ES2219690T3

ES2219690T3 - Sales de derivados de amidina y de inhibidor de ciclooxigenasa, su procedimiento de preparacion como medicamentos y las composiciones farmaceuticas que los contienen.

Info

Publication number: ES2219690T3
Application number: ES96925786T
Authority: ES
Inventors: Pierre-Etienne Chabrier De Lassauniere; Colette Broquet
Original assignee: Societe de Conseils de Recherches et dApplications Scientifiques SCRAS SAS
Current assignee: Ipsen Pharma SAS
Priority date: 1995-07-15
Filing date: 1996-07-15
Publication date: 2004-12-01
Anticipated expiration: 2016-07-15
Also published as: CN1190890A; CA2227034A1; PT839041E; NO980178D0; PL185375B1; CZ293676B6; DE69632193T2; CN1187056C; EP0839041A1; ZA965969B; HUP9901331A2; JPH11509540A; US6063807A; CZ7398A3; AU704373B2; IL122737A0; DE69632193D1; NO980178L; HUP9901331A3; ATE264107T1

Abstract

LA PRESENTE INVENCION ESTA RELACIONADA CON SALES DE DERIVADOS DE LA AMIDINA Y DE INHIBIDORES DE LA CICLOOXIGENASA, CON LOS PROCEDIMIENTOS DE PREPARACION DE AQUELLAS, CON LAS COMPOSICIONES FARMACEUTICAS QUE LAS INCORPORAN Y CON SUS POSIBLES APLICACIONES, PRINCIPALMENTE COMO INHIBIDORES DE LA NO SINTASA Y CICLOOXIGENASA.

Description

Sales de derivados de amidina y de inhibidor de ciclooxigenasa, su procedimiento de preparación como medicamentos y las composiciones farmacéuticas que los contienen.

La presente invención se refiere a nuevos compuestos que presentan una doble actividad biológica, a saber que inhiben a la vez la formación de monóxido de nitrógeno (NO) y la actividad de ciclooxigenasas, un procedimiento para su preparación, composiciones farmacéuticas que los contienen y su utilización principalmente como inhibidores de NO-sintasa y de ciclooxigenasa.

Los inhibidores de ciclooxigenasa o de medicamentos análogos de aspirina, es decir ácido acetilsalicílico y ácido salicílico, derivados de indol metilado, tales como indometacina (DCI del ácido [1-(4-cloro-benzoil)-5-metoxi-2-metil-1H-indol-3-il]-acético y sulindaco (DCI del ácido [5-fluoro-2-metil-1-[[4-metil-sulfinil)fenil]- metilen]1H-inden-3-il]-acético, derivados de ácidos N-fenilantranílícos (meclofenamato, fenamatos), derivados de ácido propiónico tales como ibuprofeno (DCI del ácido p-isobutilhidratrópico), naproxeno, fenoprofeno, se emplean ampliamente y han dado pruebas suficientes como medicamento eficaz en terapia de inflamación, con, si embargo, algunos efectos secundarios indeseables a dosis elevadas (R. Flower, S. Moncada y J. Vane. Mechanism of action of aspirin-like drugs- In the pharmacological basis of therapeutics Goodman and Gilman, 1985, 29, 674-715). Además, estos compuestos se han empleado a la vez en el tratamiento agudo y profiláctico de la migraña. El valor de estos medicamentos es innegable, bien que sus respuestas terapéuticas sean a menudo incompletas y que, en algunos enfermos, el tratamiento por tales compuestos no esté adaptado. En razón de sus propiedades antiinflamatoria y antiagregante de plaquetas, estos compuestos se han empleado igualmente para trombosis y con una reducción evidente del edema, en los modelos de isquemias de cerebro y, por consecuencia, se proponen en el tratamiento y la prevención de infartos, conmociones y enfermedades cerebrovasculares (W. Armstrong Recent trends in research and treatment of stroke, SCRIP, PJB publications, 1991).

La actividad biológica de los inhibidores de NO-sintasa no ha sido descubierta hasta recientemente y sus uso terapéutico potencial está solamente en estudio. Estas sustancias, cuyas estructuras se representan por análogos de
L-arginina y descritas en la patente danesa 3041/90, son inhibidores de la producción de óxido nítrico (NO).

