KR20230009815A - Il-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 조성물 - Google Patents

Il-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20230009815A
KR20230009815A KR1020220055562A KR20220055562A KR20230009815A KR 20230009815 A KR20230009815 A KR 20230009815A KR 1020220055562 A KR1020220055562 A KR 1020220055562A KR 20220055562 A KR20220055562 A KR 20220055562A KR 20230009815 A KR20230009815 A KR 20230009815A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
leu
ser
val
gly
antigen
Prior art date
Application number
KR1020220055562A
Other languages
English (en)
Inventor
유지환
한승한
김보민
윤주헌
천재희
정연욱
박지혜
정다은
Original Assignee
연세대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 연세대학교 산학협력단 filed Critical 연세대학교 산학협력단
Publication of KR20230009815A publication Critical patent/KR20230009815A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4614—Monocytes; Macrophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
    • A61K39/4622—Antigen presenting cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464429—Molecules with a "CD" designation not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere in G01N2333/705
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/12—Pulmonary diseases
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/56—Staging of a disease; Further complications associated with the disease

Abstract

본 발명은 IL-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 조성물 및 예측을 위한 정보를 제공하는 방법에 관한 것으로서, 목적하는 시료 내 존재하는 CD39+CD9+Ly6G-CD11b+CD11c- 단핵구의 수가 정상 대조군과 비교하여 감소되어 있는 경우 NETosis가 효과적으로 억제되지 않아 상기 질환이 중증도를 나타내는 것을 통해 질환의 중증도를 예측할 수 있다.
나아가, CD39+CD9+Ly6G-CD11b+CD11c- 단핵구의 경우 다른 단핵구의 도움 없이 직접 NETosis를 억제할 수 있기 때문에, 해당 단핵구를 사용하는 경우 IL-23에 의해 매개되는 질환을 매우 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있을 뿐만 아니라, 기존의 항-IL-23 항체와 병용 투여를 위해 사용되는 경우 치료 효과를 현저하게 증가시킬 수 있다.

