EA026110B1 - Антитела против il-12/il-23 - Google Patents

Антитела против il-12/il-23 Download PDF

Info

Publication number
EA026110B1
EA026110B1 EA201170323A EA201170323A EA026110B1 EA 026110 B1 EA026110 B1 EA 026110B1 EA 201170323 A EA201170323 A EA 201170323A EA 201170323 A EA201170323 A EA 201170323A EA 026110 B1 EA026110 B1 EA 026110B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
human
zeo
antibody
antibodies
binding
Prior art date
Application number
EA201170323A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201170323A1 (ru
Inventor
Адам Уильям Кларк
Энтони Джерард Дойл
Филип Энтони Дженнингз
Линн Дороти Паултон
Бернадетт Уэй
Эндрю Джеймс Пау
Джордж Копсидас
Original Assignee
Сефалон Острэйлиа Пти Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AU2008904178A external-priority patent/AU2008904178A0/en
Application filed by Сефалон Острэйлиа Пти Лтд. filed Critical Сефалон Острэйлиа Пти Лтд.
Publication of EA201170323A1 publication Critical patent/EA201170323A1/ru
Publication of EA026110B1 publication Critical patent/EA026110B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5434—IL-12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

Настоящее изобретение относится к антителу, содержащему антигенсвязывающий домен, который связывается с человеческим IL-12 и с человеческим IL-23. Указанное антитело связывается с человеческим IL-12p40, присутствующим в виде мономера (человеческим IL-12p40) и в виде гомодимера (человеческим IL-12р80), и ингибирует связывание человеческого IL-12 с человеческим IL-12Rβ2 и связывание человеческого IL-23 с человеческим IL-23R, но не ингибирует связывание человеческого IL-12 или человеческого IL-23, или человеческого IL-12p40 или человеческого IL-12p80 с человеческим IL-12Rβ1.