Nuestro conocimiento actual sobre el NO ha sido revisada en 1991, por Moncada et al., (S. Moncada, R. M. J. Palmer, E. A. Higgs: Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology - Pharmacological reviews 43, 2, 109-142) y más recientemente por Kerwin et al. (Kerwin J., Lancaster J., Feldman P., Nitric oxide: a new paradigm for second messengers, J. Med. Chem. (1995). vol. 38, 22. 4343-4362). En sustancia, parece que el NO sirve de mecanismo de transducción para la guanilato-ciclasa soluble en las plaquetas, el sistema nervioso, y de molécula efectora en las reacciones inmunológicas en muchas células y tejidos, incluido los macrófagos y los neutrófilos. El NO se produce enzimáticamente a partir de L-arginina, por una enzima llamada NO-sintasa. Esta enzima existe bajo dos formas: una constitutiva (endotelial y neuronal) y la otra inducible. En ciertas patologías, se puede producir una producción excesiva de NO, como ya se ha demostrado a lo largo de un choque, y tal como se ha descrito en la patente citada precedentemente. En este contexto, los inhibidores de la NO-sintasa son medicamentos eficaces para prevenir consecuencias vasculares y la mortalidad causadas por una enfermedad, en particular cuando se combinan con inhibidores de ciclooxigenasa como aspirina, indometacina o meclofenamato.

Los efectos benéficos de la combinación de dos principios activos en la misma molécula, son susceptibles de producirse para los pacientes que sufren de otras patologías, como por ejemplo:

\bullet trastornos cardiovasculares y cerebrovasculares que comprenden por ejemplo arterioesclerosis, migraña, hipertensión arterial, choc séptico, infartos cardiacos o cerebrales de origen isquémico o hemorrágico, isquemias y trombosis;

\bullet trastornos del sistema nervioso central o periférico como por ejemplo enfermedades neurodegenerativas entre las que se pueden citar principalmente infartos cerebrales, demencias seniles, incluido la enfermedad de Alzheimer, corea de Huntington, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Creutzfeld Jacob, esclerosis lateral amiotrópica pero también el dolor, traumatismos cerebrales o de la espina dorsal, adicción a los opiáceos, al alcohol y a las sustancias que inducen una costumbre, trastornos de la erección y de la reproducción, desórdenes cognitivos, encefalopatías;

\bullet enfermedades proliferativas e inflamatorias como por ejemplo arterioesclerosis, hipertensión pulmonar, glomerulonefrita, hipertensión portal, soriasis, artrosis y artritis reumática, fibrosis, amiloidosis, inflamaciones del sistema gastrointestinal (colitis, enfermedad de Crohn) o del sistema pulmonar y de las vías aéreas (asma, sinusitis);

\bullet transplantes de órganos;

\bullet enfermedades autoinmunes y virales como por ejemplo lupus, sida, infecciones parasitarias y virales, diabetes, esclerosis en placa;

\bullet cáncer; o

\bullet todas la patologías caracterizadas por una producción o una disfunción de NO y/o de las ciclooxigenasas.

Así la patente GB-A-2 263 111 describe sales de derivados de amidina e inhibidor de ciclooxigenasa, su procedimiento de preparación así como su utilización en el tratamiento de trastornos cardiovasculares y cerebrovasculares, de diversas formas de inflamación o trastornos del sistema inmunitario. Los inhibidores de ciclooxigenasa descritos en la patente son: ácido salicílico, ácido acetilsalicílico, ácido mefenámico, ibuprofeno, indometacina y sulindaco; en cuanto a los derivados de amidina, se representan por análogos de arginina (L-NO, L-NMMA, L-NAME).

La invención tiene así por objeto los productos de fórmula general I

(I)A.B

en forma de sal, en la que

A representa un inhibidor de ciclooxigenasa que presenta una función carboxi;

B representa un compuesto de fórmula general I_{B}

1

en la que

R_{1} representa H, radical nitro o fenilo, estando el radical fenilo eventualmente sustituido con uno o varios sustituyentes elegidos entre los radicales halo, ciano, nitro, trifluorometilo, alquilo inferior o alcoxi inferior;

R_{2} representa un radical amino sustituido con un radical amino o alquilo inferior.

En las definiciones indicadas anteriormente, el término halo representa el radical flúor, cloro, bromo o yodo, preferentemente flúor o cloro.