Description

IL-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 조성물{A composition for predicting severity of disease mediated by IL-23}
본 발명은 IL-23에 의해 매개되는 질환의 중증도에 대한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.
천식은 다양한 내형(endotype)과 과도한 이환율을 가지는 기도의 만성 염증 질환을 의미한다. TH2 세포 매개 호산 구성, TH17 세포 매개 호중구 또는 심지어 무과립구 염증과 관련될 수 있는 여러 유형의 천식기도 염증이 있다. 호산구는 천식성 폐에 존재하는 중요한 염증 세포이지만, 이러한 호산구는 호산구 기도 염증, 특히 급성 악화 시 폐 내강에서 호중구 세포가 증가한 환자의 의학적 증상을 설명하지 못한다. 최근, 천식 중증도 및 악화, 스테로이드 치료 반응과 폐 호중구 염증의 높은 상관관계가 보고되었다. 호산구 기도 염증과는 달리 호중구 기도 염증은 종종 흡입 또는 전신 코르티코스테로이드(corticosteroids)에 반응하지 않아, 약물에 의한 반응성이 낮고, 재발될 수 있다. 이에, 강화된 치료적 접근에 대한 상당한 요구가 있었으나, 호중구가 우세한 천식, 즉 호중구 우세 천식에 대한 특정 치료의 개발은 근본적인 메커니즘에 대한 근거가 부족하여 어려운 실정이었다.
한편, 대식세포 및 수지상세포를 포함한 골수 세포는 면역반응에서 항원제시 역할을 하며, 천식의 경우, 나이브 CD4+T 세포가 이펙터 TH2 및 TH17 세포로 분화될 수 있도록 지시하고, 흡입된 항원에 대한 내성을 제어한다.
상기 TH17 세포의 경우, 낮은 항원 용량과 OX40 리간드의 발현에 의해 분화가 유도되고, 높은 수준의 IL-4, IL-5 및 IL-13이 존재하는 사이토카인 환경에서 항원 제시세포에 의해 들쭉날쭉하게 된다. 대조적으로, CD40 및 CD86의 발현 및 IL-6, IL-1 베타 및 IL-24 및 TGF-베타(transforming growth factor-beta)를 포함하는 전염증성사이토카인의 발현 수준이 높은 경우에 TH17이 분화되는데 유리하다. 특히, IL-23의 경우, 기도에 호중구의 침윤을 유도하여 TH17 세포를 활성화시키고, IL-17의 분비를 통해 중증도의 천식을 유발한다.
소아 천식에서IL-23의 혈청 수준은 FEV1(Forced Expiratory Volume in One second) 값에서 강제 호기량과 반비례하여, IL-23이 천식의 중증도를 평가할 때 보조적인 바이오마커로 사용될 수 있다. 또한, 최근IL-23 길항제 또는 억제제를 이용하여 IL-23의 잠재적인 치료 효과를 입증하기 위한 실험이 천식 환자 및 천식 마우스 모델에서 시험되었다. 그러나, IL-23의 조절 메커니즘과 다양한 천식 상태에서의 특정 역할이 명확하지 않기 때문에 이를 표적으로 하는 치료제의 개발은 지연되고 있는 실정이다.
특허문헌 1. 한국특허공개공보 제10-2013-0139975호
본 발명의 일 목적은 IL-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 IL-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측을 위한 정보를 제공하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 IL-23 매개 질환의 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물을 제공하는 것이다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명의 일 구현 예에서는 IL-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 조성물을 제공한다.
본 발명의 상기 조성물은 단핵구의 CD39 항원, CD9 항원, Ly6G 항원, CD11b 항원 및 CD11c 항원으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 단백질; 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제를 포함한다.
본 발명의 상기 “CD39(Cluster of Differentiation 39) 항원”은 종양 간극에 고농도로 존재하는 전 염증성 대사 산물인 세포 외 ATP (eATP)를 가수 분해하는 표면 발현 효소이다. 본 발명의 상기 CD39 항원은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 “CD9(Cluster of Differentiation 9) 항원”은 면역 세포의 분자 마커로서, 본 발명의 상기 CD9 항원은 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 “Ly6G(Lymphocyte antigen 6G) 항원”은 골수 유래 세포에 의해 발현되는 21-25kD 글리코실 포스파티딜 이노시톨(GPI) 연결된 분화 항원이다. 골수 발달 동안 일시적으로 단핵구에서 Ly6G가 발현될 수 있고, 과립구 및 말초 호중구에서 Ly6G 발현은 세포의 분화 및 성숙 수준과 직접적으로 관련되어 있다. 본 발명의 상기 Ly6G 항원은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 “CD11b 항원”은 단핵구, 대식세포, NK 세포 및 과립구와 같은 세포 사이의 다양한 접착에 관여한다. 본 발명의 상기 CD11b 항원은 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 “CD11c 항원”은 단핵구, 대식세포, 호중구 및 B 세포에 있는 제1형 막 관통 단백질로서, 세포를 활성화하고 호중구 호흡폭발을 일으킨다. 본 발명의 상기 CD11c 항원은 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구체 예에서, 상기 단핵구는 CD39 항원, CD9 항원 및 CD11b 항원이 단핵구의 표면에 발현되는 것일 수 있고, 및/또는 상기 단핵구는 Ly6G 항원 및 CD11c 항원이 단핵구의 표면에 발현되지 않는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 목적상, 목적하는 시료 내 존재하는 CD39+CD9+Ly6G-CD11b+CD11c- 단핵구의 수가 정상 대조군과 비교하여 감소되어 있는 경우 호중구 세포 외 트랩인 NETosis가 효과적으로 억제되지 않아 상기 질환이 중증도를 나타낼 수 있다. 따라서, 상기 항원들의 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현 수준을 측정함으로써, 정상 대조군과 비교하여 그 발현 수준이 변화되어 있는 경우 상기 질환이 중증도를 나타낼 수 있다고 예측할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 “IL-23에 의해 매개되는 질환”은 IL-23에 의해 발병되거나, 또는 그 질환이 진행되는데 IL-23이 관여할 수 있는 질환을 의미하는 것으로서, 상기 IL-23에 의해 매개되는 질환은 호흡기 질환; 다발성 경화증; 류마티스 성 관절염; 건선; 염증성 장 질환; 및 강직성 척추염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 호흡기 질환은 천식 또는 부비동염일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 천식은 호중구 우세 천식인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 “호중구 우세 천식”은 일반적인 치료 방법에 의해 증상이 완화될 수 있는 경증 천식과 비교하여 폐 조직에 호중구(Neutrophil)의 수가 호산구(Eosinophil)에 비하여 현저하게 증가되어 있는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는 것으로서, 난치성 알레르기성 천식, 스테로이드 의존성 알레르기성 천식, 치료 불응성 알레르기성 천식(Refractory allergic asthma) 등의 다양한 용어로 일컬어질 수 있다.
본 발명의 상기 “중증도”는 질환의 발병 위험의 증감 정도, 병변의 진행 정도 및 재발 위험의 증감 정도를 포함하는 의미일 수 있다. 상기 발병 위험의 증감 정도는 질환이 발병할 위험이 있거나, 발병한 가능성이 있는 정도를 포함하는 의미이다. 상기 병변의 진행 정도라 함은 질환이 발병하여 병변이 진행되어 질환이 경미한 정도 내지 심각한 정도를 포함하는 의미이다. 또한, 상기 재발 위험의 증감 정도라 함은 질환 완치 판정 후 재발 위험이 있거나 재발된 가능성이 있는 정도를 의미한다. 상기 질환의 중증도는 정성적 및/또는 정량적으로 나타낼 수 있으며, 중증도는 그 정도에 따라 분류될 수 있다.
본 발명의 일 구체 예에서, 상기 “천식 중증도”는 환자의 증상, 폐기능 지표를 통해 분류할 수 있으며, 경증 간헐성, 경증 지속성, 중등증 지속성 및 중증 지속성에 해당하는 분류에 의해 구분될 수 있다. 여기서, 중등증 지속성의 경우, 매일 천식 증상이 있으며, 증상 악화가 주에 2주 있고, FEV가 60~80%이고, PEFR 일중 변동률이 ≥30%인 경우를 의미한다. 또한, 여기서, 중증 지속성의 경우 지속적인 천식 증상이 있고, 활동 제한 및 잦은 증상 악화와 FEV가 ≤60% 이고, PEFR 일중 변동률이 ≥30%인 경우를 의미한다.
본 발명의 상기 IL-23에 의해 매개되는 질환인 다발성 경화증은 Th1 유형 T 세포 매개 자가 면역 질환으로, IL-23은 Th1 편향에 대한 선천적 면역 반응을 분극화하는 방식으로 면역계에 영향을 미침으로써 다발성 경화증의 병인에 중요한 역할을 할 수 있다(J Immunol 2006 년6 월15 일, 176 (12) 7768-7774).
본 발명의 상기 IL-23에 의해 매개되는 질환인 류마티스 성 관절염의 경우, p19 및 p40 서브 유닛으로 구성된 IL-23이 IL-23 수용체 복합체와 상호작용하여 과다한 생화학적 작용을 유발하고, 주로 IL-17 및 TH17 세포를 통해 파골 세포 생성 효과를 발휘하여 류마티스 성 관절염이 발휘되도록 할 수 있다(Immunopharmacol Immunotoxicol. 2019 Apr;41(2):185-191.).
본 발명의 상기 IL-23에 의해 매개되는 질환인 건선의 경우, 진피 수지상세포에서 IL-23의 생산이 증가되면 TH17(CD4+ 헬퍼T 세포) 세포, TC17(독성CD8+ T 세포), ILC3(innate lymphoid 세포) 및γδT 세포를 포함하여 IL-17를 생산하는 세포를 활성화한다. 이렇게 주로 염증성 피부의 수지상 세포에서 분비되는 IL-23은 IL-17을 분비하는 세포의 수가 증가되며, 많은 양의 IL-17을 생성하여 표피 각질 세포에 의해 생성된 건선 관련 유전자가 상향조절 됨으로써 건선의 발병 및 유지에 기여할 수 있다(Ther Adv Chronic Dis. 2018 May; 9(5): 111-119.).
본 발명의 상기 IL-23에 의해 매개되는 질환인 염증성 장 질환은 IL-23가 Th-17 경로를 통해 장에 염증이 발생되는 과정을 통해 발병 및 유지에 기여할 수 있다(Science 2006 Dec 1;314(5804):1461-3).
본 발명의 상기 IL-23에 의해 매개되는 질환인 강직성 척추염은 IL-23 수용체(IL-23R) 다형성이 해당 발생 위험 증가와 관련이 있음이 입증되었으며, 이와 같은 질환이 발생된 환자의 관절에서 IL-23을 생산하는 세포의 수가 증가되어 있는 것이 확인되었다(Ann Rheum Dis. 2019 Aug;78(8):1015-1018).
본 발명의 목적상 상기 IL-23에 의해 매개되는 질환들이 중증도를 나타내는 경우, CD39+CD9+Ly6G-CD11b+CD11c- 단핵구의 수가 정상 대조군과 비교하여 감소되어 있는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 단백질의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제는 상기 유전자에 상보적으로 결합하는 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 단백질의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제는 상기 단백질에 특이적으로 결합하여 그 단백질의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제라면 제한되지 않는다. 예를 들면, 상기 단백질의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제는 상기 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 올리고펩타이드, 리간드, PNA(Peptide nucleic acid) 및 앱타머(aptamer)로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것일 수 있다.
본 발명의 상기 “항체”는 항원과 특이적으로 결합하여 항원-항체 반응을 일으키는 물질을 가리킨다. 본 발명의 목적상, 항체는 상기 단백질에 대해 특이적으로 결합하는 항체를 의미한다. 본 발명의 항체는 다클론 항체, 단클론 항체 및 재조합 항체를 모두 포함한다. 상기 항체는 당업계에 널리 공지된 기술을 이용하여 용이하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 다클론 항체는 상기 단백질의 항원을 동물에 주사하고 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 과정을 포함하는 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 생산될 수 있다. 이러한 다클론 항체는 염소, 토끼, 양, 원숭이, 말, 돼지, 소, 개 등의 임의의 동물로부터 제조될 수 있다. 또한, 단클론 항체는 당업계에 널리 공지된 하이브리도마 방법(hybridoma method; Kohler 및Milstein (1976) European Journal of Immunology 6:511-519 참조), 또는 파지 항체 라이브러리 기술(Clackson et al, Nature, 352:624-628, 1991; Marks et al, J. Mol. Biol., 222:58, 1-597, 1991 참조)을 이용하여 제조될 수 있다. 상기 방법으로 제조된 항체는 겔 전기영동, 투석, 염 침전, 이온교환 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피 등의 방법을 이용하여 분리, 정제될 수 있다. 또한, 본 발명의 항체는 2개의 전장의 경쇄 및 2개의 전장의 중쇄를 갖는 완전한 형태뿐만 아니라, 항체의 기능적인 단편을 포함한다.
본 발명의 상기 항체의 기능적인 단편이란, 적어도 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 의미하며, Fab, F(ab'), F(ab')2 및 Fv 등이 있다.
본 발명에 상기 “PNA(Peptide Nucleic Acid)”는 인공적으로 합성된, DNA 또는 RNA와 비슷한 중합체를 가리키며, 1991년 덴마크 코펜하겐 대학교의 Nielsen, Egholm, Berg와Buchardt 교수에 의해 처음으로 소개되었다. DNA는 인산-리보스당 골격을 갖는데 반해, PNA는 펩타이드 결합에 의해 연결된 반복된 N-(2-아미노에틸)-글리신 골격을 가지며, 이로 인해 DNA 또는 RNA에 대한 결합력과 안정성이 크게 증가되어 분자 생물학, 진단 분석 및 안티센스 치료법에 사용되고 있다. PNA는 문헌[Nielsen PE, Egholm M, Berg RH, Buchardt O (December 1991). “Sequence-selective recognition of DNA by strand displacement with a thymine-substituted polyamide”. Science 254 (5037): 1497-1500]에 상세하게 개시되어 있다.
본 발명의 상기 “앱타머”는 올리고핵산 또는 펩타이드 분자이며, 앱타머의 일반적인 내용은 문헌[Bock LC et al., Nature 355(6360):5646(1992); Hoppe-Seyler F, Butz K “Peptide aptamers: powerful new tools for molecular medicine”. J Mol Med. 78(8):42630(2000); Cohen BA, Colas P, Brent R. “An artificial cell-cycle inhibitor isolated from a combinatorial library”. Proc Natl Acad Sci USA. 95(24): 142727(1998)]에 상세하게 개시되어 있다.
본 발명의 상기 항체, PNA 및 앱타머는 본 발명의 상기 단백질의 아미노산 서열을 기초로 통상의 기술자가 쉽게 제작할 수 있다.
본 발명의 상기 유전자의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제는 본 발명의 상기 유전자와 상보적으로 결합하여 그 발현 수준을 측정할 수 있는 것이라면 제한되지 않고 모두 포함될 수 있다. 예를 들면, 상기 유전자의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제는 상기 유전자에 상보적으로 결합하는 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것일 수 있다.
본 발명의 상기 “프라이머”는 표적 유전자 서열을 인지하는 단편으로서, 정방향 및 역방향의 프라이머 쌍을 포함하나, 바람직하게는, 특이성 및 민감성을 가지는 분석 결과를 제공하는 프라이머 쌍이다. 프라이머의 핵산 서열이 시료 내 존재하는 비-표적 서열과 불일치하는 서열이어서, 상보적인 프라이머 결합 부위를 함유하는 표적 유전자 서열만 증폭하고 비특이적 증폭을 유발하지 않는 프라이머일 때, 높은 특이성이 부여될 수 있다.
