ES2288518T3 - Polimorfos de un analogo de epotilona. - Google Patents

Abstract

Un polimorfo cristalino de un análogo de epotilona representado por la fórmula (Ver fórmula) que comprende la forma A caracterizada por: parámetros de la celda unidad aproximadamente iguales a los siguientes: Dimensiones de la celda a = 14, 152(6) ° A b = 30, 72(2) ° A c = 6, 212(3) ° A Volumen = 2701(4) A 3 Grupo espacial P212121 Ortorrómbico Moléculas/celda unidad 4 Densidad (calculada) (g/cm 3 ) 1, 247 Punto de fusión 182-185ºC (descomposición); y picos característicos en el patrón de difracción de rayos X de polvo a valores de dos teta (CuKalfa lambda = 1, 5406 ° A a 22ºC): 5, 69, 6, 76, 8, 38, 11, 43, 12, 74, 13, 62, 14, 35, 15, 09, 15, 66, 16, 43, 17, 16, 17, 66, 18, 31, 19, 03, 19, 54, 20, 57, 21, 06, 21, 29, 22, 31, 23, 02, 23, 66, 24, 18, 14, 98, 25, 50, 26, 23, 26, 23, 26, 46, 27, 59, 28, 89, 29, 58, 30, 32, 31, 08 y 31, 52; o la forma B se caracteriza por: parámetros de la celda unidad aproximadamente iguales a los siguientes: Dimensiones de la celda a = 16, 675(2) ° Ab = 28, 083(4) ° A c = 6, 054(1) ° A Volumen = 2835(1) A 3 Grupo espacial P212121 Ortorrómbico Moléculas/celda unidad 4 Densidad (calculada) (g/cm 3 ) 1, 187 Punto de fusión 191-199ºC, descomposición; y picos característicos en el patrón de difracción de rayos X de polvo a valores de dos teta (CuKalfa lambda = 1, 5406 ° A a 22ºC): 6, 17, 10, 72, 12, 33, 14, 17, 14, 93, 15, 88, 16, 17, 17, 11, 17, 98, 19, 01, 19, 61, 20, 38, 21, 55, 21, 73, 22, 48, 23, 34, 23, 93, 24, 78, 25, 15, 25, 90, 26, 63, 27, 59, 28, 66, 29, 55, 30, 49 y 31, 22.

Description

Polimorfos de un análogo de epotilona.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a formas polimórficas cristalinas de un análogo de epotilona sumamente potente que se caracteriza por propiedades mejoradas.

Antecedentes de la invención

Las epotilonas son compuestos macrólidos que encuentran utilidad en el campo farmacéutico. Por ejemplo, en las epotilonas A y B que tienen las estructuras:

1

puede encontrarse que ejercen efectos de estabilización de microtúbulos similares a paclitaxel (TAXOL®) y de ahí la actividad citotóxica contra células que proliferan rápidamente, tales como células tumorales u otra enfermedad celular hiperproliferativa, véase Hofle, G., y col., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., volumen 35, número 13/14, 1567-1569 (1996); documento WO93/10121 publicado el 27 de mayo de 1993; y documento WO97/19086 publicado el 29 de mayo de 1997.

Se han sintetizado diversos análogos de epotilona y pueden usarse para tratar una variedad de cánceres y otras enfermedades proliferativas anómalas. Tales análogos se describen en Hofle y col., Id.; Nicolaou, K.C., y col., Angew Chem. Int. Ed. Engl., volumen 36, número 19, 2097-2103 (1997); y Su, D.-S., y col., Angew Chem. Int. Ed. Engl., volumen 36, número 19, 2093-2097 (1997).

Un análogo de epotilona particularmente ventajoso que se ha descubierto que tiene actividad ventajosa es [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-dihidroxi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)
etenil]-4-aza-17-oxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona. Según la presente invención, se proporcionan dos formas cristalinas del análogo de epotilona objeto. Estos polimorfos, que se han designado como las formas A y B, respectivamente, son formas cristalinas novedosas y se identifican más adelante en este documento.

Breve descripción de los dibujos

La fig. 1 es un patrón de difracción de rayos X de polvo (CuK\alpha \lambda = 1,5406 \ring{A} a temperatura ambiente) de la forma A del análogo de epotilona objeto;

la fig. 2 es un patrón de difracción de rayos X de polvo de la forma B (CuK\alpha \lambda = 1,5406 \ring{A} a temperatura ambiente) del análogo de epotilona objeto;

la fig. 3 es un patrón de difracción de rayos X de polvo de una mezcla de las formas A y B (CuK\alpha \lambda = 1,5406 \ring{A} a temperatura ambiente) del análogo de epotilona objeto;

la fig. 4 es una comparación de los patrones de difracción de rayos X de polvo simulados y reales de las formas A y B del análogo de epotilona objeto;

la fig. 5 es un espectro Raman de la forma A del análogo de epotilona objeto;

la fig. 6 es un espectro Raman de la forma B del análogo de epotilona objeto;

la fig. 7 es un espectro Raman de una mezcla de las formas A y B del análogo de epotilona objeto;

la fig. 8 representa la conformación de estado sólido en la forma A del análogo de epotilona objeto;

la fig. 9 representa la conformación de estado sólido en la forma B del análogo de epotilona objeto.

Resumen de la invención

Según la presente invención, se proporcionan dos polimorfos cristalinos del análogo de epotilona representado por la fórmula I.

