JPH11509540A

JPH11509540A - アミジン誘導体とシクロオキシゲナーゼ阻害剤との塩、その製造方法、医薬としての応用及びそれを含有する製薬組成物

Info

Publication number: JPH11509540A
Application number: JP9506344A
Authority: JP
Inventors: ドラソーニエル，ピエール−エタンヌシヤブリエ; ブローケ，コレツト
Original assignee: ソシエテドコンセイユドルシエルシエエダアツプリカーシヨンシヤンテイフイツク（エス．セー．エール．アー．エス．）
Priority date: 1995-07-15
Filing date: 1996-07-15
Publication date: 1999-08-24
Also published as: WO1997003678A1; PT839041E; ES2219690T3; RU2167856C2; GB9514518D0; PL185375B1; CZ293676B6; IL122737A0; US6063807A; NO980178D0; EP0839041B1; AU704373B2; IL122737A; DE69632193T2; CN1190890A; HUP9901331A2; UA53624C2; NZ313654A; CZ7398A3; PL324490A1

Abstract

(57)【要約】シクロオキシゲナーゼ阻害剤とアミジン誘導体との塩、その製造方法、該塩を含有する製薬組成物及び特にＮＯシンターゼ及びシクロオキシゲナーゼ阻害剤としてその使用が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】アミジン誘導体とシクロオキシゲナーゼ阻害剤との塩、その製造方法、医薬としての応用及びそれを含有する製薬組成物本発明は二重の生物学的活性即ち一酸化窒素(NO)の生成並びにシクロオキシゲナーゼ活性を同時に抑制する活性を示す新規な化合物、その製造方法、それを含有する製薬組成物及び特にＮＯシンターゼ及びシクロオキシゲナーゼの阻害剤としてその使用に関する。シクロオキシゲナーゼ阻害剤又はアスピリンと同様な医薬例えばアセチルサリチル酸及びサリチル酸、メチル化したインドール誘導体例えばインドメタシン（〔１−（４−クロロベンゾイル）−５−メトキシ−２−メチル−1H−インドール −３−イル〕酢酸の商品名ＤＣＩ）及びスリンダック（〔５−フロオロ−２−メチル−１−（（４−（メチルスルフィニル）フェニル）メチレン）−1H−インデン−３−イル〕酢酸の商品名）、Ｎ−フェニルアントラニル酸の誘導体（メクロフェナメート、フェナメート）、プロピオン酸の誘導体例えばイブプロフェン（ｐ−イソブチルヒドロアトロピン酸の商品名）、ナプロキセン、フェノプロフェンは炎症の処置に有能な医薬として広く用いられしかもそれらは有効であると判明したが、投与量を増大させると幾つかの望ましくない副作用を生ずるものである(R.Flower，S.Moncoda及び J.Vane，アスピリン様薬剤の作用機序、In the pharma-cological basis of the rapeutics Goodman and Gilman,1985,29，674〜715)。更には、これらの化合物は片頭痛の悪性及び予防処置に同時に用いていた。これらの医薬の治療応答が不完全であることが多いとしてもしかも或る患者にはかゝる化合物での処置が適当ではないとしても、かゝる医薬の価値は否定できるものではない。これらの化合物は抗炎症特性及び抗血小板凝集特性を有する故に、該化合物は同様に脳の阻血モデルにおいて浮腫を明らかに減少させながら血栓症に用いられ、従って梗塞症、振盪症及び脳血管疾患の処置及び予防に提案されている(W Armstrongの発作の研究及び処置における最近の傾向、SCRIP，PJB出版，1991)。ＮＯシンターゼ阻害剤の生物学的活性は最近発見されたに過ぎずそれらの潜在的な治療機能は現在調査段階にあるに過ぎない。これらの物質の化学構造はＬ− アルギニンの同族体によって表わされしかもデンマーク特許第3041／90号に記載されており、該物質は酸化窒素(NO)生成の阻害剤である。