본 발명의 상기 “프로브”란 시료 내의 검출하고자 하는 표적 물질과 상보적으로 결합할 수 있는 물질을 의미하며, 상기 결합을 통하여 특이적으로 시료 내의 표적 물질의 존재를 확인할 수 있는 물질을 의미한다. 프로브의 종류는 당업계에서 통상적으로 사용되는 물질로서 제한은 없으나, 바람직하게는 PNA(peptide nucleic acid), LNA(locked nucleic acid), 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, RNA 또는 DNA일 수 있으며, 가장 바람직하게는 PNA이다. 보다 구체적으로, 상기 프로브는 바이오 물질로서 생물에서 유래되거나 이와 유사한 것 또는 생체 외에서 제조된 것을 포함하는 것으로, 예를 들어, 효소, 단백질, 항체, 미생물, 동식물 세포 및 기관, 신경세포, DNA, 및 RNA일 수 있으며, DNA는 cDNA, 게놈DNA, 올리고뉴클레오타이드를 포함하며, RNA는 게놈RNA, mRNA, 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
본 발명의 상기 “LNA(Locked nucleic acids)”란, 2'-O, 4'-C 메틸렌 브릿지를 포함하는 핵산 아날로그를 의미한다[J Weiler, J Hunziker and J Hall Gene Therapy (2006) 13, 496.502]. LNA 뉴클레오사이드는 DNA와 RNA의 일반적 핵산 염기를 포함하며, Watson-Crick 염기 쌍 규칙에 따라 염기쌍을 형성할 수 있다. 하지만, 메틸렌 브릿지로 인한 분자의 ‘locking’으로 인해, LNA는 왓슨-크릭 결합에서 이상적 형상을 형성하지 못하게 된다. LNA가DNA 또는RNA 올리고뉴클레오티드에 포함되면, LNA는 보다 빠르게 상보적 뉴클레오티드 사슬과 쌍을 이루어 이중 나선의 안정성을 높일 수 있다.
본 발명의 상기 “안티센스”는 안티센스 올리고머가 왓슨-크릭 염기쌍 형성에 의해 RNA 내의 표적 서열과 혼성화되어, 표적서열 내에서 전형적으로 mRNA와 RNA : 올리고머 헤테로이중체의 형성을 허용하는, 뉴클레오티드 염기의 서열 및 서브유닛간 백본을 갖는 올리고머를 의미한다. 올리고머는 표적 서열에 대한 정확한 서열 상보성 또는 근사 상보성을 가질 수 있다.
본 발명의 상기 유전자의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제는 본 발명의 상기 단백질에 대한 아미노산 서열을 토대로 그 유전자의 염기 서열을 도출할 수 있으므로, 통상의 기술자는 이를 바탕으로 상기 유전자에 상보적으로 결합하는 프라이머, 프로브 등을 쉽게 제작할 수 있다.
본 발명의 다른 구현 예에서는 IL-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 키트를 제공한다.
본 발명의 상기 키트는 본 발명에 따른 상기 IL-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 조성물을 포함한다.
본 발명의 상기 키트에서, IL-23에 의해 매개되는 질환, 중증도, 단핵구의 CD39 항원, CD9 항원, Ly6G 항원, CD11b 항원 및 CD11c 항원 등과 관련된 내용은 앞서 기재된 바와 동일하여, 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위해 생략한다.
본 발명의 상기 키트는 RT-PCR 키트, DNA 칩 키트, ELISA 키트, 단백질 칩 키트, 래피드(rapid) 키트 또는 MRM(Multiple reaction monitoring) 키트일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 키트는 분석 방법에 적합한 한 종류 또는 그 이상의 다른 구성 성분 조성물, 용액 또는 장치를 더 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 진단용 키트는 역전사 중합효소반응을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 더 포함할 수 있다. 역전사 중합효소반응 키트는 단백질을 코딩하는 유전자에 대해 특이적인 프라이머 쌍을 포함한다. 프라이머는 상기 유전자의 핵산서열에 특이적인 서열을 가지는 뉴클레오티드로서, 약 7bp 내 지 50bp의 길이, 보다 바람직하게는 약 10bp 내지 30bp의 길이를 가질 수 있다. 또한 대조군 유전자의 핵산 서열에 상보적인 프라이머를 포함할 수 있다. 그 외 역전사 중합효소반응 키트는 테스트 튜브 또는 다른 적절한 용기, 반응 완충액(pH 및 마그네슘 농도는 다양), 데옥시뉴클레오타이드(dNTPs), Taq-폴리머라아제 및 역전사효소와 같은 효소, DNase, RNase 억제제 DEPC-수(DEPC-water), 멸균수 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 진단용 키트는 DNA 칩을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함할 수 있다. DNA 칩 키트는 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA 또는 올리고뉴클레오티드(oligonucleotide)가 부착되어 있는 기판, 및 형광표지 프로브를 제작하기 위한 시약, 제제, 효소 등을 포함할 수 있다. 또한 기판은 대조군 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA 또는 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
본 발명의 진단용 키트는 ELISA를 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함할 수 있다. ELISA 키트는 상기 단백질에 대해 특이적인 항체를 포함한다. 항체는 마커 단백질에 대한 특이성 및 친화성이 높고 다른 단백질에 대한 교차 반응성이 거의 없는 항체로, 단클론 항체, 다클론 항체 또는 재조합 항체이다. 또한 ELISA 키트는 대조군 단백질에 특이적인 항체를 포함할 수 있다. 그 외 ELISA 키트는 결합된 항체를 검출할 수 있는 시약, 예를 들면, 표지된2차 항체, 발색단(chromophores), 효소(예: 항체와 컨주게이트됨) 및 그의 기질 또는 항체와 결합할 수 있는 다른 물질 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현 예에서는 IL-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측을 위한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.
본 발명의 상기 방법은 목적하는 개체로부터 분리된 시료에서, 단핵구의 CD39 항원, CD9 항원, Ly6G 항원, CD11b 항원 및 CD11c 항원으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 단백질; 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계;를 포함한다.
본 발명의 상기 방법에서, 정상 대조군과 비교하여 CD39 항원, CD9 항원 및 CD11b 항원은 표면에 발현되고, Ly6G 항원 및 CD11c 항원은 단핵구의 표면에 발현되지 않는 단핵구가 낮은 수준으로 존재하는 경우, 상기 질환의 중증도가 높은 것으로 예측할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 방법에서, IL-23에 의해 매개되는 질환, 중증도, 단핵구의 CD39 항원, CD9 항원, Ly6G 항원, CD11b 항원 및 CD11c 항원 등과 관련된 내용은 앞서 기재된 바와 동일하여, 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위해 생략한다.
본 발명의 상기 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계는 단백질의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제를 이용하여, 단백질 칩 분석, 면역측정법, 리간드 바인딩 어세이, MALDI-TOF(Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, SELDI-TOF(Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, 방사선 면역 분석, 방사 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 보체 고정 분석법, 2차원 전기영동 분석, 액상 크로마토그래피-질량분석(liquid chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS), LC-MS/MS(liquid chromatography-Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry), 유세포 분석, 웨스턴 블랏팅 및 ELISA(enzyme linked immunosorbentassay)로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현 예에서는 IL-23에 의해 매개되는 질환의 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물을 제공한다.
본 발명의 상기 조성물은 CD39 항원, CD9 항원 및 CD11b 항원을 발현하고; Ly6G 항원 및 CD11c 항원을 발현하지 않는 아형의 단핵구를 유효성분으로 포함한다.
본 발명의 상기 조성물에서, IL-23에 의해 매개되는 질환, 중증도, 단핵구의 CD39 항원, CD9 항원, Ly6G 항원, CD11b 항원 및 CD11c 항원 등과 관련된 내용은 앞서 기재된 바와 동일하여, 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위해 생략한다.
본 발명의 상기 “세포치료제”는 ‘세포의 조직과 기능을 복원시키기 위하여 살아있는 자가(autologus), 동종(allogenic), 또는 이종(xenogenic) 세포를 체외에서 증식·선별하거나 여타한 방법으로 세포의 생물학적 특성을 변화시키는 등의 일련의 행위를 통하여 치료, 진단 및 예방의 목적으로 사용되는 의약품’을 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 세포치료제는 본 발명의 상기 항원의 발현 특성을 갖는 세포, 예를 들면 단핵구일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구체 예에서, 상기 세포치료제에 해당하는 세포는 본 발명의 일실시 형태에서, 세포(예컨대, 단핵구)는 1Х105~5Х105, 5Х105~1Х106, 1Х106~2×106, 2Х106~3Х106, 3Х106~4Х106, 4Х106~5Х106, 5Х106~6Х106, 6Х106~7Х106, 7Х106~8Х106, 8Х106~1Х108, 1Х106~3Х106, 3Х106~5Х106, 5Х106~7Х106, 2Х106~4Х106, 1Х106~5Х106 또는 5Х106~1Х107개 중 어느 하나의 세포/개체의 투여량으로 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 세포치료제는 항-IL-23 항체, 예를 들면 리산키주맙(Risankizumab)등과 병용 투여를 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 상기 항-IL-23 항체는 IL-23p19를 표적하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 세포치료제 조성물은 약학 조성물일 수 있다.
본 발명의 상기 “예방”은 질병 또는 병증의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 조성물은 IL-23에 의해 매개되는 질환의 발병 시기를 지연시키거나, 발병을 억제하는 것을 의미한다.
본 발명의 상기 “치료”는 질병 또는 병증의 진행을 지연, 중단 또는 역전시키는 모든 행위를 의미하는 것으로서, 본 발명의 목적상 상기 조성물은 IL-23에 의해 매개되는 질환의 진행을 중단, 경감, 완화 또는 없애거나 역전시키는 것을 의미한다.
본 발명의 상기 약학 조성물은 캡슐, 정제, 과립, 주사제, 연고제, 분말 또는 음료 형태임을 특징으로 할 수 있으며, 상기 약학 조성물은 인간을 대상으로 하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 상기 약학 조성물은 이들로 한정되는 것은 아니지만, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 캡슐, 정제, 수성 현탁액 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사 용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용되는 담체는 경구 투여 시에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있고, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있으며, 국소투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 상기 약학 조성물의 제형은 상술한 바와 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 투여시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭서(Elixir), 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 제조할 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수 회 투약 형태로 제조할 수 있다. 기타, 용액, 현탁액, 정제, 캡슐, 서방형 제제 등으로 제형화 할 수 있다.
본 발명의 상기 제제화에 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등이 사용될 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 약학 조성물의 투여 경로는 이들로 한정되는 것은 아니지만 구강, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장이 포함된다. 경구 또는 비경구 투하가 바람직하다. 본 발명에서 상기 “비경구”는 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액낭내, 흉골내, 경막내, 병소내 및 두개골내 주사 또는 주입 기술을 포함한다. 또한, 상기 약학 조성물은 직장 투여를 위한 좌제의 형태로 투여될 수 있다.
본 발명의 상기 약학 조성물은 사용된 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 정식, 투여 시간, 투여 경로, 배출율, 약물 배합 및 예방 또는 치료될 특정 질환의 중증을 포함한 여러 요인에 따라 다양하게 변할 수 있고, 상기 약학 조성물의 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약무 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르지만 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있고, 1일 0.0001 내지 50 mg/kg 또는 0.001 내지 50 mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명에 따른 약학 조성물은 환제, 당의정, 캡슐, 액제, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁제로 제형화될 수 있다.
[서열목록]
서열번호 1: CD39 항원
MEDTKESNVKTFCSKNILAILGFSSIIAVIALLAVGLTQNKALPENVKYGIVLDAGSSHT
SLYIYKWPAEKENDTGVVHQVEECRVKGPGISKFVQKVNEIGIYLTDCMERAREVIPRSQ
HQETPVYLGATAGMRLLRMESEELADRVLDVVERSLSNYPFDFQGARIITGQEEGAYGWI
TINYLLGKFSQKTRWFSIVPYETNNQETFGALDLGGASTQVTFVPQNQTIESPDNALQFR
LYGKDYNVYTHSFLCYGKDQALWQKLAKDIQVASNEILRDPCFHPGYKKVVNVSDLYKTP
CTKRFEMTLPFQQFEIQGIGNYQQCHQSILELFNTSYCPYSQCAFNGIFLPPLQGDFGAF
SAFYFVMKFLNLTSEKVSQEKVTEMMKKFCAQPWEEIKTSYAGVKEKYLSEYCFSGTYIL
SLLLQGYHFTADSWEHIHFIGKIQGSDAGWTLGYMLNLTNMIPAEQPLSTPLSHSTYVFL
MVLFSLVLFTVAIIGLLIFHKPSYFWKDMV
서열번호 2: CD9 항원
MPVKGGTKCI KYLLFGFNFI FWLAGIAVLA IGLWLRFDSQ TKSIFEQETN
NNNSSFYTGV YILIGAGALM MLVGFLGCCG AVQESQCMLG LFFGFLLVIF
AIEIAAAIWG YSHKDEVIKE VQEFYKDTYN KLKTKDEPQR ETLKAIHYAL
NCCGLAGGVE QFISDICPKK DVLETFTVKS CPDAIKEVFD NKFHIIGAVG
IGIAVVMIFG MIFSMILCCA IRRNREMV
서열번호 3: Ly6G 항원
MDTCHIAKSC VLILLVVLLC AERAQGLECY NCIGVPPETS CNTTTCPFSD
GFCVALEIEV IVDSHRSKVK SNLCLPICPT TLDNTEITGN AVNVKTYCCK
EDLCNAAVPT GGSSWTMAGV LLFSLVSVLL QTFL
서열번호 4: CD11b 항원
MALRVLLLTA LTLCHGFNLD TENAMTFQEN ARGFGQSVVQ LQGSRVVVGA
PQEIVAANQR GSLYQCDYST GSCEPIRLQV PVEAVNMSLG LSLAATTSPP
QLLACGPTVH QTCSENTYVK GLCFLFGSNL RQQPQKFPEA LRGCPQEDSD
IAFLIDGSGS IIPHDFRRMK EFVSTVMEQL KKSKTLFSLM QYSEEFRIHF
TFKEFQNNPN PRSLVKPITQ LLGRTHTATG IRKVVRELFN ITNGARKNAF
KILVVITDGE KFGDPLGYED VIPEADREGV IRYVIGVGDA FRSEKSRQEL
NTIASKPPRD HVFQVNNFEA LKTIQNQLRE KIFAIEGTQT GSSSSFEHEM
SQEGFSAAIT SNGPLLSTVG SYDWAGGVFL YTSKEKSTFI NMTRVDSDMN
DAYLGYAAAI ILRNRVQSLV LGAPRYQHIG LVAMFRQNTG MWESNANVKG
TQIGAYFGAS LCSVDVDSNG STDLVLIGAP HYYEQTRGGQ VSVCPLPRGR
