EP1268554A2 - Diagnostik- und arzneimittel zur untersuchung des zelloberflächenproteoms von tumor- und entzündungszellen sowie zur behandlung von tumorerkrankungen und entzündlichen erkrankungen vorzugsweise mit hilfe einer spezifischen chemokinrezeptor-analyse und der chemokinrezeptor-ligand-interaktion - Google Patents

Diagnostik- und arzneimittel zur untersuchung des zelloberflächenproteoms von tumor- und entzündungszellen sowie zur behandlung von tumorerkrankungen und entzündlichen erkrankungen vorzugsweise mit hilfe einer spezifischen chemokinrezeptor-analyse und der chemokinrezeptor-ligand-interaktion

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Publication number
EP1268554A2
EP1268554A2 EP01923710A EP01923710A EP1268554A2 EP 1268554 A2 EP1268554 A2 EP 1268554A2 EP 01923710 A EP01923710 A EP 01923710A EP 01923710 A EP01923710 A EP 01923710A EP 1268554 A2 EP1268554 A2 EP 1268554A2
Authority
EP
European Patent Office
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chemokine receptor
receptors
chemokine
antibodies
different
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP01923710A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Wolf-Georg Forssmann
Knut Adermann
Aleksandra Heitland
Nikolaj Spodsberg
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IPF Pharmaceuticals GmbH
Original Assignee
IPF Pharmaceuticals GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
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Withdrawn legal-status Critical Current

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Definitions

  • the present invention relates to the preparation of a medicament and a diagnostic agent obtained via a proteome analysis, preferably containing at least two different chemokine receptor ligands or chemokine receptor antibodies, and furthermore the use of at least two different chemokine receptor ligands, chemokine receptor antibodies and / or two different chemokine receptors.
  • the medicament consists in the use of inhibitors, ligands or antibodies of at least two chemokine receptors or the associated algorithms of the surface chemokine receptor proteome as well as the use of at least one chemokine receptor ligand and / or a chemokine receptor, peptides and antibodies and their use for the diagnosis and therapy of tumor diseases and inflammatory diseases.
  • clusters of analyzed tumor cell surface proteomes such as ectoproteases, adhesion molecules or various types of receptors can be used.
  • chemokines of the CC and the CXC chemokines include in particular the chemokines of the CC and the CXC chemokines, preferably, for example, HCC-1 to HCC-3 and SDF-1 (Schulz-Knappe P et al., J Exp ed 183: 295, 1996; Pardigol A et al., Proc Natl Acad Sei USA 95: 6308, 1998; Nagasawa T et al., Proc Natl Acad Sei USA 91: 2305, 1994).
  • MCP-1 and RANTES Wang JM et al., Int J Cancer 75: 900, 1998.
  • tumor cell lines can thus react to specific chemokines by stimulating the receptors. If the corresponding chemokine peptide is formed in corresponding cells, tissues and organs, an autocrine, paracrine or endocrine reaction can occur, whereby cell migration and cell proliferation are influenced. For example, kidney metastases from tumors that have receptors for MCP-1 and RANTES are said to arise preferentially, since a strong expression of these chemokines is observed in the kidney (Wang JM et al., Int J Cancer 75: 900, 1998).
  • chemokines inhibit tumor growth (Wang JM et al., J Interferon Cytokine Res 16: 53, 1996), so that tumor growth can also be negatively influenced by chemokine administration.
  • the role of chemokines in the migration of tumor cells has been observed using breast cancer cell lines (Youngs et al., Int J Cancer 71: 257, 1997).
  • the control of angiogenesis is also influenced positively or negatively by various cytokines.
  • the chemokine receptor CXCR4 via which the chemokine SDF-1 exerts its action, is essential for the vascularization of the gastrointestinal tract (Tachibana K et al., Nature 393: 591, 1998).
  • a technical problem on which the invention is based is the improvement of the diagnosis of tumors and the presence of inflammatory processes.
  • Another problem is the improved treatment of tumors and inflammatory diseases.
  • the problem is solved by a diagnostic agent and a medicament according to the invention.
  • the diagnostic agent according to the invention contains at least two different ligands of receptors which are involved in a disease process.
  • the diagnostic agent according to the invention preferably contains at least two different chemokine receptor ligands, such as protein peptide structures, which interact with chemokine receptors (or other tumor cell surface proteins), namely chemokine receptor ligands, chemokine receptor antagonists and / or chemokine receptor antibodies.
  • the chemokine receptor ligands are preferably chemokines, chemokine derivatives, agonists or antagonists of chemokine receptors, antibodies or antibody fragments which at least partially block the binding site of the chemokine receptor and surprisingly result in inhibition of tumor growth.
  • Chemokines are particularly preferably selected from the group consisting of the natural chemokines C, CC, CXC, CX 3 C, their analogs, binding proteins and antibodies which bind to the specific receptors in accordance with the chemokines mentioned.
  • the chemokine receptors as a whole Crystalproteom and corresponding thereto chemokine receptor ligand in primary and secondary tumors, and circulating single cells are preferably (1) by immunochemical methods (immunohistochemistry using Se ⁇ ensburgen or multiple successive or simultaneous individual cuts, FACS analysis') and additionally (2), or alternatively, the expression at the transcription level is recorded and analyzed by molecular biological methods (PCR or Northern analysis, in-situ hybridization). Clusters of analyzed tumor cell surface proteomes such as ectoproteases, adhesion molecules or various types of receptors can also be used according to the invention.
  • the method according to the invention for the detection of receptors involved in disease processes is closely related to the diagnostic agent according to the invention, expression profiles at the proteome level being examined by means of cell biological or cytochemical methods, in particular by immunochemical methods, immunohistochemistry using serial sections or multiple successive or simultaneous single sections, FACS analysis and / or the expression of receptors at the transcription level by molecular biological methods, in particular PCR, Northern analysis and / or in-situ hybridization processes.
  • the present invention thus also relates to the use of at least two different chemokine receptor ligands and / or two different chemokine receptors for the diagnostic characterization of tumors, which is different for each type of tumor and each individual tumor.
  • the method according to the invention can be used for tumors which originate from the group consisting of colorectal tumors and prostate tumors.
  • tumors of other organ systems can also be addressed diagnostically and thus therapeutically using the method according to the invention.
  • the at least two different chemokine receptors and / or two different chemokine receptor ligands can be used to diagnose inflammatory processes such as organ rejection reactions and to diagnose autoimmune diseases.
  • tumors, inflammatory diseases and autoimmune diseases of the blood system, the lymphatic system, the cardiovascular system, the nervous system, the respiratory tract, the digestive tract, the endocrine system, the skin including the appendages, the musculoskeletal system and the urogenital tract including the kidney can be diagnosed.
  • the diagnostic agent according to the invention enables an expansion of the cytological characterization of tumor tissues compared to conventional diagnostic methods, which after diagnosis can also be used to develop a specific therapy.
  • the antagonists / agonists of the associated chemokines and the specific chemokine receptor antibodies are used to influence the cell growth to the chemokine receptors found (and analogously to other tumor cell proteome clusters).
  • an accelerated onset of tumor cell death (apoptosis) is surprisingly observed.
  • the present invention also relates to a medicament containing at least one inhibitor of at least two chemokine receptors.
  • the medicament according to the invention preferably contains antagonists of chemokine receptors, antibodies or antibody fragments, which are the binding site block the chemokine receptor at least partially.
  • a chemokine receptor-ligand interaction preferably a protein-protein (peptide) interaction with non-specific molecules, which are obtained from natural extracts, from synthetic or recombinantly produced binding proteins and from other peptide-protein libraries, is also sufficient for the to bring about a surprising effect of tumor cell apoptosis.
  • the inhibitors of at least two chemokine receptors which can be used in the medicament according to the invention can be used to produce a medicament for the treatment of tumors, inflammatory diseases, autoimmune diseases of the bone marrow and other organs, rejection reactions in transplants.
  • tumors, inflammatory diseases and autoimmune diseases of the blood system, the lymphatic system, the cardiovascular system, the nervous system, the respiratory tract, the digestive tract, the endocrine system, the skin including the appendages, the musculoskeletal system and the urogenital tract including the kidney can be treated.
  • Inhibitors or protein ligands are preferably used which are selected from the group consisting of antagonists of chemokine receptors, antibodies or antibody fragments which at least partially block the binding site of the chemokine receptor.
  • the tumors that can be treated in particular are selected from the group consisting of colorectal tumors, prostate tumors and other tumor diseases of the blood system, the lymphatic system, the cardiovascular system, the nervous system, the respiratory tract, the digestive tract, the endocrine system stem, the skin including the appendages, the musculoskeletal system and the urogenital tract including the kidney.
  • the inflammatory processes to be treated in particular are selected from the group consisting of bronchial asthma, chronic inflammatory bowel diseases, organ rejection and other inflammatory processes of the blood system, the lymphatic system, the cardiovascular system, the nervous system, the respiratory tract, the digestive tract, the endocrine system, the skin including the appendages, the musculoskeletal system and the urogenital tract including the kidney.
  • the autoimmune diseases to be treated in particular are selected from the group consisting of rheumatoid arthritis, lupus erythematosus and other chronic inflammations of the blood system, the lymphatic system, the cardiovascular system, the nervous system, the respiratory tract, the digestive tract, the endocrine system, the skin including Appendages, the musculoskeletal system and the urogenital tract including the kidney.
  • the invention further relates to the use of an inhibitor of a chemokine receptor for the manufacture of a medicament for preventing or alleviating organ rejection reactions after organ transplantation, in particular after transplantation of the heart, liver, kidney and pancreas as well as other organs, tissues and cell systems of the gastrointestinal tract, the respiratory tract and the urogenital tract , Circulatory system, the neuro-endocrinium and the musculoskeletal system as well as the blood and immune system.
  • the method according to the invention can also be used for the purpose of diagnosis and therapy.
  • the use of chemokines and their corresponding receptors, their antagonists, including antibodies was found in order to inhibit cancer growth, including metastasis, and to suppress inflammatory and autoimmune diseases.
  • the method according to the invention is based on the finding that chemokines act on specific tumor and inflammatory cells through autocrine, paracrine and endocrine routes via the disease-specific constellation of the chemokine receptor proteome. Primary and secondary tumors as well as specific inflammatory cells are controlled in their migration and proliferation behavior. Diagnostic detection of the locally increased expressed and regulated chemokines and the presence of the chemokine receptor compositions gives rise to the possibility of cancer growth, tumor metastasis and inflammatory as well To decisively suppress or completely prevent autoimmune diseases.
  • the peptides according to the invention with Seq ID No 1 to 40 can be used as epitopes for generating antibodies.
  • These sequences according to the invention are (ID 1-40):
  • X represents an amino acid residue or a peptide residue of up to 30 amino acids
  • Y represents an amino acid residue or a peptide residue of up to 30 amino acids
  • the peptides according to the invention are coupled to the protein carrier KLH (keyhole limpet hemocyanin). This coupling takes place using MBS (m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester) via a cysteine terminally integrated in the petid, or directly using carbodiimide.
  • KLH keyhole limpet hemocyanin
  • the antibodies are obtained by conventional methods by immunization, preferably from mice, rabbits, etc.
  • the methods for producing monoclonal antibodies by molecular biological methods, such as recombinant production, can also be used.
  • the antibodies are purified according to the known methods and galenically prepared for use.
  • cell preparations, cell extracts and in particular membrane isolates from overexpressing, artificially transfected chemokine receptor-carrying cells were used to generate such specific antibodies.
  • proteins based on known sequences were used as epitopes for generating antibodies. These sequences are known (ID 41-63): CCR1 ACCESSION P32246 355 aa
  • this method can also be used as follows.
  • the tumor cells whose receptor composition is to be investigated are grown in parallel in vitro, and the cells obtained therefrom are also examined for their receptor composition and treated with chemokines, preferably of the types HCC-1, HCC-2, MCP-1, RANTES or SDF-1 , In addition, the known analogues were also used.
  • chemokines preferably of the types HCC-1, HCC-2, MCP-1, RANTES or SDF-1
  • the known analogues were also used.
  • the modified Boyden migration chamber method it can be determined that the tumor cells react chemotactically when agonists that bind to the corresponding chemokine receptors are administered. The inhibition of their migration is confirmed by prior incubation with antagonists or receptor antibodies.
  • nude mice Since nude mice have a deficient immune system, the metastatic behavior in a host body can be examined in a nude mouse model without the known immune reactions between species taking place and the foreign cells being rejected. Nude mice are vaccinated in a manner known per se with tumor cells or tumor cell lines whose chemokine receptor distribution pattern had been analyzed and the metastasis by these cells is checked when treated with chemokines and when treated with chemokine antagonists and / or receptor antibodies. Surprisingly, it is found that chemokine antagonists and receptor antibodies belonging to the found receptors significantly inhibit or prevent metastasis, while the addition of chemokines leads to a modulation of tumor growth. Surprisingly, it also emerges that the preparations analyzed by immunohistochemistry show a specific distribution of chemokines and chemokine receptors in the tumor and surrounding tissue. This identified additional targeted intervention options.
  • This intervention in accordance with the method according to the invention consists in additionally expanding the proteome analysis of the chemokines and their receptors by analyzing antitumor peptides / proteins in the same method. This results in the expansion of the diagnostic and therapeutic approach, in particular to use antagonists directed against further clusters of the tumor cell surface proteome. These effects can be enhanced by a combination with chemokine receptor antagonists and antibodies.
  • tumor cell lines e.g. preferably LNCaP, PC-3, DU-145, HT-29, Caco-2, T-84
  • tumor cells settle.
  • modified cells thus preferably form metastases in the liver.
  • chemokine / chemokine receptor proteome in particular the chemokine receptors CXCR4, and CCR5 and / or CXCR3, can also be used in the rejection of Kidney transplants can be demonstrated.
  • chemokine receptors CXCR4, and CCR5 and / or CXCR3 can also be used in the rejection of Kidney transplants.
  • In vitro experiments have also shown that a mixture of antibodies and antagonists directed at these receptors strongly inhibits the migration of disease-specific effector cells.
  • Example 1 The invention is explained in more detail below with the aid of examples.
  • Example 1 The invention is explained in more detail below with the aid of examples.
  • Example 1 Example 1 :
  • chemokine receptors preferably CCR and CXCR
  • other clusters of the tumor cell surface proteome preferably CCR and CXCR
  • mice type NZW X NZB
  • the mice are used to produce monoclonal antibodies, which is carried out using the routine methods of IPF PharmaCeuticals GmbH.
  • the antibodies checked by Western blot and ELISA can be used for the above-mentioned diagnostic and therapeutic purposes if they are highly purified using the laboratory methods of IPF PharmaCeuticals GmbH.
  • the sequences used for the chemokine receptors must be selected in accordance with sequence ID 1-63.
  • chemokines and chemokine receptors Detection of chemokines and chemokine receptors in primary tumors, tumor metastases and single tumor cells.
  • the tumor cells could be obtained and analyzed by immunohistochemical methods and other molecular biological methods.
  • the primary tumor cells, the metastases and circulating single cells contain a specific composition of chemokines and chemokine receptors.
  • the algorithm of this composition is individually and tumor-dependent of high specificity, which surprisingly enables targeted tumor treatment based on the diagnosed proteome clusters using the method according to the invention.
  • the algorithms of the chemokine receptors are preferably suitable here. According to the invention, these algorithms derived from the tests are defined as follows:

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Abstract

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Erstellung eines Arzneimittels und eines Diagnostikmittels erhalten über eine Proteomanalyse, vorzugsweise enthaltend mindestens zwei unterschiedliche Chemokinrezeptorliganden oder Chemokinrezeptorantikörper, und weiter die Verwendung von mindestens zwei unterschiedlichen Chemokinrezeptorliganden, Chemokinrezeptorantikörper und/oder zwei unterschiedlichen Chemokinrezeptoren. Das Arzneimittel enthält als Inhibitoren vorzugsweise Liganden oder Antikörper von mindestens zwei Chemokinrezeptoren bzw. den zugehörigen Algorithmen des Oberflächen-Chemokinrezeptorproteoms sowie der Verwendung von mindestens einem Chemokinrezeptorliganden und/oder einem Chemokinrezeptor, Peptide und Antikörper sowie deren Verwendung zur Diagnostik und Therapie von Tumorerkrankungen und entzündlichen Erkrankungen. In analoger Weise sind Cluster von analysierten Tumorzelloberflächenproteomen wie Ektoproteasen, Adhäsionsmolekülen oder verschiedenen Rezeptorentypen verwendbar.Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Zwecke der Diagnose und Therapie sowie der medizinischen und gewerblichen Verwendung von Chemokinen und deren korrespondierenden Rezeptoren, ihren Antagonisten einschließlich von Antikörpern, um das Krebswachstum inklusive Metastasierung zu hemmen sowie entzündliche und Autoimmun-erkrankungen zu unterdrücken. Das Verfahren beruht auf der Feststellung, dass Chemokine durch autokrine, parakrine und endokrine Wege über die krankheitsspezifische Konstellation des Chemokinrezeptorproteoms auf spezifische Tumor- und Entzündungszellen wirken. Primär- und Sekundärtumore, sowie spezifische Entzündungszellen werden in ihrem Migrations- und Proliferationsverhalten gesteuert. Durch diagnostischen Nachweis der lokal erhöht exprimierten und regulierten Chemokine sowie der Präsenz der Chemokinrezeptor-Zusammensetzungen ergibt sich die Möglichkeit, das Krebswachstum, die Tumormetastasierung sowie entzündliche als auch Autoimmunkrankheiten entscheidend zu unterdrücken oder vollständig zu verhindern.

Description

Diagnostik- und Arzneimittel zur Untersuchung des Zelloberflächenproteoms von Tumor- und Entzundungszellen sowie zur Behandlung von
Tu morerkran kungen und entzündlichen Erkrankungen vorzugsweise mit Hilfe einer spezifischen Chemokinrezeptor-Analyse und der Chemokinrezeptor-
Ligand-Interaktion.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Erstellung eines Arzneimittels und eines Diagnostikmittels erhalten über eine Proteomanalyse, vorzugsweise enthaltend mindestens zwei unterschiedliche Chemokinrezeptorliganden oder Chemokinrezeptorantikörper, und weiter die Verwendung von mindestens zwei unterschiedlichen Chemokinrezeptorliganden, Chemokinrezeptorantikörper und/oder zwei unterschiedlichen Chemokinrezeptoren. Das Arzneimittel besteht in der Verwendung von Inhibitoren, Liganden oder Antikörpern von mindestens zwei Chemokinrezeptoren bzw. den zugehörigen Algorithmen des Oberflächen- Chemokinrezeptorproteoms sowie der Verwendung von mindestens einem Chemokinrezeptorliganden und/oder einem Chemokinrezeptor, Peptide und Antikörper sowie deren Verwendung zur Diagnostik und Therapie von Tumorerkrankungen und entzündlichen Erkrankungen. In analoger Weise sind Cluster von analysierten Tumorzelloberflachenproteomen wie Ektoproteasen, Adhäsionsmolekülen oder verschiedenen Rezeptorentypen verwendbar.
In jüngster Zeit hat sich immer mehr gezeigt, dass Stoffe der Regulation des Zellwachstums und der Zellmigration diagnostisch und therapeutisch von großem Interesse sind und dass wahrscheinlich eine große Zahl unbekannter Faktoren existieren, die das Krebswachstum steuern, wobei Primär- und Sekundärtumoren sowie die besiedelten Organe miteinander interagieren. Diese Faktoren sind überraschenderweise von klinisch verwertbarer Bedeutung. Dazu gehören insbesondere die Chemokine vom Typ der CC- und der CXC-Chemokine, vorzugsweise z.B. HCC-1 bis HCC-3 und SDF-1 (Schulz-Knappe P et al., J Exp ed 183: 295, 1996; Pardigol A et al., Proc Natl Acad Sei USA 95: 6308, 1998; Nagasawa T et al., Proc Natl Acad Sei USA 91: 2305, 1994). So konnte in neuesten Arbeiten nachgewiesen werden, dass u.a. Zellinien von Tumorzellen die Rezeptoren für die bekannten Chemokine MCP-1 und RANTES besitzen (Wang JM et al., Int J Cancer 75: 900, 1998). Diese Tumorzellinien können somit über die Stimulation der Rezeptoren auf spezifische Chemokine reagieren. Wenn in entsprechenden Zellen, Geweben und Organen das korrespondierende Chemokin-Peptid gebildet wird, kann es zu einer autokrinen, parakrinen oder endokrinen Reaktion kommen, wobei Zellmigration und Zeilproliferation beeinflusst werden. So sollen präferentiell Nierenmetastasen von solchen Tumoren entstehen, die Rezeptoren für MCP-1 und RANTES besitzen, da in der Niere eine starke Expression dieser Chemokine beobachtet wird (Wang JM et al., Int J Cancer 75: 900, 1998). In weiteren neuen Arbeiten wurde auch festgestellt, dass bestimmte Chemokine das Tumorwachstum inhibieren (Wang JM et al., J Interferon Cytokine Res 16: 53, 1996), so dass das Tumorwachstum über eine Chemokin-Applikation auch negativ beeinflusst werden kann. Die Rolle von Chemokinen bei der Migration von Tumorzellen wurde anhand von Mammakarzinomzellinien beobachtet (Youngs et al., Int J Cancer 71: 257, 1997). Auch die Steuerung der Angiogenese wird durch verschiedene Zytokine positiv oder negativ beeinflußt. So ist der Chemokinrezeptor CXCR4, über den das Chemokin SDF-1 seine Wirkung entfaltet, essentiell für die Vaskularisation des gastrointestinalen Traktes (Tachibana K et al., Nature 393: 591, 1998). Diese Faktoren können somit auch im Rahmen der parakrinen Steuerung der Vaskularisation von Tumoren und demzufolge für die Tumorerhaltung von ausschlaggebender Bedeutung sein.
Die bisher bekannten Befunde bezüglich dem Chemokinsystem und Tumoren beruhen immer nur auf der Beobachtung einzelner Chemokinrezeptoren. Das humane Chemokinsystem ist jedoch aufgrund inzwischen über 15 bekannter Chemokinrezeptoren mit über 40 dazugehörigen Chemokinen äußerst komplex und dazu noch redundant. Somit sind die bisher angewendeten diagnostischen und therapeutischen Methodenansätze nicht optimal, um eine spezifische Diagnostik und Therapie, die auf dem Chemokinsystem basiert, durchzuführen. Mit dem erfindungsgemäßen, angewandten Verfahren lässt sich überraschenderweise eine Lösung dieser Problematik erreichen, die somit erstmalig eine zuverlässige Diagnostik und Therapie von Tumor- und Entzündungserkrankungen auf Basis des Chemokinsystems oder weiterer Tumoroberflächenproteomduster erlaubt.
Ein der Erfindung zu Grunde liegendes technisches Problem ist die Verbesserung der Diagnostik von Tumoren und dem Vorliegen entzündlicher Prozesse. Ein weiteres Problem besteht in einer verbesserten Behandlung von Tumoren und entzündlichen Erkrankungen.
Gelöst wird das Problem durch ein Diagnostikmittel und ein Arzneimittel gemäß der Erfindung.
Das erfindungsgemäße Diagnostikmittel enthält mindestens zwei unterschiedliche Liganden von Rezeptoren, die an einem Krankheitsgeschehen beteiligt sind.
Vorzugsweise enthält das erfindungsgemäße Diagnostikmittel mindestens zwei unterschiedliche Chemokinrezeptorliganden wie Protein-Peptidstrukturen, die mit Chemokinrezeptoren (oder anderen Tumorzelloberflächenproteinen) interagieren, nämlich Chemokinrezeptorliganden, Chemokinrezeptorantagonisten und/oder Chemokinrezeptorantikörper. Vorzugsweise sind die Chemokinrezeptorliganden Chemokine, Chemokinderivate, Agonisten oder Antagonisten von Chemokinrezeptoren, Antikörper oder Antikörperfragmente, die die Bindungsstelle des Chemokinrezeptors zumindest teilweise blockieren und überraschenderweise eine Hemmung des Tumorwachstums ergeben.
Insbesondere bevorzugt sind Chemokine ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus den natürlichen Chemokinen C, CC, CXC, CX3C, ihren Analoga, Bindungsproteine und Antikörper, die entsprechend der genannten Chemokine an die spezifischen Rezeptoren binden.
Erfindungsgemäß werden die Chemokinrezeptoren als gesamtes Teilproteom und dazu korrespondierende Chemokinrezeptorliganden in Primär- und Sekundärtumoren und zirkulierenden Einzelzellen vorzugsweise (1) durch immunchemische Verfahren (Immunhistochemie mittels Seπ'enschnitten bzw. multiplen sukzessiven oder simultanen Einzelschnitten, FACS-Analyse) und (2) zusätzlich oder alternativ die Expression auf Transkriptionsebene durch molekularbiologische Methoden (PCR oder Northernanalyse, In-situ-Hybridisierung) erfasst und analysiert. Auch Cluster von analysierten Tumorzelloberflachenproteomen wie Ektoproteasen, Adhäsionsmolekülen oder verschiedenen Rezeptorentypen sind erfindungsgemäß verwendbar.
Mit dem erfindungsgemäßen Diagnostikmittel in engem Zusammenhang steht das erfindungsgemäße Verfahren zur Erkennung von an Krankheitsgeschehen beteiligten Rezeptoren, wobei Expressionsprofile auf Proteomebene untersucht werden mittels zellbiologischer oder cytochemischer Verfahren, insbesondere durch immunchemische Verfahren, Immunhistochemie mittels Serienschnitten bzw. multiplen sukzessiven oder simultanen Einzelschnitten, FACS-Analyse und/oder die Expression von Rezeptoren auf Transkriptionsebene durch molekularbiologische Methoden, insbesondere PCR-, Northernanalyse und/oder In-situ-Hybridisierungs- Verfahren.
Damit ist Gegenstand der vorliegenden Erfindung auch die Verwendung von mindestens zwei unterschiedlichen Chemokinrezeptorliganden und/oder zwei unterschiedlichen Chemokinrezeptoren zur diagnostischen Charakterisierung von Tumoren, die für jede Tumorart und jeden individuellen Tumor verschieden ist. Insbesondere ist das erfindungsgemäße Verfahren für Tumoren anwendbar, die aus der Gruppe bestehend aus colorektalen Tumoren und Prostatatumoren stammen. Aber auch Tumoren anderer Organsysteme können mit dem erfindungsgemäßen Verfahren diagnostisch und damit auch therapeutisch angegangen werden. Darüber hinaus können die mindestens zwei unterschiedlichen Chemokinrezeptoren und/oder zwei unterschiedlichen Chemokinrezeptorliganden zur Diagnose von entzündlichen Prozessen wie Organabstoßungsreaktionen und zur Diagnose von Autoimmunerkrankungen eingesetzt werden. Somit können insbesondere Tumoren, Entzündungserkrankungen und Autoimmunerkrankungen des Blutsystemes, des Lymphsystems, des Herz-Kreislauf-Systems, des Nervensystems, des Respirationstraktes, des Verdauungstraktes, des Endokrinen Systemstems, der Haut einschließlich Anhangsgebilde, des Bewegungsapparates und des Urogenitaltraktes einschließlich der Niere diagnostiziert werden.
Das erfindungsgemäße Diagnostikmittel ermöglicht gegenüber üblichen diagnostischen Methoden eine Erweiterung der zytologischen Charakterisierung von Tumorgeweben, die nach der Diagnostik auch zur Entwicklung einer spezifischen Therapie benutzt werden kann. Zu den gefundenen Chemokinrezeptoren (und analog anderen Tumorzellproteomclustern) werden die Antagonisten/Agonisten der zugehörigen Chemokine sowie die spezifischen Chemokinrezeptorantikörper eingesetzt, um das Zellwachstum zu beeinflussen. Hierbei wird überraschenderweise ein beschleunigter Eintritt des Tumorzelltodes (Apoptose) beobachtet.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist auch ein Arzneimittel enthaltend mindestens einen Inhibitor von mindestens zwei Chemokinrezeptoren.
Das erfindungsgemäße Arzneimittel enthält vorzugsweise Antagonisten von Chemokinrezeptoren, Antikörper oder Antikörperfragmente, die die Bindungsstelle des Chemokinrezeptors zumindest teilweise blockieren. Eine Chemokinrezeptor- Ligand-Interaktion, vorzugsweise eine Protein-Protein(Peptid)-Interaktion mit unspezifischen Molekülen, die aus natürlichen Extrakten, aus synthetischen oder rekombϊnant hergestellten Bindungsproteinen sowie aus anderen Peptid-Protein- Libraries gewonnen werden, reicht aber auch aus, um den überraschenden Effekt der Apoptose von Tumorzellen herbeizuführen.
Die in dem erfindungsgemäßen Arzneimittel verwendbaren Inhibitoren von mindestens zwei Chemokinrezeptoren können zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Tumoren, entzündlichen Erkrankungen, Autoimmunerkrankungen des Knochenmarkes und anderer Organe, Abstoßungsreaktionen bei Transplantaten verwendet werden. Somit können insbesondere Tumoren, Entzündungserkrankungen und Autoimmunerkrankungen des Blutsystemes, des Lymphsystems, des Herz-Kreislauf-Systems, des Nervensystems, des Respirationstraktes, des Verdauungstraktes, des Endokrinen Systemstems, der Haut einschließlich Anhangsgebilde, des Bewegungsapparates und des Urogenitaltraktes einschließlich der Niere behandelt werden.
Vorzugsweise werden Inhibitoren oder Proteinliganden verwendet, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Antagonisten von Chemokinrezeptoren, Antikörper oder Antikörperfragmente, die die Bindungsstelle des Chemokinrezeptors zumindest teilweise blockieren.
Die Tumoren, die insbesondere behandelbar sind, sind ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus colorektalen Tumoren, Prostata-Tumoren sowie weiteren Tumorerkrankungen des Blutsystems, des Lymphsystems, des Herz-Kreislauf- Systems, des Nervensystems, des Respirationstraktes, des Verdauungstraktes, des Endokrinen Systemstems, der Haut einschließlich Anhangsgebilde, des Bewegungsapparates und des Urogenitaltraktes einschließlich der Niere.
Die insbesondere zu behandelnden entzündlichen Prozesse sind ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Asthma bronchiale, chronisch entzündliche Darmerkrankungen, Organrejektion und weitere Entzündungsprozesse des Blutsystems, des Lymphsystems, des Herz-Kreislauf-Systems, des Nervensystems, des Respirationstraktes, des Verdauungstraktes, des Endokrinen Systemstems, der Haut einschließlich Anhangsgebilde, des Bewegungsapparates und des Urogenitaltraktes einschließlich der Niere. Die insbesondere zu behandelnden Autoimmunerkrankungen sind ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Rheumatoide Arthritis, Lupus erythematodes und weitere chronische Entzündungen des Blutsystems, des Lymphsysteme, des Herz- Kreislauf-Systems, des Nervensystems, des Respirationstraktes, des Verdauungstraktes, des Endokrinen Systemstems, der Haut einschließlich Anhangsgebilde, des Bewegungsapparates und des Urogenitaltraktes einschließlich der Niere.
Bei der Diagnose von Organabstoßungsreaktionen nach Organtransplantationen, die insbesondere an aus der Zirkulation von Patienten gewonnenen Leukozyten durchgeführt wurde, ist auch die Verwendung von nur mindestens einem Chemokinrezeptorliganden und/oder einem Chemokinrezeptor möglich.
Gegenstand der Erfindung ist ferner die Verwendung eines Inhibitors eines Chemokinrezeptors zur Herstellung eines Arzneimittels zur Verhinderung oder Linderung von Organabstoßungsreaktionen nach Organtransplantationen, insbesondere nach Transplantationen von Herz, Leber, Niere und Pankreas sowie anderen Organen, Geweben und Zellsystemen des Gastrointestinaltraktes, des Respirationstraktes, des Urogenitaltraktes, Kreislaufsystems, des Neuro- Endokrinium sowie des Bewegungsapparates als auch des Blut- und Immunsystems.
Das erfindungsgemäße Verfahren kann neben der Etablierung neuer Kausalitäten in einem Krankheitsgeschehen auch zum Zwecke der Diagnose und Therapie eingesetzt werden. Mittels des erfindungsgemäßen Verfahrens wurde zum Beispiel die Verwendung von Chemokinen und deren korrespondierenden Rezeptoren, ihren Antagonisten einschließlich von Antikörpern, gefunden, um das Krebswachstum inklusive Metastasierung zu hemmen sowie entzündliche und Autoimmunerkrankungen zu unterdrücken. Das erfindungsgemäße Verfahren beruht auf der Feststellung, dass Chemokine durch autokrine, parakrine und endokrine Wege über die krankheitsspezifische Konstellation des Chemokinrezeptorproteoms auf spezifische Tumor- und Entzündungszellen wirken. Primär- und Sekundärtumore, sowie spezifische Entzündungszellen werden in ihrem Migrations- und Proliferationsverhalten gesteuert. Durch diagnostischen Nachweis der lokal erhöht exprimierten und regulierten Chemokine sowie der Präsenz der Chemokinrezeptor-Zusammensetzungen ergibt sich die Möglichkeit, das Krebswachstum, die Tumormetastasierung sowie entzündliche als auch Autoimmunkrankheiten entscheidend zu unterdrücken oder vollständig zu verhindern.
Die erfindungsgemäßen Peptide mit den Seq ID No 1 bis 40 können als Epitope zur Generierung von Antikörpern eingesetzt werden. Diese erfindungsgemäßen Sequenzen sind (ID 1-40) :
Verwendete Aminosäuresequenzen der N-Terminalen Domänen humaner
Chemokinrezeptoren zur Herstellung spezifscher Antikörper
1 CXCR1 X-MSNITDPQMWDFDDLNFTGMPPADEDYSPCMLETETLNK-Y
2 CXCR2 X-MEDFNMESDSFEDFWKGEDLSNYSYSSTLPPFLLDAAPCEPESLEINK-Y
3 CXCR3 X-MVLEVSDHQVLNDAEVAALLENFSSSYDYGENESDSCCTSPPCPQDFSLNFDR-Y
4 CXCR4 X-MEGISIYTSDNYTEEMGSGDYDSMKEPCFREENANFNKI-Y
5 CXCR5 X-MNYPLTLEMDLENLEDLFWELDRLDNYNDTSLVENHLCPATGPLMASFKAVFVP-Y
4 CXCR6 X-MAEHDYHEDYGFSSFNDSSQEEHQDFLQFSKV-Y
5 CCR1 X-METPNTTEDYDTTTEFDYGDATPCQKVNERAFGA-Y
6 CCR2 X-MLSTSRSRFIRNTNESGEEVTTFFDYDYGAPCHKFDVKQIGA-Y
7 CCR3 X-MTTSLD1Λ/ETFGTTSYYDDVGLLCEKADTRALMA-Y
8 CCR4 X-MNPTDIADTTLDESIYSNYYLYESIPKPCTKEGIKAFGE-Y
9 CCR5 X-MDYQVSSPIYDINYYTSEPCQKINVKQIAA-Y
10 CCR6a X-MSGESMNFSDVFDSSEDYFVSVNTSYYSVDSEMLLCSLQEVRQFSRL-Y
11 CCR6b X-MNFSDVFDSSEDYFVSVNTSYYSVDSEMLLCSLQEVRQFSRL-Y 12 CCR7 X-MDLGKPMKSVLVVALLVIFQVCLCQDEVTDDYIGDNTTVDYTLFESLCSKKDVRNFKAW-Y
13 CCR8 X-MDYTLDLSVTTVTDYYYPDIFSSPCDAELIQTNGK-Y
14 CCR9a X-MTPTDFTSPIPNMADDYGSESTSSMEDYVNFNFTDFYCEKNNVRQFASH-Y
15 CCR9b X-MADDYGSESTSSMEDYVNFNFTDFYCEKNNVRQFASH-Y
16 CCR10 X-MGTEATEQVSWGHYSGDEEDAYSAEPLPELCYKADVQAFSRAFQPSVSLTVA-Y
17 CCR11 X-MALEQNQSTDYYYEENEMNGTYDYSQYELICIKEDVREFAKV-Y
18 XCR1 X-MESSGNPESTTFFYYDLQSQPCENQAWVFAT-Y
19 CX3CR1 X-MDQFPESVTENFEYDDLAEACYIGDIVVFGT-Y
20 D6 X-MAATASPQPLATEDADSENSSFYYYDYLDEVAFMLCRKDAVVSFGKVFL-Y
Verwendete Aminosäuresequenzen der 2. extrazelluläre Loop-Domänen humaner Chemokinrezeptoren zur Herstellung spezifischer Antikörper
21 CXC 1 X-RQAYHPNNSSPVCYEVLGNDTAKWR -Y, insbesondere CFRQAYHPNNSSPV
22 CXCR2 X-RRTVYSSNVSPACYEDMGNNTANWR-Y, insbesondere CFRRTvΥSSNVSPA
23 CXCR3 X-LSAHHDERLNATHCQYNFPQVGR-Y, insbesondere CLSAHHDERLNATH
24 CXCR4 X-NVSEADDRYICDRFYPNDLWWVFQ-Y, insbesondere DRFYPNDLWWVFQFC
25 CXCR5 X- VSQGHHNNSLPRCTFSQENQAETHAWFTSR-Y, insbesondere TFSQENQAETHAWFTSRC 26 CXCR6 X-PQIIYGNVFNLDKLICGYHDEAI-Y, insbesondere
27 CCR1 X-SKTQWEFTHHTCSLHFPHESLREWKL-Y, insbesondere SLHFPHESLREWKLC
28 CCR2 X-TKCQKEDSVYVCGPYFPRGWNNFHTIMR-Y, insbesondere GPYFPRGWNNFHTI RNC
29 CCR3 X-YETEELFEETLCSALYPEDTVYSWRHFHTLRM-Y, insbesondere SALYPEDTVYSWRHFHTLR TC
30 CCR4 X-STCYTERNHTYCKTKYSLNSTTWKVLSSLEI-Y, insbesondere KTKYSLNSTTWKVLSSLEINC
31 CCR5 X-TRSQKEGLHYTCSSHFPYSQYQFWKNFQTLKI-Y, insbesondere SSHFPYSQYQFWKNFQTLKIVC
32 CCR6 X-STFVFNQKYNTQGSDVCEPKYQTVSEPIRW-Y, insbesondere EPKYQTVSEPIRWKC
33 CCR7 X-PELLYSDLQRSSSEQAMRCSLITEHVEA-Y, insbesondere CPELLYSDLQRSSSEQA R
34 CCR8 X-YQVASEDGVLQCYSFYNQQTLKWKIFTNFK -Y, insbesondere YSFYNQQTLKWKIFTNFKMC
35 CCR9 X-PEILYSQIKEESGIAICTMVYPSDESTKL-Y, insbesondere CT VYPSDESTKLK
36 CCR10 X-SQDGQREGQRRCRLIFPEGLTQTV-Y, insbesondere FSQDGQREGQRRC
37 CCR11 X-TVNDNARCIPIFPRYLGTSMKA-Y, insbesondere CIPIFPRYLGTSMKA
38 XCR1 X-HKVLSSGCDYSELTWYLTSVYQH-Y, insbesondere DYSELTWYLTSVYQHC
39 CX3CR1 X-TKQKENECLGDYPEVLQEIWPVLRNVET-Y, insbesondere LGDYPEVLQEIWPVLRNVET
40 D6 X-QTHENPKGVWNCHADFGGHGTIWKLFLRFQQNL-Y, insbesondere HADFGGHGTIWKLFLRFQQNC
wobei X einen Aminosäurerest oder einen Peptidrest von bis zu 30 Aminosäuren bedeutet, wobei Y einen Aminosäurerest oder einen Peptidrest von bis zu 30 Aminosäuren bedeutet
Zur Herstellung der Antikörper werden die erfindungsgemäßen Peptide (Sequenzen gemäß ID 1 - 40), die normalerweise nicht immunogen sind, an den Proteincarrier KLH (Keyhole limpet hemocyanin) gekoppelt. Diese Kopplung geschieht mittels MBS (m-Maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimid Ester) über ein in das Petid terminal integriertes Cystein, oder direkt mittels Carbodiimid.
Die Antikörper werden über herkömmliche Methoden durch Immunisierung vorzugsweise von Mäusen, Kaninchen etc. gewonnen. Auch die Methoden der Herstellung von monoklonalen Antikörpern durch molekularbiologische Verfahren, wie rekombinanter Herstellung, sind anwendbar. Die Antikörper werden nach den bekannten Verfahren gereinigt und für die Verwendung galenisch aufbereitet.
Weiterhin wurden Zellpräparationen, Zellextrakten sowie insbesondere Membranisolate aus überexprimierenden, künstlich transfizierten Chemokin- rezeptor-tragenden Zellen benutzt, um solche spezifische Antikörper zu generieren.
Erfindungsgemäßen wurden dabei Proteine basierend auf bekannten Sequenzen als Epitope zur Generierung von Antikörpern eingesetzt. Diese Sequenzen sind bekannt (ID 41-63): CCR1 ACCESSION P32246 355 aa
1 METPNTTEDY DTTTEFDYGD ATPCQKVNER AFGAQLLPPL YSLVFVIGLV GNILWLVLV 61 QYKRLKNMTS IYLLNLAISD LLFLFTLPFW IDYKLKDDWV FGDAMCKILS GFYYTGLYSE 121 IFFIILLTID RYLAIVHAVF ALRARTVTFG VITSIIIWAL AILASMPGLY FSKTQWEFTH 181 HTCSLHFPHE SLREWKLFQA LKLNLFGLVL PLLVMIICYT GIIKILLRRP NEKKSKAVRL 241 IFVIMIIFFL FWTPYNLTIL ISVFQDFLFT HECEQSRHLD LAVQVTEVIA YTHCCVNPVI 301 YAFVGERFRK YLRQLFHRRV AVHLVKWLPF LSVDRLERVS STSPSTGEHE LSAGF
CCR2a ACCESSION P41597 374 aa
1 MLSTSRSRFI RNTNESGEE TTFFDYDYGA PCHKFDVKQI GAQLLPPLYS LVFIFGFVGN 61 MLVVLILINC KKLKCLTDIY LLNLAISDLL FLITLPLWAH SAANEWVFGN AMCKLFTGLY 121 HIGYFGGIFF IILLTIDRYL AIVHAVFALK ARTVTFGVVT SVITWLVAVF ASVPGIIFTK 181 CQKEDSVYVC GPYFPRGWNN FHTIMRNILG LVLPLLIMVI CYSGILKTLL RCRNEKKRHR 241 AVRVIFTIMI VYFLFWTPYN IVILLNTFQE FFGLSNCEST SQLDQATQVT ETLGMTHCCI 301 NPIIYAFVGE KFRSLFHIAL GCRIAPLQKP VCGGPGVRPG KNVKVTTQGL LDGRGKGKSI 361 GRAPEASLQD KEGA
CCR2b ACCESSION NP_000639 360 aa
1 MLSTSRSRFI RNTNESGEEV TTFFDYDYGA PCHKFDVKQI GAQLLPPLYS LVFIFGFVGN 61 MLVVLILINC KKLKCLTDIY LLNLAISDLL FLITLPLWAH SAANEWVFGN AMCKLFTGLY 121 HIGYFGGIFF IILLTIDRYL AIVHAVFALK ARTVTFGVVT SVITWLVAVF ASVPGIIFTK 181 CQKEDSVYVC GPYFPRGWNN FHTIMRNILG LVLPLLIMVI CYSGILKTLL RCRNEKKRHR 241 AVRVIFTIMI VYFLFWTPYN IVILLNTFQE FFGLSNCEST SQLDQATQVT ETLGMTHCCI 301 NPIIYAFVGE KFRRYLSVFF RKHITKRFCK QCPVFYRETV DGVTSTNTPS TGEQEVSAGL
CCR3 ACCESSION P51677 355 aa
1 MTTSLDTVET FGTTSYYDDV GLLCEKADTR ALMAQFVPPL YSLVFTVGLL GNVVVVMILI 61 KYRRLRIMTN IYLLNLAISD LLFLVTLPFW IHYVRGHNWV FGHGMCKLLS GFYHTGLYSE 121 IFFIILLTID RYLAIVHAVF ALRARTVTFG VITSIVTWGL AVLAALPEFI FYETEELFEE 181 TLCSALYPED TVYSWRHFHT LRMTIFCLVL PLLVMAICYT GIIKTLLRCP SKKKYKAIRL 241 IFVIMAVFFI FWTPYNVAIL LSSYQSILFG NDCERSKHLD LVMLVTEVIA YSHCCMNPVI 301 YAFVGERFRK YLRHFFHRHL LMHLGRYIPF LPSEKLERTS SVSPSTAEPE LSIVF
CCR4 ACCESSION P51679 360 aa
1 MNPTDIADTT LDESIYSNYY LYESIPKPCT KEGIKAFGEL FLPPLYSLVF VFGLLGNSVV 61 VLVLFKYKRL RSMTDVYLLN LAISDLLFVF SLPFWGYYAA DQWVFGLGLC KMISWMYLVG 121 FYSGIFFVML MSIDRYLAIV HAVFSLRART LTYGVITSLA TWSVAVFASL PGFLFSTCYT 181 ERNHTYCKTK YSLNSTTWKV LSSLEINILG LVIPLGIMLF CYSMIIRTLQ HCKNEKKNKA 241 VKMIFAVVVL FLGFWTPYNI VLFLETLVEL EVLQDCTFER YLDYAIQATE TLAFVHCCLN 301 PIIYFFLGEK FRKYILQLFK TCRGLFVLCQ YCGLLQIYSA DTPSSSYTQS TMDHDLHDAL 361
CCR5 ACCESSION P51681 352 aa
1 MDYQVSSPIY DINYYTSEPC QKINVKQIAA RLLPPLYSLV FIFGFVGNML VILILINCKR 61 LKSMTDIYLL NLAISDLFFL LTVPFWAHYA AAQWDFGNTM CQLLTGLYFI GFFSGIFFII 121 LLTIDRYLAV VHAVFALKAR TVTFGVVTSV ITWVVAVFAS LPGIIFTRSQ KEGLHYTCSS 181 HFPYSQYQFW KNFQTLKIVI LGLVLPLLVM VICYSGILKT LLRCRNEKKR HRAVRLIFTI 241 MIVYFLFWAP YNIVLLLNTF QEFFGLNNCS SSNRLDQAMQ VTETLGMTHC CINPIIYAFV 301 GEKFRNYLLV FFQKHIAKRF CKCCSIFQQE APERASSVYT RSTGEQEISV GL
CCR6a ACCESSION P51684 374 aa
1 MSGESMNFSD VFDSSEDYFV SVNTSYYSVD SEMLLCSLQE VRQFSRLFVP IAYSLICVFG 61 LLGNILVVIT FAFYKKARSM TDVYLLNMAI ADILFVLTLP FWAVSHATGA WVFSNATCKL 121 LKGIYAINFN CGMLLLTCIS MDRYIAIVQA TKSFRLRSRT LPRSKIICLV VWGLSVIISS 181 STFVFNQKYN TQGSDVCEPK YQTVSEPIRW KLLMLGLELL FGFFIPLMFM IFCYTFIVKT 241 LVQAQNSKRH KAIRVIIAVV LVFLACQIPH NMVLLVTAAN LGKMNRSCQS EKLIGYTKTV 301 TEVLAFLHCC LNPVLYAFIG QKFRNYFLKI LKDLWCVRRK YKSSGFSCAG RYSENISRQT 361 SETADNDNAS SFTM
CCR6b 369 aa
1 MNFSDVFDSS EDYFVSVNTS YYSVDSEMLL CSLQEVRQFS RLFVPIAYSL ICVFGLLGNI 61 LVVITFAFYK KARSMTDVYL LNMAIADILF VLTLPFWAVS HATGAWVFSN ATCKLLKGIY 121 AINFNCGMLL LTCISMDRYI AIVQATKSFR LRSRTLPRSK IICLVVWGLS VIISSSTFVF 181 NQKYNTQGSD VCEPKYQTVS EPIRWKLLML GLELLFGFFI PLMFMIFCYT FIVKTLVQAQ 241 NSKRHKAIRV IIAVVLVFLA CQIPHNMVLL VTAANLGKMN RSCQSEKLIG YTKTVTEVLA 301 FLHCCLNPVL YAFIGQKFRN YFLKILKDLW CVRRKYKSSG FSCAGRYSEN ISRQTSETAD 361 NDNASSFTM
CCR7 ACCESSION P32248 378 aa
1 MDLGKPMKSV LVVALLVIFQ VCLCQDEVTD DYIGDNTTVD YTLFESLCSK KDVRNFKAWF 61 LPIMYSIICF VGLLGNGLVV LTYIYFKRLK TMTDTYLLNL AVADILFLLT LPFWAYSAAK 121 SWVFGVHFCK LIFAIYKMSF FSGMLLLLCI SIDRYVAIVQ AVSAHRHRAR VLLISKLSCV 181 GIWILATVLS IPELLYSDLQ RSSSEQAMRC SLITEHVEAF ITIQVAQMVI GFLVPLLAMS 241 FCYLVIIRTL LQARNFERNK AIKVIIAVVV VFIVFQLPYN G VLAQTVAN FNITSSTCEL 301 SKQLNIAYDV TYSLACVRCC VNPFLYAFIG VKFRNDLFKL FKDLGCLSQE QLRQWSSCRH 361 IRRSSMSVEA ETTTTFSP
CCR8 ACCESSION P51685 355 aa
1 MDYTLDLSVT TVTDYYYPDI FSSPCDAELI QTNGKLLLAV FYCLLFVFSL LGNSLVILVL 61 VVCKKLRSIT DVYLLNLALS DLLFVFSFPF QTYYLLDQWV FGTVMCK VS GFYYIGFYSS 121 MFFITLMSVD RYLAWHAVY ALKVRTIRMG TTLCLAVWLT AIMATIPLLV FYQVASEDGV
181 LQCYSFYNQQ TLKWKIFTNF KMNILGLLIP FTIFMFCYIK ILHQLKRCQN HNKTKAIRLV
241 LIVVIASLLF WVPFNVVLFL TSLHSMHILD GCSISQQLTY ATHVTEIISF THCCVNPVIY
301 AFVGEKFKKH LSEIFQKSCS QIFNYLGRQM PRESCEKSSS CQQHSSRSSS VDYIL
CCR9a ACCESSION XP_003251 369 aa
1 MTPTDFTSPI PNMADDYGSE STSSMEDYVN FNFTDFYCEK NNVRQFASHF LPPLYWLVFI 61 VGALGNSLVI LVYWYCTRVK TMTDMFLLNL AIADLLFLVT LPFWAIAAAD QWKFQTFMCK 121 VVNSMYKMNF YSCVLLIMCI SVDRYIAIAQ AMRAHTWREK RLLYSKMVCF TIWVLAAALC 181 IPEILYSQIK EESGIAICTM VYPSDESTKL KSAVLTLKVI LGFFLPFVVM ACCYTIIIHT 241 LIQAKKSSKH KALKVTIT /L TVFVLSQFPY NCILLVQTID AYAMFISNCA VSTNIDICFQ 301 VTQTIAFFHS CLNPVLYVFV GERFRRDLVK TLKNLGCISQ AQWVSFTRRE GSLKLSSMLL 361 ETTSGALSL
CCR9b ACCESSION P51686 357 aa
1 MADDYGSEST SSMEDYVNFN FTDFYCEKNN VRQFASHFLP PLYWLVFIVG ALGNSLVILV 61 YWYCTRVKTM TDMFLLNLAI ADLLFLVTLP FWAIAAADQW KFQTFMCKVV NSMYKMNFYS 121 CVLLIMCISV DRYIAIAQAM RAHTWREKRL LYSKMVCFTI WVLAAALCIP EILYSQIKEE 181 SGIAICTMVY PSDESTKLKS AVLTLKVILG FFLPFVVMAC CYTIIIHTLI QAKKSSKHKA 241 LKVTITVLTV FVLSQFPYNC ILLVQTIDAY AMFISNCAVS TNIDICFQVT QTIAFFHSCL 301 NPVLYVFVGE RFRRDLVKTL KNLGCISQAQ WVSFTRREGS LKLSSMLLET TSGALSL
CCR10 ACCESSION P46092 362 aa
1 MGTEATEQVS WGHYSGDEED AYSAEPLPEL CYKADVQAFS RAFQPSVSLT VAALGLAGNG 61 LVLATHLAAR RAARSPTSAH LLQLALADLL LALTLPFAAA GALQGWSLGS ATCRTISGLY 121 SASFHAGFLF LACISADRYV AIARALPAGP RPSTPGRAHL VSVIVWLLSL LLALPALLFS 181 QDGQREGQRR CRLIFPEGLT QTVKGASAVA QVALGFALPL GVMVACYALL GRTLLAARGP 241 ERRRALRVVV ALVAAFWLQ LPYSLALLLD TADLLAARER SCPASKRKDV ALLVTSGLAL 301 ARCGLNPVLY AFLGLRFRQD LRRLLRGGSS PSGPQPRRGC PRRPRLSSCS APTETHSLSW 361 DN
CCR11 ACCESSION AAF61299 350 aa
1 MALEQNQSTD YYYEENEMNG TYDYSQYELI CIKEDVREFA KVFLPVFLTI VFVIGLAGNS 61 MVVAIYAYYK KQRTKTDVYI LNLAVADLLL LFTLPFWAVN AVHGWVLGKI MCKITSALYT 121 LNFVSGMQFL ACISIDRYVA VTKVPSQSGV GKPCWIICFC VWMAAILLSI PQLVFYTVND 181 NARCIPIFPR YLGTSMKALI QMLEICIGFV VPFLIMGVCY FITARTLMKM PNIKISRPLK 241 VLLTVVIVFI VTQLPYNIVK FCRAIDIIYS LITSCNMSKR MDIAIQVTES IALFHSCLNP 301 ILYVFMGASF KNYVMKVAKK YGSWRRQRQS VEEFPFDSEG PTEPTSTFSI
CXCR1 ACCESSION P25024 350 aa 1 MSNITDPQMW DFDDLNFTGM PPADEDYSPC MLETETLNKY VVIIAYALVF LLSLLGNSLV
61 MLVILYSRVG RSVTDVYLLN LALADLLFAL TLPIWAASKV NGWIFGTFLC KVVSLLKEVN
121 FYSGILLLAC ISVDRYLAIV HATRTLTQKR HLVKFVCLGC WGLSMNLSLP FFLFRQAYHP
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301 NPIIYAFIGQ NFRHGFLKIL AMHGLVSKEF LARHRVTSYT SSSVNVSSNL
56 CXCR2 ACCESSION P25025 360 aa
1 MEDFNMESDS FEDFWKGEDL SNYSYSSTLP PFLLDAAPCE PESLEINKYF VVIIYALVFL 61 LSLLGNSLVM LVILYSRVGR SVTDVYLLNL ALADLLFALT LPIWAASKVN GWIFGTFLCK 121 VVSLLKEVNF YSGILLLACI SVDRYLAIVH ATRTLTQKRY LVKFICLSIW GLSLLLALPV 181 LLFRRTVYSS NVSPACYEDM GNNTANWRML.LRILPQSFGF IVPLLIMLFC YGFTLRTLFK 241 AHMGQKHRAM RVIFAWLIF LLCWLPYNLV LLADTLMRTQ VIQETCERRN HIDRALDATE 301 ILGILHSCLN PLIYAFIGQK FRHGLLKILA IHGLISKDSL PKDSRPSFVG SSSGHTSTTL
57 CXCR3 ACCESSION P49682 368 aa
1 MVLEVSDHQV LNDAEVAALL ENFSSSYDYG ENESDSCCTS PPCPQDFSLN FDRAFLPALY
61 SLLFLLGLLG NGAVAAVLLS RRTALSSTDT FLLHLAVADT LLVLTLPLWA VDAAVQWVFG
121 SGLCKVAGAL FNINFYAGAL LLACISFDRY LNIVHATQLY RRGPPARVTL TCLAVWGLCL
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301 SVTSGLGYMH CCLNPLLYAF VGVKFRERMW MLLLRLGCPN QRGLQRQPSS SRRDSSWSET
361 SEASYSGL
58 CXCR4 ACCESSION P30991 352 aa
1 MEGISIYTSD NYTEEMGSGD YDSMKEPCFR EENANFNKIF LPTIYSIIFL TGIVGNGLVI 61 LVMGYQKKLR SMTDKYRLHL SVADLLFVIT LPFWAVDAVA NWYFGNFLCK AVHVIYTVNL 121 YSSVLILAFI SLDRYLAIVH ATNSQRPRKL LAEKWYVGV WIPALLLTIP DFIFANVSEA 181 DDRYICDRFY PNDLWVVVFQ FQHIMVGLIL PGIVILSCYC IIISKLSHSK GHQKRKALKT 241 TVILILAFFA CWLPYYIGIS IDSFILLEII KQGCEFENTV HKWISITEAL AFFHCCLNPI 301 LYAFLGAKFK TSAQHALTSV SRGSSLKILS KGKRGGHSSV STESESSSFH SS
59 CXCR5 ACCESSION P32302 372 aa
1 MNYPLTLEMD LENLEDLFWE LDRLDNYNDT SLVENHLCPA TEGPLMASFK AVFVPVAYSL 61 IFLLGVIGNV LVLVILERHR QTRSSTETFL FHLAVADLLL VFILPFAVAE GSVGWVLGTF 121 LCKTVIALHK VNFYCSSLLL ACIAVDRYLA IVHAVHAYRH RRLLSIHITC GTIWLVGFLL 181 ALPEILFAKV SQGHHNNSLP RCTFSQENQA ETHAWFTSRF LYHVAGFLLP MLVMGWCYVG 241 VVHRLRQAQR RPQRQKAVRV AILVTSIFFL CWSPYHIVIF LDTLARLKAV DNTCKLNGSL 301 PVAITMCEFL GLAHCCLNPM LYTFAGVKFR SDLSRLLTKL GCTGPASLCQ LFPSWRRSSL 361 SESENATSLT TF
60 CXCR6 ACCESSION NP_006555 342 aa
1 MAEHDYHEDY GFSSFNDSSQ EEHQDFLQFS KVFLPCMYLV VFVCGLVGNS LVLVISIFYH 61 KLQSLTDVFL VNLPLADLVF VCTLPFWAYA GIHEWVFGQV MCKSLLGIYT INFYTSMLIL 121 TCITVDRFIV VVKATKAYNQ QAKRMTWGKV TSLLIWVISL LVSLPQIIYG NVFNLDKLIC 181 GYHDEAISTV VLATQMTLGF FLPLLTMIVC YSVIIKTLLH AGGFQKHRSL KIIFLVMAVF 241 LLTQMPFNLM KFIRSTHWEY YAMTSFHYTI MVTEAIAYLR ACLNPVLYAF VSLKFRKNFW 301 KLVKDIGCLP YLGVSHQWKS SEDNSKTFSA SHNVEATSMF QL
61 CX3CR1 ACCESSION P49238 355 aa
1 MDQFPESVTE NFEYDDLAEA CYIGDIVVFG TVFLSIFYSV IFAIGLVGNL L VFALTNSK 61 KPKSVTDIYL LNLALSDLLF VATLPFWTHY LINEKGLHNA MCKFTTAFFF IGFFGSIFFI 121 TVISIDRYLA IVLAANSMNN RTVQHGVTIS LGVWAAAILV AAPQFMFTKQ KENECLGDYP 181 EVLQEIWPVL RNVETNFLGF LLPLLIMSYC YFRIIQTLFS CKNHKKAKAI KLILLVVIVF 241 FLFWTPYNVM IFLETLKLYD FFPSCDMRKD LRLALSVTET VAFSHCCLNP LIYAFAGEKF 301 RRYLYHLYGK CLAVLCGRSV HVDFSSSESQ RSRHGSVLSS NFTYHTSDGD ALLLL
62 XCR1 ACCESSION P46094 333 aa
1 MESSG PEST TFFYYDLQSQ PCENQAWVFA TLATTVLYCL VFLLSLVGNS LVLWVLVKYE 61 SLESLTNIFI LNLCLSDLVF ACLLPVWISP YHWGWVLGDF LCKLLNMIFS ISLYSSIFFL 121 TIMTIHRYLS VVSPLSTLRV PTLRCRVLVT MAVWVASILS SILDTIFHKV LSSGCDYSEL 181 TWYLTSVYQH NLFFLLSLGI ILFCYVEILR TLFRSRSKRR HRTVKLIFAI VVAYFLSWGP 241 YNFTLFLQTL FRTQIIRSCE AKQQLEYALL ICRNLAFSHC CFNPVLYVFV GVKFRTHLKH 301 VLRQFWFCRL QAPSPASIPH SPGAFAYEGA SFY
63 D6 ACCESSION XP_003126 384 aa
1 MAATASPQPL ATEDADSENS SFYYYDYLDE VAFMLCRKDA VVSFGKVFLP VFYSLIFVLG 61 LSGNLLLLMV LLRYVPRRRM VEIYLLNLAI SNLLFLVTLP FWGISVAWHW VFGSFLCKMV 121 STLYTINFYS GIFFISCMSL DKYLEIVHAQ PYHRLRTRAK SLLLATIVWA VSLAVSIPDM 181 VFVQTHENPK GVWNCHADFG GHGTIWKLFL RFQQNLLGFL LPLLAMIFFY SRIGCVLVRL 241 RPAGQGRALK IAAALVVAFF VLWFPYNLTL FLHTLLDLQV FGNCEVSQHL DYALQVTESI 301 AFLHCCFSPI LYAFSSHRFR QYLKAFLAAV LGWHLAPGTA QASLSSCSES SILTAQEEMT 361 GMNDLGERQS ENYPNKEDVG NKSA Die erfindungsgemäßen Arzneimittel können in geeigneten galenischen Applikationsformen, insbesondere in lyophilisierter, mit Mannit oder ähnlichen Zuckern aufgenommener Form in sterilen Ampullen zur Auflösung in physiologischer Kochsalzlösung und/oder Infusionslösung zur wiederholten Einzelinjektion und/oder Dauerinfusion in Mengen von 300 mg bis 30 mg reiner Chemokinrezeptorliganden, insbesondere Chemokine, Chemokinagonisten oder -antagonisten sowie Chemokin- und Chemokinrezeptorantikörper pro Therapieeinheit verabreicht werden. Vorzugsweise wird das erfindungsgemäße Arzneimittel in einer galenischen Applikationsform, bei der das Medikament in biokompatiblen Mikrosphären eingesetzt wird, und über Aerosol, intravenöse oder subkutane Applikation systemisch oder lokal verabreicht.
Erfindungsgemäß kann in diesem Verfahren auch folgendermaßen vorgegangen werden. Die Tumorzellen, deren Rezeptorenzusammensetzung untersucht werden soll, wird parallel in vitro gezüchtet, und die daraus erhaltenen Zellen werden ebenfalls auf ihre Rezeptorzusammensetzung untersucht und mit Chemokinen vorzugsweise der Typen HCC-1, HCC-2, MCP-1, RANTES oder SDF-1 behandelt. Darüber hinaus wurden auch die bekannten Analoga eingesetzt. Mit dem modifizierte Boyden-Migrationskammer-Verfahren ist feststellbar, dass die Tumorzellen bei Gabe von Agonisten, die an die entsprechenden Chemokinrezeptoren binden, chemotaktisch reagieren. Die Hemmung ihrer Migration wird durch vorherige Inkubation mit Antagonisten oder Rezeptor- Antikörpern bestätigt.
Bei Verwendung hochgereinigter Antikörper konnte festgestellt werden, dass diese bei in vitro und in vivo Modellen in der Lage sind die Apoptose von Tumorzellen zu bewirken. Züchtet man Zellinien oder entnommene Tumorzellen unter Benutzung der üblichen Zellkulturverfahren, wird deren Überlebenszeit in vitro durch Beigabe von Chemokin-Antikörpern, deren korrespondierende Rezeptoren zuvor auf der Zelloberfläche dieser Zelltypen nachgewiesen wurden, stark reduziert. Dabei ist eine Apoptose einer großen Zahl dieser kultivierten Zellen zu beobachten.
Auch bei in vivo Modellen kann man überraschenderweise eine Tumorzellabnahme durch Apoptose feststellen.
Da Nacktmäuse ein defizientes Immunsystem besitzen, kann das Metastasierungsverhalten in einem Wirtskörper in einem Nacktmaus-Modell untersucht werden, ohne dass die zwischen Spezies bekannten Immunreaktionen stattfinden und eine Abstoßung der Fremdzellen erfolgt. Nacktmäuse werden in an sich bekannter Weise mit Tumorzellen oder Tumor-Zellinien, deren Chemokinrezeptor-Verteilungsmuster analysiert worden war, geimpft und die Metastasierung durch diese Zellen bei Behandlung mit Chemokinen und bei Behandlung mit Chemokinantagonisten und/oder Rezeptorantikörpern überprüft. Dabei ergibt sich überraschenderweise, dass zu den gefundenen Rezeptoren gehörende Chemokinantagonisten und Rezeptorantikörper eine Metastasenbildung deutlich hemmen oder verhindern, während die Chemokingabe zu einer Modulation des Tumorwachstums führt. Überraschenderweise ergibt sich ebenfalls, dass die durch Immunhistochemie analysierten Präparate eine spezifische Verteilung von Chemokinen und Chemokinrezeptoren im Tumor und tumorumgebenden Gewebe zeigen. Damit wurden weitere gezielte Eingriffsmöglichkeiten erkannt.
Diese Intervention entsprechend des erfindungsgemäßen Verfahrens besteht darin, die Proteomanalyse der Chemokine und ihrer Rezeptoren zusätzlich durch die Analyse antitumoraler Peptide/Proteine im gleichen Verfahren zu erweitern. Daraus ergibt sich die Erweiterung des diagnostischen als auch therapeutischen Ansatzes, insbesondere gegen weitere Cluster des Tumorzelloberflächenproteoms gerichtete Antagonisten anzuwenden. Eine Verstärkung dieser Effekte kann durch eine Kombination mit Chemokinrezeptor-antagonisten und -antikörpern erreicht werden.
Um diese Befunde zu bestätigen, können auch Tumorzellinien (z.B. vorzugsweise LNCaP-, PC-3-, DU-145, HT-29-, Caco-2-, T-84-) mit einem oder mehreren der Chemokinrezeptoren stabil transfiziert werden. Nach subsequenter Injektion dieser Zellen in Tiere, bei denen in der Leber transgen ein zum Rezeptor korrespondierendes Chemokin überexprimiert ist, siedeln sich solche Tumorzellen an. Solche modifizierten Zellen bilden damit vorzugsweise Metastasen in der Leber.
Bei Verwendung des Verfahrens in Proben von Effektorzellen in entzündlichen (akute Abstoßung in der Nierentransplantation) und Autoimmunerkrankungen (Rheumatoide Arthritis) kann auch eine spezifische Zusammensetzung des Chemokin-/Chemokinrezeptorproteoms, insbesondere die Chemokinrezeptoren CXCR4, und CCR5 und/oder CXCR3, bei der Abstoßung von Nierentransplantaten nachgewiesen werden. Bei in vitro Versuchen ist auch nachgewiesen, dass ein Gemisch von Antikörpern und Antagonisten auf diese Rezeptoren gerichtet die Migration von krankheitsspezifischen Effektorzellen stark hemmt.
Die Erfindung wird nachfolgend anhand von Beispielen näher erläutert. Beispiel 1 :
Herstellung spezifischer Antikörper gegen Chemokin-Rezeptoren (vorzugsweise CCR und CXCR) und andere Cluster des Tumorzelloberflächenproteoms.
Zur Herstellung spezifischer Antikörper gegen Chemokin-Rezeptoren hat sich überraschenderweise gezeigt, dass die Benutzung von spezifischen Aminosäuresequenzen (siehe Tabelle 1 und 2) insbesondere gegen die (1) N- terminale extrazelluläre und die (2) zweite extrazelluläre Loop-Domäne dieser 7- TM D-Rezeptoren (sieben transmembranäre Domänen) besonders für die Immunisierung geeignet sind, wenn die synthetisierten Peptide nach den üblichen Verfahren an Carrier-Moleküle gekoppelt sind und bei Mäusen injiziert werden. Des weiteren eignen sich auch multiple antigene Peptide (MAP), die mittels Lysin zu größeren Molekülen verbunden sind, oder Chemokinrezeptor-transfizierte Zellinien (Sequenzen gemäß Tabelle 3), um diese Antikörper herzustellen. Als weitere Methode hat sich die Verwendung von Immunogenen aus stabil transfizierten, Chemokinrezeptor tragenden Zellen überraschend gut bewährt, wobei Membranisolate, Zellextrakte mit kompletten oder fragmentierten Rezeptoren oder auch lyophilisierte Gesamtpräparate benutzt wurden.
Die Mäuse (Typ NZW X NZB) werden zur Herstellung monoklonaler Antikörper eingesetzt, was mit den Routinemethoden der IPF PharmaCeuticals GmbH durchgeführt wird. Die durch Western-Blot und ELISA überprüften Antikörper können für die genannten diagnostischen und therapeutischen Zwecke eingesetzt werden, wenn diese mit den Labormethoden der IPF PharmaCeuticals GmbH hochaufgereinigt werden. Im einzelnen sind die benutzten Sequenzen für die Chemokin-Rezeptoren, entsprechend Sequenz ID 1-63 zu wählen.
Beispiel 2:
Nachweis von Chemokinen und Chemokinrezeptoren in Primärtumoren, Tumormetastasen und Tumoreinzelzellen.
Bei der operativen Behandlung von Tumoren (z.B. Colon, Prostata) und ihren Metastasen, die beispielsweise aus der Leber bzw. Lymphknoten entfernt wurden, konnten die Tumorzellen gewonnen werden und durch immunhistochemische Methoden sowie weitere molekularbiologische Methoden analysiert werden. Bei den immunchemischen und molekularbiologischen Analysen wurde festgestellt, dass die Primärtumor-Zellen, die Metastasen und zirkulierende Einzelzellen (gewonnen aus dem Blut von Patienten) eine spezifische Zusammensetzung von Chemokinen und Chemokinrezeptoren enthalten. Der Algorithmus dieser Zusammensetzung ist individuell und tumorabhängig von hoher Spezifizität, was überraschend die gezielte Tumorbehandlung auf der Basis der diagnostizierten Proteomcluster nach dem erfindungsgemäßen Verfahren ermöglicht. Überraschend sind hier vorzugsweise die Algorithmen der Chemokinrezeptoren geeignet. Diese aus den Versuchen abgeleiteten Algorithmen sind erfindungsgemäß folgendermaßen definiert:
X = neu zu identifizierende Chemokinrezeptoren n = 0 bis co weitere Chemokirezeptoren bzw. neu zu identifizierende Chemokinrezeptoren
CCR1 + CCR2 + n CCR2 + CCR5 + n CCR3 + CCR8 + n
CCR1 + CCR3 + n CCR2 + CCR6 + n CCR3 + CCR9 + n
CCR1 + CCR4 + n CCR2 + CCR7 + n CCR3 + CCR10 + n
CCR1 + CCR5 + n CCR2 + CCR8 + n CCR3 + CCR11 + n
CCR1 + CCR6 + n CCR2 + CCR9 + n CCR3 + CXCR1 + n
CCR1 + CCR7 + n CCR2 + CCR10 + n CCR3 + CXCR2 + n
CCR1 + CCR8 + n CCR2 + CCR11 + n CCR3 + CXCR3 + n
CCR1 + CCR9 + n CCR2 + CXCR1 + n CCR3 + CXCR4 + n
CCR1 + CCR10 + n CCR2 + CXCR2 + n CCR3 + CXCR5 + n
CCR1 + CCR11 + n CCR2 + CXCR3 + n CCR3 + CXCR6 + n
CCR1 + CXCR1 + n CCR2 + CXCR4 + n CCR3 + XCR1 + n
CCR1 + CXCR2 + n CCR2 + CXCR5 + n CCR3 + CX3CR1 + n
CCR1 + CXCR3 + n CCR2 + CXCR6 + n CCR3 + D6 + n
CCR1 + CXCR4 + n CCR2 + XCR1 + n CCR3 + X + n
CCR1 + CXCR5 + n CCR2 + CX3CR1 + n
CCR1 + CXCR6 + n CCR2 + D6 + n CCR4 + CCR1 + n
CCR1 + XCR1 + n CCR2 + X + n CCR4 + CCR2 + n
CCR1 + CX3CR1 + n CCR4 + CCR3 + n
CCR1 + D6 + n CCR3 + CCR1 + n CCR4 + CCR5 + n
CCR1 + X + n CCR3 + CCR2 + n CCR4 + CCR6 + n
CCR3 + CCR4 + n CCR4 + CCR7 + n
CCR2 + CCR1 + n CCR3 + CCR5 + n CCR4 + CCR8 + n
CCR2 + CCR3 + n CCR3 + CCR6 + n CCR4 + CCR9 + n
CCR2 + CCR4 + n CCR3 + CCR7 + n CCR4 + CCR10 + n CCR4 + CCR11 + n CCR6 + CCR9 + n CCR8 + CCR6 + n
CCR4 + CXCR1 + n CCR6 + CCR10 + n CCR8 + CCR7 + n
CCR4 + CXCR2 + n CCR6 + CCR11 + n CCR8 + CCR9 + n
CCR4 + CXCR3 + n CCR6 + CXCR1 + n CCR8 + CCR10 + n
CCR4 + CXCR4 + n CCR6 + CXCR2 + n CCR8 + CCR11 + n
CCR4 + CXCR5 + n CCR6 + CXCR3 + n CCR8 + CXCR1 + n
CCR4 + CXCR6 + n CCR6 + CXCR4 + n CCR8 + CXCR2 + n
CCR4 + XCR1 + n CCR6 + CXCR5 + n CCR8 + CXCR3 + n
CCR4 + CX3CR1 + n CCR6 + CXCR6 + n CCR8 + CXCR4 + n
CCR4 + D6 + n CCR6 + XCR1 + n CCR8 + CXCR5 + n
CCR4 + X + n CCR6 + CX3CR1 + n CCR8 + CXCR6 + n
CCR6 + D6 + n CCR8 + XCR1 + n
CCR5 + CCR1 + n CCR6 + X + n CCR8 + CX3CR1 + n
CCR5 + CCR2 + n CCR8 + D6 + n
CCR5 + CCR3 + n CCR7 + CCR1 + n CCR8 + X + n
CCR5 + CCR4 + n CCR7 + CCR2 + n
CCR5 + CCR6 + n CCR7 + CCR3 + n CCR9 + CCR1 + n
CCR5 + CCR7 + n CCR7 + CCR4 + n CCR9 + CCR2 + n
CCR5 + CCR8 + n CCR7 + CCR5 + n CCR9 + CCR3 + n
CCR5 + CCR9 + n CCR7 + CCR6 + n CCR9 + CCR4 + n
CCR5 + CCR10 + n CCR7 + CCR8 + n CCR9 + CCR5 + n
CCR5 + CCR11 + n CCR7 + CCR9 + n CCR9 + CCR6 + n
CCR5 + CXCR1 + n CCR7 + CCR10 + n CCR9 + CCR7 + n
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CCR5 + CXCR4 + n CCR7 + CXCR2 + n CCR9 + CCR11 + n
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CCR5 + CXCR6 + n CCR7 + CXCR4 + n CCR9 + CXCR2 + n
CCR5 + XCR1 + n CCR7 + CXCR5 + n CCR9 + CXCR3 + n
CCR5 + CX3CR1 + n CCR7 + CXCR6 + n CCR9 + CXCR4 + n
CCR5 + D6 + n CCR7 + XCR1 + n CCR9 + CXCR5 + n
CCR5 + X + n CCR7 + CX3CR1 + n CCR9 + CXCR6 + n
CCR7 + D6 + n CCR9 + XCR1 + n
CCR6 + CCR1 + n CCR7 + X + n CCR9 + CX3CR1 + n
CCR6 + CCR2 + n CCR9 + D6 + n
CCR6 + CCR3 + n CCR8 + CCR1 + n CCR9 + X + n
CCR6 + CCR4 + n CCR8 + CCR2 + n
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CXCR6 + CXCR3 + n CX3CR1 + CXCR1 + n
CXCR6 + CXCR4 + n CX3CR1 + CXCR2 + n
CXCR6 + CXCR5 + n CX3CR1 + CXCR3 + n

Claims

Patentansprüche
1. Diagnostikmittel enthaltend mindestens zwei unterschiedliche Liganden von Rezeptoren, die an einem Krankheitsgeschehen beteiligt sind.
2. Diagnostikmittel enthaltend mindestens zwei unterschiedliche Chemokinrezeptorliganden.
3. Diagnostikmittel nach Anspruch 2, wobei die Chemokinrezeptorliganden Chemokine, Chemokinderivate, Agonisten oder Antagonisten von Chemokinrezeptoren sind, Agonisten und Antagonisten von Chemokinrezeptoren, Antikörper oder Antikörperfragmente, die die Bindungsstelle des Chemokinrezeptors zumindest teilweise blockieren, sind.
4. Diagnostikmittel nach Anspruch 2 und 3, wobei die Chemokine ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus C, CC, CXC, CX3C Chemokinen ihren pharmakolagischen Analoga, Bindungsproteine und Antikörper, die entsprechend der genannten Chemokine an die spezifischen Rezeptoren binden.
5. Verwendung von mindestens zwei unterschiedlichen Liganden von Rezeptoren, die an einem Krankheitsgeschehen beteiligt sind, zur Diagnose von Erkrankungen.
6. Verwendung nach Anspruch 5 wobei mindestens zwei Chemokinrezeptorliganden und/oder zwei unterschiedlichen Chemokinrezeptoren zur Diagnose von Tumoren eingesetzt werden.
7. Verwendung nach Anspruch 6, wobei die Tumoren ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus colorektalen Tumoren, Prostata- Tumoren.
8. Verwendung von mindestens zwei unterschiedlichen Chemokinrezeptorliganden und/oder zwei unterschiedlichen Chemokinrezeptoren zur Diagnose von Organabstoßungsreaktionen.
9. Verwendung von mindestens zwei unterschiedelichen Chemokinrezeptorliganden und/oder zwei unterschiedlichen Chemokinrezeptoren zur Diagnose von entzündlichen Prozessen.
10. Verwendung von mindestens zwei unterschiedlichen Chemokinrezeptorliganden und/oder zwei unterschiedlichen Chemokinrezeptoren zur Diagnose von Autoimmunerkrankungen.
11. Arzneimittel enthaltend mindestens einen Inhibitor von mindestens zwei unterschiedlichen Liganden von Rezeptoren, die an einem Krankheitsgeschehen beteiligt sind.
12. Arzneimittel nach Anspruch 11, enthaltend mindestens einen Inhibitor von mindestens zwei Chemokinrezeptoren.
13. Arzneimittel nach Anspruch 12 enthaltend Antagonisten von Chemokinrezeptoren, Antikörper oder Antikörperfragmente, die die Bindungsstelle des Chemokinrezeptors zumindest teilweise blockieren.
14. Verwendung von Inhibitoren von mindestens zwei unterschiedliche Liganden von Rezeptoren, die an einem Krankheitsgeschehen beteiligt sind zur Behandlung dieser Erkrankungen.
15. Verwendung nach Anspruch 14, wobei mindestens zwei Chemokinrezeptoren zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Tumoren, entzündlichen Prozessen, Autoimmunerkrankungen, Erkrankungen des Knochenmarkes.
16. Verwendung nach Anspruch 14, wobei Tumoren, entzündliche Prozesse, Autoimmunerkrankungen des Blutgefäßsystems, des Lymphsystems, des Respirationstraktes, des Verdauungstraktes und des Urogenitaltraktes einschließlich der Niere betroffen sind.
17. Verwendung nach Anspruch 15 und 16, wobei die Inhibitoren ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Antagonisten von Chemokinrezeptoren, Antikörper oder Antikörperfragmente, die die Bindungsstellen des Chemokinrezeptors zumindest teilweise blockieren und somit deren Funktion modulieren.
18. Verwendung nach einem der Ansprüche 15 bis 17, wobei die Tumoren ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus colorektalen Tumoren, Prostata-Tumoren, sowie weiteren Tumorerkrankungen des Blutsystems, des Lymphsystems, des Herz-Kreislauf-Systems, des Nervensystems, des Respirationstraktes, des Verdauungstraktes, des Endokrinen Systems, der Haut einschließlich Anhangsgebilde, des Bewegungsapparates und des Urogenitaltraktes einschließlich der Niere.
19. Verwendung nach einem der Ansprüche 15 bis 17, wobei die entzündlichen Prozesse ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Asthma bronchiale, chronisch entzündliche Darmerkrankungen, Organrejektion, und weitere Entzündungsprozesse des Blutsystems, des Lymphsystems, des Herz-Kreislauf-Systems, des Nervensystems, des Respirationstraktes, des Verdauungstraktes, des Endokrinen Systems, der Haut einschließlich Anhangsgebilde, des Bewegungsapparates und des Urogenitaltraktes einschließlich der Niere.
20. Verwendung nach einem der Ansprüche 15 bis 17, wobei die Autoimmunerkrankungen ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Rheumatoide Arthritis, Lupus erythematodes, und weitere chronische Entzündungen des Blutsystems, des Lymphsysteme, des Herz-Kreislauf-Systems, des Nervensystems, des Respirationstraktes, des Verdauungstraktes, des Endokrinen Systems, der Haut einschließlich Anhangsgebilde, des Bewegungsapparates und des Urogenitaltraktes einschließlich der Niere.
21. Verwendung von mindestens einem Chemokinrezeptorliganden und/oder einem Chemokinrezeptor zur Diagnose von Organabstoßungsreaktionen nach Organtransplantationen.
22. Verwendung eines Inhibitors eines Chemokinrezeptors zur Herstellung eines Arzneimittels zur Verhinderung oder Linderung von Organabstoßungsreaktionen nach Organtransplantationen.
23. Verwendung nach Anspruch 22, nach Transplantationen von Leber, Niere, Pankreas, Dünndarm, sowie anderen Organen, Geweben und Zellsystemen des Gastrointestinaltraktes, des Respirationstraktes, des Urogenitaltraktes, Kreislaufsystems, des Neuro-Endokrinium sowie des Bewegungsapparates als auch des Blut- und Immunsystems.
24. Peptide mit den Seq ID No 1 bis 40.
25. Verwendung der Peptide nach Anspruch 24 zur Herstellung von Antikörpern gegen einen Chemokinrezeptor.
26. Verfahren zur Erkennung von an Krankheitsgeschehen beteiligten Rezeptoren, wobei Expressionsprofile auf Proteomebene untersucht werden mittels zellbiologischer oder cytochemischer Verfahren, insbesondere durch immunchemische Verfahren, Immunhistochemie mittels Serienschnitten bzw. multiplen sukzessiven oder simultanen Einzelschnitten, FACS-Analyse und/oder die Expression von Rezeptoren auf Transkriptionsebene durch molekularbiologische Methoden, insbesondere PCR-, Northernanalyse und/oder In-situ- Hybridisierungs-Verfahren.
