ES2367081T3 - Procedimiento para la replicación de virus de la gripe en cultivo celular y los virus de la gripe que pueden obtenerse por el procedimiento. - Google Patents

Procedimiento para la replicación de virus de la gripe en cultivo celular y los virus de la gripe que pueden obtenerse por el procedimiento. Download PDF

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Abstract

Un procedimiento para preparar una vacuna para administración a seres humanos o animales que comprende: a) replicación de virus de la gripe en cultivo celular, en el que se cultivan células MDCK que pueden infectarse por virus de la gripe en cultivo celular, las células se infectan con virus de la gripe y después de la infección se cultivan a una temperatura de 33 ºC para replicación del virus, en la que se añade una proteasa a las células cultivadas antes, durante o después de la infección con virus de la gripe; b) recogida y aislamiento de los virus de la gripe replicados de 2 a 10 días después de la infección, incluyendo una etapa de separar células o restos celulares del medio de cultivo; y c) formulación de los virus de la gripe replicados para proporcionar la vacuna.

Description

La presente invención se refiere a procedimientos para preparar una vacuna para administración a seres humanos o animales en cultivo de células MDCK a temperaturas reducidas.
Mancini y col. (Rev. Farm. Bloquím. Univ. São Paulo, Vol. 29(2) 1993; 89-95) desvela experimentos en los que se evaluó la diferencia de tripsina en la multiplicación de virus de la gripe en células MDCK. En estos experimentos las células se incubaron a 35 ºC después de que se añadiera el virus de la gripe.
Todas las vacunas de la gripe que se han usado desde los años 40 hasta la actualidad como vacunas permitidas para el tratamiento de seres humanos y animales consisten en una o más cepas del virus que se han replicado en huevos de gallina embrionados. Estos virus se aislaron del fluido alantoideo de huevos de gallina infectados y se usan sus antígenos como vacuna como partículas del virus intactas o como partículas del virus disgregadas por detergentes y/o disolventes, denominada vacuna escindida, o como proteínas del virus definidas aisladas, denominada vacuna de subunidad. En todas las vacunas permitidas, los virus se inactivan por procedimientos conocidos por el experto en la materia. Incluso la replicación de virus atenuados vivos, que se ensaya en vacunas experimentales, se lleva a cabo en huevos de gallina embrionados.
El uso de huevos de gallina embrionados para producción de vacunas es costoso, laborioso y consume tiempo. Los huevos, de poblaciones sanas de gallinas controladas por veterinarios, deben incubarse antes de la infección, habitualmente durante 12 días. Antes de la infección, los huevos tienen que seleccionarse con respecto a embriones vivos, puesto que solo estos huevos son adecuados para replicación del virus. Después de la infección los huevos se incuban de nuevo, habitualmente durante 2 a 3 días. Los embriones aun vivos en este momento se sacrifican por frío y el fluido alantoideo se obtiene después a partir de los huevos individuales por aspiración. Por medio de procedimientos de purificación laboriosos, se separan sustancias del huevo de la gallina que conducen a efectos secundarios no deseados de los virus y se concentran los virus. Puesto que los huevos no son estériles (sin patógenos), es necesario adicionalmente retirar y/o inactivar pirógenos y todos los patógenos que posiblemente están presentes. Para aumentar la producción de virus, la replicación de los virus de la gripe en los huevos de gallina como norma se lleva a cabo a temperaturas reducidas (aproximadamente 34 ºC). Incluso los virus que provocan enfermedades respiratorias pueden replicarse en cultivo celular. Aquí también, en algunos casos, se emplean temperaturas reducidas (aproximadamente de 33 ºC), que, sin embargo, no tienen efecto en la calidad de una vacuna que pueda obtenerse, sino que favorecen únicamente la replicación.
Pueden replicarse virus de otras vacunas tales como, por ejemplo, virus de la rabia, virus de las paperas, sarampión y rubéola, virus de la polio y virus de FSME en cultivos celulares. Puesto que los cultivos celulares que se originan de bancos celulares ensayados están sin patógenos y, a diferencia de los huevos de gallina, son un sistema de replicación de virus definido que (teóricamente) está disponible en cantidades casi ilimitadas, hacen posible una replicación de virus económica en ciertas circunstancias incluso en el caso de virus de la gripe. La producción de vacuna económica se consigue también posiblemente en tanto que el aislamiento y purificación del virus de un medio de cultivo celular estéril definido parece más sencilla que del fluido alantoideo que contiene proteína en gran medida.
El aislamiento y replicación de virus de la gripe en huevos conduce a una selección de ciertos fenotipos, la mayoría de los cuales difiere del aislado clínico. A diferencia de esto está el aislamiento y replicación de los virus en cultivo celular, en el que no se produce selección dependiente de pase (Oxford, J.S. y col., J. Gen. Virology 72 (1991), 185 189; Robertson, J.S. y col., J. Gen. Virology 74 (1993) 2047 -2051). Para una vacuna eficaz, por lo tanto, la realización de virus en cultivo tisular también va a preferirse a partir de este aspecto que de huevos. Se sabe que los virus de la gripe pueden replicarse en cultivos celulares. Además de células embrionarias de gallinas y células de hámster (BHK 21-F y HKCC), células MDBK y en particular células MDCK se han descrito como células adecuadas para la replicación in Vitro de virus de la gripe (Kilbourne, E. D., en: Influenza, páginas 89 -110, Plenum Medical Book Company-Nueva York y Londres, 1987). Un prerrequisito para una infección exitosa es la adición de proteasas al medio de infección, preferentemente tripsina o serina proteasa similares, puesto que estas proteasas escinden extracelularmente la proteína precursora de hemaglutinina [HA0] a hemaglutinina activa [HA1 y HA2]. Solamente la hemaglutinina escindida conduce a la adsorción de los virus de la gripe en células con asimilación de virus posterior en la célula (Tobita, K. y col., Med. Microbiol. Immunol., 162 (1975), 9 -14; Lazarowitz, S.G. & Choppin, P.W., Virology, 68 (1975) 440 -454; Klenk, H.-D. y col,. Virology 68 (1975) 426 -439) y de este modo a un ciclo de replicación adicional del virus en el cultivo celular.
