KR101931591B1 - 항－ｉｌ－２３ 항체 - Google Patents

항－ｉｌ－２３ 항체 Download PDF

Info

Publication number
KR101931591B1
KR101931591B1 KR1020137011474A KR20137011474A KR101931591B1 KR 101931591 B1 KR101931591 B1 KR 101931591B1 KR 1020137011474 A KR1020137011474 A KR 1020137011474A KR 20137011474 A KR20137011474 A KR 20137011474A KR 101931591 B1 KR101931591 B1 KR 101931591B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
seq
amino acid
acid sequence
chain variable
Prior art date
Application number
KR1020137011474A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20130139975A (ko
Inventor
레이철 리베카 배럿
키스 캐나다
카트리나 메리 카트론
로버트 코펜하버
리 에드워드 프레고
어니스트 리 레이먼드
산자야 싱
샹양 주
Original Assignee
베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 filed Critical 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하
Publication of KR20130139975A publication Critical patent/KR20130139975A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101931591B1 publication Critical patent/KR101931591B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)

Abstract

본 발명은 항-IL-23p19 결합 화합물, 특히 사람화된 항-IL-23p19 항체 및, 이를 사용하기 위한 치료학적 및 진단학적 방법 및 조성물에 관한 것이다.

Description

항－ＩＬ－２３ 항체{ANTI-IL-23 ANTIBODIES}
발명의 기술 분야
본 발명은 일반적으로 진단 및 치료학적 용도를 위한 항-IL-23p19 항체에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 사람화된 항-IL-23p19 항체 및 다양한 질환 또는 장애의 치료를 위한 사용 방법이 기재되어 있다. 이러한 화합물을 포함하는 약제학적 조성물 및 키트(kit) 또한 기재되어 있다.
발명의 배경
고등 진핵생물은 선천적인 면역 반응에 의해서 및 이후에 적응된 면역 반응에 의해 개시되는 병원체에 대한 복잡한 반응을 발달시켜왔다. 이들과 함께 2개의 메카니즘이 유기체를 감염시키는 병원체를 근절시킬 뿐 아니라 미래의 노출에 대한 장기간의 면역학적 반응도 확립한다. 이들 반응에 있어서 결함은 감염 및/또는 만성 염증 및 자가면역성을 초래하는 적응할 수 있는 면역 반응의 변경에 대한 증가된 감수성을 초래할 수 있다. p40 및 p35 단백질 소단위(subunit)로 이루어진 이종이합체성 사이토킨인 IL-12는 적응할 수 있는 면역성에 있어 주요 영향과 함께 선천적인 면역 반응의 특징적인 사이토킨으로 오랫동안 고려되어 왔다. 그러나, 당해 사이토킨의 생물학적 역할의 연구로부터의 데이타는 혼란스러운 결과를 초래하였다. 예를 들면, p40에 결함이 있는 마우스는 콜라겐 유도된 관절염(CIA) 및 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)에 대해 내성이 있었지만, p35에 결함이 있는 마우스는 둘다 및 심지어 나타난 악화된 질환에 대해 감수성이었다. 이러한 수수께끼는 1990년대 말에 면역 반응-IL-23에 있어서 뚜렷한 역할을 지닌 IL-12 사이토킨 계열의 새로운 구성원의 발견으로 해결되기 시작하였다.
IL-23은 일반적인 소단위(p40)와 IL-12 및 독특한 p19 소단위로 구성된다. 이러한 공유된 p40 소단위에도 불구하고, IL-23 및 IL-12에 대한 역할은 상당히 상이하다. IL-12는 Th1 세포 분화, 증식 및 활성화의 촉진을 통해 Th1 반응에 중요하다. 대조적으로, IL-23은 IL-17 및 관련된 사이토킨을 생산하는 이의 능력으로 인하여 Th17 세포로 명명된 CD4+ T 헬퍼 세포(helper cell)의 최근에 정의된 세트의 발달 및 유지를 지지한다. IL-23이 만성 자가면역 염증에 관여하며, IL-23 활성의 조절이 자가면역 질환에 대해 촉망되는 치료요법을 제공할 수 있다는 증거가 늘어나고 있다.
따라서, 사람에서 질환, 특히 면역학적 및 자가면역 질환을 치료하기 위한 치료제로서 사용할 수 있는 유리한 약리학적 특성을 갖는 IL-23에 대한 길항제 분자에 대한 요구가 존재한다.
따라서, 본 발명의 한가지 목표는 항-IL-23 길항제 분자, 특히 IL-23에 대해 고 결합 친화성을 갖는 항-IL-23 길항제 분자를 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목표는 IL-23에 대해 고 특이성을 갖는 항-IL-23 길항제 분자를 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목표는 IL-23 및 이의 수용체의 연합에 대해 고 차단 활성을 갖는, 항-IL-23 길항제를 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목표는 강력한 세포 활성을 갖는 항-IL-23 길항제를 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목표는 양호한 생체이용율(bioavailability)을 갖는 항-IL-23 길항제를 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목표는 양호한 생체물리학적 특성을 갖는 항-IL-23 길항제를 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목표는 위에서 설정된 목표들 중의 어느 것의 조합을 포함한다.
발명의 요약
본 발명은 상기 필요성들에 초점이 맞추어져 있으며 IL-23 단백질의 p19 소단위에 결합하는 항체를 제공한다. 하나의 국면에서, 본 발명의 항체는 고 친화성으로 사람 IL-23에 결합한다. 다른 국면에서, 본 발명의 항체는 마우스 비장세포로부터 IL-17의 IL-23 자극된 생산을 억제한다. 다른 국면에서, 본 발명의 항체는 IL-23에 대해 밀접하게 관련된 계열 구성원인, IL-12에 결합하지 않거나 이를 길항하지 않는다.
하나의 양태에서, 본 발명은 마우스 하이브리도마(hybridoma)로부터 기원한 항-IL-23p19 항체, 예를 들면, 단클론 항체를 제공한다. 하나의 양태에서, 본 발명은 완전한 길이의 항-IL-23p19 항체를 제공한다. 다른 양태에서, 본 발명은 항-IL-23p19 사람화된 항체, 예를 들면, 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체, 예를 들면, 완전한 길이의 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체를 제공한다. 하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 사람 IL-23에 고 친화성으로 결합한다. 다른 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 또한 시노몰구스(cynomolgus) IL-23에 고 친화성으로 결합한다. 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 DB 세포에서 IL-23-유도된 STAT3 인산화(phosphorylation)를 억제한다. 다른 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 예를 들면, 이의 생산이 IL-23에 의해 자극되는, IL-17 및 IL-22와 같은 사이토킨의 억제에 의해 측정되는 것으로서, IL-23의 p19 소단위에 대한 결합에 의해 IL-23의 작용을 길항한다. 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 양호한 약동학적(PK) 프로파일을 갖는다. 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 예를 들면, 단량체 형태의 항체의 퍼센트에 의해 정의되는 바와 같이, 품질, 안정성 또는 가용성과 같은 양호한 생체물리학적 특성을 갖는다. 추가의 양태는 본 발명의 항체를 암호화하는 DNA 분자, 이러한 DNA 분자를 포함하는 발현 벡터 및 숙주 세포, 및 본 발명의 항체를 제조하는 방법을 포함한다. 본 발명은 또한 본 발명의 항체를 위한, 특히 면역학적 및 자가면역 질환에 대한 치료학적 용도를 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 1, 4, 6, 7, 8, 11, 15, 18, 19, 22, 27 또는 30의 경쇄 CDR1 (L-CDR1) 서열; 서열 번호 2, 5, 9, 12, 16, 20, 23, 25, 28 또는 31의 경쇄 CDR2 (L-CDR2) 서열; 서열 번호 3, 10, 13, 14, 17, 21, 24, 26, 29, 또는 32의 경쇄 CDR3 (L-CDR3) 서열; 서열 번호 33, 36, 38, 40, 43, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 67, 68, 69, 77 또는 80의 중쇄 CDR1 (H-CDR1) 서열; 서열 번호 34, 39, 41, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 70, 72, 73, 75, 78 또는 81의 중쇄 CDR2 (H-CDR2) 서열; 및 서열 번호 35, 37, 42, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 65, 71, 74, 76, 79 또는 82의 중쇄 CDR3 (H-CDR3) 서열을 포함하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 위에서 나열한 L-CDR1, 위에서 나열한 L-CDR2 및 위에서 나열한 L-CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 위에서 나열한 H-CDR1, 위에서 나열한 H-CDR2 및 위에서 나열한 H-CDR3를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 또한 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공하며, 여기서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 각각 서열 번호 1, 2, 3, 33, 34, 및 35의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 4, 5, 3, 36, 34 및 37의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 1, 2, 3, 38, 39 및 35의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 6, 2, 3, 40, 41 및 42의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 7, 2, 3, 43, 41 및 44의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 8, 9, 10, 45, 46 및 47의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 8, 9, 10, 48, 49 및 50의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 11, 12, 13, 51, 52 및 53의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 7, 2, 14, 54, 55 및 56의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 15, 16, 17, 57, 58 및 59의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 18, 16, 17, 60, 61 및 62의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 19, 20, 21, 63, 66, 67 또는 68, 64 및 65의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 22, 23, 24, 69, 70 및 71의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 22, 25, 26, 55, 72 및 71의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 8, 9, 10, 45, 73 및 74의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 27, 28, 29, 45, 75 및 76의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 8, 9, 10, 77, 78 및 79의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는 각각 서열 번호 30, 31, 32, 80, 81 및 82의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열을 포함한다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상기 나열한 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3의 조합을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 상기 나열한 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 조합을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 148의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 또는 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 158, 160, 162 및 164로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 166, 168, 170 및 172로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 40pM 미만의 IL-23에 대한 KD, 또는 20pM 미만의 IL-23에 대한 KD, 또는 10pM 미만의 IL-23에 대한 KD 또는 1pM 미만의 IL-23에 대한 KD를 갖는다.
추가의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 181의 108 내지 126번 아미노산 잔기 및 서열 번호 181의 137 내지 151번 아미노산 잔기로 이루어진 에피토프(epitope)에서 사람 IL-23p19에 결합하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 사람 IL-23p19에 대해 본 발명의 항체와 경쟁적으로 결합하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 하나의 양태에서, 본 발명은 사람 IL-23p19에 대해 서열 번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체와 경쟁적으로 결합하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 하나의 양태에서, 본 발명은 사람 IL-23p19에 대해 서열 번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체와 경쟁적으로 결합하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 하나의 양태에서, 본 발명은 사람 IL-23p19에 대해 서열 번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체와 경쟁적으로 결합하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 하나의 양태에서, 본 발명은 사람 IL-23p19에 대해 서열 번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체와 경쟁적으로 결합하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 사람화된 항체이다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 단클론 항체이다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 완전한 길이의 항체이다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 사람화된 단클론 항체, 예를 들면, 완전한 길이의 사람화된 단클론 항체이다. 하나의 양태에서, 항원-결합 단편은 Fab, F(ab')2, 또는 단일쇄 Fv　단편이다. 하나의 양태에서, 항원-결합 단편은 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 19의 아미노산 서열(CDR1-L); 서열 번호 20의 아미노산 서열(CDR2-L); 서열 번호 21의 아미노산 서열(CDR3-L): 서열 번호 63, 66, 67 또는 68의 아미노산 서열(CDR1-H); 서열 번호 64의 아미노산 서열(CDR2-H); 및 서열 번호 65의 아미노산 서열(CDR3-H)을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 19의 아미노산 서열(CDR1-L); 서열 번호 20의 아미노산 서열(CDR2-L); 서열 번호 21의 아미노산 서열(CDR3-L): 서열 번호 66의 아미노산 서열(CDR1-H); 서열 번호 64의 아미노산 서열(CDR2-H); 및 서열 번호 65의 아미노산 서열(CDR3-H)을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 19의 아미노산 서열(CDR1-L); 서열 번호 20의 아미노산 서열(CDR2-L); 및 서열 번호 21의 아미노산 서열(CDR3-L)을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 서열 63, 66, 67 또는 68의 아미노산 서열(CDR1-H); 서열 번호 64의 아미노산 서열(CDR2-H); 및 서열 번호 65의 아미노산 서열(CDR3-H)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 항-IL-23p19 또는 이의 항원-결합 단편 항체를 추가로 제공하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 19의 아미노산 서열(CDR1-L); 서열 번호 20의 아미노산 서열(CDR2-L); 및 서열 번호 21의 아미노산 서열(CDR3-L)을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 서열 번호 66의 아미노산 서열(CDR1-H); 서열 번호 64의 아미노산 서열(CDR2-H); 및 서열 번호 65의 아미노산 서열(CDR3-H)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 158, 160, 162 또는 164 중의 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 서열 번호 166, 168, 170 또는 172 중의 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 포함하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공하며, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 사람화된 항체이다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 단클론 항체이다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 완전한 길이의 항체이다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체, 예를 들면, 완전한 길이의 사람화된 단클론 항체이다. 하나의 양태에서, 항원-결합 단편은 Fab, F(ab')2, 또는 단일쇄 Fv　단편이다. 하나의 양태에서, 항원-결합 단편은 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 사람 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA 또는 IgE 중쇄 불변 영역에 연결된 서열 번호 166 또는 168의 아미노산 서열을 포함하는 항체를 추가로 제공한다. 서열 번호 166 또는 168의 아미노산 서열을 포함하는 항체는 사람 IgG1 중쇄 불변 영역에 연결된다. 서열 번호 158 또는 160의 아미노산 서열을 포함하는 항체는 사람 카파 또는 람다 경쇄 불변 영역에 연결된다. 서열 번호 158 또는 160의 아미노산 서열을 포함하는 항체는 사람 카파 경쇄 불변 영역에 연결된다.
하나의 양태에서, 본 발명은 사람 IgG1 중쇄 불변 영역에 연결된 서열 번호 166 또는 168의 아미노산 서열; 및 사람 카파 경쇄 불변 영역에 연결된 서열 번호 158 또는 160의 아미노산 서열을 포함하는 항체를 추가로 제공한다
하나의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 158, 160, 162 및 164 중의 어느 하나로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 166, 168, 170 및 172 중의 어느 하나로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 174 또는 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 176 또는 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체를 추가로 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 160의 CDR을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호 160의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역 및 서열 번호 166의 CDR을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 166의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역을 포함하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 사람화된 단클론 항체, 예를 들면, 완전한 길이의 사람화된 단클론 항체이다.
추가의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 160의 CDR을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호 160의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역 및 서열 번호 168의 CDR을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 168의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역을 포함하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 사람화된 단클론 항체, 예를 들면, 완전한 길이의 사람화된 단클론 항체이다.
추가의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 158의 CDR을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호 158의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역 및 서열 번호 166의 CDR을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 166의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역을 포함하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 사람화된 단클론 항체, 예를 들면, 완전한 길이의 사람화된 단클론 항체이다.
추가의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 158의 CDR을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호 158의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역 및 서열 번호 168의 CDR을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 168의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역을 포함하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 사람화된 단클론 항체, 예를 들면, 완전한 길이의 사람화된 단클론 항체이다.
하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 사람 IL-23에 대해 1pM 이하의 KD를 추가의 특징으로 할 수 있다. 하나의 국면에서, 50% 사람 혈청에서 결합 온-속도(on-rate)에 있어서 이동(shift)은 없다.
하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 시험관내에서 사람 IL-23R/Fc에 대해 IL-23 결합을 차단함을 추가의 특징으로 할 수 있다.
하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 사람 IL-12에 결합하지 않음을 추가의 특징으로 할 수 있다.
하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 마우스 비장세포에서 사람 IL-23 유도된 IL-17 생산을 20 pM 이하의 IC50으로 억제함을 추가의 특징으로 할 수 있다.
하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 사람 DB 세포내에서 사람 IL-23 유도된 STAT3 인산화를 40 pM 이하의 IC50으로 억제함을 추가의 특징으로 할 수 있다.
하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 ADCC/CDC에 있어서 예측된 활성을 가지지 않음을 추가의 특징으로 할 수 있다.
하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 시노몰구스 원숭이 IL-23에 대해 1pM 이하의 KD를 가짐을 추가의 특징으로 할 수 있다.
하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 마우스 또는 랫트 IL-23에 대해 교차 반응성을 가지지 않음을 추가의 특징으로 할 수 있다.
하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 마우스 귀에서 사람 IL-23 유도된 IL-17 및 IL-22 생산을 1 mg/kg에서 사이토킨 둘다의 80% 이상의 억제율로 억제함을 추가의 특징으로 할 수 있다.
하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 차등 주사 열량계에 의해 측정된 것으로서 83℃의 용융 온도를 추가의 특징으로 할 수 있다.
하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 UV 분광광도계에 의해 측정되고 혼탁도에 의해 모니터링된 것으로서, 100 mg/ml 이상의 가용성을 추가의 특징으로 할 수 있다.
추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 완충액 속에서 적어도 90% 단량체 형태, 또는 적어도 92% 단량체 형태, 또는 적어도 95% 단량체 형태로 존재한다는 점을 추가의 특징으로 할 수 있다.
추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 완충액 속에 적어도 90%의 단량체 형태, 또는 적어도 92% 단량체 형태, 또는 적어도 95% 단량체 형태로 1개월 또는 4개월 동안 잔존한다는 점을 추가의 특징으로 할 수 있다.
하나의 국면에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체는 사람화된 단클론 항체, 예를 들면, 완전한 길이의 사람화된 단클론 항체이다.
추가의 양태는 상기 가변 경쇄 영역을 암호화하는 DNA 분자, 상기 가변 중쇄 영역을 암호화하는 DNA 분자, 상기 경쇄 영역을 암호화하는 DNA 분자, 또는 상기 중쇄 영역을 암호화하는 DNA 분자를 포함한다.
추가의 양태는 상기 DNA 분자를 함유하는 발현 벡터를 포함한다. 하나의 양태에서, 발현 벡터는 가변 중쇄 및/또는 가변 경쇄 각각을 암호화하는 DNA 분자에 연결된, 불변 중쇄 및/또는 불변 경쇄를 각각 암호화하는 DNA 분자를 포함한다. 추가의 양태는 상기 하나 이상의 발현 벡터를 지니는 숙주 세포를 포함한다. 하나의 양태에서, 숙주는 포유동물 세포이다.
추가의 양태는 포유동물 숙주 세포를 하나 이상의 상기 벡터로 형질감염시키고, 숙주 세포를 배양하며 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 회수하고 정제함을 포함하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법을 포함한다.
추가의 양태는 하나 이상의 상기 벡터를 포함하는 포유동물 숙주 세포를 수득하는 단계, 및 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는 상기한 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법을 포함한다. 하나의 양태에서, 당해 방법은 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 회수하고 정제하는 단계를 추가로 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 의약으로 사용하기 위한 상기한 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 제공한다. 하나의 양태에서, 용도는 염증 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 대사 장애 또는 암의 치료이다. 하나의 양태에서, 용도는 건선, 염증성 장 질환[크론병(Crohn's disease), 궤양성 대장염), 건선 관절염, 다발 경화증, 류마티스 관절염, 또는 강직성 척추염의 치료이다. 하나의 양태에서, 용도는 건선의 치료이다. 하나의 양태에서, 용도는 염증성 장 질환의 치료이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 상기 항체 분자 또는 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 추가로 제공한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 염증 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 대사 장애 또는 암의 치료가 필요한 대상체, 예를 들면 환자에게, 치료학적 유효량의 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하는, 염증 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 대사 장애 또는 암을 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 하나의 양태에서, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 비경구 투여 경로로 투여하거나, 정맥내 또는 피하내로 투여한다. 하나의 양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 피하로 투여한다. 하나의 양태에서, 질환은 건선, 염증성 장 질환(크론병, 궤양성 대장염), 건선 관절염, 다발경화증, 류마티스 관절염, 또는 강직성 척추염을 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 하나의 양태에서, 질환은 건선이다. 하나의 양태에서, 질환은 염증성 장 질환이다.
하나의 양태에서, 본 발명은 상기 항체 분자 또는 항원-결합 단편을 세포에게 투여함을 포함하는, 포유동물 세포에서 IL-23 수용체에 대한 IL-23의 결합을 억제하는 방법을 추가로 제공하며, 이에 의해, IL-23 수용체에 의해 매개된 시그날링이 억제된다.
하나의 양태에서, 본 발명은 상기 항체 또는 항원-결합 단편을 대상체에게 투여함을 포함하는, IL-23과 관련된 장애를 가진 대상체를 치료하는 방법을 추가로 제공하며, 당해 항체 또는 항원-결합 단편은 사람 IL-23에 결합한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 샘플을 상기 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계 및 상기 항체 또는 이의 단편과 IL-23p19의 결합을 검출하는 단계에 의해 생물학적 샘플 속에서 IL-23 수준을 검출하고/하거나 정량하는 방법을 추가로 제공한다. 당해 정보는 IL-23과 관련된 장애를 진단하는데 사용될 수 있다. 따라서, 방법은 IL-23과 관련된 장애를 진단하거나, 대상체가 IL-23과 관련된 장애로 진행될 위험이 증가되어 있는지를 측정하기 위해 제공되며, 여기서, 당해 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플을 상기 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계 및 IL-23p19에 대한 항체 또는 항원 결합 단편의 결합을 검출하여 IL-23의 발현 또는 농도를 측정하는 단계를 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 세포 또는 세포 환경에 상기 항체 또는 항원-결합 단편을 투여하는 단계를 포함하여 세포에서 IL-23 수용체에 대한 IL-23의 결합을 억제하는 방법을 추가로 제공하며, 이에 의해 IL-23 수용체에 의해 매개된 시그날링이 억제된다.
도 1: 마우스 및 사람화된 가변 영역의 정렬.
도 1a: 항-IL-23p19 6B8 가공된 Vk 영역.
도 1b: 항-IL-23p19 6B8 가공된 VH 영역.
아미노산의 번호매김은 표준 카밧 번호매김 계획(Standard Kabat numbering scheme)에 의한다.
규칙적인 활자 = 사람; 이탤릭체/밑줄 활자 = 뮤린(murine); 음영이 있는 활자 = 합성; 굵은체/이탤릭체/밑줄 = CDR.
도 2: IL-23R/Fc에 결합하는 IL-23의 사람의 경쟁 결합 검사.
상세한 설명
IL-23의 p19 소단위(또한 본원에서 "IL-23p19" 및 "p19 소단위"로 언급됨)는 21개의 aa 리더 서열(leader sequence)을 함유하는 189개 아미노산 폴리펩타이드이다[참조: Oppmann et al. Immunity 13:715 (2000), 서열 번호 181]. 분자의 생물학적 활성은, 이것이 IL-12p40 소단위와 짝을 이루어 IL-23을 형성하는 경우에만 검출된다. IL-23은 활성화된 수지상 세포(DC) 및 식세포에 의해 주로 발현된다. IL-23에 대한 수용체는 IL-23R로 불리는 독특한 소단위와 짝을 이룬 IL-12 수용체의 IL-12Rβ1 소단위로 구성되어 있음이 밝혀졌다[참조: Parham et al. J. Immunol. 168:5699 (2002)]. 수용체의 발현은 기억 T 세포 및 NK 세포에서 주로 검출된다. 따라서, 당해 사이토킨:수용체 쌍의 발현은 면역 세포의 특이적인 집단으로 제한되어지는 것으로 여겨진다. 최초에 IL-12 및 IL-23은 많은 기능을 공유할 수 있는 것으로 고려되었지만, 데이타는 상황이 상이함을 나타낸다. IL-12는 Th1 세포의 생산에 주로 역할을 하는 반면, IL-23은 Th17로 명명된 최근에 인식된 Th 세포 소세트의 생산 및 유지에 중요하게 관여하는 것으로 밝혀졌다[참조: Kikly et al. Curr. Opin. Immunol. 18:670 (2006), Kastelein et al. Ann. Rev. Immunol. 25:221 (2007)]. 이들 세포는 IL-17A, IL-17F, IL-22 및, IL-6 및 TNF-α와 같은 다른 전-염증성(pro-inflammatory) 사이토킨을 생산한다. 하기에 기술되는 바와 같이, 이들 Th17 세포의 역할에 있어서 동물 모델 연구는 만성 염증 및 자가면역성에 있어서 구동력으로서 이들의 중요성을 나타낸다.
본 발명은 IL-23, 특히 사람 IL-23p19의 p19 소단위에 결합하는 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 IL-23의 p19 소단위를 인식하는 사람화된 항체에 관한 것이다. 구체적인 양태에서, 이들 사람화된 항체의 서열은 특정 리드(lead) 마우스 항체의 서열을 기준으로 확인되어 왔다.
본 발명의 리드 마우스 항체는 마우스 하이브리도마(hybridoma)로부터 기원하였다. 마우스의 면역화는 상이한 기술들을 사용하여 수행된다. 예를 들면, 사람 IL-23p19 단백질 또는 이의 단편에 대해 특이적인 항체는 분리된 IL-23p19 단백질, 분리된 IL-23 단백질, 분리된 하이브리드 IL-23 단백질, 및/또는 상기 중 어느 것의 이의 일부(합성 펩타이드 포함)와 같은 면역원성 항원에 대해 생성될 수 있다. 예를 들면, 마우스 IL-23p40 소단위 및 사람 IL-23p19 소단위를 포함하는 하이브리드 IL-23 단백질을 사용하여 마우스를 면역화시킨다. 면역원성 항원의 제조 및 단클론 항체 생산은 당해 분야에 공지된 어떠한 적합한 기술도 사용하여 수행할 수 있다.
리드 마우스 항체는 사람 IL-23에 대한 이들의 고 친화성을 기준으로 선택되었다. 따라서, 하나의 국면에서, 본 발명은 사람 IL-23에 고 친화성으로 결합하는 항체를 제공한다. 선택된 마우스 항체는 사람화된 항체를 생성하도록 사람화되었다. 본 발명의 사람화된 항체는 사람 IL-23에 고 친화성으로 결합한다. 따라서, 다른 국면에서, 본 발명은 사람 IL-23에 고 친화성으로 결합하는 사람화된 항체를 제공한다.
따라서, 하나의 양태에서, 본 발명은, KD가 40pM 미만인 항-IL-23p19 항체를 제공한다. 추가의 양태에서, 본 발명은, KD가 20pM 미만인 항-IL-23p19 항체를 제공한다. 추가의 양태에서, 본 발명은, KD가 10pM 미만인 항-IL-23p19 항체를 제공한다. 추가의 양태에서, 본 발명은, KD가 1pM 미만인 항-IL-23p19 항체를 제공한다.
다른 국면에서, 본 발명의 항체는 사람 혈청의 부재 또는 50% 사람 혈청의 존재하에서 IL-23p19에 고 친화성으로 결합한다.
추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 시노몰구스 원숭이 IL-23에 고 친화성으로 결합한다.
다른 국면에서, 본 발명의 항체는 IL-23에 결합하지만, IL-12에 결합하지 않는다. 추가의 국면에서, 본 발명의 항체는 IL-23에 대해 밀접하게 관련된 계열 구성원(family member)인 IL-12의 생물학적 활성을 방해하지 않는다.
다른 국면에서, 본 발명의 항체는 마우스 비장세포로부터 IL-17의 IL-23 자극된 생산을 억제한다.
추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 DB 세포에서 IL-23-유도된 STAT3 포스포릴화를 억제한다.
추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 IL-17 및 IL-22와 같은 사이토킨의 억제에 의해 측정된 것으로서, IL-23의 p19 소단위에 결합함으로써 IL-23의 작용을 길항하며, 이의 생산은 IL-23에 의해 자극되고, 이들 사이토킨의 수준의 감소에 의해 검출된다.
추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 시노몰구스 원숭이에서 생체내 반감기에 의해 예시된 것으로서, 양호한 약동학적 프로파일(PK) 프로파일을 갖는다.
추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체는 양호한 생체물리학적 특성, 예를 들면, 품질, 안정성 또는 가용성을 갖는다.
하나의 국면에서, 항-IL-23p19 항체는 사람화된 항체이다. 하나의 국면에서, 항-IL-23p19 항체는 단클론 항체이다. 하나의 국면에서, 항-IL-23p19 항체는 완전한 길이의 항체이다. 하나의 국면에서, 항-IL-23p19 항체는 사람화된 단클론 항체, 예를 들면, 완전한 길이의 사람화된 단클론 항체이다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 특이적인 "IL-23p19 항원 에피토프" 또는 " IL-23p19 에피토프"를 인식한다. 본원에 사용된 것으로서 이들 용어는 분자(예를 들면, 펩타이드) 또는 항-IL-23p19 항체와 면역반응성일 수 있는 분자의 단편을 말하며, 예를 들면, 서열 번호 84/121, 86/123, 88/125, 90/127, 91/128, 93/130, 95/132, 97/134, 99/136, 101/138, 103/140, 105/142, 107/144, 109/146, 111/148, 113/150, 115/152, 117/154, 119/156, 160/166, 160/168, 158/166 또는 158/168의 경쇄/중쇄 서열 조합을 갖는 항체 중 어느 것에 의해 인식된 IL-23p19 항원 결정인자를 포함한다. IL-23p19 항원 에피토프는 단백질, 단백질 단편, 펩타이드 등 속에 포함될 수 있다. 에피토프는 가장 일반적으로 단백질, 짧은 올리고펩타이드, 올리고펩타이드 모방체(mimic)(즉, IL-23p19 항원의 항체 결합 특성을 모방하는 유기 화합물), 또는 이의 조합이다. 항체에 대한 펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프의 최소 크기는 약 4 내지 5개의 아미노산인 것으로 고려된다. 펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프는 예를 들면, 적어도 7개의 아미노산 또는 예를 들면, 적어도 9개의 아미노산 또는 예를 들면, 약 15 내지 약 20개의 아미노산을 함유한다. 항체는 이의 3차 형태로 항원성 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 인식할 수 있으므로, 에피토프를 포함하는 아미노산은 연속일 필요가 없으며, 일부 경우에, 심지어 동일한 펩타이드 쇄 상에 존재하지 않을 수 있다. 에피토프는 X-선 결정학, 수소/중수소 교환 질량 분광계(HXMS), 부위-지시된 돌연변이유발, 알라닌 주사 돌연변이유발, 및 펩타이드 스크리닝 방법과 같이, 당해 분야에 공지된 다양한 기술에 의해 측정할 수 있다.
항체 또는 면역글로불린의 일반화된 구조는 당해 분야의 숙련가에게 잘 공지되어 있다. 이들 분자는 2개의 동일한 경(L) 쇄 및 2개의 동일한 중(H) 쇄로 구성된, 전형적으로 약 150,000 달톤인 이종사합체성 당단백질이며 완전한 길이의 항체로 전형적으로 언급된다. 각각의 경쇄는 하나의 이황화물 결합에 의해 중쇄에 공유결합적으로 연결되어 이종이합체를 형성하며, 이종사합체 분자는 이종이합체의 2개의 동일한 중쇄 사이의 공유결합성 이황화물 연결을 통하여 형성된다. 비록 경쇄 및 중쇄가 하나의 이황화물 결합에 의해 함께 연결된다고 해도, 2개의 중쇄들 사이의 이황화물 연결의 수는 면역글로불린 동형에 의해 변한다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적으로 떨어진 쇄내 이황화물 브릿지를 갖는다. 각각의 중쇄는 아미노-말단에서 가변 도메인(VH)에 이어서, 3개 또는 4개의 불변 도메인(CH1, CH2, CH3, 및 CH4), 및 CH1 및 CH2 사이에 힌지 영역(hinge region)을 갖는다. 각각의 경쇄는 2개의 도메인, 아미노-말단 가변 도메인(VL) 및 카복시-말단 불변 도메인(CL)을 갖는다. VL 도메인은 VH 도메인과 비-공유결합적으로 연합되는 반면, CL 도메인은 이황화물 결합을 통해 CH1 도메인에 일반적으로 공유결합적으로 연결된다. 특수한 아미노산 잔기는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 사이에 인터페이스(interface)를 형성하는 것으로 여겨진다(참조: Chothia et al., 1985, J. Mol. Biol. 186:651-663). 가변 도메인은 또한 본원에서 가변 영역으로 언급된다.
가변 도메인내 특정 도메인은 상이한 항체들 사이에서 전적으로 상이한데, 즉, "초가변적(hypervariable)"이다. 이들 초가변적 도메인은 이의 특수한 항원 결정인자에 대한 각각의 특수한 항체의 결합 및 특이성에 직접 관여하는 잔기를 함유한다. 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘다에서 초가변성은 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변성 루프(HVL)로서 공지된 3개의 분절(segment)내에 집중되어 있다. CDR은 문헌[참조: Kabat et al., 1991, In: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.]에서 서열 비교에 의해 정의된 반면, HVL(또한 본원에서 CDR로 언급됨)은 문헌[참조: Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917]에 기재된 바와 같이, 가변 도메인의 3차원 구조에 따라 구조적으로 정의된다. 이들 2개의 방법은 CDR의 약간 상이한 동정을 초래한다. 카밧(Kabat)에 의해 정의된 바와 같이, 경쇄 가변 도메인내에서 CDR-L1은 약 24 내지 34번 잔기에 위치하며, CDR-L2는 약 50 내지 56번 잔기에 위치하고 CDR-L3은 약 89 내지 97번 잔기에 위치하며; 중쇄 가변 도메인에서 CDR-H1은 약 31 내지 35번 잔기에 위치하고, CDR-H2는 약 50 내지 65번 잔기에 위치하며 CDR-H3은 약 95 내지 102번 잔기에 위치한다. 특수한 CDR을 포함하는 정확한 잔기 번호는 CDR의 서열 및 크기에 의존하여 변할 것이다. 당해 분야의 숙련가들은, 어떤 잔기가 항체의 가변 영역 아미노산 서열내에 특수한 CDR을 포함하는지를 정규적으로 측정할 수 있다. 따라서, 중쇄 및 경쇄의 CDR1, CDR2, CDR3는 제공된 항체에 대해 특이적인 독특하고 기능적인 특성들을 정의한다.
중쇄 및 경쇄 각각내 3개의 CDR은 가변적이지 않은 경향이 있는 서열을 함유하는 골격 영역(FR)에 의해 분리된다. 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 아미노 말단으로부터 카복시 말단까지, FR 및 CDR은 다음 순서로 정렬된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4. FR의 거대한 β-시이트(sheet) 배치는 쇄 각각내 CDR이 서로 간에 및 다른 쇄로부터의 CDR에 밀접하게 근접하도록 한다. 비록 모든 CDR 잔기가 항원 결합에 필수적으로 직접 관여되어 있지 않다고 해도, 수득되는 구조는 항원 결합 부위에 기여한다(참조: Kabat et al., 1991, NIH Publ. No. 91-3242, Vol. I, pages 647-669).
FR 잔기 및 Ig 불변 도메인은 항원 결합에 직접 관여되어 있지 않지만, 항원 결합에 기여하고/하거나 항체 작용제 기능을 매개한다. 일부 FR 잔기는 적어도 3가지 방식으로 항원 결합에서 유의적인 효과를 가지는 것으로 고려된다: 에피토프에 대해 직접적인 비공유결합적 결합에 의한 방식, 하나 이상의 CDR 잔기와의 상호작용에 의한 방식, 및 중쇄와 경쇄 사이의 인터페이스에 영향을 미침에 의한 방식. 불변 도메인은 항원 결합에 직접 관여하지 않지만 항체 의존적인 세포 세포독성(ADCC), 상보체 의존성 세포독성(CDC) 및 항체 의존성 세포 식세포작용(ADCP)에서 항체의 관여와 같은 다양한 Ig 작용제 기능을 매개한다.
척추동물 면역글로불린의 경쇄는 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로 하여, 2개의 명확하게 구별되는 부류, 카파(κ) 및 람다(λ) 중 하나에 지정된다. 비교에 의해, 포유동물 면역글로불린의 중쇄는 불변 도메인의 서열에 따라 5개의 주요 부류 중 하나로 지정된다: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM. IgG 및 IgA는 소부류(동형), 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 추가로 분리된다. 면역글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ로 불린다. 천연 면역글로불린의 부류의 소단위 구조 및 3차원 배치는 잘 공지되어 있다.
용어, "항체", "항-IL-23p19 항체", "사람화된 항-IL-23p19 항체", "사람화된 항-IL-23p19 에피토프 항체", 및 "변이체 사람화된 항-IL-23p19 에피토프 항체"는 구체적으로 단클론 항체(완전한 길이의 단클론 항체 포함), 다클론 항체, 다중특이적인 항체(예를 들면, 이특이적 항체), 및 가변 도메인 및 바람직한 생물학적 활성, 예를 들면, IL-23p19 결합을 나타내는 항체의 다른 부위와 같은 항체 단편을 포함한다. 용어 "단클론 항체"(mAb)는 단일의 항원 결정인자, "에피토프"에 대해 지시되는, 고도로 특이적인 항체를 말한다. 따라서, 수식어 "단클론"은 동일한 에피토프에 대한 항체의 지표이며 어떠한 특수 방법에 의해 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 고려되지 않아야 한다. 단클론 항체는 예를 들면, 하이브리도마 방법(참조: Kohler et al., 1975, Nature 256:495), 또는 당해 분야에 공지된 재조합체 DNA 방법(참조: 예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호), 또는 문헌[참조: Clackson et al., 1991, Nature 352: 624-628, 및 Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222: 581-597]에 기재된 기술을 사용한, 파아지 항체 라이브러리를 사용하여 재조합적으로 생산된 단클론의 분리 방법을 포함하는, 당해 분야에 공지된 임의의 기술 또는 방법론에 의해 제조될 수 있다.
용어 "단량체"는 항체의 동종 형태를 말한다. 예를 들면, 완전한 길이의 항체의 경우, 단량체는 2개의 동일한 중쇄 및 2개의 동일한 경쇄를 갖는 단량체 항체를 의미한다.
키메라 항체는 하나의 종(예를 들면, 마우스와 같은 비-사람 포유동물)으로부터의 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 및 다른 종(예를 들면, 사람) 항체의 중쇄 및 경쇄 불변 영역으로 이루어지며 제1 종(예를 들면, 마우스)으로부터의 항체의 가변 영역을 암호화하는 DNA 서열을 제2 종(예를 들면, 사람)으로부터의 항체의 불변 영역에 대한 DNA 서열에 연결시키고 숙주를 연결된 서열을 함유하는 발현 벡터로 형질전환하여 이것이 키메라 항체를 생산하도록 함으로써 수득할 수 있다. 또는, 키메라 항체는 또한, 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 영역 또는 도메인이 다른 면역글로불린 부류 또는 동형으로부터, 또는 컨센서스(consensus) 또는 배선 서열로부터의 단클론 항체내 상응하는 서열과 동일하거나, 이와 상동성이거나, 이의 변이체일 수 있다. 키메라 항체는 이러한 항체의 단편을 포함할 수 있으며, 단, 항체 단편은 이의 모 항체의 바람직한 생물학적 활성, 예를 들면, 동일한 에피토프에 대한 결합을 나타낸다(참조: 예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호; 및 Morrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855).
용어, "항체 단편", "항-IL-23p19 항체 단편", "항-IL-23p19 에피토프 항체 단편", "사람화된 항-IL-23p19 항체 단편", "사람화된 항-IL-23p19 에피토프 항체 단편", "변이체 사람화된 항-IL-23p19 에피토프 항체 단편"은 완전한 길이의 항-IL-23p19 항체의 일부를 말하며, 여기서 가변 영역 또는 기능성 능력은 보유되어, 예를 들면, 특이적인 IL-23p19 에피토프 결합을 보유한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, scFv 및 scFv-Fc 단편, 디아바디(diabody), 선형 항체, 단일쇄 항체, 미니바디(minibody), 항체 단편으로부터 형성된 디아바디, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적인 항체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
완전한 길이의 항체는 파파인 또는 펩신과 같은 효소로 처리하여 유용한 항체 단편을 생성할 수 있다. 파파인 분해는 "Fab" 단편으로 불리는 2개의 동일한 항원-결합 항체 단편을 생산하는데 사용되며, 각각은 단일의 항원-결합 부위, 및 잔류성 "Fc" 단편을 갖는다. Fab 단편은 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 CH1 도메인을 함유한다. 펩신 처리로 2개의 항원-결합 부위를 가지고 여전히 항원과 교차-결합할 수 있는 F(ab')2 단편을 수득한다.
'Fab' 단편은 CH1 도메인의 C-말단에서 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 추가의 잔기의 존재에 의해 Fab 단편과는 상이하다. F(ab')2 항체 단편은 힌지 영역내 시스테인 잔기에 의해 연결된 Fab' 단편의 쌍이다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되어 있다.
"Fv" 단편은 단단한, 비-공유결합적 연합내 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이합체로 이루어진 완전한 항원-인식 및 결합 부위를 함유한다. 당해 구조에서, 각각의 가변 도메인의 3개의 CDR은 상호작용하여 VH-VL 이합체의 표면에서 항원-결합 부위를 정의한다. 총괄적으로, 6개의 CDR은 항체에 대해 항원-결합 특이성을 부여한다.