Description

Настоящее изобретение также относится к способу лечения или ослабления симптомов по меньшей мере одного заболевания, ассоциированного с ГО-12 и/или ГО-23, в клетках, тканях, органах, в организме животного или пациента, где указанный способ включает применение антитела согласно изобретению или его специфической части или специфического варианта.
Для лучшего понимания сущности настоящего изобретения ниже описаны различные формы его осуществления со ссылками на графический материал и примеры.
Краткое описание графического материала
Фиг. 1: Различные классы анти-1Ь-12/23 антител.
Фиг. 1.1: Антитело, которое связывается с субъединицей р40 в 1Ь-12, 1Ь-23, 1Ь-12р40 и 1Ь-12р80; фиг. 1.2:антитело, которое связывается с субъединицей р35 в ГЬ-12; фиг. 1.3:антитело, которое связывается с субъединицами р35 и р40 в ГЬ-12, присутствующими в виде гетеродимера; фиг. 1.4 антитело, которое связывается с субъединицей р19 в ГЬ-23; фиг. 1.5:антитело, которое связывается с субъединицей р40, присутствующей в 1Ь-23, 1Ь-12р40 и 1Ь-12р80, но не в 1Ь-12.
Фиг. 2: Взаимодействия рецепторов 1Ь-12/23. 1Ь-12 связывается с ΙΕ-12Κβ1 и с ΙΕ-12Κβ2, 1Ь-23 связывается с ΙΕ-12Κβ1 и с ГО-23ГО 1Ь-12р40 связывается с ΙΕ-12Κβ1. 1Ь-12р80 связывается с ΙΕ-12Κβ1. Фиг. 2.1:субъединицы ГЬ-12 и ГЬ-23. Фиг. 2.2:антитело, которое ингибирует связывание ГЬ-12 с ΙΕ-12Κβ2. Фиг. 2.3:антитело, которое ингибирует связывание ГЬ-12 с ΙΕ-12Κβ2 и связывание ГЬ-23 с ГЬ-23К.
Фиг. 3: РМА204 и антитело 1 связываются с ГО-12(А), ΙΕ-23/В), !Н-12р40(С) и !Н-12р80(О) в зависимости от дозы, как было измерено с помощью ЕЫЗА.
Фиг. 4: РМА204 и антитело 1 нейтрализуют связывание ГО-12 с ΙΕ-12Κβ2 (А) и ГО-23 с ГО-23К (В).
Фиг. 5: РМА204 и антитело 1 не ингибируют связывание ГО-12 с ΙΕ-12Κβ1 (А) и [И-12р80 с ГО12Κβ1 (В).
Фиг. 6: РМА204 и антитело 1 не ингибируют связывание ГО-12р40 с ΙΕ-12Κβ1 (А) и ГО-23 с ГО12Κβ1 (В).
Фиг. 7: Антитело 1 не ингибирует связывание [И-12р40 (А), ГО-12 (В), ГО-23 (С) с клеточной линией •Титка!, стабильно трансфицированной ΙΕ-12Κβ1. Антитело 202.1, используемое в качестве позитивного контроля, ингибирует связывание ГО-12р40, ГО-12 и ГО-23 с этой клеточной линией в зависимости от дозы.
Фиг. 8: Антитело 1 связывается с ГО-12р40 (А), ГО-12 (В) и ГО-23 (С), связанными с клеточными линиями .Тшкар стабильно трансфицированными ΙΕ-12Κβ1, и образует комплекс. Антитело 202.1, используемое в качестве позитивного контроля, не обладает способностью образовывать такой комплекс.
Фиг. 9: Данные ЕЫЗА, указывающие на связывание различных антител с ГО-12 и ГО-23.
Фиг. 10: Электрофорез в ДСН-ПААГ, проводимый для антител 1, 3, 4, 7 и сравнительного антитела, продемонстрировал различные паттерны полос.
Фиг. 11: РМА204, антитело 1, антитело 50, антитело 68 и антитело 80 продемонстрировали ингибирование ГО-12-индуцированнного высвобождения ΙΡΝ-γ клетками ΝΚ-92.
Фиг. 12: Данные ЕЫЗА, указывающие на связывание различных антител с ГО-12 и ГО-23.
Фиг. 13:Данные ЕЫЗА, указывающие на связывание различных антител с ГО-12 и ГО-23.
Фиг. 14:Антитело 80 и антитело 136 ингибировали ГО-23-индуцированную секрецию ГО-17 мышиными спленоцитами.
Фиг. 15:Данные ЕЫЗА, указывающие на связывание различных антител с ГО-12 и ГО-23.
Фиг. 16:Данные ЕЫЗА, указывающие на связывание различных антител с ГО-12 и ГО-23.
Фиг. 17: Антитело 80 и антитело 136 ингибировали ГО-12индуцированное высвобождение ΙΡΝ-γ человеческими МКПК,
Фиг. 18: Данные ЕЫЗА, указывающие на связывание различных антител с ГО-12 и ГО-23.
Фиг. 19: Данные ЕЫЗА, указывающие на связывание различных антител с ГО-12 и ГО-23.
Фиг. 20: Данные ЕЫЗА, указывающие на связывание различных антител с ГО-12 и ГО-23.
Фиг. 21: Эксперименты по конкурентному связыванию, проводимые методом поверхностного плазменного резонанса (НИР), показали, что антитело 136 и РМА204 конкурируют за связывание с ГО-12 (А) и ГЬ-23 (В).
Фиг. 22: Эксперименты по конкурентному связыванию, проводимые с помощью ППР, показали, что антитело 136 и РМА202 не конкурируют за связывание с ГО-12 (А) и ГО-23 (В).
Фиг. 23: Эксперименты по конкурентному связыванию, проводимые с помощью ЕЫЗА, показали, что РМА204 и антитело 202.1 не конкурируют за связывание с ГО-12 или ГО-23. РМА204 и антитело 136 конкурируют за связывание с ГО-12 и ГО-23.
Фиг. 24: Антитело 80 и антитело 136, в отличие от антитела 202.1, нейтрализуют связывание ГО-12 с ΙΕ-12Κβ2 (А) и ГО-23 с ГО-23К (В), что указывает на отсутствие ингибирования при наивысших концентрациях тестируемого антитела.
Фиг. 25: РМА204 и антитело 1 не обладают способностью нейтрализовать связывание ГО-12 с ГО- 4 026110
12Κβ1 (А) и 1Ь-23 с ΙΡ-12Κβ1 (В). Антитело 202.1 обнаруживает дозозависимое ингибирование связывания ГО-12 с ГО-12К£1 (А) и связывания ГО-23 с ΙΕ-12Κβ1 (В).
Фиг. 26: Различные гуманизованные и аффинно зрелые антитела ингибируют ГО-23индуцированное высвобождение ГО-17 из мышиных спленоцитов. Показаны две группы аффинно зрелых гуманизованных первых антител, полученных на основе антитела 80 (А) и на основе антитела 136 (В).
Фиг. 27: Через 6 дней после внутрикожного введения ГО-23 мышам у этих мышей начиналось кожное воспаление, напоминающее псориаз. А) Введение контрольного изотипа не способствовало предупреждению кожного воспаления, однако, антитело 80 и антитело 136 способствовали снижению воспаления у этой модели, на что указывала нижняя клиническая оценка. В) На гистологическом уровне, через 6 дней после внутрикожного введения ГО-23 наблюдалось утолщение эпидермиса. Обработка антителом 80 и антителом 136 приводила к уменьшению толщины эпидермиса, а обработка антителом контрольного изотипа не давала какого-либо эффекта.
Фиг. 28: Различные гуманизованные и аффинно зрелые антитела ингибировали высвобождение ΙΡΝ-γ, индуцированное химерным ГО-12, из мышиных спленоцитов. Показаны две группы аффинно зрелых гуманизованных первых антител, полученных на основе антитела 80 (А) и на основе антитела 136 (В).
Фиг. 29: У мышей, которым вводили повторные инъекции химерного ГО-12, наблюдались повышенные уровни ΙΡΝ-γ в сыворотке. При обработке антителом 80 или антителом 136, уровни ΙΡΝ-γ в сыворотке снижались, в отличие от обработки антителом контрольного изотипа.
Фиг. 30: (А) Антитело 80 обладает способностью разпознавать рекомбинантный ГО-23 в сэндвичЕЫ8А (В) Антитело 80 обладает способностью разпознавать нативный ГО-23, продуцируемый 8АСстимулируемыми МКПК в сэндвич-Еи§А.
Фиг. 31: Антитело 80 в значительной степени связывается с белком ГО-23\УТ (дикого типа), но в меньшей степени связывается с мутантами ГО-23, И265А и К266А, в анализе ЕЫ8А.
Подробное описание изобретения
Авторами настоящего изобретения была получена панель антител против ГО-12. При скрининге этих антител было неожиданно обнаружено, что конкретная субсерия антител связывается с человеческим ГО-12 и ГО-23 и ингибирует связывание ГО-12 с ΙΡ-12Κβ2 и ГО-23 с ГО-23К, не ингибирует связывание ГО-12 или ГО-23 или ГО-12р40 или ГО-12р80 с ΙΡ-12Κβ1. Поэтому активность ГО-12 и ГО-23 может быть модифицирована методом, который не мог быть осуществлен ранее.
В соответствии с этим настоящее изобретение относится к антителу, содержащему антигенсвязывающий домен, который связывается с человеческим ГО-12 и человеческим ГО-23, где указанное антитело связывается с человеческим ГО-12р40, присутствующим в виде мономера (человеческим ΙΠ-12ρ40) и в виде гомодимера (человеческим ΙΠ-12ρ80), и где указанное антитело ингибирует связывание человеческого ГО-12 с человеческим ΙΡ-12Κβ2 и связывание человеческого ГО-23 с человеческим ГО-23К, но не ингибирует связывание человеческого ГО-12 или человеческого ГО-23, или человеческого ГО-12р40 или человеческого ГО-12р80 с человеческим ГО-12Кр1.
В предпочтительном варианте изобретения антитело конкурирует за связывание с человеческим ΙΡ12 и/или с человеческим ГО-23, где указанное антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую последовательность РМА204 (8ЕО ГО N0:6) и/или вариабельную область легкой цепи, имеющую последовательность РМА204 (8ЕО ГО N0:7).
Используемый здесь термин конкурирует означает, что тестируемое антитело при его использовании в такой же концентрации, как и РМА204, снижает уровень связывания РМА204 с ГО-12, ГО-23 или ГО-12р40 по меньшей мере на 10%, как было определено с помощью ЕЫ8А.
Настоящее изобретение относится к антителу или к его варианту, которые связываются с ГО-12р40, присутствующим в ГО-12 и ГО-23, имеющих последовательность, представленную в 8Е0 ГО N0:1 и проиллюстрированную ниже:
1ВДЕЬККОУУУУЕЬОИУРОАРСЕМУУЬТСОТРЕЕОС1ТИТЬО<255ЕУЬС5СКТЬТ112УКЕГСОА е0УТСНК66ЕУЕЗНЗЫЕЬНККЕО61ИЗТО1ЬКО0КЕРКМКТЕЬЕСЕАКЫУ36ЕЕТСИИЬТТ1 5ТОЬТЕ5УК55ЕС55ОР<2СУТССААТЪ5АЕКУКСОМКЕУЕУ5УЕС0ЕО5АСРААЕЕ5ЬР1ЕУМ νϋΑνΗΚΕΚΥΕΝΥΤ5 8ΓΕΙΕϋΙΙΚΡΟΡΡΚΝΙ,0Ι,ΚΡΕΚΝ8Ε0νΕν8ΜΕΥΡΟΤΜ8ΤΡΗ8ΥΕ8Ι,ΤΓΟ У0У£)(ЗК5КЕЕККОЕУЕТОКТЗАТУ1СЕКЫА515УКА0ОЕУУ555ВД5ЕИА5УРС8
В предпочтительном варианте изобретения, эпитоп, связанный с антителом, находится в последовательности УрурОКЗККЕККПК.УРТПКТЗАТУГОККтЗГОУ (ЗЕО ГО N0: 65). В частности, указанное антитело связывается с человеческим ГО-12р40 (8Е0 ГО N0:1) в положении Акр 265.
В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к антителу, содержащему антигенсвязывающий домен, который связывается с человеческим ГО-23 (8Е0 ГО N0:66), где уровень связывания указанного антитела с человеческим ГО-23 (8Е0 ГО N0:66) превышает уровень связывания указанного антитела с мутантным ГО-23 И265А (8Е0 ГО N0: 75).
Указанное антитело может также связываться с человеческим ГО-12р40, присутствующим в виде
- 5 026110 мономера (человеческим 1Ь-12р40) и в виде гомодимера (человеческим 1Ь-12р80), и ингибирует связывание человеческого 1Ь-12 с человеческим ΙΕ-12Κβ2 и человеческого 1Ь-23 с человеческим 1Ь-23К, но не ингибирует связывание человеческого 1Ь-12 или человеческого 1Ь-23 или человеческого 1Ь-12р40 или человеческого 1Ь-12р80 с человеческим ΙΣ-12Κ.β1.
Настоящее изобретение относится к антителам, которые могут быть использованы для лечения по меньшей мере одного состояния, ассоциированного с 1Ь-12 и/или 1Ь-23, путем селективной нейтрализации связывания 1Ь-12 с ΙΕ-12Κβ2 и связывания 1Ь-23 с 1Ь-23К.
Настоящее изобретение относится к антителу, содержащему 3 последовательности СЭР тяжелой цепи, выбранные из:
СОКНСШУУХД где Х1=М или Ь;
(ΌΗΙ 1С2:\\41)1УХС1)Т1/\;ЛРк1У)С,. где Χ2=Υ, Н или 8;
СНКНС3:Х3КЕЕКУЕНУ, где Х3=С, Α, Ν, Ό, Е, О. С, Н, I, Ь, Р или V.
Настоящее изобретение относится к антителу, содержащему 3 последовательности СОК легкой цепи, выбранные из
СНК1С1:КАХ4Х5818ПЯЕН, где
Х4=8 или Р;
Х5=О или К;
СОР1С2:РАХб05Х-5· где
Х6=8 или К;
Х7=1 или Т;
СНК1С3:РР8^Х8РЬТ, где Х8=\ или Р.
Настоящее изобретение относится к антителу, содержащему 3 последовательности СОК тяжелой цепи, выбранные из
С^КНС1:^ΥΥX1Н, где Х1=М или Ь;
СНКНС2:\ГОРЕ^НТЕХ2АРКРРС, где Х2=^ Н или 8;
(ΌΗΙ ΙίΑ.ΥΚΗΙ.ΗΥΡυν где Х3=С, Α, Ν, Ό, Е, Ц, С, Н, I, Ь, Р или V; и 3 последовательности СОК легкой цепи, выбранные из СНК1С1:КАХ4Х5818ПЯЕН, где
Х4=8 или Р;
Х5=О или К;
СНК1С2:РАХ6р§Х78, где
Х6=8 или К;
Х7=1 или Т;
СНК1С3:РР8^Х8РЬТ, где Х8=\ или Р.
Настоящее изобретение относится к антителу, состоящему из вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, состоящей из одной из нижеследующих последовательностей:
ЗЕО ΙΏ N0: 6, ЗЕО Ю N0: 62, ЗЕО ю N0: 114, ЗЕО Ю N0: 142,
ЗЕО Ю НО: 28, ЗЕО Ιϋ N0: 87, ЗЕО ю N0: 115, ЗЕО ΙΌ N0: 143,
ЗЕО ΙΏ N0: 29, ЗЕО ю N0: 88, ЗЕО ю N0: 116, ЗЕО Ю N0: 144,
ЗЕО Ю N0: 30, ЗЕО 1Б N0: 90, ЗЕО ю НО: 117, ЗЕО 1Б N0: 145,
- 6 026110
ΞΕζ Ιϋ N0: 31, ΞΕζ Ю N0: 91, ΞΕζ Ιϋ N0: 118, ΞΕζ Ю Νζ; 146
ΞΕζ ю N0: 33, ΞΕζ Ιϋ N0: 92, ΞΕζ ΙΒ N0: 119, ΞΕζ Ю N0: 147
ΞΕζ 1Б N0: 34, ΞΕζ Ιϋ N0: 93, 3Εζ Ιϋ N0: 120, ΞΕζ Ю N0: 148
ΞΕζ Ιβ N0: 35, ΞΕζ ΙΒ N0: 94, ΞΕζ ΙΒ N0: 122, ΞΕζ Ю N0: 149
ΞΕζ Ιβ N0: 36, ΞΕζ Ιϋ N0: 95, ΞΕζ Ιϋ N0: 124, ΞΕζ Ю N0: 150
ΞΕζ ю N0: 38, ΞΕζ Ιϋ N0: 96, ΞΕζ ΙΒ N0: 125, ΞΕζ Ю N0; 151
ΞΕζ Ιβ N0: 39, 3Εζ Ιϋ N0: 97, ΞΕζ Ιϋ N0: 126, 3Εζ Ю N0: 152
ΞΕζ ΐβ N0: 40, ΞΕζ ΙΒ N0: 99, ΞΕζ ΙΒ N0: 127, ΞΕζ Ю N0: 153
ΞΕζ ю N0: 41, ΞΕζ Ю N0: 100, ΞΕζ Ю N0 128, ΞΕζ Ιϋ N0: 154
ΞΕζ ιβ N0: 42, ΞΕζ ю N0; 101, ΞΕζ ΙΒ N0 129, ΞΕζ Ю N0: 155
ΞΕζ ю N0: 43, 3Εζ ю N0: 102, ΞΕζ Ιϋ N0 130, 3Εζ Ιϋ N0: 156
ΞΕζ ιβ N0: 44, ΞΕζ ю N0: 103, ΞΕζ ΙΒ N0 131, ΞΕζ Ю N0; 157
ΞΕζ ю N0: 45, 8Εζ ю N0: 104, ΞΕζ Ю N0 132, ΞΕζ Ιϋ N0: 158
ΞΕζ ιβ N0: 53, 3Εζ ю ИО; 105, ΞΕζ ΙΒ N0 133, ΞΕζ Ю N0: 159
ΞΕζ ю N0: 54, ΞΕζ ю N0: 106, ΞΕζ Ιϋ N0 134, ΞΕζ Ю N0: 160
ΞΕζ ιβ N0: 55, ΞΕζ ю N0: 107, ΞΕζ ΙΒ N0 135, ΞΕζ Ю N0; 161
ΞΕζ ю N0: 56, 3Εζ ю N0: 108, ΞΕζ Ιϋ N0 136, 5Εζ Ιϋ N0: 162
ΞΕζ ιβ N0: 57, ΞΕζ ю N0: 109, ΞΕζ ΙΒ N0 137, ΞΕζ ΙΒ N0; 163
ΞΕζ ю N0: 58, ΞΕζ ю N0: 110, ΞΕζ Ιϋ N0 138, ΞΕζ Ιϋ N0: 164
ΞΕζ ю N0: 59, ΞΕζ ю N0: 111, ΞΕζ Ю N0 139, ΞΕζ Ιϋ N0: 165
ΞΕζ ю N0: 60, 3Εζ ΙΏ N0: 112, ΞΕζ Ιϋ Νζ) 140, ΞΕζ Ιϋ N0: 166
ΞΕζ ю N0: 61, ΞΕζ ю N0: 113, ΞΕζ Ю N0: 141 и ΞΕζ Ю N0: 167
Настоящее изобретение относится к антителу, состоящему из вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина, состоящей из одной из нижеследующих последовательностей:
ΞΕζ Ιϋ N0: 7, ΞΕζ Ю N0: 169, ΞΕζ Ю N0: 181, ΞΕζ Ю N0: 193
ΞΕζ Ιϋ N0: 32, ΞΕζ Ιϋ N0: 170, ΞΕζ Ιϋ N0: 182, ΞΕζ ΙΏ N0: 194
ΞΕζ Ю N0: 37, ΞΕζ Ю Νζ: 171, ΞΕζ Ю N0: 183, ΞΕζ Ю N0: 195
ΞΕζ Ю N0: 42, ΞΕζ Ιϋ N0: 172, ΞΕζ Ю N0: 184, ΞΕζ ΙΏ N0: 196
ΞΕζ Ю N0: 46, ΞΕζ Ю Νζ: 173, ΞΕζ Ю N0: 185, ΞΕζ Ю Νζ; 197
ΞΕζ Ю N0: 47, ΞΕζ Ю N0: 174, ΞΕζ Ю N0: 186, ΞΕζ Ю N0: 198
ΞΕζ Ιϋ N0: 48, ΞΕζ Ю N0: 175, ΞΕζ Ιϋ N0: 187, ΞΕζ Ю N0: 199
ΞΕζ Ιϋ N0: 49, ΞΕζ Ιϋ N0: 176, ΞΕζ Ιϋ N0: 188, ΞΕζ ΙΏ N0: 200
ΞΕζ ΙΌ N0: 50, ΞΕζ Ю N0: 177, ΞΕζ ΙΌ N0: 189, ΞΕζ Ю N0: 201
ΞΕζ Ιϋ N0: 51, ΞΕζ ΙΏ N0: 178, ΞΕζ Ιϋ N0: 190, ΞΕζ ΙΕ ι N0: : 52
ΞΕζ Ю N0: 179 и ΞΕζ Ю N0 : 192
Настоящее изобретение относится к антителу, которое также включает акцепторную каркасную область тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина. А в частности, настоящее изобретение относится к антителу, в котором указанная акцепторная каркасная область содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕО ГО N0:202, 8Е0 ГО N0:205, 8Е0 ГО N0:208, 8Е0 ГО N0:203, 5ЕО ГО N0:206, 5ЕО ГО N0:209, 5ЕО ГО N0:204 и 5ЕО ГО N0:207.
Настоящее изобретение относится к антителу, которое также включает акцепторную каркасную область легкой цепи человеческого иммуноглобулина. А в частности, настоящее изобретение относится к антителу, в котором указанная акцепторная каркасная область содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:210, 8Е0 ГО N0:213, 8Е0 ГО N0:216, 8Е0 ГО N0:211, 5ЕО ГО N0:214, 5ЕО ГО N0:212 и 5ЕО ГО N0:215.
Настоящее изобретение относится к антителу, содержащему две вариабельные области иммуноглобулина, где указанные две вариабельные области иммуноглобулина выбраны из группы, состоящей из:
- 7 026110
БЕО ю N0: 6 И БЕС ю НО 7 ЗЕО 10 НО: 115 и БЕО ю НО: 190
БЕО 10 НО: 6 и ЗЕО Ю НО: 169 ЗЕО 10 НО: 115 и БЕС! 10 НО: 192
БЕО 10 НО: 28 и ЗЕО 10 НО: 179 ЗЕО ю НО: 115 и БЕО 10 НО: 193
БЕО 10 НО: 29 и ЗЕО 10 НО: 179 ЗЕО ю НО: 115 и БЕО 10 НО: 194
БЕО 10 НО: 30 и ЗЕО 10 НО: 179 ЗЕО ю НО: 115 и БЕО 10 НО: 195
БЕО 10 НО: 31 и ЗЕО 10 НО: 32 ЗЕО ю НО: 115 и БЕО 10 НО: 196
БЕО ю НО: 33 и ЗЕО Ю НО: 179 ЗЕО ю N0: 115 и БЕО ю НО: 197
ЗЕО ю N0: 34 и ЗЕО 10 N0: 51 ЗЕО ю НО: 115 и ЗЕО ю НО: 198
ЗЕО ю N0: 34 и ЗЕО 10 N0: 47 ЗЕО ю НО: 115 и ЗЕО ю N0: 199
ЗЕО ю N0: 35 и ЗЕС 10 N0: 179 ЗЕО ю N0: 115 и ЗЕС ю ЫО: 200
ЗЕО ю НО: 36 и ЗЕО Ю N0: 37 ЗЕО ю N0: 115 и ЗЕО ю N0: 201
ЗЕО ю НО: 38 и ЗЕО 10 N0: 179 ЗЕО ю N0: 116 и ЗЕО ю ЫО: 173
ЗЕО ю НО: 38 и ЗЕО 10 N0: 51 ЗЕО ю N0: 116 и ЗЕО ю ЫО: 174
ЗЕО 10 НО: 38 и ЗЕО 10 N0: 32 ЗЕО 10 N0: 116 и ЗЕО ю ЫО: 175
ЗЕО 10 НО: 38 и ЗЕО Ю N0: 47 ЗЕО 10 N0: 116 и ЗЕО ю ЫО: 176
БЕС 10 НО: 38 и ЗЕО 10 НО: 52 ЗЕО 10 НО: 116 и БЕС 10 НО: 177
БЕС 10 НО: 39 и 3ΕΏ Ю НО: 179 ЗЕО 10 НО: 117 и БЕС 10 НО: 173
ЗЕО 10 ЫО: 40 и ЗЕО Ю N0: 179 ЗЕО Ю N0
ЗЕО ю N0: 41 и 5Е0 Ю N0: 42 ЗЕО Ю но
ЗЕО 10 ЫО: 43 и ЗЕО 10 N0: 179 ЗЕО ю но
ЗЕО ю ЫО: 44 и ЗЕО 10 N0: 179 ЗЕО ю но
ЗЕО 10 ЫО: 44 и ЗЕО Ю N0: 51 ЗЕО ю но
ЗЕО 10 НО: 44 и ЗЕО Ю НО: 32 ЗЕО 10 но
ЗЕО 10 НО: 44 и ЗЕО Ю НО: 47 ЗЕО ю но
ЗЕО 10 НО: 44 и ЗЕО ΙΒ НО: 52 ЗЕО 10 но
ЗЕО 10 НО: 45 и ЗЕО Ю НО: 179 ЗЕО ю но
ЗЕО 10 НО: 45 и ЗЕО Ю НО: 179 ЗЕО ю но
117 и ЗЕО ю НО: 174
117 и ЗЕО ю НО: 175
117 и ЗЕО ю НО: 176
117 и ЗЕО ю НО: 177
118 и ЗЕО ю НО: 178
113 и ЗЕО 10 N0: 179
119 и ЗЕО ю N0: 173
119 и ЗЕО 10 НО: 179
119 и ЗЕО ю НО: 51
119 и ЗЕО ю НО: 189
ЗЕО 10 НО: 53 И ЗЕО ю НО: 41 ЗЕО Ю НО: 119 И ЗЕО ю НО: 46
БЕО 10 НО: 54 и ЗЕО ю НО: 179 ЗЕО 10 НО: 119 и ЗЕО 10 НО: 47
ЗЕО 10 НО: 55 и ЗЕО 10 НО: 179 ЗЕО 10 НО: 119 и ЗЕО 10 НО: 48
ЗЕО 10 НО: 56 и ЗЕО 10 N0: 179 5Е0 ю НО: 119 и ЗЕО ю НО: 49
ЗЕО 10 НО: 57 и ЗЕО 10 ЫО: 179 ЗЕО ю НО: 119 и ЗЕО ю НО: 50
ЗЕО 10 НО: 58 и ЗЕО ю N0: 42 ЗЕО ю НО: 119 и ЗЕО ю НО: 51
ЗЕО 10 НО: 59 и ЗЕО 10 N0: 179 ЗЕО ю НО: 119 и ЗЕО ю НО: 52
ЗЕО 10 ЫО: 60 И ЗЕО ЮНО: 179 5Е0 Ю НО
ЗЕО 10 ЫО: 61 и ЗЕО Ιϋ N0: 42 ЗЕО Ю НО
ЗЕО 10 ЫО: 62 и ЗЕО Ю НО: 42 ЗЕО 10 НО
ЗЕО 10 ЫО: 87 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО ю НО
ЗЕО 10 НО: 88 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО юно
ЗЕО Ю НО: 90 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО 10 но
ЗЕО Ю НО: 91 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО юно
ЗЕО Ю НО: 92 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО 10 но
ЗЕО Ю НО: 93 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО юно
ЗЕО Ю НО: 94 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО 10 но
ЗЕО Ю НО: 95 и ЗЕО Ю N0: 7 ЗЕО юно
ЗЕО Ю НО: 96 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО 10 но
ЗЕО Ю НО: 97 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО 10 но
ЗЕО 10 НО: 99 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО ю но
ЗЕО Ю НО: 100 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО ю но
ЗЕО Ю НО: 101 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО ю но
ЗЕО Ю НО: 102 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО ю но
ЗЕО Ю НО: 103 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО ю но
ЗЕО Ю НО: 104 и ЗЕО Ю НО: 7 ЗЕО ю но
ЗЕО ю НО: 105 и ЗЕО ю НО: 7 ЗЕО ю но
ЗЕО Ю НО: 106 и ЗЕО Ю НО: 171 ЗЕО ю но
120 И ЗЕО ю НО: 178
120 и ЗЕО 10 НО: 179
122 и ЗЕО Ю НО: 176
124 и ЗЕО 10 НО: 176
125 и ЗЕО Ю НО: 176
126 и ЗЕО 10 НО: 176
127 и ЗЕО Ю НО: 176
128 и ЗЕО 10 НО: 176
129 и ЗЕО ю НО: 176
130 и ЗЕО ю НО: 176
131 и БЕО ю N0: 176
132 и ЗЕО ю НО: 176
133 и БЕО 10 НО: 176
134 и ЗЕО 10 НО: 176
135 и ЗЕО ю НО: 176
136 и ЗЕО ю НО: 176
137 и ЗЕО ю НО: 176
138 и ЗЕО ю НО: 176
139 и ЗЕО 10 НО: 176
140 и ЗЕО ю НО: 176
141 и ЗЕО ю НО: 176
ЗЕС ΙΌ N0: 106 И ЗЕС ю НО: 172 ЗЕО ю НО: 142 И ЗЕС ю НО: 176
ЗЕС ΙΌ N0: 107 и ЗЕС ю НО: 171 ЗЕО 10 НО: 143 и ЗЕС ю НО: 176
ЗЕС ΙΌ N0: 107 и ЗЕС 10 НО: 172 ЗЕО 10 НО: 144 и ЗЕС 10 НО: 176
ЗЕС ΙΌ N0: 108 и ЗЕС ю N0: 171 ЗЕО 10 НО: 145 и ЗЕС 10 НО: 176
ЗЕС ΙΌ N0: 108 и ЗЕС ю N0: 172 ЗЕО 10 НО: 146 и ЗЕС 10 НО: 176
ЗЕС 10 НО: 109 и ЗЕС 10 N0: 170 ЗЕС 10 НО: 147 и ЗЕС 10 НО: 176
ЗЕС 10 НО: 110 и ЗЕС 10 N0: 171 ЗЕС 10 N0: 148 и ЗЕС 10 НО: 176
ЗЕС 10 НО: 111 Т4 ЗЕС 10 N0: 172 ЗЕС 10 НО: 149 и ЗЕС 10 N0: 176
ЗЕС 10 НО: 112 14 ЗЕО ю N0: 169 ЗЕС 10 НО: 150 и ЗЕО 10 НО: 176
ЗЕС 10 НО: 113 14 ЗЕО 10 N0: 173 ЗЕС 10 НО: 151 и ЗЕО 10 НО: 176
ЗЕС 10 НО: 113 14 ЗЕС 10 N0: 174 ЗЕС 10 НО: 152 и ЗЕС 10 НО: 176
ЗЕС 10 НО: 113 14 ЗЕС 10 N0: 175 ЗЕС 10 НО: 153 и ЗЕС 10 НО: 189
ЗЕС 10 НО: 113 14 ЗЕС 10 N0: 176 ЗЕС 10 НО: 154 и 3ΕΩ 10 N0: 189
ЗЕС Ю N0: 113 И ЗЕС ю НО: 177 ЗЕО 10 НО: 155 и ЗЕС ю НО: 189
ЗЕС Ю N0: 113 И ЗЕС 10 НО: 176 ЗЕО 10 НО: 156 и ЗЕС 10 НО: 189
ЗЕО 10 N0: 114 И ЗЕС ю N0: 173 ЗЕО 10 НО: 157 и ЗЕС 10 НО: 189
ЗЕО 10 N0: 114 И ЗЕС ю N0: 174 ЗЕО 10 НО: 158 и ЗЕС 10 НО: 189
ЗЕС ю НО: 114 И ЗЕС ю N0: 175 ЗЕО 10 НО: 159 и ЗЕС ю НО: 189
ЗЕС ю N0: 114 И ЗЕС 10 НО: 176 ЗЕО 10 НО: 160 и ЗЕС ю НО: 189
ЗЕО 10 N0: 114 И ЗЕС ю N0: 177 ЗЕО 10 НО: 161 и ЗЕС 10 НО: 189
ЗЕО 10 N0: 115 И ЗЕС ю НО: 173 ЗЕО ю НО: 161 и ЗЕС ю НО: 179
ЗЕС 10 НО: 115 14 ЗЕС 10 N0: 174 ЗЕС 10 N0: 162 и ЗЕС 10 НО: 189
ЗЕС 10 НО: 115 14 ЗЕО ю N0: 175 ЗЕС 10 НО: 162 и ЗЕО ю N0: 179
ЗЕС 10 НО: 115 14 ЗЕО 10 N0: 176 ЗЕС 10 НО: 163 и ЗЕ<2 10 НО: 189
ЗЕС 10 НО: 115 14 ЗЕС 10 N0: 177 ЗЕС 10 НО: 163 и ЗЕО 10 НО: 179
ЗЕС 10 НО: 115 14 ЗЕС 10 N0: 181 ЗЕС 10 НО: 164 и ЗЕС 10 N0: 189
ЗЕС 10 НО: 115 14 ЗЕО ю N0: 182 ЗЕС 10 НО: 164 и ЗЕ<2 10 НО: 179
ЗЕС 10 НО: 115 14 ЗЕС 10 N0: 183 ЗЕС 10 НО: 165 и ЗЕС 10 НО: 189
ЗЕС 10 НО: 115 14 ЗЕС 10 N0: 184 ЗЕС 10 НО: 165 и ЗЕС 10 N0: 179
ЗЕС 10 НО: 115 14 ЗЕО ю N0: 185 ЗЕС 10 НО: 166 и ЗЕО 10 N0: 189
ЗЕС ю N0: 115 И ЗЕС 10 НО: 186 ЗЕО 10 НО: 166 и ЗЕС 10 НО: 179
ЗЕО 10 N0: 115 И ЗЕС ю N0: 187 ЗЕО 10 НО: 167 и ЗЕС 10 НО: 189
ЗЕО 10 N0: 115 И ЗЕС ю НО: 188 ЗЕО ю НО: 167 и ЗЕС ю НО: 179
ЗЕС 10 НО: 115 И ЗЕС ю НО: 189 ЗЕС 10 НО: 168 и ЗЕС 10 N0: 189.
Настоящее изобретение относится к антителу, в котором указанная акцепторная человеческая каркасная область содержит по меньшей мере одну аминокислотную замену в каркасной области в положении ключевого остатка, где указанный ключевой остаток выбран из группы, состоящей из остатка, смежного с СЭК; остатка сайта гликозилирования; редкого остатка; остатка, способного взаимодействовать с субъединицей р40 человеческого 1Ь-12; остатка, способного взаимодействовать с СЭК; канонического остатка; контактного остатка, расположенного между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи; остатка, находящегося в зоне Верньера; и остатка, находящегося в области, которая перекрывается в области, расположенной между СЭК1 УН-домена, определенного по Чотии, и первой каркасной областью тяжелой цепи, определенной по Кэбату. В другом аспекте изобретения, указанная человеческая акцепторная каркасная область содержит по меньшей мере одну аминокислотную замену в каркасной области, где указанная аминокислотная последовательность каркасной области по меньшей мере на 65% идентична последовательности указанной человеческой акцепторной каркасной области и содержит по меньшей мере 70 аминокислотных остатков, идентичных аминокислотным остаткам указанной человеческой акцепторной каркасной области.
Настоящее изобретение относится к антителу, которое представляет собой консенсусный домен человеческой УН. Кроме того, настоящее изобретение относится к антителу, которое представляет собой консенсусный домен человеческой УЬ.
Настоящее изобретение относится к антителу, где указанная человеческая акцепторная каркасная область содержит по меньшей мере одну аминокислотную замену в каркасной области, где указанная аминокислотная последовательность каркасной области по меньшей мере на 65% идентична последовательности указанной человеческой акцепторной каркасной области и содержит по меньшей мере 70 ами- 9 026110 нокислотных остатков, идентичных аминокислотным остаткам указанной человеческой акцепторной каркасной области.
В настоящем изобретении описано антитело, которое содержит константную область тяжелой цепи иммуноглобулина человека или примата, не являющегося человеком, где указанное антитело выбрано из группы, состоящей из Ι§01, Ι§02, Ι§03, Ι§04, 1дМ, Ι§Ε и Ι§Α.
В настоящем изобретении описано антитело, которое содержит константную область легкой цепи иммуноглобулина человека или примата, не являющегося человеком, где указанное антитело выбрано из группы, состоящей из цепей каппа или лямбда.
Настоящее изобретение также относится к способу продуцирования антитела согласно изобретению, где указанный способ включает:
(ί) иммунизацию животного человеческим 1Ь-12р40 или фрагментом человеческого 1Ь-12р40 с получением первой панели антител;
(ίί) отбор из этой первой панели антител, которые связываются с человеческим 1Ь-12 и человеческим 1Ь-23 с получением второй панели антител; и (ίίί) отбор из этой второй панели антител, которые связываются с субъединицей р40, присутствующей в виде мономера (человеческого 1Ь-12р40) и в виде гомодимера (человеческого 1Ь-12р80), и которые ингибируют связывание человеческого 1Ь-12 с человеческим ΙΕ-12Κβ2 и связывание человеческого 1Ь-23 с человеческим 1Ь-23К, но не ингибируют связывание человеческого 1Ь-12 или человеческого 1Ь-23, или человеческого 1Ь-12р40 или человеческого 1Ь-12р80 с человеческим ГО-12КР1.
Указанный способ может также включать на стадии (ίί) отбор антител, которые также связываются с пептидом, имеющим последовательность νρνρΟΚδΚΚΕΚΚΌΚνΕΤΌΚΤδΑΤνίΟΚΚΝΑδΙδν (8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 65).
Настоящее изобретение также относится к другому способу продуцирования антитела согласно изобретению, где указанный способ включает:
(ί) иммунизацию животного пептидом, имеющим последовательность УОУОС1<δΚΚΕΚΚΌΚνΕΤΌΚΤδΑΤνίΟΚΚΝΑδΙδν (8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 65), с получением первой панели антител;
(ίί) отбор из этой первой панели антител, которые связываются с человеческим ГО-12 и человеческим ГО-23, с получением второй панели антител; и (ίίί) отбор из этой второй панели антител, которые связываются с субъединицей р40, присутствующей в виде мономера (человеческого ГО-12р40) и в виде гомодимера (человеческого ГЕ-12р80), и которые ингибируют связывание человеческого ГО-12 с человеческим ΙΕ-12Κβ2 и связывание человеческого ГО-23 с человеческим ГО-23К, но не ингибируют связывание человеческого ГО-12 или человеческого ГО-23, или человеческого ГО-12р40 или человеческого ГО-12р80 с человеческим ΙΕ-12Κβ1.
Настоящее изобретение также относится к способу продуцирования антитела согласно изобретению, где указанный способ включает:
(ί) получение библиотеки представления человеческих антител и создание первой панели антител;
(ίί) отбор из этой первой панели антител, которые связываются с человеческим ГО-12 и человеческим ГО-23 с получением второй панели антител; и (ίίί) отбор из этой второй панели антител, которые связываются с субъединицей р40, присутствующей в виде мономера (человеческого ГО-12р40) и/или в виде гомодимера (человеческого ГЕ-12р80), и которые ингибируют связывание человеческого ГО-12 с человеческим ΙΕ-12Κβ2 и связывание человеческого ГО-23 с человеческим ГО-23К, но не ингибируют связывание человеческого ГО-12 или человеческого ГО-23, или человеческого ГО-12р40 или человеческого ГО-12р80 с человеческим ΙΕ-12Κβ1.
Настоящее изобретение относится к молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей домен УН согласно изобретению. При этом, предпочтительно, чтобы указанная молекула нуклеиновой кислоты имела последовательность, выбранную из
ЗЕО 10 НО: 217 ЗЕО ю N0: 254 ЗЕО 10 НО: 282 ЗЕО ΙΌ ЫО: эго
ЗЕО 10 НО: 218 ЗЕО 10 N0: 255 ЗЕО 10 ЫО: 283 ЗЕО ΙΌ ЫО: эн
ЗЕО 10 НО: 219 ЗЕО 10 N0: 257 ЗЕО 10 ЫО: 284 ЗЕО ΙΌ ЫО: 312
ЗЕО 10 НО: 220 ЗЕО ю N0: 258 ЗЕО 10 НО: 285 ЗЕО ΙΌ ЫО: 313
ЗЕО 10 НО: 222 ЗЕО ю N0: 259 ЗЕО 10 ЫО: 286 ЗЕО ΙΌ ЫО: 314
ЗЕО 10 НО: 223 ЗЕО 10 N0: 260 ЗЕО 10 ЫО: 287 ЗЕО ΙΌ ЫО: 315
ЗЕО 10 N0: 224 ЗЕО 10 N0: 261 ЗЕО 10 ЫО: 289 ЗЕО Ю N0: 316
ЗЕО 10 N0: 225 ЗЕО 10 N0: 262 ЗЕО 10 ЫО: 291 ЗЕО Ю N0: 317
ЗЕО 10 N0: 227 ЗЕО 10 N0: 263 ЗЕО 10 ЫО: 292 ЗЕО Ю N0: 318
ЗЕО 10 N0: 228 ЗЕО 10 N0: 264 ЗЕО 10 ЫО: 293 ЗЕО Ю N0: 319
ЗЕО Ю N0: 229 ЗЕО Ю N0: 266 ЗЕО ю N0: 294 ЗЕО ю N0: 320
ЗЕО Ю N0: 230 ЗЕО ΙΌ N0: 267 ЗЕО ю N0: 295 ЗЕО ю N0: 321
ЗЕО ΙΌ N0: 232 ЗЕО ΙΌ N0: 268 ЗЕО ю НО: 296 ЗЕО 10 N0: 322
ЗЕО Ю N0: 233 ЗЕО Ю N0: 269 ЗЕО ю N0: 297 ЗЕО 10 N0: 323
ЗЕО Ю N0: 234 ЗЕО Ю N0: 270 ЗЕО ю НО: 298 ЗЕО 10 N0: 324
ЗЕО 10 НО: 242 ЗЕО Ю N0: 271 ЗЕО 10 НО: 299 ЗЕО ю N0: 325
ЗЕО 10 НО: 243 ЗЕО Ю N0: 272 ЗЕО 10 НО: 300 ЗЕО ю N0: 326
ЗЕО 10 НО: 244 ЗЕО 10 N0: 273 ЗЕО 10 НО: 301 ЗЕО 10 N0: 327
ЗЕО 10 НО: 245 ЗЕО Ю N0: 274 ЗЕО 10 НО: 302 ЗЕО 10 N0: 328
ЗЕО 10 НО: 246 ЗЕО Ю N0: 275 ЗЕО 10 НО: 303 ЗЕО ю N0: 329
ЗЕО 10 НО: 247 ЗЕО Ю N0: 276 ЗЕО ю НО: 304 ЗЕО ю N0: 330
ЗЕО 10 НО: 248 ЗЕО 10 N0: 277 ЗЕО 10 НО: 305 ЗЕО 10 N0: 331
ЗЕО 10 НО: 249 ЗЕО ю N0: 278 ЗЕО 10 НО: 306 ЗЕО ю N0: 332
ЗЕО Ю N0: 250 ЗЕО ю N0: 279 ЗЕО ю НО: 307 ЗЕО 10 N0: 333
ЗЕО 10 НО: 251 ЗЕО ю N0: 280 ЗЕО ю НО: 308 ЗЕО 10 N0: 334
ЗЕО 10 НО: 252 ЗЕО ю N0: 281 ЗЕО ю НО: 309 ЗЕО ю НО: 335,
Настоящее изобретение относится к молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей домен УЬ согласно изобретению. При этом предпочтительно, чтобы указанная молекула нуклеиновой кислоты имела последовательность, выбранную из:
ЗЕО ю НО: 221 ЗЕО ю N0: 338 ЗЕО ю НО: 350 ЗЕО Ю N0: 362
ЗЕО ю N0: 226 ЗЕО ю НО: 339 ЗЕО ю N0: 351 ЗЕО 10 НО: 363
ЗЕО ю НО: 231 ЗЕО ю N0: 340 ЗЕО ю НО: 352 ЗЕО Ю НО: 364
ЗЕО ю НО: 235 ЗЕО ю НО: 341 ЗЕО ю N0: 353 ЗЕО 10 НО: 365
ЗЕО 10 НО: 236 ЗЕО ю N0: 342 ЗЕО Ю N0: 354 ЗЕО Ю N0: 366
ЗЕО 10 N0: 237 ЗЕО ю НО: 343 ЗЕО Ю N0: 355 ЗЕО 10 НО: 367
ЗЕО 10 НО: 238 ЗЕО ю НО: 344 ЗЕО ю НО: 356 ЗЕО Ю НО: 368
ЗЕО 10 N0: 239 ЗЕО ю НО: 345 ЗЕО Ιϋ N0: 357 ЗЕО 10 НО: 369
ЗЕО ю НО: 240 ЗЕО ю НО: 346 ЗЕО Ιϋ НО: 358 ЗЕО Ю N0: 370
ЗЕО ю N0: 241 ЗЕО ю НО: 347 ЗЕО Ю N0: 359
ЗЕО ю НО: 336 ЗЕО ю НО; 348 ЗЕО ю НО: 361.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения заболевания у индивидуума, включающему введение указанному индивидууму антитела согласно изобретению, где указанное заболевание выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, остеоартрита, реактивного артрита, псориатического артрита, потери костной ткани, гиперчувствительности дыхательных путей, хронической обструктивной болезни легких, демиелинизирующего заболевания, псориаза, рассеянного склероза, гиперчувствительности кожи, острого и хронического отторжения трансплантата, отторжения аллотрансплантата, реакции трансплантат против хозяина, системного склероза, системной красной волчанки, аутоиммунного воспалительного заболевания кишечника, воспалительного заболевания мочеполовых путей, сердечно-сосудистого заболевания, васкулитов, перемежающейся лихорадки, нарушения метаболизма глюкозы, болезни легких, рака, периодонтита, гепатического стромального кератита, аллергии, воспалительной боли, спондилоартропатии, септицемии, септического или эндотоксического шока, менингита, хирургической травмы, аутоиммунной болезни крови, болезни Альцгеймера, саркоидоза, цирроза, гепатита (включая аутоиммунный гепатит), первичного билиарного цирроза, увеита, тиреоидита, атеросклероза, алопеции, болезни Вильсона, гломерулонефрита и дислипидемии.
Настоящее изобретение также относится по меньшей мере к одному антителу, к его специфической части или варианту, используемым в способе или композиции путем их введения в терапевтически эффективном количестве в целях модуляции, лечения или ослабления симптомов по меньшей мере одного заболевания, ассоциированного с 1Ь-12 и/или 1Ь-23, в клетке, ткани, в органах и в организме животного или пациента, и/или, при необходимости, многих других состояний, где указанное введение может быть осуществлено до, после или во время лечения известных и/или описанных, но не ограничивающихся ими, здесь, родственных заболеваний или состояний.
Настоящее изобретение также относится по меньшей мере к одному антителу, к его специфической части или варианту, используемым в способе или композиции путем их введения в терапевтически эффективном количестве в целях модуляции, лечения или ослабления симптомов иммунных, нервных и родственных заболеваний, таких как, но не ограничивающихся ими, артрит, остеоартрит, ревматоидный артрит, юношеский хронический артрит, септический артрит, артрит Лайма, псориатический артрит, реактивный артрит, спонидилоартропатия, системная красная волчанка, болезнь Крона, язвенный колит,
- 11 026110 воспалительное заболевание кишечника, инсулинзависимый сахарный диабет, тиреоидит, астма, аллергические заболевания, псориаз, склеродермальный дерматит, реакция трансплантат против хозяина, отторжение трансплантированных органов, острое или хроническое иммунное заболевание, ассоциированное с трансплантацией органов, саркоидоз, атеросклероз, диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови, болезнь Кавазаки, болезнь Грейвса, нефротический синдром, синдром хронической усталости, гранулематоз Вегенера, пурпура Геноха-Шенлейна, микроскопический васкулит почек, острый и хронический гепатит, увеит, септический шок, синдром токсического шока, септический синдром, кахексия, инфекционные заболевания, заболевания, вызываемые паразитами, синдром приобретенного иммунодефицита, острый поперечный миелит, хорея Гентингтона, болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, инсульт, первичный билиарный цирроз, гемолитическая анемия, злокачественные заболевания, сердечная недостаточность, инфаркт миокарда, болезнь Аддиссона, спорадический полигландулярный дефицит типа 1 и полигландулярный дефицит типа II, синдром Штидта, (острый) респираторный дистресссиндром взрослых, алопеция, гнездная алопеция, серонегативная артропатия, артропатия, болезнь Рейтера, псориатическая артропатия, артропатия, ассоциированная с язвенным колитом, энтеропатический синовит, артропатия, ассоциированная с СЫашуФа, Уегмша и §а1шоие11а, спондилоартропатия, атероматозное заболевание/артериосклероз, атопическая аллергия, аутоиммунное буллезное заболевание, вульгарная пузырчатка, листовидная пузырчатка, пемфигоид, болезнь прямых цепей 1дА, аутоиммунная гемолитическая анемия, позитивная гемолитическая анемия Кумбса, приобретенная пернициозная анемия, юношеская пернициозная анемия, миалгический энцефалит/британский миалгический энцефаломиелит, хронический кандидоз кожи и слизистой, гигантоклечный артерит, первичный склерозирающий гепатит, криптогенный аутоиммунный гепатит, синдром приобретенного иммунодефицита, заболевания, ассоциированные с приобретенным иммунодефицитом, гепатит В, гепатит С, вариабельный неклассифицированный иммунодефицит (вариабельная неклассифицированная гипогаммаглобулинемия), застойная кардиомиопатия, бесплодие у женщин, дисфункция яичников, преждевременная дисфункция яичников, фиброзное заболевание легких, криптогенный фиброзный альвеолит, интерстициальная болезнь легких после воспаления, интерстициальный пневмонит, интерстициальная болезнь легких, ассоциированная с болезнью соединительной ткани, болезнь легких, ассоциированная со смешанным заболеванием соединительных тканей, интерстициальная болезнь легких, ассоциированная с системным склерозом, интерстициальная болезнь легких, ассоциированная с ревматоидным артритом, болезнь легких, ассоциированная с системной красной волчанкой, болезнь легких, ассоциированная с дерматомиозитом/полимиозитом, болезнь легких, ассоциированная с синдромом Сьегрена, болезнь легких, ассоциированная с анкилозирующим спондилитом, васкулярное диффузное заболевание легких, болезнь легких, ассоциированная с гемосидерозом, интерстициальная болезнь легких, индуцируемая лекарственными средствами, фиброз, лучевой фиброз, облитерирующий бронхиолит, хроническая эозинофильная пневмония, болезнь легких, вызываемая инфильтрацией лимфоцитов, постинфекционная интерстициальная болезнь легких, подагрический артрит, аутоиммунный гепатит, аутоиммунный гепатит типа-1 (классический аутоиммунный или волчаночный гепатит), аутоиммунный гепатит типа-2 (гепатит, вызываемый анти-ЬКМ антителами), аутоиммунная гипогликемия, инсулинорезистентность типа В, сопровождающаяся черным акантозом, гипопаратиреоидит, острое иммунное заболевание, ассоциированное с трансплантацией органов, хроническое иммунное заболевание, ассоциированное с трансплантацией органов, остеоартроз, первичный склерозирующий холангит, псориаз типа 1, псориаз типа 2, идиопатическая лейкопения, аутоиммунная нейтропения, почечное заболевание без указания диагноза, гломерулонефрит, микроскопический васкулит почек, болезнь Лайма, дисковидная красная волчанка, идиопатическое бесплодие у мужчин или бесплодие у мужчин без указания диагноза, аутоиммунное бесплодие, вызываемое образованием антител к сперматозоидам, рассеянный склероз (всех подтипов), симпатическая офтальмия, легочная гипертензия, вызываемая заболеванием соединительных тканей, синдром Гудпасчера, нодозный полиартерит, проявляющийся поражением легких, острая ревматическая лихорадка, ревматоидный спондилит, болезнь Стилла, системный склероз, синдром Сьегрена, болезнь Такаясу/артерит, аутоиммунная тромбоцитопения, идиопатическая тромбоцитопения, аутоиммунное заболевание щитовидной железы, гипертиреоидит, зобный аутоиммунный гипотиреоидит (болезнь Хашимото), атрофический аутоиммунный гипотереоидит, первичная миксоэдема, факогенный увеит, первичный васкулит, острое заболевание печени при витилиго, хронические заболевания печени, алкогольный цирроз, поражение печени, вызываемое алкоголем, холеосататит, идиосинкратическое заболевание печени, гепатит, индуцированный лекарственными средствами, неалкогольный стеатогепатит, аллергия и астма, инфекционное заболевание, вызываемое стрептококками группы В (СВ§), умственные расстройства (например, депрессия и шизофрения), заболевания, опосредуемые лимфоцитами типа Тн2 и Тн1, острая и хроническая боль (различные формы боли) и раковые заболевания, такие как рак легких, молочной железы, желудка, мочевого пузыря, толстой кишки, поджелудочной железы, яичника, предстательной железы и прямой кишки, и злокачественные заболевания гемопоэтической системы (лейкоз и лимфома), липопротеимия альфа, бета, акроцианоз, острые и хронические паразитарные или инфекционные заболевания, острый лейкоз, острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), острый миелоидный лейкоз (ОМЛ), острая или хроническая бактериальная инфекция, острый панкреатит, острая почечная недостаточность, аденокарцинома, эктопиче- 12 026110 ские предсердные сокращения, комплекс СПИД-деменция, алкогольный гепатит, аллергический конъюнктивит, аллергический контактный дерматит, аллергический ринит, отторжение аллотрансплантата, болезнь, вызываемая дефицитом альфа-1-антитрипсина, амиотрофический боковой склероз, анемия, стенокардия, дегенерация клеток переднего рога, заболевание, вызываемое лечением анти-СЭ3 антителами, антифосфолипидный синдром, иммунные реакции, ассоциированные с гиперчувствительностью к антителам против рецепторов, аневризмы аорты и периферических органов, отслаивание аорты, артериальная гипертензия, артериосклероз, артериовенозные свищи, атаксия, фибрилляция предсердий (замедленная или пароксизмальная), трепетания предсердий, атриовентрикулярная блокада, В-клеточная лимфома, отторжение костного трансплантата, отторжение трансплантата костного мозга (ВМТ), блокада ножки пучка Гиса, лимфома Беркитта, ожоги, сердечная аритмия, синдром остановки сердца, опухоли сердца, кардиомиопатия, воспалительный ответ, ассоциированный с кардиопульмонарным шунктированием, отторжение хрящевого трансплантата, дегенерация коркового вещества мозжечка, расстройства мозжечка, хаотическая или мультифокальная предсердная тахикардия, расстройства, ассоциированные с химиотерапией, хронический миелоцитарный лейкоз (ХМЛ), хронический алкоголизм, хронические воспалительные патологии, хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), хроническая интоксикация салицилатом, карцинома прямой и ободочной кишки, застойная сердечная недостаточность, конъюнктивит, контактный дерматит, легочное сердце, заболевания коронарной артерии, болезнь Крейцфельда-Якоба, сепсис, вызываемый негативной культурой, кистозный фиброз, заболевания, ассоциированные с цитокиновой терапией, деменция боксеров, димиелинизирующие заболевания, геморрагическая лихорадка денге, дерматит, кожные болезни, диабет, сахарный диабет, диабетическое атеросклеротическое заболевание, болезнь диффузных телец Леви, застойная карбиомиопатия, заболевания базальных ганглиев, синдром Дауна в среднем возрасте, расстройства двигательных функций, индуцированные лекарственными средствами, блокирующими допаминовые рецепторы ЦНС, чувствительность к лекарственным средствам, экзема, энцефалломиелит, эндокардит, эндокринопатия, эпиглотит, инфекционное заболевание, вызываемое вирусом Эпштейна-Барра, эритромелалгия, нарушение функций экстрамирамидного пути и мозжечка, наследственный гематофагоцитарный лимфогистиоцитоз, отторжение имплантата тимуса плода, атаксия Фридриха, заболевание функциональных периферических артерий, сепсис, вызываемый грибами, газовая гангрена, язва желудка, гломерулонефрит, отторжение трансплантата любых органов или тканей, сепсис, вызываемый грам-отрицательными бактериями, сепсис, вызываемый грамположительными бактериями, гранулемы, вызываемые внутриклеточными микроорганизмами, ретикулоэндотелиоз, болезнь Халлервордена-Шпатца, тиреоидит Хашимото, сенная лихорадка, отторжение трансплантата сердца, гемахроматоз, гемодиализ, гемолитический уремический синдром/тромболитическая тромбоцитопеническая пурпура, геморрагия, гепатит (А), аритмии пучка Гиса, ВЭЛ-инфекция/ВИЧ-невропатия, болезнь Ходжкина, нарушения гиперкинетической двигательной активности, реакция гиперчувствительности, пневмонит, ассоциированный с гиперчувствительностью, гипертензия, нарушения гипокинетической двигательной активности, нарушение функции оси гипоталамуса-гипофиза-коры надпочечника, идиопатическая болезнь Адиссона, идиопатический фиброз легких, цитотоксичность, опосредуемая антителом, астения, атрофия мышц спинного мозга у детей, воспаление аорты, грипп, вызываемый вирусом А, заболевание, вызываемое ионизирующим облучением, иридоциклит/увеит/нейрит зрительного нерва, репефузионное повреждение при ишемии, ишемический инсульт, ювенильный ревматоидный артрит, ювенильная атрофия мышц спинного мозга, саркома Капоши, отторжение почечного трансплантата, болезнь, вызываемая бактерией ЬедюиеПа, лейшманиоз, лепра, поражение кортикоспинальной системы, жировой отек, отторжение трансплантата печени, лимфедема, малярия, злокачественная лимфома, злокачественный гистиоцитоз, злокачественная меланома, менингит, менингококцемия, метаболические/идиопатические расстройства, головная боль при мигрени, митохондриальное расстройство многих органов, смешанное заболевание соединительной ткани, моноклональная гаммопатия, множественная миелома, дегенерация многих органов (МенцеляДежерина-Томаса-Ши-Драгера и Мачадо-Йозефа), тяжелая миастения, заболевание, вызываемое внутриклеточной бактерией МусоЪас1егшт ανίιιιη. туберкулез, вызываемый микобактерией, миелодипластический синдром, инфаркт миокарда, ишемия миокарда, карцинома носоглотки, хроническое заболевание легких у новорожденных, нефрит, нефроз, нейродегенеративные заболевания, нейрогенная атрофия мышц I, нейтропеническая лихорадка, не-ходжкинская лимфома, закупорка брюшной аорты и ее ветвей, окклюзивное артериальное расстройство, заболевание, ассоциированное с терапией о1<13, орхит/эпидидимит, орхит/операция по обратимой вазэктомии, органомегалия, остеопороз, отторжение трансплантата поджелудочной железы, карцинома поджелудочной железы, паранеопластический синдром/злокачественная гиперкальцемия, отторжение трансплантата паращитовидной железы, воспалительное заболевание области таза, круглогодичный ринит, перикардит, атеросклеротическое заболевание периферических органов, расстройства периферических сосудов, перитонит, пернициозная анемия, пневмония, вызываемая пневмоцистой Саппи, пневмония, синдром ΡΘΕΜ8 (полиневропатия, органомегалия, эндокринопатия, моноклональная гаммопатия и синдром изменения структуры кожи), постреперфузионный синдром, постгемодиализный синдром, пост-миокардиотомический синдром, преэклампсия, прогрессирующий надъядерный паралич, первичная легочная гипертензия, нарушения, ассоциированные
- 13 026110 с лучевой терапией, феномен и болезнь Рейно, болезнь Рейно, болезнь Рефсума, тахиаритмия, вызываемая сужением комплексов ОР8. вазоренальная гипертензия, реперфузионное повреждение, рестриктивная кардиомиопатия, саркома, склеродермия, сенильная хорея, сенильная деменция, вызываемая тельцами Леви, серонегативные артропатии, инсульт, серповидноклеточная анемия, отторжение кожного трансплантата, синдром изменения структуры кожи, отторжение трансплантата тонкой кишки, солидные опухоли, специфическая аритмия, атаксия спинного мозга, дегенерация спинного мозга и мозжечка, миозит, вызываемый стрептококками, структурные поражения мозжечка, подострый склерозирующий панэнцефалит, синкопе, сифилис сердечно-сосудистой системы, системный анафилактический шок, синдром системной воспалительной реакции, системный юношеский ревматоидный артрит, Т-клеточный ОЛЛ или ФАБ-ОЛЛ, телеангиэктазия, облитерирующий тромбоангит, тромбоцитопения, токсикоз, расстройство, ассоциированное с трансплантацией органов, травма/геморрагия, реакции гиперчувствительности типа М, реакции гиперчувствительности типа IV, нестабильная стенокардия, уремия, уросепсис, крапивница, заболевания сердечного клапана, варикозное расширение вен, васкулит, заболевания вен, венозный тромбоз, фибрилляция желудочков, вирусные и грибковые инфекции, летальный энцефалит/асептический менингит, гемафагоцитарный синдром с летальным исходом, синдром ВерникеКорсакова, болезнь Вильсона и отторжение ксенотрансплантата любых органов или тканей.
В объем настоящего изобретения входит анти-1Ь-12/1Ь-23 антитело, которое было подвергнуто созреванию аффинности.
Специалистам известно множество методов созревания аффинности антител. Многие из них основаны на общей стратегии генерирования панелей или библиотек вариантов белков, полученных посредством мутагенеза, с последующим отбором и/или скринингом на повышенную аффинность. Мутагенез часто осуществляют на уровне ДНК, например, посредством ПЦР с вероятностью ошибки (ТЫе 2009), путем перестановки генов (Ко1ктап 2001), с использованием мутагенных химических веществ или путем облучения, с использованием штаммов-мутаторов, действующих по механизму репликации с вероятностью ошибки (Огеепег 1996), или методами соматической гипермутации, в которых используется природный механизм созревания аффинности (Ре1ей 2008). Мутагенез может быть также осуществлен на уровне РНК, например, с использованием репликазы Οβ (Кор81Йа8 2006). Методы с использованием библиотек, позволяющие осуществлять скрининг на улучшенные варианты белков, могут быть разработаны на основе различных технологий представления, таких как технологии на основе фагов, дрожжей, рибосомы, клеток бактерий или млекопитающих, хорошо известные специалистам (ВепЪаг 2007). Созревание аффинности может быть достигнуто с применением более направленных/прогностических методов, например, методов сайт-направленного мутагенеза или синтеза генов, проводимого с использованием данных по 3-мерному моделированию белка (см., например, Онееп 1989; или патенты США № 6180370; или 5225539).
В соответствии с этим, настоящее изобретение относится к способу продуцирования антигенсвязывающего домена, который связывается с человеческим 1Ь-12р40, где указанный способ включает:
a) добавление, делецию, замену или инсерцию одной или более аминокислот в аминокислотной последовательности родительского домена νΗ, содержащего НСОК1, НСЭР2 и НСОК3, где родительские домены νΗ НСОК.1, НСЭР2 и НСЭР3 представляют собой серию определенных выше СОК; и домена νΗ, который представляет собой аминокислотную последовательность варианта родительского домена νΗ, с последующим объединением, но необязательно, полученного таким образом домена νΗ с одним или более доменами νκ с получением одной или более комбинаций νΗ/νΒ; и
b) тестирование указанного домена νΗ, который представляет собой вариант аминокислотной последовательности родительского домена νΗ или комбинации или комбинаций νΗ/νΒ для идентификации антигенсвязывающего домена антитела против человеческого 1Ь-12р40.
При этом, предпочтительно, чтобы родительский домен νΗ имел аминокислотную последовательность, представленную в
- 14 026110
ЗЕО Ιϋ
6, ЗЕО Ю N0: 62, ЗЕО Ю N0: 114, ЗЕО Ю N0: 142, ЗЕО Ю
N0:
N0: 28, ЗЕО Ю N0:
N0: 29, ЗЕО Ιϋ N0:
N0: 30, ЗЕО Ю N0:
N0: 31, ЗЕО Ю N0:
N0: 33, ЗЕО Ιϋ N0:
N0: 34, ЗЕО Ιϋ N0:
N0: 35, ЗЕО Ю N0:
N0: 36, ЗЕО Ю N0:
N0: 38, ЗЕО Ιϋ N0:
N0: 39, ЗЕО Ιϋ N0:
N0: 40, ЗЕО Ю N0:
87, ЗЕО Ю N0:
88, ЗЕО Ю N0:
90, ЗЕО Ю N0:
91, ЗЕО Ю N0:
92, ЗЕО Ю N0:
93, ЗЕО Ю N0:
94, ЗЕО Ю N0:
95, ЗЕО Ю N0:
96, ЗЕО Ю N0:
97, ЗЕО Ю N0:
115, ЗЕО Ю N0: 143, ЗЕО Ю
116, ЗЕО Ю N0: 144, ЗЕО Ю
117, ЗЕО Ю N0: 145, ЗЕО Ю
118, ЗЕО Ю N0: 146, ЗЕО Ю
119, ЗЕО Ю N0: 147, ЗЕО Ю
120, ЗЕО Ю N0: 148, ЗЕО Ю
122, ЗЕО Ю N0: 149, ЗЕО Ю
124, ЗЕО Ю N0: 150, ЗЕО Ю
125, ЗЕО Ю N0: 151, ЗЕО Ю
126, ЗЕО Ю N0: 152, ЗЕО Ю
99, ЗЕО Ю N0: 127, ЗЕО Ю N0: 153, ЗЕО Ю
Домен УН, который имеет модифицированную аминокислотную последовательность родительского домена УН, может быть получен посредством мутагенеза СЭР.
В этом способе один или более доменов УЪ получают путем добавления, делеции, замены или инсерции одной или более аминокислот в аминокислотной последовательности родительского домена УЬ, содержащего ЬСНЫ. ЬСОК2 и ЬСНК3, где родительский домен УЬ ЬСНЫ. ЬСОК2 и ЬСОК3 представляют собой серию СОК УЬ, определенных выше, в результате чего образуются один или более доменов УЬ, каждый из которых имеет модифицированную аминокислотную последовательность родительского домена УЬ.
При этом предпочтительно, чтобы родительский домен УЬ имел аминокислотную последовательность, представленную в
ЗЕО Ιϋ
N0: 7, ЗЕО Ю N0: 169, ЗЕО ю N0: 181, ЗЕО Ю N0: 193, ЗЕО Ю
N0: 32, ЗЕО Ю N0: : 170, ЗЕО Ιϋ N0: : 182, ЗЕО ю N0: 194, ЗЕО Ιϋ
N0: 37, ЗЕО Ю N0: : 171, ЗЕО ΙΌ N0: : 183, ЗЕО ю N0: 195, ЗЕО Ю
N0: 42, ЗЕО Ю N0: : 172, ЗЕО Ю N0: : 184, ЗЕО ю N0: 196, ЗЕО Ю
N0: 46, ЗЕО Ю N0: : 173, ЗЕО ΙΌ N0: : 185, ЗЕО ю N0: 197, ЗЕО Ю
N0: 47, ЗЕО Ю N0: : 174, ЗЕО Ιϋ N0: : 186, ЗЕО ю N0: 198, ЗЕО Ιϋ
N0: 48, ЗЕО Ю N0: : 175, ЗЕО ΙΌ N0: : 187, ЗЕО ю N0: 199, ЗЕО ю
N0: 49, ЗЕО Ю N0: : 176, ЗЕО Ιϋ N0: : 188, ЗЕО ю N0: 200, ЗЕО ю
N0: 50, ЗЕО Ю N0: : 177, ЗЕО Ю N0: : 189, ЗЕО ю N0: 201, ЗЕО ю
N0: 51 , ЗЕО Ю N0: 178 , ЗЕО Ю N0:190, , ЗЕО Ю N0 :52, ЗЕО ю
N0: 179 или ЗЕО Ιϋ N0:192
Домен УЬ, который представляет собой модифицированную аминокислотную последовательность родительского домена УЬ, может быть получен посредством мутагенеза СОК.
- 15 026110
Антигенсвязывающий домен антитела может быть получен в виде компонента молекулы антитела ЦС. ксРу или РаЬ.
Настоящее изобретение также относится к способу получения антигенсвязывающего домена, который связывается с человеческим ГЬ-12р40, где указанный способ включает:
а) обеспечение исходной нуклеиновой кислоты, кодирующей домен УН, или исходного набора нуклеиновых кислот, каждая из которых кодирует домен УН, где указанный домен УН выбран из группы, состоящей из
5Е0 ΙΏ N0: 6, 5Е£> Ю N0:
Ю N0:
b) объединение указанной исходной нуклеиновой кислоты или исходного набора таких нуклеиновых кислот с донорной нуклеиновой кислотой или с донорными нуклеиновыми кислотами, кодирующими указанную аминокислотную последовательность или продуцируемыми путем введения мутации в указанную аминокислотную последовательность так, чтобы указанная донорная нуклеиновая кислота или донорные нуклеиновые кислоты были встроены в домен УН исходной нуклеиновой кислоты или исходного набора нуклеиновых кислот, с получением набора продуктов нуклеиновых кислот, кодирующих домены УН; и экспрессию нуклеиновых кислот указанного набора продуктов с получением продукта доменов УН;
c) объединение, но необязательно, указанного продукта доменов УН с одним или более доменами УЬ;
б) отбор антигенсвязывающего домена антитела против человеческого ГЬ-12р40;
е) выделение указанного антигенсвязывающего домена или нуклеиновой кислоты, кодирующей этот домен, где указанный антигенсвязывающий домен содержит продукт домена УН и необязательно домена УЬ.
Настоящее изобретение также относится к способу получения антигенсвязывающего домена, который связывается с человеческим ГЬ-12р40, где указанный способ включает:
а) обеспечение исходной нуклеиновой кислоты, кодирующей домен УЬ, или исходного набора нуклеиновых кислот, каждая из которых кодирует домен УЬ, где указанный домен УЬ выбран из группы,
- 16 026110 состоящей из:
5Е0 Ю N0: 7, ЗЕС Ю N0: 169, ЗЕО Ю N0:
b) объединение указанной исходной нуклеиновой кислоты или исходного набора таких нуклеиновых кислот с донорной нуклеиновой кислотой или с донорными нуклеиновыми кислотами, кодирующими указанную аминокислотную последовательность или продуцируемыми путем введения мутации в указанную аминокислотную последовательность так, чтобы указанная донорная нуклеиновая кислота или донорные нуклеиновые кислоты были встроены в домен исходной нуклеиновой кислоты или исходного набора нуклеиновых кислот, с получением набора продуктов нуклеиновых кислот, кодирующих домены νί; и экспрессию нуклеиновых кислот указанного набора продуктов с получением продукта доменов νΈ;
c) объединение, но необязательно, указанного продукта доменов с одним или более доменами νΉ;
ά) отбор антигенсвязывающего домена антитела против человеческого 1Ь-12р40;
е) выделение указанного антигенсвязывающего домена или нуклеиновой кислоты, кодирующей этот домен, где указанный антигенсвязывающий домен содержит продукт домена VН и необязательно домена νκ
В этих способах донорные нуклеиновые кислоты могут быть получены путем мутации указанной НСОК1 и/или НСЭК2 и/или НСОК3. Донорная нуклеиновая кислота может быть также получена путем произвольноой мутации нуклеиновой кислоты.
Антитело согласно изобретению может быть выбрано из широкого ряда молекул антител, хорошо известных специалистам. В некоторых вариантах изобретения, антитело выбрано из группы, состоящей из молекулы иммуноглобулина, моноклонального антитела (тАЬ), химерного антитела, СЭК-привитого антитела, гуманизованного антитела, совместно гуманизованного антитела, примитизированного антитела, домена антитела, фрагмента верблюжьего антитела, РаЬ-, РаЬ'-, Р(аЬ')2-, Ρν-, 8сРу-фрагментов, Ρν с дисульфидной связью, диантитела, поливалентного антитела, антитела с двойной специфичностью, биспецифического антитела, домена, связывающегося с константной областью иммуноглобулина, и белкового остова, к которому присоединены антигенсвязывающие домены (примеры приводятся в публикации Οίιι е1 а1. 2007 Ναι. В|о1есНпо1. 25, 921-9), и их вариантов. Настоящее изобретение также относится к композициям антител, нуклеиновым кислотам, кодирующим такие антитела, к комплементарным нуклеиновым кислотам, к векторам, клеткам-хозяевам, композициям, препаратам, устройствам, трансгенным животным, трансгенным растениям, и к способам их получения и применения, описанным и рассматриваемым в настоящей заявке, в комбинации с объектами, уже известными специалистам.
Настоящее изобретение относится к выделенным молекулам нуклеиновой кислоты, включающим полинуклеотид, кодирующий специфические антитела или их варианты, содержащие по меньшей мере одну специфическую последовательность, или ее домен, часть или вариант, а также к молекулам, комплементарным указанному полинуклеотиду или гибридизующимся с указанным полинуклеотидом. Настоящее изобретение относится к рекомбинантным векторам, содержащим указанные молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие антитела, к клеткам-хозяевам, содержащим такие нуклеиновые кислоты и/или рекомбинантные векторы, а также к способам получения и/или применения указанных нуклеиновых кислот, кодирующих антитела, векторов и/или клеток-хозяев, содержащих такие антитела.
Настоящее изобретение также относится по меньшей мере к одной композиции, включающей (а) выделенное антитело, его специфическую часть или вариант; кодирующую их нуклеиновую кислоту, и/или антитело, описанное в настоящей заявке; и (Ь) подходящий носитель или разбавитель. Такой носитель или разбавитель может быть, но необязательно, фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем, обычно используемым в известных методах. Такая композиция может также включать, но необязательно, по меньшей мере одно другое соединение, белок или композицию.
Настоящее изобретение также относится по меньшей мере к одному способу экспрессии антител или их вариантов в клетках-хозяевах, где указанный способ включает культивирование клетки-хозяина,
- 17 026110 описанной в настоящей заявке и/или известной специалистам, в условиях, при которых такое антитело или его вариант экспрессируется в выделяемых количествах.
Настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей по меньшей мере одно антитело, и включающей нуклеиновую кислоту, которая гибридизуется с нуклеиновой кислотой, кодирующей антитело, в жестких условиях, или имеет последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности указанной нуклеиновой кислоты. Настоящее изобретение также относится к выделенному антителу, кодируемому указанной нуклеиновой кислотой. Настоящее изобретение также относится к вектору, кодирующему антитело и содержащему такую нуклеиновую кислоту, где указанный вектор также включает, но необязательно, по меньшей мере один промотор, выбранный из группы, состоящий из позднего или раннего промотора 8У40, промотора СМУ, промотора Н8У 1к, промотора рдк, промотора человеческого иммуноглобулина и промотора ЕР-1а. Такой вектор может также включать, но необязательно, по меньшей мере один селективный ген или его часть, выбранные по меньшей мере из генов метотрексата (МТХ), дигидрофолат-редуктазы (ΌΗΡΚ), белка, флуоресцирующего в зеленом диапазоне спектра (СРР), неомицина (0418) или глутамин-синтетазы (08). Настоящее изобретение также включает клетку-хозяина млекопитающего, содержащую, но необязательно, указанную выделенную нуклеиновую кислоту, где указанным хозяином является по меньшей мере один хозяин, выбранный из клеток С08-1, СО8-7, НЕК293, ВНК21, СНО, В8С-1, Имр02. РегСР, 653, 8Р2/0, 293, НеЬа, миеломы или лимфомы, или любых их производных, либо иммортализованных или трансформированных клеток.
Настоящее изобретение также относится по меньшей мере к одному способу получения композиции, содержащей по меньшей мере одно антитело, где указанная композиция содержит по меньшей мере одно антитело, а также, но необязательно, носитель или разбавитель, где указанный носитель или разбавитель являются фармацевтически приемлемыми и/или где указанная композиция также содержит по меньшей мере одно соединение или белок, выбранные из антагониста ΤΝΡ, противоревматического средства, мышечного релаксанта, наркотического средства, нестероидного противовоспалительного средства (НСПВС), аналгетика, анестетика, седативного средства, местного анестетика, нейромышечного блокатора, противомикробного средства, средства против псориаза, кортикостероида, анаболического стероида, анти-1Ь-23 антитела, анти-1Ь-12 антитела, микроэлементов, питательных веществ, тиреотропного средства, витамина, гормона кальцитонина, средства против диареи, средства против кашля, противорвотного средства, противоязвенного средства, слабительного, антикоагулянта, эритропоэтина, филграстима, сарграмостима, иммунизирующего средства, иммуноглобулина, иммунодепрессанта, гормона роста, лекарственного средства для гормон-заместительной терапии, модулятора рецептора экстрогена, мидриатического средства, средства против циклоплегии, алкилирующего агента, антиметаболита, ингибитора митоза, радиофармацевтического средства, антидепрессанта, средства против маниакальнодепрессивных расстройств, антипсихотического средства, анксиолитика, гипнотического средства, симпатомиметика, стимулятора, донепезила, такрина, противоастматического средства, бета-агониста, стероида, вводимого путем ингаляции, ингибитора лейкотриена, метилксантина, кромолина, эпинефрина или его аналога, дорназы-альфа, цитокина и антагониста цитокина.
Настоящее изобретение также относится по меньшей мере к одному способу лечения состояния, ассоциированного с Ю12/23, присутствующих в клетке, ткани, органе или в организме животного, где указанный способ включает контактирование по меньшей мере одного антитела с указанными клеткой, тканью, органом или организмом животного, или введение, но необязательно, указанного по меньшей мере одного антитела в указанные клетку, ткань, органы или организм животного в количестве, которое является эффективным для модуляции иммуно-опосредованного состояния или инфекционного состояния, и где указанным животным является примат, необязательно, обезьяна или человек. Указанный способ может также включать, но необязательно, введение в указанные клетки, ткани, органы или организм животного эффективного количества антитела, составляющего примерно 0,001-100 мг/кг указанных клеток, тканей, органов или организма животного. Указанный способ может также включать указанное контактирование или введение, осуществляемые по меньшей мере одним способом, выбранным из внутривенного введения, внутримышечного введения, введения в виде болюса, внутрибрюшинного введения, подкожного введения, введения в дыхательные пути, введения путем ингаляции, местного введения, интраназального введения, вагинального введения, ректального введения, трансбуккального введения, подъязычного введения, интраназального введения, подкожного и трансдермального введения. Такой способ может также включать введение до, во время или после указанного контактирования или введения по меньшей мере одной композиции, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения или белка, выбранных по меньшей мере из антагониста ΤΝΡ, противоревматического средства, мышечного релаксанта, наркотического средства, нестероидного противовоспалительного средства (НСПВС), аналгетика, анестетика, седативного средства, местного анестетика, нейромышечного блокатора, противомикробного средства, средства против псориаза, кортикостероида, анаболического стероида, анти-1Ь-23 антитела, анти-1Ь-12 антитела, микроэлементов, питательных веществ, тиреотропного средства, витамина, гормона кальцитонина, средства против диареи, средства против кашля, противорвотного средства, противоязвенного средства, слабительного, антикоагулянта, эритропоэтина,
- 18 026110 филграстима, сарграмостина, иммунизирующего средства, иммуноглобулина, иммунодепрессанта, гормона роста, лекарственного средства для гормон-заместительной терапии, модулятора рецептора экстрогена, мидриатического средства, средства против циклоплегии, алкилирующего агента, антиметаболита, ингибитора митоза, радиофармацевтического средства, антидепрессанта, средства против маниакальнодепрессивных расстройств, антипсихотического средства, анксиолитика, гипнотического средства, симпатомиметика, стимулятора, донепезила, такрина, противоастматического средства, бета-агониста, стероида, вводимого путем ингаляции, ингибитора лейкотриена, метилксантина, кромолина, эпинефрина или его аналога, дорназы-альфа, цитокина и антагониста цитокина.
Настоящее изобретение также включает по меньшей мере один препарат, содержащий по меньшей мере одно антитело и по меньшей мере один препарат для получения композиции, где указанный препарат выбран из стерильной воды, стерильной забуференной воды или по меньшей мере одного консерванта, выбранного из группы, состоящей из фенола, м-крезола, п-крезола, о-крезола, хлоркрезола, бензилового спирта, алкилпарабена, хлорида бензалкония, хлорида бензэтония, дегидроацетата натрия и тимерозала или их смесей, необязательно, в водном разбавителе, где концентрация белка составляет примерно от 0,1 до 100 мг/мл, и где указанный препарат содержит по меньшей мере один агент, придающий изотоничность, или по меньшей мере один физиологически приемлемый буфер.
Настоящее изобретение также относится по меньшей мере к одному промышленному изделию, предназначенному для фармацевтического применения в медицине, где указанное изделие включает упаковочный материал и контейнер, содержащий раствор или лиофилизованную форму по меньшей мере одного антитела согласно изобретению, где указанный контейнер также представляет собой, но необязательно, стеклянный или пластиковый контейнер с крышкой для многократного применения, и где указанный контейнер также представляет собой, но необязательно, блистерную упаковку, в которой может быть сделан прокол и которая может быть использована для внутривенного введения, внутримышечного введения, введения в виде болюса, внутрибрюшинного введения, подкожного введения, местного введения, введения в дыхательные пути, введения путем ингаляции, интраназального введения, вагинального введения, ректального введения, трансбуккального введения, подъязычного введения, интраназального введения, подкожного или трансдермального введения; либо указанный контейнер представляет собой компонент устройства или системы для внутривенного введения, внутримышечного введения, введения в виде болюса, внутрибрюшинного введения, подкожного введения, введения в дыхательные пути, введения путем ингаляции, интраназального введения, вагинального введения, местного введения, ректального введения, трансбуккального введения, подъязычного введения, интраназального введения, подкожного или трансдермального введения; либо указанный контейнер представляет собой компонент устройства или системы в виде инжектора или инжектора типа писчего пера для внутривенного введения, внутримышечного введения, введения в виде болюса, внутрибрюшинного введения, подкожного введения, введения в дыхательные пути, введения путем ингаляции, местного введения, интраназального введения, вагинального введения, ректального введения, трансбуккального введения, подъязычного введения, интраназального введения, подкожного введения или трансдермального введения.
Настоящее изобретение также относится по меньшей мере к одному способу продуцирования по меньшей мере одного антитела согласно изобретению, где указанный способ включает получение клетки-хозяина, трансгенного животного, трансгенного растения или растительной клетки, способной экспрессировать выделяемые количества указанного человеческого антитела, и где, но необязательно, указанная клетка-хозяин представляет собой клеткую млекопитающего, клетку растения или дрожжевую клетку; указанным трансгенным животным является млекопитающее, а указанное трансгенное млекопитающее выбрано из коз, коров, овец, лошадей и приматов, не являющихся человеком.
Настоящее изобретение также относится по меньшей мере к одному способу лечения по меньшей мере одного 1Ь-12/23-опосредованного расстройства, где указанный способ включает по меньшей мере (а) введение эффективного количества композиции или фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере один белок, связывающийся с клеткой, тканью, органом или организмом животного или пациента, нуждающегося в такой модуляции, лечении или терапии, а также (Ь) введение до, во время и/или после введения, описанного выше в (а), по меньшей мере одного средства, выбранного из иммунномодулирующего терапевтического средства, антагониста ΤΝΡ, противоревматического средства, мышечного релаксанта, наркотического средства, нестероидного противовоспалительного средства (НСПВС), аналгетика, анестетика, седативного средства, местного анестетика, нейромышечного блокатора, противомикробного средства, средства против псориаза, кортикостероида, анаболического стероида, неврологического средства, микроэлементов, питательных веществ, тиреотропного средства, витамина, гормона кальцитонина, средства против диареи, средства против кашля, противорвотного средства, противоязвенного средства, слабительного, антикоагулянта, эритропоэтина, филграстима, сарграмостима, иммунизирующего средства, иммуноглобулина, иммунодепрессанта, гормона роста, лекарственного средства для гормон-заместительной терапии, модулятора рецептора экстрогена, мидриатического средства, средства против циклоплегии, алкилирующего агента, антиметаболита, ингибитора митоза, радиофармацевтического средства, антидепрессанта, средства против маниакально-депрессивных расстройств, антипсихотического средства, анксиолитика, гипнотического средства, симпатомиметика, стимулятора,
- 19 026110 донепезила, такрина, противоастматического средства, бета-агониста, стероида, вводимого путем ингаляции, ингибитора лейкотриена, метилксантина, кромолина, эпинефрина или его аналога, дорназыальфа, цитокина и антагониста цитокина.
1Ь-12р40 присутствует в белках 1Ь-12 и 1Ь-23 и существует в виде мономера 1Ь-12р40 и гомодимера 1Ь-12р80. В настоящем изобретении описано антитело, которое связывается с 1Ь-12, 1Ь-23, 1Ь-12р40, 1Ь12р80, и вероятно, связывается с любыми недавно обнаруженными белками, содержащими субъединицу 1Ь-12р40. Указанное антитело специфически связывается с 1Ь-12р40, но не с 1Ь-12р35 или 1Ь-23р19. Настоящее изобретение также относится к композициям и препаратам, содержащим такие антитела, к способам получения таких антител, к устройствам, содержащим указанные антитела, и к применению этих антител, включая терапевтическое применение.
В одном из вариантов изобретения указанное антитело обладает способностью нейтрализовать связывание 1Ь-12 с ΙΕ-12Κβ2, который, как предполагается, связывается с 1Ь-12 в области контакта р40/р35. В другом варианте изобретения указанное антитело обладает способностью ингибировать связывание 1Ь23 с 1Ь-23К, которое, как предполагается, опосредуется взаимодействиями в области контакта р19/р40. В другом варианте изобретения, указанное антитело обладает способностью ингибировать связывание 1Ь12 с ΙΕ-12Κβ2 и связывание 1Ь-23 с 1Ь-23К. При связывании с 1Ь-12р40 на участке, расположенном возле области контакта с р35 или р19, указанное антитело ингибирует связывание релевантных рецепторов с ГО-12 и/или ГО-23.
В настоящем изобретении описаны антитела, которые связываются с 1Ь-12р40/80, но не обладают способностью нейтрализовать связывание 1Ь-12р40 или 1Ь-12р80 с ΙΕ-12Κβ1. Регуляция систем 1Ь-12 или 1Ь-23 может быть осуществлена посредством субъединицы 1Ь-12р40/80 в присутствии антитела, поскольку эти белки свободно связываются с ΙΕ-12Κβ1. Преимущество такого способа действия заключается в том, что он позволяет природным регуляторам системы 1Ь-12 и 1Ь-23 (1Ь-12р40/р80) сохранять свою способность конкурировать за связывание наряду с антителом, которое также действует как антагонист 1Ь-12 и 1Ь-23. Следовательно, благодаря этому способу действия может быть получена система из двух антагонистов, которая придает антителу большую эффективность при его использовании в качестве терапевтического средства. Это также может улучшать профиль безопасности при использовании антител, которые не ингибируют биологическую функцию 1Ь-12р40/80. Недавно было показано, что 1Ь-12р40/80 играют различные роли, и кроме того, они служат в качестве антагонистов и регуляторов путей 1Ь-12/1Ь23. Указанное антитело не препятствует действию 1Ь-12р40/80 в качестве хемоаттрактантов для макрофагов и в качестве индуктора миграции ДК в ответ на стимуляцию патогеном. Это может приводить к улучшению профиля безопасности антитела при его введении в качестве терапевтического средства.
Все научные факты, патенты, патентные заявки и технические описания производителей во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки.
В настоящем описании, если это не оговорено особо, при употреблении слова содержать или других его грамматических форм, таких как содержит или содержащий, подразумевается, что данный объект включает указанный элемент или целое количество элементов, либо группу или целые количества элементов, но не исключает присутствия любого другого элемента или целого количества элементов, либо группу или целые количества элементов.
Совершенно очевидно, что настоящее изобретение не ограничивается конкретно описанными здесь компонентами препаратов, методами их получения, протоколами введения доз и т.п., которые могут варьироваться, если это не оговорено особо.
Следует отметить, что при употреблении артиклей а, ап и (Не с существительными в единственном числе подразумевается, что эти существительные могут присутствовать и во множественном числе, если это конкретно не следует из контекста описания. Так, например, существительное с артиклем а может означать один, а также два или более; существительное с артиклем ап может означать один, а также два или более; существительное с артиклем (Не может означать один, а также два или более, и т.п.
Используемый здесь термин полипептид означает любую полимерную цепь аминокислот.
Используемые здесь термины пептид и белок являются синонимами термина полипептид и также означают полимерную цепь аминокислот. Термин полипептид охватывает природные или искусственные белки, фрагменты белка и полипептидные аналоги последовательности белка. Полипептид может быть мономерным или полимерным.
Термин выделенный белок или выделенный полипептид представляет собой белок или полипептид, которые по своей природе или происхождению не ассоциируются с природными компонентами, с которыми они встречаются в природе; в основном, не содержат других белков, происходящих от того же вида; экспрессируются клетками различных видов или не встречаются в природе. Таким образом, полипептид, который был химически синтезирован или синтезирован в клеточной системе, отличающейся от клеток, от которых он обычно происходит, может быть отделен от компонентов, с которыми он ассоциируется в природе. Этот белок может быть также, в основном, отделен от всех его природных компонентов путем его выделения с применением методов очистки белков, хорошо известных специали- 20 026110 стам. Используемый здесь термин выделение означает способ удаления из химических молекул, таких как полипептид, в основном, всех его природных компонентов путем отделения, например, с применением методов очистки белков, хорошо известных специалистам.
Используемый здесь термин человеческий ГО-12 (сокращенно обозначаемый здесь как ЫЬ-12 или ГО-12) включает человеческий цитокин, который секретируется, главным образом, антигенпрезентирующими клетками, такими как моноциты, макрофаги и дендритные клетки. Этот термин включает гетеродимерный белок, содержащий субъединицу 35 кД (р35) и субъединицу 40 кД (р40), которые связаны друг с другом дисульфидным мостиком. Гетеродимерный белок называется белком р70. Термин человеческий ГО-12 включает рекомбинантный человеческий 1Ь-12 (гЫЬ-12), который может быть получен стандартными рекомбинантными методами экспрессии. 1Ь-12 принадлежит к семейству интерлейкинов, то есть, к самому новому члену этого семейства, обозначаемому 1Ь-35, который имеет общие свойства с субъединицей 1Ь-12р35 (№ейЪа1а е! а1. 2007 Еиг. Г 1ттипо1. 37 3021-9). Недавнее обнаружение 1Ь-35 указывает на то, что существует большее число форм 1Ь-12р40 и 1Ь-12р35, которые пока еще не открыты. Логично предположить, что антитела, описанные в настоящей заявке, будут связываться со всеми недавно обнаруженными белками, содержащими формы 1Ь-12р40.
Используемый здесь термин человеческий 1Ь-23 (сокращенно обозначаемый здесь как ЫЬ-23 или ГО-23) включает гетеродимерный человеческий цитокин, принадлежащий к семейству, состоящему из пяти таких гетеродимерных цитокинов, включая 1Ь-12 и 1Ь-27 (ТгшсЫеп е! а1. 2003 1ттипйу 19, 641-4). Этот термин включает гетеродимерный белок, содержащий субъединицы р19 и р40, которые связаны друг с другом дисульфидным мостиком. Термин человеческий 1Ь-23 включает рекомбинантный человеческий ГО-23 (гйГО-23), который может быть получен стандартными рекомбинантными методами экспрессии.
Используемый здесь термин ГО-12/23 в своем собирательном значении означает человеческие ГО12 и ГО-23.
Используемый здесь термин ГО-12р40 идентичен ГО-23р40, а также означает просто субъединицы р40 и р40, и включает субъединицу 40 кД человеческого цитокина ГО-12 (р40) и субъединицу 40 кД человеческого цитокина ГО-23.
Используемый здесь термин ГО-12р80, а также просто р80 означает 2 мономерных субъединицы по 40 кД человеческого цитокина ГО-12 (р40), связанных вместе дисульфидным мостиком и образующих димерный белок.
Используемый здесь термин ГО-12р35, а также просто р35 означает субъединицу в 35 кД человеческих цитокинов ГО-12 (р70) и ГО-35.
Используемый здесь термин ГО-23р19, а также просто р19 означает субъединицу в 19 кД человеческого цитокина ГО-23.
Комплекс ГО-12К состоит из двух субъединиц, называемых рецептором бета 1, обозначаемым здесь ΙΓ-12Κβ1, и рецептором ГО-12 бета 2, обозначаемым здесь ΙΡ-12Κβ2, и оба эти рецептора необходимы для высокоаффинного связывания с ГО-12 и передачи сигнала. ГО-12К был первоначально охарактеризован на РНА-активированных лимфобластах, и на ГО-2-активированных ΝΚ-клетках (С.'1й//опПе е! а1. 1992 Р 1ттипо1. 148, 3117-24; СБиа е! а1. 1994 Р 1ттипо1. 153, 128-36). Было показано, что ГО-12КР2 ответственней за передачу сигнала по пути Тук2ЯЛ1<2 и 8ТАТ4, который направляет клетки далее на путь Тп1 (высвобождение ΙΡΝ-γ) (Ртееку е! а1. 1996 Ргос. Νη11. Асай. 8ск И8А 93, 14002-7; VаίГо^й е! а1. 2004 1ттипо1. Кеу. 202, 139-56). Так как было показано, что ΙΓ-12Κβ1 участвует в передаче сигнала фосфорилирующими Тук2 и 8ТАТ3 (2ои е! а1. 1997 Р Вю1. СБет. 272, 6073-7).
Комплекс ГО-23К состоит из двух субъединиц:субъединицы ΙΓ-12Κβ1, которая присутствует с комплексе ГО-12К, и субъединицы рецептора ГО-23, обозначаемого здесь ГО-23К. Связывание ГО-23К с ГО-23 приводит к аутофосфорилированию ΊΛΚ2 и к фосфорилированию ГО-23К. Это позволяет определить локализацию и уровень фосфорилирования 8ТАТ3, а также 8ТАТ1, 8ТАТ4 и 8ТАТ5 (РагБат е! а1. 2002 Р Тштипо1. 168, 5699-708).
Используемый здесь термин биологическая активность означает все биологические свойства, присущие данному цитокину. Биологическими свойствами ГО-12 являются, но не ограничиваются ими, связывание ΙΓ-12Κβ1 и/или ΙΓ-12Κβ2; индуцирование секреции ΙΡΝ-γ; и регуляция баланса между антигенспецифическими Т-хелперными лимфоцитами типа 1 (Тн1) и типа 2 (Тн2). Биологическими свойствами ГО-23 являются, но не ограничиваются ими, связывание ΙΡ-12Κβ1 и/или ГО-23К, индуцирование продуцирования ΙΡΝ-γ, индуцирование продуцирования ГО-17, индуцирование продуцирования ГО-21, индуцирование продуцирования ГО-22, дифференцировка Тн17-клеток и активация антигенпрезентирующих функций дендритных клеток, и селективное индуцирование пролиферации Т-клеток памяти.
Термины специфическое связывание или специфически связывающийся, если они используются здесь в связи с взаимодействием антитела, белка или пептида со вторыми химическими молекулами, означают, что такое взаимодействие зависит от присутствия конкретной структуры (например, антигенной детерминанты или эпитопа) на химических молекулах; так, например, указанное антитело распознает специфическую белковую структуру, а не белки в целом, и связывается с такой структурой. Если ан- 21 026110 титело является специфичным к эпитопу А, то присутствие молекулы, содержащей эпитоп А (или свободный немеченный А) в реакционной смеси, содержащей меченный А и антитело, будет приводить к снижению количества меченного А, связанного с антителом.
Используемый здесь термин антитело, в своем широком смысле означает любую молекулу иммуноглобулина ^д), состоящую из четырех полипептидных цепей (Н), то есть, двух тяжелых цепей (Н) и двух легких цепей (Ь) или любых их функциональных фрагментов, мутантов, вариантов или производных, которые, по существу, сохраняют способность молекулы Ιβ связываться с эпитопом. Такие мутанты, варианты или производные антител известны специалистам. Неорганичивающие варианты таких молекул обсуждаются ниже.
В полноразмерном антителе, каждая тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи (сокращенно обозначаемой здесь НСУК или УН) и константной области тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи состоит из трех доменов, СН1, СН2 и СН3. Каждая легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи (сокращенно обозначемой здесь ЬСУК или УЬ) и константной области легкой цепи. Константная область легкой цепи состоит из одного домена СЬ. Области УН и УЬ могут быть также подразделены на гипервариабельные области, называемые гипервариабельными областями (комплементарность-определяющими областями (СОК)), между которыми находятся более консервативные области, которые называются каркасными областями (РК). Каждая УН и УЬ состоит из трех СОК и четырех РК, расположенных в следующем порядке, в направлении от аминоконца к карбоксиконцу:РК1, СОК1, РК2, СЭК2, РК3, СЭКТ, РК4. Молекулами иммуноглобулина могут быть молекулы любого типа (например, Ιβ& ΙβΕ, ΙβΜ, Ιβϋ, ΙβΑ и ΙβΥ), класса (например, ^С1, ^С2, ЦСЛ, ^С4, ΙβΑ1 и ΙβΑ2) или подкласса.
Используемые здесь термины антигенсвязывающий домен или антигенсвязывающая часть антитела означает один или более фрагментов антитела или белка, который сохраняет способность специфически связываться с антигеном (например, с ГЬ-12). Было показано, что антигенсвязывающая функция антитела может быть реализована под действием фрагментов полноразмерного антитела. Такие варианты антител могут быть также биспецифическими, и могут иметь двойную специфичность, либо они могут быть мультиспецифическими; причем, указанные варианты антител специфически связываются с двумя или более различными антигенами. Примерами связывающихся фрагментов, входящих в объем термина «антигенсвязывающая часть» антитела, являются:© РаЬ-фрагмент, одновалентный фрагмент, состоящий из доменов УЬ, УН, СЬ и СН1; (ίί) Р(аЬ')2-фрагмент, двухвалентный фрагмент, включающий два РаЬфрагмента, связанных дисульфидной мостиковой связью в шарнирной области; (ίίί) Рб-фрагмент, состоящий из доменов УН и СН1; (ίν) Ρν-фрагмент, состоящий из доменов УЬ и УН одной ветви антитела, (ν) бΑЬ-фрагмент (^агб е! а1. 1989 №!иге 341, 544-6, ХУиНег е! а1, публикация заявки РСТ \УО 90/05144 Α1, которая вводится в настоящее описание посредством ссылки), содержащий один вариабельный домен; и (νί) выделенная гипервариабельная область (СОК). Кроме того, хотя два домена Ρν-фрагмента, УЬ и УН, кодируются отдельными генами, однако, они могут быть присоединены друг к другу рекомбинантными методами посредством синтетического линкера, что позволяет получить одну белковую цепь, в которой области УЬ и УН спариваются с образованием одновалетных молекул (известных как одноцепочечный Ρν (8θΡν); (см., например, Вйб е! а1. 1988, δ^ι^ 242, 423-6; Ник!оп е! а1. 1988 Ргос. №И. Αсаб. δα. υδΑ 85, 5879-83). Такие одноцепочечные антитела также входят в объем термина антигенсвязывающая часть антитела. В объем этого термина также входят и другие формы одноцепочечных антител, такие как диантитела. Диантитела представляют собой двухвалентные биспецифические антитела, в которых домены УН и УЬ экспрессируются на одной полипептидной цепи, но посредством линкера, который является слишком коротким для спаривания двух доменов на одной и той же цепи, а поэтому эти домены вынуждены спариваться с комплементарными доменами другой цепи и образуют два антигенсвязывающих сайта (см., например, НоШдег, Р., е! а1., 1993, Ргос. Νηΐΐ. Αсаб. δ^. υδΑ 90:6444-6448; Ро1_)ак, К. ί., е! а1., 1994, δΙπιαιιΐΌ 2:1121-1123). Такие антигенсвязывающие части антитела известны специалистам (Коп!егтапп апб ЭиЬе1 ебк., Αη!^Ьοбу Епдшеегшд 2001 δр^^ηде^-Уе^1ад. Νον Υο^к. 790 рр., ΙδΒΝ 3540-41354-5).
Используемый здесь термин конструкция антитела означает полипептид, содержащий одну или более антигенсвязывающих частей согласно изобретению, связанных с полипептидным линкером или константным доменом иммуноглобулина. Линкерные полипептиды содержат два или более аминокислотных остатка, связанных пептидными связями, и служат для связывания одной или более антигенсвязывающих частей. Такие линкерные полипептиды хорошо известны специалистам (см., например, Но1Пдег е! а1. 1993 Ргос. №И. Αсаб. δ^. υδΑ 90, 6444-8).
Термин константный домен иммуноглобулина означает константный домен тяжелой или легкой цепи. Аминокислотные последовательности константного домена тяжелой цепи и легкой цепи человеческого ЦС известны специалистам и их примеры приводятся ниже.
Константный домен тяжелой цепи человеческого Ιβ© (или их производные, имеющиеся в NСΒI, рег. №: Р01857):
- 22 026110 пЗТКМРОУГРЬАРЗЗКЗТЗееТААЬеСЬУКОУРРЕРУТУЗИМЗеАЬТЗбУНТРРАУЬОЗЗСЬУ
ЗЬЗЗУУТУРЗЗЗЬСТОТУРСЫУЫНКРЗЫТКУОККУЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕЬЬСбРЗУЕЬЕ
ΡΡΚΡΚϋΤΕΜΙ5ΚΤΡΕνΤ€νννΡν5ΗΕΟΡΕνΚΓΝΝΥνϋ6νΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ<2ΥΝ5ΤΥΚνν5νΐ,
Т7ЬН0РИЬЫСКЕУКСК75ЫКАЬРАР1ЕКТ15КАКС0РКЕР07УТЬРР5К1ЖЬТКЫ0У8ЬТС1Л/
ΚΟΕΥΡδϋΙ АУЕ^ЗЫССРЕШУКТТРРУЬОЗОСЗЕЕЬУЗКЬТУБКЗКЖХХЖУЕЗСЗУМНЕАЬ ΗΝΗΥΤςΚ3Ε3Σ3ΡΟΚ
Константный домен человеческой легкой цепи каппа (имеющийся в базе данных Νί'.'ΒΙ. рег. Νο:Ρ01834):
ТУААР5УГ1ГРР5БЕ<2ЬК5СТА5УУСЬЬННГУРКЕАКУ<2НКУБНАЬ<25СМ5<2Е5УТЕ<2О5КО5
ТУЗЬЗЗТЬТЬЗКАРУЕКНКУУАСЕУТНОСЬЗЗРУТКЗгаКСЕС
Константный домен человеческой легкой цепи лямбда (имеющийся в ΝΟΒΙ, рег. №:Ρ01842): СРКААРЗУТЬГРРЗЗЕЕЬОАЫКАТЬУСЫЗОГУРСАУТУАИКАОЗЗРУКАСУЕТТТРЗКОЗЫЫ
ΚΥΑΑ3ЗУЬЗЬТРЕСИКЗНЕЗУЗСОУТНЕбЗТУЕКТУАРТЕСЗ
Кроме того, антитело или его антигенсвязывающая часть могут быть частью более крупной молекулой иммуноадгезина, образованной посредством ковалентного или нековалентного связывания антитела или его части с одним или более другими белками или пептидами. Примерами таких молекул иммуноадгезина является коровая область стрептавидина, которая используется для создания тетрамерной молекулы 8сРу (Карпуапоу е! а1. 1995 Нит. ЛпбЬоШсз НуЬпйота8 6, 93-101), а также цистеиновый остаток, маркерный пептид и С-концевая полигистидиновая метка, которые используются для создания двухвалентного и биотинилированного 8сРу (Карпуапоу е! а1. 1994 Мо1. 1ттипо1. 31, 1047-58). Части антитела, такие как РаЬ- и Р(аЬ')2-фрагменты, могут быть получены из целых антител стандартными методами, такими как гидролиз целых антител папаином или пепсином, соответственно. Кроме того, молекулы антител, частей антител и иммуноадгезина могут быть получены стандартными методами рекомбинантных ДНК, описанными в настоящей заявке.
Используемый здесь термин выделенное антитело означает антитело, которое, в основном, не содержит других антител, обладающих другой антигенной специфичностью (например, выделенное антитело, которое специфически связывается с ЫЬ-12, в основном, не содержит антител, которые специфически связываются с антигенами, не являющимися ЫЬ-12). Однако выделенное антитело, специфически связывающееся с ЫЬ-12, может перекрестно реагировать и с другими антигенами, такими как молекулы 1Ь-12, происходящие от других видов. Кроме того, выделенное антитело может, в основном, не содержать другой клеточный материал и/или другие химические соединения.
Используемый здесь термин человеческое антитело включает антитела, имеющие вариабельные и константные области, происходящие от последовательностей иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. Человеческие антитела согласно изобретению могут включать аминокислотные остатки, не принадлежащие последовательностям иммуноглобулина человеческой зародышевой линии (например, в них могут быть введены мутации посредством неспецифического или сайт-специфического мутагенеза ίη νίίΐΌ или посредством соматической мутации ίη У1уо), например, такие остатки могут присутствовать в СОК, а в частности, в СОК3. Однако, используемый здесь термин человеческое антитело не включает антитела, в которых последовательности СОК, происходящие от зародышевой линии млекопитающих других видов, таких как мышь, были присоединены к человеческим каркасным последовательностям.
Используемый здесь термин рекомбинантное человеческое антитело включает все человеческие антитела, которые были получены, экспрессированы, сконструированы или выделены рекомбинантными методами, например антитела, экспрессируемые с использованием рекомбинантного экспрессионного вектора, трансфицированного в клетку-хозяина; антитела, выделенные из библиотеки рекомбинантных комбинаторных человеческих антител (НоодепЬоот 1997, ТгепЙ8 Вю1есЬпо1 15, 62-70; Л//а/у е! а1. 2002 СЬп ВюсЬет 35, 425-45; Сауйопйо е! а1. 2000 Вю1есЬтдие8 29, 128-32, 134-6, 138 ра881т НоодепЬоот е! а1. 2000 1ттипо1 Тойау 21, 371-8), антитела, выделенные у животных (например, мышей), которые являются трансгенными по отношению к генам человеческого иммуноглобулина (см., например, Тау1ог е! а1. 1992 ШсЫс Ас1Й8 Ке8. 20, 6287-95, ЬЬЙе е! а1. 2000 1ттипо1. Тойау 21:364-70); или антитела, которые были получены, экспрессированы, сконструированы или выделены другими методами, включающими сплайсинг последовательностей генов человеческого иммуноглобулина с образованием других последовательностей ДНК. Такие рекомбинантные человеческие антитела имеют вариабельные и константные области, происходящие от последовательностей иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. Однако в некоторых вариантах изобретения, такие рекомбинантные человеческие антитела подвергают мутагенезу ш \Ьго (или, если используется животное, которое является трансгенным по отношению к последовательностя человеческого 1д, то его подвергают соматическому мутагенезу ш У1уо), и таким образом, аминокислотные последовательности областей УН и УЬ рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, хотя и происходят от последовательностей УН и УЬ человеческой зародышевой линии и являются родственными этим последовательностям, однако в природе они могут
- 23 026110 не присутствовать в репертуаре человеческих антител зародышевой линии ίη νίνο.
Термин химерное антитело означает антитела, которые содержат последовательности вариабельной области тяжелой и легкой цепи, происходящие от одного вида, и последовательности константной области, происходящие от других видов, такие как антитела, имеющие мышиные вариабельные области тяжелой и легкой цепи, присоединенные к человеческим константным областям.
Термин СОК-привитое антитело означает антитела, содержащие последовательности вариабельной области тяжелой и легкой цепи, которые происходят от одного вида, но в которых последовательности одной или более СЭК-областей УН и/или УЬ заменены последовательностями СОК других видов, например, такие антитела имеют мышиные вариабельные области тяжелой и легкой цепи, в которых одна или более мышиных СОК (например, СЭК3) были заменены человеческими последовательностями СОК.
Термин гуманизованное антитело означает антитела, которые содержат последовательности вариабельной области тяжелой и легкой цепи, происходящие от млекопитающих, не являющихся человеком (например, мыши), но в которых по меньшей мере часть последовательности УН и/или УЬ была модифицирована для сообщения ей большего сходства с последовательностью человеческого антитела, то есть, большего сходства с вариабельными последовательностями человеческой зародышевой линии. Гуманизованным антителом одного из типов является СОК-привитое антитело, в котором человеческие последовательности СОК были введены в не-человеческие последовательности УН и УЬ для замены соответствующих не-человеческих последовательностей СОК.
Используемые здесь термины нумерация по Кэбату, определение по Кэбату и мечение по Кэбату являются синонимами. Эти термины, известные специалистам, означают систему нумерации аминокислотных остатков, которые являются более вариабельными (то есть, гипервариабельными), чем другие аминокислотные остатки в вариабельных областях тяжелой и легкой цепи антитела или его антигенсвязывающей части (КаЬа! е! а1. 1971, Апп. Асай, Зек 190:382-391 и КаЬа1, Е.А., е! а1. (1991) 8ециепсек οί Рго1ешк οί Пптипо^щса! [Шегек!. ΡίΠΙι Еййюп, и.8. ЭераПтет οί Неайй апй Нитап ЗеМсек, №Н РиЬйса1юп № 91-3242). Для вариабельной области тяжелой цепи, гипервариабельная область простирается в пределах от аминокислотного положения 31 до аминокислотного положения 35 для СОК1; от аминокислотного положения 50 до аминокислотного положения 65 для СОК2; и от аминокислотного положения 95 до аминокислотного положения 102 для СОК3. Для вариабельной области легкой цепи, гипервариабельная область простирается в пределах от аминокислотного положения 24 до аминокислотного положения 34 для СОК1; от аминокислотного положения 50 до аминокислотного положения 56 для СОК2; и от аминокислотного положения 89 до аминокислотного положения 97 для СОК3.
Используемые здесь термины акцептор и акцепторное антитело означает последовательность антитела, включающую аминокислотную последовательность, или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98 или 100% идентична аминокислотной последовательности одной или более каркасных областей. В некоторых вариантах изобретения термин акцептор означает аминокислотную последовательность антитела, включающую константную(ые) область(и), или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую константную(ые) область(и). В другом варианте изобретения, термин акцептор означает аминокислотную последовательность антитела, включающую одну или более каркасных областей и константных областей, или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую указанные области. В конкретном варианте изобретения термин акцептор означает последовательность человеческого антитела, включающую аминокислотную последовательность, или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98 или 100% идентична аминокислотной последовательности одной или более каркасных областей. В соответствии с этим вариантом акцептор может содержать по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, или по меньшей мере 10 аминокислотных остатков, которые не присутствуют в одном или более конкретных положениях человеческого антитела. Акцепторная каркасная область и/или акцепторная(ые) константная(ые) область(и) могут, например, происходить или могут быть получены от гена антитела зародышевой линии, гена зрелого антитела, функционального антитела (например, антител, хорошо известных специалистам, антител, находящихся на стадии разработки, или коммерчески доступных антител). Используемый здесь термин СЭР означает гипервариабельную область в вариабельных последовательностях антитела. В каждой из вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи присутствуют три СЭИ, которые для каждой вариабельной области обозначаются СОК1, СОК2 и СОК3. Используемый здесь термин набор СОК означает группу из трех СОК, которые присутствуют в одной вариабельной области, обладающей способностью связываться с антигеном. Точные границы этих СОК были определены различным образом в зависимости от различных систем. Система, описанная Кэбатом (КаЬа! е! а1., Зециепсек οί РгоЮтк οί Iттиηο1οд^са1 !п1егек1 (№Цюпа1 Нткинцек οί Неайй, ВеГОекйа, Мй. (1987) и (1991)), имеет не только однозначную систему нумерации остатков, применяемую к любой вариабельной области антитела, но также и точные границы остатков, определяющие три СОК. Эти СОК
- 24 026110 могут называться СЭР по Кэбату. Чотия и сотрудники (Οιοίΐιία & Ьекк, ί. Μοί. ΒίοΙ. 196:901-917 (1987) и Οιοίΐιία е1 ак, №-11иге 342:877-883 (1989)) обнаружили, что некоторые субположения в СОК по Кэбату приобретают почти иденичную конформацию пептидного остова, несмотря на то, что они имеют значительные различия на уровне аминокислотной последовательности. Такие подобласти были обозначены Ь1, Ь2 и Ь3 или Н1, Н2 и Н3, где Ь и Н означают области легкой и тяжелой цепи, соответственно. Такие области могут называться СОК по Чотии, которые имеют границы, перекрывающиеся с СОК по Кэбату. Другие определения границ СОК могут, но не строго, соответствовать одной из описанных здесь систем, но тем не менее, эти границы перекрываются с СОК по Кэбату, хотя эти области могут быть короче или длиннее, чем это было предсказано или получено из экспериментальных данных, которые указывают на то, что конкретные остатки или группы остатков или даже полноразмерные СОК не оказывают значительного влияния на связывание с антигеном. В описанных здесь способах могут использоваться СОК, определенные в соответствии с любой из этих систем, хотя в некоторых вариантах используются СОК, определенные по Кэбату или Чотии.
Используемый здесь термин канонический остаток означает остаток в СИК или в каркасной области, которые определяют конкретную каноническую структуру СИК, определенную в публикации Οιοίΐιίη е1 а1. (С^Ыа апб Ьекк 1987, ί. Μοί. Βίοί. 196, 901-17; С^Ша е1 а1. 1992 ί. Μοί. Βίοί. 22, 799-817), которая вводится в настоящее описание посредством ссылки., как описано в публикации СЬс1Ыа и др., основные положения СИК многих антител имеют почти одинаковые конфиг. ции пептидных остовов, несмотря на значительное их разнообразие на уровне аминокислотных последовательностей. Каждая каноническая структура характеризуется, главным образом, набором торсионных углов пептидного остова для сегмента из следующих друг за другом аминокислотных остатков, образующих петлю.
Используемые здесь термины донор и донорное антитело означают антитело, обеспечивающее присутствие одной или более СИК. В предпочтительном варианте изобретения донорным антителом является антитело определенного вида, отличающееся от антитела, от которого были получены или от которого происходят каркасные области. При описании гуманизованного антитела термин донорное антитело означает не-человеческое антитело, обеспечивающее одну или более СИК. Используемые здесь термины каркасная область или каркасная последовательность означают остальные последовательности вариабельной области минус СИК. Поскольку точное определение последовательности СИК может быть дано, исходя из других систем, то термин каркасная последовательность может иметь, соответственно, другую интерпретацию. Шесть СИК (СИК-Ы, -Ь2 и -Ь3 легкой цепи и СИК-Н1, -Н2 и -Н3 тяжелой цепи) также разделяют каркасные области в легкой цепи и в тяжелой цепи на четыре подобласти (РК1, РК2, РК3 и РК4) на каждой цепи, где СИК1 расположена между РК1 и РК2, СИК2 расположена между РК2 и РК3, и СИК3 расположена между РК3 и РК4. Не прибегая к точному определению таких подобластей как РК1, РК2, РК3 или РК4, каркасную область можно определить иначе, а именно, она представляет собой объединенные РК в вариабельной области в одной природной цепи иммуноглобулина. Используемый здесь термин область РК означает одну из четырех подобластей, а термин области РК означает две или более из четырех подобластей, составляющих каркасную область.
Используемые здесь термины «ген антитела зародышевой линии» или «генный фрагмент» означают последовательность иммуноглобулина, кодируемую нелимфоидными клетками, которые не подвергались процессу созревания, приводящему к генетической реаранжировке и мутации, и которые экспрессировали конкретный иммуноглобулин. (См., например, δΙκψίΐΌ е1 ак, СА Кеу. Iттиηο1. 22:183-200; МагсЬаЦтк е1 ак, Α6ν. Ехр. Меб. Βίοί. 484:13-30). Одно из преимуществ различных вариантов согласно изобретению было выявлено исходя из того факта, что гены антитела зародышевой линии с большей вероятностью, чем гены зрелого антитела, будут сохранять основные структуры аминокислотной последовательности, характерные для индивидуумов данного вида, а следовательно, менее вероятно, что они будут распознаваться как последовательности, происходящие из чужеродного источника при их терапевтическом применении в данных видах.
Используемый здесь термин ключевые остатки означает некоторые остатки в вариабельной области, которые оказывают большее влияние на специфичность и/или аффинность связывания антитела, а в частности, гуманизованного антитела. Ключевыми остатками являются, но не ограничиваются ими, один или более нижеследующих остатков: остаток, который является смежным с СИК, остаток потенциального сайта гликозилирования (таким сайтом может быть сайт Ν- или О-гликозилирования), редкий остаток, остаток, способный взаимодействовать с антигеном, остаток, способный взаимодействовать с СИК, канонический остаток, контактирующий остаток, находящийся между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, остаток в зоне Верньера и остаток в области, которая перекрывается с областью, расположенной между СИК1 домена УН, определенной по Чотии, и первой каркасной областью тяжелой цепи, определенной по Кэбату.
Используемый здесь термин гуманизованное антитело означает антитело или его вариант, производное, аналог или фрагмент, которые иммуноспецифически связываются с представляющим интерес антигеном и содержат каркасную область (РК), имеющую, в основном, аминокислотную последовательность человеческого антитела и гипервариабельную область (СИК), имеющую, в основном, аминокислотную последовательность нечеловеческого антитела. Используемый здесь термин в основном, отно- 25 026110 сящийся к СОК, означает, что СОК имеет аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична аминокислотной последовательности СОК нечеловеческого антитела. Гуманизованное антитело включает, в основном, все или по меньшей мере один, а обычно два вариабельных домена (РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')2, РаЬС, Ρν), в которых все или, в основном, все области СОК соответствуют не-человеческому иммуноглобулину (то есть, донорному антителу), а все или, в основном, все каркасные области представляют собой области, имеющие консенсусную последовательность человеческого иммуноглобулина.
Предпочтительно, гуманизованное антитело также содержит по меньшей мере часть константной области иммуноглобулина (Рс), а обычно человеческого иммуноглобулина. В некоторых вариантах изобретения, гуманизованное антитело содержит легкую цепь, а также по меньшей мере вариабельный домен тяжелой цепи. Такое антитело также может включать области Сн1, шарнирную область, и области Сн2, Сн3, и Сн4 тяжелой цепи. В некоторых вариантах изобретения гуманизованное антитело также содержит гуманизованную легкую цепь. В некоторых вариантах изобретения гуманизованное антитело также содержит гуманизованную тяжелую цепь. В конкретных вариантах изобретения, гуманизованное антитело содержит только гуманизованный вариабельный домен легкой цепи и/или гуманизованную тяжелую цепь.
Гуманизованное антитело может быть выбрано из любого класса иммуноглобулинов, включая ЦМ, Ι§0, Ι§Ό, и !д.Е, и любого изотипа, включая, но не ограничиваясь ими, !дС1, Ι§02, !дС3 и ΙβΟ4. Гуманизованное антитело может включать последовательности более, чем одного класса или изотипа, а домены константной области могут быть выбраны для оптимизации нужных эффекторных функций с применением хорошо известных методов.
Каркасные области и области СОК гуманизованного антитела необязательно должны точно соответствовать родительским последовательностям, например, СОК или консенсусная каркасная область донорного антитела могут быть подвергнуты мутагенезу путем замены, инсерции и/или делеции по меньшей мере одного аминокислотного остатка так, чтобы остаток СОК или каркасной области в этом сайте не соответствовали остаткам донорного антитела или консенсусной каркасной области. Однако, в предпочтительном варианте изобретения, таких мутаций не должно быть слишком много. Обычно, остатки гуманизованного антитела по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, а наиболее предпочтительно по меньшей мере на 95% соответствуют остаткам родительских последовательностей РК и СОК. Используемый здесь термин консенсусная каркасная область означает каркасную область в консенсусной последовательности иммуноглобулина. Используемый здесь термин консенсусная последовательность иммуноглобулина означает последовательность, образованную аминокислотами (или нуклеотидами), наиболее часто встречающимися в семействе родственных последовательностей иммуноглобулина (см. например, ХУтпакег, Ргот Оепек !о С1опек, УепадкдекеНксЬай, ХУетНепп, Сегтапу 1987). В семействе иммуноглобулинов каждое положение в консенсусной последовательности занято аминокислотой, наиболее часто встречающейся в этом положении данного семейства. Если две аминокислоты встречаются с одинаковой частотой, то в консенсусную последовательность может быть включена любая из этих аминокислот. Используемый здесь термин зона Верньера означает подпоследовательность каркасных остатков, которая может корректировать структуру СОК и точно регулировать сборку антигена, как описано в публикации Роо!е е! а1. 1992 I Мо1. Вю1. 224, 487-99. Остатки зоны Верньера образуют слой, лежащий в основе СОК и могут влиять на структуру СОК и аффинность антитела.
Используемый здесь термин нейтрализация относится к предотвращению биологической активности цитокина при его специфическом связывании с цитокином. Предпочтительным нейтрализующим антителом является нейтрализующее антитело, связывание которого с Х-12 и/или Х-23 приводит к ингибированию биологической активности Х-12 и/или Х-23. Предпочтительно нейтрализующее антитело связывается с Х-12 и/или Х-23 и снижает биологическую активность Х-12 и/или Х-23 по меньшей мере примерно на 50, 60, 80, 85% или более. Используемый здесь термин ингибирование означает снижение биологической активности цитокина при специфическом связывании антитела с цитокином. Ингибирование биологической активности Х-12 и/или Х-23 нейтрализующим антителом может быть оценено путем определения одного или более показателей биологической активности Х-12 и/или Х-23, хорошо известных специалистам. Так, например, может быть оценено ингибирование пролиферации бластов в присутствии человеческого фитогемаглютинина в ш уйго анализе на Х-12 РнА или ингибирование связывания с рецептором в анализе на связывание с человеческим рецептором Х-12 (см. примеры).
Термин активность включает активности, такие как специфичность/аффинность связывания антитела с антигеном, например анти-Х-Х антитела, которое связывается с антигеном Х-12; и/или нейтрализующая активность антитела, например, анти-ГЕ-12 антитела, которое при его связывании с Х-12 ингибирует биологическую активность ЫЬ-12, например ингибирует пролиферацию РНА-бластов или ингибирует связывание с рецептором в анализе на связывание с человеческим рецептором Х-12 или в РНА-анализе на Х-12 ш уйго.
Термин эпитоп включает любую полипептидную детерминанту, способную специфически связы- 26 026110 ваться с иммуноглобулином или Т-клеточным рецептором. В некоторых вариантах изобретения, детерминанты или эпитопы включают химически активные поверхностные группы молекул, таких как аминокислоты, сахарные боковые цепи, фосфорил или сульфонил, а в некоторых вариантах изобретения, они могут обладать специфическими трехмерными структурными свойствами и/или могут иметь конкретный заряд. Эпитоп представляет собой область антигена, связывающуюся с антителом. В некоторых вариантах изобретения считается, что антитело специфически связывается с антигеном, если оно преимущественно распознает антиген-мишень в комплексной смеси белков и/или макромолекул.
Настоящее изобретение также относится к антителу, которое ингибирует активность 1Ь-12/23 в антигенпрезентирующих клетках (АПК), таких как, но не ограничивающихся ими, макрофаги, микроглиальные клетки, мезангиальные фагоциты, синовиальные клетки А, предшественники стволовых клеток, клетки Лангерганса, клетки Купфера, дендритные клетки, В-клетки и т.п. Такие АПК могут присутствовать в различных тканях, например, таких как, но не ограничивающихся ими, ткани кожи, эпидермиса, печени, селезенки, головного мозга, спинного мозга, тимуса, костного мозга, суставной синовиальной жидкости, почек, крови и т.п. Такие АПК могут также присутствовать только с внешней стороны или с внутренней стороны гематоэнцефалического барьера.
Настоящее изобретение относится к выделенным, рекомбинантным и/или синтетическим антителам, к их специфическим частям или вариантам, а также к композициям и кодирующим молекулам нуклеиновой кислоты, содержащим по меньшей мере один полинуклеотид, кодирующий по меньшей мере одно антитело. Такие антитела, их специфические части или варианты согласно изобретению включают специфические полноразмерные последовательности антител, их домены, фрагменты и специфические варианты, и настоящее изобретение также относится к способам получения и применения указанных нуклеиновых кислот и антител, а также их специфических частей или вариантов, включая терапевтические композиции, способы и устройства.
Антитела, которые могут быть использованы в настоящем изобретении, характеризуются, но необязательно, своим терапевтическим действием на пациентов в течение продолжительных периодов времени, которое заключается в хорошем или превосходном ослаблении симптомов и низкой токсичности. Терапевтические эффекты могут быть достигнуты за счет низкой иммуногенности и/или высокой аффинности, а также за счет других подходящих свойств. Термин низкая иммуногенность определен здесь как увеличение значимых НАНА-, НАСА- или НАМА-ответов у менее чем примерно 75%, или предпочтительно у менее чем примерно 50% пациентов, подвергаемых лечению, и/или повышение низких титров у пациента, подвергаемого лечению (менее, чем примерно на 300, а предпочтительно менее чем примерно на 100, как было измерено с помощью иммуноферментного анализа с двумя антигенами; ЕШой е! а1. 1994 Ьапсе!, 344:1125-7).
Выделенные нуклеиновые кислоты согласно изобретению могут быть использованы для продуцирования по меньшей мере одного антитела, его фрагмента или специфического варианта, которые могут быть использованы в клетках, тканях, органах или в организме животного (включая млекопитающих и человека) для модуляции, устранения, облегчения, предупреждения по меньшей мере одного состояния, ассоциированного с 1Ь-12 и/или 1Ь-23, или ослабления его симптомов.
Такой способ может включать введение эффективного количества композиции или фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно антитело или его специфическую часть или вариант, в клетку, ткань, орган, организм животного или пациента, нуждающегося в модуляции, устранении, облегчении, предупреждении или ослаблении симптомов и побочных эффектов данного состояния или механизмов его возникновения. Эффективное количество может представлять собой количество примерно от 0,001 до 500 мг/кг на одно или множество введений или количество, необходимое для достижения концентрации в сыворотке 0,01-5000 мкг/мл сыворотки на одно или более введений, или любое эффективное количество, входящее в интервал значений эффективных количеств, который был вычислен и определен известными методами, описанными в настоящей заявке или в специальной литературе.
Антитела, которые являются специфичными к субъединице 1Ь-12р40, могут вырабатываться против соответствующего иммуногенного антигена, такого как выделенный белок 1Ь-12р40, 1Ь-12 или 1Ь-23 или его часть (включая синтетические молекулы, такие как синтетические пептиды). Получение иммуногенных антигенов и продуцирование моноклональных антител может быть осуществлено любым подходящим методом. В литературе был описан ряд методов (см., например, публикации КоЫег е! а1. 1975 №Циге, 256:495-7 и КоЫег е! а1. 1976 Еиг. ί. 1ттипо1. 6:511-9; Сайге е! а1. 1977 №йиге 266, 550-2; Корго\У51й е! а1., патент США № 4172124; Наг1о\г Е. апй Ό. Ьапе, 1988, Икшд АпйЬоЙ1ек:А ЬаЬогаЮгу Мапиа1, Со1й 8ргшд НагЬог ЬаЬога!огу:Со1й 8ргшд НагЬог, Ν.Υ.; СиггеЫ Рго!осо1к 1п Мо1еси1аг Вю1оду, νθ1. 2 (е.д., 8ирр1етеп! 27, 8иттег'94), АикиЬе1 Р. М. е! а1, Ейк., 1оЬп \УПеу & 8опк:№\у Уогк, Ν.Υ., Сйар!ег 11, (1991-2003)), которые во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки. Обычно гибридому получают путем слияния подходящей иммортализованной клеточной линии (например, миеломной клеточной линии, такой как, но не ограничивающейся ими, 8р2/0, 8р2/0-АС14, Ν8Ο, Ν81, Ν82, АЕ-Ι, Ь.5, >243, Р3Х63Ад8.653, 8р2 8А3, 8р2 МА1, 8р2 881, 8р2 8А5, И937, МЬА 144, АСТ IV, МОЬТ4, ЭА-1, ШККАТ, \ЕН1, К-562, СО8, КАЛ, МН 3Т3, НЬ-60, МЬА 144, ХАМАт',® ЫЕИКО 2А или т.п., или гетеромиелом, их продуктов слияния, или любых клеток, или происходящих от них слитых
- 27 026110 клеток, или любой другой подходящей клеточной линии, известной специалистам, см., например, сайты №№№.а!сс.огд, ьхАхлуЛГеЮсксот., и т.п., каждый из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки) с антитело-продуцирующими клетками, такими как, но не ограничивающимися ими, выделенные или клонированные клетки селезенки или любые другие клетки, экспрессирующие последовательности константной области, вариабельной области, каркасной области или СОК тяжелой или легкой цепи в виде либо эндогенной, либо гетерологичной нуклеиновой кислоты, рекомбинантной или эндогенной, а именно нуклеиновой кислоты вирусов, бактерий, водорослей, прокариотов, амфибий, насекомых, рептилий, рыб, млекопитающих, грызунов, лошадей, овец, коз, баранов, приматов, эукариотов; геномной ДНК, кДНК, рДНК, митохондриальной ДНК или РНК, ДНК или РНК хлоропластов, человеческой РНК, мРНК, тРНК, одноцепочечной, двухцепочечной или трехцепочечной РНК, гибридизованной РНК, и т.п. или любых их комбинаций. См, например, руководства АикиЬе1 выше, и СоШдап, 1ттипо1оду, выше, главу 2, каждое из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Антитело-продуцирующие клетки могут быть получены из периферической крови или, предпочтительно, селезенки или лимфоузлов человека или других подходящих животных, иммунизованных представляющим интерес антигеном. Для экспрессии гетерологичной или эндогенной нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело, его специфический фрагмент или вариант согласно изобретению, могут быть также использованы любые другие подходящие клетки-хозяева. Слитые клетки (гибридомы) или рекомбинантные клетки могут быть выделены в селективных условиях культивирования или любыми другими подходящими известными методами, и могут быть клонированы путем лимитирующего разведения или клеточного сортинга, или другими известными методами. Клетки, продуцирующие антитела с нужной специфичностью, могут быть отобраны с помощью подходящего анализа (например, ЕЬ18А).
Могут быть применены и другие подходящие методы продуцирования или выделения антител с нужной специфичностью, включая, но не ограничиваясь ими, методы отбора рекомбинантного антитела из пептидной или белковой библиотеки (например, такой как, но не ограничивающейся ими, бактериофаговая, рибосомная и олигонуклеотидная библиотека, библиотека РНК, библиотека кДНК или т.п., библиотека представления, например, поставляемые СатЬпбде АпбЬобу ТесЬио1од1ек, СатЬпбдекЫге, ИК; МогрЕо8ук, Магбпкге1б/Р1аиедд, ΌΕ; Вюуабоп, АЬегбееп, 8со!1апб, ИК; Вю1пуеп!, Ьипб, 8\уебеп; Оуах Согр., Еп/оп, Айутах/Вюкбе; Хота, Вегке1еу, СаНГ.; 1хкук, см., например, ЕР 368684, РСТ/ОВ91/01134; РСТ/ОВ92/01755; РСТ/0В92/002240; РСТ/0В92/00883; РСТ/0В93/00605; заявку на патент США рег. № 08/350260 (12 мая 1994 г.); РСТ/ОВ 94/01422; РСТ/ОВ94/02662; РСТ/ОВ 97/01835; (САТ/МКС); АО 90/14443; АО 90/14424; АО 90/14430; РСТ/и8594/1234; АО 92/18619; АО 96/07754; (8спррк); АО 96/13583, АО 97/08320 (МогрНо8ук); АО 95/16027 (Вю1пуеп!); АО 88/06630; АО 90/3809 (1Аа.\); патент США № 4704692 (Еп/оп); РСТ/и8 91/02989 (АГГутах); АО 89/06283; ЕР 371998; ЕР 550400; (Хота); ЕР 229046; РСТ/и891/07149 (1хкук); или стохастически продуцированные пептиды или белки, патенты США №№ 5723323, 5763192, 5814476, 5817483, 5824514, 5976862, АО 86/05803, ЕР 590689 (1хкук, настоящее название АррНеб Мо1еси1аг Еуо1и!юп (АМЕ), которые во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки), или методы, основанные на иммунизации трансгенных животных (например, мышей 8СГО, см., публикации Nдиуеη е! а1. 1997 МьсгоЬюЕ 1ттипо1. 41 901-7; 8апбНи е! а1. 1996 СгН. Кеу. ВюЮсНпоЕ 16, 95-118; каждая из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки, а также родственные патенты и заявки), которые обладают способностью продуцировать определенный репертуар человеческих антител, известных специалистам и/или описанных в настоящей заявке. Такими методами являются, но не ограничиваются ими, метод рибосомного представления (Напек е! а1. 1997 Ргос. Νηΐ1. Асаб. 8сг И8А 94, 4937-42; Напек е! а1. 1998 Ргос. Νηΐ1. Асаб. 8сг И8А 95 14130-5); технологии продуцирования антител одной клеткой (например, метод отбора лимфоцитотоксических антител (8ЬАМ) патент США № 5627052, Аеп е! а1. 1987 Еиг. I. 1ттипо1. 17, 887-92; ВаЬсоок е! а1. 1996 Ргос. Νηΐ1. Асаб. 8сЕ И8А 93, 7843-8); метод гелевых микрокапелек и проточной цитометрии (Ро^еН е! а1. 1990 Вю!есНпо1оду (ΝΥ) 8, 333-7); методы с применением одноклеточных систем, СатЬпбде, Макк.; (Огау е! а1. 1995 I. 1ттипо1. Ме!Нобк 182, 155-63; Кеппеу е! а1. 1995 Вю!есЬпо1оду (ΝΥ) 13 787-90); метод отбора В-клеток (8!еепЬаккегк е! а1. 1994 Мо1 Вю1. Кер. 19, 125-34; .Гопак е! а1., Ргодгекк Вю!есН, Уо1. 5, 1п уНго Нптиш/аНоп т НуЬпбота ТесЬпо1оду, ВоггеЬаеск, еб., Е1кеуьег 8сьепсе РиЬНкНегк В. V., Атк!егбат, №!Нег1апбк (1988), каждый из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки).
Для введения антител человеку ш уьуо могут оказаться предпочтительными химерные, гуманизованные или человеческие антитела. Химерным антителом является молекула, в которой различные части антитела происходят от животных различных видов, и такими антителами являются антитела, имеющие вариабельную область, происходящую от мышиного моноклонального антитела, и константную область человеческого иммуноглобулина. Методы продуцирования химерных антител известны специалистам. См., например, Моткоп (1985); ()ι (1986); ОННек (1989); патенты США № 5807715; 4816567; и 4816397.
В объем настоящего изобретения входят деиммунизованные антитела, которые могут быть использованы для осуществления способов согласно изобретению, и которые имеют различные последовательности, полученные методами, описанными, например, в патентной публикации ЕР 0983303А1, в заявках
- 28 026110
АО 2000/34317 и №0 98/52976.
Другим способом, входящим в объем настоящего изобретения и применяемым для минимизации иммуногенных и аллергических ответов, присущих мышиным или другим нечеловеческим моноклональным антителам, и для повышения эффективности и безопасности вводимых антител, является маскировка. Термин «маскированное антитело» означает антитело, в котором была сделана селективная замена остатков каркасной области, происходящих, например, от вариабельной области мышиной тяжелой или легкой цепи, остатками человеческой каркасной области, в целях получения ксеногенной молекулы, содержащей антигенсвязывающий сайт, который сохраняет, в основном, всю укладку структуры нативной каркасной области. В основе методов маскировки лежит тот факт, что лиганд-связывающие свойства антигенсвязывающего сайта определяются, главным образом, структурой и относительным расположением наборов СОК тяжелой и легкой цепей на антигенсвязывающей поверхности (Эау1е5 (1990)). Таким образом, специфичность связывания с антигеном может быть сохранена в гуманизованном антителе только при полном сохранении структур СОК, их взаимодействия друг с другом и их взаимодействия с остальными доменами в У-области. С применением методов маскировки, внешние (например, доступные для растворителя) остатки каркасной области, которые легко взаимодействуют с иммунной системой, селективно заменяют человеческими остатками, в результате чего получают гибридную молекулу, имеющую слабоиммуногенную или, в основном, неиммуногенную маскированную поверхность.
В объем настоящего изобретения также входят гуманизованные анти-1Ь-12/1Ь-23 антитела. Гуманизованными формами анти-1Ь-12/1Ь-23 антител являются антитела, содержащие минимальную последовательность, происходящую от последовательностей нечеловеческого иммуноглобулина. По большей части, гуманизованными антителами являются человеческие иммуноглобулины (антитело-реципиент), в которых остатки гипервариабельной области (также известной как гипервариабельная область или СОК) реципиента заменены остатками гипервариабельной области антитела млекопитающего, не являющегося человеком (донорного антитела), такого как мыши, крысы, кролики или приматы, не являющиеся человеком, где указанное антитело обладает нужной специфичностью, аффинностью и емкостью.
Гуманизованные антитела, входящие в объем настоящего изобретения и используемые в способах согласно изобретению, могут обладать, например, связывающими свойствами, аналогичными свойствам негуманизованных антител, таких как, например, моноклональное антитело РМА204, описанное в настоящей заявке.
Гуманизация может быть, в основном, осуществлена методом,описанным АиНег и сотрудниками Цоиек (1986); ШесЬтапп (1988); УегЬоеуеп (1988)), путем замены последовательностей СОК грызунов или мутантных грызунов соответствующими последовательностями СОК человеческого антитела. См., также патенты США № 5225539; 5585089; 5693761; 5693762 и 5859205.
Антитела могут быть гуманизованы рядом методов, известных специалистам, включая, например, метод СОК-прививки (ЕР 239400; публикация заявки РСТ АО 91/09967; патенты США № 5225539; 5530101; и 5585089), методы маскировки или отделки (ЕР 592106; ЕР 519596; РаФап (1991); §Фйтска (1994); Кодикка (1994)), и перестановки цепей (патент США № 5565332).
В некоторых случаях, остатки каркасных областей одной или более вариабельных областей человеческого иммуноглобулина заменяют соответствующими не-человеческими остатками (см., например, Циееи е! а1., патент США № 5585089; патенты США №№ 5693761; 5693762 и 6180370; см., также, например, ЮесЬтапи (1988)).