La Patente US 4 500 513 describe la replicación de virus de la gripe en cultivos celulares en células que crecen de forma adherente. Después de la proliferación celular, el medio nutriente se retira y se añade medio nutriente fresco a las células, teniendo lugar la infección de las células con virus de la gripe simultáneamente o poco después. Un tiempo dado después de la infección, se añade proteasa (por ejemplo tripsina) para obtener una replicación de virus óptima. Los virus se recogen, purifican y procesan para proporcionar vacuna inactivada o atenuada. La replicación de virus de la gripe económica como un prerrequisito para la producción de vacunas no puede conseguirse, sin embargo, usando la metodología descrita en la patente mencionada, puesto que el cambio de medio, la infección posterior así como la adicción de tripsina que se lleva a cabo más tarde, necesitan que se abran los recipientes de cultivo celular individuales varias veces y es por lo tanto muy laboriosa. Además, aumenta el peligro de contaminación del cultivo celular por microorganismos no deseables y virus con cada manipulación de los recipientes de cultivo. Una alternativa más rentable es proliferación celular en sistemas fermentadores conocidos por el experto en la materia, creciendo las células de forma adherente en micro vehículos. El suero necesario para el crecimiento de las células en los micro vehículos (habitualmente suero de ternero fetal), sin embargo, contiene inhibidores de tripsina, de modo que incluso en este procedimiento de producción es necesario un cambio de medio a medio sin suero para conseguir la escisión de la hemaglutinina de la gripe por tripsina y por lo tanto una replicación de virus adecuadamente alta. De este modo esta metodología también requiere la apertura de los recipientes de cultivo varias veces y por lo tanto trae consigo el aumento de peligro de contaminación.
La presente invención se basa por lo tanto en el objeto de realizar procedimientos disponibles que hagan posible una aplicación de virus de la gripe simple y económica en cultivo celular y conduzca a una vacuna altamente eficaz.
Este objeto se consigue por la provisión de las realizaciones indicadas en las reivindicaciones de la patente.
Se ha descubierto sorprendentemente que por la replicación de los virus de la gripe en células infectadas a temperaturas reducidas, se obtienen virus que tienen una eficacia sensiblemente superior como vacuna que los virus que se obtienen por replicación a 37 ºC. La replicación a 37 ºC, la temperatura usada habitualmente para la replicación de gripe en el cultivo celular, ciertamente conduce a rendimientos de virus comparativamente altos en un tiempo corto. Sin embargo, los virus introducidos de este modo tienen una eficacia baja como vacuna en comparación con virus que se preparan por el procedimiento de acuerdo con la invención.
En el contexto de la presente invención, se estableció una línea celular adicional a partir de la línea celular de riñón canina MDCK, adaptándose dicha línea celular adicional a crecimiento en suspensión en medio sin suero y hace posible por lo tanto una replicación de virus y cultivo eficaz y particularmente simple. Esta línea celular, MDCK 33016, se usa preferentemente particularmente en el procedimiento de acuerdo con la invención. Se depositó con el número de depósito DSM ACC 2219 el 7 de junio de 1995 de acuerdo con los requisitos de la Convención de Budapest para el reconocimiento de la deposición de Microorganismos para fines de patente en la Colección alemana de Microorganismos (DSM) en Brunswick (Republica Federal de Alemania), que se reconoce como el sitio de deposición Internacional.
Para cultivar las células en el procedimiento de acuerdo con la invención, pueden usarse los procedimientos habituales conocidos por el experto en la materia para el cultivo celular, en particular los que ya se conocen para la replicación de virus de la gripe en cultivo celular. Llevar a cabo el procedimiento de acuerdo con la invención usando células que crecen en suspensión, en particular las que pueden cultivarse en medio sin suero, hace posible una aplicación de virus particularmente simple y eficaz. El cultivo de las células en suspensión puede en este caso llevarse a cabo tanto en el procedimiento discontinuo como en el sistema de perfusión, por ejemplo en un fermentador de recipiente agitado, usando los sistemas de retención celular conocidos por el experto en la materia, tales como, por ejemplo, centrifugación, filtración, filtros de centrifugación y similares.
El cultivo de las células se lleva a cabo como norma a un pH regulado que está preferentemente en el intervalo de pH 6,6 a pH 7,8, en particular en el intervalo de pH 6,8 a pH 7,3.
Además, el valor de pO2 puede regularse ventajosamente y está por lo tanto como norma entre 25 % y 95 %, en particular entre 35 % y 60 % (basándose en la saturación de aire).
La infección de las células cultivadas en suspensión se llevan a cabo preferentemente cuando las células en el procedimiento discontinuo han alcanzado una densidad celular de aproximadamente 8 a 25 x 105 células/ml o de aproximadamente 5 a 20 x 106 células/ml en el sistema de perfusión. Si se usan células que crecen de forma adherente, la densidad celular óptima para la infección depende de la línea celular particular.
La infección de las células con virus de la gripe se lleva acabo preferentemente a una m.o.i (multiplicidad de infección) de aproximadamente 0,0001 a 10, preferentemente de 0,002 a 0,5.
La adicción de una proteasa que provoca la escisión de la proteína precursora de hemaglutinina [HA0] y por lo tanto la adsorción de los virus a las células puede llevarse a cabo de acuerdo con la invención poco antes, simultáneamente con o poco después de la infección de las células con virus de la gripe. Si la adicción se lleva a cabo simultáneamente con la infección, la proteasa puede añadirse directamente al cultivo celular a infectar o, por ejemplo, como un concentrado junto con el inoculado de virus. Si se usa un medio que contiene suero para el cultivo, este debería retirarse antes de la adición de proteasa. La proteasa es preferentemente una serina proteasa y particularmente preferentemente tripsina.