"단일쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 단일쇄 Fv 변이체이며, 여기서 도메인은 단일의 폴리펩타이드 쇄내에 존재한다. 단일쇄 Fv는 항원을 인식하여 결합할 수 있다. scFv 폴리펩타이드는 임의로 또한 VH 도메인과 VL 도메인 사이에 위치한 폴리펩타이드 링커(linker)를 함유함으로써 scFv에 의한 항원 결합에 대해 바람직한 3차원 구조의 형성을 촉진한다(참조: 예를 들면, Pluckthun, 1994, In The Pharmacology of monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315).
"디아바디"는 2개의 항원-결합 부위를 지닌 소 항체 단편을 말하며, 각각의 단편은 동일한 폴리펩타이드 쇄(VH-VL 또는 VL-VH)내 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 디아바디는 문헌[참조: Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448]에 보다 상세히 기재되어 있다.
다른 인식된 항체 단편은 탄뎀(tandem) Fd 분절(VH-CH1-VH-CH1)을 포함함으로써 항원 결합 영역의 쌍을 형성하는 것들을 포함한다. 이들 "선형 항체"는 예를 들면, 문헌[참조: Zapata et al. 1995, Protein Eng. 8(10):1057-1062]에 기재된 바와 같이, 이특이적 또는 일특이적일 수 있다.
"사람화된 항체" 또는 "사람화된 항체 단편"은 예정된 항원에 결합할 수 있고, 실질적으로 사람 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 FR 및 실질적으로 비-사람 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 CDR을 포함하는, 면역글로불린 아미노산 서열 변이체, 또는 이의 단편을 포함하는 키메라 항체의 특수 유형이다. "도입(import)" 서열로서 흔히 언급된 이러한 비-사람 아미노산 서열은 전형적으로 "도입" 항체 도메인, 특히 가변 도메인으로부터 취해진다. 일반적으로, 사람화된 항체는 사람 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인의 FR들 사이에 삽입된, 비-사람 항체의 적어도 CDR 또는 HVL을 포함한다. 본 발명은 사람 배선 서열 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 FR들 사이에 삽입된 표 3 및 4에 나타낸 마우스 단클론 항체 또는 사람화된 CDR로부터 기원한 CDR을 함유하는 특이적인 사람화된 항-IL-23p19 항체를 기술한다. 특정의 마우스 FR 잔기는 사람화된 항체의 기능에 중요할 수 있으므로 특정의 사람 배선 서열 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 잔기는 상응하는 마우스 서열의 것과 동일하도록 변형된다.
다른 국면에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체는 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의, 가변 도메인(예를 들면, Fab, Fab', F(ab')2, Fabc, 및 Fv 단편에 함유됨) 중 실질적으로 모두를 포함하며, 여기서 CDR 중 모두, 또는 실질적으로 모두는 비-사람 면역글로불린의 것에 상응하며, 구체적으로 본원에서, 모든 CDR은 본원의 하기의 표 1 내지 4에 상세히 기술한 바와 같은 마우스 또는 사람화된 서열이며, FR의 모두, 또는 실질적으로 모두는 사람 면역글로불린 컨센서스(consensus) 또는 배선 서열의 것이다. 다른 국면에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체는 또한 면역글로불린 Fc 영역의 적어도 일부, 전형적으로 사람 면역글로불린의 것을 포함한다. 통상적으로, 항체는 경쇄 및 중쇄의 적어도 가변 도메인을 둘 다 함유할 것이다. 항체는 또한 적절하게는 중쇄의 하나 이상의 CH1, 힌지, CH2, CH3, 및/또는 CH4 영역을 포함할 수 있다.
사람화된 항-IL-23p19 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 포함하는 면역글로불린의 어떠한 부류, 및 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2를 포함하는 어떠한 동형 중에서 선택될 수 있다. 예를 들면, 불변 도메인은 상보체 고정된 불변 도메인일 수 있으며, 여기서 사람화된 항체가 세포독성 활성을 나타내고, 동형이 전형적으로 IgG1인 것이 바람직하다. 이러한 세포독성 활성이 바람직하지 않은 경우, 불변 도메인은 다른 동형, 예를 들면, IgG2일 수 있다. 대안의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하나 이상의 면역글로불린 부류 또는 동형으로부터의 서열을 포함할 수 있으며, 바람직한 효과기 기능을 최적화하기 위한 특수한 불변 도메인의 선택은 당해 분야의 통상의 기술내에 있다. 구체적인 양태에서, 본 발명은 IgG1 항체 및 보다 특히 효과기 기능의 녹-아웃(knock-out)이 존재하는 IgG1 항체인, 항체를 제공한다.
사람화된 항-IL-23p19 항체의 FR 및 CDR, 또는 HVL은 모 서열에 정밀하게 상응할 필요가 없다. 예를 들어, 도입 CDR, 또는 HVL, 또는 컨센서스 또는 배선 FR 서열내 하나 이상의 잔기는 치환, 삽입 또는 결실에 의해 변경(예를 들면, 돌연변이)됨으로써 수득되는 아미노산 잔기는 모 서열내 상응하는 위치에서 원래의 잔기와 더 이상 동일하지 않지만, 그럼에도 불구하고 항체는 IL-23p19에 대한 결합의 기능을 보유한다. 이러한 변경은 전형적으로 대규모이지 않으며 보존된 변경일 것이다. 일반적으로, 사람화된 항체 잔기의 적어도 75%, 보다 흔히 적어도 90%, 및 가장 흔히 95% 이상, 또는 98% 이상 또는 99% 이상은 모 컨센서스 또는 배선 FR 및 도입 CDR 서열의 것에 상응할 것이다.
중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역 사이의 인터페이스("VL-VH 인터페이스")에 영향을 미치는 면역글로불린 잔기는 서로에 대해 2개의 쇄의 근접성 또는 배향에 영향을 미치는 것들이다. 쇄간 상호작용에 관여할 수 있는 특정 잔기는 VL 잔기 34, 36, 38, 44, 46, 87, 89, 91, 96, 및 98번 및 VH 잔기 35, 37, 39, 45, 47, 91, 93, 95, 100, 및 103번[문헌(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987))에 설정된 번호매김 시스템 이용]을 포함한다. 미국 특허 제6,407,213호는 또한, VL 잔기 43 및 85, 및 VH 잔기 43 및 60과 같은 잔기가 이러한 상호작용에 관여할 수 있음을 논의한다. 이들 잔기들이 사람 IgG만에 대해 나타내는 경우, 이들은 종을 따라 적용가능하다. 쇄간 상호작용에 관여하는 것으로 충분히 예상되는 중요한 항체 잔기는 컨센서스 서열내로의 치환을 위해 선택된다.
용어 "컨센서스 서열" 및 "컨센서스 항체"는 어떠한 특수 부류, 동형, 또는 소단위 구조, 예를 들면, 사람 면역글로불린 가변 도메인의 모든 면역글로불린내 각각의 위치에서 가장 흔히 존재하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열을 말한다. 컨센서스 서열은 특수한 종 또는 많은 종의 면역글로불린을 기반으로 할 수 있다. "컨센서스" 서열, 구조, 또는 항체는 특정 양태에서 기재된 바와 같은 컨센서스 사람 서열을 포함하며, 어떠한 특수 부류, 동형, 또는 소단위 구조의 모든 사람 면역글로불린에서의 각각의 위치에 가장 흔히 존재하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열을 언급하는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 컨센서스 서열은 각각의 위치에서 하나 이상의 공지된 면역글로불린에 존재하지만, 어떠한 단일의 면역글로불린의 전체 아미노산 서열을 정확히 중복하지 않을 수 있는 아미노산을 각각의 위치에서 갖는 아미노산 서열을 함유한다. 가변 영역 컨센서스 서열은 어떠한 천연적으로 생산된 항체 또는 면역글로불린(참조: Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.) 및 이의 변이체로부터 수득되지 않는다. 중쇄 및 경쇄 컨센서스 서열의 FR은 사람화된 항-IL-23p19 항체의 제조를 위한 유용한 서열을 제공한다(참조: 예를 들면, 미국 특허 제6,037,454호 및 제6,054,297호).
사람 배선 서열은 사람 집단에서 천연적으로 발견된다. 이들 배선 유전자의 조합은 항체 다양성을 생성한다. 항체의 경쇄에 대한 배선 항체 서열은 보존된 사람 배선 카파 또는 람다 v-유전자 및 j-유전자로부터 온다. 유사하게, 중쇄 서열은 배선 v-, d- 및 j-유전자로부터 온다(참조: LeFranc, M-P, and LeFranc, G, "The Immunoglobulin Facts Book"Academic Press, 2001).
본원에 사용된 것으로서, "변이체", "항-IL-23p19 변이체", "사람화된 항- IL-23p19 변이체", 또는 "변이체 사람화된 항-IL-23p19" 각각은 표 1에 나타낸 바와 같은 서열 중 어느 것으로부터의 적어도 경쇄 가변 뮤린 CDR 또는 표 2에 나타낸 바와 같은 뮤린 단클론 항체로부터 기원한 중쇄 뮤린 CDR 서열을 갖는 사람화된 항-IL-23p19 항체를 말한다. 변이체는 하나 또는 둘다의 경쇄 또는 중쇄 가변 도메인내 하나 이상의 아미노산 변화를 갖는 것을 포함하며, 단, 아미노산 변화는 IL-23p19에 대한 항체의 결합을 실질적으로 손상시키지 않는다. 본원에서 생산된 예시적인 사람화된 항체는 항체 A, 항체 B, 항체 C 및 항체 D, 및 각각 서열 번호 174 및 180, 및 서열 번호 176 및 178에 나타낸 이의 다양한 경쇄 및 중쇄로서 지정된 것들을 포함한다.
"분리된" 항체는 이의 천연 환경의 성분으로부터 확인되고 분리되고/되거나 회수된 것이다. 항체의 천연 환경의 오염 성분은 항체의 진단학적 또는 치료학적 용도에 간섭할 수 있는 물질들이며, 효소, 호르몬, 또는 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질일 수 있다. 하나의 국면에서, 항체는 항체의 중량당 적어도 95% 이상의 분리율로 정제될 것이다.
분리된 항체는, 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이므로, 이것이 생산되는 재조합체 세포내에서 동일계 항체를 포함한다. 그러나, 통상적으로, 분리된 항체는, 재조합체 세포 물질이 제거되는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
용어 "항체 수행능(antibody performance)"은 생체내에서 항원의 항체 인식 또는 항체의 효능에 기여하는 인자를 말한다. 항체의 아미노산 서열내 변화는 폴딩(folding)과 같은 항체 특성에 영향을 미칠 수 있으며, 항원에 결합하는 항체의 초기 비율(ka), 항원으로부터 항체의 해리 상수(kd), 항원에 대한 항체의 친화성 상수(Kd), 항체의 구조, 단백질 안정성, 및 항체의 반감기와 같은 물리적 인자에 영향을 미칠 수 있다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "태그된 에피토프(epitope tagged)"는 "에피토프 태그"에 융합된 항-IL-23p19 항체를 말한다. "에피토프 태그"는 충분한 수의 아미노산을 가짐으로써 항체 생산을 위한 에피토프를 제공하지만, 사람화된 항-IL-23p19 항체의 바람직한 활성을 방해하지 않도록 설계된 폴리펩타이드이다. 에피토프 태그는 일반적으로 충분히 독특해서, 에피토프 태그에 대해 생성된 항체는 다른 에피토프와 실질적으로 교차-반응하지 않는다. 적합한 태그 폴리펩타이드는 일반적으로 적어도 6개의 아미노산 잔기를 함유하며 일반적으로 약 8 내지 50개 아미노산 잔기, 또는 약 9 내지 30개 잔기를 함유한다. 에피토프 태그 및, 에피토프에 결합하는 항체의 예는 flu HA 태그 폴리펩타이드 및 이의 항체 12CA5(참조: Field et al., 1988 Mol. Cell. Biol. 8: 2159-2165; c-myc 태그 및 이에 대한 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 및 9E10 항체[참조: Evan et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5(12):3610-3616]; 및 헤르페스 단성 바이러스 당단백질 D(gD) 태그 및 이의 항체[참조: Paborsky et al. 1990, Protein Engineering 3(6): 547-553]를 포함한다. 특정 양태에서, 에피토프 태그는 "구제(salvage) 수용체 결합 에피토프"이다. 본원에 사용된 것으로서, 용어 "구제 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기를 증가시키는데 관여하는 IgG 분자(예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 말한다.
일부 양태에서, 본 발명의 항체는 세포독성제에 접합될 수 있다. 이는 세포의 기능을 억제하거나 방지하고/하거나 세포의 파괴를 유발하는 임의의 물질이다. 당해 용어는 방사활성 동위원소(예를 들면, I131, I125, Y90, 및 Re186), 화학치료제, 및 세균, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소, 및 이의 단편을 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 세포독성제는 표준 과정을 사용하여 본 발명의 사람화된 항체에 커플링시킬 수 있으며, 예를 들면 항체를 사용한 치료요법에 대해 처방된 환자를 치료하는데 사용될 수 있다.
"화학치료제"는 암의 치료시 유용한 화학적 화합물이다. 본 발명의 치료용 항체와 함께 접합될 수 있는 화학치료제의 다수의 예가 존재한다. 이러한 화학치료제의 예는 티오테파 및 사이클로포스파미드와 같은 알킬화제; 부설판, 임프로설판, 및 피포설판과 같은 알킬 설포네이트; 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파와 같은 아지리딘; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드, 및 트리메틸롤로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸라멜라민; 아세토게닌(특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신(합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(이의 아도젤레신, 카르젤레신, 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신(특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴, 아우리스타틴(유사체 모노메틸-아우리스타틴 E 및 모노메틸-아우리스타틴 F); 듀오카르마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CBI-TMI 포함); 엘레우테로빈; 판크레아티스타틴; 사르코딕틴; 스폰기스타틴; 클로람부실, 클로마파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스킨과 같은 질소 무스타드(nitrogen mustad); 트로포스파미드, 우라실 무스타드; 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴과 같은 니트로스우레아; 에네다인 항생제(예를 들면, 칼리체아미신, 특히 칼리체미신 감마 1I 및 칼리체아미신 phil1(참조: 예를 들면, Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186)과 같은 항생제; 다이네미신 A를 포함하는 다이네미신; 클로드로네이트와 같은 비스포스포네이트; 에스페라미신; 및 네오카르지노스타틴 크로모포어 및 관련된 크로모프로테인 에네디인 항생제 크로모모포어), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르루이신, 독소루비신(AdriamycinTM)(모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 C와 같은 미토마이신, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU)와 같은 항-대사물질; 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트와 같은 엽산 유사체; 플루다라빈, 6-머캅토푸린, 티아미프린, 티오구아닌과 같은 푸린 유사체; 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 사이타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘과 같은 피리미딘 유사체; 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스톨락톤과 같은 안드로겐; 아미노글루테쓰이미드, 미토탄, 트릴로스탄과 같은 항-아드라날; 프롤린산과 같은 엽산 보충제; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데모콜신; 디아지퀴온; 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 마이탄신 및 안사미토신과 같은 마이탄시노이드; 미토구아존, 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸하이드라지드; 프로카르바진; PSK®; 라족산; 리족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지퀴온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미타브로니톨; 미톨락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들면, 파클리탁셀[TAXOL®, 제조원: 브리스톨-마이어스 스퀴브 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology), 미국 뉴저지주 프린스톤 소재] 및 도세탁셀[TAXOTERE®, 제조원: 론-폴랑 로러(Rhone-Poulenc Rorer), 프랑스 안토니 소재]; 클로람부실; 겜시타빈(GemzarTM); 6-티오구아닌; 머캅토푸린; 메토트렉세이트; 시스플라틴 및 카르보플라틴과 같은 백금 유사체; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드(VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈(NavelbineTM); 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 크셀로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노산과 같은 레티노이드; 카펙시타빈; 및 상기 중의 어느 것의 약제학적으로 허용되는 염, 산, 또는 유도체를 포함한다. 또한 당해 정의에는 항-에스트로겐 및 예를 들면, 타목시펜(NolvadexTM 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 토레미펜(FarestonTM)을 포함하는 선택적인 에스트로겐 수용체 조절인자(SERM)와 같이 종양에서 호르몬 작용을 조절하거나 억제하기 위해 작용하는 항-호르몬제; 효소 아로마타제를 억제하고, 부신에서 에스트로겐 생산을 조절하는 아로마타제 억제제, 예를 들면, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테쓰이미드, 메게스트롤 아세테이트(MegaceTM), 엑세메스탄, 포르메스탄, 파드로졸, 보로졸(RivisorTM), 레트로졸(FemaraTM), 및 아나스트로졸(ArimidexTM); 및 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드, 및 고세렐린과 같은 항-안드로겐; 및 상기 중의 어느 것의 약제학적으로 허용되는 염, 산, 또는 유도체가 포함된다. 이들 제제들 중의 어느 하나 이상은 본 발명의 사람화된 항체와 접합하여 각종 장애의 치료를 위한 유용한 치료제를 제공할 수 있다.
항체는 또한 전구약물(prodrug)과 접합될 수 있다. "전구약물"은 효소적으로 활성화되거나 보다 활성인 형태로 전환될 수 있고 모 약물과 비교하여 종양 세포에 대해 거의 세포독성이 없는 약제학적으로 활성인 물질의 전구체 또는 유도체 형태이다[참조: 예를 들면, Wilman, 1986, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy", In Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast and Stella et al., 1985, "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery, In: "Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 247-267, Humana Press]. 유용한 전구약물은 보다 활성인 세포독성 유리 약물로 전환될 수 있는 포스페이트-함유 전구약물, 티오포스페이트-함유 전구약물, 설페이트-함유 전구약물, 펩타이드-함유 전구약물, D-아미노산-변형된 전구약물, 글리코실화된 전구약물, β-락탐-함유 전구약물, 임의 치환된 페녹시아세트아미드-함유 전구약물, 및 임의로 치환된 페닐아세트아미드-함유 전구약물, 5-플루오로사이토신 및 다른 5-플루오로우리딘 전구약물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 전구약물 형태로 유도체화될 수 있는 세포독성 약물의 예는 위에서 기술한 화학치료요법제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
진단학적 및 치료학적 모니터링 목적을 위해, 본 발명의 항체를 또한 표지(label)와, 표지 단독 또는 표지와 추가의 제2 제제(전구약물, 화학치료제 등)에 접합시킬 수 있다. 다른 제2 제제와 구별되는 것으로서 표지는 검출가능한 화합물 또는 조성물인 제제를 말하며 이는 본 발명의 사람화된 항체에 직접 또는 간접적으로 접합될 수 있다. 표지 자체는 검출가능(예를 들면, 방사선동위원소 표지 또는 형광성 표지)하거나, 효소 표지의 경우에, 검출가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변경을 촉매화할 수 있다. 표지된 사람화된 항-IL-23p19 항체는 제조되어 시험관내 및 생체내 진단을 포함하는 다양한 적용에서 사용될 수 있다.
본 발명의 항체는 생체내에서 이의 전달에 영향을 미치기 위하여 리포좀 제제의 일부로서 제형화될 수 있다. "리포좀"은 각종 유형의 지질, 인지질, 및/또는 표면활성제로 구성된 작은 소포(vesicle)이다. 리포좀은 임의로, 하나 이상의 약제학적으로 활성인 제제 및/또는 표지에 커플링되거나 이와 조합된, 본원에 기재된 사람화된 항-IL-23p19 항체와 같은 화합물 또는 제형을 포유동물로 전달하기에 유용하다. 리포좀 성분은 일반적으로 생물학적 막의 지질 정렬과 유사한 이중층 형성으로 정렬된다.
본 발명의 특정 국면은 본 발명의 사람화된 항체의 하나 이상의 도메인을 암호화하는 분리된 핵산에 관한 것이다. "분리된" 핵산 분자는, 항체 핵산의 천연 공급원과 통상적으로 연합되는 적어도 하나의 오염물질 핵산 분자로부터 확인되고 분리된 핵산 분자이다. 분리된 핵산 분자는 천연 세포에 존재하므로 핵산 분자와는 구별된다.
본 발명의 각종 국면에서 사람화된 항체의 하나 이상의 도메인은 재조합적으로 발현될 것이다. 이러한 제조합체 발현은 하나 이상의 제어 서열, 즉, 특수 숙주 유기체내에서 작동적으로 연결된 암호화 서열의 발현을 위해 필수적인 폴리뉴클레오타이드 서열을 사용할 수 있다. 원핵 세포에서 사용하기에 적합한 제어 서열은 예를 들면, 프로모터, 오퍼레이터(operator), 및 리보소옴 결합 부위 서열을 포함한다. 진핵세포 조절 서열은 프로모터, 폴리아데닐화 시그날, 및 인핸서(enhancer)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이들 조절 서열은 원핵 및 진핵 숙주 세포내에서 사람화된 항-IL-23p19 항체의 발현 및 생산에 이용될 수 있다.
핵산 서열은 다른 핵산 서열과 기능적 관계로 위치하는 경우 "작동적으로 연결"된다. 예를 들어, 핵산 전서열(presequence) 또는 분비 리더는 폴리펩타이드의 분비에 관여하는 전단백질로서 발현되는 경우 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산에 작동적으로 연결되며; 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 미치는 경우 암호화 서열에 작동적으로 연결되거나; 리보소옴 결합 부위는 해독이 촉진되도록 위치하는 경우 암호화 서열에 작동적으로 연결된다. 일반적으로, "작동적으로 연결된"은, 연결된 DNA 서열이 연속적이며, 분비성 리더의 경우에, 연속성이고 판독 프레임내에 있음을 의미한다. 그러나, 인핸서는 임의로 연속적이다. 연결은 편리한 제한 부위에서 연결하여 달성할 수 있다. 이러한 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고뉴클레오타이드 어댑터(adaptor) 또는 링커를 사용할 수 있다.
본원에 사용된 것으로서, 표현 "세포", "세포주", 및 "세포 배양물"은 상호교환적으로 사용되며, 이러한 정의 모두는 이의 후대세포를 포함한다. 따라서, "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"는 주요 대상체 세포 및 이전의 수와 관계없이 이로부터 기원한 배양물을 포함한다.
치료 목적을 위한 용어 "포유동물"은 사람, 사육 동물 및 농장 동물, 및 동물원, 운동, 또는 애완 동물, 예를 들면, 개, 말, 고양이, 소 등을 포함하는 포유동물로서 분류된 임의의 동물을 말한다. 바람직하게는, 포유동물은 사람이다.
본원에 사용된 것으로서, "장애"는 본원에 기재된 사람화된 항-IL-23p19 항체를 사용한 처리로부터 유리할 수 있는 어떠한 조건이다. 이는, 포유동물이 문제의 장애로 예비진단되는 병리학적 상태를 포함하는 만성 및 급성 장애 또는 질환을 포함한다. 본원에서 치료될 비-제한적 예 또는 장애는 염증, 혈관형성, 자가면역 및 면역학적 장애, 호흡기 장애, 암, 혈액학성 악성종양, 양성 및 악성 종양, 백혈병 및 림프구 악성종양을 포함한다.
용어 "암" 및 "암성"은 조절되지 않는 세포 성장을 전형적으로 특징으로 하는 포유동물에서 생리학적 상태를 말하거나 설명한다. 암의 예는 암종, 림프종, 아세포종, 육종, 및 백혈병을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "IL-23과 관련된 장애" 또는 "IL-23과 관련된 질환"은, IL-23 활성이 질환에 기여하고 전형적으로 IL-23이 비정상적으로 발현되는 상태를 말한다. IL-23과 관련된 장애는 자가면역 장애 및 염증 장애와 같이, 면역계의 질환 및 장애를 포함한다. 이러한 상태는 류마티스 관절염(RA), 전신 홍반성 루프스(SLE), 피부경화증, 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 다발 경화증, 건선, 건선 관절염, 염증성 장 질환[예를 들면, 궤양성 대장염 및 크론병(Crohn's disease)], 폐 염증, 천식, 특발성 저혈소판자색반(idiopathic thrombocytopenic purara: ITP) 및 강직척추염을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
용어 "정맥내 주입"은 동물 또는 사람 환자의 정맥내에 대략 15분 이상, 일반적으로 대략 30 내지 90분의 기간에 걸친 제제의 도입을 말한다.
용어 "정맥내 볼러스(intravenous bolus)" 또는 "정맥내 푸쉬(intravenous push)"는 동물 또는 사람의 정맥내로 약물을 투여하여 신체가 약물을 대략 15분 이하, 일반적으로 5분 이하에서 제공받음을 말한다.
용어 "피하 투여"는 동물 또는 사람 환자의 피부 아래에, 바람직하게는 피부와 기초 조직(underlying tissue) 사이의 포켓(pocket)내에, 약물 용기(receptacle)로부터의 비교적 느리고 서방출에 의한 제제의 도입을 나타낸다. 기초 조직으로부터 위로 및 떨어져서 피부를 핀칭(pinching) 또는 드로잉(drawing)하면 포켓을 생성할 수 있다.
용어 "피하 주입"은 동물 또는 사람 환자의 피부 아래에, 바람직하게는 피부와 기초 조직 사이의 포켓내에, 30분 이하, 또는 90분 이하를 포함하나, 이에 한정되지 않는 기간 동안 약물 용기로부터 비교적 느리고, 서방출에 의한 약물의 도입을 말한다. 임의로, 주입은 동물 또는 사람 환자의 피부 아래에 이식된 약물 전달 펌프의 피하 이식에 의해 이루어질 수 있으며, 여기서 펌프는 예정된 양의 약물을 30분, 90분, 또는 치료 요법의 길이 전체의 기간과 같은 예정된 기간 동안 전달한다.
용어 "피하 볼러스"는 동물 또는 사람 환자의 피부 아래에 약물을 투여하는 것을 말하며, 여기서 볼러스 약물 전달은 대략 15분 미만이고; 다른 국면에서 5분 미만이며, 또 다른 국면에서 60초 미만이다. 심지어 추가의 다른 국면에서, 투여는 피부와 기초 조직 사이의 포켓내이며, 여기서 포켓은 기초 조직으로부터 위로 및 떨어져서 핀칭(pinching) 또는 드로잉(drawing)함으로써 생성시킬 수 있다.
용어 "치료학적 유효량"은 치료되는 장애의 증상들 중 하나 이상을 경감시키거나 완화시키는 활성제의 양을 말하는데 사용된다. 다른 국면에서, 치료학적 유효량은 예를 들면 질환 진행을 지연시키는데 효과적인 것으로 입증된 표적 혈청 농도를 말한다. 효능은 치료되는 상태에 따라, 통상의 방법으로 측정할 수 있다.
본원에 사용된 것으로서, 용어 "치료" 및 "치료요법" 등은 하나 이상의 증상의 완화 또는 경감, 질환 또는 장애의 진행의 회귀, 지연 또는 중지를 포함하나, 이에 한정되지 않는 어떠한 임상적으로 바람직하거나 유리한 효과를 초래하는 질환 또는 장애에 대한 치료학적 및 예방학적, 또는 억제성 척도를 포함함을 의미한다. 따라서, 예를 들면, 용어 치료는 질환 또는 장애의 증상의 발병 이전 또는 이후에 제제를 투여함으로써 질환 또는 장애의 하나 이상의 징후를 예방하거나 제거함을 포함한다. 다른 예로서, 용어는 질환의 임상적 만연 후 제제를 투여하여 질환의 증상을 방지함을 포함한다. 또한, 발병 후 및 임상 증상 후 제제의 투여는, 투여가 조직 손상의 정도 또는 전이의 양 또는 정도와 같이, 질환 또는 장애의 임상적 매개변수에 영향을 미치는 경우에 개발되어 왔으며, 치료가 질환의 완화를 초래하거나 초래하지 않는 것에 상관없이, 본원에서 사용된 것으로서 "치료" 또는 "치료요법"을 포함한다. 또한, 본 발명의 조성물이 단독으로 또는 다른 치료제와 병용되어 사람화된 항-IL-23p19 항체 조성물을 사용하지 않은 상태에서 증상과 비교하여 치료되는 장애의 적어도 하나의 증상을 완화하거나 개선시키는 한, 당해 결과는, 장애의 모든 증상들이 완화되거나 완화되지 않는 것에 상관없이 근본적인 장애의 효과적인 치료로 고려되어야 한다.
용어 "포장 삽입물(package insert)"은 처방, 용도, 투여, 사용금지 사유 및/또는 이러한 치료학적 생성물의 사용에 관한 경고에 대한 정보를 함유하는, 치료학적 생성물의 시판되는 포장 속에 통상적으로 포함된 지시사항을 나타내기 위해 사용된다.
항체
하나의 국면에서, 항-IL-23 항체, 특히 사람화된 항-IL-23p19 항체, 및 하나 이상의 항-IL-23 항체, 특히 본 발명의 하나 이상의 사람화된 항-IL-23p19 항체를 포함하는 조성물 및 제조 문헌이 본원에 설명되고 기재되어 있다. 또한 항-IL-23 항체, 특히 사람화된 항-IL-23p19 항체의 항원-결합 단편을 포함하는 결합제가 기재되어 있다. 사람화된 항-IL-23p19 항체 및 결합제는 만성 자가면역 및 염증 질환에 기여하는, Th17 관련된 사이토킨의 생산을 억제할 수 있다. 따라서, 사람화된 항-IL-23p19 항체 및 결합제는 다양한 질환 또는 장애의 치료에 사용될 수 있다. 사람화된 항-IL-23p19 항체 및 IL-23p19 결합제 각각은 IL-23p19 에피토프(즉, 항원-결합 단편)를 특이적으로 인식하는 적어도 하나의 부위를 포함한다.
초기 특성화에서 마우스 항체는 IL-23p19 결합 특성화를 기초로 선택되었다.
따라서 하나의 국면에서, 본 발명의 항체는, IL-23, 특히 사람 IL-23에 대한 KD가 100pM 미만이다. 다른 국면에서, 본 발명의 항체는, KD가 40pM 미만이다. 다른 국면에서, 본 발명의 항체는, KD가 20pM 미만이다. 다른 국면에서, 본 발명의 항체는, KD가 10pM 미만이다. 다른 국면에서, 본 발명의 단클론 항체는, KD가 1pM 미만이다.
선택된 마우스 항체는 표 1 및 2에 나타낸 바와 같이 다음의 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 갖는다:
Figure 112013039021542-pct00001
Figure 112013039021542-pct00002
Figure 112013039021542-pct00003
Figure 112013039021542-pct00004
Figure 112013039021542-pct00005
Figure 112013039021542-pct00006
사람 골격 서열은 골격 상동성, CDR 구조, 보존된 원형(canonical) 잔기, 보존된 인터페이스 패킹(interface packing) 잔기 및 기타 매개변수를 기초로 마우스 리드의 각각에 대해 선택되었다.
각종 마우스 항체의 마우스 경쇄 및 중쇄 CDR은 각각 표 3 및 표 4에 나타낸다. 표 4는 또한 사람화 공정을 통해 마우스 항체 6B8로부터 기원한 3개의 중쇄 CDR을 나타낸다.
Figure 112013039021542-pct00007
Figure 112013039021542-pct00008
표 3 및 4에 나열된 CDR은 쵸티아 번호매김 시스템(Chothia numbering system)[참조: Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948]을 사용하여 정의된다.
키메라 모 Fab와 비교하여 보다 우수하거나 동등한 결합을 나타낸 Fab를 IgG로의 전환을 위해 선택하였다. 6B8을 IgG1KO 양식으로 전환시켰다. IgG1KO[효과기 기능의 녹-아웃(knock-out)]은 Fc 영역내에 2개의 돌연변이, Leu234Ala 및 Leu235Ala를 가지며, 이는 FcγR 및 상보체 결합과 같은 효과기 기능을 감소시킨다. IgG 양식은 문헌[참조: 예를 들면, Hezareh et al. (2001) Journal of Virology 75: 12161-12168]에 기재되어 있다. 실시예 1은 사람화 공정을 보다 상세히 기술하고 있다. 이러한 사람화의 결과는 사람화된 항체 서열을 생성하였다. 마우스 항체 6B8로부터 기원한 사람화된 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 대표적인 번호는 표 5 및 6에 제공되고 나타낸다. 마우스 항체 6B8로부터 기원한 사람화된 경쇄와 중쇄 가변 영역 및 마우스 항체 6B8로부터의 경쇄 및 중쇄 가변 영역 사이의 정렬은 도 1에 나타낸다.
마우스 항체 6B8로부터 기원한 사람화된 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 선택된 조합은 항체 A, B, C 및 D를 생성하였다:
항체 A: IgK-66(중쇄 가변 영역 6B8CVH-02 및 경쇄 가변 영역 6B8CVK-66)을 지닌 6B8-IgG1KO-2;
항체 B: IgK-66(중쇄 가변 영역 6B8CVH-05 및 경쇄 가변 영역 6B8CVK-66)을 지닌 6B8-IgG1KO-5;
항체 C: IgK-65(중쇄 가변 영역 6B8CVH-02 및 경쇄 가변 영역 6B8CVK-65)을 지닌 6B8-IgG1KO-2;
항체 D: IgK-65(중쇄 가변 영역 6B8CVH-05 및 경쇄 가변 영역 6B8CVK-65)을 지닌 6B8-IgG1KO-5.
항체 A, B, C 및 D는 표 7에 나타낸 중쇄 및 경쇄 서열을 가진다.
Figure 112013039021542-pct00009
Figure 112013039021542-pct00010
Figure 112013039021542-pct00011
Figure 112013039021542-pct00012
Figure 112013039021542-pct00013
Figure 112013039021542-pct00014
Figure 112013039021542-pct00015
Figure 112013039021542-pct00016
항체 A, B, C, 및 D의 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 상기 표 7에 밑줄쳐져 있다.
하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 중 적어도 하나를 갖는다. 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 적어도 2개, 또는 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11개의 하기 특성의 임의의 조합을 갖는다. 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성 모두를 갖는다.
· 사람 IL-23에 대한 KD ≤ 1 pM(50% 사람 혈청에 있어서 결합 온-속도(binding on-rate)에서 이동 없음)
· 시험관내에서 사람 IL-23R/Fc에 대한 IL-23 결합을 차단
· 사람 IL-12에 대한 결합 없음
· 마우스 비장세포내에서 사람 IL-23 유도된 IL-17 생산을 IC50 ≤ 20 pM으로 억제
· 사람 DB 세포내에서 사람 IL-23 유도된 STAT3 인산화를 IC50 ≤ 40 pM로 억제
· ADCC/CDC에서 예측된 활성 없음
· 시노몰구스 원숭이 IL-23에 대한 KD <1 pM
· 마우스 또는 랫트 IL-23에 대한 교차 반응성 없음
· 마우스 귀에서 사람 IL-23 유도된 IL-17 및 IL-22 생산 억제(1 mg/kg에서 사이토킨 둘다의 >80% 억제)
· 83℃에서 안정성(차등 주사 열량계로 측정한 83℃의 용융 온도)
· >100 mg/ml의 가용성(UV 분광법으로 측정하고 혼탁도로 모니터링됨)
· 3마리의 시노몰구스 원숭이에서 1.0 mg/kg의 피하 투여는 대략 70%의 생체이용율로 대략 28일 동안 지속된 ≥ 10 nM 노출을 나타낸다.
ADCC/DC에서 예측된 활성이 없으므로, 본원에서 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 Fc 수용체에 대해 감소된 친화성을 나타내므로 ADCC/CDC에서 활성을 갖지 않는 것으로 예측됨을 의미한다.
하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특징들 중 적어도 하나를 갖는다. 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 중 적어도 2개, 또는 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 임의의 조합을 갖는다. 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 모두를 갖는다.
· ≤ 1 pM의 사람 IL-23에 대한 KD(50% 사람 혈청 속에서 결합 온-속도에 있어 이동은 없다)
· 시험관내에서 사람 IL-23R/Fc에 대한 IL-23 결합의 차단
· 사람 IL-12에 대한 결합 없음
· 마우스 비장세포내에서 사람 IL-23 유도된 IL-17 생산을 ≤ 20pM의 IC50으로 억제
· 사람 DB 세포에서 사람 IL-23 유도된 STAT3 인산화를 ≤ 40pM의 IC50으로 억제
· ADCC/CDC에서 예측된 활성 없음
· 시노몰구스 원숭이 IL-23에 대해 ≤ 1pM의 KD
· 마우스 또는 랫트 IL-23에 대해 교차 반응성 없음
· 마우스 귀에서 사람 IL-23 유도된 IL-17 및 IL-22 생산의 억제(1 mg/kg에서 사이토킨 둘다의 ≥ 80% 억제)
· 83℃에서 안정성(차등 주사 열량계로 측정한 83℃의 용융 온도)
· >100 mg/ml의 가용성(UV 분광계로 측정하고 혼탁도로 모니터링함)
추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 다음의 결합 특성들 중 적어도 하나를 갖는다(특성 A). 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 중 적어도 2개, 또는 적어도 3개의 임의의 조합을 갖는다. 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 모두를 갖는다.
· ≤ 1pM의 사람 IL-23에 대한 KD(50% 사람 혈청에서 결합 온-속도에 있어 이동 없음)
· 사람 IL-12에 대한 결합 없음
· 시노몰구스 원숭이 IL-23에 대해 ≤ 1pM의 KD
· 마우스 또는 랫트 IL-23에 대해 교차 반응성 없음
특히, 본 발명의 사람화된 항체는, 사람 IL-23에 대한 KD가 ≤ 1 pM(50% 사람 혈청에서 결합 온-속도에 있어 이동 없음)이고 사람 IL-12에 대한 결합이 없다.
추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 다음 기능성 특성들 중 적어도 하나를 갖는다(특성 B). 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 중 적어도 2개, 또는 적어도 3개의 임의의 조합을 갖는다. 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 모두를 갖는다.
·시험관내에서 사람 IL-23R/Fc에 대한 IL-23 결합을 차단.
· 마우스 비장 세포에서 사람 IL-23 유도된 IL-17 생산을 ≤ 20pM의 IC50으로 억제
· 사람 DB 세포에서 사람 IL-23 유도된 STAT3 인산화를 ≤ 40pM의 IC50으로 억제
·마우스 귀에서 사람 IL-23 유도된 IL-17 및 IL-22 생산을 억제(1mg/kg에서 사이토킨 둘다를 ≥ 80% 억제).
추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 다음 특성들 중 적어도 하나를 갖는다(특성 C). 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 중 적어도 2개, 또는 적어도 3개의 임의의 조합을 갖는다. 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 모두를 갖는다.
· ADCC/CDC에 있어서 예측된 활성 없음.
· 83℃에서 안정성(차등 주사 열량계로 측정한 83℃의 용융 온도)
· ≥ 100 mg/ml의 가용성(UV 분광계로 측정하고 혼탁도에 의해 모니터링함)
· 3마리의 시노몰구스 원숭이에서 1.0 mg/kg의 피하 투여는 대략 70%의 생체이용율로 대략 28일 동안 지속된 ≥ 10nM 노출을 나타낸다.
추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 다음 특성들 중 적어도 하나를 갖는다(특성 C). 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 중 적어도 2개의 임의의 조합을 갖는다. 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 하기 특성들 모두를 갖는다.
· ADCC/CDC에 있어서 예측된 활성 없음.
· 83℃에서 안정성(차등 주사 열량계로 측정한 83℃의 용융 온도)
· ≥ 100 mg/ml의 가용성(UV 분광계로 측정하고 혼탁도에 의해 모니터링함)
추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 적어도 하나의 특성 A, 적어도 하나의 특성 B 및 적어도 하나의 특성 C를 갖는다. 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 특성 A, B 및 C중 적어도 2개, 또는 적어도 3개의 특성 조합을 갖는다.
일부 국면에서, 사람화된 항체는 차단 활성을 나타냄으로써, 이는 IL-23 수용체에 대한 IL-23의 결합을 적어도 45%까지, 적어도 50%까지, 적어도 55%까지, 적어도 60%까지, 적어도 65%까지, 적어도 70%까지, 적어도 75%까지, 적어도 80%까지, 적어도 85%까지, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 까지 감소시킨다. IL-23 수용체에 대한 IL-23의 결합을 차단하는 항체의 능력은 당해 분야에 공지된 경쟁적 결합 검사를 사용하여 측정할 수 있다. 또는, 항체의 차단 활성은, IL-23 수용체에 의해 매개된 시그날링이 억제되는지를 측정하기 위한 IL-17 및 IL-22의 생산과 같이, IL-23의 생물학적 효과를 평가함으로써 측정할 수 있다.
추가의 국면에서, 본 발명은 양호한 생체물리학적 특성을 갖는 사람화된 항-IL-23p19 항체를 제공한다. 하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 완충액 속에 적어도 90%의 단량체 형태, 또는 적어도 92%의 단량체 형태, 또는 적어도 95%의 단량체 형태로 존재한다. 추가의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항-IL-23p19 항체는 완충액 속에서 1개월 또는 4개월 동안 적어도 90%의 단량체 형태, 또는 적어도 92%의 단량체 형태, 또는 적어도 95%의 단량체 형태로 잔존한다.
하나의 국면에서, 본 발명의 사람화된 항체는 항체 A, 항체 B, 항체 C 또는 항체 D이다. 따라서, 하나의 양태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열 번호 174의 경쇄 서열 및 서열 번호 176의 중쇄 서열(항체 A)을 포함한다. 다른 양태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열 번호 174의 경쇄 서열 및 서열 번호 178의 중쇄 서열(항체 B)을 포함한다. 다른 양태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열 번호 180의 경쇄 서열 및 서열 번호 176의 중쇄 서열(항체 C)을 포함한다. 다른 양태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열 번호 180의 경쇄 서열 및 서열 번호 178의 중쇄 서열(항체 D)을 포함한다.
추가의 양태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열 번호 174의 경쇄 서열 및 서열 번호 176의 중쇄 서열(항체 A)로 이루어진다. 추가의 양태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열 번호 174의 경쇄 서열 및 서열 번호 178의 중쇄 서열(항체 B)로 이루어진다. 추가의 양태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열 번호 180의 경쇄 서열 및 서열 번호 176의 중쇄 서열(항체 C)로 이루어진다. 추가의 양태에서, 본 발명의 사람화된 항체는 서열 번호 180의 경쇄 서열 및 서열 번호 178의 중쇄 서열(항체 D)로 이루어진다.
일부 양태에서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역과 같은 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 사람화된 항-IL-23p19 항체는 항체 A(경쇄 서열 = 서열 번호 174; 중쇄 서열 = 서열 번호 176), 항체 B (경쇄 서열 = 서열 번호 174; 중쇄 서열 = 서열 번호 178), 항체 C (경쇄 서열 = 서열 번호 180; 중쇄 서열 = 서열 번호 176) 또는 항체 D (경쇄 서열 = 서열 번호 180; 중쇄 서열 = 서열 번호 178)로부터 기원한 잔기의 아미노산 서열을 포함한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 181의 108 내지 126번 아미노산 잔기 및 137 내지 151번 아미노산 잔기로 이루어진 에피토프에서 사람 IL-23p19에 결합하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 본 발명의 항체, 예를 들면 본원에 기재된 항체 A, 항체 B, 항체 C 또는 항체 D와 사람-IL-23p19에 대해 경쟁적으로 결합하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. IL-23p19에 경쟁적으로 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편의 능력은 당해 분야에 공지된 경쟁적 결합 검사를 사용하여 측정할 수 있다.
사람화된 항-IL-23p19 항체는 컨센서스 또는 배선 골격 영역내에 특이적인 아미노산 치환을 임의로 포함한다. 이들 골격 위치에서 아미노산 잔기의 구체적인 치환은, 사람 배선 골격 영역내로 CDR 또는 HVL의 "직접적인 스왑(direct swap)"에 의해 형성된 사람화된 항체에서 입증된 것보다, 결합 친화성 및/또는 안정성을 포함하는 항체 수행능의 각종 국면들을 향상시킬 수 있다.
일부 양태에서, 본 발명은 서열 번호 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 또는 119에 설정된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 지닌 다른 단클론 항체를 기술한다. 일부 양태에서, 본 발명은 서열 번호 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 또는 156에 설정된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 갖는 다른 단클론 항체를 기술한다(참조: 상기 표 1 및 2). 이들 마우스 항체의 CDR 서열은 표 3 및 4에 나타낸다. 사람 컨센서스 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 FR내로 이러한 CDR을 위치시키면 본 발명의 유용한 사람화된 항체를 수득할 것이다.
특히, 본 발명은 서열 번호 84/121, 86/123, 88/125, 90/127, 91/128, 93/130, 95/132, 97/134, 99/136, 101/138, 103/140, 105/142, 107/144, 109/146, 111/148, 113/150, 115/152, 117/154 또는 119/156의 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합을 지닌 단클론 항체를 제공한다. 이러한 가변 영역은 사람 불변 영역과 조합될 수 있다.
일부 양태에서, 본 발명은 서열 번호 158, 160, 162 또는 164에 설정된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 지닌 다른 사람화된 항체를 기술한다. 일부 양태에서, 본 발명은 서열 번호 166, 168, 170 또는 172에 설정된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 서열을 갖는 다른 사람화된 항체를 기술한다(참조: 상기 표 5 및 6). 이들 항체의 CDR 서열은 표 3 및 4에 나타낸다. 특히, 본 발명은 서열 번호 160/166, 160/168, 158/166 또는 158/168의 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합을 지닌 단클론 항체를 제공한다. 이러한 가변 영역은 사람 불변 영역과 조합될 수 있다.
추가의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 160의 CDR 및 서열 번호 160의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일하거나, 적어도 93% 동일하거나 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인 및, 서열 번호 166의 CDR 및 서열 번호 166의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일하거나, 적어도 93% 동일하거나 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 사람화된 단클론 항체이다.
추가의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 160의 CDR 및 서열 번호 160의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일하거나, 적어도 93% 동일하거나 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인 및, 서열 번호 168의 CDR 및 서열 번호 168의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일하거나, 적어도 93% 동일하거나 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 사람화된 단클론 항체이다.
추가의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 158의 CDR 및 서열 번호 158의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일하거나, 적어도 93% 동일하거나 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인 및, 서열 번호 166의 CDR 및 서열 번호 166의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일하거나, 적어도 93% 동일하거나 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 사람화된 단클론 항체이다.
추가의 양태에서, 본 발명은 서열 번호 158의 CDR 및 서열 번호 158의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일하거나, 적어도 93% 동일하거나 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인 및, 서열 번호 168의 CDR 및 서열 번호 168의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일하거나, 적어도 93% 동일하거나 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인을 포함하는, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 하나의 양태에서, 항-IL-23p19 항체는 사람화된 단클론 항체이다.
