BR112013011065B1

BR112013011065B1 - Anticorpo anti-il-23p19 humanizado ou seu fragmento de ligação ao antígeno, seu uso e composição farmacêutica

Info

Publication number: BR112013011065B1
Application number: BR112013011065-1A
Authority: BR
Inventors: Rachel Rebecca Barrett; Keith Canada; Katrina Mary Catron; Robert COPENHAVER; Lee Edward Frego; Ernest Lee Raymond; Xiangyang Zhu; Sanjaya Singh
Original assignee: Boehringer Ingelheim International Gmbh
Priority date: 2010-11-04
Filing date: 2011-11-02
Publication date: 2022-03-15
Also published as: ECSP13012649A; TW201641516A; CO6801628A2; AP2013006820A0; AU2016273970B2; NL301013I1; RS55161B1; US8778346B2; CA3017116A1; CA2816950A1; US20140363444A1; SG190006A1; CN107522784A; AU2011323426A1; MA34641B1; SG10201604605VA; TWI545133B; CY2019040I1; AU2011323426B2; IL244335A

Abstract

ANTICORPO ANTI-IL-23P19 OU SEU FRAGMENTO DE LIGAÇÃO AO ANTÍGENO, SEUS MÉTODO DE PRODUÇÃO E USO NO TRATAMENTO DE DOENÇAS, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, MÉTODO PARA INIBIR A LIGAÇÃO DA IL-23 AO SEU RECEPTOR, POLINUCLEOTÍDEO, VETOR DE EXPRESSÃO, CÉLULA HOSPEDEIRA. A presente invenção refere-se aos compostos de ligação do anti- IL-23p19, especificamente anticorpos anti-IL-23p19 humanizados, seu uso no tratamento de doenças associadas à IL-23, doenças inflamatórias, doenças autoimunes, doenças respiratórias, distúrbios metabólicos ou câncer, bem como o seu método de produção. Ainda, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica, polinucleotídeo, vetor de expressão e célula hospedeira.

Description

Campo técnico da invenção

[0001] Esta invenção refere-se geralmente a anticorpos anti-IL- 23p19 para uso terapêutico e em diagnóstico. Mais especificamente, os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados e métodos de uso para o tratamento de diversas doenças ou distúrbios são divulgados. As composições farmacêuticas e kits compreendendo estes compostos também são descritas.

Antecedentes da invenção

[0002] Os eucariotas superiores desenvolveram uma resposta intrincada aos agentes patogênicos que é iniciada pela resposta imune inata e seguida pela resposta imunitária adaptativa. Juntos, estes dois mecanismos não só erradicam os patógenos que infectam o organismo, mas também estabelecem uma resposta imunológica de longo prazo contra exposições futuras. Deficiências nessas respostas podem resultar em aumento da susceptibilidade à infecções e/ou às alterações da resposta imune adaptativa levando a uma inflamação crônica e à autoimunidade. A IL-12, uma citocina heterodimérica que consiste numa subunidade da proteína p40 e p35, tem sido considerada há muito tempo a citocina símbolo da resposta imune inata com grande influência sobre a imunidade adaptativa. No entanto, os dados da investigação do papel biológico desta citocina levaram a resultados confusos. Por exemplo, enquanto os camundongos deficientes em p40 eram resistentes à artrite induzida por colágeno (CIA) e à encefalomielite autoimune experimental (EAE), os camundongos deficientes em p35 eram suscetíveis a ambas, e ainda exibiram doenças exacerbadas. Tais enigmas começaram a ser resolvidos com a descoberta no final de 1990 de um novo membro da família de citocinas IL-12 com um papel distinto na resposta imune - IL-23.

[0003] A IL-23 é composta por uma subunidade comum (p40) com a IL-12 e uma única subunidade p19. Apesar desta subunidade p40 compartilhada, os papéis para a IL-23 e a IL-12 são bastante diferentes. A IL-12 é importante para a promoção de respostas Th1 através da diferenciação, proliferação e ativação de células Th1. Em contraste, a IL-23 suporta o desenvolvimento e a manutenção de um conjunto recentemente definido de células ajudantes CD4+ T denominada células Th17, devido à sua capacidade para produzir a IL- 17 e citocinas relacionadas. Há evidências de que a IL-23 está envolvida na inflamação autoimune crônica e a modulação da atividade da IL-23 poderia fornecer terapias promissoras contra as doenças autoimunes.

[0004] Existe, portanto, uma necessidade de moléculas antagonistas contra a IL-23, com propriedades farmacológicas benéficas, que podem ser usadas como agentes terapêuticos para o tratamento de doenças, em particular, doenças imunológicas e autoimunes em seres humanos.

[0005] Por conseguinte, um objetivo da presente invenção consiste em proporcionar moléculas antagonista anti-IL-23, especificamente, moléculas antagonistas anti-IL-23, que possuem elevada afinidade de ligação à IL-23.

[0006] Outro objetivo da presente invenção consiste em proporcionar moléculas antagonistas anti-IL-23, que possuem elevada especificidade para a IL-23.

[0007] Outro objetivo da presente invenção consiste em proporcionar antagonistas anti-IL-23, que possuem atividade de bloqueio elevada para a associação da IL-23 e seu receptor.

[0008] Outro objetivo da presente invenção consiste em proporcionar antagonistas anti-IL-23, que possuem atividade celular potente.

[0009] Outro objetivo da presente invenção consiste em proporcionar antagonistas anti-IL-23, que possuem uma biodisponibilidade favorável.

[00010] Outro objetivo da presente invenção consiste em proporcionar antagonistas anti-IL-23, que possuem propriedades biofísicas favoráveis.

[00011] Outros objetivos da presente invenção incluem as combinações de qualquer um dos objetivos estabelecidos acima.

Sumário da invenção

[00012] A presente invenção aponta as necessidades acima e proporciona anticorpos que se ligam à subunidade p19 da proteína IL- 23. Em um aspecto, um anticorpo da presente invenção se liga a IL-23 humana com elevada afinidade. Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção inibe a produção estimulada da IL-23 a partir da IL- 17 de esplenócitos de camundongos. Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção não se liga a, nem antagoniza a IL-12, que é um membro da família intimamente relacionado com a IL-23.

[00013] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona anticorpos anti-IL-23p19 que são derivados de hibridomas de camundongos, por exemplo, anticorpos monoclonais. Em uma modalidade, a presente invenção proporciona anticorpos anti-IL-23p19 de cadeia completa. Em outra modalidade, a presente invenção proporciona anticorpos humanizados anti-IL-23p19, por exemplo, anticorpos anti-IL-23p19 monoclonais humanizados, por exemplo, anticorpos anti-IL-23p19 monoclonais humanizados de cadeia completa. Em um aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção se liga à IL-23 humana com elevada afinidade. Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção também se liga à IL-23 de cinomolgos com elevada afinidade. Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção inibe a fosforilação de STAT3 induzida pela IL- 23 em células DB. Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção antagoniza a ação da IL-23 pela ligação à subunidade p19 da IL-23, por exemplo, como medido através da inibição de citocinas, tais como IL-17 e IL-22, cuja produção é estimulada pela IL-23. Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção tem um perfil farmacocinético favorável (PK). Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção tem propriedades biofísicas favoráveis, tais como a qualidade, estabilidade ou solubilidade, por exemplo, tal como definido pela percentagem do anticorpo na forma de monômeros.

[00014] Outras modalidades compreendem moléculas de DNA que codificam os anticorpos da presente invenção, vetores de expressão e células hospedeiras compreendendo tais moléculas de DNA, e métodos para produzir os anticorpos da presente invenção. A presente invenção proporciona ainda usos terapêuticos para os anticorpos da presente invenção, em particular, contra doenças imunológicas e autoimunes.

[00015] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, que compreende uma sequência de cadeia leve CDR1 (L- CDR1) de SEQ ID NO: 1, 4, 6, 7, 8, 11, 15, 18, 19, 22, 27 ou 30; uma sequência de cadeia leve CDR2 (L-CDR2) de SEQ ID NO: 2, 5, 9, 12, 16, 20, 23, 25, 28 ou 31, uma sequência de cadeia leve CDR3 (L- CDR3) de SEQ ID NO: 3, 10, 13, 14, 17, 21, 24, 26, 29, ou 32, uma sequência de cadeia pesada CDR1 (H-CDR1) de SEQ ID NO: 33, 36, 38, 40, 43, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 67, 68, 69, 77 ou 80, uma sequência de cadeia pesada CDR2 (H-CDR2) de SEQ ID NO: 34, 39, 41, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 70, 72, 73, 75, 78 ou 81, e uma sequência de cadeia pesada RDC3 (H-CDR3) de SEQ ID NO: 35, 37, 42, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 65, 71, 74, 76, 79 ou 82. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve que compreende uma L-CDR1 listada acima, uma L-CDR2 listada acima e uma L-CDR3 listada acima, e uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma H-CDR1 listada acima, uma H-CDR2 listada acima e uma H-CDR3 listada acima.

[00016] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, em que o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 1, 2, 3, 33, 34 e 35, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H- CDR3 da SEQ ID NO: 4, 5, 3, 36, 34 e 37, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 1, 2, 3, 38, 39 e 35, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 6, 2, 3, 40, 41 e 42, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 7, 2, 3, 43, 41 e 44, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 8, 9, 10, 45, 46 e 47, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 8, 9, 10, 48, 49 e 50, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 11, 12, 13, 51, 52 e 53, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 7, 2, 14, 54, 55 e 56, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 15, 16, 17, 57, 58 e 59, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 18, 16, 17, 60, 61 e 62, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 19, 20, 21, 63, 66, 67 ou 68, 64 e 65, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2 L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H- CDR3 da SEQ ID NO: 22, 23, 24, 69, 70 e 71, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H- CDR3 da SEQ ID NO: 22, 25, 26, 55, 72 e 71, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 8, 9, 10, 45, 73 e 74, respectivamente, ou uma sequência L- CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 27, 28, 29, 45, 75 e 76, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 8, 9, 10, 77, 78 e 79, respectivamente, ou uma sequência L-CDR1, L- CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 30, 31, 32, 80, 81 e 82, respectivamente. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve que contém uma combinação de L- CDR1, L-CDR2 e L-CDR3 listadas acima, e uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma combinação H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 listadas acima.

[00017] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, em que o anticorpo ou o seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 84 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 121; ou uma região variável da cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 86 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 123; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 88 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 125; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 90 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 127; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 91 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 128; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 93 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 130; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 95 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 132; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 97 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 134; ou uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 99 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 136; ou uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 101 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 138; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 103 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 140; ou uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 105 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 142; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 107 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 144; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 109 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 146; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 111 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 148; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 113 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 150; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 115 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 152; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 117 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 154, ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 119 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 156.

[00018] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, em que o anticorpo ou o seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 158, 160, 162 e 164 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 166, 168, 170 e 172.

[00019] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, em que o anticorpo ou o seu fragmento de ligação ao antígeno tem uma KD para a IL-23 inferior a 40pM, ou uma KD para a IL- 23 inferior a 20pM, ou uma KD para a IL-23 inferior a 10pM ou uma KD para a IL-23 inferior a 1pM.

[00020] Em outra modalidade, a presente invenção proporciona um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno que se liga a IL-23p19 humana em um epítopo consistindo em resíduos de aminoácidos 108 a 126 e resíduos de aminoácidos 137 a 151 da SEQ ID NO: 181.

[00021] Em outra modalidade, a presente invenção proporciona um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno que se liga competitivamente a IL-23p19 humana com um anticorpo da presente invenção. Em uma modalidade, a presente invenção proporciona um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno que se liga competitivamente a IL-23p19 humana com um anticorpo monoclonal humanizado anti-IL-23p19 que compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 174 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 176. Em uma modalidade, a presente invenção proporciona um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno que se liga competitivamente a IL-23p19 humana com um anticorpo monoclonal humanizado anti-IL-23p19 que compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 174 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 178. Em uma modalidade, a presente invenção proporciona um anticorpo anti- IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno que se liga competitivamente a IL-23p19 humana com um anticorpo monoclonal humanizado anti-IL-23p19 que compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 180 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 176. Em uma modalidade, a presente invenção proporciona um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno que se liga competitivamente a IL-23p19 humana com um anticorpo monoclonal humanizado anti-IL-23p19 que compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 180 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 178.

[00022] Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo humanizado. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL- 23p19 é um anticorpo de cadeia completa. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de cadeia completa. Em uma modalidade, o fragmento de ligação ao antígeno é um fragmento Fab, F(ab')2, ou Fv de cadeia única. Em uma modalidade, o fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada.

[00023] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, em que o anticorpo ou o seu fragmento de ligação ao antígeno compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19 (CDR1-L), a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 20 (CDR2-L), a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 (CDR3-L): a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 63, 66, 67 ou 68 (CDR1- H), a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64 (H-CDR2), e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 65 (CDR3-H).

[00024] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, em que o anticorpo ou o seu fragmento de ligação ao antígeno compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19 (CDR1-L); a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 20 (CDR2-L); a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 (CDR3-L); a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 66 (CDR1-H); a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64 (H-CDR2); e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 65 (CDR3-H).

[00025] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, em que o anticorpo ou o seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19 (CDR1-L); a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 20 (CDR2-L); e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 (CDR3-L); e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 63, 66, 67 ou 68 (CDR1-H); a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64 (H-CDR2); e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 65 (CDR3-H).

[00026] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um fragmento de anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, em que o anticorpo ou o seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19 (CDR1-L); a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 20 (CDR2-L); e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 (CDR3-L); e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 66 (CDR1-H); a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64 (H-CDR2); e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 65 (CDR3-H).

[00027] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19, ou seu fragmento de ligação ao antígeno, em que o anticorpo ou o seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NO : 158, 160, 162 ou 164, e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NO: 166, 168, 170 ou 172.

[00028] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, em que o anticorpo ou o seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 160 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 166.

[00029] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, em que o anticorpo ou o seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 160 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 168.

[00030] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, em que o anticorpo ou o seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 158 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 166.

[00031] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, em que o anticorpo ou o seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 158 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 168.

[00032] Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo humanizado. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL- 23p19 é um anticorpo de cadeia completa. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado anti- IL-23p19, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de cadeia completa. Em uma modalidade, o fragmento de ligação ao antígeno é um fragmento Fab, F(ab')2, ou Fv de cadeia única. Em uma modalidade, o fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve e uma região variável da cadeia pesada.

[00033] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo que compreende a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 166 ou 168 ligada a uma região constante da cadeia pesada da IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA ou IgE humana. Um anticorpo que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 166 ou 168 ligada a uma região constante de cadeia pesada da IgG1 humana. Um anticorpo que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 158 ou 160 ligada a uma capa humana ou lambda região constante da cadeia leve. Um anticorpo que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 158 ou 160 ligada a uma região constante de cadeia leve capa humana.

[00034] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 166 ou 168 ligada a uma região constante de cadeia pesada da IgG1 humana; e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 158 ou 160 ligada a um região constante de cadeia leve capa humana.

[00035] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em qualquer uma das SEQ ID NO: 158, 160, 162 e 164 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em qualquer uma das SEQ ID NO: 166, 168, 170 e 172.

[00036] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 160 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 166.

[00037] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo monoclonal humanizado anti-IL-23p19 compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 160 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 168.

[00038] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo monoclonal humanizado anti-IL-23p19 compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 158 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 166.

[00039] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo monoclonal humanizado anti-IL-23p19 compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 158 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos SEQ ID NO: 168.

[00040] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo monoclonal humanizado anti-IL-23p19 que compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoá- cidos da SEQ ID NO: 174 ou 180 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 176 ou 178.

[00041] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo monoclonal humanizado anti-IL-23p19 que compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 174 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 176.

[00042] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo monoclonal humanizado anti-IL-23p19 que compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 174 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 178.

[00043] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo monoclonal humanizado anti-IL-23p19 que compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 180 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 176.

[00044] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo monoclonal humanizado anti-IL-23p19 que compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 180 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 178.

[00045] Em outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, que compreende um domínio variável de cadeia leve humanizada compreendendo os CDRs da SEQ ID NO: 160 e regiões de estrutura possuindo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos das regiões de estrutura da sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 160 e um domínio variável de cadeia pesada humanizada compreendendo as CDRs da SEQ ID NO: 166 e as regiões de estrutura possuindo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos das regiões de estrutura da sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 166. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de cadeia completa.

[00046] Em outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, que compreende um domínio variável de cadeia leve humanizada compreendendo os CDRs da SEQ ID NO: 160 e regiões de estrutura possuindo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90 % idêntica à sequência de aminoácidos das regiões de estrutura da sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 160 e um domínio variável de cadeia pesada humanizada compreendendo as CDRs da SEQ ID NO: 168 e regiões estruturais que possuem uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos das regiões de estrutura de sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 168. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de cadeia completa.

[00047] Em outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, que compreende um domínio variável de cadeia leve humanizada compreendendo os CDRs da SEQ ID NO: 158 e regiões estruturais que possuem uma sequência de aminoácidos pelo menos 90 % idêntica à sequência de aminoácidos das regiões estruturais da sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 158, e um domínio variável de cadeia pesada humanizada compreendendo as CDRs da SEQ ID NO: 166 e regiões de estrutura possuindo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos das regiões de estrutura da sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 166. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de cadeia completa.

[00048] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, que compreende um domínio variável de cadeia leve humanizada compreendendo os CDRs da SEQ ID NO: 158 e regiões estruturais que possuem uma sequência de aminoácidos pelo menos 90 % idêntica à sequência de aminoácidos das regiões estruturais da sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 158, e um domínio variável de cadeia pesada humanizada compreendendo as CDRs da SEQ ID NO: 168 e regiões estruturais que possuem uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos das regiões de estrutura da sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 168. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de cadeia completa.

[00049] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção pode ser ainda caracterizado por um KD para a IL- 23 humana, igual ou inferior a 1pM. Em um aspecto, não existe uma mudança na ligação na taxa de 50% de soro humano.

[00050] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção pode ser ainda caracterizado pelo fato de bloquear a ligação de IL-23 para IL-23R/Fc humana in vitro.

[00051] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção pode ainda ser caracterizado pelo fato de não se ligar à IL-12 humana.

[00052] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção pode ser ainda caracterizado pelo fato de inibir a produção da IL-17 induzida pela IL-23 humana em esplenócitos de camundongo com IC50 igual ou inferior a 20 pM.

[00053] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção pode ser caracterizado ainda pelo fato de inibir uma fosforilação de STAT3 induzida pela IL-23 humana em células humanas DB com IC50 igual ou inferior a 40 pM.

[00054] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção pode ser ainda caracterizado pelo fato de não ter nenhuma atividade prevista no ADCC/CDC.

[00055] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção pode ser ainda caracterizado pelo fato de possuir uma KD igual ou inferior a 1 pM para a IL-23 do macaco cinomolgo.

[00056] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção pode ser ainda caracterizado pelo fato de não possuir reatividade cruzada para IL-23 de camundongo ou de rato.

[00057] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção pode ser ainda caracterizado pelo fato de inibir a IL-17 induzida pela IL-23 humana e a produção de IL-22 em uma orelha de camundongo a 80% ou mais de inibição de ambas as citocinas a 1 mg/kg.

[00058] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção pode ser ainda caracterizado por uma temperatura de fusão de 83° C como determinado por calorimetria diferencial de varrimento.

[00059] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção pode ser ainda caracterizado pela solubilidade igual ou superior a 100 mg/ ml, tal como medida por espectroscopia de UV e monitorada pela turvação.

[00060] Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção pode ser ainda caracterizado pelo fato de estar presente em pelo menos 90% da forma de monômero, ou, pelo menos, 92% da forma de monômero, ou em 95% da forma de monômero em um tampão.

[00061] Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção pode ainda ser caracterizado em que ele continua a ser, pelo menos, 90% da forma de monômero, ou, pelo menos, 92% da forma de monômero, ou em pelo menos 95% da forma de monômero em um tampão por um mês ou por quatro meses.

[00062] Em um aspecto, o anticorpo anti-IL-23p19 humanizado é um anticorpo monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de cadeia completa.

[00063] Outras modalidades compreendem uma molécula de DNA que codifica uma região variável de cadeia leve acima, uma molécula de DNA que codifica uma região variável de cadeia pesada acima, uma molécula de DNA que codifica uma região de cadeia leve acima, ou uma molécula de DNA que codifica uma região de cadeia pesada acima.

[00064] Outras modalidades compreendem um vetor de expressão contendo uma molécula de DNA acima. Em uma modalidade, um vetor de expressão compreende uma molécula de DNA que codifica a cadeia pesada constante e/ou a cadeia leve constante, respectivamente, ligada à molécula de DNA que codifica a cadeia pesada variável e/ou a cadeia leve variável, respectivamente. Outras modalidades compreendem uma célula hospedeira transportando um ou mais vetores de expressão acima. Em uma modalidade, um hospedeiro é uma célula de mamífero.

[00065] Outras modalidades compreendem um método para produzir um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno acima que compreende a transfecção de uma célula hospedeira de mamífero com um ou mais dos vetores mencionados acima, cultivando a célula hospedeira e recuperando e purificando o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno.

[00066] Outras modalidades compreendem um método para produzir um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno acima que compreende a obtenção de uma célula hospedeira de mamífero compreendendo um ou mais dos vetores mencionados acima, e cultivando a célula hospedeira. Em uma modalidade, o método compreende ainda a recuperação e a purificação do anticorpo ou do seu fragmento de ligação ao antígeno.

[00067] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno acima para o uso em medicina. Em uma modalidade, o uso é o tratamento de uma doença inflamatória, de uma doença autoimune, de uma doença respiratória, de um distúrbio metabólico ou de um câncer. Em uma modalidade, o uso é para o tratamento de psoríase, doença inflamatória do intestino (doença de Crohn, colite ulcerosa), artrite psoriática, esclerose múltipla, artrite reumatoide ou espondilite anquilosante. Em uma modalidade, o uso é para o tratamento de psoríase. Em uma modalidade, o uso é para o tratamento da doença inflamatória do intestino.

[00068] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda uma composição farmacêutica compreendendo uma molécula de anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno acima e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[00069] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um método para o tratamento de uma doença inflamatória, uma doença autoimune, uma doença respiratória, um distúrbio metabólico ou um câncer, compreendendo a administração a um indivíduo com essa necessidade, por exemplo, um paciente, uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-IL-23p19 ou um fragmento de ligação ao antígeno acima, ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno. Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é administrado por via de administração parentérica, ou é administrado por via intravenosa ou subcutânea. Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno é administrado por via subcutânea. Em uma modalidade, a doença é psoríase, doença inflamatória do intestino (doença de Crohn, colite ulcerosa), artrite psoriática, esclerose múltipla, artrite reumatoide ou espondilite anquilosante. Em uma modalidade, a doença é a psoríase. Em uma modalidade, a doença é a doença inflamatória do intestino.

[00070] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um método para inibir a ligação da IL-23 ao receptor da IL-23 em uma célula de mamífero, compreendendo a administração à célula de uma molécula de anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno acima, em que a sinalização mediada pelo receptor IL-23 é inibida.

[00071] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um método para o tratamento de um indivíduo possuindo um distúrbio associado à IL-23, compreendendo administrar ao indivíduo um anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno acima, em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se liga à IL- 23.

[00072] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um método para detectar e/ou quantificar os níveis da IL-23 numa amostra biológica ao colocar a amostra em contato com um anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno acima e detectar a ligação do anticorpo ou do seu fragmento com a IL-23p19. Esta informação pode ser usada para diagnosticar um distúrbio associado à IL-23. Assim, são proporcionados métodos para o diagnóstico de um distúrbio associado à IL-23 ou para determinar se um indivíduo tem um aumento de risco de desenvolver um distúrbio associado à IL-23, em que o método compreende colocar uma amostra biológica de um indivíduo em contato com um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno acima e detectar a ligação do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno à IL-23p19 para determinar a expressão ou a concentração de IL-23.

[00073] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona ainda um método para inibir a ligação da IL-23 ao receptor da IL-23 em uma célula, compreendendo administrar à célula ou ao meio celular um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno acima, em que a sinalização mediada pelo receptor da IL-23 é inibida.

Breve descrição das Figuras

[00074] Figura 1: Alinhamento das regiões variáveis humanizadas e do camundongo. Figura 1a: regiões Vk modificadas anti-IL-23p19 6B8. Figura 1b: regiões VH modificadas anti-IL-23p19 6B8.

[00075] A numeração dos aminoácidos é pelo esquema padrão de numeração de Kabat. Fonte normal = humano; fonte itálica/sublinhada = murino; fonte sombreada = sintético; negrito/ itálico/ sublinhado = CDR.

[00076] Figura 2: Ensaio competitivo de ligação de IL-23 humana se ligando à IL-23R/Fc.

Descrição detalhada

[00077] A subunidade p19 da IL-23 (também referida aqui como "IL- 23p19" e "subunidade p19") é um polipeptídeo de 189 aminoácido contendo uma sequência líder 21 aa (Oppmann et al. Immunity 13:715 (2000), SEQ ID NO: 181). A atividade biológica da molécula só é detectada quando ela é associada com a subunidade da IL-12p40 para formar a IL-23. A IL-23 é predominantemente expressada por células dendríticas (DCs) e células fagocitárias ativadas. O receptor para a IL- 23 verificou-se ser composto pela subunidade IL-12Rβ1 do receptor da IL-12 associado com uma única subunidade chamada IL-23R (Parham et al. J. Immunol. 168:5699 (2002)). A expressão do receptor é detectada principalmente em células T e células NK de memória. Assim, a expressão desse par citocina:receptor parece estar restrita a populações específicas de células imunes. Embora se pensasse antigamente que a IL-12 e a IL-23 compartilhariam muitas funções, os dados têm mostrado que o cenário é diferente. Enquanto a IL-12 tem um papel preponderante na produção de células Th1, a IL-23 verificou- se ser criticamente envolvida na produção e na manutenção de um subconjunto de células Th reconhecido recentemente denominado Th17 (Kikly et al. Curr. Opin. Immunol 18:670 (2006), Kastelein et al. Ann Rev. Immunol 25:221 (2007)). Estas células produzem IL-17A, IL- 17F, IL-22 e outras citocinas pró-inflamatórias, tais como IL-6 e TNF-α. Conforme descrito abaixo, estudos de modelos animais sobre o papel dessas células Th17 mostram a sua importância como uma força motriz na inflamação e autoimunidade crônica.