ARWQCDAVLY GEQGQPWGRF GAALTVLGDV NGDKLTDVAI GAPGEEDNRG
AVYLFHGTSG SGISPSHSQR IAGSKLSPRL QYFGQSLSGG QDLTMDGLVD
LTVGAQGHVL LLRSQPVLRV KAIMEFNPRE VARNVFECND QVVKGKEAGE
VRVCLHVQKS TRDRLREGQI QSVVTYDLAL DSGRPHSRAV FNETKNSTRR
QTQVLGLTQT CETLKLQLPN CIEDPVSPIV LRLNFSLVGT PLSAFGNLRP
VLAEDAQRLF TALFPFEKNC GNDNICQDDL SITFSFMSLD CLVVGGPREF
NVTVTVRNDG EDSYRTQVTF FFPLDLSYRK VSTLQNQRSQ RSWRLACESA
SSTEVSGALK STSCSINHPI FPENSEVTFN ITFDVDSKAS LGNKLLLKAN
VTSENNMPRT NKTEFQLELP VKYAVYMVVT SHGVSTKYLN FTASENTSRV
MQHQYQVSNL GQRSLPISLV FLVPVRLNQT VIWDRPQVTF SENLSSTCHT
KERLPSHSDF LAELRKAPVV NCSIAVCQRI QCDIPFFGIQ EEFNATLKGN
LSFDWYIKTS HNHLLIVSTA EILFNDSVFT LLPGQGAFVR SQTETKVEPF
EVPNPLPLIV GSSVGGLLLL ALITAALYKL GFFKRQYKDM MSEGGPPGAE
PQ
서열번호 5: CD11c 항원
MTRTRAALLL FTALATSLGF NLDTEELTAF RVDSAGFGDS VVQYANSWVV
VGAPQKITAA NQTGGLYQCG YSTGACEPIG LQVPPEAVNM SLGLSLASTT
SPSQLLACGP TVHHECGRNM YLTGLCFLLG PTQLTQRLPV SRQECPRQEQ
DIVFLIDGSG SISSRNFATM MNFVRAVISQ FQRPSTQFSL MQFSNKFQTH
FTFEEFRRSS NPLSLLASVH QLQGFTYTAT AIQNVVHRLF HASYGARRDA
AKILIVITDG KKEGDSLDYK DVIPMADAAG IIRYAIGVGL AFQNRNSWKE
LNDIASKPSQ EHIFKVEDFD ALKDIQNQLK EKIFAIEGTE TTSSSSFELE
MAQEGFSAVF TPDGPVLGAV GSFTWSGGAF LYPPNMSPTF INMSQENVDM
RDSYLGYSTE LALWKGVQSL VLGAPRYQHT GKAVIFTQVS RQWRMKAEVT
GTQIGSYFGA SLCSVDVDSD GSTDLVLIGA PHYYEQTRGG QVSVCPLPRG
WRRWWCDAVL YGEQGHPWGR FGAALTVLGD VNGDKLTDVV IGAPGEEENR
GAVYLFHGVL GPSISPSHSQ RIAGSQLSSR LQYFGQALSG GQDLTQDGLV
DLAVGARGQV LLLRTRPVLW VGVSMQFIPA EIPRSAFECR EQVVSEQTLV
QSNICLYIDK RSKNLLGSRD LQSSVTLDLA LDPGRLSPRA TFQETKNRSL
SRVRVLGLKA HCENFNLLLP SCVEDSVTPI TLRLNFTLVG KPLLAFRNLR
PMLAADAQRY FTASLPFEKN CGADHICQDN LGISFSFPGL KSLLVGSNLE
LNAEVMVWND GEDSYGTTIT FSHPAGLSYR YVAEGQKQGQ LRSLHLTCDS
APVGSQGTWS TSCRINHLIF RGGAQITFLA TFDVSPKAVL GDRLLLTANV
SSENNTPRTS KTTFQLELPV KYAVYTVVSS HEQFTKYLNF SESEEKESHV
AMHRYQVNNL GQRDLPVSIN FWVPVELNQE AVWMDVEVSH PQNPSLRCSS
EKIAPPASDF LAHIQKNPVL DCSIAGCLRF RCDVPSFSVQ EELDFTLKGN
LSFGWVRQIL QKKVSVVSVA EITFDTSVYS QLPGQEAFMR AQTTTVLEKY
KVHNPTPLIV GSSIGGLLLL ALITAVLYKV GFFKRQYKEM MEEANGQIAP
ENGTQTPSPP SEK
본 발명은 IL-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 조성물 및 예측을 위한 정보를 제공하는 방법에 관한 것으로서, 목적하는 시료 내 존재하는 CD39+CD9+Ly6G-CD11b+CD11c- 단핵구의 수가 정상 대조군과 비교하여 감소되어 있는 경우 NETosis가 효과적으로 억제되지 않아 상기 질환이 중증도를 나타내는 것을 통해 질환의 중증도를 예측할 수 있다.
나아가, CD39+CD9+Ly6G-CD11b+CD11c- 단핵구의 경우 다른 단핵구의 도움 없이 직접 NETosis를 억제할 수 있기 때문에, 해당 단핵구를 사용하는 경우 IL-23에 의해 매개되는 질환을 매우 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있을 뿐만 아니라, 기존의 항-IL-23 항체와 병용 투여를 위해 사용되는 경우 치료 효과를 현저하게 증가시킬 수 있다.
도1은 본 발명의 일 실시예에 따른 실험군에서 NETosis 현상을 형광 현미경을 통해 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 실험군에서 NETosis 현상을 군집화 지역의 면적을 수치화한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 실험군에서 CD11b+CD11c- 세포 중에서 Ly6G+인 세포의 비율을 그래프로 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 실험군에서 CD11b+CD11c- 세포 중에서 Ly6G-CD39+CD9+인 세포의 비율을 그래프로 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 실험군에서 전체 세포 수를 개수하여 그래프로 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 실험군에서 호중구 세포 수를 개수하여 그래프로 나타낸 것이다.
도 7 내지 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 실험군의 혈청에서 측정된 사이토카인(IL-17, IL-22, IFN-감마)의 발현 수준을 그래프로 나타낸 것이다.
도 10은 본 발명의 일 실시예에 따른 조직 내 염증 세포의 침윤 정도를 H&E 염색을 통해 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 11은 본 발명의 일 실시예에 따른 실험군에서 확인된 Penh 값을 그래프로 나타낸 것이다.
도 12는 본 발명의 일 실시예에 따른 실험군의 혈청에서 측정된 IL-23의 발현 수준을 그래프로 나타낸 것이다.
도 13은 본 발명의 일 실시예에 따른 CD39+ CD9+ 세포 유무에 따른 호중구의 NETosis 정도를 비교한 그래프이며, NETosis 정도는 MPO와 citH3의 군집화 지역의 면적에 의하여 측정되었다.
도 14은 본 발명의 일 실시예에 따른 부비동염의 중증도와 CD45+ 세포 중 CD39+ CD9+ 세포의 비율이 역상관 관계에 있음을 나타내는 그래프이다.
도 15는 본 발명의 일 실시예에 따른 가벼운 증상(mild) 및 중증(moderate-severe)으로 분류된 부비동염 환자의 코안의 천정에 있는 뼈(ethmoid) 점막 조직 내에 CD45 + 세포 중CD39 + CD9 + 세포의 비율을 그래프로 나타낸 것이다.
도 16은 본 발명의 일 실시예에 따른 궤양성 대장염(Ulcerative Colitis, UC) 및 크론병(Crohn’s Disease, CD)에서 CD9, CD39 및 CD45의 발현량을 대조군(HC)와 비교한 상대적 풍부도로 히트맵(heat map)을 통하여 도시한 것이다.
도 17은 본 발명의 일 실시예에 따라, CD9 또는 CD39의 발현량을 CD45와의 상대적인 풍부도로 측정한 것을 도시한 그래프이다.
도 18은 대조군, 궤양성 대장염(UC) 및 크론병(CD) 환자의 대장 점막에 대한 면역염색결과의 공초점 현미경 이미지(Confocal Microscopy Image)로써, CD9은 붉은색, CD39는 보라색, CD45는 녹색으로 염색되었다.
이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예
실험방법
[실험 방법 1] 실험동물 마우스
실험에 사용한 마우스는 야생형 C57BL/6 마우스(6-8 주령)를 오리엔트 바이오(경기도, 한국)에서 구입하여 사용하였다. 상기 마우스는 실험이 시작될 때까지 특정 병원체가 없는 조건에서 사육하였다. 이와 같은 동물 실험은 연세대학교 의과대학교 기관 심의위원회의 승인을 받아 수행하였다.
[실험 방법 2] 호산구 우세 및 호중구 우세 마우스 모델 제작
호산구 우세 마우스 모델 제작은 다음과 같은 과정을 통해 수행하였다. 구체적으로, 0일에 수산화 알루미늄 2.5 mg에 200 ㎍의 OVA(Ovalbumin)을 복강 내 주사하여 마우스를 1차 감작하였다. 1차 감작을 수행한지 11일 후에, 동일한 양의 OVA를 복강 내 주사하여 감작하고, 10일 이후에 21일, 22일, 23일 각각에 상기 마우스를 마취시키고 50 ㎍의 OVA를 비강 내에 감작하였다. 마지막으로, 25일이 되는 때에 마우스에 100 ㎍의 OVA를 비강 내로 투여하고 48시간 이후에 마우스를 희생시켜 실험을 수행하였다.
호중구 우세 마우스 모델 제작은 다음과 같은 과정을 통해 수행하였다. 구체적으로, 0일, 1일 및 2일에 100 ㎍의 LPS(E. coli) 및 75 ㎍의 OVA를 비강 내 주사하여 마우스를 감작하였다. 2일에 해당하는 3차 감작 5일 후, 동일한 양의 LPS 및 OVA를 비강 내 주사하는 과정을 통해 감작을 수행하였다. 이렇게, 마지막 감작한지 7일 후, 14일, 15일, 21일 및 22일 각각에 PBS에 녹인 50 ㎍의 OVA를 마우스의 비강 내 주사하는 과정을 통해 감작하고 48시간 이후에 마우스를 희생시켜 실험을 수행하였다.
[실험 방법 3] 중화 항체 및 덱사메타손 억제제 처리
IL-23p19 중화항체(BioxCell, West Lebanon, NH, USA)는 마우스 한 마리당 400 ㎍의 양을 상기 실험 방법 2에 기재된 최초 감작 1시간 전에 복강 내로 주사하였다. 또한, 덱사메타손(Dexamethasone, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)의 경우, 마우스 한 마리당 1 mg/kg의 양으로 상기 실험 방법 2에 기재된 최초 감작 1시간 전에 복강 내로 주사하였다.
대조군의 경우, 400 ㎍의 마우스 IgG2a 아이소타입을 이용하여 상기 중화항체와 동일한 시간대에 복강 내로 주사하였으며, POM1 (20 mg/kg per mouse, TOCRIS a biotechne brand), aCD9 (20 mg/kg per mouse, BD Pharmingen) 및 GSK484(4 mg/kg per mouse, CAYMAN CHEMICAL COMPANY)는 모두 상기 중화항체와 동일한 시간대에 복강 내로 주사하였다.
[실험 방법 4] 메타콜린(methacholine) AHR 측정 방법
상기 실험 방법 2에 기재된 OVA 감작 반응을 수행한지 24시간 후에, 의식이 있는 마우스에서 전신 혈량 측정법(WBP; Buxco Research Systems, Wilmington, NC)을 이용하여 흡입 메타 콜린(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)에 대한 반응을 측정하였다.
[실험 방법 5] H&E 염색 방법
실험 동물의 폐 조직을 수집하고, 4% 포름알데히드 용액에 고정한 후, 파라핀으로 포매하여 블록을 제작하였다. 그런 다음, 상기 블록을 3 ㎛ 두께의 절편을 제작하였다. 폐 조직의 H&E 염색을 위해 파라핀 절편을 60 ℃에서 30분간 말린 후, 자일렌으로 15분간 탈피시키고 100%, 95%, 80%, 75% 알코올 순서대로 함수시켰다. 준비된 조직 슬라이드를 헤마톡실린(hematoxylin) 용액을 떨어뜨려 3분간 반응시키고 증류수로 1분씩 3회 세척한 후 에오신(eosin) 용액으로 10분간 반응시키고 증류수로 세척하였다. 이를 퍼마운트로 마운팅(mounting)한 후 광학현미경을 이용하여 폐조직의 구조적 변화를 관찰하였다. 이때 헤마톡실린은 염기성으로 세포 핵 내 염색질과 핵 막을 염색하여 보라색으로 나타나며, 산성 염색약인 에오신은 염기를 띠는 세포질 단백질과 콜라겐 등과 결합하여 분홍색으로 관찰된다.
[실험 방법 6] Penh 측정방법
Penh는 기도저항을 나타내는 지표로서, 상기 마우스 모델에서 기도저항 측정기를 이용하여 측정된 값을 다음과 같은 공식을 통해 수치화하여 Penh를 도출하였다.
[식 1]
Penh = (Te/RT-1) X PEF(peak expiratory flow rat, mL/s)/PIF(peak inspiratory flow rat, mL/s)
Te: 흡기 끝에서 다음 흡기까지(expiratory time, sec)
RT: 호기동안 호기양이 일회호흡양의 30%가 남을 때까지 걸리는 시간(relaxation time, sec)
[실험 방법 7] 사이토카인농도측정
상기 마우스 모델의 혈청에서 IL-17, IL-22, IFN-감마 및 IL-23이 존재하는 수준을 ELISA 키트를 이용하여 측정하였다. 구체적으로 96-웰ELISA 플레이트에0.1 M 소듐 카르보네이트 용액으로 희석한 1차 항체를 100 ㎕씩 넣은 후 4℃에서 하룻밤 반응시켰다. 이후, 상기 플레이트를 1 X 세척 완충액으로 3회 세척한 후 10% BSA가 함유된 1 X PBS를 각 웰에 넣어 실온에서 1시간 동안 정치함으로써 차단하였다. 그런 다음, 상기 각 웰에 혈청을 100 ㎕씩 넣어 실온에서 2시간 반응시킨 후 5회 1 X 세척 완충액으로 세척하고 퍼옥시다제(peroxidase)가 결합된HRP-결합 2차 항체를 넣고 실온에서 1시간 반응시켰다. 이를 다시 5회 세척한 다음 기질용액(TMB)을 넣어 10분 동안 암실조건에서 반응시킴으로써 발색을 유도하였다. 반응종료 후 각 웰에 정지액을 50 ㎕씩 넣어 효소반응을 정지시킨 후 마이크로플레이트 리더를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 혈청 내 사이토카인의 농도는 표준용액의 정량곡선을 기준으로 계산하였다.
[실험 방법 8] 면역세포 표현형 확인
상기 마우스 모델로부터 기관지 폐포 세척액을 수득한 뒤, PBS를 이용하여 1회 세척하고, 형광 물질이 결합된 항체들과 혼합한 뒤에 4℃에서 1시간 동안 반응시키고 유세포 분석기를 사용하여 폐 세포에 존재하는 면역 세포의 표현형을 확인하였다.
실험 결과
[실험 결과 1] NETosis 억제에서 단핵구의 역할 확인
NDA(neutrophil-dominant asthma) 모델에서 CD39 및 CD9가 호중구 염증의 항-IL-23p19 매개 억제를 어떻게 조절하는지 확인하였다. 이를 위해 citH3 및 MPO가 포함된 이중 양성 세포 계수를 하기 표 1에 표시된 것과 같은 실험군에서 확인하여, NETosis 정도를 비교하고 그 결과를 도 1 및 2에 나타내었다.
구분 표기 내용
실험군 1 ■ OVA + LPS / PBS
실험군 2 ▼ OVA + LPS / OVA
실험군 3 △ OVA + LPS / OVA + GSK484
실험군 4 Ｘ OVA + LPS / OVA + αIL23p19
실험군 5 ＊ OVA + LPS / OVA + αIL23p19 + POM1
실험군 6 ＋ OVA + LPS / OVA +αIL23p19 + POM1 +GSK484
실험군 7 ● OVA + LPS / OVA + αIL23p19 + αCD9
실험군 8 ○ OVA + LPS / OVA + αIL23p19 + αCD + GSK484
* OVA + LPS: 호중구 우세 동물 모델 유도
* GSK484: NETosis 억제제
** αIL23p19: 항-IL-23p19 항체
*** POM1: Ecto-NTPDases 억제제
**** αCD9: 항-CD9 항체
도 1 및 도 2에서 보는 바와 같이, 실험군 1과 비교하여 실험군 2에서 NETosis가 증가되었으며, 실험군 3 및 실험군 4에서 NETosis가 현저하게 감소되었다. 나아가, 실험군 4에서 감소된 NETosis가 POM1을 처리한 실험군 5에서 다시 실험군 1과 같이 증가되었으며, 여기에 GSK484를 다시 처리한 실험군 6에서 다시 감소되었다. 또한, 실험군 7에서 보는 바와 같이, 항-CD9 항체를 처리하였을 때 POM1 처리와 동일하게 NETosis가 증가되었다. 이에 더하여, 실험군 8에서 보는 바와 같이, 항-CD9 항체를 처리하여 NETosis가 증가된 효과는 GSK484의 처리에 의해 감소되었다.
상기 결과를 통해, 호중구 우세 천식에서 IL-23에 의존적인 NETosis가 수지상세포와 IL-23을 생성하는 면역 세포를 활성화시켜 염증을 유발할 수 있고, 이렇게 유발된 NETosis의 억제에 CD9가 관여하는 것을 알 수 있다.
상기 표 1에 표시된 실험군으로부터 수득된 기관지 폐포 세척액(bronchoalveolar lavage fluid, BALF) 내에서 LyG+CD11b+CD11c-, Ly6G-CD39+CD9+CD11b+CD11c-, 전체 세포 수, 호중구 수 및 사이토카인(IL-23, IL-17, IL-22 및 IFN-감마)이 존재하는 수준을 측정하여, 그 결과를 도 3 내지 10에 나타내었다.
도 3 및 4에서 보는 바와 같이, Ly6G+CD11b+CD11c- 호중구 비율 (도 3)과는 대조적으로, 실험군 2에서 감소되어 있던 CD39+CD9+Ly6G-CD11b+CD11c- 단핵구의 비율이 항-IL-23p19 및 GSK484를 처리한 실험군 3 및 4에서 증가되었다. 또한, 실험군 5에서 감소된 CD39+CD9+Ly6G-CD11b+CD11c- 단핵구는 GSK484가 처리된 실험군 6 및 실험군 8에서 증가되었다.
상기 결과를 통해, CD39 및 CD9 모두 IL-23에 의존되는 호중구의 확장을 억제하고 호중구 우세 마우스 동물 모델의 폐에서 NETosis의 억제를 유도할 수 있음을 알 수 있다.
도 5 내지 11에서 보는 바와 같이, 실험군 2, 실험군 5 및 실험군 7에서 증가된 BALF 내 전체 세포 수(도 5)와, 호중구 수(도 6), IL-17(도 7), IL-22(도 8), IFN-감마(도 9), 면역세포 침윤(도 10) 및 Pehn 값(도 11) 이 실험군 3, 실험군 4, 실험군 6 및 실험군 8에서 감소되었다.