2

Se ha descubierto que uno de estos polimorfos, designado la forma A, tiene propiedades particularmente ventajosas. La presente invención se refiere a los polimorfos cristalinos forma A y forma B, además de a mezclas de los mismos. La presente invención se refiere además al uso de estas formas cristalinas en el tratamiento de cánceres y otras enfermedades proliferativas y a formulaciones farmacéuticas que las contienen.

Descripción detallada de la invención

Según la presente invención, se proporcionan polimorfos de un análogo de epotilona representado por la fórmula I de a continuación

3

El análogo de epotilona representado por la fórmula I es químicamente [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,
16S*]]-7,11-dihidroxi-8, 8,10,12,16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4-aza-17-oxabiciclo[14.1.0]
heptadecano-5,9-diona. Este análogo y la preparación del mismo se describen en la solicitud de patente de los EE.UU. número de serie 09/170.582, presentada el 13 de octubre de 1998, cuya descripción se incorpora a este documento como referencia. Los polimorfos del análogo representado por la fórmula I anterior son agentes estabilizantes de microtúbulos. Por tanto, son útiles en la prestación de medicamentos para el tratamiento de una variedad de cánceres y otras enfermedades proliferativas que incluyen, pero no se limitan a, las siguientes;

- carcinoma, que incluye el de vejiga, mama, colon, riñón, hígado, pulmón, ovario, páncreas, estómago, boca del útero, tiroides y piel, que incluye carcinoma de células escamosas;

- tumores hematopoyéticos de linaje linfoide, que incluyen leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B, linfoma de células T, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de células pilosas y linfoma de Burkett;

- tumores hematopoyéticos de linaje mieloide, que incluyen leucemias mielógenas agudas y crónicas y leucemia promielocítica;

- tumores de origen mesenquimal, que incluyen fibrosarcoma y rabdomiosarcoma;

- otros tumores, que incluyen melanoma, seminoma, teratocarcinoma, neuroblastoma y glioma;

- tumores del sistema nervioso central y periférico, que incluyen astrocitoma, neuroblastoma, glioma y neurinomas;

- tumores de origen mesenquimal, que incluyen fibrosarcoma, rabdomiosarcoma y osteosarcoma; y

- otros tumores, que incluyen melanoma, xeroderma pigmentoso, queratoacantoma, seminoma, cáncer folicular de tiroides y teratocarcinoma.

Los presentes polimorfos también inhibirán angiogénesis, afectando así el crecimiento de tumores y proporcionando tratamiento de tumores y trastornos relacionados con tumores. Tales propiedades antiangiogénicas también serán útiles en el tratamiento de otros estados sensibles a agentes antiangiogénicos que incluyen, pero no se limitan a, ciertas formas de ceguera relacionadas con vascularización de la retina, artritis, especialmente artritis inflamatoria, esclerosis múltiple, reestenosis y psoriasis.

Los polimorfos del análogo representado por la fórmula I inducirán o inhibirán apoptosis, un proceso fisiológico de muerte celular crítico para el desarrollo normal y la homeostasis. Las alteraciones de las rutas apoptóticas contribuyen a la patogénesis de una variedad de enfermedades humanas. Los presentes polimorfos, como moduladores de la apoptosis, serán útiles en el tratamiento de una variedad de enfermedades humanas con anomalías en la apoptosis que incluyen, pero no se limitan a, cáncer y lesiones precancerosas, enfermedades relacionadas con la respuesta inmune, infecciones víricas, enfermedades degenerativas del sistema musculoesquelético y enfermedad renal.

Sin desear ceñirse a ningún mecanismo o morfología, tales formas cristalinas del análogo de epotilona representado por la fórmula I también pueden usarse en la prestación de medicamentos para tratar estados diferentes de cáncer u otras enfermedades proliferativas. Tales estados incluyen, pero no se limitan a, infecciones víricas tales como virus herpes, virus pox, virus Epstein-Barr, virus Sindbis y adenovirus, enfermedades autoinmunes tales como lupus sistémico eritematoso, glomerulonefritis mediada inmunológicamente, artritis reumatoide, psoriasis, enfermedades inflamatorias del intestino y diabetes mellitus autoinmune, trastornos neurodegenerativos tales como la enfermedad de Alzheimer, demencia asociada al SIDA, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, retinitis pigmentaria, atrofia muscular espinal y degeneración cerebelosa; SIDA; síndromes mielodisplásicos; anemia aplásica; lesión isquémica asociada a infartos de miocardio; accidente cerebrovascular y lesión por reperfusión; reestenosis; arritmia; aterosclerosis; enfermedades hepáticas inducidas por toxinas o inducidas por alcohol; enfermedades hematológicas tales como anemia crónica y anemia aplásica; enfermedades degenerativas del sistema musculoesquelético tales como osteoporosis y artritis; rinosinusitis sensible a aspirina; fibrosis cística; esclerosis múltiple; enfermedades renales y dolores asociados al cáncer.