Si se usa tripsina, la concentración final añadida en el medio de cultivo es ventajosamente de 1 a 200 µg/ml, preferentemente de 5 a 50 µg/ml y particularmente preferentemente de 5 a 30 µg/ml.
Después de la infección, el cultivo de células infectadas se cultiva adicionalmente para replicar los virus, en particular hasta que pueda detectarse un efecto citopático máximo o una cantidad máxima de antígeno de virus.
En una realización preferida del procedimiento, la recogida y aislamiento de los virus de la gripe replicados se lleva a cabo de 2 a 10 días, preferentemente de 3 a 17 días, después de la infección. Para hacer esto, por ejemplo, las células o restos celulares se separan del medio de cultivo por medio de procedimientos conocidos por el experto en la materia, por ejemplo por separadores o filtros. Después de esto la concentración de los virus de la gripe presentes en el medio de cultivo se lleva a cabo por procedimientos conocidos por el experto en la materia, tales como, por ejemplo, centrifugación del gradiente, filtración, precipitación y similares.
Los virus de la gripe que pueden obtenerse por un procedimiento de acuerdo con la invención puede formularse por procedimientos conocidos para proporcionar una vacuna para administración a seres humanos o animales. Como ya se ha explicado anteriormente, los virus de la gripe de este tipo tienen una mayor eficacia como vacunas que los virus de la gripe que se obtienen por replicación a 37 ºC en cultivo celular. La inmunogenicidad o eficacia de los virus de la gripe obtenidos como vacunas puede determinarse por procedimientos conocidos por el experto en la materia, por ejemplo por medio de la protección transmitida en el experimento de exposición o como titulaciones de anticuerpo de anticuerpos neutralizadores del virus.
La determinación de la cantidad de virus o antígeno producida puede llevarse a cabo, por ejemplo, mediante la determinación de la cantidad de hemaglutinina por procedimientos conocidos por el experto en la materia. Se sabe, por ejemplo, que la hemaglutinina escindida se une a eritrocitos de diversas especies, por ejemplo a eritrocitos de gallinas. Esto hace posible una cuantificación sencilla y rápida de los virus producidos o del antígeno formado por procedimientos de detección apropiados.
Por medio de experimentos de comparación en modelos animales, se demostró que los virus de la gripe de acuerdo con la invención producen una titulación apreciablemente superior de anticuerpos neutralizadores que los virus replicados a 37 ºC y por lo tanto transmiten una protección sensiblemente mejor contra infección por virus de la gripe. En experimentos con ratones como modelo animal, la titulación de anticuerpos neutralizadores fue, por ejemplo, mayor en al menos un factor de 42, semanas después de la vacunación que la titulación de anticuerpos neutralizadores después de la inoculación con virus de la gripe que se habían replicado a 37 ºC. 4 semanas después de la inoculación, la titulación de anticuerpos neutralizadores era mayor en al menos un factor de 17 y en algunos casos hasta 27 veces mayor. Si se llevara a cabo una revacunación, la titulación de anticuerpos neutralizadores podría ser mayor en un factor de más de 60 cuando se usan virus de la gripe de acuerdo con la invención en comparación con virus de la gripe que se habían replicado a 37 ºC. En consecuencia, la tasa de supervivencia de animales en un experimento de exposición usando una administración de 1000 DL50 (dosis letal al 50 %) puede aumentarse de 1/10 a al menos 8/1, preferentemente a 9/10 y particularmente preferentemente a 10/10 (100 %).
Las vacunas que contienen virus de la gripe que pueden obtenerse del procedimiento de acuerdo con la invención pueden contener opcionalmente los aditivos habituales para vacunas, en particular sustancias que aumentan la respuesta inmune, es decir los denominados adyuvantes, por ejemplo hidróxidos de diversos metales, constituyentes de paredes celulares bacterianas, aceites o saponinas y además excipientes farmaceuticamente tolerables.
Los virus pueden estar presentes en las vacunas como partículas de virus intactas, en particular como virus atenuados vivos. Para este fin, los concentrados de virus se ajustan a la titulación deseada y se liofilizan o estabilizan en forma líquida.
En una realización preferida adicional, las vacunas pueden contener virus disgregados, es decir inactivados, o intactos, pero inactivados. Para este fin, la posibilidad de infección de los virus se destruye por medio de procedimientos químicos y/o físicos (por ejemplo por detergentes o formaldehído). La vacuna se ajusta después a la cantidad deseada de antígeno y después de posible mezcla de adyuvantes o después de posible formulación de vacunas, se distribuye, por ejemplo, como liposomas, microesferas o formulaciones de liberación lenta.
En una realización preferida adicional la vacuna puede finalmente estar presente como vacuna de subunidad, es decir, puede contener constituyentes de virus aislados definidos, preferentemente proteínas aisladas del virus de la gripe. Estos constituyentes pueden aislarse de los virus de la gripe por procedimientos conocidos por el experto en la materia.
Los ejemplos ilustran la invención.
Ejemplo 1
Replicación de virus de la gripe en células MDCK a 33 ºC
Se replicaron células MDCK (ATCC CCL 34) en frascos de cultivo celular (MEM de Eagle [EMEM] usando FCS 2 %, incubación a 37 ºC durante 4 días). El césped celular denso resultante se separó de la pared del recipiente usando solución de tripsina, las células se aislaron y el concentrado de células se resuspendió en medio que contenía suero. Las células se inocularon en frascos rotatorios (200 ml/frasco) a una densidad celular de 5 x 105 células/ml y se incubaron a 37 ºC a 4 rpm. Después de dos días, las células se infectaron con virus de la gripe. Para hacer esto, se
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retiro el medio por encima del césped celular denso y se reemplazo con EMEM sin suero. Se añadió virus de la gripe A/PR/8/34 con una m.o.i. (multiplicidad de infección) de 0.1 y tripsina en una concentración final de 25 µg/ml al medio. Se incubaron dos frascos rotarios en cada caso a 37 ºC o a 33 ºC. La replicación del virus se determinó como cantidad de antígeno (medida como unidades de hemaglutinina) y como posibilidad de infección (medida en el ensayo de CC DI50) y se muestra en la Tabla 1.