Сверхгуманизация представляет собой способ гуманизации, в котором СОК, сообщающие специфичность к антигену (донор), присоединяют к каркасным последовательностям человеческой зародышевой линии (акцептор), которые, как известно, экспрессируются вместе с человеческими СОК, имеющими структуру, идентичную или аналогичную структуре донорных СОК (Тап 2002, см. также публикацию Международной заявки № АО 2004/006955). При использовании каркасных областей, кодируемых последовательностями генов У генома человека, а не последовательностей, которые могут включать соматические мутации, этот способ позволяет еще больше снижать иммуногенность. При установлении структурной гомологии между донорными и акцепторными СОК, это способ также повышает вероятность сохранения аффинности.
Кроме того, гуманизованные антитела могут содержать остатки, которые не были обнаружены в антителе-реципиенте или в антителе-доноре. Такие модификации осуществляют для дополнительного уточнения свойств антител (например, для получения желаемой аффинности). В общих чертах, гуманизованное антитело может содержать, по существу, все или по меньшей мере один, а обычно два вариабельных домена, в которых все или, в основном, все гипервариабельные области соответствуют указанным областям не-человеческого иммуноглобулина и все или в основном, все каркасные области представляют собой области, имеющие указанную последовательность человеческого иммуноглобулина.
Гуманизованное антитело может также включать, но не обязательно, по меньшей мере часть константной области (Рс) иммуноглобулина, обычно человеческого иммуноглобулина. Более подробно см. 1опек (1986); МесЬтапп (1988); и Ргек!а (1992). В соответствии с этим такие гуманизованные антитела могут включать антитела, в которых, в основном, менее, чем один интактный человеческий вариабель- 29 026110 ный домен заменен соответствующей последовательностью, происходящей от других видов, не являющихся человеком. На практике, гуманизованными антителами обычно являются человеческие антитела, в которых некоторые остатки СОК, а возможно, и некоторые каркасные остатки заменены остатками аналогичных сайтов антител грызунов. См., например, патенты США № 5225539; 5585089; 5693761; 5693762; 5859205. См., также патент США № 6180370, и публикацию Международной заявки № \О 2001/27160, где описаны гуманизованные антитела и методы продуцирования гуманизованных антител, обладающих повышенной аффинностью по отношению к предварительно определенному антигену.
Человеческие антитела могут быть получены различными методами, известными специалистам, включая описанные выше методы фагового представления, проводимые с использованием библиотек антител, происходящих от последовательностей человеческого иммуноглобулина. См., также патенты США № 4444887 и 4716111; и публикациях заявок РСТ № \О 98/46645, \О 98/50433, \О 98/24893, \О 98/16654, \О 96/34096, \О 96/33735 и \О 91/10741.
Полностью человеческие антитела, которые распознают выбранный эпитоп, могут быть получены методом, называемым направленный отбор. В таком методе, отобранное нечеловеческое моноклональное антитело, например мышиное антитело, используют для облегчения отбора полностью человеческого антитела, распознающего тот же самый эпитоп (1е§рег8 (1988)).
Человеческие антитела могут быть также продуцированы с использованием трансгенных животных, которые не способны экспрессировать функциональные эндогенные иммуноглобулины, но могут экспрессировать гены человеческого иммуноглобулина. Так, например, комплексы генов тяжелой и легкой цепи человеческого иммуноглобулина могут быть введены произвольно или путем гомологичной рекомбинации в стволовые клетки мышиного эмбриона. Альтернативно, в стволовые клетки мышиного эмбриона, помимо генов человеческой тяжелой и легкой цепи, могут быть введены человеческая вариабельная область, константная область и дивергирующая область.
Общее описание такого метода продуцирования человеческих антител можно найти в публикации ЬопЬегд и Ищ/аг (1995). Более подробное обсуждение такого метода продуцирования человеческих антител и человеческих моноклональных антител и протоколов продуцирования таких антител можно найти, например, в публикациях заявок РСТ \О 98/24893; \О 92/01047; \О 96/34096; \О 96/33735; в Европейском патенте № 0598877; и в патентах США №№ 5413923; 5625126; 5633425; 5569825; 5661016; 5545806; 5814318; 5885793;5916771;5939598;6075181 и 6114598.
Выбранные вариабельные домены человеческих антител, как легких, так и тяжелых цепей, используемых для получения гуманизованных антител, могут быть применены для снижения антигенности. В соответствии с так называемым методом «наилучшего соответствия», последовательность вариабельного домена антитела грызунов скринируют по всей библиотеке известных последовательностей человеческих вариабельных доменов. Затем человеческую последовательность, наиболее сходную с последовательностью грызунов, выбирают как человеческую каркасную область (РК) для гуманизованного антитела (см. публикации СНоЙпа апй Ьекк 1987 I Мо1. ΒίοΙ. 196, 901-17; §1т8 е( а1. 1993 I. 1ттипо1. 151, 2296308, каждая из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки). В другом методе используется конкретная каркасная область, происходящая от консенсусной последовательности всех человеческих антител конкретной подгруппы легких или тяжелых цепей. Одна и та же каркасная область может быть использована для нескольких различных гуманизованных антител (см. публикации Сайег е( а1. 1992 Ргос. ЫаЙ. Асай. δα. И8А 89, 4285-9; Рге8(а е( а1. 1993 I. 1ттипо1. 151, 262332, каждая из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки).
Антитела могут быть также, но не обязательно, гуманизованы с сохранением высокой аффинности к данному антигену, а также других желательных биологических свойств. Для достижения этой цели, в соответствии с предпочтительным методом, гуманизованные антитела получают путем анализа родительских последовательностей и различных концептуальных гуманизованных продуктов с использованием трехмерных моделей родительских и гуманизованных последовательностей. Трехмерные модели иммуноглобулинов являются общедоступными и хорошо известны специалистам. Существуют компьютерные программы, которые иллюстрируют и представляют вероятные трехмерные конформационные структуры отобранных последовательностей-кандидатов иммуноглобулинов. Исследование этих представлений позволяет проанализировать вероятную роль данных остатков в функционировании последовательностей иммуноглобулина-кандидата, то есть, остатков, которые влияют на способность иммуноглобулина-кандидата связываться с его антигеном. Таким образом, остатки РК могут быть выбраны из консенсусных и импортных последовательностей и объединены, в результате чего может быть получено желаемое антитело с нужными свойствами, такими как повышенная аффинность по отношению к антигену(ам)-мишени(ям). В общих чертах, остатки СОК непосредственно и в значительной степени влияют на связывание с антигеном.
Человеческие антитела, а в частности, человеческие моноклональные антитела могут быть получены гибридомным методом. Клеточные линии человеческой миеломы и гетеромиеломы мышь-человек, используемые для продуцирования человеческих моноклональных антител, описаны, например, в публикациях Ко/Ьог, I. 1ттипо1. 133:3001 (1984); Вгойеиг е( а1., Мопос1опа1 АпйЬойу Ргойисйоп ТесНтциек апй АррНсайопк, рр. 51-63 (Магсе1 Оеккег, 1пс., №\ν Уогк, 1987); и Воегпег е( а1., I. 1ттипо1. 147:86 (1991),
- 30 026110 каждая из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Альтернативно, помимо технологии, описанной выше, для продуцирования человеческих антител и фрагментов антител ш уйго из наборов генов вариабельного домена иммуноглобулина (У) от неиммунизованных доноров может быть использована технология фагового представления. В соответствии с одним из неограничивающих примеров такой технологии гены домена У антител клонируют с сохранением рамки считывания в мажорный или минорный ген белковой оболочки нитчатого бактериофага, такого как М13 или £б, и представляют на поверхности фаговой частицы как функциональные фрагменты антител. Поскольку нитчатая частица содержит копию одноцепочечной ДНК генома фага, то отбор, проводимый на основе функциональных свойств антитела, также позволяет отбирать ген, кодирующий антитело, обладающее этими свойствами. Таким образом, фаг имитирует некоторые свойства В-клеток. Фаговое представление может быть осуществлено в различных форматах, описанных в публикациях 1ойпкоп 1993 Сиггеп! Оршюпк ш δΐΓΐ.ιαιιπ·ι1 Вю1о§у 3, 564-571, каждая из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Для фагового представления может быть использовано несколько источников У-генных сегментов. В публикации С1асккоп и др. (С1асккоп е! а1., 1991, №!иге, 352: 624-8) описано выделение разнообразных массивов антител против оксазолона из небольшой рандомизированной комбинаторной библиотеки Угенов, полученной из селезенки иммунизованных мышей. Может быть также сконструирован набор Угенов от неиммунизованных людей-доноров, и могут быть выделены антитела против разнообразного массива антигенов (включая аутоантигены), в основном, методами, описанными в публикациях Магкк е! а1., 1991, I. Мо1. Вю1. 222:581-597, или СпййЪк е! а1., 1993, ЕМВО I. 12:725-734, каждая из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.
В случае естественного иммунного ответа гены антитела накапливают мутации с высокой скоростью (соматическая гипермутация). Некоторые вводимые изменения будут сообщать более высокую аффинность, а во время последующей стимуляции антигеном, В-клетки, отображающие поверхностный иммуноглобулин с высокой аффинностью, будут преимущественно реплицироваться и дифференцироваться. Этот природный процесс может быть имитирован методом, известным как перестановка цепей (Магкк е! а1. 1992 Вю!есйпо1о§у (ΝΥ) 10:779-83). В этом методе, аффинность первых человеческих антител, полученных посредством фагового представления, может быть повышена путем последовательной замены генов У-области тяжелой и легкой цепей набором природных вариантов (репертуаров) генов Удомена, полученных от неиммунизованных доноров. Такой метод позволяет получать антитела и фрагменты антител с аффинностями в нМ-интервалах.
Стратегия получения очень больших наборов фаговых антител была описана ^а!егйоике и др. (\Уа!егйоике е! а1. 1993 №с1ею Α06κ Кек. 21:2265-6). Перестановка генов может быть также использована для получения человеческих антител из антител грызунов, где указанное человеческое антитело обладает аффинностью и специфичностью, аналогичными аффинности и специфичности исходного антитела грызунов. В соответствии с этим методом, который также называется импринтингом эпитопа, ген Удомена тяжелой или легкой цепей антител грызунов, полученный методом фагового представления, заменяют набором генов У-домена человеческого антитела, в результате чего получают химеры грызунчеловек. Отбор с использованием антигена позволяет выделять человеческие вариабельные домены, обладающие способностью сохранять функциональный антигенсвязывающий сайт, то есть, эпитоп обусловливает (определяет) выбор партнера. Путем повторения этого процесса для замены оставшегося Удомен грызунов получают человеческое антитело (см. РСТ \УО 93/06213). В отличие от традиционной гуманизации антител грызунов посредством присоединения СОК этот метод позволяет получить полностью человеческие антитела, которые не имеют каркасных остатков или остатков СОК грызунов.
Могут быть также использованы биспецифические антитела, которые представляют собой моноклональные, а предпочтительно человеческие или гуманизованные антитела, обладающие специфичностью связывания по меньшей мере с двумя различными антигенами. В данном случае, одной из специфичностей связывания является специфичность связывания по меньшей мере с одним белком ГО-12 и/или ГО-23, а другой является специфичность связывания с любым другим антигеном. Так, например, в объем настоящего изобретения входят биспецифические антитела, специфически связывающиеся с белком ГО12/23 и по меньшей мере с одним нейротропным фактором, или с двумя различными полипептидами ГО12/23.
Методы продуцирования биспецифических антител известны специалистам. Традиционное рекомбинантное продуцирование биспецифических антител основано на коэкспрессии двух пар тяжелой цепилегкой цепи иммуноглобулина, где указанные две тяжелые цепи обладают различными специфичностями (МШк!еш е! а1., 1983, №Циге, 305:537-40). Из-за рандомизированного набора тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина, эти гибридомы (квадромы) продуцируют потенциальную смесь из 10 различных молекул антител, из которых только одна молекула имеет правильную биспецифическую структуру. Очистка такой правильной молекулы, которую обычно осуществляют путем проведения стадий аффинной хроматографии, представляет значительные трудности и дает низкий выход продукта. Аналогичные процедуры описаны в заявке \УО 93/08829 и в публикации ^аи^скет е! а1., 1991, ЕМВО I., 10:3655-9, которые во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки.
- 31 026110
В соответствии с другим и более предпочтительным подходом, вариабельные домены антитела с нужными специфичностями связывания (сайтами связывания антитело-антиген) присоединяют к последовательностям константного домена иммуноглобулина.
Такое лигирование предпочтительно осуществляют путем присоединения к константному домену тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащему по меньшей мере часть шарнирной области, второй константной области тяжелой цепи (Сн2) и третьей константной области тяжелой цепи (Сн3). При этом, предпочтительно, чтобы этот гибрид имел первую константную область тяжелой цепи (Сн1), содержащую сайт, необходимый для связывания с легкой цепью, присутствующей по меньшей мере в одном из гибридов. ДНК, кодирующую гибриды тяжелой цепи иммуноглобулина и, если это необходимо, легкой цепи иммуноглобулина, встраивают в отдельные экспрессионные векторы, и ко-трансфецируют в подходящий организм хозяина. Это обеспечивает более высокую степень гибкости при коррекции соотношений трех полипептидных фрагментов в тех вариантах изобретения, в которых неравные содержания трех полипептидных цепей, используемых в данной конструкции, дают оптимальные выходы. Однако можно встраивать кодирующие последовательности для двух или всех трех полипептидных цепей в один экспрессионный вектор, если продуцирование по меньшей мере двух полипептидных цепей, при их равном соотношении, дает высокие выходы, или если такие соотношения не оказывают значительного влияния на выход. В предпочтительном варианте такого способа, биспецифические антитела состоят из гибридной тяжелой цепи иммуноглобулина, обладающего первой специфичностью связывания в одной ветви, и гибридной пары тяжелой - легкой цепи иммуноглобулина (обладающей второй специфичностью связывания) в другой ветви. Такая ассиметрическая структура позволяет легко отделять нужное биспецифическое соединение от нежелательной комбинации цепей иммуноглобулина, поскольку присутствие легкой цепи иммуноглобулина только в одной половине биспецифической молекулы облегчает такой процесс разделения. Более подробное описание получения биспецифических антител можно найти, например, у 8игееБ е! а1. 1986, Ме!Бойв Еп/уто1 121: 210-28.
Антитела представляют собой бифункциональные молекулы, в которых Ν-концевые вариабельные сегменты тяжелой и легкой цепей специфически связываются друг с другом с образованием трехмерной структуры, обладающей аффинностью по отношению к конкретному эпитопу, присутствующему на поверхности антигена. Сегменты константной области ответственны за более продолжительное время полужизни в сыворотке и за эффекторные функции антитела, связывание с комплементом, стимуляцию фагоцитоза, антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (АЭСС) и запуск высвобождения гранулоцитарных зерен. Можно предположить, что анти-ГО-12/23 антитело должно обладать способностью осуществлять эффекторные функции, такие как АЭСС или СЭС (комплемент-зависимая цитотоксичность). Об этом свидетельствует тот факт, что ГО-12 может существовать в мембраносвязанной форме (Ошпопев е! а1. 2000 Р Ехр. Мей. 192:507-16), с которой может связываться антитело, и осуществлять рекрутинг эффекторных клеток. Альтернативно, антитело согласно изобретению может связываться с ГО12 или ГО-23, связанными с поверхностью клеток, и таким образом, образовывать комплекс, способный осуществлять рекрутинг эффекторных клеток на поверхность клеток-мишеней (Уоде1 е! а1. 1996 ГО!. Тттипо1. 8:1955-62).
Из этого следует, что терапевтический эффект антител может быть усилен путем модуляции их функциональных свойств, таких как антитело-зависимая клеточная цитотоксичность, комплементзависимая цитотоксичность, время полужизни в сыворотке, биологическое распределение и связывание с Рс-рецепторами. Такая модуляция может быть достигнута методами конструирования белков, конструирования углеводов или химическими методами. В зависимости от терапевтического применения и от желаемого уровня требуемой эффекторной активности может оказаться предпочтительным повышение или снижение любой из этих активностей. Описание современных способов усиления функций Рс можно найти в публикации Сайет 2006 Ν;·ιΙ. Кеу. Iттиηо1. 6: 343-57; Ргев!а 2006 Айу. Эгид. ЭеБу. Кеу. 58:640-56. Такое усиление может включать мутацию Рс-части антитела для идентификации мутантов, обладающих повышенной аффинностью по отношению к Рс-рецепторам (8Ые1йе е! а1. 2001 ί Вю1 СБет 276, 6591-604; Ба/аг е! а1. 2006 Ргос. №И. Асай. 8ск И8А 103: 4005-10), и специальное конструирование гликановой структуры посредством экспрессии антител в клетках с созданными профилями гликозилирования (Уатапе-0Бпик1 е! а1. 2004 Вю!есБпо1 Вюепд 87, 614-22; Ы е! а1. 2006 Ν;·ιΙ. Вю!есБпо1. 24:210-5; 8сБие!ет е! а1. 2007 Вю!есБпо1. Р 2:700-8).
Ряд методов модуляции времени полужизни антитела в сыворотке и его биологического распределения основан на модификации взаимодействия антитела с Рс-рецептором новорожденных (РсКп), то есть, рецептором, играющим ключевую роль в защите ΙβΟ от катаболизма, и на поддержании высокой концентрации антител в сыворотке. В публикации ЭаБ'Асциа е! а1. (2002) описаны замены в Рс-области Ι§01, которые повышают аффинность связывания с РсКп, что приводит к увеличению времени полужизни в сыворотке, а также продемонстрированы повышенная биологическая доступность и модуляция АЭСС-активности с тремя заменами М252У/8254Т/Т256Е (Эа11' Ассща 2006). См. также патенты США № 6277375; 6821505 и 7083784. В публикации Нш!оп е! а1. (2004, 2005) описаны аминокислотные замены константного домена в положениях 250 и 428, которые способствуют увеличению времени полужизни ш У1уо. См. также патент США № 7217797. В публикации РеГОоуа е! а1. (2006) описаны аминокислотные
- 32 026110 замены константного домена в положениях 307, 380 и 434, которые способствуют увеличению времени полужизни ίη νίνο. См. также публикацию 8Ые1йк с1 а1. (2001) и заявку \УО 2000/42072. Другие примеры аминокислотных замен константного домена, которые модулируют связывание с Рс-рецепторами и последующую функцию, опосредуемую этими рецепторами, включая связывание с РсКп и время полужизни в сыворотке, описаны в заявках на патент США № 20090142340; 20090068175 и 20090092599.
Известно, что гликаны, связанные с молекулами антител, влияют на взаимодействие антитела с Рсрецепторами и с гликановыми рецепторами, и тем самым влияют на активность антитела, включая время полужизни в сыворотке (Капеко Υ е1 а1, 2006; 1опек Л.к е1 а1, 2007; Капйа Υ е1 а1, 2007). Следовательно, некоторые глико-формы, модулирующие желаемую активность антител, могут сообщать терапевтическую эффективность. Методы конструирования гликоформ известны специалистам, и такими методами являются, но не ограничиваются ими, методы, описанные в патентах США № 6602684; 7326681; 7388081; и в заявке У'О 2008/006554.
Присоединение полиэтиленгликоля (ПЭГ) широко применяется для увеличения времени полужизни белков в сыворотке, например, как описано ПкНЪигп (2008).
В объем настоящего изобретения также входят гетероконъюгированные антитела. Гетероконъюгированные антитела состоят из двух ковалентно связанных антител. Такие антитела, предположительно нацеливают клетки иммунной системы на нежелательные клетки (патент США № 4676980), и могут быть использованы для лечения ВИЧ-инфекций (\УО 91/00360; \УО 92/00373; и ЕР 03089). Гетероконъюгированные антитела могут быть получены любыми стандартными методами перекрестного связывания. Подходящие перекрестно-связывающие агенты хорошо известны специалистам и описаны в патенте США № 4676980 наряду с различными методами перекрестного связывания.
В предпочтительном варианте изобретения по меньшей мере одно антитело или его специфическая часть или вариант согласно изобретению продуцируются клеточной линией, смешанной клеточной линией, иммортализованной клеткой или клональной популяцией иммортализованных клеток. Связывающиеся иммортализованные клетки-продуценты могут быть получены подходящими методами, например путем слияния клеток, продуцирующих человеческое антитело, и гетеромиеломных клеток, или путем иммортализации активированных человеческих В-клеток посредством инфицирования вирусом Эпштейна-Барра (СикШккоп е1 а1. 1991 Нит. АпОЪоШек НуЪпйотак 2:26-32; 2апе11а е1 а1. 1992 I. 1ттипо1. Ме1бойк 156, 205-15; №ейЪа1а е1 а1. 1998 НуЪпйота 17:299-304). Предпочтительно человеческие белки против человеческого Ш-12/23, их фрагменты, специфические части или варианты получают путем иммунизации трансгенного животного (например, мыши, крысы, хомячка, примата, не являющегося человеком, и т.п.), способного продуцировать определенный набор человеческих антител, описанных в настоящей заявке и/или известных специалистам. Клетки, продуцирующие человеческое антитело, могут быть выделены из указанных животных и иммотализованы подходящими методами, такими как методы, описанные в настоящей заявке.
Трансгенные мыши, которые могут продуцировать репертуар человеческих антител, которые связываются с человеческими антигенами, могут быть получены известными методами (например, методами, включая, но не ограничиваясь ими, описанные в патентах США № 5770428, 5569825, 5545806, 5625126, 5625825, 5633425, 5661016 и 5789650, выданных ЬопЪегд е1 а1.; ,1акоЪо\Ик е1 а1. У'О 98/50433, СкоЪоуйк е1 а1. \УО 98/24893, ЬопЪегд е1 а1. \УО 98/24884, ЬопЪегд е1 а1. \УО 97/13852, ЬопЪегд е1 а1. \УО 94/25585, Кисбег1ара1е е1 а1. \УО 96/34096, Кисбег1ара1е е1 а1. ЕР 0463151 В1, Кисбег1ара1е е1 а1. ЕР 0710719 А1, §игат е1 а1., патент США № 5545807, Вгиддетапп е1 а1. \УО 90/04036, Вгиддетапп е1 а1. ЕР 0438 474 В1, ЬопЪегд е1 а1. ЕР 0814259 А2, ЬопЪегд е1 а1. СВ 2272440 А, Тау1ог, Сагтаск е1 а1. 1992 Иискю Ас1Йк Кек 20, 6287-95; ТиаШоп е1 а1. 1993 Ргос. ИаЙ. Асай. §ск И8А 90, 3720-4; Сгееп е1 а1. 1994 Иак Сепек 7 13-21; ЬопЪегд е1 а1. 1994 ИаШте 368 856-9; Тау1ог е1 а1. 1994 1пк 1ттипо1. 6, 579-91; ЬопЪегд е1 а1. 1995 1п1 Реу. 1ттипо1. 13, 65-93; ПкНтйй е1 а1. 1996 Иак Вю1есбпо1. 14, 845-51; Мепйе/ е1 а1. 1997 Иак Сепек 15, 146-56, и каждый из этих документов во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки). Вообще говоря, эти мыши имеют по меньшей мере один трансген, содержащий ДНК от по меньшей мере одного локуса человеческого иммуноглобулина, который подвергался функциональной реаранжировке, или который может быть подвергнут функциональной реаранжировке. Такие эндогенные локусы иммуноглобулина у указанных мышей могут быть подвергнуты дизрупции или делеции для элиминации способности животного продуцировать антитела, кодируемые эндогенными генами.
Используемый здесь термин функциональная реаранжировка относится к сегменту ДНК локуса иммуноглобулина, который был подвергнут рекомбинации У(И)1 с последующим продуцированием гена иммуноглобулина, кодирующего цепь иммуноглобулина (например, тяжелую цепь, легкую цепь), или любую ее часть. Ген иммуноглобулина, подвергнутый функциональной реаранжировке, может быть непосредственно или опосредовано идентифицирован подходящими методами, такими как, например, секвенирование нуклеотидов, гибридизация (например, Саузерн-блот-анализ, Нозерн-блот-анализ) с использованием зондов, которые могут гибридизоваться с кодирующими стыками, расположенными между генными сегментами, или ферментативная амплификация генов иммуноглобулина (например, с помощью полимеразной цепной реакции) с использованием праймеров, которые могут гибридизоваться с ко- 33 026110 дирующими стыками, расположенными между генными сегментами. Для того, чтобы определить, может ли клетка продуцировать антитело, содержащее конкретную вариабельную область или вариабельную область, содержащую конкретную последовательность (например, по меньшей мере одну последовательность СОК), могут быть применены подходящие методы. В одном из примеров, мРНК может быть выделена из антитело-продуцирующей клетки (например, гибридомы или рекомбинантной клетки или другого подходящего источника) и использована для продуцирования кДНК, кодирующей антитело или его специфическую часть или специфический вариант. кДНК может быть клонирована и секвенирована, либо она может быть амплифицирована (например, с помощью полимеразной цепной реакции или другими известными и подходящими методами) с использованием первого праймера, который специфически гибридизуется с частью представляющей интерес вариабельной области (например, СОК, области, кодирующей стык), и второго праймера, который специфически гибридизуется с последовательностями невариабельной области (например, СН1, УН). Скрининг антител, их специфических частей или вариантов на специфическое связывание с аналогичными белками или фрагментами может быть достигнут стандартными методами с использованием библиотек пептидного представления. Такой метод включает скрининг крупных наборов пептидов на отдельные члены, имеющие нужную функцию или структуру. Скрининг антител с использованием библиотек пептидного представления хорошо известен специалистам. Последовательности пептидного представления могут иметь длину от 3 до 5000 или более аминокислот, в основном, 5-100 аминокислот, а в большинстве случаев, примерно от 8 до 25 аминокислот. Помимо прямых химических методов синтеза пептидных библиотек были описаны некоторые методы рекомбинантных ДНК. Один из таких методов включает представление пептидной последовательности на поверхности бактериофага или клетки. Каждый бактериофаг или клетка содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую конкретную последовательность пептидного представления. Такие методы описаны в публикациях патентных заявок РСТ АО 91/17271, АО 91/18980, АО 91/19818 и АО 93/08278. Другие системы для генерирования пептидных библиотек могут быть получены методами химического синтеза ίη νίίτο и рекомбинантными методами. См. публикации патентных заявок РСТ АО 92/05258, АО 92/14843 и АО 96/19256. См., также патенты США № 5658754 и 5643768. Библиотеки пептидного представления, вектор и наборы для скрининга являются коммечески доступными и могут быть закуплены у поставщиков, таких как Ιηνίΐτο^βη (СагЪЪаД, СаИГ.), и СатЪпДде АпДЪоДу ТесЬпо1од1е8 (СатЪпДдекЫте, ЦК), См., например, патенты США № 4704692, 4939666, 4946778, 5260203, 5455030, 5518889, 5534621, 5656730, 5763733, 5767260, 5856456, переуступленные Нп/оп; патенты США № 5223409, 5403484 5571698, 5837500, переуступленные Оуах, патенты США № 5427908, 5580717, переуступленные АГГутах; патент США № 5885793, переуступленный СатЪпДде АтДЪоДу ТесЬпо1од1е§; патент США № 5750373, переуступленный ОепейесЬ, патенты США № 5618920, 5595898, 5576195, 5698435, 5693493, 5698417, переуступленные Хота, СоШдап, см. выше; Аи8иЪе1, см. выше; или ЗатЪгоок, см. выше, где все вышеупомянутые патены и публикации во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки.
Антитела, их специфические части и варианты согласно изобретению могут быть также получены путем введения нуклеиновой кислоты, кодирующей по меньшей мере одно антитело, его специфическую часть или вариант, трансгенным животным или млекопитающим, таким как козы, коровы, лошади, овцы и т.п., в молоке которых продуцируются такие антитела, их специфические части или варианты. Такие животные могут быть созданы известными методами. См. например, такие патенты США, но не ограничивающиеся ими, № 5827690; 5849992; 4873316; 5849992; 5994616; 5565362; 5304489, каждый из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Антитела, их специфические части и варианты согласно изобретению могут быть также получены с использованием нуклеиновой кислоты, кодирующей по меньшей мере одно антитело, его специфическую часть или вариант с последующим созданием трансгенных растений и клеток культурных растений (таких как, например, но не ограничивающихся ими, табак, кукуруза и бриофиты), которые в своих органах или в их культивированных клетках продуциуют такие антитела, их специфические части или варианты. В качестве неограничивающего примера могут служить листья трансгенного табака, экспрессирующие рекомбинантные белки, которые были с успехом использованы для получения больших количеств рекомбинантных белков, например, с использованием индуцибельного промотора. См., например, Сгатег е! а1. 1999 Сигг. Тор. МютоЪю1. Iттиηο1. 240:95-118 и цитируемые там работы. Трансгенные мыши были также использованы для экспрессии белков млекопитающих на промышленных уровнях, которые имели биологическую активность, эквивалентную активности белков, продуцируемых в других рекомбинантных системах или выделенных из природных источников. См., например, НооД е! а1. 1999 АДу. Ехр. МеД. Бю1. 464:127-47 и цитируемые там работы. Антитела в больших количествах были также продуцированы из семян трансгенных растений, включая семена табака и клубни картофеля. См., например, публикацию СопгаД е! а1. 1998 Р1ап!. Мо1. Бю1. 38:101-9 и цитируемые там работы. Антитела были также временно экспрессированы и секретированы такими генетически модифицированными протопластами мха и обнаруживали неизмененную аффинность связывания с антигеном, а в крупномасштабных экспериментах, они обнаруживали в 40 раз большую АЭСС (ЗсЬи8!ет, Док1 е! а1. 2007 В1о1есНпо1. ί. 2:700-8). Таким образом, антитела, их специфические части и варианты согласно изобретению могут быть также
- 34 026110 продуцированы с использованием трансгенных растений известными методами. См, также, например, публикации \У1Ше1ат е! а1. 1994 ВюсНст. §ос. Тгапз. 22:940-4; Ма е! а1. 1995 Тгепйз Бю1есЬпо1. 13, 522-7; Ма е! а1. 1995 Р1ап! РНузю1. 109:341-6 и цитируемые там работы. Каждая из вышеупомянутых работ во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки. Антитела согласно изобретению могут связываться с человеческим 1Ь-12/23 с аффинностью в широком интервале величин (Кс). В предпочтительном варианте изобретения, по меньшей мере одно антитело согласно изобретению может, но необязательно, связываться с человеческим 1Ь-12/23 с высокой аффинностью. Так, например, антитело может связываться с человеческими белками 1Ь-12/23 с Кс, равным или составляющим менее, чем примерно 10-9М или, более предпочтительно, с Кс, равным величине или составляющим величину менее, чем примерно 0,1-9,9 (или равным любой величине в пределах указанного интервала), умноженную на 10-10 М, 10-11, 10-12, 10-13 или любую величину в пределах указанного интервала. Аффинность или авидность антитела по отношению к антигену могут быть определены экспериментально любым подходящим методом (см., например, публикации Бег/оГзку, е! а1., АпйЪойу-Апйдеп 1п1егасйопз, 1п Рипйатейа1 1ттипо1оду, Раи1, Е., Ей., Кауеп Ргезз:№\\' Уогк, N. Υ. (1984); КиЪу, .Гатз 1ттипо1оду, Н. Ргеетап апй Сотрапу:№\у Υо^к, N. Υ. (1992); и описанные там методы). Измеряемая аффинность конкретного антитела по отношению к его партнеру по связыванию может варьироваться в зависимости от различных условий (например, концентрации соли, рН). Таким образом, измерение аффинности и других параметров связывания с антигеном (например, Кс, Ка, Кй) предпочтительно осуществляют с использованием стандартизированных растворов антитела и его партнера по связыванию, и стандартизированного буфера, описанного в настоящей заявке.
Выделенными молекулами нуклеиновой кислоты согласно изобретению могут быть молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие открытую рамку считывания (ОРС), необязательно с одним или более интронами, например, такими как, но не ограничивающимися ими, интроны по меньшей мере в одной специфической части по меньшей мере одного СОК, а именно СОК1, СОК2 и/или СОК3 по меньшей мере одной тяжелой или легкой цепи, соответственно; молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие последовательность, кодирующую антитело, его специфическую часть или вариант, и молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие нуклеотидную последовательность, которая по существу отличается от описанной выше последовательности, но, из-за вырожденности генетического кода, кодирует по меньшей мере одно антитело, описанное в настоящей заявке и/или известное специалистам. Совершенно очевидно, что генетический код хорошо известен специалистам. Таким образом, специалист в данной области может рутинным способом получить такие вырожденные варианты нуклеиновой кислоты, кодирующие специфическое антитело, его специфическую часть или варианты согласно изобретению. См., например, АизиЪе1 е! а1., см. выше, и такие варианты нуклеиновой кислоты входят в объем настоящего изобретения.
Как указывалось выше, молекулами нуклеиновой кислоты согласно изобретению, которые содержат нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело или его специфическую часть или вариант, могут быть, но не ограничиваются ими, молекулы, кодирующие аминокислотную последовательность фрагмента антитела, как такового; последовательность, кодирующая полноразмерное антитело или его часть; последовательность, кодирующая антитело, его фрагмент или часть, а также дополнительные последовательности, такие как последовательность, кодирующая по меньшей мере один сигнальный лидерный или сигнальный пептид, в присутствии или в отсутствии вышеупомянутых дополнительных кодирующих последовательностей, таких как по меньшей мере один интрон вместе с дополнительными некодирующими последовательностями, включая, но не ограничиваясь ими, некодирующие 5' - и 3'последовательности, такие как транскрибируемые нетранслируемые последовательности, которые играют определенную роль в траснкрипции и в процессенге мРНК, включая сигналы сплайсинга и полиаденилирования (например, ответственные за связывание с рибосомой и за стабильность мРНК), и дополнительная кодирующая последовательность, которая кодирует дополнительные аминокислоты, такие как аминокислоты, сообщающие дополнительные функциональные свойства. Таким образом, последовательность, кодирующая антитело или его специфическую часть или вариант, может быть присоединена к маркерной последовательности, такой как последовательность, кодирующая пептид, облегчающий очистку гибридного антитела или его специфической части или варианта, содержащих фрагмент или часть антитела.
Настоящее изобретение относится к выделенным нуклеиновым кислотам, которые гибридизуются в селективных условиях гибридизации с полинуклеотидом, кодирующим антитело согласно изобретению. Таким образом, полинуклеотиды этого варианта могут быть использованы для выделения, детектирования и/или количественной оценки нуклеиновых кислот, содержащих такие полинуклеотиды. Так, например, полинуклеотиды согласно изобретению могут быть использованы для идентификации, выделения или амплификации неполных или полноразмерных клонов в депонированной библиотеке. В некоторых вариантах изобретения, полинуклеотидами являются геномные последовательности или последовательности кДНК, выделенные из библиотеки нуклеиновых кислот человека или млекопитающего, или комплементарные такой кДНК.
При этом предпочтительно, чтобы библиотека кДНК содержала по меньшей мере 80% полноразмерных последовательностей, более предпочтительно по меньшей мере 85 или 90% полноразмерных
- 35 026110 последовательностей, а наиболее предпочтительно по меньшей мере 95% полноразмерных последовательностей. Библиотеки кДНК могут быть нормализованы для повышения репрезентативности редких последовательностей. Гибридизацию в условиях низкой или умеренной жесткости, обычно, но не исключительно, применяют к последовательностям, имеющим меньшую степень идентичности по отношению к комплементарным последовательностям. Гибридизацию в условиях умеренной и высокой жесткости, обычно, но необязательно, применяют к последовательностям, имеющим высокую идентичность. Условия низкой жесткости позволяют осуществлять селективную гибридизацию последовательностей с идентичностью примерно 70% и могут быть использованы для идентификации ортологичных или паралогичных последовательностей.
Полинуклеотиды согласно изобретению кодируют, но необязательно, по меньшей мере часть антитела или его специфическую часть или вариант, кодируемые описанными здесь полинуклеотидами. Полинуклеотиды согласно изобретению включают последовательности нуклеиновой кислоты, которые могут быть использованы для селективной гибридизации с полинуклеотидом, кодирующим антитело или его специфическую часть или вариант согласно изобретению. См., например, руководство Αυδϋ^ί, выше; ΓοΠί^-ιη, выше, каждое из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Выделенные нуклеиновые кислоты могут быть получены (а) рекомбинантными методами, (Ь) методами синтеза и (с) методами очистки или их комбинациями, хорошо известными специалистам.
Нуклеиновые кислоты могут обычно содержать, помимо полинуклеотида согласно изобретению, и другие последовательности. Так, например, сайт множественного клонирования, содержащий один или более сайтов рестрикции эндонуклеазой, может быть встроен в нуклеиновую кислоту для облегчения выделения полинуклеотида. Кроме того, транслируемые последовательности могут быть встроены для облегчения выделения транслируемого полинуклеотида согласно изобретению. Так, например, последовательность гекса-гистидинового маркера представляет собой стандартное средство для очистки белков согласно изобретению. Нуклеиновой кислотой согласно изобретению, исключая кодирующую последовательность, является, но необязательно, вектор, адаптер или линкер для клонирования и/или экспрессии полинуклеотида согласно изобретению.
К таким клонирующим последовательностям и/или экспрессионным последовательностям могут быть добавлены дополнительные последовательности для оптимизации их функций при клонировании и/или экспрессии, для облегчения выделения полинуклеотида и для улучшения введения полинуклеотида в клетку. Использование клонирующих векторов, экспрессионных векторов, адаптеров и линкеров хорошо известны специалистам (См, например, Αη8ηΑ1, выше; или δ;·ιιι·ΛΐΌο1<, выше).
Композиции выделенных нуклеиновых кислот согласно изобретению, таких как РНК, кДНК, геномные ДНК и любые их комбинации могут быть получены из биологических источников с применением методики, известной специалистам. В некоторых вариантах изобретения, для идентификации нужной последовательности в библиотеке кДНК или геномной ДНК, используют олигонуклеотидные зонды, которые селективно гибридизуются в жестких условиях с полинуклеотидами согласно изобретению. Выделение РНК и конструирование библиотек кДНК и геномных библиотек хорошо известно среднему специалисту в данной области. (См, например, Αη8η^1, выше; или δηιηΑοοΚ, выше).
Библиотека кДНК или геномная библиотека могут быть скринированы с использованием зонда на основе последовательности полинуклеотида согласно изобретению, такой как последовательность, описанная в настоящей заявке. Зонды могут быть использованы для гибридизации с последовательностями геномных ДНК или кДНК в целях выделения гомлогичных генов из одного и того же или из различных организмов. Для специалиста в данной области очевидно, что в анализе может быть применена гибридизация с различными степенями жесткости, и при этом, для гибридизации или промывки могут быть использованы условия определенной жесткости. Чем выше жесткость условий гибридизации, тем выше должна быть степень комплементарности между зондом и мишенью для образования дуплекса. Степень жесткости может регулироваться одним или более параметрами, такими как температура, ионная сила, рН и присутствие частично денатурирующего растворителя, такого как формамид. Так, например, жесткость условий гибридизации обычно варьируется путем изменения полярности раствора реагента, например, путем изменения концентрации формамида в пределах от 0 до 50%. Степень комплементарности (идентичности последовательностей), необходимая для детектирования связывания, может варьироваться в зависимости от жесткости среды для гибридизации и/или промывочной среды. Степень комплементарности оптимально составляет 100% или 90-100%, или любое значение в указанных интервалах. Однако следует отметить, что небольшие изменения последовательностей зондов и праймеров могут компенсироваться снижением жесткости среды для гибридизации и/или промывки.
Методы амплификации РНК или ДНК хорошо известны специалистам и могут быть применены в настоящем изобретении без излишнего экспериментирования, исходя из представленных здесь описания и рекомендаций. Известными методами амплификации ДНК или РНК являются, но не ограничиваются ими, полимеразная цепная реакция (ПСР) и родственные способы амплификации (см., например, патенты США № 4683195, 4683202, 4800159, 4965188, МиШ8, е! ц1; патенты США № 4795699 и 4921794, ΤаЬο^, е! ак; патент США № 5142033, Ιηηΐ8; патент США № 5122464, \νίί8οη е! ак; патент США № 5091310, Ιη- 36 026110 πίκ; патент США № 5066584, Оу11епк!еп, е! а1.; патент США № 4889818, Ое1Гапй е! а1.; патент США № 4994370, Еакег е! а1.; патент США № 4766067, Βίκλν-ικ; патент США № 4656134, Кшдо1й) и РНКопосредованная амплификация, в которой, в качестве матрицы для синтеза двухцепочечной ДНК используется антисмысловая РНК, направленная на последовательность-мишень (патент США № 5130238, торговый знак NА§ВА). Содержание всех указанных документов вводится в настоящее описание посредством ссылки. (См, например, Аи5иЬе1, выше; или §атЬтоок, выше).
Так, например, для амплификации последовательностей полинуклеотидов согласно изобретению и родственных генов, непосредственно происходящих от библиотек геномных ДНК или кДНК, может быть применен ПЦР-метод. ПЦР-методы и другие методы амплификации ш уйго могут быть также применены, например, для клонирования последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих экспрессируемые белки, с получением нуклеиновых кислот, которые могут быть использованы в качестве зондов для детектирования присутствия нужной мРНК в образцах, для секвенирования нуклеиновой кислоты или в других целях. Примеры методов, подходящих для специалиста, работающего в области амплификации ш ν^ι^о. можно найти в публикациях Вегдег, выше, 8атЬтоок, выше, и Аи5иЬе1, выше, также как МиШк, е! а1., патент И8 № 4683202 (1987); и в публикации Ιιτιτίκ- е! а1., РСК Рто!осо1к А Ошйе !о Мейюйк апй АррНсайопк, Ейк., Асайетк Ртекк Шс., 8ап Окдо, СаПГ. (1990). Коммерчески доступные наборы для ПЦР-амплификации геномной ДНК известны специалистам. См., например, набор Айцаи!аде®-ОС Оепоийс РСК (С1оп!есЬ). Для повышения выхода длинноцепочечных ПЦР-продуктов может быть использован белок 32 гена Т4 (ВоеЬтшдег МаппНе1т).
Выделенные нуклеиновые кислоты согласно изобретению могут быть также получены путем прямого химического синтеза известными методами (см., например, Аи5иЬе1, е! а1., выше). Химический синтез обычно позволяет продуцировать одноцепочечный олигонуклеотид, который может быть превращен в двухцепочечную ДНК путем гибридизации с комплементарной последовательностью или путем полимеризации под действием ДНК-полимеразы, проводимой с использованием одной цепи в качестве матрицы. Для специалиста в данной области очевидно, что хотя химический синтез ДНК может быть ограничен последовательностями примерно из 100 или более оснований, однако, все же могут быть получены и более длинные последовательности путем лигирования более коротких последовательностей.
Настоящее изобретение также относится к рекомбинантным экспрессионным кластерам, содержащим нуклеиновую кислоту согласно изобретению. Последовательность нуклеиновой кислоты согласно изобретению, например, последовательность кДНК или геномная последовательность, кодирующая антитело или его специфическую часть или вариант согласно изобретению, могут быть использованы для конструирования рекомбинантного экспрессионного кластера, который может быть введен по меньшей мере в одну нужную клетку-хозяина. Рекомбинантный экспрессионный кластер обычно содержит полинуклеотид согласно изобретению, функционально присоединенный к регуляторным последовательностям инициации транскрипции, которые направляют транскрипцию полинуклеотида в нужную клеткухозяина. Для прямой экспрессии нуклеиновых кислот согласно изобретению могут быть использованы гетерологичные и негетерологичные (то есть, эндогенные) промоторы.
В некоторых вариантах изобретения, выделенные нуклеиновые кислоты, которые служат в качестве промотора, энхансера или других элементов, могут быть введены в соответствующее положение (выше, ниже или в интрон) негетерологичной формы полинуклеотида согласно изобретению так, чтобы осуществлялась активация или ингибирование экспрессии полинуклеотида согласно изобретению. Так, например, эндогенные промоторы могут быть модифицированы ш νί\Ό или ш уйго путем мутации, делеции и/или замены.
Настоящее изобретение также относится к векторам, включающим выделенные молекулы нуклеиновой кислоты согласно изобретению, к клеткам-хозяевам, генетически сконструированным с использованием рекомбинантных векторов, и к продуцированию по меньшей мере одного антитела или его специфической части или варианта рекомбинантными методами, хорошо известными специалистам. См., например, руководства 8ашЬтоок е! а1., выше; АикиЬе1 е! а1., выше, каждое из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки. Полинуклеотиды могут быть, но необязательно, присоединены к вектору, содержащему селективный маркер для размножения в хозяине. Обычно, плазмидный вектор вводят в преципитате, таком как преципитат фосфата кальция, или в комплексе с заряженным липидом. Если вектором является вирус, то он может быть упакован ш уйго с использованием соответствующей упаковывающей клеточной линии, а затем перенесен в клетки-хозяева.
ДНК-вставка должна быть функционально присоединена к соответствующему промотору. Экспрессионные конструкции также содержат сайты инициации транскрипции, сайты терминации транскрипции, а в транскрибируемой области, сайт связывания с рибосомой для трансляции. Кодирующая часть зрелых транскриптов, экспрессируемых данными конструкциями, предпочтительно включает сайт инициации трансляции в старт-кодоне и стоп-кодоне (например, ИАА, ИОА или ИАО), соответствующим образом расположенных в конце транслируемой мРНК, причем, для экспрессии в клетках млекопитающих или в эукариотических клетках, предпочтительными являются ИАА и ИАО.
Экспрессионные векторы предпочтительно, но необязательно, включают по меньшей мере один селективный маркер. Такими маркерами являются, например, но не ограничиваются ими, гены резистент- 37 026110 ности к метотрексату (МТХ), к дигидрофолат-редуктазе (ОНРК, патенты США № 4399216; 4634665; 4656134; 4956288; 5149636; и 5179017), к ампициллину, к неомицину (0418), к микофеноловой кислоте или к глутамин-синтетазе (08, патенты США № 5122464; 5770359 и 5827739), используемые для культивирования эукариотических клеток, и гены резистентности к тетрациклину или ампициллину, используемые для культивирования в Е. сο1^ и в других бактериях или в прокариотах (вышеупомянутые патенты во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки). Соответствующие культуральные среды и условия культивирования вышеописанных клеток-хозяев известны специалистам. Подходящие векторы хорошо известны специалистам. Введение векторной конструкции в клеткухозяина может быть осуществлено путем трансфекции фосфатом кальция, трансфекции, опосредуемой ОЕАЕ-декстраном, трансфекции, опосредуемой катионным липидом, электропорации, трансдукции, инфицирования или другими известными методами. Такие методы описаны в литературе, например, в руководствах 8;·ιιιΦιόο1<, выше, главы 1-4 и 16-18; АикиЬе1, выше, главы 1, 9, 13, 15, 16.
По меньшей мере одно антитело, его специфическая часть или вариант согласно изобретению могут экспрессироваться в модифицированной форме, такой как гибридный белок, и могут включать не только сигналы секреции, но также и дополнительные гетерологичные функциональные области. Так, например, область дополнительных аминокислот, а в частности заряженных аминокислот, может быть присоединена к Оконцу антитела, его специфической части или варианта для повышения стабильности и сохранения стабильности в клетках-хозяевах, в процессе очистки или в процессе последующей обработки и хранения. Кроме того, для облегчения очистки к антителу, его специфической части или варианту согласно изобретению могут быть добавлены пептидные молекулы. Такие области могут быть удалены до получения конечного препарата антитело или по меньшей мере одного его фрагмента. Указанные методы описаны во многих стандартных лабораторных руководствах, таких как руководства 8;·ιιιΦιόο1<, выше, главы 17.29-17.42 и 18.1-18.74; АикиЬе1, выше, главы 16, 17 и 18. Среднему специалисту в данной области известно множество систем, подходящих для экспрессии нуклеиновой кислоты, кодирующей белок согласно изобретению.
Альтернативно, нуклеиновые кислоты согласно изобретению могут быть экспрессированы в клетках-хозяевах путем внесения изменений (модификаций) в клетку-хозяина, которая содержит эндогенную ДНК, кодирующую антитело, его специфическую часть или вариант согласно изобретению. Такие методы хорошо известны специалистам и описаны, например, в патентах США № 5580734, 5641670, 5733746 и 5733761, которые во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки.
Репрезентативными клеточными культурами, подходящими для продуцирования антител, его специфических частей или вариантов, являются клетки млекопитающих. Клеточные системы млекопитающих, в большинстве случаев, присутствуют в форме клеточных монослоев, хотя могут быть также использованы суспензии клеток млекопитающих или биореакторы с клетками млекопитающих. Специалистами был разработан ряд подходящих клеточных линий хозяев, способных экспрессировать интактные гликозилированные белки, и такими клеточными линиями являются клеточные линии С08-1 (например, АТСС СКЬ-1650), С08-7 (например, АТСС СКЬ-1651), НЕК293, ВНК21 (например, АТСС СКЬ-10), СНО (например, АТСС СКЬ 1610) и В8С-1 (например, АТСС СКЬ-26), клетки с08-7, клетки СНО, клетки Нер02, клетки Р3Х63Ад8.653, клетки 8Р2/0-Ад14, клетки 293, клетки НеЬа и т.п., которые поставляются, например, Атепсап Туре СиЙиге ^1ΕΑίοη Мапаккак, Уа. Предпочтительными клеткамихозяевами являются клетки лимфоидных органов, такие как клетки миеломы и лимфомы. Особенно предпочтительными клетками-хозяевами являются клетки Р3Х63Ад8.653 (АТСС, рег. № СКЬ-1580) и клетки 8Р2/0-Ад14 (АТСС рег. № СКЬ-1851). В особенно предпочтительном варианте изобретения рекомбинантными клетками являются клетки Р3Х63АЬ8.653 или клетки 8Р2/0-Ад14.
Экспрессионные векторы, подходящие для этих клеток, могут включать одну или более нижеследующих последовательностей регуляции экспрессии, таких как, но не ограничивающихся ими, последовательности ориджина репликации; промотора (например, позднего или раннего промотора 8У40, промотора СМУ; патенты США № 5168062; 5385839), промотора Н8У !к, промотора рдк (фосфоглицераткиназы), промотора ЕР-1-альфа (патент США № 5266491), по меньшей мере одного промотора человеческого иммуноглобулина; энхансера и/или информационных сайтов процессинга, таких как сайты связывания с рибосомой, сайты РНК-сплайсинга и сайты полиаденилирования (например, крупный сайт присоединения ρο1у-Α Т-Ад 8У40), и терминатора транскрипции. См., например, АикиЬе1 е! а1., выше; 8ат^οο^ е! а1., выше. Другие клетки, которые могут быть использованы для продуцирования нуклеиновых кислот или белков согласно изобретению, известны специалистам и/или могут быть взяты, например, из каталога Американской коллекции типовых культур клеточных линий и гибридом ¢№№№.аΐсс.ο^д) или из других известных или коммерчески доступных источников.
При использовании эукариотических клеток-хозяев, в вектор обычно вводят последовательности полиаденилирования или терминации транскрипции. Примером терминаторной последовательности является последовательность полиаденилирования, происходящая от коровьего гена гормона роста. Могут быть также включены последовательности для правильного сплайсинга транскрипта. Примером последовательности для сплайсинга является интрон УР1 от 8У40 (8ргадие е! а1. 1983 ί. У1го1. 45:773-81). Кроме того, в вектор могут быть включены генные последовательности регуляции репликации в клетках- 38 026110 хозяевах, известные специалистам.
Антитело, его специфическая часть или вариант могут быть выделены и очищены из рекомбинантных клеточных культур хорошо известными методами, включая, но не ограничиваясь ими, очистка на белке А, преципитация сульфатом аммония или этанолом, экстракция кислотой, анионообменная или катионообменная хроматография, хроматография на фосфоцеллюлозе, гидрофобная хроматография, аффинная хроматография, хроматография на гидроксиапатитах и хроматография на лектине. Для очистки может также применяться высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). См. например, руководства СоШдап, Сиггеп! Рго!осо1к ш 1ттипо1оду или Сиггеп! Рго!осо1к ш Рго!ет Баепсе, 1оЬп АПеу & 8опк, ΝΥ, Ν.Υ., (1997-2003), например, главы 1, 4, 6, 8, 9, 10, каждое из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Антителами, их специфическими частями или вариантами согласно изобретению являются природные очищенные продукты, продукты химического синтеза и продукты, полученные рекомбинантными методами из эукариотических хозяев, включая, например, клетки дрожжей, высших растений, насекомых и млекопитающих. В зависимости от хозяина, используемого в рекомбинантном методе продуцирования, антитело, его специфическая часть или вариант согласно изобретению могут быть гликозилированными или негликозилированными, а предпочтительно, гликозилированными. Такие методы описаны во многих стандартных лабораторных руководствах, таких как руководства 8атЬгоок, выше, разделы 17.37-17.42; АикиЬе1, выше, главы 10, 12, 13, 16, 18 и 20, СоШдап, Рго!ет 8аепсе. выше, главы 12-14, и все эти руководства во всей своей полноте вводятся в настоящее описание посредством ссылки.
Выделенные антитела согласно изобретению включают антитело или его специфическую часть или вариант, кодируемые любым одним из полинуклеотидов согласно изобретению, как более подробно обсуждается в настоящей заявке, или любое выделенное или полученное антитело, его специфическую часть или вариант.
Предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с человеческими белками ГО-12/23, и тем самым, в значительной степени нейтрализуют биологическую активность белков. Антитело, его специфическая часть или вариант, частично, а предпочтительно в значительной степени нейтрализуют по меньшей мере одну биологическую активность по меньшей мере одного белка 1Ь12/23 и тем самым ингибируют активность, опосредуемую связыванием Ш-12 по меньшей мере с одним рецептором Ш-12, или 1Ь-23 по меньшей мере с одним рецептором Ш-23 или посредством других ГО-12или ГО-23-зависимых или опосредуемых механизмов. Используемый здесь термин нейтрализующее антитело означает антитело, которое может ингибировать активность, опосредуемую человеческим белком 1Ь-12р40 или его фрагментом, примерно на 20-120%, предпочтительно, по меньшей мере примерно на 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% или более в зависимости от проводимого анализа. Способность антитела или его специфической части или варианта ингибировать ГО-12/23-опосредуемую активность предпочтительно оценивают с помощью по меньшей мере одного подходящего анализа антитела или белка, как описано в настоящей заявке и/или как известно специалистам. Антитело, его специфическая часть или вариант согласно изобретению могут принадлежать к любому классу (1д0, 1дА, 1дМ, 1дЕ, 1дИ и т.п.) или изотипу, и могут содержать легкую цепь каппа или лямбда. В одном из вариантов изобретения, антитело его специфическая часть или вариант содержат тяжелую цепь 1дО или определенный фрагмент, например, по меньшей мере одного из изотипов 1дО1, 1дО2, 1дО3 или 1дО4. Антитела этого типа могут быть получены путем использования трансгенных мышей или других трансгенных млекопитающих, не являющихся человеком и содержащих по меньшей мере один трансген человеческой легкой цепи (например, 1дО, 1дА и 1дМ; например, γ1, γ2, γ3, γ4), описанный в настоящей заявке и/или известный специалистам. В другом варианте изобретения, антитело, его специфическая часть или вариант содержат тяжелую цепь 1дО1 и легкую цепь 1дО1.
По меньшей мере одно антитело, его специфическая часть или вариант согласно изобретению связываются по меньшей мере с одним конкретным эпитопом, специфичным к белку 1Ь-12р40, его фрагменту, части или любой их комбинации. В качестве неограничивающих примеров могут служить антитело, его специфическая часть или вариант, которые специфически связываются по меньшей мере с одним эпитопом, содержащим по меньшей мере 1-3 аминокислоты полноразмерной аминокислотной последовательности субъединицы 1Ь-12р40. По меньшей мере один специфический эпитоп может содержать любую комбинацию по меньшей мере из одной аминокислоты 1Ь-12р40, например из числа аминокислот, но не ограничивающегося ими, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 аминокислот из по меньшей мере одной из 1-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 90-100, 100-110, 110-120, 120-130, 130-140, 140-150, 150-160, 160-170, 170-180, 180-190, 190-200, 200-210, 210-220, 220-230, 230240, 240-250, 250-260, 260-270, 280-290, 290-300, 300-306, 1-7, 14-21, 29-52, 56-73, 83-93, 96-105, 156-175, 194-204, 208-246, 254-273, 279-281 или 289-300 аминокислот §ЕЦ ГО N0:1 (человеческой субъединицы ГО-12р40, 306 аминокислот). Эти предсказанные эпитопы находятся на мономере ГО-12, ГО-23, ГО-12р40 и на гомодимере ГО-12р80.
Антитело может содержать по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой или легкой цепи, имеющую определенную аминокислотную последовательность. Так, например, в предпочтительном варианте изобретения антитело содержит по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи
- 39 026110 и/или по меньшей мере одну вариабельную область легкой цепи. Человеческие антитела, которые связываются с человеческими белками ГЬ-12/23 и/или с их фрагментами, и которые могут содержать определенную вариабельную область тяжелой или легкой цепи, могут быть получены подходящими методами, такими как фаговое представление (Ка!киЬе е! а1. 1998 1п!. ί. Мо1. Мей. 1:8 63-8) или методы, в которых используются трансгенные животные, как известно специалистам и/или, как описано в настоящей заявке. Так, например, трансгенные мыши, содержащие функционально реаранжированный трансген тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, и трансген, содержащий ДНК локуса тяжелой цепи человеческого иммуноглобулина, который может подвергаться функциональной реаранжировке, могут быть иммунизованы человеческими белками 1Ь-12 и/или 1Ь-23, их рецепторами и/или фрагментами с последующим вырабатыванием антител. При необходимости, могут быть выделены антитело-продуцирующие клетки, и могут быть получены гибридомы или другие иммортализованные антитело-продуцирующие клетки, как описано в настоящей заявке и/или как известно специалистам. Альтернативно, антитело, его специфическая часть или вариант могут экспрессироваться посредством кодирующей нуклеиновой кислоты или ее части в подходящей клетке-хозяине.
Настоящее изобретение также относится к антителам, к антигенсвязывающим фрагментам, к цепям иммуноглобулина и к СОК, содержащим аминокислоты в последовательности, которая по существу, аналогична описанной здесь аминокислотой последовательности. Предпочтительно такие антитела или антигенсвязывающие фрагменты и антитела, содержащие такие цепи или СОК, могут связываться с человеческими белками Ш-12/23 и/или с их фрагментами с высокой аффинностью (например, с Кс менее, чем или примерно 10-9 М). Аминокислотными последовательностями, которые, по существу, аналогичны описанным здесь последовательностям, являются последовательности, содержащие консервативные аминокислотные замены, а также аминокислотные делеции и/или инсерции. Термин консервативная аминокислотная замена означает замену первой аминокислоты другой аминокислотой, которая имеет химические и/или физические свойства (например, заряд, структуру, полярность, гидрофобность/гидрофильность), аналогичные химическим и/или физическим свойствам первой аминокислоты. Консервативные замены включают замену одной аминокислоты другой аминокислотой, входящей в нижеследующую группу аминокислот:лизин (К), аргинин (К) и гистидин (Н); аспартат (Ό) и глутамат (Е); аспарагин (Ν), глутамин (О), серин (8), треонин (Т), тирозин (Υ), К, К, Н, Ό и Е; аланин (А), валин (V), лейцин (Ь), изолейцин (I), пролин (Р), фенилаланин (Р), триптофан (\), метионин (М), цистеин (С) и глицин (С); Р, \ и Υ; С, 8 и Т.
Антитело или его специфическая часть или вариант согласно изобретению могут включать одну или более аминокислотных замен, делеций или добавлений, образующихся в результате природных или введенных человеком мутаций, как конкретно определено в настоящей заявке. Вообще говоря, число аминокислотных замен, обычно вводимых специалистом, зависит от многих факторов, включая факторы, описанные выше. Вообще говоря, число аминокислотных замен, инсерций или делеций в любом из указанных связывающихся полипептидов составляет не более чем 40, 30, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, например 1-30 или любое число в указанных интервалах, определенных в настоящей заявке.
Аминокислоты в антителе, его специфической части или варианте согласно изобретению, которые играют важную роль в осуществлении нужных функций, могут быть идентифицированы методами, известными специалистам, такими как сайт-направленный мутагенез или аланин-сканирующий мутагенез (например, АикиЬе1, выше, главы 8, 15; СипшпдНат е! а1. 1989 8аепсе 244, 1081-5). Последняя процедура включает введение одной аланиновой замены в каждое положение остатка данной молекулы. Затем полученные мутантные молекулы тестируют на биологическую активность, такую как, но не ограничивающуюся ими, по меньшей мере одна ΓΕ-12/23-нейтрализующая активность. Сайты, которые играют важную роль в связывании антитела, его специфической части или варианта, могут быть также идентифицированы путем структурного анализа, такого как кристаллизация, ядерный магнитный резонанс или фотоаффинное мечение (йе ^5 е! а1. 1992 8шепсе 255, 306-12; 8тйЬ е! а1. 1992 ί. Мо1. Вю1. 224:899-904).
В другом своем аспекте, настоящее изобретение относится к антителам и к антигенсвязывающим фрагментам, описанным в настоящей заявке, которые были модифицированы путем ковалентного связывания с органической молекулой. В результате такой модификации может быть получено антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, обладающие улучшенными фармакокинетическими свойствами (например, имеющие более длительное время полужизни в сыворотке ш νί\Ό). Органическая молекула может представлять собой прямую или разветвленную гидрофильную полимерную группу, группу жирной кислоты или сложноэфирную группу жирной кислоты. В конкретных вариантах изобретения гидрофильная полимерная группа может иметь молекулярную массу примерно от 800 до 120000 Да и может представлять собой полиалкангликоль (например, полиэтиленгликоль (ПЭГ), полипропиленгликоль (ППГ)), углеводный полимер, аминокислотный полимер или поливинилпирролидон, а группа жирной кислоты или сложноэфирная группа жирной кислоты может содержать примерно от восьми до сорока атомов углерода.
Модифицированные антитела и антигенсвязывающие фрагменты согласно изобретению могут содержать одну или более органических молекул, ковалентно связанных, прямо или опосредованно, с ан- 40 026110 тителом, его специфической частью или вариантом. Каждая органическая молекула, связанная с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом согласно изобретению, может независимо представлять собой гидрофильную полимерную группу, группу жирной кислоты или сложноэфирную группу жирной кислоты. Используемый здесь термин жирная кислота включает монокарбоновые кислоты и дикарбоновые кислоты. Используемый здесь термин гидрофильная полимерная группа означает органический полимер, который обладает лучшей растворимостью в воде, чем в октане. Так, например, полилизин лучше растворяется в воде, чем в октане. Таким образом, в объем настоящего изобретения входит антитело, модифицированное посредством ковалентного связывания с полилизином. Гидрофильные полимеры, подходящие для модификации антител согласно изобретению, могут быть прямыми или разветвленными, и такими полимерами являются, например, полиалкангликоли (например, ПЭГ, монометоксиполиэтиленгликоль (мПЭГ), ППГ и т.п.), углеводы (например, декстран, целлюлоза, олигосахариды, полисахариды и т.п.), полимеры гидрофильных аминокислот (например, полилизин, полиаргинин, полиаспартат и т.п.), полиалканоксиды (например, полиэтиленоксид, полипропиленоксид и т.п.) и поливинилпирролидон. Предпочтительно гидрофильный полимер, который модифицирует антитело согласно изобретению, имеет молекулярную массу примерно от 800 до 150000 Да и составляет отдельную молекулярную единицу. Так, например, могут быть использованы РЕС5000 и РЕС20000, где нижний индекс означает среднюю молекулярную массу полимера в дальтонах.
Гидрофильная полимерная группа может быть замещена примерно 1-6 алкильными группами, группами жирной кислоты или сложноэфирными группами жирной кислоты. Гидрофильные полимеры, которые замещены группой жирной кислоты или сложноэфирной группой жирной кислоты, могут быть получены с применением подходящих методов. Так, например, к полимеру, содержащему аминогруппу, может быть присоединен карбоксилат жирной кислоты или сложный эфир жирной кислоты, а активированный карбоксилат (например, карбоксилат, активированный ^^карбонилдиимидазолом) на жирной кислоте или на сложном эфире жирной кислоты может быть присоединен к гидроксильной группе на полимере.
Жирные кислоты и сложные эфиры жирных кислот, подходящие для модификации антител согласно изобретению, могут быть насыщенными, либо они могут содержать одну или более ненасыщенных групп. Жирными кислотами, подходящими для модификации антител согласно изобретению, являются, например, н-додеканоат (С12, лаурат), н-тетрадеканоат (С14, миристат), н-октадеканоат (С18, стеарат), нэйкозаноат (С20 арахидат), н-докозаноат (С22, бегенат), н-триаконтаноат (С30) , н-тетраконтаноат (С40), цис-Д9-октадеканоат (С18, олеат), полностью цис-Д5,8,11,14-эйкозатетраеноат (С20, арахидонат), октандионовая кислота, тетрадекандионовая кислота, октадекандионовая кислота, докозандионовая кислота и т.п. Подходящими сложными эфирами жирных кислот являются сложные моноэфиры дикарбоновых кислот, содержащих прямую или разветвленную низшую алкильную группу. Низшая алкильная группа может содержать от одного до примерно двенадцати, а предпочтительно, от одного до примерно шести атомов углерода.
Модифицированные антитела и их антигенсвязывающие фрагменты могут быть получены подходящими методами, такими как реакция взаимодействия с одним или более модифицирующими агентами. Используемый здесь термин модифицирующий агент означает подходящую органическую группу (например, гидрофильный полимер, жирную кислоту, сложный эфир жирной кислоты), содержащую активирующую группу. Активирующая группа представляет собой химическую молекулу или функциональную группу, которая в соответствующих условиях может реагировать со второй химической группой с образованием ковалентной связи между модифицирующим агентом и второй химической группой. Так, например, реагирующими с амином акивирующими группами являются электрофильные группы, такие как тозилат, мезилат, галоген (хлор, бром, фтор, иод), ^гидроксисукцинимидоэфиры (ИН§) и т.п. Активирующими группами, которые могут реагировать с тиолами, являются, например, малеимид, иодацетил, акрилолил, пиридилдисульфиды, 5-тиол-2-нитробензойная кислота-тиол (ТИБ-тиол) и т.п. Альдегидная функциональная группа может быть присоединена к молекулам, содержащим амин или гидрозид, а азидная группа может реагировать с группой трехвалентного фосфора с образованием фосфорамидатных или фосфоримидных связей. Подходящие методы введения активирующих групп в молекулы известны специалистам (см. например, Негшаикои, С. Т., Вюсои)ида1е ТссПпщисз. ЛсаДешк Ргекк: 8аи Эюдо. СаПГ. (1996)). Активирующая группа могут быть непосредственно связана с органической группой (например, гидрофильным полимером, жирной кислотой, сложным эфиром жирной кислоты), либо она может быть связана посредством линкерной группы, например, двухвалентной С-С^-группы, где один или более атомов углерода могут быть заменены гетероатомом, таким как кислород, азот или сера. Подходящими линкерными молекулами являются, например, тетраэтиленгликоль, -(СН2)3-, -ИН-(СН2)6-ПН-, -(СН2)2-ПН- и -СН2-0-СН2-СН2-0-СН2-СН2-0-СН-ЫН-. Модифицирующие агенты, содержащие линкерную молекулу, могут быть получены, например, путем взаимодействия моно-Вос-алкилдиамина (например, моно-Вос-этилендиамина, моно-Вос-диаминогексана) с жирной кислотой в присутствии 1-этил-3-(3диметиламинопропил)карбодиимида (ЕЭС) с образованием амидной связи между свободным амином и карбоксилатом жирной кислоты. Защитная Вос-группа может быть удалена из продукта путем обработки трифторуксусной кислотой (ТТЛ) для выделения первичного амина, который может быть подвергнут
- 41 026110 реакции взаимодействия с другим карбоксилатом, как описано в настоящей заявке, либо он может быть подвергнут реакции взаимодействия с ангидридом малеиновой кислоты с последующей циклизацией полученного продукта с образованием активированного малеимидо-производного жирной кислоты (см., например, ТНотркоп, е( а1., заявку \О 92/16221, полное описание которой вводится в настоящее описание посредством ссылки).
Модифицированные антитела согласно изобретению могут быть продуцированы посредством реакции антитела или антигенсвязывающего фрагмента с модифицирующим агентом. Так, например, органические молекулы могут быть связаны с антителом по не-сайт-специфическому механизму с использованием реагирующего с амином модифицирующего агента, например ΝΗδ-эфира ПЭГ. Модифицированные антитела или антигенсвязывающие фрагменты могут быть также получены путем восстановления дисульфидных связей (например, внутрицепочечных дисульфидных связей) антитела или антигенсвязывающего фрагмента. Затем, восстановленное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут быть подвергнуты реакции взаимодействия с реагирующим с тиолом модифицирующим агентом с получением модифицированного антитела согласно изобретению. Модифицированные антитела и антигенсвязывающие фрагменты, содержащие органическую молекулу, которая связана со специфическими сайтами антитела, его специфической части или варианта согласно изобретению, могут быть получены подходящими методами, такими как обратный протеолиз (Р1ксЬ е( а1. 1992 Вюсонщд СНет 3, 147-53; \ег1еп е( а1. 1994 Вюсопщд СНет 5, 411-7; Саре11ак е( а1. 1997 Вю1есНпо1 Вюепд 56, 456-63; Китагап е( а1. 1997 Рго(еш δα 6, 2233-41), и методами, описанными Негтапкоп, О. Т., Вюсоп)ида(е ТесНтсщек, Асайепнс Ргекк: δап О1едо, СаП£. (1996)).
Композиции антител согласно изобретению могут также, но необязательно, содержать эффективное количество по меньшей мере одного соединения или белка, выбранного по меньшей мере из таких соединений, как противоинфекционное лекарственное средство, лекарственное средство, применяемое для лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы (ССС), лекарственное средство, применяемое для лечения заболеваний центральной нервной системы (ЦНС), лекарственное средство, применяемое для лечения заболеваний вегетативной нервной системы (ВНС), лекарственное средство, применяемое для лечения заболеваний дыхательных путей, лекарственное средство, применяемое для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), гормональное лекарственное средство, лекарственное средство для достижения водно-солевого баланса, гематологическое лекарственное средство, противоопухолевое лекарственное средство, иммуномодулирующее лекарственное средство, лекарственное средство для лечения глазных болезней и болезней уха-горла-носа, лекарственное средство для местного применения, питательное лекарственное средство или т.п. Такие лекарственные средства, включая препараты, полученные на их основе, а также показания, дозы и способы их введения хорошо известны специалистам и описаны в настоящей заявке (см., например, публикации №гкшд 2001 НапйЬоок о£ Эгидк, 21к( еййоп, δр^^пдЬοиκе Согр., δр^^пдЬοиκе, Ра., 2001; НеаНН РгоГекыопаГк Эгид Ошйе 2001, ей., δЬаппοп, \Пкоп, δαι^, Р^епι^се-Ηа11. 1пс, Иррег δайй1е КГОег, N1.; РНагтсоЮегару ΗапйЬοοк, \е11к е( а1., ей., Арр1е(оп & Ьапде, δΕ-ΗπΙοι^, Сопп., каждая из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки).
Композиции антитела, его специфической части или варианта согласно изобретению могут также содержать по меньшей мере один из любых подходящих вспомогательных агентов, таких как, но не ограничивающихся ими, разбавитель, связующее вещество, стабилизатор, буферы, соли, липофильные растворители, консервант, адъювант или т.п. Предпочтительными являются фармацевтически приемлемые добавки. Неограничиващие примеры таких стерильных растворов и методы их получения хорошо известны специалистам и описаны в публикациях, таких как, но не ограничивающихся ими, публикации Оеппаго, Ей., Кеттд(оп'к РНагтасеиНса1 δ^ι^κ, 18'1' ЕйШоп, Маск РиЬНкЫпд Со. (ЕакЮп, Ра.) 1990. Фармацевтически приемлемые носители, которые являются подходящими для конкретного способа введения, обеспечения растворимости и/или стабильности композиции антител, могут быть выбраны рутинным способом, хорошо известным специалистам или описанным в настоящей заявке.
Фармацевтическими наполнителями и добавками, которые могут быть использованы в композиции согласно изобретению, являются, но не ограничиваются ими, белки, пептиды, аминокислоты, липиды и углеводы (например, сахара, включая моносахариды, ди-, три-, тетра- и олигосахариды; дериватизированные сахара, такие как альдиты, альдоновые кислоты, этерифицированные сахара и т.п.; и полисахариды или полимеры сахаров), которые могут присутствовать отдельно или в комбинации в количестве 199,99% по массе или по объему. Репрезентативными белковыми наполнителями являются сывороточный альбумин, такой как альбумин человеческой сыворотки №А), рекомбинантный человеческий альбумин (гНЛ), желатин, казеин и т.п. Репрезентативными аминокислотами, которые могут служить в качестве забуферивающего вещества, являются аланин, глицин, аргинин, бетаин, гистидин, глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота, цистеин, лизин, лейцин, изолейцин, валин, метионин, фенилаланин, аспартам и т.п. Одной из предпочтительных аминокислот является глицин.
Углеводными наполнителями, подходящими для их использования в настоящем изобретении, являются, например, моносахариды, такие как фруктоза, мальтоза, галактоза, глюкоза, Ό-манноза, сорбоза и т.п.; дисахариды, такие как лактоза, сахароза, трегалоза, целлобиоза и т.п.; полисахариды, такие как
- 42 026110 раффиноза, мелезитоза, мальтодекстрины, декстраны, крахмалы и т.п.; и альдиты, такие как маннит, ксилит, мальтит, лактит, ксилит-сорбит (глюцит), миоинозит, и т.п. Предпочтительными углеводными наполнителями, которые могут быть использованы в настоящем изобретении, являются маннит, трегалоза и раффиноза.
Композиции антител могут также включать буфер или рН-корректирующий агент, а обычно, буфером является соль, полученная из органической кислоты или органического основания. Репрезентативными буферами являются соли органических кислот, такие как соли лимонной кислоты, аскорбиновой кислоты, глюконовой кислоты, угольной кислоты, винной кислоты, янтарной кислоты, уксусной кислоты или фталевой кислоты; трис, гидрохлорид трометамина или фосфатные буферы. Предпочтительными буферами, используемыми в композициях согласно изобретению, являются соли органических кислот, такие как цитрат.
Кроме того, композиции антитела, его специфической части или варианта согласно изобретению могут включать полимерные наполнители/добавки, такие как поливинилпирролидоны, фиколлы (полимерный сахар), декстраты (например, циклодекстрины, такие как 2-гидроксипропил-в-циклодекстрин), полиэтиленгликоли, ароматизаторы, антимикробные средства, подсластители, антиоксиданты, антистатики, поверхностно-активные вещества (например, полисорбаты, такие как 'ГОЛЕЕ®® 20 и 'ГОЛЕЕ®® 80), липиды (например, фосфолипиды, жирные кислоты), стероиды (например, холестерин) и хелатообразующие агенты (например, Ε^ΤΑ).
Эти и другие известные фармацевтические наполнители и/или добавки, подходящие для их использования в композициях антител согласно изобретению, известны специалистам и описаны, например, в руководствах КеттдЮп: Ию 8с1епсе & РгасИсе οί РЬагтасу, 19* еб., ХУПЬапъ & ХУПНапъ, (1995), и РЬу81С1ап'8 Эе8к КеЕегепсе, 52пб еб., МебГО-ιί Εсοηοт^с8. МспТОак, Ν.Ι (1998), описание которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки. Предпочтительными носителями или наполнителями являются углеводы (например, сахариды и альдиты) и буферы (например, цитрат) или полимерные агенты.
Настоящее изобретение относится к стабильным препаратам, которые предпочтительно содержат фосфатный буфер с физиологическим раствором или выбранной солью, к консервант-содержащим растворам и препаратам, содержащим консервант, а также к консервант-содержащим препаратам для многократного введения, подходящим для применения в фармацевтике или в ветеринарии, где указанный фармацевтически приемлемый препарат содержит по меньшей мере одно антитело, его специфическую часть или вариант. Консервант-содержащие препараты включают по меньшей мере один известный консервант, необязательно выбранный из группы, состоящей по меньшей мере из одного соединения, такого как фенол, м-крезол, п-крезол, о-крезол, хлоркрезол, бензиловый спирт, нитрит фенилртути, феноксиэтанол, формальдегид, хлорбутанол, хлорид магния (например, гексагидрат), алкилпарабен (метил-, этил-, пропил-, бутилпарабен и т.п.), хлорид бензалкония, хлорид бензэтония, дегидроацетат натрия и тимерозал, или их смеси в водном разбавителе. При этом, могут быть использованы любая подходящая концентрация или смесь, известные специалистам, такие как 0,001-5%, или любая величина в указанном интервале, такая как, но не ограничивающаяся ими, 0,001, 0,003, 0,005, 0,009, 0,01, 0,02, 0,03, 0,05, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,3, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, или любая величина в указанном интервале. Неограничивающими примерами являются препараты без консервантов, и препараты, содержащие, 0,1-2% м-крезола (например, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,9, 1,0%), 0,1-3% бензилового спирта (например, 0,5, 0,9, 1,1, 1,5, 1,9, 2,0, 2,5%), 0,001-0,5% тимерозала (например, 0,005, 0,01), 0,001-2,0% фенола (например, 0,05, 0,25, 0,28, 0,5, 0,9, 1,0%), 0,0005-1,0% алкилпарабена(ов) (например, 0,00075, 0,0009, 0,001, 0,002, 0,005, 0,0075, 0,009, 0,01, 0,02, 0,05, 0,075, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,5, 0,75, 0,9, 1,0%) и т.п.
Любой способ согласно изобретению может включать введение эффективного количества композиции или фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно антитело, его специфическую часть или вариант, в клетку, ткань, орган и организм животного или пациента, нуждающихся в такой модуляции, лечении или терапии. Такой способ может также включать, но необязательно, совместное введение или комбинированную терапию для лечения указанных иммунных заболеваний, где по меньшей мере одно указанное антитело, его специфическую часть или вариант вводят до, во время и/или после введения по меньшей мере одного агента, выбранного из таких средств, как терапевтическое средство для лечения рассеянного склероза (включая, но не ограничиваясь ими, бета-интерферон 1а и бетаинтерферон 1Ь (например, Ανοικχ'1™, КеЫР™, Βеίа8еοη™), ацетат глутирамера (например, Сοраxοηе), циклофосфамид, азатиоприн, глюкокортикостероиды, метотраксат, паклитаксел, 2-хлордезоксиаденозин, митоксантрон, ΙΒ-10, ΤΟΒΑ СЭ4, СЭ52, антегрен, СЭ11, СЭ18, ΤΝΕ-альфа, ГО-1, ГО-2 и/или анти-СЭ4 антитело или гибрид антитело-рецептор, интерферон-альфа, иммуноглобулин, лисмид (Кецшттах™), инсулиноподобный фактор роста-1 (ЮР-1), элпродил, пирфенидон, перорально вводимый миелин или соединение, которое обладает по меньшей мере одной или более функциями, такими как аутоиммунная суппрессия декструкции миелина, иммунная регуляция, активация, пролиферация, миграция и/или подавление функции Т-клеток, ингибирование взаимодействия Т-клеточного рецептора/пептида/МНС-ΙΙ,
- 43 026110 индуцирование Т-клеточной анергии, делеция аутореактивных Т-клеток, предотвращение перехода через гематоэнцефалический барьер, изменение баланса провоспалительных (ΤηΗ) и иммуномодулирующих (Τ^2) цитокинов, подавление действия ингибиторов металлопротеазы матрикса, нейрозащита, предотвращение глиоза, стимуляция ремиелинизации), антагонист ΤΝΡ (например, такой как, но не ограничивающийся ими, анти-ΤΝΡ антитело или его фрагмент, растворимый рецептор ΤΝΡ или его фрагмент, гибридные белки или небольшая молекула антагониста ΤΝΡ), противоревматическое средство, мышечный релаксант, наркотическое средство, нестероидное противовоспалительное средство (НСПВС), аналгетик, анестетик, седативное средство, местный анестетик, нейромышечный блокатор, противомикробное средство (например, аминогликозид, противогрибковое средство, антипаразитарное средство, противовирусное средство, карбапенем, цефалоспорин, фторхинолон, макролид, пенициллин, сульфонамид, тетрациклин и другие противомикробные средства), средство против псориаза, кортикостероид, анаболический стероид, анти-ГЬ-12/23 антитело, микроэлементы, питательные вещества, тиреотропное средство, витамин, гормон кальцитонина, средство против диареи, средство против кашля, противорвотное средство, противоязвенное средство, слабительное, антикоагулянт, эритропоэтин (например, эпоэтин-альфа), филграстим (О-С8Р, №иродеп®), сарграмостим (СМ-СδΡ, Ьеикше), иммунизирующее средство, иммуноглобулин, иммунодепрессант (например, базиликсимаб, циклоспорин, даклизумаб), гормон роста, лекарственное средство для гормон-заместительной терапии, модулятор рецептора экстрогена, мидриатическое средство, средство против циклоплегии, алкилирующий агент, антиметаболит, ингибитор митоза, радиофармацевтическое средство, антидепрессант, средство против маниакально-депрессивных расстройств, антипсихотическое средство, анксиолитик, гипнотическое средство, симпатомиметик, стимулятор, донепезил, такрин, противоастматическое средство, бета-агонист, стероид, вводимый путем ингаляции, ингибитор лейкотриена, метилксантин, кромолин, эпинефрин или его аналог, дорназа-альфа (Ри1то/уте®), цитокин или антагонист цитокина. Подходящие дозы хорошо известны специалистам. См., например, публикации ^е11к е! а1., ебк., Рйагтасо!йегару НапбЬоок, 2пб Ебйюп, Αрр1е!οη апб Ьапде, δΕ-υπΙοι^, Сопп. (2000); РОК Рйагтасорое1а, Τа^аксοη Роске! Рйагтасорое1а 2000, Эе1ихе Ебйюп, Τа^аксοη РиЬНкЫпд, Ьота Ыпба, СаПГ. (2000), каждая из которых во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Антагонистами ΤΝΡ, подходящими для их использования в приготовлении композиций, в комбинированной терапии, совместном введении, а также для их применения в устройствах и/или способах согласно изобретению (где указанные композиции также включают по меньшей мере одно антитело, его специфическую часть и вариант согласно изобретению), являются, но не ограничиваются ими, анти-ΤΝΡ антитела, их антигенсвязывающие фрагменты и молекулы рецепторов, которые специфически связываются с ΤΝΡ; соединения, предотвращающие и/или ингибирующие синтез ΤΝΡ, высвобождение ΤΝΡ или его действие на клетки-мишени, а именно, такие соединения, как талидомид, тенидап, ингибиторы фосфодиэстеразы (например, пентоксифиллин и ролипрам), агонисты аденозинового рецептора Α2Ь и усилители действия аденозинового рецептора Α2Π; соединения, которые предотвращают и/или ингибируют передачу сигнала рецептора ΤΝΡ, такие как активированные митогеном ингибиторы протеинкиназы (МΑР); соединения, которые блокируют и/или ингибируют расщепление мембранного ΤΝΡ, такие как ингибиторы металлопротеиназы; соединения, которые блокируют и/или ингибируют активность ΤΝΡ, такие как ингибиторы ангиотензин-конвертирующего фермента (АСЕ) (например, каптоприл); и соединения, которые блокируют и/или ингибируют продуцирование и/или синтез ΤΝΡ, такие как ингибиторы киназы МΑР.
Используемое здесь антитело против фактора некроза опухоли, анти-ΤΝΡ антитело, анти-ΤΝΡα антитело или их фрагмент и т.п. снижают, блокируют, ингибируют, устраняют или предотвращают активность ΤΝΡα ш νίίτο, ш кйи и/или предпочтительно ш νίνο. Так, например, подходящее человеческое антитело против ΤΝΡ согласно изобретению может связываться с ΤΝΡα, и такими антителами являются анти-ΤΝΡ антитела, их антигенсвязывающие фрагменты и специфические мутанты или домены, которые специфически связываются с ΤΝΡα. Подходящее анти-ΤΝΡ антитело или его фрагмент могут также снижать, блокировать, устранять, предотвращать, элиминировать и/или ингибировать синтез РНК, ДНК или белка ΤΝΡ, высвобождение ΤΝΡ, передачу сигнала рецептора ΤΝΡ, расщепление мембранного ΤΝΡ, активность ΤΝΡ, продуцирование и/или синтез ΤΝΡ.
Предпочтительными молекулами рецептора ΤΝΡ, используемыми в настоящем изобретении, являются молекулы, которые связываются с ΤΝΡα с высокой аффинностью (см., например, Ρе1бтаηη е! а1., публикацию Международной заявки № \УО 92/07076; Ьое!ксйег е! а1. 1990 Се11 61, 351-9; δсйа11 е! а1. 1990 Се11 61, 361-70, которая во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки) и которые обладают, но необязательно, низкой иммуногенностью. В частности, в настоящем изобретении могут быть использованы рецепторы ΤΝΡ клеточной поверхности размером 55 кДа (р55 ΤΝΡ-К) и 75 кДа (р75 ΤΝΡ-К). В настоящем изобретении могут быть также использованы усеченные формы этих рецепторов, содержащие внеклеточные домены (ЕСЭ) указанных рецепторов или их функциональных частей (См., например, Согсогап е! а1. 1994 Еиг I Вюсйет 223 831-40). Усеченные формы рецепторов ΤΝΡ, содержащие ЕСЭ, были детектированы в моче и в сыворотке как ингибирующие анти-ΤΝΡα антитела раз- 44 026110 мером 30 кДа и 40 кДа (Епде1тапп е! а1. 1990 I Бю1 СНет 265 1531-6). Другими примерами молекул рецепторов ΤΝΡ, которые могут быть использованы в способах и в композициях согласно изобретению, являются молекулы мультимерных рецепторов ΤΝΡ и гибридные молекулы иммунорецептора ΤΝΡ, и их производные, фрагменты или части. Молекулы рецептора ΤΝΡ, которые могут быть использованы в настоящем изобретении, характеризуются тем, что они могут быть использованы для лечения пациентов в течение длительных периодов времени и дают хороший или превосходный эффект в отношении облегчения симптомов заболевания, а также обладают низкой токсичностью. Определенный вклад в терапевтический эффект могут вносить низкая иммуногенность и/или высокая аффинность, а также другие пока не установленные свойства.
Обычно, лечение патологических состояний осуществляют путем введения эффективного количества или дозы по меньшей мере одной композиции антитела, которая в целом или в среднем составляет по меньшей мере примерно от 0,01 до 500 мг по меньшей мере одного антитела, его специфической части или варианта/килограмм массы тела пациента на дозу, а предпочтительно по меньшей мере примерно от 0,1 до 100 мг антитела, его специфической части или варианта/килограмм массы тела пациента на одно или множество введений, в зависимости от удельной активности антитела, его специфической части или варианта, содержащихся в данной композиции. Альтернативно, эффективная концентрация в сыворотке может составлять 0,1-5000 мкг/мл на одно или множество введений. Подходящие дозы, как известно, могут быть определены лечащим врачом, и как очевидно, зависят от конкретного патологического состояния, удельной активности вводимой композиции и от конкретного пациента, подвергаемого лечению. В некоторых случаях, для достжения желаемого терапевтического эффекта может оказаться необходимым повторное введение, то есть, повторное введение индивидууму регулируемой или установленной дозы, где отдельное введение повторяют до тех пор, пока не будет достигнута желаемая суточная доза или желаемый эффект. Предпочтительными дозами могут быть, но необязательно, дозы 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26,
27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56,
57, 58, 59, 60, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87,
88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 и/или 100 мг/кг/введение, или любые интервалы указанных величин, или величины, входящие в эти интералы, или дробные величины этих доз, или дозы, необходимые для достижения концентрации в сыворотке 0,1, 0,5, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,5, 1,9, 2,0, 2,5, 2,9, 3,0, 3,5, 3,9, 4,0, 4,5, 4,9, 5,0, 5,5, 5,9, 6,0, 6,5, 6,9, 7,0, 7,5, 7,9, 8,0, 8,5, 8,9, 9,0, 9,5, 9,9, 10, 10,5, 10,9, 11, 11,5, 11,9, 20,
12.5, 12,9, 13,0, 13,5, 13,9, 14,0, 14,5, 4,9, 5,0, 5,5, 5,9, 6,0, 6,5, 6,9, 7,0, 7,5, 7,9, 8,0, 8,5, 8,9, 9,0, 9,5, 9,9, 10,
10.5, 10,9, 11, 11,5, 11,9, 12, 12,5, 12,9, 13,0, 13,5, 13,9, 14, 14,5, 15, 15,5, 15,9, 16, 16,5, 16,9, 17, 17,5, 17,9, 18, 18,5, 18,9, 19, 19,5, 19,9, 20, 20,5, 20,9, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 96, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, и/или 5000 мкг/мл на одно или более введений, или любые интервалы указанных величин, или величины, входящие в эти интералы, или дробные величины этих доз.
Альтернативно, вводимая доза может варьироваться в зависимости от известных факторов, таких как фармакодинамические свойства конкретного средства, его способа и схемы введения; возраста, состояния здоровья и массы тела реципиента; природы и степени тяжести симптомов; типа одновременно проводимого лечения, частоты проведения курса лечения и желаемого эффекта. Обычно доза активного ингредиента может составлять примерно от 0,1 до 100 мг на килограмм массы тела. Обычно, для достижения желаемых результатов, эффективной является доза от 0,1 до 50, а предпочтительно от 0,1 до 10 мг на килограмм на одно введение лекарственного средства или введение лекарственного средства пролонгированного высвобождения.
В качестве неограничивающего примера может служить лечение человека или животных путем однократного или периодического введения дозы по меньшей мере одного антитела, его специфической части или варианта согласно изобретению в количестве от 0,1 до 100 мг/кг, например, 0,5, 0,9, 1,0, 1,1,
1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 или 100 мг/кг в день, по меньшей мере один раз в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14,
15, 16, 17, 18,19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 или 40 дней, или, альтернативно, или дополнительно по меньшей мере один раз в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15,
16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51 или 52 недель, или, альтернативно, или дополнительно по меньшей мере один раз в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 лет, или в любых указанных комбинациях путем введения или вливания одной или более доз.
Лекарственные формы (композиции), подходящие для внутреннего введения, обычно содержат примерно от 0,1 до 500 мг активного ингредиента на одну лекарственную форму или контейнер. В этих фармацевтических композициях активный ингредиент обычно присутствует в количестве примерно 0,599,999 мас.% всей композиции.
Для парентерального введения, антитело, его специфическая часть или вариант могут быть получены в виде раствора, суспензии, эмульсии или лиофилизованного порошка, приготовленных отдельно или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем для парентерального введения. Примерами
- 45 026110 таких носителей являются вода, физиологический раствор, раствор Рингера, раствор декстрозы и 1-10% альбумин человеческой сыворотки. Могут быть также использованы липосомы и безводные носители, такие как жирные масла. Носитель или лиофилизованный порошок может содержать добавки, поддерживающие изотоничность (например, хлорид натрия, маннит) и обеспечивающие химическую стабильность (например, буферы и консерванты). Данный препарат стерилизуют известными или подходящими методами.
Подходящие фармацевтические носители описаны в самом последнем издании руководства Кетшд!оп'е РБаттасеи!1са1 8с1епсее, А. 0ео1, то есть, в стандартном справочном руководстве для специалистов в данной области.
Иногда может оказаться желательным введение антител согласно изобретению индивидууму в течение длительных периодов времени, например, в течение периода времени от одной недели до одного года, начиная с первого введения. Могут быть также использованы различные лекарственные формы пролонгированного высвобождения, депо-препараты или имплантаты. Так, например, лекарственная форма может содержать фармацевтически приемлемую нетоксичную соль соединений, которые имеют низкую степень растворимости в физиологических жидкостях, например: (а) кислотно-аддитивную соль, образованную полиосновной кислотой, такой как фосфорная кислота, серная кислота, лимонная кислота, винная кислота, дубильная кислота, памовая кислота, альгиновая кислота, полиглутаминовая кислота, нафталин-моно- или дисульфоновые кислоты, полигалактуроновая кислота и т.п.; (Ъ) соль, образованную катионом поливалентного металла, такого как цинк, кальций, висмут, барий, магний, алюминий, медь, кобальт, никель, кадмий и т.п., или органическим катионом, образованным, например, Ν,Ν'дибензилэтилендиамином или этилендиамином; или (с) комбинации солей (а) и (Ъ), например, такую соль, как таннат цинка. Кроме того, соединения согласно изобретению или, предпочтительно, относительно нерастворимая соль, такая как соль, непосредственно описанная выше, могут быть приготовлены в форме геля, например, геля, содержащего моностеарат алюминия с добавлением, например, кунжутного масла, подходящего для инъекций. Особенно предпочтительными солями являются соли цинка, таннатные соли цинка, соли памовой кислоты и т.п.Депо-препарат пролонгированного высвобождения другого типа, подходящий для инъекций, может содержать соединение или соль, диспергируемые для инкапсуляции в медленно разлагающемся нетоксичном неантигенном полимере, таком как полимер полимолочной кислоты/полигликолевой кислоты, описанный, например, в патенте США № 3773919. Указанные соединения или предпочтительно относительно нерастворимые соли, описанные выше, могут быть также приготовлены в виде силастических гранул на холестериновой матрице, в частности, для их введения животным. Другие препараты пролонгированного высвобождения, депо-препараты или препараты в виде имплантатов, например, газообразные или жидкие липосомы описаны в литературе (патент США № 5770222 и публикация 8ие!ашей апй Сойто11ей Ке1еаее Эгид ЭеНуету 8уе!ете, Р К. КоЪшеоп ей., Магсе1 Эеккет, ГОс., Ν.Υ., 1978).
Для лучшего понимания настоящего изобретения, которое в общих чертах описано выше, ниже представлены примеры, иллюстрирующие, но не ограничивающие объема настоящего изобретения.
Примеры осуществления настоящего изобретения
В этих примерах, все указанные ГО-12, ГО-23, I^-12р40. Ш-12р80, ΙΕ-12Ρβ 1, ΙΕ-12Ρβ2 и ГО-23 относятся к человеческим формам белка, если это не оговорено особо.
В табл. 10 представлены соответствующие последовательности белков и ДНК для каждого антитела, описанного в этих примерах.
Пример 1.
1.1 Выделение гибридомы и получение химерных антител
С применением стандартных методов продуцирования мышиных гибридом и рекомбинантного ГО12 в качестве иммуногена были получены две гибридомных клеточных линии, РМА202 и РМА204. Эти клеточные линии секретировали антитело, которое связывается с ГО-12р40 (8ЕО ГО Ν0:1), ГО-12 (8ЕО ГО Ν0:1 и 8ЕО ГО Ν0:2) и ГО-23 (8ЕО ГО Ν0:1 и 8ЕО ГО Ν0:3), как было проанализировано в ЕЫ8А (РМА204 - фиг. 3). Как было определено, эти антитела имели изотип мышиного ΙβΟι каппа.
После экстракции РНК из клеточных линий, РМА202 и РМА204, и с применением ПЦР-методов были получены последовательности вариабельных областей мышиной тяжелой и легкой цепи. Ниже проиллюстрированы последовательности, где области СЭК подчеркнуты и определены по Кэбату (КаЪа! е! а1. 1971 Апп. Ν. Υ. Асай. 8сЕ 190:382-93 и КаЪа!, Е.А., е! а1. (1991) 8ециепсее оГ Рто!еше оГ Iттиηо1од^са1 Шегее!, РГОБ ЕйШон и.8. Эерайтеп! оГ НеаЙБ апй Нитап 8егу1сее, ΝΙΗ РиЪНсайоп № 91-3242). Следует отметить, что все последующие вариабельные области антител в последовательности белка пронумерованы по системе нумерации Кэбата.
Вариабельная область мышиной тяжелой цепи РМА202 (8ЕО ГО Ν0:4):
О1ОЬУО5СРЕЬККР6ЕТУК15СКА56УТЕТНУ6МЫИУКОАРСК6ЬКИМ6Й1ЫТУТСЕРТУАРР ГКбКЕАЕЗЬЕТЗАЗТАЬОIΝΝΕΚΝΕΡΤΑΤΥГСАЕ2ЬгТМ1ТТТГАУИ606ТЪУТУЗ3
Вариабельная область мышиной легкой цепи РМА202 (8ЕО ГО Ν0:5)
- 46 026110
51УМТ0ТРКЕЬЬУ5АеРЕУТ1ТСКА505У5МРУАИУ00КРе05РКЬЫУУАЗЫКУТеУРРЕЕТ езсуетрртрт1зтуоАЕРЬАУУРсооруззрутрдддткьЕ1КЕ
Вариабельная область мышиной тяжелой цепи РМА204 (8ЕЦ ГО N0:6)
Е УО Ь <2<2 3 ЗАРЬ УЕ 3 ЗА 31 КЬ 3 С Т А 3 ΟΕΝI КЭУУМНИУКОК РЕ о 5Ι,ΕΜΙ5ΜΙΡΡΕΝ5ΡΤΕΥΑΡΚ ГаЗКАТМТАРТЗЗЫТАУЬОЬЗЗЬТЗЕРТАУУУСМАСКЕЬЕУГРУМСАСТТУТУЗЗ
Вариабельная область мышиной легкой цепи РМА204 (8ЕЦ ГО N0:7)
Р1УЬТдЗРАТЬЗУТРеРЗУЗЬЗСКА303131ЫЬНИУ0дКЗНЕЗРКЬЫКЕА30313О1РЗК
ЕЗСУСЗСТРЕТЬ31МЗУЕТЕРЕСЕУГСООЗНЗИРЬТГСАСТКЬЕЬКЕ
С использованием последовательностей белка РМА202 в качестве матрицы была продуцирована новая оптимизированная нуклеотидная последовательность, в которой вариабельная область мышиной тяжелой цепи была присоединена к домену человеческого Ι§Οι (СН1, СН2 и СН3) (8ЕЦ ГО N0:8), а вариабельная область легкой цепи была присоединена к константному домену человеческой цепи каппа (8ЕЦ ГО N0:9), как показано ниже. Это химерное антитело было обозначено как антитело 202.1:
Тяжелая цепь антитела 202.1 (8ЕЦ ГО N0:10)
01рРУ056РЕЬККРСЕТУК15СКА56УТЕТЫУСМЫИУК0АРСКеЬКИМСИЮТУТ6ЕРТУАРР ЕКбЕЕАЕЗЬЕТЗАЗТАУЬОРЫЫЕКЫЕРТАТУЕСАЕЗЬЗТМГГТТЕАУИбОСТЪУТУЗ5Α5ΤΚΝ РРУЕРЬАРЗЗК5Т366ТААЬеСЬУКРУЕРЕРУТУЗИЫЗеАЬТ35УНТЕРАУЬ0336ЬУЗЬЗЗУ УТУР555ЬСТ0ТУ1СНУННКРЗНТКУРККУЕРК5СРКТНТРРСРАРЕЬЬССР5УГЬЕРРКРКР ΤΕΜΙ5ΚΤΡΕνΤθνννΡν5ΗΕΡΡΕνΚΓΝΗΥνΡ5νΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ0ΥΝ8ΤΥΚνν5νΕΤνΡΗ0Ρ ИЬЫСКЕУКСКУЗЫКАЬРАР1ЕКТ13КАКС0РЕЕР0УУТЬРРЗЕРЕЬТКЫ0УЗЬТСЬУКСЕУРЗ ΡΙΑνΕΗΕ8Ν0αΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΡΡ5Ρ65ΕΕΡΥ5ΚΡΤνΡΚ8ΚΜ(2ί26ΝνΕ808νΜΗΕΑΕΗΝΗΥΤ(2
КЗЬЗЬЗРСК
Легкая цепь антитела 202.1 (8ЕЦ ГО N0:11)
51УМТ2ТРКГЬЬУ5АСРКУТ1ТСКА505У5ЫРУАИУ00КРе05РКЬЫУУА5ШУТеУРРЕГТ
СЗСУСТРЕТГТ13ТУ0АЕРЬАУУГС00РУЗЗРУТЕСССТКЬЕ1КЕТУААР5УГ1ЕРРЗРЕ0ЬК
56ТА5УУСЬЬИИГУРКЕАКУ(2НКУРЫАЫ255И50Е5УТЕ0Р5КР5Т¥5Ь55ТЬТЬЗКАРУЕКН КУУАСЕУТНОСЬЗ 3 РУТКЗ ГЫЕЗЕС
С использованием последовательностей белка РМА204 в качестве матрицы была продуцирована новая оптимизированная нуклеотидная последовательность, в которой вариабельная область мышиной тяжелой цепи была присоединена к домену человеческого ΙβΟι (СН1, СН2 и СН3) (8ЕЦ ГО N0:8), а вариабельная область легкой цепи была присоединена к константному домену человеческой цепи каппа (8ЕЦ ГО N0:9), как показано ниже. Это химерное антитело было обозначено как антитело 1:
Тяжелая цепь антитела 1 (8ЕЦ ГО N0:12)
Εν0Ε0Ρ5ΰΑΟΕνΕ30Α3ΙΚΕ30ΤΑ53ΓΝΙΚΡΥΥΜΗΗνΚι2ΕΡΕι20ΕΕΜΙ0ΜΙΡΡΕΝ6ΡΤΕΥΑΡΚ
ЕОбКАТМТАРТЗЗИТАУЬОЬЗЗЬТЗЕРТАУУУСИАСКЕЬЕУЕРУИеАбТТУТУЗЗАЗТКИРРУ
ЕРЬАРгЗКгТЗССТААЬССЬУКРУГРЕРУТУЗННгОАЬТЗСУНТГРАУЬОгЗОЬУЗЬЗЗУУТУ
Р335ЬСТСТУ1СКУННКРЗНТКУРККУЕРКЗСРКТНТСРРСРАРЕЬЬ00РЗУЕЬЕРРКРКРТЬ
М13ЕТРЕУТСУУУРУЗНЕРРЕУКГЫИУУР6УЕУНКАКТКРЕЕЕ0УК5ТУЕУУЗУЬТУЬН0РИЬ
ЫСКЕУКСКУЗНКАЬРАР1ЕКТ13КАКССРЕЕРСУУТЬРРЗЕОЕЬТКЫ12УЗЬТСЬУКСЕУРЗО1
АУЕИЕЗЫбОРЕЫМУКТТРРУЬРЗРбЗГГЬУЗКЬТУРКЗЕИООСЫУЕЗСЗУМНЕАЬНЫНУТОКЗ
ЬЗЬЗРСК
Легкая цепь антитела 1 (8ЕЦ ГО N0:13)
Р1У1,Т05РАТ1,5УТРСР5У5Е5СКА505151НЬНИУ00К5НЕ5РК1,ЫКЕА5<2515С1Р5ЕЕ5
СУ63СТРРТЪ31МЗУЕТЕРРСЕУРС0рЗМЗИРЬТРСАСТКЬЕЪКЕТУААРЗУР1РРР5РЕрЪК
ЗбТАЗУУСЬРЫЫЕУРЕЕАКУрИКУРЫАЕрЗСЫЗОЕЗУТЕОРЗКРЗТУЗЕЗЗТЬТЬЗКАРУЕКН КУУАСЕУТ ВДСЬЗ 3РУТКЗ ЕИКСЕС
Оба антитела были временно продуцированы в клеточной линии НЕК и очищены с помощью хроматографии на белке А. Антитело 1 против ГО-12, ГО-23, ГО-12р40 тестировали с помощью анализов ЕЫ8А (фиг. 3) и поверхностного плазмонного резонанса (ППР) (табл. 1), и было показано, что оно является специфичным к субъединице р40 ГО-12/23. Профиль связывания был аналогичен профилю связывания исходного мышиного антитела РМА204 (фиг. 3).
- 47 026110
Таблица 1. ППР-данные для антитела 1
Аналит ка (Ι/мс) ка (1/с) Ко (пМ)
1Ь-12 1, ЗбхЮ6 6,45x10’: 47,7
1Б-23 2,55х106 1, 14x10^ 44, 6
1Ь-12р40 1,07х106 7, 12х105 66, 3
Пример 2.
2.1. Специфичность РМА204 и антитела 1
РМА204 и антитело 1 в равной степени эффективно связывались с человеческими ГО-12, ГО-23, ГО12р40 и !ГО-12р80 в зависимости от дозы, как было определено с помощью ЕЫЗА (фиг. 3). С помощью НИР были вычислены кинетические данные для антитела 1, включая ка (константу ассоциации), кД (константу диссоциации) и константу равновесной диссоциации (Кс), и эти данные представлены в табл. 1. Антитело 1 связывалось с человеческими ГО-12, ГО-23, !И-12р40 с аналогичными величинами Кс в пределах 40-70 пМ (табл. 1).
2.2. РМА204 и антитело 1 нейтрализуют связывание ГО-12 с ΙΕ-12Κβ2 и связывание ГО-23 с ГО-23К
Анализ на нейтрализацию рецептора продемонстрировал, что РМА204 и антитело 1 нейтрализовали связывание ГО-12 с внеклеточным доменом Ε-12Κβ2 (ЗЕЦ ГО NО: 15) (фиг. 4А) и связывание ГО-23 с внеклеточным доменом ГО-23К (ЗЕЦ ГО NО: 16) (фиг. 4В).
2.3. РМА204 и антитело 1 не обладают способностью нейтрализовать связывание ГО-12, !Н-12р40, ГО-12р80 или ГО-23 с ΙΕ-12Κβ1
РМА204 и антитело 1 не обладают способностью нейтрализовать связывание ГО-12 и [И-12р80 с ГО12Κβ1 (ЗЕЦ ГО NО:14) (фиг. 5). Связывание [И-12р40 и ГО-23 с ΙΕ-12Κβ1 не ингибировалось РМА204 или антителом 1 (фиг. 6).
2.4 Антитело 1 не ингибирует связывание ГО-12/23 с ΙΕ-12Κβ 1-трансфицированными клеточными линиями
Была получена стабильно трансфицированная клеточная линия 1игка!, сверхэкспрессирующая ГЬ12Κβ1. Эта клеточная линия была негативной по ΙΕ-12Κβ2 и ГО-23К, как было определено методом проточной цитометрии. Связывание ГО-12р40, ГО-12 и ГО-23 с этой клеточной линией было подтверждено методом проточной цитометрии. В эксперименте, в котором антитело 1 и антитело 202.1 титровали с ГО12р40, ГО-12 или ГО-23, антитело 202.1 продемонстрировало титруемое ингибирование связывание цитокина с клеточной линией 1итка!, трансфицированной ΙΕ-12Κβ1 (фиг. 7). В противоположность этому, антитело 1 не обладало какой-либо заметной способностью нейтрализовать связывание любой из отдельно взятых цепей ГО-12, ГО-23 или [И-12р40 с ΙΕ-12Κβ 1-трансфицированной клеточной линией .Титка! (фиг. 7). Средняя интенсивность флуоресценции ГО-12 и ГО-23 возрастала с увеличением концентрации антитела 1 до 1 мкг/мл, что указывало на образование комплексов антитело - цитокин - рецептор (фиг. 7).
2.5. Антитело 1 образует комплекс с ГО-12, ГО-23, связанными с ΙΕ-12Κβ1 на трансфицированных клеточных линиях
Антитело 1 сильно связывается с цепями ГО-12, ГО-23 или [И-12р40, связанными с ΙΕ-12Κβ1 на поверхности трансфицированных клеток (фиг. 8). При этом предполагается, что такой комплекс может присутствовать в биологических системах, а присутствие антитела в такой ориентации позволяет Рсобласти антитела взаимодействовать с Рс-связывающими рецепторами. Такие рецепторы могут присутствовать на эффекторных клетках и индуцировать АЭСС- и СНС-активность, а поэтому они оказывают токсическое действие на клетки-мишени, на которых образуется указанный комплекс антитело - цитокин - рецептор. В противоположность этому антитело 202.1 почти не связывалось с комплексами цитокин - рецептор.
Пример 3.
3.1. Оптимизация антитела 1
3.1.1. А в положении 94 в легкой цепи
В процессе очистки антител триптофан может окисляться, что приводит к образованию окисленных и неокисленных молекул, и тем самым затрудняет проведение ВЭЖХ-анализа белка, как описано в публикации Уап§ е! а1. 2007, ί. СЬгота!одг. А 1156:174-82. Во избежание этого осуществляют консервативную замену Тгр на РЬе в положении 94 легкой цепи. Это антитело, называемое антителом 3, было получено путем синтеза генов, экспрессии и скрининга в ЕЫЗА (фиг. 9). При ППР-скрининге, это антитело диссоциировалось из ГО-12 и ГО-23 быстрее, чем антитело 1 (табл. 2).
- 48 026110
Таблица 2. ППР-данные для антител 1, 3, 4 и 7
Антитело № Связывание ТЬ-12 Связывание ТЬ-23
ка (1/мс) ка (1/с) КР (пМ) ка (1/мс) ка (1/с) КР (пМ)
1 1,67x10“ 1,32х10~4 79,5 2,85x10“ 1,46х104 51, 3
3 2,15x10“ 9, 3 9х105 43, 8 1,24x10“ 1, 11х104 89, 6
4 1,54x10“ 2,04х10'4 133, 0 1,25x10й 1, 58х10'4 127,0
7 1,82Х106 1, 67х10'4 91, 8 2,03x10“ 1,47х104 72,2
3.1.2. М в положении 34 тяжелой цепи
Было показано, что в процессе очистки и хранения антител, Ме! может окисляться. Поиск последовательностей человеческих антител, проводимый с помощью программы ВЬА8Т, показал, что Ьеи присутствует в этом положении во всех последовательностях. Была сделана замена М34Ь, и эта конструкция была названа антителом 4. Затем ген синтезировали, экспрессировали и антитело скринировали с помощью НИР и ЕЫ8А (фиг. 9). Антитело 4, по сравнению с антителом 1, обнаруживало небольшую потерю аффинности по отношению к 1Ь-12 и 1Ь-23 (табл. 2).
3.1.3. Цистеин в положении 95 в тяжелой цепи
Определенные проблемы могут быть связаны в связи с остатком в положении 95 тяжелой цепи антитела 1. Этот цистеин, присутствующий в начале СЭК3, может окисляться, что будет приводить к гетерогенности в любом полученном продукте антитела. Он может также образовывать комплексы в результате образования дисульфидных связей. Поэтому, каждая из других 18 (за исключением исходных Сук и Тгр) аминокислот была заменена в этом положении путем синтеза генов с получением временно экспрессируемых антител (антител 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22). Эти антитела анализировали с помощью ЕЫ8А (фиг. 9). Некоторые из этих антител сохраняли активность связывания с 1Ь-12 и 1Ь-23, другие антитела сохраняли активность связывания только с одним цитокином или т.п., а другие обнаруживали минимальный уровень связывания с любым из цитокинов. Образцы подвергали ППР-анализу и на основании этих данных анализировали скорость диссоциации таких конструкций. Исходя из этих данных, был сделан вывод, что антитело 7, которое имело замену С95Н обнаруживало наибольшее сходство с антителом 1 (табл. 2).
Неожиданно было обнаружено, что такая замена значительно повышает гомогенность продукта, на что указывал электрофорез в ДСН-ПААГ. Антитело 7 обнаруживало такое распределени размеров, как и большинство молекул, которые были аналогичны сравнительному антителу с известной молекулярной массой (фиг. 10). Было проведено сравнение с антителом 1, которое обнаруживало две главных полосы (фиг. 10).
Затем были сделаны 3 замены в одном антителе, которое было названо антителом 50, и которое имело нижеследующие вариабельные области тяжелой и легкой цепи.
Домен νΗ антитела 50 (8ЕО ГО NО: 112)
ЕУОЬООΞСАРЬУКЗ5ΑΞ1КЬ3СТАЗ6ЕМ1КРУУЬНИУК0ЕРЕ0еЬЕИ15ΜΙΡΡΕΝ5ΡΤΕΪΑΡΚ Е0СКАТМТАРТ55ЫТаУЬ0Ь55ЬТ5ЕРТаУУУСЫаЫКЕЬЕУЕРУИЗаЗТТУТУ55
Домен УЬ антитела 50 (5Е0 Ю ΝΟ: 169) Р1УЬТ05РаТЬ5УТРСР5У5Ь5СЕа50515таЬНИУ00К5НЕ5РЕЬЫКЕа505П561Р5ЕЕ5 6У656ТРГТЬ51Ц5УЕТЕРЕ6ЕУЕС005Н5ЕТЬТЕеАеТКЬЕЬКК
Это антитело сохраняло высокую аффинность по отношению к ГО-12 и ГО-23, как было определено с помощью ЕЫ8А, НИР и клеточного анализа (фиг. 11).
Пример 4.
4.1. Сверхгуманизация РМА204
Сверхгуманизацию РМА204 осуществляли методом, описанным в публикации И8 2003/039649 (Роо!е) и в публикации РСТ АО 04/006955 (Роо!е), а более подробное объяснение этого метода приводится в работах Тап е! а1. (2002) и Н\\апд е! а1. (2005).
Сначала канонические структуры для СОК тяжелых и легких цепей определяли (см. ниже) методом, описанным в заявке на патент США рег. № 10/194975 и в патенте США № 6881557, а более подробное объяснение этого метода приводится в работах Тап е! а1 (2002, 1. 1ттипо1. 169(2):1119-25), Н\\апд е! а1. (2005) и в настоящей заявке (см. выше). Эти структуры представлены ниже:
- 49 026110
Таблица 3. Паттерны канонических структур СОК РМА204
В качестве акцепторов были выбраны последовательности области УН человеческой зародышевой линии (Н\уапд е! а1., 2005), которые имели профиль канонической структуры, аналогичный профилю канонической структуры РМА204. Эти последовательности зародышевой линии представлены ниже (примечание:все последовательности зародышевой линии взяты из базы данных ГМ0Т, ОшйюеШ, У. е! а1. №.1с1е1с Аайк Кек., 33:0256-0261 (2005), при этом, следует отметить, что некоторые остатки в этих последовательностях зародышевой линии являются гипервариабельными и не представлены в данной последовательности):
1СНУ1-£*01 (ЗЕО Ю НО: П)
ЕУОЬУОЗеАЕУККРеАТУИЗСКУЗеУТЕТРУУМНУУООАРСКеЬЕИМеЬУСРЕРеЕТ IΥΑΕΚΕΟΟΡνΤIТАРТЗТРТАХМЕЬЗЗЬРЗЕОТАУУΥΟΑΤ
1СНУ1-24*01 (ЗЕО Ιϋ N0: 18)
ОУОРУОЗбАЕУККРбАЗУКУЗСКУЗСУТРТЕЬЗМНИУРОАРСКбЬЕНМббЕРРЕРбЕТ IУАОКЕОбКУТМТЕРТЗТРТАУМЕЬЗЗЬКЗЕОТАУУУСАТ
16НУ1-18*01 (ЗЕО Ю N0: 19)
0У01,У05ОАЕУККРСАЗУКУЗСКА8СУТЕТ8ЕС15№7К0АРС0СЬЕИМОИ13АУН6ЫТ
НУАОКЬОбРУТМТТРТЗТЗТАУМЕЬРЗЬРЗРОТАУУУСАК
Любые из представленных последовательностей зародышевой линии (8Е0 ГО N0:17, 8Е0 ГО N0:18, 8Е0 ГО N0:19) в комбинации с любыми шестью известными последовательностями 1Н человеческой зародышевой линии могут обеспечивать каркасные области с образованием гуманизованной тяжелой цепи. Нижеследующая последовательность области Ш была выбрана, исходя из сходства первичных последовательностей:
ЛНЗ (ЗЕО ю N0: 20)
АРРУИСОСТМУТУЗЗ
В качестве акцепторов были выбраны последовательности области УЬ человеческой зародышевой линии (Н\\апд е! а1., 2005), которые имели профиль канонической структуры, аналогичный профилю канонической структуры РМА204. Эти последовательности зародышевой линии представлены ниже:
1СКУбО-21*01 (ЗЕО Ιϋ N0: 21)
Е1УЬТ05РОЕ05УТРКЕКУТ1ТСЕА5031еЗЗЬНИУ00КРО05РКЬЫКУА503Е5еУ
Р5ЕЕ5С5С5СТОЕТЬТ1Ы5ЬЕАЕОААТУУСН0555ЬР
16КУЗ-15*01 (ЗЕО Ю N0: 22)
Е1УМТОЗРАТЬ5УЗРСЕКАТЬЗСКАЗОЗУ55МЬАИУООКРСОАРКЬЫУСАЗТКАТС1
РАЕЕЗСЗеЗОТЕЕТЬТТЗЗЬОЗЕОЕАУУУСООУЫЫИР
1СКУЗ-11*01 (ЗЕО ю N0: 23)
ЕТУЬТОЗРАТЬЗЬЗРСтЕЕАТЬЗСНАЗОЗУЗЗУЬАИУООКРСОАРКЬЫ ΥϋΑ3ΝΗΑΤ(3Ι РАКЕЗСЗСЗСТБЕТЬТ133ЬЕРЕ0ЕАУУУС00КЗМИР
Любые из представленных последовательностей зародышевой линии (8Е0 ГО N0: 21, 8Е0 ГО N0: 22, 8Е0 ГО N0: 23) в комбинации с любыми 5 возможными последовательностями ГО могут обеспечивать каркасные области с образованием гуманизованной легкой цепи. Нижеследующая последовательность области ГО была выбрана, исходя из сходства первичных последовательностей:
Лк4 (ЗЕО Ю N0: 24)
ЬТГСббТКУЕΪΚΚ.
СОК акцепторов заменяли соответствующими СОК РМА204. Гены были созданы путем синтеза, и различные комбинации сверхгуманизованных тяжелых и легких цепей были трансфицированы (антитела 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48). Все эти экспрессированные антитела сохраняли активность связывания с ГО-12 и ГО-23 (фиг. 12).
Были идентифицированы две редкие аминокислоты в тяжелой цепи РМА204, а именно А1а в положении 93 и Акп в положении 94. Эти аминокислоты были введены в качестве обратных мутаций в сверхгуманизованные варианты тяжелой цепи. Гены получали путем синтеза, и различные комбинации этих
- 50 026110 подвергнутых обратной мутации сверхгуманизованных тяжелых цепей и сверхгуманизованных легких цепей трансфецировали (антитела 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39). Некоторые из этих экспрессированных антител сохраняли активность связывания с Х-12 и Х-23, некоторые из них сохраняли активность связывания только с одним цитокином или т.п., а другие обнаруживали минимальный уровень связывания с любым из цитокинов (фиг. 12).
Из этих комбинаций антител, несколько антител обнаруживали постоянное и сильное связывание с антигеном в ЕША и ППР-анализах. Было отбрано три антитела, антитела 37, 39 и 44. Исходя из оптимизации антитела 1, в антитела 37, 39 и 44 были введены 3 точковых мутации, которые улучшали биофизические свойства антитела 1 (У94Р легкой цепи, М34Ь тяжелой цепи, С95N тяжелой цепи). Был осуществлен комбинированный способ смешивания тяжелых и легких цепей оптимизированных вариантов с получением панели антител (антитела 76, 77, 78, 79, 80, 81). Все эти антитела связывались с Х-12 и Х-23, как было определено в ЕША (фиг. 13). Антитело 80 обнаруживало сильное связывание с Х-12, как было определено с помощью ППР, и это антитело было выбрано для последующего анализа на основе клеток ΝΚ92 (фиг. 11), анализа на Χ-12-индуцированый ΙΡΝ-γ в человеческих МКПК (фиг. 17) и анализа мышиных спленоцитов (фиг. 14). Конструкция антитела 80 обнаруживала сильное ингибирование Х-12индуцированной секреции ΙΡΝ-γ в анализе ΝΚ-92 и Χ-23-индуцированной секреции Х-17 в анализе мышиных спленоцитов.
Пример 5.
5.1. Гуманизация РМА204
РМА204 также подвергали гуманизации с использованием человеческих каркасных последовательностей, которые представляли собой линейную пептидную последовательность, наиболее гомологичную каркасным последовательностям исходного мышиного антитела.
Поиск в базе данных РВЭ, осуществляемый с помощью программы ВЬА§Т (Ь!1р://№№№.рйЬ.отд/рйЬ/Ьоте/Ьоте.йо), проводили с использованием тяжелых и легких цепей РМА204 в качестве запрашиваемых последовательностей.
Человеческая последовательность, которая имеет наибольшую гомологию вариабельной области тяжелой цепи РМА204, представляет собой вариабельную область 1К27нС (5>ЕО ΙΌ ΝΟ:25), указанную ниже:
Между двумя последовательностями, расположенными за пределами областей СОК, имеются различия в 31 аминокислоту.
Между вариабельными областями легкой цепи РМА204 и 1К27ЬС также наблюдалась высокая степень гомологии легких цепей (8ЕО ГО ΝΟ:26), представленная ниже:
Между двумя последовательностями, расположенными за пределами областей СОК, наблюдалось различие в 31 аминокислоту.
С помощью программы 3-мерного моделирования (Ассе1гук, Мойе11ег) были сконструированы 3мерные модели тяжелой и легкой цепи РМА204 с использованием 10 наиболее гомологичных антител в качестве матриц, полученных на основе первичной последовательности, обнаруженной в процессе
- 51 026110
ВЬА8Т-поиска в базе данных ΡΒΌ, где каждое антитело, используемое в качестве матрицы, имело опубликованную кристаллическую структуру высокого разрешения. Выравнивание модели РМА204 и 1ΕΖ7 продемонстрировало приемлемое соответствие (ср. кв. отк. для тяжелых цепей = 1,53 и ср. кв. отк. для легких цепей = 0,6) между каркасными последовательностями двух антител. Поэтому 1ΡΖ7 был выбран в качестве акцепторной каркасной области, в которую были перенесены донорные СОК от РМА204 с получением СЭК-привитого антитела.
Более точная оценка модели РМА204 выявила важную роль каркасных остатков, которые могут влиять на связывание СГОК-привитого антитела с антигеном. Эти остатки представлены ниже:
Тяжелая цепь:
АКС40 - имеет водородные связи с другим остатком и стабилизирует структуру петли СОК
СЬИ42 - отличается во вторичной структуре донора и акцептора
ΕΥ866 - имеет водородные связи с 3 различными остатками и стабилизирует структуру петли СОК
Легкая цепь:
ΕΥ849 - имеет Н-связи с остатками СЭК3 тяжелой цепи
ТУК65 - редкий неконсервативный остаток
АКС85 - редкий неконсервативный остаток
Каждая из этих аминокислот была введена в СЭК-привитое антитело в виде обратных мутаций. Исходя из оптимизации антитела 1, во все гуманизованные варианты было введено 3 точковых мутации, которые улучшали биофизические свойства антитела 1 (\94Р легкой цепи, М34Ь тяжелой цепи, С95N тяжелой цепи).
После синтеза генов, кодирующих все гуманизованные варианты, осуществляли совместную экспрессию комбинаций СГОК-привытых антител с прямой цепью и цепями с обратными мутациями, в результате чего получали панель гуманизованных антител (антител 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75). Эти антитела подвергали ЕЬГОА-анализу. Все эти антитела сохраняли активность связывания с ГЬ-12 и ГО-23 (фиг. 15, фиг. 16). Антитело 68 обнаруживало сильное связывание с ГЕ-23, как показал ППР-анализ, и это антитело было выбрано для последующего анализа с использованием клеток ΝΙ<92 (фиг. 11). Антитело 68 продемонстрировало сильное ингибирование ΣΕ-12-индуцированной секреции ΣΕΝ-γ в анализе ЫК-92.
Для того, чтобы определить, могут ли другие обратные мутации повышать аффинность и активность антитела, было осуществлено выравнивание последовательностей вариабельной области тяжелой цепи антитела 68 и последовательности вариабельной области тяжелой цепи оптимизированного химерного антитела 50. В каждом положении, в котором антитело 68 отличается от антитела 50, остаток антитела 50 в этом положении был введен в антитело 68. Эти кодируемые геном варианты синтезировали, спаривали с легкой цепью антитела 68 и экспрессировали (антитела 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125). ЕЫ8А осуществляли для всех тяжелых цепей и легких цепей антител. Некоторые из них сохраняли активность связывания с обоими ГО-12 и ГО-23, другие сохраняли активность связывания только с одним цитокином, или т.п., а некоторые вообще не связывались ни с одним цитокином (фиг. 18).
Для того, чтобы определить, могут ли другие обратные мутации повышать аффинность и активность антитела, было осуществлено выравнивание последовательности вариабельной области легкой цепи антитела 68 и последовательности вариабельной области легкой цепи оптимизированного химерного антитела 50. В каждом положении, в котором антитело 68 отличается от антитела 50, остаток антитела 50 в этом положении был введен в антитело 68. Эти кодируемые геном варианты синтезировали, спаривали с тяжелой цепью антитела 68 и экспрессировали (антитела 126, 127, 128, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148). ЕЫ8А осуществляли для всех тяжелых цепей и легких цепей антител. Некоторые из них сохраняли активность связывания с обоими ГО-12 и ГО-23, а некоторые вообще не связывались ни с одним цитокином (фиг. 19).
Антитела 127, 130, 136, 140, 146, 147 и 148 были отобраны по их сильному связыванию с ГО-12 и ГО23 путем скрининга в клеточных анализах. Антитело 136 обнаруживало сильное ингибирование ГО-12индуцированной секреции ΞΕΝ-γ в анализе с использованием человеческих МКПК (фиг. 17) и ГО-23индуцированной секреции ГО-17 в анализе с использованием мышиных спленоцитов (фиг. 14).
Пример 6.
6.1. Созревание аффинности антитела 80
6.1.1. Получение материалов для рибосомного представления
Антитело 80 было реконструировано в целях экспрессии в виде 5сΡν (5сΡν-80) (8ЕЦ ГО ΝΟ:27) и субклонировано в экспрессионный вектор рЕСХ448. 5сΡν экспрессировали с меткой РЬАС для аффинной очистки. Затем 5сΡν экспрессировали в Е.соП и очищали с помощью аффинной хроматографии и гель-фильтрации. Экспрессию подтверждали с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ и иммуноблотинга. 5сΡν сохранял активность связывания с ГО-12 и ГО-23 с кинетическими свойствами, аналогичными свойствам родительского ЦС, как было подтверждено с помощью ПНР.
Кодирующую последовательность для 5сΡν-80 субклонировали в вектор рЕСХ412 для мутагене- 52 026110 за/рибосомного представления, и в последовательность ксРу вводили произвольные мутации с использованием Ц-бета-репликазы (КоркИак е! а1., 2007, ВМС ВюЮсЬпо^ду, 7:18). Полученный пул ДНКконструкций, кодирующих мутантные варианты ксРу-80, транскрибировали посредством реакции РНКполимеразы Т7 с получением одноцепочечной мРНК, которую затем использовали для рибосомного представления.