Un experto en la materia puede determinar la cantidad eficaz de los polimorfos objeto, particularmente la forma A, e incluye cantidades de dosificación a modo de ejemplo para un ser humano de 0,05 a 200 mg/kg/día, que pueden administrarse en una dosis única o en forma de dosis individualmente divididas, tales como de 1 a 4 veces por día. Preferentemente, los polimorfos objeto se administran en una dosificación inferior a 100 mg/kg/día, en una dosis única o en de 2 a 4 dosis divididas. Se entenderá que puede variarse el nivel de dosis específico y la frecuencia de dosificación para cualquier sujeto particular y dependerá de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleado, la estabilidad metabólica y la duración de la acción de ese compuesto, las especies, edad, peso corporal, salud general, sexo y alimentación del sujeto, el modo y la hora de administración, velocidad de excreción, combinación de fármacos y gravedad del estado particular. Los polimorfos objeto se administran preferentemente por vía parenteral; sin embargo, en este documento también se contemplan otras vías de administración que son reconocidas por los expertos en las técnicas oncológicas. Los sujetos preferidos para el tratamiento incluyen animales, más preferentemente especies de mamíferos tales como seres humanos y animales domésticos tales como perros, gatos y similares, sometidos a los trastornos anteriormente mencionados.

La preparación de los análogos de epotilona representados por la fórmula I descrita en la solicitud de patente de los EE.UU. número de serie 09/170.582 produjo el análogo de epotilona objeto como un aceite que puede someterse a cromatografía y purificarse para dar un polvo amorfo. Una preparación preferida se describe en una solicitud pendiente con el número de serie 09/528.526 presentada el 20 de marzo de 2000, cuya descripción se incorpora a este documento como referencia. En esta preparación, como se refiere a los análogos representados por la fórmula I, la epotilona B se hace reaccionar con un agente donante de azida y un agente de tamponamiento en presencia de un catalizador de paladio y un agente reductor para formar un producto intermedio representado por la fórmula

4

Luego se lleva a cabo una reacción de macrolactamización en el producto intermedio para formar el análogo representado por la fórmula I. Ahora se ha descubierto que este análogo, en su forma cristalina, está constituido por una mezcla de las formas A y B como se describe en detalle en este documento. La forma amorfa del análogo de epotilona representado por la fórmula I puede recogerse en un disolvente adecuado, preferentemente un disolvente mixto tal como acetato de etilo/diclorometano/trietilamina, purificarse tal como mediante filtración en almohadilla de gel de sílice y cristalizarse mediante enfriamiento hasta una temperatura de aproximadamente 5ºC para formar un material cristalino que es una mezcla de la forma A y la forma B. La etapa de purificación usando una mezcla de disolventes que contiene un componente tal como diclorometano elimina disolventes residuales de la síntesis que podrían afectar al procedimiento de cristalización.

Generalmente, la recogida del material purificado en una cantidad limitada de acetato de etilo y el calentamiento de la suspensión resultante hasta 75-80ºC producirá la formación de la forma A. Por cantidad limitada se indica de 8 a 16 ml, preferentemente de 8 a 12 ml, de acetato de etilo por gramo de material purificado. Cuando se calienta la disolución se forma una fina suspensión que se ha descubierto que es predominantemente la forma B. A aproximadamente 75ºC, la suspensión experimenta un espesamiento del material, que se ha descubierto que es la formación de la forma A. La suspensión se mantiene a 75-80ºC durante aproximadamente una hora para asegurar la finalización de la formación de la forma A, momento en el que se añade ciclohexano a la suspensión en una relación respecto a acetato de etilo de 1:2 a 2:2, preferentemente 1:2, y la mezcla se deja enfriar hasta temperatura ambiente, a la que se mantiene con agitación durante un periodo de 12 a 96 horas. Entonces, la mezcla se enfría hasta aproximadamente 5ºC durante aproximadamente dos horas, tras lo que se recuperan los cristales de la forma A del análogo de epotilona objeto. La forma A se proporciona en buen rendimiento y pureza.

Procedimientos alternativos para la preparación de la forma A implican la adición de cristales de siembra. En las descripciones de a continuación se usaron cristales de siembra de la forma A, pero también pueden usarse cristales de siembra de la forma B o mezclas de los mismos. En un procedimiento tal, el material purificado se recoge en una cantidad limitada de acetato de etilo como se describe anteriormente y se calienta hasta aproximadamente 75ºC, se añaden cristales de siembra y la mezcla se mantiene durante aproximadamente 30 minutos. Entonces se añade gota a gota una cantidad de ciclohexano como se describe anteriormente, manteniéndose la temperatura a aproximadamente 70ºC. A partir de entonces, la mezcla se enfría hasta 20ºC y se mantiene con agitación durante 18 horas, tras lo que se enfría hasta 5ºC y los cristales blancos de la forma A se recuperan mediante separación física, por ejemplo filtración.

En un segundo procedimiento, la disolución inicial de material en acetato de etilo se calienta hasta 75ºC durante al menos una hora hasta que se produce una disolución. La disolución se enfría hasta aproximadamente 50ºC durante el transcurso de aproximadamente dos horas, añadiéndose cristales de siembra de la forma A cuando la temperatura alcanza aproximadamente 60ºC. Los cristales empiezan a aparecer a aproximadamente 55ºC. La temperatura se reduce de nuevo hasta aproximadamente 20ºC durante otras dos horas, añadiéndose gota a gota durante una hora de esas dos una cantidad de ciclohexano como se describe anteriormente. La suspensión final se enfría adicionalmente durante dos horas hasta -10ºC y se mantiene a esa temperatura durante otra hora. Entonces, la suspensión se filtra para proporcionar cristales blancos de la forma A.