ＮＯについての本出願人の現在の知識はMoncada(S.Moncada，R.M.J.Palmer，E.A.Higgs：酸化窒素：生理学、病理生理学、薬理学−薬理学的考察、43，2，109〜142)によって1991年に修正されておりしかもより最近にはKerwinら（Kerwin J.，Lancaster J.，Feldm an P.，酸化窒素；第２のメッセンジャーについての新規な範例、J.Med.Chem.(1 995),38巻，22，4343〜 4362頁）によって修正されている。要約すると、ＮＯは血小板、神経系における可溶性グアニル酸シクラーゼの導入機序として役立ちしかもマクロファージ及び好中球を包含する多数の細胞及び組織における免疫学的反応で作用因子（エフェクター）分子として役立つ。ＮＯはＮＯシンターゼと呼ばれる酵素によってＬ− アルギニンから酵素作用的に生産される。この酵素は２つの形で存在し；１つは構成性酵素（内皮及びニューロン）であり、他方は誘導酵素である。或る病理学においては、既にショック中に生起することが証明されている如くしかも既に先に挙げた特許に記載されている如くＮＯの過度の生産が生起してしまう。本明細書において、ＮＯシンターゼ阻害剤は、特にこれらをアスピリン、インドメタシン又はメクロファナメートの如きシクロオキシゲナーゼ阻害剤と組合せた時に、病気によって生起される血管の重大性及び死亡数を防止するのに有効な薬剤である。同じ分子中に２種の活性成分を組合せた有利な効果は、例えば次の病気の如き別の病変を受けた患者に生起するのは公然である：（イ）例えばアテローム性動脈硬化症、片頭痛、動脈の高血圧症、敗血性ショック、阻血又は出血性起源の心臓又は脳内の梗塞症、阻血及び血栓を包含してなる心臓血管及び脳血管性疾患；（ロ）例えば神経変性病の如き末梢神経系又は中枢神経系の疾患特に脳梗塞、アルツハイマー病とハンチングトン舞踏病とパーキンソン病とクロイツフェルドヤコブ病と側索筋萎縮性硬化症とを包含する老年性痴呆、並びに疼痛、脳傷害又は脊髄傷害、アヘン剤の耽溺、アルコールの耽溺及び耐性、勃起及び疾病再発を誘発する物質の耽溺、認識病 (cognitive dis-orders)又は脳疾患；（ハ）増殖性疾患及び炎症性疾患例えばアテローム性動脈硬化症、肺動脈圧亢進症、糸球体腎炎、門脈圧亢進症、乾癬、リウマチ様関節炎及び関節炎、線維症、類デンプン症、胃腸系の炎症（ボウコウ炎、クローン病）又は肺系の炎症及び気道の炎症（喘息、静脈洞炎）；（ニ）器官の移植；（ホ）自己免疫病及びウイルス性疾患例えば狼瘡、AIDS、寄生性及びウイルス性感染、糖尿病、プラーク硬化症；（ヘ）ガン又は（ト）ＮＯ及び／又はシクロオキシゲナーゼの生産又は脱機能を特徴とする全ての病変。それ故本発明の要旨は塩の形での次式（Ｉ）：Ａ．Ｂ（Ｉ）〔式中Ａはカルボキシ官能基を有するシクロオキシゲナーゼ阻害剤を表わし；Ｂは次式Ｉ_B （但しＲ₁はＨ、ニトロ又はフェニル基を表わし、該フェニル基は場合によってはハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、低級アルキル又は低級アルコキシ基から選んだ１個又はそれ以上の置換基で置換されており；Ｒ₂は低級アルキル基；低級アルキルチオ基；アルキルチオアルキル基；ハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、低級アルキル又は低級アルコキシ基から選んだ１個又はそれ以上の置換基によって場合によっては置換されたアリール基；あるいはニトロ、アミノ、低級アルキル又はフェニル基から選んだ置換基によって場合によっては置換されたアミノ基を表わし、該フェニル基それ自体は場合によってはハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、低級アルキル又は低級アルコキシ基から選んだ１個又はそれ以上の置換基によって置換されている）のアミジン化合物を表わし；Ａがアセチルサリチル酸を表わし、Ｒ₁が水素原子を表わす時は、Ｒ₂はアリール基を表わさずまたフェニル基が場合によっては置換されているフェニルアミノ基を表わさない〕の化合物を提供する。前記の定義において、用語ハロはフルオロ、クロロ、ブロモ又はイオド基好ましくはフルオロ又はクロロ基を表わす。用語低級アルキル基は好ましくは１〜６個の炭素原子を含有する直鎖又は分枝鎖アルキル基を表わし、特に１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec−ブチル及びtert−ブチル基を表わす。