La expresión alquilo inferior representa preferentemente un radical alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono lineal o ramificado y en particular un radical alquilo que tiene de 1 a 4 átomos de carbono tales como los radicales metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, y terc-butilo. Los radicales alcoxi inferiores pueden corresponder a los radicales alquilo indicados anteriormente. Se prefieren los radicales metoxi, etoxi o isopropiloxi.

La invención tiene más particularmente por objeto los productos de fórmula general I tal como se ha definido anteriormente, caracterizada porque el compuesto A se elige entre salicilatos tales como el ácido salicílico y sus derivados, indometacina, sulindaco, fenamatos y derivados del ácido propiónico.

Entre los derivados del ácido salicílico, se pueden citar los compuestos obtenidos por esterificación de la función carboxi del ácido salicílico, por ejemplo, salicilato de metilo, compuestos obtenidos por sustitución del radical hidroxi del ácido salicílico como, por ejemplo, ácido acetilsalicílico o bien compuestos obtenidos por adición de sustituyente(s) sobre sitios libres del radical fenilo del ácido salicílico, como por ejemplo, diflunisal. Entre los fenamatos, se pueden citar ácido mefenámico, meclofenámico, flufenámico y tolfenámico Como ejemplos de derivados del ácido propiónico se pueden citar los compuestos tales como ibuprofeno, naproxeno, fenoprofeno, fenbufeno, flurbiprofeno, indoprofeno, ketoprofeno o suprofeno.

La invención tiene particularmente por objeto los compuestos de fórmula general 1 tal como se ha descrito anteriormente, caracterizada porque

-: A representa ácido salicílico, salicilato de metilo, ácido acetilsalicílico, indometacina, sulindaco, ácido mefenámico, ácido meclofenámico o ibuprofeno; y

-: B es de fórmula general (I_{B}) tal como se ha definido anteriormente en la que R_{1} representa H, radical nitro o fenilo, estando el radical fenilo eventualmente sustituido con uno o varios sustituyentes elegidos entre los radicales cloro, flúor, ciano, nitro, trifluorometilo, metilo, etilo, metoxi, etoxi o isopropiloxi; y R_{2} representa un radical hidrazino; metilamino o etilamino.

Más particularmente, la invención tiene por objeto los productos descritos a continuación en los ejemplos, en particular los productos que responden a las fórmulas siguientes:

- salicilato de amiguanidina;

- ibuprofenato de aminoguanidina;

- indometacinato de aminoguanidina;

- acetilsalicilato de metilguanidina;

- salicilato de metilguanidina;

- ibuprofenato de metilguanidina; y

- mefenamato de metilguanidina.

La invención tiene igualmente por objeto un procedimiento de preparación de productos de fórmula general I tal como se han definido anteriormente, caracterizado porque se hace reaccionar en agua, a una temperatura comprendida entre la temperatura ambiente y 70ºC, una mezcla del compuesto de fórmula A tal como se ha definido anteriormente con un compuesto de fórmula B tal como se ha definido anteriormente.

Durante la puesta en marcha del procedimiento, el compuesto de fórmula A puede emplearse tal cual o en forma de sal como, por ejemplo, sal de sodio. De mismo, el compuesto de fórmula B puede emplearse tal cual o en forma como, por ejemplo, su bicarbonato o su hidrocloruro.

Los productos de fórmula A son conocidos o pueden fabricarse por métodos conocidos por el experto en la técnica. Los productos de fórmula B pueden obtenerse aplicando los métodos de preparación de amidinas conocidas por el experto en la técnica (Schwan T. J. et coll., J. Pharm. Sci. (1975), 64, 337-338; Roger R et coll., Chem. Rev. 61, 179, (1961); Tetrahedron, 29 (14), 2147-51 (1973); Patai S., Chem. Amidines Imidates. vol. 1, 283-348 (1975); Patai S., Chem. Amidines Imidates, vol.2 339-366 (1990)).

Los compuestos de la presente invención poseen interesantes propiedades farmacológicas. Presentan una doble actividad biológica, a saber que inhiben a la vez el proceso de la L-arginina / óxido nítrico (NO) y el proceso de la ciclooxigenasa. Los compuestos de la presente invención pueden emplearse así en diferentes aplicaciones terapéuticas.