일부 구체적인 양태에서, 본원에 기재된 사람화된 항-IL-23p19 항체는 상기 표 1 내지 6에 나타낸 바와 같은 뮤린 단클론 항체 또는 사람화된 항체의 CDR 또는 HVL 및, 사람 배선 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 FR을 포함하는 적어도 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
이들 서열의 CDR은 표 3 및 4에 나타낸다. 따라서, 하나의 국면에서, 본 발명은 서열 번호 1, 4, 6, 7, 8, 11, 15, 18, 19, 22, 27 또는 30의 경쇄 CDR1 (L-CDR1) 서열; 서열 번호 2, 5, 9, 12, 16, 20, 23, 25, 28 또는 31의 경쇄 CDR2 (L-CDR2) 서열; 서열 번호 3, 10, 13, 14, 17, 21, 24, 26, 29, 또는 32의 경쇄 CDR3 (L-CDR3) 서열; 서열 번호 33, 36, 38, 40, 43, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 67, 68, 69, 77 또는 80의 중쇄 CDR1 (H-CDR1) 서열; 서열 번호 34, 39, 41, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 70, 72, 73, 75, 78 또는 81의 중쇄 CDR2 (H-CDR2) 서열; 및 서열 번호 35, 37, 42, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 65, 71, 74, 76, 79 또는 82의 중쇄 CDR3 (H-CDR3) 서열을 포함하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 하나의 국면에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상기 나열된 L-CDR1, 상기 나열된 L-CDR2 및 상기 나열된 L-CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 상기 나열한 H-CDR1, 상기 나열한 H-CDR2 및 상기 나열한 H-CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
추가의 국면에서, 본 발명은:
a) 각각 서열 번호 1, 2, 3, 33, 34, 및 35의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
b) 각각 서열 번호 4, 5, 3, 36, 34 및 37의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
c) 각각 서열 번호 1, 2, 3, 38, 39 및 35의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
d) 각각 서열 번호 6, 2, 3, 40, 41 및 42의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
e) 각각 서열 번호 7, 2, 3, 43, 41 및 44의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
f) 각각 서열 번호 8, 9, 10, 45, 46 및 47의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
g) 각각 서열 번호 8, 9, 10, 48, 49 및 50의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
h) 각각 서열 번호 11, 12, 13, 51, 52 및 53의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
i) 각각 서열 번호 7, 2, 14, 54, 55 및 56의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
j) 각각 서열 번호 15, 16, 17, 57, 58 및 59의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
k) 각각 서열 번호 18, 16, 17, 60, 61 및 62의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
l) 각각 서열 번호 19, 20, 21, 63, 66, 67 또는 68, 64 및 65의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
m) 각각 서열 번호 22, 23, 24, 69, 70 및 71의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
n) 각각 서열 번호 22, 25, 26, 55, 72 및 71의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
o) 각각 서열 번호 8, 9, 10, 45, 73 및 74의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
p) 각각 서열 번호 27, 28, 29, 45, 75 및 76의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
q) 각각 서열 번호 8, 9, 10, 77, 78 및 79의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열; 또는
r) 각각 서열 번호 30, 31, 32, 80, 81 및 82의 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3 서열을 포함하는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.
하나의 국면에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상기 나열한 L-CDR1, L-CDR2 및 L-CDR3의 조합을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 상기 나열한 H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3의 조합을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
구체적인 양태에서, 이들 예시적인 면역글로불린 사이에 스위칭된 CDR 영역(즉, 예를 들면, 다른 마우스 항체로부터의 유사한 CDR을 지닌 이로부터 기원한 마우스 항체 또는 사람화된 항체 또는 이로부터 기원한 사람화된 항체중의 하나의 1개 또는 2개의 CDR의 스위칭)을 지닌 키메라 항체는 유용한 항체를 수득할 수 있다는 것이 고려된다.
특정 양태에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체는 항체 단편이다. 각종 항체 단편이 일반적으로 상기에 논의되어 왔고 항체 단편의 생산을 위해 개발되어 온 기술이 있다. 단편은 완전한 항체의 단백질분해적 분해를 통해 유도될 수 있다(참조: 예를 들면, Morimoto et al., 1992, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117; 및 Brennan et al., 1985, Science 229:81). 또는, 단편은 재조합체 숙주 세포에서 직접 생산될 수 있다. 예를 들면, Fab'-SH 단편은 이. 콜라이(E. coli)로부터 직접 회수되고 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다(참조: 예를 들면, Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167). 다른 시도에 의해, F(ab')2 단편을 재조합체 숙주 세포 배양물로부터 직접 분리할 수 있다. 항체 단편의 생산을 위한 다른 기술은 당해 분야의 숙련가에게 명백할 것이다. 따라서, 하나의 국면에서, 본 발명은 본원에 기재된 CDR을 포함하는 항체 단편, 특히 본원에 기재된 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3, H-CDR1, H-CDR2 및 H-CDR3의 조합중 하나를 제공한다. 추가의 국면에서, 본 발명은 본원에 기재된 가변 영역을 포함하는 항체 단편, 예를 들면, 본원에 기재된 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합 중 하나를 제공한다.
특정 양태는 서열 번호 176 또는 178의 중쇄 서열과 조합하여 서열 번호 174 또는 180 중 어느 것의 경쇄 서열을 포함하는 사람화된 항-IL-23p19 항체의 F(ab')2 단편을 포함한다. 이러한 양태는 이러한 F(ab')2를 포함하는 완전한 항체를 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 항체 또는 항체 단편은 효과기 기능을 매개하는 불변 영역을 포함한다. 불변 영역은 IL-23을 발현하는 표적 세포에 대한 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC), 항체-의존성 세포 식균작용(ADCP) 및/또는 상보체-의존성 세포독성(CDC) 반응을 제공할 수 있다. 효과기 도메인(들)은 예를 들면, Ig 분자의 Fc 영역일 수 있다.
항체의 효과기 도메인은 어떠한 적합한 척추동물 종 및 동형으로부터 기원할 수 있다. 상이한 동물 종으로부터의 동형은 효과기 기능을 매개하는 능력에 있어서 상이하다. 예를 들면, CDC 및 ADCC/ADCP를 매개하는 사람 면역글로불린의 능력은 일반적으로 각각 IgM
Figure 112013039021542-pct00017
IgG1
Figure 112013039021542-pct00018
IgG3>IgG2>IgG4 및 IgG1
Figure 112013039021542-pct00019
IgG3>IgG2/IgM/IgG4이다. 뮤린 면역글로불린은 CDC 및 ADCC/ADCP를 일반적으로 각각 뮤린 IgM
Figure 112013039021542-pct00020
IgG3>>IgG2b>IgG2a>>IgG1 및 IgG2b>IgG2a>IgG1>>IgG3의 순서로 매개한다. 다른 예에서, 뮤린 IgG2a는 ADCC를 매개하는 반면 뮤린 IgG2a 및 IgM 둘다는 CDC를 매개한다.
항체 변형
사람화된 항-IL-23p19 항체 및 제제는 사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 변형을 포함할 수 있다. 예를 들면, 이는 효과기 기능과 관련하여 항체를 변형시켜, 암의 치료시 항체의 효능을 향상시키는 것이 바람직할 수 있다. 한가지 이러한 변형은 시스테인 잔기(들)의 Fc 영역내로의 도입에 의해 당해 영역내에서 쇄간 이황화물 결합 형성을 허용하는 것이다. 이렇게 생성된 동종이합체 항체는 내부화 능력 및/또는 증가된 상보체-매개된 세포 사멸 및/또는 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC)을 개선시킬 수 있다[참조: 예를 들면, Caron et al., 1992, J. Exp Med. 176:1191-1195; 및 Shopes, 1992, J. Immunol. 148:2918-2922]. 향상된 항-종양 활성을 갖는 동종이합체 항체는 문헌(참조: Wolff et al., 1993, Cancer Research 53: 2560-2565)에 기재된 바와 같이 이종이기능성 교차-결합제를 사용하여 또한 제조할 수 있다. 또는, 항체는 이중 Fc 영역을 함유하도록 가공함으로써 항체의 상보체 분해 및 ADCC 능력을 향상시킬 수 있다(참조: Stevenson et al., 1989, Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230).
ADCC를 지지하는 능력이 개선된 항체는 이들의 Fc 영역의 글리코실화 패턴을 변형시켜 생성할 수 있다. 이는, CH2 도메인내 아스파라긴 잔기, N297에서 항체 글리코실화가 ADCC에 대한 전제조건인 IgG와 Fcγ수용체 사이의 상호작용에 관여하므로 가능하다. 숙주 세포주는 N-아세틸글루코사민 또는 감소된 푸코즈의 증가된 이등분과 같은, 변경된 글리코실화를 지닌 항체를 발현하도록 가공되어 왔다. 푸코즈 감소는 이등분되는 N-아세틸글루코사민의 존재를 증가시키는 것보다 ADCC 활성에 대해 보다 큰 향상을 제공한다. 또한, 저 푸코즈 항체에 의한 ADCC의 향상은 FcγRIIIa V/F 다형성과는 독립적이다.
항체의 Fc 영역의 아미노산 서열의 변형은 ADCC를 향상시키기 위해 가공하는 글리코실화에 대한 대안이다. Fcγ 수용체에 대한 사람 IgG1에서 결합 부위는 광범위한 돌연변이 분석으로 측정하여 왔다. 이는 FcγRIIIa에 대한 결합 친화성을 증가시키고 시험관내에서 ADCC를 향상시키는 Fc 돌연변이를 지닌 사람화된 IgG1 항체의 생성을 초래한다. 또한, Fc 변이체는 결합 특징, 예를 들면, 다른 FcγR 수용체에 대한 변하지 않거나 감소된 결합을 지닌 특이적인 FcγR 수용체에 대한 증진된 결합의 많은 상이한 치환으로 수득되어 왔다.
다른 국면은 화학치료제, 독소(예를 들면, 세균, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소, 또는 이의 단편), 또는 방사활성 동위원소(즉, 방사성접합체)와 같은 세포독성제에 접합된 사람화된 항체 또는 이의 단편을 포함하는 면역접합체를 포함한다.
이러한 면역접합체의 생성에 유용한 화학치료제는 위에 기재되어 있다. 유용한 면역접합체를 형성하는데 사용될 수 있는 효소적으로 활성인 독소 및 이의 단편은 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 쇄[슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)로부터], 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피톨라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 차란티아(Momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(Sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 트리코테센 등을 포함한다. 다양한 방사핵이 방사선접합된 사람화된 항-IL-23p19 항체의 생산에 이용가능하다. 예는 212Bi, 131I, 131In, 90Y, 및 186Re를 포함한다.
사람화된 항-IL-23p19 항체 및 세포독성 또는 화학치료제의 접합체는 공지된 방법에 의해 N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티올)프로피오네이트(SPDP), 이미노티올란(IT), 이미도에스테르의 이기능성 유도체(예를 들면, 디메틸 아디피미데이트 HCL), 활성 에스테르(예를 들면, 디석신이미딜 수베레이트), 알데하이드(예를 들면, 글루타렐데하이드), 비스-아지도 화합물[예를 들면, 비스(p-아지도벤조일)헥산디아민], 비스-디아조늄 유도체[예를 들면, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민], 디이소시아네이트(예를 들면, 톨루엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물(예를 들면, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)과 같은 다양한 이기능성 단백질 커플링제를 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들면, 리신 면역독소는 문헌(참조: Vitetta et al., 1987, Science 238:1098)에 기재된 바와 같이 제조할 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산(MX-DTPA)은 항체에 대한 방사선뉴클레오타이드의 접합을 위한 예시적인 킬레이트제이다. 접합체는 또한 절단가능한 링커를 사용하여 형성시킬 수 있다.
본원에 기재된 사람화된 항-IL-23p19 항체는 또한 면역리포좀으로서 제형화될 수 있다. 항체를 함유하는 리포좀은 문헌(참조: Epstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688; Hwang et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030; 및 미국 특허 제4,485,045호 및 제4,544,545호)에 기재된 바와 같은, 당해 분야에 공지된 방법에 의해 제조된다. 향상된 순환 시간을 갖는 리포좀은 예를 들면, 미국 특허 제5,013,556호에 기재되어 있다.
특히 유용한 리포좀은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화된 포스파티딜에탄올아민(PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 사용한 역상 증발 방법에 의해 생성될 수 있다. 리포좀은 정의된 공극 크기의 여과기를 통해 압출되어 바람직한 직경을 갖는 리포좀을 수득한다. 본원에 기재된 항체의 Fab' 단편은 문헌(참조: Martin et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:286-288)에 기재된 바와 같이 이황화물 교환 반응을 통해 리포좀에 접합시킬 수 있다. 화학치료제(예를 들면, 독소루비신)는 리포좀내에 임의로 함유된다[참조: 예를 들면, Gabizon et al., 1989, J. National Cancer Inst. 81(19):1484].
본원에 기술되고 기재된 항체는 또한 ADEPT(항체-지시된 효소 전구약물 치료요법) 과정에서 전구약물(예를 들면, 펩티딜 화학치료제)을 활성 항암 약물로 전환시키는 전구약물-활성화 효소에 항체를 접합시킴에 의해 사용될 수 있다(참조: 예를 들면, 국제 특허 출원 공보 제WO 81/01145호, 제WO 88/07378호, 및 미국 특허 제4,975,278호). ADEPT에 유용한 면역접합체의 효소 성분은 전구약물을 이의 보다 활성인, 세포독성 형태로 전환시키는 방식으로 전구약물에서 작용할 수 있는 효소이다. ADEPT에 유용한 구체적인 효소는 포스페이트-함유 전구약물을 유리 약물로 전환시키기 위한 알칼린 포스파타제; 설페이트-함유 전구약물을 유리 약물로 전환시키기 위한 아릴설파타제; 비-독성 5-플루오로사이토신을 항암 약물인 5-플루오로우라실로 전환시키기 위한 사이토신 데아미나제; 펩타이드-함유 전구약물을 유리 약물로 전환시키기 위한 세라티아 프로테아제, 테르몰라이신, 서브틸리신, 카르복시펩티다제, 및 카텝신(예를 들면, 카텝신 B 및 L)과 같은 프로테아제; D-아미노산 치환체를 함유하는 전구약물을 전환시키기 위한 D-알라닐카복시펩티다제; 글리코실화된 전구약물을 유리 약물로 전환시키기 위한 β-갈락토시다제 및 뉴라미니다제와 같은 카보하이드레이트-절단 효소; β-락탐으로 유도체화된 약물을 유리 약물로 전환시키기 위한 β-락타마제; 및 이들의 아민 질소에서 페녹시아세틸 또는 펜아실 그룹으로 유도체화된 약물을 각각 유리 약물로 전환시키기 위한 페니실린 V 아미다제 또는 페니실린 G 아미다제와 같은 페니실린 아미다제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 또는, 효소 활성을 갖는 항체("아브자임")을 사용하여 전구약물을 유리된 활성 약물(참조: 예를 들면, Massey, 1987, Nature 328: 457-458)로 전환시킬 수 있다. 항체-아브자임 접합체는 예를 들면, 효소를 위에서 논의한 사람화된 항-IL-23p19항체/이종이기능성 교차결합 시약에 공유 결합시킴으로써 아브자임을 종양 세포 집단으로 전달하기 위한 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다. 또는, 위에서 기술한 바와 같은 효소의 적어도 기능적으로 활성인 부위에 연결된 본원에 기재된 항체의 적어도 항원 결합 영역을 포함하는 융합 단백질을 재조합체 DNA 기술을 사용하여 작제할 수 있다(참조: 예를 들면, Neuberger et al., 1984, Nature 312:604-608).
특정 양태에서, 완전한 항체보다는 사람화된 항-IL-23p19 항체 단편을 사용하여 조직 침투를 증가시키는 것이 바람직할 수 있는데, 예를 들면, 이의 혈청 반감기를 증가시키기 위하여 항체 단편을 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 이는 예를 들면, 재이용(salvage) 수용체 결합 에피토프를 항체 단편내로 혼입시킴에 의해 달성할 수 있다. 하나의 방법에서, 항체 단편의 적절한 영역은 변경시킬 수 있거나(예를 들면, 돌연변이), 에피토프를 펩타이드 태그내로 혼입시킨 후, 예를 들면 DNA 또는 펩타이드 합성에 의해 말단 또는 중간에서 항체 단편에 융합시킬 수 있다(참조: 예를 들면, 국제 특허 출원 공보 제WO 96/32478호).
다른 양태에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체의 공유결합성 변형이 또한 포함된다. 공유결합성 변형은 시스테이닐 잔기, 히스티딜 잔기, 라이시닐 및 아미노-말단 잔기, 아르기닐 잔기, 타이로실 잔기, 카복실 측쇄 그룹(아스파르틸 또는 글루타밀), 글루타밀 및 아스파라기닐 잔기, 또는 세릴, 또는 트레오닐 잔기의 변형을 포함한다. 공유결합성 변형의 다른 유형은 항체에 대한 화학적으로 또는 효소적으로 커플링된 글리코시드를 포함한다. 이러한 변형은 경우에 따라, 항체의 화학적 합성 또는 효소적 또는 화학적 절단으로 달성할 수 있다. 항체의 공유결합성 변형의 다른 유형은 항체의 표적화된 아미노산 잔기를, 선택된 측쇄 또는 아미노- 또는 카복시-말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시켜 분자내로 도입시킬 수 있다.
항체에 존재하는 어떠한 탄수화물 모이어티(moiety)의 제거도 화학적으로 또는 효소적으로 달성할 수 있다. 화학적 탈글리코실화는 문헌(참조: Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52 및 Edge et al., 1981, Anal. Biochem., 118:131)에 기재되어 있다. 항체에서 탄수화물 모이어티의 효소적 절단은 문헌(참조: Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol 138:350)에 기재된 바와 같은 다양한 엔도- 및 엑소-글리코시다제의 사용으로 달성할 수 있다.
유용한 공유 결합 변형의 다른 유형은, 항체를, 다양한 비단백질성 중합체, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알킬렌 중 하나에, 미국 특허 제4,640,835호, 미국 특허 제4,496,689호, 미국 특허 제4,301,144호, 미국 특허 제4,670,417호, 미국 특허 제4,791,192호 및 미국 특허 제4,179,337호 중 하나 이상에 설정된 방식으로 연결시킴을 포함한다.
사람화 및 아미노산 서열 변이체
항-IL-23p19 항체의 아미노산 서열 변이체는 적절한 뉴클레오타이드 변화를 항-IL-23p19 항체 DNA내로 도입시키거나, 펩타이드 합성에 의해 제조할 수 있다. 이러한 변이체는 예를 들면, 본원의 실시예의 항-IL-23p19 항체의 아미노산 서열로부터의 결실, 및/또는 당해 서열내로의 삽입 및/또는 당해 서열의 치환을 포함한다. 결실, 삽입, 및 치환의 어떠한 조합도 최종 작제물에 도달하도록 이루어지며, 단 최종 작제물은 바람직한 특징을 소유한다. 아미노산 변화는 또한 글리코실화 부위의 수 또는 위치를 변화시키는 것과 같은 사람화되거나 변이체 항-IL-23p19 항체의 해독후 과정을 변경시킬 수 있다.
돌연변이유발을 위한 바람직한 위치에 있는 항-IL-23p19 항체의 특정 잔기 또는 영역의 확인을 위한 유용한 방법은 문헌[참조: Cunningham and Wells (Science, 244:1081-1085 (1989)]에 기재된 바와 같이, "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 불린다. 본원에서, 잔기 또는 표적 잔기의 그룹이 확인되고(예를 들면, arg, asp, his, lys, 및 glu와 같은 하전된 잔기) 및 중성 또는 음성적으로 하전된 아미노산(전형적으로 알라닌)으로 교체되어 아미노산과 IL-23p19 항원의 상호작용에 영향을 미친다. 이후에, 치환에 대한 기능적 감수성을 입증하는 아미노산 위치는 치환 부위에서 또는 부위에 대해 추가의 또는 다른 변이체를 도입시킴으로써 개선된다. 따라서, 아미노산 서열 변이를 도입시키기 위한 부위가 예정되지만, 돌연변이 그 자체의 특성이 예정될 필요는 없다. 예를 들어, 제공된 부위에서 돌연변이의 수행능을 분석하기 위해서, 알라닌 스캐닝 또는 무작위 돌연변이유발을 표적 코돈 또는 영역에서 수행하고 발현된 항-IL-23p19 항체 변이체를 바람직한 활성에 대해 스크리닝한다.
아미노산 서열 삽입은 하나의 잔기로부터 수백개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩타이드의 길이 범위의 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합체, 및 단일 또는 다수의 아미노산 잔기의 서열간 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 에피토프 태그에 융합된 항-IL-23p19 항체를 포함한다. 항-IL-23p19 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 효소 또는 폴리펩타이드의 항-IL-23p19 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 융합체를 포함한다.
다른 유형의 변이체는 아미노산 치환 변이체이다. 이들 변이체는 이의 위치에서 제거된 항-IL-23p19 항체 분자내 적어도 하나의 아미노산 잔기 및 이의 위치내에 삽입된 상이한 잔기를 갖는다. 치환적 돌연변이유발을 위한 가장 흥미있는 부위는 초가변 영역을 포함하지만, FR 변경 또한 고려된다. 보존적 치환은 "바람직한 치환"의 제목하에 표 5에 나타낸다. 이러한 치환이 생물학적 활성에 있어서 변화를 초래하는 경우, "예시적인 치환"으로 명명되거나 아미노산 부류와 관련하여 하기에 추가로 기재된 추가의 실질적인 변화를 도입하고 생성물을 스크리닝할 수 있다.
Figure 112013039021542-pct00021
단백질 화학에서, 항체의 생물학적 특징은 (a) 예를 들면, 쉬이트(sheet) 또는 나선 구조로서, 치환 부위내 폴리펩타이드 골격의 구조, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 벌크한 측쇄를 유지하는데 있어서 이들의 효과가 유의적으로 상이한 치환을 선택함으로써 달성할 수 있다. 천연적으로 존재하는 잔기는 일반적인 측쇄 특징을 기준으로 하여 그룹으로 분리된다:
(1) 소수성: 노르루이신, met, ala, val, leu, ile;
(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;
(3) 산성: asp, glu;
(4) 염기성: asn, gin, his, lys, arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: gly, pro; 및
(6) 방향족: trp, tyr, phe.
비-보존적 치환은 다른 부류에 대한 이들 부류중 하나의 구성원으로 교환함을 포함할 것이다.
사람화된 또는 변이체 항-IL-23p19 항체의 적절한 구조를 유지하는데 포함되지 않는 어떠한 시스테인 잔기도 또한 일반적으로 세린으로 치환하여 분자의 산성 안정성을 증진시키거나, 비정상적인 교차결합을 방지하거나, 세포독성 또는 세포정지 화합물에 대한 확립된 접합점을 제공할 수 있다. 역으로, 시스테인 결합(들)을 항체에 가하여 이의 안정성(특히 항체가 Fv 단편과 같은 항체 단편인 경우)을 개선시킬 수 있다.
치환성 변이체의 유형은 모 항체(예를 들면, 사람화된 또는 사람 항체)의 하나 이상의 초가변 영역 잔기를 치환함을 포함한다. 일반적으로, 추가의 개발을 위해 선택된 수득되는 변이체(들)은, 이들이 생성되는 모 항체에 대해 개선된 생물학적 특성을 가질 것이다. 이러한 치환성 변이체를 생성하는 편리한 방식은 파아지 디스플레이를 사용하는 친화성 성숙이다. 요약하면, 수개의 초가변 영역 부위(예를 들면, 6 내지 7개 부위)를 돌연변이시켜 각각의 위치에서 모든 가능한 아미노 치환을 생성할 수 있다. 이렇게 생성된 항체 변이체는 각각의 입자내에서 패키지된 M13의 유전자 III 생성물에 대한 융합체로서 필라멘트성 파아지 입자로부터 1가 융합체로 나타난다. 이후에, 파아지-디스플레이된 변이체는 이들의 생물학적 활성(예를 들면, 결합 친화성)을 위해 스크리닝된다. 변형을 위한 후보자 초가변 영역 부위를 확인하기 위하여, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발을 수행하여 항원 결합에 유의적으로 기여하는 초가변 영역 잔기를 확인할 수 있다. 달리는, 또는 추가로, 항원-항체 착체의 결정 구조를 분석하여 항체와 사람 IL-23p19 사이의 접촉점을 확인하는 것이 유리할 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 이웃하는 잔기는 본원에 열거한 기술들에 따른 치환을 위한 후보물들이다. 이러한 변이체가 생성되면, 변이체의 패널을 본원에 기재된 바와 같은 스크리닝에 적용시키고 하나 이상의 관련 검사에서 우수한 특성을 갖는 항체를 추가의 개발을 위해 선택할 수 있다.
항체의 아미노산 변이체의 다른 유형은 항체의 원래의 글리코실화 패턴을 변경시킨다. "변경"은 항체에서 발견된 하나 이상의 탄수화물 모이어티의 결실, 및/또는 항체내에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위의 첨가를 의미한다.
일부 양태에서, 본 발명의 항체를 변형시켜 글리코실화 부위를 첨가하는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결된다. N-연결된은 아스파라긴 잔기의 측쇄에 탄수화물 모이어티의 부착을 말한다. 트리펩타이드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌(여기서, X는 프롤린 이외의 어떠한 아미노산이다)는 아스파라긴 측쇄에 대한 탄수화물 모이어티의 효소적 부착을 위한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩타이드내 이들 트리펩타이드 서열들 중의 어느 하나의 존재는 잠재적인 글리코실화 부위를 생성한다. O-연결된 글리코실화는, 비록 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시라이신이 또한 사용될 수 있다고 해도, 하이드록시아미노산, 가장 일반적으로 세린 또는 트레오닌에 대한 당 N-아세틸갈락토즈아민, 갈락토즈, 또는 크실로즈 중 하나의 부착을 말한다. 따라서, 제공된 단백질, 예를 들면, 항체를 글리코실화시키기 위하여, 단백질의 아미노산 서열을 가공하여 위에서 기술한 트리펩타이드 서열(N-연결된 글리코실화 부위에 대해) 중 하나 이상을 함유하도록 한다. 변경은 또한 원래의 항체의 서열(O-연결된 글리코실화 부위에 대해)에 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 첨가, 또는 이에 의한 치환에 의해 이룰 수 있다.
항-IL-23p19 항체의 아미노산 서열 변이체를 암호화하는 핵산 분자는 당해 분야에 공지된 다양한 방법에 의해 제조된다. 이들 방법은 천연 공급원(천연적으로 존재하는 아미노산 서열 변이체의 경우에)으로부터의 분리 또는 올리고뉴클레오타이드-매개된(또는 부위-지시된) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발, 및 항-IL-23p19 항체의 이미 제조된 변이체 또는 비-변이체 버젼의 카세트 돌연변이유발(cassette mutagenesis)에 의한 제조를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
폴리펩타이드 , 벡터, 숙주 세포, 및 재조합 방법
다른 양태는 사람화된 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 및 폴리펩타이드를 포함하는 숙주 세포, 및 사람화된 항체를 제조하기 위한 재조합 기술을 포함한다. 분리된 폴리뉴클레오타이드는 예를 들면, 완전한 길이의 단클론 항체, Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, 디아바디(diabody), 선형 항체, 단일쇄 항체 분자, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적인 항체를 포함하는 항-IL-23p19 항체의 어떠한 바람직한 형태를 암호화할 수 있다.
일부 양태는 서열 번호 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 또는 119 중 어느 것의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 경쇄 가변 영역을 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 이러한 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 83, 85, 87, 89, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116 및 118이다. 일부 양태는 서열 번호 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 또는 156의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 중쇄 가변 영역을 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 이러한 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 120, 122, 124, 126, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153 또는 155이다.
일부 양태는 서열 번호 158, 160, 162 또는 164 중 어느 것의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 경쇄 가변 영역을 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 이러한 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 157, 159, 161 또는 163이다. 일부 양태는 서열 번호 166, 168, 170 또는 172의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 중쇄 가변 영역을 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 이러한 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 165, 167, 169 또는 171이다.
일부 양태는 서열 번호 174 또는 180 중 어느 것의 아미노산 서열을 갖는 항체의 경쇄를 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 이러한 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 173 또는 179이다. 일부 양태는 서열 번호 176 또는 178의 아미노산 서열을 갖는 항체의 중쇄를 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 이러한 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호 175 또는 177이다.
하나의 국면에서, 분리된 폴리뉴클레오타이드 서열(들)은 각각 서열 번호 174 및 서열 번호 176; 각각 서열 번호 174 및 서열 번호 178; 각각 서열 번호 180 및 서열 번호 176; 각각 서열 번호 180 및 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하는다. 이러한 아미노산 서열을 암호화하는 예시적인 폴리뉴클레오타이드 서열은 각각 서열 번호 173 및 175, 각각 서열 번호 173 및 177, 각각 서열 번호 179 및 175, 각각 서열 번호 179 및 177이다.
사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 단편 또는 쇄를 암호화하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드(들)은 당해 분야에 공지된 바와 같이, 하나 이상의 조절 또는 제어 서열에 융합시킬 수 있으며 당해 분야에 공지된 바와 같은 적합한 발현 벡터 또는 숙주 세포내에 함유될 수 있다. 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 분자 각각은 완전한 항체의 생산을 가능하게 하는, 사람 불변 도메인과 같은, 불변 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 독립적으로 융합시킬 수 있다. 또는, 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 일부는 함께 융합되어 단일쇄 항체의 생산을 위한 주형(template)을 제공할 수 있다.
재조합체 생산을 위해, 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 클로닝(DNA의 증폭) 또는 발현을 위한 복제가능한 벡터내로 삽입된다. 재조합체 항체를 발현시키기 위한 많은 적합한 벡터가 이용가능하다. 벡터 성분은 일반적으로 다음 중 하나 이상을 포함하나, 이에 한정되지 않는다: 시그날 서열, 복제 오리진, 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 성분, 프로모터, 및 전사 종결 서열.
사람화된 항-IL-23p19 항체는 또한 융합 폴리펩타이드로서 생산될 수 있으며, 여기서 항체는 성숙한 단백질 또는 폴리펩타이드의 아미노 말단에서 특이적인 절단 부위를 갖는 다른 폴리펩타이드 또는 시그날 서열과 같은 이종 폴리펩타이드와 융합된다. 선택된 이종 시그날 서열은 전형적으로 숙주 세포에 의해 인식되고 프로세싱(즉, 시그날 펩티다제에 의해 절단됨) 된 것이다. 사람화된 항-IL-23p19 항체 시그날 서열을 인식하여 프로세싱하지 않는 원핵 숙주 세포의 경우, 시그날 서열은 원핵세포 시그날 서열로 치환될 수 있다. 시그날 서열은 예를 들면, 알칼린 포스파타제, 페니실리나제, 지단백질, 열-안정성 엔테로톡신 II 리더 등일 수 있다. 효모 분비의 경우, 천연의 시그날 서열은 예를 들면, 효모 인버타제 알파-인자(사카로마이세스 및 클루이베로마이세스 α-인자 리더 포함), 산 포스파타제, 씨. 알비칸스(C. albicans) 글루코아밀라제, 또는 국제 특허 출원 공보 제WO90/13646호에 기재된 시그날로부터 수득된 리더 서열로 치환될 수 있다. 포유동물 세포에서, 포유동물 시그날 서열 및 바이러스 분비 리더, 예를 들어, 헤르페스 단성(herpes simplex) gD 시그날을 사용할 수 있다. 이러한 전구체 영역에 대한 DNA는 사람화된 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 DNA에 판독 프레임내에서 연결된다.
발현 및 클로닝 벡터는, 벡터가 하나 이상의 선택된 숙주 세포내에서 복제하도록 할 수 있는 핵산 서열을 함유한다. 일반적으로, 클로닝 벡터에서 당해 서열은, 벡터가 숙주 염색체 DNA와는 독립적으로 복제할 수 있도록 하고, 복제 오리진 또는 자가 복제하는 서열을 포함하는 것이다. 이러한 서열은 다양한 세균, 효모, 및 바이러스에 대해 잘 알려져 있다. 플라스미드 pBR322로부터의 복제 오리진이 대부분의 그램 음성 세균, 2-υ에 적합하다. 플라스미드 오리진은 효모에 적합하고 다양한 바이러스 오리진(SV40, 폴리오마, 아데노바이러스, VSV, 및 BPV)는 포유동물 세포에서 벡터를 클로닝하는데 유용하다.
일반적으로, 복제 오리진 성분은 포유동물 발현 벡터의 경우 필요하지 않다(SV40 오리진은 얼리 프로모터(early promoter)를 함유하므로 단지 전형적으로 사용될 수 있다).
발현 및 클로닝 벡터는 선택성 마커를 암호화하는 유전자를 함유함으로써 발현의 확인을 용이하게 할 수 있다. 대표적인 선택성 마커 유전자는 항생제 또는 다른 독소, 예를 들면, 암피실린, 네오마이신, 메토트렉세이트, 또는 테트라사이클린에 대해 내성을 부여하는 단백질을 암호화하거나, 또는 상보체 영양요구성 결함이 있거나 또는 다른 대안에서, 착체 매질, 예를 들어, 바실러스의 경우 D-알라닌 라세마제를 암호화하는 유전자 속에 존재하지 않는 특수 영양분을 공급한다.
선택 계획의 한가지 예는 숙주 세포의 성장을 정지시키기 위한 약물을 사용한다. 이종 유전자로 성공적으로 형질전환되는 세포는 약물 내성을 부여함으로써 선택 요법을 생존시키는 단백질을 생산한다. 이러한 우성 선택의 예는 약물 네오마이신, 마이코페놀산, 및 하이그로마이신을 사용한다. 포유동물 세포용으로 일반적인 선택성 마커는 DHFR(디하이드로폴레이트 리덕타제), 티미딘 키나제, 메탈로티오네인-I 및 -II(예를 들면, 영장류 메탈로티오네인 유전자), 아데노신 데아미나제, 오르니틴 데카복실라제 등과 같은 사람화된 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 핵산을 수용하는데 능숙한 세포의 확인을 가능하도록 하는 것이다. DHFR 선택 유전자로 형질전환된 세포는 우선 형질전환체 모두를 메토트렉세이트(Mtx), DHFR의 경쟁적 길항제를 함유하는 배양 배지 속에서 배양함으로써 확인한다. 야생형 DHFR이 사용되는 경우 적절한 숙주 세포는 DHFR 활성이 결여된 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포주(예를 들면, DG44)이다.
대안적으로, 항-IL-23p19 항체, 야생형 DHFR 단백질, 및 아미노글리코시드 3'-포스포트랜스퍼라제(APH)와 같은 다른 선택성 마커를 암호화하는 DNA 서열로 형질전환되거나 동시-형질전환된 숙주 세포(특히 내인성 DHFR을 함유하는 야생형 숙주)는 아미노글리코시드성 항생제, 예를 들면, 가나마이신, 네오마이신, 또는 G418과 같은 선택성 마커에 대한 선택제를 함유하는 배지 속에 세포 성장에 의해 선택할 수 있다(참조: 예를 들면, 미국 특허 제4,965,199호).
재조합체 생산이 숙주 세포로서 효모 세포 속에서 수행되는 경우, 효모 플라스미드 YRp7 속에 존재하는 TRP1 유전자(참조: Stinchcomb et al., 1979, Nature 282: 39)를 선택성 마커로서 사용할 수 있다. TRP1 유전자는 트립토판 속에서 성장하는 능력을 결여하고 있는 효모의 돌연변이 균주에 대한 선택 마커, 예를 들면, ATCC 수탁번호 44076 또는 PEP4-1[참조: Jones, 1977, Genetics 85:12]를 제공한다. 이후, 효모 숙주 세포 게놈내 trp1 병변의 존재는 트립토판의 부재하에서 성장에 의한 형질전환을 검출하기에 효과적인 환경을 제공한다. 유사하게, ATCC 수탁번호 20,622 및 38,626과 같은 Leu2p-결핍성 효모 균주는 LEU2 유전자를 지닌 공지된 플라스미드에 의해 보완된다.
또한, 1.6㎛의 원형 플라스미드 pKD1으로부터 기원한 벡터는 클루이베로마이세스 효모의 형질전환을 위해 사용할 수 있다. 또는, 재조합체 소(calf) 키모신의 대량 생산을 위한 발현 시스템은 케이. 락티스(K. lactis)에 대해 보고되어 있다(참조: Van den Berg, 1990, Bio/Technology 8:135). 클루이베로마이세스의 산업용 균주에 의한 성숙한 재조합체 사람 혈청 알부민의 분비를 위한 안정한 다중-카피 발현 벡터가 또한 기재되어 있다(참조: Fleer et al., 1991, Bio/Technology 9:968-975).
발현 및 클로닝 벡터는 일반적으로 숙주 유기체에 의해 인식되고 항-IL-23p19 항체 또는 이의 폴리펩타이드 쇄를 암호화하는 핵산 분자에 작동적으로 연결된 프로모터를 함유한다. 원핵세포 숙주와 함께 사용하기에 적합한 프로모터는 phoA 프로모터, β-락타마제 및 락토즈 프로모터 시스템, 알칼린 포스파타제, 트립토판(trp) 프로모터 시스템, 및 tac 프로모터와 같은 하이브리드 프로모터를 포함한다. 다른 공지된 세균 프로모터도 또한 적합하다. 세균 시스템에서 사용하기 위한 프로모터는 또한 사람화된 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 DNA에 작동적으로 연결된 샤인-달가노(Shine-Dalgarno: S.D.) 서열을 함유할 것이다.
많은 진핵세포 프로모터 서열이 공지되어 있다. 사실상 모든 진핵세포 유전자는, 전사가 개시되는 부위로부터 상류에 대략 25 내지 30개 염기에 위치한 AT가 풍부한 영역을 갖는다. 많은 유전자의 전사 개시로부터 상류로 70 내지 80개 염기에서 발견된 다른 서열은 CNCAAT 영역이며, 여기서 N은 어떠한 뉴클레오타이드일 수 있다. 대부분의 진핵세포 유전자의 3' 말단에는 암호화 서열의 3' 말단에 폴리 A 테일의 첨가를 위한 시그날일 수 있는 AATAAA 서열이다. 이들 서열 모두는 진핵세포 발현 벡터내로 적합하게 삽입된다.
효모 숙주와 함께 사용하기 위한 적합한 프로모팅 서열의 예는 3-포스포글리세레이트 키나제에 대한 프로모터 또는 에놀라제, 글리세르알데하이드-3-포스페이트 데하이드로게나제, 헥소키나제, 피루베이트 데카복실라제, 포스포프럭토키나제, 글루코즈-6-포스페이트 이소머라제, 3-포스포글리세레이트 뮤타제, 피루베이트 키나제, 트리오세포스페이트 이소머라제, 포스포글루코즈 이소머라제, 및 글루코키나제와 같은 다른 당분해 효소에 대한 프로모터를 포함한다.
유도성 프로모터는 성장 조건에 의해 제어된 전사의 추가의 이점을 갖는다. 이는 알코올 데하이드로게나제 2, 이소시토크롬 C, 산 포스파타제, 질소 대사와 관련된 유도체 효소, 메탈로티오네인, 글리세르알데하이드-3-포스페이트 데하이드로게나제, 및 말토즈 및 갈락토즈 이용에 관여하는 효소를 위한 효모 프로모터 영역을 포함한다. 효모 발현시 사용하기에 적합한 벡터 및 프로모터는 또한 유럽 특허 제EP 73,657호에 기재되어 있다. 효모 인핸서는 또한 효모 프로모터와 함께 유리하게 사용된다.
포유동물 숙주 세포에서 벡터로부터 사람화된 항-IL-23p19 항체 전사는 예를 들면, 폴리오마 바이러스, 포울폭스 바이러스, 아데노바이러스(예를 들면, 아데노바이러스 2), 소 파필로마 바이러스, 조류 육종 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 레트로바이러스, B형 간염 바이러스 및 시미안 바이러스 40(SV40)와 같은 바이러스의 게놈으로부터, 이종 포유동물 프로모터, 예를 들면, 액틴 프로모터 또는 면역글로불린 프로모터로부터, 또는 열-쇼크 프로모터로부터 수득된 프로모터에 의해 제어되며, 단 이러한 프로모터는 숙주 세포 시스템과 상용성이다.
SV40 바이러스의 얼리(early) 및 레이트(late) 프로모터는 SV40 바이러스 복제 오리진을 또한 함유하는 SV40 제한 단편으로서 편리하게 수득된다. 사람 사이토메갈로바이러스의 이미디에이트 얼리(immediate early) 프로모터는 HindIII E 제한 단편으로서 편리하게 수득된다. 소 파필로마 바이러스를 벡터로서 사용하는 포유동물 숙주에서 DNA를 발현하기 위한 시스템은 미국 특허 제4,419,446호에 기재되어 있다. 당해 시스템의 변형은 미국 특허 제4,601,978호에 기재되어 있다. 또한, 헤르페스 단성 바이러스로부터의 티미딘 키나제 프로모터의 제어하에 마우스 세포내에서 사람 p-인터페론 cDNA의 발현을 기술하는 문헌(참조: Reyes et al., 1982, Nature 297:598-601)도 참조한다. 또는, 로우스 육종 바이러스 장 말단 반복체(Rous sarcoma virus long terminal repeat)를 프로모터로서 사용할 수 있다.
재조합체 발현 벡터에서 사용할 수 있는 다른 유용한 요소는 인핸서 서열이며, 이는 고등 진핵세포에 의해 사람화된 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 DNA의 전사를 증가시키기 위해 사용된다. 많은 인핸서 서열이 현재 포유동물 유전자(예를 들면, 글로빈, 엘라스타제, 알부민, α-페토프로테인, 및 인슐린)로부터 공지되어 있다. 그러나, 전형적으로, 진핵세포 바이러스로부터의 인핸서가 사용된다. 예는 복제 오리진의 레이트 측면(late side)에서의 SV40 인핸서(bp 100-270), 사이토메갈로바이러스 얼리 프로모터 인핸서, 복제 오리진의 레이트 측면의 폴리오마 인핸서, 및 아데노바이러스 인핸서를 포함한다(참조: 진핵세포 프로모터의 활성화를 위한 인핸싱 요소의 기술에 대한 문헌 Yaniv, 1982, Nature 297:17-18). 인핸서는 사람화된 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 서열에 대해 5' 또는 3' 위치에서 벡터내로 스플라이싱(splicing)될 수 있지만, 바람직하게는 프로모터로부터 5' 부위에 위치한다.
진핵세포 숙주 세포(효모, 진균, 곤충, 식물, 동물, 사람, 또는 다른 다핵 유기체로부터의 유핵 세포)에서 사용된 발현 벡터는 또한 전사의 종결 및 mRNA를 안정화시키는데 필수적인 서열을 함유할 수 있다. 이러한 서열은 일반적으로 진핵세포 또는 바이러스 DNA 또는 cDNA의 5' 및, 때때로 3'으로부터의, 해독되지 않은 영역으로부터 일반적으로 이용가능하다. 이들 영역은 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 mRNA의 해독되지 않은 부위내에 폴리아데닐화된 단편으로서 전사된 뉴클레오타이드 분절을 함유한다. 하나의 유용한 전사 종결 성분은 소 성장 호르몬 폴리아데닐화 영역이다(참조: 국제 특허 출원 공보 제WO94/11026호 및 이에 기재된 발현 벡터). 일부 양태에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체는 CHEF 시스템을 사용하여 발현시킬 수 있다(참조: 예를 들면, 미국 특허 제5,888,809호; 이의 기재내용은 본원에 참조로 포함된다).
본원의 벡터내에서 DNA를 클로닝하거나 발현시키기에 적합한 숙주 세포는 위에서 기술한 원핵세포, 효모, 또는 고등 진핵세포이다. 당해 목적을 위한 적합한 원핵세포는 그람-음성 또는 그람-양성 유기체와 같은 유박테리아(eubacteria), 예를 들면, 에스케리키아, 예를 들면, 이. 콜라이(E. coli)와 같은 엔테로박테리아세아에, 엔테로박터, 에르위니아, 크렙시엘라, 프로테우스, 살모넬라, 예를 들면, 살모넬라 티피무리움, 세라티아, 예를 들면, 세라티아 마르세스칸스, 및 시겔라, 및 비. 서브틸리스(B. subtilis) 및 비. 리체니포르미스(B. licheniformis)(예를 들면, 1989년 4월 12일자로 공개된 제DD 266,710호에 기재된 비. 리체니포르미스 41 P)와 같은 바실러스, 피, 아에루기노사(P. aeruginosa)와 같은 슈도모나스, 및 스트렙토마이세스(Streptomyces)를 포함한다. 하나의 바람직한 이. 콜라이 클로닝 숙주는 이. 콜라이 294(ATCC 31,446)이나, 이. 콜라이 B, 이. 콜라이 X1776 (ATCC 31,537), 및 이. 콜라이 W3110(ATCC 27,325)와 같은 다른 균주도 적합하다. 당해 예는 제한하는 것이 아니라 예시하는 것이다.
원핵세포 외에, 필라멘트 진균 또는 효모와 같은 진핵세포 미생물이 사람화된 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 벡터에 대한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 사카로마이세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae), 또는 일반적인 제빵 효모가 하등 진핵 숙주 미생물 중에서 가장 일반적으로 사용된다. 그러나, 스키조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe); 예를 들면, 케이. 락티스(K. lactis), 케이. 프라길리스(K. fragilis)(ATCC 12,424), 케이. 불가리쿠스(K. bulgaricus)(ATCC 16,045), 케이. 윅케라미이(K. wickeramii)(ATCC 24,178), 케이. 왈티이(K. waltii)(ATCC 56,500), 케이. 드로소필라룸(K. drosophilarum)(ATCC 36,906), 케이. 써모톨레란스(K. thermotolerans), 및 케이. 마륵시아누스(K. marxianus)와 같은 클루이베로마이세스 숙주; 야로위아(yarrowia)(참조: EP 402,226); 피키아 파스토르스(Pichia pastors)(EP 183,070); 칸디다(Candida); 트리초데르마 레시아(Trichoderma reesia)(EP 244,234); 뉴로스포라 크로싸(Neurospora crassa); 슈와니오마이세스 옥시덴탈리스(Schwanniomyces occidentalis)와 같은 슈와니오마이세스; 및 예를 들면, 뉴로스포라(Neurospora), 페니실륨(Penicillium), 톨리포클라디움(Tolypocladium)과 같은 필라멘트상 진균, 및 에이. 니둘란스(A. nidulans) 및 에이. 나이거(A. niger)와 같은 아스퍼길러스(Aspergillus) 숙주와 같은, 다수의 다른 속, 종, 및 균주가 일반적으로 본원에서 이용가능하며 유용하다.
글리코실화된 사람화된 항-IL-23p19 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 다세포 유기체로부터 기원한다. 무척추동물 세포의 예는 예를 들면, 다수의 바큘로바이러스 균주 및 변이체를 포함하는 식물 및 곤충 세포 및, 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda)[카테르필라(caterpillar)], 아에데스 아에깁티(Aedes aegypti)(모기), 아에데스 알보픽투스(Aedes albopictus)(모기), 드로소필라 멜라노가스터(Drosophila melanogaster)(초파리), 및 봄빅스 모리(Bombyx mori)(누에)와 같은 숙주로부터의 상응하는 허용되는 곤충 숙주 세포를 포함한다. 형질감염용의 각종 바이러스 균주, 예를 들면, 아우토그라파 칼리포르니카(Autographa californica) NPV의 L-1 변이체 및 봄빅스 모리 NPV의 Bm-5 균주가 널리 이용가능하며, 이러한 바이러스는 특히 스포도프테라 프루기페르다 세포의 형질감염을 위해 사용될 수 있다.
면화, 옥수수, 감자, 대두, 페튜니아(petunia), 토마토, 및 담배의 식물 세포 배양물을 또한 숙주로서 사용할 수 있다.