도 12에서 보는 바와 같이, 실험군 1 내지 4에서 IL-23이 존재하는 수준을 확인한 결과, IL-23이 존재하는 수준은 IL-17, IL-22 및 Th-1 세포를 매개로하는 사이토카인인 IFN-감마와 유사하게 실험군 1과 비교하여 실험군 2에서 증가되었으며, 이렇게 증가된 값은 실험군 3 및 실험군 4에서 감소되었다. 나아가, 실험군 3에서 감소된 IL-23의 발현 수준은 POM1 및 항-CD9 항체를 처리한 실험군 5 및 실험군 7에서 다시 실험군 2와 동일한 수준으로 증가되었다.
상기 결과를 통해 CD39와 CD9 모두 호중구 우세 마우스 동물 모델에서 NETosis의 억제를 통해 IL-23에 의존되는 호중구 염증을 억제할 수 있음을 알 수 있다.
[실험 결과 2] CD39+CD9+Ly6G-CD11b+CD11c- 단핵구의 NETosis 억제 방식 확인
CD39+CD9+Ly6G-CD11b+CD11c- 단핵구가 Ly6G+CD11b+CD11c- 호중구의 NETosis를 직접 억제하는지 확인하기 위해, CD39-CD9-Ly6G+CD11b+CD11c- 호중구의 NETosis를 실험군 4로부터 분리된 CD39+CD9+Ly6G-CD11b+CD11c- 단핵구가 존재 또는 존재하지 않는 호중구 우세 마우스 모델에서 MPO, Cit 히스톤 H3 및 DAPI를 이용하여 염색한 뒤에 형광 현미경을 통해 분석하여, 그 결과를 도13에 나타내었다.
도 13에서 보는 바와 같이, CD39-CD9-Ly6G+CD11b+CD11c- 호중구 (neutrophil only)에서 확인되는 다량의 NETosis가CD39+CD9+Ly6G-CD11b+CD11c- 단핵구(anti cell)를 추가하자 완전히 감소되는 것을 확인하였다.
상기 결과를 통해, 다른 CD39+CD9+ 면역 세포를 제외한 CD39+CD9+ Ly6G-CD11b+CD11c- 단핵구가 CD39 및 CD9에 의존적인 방식으로Ly6G+CD11b+CD11c- 호중구의 NETosis를 직접 억제하는 것을 알 수 있다.
[실험 결과 3] 부비동염 환자에서 CD39+CD9+ 세포의 비율 확인
부비동염 환자를 가벼운 증상(mild) 및 중증(moderate-severe)으로 분류하고, 환자의 코안의 천정에 있는 뼈(ethmoid) 점막을 채취하여 해당 조직 내에 CD45+ 세포 중 CD39+CD9+ 세포의 비율을 측정하여, 그 결과를 도 14 및 15에 나타내었다.
도 14 및 15에서 보는 바와 같이, 중증으로 분류된 만성 부비동염 환자의 코안의 천정에 있는 뼈 점막에서 내에 CD45+ 세포 중 CD39+CD9+ 세포의 비율이 가벼운 증상의 경우와 비교하여 매우 낮은 수준으로 존재, 즉 역상관관계가 있는 것을 확인하였다.
상기 결과를 통해, 천식 이외에도 IL-23에 의해 매개되는 질환인 부비동염에서 CD39+CD9+ 세포의 비율이 감소되어 있는 경우에는 그 질환이 중증인 것을 알 수 있다.
[실험 결과 4] 염증성 장 질환 환자에서 CD39+CD9+ 세포의 비율 확인
IL-23-Th17 신호전달 경로의 과도한 활성화가 염증성 장 질환(Inflammatory Bowel Disease, IBD)의 발생의 원인인 것에 착안하여, IBD환자의 대장 점막에서 CD39+CD9+ 면역 세포의 숫자가 적을 것이라고 가정하였다. 이를 확인하기 위하여 IBD환자 14명을 포함하여, 궤양성 대장염(Ulcerative Colitis, UC) 7명, 크론병(Chrohn’s Disease, CD) 7명 및 정상 대조군(HC) 7명의 대장 점막에서 CD9 또는 CD39의 CD45에 대한 단백질 발현 비율을 확인하였다. 이를 확인하는데 본 발명자들의 이전 실험에서 사용하였던 단백질체 분석(Proteomics Analysis) 결과을 이용하였다. 건강한 대조군(HC)와 비교하여 UC와 CD에서 CD9의 CD45에 대한 발현율이 1/3 수준을 보였다. 반면, CD39의 CD45에 대한 발현율은 UC/CD와 건강한 대조군을 비교했을 때 유의한 차이가 없었다(도 16 및 17). 이러한 단백질체 분석 결과와 일관되게, CD39+CD9+CD45+ 세포는 건강한 대조군(HC)의 대장 점막에서 관찰되었지만, UC와 CD 환자에서는 관찰되지 않았다(도 18).
상기 실험 결과에서 관찰된 NDA 모델, 중증 CRS 환자, IBD 환자에서의 낮은 CD39+CD9+ 면역 세포수를 통하여, 해당 면역세포가 IL-23-Th17 세포-연관 면역 질환의 치료에 대한 중요한 타겟으로 활용될 수 있음을 확인할 수 있었다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
<110> Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University <120> A composition for predicting severity of disease mediated by IL-23 <130> PDPB214177k01 <160> 5 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 510 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Glu Asp Thr Lys Glu Ser Asn Val Lys Thr Phe Cys Ser Lys Asn 1 5 10 15 Ile Leu Ala Ile Leu Gly Phe Ser Ser Ile Ile Ala Val Ile Ala Leu 20 25 30 Leu Ala Val Gly Leu Thr Gln Asn Lys Ala Leu Pro Glu Asn Val Lys 35 40 45 Tyr Gly Ile Val Leu Asp Ala Gly Ser Ser His Thr Ser Leu Tyr Ile 50 55 60 Tyr Lys Trp Pro Ala Glu Lys Glu Asn Asp Thr Gly Val Val His Gln 65 70 75 80 Val Glu Glu Cys Arg Val Lys Gly Pro Gly Ile Ser Lys Phe Val Gln 85 90 95 Lys Val Asn Glu Ile Gly Ile Tyr Leu Thr Asp Cys Met Glu Arg Ala 100 105 110 Arg Glu Val Ile Pro Arg Ser Gln His Gln Glu Thr Pro Val Tyr Leu 115 120 125 Gly Ala Thr Ala Gly Met Arg Leu Leu Arg Met Glu Ser Glu Glu Leu 130 135 140 Ala Asp Arg Val Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Leu Ser Asn Tyr Pro 145 150 155 160 Phe Asp Phe Gln Gly Ala Arg Ile Ile Thr Gly Gln Glu Glu Gly Ala 165 170 175 Tyr Gly Trp Ile Thr Ile Asn Tyr Leu Leu Gly Lys Phe Ser Gln Lys 180 185 190 Thr Arg Trp Phe Ser Ile Val Pro Tyr Glu Thr Asn Asn Gln Glu Thr 195 200 205 Phe Gly Ala Leu Asp Leu Gly Gly Ala Ser Thr Gln Val Thr Phe Val 210 215 220 Pro Gln Asn Gln Thr Ile Glu Ser Pro Asp Asn Ala Leu Gln Phe Arg 225 230 235 240 Leu Tyr Gly Lys Asp Tyr Asn Val Tyr Thr His Ser Phe Leu Cys Tyr 245 250 255 Gly Lys Asp Gln Ala Leu Trp Gln Lys Leu Ala Lys Asp Ile Gln Val 260 265 270 Ala Ser Asn Glu Ile Leu Arg Asp Pro Cys Phe His Pro Gly Tyr Lys 275 280 285 Lys Val Val Asn Val Ser Asp Leu Tyr Lys Thr Pro Cys Thr Lys Arg 290 295 300 Phe Glu Met Thr Leu Pro Phe Gln Gln Phe Glu Ile Gln Gly Ile Gly 305 310 315 320 Asn Tyr Gln Gln Cys His Gln Ser Ile Leu Glu Leu Phe Asn Thr Ser 325 330 335 Tyr Cys Pro Tyr Ser Gln Cys Ala Phe Asn Gly Ile Phe Leu Pro Pro 340 345 350 Leu Gln Gly Asp Phe Gly Ala Phe Ser Ala Phe Tyr Phe Val Met Lys 355 360 365 Phe Leu Asn Leu Thr Ser Glu Lys Val Ser Gln Glu Lys Val Thr Glu 370 375 380 Met Met Lys Lys Phe Cys Ala Gln Pro Trp Glu Glu Ile Lys Thr Ser 385 390 395 400 Tyr Ala Gly Val Lys Glu Lys Tyr Leu Ser Glu Tyr Cys Phe Ser Gly 405 410 415 Thr Tyr Ile Leu Ser Leu Leu Leu Gln Gly Tyr His Phe Thr Ala Asp 420 425 430 Ser Trp Glu His Ile His Phe Ile Gly Lys Ile Gln Gly Ser Asp Ala 435 440 445 Gly Trp Thr Leu Gly Tyr Met Leu Asn Leu Thr Asn Met Ile Pro Ala 450 455 460 Glu Gln Pro Leu Ser Thr Pro Leu Ser His Ser Thr Tyr Val Phe Leu 465 470 475 480 Met Val Leu Phe Ser Leu Val Leu Phe Thr Val Ala Ile Ile Gly Leu 485 490 495 Leu Ile Phe His Lys Pro Ser Tyr Phe Trp Lys Asp Met Val 500 505 510 <210> 2 <211> 228 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Pro Val Lys Gly Gly Thr Lys Cys Ile Lys Tyr Leu Leu Phe Gly 1 5 10 15 Phe Asn Phe Ile Phe Trp Leu Ala Gly Ile Ala Val Leu Ala Ile Gly 20 25 30 Leu Trp Leu Arg Phe Asp Ser Gln Thr Lys Ser Ile Phe Glu Gln Glu 35 40 45 Thr Asn Asn Asn Asn Ser Ser Phe Tyr Thr Gly Val Tyr Ile Leu Ile 50 55 60 Gly Ala Gly Ala Leu Met Met Leu Val Gly Phe Leu Gly Cys Cys Gly 65 70 75 80 Ala Val Gln Glu Ser Gln Cys Met Leu Gly Leu Phe Phe Gly Phe Leu 85 90 95 Leu Val Ile Phe Ala Ile Glu Ile Ala Ala Ala Ile Trp Gly Tyr Ser 100 105 110 His Lys Asp Glu Val Ile Lys Glu Val Gln Glu Phe Tyr Lys Asp Thr 115 120 125 Tyr Asn Lys Leu Lys Thr Lys Asp Glu Pro Gln Arg Glu Thr Leu Lys 130 135 140 Ala Ile His Tyr Ala Leu Asn Cys Cys Gly Leu Ala Gly Gly Val Glu 145 150 155 160 Gln Phe Ile Ser Asp Ile Cys Pro Lys Lys Asp Val Leu Glu Thr Phe 165 170 175 Thr Val Lys Ser Cys Pro Asp Ala Ile Lys Glu Val Phe Asp Asn Lys 180 185 190 Phe His Ile Ile Gly Ala Val Gly Ile Gly Ile Ala Val Val Met Ile 195 200 205 Phe Gly Met Ile Phe Ser Met Ile Leu Cys Cys Ala Ile Arg Arg Asn 210 215 220 Arg Glu Met Val 225 <210> 3 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Asp Thr Cys His Ile Ala Lys Ser Cys Val Leu Ile Leu Leu Val 1 5 10 15 Val Leu Leu Cys Ala Glu Arg Ala Gln Gly Leu Glu Cys Tyr Asn Cys 20 25 30 Ile Gly Val Pro Pro Glu Thr Ser Cys Asn Thr Thr Thr Cys Pro Phe 35 40 45 Ser Asp Gly Phe Cys Val Ala Leu Glu Ile Glu Val Ile Val Asp Ser 50 55 60 His Arg Ser Lys Val Lys Ser Asn Leu Cys Leu Pro Ile Cys Pro Thr 65 70 75 80 Thr Leu Asp Asn Thr Glu Ile Thr Gly Asn Ala Val Asn Val Lys Thr 85 90 95 Tyr Cys Cys Lys Glu Asp Leu Cys Asn Ala Ala Val Pro Thr Gly Gly 100 105 110 Ser Ser Trp Thr Met Ala Gly Val Leu Leu Phe Ser Leu Val Ser Val 115 120 125 Leu Leu Gln Thr Phe Leu 130 <210> 4 <211> 1152 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Ala Leu Arg Val Leu Leu Leu Thr Ala Leu Thr Leu Cys His Gly 1 5 10 15 Phe Asn Leu Asp Thr Glu Asn Ala Met Thr Phe Gln Glu Asn Ala Arg 20 25 30 Gly Phe Gly Gln Ser Val Val Gln Leu Gln Gly Ser Arg Val Val Val 35 40 45 Gly Ala Pro Gln Glu Ile Val Ala Ala Asn Gln Arg Gly Ser Leu Tyr 50 55 60 Gln Cys Asp Tyr Ser Thr Gly Ser Cys Glu Pro Ile Arg Leu Gln Val 65 70 75 80 Pro Val Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu Ala Ala Thr 85 90 95 Thr Ser Pro Pro Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Val His Gln Thr 100 105 110 Cys Ser Glu Asn Thr Tyr Val Lys Gly Leu Cys Phe Leu Phe Gly Ser 115 120 125 Asn Leu Arg Gln Gln Pro Gln Lys Phe Pro Glu Ala Leu Arg Gly Cys 130 135 140 Pro Gln Glu Asp Ser Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser 145 150 155 160 Ile Ile Pro His Asp Phe Arg Arg Met Lys Glu Phe Val Ser Thr Val 165 170 175 Met Glu Gln Leu Lys Lys Ser Lys Thr Leu Phe Ser Leu Met Gln Tyr 180 185 190 Ser Glu Glu Phe Arg Ile His Phe Thr Phe Lys Glu Phe Gln Asn Asn 195 200 205 Pro Asn Pro Arg Ser Leu Val Lys Pro Ile Thr Gln Leu Leu Gly Arg 210 215 220 Thr His Thr Ala Thr Gly Ile Arg Lys Val Val Arg Glu Leu Phe Asn 225 230 235 240 Ile Thr Asn Gly Ala Arg Lys Asn Ala Phe Lys Ile Leu Val Val Ile 245 250 255 Thr Asp Gly Glu Lys Phe Gly Asp Pro Leu Gly Tyr Glu Asp Val Ile 260 265 270 Pro Glu Ala Asp Arg Glu Gly Val Ile Arg Tyr Val Ile Gly Val Gly 275 280 285 Asp Ala Phe Arg Ser Glu Lys Ser Arg Gln Glu Leu Asn Thr Ile Ala 290 295 300 Ser Lys Pro Pro Arg Asp His Val Phe Gln Val Asn Asn Phe Glu Ala 305 310 315 320 Leu Lys Thr Ile Gln Asn Gln Leu Arg Glu Lys Ile Phe Ala Ile Glu 325 330 335 Gly Thr Gln Thr Gly Ser Ser Ser Ser Phe Glu His Glu Met Ser Gln 340 345 350 Glu Gly Phe Ser Ala Ala Ile Thr Ser Asn Gly Pro Leu Leu Ser Thr 355 360 365 Val Gly Ser Tyr Asp Trp Ala Gly Gly Val Phe Leu Tyr Thr Ser Lys 370 375 380 Glu Lys Ser Thr Phe Ile Asn Met Thr Arg Val Asp Ser Asp Met Asn 385 390 395 400 Asp Ala Tyr Leu Gly Tyr Ala Ala Ala Ile Ile Leu Arg Asn Arg Val 405 410 415 Gln Ser Leu Val Leu Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Ile Gly Leu Val 420 425 430 Ala Met Phe Arg Gln Asn Thr Gly Met Trp Glu Ser Asn Ala Asn Val 435 440 445 Lys Gly Thr Gln Ile Gly Ala Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val 450 455 460 Asp Val Asp Ser Asn Gly Ser Thr Asp Leu Val Leu Ile Gly Ala Pro 465 470 475 480 