Teniendo en cuenta el papel potencial de NO-sintasa y de la ciclooxigenasa en la fisiopatología, los compuestos según la invención pueden producir efectos benéficos y favorables en el tratamiento de:

-: trastornos cardiovasculares y cerebrovasculares, que comprenden, por ejemplo, migrañas, congestiones cerebrales, infartos, isquemias, choques sépticos, endotoxínicos y hemorrágicos, dolores;

-: diversas formas de inflamación, que comprenden, por ejemplo, fiebres reumáticas agudas, artritis reumáticas u otros tipos de artritis, osteo-artritis, asma;

-: trastornos del sistema inmunitario, que comprenden infecciones virales o no virales, enfermedades autoinmunes y todas las patologías caracterizadas por una producción excesiva de óxido nítrico y/o de metabolitos del ácido araquídico.

Se encontrará, a continuación, en la parte experimental, una ilustración de las propiedades farmacológicas de los compuestos de la invención.

Estas propiedades hacen los compuestos de fórmula I aptos para una utilización farmacéutica. La presente solicitud de patente tiene igualmente por objeto, a título de medicamentos, los productos de fórmula I tal como se ha definido anteriormente así como las composiciones farmacéuticas que contienen, a título de principio activo, uno al menos de los medicamentos tal como se han definido anteriormente.

La invención se refiere así a las composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de la invención en asociación con un soporte farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede estar en forma de un sólido, por ejemplo, polvos, gránulos, comprimidos, cápsulas o supositorios. Los soportes sólidos apropiados pueden ser, por ejemplo, fosfato de calcio, estearato de magnesio, talco, azúcares, lactosa, dextrina, almidón, gelatina, celulosa, celulosa de metilo, celulosa de carboximetilo de sodio, polivinilpirrolidina y cera.

Las composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de la invención pueden también presentarse en forma líquida, por ejemplo, soluciones, emulsiones, suspensiones o jarabes. Los soportes líquidos apropiados pueden ser, por ejemplo, agua, disolventes orgánicos tales como glicerol o glicoles, así como sus mezclas, en proporciones variadas, en agua, adicionadas a aceites o grasas farmacéuticamente aceptables. Las composiciones farmacéuticas según la invención pueden administrarse según modos de administración clásica tal como administración oral o por inyección intramuscular, intraperitoneal, intravenosa o subcutánea.

La invención tiene igualmente por objeto la utilización de productos de fórmula I tal como se ha definido anteriormente, para la preparación de medicamentos destinados a tratar trastornos cardiovasculares y cerebrovasculares, de medicamentos destinados a tratar diversas formas de inflamación, de medicamentos destinados a tratar trastornos del sistema inmunitario.

Los ejemplos siguientes se presentan para ilustrar los procedimientos anteriores.

Parte experimental Ejemplo 1 Salicilato de aminoguanidina

Se disolvieron, calentando aproximadamente a 70ºC, 420 mg (2,5 mmoles) de bicarbonato de aminoguanidina en 25 ml de agua, luego se añadió, agitando, una disolución acuosa de 400 mg de salicilato de sodio. Se calentó la mezcla durante 20 minutos, luego se liofilizó (polvo blanco; p.f. = 148ºC).

Ejemplo 2 Ibuprofenato de aminoguanidina

Se disolvieron, calentando aproximadamente a 70ºC, 420 mg (2,5 mmoles) de bicarbonato de aminoguanidina en 25 ml de agua. Se añadió una disolución acuosa de 570 mg de sal de sodio de ibuprofeno. Se prolongó el calentamiento durante 20 minutos, luego se liofilizó (polvo blanco; p.f. = 134ºC).

Ejemplo 3 Indometacinato de aminoguanidina

Se procedió como se describe en el ejemplo 1, pero empleando indometacinato en lugar de salicilato de sodio (polvo amarillo; p.f. = 196ºC).

Ejemplo 4 Acetilsalicilato de metilguanidina

Se disolvieron 450 mg (2,5 mmoles) de ácido acetilsalicílico en 20 ml de agua que contenía 2,5 ml de NaOH 1N. Se añadieron, luego, 237,8 mg de hidrocloruro de metilguanidina en 10 ml de agua. Se continúo la agitación durante 15 minutos. Se obtuvo una solución límpida. La liofilización proporcionó un polvo blanco (p.f. = 153ºC).

RMN-^{1}H (100 MHz, D_{2}O): 7,3- 6,6 (m, 4H, aromático); 2,3 (s, 3H, NCH_{3}); 1,8 (s, 3H, COCH_{3}).