다른 국면에서, 사람화된 항-IL-23p19의 발현은 척추동물 세포내에서 수행한다. 배양물(조직 배양물) 속에서 척추동물 세포의 증식은 통상의 과정이 되며 기술은 광범위하게 이용가능하다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 예는 SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651)에 의해 형질감염된 원숭이 신장 CV1 주(line), 사람 배아 신장 세포주(현탁액 배양물 속에서 성장을 위해 아클로닝된(subcloned) 293 또는 293 세포)(참조: Graham et al., 1977, J. Gen Virol. 36: 59), 새끼 햄스터 신장 세포(BHK, ATCC CCL 10), 차이니즈 햄스터 난소 세포/-DHFR1(CHO, 참조: Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216; 예를 들면, DG44), 마우스 세르톨리 세포(TM4, 참조: Mather, 1980, Biol. Reprod. 23:243-251), 원숭이 신장 세포(CV1 ATCC CCL 70), 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76, ATCC CRL-1587), 사람 경부암종 세포(HELA, ATCC CCL 2), 개 신장 세포(MDCK, ATCC CCL 34), 버팔로 랫트 간 세포(BRL 3A, ATCC CRL 1442), 사람 폐 세포(W138, ATCC CCL 75), 사람 간 세포(Hep G2, HB 8065), 마우스 유방 종양(MMT 060562, ATCC CCL51), TR1 세포(참조: Mather et al., 1982, Annals N.Y. Acad. Sci. 383: 44-68), MRC 5 세포, FS4 세포, 및 사람 간세포암 주(hepatoma line)(Hep G2)이다.
숙주 세포는 사람화된 항-IL-23p19 항체 생산을 위한 위에서 기술한 발현 또는 클로닝 벡터로 형질전환시키고 프로모터를 유도하거나, 형질전환체를 선택하거나 바람직한 서열을 암호화하는 유전자를 증폭시키기 위해 적절하게 변형된 통상의 영양 배지 속에서 배양된다.
본원에 기재된 사람화된 항-IL-23p19 항체를 생산하기 위해 사용된 숙주 세포는 광범위한 배지 속에에서 배양될 수 있다. 햄스(Ham's) F10[제조원: 시그마-알드리치 컴퍼니(Sigma-Aldrich Co.), 미국 미주리주 세인트 루이스 소재], 최소 필수 배지[(MEM), 제조원: 시그마-알드리치 컴퍼니], RPMI-1640(제조원: 시그마-알드리치 컴퍼니), 및 둘베코 변형 이글스 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)[(DMEM), 제조원: 시그마-알드리치 컴퍼니]과 같은 상업적으로 이용가능한 배지가 숙주 세포를 배양하기에 적합하다. 또한, 문헌(참조: Ham et al., 1979, Meth. Enz. 58: 44, Barnes et al., 1980, Anal. Biochem. 102: 255, 미국 특허 제4,767,704호, 미국 특허 제4,657,866호, 미국 특허 제4,927,762호, 미국 특허 제4,560,655호, 미국 특허 제5,122,469호, 국제 특허 출원 공보 제WO 90/103430호, 및 제WO 87/00195호) 중 하나 이상에 기재된 배지 중 어느 것도 숙주 세포용 배양 배지로서 사용될 수 있다. 이들 배지 중 어느 것도 필수적으로 호르몬 및/또는 다른 성장 인자(예를 들면, 인슐린, 트랜스페린, 또는 상피 성장 인자), 염(예를 들면, 염화나트륨, 칼슘, 마그네슘, 및 포스페이트), 완충액(예를 들면, HEPES), 뉴클레오타이드(예를 들면, 아데노신 및 티미딘), 항생제(예를 들면, 젠타마이신), 미량 성분(일반적으로 마이크로몰 범위의 최종 농도로 존재하는 무기 화합물로서 정의됨), 및 글루코즈 또는 등가의 에너지 공급원으로 보충할 수 있다. 다른 보충물은 또한 당해 분야의 숙련가에게 공지될 수 있는 적절한 농도로 포함될 수 있다. 온도, pH 등과 같은 배양 조건이 발현을 위해 선택된 숙주 세포와 함께 이미 사용된 것들이며, 당해 분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다.
재조합체 기술을 사용하는 경우, 항체는 세포내적으로, 원형질막주위 공간내에서 생산될 수 있거나, 배지내로 직접 분비될 수 있다. 항체가 세포내적으로 생산되는 경우, 세포는 파괴되어 제1 단계로서 단백질을 방출할 수 있다. 숙주 세포 또는 분해된 단편인 입자화된 잔해는 예를 들면, 원심분리 또는 한외여과에 의해 제거할 수 있다. 문헌(참조: Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167)은 이. 콜라이의 원형질막주위 공간으로 분비되는 항체를 분리하기 위한 과정을 기술하고 있다. 요약하면, 세포 페이스트를 아세트산나트륨(pH 3.5), EDTA, 및 페닐메틸설포닐플루오라이드(PMSF)의 존재하에 약 30분에 걸쳐서 해동시킨다. 세포 잔해를 원심분리에 의해 제거할 수 있다. 항체가 배지로 분비되는 경우, 이러한 발현 시스템으로부터의 상층액은 일반적으로 시판되는 단백질 농도 여과기, 예를 들면, 아미콘(Amicon) 또는 밀리포어 펠리콘 한외여과 장치(Millipore Pellicon ultrafiltration unit)를 사용하여 우선 농축시킨다. PMSF와 같은 프로테아제 억제제는 앞서의 단계 중 어느 단계에 포함되어 단백질분해를 억제할 수 있으며 항생제가 우발적인 오염물의 성장을 방지하기 위해 포함될 수 있다. 각종 방법을 사용하여 숙주 세포로부터 항체를 분리할 수 있다.
세포로부터 제조된 항체 조성물은 예를 들면, 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 및 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제할 수 있으며, 친화성 크로마토그래피는 대표적인 정제 기술이다. 친화성 리간드로서 단백질 A의 적합성은 항체 속에 존재하는 어떠한 면역글로불린 Fc 도메인의 동형 및 종에 의존한다. 단백질 A는 사람 감마1, 감마2, 또는 감마4 중쇄를 기준으로 하는 항체를 정제하는데 사용될 수 있다(참조: 예를 들면, Lindmark et al., 1983 J. Immunol. Meth. 62:1-13). 단백질 G는 모든 마우스 동형 및 사람 감마3에 대해 추천된다(참조: 예를 들면, Guss et al., 1986 EMBO J. 5:1567-1575). 친화성 리간드가 부착된 매트릭스는 가장 흔히 아가로즈이지만, 다른 매트릭스로 이용가능하다. 조절된 공극 유리 또는 폴리(스티렌디비닐)벤젠과 같은 기계적으로 안정한 매트릭스는 아가로즈로 달성될 수 있는 것보다 더 신속한 유속 및 보다 짧은 프로세싱 시간을 허용한다. 항체가 CH3 도메인을 포함하는 경우, Bakerbond ABXTM 수지(참조: J. T. Baker, Phillipsburg, N.J.)가 정제를 위해 유용하다. 또한, 이온 교환 컬럼상에서 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 위에서 크로마토그래피, 헤파린 위에서의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환 수지(예를 들면, 폴리아스파르트산 컬럼) 위에서의 SEPHAROSETM 크로마토그래피, 크로마토포커싱(chromatofocusing), SDS-PAGE, 및 황산암모늄 침전과 같은 단백질 정제를 위한 기타 기술들이, 회수될 항체에 따라 이용가능하다.
어떠한 예비 정제 단계(들)에 이어서, 목적한 항체 및 오염물질을 포함하는 혼합물을 pH 약 2.5 내지 4.5에서 용출 완충액을 사용한 저 pH 소수성 상호작용 크로마토그래피에 적용시키고, 전형적으로 저 염 농도(예를 들면, 약 0 내지 0.25M의 염)에서 수행할 수 있다.
또한 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 분리된 폴리뉴클레오타이드 서열(들)에 의해 나타낸 뉴클레오타이드 서열 모두 또는 일부(예를 들면, 가변 영역을 암호화하는 부위)에 대해 본원에 정의한 바와 같은, 저, 중간 및 고 스트링전시 조건(stringency condition) 하에서 하이브리드화하는 핵산이 포함된다. 하이브리드화 핵산의 하이브리드화 부위는, 전형적으로 길이가 적어도 15(예를 들면, 20, 25, 30 또는 50)개 뉴클레오타이드이다. 하이브리드화 핵산의 하이브리드화 부위는 항-IL-23p19 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 중 모두 또는 일부(예를 들면, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역), 또는 이의 상보체의 서열에 대해 적어도 80%, 예를 들면, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 동일하다. 본원에 기재된 유형의 하이브리드화 핵산은 예를 들면, 클로닝 프로브, 프라이머, 예를 들면, PCR 프라이머, 또는 진단 프로브로서 사용될 수 있다.
일부 양태는 서열 번호 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 또는 119 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하고, 서열 번호 83, 85, 87, 89, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116 또는 118의 폴리뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
일부 양태는 서열 번호 158, 160, 162 또는 164 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하고, 서열 번호 157, 159, 161 또는 163의 폴리뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
일부 양태는 서열 번호 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 또는 156 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하고, 서열 번호 120, 122, 124, 126, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153 또는 155의 폴리뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
일부 양태는 서열 번호 166, 168, 170 또는 172 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하고 서열 번호 165, 167, 169 또는 171의 폴리뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
일부 양태는 서열 번호 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 또는 119 중 어느 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 양태는 서열 번호 158, 160, 162 또는 164 중 어느 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 양태는 서열 번호 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 또는 156 중 어느 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 양태는 서열 번호 166, 168, 170 또는 172 중 어느 하나의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 본원에 사용된 것으로서, 2개 이상의 핵산 또는 폴리펩타이드 서열과 관련하여 용어 "동일한" 또는 "동질성 퍼센트"는 최대 상응성에 대해 비교하고 정렬한 경우, 동일한 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기의 규정된 퍼센트를 갖거나 동일한 2개 이상의 서열 또는 아서열(subsequence)을 말한다. 동질성 퍼센트를 측정하기 위해, 서열은 최적의 비교 목적으로 정렬된다(예를 들면, 갭을 제2 아미노 또는 핵산 서열을 지닌 최적 정렬을 위해 제1 아미노산 또는 핵산 서열의 서열내로 도입시킬 수 있다). 이후에, 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오타이드 위치에서 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드를 비교한다. 제1 서열내 위치가 제2 서열내 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드에 의해 점유되는 경우, 분자는 당해 위치에서 동일하다. 2개의 서열 사이의 동질성 퍼센트는 서열에 의해 공유된 동일한 위치의 수의 함수이다[즉, 동질성% = 동일한 위치의 수/위치의 총 수(예를 들면, 오우버랩핑 위치) x 100]. 일부 양태에서, 비교하는 2개의 서열은, 갭이 서열에 도입된 후 적절하게는(예를 들면, 비교하는 서열을 초과하여 연장되는 추가의 서열 배제) 동일한 길이이다. 예를 들어, 가변 영역 서열을 비교하는 경우, 리더 및/또는 불변 도메인 서열은 고려되지 않는다. 2개의 서열 사이의 서열 비교를 위해, "상응하는" CDR은 서열 둘다에서 동일한 위치내 CDR(예를 들면, 각각의 서열의 CDR-H1)을 말한다.
2개의 서열 사이의 동질성 퍼센트 또는 유사성 퍼센트의 측정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성할 수 있다. 2개의 서열의 비교를 위해 사용된 수학적 알고리즘의 바람직한, 비-제한적 예는 문헌(참조: Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877)에서와 같이 변형된, 문헌(참조: Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268)의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 문헌(참조: Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410)의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램내로 혼입된다. BLAST 뉴클레오타이드 조사는 NBLAST 프로그램, 스코어=100, 워드렝쓰(wordlength)=12를 사용하여 수행함으로써 목적한 단백질을 암호화하는 핵산에 대해 동종인 뉴클레오타이드 서열을 수득할 수 있다. BLAST 단백질 조사는 XBLAST 프로그램, 스코어=50, 워드렝쓰=3을 사용하여 수행함으로써 목적한 단백질에 대해 동종인 아미노산 서열을 수득할 수 있다. 비교 목적을 위한 갭이 있는 정렬을 수득하기 위해, Gapped BLAST를 문헌(참조: Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402)에 기재된 바와 같이 이용할 수 있다. 또는, PSI-Blast를 사용하여 분자들(Id.) 사이의 떨어진 관계를 검출하는 반복된 조사를 수행할 수 있다. BLAST, Gapped BLAST, 및 PSI-Blast 프로그램을 사용하는 경우, 각각의 프로그램(예를 들면, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 매개변수(default parameter)를 사용할 수 있다. 서열 비교를 위해 이용된 수학적 알고리즘의 다른 바람직한, 비-제한적 예는 문헌[참조: Myers and Miller, CABIOS (1989)]의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 일부인 ALIGN 프로그램(버젼 2.0)내로 혼입된다. 아미노산 서열을 비교하기 위한 ALIGN 프로그램을 이용하는 경우, PAM120 중량 잔기 표, 12의 갭 길이 페널티(penalty), 및 4의 갭 페널티를 사용할 수 있다. 서열 분석을 위한 추가의 알고리즘이 당해 분야에 공지되어 있으며 문헌(참조: Torellis and Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5)에 기재된 ADVANCE 및 ADAM; 및 문헌(참조: Pearson and Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444-8)에 기재된 FASTA를 포함한다. FASTA내에서, ktup은 조사의 감수성 및 속도를 설정하는 대조군 선택사항이다. ktup이 2인 경우, 비교하는 2개의 서열내 유사한 영역은 정렬된 잔기의 쌍에서 관찰로 발견되며; ktup이 1인 경우, 단일의 정렬된 아미노산을 시험한다. ktup은 단백질 서열의 경우 2 또는 1로 설정될 수 있으며, DNA 서열의 경우 1 내지 6으로 설정된다. ktup이 명시되지 않는 경우 디폴트는 단백질의 경우 2이고 DNA의 경우 6이다. 또는, 단백질 서열 정렬은 문헌(참조: Higgins et al., 1996, Methods Enzymol. 266:383-402)에 기재된 바와 같이, CLUSTAL W 알고리즘을 사용하여 수행할 수 있다.
비-치료학적 용도
본원에 기재된 항체는 친화성 정제 제제로서 유용하다. 당해 공정에서, 항체는 단백질 A 수지와 같은 고체 상에 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 고정시킨다. 고정된 항체는 정제될 IL-23p19 단백질(또는 이의 단편)을 함유하는 샘플과 접촉된 후, 지지체를 고정된 항체에 결합된, IL-2319 단백질을 제외한 샘플내 실질적으로 모든 물질을 제거할 적합한 용매로 세척한다. 최종적으로, 지지체를 항체로부터 IL-23p19 단백질을 방출할 다른 적합한 용매로 세척한다.
항-IL-23p19 항체, 예를 들면, 사람화된 항-IL-23p19 항체는 또한 IL-23 단백질을 검출하고/하거나 정량하기 위한, 예를 들면, 특정 세포, 조직, 또는 혈청내 IL-23 발현을 검출하는데 유용하다. 항-IL-23p19 항체는 예를 들면, 임상 시험 과정의 일부로서 질환의 발달 또는 진행을 모니터하기 위해, 예를 들면, 제공된 치료 및/또는 예방 요법의 효능을 측정하기 위해 진단적으로 사용할 수 있다. 검출은 항-IL-23p19 항체를 커플링시킴으로써 용이하게 할 수 있다. 검출가능한 물질의 예는 각종 효소, 인공 그룹(prosthetic group), 형광성 물질, 발광성 물질, 생물발광 물질, 방사활성 물질, 다양한 양전자 방사 단층 촬영을 사용하는 양전자 방사 금속 및 비방사활성 상자성 금속 이온을 포함한다. 본 발명에 따른 진단제로서 사용하기 위해 항체에 접합시킬 수 있는 금속 이온의 경우 예를 들면, 미국 특허 제4,741,900호를 참조한다.
항-IL-23p19 항체는 IL-23과 관련된 장애(예를 들면, IL-23의 비정상적인 발현에 의해 특징화되는 장애)를 진단하거나 대상체가 IL-23-관련 장애로 발달할 위험이 증가되어 있는지를 측정하기 위한 방법에서 사용될 수 있다. 이러한 방법은 대상체로부터 생물학적 샘플을 IL-23p19 항체와 접촉시키고 IL-23p19에 대한 항체의 결합을 검출함을 포함한다. "생물학적 샘플"은 IL-23을 잠재적으로 발현하는 개인, 세포주, 조직 배양물, 또는 세포의 다른 공급원으로부터 수득된 어떠한 생물학적 샘플을 의도한다. 포유동물로부터 조직 생검 및 체액을 수득하기 위한 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다.
일부 양태에서, 당해 방법은 대조군 샘플(예를 들면, IL-23과 관련된 장애를 가지지 않은 대상체)에 대해 환자 샘플내 IL-23의 수준을 비교하여 환자가 IL-23과 관련된 장애를 가지거나 IL-23과 관련된 장애로 발달할 위험이 있는지를 측정함을 추가로 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 예를 들면 진단 목적을 위해 검출가능한 모이어티를 가진 항체를 표지하는 것이 유리할 것이다. 방사선동위원소, 형광성 표지, 표소 기질 표지 등을 포함하는, 다수의 검출가능한 표지가 이용가능하다. 당해 표지는 각종의 공지된 기술을 사용하여 항체와 간접적으로 접합시킬 수 있다.
예를 들면, 항체는 바이오틴과 접합시킬 수 있으며 위에서 언급한 표지의 3개의 광범위한 범주 중 어느 것도 아비딘과 접합시키거나 역으로 접합시킬 수 있다. 바이오틴은 아비딘에 선택적으로 결합함으로써, 표지는 이러한 간접적인 방식으로 항체와 접합될 수 있다. 또는, 표지와 항체의 간접적인 접합을 달성하기 위하여, 항체를 작은 합텐(예를 들면 디곡신)과 접합시킬 수 있으며 위에서 언급한 표지 중 상이한 유형 중 하나를 항-합텐 항체(예를 들면, 항-디곡신 항체)와 접합시킨다. 따라서, 표지와 항체의 간접적인 접합을 달성할 수 있다.
예시적인 방사선동위원소 표지는 35S, 14C, 125I, 3H, 및 131I를 포함한다. 항체는 예를 들면, 문헌(참조: Current Protocols in Immunology, Volumes 1 and 2, 1991, Coligen et al., Ed. Wiley-Interscience, New York, N.Y., Pubs)에 기재된 기술을 사용하여 방사선동위원소로 표지할 수 있다. 방사활성은 예를 들면, 신틸레이션 계수(scintillation counting)로 측정할 수 있다.
예시적인 형광성 표지는 희토류 킬레이트(유로피움 킬레이트)로부터 기원한 표지를 포함할 수 있거나 플루오레세인 및 이의 유도체, 로다민 및 이의 유도체, 단실, 리싸민, 피코에리트린, 및 텍사스 레드(Texas Red)가 이용가능하다. 형광성 표지는 예를 들면, 문헌(참조: Current Protocols in Immunology)에 기재된 것들과 같은, 공지된 기술을 통해 항체에 접합시킬 수 있다. 형광성은 형광계를 사용하여 정량화할 수 있다.
당해 분야에 각종의 잘-특징화된 효소-기질 표지가 존재한다(참조: 예를 들면, 고찰을 위한 미국 특허 4,275,149). 효소는 일반적으로 다양한 기술을 사용하여 측정할 수 있는 색원체성 기질의 화학적 변경을 촉매한다. 예를 들면, 변경은 분광광도계적으로 측정할 수 있는 기질내 색상 변화일 수 있다. 또는, 효소는 기질의 형광성 또는 화학발광성을 변경시킬 수 있다. 형광성에 있어서의 변화를 정량화하기 위한 기술은 위에 기재되어 있다. 화학발광성 기질은 화학 반응에 의해 전자적으로 여기된 후 예를 들면, 화학발광계를 사용하여 측정될 수 있는 광을 방사하거나 에너지를 형광성 수용체로 제공할 수 있다.
표소 표지의 예는 불나방 루시퍼라제 및 세균 루시퍼라제와 같은 루시퍼라제(참조: 미국 특허 제4,737,456호), 루시페린, 2,3-디하이드로프탈라진디온, 말레이트 데하이드로게나제, 우레아제, 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRPO)와 같은 퍼옥시다제, 알칼린 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 라이소자임, 사카라이드 옥시다제(예를 들면, 글루코즈 옥시다제, 갈락토즈 옥시다제, 및 글루코즈-6-포스페이트 데하이드로게나제), 헤테로사이딕 옥시다제(예를 들면, 우리카제 및 크산틴 옥시다제), 락토퍼옥시다제, 마이크로퍼옥시다제 등을 포함한다. 효소를 항체에 접합시키기 위한 기술은 예를 들면 문헌[참조: O'Sullivan et al., 1981, Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. (J. Langone & H. Van Vunakis, eds.), Academic press, N.Y., 73: 147-166]에 기재되어 있다.
효소-기질 조합의 예는 예를 들면, 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRPO)와 기질로서 수소 퍼옥시다제[여기서, 수소 퍼옥시다제는 오르토페닐렌 디아민(OPD) 또는 3,3',5,5'-테트라메틸 벤지딘 하이드로클로라이드(TMB)과 같은 염료 전구체를 산화시킨다]; 알칼린 포스파타제(AP)와 색원체성 기질로서 파라-니트로페닐 포스페이트; 및 β-D-갈락토시다제(β-D-Gal)와 p-니트로페닐-β-D-갈락토시다제 또는 형광원 기질 4-메틸움벨리페릴-β-D-갈락토시다제와 같은 색원체성 기질을 포함한다.
다수의 다른 효소-기질 조합이 당해 분야의 숙련가에게 이용가능하다. 이들의 일반적인 고찰을 위해, 미국 특허 제4,275,149호 및 미국 특허 제4,318,980호를 참조한다. 다른 양태에서, 사람화된 항-IL-23p19 항체를 표지하지 않고 사용하고 사람화된 항-IL-23p19 항체에 결합하는 표지된 항체를 사용하여 검출한다.
본원에 기재된 항체는 경쟁적 결합 검사, 직접 또는 간접 샌드위치 검사, 및 면역침전 검사와 같은 어떠한 공지된 검사 방법에서도 사용할 수 있다[참조: 예를 들면, Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987)].
항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IL-23 수용체에 대한 IL-23의 결합을 억제하는데 사용할 수 있다. 이러한 방법은 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 세포(예를 들면, 포유동물 세포) 또는 세포 환경에 투여함을 포함하며, 이에 의해 IL-23 수용체에 의해 매개된 시그날링이 억제된다. 이들 방법들은 시험관내 또는 생체내에서 수행할 수 있다. "세포 환경"은 조직, 배지, 또는 세포를 둘러싼 세포외 매트릭스를 의도한다. 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 세포의 세포 환경에, 항체 또는 표적이 세포의 외부 또는 세포의 주변의 IL-23 분자에 결합할 수 있는 방식으로 투여됨으로써 이의 수용체에 대한 IL-23의 결합을 방지한다.
진단 키트
항-IL-23p19 항체는 진단 키트, 예를 들면, 예정된 양의 시약과 진단 검사를 수행하기 위한 지시사항과의 포장된 조합으로 사용될 수 있다. 항체가 효소로 표지되는 경우, 키트는 기질 및, 검출가능한 발색단 또는 형광단을 제공하는 기질 전구체와 같은 효소에 의해 요구되는 보조인자를 포함할 수 있다. 또한, 안정화제, 완충액(예를 들면, 차단 완충액 또는 용해 완충액)과 같은 다른 첨가제 등이 포함될 수 있다. 각종 시약의 상대적인 양은 검사의 감수성을 실질적으로 최적화하는 시약의 용액 속에서 농도를 제공하기 위해 광범위하게 변할 수 있다. 시약은 용해시 적절한 농도를 갖는 시약 용액을 제공할 부형제를 포함하는, 일반적으로 동결건조된 무수 분말로서 제공될 수 있다.
치료학적 용도
다른 양태에서, 본원에 기재된 사람화된 항-IL-23p19 항체는 본원에 기재된 바와 같은 IL-23p19의 발현과 관련된 각종 장애의 치료시 유용하다. IL-23 관련된 질환의 치료 방법은 치료학적 유효량의 사람화된 항-IL-23p19 항체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함한다.
사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 제제는 비경구, 피하, 복강내, 폐내, 및 비강내 및 경우에 따라, 국소 면역억제성 치료를 위해, 병변내 투여(관류 또는 기타의 경우 이식전 이식체와 항체의 접촉을 포함)를 포함하는 어떠한 적합한 수단에 의해서도 투여된다. 사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 제제는 예를 들면, 주입으로서 또는 볼루스(bolus)로서 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 또한, 사람화된 항-IL-23p19 항체는 특히 항체의 감소하는 용량을 사용한 펄스 주입(pulse infusion)으로 적합하게 투여된다. 하나의 국면에서, 투여는, 투여가 짧거나 만성인 경우에 일부 의존하여, 주사에 의해, 가장 바람직하게는 정맥내 또는 피하 주사에 의해 제공된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 항체의 적절한 투여량은, 항체가 예방학적 또는 치료학적 목적을 위해 투여되는지에 상관없이, 위에서 정의한 바와 같은, 치료될 질환의 유형, 질환의 중증도 및 과정, 선행 치료요법, 환자의 임상 병력 및 항체에 대한 반응, 및 주치의의 재량과 같은 다양한 인자에 의존할 것이다. 항체는 환자에게 1회 또는 일련의 치료에 걸쳐 적합하게 투여된다.
질환의 유형 및 중증도에 따라서, 약 1 mg/kg 내지 20 mg/kg(예를 들면, 0.1 내지 15 mg/kg)의 항체는, 예를 들면, 1회 이상의 별도의 투여에 의해, 또는 연속 주입에 의해, 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량이다. 대표적인 1일 투여량은 위에서 언급한 인자들에 따라, 약 1㎍/kg 내지 100 mg/kg 이상의 범위일 수 있다. 상태에 따라, 수일 이상에 걸친 반복된 투여를 위해, 치료는 질환 증상의 바람직한 억제가 일어날 때까지 지속된다. 그러나, 다른 투여량 요법이 유용할 수 있다. 이러한 치료요법의 진행은 통상의 기술 및 검사에 의해 용이하게 모니터링된다. 예시적인 투여 요법은 국제 특허 출원 공보 제WO 94/04188호에 기재되어 있다.
용어 "억제"는 질환의 하나 이상의 특징을 약화시킴을 의미하기 위해 "개선" 및 "완화"와 동일한 내용으로 본원에서 사용된다.
항체 조성물은 우수한 의학적 실시와 일치하는 양식으로 제형화되고, 복용되고, 투여될 것이다. 이와 관련하여 고려할 인자는 치료되는 특수 장애, 치료되는 특수 포유동물, 개개 환자의 임상 상태, 장애의 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 계획, 및 의학 숙련의에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 투여될 항체의 "치료학적 유효량"은 이러한 고려에 의해 조절될 것이며 IL-23 발현과 관련된 장애를 예방하거나, 완화시키거나, 치료하는데 필수적인 최소량이다.
항체는 문제의 장애를 예방하거나 치료하기 위해 현재 사용된 하나 이상의 제제와 함께 존재할 필요는 없지만 임의로 이와 제형화된다. 이러한 다른 제제의 유효량은 제형 속에 존재하는 사람화된 항-IL-23p19 항체의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 위에서 논의한 다른 인자에 의존한다. 이들은 일반적으로 동일한 투여량 및 앞서 사용된 바와 같은 투여 경로에서 또는 앞서 사용된 투여량의 약 1 내지 99%로 사용된다.
IL -23-관련 장애
항-IL-23p19 항체 또는 제제는 IL-23의 비정상적인 발현에 의해, 예를 들면, 면역 세포(예를 들면, 림프구 또는 수지상 세포)의 부적절한 활성화에 의해 특징화되는 면역학적 장애를 치료하거나 예방하는데 유용하다. IL-23의 이러한 비정상적인 발현은 예를 들면, 증가된 IL-23 단백질 수준에 기인할 수 있다. 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 또한 호흡기 장애, 대사 장애, 예를 들면, 진성 당뇨병, 및 특정 암의 치료 또는 예방시 사용된다. 본원에 기재된 방법에 따른 면역학적 장애, 호흡기 장애, 대사 장애 또는 암의 치료 또는 예방은 이러한 치료 또는 예방이 요구되는 대상체에게 유효량의 항-IL-23p19 항체 또는 제제를 투함으로써 달성되며, 이에 의해 항체는 질환 상태와 관련된 IL-23의 활성을 감소시킨다.
면역 세포의 부적절한 활성화에 의해 특징화되며 본원에 기재된 방법에 의해 치료되거나 예방할 수 있는 면역학적 질환은 예를 들면, 장애의 기저를 이루는 과감수성 반응(들)의 유형(들)에 의해 분류될 수 있다. 이러한 반응은 전형적으로 4개의 유형: 과민증 반응, 세포독성(세포분해) 반응, 면역복합체 반응, 또는 세포-매개된 면역성(CMI) 반응(또한 지연된-유형의 과감수성(DTH) 반응으로 언급됨)으로 분류된다(참조: 예를 들면, Fundamental Immunology (William E. Paul ed., Raven Press, N.Y., 3rd ed. 1993). 면역학적 질환은 염증성 질환 및 자가면역 질환을 포함한다.
이러한 면역학적 질환의 구체적인 예는 다음을 포함한다: 류마티스 관절염, 자가면역 탈수초성 질환(예를 들면, 다발경화증, 알레르기성 뇌척수염), 내분비성 눈병, 포도막망막염(uveoretinitis), 전신 홍반 루푸스, 중증 근무력증, 그레이브스병(Grave's disease), 사구체신염, 자가면역 혈액 장애, 염증성 장 질환[예를 들면, 크론병(Crohn's disease) 또는 궤양성 대장염), 과민증, 알레르기 반응, 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 제I형 진성 당뇨병, 원발쓸개관간경화증, 베게너육아종증, 섬유근통, 다발근육염, 피부근염, 염증성 근염, 다발성 내분비기능상실(multiple endocrine failure), 쉬미트 증후군(Schmidt's syndrome), 자가면역 포도막염, 애디슨병(Addison's disease), 부신염, 육아종갑상샘염, 하시모토 갑상선염(Hashimoto's thyroiditis), 자가면역갑상선 질환, 악성빈혈, 위선 위축, 만성 간염, 낭창양간염(lupoid hepatitis), 죽상경화증, 아급성피부홍반루푸스, 부갑상샘기능저하증, 드레슬러 증후군(Dressler's syndrome), 자가면역성혈소판감소증, 특발저혈소판자색반병, 용혈빈혈, 보통천포창, 천포창, 포진피부염, 원형탈모증(alopecia arcata), 유사천포창, 피부경화증, 진행전신경화증, 크레스트 증후군(CREST syndrome)[석회증, 레이노현상(Raynaud's phenomenon), 식도 운동장애(esophageal dysmotility), 가락피부경화증, 및 모세혈관확장증], 남성 및 여성 자가면역성 불임증, 강직척추염, 궤양성 대장염, 혼합결합조직병, 결절다발동맥염, 전신괴사혈관염, 아토피성 피부염, 아토피성 비염, 굳파스춰 증후군(Goodpasture's syndrome), 샤가스병(Chagas' disease), 사르코이드증(sarcoidosis), 류마티스열, 천식, 재발성 유산, 항-인지질 증후군, 농부폐(farmer's lung), 다형 홍반, 심장절개술후증후군, 쿠싱증후군(Cushing's syndrome), 자가면역 만성 활성 간염, 새 사육가 폐(bird-fancier's lung), 독성표피괴사용해, 알포트증후군(Alport's syndrome), 폐포염, 알레르기성 폐포염, 섬유화 폐포염(fibrosing alveolitis), 간질성폐질환, 결절홍반, 괴저화농피부증, 수혈 반응, 다카야스 동맥염(Takayasu's arteritis), 류마티스성 다발성 근육통, 측두동맥염, 주혈흡충증, 거세포동맥염, 회충증, 아스페르길루스증(aspergillosis), 샘터 증후군(Sampter's syndrome), 습진, 림프종모양육아종증, 베체트병(Behcet's disease), 카플란 증후군(Caplan's syndrome), 가와사키병(Kawasaki's disease), 뎅기(dengue), 뇌척수염, 심내막염, 심내막심근섬유증, 안구내염, 지속융기홍반(erythema elevatum et diutinum), 건선, 건선관절염, 태아적모구증, 호산구성 근막염, 슐만 증후군(Shulman's syndrome), 펠티증후군(Felty's syndrome), 사상충증, 섬모체염, 만성 섬모체염, 헤테로클로닉 섬모체염(heterochronic cyclitis), 푸흐 섬모체염(Fuch's cyclitis), IgA 콩팥병증, 헤노흐-쇤라인자색반(Henoch-Schonlein purpura), 이식체 대 숙주병, 이식 거부, 심근병증, 이튼-람베르트 증후군(Eaton-Lambert syndrome), 재발성 다발신경병증, 저온글로불린혈증, 발덴스트롬스 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulemia), 에반증후군(Evan's syndrome), 급성 호흡곤란증후군, 폐 염증, 골다공증, 지연된 유형의 과감수성 및 자가면역 생식샘 기능장애(autoimmune gonadal failure).
일부 양태에서, 면역학적 장애는 T 세포-매개된 면역학적 장애이며 따라서, 본원에 기재된 바와 같은 항-IL-23p19 항체 및 제제는 또한 T 세포-매개된 면역학적 장애를 치료하거나 예방하는데 유용하다.
하나의 국면에서, 항-IL-23p19 항체 또는 제제는, IL-23이 비정상적으로 발현되는 호흡기 장애를 치료하거나 예방하는데 유용하다. 본원에 기재된 방법에 따른 호흡기 장애의 치료 또는 예방은, 이러한 치료 또는 예방이 요구되는 대상체에게 유효량의 항-IL-23p19 항체 또는 제제를 투여함으로써 달성되며, 이에 의해 항체는 질환 상태와 관련된 IL-23의 활성을 감소시킨다. 이는 호흡 곤란, 각종 기원의 폐쇄성 폐병, 각종 기원의 폐 기종, 구속성 폐질환, 간질성 폐병(interstitial pulmonary disease), 간질성 폐질환(interstitial lung disease), 낭성 섬유증, 각종 기원의 기관지염, 기관지확장증, ARDS(성인 호흡곤란 증후군) 및 모든 형태의 폐 부종; COPD (만성 폐쇄성 폐병), 천식, 만성 천식, 소아과 천식, 중증 천식, 급성 천식 발작(acute asthma attack) 및 만성 기관지염 중에서 선택된 폐쇄성 폐병; COPD(만성 폐쇄성 폐병) 또는 α1-프로테이나제 억제제 결핍증에서 이의 기원을 갖는 폐기종; 알레르기성 폐포염, 석면증 또는 규폐증과 같은 작업-관련된 유독 물질에 의해 개시된 구속성 폐질환, 예를 들면 암종림프관염, 기관지폐포암종 및 림프종과 같은 폐 종양에 의해 유발된 제한(restriction) 중에서 선택된 구속성 폐병; 예를 들면, 바이러스, 세균, 진균, 원생생물, 기생충 또는 다른 병원체에 의한 감염과 같은 감염에 의해 유발된 폐렴, 예를 들면 흡인 및 좌심장 기능부전과 같은 각종 인자들에 의해 유발된 폐렴, 방사선-유도된 폐렴 또는 섬유증, 예를 들면, 홍반루푸스, 전신피부경화증 또는 사르코이드증(sarcoidosis)과 같은 콜라겐증, 예를 들면, 베크병(Boeck's disease), 특발성 간질성 폐렴 또는 특발성 폐섬유증(IPF)과 같은 육아종증; 점액점착증, 세균 또는 바이러스 감염에 의해 유발된 기관지염, 알레르기성 기관지염 및 독성 기관지염; 기관지확장증; 폐부종, 예를 들면, 독성 물질 및 외부 물질의 흡인 또는 흡입 후 독성 폐부종; 비염, 관절염 및 관련된 관절병증, 건선, 골수성 백혈병, 다발경화증, 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 사구체신염, 및 만성 아토피성 피부염을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
다른 국면에서, 본원에 기재된 항-IL-23p19 항체 및 제제는, 또한 IL-23이 비정상적으로 발현되는 암을 치료하는데 유용하다.
본원에 기재된 방법으로 치료할 수 있는 IL-23을 발현하는 암은 예를 들면, 급성 백혈병, 급성 림프성백혈병, 급성 골수세포백혈병(예를 들면, 골수모구, 전골수구, 골수단핵구, 단핵구, 또는 적백혈병), 만성 백혈병, 만성 골수구(과립구) 백혈병, 또는 만성림프성 백혈병; 진성적혈구증가증; 림프종[예를 들면, 호지킨병(Hodgkin's disease) 또는 비-호지킨병(Non-Hodgkin's disease)]; 다발골수종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia); 중쇄병; 육종 및 암종[예를 들면, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종(osteogenic sarcoma), 뼈육종(osteosarcoma), 척삭종, 혈관육종, 내피육종(endotheliosarcoma), 림프관육종, 림프관내피포육종(lymphangioendotheliosarcoma), 윤활막종, 중피종, 유윙종양(Ewing's tumor), 평활근육종, 횡문근육종, 결장암종, 결장직장암종, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립샘암, 평편세포 암종, 기저세포 암종, 샘암종, 한선 암종, 피부기름샘 암종, 유두모양암종, 유두모양샘암종, 낭선암종, 수질암종, 기관지원성 암종, 신장 세포 암종, 간암, 쓸개관 암종, 융모막암종, 고환종, 배아암종, 윌름즈종양(Wilms' tumor), 경부암, 자궁암, 고환종양, 폐 암종, 소세포 폐 암종, 비 소세포 폐 암종, 방광 암종, 상피 암종, 신경아교종, 별아교세포종, 속질모세포종, 두개인두종, 뇌실막종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경초종, 희소돌기아교세포종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종, 망막모세포종, 코인두암종, 또는 식도암종]과 같은 고형 종양을 포함한다.
약제학적 조성물 및 이의 투여
IL-23p19 결합제(예를 들면, 항-IL-23p19 항체)를 포함하는 조성물은 면역학적 질환, 호흡기 장애 또는 암에 걸리거나 걸릴 위험이 있는 대상체에게 투여될 수 있다. 본 발명은 또한 암, 호흡기 장애 또는 면역학적 장애의 예방 또는 치료용 의약의 제조시 IL-23p19 결합제(예를 들면, 항-IL-23p19 항체)의 용도를 제공한다. 본원에 사용된 것으로서 용어 "대상체"는, IL-23p19 결합제가 투여될 수 있는 어떠한 포유동물 환자, 예를 들면, 사람 및 영장류, 설치류 및 개와 같은 비-사람 포유동물을 의미한다. 본원에 기재된 방법을 사용한 치료를 위해 구체적으로 의도된 대상체는 사람을 포함한다. 항체 또는 제제는 면역학적 장애, 호흡기 장애 또는 암의 예방 또는 치료시 다른 조성물과 함께 또는 단독으로 투여될 수 있다. 항체 또는 다른 제제와 함께 투여될 수 있는 이러한 제제는 메토트렉세이트(MTX) 및 면역조절인자, 예를 들면, 항생제 또는 소분자를 포함한다.
이러한 약제학적 조성물에서 사용하기 위한 항체의 예는 서열 번호 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 또는 119 중 어느 것의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 사람화된 항체 또는 항체 단편를 포함하는 것이다. 이러한 조성물에서 사용하기 위한 항체의 예는 또한 서열 번호 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 또는 156 중 어느 것의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 사람화된 항체 또는 항체 단편을 포함하는 것이다.
이러한 약제학적 조성물에서 사용하기 위한 항체의 추가의 예는 서열 번호 158, 160, 162 또는 164 중 어느 것의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 사람화된 항체 또는 항체 단편을 포함하는 것이다. 이러한 약제학적 조성물에서 사용하기에 바람직한 항체는 서열 번호 166, 168, 170 또는 172 중 어느 것의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 사람화된 항체 또는 항체 단편을 포함하는 것이다.
이러한 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항체의 추가의 예는 또한 서열 번호 160 및 166, 서열 번호 160 및 168, 서열 번호 158 및 166 또는 서열 번호 158 및 168 중 어느 것의 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 갖는 사람화된 항체 또는 항체 단편을 포함하는 것이다.
이러한 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항체의 추가의 예는 또한 서열 번호 174 또는 180 중 어느 것의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 사람화된 항체를 포함하는 것이다. 이러한 약제학적 조성물에 사용하기 위한 바람직한 항체는 또한 서열 번호 176 또는 178 중 어느 것의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열을 갖는 사람화된 항체를 포함하는 것이다.
이러한 약제학적 조성물에 사용하기 위한 항체의 추가의 예는 또한 항체 A, 항체 B, 항체 C 또는 항체 D를 포함하는 것이다.
각종 전달 시스템이 공지되어 있으며 IL-23p19 결합제를 투여하는데 사용될 수 있다. 도입 방법은 피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비내, 경막외 및 경구 경로를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. IL-23p19 결합제는 예를 들면, 주입, 볼루스 또는 주사에 의해 투여될 수 있으며, 화학치료제와 같은 다른 생물학적으로 활성인 제제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신 또는 국소일 수 있다. 바람직한 양태에서, 투여는 피하 주사에 의한다. 이러한 주사용 제형은 예를 들면 격주당 1회 투여될 수 있는 예비충전된 주사기 속에 제조될 수 있다.
구체적인 양태에서, IL-23p19 결합제 조성물은 주사에 의해, 카테터(catheter)의 수단에 의해, 좌제의 수단에 의해, 또는 이식의 수단에 의해 투여되며, 이식체는 실라스틱 막과 같은 막, 또는 섬유를 포함하는 다공성, 비-다공성, 또는 젤라틴성 물질이다. 전형적으로, 조성물을 투여하는 경우, 항-IL-23p19 항체 또는 제제가 흡수되지 않는 물질이 사용된다.
다른 양태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 제제는 조절된 방출 시스템으로 전달된다. 하나의 양태에서, 펌프가 사용될 수 있다(참조: 예를 들면, Langer, 1990, Science 249:1527-1533; Sefton, 1989, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574). 다른 양태에서, 중합체성 물질이 사용될 수 있다[참조: 예를 들면, Medical Applications of Controlled Release (Langer and Wise eds., CRC Press, Boca Raton, Fla., 1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen and Ball eds., Wiley, New York, 1984); Ranger and Peppas, 1983, Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61. See also Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105]. 다른 조절된 방출 시스템이 예를 들면 상기 문헌(참조: Langer)에 논의되어 있다.
IL-23p19 결합제(예를 들면, 항-IL-23p19 항체)는 치료학적 유효량의 결합제 및 하나 이상의 약제학적으로 혼용성인 성분을 포함하는 약제학적 조성물로서 투여될 수 있다.
대표적인 양태에서, 약제학적 조성물은 사람에게 정맥내 또는 피하 투여를 위해 채택된 약제학적 조성물로서 통상의 과정에 따라서 제형화된다. 전형적으로, 주사에 의한 투여용 조성물은 멸균 등장성 수성 완충액 중 액제이다. 경우에 따라, 약제는 또한 주사 부위에서 통증을 줄이는 리그노카인과 같은 국소 마취제 및 가용화제를 포함할 수 있다. 일반적으로, 성분은 예를 들면 앰플 또는 활성 성분의 양을 나타내는 사셰(sachette)와 같은 밀봉된 용기 속에 무수 동결건조된 분말 또는 무수 농축물로서 단위 투여량형 속에 별도로 공급되거나 함께 혼합된다. 약제가 주입에 의해 투여되는 경우, 이는 멸균 약제 등급의 물 또는 염수를 함유하는 주입병으로 조제될 수 있다. 약제가 주사에 의해 투여되는 경우, 주사용 멸균수 또는 염수의 앰플이 제공되어 성분을 투여 전에 혼합할 수 있다.
또한, 약제학적 조성물은 (a) 동결건조된 형태의 IL-23p19 결합제(예를 들면, 항-IL-23p19 항체)를 함유하는 용기 및 (b) 주사용의 약제학적으로 허용되는 희석제(예를 들면, 멸균수)를 함유하는 제2 용기를 포함하는 약제학적 키트로서 제공될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 희석제는 동결건조된 항-IL-23p19 항체 또는 제제의 재구성 또는 희석을 위해 사용될 수 있다. 이러한 용기(들)과 함께 약제 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 감독하는 정부 기관에 의해 처방된 형태의, 제조 단체에 의한 승인, 사람 투여를 위한 사용 또는 판매를 반영하는 안내서와 임의로 연합될 수 있다.
면역학적 장애 또는 암을 치료하거나 예방하는데 있어서 효과적인 IL-23p19 결합제(예를 들면, 항-IL-23p19 항체)의 양은 표준 임상 기술로 측정할 수 있다. 또한, 시험관내 검사는 최적의 투여량 범위를 확인하는데 도움을 주기 위해 임의로 사용될 수 있다. 제형에서 사용될 정밀한 용량은 또한 투여 경로, 및 면역학적 장애 또는 암의 단계에 의존할 것이며, 의사의 판단 및 각각의 환자의 상태에 따라 결정될 수 있다. 유효 용량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 기원한 용량-반응 곡선으로부터 추론될 수 있다.
일반적으로, 면역학적 장애 또는 항-IL-23p19를 발현하는 암을 지닌 환자에게 투여된 항-IL-23p19 항체 또는 IL-23p19 결합제의 투여량은 전형적으로 약 0.1 mg/kg 내지 약 100 mg/kg의 대상체의 체중이다. 대상체에게 투여된 투여량은 약 0.1 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 15 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 대상체의 체중이다.
예시적인 용량은 1 ng/kg 내지 100 mg/kg을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일부 양태에서, 용량은 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 11 mg/kg, 약 12 mg/kg, 약 13 mg/kg, 약 14 mg/kg, 약 15 mg/kg 또는 약 16 mg/kg이다. 용량은 예를 들면, 매일, 주당 1회(매주), 주당 2회, 주당 3회, 주당 4회, 주당 5회, 주당 6회, 격주로 또는 매달, 격달마다, 또는 3개월마다 투여될 수 있다. 구체적인 양태에서, 용량은 약 0.5 mg/kg/주, 약 1 mg/kg/주, 약 2 mg/kg/주, 약 3 mg/kg/주, 약 4 mg/kg/주, 약 5 mg/kg/주, 약 6 mg/kg/주, 약 7 mg/kg/주, 약 8 mg/kg/주, 약 9 mg/kg/주, 약 10 mg/kg/주, 약 11 mg/kg/주, 약 12 mg/kg/주, 약 13 mg/kg/주, 약 14 mg/kg/주, 약 15 mg/kg/주 또는 약 16 mg/kg/주이다. 일부 양태에서, 용량은 약 1 mg/kg/주 내지 약 15 mg/kg/주의 범위이다.
일부 양태에서, IL-23p19 결합제를 포함하는 약제학적 조성물은 결합제에 접합되거나 접합되지 않는 치료제를 추가로 포함할 수 있다. 항-IL-23p19 항체 또는 IL-23p19 결합제는 면역학적 장애 또는 암의 치료 또는 예방용의 하나 이상의 치료제와 함께 동시-투여될 수 있다.
이러한 조합 치료요법 투여는 질환 매개변수(예를 들면, 증상의 중증도, 증상의 수, 또는 재발 빈도)에 있어서 부가효과 또는 상승효과를 가질 수 있다.
조합 치료를 위한 치료학적 요법과 관련하여, 구체적인 양태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 IL-23p19 결합제는 치료제와 동시에 투여된다. 다른 구체적인 양태에서, 치료제는 항-IL-23p19 항체 또는 IL-23p19 결합제의 투여 전 또는 후속적으로, 적어도 1시간 및 7개월까지 예를 들면, 적어도 1시간, 5시간, 12시간, 1일, 1주, 1개월, 또는 3개월, 항-IL-23p19 항체 또는 IL-23p19 결합제의 투여 전 또는 후속적으로 투여된다.
제조 제품
다른 국면에서, 위에서 기재된 장애의 치료에 유용한 물질을 함유하는 제조 제품이 포함된다. 제조 제품은 용기 및 표지를 포함한다. 적합한 용기는 예를 들면, 병, 바이알, 주사기, 및 시험 튜브를 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 각종 물질로부터 형성될 수 있다. 용기는 상태를 치료하는데 효과적인 조성물을 보유하며 멸균된 접근가능한 포트(sterile access port)를 가질 수 있다. 예를 들면, 용기는 피하주사 침에 의해 뚫릴 수 있는 스토퍼(stopper)를 가진 정맥내 용액 백(bag) 또는 바이알(vial)일 수 있다. 조성물 중 활성제는 사람화된 항-IL-23p19 항체이다. 용기 상의 또는 이와 관련된 표지는, 조성물이 선택된 상태를 치료하는데 사용됨을 나타낸다. 제조 제품은 인산염-완충된 염수, 링거액(Ringer's solution), 및 덱스트로즈 용액과 같은 약제학적으로 허용되는 완충액을 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 또한 다른 완충액, 희석액, 여과제, 침, 주사기, 및 사용을 위한 지시사항이 들어있는 포장 삽입물을 포함하는, 시판 및 사용자 관점으로부터 바람직한 다른 자재를 포함할 수 있다.
본 발명은 본 발명의 영역을 제한하는 것으로 의도되지 않는, 다음 실시예에 추가로 기재되어 있다.
실시예
실시예 1: 사람화된 항-IL-23p19 항체의 생산
마우스 리드 항체(Mouse lead antibody) 6B8을 6B8의 마우스 가변 도메인 및 사람 고정 IgG1KO 도메인으로 이루어진 키메라 항체로 전환시켰다. 마우스 항체 6B8는 상기 본원의 표 1 및 2에 나타낸다. IgG1KO(녹 아웃(knock out))은 FcγR 및 상보체 결합과 같은 효과기 기능을 감소시킴으로써 ADCC 및 CDC 활성을 제거하는 2개의 치환 돌연변이(Leu234Ala 및 Leu235Ala)를 갖는다. 마우스 및 키메라 항체의 가변 도메인은 동일하다. 키메라 항체는 항체의 기능을 확인하고 정확한 서열이 수득되는 것을 보증하기 위해 생성된다. 이후에, 항체의 가변 영역을 설계 및 스크리닝 공정을 통해 사람화한다. 라이브러리를 제조하며 여기서 사람 및 마우스 잔기는 어떠한 제공된 위치에서도 사람 또는 마우스 잔기가 존재할 수 있도록 하는 방식으로 변하였다. 이러한 라이브러리를 사람 배선 및 마우스 항체 사이에 상이한 아미노산에 대해 제조하였다. 모 마우스 항체의 기능을 보유하는 클론만을 선택하였다. 항체 6B8에 대한 대표적인 사람화된 가변 영역은 표 5 및 6에 나타낸다.
당해 방식으로, 항체 A, 항체 B, 항체 C 및 항체 D는 마우스 항체 6B8 (사람 IgG1-KO내로 클로닝됨(KO = 녹 아웃)/카파 골격)으로부터 기원한 사람화된 항체였다. 항체 A, B, C 및 D는 표 7에 나타낸다.
실시예 2: 재조합체 IL-23 단백질에 대한 항체의 결합
A) 재조합체 사람 IL-23에 대한 마우스 항-IL-23p19 항체 결합의 역학 및 친화성을 하기(표 9)에 나타낸다. 역학 및 결합 친화성은 포르테바이오 옥테트(Fortebio Octet)[제조원: 포르테바이오(Fortebio), 미국 캘리포니아주 멘로 파크 소재]를 사용하여 하이브리도마로부터 단일 컬럼 정제 후 생성된 물질을 사용하여 측정하였다. 옥테트는 유체공학계 기술이 아니므로, 당해 방법은 오프-속도(off-rate)의 정밀한 측정을 제공하지 않는다. 일부 경우에, 친화성의 추정치만이 수득될 수 있다.
항체 ka(1/Ms) kd(1/s) KD(pM)
18C4 3.84E+05 2.14E-06 5.57
18E 5 3.29E+05 2.61E-06 7.93
