EA030436B1 - АНТИТЕЛА К IL-23p19 ИЛИ ИХ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ ФРАГМЕНТЫ, ИХ ПРИМЕНЕНИЕ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЭТИ АНТИТЕЛА, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ВЫДЕЛЕННЫЕ ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ, ЭКСПРЕССИОННЫЕ ВЕКТОРЫ И КЛЕТКИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛ - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к антителам к IL-23p19 или их антигенсвязывающему фрагменту, который содержит: а) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19 (CDR1-L); аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20 (CDR2-L) и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21 (CDR3-L); и б) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, 66, 67 или 68 (CDR1-H); аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64 (CDR2-H) и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65 (CDR3-H), а также их получению и применению. Оно также относится к кодирующим их полинуклеотидам, обеспечивающим экспрессию указанных антител и их фрагментов векторам и клеткам-хозяевам, к содержащим их фармацевтическим композициям, предназначенным для лечения воспалительного заболевания, аутоиммунного заболевания, респираторного заболевания, метаболического нарушения или рака.

Description

Изобретение относится к антителам к 1Ь-23р19 или их антигенсвязывающему фрагменту, который содержит: а) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δЕ^ ГО NΟ: 19 (СИРТ-Ь); аминокислотную последовательность δЕ^ ГО NΟ: 20 (СИРТ-Ь) и аминокислотную последовательность δЕ^ ГО NΟ: 21 (СПР3-Ь); и б) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δЕ^ ГО NΟ: 63, 66, 67 или 68 (СИР1-Н); аминокислотную последовательность δЕ^ ГО NΟ: 64 (СИР2Н) и аминокислотную последовательность δЕ^ ГО NΟ: 65 (СПР3-Н), а также их получению и применению. Оно также относится к кодирующим их полинуклеотидам, обеспечивающим экспрессию указанных антител и их фрагментов векторам и клеткам-хозяевам, к содержащим их фармацевтическим композициям, предназначенным для лечения воспалительного заболевания, аутоиммунного заболевания, респираторного заболевания, метаболического нарушения или рака.

030436

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится в целом к антителам к 1Ь-23р19, предназначенным для диагностического и терапевтического применения. Более конкретно, описаны моноклональные антитела к 1Ь-23р19 и способы их применения для лечения различных заболеваний или нарушений. Описаны также фармацевтические композиции, содержащие указанные соединения.

Предпосылки создания изобретения

У высших эукариотических организмов в процессе эволюции развился сложный ответ на патогены, который сначала проявляется в виде врожденного иммунного ответа, после чего запускается адаптивный иммунный ответ. В сочетании друг с другом эти два механизма не только уничтожают патогены, которые заражают организм, но и создают также долговременный иммунологический ответ против последующих воздействий. Дефицит указанных ответов может приводить к повышенной чувствительности к инфекциям и/или изменениям адаптивного иммунного ответа, что приводит к хроническому воспалению и аутоиммунитету. 1Ь-12, гетеродимерный цитокин, состоящий из белковых субъединиц р40 и р35, в течение многих лет рассматривался как цитокин, являющийся отличительным признаком врожденного иммунного ответа, который оказывает очень большое влияние на адаптивный иммунитет. Однако данные исследований биологической роли этого цитокина привели к неоднозначным результатам. Например, в то время как мыши с дефицитом р40 обладали устойчивостью к индуцированному коллагеном артриту (С1А) и экспериментальному аутоиммунному энцефаломиелиту (ЕАЕ), мыши с дефицитом р35 обладали чувствительностью к обоим заболеваниям, и у них отмечалось даже обострение болезни. Указанные "загадки" начали разрешаться с открытием в конце 1990-х годов нового представителя семейства ΙΕ-12-цитокинов, играющего особую роль в иммунном ответе, а именно 1Ь-23.

1Ь-23 состоит из общей с 1Ь-12 субъединицы (р40) и уникальной субъединицы р19. Несмотря на присутствие общей субъединицы р40, роли 1Ь-23 и 1Ь-12 являются совершенно различными. 1Ь-12 играет важную роль для ТЫ-ответов посредством усиления дифференцировки, пролиферации и активации ТЫклеток. В противоположность этому 1Ь-23 обеспечивает развитие и поддержание недавно обнаруженной популяции СИ4⁺-Т-клеток-хелперов, обозначенных как ТЫ7-клетки, из-за их способности продуцировать 1Ь-17 и родственные цитокины. Имеются убедительные данные о том, что ГО-23 принимает участие в хроническом аутоиммунном воспалении, и модуляция активности 1Ь-23 может представлять собой перспективный терапевтический подход к лечению аутоиммунных заболеваний.

Таким образом, существует необходимость в обладающих ценными фармакологическими свойствами молекулах-антагонистах 1Ь-23, которые можно применять в качестве терапевтических средств для лечения заболеваний, в частности иммунологических и аутоиммунных заболеваний у людей.

Таким образом, одна из задач, положенных в основу настоящего изобретения, заключалась в том, чтобы разработать анти-1Ь-23 антагонистические молекулы, в частности анти-1Ь-23 антагонистические молекулы, которые обладают высокой аффинностью связывания с 1Ь-23.

Следующая задача, положенная в основу настоящего изобретения, заключалась в том, чтобы разработать анти-1Ь-23 антагонистические молекулы, которые обладают высокой специфичностью в отношении 1Ь-23.

Следующая задача, положенная в основу настоящего изобретения, заключалась в том, чтобы разработать анти-1Ь-23 антагонисты, которые обладают высокой блокирующей активностью в отношении ассоциации 1Ь-23 с его рецептором.

Следующая задача, положенная в основу настоящего изобретения, заключалась в том, чтобы разработать анти-1Ь-23 антагонисты, которые обладают эффективной клеточной активностью.

Следующая задача, положенная в основу настоящего изобретения, заключалась в том, чтобы разработать анти-1Ь-23 антагонисты, которые обладают предпочтительной биодоступностью.

Следующая задача, положенная в основу настоящего изобретения, заключалась в том, чтобы разработать анти-1Ь-23 антагонисты, которые обладают предпочтительными биофизическими свойствами.

Следующими задачами, положенными в основу настоящего изобретения, являются комбинации любых из указанных выше задач.

Краткое изложение сущности изобретения

Изобретение направлено на решение указанных выше задач и в нем предложены антитела, которые связываются с субъединицей р19 белка 1Ь-23.

Согласно одному из объектов изобретения предложено антитело к 1Ь-23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 19 (СЭКТ-Ь); аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 20 (СГОК2-Б) и аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 21 (С0К3-Б); и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 63, 66, 67 или 68 (СЭК1-Н); аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 64 (СГОК2-Н) и аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 65 (СИК.3-Н).

В предпочтительном варианте антитело к 1Ь-23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 19 (СЭКТ-Ь); аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 20 (СГОК2-Б) и аминокислотную после- 1 030436

довательность δΕΟ ΙΌ N0: 21 (СОК3-Ь); и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 63 (СЭК1-Н); аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 64 (СГОК2-Н) и аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 65 (СЭК3-Н).

Кроме того, антитело к 1Ь-23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 19 (СЭК1Ь); аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 20 (СОК2-Ь) и аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 21 (СОК3-Ь); и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 66 (СОК1-Н); аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 64 (СОК2-Н) и аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 65 (СОК3-Н).

Еще в одном предпочтительном варианте осуществления изобретения антитело к ΙΕ-23ρ19 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 19 (СОК1-Ь); аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 20 (СОК2-Ь); и аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 21 (СОК3-Ь) и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 67 (СОК1-Н); аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 64 (СОК2-Н) и аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 65 (СОК3-Н).

Изобретение, предпочтительно, также относится к антителу к ΙΌ-23ρ19 или его антигенсвязывающему фрагменту, который содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 19 (СОК1-Ь); аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 20 (СОК2-Ь) и аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 21 (СОК3-Ь); и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 68 (СОК1-Н); аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 64 (СОК2-Н) и аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 65 (С0К3-Н).

Кроме того, в еще одном предпочтительном варианте антитело к ΙΌ-23ρ19 или его антигенсвязывающий фрагмент может включать вариабельную область легкой цепи, содержащую любую из аминокислотных последовательностей δΕΟ ΙΌ N0: 158, 160, 162 или 164; и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую любую из аминокислотных последовательностей δΕΟ ΙΌ N0: 166, 168, 170 или 172.

В наиболее предпочтительном варианте антитело к ΙΌ-23ρ19 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 160, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 166, или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 160, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 168, или вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 158, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 166, вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 158, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 168. В наиболее предпочтительном варианте антитело к ΙΌ-23ρ19 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 166 или 168, связанную с константной областью тяжелой цепи человеческого Ι§Οι; и аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 158 или 160, связанную с константной областью человеческой легкой каппа-цепи.

При этом самым предпочтительным является антитело к ΙΌ-23ρ19 или его антигенсвязывающий фрагмент, который содержит:

а) вариабельную область гуманизированной легкой цепи, содержащую СОК-участки из δΕΟ ΙΌ N0: 158 или 160, и каркасные участки, имеющие аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности каркасных участков вариабельной области легкой цепи, которая имеет аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 158 или 160;

б) вариабельную область гуманизированной тяжелой цепи, содержащей СОК-участки из δΕΟ ΙΌ N0: 166 или 168, и каркасные участки, имеющие аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности каркасных участков вариабельной области тяжелой цепи, которая имеет аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 166 или 168.

Заявленное антитело может представлять собой моноклональное антитело.

Причем в предпочтительном варианте осуществления данного изобретения моноклональное антитело к ΙΌ-23ρ19 содержит легкую цепь, которая включает аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 174 или 180, и тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 176 или 178.

Вторым объектом данного изобретения является моноклональное антитело к ΙΌ-23ρ19, которое содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 174, и тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 176, или легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 174, и тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 178, или легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ N0: 180, и тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную

- 2 030436

последовательность 8ЕО ГО N0: 176, или легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 180, и тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 178.

Третьим объектом данного изобретения является применение заявленного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента для лечения воспалительного заболевания, аутоиммунного заболевания, респираторного заболевания, метаболического нарушения или рака.

В частности, с их помощью можно лечить псориаз, воспалительное заболевание кишечника, псориатический артрит, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, болезнь Крона или анкилозирующий спондилит, а также астму или хроническую обструктивную болезнь легких (ХОБЛ).

Еще одним объектом данного изобретения является фармацевтическая композиция для лечения воспалительного заболевания, аутоиммунного заболевания, респираторного заболевания, метаболического нарушения или рака, содержащая казанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтически приемлемый носитель.

Изобретение, кроме того, относится к выделенному полинуклеотиду, содержащему последовательность, которая кодирует вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела, или вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела.

Причем в предпочтительном варианте выделенный полинуклеотид содержит последовательность, которая кодирует легкую цепь антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 174 или 180, или же последовательность, которая кодирует тяжелую цепь антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 176 или 178.

В заявке описан экспрессионный вектор, включающий заявленный полинуклеотид и клетка-хозяин, предназначенная для получения заявленного антитела, которая включает:

а) выделенный полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 158, 160, 162 или 164;

б) выделенный полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 166, 168, 170 или 172.

В предпочтительном варианте клетка-хозяин содержит указанный выделенный полинуклеотид по

а) , который включает последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 160, и указанный выделенный полинуклеотид по б), который включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 166, или указанный выделенный полинуклеотид по а), который включает последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 160, и указанный выделенный полинуклеотид по б), который включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 168, или указанный выделенный полинуклеотид по а), который включает последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 158, и указанный выделенный полинуклеотид по б), который включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 166, или указанный выделенный полинуклеотид по а), который включает последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 158, и указанный выделенный полинуклеотид по б), который включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 168.

В еще одном предпочтительном варианте клетка-хозяин может включать:

а) выделенный полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует легкую цепь антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 174 или 180, и

б) выделенный полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует тяжелую цепь антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 176 или 178.

В самом предпочтительном варианте указанный выделенный полинуклеотид по а) предложенной клетки включает последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 174, и указанный выделенный полинуклеотид по

б) , который включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 176, или указанный выделенный полинуклеотид по а), который включает последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 174, и указанный выделенный полинуклеотид по б), который включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 178.

- 3 030436

Указанный выделенный полинуклеотид по а) заявленной клетки-хозяина может включать последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 180, и указанный выделенный полинуклеотид по б), который включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 176, или же указанный выделенный полинуклеотид по а), который включает последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 180, и указанный выделенный полинуклеотид по б), который включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 178.

Наконец, последним объектом данного изобретения является способ получения заявленных антитела или антигенсвязывающего фрагмента, включающий:

а) получение указанной клетки-хозяина;

б) ее культивирование;

с) выделение и очистку антитела или антигенсвязывающего фрагмента.

Краткое описание чертежей

На чертежах показано

на фиг. 1 - сравнительный анализ первичной структуры мышиной и гуманизированных вариабельных областей; на фиг. 1а - антитело к 1Ь-23р19 6В8 со сконструированными Ук-областями; на фиг. 1б антитело к 1Ь-23р19 6В8 со сконструированными УН-областями. Нумерация аминокислот соответствует стандартной системе нумерации Кэбота. Обычным шрифтом обозначены участки человеческой последовательности; курсивом/подчеркнутым шрифтом участки мышиной последовательности; затемненным шрифтом участки синтетической последовательности; жирным шрифтом/курсивом/подчеркнутым шрифтом обозначены СЭК;

на фиг. 2 - результаты анализа связывания в конкурентных условиях человеческого ГО-23 с ГО23К/Ре.

Подробное описание изобретения

Субъединица р19 ГО-23 (которую обозначают также как "ГО-23р19" и "субъединица р19") представляет собой состоящий из 189 аминокислот полипептид, содержащий состоящую из 21 аминокислоты (ак) лидерную последовательность (0рртапп и др., 1ттшШу 13, 2000, с. 715, 8Е0 ГО N0: 181). Биологическую активность этой молекулы можно обнаружить только после ее спаривания с субъединицей ГО12р40 с образованием ГО-23. ГО-23 экспрессируется главным образом активированными дендритными клетками (ОС) и фагоцитарными клетками. Установлено, что рецептор ГО-23 состоит из субъединицы ГО12Κβ1 ГО-12-рецептора, спаренной с уникальной субъединицей, обозначенной как ГО-23К. (РагЬат и др., 1. 1ттипо1. 168, 2002, с. 5699). Экспрессия рецептора главным образом имеет место на Т-клетках памяти и ИК-клетках. Таким образом, экспрессия указанной пары цитокин:рецептор, вероятно, ограничена конкретными популяциями иммунных клеток. Хотя сначала предполагалось, что ГО-12 и ГО-23 могут обладать общими функциями, получены данные, свидетельствующие о том, что картина является другой. В то время как ГО-12 играет основную роль в производстве ТЬ1-клеток, установлено, что ГО-23 играет решающее значение в производстве и поддержании недавно обнаруженной подпопуляции ТЬ-клеток, обозначенных как ТЬ17 (Ктк1у и др., Сигг. 0рш. 1ттипо1. 18, 2006, с. 670, Ка81е1еш и др., Апп. Кеу. 1ттипо1. 25, 2007, с. 221). Эти клетки продуцируют ГО-17А, ГО-17Р, ГО-22 и другие провоспалительные цитокины, такие как ГО-6 и Т®Е-а. Как будет описано ниже, изучение на животных моделях роли указанных ТЬ17клеток продемонстрировало их важность в качестве "движущей силы" при хроническом воспалении и аутоиммунитете.

"Лидерные" мышиные антитела выводят из мышиных гибридом. Иммунизацию мышей осуществляют с использованием различных методик. Например, антитела, специфические в отношении человеческих белков ГО-23р19 или их фрагментов, могут вырабатываться против иммуногенного антигена, такого как выделенный белок ГО-23р19, выделенный белок ГО-23, выделенный гибридный белок ГО-23 и/или фрагмент любого из указанных выше белков (включая синтетические пептиды). Например, для иммунизации мышей используют гибридный белок ГО-23, содержащий мышиную субъединицу ГО-23р40 и человеческую субъединицу ГО-23р19. Для получения иммуногенных антигенов и производства моноклональных антител можно применять любую приемлемую методику, известную в данной области.

"Лидерные" мышиные антитела выбирали на основе их высокой аффинности к человеческому ГО23. Отобранные мышиные антитела гуманизировали с получением гуманизированных антител. Гуманизированные антитела связываются с человеческим ГО-23 с высокой аффинностью.

Заявленное антитело к ГО-23р19 характеризуется величиной К_с, составляющей менее чем 40 пМ или менее чем 20 пМ, или менее 10 пМ, или менее чем 1 пМ.

Оно связывается с ГО-23р19 с высокой аффинностью в отсутствии человеческой сыворотки или в присутствии 50% человеческой сыворотки, связывается с ГО-23, но не связывается с ГО-12, и не оказывает интерферирующего воздействия на биологическую активность ГО-12, который является близкородственным к ГО-23 представителем семейства.

- 4 030436

Антитело согласно изобретению ингибирует стимулируемое 1Ь-23 производство 1Ь-17 мышиными спленоцитами, а гуманизированное антитело ингибирует индуцируемое 1Ь-23 фосфорилирование 8ТАТ3 в ΌΒ-клетках и антагонизирует действие 1Ь-23 посредством связывания с субъединицей р19 1Ь-23, например, при оценке по ингибированию цитокинов, таких как 1Ь-17 и 1Ь-22, производство которых стимулируется 1Ь-23, и что определяют по снижению уровней указанных цитокинов. Оно обладает предпочтительным фармакокинетическим (ФК) профилем, например временем полужизни ίη νΐνο в организме обезьян циномолгус и предпочтительными биофизическими свойствами, такими, например, как качество, стабильность или растворимость.

Итак, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, предлагаемое/предлагаемый в настоящем изобретении, специфически распознает "антигенный эпитоп 1Ь-23р19" или "эпитоп 1Ь-23р19". В контексте настоящего описания эти понятия относятся к молекуле (например, пептиду) или фрагменту молекулы, которая/который обладает способностью к иммунологической реакции с антителом к 1Ь-23р19, и, например, включает антигенную детерминанту 1Ь-23р19, распознаваемую любым из антител, имеющих следующую комбинацию последовательностей легкой цепи/тяжелой цепи: §Еф ГО N0: 84/121, 86/123, 88/125, 90/127, 91/128, 93/130, 95/132, 97/134, 99/136, 101/138, 103/140, 105/142, 107/144, 109/146, 111/148, 113/150, 115/152, 117/154, 119/156, 160/166, 160/168, 158/166 или 158/168. Антигенные эпитопы 1Ь-23р19 могут быть включены в белки, белковые фрагменты, пептиды и т.п. Эпитопы в большинстве случаев представляют собой белки, короткие олигопептиды, миметики олигопептидов (например, органические соединения, которые имитируют связывающую способность антигена 1Ь-23р19) или их комбинации. Считается, что минимальный размер пептидного или полипептидного эпитопа для антитела должен составлять примерно 4-5 аминокислот. Пептидные или полипептидные эпитопы содержат, например, по меньшей мере семь аминокислот, или, например, по меньшей мере девять аминокислот, или, например, от примерно 15 до примерно 20 аминокислот. Поскольку антитело может распознавать антигенный пептид или полипептид в его третичной форме, то не требуется, чтобы аминокислоты, входящие в эпитоп, были смежными, в некоторых случаях они могут даже не находиться на одной и той же пептидной цепи. Эпитопы можно определять с помощью различных методик, известных в данной области, таких как рентгеновская кристаллография, масс-спектрометрия дейтеро/водородного обмена (ΗΧΜδ), сайтнаправленный мутагенез, аланин-сканирующий мутагенез и методы пептидного скрининга.

Общая структура антител или иммуноглобулина хорошо известна специалистам в данной области. Эти молекулы представляют собой гетеротетрамерные гликопротеины, как правило с молекулярной массой примерно 150000 Да, состоящие из двух идентичных легких (Ъ) цепей и двух идентичных тяжелых (Η) цепей, и, как правило, их обозначают как полноразмерные антитела. Каждая легкая цепь ковалентно связана с тяжелой цепью с помощью одной дисульфидной связи с образованием гетеродимера, и гетеротетрамерная молекула образуется посредством ковалентной дисульфидной связи между двумя идентичными тяжелыми цепями гетеродимеров. Хотя легкие и тяжелые цепи связаны с помощью одной дисульфидной связи, количество дисульфидных связей между двумя тяжелыми цепями варьируется в зависимости от изотипа иммуноглобулина. Каждая тяжелая и легкая цепь имеет также равномерно распределенные внутрицепочечные дисульфидные мостики. Каждая тяжелая цепь имеет аминоконцевой вариабельный домен (ν_Η), за которым расположены три или четыре константных домена (С_Н1, С_Н2, С_Н3 и С_Н4), а также шарнирный участок между С_Н1 и С_Н2. Каждая легкая цепь имеет два домена, аминоконцевой вариабельный домен (УО и карбоксиконцевый константный домен (Сь). V!-домен нековалентно связан с νιι-доменом, а С_ъ-домен, как правило, ковалентно связан с С_т-доменом через дисульфидную связь. Считается, что определенные аминокислотные остатки образуют поверхность раздела между вариабельными областями легких и тяжелых цепей (Οιοίΐιία и др., ί. Μοί. ΒίοΙ. 186, 1985, сс. 651-663). В контексте настоящего описания вариабельные домены обозначают также как вариабельные области.

Определенные участки в вариабельных доменах значительно различаются у различных антител, т.е. они являются "гипервариабельными". Эти гипервариабельные участки содержат остатки, которые непосредственно участвуют в связывании и определяют специфичность каждого конкретного антитела в отношении специфической для него антигенной детерминанты. Гипервариабельность в вариабельных доменах, как легкой цепи, так и тяжелой цепи, концентрируется в трех сегментах, которые обозначают как определяющие комплементарность участки (гипервариабельные участки) (СИР) или гипервариабельные петли (ΗνΕ). СГОК определяют путем сравнения последовательностей согласно методу, описанному у КаЬа! и др. в: §едиепсе8 οί РгоЮнъ ο£ Iттиηο1οд^са1 1п1еге81, 5-е изд., изд-во РиЬйс НеаИй §еМсе, Ναΐίοηαί ИъШШех ο£ НеаИй, ВеШекйа, Μά., 1991, а ΜνΕ (которые обозначают также как СЭР) структурно определяют на основе трехмерной структуры вариабельного домена согласно методу, описанному у С1ю11на и Ьекк, ί. Μοί. Βΐοί. 196, 1987, сс. 901-917. Эти два метода приводят к некоторым различиям при идентификации СГОР. Согласно номенклатуре Кэбота СИК-Ы расположен примерно на остатках 24-34, СГОР-И2 примерно на остатках 50-56 и СГОР-И-3 примерно на остатках 89-97 в вариабельном домене легкой цепи; СГОР-Н1 расположен примерно на остатках 31-35, СГОР-Н2 примерно на остатках 50-65 и СГОР-Н3 примерно на остатках 95-102 в вариабельном домене тяжелой цепи. Точные номера остатков, которые образуют конкретный СИР, должны варьироваться в зависимости от последовательности и размера СИР. Специалисты в данной области могут на основе аминокислотной последовательности вариабельной об- 5 030436

ласти антитела с использованием общепринятых методов определять, какие остатки содержатся в конкретном СИК. Таким образом, СИК1, СИК2, СИКЗ тяжелых и легких цепей определяют уникальные и функциональные свойства, специфические для данного антитела.

Три СИК в каждой из тяжелых и легких цепей разделены каркасными участками (РК), которые содержат последовательности, в меньшей степени имеющие тенденцию к вариабельности. Начиная с аминоконца по направлению к карбоксиконцу вариабельных доменов тяжелых и легких цепей РК и СИК упорядочены следующим образом: РК1, СИК1, РК2, СИК2, РКЗ, СИКЗ и РК4. В значительно степени βскладчатая конформация РК позволяет СИК в каждой из цепей находиться в непосредственной близости друг с другом, а также с СИК из другой цепи. Полученная конформация присуща антигенсвязывающему центру (см. КаЬа! и др., ΝΙΗ РиЫ. №91-3242, т.1, 1991, сс.647-669), хотя не является необходимым условием, чтобы все остатки СИК непосредственно участвовали в связывании антигена.

Остатки РК и константные домены 1д не вовлечены непосредственно в связывание антигена, но участвуют в связанной с антигеном и/или опосредуемой антигеном эффекторной функции. Некоторые остатки РК, вероятно, оказывают выраженное воздействие на связывание антигена по меньшей мере тремя путями: путем нековалентного связывания непосредственно с эпитопом, путем взаимодействия с одним или несколькими остатками СИК и путем влияния на поверхность раздела между тяжелыми и легкими цепями. Константные домены не участвуют непосредственно в связывании антигена, но опосредуют различные эффекторные функции 1д, такие как участие антитела в антитело-обусловленной клеточнозависимой цитотоксичности (ЛИСС), комплементзависимой цитотоксичности (СИС) и антителообусловленном клеточном фагоцитозе (ЛИСР).

Легкие цепи иммуноглобулинов позвоночных животных относят к одному из двух четко различимых классов, каппа (к) и лямбда (λ), на основе аминокислотной последовательности константного домена. Для сравнения, тяжелые цепи иммуноглобулинов млекопитающих относят к одному из пяти основных классов с учетом последовательности константных доменов: 1дА, 1§И, Ι§Ε, 1§О и 1дМ. 1§О и 1дА дополнительно подразделяют на подклассы (изотипы), например, 1дО_ь 1дО₂, 1дО₃, 1дО₄, 1дА] и 1§А₂. Константные домены тяжелых цепей, которые соответствуют различным классам иммуноглобулинов, обозначают как α, δ, ε, γ и μ соответственно. Структуры субъединиц и трехмерные конфигурации классов нативных иммуноглобулинов хорошо известны.

Понятия "антитело", "антитело к 1Ь-23р19", "гуманизированное антитело к 1Ь-23р19", "гуманизированное антитело к эпитопу 1Ь-23р19" и "вариант гуманизированного антитела к эпитопу 1Ь-23р19" относятся, в частности, к моноклональным антителам (включая полноразмерные моноклональные антитела), поликлональным антителам, мультиспецифическим антителам (например, биспецифическим антителам) и фрагментам антител, таким как вариабельные домены и другие участки антител, которые обладают требуемой биологической активностью, например способностью связываться с 1Ь-23р19. Понятие "моноклональное антитело" (МАт) относится к антителу, которое является высоко специфическим, его мишенью является индивидуальная антигенная детерминанта, "эпитоп". Таким образом, прилагательное "моноклональные" указывает на отличительный признак антител, мишенью которых является идентичный эпитоп, и оно не связано с требованием к получению антител с помощью какого-либо конкретного метода. Должно быть очевидно, что моноклональные антитела можно получать с помощью любой техники или методологии, известной в данной области; включая, например, метод гибридом (КоЫет и др., №Цигс 256, 1975, с. 495), или методы рекомбинантной ДНК, известные в данной области (см., например, И8 №4816567), или методы выделения моноклональных полученных с помощью рекомбинантной ДНК антител с использованием фаговых библиотек антител с помощью методик, которые описаны у С1асккоп и др., №Диге 352, 1991, сс.624-628 и у Магкк и др., 1. Мо1. Βίοί. 222, 1991, сс.581-597.

Понятие "мономер" относится к гомогенной форме антитела. Например, в случае полноразмерного антитела мономер означает мономерное антитело, которое имеет две идентичные тяжелые цепи и две идентичные легкие цепи.

Химерные антитела состоят из вариабельных областей тяжелых и легких цепей антител из одного вида (например, из млекопитающего кроме человека, такого как мышь) и константных областей тяжелой и легкой цепи антитела из других видов (например, человека), и их можно получать путем соединения последовательностей ДНК, кодирующих вариабельные области антитела из первого вида (например, мыши), с последовательностями ДНК константных областей антитела из второго вида (например, человека), и трансформации хозяина экспрессионным вектором, содержащим связанные последовательности, что позволяет хозяину продуцировать химерное антитело. В альтернативном варианте химерное антитело может также представлять собой антитело, в котором одна или несколько областей или доменов тяжелой и/или легкой цепи идентичны, гомологичны или являются вариантом соответствующей последовательности в моноклональном антителе из другого класса или изотипа иммуноглобулина или из консенсусной последовательности, или последовательности зародышей линии. Химерные антитела могут включать фрагменты указанных антител при условии, что фрагмент антитела обладает требуемой биологической активностью родительского антитела, например способностью связываться с одним и тем же эпитопом (см., например, υδ №4816567; и Моткой и др., Ргос. №И. АсаД. δα. υδΑ 81, 1984, сс. 6851- 6 030436

6855).

Понятия "фрагмент антитела", "фрагмент антитела к 1Ь-23р19", "фрагмент антитела к эпитопу 1Ь23р19", "фрагмент гуманизированного антитела к 1Ь-23р19", "фрагмент гуманизированного антитела к эпитопу 1Ь-23р19", "фрагмент варианта гуманизированного антитела к эпитопу 1Ь-23р19" относятся к части полноразмерного антитела к 1Ь-23р19, в котором сохраняется вариабельная область или ее функциональная способность, например, специфичность связывания с эпитопом 1Ь-23р19. Примерами фрагментов антител являются (но, не ограничиваясь только ими) РаЬ-, РаЬ'-, Р(аЬ')₂-, Рй-, Ру-, кеРу- и кеРу-Рефрагмент, димерное антитело (диабоди), линейное антитело, одноцепочечное антитело, минитело, димерное антитело, образованное из фрагментов антитела, и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.

Полноразмерные антитела можно обрабатывать ферментами, такими как папаин или пепсин, с получением требуемых фрагментов антител. Расщепление папаином применяют для получения двух идентичных антигенсвязывающих фрагментов антител, которые называют "РаЬ"-фрагментами, каждый с одним антигенсвязывающим центром, при этом оставшуюся часть обозначают как "Ре"-фрагмент. РаЬфрагмент содержит также константный домен легкой цепи и С_Н1 -домен тяжелой цепи. После обработки пепсином получают Р(аЬ')₂-фрагмент, который несет два антигенсвязывающих центра и все еще сохраняет способность к перекрестному сшиванию с антигеном.

РаЬ'-фрагменты отличаются от РаЬ-фрагментов присутствием дополнительных остатков, включая один или несколько остатков цистеина из шарнирной области антитела на С-конце Сщ-домена. Р(аЬ')₂фрагменты антител представляют собой пары РаЬ'-фрагментов, связанных с помощью остатков цистеина в шарнирной области. Известны другие химические сочетания фрагментов антител.

"Ру"-фрагмент содержит полный антиген-распознающий и антиген-связывающий центр, состоящий из димера, включающего вариабельный домен одной тяжелой и одной легкой цепи, которые находятся в тесной нековалентной ассоциации. В этой конфигурации три СОК. каждого вариабельного домена взаимодействуют с определенным антигенсвязывающим центром на поверхности димера У_Н-У_Ъ. В целом, шесть СОК обусловливают специфичность антитела в отношении связывания антигена.

"Одноцепочечный Ρν" или "8сРу"-фрагмент антитела представляет собой одноцепочечный Ρνвариант, содержащий У_Н- и У_ъ-домсны антитела, при этом домены присутствуют в одной полипептидной цепи. Одноцепочечный Ρν обладает способностью распознавать антиген и связываться с ним. Полипептид кеРу необязательно может содержать также полипептидный линкер, расположенный между У_Н- и Уь-доменами, для облегчения образования трехмерной структуры, требуемой для связывания кеРу с антигеном (см., например, ИискШип, в: ТИе Ркагтаео1оду οί топос1опа1 АпйЬоФек, т.113, под ред. КокепЬигд и Мооге, изд-во 8ргшдег-Уег1ад, №\ν Уогк, 1991, ее.269-315).

Понятие "димерное антитело (диабоди)" относится к небольшим фрагментам антитела с двумя антигенсвязывающими центрами, при этом фрагменты содержат вариабельный домен тяжелой цепи (УН), сцепленный с вариабельным доменом легкой цепи (У_ъ) в одной и той же полипепидной цепи (У_Н-У_Ъ или Уь-У_Н). Димерные антитела описаны более подробно например, у НоШдег и др., Ргос. №и1. Асай. 8е1. И8А 90, 1993, ее. 6444-6448.

Другие обладающие способностью к распознаванию фрагменты антител включают фрагменты, которые содержат пару расположенных в виде тандема Рй-сегментов (У_Н-С_Н1-У_Н-С_Н1), образующих пару антигенсвязывающих участков. Указанные "линейные антитела" могут быть биспецифическими или моноспецифическими, что описано, например, у 2ара!а и др., Рго1еш Епд. 8(10), 1995, ее. 1057-1062.

Гуманизированное антитело или фрагмент гуманизированного антитела представляет собой специфический тип химерного антитела, которое включает вариант аминокислотной последовательности иммуноглобулина или его фрагмента, который обладает способностью связываться с предварительно определенным антигеном и который содержит один или несколько РК, который(ые) имеет(ют) аминокислотную последовательность, практически соответствующую последовательности человеческого иммуноглобулина, и один или несколько СОК, который(ые) имеет(ют) аминокислотную последовательность, которая практически соответствует аминокислотной последовательности нечеловеческого иммуноглобулина. Указанную нечеловеческую аминокислотную последовательность, которую часто обозначают как "импортная" последовательность, как правило, получают из "импортного" домена антитела, в частности вариабельного домена. В целом, гуманизированное антитело включает по меньшей мере СОК или НУЪ нечеловеческого антитела, встроенные между РК вариабельного домена человеческой тяжелой или легкой цепи. В настоящем изобретении описаны специфические гуманизированные антитела к 1Ь-23р19, которые содержат СОК, выведенные из мышиных моноклональных антител, или гуманизированные СОК, которые представлены в табл. 3 и 4, встроенные между РК в последовательностях вариабельных доменов тяжелой и легкой цепи человеческой зародышевой линии. Должно быть очевидно, что определенные остатки мышиного РК можно импортировать для обеспечения функции гуманизированных антител, и следовательно, определенные остатки последовательностей вариабельных доменов тяжелой и легкой цепи человеческой зародышевой линии модифицируют для того, чтобы они были такими же как в соответствующей мышиной последовательности.

Гуманизированное антитело к 1Ь-23р19 может содержать практически полностью по меньшей мере

- 7 030436

один и, как правило, два вариабельных домена (таких, например, как входящие в РаЬ-, РаЬ'-, Р(аЬ')₂-, РаЬе- и Ρν-фрагменты), в которых все или практически все СОК соответствуют СОК нечеловеческих иммуноглобулинов, и все СОК представляют собой мышиные или гуманизированные последовательности, подробно описанные в представленных ниже в табл. 1-4, и все или практически все РК представляют собой РК, которые имеют консенсусную последовательность или последовательность зародышевой линии человеческого иммуноглобулина. Гуманизированное антитело к 1Ь-23р19 включает также по меньшей мере часть Рс-области иммуноглобулина, как правило, человеческого иммуноглобулина. Как правило, антитело должно содержать как легкую цепь, так и по меньшей мере вариабельный домен тяжелой цепи. Антитело может включать также при необходимости один или несколько из следующих участков: С_Н1, шарнирная область, С_Н2, С_Н3 и/или С_Н4 тяжелой цепи.

Гуманизированное антитело к 1Ь-23р19 можно выбирать из любого класса иммуноглобулинов, включая 1дМ, 1дС. ΙβΩ. 1дА и 1дЕ, и любого изотипа, включая 1§С₁, 1дО₂, 1дО₃, 1дО₄, 1дА₁ и 1дА₂. Например, константный домен может представлять собой комплементфиксирующий константный домен, если требуется, чтобы гуманизированное антитело обладало цитотоксической активностью, и изотип, как правило, представляет собой Ι§Ομ Если указанная цитотоксическая активность не требуется, то константный домен может относиться к другому изотипу, например, 1дО₂. Гуманизированное антитело к 1Ь23р19 может содержать последовательности более чем из одного класса или изотипа иммуноглобулинов, и выбор конкретных константных доменов для оптимизации требуемых эффекторных функций находится в компетенции обычного специалиста в данной области. Описанные в заявке антитела представляют собой антитела изотипа ΙβΟι и более конкретно антитела изотипа Ι§Οι, в которых "выключены" эффекторные функции.

РК- и СОК- или НУЪ-участки гуманизированного антитела к 1Ь-23р19 не обязательно должны точно соответствовать родительским последовательностям. Например, один или несколько остатков в импортном СОК или НУЪ или в консенсусной последовательности или последовательности зародышевой линии РК можно изменять (например, посредством мутагенеза) путем замены, инсерции или делеции, в результате чего полученный аминокислотный остаток становится не идентичным исходному остатку в соответствующем положении любой родительской последовательности, но, тем не менее, антитело сохраняет функцию, такую как способность связываться с 1Ь-23р19. Указанное изменение, как правило, не должно быть обширным и должно представлять собой консервативные изменения. Как правило, по меньшей мере 75% остатков, чаще по меньшей мере 90% и наиболее часто более 95% или более 98%, или более 99%, гуманизированного антитела должно соответствовать остаткам родительской консенсусной последовательности или последовательности РК зародышевой линии и импортных последовательностей СОК.

Остатки иммуноглобулина, которые влияют на поверхность раздела между вариабельными областями тяжелой и легкой цепи ("поверхность раздела Уъ-У_Н"), представляют собой остатки, которые влияют на близость или ориентацию двух цепей относительно друг друга. Конкретными остатками, которые могут участвовать во взаимодействиях между цепями, являются остатки У_ъ 34, 36, 38, 44, 46, 87, 89, 91, 96 и 98 и остатки У_Н 35, 37, 39, 45, 47, 91, 93, 95, 100 и 103 (согласно системе нумерации, предложенной КаЬа! и др., Зссщспссх οί Рго1еш8 οί 1ттипо1одюа1 1п1сгс>1 (Ыайопа1 1п8О1Ше8 οί НеаИЬ, Ве1Ье8ба, Мб., 1987)). В И8 №6407213 обсуждается также, что в указанном взаимодействии могут участвовать такие остатки, как остатки У_ъ 43 и 85 и остатки У_Н 43 и 60. Хотя эти остатки указаны только для человеческого 1дО, их можно рассматривать и для других видов. Важные остатки антитела, которые, как ожидается, могут участвовать во взаимодействиях между цепями, отбирают для замены в консенсусной последовательности.

Понятия "консенсусная последовательность" и "консенсусное антитело" относятся к амино кислотной последовательности, которая содержит наиболее часто встречающийся аминокислотный остаток в каждом положении во всех иммуноглобулинах любого класса, изотипа или в любой субъединичной структуре, например, вариабельном домене человеческого иммуноглобулина. Консенсусная последовательность может базироваться на иммуноглобулинах конкретных видов или множества видов. Под "консенсусной/консенсусным" последовательностью, структурой или антителом подразумевают консенсусную человеческую последовательность, указанную в конкретных вариантах осуществления изобретения, и понятие относится к аминокислотной последовательности, которая содержит наиболее часто встречающиеся остатки в каждом положении во всех человеческих иммуноглобулинах конкретного класса, изотипа или субъединичной структуры. Таким образом, консенсусная последовательность содержит аминокислотную последовательность, которая имеет в каждом положении аминокислоту, которая присутствует в одном или нескольких известных иммуноглобулинах, но которая может не представлять собой точную копию полной аминокислотной последовательности любого индивидуального иммуноглобулина. Вариабельную область консенсусной последовательности не получают из какого-либо встречающегося в естественных условиях антитела или иммуноглобулина (КаЬа! и др., δе^иеηсе8 οί Рго1еш8 οί 1ттипо1ощса1 1п1еге8С 5-е изд., изд-во РиЬйс НеаНЬ δе^ν^се, №0опа1 1и8Й1и1е8 οί НеаНЬ, Ве1Ье8ба, Мб., 1991) и его вариантов. Консенсусные последовательности РК тяжелой и легкой цепи и их варианты представляют собой ценные последовательности для получения гуманизированных антител к 1Ь-23р19

- 8 030436

(см., например, И8 №6037454 и 6054297).

Последовательности человеческой зародышевой линии присутствуют в естественных условиях в популяции человеческих антител. Комбинация этих генов зародышевой линии создает разнообразие антител. Последовательности зародышевой линии антитела легкой цепи антитела получают из консервативных ν-генов и )-генов человеческой зародышевой линии каппа или лямбда. Аналогично этому последовательности тяжелой цепи получают из ν-, ά- и )-генов зародышевой линии (ЬеРгаис М.-Р. и ЬеРгаис С., "ТЬе 1ттииод1оЬи1т Рас1к Воок", изд-во Асайетю Ргекк, 2001).

В контексте настоящего описания каждое из понятий "вариант", "вариант антитела к 1Ь-23р19", "гуманизированный вариант антитела к 1Ь-23р19" или "вариант гуманизированного антитела к 1Ь-23р19" относится к гуманизированного антителу к 1Ь-23р19, которое имеет, по меньшей мере, последовательность мышиного СЭР вариабельной области легкой цепи, выбранную из любых последовательностей, представленных в табл. 1, или последовательность мышиного СОК тяжелой цепи, выведенную из мышиного моноклонального антитела, представленного в табл. 2. К вариантам относятся последовательности, имеющие одну или несколько аминокислотных замен в вариабельных областях одной или обеих легких цепей или тяжелых цепей, при условии, что аминокислотная замена не оказывает существенного воздействия на связывание антитела с 1Ь-23р19.

"Выделенное" антитело представляет собой антитело, которое идентифицировано и отделено и/или очищено от компонента его естественного окружения. Загрязняющие компоненты естественного окружения антитела представляют собой субстанции, которые могут влиять на диагностическое или терапевтическое применение антитела и могут представлять собой ферменты, гормоны или другие белковые или небелковые растворенные вещества. В одном из объектов изобретения выделенное антитело должно представлять собой антитело, очищенное до степени, превышающей 95 мас.%.

Выделенное антитело представляет собой антитело ίη κίΐιι внутри рекомбинантных клеток, в которых оно продуцировано, если в нем не присутствует ни один компонент естественного окружения антитела. Однако, как правило, выделенное антитело получают с помощью по меньшей мере одной стадии очистки, во время которой удаляют рекомбинантный клеточной материал.

Понятие "характеристика антитела" относится к факторам, которые участвуют в распознавании антителом антигена или эффективности антитела ίη νί\Ό. Изменения в аминокислотной последовательности антитела могут влиять на свойства антитела, такие как фолдинг, и могут влиять на физические факторы, такие как начальная скорость связывания антитела с антигеном (ка), константа диссоциации антитела от антигена (ка), константа аффинности антитела к антигену (Κά), конформация антитела, стабильность белка и время полужизни антитела.

В контексте настоящего описания понятие "эпитопное мечение" относится к антителу к 1Ь-23р19, слитому с "эпитопной меткой". "Эпитопная метка" представляет собой полипептид, состоящий из достаточного количества аминокислот для создания эпитопа для производства антитела, при этом ее создают так, чтобы она не оказывала воздействия на требуемую активность гуманизированного антитела к 1Ь23р19. Эпитопная метка, как правило, является в значительной степени уникальной, в результате чего антитело, которое образуется против эпитопной метки, не дает выраженную перекрестную реакцию с другими эпитопами. Приемлемые полипептиды-метки, как правило, содержат по меньшей мере 6 аминокислотных остатков и, как правило, содержат примерно 8-50 аминокислотных остатков или примерно 930 остатков. Примерами эпитопных меток и антител, которые связываются с эпитопом, являются полипептид-метка йи НА (НА вируса гриппа) и соответствующее ему антитело 12СА5 (Р1е1б и др., Мо1. Се11. Вю1. 8, 1988 2159-2165); с-тус-метка и соответствующие ей антитела 8Р9, 3С7, 6Е10, С4, В7 и 9Е10 (Εναη и др., Мо1. Се11. Вю1. 5(12), 1985, сс.3610-3616); и метка, включающая гликопротеин Ό (дИ) вируса герпеса простого, и соответствующее ей антитело (РаЬогкку и др. Рго1еш Епдшеейпд 3(6), 1990, сс.547553). В конкретных вариантах эпитопная метка представляет собой "эпитоп, связывающийся с рецептором спасения". В контексте настоящего описания понятие "эпитоп, связывающийся с рецептором спасения" относится к эпитопу Рс-области молекулы 1дС (такой как 1дС_ь 1дС₂, 1дС₃ или 1дС₄), ответственному за удлинение времени полужизни молекулы 1дС ίη νί\Ό в сыворотке.

Антитела можно конъюгировать с цитотоксическим агентом. Он может представлять собой любую субстанцию, которая ингибирует или препятствует функции клеток и/или вызывает деструкцию клеток. Под понятие подпадают радиоактивные изотопы (такие как I¹³¹, I¹²⁵, Υ⁹⁰, и Ке¹⁸⁶), химиотерапевтические средства и токсины, такие как обладающие ферментативной активностью токсины, полученные из бактерий, грибов, растений или животных, и их фрагменты. Указанные цитотоксические агенты можно сшивать с гуманизированными антителами с помощью стандартных процедур и применять, например, для лечения пациента, которому показана терапия на основе антитела.

"Химиотерапевтическое средство" представляет собой химическое соединение, которое можно применять для лечения рака. Известны многочисленные примеры химиотерапевтических средств, которые можно конъюгировать с терапевтическими антителами, предлагаемыми в настоящем изобретении. Примерами указанных химиотерапевтических средств являются алкилирующие средства, такие как тиотепа и циклофосфамид; алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая

- 9 030436

алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилоломеламин; ацетогенины (прежде всего буллатацин и буллатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; каллистатин; СС-1065 (включая его синтетические аналоги адозелесин, карзелесин и бизелесин); криптофицины (прежде всего криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин, ауристатины (включая такие аналоги, как монометил-ауристатин Е и монометил-ауристатин Р); дуокармицин (включая синтетические аналоги К^-2189 и СВ1-ТМ1); элеутеробин; панкратистатин; саркодиктиин; спонгистатин; азотные аналоги горчичного газа (иприта), такие как хлорамбуцил, хломафазин, хлорфосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, гидрохлорид оксида мехлорметамина, мелфалан, новембихин, фенэстерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин (азотистоипритовое производное урацила); нитрозмочевины, такие как кармустин, хлорзотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин; антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихеаминцин, прежде всего калихеамицин гамма II и калихеаминцин рЬЛ1 (см., например, Адпете, СЬет. Ιηΐ1. Εά. Епд1., 33, сс. 183186); динемицин, включая динемицин А; бисфосфонаты, такие как клодронат; эсперамицин; а также неокарзиностатиновый хромофор и родственный хромопротеин хромофоров энедииновых антибиотиков), аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карзинофелин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диаза-5-оксо-Ьнорлейцин, доксорубицин (Αάπαιηναη™) (включая морфолино-доксорубицин, цианморфолинодоксорубицин, 2-пирролино-доксорубицин и дезоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофенольная кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, хеломицин, родарубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5фторурацил (5-ФУ); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуриновые аналоги, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамитрин, тиогуанин; пиримидиновые аналоги, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуредин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолонпропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антиадренергетики, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; заменитель фолиевой кислоты, такой как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамидгликозид; аминолевулиновая кислота; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демоколцин; диазихон; элформитин; эллиптиния ацетат; эпотилон; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидамин; майтансиноиды, такие как майтансин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопидамол; нитракрин; пентостатин; фенамед; пирарубицин; лосоксантрон; подафиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; Р8К®; разоксан; ризоксин; сизофуран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазихон; 2,2',2"-трихлортриэтиламин; трихотецены (прежде всего токсин Т-2, верракурин А, роридин А и ангуидин); уретан; виндесин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид ("Ага-С"); циклофосфамид; тиотепа; таксоиды, например паклитаксел (ТАХОЬ®, фирма Вп5Ю1-Муег5 8с.]шЬЬ Опсо1оду, Принстон, штат НьюДжерси) и доцетаксел (ТАХОТЕКЕ®, фирма КЬопе-Рои1епс Когег, Энтони, Франция); хлорамбуцил; гемцитабин (Сет/аг™); 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; платина; этопозид (УР-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин; винорелбин (ЫауеФте™); новантрон; тенипозид; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; кселода; ибандронат; СРТ-11; ингибитор топоизомеразы КР8-2000; дифторметилорнитин (ДМПО); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; капецитабин, и их фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из указанных выше соединений. Также под объем этого определения подпадают антигормональные агенты, которые регулируют или ингибируют действие гормона на опухоли, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы рецепторов эстрогена (8ЕКМ), включая, например, тамоксифен (включая Ыо1νаάеx™), ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, ЬУ117018, онапристон и торемифен (РагезФп™); ингибиторы ароматазы, которые ингибируют фермент ароматазу, регулируют производство эстрогена надпочечниками, такие, например, как 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, мегестрола ацетат (Медасе™), эксеместан, форместан, фадрозол, ворозол (КМког™), летрозол (Ретага™) и анастрозол (А^^т^άеx™); и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, леупролид и госерелин, а также фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные любого из указанных выше соединений. Любое одно или несколько этих средств можно конъюгировать с гуманизированными антителами, предлагаемыми в настоящем изобретении, с получением ценного терапевтического средства, которое можно применять для лечения различных нарушений.

Антитела можно конъюгировать также с пролекарствами. "Пролекарство" представляет собой предшественник или производное фармацевтически активной субстанции, которое является менее цитотоксичным в отношении опухолевых клеток по сравнению с исходным лекарственным средством и обладает способностью активироваться или превращаться в более активную исходную форму с помощью ферментов (см., например, \УПтап в: "РгсЛшдх ίη Сапсег СЬетоШегару", ВюсЬетюаЕ 8ос1е1у ТгапзасЬопз, 14, 1986, сс. 375-382, 615-й симпозиум в Белфасте (1986); и 84е11а и др. в: "РгсЛшдз: А СЬетюа! АрргоасЬ 1о Та^деΐеά Эгид ЭеЬуегу", Эиес^ Эгид ЭеЬуегу, под ред. ВогсЬаМ! и др., изд-во Ни- 10 030436

тапа Рге88, 1985, сс. 247-267). Пригодные пролекарства включают (но, не ограничиваясь ими) фосфатсодержащие пролекарства, тиофосфатсодержащие пролекарства, сульфатсодержащие пролекарства, пептидсодержащие пролекарства, модифицированные Ό-аминокислотой пролекарства, гликозилированные пролекарства, β-лактамсодержащие пролекарства, пролекарства, содержащие необязательно замещенный феноксиацетамид, или пролекарства, содержащие необязательно замещенный фенилацетамид, 5фторцитозин- и другие 5-фторуридинсодержащие пролекарства, которые могут превращаться в более активную цитотоксическую свободную лекарственную форму. Примеры цитотоксических лекарственных средств, которые могут образовывать производные в виде пролекарства, включают (но, не ограничиваясь ими) описанные выше химиотерапевтические средства.

Для диагностических целей, а также для мониторинга лечения антитела можно конъюгировать также с меткой, либо только с меткой, либо с меткой в сочетании с дополнительным вторым агентом (пролекарство, химиотерапевтическое средство и т.п.). Метка в отличие от второго дополнительно агента представляет собой субстанцию, которая является выявляемым соединением или выявляемой композицией, и ее можно конъюгировать прямо или косвенно с гуманизированным антителом, предлагаемым в настоящем изобретении. Метка сама по себе может представлять собой выявляемую субстанцию (например, радиоизотопные метки или флуоресцентные метки) или, как в случае ферментативной метки, она может катализировать химическое изменение соединения или композиции, представляющего/представляющей собой субстрат, которое можно выявлять. Меченое гуманизированное антитело к 1Ь23р19 можно приготавливать и применять для различных целей, включая диагностику ίη νίΐτο и ίη νίνο.