Ejemplo 5 Salicilato de metilguanidina

Se disolvieron, en caliente, 345 mg (2,5 mmoles) de ácido salicílico en 20 ml de agua que contenía 2,5 ml de NaOH 1N. Se añadió una disolución de hidrocloruro de metilguanidina (2,5 mmoles) en 10 ml de agua. Se continúo la agitación a 40ºC durante 10 minutos. La liofilización proporcionó un polvo blanco muy voluminoso (p.f. = 140ºC).

RMN-^{1}H (100 MHz, D_{2}O): 7-6,8 (m, 4H, aromático); 2,4 (s, 3H, NCH_{3}).

Ejemplo 6 Ibuprofenato de metilguanidina

Se disolvieron, en caliente, 2, 5 mmoles de ibuprofeno en 20 ml de agua que contenía 2,5 ml de NaOH 1N. Se añadió una disolución de hidrocloruro de metilguanidina (2,5 mmoles) en 10 ml de agua. Se calentó agitando a 60ºC durante 15 minutos. La liofilización proporcionó un polvo blanco (p.f. = 174ºC).

^{1}H-RMN (100 MHz, D_{2}O): 7,2 (m, 4H, aromático); 3,4 (q, 1H, C_{6}H_{6}-CH(Me)-CO); 2,6 (s, 3H, NCH_{3}); 2,25 (d, 2H, CH_{2}C_{6}H_{6}); 1,6 (m, 1H, CH(CH_{3})_{2}); 1,2 (d, 3H, -CH(CH_{3})-CO_{2}H); 0,8 (d, 6H, 2CH_{3}).

Ejemplo 7 Mefenamato de metilguanidina

Se procedió como se describe en el ejemplo 6, pero empleando ácido mefenámico en lugar de ibuprofeno. En el enfriamiento, el compuesto precipitó. Se filtró el producto (p.f. = 124ºC).

^{1}H-RMN (100 MHz, D_{2}O): 8,1 (m, 1H, H en o de CO_{2}H); 7,2-6,8 (m, 6H, 2C_{6}H_{6}); 2,9 (s, 3H, NCH_{3}); 2,4 y 2,3 (d, 2CH_{3}C_{6}H_{6}).

Empleando el procedimiento indicado anteriormente, se pueden preparar igualmente los productos siguientes, que son parte igualmente de la invención y que constituyen los productos preferidos:

TABLA 1

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Estudio farmacológico de los productos de la invención

Los compuestos de la invención se someten a ensayos biológicos in vitro, con el fin de probar su actividad para bloquear la NO-sintasa inducible y la ciclooxigenasa. Se han comparado con sustancias de referencia tal como aminoguanidina, L-nitroarginina, ibuprofeno, indometacina, y ácido acetilsalicílico.

1) Efecto in vitro sobre la NO-sintasa inducible de macrófagos murinos J774A1

El ensayo consistió en medir la transformación por la NO-sintasa de la L-arginina en L-citrulina según el método de Bredt y Snyder (Proceedings of the National Academy of Sciences USA 87, 682-685, 1990). Los macrófagos murinos J774A1 producen una gran cantidad de NO después de activación por lipopolisacáridos (LPS) e interferón-\gamma
(IFN-\gamma). Las células se cultivaron en un medio DMEM (Dubelcco's Modified Eagle's Médium) enriquecido con 10% de suero de ternero fetal a 37ºC bajo una atmósfera de 5% de CO_{2} después de activación por LPS e IFN-\gamma. Se sembraron a razón de 5000 células/cm^{2} en frascos de 150 cm^{2}. Las incubaciones se hicieron en presencia de LPS (1 \mug/ml) y de IFN-\gamma murinos (50 U/ml) en DMEM enriquecido con 10% de suero de ternero fetal. La NO-sintasa se aisló con un tampón de extracción (HEPES 50 mM, pH 7,4, ditiotreitol 0,5 mM, pepstatina A 1 mg/ml, leupeptina 1 mg/ml, inhibidor de tripsina de soja 1 mg/ml, antipaína 1 mg/ml y PMSF 10 mg/ml). Después de someter al ultrasonidos en el tampón de extracción a 4ºC, los homogenatos se ultracentrifugan (100 000 g a 4ºC durante 1 hora).