En otro procedimiento alternativo, el material se recoge en una mayor cantidad, es decir, al menos aproximadamente 40 ml/g, de acetato de etilo y la suspensión resultante se calienta hasta aproximadamente 80ºC hasta que se forma una disolución que entonces se enfría hasta aproximadamente 70ºC durante el transcurso de aproximadamente una hora. Se añaden cristales de siembra de la forma A cuando la temperatura de disolución alcanza aproximadamente 70ºC. Entonces, la temperatura se reduce hasta aproximadamente 30ºC durante otras tres horas. Los cristales empiezan a aparecer a aproximadamente 65ºC. La temperatura se reduce hasta -10ºC durante tres horas adicionales, añadiéndose gota a gota durante un periodo de treinta minutos de esas tres horas una cantidad de ciclohexano como se describe anteriormente. La temperatura se mantiene a -10ºC durante otra hora. La suspensión final se filtra para proporcionar cristales blancos de la forma A. El rendimiento y la pureza de la forma A por estos procedimientos se consideran muy buenos.

La forma B de los análogos de epotilona objeto representados por la fórmula I anterior se obtiene formando una suspensión del material bruto en una mayor cantidad de acetato de etilo, es decir, de 40 a 50 ml por g, y calentando a de 70ºC a 80ºC durante una hora para formar una disolución que entonces se mantiene a temperatura durante aproximadamente treinta minutos. La disolución se enfría hasta aproximadamente 30ºC durante el transcurso de aproximadamente dos horas, empezando a aparecer los cristales a aproximadamente 38ºC. La temperatura se reduce adicionalmente hasta aproximadamente -10ºC durante una hora, añadiéndose durante la misma gota a gota una cantidad de ciclohexano como se describe anteriormente durante un periodo de treinta minutos. La suspensión final se mantiene a -10ºC durante otras dos horas y se filtra para proporcionar cristales blancos de la forma B.

En una preparación alternativa a la anterior, el material bruto se suspende con una cantidad similar de acetato de etilo y se calienta hasta aproximadamente 78ºC para formar una disolución que entonces se mantiene a temperatura durante aproximadamente treinta minutos. La disolución se enfría hasta aproximadamente 10ºC durante el transcurso de aproximadamente dos horas y se añaden cristales de siembra de la forma A cuando la temperatura alcanza aproximadamente 10ºC. La temperatura se reduce de nuevo durante otras dos horas hasta -10ºC, añadiéndose gota a gota durante un periodo de treinta minutos de esas dos horas una cantidad de ciclohexano como se describe anteriormente. La temperatura se mantiene a -10ºC durante dos horas. La suspensión final se filtra para proporcionar cristales blancos de la forma B.

En otro procedimiento alternativo, el material purificado se recoge en otro disolvente, preferentemente tolueno, en una cantidad entre aproximadamente 10 y 20 ml por g, y se calienta hasta de 75ºC a 80ºC durante 30 minutos y luego se deja enfriar hasta 20ºC y se mantiene durante 18 horas con agitación. Los cristales blancos de la forma B se recuperan de la suspensión mediante separación física. El rendimiento y la pureza de la forma B por estos procedimientos se consideran muy buenos.

Las figuras 1 a 3 son patrones de difracción de rayos X de polvo de las formas A, B y una mezcla de las mismas, respectivamente, del análogo objeto. La figura 4 es una comparación de patrones de difracción de rayos X de polvo simulados a partir de las estructuras monocristalinas de las formas A y B con el patrón real de cada una. Los patrones de difracción de rayos X se generaron de un Philips Xpert con una fuente generadora de 44 kV y 40 mA y un filamento de CuK\alpha de \lambda = 1,5406 \ring{A} a temperatura ambiente. En los resultados mostrados en las figuras 1-4, además de en las tablas 1 y 2 de a continuación que contienen los datos en forma resumida, las diferencias establecen claramente que las formas A y B del análogo de epotilona objeto poseen diferentes estructuras cristalinas. En las tablas, las intensidades del pico de 1 a 12 se clasifican como muy débiles, de 13 a 32 como débiles, de 33 a 64 como medias, de 65 a 87 como fuertes y de 88 a 100 como muy fuertes.

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TABLA 1 Valores para la forma A

5

TABLA 2 Valores para la forma B

6

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Las figuras 5 a 7 son los resultados de la espectroscopía Raman de las formas A, B y una mezcla de las mismas, respectivamente, del análogo objeto. Los espectros también muestran dos formas cristalinas distintas, en particular las bandas a 3130 cm^{-1} y 3115 cm^{-1}.

En la tabla 3 de a continuación se muestran las características físicas distintivas de las dos formas polimorfas. La calorimetría de disolución se determinó usando un microcalorímetro de Thermometrics en etanol a 25ºC. Las solubilidades se determinaron de la misma manera a 25ºC. Además, es evidente de ciertos datos, particularmente del calor de disolución, que la forma A es la más estable y, por tanto, se prefiere la forma A.

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TABLA 3

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La forma A y la forma B de los análogos de epotilona representados por la fórmula I anterior pueden caracterizarse adicionalmente por parámetros de la celda unidad obtenidos del análisis cristalográfico de rayos X de monocristales como se expone a continuación. En el capítulo 3 de Stout & Jensen, X-Ray structure Determination: A Practical Guide, MacMillian Co., Nueva York, NY (1968), puede encontrarse una explicación detallada de celdas unidad.