Антитела можно приготавливать таким образом, чтобы они представляли собой часть препарата в виде липосомы, для их эффективного введения ίη νίνο. "Липосома" представляет собой небольшой пузырек, состоящий из различного типа липидов, фосфолипидов и/или поверхностно-активных веществ. Липосомы можно применять для введения млекопитающему соединения или композиции, например, гуманизированного антитела к 1Ь-23р19 необязательно в сочетании или в комбинации с одним или несколькими фармацевтическими действующими веществами и/или метками. Компоненты липосом обычно упорядочены в виде двухслойной структуры, аналогичной липидной структуре биологических мембран.

"Выделенная" молекула нуклеиновой кислоты представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, которая идентифицирована и отделена по меньшей мере от одной молекулы нуклеиновой кислотыпримеси, с которой она обычно связана в естественном источнике нуклеиновой кислоты антитела. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты отличается от молекулы нуклеиновой кислоты, существующей во встречающихся в естественных условиях клетках.

Можно осуществлять рекомбинантную экспрессию одного или нескольких доменов гуманизированных антител. Для осуществления указанной рекомбинантной экспрессии можно применять одну или несколько контролирующих последовательностей, т. е. полинуклеотидных последовательностей, необходимых для экспрессии функционально связанной кодирующей последовательности в конкретном организме-хозяине. Пригодные для прокариотических клеток контролирующие последовательности включают, например, последовательности промотора, оператора и сайта связывания рибосомы. В эукариотических клетках контролирующие последовательности включают (но, не ограничиваясь только ими) промоторы, сигналы полиаденилирования и энхансеры. Указанные контролирующие последовательности можно применять для экспрессии и производства гуманизированного антитела к 1Ь-23р19 в прокариотических и эукариотических клетках-хозяевах.

Нуклеиновая кислота "функционально связана", если она находится в функциональной связи с другой нуклеотидной последовательностью. Например, нуклеиновая кислота предпоследовательности или секреторного лидера функционально связана с нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид, если она экспрессируется в виде предпротеина, который принимает участие в секреции полипептида; промотор или энхансер функционально связан с кодирующей последовательностью, если он оказывает воздействие на транскрипцию последовательности; или сайт связывания рибосомы функционально связан с кодирующей последовательностью, если он расположен так, что может облегчать трансляцию. Как правило, "функционально связаны" обозначает, что связанные последовательности ДНК являются смежными, а в случае секреторного лидера, являются смежными и находятся в рамке считывания. Однако энхансеры не обязательно должны быть смежными. Связывание осуществляют путем встраивания лигированием в соответствующие сайты рестрикции. Если такие сайты не существуют, то можно применять синтетические олигонуклеотидные адаптеры или линкеры.

В контексте настоящего описания понятия "клетка", "линия клеток" и "культура клеток" используются взаимозаменяемо, и все такие понятия включают потомство. Так, понятия "трансформанты" и "трансформированные клетки" включают первичную представляющую интерес клетку и полученные из нее культуры, вне зависимости от количества пересевов.

Понятие "млекопитающее", подлежащее лечению, относится к любому животному, которое принадлежит к классу млекопитающих, включая людей, домашних и сельскохозяйственных животных, а также живущих в зоопарке животных, предназначенных для спорта или комнатных животных, таких как собаки, лошади, кошки, коровы и т.п. Предпочтительно млекопитающее представляет собой человека.

В контексте настоящего описания понятие "нарушение" означает любое состояние, которое можно

- 11 030436

облегчать посредством лечения гуманизированным антителом к 1Ь-23р19, представленным в настоящем описании. Оно включает хронические и острые нарушения или заболевания, том числе патологические состояния, которые приводят к предрасположенности млекопитающего к рассматриваемому нарушению. Примерами нарушений, которые можно лечить согласно изобретению, являются (но, не ограничиваясь только ими) воспалительные, ангиогенные, аутоиммунные и иммунологические нарушения, респираторные нарушения, рак, гематологические злокачественные заболевания, доброкачественные и злокачественные опухоли, лейкозы и лимфоидные злокачественные заболевания.

Понятия "рак" и "раковый" относятся или описывают физиологическое состояние у млекопитающего, которое, как правило, отличается нерегулируемым ростом клеток. Примерами рака являются (но, не ограничиваясь только ими) карцинома, лимфома, бластома, саркома и лейкоз.

В контексте настоящего описания понятие "ассоциированное с 1Ь-23 нарушение" или "ассоциированное с 1Ь-23 заболевание" относится к состоянию, при котором активность 1Ь-23 принимает участие в заболевании, и, как правило, происходит аномальная экспрессия 1Ь-23. Ассоциированное с 1Ь-23 нарушение включает заболевания и нарушения иммунной системы, такие как аутоиммунные нарушения и воспалительные нарушения. Указанные состояния включают (но, не ограничиваясь только ими) ревматоидный артрит (КА), системную красную волчанку (§ЬЕ), склеродерму, синдром Шегрена, рассеянный склероз, псориаз, псориатический артрит, воспалительное заболевание кишечника (например, неспецифический язвенный колит и болезнь Крона), воспаление легких, астму и идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру (ΙΤΡ) и анкилозирующий спондилит.

Понятие "внутривенная инфузия" относится к интродукции агента в вену больного животного или человека в течение периода времени, превышающего примерно 15 мин, как правило, в течение примерно 30-90 мин.

Понятие "внутривенный болюс" или "внутривенный импульс" относится к введению лекарственного средства животному или человеку таким образом, чтобы лекарственное средство поступало в организм в течение примерно 15 мин или менее, как правило, 5 мин или менее.

Понятие "подкожное введение" относится к интродукции агента под кожу больного животного или человека, предпочтительно в карман между кожей и низлежащей тканью, путем относительно медленного пролонгированного введения из содержащего лекарственное средство резервуара. Путем прищипывания или оттягивания кожи вверх и в сторону от низлежащей ткани можно создавать карман.

Понятие "подкожная инфузия" относится к интродукции лекарственного средства под кожу больного животного или человека, предпочтительно в карман между кожей и низлежащей тканью, путем относительно медленного пролонгированного введения из содержащего лекарственное средство резервуара в течение периода времени, составляющего (но, не ограничиваясь только указанным) 30 мин или менее или 90 мин или менее. Инфузию необязательно можно осуществлять путем подкожной имплантации насоса для введения лекарственного средства, имплантированного под кожу больного животного или человека, при этом насос обеспечивает введение лекарственного средства в предварительно определенном количестве в течение предварительно определенного периода времени, составляющего 30 мин, 90 мин или периода времени, соответствующего продолжительности схемы лечения.

Понятие "подкожный болюс" относится к введению лекарственного средства под кожу больного животного или человека, при этом продолжительность введения лекарственного средства в виде болюса составляет менее примерно 15 мин; в другом случае менее 5 мин, а еще в течение менее 60 с. Введение осуществляют в карман между кожей и низлежащей тканью, где карман можно создавать путем прищипывания или оттягивания кожи вверх и в сторону от низлежащей ткани.

В контексте настоящего описания понятие "терапевтически эффективное количество" относится к количеству действующего вещества, при использовании которого происходит ослабление или облечение одного или нескольких симптомов нарушения, на которое направлено лечение. Терапевтически эффективное количество относится к концентрации в сыворотке пациента, при которой, как установлено, действующее вещество является эффективным в отношении замедления развития болезни. Эффективность можно оценивать общепринятыми путями в зависимости от подлежащего лечению состояния.

В контексте настоящего описания понятия "лечение" и "терапия" и т.п. относятся к терапевтическим, а также профилактическим или подавляющим мероприятиям в отношении заболевания или нарушения, которые приводят к любому клинически важному или благоприятному действию, включая (но, не ограничиваясь только ими) облегчение или ослабления одного или нескольких симптомов, регресс, замедление или прекращение развития заболевания или нарушения. Таким образом, например, под понятие "лечение" подпадает введение агента до или после начала проявления симптома заболевания или нарушения, что приводит к предупреждению или устранению одного или нескольких признаков заболевания или нарушения. В другом примере понятие относится к введению агента после клинического проявления болезни для борьбы с симптомами болезни. Кроме того, в контексте настоящего описания понятие "лечение" или "терапия" относятся к введению агента после возникновения и после развития клинических симптомов, где введение оказывает воздействие на клинические параметры заболевания или нарушения, такие как степень повреждения ткани или количество и распространение метастазов, вне зависимости от того, приводит или нет лечение к облегчению заболевания. Кроме того, если применение

- 12 030436

композиций, либо индивидуально, либо в сочетании с другим терапевтическим средством купирует или облегчает по меньшей мере один из симптомов подлежащего лечению нарушения по сравнению с указанным симптомом без применения содержащей гуманизированное антитело к П.-23р19 композиции, то результат следует рассматривать как эффективное лечение требуемого нарушения вне зависимости от того, происходит или нет облегчение всех симптомов нарушения.

Понятие "листовка-вкладыш в упаковке" относится к инструкциям, которые принято включать в предназначенные для продажи упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, методах применения, введения, противопоказаниях и/или мерах предосторожности при применении указанных терапевтических продуктов.

Антитела.

Гуманизированные антитела к П.-23р19 и связывающие агенты могут ингибировать производство ассоциированных с ТН17 цитокинов, которые принимают участие в хронических аутоиммунных и воспалительных заболеваниях. Таким образом, гуманизированные антитела к П,-23р19 и связывающие агенты можно применять для лечения различных заболеваний или нарушений. И гуманизированное антитело к 1Ь-23р19, и 1Ь-23р19-связывающий агент, включают, по меньшей мере, участок, который специфически распознает эпитоп П,-23р19 (т.е. антигенсвязывающий фрагмент).

При осуществлении первичной оценки отбирали мышиные антитела на основе их характеристик связывания 1Ь-23р19.

Полученное антитело характеризуется величиной К_о в отношении 1Б-23, в частности в отношении человеческого 1Б-23, составляющей менее чем 100 пМ, величиной К_о, составляющей менее чем 40 пМ, величиной К_о, составляющей менее чем 20 пМ, величиной К_о, составляющей менее чем 10 пМ или величиной К_о, составляющей менее чем 1 пМ.

Отобранные мышиные антитела могут иметь вариабельные области легких цепей и вариабельные области тяжелых цепей, которые представлены ниже в табл. 1 и 2.

Таблица 1. Мышиные "лидерные" антитела к !Ь-23р19 - последовательности УК

2Шук	САСАТТСТССТСАСССААТСТССАССТТСТТТСССТСТСТСТСТАССССАСАСС СССАССАТАТССТОСАОААССАОТОАААОТОТТТАТАОТТАТОСССААААТТТТ АТАСАСТССТАССАССАСАААССАССАСАСССАСССАААСТССТСАТСТАТСС ТССАТССААССТССААТСТСССАТСССТСССАССТТСАСТСССАСТСССТСТА ССАСАСАСТТСАСССТСАССАТСААТССТСТССАСССТСАТСАТСТТССААСС ТАТТАСТСТСАССАААСТААТСАССАТСССТАСАССТТСССАОСССССАССАА ССТССАААТААСА (ЗЕр ГО ΝΟ: 83)
	О1УЕТр8РО8ЕАУ8ЕОрКАТ18СК.Т8Е8УУ8УОрКР1Н\УУррКРОрРРКЕ1ЛУ ΚΑδΝΕΕδΟΙΡΑΚΡδΟδΟδΚΤΌΡΤΕΤΜΝΡνΕΑΟΟνΑΤΥΥΕΡΡΤΝΕΟΡΥΤΡΟΟΟ ΤΚΓΕΙΚ. (δΕρ ГО ΝΟ: 84)
6В8Ук	ОАСАТТОТОАТОАСССАОТСТСАСАААТТСТТОТССАСАТСАОТОООАОА САОООТСАССАТСАСТТОСААООССАОТСОООАТОТООСТАТТОСТОТАО ССТООТАТСААСАОАААССАОООСААТСТССТАААСТАСТТСТТТТСТОО ОСАТССАСССОАСАСАСТООООТСССТОАТСОСТТСАСАООСАОТООАТС ТСООАСАОАТТТСАСТСТСАССАТТАОСААТОТОСАОТСТОААОАСТТОО САОАТТАТТТСТОТСАССААТАТАОСАОСТАТССАТТСАСОТТСООСТСОО ООАСАААОТТООАААТАААО (8Ер ГО ΝΟ: 85)
	О1УМТр8НКРЬ8Т8УСГОКУТГГСКА8К1>УА1АУА\УУррКРОр8РКТТТР\УА8 ТБШТОУРОКРТО8О8КТТ>РТ1ЛТ8КУр8ЕОЕАОУРСНрУ88УРРТРО8ОТКЕЕ1 К (8Ер ГО ΝΟ: 86)
9Ш2-Ук	ОАСАТТОСОСТОАСССААТСТССАОСТТСТТТООСТОТОТСТСТООООСАО Л РР РРГ Л ГР Л Т Л ТРГТГ Г Л Г Л РРР Л ГТГ Л Л Л /-чт Л ТТ Л Л Т Т Т Т Т Л Т Г* Г' Г' Л Г' РУ VIVIVI V-ν-РУ V-ν-РУ 1 РУ 1 V-V-1 VI ν-РУ VI РУ VI V-ν-РУ VI 1 νΐ-СУРУРУ V-1 РУ 1 1 РУРУ 1 111 ΙΡΥϊνίνίν ΡΥν ТАОТТТТАТОСАСТООТАССАОСАОАААССАООАСАОТСАСССАААСТСС ТСАТСТАТСОТОСАТССААССТАОААТСТОООАТСССТОССАООТТСАОТ ООСАОТОООТСТАООАСАОАСТТСАСССТСАССАТТААТССТОТООАООС ТОАТОАТОТТОСААССТАТТАСТОТСАОСАААСТААТОАООАТССОТАСА СОТТСООАООООООАСТААОТТООАААТАААА (8Ер ГО ΝΟ: 87)
	ΟΙΑΕΤρδΡΑδΤΑνδΕθρΚΑΤΙδΟ<ΑδΕΤΙΝΡΥΟΤδΡΜΗλνΥρρΚΡθρδΡΚΤΤΙΥΚΑδΝ ΕΕ8ΟΙΡΑΚΡ8Ο8Ο8ΚΤΤ)ΡΤΕΤΙΝΡνΕΑΙ)θνΑΤΥΥ0(2(2ΤΝΕΟΡΥΤΡΟΟΟΤΚΕΕΙΚ (8Ер ГО ΝΟ: 88)
15С11ук	ОАТОТТОТОАТОАСССАААСТССАСТСТСССТОССТОТСАОТСТТООАОАТ СААОССТССАТСТСТТОСАОАТСТАОТСАОАОССТТОТАСАСАОТААТОО А А А1 Асе 1 А1 1 1 АС А1 1ОО1АСС 1 ОС АОААОСС АООСС АО 1 С1 СС АААОС ТССТОАТСТАСАААОТТТССААСССАТТТТСТОСССТСССАОАСАОСТТС АОТОССАОТОСАТСАОССАСАОАТТТСАСАСТСААОАТСААСАОАОТОС АОССТОАОСАТСТОССАОТТТАТТТСТОСТСТСАААОТАСАСАТОТТССС ТАСАССТТСССАОСССССАСССАОСТОСАААТАААА (ЗЕр ГО ΝΟ: 89)
	ОУУМТрТРЕ8ЕРУ8ЬСГОрА818СК88р8ТУН8КОКТУТН\УУЕрКРОр8РКТТ 1УКУ8КК.Р8СУРОК.Р8С8С8СТОРТЕКШК.УЕАЕОЕСУУРС8р8ТНУРУТРСС ОТрЬЕ1К (ЗЕр ГО ΝΟ: 90)
15Р1ук	О1УМТР8РАТЕ8УТРООКУ8Е8СКА8Р818ОУЕН\¥УРРК8НЕ8РКЕЫКУА8Р 818С1Р8К.Р8С8С8С8ОРТЬТШ8УЕРЕОУСУУУСРМСН8РРРТРС8СТКЬЕ1К (ЗЕр ГО ΝΟ: 91)

- 13 030436

18ОЗук	САСАТТСТСАТСАСТСАСТСТССАСССАСССТСТСТСТСАСТССАССАСА ТАСАСТСТСТСТТТССТССАСССССАСТСАСАСТАТТАССОАСТАСТТАТ АСТССТАТСААСАААААТСАСАТСАСТСТССААСССТТСТСАТСАААТТТ ССТТСССААТССАТСТСТСССАТССССТССАССТТСАСТСОСАСТССАТС АСССТСАСАТТТСАСТСТСАСТАТССАСАСТСТССААССТОАТСАТСТТС САСТСТТТТТСТСТСААААТССТСАСАССТТТСССТТСАССТТСССАСССС ССАССААССТССАААТАААА (δΕΟ ГО N0: 92)
	О1УМТ08РАТЬ8УТРеОКА8Ь8СКА80818О¥Ь¥\¥¥00К8НЕ8РКЬиКРА80 818О1Р8КЕТО8О8О8ОгТЕ8ГО8¥ЕРООУО¥гг ΟΟΝΟΗδΕΡΕΤΡΟΟΟΤΚΕΕΙΚ (δΕΟ ГО N0: 93)
18С4ук	САСАТТСТСАТСАСТСАСТСТССАСССАСССТСТСТСТСАСТССАССАСА ТАСАСТСТСТСТТТССТССАСССССАСССАСАСТАТТАССОАСТАСТТАС АСТССТАТСААСАААААТСАСАТСАСТСТССААСССТТСТСАТСАААТАТ ССТТСССААТССАТСТСТСССАТССССТССАССТТСАСТСОСАСТССАТС АОООТСАОАТТТСАСТСТСАОТАТСААСАОТОТООААССТОААОАТОТТО САСТСТАТТАСТСТСААААТССТСАСАССТТТССАТТСАСОТТССССТСС СССАСАААСТТССАААТАААА (δΕΟ ГО N0: 94)
	ΟίνΜΤΟδΡΑΤΕδνΤΡΟΟΚνδΕδΟΚΑδΟδΙδΕΥΕΗλνΥΟΟΚδΗΕδΡΚΕΕΙΚΥΑδΟ δΙδΟΙΡδΗΡδΟδΟδΟδΟΡΤΕδΙΝδνΕΡΕΟνΟνΥΥΟΟΝΟΗδΡΡΡΤΡΟδΟΤΚΕΕΙΚ (δΕΟ ГО N0: 95)
18Е5ук	САСАТТСТСАТСАСТСАСТСТССАСССАСССТСТСТСТСАСТССАССАСА ТАСАСТСТСТСТТТССТССАСССССАСССАСАСТАТТАССОАСТАСТТАТ АСТССТАТСААСАААААТСАСАТСАСТСТССААСССТТСТСАТСАААТТТ ССТТСССААТССАТСТСТСССАТССССТССАССТТСАСТСОСАСТССАТС АСССТСАСАТТТСАСТСТСАСТАТССАСАСТСТССААССТОАТСАТСТТС САСТСТТТТТСТСТСААААТССТСАСАССТТТСССТТСАССТТСССАСССС ООАССААОСТООАААТАААА (δΕΟ ГО N0: 96)
	ΟίνΜΤΟδΡΑΤΕδνΤΡΟΟΚνδΕδΟΚΑδΟδΙδΟΥΕΥλνΥΟΟΚδΗΕδΡΚΕΕΙΚΡΑδΟ δΙδΟΙΡδΗΡΤΟδΟδΟδΟΡΤΕδΙΟδνΕΡΟΟνΟνΡΡΟΟΝΟΗδΡΡΡΤΡΟΟΟΤΚΕΕΙΚ (δΕΟ ГО N0: 97)
20Е8ук	ОАСАТТОТОАТОАСТСАОТСТССАОССАСССТОТСТОТОАСТССАООАОА ТАОАОТСТСТСТТТССТОСАОООССАОССАОАОТАТТАОСОАОТАТТТАС АСТООТАТСААСАААААТСАСАТОАОТСТССААООСТТСТСАТСАААТАТ ОСТТСССААТССАТСТСТОООАТССССТССАООТТСАОТООСАОТООАТС АОООТСАОАТТТСАСТСТСАОТАТСААСАОТОТООААССТОААОАТОТТО ОАОТТТАТТАСТОТСААААТООТСАСАОСТТТССАТТСАСОТТСООСТСОО ООАСАААОТТООАААТАААА (δΕΟ ГО N0: 98)
	ΟίνΜΤΟδΡΑΤΕδνΤΡΟΟΚνδΕδΟΚΑδΟδΙδΕΥΕΗλνΥΟΟΚδΗΕδΡΚΕΕΙΚΥΑδΟ δΙδΟΙΡδΚΡδΟδΟδΟδΟΡΤΕδΙΝδνΕΡΕΟνΟνΥΥΟΟΝΟΗδΡΡΡΤΡΟδΟΤΚΕΕΙΚ (δΕΟ ГО N0: 99)
22Е2ук	ОАСАТТОТОАТОАСТСАОТСТССАОССАСССТОТСТОТОАСТССАООАОА ТАОАОТСТСТСТСТССТОСАОООССАОССАОАОТАТТАОСОТСТАСТТАС АСТООТАТСААСАААААТСАССТОАОТСТССААООСТТСТСАТСАААТАТ ОСТТСССААТССАТСТСТОООАТССССТССАООТТСАОТООСАОТООАТС АОООТСАОАТТТСАСТСТСАОТАТСААСАОТОТООААССТОААОАТОТТО ОАОТТТАТТАСТОТСААААТООТСАСАОСТТТССАТТСАСОТТСООСТСОО ООАСАААОТТООАААТАААА (δΕΟ ГО N0: 100)
	ΏΐνΜΤΟδΡΑΤΕδνΤΡΟΏΚνδΕδΟΚΑδΟδΙδνΥΕΗλνΥΟΟΚδΡΕδΡΚΕΕΙΚΥΑδΟ δΙδΟΙΡδΗΡδΟδΟδΟδΟΡΤΕδΙΝδνΕΡΕΟνΟνΥΥΟΟΝΟΗδΡΡΡΤΡΟδΟΤΚΕΕΙΚ (δΕΟ ГО N0: 101)
24А54ук	САСАТТСТСАТСАСТСАСТСТССАСССАСССТСТСТСТСАСТССАССААА ТАСАСТСТСТСТТТССТССАСССССАСССАСАСТАТТАССОАСТАСТТАС АСТООТАТСААСАААААТСАСАТОАОТСТССААООСТТСТСАТСАААТАТ ССТТСССААТССАТСТСТСССАТССССТССАССТТСАСТСОСАСТССАТС АСССТСАААТТТСАСТСТСАСТАТСААСАСТСТССААССТОААСАТСТТС ОАОТОТАТТАТТОТСААААТООТСАСАОСТТТССАТТСАСОТТСООСТСОО

- 14 030436

	ССАСАААСТТССАААТАААА (8Еф ГО N0: 102)
	О1УМТ08РАТЕ8УТРСтУ8Е8СРА80818ОУЕН\УУ00]<8НЕ8РРГОи]<УА80 δΙδΟΙΡδΚΡδΟδΟδΟδΝΡΤΕδΙΝδνΕΡΕΟνΟνΥΥΟφΝΟΗδΡΡΡΤΡΟδΟΤΚΕΕΙΚ (δΕφ ГО N0: 103)
26Р7Ук	САСАТТСТССТСАСАСАСТСТССТССТТССТТАССТСТТТСТСТСССССАС АСССССАССАТСТСАТССАСССССАССААААСТСТСАСАТТСТСТСАСТА ТТТТТАТАТССАСТССТАССААСАСАААССАССАСАСССАСССАААСТСС ТСАТСТАССТТССАТССААССТАСААТСТССССТСССТСССАССТТСАСТ СССАСТСССТСТСССАСАСАСТТСАСССТСААСАТССАТССТСТССАССА ССАССАТССТССААССТАТТАСТСТСАСААСАСТАСССАССТТСССТАСА ССТТСССАССССССАССААССТССАСАТАААА (8Еф ГО ΝΟ: 104)
	ΟίνΕΤΟδΡΑδΕΑνδΕΟΟΡΑΤΙδίΡΑδΚδνΡΡδΟΥΡΥΜΕίνΥΟΟΚΡΟΟΡΡΚΕΕΙ ΥΕΑδΝΕΕδθνΡΑΚΡδΟδΟδΟΤΟΡΤΕΝΙΗΡνΕΕΕΟΑΑΤΥΥΟ(2ΝδΚΕΕΡΥΤΡΟΟ ΟΤΚΡΕΙΚ (δΕφ ГО ΝΟ: 105)
27С8ук	ОАСАТТОТОТТОАСАСАОТСТССТОСТТССТТАОСТОТАТСТСТООООСАО АОООССАССАТСТСАТОСАОООССАОСААААОТОТСАОТАСАТСТООСТА ТАОТТАТАТАСАСТООТАССААСАОАААССОООАСАОССАСССАААТТСС ТСАТСТАТСТТОСАТССААССТАОАТТСТООООТСССТОССАООТТСАОТО ОСАОТОООТСТОООАСАОАСТТСАСССТСААСАТССАТССТОТООАООАО ОАООАТОСТОСААССТАТТАСТОТСАОСАСАОТАОООАОСТТССОТАСАС ОТТСООАООООООАССААОСТООАААТАААА (8Еф ГО ΝΟ: 106)
	ΟίνΕΤΟδΡΑδΕΑνδΕΟΟΡΑΤΙδΟΡΑδΚδνδΤδΟΥδΥΙΗνΥΟΟΚΡΟΟΡΡΚΡΕΙΥ ΕΑδΝΕΟδθνΡΑΚΡδΟδΟδΟΤΟΡΤΕΝΙΗΡνΕΕΕΟΑΑΤΥΥΟ(2ΗδΚΕΡΡΥΤΡΟΟΟ ТКЬЕ1К (δΕφ ГО N0: 107)
31Н9ук	ОАСАТТОТОАТОАСТСАОТСТССАОССАСССТОТСТОТОАСТССАООАОА ТАОАОТСТСТСТТТССТОСАОООССАОССАОАОТАТТАОСОАСТАСТТАС АСТООТАТСААСАААААТСАСАТОАОТСТССААООСТТСТСАТСАААТАТ ОСТТСССААТССАТСТСТОООАТССССТССАООТТСАОТООСАОТООАТС Л ГЗГЗГМГГ' Λ η Л Т'Т'Т'Г"' Л ГТГТГ Л Г Т л ’Т'Г' Л ЛГЛ П’-ГП’-тП Л Л Г'Г'ТП л л а л тгттг ПУ1У1У1 1 УП-У1П.1 1 1 ОН 1 У1 УП.У1 1 21 1 1x21211x21 VI 1 11 1 111121211х1х 1 11 212111 21 1 11 1 1 11 ОАОТОТАТТАСТОТСААААТООТСАСАОСТТТССОТАСАСОТТСООАООО ОООАССААОСТООАААТАААА (8Еф ГО N0: 108)
	ΟΐνΜΤ(2δΡΑΤΕδνΤΡΟΟΚνδΕδΟΚΑδ(2δΙδΟΥΕΗνΥ(2(2ΚδΗΕδΡΚΕΕΙΚΥΑδ(2 δΙδΟΙΡδΚΡδΟδΟδΟδΟΡΤΕδΙΝδνΕΡΕΟνΟνΥΥΟφΝΟΗδΡΡΥΤΡΟΟΟΤΚΕΕΙΚ (δΕφ ГО ΝΟ: 109)
34СЗУк	ОАТОТТОТОАТОАСССАААСТССАСТСТСССТОССТОТСАОТСТТООАОАТ СААОССТССАТСТСТТОСАОАТСТАОТСАОАОССТТОТАСАСАОТААТОО АААСАССТАТТТАСАТТООТАССТОСАОААОССАООССАОТСТССАААОС ТССТОАТСТАСАААОТТТССААССОАТТТТСТООООТССССОАСАООТТСА ОТООСАОТООАТСАОООАСАОАТТТСАСАСТСААОАТСАОСАОАОТООА ООСТОАООАТСТОООАОТТТАТТТСТОСТСТСАААОТАСАСАТОТТССОТ АСАСОТТСООАООООООАССААОСТООАААТАААТ (8Еф ГО ΝΟ: 110)
	θννΜΤ(2ΤΡΕδΕΡνδΕΟΟ(2ΑδΙδΟΚδδ(2δΕνΗδΝΟΝΤΥΕΗνΥΕ(2ΚΡΟ(2δΡΚΕΕ ΙΥΚνδΝΚΡδΟνΡΟΚΡδΟδΟδΟΤΟΡΤΕΚΙδΚνΕΑΕΟΕΟνΥΡΟδρδΤΗνΡΥΤΡΟΟ ОТКЬЕШ (δΕφ ГО ΝΟ: 111)
34О9Ук	ОАСАТТАТОАТОАСССАОТСТСАСАААТТСАТОТССАСАТСАОТАООАОА САОООТСАОСАТСАССТОСААООССАОТСАООАТОТОООТААТОСТОТОО ТСТООТАТСААСАААААССАОООСААТСТССТАААСТАСТОАТТТАСТОО ОСАТССАСССООСАСАТТООАОТСССТОАТСОСТТСАСАООСАОТООАТС ТОООАСАОАТТТСАСТСТСАССАТТАССААТОТОСАОТСТОААОАСТТОО САОАТТАТТТСТОТСАОСААТАТАОСАОСТАТСТСАСОТТСООТОСТООО АССААОСТООАОСТОААА (8Еф ГО ΝΟ: 112)
	ΟΙΜΜΤΟδΗΚΕΜδΤδνΟΟΡνδΙΤΟΚΑδΟΟνΟΝΑνννΥΟΟΚΡΟΟδΡΚΕΕΙΥν ΑδΤΚΗΙθνΡΟΚΡΤΟδΟδΟΤΟΡΤΕΊΤΓΝν(2δΕΟΕΑΟΥΡΟ(2(2ΥδδΥΕΤΡΟΑΟΤΚΕ ЕЬК (δΕφ ГО ΝΟ: 113)
43Р5ук	ОАТОТТОТОАТОАСССААТСТССАСТСТСССТОССТОТСАОТСТТООАОАТ СААСССТССАТСТСТТССАСАТСТАСТСАСАСССТТСТАСАСАСТААТСС АААСАССТАТСТАСАТТООТАССТОСТОААОССАООССАОТСТССАААОС

- 15 030436

	ТССТОАТСТАСАААОТТТССААССОАТТТТСТООООТСССАОАСАООТТС АОТООСАОТООАТСАОООАСАОАТТТСАСАСТСААОАТСАОСАОАОТОО АООСТОАООАТСТОООАОТТТАТТТСТОСТСТСАААОТАСАСАТОТТССО ТАСАСОТТСООАООООООАССААОСТООАААТАААА (δΕφ ГО N0: 114)
	ΌννΜΤΟδΡΕδΕΡνδΕΟΌΟΑδΙδΟΚδδΟδΕνΗδΝΟΝΤΥΕΗλνΥΕΕΚΡΟΟδΡΚΕΕΙ ΥΚνδΝΚΡδΟνΡΟΚΡδΟδΟδΟΤΟΡΤΕΚΙδΚνΕΑΕΟΕΟνΥΕΟδΟδΤΗνΡΥΤΡΟΟ ΟΤΚΤΕΙΚ (8Е0 ГО ΝΟ: 115)
73Н10Ук	ОАСАТССАОАТОАСТСАОТСТССАОТТТТССТОТСТОСАТСТОТОООАОА ААСТОТСАССАТСАСАТОТСОАОСААОТОАОААТАТТОАСАОТТАТТТАО САТООТАТСАОСАОАААСАОООААААТСТССТСАОСТССТООТСТТТОСТ ОСАСОАААСТТАОСАОАТООТОТОССАТСААООТТСАОТООСАОТООАТС АООСАСАСАОТАТТСТСТСААОАТСААСАОААТОСАОТСТОААОАТОТТО СОАОАТАСТАСТОТСААСАТТАТТАТАОТАСТССАТТСАСОТТСООСТСОО ООАСАААОТТООАААТАОАА (δΕφ ГО N0: 116)
	ΟΙΟΜΤΟδΡνΡΕδΑδνΟΕΤνΤΙΤΟΚΑδΕΝΙΟδΥΕΑλνΥΟΟΚΟΟΚδΡΟΕΕνΡΑΑΚΝΕΑΟ ΟνΡδΚΡδΟδΟδΟΤΟΥδΕΚΙΝΚΜΟδΕϋνΑΚΥΥΟΟΗΥΥδΤΡΡΤΡΟδΟΤΚΕΕΙΕ (δΕφ ГО ΝΟ: 117)
74НЗУк	ОАСАТССАОАТОАСТСАОТСОССАОСТТСССТОТСТОСАТСТОТОООАОАААСТ ОТСАТСТТСАСАТОТСОАОСААОТОАОААТАТТОАСАОТТАТТТАОСАТООТАТ САОСАОАААСАОООААААТСТССТСАОСТССТООТСТАТОСТОСААСАААСТТ АОСАОАТООТОТОССАТСААООТТСАОТООСАОТООАТСАООСАСАСАОТАТТ СТСТСААОАТСААСАОССТОСАОТСТОААОАТОТТОСОАОАТАТТАСТОТСТАС АТТАТТАТАОТАСТССАТТСАСОТТСООСТСООООАСАОАОТТООАААТАААА (δΕφ ГО N0: 118)
	ΟΙΟΜΤΟδΡΑδΕδΑδνθΕΤνΐΡΤΟΚΑδΕΝΙΟδΥΕΑλ¥ΥΟΟΚΟΟΚδΡΟΕΕνΥΑΑΤΝΕΑΟ ΟνΡδΚΡδΟδΟδΟΤΟΥδΕΚΙΝδΕΟδΕΟνΑΚΥΥΟΕΗΥΥδΤΡΡΤΡΟδΟΤΕΕΕΙΚ (δΕφ ГО ΝΟ: 119)

Таблица 2. Мышиные "лидерные" антитела к 1Б-23р19 - последовательности УН

2ϋ1νΗ	САООТОСАОСТОААООАОТСАООАССТООССТООТООСОСССТСАСАОАО ССТОТССАТСАСАТОСАСТОТСТСТОООТТСТСАТТААССАССТАТОСТАТА АОСТОООТТСОССАОТСАССАООАААОООТСТООАОТООСТТООАОТСАТ АТООАСТООТООАООСАСААААТАТААТТСАОСТСТСАААТССАОАСТОА ОСАТСАОСАААОАСААСТССААОАОТСААОТТТТСТТАААААТОААСАОТ СТОСАААСТОАТОАСАСАОССАООТАСТАСТОТОССАОАААООАСТАТАА ТТАСОООООТОСТАТООАСТАСТООООТСААООААССТСАОТСАССОТСТС СТСА (δΕφ ГО ΝΟ: 120)
	0У0ЕКЕ86Р6ЕУАР808Е81ТСТУ86Р8ЕТТУА18\УУк08Р6К6ЕЕ\уЕ6УТ\¥Т ΟΟΟΤΚΥΝδΑΕΚδΚΕδΙδΚΟΝδΚδΟνΡΕΚΜΝδΕΟΤΟΟΤΑΚΥΥΟΑΚΚΟΥΝΥΟΟ ΑΜΌΥλνΟΟΟΤδντνδδ (δΕφ ГО ΝΟ: 121)
6В8УН	САООТТСАОСТОСААСАОТСТОАСОСТОАОТТООТОАААССТООСАСТТСА ОТОААОАСАТССТОСААААТТТСТООСААСАССТТСАСТОАССАААСТАТТ САСТООАТОААОСАОАООССТОААСАОООССТООААТООАТТООАТАТАТ ТТАТССТАОАОАТОАТАОТССТААОТАСААТОАОААСТТСААОООСААОО ССАСАТТОАСТОСАОАСАААТССТССАОСАСАОССТАСАТОСАОСТСААС АОТСТОАСАТСТОАООАСТСТОСАОТСТАТТТСТОТОСААТСССАОАСАОО ТСАООСТАСОССТООТТТАТТТАСТООООССААОООАСТСТООТСАСТОТС ТСТТСА (δΕφ ГО ΝΟ: 122)
	0 УОЬОО δϋ АЕЬ УКР ОТ δ УКТ δ СК1 δ ΟΝΤΡΤϋΟΤΙΗλνΜΚΟΚΡΕΟΟΕΕλνίΟΥΙ ΥΡ КТГО δΡΚΥΝΕΝΡΚΟΚΑΤΕΤ ΑΌΚδ δ δΤ ΑΥΜΟΕΝδΕΤδΕΌ δ ΑνΥΡΟ ΑΙΡΌΚδΟΥ Α λνΡΙΥλνΟΟΟΤΕντνδδ (δΕφ ГО ΝΟ: 123)
9Ш2УН	САООТОСАОСТОААООАОТСАООАССТОТССТООТООСОСССТСАСАОАО ССТОТССАТСАСАТОСАСТОТСТСТОООТТСТСАТТАААСААСТТТОСТАТА АОТТОООТТСОТСАОССАССАООАААОООТСТООАОТООСТТООАОСААТ

- 16 030436

	АТССАСТССТССАСССАСАААТТАТААТТСАССТСТСАААТССАСАСТСА ССАТСАССАААСАСААСТССААСАСТСААСТТТТСТТАААААТСААСАСТ СТССАААСТСАТСАСАСАСССАССТАТТАТТСТСТСАСАААССАСТАТАС ТТАССССССТССТАТССАСТАСТССССТСААССААССТСАСТСАСССТСТС СТСА (8ЕЦ ГО N0: 124)
	(2ν(2ΕΚΕδΟΡνΕνΑΡδ(2δΕδΙΤσΓνδΟΡδΕΝΝΡΑΙδλννΚ(2ΡΡΟΚΟΕΕλνΕΟΑΙλνΤΟΟΟΤ ΝΥΝδΑΕΚδΙ^δΙδΚ0ΝδΚδ(2νΡΕΚΜΝδΕ(2Τ00ΤΑΚΥΥ(3νΡΚ0ΥδΥ00ΑΜ0Υλν0(2 ΟΤδνΐΎδδ (δΕΟ ГО ΝΟ: 125)
15С11уЬ	ОАООТССАОСТОСААСАОТСТООАССТОТОСТООТОААОССТООООСТТС АОТОААОАТОТССТОТААООСТТСТООАТАСАСАТТСАСТОАСТАСТАТАТ ОААСТОООТОААОСАОАОССАТООАААОАОССТТОАОТООАТТООАОТТА ТТАТТССТТАСААСООТООТАСТАОСТАСААССАОААОТТСААОООСААО ОССАСАТТОАСТОТТОАСААОТССТССАОСАСАОССТАСАТООАОСТСААС АОССТОАСАТСТОАООАСТСТОСАОТСТАТТАСТОТОСАСОАОАТООТСАС СОСТООТАСТТСОАТОТСТООООСАСАОООАССАСООТСАССОТСТССТСА (8ЕЦ ГО N0: 126)
	Εν(2Ε(2(2δΟΡνΕνΚΡΟΑδνΚΜδΟΚΑδΟΥΤΡΤΟΥΥΜΝλννΚ(2δΗΟΚδΕΕλνΐθνΐ ΙΡ ΥΝΟΟΤ δ ΥΝ(2ΚΡΚΟΚ АТЫ1 νϋΚδ δ δΤ ΑΥΜΕΕΝ 8ЬТ 8Εϋ δ ΑνΥ Υ0 АКТ) ОНИ λνΥΡϋνλνΟΤΟΤΤντνδδ (8ЕЦ ГО ΝΟ: 127)
15Г1уЬ	Εν(2Ε(2(2δΟΡΕΕνΚΡΟΑδνΚΜδΟΚΑδΟΥΤΡΤΟΟΙΜΗλννΚ(2ΚΡΟ(20ΕΕλνΐΟΥΙ ΝΡ ΥΝϋ ΟΤΚΥΝΕΚΡΚΟΚ АТЬТ δϋΚδ δ δΤ ΑΥΜΕΕ δ 8ЬТ δΕϋ δ ΑνΥ ΥΟ А Ρ Ρ \¥ ϋ Ε ΑΥλΥΟρΟΤΕντνδΑ (8ЕЦ ГО ΝΟ: 128)
18ϋ3νΗ	ОАООТССАОСТОСАОСАОТСТООАССТОАОСТООТСААОССТООООСТТС АОТОААОАТОТССТОСААООСТТСТООАТАСАСАТТСАСТСОСТАТСТТАТ ТСАСТОООТОАААСАОААОССТОООСАОООССТТОАОТООАТТООАТАТА ТТААТССТТАСААТОАТООТАСТАААТАСААТОАОААОТТСАААООСААО ОССАСАСТОАСТТСАОАСАААТССТССАОСАСАОССТАСАТООАОСТСАО САОССТОАССТСТОАООАСТСТОСООТСТАТТАСТОТАССТСТААСТОООА ССТСОАСТАСТООООССААООСАССАСТСТСАСАОТСТССТСА (8ЕЦ ГО ΝΟ: 129)
	Εν(2Ε(2(2δΟΡΕΕνΚΡΟΑδνΚΜδ0ΚΑδΟΥΤΡΤΚΥΕΙΗλννΚ(2ΚΡΟ(2ΟΕΕλνΐΟΥΙΝ Ρ ΥΝ ϋ ΟΤΚΥΝΕΚΡΚΟΚ АТЬТ δϋΚδ δ δΤ ΑΥΜΕΕ δ 8ЬТ δΕϋ δ Α νΥ ΥΟΤ δΝλνϋΕϋ Υ \¥ОЦОТТЕТУ88 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 130)
18С4уЬ	ОАООТССАОСТОСАОСАОТСТООАССТОААОТООТАААОССТООООСТТС АОТОААОАТОТССТОСААООССТСТООАТАСАСАТТСАСТАОТТСТОТТАТ АСАСТОООТОААОСАОААООСТОООСАОООССТТОАОТООАТТООАТАТА ТСААТСССТАТААТОАТООТАСТААОТАСААТОАОААОТТСАААООСААО ОССАСАСТОАСТТСАОАСАОАТССТССАОСАСАОССТАСАТООАОСТСАО САОССТОАССТСТОАООАСТСТОСООТСТАТТАСТОТАСААОАСООТТООА СОАООСТТАСТООООССААОООАСТСТООТСАСТОТСТСТОСА (8ЕЦ ГО ΝΟ: 131)
	Εν(2Ε(2(2δΟΡΕννΚΡΟΑδνΚΜδ0ΚΑδΟΥΤΡΤδδνΐΗλννΚ(2ΚΑΟ(2ΟΕΕλνΐΟΥΙΝ ΡΥΝΟΟΤΚΥΝΕΚΡΚΟΚΑΤΕΤδΟΚδδδΤΑΥΜΕΕδδΕΤδΕΟδΑνΥΥΟΤΚΚΕΟΕΑΥ ν/СОСТЬУТУ8А (8ЕЦ ГО ΝΟ: 132)
18Е5уЬ	ОАООТССАОСТОСАОСАОТСТООАССТОАОСТООТАААОССТООООСТОС АОТОААОАТОТССТОСААООСТТСТООАТАСАСАТТСАСТСОСТАТСТТАТ ТСАСТОООТОААОСАОААОССТОООСАОООССТТОАОТООАТТООАТАТА ТТААТССТТАСААТОАТООТАСТАААТАТААТОАОААОТТСАААООСААО ОССАСАСТОАСТТСАОАСАААТССТССАОСАСАОССТАСАТООАОСТСАО САОССТОАССТСТОАООАСТСТОСООТСТАТТАСТОТАССТСТААТТОООА ССТСОАСТАСТООООССААООСАССАСТСТСАСАОТСТССТСА (8ЕЦ ГО ΝΟ: 133)
	Εν(2Ε(2(2δΟΡΕΕνΚΡΟΑΑνΚΜδ0ΚΑδΟΥΤΡΤΚΥΕΙΗλννΚ(2ΚΡΟ(2ΟΕΕλνΐΟΥΙΝ ΡΥΝϋΟΤΚΥΝΕΚΡΚΟΚ ΑΤΕΤδϋΚδ δ δΤ ΑΥΜΕΕ δ δΕΤδΕϋ δ ΑνΥΥ ΟΤδΝλνϋΕϋ Υ \¥ОЦОТТЕТУ88 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 134)
20Е8уЬ	ОАООТССАОСТОСАОСАОТСТООАССТОААСТООТАААОССТООООСТТС

- 17 030436

	АСТСААСАТСТССТССААССССТСТССАТАСАСАТТСАСТАСТТСТСТТАТ ССАСТСССТСААССАСААСССТССССАСССССТТСАСТССАТТССАТАТА ТСААТСССТАТААТСАТССТАСТСАСТАСААТСАСААСТТСАААСССААС СССАСАСТСАСТТСАСАСАААТТТТССАССАСАСССТАСАТССАССТСАСС АСССТСАССТСТСАССАСТСТССССТСТАТТАСТСТАСААСАСССТТССАС САСССТТАСТССССССААСССАСТСТССТСАСТСТСТСТССА (δΕΟ ГО N0: 135)
	ЕУ0Ь00§ОРЕЬУКРОА8УКМ8СКА8О¥ТРТ88УМН\¥УК0КАО0ОЬЕ\¥1О¥1 ΝΡ ΥΝϋ ОТО ΥΝΕΚΡΚΟΚ АТЬТ δϋΚΡ δ δΤ АУМЕЬ δ δΕΤ δΕϋ δ Α УУУСТКШГО Ε Α ΥλΥΟΟΟΤΕντνδΑ (δΕΟ ГО ΝΟ: 136)
22Ε2ν1ι	ОАООТССАОСТОСАОСАОТСТООАССТОАОСТООТАААОССТООООСТТС АОТОААОАТОТССТОСААООСТТСТООАТАСАСАТТСАСТАОСТСТАТТАТ ТСАСТОООТОААОСАОАООССТОООСАОООССТТОАОТООАТТООАТАТА ТТААТССТТАСОАТОАТОТТАСТААОТАСААТОАОААОТТСАААООСААО ОССАСАСТОАСТТСАОАСАААТССТССАОСАСАОССТАСАТООАОСТСАО САОССТОАССТСТОАООАСТСТОСООТСТАТТАСТОТОСААОАСООТОООА СОАОТСТТАСТООООССААОООАСТСТООТСАСТОТСТСТОСА (δΕΟ ГО ΝΟ: 137)
	ΕνΟΕΟΟδΟΡΕΕνΚΡΟΑδνΚΜδΟΚΑδΟΥΤΡΤδδΙΙΗλννΚΟΚΡΟΟΟΕΕλνίΟΥΙΝΡ ΥΟΟνΤΚΥΝΕΚΡΚΟΚΑΤΕΤδΟΚδδδΤΑΥΜΕΕδδΕΤδΕΟδΑνΥΥΟΑΚΚλνΟΕδΥ λΥΟΟΟΤΕντνδΑ (δΕΟ ГО ΝΟ: 138)
24А5уЬ	ОАООТССАОСТОСАОСАОТСТООАССТОАОСТООТАААОССТООООСТТС АОТОААОАТОТССТОСААООСТТСТООАТАСАСТТТСАСТАССТСТАТТАТ ОСАСТОООТОАААСАОААОССТОООСАОООССТТОАОТООАТТООАТАТА ТТААТССТТАСОАТОАТОТТАСТААОТАСААТОААААОТТСАААООСААО ОССАСАТТОАСТТСАОАСАААТССТССАОСАСАОССТАСАТООАОСТСАО САОССТОАССТСТОАООАСТСТОСАОТСТАТТАСТОТОТААОАСООТОООА СОАООСТТАСТООООССААОООАСТСТООТСАСТОТСТСТОСА (δΕΟ ГО ΝΟ: 139)
	ΕνΟΕΟΟδΟΡΕΕνΚΡΟΑδνΚΜδΟΚΑδΟΥΤΡΤΤδΙΜΗλννΚΟΚΡΟΟΟΕΕλνίΟΥΙΝ ΡΥϋϋ νΤΚΥΝΕΚΡΚΟΚ ΑΤΕΤδϋΚδ δ δΤ АУМЕЬ δ δΕΤδΕϋ δ АУУУС УККЛУОЕА ΥλΥΟΟΟΤΕντνδΑ (δΕΟ ГО ΝΟ: 140)
26Г7УН	ОАООТССАОСТОСААСААТСТООАССТОАОСТООТОААОССТООООСТТС АОТОААОАТАТССТОТААООСТТСТООАТАСАСОТТТАСТОАСТАСТАСАТ ОААСТОООТОАООСАОАОССАТООАОАОАОССТТОАОТООАТТООАОАТТ ТТААТСАТААСААТОАТОТТАТТАСТТАСААСССОААОТТСААОООСААОО ТСАСАТТОАСТОТАОАОААОТСТТССАССАСАОССТАСАТООАОСТССОСА ОССТОТСАТСТОАООАСТСТОСАОТСТАТТАСТОТОСААОООООСТАСОАО ОСТАСТАТОСТАТООАСТАСТООООТСААООААССТСАОТСАССОТСТССТ СА (δΕΟ ГО ΝΟ: 141)
	ΕνθΕΟΟδΟΡΕΕνΚΡΟΑδνΚΙδΟΚΑδΟΥΤΡΤΟΥΥΜΝλ¥νΚΟδΗΟΕδΕΕλ¥ΙΟΟΡΝ Η NN ϋ У1Т ΥΝ РКРКСК УТЬТ УЕК δ δΤΤ А УМ Ε Ш δ ίδδ Ε ϋ δ А V У УСА РСШС Υ Υ ΑΜϋΥλνΟΟΟΤδντνδδ (δΕΟ ГО ΝΟ: 142)
27С8уЬ	САООТТСАОСТОСААСАОТСТОАСОСТОАОТТООТОАААССТООАОСТТС АОТОААОАТАТССТОСААООТТТСТООСТАСАССТТСАСТОАССАТ АСТАТ ТСАСТССАТСААССАСАССССТСААСАСССССТССААТССАТТССАТАТА ТТТАТССТАСАСАТССТТАТССТААСТТСААТСАСААСТТСААССССААСС ССАСАТТСАСТССАСАСАААТССТССАССАСАСССТАСАТССАССТСААС АСССТСАСАТСТСАССАСТСТССАСТСТАТТТСТСТССААСАССССССССТ ТАСТАТССТАТССАСТАСТССССТСААССААССТСАСТСССССТСТССТСА (δΕΟ ГО ΝΟ: 143)
	0ν0Ε00δΟΑΕΕνΚΡΟΑδνΚΙδ0ΚνδΟΥΤΡΤΟΗΤΙΗλ¥ΜΚ0ΚΡΕ0ΟΕΕλ¥ΙΟΥΙΥ ΡΚΌΟΥΡΚΡΝΕΚΡΚΟΚΑΤΕΤΑΟΚδδδΤΑΥΜΟΕΝδΕΤδΕϋδΑνΥΡΟΑΚΚΡΡΥΥΑ ΜϋΥλ¥Ο0ΟΤδνΑνδδ (δΕΟ ГО ΝΟ: 144)
31Н9уЬ	САССТССААСТССАССАСТСТССАССТСАССТССТАААСССТСССССТТС АСТСААСАТСТССТССААСССТТСТССАТАСАСАТТСАСТАССТАТСТТАТ ССАСТСССТСААССАСААСССТССССАСССССТТСАСТССАТТССТТАТА