18D3 3.19E+05 2.16E-06 6.78
20 E8 4.21E+05 2.69E-04 638
22 E2 3.46E+05 3.53E-04 1024
24A5 2.02E+05 4.57E-06 22.6
15C11 4.11E+05 1.07E-05 26
43F5 1.72E+05 5.96E-06 34.6
27G8 1.57E+05 4.26E-06 27.2
31H9 2.99E+05 3.45E-06 11.5
2D1 < 1e-6 < 1
9D12 < 1e-6 < 1
6B8 < 1e-6 < 1
73H10 5.29E+04 5.24E-06 99.2
74H3 3.06E+04 2.09E-06 68.3
35H8 　
26F7 4.76E+05 1.34E-05 28.1
34G3 9.18E+05 3.10E-05 32.8
34D9 3.44E+03 1.87E-06 544
B) 친화성은 마우스 항체 6B8로부터 기원한 사람화된 항체에 대해 측정하였다. ProteON XPR36[제조원: 바이오라드(Biorad), 미국 캘리포니아주 헤르쿨레스 소재]를 사용하여 측정되고 1:1 결합 모델에 전세계적으로 일치시킨 역학적 결합 데이타는, 1 pM ~ 100 pM의 범위내에서 고 친화성이도록 p19 및 p40 소단위를 공유결합적으로 연결시키는 21개 아미노산 링커가 존재하거나 부재하는 재조합체 IL-23과의 상호작용을 입증하였다(표 10). 항체 6H12(국제 특허 출원 공보 제WO 2007/027714호에 기재됨), 항체 QF20(국제 특허 출원 공보 제WO 2007/024846호에 기재됨) 및 항체 C1273(국제 특허 출원 공보 제WO 2007/005955호에 기재됨)을 또한 시험하였다.
Figure 112013039021542-pct00022
C) 시노몰구스 IL-23에 대한 항-IL-23p19 항체 결합에 대한 친화성 및 역학적 데이타를 ProteON XPR36에서 측정하고 1:1 결합 모델에 전반적으로 일치시켰다(표 11). 항체 6H12(국제 특허 출원 공보 제WO 2007/027714호에 기재됨), 항체 QF20(국제 특허 출원 공보 제WO 2007/024846호에 기재됨) 및 항체 C1273(국제 특허 출원 공보 제WO 2007/005955호에 기재됨)을 또한 시험하였다.
항체 KD (pM) ka (1/Ms) kd (1/s)
항체 A < 1 2.95E+06 < 1e-6
항체 B < 1 2.99E+06 < 1e-6
항체 C 2.9 3.23E+06 9.36E-06
항체 D 15.9 2.07E+06 3.29E-05
C-1273 >5,000 n/a　 n/a　
6H12 157 　9.91E+05 1.56E-04　
QF20 1.2 　3.90E+06 4.78E-06　
D) 사람 IL-12에서 분자 선택성
항-IL-23p19 항체를 100nM의 농도에서 사람 IL-12 표면에 주사하였다. 포르테바이오 옥테트를 사용하여 측정한 당해 항체에 대한 결합 시그날은 0이며, 이는, 당해 항체가 사람 IL-23에 선택적으로 결합함을 나타낸다. IL-23에 대한 항-IL-23p19 항체의 결합은 또한 50% 사람 혈청의 존재하에 분석하였으며 결합 온-속도에 있어서 혈청의 유의적인 효과는 관찰되지 않았으며 이는 고 특이성을 입증한다.
실시예 3: 사람 IL-23R/Fc에 대한 사람 IL-23 결합의 경쟁 결합 검사
사람 IL-23R-Fc를 바이오센서 표면에서 포획하고 10 nM의 사람 IL-23을 주사하였다. 센서그람(sensorgram)은 IL-23과 IL-23 수용체 사이의 특이적인 결합을 나타낸다(도 2, 상부 도면). 이후에, 항체를 10 nM의 사람 IL-23과 함께 동시-주사하여 IL-23에 대한 항체 결합이 IL-23과 IL-23 수용체 사이의 상호작용을 억제할 수 있는지를 평가하였다. 당해 실시예에서, 항체가 사람 IL-23에 결합하여 상호작용을 억제할 수 있는 경우 감소된 결합 또는 비 결합이 관찰될 것이다(도 2, 하부 도면). 당해 실시예에서 등몰 농도의 항체 A가 10 nM의 재조합체 사람 IL-23과 함께 동시-주사되었음을 나타낸다.
실시예 4: 기능성 세포 검사, IL-23 자극된 마우스 비장세포로부터 IL-17 생산의 억제
항-IL-23p19 항체에 대한 1개의 기능성 세포 검사는 마우스 비장으로부터 분리된 단핵 세포로부터 IL-23 자극된 IL-17 생산을 억제하는 이들의 능력을 측정한다. 사람 재조합체 IL-23 단백질은 마우스 비장세포로부터 IL-17 방출을 자극할 수 있다. 또한, 활성화된 사람 단핵성 THP-1 세포의 상층액 속에서 발견된 사람 IL-23의 천연 공급원을 사용하여 마우스 단핵 세포로부터 IL-17 생산을 자극할 수 있다.
활성화된 THP-1 세포로부터 사람 재조합체 IL-23 또는 천연 사람 IL-23을 적정된 항-IL-23p19 항체와 함께 예비배양하였다. 이후에, IL-23/항체 조합물을 새로이 분리한 뮤린 비장세포에 가하였다. 재조합체 IL-23만을 양성 대조군으로서 사용하였다. 배양물 속에서 2일 후, 세포 상층액을 수집하고 ELISA[제조원: 알 앤드 디 시스템스(R&D Systems), 미국 미네소타주 미네아폴리스 소재]에 의해 IL-17에 대해 검사하였다. 항-IL-23p19 항체에 대한 대표적인 IC50을 하기 나타낸다. 시험한 항체는 하이브리도마(열 1 내지 19, 참조: 표 1 및 2), 키메라 항체(열 20 내지 23), 및 항체 A 내지 D로 부터 기원한 마우스 항체이다. 항체 6H12(국제 특허 출원 공보 제WO 2007/027714호에 기재됨), 항체 QF20(국제 특허 출원 공보 제WO 2007/024846호에 기재됨) 및 항체 C1273 (국제 특허 출원 공보 제WO 2007/005955호에 기재됨)을 또한 시험하였다.
항체 IC 50 값(pM), 재조합체 사람 IL-23 IC 50 값(pM), 천연의 사람 IL-23
18C4 471 100, 413
18E5 측정되지 않음 9, 9, 13
18D3 234 측정되지 않음
20E8 측정되지 않음 438, 561
22E2 61, 130 117, 35
24A5 22, 37 85, 31
15C11 126 232
43F5 250, 8000 8000
27G8 235 5000
31H9 960 2000
2D1 측정되지 않음 2336, 1911, 1597
9D12 59 281, 138
6B8 13 8, 2
73H10 1411 측정되지 않음
74H3 1352 측정되지 않음
36H8 측정되지 않음 측정되지 않음
26F7 27 2, 8
34G3 336 27, 25
34D9 510 456
키메라 18E5 31 8, 36, 10, 9
키메라 22E2 100 9, 178
키메라 24A5 404 95, 102
키메라 6B8 26, 37, 57 5, 2, 6, 3
항체 A 5, 5, 5, 15 1, 1
항체 B 13, 30, 54, 42 9, 8
항체 C 53, 71, 162, 89 16, 32
항체 D 236, 225, 614, 458 133, 125
6H12 1600, 806, 1300 957, 4400, 1013, 439
QF20 측정되지 않음 7, 12
C1273 측정되지 않음 93, 44
실시예 5: 사람 활성화된 T 세포 검사에서 IL-12에 대해 시험하는 기능적 특이성
항-IL-23p19 항체를 사람 활성화된 T 세포 검사에서 IL-12의 기능적 억제제 대해 시험하였다. 사람 재조합체 IL-12(1 ng/ml)를 5 ㎍/ml의 항-IL-23p19 항체와 함께 예비항온처리하였다. 이후에, IL-12/항체 조합물을 사람 PHA-기원한 T 세포 미분화 세포에 가하였다. 재조합체 IL-12만을 양성 대조군으로 사용하였다. 항-IL-12p70 항체[제조원: 벤더 메드시스템스(Bender MedSystems), 오스트리아 비엔나 소재]를 대조군 억제 항체로 사용하였다. 배양물 속에서 2일 후, 세포 상층액을 수집하고 IFN-γ에 대해 ELISA(제조원: 알 앤드 디 시스템스)로 검사하였다. 샘플을 3회 시험하고 IFN-γ의 평균 pg/ml를 측정하였다. 결과(표준 편차와 함께)를 하기 표에서 나타낸다.
항체 사이토킨 자극 평균 pg/ml IFN-γ +/- 표준 편차
항체 없음 없음 87 +/- 7
항체 없음 1 ng/ml IL-12 532 +/- 51
키메라 18E5 1 ng/ml IL-12 511 +/- 3
키메라 6B8 1 ng/ml IL-12 523 +/- 60
항체 A 1 ng/ml IL-12 497 +/- 30
항체 B 1 ng/ml IL-12 537 +/- 2
항체 C 1 ng/ml IL-12 495 +/- 25
항체 D 1 ng/ml IL-12 539 +/- 38
항-IL-12p70 항체 1 ng/ml IL-12 119 +/- 12
실시예 6: 사람 세포주 DB에서 IL-23 유도된 STAT3 인산화의 억제
사람 세포주 DB(ATCC, 미국 버지니아주 마나사스 소재)는 내인성 IL-23R 복합체(IL-23R 및 IL-12Rβ1)을 통해 IL-23 자극에 반응하고 STAT3을 IL-23 용량 의존적 방식으로 인산화한다. 검사는 IL-23 유도된 STAT3 인산화의 항-IL-23p19 항체 억제를 시험하기 위해 개발되었다. DB 세포를 96 웰 플레이트 속에서 1x10e6개 세포/웰로 플레이팅하였다. 시험할 항체를 일련 희석시키고 재조합체 사람 IL-23(10 ng/ml)과 함께 1시간 동안 실온에서 예비-항온처리하였다. 이후에, 항체/IL-23 혼합물을 세포에 30분 동안 37℃에서 가하였다. 세포를 4℃에서 10분 동안 원심분리로 수거한 후 빙냉 완충액[제조원: 셀 시그날링 테크놀로지(Cell Signaling Technology), 미국 매사츄세츠주 베벌리 소재] 속에서 분해하였다. 분해물의 일부를 포스포-STAT3 ELISA[제조원: 인비트로겐(Invitrogen)] 속에서 이동시켰다. 항체 IC50 값을 항체가 들어있지 않은 대조군 웰과 비교하여 STAT3 인산화의 억제 퍼센트로서 계산하였다. 대표적인 IC50 값을 하기 표에 나타낸다.
항체 IC 50 (pM)
항체 A 25, 15, 38, 23, 13, 18
항체 B 73, 84
항체 C 132, 80
항체 D 158
QF20 26, 26, 27
C-1273 163, 438
실시예 7: 마우스 귀에서 IL-23 유도된 사이토킨 생산의 생체내 모델
마우스에서 생체내 모델을 사용하였다. 재조합체 사람 IL-23을 마우스 귀의 피부에 4회 연속 일 동안 주사하여 상피 비후화 및 IL-17 및 IL-22 단백질의 상향-조절을 초래하였다. 항-IL-23p19 항체를 당해 모델에서 평가하였다. 1mg/kg 또는 5 mg/kg 항체의 단일 복강내 주사를 피부내로 초기 IL-23 주사하기 1시간 전에 투여하였다. 재조합체 사람 IL-23(링커가 있는)을 매일 1회 추가로 3일 동안 주사하고 조직을 사이토킨 평가를 위해 수집하였다. 사이토킨 생산의 억제가 항체에 대해 입증되었다. 이들 실험의 결과를 하기 표에 나타낸다(실험 1: 열 1 내지 7, 실험 2: 열 8 내지 10, 실험 3: 열 11 내지 14).
귀 조직 IL-17 pg/ml
평균 +/- SEM		 귀 조직 IL-17 억제 퍼센트 귀 조직 IL-22 pg/ml
평균 +/- SEM		 귀 조직 IL-22 억제 퍼센트
0.1% BSA + 시트레이트 완충액 i.p.
(자극되지 않은 대조군)		 3 +/- 1 NA 1 +/- 0 NA
0.3㎍ IL-23 + 시트레이트 완충액 i.p.
(비히클 대조군)		 25 +/- 3 NA 274 +/- 30 NA
0.3㎍ IL-23 + 1mg/kg 항체 6B8 7 +/- 2 81 57 +/- 19 80
0.3㎍ IL-23 + 1mg/kg 항체 A 2 +/- 1 101 17 +/- 3 94
0.3㎍ IL-23 + 1mg/kg 항체 B 5 +/- 1 93 30 +/- 2 89
0.3㎍ IL-23 + 1mg/kg 항체 C 11 +/- 1 66 108 +/- 12 61
0.3㎍ IL-23 + 1mg/kg 항체 D 10 +/- 1 67 151 +/- 12 45
0.1% BSA + 비히클
(자극되지 않은 대조군)		 14 +/- 1 NA 1 +/- 1 NA
0.3㎍ IL-23 + 비히클 31 +/- 4 NA 129 +/- 29 NA
0.3㎍ IL-23 + 5mg/kg 24A5 14 +/- 1 102 10 +/- 5 93
0.1% BSA + mIgG
(자극되지 않은 대조군)		 17 +/- 1 NA 4 +/- 1 NA
0.3㎍ IL-23 + mIgG
(비히클 대조군)		 30 +/- 2 NA 208 +/- 40 NA
0.3㎍ IL-23 + 5mg/kg 24A5 16 +/- 0 109 28 +/- 5 88
0.3㎍ IL-23 + 5mg/kg 18E5 21 +/- 2 70 53 +/- 41 80
실시예 8: 시노몰구스 원숭이에서 약동학적 연구
사람화된 항-IL-23p19 항체를 10분까지 정맥내 주입에 의해 1.0 mg/kg의 용량으로 3마리의 시노몰구스 원숭이에게 투여하였다. 혈청 샘플을 6주 기간에 걸쳐 수집하고 유리 항체 농도를 구체적인 ELISA를 사용하여 측정하였다. 항체에 대한 혈청 농도-시간 프로파일 및 상응하는 약동학적 매개변수를 하기 표 16에 요약한다.
항체 CL (ml/d/kg) Vol (ml/kg) AUC (nM·h/ml) T 1/2 (일) MRT (일)
항체 A 5.2 88 32262 12.1 17.2
항체 B 6.0 87 27030 10.1 14.8
항체 C 4.7 91 34642 14.1 19.6
항체 D 3.4 67 47633 12.6 19.8
실시예 9: NSO 세포내 발현 및 생체물리학적 데이타
NS0 세포의 형질감염 및 안정한 푸울(pool)의 생성:
NS0 세포를 형질감염 전 1% FBS의 존재하에 성장시켰다. 40x10e6 세포를 수집하고 2% FBS와 20㎍의 선형화된 DNA(중쇄 및 경쇄 발현 벡터)를 함유하는 배지 속에서 0.8ml로 재현탁시킨 후 세포를 750V/25μF(Bio-Rad Gene Pulser Xcell)에서 세포의 전기천공 전 대략 15분 동안 빙상에서 항온처리하였다. 세포를 2% FBS를 사용하여 대략 48시간 동안 37℃ 및 5% CO2 에서 회수한 후 96 웰 플레이트에 G418 및 마이코페놀산을 함유하는 2x10e5개 세포/ml에서 14 내지 21일 동안 콜로니가 형성될 때까지 플레이팅하였다.
콜로니가 있는 96웰 플레이트로부터의 상층액을 ELISA로 스크리닝하였다. ELISA 플레이트를 PBS 속에서 1㎍/ml의 염소 항-카파[제조원: 서던 바이오테크(Southern Biotech), 미국 앨라바마주 버밍햄 소재]로 피복시키고 희석된 상층액을 항온처리한 후 염소 항-사람 IgG Fc-HRP[제조원: 잭슨 임뮤노리서치 래보러토리즈(Jackson ImmunoResearch Laboratories), 미국 펜실바니아주 웨스트 그로브 소재]로 검출하였다. 양성 콜로니를 규모 확장을 위해 푸울시켰다. 항체 생산을 위한 역가를 제조업자의 프로토콜에 따라 단백질 A 팁(tip)을 사용하여 포르테바이오로 측정하였다. 항체 A 및 항체 D에 대한 역가는 단백질 정제로부터 80% 이상의 회수, 및 IEX 정제 후 94% 이상의 단량체와 함께 250 내지 350 mg/L이었다. 단백질을 20mM의 시트르산나트륨 및 115mM NaCl, pH 6.0을 함유하는 최종 완충액 속에 재현탁시켰고 4℃에서 적어도 4개월 동안 안정하며 당해 완충액 속에서 가용성이 100 mg/ml이하이다.
단백질 A 컬럼 IEX 컬럼
역가(mg/L) 수율 (mg/L) 회수 수율 (mg/L) 회수
항체 A 345 275 80% 221 80%
항체 D 248 225 90% 175 78%
품질 안정성 가용성
AUC 신선한
(%M)		 SEC 신선한
(%M)		 AUC 1 개월
(%M)		 SEC 1 개월
(%M)		 AUC 4 개월
(%M)		 SEC 4 개월
(%M)		 100 mg/ml에서
AUC(%M)
항체 A 98 99 97 99 96 99 99
항체 D 94 100 98 100 99 99 97
AUC: 0.5 내지 1 mg/ml의 농도에서 침강 속도법으로 측정한 것으로서 분석적 초원심분리; SEC: 크기 배제 크로마토그래피; %M: 단량체 퍼센트.
실시예 10: 에피토프 맵핑
수소/중수소 교환 질량 분광계(HXMS)를 사용하여 사람 IL-23p19에 결합하는 항체 A의 에피토프를 맵핑하였다. 당해 방법은 D2O로 교환하기 위한 IL-23p19의 아미드 골격 수소의 감수성을 측정하였다. 당해 실험은 IL-23 단독 및 항체 A가 첨가된 IL-23을 사용하여 수행하였다. 따라서, 항체 A의 결합으로 인한 교환으로부터 유의적인 보호를 나타내는 IL-23p19 서열의 영역을 확인하였다. 당해 방법의 해상도를 펩신 또는 프로테아제 XVIII을 사용한 분해로 생산된 펩타이드로 측정한다. 당해 IL-23p19 기원한 펩타이드는 표준 정밀한 질량(standard accurate mass) 및 HPLC MS/MS 기술을 사용하여 교환하지 않은 샘플을 사용한 추가의 대조군 실험으로 확인하였다.
재조합체 사람 IL-23을 사용하였다. 단백질 + 항체 샘플의 경우, 50μl의 IL-23(0.8mg/ml)을 10μl의 항체 A(12.7mg/ml)로 15분 동안 실온에서 항온처리하였다. 최종 몰 비 항체 A/IL-23은 1.2:1이었다.
교환을 위해 5μl의 IL-23 단백질을 50μl의 변성된 완충액(D2O 중 50mM PBS)에 가하고 100초 동안 실온에서 항온처리하였다. 50μl의 2M 우레아/0.5M TCEP를 가하고 60초 동안 실온에서 항온처리하였다. 5μl의 펩신 또는 프로테아제 XVIII(0.1% 포름산 중 4mg/ml)을 가하고 샘플을 4℃로 즉시 냉각시켰다.
5분 후 50μl의 샘플을 시마즈(Shimadzu) HPLC 시스템(SCL10A 조절기 및 2개의 LC10AD 펌프)에 다음 조건하에 주사하였다.
이동상 A = 99/1/0.1 (물/아세토니트릴/포름산)
이동상 B = 95/5/0.1 (아세토니트릴/물/포름산)
유속 = 100μl/분.
컬럼 = 페노메넥스 주피터(Phenomenex Jupiter) C5, 5u, 50x1.0mm.
이동상 라인, 컬럼, 주사기 루프(injector loop)는 빙욕 속에 둔다.
구배 = 0시(3%B), 2.2시(3%B), 10.1시(90%B), 12.0시(90%B), 12.1시(3%B).
질량 분광법을 다음과 같이 수행하였다:
질량 분광법 = 써모 오르비트랩 벨로스(Thermo Orbitrap Velos) (0900865).
방법:
A. 단편화(펩타이드 ID에 대해): 12분 획득 시간(3분 출발 지연), 30,000 해상도에서 완전한 스캔 FTMS, 7개의 이온 트랩 데이타 의존성 스캔(CID).
B. MS 이동: 12분의 획득 시간(3분 출발 지연), 60,000 해상도에서 완전한-스캔 FTMS.
펩신 및 프로테아제 XVIII 펩타이드를 단편화 데이타 및 프로그램 프로테오메 디스커버러(program Proteome Discoverer)[제조원: 써모방이언티픽(Thermoscientific), 미국 매사츄세츠주 왈탐 소재]를 사용하여 확인하였다. 확인된 펩타이드를 엑스칼리버 소프트웨어(Xcalibur software)(제조원: 써모방이언티픽)를 사용하여 가시적으로 비교하였다(단백질 단독 대 항체가 존재하는 단백질). 교환에 있어서의 유의적인 이동(shift)은 IL-23 단독 대 IL-23p19 영역 밖에 항체 A가 있는 IL-23에 대해 관찰되지 않았다. 상기 단백질의 p19 부위의 경우, 데이타를 프로그램 펩맵(PepMap)(제조원: 써모방이언티픽)을 사용하여 분석하였다. 당해 프로그램은 교환된 펩타이드에 대한 평균 질량을 계산한다. 펩맵 결과를 점검하고 입증된 결과를 생성하지 않은 펩타이드를 마이크로소프트 엑셀(Microsoft Excel)의 도움으로 계산하였다.
항체 A의 결합으로 인하여 교환으로부터 유의적인 보호를 나타내는 IL-23 서열 영역을 서열 번호 181의 108 내지 126번 아미노산 잔기 및 서열 번호 181의 137 내지 151번 아미노산 잔기로 확인하였다.
SEQUENCE LISTING <110> BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONAL GMBH <120> ANTI-IL-23 ANTIBODIES <130> 09-0561 <150> 61/410,158 <151> 2010-11-04 <150> 61/411,953 <151> 2010-11-10 <150> 61/412,594 <151> 2010-11-11 <150> 61/448,785 <151> 2011-03-03 <160> 181 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 1 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Glu Tyr Leu His 1 5 10 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Mouse <400> 2 Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Mouse <400> 3 Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 4 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu Tyr 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Mouse <400> 5 Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser 1 5 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 6 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Val Tyr Leu His 1 5 10 <210> 7 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 7 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr Leu His 1 5 10 <210> 8 <211> 16 <212> PRT <213> Mouse <400> 8 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Mouse <400> 9 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Mouse <400> 10 Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr 1 5 <210> 11 <211> 15 <212> PRT <213> Mouse <400> 11 Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Ile His 1 5 10 15 <210> 12 <211> 7 <212> PRT <213> Mouse <400> 12 Leu Ala Ser Asn Leu Asp Ser 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Mouse <400> 13 Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Mouse <400> 14 Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 15 <211> 15 <212> PRT <213> Mouse <400> 15 Arg Thr Ser Glu Ser Val Tyr Ser Tyr Gly Gln Asn Phe Ile His 1 5 10 15 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Mouse <400> 16 Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 17 <211> 9 <212> PRT <213> Mouse <400> 17 Gln Gln Thr Asn Glu Asp Pro Tyr Thr 1 5 <210> 18 <211> 15 <212> PRT <213> Mouse <400> 18 Arg Ala Ser Glu Thr Ile Asn Phe Tyr Gly Thr Ser Phe Met His 1 5 10 15 <210> 19 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 19 Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala Val Ala 1 5 10 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Mouse <400> 20 Trp Ala Ser Thr Arg His Thr 1 5 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> Mouse <400> 21 His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 22 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 22 Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 23 <211> 7 <212> PRT <213> Mouse <400> 23 Ala Ala Arg Asn Leu Ala Asp 1 5 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Mouse <400> 24 Gln His Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 25 <211> 7 <212> PRT <213> Mouse <400> 25 Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp 1 5 <210> 26 <211> 9 <212> PRT <213> Mouse <400> 26 Leu His Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 27 <211> 15 <212> PRT <213> Mouse <400> 27 Arg Ala Ser Lys Ser Val Arg Phe Ser Asp Tyr Phe Tyr Met His 1 5 10 15 <210> 28 <211> 7 <212> PRT <213> Mouse <400> 28 Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 29 <211> 9 <212> PRT <213> Mouse <400> 29 Gln Asn Ser Arg Glu Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 30 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 30 Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Asn Ala Val Val 1 5 10 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Mouse <400> 31 Trp Ala Ser Thr Arg His Ile 1 5 <210> 32 <211> 8 <212> PRT <213> Mouse <400> 32 Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Leu Thr 1 5 <210> 33 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 33 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Val Ile His 1 5 10 <210> 34 <211> 17 <212> PRT <213> Mouse <400> 34 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 35 <211> 6 <212> PRT <213> Mouse <400> 35 Arg Leu Asp Glu Ala Tyr 1 5 <210> 36 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 36 Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Leu Ile His 1 5 10 <210> 37 <211> 6 <212> PRT <213> Mouse <400> 37 Asn Trp Asp Leu Asp Tyr 1 5 <210> 38 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 38 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Val Met His 1 5 10 <210> 39 <211> 17 <212> PRT <213> Mouse <400> 39 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 40 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 40 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Ile Ile His 1 5 10 <210> 41 <211> 17 <212> PRT <213> Mouse <400> 41 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asp Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 42 <211> 6 <212> PRT <213> Mouse <400> 42 Arg Trp Asp Glu Ser Tyr 1 5 <210> 43 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 43 Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Ser Ile Met His 1 5 10 <210> 44 <211> 6 <212> PRT <213> Mouse <400> 44 Arg Trp Asp Glu Ala Tyr 1 5 <210> 45 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 45 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn 1 5 10 <210> 46 <211> 17 <212> PRT <213> Mouse <400> 46 Val Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 47 <211> 9 <212> PRT <213> Mouse <400> 47 Asp Gly His Arg Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 <210> 48 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 48 Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Tyr Met Asn 1 5 10 <210> 49 <211> 17 <212> PRT <213> Mouse <400> 49 Glu Ile Ile Pro Thr Thr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ala <210> 50 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 50 Glu Ser Gly Gly Phe Tyr Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 51 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 51 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His Thr Ile His 1 5 10 <210> 52 <211> 17 <212> PRT <213> Mouse <400> 52 Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Tyr Pro Lys Phe Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 53 <211> 9 <212> PRT <213> Mouse <400> 53 Arg Pro Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 54 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 54 Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Leu Met His 1 5 10 <210> 55 <211> 17 <212> PRT <213> Mouse <400> 55 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 56 <211> 6 <212> PRT <213> Mouse <400> 56 Asn Trp Asp Tyr Ala Tyr 1 5 <210> 57 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 57 Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr Ala Ile Ser 1 5 10 <210> 58 <211> 16 <212> PRT <213> Mouse <400> 58 Val Ile Trp Thr Gly Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 59 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 59 Lys Asp Tyr Asn Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 60 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 60 Gly Phe Ser Leu Asn Asn Phe Ala Ile Ser 1 5 10 <210> 61 <211> 16 <212> PRT <213> Mouse <400> 61 Ala Ile Trp Thr Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 62 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 62 Lys Asp Tyr Ser Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 63 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 63 Gly Asn Thr Phe Thr Asp Gln Thr Ile His 1 5 10 <210> 64 <211> 17 <212> PRT <213> Mouse <400> 64 Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 65 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 65 Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr 1 5 10 <210> 66 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 66 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Gln Thr Ile His 1 5 10 <210> 67 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 67 Gly Phe Thr Phe Thr Asp Gln Thr Ile His 1 5 10 <210> 68 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 68 Gly Gly Thr Phe Thr Asp Gln Thr Ile His 1 5 10 <210> 69 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 69 Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Val Met His 1 5 10 <210> 70 <211> 17 <212> PRT <213> Mouse <400> 70 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 71 <211> 6 <212> PRT <213> Mouse <400> 71 Asn Trp Asp Val Pro Tyr 1 5 <210> 72 <211> 17 <212> PRT <213> Mouse <400> 72 Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 73 <211> 17 <212> PRT <213> Mouse <400> 73 Val Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Gly Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 74 <211> 9 <212> PRT <213> Mouse <400> 74 Asn Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 <210> 75 <211> 17 <212> PRT <213> Mouse <400> 75 Asp Phe Asn His Asn Asn Asp Val Ile Thr Tyr Asn Pro Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 76 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 76 Gly Leu Arg Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 77 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 77 Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Asn Met Asn 1 5 10 <210> 78 <211> 17 <212> PRT <213> Mouse <400> 78 Val Ile Ile Pro Asn Tyr Gly Phe Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 79 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <400> 79 Asp Gly Gly Ile Leu Leu Trp Tyr Leu Asp Val 1 5 10 <210> 80 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <400> 80 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Met Asp 1 5 10 <210> 81 <211> 17 <212> PRT <213> Mouse <400> 81 Asp Ile Asn Pro His Asn Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 82 <211> 13 <212> PRT <213> Mouse <400> 82 Asn Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 83 <211> 333 <212> DNA <213> Mouse <400> 83 gacattgtgc tgacccaatc tccaggttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60 atatcctgca gaaccagtga aagtgtttat agttatggcc aaaattttat acactggtac 120 cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctggaatct 180 gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caccatgaat 240 cctgtggagg ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcagc aaactaatga ggatccgtac 300 acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aga 333 <210> 84 <211> 111 <212> PRT <213> Mouse <400> 84 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Thr Ser Glu Ser Val Tyr Ser Tyr 20 25 30 Gly Gln Asn Phe Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Met Asn 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn 85 90 95 Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Arg 100 105 110 <210> 85 <211> 321 <212> DNA <213> Mouse <400> 85 gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc ttgtccacat cagtgggaga cagggtcacc 60 atcacttgca aggccagtcg ggatgtggct attgctgtag cctggtatca acagaaacca 120 gggcaatctc ctaaactact tcttttctgg gcatccaccc gacacactgg ggtccctgat 180 cgcttcacag gcagtggatc tcggacagat ttcactctca ccattagcaa tgtgcagtct 240 gaagacttgg cagattattt ctgtcaccaa tatagcagct atccattcac gttcggctcg 300 gggacaaagt tggaaataaa g 321 <210> 86 <211> 107 <212> PRT <213> Mouse <400> 86 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Leu Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Leu 35 40 45 Phe Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 87 <211> 333 <212> DNA <213> Mouse <400> 87 gacattgcgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctggggca gagggccacc 60 atatcctgca gagccagtga aactattaat ttttatggca ctagttttat gcactggtac 120 cagcagaaac caggacagtc acccaaactc ctcatctatc gtgcatccaa cctagaatct 180 gggatccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caccattaat 240 cctgtggagg ctgatgatgt tgcaacctat tactgtcagc aaactaatga ggatccgtac 300 acgttcggag gggggactaa gttggaaata aaa 333 <210> 88 <211> 111 <212> PRT <213> Mouse <400> 88 Asp Ile Ala Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Thr Ile Asn Phe Tyr 20 25 30 Gly Thr Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn 85 90 95 Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 89 <211> 336 <212> DNA <213> Mouse <400> 89 gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtaatg gaaacaccta tttacattgg 120 tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240 aacagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccg 300 tacacgttcg gaggggggac ccagctggaa ataaaa 336 <210> 90 <211> 112 <212> PRT <213> Mouse <400> 90 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Asn Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 91 <211> 107 <212> PRT <213> Mouse <400> 91 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 92 <211> 321 <212> DNA <213> Mouse <400> 92 gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60 ctttcctgca gggccagtca gagtattagc gactacttat actggtatca acaaaaatca 120 catgagtctc caaggcttct catcaaattt gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180 aggttcactg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcgacag tgtggaacct 240 gatgatgttg gagtcttttt ctgtcaaaat ggtcacagct ttccgttcac gttcggaggg 300 gggaccaagc tggaaataaa a 321 <210> 93 <211> 107 <212> PRT <213> Mouse <400> 93 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asp Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Asp Asp Val Gly Val Phe Phe Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 94 <211> 321 <212> DNA <213> Mouse <400> 94 gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60 ctttcctgca gggccagcca gagtattagc gagtacttac actggtatca acaaaaatca 120 catgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180 aggttcagtg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240 gaagatgttg gagtgtatta ctgtcaaaat ggtcacagct ttccattcac gttcggctcg 300 gggacaaagt tggaaataaa a 321 <210> 95 <211> 107 <212> PRT <213> Mouse <400> 95 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Glu Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 96 <211> 321 <212> DNA <213> Mouse <400> 96 gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60 ctttcctgca gggccagcca gagtattagc gactacttat actggtatca acaaaaatca 120 catgagtctc caaggcttct catcaaattt gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180 aggttcactg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcgacag tgtggaacct 240 gatgatgttg gagtcttttt ctgtcaaaat ggtcacagct ttccgttcac gttcggaggg 300 gggaccaagc tggaaataaa a 321 <210> 97 <211> 107 <212> PRT <213> Mouse <400> 97 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asp Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Asp Asp Val Gly Val Phe Phe Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 98 <211> 321 <212> DNA <213> Mouse <400> 98 gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60 ctttcctgca gggccagcca gagtattagc gagtatttac actggtatca acaaaaatca 120 catgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180 aggttcagtg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240 gaagatgttg gagtttatta ctgtcaaaat ggtcacagct ttccattcac gttcggctcg 300 gggacaaagt tggaaataaa a 321 <210> 99 <211> 107 <212> PRT <213> Mouse <400> 99 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Glu Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 100 <211> 321 <212> DNA <213> Mouse <400> 100 gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60 ctctcctgca gggccagcca gagtattagc gtctacttac actggtatca acaaaaatca 120 cctgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180 aggttcagtg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240 gaagatgttg gagtttatta ctgtcaaaat ggtcacagct ttccattcac gttcggctcg 300 gggacaaagt tggaaataaa a 321 <210> 101 <211> 107 <212> PRT <213> Mouse <400> 101 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Val Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 102 <211> 321 <212> DNA <213> Mouse <400> 102 gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaaa tagagtctct 60 ctttcctgca gggccagcca gagtattagc gactacttac actggtatca acaaaaatca 120 catgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180 aggttcagtg gcagtggatc agggtcaaat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240 gaagatgttg gagtgtatta ttgtcaaaat ggtcacagct ttccattcac gttcggctcg 300 gggacaaagt tggaaataaa a 321 <210> 103 <211> 107 <212> PRT <213> Mouse <400> 103 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asn Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asn Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 104 <211> 333 <212> DNA <213> Mouse <400> 104 gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgttt ctctggggca gagggccacc 60 atctcatgca gggccagcaa aagtgtcaga ttctctgact atttttatat gcactggtac 120 caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctacc ttgcatccaa cctagaatct 180 ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240 cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcaga acagtaggga gcttccgtac 300 acgttcggag gggggaccaa gctggagata aaa 333 <210> 105 <211> 111 <212> PRT <213> Mouse <400> 105 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Arg Phe Ser 20 25 30 Asp Tyr Phe Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 65 70 75 80 Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Ser Arg 85 90 95 Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 106 <211> 333 <212> DNA <213> Mouse <400> 106 gacattgtgt tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 60 atctcatgca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct atagttatat acactggtac 120 caacagaaac cgggacagcc acccaaattc ctcatctatc ttgcatccaa cctagattct 180 ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240 cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acagtaggga gcttccgtac 300 acgttcggag gggggaccaa gctggaaata aaa 333 <210> 107 <211> 111 <212> PRT <213> Mouse <400> 107 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Phe Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Asp Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 65 70 75 80 Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 108 <211> 321 <212> DNA <213> Mouse <400> 108 gacattgtga tgactcagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tagagtctct 60 ctttcctgca gggccagcca gagtattagc gactacttac actggtatca acaaaaatca 120 catgagtctc caaggcttct catcaaatat gcttcccaat ccatctctgg gatcccctcc 180 aggttcagtg gcagtggatc agggtcagat ttcactctca gtatcaacag tgtggaacct 240 gaagatgttg gagtgtatta ctgtcaaaat ggtcacagct