27. Verfahren nach Anspruch 26, wobei ein Diagnostikmittel nach einem der Ansprüche 1 bis 4 eingesetzt wird.
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Families Citing this family (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995019436A1 (en) * 1994-01-13 1995-07-20 The Regents Of The University Of California Mammalian monocyte chemoattractant protein receptors
US20070072250A1 (en) * 2002-04-08 2007-03-29 Bioinfra Inc. Method and system for analysis of cancer biomarkers using proteome image mining
KR100383529B1 (en) * 2002-04-08 2003-05-12 Biolnfra Inc Method and system for analysis of cancer biomarker using proteome image mining
AU2003250221A1 (en) * 2002-08-19 2004-03-11 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human cxc chemokine receptor 6(cxcr6)
JP2006501449A (ja) 2002-09-27 2006-01-12 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレーション 細胞分離のためのマイクロ流体デバイスおよびその使用
EP1592708A2 (de) * 2003-02-14 2005-11-09 Sagres Discovery, Inc. Therapeutische zielmolekulen von g-protein gekoppelter rezeptor in krebs
BR122018071808B8 (pt) 2003-11-06 2020-06-30 Seattle Genetics Inc conjugado
EP1723970A4 (de) * 2004-03-09 2009-08-12 Univ Kyoto Medizinische zusammensetzung mit cxcr3-hemmer
CA2501422C (en) * 2004-04-29 2014-08-12 University Of Rochester Lymphoid chemokines in the diagnosis, monitoring and treatment of autoimmune disease
EP2286844A3 (de) 2004-06-01 2012-08-22 Genentech, Inc. Antikörper-Arzneimittelkonjugate und Verfahren
NZ553500A (en) 2004-09-23 2009-11-27 Genentech Inc Genentech Inc Cysteine engineered antibodies and conjugates withCysteine engineered antibodies and conjugates with a free cysteine amino acid in the heavy chain a free cysteine amino acid in the heavy chain
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
EP1698902A1 (de) * 2005-03-01 2006-09-06 DKFZ Deutsches Krebsforschungszentrum Verwendung von XCR1 zur Diagnose und Überwachung der Immuntoleranz
US20070196820A1 (en) 2005-04-05 2007-08-23 Ravi Kapur Devices and methods for enrichment and alteration of cells and other particles
EP1883651A1 (de) * 2005-05-26 2008-02-06 Rappaport Family Institute For Research in the Medical Sciences Polypeptide, zusammensetzungen die diese polypeptide enthalten und verfahren für die behandlung von medizinischen zustände welche in zusammenhang mit cxcr4 stehen
US8921102B2 (en) 2005-07-29 2014-12-30 Gpb Scientific, Llc Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles
EP2004675A1 (de) 2006-03-16 2008-12-24 Protagonists Ltd. Kombination von cytokin und cytokinrezeptor zur modulation der funktion des immunsystems
US7879799B2 (en) * 2006-08-10 2011-02-01 Institute For Systems Biology Methods for characterizing glycoproteins and generating antibodies for same
US8263064B2 (en) 2007-06-04 2012-09-11 Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences Method of suppressing disease severity of multiple sclerosis using chemokine CXC11
WO2010041150A2 (en) * 2008-10-10 2010-04-15 Protagonists Ltd. Pharmaceutical peptides for the treatment of inflammatory diseases
AU2010292172A1 (en) 2009-09-09 2012-05-03 Centrose, Llc Extracellular targeted drug conjugates
JP5972864B2 (ja) 2010-04-15 2016-08-17 メディミューン リミテッド ピロロベンゾジアゼピン及びそれらのコンジュゲート
EP2579897A1 (de) 2010-06-08 2013-04-17 Genentech, Inc. Cystein-manipulierte antikörper und konjugate
JP5864564B2 (ja) 2010-06-28 2016-02-17 ユニベルシテーツクリニクム フライブルグ 線維性疾患および癌における治療選択肢としてのｃｃｒ６を介するｃｃｌ１８シグナル伝達の遮断
JP6097690B2 (ja) 2010-09-02 2017-03-15 ヴァクシネックス， インコーポレイテッド 抗ｃｘｃｌ１３抗体およびそれを用いる方法
EA037063B1 (ru) * 2010-11-08 2021-02-01 Аблинкс Н.В. Cxcr2-связывающие полипептиды
EP2640727B1 (de) 2010-11-17 2015-05-13 Genentech, Inc. Alaninylmaytansinol-antikörperkonjugate
MX2013013054A (es) 2011-05-12 2014-02-20 Genentech Inc Metodo de monitoreo de lc-ms/ms de reaccion multiple para detectar anticuerpos terapeuticos en muestras de animales utilizando peptidos de firma de estructura.
CN103764680B (zh) * 2011-09-01 2016-11-23 卫材R&D管理有限公司 抗人xcr1抗体
KR101877598B1 (ko) 2011-10-14 2018-07-11 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트
IN2014DN08199A (de) 2012-03-02 2015-05-01 Vaccinex Inc
WO2013130093A1 (en) 2012-03-02 2013-09-06 Genentech, Inc. Biomarkers for treatment with anti-tubulin chemotherapeutic compounds
US9328174B2 (en) 2012-05-09 2016-05-03 Novartis Ag Chemokine receptor binding polypeptides
PT2892560T (pt) * 2012-09-06 2019-10-18 Adelaide Research&Innovation Pty Ltd Métodos e produtos para prevenção e/ou tratamento do cancro metastático
WO2014057120A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
PT2906296T (pt) 2012-10-12 2018-06-01 Medimmune Ltd Conjugados de pirrolobenzodiazepina-anticorpo
KR101986404B1 (ko) 2012-10-12 2019-06-07 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 피롤로벤조디아제핀-항체 컨주게이트
EP2906250B1 (de) 2012-10-12 2018-05-30 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepin-anti-psma-antikörperkonjugate
SI2906298T1 (sl) 2012-10-12 2018-12-31 Adc Therapeutics Sa Konjugati pirolobenzodiazepin-protitelo
AU2013328580B2 (en) 2012-10-12 2016-01-21 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
SI2906251T1 (en) 2012-10-12 2018-01-31 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-anti-CD22 antibody conjugates
EP2935268B2 (de) 2012-12-21 2021-02-17 MedImmune Limited Pyrrolobenzodiazepine und konjugate davon
CN105246894A (zh) 2012-12-21 2016-01-13 斯皮罗根有限公司 用于治疗增殖性和自身免疫疾病的非对称吡咯并苯并二氮杂卓二聚物
EP2951204B1 (de) 2013-01-31 2019-05-22 Vaccinex, Inc. Methoden zur steigerung des immunoglobulin a spiegels
NZ710745A (en) 2013-03-13 2019-03-29 Genentech Inc Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US9649390B2 (en) 2013-03-13 2017-05-16 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
AU2014230735B2 (en) 2013-03-13 2018-03-15 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2015023355A1 (en) 2013-08-12 2015-02-19 Genentech, Inc. 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1h-benzo[e]indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment
WO2015052532A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3054985B1 (de) 2013-10-11 2018-12-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepin-antikörper-konjugate
US9956299B2 (en) 2013-10-11 2018-05-01 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine—antibody conjugates
JP6671292B2 (ja) 2013-12-16 2020-03-25 ジェネンテック， インコーポレイテッド ペプチド模倣化合物及びその抗体−薬物コンジュゲート
BR112016013861A2 (pt) 2013-12-16 2017-10-10 Genentech Inc conjugados de droga e anticorpo, compostos, método de tratamento e composição farmacêutica
BR112016013258A2 (pt) 2013-12-16 2018-01-16 Genentech Inc composto conjugado anticorpo-droga, composição farmacêutica, método para tratar câncer e kit
EP3193940A1 (de) 2014-09-10 2017-07-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine und konjugate daraus
AR101844A1 (es) 2014-09-12 2017-01-18 Genentech Inc Anticuerpos y conjugados modificados genéticamente con cisteína
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2016040825A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Anthracycline disulfide intermediates, antibody-drug conjugates and methods
CR20170099A (es) 2014-09-17 2017-07-19 Genentech Inc Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de anticuerpos-disulfuro de las mismas
CN107148285B (zh) 2014-11-25 2022-01-04 Adc治疗股份有限公司 吡咯并苯并二氮杂䓬-抗体缀合物
CA2969689A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Genentech, Inc. Quaternary amine compounds and antibody-drug conjugates thereof
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
MA45326A (fr) 2015-10-20 2018-08-29 Genentech Inc Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
WO2017165734A1 (en) 2016-03-25 2017-09-28 Genentech, Inc. Multiplexed total antibody and antibody-conjugated drug quantification assay
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
PL3458101T3 (pl) 2016-05-20 2021-05-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Koniugaty PROTAC-przeciwciało i sposoby ich stosowania
EP3465221B1 (de) 2016-05-27 2020-07-22 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bioanalytisches verfahren zur charakterisierung von ortsspezifischen antikörper-wirkstoff-konjugaten
US10639378B2 (en) 2016-06-06 2020-05-05 Genentech, Inc. Silvestrol antibody-drug conjugates and methods of use
JP7093767B2 (ja) 2016-08-11 2022-06-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ及びその抗体コンジュゲート
CN110139674B (zh) 2016-10-05 2023-05-16 豪夫迈·罗氏有限公司 制备抗体药物缀合物的方法
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CA3047683C (en) 2017-02-08 2020-03-10 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
LT3612537T (lt) 2017-04-18 2022-10-10 Medimmune Limited Pirolobenzodiazepino konjugatai
BR112019021880A2 (pt) 2017-04-20 2020-06-02 Adc Therapeutics Sa Terapia de combinação com conjugado anticorpo anti-axl-droga
US11318211B2 (en) 2017-06-14 2022-05-03 Adc Therapeutics Sa Dosage regimes for the administration of an anti-CD19 ADC
LT3668874T (lt) 2017-08-18 2022-03-25 Medimmune Limited Pirolobenzodiazepino konjugatai
RU2020113749A (ru) 2017-09-20 2021-10-20 пиЭйч ФАРМА Ко., ЛТД. Аналоги таиланстатина
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
AU2019365238A1 (en) 2018-10-24 2021-05-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Conjugated chemical inducers of degradation and methods of use
CN113227119A (zh) 2018-12-10 2021-08-06 基因泰克公司 用于与含Fc的蛋白质进行位点特异性缀合的光交联肽
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
TW202216771A (zh) 2020-06-26 2022-05-01 德商拜耳廠股份有限公司 用於治療應用之ccr8抗體
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
WO2024138128A2 (en) 2022-12-23 2024-06-27 Genentech, Inc. Cereblon degrader conjugates, and uses thereof

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL78444A (en) * 1986-04-08 1992-05-25 Yeda Res & Dev Human gamma interferon-specific receptor protein,antibody against said protein,and compositions containing said protein and antibody
US6448379B1 (en) * 1993-09-14 2002-09-10 Chiron Corporation IL8 inhibitors
WO1996009062A1 (en) * 1994-09-23 1996-03-28 University Of Nebraska Board Of Regents Polypeptide agonists and antagonists of human interleukin-8
EP0939634A4 (de) * 1996-08-15 2001-02-21 Smithkline Beecham Corp Il-8 rezeptor antagonisten
WO2000000515A2 (en) * 1998-06-29 2000-01-06 Hyseq, Inc. A CHEMOKINE RECEPTOR OBTAINED FROM A cDNA LIBRARY OF FETAL LIVER-SPLEEN

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO0172830A2 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2001250412A1 (en) 2001-10-08
JP2003530325A (ja) 2003-10-14
US20030186889A1 (en) 2003-10-02
WO2001072830A3 (de) 2002-06-20
WO2001072830A2 (de) 2001-10-04

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EP1268554A2 (de) Diagnostik- und arzneimittel zur untersuchung des zelloberflächenproteoms von tumor- und entzündungszellen sowie zur behandlung von tumorerkrankungen und entzündlichen erkrankungen vorzugsweise mit hilfe einer spezifischen chemokinrezeptor-analyse und der chemokinrezeptor-ligand-interaktion
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