低級アルコキシ基は前述のアルキル基に対応できる。メトキシ、エトキシ又はイソプロピルオキシ基が好ましい。用語アリール基は１個の縮合環又は幾つかの縮合環を含有してなる芳香族基を表わし；各々の環は場合によっては硫黄、窒素又は酸素から選んだ１つ又はそれ以上の同じ又は異なる異原子を含有できる。アリール基の例はフェニル、ナフチル、チエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、チアゾリル、イソキサゾリル、オキサゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジル、ベンゾチエニル、ベンゾフリル及びインドリル基である。本発明の特定の要旨は、化合物Ａがサリチル酸及びその誘導体の如きサリチレート、インドメタシン、スリンダック、フェナメート及びプロピオン酸の誘導体から選ばれることを特徴とする前述の式（Ｉ）の化合物である。サリチル酸の誘導体のうちでは、ザリチル酸のカルボキシ官能基のエステル化によって得られた化合物例えばメチルサリチレート、サリチル酸のヒドロキシ基の置換によって得られた化合物例えばアセチルサリチル酸あるいはサリチル酸のフェニル基の自由位置における１つ以上の置換基の付加によって得られた化合物例えばジフルニセールさえも挙げることができる。フェナメートのうちでは、メフェナミン酸、メクロフェナミン酸、フルフェナミン酸及びトルフェナミン酸を全て挙げ得る。イブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、フェンブフェン、フルルビプロフェン、インドプロフェン、ケトプロフェン又はスプロプロフェンの如き化合物をプロピオン酸の誘導体の例として挙げ得る。本発明の更に特定の要旨は、Ａがサリチル酸、メチルサリチレート、アセチルサリチル酸、インドメタシン、スリンダック、メフェナミン酸、メクロフェナミン酸又はイブプロフェンを表わし；Ｂが前述の式（Ｉ_B）（但しＲ₁はＨ、ニトロ又はフェニル基を表わし、該フェニル基は場合によってはクロロ、フルオロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ又はイソプロピルオキシ基から選んだ１個又はそれ以上の置換基によって置換されており；Ｒ₂はアミノ、ヒドラジノ、ニトロアミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、メチル、エチル、メチルチオ、メチルチオメチル基を表わし；場合によってはクロロ、フルオロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ又はイソプロピルオキシ基から選んだ１個又はそれ以上の置換基で置換されたフェニル基を表わし；チエニル、フリル及びピロリル基を表わす）の化合物を表わすことを特徴とする前記の式（Ｉ）の化合物を提供するものである。本発明の更に特定の要旨は以下の実施例に記載された化合物でありしかも特に次の化合物：アミノグアニジンサリチレート；アミノグアニジンイブプロフェネート；アミノグアニジンインドメタシネート；メチルグアニジンアセチルサリチレート；メチルグアニジンサリチレート；メチルグアニジンイブプロフェネート；メチルグアニジンメフェナメート；に対応する化合物を提供する。本発明の要旨はまた前記の式Ａの化合物と前記の式Ｂの化合物との混合物を室温と70℃との間の温度で水中で反応させることを特徴とする前記の式（Ｉ）の化合物の製造方法に関する。本法の開始時には、式Ａの化合物はそのまゝ又は塩の形で例えばナトリウム塩の形で用い得る。同様に、式Ｂの化合物はそのまゝ又は例えばその重炭酸塩又はその塩酸塩の形で用い得る。式Ａの化合物は既知であり、当業者に既知の方法によって調製できる。式Ｂの化合物は当業者に既知のアミジンの製造方法を応用することで得られる。〔Schw an T.JらのJ.Pharm,Sci(1975)64，337〜338；Rogerらの Chem.Rev，61，179(1961)；Tetrahedron，29(14)，2147〜51(1973);Patai S.,Ch em．Amidines Imidates，vol.1,283〜348(1975)；Patai S.,Chem．