ttccgtacac gttcggaggg 300 gggaccaagc tggaaataaa a 321 <210> 109 <211> 107 <212> PRT <213> Mouse <400> 109 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 110 <211> 336 <212> DNA <213> Mouse <400> 110 gatgttgtga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtaatg gaaacaccta tttacattgg 120 tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180 tctggggtcc ccgacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240 agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccg 300 tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaat 336 <210> 111 <211> 112 <212> PRT <213> Mouse <400> 111 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn 100 105 110 <210> 112 <211> 318 <212> DNA <213> Mouse <400> 112 gacattatga tgacccagtc tcacaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60 atcacctgca aggccagtca ggatgtgggt aatgctgtgg tctggtatca acaaaaacca 120 gggcaatctc ctaaactact gatttactgg gcatccaccc ggcacattgg agtccctgat 180 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattaccaa tgtgcagtct 240 gaagacttgg cagattattt ctgtcagcaa tatagcagct atctcacgtt cggtgctggg 300 accaagctgg agctgaaa 318 <210> 113 <211> 106 <212> PRT <213> Mouse <400> 113 Asp Ile Met Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Asn Ala 20 25 30 Val Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 114 <211> 336 <212> DNA <213> Mouse <400> 114 gatgttgtga tgacccaatc tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca gatctagtca gagccttgta cacagtaatg gaaacaccta tctacattgg 120 tacctgctga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240 agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccg 300 tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336 <210> 115 <211> 112 <212> PRT <213> Mouse <400> 115 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Leu Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 116 <211> 321 <212> DNA <213> Mouse <400> 116 gacatccaga tgactcagtc tccagttttc ctgtctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60 atcacatgtc gagcaagtga gaatattgac agttatttag catggtatca gcagaaacag 120 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctttgct gcacgaaact tagcagatgg tgtgccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag tattctctca agatcaacag aatgcagtct 240 gaagatgttg cgagatacta ctgtcaacat tattatagta ctccattcac gttcggctcg 300 gggacaaagt tggaaataga a 321 <210> 117 <211> 107 <212> PRT <213> Mouse <400> 117 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Val Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Phe Ala Ala Arg Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Arg Met Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Arg Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Glu 100 105 <210> 118 <211> 321 <212> DNA <213> Mouse <400> 118 gacatccaga tgactcagtc gccagcttcc ctgtctgcat ctgtgggaga aactgtcatc 60 ttcacatgtc gagcaagtga gaatattgac agttatttag catggtatca gcagaaacag 120 ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgct gcaacaaact tagcagatgg tgtgccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag tattctctca agatcaacag cctgcagtct 240 gaagatgttg cgagatatta ctgtctacat tattatagta ctccattcac gttcggctcg 300 gggacagagt tggaaataaa a 321 <210> 119 <211> 107 <212> PRT <213> Mouse <400> 119 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Ile Phe Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Arg Tyr Tyr Cys Leu His Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Glu Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 120 <211> 357 <212> DNA <213> Mouse <400> 120 caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60 acatgcactg tctctgggtt ctcattaacc acctatgcta taagctgggt tcgccagtca 120 ccaggaaagg gtctggagtg gcttggagtc atatggactg gtggaggcac aaaatataat 180 tcagctctca aatccagact gagcatcagc aaagacaact ccaagagtca agttttctta 240 aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccaggtact actgtgccag aaaggactat 300 aattacgggg gtgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 357 <210> 121 <211> 119 <212> PRT <213> Mouse <400> 121 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Thr Gly Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Lys Asp Tyr Asn Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 122 <211> 360 <212> DNA <213> Mouse <400> 122 caggttcagc tgcaacagtc tgacgctgag ttggtgaaac ctggcacttc agtgaagaca 60 tcctgcaaaa tttctggcaa caccttcact gaccaaacta ttcactggat gaagcagagg 120 cctgaacagg gcctggaatg gattggatat atttatccta gagatgatag tcctaagtac 180 aatgagaact tcaagggcaa ggccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac 240 atgcagctca acagtctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgtgc aatcccagac 300 aggtcaggct acgcctggtt tatttactgg ggccaaggga ctctggtcac tgtctcttca 360 <210> 123 <211> 120 <212> PRT <213> Mouse <400> 123 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Asp Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Thr Ser Cys Lys Ile Ser Gly Asn Thr Phe Thr Asp Gln 20 25 30 Thr Ile His Trp Met Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Ile Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 124 <211> 357 <212> DNA <213> Mouse <400> 124 caggtgcagc tgaaggagtc aggacctgtc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60 acatgcactg tctctgggtt ctcattaaac aactttgcta taagttgggt tcgtcagcca 120 ccaggaaagg gtctggagtg gcttggagca atatggactg gtggaggcac aaattataat 180 tcagctctca aatccagact gagcatcagc aaagacaact ccaagagtca agttttctta 240 aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccaggtatt attgtgtcag aaaggactat 300 agttacgggg gtgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 357 <210> 125 <211> 119 <212> PRT <213> Mouse <400> 125 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Ala Ile Trp Thr Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Arg Lys Asp Tyr Ser Tyr Gly Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 126 <211> 354 <212> DNA <213> Mouse <400> 126 gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgtg ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgtaagg cttctggata cacattcact gactactata tgaactgggt gaagcagagc 120 catggaaaga gccttgagtg gattggagtt attattcctt acaacggtgg tactagctac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgttgaca agtcctccag cacagcctac 240 atggagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc acgagatggt 300 caccgctggt acttcgatgt ctggggcaca gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 127 <211> 118 <212> PRT <213> Mouse <400> 127 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly His Arg Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 128 <211> 115 <212> PRT <213> Mouse <400> 128 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Cys Cys 20 25 30 Ile Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Asp Glu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ala 115 <210> 129 <211> 345 <212> DNA <213> Mouse <400> 129 gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtcaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggata cacattcact cgctatctta ttcactgggt gaaacagaag 120 cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acaatgatgg tactaaatac 180 aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtac ctctaactgg 300 gacctcgact actggggcca aggcaccact ctcacagtct cctca 345 <210> 130 <211> 115 <212> PRT <213> Mouse <400> 130 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr 20 25 30 Leu Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Ser Asn Trp Asp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 131 <211> 345 <212> DNA <213> Mouse <400> 131 gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgaa gtggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cctctggata cacattcact agttctgtta tacactgggt gaagcagaag 120 gctgggcagg gccttgagtg gattggatat atcaatccct ataatgatgg tactaagtac 180 aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca gatcctccag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtac aagacggttg 300 gacgaggctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345 <210> 132 <211> 115 <212> PRT <213> Mouse <400> 132 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser 20 25 30 Val Ile His Trp Val Lys Gln Lys Ala Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Arg Leu Asp Glu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ala 115 <210> 133 <211> 345 <212> DNA <213> Mouse <400> 133 gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggctgc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggata cacattcact cgctatctta ttcactgggt gaagcagaag 120 cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acaatgatgg tactaaatat 180 aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtac ctctaattgg 300 gacctcgact actggggcca aggcaccact ctcacagtct cctca 345 <210> 134 <211> 115 <212> PRT <213> Mouse <400> 134 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ala Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr 20 25 30 Leu Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Ser Asn Trp Asp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 135 <211> 345 <212> DNA <213> Mouse <400> 135 gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgaa ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cctctggata cacattcact agttctgtta tgcactgggt gaagcagaag 120 gctgggcagg gccttgagtg gattggatat atcaatccct ataatgatgg tactcagtac 180 aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aattttccag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtac aagacggttg 300 gacgaggctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345 <210> 136 <211> 115 <212> PRT <213> Mouse <400> 136 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser 20 25 30 Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Ala Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Phe Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Arg Leu Asp Glu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ala 115 <210> 137 <211> 345 <212> DNA <213> Mouse <400> 137 gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggata cacattcact agctctatta ttcactgggt gaagcagagg 120 cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acgatgatgt tactaagtac 180 aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagacggtgg 300 gacgagtctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345 <210> 138 <211> 115 <212> PRT <213> Mouse <400> 138 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser 20 25 30 Ile Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asp Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Asp Glu Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ala 115 <210> 139 <211> 345 <212> DNA <213> Mouse <400> 139 gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggata cactttcact acctctatta tgcactgggt gaaacagaag 120 cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acgatgatgt tactaagtac 180 aatgaaaagt tcaaaggcaa ggccacattg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcagtct attactgtgt aagacggtgg 300 gacgaggctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345 <210> 140 <211> 115 <212> PRT <213> Mouse <400> 140 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Ser 20 25 30 Ile Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asp Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Arg Trp Asp Glu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ala 115 <210> 141 <211> 357 <212> DNA <213> Mouse <400> 141 gaggtccagc tgcaacaatc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60 tcctgtaagg cttctggata cacgtttact gactactaca tgaactgggt gaggcagagc 120 catggagaga gccttgagtg gattggagat tttaatcata acaatgatgt tattacttac 180 aacccgaagt tcaagggcaa ggtcacattg actgtagaga agtcttccac cacagcctac 240 atggagctcc gcagcctgtc atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagggggcta 300 cgaggctact atgctatgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 357 <210> 142 <211> 119 <212> PRT <213> Mouse <400> 142 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ser His Gly Glu Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Phe Asn His Asn Asn Asp Val Ile Thr Tyr Asn Pro Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Val Thr Leu Thr Val Glu Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Ser Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Leu Arg Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 143 <211> 354 <212> DNA <213> Mouse <400> 143 caggttcagc tgcaacagtc tgacgctgag ttggtgaaac ctggagcttc agtgaagata 60 tcctgcaagg tttctggcta caccttcact gaccatacta ttcactggat gaagcagagg 120 cctgaacagg gcctggaatg gattggatat atttatccta gagatggtta tcctaagttc 180 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgcagaca aatcctccag cacagcctac 240 atgcagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct atttctgtgc aagacggccc 300 ccttactatg ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcgccgtctc ctca 354 <210> 144 <211> 118 <212> PRT <213> Mouse <400> 144 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Asp Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His 20 25 30 Thr Ile His Trp Met Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Tyr Pro Lys Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Pro Pro Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Ala Val Ser Ser 115 <210> 145 <211> 345 <212> DNA <213> Mouse <400> 145 gaggtccaac tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggata cacattcact aggtatctta tgcactgggt gaagcagaag 120 cctgggcagg gccttgagtg gattggttat attaatcctt acaatgatgg tactaattac 180 aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgttc ccttaactgg 300 gactatgctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345 <210> 146 <211> 115 <212> PRT <213> Mouse <400> 146 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr 20 25 30 Leu Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Leu Asn Trp Asp Tyr Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ala 115 <210> 147 <211> 360 <212> DNA <213> Mouse <400> 147 gagttccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggcgcttc agtgaagata 60 tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact gactacaaca tgaactgggt gaagcagagc 120 aaaggaaaga gccttgagtg gattggagta attattccta actatggttt tactagctac 180 aatcagaact tcaagggcaa ggccactttg actgtagacc agtcttccag cacagcccac 240 atgcagctca acagtgtgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgt aagagatggg 300 ggaatactcc tctggtatct cgatgtctgg ggcacaggga ccacggtcac cgtctcctca 360 <210> 148 <211> 120 <212> PRT <213> Mouse <400> 148 Glu Phe Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Lys Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Ile Pro Asn Tyr Gly Phe Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala His 65 70 75 80 Met Gln Leu Asn Ser Val Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Asp Gly Gly Ile Leu Leu Trp Tyr Leu Asp Val Trp Gly Thr 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 149 <211> 366 <212> DNA <213> Mouse <400> 149 gaggtccagc tgcaacagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60 ccctgcaagg cttctggata cacattcact gactacaaca tggactgggt gaagaagagc 120 catggaaaga gccttgagtg gattggagat atcaatcctc acaatggtgg tactatctac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca agtcctccag cacagcccac 240 atggagctcc gcagcctgac atctgaggac actgcagtct attactgtgc aagaaattac 300 tacggtagta gttacggctg gtacttcgat gtctggggca cagggaccac ggtcaccgtc 360 tcgtca 366 <210> 150 <211> 122 <212> PRT <213> Mouse <400> 150 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met Asp Trp Val Lys Lys Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro His Asn Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala His 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Trp Tyr Phe Asp Val Trp 100 105 110 Gly Thr Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 151 <211> 360 <212> DNA <213> Mouse <400> 151 gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagatt 60 tcctgcaggg cttctggtta ctcattcact ggctactaca tgaactgggt gaagcaaagt 120 cctgaaaaga gccttgagtg gattggagag attattccta ccactggtgg tacttcctac 180 aaccagaagt tcaaggccaa ggccacattg actgtagaca aatcctccag cacagcctac 240 atgcagctca agagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagagagagc 300 ggtgggttct actggtactt cgatgtctgg ggcacaggga ccacggtcac cgtctcctca 360 <210> 152 <211> 120 <212> PRT <213> Mouse <400> 152 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Pro Glu Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Ile Pro Thr Thr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Ser Gly Gly Phe Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 153 <211> 345 <212> DNA <213> Mouse <400> 153 gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggata cacattcact aggtatgtta tgcactgggt gaagcagaag 120 cctgggcagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acaatgatgt tactaagtac 180 aatgagaagt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca gatcctccag cacagcctac 240 atgaaactca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attattgtgc aagaaactgg 300 gacgttcctt actggggcca agggactctg atcactgtct ctgca 345 <210> 154 <211> 115 <212> PRT <213> Mouse <400> 154 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Val Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Lys Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Trp Asp Val Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Ile Thr 100 105 110 Val Ser Ala 115 <210> 155 <211> 345 <212> DNA <213> Mouse <400> 155 gaggtccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cttctggata cacattcact aggtatctta tgcactgggt gaagcagaag 120 cctggacagg gccttgagtg gattggatat attaatcctt acaatgatgg tactaagtac 180 aatgagaggt tcaaaggcaa ggccacactg acttcagaca aatcctccag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagaaactgg 300 gacgtacctt actggggcca agggactctg gtcactgtct ctgca 345 <210> 156 <211> 115 <212> PRT <213> Mouse <400> 156 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr 20 25 30 Leu Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Trp Asp Val Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ala 115 <210> 157 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 157 gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60 atcacctgca aggccagccg cgacgtggcc atcgccgtgg cctggtacca gcagaagcca 120 ggcaaggtgc caaagctgct gctgttctgg gccagcaccc gccacaccgg cgtgccagac 180 cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240 gaggacctgg ccgactacta ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggccag 300 ggcaccaagc tggagatcaa g 321 <210> 158 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 158 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Leu 35 40 45 Phe Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 159 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 159 gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60 atcacctgca aggccagccg cgacgtggcc atcgccgtgg cctggtacca gcagaagcca 120 ggcaaggtgc caaagctgct gatctactgg gccagcaccc gccacaccgg cgtgccaagc 180 cgcttcagcg gcagcggcag ccgcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240 gaggacgtgg ccgactactt ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggcagc 300 ggcaccaagc tggagatcaa g 321 <210> 160 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 160 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 161 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 161 gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60 atcacctgca aggccagccg cgacgtggcc atcgccgtgg cctggtacca gcagaagcca 120 ggcaaggtgc caaagctgct gatctactgg gccagcaccc gccacaccgg cgtgccaagc 180 cgcttcagcg gcagcggcag ccgcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240 gaggacgtgg ccgactactt ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggcagc 300 ggcaccaagc tggagatcaa g 321 <210> 162 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 162 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Leu 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 163 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 163 gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60 atcacctgca aggccagccg cgacgtggcc atcgccgtgg cctggtacca gcagaagcca 120 ggcaaggtgc caaagctgct gctgttctgg gccagcaccc gccacaccgg cgtgccagac 180 cgcttcagcg gcagcggcag ccgcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240 gaggacctgg ccgactacta ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggcagc 300 ggcaccaagc tggagatcaa g 321 <210> 164 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 164 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Leu 35 40 45 Phe Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 165 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 165 caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc caggcagcag cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc gaccagacca tccactggat gcgccaggcc 120 ccaggccagg gcctggagtg gatcggctac atctacccac gcgacgacag cccaaagtac 180 aacgagaact tcaagggcaa ggtcaccatc accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240 atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc catcccagac 300 cgcagcggct acgcctggtt catctactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360 <210> 166 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 166 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Gln 20 25 30 Thr Ile His Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ile Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 167 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 167 caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc caggcagcag cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggctt caccttcacc gaccagacca tccactgggt gcgccaggcc 120 ccaggccagg gcctggagtg gatgggctac atctacccac gcgacgacag cccaaagtac 180 aacgagaact tcaagggcaa ggtcaccctg accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240 atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc catcccagac 300 cgcagcggct acgcctggtt catctactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360 <210> 168 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 168 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Gln 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ile Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 169 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 169 caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc caggcagcag cgtgaagacc 60 agctgcaagg ccagcggcgg caccttcacc gaccagacca tccactgggt gcgccagcgc 120 ccaggccagg gcctggagtg gatgggctac atctacccac gcgacgacag cccaaagtac 180 aacgagaact tcaagggccg cgtcaccatc accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240 atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc catcccagac 300 cgcagcggct acgcctggtt catctactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360 <210> 170 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 170 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Thr Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Thr Asp Gln 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ile Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 171 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 171 caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc caggcagcag cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggcgg caccttcacc gaccagacca tccactgggt gcgccaggcc 120 ccaggccagg gcctggagtg gatgggctac atctacccac gcgacgacag cccaaagtac 180 aacgagaatt tcaagggccg cgtcaccctg accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240 atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt acttctgcgc ccgcccagac 300 cgcagcggct acgcctggtt catctactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360 <210> 172 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 172 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Thr Asp Gln 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 173 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 173 gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60 atcacctgca aggccagccg cgacgtggcc atcgccgtgg cctggtacca gcagaagcca 120 ggcaaggtgc caaagctgct gatctactgg gccagcaccc gccacaccgg cgtgccaagc 180 cgcttcagcg gcagcggcag ccgcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240 gaggacgtgg ccgactactt ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggcagc 300 ggcaccaagc tggagatcaa gcgtactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 174 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 174 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 175 <211> 1347 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 175 caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc caggcagcag cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc gaccagacca tccactggat gcgccaggcc 120 ccaggccagg gcctggagtg gatcggctac atctacccac gcgacgacag cccaaagtac 180 aacgagaact tcaagggcaa ggtcaccatc accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240 atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc catcccagac 300 cgcagcggct acgcctggtt catctactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tcgacaagag agttgagccc 660 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag caccagaagc tgctggggga 720 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacat gcgtcgtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320 cagaagagcc tctccctgtc tccgggt 1347 <210> 176 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 176 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Gln 20 25 30 Thr Ile His Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ile Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly <210> 177 <211> 1347 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 177 caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc caggcagcag cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggctt caccttcacc gaccagacca tccactgggt gcgccaggcc 120 ccaggccagg gcctggagtg gatgggctac atctacccac gcgacgacag cccaaagtac 180 aacgagaact tcaagggcaa ggtcaccctg accgccgaca agagcaccag caccgcctac 240 atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc catcccagac 300 cgcagcggct acgcctggtt catctactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tcgacaagag agttgagccc 660 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag caccagaagc tgctggggga 720 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacat gcgtcgtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320 cagaagagcc tctccctgtc tccgggt 1347 <210> 178 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 178 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Gln 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Asp Ser Pro Lys Tyr Asn Glu Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ile Pro Asp Arg Ser Gly Tyr Ala Trp Phe Ile Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly <210> 179 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 179 gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60 atcacctgca aggccagccg cgacgtggcc atcgccgtgg cctggtacca gcagaagcca 120 ggcaaggtgc caaagctgct gctgttctgg gccagcaccc gccacaccgg cgtgccagac 180 cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240 gaggacctgg ccgactacta ctgccaccag tacagcagct acccattcac cttcggccag 300 ggcaccaagc tggagatcaa gcgtactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 180 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized sequence. <400> 180 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Val Ala Ile Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Leu 35 40 45 Phe Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 181 <211> 189 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 181 Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr 1 5 10 15 Ala Gln Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln 20 25 30 Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His 35 40 45 Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr 50 55 60 Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln 65 70 75 80 Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly 85 90 95 Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu 100 105 110 Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu 115 120 125 Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr 130 135 140 Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu 145 150 155 160 Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala 165 170 175 Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro 180 185