La dosificación se hizo en tubos de ensayo de vidrio en los que se distribuyeron 10 \mul de tampón de incubación que contenía 100 mM de HEPES, pH 7,4, 1 mM de ditiotreitol, 2,5 mM de CaCl_{2}, 10 \muM de tetrahidrobiopterina, FAD 10 \muM, BSA 1 mg/ml, 2 mM de NADPH reducido, 2 mM de EDTA y 2,5 mM de CaCl_{2}. Se añadieron 25 \mul de una disolución que contenía 100 nM de arginina tritiada (actividad específica: 54,4 Ci/mmol, Amersham) y 40 \muM de arginina no radiactiva. La reacción se inició al añadir 50 \muM de homogenatos, siendo el volumen final de 200 \mul (los 25 \mul que faltaban son bien del agua, o bien del producto ensayado). Después de 15 minutos, la reacción se paró con 2 ml de tampón (20 mM de HEPES, pH 5,5, 2 mM de EDTA). Después de pasar las muestras sobre un columna de 1 ml de resina DOWEX, la radiactividad se cuantificó con un espectofotómetro de centelleo líquido.

Los resultados se expresan en valor de CI_{50} y están resumidos en la tabla del párrafo 2 (primera columna de los resultados denominados "NO-sintasa inducible, formación de citrulina").

2) Efecto in vitro sobre la producción de nitritos por los macrófagos murinos J774A1

Este ensayo se empleó para medir la actividad inhibidora de los productos sobre la NO-sintasa inducible de células en cultivos. Las células se cultivaron en medio DMEM (Dubelcco's Modified Eagle's Médium) enriquecido con 10% de suero de ternero fetal a 37ºC bajo una atmósfera de 5% de CO_{2}. Para los experimentos, se repartieron placas de 96 pocillos (50 000 células por pocillos) y se incubaron en DMEM sin rojo de fenol a 10% de suero de ternero fetal con LPS (1 \mug/ml) y IFN-\gamma murino (50 U/ml) en presencia o ausencia de los productos a ensayar. Después de 48 horas, la concentración de nitritos en los medios de cultivo, productos de degradación de NO, se midieron por un método colorimétrico según Green et al., Analytical Biochemistry 126, 131- 138 (1982). Los resultados se expresan en valor de CI_{50} y están resumidos en la tabla del párrafo 2 (segunda columna de los resultados denominados "NO- sintasa inducible, formación de nitritos").

3

3) Efecto in vitro sobre la producción de nitritos y de PGE2 por células microgliales de rata

Las células microgliales se aislaron a partir de cultivos de células gliales que provenían de cortex de rata Wistar recién nacida según el protocolo de Théry et coll. (1991). Las células microgliales se sembraron en placas de 24 pocillos a razón de 5.10^{5} células por ml y 0,5 ml por pocillos. Las células microgliales se incubaron en presencia de LPS (10 \mug/ml) y de inhibidores durante 24 horas a 37ºC bajo una atmósfera a 5% de CO_{2}. Después de 24 horas, los líquidos sobrenadantes se retiraron con el fin de medir las concentraciones de nitritos y de PGE_{2}. La PGE_{2} se valoró con ayuda de un valorador radioinmunológico comercializado por NEN según el modo operatorio descrito por el fabricante. Cada muestra se valoró por duplicado. Los resultados se expresan en forma de CI_{50} calculados con ayuda de una regresión lineal sobre la parte lineal de la curva de inhibición (programa FigP6C). Los nitritos se valoraron según el método de Green et al. (Analytical Biochemistry 126, 131-138, 1982). Los resultados se expresan en forma de CI_{50} y se indican en la tabla detallada a continuación por el ejemplo 2.

4

4) Efecto in vitro sobre la ciclooxigenasa inducible

La ciclooxigenasa existe bajo dos isoformas, la COX-1 (constitutiva) y la COX-2 inducida por los agentes inflamatorios mitógenos, citoquinas y endotoxinas. Los compuestos se ensayaron sobre la actividad enzimática de dos isoformas semi-purificadas.

El principio del ensayo es cuantificar la transformación del ácido araquidónico (AA) en PGE_{2} por COX-1 o COX-2. El método está inspirado en Futaki et al. (Prostaglandins, 47, 55-59, 1994). La COX-1 (Prostaglandine H sintasa-1, EC 1.14.9.1) se conservó a -80ºC y provenía de vesícula seminal de carnero. La COX-2 (Prostaglandine H sintasa-2) también se conservó a -80ºC y provenía de placenta de oveja.