Коммерчески доступный препарат 1Ь-23 биотинилировали для его использования в экспериментах по рибосомному представлению. ППР-эксперимент осуществляли для подтверждения того, что биотинилированный 1Ь-23 хорошо связывается со стрептавидином и сохраняет активность связывания с ксРу-80 с минимальной потерей аффинности связывания.
6.1.2. Обогащение ГО-23-связывающими вариантами с использованием рибосомного представления
Пул мРНК, кодирующей варианты ксРу-80, транслировали с использованием экспрессированной системы ш νίΙΐΌ, и полученную библиотеку ксРу подвергали пэннингу на ГО-23-связывающие агенты в соответствии с протоколом рибосомного представления, описанным КоркИак е! а1. (2007). Давление отбора данной системы корректировали в отношении сдвига в сторону связывающих агентов с низкой константой диссоциации (кД После завершения одного раунда схемы рибосомного представления кодирующие последовательности для обогащенных ксРук амплифицировали с помощью ПЦР и субклонировали в экспрессионный вектор рЕОХ448. Двадцать неспецифических клонов, выделенных из субклонированного пула ксРу, секвенировали для подтверждения их идентичности как вариантов ксРу-80. Остальные клоны подвергали высокоэффективному скринингу на 1Ь-23.
6.1.3. Высокоэффективный скрининг вариантов ксРу-80, выделенных посредством рибосомного представления
Приблизительно 6500 отдельных ксРук, выделенных из реакционных смесей для рибосомного представления, экспрессировали и подвергали скринингу на связывание с 1Ь-23 с помощью высокоэффективного ППР-анализа. Полученные варианты ранжировали по к,| и наилучшие варианты секвенировали на уровне нуклеиновой кислоты. В результате этой процедуры было идентифицировано 22 новых варианта ксРу (табл. 4), каждый из которых обладал аффинностью связывания с 1Ь-23 (определенную по кД равной или превышающей аффинность связывания родительского ксРу-80.
Таблица 4. Систематизированные данные о последовательностях уникальных вариантов ксРу-80, идентифицированных путем ППР-скрининга
домен УН домен УЬ
название ЗЕф мутация* ЗЕО ЗЕО мутация* ЗЕО к4 (1/с)
ΞΟΚν Ιϋ ю Ιϋ ΝΟ ю с ΙΕ-23
ΝΟ: ΝΟ: белка ΝΟ:
белка ДНК ДНК
зсРч- 119 286 179 348 6, 5х104
80**
ΑΖ-ϋ8 28 У27С 217 179 348 4,3x10'
ΑΥ-Β2 29 М69У 218 179 348 1, ОхЮ4
ΑΥ-Ο7 119 • 286 46 Υ86Η 235 1,2х104
- 53 026110
сь-е7 30 ЕЮО 219 179 348 1, 2х10'4
СИ-Н1 119 286 47 352К*** 236 1, 6х10“4
си-Аб 31 Г29Ь, Т107А 220 32 363Г 221 1, 9х10'4
СР-А6 33 Υ59Η*** 222 179 348 1, 9х10“4
АИ-Г2 34 Υ595*** 223 179 348 2, 5х10“4
СК-В1 35 Э85Е 224 179 348 2, 6х10'4
СИ-Н7 119 286 48 VI ЗМ 237 2,78x10 4
Αν-ΠΙ 36 5112Р 225 37 Ι75Τ 226 2, 8х10_4
СЕ-В1 38 Г29Ь 227 179 348 2, 8х10_4
ВУ-В2 119 286 49 Ό826 238 2, 9х10_4
ви-Βΐ 39 Ι.34Μ*** 228 179 348 2, 9х10~4
АО-СЮ 40 К12Е, К666 229 179 348 2, 9х10_4
АИ-69 41 043К 230 42 Ι55Τ*** 231 3, 1х10~4
СЕ-610 43 У5Ь 232 179 348 3, 1х10_4
ΒΥ-Β4 44 Т28А 233 179 348 3, ЗхЮ-4
СЕ-А6 119 286 50 6643 239 3, ЗхЮ-4
АХ-64 119 286 51 526Р*** 240 3, 6хЮ’4
ΒΖ-610 119 286 52 027К*** 241 3, 6х10_4
ВВ-А9 45 Т28А, Τ68Ξ 234 179 348 4,5х10_4
* Все мутации даны по сравнению с последовательностью ксРу-80 дикого типа.
** Эта величина представляет собой среднее кй для ксРу-80, установленное для всего эксперимента по скринингу (п=110).
*** Мутации в области СОК вариабельных областей.
6.1.4. Полная характеризация кинетических свойств уникальных вариантов ксРу-80 Ряд вариантов ксРу, представленных в табл. 4, отбирали для полной характеризации кинетики связывания, включая широкий диапазон профилей мутации и аффинностей связывания. Крупномасштабная экспрессия белков была осуществлена для каждого ксРу. Экспрессированные ксРук очищали с получением мономерных белков и тестировали на связывание с 1Ь-12 и 1Ь-23 с помощью НИР (табл. 5). Полученные результаты подтвердили, что все варианты, выделенные посредством рибосомного представления и скринированные на связывание с обоими антигенами, обнаруживали некоторое увеличение аффинности связывания, которая в 5 раз превышала аффинность связывания родительского ксРу-80.
- 54 026110
Таблица 5. Полная характеризация кинетических свойств выбранных вариантов ксРу-80
Название £СГУ Связывание 11,-12 Связывание ΙΣ-23
ка (1/мс) ка (1/с) КО (пМ) ка (1/мс) ка (1/с) ко (пМ)
5сЕу-80 2, ОхЮ5 4,5хЮ4 230 з,ΐχίο5 6,1хЮ5 200
си-Аб 2, ОхЮ6 9, 7х105 48 3, ОхЮ5 <ьоэ* <ЬОЦ*
ΑΝ-Γ2 2,2x10’ 1, ОхЮ-4 46 3,5х105 <ьоэ* <ЬСЮ*
СР-Аб 2, ОхЮ5 1,2х104 61 3,1х105 <ьоэ* сьсю*
СЕ-В1 2, ОхЮ5 1,8х104 89 з,ΐχίο5 3,0x10'· 98
ви-в1 2, ОхЮ5 2,4хЮ'4 120 3, ОхЮ5 3, 7х105 120
Аи-С9 2,1хЮ5 2,4хЮ'4 110 3, 4х105 4, 4х105 130
ВВ-А9 2, ОхЮ5 2,ЗхЮ'4 120 з,ΐχίο5 4, 4х105 160
АХ-С4 2, ЗхЮ5 3,1х10'4 140 3, 6х105 5, 5х10'5 150
АУ-Г11 1, бхЮ5 3,3χ10'4 200 2,7х105 2, 5х10'5 93
СК-В1 1, 9хЮ5 4,4х104 230 3,2х105 4, 1хЮ5 130
Αζ-ею 1, 5хЮ5 5,2х10~4 350 2,8х105 4, 9хЮ'5 170
** ка для этих вариантов были ниже предела детектирования (Ь0О), вычисленного методом В1Асоге Т100, применяемым в данном формате анализа. Вычисленный Ь0О составлял 1х 10-5 с-1.
6.1.5. Превращение вариантов 8сРу в формат 1дС
Три ксРу, которые обнаруживали наибольшую аффинность связывания в ППР-анализах (А№-Р2, СИ-А6 и СР-А6), преобразовывали для экспрессии 1дС путем субклонирования доменов УН и Уъ в отдельные экспрессионные векторы млекопитающих (то есть, одну конструкцию для тяжелой цепи антитела, а другую для легкой цепи). СИ-А6 превращали в антитело 183, СР-А6 превращали в антитело 184, а А№-Р2 превращали в антитело 207 путем присоединения Рс-области человеческой тяжелой цепи (8ЕО ГО N0:8) и константной области легкой цепи каппа (8Е0 ГО N0:9). Молекулы 1дС экспрессировали путем ко-трансфекции конструкции тяжелой и легкой цепи для каждого антитела в культуры НЕК293Е. Экспрессируемые 1дС очищали с помощью аффинной хроматографии и эксклюзионной гельхроматографии, а затем полученные мономерные молекулы тестировали на связывание с ГО-12 и ГО-23 с помощью ППР-анализа (табл. 6). Все три варианта 1дС сохраняли активность связывания с обоими аналитами с заметным увеличением ка по сравнению с ка родительского 1дС дикого типа. Исходя из этого, имеются основания предположить, что варианты ксРу, описанные в табл. 4, могут быть преобразованы в формат 1дС и сохраняют повышенную способность связываться с ГО-12 и ГО-23.
Таблица 6. Полная характеризация кинетических свойств вариантов ксРу после преобразования и экспрессии в виде полноразмерных 1дС
О а Ен I Связывание 11,-12 Связывание ТЬ-23
31 >
(П Гт
щ и
ω ω
ίΰ
л
ка (1/мс) ка (1/с) КП (пМ) ка (1/мс) ка (1/с) КП (пМ)
80 п/а 4, ЗхЮ6 1, ЗхЮ3 292 4,1х105 1, 1х104 280
183 си-Аб 4,1х106 2,7х104 65 4, ОхЮ5 <1.О.О.* 2,7
184 СР-А6 4,2х106 5,4х104 127 4,1х105 4,2х105 104
207 АИ-Г2 3,7х106 6, ЗхЮ4 167 3,7х105 6, 5х105 176
* ка для этого варианта были ниже предела детектирования (Ε0Ό), вычисленного методом НИР Т100, применяемым в данном формате анализа. Вычисленный Ε0Ό составлял 1х10-5 с-1.
- 55 026110
6.1.6. Комбинация мутаций, идентифицированных методом рибосомного представления и скрининга
Серию дополнительных вариантов ксРу создавали путем получения комбинаций различных мутаций, описанных выше (табл. 4). Эти ксРу получали путем определения весов различных мутаций исходя из: (а) частоты их встречаемости при скрининге и (Ь) аффинности ксРу с мутациями. Комбинации с наибольшим весом (табл. 7) добавляли к ксРу-80 посредством сайт-направленного мутагенеза. Затем все эти комбинации ксРу экспрессировали в небольшом масштабе и подвергали частичной очистке с помощью аффинной хроматографии и на обессоливающей колонке. Каждый новый ксРу тестировали на связывание с ГО-12 и ГО-23 с помощью ППР-анализа в соответствии с протоколом анализа среднего масштаба, в котором использовали одну концентрацию аналита (табл. 7). Полученные данные показали, что все эти варианты сохраняли связывание с ГО-12 или ГО-23. В большинстве случаев, скорость диссоциации нового варианта была почти равной скорости диссоциации родительских вариантов. Две комбинации мутаций (Т28А в домене νΗ плюс δ26Р в домене νΣ, Р29Ь в домене νΗ плюс δ26Р в домене νΣ) обладали повышенной аффинностью связывания по сравнению с родительскими вариантами. Поэтому имеются основания предпологать, что ксРу, несущие новые комбинации мутаций, представленных в табл. 4, могут связываться с ГО-12 и ГО-23 с такой же, если не большей, аффинностью, как и аффинность родительских мутантов и истинных ксРу-80 дикого типа.
Таблица 7. Кинетический анализ с одной концентрацией ксРу, несущих комбинации мутаций
Домен УН Домен VI Кинетика, связывания
5 5 3 * <0 Ϊ > с а 2 ω о я о я а к А Ч м о σ 10 ω со К те 3 теГ ю Е-ι А 2 О 2; о й Р4 От ω со о 2 ιΤ5 2 § м а) а ы (П те 5 4 те! Ει А 2 О г а н ЕС РТ а н со Н 5 те! I со 2 !—1 Л? те Т—1 2 □ α Ь Φ -θ* θ ω
εοΓν-80 Отсутствует 11,-23 3,0х105 3, 1х105 104 п/а
εοΕν-80 Отсутствует 11,-12 1,6x10е 2, 5x10’ 156 п/а
1 53 <243К, 242 42 Ι55Τ 231 ΙΑ-23 2, ЗхЮ5 <ЪОБ** 32 + +
Υ59Η
2 54 Т28А, 243 179 348 1Ъ-23 2, ЗхЮ5 <ΙΌϋ** 34 + +
Υ595
3 44 Т28А 233 51 526Р 240 11,-12 1,6х106 4,5х1СГ5 29 + +
4 38 Е2 9Ь 227 51 526Р 240 11,-12 1,8x10е 4, 8х10-5 27 + +
5 44 Т28А 233 32 ЗбЗЕ 221 11,-12 1,7x10е 6, 5х105 38 + +
б 55 Т28А, 244 179 348 11,-23 2,ЗхЮ5 <1,00** 41 +
Υ59Η,
Т685
7 56 Е29Ъ, 245 179 348 1Ъ-23 2, ОхЮ5 <ΙΌϋ** 3, 3 +
Υ59Η
8 57 Е29А, 246 179 348 11,-23 2, ОхЮ5 ΐΙ,ΟΌ** 7,5 +
Υ593
9 58 О43К, 247 42 Ι55Τ 231 ΙΣ-23 2,2хЮ5 <ΣΟϋ** 27 +
Υ595
10 59 Т28А, 248 179 348 ΙΣ-23 2,2х105 <ΣΟϋ** 13 +
Υ59Η
11 34 Υ593 223 51 326Р 240 11,-23 2,2х105 <ΙΌΏ** 27 +
12 60 Т28А, 249 179 348 11,-23 2,2х105 <ΙΌΏ** 16 +
Υ593,
Т683
13 61 Т28А, 250 42 Ι55Τ 231 ΙΣ-23 2,5хЮ! 1, ЗХ1СГ5 51 +
043Е
14 62 Е29Е, 251 42 Ι55Τ 231 11,-23 2, 7хЮ5 2, ΙχΙΟ5 79 +
Ω43Ε
15 38 Е2 9Ь 224 32 ЗбЗГ 221 11,-12 1,7x10е 6, 4χ10-5 39 +
16 38 Г2 9Ь 224 47 552К 236 11,-12 1,5x10е 1, 5χ10-5 50 +
* Все мутации даны по сравнению с последовательностью ксРу-80 дикого типа.
** ка для этого варианта были ниже предела детектирования (ЬОО), вычисленного методом В1Асоге
Т100, применяемым в данном формате анализа. Вычисленный нужный ЬОО составлял приблизительно 1х10-5 с-1.
+ Комбинация мутаций давала ка, которая была по меньшей мере равна ка родительских вариантов. ++ Комбинация мутаций давала более высокое значение кй по сравнению с кй родительских вариантов. Мутация приводила к снижению аффинности.
- 56 026110
Пример 7.
7.1. Дополнительное созревание гуманизованных антител
7.1.1. Введение в антитело 136 мутаций, повышающих аффинность
Исходя из созревания аффинности антитела 80, в антитело 136 (антитела 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182) было введено несколько ключевых мутаций в вариабельную область тяжелой цепи (Υ598, Υ59Η и Р29Ь), которые повышают аффинность связывания с Х-12 и Х-23. Эти антитела были экспрессированы и скринированы в ЕША (фиг. 20). Все антитела связывались с Х-12 и Х-23.
7.1.2. Другие комбинации антител
Аффинно зрелые варианты тяжелой цепи антитела 80, содержащие замену в положении 93 (№3А), спаривали с их соответствующими легкими цепями (антител 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206) (фиг. 20). Эта замена была введена для восстановления положения 93 в исходное состояние человеческой зародышевой линии, которое в большинстве случаев содержит А1а. Аффинно зрелые варианты тяжелой цепи антитела 80, содержащие замену Ν93Α были также экспрессированы с легкой цепью антитела 136 для идентификации вариантов с более высокой аффинностью (антитела 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198) (фиг. 20).
7.2. Измерение аффинности связывания
С применением П11Р-технологии определяли к,,, кй и Кс различных гуманизованных антител. Их аффинности указаны в табл. 8. Во всех случаях, антитела, содержащие замену Υ598 или У59И, независимо от каркасной области антитела, обнаруживали более высокую аффинность связывания с Х-12 и X23.
Таблица 8. ППР-данные для различных гуманизованных антител
Антитело Связывание 1Ъ-2 3 Связывание 1Ь-12
ка (1/мс) М (1/с) Κϋ (пМ) ка (1/мс) ка (1/с) КЭ (пМ)
80 6,25Е+06 3,34Е-04 53,5 4,88Е+06 5,39Е-04 110,0
136 7,55Е+06 7,95Е-04 105, 3 5,05Е+06 9,97Е-04 197,0
177 3,43Е+06 1,28Е-04 37,3 4,61Е+06 2,12Е-04 46,0
180 3,12Е+06 9,27Е-05 29, 7 5,31Е+06 1,73Е-04 32, 5
181 4,09Е+06 1,73Е-04 42,4 3,57Е+06 2,44Е-04 68, 1
182 5,27Е+06 1,29Е-04 24,6 6,23Е+06 2,14Е-04 34, 4
190 4,28Е+06 6,09Е-04 142, 0 3,86Е+06 8,40Е-04 217,0
192 2,66Е+06 2,11Е-04 79, 4 4,16Е+06 3,56Е-04 85, 5
193 Н/Ц Ν/Ц Ν/Ό 2,60Е+06 2,06Е-04 79, 4
194 2,99Е+06 1,22Е-04 41,0 2,09Е+06 1,94Е-04 92, 7
195 4,03Е+06 2,02Е-04 50,0 2,65Е+06 2,74Е-04 103,0
198 4,65Е+06 4,09Е-04 87,7 3,75Е+06 5,94Е-04 158,0
205 4,81Е+06 4,15Е-04 86, 2 3,70Е+06 5,81Е-04 157,0
Пример 8.
8.1. Дополнительная характеризация различных антител
8.1.1. ППР-эксперименты по конкурентному связыванию
Анализ на конкурентное связывание был проведен с помощью ППР для подтверждения того, что описанные выше химерные и гуманизованные антитела обладают такой же специфичностью связывания, как и РМА204. В ПП Р-эксперименте, антитело 136 иммобилизовали на поверхности, покрытой белком А, что приводило к увеличению единиц отклика (КИ), а затем загружали Х-12 или Х-23 (что приводило к дополнительному увеличению единиц отклика). Затем загружали РМА204, но не связывали с поверхностью комплекса Х-12 или Х-23 - антитело 136 (фиг. 21) (что не приводило к увеличению единиц отклика). Это указывает на то, что антитело 136 связывается с Х-12 и Х-23 и тем самым предупреждает связывание РМА204, и что эти два антитела имеют перекрывающиеся эпитопы на Х-12 и Х-23.
В контрольном эксперименте антитело 136 иммобилизовали на поверхности, покрытой белком А,
- 57 026110 что приводило к увеличению единиц отклика, а затем загружали ГБ-12 или ГБ-23 (что приводило к дополнительному увеличению единиц отклика). Затем загружали РМА202, и было продемонстрировано увеличение единиц отклика, что указывало на связывание с комплексом. РМА202 и антитело 1 могут образовывать сэндвич-комплекс ГБ-12 или ГБ-23, что свидетельствует о том, что они связываются с молекулами ГБ-12 или ГБ-23 в различных положениях (фиг. 22).
Было высказано предположение, что аналогичный ЕБГЗА-анализ на конкурентное связывание может быть осуществлен с использованием других комбинаций иммобилизованного антитела, 1Б-12 или ГБ23 и конкурирующего антитела.
8.1.2. ЕБГЗА-эксперименты по конкурентному связыванию
Анализ на конкурентное связывание осуществляли методом ЕБГ8А для подтверждения того, что антитело 136 обладает такой же специфичностью связывания, как и РМА204. После нанесения РМА204 на ЕБГЗА-планшет добавляли 1Б-12 или ГБ-23, а затем добавляли антитело 136, но какого-либо связывания с антителом 136 не обнаруживалось (фиг. 23А). Это указывает на то, что антитело 136 и РМА204 конкурируют за связывание с 1Б-12 или 1Б-23. После нанесения контрольного антитела РМА202 и добавления предварительно инкубированной смеси антитела 136 и ГБ-12р40 можно было детектировать связывание с антителом 136 (фиг. 23В). Это указывало на то, что антитело 1 и РМА202 не конкурируют за связывание с 1Б-12. Антитело 202.1 было использовано в качестве позитивного контроля по связыванию в первом эксперименте (фиг. 23А) и в качестве негативного контроля во втором эксперименте (фиг. 23В).
8.1.3. Анализы на нейтрализацию рецептора
8.1.3.1. Антитело 80 и антитело 136 нейтрализуют связывание 1Б-12 с ГБ-12Кв2 и связывание ГБ-23 с ГБ-23К
Анализы на нейтрализацию рецептора показали, что антитело 80 и антитело 136 нейтрализуют связывание ГБ-12 с ГБ-12К32 (фиг. 24А) и связывание ГБ-23 с ГБ-23К (фиг. 24В). Контрольное антитело 202.1 не ингибировало связывание ГБ-12 с ГБ-12К32 или связывание ГБ-23 с ГБ-23К.
8.1.3.2. Антитело 80 и антитело 136 не обладают способностью нейтрализовать связывание ГБ-12 или ГБ-23 с ГБ-12К31
Антитело 80 и антитело 136 не обладают способностью нейтрализовать связывание ГБ-12 с ГБ12Ρ.β1 (фиг. 25А). Связывание ГБ-23 с ГБ-12Кв1 не ингибировалось антителом 80 и антителом 136 (фиг. 25В), но тем не менее наблюдалось образование комплекса, на что указывало повышение уровня связанного ГБ-23 выше уровня, наблюдаемого для ГБ-23 и для рецептора, взятых отдельно. Контрольное антитело 202.1 ингибировало связывание ГБ-12 и ГБ-23 с ГБ-12Кв1.
Пример 9.
9.1. Ослабление кожного воспаления, индуцированного путем внутрикожного введения ГБ-23
После того, как было обнаружено, что несколько антител первой панели обладают способностью ингибировать ГБ-23-индуцированное высвобождение ГБ-17 на мышиных спленоцитах (фиг. 26), был проведен дополнительный эксперимент по созданию животного-модели, где человеческий ГБ-23 был использован в качестве стимулятора развития заболевания. Внутрикожное введение ГБ-23 в спинку мышей С57Б1/61 в течение 6 дней приводило к развитию локализованного воспалительного ответа, проявляющегося эритемой и уплотнением тканей, при этом, гистологический анализ показал наличие эпидермальной гиперплазии, паракератоза и локализованного воспалительного инфильтрата. За один день до начала введения цитокина, антитела тестировали на их способность снижать воспалительный ответ на введение одной дозы. У мышей обеих групп, которым вводили антитело 80 и антитело 136, начиная с 5-го дня наблюдалась более низкая клиническая оценка по сравнению с оценкой для контрольного изотипа, что свидетельствовало об эффективности антител в этом исследовании (фиг. 27А).
Хотя антитело 136, по сравнению с контрольным изотипом, обнаружило способность к снижению толщины эпидермиса, однако, лишь антитело 80 давало статистически значимое снижение толщины эпидермиса (фиг. 27В). Этот результат четко коррелировал с клинической оценкой, и хотя антитело 136 и антитело 80 обладали способностью значительно снижать объем эритемы и степень утолщения тканей, вызываемые ГБ-23, однако, более эффективным было антитело 80.
Пример 10.
10.1. Нейтрализация ΣΕΝ-γ, индуцированного химерным ГБ-12 на мышиных спленоцитах
Было обнаружено, что человеческий ГБ-12 слабо реагирует с мышиными спленоцитами и неспособен продуцировать ГΡN-γ. Однако, химерная молекула, состоящая из человеческого р40 и мышиного р35 (8ЕЦ ГО N0:63), обладала способностью индуцировать ГΡN-γ-ответ в мышиных спленоцитах на уровнях, аналогичных уровням, наблюдаемым для мышиного ГБ-12. В этом анализе использовали несколько антител первой панели (антител 36, 80, 180, 181, 193, 194, 198) для определения их способности ингибировать индуцирование ГΡN-γ-ответа химерным ГБ-12 на мышиных спленоцитах. Все указанные антитела продемонстрировали нейтрализующее действие в этом анализе (фиг. 28).
10.2. Нейтрализация сывороточного ГΡN-γ-ответа (интерферона-γ) на химерный ГБ-12 (ГБ-12) у нормальных инбредных мышей
Введение 0,1 мг/кг химерного ГБ-12 (человеческая цепь ГБ-12р40 с мышиной цепью ГБ-12 р35 (8ЕЦ
- 58 026110
ΙΌ ΝΟ:63)) мышам С57Б1/61 в течение пяти дней подряд приводило к индуцированию стойкого сывороточного ΙΕΝ-γ-ответа и не вызывало какой-либо заметной токсичности. Антитела были протестированы на их способность нейтрализовать химерный ΙΌ-12, а следовательно и элиминировать ответ на ΙΤΝ-γ в дозе 5 мг/кг, где использовалась лишь одна доза в первый день введения цитокинов, или три дозы через день, которые вводили одновренно с цитокином. Оба антитела обладали способностью к нейтрализации, а одна доза антитела 80, составляющая 5 мг/кг, была достаточной для снижения сывороточного ΙΤΝ-γ до детектируемых фоновых уровней (фиг. 29).
Пример 11.
11.1. Стимуляция МКПК для продуцирования ΙΌ-23: Диагностическое детектирование с использованием антитела 80
Гуманизованные антитела против ΙΌ-12 и ΙΌ-23 могут быть использованы в качестве диагностических реагентов для обнаружения ΙΌ-12 и ΙΌ-23 в биологических образцах. Для детектирования рекомбинантного человеческого ГО-23 был разработан Ε^IδΑ-анализ. В этом анализе антитело против человеческого р19 использовали в качестве антитела для захвата, а антитело 80 использовали в качестве детектирующего антитела. Антитело 80 обладало способностью детектировать рекомбинантный человеческий ГО-23 в этом сэндвич-Ε^IЗΑ (фиг. 30А).
Обработка бактерией ΑφίΛ-ίοΜ^ι.^ аигеи8 С'ГОуап 1 (3ΑΟ) приводила к индуцированию секреции ГО-23 клетками человеческой периферической крови (МКПК). В этом сэндвич-Ε^IЗΑ антитело 80 обладало способностью детектировать эндогенный нативный человеческий ГО-23, секретируемый 8ΑΟстимулированными МКПК (фиг. 30В).
Пример 12.
12.1. Картирование эпитопа путем обмена Η/Ό
В первом эксперименте, атомы водорода на ГО-12р40 заменяли дейтронами в растворе, а затем это соединение связывали с антителом 80, иммобилизованным на колонке, после чего осуществляли обратный обмен снова в Н2О, еще связанную с колоночным антителом, в результате чего обеспечивали защиту эпитопа. Таким образом, эпитоп был помечен дейтронами. Во втором эксперименте ГО-12р40 связывали с колоночным антителом, а затем метили дейтронами, после чего осуществляли обратный обмен снова в Н2О, еще связанную с колонкой. После проведения каждого эксперимента ГО-12р40 элюировали с колонки в агрессивной среде с низким рН и пропускали через колонку с пепсином, что приводило к гидролизу белка. Затем фрагменты, образованные в результате гидролиза пепсином, загружали на ЖХ:МС-колонку. Различия уровней дейтеризации в двух экспериментах являются показателем замедления обмена при связывании с антителом.
В этом исследовании, был использован ГО-12р40, представленный в ЗЕЦ ΙΌ ΝΟ:64. Было показано, что область значительного изменения скорости обмена Н/Ό находилась только на участке от аминокислоты 253 до аминокислоты 286, который соответствовал последовательности νρνρΟΚЗΚКΕΚΚ^КVРΤ^ΚΤЗΑΤVIСКΚ ΝΑδΙδν (ЗЕС) ΙΌ ΝΟ: 65), представленной в табл. 9.
Таблица 9
Остаток Остаток Пептид Время (сек.)
начальный концевой заряд 500 1500 5000 среднее
3 9 1 6% 3% 8% 5%
3 12 2 11% 2% 5* 6%
15 23 1 10% 6% 11% 9%
16 23 1 10% 6% 12% 9%
38 40 1 -2% 2% 4% 2%
57 65 1 2% 6% 6% 5%
57 80 2 2% 3% 8% 4%
68 80 2 9% 3% 0% 4%
83 90 1 10% 9% 6% 8%
83 95 2 12% 2% 8% 7%
93 95 1 2% 8% 7% 6%
93 109 2 8% -3% 2% 2%
93 125 3 6% 0% 4% 3%
93 129 3 4% -2% 1% 1%
128 132 1 5% 5% 7% 6%
131 132 1 4% 2% -2% 1%
135 153 2 5% 5% 2% 4%
156 166 2 1% 0% 2% 1%
- 59 026110
158 168 2 3% 0% 3% 2%
173 181 1 5¾ -7% 2% 0%
184 187 1 6% 4% 5% 5%
184 189 1 4¾ 1% 3% 2%
208 231 3 7% 5% 9% 7%
212 231 3 9¾ 5% 9% 8%
234 246 2 6% 1% 1% 3%
236 246 2 9¾ 3% 9% 7%
249 250 1 4% -2% -1% 1%
249 251 1 1¾ -2% 1% 0%
253 274 3 27% 28% 30% 28%
253 275 3 28% 25% 29% 27%
254 275 3 33% 27% 31% 30%
277 286 2 10% 16% 25% 17%
295 299 1 1% 1% 7% 3%
302 306 1 2% 0% -1% 0%
Табл. 9: Процентное различие в уровнях дейтеризации каждого сегмента ГО-12р40 после проведения экспериментов по двустороннему обмену при рН 7 и при 3°С. Среднее процентное различие более, чем 10% соответствует области, которая является в значительной степени защищенной в процессе реакции обмена. Следует отметить, что номера остатков соответствуют ГО-12р40, представленному в δΞΟ ΙΌ ЫО: 64.
12.2. Анализ на связывание мутантного ГО-23 с антителом 80
Исходя из результатов, полученных в экспериментах по обмену Н/Ό, нужные мутации вводили в идентифицированную область ГО-23. Для дальнейшего сокращения числа мутаций, которые необходимо скринировать, последовательность человеческого ГО-12р40 выравнивали с последовательностью мышиного ГО-12р40 (иш-Рго! Νο: Р43432; Ь!1р://тетете.ишрго!.огд) в данном положении.
человеческий р40 νςνςακεκκΕΚ--------κοκνΓΤϋκτδΑτνισκκΜΑειεν
МЫШИНЫЙ р40 .Н1.К.КЕКМ.ЕТЕЕСС№.САЕЬУЕ. . . ТЕ . О . - . СС11УС.
Исходя из обнаружения того факта, что антитело 80 связывается с человеческим ГО-23, но не с мышиным ГО-23, для введения нужных мутаций были отобраны только те остатки, которые отличались в двух молекулах. Введенные мутации были систематизированы путем нижеследующего выравнивания аминокислот 253-297, взятых из списка δΞΟ ΙΌ ΝΝ.
1Ь-23ИТ(ЗЕ0 ΙΟ ΝΟ: бб)
0254А(5Е0 ΙΌ ΝΟ: 67)
ν255Α(3Ε<) ΙΌ МО: 68)
С257А{5ЕО Ю ΝΟ: 69)
£259А(ЗЕО ΙΌ МО: 70)
К260А<5Е<2 Ю ΝΟ: 71)
К261А(5Е<2 ΙΌ ΝΟ: 72)
Е262А(ЗЕ<2 ΙΌ ΝΟ: 73)
К264А($Е<2 ΙΌ ΝΟ: 74)
Ό265Α(5Ε0 ΙΌ ΝΟ: 75)
Р.266А($Е<) ΙΌ МО: 76)
ν267Α(5Ε0 ΙΌ N0: 77)
Р268А(ЗЕ<) ΙΌ N0: 73)
Т269А{5ЕО Ю N0: 79)
Ό270Α(5Εζ> ΙΌ N0: 80)
Т275А(ЗЕ<2 Ю N0: 31)
1277А(ЗЕ0 ΙΌ N0: 82)
К279А(ЗЕО ΙΌ N0: 83)
Ν28ΐΑ($Εζ) ΙΌ N0: 34)
5283А(5Е0 ΙΌ N0: 85)
3285А(5Е0 ΙΌ N0: 86)
0νφν0αΚ5ΚΚΕΚΚΌΚνΓτΌΚΤ5ΑΤνΐΟΚΚΝΑ5Ι5νΚ . .А.................................
. . .А................................
.....А........................... . . .
.......А............................
........А...........................
.........А..........................
......... .А. ............ ............
............А.......................
.............А......................
..............А.....................
...............А....................
................А...................
................ .А. ..... ............
..................А.................
.......................А............
.........................А..........
..............,...,.,...,. .А........
.............................А......
...............................А. . . .
.................................А. .
После переноса каждого мутанта в клетки НЕК-293Е супернатанты, полученные в результате тако- 60 026110 го переноса, скринировали методом ППР на антитело 80. Все конструкции обнаруживали уровни связывания, аналогичные уровням связывания антитела 80, за исключением мутантов Э265А и К266А. кД нескольких мутантов был значительно ниже кД ГО-23 дикого типа, что указывает на то, остатки в этой области ГО-12р40 участвуют во взаимодействии !Н-12р40 с антителом 80.
Э265А и К266А также анализировали в ЕЫЗА, где антитело 80, антитело 202.1 или ΙΕ-12Κβ1 и ГО23К наносили на планшет, и супернатанты, полученные в результате трансфекции и содержащие ГО-23 дикого типа (ГО-23АТ), Э265А и К266А, титровали по всему планшету. Мутант Э265А обнаруживал фоновые уровни связывания с антителом 80 (фиг. 31), а поэтому Ό265 был идентифицирован как остаток, играющий важную роль в связывании ГО-12р40 с антителом 80. Э265А связывался с антителами
202.1, ΙΕ-12Κβ1 и ГО-23К на уровнях, сравнимых с уровнями связывания с ГО-23 дикого типа, что указывает на то, что он имеет правильную укладку и обладает способностью к функциональному связыванию. Мутантный К266А обнаруживал низкие уровни связывания с ΙΕ-12Κβ1, ГО-23К, антителом 80 и антителом 202.1, что указывает на то, что такой мутантный белок имеет неправильную укладку (фиг. 31).
Таблица 10. Список антител
(ΰ о. о Ϊ в ЯЗ Домен УН Домен УЬ
Белок ДНК Белок ДНК
1 ЗЕО 10 N0:12 ЗЕО Ю N0: 252 ЗЕО Ю N0: 13 ЗЕО Ю N0: 336
3 ЗЕО Ю N0:12 ЗЕО Ю N0: 252 ЗЕО Ю N0: 169 ЗЕО Ю N0: 338
4 ЗЕО 10 ΝΟ: 87 ЗЕО Ю N0: 254 ЗЕО Ю N0: 13 ЗЕО Ю N0: 336
5 ЗЕО И ΝΟ: 88 ЗЕО Ю N0: 255 ЗЕО 10 N0: 13 ЗЕО 10 N0: 336
6 ЗЕО Ю N0: 89 ЗЕО Ю N0: 256 ЗЕО Ю N0: 13 ЗЕО Ю N0: 336
7 ЗЕО Ю N0: 90 ЗЕО Ю N0: 257 ЗЕО 10 N0: 13 ЗЕО 10 N0: 336
8 ЗЕО Ιϋ N0: 91 ЗЕО Ю N0: 258 ЗЕО Ю N0: 13 ЗЕО Ю N0: 336
9 ЗЕО Ю N0: 92 ЗЕО Ю N0: 259 ЗЕО Ю N0: 13 ЗЕО Ю N0: 336
10 ЗЕО Ю N0: 93 ЗЕО Ю N0: 260 ЗЕО Ю N0: 13 ЗЕО Ю N0: 336
11 ЗЕО Ю N0: 94 ЗЕО Ю N0: 261 ЗЕО Ю N0: 13 ЗЕО Ю N0: 336
12 ЗЕО Ю N0: 95 ЗЕО Ю N0: 262 ЗЕО Ю N0: 13 ЗЕО Ю N0: 336
13 ЗЕО Ю N0: 96 ЗЕО Ю N0: 263 ЗЕО Ю N0: 13 ЗЕО Ю N0: 336
14 ЗЕО Ю N0: 97 ЗЕО Ю N0: 264 ЗЕО 10 N0: 13 ЗЕО 10 N0: 336
15 ЗЕО Ю N0: 98 ЗЕО Ю N0: 265 ЗЕО Ю N0: 13 ЗЕО Ю N0: 336
16 ЗЕО Ю N0: 99 ЗЕО Ю N0: 266 ЗЕО 10 N0: 13 ЗЕО Ю N0: 336
17 ЗЕО Ю N0: 100 ЗЕО Ю N0: 267 ЗЕО Ю N0: 13 ЗЕО Ю N0: 336
18 ЗЕО Ιϋ N0: 101 ЗЕО Ю N0: 268 ЗЕО Ю N0: 13 ЗЕО ГО N0: 336
19 ЗЕО Ю N0: 102 ЗЕО Ю N0: 269 ЗЕО Ю N0: 13 ЗЕО Ю N0: 336
- 61 026110
20 ЗЕС ю N0: 103 ЗЕС ΙΏ N0: 270 ЗЕО N0: 13 3Ε0 Ιϋ N0: 336
21 ЗЕО 10 N0: 104 ЗЕС 10 N0: 271 ЗЕС ΙΒ ΗΟ: 13 ЗЕС ΙΟ ΗΟ: 336
22 ЗЕО ю N0: 105 ЗЕС Ю N0: 272 ЗЕС ΙΏ ΗΟ: 13 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 336
31 ЗЕО ю N0: 106 ЗЕС 10 НС: 273 5ЕС Ιϋ ΗΟ: 170 ЗЕС ΙΟ ΗΟ: 339
32 ЗЕО ю N0: 107 ЗЕ<2 Ю N0: 274 ЗЕО Ιϋ N0: 170 5Εφ ΙΏ ΗΟ: 339
33 ЗЕО 10 N0: 108 ЗЕС 10 НО: 275 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 170 ЗЕС ΙΟ ΗΟ: 339
34 ЗЕО 10 N0: 106 ЗЕС ю N0: 273 ЗЕО Ιϋ ΗΟ: 171 3Εφ Ю N0: 340
35 ЗЕО 10 N0: 107 ЗЕС 10 НО: 274 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 171 ЗЕС ΙΟ ΗΟ: 340
36 ЗЕО ю N0: 103 ЗЕС ю N0: 275 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 171 ΞΕ<2 Ιϋ N0: 340
37 ЗЕО 10 N0: 106 ЗЕС ю N0: 273 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 172 5ЕС Ю N0: 341
38 ЗЕО 10 N0: 107 ЗЕС 10 НО: 274 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 172 5ЕС ΙΟ ΗΟ: 341
39 ЗЕО 10 НО: 103 ЗЕС ю N0: 275 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 172 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 341
40 ЗЕО ю N0: 109 ЗЕС 10 НО: 276 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 170 5ЕС ΙΟ ΗΟ: 339
43 ЗЕО ю N0: 110 ЗЕС ю N0: 277 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 171 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 340
46 ЗЕО 10 N0: 111 ЗЕС 10 НО: 278 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 172 ЙЕО ΙΟ ΗΟ: 341
50 ЗЕО ю N0: 112 ЗЕС ю N0: 279 ЗЕО Ιϋ ΗΟ: 169 3Εζ) Ю N0: 338
51 ЗЕО 10 N0: 113 ЗЕС 10 НО: 280 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 173 5ЕС ΙΟ ΗΟ: 342
52 ЗЕО 10 N0: 114 ЗЕС ю N0: 231 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 173 5ЕС Ю N0: 342
53 ЗЕО 10 N0: 115 ЗЕС ю N0: 232 ЗЕО Ιϋ ΗΟ: 173 3Εφ Ю N0: 342
54 ЗЕО 10 N0: 116 ЗЕС 10 НО: 283 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 173 5ЕС ΙΟ ΗΟ: 342
55 ЗЕО ю N0: 117 ЗЕС ю N0: 234 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 173 ЗЕС Ю N0: 342
56 ЗЕО 10 N0: 113 ЗЕС 10 НО: 280 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 174 5ЕС ΙΟ ΗΟ: 343
57 ЗЕО 10 НО: 114 ЗЕС ю N0: 231 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 174 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 343
58 ЗЕО ю N0: 115 ЗЕС 10 НО: 282 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 174 5ЕС ΙΟ ΗΟ: 343
59 ЗЕО ю N0: 116 ЗЕС ю N0: 233 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 174 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 343
60 ЗЕО ю N0: 117 ЗЕС 10 НО: 284 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 174 ЗЕС ΙΟ ΗΟ: 343
61 ЗЕО 10 N0: 113 ЗЕС 10 НО: 280 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 175 ЗЕС ΙΟ ΗΟ: 344
62 ЗЕО ю НО: 114 ЗЕС ю N0: 231 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 175 ЗЕС Ιϋ N0: 344
63 ЗЕО ю N0: 115 ЗЕС 10 НО: 282 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 175 ЗЕС ΙΟ ΗΟ: 344
64 ЗЕО ю N0: 116 ЗЕС ю N0: 233 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 175 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 344
65 ЗЕО 10 N0: 117 ЗЕС 10 НО: 284 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 175 ЙЕО ΙΟ ΗΟ: 344
66 ЗЕО ю N0: 113 ЗЕС ю N0: 230 ЗЕО Ιϋ ΗΟ: 176 5Εφ ΙΏ ΗΟ: 345
67 ЗЕО 10 N0: 114 ЗЕС 10 НО: 281 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 176 3Ε0 ΙΟ ΗΟ: 345
68 ЗЕО ю N0: 115 ЗЕС ю N0: 232 ЗЕО Ιϋ ΗΟ: 176 3Εζ) Ю N0: 345
69 ЗЕО 10 N0: 116 ЗЕС 10 НО: 283 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 176 5ЕС ΙΟ ΗΟ: 345
70 ЗЕО 10 N0: 117 ЗЕС 10 НО: 284 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 176 3Ε0 ΙΟ ΗΟ: 345
71 ЗЕО ю N0: 113 ЗЕС ю N0: 230 ЗЕО Ιϋ ΗΟ: 177 3Εζ) Ю N0: 346
72 ЗЕО 10 N0: 114 ЗЕС 10 НО: 281 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 177 5ЕС ΙΟ ΗΟ: 346
73 ЗЕО 10 N0: 115 ЗЕС ю N0: 232 ЗЕО Ιϋ ΗΟ: 177 3Εφ Ю N0: 346
74 ЗЕО 10 N0: 116 ЗЕС 10 НО: 283 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 177 ЗЕС ΙΟ ΗΟ: 346
75 ЗЕО ю N0: 117 ЗЕС ю N0: 234 ЗЕС Ιϋ ΗΟ: 177 ЗЕС Ю N0: 346
- 62 026110
76 ЗЕО Ю ИО: 118 ЗЕО ΣΏ N0: 285 ЗЕО Ю N0: 178 ЗЕО Ю НО: 347
77 ЗЕО 10 N0: 119 ЗЕО Ю N0: 286 ЗЕО 10 N0: 178 ЗЕО ΙΠ ИО: 347
73 ЗЕО Ю ЫО: 120 ЗЕО ΣΏ N0: 287 350 Ю N0: 178 ЗЕО ΣΏ ИО: 347
79 ЗЕО Ю N0: 118 ЗЕО 10 N0: 285 ЗЕО 10 N0: 179 ЗЕО Ю ИО: 348
80 ЗЕО 10 ИО: 119 ЗЕО Ю N0: 286 350 10 ИО: 179 ЗЕО Ю ИО: 348
81 ЗЕО Ю ИО: 120 ЗЕО 10 ИО: 287 ЗЕО 10 N0: 179 ЗЕО Ю ИО: 348
92 ЗЕО Ю НО: 121 ЗЕО Ю N0: 288 350 Ю ИО: 176 ЗЕО 10 НО: 345
93 ЗЕО 10 ИО: 122 ЗЕО Ю ИО: 289 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Ю ИО: 345
94 ЗЕО Ю ИО: 123 ЗЕО Ю НО: 290 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Ю НО: 345
95 ЗЕО Ю ИО: 124 ЗЕО Ю НО: 291 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Ю ИО: 345
96 ЗЕО 10 ИО: 125 ЗЕО Ю ИО: 292 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Ю ИО: 345
97 ЗЕО Ю ИО: 126 ЗЕО Ю ИО: 293 ЗЕО Ю N0; 176 ЗЕО ΣΏ ИО: 345
93 ЗЕО Ю ИО: 127 ЗЕО Ю ИО: 294 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО 10 ИО: 345
99 ЗЕО 10 ИО: 128 ЗЕО Ю ИО: 295 350 Ю N0: 176 ЗЕО Σϋ ИО: 345
100 ЗЕО 10 ИО: 129 ЗЕО 10 ИО: 296 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Ю ИО: 345
101 ЗЕО 10 N0: 130 ЗЕО Ю ИО: 297 ЗЕО 10 ИО: 176 ЗЕО Σ0 ИО: 345
102 ЗЕО 10 ИО: 131 ЗЕО 10 ИО: 298 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Ю ИО: 345
103 ЗЕО Ю ИО: 132 ЗЕО Ю N0: 299 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО ΣΟ N0: 345
104 ЗЕО Ю N0: 133 ЗЕО Ю НО: 300 ЗЕО Ю ИО: 176 ЗЕО Σ0 НО: 345
105 ЗЕО 10 ИО: 134 ЗЕО Ю ИО: 301 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Ю ИО: 345
106 ЗЕО Ю ИО: 135 ЗЕО Ю НО: 302 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО ΣΏ НО: 345
107 ЗЕО 10 ИО: 136 ЗЕО Ю ИО: 303 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Ю ИО: 345
103 ЗЕО Ю ИО: 137 ЗЕО Ю ИО: 304 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО ΣΏ ИО: 345
109 ЗЕО Ю ИО: 138 ЗЕО 10 ИО: 305 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО 10 ИО: 345
110 ЗЕО 10 N0: 139 ЗЕО Ю ИО: 306 ЗЕО 10 ИО: 176 ЗЕО Σ0 ИО: 345
111 ЗЕО Ю ИО: 113 ЗЕО 10 НО: 280 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Σ0 ИО: 345
112 ЗЕО Ю ИО: 140 ЗЕО 10 ИО: 307 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Σ0 ИО: 345
113 ЗЕО Ю N0: 141 ЗЕО Ю НО: 308 ЗЕО Ю ИО: 176 ЗЕО Σ0 НО: 345
114 ЗЕО 10 ИО: 142 ЗЕО Ю ИО: 309 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Ю ИО: 345
115 ЗЕО Ю ИО: 143 ЗЕО Ю НО: 310 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО ΣΏ НО: 345
116 ЗЕО 10 ИО: 144 ЗЕО Ю ИО: 311 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Ю ИО: 345
117 ЗЕО 10 ИО: 145 ЗЕО Ю ИО: 312 350 Ю N0: 176 ЗЕО Σϋ ИО: 345
118 ЗЕО 10 ИО: 146 ЗЕО 10 ИО: 313 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Ю ИО: 345
119 ЗЕО 10 N0: 147 ЗЕО Ю ИО: 314 ЗЕО 10 ИО: 176 ЗЕО Σ0 ИО: 345
120 ЗЕО 10 ИО: 148 ЗЕО 10 ИО: 315 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Ю ИО: 345
121 ЗЕО Ю ИО: 149 ЗЕО 10 ИО: 316 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Σ0 ИО: 345
122 ЗЕО Ю N0: 150 ЗЕО Ю НО: 317 ЗЕО Ю ИО: 176 ЗЕО Σ0 НО: 345
123 ЗЕО 10 ИО: 151 ЗЕО Ю ИО: 318 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Ю ИО: 345
124 ЗЕО Ю ИО: 152 ЗЕО Ю НО: 319 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО ΣΏ НО: 345
125 ЗЕО 10 ИО: 115 ЗЕО Ю ИО: 282 ЗЕО Ю N0: 176 ЗЕО Ю ИО: 345
126 ЗЕО 10 ИО: 115 ЗЕО ΣΏ ИО: 282 350 Ю N0: 180 ЗЕО Σϋ ИО: 349
- 63 026110
127 ЗЕО Ιϋ ИО: 115 2Е0 Ю N0: 282 ЗЕО Ю ИО: 181 5Е0 Ю N0: 350
128 ЗЕО Ιϋ N0: 115 ЗЕО 10 ИО: 282 ЗЕО 10 НО: 182 ЗЕО 10 ИО: 351
130 ЗЕО Ιϋ ИО: 115 2Е0 Ю N0: 282 ЗЕО Ю ИО: 183 2Е0 10 ИО: 352
131 ЗЕО Ιϋ ИО: 115 ЗЕО 10 ИО: 282 ЗЕО 10 НО: 184 ЗЕО 10 ИО: 353
132 2Е0 Ιϋ НО: 115 2Е0 Ю ИО: 282 ЗЕО 10 ИО: 185 2Е0 Ю ИО: 354
133 ЗЕО 10 ИО: 115 ЗЕО 10 ИО: 282 ЗЕО 10 ИО: 186 ЗЕО 10 ИО: 355
134 ЗЕО Ιϋ ИО: 115 ЗЕО Ю N0: 282 ЗЕО Ю ИО: 187 ЗЕО Ю ИО: 356
135 ЗЕО Ιϋ ИО: 115 ЗЕО 10 НО: 282 ЗЕО 10 ИО: 188 ЗЕО 10 ИО: 357
136 ЗЕО Ιϋ ИО: 115 ЗЕО Ю N0: 282 ЗЕО Ю N0: 189 ЗЕО Ю ИО: 358
137 2Е0 Ιϋ N0: 115 2Е0 Ю НО: 282 ЗЕО Ю ИО: 190 ЗЕО Ю ИО: 359
138 ЗЕО Ιϋ ИО: 115 ЗЕО 10 ИО: 282 ЗЕО 10 НО: 191 ЗЕО 10 ИО: 360
139 2Е0 Ιϋ N0: 115 2Е0 Ю ИО: 282 ЗЕО 10 ИО: 192 ЗЕО Ю ИО: 361
140 ЗЕО 10 ИО: 115 ЗЕО 10 ИО: 282 ЗЕО 10 ИО: 193 ЗЕО 10 ИО: 362
141 ЗЕО Ιϋ ИО: 115 ЗЕО Ю N0: 282 ЗЕО Ю ИО: 194 ЗЕО Ю ИО: 363
142 ЗЕО Ιϋ ИО: 115 ЗЕО 10 НО: 282 ЗЕО 10 ИО: 195 ЗЕО 10 ИО: 364
143 ЗЕО Ιϋ ИО: 115 ЗЕО Ю N0: 282 ЗЕО Ю N0: 196 ЗЕО Ю ИО: 365
144 ЗЕО Ιϋ ИО: 115 ЗЕО 10 ИО: 282 ЗЕО 10 ИО: 197 ЗЕО 10 ИО: 366
145 ЗЕО Ιϋ ИО: 115 2Е0 Ю N0: 282 ЗЕО Ю ИО: 198 ЗЕО Ю ИО: 367
146 ЗЕО Ιϋ N0: 115 2Е0 Ю ИО: 282 ЗЕО 10 ИО: 199 ЗЕО Ю ИО: 368
147 ЗЕО 10 ИО: 115 ЗЕО 10 ИО: 282 ЗЕО 10 ИО: 200 ЗЕО 10 ИО: 369
148 ЗЕО Ιϋ N0: 115 2Е0 Ю ИО: 282 ЗЕО 10 ИО: 201 ЗЕО Ю ИО: 370
175 ЗЕО 10 ИО: 153 ЗЕО 10 ИО: 320 ЗЕО 10 ИО: 189 ЗЕО 10 ИО: 358
176 ЗЕО Ιϋ ИО: 154 ЗЕО Ю N0: 321 ЗЕО Ю ИО: 189 ЗЕО Ю ИО: 358
177 ЗЕО Ιϋ ИО: 155 ЗЕО 10 НО: 322 ЗЕО 10 ИО: 189 ЗЕО 10 ИО: 358
173 ЗЕО Ιϋ ИО: 156 ЗЕО Ю N0: 323 ЗЕО Ю N0: 189 ЗЕО Ю ИО: 358
179 ЗЕО Ιϋ ИО: 157 ЗЕО 10 ИО: 324 ЗЕО 10 ИО: 189 ЗЕО 10 ИО: 358
180 ЗЕО Ιϋ ИО: 158 ЗЕО 10 ИО: 325 ЗЕО 10 НО: 189 ЗЕО 10 ИО: 358
181 ЗЕО Ιϋ N0: 159 2Е0 Ю НО: 326 ЗЕО Ю ИО: 189 ЗЕО Ю ИО: 358
182 ЗЕО Ιϋ ИО: 160 ЗЕО 10 ИО: 327 ЗЕО 10 НО: 189 ЗЕО 10 ИО: 358
183 2Е0 Ю N0: 31 2Е0 Ю ИО: 220 2Е<2 Ιϋ N0: 32 ЗЕО Ю ИО: 221
184 ЗЕО 10 N0: 33 ЗЕО 10 ИО: 222 ЗЕО 10 ИО: 179 ЗЕО 10 ИО: 348
185 ЗЕО Ю N0: 45 ЗЕО Ю N0: 234 ЗЕО Ю ИО: 179 ЗЕО Ю ИО: 348
186 ЗЕО 10 ИО: 119 ЗЕО 10 ИО: 286 ЗЕО 10 ИО: 51 ЗЕО 10 ИО: 240
190 ЗЕО Ю ИО: 119 ЗЕО Ю N0: 286 ЗЕО Ю ИО: 189 ЗЕО Ю ИО: 358
191 ЗЕО 10 ИО: 161 ЗЕО 10 НО: 328 ЗЕО 10 ИО: 189 ЗЕО 10 ИО: 358
192 ЗЕО 10 ИО: 162 ЗЕО 10 НО: 329 ЗЕО 10 НО: 189 ЗЕО 10 ИО: 358
193 ЗЕО Ю N0: 163 ЗЕО Ю N0: 330 ЗЕО Ю ИО: 189 ЗЕО Ю ИО: 358
194 ЗЕО Ю ИО: 164 ЗЕО 10 ИО: 331 ЗЕО 10 НО: 189 ЗЕО 10 ИО: 358
195 ЗЕО Ю N0: 165 ЗЕО Ю НО: 332 ЗЕО Ю ИО: 189 ЗЕО Ю ИО: 358
196 ЗЕО Ю ИО: 166 ЗЕО 10 ИО: 333 ЗЕО 10 НО: 189 ЗЕО 10 ИО: 358
197 ЗЕО Ю N0: 167 2Е0 Ю ИО: 334 ЗЕО 10 ИО: 189 ЗЕО Ю ИО: 358
198 ЗЕО 10 НО: 168 ЗЕО Ю ИО: 335 ЗЕО Ю ИО: 189 ЗЕО Ю N0: 358
199 8Е0 10 ИО: 161 ЗЕО 10 ИО: 328 ЗЕО 10 НО: 179 ЗЕО 10 ИО: 348
200 ЗЕО Ю N0: 162 ЗЕО Ю N0: 329 ЗЕО Ю ИО: 179 ЗЕО Ю N0: 348
201 ЗЕО Ю ИО: 163 ЗЕО 10 ИО: 330 ЗЕО 10 ИО: 179 ЗЕО 10 ИО: 348
202 ЗЕО 10 ИО: 164 ЗЕО Ю ИО: 331 ЗЕО 10 ИО: 179 ЗЕО Ю N0: 348
203 ЗЕО Ю ИО: 165 ЗЕО 10 ИО: 332 ЗЕО Ю НО: 179 5Е0 Ю ИО: 348
204 ЗЕО Ю НО: 166 ЗЕО Ю ИО: 333 ЗЕО Ю ИО: 179 ЗЕО Ю N0: 348
205 ЗЕО 10 ИО: 167 ЗЕО 10 ИО: 334 ЗЕО 10 ИО: 179 ЗЕО Ю ИО: 348
206 ЗЕО Ю ИО: 168 ЗЕО Ю ИО: 335 ЗЕО Ю ИО: 179 ЗЕО Ю ИО: 348
Таблица 10: Список номеров антител и идентификационных номеров соответствующих последовательностей.
Все последовательности, представленные в этой таблице, за исключением антитела 1, представляют собой последовательности вариабельных областей антител. Все вариабельные области, представленные в этой таблице, составляют чать антител, содержащих Рс-область тяжелой цепи человеческого 1дО1 (8ЕЦ ГО N0:8) и константную область легкой цепи каппа (8ЕЦ ГО N0:9).
- 64 026110
Методы
Создание, выделение, экспрессия антител в клетках млекопитающих Генерирование гибридомных клеточных линий, экспрессия и очистка мышей ВАЬВ/С иммунизировали человеческим 1Ь-12 (Рсрго1ссН) в полном адъюванте Фрейнда, а затем вводили бустер-дозу человеческого 1Ь-12 в неполном адъюванте Фрейнда на дни 14, 35 и 70. На день 74, мышиную селезенку собирали и получали мышиные спленоциты. Эти клетки и клетки миеломной линии 8Р2/0 Ад-14 подвергали слиянию, а затем эти клетки депонировали в 96-луночных планшетах для культивирования тканей. ЕЫ§А-анализы антител против 1Ь-12, 1Ь-12р40 и 1Ь-23 (см. ниже) осуществляли на супернатанте в каждой лунке 96-луночных планшетов. Супернатанты, которые давали положительный результат во всех трех ЕШЗА-анализах, оставляли и клонировали путем лимитирующего разведения. Клоны, которые давали положительный результат в последующих ЕЫ§А-анализах, культивировали в масштабе до 500 мл, и антитело подвергали очистке (см. ниже).
Антитело, очищенное этим методом, диализовали против 1хРВ§, и определяли концентрацию с помощью аналитического набора ВСА® (Р1егсе®).
Секвенирование ДНК
РНК выделяли из гибридомных клеток с использованием реагента ΤΚΙ (Шдта-АИпск®) в соответствии с протоколом производителей. кДНК синтезировали из 10-200 нг РНК с помощью набора для синтеза 1-ой цепи кДНК АссиЗспр!® Ηίβΐι Р1йе1йу (§1га1адепе®), а затем использовали в качестве матрицы в последующей ПЦР-реакции. Праймеры, взятые из набора праймеров для тяжелой цепи и легкой цепи мышиных 1дС, Ыоуадеи, соответственно, смешивали с кДНК и с полимеразой РГи II Ма81егт1х® (§!га!адепе®), после чего проводили реакцию в термоячейке (ЕррепйогГ Ма81егсус1ег®) в следующих условиях:
о°с Время Циклы
94 2 минуты 1
94 30 секунд 30
60 30 секунд 30
72 45 секунд 30
94 5 минут 1
ПЦР-продукт подвергали гель-очистке с использованием набора для гель-экстракции ДНК (01Адеп®), метили по А-концу [ЙАТР и полимераза Тад (1пуЦгодеп™), при 72°С, в течение 15 мин присоединяли выступающий А-конец к ПЦР-продукту], лигировали в векторную систему рСЕМ-Т (Рготеда®) и переносили в компетентные клетки ТОР10 (1пуйгодеп™). Клоны скринировали на вставку размером 500 п.н. Из позитивных клонов выделяли плазмиды (М1шргер, 01Адеп®). и эти плазмиды секвенировали на стандартном оборудовании для секвенирования. Затем нуклеотидную последовательность транслировали в первичную аминокислотную последовательность.
Конструирование векторов, экспрессирующих химерные антитела
Домены ΥΗ, определенные путем секвенирования ДНК, выделенной из гибридомных клеток, РМА202 и РМА204, экспрессировали с константной областью человеческого антитела (домены СН1, шарнирной области, СН2 и СН3 тяжелой цепи человеческого 1дС1). Это было достигнуто путем обратной трансляции аминокислотных последовательностей в последовательности ДНК, которые были оптимизированы по экспрессии в клетках млекопитающих с применением технологии СепеОр11т1/ег, и синтезированы йе поуо путем сборки синтезированных олигонуклеотидов (Сепе Ат1, Сегтапу). После синтеза генов, всю последовательность субклонировали в сайт множественного клонирования вектора тяжелой цепи рТТ5 (ИигосЬег е! а1. 2002 Ыискю ЛаЙ8 Ке8. 30 Е9). Аминокислотную цепь УЬ, обнаруженную путем секвенирования ДНК гибридомных клеток, РМА202 и РМА204, экспрессировали с константной областью человеческой легкой цепи каппа путем субклонирования последовательности в сайт множественного клонирования вектора легкой цепи рТТ5. Полученное химерное антитело мышь-человек РМА202 называли антителом 202.1. Полученное химерное антитело мышь-человек РМА204 называли антителом 1. Все антитела продуцировали с применением такого метода, в котором последовательность белка-кандидата подвергали обратной трансляции в последовательность ДНК, оптимизировали и синтезировали йе поуо путем сборки синтетических олигонуклеотидов. Все антитела содержали Рс-область человеческой тяжелой цепи и константную область человеческой легкой цепи каппа. Затем все гены, кодирующие вариабельные области антител, клонировали в вектор рТТ5 для экспрессии.
Экспрессия рекомбинантных антител посредством временной трансфекции
Все антитела подвергали временной экспрессии нижеследующим методом. Вкратце, клетки НЕК293Е культивировали в полной среде для культивирования клеток (1 л среды Р17 Дпуйгодеп™), 9 мл Р1игошс Р68 (1пуЦгодеп™), 2 мМ глутамин-содержащего 20% (мас./об.) триптона N1 (Огдапо!есЬше®) с генетицином (50 мг/мл, 1пу11годеп™) в 50 мкл/100 мл культуры). За один день до трансфеции, клетки собирали путем центрифугирования и ресуспендировали в свежей среде (без генетицина). На следующий
- 65 026110 день ДНК тяжелой и легкой цепи смешивали с реагентом для трансфекции РиОЕ№)® (КосНе) и смесь для трансфекции ДНК по каплям добавляли в культуру. Эту культуру инкубировали в течение ночи при 37°С, 5% С02 и при 120 об/мин в отсутствие генетицина. На следующий день добавляли 12,5 мл триптона вместе с 250 мкл генетицина на 500 мл культуры. Эту культуру инкубировали при 37°С, 5% С02 и 120 об/мин. Через 7 дней супернатант собирали путем центрифугирования и подготавливали для очистки.
Очистка антител посредством аффинной хроматографии
Супернатант, полученный в результате описанной выше трансфекции, доводили до рН 7,4, а затем загружали на колонку с белком А ШТгар® (5 мл, ОЕ НеаПНсаге). Колонку промывали 50 мл 1хРБ8 (рН 7,4). Элюирование осуществляли с использованием 0,1М лимонной кислоты, рН 2,5. Элюированное антитело обессоливали на обессоливающих колонках 2еЪа® (Р1егсе®) в 1 хРБ8 (рН 7,4). Целостность антитела анализировали с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ и ВЭЖХ-методом гель-фильтрации. Концентрацию антитела определяли с помощью аналитического набора ВСА® (Р1егсе®).
Характеризация анти-ГЬ-12/23 антител ЕЫ8А-анализ анти-1Ь-12/23 антител
ГЬ-12 (РергоГесН), ГЬ-23 (ЕЪюзаепсе™), ГЬ-12р40 (ЕЪю заепсе™) или ГЬ-12р80 (РергоГесН) разводили до 1 мкг/мл в карбонатном буфере для нанесения покрытий (35 мМ карбонат натрия, 15 мМ бикарбонат натрия, рН 9,6) и наносили на 96-луночный планшет (Шпс™, Маюзогр™) в течение ночи при 4°С. После этого планшет три раза промывали промывочным буфером (0,01М РБ8, рН 7,2, 0,05% Твин-20), а затем три раза промывали 0,01М РБ8, рН 7,2. Затем лунки блокировали путем добавления 200 мкл блокирующего буфера (1% мас./об. Б8А в 0,01 М РБ8, рН 7,2) в каждую лунку и планшет инкубировали при 25°С в течение 1 ч. Антитело разводили в разбавителе для антитела (1% мас./об. Б8А, 0,05% Твин-20 в 0,01М РБ8, рН 7,2) в количестве, достаточном для построения кривой титрования. Лунки инкубировали с антителом в течение 1 ч при 25°С. Затем планшет промывали, как описано выше. Для детектирования связанного первого антитела использовали ПХ-конъюгат козьего антитела против человеческого иммуноглобулина О (Н+Ь) (2утей®) в отношении 1:2000 в разбавителе для антитела. Для детектирования связанного мышиного антитела использовали ПХ-конъюгат козьего антитела против мышиного иммуноглобулина (Эако) в отношении 1:2000 в разбавителе для антитела. После инкубирования при 25°С в течение 1 ч планшет снова промывали, как описано выше. Затем в каждую лунку добавляли раствор субстрата ТМВ (2утей®) и лунки оставляли для проявления окраски, после чего реакцию прекращали путем добавления в лунки 1М НС1. Оптическую плотность каждой лунки определяли на 450 пт (эт. 620 нм).
Анализы на нейтрализацию 1Ь-12/1Ь-12Кр1
Химеру ГЬ-12Кв1/Рс (К&Э 8узГетз®) разводили до 1 мкг/мл в карбонатном буфере для нанесения покрытий и добавляли в каждую лунку 96-луночного планшета, а затем инкубировали в течение ночи при 4°С. После этого планшет три раза промывали промывочным буфером, а затем его три раза промывали 0,01М РБ8, рН 7,2. Затем лунки блокировали путем добавления 200 мкл блокирующего буфера в каждую лунку и инкубировали при 25°С в течение 1 ч. Антитело разводили в разбавителе для антитела в количестве, достаточном для построения кривой титрования. ГЬ-12 (РергоГесН) разводили до концентрации 300 нг/мл в разбавителе для антитела. ГЬ-12 предварительно инкубировали с антителом в планшете с глубокими лунками в течение 2 ч. Затем планшеты промывали, как описано выше, и лунки инкубировали с раствором антитело/ГЬ-12 в течение 1 ч при 25°С. Затем планшет промывали, как описано выше, и 100 мкл биотинилированного антитела против человеческого ГЬ-12 (РергоГесН) в концентрации 0,5 мкг/мл в разбавителе для антитела использовали для детектирования связанного антитела в течение 1 ч при 25°С. Планшет промывали, как описано выше. 100 мкл стрептавидина-ПХ (2утей®) в отношении 1:1000 в разбавителе для антитела использовали для детектирования связанного биотинилированного антитела. После инкубирования при 25°С в течение 1 ч планшет снова промывали, как описано выше. 100 мкл раствора субстрата ТМВ (2утей®) добавляли в каждую лунку и эти лунки оставляли на 5 мин для проявления окраски. 100 мкл 1М НС1 добавляли для прекращения реакции проявления окраски и определяли оптическую плотность на 450 нм (этал. 620 нм).
Анализ на нейтрализацию 1Ь-12р80/1Ь-12Кр1
Этот анализ осуществляли, как описано выше для анализа на нейтрализацию ГЬ-12/ГЬ-12Кв1, но со следующими изменениями:
ГЬ-12 заменяли на ГЬ-12р80 (РергоГесН).
Анализ на нейтрализацию 1Ь-12/1Ь-12Кр2
Этот анализ осуществляли, как описано выше для анализа на нейтрализацию ГЬ-12/ГЬ-12Кв1, но со следующими изменениями: химеру ГЬ-12К31/Рс заменяли химерой ГЬ-12К32/Рс (К&Э 8у1зетз®) и разводили до 5 мкг/мл вместо 1 мкг/мл. Планшет три раза промывали промывочным буфером без дополнительной промывки РБ8. ГЬ-12 (РергоГесН) заменяли биотинилированным ГЬ-12 (РергоГесН). Лунки с раствором антитело/ГЬ-12 инкубировали в течение 2 ч при 25°С. В лунки не добавляли биотинилированное антитело против человеческого ГЬ-12. 100 мкл смеси стрептавидина-ПХ в отношении 1:1000 (2утей®)
- 66 026110 заменяли на 100 мкл смеси стрептавидина-ПХ в отношении 1:5000 (81дта-А1бгюй®). 100 мкл раствора субстрата ТМВ (2утеб®) заменяли 100 мкл раствора субстрата ТМВ (81дта-А1бгюй®).
Анализ на нейтрализацию 1Ь-23/ГО-23К
Химеру 1Ь-23/Рс (К&Э 8ук!етк®) разводили до 1 мкг/мл в карбонатном буфере для нанесения покрытий и добавляли в каждую лунку 96-луночного планшета, а затем инкубировали в течение ночи при 4°С. После этого планшет три раза промывали промывочным буфером, а затем его три раза промывали 0,01М РВ8, рН 7,2. Затем лунки блокировали путем добавления 200 мкл блокирующего буфера в каждую лунку и планшет инкубировали при 25°С в течение 1 ч. Антитело разводили в разбавителе для антитела в количестве, достаточном для построения кривой титрования. 1Ь-23 (ЕЬю ктепсе™) разводили до концентрации 300 нг/мл в разбавителе для антитела. 1Ь-23 преварительно инкубировали с антителом в планшете с глубокими лунками в течение 2 ч. Затем планшеты промывали, как описано выше, и лунки инкубировали с раствором антитело/1Ь-23 в течение 1 ч при 25°С. Затем планшеты промывали, как описано выше, и 100 мкл биотинилированного антитела против человеческого 1Ь-12 (Рерго!есй) в концентрации 0,5 мкг/мл в разбавителе для антитела использовали для детектирования связанного антитела в течение 1 ч при 25°С. Планшет промывали, как описано выше. 100 мкл стрептавидина-ПХ (2утеб®) в отношении 1:1000 в разбавителе для антитела использовали для детектирования связанного биотинилированного антитела. После инкубирования при 25°С в течение 1 ч планшет снова промывали, как описано выше. 100 мкл раствора субстрата ТМВ (2утеб®) добавляли в каждую лунку и эти лунки оставляли на 5 мин для проявления окраски. 100 мкл 1М НС1 добавляли для прекращения реакции проявления окраски и определяли оптическую плотность на 450 нм (этал. 620 нм).
Этот анализ осуществляли, как описано выше для анализа на нейтрализацию 1Ь-12/1Ь-23К, но со следующими изменениями: химеру 1Ь-23/Рс (К&Э 8у1кетк®) заменяли на полученный в своей лаборатории ГО-23К-Н18, происходящий от клеток НЕК-293Е, и очищали с помощью аффинной хроматографии. Планшет три раза промывали промывочным буфером без дополнительной промывки РВ8. 1Ь-23 (ЕЬюкаепсе™) заменяли биотинилированным 1Ь-23 (ЕЬюктепсе™). 1Ь-23 разводили до 50 нг/мл вместо 300 нг/мл в разбавителе для антитела. Лунки с раствором антитело/1Ь-23 инкубировали в течение 2 ч при 25°С. В эти лунки не добавляли биотинилированное антитело против человеческого 1Ь-12. 100 мкл смеси стрептавидина-ПХ в отношении 1:1000 (2утеб®) заменяли на 100 мкл смеси стрептавидина-ПХ в отношении 1:5000 (81дта-А1бгюй®). 100 мкл раствора субстрата ТМВ (2утеб®) заменяли 100 мкл раствора субстрата ТМВ (81дта-А1бпсЬ®). Окраску вместо 5 мин проявляли в течение 15 мин.
Эксперименты по конкурентному связыванию ЕЫ8А-анализ на конкурентное связывание с ГО-12/23
РМА204 или РМА202 разводили до 1 мкг/мл в карбонатном буфере для нанесения покрытий (35 мМ карбонат натрия, 15 мМ бикарбонат натрия, рН 9, 6) и наносили на 96-луночный планшет (Νιιικ™, Махтогр™) в течение ночи при 4°С. После этого, планшет три раза промывали промывочным буфером (0,01М РВ8, рН 7,2, 0,05% Твин-20), а затем три раза промывали 0,01М РВ8, рН 7,2. Затем лунки блокировали путем добавления 200 мкл блокирующего буфера (1% мас./об. В8А в 0,01 М РВ8, рН 7,2) в каждую лунку, и планшет инкубировали при 25°С в течение 1 ч. 1Ь-12 (Рерго!есй) или 1Ь-12 (ЕЬюкаепсе™) разводили до 0,5 мкг/мл в разбавителе для антитела (1% масс./об. В8А, 0,05% твин-20 в 0,01М РВ8, рН 7,2) и 100 мкл добавляли в каждую лунку с последующим инкубированием в течение 1 ч при 25°С. Затем планшет промывали, как описано выше. Затем осуществляли серийные полулогарифмические разведения конкурентных антител и 100 мкл добавляли в каждую лунку. Конечные концентрации белка были достаточными для построения кривой титрования. Планшеты инкубировали в течение 1 ч при 25°С, а затем промывали, как описано выше. Для детектирования связанного конкурентного антитела использовали ПХ-конъюгат козьего антитела против человеческого иммуноглобулина О (Рс-специфического) (81дта-А1бгюй®) в отношении 1:2000 в разбавителе для антитела. После инкубирования при 25°С в течение 1 ч планшет снова промывали, как описано выше. Для проявления детектирующих реагентов, меченных пероксидазой хрена (ПХ), осуществляли ферментативные реакции, которые проводили в темноте со 100 мкл/лунку субстрата тетраметилбензидина (2утеб®) при комнатной температуре. Реакцию прекращали добавлением 100 мкл 1М НС1 и измеряли оптическую плотность на 450 нм (этал. 620 нм).
ППР -анализ на конкурентное связывание
Белок А (Тйегто) иммобилизовали на сенсорном чипе СМ5 с использованием В1Асоге 3000. Затем химерное или гуманизованное антитело в концентрации 5 мкг/мл в НВ8-Р (ОЕ Неа1!йсаге) впрыскивали в течение 1 мин при скорости потока 20 мкл/мин. После этого, на поверхность впрыскивали 1Ь-12 или ГО23 в концентрации 5 мкг/мл в НВ8-Р в течение 1 мин при скорости потока 20 мкл/мин. Затем вводили мышиное антитело в концентрации 5 мкг/мл в НВ8-Р в течение 1 мин при скорости потока 20 мкл/мин. Также использовали контроль, в котором ГО-12 или ГО-23 заменяли НВ8-Р, и мышиное антитело заменяли НВ8-Р. Все полученные данные вычитали из контрольных величин, полученных в результате тестирования ГО-12 или ГО-23 или мышиного антитела на фоновое связывание с поверхностью, покрытой белком А.
- 67 026110
Генерирование стабильно трансфицированной клеточной линии, экспрессирующей цепь ΙΓ-12Κβ1
Аминокислотную последовальность ΙΕ-12Κβ1 подвергали обратной трансляции в последовательности ДНК, которые оптимизировали для экспрессии в клетках млекопитающих с применением технологии СепеОрИнп/ег и синтезировали йе поуо путем сборки синтетических олигонуклеотидов (СепеАгГ, Сегтапу). Последовательность ДНК, кодирующую ΙΕ-12Κβ1, субклонировали в рсПИАПЕ§Т-40, а затем переносили в химически компетентные клетки Е. сой Тор-10. Плазмидную ДНК выделяли из клеточной культуры с использованием набора Н1§реей Р1акт1й Мах1 (О1Адеп®), и линеаризовали путем гидролиза рестриктирующим ферментом §са1 (Рготеда®). Плазмиды переносили в клетки ЛткаГ 6Е (АТСС) и поверхностную экспрессию определяли путем окрашивания антителми против цепи рецептора ΙΕ-12Κβ1 (Κ&Ό 8у51етк®).
Детектирование связывания 1Ь-12р40, 1Ь-12 и 1Ь-23 с ΣΕ-12Κβ1, экспрессируемым клеточной линией
РЬАС-меченный 1Ь-12 или ΗΙδ-меченный 1Ь-23 или 1Ь-12р40 совместно инкубировали с ΙΕ-12-Κβ1экспрессирующими клетками (106/мл) в концентрации в пределах от 1000 до 0,01 нг/мл, достигаемых путем серийного полулогарифмического разведения в течение 2 ч при 37°С. Связывание цитокина с клетками детектировали с использованием конъюгированного с фикоэритрином мышиного антитела против метки 6χΗΙδ (АЪсат®) или ФИТЦ-конъюгированого анти-РЬАС антитела (81дта-А1йтюб®). Данные для образца получали на устройстве Весктап-Соибет ОиаШа®.
Детектирование ингибирования связывания 1Ь-12р40, 1Ь-12 и 1Ь-23 с 1Ь-12Кв1-экспрессирующей клеточной линией
РЬАС-меченный ГЬ-12 или ΗΙδ-меченный ГЬ-23 или ГЬ-12р40 в концентрации 250 нг/мл совместно инкубировали с антителом в концентрации в пределах от 10 до 0,01 мкг/мл, достигаемых путем серийного полулогарифмического разведения в течение одного часа при 37°С, а затем ΙΕ-12Κβ1экспрессирующие клетки, описанные выше, добавляли при 106/мл и смесь инкубировали еще 1 ч. Клетки тщательно промывали в РВδ/10% РВδ и связанный с клетками цитокин детектировали с использованием конъюгированного с фикоэритрином мышиного антитела против 6хНЛ-метки (АЪсат®) или ФИТЦконъюгированного анти-РЬАС антитела (§1дта-А1йг1сН®). Данные для образца получали на устройстве Весктап-Соибет ОнаШа.
Детектирование комплексов антитело-цитокин на поверхности 1Ь-12Кв1-экспрессирующий клеточной линии
РЬАС-меченный ГЬ-12 или ΗΙδ-меченные ГЬ-23 или ГЬ-12р40 совместно инкубировали с ΙΕ-12Κβ1экспрессирующими клетками, как описано выше в концентрации 250 нг/мл. После инкубирования в течение 2 ч антитело добавляли в концентрациях от 10 до 0,01 мкг/мл путем серийного полулогарифмического разведения и инкубировали в течение еще одного часа. Клетки тщательно промывали в РВδ/10% РВδ и антитело, связанное с цитокином, который был связан с клетками, детектировали с использованием ФИТЦ-конъюгированного кроличьего антитела против человеческих ЦС (Нако). Данные для образца получали на устройстве Весктап-Соибег ОиаШа®.
Созревание аффинности антитела Методы
Сборка кеГу-80-кодирующей последовательности, происходящей от доменов Ун и Уь антитела 80
Одноцепочечный фрагмент антитела (ксРу-80) получали из антитела 80 путем конструирования полипептида, содержащего вариабельный домен тяжелой цепи (Уь), присоединенный к вариабельному домену легкой цепи (Уъ) линкерной последовательностью длиной в 15 аминокислот (С1у^ег)3 (ксРу-80, δΞΟ ΙΌ ИО:27). Последовательности УН и Уъ расположены у И- и С-концов полипептида (соответственно). Затем аминокислотную последовальность подвергали обратной трансляции в последовательность ДНК, которую оптимизировали для экспрессии в клетках млекопитающих с применением технологии СепеОрИнп/ег. Затем полноразмерный ген синтезировали йе поуо путем сборки синтетических олигонуклеотидов (СепеАтГ). Конечная последовательность также включала 5'^^ и 3'-ИоП-сайты для облегчения последующего субклонирования.
Рекомбинантный ген, кодирующий белок ксРу-80, субклонировали в ИсоЬ и ИоП-сайты экспрессионного вектора рЕСХ448. рЕСХ448 конструировали так, чтобы любой ксРу, субклонированный в ИсоЬ и ИоП-сайты, автоматически присоединялся к своей аффинной метке РЬАС у С-конца.
Аналогичным образом, ген ксРу-80 субклонировали в вектор рЕСХ412 для продуцирования РНК, мутагенеза и рибосомного представления. Этот вектор был идентичен плазмиде рЕСХ253, описанной Корыйак еГ а1. (2007), за исключением того, что в векторе рЕСХ412 использовалась последовательность белка, кодируемого геном ΙΙΙ, для связывания ксРу с рибосомой вместо последовательности Съ, используемой в векторе рЕСХ253.
Продуцирование РНК и мутагенез
Конструкцию рЕСХ412-ксРу80, описанную выше, использовали для продуцирования пула РНК, кодирующего мутантные варианты ксРу-80. Для достижения этой цели плазмиду линеаризовали фермен- 68 026110 том δтаI и непосредственно использовали в качестве матрицы для продуцирования одноцепочечной РНК (оцРНК) с использованием набора с РНК-полимеразой Т7 (Рготеда®) в соответствии с инструкциями производителей. Полученную молекулу одноцепочечной РНК использовали в качестве матрицы для репликации с вероятностью ошибки с использованием репликазы О-Ве1а (Ерюейте® Вю1есНпо1од1ек). Для достижения этой цели 200 нг РНК смешивали с 33 мМ трис-ацетата (рН 7,8), 66 мМ ацетата калия, 10 мМ ацетата магния, 0,5 мМ дитиотреитола (ОТТ), 5 мМ гАТР, 5 мМ гИТР, 10 мМ гСТР, 10 мМ гОТР, 0,1 ед/мкл репликазы β-бета и Н2О до конечного объема 20 мкл. Реакционную смесь инкубировали при 45°С в течение приблизительно 16 ч.
В результате реакции репликазы β-бета была генерирована библиотека двухцепочечных молекул РНК (дцРНК), кодирующих пул мутантов родительского 5сΡν-80 с 1-2 точковыми мутациями на один мутант. Библиотеку дцРНК преобразовывали в пул фрагментов ДНК с помощью ПЦР с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР). ОТ-ПЦР-продукт очищали путем электрофореза в агарозном геле и гельэкстракции, а затем получали матрицу для конечной реакции РНК-полимеразы Т7. Продукт всех реакций, описанных выше, тестировали с помощью электрофореза в агарозном геле.
Обогащение 1Ь-23-связывающими агентами из библиотеки вариантов хеГу-80
Библиотеку 5сΡν, описанную выше, экспрессировали из вектора рЕОХ412 для продуцирования комплексов 5сΡν-рибосома, которые затем подвергали пэннингу на антитело против Х-23 в соответствии с протоколом рибосомного представления, описанным Корк1йак е! а1. (2007). Вкратце, комплексы 5сΡν-рибосома (которые также включали 5сΡν-кодирующую оцРНК) инкубировали с биотинилированным Х-23 до конечной концентрации 1 нМ в течение 24 ч на льду. Затем, в экспериментах по пэннингу использовали давление отбора для изменения в сторону обогащения Χ-23-связывающими агентами с низкими константами диссоциации. Это было достигнуто путем добавления 800-кратного избытка небиотинилированного Х-23 и продолжения реакции пэннинга в течение еще 5 дней. Комплексы ксРурибосома, которые оставались связанными с биотинилированным Х-23 по окончании реакции пэннинга, выделяли с использованием магнитных сфер, покрытых стрептавидином. Затем сферы три раза промывали РВ§, содержащим 0,05% твин-20 и 5 мМ МдС12, и два раза промывали РВ§, содержащим 5 мМ МдС12. И наконец, оцРНК элюировали из выделенных комплексов 5сΡν-рибосома, а затем кодируемый пул δсΡν амплифицировали с помощью ОТ-ПЦР с использованием системы для одностадийной ОТ-ПЦР Зцреткспр! ΙΙΙ ОпуЦгодеп™) в соответствии с инструкциями производителей, где указанную реакцию проводили с использованием 8 мкл выделенной РНК в качестве реакционной матрицы и 5сΡνспецифических олигонуклеотидных праймеров, перечисленных ниже. Следует отметить, что эти олигонуклеотиды также добавляли 5'-ΝοθΙ- и 3'-Nо!I-сайты, которые облегчали субклонирование.
Прямой праймер: 5'-ССАТООСССАООТОСАОСТО-3'
Обратный праймер: 5'-ОСООССОСТОТСОТАСОС-3'.
Протокол высокоэффективного скрининга для идентификации ГЬ-2-связывающих агентов
Пулы ОТ-ПЦР-продуктов, амплифицированных по окончании экспериментов по рибосомному представлению (описанных выше), субклонировали в ШоВ и ХоХсайты экспрессионного вектора рЕОХ448, перенесенного в компетентные клетки Е. сой Опе-8!ер Сотре!еп! ККХ (§!та!адепе®), которые выращивали на твердой культуральной среде. Полученные бактериальные колонии по отдельности инокулировали в 200 мкл жидких клеточных культур в 96-луночных планшетах, где указанные клетки выращивали до ΟΌ на 600 ни (ΟΌ600), равной 0,8, а затем индуцировали 0,5 мМ изопропил-бета-Этиогалактопиранозидом (ХТО) для экспрессии белка. 200 мкл экспрессионных культур инкубировали в течение ночи при 20°С, а затем использовали для продуцирования неочищенных бактериальных лизатов путем добавления 40 мкл буфера для лизиса (2 М сахароза; 0,25М трис, рН 7; 0,2М ЕОТА, рН 8) и встряхивания планшетов при 900 об/мин в течение 30 мин. После этого лизаты осветляли путем центрифугирования и пропускали через фильтр-планшет с предельной молекулярной массой 10000 (Мййроте). Этот метод был применен для получения приблизительно 6500 образцов 5сΡν, которые были скринированы на связывание с Х-23 в соответствии с протоколом проведения высокоэффективного ПНР, подробно описанного ниже.
Выскоэффективный ППР-скрининг осуществляли с использованием биосенсора ВХсоге А100 (ОЕ неа1!Ьсаге).
Приблизительно 10000 КИ (единиц отклика) РЬАО-специфической молекулы для захвата, полученной в собственной лаборатории, иммобилизовали на сенсорном чипе СМ5 8епек δ с применением стандартной технологии химического связывания с амином на зонах 1 и 5 (внешние зоны) и 3000КИ на зонах 2 и 4 (внутренние зоны) в каждой из четырех проточных кювет на биосенсоре В^сою А100 Вюкепког. Используемый рабочий буфер представляет собой нВ8-ЕР+ (ВМсою), а все взаимодействия определяли при 25°С. Неочищенные периплазматические препараты РЬАО-меченных 5сΡν (полученных, как описано в предыдущем параграфе) двухкратно разводили в рабочем буфере, а затем иммобилизовали при скорости потока 5 мкл/мин в течение 60 с. Приблизительно 100 КИ (на внешних зонах) и 50 КИ (на внутренних зонах) меченного 5сΡν подвергали захвату. После стабилизации в течение 2 мин, Х-23 пропускали через все зоны всех четырех проточных кювет одновременно при скорости потока 30 мкл/мин в тече- 69 026110 ние 120 с и осуществляли мониторинг диссоциации в течение 200 с. Полученные сенсорограммы сравнивали с сенсорограммами немодифицированной зоны 3 каждой проточной кюветы, а затем по лангмюровскому уравнению 1: 1 строили кривую с использованием серии Ы для локального участка с учетом изменения плотностей лиганда, и вычисляли величины ка, кб и ΚΌ.
Данные, полученные после ППР-скрининга, использовали для отбора предположительно лучших связующих веществ. Величину кб для ГО-23 каждого отдельного 8сРν сравнивали с величиной, зарегистрированной для 8сРν-80-контроля дикого типа на каждом планшете. Любой вариант 8сРν с кб, который по меньшей мере в 1,5 раз лучше (то есть, ниже), чем контроль, рассматривался как, возможно, лучший связующий агент. Затем каждый из этих вариантов подвергали анализу последовательности ДНК, и любой 8сРν, имеющий новую аминокислотную последовальность, оставляли для последующей характеризации.
Полная характеризация кинетических свойств в высокой степени очищенных хеку
Этот протокол был использован для полной характеризации кинетических свойств вариантов 8сРν, идентифицированных непосредственно в результате проведения экспериментов по рибосомному представлению и скринингу. Сначала, конструкцию рЕОХ448, кодирующую соответствующий 8сРν, переносили в клетки Е. гой ΗΒ2151. Рекомбинантные 8сРν экспрессировали в бактериальной периплазме путем выращивания 500 мл культур до ΟΌ600=0,8, с последующим индуцированием экспрессии белка с использованием 0,5 мМ ΙΡΤΟ. Клетки собирали путем центрифугирования и периплазматическую фракцию экстрагировали под действием осмотического шока, как описано Мш8ку е! ак (1986, Ргос. №ГО Αсаб. Зсц νοί. 83, 4180-4184). ЗсРν очищали от периплазматической фракции на 1 мл-колонке с сефарозной смолой, конъюгированной с антителом, которое специфически распознает С-концевую метку ΠΈΑΟ. Аффинно очищенный белок концентрировали до конечного объема 200 мкл и подвергали гель-фильтрации на колонке с Зирегбех 200 (ОЕ НеаИЬсаге), уравновешенной в ΡΒЗ, а затем максимальную белковую фракцию, соответствующую мономерному 8сРν (~32 кДа), собирали для функциональной характеризации (см. ниже).
Кинетические свойства очищенных 8сРν полностью охарактеризовывали с использованием биосенсора ΒΙΑ^γο Τ100 (ОЕ НеаИЬсаге). Приблизительно 10000 КИ ΕΕΑΟ-специфической молекулы для захвата, полученной в собственной лаборатории, иммобилизовали на сенсорном чипе СМ5 Зепе8 З с применением стандартной технологии химического связывания с амином в проточных кюветах (РС) РС1 и РС2 (или альтернативно, РС3 и РС4) биосенсора ΒΙΑ^κ Τ100. Используемым рабочим буфером является НΒЗ-ΕΡ+ (ΒΙΑ^γο), а взаимодействия измеряли при 30 или 35°С для стимуляции дифференциации 8сРν с наиболее сходными величинами ка. В высокой степени очищенные ΕΕΑΟ-меченные 8сРν (полученные, как описано в предыдущем параграфе) разводили до 10 нм в рабочем буфере и иммобилизовали на РС2 при скорости потока 10 мкл/мин для захвата 50 КИ 8сРν (для захвата меченного 8сРν на этом уровне обычно достаточно 60 с). После соответствующей стабилизации, мишень, ГО-12 или ГО-23 пропускали по РС1 и РС2 при скорости потока 60 мкл/мин в концентрациях от 81 до 0,13 нМ (с использованием пятикратного разведения ΙΚ-12) и от 81 до 1 нМ (с использованием трехкратного разведения ΙΚ-23). Время контактирования для ассоциации составляет 180 с, а для диассоциации - 10 мин, как было измерено для наивысшей концентрации и 300 с для всех других концентраций в этой серии. Данные сенсорограммы для РС2 вычитали из данных для РС1 и данных, полученных только для буферного контроля. Кривые строили по лангмюровскому уравнению 1:1 для получения величин ка, кб и ΚΌ.
Объединение мутаций, идентифицированных посредством рибосомного представления и скрининга
Дополнительные варианты 8сРν-80 получали путем объединения мутаций, обнаруженных в результате рибосомного представления и скрининга. Важно отметить, что такие комбинации мутаций не образуются в результате проведения одного раунда рибосомного продуцирования, где уровень мутагенеза, по существу, определяет одну мутацию (в среднем) на последовательность 8сРν. А поэтому, вместо этого, такие комбинации были получены путем конструирования. Комбинации были выбраны путем определения весовых коэффициентов каждой отдельной мутации, как показано в табл. 11.
- 70 026110
Таблица 11. Стратегия определения весовых коэффициентов мутаций для конструирования дополнительных вариантов ксРу-80
Мутация* Весовые коэффициенты
ν„: Г2 9Ь Ί
ν„: Υ595 3
ν„: Υ59Η 3
ν„: Т07А 3
£63Г 3
ν„: Ι28Α 2
ν4: Ι68Ξ 1
ν„: 043Ε 1
Ι55Τ 1
526Ρ 1
027Н 1
77: Ξ52Ε 1
* Все мутации даны по отношению к последовательности ксРу-80 дикого типа Набор весовых коэффициентов
Время наблюдения в процессе скрининга Полученное кратное увеличение кд*
До 2 раз более, чем в 2 раза более, чем в 3,5 раз
Один раз 1 2 3
Два раза 2 4 5
3 раза 3 5 6
4 раза 4 6 7
* где кй измеряли с использованием очищенных мономерных белков ксРу (см. табл. 5). Нуклеотидные последовательности, кодирующие ксРу с комбинациями мутаций с самыми высокими весовыми коэффициентами, получали путем сайт-направленного мутагенеза с использованием ксРу80 в качестве матрицы с помощью набора ОшксЬапде ЫдЫтпд (8!га!адепе®) в соответствии с инструкциями производителей. Праймеры для мутагенеза, используемые для введения каждой специфической мутации, представлены ниже. В табл. 4Х приводится полный список ксРу с перекрестными ссылками на аминокислотные последовательности.
Мутация Υ593 в Ά
Смысловая: 5'-даасддсдасассдадоссдсссссаа-3'
Антисмысловая: 51-ХХдддддсддасХсддХаХсдссдХХс-З'
Мутация Υ59Η в νΗ
Смысловая: 51-сддсдаХассдадсасдсссссаадРХ-З1 Антисмысловая: 5'-аасссдддддсдсдсссддсаосдссд-З'
Мутация Т28А в Ун
Смысловая: 5'-ддссадсддсСасдссССсассдасСа-З’
Антисмысловая: 51-РадРсддРдааддсдРадссдсРддсс-З'
Мутация Г29Ь в Ун
- 71 026110
Смысловая: 5'-дссадсддсСасасссСсассдасСасСаСс-3'
Антисмысловая: 5'-даЛадбадЛсддЛдадддЛдИадссдсЛддс-З'
Мутация 32 6Р в
Смысловая: 51-ОдЛссОдЛададссссссададсаОсадс-З'
Антисмысловая: 5'-дсРдаРдсРсРддддддсРсРасаддаса-3'
Мутация 352Е в
Смысловая: 5 ' -даРсРасРРсдссадасадРссаРсадсддс-3 '
Антисмысловая: 5'-дссдсРдаРддасРдРсРддсдаадРадаРс-31 Мутация £)27К в Уь
Смысловая: 5'-ссРдРададссРсссддадсаРсадсаРсаа-3'
Антисмысловая: 5'-ССдаСдсСдаСдсСссдддаддсСсСасадд-3'
Следует отметить, что не были сконструированы праймеры для введения мутации Ц43К в тяжелую цепь или Р55Т в легкую цепь. Вместо этого были непосредственно введены другие мутации в конструкцию, которая уже содержала К43 и Т55 в УН и Уь, соответственно (ЗЕЦ ГО NО:230 и ЗЕЦ ГО NО:231).
Среднемасштабный анализ кинетических свойств хсГу с комбинациями мутаций
Этот протокол был использован для исследования связывания ГО-12 и ГО-23 с вариантами 5сРу-80, несущими комбинации мутаций. Лабораторные культуры НВ2151 Е. сой использовали в целях продуцирования частично очищенных 5сРу для среднемасштабных ППР-анализов (см. ниже). Рекомбинантные 8сРу экспрессировали в периплазме, а затем экстрагировали и очищали на колонке с анти-РЬАС антителом, конъюгированным с сефарозой, как описано выше. Затем образцы 5сРу подвергали буферному обмену на РВЗ на обессоливающей колонке РЭ10 (СЕ НеаЙЬсаге) и концентрировали до конечного объема 200 мкл. Этот материал подвергали ППР-анализу без дополнительной очистки.
Эти 8сРу с объединенными мутациями в тяжелой и легкой цепи анализировали методом, аналогичным методу, применяемому для полной характеризации в высокой степени очищенных 5сРу (см. выше), за исключением того, что одна двойная эталонная концентрация ГО-12 или ГО-23 составляла 81 нМ, а диссоциацию измеряли в течение 3000 с.
Эксперименты по связыванию с 1§С, проводимые методом поверхностного плазмонного резонанса
С использованием ЗРК 3000, белок А иммобилизовали на кюветах РС1 и РС2 (или альтернативно, на РС3 и РС4) сенсерного чипа СМ5 лабораторного типа с применением технологии связывания с амином, с получением приблизительно 2000 КИ. Во всех экспериментах в качестве контроля использовали РС1. Эксперименты проводили в буфере НВЗ-Р (НИР). 20 мкл 5 мкг/мл антитела пропускали через РС2 при скорости потока 20 мкл/мин. ГО-12, ГО-23 или [И-12р40 (Рерго!есЬ) пропускали по поверхности РС1 и РС2 в концентрациях от 66 до 2 нМ. Регенерацию поверхности осуществляли с использованием 10 мМ глицина, рН 1,0. Данные сенсорограммы для РС2 вычитали из данных для РС1 и данных, полученных только для буферного контроля. Кривые строили по лангмюровскому уравнению 1:1 для получения величин ка, кД и КО. Все кривые строили с χ2 менее чем 2,0, если это возможно.
Ιη уйго исследования эффективности Ιη уйго анализ мышиных спленоцитов
Моноклеточные суспензии получали из мышиной селезенки путем ее разрушения и пропускания через 100 мкм-сито. Эритроциты подвергали лизису промывочным методом, в котором клеточную суспензию центрифугировали и ресуспендировали в 9 мл стерильной воды. Затем сразу добавляли 1 мл 10хРВЗ и смесь перемешивали. Клетки промывали, подсчитывали, а затем ресуспендировали в КРМI (с 2 мМ Ь-глутамина, 100 ед/мл пенициллина/стрептомицина, 10% РВЗ) в концентрации 107 клеток/мл. Клетки высевали в 96-луночные плоскодонные планшеты для культивирования тканей при плотности 106 клеток/лунку в 100 мкл. Конканавалин А и гЫЬ-23 добавляли до конечной концентрации 1 мкг/мл и 25 нг/мл соответственно. Тестируемые антитела титровали для всех образцов. В типичном анализе использовали 3-5 биологических дубликатов на тестируемое антитело, а исходная концентрация тестируемого антитела составляла 1-10 мкг/мл. Каждый аналитический планшет содержал дубликаты образцов, имеющих Соп А+!Р-23, но не содержащих антитело и Соп А по отдельности. Планшеты инкубировали при 37°С, 5% СО2 в течение 3 дней, а затем супернатанты собирали для ЕЫЗА-анализа ГО-17. ГО-17 анализировали с использованием набора для ЕЫЗА ГО-17 (К&Э ЗуЧепъ®) в соответствии с инструкциями производителей. Концентрации определяли методом построения стандартной кривой.
Анализ на высвобождение ΙΡΝ-γ из ΝΚ92
Клетки ΝΚ92 (АТСС, СКЬ-2407) культивировали в среде КРМН 640, 2 мМ Ь-глутамина, 100 ед. пенициллина/стрептомицина, 10% РВЗ с добавлением 200 ед/мл человеческого ГО-2 (Рерго!есЬ А§1а) и 10 нг/мл человеческого ΙΗ-15 (ЕЪюкаепсе™). Перед проведением анализа клетки содержали в отсутствие человеческого ГО-2 и человеческого ΙΗ-15. Антитело разводили в культуральной среде в концентрации,
- 72 026110 достаточной для построения титрационной кривой. В планшет добавляли 1Ь-12 (Рерго1есН) и инкубировали при 37°С, 5% СО2 в течение 2 ч. Эти клетки собирали и добавляли в лунки с получением клеточной концентрации 1 х 105 клеток/мл в полном объеме 200 мк/лунку.
Культуры инкубировали при 37°С, 5% СО2 в течение 24 ч. По окончании инкубирования супернатанты собирали и с помощью набора для ЕЫ§А человеческого ΙΡΝ-γ Эио8е1 (Κ&Ό Зу81ет8®) детектировали продуцированный человеческий ΙΡΝ-γ.
Анализ на ГЬ-12-индуцированное высвобождение ΙΡΝ-γ человеческими МКПК
Человеческие МКПК собирали из человеческой лейкоцитарной пленки методом разделения с использованием ЬушрЬоргер и культивировали при плотности 1 х 107 клеток/мл в культуральной среде (50% ЭМЕМ, 50% КРМ1, 0,045% О(+)-глюкоза, 2 мМ Ь-глутамин, 5% фетальная бычья сыворотки (РВЗ), 10 мМ НЕРЕЗ). РНА-Р (§1дта-А1йг1сЬ®) добавляли в концентрации 10 мкг/мл и инкубировали при 37°С с 5% СО2 в течение 3 дней. Затем добавляли человеческий 1Ь-2 (Κ&Ό Зу81ет8®) в концентрации 50 ед/мл. Культуру инкубировали при 37°С, 5% СО2, в течение 1 дня. Антитело разводили в культуральной среде в количестве, достаточном для построения титрационной кривой и составлящем в пределах от 10 мкг/мл до 0,001 мкг/мл в 96-луночном планшете. Затем в планшет добавляли 1 нг/мл человеческого 1Ь-12 (Рерго1есН) и смесь инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 2 ч. Затем в каждую лунку добавляли 1 нг/мл ЫЬ-2 (Κ&Ό Зу81ет8®). После этого клетки собирали и добавляли в лунки до конечной концентрации 2х105 клеток/мл в полном объеме 200 мкл/лунку. Культуры инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 2 дней. По окончании инкубирования супернатанты собирали и для детектирования продуцируемого человеческого ΙΡΝ-у использовали набор для ЕЫЗА-анализа человеческого ΙΡΝ-γ Оио8е1 (Κ&Ό Зу8!ет8®).
Ослабление кожного воспаления, индуцированного внутрикожным введением 1Ь-23 Получение набора экспериментальных данных и исследования кинетики
У самцов мышей С57В1/61 выбривали тестируемый участок спинки за два дня до начала введения инъекций, а затем делали ежедневные внутрикожные инъекции либо РВЗ, либо гЫЬ-23 в два участка спинки в количестве всего 3 или 10 мкг/мышь/день. Обе схемы введения давали некоторый уровень воспаления, однако, доза 10 мкг/день давала стойкий ответ с высокими уровнями поражения в виде эритемы. В более позднем исследовании, мышам вводили 10 мкг гЫЬ-23/день всего в течение 10 дней для определения всей кинетики воспалительного ответа. Ответ детектировался на третий день проведения эксперимента, его пик составлял на дни 6-7, а затем этот ответ снижался.
Тестирование антитела ΐη νίνο
Самцов мышей С57В1/61 обрабатывали 10 мкг/день гЫЬ-23, как описано выше, в течение 6 дней. За один день до инъекции цитокина, мышам вводили одну внутрибрюшинную инъекцию антитела 80, антитела 136 или антитела контрольного изотипа в дозе 10 мг/кг. У мышей ежедневно оценивали степень развития эритемы и ее распространения по тестируемому участку. Всю обработку и все наблюдения осуществляли слепым методом. По окончании исследования у каждой мыши брали образцы кожи и фиксировали для гистологического анализа, а затем окрашивали гематоксилином и эозином (Н&Е) в соответствии со стандартными протоколами.
Величины толщины эпидермиса определяли путем получения отпечатка на бумаге копии изображений срезов кожи от каждой мыши с меньшей контрастностью. Срез кожи на каждом изображении делили на четыре квадранта с использованием трех вертикальных линий. Затем определяли толщину эпидермиса в точке пересечения этих трех линий, прочерченных для определения границ квадрантов, то есть, для получения трех величин толщины на фотографию. Затем на каждом изображении фактические расстояния в мм преобразовывали в микроны с использованием масштабной шкалы. В некоторых случаях, когда измерения проводились в точках пересечения в области, которая рассматривалась как нерепрезентативная для измерения толщины эпидермиса, а именно, такая как волосяные фолликулы или потовые железы, локализацию точки измерения подгоняли под соседний срез кожи. Измерения проводили слепым методом двумя независимыми экспериментаторами.
Нейтрализация сывороточного ΙΡΝ-γ-ответа (интерферона-γ) на химерный 1Ь-12 (1Ь-12) у нормальных инбредных мышей Химерный 1Ь-12
Был продуцирован химерный 1Ь-12, содержащий человеческий 1Ь-12р40 и мышиный 1Ь-12р35 (ЗЕО ГО NО:63). Белок подвергали обратной трансляции в генную последовательность, а затем оптимизировали, синтезировали и субклонировали в вектор рТТ5. Химерный ГО-12 экспрессировали в клетках НЕК293Е и очищали на колонках для аффинной очистки с использованием Н1З-метки. Восприимчивость мышиных Т-клеток к химерному ГО-12 тестировали ш νίΙΐΌ. Мышиные спленоциты (107/мл) культивировали в течение ночи в КРМ1, в которую были добавлены 2 мМ Ь-глутамина и 10% фетальной бычьей сыворотки плюс химерный, рекомбинантный мышиный или рекомбинантный человеческий ГО-12 (0-20 нг/мл). Супернатанты собирали и анализировали на ΙΡΝ-γ путем проведения твердофазного иммуноферментного анализа (ЕЫЗА) с использованием набора для ЕЫЗА ΙΡΝ-γ (Κ&Ό 8у81ет8®) в соответствии с инструкциями производителей. Химерный ГО-12 обладал способностью индуцировать секрецию ΙΡΝ-γ из
- 73 026110 мышиных спленоцитов в определенных интервалах концентраций.
Человеческий ГО-12 оказался неактивным, за исключением протестированных неивысших концентраций.
Ингибирование антителом высвобождения ΙΡΝ-γ, индуцированного химерным 1Ь-12, мышиными спленоцитами
Моноклеточные суспензии получали из мышиной селезенки путем ее дизрупции и пропускания через 100 мкм-сита. Эритроциты лизировали промывочным методом, в котором клеточную суспензию центрифугировали и ресуспендировали в 9 мл стерильной воде, а затем сразу добавляли 1 мл 10хРВ8 и смесь перемешивали. Клетки промывали, подсчитывали, а затем ресуспендировали в КРМ1 + 2 мМ Ьглутамина + 100 ед/мл пенициллина/стрептомицина + 10% РВ8 в концентрации 5х 106 клеток/мл.
Клетки высевали в 96-луночные плоскодонные планшеты для культивирования тканей при плотности 5х105 клеток/лунку в 100 мкл. Конканавалин А и химерный ГО-12 добавляли до конечной концентрации 0,5 мкг/мл и 20 нг/мл, соответственно. Тестируемые антитела титровали для всех образцов. В типичном анализе использовали 3-5 биологических дубликатов на тестируемое антитело, а исходная концентрация тестируемого антитела составляла 1-10 мкг/мл. Каждый аналитический планшет содержал дубликаты образцов, имеющих Соп А+1Б-12, но не содержал антитело и Соп А по отдельности. Планшеты инкубировали при 37°С, 5% С02 в течение 24 ч, а затем супернатанты собирали для ЕЫ8А-анализа ШЫ^.
анализировали с использованием набора для ЕЫ8А (Κ&Ό 8ук1етк®) в соответствии с инструкциями производителей. Концентрации определяли методом построения стандартной кривой. Если фоновый уровень продуцирования ΣΤΉ-γ был высоким (как было определено в образцах, содержащих только Соп А), то этот фоновый уровень вычитали из величин для образца, обработанного 1Б-12, с получением концентраций ГРН-у, непосредственно приписываемых 1Б-12.
Исследование набора данных экспериментального анализа
Самцов мышей С57В1/61 обрабатывали либо РВ8, либо мышиным 1Б-12 (1Б-12) при 0,03 мг/кг, либо химерным ГО-12 при 0,03, 0,1 или 0,3 мг/кг путем введения внутрибрюшинных инъекций в течение пяти дней. На шестой день брали конечные пробы крови для получения сыворотки. Концентрации ΕΓΉ-γ в сыворотке определяли с помощью набора для высокочувствительного ЕЫ8А 1Р№у (ЕЫокиепсе™) в соответствии с инструкциями производителей.
1Р№у не детектировался у РВ8-обработанных контрольных мышей, но детектировался у мышей всех групп, обработанных мышиным или химерным ГО-12. Обработка химерным ГО-12 давала стойкое дозозависимое индуцирование 1Р№у в сыворотке. Доза 0,1 мг/кг была выбрана как идеальная доза для оценки изменений уровня IРN-γ-ответа в сыворотке.
Тестирование антитела ΐη νίνο
Самцов мышей С57В1/61 обрабатывали химерным ГО-12 при 0,1 мг/кг путем введения внутрибрюшинной инъекции в течение пяти дней. Этих мышей также обрабатывали одной дозой либо антитела 80, либо антитела 136, 5 мг/кг, на день 1 инъекции цитокина за 30 мин до введения дозы химерного ГО-12, либо тремя дозами антитела 80, либо антитела 136 или антитела контрольного изотипа на дни 1, 3 и 5 инъекции цитокина за 30 минут до введения дозы химерного ГО-12. На шестой день брали конечные пробы крови и определяли ΣΕΚ-γ в сыворотке, как описано выше.
Стимуляция МКПК с продуцированием 1Ь-23: Диагностическое детектирование с использованием антитела 80 Разработка ЕЫ8А
96-луночные плоскодонные ЕЫ8А-планшеты (№тс Мах1котр) сенсибилизировали мышиным антителом против человеческого ГО-23р19 (ЕЫокаепсе™) при 0,5 мкг/мл в РВ8 в течение ночи при 4°С. Планшеты промывали (все промывки осуществляли три раза), а затем их блокировали в течение 1 ч добавлением РВ8/10% РВ8. Планшеты промывали, а затем добавляли рекомбинантный ГО-23 в концентрациях от 1000 до 0,003 нг/мл путем полулогарифмического разведения. Планшеты инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем планшеты промывали и детектировали цитокины с использованием антитела 80 при 0,5 мкг/мл. Планшеты инкубировали еще 2 ч при комнатной температуре, промывали, а затем добавляли адсорбированное и конъюгированное с пероксидазой хрена мышиное антитело против человеческого 1дС ОпуЦгодеп™). После инкубирования в течение еще 30 мин планшеты шесть раз промывали, добавляли субстрат ТМВ ^фта-АИпсП®) и оставляли на 5-10 мин для проявления окраски. Реакцию прекращали добавлением 1М НС1 и планшеты считывали при оптической плотности на 450 нм. Все промывки осуществляли в РВ8+0,1% Твина с помощью приспособления для промывки планшетов Вю1ек® ЕЬх405.
Стимуляция человеческих МКПК для продуцирования 1Ь-23
МКПК получали из моноколонии лейкоцитарной пленки путем центрифугирования в градиенте ЬутрЬортер (Ах15-5Йе1а®). Затем эти клетки высевали в 96-луночные плоскодонные планшеты при плотности 105 клеток/лунку. Бактерии 81арПу1ососси5 аигеик Со\уап 1 (8АС) (81дта-А1апсП®) получали следующим образом: из 10% мас./об. маточного раствора удаляли соответствующий объем клеток и этот
- 74 026110 раствор центрифугировали для осаждения клеток. Затем клетки 2 раза промывали в среде Х-УШо 15 (Бю'етЫйакег™), после чего их ресуспендировали в исходной концентрации для титрования. К МКПК добавляли 8АС в концентрациях от 1% до 0,0001% мас./об путем серийного полулогарифмического разведения. Планшеты инкубировали в течение 72 ч, а затем собирали супернатанты для проведения ЕЬГ8А. ЕЬГ8А для детектирования ГЬ-23 осуществляли, как описано выше.
Эксперименты по обмену Η/ϋ
ГЬ-12р40 использовали в концентрации 1 мг/мл в РБ8. Антитело 80 использовали в концентрации 2,0 мг/мл в РБ8. Это антитело связывали со смолой Р0К08 ЛЬ (Аррйей БюзузГетз) в соответствии с инструкциями производителей. Колонку с таЪ упаковывали 600 мкл смеси антитела 80 - смолы Р0К08 АЬ и хранили при 4°С.
Колонку промывали РБ8 в 87,5% Ό20. 5 мкл 1 мг/мл ГЬ-12р40 смешивали с 35 мкл охлажденного льдом буфера РБ8 (рН 7,0) в 100% Ό20. Смесь ГЬ-12р40 инкубировали в течение 500, 1500, 5000 с (в отдельных раундах), а затем впрыскивали на колонку с антителом. Колонку промывали 200 мкл охлажденного РБ8 (с Н2О). Эту колонку оставляли на 250, 750 или 2500 с при 3°С (в отдельных раундах). Затем в колонку впрыскивали 80 мкл охлажденной 0,8% муравьиной кислоты. Затем для элюирования антигена из колонки с антителом добавляли еще 40 мкл охлажденной 0,8% муравьиной кислоты. Этот 40 мклобразец собирали и добавляли к 20 мкл охлажденной 2 М мочевины, 1 М ТСЕР, рН 3,0. После этого 55 мкл образца впрыскивали в колонку, содержащую пепсин, для расщепления белка на пептиды, которые были разделены с помощью ОФ-ВЭЖХ в 13-40% градиенте элюирующего буфера (95% ацетонитрил, 5% вода, 0,0025% ТРА) в течение 23 мин. Элюаты анализировали с помощью масс-спектроскопии в М81:профиль и М82:моды ЭВА. Для идентификации последовательности ионов родительского пептида использовали компьютерную программу 8ЕЦИЕ8Т (ТНегто).
Действие антитела на скорость обмена различных частей ГЬ-12р40 оценивали, в основном, как описано выше, за исключением того, что 5 мкл ГЬ-12р40 разводили 35 мкл охлажденного льдом буфера РБ8 (рН 7,0) в Н2О, а затем впрыскивали в колонку, которая была приготовлена с использованием РБ8 в Н2О. После связывания колонку промывали 100 мкл РБ8 в Н2О. Реакцию обмена инициировали путем пропускания 200 мкл РБ8, рН 7,0, в 87,5% Ό20 через колонку. Колонку инкубировали при 3°С в течение 500, 1500 и 5000 с в отдельных раундах.
Создание мутантных конструкций ГЬ-23
Был синтезирован ген, кодирующий ГЬ-23 дикого типа и содержащий линкер, расположенный между субъединицами и С-концевой РЬАО-меткой. После анализа рентгеновских кристаллических структур ГЬ-23 (например, 3Ό85) аминокислоты с внешними боковыми цепями отбирали для введения мутации в аланиновый остаток. Это осуществляли с помощью сайт-направленного мутагенеза гена ГЬ-23 дикого типа. Все гены клонировали в вектор рТТ5.
Трансфекция мутантных конструкций ГЬ-23
Клетки НЕК293Е культивировали в среде Р17 (Гпуйгодеп™), содержащей генетицин (Гпуйгодеп™), и переносили в культуру без генетицина при плотности 1 х 106 клеток/мл. Для каждой конструкции брали 5 мл культуры для трансфекции. 7,5 мкг ДНК трансфецировали с использованием реагентов для трансфекции 0рйМЕМ® Г (Гпуйгодеп™) и Ридепе® НЭ (КосНе). Через один день после трансфекции в культуру добавляли триптон (ΒΌ®) и генетицин. Культуры выращивали в течение 6 дней, после чего супернатант собирали и фильтровали для анализа.
ЕЬГ8А-скрининг мутантных конструкций ГЬ-23
Химеру ГЬ12К31/Рс (К&Э 8узГетз®), химеру ГЬ-23/Рс (К&Э 8узГетз®), антитело 202.1 и антитело 80 разводили до 1 мкг/мл в карбонатном буфере для нанесения покрытий и добавляли в каждую лунку 96-луночного планшета, а затем инкубировали в течение ночи при 4°С. После этого планшет три раза промывали промывочным буфером. Затем лунки блокировали путем добавления 200 мкл блокирующего буфера в каждую лунку и планшет инкубировали при 25°С в течение 1 ч. Супернатант разводили в разбавителе для антитела в количестве, достаточном для построения кривой титрования, и в лунки добавляли 100 мкл супернатанта, а затем инкубировали в течение 1 ч при 25°С. Затем планшет промывали, как описано выше, и 100 мкл ПХ-конъюгированного моноклонального антитела против РЬАО® М2 (8щтаА1йг1сН®) в отношении 1:1000 в разбавителе для антитела использовали для детектирования связанного цитокина. После инкубирования при 25°С в течение 1 ч планшет снова промывали, как описано выше. 100 мкл раствора субстрата ТМВ ^дта-АМисН®) добавляли в каждую лунку и эти лунки оставляли на 5 мин для проявления окраски. 100 мкл 1М НС1 добавляли для прекращения реакции проявления окраски и определяли оптическую плотность на 450 нм (этал. 620 нм).
- 75 026110
Библиография Журнальные статьи
Аггагу, Η. М. апб Ν. Е. ШдЬзтЗЕб, бг. (2002). СНп В1осЬет 35(6): 425-45.
ВаЬсоок, б. 5., К. В. ЬезНе, О. А. 01зеп, К. А. 5а1топ апб 3. И. ЗсЬгабег (1936) . Ргос ЫаЕ1 Асаб Зеб и 3 А 93(15) : 7843-8.
Вхгб, К. Е., еЕ а!. (1988). ЗсЕепсе 242(4877): 423-6.
Вгоип, Р. 3., Зг., еЕ а1. (1991). Ргос ЫаЕ1 Асаб 5С1 и 3 А (7) : 2663-7.
СатодИо, Ь., Ν. Р. Зи££егтапз, М. Рерре1епЬозсЬ, А. А. Ее Уе1бе, Е. 3. Ееп КаЕе, 3. 3. уап ОеуепЕег апб М. Кор£ (2002). Еиг б 1ттипо1 32(1): 261-9.
СареИаз, М., С. Сат1па1, С. 6опга1ег, б. Ьорег-ЗапЕбп апб Р. С1арез (1997). ВбоЕесЬпо! Вбоепд 56(4): 456-63.
СагЕег, Р., еб а1. (1992). Ргос ЫаЕ1 Асаб 5с1 и 3 А
89(10): 4285-9.
СагЕег, Р. 3. (2006) . ЫаЕ Кеу 1ттипо1 6(5) : 343-57.
Сазрагу, Г., С. Ε11ΪΟΕΕ, В . Т. Ыауе, Р. Уеггаа1, М.
КоЬгЬасЬ, Р. К. Ваз, Ь. Ыаде1кегкеп апб 3. ϋ. Ы1е1апб (2005) .
Вг 3 ОегтаЕо1 153(5): 937-44.
СЬеп, Ζ., С. М. ТаЕо, Ь. Мии1, А. Ьаигепсе апб б. 3
О'ЗЬеа (2007). АгЕЬг1Е1з ЕЬеит 56(9): 2936-46. . б.
СЫггопбЕе, К. , Т. ТгипЕЕ, В. В. Безаб, Р. Ыипез, Е
Роб1азк1, А. 3. ЗЕегп апб М. К. СаЕе1у (1992) . б 1ттипо1
148(10): 3117 -24.
СЬоЕЫа, С. апб А. М. Ьезк (1987). б Μοί ΒίοΙ 196 (4) : 901-
17 .
СЬоОЫа, С., А. М. Ьезк, Е. СЬегагб!, I. М. ' ГотИпзоп , С.
Ма1Еег, б. ϋ. Магкз, м. В. _1еие1уп апб С. И1пЕег (1992). б Мо1
ΒίοΙ 227 (3) : 799-817.
СЬоЕЫа, С. , еЕ а1. (1989) . ЫаЕиге 342 (6252) : 877-83
СЬиа, А. 0. , еЕ а!. (1994). б 1ттипо1 153(1): 128-36
С1аскзоп, Т., Н. К. НоодепЬоотп, А. ϋ. ОгИИеЬз апб С. ΗίηΕθΓ (1991). ИаЕиге 352(6336): 624-8.
Сопгаб, и. апб и. Е1еб1ег (1998). Р1апЕ Μοί ΒίοΙ 38(1-2):
- 76 026110
101-9.
Соорег, А. Н. апб 5. А. КЬабег (2007), Тхепбз Ιιηιηυηοΐ 28(1): 33-8.
Согсогап, А. Е., К. Ваггебб, М. Тигпег, А. Вгомп, А. М. КбззопехдЬбз, М. Сабпе11, Р. И. бгау, Υ. СЬегпа}оузку апб М. Ге1бтапп (1994). Еиг б ВбосЬет 223(3): 831-40.
Сгатег, С. Ь., б. б. ВообЬе апб К. К, ОбзЬб (1999). Сигг Тор МбсгоЬбоб 1ттипо1 240: 95-118.
Сиа, Э. б., еб а1. (2003). Ыабиге 421(6924): 744-8.
СиппбпдЬат, В. С. апб б. А. Ие11з (1989) . Зсбепсе 244 (4908) : 1081-5.
В'Апбгеа, А., еб а1. (1992). б Ехр Меб 176(5): 1387-98.
бе Кхе, М. А. (1999). Оегтабободу 199(2): 101.
бе νοε, А. Μ., М. иббзсЬ апб А. А. Коззбако££ (1992).
Зсбепсе 255(5042): 306-12.
Оеуегдпе, О., А. Сои1отЬ-Ь'Нехтбпе, Е. Саре1, М. Моизза апб Р. Саргоп (2001). Ат б РабЬо1 159(5): 1763-76.
Ппд, С., б. Хи апб б. Ьб (2008). Сигг Орбп 1пуез£хд Эхидз 9(5): 515-22.
Оопд, С. (2008). Ыаб Ксх 1ттипо1 8(5): 337-48.
Оигосбег, Υ,, 8, Реггеб апб А. Катеп (2002). Ыис1е1с Асббз Кез 30(2): Е9.
ЕИбобб, М. б., В. Ν. Мабпб, М. Геббтапп, А. Ьопд-Гох, Р. СЬагбез, Н. Вбдб апб б. Ν. Иообу (1994). Ьапсеб 344(8930): 1125-7.
Епде1тапп, Η., ϋ. Ыоубск апб ϋ. Иа11асЬ (1990). б Βίοί СЬет 265(3): 1531-6.
РаззЬепбег, К., А. КадозсЬке, 3. Коззоб, А. ЗсЬмагбг, О. Мбебке, А. Раиббд апб М. Неппегбсб (1998) . Ыеигободу 51 (3) : 753-8.
РбзсЬ, I. , С. Кипгб, К. Козе апб К. Е. 0££огб (1992) .
Вбосо^ид СЬет 3 (2) : 147-53.
ГбзЬмббб, ϋ. М., еб а1. (1996). Ыаб ВбобесЬпо! 14(7): 845-
51. Гообе, б. апб 6. Ибпбех (1992). б Μοί Вбо1 224(2): 487-99.
ба1£хе, С 5. С. Номе, С. Мббзбебп, 6. Ν. ВибсЬег апб б.
- 77 026110
С. Нотагй (1977). Ыайиге 266(5602): 550-2.
Сайе1у, М. К., ей а1. (1996). Αηη Ν Υ Асай 5с£ 795: 1-12.
Оа'./Иопйо, ОГ. V. апй й. Ν. Ьаггйск (2000). ВйойесЬпйдиез
29(1): 128-32, 134-6, 138 раззйш.
ОШеввеп, 3., ей а1. (1995). Еиг й 1ттипо1 25(1): 200-6. СЗиййсеШ, V. ей а1. Мисйейс Асййз Еез., 33: Ό256-Ο261 (2005)
Оогйоп, й. Ν., Α. ϋί ЗаЬаййпо апй Т. Т. Масйопайй (2005).
Сигг Ορίη Сазйгоепйего1 21(4): 431-7.
Огау, Г., й, 5. Кеппеу апй й. Г. Эиппе (1995) . й 1тшипо1
МейЬойз 182(2): 155-63.
Сгееп, Ь. Ь., ей а1. (1994). Ыай Сепей 7(1): 13-21.
Сг1££1йЬз, А. ϋ., ей а1. (1993). ЕтЬо й 12(2): 725-34.
Сизйа£ззоп, В., М. йопйа1 апй V. А. 5иηй^ν^зй (1991). Ниш
АпййЬоййез НуЬгййошаз 2(1): 26-32.
Напез, й., Ь. йегтийиз, 3. ИеЬег-ВогпЬаизег, Н. В.
ВоззЬагй апй А. Р1искйЬип (1998). Ргос Ыай1 Асай Зсй и 3 А 95 (24) : 14130-5.
Напез, й. апй А. Р1искйЬип (1997). Ргос Ыай1 Асай 3οί и 3
А 94 (10) : 4937- 42 .
НоШдег, Р. , Т. Ргозрего апй С. Ийпйег (1993). Ргос Ыай!
Асай 8с1 ϋ 3 А 90 (14) : 6444-8 .
Ноой, Е. Е., А. Кизпайй, Ζ. Ы1ко1оу апй й. А. Номагй
(1999). Айс Ехр Мей ΒίοΙ 464: 127-47.
НоодепЬоот, Η. Е. (1997). Тгепйз В1ОйесЬпо1 15(2): 62-70. НоодепЬоот, Η. Е. апй Р. СЬатез (2000) . 1ттипо1 Тойау
21(8): 371-8.
Низйоп, й. Ξ., ей а1. (1988). Ргос Ыай1 Асай 3οί и 3 А (16) : 5879-83.
Н-»апд, ϊί. Υ., й. С. А1тадго, Т. Ν. Визз, Р. Тап апй й.
Еоойе (2005). МейЬойз 36(1): 35-42.
йоЬпзоп, К. 3. (1993). Сиггепй Ορίηίοη3 ίη Зйгисйига1
Вйо1оду 3: 564-571.
йопез, Ρ. Т., Ρ. Н. Беаг, й. Еоойе, М. 3. ЫеиЬегдег апй С.
Ийпйег (1986). Ыайиге 321(6069): 522-5.
йипдЬапз, К. Ρ., Т. А. Иа1йтапп, Ν. Г. Ьапйо1£1, Ν. М.
- 78 026110
Ανάοίονιο, И, Ρ. ЗсЪпеДДег апД С, <2иееп (1990), Сапсег Еез 50(5): 1495-502,
КаЬаД, Е. А. апД Τ. Т. Ии (1971) . Αηη Ν Υ АсаД 5С1 190: 382-93.
Кар1ап, Μ. Η., Υ. Ь. Зип, Т. Ноеу апД М. N. СгизЬу (1996). ЫаДиге 382(6587): 174-7.
КаДзиЬе, Υ., Н. ЗигикД, Т. МигуоД апД Т. ЗазакД (1998). Ιηύ N Мо1 МеД 1(5) : 863-8.
Кеппеу, Д. 5., Е. Сгау, Μ. Н. Апсе1 апД Д. Р. Еиппе (1995). ВДоДесЬпо1оду (Ы Υ) 13(8): 787-90.
КЪаДег, 3. А., еД а1. (2006). Д Ехр МеД 203(7): 1805-15.
Кат, И,, 5. Μίη, М. СЬо, Д. Υουη, Д, Μίη, 5. Ьее, 8. Рагк, С, СЬо апД Η, Κίιη (2000), СНп Ехр 1ттипо1 119(1): 175-81.
КДргДуапоу, 3. Μ,, Г. ВгеДЫДпд, М. ЬДДД1е апД 8. ОиЬеД (1995). Нит АпЫЬоДДез НуЬгДДотаз 6(3): 93-101.
КДргДуапоу, 3. Μ., 3. ЭиЬе1, Е. ВгеДЫДпд, К. Е.
КопДегтапп апД М. ЫДД1е (1994). Мо1 1ттипо1 31(14): 1047-58.
Кпогге, Ь. С., V. V. У1аззоу апД V, Р. Йагудоуа (1985). ВДосЫтДе 67(7-8): 785-9,
КоЫег, С. апД С. МД1зДеДп (1975). ЫаДиге 256(5517): 4957 .
КоЫег, С. апД С. МД1зДеДп (1976). Еиг Д 1ттипо1 6(7): 511-9.
Китагап, 8., Э. ЭаДДа апД К. Р. Роу (1997). РгоДеДп ЗсД 6(10): 2233-41 .
Ьатап, Д. ϋ., М. уап Меигз, Μ. М. ЗсЬе11екепз, М. Де Воег, В, МеДсЬегз, Ь, МаззасезД, Н. Ьаззтапп, Е. СДааззеп апД В. Ά. НагД (1998). Д Иеиго1ттипо1 86(1): 30-45.
Ьагаг, С. А., еД а1. (2006). Ргос ЫаД1 АсаД ЗсД Ч 3 А
103(11): 4005-10.
Ьее, В. Ь., А. МигакатД, К. В. В1аке, 3. В, ЬДп апД Р. 3. МД11ег (1988). ВДосЬетДзДгу 27(9): 3197-203.
Ьее, Е., И. Ь. ТгерДссЬДо, Д. Ь. ОезДгеДсЬег, ϋ. РДДДтап, Г, Иапд, Е. СЬатДап, М, ЭЬоДаркаг апД Д. С. Кгиедег (2004). Д Ехр МеД 199(1): 125-30.
ЬеопагД, Д. Р., К. Е. ИаДДЬигдег, К. 6. ЗсЬаиЬ, Т. ЗтДдЬ,
- 79 026110
А. К. Неъ/ноп, М. Ь. Сихпег апй 5. СГ. Оо1Й1пап (1997). Сг1к Εθν 1ттипо1 17(5-6): 545-53.
Ьеипд, В. Ρ., I. В. Мс1ппез, Е. Ез£апсНап, X. <$. Ме! апй Г. Υ. Мен (2000). 7 1ттипо1 164(12): 6495-502.
Ы, Н., е£ а1. (2006). Ыа+ В1оЬесЪпо1 24(2): 210-5.
ЫСС1е, Μ., 5. М. КЛргЛуапоу, В. Ье Са11 апс! С.
Мо1йепЪаиег (2000). 1ттипо1 Тойау 21(8): 364-70.
ЬоеРзсЪег, Η., Υ. С. Рап, Н. И. ЬаЪт, В. Зепрг, М.
ВгоскЬаиз, Н. ТаЬисЫ апй №. Ьезз1аиег (1990). Се11 61(2): 3519.
ЬопЬегд, Ν. апй ϋ. Низгаг (1995). Ιη£ Εον 1ттипо1 13(1): 65-93.
ЬопЬегд, Ν., ек а1. (1994). ЫаЬиге 368(6474): 856-9.
Ма, Л. К. апс! Μ. В. Ηθίη (1995). Тгепйз ΒίοΡθθΗηοΙ 13(12):
522-7.
Ма, Л. К. апс! М. В. Не1п (1995). Р1ап£ РЬуз1о1 109(2): 341-6.
МагспаЛотз, СГ. СГ., М. К. АаеЛтап, В. Л. Йешег, Ρ. М. ЗагахЛп, Ρ. М. Ладиа апй 5. Г. 5СН1иЬег (2001). Αοίν Ехр Мей ΒίοΙ 484: 13-30.
Магкз, В. ϋ., А. ϋ. СгхЬЬхЬЬз, М. МгЛтср/Лз 5, Τ. Р.
СЛаскзоп, Л. М. Вуе апй С. ИЛпЬег (1992) . ВЛокесЬпоЛоду (Ν Υ)
10(7): 779-83.
Магкз, Л. ϋ., Н. В. НоодепЬоот, Τ. Р. ВоппегЬ, Л.
МсСа££егЬу, Α. Ώ. 0г££££ЬЬз апй 222 (3) : 581-97.
МаЬЬпег, Г., 8. ВЛзсЪег, 5.
ЗсЪтЛЬЬ, Е. Еийе апй Т. Оегтапп
2202-8.
Маккпег, В., Ь. Огтеп, В. Л.
н. Ргезку, М. К. СакеЛу апс! С,
65 (11): 4734-7.
Мепйег, М. Л. , ек а1. (1997)
Меуегз, В. Л. , 3. Л. Вепагйо
Нпдег (1989). Ргозкаке 14(3): 209-
МИзкехп, С. апс! А. С. Сие
С. №1пкег (1991). Л Μοί ΒίοΙ
Сискез, 5. ЛЛп, Н. КаиЛеп, Е. (1993). Еиг Л 1ттпипо1 23(9):
РойЛазкЛ, V. Ь. ИНкЛпзоп, ϋ. АЛЬег (1997). 1п£есЬ 1ттип . ЫаЬ СепеЬ 15 (2) : 146-56.
, ϋ. Масеу, К. ϋ. ИЫЛе апй М. 20.
По (1983). Иакиге 305(5934):
- 80 026110
537-40.
ЫеигайЬ, Μ. Ε. (2007). Ыай Мей 13(1): 26-8.
ЫеигайЬ, Μ. Ε., I. Еизз, В. Ъ. Ке1за11, Е. ЗйиЬег апй И. ЗйгоЬег (1995). Й Ехр Мей 182(5): 1281-90.
Ыдиуеп, Н., Й. ЗапйЬи апй Ν. Ногит! (1997). МйсгоЬйой 1ттипо1 41(12): 901-7.
ЫйейЬаЙа, И., X. 0. Ией, В. Сай, А. й. НиеЪег, В. Р. Ьеипд, I. В. Мс1ппез апй Ε. Υ. Ыеи (2007) . Еиг й 1ттипо1 37(11): 3021-9.
С. апй ϋ. I. Зйойй (1998). НуЪгййота 17(3):
ЫйейЪайа, И 299-304 .
Орртапп, В., ей а1 Рарр, К. А., ей ай (2000). 1ттипййу 13(5): 715-25.
(2008). Ьапсей 371(9625): 1675-84. РагЬат, С., ей а1. (2002). й 1ттипо1 168(11): 5699-708.
Роиейй, К. Т. апй й. С. Иеауег (1990). ВйойесЬпойоду (Ν Υ) 8(4): 333-7.
Ргезку, ϋ. Н., Ь. й. Мйпеййй, Ξ. бШеззеп, и. СиЫег, К. СЬйггопййе, А. 3. Зйегп апй М. К. Зайейу (1996). Апп Ν Υ Асай Зсй 795: 390-3.
Ргезку, ϋ. Η., Н. Уапд, Ь. й. Мйпеййй, А. О. СЬиа, Ν. ЫаЬауй, С. Υ. Ии, М. К. СакеЙу апй П. СиЫег (1996). Ргос ЫаЫ Асай Зсй й 3 А 93(24): 14002-7.
Ргеейа, Ь. 5. Ргезйа, Ь. С.
(2006). Αάν Эгид ϋθΐίν Кеу 58(5-6): 640-56.
8. й. ЬаЬг, Е. Ь. ЗЬйе1йз, й. Р. Рогйег, С.
йагййеи (1993). й йттипой
М. Согтап, В. М. Гепй1у апй Ρ. М 151 (5) : 2623-32.
Ойи, X. ζ)., Н. Иапд, В. Сай, Ь. Ь. Иапд апй 3. Т. ’йпе (2007). Ыай ВйойесЬпой 25(8): 921-9.
Оийпопез, М., 5. К. АЬи^а, Р. С. МейЪу, Ь. Райе, К. Ь.
Кейййск апй 3. 3. АЬи^а (2000), й Ехр Мей 192(4): 507-16,
КйесЬтапп, Ь., М. С1агк, Н. Иаййтапп апй С. Ийпйег (1988). Ыайиге 332(6162): 323-7.
Кодде, Ь., Ь. ВагЬегйз-Майпо, Μ. Βίίίϊ, Ν. Раззйпй, ϋ. Н. Ргезку, и. СиЫег апй Е. Зйпйдадййа (1997). й Ехр Мей 185(5): 825-31.
КиззеИ, Τ. ϋ., <Э. Уап, С. Еап, А. Р. КЬайййаЬ, ϋ. К.
- 81 026110
ВазЬор, 5. Ь. Вгойу апй М. й. йакег (2003). й 1ттипо1 171(12): 6866-74.
ЗапйЪи, N. 5., Е. Воупйоп, К. Согсгупзкй апй Ν. Ногшгй (1996). Сгйй Веу ВйойесЬпо1 16(1): 95-118,
ЗсЬаИ, Т. й., ей а1. (1990). СеИ 61(2): 361-70.
ЗсЬизйег, М., ей а1. (2007). ВгойесЬпой й 2(6): 700-8.
Зйакег, О. С., И. Моизйа£а, 3. Еззшай, М. АЬЙе1-НаИт апй
М. Е1-Коту (2006) . СНп ВйосЬет 39(2): 119-25.
Зйархго, 6. 3. апй Ь. й. Иузоск! (2002). Сгйй Кеу 1ттипо1
22 (3) : 183-200.
Зй1е1йз, К. £., ей а1. (2001) . й ΒίοΙ Сйет 276(9): 6591-
604.
ЗЫтогайо, 0., 3. . ида1, М. СЫуо, Н. ТакепоЬи, Н.
Мадакана, А. Майа, К. Каиатига, Н. Уататойо апй М. Тадаиа
(2006). 1ттипо1оду 117(1): 22-8.
Згтрзоп, 3. й., 8. Зкай, М. Сотйзкеу, Υ. Р. Йе йопд, В.
Иапд, Е. РИгодисЫ, А. К. Вйап апй С. Тегйогзй (1998). й Ехр Мей 187 (8) : 1225-34.
5ίηϊ3, М. й., ей а1. (1993). й 1ттипо1 151(4): 2296-308.
ЗтййЬ, Ь. й., С. Вей£йе1й, й. Воуй, 6. М. Ьаигепсе, К. С.
Ейла_йз, В. А. ЗтййЬ апй С. Μ. ϋοΕεοη (1992). й Μοί ΒίοΙ
224 (4): 899-904.
Зргадие, й., й. Н . Сопйга, Н. АгпЬеййег апй В. А.
Ьаггагйпй (1983), й νίτοί 45 (2) : 773-81.
ЗйеепЬаккегз, Р. 6. , н. А. НиЬегз апй А. И. К^пйегз
(1994). Μοί ΒίοΙ Вер 19(2): 125-34.
ЗигезЬ, М. В., А. С. Сие11о апй С. МНзйейп (1986).
МейЬойз Εηζγιηοΐ 121: 210-28.
Тау1ог, Ь. ϋ., ей а1. (1994). 1пй 1ттипо1 6(4): 579-91. Тау1ог, Ь. Ώ., С. Е. Сагтаск, 3. В. Зсйгатт, В. МазЬауекй,
К. М. Щддтпз, С. С. Кио, С. Иооййоизе, В. М. Кау апй Ν. ЬопЬегд (1992). Ыис1е1с Асайз Вез 20(23): 6287-95.
Тогйй, ϋ. С. апй 3. В. Ееййтап (2007). й Ат Асай Оегтайой
57(6): 1059-68.
Тгаипескег, А., А. ЪапгауессЫа апй К, Каг)а1айпеп (1991) .
ЕтЬо й 10 (12) : 3655-9.
- 82 026110
Тг1псМегз_, С. (2003). Иак Εθν 1ттипо1 3(2): 133-46. ТгтпсЫегт, 3., 5. Р£1апг апб К. А. Каз£е1е1п (2003).
1ттип1£у 19(5): 641-4.
ТиаШоп, Н., Ь. ϋ. Тау1ог, N. ЬопЬегд, Р. И. Тискег апб б. б. Сарга (1993). Ргос Ыа£1 Асаб Зсх и 8 А 90(8): 3720-4.
УегЬоеуеп, М., С. М±1з£е±п апб С. Итпкег (1988). Зстепсе 239(4847): 1534-6.
Уеггеск, Г. А., е£ а1. (2004). Ргос Ыа£1 Асаб 3с1 Ч 5 А
101 (13): 4560-5.
У1аззоу, V. V., V. Е, Йагукоиа, I. V. Кикпаиап, 3. V.
Магпаеи апб М. А. Робуттподтп (1986). ΝώοΙθιο Астбз Кез 14 (10) :
4065-76.
\/оде1, Ь. А. , Ь. С. ЗЪоме, Т. Ь. Ьезкег, Е. М. Мс14икк, V.
Н. \7ап С1еауе апб Ч. И. Мекгдег (1996). 1пк 1ттипо1 8(12) :
1955-62.
Иапд, X., V. Ь. НИкгпзоп, Е. б. Роб1азк1, С. Ии, , А. 3.
5£егп, ϋ. Н. Ргезку апб б. Мадгаш (1999). Еиг б 1ттипо1 29(6): 2007-13.
Иагб, Е, 3., Ч. биззом, А. Э. ОгННШ, Ρ. Т. бопез апб С. И1п£ег (1989). Иакиге 341(6242): 544-6.
ИакегЬоизе, Ρ., Α. Ч. бг1££1кЬз, К. 5. боЬпзоп апб б. И1п£ег (1993). 14ис1е1С Ас±бз Рез 21 (9): 2265-6.
Иак£огб, И. Т., В. ϋ. Шззопд, б. Н. Вгеат, Υ. Каппо, Ь. Мии1 апб б. б. О’ЗЬеа (2004). 1ттипо1 Реи 202: 139-56.
ИеЬЬ, Т. Р. апб Μ. Ч. Маккеисс1 (1986) . Ыис1ел.с Асхбз Еез 14(19): 7661-74.
Иеп, Ь., М. НапуаппсЬ, С. Иегпег-Еаиге, Ν. Вгоимегз, Ь. Н. Реггбп апб Ρ. Н. ЙиЫег (1987). Еиг б 1ттипо1 17 (6): 887-92 .
Иег1еп, К. С., М. Ьапкппеп, К. Розе, Ч. В1акеу, Н. ЗЬикЫемогкЬ, Е. Ме1коп апб К. Е. О££огб (1994) . Вхосоп^ид СЬет 5(5): 411-7.
ИЬбкебат, 6. С., И. СоскЬигп апб М. К. Омеп (1994).
В1осЬет Зое Тгапз 22(4): 940-4.
Игопе-ЗтккЬ, Т. апб В. б. Н1ско1о££ (1996). б СПп ΙηνθδΧ 98(8): 1878-87.
Уатапе-ОЬпик!, Ν., е£ а1. (2004). ВтокесЬпо! В1оепд 87(5):
- 83 026110
614-22.
Уао, В. В., Р. Νίιι, С. 5. Зигому апй С. В. Еайкупек (1999). АгсЬ ВгосЬеш ВпорЬуз 368(1): 147-55.
Уана1каг, Ы,, 5. Каг1еп, В. Нипдег, С. и. Вгапй апй Ь. В.
ВгаакЬеп (1998). й 1пуеза Эегтако1 111(6): 1053-7.
Υοοη, С., 3. С. йоЬпзкоп, й. Тапд, М. 5каЬ1, й. Г. ТоЫп апй И. 3. Зотегз (2000). ЕтЬо й 19(14): 3530-41.
2апе11а, I., В. УегагйТ, В. Ыедг1п1, С. Ропезй, 3. 0Ые1тп апй А. А1Ьегк1п1 (1992). й 1ттипо1 МекЬойз 156(2): 205-15.
йЬои, Ь., Ινβηον, II, В. 8ро1зк±, В. Μίη, К. ЗЬепйегоу, Т. Едаъга, ϋ. Е. Ьеуу, И. й. Ьеопагй апй Э. К. Ыкктап (2007). Мак 1ттипо1 8(9): 967-74.
Ζου, й., ϋ. Н. Ргезку, С. Υ. Ии апй ϋ. , СиЫег (1997). Й
ΒίοΙ СЬет 272 (9) : 6073-7.
ТЫе Н, УоейпзсЬ В, ЭиЬе! 5, Низк М, ЗсЫггтапп Т 2009
МекЬойз Μοί ΒίοΙ. 525:309-22.
КоТктап ЙА, Зкеттег ИР 2001 Как ВтокесЬпо!. Мау;
19(5):423-8.
Сгеепег, А., Са11аЬап,М. апй йегрзекЬ,В. (1996) Ιη У1кго Микадепезпз Ргокосо1з. Нитапа ргезз, ЫЙ.
Ре1ей ЙО, Киапд ГЬ, 1д1ей1аэ-иззе1 МЭ, Воа 5, КаПз ЗЬ, Соойтап МВ, ЗсЬаг££ Μϋ 2008 Аппи Веу 1ттипо1. 26:481-511.
Корз1Йаз С, КоЬегкз АЗ, Со1а С, 5£ге1£зоу УА, ИиИа11 ЗЭ. 2006 1ттипо1 Ьекк. 2006 Νον 15; 107(2):163-8. ЕриЬ 2006 Оск 16
КорзТйаз ек а1., 2007, ВМС В1окесЬпо1оду, 7: 18.
ВепЬаг I 2007 Ехрегк Ορίη ΒίοΙ ТЬег. Мау; 7(5):763-79. Оиееп С, ЗсЬпепйег ИР, ЗеИск НЕ, Раупе РИ, Ьапйо1£п ΝΕ,
Эипсап йЕ, Ауйэ1оу1С ΝΜ, Ьеупкк. М, йипдЬапз ВР, Иа1йтапп ТА 1989 Ргос Ыак1 Асай Зсй ϋ 3 А. Оес; 86(24):10029-33.
Могг1зоп ЗЬ 1985 Зс1епсе. Зер 20; 229(4719):1202-7.
Οί 1986 ВгоТесЬппдиез 4:214.
ОППез 3ϋ, Ьо КМ, Иезо1омзк1 й 1989 й 1ттипо1 МекЬойз. Оес 20; 125(1-2):191-202.
0ау1ез БК, Рай1ап ЕА, 5Ьег1££ 3 1990 Аппи Κβν ВТосЬет.;
59:439-73.
йопез РТ, Эеаг РН, Еооке й, ЫеиЬегдег М3, Игпкег С 1986
- 84 026110
Иакиге. Мау 29-йип 4; 321(6069):522-5.
ЮесЬтапп Ь, С1агк М, Иа1с1тапп Н, И1пкег С 1988 Иакиге. Маг 24; 332 (6162) :323-7.
УегЬоеуеп Μ, М1_1зке1п С, Иипкег С 1988 Зсиепсе. Маг 25; 239 (4847) :1534-6.
РасНап ЕА 1991 Мо1 1ттипо1. Арг-Мау; 28(4-5):489-98.
ЗкиЬписка СМ, Зоагез 3, Веккег М, ИННатз ЕЕ, ИаЬе11 Е, Ногиикг АН 1994 Ргокеип Епд. Йип; 7(6):805-14.
Еодизка МА, Рейегзеп ЙТ, Кеббу СА, Непгу АН, 8еаг1е Зй, ЬатЬегк ЙМ, Со1йтасЬег УЗ, В1акк1ег ИА, Ееез АЕ, СиЫй ВС 1994 Ргос Ыак1 Асай 5С1 и 5 А. ЕеЬ 1; 91(3):969-73.
ЕЬесЬтапп Ь, С1агк М, Иа1с1тапп Н, Игпкег 6 1988 Ыакиге. Маг 24; 332 (6162) :323-7.
Тап Р, МтксЬеН ϋΑ, Визе ТЫ, Но1тез МА, Апазекк! С, Еооке Й 2002 й 1ттипо1. Йи1 15; 169(2):1119-25.
йопез РТ, Эеаг РН, Еооке й, ЫеиЬегдег М3, ИЬпкег С 1986 Ыакиге. Мау 29-йип 4; 321(6069):522-5.
ЕЬесЬтапп Ь, С1агк М, Иа1с1тапп Н, ИЬпкег С 1988 Ыакиге. Маг 24; 332 (6162) :323-7.
Ргезка 1992. Сигг Ορίη Зкгиск ΒίοΙ. 2:593-596.
Йезрегз ек а1. 1988. В1о/кесЬпо1оду 12:899-903.
ЬопЬегд Ы, Низгаг ϋ 1995 1пк Εβν 1ттипо1. 1995; 13(1):6593
Й 1ттипо1. ОаИ'Асдиа ИЕ, Ηοοάε ЕМ, Иагй ЕЗ, Ра1азгупзк1 ЗЕ, Раке1 ΝΚ, ВгетсаЪ ΥΑ, Ии Н, КЬепег РА, Ьапдегтапп 3 2002 Й 1ттипо1. Νον 1; 169(9):5171-80.
ОаИ'Асдиа ИЕ, Киепег РА, Ии Н 2006 й ΒίοΙ СНет. Аид 18; 281(33):23514-24. ЕриЬ 2006 Йип 21.
ΗίηΟοη РЕ, йоЫкз МС, Хгопд ЙМ, Напезкай К, Опд КС, Ви11оск С, Ке11ег 3, Тапд МТ, Тзо ЙУ, Уйздиег М, ТзигизЬЗка N 2004 Й ΒίοΙ СЬет. ЕеЬ 20; 279(8):6213-6. ЕриЬ 2003 Оес 29.
Нгпкоп РЕ, Хгопд ЙМ, йоЫкз Мб, Тапд МТ, Ке11ег 3, ТеигиеЫка N 2006 Й 1ттипо1. йап 1; 176(1):346-56.
Реккоуа ЗВ, АкЫезЬ 3, Зргои1е Тй, СЬггзкгапзоп Сй, А1 КЬаЬЬаг Н, Вгоип АС, Ргезка ЬС, Мепд УС, Еоорепгап ОС 2006 1пк 1ттипо1. Оес; 18(12):1759-69. ЕриЬ 2006 Оск 31.
- 85 026110
ЗЫе1йз КЬ, Ыатепик АК, Нопд К, Мепд Υ6, Кае Л, Вхйддз 3,
Χίθ Э, Ьал. Л, 5каР1еп А, Ы В, Гох ЛА, Ргезка ЬЙ 2001 Л ΒίοΙ СЬет. Маг 2; 276(9):6591-604. ЕриЬ 2000 Νον 28.
Капеко У, КГл.т1пег5аЬп Г, КауексЬ ϋν 2006 Зсгепсе. Аид 4;
313 (5787) :670-3.
Зопев АЛ, Рарас ΌΙ, СЫп ЕН, Кеск К, ВаидЬтап ЗА, Ып Υ3, Кпеег 3, ВаккегзЬу ЗЕ 2007 61усоЫо1оду. Мау; 17 (5):529-40. ЕриЬ 2007 Маг 1.
Капйа Υ, Уатайа Т, Моги К, Ока^акг А, 1поие М, КИзаЦтаМгуата К, Кип1-КатпосЫ К, Иакапо К, Уапо К, Какгка 3, ЗЫкага К, ЗакоЬ М 2007 С1усоЬ1о1оду. Зап; 17(1):104-18. ЕриЬ 2006 Зер 29.
ЕизНЬигп СЗ 2008 3 РЬагт 3οί. Оск; 97(10):4167-83.
Книги
А1Ьегкэ, В., ек а1., Мо1еси1аг Вд.о1оду о£ ТЬе Се11, ТЬ£гй Ей., Саг1апй РиЬЫаЫпд, 1пс., Ыеи Уогк, 1994;
АизиЬе1, Г. М. ек а1, Сиггепк Ргокосо1з Ιη Мо1еси1аг Впо1оду, νοί, 2 (е.д., 5ирр1етепк 27, Зиттег '94). Ейв . , ЗоЬп
ИНеу & Зопе: Ыевд Уогк, Ν.Υ.;
Веггокаку, ек а1., АпкйЬойу-Апкйдеп 1пкегаскйопз, Ιη Гипйатепка1 1ттипо1оду, Раи1, И. Е., ЕЙ., Кауеп Ргезз: Иевд Уогк, Ν.Υ. (1984);
Вгойеиг ек а1., Мопос1опа1 АпЫЪойу Ргойиск1оп ТесЬп1диев апй АррИсакгопз, рр. 51-63 (Магсе1 Реккег, 1пс., Ыеи Уогк, 1987);
СоШдап, Сиггепк Ргокосо1з ίη 1ттипо1оду, ог Сиггепк Ргокосо1а ίη Ргокегп ЗсЛепсе, ДоЬп ИНеу & Зопа, ΝΥ, Ν.Υ., (1997-2003) ;
Сеппаго, Ей., Еетгпдкоп'з РЬагтасеикпса1 Зсйепсез, 18 кЬ ЕйШоп, Маск РиЫгеЫпд Со. (Еаекоп, Ра.) 1990;
Неа1кЬ Рго£еаа£опа1'а Эгид Сигйе 2001, ей., ЗЬаппоп, ИЫзоп, Зкапд, РгепЫсе-НаЫ, 1пс, иррег Зайй1е ΚίνθΓ, Ν.3.;
Негтапзоп, С. Т., Вгосо^идаке ТесЬп£диез, Асайетгс Ргезз: Зап Этедо, СаИ£. (1996);
Ыигзппд 2001 НапйЬоок о£ Эгида, 21 зк ейпкпоп, ЗрггпдЬоизе Согр., Зрг1пдЬои5е, Ра., 2001;
- 86 026110
1пп1з, ек а1.. РСЕ Ргокосойз А Сиййе ко МекЬойз апй
АррИсаЫопз, Ейз., Асайетйс Ргезз 1пс ,, Зап Ойедо, СаИ£.
(1990);
йопак е£ а1., Ргодгезз ВйокесЬ, νοί. 5, 1п У1кго
1ттип1гакз.оп ίη НуЬгййота ТесЬпо1оду, ВоггеЬаеск, ей., Е1зеу1ег Зсгепсе РиЬИзНегз Β.ν., Атзкегйат, ЫекЬег1апйз (1988);
йипдйпдег, ек а1. Ιη Эгид Регтеакйоп ЕпЬапсетепк; НзйеЬ, ϋ. 5,, Ейз,, рр, 59-90 (Магсе1 Эеккег, 1пс. Ыеи Уогк 1994
КаЬак, Е.А., ек ак1. (1991) Зедиепсез о£ Ргокейпз о! 1ттипо1од1са1 1пкегезк, Е1£кП Еййкйоп, и.5. Эерагктепк о£ Неа1кЬ апй Нитап Зегуйсез, ΝΙΗ РиЫйсакйоп № 91-3242;
Копкегтапп апй РиЬе1 ейз. , АпкйЬойу Епдйпеегйпд (2001) 8рг1пдег-Уег1ад, Неп Уогк;
Коргоизкй ек а1., Патент США № 4172124; НагЙом, Е. апй ϋ. Ьапе, 1988, Пз1пд Ап£1Ъос11ез: А ЬаЬогакогу Мапиа1, Со1й Зргйпд НагЬог ЬаЬогакогу: Со1Й Зргйпд НагЬог, Ν.Υ.;
КиЬу, Сапйз, 1тптпипо1оду, И, Н, Егеетап апй Сотрапу: Йем Уогк, Ν.Υ. (1992);
ΡΏΕ РЪагтасороека, Тагазсоп Роскек РЬагтасороейа 2000, 0е1ихе ЕсИЫоп, Тагазсоп РиЬИзЫпд, Ьота Ыпйа, СаИ£. (2000);
Зизкайпей апй Сопкго11ей Еейеазе Эгид ЭеНуегу Зузкетз, С. Е, КоЫпзоп ей., Магсе1 Оеккег, 1пс,, Ν.Υ., 1978);
Ие11з ек а1., ейз., РЬагтасокЬегару НапйЬоок, 2пй ЕЫкйоп,
Арр1е£оп апй Ьапде, 5кат£огй, Сопп. (2000).
Патентные документы
ИО 97/15327
ИО9937682 А2
И02002097048А2
Патент США № 5225539
Патент США № 5693761 ИО 2007/005608
Патент США К ϋ 7306907
Патент США К [ 5969108
Патент США К [в 7041870
Патент США ί Ρ 5939598
Патент США К [в 6914128
- 87 026110
N02006/069036 N02007/027714 Патент США № 7247711
Патент США № 4172124
ЕР 368684
РСТ/СВ91/01134
РСТ/ОВ92/01755
РСТ/СВ92/002240
РСТ/СВ92/00883
РСТ/СВ93/00605 из 2003/039649
N0 04/006955 из Зег № 08/350260
РСТ/СВ94/01422
РСТ/СВ94/02662
РСТ/ОВ97/01835
N090/14443
N090/14424
N090/14430
РСТ/В5594/1234
N092/18619
N096/07754
N096/13583
N097/08320
N095/16027
N088/06630
N090/3809
Патент США № 4704692
РСТ/и591/02989
N089/06283
ЕР 371 998
ЕР 550 400
ЕР 229 046
РСТ/ПЗ91/07149 Патент США № 5723323
Патент США № 5763192
- 88 026110
Патент США К 1’ 5814476
Патент США К И 5817483
Патент США К 1’ 5824514
Патент США К 1« 5 97 68 62
ИО 86/05803
ЕР 590 689
Патент США К Р 5627052
РСТ ио 93/06213
ИО 93/08829
Патент США № 4676980
ИО 91/00360
ИО 92/00373
ЕР 03089
Патент США № 4676980
Патент США № 5770428
Патент США № 5569825
Патент США № 5545806
Патент США № 5625126
Патент США № 5625825
Патент США № 5633425
Патент США № 5661016
Патент США № 5789650
ИО 98/50433
ИО 98/24893
ИО 98/24884
ИО 97/13852
ИО 94/25585
ИО 96/34096
ЕР 0463 151 В1
ЕР 0710 719 А1
Патент США № 5545807 ИО 90/04036 ЕР 0438 474 В1
ЕР 0814 259 А2
СВ 2 272 440 А РСТ 91/17271
- 89 026110
РСТ 91/18980
РСТ 91/19818
РСТ 93/08278
РСТ 92/05258
РСТ 92/14843
РСТ 96/19256
Патент США № 5658754
Патент США Ы» 5643768
Патент США № 4704692
Патент США № 4939666
Патент США № 4946778
Патент США № 5260203
Патент США № 5455030
Патент США № 5518889
Патент США № 5534621
Патент США № 5656730
Патент США № 5763733
Патент США Ы» 5767260
Патент США № 5856456
Патент США № 5223409
Патент США № 5403484
Патент США № 5571698
Патент США № 5837500
Патент США № 5427908
Патент США № 5580717
Патент США № 5885793
Патент США Ы» 5750373
Патент США № 5618920
Патент США № 5595898
Патент США № 5576195
Патент США № 5698435
Патент США № 5693493
Патент США № 5698417
Патент США № 5827690
Патент США № 5849992
Патент США № 4873316
- 90 026110
Патент США № 5849992
Патент США № 5994616
Патент США № 5565362
Патент США № 5304489
Патент США № 4683195
Патент США № 4683202
Патент США № 4800159
Патент США № 4965188
Патент США № 4795699
Патент США № 4921794
Патент США № 5142033
Патент США № 5122464
Патент США № 5091310
Патент США № 5066584
Патент США № 4889818
Патент США № 4994370
Патент США № 4766067
Патент США № 4656134
Патент США № 5130238
Патент США № 4683202
Патент США № 5543507
Патент США № 5672593
Патент США № 5484908
Патент США № 5256648
Патент США № 5681941
Патент США № 4399216
Патент США № 4634665
Патент США № 4656134
Патент США № 4956288
Патент США № 5149636
Патент США № 5179017
Патент США № 5122464
Патент США № 5770359
Патент США № 5827739
Патент США № 5580734
Патент США № 5641670
- 91 026110
Патент США № 5733746
Патент США № 5733761
Патент США № 5168062
Патент США № 5385839
Патент США № 5266491
N0 92/16221 ИО 92/07076
США № 5851198
США № 5839446
США № 4309989
США № 4767402
ИО 94/16970 ИО 98/35888
Патент США №
ЕР 237507 ИО 97/25086 ИО 94/08552 Патент США № ИО 94/06498 Патент США № ИО 97/22376
4668218
5458135
5404871
Патент США № 4239754
Патент США № 4925673
Патент США № 5879681
Патент США № 5871753
Патент США № 5514670
Патент США № 5849695
Патент США № 5814599
Патент США № 5770222
- 92 026110
Список последовательностей <110> Агапа ТЬегареиЫсз ЫгаЬЬес!
СЬАРКЕ, Айат ННИаш {ТОЛЬКО 05)
ΏΟΥΣΕ, Ап^Ьопу Сегагс) (ТОЛЬКО 05)
0ΕΝΝΙΚ05, РЫ1±р АпЬЬопу {ТОЛЬКО 05)
ΡΟΟΙ/ΓΟΝ, Ьупп ВогоЬЬу (ТОЛЬКО 05)
ΝΑΙ, ВегпабеЫее (ТОЛЬКО 05)
РОИ, Апогеи Латез (ТОЛЬКО 05)
<120> АНТИТЕЛА ПРОТИВ 1Ь-12/1Ь- -23
<130> 30825635
<160> 370
<170> РаЪепЫп уегзЬоп 3.5
<210> <211> <212> <213> 1 306 БЕЛОК Ното зарЬепз
<400> 1
11е Тгр С1и Ьеи Ьуз Ьуз Азр Уа1 Туг Уа1 Уа1 С1и Ьеи Азр Тгр Туг
10 15
Рго Азр А1а Рго СЬу СЬи МеЬ Уа1 Уа1 Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго СЬи 20 25 30
С1и Азр СЬу Пе ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр С1п 5ег 5ег С1и Уа1 Ьеи С1у 35 40 45
5ег С1у Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг Не С1п \/а1 Ьуз С1и РЬе С1у Азр А1а С1у 50 55 60
С1п Туг ТЬг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи Уа1 Ьеи 5ег НЬз 5ег Ьеи Ьеи 65 70 75 80
Ьеи Ьеи ΗΪ5 Ьуз Ьуз С1и Азр С1у 11е Тгр 5ег ТЬг Азр 11е Ьеи Ьуз
90 95
Азр С1п Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз С1и А1а Ьуз 100 105 110
Азп Туг 5ег СЬу Агд РЬе ТЬг Суз Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТЬг Не 5ег ТЬг 115 120 125
Азр Ьеи ТЬг РЬе 5ег Уа1 Ьуз 5ег 5ег Агд С1у 5ег 5ег Азр Рго С1п 130 135 140
С1у Уа1 ТЬг Суз СЬу А1а А1а ТЬг Ьеи 5ег АЬа СЬи Агд Уа1 Агд СЬу 145 150 155 160
- 93 026110
Αδρ Азп Ьуз С1и Туг 165 СЬи Туг Зег УаЬ О1и 170 Суз СЬп СЬи Азр Зег 175 АЬа
Суз Рго А1а А1а О1и СЬи Зег Ьеи Рго 11е СЬи УаЬ МеЬ УаЬ Азр АЬа
180 185 190
УаЬ ΗΪ3 Ьуз Ьеи Ьуз Туг СЬи Азп Туг ТЬг Зег Зег РЬе РЬе 11е Агд
195 200 205
Азр Не Не Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи СЬп Ьеи Ьуз Рго Ьеи
210 215 220
Ьуз Азп 5ег Агд С1п УаЬ СЬи Уа1 Зег Тгр СЬи Туг Рго Азр ТЬг Тгр
225 230 235 240
Зег ТЬг Рго Нгз Зег Туг РЬе Зег Ьеи ТЬг РЬе Суз УаЬ СЬп УаЬ СЬп
245 250 255
СЬу Ьуз Ёег Ьуз Агд СЬи Ьуз Ьуз Азр Агд УаЬ РЬе ТЬг Аар Ьуз ТЬг
260 265 270
Зег АЬа ТЬг 17а 1 11е Суз Агд Ьуз Азп А1а Зег 11е Зег УаЬ Агд АЬа
275 280 285
СЬп Азр Агд Туг Туг Зег Зег Зег Тгр Зег СЬи Тгр АЬа Зег УаЬ Рго
290 295 300
Суз Зег
305
<2Ь0> : 2
<211> 197
<2Ь2> 1 БЕЛОК
<213> 1 Н.ОГПО заргепз
<400> . 2
Агд Азп Ьеи Рго УаЬ АЬа ТЬг Рго Азр Рго СЬу МеЪ РЬе Рго Суз Ьеи
1 5 10 15
ΗΪ3 ΗΪ5 Зег СЬп Азп Ьеи Ьеи Агд АЬа Уа1 Зег Азп МеЬ Ьеи СЬп Ьуз
20 25 30
АЬа Агд СЬп ТЬг Ьеи СЬи РЬе Туг Рго Суз ТЬг Зег СЬи СЬи 11е Азр
35 40 45
НЬз С1и Азр 11е ТЬг Ьуз Азр Ьуз ТЬг Зег ТЬг УаЬ СЬи АЬа Суз Ьеи
50 55 60
Рго 65 Ьеи С1и Ьеи ТЬг Ьуз 70 Азп С1и Зег Суз Ьеи 75 Азп Зег Агд С1и ТЬг 80
Зег РЬе Не ТЬг Азп С1у Зег Суз Ьеи А1а Зег Агд Ьуз ТЬг Зег РЬе
85 90 95
МеЬ МеЬ А1а Ьеи Суз Ьеи Зег Зег 11е Туг С1и Азр Ьеи Ьуз МеЬ Туг
100 105 110
С1п УаЬ С1и РЬе Ьуз ТЬг МеЬ Азп А1а Ьуз Ьеи Ьеи МеЬ Азр Рго Ьуз
115 120 125
Агд С1п 11е РЬе Ьеи Азр С1п Азп МеЬ Ьеи А1а Уа1 11е Азр С1и Ьеи
130 135 140
МеЬ 21п А1а Ьеи Азп РЬе Азп Зег 21и ТЬг УаЬ Рго С1п Ьуз Зег Зег
145 150 155 160
Ьеи 61и 61и Рго Азр РЬе Туг Ьуз ТЬг Ьуз 11е Ьуз Ьеи Суз 11е Ьеи
165 170 175
Ьеи Н1з А1а РЬе Агд 11е Агд А1а Уа1 ТЬг 11е Азр Агд Уа1 МеЬ Зег
180 185 190
Туг Ьеи Азп А1а Зег
195
<210> 3
<211> 170
<212> БЕЛОК
<213> Пото зарЪепз
<400> 3
Агд А1а Уа1 Рго С1у С1у Зег Зег Рго А1а Тгр ТЬг С1п Суз С1п С1п
1 5 10 15
Ьеи Зег С1п Ьуз Ьеи Суз ТЬг Ьеи А1а Тгр Зег А1а НЬз Рго Ьеи УаЬ
20 25 30
С1у Ηί3 МеЬ Азр Ьеи Агд С1и С1и С1у Азр С1и С1и ТЬг ТЬг Азп Азр
35 40 45
УаЬ Рго НЬз 11е С1п Суз С1у Азр 31у Суз Азр Рго С1п 21у Ьеи Агд
50 55 60
Азр Азп Зег 61п Рке Суз Ьеи 61п Агд 11е НЬз 61п 61у Ьеи 11е РЬе
65 70 75 80
- 95 026110
Туг 61и Ьуз Ьеи Ьеи 85 61у Зег Азр 11е РЬе 90 ТЬг 61у 61и Рго Зег 95 Ьеи
Ьеи Рго Агр Зег Рго Уа1 С1у 61п Ьеи Н1з А1а Зег Ьеи Ьеи 61у Ьеи
100 105 но
Зег 61п Ьеи Ьеи 61п Рго 61и 61у Н1з ΗΪ8 Тгр <31и ТЬг 61п 01п Ые
115 120 125
Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег 61п Рго Тгр 61п Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РЬе
130 135 140
Ьуз Не Ьеи Агд Зег Ьеи С1п А1а РЬе Уа1 А1а Уа1 А1а А1а Агд Уа1
145 150 155 160
РЬе А1а Шз С1у А1а А1а ТЬг Ьеи Зег Рго
165 170
<210> 4
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> 1 Миа гпиаси1иа
<400> 4
61 η 11е С1п Ьеи Уа1 С1п Зег 61у Рго 61и Ьеи Ьуз Ьуз Рго 61у 61и
1 5 10 15
ТЬг Уа1 Ьуз Ые Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
01у МеТ Азп Тгр Уа1 Ьуз 61п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи Ьуз Тгр МеТ
35 40 45
61 у Тгр 11е Азп ТЬг Туг ТЬг 61у 61и Рго ТЬг Туг АЬа Азр Азр РЬе
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЬе А1а РЬе Зег Ьеи 61и ТЬг Зег А1а Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п 11е Азп Азп РЬе Ьуз Азп 61и Азр ТЬг А1а ТЬг Туг РЬе Суз
95 90 95
А1а Агд Зег Ьеи Зег ТЬг МеТ 11е ТЬг ТЬг ТЬг РЬе А1а Туг Тгр 61у
100 105 но
С1п 61у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег
115 120
<210> 5
- 96 026110 <2Η> 108 <212> БЕЛОК <213> Миз тизсиЬиз <400> 5
Зег 1 Не Уа1 МеЬ ТЬг 5 61п ТЬг Рго Ъуа РЬе 10 Ьеи Ьеи УаЬ Зег АЬа 15 СЬу
Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз Ьуз А1а Зег 61п Зег УаЬ Зег Азп Азр
20 25 30
УаЬ А1а Тгр Туг С1п СЬп Ьуз Рго С1у 61п Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг Туг А1а Зег Азп Агд Туг ТЬг СЬу УаЬ Рго Азр Агд РЬе ТЬг СЬу
50 55 60
Зег С1у Туг СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг РНе ТЬг ЬЬе Зег ТЬг УаЬ СЬп АЬа
65 70 75 80
61 и Азр Ьеи АЬа УаЬ Туг РЬе Суз СЬп СЬп Азр Туг Зег Зег Рго Туг
85 90 95
ТЬг РЬе 61у СЬу СЬу ТЬг Ьуз Ьеи СЬи 11е Ьуз Агд
100 105 <210> 6 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Миз тизсиЬиз
<400> 6
61 и Уа1 СЬп Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу АЬа Азр Ьеи Уа1 Агд Зег СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег Ые Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег СЬу РЬе Азп ЬЬе Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг МеЬ Шз Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬи 6Ьп 6Ьу Ьеи 6Ьи Тгр ЬЬе
35 40 45
61 у Тгр ЬЬе Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТЬг МеЬ ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
- 97 026110
Азп А1а Суз Ьуз 100 С1и Ьеи Агд Туг РЬе 105 Азр Уа1 Тгр С1у А1а но 31у ТЬг
ТНг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 7
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Миг тигси1из
<400> 7
Азр Не УаЬ Ьеи ТЬг С1п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Уа1 ТЬг Рго Е1у
1 5 10 15
Азр Зег Уа1 Зег Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п Зег 11е Зег 11е Азп
20 25 30
Ьеи Ыз Тгр Туг 61п 61п Ьуз Зег Ыз С1и Зег Рго Агд Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Ьуз РЬе А1а Зег СЬп Зег 11е Зег С1у 11е Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Туг С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Зег 11е Азп Зег Уа1 СЬи ТЬг
65 70 75 80
ЗЬи Азр РЬе СЬу Агд Туг РЬе Суз С1п 61п Зег Азп Зег Тгр Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе С1у А1а 61у ТЬг Ьуз Ьеи С1и Ьеи Ьуз Агд
100 105
<210> 8
<211> 330
<212> БЕЛОК
<213> Ногао гаргепз
<400> 8
А1а Зег ТЬг Ьуз Азп Рго Азр Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз
1 5 10 15
Зег ТЬг Зег СЬу 61у ТЬг А1а А1а Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг
20 25 30
РЬе Рго С1и Рго 7а1 ТЬг 7а1 Зег Тгр Азп Зег СЬу А1а Ьеи ТЬп Зег
35 40 45
61у Уа1 Ыз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи С1п Зег Зег 61у Ьеи Туг Зег
50 55 60
- 98 026110
- 99 026110
61п Ьуэ Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу Ьуз 325 330 <210> 9 <211> 106 <212> БЕЛОК <213> Ното эариепэ <400> 9
ТЬг Уа1 1 АЬа А1а Рго 5 Зег Уа1 РЬе Ые РЬе 10 Рго Рго Зег Азр С1и 15 С1п
Ьеи Ьуэ Зег СЬу ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Аэп РЬе Туг
20 25 30
Рго Агд С1и АЬа Ьуэ Уа1 С1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Аэп АЬа Ьеи еьп Зег
35 40 45
СЬу Азп Зег 61п С1и Зег Уа1 ТЬг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг
50 55 60
Туг Зег Ьеи Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз АЬа Азр Туг С1и Ьуз
65 70 75 80
ΗΪ3 Ьуэ Уа1 Туг АЬа Суэ С1и Уа1 ТЬг ΗΪ3 СЬп СЬу Ьеи Зег Зег Рго
85 90 95
Уа1 ТЬг Ьуз Зег РЬе Азп Агд СЬу С1и Суз
100 105 <210> 10 <211> 451 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> 10
С1п 11е С1п Ьеи Уа1 С1п Зег СЬу Рго СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Рго СЬу С1и
1 5 10 15
ТЬг Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг Азп Туг
20 25 30
СЬу МеЬ Азп Тгр Уа1 Ьуз С1п АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи Ьуз Тгр Мер
35 40 45