- 18 030436

	ТТААТССТТАСААТСАТССТАСТААТТАСААТСАСААСТТСАААСССААС ОССАСАСТОАСТТСАОАСАААТССТССАОСАСАОССТАСАТООАОСТСАО САСССТСАССТСТСАССАСТСТССССТСТАТТАСТСТТСССТТААСТСССА СТАТОСТТАСТООООССААОООАСТСТООТСАСТОТСТСТОСА (δΕ(2 ГО ΝΟ: 145)
	ЕУрЬ(Ю8ОРЕЕУКРОА8УКМ8СКА8ОУТРТКУЕМНАУКрКРО(2ОЕЕА1ОУ1 ΝΡ ΥΝΌ ΟΤΝΥΝΕΚΡΚΟΚ АТЬТ δΌΚδ δ δΤ ΑΥΜΕΕ δ 8ЬТ δΕΌ δ Α νΥΥΟ δΕΝ Αϋ Υ Α ΥΑΟ([)ΟΤΕντνδΑ (δΕ(2 ГО ΝΟ: 146)
34СЗУН	ОАОТТССАОСТОСАОСАОТСТООАССТОАОСТООТОААОССТООСОСТТС АОТОААОАТАТССТОСААООСТТСТООТТАСТСАТТСАСТОАСТАСААСАТ ОААСТОООТОААОСАОАОСАААООАААОАОССТТОАОТООАТТООАОТА АТТАТТССТААСТАТООТТТТАСТАОСТАСААТСАОААСТТСААОООСААО ОССАСТТТОАСТОТАОАССАОТСТТССАОСАСАОСССАСАТОСАОСТСААС АОТОТОАСАТСТОАООАСТСТОСАОТСТАТТАСТОТОТААОАОАТООООО ААТАСТССТСТООТАТСТСОАТОТСТООООСАСАОООАССАСООТСАССОТ СТССТСА (δΕζ) ГО ΝΟ: 147)
	ΕΡς>Ες>ς>δΟΡΕΕνΚΡΟΑδνΚΙδΟΚΑδΟΥδΡΤΟΥΝΜΝΑνκς>δΚΟΚδΕΕΑΙθνΐΙΡ ΝΥΟΡΤδΥΝρΝΡΚΟΚΑΤΕΤνορδδδΤΑΗΜ(2ΕΝδνΤδΕΟδΑνΥΥ0νΚΡ)ΟΟΙΕΕ ΑΥΕϋνΑΟΤΟΤΤντνδδ (δΕ<2 ГО ΝΟ: 148)
34И9УН7	ОАООТССАОСТОСААСАОТСТООАССТОАОСТООТОААОССТООООСТТС АОТОААОАТАСССТОСААООСТТСТООАТАСАСАТТСАСТОАСТАСААСАТ ООАСТОООТОААОААОАОССАТООАААОАОССТТОАОТООАТТООАОАТА ТСААТССТСАСААТООТООТАСТАТСТАСААССАОААОТТСААОООСААО ОССАСАТТОАСТОТАОАСААОТССТССАОСАСАОСССАСАТООАОСТССО САОССТОАСАТСТОАООАСАСТОСАОТСТАТТАСТОТОСААОАААТТАСТА СООТАОТАОТТАСООСТООТАСТТСОАТОТСТООООСАСАОООАССАСОО ТСАССОТСТСОТСА (δΕ(2 ГО N0:149)
	Εν(2Ε(2(2δΟΡΕΕνΚΡΟΑδνΚΙΡΟΚΑδΟΥΤΡΤΟΥΝΜΟΑνΚΚδΗΟΚδΕΕΑΙΟΟΙΝ ΡΗΝΟΟΤΙΥΝρΚΡΚΟΚΑΤΕΤνΟΚδδδΤΑΗΜΕΕΚδΕΤδΕϋΤΑνΥΥΟΑΚΝΥΥΟδδ ΥΟΑΥΡϋνΑΟΤΟΤΤντνδδ (δΕ<2 ГО ΝΟ: 150)
43Р5уЬ	ОАООТССАОСТОСАОСАОТСТООАССТОАОСТООТОААОССТООООСТТС АОТОААОАТТТССТОСАОООСТТСТООТТАСТСАТТСАСТООСТАСТАСАТ ОААСТОООТОААОСАААОТССТОААААОАОССТТОАОТООАТТООАОАОА ТТАТТССТАССАСТООТООТАСТТССТАСААССАОААОТТСААООССААОО ССАСАТТОАСТОТАОАСАААТССТССАОСАСАОССТАСАТОСАОСТСААО АОССТОАСАТСТОАООАСТСТОСАОТСТАТТАСТОТОСААОАОАОАОСОО ТОООТТСТАСТООТАСТТСОАТОТСТООООСАСАОООАССАСООТСАССОТ СТССТСА (δΕζ) ГО ΝΟ: 151)
	Ενς>Ες>ς>δΟΡΕΕνΚΡΟΑδνΚΙδΟΚ.ΑδΟΥδΡΤΟΥΥΜΝΑνκς>δΡΕΚδΕΕΑΙΟΕΙΙΡ ΤΤΟΟΤδΥΝ(2ΚΡΚΑΚΑΤΕΤνθΚδδδΤΑΥΜ(2ΕΚδΕΤδΕΟδΑνΥΥΟΑΚ.ΕδΟΟΡΥ ΑΥΡϋνΑΟΤΟΤΤντνδδ (δΕ<2 ГО ΝΟ: 152)
73Н10УН	ОАООТССАОСТОСАОСАОТСТООАССТОАОСТООТАААОССТООООСТТС АОТОААОАТОТССТОСААООСТТСТООАТАСАСАТТСАСТАООТАТОТТАТ ОСАСТОООТОААОСАОААОССТОООСАОООССТТОАОТООАТТООАТАТА ТТААТССТТАСААТОАТОТТАСТААОТАСААТОАОААОТТСАААООСААО ОССАСАСТОАСТТСАОАСАОАТССТССАОСАСАОССТАСАТОАААСТСАО САОССТОАССТСТОАООАСТСТОСООТСТАТТАТТОТОСААОАААСТОООА СОТТССТТАСТООООССААОООАСТСТОАТСАСТОТСТСТОСА (δΕ<2 ГО ΝΟ: 153)
	Εν(2Ε(2(2δΟΡΕΕνΚΡΟΑδνΚΜδΟΚΑδΟΥΤΡΤΚΥνΜΗΑνΚ(2ΚΡΟ(20ΕΕΑΙΟΥΙΝΡΥ ΝϋνΤΚΥΝΕΚΡΚΟΚΑΤΕΤδΟΚδδδΤΑΥΜΚΕδδΕΤδΕΟδΑνΥΥΟΑΚΝΑϋνΡΥΑΟρΟ ΤΕΙΤνδΑ (δΕζ) ГО ΝΟ: 154)
74Η3ΥΗ	ОАООТССАОСТОСАОСАОТСТООАССТОАОСТООТАААОССТООООСТТСАОТО ААОАТОТССТОСААООСТТСТООАТАСАСАТТСАСТАООТАТСТТАТОСАСТОО ОТОААОСАОААОССТООАСАОООССТТОАОТООАТТООАТАТАТТААТССТТАС ААТОАТООТАСТААОТАСААТОАОАООТТСАААООСААООССАСАСТОАСТТС АОАСАААТССТССАОСАСАОССТАСАТООАОСТСАОСАОССТОАССТСТОАООА
	СТСТОСООТСТАТТАСТОТОСААОАААСТОООАСОТАССТТАСТООООССААОО ОАСТСТООТСАСТОТСТСТОСА (δΕ<2 ГО ΝΟ: 155)
	ΕνρΕρρδΟΡΕΕνΚΡΟΑδνΚΜδΟΚΑδΟΥΤΡΤΚΥΕΜΗΑνκρΚΡΟρΟΕΕΑΙΟΥΙΝΡΥΝ ϋΟΤΚΥΝΕΚΡΚΟΚΑΤΕΤδΟΚδδδΤΑΥΜΕΕδδΕΤδΕΌδΑλΑΥΟΑΚΝΑΟνΡΥΑΟρΟΤΕ УТУ8А (δΕζ) ГО ΝΟ: 156)

Последовательности человеческих каркасных участков отбирали для каждого мышиного "лидерного" антитела на основе гомологии каркасных участков, структуры СОК, консервативных канонических остатков, консервативных остатков. образующих поверхность раздела. и других параметров.

СОК мышиных тяжелых цепей и легких цепей различных мышиных антител представлены в табл. 3 и табл. 4 соответственно. В табл. 4 представлены также три СОК тяжелых цепей. выведенных из мышиного антитела 6В8 при осуществлении процесса гуманизации.

- 19 030436

Таблица 3. Последовательности С1Ж легких цепей

	Ь-СОКЛ	Ε-0ϋΚ2	Ε-0ϋΚ3
	ΚΑδΟδΙδΕΥΕΗ	ΥΑδΟδΙδ	ΟΝΟΗδΡΡΡΤ
18С4	(δΕΟ ГО N0: 1)	(δΕΟ ГО N0: 2)	(δΕΟ ГО N0: 3)
	ΚΑδΟδΙδϋΥΕΥ	ΡΑδΟδΙδ	ΟΝΟΗδΡΡΡΤ
18Е5	(δΕΟ ГО N0: 4)	(δΕΟ ГО N0: 5)	(δΕΟ ГО N0: 3)
	ΚΑδΟδΙδϋΥΕΥ	ΡΑδΟδΙδ	ΟΝΟΗδΡΡΡΤ
18ϋ3	(δΕΟ ГО N0: 4)	(δΕΟ ГО N0: 5)	(δΕΟ ГО N0: 3)
	ΚΑδΟδΙδΕΥΕΗ	ΥΑδΟδΙδ	ΟΝΟΗδΡΡΡΤ
20Е8	(δΕΟ ГО N0: 1)	(δΕΟ ГО N0: 2)	(δΕΟ ГО N0: 3)
	ΚΑδΟδΙδνΥΕΗ	ΥΑδΟδΙδ	ΟΝΟΗδΡΡΡΤ
22Е2	(δΕΟ ГО N0: 6)	(δΕΟ ГО N0: 2)	(δΕΟ ГО N0: 3)
	ΚΑδΟδΙδϋΥΕΗ	ΥΑδΟδΙδ	ΟΝΟΗδΡΡΡΤ
24А5	(δΕΟ ГО N0: 7)	(δΕΟ ГО N0: 2)	(δΕΟ ГО N0: 3)
	ΚδδΟδΕνΗδΝΟΝΤΥΕΗ	ΚνδΝΚΡδ	δΟδΤΗνΡΥΤ
15С11	(δΕΟ ГО N0: 8)	(δΕΟ ГО N0: 9)	(δΕΟ ГО N0: 10)
	ΚδδΟδΕνΗδΝΟΝΤΥΕΗ	ΚνδΝΚΡδ	δΟδΤΗνΡΥΤ
43Р5	(δΕΟ ГО N0: 8)	(δΕΟ ГО N0: 9)	(δΕΟ ГО N0: 10)
	ΚΑδΚδνδΤδΟΥδΥΙΗ	ΕΑδΝΕϋδ	ΟΗδΚΕΕΡΥΤ
2708	(δΕΟ ГО N0: 11)	(δΕΟ ГО N0: 12)	(δΕΟ ГО N0: 13)
	ΚΑδΟδΙδϋΥΕΗ	ΥΑδΟδΙδ	ΟΝΟΗδΡΡΥΤ
31Н9	(δΕΟ ГО N0: 7)	(δΕΟ ГО N0: 2)	(δΕΟ ГО N0: 14)
	ΚΤδΕδνΥδΥΟΟΝΡΙΗ	ΚΑδΝΕΕδ	ΟΟΤΝΕϋΡΥΤ
2Ш	(δΕΟ ГО N0: 15)	(δΕΟ ГО N0: 16)	(δΕΟ ГО N0: 17)
	ΚΑδΕΤΙΝΡΥΟΤδΡΜΗ	ΚΑδΝΕΕδ	ΟΟΤΝΕϋΡΥΤ
9Ш2	(δΕΟ ГО N0: 18)	(δΕΟ ГО N0: 16)	(δΕΟ ГО N0: 17)
	ΚΑδΚϋνΑΙΑνΑ	ΥΑδΤΚΗΤ	ΗΟΥδδΥΡΡΤ
6В8	(δΕΟ ГО N0: 19)	(δΕΟ ГО N0: 20)	(δΕΟ ГО N0: 21)
	ΚΑδΕΝΙϋδΥΕΑ	ΑΑΚΝΕΑϋ	ΟΗΥΥδΤΡΡΤ
73Н10	(δΕΟ ГО N0: 22)	(δΕΟ ГО N0: 23)	(δΕΟ ГО N0: 24)
74НЗ	ΚΑδΕΝΙϋδΥΕΑ	ΑΑΤΝΕΑϋ	ΕΗΥΥδΤΡΡΤ
	(δΕΟ ГО N0:22)	(δΕΟ ГО N0: 25)	(δΕΟ ГО N0: 26)
	ΚδδΟδΕνΗδΝΟΝΤΥΕΗ	ΚνδΝΚΡδ	δΟδΤΗνΡΥΤ
35Н8	(δΕΟ ГО N0: 8)	(δΕΟ ГО N0: 9)	(δΕΟ ГО N0: 10)
	ΚΑδΚδνΚΡδϋΥΡΥΜΗ	ΕΑδΝΕΕδ	ΟΝδΚΕΕΡΥΤ
26Р7	(δΕΟ ГО N0: 27)	(δΕΟ ГО N0: 28)	(δΕΟ ГО N0: 29)
	ΚδδΟδΕνΗδΝΟΝΤΥΕΗ	ΚνδΝΚΡδ	δΟδΤΗνΡΥΤ
3403	(δΕΟ ГО N0:8)	(δΕΟ ГО N0: 9)	(δΕΟ ГО N0: 10)
	ΚΑδΟϋνΟΝΑνν	ΥΑδΤΚΗΙ	ΟΟΥδδΥΕΤ
34ϋ9	(δΕΟ ГО N0: 30)	(δΕΟ ГО N0: 31)	(δΕΟ ГО N0: 32)

- 20 030436

Таблица 4. Последовательности СРИ тяжелых цепей

	Η-ΟϋΚΙ	Н-СОК2	Н-СОКЗ
18С4	ΟΥΤΡΤδδνΐΗ (δΕΟ ГО ΝΟ: 33)	ΥΙΝΡΥΝϋΟΤΚΥΝΕΚΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 34)	ΚΕϋΕΑΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 35)
18Е5	ΟΥΤΓΤΚΥΕΙΗ (ЗЕ<3 ГО ΝΟ: 36)	ΥΙΝΡΥΝϋΟΤΚΥΝΕΚΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 34)	ΝλνϋΕϋΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 37)
18ϋ3	ΟΥΤΓΤΚΥΕΙΗ (δΕΟ ГО ΝΟ: 36)	ΥΙΝΡΥΝϋΟΤΚΥΝΕΚΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 34)	ΝλνϋΕϋΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 37)
20Е8	ΟΥΤΓΤδδνΜΗ (3Ε<3 ГО ΝΟ: 38)	ΥΙΝΡΥΝΟΟΤ0ΥΝΕΚΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 39)	ΚΕϋΕΑΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 35)
22Е2	ΟΥΤΡΤδδΙΙΗ (3Ε<3 ГО ΝΟ: 40)	ΥΤΝΡΥηηντΚΥΝΕΚΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 41)	ΚλΥΟΕδΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 42)
24А5	ΟΥΤΡΤΤδΙΜΗ (δΕΟ ГО ΝΟ: 43)	ΥΙΝΡΥΟϋνΤΚΥΝΕΚΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 41)	ΚλΥΌΕΑΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 44)
15С11	ΟΥΤΡΤϋΥΥΜΝ (3Ε<3 ГО ΝΟ: 45)	νΐΙΡΥΝΟΟΤδΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 46)	ΟΟΗΚλνΥΡϋν (δΕΟ ГО ΝΟ: 47)
43Р5	ΟΥδΡΤΟΥΥΜΝ (δΕΟ ГО ΝΟ: 48)	ΕΙΙΡΤΤΟΟΤδΥΝΟΚΡΚΑ (δΕΟ ГО ΝΟ: 49)	ΕδΟΟΡΥλνΥΡϋν (δΕΟ ГО ΝΟ: 50)
2708	ΟΥΤΡΤϋΗΤΙΗ (3Ε<3 ГО ΝΟ: 51)	ΥΙΥΡΚϋΟΥΡΚΡΝΕΚΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 52)	ΚΡΡΥΥΑΜϋΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 53)
31Н9	ΟΥΤΡΤΚΥΕΜΗ (3Ε<3 ГО ΝΟ: 54)	ΥΙΝΡΥΝϋΟΤΝΥΝΕΚΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 55)	ΝλνϋΥΑΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 56)
2Ш	ΟΡδΕΤΤΥΑΙδ (δΕΟ ГО ΝΟ: 57)	νίλΥΤΟΟΟΤΚΥΝ δ АБК δ (δΕΟ ГО ΝΟ: 58)	ΚϋΥΝΥΟΟΑΜϋΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 59)
9Ш2	ΟΡδΕΝΝΡΑΙδ (δΕ<3 ГО ΝΟ: 60)	ΑΙλΥΤΟΟΟΤΝΥΝ δ АБК δ (δΕ(} ГО ΝΟ: 61)	ΚϋΥδΥΟΟΑΜϋΥ (δΕ(} ГО ΝΟ: 62)
6В8	ΟΝΤΡΤΟΟΤΙΗ (δΕΟ ГО ΝΟ: 63)	ΥΙΥΡΚϋϋ δΡΚΥΝΕΝΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 64)	ΡϋΚδΟΥΑΜΈΙΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 65)
Ни 6В8-2	ΟΥΤΡΤΟΟΤΙΗ (δΕΟ ГО ΝΟ: 66)	ΥΙΥΡΚϋϋ δΡΚΥΝΕΝΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 64)	ΡϋΚδΟΥΑΜΈΙΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 65)
Ни 6В8-5	ΟΡΤΡΤΟΟΤΙΗ (δΕΟ ГО ΝΟ: 67)	ΥΙΥΡΚΟΟ δΡΚΥΝΈΝΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 64)	ΡΟΚδΟΥΑ\ΥΡΓΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 65)
Ни 6В836/65	ΟΟΤΡΤΟΟΤΙΗ (δΕΟ ГО ΝΟ: 68)	ΥΙΥΡΚϋϋ δΡΚΥΝΕΝΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 64)	ΡϋΚδΟΥΑΜΈΙΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 65)
73Н10	ΟΥΤΡΤΚΥνΜΗ (δΕΟ ГО ΝΟ: 69)	ΥΙΝΡΥΝϋνΤΚΥΝΕΚΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 70)	ΝλνϋνΡΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 71)
74НЗ	ΟΥΤΡΤΚΥΕΜΗ (δΕΟ ГО ΝΟ: 54)	ΥΙΝΡΥΝϋΟΤΚΥΝΕΚΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 72)	ΝλΥϋνΡΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 71)
35Н8	ΟΥΤΡΤϋΥΥΜΝ (δΕΟ ГО ΝΟ: 45)	νΐΙΡΥΝΟΟΙδΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 73)	ΝΟΥϋλνΥΡΟν (δΕΟ ГО ΝΟ: 74)
26Р7	ΟΥΤΡΤϋΥΥΜΝ (δΕΟ ГО ΝΟ: 45)	ΟΡΝΗΝΝϋνίΤΥΝΡΚΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 75)	ΟΕΚΟΥΥΑΜϋΥ (δΕΟ ГО ΝΟ: 76)
3403	ΟΥδΡΤϋΥΝΜΝ (δΕΟ ГО ΝΟ: 77)	νΠΡΝΥΟΡΤδΥΝΟΝΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 78)	ОООШЕМАШУ (3Ε<3 ГО ΝΟ: 79)
34ϋ9	ΟΥΤΡΤϋΥΝΜϋ (δΕΟ ГО ΝΟ: 80)	ϋΙΝΡΗΝΟΟΤΙΥΝΟΚΡΚΟ (δΕΟ ГО ΝΟ: 81)	ΝΥΥΟδδΥΟλνΥΡϋν (3Ε<3 ГО ΝΟ: 82)

СРК, представленные выше в табл. 3 и 4, определены согласно номенклатуре Хотиа (А1-Ьа71каш и др., 1ΜΒ 273, 1997, сс.927-948).

РаЪ-фрагменты, для которых обнаружено улучшенное или эквивалентное связывание по сравнению с химерным родительским РаЪ-фрагментом, отбирали для конверсии в формат Ι§Θ. 6Β8 превращали в формат ΙβΘίΚΟ. ΙβΘίΚΘ ("выключение" (кпоск-ои!) эффекторных функций) имеет две мутации в Рсобласти, а именно, Реи234А1а и Реи235А1а, которые снижают эффекторную функцию, такую как связывание РсуК и комплемента. ΙβΘ-формат описан в литературе (см., например, Не/агей и др., .1оигпа1 оГ VIго1о§у 75, 2001, сс. 12161-12168). В примере 1 более подробно описан процесс гуманизации. В результате осуществления указанной гуманизации удалось создать последовательности гуманизированных антител. Репрезентативные примеры вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи, выведенных из мышиного антитела 6В8, представлены в табл. 5 и 6. Сравнительный анализ первичной структуры гуманизированных вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи, выведенных из мышиного антитела 6В8, и вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи из мышиного антитела 6В8, представлен на фиг. 1.

Отобранные комбинации гуманизированных вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи, выведенных из мышиного антитела 6В8, позволили создать Антитела А, В, С и Р.

Антитело А: 6Β8-Ι§Θ1ΚΟ-2 с Ι§Κ-66 (вариабельная область тяжелой цепи 6Β8СVН-02 и вариабельная область легкой цепи 6Β8ί'νΐ<-66);

Антитело Β: 6Β8-Ι§Θ1ΚΟ-5 сй Ι§Κ-66 (вариабельная область тяжелой цепи 6Β8ίνΗ-05 и вариабельная область легкой цепи 6Β8ίνΚ-66);

Антитело С: 6Β8-Ι§Θ1ΚΟ-2 с Ι§Κ-65 (вариабельная область тяжелой цепи 6Β8ίνΗ-02 и вариабельная область легкой цепи 6Β8ίνΚ-65);

Антитело Ρ: 6Β8-Ι§Θ1ΚΟ-5 с Ι§Κ-65 (вариабельная область тяжелой цепи 6Β8ίνΗ-05 и вариабельная область легкой цепи 6Β8ίνΚ-65).

Антитела А, Β, С и Р имеют последовательности тяжелых и легких цепей, которые представлены в табл. 7.

- 21 030436

Таблица 5. Гуманизированные последовательности 6Β8-ΥΚ

6В8СУК-65	Саса1сса§а1§ассса§а§сссаа§са§сс1§а§сдсса§с§1§§§с§асс§с§1§асса1сасс1§с а১сса§сс§с§ас§1§§сса1с§сс§1§§сс1§§1асса§са§аа§сс১са১1§ссааа§с1§ с1§с1§Нс1§§§сса§сассс§ссасасс§§с§1§сса§асс§сНса§с§§са§с§§са§с§§сасс §асНсассс1§асса1са§са§сс1§са§сса§а§§асс1§§сс§ас1ас1ас1дссасса§1аса§са§ с1асссаНсассНс§§сса§д§сассаа§с1§§а§а1саа§ (ЗЕСД ГО ΝΟ: 157)
	О10МТ08Р88Е8А8УСОК.УТ1ТСКА8К.ОУА1АУА\УУ00КРСКУРКЬЕЬ ΡλνΑδΤΚΉΤΟνΡΟΚΡδΟδΟδΟΤΟΡΤΕΊΊδδΕΟΡΕϋΕΑΟΥΥΟΗΟΥδδΥΡΡΤ РС0СТКБЕ1К (δΕΟ ГО N0: 158)
6В8СУК-66	Саса1сса§а1§ассса§а§сссаа§са§сс1§а§с§сса§с§1§§§с§асс§с§1§асса1сасс1§с а১сса§сс§с§ас§1§§сса1с§сс§1§§сс1§§1асса§са§аа§сс১са১1§ссааа§с1§ с1§а1с1ас1§§§сса§сассс§ссасасс§§с§1§ссаа§сс§сНса§с§§са§с§§са§сс§сасс §асНсассс1§асса1са§са§сс1§са§сса§а§§ас§1§§сс§ас1асНс1§ссасса§1аса§са§ с1асссаНсассНс§§са§с§§сассаа§с1§§а§а1саа§ (8ЕСД ГО ΝΟ: 159)
	О10МТ08Р88Е8А8УСОКУТ1ТСКА8КОУА1АУА\УУ00КРОКУРКЕЫ ΥλνΑδΤΚΗΤ0νΡδΚΕδ0δ0δΚΤ0ΡΤΕΊΊδδΕ(2ΡΕ0νΑ0ΥΡ(3Η(2ΥδδΥΡΡΤ РС8СТКЬЕ1К (δΕΟ ГО N0: 160)
6В8СУК-67	Саса1сса§а1§ассса§а§сссаа§са§сс1§а§с§сса§с§1§§§с§асс§с§1§асса1сасс1§с а১сса§сс§с§ас§1§§сса1с§сс§1§§сс1§§1асса§са§аа§сс১са১1§ссааа§с1§ с1§с1§1ас1§§§сса§сасссдссасасс§§с§1§ссаа§сс§сНса§с§§са§с§§са§сс§сасс §асНсассс1§асса1са§са§сс1§са§сса§а§§ас§1§§ссасс1ас1ас1дссасса§1аса§са§ с1асссаНсассНсддсадсддсассаадс1ддада!саад (δΕΟ ГО ΝΟ: 161)
	ΟΙ0ΜΤ0δΡδδΕδΑδνθΟΚνΤΠΌΚΑδΚΤ)νΑΙΑνΑλ¥Υ00ΚΡΟΚνΡΚΕΕΕ ΥλνΑδΤΚΗΤ0νΡδΚΕδ0δ0δΚΤ0ΡΤΕΊΊδδΕ(2ΡΕ0νΑΤΥΥ(3Η(2ΥδδΥΡΡΤ РС8СТКЬЕ1К (δΕΟ ГО N0: 162)
6В8СУК-78	Саса1сса§а1§ассса§а§сссаа§са§сс1§а§с§сса§с§1§§§с§асс§с§1§асса1сасс1§с а১сса§сс§с§ас§1§§сса1с§сс§1§§сс1§§1асса§са§аа§сса§дса১1§ссааа§с1д с1§с1§Нс1§§§сса§сассс§ссасасс§§с§1§сса§асс§сНса§с§§са§с§§са§сс§сасс §асНсассс1§асса1са§са§сс1§са§сса§а§§асс1§§сс§ас1ас1ас1дссасса§1аса§са§ с1асссаНсассНсддсадсддсассаадс1ддада!саад (δΕΟ ГО ΝΟ: 163)
	ОЮМТ(28Р88Е8А8УеОКУТГГСКА8КГОУА1АУА\¥¥(ЮКРеКУРКЕЕЕ Ρλ¥ΑδΤΚΗΤθνΡΟΚΡδΟδΟδΚΤΟΡΤΕΊΊδδΕΟΡΕΟΕΑΟΥΥΟΗΟΥδδΥΡΡΤ РС8СТКЬЕ1К (δΕΟ ГО N0: 164)

Таблица 6. Гуманизированные последовательности 6Β8-ΥΗ

6В8СУН-02	С১1дса§с1§§1§са§а§сд§сдсс§а§§1§аа§аа§сса§дсадса§с§1§а১1да§с1§саа §§сса§с§§с1асассНсасс§асса§асса1ссас1§§а1§с§сс১сссс১сс১§сс1§да §1§§а1с§§с1аса1с1асссас§с§ас§асадсссааа§1асаас§а§аасИса১дса১1сасс а!сасс§ссдасаа§а§сасса§сасс§сс!аса!д§адс!§а§са§сс!§с§са§сд১асасс§сс д1д1ас1ас1§сдсса1сссадассдсадсддс1ас£сс1ддПса1с1ас1ддддссад§дсассс1дд1 дассд!дадсадс (δΕΟ ГО N0: 165)
6В8СУН-05	0У0ЕУ08ОАЕУККРО88УКУ8СКА8ОУТРТО0Т1Н\УМК0АРО0ОЕЕ λνίΟΥΙΥΡΚΟϋδΡΚΥΝΕΝΡΚΟΚνΤΙΤΑΟΚδΤδΤΑΥΜΕΕδδΕΚδΕΟΤΑνΥ ΥΟΑΙΡϋΚδΟΥΑλ¥ΡΙΥλνθΟΟΤΕντνδδ (δΕΟ ГО ΝΟ: 166) С১1дса§с1§§1§са§а§сд§сдсс§а§§1§аа§аа§сса§дсадса§с§1§а১1да§с1§саа §§сса§с§§сНсассНсасс§асса§асса1ссас1§д§1§с§сса§дсссс১сса§д§сс1§§а §1§да1§§§с1аса1с1асссас§с§ас§асадсссааад1асаас§а§аасНса১§са১1сасс с1§асс§сс§асаа§а§сасса§сасс§сс1аса1§§а§с1§а§са§сс1§с§са§сда§дасасс§сс §1§1ас1ас1§с§сса1ссса§асс§са§с§§с1ас§сс1§§Пса1с1ас1§§д§сса§д§сассс1§§1 дассд!дадсадс (δΕΟ ГО N0: 167) (2 УОЬ νς> δ 0 АЕ УККРО δ δ УК νδ СК Α δ СРТЕТИОТШУУ УКО АРОООЬЕУУ ΜΟΥΙΥΡΚΠΟδΡΚΥΝΕΝΡΚΟΚνΤΕΤΑΟΚδΤδΤΑΥΜΕΕδδΕΚδΕΟΤΑνΥΥ ΟΑΙΡΟΚδΟΥΑλνΡΙΥλνΟΟΟΤΕντνδδ (δΕΟ ГО N0: 168)
6В8СУН-36	Са§д1дсадс1д§1§са§а§с§§с§ссда§д1даа§аа§ссад§са§садс§1§аа§асса§с1дсаа §дсса§с§дсд§сассНсасс§асса§асса1ссас1§д§1§сдсса§с§ссса§дсса䧧сс1§§а §1§да1§§§с1аса1с1асссас§с§ас§аса§сссааад1асаас§а§аасНса১дссдс§1сасс а1сасс§сс§асаа§адсасса§сасс§сс1аса1§§адс1§а§са§сс1§с§са§с§а§§асасс§сс §1§1ас1ас1§сдсса1ссса§асс§са§с§§с1ас§сс1д§Нса1с1ас1§д§§сс১§сассс1§§1 дассд!дадсадс (δΕΟ ГО N0:169)
	0 УОЬ УО δ О АЕ УККРО8 δ УКТ δ СК Αδ ССТРТИ0Т1 Н\У УКОКР СОСЬБАУ ΜΟΥΙΥΡΡΌΟδΡΚΥΝΕΝΡΚΟΚνΤΙΤΑΟΚδΤδΤΑΥΜΕΕδδΕΚδΕΟΤΑνΥΥ ΟΑΙΡϋΚδΟΥΑλνΡΙΥλνΟΟΟΤΕντνδδ (δΕΟ ГО N0: 170)
6В8СУН-65	Са§д1дсадс1д§1§са§а§с§§с§ссда§д1даа§аа§ссад§са§садс§1§аа§д1§а§с1§саа §дсса§с§дсд§сассНсасс§асса§асса1ссас1§д§1§сдсс১сссса§дсса䧧сс1§§а §1§да1§§§с1аса1с1асссас§с§ас§аса§сссааа§1асаас§а§ааН1саа䧧сс§сд1сассс 1§асс§сс§асаада§сассадсасс§сс1аса1§§а§с1§а§са§сс1§с§са§сд১асасс§сс §1§1асНс1дс§ссс§ссса§асс§са§с§§с1ас§сс1§§Нса1с1ас1§д§§сс১§сассс1§§1 §асс§1§адсадс (δΕΟ ГО N0: 171)
	0У0ЕУ08САЕУККРС88УКУ8СКА8ССТРТО0ТШ\УУР_0АРС0СЕЕ\У ΜΟΥΙΥΡΚΌΟδΡΚΥΝΕΝΡΚΟΚνΤΕΤΑΟΚδΤδΤΑΥΜΕΕδδΕΚδΕΟΤΑνΥΡ ΟΑΚΡϋΚδΟΥΑλνΡΙΥννΟΟΟΤΕντνδδ (δΕΟ ГО N0: 172)

- 22 030436

Таблица 7. Последовательности ДНК и аминокислотные последовательности тяжелых и легких цепей антител А, В, С и О

Антитело А	1§К, легкая цепь, № 66	Сгаса1ссаеа1еасссаеаесссааесаесс1еаесессаесе1ее
есеассесе1еасса1сасс1есааеессаессесеасе1еесса1с
ессе1еесс1ее1ассаесаеааессаеесааее1ессаааес1ес1
еа1с1ас1ееессаесасссессасассеесе1ессааессесИса
есеесаесеесаессесассеасИсассс1еасса1саесаесс1е
саессаеаееасе1еессеас1асИс1ессассае1асаесаес1ас
сса11сассисеесаесеесассааес1ееаеа1сааесе1ас1ц1ц
§с1§сасса1с1§1с11са1с11ссс§сса1с1§а1§а§са§Ц§ааа1с1 §§аас1§сс1с1§11§1§1§сс1§с1§аа1аас11с1а1ссса§а§а§§с сааа§1аса§1§§а১1§§а1аас§ссс1ссаа1с§§§1аас1ссса §§а§а§1§1саса§а§с১аса§са১аса§сасс1аса§сс1с а§са§сассс1§ас§с1§а§сааа§са§ас1ас§а§ааасасааа§1 с1ас§сс1§с§аа§1сассса1с১§сс1§а§с1с§ссс§1сасааа §а§с11саас১§§а§а§1§1 (8ЕЦ ГО N0: 173)
		ϋΙΟΜΤΟδΡδδΕδΑδνΟϋΚνΤΙΤΟΚΑδΚϋνΑΙΑν
ΑλΥΥΟΟΚΡΟΚνΡΚΕΕΙΥλνΑδΤΚΗΤΟνΡδΚΕδΟδ
ΟδΚΤΟΡΤΕΤΙδδΕΟΡΕϋνΑΟΥΡΟΗΟΥδδΥΡΡΤΡ
ΟδΟΤΚΕΕΙΚΚΤνΑΑΡδνΕΙΕΡΡδϋΕΟΕΚδΟΤΑδν ν0ΕΕΝΝΡΥΡΚΕΑΚν0\νκνϋΝΑΕ0δΟΝδ0Εδν ΤΕρϋδΚϋδΤΥδΕδδΤΕΤΕδΚΑϋΥΕΚΗΚνΥΑΟΕ νΤΗρΟΕδδΡνΤΚδΕΝΚΟΕΟ (8ЕЦ Ιϋ ΝΟ: 174)
	1§О1 ко, тяжелая цепь, № 2	Саее1есаес1ее1есаеаесеесессеаее1еааеааессаеес
аесаесе1еааее1еаес1есааеессаесеес1асасс11сассеа
ссаеасса1ссас1ееа1есессаеессссаеессаееесс1ееае1
ееа1сеес1аса1с1асссасесеасеасаесссааае1асаасцае
аасИсааееесааее1сасса1сассессеасааеаесассацсас
сесс1аса1ееаес1еаесаесс1есесаесеаееасассессе1ц1
ас1ас1есесса1сссаеассесаесеес1асесс1ее11са1с1ас1е

- 23 030436

		ееессаееесассс1ее1еассе1еаесаесцсс1ссассаацццс
сса1с§§1сЦссссс1§§сассс1сс1ссаа§а§сасс1с1§§§§§са са§с§§ссс1§§§с1§сс1§§1са১ас1асЦсссс§аасс§§1§а с§§1§1с§1§§аас1с১с§ссс1§асса§с§§с§1§сасассЦсс с§§с1§1сс1аса§1сс1с১ас1с1ас1ссс1са§са§с§1§§1§ас с§1§ссс1сса§са§сЦ§§§сассса§асс1аса1с1§саас§1§аа1 сасаа§ссса§саасасса১1с§асаа§а§а§Ц§а§сссааа1с Ц§1§асаааас1сасаса1§сссасс§1§ссса§сасса§аа§с1§с 1§§§§§асс§1са§1сЦсс1сиссссссаааассса১асассс1с а1§а1с1ссс§§асссс1§а§§1саса1§с§1с§1§§1§§ас§1§а§с сас§аа§ассс1§а§§1саа§Цсаас1§§1ас§1§§ас§§с§1§§а §§1§са1аа1§ссаа§асааа§сс§с§§§а§§а§са§1асааса§с ас§1асс§1§1§§1са§с§1сс1сасс§1сс1§сасс১ас1§§с1§а а1§§са১а§1асаа§1§са১1с1ссаасааа§ссс1ссса§сс ссса1с§а§аааасса1с1ссааа§ссаа১§са§сссс§а§аасс ас১1§1асассс1§ссссса1ссс§§§а§§а§а1§ассаа§аасс ১1са§сс1§асс1§сс1§§1саа১сЦс1а1ссса§с§аса1с§с с§1§§а§1§§§а§а§саа1§§§са§сс§§а§аасаас1асаа§асс ас§сс1ссс§1§с1§§ас1сс§ас§§с1ссЦсЦсс1с1аса§саа§с1 сасс§1§§асаа§а§с১1§§са§с১§§аас§1сЦс1са1§с1с с§1§а1§са1§а§§с1с1§сасаассас1асас§са§аа§а§сс1с1с οοΐβΐοΐοοβββΐ (8Е<3 ГО N0: 175)
		ΟνΟΕνΟδΟΑΕνΚΚΡΟδδνκνδϋΚΑδΟΥΤΡΤΌΟ
ΤΙΗλνΜΚΟΑΡΟΟΟΕΕλνίΟΥΙΥΡΚϋϋδΡΚΥΝΕΝΡ
ΚΟΚνΤΙΤΑϋΚδΤδΤΑΥΜΕΕδδΕΚδΕϋΤΑνΥΥΟ
ΑΙΡϋΚδΟΥΑλΥΡΙΥλνΟΟΟΤΕντνδδΑδΤΚΟΡδν
ΡΡΕΑΡδδΚδΤδΟΟΤΑΑΕΟΟΕνΚϋΥΡΡΕΡντνδλν ΝδΟΑΕΤδΟνΕΙΤΡΡΑνΡΡδδΟΕΥδΡδδνντνΡδδ δΕΟΤρΤΥΙΟΝνΝΗΚΡδΝΤΚνϋΚΚνΕΡΚδΟϋΚΤ ΗΤΟΡΡΟΡΑΡΕΑΑΟΟΡδνΡΕΡΡΡΚΡΚϋΤΕΜΙδΚΤΡ ΕνΤΟνννονδΗΕΟΡΕνΚΡΝλνΥνΟΟνΕνΗΝΑ ΚΤΚΡΚΕΕρΥΝδΤΥΚννδνΕΤνΕΗρϋλνΕΝΟΚΕ ΥΚΟΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙδΚΑΚΟρΡΚΕΡρνΥΤΕ ΡΡδΚΕΕΜΤΚΝρνδΕΤΟΕνΚΟΡΥΡδΟΙΑνΕλνΕδ ΝΟρΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟδϋΟδΡΡΕΥδΚΕΤνΟΚδ ΚΛνρρΟΝνΡδΟδνΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤρΚδΕδΡδΡΟ (δΕ<3 ГО ΝΟ: 176)
Антитело В	1§К, легкая цепь, № 66	(δΕ<3 ГО ΝΟ: 173)
		(δΕΟ ΙΟ ΝΟ: 174)
	ΙβΟΙΚΟ, тяжелая цепь, № 5	саее1есаес1ее1есаеаесеесессеаее1еааеааессаееса
есаесе1еааее1еаес1есааеессаесеес11сасс11сассеас
саеасса1ссас1еее1есессаеессссаеессаееесс1ееае1
ееа1ееес1аса1с1асссасесеасеасаесссааае1асаасцае
аас11сааееесааее1сассс1еассессеасааеаесассацсас
сесс1аса1ееаес1еаесаесс1есесаесеаееасассессе1ц1
ас1ас1есесса1сссаеассесаесеес1асесс1ее11са1с1ас1§.

- 24 030436

		ееессаееесассс1ее1еассе1еаесаесцсс1ссассаа£££с
сса1с§§1сНссссс1§§сассс1сс1ссаа§а§сасс!с1§§§§§са са§с§§ссс1§§§с1§сс1§§1са১ас1асНсссс§аасс§§1§а с§§1§1с§1§§аас1с১с§ссс1§асса§с§§с§1§сасассЦсс с§§с1§1сс1аса§1сс1с১ас1с1ас1ссс!садса§с§1§§1§ас с§1§ссс1ссадса§сН§§§сассса§асс1аса1с1§саас§1§аа! сасаа§ссса§саасасса১1с§асаа§а§а§Н§а§сссааа1с Н§1§асаааас1сасаса1§сссасс§1§ссса§сасса§аа§с1§с 1§§§§§асс§1са§1сНсс1сЦссссссаааассса১асассс1с а1§а1с1ссс§§асссс1§а§§1саса!§с§1с§1§§1§§ас§1§а§с сас§аа§ассс1§а§§1саа§Нсаас1§§1ас§1д§ас§§с§1§§а §§1§са1аа1§ссаа§асааа§сс§с§§§а§§адса§1асааса§с ас§1асс§1§1д§1са§с§1сс1сасс§1сс!§сасс১ас1§§с1§а а1§§са১а§1асаа§1§са১1с1ссаасааа§ссс!ссса§сс ссса1с§а§аааасса1с1ссааа§ссаа১§са§сссс§а§аасс ас১1§1асассс1§ссссса!ссс§§§а§§а§а1§ассаа§аасс ১1са§сс1§асс1§сс1§§1саа১сПс!а1ссса§с§аса1с§с с§1§§а§1§§§а§а§саа!§§§са§сс§§а§аасаас1асаа§асс ас§сс1ссс§1дс1§§ас1сс§ас§§с1ссНсНсс1с1аса§саа§с1 сасс§1§§асаа§а§с১1§§са§с১§§аас§1сНс!са1§с1с с§1§а1§са1§а§§с1с1§сасаассас1асас§са§аа§а§сс!с1с οοΐβΐοΐοοβββΐ (8Е<3 ГО N0: 177)
		ΟνΟΕνΟδΟΑΕνΚΚΡΟδδνκνδϋΚΑδΟΡΤΡΤΌΟ
ΤΙΗλννΚΟΑΡΟΟΟΕΕλνΜΟΥΙΥΡΚΟϋδΡΚΥΝΕΝ
Т7Т® Ζ^ΤΛΤ ЛТТ Τ Л ТАТ® С ТС Τ Л АЛЛ ТТ7Т ССТ П СГТЛТ Л А 7ΆΛΑΛ ΡΑΥΙΚν 1 ΥΎΕ7ΙΧΟ 1 0 1 ΑΥ 1 АЕСЕ О ОЫХОЕР/ 1 ΑΥ V 1 1
ΟΑΙΡΟΚδΟΥΑΑνΡΙΥΑνΟΟΟΤΕντνδδΑδΤΚΟΡδ νΡΡΕΑΡδδΚδΤδΟΟΤΑΑΕΟΟΕνΚΟΥΡΡΕΡντνδ ΑΥΝδΟΑΕΤδΟνΕΙΤΡΡΑνΡΡδδΟΕΥδΡδδνντνΡ δδδΕΟΤρΤΥΙΕΝνΝΗΚΡδΝΤΚνϋΚΚνΕΡΚδΕϋ ΚΤΗΤΕΡΡΟΡΑΡΕΑΑΟΟΡδνΡΕΡΡΡΚΡΚΟΤΕΜΙδ ΚΤΡΕνΤΕνννονδΗΕΟΡΕνΚΡΝλνΥνΟΟνΕνΗ ΝΑΚΤΚΡΚΕΕρΥΝδΤΥΚννδνΕΤνΕΗρϋλνΕΝΟ ΚΕΥΚΕΚνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙδΚΑΚΟΟΡΕΕΡΟνΥ ΤΕΡΡδΚΕΕΜΤΚΝρνδΕΤΕΡνΚΟΡΥΡδΟΙΑνΕΑν ΕδΝΟρΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟδΟΟδΡΡΕΥδΚΕΤνϋ ΚδΚΛνρρΟΝνΡδΕδνΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤρΚδΕδΡδ ΡΟ (δΕ<3 ГО N0: 178)
Антитело С	1§К, легкая цепь, № 65	Сгаса1ссаеа1еасссаеаесссааесаесс1еаесессаесе1ее
есеассесе1еасса1сасс1есааеессаессесеасе1еесса1с
ессе1еесс1ее1ассаесаеааессаеесааее1ессаааес1ес!
ес1е!1с1ееессаесасссессасассеесе1ессаеассес11са
есеесаесеесаесеесассеас11сассс1еасса1саесаесс1е
саессаеаееасс1еессеас1ас1ас1ессассае!асаесаес1а
сссаИсассИсе.е.ссае.е.е.сассаае.с1е.е.ае.а1саае.сеХас1^Х
§,§,с1§,сасса1с1§,1сИса1сИссс§,сса1с1§,а1§,а§,са§,И§,ааа1с 1§,§,аас1§,сс1с1§,И§,1§,1§,сс1§,с1§,аа1аасИс1а1ссса§,а§,а§,§, ссааа£1аса£1££аа£&££а1аас£ссс1ссаа1с£££1аас1ссс а§,§,а§,а§,1§,1саса§,а§,са§,§,аса§,саа§,§,аса§,сасс1аса§,сс1 са§,са§,сассс1§,ас§,с1§,а§,сааа§,са§,ас1ас§,а§,ааасасааа

- 25 030436

		§1с1ас§сс1§с§аа§1сассса1с১§сс1§а§с1сзссс§1саса аа§а§сЕсаас১§да§а§1§1 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 179)
		ϋΙΟΜΤΟδΡδδΕδΑδνΟϋΚνΤΠΌΚΑδΚϋνΑΙΑν
ΑλΥΥΟΟΚΡΟΚνΡΚΕΕΕΡλνΑδΤΚΗΤΟνΡϋΚΡδΟ
δΟδΟΤΟΡΤΡΤΙδδΡΟΡΕϋΡΑϋΥΥΡΗΟΥδδΥΡΡΤ
ΡΟΟΟΤΚΕΕΙΚΚΤνΑΑΡδνΡΙΡΡΡδϋΕΟΕΚδΟΤΑδ ννΡΕΕΝΝΡΥΡΚΕΑΚν()\νκνθΝΑΕ()δΟΝ3()Εδ νΤΕΟΟδΚϋδΤΥδΕδδΤΕΤΕδΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑΡ ΕνΤΗρΟΕδδΡνΤΚδΡΝΚΟΕΟ (8ЕЦ ГО ΝΟ: 180)
	1§О1КО, тяжелая цепь, № 2	(δΕΟ ГО ΝΟ: 175)
		(8ЕЦ ГО ΝΟ: 176)
Антитело ϋ	1§К, легкая цепь, № 65	(8ЕЦ ГО ΝΟ: 179)
		(8ЕЦ ГО ΝΟ: 180)
	1§О1КО, тяжелая цепь, № 5	(8ЕЦ ГО ΝΟ: 177)
		(8ЕЦ ГО ΝΟ: 178)

В приведенной выше табл. 7 подчеркнуты вариабельные области легких цепей и тяжелых цепей Антител А, В, С и Ώ.

Гуманизированное антитело к П,-23р19, описанное в данной заявке, может обладать по меньшей мере одним или всеми указанными ниже свойствами.

К_о в отношении человеческого 1Ь-23 составляет <1 пМ (отсутствует сдвиг скорости ассоциации в 50%-ной человеческой сыворотке).

Блокирует связывание 1Б-23 с человеческим 1Ь-23К/Рс ΐπ νίίτο.

Не связывается с человеческим 1Б-12.

Ингибирует индуцируемое человеческим Ι1.-2.3 производство II,-17 в мышиных спленоцитах, что характеризуется 1С₅₀ <20 пМ.

Ингибирует индуцируемое человеческим 1Б-23 фосфорилирование 5ТАТ3 в человеческих ΏΒклетках, что характеризуется 1С₅₀ <40 пМ.

Не прогнозируется наличие АОСС/СЭС-активности.

К_о <1 пМ в отношении 1Б-23 обезьян циномолгус.

Отсутствует перекрестная реактивность с мышиным или крысиным ΙΕ-2.3.

Ингибирует индуцируемое человеческим 1Б-23 производство 1Б-17 и 1Б-22 в мышином ухе (>80%ное ингибирование обоих цитокинов при концентрации 1 мг/кг).

Стабильность при температуре до 83 °С (температура плавления 83 °С по данным измерений с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии).

Растворимость >100 мг/мл (по данным измерений с помощью УФ-спектроскопии и мониторинга мутности).

При подкожном введении в дозе 1,0 мг/кг трем обезьянам циномолгус имеет место длительная (> 10 нМ) экспозиция в течение примерно 28 дней при биологической доступности примерно 70%.

Под понятием "не прогнозируется наличие АОСС/СЭС-активности" в контексте настоящего описания подразумевается, что гуманизированное антитело к П,-23р19 обладает пониженной аффинностью к Рс-рецептору и следовательно у него прогнозируется отсутствие АОСС/СЭС-активности.

Кроме того, гуманизированное антитело к 1Ь-23р19 может обладать по меньшей мере одним или всеми указанными ниже свойствами:

К_о в отношении человеческого 1Б-23 составляет <1 пМ (отсутствует сдвиг скорости ассоциации в 50%-ной человеческой сыворотке).

Блокирует связывание 1Б-23 с человеческим 1Ь-23К/Рс ш νΐίΓο.

Не связывается с человеческим 1Б-12.

Ингибирует индуцируемое человеческим Ι1.-2.3 производство II,-17 в мышиных спленоцитах, что характеризуется 1С₅₀ <20 пМ.

Ингибирует индуцируемое человеческим 1Б-23 фосфорилирование 5ТАТ3 в человеческих ΏΒклетках, что характеризуется 1С₅₀ <40 пМ.

Не прогнозируется наличие АОСС/СЭС-активности.

К_о <1 пМ в отношении 1Б-23 обезьян циномолгус.

- 26 030436

Отсутствует перекрестная реактивность с мышиным или крысиным ΙΌ-23.

Ингибирует индуцируемое человеческим ΙΌ-23 производство ΙΌ-17 и ΙΌ-22 в мышином ухе (>80%ное ингибирование обоих цитокинов при концентрации 1 мг/кг).

Стабильность при температуре до 83 °С (температура плавления 83 °С по данным измерений с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии).

Растворимость >100 мг/мл (по данным измерений с помощью УФ-спектроскопии и мониторинга мутности).

Оно может также обладать одним или всеми указанными ниже свойствами.

К в отношении человеческого ГО-23 составляет <1 пМ (отсутствует сдвиг скорости ассоциации в 50%-ной человеческой сыворотке).

Не связывается с человеческим ГО-12.

К <1 пМ в отношении ГО-23 обезьян циномолгус.