\newpage

\quad

Parámetros de la celda unidad de la forma A

Dimensiones de la celda

a = 14,152(6) \ring{A}

\quad

b = 30,72(2) \ring{A}

\quad

c = 6,212(3) \ring{A}

\quad

Volumen = 2701(4) A^{3}

Grupo espacial

P2_{1}2_{1}2_{1}

\quad

Ortorrómbico

Moléculas/celda unidad

4

Densidad (calculada) (g/cm^{3})

1,247

Punto de fusión

182-185ºC (descomposición)

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\quad

Parámetros de la celda unidad de la forma B

Dimensiones de la celda

a = 16,675(2) \ring{A}

\quad

b = 28,083(4) \ring{A}

\quad

c = 6,054(1) \ring{A}

\quad

Volumen = 2835(1) A^{3}

Grupo espacial

P2_{1}2_{1}2_{1}

\quad

Ortorrómbico

Moléculas/celda unidad

4

Densidad (calculada) (g/cm^{3})

1,187

Punto de fusión

191-199ºC (descomposición)

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Las diferencias entre las formas A y B del análogo de epotilona objeto se ilustran adicionalmente mediante las conformaciones de estado sólido de cada una como se ilustran en la figura 8 y la figura 9, respectivamente, basadas en las coordenadas atómicas fraccionarias enumeradas en las tablas 4 a 7 de a continuación.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 4 Coordenadas atómicas fraccionarias para el análogo de epotilona de fórmula I: forma A

8

9

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TABLA 4 (Continuación)

10

11

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TABLA 5 Posiciones de hidrógeno: forma A

12

13

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TABLA 6 Coordenadas atómicas fraccionarias para el análogo de epotilona de fórmula I: forma B

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15

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TABLA 6 (continuación)

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TABLA 7 Posiciones de hidrógeno: forma B

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Basado en los datos anteriores se concluye que las formas A y B son entidades cristalinas únicas.

Los siguientes ejemplos sirven para ilustrar la práctica de la invención.

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Ejemplo 1 [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-dihidroxi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4-aza-17-oxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona

En un matraz de fondo redondo de 125 ml con camisa de doble pared, dotado con un agitador mecánico, se combinó epotilona-B (5,08 g), azida de tetrabutilamonio (Bu_{4}NN_{3}) (3,55 g, 1,25 equivalentes), cloruro de amonio (1,07 g, 2 eq), agua (1,8 ml, 10 equivalentes), tetrahidrofurano (THF) (15 ml) y N,N-dimetilformamida (DMF) (15 ml). La mezcla se hizo inerte mediante purgado con nitrógeno por debajo de la superficie durante 15 minutos. En un segundo matraz se cargó tetrahidrofurano (70 ml), seguido por trimetilfosfina (PMe_{3}) (1,56 ml, 1,5 equivalentes), luego aducto de tris(dibencilidenacetona)-dipaladio(0)-cloroformo (Pd_{2}(dba)_{3}\cdotCHCl_{3}) (0,259 g, 0,025 equivalentes). La mezcla de catalizadores se agitó durante 20 minutos a temperatura ambiente, luego se añadió a la mezcla de epotilona-B. La mezcla combinada se agitó durante 4,5 horas a 30ºC. Entonces, la mezcla de reacción completa se filtró eliminando el cloruro de amonio sólido (NH_{4}Cl). El filtrado contenía ácido (\betaS,\varepsilonR,\xiS,\etaS,2R,3S)-3-[(2S,3E)-2-amino-3-metil-4-(2-metil-4-tiazolil)-3-butenil]-\beta,\xi-dihidroxi-\gamma,\gamma,\varepsilon,\eta,2-pentametil-\delta-oxooxiranoundecanoico, sal de tetrabutilamonio (1:1) con un área de HPLC del 94,1%.

En un matraz de 500 ml se combinó clorhidrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (EDCI) (3,82 g, 2 equivalentes), 1-hidroxi-7-benzotriazol hidratado (HOBt) (1,68 g, 1,1 equivalentes), carbonato potásico (1,38 g, 1 equivalente), N,N-dimetilfomamida (DMF) (40 ml) y tetrahidrofurano (THF) (160 ml). La mezcla se calentó hasta 35ºC y el filtrado de antes se añadió gota a gota a ésta durante un periodo de tres horas. Entonces, esta mezcla se agitó durante 1 hora adicional a 35ºC. Entonces se aplicó destilación a vacío a la mezcla de reacción para reducir el volumen de la misma hasta aproximadamente 80 ml. La disolución resultante se dividió entre 100 ml de acetato de etilo y 100 ml de agua. Entonces, la fase acuosa se retroextrajo con 100 ml de acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se extrajeron con 50 ml de agua y luego 20 ml de salmuera. La disolución del producto resultante se filtró a través de una almohadilla Zeta Plus® y luego se destiló para dar un aceite. El aceite bruto se disolvió en diclorometano (20 ml) y se lavó con agua para eliminar las trazas finales de disolventes de síntesis y se destiló para dar un sólido. El sólido bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice 60 (35 ml de sílice por gramo de producto teórico) con un eluyente que comprendía 88% de diclorometano (CH_{2}Cl_{2}), 10%-30% de acetato de etilo (EtOAc) y 2% de trietilamina (Et_{3}N). Las fracciones se analizaron mediante HPLC, se combinaron las más puras y se destilaron para dar el sólido purificado. El sólido resultante, aproximadamente 2 g, se suspendió en acetato de etilo (32 ml) durante 40 minutos a 75ºC, luego se añadió lentamente ciclohexano (C_{6}H_{12}) (16 ml) y la mezcla se enfrió hasta 5ºC. El sólido purificado se recogió en papel de filtro, se lavó con acetato de etilo/ciclohexano frío y se secó. El rendimiento fue de 1,72 g (rendimiento del 38%) del producto sólido blanco, [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-dihidroxi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4-aza-17-oxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona, con un área de HPLC del 99,2%.