СЬу Тгр Не Азп ТЬг Туг ТЬг СЬу 61и Рго ТЬг Туг А1а Азр Азр РЬе
50 55 60
100
- 101 026110
Ьуз С1и Туг Ьуз Суз 325 Ьуз ν&ι Зег Азп Ьуз 330 АЬа Ьеи Рго АЬа Рго 335 Не
СЬи Ьуз ТНг 11е Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп Уа1
340 345 350
Туг ТНг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр С1и Ьеи ТНг Ьуз Азп СЬп ν&1 Зег
355 360 365
Ьеи ТНг Суз Ьеи Уа1 Ьуз СЬу РНе Туг Рго Зег Азр 1Ье АЬа Уа1 СЬи
370 375 330
Тгр 21и Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТНг ТНг Рго Рго
385 390 395 400
7а1 Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РНе РНе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТНг Уа1
405 410 415
Азр Ьуз Зег Агд Тгр СЬп СЬп СЬу Азп 7а1 РНе Зег Суз Зег Уа1 Ме ίί
420 425 430
ΗΪ3 С1и А1а Ьеи ΗΪ3 Азп ΗΪ3 Туг ТНг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег
435 440 445
Рго 01у Ьуз
450 <210> 11 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> : Н
Зег 11е Уа1 МеЬ ТНг О1п ТНг Рго Ьуз РНе Ьеи Ьеи Уа1 5ег АЬа СЬу
ь 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТНг Не ТНг Суз Ьуз АЬа Зег СЬп Зег Уа1 Зег Азп Азр
20 25 30
Уа1 АЬа Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго СЬу СЬп Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг Туг АЬа Зег Азп Агд Туг ТНг СЬу Уа1 Рго Азр Агд РНе ТНг СЬу
50 55 60
Сег СЬу Туг С1у ТНг Азр РНе ТНг РНе ТНг Не Зег ТНг Уа1 СЬп АЬа
65 70 75 80
СЬи Азр Ьеи А1а Уа1 Туг РНе Суэ СЬп СЬп Аэр Туг Зег Зег Рго Туг
85 90 95
102
ТЬг РЬе С1у СЬу СЬу ТЬг 100 Ьуз Ьеи СЬи 105 11е Ьуз Агд ТЬг УаЬ ыо АЬа АЬа
Рго Зег УаЬ РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр СЬи СЬп Ьеи Ьуз Зег СЬу
115 120 125
ТЬг АЬа Зег УаЬ УаЬ Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд СЬи АЬа
130 135 140
Ьуз УаЬ С1п Тгр Ьуз УаЬ Азр Азп АЬа Ьеи СЬп Зег СЬу Азп Зег СЬп
145 150 155 160
<31и Зег УаЬ ТЬг СЬи СЬп Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег
165 170 175
Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз АЬа Азр Туг СЬи Ьуз НЬз Ьуз УаЬ Туг
180 185 190
АЬа Суз СЬи Уа1 ТЬг н±з СЬп СЬу Ьеи Зег Зег Рго УаЬ ТЬг Ьуз Зег
195 200 205
РЬе Азп Агд СЬу 6Ьи Суз
210
<210> 12
<211> 448
<212> : БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 12
<31и УаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу АЬа Азр Ьеи УаЬ Агд Зег СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег 11е Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег СЬу РЬе Азп Не Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг Мер НЬз Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬи СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр 11е
35 40 45
СЬу Тгр Не Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТЬг Мер ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
103
- 104 026110
Рго Рго Зег 355 Агд Азр О1и Ьеи ТЬг 360 Ьуз Азп С1п ν&ι Зег 365 Ьеи ТЬг Суз
Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр С1и Зег
370 375 330
Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр
385 390 395 400
Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег
405 410 415
Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Н1з С1и А1а
420 425 430
Ьеи ΗΪ3 Азп ΗΪ3 Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз
435 440 445 <210> 13 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> 13
Азр 1 Не Уа1 Ьеи ТЬг 5 С1п Зег Рго А1а ТЬг 10 Ьеи Зег Уа1 ТЬг Рго 15 С1у
Азр Зег Уа1 Зег Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п Зег Не Зег 11е Азп
20 25 30
Ьеи Н1з Тгр Туг С1п 61п Ьуз Зег Н1з С1и Зег Рго Агд Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Ьуз РЬе А1а Зег С1п Зег 11е Зег С1у 11е Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Туг С1у Зег С1у ТЬг Аар РЬе ТЬг Ьеи Зег 11е Азп Зег Уа.1 31и ТЬг
65 70 75 80
С1и Азр РЬе С1у Агд Туг РЬе Суз С1п С1п Зег Аэп Зег Тгр Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе С1у А1а С1у ТЬг Ьуз Ьеи С1и Ьеи Ьуз Агд ТЬг Уа1 АЬа А1а
100 105 110
Рго Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег С1у
115 120 125
105
ТЬг А1а 130 Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи 135 Ьеи Азп Азп РЬе Туг 140 Рго Агд С1и А1а
Ьуз Уа1 61п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег С1у Азп Зег С1п
145 150 155 160
61и Зег Уа1 ТЬг 31и 31п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег
165 170 175
Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг 01и Ьуз ΗΪ3 Ьуз Уа1 Туг
180 185 190
А1а Суз С1и Уа1 ТЬг Шз С1п С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег
195 200 205
РЬе Азп Агд С1у С1и Суз
210
<210> 14
<211> 521
<212> 1 БЕЛОК
<213> 1 Ното зарьепз
<400> 14
Агд ТЬг Зег С1и Суз Суз РЬе О1п Азр Рго Рго Туг Рго Азр А1а Азр
1 5 10 15
Зег С1у Зег А1а Зег С1у Рго Агд Азр Ьеи Агд Суз Туг Агд 11е Зег
20 25 30
Зег Азр Агд Туг С1и Суз Зег Тгр С1п Туг С1и С1у Рго ТЬг А1а С1у
35 40 45
Уа1 Зег Шз РЬе Ьеи Агд Суз Суз Ьеи Зег Зег С1у Агд Суз Суз Туг
50 55 60
РЬе А1а А1а 01у Зег А1а ТЬг Агд Ьеи С1п РЬе Зег Азр 61п А1а С1у
65 70 75 80
Уа1 Зег Уа1 Ьеи Туг ТЬг Уа1 ТЬг Ьеи Тгр Уа1 01и Зег Тгр А1а Агд
85 90 95
Азп 61п ТЬг С1и Ьуз Зег Рго С1и Уа1 ТЬг Ьеи 61п Ьеи Туг Азп Зег
100 105 но
Уа1 Ьуз Туг С1и Рго Рго Ьеи С1у Азр Не Ьуз 7а1 Зег Ьуэ Ьеи А1а
115 120 125
С1у Е1п Ьеи Агд МеЬ С1и Тгр 21и ТЬг Рго Азр Азп 21п Уа1 О1у А1а
130 135 140
106
С1и Уа! 61п РНе Агд НЬз Агд ТНг Рго Зег Зег Рго Тгр Ьуз Ьеи 61у 145 150 155 160
Азр Суз С1у Рго С1п Азр Азр Азр ТНг С1и Зег Суз Ьеи Суз Рго Ьеи 165 170 175
С1и МеЬ Азп Уа1 А1а 61п 61и РНе 61п Ьеи Агд Агд Агд 61п Ьеи 61у 180 185 190
Зег С1п С1у Зег Зег Тгр Зег Ьуз Тгр Зег Зег Рго Уа1 Суз Уа1 Рго 195 200 205
Рго С1и Азп Рго Рго С1п Рго С1п \7а1 Агд РНе Зег Уа1 С1и С1п Ьеи 210 215 220
С1у С1п Азр С1у Агд Агд Агд Ьеи ТНг Ьеи Ьуз С1и С1п Рго ТНг С1п 225 230 235 240
Ьеи С1и Ьеи Рго С1и С1у Суз С1п С1у Ьеи А1а Рго С1у ТНг С1и Уа1 245 250 255
ТНг Туг Агд Ьеи 61п Ьеи НЬз МеЬ Ьеи Зег Суз Рго Суз Ьуз А1а Ьуз 260 265 270
А1а ТНг Агд ТНг Ьеи НЬз Ьеи С1у Ьуз МеЬ Рго Туг Ьеи Зег С1у А1а 275 280 285
А1а Туг Азп Уа1 А1а Уа1 Не Зег Зег Азп 21п РНе С1у Рго С1у Ьеи 290 295 300
Азп С1п ТНг Тгр НЬз 11е Рго А1а Азр ТНг НЬз ТНг С1и Рго Уа1 А1а 305 310 315 320
Ьеи Азп 11е Зег Уа1 С1у ТНг Азп С1у ТНг ТНг МеЬ Туг Тгр Рго А1а 325 330 335
Агд А1а 61п Зег МеЬ ТНг Туг Суз 11е 61и Тгр 61п Рго Уа1 61у 61п 340 345 350
Азр С1у С1у Ьеи А1а ТНг Суз Зег Ьеи ТНг А1а Рго С1п Азр Рго Азр 355 360 365
Рго А1а <31у МеЬ А1а ТНг Туг Зег Тгр Зег Агд С1и Зег С1у А1а МеЬ 370 375 380
С1у С1п С1и Ьуз Суз Туг Туг 11е ТНг 11е РНе А1а Зег А1а НЬз Рго 385 390 395 400
107 026110
СЬи Ьуз Ьеи ТЬг Ьеи 405 Тгр Зег ТЬг УаЬ Ьеи 410 Зег ТЬг Туг НЬз РЬе 415 СЬу
СЬу АЗП АЬа Зег АЬа АЬа СЬу ТЬг РГО НЬз НЬз УаЬ Зег УаЬ Ьуз Азп
420 425 430
НЬз Зег Ьеи Азр Зег УаЬ Зег УаЬ Азр Тгр АЬа Рго Зег Ьеи Ьеи Зег
435 440 445
ТЬг Суз Рго СЬу УаЬ Ьеи Ьуз СЬи Туг Уа1 Уа1 Агд Суз Агд Азр СЬи
450 455 460
Азр Зег Ьуз С1п УаЬ Зег СЬи НЬз Рго УаЬ С1п Рго ТЬг СЬи ТЬг С1п
465 470 475 480
УаЬ ТЬг Ьеи Зег СЬу Ьеи Агд АЬа С1у УаЬ АЬа Туг ТЬг УаЬ СЬп УаЬ
485 490 495
Агд АЬа Азр ТЬг АЬа Тгр Ьеи Агд СЬу Уа1 Тгр Зег СЬп Рго С1п Агд
500 505 510
РЬе Зег Ые СЬи УаЬ С1п УаЬ Зег Азр
515 520
<210> 15
<211> 599
<212> : БЕЛОК
<213> Пото зархепз
<400> 15
Ьуз Ые Азр А1а Суз Ьуз Агд СЬу Азр Уа1 ТЬг УаЬ Ьуз Рго Зег НЬз
1 5 10 15
УаЬ ЬЬе Ьеи Ьеи СЬу Зег ТЬг УаЬ Азп Ые ТЬг Суз Зег Ьеи Ьуз Рго
20 25 30
Агд СЬп СЬу Суз РЬе Шз Туг Зег Агд Агд Азп Ьуз Ьеи Ые Ьеи Туг
35 40 45
Ьуз РЬе Азр Агд Агд Ые Азп РЬе НЬз НЬз СЬу НЬз Зег Ьеи Азп Зег
50 55 60
СЬп УаЬ ТЬг С1у Ьеи Рго Ьеи СЬу ТЬг ТЬг Ьеи РЬе Уа1 Суз Ьуз Ьеи
65 70 75 80
АЬа Суз ТЬе Азп Зег Азр СЬи Ые СЬп Ые Суз СЬу АЬа СЬи Ые РЬе
85 90 95
108
УаЬ С1у УаЬ АЬа Рго СЬи СЬп Рго СЬп Азп Ьеи Зег Суз Не СЬп Ьуз 100 105 110
СЬу СЬи СЬп С1у ТЬг УаЬ АЬа Суэ ТЬг Тгр С1и Агд С1у Агд Аэр ТЬг
115 120 125
Н1з Ьеи Туг ТЬг СЬи Туг ТЬг Ьеи СЬп Ьеи Зег С1у Рго Ьуз Аэп Ьеи 130 135 140
ТЬг Тгр С1п Ьуз С1п Суз Ьуз Азр Ые Туг Суз Азр Туг Ьеи Азр РЬе 145 150 155 160
СЬу 1Ье Азп Ьеи ТЬг Рго СЬи Зег Рго СЬи Зег Азп РЬе ТЬг А1а Ьуэ 165 170 175
УаЬ ТЬг АЬа УаЬ Азп Зег Ьеи СЬу Зег Зег Зег Зег Ьеи Рго Зег ТЬг 180 185 190
РЬе ТЬг РЬе Ьеи Азр 11е УаЬ Агд Рго Ьеи Рго Рго Тгр Азр 11е Агд 195 200 205
11е Ьуз РЬе СЬп Ьуз АЬа Зег УаЬ Зег Агд Суз ТЬг Ьеи Туг Тгр Агд 210 215 220
Азр СЬи СЬу Ьеи Уа1 Ьеи Ьеи Азп Агд Ьеи Агд Туг Агд Рго Зег Азп 225 230 235 240
Зег Агд Ьеи Тгр Азп МеТ УаЬ Азп Уа1 ТЬг Ьуз АЬа Ьуз СЬу Агд НЬз 245 250 255
Азр Ьеи Ьеи Азр Ьеи Ьуз Рго РЬе ТЬг СЬи Туг СЬи РЬе СЬп 11е Зег 260 265 210
Зег Ьуз Ьеи Шз Ьеи Туг Ьуз СЬу Зег Тгр Зег Азр Тгр Зег СЬи Зег 215 280 285
Ьеи Агд АЬа СЬп ТЬг Рго СЬи 61и 61и Рго ТЬг СЬу МеЬ Ьеи Азр Уа1 290 295 300
Тгр Туг МеЬ Ьуз Агд НЬз 11е Азр Туг Зег Агд СЬп СЬп Не Зег Ьеи 305 310 315 320
РЬе Тгр Ьуз Азп Ьеи Зег УаЬ Зег 61и АЬа Агд СЬу Ьуз 11е Ьеи НЬз 325 330 335
Туг СЬп УаЬ ТЬг Ьеи С1п С1и Ьеи ТЬг СЬу СЬу Ьуз АЬа МеЬ ТЬг СЬп 340 345 350
- 109 026110
- 110 026110 <210> 16 <211> 332 <212> БЕЛОК <213> Ното зарЬепз <400> 16
С1у 1 Не ТЪг Азп 11е 5 Азп Суз Зег СЬу ΗΪ3 10 Ые Тгр УаЬ СЬи Рго 15 АЬа
ТНг Не РНе Ьуз МеН СЬу МеГ Азп 11е Зег 11е Туг Суз СЬп АЬа А1а
20 25 30
11е Ьуз Азп Суз СЬп Рго Агд Ьуз Ьеи НЬз РНе Туг Ьуз Азп СЬу 1Ье
35 40 45
Ъуз СЬи Агд РНе СЬп 1Ье ТЪг Агд 1Ье Азп Ьуз ТНг ТНг АЬа Агд Ьеи
50 55 60
Тгр Туг Ьуз Азп РНе Ьеи С1и Рго НЬз АЬа Зег МеН Туг Суз ТНг АЬа
65 70 75 80
С1и Суз Рго Ьуз НЬз РНе С1п СЬи ТНг Ьеи Не Суз СЬу Ьуз Азр 1Ье
85 90 95
Зег Зег СЬу Туг Рго Рго Азр 1Ье Рго Азр СЬи 7аЬ ТНг Суз Уа1 11е
100 105 ььо
Туг СЬи Туг Зег СЬу Азп МеЪ ТНг Суз ТНг Тгр Азп А1а СЬу Ьуз Ьеи
115 120 125
ТНг Туг 1Ье Азр ТНг Ьуз Туг УаЬ Уа1 НЬз 7а1 Ьуз Зег Ьеи СЬи ТНг
130 135 140
СЬи СЬи СЬи СЬп СЬп Туг Ьеи ТНг Зег Зег Туг 11е Азп 11е Зег ТНг
145 150 155 160
Азр Зег Ьеи СЬп СЬу СЬу Ьуз Ьуз Туг Ьеи Уа1 Тгр УаЬ СЬп АЬа АЬа
165 170 175
Азп АЬа Ьеи СЬу Ме7 СЬи 61и Зег Ьуз СЬп Ьеи СЬп 11е НЬз Ьеи Азр
180 185 Ь90
Азр 11е 7а1 1Ье Рго Зег АЬа АЬа Уа1 1Ье Зег Агд А1а СЬи ТНг 1Ье
195 200 205
Азп АЬа ТНг УаЬ Рго Ьуз ТЪг 11е 11е Туг Тгр Азр Зег СЬп ТНг ТНг
210 215 220
111
11е 225 С1и Ьуз УаЬ 5ег Суз 230 СЬи МеЬ Агд Туг Ьуз 235 АЬа Тпг ТЬг Азп С1п 240
ТЬг Тгр Азп УаЬ Ьуз СЬи РЬе Азр ТЬг Азп РЬе ТЬг Туг УаЬ С1п С1п
245 250 255
Зег С1и РЬе Туг Ьеи СЬи Рго Азп Не Ьуз Туг УаЬ РЬе СЬп Уа1 Агд
260 265 270
Суз С1п СЬи ТЬг СЬу Ьуз Агд Туг Тгр С1п Рго Тгр Зег 8ег Рго РЬе
275 280 235
РЬе Н1з Ьуз ТЬг Рго СЬи ТЬг УаЬ Рго СЬп Уа1 ТЬг Зег Ьуз А1а РЬе
290 295 300
С1п ΉΪ3 Азр ТЬг Тгр Азп Зег С1у Ьеи ТЬг Уа1 АЬа Зег 1Ье Зег ТЬг
305 310 315 320
СЬу ΉΪ3 Ьеи ТЬг Зег Азр Азп Агд СЬу Азр 11е СЬу
325 330
<210> 17
<211> 98
<212> : БЕЛОК
<213> . Ното зарЬепз
<400> 17
СЬи Уа1 СЬп Ьеи Уа1 СЬп Зег СЬу АЬа СЬи 7а1 Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 ЬО 15
ТЬг Уа1 Ьуз Не Зег Суз Ьуз 7а1 Зег СЬу Туг ТЬг РНе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг МеЬ ΗΪ5 Тгр 7а1 СЬп С1п АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеС
35 40 45
СЬу Ьеи Уа1 Азр Рго СЬи Азр СЬу СЬи ТЬг 11е Туг АЬа СЬи Ьуз РЬе
50 55 60
01 η СЬу Агд УаЬ ТЬг 1Ье ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
МеЬ СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд 5ег СЬи Азр ТЬг АЬа Уа! Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Тпг <210> 18
112 <2Ы> 98 <212> БЕЛОК <213> Ното зарЬепз <400> 18
СЬп 1 УаЬ 61п Ьеи УаЬ 5 ОЬп Зег С1у АЬа СЬи 10 УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 АЬа
бег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз УаЬ Зег СЬу Туг ТНг Ьеи ТНг СЬи Ьеи
20 25 30
Зег МеН НЬз Тгр УаЬ Агд С1п АЬа Рго С1у Ьуз С1у Ьеи СЬи Тгр МеН
35 40 45
С1у СЬу РЬе Азр Рго СЬи Азр СЬу СЬи ТЬг Ые Туг АЬа СЬп Ьуз РНе
50 55 60
С1п СЬу Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг СЬи Азр ТЬг Зег ТНг Азр ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
МеН СЬи Ьеи бег Зег Ьеи Агд бег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа ТНг
<2Ь0> 19
<211> 98
<212> 1 БЕЛОК
<2ЬЗ> 1 Ното заргепз
<400> 19
С1п Уа1 сьп Ьеи УаЬ О1п Зег СЬу АЬа СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТНг РНе ТНг бег Туг
20 25 30
СЬу ЬЬе Зег Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр МеН
35 40 45
СЬу Тгр ЬЬе бег АЬа Туг Азп СЬу Азп ТЬг Азп Туг АЬа СЬп Ьуз Ьеи
50 55 60
СЬп СЬу Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг ТНг Азр ТЬг Зег ТНг бег ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
МеН О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд бег Азр Азр ТЬг А1а УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
113
АЬа Агд <210> 20 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Ното зарЬепз <400> 20
АЬа 1 РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу 5 СЬп Е1у ТЬг МеЬ 10 Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег 15
<210> 21
<211> 95
<212> БЕЛОК
<213> Ното зарЬепз
<400> 21
СЬи 11е Уа1 Ьеи ТЬг СЬп Зег Рго Азр РЬе С1п Зег УаЬ ТЬг Рго Ьуз
1 5 10 15
СЬи Ьуа УаЬ ТЬг 11е ТЬг Суз Агд АЬа Зег С1п Зег 11е С1у Зег Зег
20 25 30
Ьеи ΗΪ5 Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго Азр 61п Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Ьуз Туг АЬа Зег СЬп Зег РЬе Зег СЬу Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег 61у Зег 6Ьу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Азп Зег Ьеи СЬи А1а
65 70 75 80
СЬи Азр АЬа А1а ТЬг Туг Туг Суг НЬз 61п Зег Зег Зег Ьеи Рго
85 90 95
<210> 22
<211> 95
<2Ь2> БЕЛОК
<213> Ното зарЬепз
<400> 22
СЬи 11е УаЬ МеЬ ТЬг СЬп Зег Рго АЬа ТЬг Ьеи Зег УаЬ Зег Рго С1у
1 5 10 15
СЬи Агд АЬа ТЬг Ьеи Зег СуЗ Агд АЬа Зег С1п Зег УаЬ Зе Γ- Зег Аеп
20 25 ΟΟ
Ьеи АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу 61п АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
114
Туг СЬу АЬа Зег ТНг Агд АЬа ТНг СЬу Ые Рго АЬа Агд РНе Зег С1у
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТНг С1и РНе ТЬг Ьеи ТНг Ые Зег Зег Ьеи СЬп Зег
65 70 75 80
СЬи Азр РНе АЬа УаЬ Туг Туг Суз СЬп СЬп Туг Азп Азп Тгр Рго
85 90 95
<210> 23
<211> 95
<212> БЕЛОК
<213> Ногпо аарЬепз
<400> 23
СЬи Не УаЬ Ьеи ТНг СЬп Зег Рго АЬа ТНг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу
1 5 10 15
СЬи Агд АЬа ТНг Ьеи Зег Суэ Агд АЬа Зег СЬп Зег Уа1 Зег Зег Туг
20 25 30
Ьеи АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Азр АЬа Зег Азп Агд АЬа ТЬг СЬу Ые Рго АЬа Агд РНе Зег СЬу
50 55 60
&ег СЬу Зег СЬу ТНг Азр РНе ТЬг Ьеи ТНг Ые Зег Зег Ьеи СЬи Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РНе АЬа УаЬ Туг Туг Суз СЬп СЬп Агд Зег Азп Тгр Рго
85 90 95
<210> 24
<211> 13
<2Ь2> БЕЛОК
<213> Ногпо зарЬепз
<400> 24
Ьеи ТЬг РЬе СЬу СЬу СЬу ТНг Ьуэ УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
1 5 ьо
<210> 25
<211> 119
<212> БЕЛОК
<2ЬЗ> Ногао зарЬепз
<400> 25
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
115
ТЬг УаЬ Ьуз Не 20 Зег Суз Ьуз АЬа Зег 25 СЬу Туг ТЬг РЬе Зег 30 Азр РЬе
Туг МоЬ Туг Тгр ν^ι Агд 01п АЬа Рго 01у Ьуз О1у Ьеи 01и Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Ьеи Не Азр Рго СЬи Азр АЬа Аэр ТЬг Ме£ Туг АЬа СЬи Ьуз РЬе
50 55 60
Агд СЬу Агд ^аЬ ТЬг Не ТЬг АЬа Аэр ТЬг Зег ТЬг Агр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи 01и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег О1и Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азр Рго Тгр СЬи Ьеи Азп АЬа РЬе Азп УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу
ЬОО 105 110
ТЬг Ьеи ν^ι Зег ν^ι Зег Зег
115
<2Ю> ; 26
<2ΐι> : 107
<212> ] БЕЛОК
<213> Нотс зарЬепз
<400> : 26
Азр 11е СЬп МеТ ТЬг сьп Зег Рго Зег Зег УаЬ Зег АЬа Зег УаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТЬг Не ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Азр Не Зег ТЬг Тгр
20 25 30
Ьеи АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг АЬа АЬа 5ег ТЬг Ьеи СЬп Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег С1у ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг Не Азп Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп АЬа Азп Зег РЬе РЬе ТЬг
85 90 95
РЬе оьу еьу С1у ТЬг Ьуз О1и Не Ьуз Агд
100 105
116
<210> 27
<211> 241
<212> БЕЛОЕ
<213> Искусственная
<400> 27
С1п Уа1 . С1п Ьеи Уа1 ι
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг 20 25 30
Туг Ьеи Шз Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго 61у 61п С1у Ьеи 61и Тгр МеЬ 35 40 45
61у Тгр 11е Азр Рго С1и Азп С1у Азр ТЬг С1и Туг А1а Рго Ьуз РЬе 50 55 60
61п 61у Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 65 70 75 80
МеЬ 61и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95
Азп А1а Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр 01у С1п С1у ТЬг 100 105 110
МеЬ Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 61у 61у 61у 61у Зег 61у С1у 61у 61у Зег
115 120 125
О1у С1у С1у А1а Зег С1и 11е Уа1 МеЬ ТЬг С1п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи 130 135 140
Зег Уа1 Зег Рго С1у С1и Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п 145 150 155 160
Зег 11е Зег 11е Азп Ьеи Шз Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а 165 170 175
Рго Агд Ьеи Ьеи 11е Туг РЬе А1а Зег С1п Зег 11е Зег С1у 11е Рго 180 185 190
А1а Агд РЬе Зег С1у Зег Й1у Зег Й1у ТЬг Й1и РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е 195 200 205
Зег Зег Ьеи С1п Зег С1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суз С1п С1п Зег 210 215 220
- 117 026110
Азп 5ег РЬе Рго Ьеи ТЬг РЬе 61у еьу ОЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи Не Ьуз
225 230 235 240
Агд
<210> 28
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 28
СЬп УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег С1у АЬа СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго 61у АЬа
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег СЬу Суз ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго сьу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр Пе Азр Рго еьи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
611Ί С1у Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
МеЬ СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп А1а Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уаь Тгр С1у СЬп С1у ТЬг
100 105 но
МеЬ Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 29
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 29
СЬп Уа1 СЬп Ьеи Уа1 СЬп Зег СЬу АЬа СЬи νβΐ Ьуз Ьуз Рго С1у АЬа
1 5 10 15
Зег 7а1 Ьуз 7а1 Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго 61у 61п 61у Ьеи 61и Тгр МеЬ
35 40 45
118
СЬу Тгр 50 11е Азр Рго СЬи Азп 55 СЬу Азр ТНг СЬи Туг 60 АЬа Рго Ьуз РНе
СЬп СЬу Агд УаЬ ТНг Уа1 ТНг ТНг Азр ТНг Зег ТНг Зег ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
МеЬ СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТНг А1а УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТНг
100 105 ььо
МеЬ Уа1 ТНг УаЬ Зег Зег
115
<210> 30
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 30
С1п УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу А1а 31п УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа 8ег О1у Туг ТНг РНе ТНг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи ΗΪ3 Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго С1у СЬп С1у Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр Не Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТНг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РНе
50 55 60
С1п СЬу Агд УаЬ ТНг МеЬ ТНг ТНг Азр ТНг Зег ТНг Зег ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
МеЬ СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТНг А1а УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РНе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТНг
100 105 ЬЬО
МеЬ УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег
115
<210> 31
<211> 118
<212> БЕЛОК
119
<213> 1 Искусственная
<400> ЗЬ
СЬп УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег 61у АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго С1у АЬа
1 5 ЬО 15
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз А1а Зег СЬу Туг ТЬг Ьеи ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп А1а Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр МеП
35 40 45
С1у Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп С1у Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг Ме£ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеИ СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп С1у АЬа
100 Ь05 но
Ме1 УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 32
<211> 108
<212> : БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 32
СЬи 11е УаЬ МеИ ТЬг СЬп Зег Рго АЬа ТЬг Ьеи Зег УаЬ Зег Рго СЬу
1 5 10 15
СЬи Агд АЬа ТЬг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег 11е Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег СЬу Ые Рго АЬа Агд РЬе РЬе СЬу
50 55 60
Зег С1у Зег СЬу ТЬг СЬи РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1п Зег
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа УаЬ Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
120
ТЬг РЬе 61у 61у 61у ТЬг Ьуэ УаЬ СЬи 1Ье Ьуз Агд 100 105 <210> 33 <211> 118 <212> ВЕЛОК <213> Искусственная <400> 33
С1п 1 УаЬ С1п Ьеи УаЬ 5 С1п Зег С1у АЬа 61и ЬО Уа1 Ьуз Ьуз Рго 61у 15 А1а
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр МеД
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи НЬз АЬа РГО Ьуз РМе
50 55 60
С1п СЬу Агд Уа1 ТЬг Мер ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Мер СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
МеЬ Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 34
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 34
61 п УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу А1а
1 5 10 15
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд 61п АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр МеД
35 40 45
121
СЬу Тгр 50 11е Азр Рго СЬи Азь 55 61у Азр ТЬг С1и Зег 60 А1а Рго Ьуз РЬе
61η 01у Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Меь 61и Ьеи Агд 5ег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп А1а Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр 61у 6ЬП 61у ТЬг
100 105 110
МеЬ УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 35
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 35
СЬп УаЬ СЬп Ьеи Уа1 СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
5ег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи Шз Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61 п СЬу Агд УаЬ ТЬг МеЬ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ме1 СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 но
Ме1 Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <21ΰ> 36 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
122 <400> 36
СЬп 1 УаЬ СЬп Ьеи УаЬ 5 СЬп Зег СЬу АЬа СЬи 10 УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 АЬа
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Меб
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг Меб ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Меб СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп А1а Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
Меб УаЬ ТЬг УаЬ Рго Зег
115 <210> 37 <2Ы> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> : 37
СЬи Не УаЬ Меб ТЬг СЬп Зег Рго АЬа ТЬг Ьеи Зег УаЬ Зег Рго СЬу
1 5 10 15
СЬи Агд АЬа ТЬг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег 11е Зег 11е Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег СЬп Зег Не Зег СЬу Не Рго АЬа Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг СЬи РЬе ТЬг Ьеи ТЬг ТЬг Зег Зег Ьеи СЬп Зег
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа УаЬ Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
- 123
ТНг РНе СЬу Е1у 61у ТНг Ьуз 17а1 С1и 11е Ьуз Агд 100 105 <210> 38 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 38
СЬп 1 17а 1 61п Ьеи 17а 1 5 61п Зег СЬу АЬа СЬи 10 УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 АЬа
Зег 17а1 Ьуз 17а1 Зег Суз Ьуз АЬа Зег 61у Туг ТНг Ьеи ТНг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи Шз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Мей
35 40 45
61 у Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТНг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд Уа1 ТНг Мей ТНг ТНг Азр ТНг Зег ТНг Зег ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
Мей С1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТНг АЬа 17а 1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РНе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп С1у ТНг
100 105 но
Мей Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег
115
<210> 39
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 39
СЬп Уа1 СЬп Ьеи 17а 1 СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз 17а 1 Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТНг РНе ТНг Азр Туг
20 25 30
Туг Мей ΗΪ3 Тгр УаЬ Агд 61п АЬа Рго еьу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Мей
35 40 45
СЬу Тгр Не Азр Ргс СЬи Азп 61у Азр ТНг 6Ьи Туг АЬа Рго Ьуз РНе
55 60
124
С1п 65 С1у Агд Уа1 ТЬг МеЬ 70 ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег 75 ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 80
МеЬ О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Туг Туг Суз
85 90 95
Азп А1а Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр С1у С1п 61у ТЬг
100 105 110
МеЬ Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 40
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 40
С1п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и Уа1 С1и Ьуз Рго 61у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи Шз Тгр Уа1 Агд αΐη А1а Рго С1у αΐη С1у Ъеи С1и Тгр МеЬ
35 40 45
С1у Тгр 11е Азр Рго С1и Азп Е1у Азр ТЬг С1и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
С1п С1у С1у Уа1 ТЬг Ме£ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ С1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп А1а Азп Ьуз 61и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр 61у 61п 61у ТЬг
100 105 110
МеЬ Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 41
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 41
125
СЬп 1 УаЬ СЬп Ьеи УаЬ 5 СЬп Зег СЬу АЬа СЬи 10 УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 АЬа
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТНг РНе ТНг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Агд СЬу Ьеи СЬи Тгр МеГ
35 40 45
СЬу Тгр 1Ье Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТНг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РНе
50 55 60
С1п СЬу Агд УаЬ ТНг МеГ ТНг ТНг Азр ТНг Зег ТНг Зег ТНг АЬа Туг
65 20 25 80
МеГ СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТНг АЬа Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РНе Азр Уа1 Тгр СЬу СЬп СЬу ТНг
100 105 110
МеГ УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег
115
<210> 42
<211> 108
<212> : БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 42
СЬи Не УаЬ МеГ ТНг СЬп Зег Рго АЬа ТНг Ьеи Зег УаЬ Зег Рго СЬу
1 5 10 Ь5
СЬи Агд АЬа ТНг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Не Зег 1Ье Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи 1Ье
35 40 45
Туг РНе АЬа Зег СЬп Зег ТНг Зег СЬу 1Ье Рго АЬа Агд РНе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТНг СЬи РНе ТНг Ьеи ТНг 1Ье Зег Зег Ьеи СЬп Зег
65 20 25 80
СЬи Азр РНе АЬа УаЬ Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РНе Рго Ьеи
85 90 95
ТНг РНе СЬу СЬу СЬу ТНг Ьуз Уа1 СЬи 1Ье Ьуз Агд
100 105
126 <210> 43 <2Ы> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 43
СЬп 1 Уа1 СЬп Ьеи Ьеи 5 СЬп 5ег СЬу АЬа СЬи 10 УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 АЬа
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа 5ег СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
С1п СЬу Агд УаЬ ТЬг МеЬ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
МеЬ СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ыо
МеЬ УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 44
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 44
СЬп УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг АЬа РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
- 127
61η 65 С1у Агд УаЬ ТЬг МеЬ 70 ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег 75 ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 80
МеЬ С1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп А1а Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр С1у С1п С1у ТЬг
100 105 110
МеЬ Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 45
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 45
61п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег 01у А1а 61и Уа1 Ьуз Ьуз Рго 61у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг А1а РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у С1п С1у Ьеи С1и Тгр МеЬ
35 40 45
С1у Тгр 11е Азр Рго 61и Азп 61у Азр ТЬг 61и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
С1п 61у Агд Уа1 Зег МеЬ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ С1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп А1а Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр 61у 61п б1у ТЬг
100 105 110
МеЬ Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 46
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 46
С1и 11е Уа1 МеЬ ТЬг 61п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Уа1 Зег Рго 61у
1 5 10 15
128 026110
СЬи Агд АЬа ТНг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬи С1п Ьуз Рго СЬу С1п АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РНе АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег СЬу Ые Рго АЬа Агд РНе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТНг СЬи РНе ТНг Ьеи ТНг Ые Зег Зег Ьеи СЬп Зег
65 70 75 80
СЬи Азр РНе АЬа УаЬ НЬз Туг Суз СЬп С1п Зег Азп Зег РНе Рго Ьеи
85 90 95
ТНг РНе СЬу СЬу СЬу ТНг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
ЬОО 105
<210> 47
<2 Ы > 108
<212> : БЕЛОК
<2ьз> : Искусственная
<400> 47
СЬи Ые УаЬ МеЬ ТНг С1п Зег Рго АЬа ТНг Ьеи Зег УаЬ Зег Рго СЬу
1 5 10 15
СЬи Агд АЬа ТНг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго СЬу С1п АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РНе АЬа Агд СЬп Зег 1Ье Зег СЬу Ые Рго АЬа Агд РНе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТНг СЬи РНе ТНг Ьеи ТНг Ые Зег Зег Ьеи СЬп Зег
65 70 75 80
СЬи Азр РНе АЬа УаЬ Туг Туг Суз С1п С1п Зег Азп Зег РНе Рго Ьеи
85 90 95
ТНг РНе СЬу СЬу СЬу ТНг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
100 105
<210> 48
<2 Ы > 108
<212> : БЕЛОК
129 <213> Искусственная <400> 48
С1и 1 Ые Уа1 МеЬ ТНг 5 СЬп Зег Рго АЬа ТНг 10 Ьеи Зег МеЬ Зег Рго 15 СЬу
СЬи Агд АЬа ТНг Ней Зег Су® Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РНе АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег СЬу Ые Рго АЬа Агд РНе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТНг СЬи РНе ТНг Ьеи ТНг Ые Зег Зег Ьеи СЬп Зег
65 70 75 80
СЬи Азр РНе АЬа УаЬ Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РНе Рго Ьеи
85 90 95
ТНг РНе СЬу СЬу СЬу ТНг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
100 105 <210> 49 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> · 49
СЬи Ые УаЬ МеЬ ТНг СЬп Зег Рго АЬа ТНг Ьеи Зег Уа1 Зег Рго СЬу
1 5 10 15
СЬи Агд АЬа ТНг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РНе АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег СЬу Ые Рго АЬа Агд РНе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТНг С1и РНе ТНг Ьеи ТНг Ые Зег Зег Ьеи С1п Зег
65 70 75 80
СЬи СЬу РНе АЬа УаЬ Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РНе Рго Ьеи
85 90 95
ТНг РНе СЬу СЬу СЬу ТНг Ьуз Уа1 СЬи Ые Ьуз Агд
100 105
- 130 026110 <210> 50 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 50
С1и 1 Не Уа1 МеЬ ТЬг 5 С1п Зег Рго АЬа ТЬг 10 Ьеи Зег Уа1 Зег Рго 15 СЬу
СЬи Агд АЬа ТНг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи Ηίβ Тгр Туг 61п 61п Ьуэ Рго С1у СЬп А1а Рго Агд Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг РНе А1а Зег СТп Зег Пе Зег 61у Ые Рго А1а Агд РЬе Зег Зег
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТНг 61и РНе ТНг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1п Зег
65 70 75 80
С1и Аер РНе А1а Уа1 Туг Туг Суз С1п С1п Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТНг РНе СТу СТу СТу ТНг Ьуз Уа! С1и 11е Ьуз Агд
100 105 <210> 51 <211> 103 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> 51 Зег Рго А1а ТЬг 10 Ьеи Зег УаЬ Зег Рго 15 С1у
61и 1 Ые УаЬ Мен ТНг 5 С1п
СЬи Агд А1а ТНг 20 Ьеи Зег Суз Агд АЬа 25 Рго С1п Зег Ые Зег 30 Ые Аэп
Ьеи Шз Тгр 35 Туг С1п С1п Ьуз Рго 40 С1у С1п А1а Рго Агд 45 Ьеи Ьеи 11е
Туг РНе 50 А1а Зег СЬп Зег Ые 55 Зег 61у Ые Рго А1а 60 Агд РЬе Зег С1у
Зег 65 СТу Зег СТу ТНг СЬи 70 РНе ТНг Ьеи ТЬг Ые 75 Зег Зег Ьеи СЬп Зег 80
- 131
С1и Азр РЬе А1а УаЬ 85 Туг Туг Суз СЬп СЬп 90 Зег Азп Зег РЬе Рго 95 Ьеи
ТЬг РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
100 105
<210> 52
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 52
С1и Не Уа1 МеЬ ТЬг СЬп Зег Рго АЬа ТЬг Ьеи Зег УаЬ Зег Рго СЬу
1 5 10 15
СЬи Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег Агд Зег 11е Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи ΗΪ3 Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп А1а Рго Агд Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РЬе А1а Зег СЬп Зег Ые Зег СЬу 11е Рго АЬа Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег С1у ТЬг СЬи РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Ые Зег Зег Ьеи СЬп Зег
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа Уа1 Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1у СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи 11е Ьуз Агд
100 105
<210> 53
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 53
С1п УаЬ С1п Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Агд СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
61у Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи НЬз АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
132 026110
61η 65 С1у Агд Уа1 ТЬг Ме! 70 ТЬг ТЬг Азр ТНг Зег 75 ТЬг Зег ТНг А1а Туг 80
Ме! С1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп А1а Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр νβΐ Тгр О1у О1п О1у ТНг
100 105 110
Ме! 7а1 ТЬг Уа! Зег Зег
115
<210> 54
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 54
С1п Уа1 61п Ьеи Уа1 61п Зег 61у АЬа СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у АЬа
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз АЬа Зег 01у Туг А1а РНе ТНг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи Шз Тгр Уа1 Агд 61п А1а Рго 61у 61п 61у Ьеи 61и Тгр Ме!
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго 61и Азп 61у Азр ТНг С1и Зег А1а Рго Ьуз РНе
50 55 60
Οίη 61у Агд Уа1 ТНг Ме! ТНг ТЬг Азр ТПг Зег ТНг Зег ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
Ме! 61и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп А1а Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РНе Азр Уа1 Тгр 01у С1п СЬу ТПг
100 105 110
Ме! Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег
115
<210> 55
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 55
- 133
61η 1 Уа1 С1п Ьеи Уа1 5 С1п Зег СЬу АЬа 61и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 АЬа
Зег УаЬ Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг АЬа РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи ΗΪ3 Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу С1п СЬу Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи НЬз АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61 η СЬу Агд Уа1 Зег Мек ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Мек СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ыо
Мек УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 56
<211> 118
<212> 1 БЕЛОК
<213> I Искусственная
<400> 56
61 п Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег СЬу АЬа СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег УаЬ Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг Ьеи ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи ΗΪ5 Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи НЬз АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд Уа1 ТЬг Мек ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Мек СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
- 134
МеД УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 <210> 57 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 57
61 η 1 УаЬ 61п Ьеи УаЬ 5 СЬп Зег СЬу АЬа СЬи 10 УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 АЬа
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа Зег 61у Туг ТНг Ьеи ТНг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд 61п АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр МеД
35 40 45
61у Тгр Не Азр Рго СЬи Азп 61у Азр ТНг 61и Зег АЬа Рго Ьуз РНе
50 55 60
СЬп 61у Агд УаЬ ТНг МеЬ ТНг ТНг Азр ТНг Зег ТНг Зег ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
МеЬ 61и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТНг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп А1а Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РНе Азр УаЬ Тгр 61у 61п 61у ТНг
100 105 110
МеЬ Уа1 ТНг УаЬ Зег Зег
115
<210> 58
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 58
61п УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег 61у АЬа 6Ьи УаЬ Ьуз Ьуз Рго 61у АЬа
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз А1а Зег СЬу Туг ТНг РНе ТНг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Агд СЬу Ьеи СЬи Тгр МеД
35 40 45
- 135
С1у Тгр 50 11е Азр Рго С1и Азп 55 С1у Азр ТЬг СЬи Зег 60 АЬа Рго Ьуз РЬе
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг Мей ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
МеЬ СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр С1у СЬп С1у ТЬг
100 105 но
Мей УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 59
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 59
СЬп УаЬ О1п Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
5ег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз АЬа Зег ОЬу Туг АЬа РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Мей
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи НЬз АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд Уа1 ТЬг Мей ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Мей СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр ОЬу СЬп еьу ТЬг
100 105 110
Мей УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210> 60 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
- 136 <400> 60
СЬп УаЬ 1 СЬп Ьеи УаЬ 5 СЬп Зег СЬу АЬа СЬи 10 УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 АЬа
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг АЬа РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Меп
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Зег АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ Зег МеП ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
МеП СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
МеХ УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 61
<2 Ь Ь> 118
<212> : БЕЛОК
<2ЬЗ> ] Искусственная
<400> 61
СЬп УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
Ь 5 10 15
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг АЬа РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Агд СЬу Ьеи СЬи Тгр Меп
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг Меп ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
МеП СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
137 026110
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу С1п СЬу ТЬг
100 105 ЫО
Мек УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 62
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 62
С1п УаЬ С1п Ьеи УаЬ С1п 5ег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа 5ег СЬу Туг ТЬг Ьеи ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Агд СЬу Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг Мек ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Мек СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу С1п СЬу ТЬг
ЬОО 105 ЫО
Мек УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 63
<211> 568
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 63
Ые Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр УаЬ Туг УаЬ УаЬ СЬи Ьеи Азр Тгр Туг
1 5 10 15
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи Мек УаЬ УаЬ Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго СЬи
20 25 30
СЬи Азр СЬу Ые ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр СЬп 5ег 5ег СЬи УаЬ Ьеи СЬу
35 40 45
138 026110
Зег СЬу Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг 11е СЬп УаЬ Ьуз СЬи РЬе СЬу Азр АЬа СЬу 50 55 60
СЬп Туг ТЬг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи УаЬ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи 65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу 1Ье Тгр Зег ТЬг Азр 1Ье Ьеи Ьуз 85 90 95
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз ЬОО 105 ЫО
Азп Туг Зег СЬу Агд РЬе ТЬг Суз Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТЬг Не Зег ТЬг 115 120 125
Азр Ьеи ТЬг РЬе Зег УаЬ Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго СЬп 130 135 140
СЬу УаЬ ТЬг Суз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд УаЬ Агд СЬу 145 150 155 160
Азр Азп Ьуз СЬи Туг СЬи Туг Зег УаЬ СЬи Суз СЬп СЬи Азр Зег АЬа 165 170 175
Суз Рго АЬа АЬа СЬи СЬи Зег Ьеи Рго 11е СЬи УаЬ Меб УаЬ Азр АЬа 180 185 190
УаЬ НЬз Ьуз Ьеи Ьуз Туг СЬи Азп Туг ТЬг Зег Зег РЬе РЬе Не Агд 195 200 205
Азр Г1е Не Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи СЬп Ьеи Ьуз Рго Ьеи 210 215 220
Ьуз Азп Зег Агд СЬп УаЬ СЬи УаЬ Зег Тгр СЬи Туг Рго Азр ТЬг Тгр 225 230 235 240
Зег ТЬг Рго НЬз Зег Туг РЬе Зег Ьеи ТЬг РЬе Суз УаЬ СЬп УаЬ СЬп 245 250 255
СЬу Ьуз Зег Ьуз Агд СЬи Ьуз Ьуз Азр Агд УаЬ РЬе ТЬг Азр Ьуз ТЬг 260 265 270
Зег АЬа ТЬг УаЬ Не Суз Агд Ьуз Азп АЬа Зег Не Зег УаЬ Агд АЬа 275 280 285
СЬп Азр Агд Туг Туг Зег Зег Зег Тгр Зег СЬи Тгр АЬа Зег УаЬ Рго 290 295 300
139
140 026110
Ьуз Ьеи Ые Зег СЬи СЬи Азр Ьеи 565 <2Ь0> 64 <211> 306 <2Ь2> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 64
Ые Ь Тгр СЬи Ьеи Ьуз 5 Ьуз Азр Уа1 Туг Уа1 УаЬ 10 СЬи Ьеи Азр Тгр Туг 15
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи МеГ УаЬ УаЬ Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго СЬи
20 25 30
СЬи Азр СЬу Ые ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр С1п Зег Зег 61и Уа1 Ьеи СЬу
35 40 45
Зег СЬу Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг Ые СЬп УаЬ Ьуз СЬи РЬе СЬу Азр АЬа СЬу
50 55 60
СЬп Туг ТЬг Суз Шз Ьуз С1у СЬу СЬи УаЬ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи
65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу Ые Тгр Зег ТЬг Азр Ые Ьеи Ьуз
85 90 95
Азр СЬп Ьуз С1и Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз
100 105 ыо
Азп Туг Зег СЬу Агд РЬе ТЬг Суз Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТЬг Ые Зег ТЬг
115 120 125
Азр Ьеи ТЬг РЬе Зег УаЬ Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго СЬп
130 135 140
СЬу УаЬ ТЬг Суз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд УаЬ Агд СЬу
145 150 155 160
Азр Азп Ьуз СЬи Туг СЬи Туг Зег Уа1 С1и Суз СЬп 61и Азр Зег А1а
165 170 175
Суз Рго А1а А1а О1и СЬи Зег Ьеи Рго 11е СЬи УаЬ МеГ УаЬ Азр АЬа
180 185 190
УаЬ НЬз Ьуз Ьеи Ьуз Туг СЬи Азп Туг ТЬг Зег Зег РЬе РЬе 11е Агд
195 200 205
141
Азр 11е 11е Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи С1п Ьеи Ьуз Рго Ьеи
210 215 220
Ьуз Азп Зег Агд 01п Ча1 <31и Ча1 Зег Тгр 61и Туг Рго Азр ТЬг Тгр
225 230 235 240
Зег ТНг Рго Шз Зег Туг РЬе Зег Ьеи ТЬг РЬе Агд Уа1 С1п Уа1 61п
245 250 255
С1у Ьуз Зег Ьуз Агд 61и Ьуз Ьуз Азр Агд Ча1 РЬе ТЬг Азр Ьуз ТЬг
260 265 270
Зег А1а ТЬг Ча1 11е Суз Агд Ьуз Азп А1а Зег 11е Зег Уа1 Агд А1а
275 280 285
61п Азр Агд Туг Туг Зег Зег Зег Тгр Зег 61и Тгр А1а Зег Ча1 Рго
290 295 300
Суз Зег 30 5
<210 65
<211> 34
<212> БЕЛОК
<213> Ното 5ар1еп5
<400> 65
Ча1 С1п Ча1 61п 61у Ьуз Зег Ьуз Агд С1и Ьуз Ьуз Азр Агд Ча1 РЬе
1 5 10 15
ТЬг Азр Ьуз ТЬг Зег А1а ТЬг Ча1 11е Суз Агд Ьуз Азп А1а Зег 11е
20 25 30
Зег Уа!
<210 <211> <212> <213> <400> 11е Тгр 1 66 497 БЕЛОК Искусственная Туг Ча1 10 Ча1 С1и Ьеи Азр Тгр 15 Туг
66 Ьуз 5 Ьуз Азр Ча1
С1и Ьеи
Рго Азр А1а Рго С1у С1и МеЬ Ча1 Ча1 Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго С1и
20 25 30
С1и Азр 01у 11е ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр 61п Зег Зег 61и Ча1 Ьеи 61у
35 40 45
142
- 143 026110
Суз 305 Зег СЬу Зег СЬу Зег 310 Зег Агд СЬу СЬу Зег 315 СЬу Зег СЬу СЬу Зег 320
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег Ьуз Ьеи Агд АЬа Уа1 Рго СЬу СЬу Зег Зег Рго
325 330 335
АЬа Тгр ТНг СЬп Суз СЬп СЬп Ьеи Зег СЬп Ьуз Ьеи Суз ТНг Ьеи АЬа
340 345 350
Тгр Зег АЬа НЬз Рго Ьеи УаЬ СЬу НЬз МеН Азр Ьеи Агд СЬи СЬи СЬу
355 360 365
Азр СЬи СЬи ТНг ТНг Азп Азр Уа1 Рго НЬз Ые СЬп Суз СЬу Азр СЬу
370 375 380
Суз Азр Рго СЬп СЬу Ьеи Агд Азр Азп Зег СЬп РНе Суз Ьеи СЬп Агд
385 390 395 400
Ые НЬз СЬи СЬу Ьеи Ые РЬе Туг СЬи Ьуз Ьеи Ьеи СЬу Зег Азр Ые
405 410 415
РНе ТНг СЬу СЬи Рго Зег Ьеи Ьеи Рго Азр Зег Рго УаЬ СЬу СЬп Ьеи
420 425 430
НЬз АЬа Зег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег СЬп Ьеи Ьеи СЬп Рго СЬи СЬу НЬз
435 440 445
НЬз Тгр СЬи ТНг СЬп СЬп Ые Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег СЬп Рго Тгр
450 455 460
61 η Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РНе Ьуз Ые Ьеи Агд Зег Ьеи СЬп АЬа РНе
465 470 475 480
Уа1 АЬа Уа1 АЬа АЬа Агд УаЬ РЬе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТНг Ьеи Зег
485 490 495
Рго
<210> 67
<211> 497
<212> 1 БЕЛОК
<213> ] Искусственная
<400> 67
Ые Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр Уа1 Туг Уа1 Уа1 СЬи Ьеи Азр Тгр Туг
10 15
- 144
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи МеЬ УаЬ УаЬ Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго СЬи 20 25 30
СЬи Азр СЬу 11е ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр СЬп Зег Зег СЬи Уа1 Ьеи СЬу 35 40 45
Зег СЬу Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг Ые СЬп УаЬ Ьуз СЬи РЬе СЬу Азр АЬа СЬу 50 55 60
СЬп Туг ТЬг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи νβΐ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи 65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу 1Ье Тгр Зег ТЬг Азр 1Ье Ьеи Ьуз 85 90 95
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз 100 105 ЫО
Азп Туг Зег СЬу Агд РЬе ТЬг Суз Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТЬг Ые Зег ТЬг 115 120 125
Азр Ьеи ТЬг РЬе Зег УаЬ Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго СЬп 130 135 140
СЬу УаЬ ТЬг Суз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд УаЬ Агд СЬу 145 150 155 160
Азр Азп Ьуз СЬи Туг СЬи Туг Зег УаЬ СЬи Суз СЬп СЬи Азр Зег АЬа 165 170 175
Суз Рго АЬа АЬа СЬи СЬи Зег Ьеи Рго Ые СЬи УаЬ МеЬ УаЬ Азр АЬа 180 185 190
УаЬ НЬз Ьуз Ьеи Ьуз Туг СЬи Азп Туг ТЬг Зег Зег РЬе РЬе Ые Агд 195 200 205
Азр Ые Ые Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи СЬп Ьеи Ьуз Рго Ьеи 210 215 220
Ьуз Азп Зег Агд СЬп УаЬ СЬи УаЬ Зег Тгр СЬи Туг Рго Азр ТЬг Тгр 225 230 235 240
Зег ТЬг Рго НЬз Зег Туг РЬе Зег Ьеи ТЬг РЬе Суз Уа1 АЬа Уа1 СЬп 245 250 255
СЬу Ьуз Зег Ьуз Агд СЬи Ьуз Ьуз 260
Азр Агд УаЬ 265
РЬе ТЬг Азр Ьуз ТЬг 270
- 145 026110
Зег АЬа ТЬг УаЬ 275 11е Суз Агд Ьуз Азп А1а 280 Зег 11е Зег 285 УаЬ Агд АЬа
СЬп Азр Агд Туг Туг Зег Зег Зег Тгр Зег СЬи Тгр АЬа Зег УаЬ Рго
290 295 300
Суз Зег СЬу Зег СЬу Зег Зег Агд СЬу СЬу Зег СЬу Зег СЬу СЬу Зег
305 310 315 320
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег Ьуз Ьеи Агд АЬа УаЬ Рго СЬу СЬу Зег Зег Рго
325 330 335
АЬа Тгр ТЬг СЬп Суз СЬп СЬп Ьеи Зег СЬп Ьуз Ьеи Суз ТЬг Ьеи АЬа
340 345 350
Тгр Зег АЬа НЬз Рго Ьеи УаЬ СЬу НЬз Меб Азр Ьеи Агд СЬи СЬи СЬу
355 360 365
Азр СЬи СЬи ТЬг ТЬг Азп Азр УаЬ Рго НЬз Не СЬп Суз СЬу Азр СЬу
370 375 380
Суз Азр Рго СЬп СЬу Ьеи Агд Азр Азп Зег СЬп РЬе Суз Ьеи СЬп Агд
385 390 395 400
Не НЬз СЬп СЬу Ьеи Не РЬе Туг СЬи Ьуз Ьеи Ьеи СЬу Зег Азр Не
405 410 415
РЬе ТЬг СЬу СЬи Рго Зег Ьеи Ьеи Рго Азр Зег Рго УаЬ СЬу СЬп Ьеи
420 425 430
НЬз АЬа Зег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег СЬп Ьеи Ьеи СЬп Рго СЬи СЬу НЬз
435 440 445
НЬз Тгр СЬи ТЬг СЬп СЬп 11е Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег СЬп Рго Тгр
450 455 460
СЬп Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РЬе Ьуз 1Ье Ьеи Агд Зег Ьеи СЬп АЬа РЬе
465 470 475 480
УаЬ АЬа УаЬ АЬа АЬа Агд УаЬ РЬе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег
485 490 495
Рго <21ΰ> 68 <2Ы> 497 <212> БЕЛОК
146 <213> Искусственная <400> 68
11е 1 Тгр СЬи Ьеи Ьуз 5 Ьуз Азр УаЬ Туг УаЬ 10 УаЬ СЬи Ьеи Азр Тгр 15 Туг
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи МеЬ УаЬ УаЬ Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго СЬи
20 25 30
61и Азр СЬу Ые ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр СЬп 5ег Зег СЬи УаЬ Ьеи СЬу
35 40 45
Зег СЬу Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг Ые СЬп Уа1 Ьуз СЬи РЬе СЬу Азр АЬа СЬу
50 55 60
СЬп Туг ТЬг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи УаЬ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи
65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу Ые Тгр Зег ТЬг Азр Ые Ьеи Ьуз
35 90 95
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз
100 105 110
Азп Туг Зег СЬу Агд РЬе ТЬг Суз Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТЬг Ые Зег ТЬг
115 120 125
Азр Ьеи ТЬг РЬе Зег УаЬ Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго СЬп
130 135 140
СЬу УаЬ ТЬг Суз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд УаЬ Агд СЬу
145 150 155 160
Азр Азп Ьуз СЬи Туг СЬи Туг Зег УаЬ СЬи Суз СЬп СЬи Азр Зег АЬа
165 170 175
Суз Рго АЬа АЬа СЬи СЬи Зег Ьеи Рго Ые СЬи Уа1 Меб Уа1 Азр АЬа
180 185 190
Уа1 НЬз Ьуз Ьеи Ьуз Туг СЬи Азп Туг ТЬг Зег Зег РЬе РЬе Ые Агд
195 200 205
Азр Ые 11е Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи СЬп Ьеи Ьуз Рго Ьеи
210 215 220
Ьуз Азп Зег Агд СЬп УаЬ СЬи УаЬ Зег Тгр СЬи Туг Рго Азр ТЬг Тгр
225 230 235 240
147 026110
- 148
Рго
<210> ' 69
<211> 497
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> ' 59
Ые Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр УаЬ Туг УаЬ УаЬ СЬи Ьеи Азр Тгр Туг
1 5 10 15
Рго Азр АЬа Рго С1у СЬи МеЬ УаЬ УаЬ Ьеи ТНг Суз Аэр ТНг Рго 61и
20 25 30
СЬи Азр СЬу Ые ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр СЬп Зег Зег СЬи Уа1 Ьеи СЬу
35 40 45
Зег СЬу Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг Ые СЬп Уа1 Ьуз СЬи РЬе СЬу Азр АЬа СЬу
50 55 60
СЬп Туг ТЬг Суэ НЬз Ьуэ СЬу СЬу СЬи УаЬ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи
65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу Ые Тгр Зег ТЬг Азр Ые Ьеи Ьуз
85 90 95
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуэ ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз
100 105 110
Азп Туг Зег СЬу Агд РЬе ТЬг Суз Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТЬг Ые Зег ТЬг
115 120 125
Азр Ьеи ТЬг РЬе Зег Уа1 Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго СЬп
130 135 140
СЬу Уа1 ТЬг Суэ СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд Уа1 Агд СЬу
145 150 155 160
Азр Азп Ьуз СЬи Туг СЬи Туг Зег Уа1 СЬи Суэ СЬп СЬи Азр Зег АЬа
165 170 175
Суз Рго АЬа АЬа СЬи СЬи Зег Ьеи Рго Ые СЬи Уа1 МеЬ Уа1 Азр АЬа
180 185 190
Уа1 ΗΪ5 Ьуз Ьеи Ьуз Туг СЬи Азп Туг ТЬг Зег Зег РЬе РЬе 11е Агд
195 200 205
Азр Ые Ые Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи С1п Ьеи Ьуз Рго Ьеи
210 215 220
149 026110
Ьуз Азп Зег Агд СЬп УаЬ СЬи УаЬ Зег Тгр 6Ьи Туг Рго Азр ТНг Тгр
225 230 235 240
Зег ТНг Рго НЬ® Зег Туг РНе Зег Ьеи ТНг РНе Су® УаЬ СЬп УаЬ СЬп 245 250 255
АЬа Ьуз Зег Ьуз Агд 61и Ьуз Ьуз Азр Агд УаЬ РНе ТНг Азр Ьуз ТНг 260 265 270
Зег АЬа ТНг УаЬ Ые Суз Агд Ьуз Азп АЬа Зег Ые Зег УаЬ Агд АЬа 275 280 285
СЬп Азр Агд Туг Туг Зег Зег Зег Тгр Зег СЬи Тгр АЬа Зег УаЬ Рго 290 295 300
Суз Зег СЬу Зег СЬу Зег Зег Агд СЬу СЬу Зег СЬу Зег СЬу СЬу Зег 305 310 315 320
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег Ьуз Ьеи Агд АЬа УаЬ Рго СЬу СЬу Зег Зег Рго 325 330 335
АЬа Тгр ТНг СЬп Суз СЬп СЬп Ьеи Зег СЬп Ьуз Ьеи Суз ТНг Ьеи АЬа 340 345 350
Тгр Зег АЬа НЬз Рго Ьеи УаЬ СЬу НЬз Мек Азр Ьеи Агд СЬи СЬи СЬу 355 360 365
Азр СЬи СЬи ТНг ТНг Азп Азр УаЬ Рго НЬз Ые СЬп Су® СЬу Азр СЬу 370 375 380
Суз Азр Рго СЬп СЬу Ьеи Агд Азр Азп Зег СЬп РНе Суз Ьеи СЬп Агд 385 390 395 400
Ые НЬз СЬп СЬу Ьеи Ые РНе Туг СЬи Ьуз Ьеи Ьеи СЬу Зег Азр Ые 405 410 415
РНе ТНг СЬу СЬи Рго Зег Ьеи Ьеи Рго Азр Зег Рго УаЬ СЬу СЬп Ьеи 420 425 430
НЬз АЬа Зег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег СЬп Ьеи Ьеи СЬп Рго СЬи СЬу НЬз 435 440 445
НЬз Тгр СЬи ТНг С1п С1п Ые Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег С1п Рго Тгр 450 455 460
СЬп Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РНе Ьуз Ые Ьеи Агд Зег Ьеи 61п АЬа РНе 465 470 475 480
150
Уа1 Рго АЬа Уа1 АЬа АЬа Агд 485 Уа1 РЬе АЬа НЬз 490 СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи 495 Зег
<210> ' <211> <212> : <213> 1 <400> ' 70 497 БЕЛОК Искусственная 70
11е 1 Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз 5 Азр Уа1 Туг Уа1 10 Уа1 СЬи Ьеи Азр Тгр 15 Туг
Рго Азр АЬа Рго 20 СЬу СЬи МеЬ УаЬ УаЬ 25 Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг 30 Рго СЬи
С1и Азр СЬу 35 11е ТЬг Тгр ТЬг Ьеи 40 Азр СЬп Зег Зег СЬи 45 Уа1 Ьеи СЬу
Зег СЬу 50 Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг 11е 55 СЬп Уа1 Ьуз СЬи РЬе 60 СЬу Азр АЬа СЬу
СЬп 65 Туг ТЬг Суз НЬз Ьуз 70 СЬу СЬу СЬи Уа1 Ьеи 75 Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз С1и 85 Азр СЬу 11е Тгр 90 Зег ТЬг Азр 11е Ьеи 95 Ьуз
Азр СЬп Ьуз СЬи 100 Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг 105 РЬе Ьеи Агд Суз СЬи 110 АЬа Ьуз
Азп Туг Зег 115 СЬу Агд РЬе ТЬг Суз 120 Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТЬг 125 11е Зег ТЬг
Азр Ьеи 130 ТЬг РЬе Зег Уа1 Ьуз 135 Зег Зег Агд СЬу Зег 140 Зег Азр Рго СЬп
СЬу 145 УаЬ ТЬг Суз СЬу АЬа 150 АЬа ТЬг Ьеи Зег АЬа 155 СЬи Агд УаЬ Агд СЬу 160
Азр Азп Ьуз СЬи Туг СЬи 165 Туг Зег Уа1 СЬи 170 Суз СЬп СЬи Азр Зег 175 А1а
Суз Рго АЬа АЬа 180 СЬи СЬи Зег Ьеи Рго 185 Ые СЬи Уа1 МеЬ Уа1 190 Азр А1а
151
152 026110
ΗΪ3 Тгр 450 СЬи ТНг СЬп СЬп 11е 455 Рго Зег Ьеи Зег Рго 460 Зег СЬп Рго Тгр
СЬп Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РНе Ьуз 1Ье Ьеи Агд Зег Ьеи СЬп АЬа РНе
465 470 475 480
Уа1 АЬа УаЬ АЬа АЬа Агд УаЬ РНе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТНг Ьеи Зег
485 490 495
Рго <210> 71 <211> 497 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> 71
Не Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр УаЬ Туг УаЬ УаЬ СЬи Ьеи Азр Тгр Туг
1 5 10 15
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи МеД УаЬ УаЬ Ьеи ТНг Суз Азр ТНг Рго СЬи
20 25 30
СЬи Азр СЬу 11е ТНг Тгр ТНг Ьеи Азр СЬп Зег Зег СЬи УаЬ Ьеи СЬу
35 40 45
Зег СЬу Ьуз ТНг Ьеи ТНг 11е СЬп УаЬ Ьуз СЬи РНе СЬу Азр АЬа СЬу
50 55 60
СЬп Туг ТНг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи УаЬ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи
65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу 11е Тгр Зег ТНг Азр Не Ьеи Ьуз
85 90 95
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТНг РНе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз
100 105 ыо
Азп Туг Зег СЬу Агд РНе ТНг Суз Тгр Тгр Ьеи ТНг ТНг 11е Зег ТНг
115 120 125
Азр Ьеи ТНг РНе Зег УаЬ Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго СЬп
130 135 140
СЬу УаЬ ТНг Суз СЬу АЬа АЬа ТНг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд УаЬ Агд СЬу
145 150 155 160
153
Азр Азп Ьуз С1и Туг С1и Туг Зег Уа1 С1и Суз С1п С1и Азр Зег А1а 165 170 175
Суз Рго А1а А1а 61и 61и Зег Ьеи Рго 11е 61и Уа1 МеЬ Уа1 Азр А1а
180 185 190
Уа1 Н£з Ьуз Ьеи Ьуз Туг О1и Азп Туг ТЬг Зег Зег РЬе РЬе 11е Агд 195 200 205
Азр 11е 11е Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи 61п Ьеи Ьуз Рго Ьеи 210 215 220
Ьуз Азп Зег Агд С1п Уа1 С1и Уа1 Зег Тгр С1и Туг Рго Азр ТЬг Тгр 225 230 235 240
Зег ТЬг Рго Шз Зег Туг РЬе Зег Ьеи ТЬг РЬе Суз Уа1 61п Уа1 61п
245 250 255
61у Ьуз Зег А1а Агд 61и Ьуз Ьуз Азр Агд Уа1 РЬе ТЬг Азр Ьуз ТЬг
260 265 270
Зег А1а ТЬг Уа1 11е Суз Агд Ьуз Азп А1а Зег 11е Зег Уа1 Агд А1а 275 280 285
С1п Азр Агд Туг Туг Зег Зег Зег Тгр Зег С1и Тгр А1а Зег Уа1 Рго
290 295 300
Суз Зег С1у Зег 61у Зег Зег Агд С1у 61у Зег 61у Зег С1у 61у Зег 305 310 315 320
61у С1у С1у С1у Зег Ьуз Ьеи Агд А1а Уа1 Рго С1у С1у Зег Зег Рго 325 330 335
А1а Тгр ТЬг 61п Суз 61п 61п Ьеи Зег С1п Ьуз Ьеи Суз ТЬг Ьеи А1а
340 345 350
Тгр Зег А1а Н1з Рго Ьеи Уа1 С1у Н1з МеЬ Авр Ьеи Агд С1и С1и С1у 355 360 365
Азр 61и 61и ТЬг ТЬг Азп Азр Уа1 Рго ΗΪ3 11е 61п Суз 61у Азр 61у 370 375 380
Суз Азр Рго С1п 61у Ьеи Агд Азр Азп Зег С1п РЬе Суз Ьеи С1п Агд 385 390 395 400
11е ΗΪ3 С1п С1у Ьеи 11е РЬе Туг С1и Ьуз Ьеи Ьеи С1у Зег Азр 11е 405 410 415
- 154 026110
РЬе ТЬг СЬу СЬи 420 Рго Зег Ьеи Ьеи Рго 425 Азр Зег Рго УаЬ СЬу 430 СЬп Ьеи
НЬз АЬа Зег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег СЬп Ьеи Ьеи СЬп Рго СЬи СЬу НЬз
435 440 445
НЬз Тгр СЬи ТЬг СЬп СЬп Ые Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег СЬп Рго Тгр
450 455 460
СЬп Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РЬе Ьуз Ые Ьеи Агд Зег Ьеи СЬп АЬа РЬе
465 470 475 480
УаЬ АЬа УаЬ АЬа АЬа Агд УаЬ РЬе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег
485 490 495
Рго
<210> 72
<211> 497
<212> : БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> ' 72
Ые Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр УаЬ Туг УаЬ УаЬ СЬи Ьеи Азр Тгр Туг
1 5 10 15
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи МеЬ УаЬ УаЬ Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго СЬи
20 25 30
СЬи Азр СЬу Ые ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр СЬп Зег Зег СЬи УаЬ Ьеи СЬу
35 40 45
Зег СЬу Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг Ые СЬп УаЬ Ьуз СЬи РЬе СЬу Азр АЬа СЬу
50 55 60
СЬп Туг ТЬг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи УаЬ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи
65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу 11е Тгр Зег ТЬг Азр 11е Ьеи Ьуз
65 90 95
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз
100 105 110
Азп Туг Зег СЬу Агд РЬе ТЬг Суз Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТЬг Ые Зег ТЬг
115 120 125
Азр Ьеи ТЬг РЬе Зег УаЬ Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго СЬп
130 135 140
155 026110
СЬу УаЬ ТНг Суз СЬу АЬа АЬа ТНг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд УаЬ Агд СЬу 145 150 155 160
Азр Азп Ьуз СЬи Туг СЬи Туг Зег УаЬ СЬи Суз СЬп СЬи Азр Зег АЬа 165 170 175
Суз Рго АЬа АЬа СЬи СЬи Зег Ьеи Рго Не 61и Уа1 Мей Уа1 Азр АЬа 180 185 190
Уа1 НЬз Ьуз Ьеи Ьуз Туг СЬи Азп Туг ТНг Зег Зег РНе РНе ЬЬе Агд 195 200 205
Азр Не Не Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи СЬп Ьеи Ьуз Рго Ьеи 210 215 220
Ьуз Азп Зег Агд СЬп УаЬ СЬи УаЬ Зег Тгр СЬи Туг Рго Азр ТНг Тгр
225 230 235 240
Зег ТНг Рго НЬз Зег Туг РНе Зег Ьеи ТНг РНе Суз УаЬ СЬп УаЬ СЬп 245 250 255
СЬу Ьуз Зег Ьуз АЬа СЬи Ьуз Ьуз Азр Агд УаЬ РНе ТНг Азр Ьуз ТНг 260 265 270
Зег АЬа ТНг УаЬ ЬЬе Суз Агд Ьуз Азп АЬа Зег ЬЬе Зег УаЬ Агд АЬа
275 280 285
СЬп Азр Агд Туг Туг Зег Зег Зег Тгр Зег СЬи Тгр АЬа Зег УаЬ Рго 290 295 300
Суз Зег СЬу Зег СЬу Зег Зег Агд СЬу СЬу Зег СЬу Зег СЬу 6Ьу Зег 305 ЗЬО 315 320
СЬу ОЬу ОЬу ОЬу Зег Ьуз Ьеи Агд АЬа УаЬ Рго ОЬу СЬу Зег Зег Рго 325 330 335
АЬа Тгр ТНг СЬп Суз СЬп СЬп Ьеи Зег СЬп Ьуз Ьеи Суз ТНг Ьеи АЬа 340 345 350
Тгр Зег АЬа НЬз Рго Ьеи Уа1 СЬу НЬз Мей Азр Ьеи Агд СЬи СЬи 61у
355 360 365
Азр СЬи СЬи ТНг ТНг Азп Азр УаЬ Рго НЬз ЬЬе СЬп Суз СЬу Азр СЬу 370 375 380
Суз Азр Рго СЬп СЬу Ьеи Агд Азр Азп Зег СЬп РНе Суз Ьеи СЬп Агд 385 390 395 400
156
Ые НЬз С1п СЬу Ьеи Ые РЬе Туг 61и Ьуз Ьеи Ьеи 61у 5ег Азр Ые 405 410 415
РЬе ТЬг СЬу 61и Рго Зег Ьеи Ьеи Рго Азр Зег Рго УаЬ СЬу СЬп Ьеи
420 425 430
НЬз АЬа Зег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег СЬп Ьеи Ьеи 61п Рго СЬи СЬу НЬз 435 440 445
НЬз Тгр СЬи ТЬг С1п СЬп Ые Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег 61п Рго Тгр 450 455 460
С1ь Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РЬе Ьуз Ые Ьеи Агд Зег Ьеи С1п АЬа РЬе 465 470 475 480
УаЬ АЬа УаЬ АЬа АЬа Агд УаЬ РЬе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег 485 490 495
Рго
<210> 73
<211> 497
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 73
Ые Тгр С1и Ьеи Ьуз
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи Мек УаЬ 7а1 Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго СЬи
25 30
СЬи Азр СЬу Ые ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр С1ь Зег Зег СЬи Т/аЬ Ьеи СЬу 35 40 45
Зег СЬу Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг Ые СЬп УаЬ Ьуз СЬи РЬе СЬу Азр АЬа СЬу 50 55 60
СЬп Туг ТЬг Суз НЬз Ьуз С1у С1у 61и УаЬ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи 65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз С1и Азр О1у Ые Тгр Зег ТЬг Азр Ые Ьеи Ьуз 85 90 95
Азр СЬп Ьуз С1и Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз 61и А1а Ьуз 100 105 110
- 157 026110
- 158 026110
Азр С1и 370 СЬи ТПг ТНг Азп Азр 375 УаЬ Рго НЬз 11е С1п 380 Суз С1у Азр С1у
Суз Азр Рго сьп СЬу Ьеи Агд Азр Азп Бег С1п РНе Суз Ьеи 61п Агд
385 390 395 400
Ые Шз СЬп С1у Ьеи 11е РНе Туг СЬи Ьуз Ьеи Ьеи СЬу Бег Азр 11е
405 410 415
РНе ТПг СЬу СЬи Рго Бег Ьеи Ьеи Рго Азр Бег Рго Уа1 С1у 61п Ьеи
420 425 430
НЬз А1а Бег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Бег С1п Ьеи Ьеи С1п Рго С1и С1у НЬз
435 440 445
Шз Тгр 61и ТПг ОЬп 61п Ые Рго Бег Ьеи Бег Рго Бег С1п Рго Тгр
450 455 460
С1п Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РНе Ьуз Ые Ьеи Агд Бег Ьеи С1п А1а РНе
465 470 475 480
Уа1 А1а Уа1 АЬа АЬа Агд УаЬ РНе АЬа НЬз С1у АЬа А1а ТНг Ьеи Бег
485 490 495
Рго <210> 74 <211> 497 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> 74
Ые Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр Уа1 Туг УаЬ Уа1 СЬи Ьеи Азр Тгр Туг
1 5 10 15
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи Ме! Уа1 Уа1 Ьеи ТНг Суз Азр ТНг Рго СЬи
20 25 30
С1и Азр СЬу Ые ТНг Тгр ТНг Ьеи Азр 61п Бег Бег 61и Уа1 Ьеи 61у
35 40 45
Бег 61у Ьуз ТНг Ьеи ТНг Ые С1п Уа1 Ьуз 61и РНе 61у Азр А1а СЬу
50 55 60
Οίη Туг ТНг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи Уа1 Ьеи Бег НЬз Бег Ьеи Ьеи
65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу Ые Тгр Бег ТНг Азр Ые Ьеи Ьуз
85 90 95
159
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз 100 105 110
Азп Туг Зег СЬу Агд РЬе ТЬг Суз Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТЬг Ые Зег ТЬг 115 120 125
Азр Ьеи ТЬг РЬе Зег УаЬ Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго СЬп 130 135 140
СЬу УаЬ ТЬг Суз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд УаЬ Агд СЬу 145 150 155 160
Азр Азп Ьуз СЬи Туг СЬи Туг Зег УаЬ СЬи Суз СЬп СЬи Азр Зег АЬа 165 170 175
Суз Рго АЬа АЬа СЬи СЬи Зег Ьеи Рго Ые СЬи УаЬ МеП УаЬ Азр АЬа 180 185 190
УаЬ НЬз Ьуз Ьеи Ьуз Туг СЬи Азп Туг ТЬг Зег Зег РЬе РЬе Ые Агд 195 200 205
Азр 11е Ые Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи СЬп Ьеи Ьуз Рго Ьеи
210 215 220
Ьуз Азп Зег Агд СЬп УаЬ СЬи УаЬ Зег Тгр СЬи Туг Рго Азр ТЬг Тгр 225 230 235 240
Зег ТЬг Рго НЬз Зег Туг РЬе Зег Ьеи ТЬг РЬе Суз УаЬ СЬп УаЬ СЬп 245 250 255
СЬу Ьуз Зег Ьуз Агд СЬи Ьуз АЬа Азр Агд УаЬ РЬе ТЬг Азр Ьуз ТЬг 260 265 270
Зег АЬа ТЬг УаЬ Ые Суз Агд Ьуз Азп АЬа Зег Ые Зег УаЬ Агд АЬа 275 280 285
СЬп Азр Агд Туг Туг Зег Зег Зег Тгр Зег СЬи Тгр АЬа Зег УаЬ Рго
290 295 300
Суз Зег СЬу Зег СЬу Зег Зег Агд СЬу СЬу Зег СЬу Зег СЬу СЬу Зег 305 310 315 320
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег Ьуз Ьеи Агд АЬа УаЬ Рго СЬу СЬу Зег Зег Рго 325 330 335
АЬа Тгр ТЬг СЬп Суз СЬп СЬп Ьеи Зег СЬп Ьуз Ьеи Суз 340 345
ТЬг
350
Ьеи АЬа
- 160 026110
Тгр Зег АЬа 355 НЬз Рго Ьеи УаЬ СЬу 360 НЬз Мек Азр Ьеи Агд 365 СЬи СЬи СЬу
Азр СЬи СЬи ТЬг ТНг Азп Азр УаЬ Рго НЬз Ые СЬп Суз СЬу Азр СЬу
370 375 380
Суз Азр Рго СЬп СЬу Ьеи Агд Азр Азп Зег СЬп РНе Суз Ьеи СЬп Агд
385 390 395 400
ЬЬе НЬз СЬп еьу Ьеи ЬЬе РНе Туг СЬи Ьуз Ьеи Ьеи СЬу Зег Азр Ые
405 410 415
РНе ТНг СЬу СЬи Рго Зег Ьеи Ьеи Рго Азр Зег Рго УаЬ СЬу СЬп Ьеи
420 425 430
НЬз АЬа Зег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег СЬп Ьеи Ьеи СЬп Рго СЬи СЬу НЬз
435 440 445
НЬз Тгр СЬи ТНг С1п С1п Ые Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег СЬп Рго Тгр
450 455 460
СЬп Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РНе Ьуз Ые Ьеи Агд 5ег Ьеи СЬп АЬа РНе
465 470 475 480
УаЬ АЬа УаЬ АЬа АЬа Агд УаЬ РНе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТНг Ьеи 5ег
485 490 495
Рго
<210> ' 75
<211> - 497
<212> ] БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> ' 75
Ые Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр УаЬ Туг УаЬ УаЬ СЬи Ьеи Азр Тгр Туг
1 5 10 15
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи Мек УаЬ УаЬ Ьеи ТНг Суз Азр ТНг Рго СЬи
20 25 30
СЬи Азр СЬу Ые ТНг Тгр ТНг Ьеи Азр С1п Зег Зег СЬи УаЬ Ьеи СЬу
35 40 45
Зег сьу Ьуз ТНг Ьеи ТНг Ые СЬп УаЬ Ьуз СЬи РНе СЬу Азр АЬа СЬу
50 55 60
161
21п Туг ТЬг Суз НЬз Ьуз С1у 21у С1и УаЬ Ьеи Зег Шз Зег Ьеи Ьеи 65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу 11е Тгр Зег ТЬг Азр 11е Ьеи Ьуз 85 90 95
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз СЬи А1а Ьуз 100 105 110
Азп Туг Зег СЬу Агд РЬе ТЬг Суз Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТЬг 11е Зег ТЬг 115 120 125
Азр Ьеи ТЬг РЬе Зег УаЬ Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго СЬп 130 135 140
СЬу УаЬ ТЬг Суз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд УаЬ Агд СЬу 145 150 155 160
Азр Азп Ьуз С1и Туг С1и Туг Зег УаЬ С1и Суз С1п С1и Азр Зег АЬа 165 170 175
Суз Рго АЬа АЬа СЬи СЬи Зег Ьеи Рго Ые СЬи УаЬ МеЬ УаЬ Азр АЬа 180 185 190
УаЬ НЬз Ьуз Ьеи Ьуз Туг СЬи Азп Туг ТЬг Зег Зег РЬе РЬе 11е Агд 195 200 205
Азр Ые Ые Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи СЬп Ьеи Ьуз Рго Ьеи 210 215 220
Ьуз Азп Зег Агд СЬп УаЬ СЬи УаЬ Зег Тгр СЬи Туг Рго Азр ТЬг Тгр
225 230 235 240
Зег ТЬг Рго НЬз Зег Туг РЬе Зег Ьеи ТЬг РЬе Суз УаЬ СЬп УаЬ СЬп 245 250 255
ЗЬу Ьуз Зег Ьуз Агд СЬи Ьуз Ьуз АЬа Агд УаЬ РЬе ТЬг Азр Ьуз ТЬг 260 265 270
Зег АЬа ТЬг УаЬ 11е Суз Агд Ьуз Азп АЬа Зег 11е Зег УаЬ Агд АЬа
275 280 285
21п Азр Агд Туг Туг Зег Зег Зег Тгр Зег О1и Тгр А1а Зег УаЬ Рго 290 295 300
Суз Зег СЬу Зег СЬу Зег Зег Агд СЬу СЬу Зег СЬу Зег СЬу СЬу Зег 305 310 315 320
- 162
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег 325 Ьуз Ьеи Агд АЬа УаЬ 330 Рго СЬу СЬу Зег Зег 335 Рго
АЬа Тгр ТЬг СЬп Суз СЬп СЬп Ьеи Зег СЬп Ьуз Ьеи Суз ТЬг Ьеи АЬа
340 345 350
Тгр Зег АЬа НЬз Рго Ьеи УаЬ СЬу НЬз МеП Азр Ьеи Агд СЬи СЬи СЬу
355 360 365
Азр СЬи СЬи ТЬг ТЬг Азп Азр УаЬ Рго НЬз Ые СЬп Суз СЬу Азр СЬу
370 375 380
Суз Азр Рго СЬп СЬу Ьеи Агд Азр Азп Зег СЬп РЬе Суз Ьеи СЬп Агд
385 390 395 400
ЬЬе НЬз СЬп СЬу Ьеи Ые РЬе Туг СЬи Ьуз Ьеи Ьеи СЬу Зег Азр Ые
405 410 415
РЬе ТЬг СЬу СЬи Рго Зег Ьеи Ьеи Рго Азр Зег Рго УаЬ СЬу СЬп Ьеи
420 425 430
НЬз АЬа Зег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег СЬп Ьеи Ьеи СЬп Рго СЬи СЬу НЬз
435 440 445
НЬз Тгр СЬи ТЬг СЬп СЬп Ые Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег СЬп Рго Тгр
450 455 460
СЬп Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РЬе Ьуз Ые Ьеи Агд Зег Ьеи СЬп АЬа РЬе
465 470 475 480
УаЬ АЬа УаЬ АЬа АЬа Агд УаЬ РЬе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег
485 490 495
Рго
<2Ь0> ' 76
<211> 497
<2Ь2> 1 БЕЛОК
<2ЬЗ> 1 Искусственная
<400> ' 76
ЬЬе Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр УаЬ Туг УаЬ УаЬ СЬи Ьеи Азр Тгр Туг
1 5 ьо 15
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи МеТ УаЬ УаЬ Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго СЬи
20 25 30
СЬи Азр СЬу ЬЬе ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр СЬп Зег Зег СЬи УаЬ Ьеи СЬу
35 40 45
163
- 164 026110
Суз Зег СЬу Зег СЬу Зег Зег Агд СЬу СЬу Зег СЬу Зег СЬу СЬу Зег 305 310 315 320
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег Ъу® Ьеи Агд АЬа УаЬ Рго СЬу СЬу Зег Зег Рго 325 330 335
АЬа Тгр ТЬг СЬп Суз СЬп СЬп Ьеи Зег СЬп Ьуз Ьеи Суз ТЬг Ьеи АЬа 340 345 350
Тгр Зег АЬа НЬз Рго Ьеи УаЬ СЬу НЬз Меб Азр Ьеи Агд СЬи СЬи СЬу 355 360 365
Азр СЬи СЬи ТЬг ТЬг Азп Азр УаЬ Рго НЬз Не СЬп Суз СЬу Азр СЬу 370 375 380
Суз Азр Рго СЬп СЬу Ьеи Агд Азр Азп Зег СЬп РЬе Суз Ьеи СЬп Агд 385 390 395 400
Не НЬз СЬп СЬу Ьеи Не РЬе Туг СЬи Ьуз Ьеи Ьеи СЬу Зег Азр Не 405 410 415
РЬе ТЬг СЬу СЬи Рго Зег Ьеи Ьеи Рго Азр Зег Рго УаЬ СЬу СЬп Ьеи 420 425 430
НЬз АЬа Зег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег СЬп Ьеи Ьеи СЬп Рго СЬи СЬу НЬз 435 440 445
НЬз Тгр СЬи ТЬг СЬп СЬп Не Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег СЬп Рго Тгр 450 455 460
СЬп Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РЬе Ьуз 11е Ьеи Агд Зег Ьеи СЬп АЬа РЬе 465 470 475 480
УаЬ АЬа УаЬ АЬа АЬа Агд УаЬ РЬе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег 485 490 495
Рго <210> 77 <211> 497 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 77
Не Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр УаЬ Туг УаЬ УаЬ СЬи Ьеи Азр Тгр Туг 15 10 15
- 165
Рго Азр АЬа Рго СЬу С1и Мек Уа1 Уа1 Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго СЬи 20 25 30
СЬи Азр СЬу ЬЬе ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр С1ь Зег Зег СЬи Уа1 Ьеи СЬу 35 40 45
Зег СЬу Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг 11е СЬп УаЬ Ьуз СЬи РЬе СЬу Азр АЬа СЬу 50 55 60
СЬп Туг ТЬг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи УаЬ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи 65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу Ые Тгр Зег ТЬг Азр Ые Ьеи Ьуз 85 90 95
Азр С1п Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз 100 105 110
Азп Туг Зег СЬу Агд РЬе ТЬг Суз Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТЬг Ые Зег ТЬг 115 120 125
Азр Ьеи ТЬг РЬе Зег Уа1 Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго С1п 130 135 140
61у Уа1 ТНг Суз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд Уа1 Агд СЬу 145 150 155 160
Азр Азп Ьуз 61и Туг 61и Туг Зег Уа1 СЬи Суз С1п СЬи Азр Зег АЬа 165 170 175
Суз Рго АЬа АЬа СЬи СЬи Зег Ьеи Рго 11е СЬи Уа1 Мек Уа1 Азр АЬа 180 185 190
Уа1 НЬз Ьуз Ьеи Ьуз Туг СЬи Азп Туг ТЬг Зег Зег РЬе РЬе 11е Агд 195 200 205
Азр Ые 11е Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи С1п Ьеи Ьуз Рго Ьеи 210 215 220
Ьуз Азп Зег Агд С1п Уа1 СЬи Уа1 Зег Тгр 61и Туг Рго Азр ТЬг Тгр 225 230 235 240
Зег ТЬг Рго НЬз Зег Туг РЬе Зег Ьеи ТЬг РЬе Суз Уа1 СЬп Уа1 С1п 245 250 255
С1у Ьуз Зег Ьуз Агд 61и Ьуз Ьуз Азр Агд А1а РЬе ТЬг Азр Ьуз ТЬг 260 265 270
- 166 026110
Зег АЬа ТЬг Уа1 275 ЬЬе Суз Агд Ъуз 280 Азп АЬа Зег Не Зег 285 Уа1 Агд АЬа
С1п Азр Агд Туг Туг Зег Зег Зег Тгр Зег СЬи Тгр АЬа Зег Уа1 Рго
290 295 300
Суз Зег ОЬу Зег СЬу Зег Зег Агд С1у С1у Зег ОЬу Зег СЬу СЬу Зег
305 310 315 320
С1у СЬу ОЬу ОЬу Зег Ъуз Ъеи Агд А1а Уа1 Рго СЬу СЬу Зег Зег Рго
325 330 335
А1а Тгр ТЬг СЬп Суз СЬп СЬп Ъеи Зег СЬп Ъуз Ъеи Суз ТЬг Ъеи АЬа
340 345 350
Тгр Зег АЬа НЬз Рго Ъеи Уа1 С1у НЬз МеЬ Азр Ъеи Агд СЬи СЬи СЬу
355 360 365
Азр СЬи СЬи ТЬг ТЬг Азп Азр Уа1 Рго НЬз 11е СЬп Суз СЬу Азр СЬу
370 375 380
Суз Азр Рго СЬп СЬу Ъеи Агд Азр Азп Зег СЬп РЬе Суз Ъеи СЬп Агд
385 390 395 400
11е НЬз СЬп СЬу Ъеи 11е РЬе Туг СЬи Ъуз Ъеи Ъеи СЬу Зег Азр 11е
405 410 415
РЬе ТЬг СЬу СЬи Рго Зег Ъеи Ъеи Рго Азр Зег Рго Уа1 СЬу СЬп Ъеи
420 425 430
НЬз АЬа Зег Ъеи Ъеи С1у Ъеи Зег СЬп Ъеи Ъеи СЬп Рго СЬи СЬу НЬз
435 440 445
НЬз Тгр СЬи ТЬг СЬп С1п 11е Рго Зег Ъеи Зег Рго Зег СЬп Рго Тгр
450 455 460
С1п Агд Ъеи Ъеи Ъеи Агд РЬе Ъуз 11е Ъеи Агд Зег Ъеи СЬп АЬа РЬе
465 470 475 480
Уа1 АЬа Уа1 АЬа АЬа Агд Уа1 РЬе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ъеи Зег
485 490 495
Рго
<210> 78
<211> 497
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
167 <400> 78
Ые Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр УаЬ Туг УаЬ УаЬ СЬи Ьеи Азр Тгр Туг 15 10 15
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи МеЬ Уа1 Уа1 Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго С1и
25 30
СЬи Азр СЬу Ые ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр СЬп Зег Зег СЬи УаЬ Ьеи СЬу 35 40 45
Зег 01у Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг Ые СЬп УаЬ Ьуз СЬи РЬе СЬу Азр АЬа СЬу 50 55 60
СЬп Туг ТЬг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи Уа1 Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи 65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу Ые Тгр Зег ТЬг Азр 11е Ьеи Ьуз 85 90 95
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз 100 105 110
Азп Туг Зег С1у Агд РЬе ТЬг Суз Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТЬг 11е Зег ТЬг 115 120 125
Азр Ьеи ТЬг РЬе Зег УаЬ Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго СЬп 130 135 140
СЬу УаЬ ТЬг Суз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд Уа1 Агд СЬу 145 150 155 160
Азр Азп Ьуз СЬи Туг СЬи Туг Зег УаЬ СЬи Суз СЬп СЬи Азр Зег АЬа 165 170 175
Суз Рго АЬа АЬа СЬи СЬи Зег Ьеи Рго Ые СЬи УаЬ Меб Уа1 Азр АЬа 180 185 190
Уа1 НЬз Ьуз Ьеи Ьуз Туг СЬи Азп Туг ТЬг Зег Зег РЬе РЬе 11е Агд 195 200 205
Азр Ые Ые Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи СЬп Ьеи Ьуз Рго Ьеи 210 215 220
Ьуз Азп Зег Агд СЬп УаЬ СЬи УаЬ Зег Тгр СЬи Туг Рго Азр ТЬг Тгр 225 230 235 240
Зег ТЬг Рго НЬз Зег Туг РЬе Зег Ьеи ТЬг РЬе Суз УаЬ СЬп УаЬ СЬп 245 250 255
- 168
С1у Ьуз Зег Ьуз Агд 61и Ьуз Ьуз Азр Агд УаЬ АЬа ТНг Азр Ьуз ТНг
260 265 270
Зег АЬа ТЬг УаЬ 11е Суз Агд Ьуз Азп АЬа Зег 11е Зег УаЬ Агд АЬа 275 280 285
СЬп Азр Агд Туг Туг Зег Зег Зег Тгр Зег СЬи Тгр АЬа Зег УаЬ Рго
290 295 300
Суз Зег СЬу Зег СЬу Зег Зег Агд СЬу СЬу Зег СЬу Зег СЬу СЬу Зег 305 310 315 320
СЬу СЬу СЬу СЬу Зег Ьуз Ьеи Агд АЬа УаЬ Рио СЬу СЬу Зег Зег Рго 325 330 335
АЬа Тир ТНг СЬп Суз СЬп СЬп Ьеи Зег С1п Ьуз Ьеи Суз ТНг Ьеи АЬа 340 345 350
Тгр Зег АЬа НЬз Рго Ьеи УаЬ СЬу НЬз МеЬ Азр Ьеи Агд СЬи СЬи СЬу 355 360 365
Азр С1и СЬи ТНг ТНг Азп Азр Уа1 Рго Шз 11е СЬп Суз СЬу Азр СЬу 370 375 380
Суз Азр Рго СЬп СЬу Ьеи Агд Азр Азп Зег СЬп РНе Суз Ьеи СЬп Агд 385 390 395 400
ЬЬе НЬз СЬп СЬу Ьеи Ые РНе Туг СЬи Ьуз Ьеи Ьеи СЬу Зег Азр 1Ье 405 410 415
РНе ТНг СЬу СЬи Рио Зег Ьеи Ьеи Рго Азр Зег Рго УаЬ СЬу 61п Ьеи
420 425 430
НЬз АЬа Зег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег СЬп Ьеи Ьеи СЬп Рго СЬи СЬу НЬз 435 440 445
НЬз Тир СЬи ТНг СЬп СЬп 11е Рио Зег Ьеи Зег Рио Зег СЬп Рио Тир 450 455 460
С1п Аид Ьеи Ьеи Ьеи Аид РНе Ьуз 11е Ьеи Аид Зег Ьеи СЬп АЬа РНе 465 470 475 480
УаЬ АЬа УаЬ АЬа АЬа Агд УаЬ РНе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТНг Ьеи Зег 485 490 495
Рго
- 169 026110
<210> 79
<211> 497
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 79
11е Тгр С1и Ьеи Ьуз
Рго Аар АЬа Рго СЬу СЬи Мей Уа1 УаЬ Ьеи ТНг Суз Аэр ТНг Рго СЬи 20 25 30
СЬи Азр СЬу Ые ТНг Тгр ТНг Ьеи Азр СЬп Зег Зег СЬи УаЬ Ьеи СЬу 35 40 45
Зег СЬу Ьуз ТНг Ьеи ТНг Ые СЬп УаЬ Ьуз СЬи РНе СЬу Азр АЬа СЬу 50 55 60
СЬп Туг ТНг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи УаЬ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи 65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу Ые Тгр Зег ТНг Азр Ые Ьеи Ьуз 85 90 95
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТНг РНе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз 100 105 110
Азп Туг Зег СЬу Агд РНе ТНг Суэ Тгр Тгр Ьеи ТНг ТНг Ые Зег ТНг 115 120 125
Азр Ьеи ТНг РНе Зег УаЬ Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго СЬп 130 135 140
СЬу УаЬ ТНг Суз СЬу АЬа АЬа ТНг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд УаЬ Агд СЬу 145 150 155 160
Азр Азп Ьуз СЬи Туг СЬи Туг Зег УаЬ СЬи Суз СЬп СЬи Азр Зег АЬа 165 170 175
Суз Рго АЬа АЬа СЬи СЬи Зег Ьеи Рго Ые СЬи УаЬ Мей Уа1 Азр АЬа 180 185 190
5Ла1 НЬз Ьуз Ьеи Ьуз Туг СЬи Азп Туг ТНг Зег Зег РНе РНе 11е Агд 195 200 205
Аар Ые Ые Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи СЬп Ьеи Ьуз Рго Ьеи 210 215 220
- 170
171 026110
Ча1 А1а Ча1 А1а А1а Агд Ча1 485 РЬе А1а Шз 490 С1у А1а А1а ТЬг Ьеи 495 Бег
Рго
<210> 80
<211> 497
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 80
11е Тгр 61и Ьеи Ьуз Ьуз Азр Ча1 Туг Уа1 Уа1 61и Ьеи Азр Тгр Туг
1 5 10 15
Рго Азр А1а Рго 21у С1и МеЬ Уа1 Уа1 Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго 01и
20 25 30
С1и Азр С1у 11е ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр С1ь Бег Бег С1и Уа1 Ьеи С1у
35 40 45
Зег С1у Ьуз ТНг Ьеи ТЬг 11е 21п Уа1 Ьуз 21и РЬе С1у Азр А1а С1у
50 55 60
С1ь Туг ТЬг Суз Шз Ьуз 61у С1у 61и Уа1 Ьеи Бег Шз Бег Ьеи Ьеи
65 70 75 80
Ьеи Ьеи Шз Ьуз Ьуз 61и Азр 61у 11е Тгр Бег ТЬг Азр 11е Ьеи Ьуз
85 90 95
Азр С1п Ьуз С1и Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз 21и А1а Ьуз
100 105 110
Азп Туг Бег 61у Агд РЬе ТЬг Суз Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТЬг 11е Бег ТЬг
115 120 125
Азр Ьеи ТЬг РНе Бег Ча1 Ьуз Бег Бег Агд 21у Бег Бег Азр Рго С1п
130 135 140
С1у Ча1 ТЬг Суз С1у А1а А1а ТЬг Ьеи Бег А1а 61и Агд Уа1 Агд С1у
145 150 155 160
Азр Азп Ьуз 61и Туг 61и Туг Бег Уа1 61и Суз 61п 61и Азр Бег А1а
165 170 175
Суз Рго А1а А1а 21и С1и Зег Ьеи Рго 11е 21и Уа1 МеЬ Уа1 Азр А1а
180 185 190
Уа1 Шз Ьуз Ьеи Ьуз Туг 61и Азп Туг ТЬг Бег Бег РЬе РЬе 11е Агд
195 200 205
172
- 173 026110
61η 465 Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд 470 РЬе Ьуз 11е Ьеи Агд 475 Зег Ьеи 61п АЬа РЬе 480
Уа1 А1а УаЬ А1а АЬа Агд УаЬ РЬе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТАг Ьеи Зег
485 490 495
Рго
<210> 81
<211> 497
<212> : БЕЛОК
<213> ] Искусственная
<400> 81
11е Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр УаЬ Туг УаЬ УаЬ СЬи Ьеи Азр Тгр Туг
1 5 10 15
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи Меб УаЬ УаЬ Ьеи ТЬг Суз Азр ТАг Рго СЬи
20 25 30
СЬи Азр СЬу Не ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр СЬп Зег Зег СЬи ¥а1 Ьеи СЬу
35 40 45
Зег СЬу Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг 11е СЬп УаЬ Ьуз СЬи РЬе СЬу Азр АЬа СЬу
50 55 60
61п Туг ТЬг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу С1и УаЬ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи
65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу 11е Тгр Зег ТЬг Азр 11е Ьеи Ьуз
85 90 95
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз С1и АЬа Ьуз
100 105 110
Азп Туг Зег СЬу Агд РЬе ТЬг Суз Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТЬг Не Зег ТЬг
115 120 125
Азр Ьеи ТЬг РЬе Зег УаЬ Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго СЬп
130 135 140
61у УаЬ ТЬг Суз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд Уа1 Агд СЬу
145 150 155 160
Азр Азп Ьуз СЬи Туг СЬи Туг Зег УаЬ СЬи Суз СЬп СЬи Азр Зег АЬа
165 170 175
174 026110
- 175
НЬз АЬа Зег 435 Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег 440 СЬп Ьеи Ьеи СЬп Рго 445 СЬи СЬу НЬз
НЬз Тгр СЬи ТНг СЬп СЬп 1Ье Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег СЬп Рго Тгр
450 455 460
61п Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РНе Ьуз 11е Ьеи Агд Зег Ьеи СЬп АЬа РЬе
465 470 475 480
УаЬ АЬа УаЬ АЬа АЬа Агд УаЬ РНе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТНг Ьеи Зег
4Э5 490 495
Рго <210> 82 <211> 497 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> 1 32
Ые Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр УаЬ Туг УаЬ Уа1 С1и Ьеи Азр Тгр Туг
1 5 10 15
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи МеГ УаЬ УаЬ Ьеи ТНг Суз Азр ТНг Рго СЬи
20 25 30
СЬи Азр СЬу 11е ТНг Тгр ТНг Ьеи Азр СЬп Зег Зег СЬи УаЬ Ьеи СЬу
35 40 45
Зег СЬу Ьуз ТЬг Ьеи ТНг Ые СЬп УаЬ Ьуз С1и РЬе С1у Азр А1а СЬу
50 55 60
СЬп Туг ТНг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи УаЬ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи
65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу Ые Тгр Зег ТЬг Азр 11е Ьеи Ьуз
85 90 95
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТНг РНе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз
100 105 110
Азп Туг Зег СЬу Агд РНе ТНг Суз Тгр Тгр Ьеи ТЬг ТНг 11е Зег ТНг
115 120 125
Азр Ьеи ТЬг РЬе Зег УаЬ Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго СЬп
130 135 140
СЬу УаЬ ТЬг Суз СЬу АЬа АЬа ТНг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд УаЬ Агд СЬу
145 150 155 160
176
177 026110
РНе ТНг СЬу СЬи Рго Зег Ьеи Ьеи Рго Азр Зег Рго УаЬ СЬу СЬп Ьеи 420 425 430
НЬз АЬа Зег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег СЬп Ьеи Ьеи СЬи Рго СЬи СЬу НЬз 435 440 445
НЬз Тгр СЬи ТНг СЬп СЬп ЬЬе Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег СЬп Рго Тгр 450 455 460
С1п Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РНе Ьуз Ые Ьеи Агд Зег Ьеи СЬп АЬа РНе 465 470 475 480
УаЬ АЬа УаЬ АЬа АЬа Агд УаЬ РНе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТНг Ьеи Сег 485 490 495
Рго
<210> 83
<211> 497
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 83
11е Тгр 61и Ьеи Ьуз
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи МеЬ УаЬ УаЬ Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго СЬи 20 25 30
СЬи Азр СЬу Ые ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр СЬп Зег Зег СЬи УаЬ Ьеи СЬу 35 40 45
Зег СЬу Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг Ые СЬп УаЬ Ьуз СЬи РЬе СЬу Азр АЬа СЬу 50 55 60
СЬп Туг ТЬг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи УаЬ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи 65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу Ые Тгр Зег ТЬг Азр Ые Ьеи Ьуз 85 90 95
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз 100 105 110
Азп Туг Зег СЬу Агд РНе ТНг Суз Тгр Тгр Ьеи ТНг ТНг Ые Зег ТНг 115 120 125
178 026110
Азр Ьеи ТЬг РЬе Зег Уа1 Ьуз Зег Зег Агд С1у Зег Зег Азр Рго С1п 130 135 140
С1у Уа1 ТЬг Суз 61у А1а А1а ТЬг Ьеи Зег А1а 61и Агд Уа1 Агд 61у
145 150 155 160
Азр Азп Ьуз 61и Туг С1и Туг Зег Уа1 С1и Суз С1п С1и Азр Зег А1а 165 170 175
Суз Рго А1а А1а 61и 61и Зег Ьеи Рго 11е С1и Уа1 МеЬ Уа1 Азр А1а 180 135 190
Уа1 Н1з Ьуз Ьеи Ьуз Туг С1и Азп Туг ТЬг Зег Зег РЬе РЬе 11е Агд 195 200 205
Азр 11е 11е Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи 61п Ьеи Ьуз Рго Ьеи
210 215 220
Ьуз Азп Зег Агд 61п Уа1 61и Уа1 Зег Тгр 61и Туг Рго Азр ТЬг Тгр
225 230 235 240
Зег ТЬг Рго Шз Зег Туг РЬе Зег Ьеи ТЬг РЬе Суз Уа1 <31п Уа1 С1п 245 250 255
С1у Ьуз Зег Ьуз Агд С1и Ьуз Ьуз Азр Агд Уа1 РЬе ТЬг Азр Ьуз ТЬг 260 265 270
Зег А1а ТЬг Уа1 11е Суз А1а Ьуз Азп А1а Зег 11е Зег Уа1 Агд А1а 275 280 285
С1п Азр Агд Туг Туг Зег Зег Зег Тгр Зег С1и Тгр А1а Зег Уа1 Рго
290 295 300
Суз Зег 61у Зег 61у Зег Зег Агд 61у 61у Зег С1у Зег С1у 61у Зег 305 310 315 320
С1у С1у С1у С1у Зег Ьуз Ьеи Агд А1а Уа1 Рго С1у С1у Зег Зег Рго 325 330 335
А1а Тгр ТЬг 61п Суз 61п 61п Ьеи Зег 61п Ьуз Ьеи Суз ТЬг Ьеи А1а 340 345 350
Тгр Зег А1а Н1з Рго Ьеи Уа1 61у Шз Мек. Азр Ьеи Агд 61и С1и С1у 355 360 365
Азр С1и С1и ТЬг ТЬг Азп Азр Уа1 Рго Нхз 11е С1п Суз С1у Азр С1у 370 375 380
- 179
Суз 385 Азр Рго СЬп С1у Ьеи 390 Агд Азр Азп Зег СЬп 395 РЬе Суз Ьеи С1п Агд 400
Ые НЬз СЬп СЬу Ьеи Ые РЬе Туг СЬи Ьуз Ьеи Ьеи СЬу Зег Азр 11е
405 410 415
РЬе ТЬг СЬу СЬи Рго Зег Ьеи Ьеи Рго Азр Зег Рго УаЬ С1у С1п Ьеи
420 425 430
НЬз АЬа Зег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег СЬп Ьеи Ьеи СЬп Рго СЬи СЬу НЬз
435 440 445
НЬз Тгр СЬи ТЬг С1п С1п Ые Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег С1п Рго Тгр
450 455 460
СЬп Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РЬе Ьуз Ые Ьеи Агд Зег Ьеи СЬп АЬа РЬе
465 470 475 480
УаЬ АЬа УаЬ АЬа АЬа Агд УаЬ РЬе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег
485 490 495
Рго
<210> 84
<211> - 497
<212> ] БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 84
Ые Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр УаЬ Туг УаЬ УаЬ С1и Ьеи Азр Тгр Туг
1 5 10 15
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи Меб УаЬ УаЬ Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго СЬи
20 25 30
С1и Азр СЬу Ые ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр С1п Зег Зег С1и УаЬ Ьеи 61у
35 40 45
8ег СЬу Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг Ые СЬп УаЬ Ьуз СЬи РЬе СЬу Азр АЬа СЬу
50 55 60
СЬп Туг ТЬг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи УаЬ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи
65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз С1и Азр С1у Ые Тгр Зег ТЬг Азр Ые Ьеи Ьу®
85 90 95
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТЬг РЬе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз
100 105 110
180
- 181
Азр СЬи СЬи 370 ТЬг ТЬг Азп Азр УаЬ 375 Рго НЬз Ые СЬп 380 Суз СЬу Азр СЬу
Суз Азр Рго СЬп СЬу Ьеи Агд Азр Азп Зег СЬп РНе Суз Ьеи СЬп Агд
385 390 395 400
Ые НЬз еьп СЬу Ьеи Ые РНе Туг СЬи Ьуз Ьеи Ьеи СЬу Зег Азр 1Ье
405 4 ЬО 415
РНе ТЬг СЬу СЬи Рго Зег Ьеи Ьеи Рго Азр Зег Рго УаЬ СЬу СЬп Ьеи
420 425 430
НЬз АЬа Зег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег СЬп Ьеи Ьеи СЬп Рго СЬи СЬу НЬз
435 440 445
Шз Тгр СЬи ТЬг СЬп СЬп Ые Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег СЬп Рго Тгр
450 455 460
СЬп Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РНе Ьуз 11е Ьеи Агд Зег Ьеи СЬп АЬа РНе
465 470 475 480
Уа1 АЬа Уа1 АЬа АЬа Агд УаЬ РНе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТНг Ьеи Зег
485 490 495
Рго
<210> 85
<211> 497
<212> 1 БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 85
Ые Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр УаЬ Туг УаЬ Уа1 СЬи Ьеи Азр Тгр Туг
1 5 10 15
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи МеЬ УаЬ УаЬ Ьеи ТНг Суз Азр ТНг Рго СЬи
20 25 30
СЬи Азр СЬу 11е ТЬг Тгр ТНг Ьеи Азр СЬп Зег Зег СЬи Уа1 Ьеи СЬу
35 40 45
Зег СЬу Ьуз ТЬг Ьеи ТНг Ые СЬп УаЬ Ьуз СЬи РНе СЬу Аар АЬа СЬу
50 55 60
СЬп Туг ТЬг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи Уа1 Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи
65 70 75 80
182
- 183
АЬа Тгр ТЬг СЬп 340 Суз СЬп СЬп Ьеи Зег 345 СЬп Ьуз Ьеи Суз ТЬг 350 Ьеи АЬа
Тгр Зег АЬа НЬз Рго Ьеи УаЬ СЬу НЬз Мек Азр Ьеи Агд СЬи СЬи СЬу
355 360 365
Азр СЬи СЬи ТЬг ТЬг Азп Азр УаЬ Рго НЬз Ые СЬп Суз СЬу Азр СЬу
370 375 380
Суз Азр Рго СЬп СЬу Ьеи Агд Азр Азп Зег СЬп РЬе Суз Ьеи СЬп Агд
385 390 395 400
Ые НЬз СЬп СЬу Ьеи Ые РЬе Туг СЬи Ьуз Ьеи Ьеи СЬу Зег Азр Ые
405 410 415
РЬе ТЬг СЬу СЬи Рго Зег Ьеи Ьеи Рго Азр Зег Рго УаЬ СЬу СЬп Ьеи
420 425 430
НЬз АЬа Зег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег СЬп Ьеи Ьеи СЬп Рго СЬи СЬу НЬз
435 440 445
НЬз Тгр СЬи ТЬг СЬп СЬп Ые Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег СЬп Рго Тгр
450 455 460
СЬп Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РЬе Ьуз Ые Ьеи Агд Зег Ьеи СЬп АЬа РЬе
465 470 475 480
УаЬ АЬа УаЬ АЬа АЬа Агд УаЬ РЬе АЬа НЬз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег
485 490 495
Рго
<210> 86
<211> - 497
<212> 1 БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 36
Ые Тгр СЬи Ьеи Ьуз Ьуз Азр Уа1 Туг УаЬ УаЬ СЬи Ьеи Азр Тгр Туг
1 5 10 15
Рго Азр АЬа Рго СЬу СЬи МеЬ Уа1 Уа1 Ьеи ТЬг Суз Азр ТЬг Рго СЬи
20 25 30
61и Азр СЬу Ые ТЬг Тгр ТЬг Ьеи Азр СЬп Зег Зег СЬи УаЬ Ьеи СЬу
35 40 45
Зег СЬу Ьуз ТЬг Ьеи ТЬг 1Ье СЬп Уа1 Ьуз СЬи РЬе СЬу Азр АЬа СЬу
50 55 60
184
СЬп Туг ТНг Суз НЬз Ьуз СЬу СЬу СЬи УаЬ Ьеи Зег НЬз Зег Ьеи Ьеи 65 70 75 80
Ьеи Ьеи НЬз Ьуз Ьуз СЬи Азр СЬу 11е Тгр Зег ТНг Азр 11е Ьеи Ьуз 85 90 95
Азр СЬп Ьуз СЬи Рго Ьуз Азп Ьуз ТНг РНе Ьеи Агд Суз СЬи АЬа Ьуз 100 105 110
Азп Туг Зег СЬу Агд РНе ТНг Суз Тгр Тгр Ьеи ТНг ТНг 1Ье Зег ТНг 115 120 125
Азр Ьеи ТНг РНе Зег УаЬ Ьуз Зег Зег Агд СЬу Зег Зег Азр Рго СЬп 130 135 140
СЬу УаЬ ТНг Суз СЬу АЬа АЬа ТНг Ьеи Зег АЬа СЬи Агд УаЬ Агд СЬу 145 150 155 160
Азр Азп Ьуз СЬи Туг СЬи Туг Зег УаЬ СЬи Суз СЬп СЬи Азр Зег АЬа 165 170 175
Суз Рго АЬа АЬа СЬи СЬи Зег Ьеи Рго 11е СЬи УаЬ МеД УаЬ Азр АЬа 180 185 190
УаЬ НЬз Ьуз Ьеи Ьуз Туг СЬи Азп Туг ТНг Зег Зег РНе РНе ГЬе Агд 195 200 205
Азр 11е 11е Ьуз Рго Азр Рго Рго Ьуз Азп Ьеи С1п Ьеи Ьуз Рго Ьеи 210 215 220
Ьуз Азп Зег Агд СЬп УаЬ СЬи УаЬ Зег Тгр СЬи Туг Рго Азр ТНг Тгр 225 230 235 240
Зег ТНг Рго НЬз Зег Туг РНе Зег Ьеи ТНг РНе Суз УаЬ СЬп УаЬ СЬп 245 250 255
СЬу Ьуз Зег Ьуз Агд СЬи Ьуз Ьуз Азр Агд УаЬ РНе ТНг Азр Ьуз ТНг 260 265 270
Зег АЬа ТНг УаЬ 11е Суз Агд Ьуз Азп АЬа Зег ГЬе АЬа УаЬ Агд АЬа 275 280 285
СЬп Азр Агд Туг Туг Зег Зег Зег Тгр Зег СЬи Тгр АЬа Зег УаЬ Рго 290 295 300
Суз Зег СЬу Зег СЬу Зег Зег Агд СЬу СЬу Зег СЬу Зег СЬу СЬу Зег 305 310 315 320
185 026110
СЬу С1у СЬу СЬу Зег 325 Ьуз Ьеи Агд АЬа Уа1 330 Рго СЬу С1у Зег Зег 335 Рго
АЬа Тгр ТЬг С1п Суз С1п СЬп Ьеи Зег СЬп Ьуз Ьеи Суз ТЬг Ьеи А1а
340 345 350
Тгр Зег АЬа НЬз Рго Ьеи Уа1 СЬу НЬз МеЬ Азр Ьеи Агд СЬи СЬи С1у
355 360 365
Азр С1и 61и ТЬг ТЬг Азп Азр Уа1 Рго НЬз Ые С1п Суз СЬу Азр С1у
370 375 380
Суз Азр Рго 61п СЬу Ьеи Агд Азр Азп Зег СЬп РЬе Суз Ьеи СЬп Агд
385 390 395 400
Ые ΗΪ5 С1п СЬу Ьеи 11е РЬе Туг С1и Ьуз Ьеи Ьеи С1у Зег Азр Ые
405 410 415
РЬе ТЬг СЬу СЬи Рго Зег Ьеи Ьеи Рго Азр Зег Рго Уа1 СЬу 61п Ьеи
420 425 430
НЬз А1а Зег Ьеи Ьеи СЬу Ьеи Зег С1п Ьеи Ьеи С1п Рго СЬи С1у НЬз
435 440 445
НЬз Тгр 61и ТЬг С1п С1п 11е Рго Зег Ьеи Зег Рго Зег С1п Рго Тгр
450 455 460
СЬп Агд Ьеи Ьеи Ьеи Агд РЬе Ьуз Ые Ьеи Агд Зег Ьеи СЬп АЬа РЬе
465 470 475 480
Уа1 А1а Уа1 АЬа АЬа Агд Уа1 РЬе А1а НЬз СЬу АЬа АЬа ТЬг Ьеи Зег
485 490 495
Рго
<210> 87
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 87
СЬи Уа1 С1п Ьеи С1п С1п Зег СЬу АЬа Азр Ьеи Уа1 Агд Зег СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег 11е Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег С1у РЬе Азп Ые Ьуз Азр Туг
20 25 30
186
Туг Ьеи НЬз 35 Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд 40 Рго СЬи СЬп СЬу Ьеи 45 СЬи Тгр Ые
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЪг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЪе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТНг Мей ТНг А1а Азр ТЪг Зег Зег Азп ТЪг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег Ьеи ТЪг Зег 61и Азр ТЪг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Суз Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу АЬа СЬу ТЪг
100 105 110
ТНг УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег
115
<210> 88
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 88
СЬи УаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу АЬа Азр Ьеи УаЬ Агд Зег СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег Ые Ьуз Ьеи Зег Суз ТЪг А1а Зег С1у РЪе Азп Ые Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг Мей НЬз Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго С1и СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр 11е
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЪг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЪе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТЪг Мей ТЪг АЬа Азр ТЪг Зег Зег Азп ТЪг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег Ьеи ТЪг Зег СЬи Азр ТЪг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа АЬа Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЪе Азр Υθΐ Тгр еьу АЬа СЬу ТЪг
100 105 110
ТЪг УаЬ ТЪг УаЬ Зег Зег
115
<210> 89
187 026110 <2Ы> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 89
СЬи 1 УаЬ СЬп Ьеи СЬп 5 СЬп Зег СЬу АЬа Азр Ьеи УаЬ 10 Агд Зег СЬу 15 АЬа
Зег Ые Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег СЬу РЬе Азп Ые Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг Мек НЬз Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬи СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр ЬЬе
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТЬг Мек ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Агд Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу АЬа СЬу ТЬг
100 105 ыо
ТЬг Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 90
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 90
СЬи Уа1 СЬп Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу АЬа Азр Ьеи УаЬ Агд Зег СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег Ые Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег СЬу РЬе Азп Ые Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг МеЬ НЬз Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬи СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Ые
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТЬг Мек ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
- 188
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег 85 Ьеи ТНг Зег СЬи Азр 90 ТНг АЬа Уа1 Туг Туг 95 Суз
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РНе Азр УаЬ Тгр СЬу АЬа СЬу ТНг
100 105 110
ТНг УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег
115
<210> 91
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 91
СЬи УаЬ С1п Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу АЬа Азр Ьеи УаЬ Агд Зег СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег Ые Ьуз Ьеи Зег Суз ТНг АЬа Зег СЬу РНе Азп Ые Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг МеД Ыз Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬи СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Ые
35 40 45
С1у Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТНг СЬи Туг А1а Рго Ьуз РНе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТНг МеД ТНг АЬа Азр ТНг Зег Зег Азп ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег Ьеи ТНг Зег СЬи Азр ТНг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азр Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр С1у АЬа СЬу ТНг
100 105 110
ТНг УаЬ ТНг Уа1 Зег Зег
115
<2 Ь 0> 92
<211> 118
<2 Ь 2> БЕЛОК
<2ЬЗ> Искусственная
<400> 92
СЬи УаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу АЬа Азр Ьеи УаЬ Агд Зег СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег Не Ьуз Ьеи Зег Суз ТНг АЬа Зег СЬу РНе Азп 11е Ьуз Азр Туг
25 30
189 026110
Туг МеЬ НЬз 35 Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд 40 Рго СЬи СЬп 61у Ьеи 45 61и Тгр Ые
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТЬг МеЬ ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа СЬи Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу АЬа СЬу ТЬг
100 105 110
ТЬг УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 93
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<2ьз> : Искусственная
<400> 93
61 и УаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу АЬа Азр Ьеи УаЬ Агд Зег СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег Ые Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег СЬу РЬе Азп 11е Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг МеЬ НЬз Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬи СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Ые
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТЬг МеЬ ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа СЬп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу АЬа СЬу ТЬг
100 105 ыо
ТЬг УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
- 190 <210> 94 <2Ы> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 94
61 и 1 УаЬ СЬп Ьеи СЬп 5 СЬп Зег СЬу АЬа Азр Ьеи Уа1 Агд 10 Зег СЬу АЬа 15
Зег Ые Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег 61у РЬе Азп Ые Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг Мек НЬз Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬи СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Ые
35 40 45
61у Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп С1у Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТЬг Мек ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа С1у Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу АЬа 61у ТЬг
100 105 ЫО
ТЬг УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 95
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 95
СЬи УаЬ С1п Ьеи СЬп СЬп Зег 61у АЬа Азр Ьеи УаЬ Агд Зег 61у АЬа
1 5 10 15
Зег Ые Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег СЬу РЬе Азп Ые Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг Мек НЬз Тгр УаЬ Ьуз 61п Агд Рго СЬи СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Ые
35 40 45
СЬу Тгр Не Азр Рго СЬи Азп 61у Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61 п С1у Ьуз АЬа ТЬг Мек ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
- 191
Ьеи 01η Ьеи Зег Зег 85 Ьеи ТНг Зег СЬи Азр 90 ТНг АЬа УаЬ Туг Туг 95 Суз
Азп АЬа НЬз Ьуз 100 СЬи Ьеи Агд Туг РНе 105 Азр УаЬ Тгр СЬу АЬа 110 СЬу ТНг
ТНг Уа1 ТНг 115 Уа1 Зег Зег
<210> <211> <212> <213> 96 118 БЕЛОК Искусственная
<400> 96
С1и Уа1 1 С1п Ьеи С1п 5 С1п Зег СЬу АЬа Азр 10 Ьеи УаЬ Агд Зег СЬу 15 АЬа
Зег 11е Ьу® Ьеи 20 Зег Суз ТНг АЬа Зег 25 СЬу РЬе Азп 11е Ьуз 30 Азр Туг
Туг Ме! НЬз 35 Тгр Уа1 Ьуз ОЬп Агд 40 Рго СЬи 61п СЬу Ьеи 45 СЬи Тгр 11е
СЬу Тгр 50 11е Азр Рго С1и Азп 55 СЬу Азр ТНг СЬи Туг 60 АЬа Рго Ьуз РЬе
Οίη О1у 65 Ьуз АЬа ТНг Ме! 70 ТНг АЬа Азр ТЬг Зег 75 Зег Азп ТЬг АЬа Туг 80
Ьеи С1п Ьеи Зег Зег 85 Ьеи ТНг Зег СЬи Азр 90 ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг 95 Суз
Азп А1а Ые Ьуз 100 О1и Ьеи Агд Туг РНе 105 Азр УаЬ Тгр СЬу АЬа 110 СЬу ТНг
ТНг Уа1 ТНг 115 Уа1 Зег Зег
<210> <211> <212> <213> 97 118 БЕЛОК Искусственная
<400> 97
О1и УаЬ 1 С1п Ьеи Οίη 5 Οίη Зег СЬу АЬа Азр 10 Ьеи УаЬ Агд Зег СЬу 15 АЬа
192
Зег 11е Ьуз Ьеи 20 Зег Суз ТЬг АЬа Зег 25 СЬу РЬе Азп Ые Ьуз 30 Азр Туг
Туг МеГ НЬз Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬи СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр 11е
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп С1у Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТЬг МеГ ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег СЬи Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Ьеи Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу АЬа СЬу ТЬг
100 105 ыо
ТЬг Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 98
<2 Ь 1> 118
<212> 1 БЕЛОК
<2ЬЗ> 1 Искусственная
<400> 98
СЬи Уа1 СЬп Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу АЬа Азр Ьеи УаЬ Агд Зег СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег Ые Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег СЬу РЬе Азп Ые Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг МеГ НЬз Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго С1и СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр 11е
35 40 45
61 у Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТЬг МеГ ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суе
85 90 95
Азп АЬа Ьуз Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу АЬа СЬу ТЬг
100 105 ыо
ТЬг УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
- 193 <210> 99 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 99
С1и 1 Уа1 С1п Ьеи 21п 5 С1п Зег С1у А1а Азр 10 Ьеи Уа1 Агд Зег С1у 15 А1а
Зег Не Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг А1а Зег С1у РЬе Азп Не Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг Мек Низ Тгр Уа1 Ьуз О1п Агд Рго С1и С1п С1у Ьеи С1и Тгр 11е
35 40 45
С1у Тгр 11е Азр Рго С1и Азп 61у Аар ТЬг С1и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
21η 61у Ьуз А1а ТЬг Мек ТЬг А1а Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп А1а Мек Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр 61у А1а (Пу ТЬг
100 105 110
ТНг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 100
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 100
С1и Уа1 С1п Ьеи С1п С1п Зег 61у А1а Азр Ьеи Уа1 Агд Зег (Пу А1а
1 5 10 15
Зег 11е Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг А1а Зег С1у РЬе Азп 11е Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг Мек ΗΪ3 Тгр Уа1 Ьуз С1п Агд Рго С1и С1п <31у Ьеи <31и Тгр 11е
35 40 45
61у Тгр Не Азр Рго 31и Азп еьу Азр ТЬг С1и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
194
СЬп 65 61у Ьуз АЬа ТЬг МеЬ 70 ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег 75 Зег Азп ТЬг АЬа Туг 80
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег 61и Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа РЬе Ьуз 61и Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр С1у АЬа СЬу ТЬг
100 105 ыо
ТЬг УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210 > 101
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 101
61 и УаЬ 61п Ьеи 61п СЬп Зег 61у АЬа Азр Ьеи УаЬ Агд Зег ОЬу АЬа
1 5 10 15
Зег Ые Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег С1у РЬе Азп Не Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг МеЬ НЬз Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬи СЬп ОЬу Ьеи СЬи Тгр Ые
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп 61у Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТЬг МеЬ ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи 61п Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег С1и Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суг
85 90 95
Азп А1а Рго Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр 61у АЬа С1у ТЬг
100 105 ыо
ТЬг Уа! ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 102
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 102
СЬи Уа1 С1п Ъеи С1п СЬп Зег 61у АЬа Азр Ьеи Уа1 Агд Зег 61у АЬа
1 5 10 15
195 026110
Зег 11е Ьуз Ьеи 20 Зег Суз ТЬг АЬа Зег 25 СЬу РЬе Азп 1Ье Ьуз 30 Азр Туг
Туг МеЬ НЬз Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬи СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр 11е
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп еьу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТЬг МеЬ ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Зег Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу АЬа СЬу ТЬг
100 105 110
ТНг УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210> 103 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<4оо> : 103
СЬи УаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу АЬа Азр Ьеи УаЬ Агд Зег СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег 11е Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег СЬу РЬе Азп 11е Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг МеЬ НЬз Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬи СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр 1Ье
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз АЬа ТЬг МеЬ ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа ТЬг Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу АЬа СЬу ТЬг
100 105 110
- 196
ТЬг УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 <210> 104 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 104
СЬи 1 УаЬ СЬп Ьеи 61п 5 СЬп Зег 61у АЬа Азр 10 Ьеи УаЬ Агд Зег 61у 15 АЬа
Зег 11е Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег СЬу РЬе Азп Ые Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг МеЬ НЬз Тгр Уа1 Ьуз СЬп Агд Рго СЬи СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр 1Ье
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61ΙΊ СЬу Ьуз АЬа ТЬг МеЬ ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬп Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Туг Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу АЬа СЬу ТЬг
100 105 110
ТЬг Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 105
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 105
СЬи Уа1 СЬп Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу АЬа Азр Ьеи УаЬ Агд Зег СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег Ые Ьуз Ьеи Зег Суз ТЬг АЬа Зег СЬу РЬе Азп 11е Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг МеЬ НЬз Тгр УаЬ Ьуз СЬп Агд Рго СЬи СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Ые
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго С1и Азп 61у Азр ТЬг 61и Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
- 197
61η 65 С1у Ьуз АЬа ТЬг МеЬ 70 ТЬг А1а Азр ТЬг Зег 75 Зег Азп ТЬг А1а Туг 80
Ьеи 61п Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег СЬи Азр ТНг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа УаЬ Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр С1у АЬа СЬу ТЬг
100 105 110
ТНг УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 106
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 106
СЬи УаЬ 61п Ьеи Уа1 СЬп Зег С1у А1а 61и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у А1а
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз Уа1 Зег С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг МеЬ ΗΪ3 Тгр Уа1 61п СЬп АЬа Рго 61у Ьуз СЬу Ьеи 61и Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп С1у Азр ТЬг С1и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61 п 61у Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Мек 61и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Суз Ьуз 61и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу С1п С1у ТЬг
100 105 110
МеЬ Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 107
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 107
198
61η 1 Уа1 С1п Ьеи Уа1 5 С1п Зег 61у А1а С1и ν&1 10 Ьуз Ьуз Рго С1у 15 АЬа
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз Уа1 Зег СЬу Туг ТЬг Ьеи ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Меб НЬз Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи СЬи Тгр Меб
35 40 45
С1у Тгр 11е Азр Рго С1и Азп С1у Азр ТЬг С1и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61п С1у Агд Уа1 ТЬг Меб ТЬг С1и Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Меб С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп А1а Суз Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр С1у С1п С1у ТЬг
100 105 110
Меб Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 108
<211> 118
<212> ] БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 108
61п Уа1 СЬп Ьеи Уа1 СЬп Зег СЬу А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Меб НЬз Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у СЬи С1у Ьеи С1и Тгр Меб
35 40 45
С1у Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп С1у Азр ТЬг С1и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61п С1у Агд Уа1 ТЬг Меб ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Меб С1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп А1а Суз Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу С1п С1у ТЬг
100 105 110
199 026110
МеЬ УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег
115 <210> 109 <211> 113 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 109
СЬи 1 Уа1 61п Ьеи УаЬ 5 61п Зег СЬу АЬа СЬи 10 УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 АЬа
ТНг УаЬ Ьуа Ые Зег Суа Ьуа УаЬ Зег СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг МеЬ Ηίί Тгр УаЬ СЬп СЬп АЬа Рго СЬу Ьуа СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
С1п СЬу Агд УаЬ ТНг Ые ТНг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
МеЬ СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суа
35 90 95
АЬа ТНг Суа Ьуа СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ЫО
МеЬ УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег
115
<210> ыо
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 110
СЬп УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз УаЬ Зег СЬу Туг ТЬг Ьеи ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг МеЬ НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр МеЬ
35 40 45
200 026110
С1у Тгр 50 11е Азр Рго 61и Азп 55 СЬу Азр ТЬг СЬи Туг 60 АЬа Рго Ьуз РЬе
С1п СЬу Агд УаЬ ТЬг Мек ТЬг 61и Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЪ 61и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа ТЬг Суз Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр 61у 61п 61у ТЬг
100 105 110
Мек Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 111
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 111
С1п УаЬ СЬп Ьеи УаЬ О1п Зег СЬу АЬа СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз νβΐ Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Мек НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу С1п С1у Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
СЬу Тгр ЬЬе Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61 η С1у Агд Уа1 ТЬг Мек ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Мек СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Суз Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ЫО
Мек УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 <210> 112 <2Ы> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
201 <400> 112
С1и 1 УаЬ 61п Ьеи 61п 5 61п Бег 61у АЬа Азр 10 Ьеи Уа1 Агд Бег 61у 15 АЬа
Зег 11е Ьуз Ьеи Бег Суз ТЬг А1а Бег 61у РЬе Азп 11е Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Ьуз 61п Агд Рго 61и 61п 61у Ьеи 61и Тгр 11е
35 40 45
С1у Тгр Не Азр Рго СЬи Азп 61у Азр ТЬг 61и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61 η 61у Ьуз АЬа ТЬг МеЬ ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азп ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи 61п Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Бег С1и Азр ТЬг АЬа Ча1 Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз 61и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр 61у АЬа 61у ТЬг
100 105 но
ТЬг Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 113
<211> 118
<212> 1 БЕЛОК
<213> I Искусственная
<400> 113
61 и Ча1 61п Ьеи Ча1 61п Бег С1у АЬа СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго еьу АЬа
1 5 10 15
ТЬг Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз АЬа Бег 61у Туг ТЬг РЬе Бег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд 61п АЬа Рго 61у Ьуз 61у Ьеи С1и Тгр Мек
35 40 45
61 у Тгр 11е Азр Рго 61и Азп 61у Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61п С1у Агд Уа1 ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Бег ТЬг Азр ТЬг С1у Туг
65 70 75 80
Ьеи 61и Ьеи Бег Бег Ьеи Агд Бег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
- 202
АЬа АЬа Азп Ьуз 100 СЬи Ьеи Агд Туг РЪе 105 Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп 110 СЬу ТЪг
Ьеи УаЬ ТЪг УаЬ Зег Зег
115
<210> 114
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 114
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
Ь 5 10 15
ТЪг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЪг РЪе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп Агд Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Мей
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЪг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЪе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЪг Ые ТЪг АЬа Азр ТЪг Зег ТЪг Азр ТЪг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЪг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЪе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЪг
100 105 110
Ьеи УаЬ ТЪг УаЬ Зег Зег
115
<210> 115
<211> 118
<212> БЕЛОК
<2ЬЗ> Искусственная
<400> 115
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи Уаь Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
ь 5 10 15
ТЪг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЪг РЪе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Мей
35 40 45
203 026110
СЬу Тгр 50 11е Азр Рго СЬи Азп 55 СЬу Азр ТЬг СЬи Туг 60 АЬа Рго Ьуз РЬе
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг 11е ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ЫО
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 116
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 116
СЬи УаЬ С1п Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеД
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз УаЬ ТЬг 11е ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ЫО
Ьеи УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег
115 <210> 117 <211> 118 <212> БЕЛОК
- 204
<2ΐ3> : Искусственная
<400> 117
СЬи УаЬ ОЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 ЬО 15
ТНг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТНг РНе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп Агд Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Ме!
35 40 45
СЬу Тгр Не Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТНг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Ьуз УаЬ ТНг Ые ТЬг АЬа Азр ТНг Зег ТНг Азр ТНг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТНг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РНе Азр УаЬ Тгр СЬу ОЬп СЬу ТЬг
100 105 110
Ьеи УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег
115
<210> 118
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 118
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ ОЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
ТНг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз УаЬ Зег СЬу Туг ТНг РНе ТНг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ СЬп СЬп АЬа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Ме!
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТНг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РНе
50 55 60
сьп сьу Агд УаЬ ТНг Ые ТНг АЬа Азр ТНг Зег ТНг Азр ТНг АЬа Туг
65 70 75 80
Ме! СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТНг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
- 205 026110
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг ЬОО 105 ЫО
МеТ УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
Ы 5 <210> 119 <21Ь> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> : 119
СЬп УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр МеП
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
еьп СЬу Агд УаЬ ТЬг МеЬ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
МеЬ СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ыо
МеЬ УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 <210> 120 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 120
СЬп УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа 15 10 15
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз УаЬ Зег СЬу Туг ТЬг Ьеи ТЬг Азр Туг 20 25 30
206
Туг Ьеи НЬз 35 Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа 40 Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи 45 Тгр МеГ
61 у Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг МеГ ТЬг СЬи Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
МеГ СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа ТЬг Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ыо
МеГ УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 121
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 121
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз 11е Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеГ
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61 η СЬу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа Агд Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ыо
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 <210> 122
- 207 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 122
СЬи УаЬ 1 СЬп Ьеи УаЬ 5 С1п Зег С1у АЬа СЬи 10 УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 АЬа
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег 61у Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд С1п АЬа Рго СЬи Ьуз еьу Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
61у Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг С1у Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр С1у СЬп С1у ТЬг
100 105 ыо
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 123
<211> ые
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 123
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег С1у АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго С1у АЬа
1 5 ЬО 15
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег 61у Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи ΗΪ3 Тгр УаЬ Агд С1п АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
сьп еьу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг С1у Туг
65 70 75 80
- 208
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
Азп Агд Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 124
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 124
СЬп УаЬ СЬп Ьеи Уа1 СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
ТЬг Уа1 Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Меб
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Аэр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
еьп сьу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи О1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Аэр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 125
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 125
СЬи УаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго С1у АЬа
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
- 209
Туг Ьеи НЬз 35 Тгр Уа1 Агд СЬп А1а 40 Рго СЬи Ьуз С1у Ьеи 45 СЬи Тгр Мек
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
С1п СЬу Агд Уа1 ТЬг Ые ТЬг А1а Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг А1а УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ыо
Ьеи Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 126
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 126
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа Азр УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
ТЬг Уа1 Ьуз Ые Зег Суз Ьуз А1а Зег СЬу Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр мек
35 40 45
С1у Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп С1у Азр ТЬг СЬи Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
С1п СЬу Агд Уа1 ТЬг Ые ТЬг А1а Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ЫО
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115
- 210 <210> 127 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 127
С1и 1 Уа1 61п Ьеи Уа1 5 61п Зег СЬу АЬа СЬи 10 Ьеи Ьуз Ьуз Рго 61у 15 АЬа
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег 61у Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз ОЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
61у Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп 61у Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп ОЬу Агд Уа1 ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг 61у Туг
65 70 75 80
Ьеи 61и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр 61у СЬп 61у ТЬг
100 105 ыо
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 128
<211> 118
<212> 1 БЕЛОК
<213> I Искусственная
<400> 128
61 и Уа1 С1п Ьеи Уа1 СЬп Зег ОЬу АЬа СЬи УаЬ Уа1 Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег 61у Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго 61и Ьуз С1у Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
61у Тгр Ые Азр Рго 61и Азп 61у Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61п СЬу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг 5ег ТЬг Азр ТЬг 61у Туг
65 70 75 80
- 211
Ьеи С1и Ьеи Бег Зег 85 Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа Уа1 90 Туг Туг 95 Суз
АЬа АЬа Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу СЬп С1у ТЬг
100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 129
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 129
СЬи УаЬ С1п Ьеи УаЬ СЬп Бег С1у АЬа СЬи Уа1 Ьуа Агд Рго С1у А1а
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз 11е Бег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд С1п А1а Рго С1и Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг С1у Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Бег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу 61п С1у ТЬг
100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг Уа1 Бег Зег
115
<210> 130
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 130
СЬи УаЬ С1п Ьеи Уа1 СЬп Бег СЬу АЬа 61и УаЬ Ьуз Ьуз Зег С1у А1а
1 5 10 15
212
ТЬг УаЬ Ьуз Ые 20 Зег Суз Ьуз АЬа Зег 25 СЬу Туг ТЬг РЬе Зег 30 Азр Туг
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
сьп еьу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг С1у Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр С1у 61п С1у ТЬг
100 105 ЫО
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 131
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 131
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ С1п Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго С1у АЬа
1 5 10 15
Зег УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд С1п АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг С1у Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу С1п СЬу ТЬг
100 105 ЫО
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
213 <210> 132 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 132
61и 1 Уа1 21п Ьеи Уа1 5 01п Зег еьу А1а 61и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго 61у 15 А1а
ТЬг 11е Ьуз 11е 5ег Суз Ьуз А1а Зег 01у Туг ТЬг РНе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи Шз Тгр Уа1 Агд 61п А1а Рго С1и Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр МеЬ
35 40 45
С1у Тгр 11е Азр Рго С1и Азп 61у Азр ТЬг 61и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
С1п С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг А1а Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг С1у Туг
65 70 75 80
Ьеи 61и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а А1а Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр 61у 61п С1у ТЬг
100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 133
<211> 118
<212> 1 БЕЛОК
<213> I Искусственная
<400> 133
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег 61у А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго 61у А1а
1 5 10 15
ТЬг Уа1 Ьуз Ьеи Зег Суз Ьуз А1а Зег 61у Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи Шз Тгр 7а1 Агд С1п А1а Рго С1и Ьуз 61у Ьеи 61и Тгр Ме1
35 40 45
61у Тгр 11е Азр Рго <31и Азп 61у Азр ТЬг 61и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
214