Отсутствует перекрестная реактивность с мышиным или крысиным ГО-23. В частности, гуманизированное антитело характеризуется К_с в отношении человеческого ГО-23, составляющей <1 пМ (отсутствует сдвиг скорости ассоциации в 50%-ной человеческой сыворотке), и не связывается с человеческим

ГО-12.

Гуманизированное антитело к ΙΓ-23ρ19 может обладать по меньшей мере одним или всеми указанными ниже свойствами.

Блокирует связывание ГО-23 с человеческим ГО-23К/Рс ίη νίΐτο.

Ингибирует индуцируемое человеческим ГО-23 производство ГО-17 в мышиных спленоцитах, что характеризуется Ю₅₀ <20 пМ.

Ингибирует индуцируемое человеческим ГБ-23 фосфорилирование δΤΑΤ3 в человеческих ΌΒклетках, что характеризуется Κ.'₅₀ <40 пМ.

Ингибирует индуцируемое человеческим ГО-23 производство ГО-17 и ГО-22 в мышином ухе (>80%ное ингибирование обоих цитокинов при концентрации 1 мг/кг).

Гуманизированное антитело к ΙΕ-23ρ19 может обладать по меньшей мере одним или всеми указанными ниже свойствами.

Не прогнозируется наличие АОСС/СЭС-активности.

Стабильность при температуре до 83 °С (температура плавления 83 °С по данным измерений с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии).

Растворимость >100 мг/мл (по данным измерений с помощью УФ-спектроскопии и мониторинга мутности).

При подкожном введении в дозе 1,0 мг/кг трем обезьянам циномолгус имеет место длительная (>10 нМ) экспозиция в течение примерно 28 дней при биологической доступности примерно 70%.

Гуманизированное антитело к ΙΕ-23ρ19 обладает по меньшей мере одним или всеми указанными ниже свойствами.

Не прогнозируется наличие АОСС/СОС-активности.

Стабильность при температуре до 83 °С (температура плавления 83 °С по данным измерений с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии).

Растворимость >100 мг/мл (по данным измерений с помощью УФ-спектроскопии и мониторинга мутности).

Гуманизированное антитело обладает блокирующей активностью, при этом оно снижает связывание ГО-23 с рецептором ГО-23 по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95%. Способность антитела блокировать связывание ГО-23 с рецептором ГО-23 можно оценивать с помощью анализов связывания в конкурентных условиях, известных в данной области. В альтернативном варианте блокирующую активность антитела можно измерять путем оценки биологических действий ГО23, таких как производство ГО-17 и ГО-22, для определения того, ингибируется ли опосредуемая рецептором ГО-23 передача сигналов.

Гуманизированное антитело к ΙΕ-23ρ19 присутствует в буфере по меньшей мере на 90% в мономерной форме, или по меньшей мере на 92% в мономерной форме, или по меньшей мере на 95% в мономерной форме. Гуманизированное антитело к ΙΕ-23ρ19 сохраняется в буфере по меньшей мере на 90% в мономерной форме, или по меньшей мере на 92% в мономерной форме, или по меньшей мере на 95% в мономерной форме в течение 1 месяца или в течение 4 месяцев.

Способность антитела или его антигенсвязывающего фрагмента конкурировать за связыванием с ΙΕ-23ρ19 можно оценивать с помощью анализов связывания в конкурентных условиях, известных в данной области.

Гуманизированные антитела к ΙΕ-23ρ19 необязательно включают специфические аминокислотные замены в консенсусных каркасных участках или каркасных участках зародышевой линии. Специфическая замена аминокислотных остатков в этих каркасных положениях может улучшать различные аспекты

- 27 030436

характеристик антител, такие как аффинность связывания и/или стабильность, по сравнению с теми, которые характерны для гуманизированных антител, полученных путем "непосредственного обмена" СИР или ΚνΕ на каркасные участки человеческой зародышевой линии.

Фрагменты антител описаны в целом выше и разработаны методики для получения фрагментов антител. Фрагменты можно получать путем протеолитического расщепления интактных антител (см., например, ΜοπιηοΙο и др., ίοιιπκιί οί Вюсйешюа1 апб Вюрйу8юа1 Μеίйοά8 24, 1992, сс. 107-117 и Вгеппап и др., 8с1епсе 229, 1985, с. 81). В альтернативном варианте фрагменты можно получать непосредственно в рекомбинантных клетках-хозяевах. Например, РаЬ'-8Н-фрагменты можно выделять непосредственно из Е. тоП и химически сшивать с получением Р(аЬ')₂-фрагментов (см., например, Сайег и др., Вю/Тесйю^ду 10, 1992, сс. 163-167). Согласно другому подходу Р(аЬ')₂-фрагменты можно выделять непосредственно из культуры рекомбинантной клетки-хозяина. Другие методики получения фрагментов антител должны быть очевидны специалисту в данной области.

Антитело или фрагмент антитела может включать константную область, которая опосредует эффекторную функцию. Константная область может опосредовать ответы, представляющие собой антитело-обусловленную клеточнозависимую цитотоксичность (АЭСС), антитело-обусловленный клеточный фагоцитоз (АЭСР) и/или комплементзависимую цитотоксичность (СИС), в отношении клетки-мишени, экспрессирующей 1Ь-23. Эффекторный(ые) домен(ы) может(могут) представлять собой, например, Рсобласть молекулы 1§.

Эффекторный домен антитела можно получать из организма любых приемлемых видов позвоночных животных и любых изотипов. Изотипы из организма различных видов животных отличаются по способности опосредовать эффекторные функции. Например, по способности опосредовать СЭС и АИСС/АОСР человеческие иммуноглобулины, как правило, располагаются в следующем порядке Ι§Μ=Ι§Οι=Ι§Ο₃>Ι§Ο₂>Ι§Ο₄ и Ι§Οι=Ι§Ο₃>Ι§Ο₂/Ι§Μ/Ι§Ο₄ соответственно. Мышиные иммуноглобулины по своей способности опосредовать СЭС и АОСС/АОСР, как правило, располагаются в следующем порядке: мышиный Ι8Μ=^:=Ι8θ₃,>>Ι8θ2ΐ_:>Ι8θ₂,_ι>>Ι8θ₁ и Ι§0₂ΟΙ§0_2ει>Ι§0ι>>Ι§0₃ соответственно. В другом примере мышиный Ι§0₂„ опосредует АЭСС, а мышиный Ι§0₂₃ и Ι§Μ оба опосредуют СЭС.

Модификации антител.

Гуманизированные антитела и агенты к ГР-23р19 могут включать модификации гуманизированного антитела к ГР-23р19 или его антигенсвязывающего фрагмента. Например, может потребоваться модифицировать антитело в отношении его эффекторной функции, повышая тем самым эффективность антитела при лечении рака. Одной из таких модификаций является интродукция остатка(ов) цистеина в Рсобласть, что приводит к образованию в этой области дисульфидной связи между цепями. Полученное таким образом гомодимерное антитело может обладать улучшенной способностью к интернализации и/или повышенной комплементзависимой цитотоксичностью и антитело-обусловленной клеточнозависимой цитотоксичностью (АЭСС) (см., например, Сагоп и др., 1. Ехр. Μеά., 176, 1992, сс.1191-1195 и ЕПюрех ί. Iттиηοί., 148, 1992, сс.2918-2922). Гомодимерные антитела с повышенной противоопухолевой активностью можно получать также с использованием гетеробифункциональных перекрестносшивающих линкеров, описанных у \νο1ΓΓ и др., Сапсег Ревеатс^ 53, 1993, сс.2560-2565. В альтернативном варианте можно сконструировать антитело, имеющее удвоенное количество Рс-областей, благодаря чему оно может иметь повышенную способность к зависящему от комплемента лизису и АЭСС (см. §ίеνеηзοη и др., Ап!-Сапсег Эгид Не81дп, 3, 1989, сс. 219-230).

Антитела с повышенной способностью поддерживать ЛЭСС получали путем модификации схемы гликозилирования их Рс-области. Это представляется возможным, поскольку гликозилирование антитела на остатке аспарагина, N297, в С_Н2-домене участвует во взаимодействии между и Рсу-рецепторами, которое необходимо для ЛЭСС. Конструировали линии клеток-хозяев для экспрессии антител с измененным гликозилированием, например, с повышенным уровнем бисекционнирующего Νацетилглюкозамина или пониженным уровнем фукозы. Пониженный уровень фукозы обеспечивает более значительное повышение АИСС-активности, чем увеличение уровня бисекционирующего Νацетилглюкозамина. Кроме того, повышенная АИСС-активность антител с низким уровнем фукозы не зависит от ν/Р-полиморфизма РсуРШа.

Модификация аминокислотной последовательности Рс-области антител является альтернативой гликозилирования в отношении повышения АИСС-активности. Сайт связывания на человеческом для Рсу-рецепторов был определен с помощью расширенного анализа мутаций. Это позволило создавать гуманизированные антитела изотипа с мутациями в Рс-области, которые повышали аффинность связывания с РсуРШа и усиливали АИСС-активность ш νίίτο. Кроме того, получали варианты Рс с многочисленными различными пермутациями способности к связыванию, например, с повышенной способностью к связыванию со специфическими РсуР-рецепторами, но с неизмененной или пониженной способностью к связыванию с другими РсуР-рецепторами.

Иммуноконъюгаты содержат гуманизированное антитело или его фрагмент, конъюгированное/конъюгированный с цитотоксическим агентом, таким как химиотерапевтическое средство, токсин (например, обладающий ферментативной активностью токсин бактериального, грибного, растительного

- 28 030436

или животного происхождения или их фрагменты) или радиоактивный изотоп (т.е. радиоконъюгат).

Химиотерапевтические средства, которые можно применять для получения таких иммуноконъюгатов, описаны выше. Обладающие ферментативной активностью токсины и их фрагменты, которые можно применять, включают цепь А дифтерийного токсина, несвязывающие активные фрагменты дифтерийного токсина, цепь А экзотоксина (из Ркеийотопак аегидшока), цепь А рицина, цепь А абрина, цепь А модеццина, альфа-сарцин, белки А1еигйек Гогйп, белки диантина, белки РНу1о1аеа атегюапа (РАР1, РАР11 и РАР-8), ингибитор из Мотогйюа еЬагапйа, курцин, кротин, ингибитор из 8араопапа ойюшаНк, гелонин, митогеллин, рестриктоцин, феномицин, эномицин, трикотецены и т.п. Для получения радиоконъюгатов гуманизированных антител к 1Ь-23р19 можно применять различные радионуклиды. Их примерами являются ²¹²Βί, ¹³¹1, ¹³¹1п, ⁹⁰Υ и ¹⁸⁶Ке.

Конъюгаты гуманизированного антитела к 1Ь-23р19 и цитотоксического или химиотерапевтического средства можно получать известными методами, с использованием целого ряда бифункциональных связывающих белки агентов, таких как Ы-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитиол)пропионат (8РЮР), иминотиолан (1Т), бифункциональные производные сложных имидоэфиров (такие как диметиладипимидат-НС1), активные сложные эфиры (такие как дисукцинимидилсуберат), альдегиды (такие как глутаровый альдегид), бисазидосоединения (такие как бис(пара-азидобензоил)гександиамин), производные бисдиазония (такие как бис(пара-диазонийбензоил)этилендиамин), диизоцианаты (такие как толуол-2,6диизоцианат) и бис-активные соединения фтора (такие как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол). Например, иммунотоксин рицина можно получать согласно методу, описанному у Уйейа и др., 8с1епее, 238, 1987, с. 1098). Меченная с помощью С¹⁴ 1-изотиоцианатобензил-3-метилдиэтилентриаминпентауксусная кислота (МХ-ЭТРА) является примером хелатирующего агента для конъюгации радионуклеотида с антителом. Конъюгаты можно получать также с использованием расщепляемого линкера.

Гуманизированные антитела к 1Ь-23р19, представленные в настоящем описании, можно приготавливать также в виде иммунолипосом. Липосомы, содержащие антитело, получают методами, известными в данной области, например, описанными у Ерк!еш и др., Ргос. №й1. Асай. 8е1. И8А 82, 1985, с.3688; Н\уапд и др., Ргос. Νηΐ1. Асай. 8е1. И8А 77, 1980, с.4030; и в И8 № 4485045 и 4544545. Липосомы с удлиненным временем жизни в кровотоке описаны, например, в И8 № 5013556.

Наиболее предпочтительные липосомы можно получать методом упаривания с обращенной фазой с использованием липидной композиции, включающей фосфатидилхолин, холестерин и дериватизированный с помощью ПЭГ фосфатидилэтаноламин (ПЭГ-ФЭ). Липосомы экструдируют через фильтры с определенным размером пор, получая липосомы требуемого диаметра. РаЬ'-фрагменты антитела, предлагаемого в настоящем изобретении, можно включать в липосомы согласно методу, описанному у Магйп и др., 1. Вю1. СЬе., 257, 1982, ее. 286-288, посредством реакции образования дисульфидной связи. В липосомы необязательно можно включать химиотерапевтическое средство (такое как доксорубицин) (см., например, ОаЫ/оп и др., 1. Ыайопа1 Сапсег 1пк!., 81(19), 1989, с. 1484).

Антитела, представленные в настоящем описании, можно применять в АЭЕРТ (процедуры на основе антитело-направленного фермента пролекарственной терапии) путем конъюгации антитела с активирующим пролекарство ферментом, который превращает пролекарство (например, пептидильный химиотерапевтический агент) в активное противораковое лекарственное средство (см., например, ЩО 81/01145, ЩО 88/07378 и И8 № 4975278). Компонент иммуноконъюгата, представляющий собой фермент, который можно применять в АЭЕРТ, может представлять фермент, который обладает способно стью оказывать такое воздействие на пролекарство, в результате которого оно превращается в более активную цитотоксическую форму. Конкретные ферменты, которые можно применять в АЭЕРТ, включают (но, не ограничиваясь только ими) щелочную фосфатазу для превращения содержащих фосфат пролекарств в свободные лекарственные субстанции; арилсульфатазу для превращения содержащих сульфат пролекарств в свободные лекарственные субстанции; цитозиндеаминазу для превращения нетоксичного 5-фторцитозина в противораковую лекарственную субстанцию 5-фторурацил; протеазы, такие как протеиназа 8еггайа, термолизин, субтилизин, карбоксипептидазы и катепсины (такие как катепсины В и Ь), для превращения содержащих пептид пролекарств в свободные лекарственные субстанции; Όаланилкарбоксипептидазы для превращения пролекарств, содержащих Ό-аминокислотные заместители; расщепляющие углеводы ферменты, такие как β-галактозидаза и нейраминидаза, для превращения гликозилированных пролекарств в свободные лекарственные субстанции; β-лактамазу для превращения пролекарств, дериватизированных β-лактамами, в свободные лекарственные субстанции; и амидазы пенициллина, такие как амидаза пенициллина У или амидаза пенициллина О, для превращения лекарственных субстанций, дериватизированных по азотам амина феноксиацетильной или фенилацетильной группами, соответственно, в свободные лекарственные субстанции. В альтернативном варианте можно применять антитела с ферментативной активностью ("абзимы") для превращения пролекарств в свободные активные лекарственные субстанции (см., например, Маккеу, №йиге 328, 1987, ее.457-458). Конъюгаты антитело-абзим можно получать с помощью известных в данной области методов, предназначенных для введения абзима в популяцию опухолевых клеток, например, путем ковалентного связывания фермента с гуманизированным антителом к !Ь-23р19/гетеробифункциональными перекресносшивающими реаген- 29 030436

тами, которые описаны выше. В альтернативном варианте слитые белки, которые содержат, по меньшей мере, антигенсвязывающую область антитела, сцепленную, по меньшей мере, с функционально активной областью фермента, представленного в настоящем описании, можно конструировать с использованием метода рекомбинантной ДНК (см., например, ЫеиЪегдег и др., ЫаШге 312, 1984, сс. 604-608).

Применение фрагмента гуманизированного антитела к 1Ь-23р19 может потребоваться вместо интактного антитела, например, для повышения способности проникать в ткань, например может потребоваться модифицировать фрагмент антитела для удлинения времени полужизни в сыворотке. Для этой цели можно, например, включать эпитоп, связывающийся с рецептором спасения, во фрагмент антитела. Согласно одному из методов соответствующую область фрагмента антитела можно изменять (например, подвергать мутации) или эпитоп можно встраивать в пептидную метку, которую затем сливают с фрагментом антитела на любом конце или в середине, например, с использованием ДНК или пептидного синтеза (см., например, \УО 96/32478).

Можно также применять ковалентные модификации гуманизированного антитела к 1Ь-23р19. Ковалентные модификации включают модификацию цистеинильных остатков, гистидильных остатков, лизинильных и аминоконцевых остатков, аргинильных остатков, тирозильных остатков, карбоксильных боковых групп (аспартил или глутамил), глутаминильных и аспарагинильных остатков, или серильных, или треонильных остатков. Другой тип ковалентной модификации включает химическое или ферментативное сшивание гликозидов с антителом. Указанные модификации можно осуществлять с помощью химического синтеза или путем ферментативного или химического расщепления антитела, если это возможно. Для интродукции других типов ковалентных модификаций в молекулу антитела можно применять взаимодействие меченых аминокислотных остатков антитела с органическим дериватизирующим агентом, который может взаимодействовать с выбранными боковыми цепями или аминоконцевыми или карбоксиконцевыми остатками.

Удаление любых углеводных фрагментов, присутствующих на антителе, можно осуществлять химическим или ферментативным путем. Химическое дегликозилирование описано у Нак^тиάά^η и др., АгсЬ. ВюсЬет. ВюрЬук. 259, 1987, с. 52 и у Εάде и др., Апа1. ВюсЬет., 118, 1981, с. 131. Ферментативное отщепление углеводных фрагментов на антителах можно осуществлять с помощью различных эндо- и экзогликозидаз согласно методу, описанному у ТЬо1акига и др., Ме1Ь. Ем/утоК 138, 1987, с. 350.

Другой тип пригодной ковалентной модификации предусматривает связывание антитела с одним из многочисленных небелковых полимеров, например с полиэтиленгликолем (ПЭГ), полипропиленгликолем или полиоксиалкиленами, с помощью методов, описанных в одном или нескольких из И8 № 4640835, И8 № 4496689, И8 № 4301144, И8 №4670417, И8 № 4791192 и И8 № 4179337.

Гуманизация и варианты аминокислотной последовательности.

Варианты аминокислотной последовательности антитела к 1Ь-23р19 можно получать путем интродукции соответствующих нуклеотидных изменений в ДНК антитела к 1Ь-23р19 или с помощью пептидного синтеза. Указанные варианты включают, например, делеции и/или инсерции, и/или замены остатков в аминокислотных последовательностях антител к 1Ь-23р19, представленных в качестве примера в настоящем описании. Для получения конечной конструкции применяют любую комбинацию делеций, инсерции и замен при условии, что конечная конструкция обладает требуемыми характеристиками. Аминокислотные замены могут изменять также пост-трансляционный процессинг гуманизированного антитела к 1Ь-23р19 или его варианта, например изменение количества или положения сайтов гликозилирования.

Пригодным методом идентификации конкретных остатков или областей в антителе к 1Ь-23р19, которые представляют собой предпочтительные сайты для мутагенеза, является так называемый "аланинсканирующий мутагенез", описанный у СиптпдЬат и ^е11к, 8аепсе, 244, 1989, сс. 1081-1085. С его помощью идентифицируют остаток или группу остатков-мишеней (например, заряженные остатки, такие как агд, акр, Ык, 1ук и д1и) и заменяют на нейтральную или отрицательно заряженную аминокислоту (как правило, на аланин) для воздействия на взаимодействие аминокислот с антигеном 1Ь-23р19. Те положения аминокислот, для которых продемонстрирована функциональная чувствительность к заменам, затем усовершенствуют путем интродукции дополнительных или других вариантов в сайты замены или для сайтов замены.

При этом, хотя сайт для интродукции вариации аминокислотной последовательности является предопределенным, природа самой мутации не является предопределенной. Например, для анализа эффективности мутации в рассматриваемом сайте осуществляют сканирование аланином или неспецифический мутагенез кодона-мишени или области-мишени и полученные в результате экспрессии варианты антитела к 1Ь-23р19 подвергают скринингу в отношении требуемой активности.

Инсерции в аминокислотную последовательность включают амино- и/или карбоксиконцевые слияния различной длины от одного остатка до полипептидов, которые содержат сто или большее количество остатков, а также инсерции внутрь последовательности одного или нескольких аминокислотных остатков. Примерами концевых инсерции является антитело к 1Ь-23р19, слитое с эпитопом-меткой. Другие инсерционные варианты молекулы антитела к 1Ь-23р19 включают слияние с Ν- или С-концом антитела к 1Ь-23р19 фермента или полипептида, который удлиняет время полужизни антитела в сыворотке.

- 30 030436

Другим типом варианта является вариант, включающий аминокислотную замену. В этих вариантах по меньшей мере один аминокислотный остаток в молекуле антитела к П,-23р19 удален, а другой остаток встроен на его место. Представляющими наибольший интерес сайтами для мутагенеза путем замен являются гипервариабельные участки, но можно осуществлять также изменения в РК. Консервативные замены представлены в табл. 8 под названием "предпочтительные замены". Если такие замены приводят к изменению биологической активности, то можно интродуцировать более существенные замены, обозначенные как "Примеры замен", или другие замены, описанные ниже при ссылке на класс аминокислот, и затем продукты можно подвергать скринингу.

_ Таблица 8

Исходный остаток	Примеры замен	Предпочтительные замены
А1а (А)	Уа1; Ьеи; Не	Уа1
Агд (К)	Ьуз; Сг1п; Азп	Ьуз
Азп (Ν)	Сг1п; Из; Азр; Ьуз; Агд	С1п
Азр (Ό)	(Ни; Азп	С1и
Суз (С)	Зег; А1а	Зег
О1п ((})	Азп; (Ии	Азп
О1и (Е)	Азр; О1п	Азр
О1у (О)	А1а	А1а
ΗΪ3 (Н)	Агд; Азп; О1п; Ьуз	АГ£
Не (I)	Ьеи; Уа1; МеЕ; А1а; РНе; норлейцнн	Ьеи
Ьеи (Ь)	Не; норлейцнн; Уа1; МеЕ; А1а; РЬе	Не
Ьуз (К)	Агд; РЬе; Не	АГ£
МеЕ (М)	Ьеи; РЬе; Не	Ьеи
РНе (Р)	Туг; Ьеи; Уа1; Не; А1а	Туг
Рго (Р)	А1а	А1а
Зег (8)	ТЬг	ТЬг
ТНг (Т)	Зег	Зег
Тгр (\У)	Туг; РЬе	Туг
Туг (Υ)	РЬе; Тгр; ТЬг; Зег	РЬе
Уа1 (V)	Ьеи; Не; МеЕ; РЬе; А1а; норлейцнн	Ьеи

В химии белков является общепринятым, что биологические свойства антитела можно модифицировать путем выбора замен, которые в значительной степени различаются по их воздействию на поддержание (а) структуры каркаса полипептида в области замены, например, складчатой или спиральной конформации, (б) заряда или гидрофобности молекулы в сайте-мишени или (в) размера боковой цепи. Встречающиеся в естественных условиях остатки подразделяют на группы на основе общих свойств боковых цепей:

(1) гидрофобные: норлейцин, те1, а1а, уа1, 1еи, йе;

(2) нейтральные гидрофильные: суз, зег, 1Нт;

(3) кислые: азр, д1и;

(4) основные: азп, д1п, Ыз, 1уз, агд;

(5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: д1у, рго; и

(6) ароматические: 1гр, 1уг, рйе.

Неконсервативные замены предусматривают замену представителя одного из этих классов на представителя другого класса.

Любой из остатков цистеина, не участвующий в поддержании соответствующей конформации гуманизированного антитела к П,-23р19 или его варианта, можно заменять также, как правило, на серин, с целью повышения устойчивости молекулы к окислению и предупреждению аномального перекрестного сшивания или для создания точек для конъюгации с цитотоксическим или цитостатическим соединением. И наоборот, можно вводить в антитело цистеиновую(ые) связь(и) для повышения его стабильности (особенно если антитело представляет собой фрагмент антитела, такой как Ρν-фрагмент).

Один из типов создаваемого путем замены варианта включает замену одного или нескольких остатков гипервариабельного участка родительского антитела (например, гуманизированного или человеческого антитела). Как правило, полученный(ые) в результате вариант(ы), отобранный(е) для дальнейшего усовершенствования, должен(ны) обладать улучшенными биологическими свойствами относительно родительского антитела, из которого оно(они) получено(ы). Приемлемый путь получения таких вариантов на основе замены включает созревание аффинности с использованием фагового дисплея. В целом, метод состоит в следующем: несколько сайтов гипервариабельного участка (например, 6-7 сайтов) подвергают мутации, получая все возможные аминокислотные замены в каждом сайте. Полученные таким образом варианты антитела экспонируются в одновалентной форме на поверхности частиц нитчатого фага в виде слияний с продуктом гена III фага М13, который упакован в каждой частице. Варианты, которые экспонируются фагом, затем подвергают скринингу в отношении их биологической активности (например, аффинности связывания). Для того чтобы выявлять перспективные с точки зрения модифика- 31 030436

ции сайты гипервариабельного участка, можно осуществлять аланин-сканирующий мутагенез с целью идентификации остатков гипервариабельного участка, которые наиболее важны для связывания антигена. В альтернативном или дополнительном варианте может оказаться целесообразным анализировать кристаллическую структуру комплекса антиген-антитело с целью выявления точек соприкосновения между антителом и человеческим ΙΡ-23ρ19. Такие остатки в точках соприкосновения и соседние остатки является кандидатами для замены с помощью способов, разработанных при создании настоящего изобретения. После создания таких вариантов панель вариантов подвергают скринингу, представленному в данном описании, и антитела с улучшенными свойствами по данным одного или нескольких соответствующих анализов можно отбирать для дальнейшей разработки.

Другим типом получения аминокислотного варианта антитела является изменение исходной схемы гликозилирования антитела. Под "изменением" подразумевают делецию одного или нескольких углеводных фрагментов, присутствующих в антителе, и/или добавление одного или нескольких сайтов гликозилирования, не присутствующих в антителе.

Гликозилирование антител обычно происходит посредством либо ^связывания, либо 0связывания. ^связывание предусматривает присоединение углеводного фрагмента к боковой цепи остатка аспарагина. Трипептидные последовательности аспарагин-Х-серин и аспарагин-Х-треонин, где X обозначает любую аминокислоту кроме пролина, представляют собой распознаваемые последовательности, предназначенные для ферментативного присоединения углеводного фрагмента к боковой цепи остатка аспарагина. Так, присутствие любой их этих трипептидных последовательностей в полипептиде создает потенциальный сайт гликозилирования. 0-связанное гликозилирование предусматривает присоединение одного из Сахаров, таких как Юацетилгалактозамин, галактоза или ксилоза, к гидроксиаминокислоте, наиболее часто к серину или треонину, хотя можно применять также 5-гидроксипролин или 5-гидроксилизин. Таким образом, для гликозилирования данного белка, например антитела, создают аминокислотную последовательность белка, которая содержит одну или несколько описанных выше трипептидных последовательностей (для сайтов ^гликозилирования). Изменение может также представлять собой добавление или замену одного или нескольких остатков серина или треонина в последовательности исходного антитела (для сайтов 0-гликозилирования).

Молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют варианты аминокислотных последовательностей антитела к ΙΤ-23ρ19, получают с помощью различных методов, известных в данной области. Эти методы включают (но, не ограничиваясь только ими) выделение из природного источника (в случае встречающихся в естественных условиях вариантов аминокислотных последовательностей) или получение с помощью мутагенеза с использованием олигонуклеотидов (или сайтнаправленного мутагенеза), ПЦР-мутагенеза и кассетного мутагенеза полученного ранее варианта или невариантной версии антитела к ΙΤ-23ρ19.

Полинуклеотиды, векторы, клетки-хозяева и методы рекомбинации.

Выделенные полинуклеотиды могут кодировать любую требуемую форму антитела к ΙΤ-23ρ19, включая, например, полноразмерные моноклональные антитела, РаЬ-, РаЬ'-, Р(аЬ')₂- и Ρν-фрагменты, димерные антитела, линейные антитела, молекулы одноцепочечных антител и мульспецифические антитела, полученные из фрагментов антител.

Полинуклеотид(ы), который(ые) содержит(ат) последовательность, кодирующую гуманизированное антитело к ΙΡ-23ρ19 или его фрагмент или цепь, можно сливать с одной или несколькими регуляторными или контролирующими последовательности, известными в данной области, и можно включать в приемлемые экспрессионные векторы или клетку-хозяина, известные в данной области. Каждую из молекул полинуклеотида, кодирующего вариабельные домены тяжелой или легкой цепи, можно независимо друг от друга сливать с полинуклеотидной последовательностью, которая кодирует константный домен, например, человеческий константный домен, что позволяет получать интактные антитела. В альтернативном варианте полинуклеотиды или их участки можно сливать вместе, создавая матрицу для получения одноцепочечного антитела.

Для получения с помощью методов рекомбинации полинуклеотид, кодирующий антитело, встраивают в реплицируемый вектор для клонирования (амплификация ДНК) или для экспрессии. Известно и доступно много приемлемых векторов для экспрессии рекомбинантного антитела. Компонентами вектора, как правило, являются (но, не ограничиваясь только ими) один или несколько следующих элементов: сигнальная последовательность, сайт инициации репликации, один или несколько маркерных генов, энхансерный элемент, промотор и последовательность терминатора транскрипции.

Гуманизированные антитела к ΙΡ-23ρ19 можно получать также в виде слитых полипептидов, в которых антитело слито с гетерологичным полипептидом, таким как сигнальная последовательность или другой полипептид, несущий специфический сайт расщепления на аминоконце зрелого белка или полипептида. Выбранная гетерологичная сигнальная последовательность, как правило, представляет собой последовательность, которая распознается и процессируется (т.е. отщепляется сигнальной пептидазой) в клетке-хозяине. Для прокариотических клеток-хозяев, которые не могут распознавать и процессировать сигнальную последовательность гуманизированного антитела к ΙΡ-23ρ19, сигнальную последовательность можно заменять на прокариотическую сигнальную последовательность. Сигнальная последова- 32 030436

тельность может представлять собой, например, лидерные последовательности щелочной фосфатазы, пенициллиназы, липопротеина или термостабильного энтеротоксина II и т.п. Для секреции из дрожжей нативную сигнальную последовательность можно заменять, например, на лидерную последовательность, полученную из α-фактора дрожжевой инвертазы (включая лидерные последовательности α-фактора 8ассЬаготусек и К1цууеготусек), кислой фосфатазы, глюкоамилазы С. а1Ъюапк или сигнальную последовательность, описанную в \УО 90/13646. Для экспрессии в клетках млекопитающих можно применять сигнальные последовательности млекопитающих, а также вирусные секреторные лидерные последовательности, например, дО-сигнал вируса герпеса простого. ДНК, кодирующую указанную областьпредшественник, лигируют в рамке считывания с ДНК, которая кодирует гуманизированное антитело к 1Ь-23р19.

Экспрессионные и клонирующие векторы содержат нуклеотидную последовательность, которая позволяет вектору реплицироваться в одной или нескольких выбранных клетках-хозяевах. Как правило, в клонирующих векторах эта последовательность представляет собой последовательность, которая обеспечивает репликацию вируса, не зависящую от хромосомной ДНК хозяина, и она включает сайт инициации репликации или автономно реплицирующиеся последовательности. Такие последовательности хорошо известны для различных бактерий, дрожжей и вирусов. Сайт инициации репликации из плазмиды рВК322 пригоден для большинства грамотрицательных бактерий, сайт инициации плазмиды 2μ пригоден для дрожжей, а различные вирусные сайты инициации (8У40 (обезьяний вирус 40), вируса полиомы, аденовируса, У8У (вирус везикулярного стоматита) или ВРУ (вирус папилломы крупного рогатого скота)) пригодны для клонирующих векторов в клетках млекопитающих. Как правило, для экспрессионных векторов млекопитающих не требуется компонент, представляющий собой сайт инициации репликации (как правило, можно применять только сайт инициации репликации 8У40, поскольку он содержит ранний промотор).

Экспрессионные и клонирующие векторы могут содержать ген, который кодирует селектируемый маркер, для облегчения идентификации или экспрессии. Как правило, гены селектируемых маркеров кодируют белки, которые обусловливают устойчивость к антибиотикам или другим токсинам, таким как ампициллин, неомицин, метотрексат или тетрациклин, или в альтернативном варианте восполняют ауксотрофную недостаточность, или в другом альтернативном варианте пополняют имеющие решающее значение питательные вещества, которые не присутствуют в комплексных средах, например ген, кодирующий Ό-аланинрацемазу для Васйй.

В одной из приведенных в качестве примерах схем селекции применяют лекарственное средство для прекращения роста клетки-хозяина. В тех клетках, которые успешно трансформированы гетерологичным геном, образуется белок, обусловливающий устойчивость к лекарственному средству, и поэтому клетки выживают при такой схеме селекции. Примерами лекарственных средств, применяемых для такой доминантной селекции, являются неомицин, микофеноловая кислота и гигромицин. Общепринятыми селектируемыми маркерами для клеток млекопитающих являются маркеры, позволяющие идентифицировать клетки, компетентные в отношении поглощения нуклеиновой кислоты, которая кодирует гуманизированное антитело к 1Ь-23р19, такие как ΌΗΡΚ (дигидрофолатредуктаза), тимидинкиназа, металлотионеин-Ι и -II (например, гены металлотионеина приматов), аденозиндеаминаза, орнитиндекарбоксилаза и т.п. Клетки, трансформированные применяемым для селекции геном ΌΗΡΚ, идентифицируют, прежде всего, путем культивирования всех трансформантов в культуральной среде, которая содержит метотрексат (М1х), конкурентный антагонист ΌΗΡΚ. Приемлемой клеткой-хозяином, когда применяют ΌΗΡΚ дикого типа, является клетка яичника китайского хомячка (СНО) с дефицитом ΌΗΡΚ-активности (например, ОС44).

В альтернативном варианте клетки-хозяева (прежде всего, хозяева дикого типа, которые содержат эндогенный ген ΌΗΡΚ), трансформированные или совместно трансформированные последовательностями ДНК, которые кодируют антитело к ГЬ-23р19, белок ΌΗΡΚ дикого типа и другой селектируемый маркер, такой как аминогликозид-3'-фосфотрансфераза (АРН), можно отбирать по признаку роста клетки в среде, содержащий селектирующий агент для селектирующего маркера, такой как аминогликозидный антибиотик, например, канамицин, неомицин или С418 (см., например, И8 №4965199).

Когда получение методом рекомбинации осуществляют с использованием дрожжевой клетки в качестве клетки-хозяина, то в качестве маркера можно применять ген ТКР1, который присутствует в полученной из дрожжей плазмиде УКр7 (8йпсЬсотЪ и др., №1иге, 282, 1979, с. 39). Ген ТКР1 является селектирующим маркером для мутантного штамма дрожжей, лишенного способности расти в среде с добавлением триптофана, например штамма АТСС №44076 или РЕР4-1 Цопек, Сепейск, 85, 1977, с. 12). Таким образом, наличие повреждения 1гр1 в геноме дрожжевой клетки-хозяине обеспечивает эффективное окружение для выявления трансформации по признаку роста в отсутствии триптофана. Аналогично этому, штаммы дрожжей с дефицитом Ьеи2р, такие как АТСС 20622 и 38626, дополняют с помощью известных плазмид, несущих ген ЬЕИ2.

Кроме того, векторы, полученные из кольцевой плазмиды рКЭ1 размером 1,6 мкм, можно применять для трансформации дрожжей К1цууеготусек. С другой стороны, известна экспрессионная система

- 33 030436

для крупномасштабного получения рекомбинантного телячьего химозина в Κ. 1асОк (Уап άеη Вегд, В^о/ТесЬηо1оду 8, 1990, с. 135). Описаны также стабильные мультикопийные экспрессионные векторы для секреции зрелого рекомбинантного человеческого сывороточного альбумина с помощью промышленных штаммов К1иууеготусек (Р1еег и др., В^о/ТесЬηо1оду 9, 1991, сс.968-975).

Экспрессионные и клонирующие векторы, как правило, содержат промотор, распознаваемый организмом-хозяином и функционально связанный с молекулой нуклеиновой кислоты, которая кодирует антитело к 1Ь-23р19 или его полипептидную цепь. Промоторы, которые пригодны для применения в прокариотических хозяевах, представляют собой промотор рЬоА, промоторные системы β-лактамазы и лактозы, промоторные системы щелочной фосфатазы, триптофана (1гр) и гибридные промоторы, такие как промотор 1ас. Можно применять также другие промоторы бактерий. Промоторы, предназначенные для применения в бактериальных системах, содержат также последовательность Шайна-Дальгарно (δ.Ό.), функционально связанную с ДНК, которая кодирует гуманизированное антитело к 1Ь-23р19.

Известны многие промоторные последовательности эукариот. Фактически все гены эукариот имеют богатую АТ область, локализованную примерно на расстоянии 25-30 оснований против хода транскрипции от сайт инициации транскрипции. Другая последовательность, обнаруженная на расстоянии 70-80 оснований от сайта инициации транскрипции многих генов, представляет собой СЫСААТ-область, в которой N может обозначать любой нуклеотид. На 3'-конце большинства генов эукариот находится последовательность ААТААА, которая может представлять собой сигнал для добавления поли-А-хвоста к 3'концу кодирующей последовательности. Все эти последовательности можно встраивать в эукриотические экспрессионные векторы.

Примеры промоторных последовательностей, которые можно применять в дрожжевых клеткаххозяевах, включают промоторы 3-фосфоглицераткиназы или других гликолитических ферментов, таких как енолаза, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа, гексокиназа, пируватдекарбоксилаза, фосфофруктокиназа, глюкозо-6-фосфатизомераза, 3-фосфоглицератмутаза, пируваткиназа, триозофосфатизомераза, фосфоглюкозоизомераза и глюкокиназа.

Индуцибельные промоторы имеют дополнительное преимущество, связанное с транскрипцией, которая контролируется условиями роста. Они включают дрожжевые промоторные области алкогольдегидрогеназы 2, изоцитохрома С, кислой фосфатазы, расщепляющих ферментов, связанных с метаболизмом азота, металлтионеина, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы и ферментов, ответственных за утилизацию мальтозы и галактозы. Кроме того, приемлемые векторы и промоторы, которые можно применять при экспрессии в дрожжах, описаны в ЕР 73657. Энхансеры из дрожжей целесообразно применять также в сочетании с промотарами из дрожжей.

Транскрипция гуманизированного антитела к 1Ь-23р19 с векторов в клетках-хозяевах млекопитающих контролируют, например, с помощью промоторов, полученных из геномов вирусов, таких как вирус полиомы, вирус оспы птиц, аденовирус (такой как аденовирус 2), вирус папилломы крупного рогатого скота, вирус саркомы птиц, цитомегаловирус, ретровирус, вирус гепатита В и обезьяний вирус 40 (§У40), с помощью гетерологичных промоторов млекопитающих, например промотора актина или промотора иммуноглобулина, или промоторов теплового шока при условии, что такие промоторы совместимы с системами клетки-хозяина.

Ранний и поздний промоторы вируса 8У40 целесообразно получать в виде рестрикционного фрагмента 8У40, который содержит также сайт инициации репликации вируса 8У40. Немедленно-ранний промотор человеческого цитомегаловируса целесообразно получать в виде рестрикционного ΗίηάΙΙΙ Ефрагмента. Система экспрессии ДНК в клетках-хозяевах млекопитающих, в которой применяли вирус бычьей папилломы в качестве вектора, описана в υδ №4419446. Модификация указанной системы описана в И8 №4601978 (см. также у Кеуек и др., Ыа1иге 297, 1982, сс. 598-601 описание экспрессии кДНК человеческого р-интеферона в мышиных клетках под контролем промотора тимидинкиназы из вируса герпеса простого). В альтернативном варианте в качестве промотора можно применять длинный концевой повтор вирус саркомы Рауса.

Другим важным элементом, который можно применять в рекомбинантном экспрессионном векторе, является энхансерная последовательность, которую используют для повышения транскрипции ДНК, кодирующей гуманизированное антитело к 1Ь-23р19, в высших эукариотических организмах. Известны многие энхансерные последовательности генов млекопитающих (генов глобина, эластазы, альбумина, афетопротеина и инсулина). Однако, как правило, применяют энхансер из вируса эукариотической клетки. Примерами являются энхансер δν40, расположенный на удаленной стороне от сайта инициации репликации (пары оснований 100-270), энхансер раннего промотора цитомегаловируса, энхансер полиомы, расположенный на удаленной стороне от сайта инициации репликации, и энхансеры аденовирусов (см. также у Υηηίν Ыа1иге 297, 1982, сс. 17-18 описание энхансерных элементов, применяемых для активации эукариотических промоторов). Энхансер можно встраивать путем сплайсинга в вектор в 5'- или 3'положение относительно кодирующей последовательности антитела к 1Ь-23р19, но предпочтительно его помещают в сайт, расположенный в 5'-направлении относительно промотора.

Экспрессионные векторы, применяемые в эукариотических клетках-хозяевах (клетки дрожжей, грибов, насекомых, растений, животных, людей или содержащие ядро клетки других многоклеточных

- 34 030436

организмов), должны содержать также последовательности, необходимые для терминации транскрипции и стабилизации мРНК. Такие последовательности обычно получают из 5'- и иногда из 3'нетранслируемых областей эукариотических или вирусных ДНК или кДНК. Эти области содержат нуклеотидные сегменты, транскрибированные в виде полиаденилированных фрагментов в нетранслируемой области мРНК, которая кодирует антитело к 1Ь-23р19. Одним из пригодных компонентов терминации транскрипции является область полиаденилирования бычьего гормона роста (см. ΥΘ 94/11026 и представленный в указанной заявке экспрессионный вектор). В некоторых вариантах осуществления изобретения гуманизированные антитела к 1Ь-23р19 можно экспрессировать с помощью системы СНЕР (см., например, И8 №5888809, описание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки).

Приемлемыми клетками-хозяевами для клонирования или экспрессии ДНК в векторах, указанных в настоящем описании, являются клетки прокариот, дрожжей или высших эукариот. Приемлемыми прокариотами являются (но, не ограничиваясь ими) эукариотические бактерии (эубактерии), такие как грамотрицательные или грамположительные организмы, например сем. Еп1егоЬас1епасеае. такие как Е.соН. Еп1егоЬас1ег. ΕΓ^νίηία, К1еЬк1е11а, Рго1еик, 8а1топе11а, например 8а1топе11а 1урНтиг1ит, 8еггаНа, например 8еггаНа тагсексапк, и 8Ы§е11а, а также ВасПН, такие как В. биМПб и В. ПсНешГогпик (например, штамм В. ПсНешГогпик 41Р, который описан в ΌΌ 266710, опубликованной 12 апреля 1989 г.), Ркеийотопак, такие как Р. аегидшока, и 81гер1отусек. Одним из предпочтительных штаммов Е.соН, который применяют в качестве хозяина при клонировании, является штамм Е.соН 294 (АТСС 31446), хотя можно использовать и другие штаммы Е.соН В, Е.соН Х1776 (АТСС 31537) и Е.соН Υ3110 (АТСС 27325). Эти примеры приведены в качестве иллюстрации и не ограничивают объем изобретения.

Помимо прокариотических организмов в качестве хозяев для клонирования или экспрессии векторов, которые кодируют гуманизированное антитело к 1Ь-23р19, можно использовать эукариотические микроорганизмы, такие как нитчатые грибы или дрожжи. Наиболее часто применяемым низшим эукариотическим микроорганизмом-хозяином является 8ассНаготусек сегеуыае, т.е. обычные пекарские дрожжи. Однако согласно настоящему изобретению можно применять многочисленных известных и доступных представителей других родов, видов и штаммов, таких как 8с1и/окассНаготусек ротЬе; хозяев из сем. К1иууеготусек таких, например, как К. 1асНк, К. ГгадШк (АТСС 12424), К. ЬиЦапсик (АТСС 16045), К. \У1скегати (АТСС 24178), К. теаНл (АТСС 56500), К. йгокорНйагит (АТСС 36906), К. (Негто1о1егапк и К. татапик; Уаггслхаа (ЕР 402226); РЫиаракЮпк (ЕР 183070); СапйМа; ТпсНойегта гееча (ЕР 244234); Ыеигокрога сгакка (Саке и др., Ргос. ЫаН. Асай. 8ск И8А, 76, 1979, сс. 5259-5263); 8сН^аппютусек, такие как 8сН\уапшотусек осайеШаПкт и нитчатые грибы, такие, например, как Ыеигокрога, РетсП1шт, То1урос1ай1ит и хозяева р. АкрегдШик, такие как А. тйи1апк и А. тдег.

Клетки-хозяева, пригодные для экспрессии гликозилированного гуманизированного антитела к 1Ь23р19, получают из многоклеточных организмов. Примерами клеток беспозвоночных являются клетки растений и клетки насекомых, например многочисленные бакуловирусные штаммы и их варианты и соответствующие пригодные для них в качестве хозяев клетки насекомых, таких как 8ройор1ега Ггидрегйа (гусеница), Аейек аещрН (комар), Аейек а1Ьорю1ик (комар), ЭгокорНйа те1аподак1ег (плодовая муха) и ВотЬух топ (шелковичный червь). Широко известны разнообразные штаммы вирусов, которые можно использовать для трансфекции, например вариант Ь-1 Ац1одгарНа саНГогтса ЫРУ и штамм ВотЬух топ Вт-5 МРУ, и такие вирусы можно применять, прежде всего, для трансфекции клеток 8ройор1ега Ггц§1регйа.

В качестве хозяев можно применять также культуры клеток хлопчатника, кукурузы, картофеля, сои, петуньи, томатов и табака.

Согласно другому объекту изобретения экспрессию гуманизированного антитела к 1Ь-23р19 осуществляют в клетках позвоночных животных. В настоящее время размножение клеток позвоночных в культуре (культура ткани) стало стандартной процедурой, и соответствующие методики являются широко распространенными. Примерами пригодных в качестве хозяев линий клеток млекопитающих являются линия клеток почки обезьяны СУ1, трансформированная 8У40 (СО8-7, АТСС СКЬ 1651); линия клеток почки эмбриона человека (293 или клетки линии 293, субклонированные с целью выращивания в суспензионной культуре, СгаНат и др., 1. Сеп. Уно1., 36, 1977, с. 59); клетки почки детеныша хомячка (ВНК, АТСС ССЬ 10); клетки яичника китайского хомячкаГОНРИ. (СНО, Иг1аиЬ и др., Ргос. Νηΐ1. Асай. 8ск И8А, 77, 1980, с. 4216); клетки сертоли мыши (ТМ4, МаЛег, Вю1. Вергой., 23, 1980, сс. 243-251); клетки почки обезьяны (СУ1, АТСС ССЬ 70); клетки почки африканской зеленой мартышки (УЕКО-76, АТСС СКЬ-1587); клетки карциномы шейки матки человека (НЕЬА, АТСС ССЬ 2); клетки почки собаки (МОСК, АТСС ССЬ 34); клетки печени бычьей крысы (ВКЬ ЗА, АТСС СКЬ 1442); клетки легкого человека (Υ138, АТСС ССЬ 75); клетки печени человека (Нер С2, НВ 8065); клетки опухоли молочной железы мыши (ММТ 060562, АТСС ССЬ51); клетки ТК1 (МаИег и др., Апп а1к Ν.Υ. Асай. 8ск, 383, 1982, сс. 44-68); клетки МКС 5; клетки Р84 и линия клеток гепатомы человека (Нер С2).

Клетки-хозяева трансформируют с помощью описанных выше экспрессионных или клонирующих векторов с целью получения гуманизированного антитела к 1Ь-23р19 и культивируют в пригодных питательных средах, соответствующим образом модифицированных для индукции промоторов, отбора трансформантов или амплификации генов, кодирующих требуемые последовательности.

- 35 030436

Клетки-хозяева, которые применяют для получения гуманизированного антитела к 1Ь-23р19, можно культивировать в широком разнообразии сред. Для культивирования клеток-хозяев можно использовать имеющиеся в продаже среды, такие как среда Хэма Р10 (фирма 81дта-А1йг1сЬ Со., Сент-Луис, шт. Миссури), минимальная поддерживающая среда ((МЕМ), фирма 81дта-А1йгюЬ Со.), КРМ1-1640 (фирма 8ί§та-А1йпеЬ Со.) и модифицированная по методу Дульбекко среда Игла (ЩМЕМ), фирма 8щта-А1йпе11 Со.). Кроме того, в качестве сред для культивирования клеток-хозяев можно использовать любые из сред, которые описаны в одной или нескольких следующих публикациях: Нат и др., Ме!Ь. Еп/. 58, 1979, с. 44, Вагпек и др., Апа1. ВюеЬет. 102, 1980, с.255, И8 № 4767704, И8 № 4657866, И8 № 4927762, И8 № 4560655, и8 № 5122469, ЩО 90/103430 и ЩО 87/00195. Любую из этих сред при необходимости можно дополнять гормонами и/или другими факторами роста (такими как инсулин, трансферрин или эпидермальный фактор роста), солями (такими как хлорид и фосфат натрия, кальция, магния), буферами (такими как НЕРЕ8), нуклеотидами (такими как аденозин и тимидин), антибиотиками (такими как гентамицин), микроэлементами (т.е. неорганическими соединениями, которые обычно присутствуют в конечных концентрациях, находящихся в микромолярном диапазоне) и глюкозой или эквивалентным источником энергии. Специалистам в данной области должно быть очевидно, что можно включать также любые другие необходимые добавки в соответствующих концентрациях. Условия культивирования, такие как температура, значение рН и т.п., представляют собой условия, которые использовались ранее для клетокхозяев, отобранных для экспрессии, и они должны быть очевидны обычному специалисту в данной области.

При использовании методов рекомбинации антитело может продуцироваться внутри клетки, в периплазматическом пространстве или непосредственно выделяться в среду. Если антитело продуцируется внутри клетки, то на первой стадии клетки можно разрушать для высвобождения белка. Состоящий из отдельных частиц дебрис, либо клеток-хозяев, либо лизированных фрагментов, можно удалять, например, с помощью центрифугирования или ультрафильтрации. У Сайег и др., Вю/ТесЬмИ^у, 10, 1992, ее. 163-167 описан метод выделения антител, секретируемых в периплазматическое пространство Е. еой. В целом, метод состоит в следующем: клеточную массу в виде пасты подвергают оттаиванию приблизительно в течение 30 мин в присутствии ацетата натрия (рН 3,5), ЭДТК и фенилметилсульфонилфторида (ФМСФ). Клеточный дебрис можно удалять центрифугированием. Если антитело секретируется в среду, то супернатанты таких экспрессионных систем, как правило, сначала концентрируют с помощью имеющегося в продаже фильтра для концентрирования белков, например устройства для ультрафильтрации типа Атюоп или МПЕроге РеШеоп. На любой из предыдущих стадий для ингибирования протеолиза можно добавлять ингибитор протеазы, такой как ФМСФ, а для предупреждения увеличения нежелательных примесей можно добавлять антибиотики. Для выделения антитела из клетки-хозяина можно применять широкое разнообразие методов.

Композицию антитела, полученную из клеток, можно очищать, например, хроматографией на гидроксилапатите, гель-электрофорезом, диализом и аффинной хроматографией, при этом предпочтительным методом очистки является аффинная хроматография. Возможность применения белка А в качестве аффинного лиганда зависит от вида и изотипа Ре-области любого иммуноглобулина, присутствующей в антителе. Белок А можно использовать для очистки антител, основой которых являются человеческие тяжелые гамма1-, гамма2- или гамма4-цепи (Ьшйтагк и др., 1. 1ттипо1. Ме!Ь., 62, 1983, ее. 1-13). Белок О рекомендуется для применения для всех мышиных изотипов и для человеческой гамма3-цепи (Оикк и др., ЕМВО 1., 5, 1986, ее. 1567-1575). В качестве матрицы, с которой связывается аффинный лиганд, наиболее часто применяют агарозу, однако можно использовать и другие матрицы. Устойчивые к механическим воздействиям матрицы, такие как стекло или поли(стиролдивинил)бензол с контролируемым размером пор, позволяют достигать более высоких скоростей потока и более короткого времени процесса по сравнению с характеристиками, достигаемыми при использовании агарозы. Если антитело содержит С_Н3-домен, то для очистки можно использовать смолу типа ВакегЬопй АВХ'™ (фирма ТТ. Вакег, Филлипсбург, шт. Нью-Джерси). В зависимости от антитела, подлежащего выделению, можно применять также другие методы очистки белка, такие как фракционирование на ионообменной колонке, осаждение этанолом, ЖХВР с обращенной фазой, хроматография на силикагеле, хроматография на гепарин8ЕРНАКО8Е™, хроматографии на анионо- или катионообменной смоле (например на колонке с полиаспартамовой кислотой), хроматофокусирование, ДСН-ПААГ и осаждение сульфатом аммония.

После любой(ых) из предыдущей(их) стадии(й) очистки смесь, содержащую представляющее интерес антитело и примеси, можно подвергать хроматографии, основанной на гидрофобном взаимодействии, при низком значении рН с использованием буфера для элюции, который имеет значение рН приблизительно от 2,5 до 4,5, хроматографию предпочтительно осуществляют при низких концентрациях солей (например, с использованием приблизительно 0-0,25М солей).

Нуклеиновые кислоты могут гибридизоваться с заявленными НК в слабых, умеренных или строгих условиях. Гибридизующаяся область гибридизующейся нуклеиновой кислоты, как правило, состоит по меньшей мере из 15 (например, 20, 25, 30 или 50) нуклеотидов. Гибридизующаяся область гибридизующейся нуклеиновой кислоты идентична по меньшей мере на 80%, например по меньшей мере на 90%, по

- 36 030436

меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 98% последовательности участка или всей нуклеиновой кислоты, которая кодирует анти-1Ь-23р19 полипептид (например, вариабельную область тяжелой цепи или легкой цепи), или ее комплементу. Гибридизующиеся нуклеиновые кислоты можно применять, например, в качестве зонда для клонирования, праймера, например ПЦР-праймера, или диагностического зонда.

В контексте настоящего описания понятия "идентичный" или "процент идентичности" касательно двух или большего количества нуклеотидных или полипептидных последовательностей относится к двум или большему количеству последовательностей или подпоследовательностей, которые являются одинаковыми или имеют определенный процент одинаковых нуклеотидов или аминокислотных остатков при сравнении и выравнивании для максимального соответствия. Для определения процента идентичности последовательности выравнивают для оптимального сравнения (например, можно интродуцировать бреши в последовательность первой аминокислотной или нуклеотидной последовательности для оптимального сравнительного анализа первичной структуры со второй аминокислотной или нуклеотидной последовательностью). Затем сравнивают аминокислотные остатки или нуклеотиды в соответствующих положениях аминокислот или положениях нуклеотидов. Когда в положении в первой последовательности находится такой же аминокислотный остаток или нуклеотид, что и в соответствующем положении во второй последовательности, то молекулы являются идентичными в указанном положении. Процент идентичности между двумя последовательностями является функцией от количества идентичных положений в последовательностях (т.е. % идентичности = количество идентичных положений/общее количество положений (например, перекрывающихся положениях 100). В некоторых вариантах осуществления изобретения две сравниваемые последовательности имеют одинаковую длину после интродукции при необходимости брешей в последовательности (например, исключая дополнительную последовательность, простирающуюся за последовательности, подлежащие сравнению). Например, когда сравнивают последовательности вариабельных областей, то не рассматривают лидерные и/или последовательности константных доменов. При сравнении последовательностей двух последовательностей "соответствующий" СОК относится к СЭК. расположенному в одинаковом положении в обеих последовательностях (например, СЭК-Н1 каждой последовательности).

Определение процента идентичности или процента сходства между двумя последовательностями можно осуществлять с помощью математического алгоритма. Предпочтительным примером математического алгоритма, который можно применять для сравнения двух последовательностей, является (но, не ограничиваясь только им) алгоритм Каг1ш и А11зсНи1, Ргос. №а11. Асай. Зск ИЗА 87, 1990, сс. 2264-2268, модифицированный согласно Кагйп и АИзсЬи1, Ргос. Νη11. Асай. Зск ИЗА 90, 1993, сс. 5873-5877. Указанный алгоритм включен в программы ΝΒΕΛ3Τ и ХВЬАЗТ, описанные у А11зс1ш1 и др., I. Мо1. Βίο1. 215, 1990, сс. 403-410. Анализ нуклеотидов с помощью ВЬАЗТ можно осуществлять с помощью программы ХВЕАЗТ, в которой балл = 100, длина слова = 12, для получения нуклеотидных последовательностей, гомологичных нуклеиновой кислоте, кодирующей представляющей интерес белок. Анализ белков с помощью ВЬАЗТ можно осуществлять с помощью программы ХВЬАЗТ, в которой балл = 50, длина слова = 3, для получения аминокислотных последовательностей, гомологичных представляющему интерес белку. Для осуществления сравнительных анализов первичной структуры, включающей бреши, можно применять программу Саррей ВЬАЗТ, описанную у А11зсЬи1 и др., ШсЫс Аайз, 25, 1997, сс. 3389-3402. В другом варианте можно применять РЗ1-В1аз1 для осуществления итерационного поиска, позволяющего определять отдаленные взаимосвязи между молекулами (1й.). При применении программ ВЬАЗТ, Саррей ВЬАЗТ и РЗ1-В1аз1 можно применять задаваемые по умолчанию параметры соответствующих программ (например, ХВЬАЗТ и ХВЬАЗТ). Другим предпочтительным примером (но, не ограничиваясь только им) математического алгоритма, который можно применять для сравнения последовательностей, является алгоритм, описанный у Муегз и МШег, САВЮЗ, 1989. Указанный алгоритм включен в программу АЫСХ (версия 2.0), которая является частью пакета программ для сравнительного анализа первичной структуры последовательностей ССС. Когда программу АЫСХ применяют для сравнения аминокислотных последовательностей, то можно применять таблицу взвешенных остатков РАМ120, штраф за длину бреши 12 и штраф за брешь 4. Дополнительные алгоритмы для анализа последовательностей известны в данной области и включают АБУАХСЕ и АРАМ, описанные у ТогеШз и КоЬо1й, СошриЕ. Арр1. Вюзск 10, 1994, сс. 3-5; и РАЗТА, описанный у Реагзоп и Ыртап, Ргос. №а11. Асай. Зск ИЗА 85, 1988, сс. 2444-2448. В программе РАЗТА параметр к1ир обозначает контрольный параметр, который задает чувствительность и скорость поиска. Если к1ир = 2, то сходные области в двух подлежащих сравнению последовательностях выявляют путем просмотра пар выравненных остатков; если к1ир = 1, то оценивают индивидуальные выравненные аминокислоты. Для белковых последовательностей можно задавать значение к1ир, равное 2 или 1, а для последовательностей ДНК значения в пределах от 1 до 6. Задаваемое по умолчанию значение к1ир, если его не определяют специально, равно 2 в случае белков и равно 6 в случае ДНК. В альтернативном варианте сравнительный анализ первичной структуры белковых последовательностей можно осуществлять с помощью алгоритма СЕиЗТАй Υ, описанного у Шддшз и др., Мейюйз Еп/уто1. 266, 1996, сс. 383-402.

- 37 030436

Нетерапевтическое применение.

Антитела можно применять в качестве средств, используемых для очистки на основе аффинности. При осуществлении этого процесса антитела иммобилизуют на твердой фазе, такой как смола, содержащая белок А, с помощью методов, хорошо известных в данной области. Иммобилизованное антитело приводят в контакт с образцом, содержащим белок ГБ-23р19 (или его фрагмент), который подлежит очистке, и затем подложку отмывают приемлемым растворителем, который должен удалять практически весь материал в образце кроме белка ГО-23р19, связанного с иммобилизованным антителом. И, наконец, подложку отмывают другим приемлемым растворителем, который должен отделять белок ГО-23р19 от антитела.

Антитела к ГО-23р19, например гуманизированные антитела к ГО-23р19, можно применять также в диагностических анализах для выявления и/или количественной оценки белка ГО-23, например, путем определения экспрессии ГО-23 в конкретных клетках, тканях или сыворотке. Антитела к ГО-23р19 можно использовать с целью диагностики, например для мониторинга развития или прогрессирования заболевания, в качестве части клинической процедуры тестирования, например для определения эффективности данной схемы лечения и/или профилактики. Выявление можно облегчать путем связывания антитела ГО-23р19. Примерами выявляемых субстанций являются различные ферменты, простетические группы, флуоресцентные материалы, люминесцентные материалы, биолюминисцентные материалы, радиоактивные материалы, испускающие позитроны материалы, для выявления которых используют позитронэмиссионную томографию, и ионы нерадиоактивных парамагнитных металлов (см., например, И8 №4741900, в котором описаны ионы металлов, которые можно конъюгировать с антителами для применения в диагностике, предлагаемой в настоящем изобретении.

Антитела к ГО-23р19 можно применять в методах диагностирования ассоциированного с ГО-23 нарушения (например, нарушения, характеризующегося аномальной экспрессией ГО-23) или для определения того, имеет ли индивидуум повышенный риск развития ассоциированного с ГО-23 нарушения. Такие методы включают приведение в контакт биологического образца из организма индивидуума с антителом к ГО-23р19 и определения связывания антитела с ГО-23р19. Под "биологическим образцом" подразумевается любой биологический образец, полученный из индивидуума, клеточной линии, культуры ткани или другого источника клеток, потенциально экспрессирующих ГО-23. Методы получения биопсий ткани и общей воды организма млекопитающих хорошо известны в данной области.

В некоторых вариантах осуществления изобретения метод может заключаться также в сравнении уровня ГО-23 в образце из организма пациента и в контрольном образце (например, из организма пациента, у которого отсутствует ассоциированное с ГО-23 нарушение) для определения того, имеет ли пациент ассоциированное с ГО-23 нарушение или риск развития ассоциированного с ГО-23 нарушения.

Для диагностических целей целесообразно метить антитело с помощью выявляемого фрагмента. Известны и доступны многочисленные выявляемые метки, такие как радиоизотопы, флуоресцентные метки, метки, представляющие собой субстраты для ферментов и т.п. Метку можно конъюгировать с антителом опосредованным путем с помощью различных известных методик. Например, антитело можно конъюгировать с биотином, и любую из указанных выше меток, относящихся к трем широким категориям, можно конъюгировать с авидином, или наоборот. Биотин избирательно связывается с авидином и поэтому метку можно конъюгировать с антителом опосредованным путем. В альтернативном варианте для достижения опосредованной конъюгации метки с антителом антитело можно конъюгирововать с небольшим гаптеном (таким как дигоксин) и одну из различных типов указанных выше меток конъюгировать с антителом к гаптену (например, антителом к дигоксину). Таким путем можно осуществлять опосредованную конъюгацию метки с антителом.

35 14 125 3 131

Примерами радиоизотопных меток являются §, С, Ι, Н и Ι. Антитело можно метить радиоизотопом с помощью методик, описанных, например, в СиггеШ РюШетС ш Iттиηοίοду, т. 1 и 2, 1991, под ред. СеНдеп и др., изд-во ^ПеуЛйегешепсе, Νον ΥογΚ Ν.Υ., 1991. Радиоактивность можно измерять, например, с помощью сцинтилляционного счетчика.

Примерами флуоресцентных меток являются известные метки, полученные на основе хелатов редкоземельных металлов (хелаты европия), или метки на основе флуоресцеина и его производных, родамина и его производных, дансила, лиссамина, фикоэритрина и техасского красного. Флуоресцентные метки можно конъюгировать с антителом с помощью известных методик, например описанных в СиггеШ РгоЮ^1к ш Iттиηοίοду, выше. Флуоресценцию можно оценивать количественно с помощью флуориметра.

В данной области известны различные хорошо охарактеризованные фермент-субстратные метки (см., например, обзор, приведенный в И8 №4275149). Фермент, как правило, катализирует химическое изменение хромогенного субстрата, которое можно оценивать с помощью различных методик. Например, изменение может представлять собой изменение цвета субстрата, которое можно оценивать спектрофотометрически. В другом варианте фермент может изменять флуоресценцию или хемилюминисценцию субстрата. Методики количественной оценки изменения флуоресценции описаны выше. В результате химической реакции в хемилюминесцентном субстрате возникает электронно-возбуждённое состояние, вследствие чего он может испускать свет, который можно оценивать, например, с помощью хемилюминометра, или он является донором энергии для флуоресцентного акцептора.

- 38 030436

Примерами ферментативных меток являются люциферазы, такие как люцифераза светляка и бактериальная люцифераза (И8 №4737456), люциферин, 2,3-дигидрофталазиндионы, малатдегидрогеназа, уреаза, пероксидаза, например пероксидаза из хрена (НКР0), щелочная фосфатаза, β-галактозидаза, глюкоамилаза, лизоцим, оксидазы сахаридов (такие как оксидаза глюкозы, оксидаза галактозы и глюкозо-6фосфатдегидрогеназа), оксидазы гетероциклических соединений (такие как уриказа и оксидаза ксантина), лактопероксидаза, микропероксидаза и т.п. Методики конъюгации ферментов с антителами описаны, например, у 0'8иШуаи и др., Ме11ю<к £ог Не Ргерагайои о£ Еп/утс-АпПЬоДу Соп)ида1ек £ог ике ίη Еп/утс 1ттипоаккау, в: Ме11ю<к ίη Еп/ут., под ред. ί. Ьапдопе и Н. Уап УипаИк, изд-во Асайетю Ргекк, КУ., 73, 1981, сс. 147-166.

Примерами комбинаций фермент-субстрат являются, например: пероксидаза из хрена (НКР0) и гидрогенпероксидаза в качестве субстрата, при этом гидрогенпероксидаза окисляет красительпредшественник, такой как ортофенилендиамин (0РЭ) или гидрохлорид 3,3',5,5'-тетраметилбензидина (ТМВ); щелочная фосфатаза (АР) и пара-нитрофенилфосфонат в качестве хромогенного субстрата; и βΌ-галактозидаза (β-Ό-ΟηΙ) и хромогенный субстрат, такой, например, как пара-нитрофенил-β-Όгалактозидаза, или флуорегенный субстрат, такой как 4-метилумбеллиферил^-Э-галактозидаза.

Специалистам в данной области известны многочисленные другие комбинации фермент-субстрат. Общий обзор представлен, например, в И8 № 4275149 и И8 № 4318980.

Гуманизированное антитело к 1Ь-23р19 можно применять в немеченом виде и выявляют с помощью меченого антитела, связанного с гуманизированным антителом к 1Ь-23р19.

Антитела можно применять в любом известном методе анализа, таком как анализы связывания в условиях конкуренции, прямые и косвенные сэндвич-анализы и анализы на основе иммунопреципитации (см., например, 2о1а, Мопос1опа1 АпИЪоФек: А Мапиа1 о£ ТесЬтдиек, изд-во СКС Ргекк, 1пс., 1987, сс. 147158).

Антитело к 1Ь-23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент можно применять для ингибирования связывания 1Ь-23 с рецептором 1Ь-23. Указанные методы заключаются в том, что вводят антитело к 1Ь23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент в клетку (например, клетку млекопитающего) или окружающую клетку среду, тем самым ингибируя передачу сигналов, опосредуемую рецептором 1Ь-23. Эти методы можно осуществлять ш νίΙΐΌ или ш νί\Ό. Под "окружающей клетку средой" подразумевается ткань, среда или внеклеточный матрикс, окружающий клетку. Антитело к 1Ь-23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в окружающую клетку среду таким образом, что антитело или его фрагмент обладает способностью связываться с молекулами 1Ь-23 вне клеточного окружения или в клеточном окружении, тем самым препятствуя связыванию 1Ь-23 с его рецептором.

Диагностические наборы.

Можно применять гуманизированное антитело к 1Ь-23р19, входящее в состав диагностического набора, представляющего собой упаковку, которая содержит комбинацию реагентов, взятых в предварительно определенных количествах, в сочетании с инструкциями по осуществлению диагностического анализа. Если антитело мечено ферментом, то набор может включать необходимые для фермента субстраты и кофакторы, такие как субстрат-предшественник, образующий выявляемый хромофор или флуорофор. Кроме того, можно включать другие добавки, такие как стабилизаторы и буферы (например, блокирующий буфер или лизирующий буфер) и т.п. Относительные количества различных реагентов могут варьироваться в широких пределах, обеспечивая концентрации реагентов в растворе, которые в значительной степени оптимизируют чувствительность анализа. Реагенты могут представлять собой сухие порошки, как правило, лиофилизированные, включая эксципиенты, которые при растворении должны образовывать раствор реагента, имеющий соответствующую концентрацию.

Терапевтическое применение.

Гуманизированное антитело к 1Ь-23р19 можно применять для лечения различных нарушений, ассоциированных с экспрессией 1Ь-23р19, которые указаны в настоящем описании. Методы лечения ассоциированного с 1Ь-23 нарушения заключаются в том, что вводят в терапевтически эффективном количестве гуманизированное антитело к 1Ь-23р19 индивидууму, который нуждается в этом.

Гуманизированное антитело или агент к 1Ь-23р19 вводят любыми приемлемыми путями, включая парентеральный, подкожный, внутрибрюшинный, внутрилегочный и интраназальный пути введения и, если требуется местное иммуносупрессорное лечение, путем введения в пораженную область (включая перфузию или другой путь обеспечения контакта трансплантата с антителом перед трансплантацией). Гуманизированное антитело и агент к 1Ь-23р19 можно вводить, например, с помощью инфузии или болюса. Парентеральные инфузии включают внутримышечное, внутривенное, внутриартриальное, внутрибрюшинное или подкожное введение. Кроме того, гуманизированное антитело к 1Ь-23р19 можно вводить путем пульсирующей инфузии, прежде всего с использованием понижающих доз антитела. Дозирование осуществляют путем инъекций, наиболее предпочтительно внутривенных или подкожных инъекций, в том числе в зависимости от того является ли обработка кратковременной или пролонгированной.

Для предупреждения или лечения заболевания соответствующая доза антитела должна зависеть от ряда факторов, таких как тип заболевания, подлежащего лечению, серьезность и процесс течения заболе- 39 030436

вания, вводят ли антитело для профилактических или терапевтических целей, предшествующая терапия, история болезни пациента и ответ на антитело, а также от предписания лечащего врача. Антитело можно вводить пациенту однократно или путем серий обработок.

В зависимости от типа и серьезности заболевания пациенту можно сначала вводить примерно от 1 мкг/кг до 20 мг/кг (например, 0,1-15 мг/кг) антитела в виде начальной предполагаемой дозы, путем, например, посредством одного или нескольких введений или путем непрерывной инфузии. Как правило, суточная доза должна составлять от примерно 1 мкг/кг до 100 мг/кг или более в зависимости от указанных выше факторов. Для повторных введений в течение нескольких дней или более продолжительного периода времени, в зависимости от состояния, лечение продолжают до требуемого подавления имеющихся симптомов заболевания. Однако можно применять другие схемы введения доз. Успех указанной терапии легко оценивать общепринятыми методами и анализами. Пример схемы введения доз представлен в А0 94/04188.

В контексте настоящего описания понятие "подавление" имеет такое же значение, что и понятия "облегчение" и "купирование", и относится к ослаблению одной или нескольких характеристик заболевания.

Композицию антитела можно включать в препаративную форму, дозировать и вводить в соответствии с надлежащей клинической практикой. Важные в этом плане факторы включают конкретное нарушение, подлежащее лечению, конкретное млекопитающее, подлежащее лечению, клиническое состояние индивидуального пациента, причину нарушения, область введения агента, метод введения, схему введения и другие факторы, известные практикующим медикам. В этой связи "терапевтически эффективное количество" антитела, подлежащего введению, регулируют таким образом, чтобы оно представляло собой минимальное количество, необходимое для предупреждения, облегчения или лечения нарушения, ассоциированного с экспрессией ГО-23.

Антитело необязательно, но в определенных случаях, включают в препаративную форму в сочетании с одним или несколькими средствами, применяемыми в настоящее время для предупреждения или лечения рассматриваемого нарушения. Эффективное количество указанных других средств зависит от количества гуманизированного антитела к ΙΕ-23ρ19, присутствующего в препаративной форме, типа нарушения или лечения и других указанных выше факторов. Их, как правило, применяют в таких же дозах и с использованием таких же путей введения, в которых их применяли ранее, или с использованием в дозе, составляющей примерно от 1 до 99% от их принятых для применения доз.

Ассоциированные с ГО-23 нарушения.

Антитела или агенты к ΙΕ-23ρ19 можно применять для лечения или предупреждения иммунологического нарушения, характеризующегося аномальной экспрессией ГО-23, например несоответствующей активацией иммунных клеток (например, лимфоцитов или дендритных клеток). Указанная аномальная экспрессия ГО-23 может быть связана, например, с повышенными уровнями белка ГО-23. Антитела к ГО23ρ19 или их антигенсвязывающие фрагменты могут найти также применение для лечения или предупреждения респираторных нарушений, метаболических нарушений, например сахарного диабета, и определенных типов рака. Лечение или предупреждение иммунологического нарушения, респираторного нарушения, метаболического нарушения или рака с использованием способов, указанных в настоящем описании, осуществляют путем введения индивидууму, который нуждается в таком лечении или предупреждении, в эффективном количестве антитело или агент к ΙΕ-23ρ19, при этом антитело уменьшает активность ГО-23, ассоциированную с болезненным состоянием.

Иммунологические заболевания, которые отличаются несоответствующей активацией иммунных клеток и которые можно лечить или предупреждать с помощью способов, предлагаемых в настоящем описании, можно классифицировать, например, по типу(ам) реакции(ий) гиперчувствительности, которая(ые) лежит(ат) в основе нарушения. Эти реакции, как правило, разделяют на 4 типа: анафилактические реакции, цитотоксические (цитолитические) реакции, иммунные комплексные реакции или реакции клеточно-опосредованного иммунитета (СМ1) (которые обозначают также как реакции замедленной гиперчувствительности (ΌΊΉ) (см., например, Рип4атейа1 Ιιηιηιιηοίοβν. под ред. АППат Ε. Раи1, изд-во Ρανοη Рге88, КУ., 3-е изд., 1993). Иммунологические заболевания включают воспалительные заболевания и аутоиммунные заболевания.

Конкретными примерами указанных иммунологических заболеваний являются: ревматоидный артрит, аутоиммунные демиелинизирующие заболевания (например, рассеянный склероз, аллергический энцефаломиелит), эндокринная офтальмопания, увеоретинит, системная красная волчанка, тяжелая псевдопаралитическая миастения, болезнь Грейвса, гломерулонефрит, аутоиммунное гепатологическое нарушение, воспалительное заболевание кишечника (например, болезнь Крона или неспецифический язвенный колит), анафилаксия, аллергическая реакция, синдром Шегрена, сахарный диабет типа Ι, первичный билиарный цирроз, грануломатоз Вегенера, фибромиалгия, полимиозит, дерматомиозит, воспалительный миозит, множественная эндокринная недостаточность, синдром Шмидта, аутоиммунный увеит, болезнь Аддисона, воспаление надпочечника, тиреоидит, тиреоидит Хашимото, аутоиммунное заболевание щитовидной железы, пернициозная анемия, атрофия желудка, хронический гепатит, волчаночный гепатит, атеросклероз, подострая кожная красная волчанка, гипопаратиреоидзм, синдром Дресслера, ау- 40 030436

тоиммунная тромбоцитопения, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, гемолитическая анемия, пузырчатка обыкновенная, пузырчатка, дерматит герпетиформный, гнездная алопеция, пемфигоид, склеродерма, прогрессирующий системный склероз, СКЕ§Т-синдром (кальциноз, болезнь Рейно, эзофагит (нарушение моторики пищевода), склеродактилия и телеангиоэктазия), мужское и женское аутоиммунное бесплодие, анкилозирующий спондилит, неспецифический язвенный колит, смешанная соединительнотканная болезнь, нодозный полиартериит, системный некротизирующий васкулит, атопический дерматит, атопический ринит, синдром Гудпасчера, болезнь Шагаса, саркоидоз, ревматическая атака, астма, привычный выкидыш, антифосфолипидный синдром, экзогенный аллергический альвеолит, полиформная эритема, посткардиотомический синдром, синдром Кушинга, аутоиммунный хронический активный гепатит, аллергия птицеловов, токсический эпидермальный некролиз, синдром Альпорта, альвеолит, аллергический альвеолит, фиброзный альвеолит, интерстициальное заболевание легких, узловатая эритема, гангренозная пиодермия, реакция на трансфузию, артерит Такаясу, ревматическая полимиалгия, преходящий артерит, шистосомоз, гингантоклеточный артерит, аскариоз, аспергиллез, синдром Самптера, экзема, лимфоматоидный грануломотоз, болезнь Бехчета, синдром Каплана, болезнь Кавасаки, лихорадка Денге, энцефаломиелит, эндокардит, эндомиокардиальный фиброз, эндофтальмит, стойкая возвышающаяся эритема, псориаз, псориатический артрит, эритробластоз плода, эозинофильный фасциит, синдром Шульмана, синдром Фелти, филариоз, циклит, хронический циклит, гетерохронический циклит, циклит Фукса, 1дА-нефропатия, пурпура Геноха-Шенлейна, реакция "трансплантат-противхозяина", отторжение трансплантата, кардиомиапатия, синдром Итона-Лэмберта, рецидивирующий полихондрит, криоглобулинемия, макроглобулемия Вальденстрема, синдром Эванса, острый респираторный дистресс-синдром, воспаление легких, остоеопороз, реакция замедленной гиперчувствительности и аутоиммунная гонадная дисфункция.

Иммунологическое нарушение представляет собой опосредуемое Т-клетками иммунологическое нарушение и, таким образом, антитела или агенты к Ш-23р19 можно применять также для лечения или предупреждения опосредуемых Т-клетками иммунологических нарушений.

Антитела или агенты к Ш-23р19 можно применять для лечения или предупреждения респираторного нарушения, при котором происходит аномальная экспрессия Ш-23. Лечение или предупреждение респираторного нарушения с использованием способов, указанных в настоящем описании, осуществляют путем введения индивидууму, который нуждается в таком лечении или предупреждении, в эффективном количестве антитело или агент к Ш-23р19, при этом антитело уменьшает активность Ш-23, ассоциированную с болезненным состоянием. Они включают (но, не ограничиваясь только ими): жалобы, связанные с респираторной функцией, обструктивные легочные заболевания различного происхождения, эмфизему легких различного происхождения, облитерирующие легочные заболевания, интерстициальные пульмональные заболевания, интерстициальную болезнь легких, муковисцидоз, бронхиты различного происхождения, бронхоэктаз, РДСВ (респираторный дистрес-синдром взрослых) и все формы легочного отека; обструктивные легочные заболевания, выбранные из ХОЗЛ (хроническое обструктивное заболевание легких), астму, бронхиальную астму, педиатрическую астму, серьезную астму, острые приступы астмы и хронический бронхит; эмфизему легких, происхождение которой связано с ХОЗЛ (хроническое обструктивное заболевание легких) или с дефицитом ингибитора а1-протеиназы; облитерирующие легочные заболевания, выбранные из аллергического альвеолита, облитерирующих легочных заболеваний, которые инициируются работой с вредными токсичными веществами, таких как асбестоз или силикоз, и облитерации, связанной с опухолями легких, такими как карциноматозный лимфагиоз, бронхоальвеолярная карцинома и лимфомы; пневмонию, вызванную инфекциями, такими, например, как инфекция, связанная с вирусами, бактериями, грибами, простейшими, гельминтами или другими патогенами, пневмонит, вызываемый различными факторами, такими, например, как аспирация и левожелудочковая сердечная недостаточность, индуцированный облучением пневмонит или фиброз, коллагеноз, такой, например, как красная волчанка, системная склеродема или саркоидоз, грануломатоз, такой, например, как болезнь Бека, идиопатическая интерстициальная пневмония или идиопатический пневмосклероз (ИПФ); муковисцидоз, бронхит, вызванный бактериальной или вирусной инфекцией, аллергический бронхит и токсический бронхит; бронхоэктаз; отек легких, например, токсический отек легких после аспирации или ингаляции токсических субстанций и чужеродных субстанций; ринит, артрит и родственные артропатии, псориаз, миелоидный лейкоз, рассеянный склероз, болезнь Альцгеймера, гломерулонефрит и хронический атопический дерматит.

Антитела или агенты к Ш-23р19 можно применять также для лечения различных типов рака, при которых происходит аномальная экспрессия Ш-23.

Типы рака, при которых происходит экспрессия Ш-23, которые можно лечить с помощью способов, предлагаемых в настоящем описании, включают, например, лейкоз, например, острый лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, острый миелоцитарный лейкоз (например, миелобластный, промиелоцитарный, миеломоноцитарный, моноцитарный лейкоз или эритролейкоз), хронический лейкоз, хронический миелоцитарный (гранулоцитарный) лейкоз или хронический лимфоцитарный лейкоз; истинную полицитемию; лимфому (например, болезнь Ходжкина или неходжкинскую лимфому); множественную миелому, макроглобулинемию Вальденстрема; болезнь тяжелых цепей; плотные (солидные) опухоли, такие как

- 41 030436

саркомы и карциномы (например, фибросаркома, миксосаркома, липосаркома, хондросаркома, остеогенная саркома, остеосаркома, хордома, ангиосаркома, эндотелиосаркома, лимфангиосаркома, лимфангиоэндотелиосаркома, синовиома, мезотелиома, опухоль Юинга, лейомиосаркома, рабдомиосаркома, карцинома ободочной кишки, колоректальная карцинома, рак поджелудочной железы, рак молочной железы, рак яичника, рак предстательной железы, плоскоклеточная карцинома, базальноклеточная карцинома, аденокарцинома, карцинома потовой железы, карцинома сальной железы, папиллярная карцинома, папиллярные аденокарциномы, цистаденокарцинома, медуллярная карцинома, бронхогенная карцинома, почечноклеточная карцинома, гепатома, карцинома желчного протока, хориокарцинома, семинома, эмбриональная карцинома, опухоль Вильмса, рак шейки матки, рак матки, рак яичка, карцинома легкого, мелкоклеточная карцинома легкого, немелкоклеточная карцинома легкого, карцинома мочевого пузыря, эпителиальная карцинома, глиома, астроцитома, медуллобластома, краниофарингиома, эпендимома, пинеалома, гемангиобластома, невринома слухового нерва, олигодендроглиома, менингиома, маланома, нейробластома, ретинобластома, назофаренгиальная карцинома или эзофагеальная карцинома).

Фармацевтические композиции и их введение.

Композицию, содержащую Ю^р^-связывающий агент (например, антитело к !Ы-23р19), можно вводить индивидууму, который страдает или имеет риск развития иммунологического нарушения, респираторного нарушения или рака. Ю^р^-связывающий агент (например, антитело к [Ы-23р19) применяют для получения лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения рака, респираторного нарушения или иммунологического нарушения. Понятие "индивидуум" в контексте настоящего описания означает любого больного млекопитающего, которому можно вводить ГЬ-23р19связывающий агент, включая, например, человека и млекопитающих кроме человека, таких как приматы, грызуны и собаки. С использованием способов, представленных в настоящем описании, можно лечить, в частности людей. Антитела или агенты можно вводить индивидуально или в сочетании с другими композициями для профилактики или лечения иммунологического нарушения, респираторного нарушения или рака. Такие композиции, которые можно применять в сочетании с антителами или агентами, включают метотрексат (МТХ) и иммуномодуляторы, например антитела или малые молекулы.

Известны различные системы введения и их можно использовать для введения ГЬ-23р19связывающего агента. Методы интродукции включают (но не ограничиваются толь ими) внутрикожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный, подкожный, интраназальный, эпидуральный и оральный пути. ГЬ-23р19-связывающий агент можно вводить, например, путем инфузии, в виде болюса или инъекции, и его можно вводить вместе с другими биологически активными средствами, такими как химиотерапевтические средства. Введение может быть системным или местным. Введение может представлять собой подкожную инъекцию. Препаративные формы для таких инъекций можно приготавливать, например, в виде предварительно заполненных шприцев, и их можно применять с недельным интервалом.

Ю^р^-связывающий агент можно водить с помощью инъекции, с помощью катетера, с помощью суппозитория или с помощью имплантата, где имплантат состоит из пористого, непористого или гелеобразного материала, включая мембрану, такую как мембрана из силастика, или волокно. Как правило, при введении композиции используют вещества, которые не абсорбируют антитело или агент к ГЬ-23р19.

Антитело или агент к ГЬ-23р19 можно вводить с помощью системы с контролируемым высвобождением. Можно использовать насос (см. например, Ьапдег, 8с1епсе 249, 1990, сс. 1527-1533; 8ейоп, СКС СгЪ. Ке£. Вюп^. Епд. 14, 1989, с 201; ВисЬтаШ и др., 8игдегу 88, 1980, с. 507; 8аЮек и др., Ν. Епд1. I. Меά., 321, 1989, с 574). Можно использовать полимерные материалы (см., например, Меά^са1 Аррйсайопк о£ Соп1го1^ Ке1еаке, под ред. Ьапдег и ^1ке, изд-во СКС Ргекк, Воса Ка1оп, Р1о^^άа, 1974); Сопйо1^ Эгид ВюауайаЪййу, Эгид Р^оάисΐ Эейдп ηπά РегТогтапсе, под ред. 8то1еп и Ва11, изд-во ^йеу, №\ν Уогк, 1984); Капдег и Реррак, Масгото1. 8ск Кеу. Масгото1. СЬет. 23, 1983, с 61; см. также Ьеуу и др., 8аепсе 228, 1985, с. 190; Этюд и др., Апп. №иго1. 25, 1989, с. 351; ^теаМ и др., I. №игокигд. 81, 1989, с. 105). У Ьапдег, выше, обсуждены другие системы с контролируемым высвобождением.

ГЬ-23р19-связывающий агент (например, антитело к ГЬ-23р19) можно вводить в виде фармацевтических композиций, содержащих в терапевтически эффективном количестве связывающий агент и один или несколько фармацевтически совместимых ингредиентов.

Фармацевтическую композицию приготавливают согласно общепринятым процедурам с получением фармацевтической композиции, пригодной для внутривенного или подкожного введения человеку. Как правило, композиции для введения путем инъекции представляют собой растворы в стерильном изотоническом водном буфере. При необходимости фармацевтическое средство может содержать также солюбилизирующий агент и местный анестетик, такой как липокаин, для снятия боли в месте инъекции. Как правило, ингредиенты поставляются либо по отдельности, либо их смешивают с получением стандартной дозы лекарственного средства, например, в виде сухого лиофилизованного порошка или не содержащего воду концентрата в герметично закрытом контейнере, таком как ампула или саше, с указанием количества действующего вещества. В тех случаях, когда фармацевтическое средство предназначено для введения путем инфузии, то его можно разливать по бутылям для инфузий, содержащим стерильную воду или физиологический раствор фармацевтической степени чистоты. В тех случаях, когда фармацев- 42 030436

тическое средство вводят с помощью инъекции, то можно использовать ампулу со стерильной водой для инъекций или физиологическим раствором для того, чтобы ингредиенты можно было перемешивать перед введением.

Кроме того, фармацевтическую композицию можно включать в фармацевтический набор, который содержит (а) контейнер с 1Ь-23р19-связывающим агентом (например, антителом к 1Ь-23р19) в лиофилизованной форме и (б) второй контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый разбавитель (например, стерильную воду) для инъекций. Фармацевтически приемлемый разбавитель можно использовать для восстановления или разведения лиофилизованного антитела или агента к 1Ь-23р19. Необязательно к указанному(ым) контейнеру(ам) может прилагаться уведомление в форме, утвержденной официальным агентством, разрешающим производство, применение или продажу фармацевтических препаратов или биологических продуктов, где в уведомлении отражено разрешение агентства на производство, применение или продажу с целью введения людям.

Количество 1Ь-23р19-связывающего агента (например, антитела к 1Ь-23р19), которое является эффективным для лечения или профилактики иммунологического нарушения или рака, можно определять обычными методами клинических исследований. Кроме того, необязательно можно использовать анализы ίη У11го. результаты которых могут способствовать определению оптимальных пределов доз. Точная доза для применения в препаративной форме должна зависеть также от пути введения и стадии развития иммунологического нарушения или рака, и она должна приниматься на основе рекомендаций лечащего врача и обстоятельств, характерных для каждого пациента. Эффективные дозы можно определять путем экстраполяции на основе кривых дозовой зависимости, полученных по результатам опытов ίη νίίΐΌ или на модельных тест-системах с использованием животных.

Как правило, доза антитела к 1Ь-23р19 или 1Ь-23р19-связывающего агента, которую вводят пациенту с иммунологическим нарушением или с раком, для которого характерна экспрессия 1Ь-23р19, составляет примерно от 0,1 до примерно 100 мг/кг веса тела индивидуума. Доза, вводимая индивидууму, составляет от примерно 0,1 до примерно 50 мг/кг, от примерно 1 до примерно 30 мг/кг, от примерно 1 до примерно 20 мг/кг, от примерно 1 до примерно 15 мг/кг или от примерно 1 до примерно 10 мг/кг веса тела индивидуума.

Примерами доз являются (но не ограничиваются только ими) дозы, составляющие от 1 нг/кг до 100 мг/кг. Иногда доза составляет примерно 0,5, примерно 1, примерно 2, примерно 3, примерно 4, примерно 5, примерно 6, примерно 7, примерно 8, примерно 9, примерно 10, примерно 11, примерно 12, примерно 13, примерно 14, примерно 15 или примерно 16 мг/кг. Дозу можно вводить, например, каждый день, раз в неделю (каждую неделю), два раза в неделю, три раза в неделю, четыре раза в неделю, пять раз в неделю, шесть раз в неделю, раз в две недели или ежемесячно, каждые два месяца или каждые три месяца. В конкретных вариантах осуществления изобретения доза составляет примерно 0,5 мг/кг/неделю, примерно 1 мг/кг/неделю, примерно 2 мг/кг/неделю, примерно 3 мг/кг/неделю, примерно 4 мг/кг/неделю, примерно 5 мг/кг/неделю, примерно 6 мг/кг/неделю, примерно 7 мг/кг/неделю, примерно 8 мг/кг/неделю, примерно 9 мг/кг/неделю, примерно 10 мг/кг/неделю, примерно 11 мг/кг/неделю, примерно 12 мг/кг/неделю, примерно 13 мг/кг/неделю, примерно 14 мг/кг/неделю, примерно 15 мг/кг/неделю или примерно 16 мг/кг/неделю. Пределы доз составляют от примерно 1 мг/кг/неделю до примерно 15 мг/кг/неделю.

Фармацевтические композиции, содержащие 1Ь-23р19-связывающий агент, могут дополнительно включать терапевтическое средство, конъюгированное или неконъютированное со связывающим агентом. Антитело к 1Ь-23р19 или 1Ь-23р19-связывающий агент можно вводить совместно с одним или несколькими терапевтическими средствами, применяемыми для лечения или профилактики иммунологических нарушений или рака.

Такая комбинированная терапия может область аддитивным или синергетическим действием в отношении признаков заболевания (например, тяжести проявления симптома, количества симптомов или частоты рецидивов).

При применении схем лечения при комбинированном введении антитело к 1Ь-23р19 или 1Ь-23р19связывающий агент вводят одновременно с терапевтическим средством. Терапевтическое средство также можно вводить до или после введения антитела к 1Ь-23р19 или 1Ь-23р19-связывающего агента, по меньшей мере, в течение периода времени, составляющего от 1 ч до нескольких месяцев, например в течение по меньшей мере 1, 5, 12 ч, одних суток, недели, месяца или трех месяцев до или после введения антитела к 1Ь-23р19 или 1Ь-23р19-связывающего агента.

Изделия.

Изделие, как правило, включает контейнер и этикетку. Приемлемыми контейнерами являются, например, бутыли, флаконы, шприцы и лабораторные пробирки. Контейнеры могут быть изготовлены из различных материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер содержит композицию, которая является эффективной для лечения конкретного состояния, и может иметь стерильный порт доступа. Например, контейнер может представлять собой мешок или флакон для внутривенного раствора, имеющий запирающее устройство, проницаемое для инъекционной иглы для подкожного введения. Действующее вещество в композиции представляет собой гуманизированное антитело к 1Ь-23р19. На этикетке на кон- 43 030436

тейнере или связанной с ним указывается, что композиция используется для лечения выбранного состояния. Изделие может дополнительно включать второй контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и раствор дектрозы. Он может дополнительно включать другие вещества, присутствие которых желательно с коммерческой и потребительской точки зрения, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы, шприцы и вкладыши в упаковку с инструкциями по применению.

Изобретение описано ниже с помощью представленных примеров, которые не направлены на ограничение объема изобретения.

Примеры

Пример 1. Получение гуманизированных антител к 1Ь-23р19.

Мышиное "лидерное" антитело 6В8 превращали в химерное антитело, состоящее из вариабельного домена мышиного 6В8 и константного домена человеческого 1дО1 КО. Мышиное антитело 6В8 представлено выше в табл. 1 и 2. 1дО1КО (кпоек ои1, выключение) несет две заместительные мутации (трансверсии) (Ьеи234А1а и Ьеи235А1а), которые элиминируют АОСС- и СОС-активность путем снижения эффекторных функций, таких как связывание с РеуК и комплементом. Вариабельные домены мышиных и химерных антител являются идентичными. Химерные антитела создавали для подтверждения функции антитела и для гарантии того, что получена правильная последовательность. Затем вариабельную область антитела гуманизировали посредством конструирования и процесса скрининга. Получали библиотеку, в которой человеческие и мышиные остатки варьировали таким образом, чтобы в любом конкретном положении мог находиться либо человеческий, либо мышиный остаток. Указанную библиотеку создавали для тех аминокислотных остатков, которые были различными у человеческой зародышевой линии и мышиного антитела. Отбирали только те клоны, у которых сохранялась функция родительского мышиного антитела. Репрезентативные гуманизированные вариабельные области антитела 6В 8 представлены в табл. 5 и 6.

Таким образом, Антитело А, Антитело В, Антитело С и Антитело Ό представляли собой гуманизированные антитела, выведенные из мышиного антитела 6В8 (клонированного в каркасе человеческого 1дО1-КО (КО - сокращение кпоек-ои1;)/каппа). Антитела А, В, С и Ό представлены в табл. 7.

Пример 2. Связывание антител с рекомбинантным белком ΙΙ.-23.

А) Данные о кинетике и аффинности связывания мышиных антител к 1Ь-23р19 с рекомбинантным человеческим II .-23 представлены ниже (табл. 9). Кинетические характеристики и аффинность связывания оценивали на основе технологии Рог1еЬю Ое1е1 (фирма РойеЬю, Менло-Парк, шт. Калифорния), используя материал, полученный из гибридомы, после одной очистки на колонке. Поскольку Ое1е1 не представляет собой технологию на основе жидкостей, то этот метод не позволяет точно определять скорость диссоциации. В некоторых случаях удавалось оценивать только аффинность.

_ Таблица 9

Антитело	ка(1/Мс)	ка(1/с)	Ко(пМ)
18С4	3,84Е+05	2,14Е-06	5,57
18Е 5	3,29Е+05	2,61Е-06	7,93
18Ό3	ЗД9Е+05	2,16Е-06	6,78
20 Е8	4,21Е+05	2,69Е-04	638
22 Е2	3,46Е+05	3,53Е-04	1024
24А5	2,02Е+05	4,57Е-06	22,6
15С11	4Д1Е+05	1,07Е-05	26
43Р5	1,72Е+05	5,96Е-06	34,6
2708	1,57Е+05	4,26Е-06	27,2
31Н9	2,99Е+05	3,45Е-06	П,5
2Ό1		< 1Е-6	< 1
9Ό12		< 1Е-6	< 1
6В8		< 1Е-6	< 1
73Н10	5,29Е+04	5,24Е-06	99,2
74НЗ	3,06Е+04	2,09Е-06	68,3
35Н8
26Р7	4,76Е+05	1,34Е-05	28,1
3403	9Д8Е+05	ЗД0Е-05	32,8
34ϋ9	3,44Е+03	1,87Е-06	544

Б) Оценивали аффинность гуманизированных антител, выведенных из мышиного антитела 6В8. Данные о кинетике связывания, измеренные с помощью устройства Рго1еОХ ХРК36 (фирма Вюгай, Геркулес, шт. Калифорния) и глобальной аппроксимации на основе модели связывания 1:1, продемонстрировали, что взаимодействия между рекомбинантным II .-23, который либо содержал состоящий из 21 аминокислот линкер, ковалентно связанный с субъединицами р19 и р40, либо не содержал указанный

- 44 030436

линкер, характеризовались высокой аффинность в диапазоне 1 ~ 100 пМ (табл. 10). Тестировали также Антитело 6Н12 (описанное в АО 2007/027714), антитело РР20 (описанное в АО 2007/024846) и антитело С1273 (описанное в АО 2007/005955).

_ Таблица 10

Антитело	Человеческий ГО-23 с линкером	Человеческий ГО-23 без линкера
ка (1/Мс)	кс (1/с)	Ко (пМ)	ка (1/Мс)	ка(1/с)	К и (пМ)
Мышиное 6В8				5,57Е+05	Ц38Е-05	24,5
Антитело А	6,27Е+05	< 1Е-6	< 1	5,51Е+05	< 1Е-6	< 1
Антитело В	3,56Е+05	< 1Е-6	< 1	5Д7Е+05	< 1Е-6	< 1
Антитело С	3,74Е+05	1Д9Е-05	31,8	4,54Е+05	Ε65Ε-05	36,3
Антитело ϋ	3,82Е+05	4,07Е-05	107	3,66Е+05	4,93Е-05	135
С-1273				3,60Е+05	5,75Е-06	15,8
6Н12				4,99Е+05	1,07Е-04	214
ЦР20				2,03Е+05	5,89Е-06	2,91

В) Аффинность и кинетические характеристики связывания антител к П,-23р19 с ГО-23 обезьяны циномолгус измеряли с помощью устройства Рго1еО\ ХРК36 и глобальной аппроксимации на основе модели связывания 1:1 (табл. 11). Тестировали также Антитело 6Н12 (описанное в АО 2007/027714), антитело РР20 (описанное в АО 2007/024846) и антитело С1273 (описанное в АО 2007/005955).

_ Таблица 11

Антитело	Ко (пМ)	ка(1/Мс)	ка (1/с)
Антитело А	< 1	2,95Е+06	< 1Е-6
Антитело В	< 1	2,99Е+06	< 1Е-6
Антитело С	2,9	3,23Е+06	9,36Е-06
Антитело ϋ	15,9	2,07Е+06	3,29Е-05
С-1273	>5000	п/а	п/а
6Н12	157	9,91Е+05	1,56Е-04
ЦР20	1,2	3,90Е+06	4,78Е-06

Г) Селективность на молекулярном уровне в отношении человеческого 1Ь-12.

Антитела к П,-23р19 инъецировали также на поверхность человеческого ГО-12 в концентрации 100 нМ. Сигнал связывания указанных антител, измеренный с использованием технологии Рог1еЫо Ос1е1, равнялся нулю, что свидетельствует о том, что эти антитела избирательность связываются с человеческим 1Ь-23. Связывание антител к 1Ь-23р19 с 1Ь-23 анализировали также в присутствии 50% человеческой сыворотки и обнаруженное отсутствие существенного воздействия сыворотки на скорость ассоциации, демонстрирует высокую специфичность.

Пример 3. Анализ связывания в конкурентных условиях человеческого ГО-23, связывающегося с человеческим 1Ь-23К/Рс.

Человеческий ГО-23К-Рс иммобилизовали на поверхности биосенсора и инъецировали 10 нМ человеческий ГО-23. Сенсограммы свидетельствовали о специфическом связывании между ГО-23 и рецептором ГО-23 (фиг. 2, верхний чертеж). Затем антитела совместно инъецировали с 10 нМ человеческим ГО-23 для решения вопроса о том, может ли связывание антитела с ГО-23 ингибировать взаимодействие между ГО-23 и рецептором ГО-23. В этом примере было установлено, что, если антитело связывается с человеческим ГО-23 и обладает способностью ингибировать взаимодействие, то имеет место пониженное связывание или отсутствие связывания (фиг. 2, нижний график). В этом примере Антитело А, которое применяли в эквивалентной молярной концентрации, инъецировали совместно с 10 нМ рекомбинантным человеческим ГО-23.

Пример 4. Функциональные клеточные анализы, ингибирование производства ГО-17 в стимулированных ГО-23 мышиных спленоцитах.

Один из функциональных клеточных анализов антител к ГО-23р19 позволял измерять способность ингибировать стимулированное ГО-23 производство ГО-17 в мононуклеарных клетках, выделенных из селезенки мышей. Человеческий рекомбинантный белок ГО-23 обладает способностью стимулировать высвобождение ГО-17 из мышиных спленоцитов. Кроме того, для стимуляции производства ГО-17 в мышиных мононуклеарных клетках можно применять встречающийся в естественных условиях источник человеческого ГО-23, обнаруженный в супернатанте активированных человеческих моноцитарных ТНР- 45 030436

1-клеток.

Человеческий рекомбинантный 1Ь-23 или встречающийся в естественных условиях 1Ь-23 из активированных ТНР-1-клеток предварительно инкубировали с титрованными антителами к 1Ь-23р19. Затем комбинации ΙΙ.-23/антитело добавляли к свежевыделенным мышиным спленоцитам. Образец, в который входил только рекомбинантный ΙΙ.-23, применяли в качестве положительного контроля. После культивирования в течение 2 дней клеточные супернатанты собирали и анализировали в отношении ΙΙ.-17 с помощью ЕЫ8А (фирма Κ&Ό 8у§1еш§, Миннеаполис, шт. Миннесота). Ниже приведены репрезентативные величины 1С₅о для антител к 1Ь-23р19. Изученные антитела представляли собой мышиные антитела, выведенные из гибридом (строки 1-19, см. табл. 1 и 2), химерные антитела (строки 20-23) и Антитела Α-Ό. Тестировали также Антитело 6Н12 (описанное в АО 2007/027714), антитело ΡΡ20 (описанное в АО 2007/024846) и антитело С1273 (описанное в АО 2007/005955).

_ Таблица 12

Антитело	Величины ΙΟ50 (пМ), рекомбинантный человеческий ΙΕ-23	Величины 1С50 (пМ), встречающийся в естественных условиях человеческий ΙΕ-23
18С4	471	100, 413
18Е5	не определяли	9, 9, 13
18Ό3	234	не определяли
20Е8	не определяли	438, 561
22Е2	61, 130	117, 35
24А5	22, 37	85, 31
15С11	126	232
43Р5	250, 8000	8000
2708	235	5000
31Н9	960	2000
2Ό1	не определяли	2336, 1911, 1597
9Ό12	59	281, 138
6В8	13	8, 2
73Н10	1411	не определяли
74НЗ	1352	не определяли
36Н8	не определяли	не определяли
26Р7	27	2, 8
3403	336	27, 25
34Ό9	510	456
химерное 18Е5	31	8, 36, 10, 9
химерное 22Е2	100	9, 178
химерное 24А5	404	95, 102
химерное 6В8	26, 37, 57	5, 2, 6, 3
Антитело А	5, 5, 5, 15	Р 1
Антитело В	13, 30, 54, 42	9, 8
Антитело С	53, 71, 162, 89	16, 32
Антитело ϋ	236, 225, 614, 458	133, 125
6Н12	1600, 806, 1300	957, 4400, 1013, 439
ОР20	не определяли	7, 12
С1273	не определяли	93, 44

Пример 5. Определение функциональной специфичности в отношении 1Ь-12 с помощью анализа в человеческих активированных Т-клетках.

Тестировали антитела к И,-23р19 в отношении функционального ингибирования ΙΙ.-12 с помощью анализа в человеческих активированных Т-клетках. Человеческий рекомбинантный ΙΙ.-12 (1 нг/мл) предварительно инкубировали с антителами к И,-23р19 в концентрации 5 мкг/мл. Затем добавляли комбинацию ΙΡ-12/антитело к полученным с использованием ФГА (фитогемагглютинина) бластным Т-клеткам. Образец, содержащий только рекомбинантный И,-12, применяли в качестве положительного контроля. Антитело к П,-12р70 (фирма Вепйег Мей8у§1еш8, Вена, Австрия) применяли в качестве контрольного ингибирующего антитела. После культивирования в течение 2 дней клеточные супернатанты собирали и анализировали в отношении ΙΡΝ-γ с помощью ΕΡΙ8Α (фирма Κ&Ό 8у§1еш§). Образцы оценивали в трех повторностях и определяли средний уровень ΙΡΝ-γ. Результаты (с указанием стандартных отклонений)

- 46 030436

приведены ниже в таблице.

Таблица 13

Антитело	Стимуляция цитокина	Средний уровень (пг/мл) ΙΡΝ-γ ± стандартное отклонение
антитело отсутствует	нет	87 ± 7
антитело отсутствует	1 нг/мл Ш-12	532 ± 51
химерное 18Е5	1 нг/мл Ш-12	511 ± 3
химерное 6В8	1 нг/мл Ш-12	523 ± 60
Антитело А	1 нг/мл Ш-12	497 ±30
Антитело В	1 нг/мл Ш-12	537 ± 2
Антитело С	1 нг/мл Ш-12	495 ± 25
Антитело ϋ	1 нг/мл Ш-12	539 ± 38
антитело к Ш-12р70	1 нг/мл Ш-12	119 ± 12

Пример 6. Ингибирование индуцируемого ΙΕ-23 фосфорилирования δΤΑΤ3 на человеческой клеточной линии ΌΒ.

Человеческая клеточная линия ΌΒ (АТСС, Манасас, шт. Виргиния) отвечает на стимуляцию Ш-23 с помощью эндогенного комплекса ΙΕ-23Ρ (ΙΕ-23Ρ и ΙΕ-12ΡΡ1) и в ней происходит фосфорилирование δΤΑΤ3 в зависимости от дозы ΙΕ-23. Осуществляли анализ для оценки ингибирования антителом к ΙΕ23ρ19 индуцируемого ΙΕ-23 фосфорилирования δΤΑΤ3. ΌΒ-клетки высевали из расчета 1х10Е6 клеток/лунку в 96-луночный планшет. Подлежащие тестированию антитела серийно разводили и предварительно инкубировали с рекомбинантным человеческим ΙΕ-23 (10 нг/мл) в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем к клетками добавляли смесь антитело/I^-23 в течение 30 мин при 37°С. Клетки собирали центрифугированием при 4°С в течение 10 мин и затем лизировали в охлажденном на льду буфере (фирма Се11 81§па1шд ТесЬпо1оду, Беверли, шт. Массачусетс). Часть лизата использовали для анализа с помощью ΕΟδΑ, предназначенного для оценки фосфо^ТАТ3 (фирма ΙηνΐΒΌ^η). Величины Ι0₀ для антител рассчитывали в виде процента ингибирования фосфорилирования δΤΑΤ3 по сравнению с контрольными лунками без антитела. Репрезентативные величины ΙΟ₀ приведены ниже в таблице.

Таблица 14

Антитело	1С50 (пМ)
Антитело А	25, 15, 38, 23, 13, 18
Антитело В	73, 84
Антитело С	132, 80
Антитело ϋ	158
ζ)Ρ20	26, 26, 27
С-1273	163,438

Пример 7. Модель ΐη νίνο индуцируемого Ш-23 производства цитокинов в ухе мышей.

Применяли созданную на мышах модель ΐη νίνο. Рекомбинантный человеческий ΙΕ-23 инъецировали в кожу уха мышей в течение 4 последовательных дней, что приводило к эпидермальному утолщению и повышающей регуляции белков Ш-17 и Ш-22. На этой модели оценивали антитела к ΙΕ-23ρ19. Осуществляли одну внутрибрюшинную инъекцию антитела в дозе 1 или 5 мг/кг за 1 ч до начала введения Ш-23 в кожу. Рекомбинантный человеческий Ш-23 (с линкером) инъецировали один раз в день в течение 3 дополнительных дней, и образцы ткани получали для оценки цитокинов. Продемонстрировано, что антитела ингибировали производство цитокинов. Ниже в таблице представлены результаты трех экспериментов (пример 1: строки 1-7, пример 2: строки 8-10, пример 3: строки 11-14).

Таблица 15

	Ткань уха, ΙΕ17 пг/мл среднее значение ± СКО	Ткань уха, процент ингибирования ГО-17	Ткань уха, ГО22 пг/мл среднее значение ± СКО	Ткань уха, процент ингибирования ГО-22
0,1% БСА + цитратный буфер ί.ρ. (нестиму лированный контроль)	3 ± 1	ΝΑ	1 ± 0	ΝΑ
0,3 мкг ГО-23 + цитратный буфер ί.ρ. (наполнитель в качестве контроля)	25 ± 3	ΝΑ	274 ± 30	ΝΑ

- 47 030436

0,3 мкг Ш-23 + 1 мг/кг Антитела 6В8	7 ± 2	81	57 ± 19	80
0,3 мкг Ш-23 + 1 мг/кг Антитела А	2 ± 1	101	17 ± 3	94
0,3 мкг Ш-23 + 1 мг/кг Антитела В	5 ± 1	93	30 ± 2	89
0,3 мкг Ш-23 + 1 мг/кг Антитела С	11 ± 1	66	108 ± 12	61
0,3 мкг Ш-23 + 1 мг/кг Антитела □	10 ± 1	67	151 ± 12	45
0,1% БСА + наполнитель (нестиму лированный контроль)	14 ± 1	ΝΑ	1 ± 1	ΝΑ
0,3 мкг 1Ь-23 + наполнитель	31 ± 4	ΝΑ	129 ± 29	ΝΑ
0,3 мкг Ш-23 + 5 мг/кг 24А5	14 ± 1	102	10 ± 5	93
0,1% БСА + т1§С (нестиму лированный контроль)	17 ± 1	ΝΑ	4 ± 1	ΝΑ
0,3 мкг Ш-23 + т1дС (наполнитель в качестве контроля)	30 ± 2	ΝΑ	208 ± 40	ΝΑ
0,3 мкг Ш-23 + 5 мг/кг 24А5	16 ± 0	109	28 ± 5	88
0,3 мкг Ш-23 + 5 мг/кг 18Е5	21 ± 2	70	53 ± 41	80

Пример 8. Фармакокинетические исследования на обезьянах циномолгус.

Гуманизированные антитела к ГЕ-23р19 вводили путем десятиминутной внутривенной инфузии в дозе 1,0 мг/кг трем обезьянам циномолгус. Образцы сыворотки получали в течение 6-недельного периода и концентрации свободных антител оценивали с помощью специфического ЕЫ8А. Профили зависимости концентрации в сыворотке от времени для антител и соответствующие фармакокинетические параметры обобщены ниже в табл. 16.

Таблица 16

Антитело	СЬ (мл/д/кг)	Объем (мл/кг)	лис (нМ»ч/мл)	Тι/г (дни)	МКТ (дни)
Антитело А	5,2	88	32262	12,1	17,2
Антитело В	6,0	87	27030	10,1	14,8
Антитело С	4,7	91	34642	14,1	19,6
Антитело Ό	3,4	67	47633	12,6	19,8

Пример 9. Экспрессия в ΝδΟ-клетках и биофизические данные.

Трансфекция ΝδΟ-клеток и получение стабильных пулов.

ΝδΟ-клетки выращивали в присутствии 1% РΒδ перед трансфекцией. Собирали 40х10е6 клеток и ресуспендировали в 0,8 мл в средах, содержащих 2% РΒδ. с 20 мкг линеаризованной ДНК (экспрессионные векторы тяжелой цепи и легкой цепи) и затем клетки инкубировали на льду в течение примерно 15 мин перед электропорацией клеток при 750 В/25 мкФ (фирма Вю-Раб, устройство Сепе Ри1зег Хсе11). Клетки выделяли с помощью 2% РΒδ в течение примерно 48 ч при 37ν и 5% С0₂, затем высевали из расчета 2х10е5 клеток/мл в 96-луночные планшеты, содержащие С418 и микофеноловую кислоту, и выдерживали в течение 14-21 дня до формирования колоний.

Супернатанты из 96-луночных планшетов, содержащих колонии, подвергали скринингу с помощью ЕЬКА. Планшеты для ЕЬКА сенсибилизировали козьим антителом к каппа-цепи в концентрации 1 мкг/мл (фирма δο^Α™ В^есй, Бирмингем, шт. Алабама) в ЗФР и разведенный супернатант инкубировали и затем оценивали с помощью козьего антитела к человеческому ^С Рс-НРР (фирма ^аскзοη Ι+™тоРезеагсй ^аЬο^аίο^^ез. Вест-Гроув, шт. Пенсильвания). Дающие положительную реакцию колонии объединяли для размножения. Титры образовавшихся антител определяли с помощью устройства фирмы Рο^ίеΒ^ο. используя покрытые белком А насадки согласно протоколу производителя. Титры Антитела А и Антитела Ό составляли 250-350 мг/л, при этом регенерация белка после очистки составляла более 80% и обнаружено более 94% мономеров после очистки электродиализом и ионообменом (ГЕХ). Белки ресуспендировали в конечном буфере, содержащем 20мМ цитрат натрия и 115мМ №С1, рН 6,0, и они сохраняли стабильность при 4°С в течение по меньшей мере 4 месяцев, и их растворимость в указанном буфере составляла вплоть до 100 мг/мл.

- 48 030436

	Колонка с белком А	ΙΕΧ-колонка
Титр (мг/л)	Выход (мг/л)	Регенерация	Выход (мг/л)	Регенерация
Антитело А	345	275	80%	221	80%
Антитело ϋ	248	225	90%	175	78%

Таблица 17

Таблица 18

	Качество	Стабильность	Растворимость
	АУЦ,	ГФХ,	АУЦ 1	ГФХ 1	АУЦ 4	ГФХ 4	АУЦ при 100
	свежевыделенное	свежевыделенное	мес.	мес.	мес.	мес.	мг/мл (%М)
	/О/, АЛЛ у/υ±ν±у	/О/, АЛЛ у/υ±ν±у	/О/.АЛЛ у / υ±ν±у	/О/.АЛЛ у/υ±ν±у	/О/.АЛЛ у/υ±ν± у	/О/.АЛЛ у/υ±ν±у
Антитело А	98	99	97	99	96	99	99
Антитело ϋ	94	100	98	100	99	99	97

АУЦ: аналитическое центрифугирование, основанное на измерении скорости осаждения при концентрациях 0,5-1 мг/мл; ГФХ: гель-фильтрационная хроматография; %М: процент мономеров.

Пример 10. Эпитопное картирование.

Применяли масс-спектрометрию на основе водородно/дейтериевого обмена (НХМЗ) для картирования эпитопа Антитела А, связывающегося с человеческой субъединицей ГО-23р19. С помощью этого метода определяли чувствительность водородного амидного каркаса ГО-23р19 к обмену на Э₂О. Эксперимент проводили с использованием только ГО-23 и ГО-23 с добавлением Антитела А. Таким путем идентифицировали области в последовательности ГО-23р19, для которых установлена выраженная защита от обмена в результате связывания с Антителом А. Разрешение метода определяли по пептидам, образовавшимся при расщеплении пепсином или протеазой XVIII. Указанные выведенные из ГО-23р19 пептиды идентифицировали с помощью дополнительных контрольных экспериментов с образцами, в которых не осуществляли обмен, применяя стандартные точные методики определения массы и ЖХВР-МС/МС.

Применяли рекомбинантный человеческий ГО-23. В случае образца, содержащего белок + антитело, 50 мкл ГО-23 (0,8 мг/мл) инкубировали с 10 мкл Антитела А (12,7 мг/мл) в течение 15 мин при комнатной температуре. Конечное молярное соотношение Антитело А/ГО-23 составляло 1,2:1.

Для осуществления обмена 5 мкл белка ГО-23 добавляли к 50 мкл дейтерированного буфера (50мМ ЗФР в Э₂О) и инкубировали в течение 100 с при комнатной температуре. Добавляли 50 мкл 2М мочевины/0,5М ТСЕР и инкубировали в течение 60 с при комнатной температуре. Добавляли 5 мкл пепсина или протеазы XVIII (4 мг/мл в 0,1% муравьиной кислоты) и образец немедленно охлаждали до 4°С.

Через 5 мин 50 мкл образца инъецировали в ЖХВР-систему ЗЫтай7и (контролирующее устройство ЗСЙ10А и два РСГОАЭ-насоса) в следующих условиях.

Подвижная фаза А: 99/1/0,1 (вода/ацетонитрил/муравьиная кислота).

Подвижная фаза Б: 95/5/0,1 (ацетонитрил/вода/муравьиная кислота).

Скорость потока: 100 мкл/мин.

Колонка: Рйепотепех Шрйег С5, 5 мкм, 50х1,0 мм.

Линии подвижных фаз, колонка, петля инжектора находились в ледяных банях.

Градиент: момент времени 0 (3%Б), момент времени 2,2 (3%Б), момент времени 10,1 (90%Б), момент времени 12,0 (90%Б), момент времени 12,1 (3%Б).

Масс-спектрометрию осуществляли следующим образом: масс-спектрометр: Тйегто ОгЬйгар Vе1οз (0900865).

Методы.

А. Фрагментация (до ГО-пептидов): 12 мин - время захвата (3-минутная задержка на старте), полное сканирование на основе масс-спектрометрии с Фурье-преобразованием (РТМЗ) при разрешении 30000, семь сканированных изображений данных в зависимости от ионного захвата (СГО).

Б. МС-погоны: 12 мин - время захвата (3-минутная задержка на старте), полное сканирование на основе РТМЗ при разрешении 60000.

Пептиды, полученные после обработки пепсином и протеазой XVIII, идентифицировали с использованием данных о фрагментации и программы Рго1еоте ^^зсονе^е^ (фирма Тйегтозшепййс, Уолтем, шт. Массачусетс). Идентифицированные пептиды визуализировали путем сравнения (индивидуальный белок в сравнении с белком в присутствии антитела), используя программу ХсайЬиг (фирма Тйегтозшепййс). При осуществлении обмена вне ГО-23р19-области не обнаружено никаких существенных сдвигов при оценке ГО-23 индивидуально по сравнению с ГО-23 в присутствии Антитела А. Для р19-области белка

- 49 030436

данные анализировали с использованием программы РерМар (фирма ТЬегтокшепййс). Эта программа позволяет рассчитывать среднюю массу измененных пептидов. Проверяли результаты, полученные с помощью РерМар, и те пептиды, для которых не были получены подтвержденные результаты, рассчитывали с помощью Мкгокой Ехсе1.

Области последовательности 1Ь-23, для которых установлена выраженная защита от обмена в результате связывания с Антителом А, идентифицировали как содержащие аминокислотные остатки 108126 §ЕО ГО N0: 181 и аминокислотные остатки 137-151 §Е0 ГО N0: 181.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Бёрингер Ингельхайм Интернациональ ГмбХ

<120> АНТИТЕЛА К 1Ь-23р19 ИЛИ ИХ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ ФРАГМЕНТЫ, ИХ

ПРИМЕНЕНИЕ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЭТИ АНТИТЕЛА, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ВЫДЕЛЕННЫЕ ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ, ЭКСПРЕССИОННЫЕ ВЕКТОРЫ И КЛЕТКИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛ

<130> 09-0561

<150> 61/410,158

<151> 2010-11-04

<150> 61/411,953

<151> 2010-11-10

<150> 61/412,594

<151> 2010-11-11

<150> 61/448,785

<151> 2011-03-03

<160> 181

<17 0> ЕазЬ5Е12 для Μίηάον’δ, версия 4.0

<210> 1

<211> 11

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 1

Агд А1а Бег Οίη Бег 11е Бег О1и Туг Ьеи НЧз

1 5 10

<210> 2

<211> 7

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 2

Туг А1а Бег Ο1η Бег 11е Бег

1 5

<210> 3 <211> 9

<212> РКТ <213> Мышиная

<400> 3

- 50 030436

Οίη Азп О1у Нгз Зег	РЬе	Рго	РЬе	ТЬг
1	5
<210> 4 <211> 11 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 4 Агд А1а Зег Ο1η	Зег	11е	Зег	Азр	Туг	Ьеи	Туг
1	5					10
<210> 5 <211> 7 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 5 РНе А1а Зег Ο1η	Зег	11е	Зег
1	5
<210> 6 <211> 11 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 6 Агд А1а Зег Ο1η	Зег	11е	Зег	Уа1	Туг	Ьеи	Няз
1	5					10
<210> 7 <211> 11 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 7 Агд А1а Зег Ο1η	Зег	11е	Зег	Азр	Туг	Ьеи	Няз
1	5					10
<210> 8 <211> 16 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 8 Агд Зег Зег Ο1η	Зег	Ьеи	Уа1	Няз	Зег	Азп	О1у Азп ТЪг	Туг Ьеи Няз
1	5					10		15
<210> 9 <211> 7 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 9 Ьуз Уа1 Зег Азп	Агд	РЬе	Зег
1	5

- 51 030436

<210> 10 <211> 9 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 10

Зег О1п Зег ТЬг ΗΪ3	Уа1	Рго	Туг	ТЪг
1	5
<210> 11 <211> 15 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 11 Агд А1а Зег Ьуз	Зег	Уа1	Зег	ТЪг	Зег	О1у	Туг	Зег	Туг	11е	Ηΐ3
1	5					10					15
<210> 12 <211> 7 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 12 Ьеи А1а Зег Азп	Ьеи	Азр	Зег
1	5
<210> 13 <211> 9 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 13 О1п Ηΐ3 Зег Агд	О1и	Ьеи	Рго	Туг	ТЪг
1	5
<210> 14 <211> 9 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 14 О1п Азп О1у Ηΐ3	Зег	РЪе	Рго	Туг	ТЪг
1	5
<210> 15 <211> 15 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 15 Агд ТЪг Зег О1и	Зег	Уа1	Туг	Зег	Туг	О1у	О1п	Азп	РЪе	11е	Ηΐ3
1	5					10					15

<210> 16 <211> 7

- 52 030436

<212> РКТ <213> Мышиная

<400> 16

Агд А1а Зег Азп Ьеи	О1и	Зег
1	5
<210> 17 <211> 9 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 17 О1п О1п ТЬг Азп	О1и	Азр	Рго	Туг	ТЬг
1	5
<210> 18 <211> 15 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 18 Агд А1а Зег О1и	ТЬг	11е	Азп	РЬе	Туг	О1у	ТЬг Зег РЬе МеЬ Няз
1	5					10	15
<210> 19 <211> 11 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 19 Ьуз А1а Зег Агд	Азр	Уа1	А1а	11е	А1а	Уа1	А1а
1	5					10
<210> 20 <211> 7 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 20 Тгр А1а Зег ТЬг	Агд	Няз	ТЬг
1	5
<210> 21 <211> 9 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 21 Няз О1п Туг Зег	Зег	Туг	Рго	РЬе	ТЬг
1	5

<210> 22 <211> 11 <212> РКТ <213> Мышиная

- 53 030436

<400> 22

Агд А1а Бег О1и Азп	11е	Азр	Бег	Туг	Ьеи 10	А1а
1	5
<210> 23 <211> 7 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 23 А1а А1а Агд Азп	Ьеи	А1а	Азр
1	5
<210> 24 <211> 9 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 24 О1п Няз Туг Туг	Бег	ТЬг	Рго	РЬе	ТЬг
1	5
<210> 25 <211> 7 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 25 А1а А1а ТЬг Азп	Ьеи	А1а	Азр
1	5
<210> 26 <211> 9 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 26 Ьеи Няз Туг Туг	Бег	ТЬг	Рго	РЬе	ТЬг
1	5
<210> 27 <211> 15 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 27 Агд А1а Бег Ьуз	Бег	Уа1	Агд	РЬе	Бег	Азр	Туг РЬе Туг МеЕ	Няз
1	5					10		15
<210> 28 <211> 7 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 28 Ьеи А1а Бег Азп	Ьеи	О1и	Бег
1	5

- 54 030436

<210> 29

<211> 9

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 29

О1п Азп Зег Агд О1и	Ьеи	Рго	Туг	ТЬг
1	5
<210> 30 <211> 11 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 30 Ьуз А1а Зег О1п	Азр	Уа1	О1у	Азп	А1а	Уа1	Уа1
1	5					10
<210> 31 <211> 7 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 31 Тгр А1а Зег ТЬг	Агд	Ηΐ3	11е
1	5
<210> 32 <211> 8 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 32 О1п О1п Туг Зег	Зег	Туг	Ьеи	ТЬг
1	5
<210> 33 <211> 10 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 33 О1у Туг ТЬг РЬе	ТЬг	Зег	Зег	Уа1	11е	Ηΐ3
1	5					10
<210> 34 <211> 17 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 34 Туг 11е Азп Рго	Туг	Азп	Азр	О1у	ТЬг	Ьуз	Туг Азп О1и Ьуз	РЬе Ьуз
1	5					10		15

О1у

- 55 030436

<210> 35

<211> 6

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 35

Агд Ьеи Азр О1и А1а	Туг
1	5
<210> 36 <211> 10 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 36 О1у Туг ТЬг РЬе 1	ТЬг 5	Агд	Туг	Ьеи	11е	Няз 10
<210> 37 <211> 6 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 37 Азп Тгр Азр Ьеи 1	Азр 5	Туг
<210> 38 <211> 10 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 38 О1у Туг ТЬг РЬе 1	ТЬг 5	Зег	Зег	Уа1	Мек	Няз 10
<210> 39 <211> 17 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 39 Туг 11е Азп Рго 1 О1у	Туг 5	Азп	Азр	О1у	ТЬг	О1п Туг Азп О1и Ьуз 10	РЬе Ьуз 15
<210> 40 <211> 10 <212> РКТ <213> Мышиная
<400> 40 О1у Туг ТЬг РЬе 1	ТЬг 5	Зег	Зег	11е	11е	Няз 10

- 56 030436

<210> 41

<211> 17

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 41

Туг 11е Азп Рго 1 О1у

Туг 5

Азр Азр

Уа1

ТЪг

Ьуз 10

Туг

Азп

О1и

Ьуз

РЪе 15

Ьуз

<210> 42 <211> 6 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 42 Агд Тгр Азр О1и

Зег

Туг

1

5

<210> 43 <211> 10 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 43 О1у Туг ТЪг РЪе

ТЪг

ТЪг

Зег

11е

МеЬ

Ηΐ3

1

5

10

<210> 44 <211> 6 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 44 Агд Тгр Азр О1и

А1а

Туг

1

5

<210> 45 <211> 10 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 45 О1у Туг ТЪг РЪе

ТЪг

Азр

Туг

Туг

МеЬ

Азп

1

5

10

<210> 46 <211> 17 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 46 Уа1 11е 11е Рго

Туг

Азп

О1у

О1у

ТЪг

Зег

Туг

Азп

О1п

Ьуз

РЪе

Ьуз

1

5

10

15

О1у

- 57 030436

<210> 47

<211> 9

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 47

Азр О1у Нгз Агд Тгр

Туг

РЪе

Азр

Уа1

1

5

<210> 48 <211> 10 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 48 О1у Туг Зег РЪе 1

ТЪг 5

О1у

Туг

Туг

МеЬ

Азп 10

<210> 49 <211> 17 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 49 О1и 11е 11е Рго 1 А1а

ТЪг 5

ТЪг

О1у

О1у

ТЪг

Зег 10

Туг

Азп

Ο1η

Ьуз

РЪе 15

Ьуз

<210> 50 <211> 11 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 50 О1и Зег О1у О1у 1

РЪе 5

Туг

Тгр

Туг

РЪе

Азр 10

Уа1

<210> 51 <211> 10 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 51 О1у Туг ТЪг РЪе 1

ТЪг 5

Азр

Н1з

ТЪг

11е

Н1з 10

<210> 52 <211> 17 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 52 Туг 11е Туг Рго 1

Агд 5

Азр

О1у

Туг

Рго

Ьуз 10

РЪе

Азп

О1и

Ьуз

РЪе 15

Ьуз

О1у

- 58 030436

<210> 53

<211> 9

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 53

Агд Рго Рго Туг Туг А1а МеЬ

Азр

Туг

1

5

<210> 54 <211> 10 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 54 О1у Туг ТЪг РЪе 1

ТЪг 5

Агд

Туг

Ьеи

МеЬ

Ηΐ3 10

<210> 55 <211> 17 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 55 Туг 11е Азп Рго 1 О1у

Туг 5

Азп

Азр

О1у

ТЪг

Азп 10

Туг

Азп

О1и

Ьуз

РЪе 15

Ьуз

<210> 56 <211> 6 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 56 Азп Тгр Азр Туг 1

А1а 5

Туг

<210> 57 <211> 10 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 57 О1у РЪе Зег Ьеи 1

ТЪг 5

ТЪг

Туг

А1а

11е

Зег 10

<210> 58 <211> 16 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 58 Уа1 11е Тгр ТЪг 1

О1у 5

О1у

О1у

ТЪг

Ьуз

Туг 10

Азп

Зег

А1а

Ьеи

Ьуз 15

Зег

- 59 030436

<210> 59

<211> 11

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 59

Ьуз Азр Туг Азп Туг

О1у

О1у

А1а

Меб

Азр 10

Туг

1

5

<210> 60 <211> 10 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 60 О1у РЬе Бег Ьеи

Азп

Азп

РЬе

А1а

11е

Бег

1

5

10

<210> 61 <211> 16 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 61 А1а 11е Тгр ТЬг

О1у

О1у

О1у

ТЬг

Азп

Туг

Азп

Бег

А1а

Ьеи

Ьуз

Бег

1

5

10

15

<210> 62 <211> 11 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 62 Ьуз Азр Туг Бег

Туг

О1у

О1у

А1а

Меб

Азр

Туг

1

5

10

<210> 63 <211> 10 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 63 О1у Азп ТЬг РЬе

ТЬг

Азр

Ο1η

ТЬг

11е

Н1з

1

5

10

<210> 64 <211> 17 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 64 Туг 11е Туг Рго

Агд

Азр

Азр

Бег

Рго

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Азп

РЬе

Ьуз

1

5

10

15

О1у

- 60 030436

<210> 65

<211> 11

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 65

Рго Азр Агд Зег О1у Туг А1а Тгр РЬе 11е Туг 1 5 10

<210> 66

<211> 10

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 66

О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр О1п ТЬг 11е Няз 1 5 10

<210> 67

<211> 10

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 67

О1у РЬе ТЬг РЬе ТЬг Азр О1п ТЬг 11е Няз 1 5 10

<210> 68

<211> 10

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 68

О1у О1у ТЬг РЬе ТЬг Азр О1п ТЬг 11е Няз 1 5 10

<210> 69

<211> 10

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 69

О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Агд Туг Уа1 МеГ Няз 1 5 10

<210> 70 <211> 17 <212> РКТ <213> Мышиная

- 61 030436

<400> 70

Туг 11е Азп Рго 1 О1у

Туг 5

Азп

Азр

Уа1

ТЪг

Ьуз 10

Туг

Азп

О1и

Ьуз

РЪе 15

Ьуз

<210>

71

<211>

6

<212>

РКТ

<213>

Мышиная

<400>

71

Азп Тгр Азр Уа1

Рго

Туг

1

5

<210>

72

<211>

17

<212>

РКТ

<213>

Мышиная

<400>

72

Туг 11е Азп Рго

Туг

Азп

Азр

О1у

ТЪг

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Агд

РЪе

Ьуз

1

5

10

15

О1у

<210>

73

<211>

17

<212>

РКТ

<213>

Мышиная

<400>

73

Уа1 11е 11е Рго

Туг

Азп

О1у

О1у

11е

Зег

Туг

Азп

О1п

Ьуз

РЪе

Ьуз

1

5

10

15

О1у

<210>

74

<211>

9

<212>

РКТ

<213>

Мышиная

<400>

74

Азп Азр Туг Азр

Тгр

Туг

РЪе

Азр

Уа1

1

5

<210>

75

<211>

17

<212>

РКТ

<213>

Мышиная

<400>

75

Азр РЪе Азп Ηΐ8

Азп

Азп

Азр

Уа1

11е

ТЪг

Туг

Азп

Рго

Ьуз

РЪе

Ьуз

1

5

10

15

О1у

- 62 030436

<210> 76

<211> 10

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 76

О1у Ьеи Агд О1у Туг

Туг

А1а

МеЕ

Азр

Туг 10

1

5

<210> 77 <211> 10 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 77 О1у Туг Бег РЬе 1

ТЬг 5

Азр

Туг

Азп

МеЕ

Азп 10

<210> 78 <211> 17 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 78 Уа1 11е 11е Рго 1 О1у

Азп 5

Туг

О1у

РЬе

ТЬг

Бег 10

Туг

Азп

О1п

Азп

РЬе 15

Ьуз

<210> 79 <211> 11 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 79 Азр О1у О1у 11е 1

Ьеи 5

Ьеи

Тгр

Туг

Ьеи

Азр 10

Уа1

<210> 80 <211> 10 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 80 О1у Туг ТЬг РЬе 1

ТЬг 5

Азр

Туг

Азп

МеЕ

Азр 10

<210> 81 <211> 17 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 81 Азр 11е Азп Рго 1

НФз 5

Азп

О1у

О1у

ТЬг

11е 10

Туг

Азп

О1п

Ьуз

РЬе 15

Ьуз

О1у

- 63 030436

<210> 82

<211> 13

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 82

Азп Туг Туг О1у Зег Зег Туг О1у Тгр Туг РЬе Азр Уа1

1 5 10

<210> 83

<211> 333

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 83

дасаЕЕдЕдс ЕдасссааЕс ЕссаддЕЕсЕ ЕЕддсЕдЕдЕ сЕсЕадддса дадддссасс 60

аЕаЕссЕдса даассадЕда аадЕдЕЕЕаЕ адЕЕаЕддсс ааааЕЕЕЕаЕ асасЕддЕас 120

садсадааас саддасадсс асссааасЕс сЕсаЕсЕаЕс дЕдсаЕссаа ссЕддааЕсЕ 180

дддаЕсссЕд ссаддЕЕсад ЕддсадЕддд ЕсЕаддасад асЕЕсасссЕ сассаЕдааЕ 240

ссЕдЕддадд сЕдаЕдаЕдЕ ЕдсаассЕаЕ ЕасЕдЕсадс ааасЕааЕда ддаЕссдЕас 300

асдЕЕсддад дддддассаа дсЕддаааЕа ада 333

<210> 84

<211> 111

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 84

Азр 1

11е

Уа1

Ьеи

ТЬг 5

О1п

Зег

Рго

О1у

Зег 10

Ьеи

А1а

Уа1

Зег

Ьеи 15

О1у

О1п

Агд

А1а

ТЬг

11е

Зег

Суз

Агд

ТЬг

Зег

О1и

Зег

Уа1

Туг

Зег

Туг

20

25

30

О1у

О1п

Азп

РЬе

11е

НФз

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Рго

О1у

О1п

Рго

Рго

35

40

45

Ьуз

Ьеи

Ьеи

11е

Туг

Агд

А1а

Зег

Азп

Ьеи

О1и

Зег

О1у

11е

Рго

А1а

50

55

60

Агд

РЬе

Зег

О1у

Зег

О1у

Зег

Агд

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

МеЕ

Азп

65

70

75

80

Рго

Уа1

О1и

А1а

Азр

Азр

Уа1

А1а

ТЬг

Туг

Туг

Суз

О1п

О1п

ТЬг

Азп

85

90

95

О1и

Азр

Рго

Туг

ТЬг

РЬе

О1у

О1у

О1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Агд

100

105

110

<210> 85

<211> 321

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 85

дасаЕЕдЕда ЕдасссадЕс ЕсасаааЕЕс ЕЕдЕссасаЕ садЕдддада садддЕсасс 60

аЕсасЕЕдса аддссадЕсд ддаЕдЕддсЕ аЕЕдсЕдЕад ссЕддЕаЕса асадааасса 120

дддсааЕсЕс сЕааасЕасЕ ЕсЕЕЕЕсЕдд дсаЕссассс дасасасЕдд ддЕсссЕдаЕ 180

сдсЕЕсасад дсадЕддаЕс ЕсддасадаЕ ЕЕсасЕсЕса ссаЕЕадсаа ЕдЕдсадЕсЕ 240

даадасЕЕдд садаЕЕаЕЕЕ сЕдЕсассаа ЕаЕадсадсЕ аЕссаЕЕсас дЕЕсддсЕсд 300

дддасааадЕ ЕддаааЕааа д 321

<210> 86 <211> 107 <212> РКТ

- 64 030436

<213> Мышиная

<400> 86

Азр

11е

Уа1

Мек

ТЬг

О1п

Зег

Н1з

Ьуз

РЬе

Ьеи

Зег

ТЬг

Зег

Уа1

О1у

1

5

10

15

Азр

Агд

Уа1

ТЬг

11е

ТЬг

Суз

Ьуз

А1а

Зег

Агд

Азр

Уа1

А1а

11е

А1а

20

25

30

Уа1

А1а

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Рго

О1у

О1п

Зег

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

Ьеи

35

40

45

РЬе

Тгр

А1а

Зег

ТЬг

Агд

Н1з

ТЬг

О1у

Уа1

Рго

Азр

Агд

РЬе

ТЬг

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

Агд

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

11е

Зег

Азп

Уа1

О1п

Зег

65

70

75

80

О1и

Азр

Ьеи

А1а

Азр

Туг

РЬе

Суз

Н1з

О1п

Туг

Зег

Зег

Туг

Рго

РЬе

85

90

95

ТЬг

РЬе

О1у

Зег

О1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100 105

<210> 87

<211> 333

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 87

дасаккдсдс кдасссаакс кссадсккск ккддскдкдк скскддддса дадддссасс 60

акаксскдса дадссадкда ааскаккаак ккккакддса скадккккак дсаскддкас 120

садсадааас саддасадкс асссаааскс сксакскакс дкдсакссаа сскадаакск 180

дддакссскд ссаддкксад кддсадкддд кскаддасад аскксассск сассаккаак 240

сскдкддадд скдакдакдк кдсаасскак каскдксадс аааскаакда ддакссдкас 300

асдкксддад дддддаскаа дккддааака ааа 333

<210> 88

<211> 111

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 88

Азр 1

11е А1а

Ьеи

ТЬг 5

О1п

Зег

Рго

А1а

Зег 10

Ьеи А1а Уа1

Зег

Ьеи 15

О1у

О1п

Агд

А1а

ТЬг

11е

Зег

Суз

Агд

А1а

Зег

О1и

ТЬг

11е

Азп

РЬе

Туг

20

25

30

О1у

ТЬг

Зег

РЬе

Мек

Н1з

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Рго

О1у

О1п

Зег

Рго

35

40

45

Ьуз

Ьеи

Ьеи

11е

Туг

Агд

А1а

Зег

Азп

Ьеи

О1и

Зег

О1у

11е

Рго

А1а

50

55

60

Агд

РЬе

Зег

О1у

Зег

О1у

Зег

Агд

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

11е

Азп

65

70

75

80

Рго

Уа1

О1и

А1а

Азр

Азр

Уа1

А1а

ТЬг

Туг

Туг

Суз

О1п

О1п

ТЬг

Азп

85

90

95

О1и

Азр

Рго

Туг

ТЬг

РЬе

О1у

О1у

О1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100 105 110

<210> 89

<211> 336

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 89

дакдккдкда кдасссааас кссасксксс скдсскдкса дксккддада ксаадссксс 60

аксксккдса дакскадкса дадссккдка сасадкаакд дааасасска кккасаккдд 120

касскдсада адссаддсса дкскссааад сксскдакск асааадкккс саассдаккк 180

- 65 030436

ЕсЕддддЕсс садасаддЕЕ садЕддсадЕ ддаЕсаддда аасададЕдд аддсЕдадда ЕсЕдддадЕЕ ЕаЕЕЕсЕдсЕ ЕасасдЕЕсд даддддддас ссадсЕддаа аЕаааа

садаЕЕЕсас асЕсаадаЕс 240 сЕсааадЕас асаЕдЕЕссд 300

336

<210> 90 <211> 112 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 90

Азр

Уа1

Уа1

МеЕ

ТЬг

С1п

ТЬг

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Рго

Уа1

Зег

Ьеи

О1у

1

5

10

15

Азр

О1п

А1а

Зег

11е

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

О1п

Зег

Ьеи

Уа1

Няз

Зег

20

25

30

Азп

О1у

Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

Няз

Тгр

Туг

Ьеи

О1п

Ьуз

Рго

О1у

О1п

Зег

35

40

45

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

11е

Туг

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

О1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

О1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

11е

65

70

75

80

Азп

Агд

Уа1

О1и

А1а

О1и

Азр

Ьеи

С1у

Уа1

Туг

РЬе

Суз

Зег

О1п

Зег

85

90

95

ТЬг

Няз

Уа1

Рго

Туг

ТЬг

РЬе

С1у

С1у

О1у

ТЬг

О1п

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

110

<210> 91 <211> 107 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 91

Азр

11е

Уа1

МеЕ

ТЬг

О1п

Зег

Рго

А1а

ТЬг

Ьеи

Зег

Уа1

ТЬг

Рго

О1у

1

5

10

15

Азр

Агд

Уа1

Зег

Ьеи

Зег

Суз

Агд

А1а

Зег

О1п

Зег

11е

Зег

Азр

Туг

20

25

30

Ьеи

Няз

Тгр

Туг

О1п

О1п

Агд

Зег

Няз

О1и

Зег

Рго

Агд

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Ьуз

Туг

А1а

Зег

О1п

Зег

11е

Зег

О1у

11е

Рго

Зег

Агд

РЬе

Зег

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

О1у

Зег

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

11е

Азп

Зег

Уа1

О1и

Рго

65

70

75

80

О1и

Азр

Уа1

О1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

О1п

Азп

О1у

Няз

Зег

РЬе

Рго

РЬе

85

90

95

ТЬг

РЬе

О1у

Зег

О1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

<210> 92 <211> 321 <212> ДНК <213> Мышиная

<400> 92

дасаЕЕдЕда

сЕЕЕссЕдса

саЕдадЕсЕс

аддЕЕсасЕд

даЕдаЕдЕЕд

дддассаадс

ЕдасЕсадЕс

дддссадЕса

сааддсЕЕсЕ

дсадЕддаЕс

дадЕсЕЕЕЕЕ

ЕддаааЕааа

Ессадссасс

дадЕаЕЕадс

саЕсаааЕЕЕ

адддЕсадаЕ

сЕдЕсааааЕ

а

сЕдЕсЕдЕда

дасЕасЕЕаЕ

дсЕЕсссааЕ

ЕЕсасЕсЕса

ддЕсасадсЕ

сЕссаддада

асЕддЕаЕса

ссаЕсЕсЕдд

дЕаЕсдасад

ЕЕссдЕЕсас

ЕададЕсЕсЕ 60 асаааааЕса 120 даЕссссЕсс 180 ЕдЕддаассЕ 240 дЕЕсддаддд 300

321

<210> 93 <211> 107

66

030436

<212> РКТ <213> Мышиная

<400> 93

Азр

11е

Уа1

МеЕ

ТЬг

О1п

Зег

Рго

А1а

ТЬг

Ьеи

Зег

Уа1

ТЬг

Рго

О1у

1

5

10

15

Азр

Агд

Уа1

Зег

Ьеи

Зег

Суз

Агд

А1а

Зег

О1п

Зег

11е

Зег

Азр

Туг

20

25

30

Ьеи

Туг

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Зег

Няз

О1и

Зег

Рго

Агд

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Ьуз

РЬе

А1а

Зег

О1п

Зег

11е

Зег

О1у

11е

Рго

Зег

Агд

РЬе

ТЬг

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

О1у

Зег

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Зег

11е

Азр

Зег

Уа1

О1и

Рго

65

70

75

80

Азр

Азр

Уа1

О1у

Уа1

РЬе

РЬе

Суз

О1п

Азп

О1у

Няз

Зег

РЬе

Рго

РЬе

85

90

95

ТЬг

РЬе

О1у

О1у

О1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

<210> 94 <211> 321 <212> ДНК <213> Мышиная

<400> 94

дасаЕЕдЕда

сЕЕЕссЕдса

саГдадГсГс

аддЕЕсадЕд

даадаЕдЕЕд

дддасааадЕ

ЕдасЕсадЕс

дддссадсса

сааддсЕЕсЕ

дсадЕддаЕс

дадЕдЕаЕЕа

ЕддаааЕааа

Ессадссасс

дадЕаЕЕадс

саЕсаааЕаЕ

адддЕсадаЕ

сЕдЕсааааЕ

а

сЕдЕсЕдЕда

дадЕасЕЕас

дсЕЕсссааЕ

ЕЕсасЕсЕса

ддЕсасадсЕ

сЕссаддада

асЕддЕаЕса

ссаЕсЕсЕдд

дЕаЕсаасад

ЕЕссаЕЕсас

ЕададЕсЕсЕ 60 асаааааЕса 120 даЕссссЕсс 180 ЕдЕддаассЕ 240 дЕЕсддсЕсд 300

321

<210> 95 <211> 107 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 95

Азр

11е

Уа1

МеЕ

ТЬг

О1п

Зег

Рго

А1а

ТЬг

Ьеи

Зег

Уа1

ТЬг

Рго

О1у

1

5

10

15

Азр

Агд

Уа1

Зег

Ьеи

Зег

Суз

Агд

А1а

Зег

О1п

Зег

11е

Зег

О1и

Туг

20

25

30

Ьеи

Няз

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Зег

Няз

О1и

Зег

Рго

Агд

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Ьуз

Туг

А1а

Зег

О1п

Зег

11е

Зег

О1у

11е

Рго

Зег

Агд

РЬе

Зег

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

О1у

Зег

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Зег

11е

Азп

Зег

Уа1

О1и

Рго

65

70

75

80

О1и

Азр

Уа1

О1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

О1п

Азп

О1у

Няз

Зег

РЬе

Рго

РЬе

85

90

95

ТЬг

РЬе

О1у

Зег

О1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

<210> 96 <211> 321 <212> ДНК <213> Мышиная

<400> 96

дасаЕЕдЕда ЕдасЕсадЕс Ессадссасс сЕдЕсЕдЕда сЕссаддада ЕададЕсЕсЕ 60 сЕЕЕссЕдса дддссадсса дадЕаЕЕадс дасЕасЕЕаЕ асЕддЕаЕса асаааааЕса 120

- 67 030436

сакдадкскс сааддсккск саксаааккк дскксссаак ссакскскдд дакссссксс 180

аддкксаскд дсадкддакс адддксадак кксаскскса дкаксдасад кдкддаасск 240

дакдакдккд дадксккккк скдксаааак ддксасадск ккссдкксас дкксддаддд 300

дддассаадс кддааакааа а 321

<210> 97

<211> 107

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 97

Азр 1

11е

Уа1

Мек

ТЬг 5

О1п

Зег

Рго

А1а

ТЬг 10

Ьеи

Зег

Уа1

ТЬг

Рго 15

О1у

Азр

Агд

Уа1

Зег

Ьеи

Зег

Суз

Агд

А1а

Зег

О1п

Зег

11е

Зег

Азр

Туг

20

25

30

Ьеи

Туг

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Зег

Няз

О1и

Зег

Рго

Агд

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Ьуз

РЬе

А1а

Зег

О1п

Зег

11е

Зег

О1у

11е

Рго

Зег

Агд

РЬе

ТЬг

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

О1у

Зег

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Зег

11е

Азр

Зег

Уа1

О1и

Рго

65

70

75

80

Азр

Азр

Уа1

О1у

Уа1

РЬе

РЬе

Суз

О1п

Азп

О1у

Няз

Зег

РЬе

Рго

РЬе

85

90

95

ТЬг

РЬе

О1у

О1у

О1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

<210> 98

<211> 321

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 98

дасаккдкда кдасксадкс кссадссасс скдкскдкда скссаддада кададкскск 60

сккксскдса дддссадсса дадкаккадс дадкакккас аскддкакса асааааакса 120

сакдадкскс сааддсккск саксааакак дскксссаак ссакскскдд дакссссксс 180

аддкксадкд дсадкддакс адддксадак кксаскскса дкаксаасад кдкддаасск 240

даадакдккд дадкккакка скдксаааак ддксасадск ккссакксас дкксддсксд 300

дддасааадк кддааакааа а 321

<210> 99

<211> 107

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 99

Азр 1

11е

Уа1

Мек

ТЬг 5

О1п

Зег

Рго

А1а

ТЬг 10

Ьеи

Зег

Уа1

ТЬг

Рго 15

О1у

Азр

Агд

Уа1

Зег

Ьеи

Зег

Суз

Агд

А1а

Зег

О1п

Зег

11е

Зег

О1и

Туг

20

25

30

Ьеи

Няз

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Зег

Няз

О1и

Зег

Рго

Агд

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Ьуз

Туг

А1а

Зег

О1п

Зег

11е

Зег

О1у

11е

Рго

Зег

Агд

РЬе

Зег

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

О1у

Зег

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Зег

11е

Азп

Зег

Уа1

О1и

Рго

65

70

75

80

О1и

Азр

Уа1

О1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

О1п

Азп

О1у

Няз

Зег

РЬе

Рго

РЬе

85

90

95

ТЬг

РЬе

О1у

Зег

О1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

<210> 100

- 68 030436

<211> 321

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 100

дасаЕЕдЕда ЕдасЕсадЕс Ессадссасс сЕдЕсЕдЕда сЕссаддада ЕададЕсЕсЕ 60

сЕсЕссЕдса дддссадсса дадЕаЕЕадс дЕсЕасЕЕас асЕддЕаЕса асаааааЕса 120

ссЕдадЕсЕс сааддсЕЕсЕ саЕсаааЕаЕ дсЕЕсссааЕ ссаЕсЕсЕдд даЕссссЕсс 180

аддЕЕсадЕд дсадЕддаЕс адддЕсадаЕ ЕЕсасЕсЕса дЕаЕсаасад ЕдЕддаассЕ 240

даадаЕдЕЕд дадЕЕЕаЕЕа сЕдЕсааааЕ ддЕсасадсЕ ЕЕссаЕЕсас дЕЕсддсЕсд 300

дддасааадЕ ЕддаааЕааа а 321

<210> 101

<211> 107

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 101

Азр 1

11е

Уа1

МеЕ

ТЪг 5

О1п

Зег

Рго

А1а

ТЪг 10

Ьеи

Зег

Уа1

ТЪг

Рго 15

О1у

Азр

Агд

Уа1

Зег

Ьеи

Зег

Суз

Агд

А1а

Зег

О1п

Зег

11е

Зег

Уа1

Туг

20

25

30

Ьеи

ΗΪ8

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Зег

Рго

О1и

Зег

Рго

Агд

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Ьуз

Туг

А1а

Зег

О1п

Зег

11е

Зег

О1у

11е

Рго

Зег

Агд

РЪе

Зег

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

О1у

Зег

Азр

РЪе

ТЪг

Ьеи

Зег

11е

Азп

Зег

Уа1

О1и

Рго

65

70

75

80

О1и

Азр

Уа1

О1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

О1п

Азп

О1у

Нгз

Зег

РЪе

Рго

РЪе

85

90

95

ТЪг

РЪе

О1у

Зег

О1у

ТЪг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

<210> 102 <211> 321 <212> ДНК <213> Мышиная

<400> 102

дасаЕЕдЕда ЕдасЕсадЕс Ессадссасс сЕдЕсЕдЕда сЕссаддааа ЕададЕсЕсЕ 60

сЕЕЕссЕдса дддссадсса дадЕаЕЕадс дасЕасЕЕас асЕддЕаЕса асаааааЕса 120

саЕдадЕсЕс сааддсЕЕсЕ саЕсаааЕаЕ дсЕЕсссааЕ ссаЕсЕсЕдд даЕссссЕсс 180

аддЕЕсадЕд дсадЕддаЕс адддЕсаааЕ ЕЕсасЕсЕса дЕаЕсаасад ЕдЕддаассЕ 240

даадаЕдЕЕд дадЕдЕаЕЕа ЕЕдЕсааааЕ ддЕсасадсЕ ЕЕссаЕЕсас дЕЕсддсЕсд 300

дддасааадЕ ЕддаааЕааа а 321

<210> 103

<211> 107

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 103

Азр 1

11е

Уа1

МеЕ

ТЪг 5

О1п

Зег

Рго

А1а

ТЪг 10

Ьеи

Зег

Уа1

ТЪг

Рго 15

О1у

Азп

Агд

Уа1

Зег

Ьеи

Зег

Суз

Агд

А1а

Зег

О1п

Зег

11е

Зег

Азр

Туг

20

25

30

Ьеи

Н1з

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Зег

Н1з

О1и

Зег

Рго

Агд

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Ьуз

Туг

А1а

Зег

О1п

Зег

11е

Зег

О1у

11е

Рго

Зег

Агд

РЪе

Зег

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

О1у

Зег

Азп

РЪе

ТЪг

Ьеи

Зег

11е

Азп

Зег

Уа1

О1и

Рго

65

70

75

80

- 69 030436

О1и Азр Уа1 О1у Уа1 Туг Туг Суз Ο1η Азп О1у Н1з Зег РЪе Рго РЪе 85 90 95

ТЪг РЪе О1у Зег О1у ТЪг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз 100 105

<210> 104 <211> 333 <212> ДНК <213> Мышиная

<400> 104

дасаЬЬдЬдс ЬдасасадЬс ЬссЬдсЬЬсс ЬЬадсЬдЬЬЬ сЬсЬддддса дадддссасс 60

аЬсЬсаЬдса дддссадсаа аадЬдЬсада ЬЬсЬсЬдасЬ аЬЬЬЬЬаЬаЬ дсасЬддЬас 120

саасадааас саддасадсс асссааасЬс сЬсаЬсЬасс ЬЬдсаЬссаа ссЬадааЬсЬ 180

ддддЬсссЬд ссаддЬЬсад ЬддсадЬддд ЬсЬдддасад асЬЬсасссЬ саасаЬссаЬ 240

ссЬдЬддадд аддаддаЬдс ЬдсаассЬаЬ ЬасЬдЬсада асадЬаддда дсЬЬссдЬас 300

асдЬЬсддад дддддассаа дсЬддадаЬа ааа 333

<210> 105

<211> 111

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 105

Азр 1

11е

Уа1

Ьеи

ТЪг Ο1η 5

Зег

Рго

А1а

Зег 10

Ьеи

А1а

Уа1

Зег

Ьеи 15

О1у

Ο1η

Агд

А1а

ТЪг

11е

Зег

Суз

Агд

А1а

Зег

Ьуз

Зег

Уа1

Агд

РЪе

Зег

20

25

30

Азр

Туг

РЪе

Туг

МеЬ

Н1з

Тгр

Туг

Ο1η

Ο1η

Ьуз

Рго

О1у

Ο1η

Рго

Рго

35

40

45

Ьуз

Ьеи

Ьеи

11е

Туг

Ьеи

А1а

Зег

Азп

Ьеи

О1и

Зег

О1у

Уа1

Рго

А1а

50

55

60

Агд

РЪе

Зег

О1у

Зег

О1у

Зег

О1у

ТЪг

Азр

РЪе

ТЪг

Ьеи

Азп

11е

Н1з

65

70

75

80

Рго

Уа1

О1и

О1и

О1и

Азр

А1а

А1а

ТЪг

Туг

Туг

Суз

Ο1η

Азп

Зег

Агд

85

90

95

О1и

Ьеи

Рго

Туг

ТЪг

РЪе

О1у

О1у

О1у

ТЪг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

110

<210> 106

<211> 333

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 106

дасаЬЬдЬдЬ ЬдасасадЬс ЬссЬдсЬЬсс ЬЬадсЬдЬаЬ сЬсЬддддса дадддссасс 60

аЬсЬсаЬдса дддссадсаа аадЬдЬсадЬ асаЬсЬддсЬ аЬадЬЬаЬаЬ асасЬддЬас 120

саасадааас сдддасадсс асссаааЬЬс сЬсаЬсЬаЬс ЬЬдсаЬссаа ссЬадаЬЬсЬ 180

ддддЬсссЬд ссаддЬЬсад ЬддсадЬддд ЬсЬдддасад асЬЬсасссЬ саасаЬссаЬ 240

ссЬдЬддадд аддаддаЬдс ЬдсаассЬаЬ ЬасЬдЬсадс асадЬаддда дсЬЬссдЬас 300

асдЬЬсддад дддддассаа дсЬддаааЬа ааа 333

<210> 107 <211> 111 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 107

Азр 11е Уа1 Ьеи ТЪг Ο1η Зег Рго А1а Зег Ьеи А1а Уа1 Зег Ьеи О1у 1 5 10 15

Ο1η Агд А1а ТЪг 11е Зег Суз Агд А1а Зег Ьуз Зег Уа1 Зег ТЪг Зег

- 70 030436

20

25

30

О1у

Туг

Бег

Туг

11е

Няз

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Рго

С1у

О1п

Рго

Рго

35

40

45

Ьуз

РЬе

Ьеи

11е

Туг

Ьеи

А1а

Бег

Азп

Ьеи

Азр

Бег

О1у

Уа1

Рго

А1а

50

55

60

Агд

РЬе

Бег

О1у

Бег

О1у

Бег

О1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Азп

11е

Няз

65

70

75

80

Рго

Уа1

О1и

О1и

О1и

Азр

А1а

А1а

ТЬг

Туг

Туг

Суз

О1п

Няз

Бег

Агд

85

90

95

О1и

Ьеи

Рго

Туг

ТЬг

РЬе

О1у

О1у

О1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

110

<210> 108 <211> 321 <212> ДНК <213> Мышиная

<400> 108

дасаЕЕдЕда ЕдасЕсадЕс Ессадссасс сЕдЕсЕдЕда сЕссаддада ЕададЕсЕсЕ 60

сЕЕЕссЕдса дддссадсса дадЕаЕЕадс дасЕасЕЕас асЕддЕаЕса асаааааЕса 120

саЕдадЕсЕс сааддсЕЕсЕ саЕсаааЕаЕ дсЕЕсссааЕ ссаЕсЕсЕдд даЕссссЕсс 180

аддЕЕсадЕд дсадЕддаЕс адддЕсадаЕ ЕЕсасЕсЕса дЕаЕсаасад ЕдЕддаассЕ 240

даадаЕдЕЕд дадЕдЕаЕЕа сЕдЕсааааЕ ддЕсасадсЕ ЕЕссдЕасас дЕЕсддаддд 300

дддассаадс ЕддаааЕааа а 321

<210> 109

<211> 107

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 109

Азр 1

11е

Уа1

МеЕ

ТЬг 5

О1п

Бег

Рго

А1а

ТЬг 10

Ьеи

Бег

Уа1

ТЬг

Рго 15

О1у

Азр

Агд

Уа1

Бег

Ьеи

Бег

Суз

Агд

А1а

Бег

О1п

Бег

11е

Бег

Азр

Туг

20

25

30

Ьеи

Няз

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Бег

Няз

О1и

Бег

Рго

Агд

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Ьуз

Туг

А1а

Бег

О1п

Бег

11е

Бег

О1у

11е

Рго

Бег

Агд

РЬе

Бег

О1у

50

55

60

Бег

О1у

Бег

О1у

Бег

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Бег

11е

Азп

Бег

Уа1

О1и

Рго

65

70

75

80

О1и

Азр

Уа1

О1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

О1п

Азп

О1у

Няз

Бег

РЬе

Рго

Туг

85

90

95

ТЬг

РЬе

О1у

О1у

О1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

<210> 110

<211> 336

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 110

даЕдЕЕдЕда Едасссааас ЕссасЕсЕсс сЕдссЕдЕса дЕсЕЕддада ЕсаадссЕсс 60

аЕсЕсЕЕдса даЕсЕадЕса дадссЕЕдЕа сасадЕааЕд дааасассЕа ЕЕЕасаЕЕдд 120

ЕассЕдсада адссаддсса дЕсЕссааад сЕссЕдаЕсЕ асааадЕЕЕс саассдаЕЕЕ 180

ЕсЕддддЕсс ссдасаддЕЕ садЕддсадЕ ддаЕсаддда садаЕЕЕсас асЕсаадаЕс 240

адсададЕдд аддсЕдадда ЕсЕдддадЕЕ ЕаЕЕЕсЕдсЕ сЕсааадЕас асаЕдЕЕссд 300

ЕасасдЕЕсд даддддддас саадсЕддаа аЕаааЕ 336

<210> 111 <211> 112

- 71 030436

<212> РКТ <213> Мышиная

<400> 111

Азр 1

Уа1

Уа1

Меб

ТЬг 5

О1п ТЬг

Рго

Ьеи

Зег 10

Ьеи

Рго

Уа1

Зег

Ьеи 15

О1у

Азр

О1п

А1а

Зег

11е

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

О1п

Зег

Ьеи

Уа1

Няз

Зег

20

25

30

Азп

О1у

Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

Няз

Тгр

Туг

Ьеи

О1п

Ьуз

Рго

О1у

О1п

Зег

35

40

45

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

11е

Туг

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

О1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

О1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

11е

65

70

75

80

Зег

Агд

Уа1

О1и

А1а

О1и

Азр

Ьеи

С1у

Уа1

Туг

РЬе

Суз

Зег

О1п

Зег

85

90

95

ТЬг

Няз

Уа1

Рго

Туг

ТЬг

РЬе

С1у

С1у

О1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Азп

100

105

110

<210> 112

<211> 318

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 112

дасаббабда бдасссадбс бсасаааббс абдбссасаб садбаддада садддбсадс 60

абсассбдса аддссадбса ддабдбдддб аабдсбдбдд бсбддбабса асааааасса 120

дддсаабсбс сбааасбасб дабббасбдд дсабссассс ддсасаббдд адбсссбдаб 180

сдсббсасад дсадбддабс бдддасадаб ббсасбсбса ссаббассаа бдбдсадбсб 240

даадасббдд садаббаббб сбдбсадсаа бабадсадсб абсбсасдбб сддбдсбддд 300

ассаадсбдд адсбдааа 318

<210> 113

<211> 106

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 113

Азр

11е

Меб

Меб

ТЬг

О1п

Зег

Няз

Ьуз

РЬе

Меб

Зег

ТЬг

Зег

Уа1

О1у

1

5

10

15

Азр

Агд

Уа1

Зег

11е

ТЬг

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1п

Азр

Уа1

О1у

Азп

А1а

20

25

30

Уа1

Уа1

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Рго

О1у

О1п

Зег

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Туг

Тгр

А1а

Зег

ТЬг

Агд

Няз

11е

О1у

Уа1

Рго

Азр

Агд

РЬе

ТЬг

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

О1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

11е

ТЬг

Азп

Уа1

О1п

Зег

65

70

75

80

О1и

Азр

Ьеи

А1а

Азр

Туг

РЬе

Суз

О1п

О1п

Туг

Зег

Зег

Туг

Ьеи

ТЬг

85

90

95

РЬе

О1у

А1а

О1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

О1и

Ьеи

Ьуз

100

105

<210> 114

<211> 336

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 114

дабдббдбда бдасссаабс бссасбсбсс сбдссбдбса дбсббддада бсаадссбсс 60 абсбсббдса дабсбадбса дадссббдба сасадбаабд дааасассба бсбасаббдд 120

- 72 030436

ЬассЬдсЬда адссаддсса дЬсЬссааад сЬссЬдаЬсЬ асааадЬЬЬс саассдаЬЬЬ 180

ЬсЬддддЬсс садасаддЬЬ садЬддсадЬ ддаЬсаддда садаЬЬЬсас асЬсаадаЬс 240

адсададЬдд аддсЬдадда ЬсЬдддадЬЬ ЬаЬЬЬсЬдсЬ сЬсааадЬас асаЬдЬЬссд 300

ЬасасдЬЬсд даддддддас саадсЬддаа аЬаааа 336

<210> 115

<211> 112

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 115

Азр 1

Уа1

Уа1

МеЬ

ТЪг 5

О1п

Зег

Рго

Ьеи

Зег 10

Ьеи

Рго

Уа1

Зег

Ьеи 15

О1у

Азр

О1п

А1а

Зег

11е

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

О1п

Зег

Ьеи

Уа1

Н1з

Зег

20

25

30

Азп

О1у

Азп

ТЪг

Туг

Ьеи

Н1з

Тгр

Туг

Ьеи

Ьеи

Ьуз

Рго

О1у

О1п

Зег

35

40

45

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

11е

Туг

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЪе

Зег

О1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЪе

Зег

О1у

Зег

О1у

Зег

О1у

ТЪг

Азр

РЪе

ТЪг

Ьеи

Ьуз

11е

65

70

75

80

Зег

Агд

Уа1

О1и

А1а

О1и

Азр

Ьеи

О1у

Уа1

Туг

РЪе

Суз

Зег

О1п

Зег

85

90

95

ТЪг

Нгз

Уа1

Рго

Туг

ТЪг

РЪе

О1у

О1у

О1у

ТЪг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

110

<210> 116

<211> 321

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 116

дасаЬссада ЬдасЬсадЬс ЬссадЬЬЬЬс сЬдЬсЬдсаЬ сЬдЬдддада аасЬдЬсасс 60

аЬсасаЬдЬс дадсаадЬда дааЬаЬЬдас адЬЬаЬЬЬад саЬддЬаЬса дсадааасад 120

ддааааЬсЬс сЬсадсЬссЬ ддЬсЬЬЬдсЬ дсасдааасЬ ЬадсадаЬдд ЬдЬдссаЬса 180

аддЬЬсадЬд дсадЬддаЬс аддсасасад ЬаЬЬсЬсЬса адаЬсаасад ааЬдсадЬсЬ 240

даадаЬдЬЬд сдадаЬасЬа сЬдЬсаасаЬ ЬаЬЬаЬадЬа сЬссаЬЬсас дЬЬсддсЬсд 300

дддасааадЬ ЬддаааЬада а 321

<210> 117

<211> 107

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 117

Азр 1

11е

О1п

МеЬ

ТЪг 5

О1п

Зег

Рго

Уа1

РЪе 10

Ьеи

Зег

А1а

Зег

Уа1 15

О1у

О1и

ТЪг

Уа1

ТЪг

11е

ТЪг

Суз

Агд

А1а

Зег

О1и

Азп

11е

Азр

Зег

Туг

20

25

30

Ьеи

А1а

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

О1п

О1у

Ьуз

Зег

Рго

О1п

Ьеи

Ьеи

Уа1

35

40

45

РЪе

А1а

А1а

Агд

Азп

Ьеи

А1а

Азр

О1у

Уа1

Рго

Зег

Агд

РЪе

Зег

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

О1у

ТЪг

О1п

Туг

Зег

Ьеи

Ьуз

11е

Азп

Агд

МеЬ

О1п

Зег

65

70

75

80

О1и

Азр

Уа1

А1а

Агд

Туг

Туг

Суз

О1п

Н1з

Туг

Туг

Зег

ТЪг

Рго

РЪе

85

90

95

ТЪг

РЪе

О1у

Зег

О1у

ТЪг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

О1и

100

105

<210> 118

- 73 030436

<211> 321

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 118

дасабссада бдасбсадбс дссадсббсс сбдбсбдсаб сбдбдддада аасбдбсабс 60

ббсасабдбс дадсаадбда даабаббдас адббабббад сабддбабса дсадааасад 120

ддаааабсбс сбсадсбссб ддбсбабдсб дсаасааасб бадсадабдд бдбдссабса 180

аддббсадбд дсадбддабс аддсасасад баббсбсбса адабсаасад ссбдсадбсб 240

даадабдббд сдадабабба сбдбсбасаб баббабадба сбссаббсас дббсддсбсд 300

дддасададб бддааабааа а 321

<210> 119

<211> 107

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 119

Азр 1

11е

Ο1η

Меб

ТЬг 5

Ο1η

Бег

Рго

А1а

Бег 10

Ьеи

Бег

А1а

Бег

Уа1 15

О1у

О1и

ТЬг

Уа1

11е

РЬе

ТЬг

Суз

Агд

А1а

Бег

О1и

Азп

11е

Азр

Бег

Туг

20

25

30

Ьеи

А1а

Тгр

Туг

Ο1η

Ο1η

Ьуз

Ο1η

О1у

Ьуз

Бег

Рго

Ο1η

Ьеи

Ьеи

Уа1

35

40

45

Туг

А1а

А1а

ТЬг

Азп

Ьеи

А1а

Азр

О1у

Уа1

Рго

Бег

Агд

РЬе

Бег

О1у

50

55

60

Бег

О1у

Бег

О1у

ТЬг

Ο1η

Туг

Бег

Ьеи

Ьуз

11е

Азп

Бег

Ьеи

Ο1η

Бег

65

70

75

80

О1и

Азр

Уа1

А1а

Агд

Туг

Туг

Суз

Ьеи

Н1з

Туг

Туг

Бег

ТЬг

Рго

РЬе

85

90

95

ТЬг

РЬе

О1у

Бег

О1у

ТЬг

О1и

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

<210> 120

<211> 357

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 120

саддбдсадс бдааддадбс аддассбддс сбддбддсдс ссбсасадад ссбдбссабс 60

асабдсасбд бсбсбдддбб сбсаббаасс ассбабдсба баадсбдддб бсдссадбса 120

ссаддааадд дбсбддадбд дсббддадбс абабддасбд дбддаддсас аааабабааб 180

бсадсбсбса аабссадасб дадсабсадс ааадасаасб ссаададбса адббббсбба 240

аааабдааса дбсбдсааас бдабдасаса дссаддбасб асбдбдссад аааддасбаб 300

ааббасдддд дбдсбабдда сбасбддддб сааддаассб садбсассдб сбссбса 357

<210> 121 <211> 119

<212> РКТ <213> Мышиная

<400> 121
Ο1η Уа1 Ο1η Ьеи
1
Бег Ьеи Бег 11е
20
А1а 11е Бег Тгр
35
О1у Уа1 11е Тгр
50
Бег Агд Ьеи Бег
65

Ьуз 5	О1и	Бег	О1у
ТЬг	Суз	ТЬг	Уа1
Уа1	Агд	Ο1η	Бег 40
ТЬг	О1у	О1у 55	О1у
11е	Бег 70	Ьуз	Азр

Рго О1у Ьеи 10 Бег О1у РЬе	Уа1 Бег О1у
25 Рго	О1у	Ьуз
ТЬг	Ьуз	Туг	Азп 60
Азп	Бег	Ьуз 75	Бег

А1а	Рго	Бег 15	Ο1η
Ьеи	ТЬг 30	ТЬг	Туг
Ьеи 45	О1и	Тгр	Ьеи
Бег	А1а	Ьеи	Ьуз
Ο1η	Уа1	РЬе	Ьеи 80

- 74 030436

Ьуз

МеЕ

Азп Бег Ьеи О1п 85

ТЬг

Азр

Азр

ТЬг А1а Агд Туг Туг Суз

А1а

90

95

Агд

Ьуз

Азр

Туг

Азп

Туг

О1у

О1у

А1а

МеЕ

Азр

Туг

Тгр

О1у

О1п

О1у

100

105

110

ТЬг

Бег

Уа1

ТЬг

Уа1

Бег

Бег

115

<210> 122

<211> 360

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 122

саддЕЕсадс ЕдсаасадЕс ЕдасдсЕдад ЕЕддЕдааас сЕддсасЕЕс адЕдаадаса 60

ЕссЕдсаааа ЕЕЕсЕддсаа сассЕЕсасЕ дассааасЕа ЕЕсасЕддаЕ даадсададд 120

ссЕдаасадд дссЕддааЕд даЕЕддаЕаЕ аЕЕЕаЕссЕа дадаЕдаЕад ЕссЕаадЕас 180

ааЕдадаасЕ Есаадддсаа ддссасаЕЕд асЕдсадаса ааЕссЕссад сасадссЕас 240

аЕдсадсЕса асадЕсЕдас аЕсЕдаддас ЕсЕдсадЕсЕ аЕЕЕсЕдЕдс ааЕсссадас 300

аддЕсаддсЕ асдссЕддЕЕ ЕаЕЕЕасЕдд ддссааддда сЕсЕддЕсас ЕдЕсЕсЕЕса 360

<210> 123 <211> 120 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 123

О1п

Уа1

О1п

Ьеи

О1п

О1п

Бег

Азр

А1а

О1и

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

О1у

ТЬг

1

5

10

15

Бег

Уа1

Ьуз

ТЬг

Бег

Суз

Ьуз

11е

Бег

О1у

Азп

ТЬг

РЬе

ТЬг

Азр

О1п

20

25

30

ТЬг

11е

НФз

Тгр

МеЕ

Ьуз

О1п

Агд

Рго

О1и

О1п

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Туг

11е

Туг

Рго

Агд

Азр

Азр

Бег

Рго

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Азп

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьеи

ТЬг

А1а

Азр

Ьуз

Бег

Бег

Бег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

МеЕ

О1п

Ьеи

Азп

Бег

Ьеи

ТЬг

Бег

О1и

Азр

Бег

А1а

Уа1

Туг

РЬе

Суз

85

90

95

А1а

11е

Рго

Азр

Агд

Бег

О1у

Туг

А1а

Тгр

РЬе

11е

Туг

Тгр

О1у

О1п

100

105

110

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Бег

Бег

115

120

<210> 124

<211> 357

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 124

саддЕдсадс ЕдааддадЕс аддассЕдЕс сЕддЕддсдс ссЕсасадад ссЕдЕссаЕс 60

асаЕдсасЕд ЕсЕсЕдддЕЕ сЕсаЕЕааас аасЕЕЕдсЕа ЕаадЕЕдддЕ ЕсдЕсадсса 120

ссаддааадд дЕсЕддадЕд дсЕЕддадса аЕаЕддасЕд дЕддаддсас аааЕЕаЕааЕ 180

ЕсадсЕсЕса ааЕссадасЕ дадсаЕсадс ааадасаасЕ ссаададЕса адЕЕЕЕсЕЕа 240

ааааЕдааса дЕсЕдсааас ЕдаЕдасаса дссаддЕаЕЕ аЕЕдЕдЕсад аааддасЕаЕ 300

адЕЕасдддд дЕдсЕаЕдда сЕасЕддддЕ сааддаассЕ садЕсассдЕ сЕссЕса 357

<210> 125

<211> 119

<212> РКТ

<213> Мышиная

- 75 030436

<400> 125

О1п

Уа1

О1п

Ьеи

Ьуз

О1и

Зег

О1у

Рго

Уа1

Ьеи

Уа1

А1а

Рго

Зег

О1п

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Зег

11е

ТЪг

Суз

ТЪг

Уа1

Зег

О1у

РЪе

Зег

Ьеи

Азп

Азп

РЪе

20

25

30

А1а

11е

Зег

Тгр

Уа1

Агд

О1п

Рго

Рго

О1у

Ьуз

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

Ьеи

35

40

45

О1у

А1а

11е

Тгр

ТЪг

О1у

О1у

О1у

ТЪг

Азп

Туг

Азп

Зег

А1а

Ьеи

Ьуз

50

55

60

Зег

Агд

Ьеи

Зег

11е

Зег

Ьуз

Азр

Азп

Зег

Ьуз

Зег

О1п

Уа1

РЪе

Ьеи

65

70

75

80

Ьуз

МеЬ

Азп

Зег

Ьеи

О1п

ТЪг

Азр

Азр

ТЪг

А1а

Агд

Туг

Туг

Суз

Уа1

85

90

95

Агд

Ьуз

Азр

Туг

Зег

Туг

О1у

О1у

А1а

МеЬ

Азр

Туг

Тгр

О1у

О1п

О1у

100

105

110

ТЪг

Зег

Уа1

ТЪг

Уа1

Зег

Зег

115

<210> 126 <211> 354 <212> ДНК <213> Мышиная

<400> 126

даддЬссадс ЬдсаасадЬс ЬддассЬдЬд сЬддЬдаадс сЬддддсЬЬс адЬдаадаЬд 60

ЬссЬдЬаадд сЁЬсЬддаЬа сасаЬЬсасЬ дасЬасЬаЬа ЬдаасЬдддЬ даадсададс 120

саЬддааада дссЬЬдадЬд даЁЬддадЁЬ аЁЬаЁЁссЬЁ асаасддЬдд ЬасЬадсЬас 180

аассадаадЬ Ьсаадддсаа ддссасаЬЬд асЬдЬЬдаса адЬссЬссад сасадссЬас 240

аЬддадсЬса асадссЬдас аЬсЬдаддас ЁсЬдсадЁсЬ аЁЬасЬдЬдс асдадаЬддЬ 300

сассдсЬддЬ асЁЬсдаЁдЬ сЬддддсаса дддассасдд ЬсассдЬсЬс сЬса 354

<210> 127

<211> 118

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 127

О1и

Уа1

О1п

Ьеи

О1п

О1п

Зег

О1у

Рго

Уа1

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

О1у

А1а

1

5

10

15

Зег

Уа1

Ьуз

МеЬ

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1у

Туг

ТЪг

РЪе

ТЪг

Азр

Туг

20

25

30

Туг

МеЬ

Азп

Тгр

Уа1

Ьуз

О1п

Зег

Η18

О1у

Ьуз

Зег

Ьеи

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Уа1

11е

11е

Рго

Туг

Азп

О1у

О1у

ТЪг

Зег

Туг

Азп

О1п

Ьуз

РЪе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЪг

Ьеи

ТЪг

Уа1

Азр

Ьуз

Зег

Зег

Зег

ТЪг

А1а

Туг

65

70

75

80

МеЬ

О1и

Ьеи

Азп

Зег

Ьеи

ТЪг

Зег

О1и

Азр

Зег

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Азр

О1у

Η18

Агд

Тгр

Туг

РЪе

Азр

Уа1

Тгр

О1у

ТЪг

О1у

ТЪг

100

105

110

ТЪг

Уа1

ТЪг

Уа1

Зег

Зег

115

<210>	128
<211>	115
<212>	РКТ
<213>	Мышиная
<400>	128

- 76 030436

О1и

Уа1

О1п

Ьеи

О1п

О1п

Зег

С1у

Рго

О1и

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

О1у

А1а

1

5

10

15

Зег

Уа1

Ьуз

Меб

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1у

Туг

ТЬг

РЬе

ТЬг

Суз

Суз

20

25

30

11е

Меб

Ηΐ3

Тгр

Уа1

Ьуз

О1п

Ьуз

Рго

О1у

О1п

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Туг

11е

Азп

Рго

Туг

Азп

Азр

О1у

ТЬг

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Ьуз

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Азр

Ьуз

Зег

Зег

Зег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

Меб

О1и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

ТЬг

Зег

О1и

Азр

Зег

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Агд

Тгр

Азр

О1и

А1а

Туг

Тгр

О1у

О1п

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

100

105

110

Уа1

Зег

А1а

115

<210> 129 <211> 345 <212> ДНК <213> Мышиная

<400> 129

даддбссадс бдсадсадбс бддассбдад сбддбсаадс сбддддсббс адбдаадабд 60

бссбдсаадд сббсбддаба сасаббсасб сдсбабсбба ббсасбдддб дааасадаад 120

ссбдддсадд дссббдадбд даббддабаб аббаабссбб асаабдабдд басбааабас 180

аабдадаадб бсаааддсаа ддссасасбд асббсадаса аабссбссад сасадссбас 240

абддадсбса дсадссбдас сбсбдаддас бсбдсддбсб аббасбдбас сбсбаасбдд 300

дассбсдасб асбддддсса аддсассасб сбсасадбсб ссбса 345

<210> 130

<211> 115

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 130

О1и

Уа1

О1п

Ьеи

О1п

О1п

Зег

О1у

Рго

О1и

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

О1у

А1а

1

5

10

15

Зег

Уа1

Ьуз

Меб

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1у

Туг

ТЬг

РЬе

ТЬг

Агд

Туг

20

25

30

Ьеи

11е

Няз

Тгр

Уа1

Ьуз

О1п

Ьуз

Рго

О1у

О1п

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Туг

11е

Азп

Рго

Туг

Азп

Азр

О1у

ТЬг

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Ьуз

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Азр

Ьуз

Зег

Зег

Зег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

Меб

О1и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

ТЬг

Зег

О1и

Азр

Зег

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

ТЬг

Зег

Азп

Тгр

Азр

Ьеи

Азр

Туг

Тгр

О1у

О1п

О1у

ТЬг

ТЬг

Ьеи

ТЬг

100

105

110

Уа1

Зег

Зег

115

<210> 131

<211> 345

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 131

даддбссадс бдсадсадбс бддассбдаа дбддбааадс сбддддсббс адбдаадабд 60 бссбдсаадд ссбсбддаба сасаббсасб адббсбдбба басасбдддб даадсадаад 120

- 77 030436

дсЬдддсадд дссЬЬдадЬд даЬЬддаЬаЬ аЬсааЬсссЬ аЬааЬдаЬдд ЬасЬаадЬас 180

ааЬдадаадЬ Ьсаааддсаа ддссасасЬд асЬЬсадаса даЬссЬссад сасадссЬас 240

аЬддадсЬса дсадссЬдас сЬсЬдаддас ЬсЬдсддЬсЬ аЬЬасЬдЬас аадасддЬЬд 300

дасдаддсЬЬ асЬддддсса адддасЬсЬд дЬсасЬдЬсЬ сЬдса 345

<210> 132

<211> 115

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 132

О1и

Уа1

О1п

Ьей

О1п

О1п

Зег

С1у

Рго

О1и

Уа1

Уа1

Ьуз

Рго

О1у

А1а

1

5

10

15

Зег

Уа1

Ьуз

МеЬ

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1у

Туг

ТЬг

РЬе

ТЬг

Зег

Зег

20

25

30

Уа1

11е

Няз

Тгр

Уа1

Ьуз

О1п

Ьуз

А1а

О1у

О1п

О1у

Ьей

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Туг

11е

Азп

Рго

Туг

Азп

Азр

О1у

ТЬг

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Ьуз

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьей

ТЬг

Зег

Азр

Агд

Зег

Зег

Зег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

МеЬ

О1и

Ьей

Зег

Зег

Ьей

ТЬг

Зег

О1и

Азр

Зег

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

ТЬг

Агд

Агд

Ьей

Азр

О1и

А1а

Туг

Тгр

О1у

О1п

О1у

ТЬг

Ьей

Уа1

ТЬг

100

105

110

Уа1

Зег

А1а

115

<210> 133 <211> 345 <212> ДНК <213> Мышиная

<400> 133

даддЬссадс ЬдсадсадЬс ЬддассЬдад сЬддЬааадс сЬддддсЬдс адЬдаадаЬд 60

ЬссЬдсаадд сЬЬсЬддаЬа сасаЬЬсасЬ сдсЬаЬсЬЬа ЬЬсасЬдддЬ даадсадаад 120

ссЬдддсадд дссЬЬдадЬд даЬЬддаЬаЬ аЬЬааЬссЬЬ асааЬдаЬдд ЬасЬаааЬаЬ 180

ааЬдадаадЬ Ьсаааддсаа ддссасасЬд асЬЬсадаса ааЬссЬссад сасадссЬас 240

аЬддадсЬса дсадссЬдас сЬсЬдаддас ЬсЬдсддЬсЬ аЬЬасЬдЬас сЬсЬааЬЬдд 300

дассЬсдасЬ асЬддддсса аддсассасЬ сЬсасадЬсЬ ссЬса 345

<210> 134

<211> 115

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 134

О1и

Уа1

О1п

Ьей

О1п

О1п

Зег

О1у

Рго

О1и

Ьей

Уа1

Ьуз

Рго

О1у

А1а

1

5

10

15

А1а

Уа1

Ьуз

МеЬ

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1у

Туг

ТЬг

РЬе

ТЬг

Агд

Туг

20

25

30

Ьей

11е

Няз

Тгр

Уа1

Ьуз

О1п

Ьуз

Рго

О1у

О1п

О1у

Ьей

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Туг

11е

Азп

Рго

Туг

Азп

Азр

О1у

ТЬг

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Ьуз

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьей

ТЬг

Зег

Азр

Ьуз

Зег

Зег

Зег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

МеЬ

О1и

Ьей

Зег

Зег

Ьей

ТЬг

Зег

О1и

Азр

Зег

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

ТЬг

Зег

Азп

Тгр

Азр

Ьей

Азр

Туг

Тгр

О1у

О1п

О1у

ТЬг

ТЬг

Ьей

ТЬг

100

105

110

Уа1

Зег

Зег

- 78 030436

115

адЕдаадаЕд 60

даадсадаад 120

ЕасЕсадЕас 180

сасадссЕас 240

аадасддЕЕд 300

345

<210> 135 <211> 345 <212> ДНК <213> Мышиная

<400> 135

даддЕссадс

ЕссЕдсаадд

дсЕдддсадд

ааЕдадаадЕ

аЕддадсЕса

дасдаддсЕЕ

ЕдсадсадЕс

ссЕсЕддаЕа

дссЕЕдадЕд

Есаааддсаа

дсадссЕдас

асЕддддсса

ЕддассЕдаа

сасаЕЕсасЕ

даЕЕддаЕаЕ

ддссасасЕд

сЕсЕдаддас

адддасЕсЕд

сЕддЕааадс

адЕЕсЕдЕЕа

аЕсааЕсссЕ

асЕЕсадаса

ЕсЕдсддЕсЕ

дЕсасЕдЕсЕ

сЕддддсЕЕс

ЕдсасЕдддЕ

аЕааЕдаЕдд

ааЕЕЕЕссад

аЕЕасЕдЕас

сЕдса

<210> 136 <211> 115 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 136

О1и

Уа1

О1п

Ьеи

О1п

О1п

Зег

С1у

Рго

О1и

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

О1у

А1а

1

5

10

15

Зег

Уа1

Ьуз

МеЕ

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1у

Туг

ТЬг

РЬе

ТЬг

Зег

Зег

20

25

30

Уа1

МеЕ

Ηΐ3

Тгр

Уа1

Ьуз

О1п

Ьуз

А1а

О1у

О1п

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Туг

11е

Азп

Рго

Туг

Азп

Азр

О1у

ТЬг

О1п

Туг

Азп

О1и

Ьуз

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Азр

Ьуз

РЬе

Зег

Зег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

МеЕ

О1и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

ТЬг

Зег

О1и

Азр

Зег

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

ТЬг

Агд

Агд

Ьеи

Азр

О1и

А1а

Туг

Тгр

О1у

О1п

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

100

105

110

Уа1

Зег

А1а

115

<210> 137 <211> 345 <212> ДНК <213> Мышиная

<400> 137

даддЕссадс ЕдсадсадЕс ЕддассЕдад сЕддЕааадс сЕддддсЕЕс адЕдаадаЕд 60

ЕссЕдсаадд сЕЕсЕддаЕа сасаЕЕсасЕ адсЕсЕаЕЕа ЕЕсасЕдддЕ даадсададд 120

ссЕдддсадд дссЕЕдадЕд даЕЕддаЕаЕ аЕЕааЕссЕЕ асдаЕдаЕдЕ ЕасЕаадЕас 180

ааЕдадаадЕ Есаааддсаа ддссасасЕд асЕЕсадаса ааЕссЕссад сасадссЕас 240

аЕддадсЕса дсадссЕдас сЕсЕдаддас ЕсЕдсддЕсЕ аЕЕасЕдЕдс аадасддЕдд 300

дасдадЕсЕЕ асЕддддсса адддасЕсЕд дЕсасЕдЕсЕ сЕдса 345

<210> 138

<211> 115

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 138

О1и Уа1 1

О1п

Ьеи

О1п 5

О1п

Зег О1у

Рго

О1и 10

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

О1у А1а 15

Зег

Уа1

Ьуз

МеЕ

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1у

Туг

ТЬг

РЬе

ТЬг

Зег Зег

20

25

30

- 79 030436

11е

11е

Ηΐ3 35

Тгр Уа1

Ьуз

О1п

Агд 40

Рго

О1у

О1п О1у

Ьеи 45

О1и

Тгр

11е

О1у

Туг

11е

Азп

Рго

Туг

Азр

Азр

Уа1

ТЬг

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Ьуз

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Азр

Ьуз

Зег

Зег

Зег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

Меб

О1и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

ТЬг

Зег

О1и

Азр

Зег

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Агд

Тгр

Азр

О1и

Зег

Туг

Тгр

О1у

О1п

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

100

105

110

Уа1

Зег

А1а

115

<210> 139 <211> 345 <212> ДНК <213> Мышиная

<400> 139

даддбссадс бдсадсадбс бддассбдад сбддбааадс сбддддсббс адбдаадабд 60

бссбдсаадд сббсбддаба сасбббсасб ассбсбабба бдсасбдддб дааасадаад 120

ссбдддсадд дссббдадбд даббддабаб аббаабссбб асдабдабдб басбаадбас 180

аабдаааадб бсаааддсаа ддссасаббд асббсадаса аабссбссад сасадссбас 240

абддадсбса дсадссбдас сбсбдаддас бсбдсадбсб аббасбдбдб аадасддбдд 300

дасдаддсбб асбддддсса адддасбсбд дбсасбдбсб сбдса 345

<210> 140

<211> 115

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 140

О1и

Уа1

О1п

Ьеи

О1п

О1п

Зег

О1у

Рго

О1и

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

О1у

А1а

1

5

10

15

Зег

Уа1

Ьуз

Меб

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1у

Туг

ТЬг

РЬе

ТЬг

ТЬг

Зег

20

25

30

11е

Меб

ΗΪ8

Тгр

Уа1

Ьуз

О1п

Ьуз

Рго

О1у

О1п

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Туг

11е

Азп

Рго

Туг

Азр

Азр

Уа1

ТЬг

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Ьуз

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Зег

Азр

Ьуз

Зег

Зег

Зег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

Меб

О1и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

ТЬг

Зег

О1и

Азр

Зег

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

Уа1

Агд

Агд

Тгр

Азр

О1и

А1а

Туг

Тгр

О1у

О1п

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

100

105

110

Уа1

Зег

А1а

115

<210> 141

<211> 357

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 141

даддбссадс бдсаасаабс бддассбдад сбддбдаадс сбддддсббс адбдаадаба 60

бссбдбаадд сббсбддаба сасдбббасб дасбасбаса бдаасбдддб даддсададс 120

сабддадада дссббдадбд даббддадаб бббаабсаба асаабдабдб баббасббас 180

аасссдаадб бсаадддсаа ддбсасаббд асбдбадада адбсббссас сасадссбас 240

абддадсбсс дсадссбдбс абсбдаддас бсбдсадбсб аббасбдбдс аадддддсба 300

сдаддсбасб абдсбабдда сбасбддддб сааддаассб садбсассдб сбссбса 357

- 80 030436

<210> 142 <211> 119 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 142
О1и 1	Уа1	О1п	Ьеи	О1п 5	О1п	Зег	О1у
Зег	Уа1	Ьуз	11е 20	Зег	Суз	Ьуз	А1а
Туг	МеЕ	Азп 35	Тгр	Уа1	Агд	О1п	Зег 40
О1у	Азр 50	РЬе	Азп	НФз	Азп	Азп 55	Азр
Ьуз 65	О1у	Ьуз	Уа1	ТЬг	Ьеи 70	ТЬг	Уа1
МеЕ	О1и	Ьеи	Агд	Зег 85	Ьеи	Зег	Зег
А1а	Агд	О1у	Ьеи 100	Агд	О1у	Туг	Туг
ТЬг	Зег	Уа1 115	ТЬг	Уа1	Зег	Зег

Рго	О1и 10	Ьеи	Уа1	Ьуз	Рго	О1у 15	А1а
Зег 25	О1у	Туг	ТЬг	РЬе	ТЬг 30	Азр	Туг
НФз	О1у	О1и	Зег	Ьеи 45	О1и	Тгр	11е
Уа1	11е	ТЬг	Туг 60	Азп	Рго	Ьуз	РЬе
О1и	Ьуз	Зег 75	Зег	ТЬг	ТЬг	А1а	Туг 80
О1и	Азр 90	Зег	А1а	Уа1	Туг	Туг 95	Суз
А1а 105	МеЕ	Азр	Туг	Тгр	О1у 110	О1п	О1у

<210> 143 <211> 354 <212> ДНК <213> Мышиная

<400> 143

саддЕЕсадс ЕдсаасадЕс ЕдасдсЕдад ЕЕддЕдааас сЕддадсЕЕс адЕдаадаЕа 60

ЕссЕдсаадд ЕЕЕсЕддсЕа сассЕЕсасЕ дассаЕасЕа ЕЕсасЕддаЕ даадсададд 120

ссЕдаасадд дссЕддааЕд даЕЕддаЕаЕ аЕЕЕаЕссЕа дадаЕддЕЕа ЕссЕаадЕЕс 180

ааЕдадаадЕ Есаадддсаа ддссасаЕЕд асЕдсадаса ааЕссЕссад сасадссЕас 240

аЕдсадсЕса асадссЕдас аЕсЕдаддас ЕсЕдсадЕсЕ аЕЕЕсЕдЕдс аадасддссс 300

ссЕЕасЕаЕд сЕаЕддасЕа сЕддддЕсаа ддаассЕсад ЕсдссдЕсЕс сЕса 354

<210> 144

<211> 118

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 144

О1п

Уа1

О1п

Ьеи

О1п

О1п

Зег

Азр

А1а

О1и

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

О1у

А1а

1

5

10

15

Зег

Уа1

Ьуз

11е

Зег

Суз

Ьуз

Уа1

Зег

О1у

Туг

ТЬг

РЬе

ТЬг

Азр

НФз

20

25

30

ТЬг

11е

НФз

Тгр

МеЕ

Ьуз

О1п

Агд

Рго

О1и

О1п

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Туг

11е

Туг

Рго

Агд

Азр

О1у

Туг

Рго

Ьуз

РЬе

Азп

О1и

Ьуз

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьеи

ТЬг

А1а

Азр

Ьуз

Зег

Зег

Зег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

МеЕ

О1п

Ьеи

Азп

Зег

Ьеи

ТЬг

Зег

О1и

Азр

Зег

А1а

Уа1

Туг

РЬе

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Агд

Рго

Рго

Туг

Туг

А1а

МеЕ

Азр

Туг

Тгр

О1у

О1п

О1у

ТЬг

100

105

110

Зег

Уа1

А1а

Уа1

Зег

Зег

115

<210> 145

- 81 030436

<211> 345

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 145

даддЕссаас ЕдсадсадЕс ЕддассЕдад сЕддЕааадс сЕддддсЕЕс адЕдаадаЕд 60

ЕссЕдсаадд сЕЕсЕддаЕа сасаЕЕсасЕ аддЕаЕсЕЕа ЕдсасЕдддЕ даадсадаад 120

ссЕдддсадд дссЕЕдадЕд даЕЕддЕЕаЕ аЕЕааЕссЕЕ асааЕдаЕдд ЕасЕааЕЕас 180

ааЕдадаадЕ Есаааддсаа ддссасасЕд асЕЕсадаса ааЕссЕссад сасадссЕас 240

аЕддадсЕса дсадссЕдас сЕсЕдаддас ЕсЕдсддЕсЕ аЕЕасЕдЕЕс ссЕЕаасЕдд 300

дасЕаЕдсЕЕ асЕддддсса адддасЕсЕд дЕсасЕдЕсЕ сЕдса 345

<210> 146

<211> 115

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 146

О1и

Уа1

О1п

Ьеи

О1п

О1п

Бег

О1у

Рго

О1и

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

О1у

А1а

1

5

10

15

Бег

Уа1

Ьуз

МеЕ

Бег

Суз

Ьуз

А1а

Бег

О1у

Туг

ТЬг

РЬе

ТЬг

Агд

Туг

20

25

30

Ьеи

МеЕ

НФз

Тгр

Уа1

Ьуз

О1п

Ьуз

Рго

О1у

О1п

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Туг

11е

Азп

Рго

Туг

Азп

Азр

О1у

ТЬг

Азп

Туг

Азп

О1и

Ьуз

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Бег

Азр

Ьуз

Бег

Бег

Бег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

МеЕ

О1и

Ьеи

Бег

Бег

Ьеи

ТЬг

Бег

О1и

Азр

Бег

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

Бег

Ьеи

Азп

Тгр

Азр

Туг

А1а

Туг

Тгр

О1у

О1п

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

100

105

110

Уа1

Бег

А1а

115

<210> 147

<211> 360

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 147

дадЕЕссадс ЕдсадсадЕс ЕддассЕдад сЕддЕдаадс сЕддсдсЕЕс адЕдаадаЕа 60

ЕссЕдсаадд сЕЕсЕддЕЕа сЕсаЕЕсасЕ дасЕасааса ЕдаасЕдддЕ даадсададс 120

аааддааада дссЕЕдадЕд даЕЕддадЕа аЕЕаЕЕссЕа асЕаЕддЕЕЕ ЕасЕадсЕас 180

ааЕсадаасЕ Есаадддсаа ддссасЕЕЕд асЕдЕадасс адЕсЕЕссад сасадсссас 240

аЕдсадсЕса асадЕдЕдас аЕсЕдаддас ЕсЕдсадЕсЕ аЕЕасЕдЕдЕ аададаЕддд 300

ддааЕасЕсс ЕсЕддЕаЕсЕ сдаЕдЕсЕдд ддсасаддда ссасддЕсас сдЕсЕссЕса 360

<210> 148 <211> 120 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 148

О1и 1

РЬе

О1п Ьеи

О1п 5

О1п

Бег О1у

Рго

О1и 10

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

О1у 15

А1а

Бег

Уа1

Ьуз

11е

Бег

Суз

Ьуз

А1а

Бег

О1у

Туг

Бег

РЬе

ТЬг

Азр

Туг

20

25

30

Азп

МеЕ

Азп

Тгр

Уа1

Ьуз

О1п

Бег

Ьуз

О1у

Ьуз

Бег

Ьеи

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Уа1

11е

11е

Рго

Азп

Туг

О1у

РЬе

ТЬг

Бег

Туг

Азп

О1п

Азп

РЬе

- 82 030436

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Уа1

Азр

О1п

Зег

Зег

Зег

ТЬг

А1а

Ηΐ3

65

70

75

80

Меб

О1п

Ьеи

Азп

Зег

Уа1

ТЬг

Зег

О1и

Азр

Зег

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

Уа1

Агд

Азр

О1у

О1у

11е

Ьеи

Ьеи

Тгр

Туг

Ьеи

Азр

Уа1

Тгр

О1у

ТЬг

100

105

110

О1у

ТЬг

ТЬг

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

115

120

<210> 149

<211> 366

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 149

даддбссадс бдсаасадбс бддассбдад сбддбдаадс сбддддсббс адбдаадаба 60

сссбдсаадд сббсбддаба сасаНсасЬ дасбасааса бддасбдддб даадаададс 120

сабддааада дссббдадбд даббддадаб абсаабссбс асаабддбдд басбабсбас 180

аассадаадб бсаадддсаа ддссасаббд асбдбадаса адбссбссад сасадсссас 240

абддадсбсс дсадссбдас абсбдаддас асбдсадбсб аббасбдбдс аадаааббас 300

басддбадба дббасддсбд дбасббсдаб дбсбддддса садддассас ддбсассдбс 360

бсдбса 366

<210> 150 <211> 122 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 150

О1и

Уа1

О1п

Ьеи

О1п

О1п

Зег

О1у

Рго

О1и

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

О1у

А1а

1

5

10

15

Зег

Уа1

Ьуз

11е

Рго

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1у

Туг

ТЬг

РЬе

ТЬг

Азр

Туг

20

25

30

Азп

Меб

Азр

Тгр

Уа1

Ьуз

Ьуз

Зег

ΗΪ8

О1у

Ьуз

Зег

Ьеи

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Азр

11е

Азп

Рго

ΗΪ8

Азп

О1у

О1у

ТЬг

11е

Туг

Азп

О1п

Ьуз

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Уа1

Азр

Ьуз

Зег

Зег

Зег

ТЬг

А1а

Няз

65

70

75

80

Меб

О1и

Ьеи

Агд

Зег

Ьеи

ТЬг

Зег

О1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Азп

Туг

Туг

О1у

Зег

Зег

Туг

О1у

Тгр

Туг

РЬе

Азр

Уа1

Тгр

100

105

110

О1у

ТЬг

О1у

ТЬг

ТЬг

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

115

120

<210> 151

<211> 360

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 151

даддбссадс бдсадсадбс бддассбдад сбддбдаадс сбддддсббс адбдаадабб 60

бссбдсаддд сббсбддбба сбсаббсасб ддсбасбаса бдаасбдддб даадсааадб 120

ссбдаааада дссббдадбд даббддадад аббаббссба ссасбддбдд басббссбас 180

аассадаадб бсааддссаа ддссасаббд асбдбадаса аабссбссад сасадссбас 240

абдсадсбса ададссбдас абсбдаддас бсбдсадбсб аббасбдбдс аададададс 300

ддбдддббсб асбддбасбб сдабдбсбдд ддсасаддда ссасддбсас сдбсбссбса 360

- 83 030436

<210> 152 <211> 120 <212> РКТ <213> Мышиная

<400> 152
О1и 1	Уа1	Ο1η	Ьеи	Ο1η 5	Ο1η	Зег	О1у
Зег	Уа1	Ьуз	11е 20	Зег	Суз	Агд	А1а
Туг	МеЬ	Азп 35	Тгр	Уа1	Ьуз	Ο1η	Зег 40
О1у	О1и 50	11е	11е	Рго	ТЪг	ТЪг 55	О1у
Ьуз 65	А1а	Ьуз	А1а	ТЪг	Ьеи 70	ТЪг	Уа1
МеЬ	Ο1η	Ьеи	Ьуз	Зег 85	Ьеи	ТЪг	Зег
А1а	Агд	О1и	Зег 100	О1у	О1у	РЪе	Туг
О1у	ТЪг	ТЪг 115	Уа1	ТЪг	Уа1	Зег	Зег 120

Рго	О1и 10	Ьеи	Уа1	Ьуз	Рго	О1у 15	А1а
Зег 25	О1у	Туг	Зег	РЪе	ТЪг 30	О1у	Туг
Рго	О1и	Ьуз	Зег	Ьеи 45	О1и	Тгр	11е
О1у	ТЪг	Зег	Туг 60	Азп	Ο1η	Ьуз	РЪе
Азр	Ьуз	Зег 75	Зег	Зег	ТЪг	А1а	Туг 80
О1и	Азр 90	Зег	А1а	Уа1	Туг	Туг 95	Суз
Тгр 105	Туг	РЪе	Азр	Уа1	Тгр 110	О1у	ТЪг

<210> 153 <211> 345 <212> ДНК <213> Мышиная

<400> 153

даддЬссадс ЬдсадсадЬс ЬддассЬдад сЬддЬааадс сЬддддсЬЬс адЬдаадаЬд 60

ЬссЬдсаадд сЬЬсЬддаЬа сасаЬЬсасЬ аддЬаЬдЬЬа ЬдсасЬдддЬ даадсадаад 120

ссЬдддсадд дссЬЬдадЬд даЬЬддаЬаЬ аЬЬааЬссЬЬ асааЬдаЬдЬ ЬасЬаадЬас 180

ааЬдадаадЬ Ьсаааддсаа ддссасасЬд асЬЬсадаса даЬссЬссад сасадссЬас 240

аЬдааасЬса дсадссЬдас сЬсЬдаддас ЬсЬдсддЬсЬ аЬЬаЬЬдЬдс аадааасЬдд 300

дасдЬЬссЬЬ асЬддддсса адддасЬсЬд аЬсасЬдЬсЬ сЬдса 345

<210> 154

<211> 115

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 154

О1и

Уа1

Ο1η

Ьеи

Ο1η

Ο1η

Зег

О1у

Рго

О1и

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

О1у

А1а

1

5

10

15

Зег

Уа1

Ьуз

МеЬ

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1у

Туг

ТЪг

РЪе

ТЪг

Агд

Туг

20

25

30

Уа1

МеЬ

Н1з

Тгр

Уа1

Ьуз

Ο1η

Ьуз

Рго

О1у

Ο1η

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Туг

11е

Азп

Рго

Туг

Азп

Азр

Уа1

ТЪг

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Ьуз

РЪе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЪг

Ьеи

ТЪг

Зег

Азр

Агд

Зег

Зег

Зег

ТЪг

А1а

Туг

65

70

75

80

МеЬ

Ьуз

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

ТЪг

Зег

О1и

Азр

Зег

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Азп

Тгр

Азр

Уа1

Рго

Туг

Тгр

О1у

Ο1η

О1у

ТЪг

Ьеи

11е

ТЪг

100

105

110

Уа1

Зег

А1а

115

<210> 155 <211> 345

- 84 030436

<212> ДНК

<213> Мышиная

<400> 155

даддбссадс бдсадсадбс бддассбдад сбддбааадс сбддддсббс адбдаадабд 60

бссбдсаадд сббсбддаба сасаббсасб аддбабсбба бдсасбдддб даадсадаад 120

ссбддасадд дссббдадбд даббддабаб аббаабссбб асаабдабдд басбаадбас 180

аабдададдб бсаааддсаа ддссасасбд асббсадаса аабссбссад сасадссбас 240

абддадсбса дсадссбдас сбсбдаддас бсбдсддбсб аббасбдбдс аадааасбдд 300

дасдбассбб асбддддсса адддасбсбд дбсасбдбсб сбдса 345

<210> 156

<211> 115

<212> РКТ

<213> Мышиная

<400> 156

О1и

Уа1

Ο1η

Ьеи

Ο1η

Ο1η

Бег

О1у

Рго

О1и

Ьеи

Уа1

Ьуз

Рго

О1у

А1а

1

5

10

15

Бег

Уа1

Ьуз

Меб

Бег

Суз

Ьуз

А1а

Бег

О1у

Туг

ТЬг

РЬе

ТЬг

Агд

Туг

20

25

30

Ьеи

Меб

Н1з

Тгр

Уа1

Ьуз

Ο1η

Ьуз

Рго

О1у

Ο1η

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Туг

11е

Азп

Рго

Туг

Азп

Азр

О1у

ТЬг

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Агд

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Бег

Азр

Ьуз

Бег

Бег

Бег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

Меб

О1и

Ьеи

Бег

Бег

Ьеи

ТЬг

Бег

О1и

Азр

Бег

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Азп

Тгр

Азр

Уа1

Рго

Туг

Тгр

О1у

Ο1η

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

100

105

110

Уа1

Бег

А1а

115

<210> 157

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 157

дасабссада бдасссадад сссаадсадс сбдадсдсса дсдбдддсда ссдсдбдасс 60

абсассбдса аддссадссд сдасдбддсс абсдссдбдд ссбддбасса дсадаадсса 120

ддсааддбдс сааадсбдсб дсбдббсбдд дссадсассс дссасассдд сдбдссадас 180

сдсббсадсд дсадсддсад сддсассдас ббсасссбда ссабсадсад ссбдсадсса 240

даддассбдд ссдасбасба сбдссассад басадсадсб асссаббсас сббсддссад 300

ддсассаадс бддадабсаа д 321

<210> 158

<211> 107

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 158

Азр 11е Ο1η Меб ТЬг Ο1η Бег Рго Бег Бег Ьеи Бег А1а Бег Уа1 О1у 1 5 10 15

Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Ьуз А1а Бег Агд Азр Уа1 А1а 11е А1а

- 85 030436

20

25

30

Уа1

А1а

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Рго

О1у

Ьуз

Уа1

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

Ьеи

35

40

45

РЪе

Тгр

А1а

Зег

ТЪг

Агд

Нтз

ТЪг

О1у

Уа1

Рго

Азр

Агд

РЪе

Зег

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

О1у

ТЪг

Азр

РЪе

ТЪг

Ьеи

ТЪг

11е

Зег

Зег

Ьеи

О1п

Рго

65

70

75

80

О1и

Азр

Ьеи

А1а

Азр

Туг

Туг

Суз

Нтз

О1п

Туг

Зег

Зег

Туг

Рго

РЪе

85

90

95

ТЪг

РЪе

О1у

О1п

О1у

ТЪг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

<210> 159

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 159

дасаЕссада Едасссадад сссаадсадс сЕдадсдсса дсдЕдддсда ссдсдЕдасс 60

аЕсассЕдса аддссадссд сдасдЕддсс аЕсдссдЕдд ссЕддЕасса дсадаадсса 120

ддсааддЕдс сааадсЕдсЕ даЕсЕасЕдд дссадсассс дссасассдд сдЕдссаадс 180

сдсЕЕсадсд дсадсддсад ссдсассдас ЕЕсасссЕда ссаЕсадсад ссЕдсадсса 240

даддасдЕдд ссдасЕасЕЕ сЕдссассад ЕасадсадсЕ асссаЕЕсас сЕЕсддсадс 300

ддсассаадс ЕддадаЕсаа д 321

<210> 160

<211> 107

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 160

Азр 1

11е

О1п

МеЕ

ТЪг 5

О1п

Зег

Рго

Зег

Зег 10

Ьеи

Зег

А1а

Зег

Уа1 15

О1у

Азр

Агд

Уа1

ТЪг

11е

ТЪг

Суз

Ьуз

А1а

Зег

Агд

Азр

Уа1

А1а

11е

А1а

20

25

30

Уа1

А1а

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Рго

О1у

Ьуз

Уа1

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Туг

Тгр

А1а

Зег

ТЪг

Агд

Нтз

ТЪг

О1у

Уа1

Рго

Зег

Агд

РЪе

Зег

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

Агд

ТЪг

Азр

РЪе

ТЪг

Ьеи

ТЪг

11е

Зег

Зег

Ьеи

О1п

Рго

65

70

75

80

О1и

Азр

Уа1

А1а

Азр

Туг

РЪе

Суз

Нтз

О1п

Туг

Зег

Зег

Туг

Рго

РЪе

85

90

95

ТЪг

РЪе

О1у

Зег

О1у

ТЪг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

<210> 161

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 161

- 86 030436

дасаЕссада Едасссадад сссаадсадс сЕдадсдсса дсдЕдддсда ссдсдЕдасс 60

аЕсассЕдса аддссадссд сдасдЕддсс аЕсдссдЕдд ссЕддЕасса дсадаадсса 120

ддсааддЕдс сааадсЕдсЕ даЕсЕасЕдд дссадсассс дссасассдд сдЕдссаадс 180

сдсЕЕсадсд дсадсддсад ссдсассдас ЕЕсасссЕда ссаЕсадсад ссЕдсадсса 240

даддасдЕдд ссдасЕасЕЕ сЕдссассад ЕасадсадсЕ асссаЕЕсас сЕЕсддсадс 300

ддсассаадс ЕддадаЕсаа д 321

<210> 162

<211> 107

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 162

Азр 1

11е

О1п

МеЕ

ТЬг 5

О1п

Зег

Рго

Зег

Зег 10

Ьеи

Зег

А1а

Зег

Уа1 15

О1у

Азр

Агд

Уа1

ТЬг

11е

ТЬг

Суз

Ьуз

А1а

Зег

Агд

Азр

Уа1

А1а

11е

А1а

20

25

30

Уа1

А1а

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Рго

О1у

Ьуз

Уа1

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

Ьеи

35

40

45

Туг

Тгр

А1а

Зег

ТЬг

Агд

Няз

ТЬг

О1у

Уа1

Рго

Зег

Агд

РЬе

Зег

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

Агд

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

11е

Зег

Зег

Ьеи

О1п

Рго

65

70

75

80

О1и

Азр

Уа1

А1а

ТЬг

Туг

Туг

Суз

Няз

О1п

Туг

Зег

Зег

Туг

Рго

РЬе

85

90

95

ТЬг

РЬе

О1у

Зег

О1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

<210> 163

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 163

дасаЕссада Едасссадад сссаадсадс сЕдадсдсса дсдЕдддсда ссдсдЕдасс 60

аЕсассЕдса аддссадссд сдасдЕддсс аЕсдссдЕдд ссЕддЕасса дсадаадсса 120

ддсааддЕдс сааадсЕдсЕ дсЕдЕЕсЕдд дссадсассс дссасассдд сдЕдссадас 180

сдсЕЕсадсд дсадсддсад ссдсассдас ЕЕсасссЕда ссаЕсадсад ссЕдсадсса 240

даддассЕдд ссдасЕасЕа сЕдссассад ЕасадсадсЕ асссаЕЕсас сЕЕсддсадс 300

ддсассаадс ЕддадаЕсаа д 321

<210> 164

<211> 107

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 164

Азр 1

11е

О1п МеЕ

ТЬг 5

О1п

Зег

Рго

Зег

Зег 10

Ьеи

Зег А1а

Зег

Уа1 15

О1у

Азр

Агд

Уа1

ТЬг

11е

ТЬг

Суз

Ьуз

А1а

Зег

Агд

Азр

Уа1

А1а

11е

А1а

20

25

30

Уа1

А1а

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Рго

О1у

Ьуз

Уа1

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

Ьеи

35

40

45

- 87 030436

РЬе

Тгр 50

А1а

Бег

ТЬг Агд

Н1з 55

ТЬг О1у Уа1

Рго

Азр 60

Агд

РЬе

Бег

О1у

Бег

О1у

Бег

Агд

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

11е

Бег

Бег

Ьеи

О1п

Рго

65

70

75

80

О1и

Азр

Ьеи

А1а

Азр

Туг

Туг

Суз

Н1з

О1п

Туг

Бег

Бег

Туг

Рго

РЬе

85

90

95

ТЬг

РЬе

О1у

Бег

О1у

ТЬг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

100

105

<210> 165

<211> 360

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 165

саддЕдсадс ЕддЕдсадад сддсдссдад дЕдаадаадс саддсадсад сдЕдааддЕд 60

адсЕдсаадд ссадсддсЕа сассЕЕсасс дассадасса ЕссасЕддаЕ дсдссаддсс 120

ссаддссадд дссЕддадЕд даЕсддсЕас аЕсЕасссас дсдасдасад сссааадЕас 180

аасдадаасЕ Есаадддсаа ддЕсассаЕс ассдссдаса ададсассад сассдссЕас 240

аЕддадсЕда дсадссЕдсд садсдаддас ассдссдЕдЕ асЕасЕдсдс саЕсссадас 300

сдсадсддсЕ асдссЕддЕЕ саЕсЕасЕдд ддссадддса сссЕддЕдас сдЕдадсадс 360

<210> 166

<211> 120

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 166

О1п

Уа1

О1п

Ьеи

Уа1

О1п

Бег

О1у

А1а

О1и

Уа1

Ьуз

Ьуз

Рго

О1у

Бег

1

5

10

15

Бег

Уа1

Ьуз

Уа1

Бег

Суз

Ьуз

А1а

Бег

О1у

Туг

ТЬг

РЬе

ТЬг

Азр

О1п

20

25

30

ТЬг

11е

Н1з

Тгр

МеЕ

Агд

О1п

А1а

Рго

О1у

О1п

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Туг

11е

Туг

Рго

Агд

Азр

Азр

Бег

Рго

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Азп

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

Уа1

ТЬг

11е

ТЬг

А1а

Азр

Ьуз

Бег

ТЬг

Бег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

МеЕ

О1и

Ьеи

Бег

Бег

Ьеи

Агд

Бег

О1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

11е

Рго

Азр

Агд

Бег

О1у

Туг

А1а

Тгр

РЬе

11е

Туг

Тгр

О1у

О1п

100

105

110

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Бег

Бег

115

120

<210> 167

<211> 360

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 167

- 88 030436

саддкдсадс кддкдсадад сддсдссдад дкдаадаадс саддсадсад сдкдааддкд 60

адскдсаадд ссадсддскк сасскксасс дассадасса кссаскдддк дсдссаддсс 120

ссаддссадд дсскддадкд дакдддскас акскасссас дсдасдасад сссааадкас 180

аасдадааск ксаадддсаа ддксассскд ассдссдаса ададсассад сассдсскас 240

акддадскда дсадсскдсд садсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс саксссадас 300

сдсадсддск асдсскддкк сакскаскдд ддссадддса ссскддкдас сдкдадсадс 360

<210> 168

<211> 120

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 168

О1п

Уа1

О1п

Ьеи

Уа1

О1п

Зег

О1у

А1а

О1и

Уа1

Ьуз

Ьуз

Рго

О1у

Зег

1

5

10

15

Зег

Уа1

Ьуз

Уа1

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1у

РЬе

ТЬг

РЬе

ТЬг

Азр

О1п

20

25

30

ТЬг

11е

Н1з

Тгр

Уа1

Агд

О1п

А1а

Рго

О1у

О1п

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

Мек

35

40

45

О1у

Туг

11е

Туг

Рго

Агд

Азр

Азр

Зег

Рго

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Азп

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

Уа1

ТЬг

Ьеи

ТЬг

А1а

Азр

Ьуз

Зег

ТЬг

Зег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

Мек

О1и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

Агд

Зег

О1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

11е

Рго

Азр

Агд

Зег

О1у

Туг

А1а

Тгр

РЬе

11е

Туг

Тгр

О1у

О1п

100

105

110

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

115

120

<210> 169

<211> 360

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 169

саддкдсадс кддкдсадад сддсдссдад дкдаадаадс саддсадсад сдкдаадасс 60

адскдсаадд ссадсддсдд сасскксасс дассадасса кссаскдддк дсдссадсдс 120

ссаддссадд дсскддадкд дакдддскас акскасссас дсдасдасад сссааадкас 180

аасдадааск ксаадддссд сдксассакс ассдссдаса ададсассад сассдсскас 240

акддадскда дсадсскдсд садсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс саксссадас 300

сдсадсддск асдсскддкк сакскаскдд ддссадддса ссскддкдас сдкдадсадс 360

<210> 170

<211> 120

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 170

О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у Зег 1 5 10 15

- 89 030436

Зег

Уа1

Ьуз

ТЬг 20

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег 25

О1у

О1у

ТЬг

РЬе

ТЬг 30

Азр

О1п

ТИг

11е

Няз

Тгр

Уа1

Агд

О1п

Агд

Рго

О1у

О1п

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

МеЕ

35

40

45

О1у

Туг

11е

Туг

Рго

Агд

Азр

Азр

Зег

Рго

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Азп

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Агд

Уа1

ТЬг

11е

ТЬг

А1а

Азр

Ьуз

Зег

ТЬг

Зег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

МеЕ

О1и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

Агд

Зег

О1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

11е

Рго

Азр

Агд

Зег

О1у

Туг

А1а

Тгр

РЬе

11е

Туг

Тгр

О1у

О1п

100

105

110

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

115

120

<210> 171

<211> 360

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 171

саддЕдсадс ЕддЕдсадад сддсдссдад дЕдаадаадс саддсадсад сдЕдааддЕд 60

адсЕдсаадд ссадсддсдд сассЕЕсасс дассадасса ЕссасЕдддЕ дсдссаддсс 120

ссаддссадд дссЕддадЕд даЕдддсЕас аЕсЕасссас дсдасдасад сссааадЕас 180

аасдадааЕЕ Есаадддссд сдЕсасссЕд ассдссдаса ададсассад сассдссЕас 240

аЕддадсЕда дсадссЕдсд садсдаддас ассдссдЕдЕ асЕЕсЕдсдс ссдсссадас 300

сдсадсддсЕ асдссЕддЕЕ саЕсЕасЕдд ддссадддса сссЕддЕдас сдЕдадсадс 360

<210> 172

<211> 120

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 172

О1п

Уа1

О1п

Ьеи

Уа1

О1п

Зег

О1у

А1а

О1и

Уа1

Ьуз

Ьуз

Рго

О1у

Зег

1

5

10

15

Зег

Уа1

Ьуз

Уа1

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1у

О1у

ТЬг

РЬе

ТЬг

Азр

О1п

20

25

30

ТЬг

11е

Няз

Тгр

Уа1

Агд

О1п

А1а

Рго

О1у

О1п

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

МеЕ

35

40

45

О1у

Туг

11е

Туг

Рго

Агд

Азр

Азр

Зег

Рго

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Азп

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Агд

Уа1

ТЬг

Ьеи

ТЬг

А1а

Азр

Ьуз

Зег

ТЬг

Зег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

МеЕ

О1и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

Агд

Зег

О1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

РЬе

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Рго

Азр

Агд

Зег

О1у

Туг

А1а

Тгр

РЬе

11е

Туг

Тгр

О1у

О1п

100

105

110

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

115

120

<210> 173 <211> 642 <212> ДНК

- 90 030436

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 173

дасаЬссада Ьдасссадад сссаадсадс сЬдадсдсса дсдЬдддсда ссдсдЬдасс 60

аЬсассЬдса аддссадссд сдасдЬддсс аЬсдссдЬдд ссЬддЬасса дсадаадсса 120

ддсааддЬдс сааадсЬдсЬ даЬсЬасЬдд дссадсассс дссасассдд сдЬдссаадс 180

сдсЬЬсадсд дсадсддсад ссдсассдас ЬЬсасссЬда ссаЬсадсад ссЬдсадсса 240

даддасдЬдд ссдасЬасЬЬ сЬдссассад ЬасадсадсЬ асссаЬЬсас сЬЬсддсадс 300

ддсассаадс ЬддадаЬсаа дсдЬасЬдЬд дсЬдсассаЬ сЬдЬсЬЬсаЬ сЬЬсссдсса 360

ЬсЬдаЬдадс адЬЬдаааЬс ЬддаасЬдсс ЬсЬдЬЬдЬдЬ дссЬдсЬдаа ЬаасЬЬсЬаЬ 420

сссадададд ссааадЬаса дЬддааддЬд даЬаасдссс ЬссааЬсддд ЬаасЬсссад 480

дададЬдЬса сададсадда садсааддас адсассЬаса дссЬсадсад сасссЬдасд 540

сЬдадсааад садасЬасда дааасасааа дЬсЬасдссЬ дсдаадЬсас ссаЬсадддс 600

сЬдадсЬсдс ссдЬсасааа дадсЬЬсаас аддддададЬ дЬ 642

<210> 174

<211> 214

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 174

Азр 1

11е

О1п

МеЬ

ТЪг 5

О1п

Зег

Рго

Зег

Зег 10

Ьеи

Зег

А1а

Зег

Уа1 15

О1у

Азр

Агд

Уа1

ТЪг

11е

ТЪг

Суз

Ьуз

А1а

Зег

Агд

Азр

Уа1

А1а

11е

А1а

20

25

30

Уа1

А1а

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Рго

О1у

Ьуз

Уа1

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

11е

35

40

45

Туг

Тгр

А1а

Зег

ТЪг

Агд

Н1з

ТЪг

О1у

Уа1

Рго

Зег

Агд

РЪе

Зег

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

Агд

ТЪг

Азр

РЪе

ТЪг

Ьеи

ТЪг

11е

Зег

Зег

Ьеи

О1п

Рго

65

70

75

80

О1и

Азр

Уа1

А1а

Азр

Туг

РЪе

Суз

Н1з

О1п

Туг

Зег

Зег

Туг

Рго

РЪе

85

90

95

ТЪг

РЪе

О1у

Зег

О1у

ТЪг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

Агд

ТЪг

Уа1

А1а

А1а

100

105

110

Рго

Зег

Уа1

РЪе

11е

РЪе

Рго

Рго

Зег

Азр

О1и

О1п

Ьеи

Ьуз

Зег

О1у

115

120

125

ТЪг

А1а

Зег

Уа1

Уа1

Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

Азп

РЪе

Туг

Рго

Агд

О1и

А1а

130

135

140

Ьуз

Уа1

О1п

Тгр

Ьуз

Уа1

Азр

Азп

А1а

Ьеи

О1п

Зег

О1у

Азп

Зег

О1п

145

150

155

160

О1и

Зег

Уа1

ТЪг

О1и

О1п

Азр

Зег

Ьуз

Азр

Зег

ТЪг

Туг

Зег

Ьеи

Зег

165

170

175

Зег

ТЪг

Ьеи

ТЪг

Ьеи

Зег

Ьуз

А1а

Азр

Туг

О1и

Ьуз

Н1з

Ьуз

Уа1

Туг

180

185

190

А1а

Суз

О1и

Уа1

ТЪг

Н1з

О1п

О1у

Ьеи

Зег

Зег

Рго

Уа1

ТЪг

Ьуз

Зег

195

200

205

РЪе

Азп

Агд

О1у

О1и

Суз

210

<210> 175

<211> 1347

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

- 91 030436

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 175

саддбдсадс бддбдсадад сддсдссдад дбдаадаадс саддсадсад сдбдааддбд 60

адсбдсаадд ссадсддсба сассббсасс дассадасса бссасбддаб дсдссаддсс 120

ссаддссадд дссбддадбд дабсддсбас абсбасссас дсдасдасад сссааадбас 180

аасдадаасб бсаадддсаа ддбсассабс ассдссдаса ададсассад сассдссбас 240

абддадсбда дсадссбдсд садсдаддас ассдссдбдб асбасбдсдс сабсссадас 300

сдсадсддсб асдссбддбб сабсбасбдд ддссадддса сссбддбдас сдбдадсадс 360

дссбссасса адддсссабс ддбсббсссс сбддсасссб ссбссаадад сассбсбддд 420

ддсасадсдд сссбдддсбд ссбддбсаад дасбасббсс ссдаассддб дасддбдбсд 480

бддаасбсад дсдсссбдас садсддсдбд сасассббсс сддсбдбссб асадбссбса 540

ддасбсбасб сссбсадсад сдбддбдасс дбдсссбсса дсадсббддд сасссадасс 600

басабсбдса асдбдаабса саадсссадс аасассаадд бсдасаадад адббдадссс 660

ааабсббдбд асаааасбса сасабдссса ссдбдсссад сассадаадс бдсбддддда 720

ссдбсадбсб бссбсббссс сссаааассс ааддасассс бсабдабсбс ссддассссб 780

даддбсасаб дсдбсдбддб ддасдбдадс сасдаадасс сбдаддбсаа дббсаасбдд 840

басдбддасд дсдбддаддб дсабаабдсс аадасааадс сдсдддадда дсадбасаас 900

адсасдбасс дбдбддбсад сдбссбсасс дбссбдсасс аддасбддсб даабддсаад 960

дадбасаадб дсааддбсбс саасааадсс сбсссадссс ссабсдадаа аассабсбсс 1020

ааадссааад ддсадссссд адаассасад дбдбасассс бдсссссабс ссдддаддад 1080

абдассаада ассаддбсад ссбдассбдс сбддбсааад дсббсбабсс садсдасабс 1140

дссдбддадб дддададсаа бдддсадссд дадаасаасб асаадассас дссбсссдбд 1200

сбддасбссд асддсбссбб сббссбсбас адсаадсбса ссдбддасаа дадсаддбдд 1260

садсадддда асдбсббсбс абдсбссдбд абдсабдадд сбсбдсасаа ссасбасасд 1320

садаададсс бсбсссбдбс бссдддб 1347

<210> 176

<211> 449

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 176

О1п 1

Уа1

О1п

Ьеи

Уа1 5

О1п

Зег О1у

А1а

О1и 10

Уа1

Ьуз

Ьуз

Рго

О1у 15

Зег

Зег

Уа1

Ьуз

Уа1

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1у

Туг

ТЬг

РЬе

ТЬг

Азр

О1п

20

25

30

ТИг

11е

Н1з

Тгр

Меб

Агд

О1п

А1а

Рго

О1у

О1п

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

11е

35

40

45

О1у

Туг

11е

Туг

Рго

Агд

Азр

Азр

Зег

Рго

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Азп

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

Уа1

ТЬг

11е

ТЬг

А1а

Азр

Ьуз

Зег

ТЬг

Зег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

Меб

О1и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

Агд

Зег

О1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

11е

Рго

Азр

Агд

Зег

О1у

Туг

А1а

Тгр

РЬе

11е

Туг

Тгр

О1у

О1п

100

105

110

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

А1а

Зег

ТЬг

Ьуз

О1у

Рго

Зег

Уа1

115

120

125

РЬе

Рго

Ьеи

А1а

Рго

Зег

Зег

Ьуз

Зег

ТЬг

Зег

О1у

О1у

ТЬг

А1а

А1а

130

135

140

Ьеи

О1у

Суз

Ьеи

Уа1

Ьуз

Азр

Туг

РЬе

Рго

О1и

Рго

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

145

150

155

160

Тгр

Азп

Зег

О1у

А1а

Ьеи

ТЬг

Зег

О1у

Уа1

Н1з

ТЬг

РЬе

Рго

А1а

Уа1

165

170

175

Ьеи

О1п

Зег

Зег

О1у

Ьеи

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Зег

Уа1

Уа1

ТЬг

Уа1

Рго

180

185

190

Зег

Зег

Зег

Ьеи

О1у

ТЬг

О1п

ТЬг

Туг

11е

Суз

Азп

Уа1

Азп

Н1з

Ьуз

195

200

205

Рго

Зег

Азп

ТЬг

Ьуз

Уа1

Азр

Ьуз

Агд

Уа1

О1и

Рго

Ьуз

Зег

Суз

Азр

- 92 030436

210

215

220

Ьуз

ТЬг

Н1з

ТЬг

Суз

Рго

Рго

Суз

Рго

А1а

Рго

О1и

А1а

А1а

О1у

О1у

225

230

235

240

Рго

Зег

Уа1

РЬе

Ьеи

РЬе

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТЬг

Ьеи

МеЕ

11е

245

250

255

Зег

Агд

ТЬг

Рго

О1и

Уа1

ТЬг

Суз

Уа1

Уа1

Уа1

Азр

Уа1

Зег

Н1з

О1и

260

265

270

Азр

Рго

О1и

Уа1

Ьуз

РЬе

Азп

Тгр

Туг

Уа1

Азр

О1у

Уа1

О1и

Уа1

Н1з

275

280

285

Азп

А1а

Ьуз

ТЬг

Ьуз

Рго

Агд

О1и

О1и

О1п

Туг

Азп

Зег

ТЬг

Туг

Агд

290

295

300

Уа1

Уа1

Зег

Уа1

Ьеи

ТЬг

Уа1

Ьеи

Н1з

О1п

Азр

Тгр

Ьеи

Азп

О1у

Ьуз

305

310

315

320

О1и

Туг

Ьуз

Суз

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Ьуз

А1а

Ьеи

Рго

А1а

Рго

11е

О1и

325

330

335

Ьуз

ТЬг

11е

Зег

Ьуз

А1а

Ьуз

О1у

О1п

Рго

Агд

О1и

Рго

О1п

Уа1

Туг

340

345

350

ТЬг

Ьеи

Рго

Рго

Зег

Агд

О1и

О1и

МеЕ

ТЬг

Ьуз

Азп

О1п

Уа1

Зег

Ьеи

355

360

365

ТЬг

Суз

Ьеи

Уа1

Ьуз

О1у

РЬе

Туг

Рго

Зег

Азр

11е

А1а

Уа1

О1и

Тгр

370

375

380

О1и

Зег

Азп

О1у

О1п

Рго

О1и

Азп

Азп

Туг

Ьуз

ТЬг

ТЬг

Рго

Рго

Уа1

385

390

395

400

Ьеи

Азр

Зег

Азр

О1у

Зег

РЬе

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

Ьуз

Ьеи

ТЬг

Уа1

Азр

405

410

415

Ьуз

Зег

Агд

Тгр

О1п

О1п

О1у

Азп

Уа1

РЬе

Зег

Суз

Зег

Уа1

МеЕ

Н1з

420

425

430

О1и

А1а

Ьеи

Нтз

Азп

Нтз

Туг

ТЬг

О1п

Ьуз

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи

Зег

Рго

435

440

445

О1у

<210> 177

<211> 1347

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 177

саддЕдсадс ЕддЕдсадад сддсдссдад дЕдаадаадс саддсадсад сдЕдааддЕд 60

адсЕдсаадд ссадсддсЕЕ сассЕЕсасс дассадасса ЕссасЕдддЕ дсдссаддсс 120

ссаддссадд дссЕддадЕд даЕдддсЕас аЕсЕасссас дсдасдасад сссааадЕас 180

аасдадаасЕ Есаадддсаа ддЕсасссЕд ассдссдаса ададсассад сассдссЕас 240

аЕддадсЕда дсадссЕдсд садсдаддас ассдссдЕдЕ асЕасЕдсдс саЕсссадас 300

сдсадсддсЕ асдссЕддЕЕ саЕсЕасЕдд ддссадддса сссЕддЕдас сдЕдадсадс 360

дссЕссасса адддсссаЕс ддЕсЕЕсссс сЕддсасссЕ ссЕссаадад сассЕсЕддд 420

ддсасадсдд сссЕдддсЕд ссЕддЕсаад дасЕасЕЕсс ссдаассддЕ дасддЕдЕсд 480

ЕддаасЕсад дсдсссЕдас садсддсдЕд сасассЕЕсс сддсЕдЕссЕ асадЕссЕса 540

ддасЕсЕасЕ сссЕсадсад сдЕддЕдасс дЕдсссЕсса дсадсЕЕддд сасссадасс 600

ЕасаЕсЕдса асдЕдааЕса саадсссадс аасассаадд Есдасаадад адЕЕдадссс 660

аааЕсЕЕдЕд асаааасЕса сасаЕдссса ссдЕдсссад сассадаадс ЕдсЕддддда 720

ссдЕсадЕсЕ ЕссЕсЕЕссс сссаааассс ааддасассс ЕсаЕдаЕсЕс ссддассссЕ 780

даддЕсасаЕ дсдЕсдЕддЕ ддасдЕдадс сасдаадасс сЕдаддЕсаа дЕЕсаасЕдд 840

ЕасдЕддасд дсдЕддаддЕ дсаЕааЕдсс аадасааадс сдсдддадда дсадЕасаас 900

адсасдЕасс дЕдЕддЕсад сдЕссЕсасс дЕссЕдсасс аддасЕддсЕ дааЕддсаад 960

дадЕасаадЕ дсааддЕсЕс саасааадсс сЕсссадссс ссаЕсдадаа аассаЕсЕсс 1020

ааадссааад ддсадссссд адаассасад дЕдЕасассс ЕдсссссаЕс ссдддаддад 1080

аЕдассаада ассаддЕсад ссЕдассЕдс сЕддЕсааад дсЕЕсЕаЕсс садсдасаЕс 1140

дссдЕддадЕ дддададсаа Едддсадссд дадаасаасЕ асаадассас дссЕсссдЕд 1200

сЕддасЕссд асддсЕссЕЕ сЕЕссЕсЕас адсаадсЕса ссдЕддасаа дадсаддЕдд 1260

- 93 030436

садсадддда асдксккскс акдскссдкд акдсакдадд скскдсасаа ссаскасасд 1320 садаададсс кскссскдкс кссдддк 1347

<210> 178

<211> 449

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 178

О1п Уа1 1

О1п

Ьеи

Уа1 5

О1п

Зег

О1у А1а

О1и 10

Уа1

Ьуз

Ьуз

Рго

О1у 15

Зег

Зег

Уа1

Ьуз

Уа1

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

О1у

РЬе

ТЬг

РЬе

ТЬг

Азр

О1п

20

25

30

ТИг

11е

Н1з

Тгр

Уа1

Агд

О1п

А1а

Рго

О1у

О1п

О1у

Ьеи

О1и

Тгр

Мек

35

40

45

О1у

Туг

11е

Туг

Рго

Агд

Азр

Азр

Зег

Рго

Ьуз

Туг

Азп

О1и

Азп

РЬе

50

55

60

Ьуз

О1у

Ьуз

Уа1

ТЬг

Ьеи

ТЬг

А1а

Азр

Ьуз

Зег

ТЬг

Зег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

Мек

О1и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

Агд

Зег

О1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

11е

Рго

Азр

Агд

Зег

О1у

Туг

А1а

Тгр

РЬе

11е

Туг

Тгр

О1у

О1п

100

105

110

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

А1а

Зег

ТЬг

Ьуз

О1у

Рго

Зег

Уа1

115

120

125

РЬе

Рго

Ьеи

А1а

Рго

Зег

Зег

Ьуз

Зег

ТЬг

Зег

О1у

О1у

ТЬг

А1а

А1а

130

135

140

Ьеи

О1у

Суз

Ьеи

Уа1

Ьуз

Азр

Туг

РЬе

Рго

О1и

Рго

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

145

150

155

160

Тгр

Азп

Зег

О1у

А1а

Ьеи

ТЬг

Зег

О1у

Уа1

Н1з

ТЬг

РЬе

Рго

А1а

Уа1

165

170

175

Ьеи

О1п

Зег

Зег

О1у

Ьеи

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Зег

Уа1

Уа1

ТЬг

Уа1

Рго

180

185

190

Зег

Зег

Зег

Ьеи

О1у

ТЬг

О1п

ТЬг

Туг

11е

Суз

Азп

Уа1

Азп

Н1з

Ьуз

195

200

205

Рго

Зег

Азп

ТЬг

Ьуз

Уа1

Азр

Ьуз

Агд

Уа1

О1и

Рго

Ьуз

Зег

Суз

Азр

210

215

220

Ьуз

ТЬг

Н1з

ТЬг

Суз

Рго

Рго

Суз

Рго

А1а

Рго

О1и

А1а

А1а

О1у

О1у

225

230

235

240

Рго

Зег

Уа1

РЬе

Ьеи

РЬе

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТЬг

Ьеи

Мек

11е

245

250

255

Зег

Агд

ТЬг

Рго

О1и

Уа1

ТЬг

Суз

Уа1

Уа1

Уа1

Азр

Уа1

Зег

Н1з

О1и

260

265

270

Азр

Рго

О1и

Уа1

Ьуз

РЬе

Азп

Тгр

Туг

Уа1

Азр

О1у

Уа1

О1и

Уа1

Н1з

275

280

285

Азп

А1а

Ьуз

ТЬг

Ьуз

Рго

Агд

О1и

О1и

О1п

Туг

Азп

Зег

ТЬг

Туг

Агд

290

295

300

Уа1

Уа1

Зег

Уа1

Ьеи

ТЬг

Уа1

Ьеи

Н1з

О1п

Азр

Тгр

Ьеи

Азп

О1у

Ьуз

305

310

315

320

О1и

Туг

Ьуз

Суз

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Ьуз

А1а

Ьеи

Рго

А1а

Рго

11е

О1и

325

330

335

Ьуз

ТЬг

11е

Зег

Ьуз

А1а

Ьуз

О1у

О1п

Рго

Агд

О1и

Рго

О1п

Уа1

Туг

340

345

350

ТЬг

Ьеи

Рго

Рго

Зег

Агд

О1и

О1и

Мек

ТЬг

Ьуз

Азп

О1п

Уа1

Зег

Ьеи

355

360

365

ТЬг

Суз

Ьеи

Уа1

Ьуз

О1у

РЬе

Туг

Рго

Зег

Азр

11е

А1а

Уа1

О1и

Тгр

370

375

380

О1и

Зег

Азп

О1у

О1п

Рго

О1и

Азп

Азп

Туг

Ьуз

ТЬг

ТЬг

Рго

Рго

Уа1

385

390

395

400

Ьеи

Азр

Зег

Азр

О1у

Зег

РЬе

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

Ьуз

Ьеи

ТЬг

Уа1

Азр

- 94 030436

405

410

415

Ьуз

Зег

Агд

Тгр

О1п

О1п

О1у Азп

Уа1

РЪе

Зег

Суз

Зег

Уа1

МеЬ

Η18

420

425

430

О1и

А1а

Ьеи

Η18

Азп

Η18

Туг ТЪг

О1п

Ьуз

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи

Зег

Рго

435

440

445

О1у

<210> 179

<211> 642

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 179

дасаЬссада Ьдасссадад сссаадсадс сЬдадсдсса дсдЬдддсда ссдсдЬдасс 60

аЬсассЬдса аддссадссд сдасдЬддсс аЬсдссдЬдд ссЬддЬасса дсадаадсса 120

ддсааддЬдс сааадсЬдсЬ дсЬдЬЬсЬдд дссадсассс дссасассдд сдЬдссадас 180

сдсЬЬсадсд дсадсддсад сддсассдас ЬЬсасссЬда ссаЬсадсад ссЬдсадсса 240

даддассЬдд ссдасЬасЬа сЬдссассад ЬасадсадсЬ асссаЬЬсас сЬЬсддссад 300

ддсассаадс ЬддадаЬсаа дсдЬасЬдЬд дсЬдсассаЬ сЬдЬсЬЬсаЬ сЬЬсссдсса 360

ЬсЬдаЬдадс адЬЬдаааЬс ЬддаасЬдсс ЬсЬдЬЬдЬдЬ дссЬдсЬдаа ЬаасЬЬсЬаЬ 420

сссадададд ссааадЬаса дЬддааддЬд даЬаасдссс ЬссааЬсддд ЬаасЬсссад 480

дададЬдЬса сададсадда садсааддас адсассЬаса дссЬсадсад сасссЬдасд 540

сЬдадсааад садасЬасда дааасасааа дЬсЬасдссЬ дсдаадЬсас ссаЬсадддс 600

сЬдадсЬсдс ссдЬсасааа дадсЬЬсаас аддддададЬ дЬ 642

<210> 180

<211> 214

<212> РКТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гуманизированная последовательность

<400> 180

Азр 1

11е

О1п

МеЬ

ТЪг 5

О1п

Зег

Рго

Зег

Зег 10

Ьеи

Зег

А1а

Зег

Уа1 15

О1у

Азр

Агд

Уа1

ТЪг

11е

ТЪг

Суз

Ьуз

А1а

Зег

Агд

Азр

Уа1

А1а

11е

А1а

20

25

30

Уа1

А1а

Тгр

Туг

О1п

О1п

Ьуз

Рго

О1у

Ьуз

Уа1

Рго

Ьуз

Ьеи

Ьеи

Ьеи

35

40

45

РЪе

Тгр

А1а

Зег

ТЪг

Агд

Η18

ТЪг

О1у

Уа1

Рго

Азр

Агд

РЪе

Зег

О1у

50

55

60

Зег

О1у

Зег

О1у

ТЪг

Азр

РЪе

ТЪг

Ьеи

ТЪг

11е

Зег

Зег

Ьеи

О1п

Рго

65

70

75

80

О1и

Азр

Ьеи

А1а

Азр

Туг

Туг

Суз

Η18

О1п

Туг

Зег

Зег

Туг

Рго

РЪе

85

90

95

ТЪг

РЪе

О1у

О1п

О1у

ТЪг

Ьуз

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

Агд

ТЪг

Уа1

А1а

А1а

100

105

110

Рго

Зег

Уа1

РЪе

11е

РЪе

Рго

Рго

Зег

Азр

О1и

О1п

Ьеи

Ьуз

Зег

О1у

115

120

125

ТЪг

А1а

Зег

Уа1

Уа1

Суз

Ьеи

Ьеи

Азп

Азп

РЪе

Туг

Рго

Агд

О1и

А1а

130

135

140

Ьуз

Уа1

О1п

Тгр

Ьуз

Уа1

Азр

Азп

А1а

Ьеи

О1п

Зег

О1у

Азп

Зег

О1п

145

150

155

160

О1и

Зег

Уа1

ТЪг

О1и

О1п

Азр

Зег

Ьуз

Азр

Зег

ТЪг

Туг

Зег

Ьеи

Зег

165

170

175

Зег

ТЪг

Ьеи

ТЪг

Ьеи

Зег

Ьуз

А1а

Азр

Туг

О1и

Ьуз

Η18

Ьуз

Уа1

Туг

180

185

190

- 95 030436

А1а Суз О1и Уа1 ТЬг НФз О1п О1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег 195 200 205

РЬе Азп Агд О1у О1и Суз 210

<210> 181

<211> 189

<212> РКТ

<213> Ното заргепз

<400> 181

МеЕ 1

Ьеи

О1у

Зег

Агд 5

А1а

Уа1

МеЕ

Ьеи

Ьеи 10

Ьеи

Ьеи

Ьеи

Рго

Тгр 15

ТЬг

А1а

О1п

О1у

Агд

А1а

Уа1

Рго

О1у

О1у

Зег

Зег

Рго

А1а

Тгр

ТЬг

О1п

20

25

30

Суз

О1п

О1п

Ьеи

Зег

О1п

Ьуз

Ьеи

Суз

ТЬг

Ьеи

А1а

Тгр

Зег

А1а

НФз

35

40

45

Рго

Ьеи

Уа1

О1у

НФз

МеЕ

Азр

Ьеи

Агд

О1и

О1и

О1у

Азр

О1и

О1и

ТЬг

50

55

60

ТЬг

Азп

Азр

Уа1

Рго

НФз

11е

О1п

Суз

О1у

Азр

О1у

Суз

Азр

Рго

О1п

65

70

75

80

О1у

Ьеи

Агд

Азр

Азп

Зег

О1п

РЬе

Суз

Ьеи

О1п

Агд

11е

НФз

О1п

О1у

85

90

95

Ьеи

11е

РЬе

Туг

О1и

Ьуз

Ьеи

Ьеи

О1у

Зег

Азр

11е

РЬе

ТЬг

О1у

О1и

100

105

110

Рго

Зег

Ьеи

Ьеи

Рго

Азр

Зег

Рго

Уа1

О1у

О1п

Ьеи

НФз

А1а

Зег

Ьеи

115

120

125

Ьеи

О1у

Ьеи

Зег

О1п

Ьеи

Ьеи

О1п

Рго

О1и

О1у

НФз

НФз

Тгр

О1и

ТЬг

130

135

140

О1п

О1п

11е

Рго

Зег

Ьеи

Зег

Рго

Зег

О1п

Рго

Тгр

О1п

Агд

Ьеи

Ьеи

145

150

155

160

Ьеи

Агд

РЬе

Ьуз

11е

Ьеи

Агд

Зег

Ьеи

О1п

А1а

РЬе

Уа1

А1а

Уа1

А1а

165

170

175

А1а

Агд

Уа1

РЬе

А1а

НФз

О1у

А1а

А1а

ТЬг

Ьеи

Зег

Рго

180

185

Claims (38)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Антитело к 1Ь-23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

   а) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕО ГО N0: 19 (СГОК1-Ь); аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 20 (СГОК2-Ь); и аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 21 (СГОК3-Ь); и

   б) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 63, 66, 67 или 68 (СЭК1-Н); аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 64 (СГОК2-Н); и аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 65 (СГОК3-Н).
2. 2. Антитело к 1Ь-23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

   а) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 19 (СГОК1-Ь); аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 20 (СГОК2-Ь); и аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 21 (СГОК3-Ь); и

   б) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 63 (СОК1-Н); аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 64 (СГОК2-Н); и аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 65 (СГОК3-Н).
3. 3. Антитело к 1Ь-23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

   а) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 19 (СГОК1-Ь); аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 20 (СГОК2-Ь); и аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 21 (СГОК3-Ь); и

   б) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 66 (СОК1-Н); аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 64 (СГОК2-Н); и аминокислотную

   - 96 030436

   последовательность δΕφ ΙΌ N0: 65 (СЭК3-Н).
4. 4. Антитело к 1Ь-23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

   а) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕφ ΙΌ N0: 19 (СОКГ-Ь); аминокислотную последовательность δΕφ ΙΌ N0: 20 (СОК2-Ь); и аминокислотную последовательность δΕφ ΙΌ N0: 21 (СЭКЗ-Ь); и

   б) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕφ ΙΌ N0: 67 (СЭК1-Н); аминокислотную последовательность δΕφ ΙΌ N0: 64 (СЭК2-Н); и аминокислотную последовательность δΕφ ΙΌ N0: 65 (СЭК3-Н).
5. 5. Антитело к ΙΕ-23ρ19 или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

   а) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕφ ΙΌ N0: 19 (СГОК 1-Ь); аминокислотную последовательность δΕφ ΙΌ N0: 20 (СГОК2ГО·); и аминокислотную последовательность δΕφ ΙΌ N0: 21 (СГОК3ГО·); и

   б) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕφ ΙΌ N0: 68 (СОК1-Н); аминокислотную последовательность δΕφ ΙΌ N0: 64 (СГОК2-Н); и аминокислотную последовательность δΕφ ΙΌ N0: 65 (СГОК3-Н).
6. 6. Антитело к ΙΕ-23ρ19 или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую любую из аминокислотных последовательностей δΕφ ΙΌ N0: 158, 160, 162 или 164; и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую любую из аминокислотных последовательностей δΕφ ΙΌ N0: 166, 168, 170 или 172.
7. 7. Антитело к ΙΕ-23ρ19 или его антигенсвязывающий фрагмент по п.6, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕφ ΙΌ N0: 160, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕφ ГО N0: 166.
8. 8. Антитело к ГО-23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент по п.6, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕφ ГО N0: 160, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕφ ГО N0: 168.
9. 9. Антитело к ГО-23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент по п.6, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕφ ГО N0: 158, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕφ ГО N0: 166.
10. 10. Антитело к ГО-23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент по п.6, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕφ ГО N0: 158, и вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность δΕφ ГО N0: 168.
11. 11. Антитело к ГО-23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент по п.6, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит аминокислотную последовательность δΕφ ГО N0: 166 или 168, связанную с константной областью тяжелой цепи человеческого фСд и аминокислотную последовательность δΕφ ΙΌ N0: 158 или 160, связанную с константной областью человеческой легкой каппа-цепи.
12. 12. Антитело к ГО-23р19 или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

    а) вариабельную область гуманизированной легкой цепи, содержащую СГОК-участки из δΕφ ГО N0: 158 или 160, и каркасные участки, имеющие аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности каркасных участков вариабельной области легкой цепи, которая имеет аминокислотную последовательность 8Εφ ГО N0: 158 или 160;

    б) вариабельную область гуманизированной тяжелой цепи, содержащей СГОК-участки из 8Εφ ГО N0: 166 или 168, и каркасные участки, имеющие аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности каркасных участков вариабельной области тяжелой цепи, которая имеет аминокислотную последовательность 8Εφ ГО N0: 166 или 168.
13. 13. Антитело к ГО-23р19 по одному из пп.1-12, где антитело представляет собой моноклональное антитело.
14. 14. Антитело к ГО-23р19 по п.1, где антитело представляет собой моноклональное антитело к ГО23р19, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность 8Εφ ГО N0: 174 или 180, и тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность 8Εφ ГО N0: 176 или 178.
15. 15. Моноклональное антитело к ГО-23р19 по п.14, где указанное антитело содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность 8Εφ ΙΌ N0: 174, и тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность 8Εφ ΙΌ N0: 176.
16. 16. Моноклональное антитело к ГО-23р19 по п.14, где указанное антитело содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность 8Εφ ΙΌ N0: 174, и тяжелую цепь, которая со- 97 030436

    держит аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 178.
17. 17. Моноклональное антитело к 1Ь-23р19 по п.14, где указанное антитело содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 180, и тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 176.
18. 18. Моноклональное антитело к 1Ь-23р19 по п.14, где указанное антитело содержит легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 180, и тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 178.
19. 19. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по одному из пп.1-18 для лечения воспалительного заболевания, аутоиммунного заболевания, респираторного заболевания, метаболического нарушения или рака.
20. 20. Применение по п.19 для лечения псориаза, воспалительного заболевания кишечника, псориатического артрита, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, болезни Крона или анкилозирующего спондилита.
21. 21. Применение по п.19 для лечения астмы или хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).
22. 22. Фармацевтическая композиция для лечения воспалительного заболевания, аутоиммунного заболевания, респираторного заболевания, метаболического нарушения или рака, содержащая антитело или антигенсвязывающий фрагмент по одному из пп.1-18 и фармацевтически приемлемый носитель.
23. 23. Выделенный полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела по п.18.
24. 24. Выделенный полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела по п.18.
25. 25. Выделенный полинуклеотид по п.23, где указанный полинуклеотид содержит последовательность, которая кодирует легкую цепь антитела, имеющую аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 174 или 180.
26. 26. Выделенный полинуклеотид по п.24, где указанный полинуклеотид содержит последовательность, которая кодирует тяжелую цепь антитела, имеющую аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 176 или 178.
27. 27. Экспрессионный вектор, включающий полинуклеотид по пп.23-26.
28. 28. Клетка-хозяина для получения антитела по пп.1-18, включающая:

    а) выделенный полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 158, 160, 162 или 164;

    б) выделенный полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 166, 168, 170 или 172.
29. 29. Клетка-хозяин по п.28, где указанный выделенный полинуклеотид по а) включает последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 160, и указанный выделенный полинуклеотид по б) включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 166.
30. 30. Клетка-хозяин по п.28, где указанный выделенный полинуклеотид по а) включает последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 160, и указанный выделенный полинуклеотид по б) включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 168.
31. 31. Клетка-хозяин по п.28, где указанный выделенный полинуклеотид по а) включает последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 158, и указанный выделенный полинуклеотид по б) включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 166.
32. 32. Клетка-хозяин по п.28, где указанный выделенный полинуклеотид по а) включает последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 158, и указанный выделенный полинуклеотид по б) включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела или фрагмента антитела, имеющую аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 168.
33. 33. Клетка-хозяин для получения антитела по пп.1-18, включающая:

    а) выделенный полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует легкую цепь антитела, имеющую аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 174 или 180, и

    б) выделенный полинуклеотид, содержащий последовательность, которая кодирует тяжелую цепь антитела, имеющую аминокислотную последовательность §Е0 ГО N0: 176 или 178.
34. 34. Клетка-хозяин по п.33, где указанный выделенный полинуклеотид по а) включает последова- 98 030436

    тельность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность ВЕС) ГО N0: 174, и указанный выделенный полинуклеотид по б) включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность ВЕР ГО N0: 176.
35. 35. Клетка-хозяин по п.33, где указанный выделенный полинуклеотид по а) включает последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность ВЕР ГО N0: 174, и указанный выделенный полинуклеотид по б) включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность ВЕР ГО N0: 178.
36. 36. Клетка-хозяин по п.33, где указанный выделенный полинуклеотид по а) включает последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность ВЕР ГО N0: 180, и указанный выделенный полинуклеотид по б) включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность ВЕР ГО N0: 176.
37. 37. Клетка-хозяин по п.33, где указанный выделенный полинуклеотид по а) включает последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность ВЕР ГО N0: 180, и указанный выделенный полинуклеотид по б) включает последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела, имеющую аминокислотную последовательность ВЕР ГО N0: 178.
38. 38. Способ получения антитела или антигенсвязывающего фрагмента, включающий:

    а) получение клетки-хозяина по пп.28-37;

    б) культивирование клетки-хозяина;

    с) выделение и очистку антитела или антигенсвязывающего фрагмента.

    Сконструированные Ук-области антитела к 1Ь-23р 19 6В8

    >6В8-Ук >8иж Ук#в5 >Ниа Ук#66 >Нш Ук#67 Жия νκ#7β

    >вВ8-Ук >Ни» Ук#85 >Вив Ук#бб >Вия Ук#67 >Нии Ук#78

    >6Β8-νΒ >№ял УН#2 >Иивп УН#5 >Нип УН#36 >Н«а УН# 65

    СЬоЪЫа---- СЬоЬЫа

    КаЬаЬ------ КаЬаЪ-1МСТ-- ΣΜΟΪ

    р ι ν м т о 5 н ш ε г з ν е о л ν г ιτ с кдяярудхдуа ν у о о к р е о $ р к ь и гядвгаяг Р I о Μ т <2 5 Р 5 5 Ь 3 А 5 V С Р К V ΤIТ С ХДДКРУД1АУЛΗ Υ О О К Р 3 К V Р К ί Ь ДГУАДГаЯГ ΡΙОМТ05Р58Ь5АЗУ6РКУТXТСХД8КРУА1ДУДУУООКРбКУРКЬЫУЯАДГаЯГ РIоΜТо5Р33Ь8А5V6РКVΤIТСКА8ЯРУЛ1ДУАИΥООКР5КVРКЬЬЬУЯА8ГЯЯГ ОI ς Μ Т 0 5 Р 8 8 X. δ А 5 V С 0 К. V ΤIТ С ХАДХРУАТАУАЯ У О О К Р 6 К V Р К Ь Ь ЬГЯАДГаЯГ

    СЬе'ЬЫа- ХаЬаЬ---ХМвТ----6УРРКГТ6565КТРГГЬГ15ЯУ05ЕРЬАРУГСЯаГ88ГгГГГС55ГХЬЕГХ бУРРкгзезБзстргтьтьззьоРЕРХАРУусяогддгругр60сткье1К 5УРЗКГ5 55 55 ДТ РГТЬТ I 8 ЗЬОРЕРУАРУ ГСЯ0ГЯ8ГРХТР555ТКЬΕ 1К 6У Р5 Η ГЗ 55 6 5 ДТ РГТЬΤ I 3 51 ΟΡΕ РУАТ УУСЯ0Г8Д УРГТГ655ТКЬЕ IК 5V Р РН Г5 5 3 53 ДТ РГТЬТ I 5 5 Ь ЭРЕ Р ЬА РУ Ϊ С ЯОГДДГЯГТГБ 5.5 т к ьеιк