Amidines Imi dates，vol.2，339〜366(1990)〕。本発明の化合物は興味ある薬理学的特性を有する。該化合物は二つの生物学的活性を示し、即ち該化合物はＬ−アルギニン／酸化窒素(NO)過程とシクロオキシゲナーゼ過程との両方を同時に抑制する。かくして、本発明の化合物は種々の治療用途に用い得る。生理病理学におけるＮＯシンターゼとシクロオキシゲナーゼの潜在的な役割を考慮して、本発明の化合物は以下の疾患の処置に有益で好都合な効果を生じ得る；ｉ）例えば片頭痛、脳内ウッ血、梗塞症、阻血、敗血症、内毒素性及び出血性のショック及び疼痛を含めての心臓血管及び脳血管の疾患； ii）例えば急性のリウマチ熱、リウマチ様関節炎又は別型式の関節炎、骨関節炎、喘息を包含してなる種々形式の炎症； iii）ウイルス性又は非ウイルス性の感染、自己免疫疾患及び酸化窒素及び／又はアラキジン酸代謝物の過剰生産を特徴とする全ての病変を包含してなる免疫系疾患。本発明の化合物のこれらの薬理特性の説明は以下の実験部分に見出すことができる。これらの薬理特性は本発明の式（Ｉ）の化合物を製薬用途に適当とさせる。本発明の要旨はまた医薬として前述の式（Ｉ）の化合物並びに活性成分として前述の医薬の少なくとも１つを含有してなる製薬組成物に関する。それ故、本発明は製薬上許容し得る担体と組合せて本発明の化合物を含有してなる製薬組成物に関する。製薬組成物は固体の形であることができ、例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル又は座薬の形であり得る。適当な固体担体は例えばリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトール、デキストリン、デンプン、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリジン及びワックスであり得る。本発明の化合物を含有してなる製薬組成物はまた液体の形であることもでき、例えば溶液、エマルジョン、懸濁物又はシロップの形であり得る。適当な液体担体は例えば水、有機溶剤例えばグリセロール又はグリコール並びに水に入れた種々の割合でのこれらの混合物であり、製薬上許容し得る油脂に添加してある。本発明の製薬組成物は代表的な投与方法により投与でき例えば経口投与又は筋肉内注射、腹腔内注射、静脈内注射又は皮下注射によって投与できる。本発明の要旨はまた心臓血管又は脳血管の疾患の処置に意図した医薬、種々の炎症の処置に意図した医薬及び免疫系疾患の処置に意図した医薬を調製するために、前述の式（Ｉ）の化合物の使用に関する。次の実施例は前記の方法を例証するのに呈示されており、何れの場合も本発明の範囲を限定するものと考えるべきものではない。実験部分実施例１：アミノグアニジンサリチレート 420mg(2.5ミリモル)のアミノグアニジン重炭酸塩を70℃に加熱することにより 25mlの水に溶解させ、続いて攪拌しながら400mgのナトリウムサリチレートの水溶液を添加した。該混合物を20分間加熱し次いで凍結乾燥させた（白色粉末；融点＝148℃）。実施例２：アミノグアニジンイブプロフェネート 420mg(2.5ミリモル)のアミノグアニジン重炭酸塩を70℃に加熱することにより 25mlの水に溶解させた。570mgのナトリウムイブプロフェンの水溶液を添加した。該混合物を20分間加熱し次いで凍結乾燥させた（白色粉末；融点＝154℃）。実施例３：アミノグアニジンインドメタシネートナトリウムサリチレートの代りにインドメタシンを用いることにより、実施例１に記載される如く処理した（黄色粉末；融点＝196℃）実施例４：メチルグアニジンアセチルサリチレート 450mg(2.5ミリモル)のアセチルサリチル酸を、2.5mlの１Ｎ NaOHを含有する水 20mlに溶解させた。10mlの水に入れた237.8mgのメチルグアニジン塩酸塩を次いで添加した。該混合物を15分間攪拌した。澄明な溶液が得られた。凍結乾燥によって白色粉末を与える（融点＝153℃）。 NMR-¹H(100MHz,D₂O):7.3-6.6(m,4H,芳香族);2.3(s,3H,NCH₃);1.8(s,3H,COCH₃) ．実施例５：メチルグアニジンサリチレート 345mg(2.5ミリモル)のサリチル酸を、2.5mlの１Ｎ NaOHを含有する20mlの水に高温のうちに溶解させた。