Claims (40)

  1. a) 서열 번호 19의 아미노산 서열(CDR1-L); 서열 번호 20의 아미노산 서열(CDR2-L); 및 서열 번호 21의 아미노산 서열(CDR3-L)을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및
    b) 서열 번호 66 또는 67의 아미노산 서열(CDR1-H); 서열 번호 64의 아미노산 서열(CDR2-H); 및 서열 번호 65의 아미노산 서열(CDR3-H)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    을 포함하는, 사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  2. 제1항에 있어서,
    a) 서열 번호 19의 아미노산 서열(CDR1-L); 서열 번호 20의 아미노산 서열(CDR2-L); 및 서열 번호 21의 아미노산 서열(CDR3-L)을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및
    b) 서열 번호 66의 아미노산 서열(CDR1-H); 서열 번호 64의 아미노산 서열(CDR2-H); 및 서열 번호 65의 아미노산 서열(CDR3-H)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    을 포함하는, 사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  3. 제1항에 있어서,
    a) 서열 번호 19의 아미노산 서열(CDR1-L); 서열 번호 20의 아미노산 서열(CDR2-L); 및 서열 번호 21의 아미노산 서열(CDR3-L)을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및
    b) 서열 번호 67의 아미노산 서열(CDR1-H); 서열 번호 64의 아미노산 서열(CDR2-H); 및 서열 번호 65의 아미노산 서열(CDR3-H)을 포함하는 중쇄 가변 영역
    을 포함하는, 사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 서열 번호 158, 160, 162 또는 164 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 서열 번호 166 또는 168 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  5. 제4항에 있어서, 상기 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  6. 제4항에 있어서, 상기 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  7. 제4항에 있어서, 상기 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 서열 번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  8. 제4항에 있어서, 상기 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 사람 IgG1 중쇄 불변 영역에 연결된 서열 번호 166 또는 168의 아미노산 서열; 및 사람 카파 경쇄 불변 영역에 연결된 서열 번호 158 또는 160의 아미노산 서열을 포함하는, 사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  9. 제1항에 있어서, 상기 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편이,
    a) 서열 번호 158 또는 160의 CDR들과, 서열 번호 158 또는 160의 가변 도메인 경쇄 아미노산 서열의 골격 영역들의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역들을 포함하는 사람화된 경쇄 가변 도메인; 및
    b) 서열 번호 166 또는 168의 CDR들과, 서열 번호 166 또는 168의 가변 도메인 중쇄 아미노산 서열의 골격 영역들의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 골격 영역들을 포함하는 사람화된 중쇄 가변 도메인
    을 포함하는, 사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  10. 제1항 내지 제9항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 단클론 항체인, 사람화된 항-IL-23p19 항체.
  11. 제1항에 있어서, 상기 항체가, 서열 번호 174 또는 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 176 또는 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체인, 사람화된 항-IL-23p19 항체.
  12. 제11항에 있어서, 상기 항체가, 서열 번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체.
  13. 제11항에 있어서, 상기 항체가, 서열 번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체.
  14. 제11항에 있어서, 상기 항체가, 서열 번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 사람화된 단클론 항-IL-23p19 항체.
  15. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 사람화된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 염증 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 대사 장애 또는 암을 치료하기 위한, 약제학적 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 건선, 염증성 장 질환, 건선 관절염, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 크론병, 궤양성 대장염, 또는 강직성 척추염을 치료하기 위한, 약제학적 조성물.
  17. 제15항에 있어서, 천식 또는 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)을 치료하기 위한, 약제학적 조성물.
  18. 서열 번호 158, 160, 162 또는 164의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 경쇄 가변 영역을 암호화하고, 서열 번호 166 또는 168의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 중쇄 가변 영역을 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드.
  19. 제18항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드가 서열 번호 174 또는 180의 아미노산 서열을 갖는 항체의 경쇄를 암호화하고, 서열 번호 176 또는 178의 아미노산 서열을 갖는 항체의 중쇄를 암호화하는 서열을 포함하는, 분리된 폴리뉴클레오타이드
  20. 제18항 또는 제19항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터.
  21. a. 서열 번호 158, 160, 162 또는 164의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 경쇄 가변 영역을 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드; 및
    b. 서열 번호 166 또는 168의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 중쇄 가변 영역을 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드
    를 포함하는 숙주 세포.
  22. a. 서열 번호 174 또는 180의 아미노산 서열을 갖는 항체의 경쇄를 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드; 및
    b. 서열 번호 176 또는 178의 아미노산 서열을 갖는 항체의 중쇄를 암호화하는 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드
    를 포함하는 숙주 세포.
  23. a. 제21항 또는 제22항에 따른 숙주 세포를 수득하는 단계; 및
    b. 상기 숙주 세포를 배양하는 단계
    를 포함하는, 항체 또는 항원-결합 단편의 생산방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 항체 또는 항원-결합 단편을 회수하고 정제하는 단계를 추가로 포함하는, 항체 또는 항원-결합 단편의 생산방법.
  25. 삭제
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 삭제
  30. 삭제
  31. 삭제
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 삭제
  35. 삭제
  36. 삭제
  37. 삭제
  38. 삭제
  39. 삭제
  40. 삭제
KR1020137011474A 2010-11-04 2011-11-02 항－ｉｌ－２３ 항체 KR101931591B1 (ko)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US41015810P 2010-11-04 2010-11-04
US61/410,158 2010-11-04
US41195310P 2010-11-10 2010-11-10
US61/411,953 2010-11-10
US41259410P 2010-11-11 2010-11-11
US61/412,594 2010-11-11
US201161448785P 2011-03-03 2011-03-03
US61/448,785 2011-03-03
PCT/US2011/058869 WO2012061448A1 (en) 2010-11-04 2011-11-02 Anti-il-23 antibodies