СЬп 65 СЬу Агд УаЬ ТНг 11е 70 ТНг АЬа Азр ТНг Зег 75 ТНг Азр ТНг СЬу Туг 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТНг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РНе Азр Уа1 Тгр СЬу СЬп СЬу ТНг
100 105 ыо
Ьеи УаЬ ТНг Уа1 Зег Зег
115
<210> 134
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<2ьз> : Искусственная
<400> 134
ОЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу А1а СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
ТНг УаЬ Ьуе Ые Зег Суз ТНг А1а Зег С1у Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго С1и Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеД
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп 61у Азр ТНг С1и Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
С1п СЬу Агд Уа1 ТНг Ые ТНг А1а Азр ТНг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТНг АЬа Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ЫО
Ьеи УаЬ ТНг УаЬ Зег Зег
115 <210> 135 <2Ы> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 135
С1и УаЬ С1п Ьеи УаЬ С1п Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу А1а 15 10 15
215 026110
ТЬг Уа1 Ьуз 11е 20 Бег Суз Ьуз АЬа Бег 25 С1у РЬе ТЬг РЬе Бег 30 Азр Туг
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд ОЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Ме!
35 40 45
61у Тгр 11е Азр Рго С1и Азп С1у Азр ТЬг С1и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
С1п С1у Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг АЬа Азр ТЬг Бег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу С1п 61у ТЬг
100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег
115 <210> 136 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> 136
СЬи Уа1 61п Ьеи Уа1 61п Бег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг Азп РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд С1п АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Ме!
35 40 45
С1у Тгр 11е Азр Рго С1и Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
сьп СЬу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Бег Бег Ьеи Агд Бег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
- 216
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 137 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 137
СЬи 1 УаЬ С1п Ьеи УаЬ 5 С1п Зег 61у А1а 61и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго 61у 15 А1а
ТЬг 7а 1 Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг Ые Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61 η СЬу Агд Уа1 ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа 7а1 Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз 61и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу С1п СЬу ТЬг
100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 138
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 138
СЬи Уа1 С1п Ьеи Уа1 СЬп Зег СЬу А1а С1и νβΐ Ьуз Ьуз Рго СЬу А1а
1 5 10 15
ТЬг Уа1 Ьу® Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег С1у Туг ТЬг РЬе Ьуз Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи Н1з Тгр Уа1 Агд 61п АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
61у Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп 61у Азр ТЬг 61и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
217
СЬп 65 СЬу Агд УаЬ ТЬг Ые 70 ТЬг АЬа Агр ТЬг Бег 75 ТНг Азр ТНг СЬу Туг 80
Ьеи С1и Ьеи Бег Бег Ьеи Агд Бег СЬи Азр ТЬг А1а УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу еьп СЬу ТЬг
100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Бег Бег
115
<210> 139
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 139
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Бег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 ЬО 15
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Бег СЬу Туг ТЬг РЬе 5ег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи ΗΪ5 Тгр УаЬ Ьуз СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Ме£
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьу5 РЬе
50 55 60
СЬп С1у Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТНг Азр ТНг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Бег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
ЬОО 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Бег Бег
115
<210> 140
<2Ь1> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 140
218
СЬи ν&1 1 СЬп Ьеи УаЬ 5 СЬп Зег С1у А1а С1и 10 УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 АЬа
ТНг Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз АЬа Зег С1у Туг ТЪг РНе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго С1и Ьуз С1у Ьеи СЬи Тгр 11е
35 40 45
СЬу Тгр Не Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЪг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РНе
50 55 60
С1п СЬу Агд ν&ι ТНг 11е ТЪг АЬа Азр ТЪг Зег ТЪг Азр ТЪг СЬу Туг
65 70 75 30
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТНг А1а УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа А1а Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РНе Азр УаЬ Тгр СЬу С1п С1у ТНг
100 105 110
Ьеи Уа1 ТНг Уа1 Зег Зег
115 <21ΰ> 141 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> : 141
СЬи УаЬ СЬп Ьеи Уа1 СЬп Зег СЬу А1а С1и УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу А1а
1 5 10 15
ТЪг Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЪг РЪе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи ΗΪ3 Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго С1и Ьуз С1у Ьеи СЬи Тгр Мей
35 40 45
С1у Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп С1у Азр ТЪг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЪе
50 55 60
С1п СЬу Агд А1а ТЪг 11е ТЪг АЬа Азр ТЪг Зег ТЪг Азр ТЪг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а А1а Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЪе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЪг
100 105 110
219
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 142 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 142
СЬи 1 Уа1 С1п Ьеи Уа1 СЬп 5 Зег С1у АЬа СЬи 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 А1а
ТЬг Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз АЬа Зег С1у Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп А1а Рго СЬи Ьуз 61у Ьеи 61и Тгр Меб
35 40 45
С1у Тгр 11е Азр Рго 61и Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
С1п С1у Агд Уа1 ТЬг Меб ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи 61и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег 61и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а АЬа Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 143
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 143
С1и νβΐ 61п Ьеи Уа1 С1п Зег 61у А1а О1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЬу А1а
1 5 10 15
ТЬг Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз А1а Зег 61у Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи Шз Тгр Уа1 Агд С1п АЬа Рго С1и Ьуз С1у Ьеи СЬи Тгр Меб
35 40 45
220
СЬу Тгр 50 Ые Азр Рго СЬи Азп 55 СЬу Азр ТЬг СЬи Туг 60 АЬа Рго Ьуз РЬе
61 η СЬу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ыо
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 144
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 144
СЬи УаЬ 61п Ьеи УаЬ 61п Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег 61у Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеГ
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго 61и Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег Зег Азр ТЬг 61у Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр 61у 61п 61у ТЬг
100 105 ыо
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 <210> 145 <2Ы> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
- 221 026110 <400> 145
СЬи 1 Уа1 СЬп Ьеи УаЬ 5 СЬп Зег С1у АЬа СЬи 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго 61у 15 А1а
ТЬг Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи С1и Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп 61у Азр ТЬг 61и Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61п СЬу Агд Уа1 ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азп ТЬг С1у Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 146
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 146
61и Уа1 С1п Ьеи УаЬ С1п Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго С1и Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
С1п СЬу Агд Уа1 ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Ьеи 61и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
90 95
222 026110
АЬа АЬа Азп Ьуз 100 СЬи Ьеи Агд Туг РЬе 105 Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп 110 СЬу ТЬг
Ьеи УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 147
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 147
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу А1а СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго С1у АЬа
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз 11е Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи Низ Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи С1и Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр 1Ье Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг 11е ТЬг А1а Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
МеЬ СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр 61у 61п СЬу ТЬг
100 105 но
Ьеи УаТ ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 148
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 148
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег Е1у АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 ЬО 15
ТЬг УаЬ Ьуз 1Ье Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи Шз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
- 223
С1у Тгр 50 11е Азр Рго С1и Азп 55 еьу Азр ТЬг СЬи Туг 60 АЬа Рго Ьуз РЬе
СЬп сьу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг А1а Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг С1у Туг
65 70 75 80
Ьеи С1п Ьеи Зег Зег Ьеи Агд 5ег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа А1а Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 149
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 149
СЬи Уа1 С1п Ьеи Уа1 СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег ОЬу Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Ггр Ые Азр Рго СЬи Азп ОЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп ОЬу Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу СЬп ОЬу ТЬг
100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210> 150 <2Ы> 118 <212> БЕЛОК
- 224 <213> Искусственная <400> 150
СЬи 1 УаЬ СЬп Ьеи УаЬ 5 СЬп Зег 61у АЬа СЬи 10 УаЬ Ьуз Ьуз Рго 61у 15 АЬа
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег С1у Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд 01п АЬа Рго СЬи Ьуз еьу Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
61 у Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи ТЬг Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
35 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп ОЬу ТЬг
100 105 ыо
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 151
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 151
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег С1у АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго С1у АЬа
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз С1у Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
С1п СЬу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
225 026110
АЬа АЬа Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр С1у С1п С1у ТЬг
100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 152
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 152
СЬи Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у АЬа С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЬу А1а
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуэ 11е Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго С1и Азп С1у Азр ТЬг С1и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
С1п СЬу Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг С1у Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр С1у АЬа С1у ТЬг
100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 153
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 153
СЬи УаЬ С1п Ьеи Уа1 О1п Зег СЬу А1а С1и Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у АЬа
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз 11е Зег Суз Ьуз АЬа Зег С1у Туг АЬа РЬе Зег Азр Туг
20 25 30
226 026110
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуа СЬу Ьеи СЬи Тгр Меи 35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе 50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг 65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг 100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 154
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 154
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ ι
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг Ьеи Йег Азр Туг 20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ 35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе 50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг 65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг 100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег 115 <210> 155
- 227 026110 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 155
СЬи УаЬ 1 СЬп Ьеи УаЬ 5 еьп Зег СЬу АЬа СЬи 10 УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 АЬа
ТНг УаЬ Ьуз 11е Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТНг РНе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго Е1и Ьуз СЬу Ьеи Е1и Тгр МеД
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Зег АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг 11е ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТНг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ЬЬО
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 156
<211> 118
<212> 1 БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 156
СЬи УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз 11е Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг АЬа Ьеи Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи Ыз Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеД
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТНг 11е ТНг АЬа Азр ТНг Зег ТНг Азр ТНг СЬу Туг
65 70 75 80
228
Ьеи 61и Ьеи Зег Зег 85 Ьеи Агд Зег СЬи Азр 90 ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг 95 Суз
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр 61у 61п 61у ТЬг
100 105 110
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115 <210> 157 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> : 157
СЬи Уа1 СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег С1у АЬа С1п Уа1 Ьуз Ьуз Рго С1у АЬа
1 5 10 15
ТЬг Уа1 Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег 61у Туг ТЬг Ьеи Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Мей
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп С1у Азр ТЬг С1и Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61 п С1у Агд νβΐ ТЬг 11е ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг ОЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи 61и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег 61и Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а А1а Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу СЬп С1у ТЬг
100 105 110
Ьеи Уа1 ТЬг \7а1 Зег Зег 115 <210> 158 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 158
С1и ЦаЬ 61п Ьеи ЦаЬ СЬп Зег ОЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго ОЬу АЬа
ь 5 10 15
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег 61у Туг ТЬг Ьеи Зег Азр Туг
20 25 30
229 026110
Туг Ьеи НЬз 35 Тгр Уа1 Агд С1п АЬа 40 Рго С1и Ьуз С1у Ьеи 45 С1и Тгр Ме!
СЬу Тгр ЬЬе Азр Рго С1и Азп С1у Азр ТНг С1и Зег АЬа Рго Ьуз РНе
50 55 60
С1п С1у Агд Уа1 ТНг 1Ье ТНг АЬа Азр ТНг Зег ТНг Азр ТНг С1у Туг
65 70 75 80
Ьеи С1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТНг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РНе Азр УаЬ Тгр СЬу С1п СЬу ТНг
100 105 110
Ьеи УаЬ ТНг Уа1 Зег Зег
115
<210> 159
<211> 118
<212> : БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 159
СЬи УаЬ С1п Ьеи УаЬ С1п Зег С1у А1а СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
ТНг УаЬ Ьуз 11е Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТНг РНе Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд С1п А1а Рго С1и Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Ме!
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТНг С1и Н1з АЬа Рго Ьуз РНе
50 55 60
С1п С1у Агд Уа1 ТНг 1Ье ТНг АЬа Азр ТНг Зег ТНг Азр ТНг С1у Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТНг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РНе Азр УаЬ Тгр СЬу С1п СЬу ТНг
100 105 110
230 <210> 160 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 160
61 и 1 УаЬ СЬп Ьеи УаЬ 5 СЬп Зег СЬу АЬа 61и 10 УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу 15 АЬа
ТЬг УаЬ Ьуз Ые Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг Ьеи Зег Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬи Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи НЬз АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61η СЬу Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг АЬа Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг СЬу Туг
65 70 75 80
Ьеи СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 1 ЬО
Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 161
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 161
СЬп УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи Н1з Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Меь
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп 61у Агд УаЬ ТЬг МеЬ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
- 231
МеГ СЬи Ьеи Агд Зег 85 Ьеи Агд Зег Азр Азр 90 ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг 95 Суз
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
МеГ Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 162
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 162
61 η УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суе Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг Ьеи ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр МеГ
35 40 45
61 у Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд УаЬ ТЬг МеГ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
МеГ СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 ыо
МеГ УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 163
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 163
СЬп УаЬ СЬп Ьеи Уа1 СЬп Зег 61у АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго еьу АЬа
1 5 10 15
- 232
Зег УаЬ Ьуз УаЬ 20 Зег Суз Ъу$ А1а Зег 25 СЬу Туг ТЬг РЬе ТЬг 30 Азр Туг
Туг Ьеи НЬз Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр Ые Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Зег АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
С1п СЬу Агд УаЬ ТЬг МеЬ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
МеЬ СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
А1а АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
МеЬ УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 164
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 164
СЬп УаЬ СЬп Ьеи Уа1 СЬп Зег СЬу АЬа СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа
1 5 10 15
Зег УаЬ Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа Зег СЬу Туг ТЬг Ьеи ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр МеЬ
35 40 45
СЬу Тгр 11е Азр Рго СЬи Азп СЬу Азр ТЬг СЬи Зег АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп СЬу Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
МеЬ СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр СЬу СЬп СЬу ТЬг
100 105 110
МеЬ УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег
115
233 <210> 165 <211> 118 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <40ΰ> 165
01η УаЬ 1 О1п Ьеи УаЬ 61п 5 Зег 61у АЬа 61и 10 УаЬ Ьуз Ьуз Рго 61у 15 АЬа
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг ТНг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи Низ Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго С1у СЬп С1у Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
61у Тгр 11е Азр Рго С1и Азп еьу Азр ТЬг 61и Шз АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
СЬп 61у Агд Уа1 ТЬг Мек ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг
65 70 75 80
Мек 61и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа АЬа Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр СЬу СЬп еьу ТЬг
100 105 110
Мек Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 166
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 166
Θΐη УаЬ СЬп Ьеи УаЬ СЬп Зег еьу А1а С1и Уа1 еьи Ьуз Рго еьу АЬа
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз АЬа Зег С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи Шз Тгр Уа1 Агд С1п АЬа Рго С1у СЬп 01у Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
61у Тгр 11е Азр Рго С1и Азп С1у Азр ТЬг С1и Туг АЬа Рго Ьуз РЬе
50 55 60
- 234
61η 65 61у С1у УаЬ ТЬг Мек 70 ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег 75 ТЬг Зег ТЬг АЬа Туг 80
Мек 61и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а А1а Азп Ьуз 61и Ьеи Агд Туг РЬе Азр УаЬ Тгр 61у 61п 61у ТЬг
100 105 110
Мек Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115
<210> 167
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 167
61п УаЬ О1п Ьеи УаЬ 61п Зег СЬу А1а СЬи УаЬ Ьуз Ьуз Рго СЬу А1а
1 5 10 15
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз АЬа Зег 61у Туг ТЬг РЬе ТЬг Азр Туг
20 25 30
Туг Ьеи НЬз Тгр УаЬ Агд С1п АЬа Рго С1у Агд С1у Ьеи 61и Тгр Мек
35 40 45
61у Тгр 11е Азр Рго 61и Азп 61у Азр ТЬг 61и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61п 61у Агд Уа1 ТЬг Мек ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Мек СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз
85 90 95
АЬа А1а Азп Ьуз СЬи Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр С1у С1п С1у ТЬг
100 105 110
Мек Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег
115
<210> 168
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 168
61п Уа1 61п Ьеи Уа1 61п Зег 61у А1а 61и Уа1 Ьуз Ьуз Рго 61у АЬа
1 5 10 15
- 235
Зег Уа1 Ьуз Уа1 20 Зег Суз Ьуз А1а Зег 25 61у Туг А1а РЬе ТЬг 30 Азр Туг
Туг Ьеи НЬз Тгр Уа1 Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Мек
35 40 45
С1у Тгр Ые Азр Рго С1и Азп СЬу Азр ТЬг С1и Туг А1а Рго Ьуз РЬе
50 55 60
61п 61у Агд Уа1 ТЬг Мек ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Мек СЬи Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а АЬа Азп Ьуз С1и Ьеи Агд Туг РЬе Азр Уа1 Тгр С1у СЬп С1у ТЬг
100 105 ЫО
Мек Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 <210> 169 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<юо> : 169
Азр Ые Уа1 Ьеи ТЬг 61п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Уа1 ТЬг Рго 61у
1 5 10 15
Азр Зег Уа1 Зег Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег ЬЬе Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи Н1з Тгр Туг С1п СЬп Ьуз Зег НЬз С1и Зег Рго Агд Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Ьуз РЬе А1а Зег С1п Зег Ые Зег С1у Ые Рго Зег Агд РЬе Зег 61у
50 55 60
Туг СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи Зег Ые Азп Зег Уа1 СЬи ТЬг
65 70 75 80
61и Азр РЬе С1у Агд Туг РЬе Суз С1п С1п Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
Э5 90 95
ТЬг РЬе СЬу АЬа СЬу ТЬг Ьуз Ьеи СЬи Ьеи Ьуз Агд
100 105
- 236 <210> 170 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 170
θΐυ 1 Не УаЬ Ьеи ТНг 5 СЬп Зег Рго Азр РЬе 10 С1п Эег Уа1 ТЬг Рго 15 Ьуз
СЬи Ьуз Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго Азр С1п Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Ьуз РЬе А1а Йег С1п Зег Не Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Эе г С1у Йег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Ые Азп Зег Ьеи СЬи АЬа
65 70 75 80
СЬи Азр АЬа АЬа ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п Зег Азп Зег Тгр Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
100 105 <210> 171 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> : 1.71
С1и 11е Уа1 Меб ТЬг С1п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Уа1 Зег Рго С1у
1 5 10 15
СЬи Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег 61п Зег 11е Зег 11е Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг РЬе А1а Зег С1п Зег 11е Зег СЬу Ые Рго АЬа Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег СЬу Зег С1у ТЬг СЬи РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи СЬп Зег
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа Уа1 Туг Туг Суз С1п С1п Зег Азп Зег Тгр Рго Ьеи
85 90 95
- 237
ТЬг РЬе С1у б1у С1у ТЬг Ьуз \7а1 С1и 11е Ьуз Агд 100 105 <210> 172 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 172
61и 1 11е УаЬ Ьеи ТЬг 5 Е1п Зег Рго АЬа ТЬг 10 Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 15 С1у
СЬи Агд АЬа ТЬг Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1п Зег 1Ье Зег 1Ье Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг С1п Е1п Ьуз Рго С1у Е1п АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег ЕЬп Зег 1Ье Зег Е1у 1Ье Рго АЬа Агд РЬе Зег Е1у
50 55 60
Зег ЕЬу Зег ЕЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 1Ье Зег Зег Ьеи 61и Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе А1а УаЬ Туг Туг Суз Е1п 21п Зег Азп Зег Тгр Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе 61у 61у 61у ТЬг Ьуз УаЬ Е1и 1Ье Ьуз Агд
100 105
<210> 173
<211> 108
<212> : БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 173
Азр Не С1п МеЬ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Уа1 Зег АЬа Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Зег 1Ье Зег 1Ье Азп
20 25 30
Ьеи Н1з Тгр Туг Οίη Е1п Ьуз Рго Е1у Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег С1п Зег 1Ье Зег Е1у УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег Е1у
55 60
238
Зег 65 СЬу Зег СЬу ТНг Азр 70 РНе Зег Ьеи ТНг Ые 75 Азп Зег Ьеи СЬп Рго 80
СЬи Азр РНе АЬа ТНг Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РНе Рго Ьеи
85 90 95
ТНг РНе еьу СЬу СЬу ТНг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
100 105
<210> 174
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 174
Азр Ые СЬп МеЬ ТНг СЬп Зег Рго Зег Зег УаЬ Зег АЬа Зег УаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТНг Ые ТНг Суз Агд А1а Зег СЬп Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Ьуз РНе АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РНе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТНг Азр РНе Зег Ьеи ТНг Ые Азп Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РНе АЬа ТНг Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РНе Рго Ьеи
85 90 95
ТНг РНе СЬу СЬу СЬу ТНг Ьуз УаЬ СЬи 11е Ьуз Агд
100 105
<2Ь0> 175
<211> 108
<2Ь2> БЕЛОК
<2ЬЗ> Искусственная
<400> 175
Азр Ые СЬп МеЬ ТНг СЬп Зег Рго Зег Зег УаЬ Зег АЬа Зег УаЬ СЬу
Ь 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТНг Не ТНг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Не Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
239
Туг РЬе АЬа Зег ОЬп Зег Ые Зег С1у УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег 61у
50 55 60
Туг С1у Зег ОЬу ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг Ые Азп Зег Ьеи ОЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз С1п ОЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе ОЬу ОЬу СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
100 105
<210> 176
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 176
Азр Ы е СЬп Мек ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег УаЬ Зег АЬа Зег УаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг Суз Агд АЬа Зег 61п Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп οίη Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег ОЬу ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг Ые Азп Зег Ьеи 01п Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа Агд Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
100 105
<210> 177
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 177
Азр Ые ОЬп Мек ТЬг ОЬп Зег Рго Зег Зег УаЬ Зег АЬа Зег УаЬ ОЬу
1 5 10 15
240 026110
Азр Агд УаЬ ТЪг 20 Ые ТЪг Суз Агд АЬа 25 Зег СЬп Зег Ые Зег 30 Ые Азп
Ьеи Шз Тгр Туг С1п СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Ьуз РЪе АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЪе Зег СЬу
50 55 60
Туг СЬу Зег СЬу ТЪг Азр РЪе Зег Ьеи ТЪг Ые Азп Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЪе АЬа Агд Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЪе Рго Ьеи
85 90 95
ТЪг РЪе СЬу СЬу СЬу ТЪг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
100 105
<210> 178
<211> 108
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 178
СЬи Ые Уа1 Ьеи ТЪг СЬп Зег Рго АЬа ТЪг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу
1 5 10 15
СЬи Агд АЬа ТЪг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи Шз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РЪе АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег СЬу Ые Рго АЬа Агд РЪе Зег СЬу
50 55 60
5ег СЬу Зег СЬу ТЪг Азр РЪе ТЪг Ьеи ТЪг Ые Зег Зег Ьеи СЬи Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЪе А1а УаЬ Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЪе Рго Ьеи
85 90 95
ТЪг РЪе СЬу СЬу СЬу ТЪг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
100 105
<210> 179 <2Ы> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
- 241
<40 0> 179
С1и 11е Уа1 МеЬ ТЬг Θΐη Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Уа1 Зег Рго С1у
1 5 10 15
61и Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Су® Агд А1а Зег С1п Зег 11е Зег 11е Азп
20 25 30
Ьеи Н1з Тгр Туг С1п Θΐη Ьуз Рго 61у 61п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг РЬе А1а Зег С1п Зег 11е Зег СЬу 11е Рго А1а Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег 01у ТЬг С1и РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1п Зег
65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суз 61ь С1ь Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТНг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз Уа1 СЬи 11е Ьуз Агд
100 105
<210> 180
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 180
Азр 11е Уа1 МеЬ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Уа1 Зег АЬа Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Су® Агд А1а Зег С1п Зег 11е Зег 11е Азп
20 25 30
Ьеи ΗΪ3 Тгр Туг Е1п Θΐη Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг РЬе А1а Зег 61п Зег 11е Зег СЬу Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег СЬу Зег С1у ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг 11е Азп Зег Ьеи С1п Рго
65 70 75 80
С1и Азр РНе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п Зег Азп Зег РНе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе С1у 01у С1у ТЬг Ьуз Уа1 01и 11е Ьуз Агд
100 105
242 <210> 181 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 181
Азр 1 Не С1п Ьеи ТНг 5 С1п Зег Рго Зег Зег 10 Уа1 Зег А1а Зег Уа1 15 СЬу
Азр Агд Уа1 ТНг Не ТНг Суз Агд А1а Зег С1п Зег 11е Зег 11е Азп
20 25 30
Ьеи ΗΪ5 Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РНе А1а Зег С1п Зег 11е Зег С1у 7а1 Рго Зег Агд РНе Зег О1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТНг Аэр РНе Зег Ьеи ТНг 11е Аэп Зег Ьеи С1п Рго
65 70 75 80
61и Азр РЬе А1а ТНг Туг Туг Суз С1п С1п Зег Азп Зег РНе Рго Ьеи
85 90 95
ТНг РНе С1у С1у С1у ТНг Ьуз Уа1 С1и 11е Ьуз Агд
100 105 <210> 182 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> 182
Азр 11е С1п МеД ТНг СЬп Зег Рго Зег Зег Уа1 Зег А1а ТНг УаЬ С1у
1 5 10 15
Азр Агд ТНг Ые ТНг Суз Агд А1а Зег С1п Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи Н13 Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Не
35 40 45
Туг РНе А1а Бег СЬп Бег Не Зег С1у 7а1 Рго Зег Агд РНе Бег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег СЬу ТНг Азр РНе Зег Ьеи ТНг Не Азп Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
С1и Азр РНе АЬа ТНг Туг Туг Суз С1п С1п Зег Азп Бег РНе Рго Ьеи
85 90 95
243
ТЬг РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи 11е Ьуз Агд 100 105 <210> 183 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 183
Азр 1 Ые СЬп Ме1 ТЬг 5 СЬп Зег Рго Зег Зег Уа1 10 Зег АЬа Зег Рго 15 СЬу
Азр Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи Нгз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег СЬп Зег 11е Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг Ые Азп Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
100 105
<210> 184
<211> 108
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 184
Азр Ые СЬп МеГ ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег УаЬ Зег АЬа Зег УаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи Нгз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Зег СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег СЬп Зег 11е Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
55 60
- 244
Зег 65 СЬу Зег С1у ТЬг Азр 70 РЬе Зег Ьеи ТЬг 11е 75 Азп Зег Ьеи С1п Рго 80
СЬи Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п Οίη Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу С1у СЬу ТЬг Ьуе УаЬ С1и Не Ьуе Агд
100 105 <210> 185 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> 185
Азр 1 Ые С1п МеЬ ТЬг 5 С1п Зег Рго Зег Зег 10 Уа1 Зег АЬа Зег Уа1 15 СЬу
Азр Агд УаЬ ТЬг 11е ТЬг Суе Агд А1а Зег С1п Зег 11е Зег 11е Азп
20 25 30
Леи ΗΪ5 Тгр Туг С1п С1п Ьуе Рго Нгз Луз А1а Рго Луз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег С1п Зег 11е Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
бег СЬу Зег С1у ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг Ые Азп Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
С1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуе УаЬ С1и Ые Ьуе Агд
100 105
<210> 186
<211> 108
<212> : БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400> 136
Азр Ые С1п МеЬ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Уа1 Зег АЬа Зег УаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТЬг 11е ТЬг Суе Агд А1а Зег С1п Зег 11е Зег 11е Азп
20 25 30
Леи ΗΪ3 Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1и А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
245
Туг РЬе 50 А1а Зег С1п Зег 11е 55 Зег С1у Уа1 Рго Зег 60 Агд РЬе Эег О1у
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе Зег Ъеи ТЬг Не Азп Зег Ъеи СЬп Рго
65 70 75 80
61и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п Зег Азп Зег РЬе Рго Ъеи
85 90 95
ТЬг РЬе О1у С1у С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и 11е Ъуз Агд
100 105
<210> 187
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 187
Азр 11е 61п Мей ТЬг 61п Зег Рго Зег Зег Уа1 Зег А1а Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Зег 11е Зег 11е Азп
20 25 30
Ьеи ΗΪ5 Тгр Туг С1П С1п Ьуз Рго О1у Ьуз 5ег Рго Ьуз Ъеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег С1п Зег 11е Зег С1у ν^ι Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Эе г С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе Зег Ъеи ТЬг Пе Азп Зег Ъеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз С1п С1п Зег Азп Зег РЬе Рго Ъеи
85 90 95
ТЬг РЬе 61у С1у С1у ТЬг Ьуз Уа1 С1и 11е Ъуз Агд
100 105
<210> 188
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 183
Азр Не С1п Мей ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Уа1 Зег АЬа Зег Уа1 Л1у
1 5 10 15
- 246 026110
Азр Агд УаЬ ТЬг 20 Ые ТЬг Суз Агд АЬа 25 Зег СЬп Зег Ые Зег 30 Ые Азп
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег еьп Зег Ые Зег СЬу Ые Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Аар РЬе Зег Ьеи ТЬг Ые Азп Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
61и Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
100 105
<210> 189
<211> 108
<212 > БЕЛОК
<213> : Искусственная
<400 189
Азр 11е СЬп Мер ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег УаЬ Зег АЬа Зег УаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг Суа Агд АЬа Зег СЬп Зег 11е Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуа АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег СЬп Зег 11е Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг Ые Азп Зег Ьеи СЬп ТЬг
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Туг Туг Суа СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуа УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
100 105
<210 190
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
247 026110 <400> 190
Азр 1 11е СЬп Мек ТЬг 5 СЬп Зег Рго Зег Зег 10 Уа1 Зег АЬа Зег УаЬ 15 СЬу
Азр Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег ЬЬе Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи Шз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РЬе А1а Зег СЬп Зег 11е Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг ЬЬе Азп Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа ТЬг Туг РЬе Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи ЬЬе Ьуз Агд
100 105
<210> 191
<211> 108
<212> : БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 191
Азр 11е Уа1 Мек ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Уа1 Зег А1а Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТЬг ЬЬе ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи Шз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РЬе А1а Зег СЬп Зег Ые Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг ЬЬе Азп Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа Агд Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи ЬЬе Ьуз Агд
100 105
248 026110
<210> <211> <212> <213> <400> 192 108 БЕЛОК
Искусственная УаЬ Зег АЬа Зег УаЬ 15 СЬу
192 Зег Зег 10
Азр 1 Ые СЬп Ьеи ТЬг 5 СЬп Зег Рго
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег 11е Зег Не Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег СЬу Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг 11е Азп Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа Агд Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу 61у СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
100 105
<210> 193
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 193
Азр Ые СЬп МеЬ ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег УаЬ Зег АЬа ТЬг УаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТЬг 11е ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг Ые Азп Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа Агд Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
249
ТНг РЬе С1у С1у С1у ТНг Ьуз Уа1 С1и Не Ьуз Агд 100 105 <210> 194 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 194
Азр 1 Ые οίη Мек ТЬг 5 СЬп Зег Рго Зег Зег 10 УаЬ Зег АЬа Зег Рго 15 С1у
Азр Агд Уа1 ТЬг Ые ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег СЬу Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг Ые Азп Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
С1и Азр РЬе АЬа Агд Туг Туг Суз СЬп С1п Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе С1у СЬу СЬу ТЬг Ьуз Уа1 СЬи Ые Ьуз Агд
100 105
<210> 195
<211> 108
<212> : БЕЛОК
<213> 1 Искусственная
<400> 195
Азр Не С1п Мек ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег УаЬ Зег АЬа Зег УаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТЬг Ые ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег Ые Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Зег СЬу Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег СЬу Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
55 60
250
5ег 65 С1у Зег С1у ТЬг Азр 70 РЬе Зег Ьеи ТЬг Не 75 Азп Зег Ьеи С1п Рго 80
61и Азр РЬе А1а Агд Туг Туг Суз С1п С1п Зег Азп Зег РЬе Рто Ьеи
85 90 95
ТНг РЬе С1у С1у С1у ТЬг Ьуз 7а1 С1и Не Ьуз Агд
100 105
<210> 196
<211> 10 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 196
Агр Ые Οίη МеЬ ТЬг С1п Зег Рто Зег Зег Зег А1а Зег ν&ι С1у
1 5 10 15
Агр Агд Уа1 ТНг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Зег Не Зег Не Агп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг Οίη С1п Ьуз Рто ΗΪ3 Ьуз А1а Рто Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РНе А1а Зег С1п Зег Не Зег С1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег С1у
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг Не Азп Зег Ьеи 01п Рго
65 70 75 80
61и Агр РЬе АЬа Агд Туг Туг Суз О1п О1п Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТНг РНе О1у СЬу Й1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и Не Ьуз Агд
100 105
<210> 197
<2И> 103
<212> : БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 197
Азр Ые Οίη МеЬ ТЬг С1п Зег Рго Зег Зег Уа1 Зег А1а Зег Уа1 С1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТНг Не ТЬг Суз Агд А1а Зег С1п Зег Не Зег Не Агп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг Οίη С1п Ьуз Рго С1у С1и А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
251
Туг РНе 50 А1а Зег СЬп Зег 11е 55 Зег СЬу Уа1 Рго Зег 60 Агд РЬе Зег СЬу
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг 11е Азп Зег Ьеи С1п Рго
65 70 75 80
61и Азр РЬе АЬа Агд Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РНе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи 11е Ьуз Агд
100 105
<210> 198
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 198
Азр 11е СЬп МеЬ ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег Уа1 Зег А1а Зег УаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег 11е Зег 11е Азп
20 25 30
Ьеи ΗΪ3 Тгр Туг С1п Θ1Π Ьуз Рго Е1у Ьуз Зег Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг РНе АЬа Зег СЬп Зег 11е Зег СЬу Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг 11е Азп Зег Ьеи С1п Рго
65 70 75 80
<31и Азр РЬе АЬа Агд Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РНе С1у СЬу СЬу ТЬг Ьуз Уа1 СЬи 11е Ьуз Агд
100 105
<210> 199
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 199
Азр Не СЬп МеЬ ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег Уа1 Зег АЬа Зег Уа1 СЬу
10 15
252
Азр Агд УаЬ ТЬг 20 Не ТЬг Суз Агд АЬа 25 Зег СЬп Зег Ые Зег 30 Ые Азп
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые
35 40 45
Туг РЬе АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег СЬу Ые Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
50 55 60
8ег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг Ые Азп Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
61и Азр РЬе АЬа Агд Туг Туг Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи Ые Ьуз Агд
100 105 <210> 200 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> 200
Азр ЬЬе СЬп 1 Меб ТЬг 5 СЬп Зег Рго Зег Зег 10 УаЬ Зег АЬа Зег УаЬ 15 С1у
Азр Агд УаЬ ТНг 20 Ые ТЬг Суз Агд АЬа 25 Зег СЬп Зег Ые Зег 30 Ые Азп
Ьеи НЬз Тгр 35 Туг СЬп СЬп Ьуз Рго 40 СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз 45 Ьеи Ьеи 11е
Туг РЬе АЬа 50 Зег СЬп Зег ЬЬе 55 Зег СЬу УаЬ Рго Зег 60 Агд РЬе Зег С1у
Зег СЬу Зег 65 б1у ТЬг Азр 70 РЬе Зег Ьеи ТЬг Ые 75 Азп Зег Ьеи СЬп ТНг 80
СЬи Азр РЬе Аба Агд 85 Туг Туг Суз СЬп СЬп 90 Зег Азп Зег РЬе Рго 95 Ьеи
ТЬг РЬе СЬу б1у 100 СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи 105 ЬЬе Ьуз Агд
<2Ю> 201 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
253
<400> 201
Азр Ые СЬп МеЬ ТНг СЬп Зег Рго Зег Зег УаЬ Зег АЬа Зег УаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд УаЬ ТНг 11е ТНг Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег Ые Зег 11е Азп
20 25 30
Ьеи НЬз Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг РНе АЬа Зег СЬп Зег 11е Зег СЬу Уа1 Рго Зег Агд РНе Зег СЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе Зег Ьеи ТЬг Ые Азп Зег Ьеи СЬп Рго
65 70 75 80
СЬи Азр РЬе АЬа Агд Туг РЬе Суз СЬп СЬп Зег Азп Зег РЬе Рго Ьеи
85 90 95
ТНг РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз Уа1 СЬи Ые Ьуз Агд
100 105 <210> 202 <2Ы> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 202
СЬп УаЬ СЬп Ьеи Уа1 СЬп Зег СЬу АЬа СЬи Уа1 Ьуз Ьуз Рго СЬу АЬа 15 10 15
Зег Уа1 Ьуз УаЬ Зег Суз Ьуз АЬа Зег С1у Туг ТЬг РЬе ТЬг 20 25 30 <210> 203 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 203
Тгр УаЬ Агд СЬп АЬа Рго СЬу СЬп СЬу Ьеи СЬи Тгр Мек СЬу 15 10 <210> 204 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 204
Агд Уа1 ТНг МеЬ ТНг ТНг Азр ТНг Зег ТНг Зег ТНг АЬа Туг МеЬ СЬи 15 10 15
254
Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Аар ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз Азп А1а 20 25 30 <210> 205 <211> И <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 205
Тгр 01у 61п С1у ТЬг МеГ 7а1 ТЬг Уа1 Зег Зег 1 5 10 <2Ю> 206 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 206
С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 С1п Зег С1у А1а С1и ν&1 Ьуз Ьуз Рго С1у АЬа 15 10 15
ТЬг Уа1 Ьуз 11е Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у Туг ТЬг РЬе Зег 20 25 30 <210> 207 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 207
Тгр \/а1 Агд О1п А1а Рго С1и Ьуз 61у Ьеи С1и Тгр МеТ. С1у 1 5 10 <210> 208 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 208
Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг А1а Азр ТЬг Зег ТЬг Азр ТЬг О1у Туг Ьеи О1и 15 10 15
Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а 7а1 Туг Туг Суз А1а А1а
20
<210> 209
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 209
255
Тгр О1у Οίη Е1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг УаЬ Зег Зег 15 10 <210> 210 <211> 23 <212> ВЕЛОК <213> Искусственная <400> 210
СЬи 11е УаЬ Мек ТЬг ОЬп Зег Рго АЬа ТЬг Ьеи Зег УаЬ Зег Рго ОЬу 15 10 15
С1и Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суэ <210> 211 <211> 15 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 211
Тгр Туг СЬп С1п Ьуз Рго СЬу С1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи 11е Туг 15 10 15 <210> 212 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная
<400> 212
СЬу 11е Рго А1а Агд РЬе Зег СЬу Зег 61у Зег СЬу ТЬг С1и РЬе ТЬг
1 5 10 15
Ьеи ТЬг 1Ье Зег Зег Ьеи СЬп Зег СЬи Азр РЬе АЬа УаЬ Туг Туг Суз
25 30 <210> 213 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Искусственная <400> 213
РЬе 61у СЬу СЬу ТЬг Ьуз УаЬ СЬи 11е Ьуз Агд 15 10
<210> 214
<211> 23
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400> 214
256
Азр 11е СЬп Мей ТЪг СЬп Зег Рго Зег Зег УаЬ Зег АЬа Зег УаЬ СЬу
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЪг Ые ТЪг Суз
20
<210 215
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400 215
Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи Ые Туг
1 5 10 15
<210 216
<211> 32
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная
<400 216
СЬу УаЬ Рго Бег Агд РЪе Зег СЬу Зег СЬу Зег СЬу ТЪг Азр РЪе Зег
1 5 10 15
Ьеи ТЪг 11е Азп Зег Ьеи СЬп ТЪг СЬи Азр РЪе АЬа ТЪг Туг Туг Суз
20 25 30
<210 217 <2Ы> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400 217
саддйдсадс Ъддйдсадад сддадссдаа дйдаадааас саддсдссйс сдйдааддйд 60
Ьссйдсаадд ссадсддсйд сассЫсасс дасйасйайс йдсасйдддй ссдссаддса 120
ссадддсадд дасйддаайд даЬдддсйдд айсдассссд адаасддсда ЪассдадЬас 180
дсссссаадй Ьссадддсад адйдассайд ассассдаса ссадсассад сассдссйас 240
айддаасйдс ддадссйдад аадсдасдас ассдссдйдй асйасйдсаа сдссаасааа 300
дадсЬдсддй асййсдасдй дйддддссад ддсасаайдд Ьсассдйдйс СЙСЙ 354
<210> 21Э <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <40 0 21Э
саддйдсадс Ъддйдсадад сддадссдаа дйдаадааас саддсдссйс сдйдааддйд 60
Ьссйдсаадд ссадсддсйа сассЫсасс дасйасйайс Ьдсасйдддй ссдссаддса 120
ссадддсадд дасЬддаайд даЬдддсйдд аЬсдассссд адаасддсда ЬассдадЬас 180
- 257 026110
дсссссаад! Оссадддсад ад!дассд!д ассассдаса ссадсассад сассдссОас 240
а!ддаас!дс ддадссбдад аадсдасдас ассдссдКд! ас!ас!дсаа сдссаасааа 300
дадсЬдсдд! ас!!сдасд! д!ддддссад ддсасааКдд !сассд!д!с с!с! 354
<210> 219 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 219
саддЬдсадс !дд!дсадад сддадсссаа дЬдаадааас саддсдссКс сд!даадд!д 60
1сс!дсаадд ссадсддс!а сассЫсасс дас!ас!а!с !дсас!ддд! ссдссаддса 120
ссадддсадд дасКддааОд да!дддс1дд аКсдассссд адаасддсда ЬассдадОас 180
дсссссаад! !ссадддсад адЬдассаЬд ассассдаса ссадсассад сассдссЬас 240
а!ддаас!дс ддадсс!дад аадсдасдас ассдссдСд! ас!ас!дсаа сдссаасааа 300
дадсИдсдд! асЫсдасд! д!ддддссад ддсасааВдд 1сассд!д!с с!с! 354
<210> 220 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 220
саддОдсадс 1дд!дсадад сдд&дссдаа дбдаадааас саддсдссОс сд!даадд!д 60
!сс!дсаадд ссадсддс!а сасссЬсасс дас!ас!а!с 1дсас!ддд! ссдссаддса 120
ссадддсадд дас!ддаа!д да!дддс!дд аЬсдассссд адаасддсда ЬассдадЬас 180
дсссссаад! Ьссадддсад адЬдассаЪд ассассдаса ссадсассад сассдссЬас 240
а!ддаас1дс ддадссбдад аадсдасдас ассдссдОд! ас!ас1дсаа сдссаасааа 300
дадсЬдсдд! асЫсдасд! дОддддссад ддсдсааКдд 1сассд!д1с с!с! 354
<210> 221 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 221
дада!сд!да !дасссадад сссЪдссасс сЬдадсдСд! с!ссаддсда дададссасс 60
с!д!сс!д!а дадссЬссса дадсаЬсадс а!саа!с!дс а!!дд!а!са дсадаадссс 120
ддссаддссс ссадасбдс! да!с!ас!!с дссадссад! ссабсадсдд сабссссдсс 180
адаЫЫЫд дсадсддсад сддсассдад 1!сассс!да ссабсадсад ссбдсададс 240
даддасЫсд ссдЬдЬаЫа Ыдссадсад адсаасадс! ЬсссссЬдас сЫсддсдда 300
ддсассаадд 1ддада!саа дед! 324
- 258 026110 <210> 222 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 222
саддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас саддсдсскс сдкдааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сасскксасс даскаскакс кдсаскдддк ссдссаддса 120
ссадддсадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадсас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад аадсдасдас ассдссдкдк аскаскдсаа сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсасаакдд ксассдкдкс скск 354
<210> 223 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 223
саддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас саддсдсскс сдкдааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сасскксасс даскаскакс кдсаскдддк ссдссаддса 120
ссадддсадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадксс 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад аадсдасдас ассдссдкдк аскаскдсаа сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсасаакдд ксассдкдкс скск 354
<210> 224 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 224
саддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас саддсдсскс сдкдааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сасс££сасс даскаскакс кдсаскдддк ссдссаддса 120
ссадддсадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад аадсдаадас ассдссдкдк аскаскдсаа сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсасаакдд ксассдкдкс скск 354
<210> 225
<211> 354
<212> ДНК
<213> Искусственная
<400> 225
- 259 026110
саддЬдсадс НддЪдсадад сддадссдаа дЪдаадааас саддсдссЪс сд5даадд5д 60
НссНдсаадд ссадсддсНа сассЪНсасс дасЬасНаНс ЪдсасНдддН ссдссаддса 120
ссадддсадд дасЪддааНд даДдддсДдд аЪсдассссд адаасддсда НассдадЬас 180
дсссссаадН Ъссадддсад адДдассаДд ассассдаса ссадсассад сассдссЪас 240
а5ддаас5дс ддадсс1;дад аадсдасдас ассдссдЪдЪ асЪасНдсаа сдссаасааа 300
дадсИдсддН асНИсдасдИ дДддддссад ддсасааСдд ИсассдИдсс СИСИ 354
<210> 226 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 226
дадаДсдДда Ддасссадад сссДдссасс сДдадсдДдД сДссаддсда дададссасс 60
сДдДссДдДа дадссДссса дадсаДсадс аДсааДсДдс аДДддДаДса дсадаадссс 120
ддссаддссс ссадасДдсД даДсДасДДс дссадссадД ссаДсадсдд саДссссдсс 180
адаДДДДсДд дсадсддсад сддсассдад ДДсасссДда ссассадсад ссДдсададс 240
даддасДДсд ссдДдДаДДа ДДдссадсад адсаасадсД ДсссссДдас сДДсддсдда 300
ддсассаадд ДддадаДсаа дсдД 324
<210> 227 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 227
саддДдсадс ДддДдсадад сддадссдаа дДдаадааас саддсдссДс сдДдааддДд 60
ДссДдсаадд ссадсддсДа сасссДсасс дасДасДаДс ДдсасДдддД ссдссаддса 120
ссадддсадд дасДддааДд даДдддсДдд аДсдассссд адаасддсда ДассдадДас 180
дсссссаадД Дссадддсад адДдассаДд ассассдаса ссадсассад сассдссДас 240
аДддаасДдс ддадссДдад аадсдасдас ассдссдДдД асДасДдсаа сдссаасааа 300
дадсДдсддД асДДсдасдД дДддддссад ддсасааДдд ДсассдДдДс сДсД 354
<210> 228 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 228
саддДдсадс ДддДдсадад сддадссдаа дДдаадааас саддсдссДс сдДдааддДд 60
ДссДдсаадд ссадсддсДа сассДДсасс дасДасДаДа ДдсасДдддД ссдссаддса 120
ссадддсадд дасДддааДд даДдддсДдд аДсдассссд адаасддсда ДассдадДас 180
дсссссаадД Дссадддсад адДдассаДд ассассдаса ссадсассад сассдссДас 240
- 260 026110
а£ддаас1;дс ддадсс^дад аадсдасдас ассдссд^дЪ асКас£дсаа сдссаасааа 300
дадс£дсдд£. ас££сдасд£ д1;ддддссад ддсасааЪдд ДсассдЪдЪс сЬсЬ 354
<210> 229 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 229 саддИдсадс 7.ддС.дсадад сддадссдаа дИддадааас саддсдсссс сд^дааддДд 60
ЪссЪдсаадд ссадсддсда сассИЪсасс дасС.ас£а£с ИдсасЪдддЪ ссдссаддса 120
ссадддсадд дас£ддаа1;д даКдддс1;дд аЪсдассссд адаасддсда 1;ассдад£ас 180
дсссссаад^ £ссадддсдд адКдассаКд ассассдаса ссадсассад сассдсс^ас 240
а£ддаас£дс ддадссДдад аадсдасдас ассдссдЬдИ ас£ас£дсаа сдссаасааа 300
дадс£дсдд£. асДИсдасдИ д^ддддссад ддсасааНдд ИсассдИдИс СИСИ 354
<210> 230 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 230
саддКдсадс 7дд£дсадад сддадссдаа дЪдаадааас саддсдссКс сдЪдаадд^д 60
ЪссЪдсаадд ссадсддсда сассК1;сасс дас£ас1;а1;с Ъдсас£ддд1; ссдссаддса 120
ссадддсддд дасгддааДд даидддсЪдд агсдассссд адаасддсда Ъассдадъас 180
дсссссаад£ £ссадддсад адИдассаЬд ассассдаса ссадсассад сассдссЬас 240
а£ддаас£.дс ддадссДдад аадсдасдас ассдссдИдИ асИас^дсаа сдссаасааа 300
дадс£дсдд£. ас££сдасд£ д1;ддддссад ддсасааЪдд ДсассдЪдЪс сЪсЪ 354
<210> 231 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 231
дадаЪсдЪда Ъдасссадад сссЪдссасс сЪдадсдЪдЪ сДссаддсда дададссасс 60
сЪдЪссЪдЪа дадссЪссса дадсаЪсадс аЪсааЪсЪдс аЪЪддЪаЪса дсадаадссс 120
ддссаддссс ссадасЪдсЪ даЪсЪасЪЪс дссадссадЪ ссассадсдд саЪссссдсс 130
адаЪЪЪЪсЪд дсадсддсад сддсассдад ЪЪсасссЪда ссаЪсадсад ссЪдсададс 240
даддасЪЪсд ссдЪдЪаЪЪа ЪЪдссадсад адсаасадсЪ ЪсссссЪдас сЪЪсддсдда 300
ддсассаадд ЪддадаЪсаа дсд£ 324
<210> 232
- 261 026110
<211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 232 саддкдсадс кдккдсадад сддадссдаа дкдаадааас саддсдсскс сдкдааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сасскксасс даскаскакс кдсаскдддк ссдссаддса 120
ссадддсадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад аадсдасдас ассдссдкдк аскаскдсаа сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсасаакдд ксассдкдкс скск 354
<210> 233 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 233 саддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас саддсдсскс сдкдааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сдсскксасс даскаскакс кдсаскдддк ссдссаддса 120
ссадддсадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад аадсдасдас ассдссдкдк аскаскдсаа сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсасаакдд ксассдкдкс скск 354
<210> 234 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 234 саддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас саддсдсскс сдкдааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сдсскксасс даскаскакс кдсаскдддк ссдссаддса 120
ссадддсадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдкссакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад аадсдасдас ассдссдкдк аскаскдсаа сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк. дкддддссад ддсасаакдд ксассдкдкс скск 354
<210> 235 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 235 дадаксдкда кдасссадад ссскдссасс скдадсдкдк скссаддсда дададссасс 60
- 262 026110
сЗдЗссКдКа дадссКссса дадсаОсадс аКсааКсКдс аЬКддЬаКса дсадаадссс 120
ддссаддссс ссадасЬдсЬ даЬсИасЫс дссадссадС ссаЬсадсдд саЬссссдсс 180
адаЪКЬКсКд дсадсддсад сддсассдад ЬКсасссКда ссаЬсадсад ссЬдсададс 240
даддасЫсд ссдКдсаЫза Ыздссадсад адсаасадсК КсссссКдас сЫзсддсдда 300
ддсассаадд ЬддадаЬсаа дед! 324
<21ΰ> 236 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 236
дадаЬсдЬда Ьдасссадад сссбдссасс сЬдадсдЬдЬ сЬссаддсда дададссасс 60
сЬдЪссСдСа дадссЬссса дадсабсадс аЬсааЬсЬдс аЬСддЬаСса дсадаадссс 120
ддссаддссс ссадасОдсН у а 1. с 1 ас 1.1 с дссадасадК ссаЬсадсдд сабссссдсс 180
адаШКсКд дсадсддсад сддсассдад ЬКсасссКда ссаСсадсад ссбдсададс 240
даддасКЬсд ссдЬдЬаЬЬа Ыдссадсад адсаасадсП КсссссЬдас сЬЬсддсдда 300
ддсассаадд ЬддадаЬсаа дсдЬ 324
<210> 237 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 237
дадаКсдЬда Одасссадад сссбдссасс сКдадсаКдК сЬссаддсда дададссасс 60
сбдЬссКдКа дадссКссса дадсабсадс аКсааКсКдс аСКддЬаКса дсадаадссс 120
ддссаддссс ссадасЬдсЬ даЬсЬасЬЬс дссадссадЬ ссаЬсадсдд саЬссссдсс 180
адаЫЮСсСд дсадсддсад сддсассдад ЫссасссЬда ссаЬсадсад ссЬдсададс 240
даддасКЬсд ссдЬдЬаЬЬа Ыдссадсад адсаасадсК КсссссЬдас сЬЬсддсдда 300
ддсассаадд ЬддадаЬсаа дед! 324
<210> 238 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 238
дадаСедЬда Ьдасссадад сссЬдссасс сЬдадсдЬдС сЬссаддсда дададссасс 60
сЬдЪссКдКа дадссЬссса дадсаЬсадс аКсааКсКдс аЬКддЬаКса дсадаадссс 120
ддссаддссс ссадасЬдсЬ даЬсЬасЬЬс дссадссадЬ ссаЬсадсдд сабссссдсс 180
адасСсСсСд дсадсддсад сддсассдад ЫсасссКда ссаЬсадсад ссЬдсададс 240
дадддсЫсд ссдКдКаК1а Ыдссадсад адсаасадсК КсссссКдас сН1еддедда 300
- 263 026110
ддсассаадд ЬддадаЬсаа дед! 324
<210> 239 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 239 дадаЬсдЬда Ьдасссадад сссЬдссасс сЬдадсдЬдЬ сЬссаддсда дададссасс 60
сЬдЬссЬдЬа дадссЬссса дадсаЬсадс аЬсааЬсЬдс аЬЬддЬаЬса дсадаадссс 120
ддссаддссс ссадасЬдсЬ даЬсЬасЬЬс дссадссадЬ ссаЬсадсдд саЬссссдсс 180
адаЬЬЬЬсЬа дсадсддсад сддсассдад ЬЬсасссЬда ссаЬсадсад ссЬдсададс 240
даддасЬЬсд ссдЬдЬаЬЬа ЬЬдссадсад адсаасадсЬ ЬсссссЬдас сЬЬсддсдда 300
ддсассаадд ЬддадаЬсаа дсдЬ 324
<210> 240 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 240 дадаЬсдЬда Ьдасссадад сссЬдссасс сЬдадсдЬдЬ сЬссаддсда дададссасс 60
сЬдЬссЬдЬа дадсссссса дадсаЬсадс аЬсааЬсЬдс аЬЬддЬаЬса дсадаадссс 120
ддссаддссс ссадасЬдсЬ сгаЬсЬасЬЬс дссадссадЬ ссаЬсадсдд саЬссссдсс 180
адаЬЬЬЬсЬд дсадсддсад сддсассдад ЬЬсасссЬда ссаЬсадсад ссЬдсададс 240
даддасЬЬсд ссдЬдЬаЬЬа ЬЬдссадсад адсаасадсь ЬсссссЬдас сЬЬсддсдда 300
ддсассаадд ЬддадаЬсаа дедХ 324
<210> 241 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 241 дадаЬсдЬда Ьдасссадад сссЬдссасс сЬдадсдЬдЬ сЬссаддсда дададссасс 60
сЬдЬссЬдЬа дадссЬсссд дадсаЬсадс аЬсааЬсЬдс аЬЬддЬаЬса дсадаадссс 120
ддссаддссс ссадасЬдсЬ даЬсЬасЬЬс дссадссадЬ ссаЬсадсдд саЬссссдсс 180
адаЬЬЬЬсЬд дсадсддсад сддсассдад ЬЬсасссЬда ссаЬсадсад ссЬдсададс 240
даддасЬЬсд ссдЬдЬаЬЬа ЬЬдссадсад адсаасадсЬ ЬсссссЬдас сЬЬсддсдда 300
ддсассаадд ЬддадаЬсаа дедЬ 324
<210> 242 <211> 354 <212> ДНК
- 264 026110
<213> Искусственная <400> 242 саддбдсадс бддбдсадад сддадссдаа дбдаадааас саддсдссбс сдбдааддбд 60
бссбдсаадд ссадсддсба сассббсасс дасбасбабс бдсасбдддб ссдссаддса 120
ссадддсддд дасбддаабд дабдддсбдд аКсдассссд адаасддсда бассдадсас 180
дсссссаадб бссадддсад адЬдассабд ассассдаса ссадсассад сассдссЬас 240
абддаасбдс ддадссбдад аадсдасдас ассдссдбдб асбасбдсаа сдссаасааа 300
дадсбдсддб асббсдасдб дбддддссад ддсасаабдд Ксассдбдбс сбсб 354
<210> 243 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 243 саддЬдсадс бддбдсадад сддадссдаа дбдаадааас саддсдссЬс сдбдааддбд 60
бссбдсаадд ссадсддсба сдссббсасс дасбасбабс бдсасбдддб ссдссаддса 120
ссадддсадд дасбддаабд дабдддсбдд абсдассссд адаасддсда ОассдадКсс 180
дсссссаадб бссадддсад адбдассабд ассассдаса ссадсассад сассдссбас 240
абддаасбдс ддадссбдад аадсдасдас ассдссдЬдб асбасбдсаа сдссаасааа 300
дадсЬдсддб асббсдасдб дбддддссад ддсасааЬдд КсассдЬдЬс СбСЁ 354
<210> 244 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 244 саддбдсадс бддбдсадад сддадссдаа дбдаадааас саддсдссбс сдбдааддбд 60
бссбдсаадд ссадсддсба сдссббсасс дасбасбабс Кдсасбдддб ссдссаддса 120
ссадддсадд дасбддаабд дабдддсбдд аЬсдассссд адаасддсда бассдадсас 180
дсссссаадб бссадддсад адбдбссабд ассассдаса ссадсассад сассдссбас 240
абддаасбдс ддадссбдад аадсдасдас ассдссдЬдб асбасбдсаа сдссаасааа 300
дадсбдсддб асббсдасдб дбддддссад ддсасаабдд КсассдКдКс сбсб 354
<210> 245 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 245 саддЬдсадс бддбдсадад сддадссдаа дКдаадааас саддсдссЬс сдбдааддбд 60
бссбдсаадд ссадсддсба сасссбсасс дасбасбабс бдсасбдддб ссдссаддса 120
- 265 026110
ссадддсадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадсас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад аадсдасдас ассдссдкдк аскаскдсаа сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсасаакдд ксассдкдкс скск 354
<210> 246 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 246
саддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас саддсдсскс сдкдааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сасссксасс даскаскакс кдсаскдддк ссдссаддса 120
ссадддсадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадксс 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад аадсдасдас ассдссдкдк аскаскдсаа сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсасаакдд ксассдкдкс скск 354
<210> 247 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 247
саддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас саддсдсскс сдкдааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сасскксасс даскаскакс кдсаскдддк ссдссаддса 120
ссадддсддд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадксс 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад аадсдасдас ассдссдкдк аскаскдсаа сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсасаакдд ксассдкдкс скск 354
<210> 248 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 248
саддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас саддсдсскс сдкдааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сдссДДсасс даскаскакс кдсаскдддк ссдссаддса 120
ссадддсадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадсас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад аадсдасдас ассдссдкдк аскаскдсаа сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсасаакдд ксассдкдкс скск 354
- 266 026110
<210> 249
<211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 249 саддйдсадс йддйдсадад сддадссдаа дйдаадааас саддсдссйс сдйдааддйд 60
ЬссЬдсаадд ссадсддсйа сдссДДсасс дасйасйайс йдсасйдддй ссдссаддса 120
ссадддсадд дасйддаайд дайдддсйдд айсдассссд адаасддсда Ьассдадйсс 180
дсссссаадй йссадддсад адйдйссайд ассассдаса ссадсассад сассдссйас 240
айддаасйдс ддадссйдад аадсдасдас ассдссдйдй асйасйдсаа сдссаасааа 300
дадсйдсддй асййсдасдй дйддддссад ддсасаайдд йсассдйдйс сйсй 354
<210> 250 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 250 саддйдсадс йддйдсадад сддадссдаа дйдаадааас саддсдссйс сдЬдааддйд 60
Вссйдсаадд ссадсддсйа сдссййсасс дасйасйайс йдсасйдддй ссдссаддса 120
ссадддсддд дасйддаайд дайдддсйдд айсдассссд адаасддсда йассдадйас 180
дсссссаадй йссадддсад адйдассайд ассассдаса ссадсассад сассдссйас 240
айддаасЬдс ддадссйдад аадсдасдас ассдссдйдй асйасйдсаа сдссаасааа 300
дадсйдсддй асййсдасдй дйддддссад ддсасаайдд йсассдйдйс сйсй 354
<210> 251 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 251 саддйдсадс йддйдсадад сддадссдаа дйдаадааас саддсдссйс сдйдааддйд 60
йссйдсаадд ссадсддсйа сасссйсасс дасйасйайс йдсасйдддй ссдссаддса 120
ссадддсддд дасйддаайд дайдддсйдд айсдассссд адаасддсда Ьассдадйас 180
дсссссаадй йссадддсад адйдассайд ассассдаса ссадсассад сассдссйас 240
айддаасйдс ддадссйдад аадсдасдас ассдссдйдй асйасйдсаа сдссаасааа 300
дадсйдсддй асййсдасдй дйддддссад ддсасаайдд йсассдйдйс сйсй 354
<210> 252 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
- 267 026110 <400> 252
даддкдсадс кдсадсадад сддадссдак скддкссдса дсддсдссад саксаадскд 60
ксскдсассд ссадсддскк саасаксаад даскаскаса ЪдсасЬдддЬ даадсадсдд 120
сссдадсадд дсскддаакд даксддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсаа ддссассакд ассдссдаса ссадсадсаа сассдсскас 240
скдсадскдк ссадсскдас садсдаддас ассдссдкдк ас^асЬдсаа сдсскдсааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддадсс ддсассассд ЪдассдЪдЪс саде 354
<210> 253 <211> 1017 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 253
дскадсасса адддсссакс ддкскксссс скддсассск сскссаадад сасскскддд 60
ддсасадсдд ссскдддскд сскддксаад даскаскксс ссдаассддк даеддкдкед 120
кддаасксад дсдссскдас садсддсдкд сасасскксс сддскдксск асадксскса 180
ддаскскаск сссксадсад сдкддкдасс дкдсссксса деадеккддд сасссадасс 240
касакскдса асдкдаакса саадсссадс аасассаадд кддасаадад адккдадссс 300
ааакеккдкд асааааскса сасакдссса ссдкдсссад сасскдааск сскдддддда 360
ссдксадкск кссксккссс сссаааассс ааддасассс ксакдакскс ссддасссск 420
даддксасак дедкддкддк ддасдкдадс сасдаадасс скдаддксаа дкксааскдд 480
каедкддаед дедкддаддк дсакаакдсс аадасааадс сдсдддадда дсадкасаас 540
адсасдкасс дкдкддкеад сдкссксасс дксскдсасс аддаскддск даакддсаад 600
дадкасаадк дсааддкскс саасааадсс сксссадссс ссаксдадаа аассаксксс 660
ааадссааад ддсадссссд адаассасад дкдкасассс кдсссссакс ссдддакдад 720
скдассаада ассаддксад сскдасскдс скддксааад дсккскаксс садсдасакс 780
деедкддадк дддададсаа кдддсадссд дадаасааск асаадассас дссксссдкд 840
скддаскссд асддсксскк скксскскас адсаадскса ссдкддасаа дадсаддкдд 900
садсадддда асдксккскс акдскссдкд акдеакдадд скскдсасаа ссаскасасд 960
садаададсс кскссскдкс кссдддкааа каддаксссс сдассксдас скскддс 1017
<210> 254 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 254
даддкдсадс кдсадсадад сддадссдак скддкссдса дсддсдссад саЬсаадсЬд 60
ксскдсассд ссадсддскк саасаксаад даскаскасс ЪдсасЬдддЬ даадсадсдд 120
- 268 026110
сссдадсадд дсскддаакд даксддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсаа ддссассакд ассдссдаса ссадсадсаа сассдсскас 240
скдсадскдк ссадсскдас садсдаддас ассдссдкдк аскаскдсаа сдсскдсааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддадсс ддсассассд кдассдкдкс саде 354
<210> 255 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 255
даддкдсадс кдсадсадад сддадссдак скддкссдса дсддсдссад са£саадс1;д 60
ксскдсассд ссадсддскк саасаксаад даскаскаса Ъдсас1;ддд1; даадсадсдд 120
сссдадсадд дсскддаакд даксддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадЪас 180
дсссссаадк кссадддсаа ддссассакд ассдссдаса ссадсадсаа сассдссЪас 240
скдсадскдк ссадсскдас садсдаддас ассдссдкдк асЪасЬдсаа сдссдссааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддадсс ддсассассд ЪдассдЪдЪс саде 354
<210> 256 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 256
даддкдсадс кдсадсадад сддадссдак скддкссдса дсддсдссад са£саадс£д 60
ксскдсассд ссадсддскк саасаксаад даскаскаса ЪдсасЪдддЪ даадсадсдд 120
сссдадсадд дсскддаакд даксддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадЪас 180
дсссссаадк кссадддсаа ддссассакд ассдссдаса ссадсадсаа сассдссЪас 240
скдсадскдк ссадсскдас садсдаддас ассдссдкдк асЪас!:дсаа сдсссддааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддадсс ддсассассд £дассдЁд£с саде 354
<210> 257 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 257
даддкдсадс кдсадсадад сддадссдак скддкссдса дсддсдссад саксаадскд 60
ксскдсассд ссадсддскк саасаксаад даскаскаса кдсаскдддк даадсадсдд 120
сссдадсадд дсскддаакд даксддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсаа ддссассакд ассдссдаса ссадсадсаа сассдсскас 240
скдсадскдк ссадсскдас садсдаддас ассдссдкдк аскаскдсаа сдссаасааа 300
- 269 026110
дадсЪдсддЬ асЬЪсдасдЬ дГддддадсс ддсассассд НдассдНдНс саде 354
<210> 258 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 258 даддЬдсадс Ьдсадсадад сддадссдаЬ сИддНссдса дсддсдссад саНсаадсНд 60
ГссГдсассд ссадсддсГЬ саасаЬсаад дасЪас^аса Ндсас1;ддд1; даадсадсдд 120
сссдадсадд дссЬддааГд даЬсддсЬдд аНсдассссд адаасддсда сассдадНас 180
дсссссаадЬ Ьссадддсаа ддссассаЬд ассдссдаса ссадсадсаа сассдссИас 240
сГдсадсГдЬ ссадссГдас садсдаддас ассдссдЬд£ ас£асНдсаа сдссдасааа 300
дадсЬдсддЬ асЬЬсдасдЬ дГддддадсс ддсассассд ИдассдИдИс саде 354
<210> 259 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 259 даддЬдсадс Ьдсадсадад сддадссда£ сНдд!:ссдса дсддсдссад са!саадс1.д 60
ГссГдсассд ссадсддсГЬ саасаНсаад дасИасНаса ИдсасНдддН даадсадсдд 120
сссдадсадд дссЬддааГд даЪеддеНдд аЬсдассссд адаасддсда сассдадЪас 180
дсссссаадЬ Ьссадддсаа ддссассаИд ассдссдаса ссадсадсаа сассдссИас 240
сГдсадсЬдЬ ссадссГдас садсдаддас ассдссдЪдН асНас1;дсаа сдссдадааа 300
дадсЪдсддГ асЬЬсдасдЬ д^ддддадсс ддсассассд НдассдНдНс саде 354
<210> 260 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 260 даддИдсадс Ндсадсадад сддадссдаН сИддНссдса дсддсдссад саНсаадсНд 60
НссНдсассд ссадсддсНЬ саасаНсаад дасЬасНаса ЪдсасНдддН даадсадсдд 120
сссдадсадд дееНддааНд даКсддс£дд аНсдассссд адаасддсда сассдадНас 180
дсссссаад1; 1;ссадддсаа ддссассаНд ассдссдаса ссадсадсаа сассдссНас 240
сНдсадсЪдН ссадссНдас садсдаддас ассдссдЬдЪ асЪасНдсаа сдсссадааа 300
дадсИдсддН асНИсдасдИ дНддддадсс ддсассассд ИдассдИдИс саде 354
<210> 261 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
- 270 026110 <400> 261
даддкдсадс кдсадсадад сддадссдак сЪдд^ссдса дсддсдссад саС.саадс£.д 60
ксскдсассд ссадсддскк саасаксаад дас£.асИаса £дсасИддд£ даадсадсдд 120
сссдадсадд дсскддаакд даксддскдд аксдассссд адаасддсда сассдад1;ас 180
дсссссаадк кссадддсаа ддссассакд ассдссдаса ссадсадсаа сассдсскас 240
скдсадскдк ссадсскдас садсдаддас ассдссд£д£ ас£ас£дсаа сдссддсааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддадсс ддсассассд £.дассд£.д£.с саде 354
<210> 262 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 262
даддкдсадс кдсадсадад сддадссдак с^ддЪссдса дсддсдссад саЪсаадсЪд 60
ксскдсассд ссадсддскк саасаксаад дас^асЪаса 1;дсасЪдддЪ даадсадсдд 120
сссдадсадд дсскддаакд даксддскдд аксдассссд адаасддсда сассдад^ас 180
дсссссаадк кссадддсаа ддссассакд ассдссдаса ссадсадсаа сассдсскас 240
скдсадскдк ссадсскдас садсдаддас ассдссд£д£ ас^асИдсаа сдсссасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддадсс ддсассассд 1;дассд1;д1;с саде 354
<210> 263 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 263
даддкдсадс кдсадсадад сддадссдак с£.дд£ссдса дсддсдссад са£саадс£д 60
ксскдсассд ссадсддскк саасаксаад дас£ас£аса £дсас£ддд£ даадсадсдд 120
сссдадсадд дсскддаакд даксддскдд аксдассссд адаасддсда сассдад£ас 180
дсссссаадк кссадддсаа ддссассакд ассдссдаса ссадсадсаа сассдсскас 240
скдсадскдк ссадсскдас садсдаддас ассдссд1;д1; ас^асЬдсаа сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддадсс ддсассассд £дассд£д£с саде 354
<210> 264 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 264
даддкдсадс кдсадсадад сддадссдак с^ддЪссдса дсддсдссад саЬсаадсЪд 60
ЪссЪдсассд ссадсддсЫ саасаксаад дас£ас£аса 1;дсасЪдддЪ даадсадсдд 120
сссдадсадд дсс£ддаа£д да^сддс1:дд аксдассссд адаасддсда сассдадЪас 180
- 271 026110
дсссссаадб бссадддсаа ддссассабд ассдссдаса ссадсадсаа сассдссбас 240
сбдсадсбдб ссадссбдас садсдаддас ассдссдкдЪ асбасбдсаа сдсссбдааа 300
дадсбдсддб аеббедаедб дбддддадсс ддсассассд бдассдбдбс саде 354
<210> 265 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 265
даддбдсадс бдсадсадад сддадссдаб сбддбссдса дсддсдссад саЬсаадс^д 60
бссбдсассд ссадсддсбб саасабсаад дасбасбаса ЪдсасЬдддЬ даадсадсдд 120
сссдадсадд дссбддаабд дабсддсбдд абсдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадб бссадддсаа ддссассабд ассдссдаса ссадсадсаа сассдссИас 240
сбдсадсбдб ссадссбдас садсдаддас ассдссдбдб асЬасЬдсаа сдссаадааа 300
дадсбдсддб аеббедаедб дбддддадсс ддсассассд £дассд£д£с саде 354
<210> 266 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 266
даддбдсадс бдсадсадад сддадссдаб сбддбссдса дсддсдссад сабсаадсбд 60
бссбдсассд ссадсддсбб саасабсаад дасбасбаса ИдсасЬдддЬ даадсадсдд 120
сссдадсадд дссбддаабд дабсддсбдд абсдассссд адаасддсда сассдадбас 180
дсссссаадб бссадддсаа ддссассабд ассдссдаса ссадсадсаа сассдссбас 240
сбдсадсбдб ссадссбдас садсдаддас ассдссдбдб аскасЬдсаа сдссабдааа 300
дадсбдсддб аеббедаедб дбддддадсс ддсассассд кдассдкдкс саде 354
<210> 267 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 267
даддбдсадс бдсадсадад сддадссдаб сбддбссдса дсддсдссад сабсаадсбд 60
бссбдсассд ссадсддсбб саасабсаад дасбасбаса ИдсасЬдддЬ даадсадсдд 120
сссдадсадд дссбддаабд дабсддсбдд абсдассссд адаасддсда сассдадбас 180
дсссссаадб бссадддсаа ддссассабд ассдссдаса ссадсадсаа сассдссбас 240
сбдсадсбдб ссадссбдас садсдаддас ассдссдбдб асЬасЬдсаа сдссббсааа 300
дадсбдсддб аеббедаедб дбддддадсс ддсассассд идассдидис саде 354
- 272 026110
<210> 268 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 268 даддСдсадс Сдсадсадад сддадссдай сбдд^ссдса дсддсдссад сабсаадс^д 60
йссйдсассд ссадсддсйй саасайсаад дасбасбаса Ъдсасбддд£ даадсадсдд 120
сссдадсадд дссйддаайд дайсддсйдд а£сдассссд адаасддсда сассдад^ас 180
дсссссаадй йссадддсаа ддссассайд ассдссдаса ссадсадсаа сассдссЬас 240
сйдсадсйдС ссадссйдас садсдаддас ассдссдГ.д£. асбасбдсаа сдсссссааа 300
дадсйдсддС асййсдасдй дйддддадсс ддсассассд Идассдбдбс саде 354
<210> 269 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 269 даддСдсадс Сдсадсадад сддадссдай сЪддбссдса дсддсдссад сабсаадсбд 60
йссйдсассд ссадсддсСС саасайсаад дас^ас^аса ЪдсасбдддЬ даадсадсдд 120
сссдадсадд дссСддааСд дайсддсйдд абсдассссд адаасддсда сассдадбас 180
дсссссаадС Сссадддсаа ддссассайд ассдссдаса ссадсадсаа сассдссбас 240
сСдсадсСдС ссадссйдас садсдаддас ассдссдбдб асбасбдсаа сдссадсааа 300
дадсйдсддС асййсдасдй дйддддадсс ддсассассд ЪдассдЪдЪс саде 354
<210> 270 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 270 даддСдсадс Сдсадсадад сддадссдай сбдд^ссдса дсддсдссад сабсаадс^д 60
йссйдсассд ссадсддсСС саасайсаад дасбасбаса Ъдсасбддд£ даадсадсдд 120
сссдадсадд дссйддаайд дайсддсйдд абсдассссд адаасддсда сассдадбас 180
дсссссаадй Сссадддсаа ддссассайд ассдссдаса ссадсадсаа сассдсс^ас 240
сйдсадсйдС ссадссйдас садсдаддас ассдссд£д1: асЪасбдсаа сдссассааа 300
дадсйдсддС асййсдасдй дйддддадсс ддсассассд бдассдбдбс саде 354
<210> 271 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 271
- 273 026110
даддСдсадс Сдсадсадад сддадссдаС сСддСссдса дсддсдссад саСсаадсСд 60
СссСдсассд ссадсддсСС саасаксаад дасСасСаса СдсасСдддС даадсадсдд 120
сссдадсадд дссСддааСд даСсддсСдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсаа ддссассакд ассдссдаса ссадсадсаа сассдсскас 240
сСдсадсСдС ссадсскдас садсдаддас ассдссдСдС асСасСдсаа сдссаасааа 300
дадсГ.дсдд^ асССсдасдС дкддддадсс ддсассассд СдассдСдСс саде 354
<210> 272 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 272
даддкдсадс кдсадсадад сддадссдак сСддСссдса дсддсдссад са£саадс£д 60
ксскдсассд ссадсддскк саасаксаад дасСасСаса СдсасСдддС даадсадсдд 120
сссдадсадд дсскддаакд даксддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсаа ддссассакд ассдссдаса ссадсадсаа сассдсскас 240
скдсадскдк ссадсскдас садсдаддас ассдссдСдС ас^ас^дсаа сдссд^дааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддадсс ддсассассд С.дассд£.д£с саде 354
<210> 273 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 273
даддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадаадс саддсдссас сдксаадакс 60
адскдсаадд кдкссддска сасскксасс даскаскаса £дсасЬдддЪ дсадсаддск 120
ссаддсаадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассдсскас 240
акддааскда дсадсскдсд дадсдаддас ассдссдкдк асЪасЛдсаа сдсскдсааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассакдд ЪдассдЪдЪс кадс 354
<210> 274 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 274
саддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадаадс скддсдссад сдксааддкд 60
ксскдсаадд кдкссддска сассскдасс даскаскаса кдсаскдддк дсдссаддск 120
ссаддсаадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассдаддаса ссадсассда сассдсскас 240
- 274 026110
а!ддаас!да дсадссбдсд дадсдаддас ассдссдКд! ас!ас1дсаа сдссОдсааа 300
дадсВдсдд! асЫсдасд! дДддддссад ддсассаКдд !дассд!д!с саде 354
<210> 275 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 275 саддЬдсадс ЬддКдсадад сддадссдаа дКдаадаадс сЬддсдссад сд!саадд!д 60
Кссбдсаадд сс!ссддс!а сассК^сасс дасЬасбаса ЬдсасКддд! дсдссаддс! 120
ссаддссадд дас!ддаа!д даЪдддсЛдд аКсдассссд адаасддсда сассдад!ас 180
дсссссаад! Сссадддсад адЬдассаЬд ассассдаса ссадсассад сассдсс!ас 240
а!ддаас!дс ддадссЬдсд дадсдасдас ассдссдЪд! ас!ас!дсаа сдссЬдсааа 300
дадсЬдсдд! зсЫс дасд! д'Ьддддссад ддсассаЪдд !дассд!д!с саде 354
<210> 276 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 276
даддКдсадс СддКдсадад сддадссдаа дКдаадаадс саддсдссас сд!саада!с 60
адсСдсаадд 1д!ссддс1а сассЬДсасс дас!ас1аса ЬдсасЬдддЬ дсадсаддс! 120
ссаддсаадд дас!ддаа!д да!дддс!дд аЪсдассссд адаасддсда сассдадЬас 180
дсссссаад! 1ссадддсад адВдассаВс ассдссдаса ссадсассда сассдссИас 240
а!ддаас!да дсадсс!дсд дадсдаддас ассдссдКд! асЬасЬдсдс сасс!дсааа 300
дадсЬдсдд! асЫсдасд! дбддддссад ддсассаКдд ЪдассдЪдЪс 1адс 354
<210> 277 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 277 саддЬдсадс ЬддКдеадад сддадссдаа дКдаадаадс сЬддсдссад сд!саадд!д 60
1сс!дсаадд 1д!ссддс!а сасссЪдасс дас!ас!аса !дсас1ддд! дсдссаддс! 120
ссаддсаадд даеВддааЬд да!дддс!дд аВсдассссд адаасддсда сассдадИас 180
дсссссаад! Оссадддсад ад!дасса!д ассдаддаса ссадсассда сассдссКас 240
а!ддаас!да дсадссбдсд дадсдаддас ассдссдКд! ас!ас1дсдс сассбдсааа 300
дадсЬдсдд! асЫсдасд! д!ддддссад ддсассаКдд СдассдСдСс саде 354
<210> 273
- 275 026110
<211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 278 саддДдсадс ДддДдсадад сддадссдаа дДдаадаадс сДддсдссад сдДсааддДд 60
ДссДдсаадд ссДссддсДа сассЪНсасс дасДасДаса ДдсасДдддД дсдссаддсД 120
ссаддссадд дасДддааДд даИдддсНдд аДсдассссд адаасддсда сассдадДас 180
дсссссаадД Дссадддсад адЪдасса^д ассассдаса ссадсассад сассдссДас 240
аДддаасДдс ддадссДдсд дадсдасдас ассдссдДдД асДасДдсдс ссддДдсааа 300
дадсДдсддД асДДсдасдД дНддддссад ддсассаДдд ДдассдДдДс саде 354
<210> 279 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 279 даддДдсадс Ддсадсадад сддадссдаН сДддДссдса дсддсдссад саДсаадсДд 60
ДссДдсассд ссадсддсДД саасассаад дасДасДасс ДдсасДдддД даадсадсдд 120
сссдадсадд дссДддааДд даСсддсСдд аДсдассссд адаасддсда сассдадДас 180
дсссссаадД Дссадддсаа ддссассаСд ассдссдаса ссадсадсаа сассдссДас 240
сДдсадсДдД ссадссДдас садсдаддас ассдссдДдД асДасДдсаа сдссаасааа 300
дадсДдсддД асДДсдасдД дСддддадсс ддсассассд ДдассдДдДс саде 354
<210> 280 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 280 даддДдсадс ДддДдсадад сддадссдаа дДдаадаадс сДддсдссас сдДсаадаДс 60
адсДдсаадд ссадсддсДа сассССсадс дасДасДасс ДдсасДдддД дсдссаддсД 120
ссаддсаадд дасДддааДд даДдддсДдд аДсдассссд адаасддсда сассдадДас 180
дсссссаадД Дссадддсад адСдассаСс ассдссдаса ссадсассда сассддсДас 240
сДддаасДда дсадссДдсд дадсдаддас ассдссдДдД асДасДдсдс сдссаасааа 300
дадсДдсддД асДДсдасдД дДддддссад ддсасссДдд ДдассдДдДс саде 354
<210> 281 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 281 даддДдсадс ДддДдсадад сддадссдаа дДдаадаадс сДддсдссас сдДсаадаДс 60
- 276 026110
адскдсаадд ссадсддска сасскксадс даскаскасс кдсаскдддк дсдссадсдд 120
ссаддсаадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассддскас 240
скддааскда дсадсскдсд дадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд кдассдкдкс саде 354
<210> 262 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <40ΰ> 282
даддкдсадс кддкдеадад сддадссдаа дкдаадаадс скддсдссас сдксаадакс 60
адскдсаадд ссадсддска сасскксадс даскаскасс кдсаскдддк дсдссаддск 120
ссададаадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассддскас 240
скддааскда дсадсскдсд дадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд кдассдкдкс саде 354
<210> 283 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 283
даддкдсадс кддкдеадад сддадссдаа дкдаадаадс скддсдссас сдксаадакс 60
адскдсаадд ссадсддска сассЫлсадс даскаскасс кдсаскдддк дсдссаддск 120
ссаддсаадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсаа ддкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассддскас 240
скддааскда дсадсскдсд дадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд кдассдкдкс саде 354
<210> 284 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 284
даддкдсадс кддкдеадад сддадссдаа дкдаадаадс скддсдссас сдксаадакс 60
адскдсаадд ссадсддска сасскксадс даскаскасс кдсаскдддк дсдссадсдд 120
ссададаадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсаа ддкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассддскас 240
скддааскда дсадсскдсд дадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
- 277 026110
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд кдассдкдкс саде 354
<210> 285 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 285 даддкдсадс кддкдеадад сддадссдаа дкдаадаадс саддсдссас сдксаадакс 60
адскдсаадд кдкссддска сасскксасс даскаскасс кдсаскдддк дсадсаддск 120
ссаддсаадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассдсскас 240
акддааскда дсадсскдсд дадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсаа сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассакдд кдассдкдкс кадс 354
<21ΰ> 286 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 286 саддкдсадс кддкдеадад сддадссдаа дкдаадаадс скддсдссад сдксааддкд 60
ксскдсаадд сскссддска сасскксасс даскаскасс кдсаскдддк дсдссаддск 120
ссаддссадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдсд дадсдасдас ассдссдкдк аскаскдсаа сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассакдд кдассдкдкс саде 354
<210> 287 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 287 саддкдсадс кддкдеадад сддадссдаа дкдаадаадс скддсдссад сдксааддкд 60
ксскдсаадд кдкссддска сассскдасс даскаскасс кдсаскдддк дсдссаддск 120
ссаддсаадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассдаддаса ссадсассда сассдсскас 240
акддааскда дсадсскдсд дадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сассаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассакдд кдассдкдкс саде 354
<210> 288 <211> 354 <212> ДНК
- 278 026110
<213> Искусственная <400> 288 даддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас сДддадссас сдДдаадаДс 60
адскдсаадд ссадсддска сассДДсадс даскаскакс ДдсасДдддД дсдссаддсс 120
сскдадаадд дсскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда ДассдадДас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассддсДас 240
скддааскда дсадсскдад аадсдаддас ассдссдкдк асДасДдсдс ссддаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд ДдасадДдДс сДса 354
<210> 289 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 289 даддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас сДддадссас сдДдаадаДс 60
адскдсаадд ссадсддска сасскксадс даскаскакс ДдсасДдддД дсдссаддсс 120
сскдадаадд дсскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда ДассдадДас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассддсДас 240
скддааскда дсадсскдад аадсдаддас ассдссдкдк асДасДдсаа сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд ДдасадДдДс сДса 354
<210> 290 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 290 даддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас сДддадссас сдДдаадаДс 60
адскдсаадд ссадсддска сасскксадс даскаскакс ДдсасДдддД дсдссаддсс 120
сскдадаадд дсскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда ДассдадДас 180
дсссссаадк кссадддсад адДдассаДс ассдссдаса ссадсассда сассддсДас 240
скддааскда дсадсскдад аадсдаддас ассдссдкдк асДасДдсаа ссддаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дДддддссад ддсассскдд ДдасадДдДс сДса 354
<210> 291 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 291 саддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас сДддадссас сдДдаадаДс 60
адскдсаадд ссадсддска сассДДсадс даскаскакс ДдсасДдддД дсдссаддсс 120
- 279 026110
сскдадаадд дсскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассддскас 240
скддааскда дсадсскдад аадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд кдасадкдкс скса 354
<210> 292 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 292
даддкдсадс кдсадсадад сддадссдаа дкдаадааас скддадссас сдкдаадакс 60
адскдсаадд ссадсддска сасскксадс даскаскакс кдсаскдддк дсдссаддсс 120
сскдадаадд дсскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассддскас 240
скддааскда дсадсскдад аадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд кдасадкдкс скса 354
<210> 293 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 293
даддкдсадс кддкдсадад сддадссдас дкдаадааас скддадссас сдкдаадакс 60
адскдсаадд ссадсддска сасскксадс даскаскакс кдсаскдддк дсдссаддсс 120
сскдадаадд дсскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассддскас 240
скддааскда дсадсскдад аадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд кдасадкдкс скса 354
<210> 294 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 294
даддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа скдаадааас скддадссас сдкдаадакс 60
адскдсаадд ссадсддска даскаскакс кдсаскдддк дсдссаддсс 120
сскдадаадд дсскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассддскас 240
скддааскда дсадсскдад аадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд кдасадкдкс скса 354
- 280 026110 <210> 295 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 295
даддбдсадс СддКдсадад сддадссдаа дбддбдааас сбддадссас сдбдаадабс 60
адсбдсаадд ссадсддсба сассббсадс дасбасбабс бдсасбдддб дсдссаддсс 120
ссЬдадаадд дссЬддаабд дабдддсбдд абсдассссд адаасддсда бассдадбас 180
дсссссаадб бссадддсад адбдассабс ассдссдаса ссадсассда сассддсбас 240
сбддаасбда дсадссбдад аадсдаддас ассдссдбдб асбасбдсдс сдссаасааа 300
дадсбдсддб асббсдасдб дбддддссад ддсасссбдд бдасадбдбс сбса 354
<210> 296 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 296 даддЬдсадс ЬддЬдсадад сддадссдаа дИдаадсддс сЬддадссас сдбдаадаСс 60
адсЬдсаадд ссадсддсЬа сассЬЬсадс дасЬасЬаЬс ЬдсасЬдддЬ дсдссаддсс 120
ссЪдадаадд дссЪддааЬд даЬдддсЬдд аЬсдассссд адаасддсда СассдадСас 180
дсссссаадЬ Ьссадддсад адЬдассаЪс ассдссдаса ссадсассда сассддсСас 240
сЬддаасЬда дсадссЬдад аадсдаддас ассдссдЬдЬ асЬасЬдсдс сдссаасааа 300
дадсЬдсддЬ асЬЬсдасдЬ дЬддддссад ддсасссЬдд ЬдасадЬдЬс сбса 354
<210> 297 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 297 даддбдсадс бддбдсадад сддадссдаа дЬдаадаааа дсддадссас сдСдаадаСс 60
адсбдсаадд ссадсддсСа сассЬЬсадс дасЬасЬаЬс ЬдсасЬдддЬ дсдссаддсс 120
ссбдадаадд дссбддаабд даЬдддсЬдд аЬсдассссд адаасддсда бассдадбас 180
дсссссаадб Сссадддсад адИдассаЬс ассдссдаса ссадсассда сассддсСас 240
сбддаасбда дсадссСдад аадсдаддас ассдссдЬдЬ асИасЬдсдс сдссаасааа 300
дадсбдсддб асСбсдасдС дДддддссад ддсасссЬдд ЬдасадЬдЬс сСса 354
<210> 298 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
- 281 026110 <400> 298
даддСдсадс СддСдсадад сддадссдаа дСдаадааас сСддадссад сдСдаадаСс 60
адсСдсаадд ссадсддсСа сассССсадс дасСасСаСс СдсасСдддС дсдссаддсс 120
ссСдадаадд дссСддааСд даСдддсСдд аСсдассссд адаасддсда СассдадСас 180
дсссссаадС Сссадддсад адСдассаСс ассдссдаса ссадсассда сассддсСас 240
сСддаасСда дсадссСдад аадсдаддас ассдссдСдС асСасСдсдс сдссаасааа 300
дадсСдсддС асССсдасдС дСддддссад ддсасссСдд СдасадСдСс сСса 354
<210> 299 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 299
даддСдсадс СддСдсадад сддадссдаа дСдаадааас сСддадссас саСсаадаСс 60
адсСдсаадд ссадсддсСа сассДДсадс дасСасСаСс СдсасСдддС дсдссаддсс 120
ссСдадаадд дссСддааСд даСдддсСдд аСсдассссд адаасддсда СассдадСас 180
дсссссаадС Сссадддсад адСдассаСс ассдссдаса ссадсассда сассддсСас 240
сСддаасСда дсадссСдад аадсдаддас ассдссдСдС асСасСдсдс сдссаасааа 300
дадсСдсддС асССсдасдС дСддддссад ддсасссСдд СдасадСдСс сСса 354
<210> 300 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 300
даддЬдсадс ЬддЬдсадад сддадссдаа дЬдаадааас сЬддадссас сдЬдаадсЬд 60
адсЬдсаадд ссадсддсЬа сассДДсадс дасДасЬаДс ЬдсасЬдддЬ дсдссаддсс 120
ссДдадаадд дссДддааДд даДдддсДдд аДсдассссд адаасддсда ДассдадДас 180
дсссссаадЬ Ьссадддсад адЬдассаЬс ассдссдаса ссадсассда сассддсЬас 240
сДддаасДда дсадссДдад аадсдаддас ассдссдЬдЬ асЬасЬдсдс сдссаасааа 300
дадсЬдсддЬ асЬЬсдасдЬ дЬддддссад ддсасссЬдд ЬдасадЬдЬс сЬса 354
<210> 301 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 301
даддСдсадс СддСдсадад сддадссдаа дСдаадааас сСддадссас сдСдаадаСс 60
адсСдсасад ссадсддсСа сассССсадс дасСасСаСс СдсасСдддС дсдссаддсс 120
ссСдадаадд дссСддааСд даСдддсСдд аСсдассссд адаасддсда СассдадСас 180
- 282 026110
дсссссаадЬ Ьссадддсад адЬдассаЬс ассдссдаса ссадсассда сассддсЬас 240
сЬддаасЬда дсадссЬдад аадсдаддас ассдссдЬдЬ асЬасЬдсдс сдссаасааа 300
дадсЬдсддЬ асЬЬсдасдЬ дЬддддссад ддсасссЬдд ЬдасадЬдЬс сЬса 354
<210> 302 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 302
даддЬдсадс ЬддЬдсадад сддадссдаа дЬдаадааас сЬддадссас сдЬдаадаЬс 60
адсЬдсаадд ссадсддсЬЬ сассЬЛсадс дасЬасЬаЬс ЬдсасЬдддЬ дсдссаддсс 120
ссЬдадаадд дссЬддааЬд даЬдддсЬдд аЬсдассссд адаасддсда ЬассдадЬас 180
дсссссаадЬ Ьссадддсад адЬдассаЬс ассдссдаса ссадсассда сассддсЬас 240
сЬддаасЬда дсадссЬдад аадсдаддас ассдссдЬдЬ асЬасЬдсдс сдссаасааа 300
дадсЬдсддЬ асЫсдасдЬ дЬддддссад ддсасссЬдд ЬдасадЬдЬс сЬса 354
<210> 303 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 303
даддЬдсадс ЬддЬдсадад сддадссдаа дЬдаадааас сЬддадссас сдЬдаадаЬс 60
адсЬдсаадд ссадсддсЬа саасЬЬсадс дасЬасЬаЬс ЬдсасЬдддЬ дсдссаддсс 120
ссЬдадаадд дссЪддааЬд даЬдддсЬдд аЬсдассссд адаасддсда ЬассдадЪас 180
дсссссаадЬ Ьссадддсад адЬдассаЬс ассдссдаса ссадсассда сассддсЬас 240
сЬддаасЬда дсадссЬдад аадсдаддас ассдссдЬдЬ асЬасЬдсдс сдссаасааа 300
дадсЬдсддЬ асЬЬсдасдЬ дЬддддссад ддсасссЬдд ЬдасадЬдЬс сЬса 354
<210> 304 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 304
даддЬдсадс ЬддЬдсадад сддадссдаа дЬдаадааас сЬддадссас сдЬдаадаЬс 60
адсЬдсаадд ссадсддсЬа сассаЬсадс дасЬасЬаЬс ЬдсасЬдддЬ дсдссаддсс 120
ссЬдадаадд дссЬддааЬд даЬдддсЬдд аЬсдассссд адаасддсда ЬассдадЬас 180
дсссссаадЬ Ьссадддсад адЬдассаЬс ассдссдаса ссадсассда сассддсЬас 240
сЬддаасЬда дсадссЬдад аадсдаддас ассдссдЬдЬ асЬасЬдсдс сдссаасааа 300
дадсЬдсддЬ асЬЪсдасдЬ дЬддддссад ддсасссЬдд ЬдасадЬдЬс сЬса 354
- 283 026110
<210> 305 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 305 даддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас скддадссас сдкдаадакс 60
адскдсаадд ссадсддска сасскксаад даскаскакс кдсаскдддк дсдссаддсс 120
сскдадаадд дсскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассддскас 240
скддааскда дсадсскдад аадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд кдасадкдкс скса 354
<210> 306 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 306 даддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас скддадссас сдкдаадакс 60
адскдсаадд ссадсддска сасскксадс даскаскакс кдсаскдддк даадсаддсс 120
сскдадаадд дсскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассддскас 240
скддааскда дсадсскдад аадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд кдасадкдкс скса 354
<210> 307 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 307 даддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас скддадссас сдкдаадакс 60
адскдсаадд ссадсддска сасскксадс даскаскакс кдсаскдддк дсдссаддсс 120
ссаддсаадд дсскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассдссдаса ссадсассда сассддскас 240
скддааскда дсадсскдад аадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд кдасадкдкс скса 354
<210> 308 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 308 даддкдсадс кддкдсадад сддадссдаа дкдаадааас скддадссас сдкдаадакс 60
- 284 026110
адскдсаадд ссадсддска сасскксадс даскаскакс кдсаскдддк дсдссаддсс 120
сскдадаадд дсскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адссассакс ассдссдаса ссадсассда сассддскас 240
скддааскда дсадсскдад аадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд кдасадкдкс скса 354
<210 309 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400 309
даддкдсадс кддкдеадад сддадссдаа дкдаадааас скддадссас сдкдаадакс 60
адскдсаадд ссадсддска сасскксадс даскаскакс кдсаскдддк дсдссаддсс 120
сскдадаадд дсскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассдссдаса ссадсассда сассддскас 240
скддааскда дсадсскдад аадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд кдасадкдкс скса 354
<210 310 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 310
даддкдсадс кддкдеадад сддадссдаа дкдаадааас скддадссас сдкдаадакс 60
адскдсаадд ссадсддска сасскксадс даскаскакс кдсаскдддк дсдссаддсс 120
сскдадаадд дсскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассассдаса ссадсассда сассддскас 240
скддааскда дсадсскдад аадсдаддас ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддссад ддсассскдд кдасадкдкс скса 354
<210 311 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <40 0 311
даддкдсадс кддкдеадад сддадссдаа дкдаадааас скддадссас сдкдаадакс 60
адскдсаадд ссадсддска сасскксадс даскаскакс кдсаскдддк дсдссаддсс 120
сскдадаадд дсскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда кассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакс ассдссдаса ссадсадсда сассддскас 240
- 285 026110
сГддаасЬда дсадссЬдад аадсдаддас ассдссдЬдЬ асЬасЬдсдс сдссаасааа 300
дадсЬдсддГ асЬЬсдасдЬ д^ддддссад ддсасссЬдд ЬдасадЬдЬс сЬса 354
<210> 312 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 312 даддЬдсадс ЬддЬдсадад сддадссдаа дЬдаадааас сГддадссас сдГдаадаГс 60
адсГдсаадд ссадсддсЬа сасс1;7садс дасЪасГаЬс ЬдсасЬдддЬ дсдссаддсс 120
ссЬдадаадд дссЬддааЬд даЬдддсЬдд аЬсдассссд адаасддсда ЬассдадЬас 180
дсссссаадГ Ьссадддсад адЬдассаЬс ассдссдаса ссадсассаа сассддсЬас 240
сГддаасГда дсадссГдад аадсдаддас ассдссдЬдЬ асЬасГдсдс сдссаасааа 300
дадсЬдсддГ асЬЬсдасдЬ дЬддддссад ддсасссЬдд ЬдасадЬдЬс сЬса 354
<210> 313 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 313 даддЬдсадс ЬддЬдсадад сддадссдаа дЬдаадааас сГддадссас сдГдаадаГс 60
адсГдсаадд ссадсддсЬа сассЬГсадс дасЬасГаЬс ЬдсасЬдддЬ дсдссаддсс 120
ссЬдадаадд дссЬддааГд даЬдддсГдд аЬсдассссд адаасддсда ГассдадЬас 180
дсссссаадГ Ьссадддсад адЬдассаЬс ассдссдаса ссадсассда сассдссЬас 240
сГддаасЬда дсадссЬдад аадсдаддас ассдссдЬдЬ асЬасЬдсдс сдссаасааа 300
дадсЬдсддГ асЬЬсдасдЬ дЬддддссад ддсасссЬдд ЬдасадЬдЬс сьса 354
<210> 314 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 314
даддЬдсадс ЬддЬдсадад сддадссдаа дЬдаадааас сГддадссас сдГдаадаГс 60
адсГдсаадд ссадсддсЬа сассЬГсадс дасЬасГаЬс ЬдсасЬдддЬ дсдссаддсс 120
ссЬдадаадд дссЬддааЬд даЬдддсЬдд аЬсдассссд адаасддсда ЬассдадЬас 180
дсссссаадГ Ьссадддсад адЬдассаЬс ассдссдаса ссадсассда сассддсЬас 240
аГддаасГда дсадссГдад аадсдаддас ассдссдЬдГ асЬасГдсдс сдссаасааа 300
дадсЬдсддГ асЬЬсдасдЬ дЬддддссад ддсасссЬдд ЬдасадЬдЬс сЬса 354
<210> 315 <211> 354
- 286 026110 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 315
даддКдсадс КддЬдсадад сддадссдаа дКдаадааас сЬддадссас сдЪдаадаЬс 60
адсбдсаадд ссадсддсСа сассЪ1:садс дасКасЬаЬс КдсасЬдддС дсдссаддсс 120
ссЬдадаадд дссЬддааЬд даДдддсЬдд аДсдассссд адаасддсда ЬассдадДас 180
дсссссаадЬ Ьссадддсад адИдассаГс ассдссдаса ссадсассда сассддсИас 240
сЬдсадсЬда дсадссЪдад аадсдаддас ассдссдЬдЬ асЬасКдсдс сдссаасааа 300
дадсКдсддК асКЬсдасдЬ дрддддссад ддсасссКдд КдасадЕдЬс сЬса 354
<210> 316 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 316 даддЬдсадс ЬддЬдсадад сддадссдаа дДдаадааас сЬддадссас сдЬдаадаЬс 60
адс^дсаадд ссадсддсЪа сассГЬсадс дасСас1:а1:с ГдсасЪдддЪ дсдссаддсс 120
ссЬдадаадд дссЬддааЪд даЬдддсЬдд аЬсдассссд адаасддсда ЪассдадЬас 180
дсссссаадК Кссадддсад адЬдассаКс ассдссдаса ссадсассда сассддсЬас 240
сОддаасОдс ддадссбдад аадсдаддас ассдссдНдК асОасОдсдс сдссаасааа 300
дадсЬдсдд! асЫсдасд! дЬддддссад ддсасссЬдд ЬдасадЬдЬс с!са 354
<210> 317 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 317 даддЬдсадс ЬддЬдсадад сддадссдаа дЬдаадааас сЬддадссас сдЪдаадаЬс 60
адсЬдсаадд ссадсддсЪа сассКЬсадс дасКасЬаЬс КдсасКдддЪ дсдссаддсс 120
ссКдадаадд дссОддаабд даНдддсбдд аКсдассссд адаасддсда СассдадНас 180
дсссссаад! Ьссадддсад адЬдассаКс ассдссдаса ссадсассда сассддсЬас 240
с£ддаас£да дсадссЪдас садсдаддас ассдссдЬд! асЬасЬдсдс сдссаасааа 300
дадсЪдсддЪ асЫсдасдЬ дЬддддссад ддсасссЬдд ЬдасадЬдЬс сЬса 354
<210> 318 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 318 даддКдсадс ОддОдсадад сддадссдаа дКдаадааас сОддадссас сдДдаадаДс 60
адсбдсаадд ссадсддсСа сассЪ£садс дасКасЬаЬс КдсасЬдддС дсдссаддсс 120
- 287 026110
ссДдадаадд дссДддааДд даДдддсДдд аДсдассссд адаасддсда ДассдадДас 180
дсссссаадД Дссадддсад адДдассаДс ассдссдаса ссадсассда сассддсДас 240
сДддаасДда дсадссДдад аадсдасдас ассдссдДдД асДасДдсдс сдссаасааа 300
дадсДдсддД асДДсдасдД дДддддссад ддсасссДдд ДдасадДдДс сДса 354
<210> 319 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 319
даддДдсадс ДддДдсадад сддадссдаз дДдаадааас сДддадссас сдДдаадаДс 60
адсДдсаадд ссадсддсДа сассЪ^садс дасДасДаДс ДдсасДдддД дсдссаддсс 120
ссДдадаадд дссДддааДд даДдддсДдд аДсдассссд адаасддсда ДассдадДас 180
дсссссаадД Дссадддсад адДдассаДс ассдссдаса ссадсассда сассддсДас 240
сДддаасДда дсадссДдад аадсдаддас ассдссдДдД асДасДдсдс сдссаасааа 300
дадсДдсддД асДДсдасдД дДддддадсс ддсасссДдд ДдасадДдДс сДса 354
<210> 320 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 320
даадДдсадс ДддДдсадад сддадссдаа дДдаадааас сДддсдссас сдНдаадаНс 60
адсДдсаадд ссадсддсДа сдссГЛсадс дасДасДасс ДдсасДдддД дсдссаддсс 120
ссДдадаадд дссДсдааДд даДдддсДдд аДсдассссд адаасддсда НассдадЬас 180
дсссссаадД Дссадддсад адДдассаДс ассдссдаса ссадсассда сассддсЪас 240
сДддаасДда дсадссДдад аадсдаддас ассдссдДдД асДасДдсдс сдссаасааа 300
дадсДдсддД асДДсдасдД дДддддссад ддсасасДдд ДдассдДдДс с£са 354
<210> 321 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 321
даадДдсадс ДддДдсадад сддадссдаа дДдаадааас сДддсдссас сдДдаадаДс 60
адсДдсаадд ссадсддсДа сасссДдадс дасДасДасс ДдсасДдддД дсдссаддсс 120
ссДдадаадд дссДсдааДд даДдддсДдд аДсдассссд адаасддсда ДассдадДас 180
дсссссаадД Дссадддсад адДдассаДс ассдссдаса ссадсассда сассддсДас 240
сДддаасДда дсадссДдад аадсдаддас ассдссдДдД асДасДдсдс сдссаасааа 300
- 288 026110
дадсбдсддб аеббедаедб дбддддссад ддсасасбдд бдассдбдбс сбса 354
<210> 322 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 322 даадбдсадс бддбдеадад сддадссдаа дбдаадааас сбддсдссас едбдаадабе 60
адсбдсаадд ссадсддсба сассббсадс дасбасбасс бдсасбдддб дсдссаддсс 120
ссбдадаадд дссбсдаабд дабдддсбдд абсдассссд адаасддсда бассдададс 180
дсссссаадб бссадддсад адбдассабс ассдссдаса ссадсассда сассддсбас 240
сбддаасбда дсадссбдад аадсдаддас ассдссдбдб асбасбдсдс сдссаасааа 300
дадсбдсддб аеббедаедб дбддддссад ддсасасбдд бдассдбдбс сбса 354
<210> 323 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 323
даадбдсадс бддбдеадад сддадссдаа дбдаадааас сбддсдссас едбдаадабе 60
адсбдсаадд ссадсддсба сдсссбдадс дасбасбасс бдсасбдддб дсдссаддсс 120
ссбдадаадд дссбсдаабд дабдддсбдд абсдассссд адаасддсда бассдадбас 180
дсссссаадб бссадддсад адбдассабс ассдссдаса ссадсассда сассддсбас 240
сбддаасбда дсадссбдад аадсдаддас ассдссдбдб асбасбдсдс сдссаасааа 300
дадсбдсддб аеббедаедб дбддддссад ддсасасбдд бдассдбдбс сбса 354
<210> 324 <211 > 354 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 324 даадбдсадс бддбдеадад сддадсссад дбдаадааас сбддсдссас едбдаадабе 60
адсбдсаадд ссадсддсба сасссбдадс дасбасбасс бдсасбдддб дсдссаддсс 120
ссбдадаадд дссбсдаабд дабдддсбдд абсдассссд адаасддсда бассдадбас 180
дсссссаадб бссадддсад адбдассабс ассдссдаса ссадсассда сассддсбас 240
сбддаасбда дсадссбдад аадсдаддас ассдссдбдб асбасбдсдс сдссаасааа 300
дадсбдсддб аеббедаедб дбддддссад ддсасасбдд бдассдбдбс сбса 354
<210> 325 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная
- 289 026110 <400 325
даадйдсадс йддйдсадад сддадссдаа дйдаадааас сйддсдссас сдйдаадайс 60
адсйдсаадд ссадсддсйа сасссйдадс дасйасйасс йдсасйдддй дсдссаддсс 120
ссйдадаадд дссйсдаайд дайдддсйдд айсдассссд адаасддсда йассдададс 180
дсссссаадй йссадддсад адйдассайс ассдссдаса ссадсассда сассддсйас 240
сйддаасйда дсадссйдад аадсдаддас ассдссдйдй асйасйдсдс сдссаасааа 300
дадсйдсддй асййсдасдй дйддддссад ддсасасйдд йдассдйдйс сйса 354
<210 326 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400 326
даадйдсадс йддйдсадад сддадссдаа дйдаадааас сйддсдссас сдйдаадайс 60
адсйдсаадд ссадсддсйа сассЪЪсадс дасйасйасс йдсасйдддй дсдссаддсс 120
ссйдадаадд дссйсдаайд дайдддсйдд айсдассссд адаасддсда йассдадсас 180
дсссссаадй йссадддсад адйдассайс ассдссдаса ссадсассда сассддсйас 240
сйддаасйда дсадссйдад аадсдаддас ассдссдйдй асйасйдсдс сдссаасааа 300
дадсйдсддй асййсдасдй дйддддссад ддсасасйдд йдассдйдйс сйса 354
<210 327 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400 327
даадйдсадс йддйдсадад сддадссдаа дйдаадааас сйддсдссас сдйдаадайс 60
адсйдсаадд ссадсддсйа сасссйдадс дасйасйасс йдсасйдддй дсдссаддсс 120
ссйдадаадд дссйсдаайд дайдддсйдд айсдассссд адаасддсда йассдадсас 180
дсссссаадй йссадддсад адйдассайс ассдссдаса ссадсассда сассддсйас 240
сйддаасйда дсадссйдад аадсдаддас ассдссдйдй асйасйдсдс сдссаасааа 300
дадсйдсддй асййсдасдй дйддддссад ддсасасйдд йдассдйдйс сйса 354
<210 328 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400 328
саддйссадс йсдйдсадад сддадссдаа дйдаадаадс сйддсдсййс сдйсааддйд 60
йссйдсаадд ссадсддсйа сассййсасс дасйасйасс йдсасйдддй ссдссаддсй 120
ссаддссадд дасйддаайд дайдддсйдд айсдассссд адаасддсда сассдадйас 180
- 290 026110
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад акскдасдак ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддасад ддсасаакдд ксасадкдкс скса 354
<210 329 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400 329
саддкссадс ксдкдсадад сддадссдаа дкдаадаадс скддсдсккс сдксааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сассскдасс даскаскасс кдсаскдддк ссдссаддск 120
ссаддссадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад акскдасдак ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддасад ддсасаакдд ксасадкдкс скса 354
<210 330 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400 330
саддкссадс ксдкдсадад сддадссдаа дкдаадаадс скддсдсккс сдксааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сасскксасс даскаскасс кдсаскдддк ссдссаддск 120
ссаддссадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдададс 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад акскдасдак ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддасад ддсасаакдд ксасадкдкс скса 354
<21ΰ> 331 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400 331
саддкссадс ксдкдсадад сддадссдаа дкдаадаадс скддсдсккс сдксааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сасссЪдасс даскаскасс кдсаскдддк ссдссаддск 120
ссаддссадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдададс 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад акскдасдак ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддасад ддсасаакдд ксасадкдкс скса 354
- 291 026110
<210> 332 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 332 саддкссадс ксдкдсадад сддадссдаа дкдаадаадс скддсдсккс сдксааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сасскксасс даскаскасс кдсаскдддк ссдссаддск 120
ссаддссадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадсас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад акскдасдак ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддасад ддсасаакдд ксасадкдкс скса 354
<210> 333 <211> 354 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 333 саддкссадс ксдкдсадад сддадссдаа дкддадаадс скддсдсккс сдксааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сасскксасс даскаскасс кдсаскдддк ссдссаддск 120
ссаддссадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсдд сдкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад акскдасдак ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддасад ддсасаакдд ксасадкдкс скса 354
<210> 334 <211> 355 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 334 саддкссадс ксдкдсадад сддадссдаа дкдаадаадс скддсдсккс сдксааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сасскксасс даскаскасс кдсаскдддк ссдссаддск 120
ссаддссддд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад акскдасдак ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддасад ддсасаакдд ксасадкдкс сксас 355
<210> 335 <211> 355 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 335
- 292 026110
саддкссадс ксдкдсадад сддадссдаа дкдаадаадс скддсдсккс сдксааддкд 60
ксскдсаадд ссадсддска сдсскксасс даскаскасс кдсаскдддк ссдссаддск 120
ссаддссадд даскддаакд дакдддскдд аксдассссд адаасддсда сассдадкас 180
дсссссаадк кссадддсад адкдассакд ассассдаса ссадсассад сассдсскас 240
акддааскдс ддадсскдад акскдасдак ассдссдкдк аскаскдсдс сдссаасааа 300
дадскдсддк аскксдасдк дкддддасад ддсасаакдд ксасадкдкс сксас 355
<210> 336 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 336
дасаксдкдс кдасссадад ссссдссасс скдадсдкда сссскддсда садсдкдадс 60
скдадскдсс дддсскссса дадсаксадс аксаасскдс аскддкакса дсадаададс 120
сасдададсс ссаддскдск даксаадккс дссадссадк ссаксадсдд сакссссадс 180
сддкксадсд дскасддсад сддсассдас кксассскда дсаксаасад сдкддадаса 240
даддаскксд дссддкаскк скдссадсад адсаасадск ддсссскдас скксддадсс 300
ддсассаадс кддааскдаа дсдк 324
<210> 337 <211> 318 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 337
асддкддссд сксссадсдк дкксаксккс ссссссадсд асдадсадск даададсддс 60
ассдссадсд кддкскдсск дскдаасаас ккскассссс дддаддссаа 120
ааддкддаса асдссскдса дкскддсаас адссаддааа дсдксассда дсаддасадс 180
ааддакадса сскасадсск дадсадсасс скдассскда дсааддссда с£асдадаад 240
сасааддкдк асдсскдсда ддксасссас садддсскдк скадссссдк сассаададс 300
кксаассддд дсдадкдс 318
<210> 338 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 338
дасаксдкдс кдасссадад ссссдссасс скдадсдкда сссскддсда садсдкдадс 60
скдадскдсс дддсскссса дадсаксадс аксаасскдс аскддкакса дсадаададс 120
сасдададсс ссаддскдск даксаадккс дссадссадк ссаксадсдд сакссссадс 180
сддкксадсд дскасддсад сддсассдас кксассскда дсаксаасад сдкддадаса 240
- 293 026110
даддаскксд дссддкаскк скдссадсад адсаасадск кссссскдас скксддадсс 300 324
ддсассаадс кддааскдаа дсдк
<210> 339 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 339 дадаксдкдс кдасссадад ссссдасккс сададсдкда сссссааада аааадкдасс 60
аксасскдсс дддсккссса дадсаксадс аксаасскдс аскддкакса дсадаадссс 120
дассадкссс ссаадскдск даксаадккс дссадссадк ссаксадсдд сдкдсссадс 180
сддкккадсд дсадсддскс сддсассдас кксассскда ссаксаасад сскддаадсс 240
даддасдссд ссасскаска скдссадсад адсаасадск ддсссскдас скккддсддс 300
ддаасааадд кддаааксаа дсдк 324
<210> 340 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 340 дадаксдкда кдасссадад ссссдссасс скдкссдкда дссскддсда дсдддссасс 60
скдадскдсс дддсскссса дадсаксадс аксаасскдс аскддкакса дсадаадссс 120
ддссаддссс ссадаскдск дакскасккс дссадссадк ссаксадсдд сакссссдсс 180
аддкксадсд дсадсддскс сддсассдад кксассскда ссаксадсад сскдсададс 240
даддаскксд ссдкдкаска скдссадсад адсаасадск ддсссскдас скккддсддс 300
ддаасааадд кддадаксаа дсдк 324
<210> 341 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 341 дадаксдкдс кдасссадад ссссдссасс скдкссскса дссскддсда дсдддссасс 60
скдадскдсс дддсскссса дадсаксадс аксаасскдс аскддкакса дсадаадссс 120
ддссаддссс ссадаскдск дакскасккс дссадссадк ссаксадсдд сакссссдсс 180
аддкксадсд дсадсддскс сддсассдас кксассскда ссаксадсад сскддадссс 240
даддаскксд ссдкдкаска скдссадсад адсаасадск ддсссскдас скккддсддс 300
ддаасааадд кддадаксаа дсдк 324
<210> 342
- 294 026110
<211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 342 дасакссада кдасссадад ссссадсадс дкдкссдсса дсдкдддсда сададкдасс 60
аксасскдсс дддссадсса дадсаксадс аксаасскдс аскддкакса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадскдск дакскасккс дссадссадк ссаксадсдд сдкдсссадс 180
сддкккадсд дсадсддскс сддсассдас кксадсскда ссаксаасад сскдсадссс 240
даддаскксд ссасскаска скдссадсад адсаасадск кссссскдас скккддсддс 300
ддаасааадд кддадаксаа дсдк 324
<210> 343 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 343 дасакссада кдасссадад ссссадсадс дкдкссдсса дсдкдддсда сададкдасс 60
аксасскдсс дддссадсса дадсаксадс аксаасскдс аскддкакса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадскдск даксаадккс дссадссадк ссаксадсдд сдкдсссадс 180
сддкккадсд дсадсддскс сддсассдас кксадсскда ссаксаасад сскдсадссс 240
даддаскксд ссасскаска скдссадсад адсаасадск кссссскдас скккддсддс 300
ддаасааадд кддадаксаа дсдк 324
<210> 344 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 344 дасакссада кдасссадад ссссадсадс дкдкссдсса дсдкдддсда сададкдасс 60
аксасскдсс дддссадсса дадсаксадс аксаасскдс аскддкакса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадскдск дакскасккс дссадссадк ссаксадсдд сдкдсссадс 180
сддкккадсд дскасддскс сддсассдас кксадсскда ссаксаасад сскдсадссс 240
даддаскксд ссасскаска скдссадсад адсаасадск кссссскдас скккддсддс 300
ддаасааадд кддадаксаа дсдк 324
<210> 345 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 345 дасакссада кдасссадад ссссадсадс дкдкссдсса дсдкдддсда сададкдасс 60
- 295 026110
а!сасс!дсс дддссадсса дадса!садс а!саасс!дс ас!дд!а1са дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадсСдс! да!с1ас11с дссадссад! сса!садсдд сдЬдсссадс 180
сддСЫадсд дсадсддсСс сддсассдас ЫсадссЬда ссаСсаасад ссКдсадссс 240
даддасЫсд сссддКасба сбдссадсад адсаасадс! 1ссссс1дас сКЫддсддс 300
ддаасааадд 1ддада1саа дед! 324
<21ΰ> 346 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400 346
дасаВссада 1дасссадад ссссадсадс дВдВссдсса дсдЬдддсда сададВдасс 60
а!сасс!дсс дддссадсса дадса!садс а!саасс1дс ас!дд1а1са дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадсбдс! даКсаад11с дссадссад! ссабсадсдд сдбдсссадс 180
сддЮадсд дсбасддсбс сддсассдас ЫсадссКда ссабсаасад ссбдсадссс 240
даддасЫсд сссдд1ас!а с!дссадсад адсаасадсЬ ЬсссссЪдас сЫЬддсддс 300
ддаасааадд 1ддада!саа дед! 324
<21 0 347 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400 347
дадабедбде бдасссадад ссссдссасс с!д!ссс1са дсссбддсда дсдддссасс 60
с!дадс1дсс дддссбссса дадсабсадс а!саасс!дс ас1дд!а!са дсадаадссс 120
ддссаддссс ссадасЬдс! даЬсЬасИс дссадссадЬ сса!садсдд са!ссссдсс 180
аддЫсадсд дсадсддсЬс сддсассдас ЫсасссИда сса!садсад сс!ддадссс 240
даддасЫсд ссд!д!ас1а с!дссадсад адсаасадс! 1ссссс1дас сШддсддс 300
ддаасааадд 1ддада!саа дед! 324
<21 0 348 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400 348
дада!сд!да 1дасссадад ссссдссасс с!д1ссд1да дсссВддсда дсдддссасс 60
с!дадс1дсс дддссВссса дадса!садс а!саасс1дс ас!дд1а1са дсадаадссс 120
ддссаддссс ссадас!дс1 да!с1ас11с дссадссад! ссаЬсадсдд са!ссссдсс 180
аддЫсадсд дсадсддсбс сддсассдад ЫсасссКда ссабсадсад ссбдсададс 240
даддасЫсд ссд1д1ас!а сбдссадсад адсаасадс! 1ссссс1дас сКЫддсддс 300
- 296 026110
ддаасааадд кддадаксаа дсдк 324
<210> 349 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 349 дасаксдкда кдасссадад ссскадсадс дкдкскдсса дсдкдддсда сададкдасс 60
аксасскдкс дддссадсса дадсаксадс аксаакскдс аскддкакса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадскдск дакскасккс дссадссадк ссаксадсдд сдкдсссадс 180
адаккккскд дсадсддсад сддсассдас кксадсскда ссаксаасад сскдсадссс 240
даддаскксд ссасскаска скдссадсад адсаасадск кссссскдас скксддсдда 300
ддсассаадд кддадаксаа дсдк 324
<210> 350 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 350 дасакссадс кдасссадад ссскадсадс дкдкскдсса дсдкдддсда сададкдасс 60
аксасскдкс дддссадсса дадсаксадс аксаакскдс аскддкакса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадскдск дакскасккс дссадссадк ссаксадсдд сдкдсссадс 180
адаккккскд дсадсддсад сддсассдас кксадсскда ссаксаасад сскдсадссс 240
даддаскксд ссасскаска скдссадсад адсаасадск кссссскдас скксддсдда 300
ддсассаадд кддадаксаа дсдк 324
<210> 351 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 351
дасакссада кдасссадад ссскадсадс дкдкскдсса ссдкдддсда сададкдасс 60
аксасскдкс дддссадсса дадсаксадс аксаакскдс аскддкакса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадскдск дакскасккс дссадссадк ссаксадсдд сдкдсссадс 180
адаккккскд дсадсддсад сддсассдас кксадсскда ссаксаасад сскдсадссс 240
даддаскксд ссасскаска скдссадсад адсаасадск кссссскдас скксддсдда 300
ддсассаадд кддадаксаа дсдк 324
<210> 352 <211> 324 <212> ДНК
- 297 026110
<213> Искусственная
<400> 352
дасаДссада Ддасссадад сссДадсадс дДдДсДдсса дсссДддсда сададДдасс 60
аДсассДдДс дддссадсса дадсаДсадс аДсааДсДдс асДддДаДса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадсДдсД даДсДасДДс дссадссадД ссаДсадсдд сдДдсссадс 180
адаДДДДсДд дсадсддсад сддсассдас ДДсадссДда ссаДсаасад ссДдсадссс 240
даддасДДсд ссассДасДа сДдссадсад адсаасадсД ДсссссДдас сДДсддсдда 300
ддсассаадд Дддададсаа дсдД 324
<210> 353 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 353 дасаДссада Ддасссадад сссДадсадс дДдДсДдсса дсдДдддсда сададДдасс 60
аДсассДдДс дддссадсса дадсаДсадс аДсааДсДдс асДддДаДса дсадаададс 120
ддсааддссс ссаадсДдсД даДсДасДДс дссадссадД ссаДсадсдд сдДдсссадс 180
адаДДДДсДд дсадсддсад сддсассдас ДДсадссДда ссаДсаасад ссДдсадссс 240
даддасДДсд ссассДасДа сДдссадсад адсаасадсД ДсссссДдас сДДсддсдда 300
ддсассаадд ДддадаДсаа дсдД 324
<210> 354 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 354 дасаДссада Ддасссадад сссДадсадс дДдДсДдсса дсдДдддсда сададДдасс 60
аДсассДдДс дддссадсса дадсаДсадс аДсааДсДдс асДддДаДса дсадаадссс 120
сасааддссс ссаадсДдсД даДсДасДДс дссадссадД ссаДсадсдд сдДдсссадс 180
адаДДДДсДд дсадсддсад сддсассдас ДДсадссДда ссаДсаасад ссДдсадссс 240
даддасДДсд ссассДасДа сДдссадсад адсаасадсД ДсссссДдас сДДсддсдда 300
ддсассаадд ДддадаДсаа дсдД 324
<210> 355 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 355
дасаДссада Ъдасссадад сссДадсадс дДдДсДдсса дсдДдддсда сададДдасс 60
аДсассДдДс дддссадсса дадсаДсадс аДсааДсДдс асДддДаДса дсадаадссс 120
- 298 026110
ддсдаддссс ссаадскдск дакскасккс дссадссадк ссаксадсдд сдкдсссадс 180
ада£ЪЪЪсЪд дсадсддсад сддсассдас кксадсскда ссаксаасад сскдсадссс 240
даддасЪЪсд ссасскаска скдссадсад адсаасадск кссссскдас скксддсдда 300
ддсасса&дд кддадаксаа дсдк 324
<210> 356 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 356
дасакссада кдасссадад ссскадсадс дкдкскдсса дсдкдддсда сададкдасс 60
аксасскдкс дддссадсса дадсаксадс аксаакскдс аскддкакса дсадаадссс 120
ддсаададсс ссаадскдск дакскасккс дссадссадк ссаксадсдд сдкдсссадс 180
адаккккскд дсадсддсад сддсассдас кксадсскда ссаксаасад сскдсадссс 240
даддаскксд ссасскаска скдссадсад адсаасадск кссссскдас скксддсдда 300
ддсассаадд кддадаксаа дсдк 324
<210> 357 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 357
дасакссада кдасссадад ссскадсадс дкдкскдсса дсдкдддсда сададкдасс 60
аксасскдкс дддссадсса дадсаксадс аксаакскдс аскддкакса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадскдск дакскасккс дссадссадк ссаксадсдд сакссссадс 180
адаккккскд дсадсддсад сддсассдас кксадсскда ссаксаасад сскдсадссс 240
даддаскксд ссасскаска скдссадсад адсаасадск кссссскдас скксддсдда 300
ддсассаадд кддадаксаа дсдк 324
<210> 358 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 358
дасакссада кдасссадад ссскадсадс дкдкскдсса дсдкдддсда сададкдасс 60
аксасскдкс дддссадсса дадсаксадс аксаакскдс аскддкакса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадскдск дакскасккс дссадссадк ссаксадсдд сдкдсссадс 180
адаккккскд дсадсддсад сддсассдас кксадсскда ссаксаасад сскдсадасс 240
даддаскксд ссасскаска скдссадсад адсаасадск кссссскдас скксддсдда 300
ддсассаадд кддадаксаа дсдк 324
- 299 026110 <210> 359 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 359
дасабссада бдасссадад сссбадсадс дбдбсбдсса дсдбдддсда сададбдасс 60
абсассбдбс дддссадсса дадсабсадс абсаабсбдс асбддбабса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадсбдсб дабсбасббс дссадссадб ссабсадсдд сдбдсссадс 180
адаббббсбд дсадсддсад сддсассдас ббсадссбда ссабсаасад ссбдсадссс 240
даддасббсд ссассбасбб ббдссадсад адсаасадсб бсссссбдас сббсддсдда 300
ддсассаадд бддадабсаа дсдб 324
<210> 360 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 360 дасабсдбда бдасссадад сссбадсадс дбдбсбдсса дсдбдддсда сададбдасс 60
абсассбдбс дддссадсса дадсабсадс абсаабсбдс асбддбабса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадсбдсб дабсбасббс дссадссадб ссабсадсдд сдбдсссадс 180
адаббббсбд дсадсддсад сддсассдас ббсадссбда ссабсаасад ссбдсадссс 240
даддасббсд сссддбасба сбдссадсад адсаасадсб бсссссбдас сббсддсдда 300
ддсассаадд бддадабсаа дсдб 324
<210> 361 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 361 дасабссадс бдасссадад сссбадсадс дбдбсбдсса дсдбдддсда сададбдасс 60
абсассбдбс дддссадсса дадсабсадс абсаабсбдс асбддбабса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадсбдсб дабсбасббс дссадссадб ссабсадсдд сдбдсссадс 180
адаббббсбд дсадсддсад сддсассдас ббсадссбда ссабсаасад ссбдсадссс 240
даддасббсд сссддбасба сбдссадсад адсаасадсб бсссссбдас сббсддсдда 300
ддсассаадд бддадабсаа дсдб 324
<210> 362 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
- 300 026110 <400> 362
дасайссада йдасссадад сссйадсадс дйдйсйдсса ссдСдддсда сададйдасс 60
айсассйдйс дддссадсса дадсайсадс айсаайсйдс асйддйайса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадсйдсй дайсйасййс дссадссадй ссайсадсдд сдйдсссадс 180
адаййййсйд дсадсддсад сддсассдас ййсадссйда ссайсаасад ссйдсадссс 240
даддасййсд сссддйасйа сйдссадсад адсаасадсй йсссссйдас сййсддсдда 300
ддсассаадд йддадайсаа дсдй 324
<210> 363 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 363
дасайссада йдасссадад сссйадсадс дйдйсйдсса дсссйддсда сададйдасс 60
айсассйдйс дддссадсса дадсайсадс айсаайсйдс асйддйайса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадсйдсй дайсйасййс дссадссадй ссайсадсдд сдйдсссадс 180
адаййййсйд дсадсддсад сддсассдас ййсадссйда ссайсаасад ссйдсадссс 240
даддасййсд сссддйасйа сйдссадсад адсаасадсй йсссссйдас сййсддсдда 300
ддсассаадд йддадайсаа дсдй 324
<210> 364 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 364
дасайссада йдасссадад сссйадсадс дйдйсйдсса дсдйдддсда сададйдасс 60
айсассйдйс дддссадсса дадсайсадс айсаайсйдс асйддйайса дсадаададс 120
ддсааддссс ссаадсйдсй дайсйасййс дссадссадй ссайсадсдд сдйдсссадс 180
адаййййсйд дсадсддсад сддсассдас ййсадссйда ссайсаасад ссйдсадссс 240
даддасййсд сссддйасйа сйдссадсад адсаасадсй йсссссйдас сййсддсдда 300
ддсассаадд йддадайсаа дсдй 324
<210> 365 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 365
дасайссада йдасссадад сссйадсадс дйдйсйдсса дсдйдддсда сададйдасс 60
айсассйдйс дддссадсса дадсайсадс айсаайсйдс асйддйайса дсадаадссс 120
сасааддссс ссаадсйдсй дайсйасййс дссадссадй ссайсадсдд сдйдсссадс 180
- 301 026110
адаййййсйд дсадсддсад сддсассдас ййсадссйда ссайсаасад ссйдсадссс 240
даддасййсд сссддйасйа сйдссадсад адсаасадсй йсссссйдас сййсддсдда 300
ддсассаадд йддадайсаа дсдй 324
<210> 366 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 366
дасайссада йдасссадад сссйадсадс дйдйсйдсса дсдйдддсда сададйдасс 60
айсассйдйс дддссадсса дадсайсадс айсаайсйдс асйддйайса дсадаадссс 120
ддсдаддссс ссаадсйдсй дайсйасййс дссадссадй ссайсадсдд сдйдсссадс 180
адаййййсйд дсадсддсад сддсассдас ййсадссйда ссайсаасад ссйдсадссс 240
даддасййсд сссддйасйа сйдссадсад адсаасадсй йсссссйдас сййсддсдда 300
ддсассаадд йддадайсаа дсдй 324
<210> 367 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 367
дасайссада йдасссадад сссйадсадс дйдйсйдсса дсдйдддсда сададйдасс 60
айсассйдйс дддссадсса дадсайсадс айсаайсйдс асйддйайса дсадаадссс 120
ддсаададсс ссаадсйдсй дайсйасййс дссадссадй ссайсадсдд сдйдсссадс 180
адаййййсйд дсадсддсад сддсассдас ййсадссйда ссайсаасад ссйдсадссс 240
даддасййсд сссддйасйа сйдссадсад адсаасадсй йсссссйдас сййсддсдда 300
ддсассаадд йддадайсаа дсдй 324
<210> 368 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 368
дасайссада йдасссадад сссйадсадс дйдйсйдсса дсдйдддсда сададйдасс 60
айсассйдйс дддссадсса дадсайсадс айсаайсйдс асйддйайса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадсйдсй дайсйасййс дссадссадй ссайсадсдд сайссссадс 180
адаййййсйд дсадсддсад сддсассдас ййсадссйда ссайсаасад ссйдсадссс 240
даддасййсд сссддйасйа сйдссадсад адсаасадсй йсссссйдас сййсддсдда 300
ддсассаадд йддадайсаа дсдй 324
- 302 026110 <210> 369 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная <400> 369
дасабссада Ьдасссадад сссбадсадс дбдбсбдсса дсдбдддсда сададбдасс 60
абсассбдбс дддссадсса дадсабсадс абсаабсбдс асбддбабса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадсЬдсЪ дабсбасббс дссадссадб ссабсадсдд сдбдсссадс 180
адаббббсбд дсадсддсад сддсассдас ббсадссбда ссабсаасад ссбдсадасс 240
даддасббсд сссддИасЬа сбдссадсад адсаасадсб бсссссбдас сббсддсдда 300
ддсассаадд 1;ддада1:саа дсдб 324
<210> 370 <211> 324 <212> ДНК <213> Искусственная
<400> 370 дасабссада бдасссадад сссбадсадс дбдбсбдсса дсдбдддсда сададбдасс 60
абсассбдбс дддссадсса дадсабсадс абсаабсбдс асбддбабса дсадаадссс 120
ддсааддссс ссаадсбдсб дабсбасббс дссадссадб ссабсадсдд сдбдсссадс 180
адаббббсбд дсадсддсад сддсассдас ббсадссбда ссабсаасад ссбдсадссс 240
даддасббсд сссддбасбб ббдссадсад адсаасадсб бсссссбдас сббсддсдда 300
ддсассаадд бддадабсаа дсдб 324
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Антитело, включающее антигенсвязывающий домен, который связывается с человеческим 1Ь-12