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Ejemplo 2 [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R^{*},16S*]]-7,11-dihidroxi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazo-lil)etenil]-4-aza-17-oxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona, forma A

Se cargó un matraz de tres bocas de 250 ml con 0,61 g del compuesto del título que se había purificado (filtración en almohadilla de gel de sílice con EtOAc/hexano/Et_{3}N como eluyente, área de HPLC de 96,88) y acetato de etilo (28 ml, 46 ml/1 g). La suspensión resultante se calentó hasta 75ºC. Todos los sólidos se disolvieron después de que la suspensión se agitara a 75ºC durante 60 minutos. La disolución proporcionada se enfrió de 75ºC a 50ºC durante 120 minutos, añadiéndose cristales de siembra de la forma A a 60ºC. Los cristales aparecieron a 55ºC. A partir de entonces, la temperatura se enfrió hasta 20ºC durante 120 minutos, a la vez que se añadió ciclohexano (35 ml, 57 ml/1 g) gota a gota a la mezcla durante un periodo de 60 minutos. La suspensión obtenida se enfrió hasta -10ºC durante 120 minutos y se mantuvo durante 60 minutos adicionales. La suspensión se filtró y los cristales blancos proporcionados se secaron dando 0,514 g del compuesto del título, forma A, con un rendimiento del 84,3% con un área de HPLC de 99,4.

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Forma A - Procedimiento alternativo

Se cargó un matraz de tres bocas de 250 ml con 0,51 g del compuesto del título que se había purificado (filtración en almohadilla de gel de sílice con EtOAc/hexano/Et_{3}N como eluyente, área de HPLC de 96) y acetato de etilo (8,5 ml, 16,7 ml/1 g). La suspensión resultante se calentó hasta 80ºC. La disolución proporcionada se enfrió de 80ºC a 70ºC durante 60 minutos, añadiéndose cristales de siembra de la forma A a 70ºC. A partir de entonces, la temperatura se enfrió hasta 30ºC durante 180 minutos. Los cristales aparecieron a 65ºC. La disolución se enfrió adicionalmente hasta -10ºC durante 180 minutos, a la vez que se añadió ciclohexano (10,2 ml, 20 ml/1 g) gota a gota a la mezcla durante un periodo de 30 minutos. La suspensión obtenida se enfrió, se mantuvo durante 60 minutos adicionales. La suspensión se filtró y los cristales blancos proporcionados se secaron dando 0,43 g del compuesto del título, forma A, con un rendimiento del 84,3% con un área de HPLC de 99,7.

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Forma A - Procedimiento alternativo

Se cargó un matraz de tres bocas de 500 ml con 18,3 g de una mezcla de las formas A y B que se habían purificado (filtración en almohadilla de gel de sílice con EtOAc/diclorometano/Et_{3}N como eluyente, área de HPLC de 99) y acetato de etilo (183 ml, 10 ml/1 g). La suspensión resultante se calentó hasta 75ºC, se añadieron cristales de siembra de la forma A y la temperatura se mantuvo durante 30 minutos. Se añadió ciclohexano (90,2 ml, 5 ml/1 g) gota a gota a la mezcla manteniendo la temperatura a 70ºC. Después de finalizarse la adición, la temperatura se disminuyó hasta 20ºC y la mezcla se mantuvo con agitación durante otras 18 horas. A partir de entonces, la temperatura se disminuyó hasta 5ºC y se mantuvo durante 5 horas. La suspensión se filtró y los cristales blancos proporcionados se secaron dando 16,1 g del compuesto del título, forma A, con un rendimiento del 88% con un área de HPLC de 99,49.

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Ejemplo 3 [1S-[1R*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*]]-7,11-dihidroxi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[1-metil-2-(2-metil-4-tiazolil)etenil]-4-aza-17-oxabiciclo[14.1.0]heptadecano-5,9-diona, forma B

Se cargó un matraz de tres bocas de 250 ml con 0,108 g del compuesto del título que no se había purificado como en el ejemplo 2, N,N-dimetilformamida (0,0216 g) y acetato de etilo (5 ml, 46 ml/1 g). La suspensión resultante se calentó hasta 80ºC y se agitó durante 30 minutos para disolver todos los sólidos. La disolución proporcionada se enfrió de 80ºC a 30ºC durante 120 minutos, apareciendo los cristales a 38ºC. Se añadió ciclohexano (7,5 ml, 69,5 ml/1 g) gota a gota a la mezcla durante un periodo de 30 minutos, a la vez que la temperatura se enfrió hasta -10ºC durante 60 minutos, y se mantuvo durante 120 minutos adicionales. La suspensión se filtró y los cristales blancos proporcionados se secaron dando 0,082 g del compuesto del título, forma B, con un rendimiento del 76% con un área de HPLC de 99,6.

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Forma B - Procedimiento alternativo

Se cargó un matraz de tres bocas de 250 ml con 0,458 g del compuesto del título que no se había purificado como en el ejemplo 2 y contenía aproximadamente el 6% de N,N-dimetilformamida y acetato de etilo (10 ml, 21,8 ml/1 g). La suspensión resultante se calentó hasta 78ºC y se agitó durante 30 minutos para disolver todos los sólidos. La disolución proporcionada se enfrió de 78ºC a 10ºC durante 120 minutos. Se añadieron cristales de siembra de la forma A a 10ºC. Se añadió ciclohexano (20 ml, 43,7 ml/1 g) gota a gota a la mezcla durante un periodo de 60 minutos, a la vez que la temperatura se enfrió hasta -10ºC durante 120 minutos, y se mantuvo durante 120 minutos adicionales. La suspensión se filtró y los cristales blancos proporcionados se secaron dando 0,315 g del compuesto del título, forma B, con un rendimiento del 68,8% con un área de HPLC de 98,2.

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Forma B - Procedimiento alternativo

Una botella de Wheaton de 5 ml se cargó con 250 mg del compuesto del título que no se había purificado como en el ejemplo 2 y tolueno (3,75 ml, 15 ml/g) y la suspensión resultante se calentó hasta 75ºC y se mantuvo durante 30 minutos. La suspensión resultante se dejó enfriar hasta 20ºC y se mantuvo a esa temperatura durante 18 horas con agitación. La suspensión se filtró y los cristales blancos proporcionados se secaron dando 150 mg del compuesto del título, forma B, con un rendimiento del 60% con un área de HPLC de 99,2.

Claims (21)

1. Un polimorfo cristalino de un análogo de epotilona representado por la fórmula

20

que comprende la forma A caracterizada por:

parámetros de la celda unidad aproximadamente iguales a los siguientes:

Dimensiones de la celda

a = 14,152(6) \ring{A}

\quad

b = 30,72(2) \ring{A}

\quad

c = 6,212(3) \ring{A}

\quad

Volumen = 2701(4) A^{3}

Grupo espacial

P2_{1}2_{1}2_{1}

\quad

Ortorrómbico

Moléculas/celda unidad

4

Densidad (calculada) (g/cm^{3})

1,247

Punto de fusión

182-185ºC (descomposición); y

picos característicos en el patrón de difracción de rayos X de polvo a valores de dos teta (CuK\alpha \lambda = 1,5406 \ring{A} a 22ºC): 5,69, 6,76, 8,38, 11,43, 12,74, 13,62, 14,35, 15,09, 15,66, 16,43, 17,16, 17,66, 18,31, 19,03, 19,54, 20,57, 21,06, 21,29, 22,31, 23,02, 23,66, 24,18, 14,98, 25,50, 26,23, 26,23, 26,46, 27,59, 28,89, 29,58, 30,32, 31,08 y 31,52; o

la forma B se caracteriza por:

parámetros de la celda unidad aproximadamente iguales a los siguientes:

Dimensiones de la celda

a = 16,675(2) \ring{A}

\quad

b = 28,083(4) \ring{A}

\quad

c = 6,054(1) \ring{A}

\quad

Volumen = 2835(1) A^{3}

Grupo espacial

P2_{1}2_{1}2_{1}

\quad

Ortorrómbico

Moléculas/celda unidad

4

Densidad (calculada) (g/cm^{3})

1,187

Punto de fusión

191-199ºC, descomposición; y

picos característicos en el patrón de difracción de rayos X de polvo a valores de dos teta (CuK\alpha \lambda = 1,5406 \ring{A} a 22ºC): 6,17, 10,72, 12,33, 14,17, 14,93, 15,88, 16,17, 17,11, 17,98, 19,01, 19,61, 20,38, 21,55, 21,73, 22,48, 23,34, 23,93, 24,78, 25,15, 25,90, 26,63, 27,59, 28,66, 29,55, 30,49 y 31,22.

2. Un polimorfo cristalino de un análogo de epotilona representado por la fórmula

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21

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que comprende la forma A caracterizada sustancialmente por difracción de rayos X de polvo como se muestra en la figura 1 de a continuación y un espectro Raman como se muestra sustancialmente en la figura 5 de a continuación; o la forma B caracterizada sustancialmente por difracción de rayos X de polvo como se muestra en la figura 2 de a continuación y un espectro Raman como se muestra sustancialmente en la figura 6 de a continuación:

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22

220

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23

230

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3. Un polimorfo cristalino de un análogo de epotilona representado por la fórmula

24

que comprende la forma A caracterizada por una solubilidad en agua de 0,1254, una solubilidad en una disolución acuosa al 3% de polisorbato 80 de 0,2511, un punto de fusión con descomposición entre 182-185ºC y un calor de disolución de 20,6 kJ/mol; o la forma B caracterizada por una solubilidad en agua de 0,1907, una solubilidad en una disolución acuosa al 3% de polisorbato 80 de 0,5799, un punto de fusión con descomposición entre 191-199ºC y un calor de disolución de 9,86 kJ/mol.

4. Un polimorfo cristalino según las reivindicaciones 1, 2 ó 3, en el que dicho polimorfo es la forma A.

5. Un polimorfo cristalino según las reivindicaciones 1, 2 ó 3, en el que dicho polimorfo es la forma B.

6. Un material cristalino que comprende una mezcla de la forma A y la forma B según la reivindicación 1, 2 ó 3.

7. Un procedimiento para producir un polimorfo cristalino que es la forma A del análogo de epotilona representado por la fórmula I en la reivindicación 1 que comprende calentar una suspensión de dicho análogo representado por la fórmula I en de 8 a 16 ml de acetato de etilo por gramo de dicho análogo a aproximadamente 75ºC, manteniendo la temperatura durante aproximadamente una hora, añadir una cantidad de ciclohexano en una relación respecto a la cantidad de acetato de etilo de 1:2 a 2:2, dejar que la mezcla se enfríe hasta temperatura ambiente, mantener la mezcla con agitación de 12 a 96 horas, enfriarla adicionalmente hasta aproximadamente 5ºC durante aproximadamente dos horas y recuperar la forma A cristalina de la misma.