His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro Leu 485 490 495 Pro Arg Gly Arg Ala Arg Trp Gln Cys Asp Ala Val Leu Tyr Gly Glu 500 505 510 Gln Gly Gln Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu Gly 515 520 525 Asp Val Asn Gly Asp Lys Leu Thr Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Gly 530 535 540 Glu Glu Asp Asn Arg Gly Ala Val Tyr Leu Phe His Gly Thr Ser Gly 545 550 555 560 Ser Gly Ile Ser Pro Ser His Ser Gln Arg Ile Ala Gly Ser Lys Leu 565 570 575 Ser Pro Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ser Leu Ser Gly Gly Gln Asp 580 585 590 Leu Thr Met Asp Gly Leu Val Asp Leu Thr Val Gly Ala Gln Gly His 595 600 605 Val Leu Leu Leu Arg Ser Gln Pro Val Leu Arg Val Lys Ala Ile Met 610 615 620 Glu Phe Asn Pro Arg Glu Val Ala Arg Asn Val Phe Glu Cys Asn Asp 625 630 635 640 Gln Val Val Lys Gly Lys Glu Ala Gly Glu Val Arg Val Cys Leu His 645 650 655 Val Gln Lys Ser Thr Arg Asp Arg Leu Arg Glu Gly Gln Ile Gln Ser 660 665 670 Val Val Thr Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Ser Gly Arg Pro His Ser Arg 675 680 685 Ala Val Phe Asn Glu Thr Lys Asn Ser Thr Arg Arg Gln Thr Gln Val 690 695 700 Leu Gly Leu Thr Gln Thr Cys Glu Thr Leu Lys Leu Gln Leu Pro Asn 705 710 715 720 Cys Ile Glu Asp Pro Val Ser Pro Ile Val Leu Arg Leu Asn Phe Ser 725 730 735 Leu Val Gly Thr Pro Leu Ser Ala Phe Gly Asn Leu Arg Pro Val Leu 740 745 750 Ala Glu Asp Ala Gln Arg Leu Phe Thr Ala Leu Phe Pro Phe Glu Lys 755 760 765 Asn Cys Gly Asn Asp Asn Ile Cys Gln Asp Asp Leu Ser Ile Thr Phe 770 775 780 Ser Phe Met Ser Leu Asp Cys Leu Val Val Gly Gly Pro Arg Glu Phe 785 790 795 800 Asn Val Thr Val Thr Val Arg Asn Asp Gly Glu Asp Ser Tyr Arg Thr 805 810 815 Gln Val Thr Phe Phe Phe Pro Leu Asp Leu Ser Tyr Arg Lys Val Ser 820 825 830 Thr Leu Gln Asn Gln Arg Ser Gln Arg Ser Trp Arg Leu Ala Cys Glu 835 840 845 Ser Ala Ser Ser Thr Glu Val Ser Gly Ala Leu Lys Ser Thr Ser Cys 850 855 860 Ser Ile Asn His Pro Ile Phe Pro Glu Asn Ser Glu Val Thr Phe Asn 865 870 875 880 Ile Thr Phe Asp Val Asp Ser Lys Ala Ser Leu Gly Asn Lys Leu Leu 885 890 895 Leu Lys Ala Asn Val Thr Ser Glu Asn Asn Met Pro Arg Thr Asn Lys 900 905 910 Thr Glu Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Met Val 915 920 925 Val Thr Ser His Gly Val Ser Thr Lys Tyr Leu Asn Phe Thr Ala Ser 930 935 940 Glu Asn Thr Ser Arg Val Met Gln His Gln Tyr Gln Val Ser Asn Leu 945 950 955 960 Gly Gln Arg Ser Leu Pro Ile Ser Leu Val Phe Leu Val Pro Val Arg 965 970 975 Leu Asn Gln Thr Val Ile Trp Asp Arg Pro Gln Val Thr Phe Ser Glu 980 985 990 Asn Leu Ser Ser Thr Cys His Thr Lys Glu Arg Leu Pro Ser His Ser 995 1000 1005 Asp Phe Leu Ala Glu Leu Arg Lys Ala Pro Val Val Asn Cys Ser Ile 1010 1015 1020 Ala Val Cys Gln Arg Ile Gln Cys Asp Ile Pro Phe Phe Gly Ile Gln 1025 1030 1035 1040 Glu Glu Phe Asn Ala Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Asp Trp Tyr 1045 1050 1055 Ile Lys Thr Ser His Asn His Leu Leu Ile Val Ser Thr Ala Glu Ile 1060 1065 1070 Leu Phe Asn Asp Ser Val Phe Thr Leu Leu Pro Gly Gln Gly Ala Phe 1075 1080 1085 Val Arg Ser Gln Thr Glu Thr Lys Val Glu Pro Phe Glu Val Pro Asn 1090 1095 1100 Pro Leu Pro Leu Ile Val Gly Ser Ser Val Gly Gly Leu Leu Leu Leu 1105 1110 1115 1120 Ala Leu Ile Thr Ala Ala Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg Gln 1125 1130 1135 Tyr Lys Asp Met Met Ser Glu Gly Gly Pro Pro Gly Ala Glu Pro Gln 1140 1145 1150 <210> 5 <211> 1163 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Met Thr Arg Thr Arg Ala Ala Leu Leu Leu Phe Thr Ala Leu Ala Thr 1 5 10 15 Ser Leu Gly Phe Asn Leu Asp Thr Glu Glu Leu Thr Ala Phe Arg Val 20 25 30 Asp Ser Ala Gly Phe Gly Asp Ser Val Val Gln Tyr Ala Asn Ser Trp 35 40 45 Val Val Val Gly Ala Pro Gln Lys Ile Thr Ala Ala Asn Gln Thr Gly 50 55 60 Gly Leu Tyr Gln Cys Gly Tyr Ser Thr Gly Ala Cys Glu Pro Ile Gly 65 70 75 80 Leu Gln Val Pro Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu 85 90 95 Ala Ser Thr Thr Ser Pro Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Val 100 105 110 His His Glu Cys Gly Arg Asn Met Tyr Leu Thr Gly Leu Cys Phe Leu 115 120 125 Leu Gly Pro Thr Gln Leu Thr Gln Arg Leu Pro Val Ser Arg Gln Glu 130 135 140 Cys Pro Arg Gln Glu Gln Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly 145 150 155 160 Ser Ile Ser Ser Arg Asn Phe Ala Thr Met Met Asn Phe Val Arg Ala 165 170 175 Val Ile Ser Gln Phe Gln Arg Pro Ser Thr Gln Phe Ser Leu Met Gln 180 185 190 Phe Ser Asn Lys Phe Gln Thr His Phe Thr Phe Glu Glu Phe Arg Arg 195 200 205 Ser Ser Asn Pro Leu Ser Leu Leu Ala Ser Val His Gln Leu Gln Gly 210 215 220 Phe Thr Tyr Thr Ala Thr Ala Ile Gln Asn Val Val His Arg Leu Phe 225 230 235 240 His Ala Ser Tyr Gly Ala Arg Arg Asp Ala Ala Lys Ile Leu Ile Val 245 250 255 Ile Thr Asp Gly Lys Lys Glu Gly Asp Ser Leu Asp Tyr Lys Asp Val 260 265 270 Ile Pro Met Ala Asp Ala Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val 275 280 285 Gly Leu Ala Phe Gln Asn Arg Asn Ser Trp Lys Glu Leu Asn Asp Ile 290 295 300 Ala Ser Lys Pro Ser Gln Glu His Ile Phe Lys Val Glu Asp Phe Asp 305 310 315 320 Ala Leu Lys Asp Ile Gln Asn Gln Leu Lys Glu Lys Ile Phe Ala Ile 325 330 335 Glu Gly Thr Glu Thr Thr Ser Ser Ser Ser Phe Glu Leu Glu Met Ala 340 345 350 Gln Glu Gly Phe Ser Ala Val Phe Thr Pro Asp Gly Pro Val Leu Gly 355 360 365 Ala Val Gly Ser Phe Thr Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro 370 375 380 Asn Met Ser Pro Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Val Asp Met 385 390 395 400 Arg Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Glu Leu Ala Leu Trp Lys Gly 405 410 415 Val Gln Ser Leu Val Leu Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Thr Gly Lys 420 425 430 Ala Val Ile Phe Thr Gln Val Ser Arg Gln Trp Arg Met Lys Ala Glu 435 440 445 Val Thr Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser 450 455 460 Val Asp Val Asp Ser Asp Gly Ser Thr Asp Leu Val Leu Ile Gly Ala 465 470 475 480 Pro His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro 485 490 495 Leu Pro Arg Gly Trp Arg Arg Trp Trp Cys Asp Ala Val Leu Tyr Gly 500 505 510 Glu Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu 515 520 525 Gly Asp Val Asn Gly Asp Lys Leu Thr Asp Val Val Ile Gly Ala Pro 530 535 540 Gly Glu Glu Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Leu Phe His Gly Val Leu 545 550 555 560 Gly Pro Ser Ile Ser Pro Ser His Ser Gln Arg Ile Ala Gly Ser Gln 565 570 575 Leu Ser Ser Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ala Leu Ser Gly Gly Gln 580 585 590 Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Arg Gly 595 600 605 Gln Val Leu Leu Leu Arg Thr Arg Pro Val Leu Trp Val Gly Val Ser 610 615 620 Met Gln Phe Ile Pro Ala Glu Ile Pro Arg Ser Ala Phe Glu Cys Arg 625 630 635 640 Glu Gln Val Val Ser Glu Gln Thr Leu Val Gln Ser Asn Ile Cys Leu 645 650 655 Tyr Ile Asp Lys Arg Ser Lys Asn Leu Leu Gly Ser Arg Asp Leu Gln 660 665 670 Ser Ser Val Thr Leu Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Ser Pro 675 680 685 Arg Ala Thr Phe Gln Glu Thr Lys Asn Arg Ser Leu Ser Arg Val Arg 690 695 700 Val Leu Gly Leu Lys Ala His Cys Glu Asn Phe Asn Leu Leu Leu Pro 705 710 715 720 Ser Cys Val Glu Asp Ser Val Thr Pro Ile Thr Leu Arg Leu Asn Phe 725 730 735 Thr Leu Val Gly Lys Pro Leu Leu Ala Phe Arg Asn Leu Arg Pro Met 740 745 750 Leu Ala Ala Asp Ala Gln Arg Tyr Phe Thr Ala Ser Leu Pro Phe Glu 755 760 765 Lys Asn Cys Gly Ala Asp His Ile Cys Gln Asp Asn Leu Gly Ile Ser 770 775 780 Phe Ser Phe Pro Gly Leu Lys Ser Leu Leu Val Gly Ser Asn Leu Glu 785 790 795 800 Leu Asn Ala Glu Val Met Val Trp Asn Asp Gly Glu Asp Ser Tyr Gly 805 810 815 Thr Thr Ile Thr Phe Ser His Pro Ala Gly Leu Ser Tyr Arg Tyr Val 820 825 830 Ala Glu Gly Gln Lys Gln Gly Gln Leu Arg Ser Leu His Leu Thr Cys 835 840 845 Asp Ser Ala Pro Val Gly Ser Gln Gly Thr Trp Ser Thr Ser Cys Arg 850 855 860 Ile Asn His Leu Ile Phe Arg Gly Gly Ala Gln Ile Thr Phe Leu Ala 865 870 875 880 Thr Phe Asp Val Ser Pro Lys Ala Val Leu Gly Asp Arg Leu Leu Leu 885 890 895 Thr Ala Asn Val Ser Ser Glu Asn Asn Thr Pro Arg Thr Ser Lys Thr 900 905 910 Thr Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Thr Val Val 915 920 925 Ser Ser His Glu Gln Phe Thr Lys Tyr Leu Asn Phe Ser Glu Ser Glu 930 935 940 Glu Lys Glu Ser His Val Ala Met His Arg Tyr Gln Val Asn Asn Leu 945 950 955 960 Gly Gln Arg Asp Leu Pro Val Ser Ile Asn Phe Trp Val Pro Val Glu 965 970 975 Leu Asn Gln Glu Ala Val Trp Met Asp Val Glu Val Ser His Pro Gln 980 985 990 Asn Pro Ser Leu Arg Cys Ser Ser Glu Lys Ile Ala Pro Pro Ala Ser 995 1000 1005 Asp Phe Leu Ala His Ile Gln Lys Asn Pro Val Leu Asp Cys Ser Ile 1010 1015 1020 Ala Gly Cys Leu Arg Phe Arg Cys Asp Val Pro Ser Phe Ser Val Gln 1025 1030 1035 1040 Glu Glu Leu Asp Phe Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Val 1045 1050 1055 Arg Gln Ile Leu Gln Lys Lys Val Ser Val Val Ser Val Ala Glu Ile 1060 1065 1070 Thr Phe Asp Thr Ser Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe 1075 1080 1085 Met Arg Ala Gln Thr Thr Thr Val Leu Glu Lys Tyr Lys Val His Asn 1090 1095 1100 Pro Thr Pro Leu Ile Val Gly Ser Ser Ile Gly Gly Leu Leu Leu Leu 1105 1110 1115 1120 Ala Leu Ile Thr Ala Val Leu Tyr Lys Val Gly Phe Phe Lys Arg Gln 1125 1130 1135 Tyr Lys Glu Met Met Glu Glu Ala Asn Gly Gln Ile Ala Pro Glu Asn 1140 1145 1150 Gly Thr Gln Thr Pro Ser Pro Pro Ser Glu Lys 1155 1160