Claims (26)

1. Антитело, включающее антигенсвязывающий домен, который связывается с человеческим 1Ь-12 и человеческим ГБ-23, где указанное антитело связывается с человеческим 1Ь-12р40, присутствующим в виде мономера (человеческим 1Ь-12р40) и в виде гомодимера (человеческим 1Ь-12р80), и где указанное антитело ингибирует связывание человеческого ГБ-12 с человеческим Χ-12Ρβ2 и человеческого ГБ-23 с человеческим ГБ-23Р, но не ингибирует связывание человеческого ГБ-12, или человеческого ГБ-23, или человеческого 1Ь-12р40, или человеческого 1Ь-12р80 с человеческим Χ-12Κ.β1, где указанное антитело содержит следующие 3 последовательности СОР тяжелой цепи:
11С1)Р1:1)¥¥Б11;
11(ΌΡ2:\\ΊΙ)ΡΡ\(.ιΙ)ΤΡΧ%ΡΚΙ;Ο(.ι. где Х2 = Υ, Η или δ;
11С1ЖХ ΝΚΕΕΡΥΡΌν, и следующие 3 последовательности СОР легкой цепи:
БСОР1: ΡΑδβδΙδΙΝΌΗ;
БСОР2: ΡΑδβδΙδ;
БСГОР3:ОО8Х8БРБТ.
2. Антитело по п.1, которое конкурирует за связывание с человеческим 1Ь-12 и с человеческим ГБ23 с антителом, содержащим вариабельную область тяжелой цепи, имеющую последовательность δΕβ ΙΌ ΝΟ: 6.
3. Антитело по п.1, которое конкурирует за связывание с человеческим 1Ь-12 и с человеческим ГБ23 с антителом, содержащим вариабельную область легкой цепи, имеющую последовательность δΕβ ΙΌ ΝΟ: 7.
4. Антитело по п.1, которое связывается с частью человеческого ГБ-12р40, имеющего последовательность νβνβΟΚδΚΡΕΚΚΌΡνΡΤΟΚΤδΑΤνΧΡΚΝΑδΙδν (δΕβ ΙΌ ΝΟ: 65).
5. Антитело по п.1, которое специфически связывается с человеческим ГБ-12р40 (δΕβ ΙΌ ΝΟ: 1) в положении Акр 265.
6. Антитело по п.1, где уровень связывания указанного антитела с человеческим ГБ-23 (δΕβ ΙΌ ΝΟ: 66) превышает уровень связывания указанного антитела с мутантным ГБ-23 Ό265Α (δΕβ ΙΌ ΝΟ: 75).
7. Антитело по любому из пп.1-6, которое также содержит последовательность акцепторной каркасной области человеческой тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из δΕβ ΙΌ ΝΟ:202, δΕβ ГО ΝΟ: 205, δΕβ ГО ΝΟ: 208, δΕβ ГО ΝΟ: 203, δΕβ ГО ΝΟ: 206, δΕβ ГО ΝΟ: 209, δΕβ ГО ΝΟ: 204 и δΕβ ГО ΝΟ: 207.
8. Антитело по любому из пп.1-7, которое также содержит последовательность акцепторной кар- 303 026110 касной области человеческой легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из 8ЕР ГО N0: 210, 8ЕР ГО N0: 213, 8Ер ГО N0: 216, 8Ер ГО N0: 211, 8Ер ГО N0: 214, 8Ер ГО N0: 212 и 8Ер ГО N0: 215.
9. Антитело по любому из пп.1-8, которое включает вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из 8ЕР ГО N0: 115, 8ЕР ГО N0: 119, 8ЕР ГО N0: 162 и 8ЕР ГО N0: 112.
10. Антитело по любому из пп.1-8, которое включает вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из 8ЕР ГО N0: 169, 8ЕР ГО N0: 189 и 8ЕР ГО N0: 179.
11. Антитело по любому из пп.1-8, которое включает две вариабельные области иммуноглобулина, где указанные две вариабельные области иммуноглобулина выбраны из группы, состоящей из 8ЕР ГО N0: 119 и 8Ер ГО N0: 179; 8Ер ГО N0: 112 и 8Ер ГО N0: 169; 8Ер ГО N0: 158 и 8Ер ГО N0: 189; 8Ер ГО N0: 159 и 8Ер ГО N0: 189 и 8Ер ГО N0: 162 и 8Ер ГО N0: 189.
12. Антитело по любому из пп.1-11, которое содержит константную область тяжелой цепи иммуноглобулина человека или примата, не являющегося человеком, и где указанное антитело выбрано из группы, состоящей из 1§С1, 1§02, 1§03, 1§04, 1дМ, 1дЕ и 1дА.
13. Антитело по любому из пп.1-11, которое содержит константную область легкой цепи иммуноглобулина человека или примата, не являющегося человеком, выбранную из группы, состоящей из цепей каппа и лямбда.
14. Антитело по любому из пп.1-13, которое модифицировано посредством ковалентного присоединения органической молекулы, выбранной из группы, состоящей из прямого или разветвленного гидрофильного полимера, жирной кислоты и сложного эфира жирной кислоты.
15. Антитело по любому из пп.1-13, которое модифицируют в целях модуляции функциональных свойств, выбранных из группы, состоящей из антитело-зависимой клеточной цитотоксичности, комплемент-зависимой цитотоксичности, времени полужизни в сыворотке, биологического распределения и связывания с Рс-рецепторами.
16. Способ продуцирования антитела по п.1, где указанный способ включает:
I) иммунизацию животного человеческим 1Ь-12р40 или фрагментом человеческого 1Ь-12р40 с получением первой панели антител, которые связывают человеческий 1Ь-12р40 или фрагмент человеческого ГО-12р40;
II) отбор из этой первой панели антител, которые связываются с человеческим 1Ь-12 и человеческим ГО-23 с получением второй панели антител; и
III) отбор из этой второй панели антител, которые связываются с субъединицей р40, присутствующей в виде мономера (человеческого ГО-12р40) и в виде гомодимера (человеческого ГО-12р80), и ингибируют связывание человеческого ГО-12 с человеческим ГО-12Кв2 и связывание человеческого ГО-23 с человеческим ГО-23К, но не ингибируют связывание человеческого ГО-12, или человеческого ГО-23, или человеческого ГО-12р40, или человеческого !ГО-12р80 с человеческим !Ό-12Κβ I.
17. Способ по п.16, где стадия (II) указанного способа дополнительно включает отбор антител, которые также связываются с пептидом, имеющим последовательность УРУРСКЗККЕККЭКУРТЭКТЗАТУТС НК\А8!8У (8Ер ГО N0: 65).
18. Способ продуцирования антитела по п.1, где указанный способ включает:
I) иммунизацию животного пептидом, имеющим последовательность УрурСКЖЕЕККЭКУРТЭКТЗАТУТСККНАЖУ (8ЕР ГО N0: 65), с получением первой панели антител;
II) отбор из этой первой панели антител, которые связываются с человеческим ГО-12 и человеческим ГО-23 с получением второй панели антител; и
III) отбор из этой второй панели антител, которые связываются с субъединицей р40, присутствующей в виде мономера (человеческого ГО-12р40) и в виде гомодимера (человеческого ГО-12р80), и ингибируют связывание человеческого ГО-12 с человеческим ГО-12Кв2 и связывание человеческого ГО-23 с человеческим ГО-23К, но не ингибируют связывание человеческого ГО-12, или человеческого ГО-23, или человеческого ГО-12р40, или человеческого [И-12р80 с человеческим !Ό-12Κβ 1.
19. Способ продуцирования антитела по п.1, где указанный способ включает:
I) скрининг библиотеки дисплея человеческих антител для отбора антител, которые связываются с человеческим ГО-12 и человеческим ГО-23 с получением первой панели антител; и
II) отбор из этой первой панели антител, которые связываются с субъединицей р40, присутствующей в виде мономера (человеческого ГО-12р40) и в виде гомодимера (человеческого ГО-12р80), и ингибируют связывание человеческого ГО-12 с человеческим ГО-12Кв2 и связывание человеческого ГО-23 с человеческим ГО-23К, но не ингибируют связывание человеческого ГО-12, или человеческого ГО-23, или человеческого ГО-12р40, или человеческого [И-12р80 с человеческим !Ό-12Κβ 1.
20. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая домен УН антитела по любому из пп.1-11.
21. Молекула нуклеиновой кислоты по п.20, имеющая последовательность нуклеотидов, выбранную из 8ЕР ГО N0: 282, 8Ер ГО N0: 286, 8Ер ГО N0: 307 и 8Ер ГО N0: 329.
22. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая домен УЬ антитела по любому из пп.1-11.
23. Молекула нуклеиновой кислоты по п.22, имеющая последовательность нуклеотидов, выбран- 304 026110 ную из 8Ер ГО N0: 338, 8Ер ГО N0: 348 и 8Ер ГО N0: 358.
24. Способ лечения заболевания у индивидуума, включающий введение указанному индивидууму антитела по любому из пп.1-15, где указанное заболевание выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, реактивного артрита, псориатического артрита, демиелинизирующего заболевания, псориаза, рассеянного склероза, гиперчувствительности кожи, острого и хронического отторжения трансплантата, отторжения аллотрансплантата, реакции трансплантат против хозяина, системной красной волчанки, аутоиммунного воспалительного заболевания кишечника, васкулита, спондилоартропатии, саркоидоза, гепатита (включая аутоиммунный гепатит), первичного билиарного цирроза, увеита и атеросклероза.
25. Применение антитела по любому из пп.1-15 в лечении заболевания, выбранного из группы, состоящей из ревматоидного артрита, реактивного артрита, псориатического артрита, демиелинизирующего заболевания, псориаза, рассеянного склероза, гиперчувствительности кожи, острого и хронического отторжения трансплантата, отторжения аллотрансплантата, реакции трансплантат против хозяина, системной красной волчанки,, аутоиммунного воспалительного заболевания кишечника, васкулита, спондилоартропатии, саркоидоза, гепатита (включая аутоиммунный гепатит), первичного билиарного цирроза, увеита и атеросклероза.
26. Применение антитела по любому из пп.1-15 в приготовлении лекарственного средства для лечения заболевания, выбранного из группы, состоящей из ревматоидного артрита, реактивного артрита, псориатического артрита, демиелинизирующего заболевания, псориаза, рассеянного склероза, гиперчувствительности кожи, острого и хронического отторжения трансплантата, отторжения аллотрансплантата, реакции трансплантат против хозяина, системной красной волчанки, аутоиммунного воспалительного заболевания кишечника, васкулита, спондилоартропатии, саркоидоза, гепатита (включая аутоиммунный гепатит), первичного билиарного цирроза, увеита и атеросклероза.
EA201170323A 2008-08-14 2009-08-14 Антитела против il-12/il-23 EA026110B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US8902808P 2008-08-14 2008-08-14
AU2008904178A AU2008904178A0 (en) 2008-08-14 Anti-IL-12/23 Antibodies
PCT/AU2009/001047 WO2010017598A1 (en) 2008-08-14 2009-08-14 Anti-il-12/il-23 antibodies

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201170323A1 EA201170323A1 (ru) 2011-10-31
EA026110B1 true EA026110B1 (ru) 2017-03-31

Family

ID=41668588

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201170323A EA026110B1 (ru) 2008-08-14 2009-08-14 Антитела против il-12/il-23

Country Status (19)

Country Link
US (3) US8563697B2 (ru)
EP (1) EP2326668B1 (ru)
JP (1) JP5623401B2 (ru)
KR (2) KR20160116056A (ru)
CN (1) CN102177178B (ru)
AR (1) AR073060A1 (ru)
AU (1) AU2009281713B9 (ru)
CA (1) CA2733642A1 (ru)
EA (1) EA026110B1 (ru)
IL (2) IL210903A (ru)
MA (1) MA32629B1 (ru)
MX (1) MX2011001409A (ru)
MY (1) MY153074A (ru)
NZ (1) NZ590816A (ru)
TN (1) TN2011000052A1 (ru)
TW (1) TWI501776B (ru)
UA (1) UA104297C2 (ru)
WO (1) WO2010017598A1 (ru)
ZA (1) ZA201100711B (ru)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2733642A1 (en) * 2008-08-14 2010-02-18 Cephalon Australia Pty Ltd Anti-il-12/il-23 antibodies
JO3244B1 (ar) 2009-10-26 2018-03-08 Amgen Inc بروتينات ربط مستضادات il – 23 البشرية
ES2961381T3 (es) 2010-06-19 2024-03-11 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anticuerpos anti-GD2
WO2012009760A1 (en) * 2010-07-20 2012-01-26 Cephalon Australia Pty Ltd Anti-il-23 heterodimer specific antibodies
RS55161B1 (sr) 2010-11-04 2017-01-31 Boehringer Ingelheim Int Anti-il-23 antitela
AU2012204869B2 (en) 2011-01-04 2016-01-28 Charite Universitatsmedizin Berlin Modulators of IL-12 and/or IL-23 for the prevention or treatment of Alzheimer's disease
US20140314710A1 (en) * 2011-05-19 2014-10-23 Rush University Medical Center IL-12 P40 Monomer, Monoclonal Antibody Against P40 Homodimer and the Combination of the Two for Autoimmune Disease Treatment
PL2812443T3 (pl) 2012-02-06 2020-01-31 Inhibrx, Inc. Przeciwciała CD47 i sposoby ich zastosowania
NZ700802A (en) 2012-05-03 2017-06-30 Boehringer Ingelheim Int Anti-il-23p19 antibodies
WO2014004436A2 (en) 2012-06-27 2014-01-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Crystalline anti-human il-23 antibodies
JP2016507555A (ja) * 2013-02-06 2016-03-10 インヒブルクス エルピー 血小板非減少性かつ赤血球非減少性ｃｄ４７抗体及びその使用方法
EP2968545B1 (en) 2013-03-15 2019-03-06 Memorial Sloan Kettering Cancer Center High affinity anti-gd2 antibodies
EP3708679A1 (en) 2014-07-24 2020-09-16 Boehringer Ingelheim International GmbH Biomarkers useful in the treatment of il-23a related diseases
TWI711629B (zh) 2014-09-03 2020-12-01 德商包林格因蓋爾漢國際股份有限公司 靶向IL-23A與TNF-α之化合物及其用途
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
US11071782B2 (en) 2016-04-20 2021-07-27 Coherus Biosciences, Inc. Method of filling a container with no headspace
US20180043020A1 (en) * 2016-04-20 2018-02-15 Coherus Biosciences, Inc. Method of reducing immunogenicity of drug products
CN109164266B (zh) * 2017-11-27 2021-09-24 首都医科大学附属北京友谊医院 细胞因子在区分淋巴瘤相关噬血细胞综合征和淋巴瘤中的应用
KR20220020879A (ko) 2019-06-12 2022-02-21 에스크진 파마, 아이엔씨. 새로운 il-15 프로드럭 및 이를 사용하는 방법
EP4008727A4 (en) * 2019-07-30 2024-01-17 Akeso Biopharma Inc HUMANIZED ANTIBODY DIRECTED AGAINST THE P40 PROTEIN DOMAIN AND ITS USE
CN114401997A (zh) 2019-09-28 2022-04-26 奥美药业有限公司 细胞因子前药和双前药
WO2021081516A1 (en) * 2019-10-26 2021-04-29 Breach Clarity, Inc. Data breach system and method
CN115353566B (zh) * 2022-09-14 2023-05-09 江苏睿源生物技术有限公司 用于检测白细胞介素1-β的抗体组合及其应用
CN116047081B (zh) * 2023-01-10 2024-02-13 北京新源长青生物科技有限公司 检测Aβ40、Aβ42的试剂盒与方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004101750A2 (en) * 2003-05-09 2004-11-25 Centocor, Inc. IL-23p40 SPECIFIC IMMUNOGLOBULIN DERIVED PROTEINS, COMPOSITIONS, METHODS AND USES

Family Cites Families (140)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4309989A (en) 1976-02-09 1982-01-12 The Curators Of The University Of Missouri Topical application of medication by ultrasound with coupling agent
FR2374910A1 (fr) 1976-10-23 1978-07-21 Choay Sa Preparation a base d'heparine, comprenant des liposomes, procede pour l'obtenir et medicaments contenant de telles preparations
US4172124A (en) 1978-04-28 1979-10-23 The Wistar Institute Method of producing tumor antibodies
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4656134A (en) 1982-01-11 1987-04-07 Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University Gene amplification in eukaryotic cells
US5149636A (en) 1982-03-15 1992-09-22 Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method for introducing cloned, amplifiable genes into eucaryotic cells and for producing proteinaceous products
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4965188A (en) 1986-08-22 1990-10-23 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme
US6492107B1 (en) 1986-11-20 2002-12-10 Stuart Kauffman Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique
DE3546807C2 (ru) 1985-03-30 1991-03-28 Marc Genf/Geneve Ch Ballivet
SE448277B (sv) 1985-04-12 1987-02-09 Draco Ab Indikeringsanordning vid en doseringsanordning for lekemedel
US4766067A (en) 1985-05-31 1988-08-23 President And Fellows Of Harvard College Gene amplification
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5618920A (en) 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US5576195A (en) 1985-11-01 1996-11-19 Xoma Corporation Vectors with pectate lyase signal sequence
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
SE453566B (sv) 1986-03-07 1988-02-15 Draco Ab Anordning vid pulverinhalatorer
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4767402A (en) 1986-07-08 1988-08-30 Massachusetts Institute Of Technology Ultrasound enhancement of transdermal drug delivery
EP0318512B1 (en) 1986-08-18 1998-06-17 Emisphere Technologies, Inc. Delivery systems for pharmacological agents
US4889818A (en) 1986-08-22 1989-12-26 Cetus Corporation Purified thermostable enzyme
US4704692A (en) 1986-09-02 1987-11-03 Ladner Robert C Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US4795699A (en) 1987-01-14 1989-01-03 President And Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
US4921794A (en) 1987-01-14 1990-05-01 President And Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
EP0832981A1 (en) 1987-02-17 1998-04-01 Pharming B.V. DNA sequences to target proteins to the mammary gland for efficient secretion
WO1988006630A1 (en) 1987-03-02 1988-09-07 Genex Corporation Method for the preparation of binding molecules
US4873316A (en) 1987-06-23 1989-10-10 Biogen, Inc. Isolation of exogenous recombinant proteins from the milk of transgenic mammals
CA1341235C (en) 1987-07-24 2001-05-22 Randy R. Robinson Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US4939666A (en) 1987-09-02 1990-07-03 Genex Corporation Incremental macromolecule construction methods
EP0396612B1 (en) 1988-01-11 1996-07-24 Xoma Corporation Novel plasmid vector with pectate lyase signal sequence
US5256648A (en) 1988-01-21 1993-10-26 Yale University Selective inhibition of gene expression by photoactivatable oligonucleotides
US4956288A (en) 1988-04-22 1990-09-11 Biogen, Inc. Method for producing cells containing stably integrated foreign DNA at a high copy number, the cells produced by this method, and the use of these cells to produce the polypeptides coded for by the foreign DNA
US5130238A (en) 1988-06-24 1992-07-14 Cangene Corporation Enhanced nucleic acid amplification process
EP0350260B1 (en) 1988-07-04 1993-10-20 Meiji Seika Kaisha Ltd. New oxamic acid compounds and pharmaceutical composition for use in improvement of damaged cerebral functions of brain
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5066584A (en) 1988-09-23 1991-11-19 Cetus Corporation Methods for generating single stranded dna by the polymerase chain reaction
US5091310A (en) 1988-09-23 1992-02-25 Cetus Corporation Structure-independent dna amplification by the polymerase chain reaction
US5142033A (en) 1988-09-23 1992-08-25 Hoffmann-La Roche Inc. Structure-independent DNA amplification by the polymerase chain reaction
US4987893A (en) 1988-10-12 1991-01-29 Rochal Industries, Inc. Conformable bandage and coating material
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
EP0368684B2 (en) 1988-11-11 2004-09-29 Medical Research Council Cloning immunoglobulin variable domain sequences.
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US4994370A (en) 1989-01-03 1991-02-19 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services DNA amplification technique
US5266491A (en) 1989-03-14 1993-11-30 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. DNA fragment and expression plasmid containing the DNA fragment
EP0478627A4 (en) 1989-05-16 1992-08-19 William D. Huse Co-expression of heteromeric receptors
CA2016842A1 (en) 1989-05-16 1990-11-16 Richard A. Lerner Method for tapping the immunological repertoire
CA2016841C (en) 1989-05-16 1999-09-21 William D. Huse A method for producing polymers having a preselected activity
EP0739904A1 (en) 1989-06-29 1996-10-30 Medarex, Inc. Bispecific reagents for aids therapy
AU638762B2 (en) 1989-10-05 1993-07-08 Optein Inc Cell-free synthesis and isolation of novel genes and polypeptides
US5580575A (en) 1989-12-22 1996-12-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Therapeutic drug delivery systems
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
ATE356869T1 (de) 1990-01-12 2007-04-15 Amgen Fremont Inc Bildung von xenogenen antikörpern
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
CA2083148C (en) 1990-05-24 2002-01-01 Christopher J. Michejda Bistriazenes as chemotherapeutic agents
AU8081491A (en) 1990-06-01 1991-12-31 Cetus Corporation Compositions and methods for identifying biologically active molecules
US5723286A (en) 1990-06-20 1998-03-03 Affymax Technologies N.V. Peptide library and screening systems
ATE204902T1 (de) 1990-06-29 2001-09-15 Large Scale Biology Corp Melaninproduktion durch transformierte mikroorganismen
CA2109602C (en) 1990-07-10 2002-10-01 Gregory P. Winter Methods for producing members of specific binding pairs
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5580734A (en) 1990-07-13 1996-12-03 Transkaryotic Therapies, Inc. Method of producing a physical map contigous DNA sequences
WO1992002551A1 (en) 1990-08-02 1992-02-20 B.R. Centre Limited Methods for the production of proteins with a desired function
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
WO1992005258A1 (en) 1990-09-20 1992-04-02 La Trobe University Gene encoding barley enzyme
IL99552A0 (en) 1990-09-28 1992-08-18 Ixsys Inc Compositions containing procaryotic cells,a kit for the preparation of vectors useful for the coexpression of two or more dna sequences and methods for the use thereof
GB9022648D0 (en) 1990-10-18 1990-11-28 Charing Cross Sunley Research Polypeptide and its use
ES2113940T3 (es) 1990-12-03 1998-05-16 Genentech Inc Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas.
CA2104698A1 (en) 1991-02-21 1992-08-22 John J. Toole Aptamers specific for biomolecules and methods of making
US5404871A (en) 1991-03-05 1995-04-11 Aradigm Delivery of aerosol medications for inspiration
ATE240740T1 (de) 1991-03-15 2003-06-15 Amgen Inc Pegylation von polypeptiden
EP0580737B1 (en) 1991-04-10 2004-06-16 The Scripps Research Institute Heterodimeric receptor libraries using phagemids
US5962255A (en) 1992-03-24 1999-10-05 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing recombinant vectors
KR100246082B1 (ko) 1991-07-02 2000-04-01 인헤일, 인코오포레이티드 에어로졸화된약제를전달하는방법및장치
WO1993006213A1 (en) 1991-09-23 1993-04-01 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5270170A (en) 1991-10-16 1993-12-14 Affymax Technologies N.V. Peptide library and screening method
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US5968502A (en) 1991-11-05 1999-10-19 Transkaryotic Therapies, Inc. Protein production and protein delivery
US5641670A (en) 1991-11-05 1997-06-24 Transkaryotic Therapies, Inc. Protein production and protein delivery
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
WO1993011236A1 (en) 1991-12-02 1993-06-10 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
US5667988A (en) 1992-01-27 1997-09-16 The Scripps Research Institute Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains
US5543507A (en) 1992-03-05 1996-08-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Covalently cross-linked oligonucleotides
EP0656941B1 (en) 1992-03-24 2005-06-01 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
AU4829593A (en) 1992-09-23 1994-04-12 Fisons Plc Inhalation device
SK51695A3 (en) 1992-10-19 1995-11-08 Dura Pharma Inc Dry powder medicament inhaler
US5643252A (en) 1992-10-28 1997-07-01 Venisect, Inc. Laser perforator
AU5670194A (en) 1992-11-20 1994-06-22 Enzon, Inc. Linker for linked fusion polypeptides
US5849695A (en) 1993-01-13 1998-12-15 The Regents Of The University Of California Parathyroid hormone analogues useful for treatment of osteoporosis and disorders of calcium meatabolism in mammals
DE69414369T2 (de) 1993-01-19 1999-05-27 Glaxo Group Ltd Aerosol-spender und verfahren zu seiner herstellung
CA2155728C (en) 1993-02-12 2000-04-25 Gerald R. Crabtree Regulated transcription of targeted genes and other biological events
US5770428A (en) 1993-02-17 1998-06-23 Wisconsin Alumni Research Foundation Chimeric retrovial expression vectors and particles containing a simple retroviral long terminal repeat, BLV or HIV coding regions and cis-acting regulatory sequences, and an RNA translational enhancer with internal ribsome entry site
AU6819494A (en) 1993-04-26 1994-11-21 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
GB9313509D0 (en) 1993-06-30 1993-08-11 Medical Res Council Chemisynthetic libraries
US5514670A (en) 1993-08-13 1996-05-07 Pharmos Corporation Submicron emulsions for delivery of peptides
US5625825A (en) 1993-10-21 1997-04-29 Lsi Logic Corporation Random number generating apparatus for an interface unit of a carrier sense with multiple access and collision detect (CSMA/CD) ethernet data network
US5814599A (en) 1995-08-04 1998-09-29 Massachusetts Insitiute Of Technology Transdermal delivery of encapsulated drugs
JPH09506508A (ja) 1993-12-03 1997-06-30 メディカル リサーチ カウンシル 組換え結合タンパク質およびペプチド
SE9304060D0 (sv) 1993-12-06 1993-12-06 Bioinvent Int Ab Sätt att selektera specifika bakteriofager
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
US6830751B1 (en) * 1994-03-14 2004-12-14 Genetics Institute, Llc Use of IL-12 antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis
US5763733A (en) 1994-10-13 1998-06-09 Enzon, Inc. Antigen-binding fusion proteins
WO1996013583A2 (en) 1994-10-20 1996-05-09 Morphosys Gesellschaft Für Proteinoptimierung Mbh Targeted hetero-association of recombinant proteins to multi-functional complexes
US5549551A (en) 1994-12-22 1996-08-27 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Adjustable length balloon catheter
US5656730A (en) 1995-04-07 1997-08-12 Enzon, Inc. Stabilized monomeric protein compositions
WO1996034096A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5730723A (en) 1995-10-10 1998-03-24 Visionary Medical Products Corporation, Inc. Gas pressured needle-less injection device and method
EP0859841B1 (en) 1995-08-18 2002-06-19 MorphoSys AG Protein/(poly)peptide libraries
US5853697A (en) 1995-10-25 1998-12-29 The United States Of America, As Represented By The Department Of Health & Human Services Methods of treating established colitis using antibodies against IL-12
GB9526100D0 (en) 1995-12-20 1996-02-21 Intersurgical Ltd Nebulizer
BR9612410A (pt) 1996-01-03 1999-07-13 Glaxo Group Ltd Aparelho para inalação
DE19624387C2 (de) 1996-06-19 1999-08-19 Hatz Motoren Kaltstartvorrichtung
GB9712818D0 (en) 1996-07-08 1997-08-20 Cambridge Antibody Tech Labelling and selection of specific binding molecules
WO1998024893A2 (en) 1996-12-03 1998-06-11 Abgenix, Inc. TRANSGENIC MAMMALS HAVING HUMAN IG LOCI INCLUDING PLURAL VH AND Vλ REGIONS AND ANTIBODIES PRODUCED THEREFROM
US5879681A (en) 1997-02-07 1999-03-09 Emisphere Technolgies Inc. Compounds and compositions for delivering active agents
US5921447A (en) 1997-02-13 1999-07-13 Glaxo Wellcome Inc. Flow-through metered aerosol dispensing apparatus and method of use thereof
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
DE69935574T2 (de) 1998-01-23 2007-12-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Antikörper gegen mensliches il-12
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
KR100857943B1 (ko) 2000-11-30 2008-09-09 메다렉스, 인코포레이티드 인간 항체의 제조를 위한 형질전환 트랜스염색체 설치류
US20030157105A1 (en) 2001-05-30 2003-08-21 Carton Jill M. Anti-p40 immunglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
MXPA05000511A (es) 2001-07-12 2005-09-30 Jefferson Foote Anticuepros super humanizados.
AR051444A1 (es) * 2004-09-24 2007-01-17 Centocor Inc Proteinas derivadas de inmunoglobulina especifica de il-23p40, composiciones, epitopos, metodos y usos
CN101120087A (zh) 2004-12-21 2008-02-06 森托科尔公司 抗-il-12抗体、表位、组合物、方法和用途
EP1907421A4 (en) 2005-06-30 2012-03-28 Abbott Lab IL-12 / P40 BINDING PROTEINS
DK1931710T3 (en) 2005-08-31 2017-04-03 Merck Sharp & Dohme CONSTRUCTED ANTI-IL-23 ANTIBODIES
KR20150038227A (ko) * 2007-01-16 2015-04-08 애브비 인코포레이티드 건선의 치료방법
CA2733642A1 (en) * 2008-08-14 2010-02-18 Cephalon Australia Pty Ltd Anti-il-12/il-23 antibodies

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004101750A2 (en) * 2003-05-09 2004-11-25 Centocor, Inc. IL-23p40 SPECIFIC IMMUNOGLOBULIN DERIVED PROTEINS, COMPOSITIONS, METHODS AND USES

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DING CHANGHAI et al., 'ABT-874, a fully human monoclonal anti-IL-12/IL23 antibody for the potential treatment of autoimmune diseases', Current Opinion in Investigational Drugs, 25 April 2008, vol. 9, No. 5, pages 515-522, page 516, left hand column, second full paragraph, page 519, left hand column, first paragraph *
REDDY MANJULA et al., 'Modulation of CLA, IL-12R, CD40L and IL-2Rα expression and inhibition of IL-12- and IL-23-induced cytokine secretion by CNTO 1275', Cellular Immunology, 2007, vol. 247, No. 1, pages 1-11, page 1, left hand column, second full paragraph *

Also Published As

Publication number Publication date
NZ590816A (en) 2013-02-22
US20140086922A1 (en) 2014-03-27
KR101781965B1 (ko) 2017-09-27
AU2009281713B2 (en) 2013-10-24
TWI501776B (zh) 2015-10-01
US20160264661A1 (en) 2016-09-15
MA32629B1 (fr) 2011-09-01
UA104297C2 (en) 2014-01-27
EA201170323A1 (ru) 2011-10-31
AR073060A1 (es) 2010-10-13
US8563697B2 (en) 2013-10-22
EP2326668A4 (en) 2014-01-22
AU2009281713A1 (en) 2010-02-18
MY153074A (en) 2014-12-31
IL210903A0 (en) 2011-04-28
KR20160116056A (ko) 2016-10-06
WO2010017598A1 (en) 2010-02-18
ZA201100711B (en) 2012-05-01
EP2326668B1 (en) 2018-01-17
CN102177178A (zh) 2011-09-07
TW201010725A (en) 2010-03-16
CA2733642A1 (en) 2010-02-18
AU2009281713B9 (en) 2014-05-29
EP2326668A1 (en) 2011-06-01
JP2011530298A (ja) 2011-12-22
IL210903A (en) 2016-05-31
IL245547A0 (en) 2016-06-30
JP5623401B2 (ja) 2014-11-12
CN102177178B (zh) 2015-07-01
US20110262445A1 (en) 2011-10-27
TN2011000052A1 (en) 2012-09-05
MX2011001409A (es) 2011-03-29
KR20110043761A (ko) 2011-04-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA026110B1 (ru) Антитела против il-12/il-23
KR20230052910A (ko) Ccr8 항체 및 이의 응용
CN110121510A (zh) 程序性细胞死亡(pd-1)的单结构域抗体
EA022759B1 (ru) Связывающие элементы для пептида c5a с высоким ингибирующим действием
JP2021532058A (ja) 抗ｔｉｇｉｔ抗体及びその使用
BR122020002414B1 (pt) Uso de anticorpos anti-cd27 humanos
EA024701B1 (ru) Антитела, связывающие cd27 человека, и их применение
EA022984B1 (ru) Конструкты, связывающиеся с ron, и способы их использования
EA014229B1 (ru) Антитело против мср-1, содержащие его композиции и способы применения антитела и композиций
JP2003526371A (ja) ヒトｃｄ１５４に対する抗体
US11345739B2 (en) CD137 binding fibronectin type III domains
EA030182B1 (ru) Антитела, специфические для кадгерина-17
US10597438B2 (en) PD-L1 binding fibronectin type III domains
CN107810197A (zh) 鉴定包含结合多肽的细菌的方法
US20210145976A1 (en) Cd71 binding fibronectin type iii domains
US20080063646A1 (en) Treatment Of Inflammatory Bowel Diseases With Anti-Ip-10 Antibodies
JP2022538461A (ja) Ｃｄ３８およびｃｄ３に結合するヘテロ二量体抗体
CN109517064B (zh) 白介素-6的人源化单克隆抗体、其编码基因及应用
US20220332795A1 (en) Cd71 binding fibronectin type iii domains
WO2018121476A1 (zh) 一种识别hla-a2分子与nlvpmvatv短肽形成的复合物的单域抗体
JP2019533423A (ja) ＢＬｙＳ抗体及びその製造方法と応用
AU2013297478B2 (en) Monoclonal antibody against human midkine
US20240132603A1 (en) Ccr8 antibody and application thereof
US20230330239A1 (en) Epcam binding fibronectin type iii domains
TW202336032A (zh) 白細胞介素2突變體以及含有其的複合物

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU