘキサン1:4）による精製により、93mg（73%）のオルトチオメチルエステル （構造（30））および8mgの回収アルデヒド（構造（16））を得た。 構造（31）の合成： 構造（31）を以下のように合成した。2.5mlの12:1メタノール/水中の77mg（0. 11mmol）のオルトチオメチルエステル（構造（30））、117mg（0.43mmol）の塩 化第二水銀、および39mg（0.18mmol）の酸化第二水銀の混合物を室温で４時間撹 拌した。この混合物をCeliteを通して濾過し、そして残渣をEtOAcで洗浄した（3 ’×）。濾液を水で希釈し、そしてEtOAcで抽出した（3×）。有機層を75％NH4O Ac/NH4Clで２回洗浄し、次いでNH4Clで洗浄し、そして乾燥した（Na2SO4）。溶 媒を真空下で除去し、そして残渣をフラッシュクロマトグラフィー（EtOAc/Hex ，1:3）により精製して、48mg（72％）の構造（31）の２つのジアステレオマー を1:2.7の比率で得た。 構造（32）の合成： 構造（32）を以下のように合成した。THF/水（4ml，1:3）中の32mgのメチルエ ステル（構造（31））（0.051mmol）の溶液を５mg（0.119mmol）のLiOH・H2Oで処 理した。45分間撹拌した後、反応物を５％クエン酸で希釈し、そして酢酸エチル で抽出した（3×）。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、そ して濃縮して、30mg（96％）の構造（32）を白色固体として得た。この生成物を さらに精製することなく使用した。 構造（33）の合成： 構造（33）を以下のように合成した。THF（5ml）中の構造（32）の化合物（29 mg，0.047mmol）、HOBt（8mg，0.056mmol）およびEDC（11mg，0.056mmol）の溶 液に、フェネチルアミン（7ml，0.056mmol）およびそれに続いてジイソプロピル エチルアミン（12μL，0.071mmol）を添加した。この反応混合物を室温で一晩撹 拌し、そして５％クエン酸で希釈した。有機層を分離し、そして水相をEtOAcで 抽出した（3×）。合わせた抽出物をNaHCO3の飽和溶液、ブラインで洗浄し、Na2 SO4で乾燥し、そして濾過した。濃縮後、粗生成物をクロマトグラフィー（EtOAc /Hex，1:1）で２段階で精製して、26mg（77%）の構造（33）を得た。 構造（34）の合成： 構造（34）を以下のように合成した。THF（5ml）中のフェネチルアミド（構造 （33），25mg，0.035mmol）の溶液に、18mgのp-トルエンスルホン酸一水和物（0 .093mmol）を添加した。この反応混合物を室温で一晩撹拌して、TLCによるベー スラインスポットを得た。この溶液を真空下で濃縮し、そして残渣をエーテルで ２ 回洗浄して過剰のpTsOHを除去して、構造（34）を黄白色固体として得、これを さらに精製することなく使用した。1H NMR（500MHz，CDCl3）は予想された生成 物と一致したが、個々のピークの帰属はブロードになったため困難であった。MS （ES+）m/z 520.4（M＋H+）。 構造（34）を実施例１の構造（9a）と反応させ（構造（18）の合成について実 施例２において記載した手順と類似の方法で）、その後酸化および脱保護を行っ て（それぞれ構造（18）および（19）の酸化および脱保護に関して記載した方法 と類似の方法で）、下記表９に示す構造（35）を得た。 実施例11 代表的βシート模倣物の合成 この実施例は、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の合成を例示する。 構造（36）の合成： 構造（36）を、ベンジルアミンおよび構造（32）から出発して、化合物（34） と類似の方法で合成した。1H NMR（500MHz，CDCl3）は予想された生成物と一致 したが、個々のピークの帰属はブロードになったため困難であった。MS（FAB+） m/z 506.4（M＋H+）。 構造（36）を実施例１の構造（9a）と反応させ（構造（18）の合成について実 施例２において記載した手順と類似の方法で）、その後酸化および脱保護を行っ て（それぞれ構造（18）および（19）の酸化および脱保護に関して記載した方法 と類似の方法で）、下記表９に示す構造（37）を得た。 実施例12 代表的βシート模倣物の合成 この実施例は、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の合成を例示する。 構造（38）の合成： 構造（38）を、p-クロロフェネチルアミンおよび構造（32）から出発して、構 造（34）と類似の方法で合成した。1H NMR（590MHz，CDCl3）は予想された生成 物と一致したが、個々のピークの帰属はブロードになったため困難であった。MS （ES+）m/z 554.5（M＋H+）。 構造（38）を実施例１の構造（9a）と反応させ（構造（18）の合成について実 施例２において記載した手順と類似の方法で）、その後酸化および脱保護を行っ て（それぞれ構造（18）および（19）の酸化および脱保護に関して記載した方法 と類似の方法で）、下記表９に示す構造（39）を得た。 実施例13 代表的βシート模倣物の合成 この実施例では、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の合成を例示する。構造（40）の合成： 構造（40）を、p-メトキシフェネチルアミンおよび構造（32）を用いて、化合 物（34）と類似の方法で合成した。1H NMR（500MHz，CDCl3）は予想された生成 物と一致したが、個々のピークの帰属はブロードになったため困難であった。MS （ES+）m/z 550.5（M＋H+）。 構造（40）を実施例１の構造（9a）と反応させ（構造（18）の合成について実 施例２において記載した手順と類似の方法で）、次いで酸化および脱保護を行っ て（それぞれ構造（18）および（19）の酸化および脱保護に関して記載した方法 と類似の方法で）、下記表９に示す構造（41）を得た。 実施例14 代表的なβシート模倣物の合成 この実施例では、本発明のさらなる代表的なβシート模倣物の合成を例示する 。構造（42）の合成： 構造（42）を次のように調製した。10ml丸底フラスコにCH2Cl2（10ml）、2,3- ジメチルアミノプロピオン酸メチル二塩酸塩（19.9mg，0.103mmol，1.5当量）お よびジイソプロピルエチルアミン（53ml，0.304mmol，4.4当量）を加えた。この 懸濁液を室温で1時間磁気により撹拌し、その時点で、構造（30）の化合物（50m g，0.068mmol，1当量）、塩化水銀（II）（82.4mg，0.304mmol，4.4当量）およ び酸化水銀（II）（25.7mg，0.120mmol，1.7当量）を加えた。得られた黄色懸濁 液を16.5時間撹拌した。この間に懸濁液は灰色に変色した。その反応物をCH2Cl2 （50ml）で希釈し、飽和NH4Cl水溶液（5ml）、飽和NaCl水溶液（5ml）で洗浄し 、Na2SO4で乾燥した。その濁った懸濁液を濾過し、溶媒を真空下で除去した。そ の白色固体を分取薄層クロマトグラフィーで精製することにより、イミダゾリン 構造（42）（25.3mg，収率52%）を透明な非晶質固体として得た： 構造（43）の合成： 構造（43）を次のように合成した。25ml丸底フラスコに、構造（42）の化合物 （230mg，0.33mmol）、CHCl3（5ml）およびMnO2（500mg，5.75mmol，17.4当量） を入れた。5時間撹拌した後、その懸濁液を濾過し、固体をメタノールで洗浄し た。溶媒を真空下で除去し、残渣を酢酸エチル（5ml）とメタノール（1ml）に溶 解し、新たなMnO2（500mg）を入れて、その反応物を室温で15時間撹拌した。固 体を濾過し、溶媒を真空下で除去した。その残渣をシリカゲルによるカラムクロ マトグラフィー（1:1酢酸エチル：ヘキサンで溶出後、純粋な酢酸エチルで溶出 し、次いで1:9メタノール：酢酸エチルで溶出）で精製することにより、所望の 生成物（構造（43），190mg，収率83%）を非晶質固体として得た： 構造（44）の合成： 構造（44）を、構造（33）から構造（34）への構築に使用した方法と同じ方法 によって合成した。生成物をさらに精製することなくカップリングに使用した。 構造（44）を実施例1の構造（9a）と（構造（18）の合成について実施例2に記 述した手順と類似の方法で）反応させた後、（それぞれ構造（19）の脱保護に関 して記述した方法と類似の方法で）脱保護を行うことにより、下記表9に示す構 造（45）を得た。構造（45）の調製では、そのカップリング工程を、類似のヒド ロキシ化合物ではなく構造（44）のカルボニル化合物で行った。 実施例15 代表的βシート模倣物の合成 この実施例では、本発明のさらなる代表的βシート模倣物の合成を例示する。 構造（46）の合成： 構造（46）を、構造（16）とチアゾールから出発して、構造（17）と類似の方 法で合成した。この化合物をさらに精製することなくカップリング工程に使用し た。 構造（46）を実施例1の構造（9a）と（構造（18）の合成について実施例2に記 述した手順と類似の方法で）反応させた後、（それぞれ構造（18）および（19） の酸化および脱保護に関して記述した方法と類似の方法で）酸化と脱保護を行う ことにより、下記表9に示す構造（47）を得た。 実施例16 代表的なβシート模倣物の合成 この実施例では、本発明のさらなる代表的なβシート模倣物の合成を例示する 。 構造（48）の合成： −25℃のTHF（5ml）中で撹拌したα-Boc-β-Fmoc-2,3-ジアミノプロピオン酸 （818mg，1.92mmol）の溶液に、4-メチルモルホリン（0.23ml，2.1mmol）を加え 、次いでクロロギ酸イソブチル（0.25ml，1.9mmol）を加えた。得られた懸濁液 を5分間撹拌した後、5mlのTHFを使って濾過した。その濾液を氷/水浴で冷却した 後、水（2.5ml）に溶解したホウ水素化ナトリウム（152mg，0.40mmol）を滴下し た。その混合物を15分間撹拌した後、水（50ml）を加え、その混合物をCH2Cl2（ 3×50ml）で抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウ ムで乾燥し、濾過した。濾液を真空下で濃縮することにより、淡黄色固体を得、 それ をフラッシュクロマトグラフィー（50%酢酸エチル/ヘキサン溶出液）で精製して 、596mgのアルコールを白色固体として得た。 そのアルコール（224mg，0.543mmol）を塩化メチレンに溶解し、Dess-Martin ペルヨージナン（262mg，0.64mmol）を加えた。その混合物を室温で1時間撹拌し た後、酢酸エチル（50ml）で希釈し、10%Na2S2O3水溶液、飽和NaHCO3水溶液およ びブラインで順次抽出した。その有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過 し、真空下で濃縮して白色固体を得た。その固体をフラッシュクロマトグラフィ ーで精製することにより、169mgのアルデヒド構造（48）を白色固体として得た 。 構造（49）の合成： 構造（49）を、構造（48）とベンゾチアゾールから出発して、構造（17）と類 似の方法で合成した。この化合物を、ジアステレオマーの1:1混合物として、さ らに精製することなくカップリング工程（下記）に使用した。MS（EI+）：m/z 4 46.4（M+H+）。構造（50）の合成： 構造（49）と二環式酸構造（9a）（27.mg，0.069mmol）およびHOBt水和物（71 mg，0.46mmol）をTHF（1ml）に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（0.0.059m l，0.34mmol）を加えた後、EDC（19mg，0.099mmol）を加えた。その混合物を室 温で20時間撹拌した後、酢酸エチルで希釈し、5%クエン酸水溶液、飽和重炭酸ナ トリウム水溶液、水およびブラインで順次抽出した。その有機溶液を無水硫酸ナ トリウムで乾燥し、濾過し、真空下で濃縮して黄色泡状物61mgを得た。1H NMR分 析は、ジアステレオマーアミドの混合物を示した。 前記泡状物をCH3CNに溶解し、ジエチルアミンを加えた。その溶液を室温で30 分間撹拌した後、真空下で濃縮して黄色泡状物を得た。その泡状物をヘキサンで 濯ぎ、DMF（0.5ml）に溶解した。別のフラスコで、カルボニルジイミダゾール（ 16mg，0.99mmol）とグアニジン塩酸塩（10mg，0.10mmol）をDMF（1ml）に溶解し 、ジイソプロピルエチルアミン（0.035ml，0.20mmol）を加えた後、DMAP（1mg） を加えた。その溶液を室温で1.5時間撹拌した後、前記アミンの溶液を加え、撹 拌を16時間続けた。その溶液を真空下で濃縮した後、その残渣に水を加え、その 混合物を酢酸エチル（3×25ml）で抽出した。合わせた抽出物をブラインで洗浄 し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を真空下で濃縮して、58mgの 構造（50）を黄色泡状物として得た。MS（ES+）：m/z 680.6（M+H+）。 構造（50）を酸化して、構造（51）の対応するケトンを得た。実施例17 代表的なβシート模倣物のプロテアーゼインヒビターとしての活性 この実施例では、トロンビン、第VII因子、第X因子、第XI因子、トリプターゼ 、aPC、プラスミン、tPA、ウロキナーゼ、トロンビン-トロンボモジュリン複合 体、およびトリプシンのインヒビターとして機能する、本発明のさらなる代表的 なβシート模倣物の能力を例証する。表9に挙げる構造のβシート模倣物は表10 に示す阻害活性を有した。 プロテイナーゼインヒビターアッセイは実施例9に記述したように行った。ト ロンビン-トロンボモジュリン複合体に関するアッセイは、インヒビターと基質 の添加の前に、トロンビンを4nMトロンボモジュリンと共に室温で20分間予備イ ンキュベートした点を除き、トロンビンの場合と同様に行った。 実施例18 血管移植片における血小板沈着に対する代表的なβシート模倣物の効果 血管移植片における血小板沈着に対する本発明化合物の効果を、Kellyら,Proc ．Natl．Acad．Sci.，USA 89:6040-6044（1992）に記述されているようにシャン トに対して近位に化合物を導入した点を除き、Hansonら「Interruption of acut e platelet-dependent thrombosis by synthetic antithrombin D-phenylalanyl -L-prolyl-L-arginyl chloromethylketone（合成抗トロンビンD-フェニルアラニ ル-L-プロリル-L-アルギニルクロロメチルケトンによる急性血小板依存性血栓症 の妨害）」Proc．Natl．Acad．Sci.，USA 85:3148-3188（1988）の手順に従って 測定した。その結果を構造（20b）、（39）および（29b）について、それぞれ図 1、2、および3に示す。 実施例19 代表的βシート模倣物の合成 この実施例では、下記の構造を有する本発明のさらなる代表的なβシート模倣 物の合成を例示する。 構造（52）は、実施例２の中間体（16）の代わりに下記中間体（53）を用いる ことによって合成され得る： 中間体（53）は次の反応スキームに従って合成され得る：あるいは、下記反応スキームに従って中間体（53）を合成し得る： 実施例20 MHC I およびMHC IIに結合する、代表的なβ-シート模倣物 以下の構造(54)、(55)、および(56)を、本明細書中に開示される技法で合成し た。 構造(54)および(55)のMHC I分子への結合能力は、Elliotらによる記載（Natur e 351:402-406，1991）のように本質的に実証され得る。同様に、構造(56)のMHC II分子への結合能力は、Kwokらの手順（J．Immunol．155:2468-2476，1995）に より実証され得る。 実施例21 SH2 ドメインに結合する、代表的なβ-シート模倣物 以下の構造(57)を合成し、そして構造(58)は、本明細書中に開示される技法に よって合成され得る。 構造(58)の、STAT6のSH2ドメインへの結合能力、または構造(57)の、タンパク 質チロシンホスファターゼSH-PTP1のSH2ドメインへの結合能力は、Payneらに開 示される手順（PNAS 90:4902-4906，1993）により実証され得る。SH2に結合する 模倣物のライブラリは、Songyangらの手順（Cell 72:767-778，1993）によりス クリーニングされ得る。実施例22 プロテインキナーゼに結合する、代表的なβ-シート模倣物 以下の構造(59)は、明細書中に開示される技法によって合成され得る。 プロテインキナーゼの基質またはインヒビターとして作用する構造(59)の能力 は、Songyangらによる手順（Current Biology 4:973-982，1994）によって実証 され得る。実施例23 代表的β-シート模倣物の合成 この実施例は、以下の構造(60)〜(63)を有する本発明の代表的β-シート模倣 物の合成を例証し、ここでＢはNまたはCHである： 構造(60)の合成： 構造(61)の合成： 構造(61)の別の合成： 構造(62)の合成： 構造(62)の別の合成： 構造(63)の合成： 実施例24 代表的β-シート模倣物のバイオアベイラビリティー この実施例は、上記実施例２で合成されるような、そして上記実施例９で報告 された生物学的活性を有する構造(20b)の化合物のバイオアベイラビリティーを 例証する。 詳細には、構造(20b)の薬動力学的および薬物速度論的研究を、雄Sprague Daw leyラットで行った。ラットに、構造(20b)の生理食塩水溶液を、４mg/kgの静脈 内(IV)または10mg/kgの経口(PO)投与した。ラットの群（n=3または4）を屠殺し 、そして投与後0.25、0.5、1、2、4、および8時間に瀉血した。効能パラメータ 、aPTTおよびTTを、各血漿試料について測定した。血漿中の構造(20b)の濃度を 、トリプシン阻害アッセイによって決定した。この実験の結果を、それぞれ4mg/ kg IVおよび10mg/kg POの投与について図4Aおよび4Bに示した。図4Aおよび4Bに 示されるデーターは、IVおよびPO投与の両方による構造(20b)のインビボ効能を 例証．する。平均構造(20b)濃度値の非コンパートメント薬物速度論的分析は、7 .5時間(IV)および4.5時間(PO)の最終半減期を証明する。経口投与された構造(20 b)のバイオアベイラビリティーは、約27％である。 実施例25 代表的β−シート模倣物の合成 この実施例は、以下に示す構造を有する本発明のさらなる代表的β-シート模 倣物の合成を例証する。 構造(64)の合成： 構造(64)を以下のように合成した。150mlの丸底フラスコに、5.19グラム（24. 7mmol）の1,2,3-ベンゼントリカルボン酸、75mlのトルエン、および3.3mL（24.7 mmol）のトリエチルアミンを入れた。反応物を、共沸性除去水とともに３時間加 熱還流した。このときに2.07mlのアニリンを添加し、そして反応物を、水を共沸 除去しながら６時間再び還流した。反応溶液を冷却する際に、結晶性生成物を形 成し、そして濾別した（4.68g）。次いで溶液をNaHCO3および酢酸エチルで抽出 し、そして重炭酸塩層を酸性にし、そして第２のEtOAc洗浄で再抽出した。有機 層をNaSO4上で乾燥し、濾過し、そして溶媒を除去してさらに1.24グラムの生成 物を得た。総収量は5.92g（82％）であった。 構造(65)の合成： 構造(65)を以下のように合成した。THF（2ml）中の構造(64)のイミドー酸（53 .4mg，0.2mmol）を−40℃まで冷却し、そして24.2μl(0.22mmol)のNMMおよび28. 2μlのIBCF（0.22mmol）で処理した。反応物を３分間撹拌し、そして次にエーテ ル中0.69ml（0.69mmol）のジアゾメタンの1M溶液を添加した。温度をゆっくりと -20℃まで上昇させ、そして反応物を室温にて２時間撹拌した。反応物を０℃ま で温め、そしてさらに３時間撹拌した。 反応物をEtOAc（30ml）で希釈し、そして有機層を５％クエン酸、NaHCO3、お よび飽和NaClで洗浄した。次いで、Na2SO4上で乾燥させ、そして濃縮して62.4mg の残渣を得た。この粗生成物をTHFで溶解し、−40℃まで冷却し、そしてジオキ サン中のHClの4M溶液74μlで処理した。反応物を−20℃まで温め、そして１時間 撹拌した。次に、反応物を０℃にて２時間撹拌した。この時点での反応混合物の TLCは、開始ジアゾケトンの消失を示した。溶媒を除去し、そして生成物を分取T LC（EtOAc/ヘキサン、7/3）によって精製して、22.6mg（38％）の純粋なクロロ メチルケトンを得た。 構造(66)の合成： 構造(66)を以下のように合成した。50mlの塩化メチレン中の910mg（5.14mmol ）の4-フェニルウラゾール(urazole)の撹拌懸濁液に、1.654g（5.15mmol）のヨ ードベンゼンニ酢酸を添加した。深赤色が発色し、そして撹拌によりすべての物 質が溶液に入った。室温で15分間撹拌した後、560mgの90％純粋な2,4-ペンタジ エン酸(penatdienoic acid)を添加し、そして色が徐々に退色して白色固体を形 成した。15分後、追加の70mgのペンタジエン酸を添加した。室温で２時間撹拌し た後、塩化メチレンを減圧下で除去した。エーテルを添加し（25ml）、得られた 懸濁液を-20℃まで冷却し、そして固体物質(1.41g，100％)を濾別した。生成物 は、EtOAc/クロロヘキサンから再結晶され得た。 構造(67)の合成： 構造(67)を以下のように合成した。構造(66)のディールス-アルダー付加物(43 2mg，1.57mmol)を、50ml MeOH中の150mgの10％ Pd/Cと混合した。反応物を、水 素雰囲気（水素風船）下で一晩撹拌した。18時間後、アリコート（1ml）を取り 出し、そして溶媒を減圧下でエバポレートした。残渣の1H NMRは、飽和した生成 物への95％以上の変換を示した。反応混合物をceliteを通して濾過し、そして溶 媒をロータリーエバポレーターによって除去して、424mgの結晶性生成物を得た 。 構造(68)の合成： 構造(68)を以下のように合成した。40mlの塩化メチレン中の450mg（1.64mmol ）の(67)の溶液に、142μLのオキサリルクロリード（1.64mmol）および１滴のDM Fを添加した。反応物を、Ar下で室温にて一晩撹拌した。塩化メチレンをロータ リーエバポレーターによって除去し、そして30mlのTHFを添加した。この溶液を −20℃まで冷却し、そしてエーテル中の2mlのジアゾメタンの1M溶液を添加した 。 これを徐々に室温まで温めながら、４時間撹拌した。次いで、反応物を−78℃ま で冷却し、そしてジオキサン中の500uLの4M HClを添加した。反応物を、徐々に 室温まで温めながら、Ar下で再度撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、クロロメ チルケトンおよびメチルエーテルの混合物（1H NMR分析による）を得た。これを シリカゲルでクロマトグラフ（EtOAC）を行って、185mg（36％）のクロロメチル ケトンを得た。 構造(69)の合成： 構造(69)を以下のように合成した。60mlの塩化メチレン中の4-フェニルウラゾ ール（1.179g，6.65mmol）に、2.14gのヨードベンゼン二酢酸（6.64mmol）を添 加し、そして反応混合物を室温にて撹拌した。固体がすべて徐々に溶解するにつ れて深赤色が発色した。約15分後、10mlの塩化メチレン中の640mgのソルビナー ル（6.66mmol）を反応フラスコに添加し、そして赤色はゆっくりと退色した。２ 時間後、塩化メチレンを減圧下で除去した。エーテル(30ml)を得られた残渣に添 加し、そして−20℃まで一晩冷却した。形成された固体物質（1.55g，86％収率 ）を濾紙上に集めた。 構造(70)の合成： 100ml丸底フラスコ中の0.78グラム（3.0mmol）の構造(64)の酸に、20mlのTHF を添加し、そして反応混合物を−20℃まで冷却した。4-メチルモルホリン(0.34m 1，3.0mmol)を添加し、そして続いて0.42ml（3.3mmol）のイソブチルクロロギ酸 を添加した。得られた懸濁液を５分間撹拌し、次いで0.9mlの水中の0.34グラム （9.0mmol）のホウ水素化ナトリウムの懸濁液を迅速に添加した。4〜5分後、40m lの水を添加し、そして懸濁液を125mlの酢酸エチルで抽出した。次いで、EtOAc 層を、水およびブラインで洗浄し、そしてMgSO4上で乾燥した。濾過および溶媒 エバポレーションによって粗製アルコールを肯た。 粗製アルコールを40mlのジクロロメタンに溶解し、そして2.0グラム（4.7mmol ）のDess-Martinペルヨージナン試薬を室温にて添加した。反応物を２時間撹拌 し、40mlのジクロロメタンで希釈し、そして10％重炭酸ナトリウムおよび10％チ オ硫酸ナトリウムの３×20mlの1:1（容量による）溶液、１×40mの水、１×40ml のブラインで洗浄し、そして硫酸マグネシウム上で乾燥した。濾過、溶媒エバポ レーション、および30%EtOAc/ヘキサンを使用するフラッシュクロマトグラフィ ーによって、純粋なアルデヒド（２段階で0.5g，67％）を得た。 構造(71)の合成： 25mlの丸底フラスコ中の3mlのテトラヒドロフランに、0.066ml（0.69mmol）の メチルプロピオレートを添加し、そして溶液を−78℃まで冷却した。n-ブチルリ チウム（0.28ml，0.69mmol）を１滴ずつ添加し、そして反応物を、7〜10分間撹 拌し、その時点で0.15g(0.6mmol)の構造(70)のアルデヒドの3mlジクロロメタン 溶液を迅速に添加した。反応物を−78℃で35〜45分間撹拌し、次いで1.5mlの飽 和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。有機溶媒を減圧下で除去し、そして水 層を24mlのEtOAcで抽出し、次いでこれをブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナ トリウム上で乾燥し、濾過し、そして溶媒を減圧下でエバポレートして、粗生成 物を得た。40％ EtOAc/ヘキサンを使用する分取TLC精製によって、生成物（107m g，47％）を得た。 実施例26 代表的β-シート模倣物の活性 この実施例では、実施例25の化合物を、ヒト臍静脈内皮(entothelial)細胞（H UVEC）においてTNF誘導されるV-CAM発現の阻害についてアッセイした。炎症性サ イトカインでの刺激で、HUVECは、E-セレクチン、V-CAM、およびI-CAMを含む細 胞表面接着分子を発現する。プロテアソームアンタゴニストは、これらの接着分 子のTNFαで誘導される発現を阻害し、それによって白血球接着および炎症性応 答を調節するためのメカニズムを提供する。 より詳細には、化合物(65)、(68)、(69)、および(71)を、テトラメチルベンジ ジンをo-フェニレンジアミン-ペルオキシドの代わりに使用したこと以外は、Dei sher、Kaushansky、およびHarlan（「Inhibitors of Topoisomerase II Prevent Cytokine-Induced Expression of Vascular Cell Adhesion Molecule-1，While Augmenting the Expression of Endothelial Leukocyte Adhesion Molecule-1 on Human Umbilical Vein Endothelial Cells」Cell Adhesion Commun．1:133-4 2，1993）（参考として本明細書に援用される）に記載の手順によってアッセイ した。 この実験の結果は、以下の通りである：化合物(65)、9.6±0.1μM；化合物(68 )、14.2±0.8μM；化合物(69)、32.4±1.7μM；および化合物(71)、4.9±0.18μ M。実施例27 β-シート模倣物の固相合成に使用される代表的リンカーの合成 この実施例は、β-シート模倣物の固相合成に使用されるリンカーの合成を例 証する。 構造(72)の合成： 500mLの丸底フラスコに、トリス(メチルチオ)メチルアルギノール(30)(10.70g ， 14.8mmol)およびCH2Cl2（20mL）を、磁気撹拌しながら入れた。125mLのErlenmey erフラスコに、システインメチルエステル塩酸塩(3.81g，22.2mmol)、CH2Cl2（5 0mL）、およびジイソプロピルエチルアミン(8.5mL，6.3g，48.7mmol)を入れた。 この混合物を、システインメチルエステルが溶解するまで（25分）撹拌し、そし て溶液はジイソプロピルエチルアミン塩酸塩のかすかに曇った懸濁液のように見 えた。この懸濁液を、アルギノールを含むフラスコに添加し、そして追加のCH2C l2（100mL）を反応物に添加した。HgCl2（17.7g，65.1mmol）およびHgO（5.46g ，25.2mmol）を反応混合物に添加し、そして懸濁液を、水銀塩が懸濁したままで あるように十分すばやく撹拌した。フラスコに軽くふたをして、出発物質が消費 される時間まで22時間室温で撹拌した。黄色溶液を飽和塩化アンモニウムでクエ ンチし、そしてCH2Cl2で希釈した。層を分離し、そして水層をCH2Cl2で２回抽出 した。合わせた有機層をNa2SO4/MgSO4で乾燥し、そしてシリカゲルのパッドを通 して濾過した。溶媒を真空下で除去し、そして残渣をシリカゲルで２回連続して 精製した。１回目は7:3酢酸エチル/ヘキサンで溶出し、そして２回目は1:1酢酸 エチル/ヘキサン、次いで7:3酢酸エチル/ヘキサンで溶出した。合わせた精製物 から、薄黄色泡状物として7.97g（75％収率）のNα,NG-ビスBoc-NG'-Mtr-1-[(4' -カルボキシメチル)チアゾリン-2-イル]アルギノールを得た： 構造(73)の合成： 300mLの丸底フラスコに、クロロホルム（20mL）およびアルギノール(72)（7.9 7g，11.1mmol）を入れ、そしてマグネチックスターラーを装着した。二酸化マン ガン(IV)（9.65g，111mmol，10当量）を添加し、そしてフラスコに栓をした。追 加のクロロホルム（10mL）を添加し、そして懸濁液を室温にて８時間激しく撹拌 し、その後シリカゲルを通して濾過し、酢酸エチルをすすいだ。溶媒を真空下で 除去し、そして残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（45:55 EtOAc/ ヘキサン）によって精製して、薄黄色非晶質固体としてNα,NG-ビスBoc-NG'-Mtr -1-[(4'-カルボキシメチル)チアゾール-2-イル]アルギノール（4.83g，61％収率 ）、および1.89g（24％）の回収された出発物質を得た： 構造(74)の合成： H2O（1mL）を含む25mLの三角フラスコに、2.0N LiOH（0.25mL，0.50mmol，1.5 当量）およびNα,NG-ビスBoc-NG'-Mtr-1-[(4'-カルボキシメチル)チアゾール-2- イル]アルギノール（283mg，0.33mmol）をTHF（1mL）中の溶液として添加した。 THFの第２の部分（１mL）を使用してアルギノールを含むフラスコをすすぎ、そ して反応物に添加した。均一な混合物を室温にて6.5時間磁気撹拌し、そのとき ５％HCl（0.34mL，0.55mmol）および酢酸エチル（10mL）を添加した。有機層を 分離し、そして水層を２×10mL酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を飽和Na Clで洗浄し、そしてNa2SO4で乾燥した。溶媒を除去して、薄黄色泡状物として21 2mg（92％収率）のNα,NG-ビスBoc-NG'-Mtr-1-[(4'-カルボン酸)チアゾール-2- イル]アルギノールを得た： 構造(75)の合成： マグネチックスターラーを装着した250mLの丸底フラスコに、CH2Cl2（10mL） 、酸(74)（3.40g，4.86mmol）、およびトリフルオロ酢酸（2mL）を入れた。1.5 時間後、反応は不完全であった。追加のトリフルオロ酢酸（5mL）を添加し、そ して溶液をさらに４時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、そして残渣をTHF（5 0mL）中で取り出した。飽和NaHCO3溶液（50mL）を添加し（pH約7〜8）、次いでT HF（20mL）中の9-フルオレニルメチル-N-スクシンイミジルカーボネート（1.97g ,5.83mmol，1.2当量）を添加した。室温で16時間撹拌した後、出発物質はまだ存 在し、そしてpH＝7.0であった。2M Na2CO3溶液（約3mL）を添加し（pH＝8.5）、 次いでFmocONSuの第２の部分(328mg，0.97mmol，0.2当量)を添加した。溶液を、 室温にてさらに２時間撹拌した。反応混合物を２×100mLヘキサンで洗浄した。 酢酸エチル（100mL）を添加し、そして反応混合物を6N HClでpH＝0まで酸性にし た。有機層を分離し、そして水層を２×100mL酢酸エチルで抽出した。合わせた 有機層を飽和NaClで洗浄し、そしてNa2SO4を乾燥した。溶媒を除去して、茶色泡 状物として粗Fmoc酸を得た。この泡状物を、最少の酢酸エチルで溶解し、そして エチルエーテル（250mL）にピペットで入れた。沈殿物を遠心分離して回収した 。上澄みを濃縮し、そしてエチルエーテル（50mL）に滴下した。白色沈殿物を遠 心分離し、そして合わせた沈殿物を真空下で乾燥して、3.42g（98％収率）のNα -Fmoc-NG'-Mtr-1-[(4'-カルボン酸)チアゾール-2-イル]アルギノールを白色粉末 として得た： 構造(76)の合成： アルギノールエステル誘導体(42)（1.35g，1.93mmol）を、室温にて70mLのEtO Acに溶解した。この溶液に、二酸化マンガン(IV)（5g，89.2mmol）を添加し、そ して懸濁液を室温で５時間激しく撹拌し、その後シリカゲルを通して濾過した。 溶媒を除去し、そして残渣をフラッシュクロマトグラフィー（30％ヘキサン/EtO Ac）によって精製して、所望のアルコール(76)(0.23g，18％)およびケトン（0.1 53g，11.5％）を得た。 構造(77)の合成： エステル(76)（70mg，0.1mmol）を、THF（10mL）および水（10mL）の混合物に 溶解した。この溶液に、LiOH（18mg，4.3mmol）を添加し、溶液を還流するまで ７時間加熱した。得られた溶液をエバポレートした。残渣を水に溶解し、そして エーテルで抽出した。水層をエバポレートした。得られる残渣をMeOHに溶解し、 そしてDowex樹脂(50W×8，H+形態)を添加して溶液を酸性にした。樹脂を濾別し 、そして濾液をエバポレートして、酸（35mg，60％）を得た。 構造(78)の合成： CH3CN/DMF（80mL:80mL）中の4-(クロロエチル)安息香酸（8.0g，0.046mol）に 、NaN3（6.0g，0.092mol）、テトラ-n-ブチルアンモニウムアジド（触媒量）、 テトラ-n-ブチルアンモニウムヨーダイド（触媒量）を添加し、そして反応物を7 〜9時間穏やかな還流で加熱し、この時点で反応混合物は、１つの固体ブロック に変わった。水(350mL)およびEtOAc（500mL）を添加し、そして水層をEtOAc（２ ×400mL）で抽出した。有機層をH2O（250mL）、ブライン（300mL）で洗浄し、そ してNa2SO4で乾燥した。濾過および溶媒エバポレーションによって、黄色がかっ た固体（9.4g）を得、これは次の工程で使用するために十分純粋であった。IR（ CDCL3）v-12111。 構造(79)の合成： THF/DME（175mL:60mL）中の(78)（9.4g，0.053mol）の溶液に、トリフェニル ホスフィン（15.2g，0.058mol）を添加し、そして反応物を10分間撹拌した。H20 (1.2mL)を添加し、そして反応物を室温にて22〜24時間激しく撹拌し、その時点 で溶液は粘稠な(thick)懸濁液になった。オフホワイト色の固体を濾過し、そし てTHF（３×40mL）で洗浄して、乾燥後に、16.4gの純粋なイミノホスホランを得 た。MS(ES+)(M+H+)426.1。 構造(80)の合成： イミノホスホラン(79)をTHF/H2O（320mL:190mL）に懸濁し、そして2N HCl（64 mL）を添加し、そして反応物を５時間加熱還流した。濃HCl（11mL）を添加し、 そしてさらに20時間還流を続けた。溶媒を真空下で除去し、そして得られたオフ ホワイト色の固体を高真空下で２時間乾燥し（18.0g）、そしてさらに精製する ことなく次の工程に使用した。 構造(81)の合成： CH3CN（320mL）中の4-(アミノエチル)安息香酸・HCl(80)（9.0g，0.019mol,理 論値）の懸濁液に、TEA（7.7mL，0.053mol）を添加し、そして懸濁液を０℃まで 冷却した。Fmoc-ONSu（9.3g，0.026mol）を１度に添加し、そして反応物を室温 まで１時間にわたって温め、そしてさらに１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去 し、そして残渣をEtOAc（1200mL）に溶解し、10％クエン酸（220mL）およびブラ イン（220mL）で洗浄し、そしてNa2SO4で乾燥した。濾過および溶媒エバポレー ションによって粗生成物を得、これを８％MeOH/CHCl3を使用するフラッシュクロ マトグラフィーによって精製して、純粋な生成物(2.4g)を得た。 2.20g（8.4mmol）の4-ヨード-メチルベンゾエートに、窒素下で、1.95g（12.2 6mmol）のBoc-プロパルギルアミン、0.33g（1.26mmol）のトリフェニルホスフィ ン、0.08g（0.42mmol）のヨウ化銅(I)、2.11mL（15.1mmol）のトリエチルアミン 、および250mLのDMFを添加した。この溶液を撹拌し、そして窒素で15分間脱気し 、次いで0.10g（0.42mmol）の酢酸パラジウム(II)を添加し、室温にて18時間撹 拌した。溶液をEtOAcで希釈し、そして５％クエン酸（４×）、ブライン（２× ）で洗浄し、そしてMgSO4で乾燥した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル ， 9:1ヘキサン/EtOAC）による精製から、橙色固体としてエステル(82)（2.37g，98 ％）を得た： 構造(83)の合成： 2.86g（9.88mmol）のアルキン(82)に、１atmのH2下で、40mLの無水ジエチルエ ーテルおよび触媒量の酸化白金(IV)を添加した。反応をTLCによってモニターし 、そして13時間後に完了した。混合物をCeliteのパッドを通して濾過し、ジエチ ルエーテルで洗浄し、そして溶媒を真空下で除去して、橙色油状物としてエステ ル(83)（2.72g，94％）を得た： 構造(84)の合成： 2.72g（9.27mmol）のエステル(83)に、1.17g（27.18mmol）の水酸化リチウム １水和物、50mLのTHF、および50mLのH2Oを添加した。溶液を室温にて16時間撹拌 し、そして５％クエン酸でクエンチした。反応物をEtOAc（４×）で抽出し、 そして合わせた抽出物をブラインで洗浄し、そしてMgSO4で乾燥した。溶媒の除 去によって、薄黄色固体として酸(84)（2.38g，92％）を得た： 構造(85)の合成： 2.38gの酸(84)に、20mLのジクロロメタンおよび20mlのTFAを添加した。溶液を 室温にて２時間撹拌し、そして溶媒を真空下で除去して、薄橙色固体としてアミ ノ酸(85)（3.57g）を得た： 構造(86)の合成： 3.57g（12.20mmol）のアミノ酸(85)に、70mLの1,4-ジオキサン、70のH2O、1.2 9g（12.20mmol）、および4.93g（14.6mmol）のN-(9-フルオレニルメトキシカル ボニルオキシ)スクシンイミドを添加した。濁った混合物を48時間撹拌し、大量 のEtOAcで希釈し、そして飽和塩化アンモニウムで洗浄した。混合物をEtOAc（３ ×）で抽出し、そして合わせた有機物を飽和重炭酸塩、ブラインで洗浄し、そし て硫酸ナトリウムで乾燥した。真空下での溶媒除去によって、薄黄色固体を得、 これをエーテルで洗浄して、白色固体として酸(86)（2.85g，58％；(75)に基づ くと83％）を得た： 構造(87)の合成： 75mLのジクロロメタン中で、シアノメチルトリフエニルホスホニウムクロリド （CMTPP）（8.2g，24mmol）の溶液を調製し、そして10分間撹拌した。Fmoc-Lys （Boc）（10g，21.3mmol）、1-(ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイ ミド塩酸塩（EDCI）（4.9g，25.6mmol）、および4-ジメチルアミノピリジン（DM AP）（2.2mmol）を添加して、反応容器を密封し、そして室温にて12時間撹拌し た。溶媒を真空下で油状物になるまで濃縮し、これを撹拌しながら、300mLの酢 酸エチルおよび100mLの1N HClに溶解した。層を分離し、そして有機層を２×50m Lのブラインで抽出した。酢酸エチルを硫酸マグネシウムで乾燥し、そして固体 になるまで濃縮した。この物質を、さらなる精製をせずに使用した。MS（ES+）7 52（M+H+） 構造(88)の合成： 構造(87)の化合物（16g，21.3mmol）を、100mLのMeOHに溶解し、そして−78℃ まで冷却した。オゾンを、ガス分散チューブを用いて反応溶液を通して３時間バ ブリングした。生成物を、減圧下でのMeOHの除去によって単離し、そして酢酸エ チル/ヘキサン（3:7）の移動相で平衡化したシリカゲルカラム（200g乾燥重量） で精製した。生成物を、酢酸エチル/ヘキサン（4:6）で溶出し、そして乾燥後5. 1gを得た（２段階について47％）。MS（ES+）511(M+H+)。 構造(89)の合成： ケトエステル(88)（5.1g，9.8mmol）を、100mLのTHFに溶解した。ホウ水素化 テトラメチルアンモニウム（1.4g，11.8mmol）の溶液への添加後、容器を密封し 、そして４時間撹拌した。この時点で反応は不完全であり、そしてさらなるホウ 水素化物（0.21g，2.4mmol）を添加し、そしてさらに１時間撹拌を続けた。反応 混合物を、真空下で油状物にまで濃縮し、そして平衡化したシリカゲルカラム（ 150g乾燥重量）に供し、酢酸エチル/ヘキサン（4:6）で溶出して、2.7g（53％） の生成物を得た。MS（ES+）513(M+H+)。構造(90)の合成： ヒドロキシエステル(89)（2.7g、5.3mmol）を、100mLのTHFに溶解し、そして ０℃〜５℃まで冷却した。0.2N LiOH（66.5mL，13.3mmol）を冷却した溶液に添 加し、そして30分間撹拌した。その時点で反応は不完全であり、そしてさらに0. 2N LiOH（10.4mL，2.1mmol）を添加した。反応物をさらに30分間撹拌し、次いで 300mLの酢酸エチル/0.2N HCl（2:1）でクエンチした。水相を分離し、100mLの酢 酸エチルで洗浄し、そして合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥し、そ して濾過した。濾液を真空下で油状物にまでエバポレートし、そして固体（2.0g ,78％）まで乾燥した。 構造(91)の合成： 構造(91)を、以下のスキームに示されるような標準的手順によって合成した。 実施例28 β-シート模倣物の固相合成のための代表的成分の合成 ウラゾール合成 以下の合成は、本発明のβ-シート模倣物の固相合成に使用されるウラゾール (urazole)成分を調製するために使用される代表的手順である。 構造(92)の合成： 構造(92)を、CooksonおよびGupte（Org．Syntheses，Vol．VI(1988)，936）の 方法のマイナーな改変によって合成した。160mLのEtOAc中の2-n-ブチルアニリン （12.0mL，76.6mmol）を、トルエン中324mLの20％ホスゲンに、添加ロートを介 して室温にて30分かけて添加した。溶液を30分還流し、そして溶媒を蒸留によっ て除去した。残りの油状物を75mLのクロロホルムに溶解し、そしてトルエン中メ チルヒドラジノカルボキシレート（6.90g，76.6mmol）の懸濁液を室温にて15分 間かけて添加ロートを介して添加した。混合物を1.5時間還流した。その間に、 すべての固体が溶解した。室温まで冷却した際、沈殿物が形成し、そして真空濾 過によって集めた。トルエンで洗浄し、そして真空下で乾燥して、18.17gのオフ ホワイト色の粉末（89％）を得た。生成物を、さらなる精製をせずに次の工程に 使用した。 構造(93)の合成： 構造(92)の化合物（18.03g，68.0mmol）を、190mLの4N KOHに懸濁し、そして 還流まで２時間加熱した。冷却時に、この時点で澄明な桃色溶液をエーテル（６ ×）で抽出し、そして濃HClで酸性にした。沈殿物を真空濾過によって集め、水 およびEtOAcで洗浄し、そして真空下で一晩乾燥して、14.00gの白色固体（88％ ）を得た。［必要ならば、ウラゾールを、MeOHまたは他の適切な溶媒系から再結 晶してもよい。］ 注：ウラゾールは一般的によいマススペクトルを得ない。* 純度の大まかなチェックは、以下のようにウラゾールの酸化から誘導されるト リアゾリンのUV吸収を測定することによって得られ得る。ウラゾール（5〜10mg ）およびビス(トリフルオロアセトキシ)ヨードベンゼン（40mg）をDMFに溶解し 、定量フラスコ中で5mLにする。この桃色溶液の吸収を、DMFブランクに対して、 １cm経路長のキュベットで520nm（ε≒177）で測定する。これらの条件下で、親 ウラゾールの純度は、以下の等式によって得られる：純度＝2.82(A)(MW)/(m)、 ここでAは吸光度であり、MWはウラゾールの分子量であり、そしてmは試料ウラゾ ールのmgでの重量である。 構造(94)の合成： 4-(フルオロメチル)-ベンジルアミン（4.1mL，28.5mmol）を、THF（25mL）中 のメチルヒドラジノカルボキシレート（2.56g，28.5mmol）および1,1'-カルボニ ルジイミダゾール（4.62g，28.5mmol）の撹拌溶液に添加した。溶液を室温で18 時間撹拌した。形成された白色沈殿物を真空濾過によって集め、冷THFで洗浄し 、 そして真空下で乾燥して、3.22gの(94)（39％）を得た。 構造(95)の合成： 構造(94)の化合物（3.22g，11.0mmol）を、20mLの4N KOHに懸濁し、そして還 流するまで３時間加熱した。冷却時に、溶液を濃HClで酸性にした。白色固体が 形成し、そして真空濾過によって集め、冷水で洗浄し、そして真空下で一晩乾燥 して、2.45gの白色固体（86％）を得た。UVによる純度：383％； ジエン合成 以下の合成は、本発明のβ-シート模倣物の固相合成に使用されるジエン成分 を調製するために使用される代表的な手順である。 構造(95)の合成 （９５） 150mLの乾燥ジクロロメタン中のメタクロレイン（7.01g，100mmol）およびメ チル(トリフェニルホスホルアニリデン)アセテート（35.11g，105mmol）の溶液 を、窒素雰囲気下で２時間還流した。溶媒を減圧下でエバポレートし、そして生 成物を短いシリカゲルカラムでのクロマトグラフィー（EtOAc-ヘキサン、1:9） によって精製した。生成物含有画分のエバポレーション後、化合物(95)を、透明 な油状物として得た（8.71g，69％）。 構造(96)の合成： 化合物(96)を、K．Satoら（J．Org．Chem．32:177，1967）の手順の改変によ って合成した。窒素雰囲気下で０℃まで冷却した25mLの乾燥THF中のNaH（鉱油中 60％，0.40g，10mmol）の懸濁液に、トリエチルホスホノクロトネート（2.50g， 10mmol）を撹拌しながら１滴ずつ添加した。添加後、溶液を０℃にて1.5時間撹 拌した。０℃に維持された茶赤色溶液に、3,3-ジメチルブチルアルデヒド（1.00 g，10mmol）を１滴ずつ添加した。溶液を室温まで温め、そして室温で１時間撹 拌した。混合物を、酢酸エチル（75mL）および水（75mL）で希釈し、そして２層 を分離した。有機層を水（2×50mL）およびブライン（75mL）で洗浄し、そして 硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、そしてシリカでのフラッ シュクロマトグラフィー(EtOAc/ヘキサン、1:9)によって、薄黄色固体として1.0 0g（51％）の(96)を得た。 構造(97)の合成： メタノール（15mL）および水（5mL）中のメチル7,7-ジメチル-2,4-オクタジエ ノエート(96)（0.99g，5mmol）および水酸化ナトリウム（0.60g，15mmol）の溶 液を、30分間還流した。室温まで冷却した後、溶媒を真空下で除去し、そして残 渣を水（30mL）に溶解した。得られた溶液を濃HClでpH２まで酸性にし、そして 沈殿物を濾過によって集め、水（10mL）で洗浄し、そして真空下で乾燥して、白 色固体として0.84g（99％）の酸を得た。 実施例29 代表的β-シート模倣物の固相合成 この実施例は、代表的β-シート模倣物(100)〜(227)（表11〜15）の固相合成 を例証する。この実施例の化合物を、以下の反応スキームに従って合成した： 一般的手順：β-ストランド(strand)模倣物の合成を、DMF中25％ピペリジンを 使用するFmoc PAL樹脂の脱保護によって開始した。DMFでの広範な洗浄後、Kaise srテストが陰性になるまで、樹脂を、DMF中、N-Fmoc-4-アミノメチル安息香酸の 酸フルオリド、または(81)、または(86)およびHunig's塩基で処理した。あるい は、Fmoc-保護されたチアゾール-(75)またはイミダゾールベース(77)のリンカー を、BOP、HOBt、およびDIEAを使用して樹脂にカップリングした。いくつかの場 合には、Fmoc-Leuまたは他のアミノ酸を、同じ方法論によって、チアゾールベー ス(75)またはイミダゾールベース(77)のリンカーの前に樹脂に結合した。構造(2 17)〜(221)の場合には、イソシアネート(91)を、ジクロロメタン中の触媒HClの 存在下で一晩、Wang樹脂にカップリングした。すべてのFmoc-保護されたリンカ ーの脱保護を、DMF中の25％ピペリジンでの処理によって行い、そしてBoc-保護 されたリンカー(77)の脱保護を、ジクロロメタン中TMS-Cl（1M）およびフェノー ル（3M）によって30分間行った。リジノール(lysinol)誘導体(90)を、陰性のKai serテストが達成されるまで、DMF中のPyBOP、HOBt、およびHunig's塩基を使用し て、樹脂結合したリンカー、N-Fmoc-4-アミノメチル安息香酸、(81)、または(86 )にカップリングした。次いで、DMF中25％ピペリジンでの樹脂の処理は、FMOC基 を切断した。DMFでの洗浄後、Kaiserテストの結果が陰性になるまで、DMF中のPy BOP、HOBt、およびHunig's塩基を使用して、ジエン酸(dienoic acid)を、樹脂結 合したリンカーにカップリングした。DMF中のピラゾリジンジオン（示していな い）またはウラゾールの溶液の、DMF中の[ビス(トリフルオロアセトキシ)ヨード ]ベンセンの溶液での前処理によって、環付加を行った。ポリマー支持されたジ エンを、得られた溶液で２〜16時間処理した。次いで、樹脂をDMFおよびCH2Cl2 で洗浄した。ケトアミドに対する酸化を、60分間のDMSO中のDess-Martinペルヨ ージナンの溶液での樹脂の処理によって行った。樹脂をCH2Cl2で洗浄し、そして 生成物を、95:5 TFA-H2Oでの樹脂の１〜12時間の処理によって、樹脂から切断し た。上清を集め、そして樹脂を追加のTFAで洗浄した。合わせた濾液を真空下で 濃縮した。残渣を、ジエチルエーテルで沈殿し、そしてエーテルをデカントした 。得られる固体を、1:1 CH3CN:H2Oで再構成し、そして凍結乾燥した。表11〜15 の化合物(100)〜(227)はそれぞれ、LCMS(ES+)に付した場合に、予測された(M+H+ )ピークを得た。化合物を、ジアステレオマーの混合物として凝血酵素の阻害に ついてアッセイした。 表11〜15に挙げた化合物のすべては、トロンビンインヒビターとしてKi＜100n Mを有するか、または第VIIa因子インヒビターとしての活性を有した（表15）。 表11〜15中の「*」で示した化合物は、トロンビンインヒビターとしてKi＜10nM を有しており、そして好ましい実施態様を示す。 実施例30 代表的β-シート模倣物の合成 この実施例は、本発明の代表的β-シート模倣物の合成をさらに例証する。 構造(228)の合成： メチル-2,4-ジオキソ-ペンタノエート（14.4g，0.10mol）および10.6gのトリ メチルオルトアセテートを、100mLのメタノールに溶解し、次いで300μLの塩化 アセチルを添加した。次に、この溶液を室温で６時間撹拌した。次に、アリコー トを取り、そして溶媒を、ロータリーエバポレーターを使用して除去した。残渣 の1H NMR分析は、メチルエノールエーテルへの完全な変換を示唆した。反応溶液 を真空下でエバポレートした。1H NMRによる純度は90％であり、そしてこの物質 を、精製せずに次の工程に使用した。 2-メトキシ-4-オキソ-2-ペンテノン（1.58g，10mmol）および1.63gのt-ブチル ジメチルシリルクロリド（11mmol）を、15mLのDMFに溶解した。トリエチルアミ ン（1.553mL，12mmol）を添加し、そして反応物を室温にてアルゴン下で一晩撹 拌した。翌朝、50mLのヘキサンを添加し、そして反応物を、冷NaHCO3溶液で抽出 した。ヘキサン層をNa2SO4で乾燥し、そしてヘキサンを真空下で除去して、2.01 gのジエンを油状物として得（78％）、これをさらなる精製をせずに使用した。 構造(229)の合成： CH2Cl2（5mL）中の4-フェニルウラゾール（177mg，1mmol）およびヨードベン ゼン二酢酸（322mg，1mmol）の混合物に、CH2Cl2中のジエン(228)（269mg，1.05 mmol）の溶液を添加した。反応混合物を30分撹拌し、次いで０℃まで冷却した。 BF3・OEt2（141mg，1mmol）を１滴ずつ添加し、そして反応物を30分間撹拌し、CH2 Cl2（50mL）で希釈し、NaHCO3溶液（２×15mL）、水（15mL）、およびブライン で洗浄し、乾燥しそしてエバポレートした。粗生成物を、シリカゲルでのカラム クロマトグラフィー（EtOAc/ヘキサン，1:3,v/v）によって精製して、純粋な生 成物（97mg，32％）を得た。 実施例31 代表的β-シート模倣物の合成 この実施例は、本発明の代表的β-シート模倣物の合成をさらに例証する。構造(24)の合成 250mLの炎で乾燥した丸底フラスコに、130mLの乾燥THFを添加した。フラスコ をアルゴン雰囲気下で−78℃まで冷却し、そして10mLの2.5m n-BuLiを添加し、 次いで5.3mLのヘキサメチルジシラザンを添加した。この溶液を−78℃で30分間 撹拌し、次いで2.2mLのメチルプロピオレートを添加した。−78℃で50分間撹拌 した後、2.5mL（22mmol）のヘキサジエナールを添加した。次いで、反応物を、 −30℃まで４時間かけてゆっくりと温めた。−30℃にて１時間の後、酒石酸水溶 液の添加によってクエンチした。次いで、反応混合物を、EtOAcと水との間で分 配し、そして水層を追加の酢酸エチルで洗浄した。次いで、合わせた有機層を飽 和塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濃縮して、約4.1g の赤みがかった油状物を得た。シリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィー （20％酢酸エチル/80％ヘキサン）によって、3.1gの黄色がかった油状物を得た （78％）。 構造(25)の合成 500mLの丸底フラスコに、フェニルウラゾール（4.91g）および150mLの塩化メ チレンを入れた。ヨードベンゼンニ酢酸（8.94g）をフラスコに添加し、そして 反応物を10分間撹拌して、深赤色を発色した。次いで、50mLの塩化メチレンに溶 解した5.0gの化合物(230)の溶液を添加し、そして反応物は同時に脱色した。反 応物を室温でさらに３時間撹拌した。溶媒をロータリーエバポレーターで除去し 、そして残渣を高真空下に一晩おいた。残渣を、シリカゲルでのフラッシュクロ マトグラフィー(40％EtOAc/ヘキサン)によって精製して、8.3gのエピマーアルコ ールの約60/40ジアステレオマー混合物を得た(84％)。 構造(26)の合成 アセチレンアルコールのジアステレオマー混合物としての1.0gの(231)の溶液 を、40mLのMeOHに溶解し、そして氷浴中で０℃まで冷却した。反応混合物に、80 mg（水素化物の約３当量）の粉末化ホウ水素化ナトリウムを撹拌しながら添加し た。０℃で１時間後、反応物を室温まで温め、そしてさらに１時間撹拌した。10 0mLのEtOAcおよび60mLの水の添加により、それをクエンチした。層を分液ロート で分離し、そして水相を追加のEtOAcで２回抽出した。次いで、合わせた有機相 を飽和塩化ナトリウムで洗浄し、そして硫酸ナトリウムで乾燥した。有機溶媒を ロータリーエバポレーターによって除去し、そして残渣をフラッシュクロマトグ ラフィー(40/60 EtOAc/ヘキサン）によって精製して、630mgのジアステレオマー アルコールの混合物を得た（約63％）。 構造(27)の合成 50mLの塩化メチレン中のジアステレオマー混合物としての357mgの化合物(231) の溶液に、424mgの粉末化Dess-Martin試薬を添加した。反応物を室温にて６時間 撹拌した。次いで、チオ硫酸ナトリウム溶液とともに５分間撹拌し、そして水性 重炭酸塩溶液で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウムで洗浄し、そして無水硫 酸ナトリウムで乾燥した。塩化メチレンをロータリーエバポレーションによって 除去して、348mgの固体残渣（97％）を得た。 構造(28)の合成 100mLの丸底フラスコに、アルコールのアイソマー混合物として357mgの化合物 (232)および25mLのTHFを入れた。反応溶液を０℃まで冷却し、反応物を放置して 室温まで温め、そしてさらに１時間撹拌した。次いで、40mLのEtOAcおよび30mL の水で抽出した。水相を、1mmolの酒石酸で酸性にし、そして40mLの新鮮なEtOAc で再抽出した。有機相を無水NaSO4で乾燥し、濾過し、そして溶媒をロータリー エバポレーターによって除去して、328mgの固体残渣を得た。 実施例32 この実施例では、実施例31の化合物(231)および(233)を、チオレドキシンによ るインスリンジスルフィド還元をブロックする能力についてアッセイした。チオ レドキシンは、NF-κBのp50サブユニットのCys62に関するジスルフィド結合の還 元によるDNA結合についてNF-κBをアップレギュレートすることが示されている 。チオレドキシンはまた、低分子量チオールよりも104倍速くインスリンのジス ルフィド結合を還元することが公知である（Holmgren，J．Biol．Chem．254:962 7-9632，1979）（本明細書中で参考として援用する）。したがって、NF-κB活性 化のインヒビターがチオレドキシンの阻害によって作用しているならば、チオレ ドキシンによるインスリンの還元をブロックすることもし得るべきである。以下 のアッセイは、そのジスルフィド結合がチオレドキシンの存在下で還元されるに つれて上昇する650nmでのインスリンの混濁度を分光学的に測定する。 Holmgrenの方法のわずかな改変を使用した。96ウェルマイクロタイタープレー ト上で、0.1Mリン酸カリウムpH6.5緩衝液中のチオレドキシンの溶液を、0.33mM ジチオトレイトール（DTT）および2mM EDTAの存在下で15分間、予め活性化した 。基質およびインヒビターの溶液を、最終濃度の8μMチオレドキシン、0.13mMイ ンスリン、および0〜100μMの化合物(231)または(233)のいずれかに添加した。 溶液の混濁度を、Spectra Max 250吸光度プレートリーダー（Molecular Devices ）で60分の経過にわたり650nMで測定した。結果は、混濁度が化合物(231)または (233)の濃度の上昇とともに減少することを示す。 ネガティブコントロールとして、DTTおよびEDTAの存在下であるがチオレドキ シンの存在なしで、インヒビターは、混濁度を示さなかった（DTTは検査した時 間にわたりチオレドキシンを減少させなかった）。ポジティブコントロールとし て、構造的に関連する天然の産物のパルテノリド(parthenolide)およびサントニ ンを、インヒビターの代わりに上記アッセイでテストした。パルテノリドは、不 飽和エキソメチレンラクトンを含みそして濃度依存的様式でNF-κB活性化を阻害 することが公知であり（Borkら，FEBS Lett．402:85-90，1997）、同様に、イン スリンのチオレドキシン誘導された混濁度をブロックした。サントニンは、飽和 ラクトン基を含みそしてNF-κB活性化を阻害せず、これはインスリンのチオレド キシン誘導された混濁度をブロックしなかった。ひとまとめにして考えると、こ れらの結果は、化合物(231)および(233)がチオレドキシンの阻害によるNF-κB活 性化を防止することの証拠である。実施例33 プロテアーゼインヒビターとしての代表的β-シート模倣物の活性 この実施例は、メタロプロテイナーゼのロイシンアミノペプチダーゼMおよび サーモリシンのインヒビターとしての構造(234)のβ-シート模倣物（反応スキー ム20に開示される方法によって調製される）の活性をさらに例証する。この方法 は、Spungin-Bialikら，FEBS Lett．（1996）380，79-82の方法の改変である。 以下のプロトコルを使用した：50mM Tris-Cl、100mM NaCl、1mM CaCl2、0.005 ％ Triton X-100(pH=7.5)を含む緩衝溶液を調製する。第２の緩衝溶液、40mM ED TAを、第１の緩衝溶液から調製する。基質Suc-Ala-Ala-Phe-pNAの750μM溶液を 、50mMストック溶液DMSOから水中で調製する。サーモリシンの15nM溶液を、20％ グリセロール/H2O中の200μMサーモリシンストック溶液を緩衝液で希釈すること によって調製する。ロイシンアミノペプチダーゼMの市販の溶液（Sigma，H2O中 の2.6mg/mlストック）を緩衝液で50μg/mlに希釈する。50％EtOH/H2O中のインヒ ビターを、３×所望の濃度レベルに水で希釈した。ウェル（96ウェルマイクロタ イタープレート）当たり50μlの酵素、基質、およびインヒビターを、所望の数 のマイクロタイターストリップに添加する。これは、サーモリシンについては5n Mおよび基質については250μMの最終濃度を得る。次いで、ウェルは、室温にて2 0分間インキュベートされるべきである。20分後、緩衝溶液中のEDTAを、ウェル 当たり50μlですべてのウェルに添加し、そして同時にウェル当たり50μlでウェ ルに添加する。これは、10μg/mlの最終濃度を得る。プレートは、21秒間隔で40 5nmで100×で読まれるべきである。Ki値を、上記（実施例5）のように算出した 。化合物(234)から得たKiの値は、サーモリシンおよびロイシンアミノペプチダ ーゼMについてそれぞれ６および11μMであった。これらの結果は、本発明 のβ-シート模倣物がメタロプロテイナーゼインヒビターとして機能し得ること を示す。 実施例34 プロテアーゼインヒビターとしての代表的β-シート模倣物の活性 本実施例は、システインプロテイナーゼ、パパインのインヒビターとしての構 造(235)のβ-シート模倣物（反応スキーム15に開示される方法によって調製され る）の活性をさらに例証する。アッセイ方法は、Mellorら，Biochem．J．（1993 ）290，289の方法の改変である。 アッセイを、実施例４におけるようにマイクロタイタープレートで行った。以 下のプロトコルを使用した：0.05Mクエン酸ナトリウム、0.15M NaCl、2mM DTT、 1mM EDTA(pH=6.5)を含む緩衝液を調製する。基質（Ac-Phe-Gly-pNA）の2mMスト ック溶液を、緩衝液で200μMに希釈する。インヒビターの5mMストック溶液(50％ EtOH/H2O中)を、緩衝液で500μMに希釈し、そして６連続1:5希釈を行う。ウェ ル当たりそれぞれ100μLの緩衝液、基質、およびインヒビターのアリコート（適 切な濃度で）を、８ウェルマイクロタイターストリップに添加する。パパインの 1.0mMストック溶液を、緩衝液で200μMに希釈し、そしてアッセイウェルへの100 μLアリコートの添加の前に、５分間インキュベートする。プレートは、21秒間 隔で405nmで100×で読まれるべきである。IC50値を、上記（実施例4）のように 算出した。化合物(234)は、８μMのIC50値を示した。この結果は、本発明のβ- シート模倣物がシステインプロテイナーゼインヒビターとして機能し得ることを 示す。 前述から、本発明の特定の実施態様は本明細書中に例示の目的で記載されてい るが、種々の改変が本発明の精神および範囲から逸脱することなく行われ得るこ とは明白である。したがって、本発明は、添付の請求の範囲以外によっては限定 されない。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/4245 Ａ６１Ｋ 31/4245 31/429 31/429 31/433 31/433 31/4353 31/4353 31/437 31/437 31/439 31/439 31/4985 31/4985 31/504 31/504 31/5365 31/5365 31/542 31/542 31/55 31/55 38/00 Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 3/10 9/00 9/00 25/28 25/28 29/00 １０１ 29/00 １０１ 35/00 35/00 37/06 37/06 43/00 43/00 １１１ １１１ Ｃ０７Ｄ 471/04 // Ｃ０７Ｄ 471/04 １０１ １０１ 487/04 487/04 １３６ １３６ １３７ １３７ 513/04 ３２５ 513/04 ３２５ Ａ６１Ｋ 37/02 (31)優先権主張番号 ０８／７９７，９１５ (32)優先日 平成９年２月10日(1997．2．10) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／０４７，０６７ (32)優先日 平成９年５月19日(1997．5．19) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ， ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ Ｂ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ， ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，Ｎ Ｏ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ (72)発明者 マクミラン，マイケル キム アメリカ合衆国 ワシントン 98901，シ アトル，ブロードウェイ イースト ナン バーディー 2010 (72)発明者 オグブ，シプリアン オクワラ アメリカ合衆国 ワシントン 98007，ベ ルビュウ，148ティーエイチ エヌ．イー. ナンバーエフ―101 5031 (72)発明者 江口 政尚 アメリカ合衆国 ワシントン 98005，ベ ルビュウ，129ティーエイチ プレイス エヌ．イー．636 (72)発明者 キム，フワオク アメリカ合衆国 ワシントン 98052，レ ッドモンド，154ティーエイチ アベニュ ー エヌ．イー．5606 (72)発明者 ボートマン，パトリック ダグラス，ジュ ニア アメリカ合衆国 ワシントン 98027，イ サクア，ワイルドウッド ブールバード エス．ダブリュー．485 (72)発明者 アーバン，ジャン アメリカ合衆国 ワシントン 98034，カ ークランド，エヌ．イー．141エスティー ストリート 11212 (72)発明者 ミーラ，ジョセフ パトリック アメリカ合衆国 ワシントン 98034，カ ークランド，エヌ．イー．122エヌディー ストリート 7407 (72)発明者 バブ，スレッシュ アメリカ合衆国 ワシントン 98004 ベ ルビュウ，115ティーエイチ アベニュー エヌ．イー．ナンバー131 3365 (72)発明者 フェルグソン，マーク ディー. アメリカ合衆国 ワシントン 98033，カ ークランド，エヌ．イー．113ティーエイ チ プレイス 10171 (72)発明者 ラム，クリストファー トッド アメリカ合衆国 ワシントン 98033，カ ークランド，126ティーエイチ アベニュ ー エヌ．イー．7849

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １．プロテアーゼまたはキナーゼを阻害するための医薬品の製造のための化合 物の使用であって、該化合物が以下の式を有する、使用： ここで、 Ａは、-C(=O)-、-(CH2)0-4-、-C(=O)(CH2)1-3-、-(CH2)1-2O-、および-(CH2)1 -2 S-から選択され； Ｂは、NおよびCHから選択され； Ｃは、-C(=O)-、-C(=O)(CH2)1-3-、-(CH2)0-3-、-O-、-S-、-O−(CH2)1-2-、 および-S(CH2)1-2-から選択され； Ｄは、NおよびC(R4)から選択され； Ｆは、任意のカルボニル部分であり； R1、R2’、およびR4は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択 され； R2は、アミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択されるか、あるいはＣとひ とまとめにして融合された置換されたまたは置換されていないホモ環式環または ヘテロ環式環を形成し； R3は、独立して、アミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択されるか、ある いはＣとひとまとめにして-(CH2)1-2-、-O-、および-S-から選択される架橋部分 を形成し； ＹおよびＺは、分子の残りを表し；そして 二環式東の任意の２つの隣接するCH基は、二重結合を形成し得； ただし、Ｅが-C(R1)NHZでありそして任意のＦカルボニル部分が存在する場合 、ＤはNではない。 ２．前記医薬品がプロテアーゼを阻害するためである、請求項１に記載の使用 。 ３．前記プロテアーゼがセリンプロテアーゼである、請求項２に記載の使用。 ４．前記セリンプロテアーゼが、トロンビン、第Ｘ因子、第IX因子、第VII因 子、第XI因子、ウロキナーゼ、トリプターゼ、およびカリクレインから選択され る、請求項３に記載の使用。 ５．前記セリンプロテアーゼがトロンビンである、請求項３に記載の使用。 ６．前記セリンプロテアーゼが第VII因子である、請求項３に記載の使用。 ７．前記プロテアーゼが、アスパラギン酸プロテアーゼ、システインプロテア ーゼ、およびメタロプロテアーゼから選択される、請求項２に記載の使用。 ８．前記医薬品がキナーゼを阻害するためである、請求項１に記載の使用。 ９．前記キナーゼが、セリン／トレオニンまたはチロシンキナーゼである、請 求項７に記載の使用。 １０．転写因子を調節するための医薬品を必要とする温血動物において転写因 子を調節するための医薬品の製造のための化合物の使用であって、該化合物が以 下の式を有する、使用： ここで、 Ａは、-C(=O)-、-(CH2)0-4-、-C(=O)(CH2)1-3-、-(CH2)1-2O-、および-(CH2)1 -2 S-から選択され； Ｂは、NおよびCHから選択され； Ｃは、-C(=O)-、-C(=O)(CH2)1-3-、-(CH2)0-3-、-O-、-S-、-O-(CH2)1-2-、お よび-S(CH2)1-2-から選択され； Ｄは、NおよびC(R4)から選択され； Ｆは、任意のカルボニル部分であり； R1、R2'、およびR4は、独立してアミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択 され； R2は、アミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択されるか、あるいはＣとひ とまとめにして融合された置換されたまたは置換されていないホモ環式環または ヘテロ環式環を形成し； R3は、独立して、アミノ酸側鎖部分およびその誘導体から選択されるか、ある いはＣとひとまとめにして-(CH2)1-2-、-O-、および-S-から選択される架橋部分 を形成し； ＹおよびＺは、分子の残りを表し；そして 二環式環の任意の２つの隣接するCH基は、二重結合を形成し得る。 １１．前記転写因子のDNAを結合する能ガが、細胞性酸化還元酵素によるシス テイン残基の還元によって制御される、請求項１０に記載の使用。 １２．前記転写酵素が、NF-κB、AP-1、myb、およびGREから選択される、請求 項１１に記載の使用。 １３．前記転写因子がNF-κBである、請求項１２に記載の使用。 １４．前記転写因子がAP-1である、請求項１２に記載の使用。 １５．前記細胞性酸化還元酵素が、チオレドキシン、ref-1、およびグルタレ ドキシンから選択される、請求項１１に記載の使用。 １６．前記温血動物が、クローン病、喘息、慢性関節リウマチ、虚血−再潅流 傷害、GVHD、ALS、アルツハイマー病、同種移植拒絶、および成人Ｔ細胞白血病 から選択される症状と診断されている、またはこの症状を発症する危険がある、 請求項１０に記載の使用。
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