Tabla 1
Replicación de gripe A/PR/8/34 en frascos rotatorios (línea celular MDCK) después de incubación a 37 ºC y 33 ºC, medida como contenido de antígeno (unidades de HA y posibilidad de infección) (CCDI50))
Contenido de HA CCDI50/ml [log10]
2 dpi
3 dpi 4 dpi 4 dpi
37 ºC
1:128 1:512 1:1024 6,4
33 ºC
1:64 1:256 1:1024 5,7
dpi = días después de la infección
Las relaciones indicadas significan que una dilución 1:X de la recolección del virus aun tiene propiedades hemaglutinantes. Las propiedades hemaglutinantes pueden determinarse, por ejemplo, como se describe en Mayer y col., Virologische Arbeitsmethoden, [Virological Working Methods, Volumen 1 (1974), páginas 260-261 o en Grist, Diagnostic Methods in Clinical Virology, páginas 72-75.
La determinación del valor de CCDI50 puede llevarse a cabo, por ejemplo, de acuerdo con el procedimiento que se describe en Paul, Zell-und Gewebekultur [cultivo tisular y celular] (1980), Pág. 395.
Ejemplo 2
Preparación de una línea celular que se adapta a crecimiento en suspensión y puede infectarse por virus de la gripe
Se selecciona una línea celular que es adecuada para el crecimiento en cultivo en suspensión y puede infectarse por virus de la gripe comenzando a partir de células MDCK (ATCC CCL34 MDCK (NBL-2)), que habían proliferado por medio de solamente unos pocos pases o durante varios meses en laboratorio. Esta selección se llevó a cabo por proliferación de las células en frascos rotatorios que se rotaron a 16 rpm (en lugar de aproximadamente 3 rpm como es habitual para frascos rotatorios que tienen células que crecen de forma adherente). Después de varios pases de las células presentes suspendidas en el medio, se obtuvieron cepas celulares que crecían en suspensión. Estas cepas celulares se infectaron con virus de la gripe y se seleccionaron las cepas que producían el mayor rendimiento de virus. Un aumento en la tasa de células que crecían en suspensión durante los primeros pases a 16 rpm se consiguió en de 1 a 3 pases mediante la adición de sistemas de selección conocidos por el experto en la materia, tales como hipoxantina, aminopterina y timidina, o alanosina y adenina, individualmente o en combinación. La selección de células que crecen en suspensión también es posible en otros sistemas de cultivo celular agitados conocidos por el experto en la materia, tales como matraces agitados. Un ejemplo de células que se adaptan a crecimiento en suspensión y pueden infectarse por virus de la gripe es la línea celular MDCK 33016 (DSM ACC2219).
Ejemplo 3
Replicación de virus de la gripe en células MDCK 33016 a 33 ºC
La línea celular MDCK 33016 (DSM ACC2219) que crecía en suspensión se replicó a 37 ºC en medio de Iscove con una tasa de división de 1:8 a 1:12 dos veces por semana en un frasco rotatorio que rotaba a 16 rpm. 4 días después de la transferencia, se consiguió un conteo celular de aproximadamente 7,0 x 105 células/ml. Simultáneamente con la infección del cultivo celular ahora de 4 días de edad con la cepa de la gripe A/PR/8/34 (m.o.i. = 0,1), el cultivo celular se trató con tripsina (concentración final 25 µg/ml), se incubó adicionalmente a 37 ºC o 33 ºC y se determinó la replicación del virus durante 3 días (Tabla II).
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20 Tabla II
Replicación de gripe A/PR/8/34, medida como contenido de antígenos (unidades de HA) en frascos rotatorios (línea de células MDCK MDCK 33016) después de infección de un cultivo celular sin cambio de medio a una temperatura de incubación de 37 ºC o 33 ºC.
Contenido de HA después de la infección (dpi)
1 dpi 2 dpi 3 dpi 37 ºC 1:64 1:512 1:1024 33 ºC 1:16 1:128 1:1024
Ejemplo 4 Replicación de diversas cepas de gripe en células MDCK 33016 (DSM ACC 2219) a 33 ºC
La línea celular MDCK 33016 (DSM ACC 2219) proliferó a 37 ºC en medio de Iscove con una tasa de división de 1:8 a 1:12 dos veces por semana en un frasco rotatorio que rotaba a 16 rpm. 4 días después de la transferencia, se consiguió un conteo celular de aproximadament5e 7,0 x 105 a 10 x 105 células/ml. Simultáneamente con la infección del cultivo celular ahora de 4 días de edad con diversas cepas de gripe (m.o.i. aproximadamente 0,1), el cultivo celular se trató con tripsina (concentración final de 25 µg/ml), se incubó adicionalmente a 33 ºC y la replicación del virus se determinó el quinto día después de la infección (Tabla III).
Tabla III
Replicación de cepas de gripe en frascos rotatorios (línea celular MDCK 33016) después de infección de un cultivo celular sin cambio de medio, medida como contenido de antígeno (unidades de HA)
Cepa de gripe Contenido de HA 5 días después de la infección
Contenido de HA A/Singapur 1:1024 A/Sichuan 1:256 A/Shanghai 1:256 A/Guizhou 1:128 A/Beijing 1:512 B/Beijing 1:256 B/Yamagata 1:512 A/PR/8/34 1:1024 A/Equi 1/Praga 1:512 A/Equi 2/Miami 1:256 A/Equi 2 Fontainebleau 1:128 A/Cerdo/Ghent 1:512 A/Cerdo/Iowa 1:1024 A/Cerdo/Arnsberg 1:512
Ejemplo 5 Preparación de una vacuna de gripe experimental
Después de la inoculación en ratones, los virus de gripe patogénica humana habitualmente no conducen a su infección con procesos patológicos, de modo que los experimentos de protección con ratones son experimentalmente muy difíciles de construir. La cepa de virus de la gripe A/PR/8/34, sin embargo se adapta a los ratones y después de administración intranasal provoca una mortalidad dependiente de dosis en ratones.
5
10
15
20
25
30
35
40
Se preparó una vacuna experimental a partir de virus de la gripe A/PR/8/34 del Ejemplo 3 (A/PR/8 replicado a 37 ºC
o 33 ºC) los virus de la gripe en medio de cultivo celular se separaron de células y fragmentos celulares por centrifugación de baja velocidad (2000 g, 20 minutos, 4 ºC) y se purificó por una centrifugación en gradiente de sacarosa (10 a 50 % (p/p) de gradiente de sacarosa lineal, 30.000 g, 2 horas, 4 ºC). Se obtuvo la banda que contenía virus de la gripe, se diluyó con PBS pH 7,2 1:10 y se sedimentó a 20.000 rpm y se recogió el precipitado en PBS (volumen: 50 % del medio de cultivo celular original). Los virus de la gripe se inactivaron con formaldehído (adición dos veces de 0,025 % de una solución de formaldehído de concentración a 35 % a un intervalo de 24 horas, incubación a 20 ºC con agitación).
Se inoculó a cada uno de 10 ratones NMRI, de 18 a 20 g de peso, 0,3 ml de cada una de estas vacunas experimentales inactivadas el día 0 y el día 28 por inyección subcutánea. 2 y 4 semanas después de la inoculación y también 1 y 2 semanas después de la revacunación, se tomó sangre de los animales para determinar la titulación de anticuerpos neutralizadores contra A/PR/8/34. Para determinar la tasa de protección, se expuso a los ratones 2 semanas después de la revacunación (6 semanas después del comienzo del experimento) por administración intranasal de 1000 DL50 (dosis letal al 50 %). Los resultados del experimento se recopilan en la Tabla IV.
Tabla IV
Eficacia de vacunas experimentales: para la vacuna A el virus de la gripe A/PR/8/34 se replicó a 37 ºC y para la vacuna B a 33 ºC. Se investigaron las titulaciones de anticuerpos neutralizadores contra A/PR/8 y también la tasa de protección después de exposición de los ratones.
Titulación de anticuerpos neutralizadores/ml* Tasa de protección número de vivos/total
2 s pvac 4 s pvac 1 s prevac 2 s prevac
37 ºC <28 56 676 1 620 1/10 33 ºC 112 1 549 44 670 112 200 9/10
* Semanas después de la vacunación (s pvac) y semanas después de la revacunación (s prevac)
Los experimentos confirman que los virus de la gripe que se habían replicado a 37 ºC en cultivo celular con un alto rendimiento de antígenos (titulación de HA) solamente indujeron titulaciones de anticuerpos neutralizadores bajas en el ratón y apenas proporcionaron protección, mientras que los virus de la gripe que se habían replicado a 33 ºC en el cultivo celular también con un rendimiento de antígeno alto (titulación de HA) indujeron titulaciones de anticuerpos neutralizadores muy altas en el ratón y condujeron a muy buena protección.
Ejemplo 6
Replicación de virus de la gripe en células MDCK a 33 ºC y eficacia de la vacuna obtenida
La línea celular MDCK (ATCC CL34) se replicó a 37 ºC en un frasco de cultivo celular en MEM de Eagle (EMEM) con FCS 2 % con una tasa de división de 1:8 a 1:12 dos veces por semana. 4 días después de la transformación, había resultado un césped celular denso. Después de cambiar el medio a EMEM sin suero, el cultivo celular se infectó con gripe B/Beijing (m.o.i. = 0,1), se añadió tripsina al medio en una concentración final de 25 µg/ml y se incubaron los frascos de cultivo celular infectado a 37 ºC o a 33 ºC. 4 días después de la infección, el contenido de HA en ambos lotes experimentales fue de 256 unidades de HA. Después de centrifugación a baja velocidad para retirar células/restos celulares, los virus en el sobrenadante se inactivaron con formaldehído (adición dos veces de 0,025 % de una solución de formaldehído de concentración de 35 % en un intervalo de 24 horas, incubación a 20 ºC con agitación). En cada sección experimental, el adyuvante añadido fue hidróxido de aluminio (concentración final del 10 % de una solución de Al(OH)3 de concentración 2 %). Usando estas vacunas experimentales, se sometió en cada caso a 3 cobayas (400 a 500 g) por sección experimental a vacunación interplantar con 0,2 ml y revacunación 4 semanas después con la misma vacuna. Para investigar la eficacia de la vacuna, se tomaron muestras de sangre 2, 4 y 6 semanas después de la inoculación y se ensayaron en el ensayo de inhibición de hemaglutinación y ensayo de neutralización de suero (consúltese Tabla V).
Tabla V
Eficacia de vacunas experimentales de gripe B/Beijing después de replicación del virus a 37 ºC y 33 ºC en cultivo celular: se investigaron los parámetros serológicos de inhibición de hemaglutinación y anticuerpos neutralizadores (valores medios de 3 cobayas)
37 ºC
Titulación de hemaglutinación 2 s pvac* 85 inhibición 4 s pvac* 341 de 6 s pvac 1024 titulación de anticuerpos neutralizadores 2 s pvac 4 s pvac 6 s pvac 851 1290 6760
33 ºC
85 341 853 3890 22400 117490
* s pvac = semanas después de inoculación (6 s pvac = 2 semanas después de revacunación)

Claims (14)

  1. REIVINDICACIONES
    1.
    Un procedimiento para preparar una vacuna para administración a seres humanos o animales que comprende:
    a) replicación de virus de la gripe en cultivo celular, en el que se cultivan células MDCK que pueden infectarse por virus de la gripe en cultivo celular, las células se infectan con virus de la gripe y después de la infección se cultivan a una temperatura de 33 ºC para replicación del virus, en la que se añade una proteasa a las células cultivadas antes, durante o después de la infección con virus de la gripe; b) recogida y aislamiento de los virus de la gripe replicados de 2 a 10 días después de la infección, incluyendo una etapa de separar células o restos celulares del medio de cultivo; y c) formulación de los virus de la gripe replicados para proporcionar la vacuna.
  2. 2.
    El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la separación de células o restos celulares del medio de cultivo se lleva a cabo por separadores o filtros.
  3. 3.
    El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1 o reivindicación 2, en el que la etapa b) incluye adicionalmente una etapa de concentración de los virus de la gripe presentes en el medio de cultivo.
  4. 4.
    El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la concentración de los virus de la gripe presentes en el medio de cultivo se lleva a cabo por centrifugación de gradiente, filtración o precipitación.
  5. 5.
    El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que las células en la etapa a) se cultivan en suspensión en medio sin suero.
  6. 6.
    El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la posibilidad de infección de los virus de la gripe replicados se destruye por medio de detergente o formaldehído.
  7. 7.
    El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que las células MDCK son de la línea celular MDCK 33016 (depositada con el número de depósito DSM ACC 2219 el 7 de Junio de 1995).
  8. 8.
    El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que las células que pueden infectarse por virus de la gripe crecen de forma adherente o en suspensión.
  9. 9.
    El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que la recogida y aislamiento de los virus de la gripe tiene lugar de 2 a 7 días después de la infección.
  10. 10.
    El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, estando los virus de la gripe replicados en combinación en la vacuna con sustancias que aumentan la respuesta inmune.
  11. 11.
    El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que la posibilidad de infección de los virus replicados se destruye por medio de procedimientos químicos y/o físicos.
  12. 12.
    El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que los virus están presentes en la vacuna como virus atenuados vivos.
  13. 13.
    El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que la proteasa es una serina proteasa.
  14. 14.
    El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 13, en el que la serina proteasa es tripsina.
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Families Citing this family (88)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19612966B4 (de) 1996-04-01 2009-12-10 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co. Kg MDCK-Zellen und Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren
WO1999023204A1 (en) * 1997-10-31 1999-05-14 Merck & Co., Inc. A method of improved mixing in roller bottles
EP1027426A4 (en) * 1997-10-31 2006-04-19 Merck & Co Inc METHOD FOR IMPROVED MIXING OF A VARICELLA INFECTED CELL CULTURE IN ROLL BOTTLES
FR2775601B1 (fr) * 1998-03-03 2001-09-21 Merial Sas Vaccins vivants recombines et adjuves
AU3604201A (en) 2000-03-03 2001-09-12 Chemo Sero Therapeut Res Inst Cell usable in serum-free culture and suspension culture and process for producing virus for vaccine by using the cell
DE10144906B4 (de) * 2001-09-12 2013-11-28 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh Verfahren zur großtechnischen Herstellung von Impfstoffen
WO2003072016A2 (en) * 2001-11-19 2003-09-04 Becton, Dickinson And Company Pharmaceutical compositions in particulate form
DE50211123D1 (de) 2002-09-16 2007-12-06 Pan Biotech Gmbh Verfahren zur kultivierung von zellen, insbesondere menschlicher oder tierischer zellen
ES2295418T3 (es) * 2002-09-16 2008-04-16 Pan-Biotech Gmbh Equipo para el cultivo de celulas, en especial de celulas humanas o de animales.
US7270990B2 (en) 2003-06-20 2007-09-18 Microbix Biosystems, Inc. Virus production
DE202005022108U1 (de) 2004-03-09 2013-11-12 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Influenza-Virus-Impfstoffe
CN101094915A (zh) * 2004-05-20 2007-12-26 益得生物医学公司 生产流感疫苗的方法
EP1766034B1 (en) 2004-05-21 2014-03-19 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Alphavirus vectors for influenza virus vaccines
EP2179744B1 (en) * 2004-09-09 2010-12-01 Novartis Vaccines and Diagnostics GmbH Decreasing potential latrogenic risks associated with influenza vaccines
US7510719B2 (en) 2004-12-08 2009-03-31 Medimmune, Llc Methods of producing influenza vaccine compositions
JP5414178B2 (ja) 2004-12-23 2014-02-12 メディミューン，エルエルシー ウイルス増殖用の非腫瘍形成性ｍｄｃｋ細胞株
FR2884255B1 (fr) 2005-04-11 2010-11-05 Vivalis Utilisation de lignees de cellules souches aviaires ebx pour la production de vaccin contre la grippe
CN101365480B (zh) 2005-11-01 2014-11-05 诺华疫苗和诊断有限两合公司 经由β-丙内酯处理的残留细胞DNA水平降低的细胞衍生病毒疫苗
US11707520B2 (en) 2005-11-03 2023-07-25 Seqirus UK Limited Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture
CA2628424A1 (en) 2005-11-04 2007-05-10 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Adjuvanted influenza vaccines including cytokine-inducing agents
WO2007052061A2 (en) 2005-11-04 2007-05-10 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Emulsions with free aqueous-phase surfactant as adjuvants for split influenza vaccines
US20090304742A1 (en) 2005-11-04 2009-12-10 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Influenza vaccines with reduced amount of emulsion adjuvant
NZ568211A (en) 2005-11-04 2011-11-25 Novartis Vaccines & Diagnostic Influenza vaccines including combinations of particulate adjuvants and immunopotentiators
PT2368572T (pt) 2005-11-04 2020-06-16 Seqirus Uk Ltd Vacinas com adjuvante dotadas de antigénios não-virião preparados a partir de vírus da gripe cultivado em cultura celular
KR20080089663A (ko) 2006-01-27 2008-10-07 노바티스 백신즈 앤드 다이아그노스틱스 게엠베하 운트 콤파니 카게 적혈구응집소 및 기질 단백질을 함유한 인플루엔자 백신
AU2007231027B2 (en) 2006-03-24 2013-10-03 Novartis Influenza Vaccines Marburg Gmbh Storage of influenza vaccines without refrigeration
AU2007245192B2 (en) 2006-03-31 2012-04-12 Wisconsin Alumni Research Foundation High titer recombinant influenza viruses for vaccines
WO2007132763A1 (ja) * 2006-05-11 2007-11-22 Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute インフルエンザウイルスの増殖方法
GB0614460D0 (en) 2006-07-20 2006-08-30 Novartis Ag Vaccines
AU2007297178B2 (en) 2006-09-11 2014-07-24 Novartis Ag Making influenza virus vaccines without using eggs
CN101627113B (zh) 2006-09-15 2013-04-24 米迪缪尼有限公司 支持病毒生长到高效价的mdck细胞系和采用该细胞系的生物反应器方法
WO2008068631A2 (en) 2006-12-06 2008-06-12 Novartis Ag Vaccines including antigen from four strains of influenza virus
CA2687122C (en) * 2007-05-04 2017-06-13 Baxter International Inc. Two-step temperature profile for the propagation of viruses
WO2008156778A2 (en) 2007-06-18 2008-12-24 Tokiko Watanabe Influenza m2 protein mutant viruses as live influenza attenuated vaccines
NZ582595A (en) 2007-06-27 2012-07-27 Novartis Ag Low-additive influenza vaccines
NZ587798A (en) 2008-03-18 2013-06-28 Novartis Ag Improvements in the preparation of influenza virus vaccine antigens utilising a phosphate buffer
CN102216450B (zh) 2008-09-24 2014-05-14 米迪缪尼有限公司 培养细胞、增殖和纯化病毒的方法
CN102307590A (zh) 2009-02-10 2012-01-04 诺华有限公司 具有减少量的角鲨烯的流感疫苗
WO2010092477A1 (en) 2009-02-10 2010-08-19 Novartis Ag Influenza vaccines with increased amounts of h3 antigen
CA2752039A1 (en) 2009-02-10 2010-08-19 Novartis Ag Influenza vaccine regimens for pandemic-associated strains
DE102010018462A1 (de) 2009-04-27 2011-04-07 Novartis Ag Impfstoffe zum Schutz gegen Influenza
KR101800245B1 (ko) 2009-05-21 2017-11-22 노파르티스 아게 비-내인성 ｐｏｌ ｉ 프로모터를 사용하는 역 유전학
WO2010144797A2 (en) 2009-06-12 2010-12-16 Vaccine Technologies, Incorporated Influenza vaccines with enhanced immunogenicity and uses thereof
CN102666860B (zh) 2009-07-31 2015-06-17 诺华股份有限公司 反向遗传系统
US20120237536A1 (en) 2009-09-10 2012-09-20 Novartis Combination vaccines against respiratory tract diseases
PL2491117T3 (pl) 2009-10-20 2014-05-30 Novartis Ag Udoskonalone sposoby odzyskiwania wirusa wykorzystujące odwrotną genetykę
WO2011056591A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Warf - Wisconsin Alumni Research Foundation High titer recombinant influenza viruses with enhanced replication in vero cells
US20120309056A1 (en) 2010-02-04 2012-12-06 Leon Arnaud Fed-batch process using concentrated cell culture medium for the efficient production of biologics in eb66 cells
US10130697B2 (en) 2010-03-23 2018-11-20 Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) Vaccines comprising mutant attenuated influenza viruses
WO2011139717A1 (en) 2010-04-26 2011-11-10 Novartis Ag Improved production of virus replicon particles in packaging cells
JP5876036B2 (ja) 2010-05-21 2016-03-02 ノバルティス アーゲー インフルエンザウイルス再集合方法
PL2575873T3 (pl) 2010-06-01 2016-06-30 Novartis Ag Zatężanie i liofilizacja antygenów szczepionkowych grypy
HUE051711T2 (hu) 2010-06-01 2021-03-29 Seqirus Uk Ltd Influenzavakcina antigénjeinek koncentrálása liofilizálás nélkül
ES2531577T3 (es) 2010-08-20 2015-03-17 Novartis Ag Conjuntos de agujas para la administración de vacuna soluble contra la gripe
TR201903651T4 (tr) 2010-10-11 2019-04-22 Glaxosmithkline Biologicals Sa Antijen uygulama platformları.