10mlの水を溶かしたメチルグアニジン塩酸塩(2.5ミリモル)の溶液を添加した。該混合物を40℃で10分間攪拌した。凍結乾燥によって高度に嵩高の白色粉末を与える（融点＝140℃）。 NMR-¹H(100MHz,D₂O): ７〜6.8(m,4H，芳香族); 2.4(s,3H,NCH₃)．実施例６：メチルグアニジンイブプロフェネート高温にある間に、2.5ミリモルのイブプロフェンを2.5mlの１N NaOHを含有する水20mlに溶解させた。10mlの水に入れたメチルグアニジン塩酸塩(2.5ミリモル) の溶液を添加し、続いて15分間60℃で攪拌させた。凍結乾燥によって白色粉末を与える（融点＝174℃）。 NMR-¹H(100MHz,D₂O):7.2(s,4H,芳香族);3.4(q,1H,C₆.H₆-CH(Me)-CO);2.6(s,3H ,NCH₃);2.25(d,2H,CH ₂C₆H₆);1.6(m,1H,CH(CH₃)₂);1.2(d,3H,-CH(CH)-CO₂H);0.8( d,6H,2CH₃)．実施例７：メチルグアニジンメフェナメートイブプロフェンの代りにメフェナミン酸を用いることにより実施例６に記載の如く処理した。冷却すると、化合物が沈澱し、これを濾過し乾燥させた（融点＝124℃）。 NMR-¹H(100MHz,D₂O):8.1(m,1H，HCO₂H中);7.2-6.8(m,6H,2C₆H₆);2.9(s,3H,NCH₃ );2.4及び2.3(d,2CH₃C₆H₆)．前記の方法を用いて、次の化合物を製造でき、これはまた本発明の一部を成し、しかも好ましい化合物を包含する。本発明の化合物の薬理研究本発明の化合物を試験管内(in vitro)生物学的試験にかけて誘発性ＮＯシンターゼ及びシクロオキシゲナーゼを阻止する該化合物の活性を証明した。本発明の化合物を、アミノグアニジン、Ｌ−ニトロアルギニン、イブプロフェン、インドメタシン、アセチルサリチル酸の如き対照物質と対比した。１）J774A1 マウスのマクロファージの誘発性ＮＯシンターゼにおける試験管内効果試験はブレット＆シンダー（Bredt and Synder法）に応じてＮＯシンターゼによりＬ−アルギニンのＬ−シトルリンへの転化を測定することからなる(Proceed ings of the National Academy of Sciences米国87，682〜685，1990)。J774A1 マウスのマクロファージはリポポリサッカライド(LPS)及びインターフェロン− γ（ＩＦＮ−γ）により賦活化された後には多量のＮＯを生産する。マクロファージ細胞はＬＰＳ及びＩＦＮ−γにより賦活化後には５％CO₂の雰囲気中で37℃ で10％の子牛胎児血清で富化したDMEM（ダルベッコの変性イーグル培地）中で培養した。該細胞を5000細胞／cm²の割合で150cm²のフラスコに播種した。培養反応は10％の子牛胎児の血清で富化したDMEM中でＬＰＳ（１μg/ml）及びマウスのＩＦＮ−γ（50U/ml）の存在下に行なった。ＮＯシンターゼは抽出緩衝剤(HEPES 50mM，pH7.4、ジチオトレイトール 0.5mM、ペプスタチンＡ 1mg/ml、ロイペプチン 1mg/ml、大豆トリプシン阻害剤 1mg/ml、アンチペイン 1mg/ml及びPMSF 10μg/ ml)を用いて単離した。４℃で抽出緩衝剤中で音波処理後に、ホモジネートを超遠心分離した（４℃で１時間100000ｇ）。定量(dosage)は、100mMのHEPES，pH7.4、１mMのジチオトレイトール、2.5mMの CaCl₂、10μMのテトラヒドロビオプテリン、ＦＡＤ 10μM、ＢＳＡ 1mg/ml、２ mMの還元した NADPH、２mMのEDTA及び2.5mMのCaCl₂を含有する培養緩衝剤100μ ｌを分布させたガラス試験管中で行った。100mMのトリチウム標識済みアルギニン（特異活性：56.4Ci／ミリモル、アメルシャム社）と40μMの非放射性アルギニンとを含有する溶液25μｌを添加した。反応は50μｌのホモジネートを添加することにより開始し、最終的な容量は200μｌである（残りの25μｌは水であるか又は供試化合物である）。15分後に、反応は２mlの停止緩衝剤（20mMのHEPES ，pH5.5、２mMのEDTA）を用いて停止させた。試料を１mlのDOWEX樹脂のカラム上に配置した後に、放射能は液体シンチレーション分光光度計により定量化した。結果をIC₅₀の値として表わし、以下の表に要約する（「誘発性ＮＯシンターゼ、シトルリンの形成」の見出しの第１欄）。２）J774A1 マウスのマクロファージにより亜硝酸塩の生産における試験管内効果この試験は培養物中の細胞の誘発性ＮＯシンターゼにおける本発明化合物の阻害活性を測定するのに用いる。マクロファージ細胞は５％のCO₂の雰囲気下に37℃で10％の子牛胎児の血清で富化したDMEM培地（ダルベッコの変性イーグル培地）中で培養した。これらの実験については、細胞を90個の凹みのプラーク（１個の凹み当り50000個の細胞）中に分離し、供試化合物の存在下に又は不在下にＬＰＳ（１μg/ml）及びマウスのＩＦＮ−γ（50U/ml）と共に10％の子牛胎児血清富化のフェノールレッドのないDMEM中で培養反応した。 48時間後に培地中の亜硝酸塩濃度、ＮＯの変性化合物をグリーンらの分析生化学 (Analytical Biochemistry)126，131〜138(1982)により比色分析的に測定した。結果を以下の表にIC₅₀の値で表わす（「誘発性ＮＯシンターゼ、亜硝酸塩の生成」の見出しの第２欄）。３）ラットのミクロ膠細胞により亜硝酸塩及びPGE₂生産における試験管内効果 Theryら(1991)によって開発された指示書によりウイスター種の新生ラットの外皮から由来する膠細胞の培養物からミクロ膠細胞(microglial cells)を単離した。ミクロ膠細胞を１ml当り５・10⁵細胞及び１個の凹み当り0.5mlの割合で24個の凹みのプラーク中に播種した。ミクロ膠細胞を５％のCO₂雰囲気中で37℃で24 時間ＬＰＳ（10μg/ml）及び阻害剤の存在下に培養反応した。24時間後に、上澄み液を除去して亜硝酸塩とPGE₂との濃度を測定した。PGE₂は生産者によって記載される操作法によりＮＥＮによって市販の放射線免疫学的な定量の助けをかりて定量した。各々の試料は２回定量した。結果は阻害曲線の線状部分における回帰線の助けを借りて算出したIC₅₀として表わした（論理的なFigP6C）。亜硝酸塩はグリーンらの方法（分析生化学、126，131〜138，1982）により定量した。結果をIC₅₀の形で表わし、実施例２について以下の表に示す。４）誘発性シクロオキシゲナーゼにおける試験管内効果シクロオキシゲナーゼは２つのイソ型で存在し、COX -1（構成酵素）とマイトジエン、サイトカイン及び内毒素炎症剤によって誘発されるCOX-2とで存在する。該化合物をこれらの２種の半精製したイソ型の酵素活性について試験した。この試験の原理はCOX-1又はCOX-2によってアラキドン酸(AA)のPGE₂への転化を定量化することである。該方法はFutakiら（プロスタグランジン、47，55〜59， 1994）によって示唆されている。COX-1（プロスタグランジンＨシンターゼ− １，ＥＣ 1.14.9.1）は−80℃で保存されしかも雄羊の精のうから由来する。COX -2（プロスタグランジンＨシンターゼ−２）も−80℃で保存され、雌羊の胎盤から由来する。試験管に500μｌの緩衝剤(100mMのトリスHCl，pH8，１μMのヘマチン，１mMのフェノール)及び１nM〜１mMの濃度での本発明の化合物又は対照物質を充填する。対照は阻害剤を有しない緩衝剤よりなる。５Ｕ(COX-2)又は10Ｕ(COX-1)酵素で培養反応してから２分後に、10μMアラキドン酸の５μｌを２分間添加した。反応は30μｌの１Ｎ HClで停止させた。抽出はセップパック(Sep-pack)Ｃ18カラム（Waters社）上で行なった。蒸発乾固させた後に、PGE₂は市販のキットから放射線免疫学的定量により測定した。結果はIC₅₀の値として表わし、以下の表に要約した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 31/405 ＡＢＮＡ６１Ｋ 31/405 ＡＢＮＡＣＤＡＣＤ 31/60 ＡＡＢ 31/60 ＡＡＢ 45/00 45/00 Ｃ０７Ｃ 279/18 Ｃ０７Ｃ 279/18 279/32 279/32 281/06 281/06 Ｃ０７Ｄ 209/28 Ｃ０７Ｄ 209/28 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ブローケ，コレツトフランス国エフ−92100 ブーローニユ, ブールバールジヤン−ジヨーレ，240 ビ