8. Un procedimiento según la reivindicación 7, en el que la cantidad de ciclohexano añadido está en una relación 1:2 respecto a la cantidad de acetato de etilo utilizado para formar dicha suspensión.

9. Un procedimiento según la reivindicación 7, en el que dicha suspensión de dicho análogo representado por la fórmula I en acetato de etilo se calienta hasta aproximadamente 75ºC, se añaden cristales de siembra a la misma y la mezcla se mantiene durante aproximadamente 30 minutos, tras lo que se añade dicha cantidad de ciclohexano a la misma, a la vez que se mantiene la mezcla a aproximadamente 70ºC, enfriar la mezcla hasta temperatura ambiente, mantener la mezcla con agitación durante aproximadamente 18 horas, enfriarla adicionalmente hasta aproximadamente 5ºC durante aproximadamente dos horas y recuperar la forma A cristalina de la misma.

10. Un procedimiento según la reivindicación 7, en el que dicha suspensión de dicho análogo representado por la fórmula I en acetato de etilo se calienta hasta aproximadamente 75ºC durante al menos una hora hasta que se forma una disolución, enfriar dicha disolución hasta aproximadamente 50ºC durante aproximadamente dos horas, añadir dichos cristales de siembra a la misma cuando la temperatura alcanza aproximadamente 60ºC, enfriar la disolución hasta aproximadamente 30ºC durante aproximadamente tres horas, reducir adicionalmente la temperatura de la disolución hasta -10ºC durante aproximadamente tres horas, añadiéndose gota a gota durante una hora de aquellas tres horas dicha cantidad de ciclohexano a la misma, mantener la mezcla resultante a -10ºC durante aproximadamente una hora y recuperar la forma A cristalina de la misma.

11. Un procedimiento para producir un polimorfo cristalino que es la forma B del análogo de epotilona representado por la fórmula I en la reivindicación 1 que comprende calentar una suspensión de dicho análogo representado por la fórmula I en de 40 a 50 ml de acetato de etilo por gramo de dicho análogo hasta de 75ºC a 80ºC, mantener la temperatura durante aproximadamente una hora, formándose así una disolución, mantener la disolución a temperatura durante aproximadamente 30 minutos, enfriar la disolución hasta aproximadamente 30ºC durante aproximadamente dos horas, reducir adicionalmente la temperatura de la disolución hasta -10ºC durante aproximadamente una hora, añadiéndose durante la misma gota a gota a la disolución una cantidad de ciclohexano en una relación respecto a la cantidad de acetato de etilo de 1:2 a 2:2 durante un periodo de aproximadamente treinta minutos, mantener la mezcla resultante a -10ºC durante aproximadamente dos horas y recuperar la forma B cristalina de la misma.

12. Un procedimiento según la reivindicación 11, en el que dicha suspensión de dicho análogo representado por la fórmula I en acetato de etilo se calienta hasta aproximadamente 78ºC, formándose así una disolución, enfriar la disolución hasta aproximadamente 10ºC durante aproximadamente dos horas, añadir cristales de siembra cuando la temperatura alcance 10ºC, reducir adicionalmente la temperatura de la disolución hasta -10ºC durante aproximadamente dos horas, añadiéndose durante las mismas gota a gota a la disolución dicha cantidad de ciclohexano durante un periodo de aproximadamente treinta minutos, mantener la mezcla resultante a -10ºC durante aproximadamente dos horas y recuperar la forma B cristalina de la misma.

13. Un procedimiento para producir un polimorfo cristalino que es la forma B del análogo de epotilona representado por la fórmula I en la reivindicación 1 que comprende calentar una suspensión de dicho análogo representado por la fórmula I en de 10 a 20 ml de tolueno por gramo de dicho análogo hasta de 75ºC a 80ºC, mantener la temperatura durante aproximadamente 30 minutos, enfriar la mezcla hasta aproximadamente 20ºC, mantener la temperatura durante aproximadamente 18 horas con agitación y recuperar la forma B cristalina de la misma.

14. Una composición farmacéutica que comprende como principio activo una cantidad eficaz de un polimorfo cristalino según las reivindicaciones 1, 2 ó 3 y uno o más vehículos, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables de la misma.

15. Una composición farmacéutica según la reivindicación 14, en la que dicho polimorfo cristalino es la forma A.

16. Una composición farmacéutica según la reivindicación 14, en la que dicho polimorfo cristalino es la forma B.

17. Una composición farmacéutica según la reivindicación 14, en la que dicho polimorfo cristalino es una mezcla de la forma A y la forma B.

18. Uso de un polimorfo cristalino según las reivindicaciones 1, 2 ó 3 para la fabricación de un medicamento para tratar cáncer u otras enfermedades proliferativas.

19. Uso según la reivindicación 18, en el que dicho polimorfo cristalino es la forma A.

20. Uso según la reivindicación 18, en el que dicho polimorfo cristalino es la forma B.

21. Uso según la reivindicación 18, en el que dicho polimorfo cristalino se administra por vía parenteral.