ES2727836T3 (es) 2011-01-26 2019-10-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Régimen de inmunización del VRS
CA2829774C (en) 2011-03-14 2019-09-24 National Research Council Of Canada Method of viral production in cells
AU2012322704B2 (en) 2011-10-11 2017-09-07 Novartis Ag Recombinant self-replicating polycistronic RNA molecules
WO2013054199A2 (en) 2011-10-12 2013-04-18 Novartis Ag Cmv antigens and uses thereof
US20140248320A1 (en) 2011-10-20 2014-09-04 Novartis Ag Adjuvanted influenza b virus vaccines for pediatric priming
EP2820126B1 (en) 2012-03-02 2017-05-17 Seqirus UK Limited Influenza virus reassortment
EP2822585B1 (en) 2012-03-06 2017-05-17 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Improved vaccination against influenza
JP2015526062A (ja) 2012-06-04 2015-09-10 ノバルティス アーゲー 改善された安全性試験
GB201218195D0 (en) 2012-10-10 2012-11-21 Istituto Zooprofilattico Sperimentale Delle Venezie Composition
BR112015012380A2 (pt) 2012-12-03 2017-09-12 Novartis Ag vírus influenza recombinante
AU2014229255B2 (en) 2013-03-13 2018-12-13 Novartis Ag Influenza B virus reassortment
JP2016521282A (ja) 2013-05-10 2016-07-21 ノバルティス アーゲー インフルエンザワクチンにおけるナルコレプシーのリスクの回避
DE202013005100U1 (de) 2013-06-05 2013-08-26 Novartis Ag Influenza Virus Reassortierung
DE202013005130U1 (de) 2013-06-05 2013-09-10 Novartis Ag Influenza Virus Reassortierung
EP3004332A2 (en) 2013-06-06 2016-04-13 Novartis AG Influenza virus reassortment
EP3022296B1 (en) 2013-07-15 2022-12-28 Wisconsin Alumni Research Foundation High titer recombinant influenza viruses with enhanced replication in mdck or vero cells or eggs
WO2015196150A2 (en) 2014-06-20 2015-12-23 Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) Mutations that confer genetic stability to additional genes in influenza viruses
AU2015252119A1 (en) 2014-11-07 2016-05-26 Takeda Vaccines, Inc. Hand, foot, and mouth vaccines and methods of manufacture and use thereof
MA40920A (fr) 2014-11-07 2017-09-12 Takeda Vaccines Inc Vaccins de la main, du pied et de la bouche, et procédés de fabrication et d'utilisation de ceux-ci
US10633422B2 (en) 2015-06-01 2020-04-28 Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) Influenza virus replication by inhibiting microRNA lec7C binding to influenza viral cRNA and mRNA
WO2016207853A2 (en) 2015-06-26 2016-12-29 Seqirus UK Limited Antigenically matched influenza vaccines
US9890363B2 (en) 2015-07-06 2018-02-13 Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) Influenza virus replication for vaccine development
WO2017005880A1 (en) 2015-07-07 2017-01-12 Seqirus UK Limited Influenza potency assays
JP2019510481A (ja) 2016-02-19 2019-04-18 ウィスコンシン アルムニ リサーチ ファンデイション ワクチン開発のための改善されたｂ型インフルエンザウイルス複製
MY193736A (en) 2017-11-03 2022-10-27 Takeda Vaccines Inc Method for inactivating zika virus and for determining the completeness of inactivation
US11241492B2 (en) 2019-01-23 2022-02-08 Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) Mutations that confer genetic stability to genes in influenza viruses
US11851648B2 (en) 2019-02-08 2023-12-26 Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) Humanized cell line
US11390649B2 (en) 2019-05-01 2022-07-19 Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) Influenza virus replication for vaccine development
US20220211836A1 (en) 2019-05-08 2022-07-07 Takeda Vaccines, Inc. Inactivated virus compositions and zika vaccine formulations
EP4022046A2 (en) 2019-08-27 2022-07-06 Wisconsin Alumni Research Foundation (WARF) Recombinant influenza viruses with stabilized ha for replication in eggs
MX2022006005A (es) 2019-11-18 2022-10-27 Seqirus Pty Ltd Metodo para producir virus de la influenza reagrupados.
KR102444684B1 (ko) * 2020-04-29 2022-09-16 에스케이바이오사이언스(주) 일회용 배양 공정 시스템을 이용한 인플루엔자 바이러스 생산 방법
WO2023154043A1 (en) 2022-02-09 2023-08-17 Takeda Vaccines, Inc. Zika vaccines and immunogenic compositions, and methods of using the same

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1278075B (de) * 1964-06-22 1968-09-19 Norden Lab Inc Verwendung von Gewebekulturen zur Zuechtung von Viren fuer die Gewinnung von Impfstoffen
US4064232A (en) * 1974-01-14 1977-12-20 Sandoz Ltd. Process for isolating the immunogenic components of influenza viruses
CA1122527A (en) * 1979-05-15 1982-04-27 Karen K. Brown Influenza vaccine production in liquid cell culture
USRE33164E (en) * 1979-05-15 1990-02-13 Mobay Corporation Influenza vaccine production in liquid cell culture
US4500513A (en) * 1979-05-15 1985-02-19 Miles Laboratories, Inc. Influenza vaccine production in liquid cell culture
US5013663A (en) * 1983-06-15 1991-05-07 American Home Products Corporation Canine corona virus vaccine
US4783411A (en) * 1984-10-22 1988-11-08 Janis Gabliks Influenza-A virus vaccine from fish cell cultures
US5762939A (en) * 1993-09-13 1998-06-09 Mg-Pmc, Llc Method for producing influenza hemagglutinin multivalent vaccines using baculovirus
US5824536A (en) * 1994-08-23 1998-10-20 St. Jude Children's Research Hospital Influenza virus replicated in mammalian cell culture and vaccine production
US5753489A (en) * 1994-11-10 1998-05-19 Immuno Ag Method for producing viruses and vaccines in serum-free culture
US5756341A (en) * 1994-11-10 1998-05-26 Immuno Ag Method for controlling the infectivity of viruses
US5646033A (en) * 1994-11-30 1997-07-08 Dyncorp African green monkey kidney cell lines useful for maintaining viruses and for preparation of viral vaccines
DE19612966B4 (de) * 1996-04-01 2009-12-10 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co. Kg MDCK-Zellen und Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren
US6514502B1 (en) * 1999-01-26 2003-02-04 Schering-Plough Veterinary Corporation Propagation of bovine cononavirus in chinese hamster ovary cells

Also Published As

Publication number Publication date
DK1526172T3 (da) 2011-10-03
PT1526172E (pt) 2011-09-01
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LU91381I2 (fr) 2008-01-30

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