Claims

【特許請求の範囲】１．塩の形での次式（Ｉ）：Ａ．Ｂ（Ｉ）〔式中Ａはカルボキシ官能基を有するシクロオキシゲナーゼ阻害剤を表わし；Ｂは次式Ｉ_B （但しＲ₁はＨ、ニトロ又はフェニル基を表わし、該フェニル基は場合によってはハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、低級アルキル又は低級アルコキシ基から選んだ１個又はそれ以上の置換基で置換されており；Ｒ₂は低級アルキル基；低級アルキルチオ基；アルキルチオアルキル基；ハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、低級アルキル又は低級アルコキシ基から選んだ１個又はそれ以上の置換基によって場合によっては置換されたアリール基；あるいはニトロ、アミノ、低級アルキル又はフェニル基から選んだ置換基によって場合によっては置換されたアミノ基を表わし、該フェニル基それ自体は場合によってはハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、低級アルキル又は低級アルコキシ基から選んだ１個又はそれ以上の置換基によって置換されている）のアミジン化合物を表わし；Ａがアセチルサリチル酸を表わし、Ｒ₁が水素原子を表わす時は、Ｒ₂はアリール基を表わさずまたフェニル基が場合によっては置換されているフェニルアミノ基を表わさない〕の化合物。２．化合物Ａはサリチレート、インドメタシン、スリンダック、フェナメート及びプロピオン酸誘導体から選ばれることを特徴とする請求の範囲１記載の式（Ｉ）の化合物。３．Ａはサリチル酸、メチルサリチレート、アセチルサリチル酸、インドメタシン、スリンダック、メフェナミン酸、メクロフェナミン酸又はイブプロフェンを表わし；Ｂは請求の範囲１に定義した式（Ｉ_B）（但しＲ₁はＨ、ニトロ又はフェニル基を表わし、該フェニル基は場合によってはクロロ、フルオロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ又はイソプロピルオキシ基から選んだ１個又はそれ以上の置換基によって置換されており；Ｒ₂はアミノ基、ヒドラジノ基、ニトロアミノ基、メチルアミノ基、エチルアミノ基、メチル基、エチル基、メチルチオ基、メチルチオメチル基；場合によってはクロロ、フルオロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ又はイソプロピルオキシ基から選んだ１個又はそれ以上の置換基で置換されたフェニル基；チエニル基、フリル基又はピロリル基を表わす）の化合物を表わすことを特徴とする請求の範囲１又は２記載の式（Ｉ）の化合物。４．次の化合物：アミノグアニジンサリチレート；アミノグアニジンイブプロフェネート；アミノグアニジンインドメタシネート；メチルグアニジンアセチルサリチレート；メチルグアニジンサリチレート；メチルグアニジンイブプロフェネート；メチルグアニジンメフェナメートに対応する請求の範囲１〜３の何れかに記載の式（Ｉ）の化合物。５．請求の範囲１に定義した式Ａの化合物を室温〜70℃の温度で水中で請求の範囲１に定義した式Ｂの化合物と反応させることを特徴とする請求の範囲１記載の式（Ｉ）の化合物の製造方法。６．医薬として、請求の範囲１記載の式（Ｉ）の化合物。７．医薬として、請求の範囲２〜４の何れかに記載の式（Ｉ）の化合物。８．活性成分として請求の範囲６又は７記載の医薬の少なくとも１種を含有してなる製薬組成物。９．心臓血管性及び脳血管性疾患例えば片頭痛、脳内ウッ血、梗塞症、阻血、敗血症、内毒素性及び出血性ショック及び疼痛よりなる疾患の処置に意図した医薬を製造するため請求の範囲１〜４の何れかに記載の式（Ｉ）の化合物の使用。 10．急性リウマチ熱、リウマチ様関節炎又は別型式の関節炎、骨関節炎、喘息よりなる種々の形態の炎症を処置するのに意図した医薬を製造するため請求の範囲１〜４の何れかに記載の式（Ｉ）の化合物の使用。 11．ウイルス性又は非ウイルス性感染、自己免疫疾患及び酸化窒素及び／又はアラキジン酸代謝物の過度の生産を特徴とする全ての病変よりなる免疫系疾患の処置に意図した医薬を製造するため請求の範囲１〜４の何れかに記載の式（Ｉ）の化合物の使用。