Claims (20)

  1. 단핵구의 CD39 항원, CD9 항원, Ly6G 항원, CD11b 항원 및 CD11c 항원으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 단백질; 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제를 포함하는 IL-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 단핵구는 CD39 항원, CD9 항원 및 CD11b 항원은 단핵구의 표면에 발현되는 것인, 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 단핵구는 Ly6G 항원 및 CD11c 항원은 단핵구의 표면에 발현되지 않는 것인, 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 단백질의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제는 상기 유전자에 상보적으로 결합하는 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것인, 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 유전자의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제는 상기 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 올리고펩타이드, 리간드, PNA(Peptide nucleic acid) 및 앱타머(aptamer)로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것인, 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 IL-23에 의해 매개되는 질환은 천식, 부비동염, 다발성 경화증, 류마티스 성 관절염, 건선, 염증성 장 질환 및 강직성 척추염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것인, 조성물.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 천식은 호중구 우세 천식인 것인, 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, IL-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 키트.
  9. 목적하는 개체로부터 분리된 시료에서, 단핵구의 CD39 항원, CD9 항원, Ly6G 항원, CD11b 항원 및 CD11c 항원으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 단백질; 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계;를 포함하는 IL-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측을 위한 정보를 제공하는 방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 IL-23에 의해 매개되는 질환은 천식, 부비동염, 다발성 경화증, 류마티스 성 관절염, 건선, 염증성 장 질환 및 강직성 척추염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것인, 방법.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 천식은 호중구 우세 천식인 것인, 방법.
  12. 제9항에 있어서,
    상기 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계는 단백질 칩 분석, 면역측정법, 리간드 바인딩 어세이, MALDI-TOF(Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, SELDI-TOF(Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, 방사선 면역 분석, 방사 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 보체 고정 분석법, 2차원 전기영동 분석, 액상 크로마토그래피-질량분석(liquid chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS), LC-MS/MS(liquid chromatography-Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry), 유세포 분석, 웨스턴 블랏팅 및 ELISA(enzyme linked immunosorbentassay)로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것인, 방법.
  13. 제9항에 있어서,
    상기 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계는 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting) 및 DNA 칩으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나인 것인, 방법.
  14. CD39 항원, CD9 항원 및 CD11b 항원을 발현하고; Ly6G 항원 및 CD11c 항원을 발현하지 않는 아형의 단핵구를 유효성분으로 포함하는 IL-23에 의해 매개되는 질환의 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 IL-23에 의해 매개되는 질환은 천식, 부비동염, 다발성 경화증, 류마티스 성 관절염, 건선, 염증성 장 질환 및 강직성 척추염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것인, 조성물.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 천식은 호중구 우세 천식인 것인, 조성물.
  17. 제15항에 있어서,
    상기 조성물은 항-IL-23 항체를 더 포함하는 것인, 조성물.
  18. 제 6 항에 있어서,
    상기 염증성 장 질환은 궤양성 대장염(Ulcerative Colitis, UC) 또는 크론병(Chrohn’s Disease, CD) 인 것을 특징으로 하는 조성물.
  19. 제 10 항에 있어서,
    상기 염증성 장 질환은 궤양성 대장염(Ulcerative Colitis, UC) 또는 크론병(Chrohn’s Disease, CD) 인 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제 15 항에 있어서,
    상기 염증성 장 질환은 궤양성 대장염(Ulcerative Colitis, UC) 또는 크론병(Chrohn’s Disease, CD) 인 것을 특징으로 하는 조성물.
KR1020220055562A 2021-07-09 2022-05-04 Il-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 조성물 KR20230009815A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020210090089 2021-07-09
KR20210090089 2021-07-09