Los tubos se rellenaron con 500 \mul de tampón (100 mM de Tris HCl, pH 8,1 \muM de hematina, 1 mM de fenol) y los compuestos de la invención o las sustancias de referencia a concentraciones que van de 1 nM a mM. Los testigos son tampón sin inhibidores. Después de 2 minutos de incubación con 5 U (COX-2) o 10 U (COX-1) de enzima, se añadieron 5 \mul de ácido araquinódico a 10 \muM por 2 minutos. La reacción se paró con 30 \mul de HCl a 1N. La extracción se hizo sobre columnas Seppack C18 (Waters). Después de evaporación a sequedad, la PGE_{2} se midió por valoración radioinmunológica a partir de cartera comercial. Los resultados se expresan en valor de CI_{50} y están resumidos en la tabla a continuación.

5

Claims

1. Los compuestos de fórmula general I:

(I)A.B

en forma de sal, en la que

A

\hskip0,4cm

representa un inhibidor de ciclooxigenasa que presenta una función carboxi;

B

\hskip0,4cm

representa un compuesto de fórmula general I_{B}

6

: en la que

: R_{1} representa H, radical nitro o fenilo, estando el radical fenilo eventualmente sustituido con uno o varios sustituyentes elegidos entre los radicales halo, ciano, nitro, trifluorometilo, alquilo inferior o alcoxi inferior;

: R_{2} representa un radical amino sustituido con un radical amino o alquilo inferior,

entendiéndose que el término inferior, cuando se refiere al radical alquilo o alcoxi, significa de 1 a 6 átomos de carbonos.

2. Los compuestos de fórmula general I tal como se ha definido en la reivindicación 1, caracterizados porque el compuesto A se elige entre salicilatos, indometacina, sulindaco, fenamatos, ibuprofeno, naproxeno, fenoprofeno, fenbuteno, flurbiprofeno, indoprofeno, ketoprofeno y suprofeno.

3. Los compuestos de fórmula general I tal como se ha definido en una de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizados porque

-: B es de fórmula general (I_{B}) tal como se ha definido en la reivindicación 1 en la que R_{1} representa H, radical nitro o fenilo, estando el radical fenilo eventualmente sustituido con uno o varios sustituyentes elegidos entre los radicales cloro, flúor, ciano, nitro, trifluorometilo, metilo, etilo, metoxi, etoxi o isopropiloxi; y R_{2} representa un radical hidrazino; metilamino o etilamino.

4. Los compuestos de fórmula general I tal como se ha definido en una de las reivindicaciones 1 a 2, y que responden a las fórmulas siguientes:

- salicilato de amiguanidina;

- ibuprofenato de aminoguanidina;

- indometacinato de aminoguanidina;

- acetilsalicilato de metilguanidina;

- salicilato de metilguanidina;

- ibuprofenato de metilguanidina; y

- mefenamato de metilguanidina.

5. Procedimiento de preparación de los productos de fórmula general I tal como se ha definido en la reivindicación 1, caracterizado porque se hace reaccionar en agua, a una temperatura comprendida entre la temperatura ambiente y 70ºC, una mezcla del compuesto de fórmula A tal como se ha definido en la reivindicación 1 con un compuesto de fórmula B tal como se ha definido en la reivindicación 1.

6. A título de medicamentos, los productos de fórmula I tal como se ha definido en la reivindicación 1.

7. A título de medicamentos, los productos de fórmula I tal como se ha definido en una de las reivindicaciones 2
a 4.

8. Composiciones farmacéuticas que contienen, a título de principio activo, uno al menos de los medicamentos tal como se han definido en una de las reivindicaciones 6 ó 7.

9. Utilización de productos de fórmula I tal como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para la preparación de medicamentos destinados a tratar trastornos cardiovasculares y cerebrovasculares, que comprenden, por ejemplo, migrañas, congestiones cerebrales, infartos, isquemias, choques sépticos, endotoxínicos y hemorrágicos, y dolores.

10. Utilización de productos de fórmula I tal como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para la preparación de medicamentos destinados a tratar diversas formas de inflamación que comprenden fiebres reumáticas agudas, artritis reumáticas u otros tipos de artritis, osteo-artritis, y asma.

11. Utilización de productos de fórmula I tal como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para la preparación de medicamentos destinados a tratar trastornos del sistema inmunitario, que comprenden infecciones virales o no virales, enfermedades autoinmunes y todas las patologías caracterizadas por una producción excesiva de óxido nítrico y/o metabolitos de ácido araquídico.