[00078] A presente invenção proporciona anticorpos que se ligam à subunidade p19 da IL-23, em particular a IL-23p19 humana. A presente invenção também se refere a anticorpos humanizados que reconhecem a subunidade p19 da IL-23. Em modalidades específicas, a sequência destes anticorpos humanizados foi identificada com base nas sequências de determinados anticorpos primários do camundongo.

[00079] Os anticorpos primários do camundongo da presente invenção foram obtidos de hibridomas de camundongos. A imunização dos camundongos é realizada usando técnicas diferentes. Por exemplo, os anticorpos que são específicos para as proteínas IL- 23p19 humanas ou seus fragmentos podem ser criados contra um antígeno imunogênico, tal como uma proteína IL-23p19 isolada, uma proteína IL-23 isolada, uma proteína IL-23 híbrida isolada e/ou uma porção de qualquer um dos acima (incluindo peptídeos sintéticos). Por exemplo, uma proteína IL-23 híbrida, compreendendo uma subunidade da IL-23p40 de camundongo e uma subunidade de IL-23p19 humana, é usada para imunizar camundongos. A preparação de antígenos imunogênicos e a produção de anticorpo monoclonal podem ser realizadas usando qualquer técnica adequada conhecida na técnica.

[00080] Os anticorpos primários do camundongo foram selecionados com base em sua elevada afinidade para a IL-23 humana. Deste modo, em um aspecto, a presente invenção proporciona um anticorpo que se liga à IL-23 humana com elevada afinidade. Os anticorpos de camundongo selecionados foram humanizado para resultar em anticorpos humanizados. Os anticorpos humanizados da presente invenção se ligam à IL-23 humana com elevada afinidade. Por conseguinte, em um outro aspecto, a presente invenção proporciona um anticorpo humanizado que se liga à IL-23 humana com elevada afinidade.

[00081] Deste modo, em uma modalidade, a presente invenção proporciona um anticorpo anti-IL-23p19 com uma KD inferior a 40pM. Em outra modalidade, a presente invenção proporciona um anticorpo anti-IL-23p19 com uma KD inferior a 20pm. Em outra modalidade, a presente invenção proporciona um anticorpo anti-IL-23p19 com uma KD inferior a 10pM. Em outra modalidade, a presente invenção proporciona um anticorpo anti-IL-23p19 com uma KD inferior a 1pM.

[00082] Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção se liga à IL-23p19 com elevada afinidade na ausência de soro humano ou na presença de 50% de soro humano.

[00083] Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção também se liga à IL-23 do macaco cinomolgo com elevada afinidade.

[00084] Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção se liga à IL-23, mas não se liga à IL-12. Em um aspecto adicional, um anticorpo da presente invenção não interfere com a atividade biológica da IL-12, que é um membro da família intimamente relacionada com a IL-23.

[00085] Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção inibe a produção estimulada da IL-23 a partir da IL-17 de esplenócitos de camundongo.

[00086] Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção inibe a fosforilação de STAT3 induzida pela IL-23 em células DB.

[00087] Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção antagoniza a ação da IL-23 pela ligação à subunidade p19 da IL-23, tal como medido através da inibição de citocinas, tais como IL-17 e IL-22, cuja produção é estimulada pela IL-23, e detectada pela redução nos níveis destas citocinas.

[00088] Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção tem um perfil farmacocinético (PK) favorável, como exemplificado pela meia-vida in vivo em macacos cinomolgos.

[00089] Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado da presente invenção tem propriedades biofísicas favoráveis, por exemplo, qualidade, estabilidade ou solubilidade.

[00090] Em um aspecto, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo humanizado. Em um aspecto, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal. Em um aspecto, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo de cadeia completa. Em um aspecto, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de cadeia completa.

[00091] Um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno da presente invenção reconhece o "epítopo do antígeno da IL-23p19" ou "epítopo da IL-23p19" específico. Tal como usado aqui os termos referem-se a uma molécula (por exemplo, um peptídeo) ou um fragmento de uma molécula capaz de ter imunorreatividade com um anticorpo anti-IL-23p19 e, por exemplo, inclui um determinante antigênico da IL-23p19 reconhecido por qualquer um dos anticorpos tendo uma combinação de sequência de cadeia leve/ cadeia pesada das SEQ ID NO: 84/121, 86/123, 88/125, 90/127, 91/128, 93/130, 95/132, 97/134, 99/136, 101/138, 103/140, 105/142, 107/144, 109/146, 111/148 e 113/150, 115/152, 117/154, 119/156, 160/166, 160/168, 158 / 166 ou 158/168. Epítopos de antígenos da IL-23p19 podem ser incluídos em proteínas, fragmentos de proteínas, peptídeos ou semelhantes. Os epítopos são mais comumente proteínas, oligopeptídeos curtos, imitações de oligopeptídeos (isto é, compostos orgânicos que imitam as propriedades de ligação do anticorpo do antígeno da IL-23p19) ou suas combinações. O tamanho mínimo de um epítopo de peptídeo ou polipeptídeo para um anticorpo é de cerca de 4 a 5 aminoácidos. Os epítopos de peptídeo ou polipeptídeo contêm, por exemplo, pelo menos sete aminoácidos ou, por exemplo, pelo menos nove aminoácidos, ou por exemplo, entre cerca de 15 a cerca de 20 aminoácidos. Uma vez que um anticorpo é capaz de reconhecer um peptídeo ou polipeptídeo antigênico na sua forma terciária, os aminoácidos que compreende um epítopo não precisam de ser contíguos, e, em alguns casos, podem até não estar na mesma cadeia de peptídeo. Os epítopos podem ser determinados por várias técnicas conhecidas na técnica, tais como cristalografia de raios X, espectrometria de massa com troca de hidrogênio /deutério (HXMS), mutagênese sítio dirigida, mutagênese de varredura de alanina, e métodos para a triagem de peptídeos.

[00092] A estrutura generalizada de anticorpos ou de imunoglobulina é bem conhecida pelos especialistas na técnica. Estas moléculas são glicoproteínas heterotetraméricas, tipicamente de cerca de 150.000 daltons, compostas por duas cadeias leves idênticas (L) e duas cadeias pesadas idênticas (H) e são tipicamente referidas como anticorpos de cadeia completa. Cada cadeia leve está ligada covalentemente a uma cadeia pesada por uma ligação dissulfeto para formar um heterodímero, e a molécula heterotetramérica é formada através de uma ligação covalente de dissulfeto entre as duas cadeias pesadas idênticas de heterodímeros. Apesar de as cadeias leve e pesada serem ligadas entre si por uma ligação dissulfeto, o número de ligações de dissulfeto entre as duas cadeias pesadas varia conforme o isotipo da imunoglobulina. Cada cadeia pesada e leve também tem pontes de dissulfeto intracadeias regularmente espaçadas. Cada cadeia pesada tem, no amino-terminal, um domínio variável (VH), seguido de três ou quatro domínios constantes (CH1, CH2, CH3 e CH4), bem como uma região de dobradiça entre CH1 e CH2. Cada cadeia leve tem dois domínios, um domínio variável do amino-terminal (VL) e um domínio constante carboxi-terminal (TC). O domínio VL se associa de modo não covalente com o domínio VH, enquanto o domínio CL é normalmente ligado de forma covalente ao domínio CH1 através de uma ligação dissulfeto. Acredita-se que os resíduos de aminoácido específicos formem uma interface entre os domínios variáveis da cadeia leve e pesada (Chothia et al., 1985, J. Mol. Biol. 186:651-663). Os domínios variáveis também são referidos aqui como regiões variáveis.

[00093] Alguns domínios dentro dos domínios variáveis diferem extensivamente entre os diferentes anticorpos, ou seja, são "hipervariáveis". Estes domínios hipervariáveis contêm os resíduos que estão diretamente envolvidos na ligação e na especificidade de cada anticorpo específico para o seu determinante antigênico específico. A hipervariabilidade, tanto nos domínios variáveis da cadeia leve como da cadeia pesada, é concentrada em três segmentos denominados como regiões determinantes de complemen-taridade (CDRs) ou alças hipervariáveis (HVLs). As CDRs são definidas por comparação de sequências em Kabat et al., 1991, Em: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., enquanto as HVLs (também referidas aqui como CDRs) são estruturalmente definidas de acordo com a estrutura tridimensional do domínio variável, conforme descrito por Chothia e Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917. Estes dois métodos resultam em identificações ligeiramente diferentes de um CDR. Tal como definido por Kabat, a CDR-L1 está posicionada a cerca de 24-34 resíduos, a CDR-L2 a cerca de 50-56 resíduos, e a CDR-L3 a cerca de 89-97 resíduos no domínio variável da cadeia leve; a CDR-H1 está posicionada a cerca de 31-35 resíduos, a CDR-H2 a cerca de 50-65 resíduos, e a CDR-H3 a cerca de 95-102 resíduos no domínio variável da cadeia pesada. O número exato de resíduos que abrangem uma CDR específica, irá variar dependendo da sequência e do tamanho da CDR. Os especialistas na técnica podem determinar rotineiramente quais resíduos compreendem uma CDR específica, dada a sequência de aminoácidos da região variável do anticorpo. A CDR1, CDR2, CDR3 das cadeias pesadas e leves, portanto, definem as propriedades únicas e funcionais específicas para um determinado anticorpo.

[00094] As três CDRs dentro de cada uma das cadeias leve e pesada são separadas por regiões de estrutura (FR), que contêm sequências que tendem a ser menos variável. Do amino-terminal para o carbóxi-terminal dos domínios variáveis das cadeias leves e pesadas, as FRs e as CDRs estão dispostas na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. A configuração ampla da folha β das FRs traz as CDRs dentro de cada uma das cadeias em estreita proximidade umas das outras, bem como as CDRs da outra cadeia. A conformação resultante contribui para o local de ligação ao antígeno (ver Kabat et al., 1991, NIH Publ. No. 91-3242, Vol.I, páginas 647669), embora nem todos os resíduos da CDR estejam necessáriamente diretamente envolvidos na ligação ao antígeno.

[00095] Os resíduos da FR e os domínios constantes Ig não estão diretamente envolvidos na ligação do antígeno, mas contribuem para a ligação ao antígeno e/ou mediam a função efetora de anticorpos. Alguns resíduos da FR são pensados para ter um efeito significativo na ligação ao antígeno em pelo menos três formas: pela ligação não covalente diretamente a um epítopo, pela interação com um ou mais resíduos da CDR, e afetando a interface entre as cadeias pesadas e leves. Os domínios constantes não estão diretamente envolvidos na ligação ao antígeno, mas mediam várias funções efetoras da Ig, tais como a participação do anticorpo na citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC), citotoxicidade dependente de complemento (CDC) e fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP).

[00096] As cadeias leves de imunoglobulinas de vertebrados são atribuídas a uma das duas classes claramente distintas, capa (K) e lambda (À), com base na sequência de aminoácidos do domínio constante. Por comparação, as cadeias pesadas de imunoglobulinas de mamíferos são atribuídas a uma das cinco grandes classes, de acordo com a sequência dos domínios constantes: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM. A IgG e a IgA são ainda divididas em subclasses (isotipos), por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. Os domínios constantes das cadeias pesadas que correspondem às diferentes classes de imunoglobulinas são chamados α, δ, ε, Y e μ, respectivamente. As estruturas de subunidade e as configurações tridimensionais das classes de imunoglobulinas nativas são bem conhecidas.

[00097] Os termos, "anticorpo", "anticorpo anti-IL-23p19", "anticorpo anti-IL-23p19 humanizado", "epítopo do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado", e "epítopo do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado variante" especificamente englobam anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de cadeia completa), anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos), e fragmentos de anticorpos, tais como os domínios variáveis e outras porções de anticorpos que exibem uma atividade biológica desejada, por exemplo, a ligação da IL-23p19. O termo "anticorpo monoclonal" (mAB) refere-se a um anticorpo que é altamente específico, sendo dirigido contra um único determinante antigênico, um "epítopo". Assim, o modificador "monoclonal" é indicativo de anticorpos dirigidos para o epítopo idêntico e não é para ser interpretado como requerendo a produção do anticorpo por qualquer método específico. Deve ser entendido que os anticorpos monoclonais podem ser feitos por qualquer técnica ou método conhecido na técnica, incluindo, por exemplo, o método do hibridoma (Kohler et al., 1975, Nature 256:495), ou métodos de DNA recombinantes conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Patente dos EUA 4.816.567), ou métodos de isolamento do anticorpo monoclonal produzido de forma recombinante usando as bibliotecas de anticorpos em fagos, utilizando as técnicas descritas em Clackson et al., 1991, Nature 352:624-628 e Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222: 581-597.

[00098] O termo "monômero" refere-se a uma forma homogênea de um anticorpo. Por exemplo, para um anticorpo de cadeia completa, o monômero significa um anticorpo monomérico com duas cadeias pesadas idênticas e duas cadeias leves idênticas.

[00099] Os anticorpos quiméricos consistem em regiões variáveis de cadeia pesada e leve de um anticorpo de uma espécie (por exemplo, um mamífero não-humano, como um camundongo) e as regiões constantes de cadeia pesada e leve de anticorpos de outras espécies (por exemplo, humana) e podem ser obtidos ligando as sequências de DNA que codificam as regiões variáveis do anticorpo das primeiras espécies (por exemplo, camundongo) com as sequências de DNA para as regiões constantes do anticorpo da segunda espécie (por exemplo, humana) e transformando um hospedeiro com um vetor de expressão que contenha as sequências ligadas para permiti-lo produzir um anticorpo quimérico. Alternativamente, o anticorpo quimérico também poderia ser um no qual uma ou mais regiões ou domínios de cadeia pesada e/ou leve são idênticas, homólogas a, ou uma variante da sequência correspondente em um anticorpo monoclonal de outra classe ou isotipo de imunoglobulina, ou a partir de uma sequência consenso ou da linha germinal. Os anticorpos quiméricos podem incluir fragmentos de tais anticorpos, desde que o fragmento de anticorpos apresente a atividade biológica desejada do seu anticorpo parental, por exemplo, se ligando ao mesmo epítopo (ver, por exemplo, Patente dos EUA 4.816.567; e Morrison et al., 1984, Proc Natl Acad Sci EUA 81:6851-6855).

[000100] Os termos "fragmento de anticorpo", "fragmento de anticorpo anti-IL-23p19", "fragmento do epítopo do anticorpo anti-IL- 23p19", "fragmento de anticorpo anti-IL-23p19 humanizado", "fragmento do epítopo do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado", "fragmento do epítopo do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado variante" referem-se a uma porção de um anticorpo anti-IL-23p19 de cadeia completa, em que uma região variável ou uma capacidade funcional é retida, por exemplo, ligação específica do epítopo da IL- 23p19. Exemplos de fragmentos de anticorpos incluem, mas não estão limitados a, um fragmento Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, scFv e scFv-Fc, um diacorpo, um anticorpo linear, um anticorpo de cadeia simples, um minicorpo, um diacorpo formado de fragmentos de anticorpo e anticorpos multiespecíficos formados de fragmentos de anticorpo.

[000101] Os anticorpos de cadeia completa podem ser tratados com enzimas, tais como papaína ou pepsina para gerar fragmentos de anticorpos úteis. A digestão com papaína é usada para produz dois fragmentos de anticorpos de ligação ao antígeno idênticos denominados fragmentos "Fab", cada um com um único local de ligação ao antígeno e um fragmento residual "Fc". O fragmento Fab também contém o domínio constante da cadeia leve e o domínio CH1 da cadeia pesada. O tratamento com pepsina rende um fragmento F(ab')2 que possui dois locais de ligação ao antígeno e é ainda capaz de ligação cruzada do antígeno.

[000102] Os fragmentos Fab' diferem dos fragmentos Fab pela presença de resíduos adicionais, incluindo uma ou mais cisteínas da região de dobradiça do anticorpo no C-terminal do domínio CH1. Os fragmentos de anticorpos F(ab')2 são pares de fragmentos Fab' ligados por resíduos de cisteína na região de dobradiça. Outros acoplamentos químicos de fragmentos de anticorpos são também conhecidos.

[000103] O fragmento "Fv" contém um local completo de reconhecimento de antígeno e de ligação constituído por um dímero de um domínio variável de cadeia leve e pesada em forte associação não-covalente. Nesta configuração, as três CDRs de cada domínio variável interagem para definir um local de ligação ao antígeno sobre a superfície do dímero VH-VL. Coletivamente, as seis CDRs conferem especificidade de ligação ao antígeno ao anticorpo.

[000104] Um "Fv de cadeia única" ou um fragmento de anticorpo "scFv" é uma única variante de Fv de cadeia simples compreendendo os domínios VH e VL de um anticorpo em que os domínios estão presentes numa única cadeia polipeptídica. O Fv de cadeia simples é capaz de reconhecer e se ligar ao antígeno. O polipeptídeo do scFv pode opcionalmente conter também um ligante de polipeptídeo posicionado entre os domínios VH e VL, de modo a facilitar a formação de uma estrutura tridimensional desejada para ligação ao antígeno pelo scFv (ver, por exemplo, Pluckthun, 1994, Em: The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg e Moore eds., SpringerVerlag, Nova York, pp. 269-315).

[000105] Um "diacorpo" refere-se a pequenos fragmentos de anticorpo com dois locais de ligação ao antígeno, cujos fragmentos compreendem um domínio variável de cadeia pesada (V.sub.H) ligado a um domínio variável de cadeia leve (V.sub.L) na mesma cadeia de polipeptídeo (V.sub.H-V.sub.L ou V.sub.L-V.sub.H). Os diacorpos são descritos mais detalhadamente em, por exemplo, Holliger, et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 90: 6444-6448.

[000106] Outros fragmentos de anticorpos reconhecidos incluem aqueles que compreendem um par de segmentos Fd em tandem (VH- CH1-VH-CH1) que formam um par de regiões de ligação ao antígeno. Estes "anticorpos lineares" pode ser biespecíficos ou monoespecíficos, tal como descrito em, por exemplo, Zapata et al. 1995, Protein Eng. 8(10):1057-1062.

[000107] Um "anticorpo humanizado" ou um "fragmento de anticorpo humanizado" é um tipo específico de anticorpo quimérico que inclui uma variante de sequência de aminoácidos da imunoglobulina, ou seu fragmento, que é capaz de se ligar a um antígeno predeterminado e que compreende uma ou mais FRs tendo substancialmente a sequência de aminoácidos de uma imunoglobulina humana e uma ou mais CDRs que têm substancialmente a sequência de aminoácidos de uma imunoglobulina não-humana. Esta sequência de aminoácidos não-humana, muitas vezes referida como uma sequência de "importação" é tipicamente feita a partir de um domínio de anticorpo de "importação", em particular um domínio variável. Em geral, um anticorpo humanizado inclui pelo menos as CDRs ou HVLS de um anticorpo não-humano, inserido entre as FRs de um domínio variável de cadeia pesada ou leve humana. A presente invenção descreve anticorpos anti-IL-23p19 humanizados específicos que contenham CDRs derivadas dos anticorpos monoclonais de camundongo ou CDRs humanizadas mostradas nas Tabelas 3 e 4, inseridas entre as FRs dos domínios variáveis da cadeia leve e pesada da sequência da linha germinativa humana. Será entendido que certos resíduos de FR de camundongos podem ser importantes para a função dos anticorpos humanizados e, portanto, certos resíduos dos domínios variáveis da cadeia leve e pesada da sequência da linha germinativa humana são modificados para serem os mesmos que as da sequência do camundongo correspondente.

[000108] Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado compreende praticamente todos, pelo menos um, e tipicamente dois domínios variáveis (tais como os contidos, por exemplo, em fragmentos Fab, Fab', F(ab')2, Fabc e Fv), em que todas, ou substancialmente todas, as CDRs correspondem às de uma imunoglobulina não humana, e especificamente aqui, todas as CDRs são sequências de camundongos ou humanizadas como detalhado nas Tabelas 1 a 4 abaixo e todos, ou substancialmente todos, os FRs são os de uma sequência consenso da imunoglobulina humana ou da linha germinal. Num outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado inclui também pelo menos uma porção de uma região Fc da imunoglobulina, tipicamente a de uma imunoglobulina humana. Normalmente, o anticorpo irá conter tanto o domínio variável da cadeia leve, assim como, pelo menos um de uma cadeia pesada. O anticorpo também pode incluir uma ou mais das regiões CH1, dobradiça, CH2, CH3 e/ou CH4 da cadeia pesada, conforme apropriado.

[000109] Um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado pode ser selecionado a partir de qualquer classe de imunoglobulinas, incluindo IgM, IgG, IgD, IgA e IgE, e qualquer isotipo, incluindo IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. Por exemplo, o domínio constante pode ser um domínio constante de fixação do complemento onde é desejado que o anticorpo humanizado apresente atividade citotóxica, e o isotipo é tipicamente o IgG1. Quando tal atividade citotóxica não é desejável, o domínio constante pode ser de outro isotipo, por exemplo, IgG2. Um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado alternativo pode compreender sequências de mais de uma classe ou isotipo de imunoglobulina, e selecionando os domínios constantes particulares para otimizar as funções efetoras desejadas está dentro do conhecimento comum na técnica. Em modalidades específicas, a presente invenção proporciona anticorpos que são anticorpos IgG1 e, mais especificamente, são anticorpos IgG1 em que existe uma desativação das funções efetoras.

[000110] As FRs e as CDRs, ou HVLs, de um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado não precisa corresponder exatamente às sequências parentais. Por exemplo, um ou mais resíduos na importação de CDR ou HVL, ou a sequência FR de consenso e da linha germinal podem ser alterados (por exemplo, mutagênese) por substituição, inserção ou eliminação de tal modo que o resíduo de aminoácidos resultante seja mais idêntico ao resíduo original na posição correspondente em qualquer sequência parental, mas o anticorpo, no entanto, retém a função de ligação à IL-23p19. Tal alteração tipicamente não será grande e serão alterações conservadoras. Normalmente, pelo menos 75% dos resíduos de anticorpo humanizado correspondem às da FR de consenso parental ou da linha germinal e as sequências da CDR de importação, mais frequentemente pelo menos 90% e, mais frequentemente, superior a 95%, ou maior do que 98% ou maior do que 99%.

[000111] Os resíduos de imunoglobulina que afetam a interface entre as regiões variáveis de cadeia pesada e leve ("a interface VL-VH") são aqueles que afetam a proximidade e a orientação das duas cadeias em relação uma à outra. Determinados resíduos que podem estar envolvidos nas interações entre cadeias incluem resíduos VL 34, 36, 38, 44, 46, 87, 89, 91, 96 e 98 e resíduos VH 35, 37, 39, 45, 47, 91, 93, 95, 100, e 103 (utilizando o sistema de numeração definido em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987)). A Patente US No. 6.407.213 também descreve que os resíduos, tais como os resíduos VL 43 e 85, e os resíduos VH 43 e 60 podem também estar envolvidos nesta interação. Embora estes resíduos sejam indicados apenas para a IgG humana, eles são aplicáveis em várias espécies. Os resíduos de anticorpos importantes que são razoavelmente esperados como estando envolvido em interações entre cadeias são selecionados para substituição na sequência consenso.

[000112] Os termos "sequência consenso" e "anticorpo consenso" referem-se a uma sequência de aminoácidos que compreende o resíduo de aminoácido que ocorre mais frequentemente em cada local em todas as imunoglobulinas de qualquer classe, isotipo, ou estrutura de subunidades, por exemplo, um domínio variável da imunoglobulina humana. A sequência consenso pode também ser baseada em imunoglobulinas de uma determinada espécie ou de muitas espécies. Uma sequência, uma estrutura ou um anticorpo "consenso" são entendidos como abrangendo uma sequência de consenso humana, tal como descrito em certas modalidades, e para se referir a uma sequência de aminoácidos que compreende os resíduos de aminoácidos de ocorrência mais frequente em cada local em todas as imunoglobulinas humanas, de qualquer determinada classe, isotipo, ou estrutura de subunidade. Assim, a sequência consenso contém uma sequência de aminoácidos possuindo, em cada posição, um aminoácido que está presente em uma ou mais imunoglobulinas conhecidas, mas que não pode duplicar exatamente toda a sequência de aminoácidos de uma única imunoglobulina. A sequência consenso da região variável não é obtida a partir de qualquer anticorpo ou imunoglobulina produzida naturalmente. Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., e suas variantes. As FRs das sequências consenso de cadeia leve e pesada, e suas variantes, proporcionam sequências úteis para a preparação de anticorpos anti- IL-23p19 humanizados. Ver, por exemplo, Patentes dos EUA. N°s 6037454 e 6054297.

[000113] As sequências da linha germinativa humana são encontradas naturalmente na população humana. Uma combinação desses genes da linha germinativa gera a diversidade de anticorpos. As sequências da linha germinativa de anticorpos para a cadeia leve do anticorpo são provenientes de v-genes e j-genes capa ou lambda da linha germinal humana conservada. Da mesma forma, as sequências de cadeias pesadas vêm de v-, d- e j-genes da linha germinativa (LeFranc, M-P e LeFranc, G, "The Immunoglobulin Facts Book" Academic Press, 2001).

[000114] Conforme usado aqui, "variantes", "variante do anti-IL- 23p19", "variante do anti-IL-23p19 humanizado", ou "anti-IL-23p19 humanizado variante" refere-se cada um ao anticorpo anti-IL-23p19 humanizado possuindo pelo menos uma CDR de variável de cadeia leve murino de qualquer uma das sequências como apresentado na Tabela 1, ou uma sequência de CDR de cadeia pesada murino derivada do anticorpo monoclonal murino como mostrado na Tabela 2. As variantes incluem aquelas que têm uma ou mais alterações de aminoácidos em um ou ambos os domínios variáveis de cadeia leve ou de cadeia pesada, desde que a alteração de um aminoácido não prejudique substancialmente a ligação do anticorpo à IL-23p19. Exemplos de anticorpos humanizados produzidos na presente invenção incluem aqueles designados como Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C e Anticorpo D, e as diferentes cadeias leves e cadeias pesadas dos mesmos são mostradas nas SEQ ID NOS: 174 e 180, e SEQ ID NOS: 176 e 178, respectivamente.

[000115] Um anticorpo "isolado" é aquele que foi identificado e separado e/ou recuperado de um componente do seu ambiente natural. Os componentes contaminantes do ambiente natural do anticorpo são aqueles materiais que podem interferir com usos diagnósticos ou terapêuticos do anticorpo, e podem ser enzimas, hormônios, e outros solutos proteicos ou não proteicos. Em um aspecto, o anticorpo será purificado até, pelo menos, mais que 95% de isolamento, em peso, de anticorpos.

[000116] Um anticorpo isolado inclui o anticorpo in situ no interior de células recombinantes nas quais é produzido, uma vez que pelo menos um componente do ambiente natural do anticorpo não estará presente. Geralmente, contudo, um anticorpo isolado será preparado por pelo menos uma etapa de purificação, em que o material celular recombinante é removido.

[000117] O termo "desempenho do anticorpo" refere-se a fatores que contribuem para o reconhecimento do anticorpo ao antígeno ou para a eficácia de um anticorpo in vivo. As alterações na sequência de aminoácidos de um anticorpo podem afetar as propriedades dos anticorpos, tais como dobragem, e podem influenciar os fatores físicos tais como a taxa inicial de ligação do anticorpo ao antígeno (ka), a constante de dissociação do anticorpo a partir do antígeno (Kd), a constante de afinidade do anticorpo para o antígeno (Kd), a conformação do anticorpo, a estabilidade da proteína, e a meia-vida do anticorpo.

[000118] O termo "epítopo marcado" quando usado aqui, refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 fundido a um "marcador de epítopo". Um "marcador de epítopo" é um polipeptídeo possuindo um número suficiente de aminoácidos para proporcionar um epítopo para a produção de anticorpos, no entanto, é desenhado de tal modo que não interfira com a atividade desejada do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado. O marcador de epítopo é geralmente suficientemente único de tal forma que um anticorpo criado contra o marcador de epítopo não reage substancialmente de forma cruzada com outros epítopos. Os polipeptídeos marcadores adequados geralmente contêm pelo menos 6 resíduos de aminoácidos e geralmente contêm cerca de 8 a 50 resíduos de aminoácidos, ou cerca de 9 a 30 resíduos. Exemplos de marcadores de epítopo e o anticorpo que se liga ao epítopo incluem o polipeptídeo marcador flu HA e o seu anticorpo 12CA5 (Field et al., 1988 Mol. Cell. Biol. 8:2159-2165); marcador c- myc e anticorpos 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 e 9E10 do mesmo (Evan et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5(12):3610-3616), e marcador da glicoproteína D (gD) do vírus do herpes simples e o seu anticorpo (Paborsky et al., 1990, Protein Engineering 3 (6): 547-553) Em determinadas modalidades, o marcador de epítopo é um "epítopo de ligação do receptor de recuperação", como é usado aqui, o termo "epítopo de ligação do receptor de recuperação" refere-se a um epítopo da região Fc de uma molécula de IgG (como, IgG1, IgG2, IgG3, ou IgG4) que é responsável pelo aumento in vivo da meia-vida sérica da molécula de IgG.

[000119] Em algumas modalidades, os anticorpos da presente invenção podem ser conjugados com um agente citotóxico, que é qualquer substância que inibe ou previne a função de células e/ou provoca a destruição de células. O termo pretende incluir isótopos radioativos (por exemplo, I131, I125, Y90 e Re186), agentes quimioterapêuticos, e toxinas tais como toxinas enzimaticamente ativas de origem bacteriana, fúngica, vegetal ou animal, e seus fragmentos. Estes agentes citotóxicos podem ser acoplados aos anticorpos humanizados da presente invenção usando procedimentos convencionais, para, por exemplo, tratar um paciente indicado para a terapia com o anticorpo.

[000120] Um "agente quimioterapêutico" é um composto químico útil no tratamento do câncer. Há inúmeros exemplos de agentes quimioterapêuticos que podem ser conjugados com os anticorpos terapêuticos da presente invenção. Exemplos de tais agentes quimioterapêuticos incluem agentes alquilantes, tais como tiotepa e ciclofosfamida; sulfonatos de alquila, tais como busulfano, improsulfano e piposulfano; aziridinas, tais como benzodopa, carboquona, meturedopa e uredopa; etileniminas e metilamelaminas, incluindo altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida e trimetilolomelamina; acetogeninas (especialmente bullatacina e bulatacinona); camptotecina (incluindo o análogo sintético topotecano); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluindo os seus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina e bizelesina); criptoficinas (particularmente criptoficina 1 e criptoficina 8); dolastatina, auristatinas, (incluindo análogos de monometil-auristatina E e monometil auristatina F); duocarmicina (incluindo os análogos sintéticos KW-2189 e CBI-TMI); eleuterobina; pancratistatina; sarcodictiina; espongistatina; mostardas de nitrogênio, tais como clorambucil, clomafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, novembichina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracil; nitrosureas, tais como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina; antibióticos, tais como os antibióticos enediinas (por exemplo, caliqueamicina, especialmente caliquemicina gamma1I e caliqueamicina phiI1, ver, por exemplo, Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186; dinemicina, incluindo dinemicina A; bifosfonatos, tais como clodronato; esperamicina; bem como cromóforo neocarzinostatina e cromóforos de antibiótico da cromoproteína enediina relacionados), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, caminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina (Adriamycin®) (incluindo morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino- doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina e desoxidoxorrubicina), epirubucina, esorubicina, idarubicina, marcelomicina, mitomicinas, tais como mitomicina C, ácido micofenico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina; anti-metabólitos, tal como metotrexato e 5-fluorouracil (5-FU), análogos de ácido fólico, tais como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina, tais como fludarabina, 6- mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos da pirimidina, tais como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, dideoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andrógenos, tais como calusterona, propionato de dromostalonona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; anti-adrenais como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; repositor de ácido fólico, como o ácido frolínico; aceglatona; glicosídeo aldofosfamida; ácido aminolevulínico; eniluracil; amsacrina; bestrabucil; bisantreno; edatraxato; defofamina; democolcine; diaziquona; elfomitina; acetato de eliptínio; uma epotilona; etoglucid, nitrato de gálio; hidroxiureia; lentinan, lonidamina; maitansinoides, tais como maitansina e ansamitocinas; mitoguazona, mitoxantrona; mopidamol; nitracrina; pentostatina; fenamet; pirarubicina; losoxantrona; ácido podofilínico, 2-etilhidrazida; procarbazina; PSK®; razoxano; rizoxina; sizofurano; espirogermânio; ácido tenuazônico; triaziquona; 2,2',2''-triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente a toxina T-2, verracurina A, roridina A e anguidina); uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitabronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinósido ("Ara-C"), ciclofosfamida, tiotepa, taxoides, por exemplo, paclitaxel (Taxol®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ) e doxetaxel (TAXOTERE®,, Rhône-Poulenc Rorer, Antony, França); clorambucil; gemcitabina (Gemzar®,), 6-tioguanina, mercaptopurina, metotrexato, análogos de platina, tais como cisplatina e carboplatina; vinblastina; platina; etoposido (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona, vincristina, vinorelbina Navelbine®,); novantrona; teniposido; edatrexato; daunomicina; aminopterina; xeloda; ibandronato; CPT-11; inibidor da topoisomerase RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides, tais como ácido retinoico, capecitabina; e sais farmaceuticamente aceitáveis, ácidos ou derivados de qualquer um dos acima. Também incluídos nesta definição estão os agentes anti- hormonais que atuam para regular ou inibir a ação do hormônio em tumores, tais como antiestrogênios e os moduladores seletivos do receptor de estrogênio (SERMs), incluindo, por exemplo, tamoxifeno (incluindo Nolvadex®,), raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifene, LY117018, onapristona e toremifeno (Fareston®,), inibidores da aromatase que inibem a enzima aromatase, que regula a produção de estrogênio nas glândulas supra-renais, tais como, por exemplo, 4(5)-imidazoles, aminoglutetimida, acetato de megestrol (Megace®,), exemestano, formestano, fadrozol, vorozol (Rivisor®,), letrozol (Femara®,) e anastrozol (Arimidex®,); e anti-andrógenos, tais como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolide e goserelina; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, ácidos ou derivados de qualquer um dos acima. Qualquer um ou mais desses agentes podem ser conjugados com os anticorpos humanizados da presente invenção para proporcionar um agente terapêutico útil para o tratamento de vários distúrbios.

[000121] Os anticorpos também podem ser conjugados com pró- fármacos. Um "pró-fármaco" é um precursor ou uma forma derivada de uma substância farmaceuticamente ativa que é menos citotóxica para células tumorais em comparação com o fármaco parental e é capaz de ser enzimaticamente ativada ou convertida na forma mais ativa. Ver, por exemplo, Wilman, 1986, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy", Em: Biochemical Society Transaction, 14, pp. 375-382, 615 Meeting Belfast e Stella et al., 1985, "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery", En: Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp 247267, Humana Press. Profármacos úteis incluem, mas não estão limitadas a, profármacos contendo fosfato, profármacos contendo tiofosfato, profármacos contendo sulfato, profármacos contendo peptídeos, profármacos modificados com D-aminoácidos, profármacos glicosilados, profármacos contendo β-lactama, profármacos contendo fenoxiacetamida substituída opcionalmente, e profármacos contendo fenilacetamida opcionalmente substituída, profármacos de 5- fluorouridina e de 5-fluorocitosina que podem ser convertidos no fármaco livre citotóxico ativo. Exemplos de fármacos citotóxicos que podem ser derivatizados em uma forma de pró-fármaco incluem, mas não estão limitados a, agentes quimioterapêuticos descritos acima.

[000122] Para diagnóstico, bem como para fins de monitorização terapêutica, os anticorpos da invenção também podem ser conjugados com um marcador, com um marcador apenas ou com um marcador e um segundo agente adicional (pró-fármaco, um agente quimiotera- pêutico e semelhantes). Um marcador, que se distingue dos outros agentes secundários refere-se a um agente que é um composto ou composição detectável e que pode ser conjugado direta ou indiretamente a um anticorpo humanizado da presente invenção. O próprio marcador pode ser detectável (por exemplo, marcadores radioisótopos ou marcadores fluorescentes) ou, no caso de um marcador enzimático, pode catalisar a alteração química de um composto ou composição substrato que é detectável. O anticorpo anti- IL-23p19 humanizado marcado pode ser preparado e usado em várias aplicações, incluindo diagnósticos in vitro e in vivo.

[000123] Os anticorpos da presente invenção podem ser formulados como parte de uma preparação de lipossomas, a fim de afetar a entrega dos mesmos, in vivo. Um "lipossoma" é uma pequena vesícula composta por vários tipos de lipídeos, fosfolipídeos e/ou surfactantes. Os lipossomas são úteis para administração a um mamífero de um composto ou uma formulação, tal como um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado divulgado aqui, opcionalmente, junto com ou em combinação com um ou mais agentes farmaceuticamente ativos e/ ou marcadores. Os componentes do lipossoma são vulgarmente dispostos numa formação em bicamada, semelhante à disposição lipídica das membranas biológicas.

[000124] Certos aspectos da presente invenção referem-se a ácidos nucleicos isolados que codificam um ou mais domínios de anticorpos humanizados da presente invenção. Uma molécula de ácido nucleico "isolada" é uma molécula de ácido nucleico que é identificada e separada de pelo menos uma molécula de ácido nucleico contaminante com a qual está normalmente associada na fonte natural do ácido nucleico do anticorpo. Uma molécula de ácido nucleico isolada distingue-se da molécula de ácido nucleico tal como existe em células naturais.

[000125] Em vários aspectos da presente invenção, um ou mais domínios de anticorpos humanizados serão expressados de forma recombinante. Tal expressão recombinante pode empregar uma ou mais sequências de controle, ou seja, sequências polinucleotídicas necessárias para a expressão de uma sequência de codificação operativamente ligada em um organismo hospedeiro particular. As sequências de controle adequadas para uso em células procariotas incluem, por exemplo, sequências do local de ligação do promotor, operador e ribossoma. As sequências de controle eucarióticas incluem, mas não estão limitadas a, promotores, sinais de poliadenilação e potenciadores. Estas sequências de controle podem ser usadas para a expressão e a produção do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado em células hospedeiras procarióticas e eucarióticas.

[000126] Uma sequência de ácido nucleico é "operativamente ligada" quando é colocada numa relação funcional com outra sequência de ácido nucleico. Por exemplo, uma pré-sequência ou uma líder secretora de ácido nucleico está operativamente ligado a um ácido nucleico que codifica para um polipeptídeo se for expresso como uma pré-proteína que participa na secreção do polipeptídeo, um promotor ou um potenciador é operativamente ligado a uma sequência de codificação se ele afetar a transcrição da sequência; ou um local de ligação ao ribossoma é operativamente ligado a uma sequência de codificação se ele estiver posicionado de modo a facilitar a translação. Geralmente, "operativamente ligado" significa que as sequências de DNA a serem ligadas são contíguas, e, no caso de uma sequência líder secretora, contígua e no quadro de leitura. Contudo, os potenciadores são opcionalmente contíguos. A ligação pode ser conseguida por ligação em locais de restrição convenientes. Se não existirem esses locais, os adaptadores oligonucleotídicos sintéticos ou ligantes podem ser usados.

[000127] Tal como usado aqui, as expressões "célula", "linhagem celular" e "cultura de células" são utilizadas alternadamente e todas estas designações incluem a progenia da mesma. Assim, "transformantes" e "células transformadas" incluem a célula sujeita primária e as culturas derivadas dela, sem considerar o número de transferências.

[000128] O termo "mamífero" para fins de tratamento refere-se a qualquer animal classificado como mamífero, incluindo seres humanos, animais da fazenda e domesticados, e animais de zoológico, de caça ou de estimação, tais como cães, cavalos, gatos, vacas, e semelhantes. Preferencialmente, o mamífero é o ser humano.

[000129] Um "distúrbio", tal como é usado aqui, é qualquer condição que possa se beneficiar do tratamento com um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado descrito aqui. Isto inclui distúrbios crônicos e agudos ou doenças, incluindo as condições patológicas que predispõem o mamífero a distúrbio em questão. Exemplos não limitantes ou distúrbios a serem tratados aqui incluem doenças inflamatórias, angiogênicas, autoimunes e imunes, distúrbios respiratórios, câncer, doenças malignas hematológicas, tumores benignos e malignos, leucemias e doenças malignas linfoides.

[000130] Os termos "câncer" e "canceroso" referem-se ou descrevem a condição fisiológica em mamíferos que é tipicamente caracterizada pelo crescimento celular desregulado. Exemplos de câncer incluem, mas não estão limitados a, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma e leucemia.

[000131] Tal como usado aqui, o termo "distúrbio associado à IL-23" ou "doença associada à IL-23" refere-se a uma condição na qual a atividade da IL-23 contribui para a doença e, tipicamente, onde a IL-23 é expressa de forma anormal. Um distúrbio associado à IL-23 inclui doenças e distúrbios do sistema imune, tais como distúrbios autoimunes e distúrbios inflamatórios. Tais condições incluem, mas não estão limitados a, artrite reumatoide (AR), lúpus eritematoso sistêmico (LES), escleroderma, síndrome de Sjogren, esclerose múltipla, psoríase, artrite psoriática, doença inflamatória do intestino (por exemplo, colite ulcerativa e doença de Crohn), inflamação pulmonar, asma, purara trombocitopênica idiopática (PTI) e espondilite anquilosante.

[000132] O termo "infusão intravenosa" refere-se à introdução de um agente para a veia de um animal ou paciente humano, durante um período de tempo superior a aproximadamente 15 minutos, geralmente entre cerca de 30 a 90 minutos.

[000133] O termo "bolo intravenoso" ou "administração intravenosa" refere-se a administração do fármaco numa veia de um animal ou ser humano, de tal modo que o corpo receba o fármaco em cerca de 15 minutos ou menos, geralmente de 5 minutos ou menos.

[000134] O termo "administração por via subcutânea" refere-se à introdução de um agente sob a pele de um animal ou paciente humano, de preferência dentro de uma bolsa entre a pele e os tecidos subjacentes, pela liberação relativamente lenta, sustentada, de um recipiente de medicamento. Beliscar ou puxar a pele para cima e para longe do tecido subjacente pode criar a bolsa.

[000135] O termo "infusão subcutânea" refere-se à introdução de um fármaco sob a pele de um animal ou paciente humano, de preferência dentro de uma bolsa entre a pele e os tecidos subjacentes, pela liberação relativamente lenta, sustentada, de um recipiente de medicamento durante um período de tempo, incluindo, mas não se limitando a, 30 minutos ou menos, ou 90 minutos ou menos. Opcionalmente, a infusão pode ser feita por implantação subcutânea de uma bomba de fornecimento de fármacos, implantada sob a pele do animal ou do paciente humano, em que a bomba proporciona uma quantidade predeterminada de fármaco durante um período de tempo predeterminado, tal como 30 minutos, 90 minutos, ou um período de tempo que mede o comprimento do regime de tratamento.

[000136] O termo "bolo subcutâneo" refere-se à administração de fármacos sob a pele de um animal ou paciente humano, onde a entrega do fármaco em bolo é menos do que aproximadamente 15 minutos, em outro aspecto, menos de 5 minutos, e ainda em outro aspecto, menos de 60 segundos. Em ainda outro aspecto, a administração está dentro de uma bolsa entre a pele e o tecido subjacente, em que a bolsa pode ser criada ao beliscar ou puxar a pele para cima e para longe do tecido subjacente.

[000137] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" é usado para se referir a uma quantidade de um agente ativo que alivia ou melhora um ou mais dos sintomas do distúrbio a ser tratado. Em outro aspecto, a quantidade terapeuticamente eficaz refere-se a uma concentração sérica alvo, que foi demonstrada ser eficaz, por exemplo, retardando a progressão da doença. A eficácia pode ser medida de maneira convencional, dependendo da condição a ser tratada.

[000138] Os termos "tratamento" e "terapia" e semelhantes, como usados aqui, são destinados a incluir as medidas terapêuticas, bem como profiláticas, ou supressora de uma doença ou distúrbio levando a um efeito clinicamente benéfico ou desejável, incluindo, mas não limitado a, redução ou alívio de um ou mais sintomas, regressão, retardamento ou interrupção da progressão da doença ou distúrbio. Assim, por exemplo, o termo tratamento inclui a administração de um agente antes ou depois do início de um sintoma de uma doença ou distúrbio, prevenindo ou removendo, assim, um ou mais sintomas da doença ou distúrbio. Como outro exemplo, o termo inclui a administração de um agente após a manifestação clínica da doença para o combate dos sintomas da doença. Além disso, a administração de um agente após o início e após os sintomas clínicos se desenvolveram onde a administração afeta os parâmetros clínicos da doença ou distúrbio, tais como o grau de lesão dos tecidos ou a quantidade ou a extensão de metástases, caso ou não o tratamento leve a uma melhoria da doença, compreende "tratamento" ou "terapia", como usado aqui. Além disso, enquanto as composições da invenção, quer isoladamente ou em combinação com outro agente terapêutico, aliviar ou melhorar pelo menos um sintoma de um distúrbio a ser tratado, em comparação com o sintoma na ausência do uso da composição do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado, o resultado deve ser considerado um tratamento eficaz do distúrbio subjacente, independentemente do fato de todos os sintomas do distúrbio serem aliviados ou não.

[000139] O termo "bula" é usado para se referir às instruções normalmente incluídas em embalagens comerciais de produtos terapêuticos, que contêm informação acerca das indicações, utilização, administração, contraindicações e/ou advertências relativas ao uso destes produtos terapêuticos. Anticorpos

[000140] Em um aspecto, descrito e divulgado aqui estão os anticorpos anti-IL-23, em particular os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados, e composições e artigos de fabricação que compreendem um ou mais anticorpos anti-IL-23, em particular um ou mais anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção. Também descritos são os agentes de ligação que incluem um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo anti-IL-23, em particular um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado. Os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados e os agentes de ligação podem inibir a produção de citocinas associadas à Th17, que contribuem para as doenças autoimunes e inflamatórias crônicas. Os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados e agentes de ligação podem assim ser usados no tratamento de uma variedade de doenças ou distúrbios. Um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado e um agente de ligação da IL-23p19, cada um inclui pelo menos uma porção que reconhece especificamente um epítopo da IL-23p19 (isto é, um fragmento de ligação ao antígeno).

[000141] Nas caracterizações iniciais, os camundongos foram selecionados com base na caracterização de ligação da IL-23p19.

[000142] Por conseguinte, em um aspecto, um anticorpo da presente invenção tem uma KD para a IL-23, em particular IL-23 humana, de menos de 100 pM. Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção tem uma KD inferior a 40pM. Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção tem uma KD inferior a 20pM. Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção tem uma KD inferior a 10pM. Em outro aspecto, um anticorpo monoclonal da presente invenção tem uma KD inferior a 1pM.

[000143] Os anticorpos selecionados do camundongo têm as seguintes regiões variáveis de cadeia leve e as regiões variáveis de cadeia pesada, como mostradas na Tabela 1 e 2: Tabela 1: Anti-IL-23p19 de camundongo primário - Sequências VK

[000144] As sequências estruturais humanas foram selecionadas para cada um do camundongo primário com base na homologia da estrutura, a estrutura da CDR, os resíduos canônicos conservados, os resíduos de embalagem de interface conservados e outros parâmetros.

[000145] As CDRs de cadeia leve e de cadeia pesada de camundongos e dos diversos anticorpos de camundongo estão apresentadas na Tabela 3 e Tabela 4, respectivamente. A Tabela 4 também mostra três CDRs de cadeia pesada derivadas do anticorpo 6B8 do camundongo ao longo do processo de humanização. Tabela 3: Sequências de CDR de cadeia leve

Tabela 4: Sequências de CDR de cadeia pesada

[000146] As CDRs listadas acima nas Tabelas 3 e 4 são definidas usando o sistema de numeração de Chothia (Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948).

[000147] Os Fabs que apresentaram ligação igual ou melhor, em comparação com o Fab quimérico parental foram selecionados para conversão em IgG. O 6B8 foi convertido para um formato IgG1KO. A IgG1KO (funções knockout ou efetoras) possui duas mutações na região Fc, Leu234Ala e Leu235Ala, que reduzem a função efetora, tais como a ligação ao FCYR e ao complemento. O formato da IgG é descrito na literatura (ver, por exemplo Hezareh et al. (2001) Journal of Virology 75: 12161-12168). O Exemplo 1 descreve o processo de humanização em mais detalhe. Os resultados de tal humanização resultaram em sequências de anticorpos humanizados. Um número representativo de regiões variáveis de cadeia pesada e de cadeia leve humanizadas derivado de anticorpos de camundongo 6B8 é fornecido nas Tabelas 5 e 6. Um alinhamento entre as regiões variáveis de cadeia leve e de cadeia pesada de anticorpos de camundongo 6B8 e as regiões variáveis de cadeia leve e de cadeia pesada humanizadas de anticorpos de camundongos 6B8 é mostrado na Figura 1.

[000148] A combinação selecionada de regiões variáveis de cadeia pesada e de cadeia leve humanizada derivadas de anticorpos de camundongos 6B8 resultou em Anticorpos A, B, C e D: Anticorpo A: 6B8-IgG1KO-2 com IgK-66 (região variável de cadeia pesada 6B8CVH-02 e região variável de cadeia leve 6B8CVK-66); Anticorpo B: 6B8-IgG1KO-5 com IgK-66 (região variável de cadeia pesada 6B8CVH-05 e região variável de cadeia leve 6B8CVK-66); Anticorpo C: 6B8-IgG1KO-2 com IgK-65 (região variável de cadeia pesada 6B8CVH-02 e região variável de cadeia leve 6B8CVK-65); Anticorpo D: 6B8-IgG1KO-5 com IgK-65 (região variável de cadeia pesada 6B8CVH-05 e região variável de cadeia leve 6B8CVK-65).

[000149] Os Anticorpos A, B, C e D possuem as sequências de cadeia pesada e leve apresentadas na Tabela 7. Tabela 5: Sequências 6B8-VK humanizadas

Tabela 6: Sequência 6B8-VH humanizada

Tabela 7: D NA de cadeia pesada e leve e sequências de aminoácidos para os Anticorpos A, B, C e D

[000150] As regiões variáveis de cadeia leve e de cadeia pesada dos Anticorpos A, B, C e D encontram-se sublinhadas na Tabela 7 acima.

[000151] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção tem pelo menos uma das propriedades abaixo. Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção tem qualquer combinação de pelo menos dois, ou pelo menos 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou 11 das propriedades abaixo. Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção possui todas as propriedades abaixo. • KD para a IL-23 humana < 1 pM (sem mudança na taxa e ligação em 50% de soro humano) • Bloqueia a ligação da IL-23 à IL-23R/Fc humana in vitro • Sem ligação à IL-12 humana • Inibe a produção da IL-17 induzida pela IL-23 humana em esplenócitos de camundongo com IC50 < 20 pM • Inibe a fosforilação de STAT3 induzida pela IL-23 humana em células DB humanas com o IC50 < 40 pM • Sem atividade prevista no ADCC/CDC • KD <1 pM para a IL-23 do macaco cinomolgo • Sem reatividade cruzada com a IL-23 do camundongo ou do rato • Inibe a IL-17 induzida pela IL-23 humana e produção da IL-22 na orelha de camundongo (> 80% de inibição de ambas as citocinas a 1 mg/kg) • Estabilidade 83° C (temperatura de fusão 83° C, conforme determinado por calorimetria de varrimento diferencial) • Solubilidade: > 100 mg/mL (tal como medido por espectroscopia de UV e monitorada pela turvação) • Administração subcutânea de 1,0 mg/kg nos três macacos cinomolgos mostra exposição sustentada > 10 nM para aproximadamente 28 dias, com uma biodisponibilidade de cerca de 70%.

[000152] Por nenhuma atividade prevista no ADCC/DC, significa aqui que um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção tem afinidade reduzida ao receptor Fc e, por conseguinte, está prevista para não ter atividade em ADCC/CDC.

[000153] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção tem pelo menos uma das propriedades abaixo. Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção tem qualquer combinação de pelo menos dois, ou pelo menos 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 das propriedades abaixo. Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção possui todas as propriedades abaixo. • KD para a IL-23 humana < 1 pM (sem mudança na taxa e ligação em 50% de soro humano) • Bloqueia a ligação da IL-23 à IL-23R/Fc humana in vitro • Sem ligação à IL-12 humana • Inibe a produção da IL-17 induzida pela IL-23 humana em esplenócitos de camundongo com IC50 < 20 pM • Inibe a fosforilação de STAT3 induzida pela IL-23 humana em células DB humanas com o IC50 < 40 pM • Sem atividade prevista no ADCC/CDC • KD <1 pM para a IL-23 do macaco cinomolgo • Sem reatividade cruzada com a IL-23 do camundongo ou do rato • Inibe a IL-17 induzida pela IL-23 humana e produção da IL-22 na orelha de camundongo (> 80% de inibição de ambas as citocinas a 1 mg/kg) • Estabilidade 83° C (temperatura de fusão 83° C, conforme determinado por calorimetria de varrimento diferencial) • Solubilidade: > 100 mg/mL (tal como medido por espectroscopia de UV e monitorada pela turvação)

[000154] Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção tem pelo menos uma das seguintes propriedades de ligação (propriedades A). Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção tem qualquer combinação de pelo menos dois, ou pelo menos três, das propriedades abaixo. Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção possui todas as propriedades abaixo. • KD para a IL-23 humana < 1 pM (sem mudança na taxa e ligação em 50% de soro humano) • Sem ligação à IL-12 humana • KD <1 pM para a IL-23 do macaco cinomolgo • Sem reatividade cruzada com a IL-23 do camundongo ou do rato

[000155] Em particular, um anticorpo humanizado do presente invento tem uma KD para a IL-23 humana < 13:00 (nenhum deslocamento em ligação com a taxa de 50% de soro humano) e nenhuma ligação a IL-12 humana.

[000156] Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção tem pelo menos uma das seguintes propriedades funcionais (propriedades B). Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção tem qualquer combinação de pelo menos dois, ou pelo menos três, das propriedades abaixo. Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção possui todas as propriedades abaixo. • Bloqueia a ligação da IL-23 à IL-23R/Fc humana in vitro • Inibe a produção da IL-17 induzida pela IL-23 humana em esplenócitos de camundongo com IC50 < 20 pM • Inibe a fosforilação de STAT3 induzida pela IL-23 humana em células DB humanas com o IC50 < 40 pM • Inibe a IL-17 induzida pela IL-23 humana e produção da IL-22 na orelha de camundongo (> 80% de inibição de ambas as citocinas a 1 mg/kg)

[000157] Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção tem pelo menos uma das seguintes propriedades (propriedades C). Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção tem qualquer combinação de pelo menos dois, ou pelo menos três, das propriedades abaixo. Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção possui todas as propriedades abaixo. • Sem atividade prevista no ADCC/CDC • Estabilidade 83° C (temperatura de fusão 83° C, conforme determinado por calorimetria de varrimento diferencial) • Solubilidade: > 100 mg/mL (tal como medido por espectroscopia de UV e monitorada pela turvação) • Administração subcutânea de 1,0 mg/kg nos três macacos cinomolgos mostra exposição sustentada > 10 nM para aproximadamente 28 dias, com uma biodisponibilidade de cerca de 70%.

[000158] Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção tem pelo menos uma das seguintes propriedades (propriedades C). Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizada da presente invenção tem qualquer combinação de pelo menos duas das propriedades abaixo. Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção possui todas as propriedades abaixo. • Sem atividade prevista no ADCC/CDC • Estabilidade 83° C (temperatura de fusão 83° C, conforme determinado por calorimetria de varrimento diferencial) • Solubilidade: > 100 mg/mL (tal como medido por espectroscopia de UV e monitorada pela turvação)

[000159] Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção tem pelo menos uma propriedade A, pelo menos uma propriedade B e, pelo menos, uma propriedade C. Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção tem qualquer combinação de pelo menos dois, ou pelo menos três, das propriedades A, B e C.

[000160] Em alguns aspectos, o anticorpo humanizado exibe atividade de bloqueio, em que ele diminui a ligação de IL-23 ao receptor da IL-23 por pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, ou pelo menos 95%. A capacidade de um anticorpo para bloquear a ligação da IL-23 ao receptor da IL-23 pode ser medida utilizando ensaios de ligação competitiva conhecidos na técnica. Alternativamente, a atividade de bloqueio de um anticorpo pode ser medida através da avaliação dos efeitos biológicos da IL-23, tais como a produção da IL-17 e da IL-22 para determinar se a sinalização mediada pelo receptor da IL-23 é inibida.

[000161] Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado possuindo propriedades biofísicas favoráveis. Em um aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção está presente em pelo menos 90% da forma de monômero, ou, pelo menos 92% da forma de monômero, ou pelo menos em 95% da forma de monômero em um tampão. Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado da presente invenção continua a pelo menos 90% da forma de monômeros, ou pelo menos 92% da forma de monômero, ou pelo menos em 95% da forma de monômero num tampão durante um mês ou por quatro meses.

[000162] Em um aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção é um Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D. Por conseguinte, numa modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção compreende a sequência de cadeia leve da SEQ ID NO: 174 e a sequência da cadeia pesada da SEQ ID NO: 176 (anticorpo A). Em outra modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção compreende a sequência de cadeia leve da SEQ ID NO: 174 e a sequência de cadeia pesada da SEQ ID NO: 178 (anticorpo B). Em outra modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção compreende a sequência de cadeia leve da SEQ ID NO: 180 e a sequência de cadeia pesada da SEQ ID NO: 176 (Anticorpo C). Em outra modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção compreende a sequência de cadeia leve da SEQ ID NO: 180 e a sequência de cadeia pesada da SEQ ID NO: 178 (anticorpo D).

[000163] Em outra modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção consiste na sequência de cadeia leve da SEQ ID NO: 174 e a sequência de cadeia pesada da SEQ ID NO: 176 (anticorpo A). Em outra modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção consiste na sequência de cadeia leve da SEQ ID NO: 174 e na sequência de cadeia pesada da SEQ ID NO: 178 (anticorpo B). Em outra modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção consiste na sequência de cadeia leve da SEQ ID NO: 180 e na sequência de cadeia pesada da SEQ ID NO: 176 (Anticorpo C). Em outra modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção consiste na sequência de cadeia leve da SEQ ID NO: 180 e na sequência de cadeia pesada da SEQ ID NO: 178 (anticorpo D).

[000164] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados, incluindo fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, tais como as regiões variáveis de cadeia pesada e leve, compreendem uma sequência de aminoácidos dos resíduos derivados do Anticorpo A (sequência de cadeia leve = SEQ ID NO: 174; sequência de cadeia pesada = SEQ ID NO: 176), anticorpo B (sequência de cadeia leve = SEQ ID NO: 174; sequência de cadeia pesada = SEQ ID NO: 178), Anticorpo C (sequência de cadeia leve = SEQ ID NO: 180; sequência de cadeia pesada = SEQ ID NO: 176) ou Anticorpo D (sequência de cadeia leve = SEQ ID NO: 180; sequência de cadeia pesada = SEQ ID NO: 178).

[000165] Em outra modalidade, a presente invenção proporciona um anticorpo anti-IL-23p19, ou seu fragmento de ligação ao antígeno que se liga à IL-23p19 em um epítopo que consiste em 108 a 126 resíduos de aminoácidos e 137 a 151 resíduos de aminoácidos da SEQ ID NO: 181.

[000166] Em outra modalidade, a presente invenção proporciona um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno que se liga competitivamente à IL-23p19 com um anticorpo da presente invenção, por exemplo, um Anticorpo, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D descritos aqui. A capacidade de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno se ligar competitivamente à IL-23p19 pode ser medida usando ensaios de ligação competitiva conhecidos na técnica.

[000167] Os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados incluem opcionalmente substituições de aminoácidos específicos nas regiões de estrutura consenso ou da linha germinativa. A substituição específica de resíduos de aminoácidos nestas posições de estrutura pode melhorar vários aspectos do desempenho do anticorpo, incluindo a afinidade de ligação e/ou a estabilidade, ao longo da demonstrada nos anticorpos humanizados formados pela "troca direta" de CDRs ou HVLS para as regiões de estrutura da linha germinativa humana.

[000168] Em algumas modalidades, a presente invenção descreve outros anticorpos monoclonais com uma região variável de cadeia leve possuindo a sequência de aminoácidos apresentada nas SEQ ID NOs: 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 ou 119. Em algumas modalidades, a presente invenção descreve outros anticorpos monoclonais com uma região variável de cadeia pesada possuindo a sequência de aminoácidos apresentada nas SEQ ID NOs: 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 ou 156 (ver as Tabelas 1 e 2 acima). A sequência CDR destes anticorpos de camundongo está apresentada nas Tabelas 3 e 4. Colocando tal CDR em FRs dos domínios variáveis de cadeia pesada e de cadeia leve consenso humanos irá produzir anticorpos humanizados úteis da presente invenção.

[000169] Em particular, a presente invenção proporciona anticorpos monoclonais com as combinações de regiões variáveis de cadeia leve e de cadeia pesada das SEQ ID NOs: 84/121, 86/123, 88/125, 90/127, 91/128, 93/130, 95/132, 97/134, 99/136, 101/138, 103/140, 105/142, 107/144, 109/146, 111/148, 113/150, 115/152, 117/154 ou 119/156. Tais regiões variáveis podem ser combinadas com regiões constantes humanas.

[000170] Em algumas modalidades, a presente invenção descreve outros anticorpos humanizados com as sequências da região variável de cadeia leve possuindo a sequência de aminoácidos apresentada nas SEQ ID NOs: 158, 160, 162 ou 164. Em algumas modalidades, a presente invenção descreve outros anticorpos humanizados com as sequências da região variável de cadeia pesada possuindo a sequência de aminoácidos apresentada nas SEQ ID NOs: 166, 168, 170 ou 172 (ver Tabelas 5 e 6 acima). As sequências de CDR destes anticorpos estão apresentadas nas Tabelas 3 e 4. Em particular, a presente invenção proporciona anticorpos monoclonais com as combinações de regiões variáveis de cadeia leve e de cadeia pesada das SEQ ID NOs: 160/166, 160/168, 158/166 ou 158/168. Tais regiões variáveis podem ser combinadas com regiões constantes humanas.

[000171] Em outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, que compreende um domínio variável de cadeia leve humanizado compreendendo as CDRs da SEQ ID NO: 160 e as regiões de estrutura possuindo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idênticas, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos das regiões de estrutura da sequência de aminoácido do domínio variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 160 e um domínio variável de cadeia pesada humanizada compreendendo as CDRs da SEQ ID NO: 166 e as regiões de estrutura possuindo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos das regiões de estrutura da sequência de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 166. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado.

[000172] Em outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, que compreende um domínio variável de cadeia leve humanizada compreendendo as CDRs da SEQ ID NO: 160 e as regiões de estrutura possuindo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos das regiões de estrutura da sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 160 e um domínio variável de cadeia pesada humanizado compreendendo as CDRs da SEQ ID NO: 168 e as regiões de estrutura possuindo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos das regiões de estrutura da sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 168. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado.

[000173] Em outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, que compreende um domínio variável de cadeia leve humanizada compreendendo as CDRs da SEQ ID NO: 158 e as regiões de estrutura possuindo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos das regiões de estrutura da sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 158 e um domínio variável de cadeia pesada humanizado compreendendo as CDRs da SEQ ID NO: 166 e as regiões de estrutura possuindo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos das regiões de estrutura da sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 166. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado.

[000174] Em outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, que compreende um domínio variável de cadeia leve humanizada compreendendo as CDRs da SEQ ID NO: 158 e as regiões de estrutura possuindo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos das regiões de estrutura da sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 158 e um domínio variável de cadeia pesada humanizado compreendendo as CDRs da SEQ ID NO: 168 e as regiões de estrutura possuindo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácidos das regiões de estrutura da sequência de aminoácidos do domínio variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 168. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado.

[000175] Em algumas modalidades específicas, os anticorpos anti-IL- 23p19 humanizados divulgados aqui compreendem, pelo menos, um domínio variável de cadeia pesada ou leve compreendendo as CDRs ou HVLs dos anticorpos monoclonais de murino ou anticorpos humanizados, como mostrado nas Tabelas 1 a 6 acima e as FRs dos domínios variáveis de cadeia leve e pesada da linha germinal humana.

[000176] As CDR destas sequências são apresentadas nas Tabelas 3 e 4. Deste modo, num aspecto, a presente invenção proporciona um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, compreendendo uma sequência de cadeia leve CDR1 (L-CDR1) das SEQ ID NOs: 1, 4, 6, 7, 8, 11, 15, 18, 19, 22, 27 ou 30, sequência de cadeia leve CDR2 (L-CDR2) das SEQ ID NOs: 2, 5, 9, 12, 16, 20, 23, 25, 28 ou 31, uma sequência de cadeia leve CDR3 (L-CDR3) das SEQ ID NOs: 3, 10, 13, 14, 17, 21, 24, 26, 29, ou 32, uma sequência de cadeia pesada CDR1 (H-CDR1) da SEQ ID NO: 33, 36, 38, 40, 43, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 67, 68, 69, 77 ou 80, uma sequência de cadeia pesada CDR2 (H-CDR2) das SEQ ID NOs: 34, 39, 41, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 70, 72, 73, 75, 78 ou 81, e uma sequência de cadeia pesada RDC3 (H-CDR3) das SEQ ID NOs: 35, 37, 42, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 65, 71, 74, 76, 79 ou 82. Em um aspecto, o anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve que compreende uma L-CDR1 listada acima, uma L-CDR2 listada acima e uma L-CDR3 listada acima, e um região variável de cadeia pesada compreendendo uma H-CDR1 listada acima, uma H-CDR2 listada acima e uma H- CDR3 listada acima.

[000177] Em outro aspecto, a presente invenção proporciona um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno, compreendendo: a) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 1, 2, 3, 33, 34 e 35, respectivamente, ou b) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 4, 5, 3, 36, 34 e 37, respectivamente, ou c) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 1, 2, 3, 38, 39 e 35, respectivamente, ou d) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 6, 2, 3, 40, 41 e 42, respectivamente, ou e) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 7, 2, 3, 43, 41 e 44, respectivamente, ou f) L-CDR1, L-CDR2 um, um L-CDR3, um H-CDR1, H-CDR2 de uma e uma sequência H-CDR3 da SEQ ID NO: 8, 9, 10, 45, 46 e 47, respectivamente, ou g) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 8, 9, 10, 48, 49 e 50, respectivamente, ou h) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 11, 12, 13, 51, 52 e 53, respectivamente, ou i) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 7, 2, 14, 54, 55 e 56, respectivamente, ou j) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 15, 16, 17, 57, 58 e 59, respectivamente, ou k) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 18, 16, 17, 60, 61 e 62, respectivamente, ou l) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 19, 20, 21, 63, 66, 67 ou 68, 64 e 65, respectivamente, ou m) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 22, 23, 24, 69, 70 e 71, respectivamente, ou n) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 22, 25, 26, 55, 72 e 71, respectivamente, ou o) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 8, 9, 10, 45, 73 e 74, respectivamente, ou p) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 27, 28, 29, 45, 75 e 76, respectivamente, ou q) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 8, 9, 10, 77, 78 e 79, respectivamente, ou r) uma sequência L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H- CDR2 e H-CDR3 da SEQ ID NO: 30, 31, 32, 80, 81 e 82, respectivamente.

[000178] Em um aspecto, o anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve que compreende uma combinação de L-CDR1, L-CDR2 e L- CDR3 listada acima, e uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma combinação de H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 listada acima.

[000179] Nas modalidades específicas, é contemplado que os anticorpos quiméricos com regiões CDR trocadas (isto é, por exemplo, trocando uma ou duas CDRs dos anticorpos de camundongo ou anticorpo humanizado derivado delas com a CDR análoga de outro anticorpo de camundongo ou anticorpo humanizado derivado delas) entre estas imunoglobulinas exemplares podem produzir anticorpos úteis.

[000180] Em certas modalidades, o anticorpo anti-IL-23p19 humanizado é um fragmento de anticorpo. Vários fragmentos de anticorpos têm sido geralmente discutidos acima e existem técnicas que foram desenvolvidas para a produção de fragmentos de anticorpo. Os fragmentos podem ser obtidos através da digestão proteolítica de anticorpos intactos (ver, por exemplo, Morimoto et al., 1992, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117, e Brennan et al., 1985, Science 229:81). Alternativamente, os fragmentos podem ser produzidos diretamente em células hospedeiras recombinantes. Por exemplo, os fragmentos Fab'-SH podem ser recuperados diretamente a partir de E. coli e quimicamente acoplados para formar fragmentos F(ab')2 (ver, por exemplo, Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163167). Por outra abordagem, os fragmentos F(ab')2 podem ser isolados diretamente a partir de cultura de células hospedeiras recombinantes. Outras técnicas para a produção de fragmentos de anticorpo serão evidentes para o especialista na técnica. Deste modo, em um aspecto, a presente invenção proporciona fragmentos de anticorpo compreendendo as CDRs descritas aqui, em particular uma das combinações de L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 descritas aqui. Em outro aspecto, a presente invenção proporciona fragmentos de anticorpo compreendendo as regiões variáveis descritas aqui, por exemplo, uma das combinações das regiões variáveis de cadeia leve e as regiões variáveis de cadeia pesada descrita aqui.

[000181] Certas modalidades incluem um fragmento F(ab')2 de um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado compreendendo uma sequência de cadeia leve de qualquer uma das SEQ ID NOs: 174 ou 180, em combinação com uma sequência de cadeia pesada das SEQ ID NOs: 176 ou 178. Tais modalidades podem incluir um anticorpo intacto compreendendo tal F(ab')2.

[000182] Em algumas modalidades, o anticorpo ou o fragmento de anticorpo compreende uma região constante que medeia a função efetora. A região constante pode fornecer respostas de citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC), fagocitose celular dependente de anticorpos (ADCP) e/ou citotoxicidade dependente do complemento (CDC) contra uma célula alvo que expressa a IL-23. O(s) domínio(s) efetor(es) podem ser, por exemplo, uma região Fc de uma molécula de Ig.

[000183] O domínio efetor de um anticorpo pode ser de qualquer espécie e isotipos de animal vertebrado adequado. Os isotipos de diferentes espécies animais diferem na capacidade de mediar as funções efetoras. Por exemplo, a capacidade da imunoglobulina humana para mediar CDC e ADCC/ADCP é geralmente na ordem de IgM~IgGi~IgG3>IgG2>IgG4 e IgGi~IgG3>IgG2/IgM/IgG4, respectivamente. Imunoglobulinas murinas medeiam CDC e ADCC/ADCP geralmente na ordem de IgM~IgG3>IgG2b>IgG2a>IgGi murina e IgG2b>IgG2a> IgGi>IgG3, respectivamente. Em outro exemplo, IgG2a murina medeia ADCC enquanto ambas IgG2a e IgM murinas medeiam CDC. Modificações de anticorpos

[000184] Os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados e os agentes podem incluir modificações do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou seu fragmento de ligação ao antígeno. Por exemplo, pode ser desejável modificar o anticorpo em relação à função efetora, de modo a aumentar a eficácia do anticorpo no tratamento do câncer. Tal modificação é a introdução do(s) resíduo(s) de cisteína na região Fc, permitindo desse modo a formação de ligações dissulfureto entre cadeias nesta região. O anticorpo homodimérico gerado assim pode ter capacidade de internalização melhorada e/ou aumento de morte celular mediada pelo complemento e/ou citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC). Ver, por exemplo, Caron et al., 1992, J. Exp. Med. 176:1191-1195 e Shopes, 1992, J. Immunol. 148:2918-2922. Os anticorpos homodiméricos com atividade antitumoral melhorada também podem ser preparados usando reticuladores heterobifuncionais como descrito em Wolff et al., 1993, Cancer Research 53: 2560-2565. Alternativamente, um anticorpo pode ser modificado para conter regiões Fc duplas, lise do complemento aprimorada e capacidades de ADCC do anticorpo. Ver Stevenson et al., 1989, Anti-Cancer Drug Design 3:219-230.

[000185] Os anticorpos com capacidade melhorada para suportar a ADCC foram gerados através da modificação do padrão de glicosilação da sua região Fc. Isto é possível uma vez que a glicosilação de anticorpos no resíduo asparagina, N297, no domínio CH2 está envolvida na interação entre a IgG e os receptores Fcy pré- requisitos para ADCC. As linhagens celulares hospedeiras foram modificadas para expressar anticorpos com glicosilação alterada, tais como o aumento da N-acetilglicosamina dividida em duas partes ou a redução da fucose. A redução da fucose proporciona um maior aumento da atividade da ADCC que faz aumentar a presença da N- acetilglicosamina dividida em duas partes. Além disso, o aumento da ADCC pelos anticorpos de baixa fucose é independente do polimorfismo FcYRIIIa V/F.

[000186] A modificação da sequência de aminoácidos da região Fc de anticorpos é uma alternativa para a modificação genética da glicosilação para aumentar a ADCC. O local de ligação na IgG1 humana para os receptores Fcy foi determinado por análise mutacional extensa. Isto levou à geração de anticorpos humanizados IgG1 com mutações Fc que aumentam a afinidade de ligação para FcYRIIIa e aumentam a ADCC in vitro. Além disso, as variantes Fc foram obtidas com muitas permutações diferentes de propriedades de ligação, por exemplo, a ligação melhorada a receptores específicos FCYR com ligação inalterada ou diminuída a outros receptores FCYR.

[000187] Outro aspecto inclui a imunoconjugados compreendendo o anticorpo humanizado ou seus fragmentos conjugados a um agente citotóxico tal como um agente quimioterapêutico, uma toxina (por exemplo, uma toxina enzimaticamente ativa de origem bacteriana, fúngica, vegetal ou animal, ou seus fragmentos), ou um isótopo radioativo (ou seja, um radioconjugado).

[000188] Os agentes quimioterapêuticos úteis na geração de tais imunoconjugados foram descritos acima. As toxinas enzimaticamente ativas e seus fragmentos que podem ser utilizados para formar imunoconjugados úteis incluem cadeia A da difteria, fragmentos ativos não ligantes da toxina da difteria, cadeia A da exotoxina (de Pseudomonas aeruginosa), cadeia A da ricina, cadeia A da abrina, cadeia A da modecina, alfa-sarcina, proteínas de Aleurites fordii, proteínas diantina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII e PAP-S), inibidor de Momordica charantia, curcina, crotina, inibidor de Sapaonaria officinalis, gelonina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomicina, tricotecenos, e similares. Uma variedade de radionuclidos está disponível para a produção de anticorpos anti-IL-23p19 humanizados radioconjugados. Exemplos incluem 212Bi, 131I, 131In, 90Y, e 186Re.

[000189] Os conjugados do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado e um agente citotóxico ou quimioterapêutico pode ser feito por métodos conhecidos, usando uma variedade de agentes de acoplamento de proteína bifuncionais, tais como propionato de N-succinimidil-3-(2- piridilditiol) (SPDP), iminotiolano (IT), derivados bifuncionais de imidoésteres (tais como adipimidato de dimetil HCL), ésteres ativos (tais como o dissuccinimidil suberato), aldeídos (tais como glutaraldeído), compostos bis-azido (tais como bis (p-azidobenzoil) hexanodiamina), derivados de bis-diazônio (tais como bis-(p-diazonio- benzoil)-etilenodiamina), diisocianatos (tais como 2,6-diisocianato de tolueno), e compostos bis-ativos de flúor (tais como 1,5-difluoro-2,4- dinitrobenzeno). Por exemplo, uma imunotoxina de ricina pode ser preparada como descrito em Vitetta et al., 1987, Ciência 238:1098. O ácido 1-isotiocianatobenzil-3-metildietileno triaminapentacético marcado com carbono-14 (MX-DTPA) é um exemplo de agente quelante para conjugação do radionucleotídeo para o anticorpo. Os conjugados podem também ser formados com um ligante clivável.

[000190] Os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados revelados aqui podem também ser formulados como imunolipossomas. Os lipossomas contendo o anticorpo são preparados por métodos conhecidos na técnica, tal como descrito em Epstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 82:3688; Hwang et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 77:4030, e Patentes dos EUA. N° s 4485045 e 4544545. Os lipossomas tendo tempo de circulação aumentado são revelados, por exemplo, na Patente dos EUA. No. 5013556.

[000191] Os lipossomas especificamente úteis podem ser gerados pelo método de evaporação de fase inversa com uma composição lipídica compreendendo fosfatidilcolina, colesterol e fosfatidiletano- lamina derivatizada com PEG (PEG-PE). Os lipossomas são extrudados através de filtros de tamanho de poro definido para obter lipossomas com o diâmetro desejado. Os fragmentos Fab' de um anticorpo descritos aqui podem ser conjugados com os lipossomas como descrito em Martin et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:286-288 através de uma reação de troca de dissulfureto. Um agente quimioterapêutico (tal como uma doxorrubicina) está opcionalmente contido dentro do lipossoma. Ver, por exemplo, Gabizon et al., 1989, J. National Cancer Inst. 81 (19): 1484.

[000192] Os anticorpos descritos e divulgados aqui podem também ser usados em procedimentos da ADEPT (Terapia pró-fármaco/enzima direcionada por anticorpo) pela conjugação do anticorpo com uma enzima de ativação do pró-fármaco que converta um pró-fármaco (por exemplo, um agente quimioterapêutico peptidil) em um fármaco ativo anticâncer. Ver, por exemplo, WO 81/01145, WO 88/07378, e Patente dos EUA No. 4975278. O componente de enzima do imunoconjugado útil para a ADEPT é uma enzima capaz de atuar sobre um pró-fármaco de tal maneira, de modo a convertê-la na sua forma citotóxica mais ativa. As enzimas específicas que são úteis na ADEPT, incluem, mas não estão limitadas a, fosfatase alcalina para converter profármacos contendo fosfato em fármacos livres; arilsulfatase para converter profármacos contendo sulfato em fármacos livres; citosina deaminase para converter 5-fluorocitosina não tóxica em fármacos anti-câncer, 5- fluorouracil; proteases, tais como protease de serratia, termolisina, subtilisina, carboxipeptidases e catepsinas (tais como catepsinas B e L), para a conversão de profármacos contendo peptídeos em fármacos livres; D-alanilcarboxipeptidases, para converter profármacos contendo substituintes D-aminoácidos; enzimas de clivagem de carboidratos, tais como β-galactosidase e neuraminidase para converter os profármacos glicosilados em fármacos livres; β-lactamase para converter fármacos derivatizados com β-lactamas em fármacos livres; e penicilina amidases, tais como penicilina V amidase ou penicilina G amidase, para converter os fármacos derivatizados nos seus nitrogênios de aminas com grupos fenoxiacetilo ou fenilacetilo, respectivamente, em fármacos livres. Alternativamente, os anticorpos com atividade enzimática ("abzimas") podem ser usados para converter os profármacos em fármacos ativos livres (ver, por exemplo, Massey, 1987, Nature 328: 457-458). Os conjugados anticorpo-abzima podem ser preparados por métodos conhecidos para a entrega da abzima a uma população de células de tumor, por exemplo, por ligação covalente da enzima aos reagentes de reticulação de anticorpos anti-IL-23p19/heterobifuncional humanizados, discutidos acima. Alternativamente, as proteínas de fusão compreendendo pelo menos a região de ligação ao antígeno de um anticorpo divulgado aqui ligado a pelo menos uma porção funcionalmente ativa de uma enzima, como descrito acima, podem ser construídas usando técnicas de DNA recombinante (ver, por exemplo, Neuberger et al., 1984, Nature 312:604-608).

[000193] Em certas modalidades, pode ser desejável usar um fragmento de anticorpo anti-IL-23p19 humanizado, em vez de um anticorpo intacto, para aumentar a penetração do tecido, por exemplo. Pode ser desejável modificar o fragmento de anticorpo de modo a aumentar a sua meia-vida sérica. Isto pode ser conseguido, por exemplo, pela incorporação de um epítopo de ligação do receptor de recuperação no fragmento de anticorpo. Em um método, a região apropriada do fragmento de anticorpo pode ser alterada (por exemplo, modificada geneticamente), ou o epítopo pode ser incorporado um marcador peptídico que é então fundido ao fragmento de anticorpo em qualquer uma das extremidades ou no meio, por exemplo, pela síntese de DNA ou de peptídeos. Ver, por exemplo, WO 96/32478.

[000194] Em outras modalidades, as modificações covalentes do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado também estão incluídas. As modificações covalentes incluem a modificação de resíduos cisteinil, resíduos histidil, resíduos lisinil e amino-terminais, resíduos arginil, resíduos tirosil, grupos laterais carboxil (aspartil ou glutamil), resíduos glutaminil e asparaginil, ou resíduos seril ou treonil. Outro tipo de modificação covalente envolve o acoplamento quimicamente ou enzimaticamente de glicosídeos ao anticorpo. Tais modificações podem ser feitas por síntese química ou por clivagem enzimática ou química do anticorpo, se aplicável. Outros tipos de modificações covalentes do anticorpo podem ser introduzidas na molécula pela reação de resíduos de aminoácido alvo do anticorpo com um agente de derivatização orgânico que é capaz de reagir com cadeias laterais selecionadas ou com os resíduos de amino- ou carbóxi-terminal.

[000195] A remoção de quaisquer porções de carboidrato presentes no anticorpo pode ser realizada química ou enzimaticamente. A desglicosilação química é descrita por Hakimuddin et al., 1987, Arch. Bioquímica. Biophvs. 259:52 e por Edge et al., 1981, Anal. Biochem., 118:131. A clivagem enzimática de porções de carboidrato em anticorpos pode ser conseguida pela utilização de uma variedade de endo- e exo-glicosidases como descrito por Thotakura et al., 1987, Meth. EnzymoL 138:350.

[000196] Outro tipo de modificação covalente útil compreende ligar o anticorpo a um ou uma variedade de polímeros não proteicos, por exemplo, polietilenoglicol, polipropilenoglicol ou polioxialquilenos, do modo estabelecido em uma ou mais das Pat. EUA N° 4640835, Pat. EUA N° 4496689, Pat. EUA N° 4301144, Pat. EUA N° 4670417, Pat. EUA N°. 4.791.192 e Pat. EUA. N°. 4179337. Humanização e variantes de sequência de aminoácidos

[000197] As variantes da sequência de aminoácidos do anticorpo anti-IL-23p19 podem ser preparadas pela introdução de alterações apropriadas de nucleotídeos no DNA do anticorpo anti-IL-23p19, ou por síntese peptídica. Tais variantes incluem, por exemplo, deleções e/ou inserções e/ou substituições, de resíduos dentro das sequências de aminoácidos dos anticorpos anti-IL-23p19 dos exemplos apresentados aqui. Qualquer combinação de deleções, inserções e substituições, é feita para chegar à construção final, desde que a construção final possua as características desejadas. As alterações de aminoácidos também podem alterar os processos pós-translacionais do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou variante, tal como alteração do número ou posição de locais de glicosilação.

[000198] Um método útil para a identificação de certos resíduos ou regiões do anticorpo anti-IL-23p19 que são localizações preferidas para a mutagênese é denominado "mutagênese de varredura de alanina", como descrito por Cunningham e Wells (Science, 244:10811085 (1989)). Aqui, um resíduo ou grupo de resíduos alvo são identificados (por exemplo, resíduos carregados tais como arg, asp, his, lys, e glu) e substituídos por um aminoácido neutro ou carregado negativamente (tipicamente alanina) para afetar a interação dos aminoácidos com o antígeno da IL-23p19. Esses locais de aminoácidos que demonstram sensibilidade funcional às substituições são então refinados através da introdução de mais ou outras variantes no, ou para os, locais de substituição. Assim, embora o local para introduzir uma variação de sequência de aminoácidos seja predeterminado, a natureza da mutação per se não necessita ser predeterminada. Por exemplo, para analisar o desempenho de uma mutação num dado local, a varredura da alanina ou mutagênese aleatória é conduzida no códon ou na região alvo e as variantes do anticorpo anti-IL-23p19 expressadas são pesquisadas quanto à atividade desejada.

[000199] As inserções de sequências de aminoácidos incluem fusões de amino- e/ou carboxil-terminais que variam em comprimento de um resíduo para polipeptídeos contendo cem ou mais resíduos, bem como inserções entre-sequência de resíduos de aminoácidos únicos ou múltiplos. Exemplos de inserções terminais incluem um anticorpo anti IL-23p19 fundido a um marcador de epítopo. Outras variantes de inserção da molécula de anticorpo anti-IL-23p19 incluem a fusão ao Nou C-terminal do anticorpo anti-IL-23p19 de uma enzima ou um polipeptídeo que aumenta a semivida sérica do anticorpo.

[000200] Outro tipo de variante é também uma variante de substituição de aminoácidos. Estas variantes têm pelo menos um resíduo de aminoácido na molécula de anticorpo anti-IL-23p19 removido e um resíduo diferente inserido no seu lugar. Os locais de maior interesse para mutagênese de substituição incluem as regiões hipervariáveis, mas alterações FR também são contempladas. As substituições conservadoras são apresentados na Tabela 5, sob o título de "substituições preferenciais". Se tais substituições resultarem numa mudança na atividade biológica, então mais alterações substanciais, denominadas "substituições exemplificativas", ou como melhor descrito abaixo em referência às classes de aminoácidos, podem ser introduzidas e os produtos são rastreados. TABELA 8:

[000201] Na química da proteína, é geralmente reconhecido que as propriedades biológicas do anticorpo podem ser conseguidas por seleção de substituições que diferem significativamente no seu efeito sobre a manutenção (a) da estrutura do esqueleto do polipeptídeo na área da substituição, por exemplo, como um conformação em folha ou helicoidal, (b) a carga ou a hidrofobicidade da molécula no local alvo, ou (c) o volume da cadeia lateral. Os resíduos que ocorrem naturalmente são divididos em grupos com base em propriedades comuns da cadeia lateral: (1) hidrofóbico: norleucina, met, ala, val, leu, ile; (2) hidrofílico neutro: cys, ser, thr; (3) ácido: asp, glu; (4) básico: asn, gin, seu, lys, arg; (5) resíduos que influenciam a orientação da cadeia: gly, pro; e (6) aromático: trp, tyr, phe.

[000202] As substituições não conservativas implicarão a troca de um membro de uma destas classes por outra classe.

[000203] Qualquer resíduo de cisteína não envolvido na manutenção da conformação correta do anticorpo ou variante anti-IL-23p19 humanizado também pode ser substituído, geralmente por serina, para melhorar a estabilidade oxidativa da molécula, evitar a reticulação aberrante, ou fornecer pontos de conjugação estabelecidos para um composto citotóxico ou citostático. Por outro lado, a(as) ligação (ões) de cisteína pode(m) ser adicionada(s) ao anticorpo para melhorar a sua estabilidade (particularmente quando o anticorpo é um fragmento de anticorpo tal como um fragmento Fv).

[000204] Um tipo de variante de substituição envolve a substituição de um ou mais resíduos da região hipervariável de um anticorpo parental (por exemplo, um anticorpo humanizado ou humano). Geralmente, a(s) variante(s) resultante(s) selecionada(s) para posterior desenvolvimento terá(ão) propriedades biológicas melhoradas relativas ao anticorpo parental a partir do qual são geradas. Uma maneira conveniente para gerar estas variantes de substituição é a maturação de afinidade usando exibição de fagos. Resumidamente, vários locais de regiões hipervariáveis (por exemplo, 6-7 locais) são modificados para gerar todas as possíveis substituições de aminoácidos em cada local. As variantes de anticorpo geradas assim são exibidas de uma maneira monovalente a partir de partículas de fagos filamentosos como fusões ao produto do gene III de M13 empacotado no interior de cada partícula. As variantes de exibição de fagos são então exibidas quanto a atividade biológica (por exemplo, afinidade de ligação). De modo a identificar locais candidatos da região hipervariável para modificação, a mutagênese de varredura de alanina pode ser realizada para identificar resíduos da região hipervariável que contribuem significativamente para a ligação ao antígeno. Alternativamente, ou em adição, pode ser benéfico analisar uma estrutura cristalina do complexo antígeno-anticorpo para identificar pontos de contato entre o anticorpo e a IL-23p19 humana. Estes resíduos de contato e resíduos vizinhos são candidatos para substituição de acordo com as técnicas elaboradas aqui. Uma vez que tais variantes são geradas, o painel de variantes é submetido a exibição como descrita aqui e os anticorpos com propriedades superiores em um ou mais ensaios relevantes podem ser selecionados para posterior desenvolvimento.

[000205] Outro tipo de variante de aminoácidos do anticorpo altera o padrão de glicosilação original do anticorpo. Por "alterar" significa a deleção de uma ou mais porções de carboidrato encontradas no anticorpo e/ou adição de um ou mais locais de glicosilação que não estão presentes no anticorpo.

[000206] Em algumas modalidades, pode ser desejável modificar os anticorpos da invenção para adicionar sítios de glicosilação. A glicosilação de anticorpos é tipicamente ligada a N ou ligada a O. Ligada a N refere-se à ligação da porção de carboidrato à cadeia lateral de um resíduo asparagina. As sequências tripeptídicas asparagina-X-serina e asparagina-X-treonina, onde X é qualquer aminoácido exceto a prolina, são as sequências de reconhecimento para a ligação enzimática da porção de carbidrato à cadeia lateral de asparagina. Assim, a presença de qualquer destas sequências tripeptídicas num polipeptídeo cria um sítio de glicosilação potencial. A glicosilação ligada a O refere-se à ligação de um dos açúcares N- acetilgalactosamina, galactose ou xilose a um hidroxiaminoácido, mais vulgarmente serina ou treonina, embora também possam ser usadas 5-hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina. Assim, a fim de glicosilar uma dada proteína, por exemplo, um anticorpo, a sequência de aminoácidos da proteína é modificada para conter uma ou mais das sequências tripeptídicas descritas acima (para locais de glicosilação ligados a N). A alteração pode também ser feita por adição ou substituição, de um ou mais resíduos serina ou treonina à sequência do anticorpo original (para locais de glicosilação ligados a O).

[000207] As moléculas de ácido nucleico que codificam as variantes da sequência de aminoácidos do anticorpo anti-IL-23p19 são preparadas por uma variedade de métodos conhecidos na técnica. Estes métodos incluem, mas não estão limitados a, isolamento de uma fonte natural (no caso de variantes da sequência de aminoácidos que ocorre naturalmente) ou preparação por mutagênese mediada por oligonucleotídeos (ou sítio-dirigida), mutagênese por PCR e mutagênese cassete de uma variante preparada anteriormente ou uma versão não variante do anticorpo anti-IL-23p19. Polinucleotídeos, vetores, células hospedeiras e métodos recombinantes

[000208] Outras modalidades abrangem polinucleotídeos isolados compreendendo uma sequência que codifica um anticorpo anti-IL- 23p19 humanizado, vetores e células hospedeiras compreendendo os polinucleotídeos, e técnicas recombinantes para a produção do anticorpo humanizado. Os polinucleotídeos isolados podem codificar qualquer forma desejada do anticorpo anti-IL-23p19, incluindo, por exemplo, anticorpos monoclonais de cadeia completa, Fab, Fab', F(ab')2 e Fv, diacorpos, anticorpos lineares, moléculas de anticorpos de cadeia única e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpo.

[000209] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados compreendendo sequências que codificam a região variável de cadeia leve de um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 ou 119. Exemplos de sequências de polinucleotídeos que codificam estas sequências de aminoácidos são SEQ ID NOs: 83, 85, 87, 89, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116 e 118. Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados compreendendo sequências que codificam a região variável de cadeia pesada de um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NOs: 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 ou 156. Exemplos de sequências de polinucleotídeos que codificam estas sequências de aminoácidos são SEQ ID NOs: 120, 122, 124, 126, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153 ou 155.

[000210] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados compreendendo sequências que codificam a região variável de cadeia leve de um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 158, 160, 162 ou 164. Exemplos de sequências de polinucleotídeos que codificam estas sequências de aminoácidos são SEQ ID NOs: 157, 159, 161 ou 163. Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados compreendendo sequências que codificam a região variável de cadeia pesada de um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácidos das SEQ ID NOs: 166, 168, 170 ou 172. Exemplos de sequências de polinucleotídeos que codificam estas sequências de aminoácidos são SEQ ID NOs: 165, 167, 169 ou 171.

[000211] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados compreendendo sequências que codificam a cadeia leve de um anticorpo que possui a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 174 ou 180. Exemplos de sequências de polinucleotídeos que codificam estas sequências de aminoácidos são SEQ ID NOs: 173 ou 179. Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados compreendendo sequências que codificam a cadeia pesada de um anticorpo que possui a sequência de aminoácidos das SEQ ID NOs: 176 ou 178. Exemplos de sequências de polinucleotídeos que codificam estas sequências de aminoácidos são SEQ ID NOs: 175 ou 177.

[000212] Em um aspecto, a(s) sequência(s) de polinucleotídeos(s) isolada (s) codifica(m) um anticorpo ou fragmento de anticorpo possuindo uma região variável de cadeia leve e de cadeia pesada que compreende as sequências de aminoácidos da SEQ ID NO: 174 e SEQ ID NO: 176, respectivamente, SEQ ID NO: 174 e SEQ ID NO: 178, respectivamente, a SEQ ID NO: 180 e SEQ ID NO: 176, respectivamente, SEQ ID NO: 180 e SEQ ID NO: 178, respectivamente. Exemplos de sequências de polinucleotídeos que codificam estas sequências de aminoácidos são SEQ ID NOs: 173 e 175, respectivamente, SEQ ID NOs: 173 e 177, respectivamente, SEQ ID NOs: 179 e 175, respectivamente, SEQ ID NOs: 179 e 177, respectivamente.

[000213] O(s) polinucleotídeo(s) que compreendem uma sequência que codifica um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou seu fragmento ou sua cadeia pode(m) ser fundido(s) a uma ou mais sequência reguladora ou de controle, como é conhecido na técnica, e pode(m) ser contido(s) em vetores de expressão ou célula hospedeira adequados, como conhecido na técnica. Cada uma das moléculas polinucleotídicas que codificam os domínios variáveis de cadeia pesada ou leve podem ser fundidas de forma independente a uma sequência de polinucleotídeo que codifica um domínio constante, tal como um domínio constante humano, permitindo a produção de anticorpos intactos. Alternativamente, os polinucleotídeos, ou suas porções, podem ser fundidos juntos, proporcionando um molde para a produção de um anticorpo de cadeia simples.

[000214] Para a produção recombinante, um polinucleotídeo que codifica o anticorpo é inserido num vetor replicável para clonagem (amplificação do DNA) ou para expressão. Muitos vetores adequados para a expressão do anticorpo recombinante estão disponíveis. Os componentes do vetor incluem geralmente, mas não estão limitados a, um ou mais dos seguintes: uma sequência sinal, uma origem de replicação, um ou mais marcadores de genes, um elemento potenciador, um promotor, e uma sequência de terminação da transcrição.

[000215] Os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados também podem ser produzidos como polipeptídeos de fusão, em que o anticorpo é fundido com um polipeptídeo heterólogo, tal como uma sequência sinal ou outro polipeptídeo possuindo um local de clivagem específico no terminal amino da proteína ou polipeptídeo maduro. A sequência sinal heteróloga selecionada é tipicamente uma que é reconhecida e processada (isto é, clivada por uma peptidase de sinal) pela célula hospedeira. Para células hospedeiras procarióticas que não reconhecem e processam a sequência sinal do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado, a sequência sinal pode ser substituída por uma sequência sinal procariótica. A sequência sinal pode ser, por exemplo, fosfatase alcalina, penicilinase, lipoproteína, líderes da enterotoxina II termoestável, e semelhantes. Para a secreção de leveduras, a sequência sinal nativa pode ser substituída, por exemplo, com uma sequência líder obtida a partir do fator alfa da invertase da levedura (incluindo líderes α-fator de Saccharomyces e Kluyveromyces), fosfatase ácida, C. albicans glucoamilase, ou o sinal descrito em WO90/13646. Em células de mamíferos, as sequências sinal de mamífero bem como líderes de secreção viral, por exemplo, o sinal gD do herpes simples, podem ser usadas. O DNA para tal região precursora é ligado no quadro de leitura ao DNA que codifica o anticorpo anti-IL-23p19 humanizado.

[000216] Os vetores de expressão e de clonagem contêm uma sequência de ácido nucleico que permite que o vetor se replique em uma ou mais células hospedeiras selecionadas. Geralmente, em vetores de clonagem esta sequência é uma que permite ao vetor se replicar independentemente do DNA cromossômico do hospedeiro, e inclui origens de replicação ou sequências de replicação autônoma. Tais sequências são bem conhecidas para uma variedade de bactérias, leveduras e vírus. A origem de replicação do plasmídeo pBR322 é adequada para a maioria das bactérias Gram-negativas, a origem do plasmídeo 2-α. é adequada para levedura, e várias origens virais (SV40, polioma, adenovírus, VSV e BPV) são úteis para vetores de clonagem em células de mamífero. Geralmente, a origem do componente de replicação não é necessária para vetores de expressão de mamífero (a origem de SV40 pode ser tipicamente usada apenas porque contém o promotor precoce).

[000217] Os vetores de expressão e de clonagem podem conter um gene que codifica um marcador selecionável para facilitar a identificação da expressão. Os genes marcadores selecionáveis típicos codificam proteínas que conferem resistência aos antibióticos ou a outras toxinas, por exemplo, ampicilina, neomicina, metotrexato ou tetraciclina, ou, alternativamente, são deficiências auxotróficas de complemento, ou em outras alternativas fornecem os nutrientes específicos, que não estão presentes em meios complexos, por exemplo, o gene que codifica a D-alanina racemase para Bacilli.

[000218] Um exemplo de um esquema de seleção usa um fármaco para parar o crescimento de uma célula hospedeira. As células que são transformadas com sucesso com um gene heterólogo produzem uma proteína que confere resistência ao fármaco e assim sobrevivem ao regime de seleção. Exemplos de tal seleção dominante usam os fármacos neomicina, ácido micofenólico e higromicina. Os marcadores selecionáveis comuns para células de mamífero são aqueles que permitem a identificação de células competentes para absorver um ácido nucleico que codifica um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado, tais como DHFR (di-hidrofolato-redutase), timidina quinase, metalotioneina-I e -II (tais como genes da metalotioneina de primata), adenosina desaminase, ornitina descarboxilase, etc. As células transformadas com o gene de seleção de DHFR são primeiro identificadas por cultura de todos os transformantes num meio de cultura que contém metotrexato (Mtx), um antagonista competitivo de DHFR. Uma célula hospedeira apropriada quando o DHFR do tipo selvagem é usado é a linhagem celular de ovário de hamster chinês (CHO) deficiente em atividade de DHFR (por exemplo, DG44).

[000219] Alternativamente, as células hospedeiras (particularmente hospedeiras do tipo selvagem que contêm DHFR endógeno) transformadas ou co-transformadas com sequências de DNA que codificam o anticorpo anti-IL-23p19, a proteína DHFR do tipo selvagem, e outro marcador selecionável, tal como aminoglicosido 3'- fosfotransferase (APH), podem ser selecionadas por crescimento celular em meio contendo um agente de seleção para o marcador selecionável tal como um antibiótico aminoglicosídico, por exemplo, canamicina, neomicina, ou G418. Ver, por exemplo, Patente dos EUA. No. 4965199.

[000220] Quando a produção recombinante for feita em uma célula de levedura, como uma célula hospedeira, o gene TRP1 presente no plasmídeo de levedura YRp7 (Stinchcomb et al., 1979, Nature 282:39) pode ser usado como um marcador selecionável. O gene TRP1 proporciona um marcador de seleção para uma estirpe mutante de levedura sem a capacidade de crescer em triptofano, por exemplo, ATCC N° 44076 ou PEP4-1 (Jones, 1977, Genetics 85:12). A presença da lesão trp1 no genoma da célula hospedeira de levedura proporciona então um ambiente eficaz para detectar a transformação através do crescimento na ausência de triptofano. Do mesmo modo, as cepas de levedura deficientes em Leu2p como ATCC 20.622 e 38.626 são complementadas por plasmídeos conhecidos portadores do gene LEU2.

[000221] Além disso, os vetores derivados do plasmídeo PKD1 circular de 1,6 mM podem ser usados para a transformação de leveduras Kluyveromyces. Alternativamente, um sistema de expressão para produção em larga escala de quimosina de vitelo recombinante foi relatado para K. lactis (Van den Berg, 1990, Bio/Technology 8:135). Os vetores de expressão de múltiplas cópias estáveis para a secreção de albumina sérica humana recombinante madura por cepas industriais de Kluyveromyces foram também descritos (Fleer et al., 1991, Bio/Technology 9:968-975).

[000222] Os vetores de expressão e de clonagem contêm usualmente um promotor que é reconhecido pelo organismo hospedeiro e está ligado operativamente à molécula de ácido nucleico que codifica um anticorpo anti-IL-23p19 ou sua cadeia polipeptídica. Os promotores adequados para uso com hospedeiros procariotas incluem o promotor phoA, sistemas promotores de β-lactamase e lactose, fosfatase alcalina, sistema promotor do triptofano (trp), e promotores híbridos, tais como o promotor tac. Outros promotores bacterianos conhecidos também são adequados. Os promotores para uso em sistemas bacterianos também conterão uma sequência de Shine-Dalgarno (SD) operativamente ligada ao DNA que codifica o anticorpo anti-IL-23p19 humanizado.

[000223] Muitas sequências de promotores eucarióticos são conhecidas. Virtualmente todos os genes eucarióticos têm uma região rica em AT localizada aproximadamente 25 a 30 bases a montante do local onde a transcrição é iniciada. Outra sequência encontrada 70 a 80 bases a montante do inicio da transcrição de muitos genes é uma região CNCAAT onde N pode ser qualquer nucleotídeo. Na extremidade 3' da maioria dos genes eucarióticos está uma sequência AATAAA que pode ser o sinal para a adição da cauda poli A à extremidade 3' da sequência de codificação. Todas estas sequências são adequadamente inseridas em vetores de expressão eucarióticos.

[000224] Exemplos de sequências promotoras adequadas para uso com hospedeiros de levedura incluem os promotores para a 3- fosfoglicerato quinase ou outras enzimas glicolíticas, tais como enolase, gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase, hexoquinase, piruvato descarboxilase, fosfofrutocinase, glicose-6-fosfato isomerase, 3- fosfoglicerato mutase, piruvato quinase, triosefosfato isomerase, fosfoglucose isomerase e glucoquinase.

[000225] Os promotores induzíveis têm a vantagem adicional de transcrição controlada por condições de crescimento. Estes incluem regiões do promotor de levedura para álcool desidrogenase 2, isocitocromo C, fosfatase ácida, enzimas derivadas associadas ao metabolismo do nitrogênio, metalotioneína, gliceraldeído-3-fosfato dehidrogenase, e enzimas responsáveis pela utilização de maltose e galactose. Os vetores e promotores adequados para utilização em expressão de levedura são ainda descritos em EP 73657. Os potenciadores de levedura também são usados vantajosamente com os promotores de levedura.

[000226] A transcrição do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado a partir de vetores em células hospedeiras de mamífero é controlada, por exemplo, por promotores obtidos a partir dos genomas de vírus, tais como vírus polioma, vírus da varíola aviária, adenovírus (tais como Adenovírus 2), vírus do papiloma bovino, vírus do sarcoma aviário, citomegalovírus, um retrovírus, vírus da hepatite B e Vírus Símio 40 (SV40), de promotores heterólogos de mamífero, por exemplo, o promotor de actina ou um promotor de imunoglobulina, ou a partir de promotores de choque térmico, desde que tais promotores sejam compatíveis com os sistemas da célula hospedeira.

[000227] Os promotores precoces e tardios do vírus SV40 são convenientemente obtidos como um fragmento de restrição do SV40 que também contém a origem viral de replicação do SV40. O promotor precoce imediato do citomegalovírus humano é convenientemente obtido como um fragmento de restrição HindIII E. Um sistema para expressar o DNA em hospedeiros mamíferos usando o vírus do papiloma bovino como um vetor é divulgado na Patente dos EUA No. 4419446. Uma modificação deste sistema está descrita na Patente dos EUA No. 4601978. Ver também Reyes et al., 1982, Nature 297:598601, revelando a expressão do cDNA do interferon-p humano em células de camundongo sob o controle de um promotor de timidina- quinase do vírus do herpes simples. Em alternativa, a repetição longa terminal do vírus do sarcoma de Rous pode ser usada como o promotor.

[000228] Outro elemento útil, que pode ser usado em um vetor de expressão recombinante é uma sequência potenciadora, que é usada para aumentar a transcrição de um DNA que codifica um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado por eucariotas superiores. Muitas sequências potenciadoras são agora conhecidas de genes de mamíferos (por exemplo, globina, elastase, albumina, a-fetoproteína e insulina). Tipicamente, no entanto, um potenciador de um vírus de células eucarióticas é usado. Exemplos incluem o potenciador de SV40 no lado tardio da origem de replicação (bp 100-270), o potenciador do promotor precoce do citomegalovírus, o potenciador do polioma no lado tardio da origem de replicação e potenciadores do adenovírus. Ver também Yaniv, 1982, Nature 297:17-18 para uma descrição dos elementos potenciadores para ativação de promotores eucarióticos. O potenciador pode sofrer junção no vetor numa posição a 5' ou 3' para a sequência de codificação do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado, mas está preferivelmente localizado num local a 5' do promotor.

[000229] Os vetores de expressão usados em células hospedeiras eucarióticas (levedura, fungos, insetos, planta, animal, humano, ou células nucleadas de outros organismos multicelulares) podem também conter sequências necessárias para a terminação da transcrição e para a estabilização do mRNA. Tais sequências estão comumente disponíveis a partir das regiões não traduzidas 5' e, ocasionalmente 3', de DNA ou cDNA eucarióticos ou virais. Estas regiões contêm segmentos de nucleotídeos transcritos como fragmentos poliadenilados na porção não traduzida do mRNA que codifica o anticorpo anti-IL-23p19. Um componente de terminação da transcrição útil é a região de poliadenilação do hormônio de crescimento bovino. Ver WO94/11026 e o vetor de expressão divulgado neste. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-IL- 23p19 humanizados podem ser expressados usando o sistema CHEF. (Ver, por exemplo, Patente dos EUA No. 5.888.809, cuja descrição está incorporada aqui por referência).

[000230] As células hospedeiras adequadas para clonagem ou expressão do DNA nos vetores aqui são as células procariotas, de levedura, ou células eucariotas superiores descritas acima. Os procariotas adequados para este propósito incluem eubactérias, tais como organismos Gram-negativos ou Gram-positivos, por exemplo, Enterobacteriaceae, tais como Escherichia, por exemplo, E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, por exemplo, Salmonella typhimurium, Serratia, por exemplo, Serratia marcescans, e Shigella, bem como Bacilli, tais como B. subtilis e B. licheniformis (por exemplo, B. licheniformis 41 P descrito na DD 266.710 publicada em 12 de abril de 1989), Pseudomonas, tais como P. aeruginosa, e Streptomyces . Uma E. coli hospedeira de clonagem preferida é a E. coli 294 (ATCC 31446), embora outras cepas tais como E. coli B, E. coli X1776 (ATCC 31,537), e E. coli W3110 (ATCC 27325) são adequadas. Estes exemplos são ilustrativos e não limitativos.

[000231] Em adição aos procariotas, os micróbios eucarióticos, tais como fungos ou leveduras filamentosas, estão os hospedeiros adequados para clonagem ou expressão para vetores de codificação do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado. Saccharomyces cerevisiae, ou levedura comum de padeiro, é a mais comumente usada entre os micro-organismos hospedeiros eucariotas inferiores. No entanto, um número de outros gêneros, espécies e cepas estão vulgarmente disponíveis e são aqui úteis, tais como Schizosaccharomyces pombe; hospedeiros de Kluyveromyces, tais como, por exemplo, K. lactis, K. fragilis (ATCC 12.424), K. bulgaricus (ATCC 16.045), K. wickeramii (ATCC 24.178), K. waltii (ATCC 56,500), K. drosophilarum (ATCC 36.906), K. thermotolerans, e K. marxianus; yarrowia (EP 402.226); Pichia pastors (EP 183.070), Candida, Trichoderma reesia (EP 244.234), Neurospora crassa; Schwanniomyces, tais como Schwanniomyces occidentalis; e fungos filamentosos, tais como, eg, Neurospora, Penicillium, Tolypocladium, e hospedeiros Aspergillus tais como A. nidulans e A. niger.

[000232] As células hospedeiras adequadas para a expressão do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado glicosilado são derivadas de organismos multicelulares. Exemplos de células de invertebrados incluem células de plantas e insetos, incluindo, por exemplo, inúmeras cepas e variantes de baculovírus e células hospedeiras do inseto permissivo correspondente de hospedeiros, como Spodoptera frugiperda (lagarta), Aedes aegypti (mosquito), Aedes albopictus (mosquito), Drosophila melanogaster (mosca da fruta) e Bombyx mori (bicho da seda). Uma variedade de cepas virais para transfecção estão publicamente disponíveis, por exemplo, a variante L-1 de Autographa californica NPV e a cepa Bm-5 de Bombyx mori NPV, e tais vírus podem ser usados, em particular, para transfecção de células de Spodoptera frugiperda.

[000233] Culturas de células de plantas de algodão, milho, batata, soja, petúnia, tomate e tabaco, podem também ser usadas como hospedeiras.

[000234] Em outro aspecto, a expressão do anti-IL-23p19 humanizado é realizada em células de vertebrados. A propagação de células de vertebrados em cultura (cultura de tecidos) tornou-se um procedimento e técnicas de rotina estão amplamente disponíveis. Exemplos de linhagens celulares hospedeiras de mamífero úteis são a linhagem CV1 de rim de macaco transformada por SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651), linhagem de rim embrionário humano (células subclonadas 293 ou 293 para crescimento em cultura em suspensão, (Graham et al., 1977, J. Gen. Virol 36: 59), células de rim de hamster filhote (BHK, ATCC CCL 10), células de ovário de hamster chinês/- DHFR1 (CHO, Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 77: 4216, por exemplo, DG44), células Sertoli de camundongo (TM4, Mather, 1980, Biol Reprod 23:243-251), células de rim de macaco (CV1 ATCC CCL 70), células de rim de macaco verde africano (VERO- 76, ATCC CRL-1587), células de carcinoma cervical humano (HELA, ATCC CCL 2), células de rim canino (MDCK, ATCC CCL 34), células de fígado de rato búfalo (BRL 3A, ATCC CRL 1442), células de pulmão humano (W138, ATCC CCL 75), células de fígado humano (Hep G2, HB 8065), tumor mamário de camundongo (MMT 060562, ATCC CCL51), células TR1 (Mather et al., 1982, Annals NY Acad Sci 383:44-68), células MRC 5, células FS4, e linhagem de hepatoma humano (Hep G2).

[000235] As células hospedeiras são transformadas com a expressão acima descrito, ou vetores de clonagem para a produção de anticorpo anti-IL-23p19 humanizado e cultivadas em meios nutrientes convencionais modificados conforme apropriado para induzir promotores, selecionar transformantes, ou amplificar os genes que codificam as sequências desejadas.

[000236] As células hospedeiras usadas para produzir um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado descrita aqui podem ser cultivadas numa variedade de meios. Meios comercialmente disponíveis tais como F10 de Ham (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, Missouri), Meio Essencial Mínimo ((MEM), (Sigma-Aldrich), RPMI-1640 (Sigma-Aldrich Co.), e Meio de Eagle Modificado por Dulbecco ((DMEM), Sigma-Aldrich Co.) são adequados para cultura das células hospedeiras. Além disso, qualquer um dos meios descritos em uma ou mais das Ham et al., 1979, Meth Enz, 58:44, Barnes et al., 1980, Anal Biochem 102:255, Patente EUA No. 4.767.704, Patente EUA No. 4.657.866, Patente EUA No. 4.927.762, Patente EUA No. 4.560.655, Patente EUA No. 5.122.469, WO 90/103430 e WO 87/00195 pode ser utilizado como meio de cultura para as células hospedeiras. Qualquer um destes meios pode ser suplementado conforme necessário com hormônios e/ou outros fatores de crescimento (tais como insulina, transferrina, ou fator de crescimento epidérmico), sais (tais como cloreto de sódio, cálcio, magnésio e fosfato), tampões (tais como HEPES), nucleotídeos (tais como adenosina e timidina), antibióticos (como a gentamicina), elementos vestigiais (definidos como compostos inorgânicos normalmente presentes em concentrações finais na gama micromolar) e glucose ou uma fonte de energia equivalente. Outros suplementos podem também ser incluídos em concentrações apropriadas que serão conhecidas dos especialistas na técnica. As condições de cultura, tais como temperatura, pH, e semelhantes, são as anteriormente usadas com a célula hospedeira selecionada para expressão e serão evidentes para o especialista na técnica.

[000237] Ao utilizar técnicas recombinantes, o anticorpo pode ser produzido intracelularmente, no espaço periplasmático, ou diretamente secretado para o meio. Se o anticorpo for produzido intracelularmente, as células podem ser rompidas para liberar proteína como uma primeira etapa. Detritos particulados, sejam células hospedeiras ou fragmentos lisados, podem ser removidos, por exemplo, por centrifugação ou ultrafiltração. Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167 descrevem um procedimento para isolar anticorpos que são segregados para o espaço periplasmático da E. coli. Resumidamente, a pasta celular é descongelada na presença de acetato de sódio (pH 3,5), EDTA e fenilmetilsulfonilfluoreto (PMSF) durante cerca de 30 minutos. Os detritos celulares podem ser removidos por centrifugação. Quando o anticorpo é segregado para o meio, os sobrenadantes de tais sistemas de expressão são geralmente primeiro concentrados utilizando um filtro de concentração de proteínas comercialmente disponível, por exemplo, unidade de ultrafiltração Amicon ou Millipore Pellicon. Um inibidor de protease tal como PMSF pode ser incluído em qualquer uma das etapas anteriores para inibir a proteólise e podem ser incluídos antibióticos para prevenir o crescimento de contaminantes adventícios. Uma variedade de métodos pode ser usada para isolar o anticorpo a partir da célula hospedeira.

[000238] A composição de anticorpo preparada a partir das células pode ser purificada usando, por exemplo, cromatografia de hidroxilapatite, eletroforese em gel, diálise e cromatografia de afinidade, com a cromatografia de afinidade sendo a técnica de purificação típica. A adequabilidade da proteína A como um ligante de afinidade depende da espécie e do isotipo de qualquer domínio Fe de imunoglobulina que está presente no anticorpo. A proteína A pode ser usada para purificar anticorpos que são baseados em cadeias pesadas gama1, gama2, ou gama4 humanas (ver, por exemplo, Lindmark et al., 1983, J. Immunol. Meth. 62:1-13). A proteína G é recomendada para todos os isotipos de camundongos e para gama3 humana (ver, por exemplo, Guss et al., 1986, EMBO J. 5:1567-1575). A matriz à qual o ligante de afinidade é ligado é muito frequentemente agarose, mas outras matrizes estão disponíveis. As matrizes mecanicamente estáveis, tais como vidro de poro controlado ou poli (estirenodivinil) benzeno permitem fluxos mais rápidos e tempos de processamento mais curtos do que podem ser alcançados com agarose. Quando o anticorpo compreende um domínio CH3, a resina Bakerbond ABX® (J.T. Baker, Phillipsburg, NJ) é útil para a purificação. Outras técnicas para purificação de proteínas tais como fraccionamento em uma coluna de troca iônica, precipitação com etanol, HPLC de fase reversa, cromatografia em sílica, cromatografia em heparina SEPHAROSE®, cromatografia sobre uma resina de troca aniônica ou catiônica (tal como uma coluna de ácido poliaspártico), cromatofocagem, SDS-PAGE, e precipitação com sulfato de amônio estão também disponíveis dependendo do anticorpo a ser recuperado.

[000239] Depois de qualquer etapa de purificação preliminar, a mistura compreendendo o anticorpo de interesse e contaminantes pode ser submetida a cromatografia de interação hidrofóbica de baixo pH utilizando um tampão de eluição a um pH entre cerca de 2,5 - 4,5, tipicamente realizada a baixas concentrações de sal (por exemplo, a partir de cerca de 0, - 0,25 M de sal).

[000240] Também estão incluídos os ácidos nucleicos que se hibridizam sob condições severas baixa, moderada e elevada, como definido aqui, para toda ou uma porção (por exemplo, a porção que codifica a região variável) da sequência de nucleotídeos representada pela(s) sequência(s) de polinucleotídeo(s) isolada(s) que codifica um anticorpo ou fragmento de anticorpo da presente invenção. A porção de hibridização do ácido nucleico de hibridação é tipicamente de pelo menos 15 (por exemplo, 20, 25, 30 ou 50) nucleotídeos de comprimento. A porção de hibridização do ácido nucleico de hibridação é pelo menos 80%, por exemplo, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou pelo menos 98% idêntica à sequência de uma porção ou da totalidade de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo anti-IL-23p19 (por exemplo, uma região variável de cadeia pesada ou de cadeia leve) ou o seu complemento. A hibridização de ácidos nucleicos do tipo descrito aqui pode ser usada, por exemplo, como uma sonda de clonagem, um iniciador, por exemplo, um iniciador de PCR, ou uma sonda de diagnóstico.

[000241] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados, incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 ou 119, e que é pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas às sequências de polinucleotídeos das SEQ ID NOs: 83, 85, 87, 89, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116 ou 118.

[000242] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados, incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 158, 160, 162 ou 164, e que é pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas às sequências de polinucleotídeos das SEQ ID NOs: 157, 159, 161 ou 163.

[000243] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados, incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 ou 156, e que é pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas às sequências de polinucleotídeos das SEQ ID NOs: 120, 122, 124, 126, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153 ou 155.

[000244] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados, incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 166, 168, 170 ou 172, e que é pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idênticas às sequências de polinucleotídeos das SEQ ID NOs: 165, 167, 169 ou 171.

[000245] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados, incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve que é pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 ou 119. Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados, incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve que é pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 158, 160, 162 ou 164. Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados, incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada que é pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 ou 156. Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados, incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada que é pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOs: 166, 168, 170 ou 172. Tal como usado aqui, os termos "idêntico" ou "identidade de percentagem", no contexto de dois ou mais ácidos nucleicos ou de sequências de polipeptídeos, referem- se a duas ou mais sequências ou subsequências que são a mesma ou têm uma percentagem especificada de resíduos de nucleotídeos ou de aminoácidos que são as mesmas, quando comparadas e alinhadas para correspondência máxima. Para determinar a percentagem de identidade, as sequências são alinhadas para fins de comparação ótimas (por exemplo, as lacunas podem ser introduzidas na sequência de uma primeira sequência de aminoácidos ou de ácido nucleico para um alinhamento ótimo com uma segunda sequência de aminoácidos ou ácidos nucleicos). Os resíduos de aminoácidos ou de nucleotídeos nas posições de aminoácidos correspondentes ou nas posições de nucleotídeos são então comparados. Quando uma posição na primeira sequência é ocupada pelo mesmo resíduo de aminoácido ou de nucleotídeos como a posição correspondente na segunda sequência, então as moléculas são idênticas nessa posição. A percentagem de identidade entre as duas sequências é uma função do número de posições idênticas compartilhadas pelas sequências (isto é,% de identidade = # de posições idênticas/ # total de posições (por exemplo, posições sobrepostas) x 100). Em algumas modalidades, as duas sequências que são comparadas têm o mesmo comprimento, depois que as lacunas são introduzidas dentro das sequências, conforme adequado (por exemplo, excluindo sequência adicional que se estende além das sequências a serem comparadas). Por exemplo, quando as sequências das regiões variáveis são comparadas, o líder e/ou as sequências de domínios constantes não são considerados. Para comparações de sequências entre duas sequências, um uma CDR "correspondente" refere-se a uma CDR no mesmo local em ambas as sequências (por exemplo, CDR-H1 de cada sequência).

[000246] A determinação da percentagem de identidade ou percentagem de semelhança entre duas sequências pode ser realizada usando um algoritmo matemático. Um exemplo não limitativo preferido de um algoritmo matemático usado para a comparação de duas sequências é o algoritmo de Karlin e Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 87:2264-2268, modificado como em Karlin e Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 90:5873-5877. Tal algoritmo está incorporado nos programas NBLAST e XBLAST de Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410. As pesquisas por nucleotídeos BLAST podem ser realizadas com o programa NBLAST, pontuação = 100, comprimento de palavra = 12, para se obter sequências de nucleotídeos homólogas a um ácido nucleico que codifica uma proteína de interesse. As pesquisas por proteínas BLAST podem ser realizadas com o programa XBLAST, pontuação = 50, comprimento de palavra = 3, para obter sequências de aminoácidos homólogas à proteína de interesse. Para obter alinhamentos com lacunas, para fins de comparação, Gapped BLAST podem ser utilizados como descrito em Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402. Alternativamente, PSI-Blast pode ser utilizado para realizar uma pesquisa reiterada que detecta relações distantes entre moléculas (Id.). Quando se utiliza os programas BLAST, Gapped BLAST e PSI-Blast, os parâmetros padrão dos respectivos programas (por exemplo, XBLAST e NBLAST) podem ser usados. Outro exemplo não limitativo preferido de um algoritmo matemático utilizado para a comparação de sequências é o algoritmo de Myers e Miller, CABIOS (1989). Tal algoritmo está incorporado no programa ALIGN (versão 2.0) que faz parte do pacote de software de alinhamento de sequências GCG. Quando se utiliza o programa ALIGN para a comparação de sequências de aminoácidos, uma tabela de peso de resíduos PAM120, uma penalidade de comprimento de lacuna de 12 e uma penalidade de lacuna de 4 podem ser utilizadas. Os algoritmos adicionais para a análise da sequência são conhecidos na técnica e incluem ADVANCE e ADAM como descrito em Torellis e Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5, e FASTA, descrito em Pearson e Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 85:2444-8. Dentro do FASTA, ktup é uma opção de controle, que define a sensibilidade e a velocidade da pesquisa. Se ktup = 2, as regiões semelhantes nas duas sequências a ser comparadas são encontradas, olhando para os pares de resíduos alinhados, se ktup = 1, os aminoácidos individuais alinhados são examinados. Ktup pode ser ajustado para 2 ou 1 para sequências de proteínas, ou de 1 a 6, para as sequências de DNA. O padrão se o ktup não for especificado é 2 para proteínas e 6 para DNA. Alternativamente, o alinhamento da sequência de proteína pode ser realizada utilizando o algoritmo CLUSTAL W, tal como descrito por Higgins et al., 1996, Methods Enzymol. 266:383-402. Usos não terapêuticos

[000247] Os anticorpos descritos aqui são úteis como agentes de purificação por afinidade. Neste processo, os anticorpos são imobilizados numa fase sólida, como uma resina de proteína A, usando métodos bem conhecidos na técnica. O anticorpo imobilizado é posto em contato com uma amostra contendo a proteína IL-23p19 (ou seu fragmento) para ser purificada, e depois o suporte é lavado com um solvente adequado que irá remover substancialmente todo o material na amostra exceto a proteína IL-2319, que está ligada ao anticorpo imobilizado. Finalmente, o suporte é lavado com outro solvente adequado que irá liberar a proteína IL-23p19 a partir do anticorpo.

[000248] Os anticorpos anti-IL-23p19, por exemplo, anticorpos anti- IL-23p19 humanizados, são também úteis em ensaios de diagnóstico para detectar e/ou quantificar a proteína IL-23, por exemplo, detectar a expressão da IL-23 em células específicas, tecidos ou soro. Os anticorpos anti-IL-23p19 podem ser usados diagnosticamente para, por exemplo, monitorizar o desenvolvimento ou a progressão de uma doença, como parte de um procedimento de ensaio clínico para, por exemplo, determinar a eficácia de um dado tratamento e/ou regime de prevenção. A detecção pode ser facilitada pelo acoplamento do anticorpo anti-IL-23p19. Exemplos de substâncias detectáveis incluem várias enzimas, grupos de próteses, materiais fluorescentes, materiais luminescentes, materiais bioluminescentes, materiais radioativos, metais emissores de pósitrons utilizando várias tomografias de emissão de pósitrons, e íons metálicos paramagnéticos não radioativos. Ver, por exemplo, Patente EUA N° 4.741.900 para íons metálicos que podem ser conjugados com anticorpos para uso como agentes de diagnóstico de acordo com a presente invenção.

[000249] Os anticorpos anti-IL-23p19 podem ser usados em métodos para diagnosticar um distúrbio associado à IL-23 (por exemplo, um distúrbio caracterizado pela expressão anormal da IL-23) ou para determinar se um indivíduo tem um risco aumentado de desenvolver um distúrbio associado à IL- 23. Tais métodos incluem colocar uma amostra biológica de um indivíduo em contato com um anticorpo IL- 23p19 e detectar a ligação do anticorpo à IL-23p19. Por "amostra biológica" entende-se qualquer amostra biológica obtida a partir de um indivíduo, uma linha celular, uma cultura de tecidos ou outra fonte de células que potencialmente expressam a IL-23. Os métodos para a obtenção de biópsias de tecidos e fluidos corporais de mamíferos são bem conhecidos na técnica.

[000250] Em algumas modalidades, o método pode ainda compreender a comparação do nível da IL-23 em uma amostra do paciente para uma amostra de controle (por exemplo, um objeto que não tem uma doença associada à IL-23) para determinar se o paciente tem um distúrbio associado à IL-23 ou está em risco de desenvolver um distúrbio associado à IL-23.

[000251] Será vantajoso em algumas modalidades, por exemplo, para fins de diagnóstico marcar o anticorpo com uma porção detectável. Numerosos marcadores detectáveis estão disponíveis, incluindo radioisótopos, marcadores fluorescentes, marcadores de substratos de enzimas e similares. O marcador pode ser indiretamente conjugado com o anticorpo usando várias técnicas conhecidas. Por exemplo, o anticorpo pode ser conjugado com a biotina e qualquer uma das três amplas categorias de marcadores mencionados acima, pode ser conjugado com avidina, ou vice-versa. A biotina se liga seletivamente à avidina e assim, o marcador pode ser conjugado com o anticorpo desta maneira indireta. Alternativamente, para alcançar a conjugação indireta do marcador com o anticorpo, o anticorpo pode ser conjugado com um pequeno hapteno (por exemplo, digoxina) e um dos diferentes tipos de marcadores mencionados acima é conjugado com um anticorpo anti-hapteno (por exemplo, anticorpo anti-digoxina). Assim, a conjugação indireta do marcador com o anticorpo pode ser alcançada.

[000252] Exemplos de marcadores de radioisótopos incluem 35S, 14C, 125I, 3H e 131I. O anticorpo pode ser marcado com o radioisótopo utilizando as técnicas descritas em, por exemplo, Current Protocols in Immunology, Volumes 1 e 2, 1991, Coligen et al. Ed. Wiley- Interscience, Nova York, NY, Pubs. A radioatividade pode ser medida, por exemplo, por contagem de cintilação.

[000253] Exemplos de marcadores fluorescentes incluem marcadores derivados de quelatos de terras raras (quelatos de európio) ou fluoresceína e seus derivados, rodamina e seus derivados, dansilo, lissamina, ficoeritrina e Texas Red estão disponíveis. Os marcadores fluorescentes podem ser conjugados com o anticorpo através de técnicas conhecidas, tais como as descritas em Current Protocols in Immunology, por exemplo. A fluorescência pode ser quantificada utilizando um fluorímetro.

[000254] Existem vários marcadores de enzima-substrato bem caracterizados conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Patente dos EUA No. 4275149 para uma revisão). A enzima geralmente catalisa uma alteração química do substrato cromogênico que pode ser medido usando várias técnicas. Por exemplo, a alteração pode ser uma alteração de cor num substrato que pode ser medido espectrofotometricamente. Alternativamente, a enzima pode alterar a fluorescência ou a quimioluminescência do substrato. Técnicas para quantificar uma alteração na fluorescência são descritas acima. O substrato quimioluminescente torna-se eletronicamente excitado por uma reação química e pode então emitir luz que pode ser medida, usando um quimioluminômetro, por exemplo, ou doar energia a um aceitador fluorescente.

[000255] Exemplos de marcadores enzimáticos incluem luciferases, tais como a luciferase do vaga-lume e luciferase bacteriana (Patente dos EUA No. 4737456), luciferina, 2,3-dihidroftalazinadionas, malato desidrogenase, urease, peroxidase, tal como peroxidase de rábano (HRPO), fosfatase alcalina, β-galactosidase, glucoamilase, lisozima, oxidases sacarídeo (por exemplo, glucose oxidase, galactose oxidase e glucose-6-fosfato dehidrogenase), oxidases heterocíclicas (tal como uricase e xantina oxidase), lactoperoxidase, microperoxidase, e semelhantes. As técnicas para conjugação de enzimas a anticorpos estão descritas, por exemplo, em O'Sullivan et al., 1981, Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, em Methods in Enzyme (J. Langone & H. Van Vunakis, eds.) Academic press, NY, 73: 147-166.

[000256] Exemplos de combinações de enzima-substrato incluem, por exemplo, peroxidase de rábano (HRPO) com peroxidase de hidrogênio como um substrato, em que a peroxidase de hidrogênio oxida um precursor de corante tal como ortofenilenodiamina (OPD) ou cloridrato de 3,3',5,5'-tetrametil benzidina (TMB); fosfatase alcalina (AP) com fosfato de para-nitrofenil como substrato cromogênico, e β- D-galactosidase (β-D-Gal) com um substrato cromogênico, tal como p- nitrofenil-β-D-galactosidase ou substrato fluorogênico 4- metilumbeliferil-β-D-galactosidase.

[000257] Numerosas outras combinações de enzima-substrato estão disponíveis para os especialistas na técnica. Para uma revisão geral, ver Pat. EUA No. 4.275.149 e Patente EUA No. 4318980.

[000258] Em outra modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 humanizado é usado não marcado e detectado com um anticorpo marcado que se liga ao anticorpo anti-IL-23p19 humanizado.

[000259] Os anticorpos descritos aqui podem ser empregados em qualquer método de ensaio conhecido, tal como ensaios de ligação competitiva, ensaios de sanduíche diretos e indiretos e ensaios e imunoprecipitação. Ver, por exemplo, Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp 147-158 (CRC Press, Inc., 1987).

[000260] O anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno pode ser usado para inibir a ligação da IL-23 ao receptor da IL-23. Tais métodos compreendem a administração de um anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno a uma célula (por exemplo, uma célula de mamífero) ou do ambiente celular, em que que a sinalização mediada pelo receptor da IL-23 é inibida. Estes métodos podem ser realizados in vitro ou in vivo. Por "ambiente celular" entende-se o tecido, o meio ou matriz extracelular que rodeia uma célula. O anticorpo anti-IL-23p19 ou seu fragmento de ligação ao antígeno é administrado ao ambiente celular de uma célula, de tal maneira que o anticorpo ou o fragmento é capaz de se ligar a moléculas da IL-23 de fora e em torno da célula, por conseguinte, impedindo a ligação da IL-23 ao seu receptor. Kits de diagnóstico

[000261] Um anticorpo anti-IL-23p19 pode ser usado num kit de diagnóstico, isto é, uma combinação embalada de reagentes em quantidades predeterminadas com instruções para realizar o ensaio de diagnóstico. Quando o anticorpo é marcado com uma enzima, o kit pode incluir substratos e cofatores requeridos pela enzima, tal como um precursor de substrato que proporciona o cromóforo ou fluoróforo detectável. Além disso, outros aditivos podem ser incluídos, tais como estabilizantes, tampões (por exemplo, um tampão de bloqueio ou tampão de lise), e similares. As quantidades relativas dos vários reagentes podem ser amplamente variadas para proporcionar concentrações em solução dos reagentes que otimizam substancialmente a sensibilidade do ensaio. Os reagentes podem ser proporcionados como pós secos, geralmente liofilizados, incluindo excipientes que em dissolução proporcionarão uma solução reagente possuindo a concentração apropriada. Usos Terapêuticos

[000262] Em outra modalidade, um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado descrito aqui é útil no tratamento de vários distúrbios associados com a expressão da IL-23p19, como descrito aqui. Métodos para o tratamento de um distúrbio associado à IL-23 compreendem a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado a um indivíduo com necessidade da mesma.

[000263] O anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou agente é administrado por qualquer meio adequado, incluindo parentérico, subcutâneo, intraperitoneal, intrapulmonar e intranasal, e, caso desejado, para o tratamento imunossupressor local, administração intralesional (incluindo perfusão ou colocando o enxerto em contato com o anticorpo antes do transplante). O anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou agente pode ser administrado, por exemplo, como uma infusão ou como um bolos. As infusões parentéricas incluem administração intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal ou subcutânea. Além disso, o anticorpo anti-IL-23p19 humanizado é administrado adequadamente por infusão por pulso, em particular com doses decrescentes do anticorpo. Em um aspecto, a dosagem é dada através de injeções, mais preferivelmente, injeções intravenosas ou subcutâneas, dependendo em parte se a administração é breve ou crônica.

[000264] Para a prevenção ou o tratamento da doença, a dosagem apropriada de anticorpo dependerá de uma variedade de fatores, tais como o tipo de doença a ser tratada, como definido acima, a gravidade e o curso da doença, se o anticorpo é administrado para o tratamento preventivo ou fins terapêuticos, a terapia prévia, a história clínica do paciente e a resposta ao anticorpo, e a discrição do médico assistente. O anticorpo é adequadamente administrado ao paciente de uma só vez ou ao longo de uma série de tratamentos.

[000265] Dependendo do tipo e da gravidade da doença, cerca de 1 μg/kg a 20 mg/kg (por exemplo, 0,1 a 15 mg/kg) de anticorpo é uma dosagem inicial candidata para administração ao paciente, seja, por exemplo, por uma ou mais administrações separadas, ou por infusão contínua. Uma dosagem diária típica pode variar entre cerca de 1 μg/kg a 100 mg/kg ou mais, dependendo dos fatores mencionados acima. Para administrações repetidas ao longo de vários dias ou mais, dependendo da condição, o tratamento é mantido até ocorrer uma supressão desejada dos sintomas da doença. Contudo, outros regimes de dosagem podem ser úteis. O progresso desta terapia é facilmente monitorizado por técnicas e ensaios convencionais. Um regime de dosagem exemplar é o descrito no documento WO 94/04188.

[000266] O termo "supressão" é aqui utilizado no mesmo contexto que "melhora" e "alívio", para significar uma diminuição de uma ou mais características da doença.

[000267] A composição de anticorpo será formulada, dosada, e administrada de uma forma consistente com a boa prática médica. Os fatores para consideração neste contexto incluem o distúrbio específico a ser tratado, o mamífero específico a ser tratado, a condição clínica do paciente individual, a causa do distúrbio, o local de entrega do agente, o método de administração, o programa de administração e outros fatores conhecidos por médicos. A "quantidade terapeuticamente eficaz" do anticorpo a ser administrada será determinada por estas considerações, e é a quantidade mínima necessária para prevenir, melhorar ou tratar o distúrbio associado com a expressão da IL-23.

[000268] O anticorpo não precisa ser, mas é opcionalmente, formulado com um ou mais agentes atualmente usados para prevenir ou tratar o distúrbio em questão. A quantidade eficaz destes outros agentes depende da quantidade do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado presente na formulação, do tipo de distúrbio ou tratamento, e de outros fatores discutidos acima. Estes são geralmente usados nas mesmas dosagens e com vias de administração como anteriormente utilizadas aqui ou cerca de 1 a 99% das dosagens até agora empregadas. Distúrbios associados à IL-23

[000269] Os anticorpos anti-IL-23p19 ou agentes são úteis para o tratamento ou prevenção de uma doença caracterizada pela expressão anormal da IL-23, por exemplo, por ativação inapropriada das células imunitárias (por exemplo, linfócitos ou células dendríticas). Tal expressão anormal da IL-23 pode ser devido, por exemplo, o aumento dos níveis de proteína da IL-23. Os anticorpos anti-IL-23p19 ou seus fragmentos de ligação ao antígeno, também encontram uso no tratamento ou na prevenção de doenças respiratórias, distúrbios metabólicos, por exemplo, diabetes mellitus, e de certos cânceres. O tratamento ou a prevenção do distúrbio imunológico, distúrbio respiratório, distúrbios metabólicos ou câncer, de acordo com os métodos descritos aqui, é conseguido através da administração a um indivíduo com necessidade de tal tratamento ou prevenção uma quantidade eficaz do anticorpo anti-IL-23p19 ou agente, em que o anticorpo diminui a atividade da IL-23 associada com o estado de doença.

[000270] As doenças imunológicas que são caracterizadas pela ativação inapropriada de células imunológicas e que podem ser tratadas ou prevenidas pelos métodos descritos aqui podem ser classificadas, por exemplo, pelo(s) tipo(s) de reação de hipersensibili- dade que estão sujeitas o distúrbio. Estas reações são geralmente classificadas em quatro tipos: reações anafiláticas, reações citotóxicas (citolíticas), reações complexas imunes, ou reações de imunidade mediadas por células (CMI) (também conhecida como reações de hipersensibilidade do tipo tardia (DTH)). (Ver, por exemplo, Fundamental Immunology, William E. Paul ed., Raven Press, NY, 3a ed. 1993). Doenças imunológicas incluem doenças inflamatórias e doenças autoimunes.

[000271] Exemplos específicos de tais doenças imunológicas incluem: artrite reumatoide, doenças desmielinizantes autoimunes (por exemplo, esclerose múltipla, encefalomielite alérgica), oftalmopatia endócrina, uveoretinite, lúpus eritematoso sistêmico, miastenia grave, doença de Grave, glomerulonefrite, transtorno hepatológico autoimune, doença inflamatória do intestino (por exemplo, doença de Crohn ou colite ulcerosa), anafilaxia, reação alérgica, síndrome de Sjogren, diabetes mellitus tipo I, cirrose biliar primária, granulomatose de Wegener, fibromialgia, polimiosite, dermatomiosite, miosite inflamatória, insuficiência endócrina múltipla, síndrome de Schmidt, uveíte autoimune, doença de Addison, adrenalitis, tireoidite, tireoidite de Hashimoto, doença autoimune da tiroide, anemia perniciosa, atrofia gástrica, hepatite crônica, hepatite lúpica, aterosclerose, lúpus eritematoso cutâneo subagudo, hipoparatireoidismo, síndrome de Dressler, trombocitopenia autoimune, púrpura trombocitopênica idiopática, anemia hemolítica, pênfigo vulgar, pênfigo, dermatite herpetiforme, alopecia arcata, penfigoide, esclerodermia, esclerose sistêmica progressiva, síndrome de CREST (calcinose, fenômeno de Raynaud, dismotilidade esofágica, esclerodactilia) e telangiectasia), infertilidade autoimune do homem e da mulher, espondilite anquilosante, colite ulcerativa, doença mista do tecido conjuntivo, poliarterite nedosa, vasculite sistêmica necrotizante, dermatite atópica, rinite atópica, síndrome de Goodpasture, doença de Chagas, sarcoidose, febre reumática, asma, aborto de repetição, síndrome anti- fosfolipídio, doença do pulmão do fazendeiro, eritema multiforme, síndrome pós-cardiotomia, síndrome de Cushing, hepatite crônica ativa autoimune, doença do pulmão do criador de pássaros, necrólise epidérmica tóxica, síndrome de Alport, alveolite, alveolite alérgica, alveolite fibrosante, doença pulmonar intersticial, eritema nodoso, pioderma gangrenoso, reação transfusional, arterite de Takayasu, polimialgia reumática, arterite temporal, esquistossomose, arterite de células gigantes, ascaridíase, aspergilose, síndrome de Sampter, eczema, granulomatose linfomatoide, doença de Behcet, síndrome de Caplan, doença de Kawasaki, dengue, encefalomielite, endocardite, endomiocardiofibrose, endoftalmite, eritema elevatum diutinum, psoríase, artrite psoriática, eritroblastose fetal, eosinofílica fasceíte, síndrome de Shulman, síndrome de Felty, filariose, ciclite, ciclite crônica, ciclite heterocrônica, ciclite de Fuchs, nefropatia por IgA, púrpura de Henoch-Schonlein, doença do enxerto versus hospedeiro, rejeição de transplante, cardiomiopatia, síndrome de Eaton-Lambert, policondrite recidivante, crioglobulinemia, macroglobulemia de Waldenstrom, síndrome de Evan, síndrome do desconforto respiratório do adulto, inflamação pulmonar, osteoporose, hipersensibilidade do tipo retardada e insuficiência gonadal autoimune.

[000272] Em algumas modalidades, o distúrbio imunológico é um distúrbio imunológico mediado por células T e, por conseguinte, os anticorpos anti-IL-23p19 e agentes tal como descritos aqui também são úteis para o tratamento ou para a prevenção de doenças imunológicas mediadas por células T.

[000273] Em um aspecto, os anticorpos anti-IL-23p19 ou agentes são úteis para o tratamento ou para a prevenção de um distúrbio respiratório, em que a IL-23 é expressa de forma anormal. O tratamento ou a prevenção do distúrbio respiratório, de acordo com os métodos descritos aqui, é conseguida através da administração a um indivíduo com necessidade de tal tratamento ou prevenção uma quantidade eficaz do anticorpo anti-IL-23p19 ou do agente, em que o anticorpo diminui a atividade da IL-23 associada com o estado da doença. Essas doenças incluem, mas não estão limitadas a: queixas respiratórias, doenças pulmonares obstrutivas de diferentes origens, enfisema pulmonar de diferentes origens, doenças pulmonares restritivas, doenças pulmonares, intersticial, doença intersticial do pulmão, fibrose cística, bronquite de várias origens, bronquiectasias, SARA (síndrome do desconforto respiratório do adulto) e todas as formas de edema pulmonar; doenças pulmonares obstrutivas selecionadas entre DPOC (doença pulmonar obstrutiva crônica), asma, asma brônquica, asma pediátrica, asma grave, ataques de asma aguda e bronquite crônica; enfisema pulmonar, que tem suas origens na DPOC (doença pulmonar obstrutiva crônica) ou deficiência do inibidor α1-proteinase, doenças pulmonares restritivas selecionadas entre alveolite alérgica, doenças pulmonares restritivas provocadas por substâncias nocivas relacionadas ao trabalho, tais como asbestose e silicose, e restrição causada por tumores pulmonares, tais como limfangiose carcinomatosa, carcinoma broncoalveolar e linfomas; pneumonia causada por infecções, tais como, por exemplo, infecção por vírus, bactérias, fungos, protozoários, helmintas ou outros agentes patogênicos, pneumonite causada por vários fatores, tais como, por exemplo aspiração e insuficiência cardíaca esquerda, pneumonite induzida por radiação ou fibrose, colagenoses, tais como, por exemplo, lúpus eritematoso, esclerodermia ou sarcoidose sistêmicas, granulomatoses, tais como, por exemplo, doença de Boeck, pneumonia intersticial idiopática ou fibrose pulmonar idiopática (PIF), mucoviscidose, bronquite causada por uma infecção bacteriana ou viral, bronquite alérgica e bronquite tóxica; bronquiectasia, edema pulmonar, por exemplo, edema pulmonar tóxico após a aspiração ou inalação de substâncias tóxicas e substâncias estranhas; rinite, artrite e artropatias relacionadas, psoríase, leucemia mieloide, esclerose múltipla, doença de Alzheimer, glomerulonefrite e dermatite atópica crônica.

[000274] Em outro aspecto, os anticorpos anti-IL-23p19 e agentes tal como descritos aqui também são úteis para o tratamento de cânceres, em que a IL-23 é expressada de forma anormal.

[000275] Os cânceres que expressam a IL-23 que podem ser tratados pelos métodos descritos aqui incluem, por exemplo, leucemia, tal como leucemia aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemia mieloide aguda (por exemplo, mieloblástica, promielocitica, mielomonocitica, monocítica e eritroleucemia), leucemia crônica, leucemia mieloide crônica (granulocítica) ou leucemia linfocítica crônica; policitemia vera, linfoma (por exemplo, doença de Hodgkin ou doença de não-Hodgkin), mieloma múltiplo, macroglobulinemia de Waldenstrom, doença de cadeia pesada; tumores sólidos, tais como sarcomas e carcinomas (por exemplo, fibrossarcoma, mixossarcoma, lipossarcoma, condrossarcoma, sarcoma osteogênico, osteossarcoma, cordoma, angiosarcoma, endoteliossarcoma, linfangiossarcoma, linfangioendoteliossarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiossarcoma, rabdomiossarcoma, carcinoma de cólon, carcinoma colorretal, câncer pancreático, câncer de mama, câncer de ovário, câncer de próstata, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basais, adenocarcinoma, carcinoma de glândulas sudoríparas, carcinoma da glândula sebácea, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogênico, carcinoma de células renais, hepatoma, carcinoma do ducto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionário, tumor de Wilms, câncer cervical, câncer uterino, tumor testicular, carcinoma de pulmão, carcinoma de pulmão de pequenas células, carcinoma de pulmão de células não pequenas, carcinoma da bexiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craniofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, menangioma, melanoma, neuroblastoma, retinoblastoma, carcinoma nasofaríngeo, ou carcinoma de esôfago). Composições farmacêuticas e administração das mesmas

[000276] Uma composição compreendendo um agente de ligação da IL-23p19 (por exemplo, um anticorpo anti-IL-23p19) pode ser administrada a um indivíduo tendo ou em risco de ter um distúrbio imunológico, distúrbio respiratório ou um câncer. A invenção proporciona ainda o uso de um agente de ligação da IL-23p19 (por exemplo, um anticorpo anti-IL-23p19), na fabricação de um medicamento para a prevenção ou o tratamento de um câncer, distúrbio respiratório ou distúrbio imunológico. O termo "indivíduo", tal como usado aqui, significa qualquer paciente mamífero ao qual um agente de ligação da IL-23p19 pode ser administrado, incluindo, por exemplo, seres humanos e mamíferos não humanos, tais como primatas, roedores e cães. Assuntos especificamente destinados para o tratamento usando os métodos descritos na presente invenção incluem os seres humanos. Os anticorpos ou os agentes podem ser administrados isoladamente ou em combinação com outras composições na prevenção ou no tratamento do distúrbio imunológico, distúrbio respiratório ou câncer. Estas composições que podem ser administradas em combinação com os anticorpos ou agentes incluem o metotrexato (MTX) e imunomoduladores, por exemplo, anticorpos ou pequenas moléculas.

[000277] Os exemplos de anticorpos para uso em tais composições farmacêuticas são aqueles que compreendem um anticorpo humanizado ou fragmento do anticorpo tendo a sequência de aminoácido da região variável de cadeia leve de qualquer uma das SEQ ID NOs: 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 ou 119. Os exemplos de anticorpos para uso em tais composições farmacêuticas também são aqueles compostos por um anticorpo humanizado ou fragmento do anticorpo tendo a sequência de aminoácido da região variável de cadeia pesada de qualquer uma das SEQ ID NOs: 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 ou 156.

[000278] Outros exemplos de anticorpos para uso em tais composições farmacêuticas também são aqueles compostos por um anticorpo humanizado ou fragmento do anticorpo tendo sequência de aminoácido da região variável de cadeia leve de qualquer uma das SEQ ID NOs: 158, 160, 162 ou 164. Os anticorpos preferidos para uso em tais composições farmacêuticas também são aqueles compostos por um anticorpo humanizado ou fragmento do anticorpo tendo a sequência de aminoácido da região variável de cadeia pesada de qualquer uma das SEQ ID NOs: 166, 168, 170 ou 172.

[000279] Outros exemplos de anticorpos para uso em tais composições farmacêuticas também são aqueles compostos por um anticorpo humanizado ou fragmento do anticorpo tendo a região variável de cadeia leve e a região variável de cadeia pesada de qualquer uma das SEQ ID NOs: 160 e 166, SEQ ID NO: 160 e 168, SEQ ID NO: 158 e 166, ou SEQ ID NO: 158 e 168.

[000280] Outros exemplos de anticorpos para uso em tais composições farmacêuticas também são aqueles compostos por um anticorpo humanizado tendo a sequência de aminoácidos da região de cadeia leve de qualquer uma das SEQ ID NO: 174 ou 180. Os anticorpos preferidos para uso em tais composições farmacêuticas também são aqueles que compreendem o anticorpo humanizado tendo a sequência de aminoácido da região variável de cadeia pesada de qualquer uma das SEQ ID NO: 176 ou 178.

[000281] Exemplos adicionais de anticorpos para uso em tais composições farmacêuticas também são aqueles compostos por um Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D.

[000282] Vários sistemas de entrega são conhecidos e podem ser usados para administrar o agente de ligação da IL-23p19. Os métodos de introdução incluem, mas não estão limitados a, vias intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutânea, intranasal, epidural e oral. O agente de ligação da IL-23p19 pode ser administrado, por exemplo, por infusão, bolo ou injeção e pode ser administrado em conjunto com outros agentes biologicamente ativos, tais como agentes quimioterapêuticos. A administração pode ser sistêmica ou local. Em modalidades preferidas, a administração é por injeção subcutânea. As formulações para tais injeções podem ser preparadas, por exemplo, em seringas pré-cheias que podem ser administradas uma vez a cada duas semanas.

[000283] Em modalidades específicas, a composição do agente de ligação da IL-23p19 é administrada por injeção, através de um cateter, por meio de um supositório, ou por meio de um implante, o implante sendo de um material poroso, não-poroso, ou gelatinoso, incluindo uma membrana, tal como uma membrana elástica, ou uma fibra. Geralmente, quando a composição é administrada, são usados os materiais aos quais o anticorpo ou o agente anti-IL-23p19 não são absorvidos.

[000284] Em outras modalidades, o anticorpo ou o agente anti-IL- 23p19 é entregue num sistema de liberação controlada. Em uma modalidade, uma bomba pode ser usada (ver, por exemplo, Langer, 1990, Science 249:1527-1533; Sefton, 1989, CRC Crit Ref Biomed Eng. 14:201; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507, Saudek et al., 1989, N. Engl J. Med. 321:574). Em outra modalidade, os materiais poliméricos podem ser usados. (Ver, por exemplo, aplicações médicas de liberação controlada (Langer e Wise eds., CRC Press, Boca Raton, Flórida, 1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen e Ball eds., Wiley, New York,1984); Ranger e Peppas, 1983, Macromol. Sci. Rev. Macromol Chem. 23:61. Ver também Levy et al., 1985, Science 228:190; Durante et al., 1989, Ann Neurol 25: 351, Howard et al., 1989, J. Neurosurg 71:105). Outros sistemas de liberação controlada são discutidos, por exemplo, em Langer, supracitado.

[000285] Um agente de ligação da IL-23p19 (por exemplo, um anticorpo anti-IL-23p19) pode ser administrado na forma de composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do agente de ligação e um ou mais ingredientes farmaceuticamente compatíveis.

[000286] Em modalidades típicas, a composição farmacêutica é formulada de acordo com procedimentos de rotina como uma composição farmacêutica adaptada para administração intravenosa ou subcutânea a seres humanos. Tipicamente, as composições para administração por injeção são soluções em tampão aquoso isotônico estéril. Quando necessário, o produto farmacêutico pode incluir também um agente solubilizante e um anestésico local tal como lidocaína para aliviar a dor no local da injeção. Geralmente, os ingredientes são fornecidos separadamente ou misturados juntos na forma de dosagem unitária, por exemplo, como um pó liofilizado seco ou concentrado livre de água em um recipiente hermeticamente selado tal como uma ampola ou sachê indicando a quantidade de agente ativo. Quando o produto farmacêutico é administrado por infusão, pode ser dispensado com uma garrafa de infusão contendo água estéril de grau farmacêutico ou soro fisiológico. Quando o produto farmacêutico é administrado por injeção, uma ampola de água estéril para injeção ou solução salina pode ser fornecida de modo que os ingredientes possam ser misturados antes da administração.

[000287] Além disso, a composição farmacêutica pode ser proporcionada como um kit farmacêutico compreendendo (a) um recipiente contendo um agente de ligação da IL-23p19 (por exemplo, um anticorpo anti-IL-23p19) na forma liofilizada e (b) um segundo recipiente contendo um diluente farmaceuticamente aceitável (por exemplo, água estéril) para injeção. O diluente farmaceuticamente aceitável pode ser usado para a reconstituição ou a diluição do anticorpo ou agente anti-IL-23p19 liofilizado. Opcionalmente associado com esse(s) recipiente(s) pode estar um aviso, na forma prescrita por um órgão governamental que regulamenta a fabricação, o uso ou a venda de produtos farmacêuticos ou biológicos, em que o aviso reflete aprovação pela agência da fabricação, do uso ou da venda para administração humana.

[000288] A quantidade do agente de ligação da IL-23p19 (por exemplo, anticorpo anti-IL-23p19) que é eficaz no tratamento ou na prevenção de uma doença imunológica ou câncer pode ser determinada por técnicas clínicas padrão. Além disso, os ensaios in vitro podem opcionalmente ser empregados para ajudar a identificar a extensão ótima de dosagem. A dose exata a ser utilizada na formulação também dependerá da via de administração, e o estado de distúrbio imunológico ou câncer, e deve ser decidida de acordo com o julgamento do médico e as circunstâncias de cada paciente. As doses eficazes podem ser extrapoladas a partir de curvas de dose-resposta derivadas de sistemas de ensaio em modelo animal ou in vitro.

[000289] Geralmente, a dosagem de um anticorpo anti-IL-23p19 ou de agente de ligação da IL-23p19 administrada a um paciente com um distúrbio imunológico ou o câncer expressando a IL-23p19 é tipicamente de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 100 mg/kg de peso corporal do indivíduo. A dosagem administrada a um paciente é de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 50 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 30 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca 15 mg/kg, ou cerca de 1 mg/kg a cerca de 10 mg/kg de peso corporal do indivíduo.

[000290] Doses exemplares incluem, mas não estão limitadas a, de 1 ng/kg a 100 mg/kg. Em algumas modalidades, uma dose é de cerca de 0,5 mg/kg, cerca de 1 mg/kg, cerca de 2 mg/kg, cerca de 3 mg/kg, cerca de 4 mg/kg, cerca de 5 mg/kg, cerca de 6 mg/kg, cerca 7 mg/kg, cerca de 8 mg/kg, cerca de 9 mg/kg, cerca de 10 mg/kg, cerca de 11 mg/kg, cerca de 12 mg/kg, cerca de 13 mg/kg, cerca de 14 mg/kg, cerca de 15 mg/kg, ou cerca de 16 mg/kg. A dose pode ser administrada, por exemplo, diariamente, uma vez por semana (semanal), duas vezes por semana, três vezes por semana, quatro vezes por semana, cinco vezes por semana, seis vezes por semana, quinzenal ou mensal, a cada dois meses, ou a cada três meses. Em modalidades específicas, a dose é de cerca de 0,5 mg/kg/ semana, cerca de 1 mg/kg/ semana, cerca de 2 mg/kg/ semana, cerca de 3 mg/kg/ semana, cerca de 4 mg/kg/ semana, cerca de 5 mg/kg/ semana, cerca de 6 mg/kg/ semana, cerca de 7 mg/kg/ semana, cerca de 8 mg/kg/ semana, cerca de 9 mg/kg/ semana, cerca de 10 mg/kg/ semana, cerca de 11 mg/kg/ semana, cerca de 12 mg/kg/ semana, cerca de 13 mg/kg/ semana, cerca de 14 mg/kg/ semana, cerca de 15 mg/kg/ semana, ou cerca de 16 mg/kg/ semana. Em algumas modalidades, a dose varia entre cerca de 1 mg/kg/ semana até cerca de 15 mg/kg/ semana.

[000291] Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas que compreendem o agente de ligação da IL-23p19 pode compreender ainda um agente terapêutico, conjugado ou não conjugado com o agente de ligação. O anticorpo anti-IL-23p19 ou o agente de ligação da IL-23p19 pode ser coadministrado em combinação com um ou mais agentes terapêuticos para o tratamento ou a prevenção de distúrbios imunológicos ou cânceres.

[000292] Tal administração da terapia combinada pode ter um efeito aditivo ou sinérgico sobre parâmetros da doença (por exemplo, a gravidade de um sintoma, o número de sintomas ou da frequência de reincidências).

[000293] No que diz respeito aos regimes terapêuticos para a administração combinatória, em uma modalidade específica, um anticorpo anti-IL-23p19 ou agente de ligação da IL-23p19 é administrado concomitantemente com um agente terapêutico. Em outra modalidade específica, o agente terapêutico é administrado antes ou após a administração do anticorpo anti-IL-23p19 ou do agente de ligação da IL-23p19, por pelo menos uma hora e até vários meses, por exemplo, pelo menos uma hora, cinco horas, 12 horas, um dia, uma semana, um mês, ou três meses antes ou após a administração do anticorpo anti-IL-23p19 ou do agente de ligação da IL-23p19. Artigos de fabricação

[000294] Em outro aspecto, está incluído um artigo de fabricação contendo materiais úteis para o tratamento dos distúrbios descritos acima. O artigo de fabricação compreende um recipiente e um rótulo. Os recipientes adequados incluem, por exemplo, garrafas, frascos, seringas e tubos de ensaio. Os recipientes podem ser formados a partir de uma variedade de materiais, tais como vidro ou plástico. O recipiente contém uma composição que é eficaz para tratar a condição e pode ter uma porta de acesso estéril. Por exemplo, o recipiente pode ser um saco de solução intravenosa ou um frasco possuindo uma rolha perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica. O agente ativo na composição é o anticorpo anti-IL-23p19 humanizado. O marcador no recipiente ou associado com ele indica que a composição é usada para tratar a condição de escolha. O artigo de fabricação pode compreender ainda um segundo recipiente contendo um tampão farmaceuticamente aceitável, tal como solução salina tamponada com fosfato, solução de Ringer e solução de dextrose. Pode incluir ainda outros materiais desejáveis do ponto de vista comercial e do usuário, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas, seringas e folhetos informativos com instruções de utilização.

[000295] A invenção é ainda descrita nos exemplos seguintes, que não se destinam a limitar o âmbito da invenção. Exemplos Exemplo 1: Produção de anticorpos anti-IL-23p19 humanizados

[000296] O anticorpo primário de camundongo 6B8 foi convertido em um anticorpo quimérico que consiste no domínio variável do 6B8 e um domínio constante da IgG1KO humana. O anticorpo de camundongo 6B8 é mostrado nas Tabelas 1 e 2 descritas aqui acima. A IgG1KO (knockout) tem duas mutações de substituição (Leu234Ala e Leu235Ala) que eliminam a atividade ADCC e CDC, reduzindo funções efetoras como FCYR e ligação complementar. Os domínios variáveis dos anticorpos quiméricos e de camundongo são idênticos. Os anticorpos quiméricos são gerados para confirmar a função do anticorpo, e para garantir que a sequência correta foi obtida. A região variável do anticorpo é, então, humanizada através de um processo de desenho e de triagem. Uma biblioteca foi feita onde os resíduos humanos e de camundongo foram variados de tal forma que, em qualquer posição, poderia ser um resíduo humano ou de camundongo. Tal biblioteca foi feita para aqueles aminoácidos que eram diferentes entre a linha germinal humana e o anticorpo de camundongo. Só foram selecionados os clones que retinham a função do anticorpo de camundongo original. As regiões variáveis humanizadas representativas para o anticorpo 6B8 são apresentadas nas Tabelas 5 e 6.

[000297] Deste modo, o Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C e Anticorpo D eram os anticorpos humanizados derivados do anticorpo do camundongo 6B8 (clonado numa IgG1-KO humana (KO = knockout)/ espinha dorsal capa. Anticorpos A, B, C e D são apresentados na Tabela 7. Exemplo 2: Ligação de anticorpos à proteína anti-IL-23 recombinante A) A cinética e a afinidade de ligação dos anticorpos anti-IL- 23p19 de camundongo à IL-23 recombinante humana são apresentadas abaixo (Tabela 9). A cinética e a afinidades de ligação foram medidas usando o Fortebio Octeto (Fortebio, Menlo Park, CA), utilizando o material gerado pelo hibridoma após a purificação em coluna única. Uma vez que o Octeto não é uma tecnologia baseada em fluidos, este método não proporciona a determinação precisa da taxa. Em alguns casos, apenas uma estimativa da afinidade pode ser obtida. Tabela 9

B) As afinidades foram medidas para os anticorpos humanizados derivados do anticorpo de camundongo 6B8. Os dados de ligação cinética, medidos pela ProteON XPR36 (Biorad, Hercules, CA) e globalmente ajustados a um modelo de ligação 1:1, demonstraram as interações com a IL-23 recombinante com ou sem um ligante aminoácido 21 covalente unindo as subunidades p19 e p40 para ser de alta afinidade, no intervalo de 1 pM ~ 100 pM (Tabela 10). O anticorpo 6H12 (divulgado em WO 2007/027714), anticorpo QF20 (divulgado em WO 2007/024846) e anticorpo C1273 (divulgado em WO 2007/005955) também foram testados. Tabela 10

C) Os dados de afinidade e cinéticos para a ligação dos anticorpos anti-IL-23p19 à IL -23 do cinomólogo foram medidos no Proteon XPR36, e globalmente ajustados a um modelo de ligação de 1:1 (Tabela 11). O anticorpo 6H12 (divulgado no WO 2007/027714), anticorpo QF20 (divulgado no WO 2007/024846) e anticorpos C1273 (divulgado no WO 2007/005955) também foram testados. Tabela 11

D) Seletividade molecular sobre a IL-12 humana

[000298] Os anticorpos anti-IL-23p19 foram também injetados sobre uma superfície da IL-12 humana a uma concentração de 100 nM. O sinal de ligação para estes anticorpos medidos usando o Fortebio Octet é igual a zero, o que indica que estes anticorpos se ligam seletivamente à IL-23 humana. A ligação dos anticorpos anti-IL-23p19 à IL-23 também foi analisada na presença de 50% de soro humano e nenhum efeito significativo do soro na taxa de ligação foi observado demonstrando especificidade elevada. Exemplo 3: Ensaio de ligação de competição da ligação da IL-23 humana à IL-23R/Fc humana

[000299] A IL-23R-Fc humana foi capturada na superfície de biossensor e 10 nM da IL-23 humana foi injetada. O sensorgrama indica a ligação específica entre a IL-23 e o receptor da IL-23 (Figura 2, parte superior do rastreamento). Os anticorpos foram então coinjetados com 10 nM da IL-23 humana para determinar se a ligação do anticorpo à IL-23 poderia inibir a interação entre a IL-23 e o receptor da IL-23. Neste exemplo, se o anticorpo se liga à IL-23 humana e é capaz de inibir a interação, então a ligação reduzida ou nenhuma ligação será observada (Figura 2, traço inferior). No exemplo mostrado, uma concentração molar equivalente do Anticorpo A foi coinjetada com 10 nM da IL-23 recombinante humana. Exemplo 4: Ensaios celulares funcionais, inibição da produção da IL- 17 a partir de esplenócitos de camundongos estimulados pela IL-23

[000300] Um ensaio de célula funcional para os anticorpos anti-IL- 23p19 mede a sua capacidade para inibir a produção da IL-17 estimulada pela IL-23 a partir de células mononucleares isoladas de baço de camundongos. A proteína IL-23 recombinante humana é capaz de estimular a liberação da IL-17 a partir de esplenócitos de camundongos. Além disso, uma fonte natural da IL-23 humana encontrada no sobrenadante de células THP-1 monocíticas humanas ativadas pode ser usada para estimular a produção da IL-17 a partir de células mononucleares do camundongo.

[000301] A IL-23 recombinante humana ou a IL-23 natural humana a partir de células THP-1 ativadas foi pré-incubada com anticorpos anti- IL-23p19 titulados. As combinações de IL-23/anticorpo foram então adicionadas aos esplenócitos murinos isolados frescos. A IL-23 recombinante sozinha foi usada como um controle positivo. Após dois dias em cultura, os sobrenadantes celulares foram colhidos e ensaiados quanto a IL-17 por ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MN). Valores representativos de IC50 para os anticorpos anti-IL-23p19 são mostrados abaixo. Os anticorpos testados são anticorpos de camundongos derivados de hibridomas (linhas 1-19, ver tabelas 1 e 2), anticorpos quiméricos (linhas 20-23), e os Anticorpos A a D. O anticorpo 6H12 (divulgado no WO 2007/027714), anticorpo QF20 (divulgado no WO 2007/024846) e anticorpos C1273 (divulgado no WO 2007/005955) também foram testados. Tabela 12

Exemplo 5: Teste de especificidade funcional contra a IL-12 em um ensaio de célula T humana ativada

[000302] Os anticorpos anti-IL-23p19 foram testados para a inibição funcional da IL-12 em um ensaio de células T humanas ativadas. A IL-12 humana recombinante (1 ng/ml) foi pré-incubada com 5 μg/ml de anticorpos anti-IL-23p19. As combinações de IL-12/anticorpo foram então adicionadas a blastos de células T derivadas de PHA de humana. A IL-12 recombinante sozinha foi usada como um controle positivo. Um anticorpo anti-IL-12p70 (Bender MedSystems, Viena, Áustria) foi usado como um anticorpo de inibição de controle. Após dois dias em cultura, os sobrenadantes celulares foram colhidos e ensaiados para a produção de IFN-Y por ELISA (R&D Systems). As amostras foram testadas em triplicado e a média pg/ml de IFN-Y foi determinada. Os resultados (com desvios padrão) são mostrados na tabela abaixo. Tabela 13

Exemplo 6: Inibição da fosforilação de STAT3 induzida pela IL-23 na linhagem celular humana DB

[000303] A linhagem celular humana DB (ATCC, Manassas, VA) responde à estimulação da IL-23 por meio de um complexo endógeno da IL-23R (IL-23R e IL-12Rβ1) e fosforila a STAT3 de uma forma dependente da dose de IL-23. O ensaio foi desenvolvido para testar a inibição de anticorpos anti-IL-23p19 da fosforilação de STAT3 induzida pela IL-23. As células DB foram plaqueadas a 1x10e6 células/poço numa placa de 96 poços. Os anticorpos a serem testados foram diluídos em série e pré- incubados com IL-23 recombinante humana (10 ng/ml) durante 1 hora em temperatura ambiente. A mistura anticorpo/IL-23 foi então adicionada às células durante 30 minutos a 37° C. As células foram colhidas por centrifugação a 4° C durante 10 minutos e depois lisadas em tampão gelado (Cell Signaling Technology, Beverly, MA). Uma porção do lisado foi corrido em um fosfo-STAT3 ELISA (Invitrogen). Os valores de IC50 do anticorpo foram calculados como percentagem de inibição da fosforilação da STAT3 comparado com poços de controle sem anticorpo. Os valores IC50 representativos são apresentados na tabela abaixo. Tabela 14

Exemplo 7: Modelo in vivo da produção de citocina induzida pela IL-23 na orelha de camundongo

[000304] Um modelo in vivo no camundongo foi usado. A IL-23 recombinante humana é injetada na pele da orelha de camundongo durante 4 dias consecutivos, resultando no espessamento da epiderme e uma regulação positiva da proteína IL-17 e IL-22. Os anticorpos anti-IL-23p19 foram avaliados neste modelo. Uma única injeção intraperitoneal de 1 mg/kg ou 5 mg/kg de anticorpo foi administrada 1 hora antes da primeira injeção de IL-23 na pele. A IL-23 recombinante humana (com ligante) foi injetada uma vez por dia durante 3 dias adicionais e o tecido foi colhido para análise de citocina. A inibição da produção de citocina foi demonstrada para os anticorpos. Os resultados de três experimentos são mostrados na tabela abaixo (exp. 1: linhas 1-7, exp 2:. linhas 8-10, exp: 3. iinhas 11-14). Tabela 15

Exemplo 8: Estudos farmacocinéticos em Macaco cinomolgo

[000305] Os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados foram administrados por infusão intravenosa de dez minutos a uma dose de 1,0 mg/kg a três macacos cinomolgos. As amostras de soro foram coletadas ao longo de um curso de tempo de seis semanas e as concentrações livres de anticorpos foram medidas utilizando um ELISA específico. Os perfis de concentração-tempo do soro para os anticorpos e os parâmetros farmacocinéticos correspondentes são resumidos na Tabela 16 abaixo. Tabela 16

Exemplo 9: Expressão em células NSO e dados biofísicos

[000306] Transfecção de células NS0 e geração de piscinas estáveis:

[000307] As células NS0 foram cultivadas na presença de FBS a 1% antes da transfecção. 40x10e6 células foram recolhidas e ressuspensas em 0,8 ml de meio contendo FBS a 2% com 20ug de DNA linearizado (vetores de expressão de cadeia pesada e de cadeia leve) e, em seguida, as células foram incubadas em gelo durante cerca de 15 minutos antes da eletroporação das células a 750V/25uF (Bio-Rad Gene Pulser Xcell). As células foram recuperadas com FBS a 2% para cerca de 48 horas a 37° C e 5% de CO2, em seguida plaqueadas em placas de 96 poços a 2x10e5 células/ml contendo G418 e ao ácido micofenólico por 14-21 dias, até a formação de colônias.

[000308] O sobrenadante de placas de 96 poços com colônias foi rastreado por meio de ELISA. As placas de ELISA foram revestidas com 1ug/ml de cabra anticapa (Southern Biotech, Birmingham, AL) em PBS e sobrenadantes diluídos foram incubados e, em seguida, detectados com anti-IgG Fc-HRP humano de cabra (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA). As colônias positivas foram agrupadas para aumentar a escala. As titulações para produção do anticorpo foram determinadas por ForteBio usando ponteiras da proteína A de acordo com o protocolo de fabricação. As titulações para o Anticorpo A e D estavam entre 250-350 mg/L, com mais de 80% de recuperação da purificação de proteínas, e mais que 94% de monômero após purificação IEX. As proteínas foram ressuspensas em um tampão final contendo 20 mM de citrato de sódio e de 115 mm de NaCl, pH 6,0 e são estáveis a 4° C durante pelo menos 4 meses, e com solubilidade superior a 100 mg/ml neste tampão. Tabela 17

Tabela18

[000309] AUC: Ultracentrifugação analítica tal como medida pelo método de velocidade de sedimentação a concentrações de 0,5 -1 mg/ml; SEC: Cromatografia de exclusão de tamanho,% M: porcentagem de monômero. Exemplo 10: Mapeamento de epítopos

[000310] Espectrometria de massa de troca de hidrogênio/ deutério (HXMS) foi usada para mapear o epítopo da ligação do Anticorpo A para a IL-23p19 humana. Este método determinou a susceptibilidade dos hidrogênios da espinha dorsal da amida da IL-23p19 para trocar com D2O. O experimento foi realizado com apenas IL-23 sozinha e com a IL- 23 com adição de anticorpo A. As regiões da sequência da IL-23p19 mostrando a proteção significativa da troca devido à ligação do Anticorpo A foram identificadas assim. A resolução do método é determinada pelos peptídeos produzidos por digestão com pepsina ou Protease XVIII. Estes peptídeos derivados da IL-23p19 foram identificados por experiências de controle adicionais com amostras insubstituíveis empregando massa exata padrão e tecnologias de HPLC MS/MS.

[000311] A IL-23 recombinante humana foi usada. Para a amostra de proteína + anticorpo, 50 ul da IL-23 (0,8mg/ml) foram incubados com 10ul de Anticorpo A (12,7mg/ml) durante 15 minutos em temperatura ambiente. A razão molar final de Anticorpo A/IL-23 foi de 1,2:1.

[000312] Para a troca de 5ul da proteína IL-23 foram adicionados a 50 ul de tampão deuterado (50 mM PBS em D2O) e incubados durante 100 segundos em temperatura ambiente. 50 ul de 2M Ureia/0,5M TCEP foram adicionados e incubados durante 60 segundos em temperatura ambiente. 5ul de pepsina ou Protease XVIII (4mg/ml em 0,1% de ácido fórmico) foram adicionados e a amostra foi imediatamente arrefecida a 4°C.

[000313] Depois de 5 minutos 50 ul de amostra foram injetados em um sistema de HPLC Shimadzu (controlador SCL10A e duas bombas LC10AD) sob as seguintes condições:

[000314] Fase Móvel A = 99/1/0,1 (água / acetonitrila / ácido fórmico).

[000315] Fase móvel B = 95/5/0,1 (acetonitrila / água / ácido fórmico).

[000316] Taxa = 100ul/min.

[000317] Coluna = Phenomenex Jupiter C5, 5u, 50x1,0mm.

[000318] Linhas de fase móvel, coluna, circuito injetor estão em banhos de gelo.

[000319] Gradiente = Tempo 0 (3% B), Tempo 2,2 (3% B), Tempo 10,1 (90% de B), Tempo 12,0 (90% B), Tempo 12,1 (3% B).

[000320] A espectrometria de massa foi realizada como se segue:

[000321] Espectro de massa = Thermo Orbitrap Velos (0900865).

[000322] Métodos: A. Fragmentação (para peptídeos ID): tempo de aquisição de 12 minutos (3 minutos de atraso de partida), escaneamento completo de FTMS a 30.000 de resolução, sete escaneamentos dependentes de dados da armadilha de íons (CID). B. Execução da EM: tempo de aquisição de 12 minutos (3 minutos de atraso de partida), escaneamento completo de FTMS a 60.000 de resolução.

[000323] A pepsina e os peptídeos protease XVIII foram identificados utilizando dados de fragmentação e o programa Proteoma Discoverer (Thermoscientific, Waltham, MA). Os peptídeos identificados foram comparados visualmente (proteína sozinha versus proteína com o anticorpo presente) utilizando o software Xcalibur (Thermoscientific). Nenhuma alteração significativa na troca foi observada para a IL-23 sozinha versus IL-23 com o anticorpo A fora da região da IL-23p19. Para a parte da proteína p19, os dados foram analisados utilizando o programa PepMap (Thermoscientific). Este programa calcula a massa média de peptídeos trocados. Os resultados do PepMap foram verificados e os peptídeos que não se produziram resultados verificados foram calculados com o auxílio do Microsoft Excel.

[000324] As regiões da sequência da IL-23, que mostram uma proteção significativa de troca, devido à ligação do anticorpo A foram identificadas como os resíduos de aminoácidos 108-126 da SEQ ID NO: 181 e os resíduos de aminoácidos 137-151 da SEQ ID NO: 181

Claims

1. Anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou seu fragmento de ligação ao antígeno, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende: a) uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19 (CDR1-L), a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 20 (CDR2-L) e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 (CDR3-L), e b) uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 66 ou 67 (CDR1-H), a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64 (CDR2-H) e sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 65 (CDR3-H).

2. Anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou seu fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende: a) uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19 (CDR1-L), a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 20 (CDR2-L) e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 (CDR3-L), e b) uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 66 (CDR1-H), a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64 (CDR2-H) e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 65 (CDR3-H).

3. Anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou seu fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende: a) uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19 (CDR1-L), a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 20 (CDR2-L) e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 (CDR3-L), e b) uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 67 (CDR1-H), a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64 (CDR2-H) e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 65 (CDR3-H).

4. Anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compre-ende uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NO: 158, 160, 162 ou 164, e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NO: 166 ou 168.

5. Anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou seu fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 160 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 166.

6. Anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou seu fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 160 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 168.

7. Anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou seu fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 158 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 166.

8. Anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou seu fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 166 ou 168 ligada a uma região constante de cadeia pesada da IgG1 humana; e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 158 ou 160 ligada a uma região constante da cadeia leve kappa humana.

9. Anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou seu fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno compreende: a) um domínio variável de cadeia leve humanizada compreendendo as CDRs da SEQ ID NO: 158 ou 160, e b) um domínio variável de cadeia pesada humanizada compreendendo as CDRs da SEQ ID NO: 166 ou 168.

10. Anticorpo anti-IL-23p19 humanizado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o referido anticorpo é um anticorpo monoclonal.

11. Anticorpo anti-IL-23p19 humanizado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado que compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 174 ou 180 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 176 ou 178.

12. Anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o referido anticorpo compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 174 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 176.

13. Anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o referido anticorpo compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 174 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 178.

14. Anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o referido anticorpo compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 180 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 176.

15. Anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de ser para uso na medicina.

16. Anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o uso é o tratamento de uma doença inflamatória, de uma doença autoimune, de uma doença respiratória, de um distúrbio metabólico ou de câncer.

17. Anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o uso é para o tratamento de psoríase, doença inflamatória do intestino, artrite psoriática, esclerose múltipla, artrite reumatoide, Doença de Crohn, colite ulcerativa ou espondilite anquilosante.

18. Anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o uso é para o tratamento de asma ou doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC).

19. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 14 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

20. Uso de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreendendo: a) uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19 (CDR1-L), a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 20 (CDR2-L) e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 (CDR3-L), e b) uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 66 ou 67 (CDR1-H), a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64 (CDR2-H) e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 65 (CDR3-H), caracterizado pelo fato de ser para a preparação de uma composição farmacêutica ou medicamento para o tratamento de psoríase, doença inflamatória do intestino, artrite psoriática, esclerose múltipla, artrite reumatoide ou espondilite anquilosante.

21. Uso de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreendendo: a) uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19 (CDR1-L), a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 20 (CDR2-L) e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21 (CDR3-L), e b) uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 66 ou 67 (CDR1-H), a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 64 (CDR2-H) e a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 65 (CDR3-H), caracterizado pelo fato de ser para a preparação de uma composição farmacêutica ou medicamento para o tratamento de asma.