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020187036509A Division KR102049223B1 (ko) 2010-11-04 2011-11-02 항－ｉｌ－２３ 항체

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20130139975A KR20130139975A (ko) 2013-12-23
KR101931591B1 true KR101931591B1 (ko) 2018-12-24

Family

ID=44936573

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020137011474A KR101931591B1 (ko) 2010-11-04 2011-11-02 항－ｉｌ－２３ 항체
KR1020187036509A KR102049223B1 (ko) 2010-11-04 2011-11-02 항－ｉｌ－２３ 항체

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020187036509A KR102049223B1 (ko) 2010-11-04 2011-11-02 항－ｉｌ－２３ 항체

Country Status (39)

Country Link
US (5) US8778346B2 (ko)
EP (4) EP3456740A1 (ko)
JP (3) JP6126532B2 (ko)
KR (2) KR101931591B1 (ko)
CN (2) CN107522784B (ko)
AP (1) AP3953A (ko)
AR (1) AR083747A1 (ko)
AU (3) AU2011323426B2 (ko)
BR (1) BR112013011065B1 (ko)
CA (2) CA2816950C (ko)
CO (1) CO6801628A2 (ko)
CY (2) CY1118014T1 (ko)
DK (1) DK2635601T3 (ko)
EA (2) EA201890548A1 (ko)
EC (1) ECSP13012649A (ko)
ES (1) ES2593754T3 (ko)
GE (1) GEP201706733B (ko)
HK (1) HK1247940A1 (ko)
HR (1) HRP20161141T1 (ko)
HU (2) HUE030916T2 (ko)
IL (2) IL225648A (ko)
LT (2) LT2635601T (ko)
LU (1) LUC00132I2 (ko)
MA (1) MA34641B1 (ko)
ME (1) ME02499B (ko)
MX (3) MX343858B (ko)
MY (1) MY162791A (ko)
NL (1) NL301013I2 (ko)
NO (1) NO2019038I1 (ko)
NZ (1) NZ610592A (ko)
PE (1) PE20141162A1 (ko)
PL (1) PL2635601T3 (ko)
PT (1) PT2635601T (ko)
RS (1) RS55161B1 (ko)
SG (2) SG10201604605VA (ko)
SI (1) SI2635601T1 (ko)
TW (2) TWI653242B (ko)
UY (1) UY33703A (ko)
WO (1) WO2012061448A1 (ko)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JO3244B1 (ar) 2009-10-26 2018-03-08 Amgen Inc بروتينات ربط مستضادات il – 23 البشرية
EP3456740A1 (en) 2010-11-04 2019-03-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Anti-il-23 antibodies
EP4039275A1 (en) 2012-05-03 2022-08-10 Boehringer Ingelheim International GmbH Anti-il-23p19 antibodies
AR094877A1 (es) * 2013-03-08 2015-09-02 Lilly Co Eli Anticuerpos que se unen a il-23
NZ712294A (en) 2013-03-15 2020-04-24 Amgen Inc Methods for treating crohn’s disease using an anti-il23 antibody
EP3689369A1 (en) 2013-03-15 2020-08-05 Amgen, Inc Methods for treating psoriasis using an anti-il-23 antibody
US10507241B2 (en) 2014-07-24 2019-12-17 Boehringer Ingelheim International Gmbh Biomarkers useful in the treatment of IL-23A related diseases
SG11201701423RA (en) 2014-09-03 2017-03-30 Boehringer Ingelheim Int Compound targeting il-23a and tnf-alpha and uses thereof
SG10202103879YA (en) * 2015-02-04 2021-05-28 Boehringer Ingelheim Int Methods of treating inflammatory diseases
JP2018512422A (ja) 2015-04-14 2018-05-17 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 疾患の処置法
UA125433C2 (uk) 2015-07-23 2022-03-09 Бьорінґер Інґельхайм Інтернаціональ Ґмбх Націлена на іl-23а і фактор активації в-лімфоцитів (baff) сполука та її застосування
KR20180063127A (ko) * 2015-09-17 2018-06-11 암젠 인크 Il23 경로 바이오마커를 사용한, il23-길항제에 대한 임상 반응의 예측
TWI733695B (zh) * 2015-09-18 2021-07-21 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 治療發炎性疾病之方法
CR20180234A (es) 2015-11-03 2018-09-11 Janssen Biotech Inc Anticuerpos que se unen especificamente a pd-1 y sus usos
CN108472367A (zh) 2015-12-22 2018-08-31 美国安进公司 作为对il23拮抗剂的临床应答的预测因子的ccl20
EP3560956A3 (en) 2016-04-15 2020-01-01 Boehringer Ingelheim International GmbH Methods of treating inflammatory diseases
EP3848390A1 (en) 2016-10-14 2021-07-14 Boehringer Ingelheim International GmbH Methods of treating diseases
EP3749352A1 (en) * 2018-02-05 2020-12-16 Tesaro Inc. Pediatric niraparib formulations and pediatric treatment methods
TWI744617B (zh) * 2018-03-30 2021-11-01 美商美國禮來大藥廠 治療潰瘍性結腸炎之方法
AU2019300491A1 (en) 2018-07-13 2021-03-04 Astrazeneca Collaboration Ventures, Llc Treating ulcerative colitis with brazikumab
CN110818793A (zh) * 2018-08-14 2020-02-21 中山康方生物医药有限公司 抗IL-1β的抗体、其药物组合物及其用途
CN109810947B (zh) * 2019-01-18 2021-06-11 北京贝来生物科技有限公司 一种抑制Th17细胞活化的间充质干细胞及其制备方法和应用
AU2020259375A1 (en) * 2019-04-15 2021-10-28 Sun Pharmaceutical Industries Limited Methods for treatment of subjects with psoriatic arthritis
AU2020409124A1 (en) 2019-12-20 2022-06-30 Novarock Biotherapeutics, Ltd. Anti-interleukin-23 p19 antibodies and methods of use thereof
CN111956606B (zh) * 2020-08-31 2021-05-14 江苏荃信生物医药有限公司 包含高浓度抗人白介素23单克隆抗体的低粘度液体制剂
TW202224702A (zh) 2020-09-10 2022-07-01 美商美國禮來大藥廠 治療性抗體調配物
CN116635052A (zh) 2020-10-13 2023-08-22 詹森生物科技公司 用于调节分化簇iv和/或viii的生物工程t细胞介导的免疫、材料和其他方法
EP4347018A1 (en) 2021-05-28 2024-04-10 Eli Lilly and Company Anti-il-23p19 antibody regulation of genes involved in ulcerative colitis
KR20230009815A (ko) 2021-07-09 2023-01-17 연세대학교 산학협력단 Il-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 조성물
JP2024536166A (ja) 2021-09-30 2024-10-04 イーライ リリー アンド カンパニー 潰瘍性大腸炎における腸切迫感に関与する遺伝子の抗ｉｌ－２３ｐ１９抗体による調節
WO2024077113A1 (en) 2022-10-06 2024-04-11 Eli Lilly And Company Methods of treating fatigue in ulcerative colitis
WO2024085697A1 (en) 2022-10-21 2024-04-25 Chong Kun Dang Pharmaceutical Corp. Stable antibody composition
WO2024178157A1 (en) 2023-02-22 2024-08-29 Eli Lilly And Company Regulation of genes in ulcerative colitis and the uses thereof
CN117875575B (zh) * 2024-03-12 2024-05-28 中国电子科技集团公司第二十九研究所 一种基于混合仿生算法的干扰资源分配方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007024846A2 (en) * 2005-08-25 2007-03-01 Eli Lilly And Company Anit-il-23 antibiodies
WO2007027714A2 (en) 2005-08-31 2007-03-08 Schering Corporation Engineered anti-il-23 antibodies

Family Cites Families (117)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4318980A (en) 1978-04-10 1982-03-09 Miles Laboratories, Inc. Heterogenous specific binding assay employing a cycling reactant as label
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
WO1981001145A1 (en) 1979-10-18 1981-04-30 Univ Illinois Hydrolytic enzyme-activatible pro-drugs
US4419446A (en) 1980-12-31 1983-12-06 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant DNA process utilizing a papilloma virus DNA as a vector
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
NZ201705A (en) 1981-08-31 1986-03-14 Genentech Inc Recombinant dna method for production of hepatitis b surface antigen in yeast
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
US4741900A (en) 1982-11-16 1988-05-03 Cytogen Corporation Antibody-metal ion complexes
US4601978A (en) 1982-11-24 1986-07-22 The Regents Of The University Of California Mammalian metallothionein promoter system
US4560655A (en) 1982-12-16 1985-12-24 Immunex Corporation Serum-free cell culture medium and process for making same
US4657866A (en) 1982-12-21 1987-04-14 Sudhir Kumar Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
US4767704A (en) 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
US4965199A (en) 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US4879231A (en) 1984-10-30 1989-11-07 Phillips Petroleum Company Transformation of yeasts of the genus pichia
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
DE3675588D1 (de) 1985-06-19 1990-12-20 Ajinomoto Kk Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist.
GB8516415D0 (en) 1985-06-28 1985-07-31 Celltech Ltd Culture of animal cells
US4927762A (en) 1986-04-01 1990-05-22 Cell Enterprises, Inc. Cell culture medium with antioxidant
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
GB8705477D0 (en) 1987-03-09 1987-04-15 Carlton Med Prod Drug delivery systems
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
ATE135397T1 (de) 1988-09-23 1996-03-15 Cetus Oncology Corp Zellenzuchtmedium für erhöhtes zellenwachstum, zur erhöhung der langlebigkeit und expression der produkte
FR2646437B1 (fr) 1989-04-28 1991-08-30 Transgene Sa Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5122469A (en) 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
AU687755B2 (en) 1992-08-21 1998-03-05 Genentech Inc. Method for treating an LFA-1-mediated disorder
ATE196606T1 (de) 1992-11-13 2000-10-15 Idec Pharma Corp Therapeutische verwendung von chimerischen und markierten antikörpern, die gegen ein differenzierung-antigen gerichtet sind, dessen expression auf menschliche b lymphozyt beschränkt ist, für die behandlung von b-zell-lymphoma
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
US6037454A (en) 1996-11-27 2000-03-14 Genentech, Inc. Humanized anti-CD11a antibodies
US5888809A (en) 1997-05-01 1999-03-30 Icos Corporation Hamster EF-1α transcriptional regulatory DNA
US6060284A (en) 1997-07-25 2000-05-09 Schering Corporation DNA encoding interleukin-B30
CO4810232A1 (es) 1997-07-25 1999-06-30 Schering Corp Citoquinas de mamiferos y sus secuencias codificadoras
WO1999040195A1 (en) 1998-02-06 1999-08-12 Schering Corporation Mammalian receptor proteins; related reagents and methods
DE69942607D1 (de) 1998-04-14 2010-09-02 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Neues cytokinartiges protein
ES2300276T5 (es) 1999-09-09 2017-06-02 Merck Sharp & Dohme Corp. P40 de interleuquina-12 de mamífero e interleuquina B30. Sus combinaciones. Anticuerpos. Usos en composiciones farmacéuticas
US7090847B1 (en) 1999-09-09 2006-08-15 Schering Corporation Mammalian cytokines; related reagents and methods
US7422743B2 (en) 2000-05-10 2008-09-09 Schering Corporation Mammalian receptor protein DCRS5;methods of treatment
NZ522146A (en) 2000-05-10 2004-10-29 Schering Corp Mammalian receptor-like proteins, designated DNAX cytokine receptor subunits (DCRS), in particular DCRS5
WO2003034818A1 (fr) 2001-10-24 2003-05-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Animal non humain a srgf genetiquement modifie
JP5290489B2 (ja) 2001-11-08 2013-09-18 アッヴィ・バイオセラピューティクス・インコーポレイテッド Ｉｇｇ抗体の安定な液体医薬製剤
EP2108660A1 (en) 2002-10-30 2009-10-14 Genentech, Inc. Inhibition of IL-17 production
CA2506672C (en) 2002-12-23 2012-04-17 Schering Corporation Il-23 for treating cutaneous wounds
WO2004071517A2 (en) 2003-02-06 2004-08-26 Schering Corporation Uses of il-23 related reagents
PL1601694T3 (pl) 2003-03-10 2010-02-26 Merck Sharp & Dohme Zastosowania antagonistów IL-23; pokrewne reagenty
WO2005005612A2 (en) 2003-07-01 2005-01-20 University Of Virginia Patent Foundation Tag-1 and tag-2 proteins and uses thereof
ATE473016T1 (de) 2003-11-04 2010-07-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Verfahren zur behandlung von krebs mit expression des cd40-antigens
ATE474599T1 (de) 2003-11-04 2010-08-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Verwendung von antagonisten-anti-cd40- monoklonalen antikörpern zur behandlung von multiplem myelom
US8277810B2 (en) 2003-11-04 2012-10-02 Novartis Vaccines & Diagnostics, Inc. Antagonist anti-CD40 antibodies
US20050100965A1 (en) 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
JP4903061B2 (ja) 2004-02-17 2012-03-21 シェーリング コーポレイション Ｉｌ−２３活性を調節する方法；関連する試薬
US7501247B2 (en) 2004-05-03 2009-03-10 Schering Corporation Method of treating skin inflammation
US20050287593A1 (en) 2004-05-03 2005-12-29 Schering Corporation Use of cytokine expression to predict skin inflammation; methods of treatment
JP2008537874A (ja) * 2004-09-27 2008-10-02 セントカー・インコーポレーテツド ｓＲＡＧＥミメティボディ、組成物、方法および使用
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
EP2292758A3 (en) 2004-12-20 2013-12-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Uses of mammalian cytokine; related reagents
US20090142855A1 (en) 2005-06-30 2009-06-04 Wei Tang Polynucleotides and Polypeptides of the IL-12 Family of Cytokines
CN101252951B (zh) * 2005-06-30 2011-12-21 森托科尔公司 抗il-23抗体、组合物、方法和用途
CN101248088A (zh) * 2005-08-25 2008-08-20 伊莱利利公司 抗il-23抗体
DK1933869T3 (da) 2005-09-01 2010-03-01 Schering Corp Anvendelse af IL-23- og IL-17-antagonister til behandling af autoimmun øjenbetændelsessygdom
BRPI0620914A2 (pt) 2005-12-28 2011-11-29 Centocor Inc marcadores e métodos para avaliar e tratar psorìase e distúrbios relacionados
EP1971366B1 (en) 2005-12-29 2014-07-30 Janssen Biotech, Inc. Human anti-il-23 antibodies, compositions, methods and uses
US7910703B2 (en) 2006-03-10 2011-03-22 Zymogenetics, Inc. Antagonists to IL-17A, IL-17F, and IL-23P19 and methods of use
US20080311043A1 (en) 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
AU2007260787A1 (en) 2006-06-13 2007-12-21 Zymogenetics, Inc IL-17 and IL-23 antagonists and methods of using the same
US20080031882A1 (en) 2006-06-19 2008-02-07 Liang Spencer C Methods of modulating IL-22 and IL-17
JP5419709B2 (ja) 2007-01-09 2014-02-19 ワイス・エルエルシー 抗ｉｌ−１３抗体製剤およびその使用
TWI426918B (zh) 2007-02-12 2014-02-21 Merck Sharp & Dohme Ｉｌ-２３拮抗劑於治療感染之用途
RU2009127888A (ru) 2007-02-16 2011-03-27 Вайет (Us) Препараты белка, содержащие сорбит
SI2426144T1 (sl) 2007-02-23 2019-02-28 Merck Sharp & Dohme Corp. Umetno proizvedena anti-IL23P19 antitelesa
WO2008103473A1 (en) 2007-02-23 2008-08-28 Schering Corporation Engineered anti-il-23p19 antibodies
AU2008219681A1 (en) 2007-02-28 2008-09-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Combination therapy for treatment of immune disorders
EP2570425B1 (en) 2007-09-04 2017-08-23 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by the SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Deletions in domain II of Pseudomonas exotoxin A that reduce non-specific toxicity
AR068723A1 (es) 2007-10-05 2009-12-02 Glaxo Group Ltd Proteina que se une a antigenos que se une a il-23 humana y sus usos
EP2212442A1 (en) 2007-10-26 2010-08-04 Galderma Research & Development Non-invasive method to perform skin inflammatory disease pharmaco-genomic studies and diagnosis method thereof
CA2607771A1 (en) 2007-11-01 2009-05-01 Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Minister Of National Defence Humanized anti-venezuelan equine encephalitis virus recombinant antibody
CN101969971A (zh) 2007-11-30 2011-02-09 雅培制药有限公司 蛋白制剂及其制备方法
WO2009082624A2 (en) 2007-12-10 2009-07-02 Zymogenetics, Inc. Antagonists of il-17a, il-17f, and il-23 and methods of using the same
JP5623401B2 (ja) 2008-08-14 2014-11-12 テバ・ファーマシューティカルズ・オーストラリア・ピーティワイ・リミテッド 抗ｉｌ−１２／ｉｌ−２３抗体
CA2734919C (en) 2008-08-27 2016-08-16 Schering Corporation Lyophilized formulations of engineered anti-il-23p19 antibodies
US8420089B2 (en) 2008-11-25 2013-04-16 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
WO2010115786A1 (en) 2009-04-01 2010-10-14 Glaxo Group Limited Anti-il-23 immunoglobulins
WO2010115092A2 (en) 2009-04-02 2010-10-07 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treating or preventing inflammatory bowel disease and colon cancer
WO2011011797A2 (en) 2009-07-24 2011-01-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Cytokine compositions and methods of use thereof
JO3244B1 (ar) 2009-10-26 2018-03-08 Amgen Inc بروتينات ربط مستضادات il – 23 البشرية
WO2011066369A2 (en) 2009-11-24 2011-06-03 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antagonists of il-6 to raise albumin and/or lower crp
CN102695465A (zh) 2009-12-02 2012-09-26 斯帕泰克医疗股份有限公司 结合具有可偏转柱和复合脊柱杆的骨锚固件的小轮廓脊柱假体
GB201013975D0 (en) 2010-08-20 2010-10-06 Imp Innovations Ltd Method of treating desease
EP2536757B1 (en) 2010-02-18 2015-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold domain proteins that bind il-23
RS61082B1 (sr) 2010-02-26 2020-12-31 Novo Nordisk As Stabilno antitelo koje sadrži kompozicije
BR112012022223B1 (pt) 2010-03-01 2022-08-09 Cytodyn Inc Formulação de proteína concentrada, uso e método de preparação da mesma
AU2011268450B2 (en) 2010-06-15 2015-07-16 Amgen (Europe) GmbH Biomarkers for the treatment of psoriasis
US20110311527A1 (en) 2010-06-16 2011-12-22 Allergan, Inc. IL23p19 ANTIBODY INHIBITOR FOR TREATING OCULAR AND OTHER CONDITIONS
AU2011282476B2 (en) 2010-07-20 2015-08-20 Cephalon Australia Pty Ltd Anti-IL-23 heterodimer specific antibodies
JP6173911B2 (ja) 2010-09-10 2017-08-09 メディミューン リミテド 抗体誘導体
EP3456740A1 (en) 2010-11-04 2019-03-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Anti-il-23 antibodies
GB201100282D0 (en) 2011-01-07 2011-02-23 Ucb Pharma Sa Biological methods
TW201309330A (zh) 2011-01-28 2013-03-01 Abbott Lab 包含糖基化抗體之組合物及其用途
US9078894B2 (en) 2011-02-04 2015-07-14 Ab Science Treatment of severe persistant asthma with masitinib
EP4039275A1 (en) 2012-05-03 2022-08-10 Boehringer Ingelheim International GmbH Anti-il-23p19 antibodies
WO2014004436A2 (en) 2012-06-27 2014-01-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Crystalline anti-human il-23 antibodies
EP3689369A1 (en) 2013-03-15 2020-08-05 Amgen, Inc Methods for treating psoriasis using an anti-il-23 antibody
NZ712294A (en) 2013-03-15 2020-04-24 Amgen Inc Methods for treating crohn’s disease using an anti-il23 antibody
KR20140119396A (ko) 2013-03-29 2014-10-10 삼성전자주식회사 단백질 약물의 액상 제형
SG11201701423RA (en) 2014-09-03 2017-03-30 Boehringer Ingelheim Int Compound targeting il-23a and tnf-alpha and uses thereof
SG10202103879YA (en) 2015-02-04 2021-05-28 Boehringer Ingelheim Int Methods of treating inflammatory diseases
UA125433C2 (uk) 2015-07-23 2022-03-09 Бьорінґер Інґельхайм Інтернаціональ Ґмбх Націлена на іl-23а і фактор активації в-лімфоцитів (baff) сполука та її застосування
TWI733695B (zh) 2015-09-18 2021-07-21 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 治療發炎性疾病之方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007024846A2 (en) * 2005-08-25 2007-03-01 Eli Lilly And Company Anit-il-23 antibiodies
WO2007027714A2 (en) 2005-08-31 2007-03-08 Schering Corporation Engineered anti-il-23 antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
AU2018236692A1 (en) 2018-10-11
AU2018236692C1 (en) 2021-11-04
AR083747A1 (es) 2013-03-20
US10202448B2 (en) 2019-02-12
AU2016273970A1 (en) 2017-01-12
NO2019038I1 (no) 2019-10-17
US20140363444A1 (en) 2014-12-11
LUC00132I2 (ko) 2020-07-16
TWI653242B (zh) 2019-03-11
KR102049223B1 (ko) 2019-11-28
CY2019040I2 (el) 2020-05-29
MX362039B (es) 2019-01-07
GEP201706733B (en) 2017-09-25
CN107522784A (zh) 2017-12-29
AU2011323426A1 (en) 2013-06-06
HRP20161141T1 (hr) 2016-12-02
TW201307386A (zh) 2013-02-16
CA2816950A1 (en) 2012-05-10
JP2017079785A (ja) 2017-05-18
JP6126532B2 (ja) 2017-05-10
DK2635601T3 (en) 2016-09-19
NZ610592A (en) 2015-03-27
US20210198355A1 (en) 2021-07-01
SG10201604605VA (en) 2016-07-28
SG190006A1 (en) 2013-06-28
RS55161B1 (sr) 2017-01-31
KR20130139975A (ko) 2013-12-23
PE20141162A1 (es) 2014-09-18
PL2635601T3 (pl) 2017-02-28
TW201641516A (zh) 2016-12-01
MX343858B (es) 2016-11-25
HUS1900048I1 (hu) 2019-11-28
LTPA2019518I1 (lt) 2019-11-11
LT2635601T (lt) 2016-10-10
AP3953A (en) 2016-12-22
IL225648A0 (en) 2013-06-27
AU2011323426B2 (en) 2016-09-29
CN107522784B (zh) 2021-07-02
CO6801628A2 (es) 2013-11-29
IL225648A (en) 2016-04-21
EA201300530A1 (ru) 2013-12-30
KR20180137588A (ko) 2018-12-27
AP2013006820A0 (en) 2013-04-30
JP2014500009A (ja) 2014-01-09
IL244335A0 (en) 2016-04-21
JP6758361B2 (ja) 2020-09-23
JP6445596B2 (ja) 2018-12-26
BR112013011065A2 (pt) 2018-09-25
US9441036B2 (en) 2016-09-13
WO2012061448A1 (en) 2012-05-10
ES2593754T3 (es) 2016-12-13
MX2019000046A (es) 2023-10-05
US8778346B2 (en) 2014-07-15
EP3115375A1 (en) 2017-01-11
CY2019040I1 (el) 2020-05-29
HUE030916T2 (en) 2017-06-28
US20120282269A1 (en) 2012-11-08
CA3017116A1 (en) 2012-05-10
LTC2635601I2 (lt) 2021-07-12
PT2635601T (pt) 2016-09-27
CY1118014T1 (el) 2017-05-17
HK1247940A1 (zh) 2018-10-05
MX2013005015A (es) 2013-08-08
MY162791A (en) 2017-07-14
NL301013I2 (nl) 2020-01-09
UY33703A (es) 2012-06-29
EP2635601A1 (en) 2013-09-11
BR112013011065B1 (pt) 2022-03-15
ME02499B (me) 2017-02-20
EP2635601B1 (en) 2016-07-20
AU2016273970B2 (en) 2018-06-28
EP3281954A1 (en) 2018-02-14
EA030436B1 (ru) 2018-08-31
CA2816950C (en) 2018-11-27
EA201890548A1 (ru) 2018-07-31
CN103282382B (zh) 2017-11-03
MA34641B1 (fr) 2013-11-02
CN103282382A (zh) 2013-09-04
US20190144534A1 (en) 2019-05-16
ECSP13012649A (es) 2013-07-31
EP3456740A1 (en) 2019-03-20
US20160333091A1 (en) 2016-11-17
AU2018236692B2 (en) 2020-07-02
IL244335A (en) 2017-11-30
JP2019054809A (ja) 2019-04-11
NL301013I1 (ko) 2019-10-22
LUC00132I1 (ko) 2019-10-16
SI2635601T1 (sl) 2017-01-31
TWI545133B (zh) 2016-08-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101931591B1 (ko) 항－ｉｌ－２３ 항체
KR102583190B1 (ko) 항-lag-3 항체 및 조성물
KR102124758B1 (ko) 항-ｉｌ-23ｐ19 항체
CN107007833B (zh) 抗il-36r抗体
KR20150082503A (ko) 혈소판 유래 성장 인자 b 특이적 항체, 및 그의 조성물 및 용도
CN106795223A (zh) 针对Fcγ受体IIB及Fcε受体的新型抗体
KR20160131082A (ko) Lg1-3에 특이적인 항-라미닌4 항체
EA040834B1 (ru) ГУМАНИЗИРОВАННОЕ АНТИТЕЛО К IL-23p19 ИЛИ ЕГО АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ФРАГМЕНТ, ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ УКАЗАННОЕ АНТИТЕЛО
OA16388A (en) Anti-IL-23 antibodies.
EA042716B1 (ru) Фармацевтическая композиция, содержащая антитело к il-23р19, и ее применение

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
A107 Divisional application of patent
GRNT Written decision to grant