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230009815A true KR20230009815A (ko) 2023-01-17

Family

ID=84800788

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020220055562A KR20230009815A (ko) 2021-07-09 2022-05-04 Il-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 조성물

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR20230009815A (ko)
WO (1) WO2023282654A1 (ko)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20130139975A (ko) 2010-11-04 2013-12-23 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 항－ｉｌ－２３ 항체

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100255513A1 (en) * 2007-03-30 2010-10-07 Denson Lee A Serological markers of inflammatory bowel disease phenotype and disease progression

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20130139975A (ko) 2010-11-04 2013-12-23 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 항－ｉｌ－２３ 항체

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023282654A1 (ko) 2023-01-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7704503B2 (en) Use of IL-17F in diagnosis and therapy of airway inflammation
EP1469879B1 (en) Diagnosis and therapy of antibody-mediated inflammatory autoimmune disorders
CN101218254A (zh) 白介素-17f抗体及其它il-17f信号传递拮抗剂和它们的用途
JP5697119B1 (ja) そう痒を伴う疾患に罹患した患者のｉｌ−３１アンタゴニストによる治療に対する応答を予測する方法
JP4155561B2 (ja) アレルギー性疾患検査方法
KR20160122756A (ko) 인간 페리오스틴을 검출하기 위한 신규 검정법
AU2012328952A1 (en) IL-19 as a biomarker of TSLP treatment
US20090191191A1 (en) Methods for the Modulation of IL-13
KR20230009815A (ko) Il-23에 의해 매개되는 질환의 중증도 예측용 조성물
JP2020524268A (ja) Ｉｒａｋ４により媒介される障害及び容態のための診断法及び治療法
JP7016110B2 (ja) スティル病と敗血症との鑑別用バイオマーカー
US20020114806A1 (en) Uses of mammalian genes and related reagents
JPWO2006134960A1 (ja) 抗炎症剤のスクリーニング方法
US20120282275A1 (en) Methods and compositions for regulation of neurological conditions
JP2008512086A (ja) 喘息治療薬としてのＲｅｇＩＩＩ蛋白質の阻害物質
KR20200101660A (ko) 알레르기성 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
US20190352425A1 (en) Assay to detect human dpp-4
Li et al. Ablation of the integrin CD11b mac-1 limits deleterious responses to traumatic spinal cord injury and improves functional recovery in mice
KR20220020461A (ko) 코로나바이러스감염증-19의 진단용 조성물
JP2021097682A (ja) Ｃａｒｄ１４を用いた治療、診断およびスクリーニング
JP2023549473A (ja) 活性化された免疫細胞の細胞表面抗原およびその多様な用途
CN115521369A (zh) 生物标志物nrp1及其在肺纤维化和哮喘诊断、预防和治疗中的应用
JPWO2002033122A1 (ja) アレルギー性疾患の検査方法
US20020099017A1 (en) Novel gene
JPWO2002088349A1 (ja) カテプシンｃのオータナティブスプライシングフォームを指標とするアレルギー性疾患検査方法

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal