BR112014027372B1 - Composição farmacêutica compreendendo anticorpos antiil-23p19 - Google Patents

Abstract

COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO ANTICORPOS ANTI-IL-23P19. A presente invenção refere-se aos compostos de ligação anti-IL-23p19, em particular novos anticorpos anti-IL-23p19 humanizados, composições farmacêuticas e métodos terapêuticos ou diagnósticos e composições para utilizar os mesmos.

Description

Campo Técnico da Invenção

[001] Esta invenção geralmente se refere a anticorpos anti-IL- 23p19 para uso diagnóstico e terapêutico. Mais especificamente, anticorpos anti-IL-23p19 humanizados e métodos de uso para o tratamento de várias doenças ou distúrbios são descritos. Composições farmacêuticas e kits compreendendo tais compostos são também descritos.

Antecedentes da Invenção

[002] Eucarióticos superiores envolvem uma resposta complexa a patógenos que é iniciada pela resposta imune inata e seguida pela resposta imune adaptativa. Juntos, estes dois mecanimos não apenas erradicam os patógenos que infectam o organismo, porém também estabilizam resposta imunológica de longa duração contra furutas exposições. Deficiências nestas respostas podem resultar na suscetibilidade à infecções e/ou alterações da resposta imune adaptativa que induz à inflamação crônica e autoimunidade. IL-12, uma citocina hete- rodimérica que consiste em uma subunidade de proteína p40 e uma p35, considerada por muito tempo a citocina de indicação da resposta imune inata com maior influência sobre a imunidade adaptativa. Entretanto, os dados da investigação do papel biológico da citocina levaram a resultados confusos. Por exemplo, ao mesmo tempo em que camundongos deficientes de p40 foram resistentes à Artrite Induzida por Colágeno (CIA) e Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE), camundongos deficientes de p35 foram suscetíveis a ambas e ainda exibiram doença exacerbada. Tais enigmas começaram a ser resolvidos com a descoberta nos últimos anos de 1990 de um novo membro d família de citocina IL-12 com um papel distinto na resposta imune - IL-23.

[003] IL-23 é composto de uma subunidade de comum (p40) com IL-12 e uma subunidade p19 exclusivo. A despeito desta subunidade p40 compartilhada, os papéis quanto a IL-23 e IL-12 são bastante diferentes. IL-12 é importante para as respostas de Th1 por meio de promoção de diferenciação, proliferação e ativação de célula Th1. Ao contrário, IL-23 sustenta o desenvolvimento e manutenção de um grupo recentemente definido de células auxiliadoras T de CD4+ chamadas células Th17 devido a sua capacidade de produzir IL-17 e citocinas relacionadas. Existe evidência crescente de que IL-23 está envolvido na inflamação autoimune crônica e a modulação de atividade de IL-23 pode fornecer terapias promissoras contra doenças autoimunes.

[004] Existe, portanto, uma necessidade de moléculas de anta gonista contra IL-23 com propriedades farmacológicas benéficas, que podem ser utilizadas como agentes terapêuticos para tratar doenças, em particular doenças imunológicas e autoimunes em humanos.

[005] Consequentemente, um objetivo da presente invenção é fornecer moléculas de antagonista anti-IL-23, em particular moléculas de antagonista anti-IL-23 que têm afinidade de ligação elevada quanto a IL-23.

[006] Um outro objetivo da presente invenção é fornecer molécu las de antagonista anti-IL-23, que têm especificidade quanto a IL-23.

[007] Um outro objetivo da presente invenção é fornecer antago nistas anti-IL-23, que têm atividade de bloqueio elevada quanto à associação de IL-23 e seu receptor.

[008] Um outro objetivo da presente invenção é fornecer antago nistas anti-IL-23, que têm potente atividade celular.

[009] Um outro objetivo da presente invenção é fornecer antago nistas anti-IL-23, que têm uma biodisponibilidade favorável.

[010] Um outro objetivo da presente invenção é fornecer antago nistas anti-IL-23, que têm propriedades biofísicas favoráveis.

[011] Um outro objetivo da presente invenção é fornecer compo- sições farmacêuticas para moléculas de anticorpo, em particular para anticorpos anti-IL-23p19. Um objetivo particular da presente invenção é fornecer composições farmacêuticas para moléculas de anticorpo com estabilidade e capacidade de armazenagem favorável.

[012] Outros objetivos da presente invenção incluem combina ções de qualquer um dos objetivos mencionados aqui.

Sumário da Invenção

[013] A presente invenção trata as necessidades acima e fornece anticorpos que se ligam à subunidade p19 da proteína IL-23. Em um aspecto, um anticorpo da presente invenção se liga a IL-23 humano com afinidade elevada. Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção inibe a produção estimulada de IL-23 de IL-17 de esplenóci- tos de camundongo. Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção não se liga a nem se antagoniza a IL-12, que é um membro da família intimamente relacionado a IL-23.

[014] Em uma modalidade, a presente invenção fornece anticor pos anti-IL-23p19 que são derivados de hibridomas de camundongo, por exemplo, anticorpos monoclonais. Em uma modalidade, a presente invenção fornece anticorpos anti-IL-23p19 de tamanho natural. Em outra modalidade, a presente invenção fornece anticorpos anti-IL-23p19 humanizados, por exemplo, anticorpos anti-IL-23p19 monoclonais humanizados, por exemplo, anticorpos anti-IL-23p19 monoclonais humanizados de tamanho natural. Em um aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção se liga a IL-23 humano com afinidade elevada. Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção também se liga a IL-23 cinomolgo com afinidade elevada. Em um outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção inibe a fosfo- rilação de STAT3 induzida por IL-23 em células CB. Em outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção antagoniza a ação de IL-23 ligando-se à subunidade de p19 de IL-23, por exemplo, quando medido pela inibição de citocinas tais como IL-17 e IL-22, cuja produção é estimulada por IL-23. Em um outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção tem um perfil farmacocinético favorável (PK). Em um outro aspecto, um anticorpo humanizado da presente invenção tem propriedades biofísicas favoráveis, tais como qualidade, estabilidade ou solubilidade, por exemplo, como definido pela porcentagem de anticorpo em forma de monômero.

[015] Outras modalidades abrangem moléculas de DNA codifi cando anticorpos da presente invenção, vetores de expressão e células hospedeiras compreendendo tais moléculas de DNA, e métodos de peraparação de anticorpos da presente invenção. A presente invenção também fornece usos terapêuticos para os anticorpos da presente invenção, em particular contra doenças imunológicas e autoimunes.

[016] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreendendo uma sequência de CDR1 de cadeia leve (L- CDR1) de SEQ ID N°: 1, 4, 6, 7, 8, 11, 15, 18, 19, 22, 27 ou 30; uma sequência de CDR2 de cadeia leve (L-CDR2) de SEQ ID N°: 2, 5, 9, 12, 16, 20, 23, 25, 28 ou 31; uma sequência de CDR3 de cadeia leve (L-CDR3) de SEQ ID N°: 3, 10, 13, 14, 17, 21, 24, 26, 29, ou 32; uma sequência de CDR1 de cadeia pesada (H-CDR1) de SEQ ID N°: 33, 36, 38, 40, 43, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 67, 68, 69, 77 ou 80; uma sequência de CDR2 de cadeia pesada (H-CDR2) de SEQ ID N°: 34, 39, 41, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 70, 72, 73, 75, 78 ou 81; e uma sequência de CDR3 de cadeia pesada (H-CDR3) de SEQ ID N°: 35, 37, 42, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 65, 71, 74, 76, 79 ou 82. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma L-CDR1 listada acima, a L-CDR2 listada acima e a L- CDR3 listada acima, e uma região variável de cadeia pesada compre- endendo uma H-CDR1 listada acima, a H-CDR2 listada acima e a H- CDR3 listada acima.

[017] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 1, 2, 3, 33, 34, e 35, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, a L- CDR3, a H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 4, 5, 3, 36, 34 e 37, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L- CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H- CDR3 de SEQ ID N°: 1, 2, 3, 38, 39 e 35, respectivamente; ou uma L- CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, a H-CDR1, uma sequência de H- CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 6, 2, 3, 40, 41 e 42, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 7, 2, 3, 43, 41 e 44, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 8, 9, 10, 45, 46 e 47, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 8, 9, 10, 48, 49 e 50, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 11, 12, 1 3, 51, 52 e 53, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 7, 2, 14, 54, 55 e 56, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 15, 16, 17, 57, 58 e 59, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 18, 16, 17, 60, 61 e 62, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 19, 20, 21,63, 66, 67 ou 68, 64 e 65, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H- CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 22, 23, 24, 69, 70 e 71, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 22, 25, 26, 55, 72 e 71, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 8, 9, 10, 45, 73 e 74, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 27, 28, 29, 45, 75 e 76, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 8, 9, 10, 77, 78 e 79, respectivamente; ou uma L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma sequência de H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 30, 31, 32, 80, 81 e 82, respectivamente. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma combinação de L-CDR1, L-CDR2 e L-CDR3 listada acima, e uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma combi-nação de H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 listada acima.

[018] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 84 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 121; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 86 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 123; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 88 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 125; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 90 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 127; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de amino- ácido SEQ ID N°: 91 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 128; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 93 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 130; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 95 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 132; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 97 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 134; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 99 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de ami- noácido SEQ ID N°: 136; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 101 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 138; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 103 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 140; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 105 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 142; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequên cia de aminoácido SEQ ID N°: 107 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 144; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 109 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 146; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de amino- ácido SEQ ID N°: 11 1 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 148; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 113 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 150; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 115 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 152; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 117 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 154; ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 119 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 156.

[019] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°: 158, 160, 162 e 164 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste em SEQ ID N°: 166, 168, 170 e 172.

[020] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo tem um KD quanto ao IL-23 menor do que 40pM, ou em KD quanto ao IL-23 menor do que 20pM, ou KD quanto IL-23 menor do que 10pM ou KD for IL-23 menor do que 1 pM.

[021] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo que se liga ao IL-23p19 humano em um epítopo que consiste em resíduos de aminoácido 108 a 126 e resíduos de aminoácido 137 a 151 de SEQ ID N°: 181.

[022] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo que se liga competitivamente ao IL-23p19 humano com um anticorpo da presente invenção. Em uma modalidade, a presente invenção fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo que se liga competitivamente ao IL-23p19 humano com um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 174 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 176. Em uma modalidade, a presente invenção fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo que se liga competitivamente ao IL-23p19 humano com um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoá- cido de SEQ ID N°: 174 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 178. Em uma modalidade, a presente invenção fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo que se liga competitivamente ao IL- 23p19 humano com um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 180 e uma cadeia pesada compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 176. Em uma modalidade, a presente invenção fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo que se liga competitivamente ao IL-23p19 humano com um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 180 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 178.

[023] Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anti corpo humanizado. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL- 23p19 é um anticorpo de tamanho natural. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de tamanho natural. Em uma modalidade o fragmento de ligação de antígeno é um fragmento de Fab, F(ab’)2, ou Fv de cadeia simples. Em uma modalidade, o fragmento de ligação de antígeno compreende uma região variável de cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada.

[024] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 19 (CDR1-L); a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 20 (CDR2-L); a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 21 (CDR3-L): a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 63, 66, 67 ou 68 (CDR1-H); a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 64 (CDR2-H); e a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 65 (CDR3-H).

[025] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 19 (CDR1-L); a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 20 (CDR2-L); a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 21 (CDR3-L): a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 66 (CDR1-H); a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 64 (CDR2-H); e a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 65 (CDR3-H).

[026] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 19 (CDR1-L); a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 20 (CDR2-L); e a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 21 (CDR3-L); e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 63, 66, 67 ou 68 (CDR1-H); a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 64 (CDR2-H); e a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 65 (CDR3-H).

[027] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo anticorpo, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 19 (CDR1-L); a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 20 (CDR2-L); e a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 21 (CDR3-L); e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 66 (CDR1-H); a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 64 (CDR2-H); e a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 65 (CDR3-H).

[028] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve que compre- ende a sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID N°: 158, 160, 162 ou 164; e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido qualquer uma de SEQ ID N°: 166, 168, 170 ou 172.

[029] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 160 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 166.

[030] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 160 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 168.

[031] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 158 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 166.

[032] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 158 e uma região va- riável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 168.

[033] Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anti corpo humanizado. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL- 23p19 é um anticorpo de tamanho natural. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de tamanho natural. Em uma modalidade, o fragmento de ligação de antígeno é um fragmento de Fab, F(ab’)2, ou Fv de cadeia simples. Em uma modalidade, o fragmento de ligação de antígeno compreende uma região variável de cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada.

[034] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 166 ou 168 ligada a uma região constante de cadeia pesada lgG1, lgG2, lgG3, lgG4, IgM, IgA ou IgE humana. Um anticorpo compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 166 ou 168 ligada a uma região constante de cadeia pesada de IgG1 humana. Um anticorpo compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 158 ou 160 ligada a uma região constante de cadeia leve de kappa ou lambda humana. Um anticorpo compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 158 ou 160 ligada a uma região constante de cadeia leve de kappa humana.

[035] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 166 ou 168 ligada a uma região constante de cadeia pesada de IgG1 humana; e a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 158 ou 160 ligada a uma região constante de cadeia leve de kappa humana.

[036] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste em qualquer uma de SEQ ID N°: 158, 160, 162 e 164 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste em qualquer uma de SEQ ID N°: 166, 168, 170 e 172.

[037] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 160 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 166.

[038] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 160 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 168.

[039] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 158 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 166.

[040] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 158 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido SEQ ID N°: 168.

[041] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 174 ou 180 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 176 ou 178.

[042] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 174 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 176.

[043] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 174 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 178.

[044] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 180 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 176.

[045] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 monoclonal humanizado compreendendo uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 180 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 178.

[046] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreendendo um domínio variável de cadeia leve humanizado compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 160 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia leve de domínio variável de SEQ ID N°: 160 e um domínio variável de cadeia pesada humanizada compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 166 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica à sequência de ami- noácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia pesada de domínio variável de SEQ ID N°: 166. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de tamanho natural.

[047] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreendendo um domínio variável de cadeia leve humanizado compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 160 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia leve de domínio variável de SEQ ID N°: 160 e um domínio variável de cadeia pesada humanizada compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 168 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica à sequência de ami- noácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia pesada de domínio variável de SEQ ID N°: 168. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de tamanho natural.

[048] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreendendo um domínio variável de cadeia leve humanizado compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 158 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia leve de domínio variável de SEQ ID N°: 158 e um domínio variável de cadeia pesada humanizada compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 166 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica à sequência de ami- noácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia pesada de domínio variável de SEQ ID N°: 166. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de tamanho natural.

[049] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreendendo um domínio variável de cadeia leve humanizado compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 158 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia leve de domínio variável de SEQ ID N°: 158 e um domínio variável de cadeia pesada humanizada compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 168 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica à sequência de ami- noácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia pesada de domínio variável de SEQ ID N°: 168. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de tamanho natural.

[050] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção pode ser também caracterizado por um KD para IL- 23 humano igual ou menor do que 1 pM. Em um aspecto, não existe nenhum desvio na taxa de ligação em 50% de soro humano.

[051] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção pode ser caracterizado pelo fato de que ele bloqueia a ligação de IL-23 a IL-23R/Fc humano in vitro.

[052] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção pode ser caracterizado pelo fato de que ele não se liga a IL-12 humano.

[053] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção pode ser caracterizado pelo fato de que ele inibe a produção de IL-17 induzida por IL-23 humano em esplenócitos de camundongo com IC50's iguais ou menores do que 20 pM.

[054] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção pode ser caracterizado pelo fato de que ele inibe a fosforilação de STAT3 induzida por IL-23 humano em células DB humanas com IC50’s iguais ou menores do que 40 pM.

[055] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção pode ser caracterizado pelo fato de que ele não tem nenhuma atividade predita em ADCC/CDC.

[056] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção pode ser caracterizado pelo fato de que ele tem um KD igual ou menor do que 1 pM para IL-23 de macaco cinomolgo.

[057] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção pode ser caracterizado pelo fato de que ele não tem nenhuma reatividade cruzada a IL-23 de camundongo ou rato.

[058] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção pode ser caracterizado pelo fato de que ele inibe a produção de IL-17 e IL-22 induzida por IL-23 humano em um orelha de camundongo em inibição de 80% ou mais de ambas citocinas a 1 mg/kg.

[059] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção pode ser também caracterizado por uma temperatura de fusão de 83 °C como determinado por calorimetria de varredura diferencial.

[060] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção pode ser também caracterizado por solubilidade igual ou maior do que 100 mg/ml, como medido por espectroscopia de UV e monitorado por turbidez.

[061] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humani zado da presente invenção pode ser caracterizado pelo fato de que ele está presente em pelo menos 90% de forma de monômero, ou em pelo menos 92% de forma de monômero, ou em pelo menos 95% de forma de monômero em um tampão.

[062] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humani zado da presente invenção pode ser caracterizado pelo fato de que ele permanece em pelo menos 90% de forma de monômero, ou em pelo menos 92% de forma de monômero, ou em pelo menos 95% de forma de monômero e um tampão durante um mês ou durante quatro meses.

[063] Em um aspecto, o anticorpo anti-IL-23p19 humanizado é um anticorpo monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de tamanho natural.

[064] Outras modalidades abrangem uma molécula de DNA codi ficando uma região de cadeia leve variável acima, uma molécula de DNA codificando uma região de cadeia pesada variável acima, uma molécula de DNA codificando uma região de cadeia leve acima, ou uma molécula de DNA codificando uma região de cadeia pesada acima.

[065] Outras modalidades abrangem um vetor de expressão con tendo a DNA molecule acima. Em uma modalidade, um vetor de expressão compreende uma molécula de DNA codificando a cadeia pesada constante e/ou cadeia leve constante, respectivamente, ligada à molécula de DNA codificando a cadeia pesada variável e/ou a cadeia leve variável, respectivamente. Outras modalidades abrangem uma célula hospedeira transportando um ou mais vetores de expressão acima. Em uma modalidade, um hospedeiro é uma célula mamífera.

[066] Outras modalidades abrangem um método para produção de um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo acima compreendendo transfectar uma célula hospedeira mamífera com um ou mais dos vetores acima, cultivar a célula hospedeira e recupe- rar e purificar o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo.

[067] Outras modalidades abrangem um método para produção de um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo acima compreendendo obter uma célula hospedeira mamífera compreendendo um ou mais dos vetores acima, e cultivar a célula hospedeira. Em uma modalidade, o método também compreende recuperar e purificar o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo.

[068] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em particular um anticorpo ou fragmento de ligação de antí- geno do mesmo acima, ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, por exemplo, uma composição farmacêutica descrita aqui, para uso em medicina. Em uma modalidade, o anticorpo é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D. Em uma modalidade, o uso é o tratamento de uma doença inflamatória, de uma doença autoimune, de uma doença respiratória, de um distúrbio metabólico ou of cancer. Em uma modalidade, o uso é para o tratamento de psoríase, doença inflamatória do intestino (doença de Crohn, colite ulcerativa), artrite psoriática, esclerose múltipla, artrite reumatoide, espondilite anquilosante ou sín- drome de Kawasaki. Em uma modalidade, o uso é para o tratamento de psoríase. Em uma modalidade, o uso é para o tratamento de doença inflamatória do intestino, por exemplo, doença de Crohn. Em uma modalidade, o uso é para o tratamento de espondilite anquilosante.

[069] Em uma modalidade, o uso é para o tratamento de psoríase de plaqueta, por exemplo, psoríase de plaqueta crônica, por exemplo, psoríase de plaqueta crônica moderada a grave, por exemplo, em pacientes adultos. Em uma modalidade, os pacientes são candidatos para fototerapia ou terapia sistêmica. Em uma modalidade, o uso é para o tratamento de psoríase de plaqueta crônica moderada a grave, por exemplo, em pacientes que são candidatos para fototerapia ou terapia sistêmica, por exemplo, pacientes adultos.

[070] Em uma modalidade, o uso é para o tratamento de psoríase pustular palmar, psoríase gutata, psoríase inversa, psoríase pustular ou psoríase eritodérmica.

[071] Em uma modalidade, o uso é para o tratamento de doença de Crohn. Em um outro aspecto, o uso é para redução de sinais e sintomas, melhora da cicatrização mucosal e indução e manutenção de remissão clínica em pacientes adultos com doença de Cronh moderada a gravemente ativa, em particular em pacientes que tiveram uma resposta inadequada à terapia convencional. Em um outro aspecto, o uso é para redução do número de drenagem de fístulas enterocutâ- neas e retovaginais e manutenção do fechamento da fístula em pacientes adultos com doença de Crohn fistulante.

[072] Em uma modalidade, o uso é para o tratamento de espondi- loartrite. Em um outro aspecto, o uso é para o tratamento de espondili- te anquilosante. Em um outro aspecto, o uso é para redução de sinais e sintomas em pacientes com espondilite anquilosante ativa. Em um outro aspecto, o uso é para o tratamento de espondilite anquilosante radiográfica ativa, grave em pacientes adultos, em particular, pacientes que responderam inadequadamente à terapia convencional.

[073] Em um outro aspecto, o uso é para o tratamento de em es- pondiloartrite axial radiográfica. Em um outro aspecto, o uso é para o tratamento de adultos com espondiloartrite axial severa sem evidência radiográfica de AS, porém com sinais objetivos de inflamação por CRP e/ou MRI elevado, em particular, pacientes que tiveram uma resposta inadequada a, ou são intolerantes a fármacos anti-inflamatórios não esteroidais. Em um outro aspecto, o uso é para o tratamento de es- pondiloartrite periférica.

[074] Em uma modalidade, o uso é para o tratamento de lúpus discoide, malária, melanoma maligno, anemia aplásica, doença de Huntington, pustulose palmoplantar, nefrite de IgA, vasculite associada a ANCA, esclerite ou sepse.

[075] Em uma modalidade, o uso é para o tratamento de pustulo- se palmoplantar. Em uma modalidade, o uso é para o tratamento de escleroderma sistêmica.

[076] Em uma modalidade, a presente invenção fornece for o uso of um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em particular um anticorpo ou fragmento de ligação de antí- geno do mesmo acima, ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, por exemplo, uma composição farmacêutica descrita aqui, na fabricação de um medicamento para o tratamento de qualquer uma das doenças ou distúrbios descritos aqui. Em uma modalidade, o anticorpo é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D.

[077] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece uma composição farmacêutica compreendendo uma molécula de anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno acima e um veículo farma- ceuticamente aceitável.

[078] Em uma modalidade, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo uma molécula de anticorpo acima e succinate buffer. Em uma modalidade, a composição farmacêutica compreende 50 mM ou menos de tampão de succinato.

[079] Em uma modalidade, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo 1 a 40 mg/ml de uma molécula de anticorpo e também compreendendo 5 a 50 mM de tampão de succinato e 50 a 200 mM de cloreto de sódio. Em uma outra modalidade, o pH da referida composição farmacêutica está na faixa de pH 6,0 a 7,0. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica compreende 2,5 a 30 mg/ml do referida molécula de anticorpo, em uma outra modalidade 5 a 20 mg/ml do referida molécula de anticorpo. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica compreende 10 a 40 mM de tampão de succinato, em uma outra modalidade 20 a 30 mM de tampão de succinato. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica compreende 75 a 175 mM de cloreto de sódio, em uma outra modalidade 100 a 150 mM de cloreto de sódio. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica também compreende um detergente, por exemplo, polissorbato 20 (Tween 20), por exemplo, em uma concentração de 0.20 g/l. Em um aspecto, a molécula de anticorpo na composição farmacêutica é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D.

[080] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece uma composição farmacêutica compreendendo 10 mg/ml de uma molécula de anticorpo, 25 mM de tampão de succinato, 125 mM de cloreto de sódio e 0,02% de Tween 20 em um pH de 6,0 a 7,0. Em um aspecto, o pH da composição farmacêutica é 6,5. Em um aspecto, a molécula de anticorpo na composição farmacêutica é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D. Em uma modalidade, a composição farmacêutica é administrada intravenosamente a um paciente.

[081] Em uma modalidade, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo 70 a 100 mg/ml de uma molécula de anticorpo e 100 a 300 mM de sorbitol. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica também compreende 25 mM ou menos de tampão de succinato. Em uma outra modalidade, o pH da referida composição farmacêutica está na faixa de pH de 5,5 a 6,5, por exemplo, na faixa de pH de 5,5 a 6,1. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica compreende 80 a 95 mg/ml do referida molécula de anticorpo. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica compreende 10 mM ou menos de tampão de succinato, em uma outra modalidade 5 mM ou menos de tampão de succinato, em uma outra modalidade pelo menos 1 mM de tampão de succinato, em uma outra modalidade pelo menos 2.5 mM de tampão de succinato, em uma outra modalidade 1 a 10 mM de tampão de succinato, em uma outra modalidade, 2,5 a 5 mM de tampão de succinato. Em uma outra modalidade a composição farmacêutica compreende 150 a 300 mM de sorbitol, em uma outra modalidade 175 a 275 mM de sorbitol, em uma outra modalidade 200 a 250 mM de sorbitol. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica também compreende um detergente, por exemplo, polissorbato 20 (Tween 20), por exemplo, em uma concentração de 0,20 g/l. Em um aspecto, a molécula de anticorpo na composição farmacêutica é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D.

[082] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece uma composição farmacêutica compreendendo 90 mg/ml de uma molécula de anticorpo, 4,4 mM de tampão de succinato, 225 mM de sorbitol e 0,02% de Tween 20 em um pH de 5,5 a 6,5. Em um aspecto, o pH da composição farmacêutica é 5,5 a 6,1. Em um aspecto, o pH da composição farmacêutica é 5,8. Em um aspecto, a molécula de anticorpo na composição farmacêutica é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D. Em uma modalidade, a composição farmacêutica é administrada subcutaneamente a um paciente.

[083] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece uma composição farmacêutica compreendendo 90 mg/ml de uma molécula de anticorpo, 240 mM de sorbitol e 0,02% de Tween 20 em um pH de 5,5 a 6,5. Em um aspecto, o pH da composição farmacêutica é 5,5 a 6,1. Em um aspecto, o pH da composição farmacêutica é 5,8. Em um aspecto, a molécula de anticorpo na composição farmacêutica é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D. Em uma modalidade, a composição farmacêutica é administrada subcutaneamente a um paciente.

[084] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um método para tratamento de uma doença inflamatória, uma doença autoimune, uma doença respiratória, um distúrbio metabólico ou câncer compreendendo administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo, por exemplo, um paciente, uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em particular um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo acima, ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, por exemplo, uma composição farmacêutica descrita aqui. Em uma modalidade, o anticorpo é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D. Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno é administrado por uma rotina parenteral de administração, ou é administrado intravenosamente ou subcutaneamente. Em uma modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno é administrado subcutaneamente. Em uma modalidade, a doença é pso- ríase, doença inflamatória do intestino (doença de Crohn, colite ulcera- tiva), artrite psoriática, esclerose múltipla, artrite reumatoide, espondili- te anquilosante ou síndrome de Kawasaki. Em uma modalidade, a doença é psoríase. Em uma modalidade, a doença é doença inflamatória do intestino, por exemplo, doença de Crohn. Em uma modalidade, a doença é espondilite anquilosante.

[085] Em uma modalidade, a doença é psoríase de plaqueta, por exemplo, psoríase de plaqueta crônica, por exemplo, psoríase de plaqueta crônica moderada a grave. Em uma modalidade, os pacientes são pacientes adultos, por exemplo, que são candidatos para fototera- pia ou terapia sistêmica. Em uma modalidade, a doença é psoríase de plaqueta crônica moderada a grave.

[086] Em uma modalidade, a doença é psoríase pustular palmar, psoríase gutata, psoríase inversa, psoríase pustular ou psoríase erito- dérmica.

[087] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um mé todo para redução de sinais e sintomas, melhora da cicatrização mucosal e indução e manutenção de remissão clínica em pacientes adultos com doença de Cronh moderada a gravemente ativa, em particular em pacientes que tiveram uma resposta inadequada à terapia convencional, o referido método compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em particular um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo acima, ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, por exemplo, uma composição farmacêutica descrita aqui. Em uma modalidade, o anticorpo é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D. Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um método para redução do número de drenagem de fístulas enterocutâneas e retovaginais e manutenção do fechamento da fístula em pacientes adultos com doença de Crohn fistu- lante compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo acima, ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, por exemplo, uma composição farmacêutica descrita aqui.

[088] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um mé todo para o tratamento de espondiloartrite. Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para o tratamento de espondili- te anquilosante. Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um método para redução de sinais e sintomas em pacientes com es- pondilite anquilosante ativa. Os métodos acima compreendem administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo, por exemplo, um paciente, uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em particular um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo acima, ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, por exemplo, uma composição farmacêutica descrita aqui. Em uma modalidade, o anticorpo é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D.

[089] Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um mé todo para o tratamento de espondilite anquilosante radiográfica ativa, grave em pacientes adultos, em particular, pacientes que responderam inadequadamente à terapia convencional, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em particular um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo acima, ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, por exemplo, uma composição farmacêutica descrita aqui. Em uma modalidade, o anticorpo é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D.

[090] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um mé todo para o tratamento de em espondiloartrite axial radiográfica. Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um método para o tratamento de adultos com espondiloartrite axial severa sem evidência radiográfica de AS, porém com sinais objetivos de inflamação por CRP e/ou MRI elevado, em particular pacientes que tiveram uma resposta inadequada à, ou são intolerantes a fármacos anti-inflamatórios não esteroidais. Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para o tratamento de espondiloartrite periférica. The acima me- tods comprise administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo, por exemplo, um paciente, uma quantidade eficaz de um anticorpo an- ti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em parti cular um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo acima, ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, por exemplo, uma composição farmacêutica descrita aqui. Em uma modalidade, o anticorpo é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D.

[091] Em uma modalidade, a doença é lúpus discoide, malária, melanoma maligno, anemia aplásica, doença de Huntington, pustulose palmoplantar, nefrite de IgA, vasculite associada a ANCA, esclerite ou sepse.

[092] Em uma modalidade, a doença é pustulose palmoplantar. Em uma modalidade, a doença é escleroderma sistêmica.

[093] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um método para inibição da ligação de IL-23 ao receptor de IL-23 em uma célulla mamífera, compreendendo administrar à célula uma molécula de anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno acima, desse modo a sinalização mediada pelo receptor de IL-23 é inibida.

[094] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um método para tratamento de um indivíduo tendo um distúrbio associado com IL-23, compreendendo administrar ao indivíduo um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno acima ou uma composição farmacêutica compreendendo o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, por exemplo, uma composição farmacêutica descrita aqui, cujo anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno se liga ao IL-23 humano.

[095] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um método para detectar e/ou quantificar os níveis de IL-23 em uma amostra biológica contatando a amostra com um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno acima e detectando a ligação do anticorpo ou fragmento do mesmo com IL-23p19. Esta informação pode ser utilizada para diagnosticar um distúrbio associado com IL-23. Des- se modo, são fornecidos métodos para diagnosticar um distúrbio associado com IL-23 ou para determinar se um indivíduo tem um risco aumentado de desenvolver um distúrbio associado com IL-23, em que o método compreende contatar uma amostra biológica de um indivíduo com um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno acima e detectar a ligação do anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno ao IL- 23p19 para determinar a expressão ou concentração de IL-23.

[096] Em uma modalidade, a presente invenção também fornece um método para inibição da ligação de IL-23 ao receptor de IL-23 em uma célula, compreendendo administrar à célula ou ambiente celular um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno acima, desse modo a sinalização mediada pelo receptor de IL-23 é inibida. Breve Descrição das Figuras Figura 1: Alinhamento de regiões variáveis humanizadas e de camundongo. Figura 1 a: regiões de VK planejadas por 6B8 Anti-IL- 23p19. Figura 1 b: regiões de VH planejadas por 6B8 Anti-IL-23p19.

[097] A numeração dos aminoácidos é pelo esquema de numera ção Kabat padrão.

[098] Fonte regular = Humano; fonte itálica/sublinhada = Murino; fonte sombreada = Sintético; negrito/itálico/sublinhado = CDR. Figura 2: Ensaio de ligação de competição de humano de ligação de IL-23 a IL-23R/Fc.

Descrição Detalhada

[099] A subunidade de p19 de IL-23 (também referida aqui como "IL-23p19" e "subunidade p19") é um polipeptídeo de aminoácido 189 contendo uma sequência líder de 21 aa (Oppmann et al. Immunity 13:715 (2000), SEQ ID N°: 181). A atividade biológica da molécula é apenas detectada quando ela é associada com a subunidade IL-12p40 para formar IL-23. IL-23 é predominantemente expresso por células dentríticas ativadas (DCs) e células fagocíticas. O receptor para IL-23 foi constatado ser composto da subunidade IL-12Rβ1 de receptor de IL-12 associado com uma única subunidade chamada IL-23R (Parham et al. J. Immunol. 168:5699 (2002)). A expressão do receptor é detectada primeiramente em células NK e células T de memória. Desse modo, a expressão deste par de citocina:receptor parece ser restrita à populações específicas de células imunes. Ao mesmo tempo em que se acreditou primeiro que IL-12 e IL-23 compartilhavam muitas funções, os dados mostraram o quadro a ser diferente. Visto que IL-12 tem um papel predominante na produção de células Th1, constatou-se que IL-23 deve estar criticamente envolvido na produção e manutenção de um subgrupo recentemente reconhecido de célula Th chamado Th17 (Kikly et al. Curr. Opin. Immunol. 18:670 (2006), Kastelein et al. Ann. Rev. Immunol. 25:221 (2007)). Estas células produzem IL-17A, IL-17F, IL-22 e outras citocinas pró-inflamatórias tais como IL-6 e TNF- α. Como descrito abaixo, estudos de modelo de animal sobre os papéis destas células Th17 mostraram sua importância como uma força impulsora em inflamação crônica e autoimunidade.

[0100] A presente invenção fornece anticorpos que se ligam à su- bunidade de p19 do IL-23, em particular IL-23p19 humano. A presente invenção também se refere a anticorpos humanizados que reconhecem a subunidade p19 de IL-23. Em modalidades específicas, a sequência destes anticorpos humanizados foi identificada com base nas sequências de certos anticorpos de camundongo condutores.

[0101] Os anticorpos de camundongo condutores da presente in venção foram derivados de hibridomas de camundongo. A imunização dos camundongos é realizada utilizando diferentes técnicas. Por exemplo, anticorpos que são específicos quanto à proteínas de IL- 23p19 humano ou fragmentos dos mesmos podem ser elevados contra um antígeno imunogênico tal como uma proteína de IL-23p19 isolada, uma proteína IL-23 isolada, uma proteína de IL-23 híbrida isola da, e/ou uma porção dos mesmos de quaisquer uns dos acima (incluindo peptídeo sintético). Por exemplo, uma proteína de IL-23 híbrida compreendendo uma subunidade de IL-23p40 de camundongo e uma subunidade de IL-23p19 humano é utilizada para imunizar os camundongos. A preparação de antígenos imunogênicos e produção de anticorpo monoclonal podem ser realizadas utilizando qualquer técnica adequada conhecida na técnica.

[0102] Os anticorpos de camundongo condutores foram selecio nados com base em sua afinidade elevada quanto a IL-23 humano. Consequentemente, em um aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo que se liga ao IL-23 humano com afinidade elevada. Anticorpos de camundongos selecionados foram humanizados para resultar em anticorpos humanizados. Os anticorpos humanizados da presente invenção se ligam ao IL-23 humano com afinidade elevada. Consequentemente, em outro aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo humanizado que se liga ao IL-23 humano com afinidade elevada.

[0103] Consequentemente, em uma modalidade, a presente in venção fornece um anticorpo anti-IL-23p19 tendo um KD menor do que 40pM. Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece um anticorpo anti-IL-23p19 tendo um KD menor do que 20pM. Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece um anticorpo anti-IL-23p19 tendo um KD menor do que 10pM. Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece um anticorpo anti-IL-23p19 tendo um KD menor do que 1 pM.

[0104] Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção se liga ao IL-23p19 com afinidade elevada na ausência de soro humano ou na presença de 50% de soro humano.

[0105] Em um outro aspecto, um anticorpo humanizado da presen te invenção também se liga ao IL-23 de macaco cinomolgo com afini- dade elevada.

[0106] Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção se liga ao IL-23, porém não se liga ao IL-12. Em um outro aspecto, um anticorpo da presente invenção não interfere com a atividade biológica of IL-12, que é um membro da família intimamente relacionado a IL-23.

[0107] Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção inibe a produção estimulada de IL-23 de IL-17 de esplenócitos de camundongo.

[0108] Em um outro aspecto, um anticorpo humanizado da presen te invenção inibe a fosforilação de STAT3 induzida por IL-23 em células CB.

[0109] Em um outro aspecto, um anticorpo humanizado da presen te invenção antagoniza a ação de IL-23 ligando-se à subunidade de p19 de IL-23, quando medida pela inibição de citocinas tais como IL-17 e IL-22, cuja produção é estimulada por IL-23, e detectada pela redução nos níveis destas citocinas.

[0110] Em um outro aspecto, um anticorpo humanizado da presen te invenção tem um perfil farmacocinético favorável (PK), como exemplificado por meia vida in vivo em macacos cinomolgos.

[0111] Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL-23p19 monoclo nal humanizado da presente invenção tem propriedades biofísicas favoráveis, por exemplo, qualidade, estabilidade, ou solubilidade.

[0112] Em um aspecto, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo humanizado. Em um aspecto, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal. Em um aspecto, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo de tamanho natural. Em um aspecto, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado, por exemplo, um anticorpo monoclonal humanizado de tamanho natural.

[0113] Um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo da presente invenção reconhece "apítopo de antígeno de IL- 23p19" ou "epítopo de IL-23p19" específico. Como utilizado aqui, estes termos se referem a uma molécula (por exemplo, um peptídeo) ou um fragmento de uma molécula capaz de imunorreatividade com um anticorpo anti-IL-23p19 e, por exemplo, incluem um determinante antigê- nico de IL-23p19 reconhecido por qualquer um dos anticorpos tendo uma combinação de sequência de cadeia leve/cadeia pesada de SEQ ID N°: 84/121, 86/123, 88/125, 90/127, 91/128, 93/130, 95/132, 97/134, 99/136, 101 /138, 103/140, 105/142, 107/144, 109/146, 111/148, 113/150, 115/152, 117/154, 119/156, 160/166, 160/168, 158/166 ou 158/168. Epítopos de antígeno de IL-23p19 podem ser incluídos em proteínas, fragmentos de proteína, peptídeos ou similares. Os epítopos são mais comumente proteínas, oligopeptídeos curtos, mímicos de oli- gopeptídeo (isto é, compostos orgânicos que imitam as propriedades de ligação de anticorpo do antígeno de IL-23p19), ou combinações dos mesmos. Acredita-se que o tamanho mínimo de um peptídeo ou epíto- po de polipeptídeo para um anticorpo seja de quatro a cinco aminoáci- dos. Peptídeo ou epítopos de polipeptídeo contêm, por exemplo, pelo menos sete aminoácidos ou, por exemplo, pelo menos nove aminoáci- dos ou, por exemplo, entre cerca de 15 a cerca de 20 aminoácidos. Visto que um anticorpo pode reconhecer um polipeptídeo ou peptídeo antigênico em sua forma terciária, os aminoácidos compreendendo um epítopo não necessitam ser contíguos, e em alguns casos, não podem ainda estar na mesma cadeia de peptídeo. Epítopos podem ser determinados por várias técnicas conhecidas na técnica, tal como cristalo-grafia de raio X, espectrometria de massa de permuta de hidrogê- nio/deutrério (HXMS), mutagênese direcionada ao sítio, mutagênese de varredura de alanina, e métodos de análise de peptídeo.

[0114] A estrutura generalizada de anticorpos ou imunoglobulina é bem conhecida por aqueles versados na técnica. Estas moléculas são glicoproteínas heterotetraméricos, tipicamente de cerca de 150.000 dáltons, compostas de duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas e são tipicamente referidas como anticorpos de tamanho natural. Cada cadeia leve é covalentemente ligada a uma cadeia pesada por uma ligação de dissulfeto para formar um heterodíme- ro, e a molécula heterotramérica é formada através de uma ligação de dissulfeto covalente entre as duas cadeias pesadas idênticas dos hete- rodímeros. Embora as cadeias leves e pesadas sejam ligadas juntas por uma ligação de dissulfeto, o número de ligações de dissulfeto entre as duas cadeias pesadas variam por isótopo de imunoglobulina. Cada cadeia pesada e cadeia leve também têm ligações em ponte de dissul- feto regularmente espaçadas. Cada cadeia pesada tem no terminal amino um domínio variável (VH), seguido por três ou quatro domínios constantes (CH1, CH2, CH3, e CH4), bem como uma região de articulação entre CH1 e CH2. Cada cadeia leve tem dois domínios, um domínio variável de terminal amino (VL) e um domínio constante de terminal car- bóxi (CL). O domínio VL associa-se não covalentemente com o domínio de VH, visto que o domínio CL é comumente covalentemente ligado ao domínio CH1 por meio de uma ligação de dissulfeto. Acredita-se que resíduos de aminoácido particulares sejam para formar uma interface entre os domínios variáveis de cadeia leve e pesada (Chothia et al., 1985, J. Mol. Biol. 186:651 -663). Domínios variáveis são também referidos aqui como regiões variáveis.

[0115] Certos domínios dentro dos domínios variáveis diferem ex tensivamente entre diferentes anticorpos isto é, são "hipervariáveis." Estes domínios hipervariáveis contêm resíduos que estão diretamente envolvidos na ligação e especificidade de cada anticorpo particular quanto a seu determinante antigênico específico. A hipervariabilidade, tanto nos domínios variáveis de cadeia leve quanto cadeia pesada, está concentrada em três segmentos conhecidos como regiões determinantes de complementaridade (CDRs) ou alças hipervariáveis (HVLs). CDRs são definidas por comparação de sequência em Kabat et al., 1991, In: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Betesda, Md., visto que HVLs (também referidas aqui como CDRs) são estruturalmente definidas de acordo com a estrutura tridimensional do domínio variável, como descrito por Chothia e Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917. Estes dois métodos resultam em identificações levemente diferentes de uma CDR. Como definido por Kabat, CDR-L1 é posicionada em cerca de residues 24-34, CDR-L2, a cerca dos resíduos 5056, e CDR-L3, a cerca dos resíduos 89-97 no domínio variável de cadeia leve; CDR-H1 é posicionada a cerca dos resíduos residues 31 a 35, CDR-H2 a cerca dos resíduos 50 a 65, e CDR-H3 a cerca dos resíduos 95 a 102 no domínio variável de cadeia pesada. Os números de resíduo exato que abrangem uma CDR particular variarão dependendo da sequência e tamanho da CDR. Aqueles versados na técnica podem rotineiramente determinar quais resíduos compreendem uma CDR particular determinando a sequência de aminoácido de região variável do anticorpo. As CDR1, CDR2, CDR3 das cadeias pesadas e leves, portanto, definem as propriedades exclusivas e funcionais específicas quanto a um determinado anticorpo.

[0116] As três CDRs dentro de cada uma das cadeias pesadas e leves são separadas por regiões de estrutura (FR), que contêm sequências que tendem ser menos variáveis. A partir do terminal amino ao terminal carbóxi dos domínios variáveis de cadeia pesada e leve, as FRs e CDRs são dispostas na ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, e FR4. Uma grande configuração de folha β dos FRs introduz as CDRs dentro de cada uma das cadeias em proximidade íntima uma à outra bem como às CDRs da outra cadeia. A conformação resultante contribui para o sítio de ligação de antígeno (veja, Kabat et al., 1991, NIH Publ. No. 91 a 3242, Volume I, páginas 647 a 669), em- bora nem todos os resíduos de CDR estejam diretamente envolvidos na ligação de antígeno.

[0117] Resíduos de FR e domínios constantes de Ig não estão di retamente envolvidos na ligação de antígeno, porém contribuem para ligação de antígeno e/ou mediam a função efetora de anticorpo. Acredita-se que alguns resíduos de FR tenham um efeito significante sobre a ligação de antígeno de pelo menos três modos: ligando-se não cova- lentemente diretamente a um epítopo, interagindo com um ou mais resíduos de CDR, e afetando a interface entre as cadeias pesada e leve. Os domínios constantes não estão diretamente envolvidos na ligação de antígeno, porém mediam várias funções efetoras de Ig, tais como a participação do anticorpo na citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC), citotoxicidade dependente de complemento (CDC) fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP).

[0118] As cadeias leves de imunoglobulinas de vertebrado são de signadas a uma das duas classes claramente distintas, kappa (K) e lambda (À), com base na sequência de aminoácido do domínio constante. Por comparação, as cadeias pesadas de imunoglobulinas mamíferas são designadas a uma das cinco classes principais, de acordo com a sequência dos domínios constantes: IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM. IgG e IgA são também divididas em subclasses (isotipos), por exemplo, IgG-1, lgG2, lgG3, lgG4, IgA-, e lgA2. Os domínios constantes de cadeia pesada que correspondem à diferentes classes de imunoglobu- linas são chamados, δ, ε, Y, e μ, respectivamente. As estruturas de subunidade e configurações tridimensionais das classes de imunoglo- bulinas nativas são bem conhecidas.

[0119] Os termos, "anticorpo", "anticorpo anti-IL-23p19", "anticorpo anti-IL-23p19 humanizado", "anticorpo de epítopo anti-IL-23p19 humanizado", e "anticorpo de epítopo anti-IL-23p19 humanizado variante" especialmente abrangem anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de tamanho natural), anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos), e fragmentos de anticorpo tais como domínios variáveis e outras porções de anticorpos que exibem uma atividade biológica desejada, por exemplo, ligação de IL-23p19. O termo "anticorpo monoclonal" (mAb) refere-se a um anticorpo que é altamente específico, sendo direcionado contra um determinante antigênico simples, um "epítopo". Portanto, o modificador "monoclonal" é indicativo de anticorpos direcionado ao epítopo idêntico e não deve ser construído como requerendo produção do anticorpo por qualquer método particular. Deve-se entender que anticorpos mo- noclonais podem ser feitos por qualquer técnica ou metodologia conhecida na técnica; incluindo, por exemplo, o método hidridoma (Kohler et al., 1975, Nature 256:495), ou métodos de DNA recombinante conhecidos na técnica (veja, por exemplo, Patente dos Estados Unidos n° 4.816.567), ou métodos de isolamento de monoclonal recombinan- temente produzido utilizando bibliotecas de anticorpo de fago, utilizando técnicas descritas em Clackson et al., 1991, Nature 352: 624-628, e Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222: 581 -597.

[0120] O termo "monômero" refere-se a uma forma homogênea de um anticorpo. Por exemplo, para um anticorpo de tamanho natural, monômero um anticorpo monomérico tendo duas cadeias pesadas idênticas e duas cadeias leves idênticas.

[0121] Anticorpos quiméricos consistem nas regiões variáveis de cadeia pesada e leve de um anticorpo de uma espécie (por exemplo, um mamífero não animal tal como um camundongo) e as regiões constantes de cadeia pesada e leve de anticorpo de outras espécies (por exemplo, humano) e podem ser obtidos ligando as sequências de DNA codificando as regiões variáveis do anticorpo da primeira espécie (por exemplo, camundongo) às sequências de DNA quanto às regiões constantes do anticorpo da segunda espécie (por exemplo, humano) e transformando um hospedeiro com um vetor de expressão contendo as sequências ligadas para permiti-lo produzir um anticorpo quimérico. Alternativamente, o anticorpo quimérico também pode ser um em que uma ou mais regiões ou domínios da cadeia pesada e/ou leve são idêntica com, homólogas a, ou uma variante da sequência correspondente em um anticorpo monoclonal de outra classe ou isotipo de imu- noglobulina, ou de uma linhagem de consenso ou de linhagem germi- nativa. Anticorpos quiméricos podem incluir fragmentos de tais anticorpos, contanto que o fragmento de anticorpo exiba a atividade biológica desejada de seu anticorpo origem, por exemplo, ligando ao mesmo epítopo (veja, por exemplo, Patente dos Estados Unidos n° 4.816.567; e Morrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 : 6851 -6855).

[0122] Os termos, "fragmento de anticorpo", "fragmento de anti corpo anti-IL-23p19", "fragmento de anticorpo de epítopo anti-IL- 23p19", "fragmento de anticorpo anti-IL-23p19 humanizado", "fragmento de anticorpo de epítopo anti-IL-23p19 humanizado", "fragmento de variante de anticorpo de epítopo anti-IL-23p19 humanizado" referem- se a uma porção de um anticorpo anti-IL-23p19 de tamanho natural, em que uma região variável ou uma capacidade funcional é mantida, por exemplo, ligação de epítopo de IL-23p19 específica. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, porém não estão limitados a, um fragmento de Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, scFv e scFv-Fc, um dianticorpo, um anticorpo linear, um anticorpo de cadeia simples, um minianticorpo, um dianticorpo formado de fragmentos de anticorpo, e anticorpos mul- tiespecíficos de fragmentos de anticorpo.

[0123] Anticorpos de tamanho natural podem ser tratados com en zimas tais como papaína ou pepsina para gerar fragmentos de anticorpo úteis. Digestão de papaína é utilizada para produzir dois fragmentos de anticorpo de ligação de antígeno idênticos chamados frag- mentos de "Fab", cada qual com um sítio de ligação de antígeno simples, e um fragmento de "Fc". O fragmento de Fab também contém o domínio constante da cadeia leve e o domínio de CH da cadeia pesada. O tratamento com pepsina produz um fragmento de F(ab')2 que tem dois sítios de ligação de antígeno e é ainda capaz de reticular o antígeno.

[0124] Os fragmentos de Fab' diferem dos fragmentos de Fab pela presença de resíduos adicionais incluindo uma ou mais cisteínas da região de articulação de anticorpo no terminal C do domínio CH. Os fragmentos de anticorpo de F(ab')2 são pares de fragmentos de Fab' ligados por resíduos de cisteína na região de articulação. Outros acoplamentos químicos de fragmentos de anticorpo são também conhecidos.

[0125] Fragmento de "Fv" contém um sítio de ligação e reconhe cimento de antígeno completo que consiste em um dímero de um domínio variável de cadeia pesada e um de cadeia leve em associação restrita, não covalente. Nesta configuração, as três CDRs de cada domínio variável interagem para definir um sítio de ligação de antígeno na superfície do dímero de VH-VL. Coletivamente, as seis CDRs conferem especificidade de ligação de antígeno ao anticorpo.

[0126] Um fragment de anticorpo de "Fv de cadeia simples" ou "scFv" é uma variante de Fv de cadeia simples compreendendo os domínios de VH e VL de um anticorpo onde os domínios estão presentes em uma cadeia de polipeptídeo simples. O Fv de cadeia simples é capaz de reconhecer e ligar o antígeno. O polipeptídeo de scFV pode opcionalmente conter um ligador de polipeptídeo posicionado entre os dompinios de VH e VL a fim de facilitar a formação de uma estrutura tridimensional quanto à ligação de antígeno pelo scFv (veja, por exemplo, Pluckthun, 1994, In The Pharmacology of monoclonal antibodies, Vol. 113, Rosenburg e Moore eds., Springer-Verlag, Nova Ior- que, páginas 269 a 315).

[0127] Um "dianticorpo" refere-se a pequenos fragmentos de anti corpo com dois sítios de ligação de antígeno, cujos fragmentos compreendem um domínio variável de cadeia pesada (V.sub.H) conectado a um domínio variável de cadeia leve (V.sub.L) na mesma cadeia de polipeptídeo (V.sub.H-V.sub.L ou V.sub.L-V.sub.H). Diacorpos são descritos mais totalmente em, por exemplo, Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448.

[0128] Outros fragmentos de anticorpo reconhecidos incluíram aqueles que compreendem um par de segmentos de tandem Fd (VH- CH1-VH-CH1) para formar um par de regiões de ligação de antígeno. Estes "anticorpos lineares" podem ser biespecíficos ou monoespecífi- cos como descritos em, por exemplo, Zapata et al. 1 995, Protein Eng. 8(10):1057-1062.

[0129] Um "anticorpo humanizado" ou um "fragmento de anticorpo humanizado" é um tipo específico de anticorpo quimérico que inclui uma variante de sequência de aminoácido de imunoglobulina, ou fragmento dos mesmos, que é capaz de ligar-se a um antígeno predeterminado e que, compreende uma ou mais FRs tendo substancialmente a sequência de aminoácido de uma imunoglobulina humana e uma ou mais CDRs tendo substancialmente a sequência de aminoáci- do de uma imunoglobulina não humana. Esta sequência de aminoáci- do não humana frequentemente referida como uma sequência de "importação" é tipicamente retirada de um domínio de anticorpo de "importação", particularmente um domínio variável. Em geral, um anticorpo humanizado inclui pelo menos as CDRs ou HVLs de um anticorpo não humano, inserido entre as FRs de um domínio variável de cadeia pesada ou leve humana. A presente invenção descreve anticorpos an- ti-IL-23p19 humanizados específicos que contêm CDRs derivadas dos anticorpos monoclonais de camundongo ou CDRs humanizadas mos- tradas nas tabelas 3 e 4 inseridas entre as FRs de domínios de variável de cadeia pesada e leve de sequência de linhagem germinativa humana. Será entendido que certos resíduos de FR de camundongo podem ser importantes para a função dos anticorpos humanizados e, portanto, certos dos resíduos de varíaveis de domínios de cadeia leve e pesada de sequência de linhagem germinativa humana são modificados ser iguais como aqueles da sequência de camundongo correspondente.

[0130] Em outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado compreende substancialmente todos de pelo menos um, e tipicamente dois, domínios variáveis (tais como os contidos, por exemplo, em fragmentos de Fab, Fab', F(ab')2, Fabc, e Fv) em que todos, ou substancialmente todos, das CDRs correspondem aqueles de uma uma imu- noglobulina não humana, e especialmente aqui, todas as CDRs são sequências de camundongos ou humanizadas como detalhado nas tabelas 1 a 4 abaixo e todos, ou substancialmente todos, as FRs são aquelas de uma uma imunoglobulina humana de linhagem de consenso ou de linhagem germinativa. Em outro aspecto, um anticorpo anti- IL-23p19 humanizado também inclui pelo menos uma porção de uma região de Fc de imunoglobulina, tipicamente aquela de uma imunoglo- bulina humana. Ordinariamente, o anticorpo conterá tanto a cadeia leve bem como pelo menos o domínio variável de uma cadeia pesada. O anticorpo também pode incluir um ou mais das regiões de CH1, de arti-culação, CH2, CH3, e/ou CH4 da cadeia pesada, como apropriado.

[0131] Um anticorpo anti-IL23p19 humanizado pode ser selecio nado de qualquer classe de imunoglobulinas, incluindo IgM, IgG, IgD, IgA e IgE, e qualquer isotipo, incluindo IgG1, lgG2, lgG3, lgG4, lgA1 e lgA2. Por exemplo, o domínio constante pode ser um domínio constante de fixação de complemento onde é desejável que o anticorpo humanizado exiba atividade citotóxica, e o isotipo é tipicamente IgG1. Onde tal atividade citotóxica não é desejável, o domínio constante pode ser de outro isotipo, por exemplo, lgG2. Um anticorpo anti-IL-23p19 humanizado alternativo pode compreender sequências de mais do que uma classe ou isotipo de imunoglobulina, e selecionar domínios constantes particulares para otimizar as funções efetoras desejadas está dentro da versalidade usual na técnica. Em modalidades específicas, a presente invenção fornece anticorpos que são lgG1 anticorpos e mais particularmente, são anticorpos lgG1 em que existe um nocaute de funções efetoras.

[0132] As FRs e CDRs, ou HVLs, de um anticorpo anti-IL23p19 humanizado não necessita corresponder precisamente às sequências origem. Por exemplo, um ou mais resíduos na CDR ou HVL de importação, ou a sequência de FR de linhgem germinativa ou de consenso pode ser alterada (por exemplo, mutagenizada) por substitução, inserção ou deleção de modo que o resíduo de aminoácido resultante não seja não mais idêntico ao resíduo original na posição correspondente na sequência parental, porém o anticorpo, no entanto, mantém a função de ligar-se a IL-23p19. Tal alteração tipicamente não será extensiva e será alterações conservativas. Geralmente, pelo menos 75% dos resíduos de anticorpo humanizadoc corresponderão àqueles das se-quências de CDR de importação e FR de linhagem germinativa ou de consenso parental, mais frequentemente pelo menos 90%, e mais fre-quentemente mais do que 95%, ou mais do que 98% ou mais do que 99%.

[0133] Resíduos de imunoglobulina que afetam a interface entre as regiões variáveis de cadeia leve e pesada ("a interface VL-VH") são aqueles que afetam a proximidade ou orientação das duas cadeias com respeito uma a outra. Certos resíduos que podem estar envolvidos nas interações de intercadeia incluem resíduos de VL 34, 36, 38, 44, 46, 87, 89, 91, 96, e 98 e resíduos de VH 35, 37, 39, 45, 47, 91, 93, 95, 100, e 103 (utilizando o sistema de numeração estabelecido em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Betesda, Md., 1987)). Patente dos Estados Unidos n° 6.407.213 também descreve que resíduos tais como resíduos de VL 43 e 85, e resíduos de VH 43 e 60 também podem estar envolvidos nesta interação. Ao mesmo tempo em que estes resíduos são indicados para IgG humana apenas, eles são aplicáves através de espécies. Resíduos de anticorpo importantes que são razoavelmente esperados estar envolvidos nas interações de intercadeia são selecionados para substituição na sequência de consenso.

[0134] Os termos "sequência de consenso" e "anticorpo de con senso" referem-se a uma sequência de aminoácido que compreende o resíduo de aminoácido de ocorrência mais frequente em cada localização em todas as imunoglobulinas de qualquer classe particular, isoti- po, ou estrutura de subunidade, por exemplo, um domínio variável de imunoglobulina humana. A sequência de consenso pode ser baseada nas imunoglobulinas de uma espécie particular ou de muitas espécies. Um anticorpo, estrutura ou sequência de "consenso" é entendido abranger uma sequência humana de consenso como descrito em certas modalidades, e se referem a uma sequência de aminoácido que compreende os resíduos de aminoácido de ocorrência mais frequente em cada localização em todas as imunoglobulinas humanas de qualquer classe, isotipo, ou estrutura de subunidade. Desse modo, a sequência de consenso contém uma sequência de aminoácido tendo em cada posição um aminoácido que está presente em uma ou mais imu- noglobulinas conhecidas, porém que não podem exatamente duplicar a sequência de aminoácido inteira de qualquer imunoglobulina simples. A sequência de consenso de região variável não é obtida de qualquer anticorpo ou imunoglobulina naturalmente produzida. Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Betesda, Md., e variantes dos mesmos. As FRs de sequências de consenso de cadeia pesada e cadeia leve, e variantes das mesmas, fornecem sequências úteis para a preparação de anticorpos anti-IL-23p19 humanizados. Veja, por exemplo, Patentes dos Estados Unidos n°s 6.037.454 e 6.054.297.

[0135] Sequências de linhagem germinativa humanas são encon tradas naturalmente na população humana. Uma combinação daqueles genes de linhagem germinativa gera uma diversidade de anticor- poa. Sequências de anticorpo de linhagem germinativa quanto à cadeia leve do anticorpo vêm de genes v e gene j de kappa ou lambda de linhagem germinativa humana conservada. Similarmente, as sequências de cadeia pesada vêm de genes v-, d-, e j de linhagem ger- minativa (LeFranc, M-P, e LeFranc, G, "The Imunoglobulina Facts Book" Academic Press, 2001).

[0136] Como utilizado aqui, "variante", "variante anti-IL-23p19", "variante anti- IL-23p19 humanizada", ou "variante humanizada anti- IL-23p19" cada qual se refere a um anticorpo anti-IL23p19 humanizado tendo pelo menos uma CDR de murino variável de cadeia leve de qualquer uma das sequências como mostrado na tabela 1 ou uma sequência de CDR de murino de cadeia pesada derivada do anticorpo monoclonal de murino como mostrado na tabela 2. Variantes incluem aquelas tendo uma ou mais mudanças de aminoácido em um ou ambos os domínios variáveis de cadeia leve ou cadeia pesada, contanto que a mudança de aminoácido não substancialmente prejudica a ligação do anticorpo ao IL-23p19. Anticorpos humanizados exemplares produzidos aqui incluem aqueles designados como Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C e Anticorpo D, e as várias cadeias leves e cadeias pesadas dos mesmos são mostradas nas SEQ ID N°s: 174 e 180, e SEQ ID N°s: 176 e 178, respectivamente.

[0137] Um anticorpo "isolado" é aquele que foi identificado e sepa rado e/ou recuperado de um cimponente de seu ambiente natural. Componentes contaminantes do ambiente natural do anticorpo são aaqueles materiais que podem interferir com os usos diagnósticos ou terapêuticos do anticorpo, e podem ser enzimas, hormônios, ou outros solutos proteináceos ou não proteináceos. Em um aspecto, o anticorpo será purificado em pelo menos mais do que 95% de isolamento po peso de anticorpo.

[0138] Um anticorpo isolado inclui um anticorpo in situ dentro de células recombinantes em que ele é produzido, visto que pelo menos um componente do ambiente natural do anticorponão estará presente. Ordinariamente, entretanto, um anticorpo isolado será preparado em pelo menos uma etapa de purificação em que o material celular re- combinante é removido.

[0139] O termo "desempenho do anticorpo" se refere a fatores que contribuem para o reconhecimento do anticorpo de antígeno ou a eficácia de um anticorpo in vivo. As mudanças na sequência de aminoá- cido de um anticorpo podem afetar as propriedades tal como duplicação, e podem influenciar os fatores físicos tais como taxa inicial de ligação de anticorpo a antígeno (kg), constante de dissociação do anticorpo de antígeno (KD), constante de afinidade do anticorpo para o an- tígeno (KD), conformação do anticorpo, estabilidade de proteína, e meia vida do anticorpo.

[0140] O termo "epítopo rotulado" quando utilizado aqui, refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 fundido a um "rótulo epítopo". Um "rótulo de epítopo" é um polipeptídeo tendo um número suficiente de aminoá- cidos para fornecer um epítopo para produção de anticorpo, ainda é designado de modo que ele não interfira com a atividade desejada do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado. O rótulo de epítopo é geralmente suficientemente único de modo que um anticorpo elevado contra o ró- tulo de epítopo não substancialmente reagir cruzadamente com outro epítopos. Polipeptídeos de rótulo adequados geralmente contêm pelo menos 6 resíduos de aminoácido e geralmente contêm cerca de 8 a 50 resíduos de aminoácido, ou cerca de 9 a 30 resíduos. Exemplos de rótulos de epítopo e o anticorpo que liga o epítopo incluem o polipeptí- deo de rótulo flu HA e seu anticorpo 12CA5 (Field et al., 1988 Mol. Cell. Biol. 8: 2159-2165; rótulo de c-myc e anticorpos de 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 e 9E10 a este (Evan et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5(12):3610-3616; e rótulo de glicoproteína D (gD) de vírus da herpes simples e seu anticorpo (Paborsky et al. 1990, Protein Engineering 3(6): 547-553). Em certas modalidades, o rótulo de epítopo é um "epí- topo de ligação ao receptor de recuperação". Como utilizado aqui, o termo "epítopo de ligação ao receptor de recuperação" refere-se a um epítopo da região de Fc de uma molécula de IgG (tal como IgG-1, lgG2, lgG3, ou lgG4) que é responsável pelo aumento da meia vida de soro in vivo da molécula de IgG.

[0141] Em algumas modalidades, os anticorpos da presente in venção podem ser conjugados a um agente citotóxico. Isto é qualquer substância que inibe ou impede a função de células e/ou causa a destruição de células. O termo destina-se a incluir isótopos radioativos (tal como I131, I125, Y90, e Re186), agentes quimioterapêuticos, e toxinas tal como toxinas enzimaticamente ativas de origem bacteriana, fúngica, de planta, ou animal, e fragmentos das mesmas. Tais agentes citotóxi- cos podem ser acoplados aos anticorpos humanizados da presente invenção utilizando procedimentos padrões, e utilizados, por exemplo, para tratar um paciente indicado para terapia com o anticorpo.

[0142] Um "agente quimioterapêutico" é um composto químico útil no tratamento de câncer. Existem numerosos exemplos de agentes quimioterapêuticos que pode ser conjugados com os anticorpos terapêuticos da presente invenção. Exemplos de tais agentes quimiotera- pêuticos incluem agente de alquilação tais como um tiotepa e ciclosfo- sfamida; alquil sulfonatos tal como busulfano, improsulfano, e piposul- fano; aziridinas tais como benzodopa, carboquona, meturedopa, e uredopa; etileniminas e metilamelaminas incluindo altretamina, trietile- nomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida, e trimeti- lolomelamina; acetogenins (especialmente bulatacina e bulatacinona); camptotecina (incluindo o análogo sintético topotecano); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluindo seus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina, e bizelesina); criptoficinas (particularmente criptoficina 1 e criptoficina 8); dolastatina, auristatinas, (incluindo os análogos mono- metil-auristatina E e monometil-auristatina F); duocarmicina (incluindo oos análogos sintéticos, KW-2189 e CBI-TMI); eleuterobina; pancratis- tatina; sarcodictiina; espongistatina; mostardas de nitrogênio tais como clorambucil, clomafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, me- cloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, novem- bicina, fenesterina, prednimustina; trofosfamida, mostarda de uracila; nitrosureias tais como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomusti- na, nimustina, ranimustina; antibióticos tais como os antibióticos de enedina (por exemplo, caliqueamicina, especialmente caliquemicina gama l1 e calicheamicina phl1, veja, por exemplo, Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186; dinemicina, incluindo dinemicina A; bisfosfona- tos, tais como clodronato; esperamicina; bem como cromóforo de neo- carzinostatina e cromóforos de antibióticos de enediína de cromoprote- ína elacionada), aclacinomisinas, actinomicina, authramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, caminomicina, carzinofilina, chromomicinas, dactinomicina, daunorubicina, detorubicina, 6-diazo-5- oxo-L-norleucina, doxorubicina (Adriamicina™) (incluindo morfolino- doxorubicina, cianomorfolino-doxorubicina, 2-pirrolino-doxorubicina, e deoxidoxorubicina), epirubucina, esorubicina, idarubicina, marcelomi- cina, mitomicinas tais como mitomicina C, ácido micofenólico, nogala- micina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicinas, quelami- cina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubeni- mex, zinostatina, zorubicina; anti-metabólitos tais como um metotrexa- to e 5-fluorouracila (5-FU); análogos de ácido fólico tais como denopte- rina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina tais como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina tais como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, dideoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andro- gênios tais como calusterona, propionato de dromostanolona, epitios- tanol, mepitiostano, testolactona; anti-adranais tais como aminoglute- timida, mitotano, trilostano; repositor de ácido fólico tal como ácido fro- línico; aceglatona; glicosídeo de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; eniluracil; ansacrina; bestrabucila; bisantreno; edatraxato; defofamina; democolcina; diaziquona; elfomitina; acetato de eliptínio; uma epotilo- na; etoglucida; nitrato de gálio; hidroxiureia; lentinano; lonidamina; mai- tansinoides tais como maitansina e ansamitocinas; mitoguazona, mito- xantrona; mopidamol; nitracrina; pentostatina; fenamet; pirarubicina; losoxantrona; ácido podofilínico; 2-etilidrazida; procarbazina; PSK®; razoxano; rizoxina; sizofurano; espirogermânio; ácido tenuazônico; tri- aziquona; 2,2',2"-triclorotrietilamina; tricothecenos (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A e anguidina); uretano; vindesina; da- carbazina; manomustina; mitabronitol; mitolactol; pipobromano; gacito- sina; arabinosídeo ("Ara-C"); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides, por exemplo, paclitaxel (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.) e doxetaxel (TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer, Antony, França); clorambucila; gencitabina (Gemzar™); 6-tioguanina; mercap- topurina; metotrexato; análogos de platina tais como cisplatina e carboplatina; vinblastina; platina; etoposídeo (VP-16); ifosfamida; mitoxan- trono; vincristina; vinorelbina Navelbine™); novantrona; teniposídeo; edatrexato; daunomicina; aminopterina; xeloda; ibandronato; CPT-11; inibidor de topoisomerase RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); re- tinoides tais como ácido retinóico; capecitabina; e sais farmaceutica- mente aceitáveis, ácidos, ou derivados de qualquer um dos acima. Estão também incluídos nesta definição são agentes anti-hormonais que agem para regular ou inibir a ação de hormônio sobre os tumores tais como antiestrogênios e moduladores de receptor de estrogênio seletivo (SERMs), incluindo, por exemplo, tamoxifeno (incluindo Nolvadex™), raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, ceoxife- no, LY117018, onapristona, e toremifeno (Fareston™); inibidores de aromatase que inibem a enzima aromatase, que regula a produção de estrogênio nas glândulas adrenais, tais como, por exemplo, 4(5)- imidazóis, aminoglutetimida, megestrol acetato (Megace™), exemes- tano, formestano, fadrozol, vorozol (Rivisor™), letrozol (Femara™), e anastrozol (Arimidax™); e antiandrogênios tais como flutamida, nilu- tamida, bicalutamida, leuprolida, e goserelina; e sais farmaceuticamen- te aceitáveis, ácidos, ou derivados de qualquer um dos acima. Qualquer um ou mais destes agentes podem ser conjugados com os anticorpos humanizados da presente invenção para fornecer um agente terapêutico útil para o tratamento de vários distúrbios.

[0143] Os anticorpos também podem ser conjugados com os pro- fármacos. Um "profármaco" é uma forma precursora ou derivada de uma substância farmaceuticamente ativa que é menos citotóxica à células de tumor em comparação ao fármaco origem e é capaz de ser enzimaticamente ativado ou convertido na forma mais ativa. Veja, por exemplo, Wilman, 1986, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy", In Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615a Meeting Belfast e Stella et al., 1985, "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery, In: "Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), páginas 247 a 267, Humana Press. Profármacos úteis, porém não estão limitados a profármacos contendo fosfato, profármacos contendo tiofosfato, profármacos contendo sulfato, profármacos contendo peptídeo, pro- fármacos modificados por D-aminoácido, profármacos glicosilados, profármacos contendo β-lactam, profármacos contendo fenoxiacetami- da opcionalmente substituído, e profármacos contendo fenilacetamida opcionalmente substituído, 5-fluorocitosina e outros profármacos de 5- fluorouridina que podem ser convertidos no fármaco livre citotóxico mais ativo. Exemplos de fármacos citotóxicos que podem ser derivados em uma forma de profármaco incluem, porém não estão limitados àqueles agentes quimioterapêuticos acima descritos.

[0144] Para propósitos de monitoramento diagnóstico bem como terapêuticos, os anticorpos da invenção também podem ser conjugados com um rótulo, ou um rótulo sozinho ou um rótulo e um segundo agente adicional (profármaco, agente quimioterapêutico e similares). Um rótulo, como distinguidos dos outros segundos agentes se refere a um agente que é um composto ou composição detectável e ele pode ser conjugado direta ou indiretamente com um anticorpo humanizado da presente invenção. O rótulo pode por si só detectável (por exemplo, rótulos de radioisótopo ou rótulos e rótulos fluorescentes) ou, no caso de um rótulo enzimático, pode catalisar a alteração química de um composto ou composição de substrato que é detectável. Anticorpo an- ti-IL-23p19 humanizado rotulado pode ser preparado e utilizado em várias aplicações incluindo diagnósticos in vitro e in vivo.

[0145] Os anticorpos da presente invenção podem ser formulados como parte de uma preparação lipossômica a fim de afetar a liberação dos mesmos in vivo. Um "lipossoma" é uma pequena vesícula composta de vários tipos de lipídios, fosfolipídios, e/ou tensoativo. Lipos- somas são úteis para liberação de um mamífero de um composto ou formulação, tal como um anticorpo anti-IL23p19 humanizado descrito aqui, opcionalmente, acoplado a ou em combinação com um ou mais agentes e/ou rótulos farmaceuticamente ativos. Os componentes do lipossoma são comumente dispostos em uma formação de bicamada, similar à disposição de lipídio de membranas biológicas.

[0146] Certos aspectos da presente invenção relacionados a áci dos nucléicos isolados que codificam um ou mais domínios dos anticorpos humanizados da presente invenção. Uma molécula de ácido nucléico “isolada” que é identificada e separada de pelo menos uma molécula de ácido nucléico contaminante com a qual ela é ordinariamente associada na fonte natural do ácido nucléico de anticorpo. Uma molécula de ácido nucléico isolada é distinguida da molécula de ácido nucléico no estado em que existe em células naturais.

[0147] Em vários aspectos da presente invenção um ou mais do mínios dos anticorpos humanizados será recombinantemente expressos. Tal expressão recombinante pode empregar uma ou mais sequências de controle, isto é, sequências de polinucleotídeo necessários para a expressão de uma sequência de codificação operavelmen- te ligada em um organismo hospedeiro particular. As sequências de controle adequadas para uso em células procarióticas incluem, por exemplo, sequências de sítio de ligação de ribossoma, promotoras e operadoras. Sequências de controle eucarióticas incluem, porém não estão limitadas a promotores, sinais de poliadenilação, e realçadores. Estas sequências de controle podem ser utilizadas para a expressão e produção de anticorpo anti-IL-23p19 humanizado em células hospedeiras procarióticas e eucarióticas.

[0148] Uma sequência de ácido nucléico é "operavelmente ligada" quando ela é colocada em uma relação funcional com outra sequência de ácido nucléico. Por exemplo, uma pré-sequência de ácido nucléico ou líder secretor é operavelmente ligada a um ácido nucléico codificando um polipeptídeo se ela for expressa como uma pré-proteína que participa na secreção do polipeptídeo; um promotor ou realçador é operavelmente ligado a uma sequência de codificação se ele afetar a transcrição da sequência; ou um sítio de ligação de ribossoma é ope- ravelmente ligada a uma sequência de codificação se ela estiver posicionada a fim de facilitar a translação. Geralmente, "operavelmente ligado" significa que as sequências de DNA sendo ligadas são contíguas, e, no caso de um líder secretório, contíguas e estrutura de leitura. Entretanto, realçadores são opcionalmente contíguous. A ligação pode ser realizada por ligação em sítios de restrição convenientes. Se tais sítios não existirem, adaptadores ou ligadores de oligonucleotí- deos sintéticos podem ser utilizados.

[0149] Como utilizado aqui, as expressões "célula", "linhagem ce- lula", e "cultura celular" são utilizadas alternadamente e todas as tais designações incluem a progênie dos mesmos. Desse modo, "transfor- mantes" e "células transformadas" incluem a célula objeto primária e culturas derivadas a partir destas sem considerar o número de transferências.

[0150] O termo "mamífero" para propósitos de tratamento refere- se a qualquer animal classificado como um mamífero, incluindo humanos, animais domesticados e fazenda, e animais de zoológico, esportes ou de estimação, tais como cachorros, cavalos, gatos, vacas, e similares. Preferivelmente, o mamífero é humano.

[0151] Um "distúrbio", como utilizado aqui, é qualquer condição que pode beneficiar-se do tratamento com um anticorpo anti-IL23p19 humanizado descrito aqui. Isto inclui distúrbios ou doenças crônicas e agudas incluindo aquelas condições patológicas que predispõem o mamífeto ao distúrbio em questão. Exemplos não limitantes ou distúrbios a serem tratados aqui incluem distúrbios inflamatórios, angiogêni- cos, autoimunes e imunológicos, distúrbios respiratórios, câncer, malignidades hematológicas, tumores benignos e tumores malignos, leucemias e malignidades de linfoide.

[0152] Os termos "câncer" e "canceroso” referem-se a ou descri- vem a condição fisiológica em mamíferos que é tipicamente caracterizado por crescimento celular desregulado. Exemplos de câncer incluem, porém não estão limitados a, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma, e leucemia.

[0153] Como utilizado aqui, o termo "distúrbio associado com IL- 23" ou "doença associada com IL-23" refere-se a uma condição em que a atividade de IL-23 contribui para a doença e tipicamente onde IL-23 é anormalmente expresso. Um distúrbio associado com IL-23 inclui doenças e distúrbios do sistema imune, tais como distúrbios au- toimunes e distúrbios inflamatórios. Tais condições incluem, porém não estão limitadas à artrite reumatoide (RA), lúpus sistêmico eritema- toso (SLE), escleroderma, síndrome de Sjogren, esclerose múltipla, psoríase, artrite psoriática, doença inflamatória do intestino (por exemplo, colite ulcerativa e doença de Crohn), inflamação pulmonar, asma, purara trombocitopênica idiopática (ITP) e espondiloartrite, por exemplo, espondilite anquilosante, em espondiloartrite axial radiográfica ou espondiloartrite periférica.

[0154] O termo "infusão intravenosa" refere-se à introdução de um agente na veia de um paciente animal ou humano durante um período de tempo maior do que aproximadamente 15 minutos, geralmente entre aproximadamente 30 a 90 minutos.

[0155] O termo "bolo intravenoso" ou "push intravenoso" refere-se uma administração de fármaco em uma veia de um animal ou humano de modo que o corpo receba o fármaco em aproximadamente 15 minutos ou menos, geralmente 5 minutos ou menos.

[0156] O termo "administração subcutânea" refere-se à introdução de um agente sob a pele de um paciente animal ou humano, preferível dentro de uma bolsa entre a pele e tecido circundante, por liberação prolongada, relativamente lenta de um receptáculo de fármaco. Beliscando ou puxando a pele para cima e distante do tecido circundante pode criar a bolsa.

[0157] O termo "infusão subcutânea" refere-se à introdução de um fármaco sob a pele de um paciente animal ou humano, preferivelmente dentro de uma bolsa entre a pele e tecido circundante, por liberação prolongada, relativamente de um receptáculo de fármaco durante um período de tempo incluindo, porém não limitado a, 30 minutos ou menos, ou 90 minutos ou menos. Opcionalmente, a infusão pode ser feita por implantação subcutânea de uma bomba de liberação de fármaco implatada sob a pele do paciente animal ou humano, em que a bomba libera uma quantidade predeterminada de fármaco durante um período predeterminado de tempo, tal como 30 minutos, 90 minutos, ou um período de tempo abrangendo o comprimento do regime de tratamento.

[0158] O termo "bolo subcutâneo" refere-se à administração de fármaco sob a pele de um paciente animal ou humano, onde a liberação de fármaco em bolo é menor do que aproximadamente 15 minutos; em outro aspecto, menor do que 5 minutos, e ainda em outro aspecto, menor do que 60 segundos. Ainda em outro aspecto, uma administração está dentro uma bolsa entre a pele e tecido circundante, onde a bolsa pode ser criada belicando-se ou puxando a pele e distanciando-a do tecido circundante.

[0159] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" é utilizado refere-se a uma quantidade de um agente ativo que alivia ou melhora um ou mais dos sintomas do distúrbio que está sendo tratado. Em outro aspecto, a quantidade terapeuticamente eficaz refere-se a uma concentração de soro alvo que foi mostrada ser eficaz na, por exemplo, diminuição da progressão da doença. A eficácia pode ser medida de maneiras convencionais, dependendo da condição a ser tratada.

[0160] Os termos "tratamento" e "terapia" e similares, como utiliza do aqui, destinam-se a incluir medidas terapêuticas bem como profilá- ticas, ou supressivas para uma doença ou distúrbio induzindo a qualquer efeito clinicamente desejável ou benéfico, incluindo, porém não limitado ao alívio ou mitigação de um ou mais sintomas, regressão, diminuição ou cessação da progressão de uma doença ou distúrbio. Desse modo, por exemplo, o termo tratamento inclui a administração de um agente antes de ou após o início de um sintoma uma doença ou distúrbio, desse modo impedindo ou removendo um ou mais sinais de uma doença ou distúrbio. Como outro exemplo, o termo inclui a administração de um agente após manifestação da doença para combater os sintomas da doença. Além disso, a administração de um agente após o início e após os sintomas clínicos terem se desenvolvidos onde a administração afeta parâmetros clínicos da doença ou distúrbio, tal como o grau de lesão do tecido ou a quantidade ou extensão da me- tástase, se ou tratamento induz ou não à melhora da doença, compreende "tratamento" ou "terapia" como utilizado aqui. Além disso, contanto que as composições da inveção, sozinhas ou em combinação com outro agente terapêutico, alivie ou melhore pelo menos um sintoma de um distúrbio sendo tratado em comparação com aquele sintoma na ausência de uso da composição de anticorpo anti-IL-23p19 humanizado, o resultado deve ser considerado um tratamento eficaz do distúrbio subjacente independente de se todos os sintomas do distúrbio são aliviados ou não.

[0161] O termo "inserção de pacote" é utilizado para referir-se à instruções geralmente incluídas em pacotes comerciais de produtos terapêuticos, que contêm informação acerca das indicações, uso, ad-ministração, contraindicações e/ou advertências envolvendo o uso de tais produtos terapêuticos.

Anticorpos

[0162] Em um aspecto, descritos e expostos aqui são anti-IL-23 anticorpos, em particular anticorpos anti-IL-23p19 humanizados, e composições e artigos de fabricação compreendendo um ou mais anticorpos anti-IL-23, em particular um ou mais anticorpos anti-IL-23p19 humanizados da presente invenção. São também descritos agentes de ligação que incluem um fragmento de ligação de antígeno de um anticorpo anti-IL-23, em particular um anticorpo anti-IL23p19 humanizado. Os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados e agentes de ligação podem inibir a produção de citocinas associadas com Th17, que contribuem para doenças crônicas autoimunes e inflamatórias. Os anticorpos anti- IL-23p19 humanizados e agentes de ligação podem, desse modo, ser utilizados no tratamento de uma variedade de doenças ou distúrbios. Um anticorpo anti-IL23p19 humanizado e um agente de ligação de IL- 23p19 cada qual inclui pelo menos uma porção que especialmente reconhece um epítopo de IL-23p19 (isto é, um fragmento de ligação de antígeno).

[0163] Na caracterização, anticorpos de camundongo foram sele cionados com base na caracterização de ligação de IL-23p19.

[0164] Consequentemente em um aspecto, um anticorpo da pre sente invenção tem um KD quanto ao IL-23, em particular IL-23 humano, menor do que 100 pM. Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção tem um KD menor do que 40pM. Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção tem um KD menor do que 20pM. Em outro aspecto, um anticorpo da presente invenção tem um KD menor do que 10pM. Em outro aspecto, a anticorpo monoclonal Da presente invenção tem um KD menor do que 1 pM.

[0165] Os anticorpos de camundongos selecionados têm as se guintes regiões variáveis de cadeia leve e regiões variáveis de cadeia pesadas como mostrado na tabela 1 e 2: Tabela 1: Condutores de Camundongo Anti-IL-23p19 - Sequências VK Tabela 2: Condutores de Camundongo Anti-IL-23p19 - Sequências de

[0166] As sequências de estrutura humana foram selecionadas para cada um dos condutores de camundongo com base na homologia de estrutura, estrutura de CDR, resíduos canônicos conservados, resíduos de empacotamento de interface conservados e outros parâmetros.

[0167] As CDRs de cadeia pesada e cadeia leve de camundongo dos vários anticorpos de camundongo são mostradas na Tabela 3 e Tabela 4, respectivamente. A tabela 4 também mostra três CDRs de cadeia pesa derivadas de anticorpo 6B8 de camundongo através do processo de humanização. Tabela 3: Sequências de CDR de Cadeia Leve Tabela 4: Sequências de CDR de Cadeia Pesada

[0168] As CDRs listadas acima nas tabelas 3 e 4 são definidas uti lizando o sistema de numeração Chothia (Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948).

[0169] Fabs que mostraram ligação melhor ou igual quando com parados ao Fab origem quimérico foram selecionados para conversão em IgG. 6B8 foi convertido em um formato IgG1KO. IgG1KO (nocaute de funções efetoras) tem duas mutações na região Fc, Leu234Ala e Leu235Ala, que reduzem a função efetora tal como FCYR e ligação de complemento. O formato de IgG é descrito na literature (veja, por exemplo, Hezareh et al. (2001) Journal of Virology 75: 12161 -12168). O exemplo 1 descreve o processo de imunização em maiores detalhes. Os resultados de tal humanização resultou em sequências de anticorpo humanizado. Um número representativo de regiões variáveis de cadeia leve e cadeia pesada humanizadas derivadas de anticorpo 6B8 de camundongo é fornecido e mostrado nas tabelas 5 e 6. Um alinhamento entre as regiões variáveis de cadeia leve e cadeia pesada derivadas de anticorpo 6B8 de camundongo e as regiões variáveis de cadeia leve e cadeia pesada de anticorpo 6B8 de camundongo é mostrado na Figura 1.

[0170] Combinação selecionada das regiões variáveis de cadeia leve e cadeia pesada derivadas de anticorpo 6B8 de camundongo resultou nos Anticorpos A, B, C e D:

[0171] Anticorpo A: 6B8-lgG1 KO-2 com lgK-66 (região variável de cadeia pesada 6B8CVH-02 e região variável de cadeia leve 6B8CVK-66);

[0172] Anticorpo B: 6B8-lgG1 KO-5 com lgK-66 (região variável de cadeia pesada 6B8CVH-05 e região variável de cadeia leve 6B8CVK-66);

[0173] Anticorpo C: 6B8-lgG1 KO-2 com lgK-65 (região variável de cadeia pesada 6B8CVH-02 e região variável de cadeia leve 6B8CVK-65);

[0174] Anticorpo D: 6B8-lgG1 KO-5 com lgK-65 (região variável de cadeia pesada 6B8CVH-05 e região variável de cadeia leve 6B8CVK-65).

[0175] Anticorpos A, B, C e D têm as sequências de cadeia pesa da e leve mostradas na Tabela 7. Tabela 5: Sequências de 6B8-VK Humanizadas Tabela 6: Sequência 6B8-VH Humanizada Tabela 7: Sequências de Aminoácido e DNA de Cadeia Leve e Pesada quanto aos Anticorpos A, B, C, e D Anticorpo (A, B, C, D) - Cadeia leve #; Cadeia pesada #.

[0176] Regiões variáveis de cadeia leve e cadeia pesada de anti corpos A, B, C, e D são delineadas na tabela 7 acima.

[0177] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção tem pelo menos uma das propriedades abaixo. Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção tem qualquer combinação de pelo menos duas, ou pelo menos 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, ou 11 das propriedades abaixo. Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente tem todas as propriedades abaixo. • KD para IL-23 humano < 1 pM (nenhuma mudança na taxa de ligação em 50% de soro humano) • Bloqueia a ligação de IL-23 ao IL-23 humanoR/Fc in vitro • Nenhuma ligação ao IL-12 humano • Inibe a produção de IL-17 induzida por IL-23 humano em esplenócitos de camundongo com IC50's < 20 pM • Inibe a fosforilação de STAT3 induzida por IL-23 humano em células DB humanas com IC50's < 40 pM • Nenhuma atividade predita em ADCC/CDC • KD <1 pM para IL-23 de macaco cinomolgo • Nenhuma reatividade ao IL-23 de camundongo ou rato • Inibe a produção de IL-17 e IL-22 induzida por IL-23 humano de orelha de rato (>80% de inibição de ambas as citocinas em 1 mg/kg) • Estabilidade 83 °C (temperatura de fusão 83 °C como de-terminado por calorimetria de varredura diferencial) • Solubilidade >100 mg/ml (quando medida por espectros- copia de UV e monitorada por turbidez) • Administração subcutânea de 1,0 mg/kg em três macacos cinomolgos mostra exposição prolongada > 10 nm durante apro-ximadamente 28 dias com um biodisponibilidade de aproximadamente 70%.

[0178] Por nenhuma atividade predita em ADCC/DC, entende-se aqui que, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção reduziu a afinidade quanto o receptor de Fc e, portanto, é previsto não ter atividade em ADCC/CDC.

[0179] Em um aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção tem pelo menos uma das propriedades abaixo. Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção tem qualquer combinação de pelo menos duas, ou pelo menos 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10 das propriedades abaixo. Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente tem todas as propriedades abaixo. • KD para IL-23 humano < 1 pM (nenhuma mudança na taxa de ligação em 50% de soro humano) • Bloqueia a ligação de IL-23 ao IL-23 humanoR/Fc in vitro • Nenhuma ligação ao IL-12 humano • Inibe a produção de IL-17 induzida por IL-23 humano em esplenócitos de camundongo com IC50's < 20 pM • Inibe a fosforilação de STAT3 induzida por IL-23 humano em células DB humanas com IC50's < 40 pM • Nenhuma atividade predita em ADCC/CDC • KD <1 pM para IL-23 de macaco cinomolgo • Nenhuma reatividade ao IL-23 de camundongo ou rato • Inibe a produção de IL-17 e IL-22 induzida por IL-23 humano de orelha de rato (>80% de inibição de ambas as citocinas em 1 mg/kg) • Estabilidade 83 °C (temperatura de fusão 83 °C como de-terminado por calorimetria de varredura diferencial) • Solubilidade >100 mg/ml (quando medida por espectros- copia de UV e monitorada por turbidez).

[0180] Em um outro aspecto, um anticorpo humanizado da presen te invenção tem pelo menos uma das seguintes propriedades de ligação (propriedades A). Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção tem qualquer combinação de pelo menos duas, ou pelo menos 3, das propriedades abaixo. Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente tem todas as propriedades abaixo. • KD para IL-23 humano < 1 pM (nenhuma mudança na taxa de ligação em 50% de soro humano) • Nenhuma ligação ao IL-12 humano • KD <1 pM para IL-23 de macaco cinomolgo • Nenhuma reatividade ao IL-23 de camundongo ou rato.

[0181] Em particular, um anticorpo humanizado da presente inven ção tem um KD para IL-23 humano < 1 pM (nenhuma mudança na taxa de ligação em 50% de soro humano) e nenhuma ligação ao IL-12 humano.

[0182] Em um outro aspecto, um anticorpo humanizado da presen te invenção tem pelo menos uma das seguintes propriedades funcionais (propriedades B). Em um outro aspecto, um anticorpo anti- IL23p19 humanizado da presente invenção tem qualquer combinação de pelo menos duas, ou pelo menos 3, das propriedades abaixo. Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente tem todas as propriedades abaixo. • Bloqueia a ligação de IL-23 ao IL-23 humanoR/Fc in vitro • Inibe a produção de IL-17 induzida por IL-23 humano em esplenócitos de camundongo com IC50's < 20 pM • Inibe a fosforilação de STAT3 induzida por IL-23 humano em células DB humanas com IC50's < 40 pM • Inibe a produção de IL-17 e IL-22 induzida por IL-23 humano de orelha de rato (>80% de inibição de ambas as citocinas em 1 mg/kg).

[0183] Em um outro aspecto, um anticorpo humanizado da presen te invenção tem pelo menos uma das seguintes propriedades (proprie-dades C). Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção tem qualquer combinação de pelo menos duas, ou pelo menos 3, das propriedades abaixo. Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente tem todas as propriedades abaixo. • Nenhuma atividade predita em ADCC/CDC • Estabilidade 83 °C (temperatura de fusão 83 °C como de-terminado por calorimetria de varredura diferencial) • Solubilidade >100 mg/ml (quando medida por espectros- copia de UV e monitorada por turbidez) • Administração subcutânea de 1,0 mg/kg em três macacos cinomolgos mostra exposição prolongada > 10 nm durante apro-ximadamente 28 dias com um biodisponibilidade de aproximadamente 70%.

[0184] Em um outro aspecto, um anticorpo humanizado da presen te invenção tem pelo menos uma das seguintes propriedades (proprie-dades C). Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humaniza- do da presente invenção tem qualquer combinação de pelo menos duas das propriedades abaixo. Em um outro aspecto, um anticorpo anti- IL23p19 humanizado da presente tem todas as propriedades abaixo. • Nenhuma atividade predita em ADCC/CDC • Estabilidade 83 °C (temperatura de fusão 83 °C como de-terminado por calorimetria de varredura diferencial) • Solubilidade >100 mg/ml (quando medida por espectros- copia de UV e monitorada por turbidez).

[0185] Em um outro aspecto, um anticorpo humanizado da presen te invenção tem pelo menos uma propriedade A, pelo menos uma pro-priedade B e pelo menos uma propriedade C. Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção tem qualquer combinação de pelo menos duas, ou pelo menos 3, of the propriedades A, B, e C.

[0186] Em alguns aspectos, o anticorpo humanizado exibe ativida de de bloqueio, desse modo ele reduz a ligação de IL-23 ao receptor de IL-23 em pelo menos 45%, em pelo menos 50%, em pelo menos 55%, em pelo menos 60%, em pelo menos 65%, em pelo menos 70%, em pelo menos 75%, em pelo menos 80%, em pelo menos 85%, em pelo menos 90%, ou em pelo menos 95%. A capacidade de um anticorpo bloquear a ligação de IL-23 ao receptor de IL-23 pode ser medida utilizando ensaios de ligação competitiva conhecidos na técnica. Alternativamente, a atividade de bloqueio de um anticorpo pode ser medida avaliando-se os efeitos biológicos de IL-23, tal como a produção de IL-17 e IL-22 para determinar se a sinalização mediada pelo receptor de IL-23 é inibida.

[0187] Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um an ticorpo anti-IL23p19 humanizado tendo propriedades biofísicas favoráveis. Em um aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção está presente em pelo menos 90% de forma de mo- nômero, ou em pelo menos 92% de forma de monômero, ou em pelo menos 95% de forma de monômero em um tampão. Em um outro aspecto, um anticorpo anti-IL23p19 humanizado da presente invenção mantém em pelo menos 90% de forma de monômero, ou em pelo menos 92% de forma de monômero, ou em pelo menos 95% de forma de monômero e um tampão durante um mês ou durante quatro meses.

[0188] Em um aspecto, um anticorpo humanizado da presente in venção é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D. Con-sequentemente, em uma modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção compreende a sequência de cadeia leve de SEQ ID N°: 174 e a sequência de cadeia pesada de SEQ ID N°: 176 (Anticorpo A). Em outra modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção compreende a sequência de cadeia leve de SEQ ID N°: 174 e a sequência de cadeia pesada de SEQ ID N°: 178 (Anticorpo B). Em outra modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção compreende a sequência de cadeia leve de SEQ ID N°: 180 e a sequência de cadeia pesada de SEQ ID N°: 176 (Anticorpo C). Em outra modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção compreende a sequência de cadeia leve de SEQ ID N°: 180 e a sequência de cadeia pesada de SEQ ID N°: 178 (Anticorpo D).

[0189] Em uma outra modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção consiste na sequência de cadeia leve de SEQ ID N°: 174 e a sequência de cadeia pesada de SEQ ID N°: 176 (Anticorpo A). Em uma outra modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção consiste na sequência de cadeia leve de SEQ ID N°: 174 e a sequência de cadeia pesada de SEQ ID N°: 178 (Anticorpo B). Em uma outra modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção consiste na sequência de cadeia leve de SEQ ID N°: 180 e a sequência de cadeia pesada de SEQ ID N°: 176 (Anticorpo C). Em uma outra modalidade, um anticorpo humanizado da presente invenção consiste na sequência de cadeia leve de SEQ ID N°: 180 e a sequência de cadeia pesada de SEQ ID N°: 178 (Anticorpo D).

[0190] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-IL-23p19 hu manizados, incluindo fragmento de ligação de antígenos dos mesmos, tal como regiões variáveis de cadeia leve e pesada, compreendem uma sequência de aminoácido dos resíduos derivados de Anticorpo A (sequência de cadeia leve = SEQ ID N°: 174; sequência de cabeça pesada = SEQ ID N°: 176), Anticorpo B (sequência de cadeia leve = SEQ ID N°: 174; sequência de cabeça pesada = SEQ ID N°: 178), Anticorpo C (sequência de cadeia leve = SEQ ID N°: 180; sequência de cabeça pesada = SEQ ID N°: 176) ou Anticorpo D (sequência de cadeia leve = SEQ ID N°: 180; sequência de cabeça pesada = SEQ ID N°: 178).

[0191] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou um fragmento de ligação de antígeno do mesmo que se liga ao IL-23p19 humano em um epítopo que consiste em resíduos de aminoácido 108 a 126 e resíduos de aminoácido 137 a 151 de SEQ ID N°: 181.

[0192] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo que se liga competitivamente ao IL-23p19 humano com um anticorpo da presente invenção, por exemplo, Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D descritos aqui. A capacidade de um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno de ligar-se competitivamente ao IL-23p19 pode ser medida utilizando ensaios de ligação competitiva conhecidos na técnica.

[0193] Os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados opcionalmente incluem substituições de aminoácido específicas nas regiões de estrutura de consenso ou linhagem germinativa. A substituição específica de resíduos de aminoácido nas posições de estrutura pode melhorar vários aspectos de desempenho do anticorpo incluindo afinidade de ligação e/ou estabilidade, sobre a qual demonstrou em anticorpos hu-manizados formados por "troca direta" de CDRs ou HVLs nas regiões de estrutura de linhagem germinativa humana.

[0194] Em algumas modalidades, a presente invenção descreve outros anticorpos monoclonais com uma região variável de cadeia leve tendo a sequência de aminoácido estabelecida na SEQ ID N°: 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 ou 119. Em algumas modalidades, a presente invenção descreve other anticorpos monoclonais com uma região variável de cadeia pesada tendo a sequência de aminoácido estabelecida na SEQ ID N°: 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 ou 156 (veja as tabelas 1 e 2 acima). As sequências de CDR destes anticorpos de camundongos são mostradas nas tabelas 3 e 4. Colocando tais CDRs em FRs dos domínios de cadeia pesada e leve de consenso humana produzirá anticorpos humanizados úteis da presente invenção.

[0195] Em particular, a presente invenção fornece anticorpos mo- noclonais com as combinações de regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve de SEQ ID N°: 84/121, 86/123, 88/125, 90/127, 91 /128, 93/130, 95/132, 97/134, 99/136, 101 /138, 103/140, 105/142, 107/144, 109/146, 111 /148, 113/150, 115/152, 117/154 ou 119/156. Tais regiões variáveis podem ser combinadas com regiões constantes humanas.

[0196] Em algumas modalidades, a presente invenção descreve outros anticorpos humanizados com região variável de cadeia leve se-quences tendo a sequência de aminoácido estabelecida na SEQ ID N°: 158, 160, 162 ou 164. Em algumas modalidades, a presente invenção descreve other anticorpos humanizados com região variável de cadeia pesada sequences tendo a sequência de aminoácido estabelecida na SEQ ID N°: 166, 168, 170 ou 172 (veja Tabelas 5 e 6 acima). As se- quências de CDR destes anticorpos são mostradas nas Tabelas 3 e 4. Em particular, a presente invenção fornece anticorpos monoclonais com as combinações de regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve de SEQ ID N°: 160/166, 160/168, 158/166 ou 158/168. Tais regiões variáveis podem ser combinadas com regiões constantes humanas.

[0197] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreendendo um domínio variável de cadeia leve humanizado compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 160 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia leve de domínio variável de SEQ ID N°: 160 e um domínio variável de cadeia pesada humanizada compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 166 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia pesada de domínio variável de SEQ ID N°: 166. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado.

[0198] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreendendo um domínio variável de cadeia leve humanizado compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 160 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia leve de domínio variável de SEQ ID N°: 160 e um domínio variável de cadeia pesada humanizada compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 168 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia pesada de domínio variável de SEQ ID N°: 168. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado.

[0199] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreendendo um domínio variável de cadeia leve humanizado compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 158 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia leve de domínio variável de SEQ ID N°: 158 e um domínio variável de cadeia pesada humanizada compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 166 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia pesada de domínio variável de SEQ ID N°: 166. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado.

[0200] Em uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreendendo um domínio variável de cadeia leve humanizado compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 158 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia leve de domínio variável de SEQ ID N°: 158 e um domínio variável de cadeia pesada humanizada compreendendo as CDRs de SEQ ID N°: 168 e regiões de estrutura tendo uma sequência de aminoácido pelo menos 90% idêntica, pelo menos 93% idêntica ou pelo menos 95% idêntica à sequência de aminoácido das regiões de estrutura da sequência de aminoácido de cadeia pesada de domínio variável de SEQ ID N°: 168. Em uma modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 é um anticorpo monoclonal humanizado.

[0201] Em algumas modalidades específicas, os anticorpos anti-IL- 23p19 humanizados descritos aqui compreendem pelo menos um domínio variável de cadeia leve ou pesada compreendendo as CDRs ou HVLs dos anticorpos monoclonais de murino ou anticorpos humanizados como mostrado nas Tabelas 1 a 6 acima e as FRs dos domínios variáveis de cadeia pesada e leve de linhagem germinativa humana.

[0202] As CDRs destas sequências são mostradas em Tabelas 3 e 4. Consequentemente, em um aspecto, a presente invenção fornece um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreendendo uma sequência de CDR1 de cadeia leve (L- CDR1) de SEQ ID N°: 1, 4, 6, 7, 8, 11, 15, 18, 19, 22, 27 ou 30; uma sequência de CDR2 de cadeia leve (L-CDR2) de SEQ ID N°: 2, 5, 9, 12, 16, 20, 23, 25, 28 ou 31; uma sequência de CDR3 de cadeia leve (L-CDR3) de SEQ ID N°: 3, 10, 13, 14, 17, 21, 24, 26, 29, ou 32; uma sequência de CDR1 de cadeia pesada (H-CDR1) de SEQ ID N°: 33, 36, 38, 40, 43, 45, 48, 51, 54, 57, 60, 63, 66, 67, 68, 69, 77 ou 80; uma sequência de CDR2 de cadeia pesada (H-CDR2) de SEQ ID N°: 34, 39, 41, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, 70, 72, 73, 75, 78 ou 81; e uma sequência de CDR3 de cadeia pesada (H-CDR3) de SEQ ID N°: 35, 37, 42, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 65, 71, 74, 76, 79 ou 82. Em um aspecto, o anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma L-CDR1 listada acima, uma L-CDR2 listada acima e a L- CDR3 listada acima, e uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma H-CDR1 listada acima, uma H-CDR2 listada acima e uma H-CDR3 listada acima.

[0203] Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um an ticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreendendo: a) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 1, 2, 3, 33, 34, e 35, respectivamente; ou b) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 4, 5, 3, 36, 34 e 37, respectivamente; ou c) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 1, 2, 3, 38, 39 e 35, respectivamente; ou d) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 6, 2, 3, 40, 41 e 42, respectivamente; ou e) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 7, 2, 3, 43, 41 e 44, respectivamente; ou f) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 8, 9, 10, 45, 46 e 47, respectivamente; ou g) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 8, 9, 10, 48, 49 e 50, respectivamente; ou h) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 11, 12, 13, 51, 52 e 53, respectivamente; ou i) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 7, 2, 14, 54, 55 e 56, respectivamente; ou j) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e H-CDR3 de SEQ ID N°: 15, 16, 17, 57, 58 e 59, respectivamente; ou k) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 18, 16, 17, 60, 61 e 62, respectivamente; ou l) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 19, 20, 21, 63, 66, 67 ou 68, 64 e 65, respectivamente; ou m) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 22, 23, 24, 69, 70 e 71, respectivamente; ou n) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 22, 25, 26, 55, 72 e 71, respectivamente; ou o) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 8, 9, 10, 45, 73 e 74, respectivamente; ou p) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 27, 28, 29, 45, 75 e 76, respectivamente; ou q) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 8, 9, 10, 77, 78 e 79, respectivamente; ou r) uma sequência de L-CDR1, uma L-CDR2, uma L-CDR3, uma H-CDR1, uma H-CDR2 e uma H-CDR3 de SEQ ID N°: 30, 31, 32, 80, 81 e 82, respectivamente.

[0204] Em um aspecto, o anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma combinação de L-CDR1, L-CDR2 e L-CDR3 listada acima, e uma região variável de cadeia pesada com-preendendo uma combinação de H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 listada acima.

[0205] Em modalidades específicas, contempla-se que anticorpos quiméricos com regiões de CRD comutadas (isto é, por exemplo, co-mutando uma ou duas CDRs de um dos anticorpos de camundongo ou anticorpos humanizados derivados a partir destes com a CDR análoga de outro anticorpo de camundongo ou anticorpos humanizados derivados a partir destes) entre estes, imunoglobulinas exemplares podem produzir anticorpos úteis.

[0206] Em certas modalidades, o anticorpo anti-IL-23p19 humani zado é um fragmento de anticorpo. Vários fragmentos de anticorpo foram de modo geral descritos acima e existem técnicas que foram de-senvolvidas para a produção de fragmentos de anticorpo. Os fragmentos podem ser derivados por meio de digestão proteolítica de anticorpos intactos (veja, por exemplo, Morimoto et al., 1992, Journal of Biochemical and Biophysical Metods 24:107-1 17; e Brennan et al., 1985, Science 229:81). Alternativamente, os fragmentos podem ser produzidos diretamente em células hospedeiras recombinantes. Por exemplo, fragmentos de Fab'-SH podem ser diretamente recuperados de E.coli e quimicamente acoplados para formar fragmentos de F(ab')2 (veja, por exemplo, Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167). Por outro método, fragmentos de F(ab')2 podem ser isolados diretamente de cultura de célula hospedeira recombinante. Outras técnicas para a produção de fragmentos de anticorpo serão evidentes para o técnico versado. Consequentemente, em um aspecto, a presente invenção fornece fragmentos de anticorpo compreendendo as CDRs descritas aqui, em particular uma das combinações de L-CDR1, L-CDR2, L- CDR3, H-CDR1, H-CDR2 e H-CDR3 descritas aqui. Em um outro as- pecto, a presente invenção fornece fragmentos de anticorpo compre-endendo as regiões variáveis descritas aqui, por exemplo, uma das combinações de regiões variáveis de cadeia leve e regiões variáveis de cadeia pesada descritas aqui.

[0207] Certas modalidades incluem um fragmento de F(ab')2 de um anticorpo anti-IL23p19 humanizado compreendendo uma sequência de cadeia leve de qualquer uma de SEQ ID N°: 174 ou 180 em combinação com uma sequência de cadeia pesada de SEQ ID N°: 176 ou 178. Tais modalidades podem incluir um anticorpo intacto compreendendo tal F(ab')2.

[0208] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de an ticorpo inclui uma região constante que media a função efetora. A região constante pode fornecer respostas de citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC), fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP) e/ou citotoxidade dependente de complemento (CDC) contra uma célula alvo expressando IL-23. O domínio(s) efetor pode ser, por exemplo, uma região de Fc de uma molécula de Ig.

[0209] O domínio efetor de um anticorpo pode ser de quaisquer iso- tipos e espécies de animal vertebrado adequado. Os isotipos de diferentes espécies de animal diferem nas capacidades de mediar as funções efetoras. Por exemplo, a capacidade de a imunoglobulina mediar CDC e ADCC/ADCP é geralmente na ordem de lgM~lgG1~lgG3>lgG2>lgG4 e IgM~lgG1~lgG3>lgG2/lgM/lgG4, respectivamente. Imunoglobulinas de murino mediam CDC e ADCC/ADCP geralmente na ordem de murine lgM~lgG3>>lgG2b>lgG2a>>lgG1 e lgG2b>lgG2a>lgG1>>lgG3, respectiva-mente. Em outro exemplo, a lgG2a de murino media ADCC ao mesmo tempo em que tanto lgG2a de murino quanto IgM mediam a CDC.

Modificações de Anticorpo

[0210] Os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados e agentes podem incluir modificações do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado ou frag- mento de ligação de antígeno do mesmo. Por exemplo, pode ser desejável modificar o anticorpo com respeito à função efetora, a fim de realçar a eficácia do anticorpo no tratamento de câncer. Uma tal modificação é a introdução de resíduo(s) de cisteína na região de Fc, desse modo permitindo a formação de ligação de dissulfeto de intercadeia. O anticorpo homodimérico desse modo gerado pode ter melhorado a capacidade de internalização e/ou morte celular mediada por complemento aumentado e/ou citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC). Veja, por exemplo, Caron et al., 1992, J. Exp Med. 176:1191 - 1195; e Shopes, 1992, J. Immunol. 148:2918-2922. Anticorpos homo- diméricos tendo atividade antitumor realçada podem também ser preparados utilizando reticuladores heterobifuncionais como descrito em Wolff et al., 1993, Cancer Research 53: 2560-2565. Alternativamente, um anticorpo pode ser planejado para conter regiões de Fc duais, realçando as capacidades de ADCC e lise de complemento do anticorpo. Veja Stevenson et al., 1989, Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230.

[0211] Anticorpos com capacidade melhorada para suportar ADCC foram gerados por modificação do padrão de glicosilação de sua região de Fc. Isto é possível visto que a glicosilação de anticorpo no resíduo de asparagina, N297, no domínio de CH2 está envolvida entre os pré-requisitos de receptores de IgG e Fey para ADCC. Linhagens de célula hospedeira foram planejadas para anticorpos com glicosilação alterada, tal como N-acetilglucosamina de bissetriz aumentada ou fucose diminuída. A redução de fucose fornece maior realce à atividade de ADCC do que o aumento da presença de N-acetilglucosamina de bissetriz. Entretanto, o realce de ADCC por anticorpos de baixa fucose é independente do polimorfismo de FcYRIIIa V/F.

[0212] Modificar a sequência de aminoácido da região de Fc de anticorpos é uma alternativa para o planejamento de glicosilação para realçar ADCC. O sítio de ligação na IgG1 humana quanto receptores de Fey foi determinado por análise mutacional extensiva. Isto induziu à geração de anticorpos de IgG1 humanizados com mutações de Fc que aumentam a afinidade de ligação quanto a FcYRIIIa e realçam ADCC in vitro. Adicionalmente, variantes de Fc foram obtidas com muitas permutações diferentes de propriedades de ligação propriedades, por exemplo, ligação melhorada a receptores de FcyR específicos com ligação não alterada ou diminuída a outros receptores de FcyR.

[0213] Outro aspecto inclui imunoconjugados compreendendo o anticorpo humanizado ou fragmentos do mesmo conjugado a um agente citotóxico tal como um agente quimioterapêutico, uma toxina (por exemplo, uma toxina enzimaticamente ativa de origem bacteriana, fúngica, planta, animal, ou fragmentos dos mesmos), ou um isótopo radioativo (isto é, um radioconjugado).

[0214] Agentes quimioterapêuticos úteis na geração de tais imu- noconjugados foram descritos acima. Toxinas enzimaticamente ativas e fragmentos das mesmas que podem pode ser utilizados para formar imunoconjugados úteis incluem cadeia de difteria A, fragmentos ativos de não ligação de toxina de difteria, cadeia de exotoxina A (de Pseudomonas aeruginosa), cadeia de ricina A, cadeia de abrina A, cadeia de modecina A, alfa-sarcina, proteínas de Aleurites fordii, proteínas de diantina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII, e PAP-S), inibidor de Momordica charantia, curcina, crotina, inibidor de Sapaona- ria officinalis, gelonina, mitogelina, restrictocina, fenomicina, enomici- na, os tricotecenos, e similares. Uma variedade de radionuclídeos é disponível para a produção de anticorpos anti-IL-23p19 humanizados radioconjugados. Exemplos incluem 212Bi, 131I, 131In, 90Y, e 186Re.

[0215] Os conjugados do anticorpo anti-IL-23p19 humanizado e agente citotóxico ou quimioterapêutico podem ser feitos por métodos conhecidos, utilizando uma variedade de agentes de acoplamento de proteína bifuncional tais como propionato de N-succinimidil-3-(2- piridilditiol) (SPDP), iminotiolano (IT), derivados bifuncionais de imido- ésteres (tal como HCL de adipimidato de dimetila), ésteres ativos (tal como suberato de dissuccinimidila), aldeídos (tal como glutareldeído), compostos de bis-azido (tal como bis (p-azidobenzoil) hexanodiamina), derivados de bis-diazônio (tal como bis-(p-diazoniobenzoil)- etilenodiamina), diisocianatos (tal como tolueno 2,6-diisocianato), e compostos de flúor bis-ativo (tal como 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzeno). Por exemplo, uma imunotoxina de ricina pode ser preparada como descrito em Vitetta et al., 1987, Science 238:1098. Ácido 1- isotiocianatobenzil-3-metildietileno triaminapentaacético rotulado por carbono-14 (MX-DTPA) é um agente quelante para conjugação de ra- dionucleotídeo ao anticorpo. Conjugados também podem ser formados com um ligador clivável.

[0216] Os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados descritos aqui podem também ser formulados como imunolipossomea. Lipossomas contendo o anticorpo são preparados por métodos conhecidos na técnica, tal como descrito em Epstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688; Hwang et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030; e Patentes dos Estados Unidos n°s 4.485.045 e 4.544.545. Liposso- mas tendo tempo de circulação realçado são descritos, por exemplo, na Patente dos Estados Unidos n° 5.013.556.

[0217] Lipossomas particularmente úteis podem ser gerados pelo método de evaporação de fase reversa com uma composição de lipídio compreendendo fosfatidilcolina, colesterol e fosfatidiletanolamina derivada de PEG (PEG-PE). Lipossomas são extrusados através de filtros de tamanho de poro definido para produzir lipossomas com o diâmetro desejado. Fragmentos de Fab' de um anticorpo descrito aqui podem ser conjugados aos lipossomas como descrito em Martin et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:286-288 por meio de uma reação de permuta de dissulfeto. Um agente quimioterapêutico (tal como doxorubicina) está opcionalmente contido no lipossoma. Veja, por exemplo, Gabizon et al., 1989, J. National Cancer Inst. 81 (19):1484.

[0218] Os anticorpos descritos e expostos aqui podem também ser utilizados em procedimentos de ADEPT (Terapia de Profármaco de Enzima Direcionada a Anticorpo) conjugando o anticorpo a uma enzima de conjugação de profármaco que converte um profármaco (por exemplo, um agente quimioterapêutico de peptidila), em um fármaco anticâncer ativo. Veja, por exemplo, WO 81/01145, WO 88/07378, e Patente dos Estados Unidos n° 4.975.278. O componente de enzima do imunoconjugado útil para ADEPT é uma enzima capaz de agir sob um profármaco de tal maneira a fim de convertê-la em sua forma cito- tóxica mais ativa. Enzimas específicas que são úteis em ADEPT incluem, porém não estão limitadas à fosfatase alcalina para conversão de profármacos contendo fosfato em fármacos livres; arilsulfatase para conversão de profármacos contendo sulfato em fármacos livres; citito- sina desaminase para conversão de 5-fluorocitosina não tóxica no fármaco anticâncer, 5-fluorouracila; proteases, tais como serratia protease, termolisina, subtilisina, carboxipeptidases, e catepsinas (tal como catepsinas B e L), contendo profármacos contendo peptídeo em fármacos livres; D-alanilcarboxipeptidases, para conversão de profárma- cos contendo aminoácido; enzimas de clivagem de carboidrato tais como β-galactosidase e neuraminidase para conversão de profármacos glicisi- lados em fármacos livres; β-lactamase para conversão de fármacos de-rivados com β-lactams em fármacos livres; e penicilina amidases, tal como penicilina V amidase ou penicilina G amidase, para conversão de fármacos derivados em seus nitrogênios de amina com grupos fe- noxiacetila ou fenilacetila, respectivamente, em fármacos livres. Alter-nativamente, anticorpos tendo atividade enzimática ("abzymes") podem ser utilizados para converter os profármacos nos fármacos ativos livres (veja, por exemplo, Massey, 1987, Nature 328: 457-458). Conju- gados de anticorpo-abzima podem ser preparadospor métodos conhecidos para liberação da enzima a uma população de célula de tumor, por exemplo, por ligação covalentemente da enzima ao anticorpo anti- IL-23p19 humanizado/reagentes de reticulação heterobifuncional descritos acima. Alternativamente, proteínas de fusão compreendendo pelo menos a região de ligação de antígeno de um anticorpo descrito aqui ligado a pelo menos uma porção funcionalmente ativa de uma enzima como descrito acima podem ser construídos utilizando técnicas recombinantes de DNA (veja, por exemplo, Neuberger et al., 1984, Nature 312:604-608).

[0219] Em certas modalidades, pode ser desejável utilizar um fra gmento de anticorpo anti-IL23p19 humanizado, em vez de um anticorpo intacto, para aumentar a penetração de tecido, por exemplo. Pode ser desejável modificar o fragmento de anticorpo a fim de aumentar sua meia vida de soro. Isto pode ser obtido, por exemplo, por incorporação de um epítopo de ligação ao receptor de recuperação no fragmento de anticorpo. Em um método, a região apropriada do fragmento de anticorpo pode ser alterada (por exemplo, mutada), ou o epítopo pode ser incorporado em um rótulo de peptídeo que é em seguida fundido ao fragmento de anticorpo no término ou meio, por exemplo, por síntese de peptídeo de DNA ou peptídeo. Veja, por exemplo, WO 96/32478.

[0220] Em outras modalidades, modificações covalentes do anti corpo anti-IL-23p19 humanizado são também incluídas. As modificações covalentes incluem a modificação de resíduos de cisteinila, resíduos de histidila, resíduos de lisinila e terminal amino, resíduos de ar- ginila, resíduos de tirosila, grupos laterais de carboxila (aspartila ou glutamila), resíduos de glutaminila e asparaginila, ou serila, ou resíduos de treonila. Outro tipo de modificação covalente envolve glicosí- deos de química ao enzimaticamente acoplados ao anticorpo. Tais modifications podem ser feitas por síntese química ou por clivagem enzimática ou química do anticorpo, se aplicável. Outros tipos de mo-dificações covalentes do anticorpo podem ser introduzidos na molécula reagindo resíduos de aminoácido alvejados do anticorpo com um agente de derivação orgânico que é capaz de reagir com cadeias laterais selecionadas ou com resíduos de terminal amino ou carbóxi.

[0221] A remoção de quaisquer porções de carboidrato presentes no anticorpo pode ser realizada química ou enzimaticamente. A desglicoli- zação química é descrita Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52 e by Edge et al., 1981, Anal. Biochem., 118:131. A clivagem enzimática de porções de carboidrato em anticorpos pode ser obtida pelouso de uma variedade de endo- e exo-glicosidases como descrito por Thotakura et al., 1987, Met. Enzymol 138:350.

[0222] Outro tipo de modificação covalente útil compreende a liga ção do anticorpo a um de uma variedade de polímeros não proteiná- ceos, por exemplo, polietileno glicol, polipropileno glicol, ou polioxial- quilenos, da maneira estabelecida em uma ou mais de Patente dos Estados Unidos n° 4.640.835. Patente dos Estados Unidos n° 4.496.689. Patente dos Estados Unidos n° 4.301.144. Patente dos Estados Unidos n° 4.670.417. Patente dos Estados Unidos n° 4.791.192 e Patente dos Estados Unidos n° 4.179.337.

Variantes de Sequência de Aminoácido e Humanização

[0223] Variantes da sequência de aminoácido do anticorpo anti-IL- 23p19 podem ser preparados introduzindo-se mudanças de nucleotí- deo apropriadas no DNA de anticorpo anti-IL-23p19, ou por síntese de peptídeo. Tais variantes incluem, por exemplo, deleções de, e/ou in-serções em e/ou substituições de, resíduos dentro da sequência de aminoácidos dos anticorpos anti-IL-23p19 dos exemplos aqui. Qualquer combinação de deleções, inserções, e substituições é feita para chegar na construção final, contanto que a construção final possua as características desejadas. As mudanças de aminoácido também podem alterar os processos pós-translacionais do anticorpo anti-IL-23p19 variante ou humanizado, tais como mudaça do número ou posição de sítios de glicosilação.

[0224] Um método útil para identificação de certos resíduos ou re giões do anticorpo anti-IL-23p19 que são locações preferidas para mu- tagênese é chamado "mutagênese de varredura de alanina," como descrito por Cunningham e Wells (Science, 244:1081 -1085 (1989)). Aqui, um resíduo ou grupo de resíduos alvo são identificados (por exemplo, resíduos carregados tais como arg, asp, his, lys, e glu) e substituídos por aminoácido neutro ou negativamente carregado (tipicamente alanina) para afetar a interação dos aminoácidos com antíge- no IL-23p19. Aquelas locações de aminoácido demonstrando sensibilidade funcional às substituições em seguida são refinadas introduzindo mais ou outras variantes em, ou para, os sítios de substituição. Desse modo, ao mesmo tempo em que o sítio para introdução de uma variação de sequência de aminoácido é predeterminada, a natureza da mutação de per si, não necessita ser predeterminada. Por exemplo, para analisar o desempenho de uma mutação em um determinado sítio, mutagênese de varredura de alanina ou randômica é conduzida no códon ou região alvo e as variantes de anticorpo anti-IL-23p19 expressas são analisadas quanto à atividade desejada.

[0225] Inserções de sequência de aminoácido incluem fusões de terminal amino e/ou carboxila variando em comprimento de um resíduo a polipeptídeo contendo uma centena de ou mais resíduos, bem como inserções de intrassequência de resíduos de aminoácido simples ou múltiplos. Exemplos de inserções de terminal incluem um anticorpo anti-IL-23p19 fundido a um rótulo de epítopo. Outras variantes inserci- onais da molécula de anticorpo anti-IL-23p19 incluem uma fusão ao terminal N ou C do anticorpo anti-IL-23p19 de uma enzima ou um poli- peptídeo que aumenta a meia vida de soro do anticorpo.

[0226] Outro tipo de variante é uma variante de substituição de aminoácido. Estas variantes têm pelo menos um resíduo de aminoáci- do na molécula de anticorpo anti-IL-23p19 removido e um resíduo diferente inserido em seu lugar. Os sítios de maior interesse para mutagê- nese substitucional incluem as regiões hipervariáveis, porém alterações de FR também são contempladas. Substituições conservativas são mostradas na tabela 5 sob o título de "substituições preferidas". Se tais substituições resultarem em uma mudança na atividade biológica, então mudanças mais substanciais, denominadas "substituições exemplares”, ou como também descrito abaixo em referência às classes de aminoácido, poderão ser introduzidas e os produtos analisados. TABELA 8:

[0227] Em química de proteína, é geralmente aceito que as propri edades biológicas do anticorpo podem ser realizadas selecionando-se substituições que diferem em seu efeito sobre a manutenção (a) da estrutura do esqueleto de polipeptídeo na área da substituição, por exemplo, como uma conformação de folha ou helical, (b) da carga ou hidrofobicidade da molécula no sítio alvo, ou (c) do volume da cadeia lateral. Resíduos de ocorrência natural são divididos em grupos com base em propriedades de cadeia lateral comuns: (1) hidrofóbicos: norleucina, met, ala, val, leu, ile; (2) hidrofílicos neutros: cys, ser, thr; (3) acídicos: asp, glu; (4) básicos: asn, gin, his, lys, arg; (5) resíduos que influenciam a orientação de cadeia: gli, pro; e (6) aromáticos: trp, tyr, phe.

[0228] Substituições não conservativas implicarão permutar um membro de uma destas classes por outra classe.

[0229] Qualquer resíduo de cisteína não envolvido na conforma ção apropriada do anticorpo anti-IL-23p19 variante ou humanizado também pode ser substituído, geralmente com serina, para melhorar a estabilidade oxidativa da molécula, impedir a reticulação aberrante, ou fornecer pontos estabelecidos de conjugação a um composto citotóxi- co ou citostático. Contrariamente, ligação(ões) de cisteína pode ser adicionada ao anticorpo para melhorar sua estabilidade (particularmente onde o anticorpo é um fragmento de anticorpo tal como um fragmento de Fv).

[0230] Um tipo de variante substitucional envolve a substituição de um ou mais resíduos de região hipervariável de um anticorpo origem (por exemplo, um anticorpo humano ou humanizado). Geralmente, a variante(s) resultante selecionada para outro desenvolvimento terá propriedades biológicas melhoradas com relação ao anticorpo origem, do qual elas são geradas. Um modo conveniente para gerar tais variantes substitucionais é a maturação por afinidade utilizando exibição de fago. Resumidamente, diversos sítios de região hipervariável (por exemplo, 6 a 7 sítios) são mutados para gerar todas as possíveis substituições de amino em cada sítio. As variantes de anticorpo, desse modo geradas, são exibidas em um modelo monovalente de partículas de fago filamentosas como fusões ao produto de gene III de M13 embalado em cada partícula. As variantes exibidas por fago são em seguida analisadas quanto a sua atividade biológica (por exemplo, afinidade de ligação). A fim de identificar os sítios de região hipervariável candidata para modificação, mutagênese de varredura de alanina pode ser realizada para identificar os resíduos de região hipervariável contribuindo significantemente para a ligação de antígeno. Alternativamente, ou além disso, pode ser benéfico analisar uma estrutura cristal do complexo de antígeno-anticorpo para identificar os pontos de contato entre o anticorpo e IL-23p19 humano. Tais resíduos de contato e resíduos adjacentes são candidatos para substituição de acordo com as técnicas elaboradas aqui. Visto que tais variantes são geradas, o painel de variantes é submetido à análise como descrito aqui e anticorpos com propriedades superiores em um ou mais ensaios relevantes podem ser selecionados para outro desenvolvimento.

[0231] Outro tipo de variante de aminoácido do anticorpo altera o padrão de glicosilação original do anticorpo. Por "alterando" entende- se a deleção de uma ou mais porções de carboidrato encontradas no anticorpo, e/ou adição de um ou mais sítios de glicolisação que não estão presentes no anticorpo.

[0232] Em algumas modalidades, pode ser desejável modificar os anticorpos da invenção para aicionais sítios de glicosilação. A glicosi- lação de anticorpos é tipicamente ligada por N ou ligada por O. Ligada por N refere-se à ligação da porção de carboidrato à cadeia lateral de um resíduo de asparagina. As sequências de tripeptídeo asparagina- X-serina e asparagina-X-treonina, onde X é qualquer aminoácido, exceto prolina, são as sequências de reconhecimento para ligação enzi- mática da porção carboidrato à cadeia lateral de asparagina. Desse modo, a presence destas sequências de tripeptídeo em um polipeptí- deo cria um sítio de glicosilação potencial. A glicosilação ligada por O refere-se à ligação de um dos açúcares N-aceilgalactosamina, galactose, ou xilose a um ácido de hidroxiamino, mais comumente serina ou treonina, embora 5-hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina possam também ser utilizados. Desse modo, a fim de glicosilar uma determinada proteína, por exemplo, um anticorpo, a sequência de aminoácido da proteína é planejada para conter uma ou mais das sequências de tripeptídeo acima descritos (para sítios de glicosilação ligados por N). A alteração pode também seer feita pela adição de, ou substituição por, um ou mais resíduos de serina ou treonina à sequência do anticorpo original (para sítios de glicosilação por O).

[0233] Moléculas de ácido nucléico codificando variantes da se quência de aminoácido do anticorpo anti-IL-23p19 são preparadas por uma variedade de métodos conhecidos na técnica. Estes métodos incluem, porém não estão limitados ao isolamento de uma fonte natural (no caso de variantes da sequência de aminoácido de ocorrência natu ral) ou preparação por mutagênese mediada por oligonucleotídeo (ou direcionada ao sítio), mutagênese de PCR, e mutagênese de cassete de uma variante preparada anteriormente ou uma versão não variante do anticorpo anti-IL-23p19.

Polinucleotídeos, Vetores, Células Hospedeiras, e Métodos Recombi- nantes

[0234] Outras modalidades abrangem polinucleotídeos isolados que compreendem uma sequência codificando um anticorpo anti- IL23p19 humanizado, vetores, e células hospedeiras compreendendo os polinucleotídeos, e técnicas recombinantes para a produção do anticorpo humanizado. Os polinucleotídeos isolados podem codificar qualquer forma desejada do anticorpo anti-IL-23p19 incluindo, por exemplo, anticorpos monoclonais de tamanho natural, fragmentos de Fab, Fab', F(ab')2, e Fv, diacorpos, anticorpos lineares, moléculas de anticorpo de cadeia simples, e anticorpos multiespecíficos formados a partir dos fragmentos de anticorpo.

[0235] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados compreendendo sequências que codificam a região variável de cadeia leve de um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID N°: SEQ ID N°: 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 ou 119. Sequências de polinucleotídeos exemplares codificando tais sequências de aminoácido são SEQ ID N°: 83, 85, 87, 89, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116 e 118. Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados compreendendo sequências que codificam a região variável de cadeia pesada de um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 ou 156. Sequências de polinucleotídeos exemplares codificando tais sequências de aminoácido são SEQ ID N°: 120, 122, 124, 126, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153 ou 155.

[0236] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados compreendendo sequências que codificam a região variável de cadeia leve de um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID N°: 158, 160, 162 ou 164. Sequências de polinucleotídeos exemplares codificando tais sequências de aminoácido são SEQ ID N°: 157, 159, 161 ou 163. Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados compreendendo se-quências que codificam a região variável de cadeia pesada de um an-ticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 166, 168, 170 ou 172. Sequências de polinucleotídeos exemplares codificando tais sequências de aminoácido são SEQ ID N°: 165, 167, 169 ou 171.

[0237] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados compreendendo sequências que codificam uma cadeia leve de um an-ticorpo tendo a sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID N°: 174 ou 180. Sequências de polinucleotídeos exemplares codificando tais sequências de aminoácido são SEQ ID N°: 173 ou 179. Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados compreendendo sequências que codificam uma cadeia pesada de um anticorpo tendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 176 ou 178. Sequências de polinucleotídeos exemplares codificando tais sequências de aminoáci- do são SEQ ID N°: 175 ou 177.

[0238] Em um aspecto, a sequência(s) de polinucleotídeo isolado codifica um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo uma cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido s de SEQ ID N°: 174 e SEQ ID N°: 176, respectivamente; SEQ ID N°: 174 e SEQ ID N°: 178, respectivamente; SEQ ID N°: 180 e SEQ ID N°: 176, respectivamente; SEQ ID N°: 180 e SEQ ID N°: 178, respectivamente. Sequências de polinucleotídeos exemplares codificando tais sequências de aminoácido são SEQ ID N°: 173 e 175, respectivamente, SEQ ID N°: 173 e 177, respectivamente, SEQ ID N°: 179 e 175, respectivamente, SEQ ID N°: 179 e 177, respectivamente.

[0239] O polinucleotídeo(s) que compreende uma sequência codi ficando um anticorpo anti-IL23p19 humanizado ou um fragmento ou cadeia do mesmo pode ser fundido a uma ou mais sequências reglató- rias ou de controle, como conhecido na técnica, e pode ser contido em vetores de expressão adequados ou célula hospedeira como conhecido na técnica. Cada uma das moléculas de polinucleotídeo codificando os domínios variáveis de cadeia pesada ou leve pode ser independentemente fundida a uma sequência de polinucleotídeo codificando um domínio constante, tal como um domínio constante humano, permitindo a produção de anticorpos intactos. Alternativamente, polinucleotí- deos, ou porções dos mesmos, podem ser fundidos entre si, fornecendo um padrão para a produção de um anticorpo de cadeia simples.

[0240] Para a produção de recombinante, um polinucleotídeo codi ficando o anticorpo é inserido em um vetor replicável para clonagem (amplificação do DNA) ou para expressão. Muitos vetores adequados para expressão do anticorpo recombinante são disponíveis. Os componentes de vetor geralmente incluem, porém não estão limitados a um ou mais dos seguintes: uma sequência de sinal, uma origem de replicação, um ou mais genes marcadores, um elemento realçador, um promotor, e uma sequência de terminação de trnscrição.

[0241] Os anticorpos anti-IL-23p19 humanizados pode também ser produzidos como polipeptídeos de fusão, em que o anticorpo é fundido com um polipeptídeo heterólogo, tal como uma sequência de sinal ou outros polipeptídeo tendo um sítio de clivagem específico no terminal amino da proteína madura ou polipeptídeo. A sequência de sinal hete- róloga selecionada é tipicamente aquela que é reconhecida e proces- sada (isto é, clivada por uma peptidase de sinal) pela célula hospedeira. Para células hospedeiras procarióticas que não reconhecem ou processam a sequência de sinal de anticorpo anti-IL-23p19 humanizado, a sequência de sinal pode ser substituída por uma sequência de sinal procariótica. A sequência de sinal pode ser, por exemplo, fosfa- tase alcalina, penicilinase, lipoproteína, líderes de enterotoxina II estáveis ao calor, e similares. Para secreção de levedura, a sequência de sinal nativo pode ser substituída, por exemplo, com uma sequência líder obtida de alfa-fator de levedura invertase (incluindo líderes de α- fator Saccharomyces e Kluyveromyces), fosfatase ácida, C. albicans glucoamilase, ou o sinal descrito no WO90/13646. Em células mamíferas, sequências de sinal mamíferas bem como líderes secretórios virais, por exemplo, o sinal gD de herpes simples, pode ser utilizado. O DNA para tal região precursora é ligado em estrutura de leitura ao DNA codificando o anticorpo anti-IL-23p19 humanizado.

[0242] Vetores de expressão e clonagem contêm uma sequência de ácido nucléico que permite o vetor replicar-se em uma ou mais células hospedeiras selecionadas. Geralmente, em vetores de clonagem esta sequência é aquela que permite o vetor replicar-se independentemente do DNA cromossômico hospedeiro, e inclui origens de repli- cação ou sequências autonomamente replicantes. Tais sequências são bem conhecidas quanto a uma variedade de bactérias, levedura, e viroses. A origem de replicação do plasmídeo pBR322 é adequada quanto a maioria das bactérias Gram-negativas, a origem de plasmí- deo 2-°. é adequada quanto à levedura, e várias origens virais (SV40, polioma, adenovírus, VSV, e BPV) são úteis quanto aos vetores de clonagem em células mamíferas.

[0243] Geralmente, a origem do componente de replicação não é necessária quanto aos vetores de expressão mamíferos (a origem SV40 pode tipicamente ser utilizada apenas por que ela contém o promotor anterior).

[0244] Vetores de expressão e clonagem podem conter um gene que codifica um marcador selecionável para facilitar a identificação de expressão. Genes marcadores selecionáveis codificam proteínas que conferem resistência a antibióticos ou outras toxinas, por exemplo, ampicilina, neomicina, metotrexato, ou tetraciclina, ou alternativamente, são deficiências de auxotróficas de complemento, ou em outras al-ternativas fornecem nutrientes específicos que não estão presentes em meios complexos, por exemplo, o gene codificando D-alanina racemase quanto a Bacilli.

[0245] Um exemplo de um esquema de seleção utiliza um fármaco para interromper o crescimento de uma célula hospedeira. Aquelas células que são transformadas de forma bem sucedida com um gene heterólogo produzem uma proteína conferindo resistência ao fármaco e desse modo sobrevivem ao regime de seleção. Exemplos de tal se- leçõa dominante usam os fármacos neomicina, ácido micofenólico, e higromicina. Marcadores comuns selecionáveis para células mamíferas são aqueles que permitem a identificação de células competentes para apreender um ácido nucléico codificando um anticorpo anti- IL23p19 humanizado, tal como DHFR (diidrofolato reductase), timidina cinase, metalotioneína l e II (tal como genes de metalotioneína de primata), adenosina desaminase, ornitina decarboxilase, e similares. Células transformadas com o gene de seleção de DHFR são primieiro identificadas por cultura de todos os transformantes em um meio de cultura que contém metotrexato (Mtx), um antagonista competitivo de DHFR. Uma célula hospedeira apropriada quando DHFR do tipo selvagem é empregado é a linhagem de célula de ovário de hamster chinês (CHO) deficiente em atividade de DHFR (por exemplo, DG44).

[0246] Alternativamente, células hospedeiras (particularmente hospedeiras do tipo selvagem que contêm DHFR endógeno) transfor- madas ou cotransformadas com sequências de DNA codificando anticorpo anti-IL-23p19, proteína de DHFR do tipo selvagem, e outro marcador selecionável tal como aminoglicosídeo 3'-fosfotransferase (APH), podem ser selecionadas por crescimento de célula em meio contendo um agente de seleção quanto ao marcador selecionável tal como um antibiótico aminoglicosídico, por exemplo, canamicina, neo- micina, ou G418. Veja, por exemplo, Patente dos Estados Unidos n° 4.965.199.

[0247] Onde a produção recombinante é realizada em uma célula de levedura como uma célula hospedeira, o gene TRP1 presente no plasmídeo de levedura YRp7 (Stinchcomb et al., 1979, Nature 282: 39) pode ser utilizada como um marcador selecionável. O gene TRP1 fornece um marcador de seleção para uma linhagem mutantede levedura sem a capacidade de desenvolver-se no triptofano, por exemplo, ATCC No. 44076 ou PEP4-1 (Jones, 1977, Genetics 85:12). A presença da lesão de trpl no genoma de célula hospedeira de levedura em seguida fornece um ambiente eficaz para detecção de transformação por crescimento na ausência de triptofano. Similarmente, linhagens de levedura deficientes de Leu2p tais como ATCC 20.622 e 38.626 são complementados por plasmídeos conhecidos transportando o gene LEU2.

[0248] Além disso, vetores derivados do pKD1 de plasmídeo circu lar de 1,6 μm podem ser utilizados para transformação de leveduras de Kluyveromyces. Alternativamente, um sistema de expressão para produção de grande escala de quimosina de bezerro recombinante foi reportado quanto a K. lactis (Van den Berg, 1990, Bio/Technology 8:135). Vetores de expressão de múltiplas cópias estáveis quanto a secreção de albumina de soro humano recombinante maduro por linhagens industriais de Kluyveromyces também foram descritos (Fleer et al., 1991, Bio/Technology 9:968-975).

[0249] Vetores de expressão e clonagem geralmente contêm um promotor que é reconhecido pelo organismo hospedeiro e está opera- velmente ligado à molécula de ácido nucléico codificando um anticorpo anti-IL-23p19 ou cadeia de polipeptídeo dos mesmos. Promotores adequados para uso com hospedeiros procarióticos incluem promotor phoA, sistemas promotores de β-lactamase e lactose, sistema promotor de fosfatase alcalina, triptofano (trp), e promotores híbridos tal como o promotor de tac. Outros promotores bacterianos conhecidos são também adequados. Promotores ppara uso em sistemas bacterianos conterão uma sequência de Shine-Dalgarno (S.D.) operavelmente ligada ao DNA codificando o anticorpo anti-IL-23p19 humanizado.

[0250] Muitas sequências promotoras eucarióticas são conheci das. Virtualmente todos os genes eucarióticos têm uma região rica em AT localizada aproximadamente 25 a 30 bases a montante do sítio onde a transcrição é iniciada. Outra sequência encontrou 70 a 80 bases a montante do início da transcrição de muitos genes é uma região de CNCAAT onde N pode ser qualquer nucleotídeo. Na extremidade 3' da maioria dos genes eucarióticos é uma sequência AATAAA que pode ser o sinal para adição da cauda à extremidade 3' da sequência de codificação. Todas destas sequências são adequadamente inseridas em vetores de expressão eucarióticos.

[0251] Exemplos de adequados de sequências de promoção ade quados para uso com hospedeiros de levedura incluem os promotores para 3-fosfoglicerato cinase ou outras enzimas glicolíticas, tais como enolase, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase, hexocinase, piruvato descarboxilase, fosfofrutocinase, glicose-6-fosfato isomerase, 3- fosfoglicerato mutase, piruvato cinase, triosefosfate isomerase, fosfo- glicose isomerase, e glicocinase.

[0252] Promotores induzíveis têm a vantagem adicional de trans crição controlada por condições de crescimento. Estes incluem regiões promotoras de levedura quanto ao álcool desidrogenase 2, isocitocro- ma C, fosfatase ácida, enzimas derivadas associadas com metabolismo de nitrogênio, metalotioneína, gliceraldeído-3-fosfato desidroge- nase, e enzimas responsáveis pela utilização de maltose e galactose. Vetores e promotores adequados para uso na expressão de levedura são também descritos em EP 73.657. Realçadores de também são vantajosamente utilizados com promotores de levedura.

[0253] Transcrição de anticorpo anti-IL-23p19 humanizado de ve tores em células hospedeiras mamíferas é controlada, por exemplo, por promotores obtidos dos genomas de viroses tais como poliomaví- rus, vírus do epitelioma contagioso, adenovírus (tal como Adenovírus 2), vírus do papiloma bovino, vírus do sarcoma aviário, citomegaloví- rus, um retrovírus, vírus da hepatie B e Vírus 40 símio (SV40), de pro- matores mamíferos heterólogos, por exemplo, o promotor de actina ou um promotor de imunoglobulina, ou de promotores de choque calor, contanto que tais promotores sejam compatíveis com sistemas de célula hospedeira.

[0254] Os promotores precoces e tardios do vírus SV40 são con venientemente obtidos como um fragmento de restrição de SV40 que também contém a origem viral de SV40 de replicação. O promotor precoce imediato do citomegalovírus é convenientemente obtido como um fragmento de restrição de Hindi 11 E. Um sistema para expressão de DNA em hospedeiros mamíferos utilizando o papilomavírus bovino como um vetor é descrito na Patente dos Estados Unidos n° 4.419.446. Uma modificação deste sistema é descrita na Patente dos Estados Unidos n° 4.601.978. Veja também Reyes et al., 1982, Nature 297:598-601, descrevendo a expressão de cDNA de p-interferon humano em células de camundongo sob o controle de um promotor de timidina cinase de vírus da herpes simples. Alternativamente, o vírus de sarcoma Rous junto com a repetição terminal podem ser utilizados como o promotor.

[0255] Outro elemento útil que pode ser utilizado em um vetor de expressão recombinante é uma sequência de realçador, que é utilizada para aumentar a transcrição de um DNA codificando um anticorpo anti-IL23p19 humanizado por eucarióticos maiores. Muitas sequências de realçador são atualmente conhecidas de genes mamiferos (por exemplo, globina, elastase, albumina, a-fetoproteína, e insulina). Tipicamente, entretanto, um realçador de um vírus de célula eucariótica é utilizado. Exemplos incluem o realçador de SV40 no lado tardio da origem de replicação (bp 100-270), o realçador de promotor precoce de citomegalovírus, o realçador de polioma no lado tardio da origem de replicação, e realçadores de adenovírus. Veja também Yaniv, 1982, Nature 297:17-18 para uma descrição de elementos de realce para ativação de promotores eucarióticos. O realçador pode ser dividido no vetor na posição 5' ou 3' para a sequência codificando o anticorpo anti- IL-23p19 humanizado, porém está preferivelmente localizada em um sítio 5' do promotor.

[0256] Vetores de expressão utilizados em células hospedeiras eucarióticas (levedura, fungos, inseto, planta, animal, ou células nu- cleadas de outros organismos multicelulares) podem também conter sequências necessárias para a terminação de transcrição e para esta-bilização do mRNA. Tais sequências são comumente disponíveis das regiões não transladadas 5' e, ocasionalmente 3', de DNAs ou cDNAs virais ou eucarióticos. Estas regiões contêm segmentos de nucleotídeo transcritas como fragmentos poliadenilados na porção não transladada do mRNA codificando anticorpo anti-IL-23p19. Um componente de terminação de transcrição útil é a região de poliadenilação de hormônio de crescimento bovino. Veja o WO94/11026 e o vetor de expressão descrito aqui. Em algumas modalidades, anticorpos anti-IL-23p19 humanizados pode ser expressos usandoo sistema CHEF. (veja, por exemplo, Patente dos Estados Unidos n° 5.888.809; a descrição da qual é incorporada por referência aqui.)

[0257] Células hospedeiras adequadas para clonagem ou expres são de DNA nos vetores aqui são as células procariotas, leveduras, ou eucariotas superiores descritas acima. Procariotas adequados para este propósito incluem eubactérias, tais como organismos Gram- negativos ou Gram-positivos, por exemplo, Enterobacteriaceae tais como Escherichia, por exemplo, E.coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, por exemplo, Salmonella typhimurium, Serra- tia, por exemplo, Serratia marcescans, e Shigella, bem como Bacilli tal como B. subtilis e B. licheniformis (por exemplo, B. licheniformis 41 P descritos em DD 266.710 publicado em 12 de Abril de 1989), Pseudomonas tais como P.aeruginosa, e Streptomyces. Um hospedeiro de clonagem de E. coli é E. coli 294 (ATCC 31,446), embora outras linhagens tais como E. coli B, E. coli X1776 (ATCC 31,537), e E. coli W3110 (ATCC 27,325) sejam adequadas. Estes exemplos são ilustrativos em vez de limitantes.

[0258] Além dos micróbios procarióticos, eucarióticos tais como fungos filamentosos ou leveduras são hospedeiros de clonagem ou expressão adequados quanto aos vetores codificando o anticorpo anti- IL-23p19 humanizado. Saccharomyces cerevisiae, ou leveduras de baker comuns, é o mais comumente utilizado entre os microorganismos hospedeiros eucarióticos inferiores. Entretanto, diversos outros gêneros, espécies, e linhagens são comumente disponíveis e úteis aqui, tal como Schizosaccharomyces pombe; hospedeiros de Kluyveromyces tais como, por exemplo, K. lactis, K. fragilis (ATCC 12.424), K. bulgaricus (ATCC 16.045), K. wickeramii (ATCC 24.178), K. waltii (ATCC 56.500), K. drosophilarum (ATCC 36.906), K. thermo- tolerans, e K. marxianus; yarrowia (EP 402.226); Pichia pastors (EP 183,070); Candida; Trichoderma reesia (EP 244.234); Neurospora crassa; Schwanniomyces tais como Schwanniomyces occidentalis; e fungos filamentosos tais como, por exemplo, hospedeiros de Neuros- pora, Penicillium, Tolypocladium, e Aspergillus tais como A. nidulans e A. niger.

[0259] Células hospedeiras adequadas para a expressão de anti corpos humanizados anti-IL-23p19 glicosilados são derivados de orga-nismos multicelulares. Exemplos de células de invertebrado incluem células de planta e inseto, incluindo, por exemplo, numerosas variantes e linhagens baculovirais e correspondendo a células hospedeiras de inseto permissivo de hospedeiros tais como Spodoptera frugiperda (lagarta), Aedes aegypti (mosquito), Aedes albopictus (mosquito), Drosophila melanogaster (moscas-da-fruta), e Bombyx mori (bicho da seda). Uma variedade de linhagens virais para transfecção são está pub- lucamente disponível, por exemplo, a variante L-1 de Autographa cali- fornica NPV e a linhagem de Bm-5 de Bombyx mori NPV, e tais vírus podem ser utilizados, particularmente para transfecção de células Spodoptera frugiperda.

[0260] Culturas de célula de planta de algodão, milho, batata, soja, petúnia, tomate, e tabaco podem também ser utilizadas como hospedeiros. Em outro aspecto, a expressão de anti-IL-23p19 humanizado é realizada em células de vertebrado. A propagação de células vertebradas em cultura (cultura de tecido) tornou-se procedimento de rotina e técnicas são amplamente disponíveis. Exemplos de linhagens de célula hospedeira mamífera úteis são a linhagem de CV1 de rim de macaco transformada por SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651), linhagem de rim embriônico humana (células 293 ou 293 subclonadas para crescimento em cultura de suspensão, (Graham et al., 1977, J. Gen Virol. 36: 59), células de rim de hamster bebê (BHK, ATCC CCL 10), células de ovário de hamster chinês/-DHFR1 (CHO, Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216; por exemplo, DG44), célu- las Sertolis de camundongo (TM4, Mather, 1980, Biol. Reprod. 23:243251), células de rim de macaco (CV1 ATCC CCL 70), células de rim de macaco verde africano (VERO-76, ATCC CRL-1587), células de carcinoma cervicais humanas (HELA, ATCC CCL 2), células de rim caninas (MDCK, ATCC CCL 34), células de fígado de rato de búfalo (BRL 3A, ATCC CRL 1442), células de pulmão humano (W138, ATCC CCL 75), células de fígado humanas (Hep G2, HB 8065), tumor mamário de camundongo (MMT 060562, ATCC CCL51), células TR1 (Mather et al., 1982, Annals N.Y. Acad. Sci. 383: 44-68), células MRC5, células FS4, e linhagem de hepatoma humana (Hep G2).

[0265] Células hospedeiras são transformadas com os vetores de expressão ou clonagem acima descritos, para a produção de anticorpo anti-IL-23p19 humanizado, e cultivadas em meios de nutriente con-vencionais modificados como apropriado para indução de promotores, seleção de transformantes, ou amplificação dos genes codificando as sequências desejadas.

[0266] As células hospedeiras utilizadas para produzir um anticor po anti-IL23p19 humanizado descrito aqui podem ser cultivadas em uma variedade de meios. Meios comercialmente disponíveis tais como Ham's F10 (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, Mo.), Meio Essencial Mínimo ((MEM), (Sigma-Aldrich Co.), RPMI-1640 (Sigma-Aldrich Co.), e Meio de Eagle Modificado de Dulbecco ((DMEM), Sigma-Aldrich Co.) são adequados para cultura das células hospedeiras. Além disso, qualquer um dos meios descritos em um ou mais de Ham et al., 1979, Met. Enz. 58: 44, Barnes et al., 1980, Anal. Biochem. 102: 255, Patente dos Estados Unidos n° 4.767.704, Patente dos Estados Unidos n° 4.657.866, Patente dos Estados Unidos n° 4.927.762, Patente dos Estados Unidos n° 4.560.655, Patente dos Estados Unidos n° 5.122.469, WO 90/103430, e WO 87/00195 pode ser utilizado como meios de cultura para as células hospedeiras. Qualquer uma destes meios pode ser su- plementedado quando necessário com hormônios e/ou outros fatores de crescimento (tais como insulina, transferrina, ou fator de crescimento epidérmico), sais (tais como cloreto de sódio, cálcio, magnésio, e fosfato), tampões (tal como HEPES), nucleotídeos (tal como adenosi- na e timidina), antibióticos (tal como gentamicina), elementos de traço (definidos como compostos inorgânicos geralmente presentes nas concentrações finais na faixa micromolar), e glicose ou uma fonte de energia equivalente. Outros suplementos podem também ser incluídos em concentrações apropriadas que podem ser conhecidas por aqueles versados na técnica. As condições de cultura, tais como temperatura, pH, e similares, são aquelas anteriormente utilizadas com a célula hospedeira selecionada para expressão, e serão evidentes para o técnico versado.

[0267] Quando utilizando técnicas recombinantes, o anticorpo po de ser produzido intracelularmente, no espaço perisplásmico, ou dire-tamente secretado no meio. Se o anticorpo for produzido intracelularmente, as células poderão ser rompidas para liberar a proteína como uma primeira etapa. Resíduos particulados, células hospedeiras ou fragmentos lisados, podem ser removidos, por exemplo, por centrifugação ou ultrafiltração. Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167 descreve um procedimento quanto ao isolamento de anticorpos que são secretados ao espaço periplásmico de E. coli. Resumidamente, a pasta celular é descongelada na presença de acetato de sódio (pH 3.5), EDTA, e fenilmetilsulfonilfluoreto (PMSF) durante cerca de 30 minutos. Resíduos de célula podem ser removidos por centrifugação. Onde o anticorpo é secretado no meio, sobrenadantes de tais sistemas de expressão são geralmente primeiro concentrados utilizando um filtro de concentração de proteína comercialmente disponível, por exemplo, uma unidade de ultrafiltração Amicon ou Millipore Pellicon. Um inibidor de protease tal como PMSF pode ser incluído em qualquer uma das etapas anteriores para inibir a proteólise e antibióticos podem ser incluídos para impedir o crescimento de contaminantes adventícios. Uma variedade de métodos pode ser utilizada para isolar o anticorpo da célula hospedeira.

[0268] A composição de anticorpo preparada das células pode ser purificada utilizando, por exemplo, cromatografia de hidroxilapatita, eletroforese de gel, diálise, e cromatografia de afinidade, com croma- tografia de afinidade sendo uma técnica de purificação típica. A ade- quabilidade de proteína A como um ligante de afinidade depende da espécie e isotipo de qualquer dompinio de Fc de imunoglobulina que está presente no anticorpo. A proteína A pode ser utilizada para purificar anticorpos que são baseados cadeias pesadas humanas de gama 1, gama 2, ou gama 4 (veja, por exemplo, Lindmark et al., 1983 J. Immunol. Met. 62:1-13). A proteína G é recomendada para todos os isotipos de camundongo e para gama 3 humana (veja, por exemplo, Guss et al., 1986 EMBO J. 5:1567-1575). Uma matriz a qual um ligan- te de afinidade está ligado é mais frequentemente agarose, porém outras matrizes estão disponíveis. Matrizes mecanicamente estáveis tais como ou poli(estirenodivinil)benzeno ou de vidro de poro controlado fornece taxas de fluxos mais rápidas e tempo de processamentos mais curtos do que os que podem ser obtidos com agarose. Onde o anticorpo compreende um domínio de CH3, a resina de Bakerbond ABX™ (J. T. Baker, Phillipsburg, N.J.) é útil para purificação. Outras técnicas para purificação de proteína tais como fracionação em uma coluna de permuta de íon, precipitação de etanol, HPLC de fase reversa, croma- tografia em sílica, cromatografia em heparina SEPHAROSE™, croma- tografia em uma permuta de ânion ou cátion (tal como uma coluna de ácido poliaspártico), cromatofocalização, SDS-PAGE, e precipitação de sulfato de amônio são também disponíveis dependendo do anticorpo a ser recuperado.

[0269] Seguindo qualquer etapa(s) de purificação preliminar, a mistura compreendendo o anticorpo de interesse e contaminantes pode ser submetida à cromatografia de interação hidrofóbica de baixo pH utilizando um tampão de eluição em um pH entre cerca de 2,5 a 4,5, tipicamente realizada em concentrações de baixo sal (por exemplo, de cerca de 0 a 0,25 M de sal).

[0270] Também incluídos são ácidos nucléicos que se hibridizam sob condições de baixa, moderada, e elevada severidade, como definido aqui, em toda ou uma porção (por exemplo, a porção codificando a região variável) da sequência de nucleotídeo representada por se- quência(s) de polinucleotídeo isolado que codifica um anticorpo ou fragmento de anticorpo da presente invenção. A porção de hibridização do ácido nucléico hibridizante é tipicamente de pelo menos 15 (por exemplo, 20, 25, 30 ou 50) nucleotídeos em comprimento. A porção de hibridização do ácido nucléico hibridizante é de pelo menos 80%, por exemplo, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 98%, idêntica à sequência de uma porção ou toda de um ácido nucléico codificando um polipeptídeo anti-IL-23p19 (por exemplo, uma cadeia pesada ou região variável de cadeia leve), ou seu complemento. Ácidos nucléicos hibridizantes do tipo descrito aqui podem ser utilizados, por exemplo, como uma sonda de clonagem, um iniciador, por exemplo, um iniciador de PCR, ou uma sonda diagnóstica.

[0271] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de an-ticorpo tendo a sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID N°: 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 ou 119, e que é pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica às sequências de polinucleotídeo de SEQ ID N°: 83, 85, 87, 89, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116 ou 118.

[0272] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de an-ticorpo tendo a sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID N°: 158, 160, 162 ou 164, e que é pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica às sequências de polinucleotídeo de SEQ ID N°: 157, 159, 161 ou 163.

[0273] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de an-ticorpo tendo a sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID N°: 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 ou 156, e que é pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica às sequências de polinucleotídeo de SEQ ID N°: 120, 122, 124, 126, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153 ou 155.

[0274] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de an-ticorpo tendo a sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID N°: 166, 168, 170 ou 172, e que é pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica às sequências de polinucleotídeo de SEQ ID N°: 165, 167, 169 ou 171.

[0275] Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de an-ticorpo tendo a sequência de aminoácido de região variável de cadeia leve que é de pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica à sequência de amino- ácido de qualquer uma de SEQ ID N°: 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 ou 119. Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácido de região variável de cadeia leve que é de pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID N°: 158, 160, 162 ou 164. Algumas modalidades incluem poli- nucleotídeos isolados incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácido de região variável de cadeia pesada que é pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID N°: 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 ou 156. Algumas modalidades incluem polinucleotídeos isolados incluindo sequências que codificam um anticorpo ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácido de região variável de cadeia pesada que é pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácido de qualquer uma de SEQ ID N°: 166, 168, 170 ou 172. Como utilizado aqui, os termos "idêntica" ou "identidade em porcentagem", em relação a dois ou mais ácidos nucleicos ou sequências de polipeptídeo, referem-se a duas ou mais sequências ou subsequências que são iguais ou têm uma porcentagem específica de nucleotídeos ou resíduos de aminoácido que são iguais, quando comparados e alinhados para correspondência máxima. Para determinar a identidade em porcentagem, as sequências são alinhadas para propósitos de comparação (por exemplo, espaços vazios podem ser introduzidos na sequência de uma primeira sequência de aminoácido ácido nucleico para alinhamento ideal com uma segunda sequência de ácido nucleico ou aminoácido). Os resíduos de aminoácido ou nucleotídeos em posições de nucleotídeo ou posições de aminoácido correspondentes são então comparadas. Quando uma posição na primeira sequência é ocupada pelo mesmo resíduo de aminoácido ou nucleotídeo que a po sição correspondente na segunda sequência, então as moléculas são idênticas na posição. O percentual de identidade entre as duas sequências é uma função do número de posições idênticas compartilhado pelas sequências (isto é, % de identidade=# de posições idênti- cas/total # de posições (por exemplo, posições de sobreposição)x100). Em algumas modalidades, as duas sequências que são comparadas são do mesmo comprimento após espaços vazios serem introduzidos nas sequências, quando apropriado (por exemplo, excluindo sequência que se estende além das sequências sendo comparadas). Por exemplo, quando sequências de região variáveis são comparadas, o líder e/ou sequências de domínio constantes não são consideradas. Para comparações de sequência entre as duas sequências, uma CDR "correspondente" refere-se a uma CDR no mesmo local em ambas as sequências (por exemplo, CDR-H1 de cada sequência).

[0276] A determinação da identidade em porcentagem ou similari dade em porcentagem pode ser acompanhada utilizando um algoritmo matemático. Um exemplo não limitante, preferido, de um algoritmo ma-temático utilizado para a comparação de duas sequências é o algoritmo de Karlin e Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:22642268, modificado como em Karlin e Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877. Tal algoritmo é incorporado nos programas de N BLAST e XBLAST de Altschul e outro, 1990, J. Mol. Biol. 215:403410. As pesquisas de nucleotídeo de BLAST podem ser realizadas com o programa N BLAST, escore = 100, tamanho da unidade de informação básica = 12, para obter sequências de nucleotídeo homólogas a um ácido nucléico que codifica uma protepina de interesse. As pesquisas de proteína de BLAST podem ser determinadas com o programa XBLAST, escore = 50, tamanho da unidade de informação básica = 3, para obter sequências de aminoácido homólogas à proteína de interesse. Para obter alinhamentos espacejados com propósitos de comparação, Gapped BLAST pode ser utilizado como descrito no Al- tschul e outro, 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402. Alternativamente, PSI-Blast pode ser utilizado para realizar uma pesquisa interada que detecte os relacionamentos distantes entre as moléculas (Id.). Ao se utilizar os programas BLAST, Gapped BLAST, e PSI-Blast, os parâmetros básicos dos respectivos programas (por exemplo, XBLAST e NBLAST) podem ser utilizados. Outro exemplo não limitante, preferido, de um algoritmo matemático utilizado para a comparação de sequências é o algoritmo de Myers e Miller, CABIOS (1989). Tal algoritmo é incorporado no programa ALIGN (versão 2.0) que é parte do pacote de software de alinhamento de sequência GCG. Ao se utilizar o programa ALIGN para comparação de sequências de aminoácido, uma tabela de resíduo de peso de PAM120, uma penalidade de extensão de espaço vazio de 12, e uma penalidade de espaço vazio de 4 podem ser utilizadas. Os algoritmos adicionais para análise de sequência são conhecidos na técnica e incluem ADVANCE e ADAM como descrito em Torellis e Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5; e FASTA descrito em Pearson e Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444-8. Dentro do FASTA, ktup é uma opção de controle que apresenta a sensibilidade e a velocidade da pesquisa. Se o ktup = 2, as regiões similares nas duas sequências sendo comparadas serão encontradas olhando-se os pares de resíduos alinhados; Se o ktup = 1, os aminoácidos alinhados únicos serão examinados, o ktup poderá ser fixado em 2 ou 1 para sequências de proteína, ou de 1 a 6 para sequências de DNA. O padrão, se ktup não for especificado, será 2 para as proteínas e 6 para o DNA. Alternativamente, o alinhamento de sequência de proteína pode ser realizado utilizando o algoritmo de CLUSTAL W, como descrito por Higgins, e outro, 1996, Metods Enzymol. 266:383-402.

Usos Não Terapêuticos

[0277] Os anticorpos descritos aqui são úteis como agentes de purificação por afinidade. Neste processo, os anticorpos são imobilizados em uma fase sólida tal como uma resina de Proteína A, utilizando métodos bem conhecidos na técnica. O anticorpo imobilizado e colocado em contato com uma amostra contendo a proteína IL-23p19 (ou fragmento dos mesmos) ser purificado, e, após isso, o suporte é lavado com um solvente adequado que removerá substancialmente todo o material na amostra, exceto a proteína IL-2319, que é ligada ao anticorpo imobilizado. Finalmente, o suporte é lavado com outro solvente adequado que liberará a proteína IL-23p19 do anticorpo.

[0278] O anticorpo anti-IL-23p19s, por exemplo, anticorpos anti-IL- 23p19 humanizados, são também úteis em ensaios diagnósticos para detectar e/ou quantificar a proteína IL-23, por exemplo, detectando a expressão de IL-23 em células, tecidos, ou soro específicos. Os anti-corpos anti-IL-23p19 podem ser utilizados diagnosticamente para, por exemplo, monitorar o desenvolvimento ou progressão de uma doença como parte de um procedimento de teste clínico, por exemplo, determinar a eficácia de um determinado tratamento e/ou regime de prevenção. A detecção pode ser facilitada acoplando-se o anticorpo anti- IL-23p19. Os exemplos de substâncias detectáveis incluem várias enzimas, grupos prostéticos, materiais fluorescentes, materiais lumiscen- tes, materiais bioluminescentes, materiais radioativos, metais de emissão de posítron utilizando várias tomografias de emissão de posítron, e íons de metal paramagnéticos não radioativos. Veja, por exemplo, a Patente dos Estados Unidos n° 4.741.900 para íons de metal que podem ser conjugados com anticorpos para uso como diagnóstico de acordo com a presente invenção.

[0279] Os anticorpos anti-IL-23p19 podem ser utilizados em méto dos para diagnosticar um distúrbio associado com IL-23 (por exemplo, um distúrbio caracterizado por expressão anormal de IL-23) ou para determinar se um paciente tiver um risco aumentado de desenvolver um distúrbio associado com IL-23. Tais métodos incluem conter uma amostra biológica de um paciente com um anticorpo IL-23p19 e detector a ligação do anticorpo à IL-23p19. Por "amostra biológica" entende- se qualquer amostra biológica obtida a partir de um indivíduo, cepa celular, cultura de tecido, ou outra fonte de células potencialmente expressando IL-23. Os métodos para obter biópsias de tecido e fluidos corporais de mamíferos são bem conhecidos na técnica.

[0280] Em algumas modalidades, o método pode também com preender a comparação do nível de IL-23 em uma amostra de paciente a uma amostra de controle (por exemplo, um paciente que não têm um distúrbio associado com IL-23) para determinar se o paciente tem um distúrbio associado com IL-23 ou está em risco de desenvolver um dis-túrbio associado com IL-23.

[0281] Será vantajoso em algumas modalidades, por exemplo, pa ra fins de diagnóstico rotular o anticorpo com uma porção detectável. Vários rótulos detectáveis são disponíveis, incluindo radioisótopos, rótulos fluorescentes, rótulos de substrato de enzima e similares. O rótulo pode ser indiretamente conjugado com o anticorpo utilizando várias técnicas conhecidas.

[0282] Por exemplo, o anticorpo pode ser conjugado com biotina e qualquer das três amplas categorias dos rótulos mencionados acima pode ser conjugado com avidina, ou vice versa. A biotina liga-se seletivamente à avidina e, desse modo, o rótulo pode ser conjugado com o anticorpo desta maneira direta. Alternativamente, para obter conjugação indireta do rótulo com o anticorpo, o anticorpo pode ser conjugado com um hapteno pequeno (tal como digoxina) e um dos tipos diferentes de rótulos mencionados acima é conjugado com um anticorpo anti- hapteno (por exemplo, anticorpo antidigoxina). Desse modo, a conju- gação indireta do rótulo com o anticorpo pode ser obtida.

[0283] Os rótulos radioisótopos exemplares incluem 35S, 14C, 125l, 3H, e 13I. O anticorpo pode ser rotulado com o radioisótopo, utilizando as técnicas descritas em, por exemplo, Current Protocols in Immunology, volumes 1 e 2, 1991, Coligen e outro, Edição Wiley-lnterscience, Nova Iorque, N.Y., Pubs. A radioatividade pode ser medida, por exemplo, por contagem de cintilação.

[0284] Os rótulos fluorescents exemplares incluem rótulos deriva dos de quelatos terrosos raros (quelatos de európio) ou fluorosceína e seus derivados, rodamina e seus derivados, dansil, Lissamina, ficoeri- trina, e Texas Red são disponíveis. Os rótulos fluorescentes podem ser conjugados com o anticorpo por meio de técnicas, tais como aquelas descritas no Current Protocols in Immunology, por exemplo. A fluo-rescência ode ser quantificada utilizando um fluorímetro.

[0285] Existem vários rótulos de substrato de enzima bem caracte rizados conhecidos na técnica (veja, por exemplo, Patente dos Estados Unidos n° 4.275.149 para uma revisão). A enzima, geralmente, catalisa uma alteração química do substrato cromogênico que pode ser medido utilizando várias técnicas. Por exemplo, a alteração pode ser uma mudança de cor em um substrato que pode ser medido es- pectofotometricamente. Alternativamente, a enzima pode alterar a fluo-rescência ou quimioluminescência do substrato. As técnicas para quantificar uma mudança em fluorescência são descritas acima. O substrato quimioluminescente torna-se eletronicamente excitado por uma reação química e pode em seguida emitir luz que pode ser medida, utilizando um quimioluminômetro, por exemplo, ou indicar energia para um aceitador fluerescente.

[0286] Os exemplos de rótulos emnzimáticos incluem luciferases tais como vaga-lume luciferase e luciferase bacteriano (Patente dos Estados Unidos n° 4.737.456), luciferina, 2,3-diidroftalazinedionas, ma- lato desidrogenase, urease, peroxidase tais como rábano picante pe-roxidase (HRPO), fosfatase alcalina, β-galactosidase, glucoamilase, lisozima, sacarídeo oxidases (tal como glicose oxidase, galactose oxi-dase, e glicose-6-fosfato desidrogenase), oxidases heterocídicas (tais como uricase e xantina oxidase), lactoperoxidase, microperoxidase, e similares. As técnicas para conjugar enzimas com anticorpos são des-critas, por exemplo, no O'Sullivan, e outro, 1981, Metods for the Prepa-ration of Enzyme-Anticorpo Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Metods in Enzym. (J. Langone & H. Van Vunakis, edições), Academic press, N.Y., 73: 147-166.

[0287] Os exemplos de combinações de substrato de enzima in cluem, por exemplo: Rábano picante peroxidase (HRPO) com peroxidase de hidrogênio como um substrato, em que a peroxidase de hidrogênio oxida um precursor de corante tal como ortofenileno diamina (OPD) ou cloridrato de 3, 3', 5,5'-tetrametil benzidina (TMB); fosfato alcalino (AP) com fosfato de para-Nitrofenila como substrato cromogê- nico; e β-D-galactosidase (β-D-Gal) com um substrato cromogênico tal como p-nitrofenil- -D-galactosidase ou substrato fluorogênico 4- metilumbelliferil- -D-galactosidase.

[0288] Várias outras combinações de substrato de enzima estão disponíveis por aqueles versados na técnica. Para uma revisão geral destas, veja a Patente dos Estados Unidos n° 4.275.149 e a Patente dos Estados Unidos n° 4.318.980.

[0289] Em outra modalidade, o anticorpo anti-IL-23p19 humaniza do é utilizado não rotulado e detectado com cum anticorpo rotulado que se liga ao anticorpo anti-IL-23p19 humanizado.

[0290] Os anticorpos descritos aqui podem ser empregados em qualquer método de ensaio conhecido, tais como os ensaios de ligação competitivos, ensaios sanduíche diretos e indiretos, e ensaios imunoprecipitação. Veja, por exemplo, Zola, monoclonal antibodies: A Manual of Techniques, páginas 147 a 158 (CRC Press, Inc. 1987).

[0291] O anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antí- geno dos mesmos pode ser utilizado para inibir a ligação de IL-23 ao receptor de IL-23. Tais métodos compreendem administrar um anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno dos mesmos a uma célula (por exemplo, uma célula de mamífero) ou ambiente celular, segundo o qual a sinalização mediada pelo receptor de IL-23 é inibida. Estes métodos podem ser realizados in vitro ou in vivo. Por "ambiente celular" entende-se o tecido, meio, ou matriz extracelular que circundam uma célula. O anticorpo anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo é administrado ao ambiente celular de uma célula de tal maneira que o anticorpo ou fragmento seja capaz de se ligar às moléculas de IL-23 fora da e circundante à célula, consequentemente, prevenindo a ligação de IL-23 a seu receptor.

Kits Diagnósticos

[0292] Um anticorpo anti-IL-23p19 pode ser utilizado em um kit diagnóstico, isto é, uma combinação embalada de reagentes em quan-tidades predeterminadas com instruções para realizar o ensaio diag-nóstico. Onde o anticorpo é rotulado com uma enzima, o kit pode incluir substratos e cofatores requeridos pela enzima tal como um precursor de substrato que fornece o cromóforo ou fluoróforo detectável. Além disso, outros aditivos podem ser incluídos tais como estabilizadores, tampões (por exemplo, um tampão de bloqueio ou tampão de lise), e similares. As quantidades relativas dos vários agentes podem ser amplamente para fornecer concentrações em solução dos reagentes que substancialmente otimizam a sensibilidade da atividade. Os reagentes podem ser fornecidos como pós secos, geralmente liofilizados, incluindo excipientes que na solução fornecerão uma solução reagente tendo a concentração apropriada.

Usos Terapêuticos

[0293] Em outra modalidade, um anticorpo anti-IL23p19 humani zado descrito aqui é útil no tratamento de vários distúrbios associados com a expressão de IL-23p19 como descrito aqui. Os métodos para tratamento de um distúrbio associado com IL-23 compreendem administrar a quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti- IL23p19 humanizado a um indivíduo em necessidade do mesmo.

[0294] O anticorpo ou agente anti-IL-23p19 humanizado é adminis trado por um meio adequado, incluindo parenteral, subcutâneo, intra-peritoneal, intrapulmonar, e intranasal, e, se desejado para tratamento imunossupressor, administração intralesional (incluindo perfusão ou, de outro modo, contatando o enxerto com o anticorpo antes do transplante). O anticorpo ou agente anti-IL-23p19 humanizado pode ser administrado, por exemplo, como uma infusão ou como um bolo. As infusões parenterais incluem administração intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, ou subcutânea. Além disso, o anticorpo anti-IL-23p19 humanizado é adequadamente administrado por infusão de pulso, particularmente com declinação das doses do anticorpo. Em um aspecto, a dosagem é fornecida por injeções, mais preferivelmente injeções intravenosas ou subcutâneas, dependendo em parte de se a administração é breve ou crônica.

[0295] Para a prevenção ou tratamento de doença, a dosagem apropriada de anticorpo dependerá de uma variedade de fatores tais como do tipo de doença a ser tratada, como definido acima, da gravidade e decorrer da doença, se o anticorpo for administrado com fins preventivos ou terapêuticos, terapia anterior, do histórico clínico do paciente e resposta do anticorpo, e da discrição do medico assistente. O anticorpo é adequadamente administrado ao paciente de uma vez ou durante uma série de tratamentos.

[0296] Dependendo do tipo e gravidade da doença, cerca de 1 μg/kg a 20 mg/kg (por exemplo, 0,1 a 15 mg/kg) de anticorpo é uma dosagem inicial candidata para administração ao paciente, se, por exemplo, por uma ou mais administrações separadas, ou por infusão contínua. Uma dosagem diária típica ode variar de cerca de 1 pg/kg a 100 mg/kg ou mais, dependendo dos fatores mencionados acima. Para administrações repetidas durante vários dias ou mais longas, dependendo da condição, o tratamento é prolongado até uma supressão desejada de sintomas da doença ocorrer. Entretanto, outros regimes de dosagem podem ser úteis. O progresso desta terapia é facilmente monitorado por técnicas e ensaios convencionais. Um regime de dosagem exemplar é aquele descrito no WO 94/04188.

[0297] O termo "supressão" é utilizado aqui no mesmo contexto como "melhora" e "alívio" para significar uma redução de uma ou mais características da doença.

[0298] A composição de anticorpo será formulada, dosada e admi nistrada em um modelo consistente com a boa prática médica. Os fatores para consideração neste contexto incluem o distúrbio particular que está sendo tratado, o mamífero particular que está sendo tratado, a condição clínica do paciente individual, o sítio de liberação do agente, o método de administração, a posologia de administração, e outros fatores conhecidos por clínicos médicos. A "quantidade terapeutica- mente eficaz" do anticorpo a ser administrada será controlada por tais considerações, e é a quantidade mínima necessária para prevenir, melhorar, ou tratar o distúrbio associado com expressão de IL-23.

[0299] O anticorpo não necessita ser, porém é opcionalmente, formulado com um ou mais agentes atualmente utilizados para prevenir ou tratar o distúrbio em questão. A quantidade eficaz de tais agentes depende da quantidade de anticorpo anti-IL-23p19 humanizado presente na formulação, do tipo de distúrbio ou tratamento, e outros fatores descritos acima. Estes são geralmente utilizados nas mesmas dosagens e com rotinas de administração como utilizado aqui anteri- ormente ou cerca de 1 a 99% das dosagens empregadas aqui anteri-ormente.

Distúrbios Associados com IL-23

[0300] Os anticorpos anti-IL-23p19 ou agentes são úteis para o tratamento de ou prevenção de um distúrbio imunológico caracterizado por expressão anormal de IL-23, por exemplo, por ativação inapropria- da de células imunes (por exemplo, linfócitos ou células dendríticas). Tal expressão anormal de IL-23 pode ser devido aos, por exemplo, níveis de proteína de IL-23 aumentados. Os anticorpos anti-IL-23p19 ou fragmento de ligação de antígenos dos mesmos também encontram uso no tratamento ou prevenção de distúrbios respiratórios, distúrbios metabólicos, por exemplo, diabetes melito, e certos cânceres. Tratamento ou prevenção do distúrbio imunológico, distúrbio respiratório, distúrbio metabólico ou câncer, de acordo com os métodos descritos aqui, é obtido administrando-se a um indivíduo em necessidade de tal tratamento ou prevenção uma quantidade eficaz de o anticorpo an- ti-IL-23p19 ou agente, desse modo o anticorpo diminui a atividade de IL-23 associado com um estado de doença.

[0301] Doenças imunológicas que são caracterizadas por ativação inapropriada de células imunes e que podem ser tratadas ou impedidas pelos métodos descritos aqui podem ser classificadas, por exemplo, pelo tipo(s) de reação(s) de hipersensibilidade que sustentam o distúrbio. Estas reações são tipicamente classificadas em quarto tipos: reações anafiláticas, reações citotóxicas (citolítica), reações de complexo imune, ou reações de imunidade mediada por célula (CMI) (também referidas como reações de hipersensibilidade do tipo retardado (DTH)). (veja, por exemplo, Fundamental Immunology (William E. Paul ed., Raven Press, N.Y., 3a edição 1993).) Doenças imunológicas in- clurm doenças inflamatórias e doenças autoimune.

[0302] Exemplos específicos de doenças imunológicas incluem as seguintes: artrite reumatoide, doenças autoimunes desmielinativas (por exemplo, esclerose múltipla, encefalomielite alérgica), oftalmopa- tia endócrina, uveoretinite, lúpus sistêmico eritematoso, miastenia grave, doença de Grave, glomerulonefrite, distúrbio hepatológico autoi- mune, doença inflamatória do intestino (por exemplo, doença de Crohn ou colite ulcerativa), anafilaxia, reação alérgica, síndrome de Sjogren, diabetes melito tipo I, cirrose biliar primária, granulomatose de Wegener, fibromialgia, polimiositose, dermatomiosite, miosite inflamatória, deficiência endócrina múltipla, síndrome de Schmidt, uveíte autoimu- ne, doença de Addison, adrenalite, tiroidite, tireoidite de Hashimoto, doença de tiroide autoimune, anemia perniciosa, atrofia gástrica, hepatite crônica, hepatite lupoide, aterosclerose, lúpus eritematoso cutâneo subagudo, hipoparatyroidismo, síndrome de Dressler, trombocitopenia autoimune, púrpura trombocitopênica idiopática, anemia hemolítica, pênfigo vulgar, pênfigo, dermatite herpetiforme, alopecia areata, penfi- goide, escleroderma, esclerose sistêmica progressiva, síndrome de CREST (calcinose, fenômeno de Raynaud, dismotilidade esofágica, esclerodactil), e telangiectasia), infertilidade autoimune masculina e feminina, espondolite anquilosante, colite ulcerativa, doença do tecido conectivo misto, poliarterite nedosa, vasculite necrosante sistêmica, dermatite atópica, rinite atópica, síndrome de Goodpasture, doença de Chagas, sarcoidose, febre reumática, asma, aborto recorrente, sín- drome anti-fosfolipídio, pulmão do fazendeiro, eritema multiforme, sín- drome pós cardiotomia, síndrome de Cushing, hepatite ativa autoimu- ne crônica, pulmão da ave columbófilo, necrólise epidérmico tóxico, síndrome de Alport, alveolite, alveolite alérgica, alveolite fibrosante, doença pulmonar intersticial, eritema nodoso, pioderma gangrenoso, reação de transfusão, artrite de Takayasu, polimialgia reumática, arterite temporal, esquistosomiase, arterite de célula gigante, ascariase, aspergilose, síndrome de Sampter, eczema, granulomatose linfoma- toide, doença de Behcet, síndrome de Caplan, doença de Kawasaki (também conhecida como síndrome de Kawasaki ou síndrome de lin- fonodo mucocutâneo), dengue, encefalomielite, endocardite, fibrose endomiocardial, endoftalmite, eritema elevatum et diutinum, psoríase, artrite psoriática, eritroblastose fetal, faciíte eosinofílica, síndrome de Shulman, síndrome de Felty, filariase, ciclite, ciclite crônica, ciclite he- terocrônica, ciclite de Fuch, nefropatia de IgA, púrpura Henoch- Schonlein, doença do hospedeiro versus enxerto, rejeição de transplante, cardiomiopatia, síndrome de Eaton-Lambert, policondrite reincidente, crioglobulinemia, macroglobulemia de Waldenstrom, síndrome de Evan, síndrome de angústia respiratória aguda, inflamação pulmonar, osteoporose, hipersensibilidade do tipo retardado e insuficiência gonadal autoimune.

[0303] Em um aspecto, a doença imunológica é psoríase. Psoríase é uma doença inflamatória crônica da pele caracterizada por hiperproli- feração e diferenciação de ceratinócito disfuncional e acúmulo acentuado de células T inflamatórias e células dendríticas. Por exemplo, a doença imunológica inclui psoríase de plaqueta, por exemplo, psoríase de plaqueta crônica, por exemplo, psoríase de plaqueta crônica moderada a grave, por exemplo, em pacientes que são candidatos para terapia sistêmica ou fototerapia. Por exemplo, a doença imunológica inclui psoríase pustular palmar, psoríase gutata, psoríase inversa, psorí- ase pustular ou psoríase eritodérmica.

[0304] Em um outro aspecto, a doença imunológica é doença de Crohn. Doença de Crohn (CD) é uma doença inflamatória do intestino caracterizada por lesões inflamatórias transmural crônicas na barreira epitelial gastrointestinal e mucosa. CD pode afetar qualquer sítio dentro do trato Gl, mais frequentemente o terminal íleo. CD tipicamente segue um curso reincidente e remitente e causa morbidez a longo prazo substancial aguda e mortalidade aumentada. Pacientes frequente- mente desenvolvem complicações locais (por exemplo, fístulas, abs-cessos), complicações sistêmicas (por exemplo, uveíte, artrite), ou efeitos de tratamento, e podem requerer maior cirurgia. Aproximadamente um terço dos pacientes se inclui em cada uma das catgorias de doença branda, moderada e grave. Pacientes com doença de Crohn moderada à grave têm enfermidade debilitante com características clínicas tais como dor abdominal, diarreia, formção de abscessos, e fístulas.

[0305] Em um outro aspecto, a doença imunológica é espondiloar- trite. Em um outro aspecto, a doença é espondilite anquilosante (também chamada espondiloartrite radiográfica).

[0306] Espondilite anquilosante (AS; espondiloartrite axial radio- gráfica) é a forma prototípica da espondiloartritides (SpA). Ela é uma doença reumatológica incidiosa incapacitante que é mais comum entre homens do que mulheres e afeta indivíduos jovens; em 80% dos paci-entes, o início de sintomas ocorre em menos do que 30 anos de idade. É caracterizada por um componente inflamatório que contribui para o Escore de Atividade de Espondilite Anquilosante (ASAS) que é utilizado como uma medição de melhora nos estudos de tratamento. Adicionalmente, crescimento anormal ósseo na formação de esporões ósseos (sindesmofitos) visíveis em radiografias planas acompanhadas por rigidez espinhal aumentada, finalmente induzidndo à ancilose esquelética e deformidades vertebrais. Em um outro aspecto, a doença imunológica é espondiloartrite axial radiográfica. Em espondiloartrite axial radiográfica (nrSpA), uma entidade mais recentemente definida do que AS, é considerada representar uma manifestação precoce dos mesmos processos patológicos como AS, embora seja crescentemente reconhecido que alguns pacientes (particularmente mulheres) podem não progredir para doença radiográfica, e podem, portanto, ser considerados ter um subtipo distinto desta doença. Em um outro as- pecto, a doença é espondiloartrite periférica. Espondiloartrite periférica pode ser definida pela presence de artrite, entesite, ou dactilite, com pelo menos uma característica de SpA 'específica' (psoríase, doença inflamatória do intestino, infecção precedente, HLA-B27, uveíte, sacroi- liíte em imageamento) ou pelo menos duas das características de SpA restantes (artrite, entesite, dactilite, dor dorsal inflamatória no passado, histórico familiar positivo quanto à SpA). Esta definição é, por exemplo, utilizada por ASAS (Sociedade de Investigação de Espondiloartrite de Associação), veja também, por exemplo, Carron P. et al. (Curr Opinion Rheumatol 2012; 24: 370-4).

[0307] Em algumas modalidades, o distúrbio imunológico é um dis túrbio imunológico mediado por célula T e consequentemente, os anti-corpos anti-IL-23p19 e agentes como descritos aqui são também úteis para o tratamento de ou prevenção de distúrbios imunológicos mediados por célula T.

[0308] Em um aspecto, os anticorpos anti-IL-23p19 ou agentes são úteis para o tratamento ou prevenção de um distúrbio respiratório em que IL-23 é anormalmente expresso. O tratamento ou prevenção do distúrbio respiratório, de acordo com os métodos descritos aqui, é obtido administrando-se a um indivíduo em necessidade de tal tratamento ou prevenção, uma quantidade eficaz do anticorpo anti-IL- 23p19 ou agente, desse modo o anticorpo diminui a atividade de IL-23 associado com um estado de doença. Estes incluem, porém não estão limitados a: enfermidades respiratórias, doenças pulmonares obstrutivas de várias origens, enfisema pulmonar de várias origens, doenças pulmonares restritivas, doenças pulmonares intersticiais, fibrose cística, bronquite de várias origens, bronquiectase, ARDS (síndrome a angústia respiratória adulta) e todas as formas de edema; doenças pulmonares obstrutivas selecionadas dentre COPD (doença pulmonar obstrutiva crônica), asma, asma brônquica, asma pediátrica, asma grave, ataque de asma aguda e bronquite crônica; enfisema pulmonar que tem sua origem em COPD (doença pulmonar obstrutiva crônica) ou deficiência de inibidor de α1-proteinase; doenças pulmonares restritivas selecionadas dentre alveolite alérgica, doenças pulmonares restritivas causadas por substâncias nocivas relacionadas com o trabalho, tais como asbestose ou silicose, e restrição causada por tumores pulmonares, tais como linfangioses carcinomatosa, carcinoma broncoal- veolar e linfomas; pneumonia causada por infecções, tais como, por exemplo, infecção por viroses, bactérias, fungos, protozoários, helmín- ticos ou outros patógenos, pneumonite causada por vários fatores, tais como, por exemplo, aspiração e insuficiência cardíaca esquerda, pneumonite induzida por radiação ou fibrose, colagenoses, tais como, por exemplo, lúpus eritematoso, escleroderma sistêmico ou sarcoido- se, granulomatoses, tais como, por exemplo, doença de Boeck, pneumonia intersticial idiopática ou fibrose pulmonar idiopática (IPF); muco- viscidose, bronquite causada por infecção bacteriana ou viral, bronquite alérgica e bronquite tóxica; bronquiectase; edema pulmonar, por exemplo, edema pulmonar tóxico após aspiração ou inalação de substâncias tóxicas e substâncias estranhas; rinite, artrite e artropatias relacionadas, psoríase, leucemia mieloide, esclerose múltipla, doença de Alzheimer, glomerulonefrite, e dermatite atópica crônica.

[0309] Em outro aspecto, os anticorpos anti-IL-23p19 e agentes como descrito aqui são também úteis para o tratamento de cânceres, em que o IL-23 é anormalmente expresso.

[0310] Cânceres expressando IL-23 que podem ser tratados pelos métodos descritos aqui incluem, por exemplo, leucemia, tais como leu-cemia aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielocítica aguda (por exemplo, mieloblastos, promielocítica, mielomonocítica, monocíti- ca, ou eritroleucemia), leucemia crônica, leucemia mielocítica crônica (granulocítica), ou leucemia linfocítica crônica; Policitemia vera; Linfo- ma (por exemplo, doença de Hodgkin ou doença de não Hodgkin); mi- eloma múltiplo, macroglobulinemia de Waldenstrom; doença de cadeia pesada; tumores sólidos tais como sarcomas e carcinomas (por exemplo, fibrosarcoma, mixossarcoma, lipossarcoma, condrossarcoma, sarcoma osteogênico, osteossarcoma, cordoma, angiossarcoma, endote- liossarcoma, limfangiossarcoma, linfangioendoteliossarcoma, sinovi- oma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiossarcoma, rabdomiossar- coma, carcinoma de cólon, carcinoma colorretal, câncer pancreático, câncer de mama, câncer ovariano, câncer de próstata, carcinoma celular escamoso, carcinoma de célula basal, adenocarcinoma, carcinoma de glândula sudorípera, carcinoma de glândula sebácea, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogênico, carcinoma de célula renal, hepatoma, carcinoma do ducto de bílis, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embriônico, tumor de Wilms, câncer cervical, câncer uterino, tumor testicular, carcinoma pulmonar, carcinoma pulmonar de célula pequena, carcinoma pulmonar de célula não pequena, carcinoma de bexiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craniofarin- gioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, menangioma, melanoma, neuroblastoma, retinoblastoma, carcinoma nasofaríngeo, ou carcinoma esofágico).

[0311] Em outro aspecto, os anticorpos anti-IL-23p19 e agentes como descrito aqui são também úteis para o tratamento de lúpus dis- coide, malária, melanoma maligno, anemia aplásica, doença de Hun-tington, pustulose palmoplantar, nefrite de IgA, vasculite associada a ANCA, esclerite ou sepse.

Composições Farmacêuticas e Administração dos mesmos

[0312] Uma composição compreendendo um agente de ligação de IL-23p19 (por exemplo, um anticorpo anti-IL-23p19) pode ser administrada a um indivíduo tendo ou em risco de ter um distúrbio imunológi- co, distúrbio respiratório ou um câncer. A invenção também fornece o uso de um agente de ligação de IL-23p19 (por exemplo, um anticorpo anti-IL-23p19) na fabricação de um medicamento para a prevenção ou tratamento de um câncer, distúrbio respiratório ou distúrbio imunológi- co. O termo "indivíduo" como utilizado aqui significa qualquer paciente mamífero ao qual um agente de ligação de IL-23p19 pode ser administrado, incluindo, por exemplo, mamíferos humanos e não humanos, tais como primatas, roedores, e cachorros. Indivíduos especialmente destinados para o tratamento utilizando os métodos descritos aqui incluem humanos. Os anticorpos ou agentes podem ser administrados sozinhos ou em combinação com outras composições na prevenção ou tratamento do distúrbio imunológico, distúrbio respiratório ou câncer. Tais composições que podem ser administradas em combinação com os anticorpos ou agentes incluem metotrexato (MTX) e imunomo- duladores, por exemplo, anticorpos ou moléculas pequenas.

[0313] Exemplos de anticorpos para uso em tais composições farmacêuticas são aqueles que compreendem um anticorpo humanizado ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácido de região variável de cadeia leve de qualquer uma de SEQ ID N°: 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117 ou 119. Exemplos de anticorpos para uso em tais composições farmacêuticas são também aqueles que compreendem um anticorpo humanizado ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácido de região variável de cadeia pesada de qualquer uma de SEQ ID N°: 121, 123, 125, 127, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154 ou 156.

[0314] Outros exemplos de anticorpos para uso em tais composi ções farmacêuticas são também aqueles que compreendem um anticorpo humanizado ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácido de região variável de cadeia leve de qualquer uma de SEQ ID N°: 158, 160, 162 ou 164. Anticorpos preferidos para uso em tais composições farmacêuticas são também aqueles que compreendem um anticorpo humanizado ou fragmento de anticorpo tendo a sequência de aminoácido de região variável de cadeia pesada de qualquer uma de SEQ ID N°: 166, 168, 170 ou 172.

[0315] Outros exemplos de anticorpos para uso em tais composi ções farmacêuticas são também aqueles que compreendem um anticorpo humanizado ou fragmento de anticorpo tendo a região variável de cadeia leve e região variável de cadeia pesada de qualquer uma de SEQ ID N°: 160 e 166, SEQ ID N°: 160 e 168, SEQ ID N°: 158 e 166 ou SEQ ID N°: 158 e 168.

[0316] Outros exemplos de anticorpos para uso em tais composi ções farmacêuticas são também aqueles que compreendem um anticorpo humanizado tendo a sequência de aminoácido de região de cadeia leve de qualquer uma de SEQ ID N°: 174 ou 180. Anticorpos preferidos para uso em tais composições farmacêuticas são também aqueles que compreendem anticorpos humanizados tendo a sequência de aminoácido de região variável de cadeia pesada de qualquer uma de SEQ ID N°: 176 ou 178.

[0317] Outros exemplos de anticorpos para uso em tais composi ções farmacêuticas são também aqueles que compreendem Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D.

[0318] Vários sistemas de liberação são conhecidos e podem ser utilizados para administrar o agente de ligação de IL-23p19. Métodos de introdução incluem, porém não estão limitados às rotinas intradér- micas, intramusculares, intraperitoneais, intravenosas, subcutâneas, intranasais, epidurais, e orais. O agente de ligação de IL-23p19 pode ser administrado, por exemplo, por infusão, bolos ou injeção, e pode ser administrado juntamente com outros agentes biologicamente ativos tais como agentes quimioterapêuticos. A administração pode ser sis têmica ou local. Em modalidades preferidas, a administração é por injeção subcutânea. Formulações para tais injeções podem ser preparadas, por exemplo, em seringas pré-carregadas que podem ser administradas uma vez a cada duas semanas.

[0319] Em modalidades específicas, a composição de agente de ligação de IL-23p19 é administrada por injeção, por meio de um cate- ter, por meio de um supositório, ou por meio de um implante, o implante sendo de um material poroso, não poroso, ou gelatinoso, incluindo uma membrana, tal como uma membrana sialástica, ou uma fibrs. Tipicamente, quando administrando a composição, materiais aos quais o anticorpo anti-IL-23p19 ou agente não absorve são utilizados.

[0320] Em outras modalidades, o anticorpo anti-IL-23p19 ou agen te é liberado em um sistema de liberação controlada. Em uma modalidade, uma bomba pode ser utilizada (veja, por exemplo, Langer, 1990, Science 249:1527-1533; Sefton, 1989, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574). Em outra modalidade, materiais poliméricos podem ser utilizados. (Veja, por exemplo, Medical Applications of Controlled Release (Langer e Wise eds., CRC Press, Boca Raton, Fla., 1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smo- len e Ball eds., Wiley, Nova Iorque, 1984); Ranger e Peppas, 1983, Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61. Veja também Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105.) Outros sistemas de liberação controlada são descritos, por exemplo, em Langer, supra.

[0321] Um agente de ligação de IL-23p19 (por exemplo, um anti corpo anti-IL-23p19) pode ser administrado como composições farma-cêuticas compreendendo a quantidade terapeuticamente eficaz do agente de ligação e um ou mais ingredientes compatíveis.

[0322] Em modalidades típicas, a composição farmacêutica é for- mulada de acordo com procedimentos de rotina como uma composição farmacêutica adaptada para administração intravenosa ou subcutânea a seres humanos. Tipicamente, composições para administração por injeção são soluções em tampão aquoso isotônico estéril. Onde necessário, o produto farmacêutico pode também incluir um agente de solubilização e um anestésico local tal como lignocaína para aliviar a dor no sítio da injeção. Geralmente, os ingredientes são fornecidos separadamente ou misturados juntamente em forma de dosagem unitária, por exemplo, como um pó liofilizado seco ou concentrado livre de água em um recipiente hermeticamente selado tal como uma ampola ou sachê indicando a quantidade de agente ativo. Onde o produto farmacêutico deve ser administrado por infusão, ele pode ser administrado com um frasco de infusão contendo salina ou água de grau farmacêutico estéril. Onde o produto farmacêutico é administrado por injeção, uma ampola de água estéril para injeção ou salina pode ser fornecida, de modo que os ingredientes possam ser misturados antes da administração.

[0323] Além disso, a composição farmacêutica pode ser fornecida como um kit farmacêutico compreendendo (a) um recipiente contendo o agente de ligação de IL-23p19 (por exemplo, um anticorpo anti-IL- 23p19) em forma liofilizada e (b) um segundo recipiente contendo um diluente farmaceuticamente aceitável (por exemplo, água estéril) para injeção. O diluente farmaceuticamente aceitável pode ser utilizado para reconstituição ou diluição do anticorpo anti-IL-23p19 ou agente liofi- lizado. Opcionalmente associada com tal recipient(s) pode estar uma notícia na forma prescrita por uma agência governamental regulando a fabricação, uso ou venda de produtos farmacêuticos ou biológicos, cuja notícia reflete a aprovação pela agência de fabricação, uso ou venda para administração humana.

[0324] A quantidade do agente de ligação de IL-23p19 (por exem- plo, anticorpo anti-IL-23p19) que é eficaz no tratamento ou prevenção de um distúrbio imunológico ou câncer pode ser determinada por técnicas clínicas padrões. Além disso, ensaios in vitro podem opcionalmente ser empregados para auxiliar a identificar faixas de dosagens ideais. A dose precisa a ser empregada na formulação também dependerá da rotina de administração, e do estágio de distúrbio imunoló- gico ou câncer, e deve ser decidida de acordo com o julgamento do médico e de cada uma das circunstâncias do paciente. Doses eficazes podem ser extrapoladas de curvas de resposta à dose derivadas de sistemas de teste de modelo in vitro ou animal.

[0325] Geralmente, a dosagem de um anticorpo anti-IL-23p19 ou agente de ligação de IL-23p19 administrada a um paciente com um distúrbio imunológico ou câncer expressando IL-23p19 é de tipicamente cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 100 mg/kg do peso corporal do indivíduo. A dosagem administrada a um indivíduo é de cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 50 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 30 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 20 mg/kg, cerca de 1 mg/kg a cerca de 15 mg/kg, ou cerca de 1 mg/kg a cerca de 10 mg/kg do peso corporal do indivíduo.

[0326] Doses exemplares incluem, porém não estão limitadas a, de 1 ng/kg a 100 mg/kg. Em algumas modalidades, uma dose é de cerca de 0,5 mg/kg, cerca de 1 mg/kg, cerca de 2 mg/kg, cerca de 3 mg/kg, cerca de 4 mg/kg, cerca de 5 mg/kg, cerca de 6 mg/kg, cerca de 7 mg/kg, cerca de 8 mg/kg, cerca de 9 mg/kg, cerca de 10 mg/kg, cerca de 11 mg/kg, cerca de 12 mg/kg, cerca de 13 mg/kg, cerca de 14 mg/kg, cerca de 15 mg/kg ou cerca de 16 mg/kg. A dose pode ser administrada, por exemplo, diarimante, uma vez por semana (semanalmente), duas vezes por semana, três vezes por semana, quatro vezes por semana, cinco vezes por semana, seis vezes por semana, semanalmente ou mensalmente, a cada dois meses, ou a cada três meses. Em modalidades específicas, a dose é de cerca de 0,5 mg/kg/semana, cerca de 1 mg/kg/semana, cerca de 2 mg/kg/semana, cerca de 3 mg/kg/semana, cerca de 4 mg/kg/semana, cerca de 5 mg/kg/semana, cerca de 6 mg/kg/semana, cerca de 7 mg/kg/semana, cerca de 8 mg/kg/ semana, cerca de 9 mg/kg/semana, cerca de 10 mg/kg/semana, cerca de 11 mg/kg/semana, cerca de 12 mg/kg/semana, cerca de 13 mg/kg/ semana, cerca de 14 mg/kg/semana, cerca de 15 mg/kg/semana ou cerca de 16 mg/kg/semana. Em algumas modalidades, a dose varia de cerca de 1 mg/kg/semana a cerca de 15 mg/kg/semana.

[0327] Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas compreendendo o agente de ligação de IL-23p19 podem também compreender um agente terapêutico, conjugado ou não conjugado ao agente de ligação. O anticorpo anti-IL-23p19 ou agente de ligação de IL-23p19 pode ser coadministrado em combinação com um ou mais agentes terapêuticos para o tratamento ou prevenção de distúrbios imunológicos ou cânceres.

[0328] Tal administração de terapia de combinação pode ter um efeito aditivo ou sinérgico sob os parâmetros da doença (por exemplo, gravidade de um sintoma, o número de sintomas, ou sequência de reincidência).

[0329] Com respeito aos regimes terapêuticos para administração combinatória, em uma modalidade específica, um anticorpo anti-IL- 23p19 ou agente de ligação de IL-23p19 é administrado concorrentemente com um agente terapêutico. Em outra modalidade específica, o agente terapêutico é administrado antes ou subsequente à administração do anticorpo anti-IL-23p19 ou agente de ligação de IL-23p19, em pelo menos uma hora e até diversos meses, por exemplo, pelo menos uma hora, conco horas, 12 horas, um dia, uma semana, um mês, três meses, antes ou subsequente à administração do anticorpo anti-IL- 23p19 ou agente de ligação de IL-23p19.

[0330] Por exemplo, uma composição farmacêutica da presente invenção compreende uma molécula de anticorpo, por exemplo, uma molécula de anticorpo descrita aqui, e tampão de succinato. Em uma modalidade, a composição farmacêutica compreende 50 mM ou menos de tampão de succinato.

[0331] Em uma outra modalidade, uma composição farmacêutica da presente invenção compreende 1 a 40 mg/ml de uma molécula de anticorpo, por exemplo, uma molécula de anticorpo como descrito aqui, e também compreende 5 a 50 mM de tampão de succinato e 50 a 200 mM de cloreto de sódio. Em uma outra modalidade, o pH da composição farmacêutica está na faixa de pH 6,0 a 7,0. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica compreende 2,5 a 30 mg/ml da molécula de anticorpo, em uma outra modalidade 5 a 20 mg/ml da molécula de anticorpo. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica compreende de 10 a 40 mM de tampão de succinato, em uma outra modalidade 20 a 30 mM de tampão de succinato. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica compreende 75 a 175 mM de cloreto de sódio, em uma outra modalidade 100 a 150 mM de cloreto de sódio. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica também compreende um detergente, por exemplo, polissorbato 20 (Tween 20), por exemplo, em uma concentração de 0,20 g/l. Em um aspecto, a molécula de anticorpo na composição farmacêutica é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D.

[0332] Em uma outra modalidade, uma composição farmacêutica da presente invenção compreende 10 mg/ml de uma molécula de anti-corpo, 25 mM de tampão de succinato, 125 mM de cloreto de sódio e 0,02% de Tween 20 em um pH de 6,0 a 7,0. Em um aspecto, o pH da composição farmacêutica é de 6,5. Em um aspecto, a molécula de an-ticorpo na composição farmacêutica é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D.

[0333] Em uma outra modalidade, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo de 70 a 100 mg/ml de uma molécula de anticorpo, por exemplo, uma molécula de anticorpo como descrito aqui, e 100 a 300 mM de sorbitol. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica também compreende 25 mM ou menos de tampão de succinato. Em uma outra modalidade, o pH da referida composição farmacêutica está na faixa de pH 5,5 a 6,5. Em um aspecto, o pH da composição farmacêutica está na faixa de 5,5 a 6,1. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica compreende 80 a 95 mg/ml de uma molécula de anticorpo. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica compreende 10 mM ou menos de tampão de succinato, em uma outra modalidade 5 mM ou menos de tampão de succinato, em uma outra modalidade pelo menos 1 mM de tampão de succinato, em uma outra modalidade pelo menos 2,5 mM de tampão de succinato, em uma outra modalidade 1 a 10 mM de tampão de succinato, em uma outra modalidade, 2,5 a 5 mM de tampão de succinato. Em uma outra modalidade a composição farmacêutica compreende 150 a 300 mM de sorbitol, em uma outra modalidade 175 a 275 mM de sorbitol, em uma outra modalidade 200 a 250 mM de sorbitol. Em uma outra modalidade, a composição farmacêutica também compreende um detergente, por exemplo, polissorbato 20 (Tween 20), por exemplo, em uma concentração de 0,20 g/l. Em um aspecto, a molécula de anticorpo na composição farmacêutica é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D.

[0334] Em uma outra modalidade, uma composição farmacêutica da presente invenção compreende 90 mg/ml de uma molécula de anti-corpo, 4,4 mM de tampão de succinato, 225 mM de sorbitol e 0,02% de Tween 20 em um pH de 5,5 a 6,5. Em um aspecto, o pH da composição farmacêutica é 5,5 a 6,1. Em um aspecto, o pH da composição farmacêutica é 5,8. Em um aspecto, a molécula de anticorpo na com- posição farmacêutica é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D.

[0335] Em uma outra modalidade, uma composição farmacêutica da presente invenção compreende 90 mg/ml de uma molécula de anti-corpo, 240 mM de sorbitol e 0,02% de Tween 20 em um pH de 5,5 a 6,5. Em um aspecto, o pH da composição farmacêutica é 5,5 a 6,1. Em um aspecto, o pH da composição farmacêutica é 5,8. Em um aspecto, a molécula de anticorpo na composição farmacêutica é Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D.

[0336] Composições farmacêuticas de acordo com a presente in venção são descritas em maiores detalhes aqui abaixo. Em um aspecto, as composições farmacêuticas descritas aqui são física e quimicamente estáveis e mantêm a integridade de um anticorpo compreendido na referida composição farmacêutica, por exemplo, quando armazenado durante 8 semanas a 40°C como mostrado aqui abaixo.

Artigos de Fabricação

[0337] Em outro aspecto, um artigo de fabricação contendo mate riais úteis para o tratamento dos distúrbios descritos acima é incluído. O artigo de fabricação compreende um recipiente e um rótulo. Recipientes adequados incluem, por exemplo, frascos, frasconetes, seringas e tubos de teste. Os recipientes podem ser formados de uma variedade de materiais tais como vidro ou plástico. O recipiente mantém uma composição que é eficaz para tratamento da condição e pode ter uma porta de acesso estéril. Por exemplo, o recipiente pode ser uma bolsa de solução intravenosa ou um frasconete tendo um tampão perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica. O agente ativo na composição é o anticorpo anti-IL-23p19 humanizado. O rótulo no ou associado com o recipiente indica que a composição é utilizada para o tratamento da condição de escolha. O artigo de fabricação pode também compreender um segundo recipiente compreendendo um tampão farmaceutica- mente aceitável, tal como salina tamponada por fosfato, solução de Ringer, e solução de dextrose. Ele pode também incluir outros materiais desejáveis de um ponto de vista comercial e de usuário, incluindo outros tampões, diluentes, cargas, agulhas, seringas, e inserções de embalagem com instruções para o uso.

[0338] A invenção é também descrita nos seguintes exemplos, que não se destinam a limitar o escopo da invenção.

Exemplos Exemplo 1: Produção de Anticorpos Anti-IL-23p19 Humanizados

[0339] Anticorpo 6B8 de camundongo condutor foi convertido em um anticorpo quimérico que consiste no domínio variável de camundongo de 6B8 e um domínio de IgG1KO constante humano. Anticorpo 6B8 de camundongo é mostrado nas tabelas 1 e 2 aqui acima. O IgG1KO (nocaute) tem duas mutações de substituição (Leu234Ala e Leu235Ala) que eliminam a atividade de ADCC e CDC reduzindo as funções efetoras tais como FcyR e ligação de complemento. Os domínios variáveis do camundongo e anticorpos quiméricos são idênticos. Anticorpos quiméricos são gerados para confirmar a função do anticorpo e garantir que a sequência correta tenha sido obtida. A região variável do anticorpo é em seguida humanizada através de um processo de planejamento e análise. Uma biblioteca foi feita onde resíduos humanos e de camundongo foram variados de tal maneira que, em qualquer posição pode existir um resíduo humano ou de camundongo. Tal biblioteca foi feita para aqueles aminoácidos que foram diferentes entre a linhagem germinativa humana e anticorpo de camundongo. Apenas os clones que mantêm a função do anticorpo de camundongo origem foram selecionados. Regiões variáveis humanizadas representativas quanto ao anticorpo 6B8 são mostradas nas Tabelas 5 e 6.

[0340] Desta maneira, Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C e An- ticorpo D foram anticorpos humanizados derivados de anticorpo 6B8 de camundongo (clonado em um esqueleto de lgG1-KO (KO=nocaute)/ kappa humano. Anticorpos A, B, C e D são mostrados na Tabela 7. Exemplo 2: Ligação de Anticorpos à Proteína de IL-23 Recombinante A) Cinéticas e afinidade de ligação de anticorpos de camundongo anti- IL-23p19 ao IL-23 humano recombinate são mostradas na tabela abaixo (Tabela 9). Cinéticas e afinidades de ligação foram medidas utilizando o Fortebio Octet (Fortebio, Menlo Park, CA) utilizando material gerado de hibridoma seguindo purificação de coluna simples. Visto que o Octet não é uma tecnologia com base em fluídica, este método não fornece determinação precisa de taxa. Em alguns casos, apenas uma estimativa de afinidade pode ser obtida. Tabela 9 B) Afinidades foram medidas quanto aos anticorpos huma-nizados derivados de anticorpo 6B8 de camundongo. Os dados de ligação cinética, medidos utilizando o ProteON XPR36 (Biorad, Hercules, CA) e ajustados globalmente para um modelo de ligação de 1:1, demostraram as interações com o IL-23 recombinante com ou sem um ligador de aminoácido 21 covalentemente unido às subunidades p19 e p40 serem de afinidade elevada, na faixa de 1 pM ~ 100 pM (Tabela 10). Anticorpo 6H12 (descrito no WO 2007/027714), anticorpo QF20 (descrito no WO 2007/024846) e anticorpo C1273 (descrito no WO 2007/005955) foram também testados. Tabela 10 C) Dados cinéticos e de afinidade quanto à ligação de anti-corpos anti-IL-23p19 ao IL-23 cinomologo foram medisos no ProteON XPR36, e globalmente ajustados para um modelo de ligação 1:1 (Tabela 11 ). O anticorpo 6H12 (descrito no WO 2007/027714), anticorpo QF20 (descrito no WO 2007/024846) e anticorpo C1273 (descrito no WO 2007/005955) foram também testados Tabela 11 D) Seletividade Molecular sobre IL-12 Humano

[0341] Os anticorpos anti-IL-23p19 foram também injetados sobre uma superfície de IL-12 humano em uma concentração de 100 nM. O sinal de ligação para estes anticorpos medido utilizando Fortebio Octet é zero, o que indica que estes anticorpos ligam-se seletivamente ao IL- 23 humano. A ligação dos anticorpos anti-IL-23p19 ao IL-23 foi também analisada na presença de 50% de soro humano e nenhum efeito significante de soro na taxa de ligação foi observado demonstrando especificidade elevada.

Exemplo 3: Ensaio de ligação por competição de ligação de IL-23 humano ao IL-23 humanoR/Fc IL-23 humano

[0261] R-Fc foi capturado na superfície biossensora e 10 nM de IL- 23 humano foram injetados. O sensograma indica a ligação específica entre IL-23 e o receptor de IL-23 (Figura 2, traço de topo). Os anticorpos foram em seguida coinjetados com 10 nM de IL-23 humano para avaliar se a ligação de anticorpo ao IL-23 poderia inibir a interação entre IL-23 e o receptor de IL-23. Neste exemplo, Se o anticorpo se liga ao IL-23 humano e é capaz de inibir a interação, então ligação reduzida ou nenhuma será observada (Figura 2, traço de base). No exemplo mostrado uma concentração molar equivalente de Anticorpo A foi coin- jetada com 10 nM de IL-23 humano recombinante.

Exemplo 4: Ensaios de Célula Funcional, Inibição de Produção de IL- 17 de Espenócitos de Camundongo Estimulados por IL-23

[0342] Um ensaio de célula funcional quanto aos anticorpos anti- IL-23p19 avalia sua capacidade de inibir a produção de IL-17 estimulada por IL-23 de células mononucleares isoladas de baços de camundongo. Proteína de IL-23 recombinante humana é capaz de estimular a liberação de IL-17 de esplenócitos de camundongo. Além disso, uma fonte natural de IL-23 humano encontrada no sobrenadante de células THP-1 monocíticas humanas ativadas podem ser utilizadas para estimular a produção de IL-17 de células mononucleares de camundon- gos.

[0343] IL-23 humano recombinante ou IL-23 humano natural de células THP-1 ativas foi pré-incubado com anticorpos anti-IL-23p19 titulados. As combinações de IL-23/anticorpo foram em seguida adici-onadas recentemente aos esplenócitos de murino isolados. IL-23 re- combinante sozinho foi utilizado como um controle positivo. Após dois dias em cultura, os sobrenadantes celulares foram coletados e ensaiados quanto ao IL-17 por ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MN). Valores de IC50 representativos quanto aos anticorpos anti-IL-23p19 são mostrados abaixo. Os anticorpos testados são anticorpos de camundongo derivados de hibridomas (linhas 1 a 19, veja tabelas 1 e 2), anticorpos quiméricos (linhas 20 a 23), e Anticorpos A a D. Anticorpo 6H12 (descrito no WO 2007/027714), anticorpo QF20 (descrito no WO 2007/024846) e anticorpo C1273 (descrito no WO 2007/005955) foram também testados. Tabela 12

Exemplo 5: Teste de Especificidade Funcional contra IL-12 em um Ensaio de Célula T Ativada Humana

[0344] Anticorpos anti-IL-23p19 foram testados quanto à inibição funcional de IL-12 em um ensaio de célula T ativada humana. IL-12 recombinante humano (1 ng/ml) foi pré-incubado com 5 μg/ml de anti-corpos anti-IL-23p19. As combinações de IL-12/anticorpo foram em seguida adicionadas aos blastos de célula T derivados de PHA humano. IL-12 recombinante sozinho foi utilizado como um controle positivo. Um anticorpo anti-IL-12p70 (Bender MedSystems, Vienna, Áustria) foi utilizado como um anticorpo inibitório de controle. Após dois dias em cultura, os sobrenadantes celulares foram coletados e ensaiados quanto ao IFN-y por ELISA (R&D Systems). As amostras foram testadas em triplicatas e o pg/ml médio de IFN-y foi determinado. Os resultados (com desvios padrões) são mostrados na tabela abaixo. Tabela 13

Exemplo 6: Inibição de fosforilaçao de STAT3 induzida por IL-23 na linhagem celular humana DB

[0345] A linhagem celular humana DB (ATCC, Manassas, VA) res ponde à estimulação de IL-23 através de um complexo de IL-23R en-dógeno (IL-23R e IL-12Bβ1) e fosforila STAT3 em uma maneira de-pendente de dose de IL-23. Um ensaio foi desenvolvido para testar a inibição de anticorpo anti-IL-23p19 por fosforilaçao de STAT3 induzida por IL-23. Células DB foram semeadas em 1 x10e6 células/cavidade em uma placa de 96 cavidades. Os anticorpos a serem testados foram serialmente diluídos e pré-incubados com IL-23 humano (10 ng/ml) durante 1 hora em temperatura ambiente. A mistura de anticorpo/I L- 23 foi em seguida adicionada às células durante 30 minutos a 37 °C. As células foram colhidas por centrifugação a 4°C durante 10 minutos e em seguida lisadas em tampão frio (Cell Signaling Technology, Beverly, MA). Uma porção do lisado foi realizada em um fosfo-STAT3 ELISA (Invitrogen). Os valores de IC50 de anticorpo foram calculados como percentual de inibição de fosforilação de STAT3 em comparação com cavidades de controle sem o anticorpo. Os valores IC50 representativos são mostrados na tabela abaixo. Tabela 14

Exemplo 7: Modelo In vivo de prod ução de citocina induzida por IL-23 na orelha de camundongo

[0346] Um modelo in vivo no camundongo foi utilizado. IL-23 re- combinante humano é injetado na pele da orelaha do camundongo durante 4 dias consecutivos resultando em espessamento epidérmico e super-regulação de proteína IL-17 e IL-22. Os anticorpos anti-IL-23p19 foram avaliados neste modelo. Uma injeção intraperitoneal de 1 mg/kg ou 5 mg/kg de anticorpo foi administrada 1 hora antes da injeção de IL- 23 inicial na pele. IL-23 recombinante humano (com ligador) foi injetado uma vez diariamente durante mais 3 dias e o tecido foi coletado para avaliação de citocina. A inibição de produção de citocina foi demonstrada quanto aos anticorpos. Os resultados de três experimentos são mostrados na tabela abaixo (exp. 1: linhas 1 a 7, exp. 2: linhas 8 a 10, exp. 3: linhas 11 a 14). Tabela 15 Tecido da orelha - pg/ml médio; Percentual de inibição; Tampão de citrato (controle não estimulado); Tampão de citrato (controle de veículo); Anticorpo.

Exemplo 8: Estudos Farmacocinéticos em Macaco Cinomolgo

[0347] Anticorpos anti-IL-23p19 humanizados foram administrados por infusão intravenosa de dez minutos em uma dose de 1,0 mg/kg a três macacos cinomolgos. Amostras de soro foram coletadas durante um curso de tempo de 6 semanas e concentrações de anticorpo livres foram medidas utilizando um ELISA específico. Os perfis de tempo- concentração de soro quanto aos anticorpos e aos parâmetros farma- cocinéticos correspondentes são sumariados na tabela 16 abaixo. Tabela 16

Exemplo 9: Expressão em Células NSO e Dados Biofísicos Transfecção de Células NSO e geração de misturas estáveis:

[0348] As células NSO foram desenvolvidas na presença de 1 % de FBS antes da transfecção. 40x10e6 células foram coletadas e ressus- pensas em 0,8ml em meio contendo 2% de FBS com 20 ug de DNA line-arizado (vetores de expressão de cadeia pesada e cadeia leve) e em se-guida, as células foram incubadas em gelo durante aproximadamente 15 minutos antes da eletroporação das células a 750V/25uF (Bio-Rad Gene Pulser Xcell). As células foram recuperadas com 2% de FBS durante aproximadamente 48 horas a 37°C e C02 a 5%, em seguida semeadas em placas de 96 cavidades em 2x10e5 células/ml contendo G418 e ácido micofenólico 14 a 21 dias até a formação de colônias.

[0349] Os sobrenadantes de placas de 96 cavidades com colônias foram analisados por ELISA. Placas de ELISA foram revestidas com 1 ug/ml de anti-kappa de cabra (Southern Biotech, Birmingham, AL) em PBS e sobrenadantes diluídos foram incubados e em seguida detectados com Fc=HRP de IgG anti-humano de cabra (de Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA). As colônias positivas foram misturadas para ampliação. Títulos para produção de anticorpo foram determinados por ForteBio utilizando extremidades de proteína A de acordo com o protocolo de fabricação. O títulos quanto ao Anticorpo A e Anticorpo D foram entre 250 a 350 mg/L, com mais do que 80% de recuperação de purificação de proteína, e mais do que 94% de monô- mero após purificação por IEX. As proteínas foram ressuspensas em um tampão final contendo citrato de sódio a 20 mM e NaCl a 115 mM, pH 6,0 e são estáveis a 4 °C durante pelo menos 4 meses e com solubilidade de até 100 mg/ml neste tampão. Tabela 17 Tabela 18 AUC: Ultracentrifugação analítica quando medida pelo método de ve-locidade de sedimentação em concentrações de 0,5 - 1 mg/ml; SEC: Cromatografia de Exclusão de tamanho; %M: percentual de monôme- ro.

Exemplo 10: Mapeamento de Epítopo

[0350] Espectrometria de Massa de Permuta de Hidrogênio/Deuté- rio (HXMS) foi empregada para mapear o epítopo de ligação de anticorpo A ao IL-23p19 humano. Este método determinou a suscetibilidade dos hidrogênios de esqueleto de amida de IL-23p19 permutarem com D20. O experimento foi conduzido com IL-23 sozinho e IL-23 com anticorpo A adicionado. Regiões da sequência de IL-23p19 mostrando proteção significante de permuta devido à ligação de anticorpo A foram, desse modo, identificadas. A resolução do método é determinada pelos peptídeos produzidos por disgestão com pepsina ou Protease XVIII. Estes peptídeos derivados de IL-23p19 foram identificados por experimentos de controle adicionais com amostras não permutadas empregando tecnologias de MS/MS de HPLC e massa precisas padrões.

[0351] IL-23 recombinante humano foi utilizado. Para a amostra de proteína + anticorpo, 50ul de IL-23 (0,8mg/ml) foi incubados com 10ul de anticorpo A (12,7mg/ml) durante 15 minutos em temperatura ambiente. A relação molar final de anticorpo A/IL-23 foi de 1.2:1.

[0352] Para a permuta 5ul de proteína IL-23 foram adicionados a 50ul de tampão deuterado (50 mM de PBS em D20) e incubados durante 100 segundos em temperatura ambiente. 50ul de 2M de ureia/0,5M de TCEP foram adicionados e incubados durante 60 segundos em temperatura ambiente. 5ul de pepsina ou Protease XVIII (4mg/ml em 0,1 % de ácido fórmico) foram adicionados e a amostra foi imediatamente resfriada para 4 °C.

[0353] Após 5 minutos, 50ul de amostra foram injetadas em um sistema de HPLC Shimadzu (controlador SCL10A e duas bombas LC10AD) sob as seguintes condições: Fase móvel A = 99/1/0,1 (água/acetonitrila/ácido fórmico). Fase móvel B = 95/5/0,1 (acetonitrila/água/ácido fórmico). Taxa de fluxo = 100ul/minutos. Coluna = Phenomenex Jupiter C5, 5u, 50x1,0mm. Linhas de fase móvel, coluna, alça injetora estão em banhos de gelo. Gradiente = Tempo 0 (3% de B), Tempo 2,2 (3% de B), Tempo 10,1 (90% de B), Tempo 12,0 (90% de B), Tempo 12,1 (3% de B).

[0354] A espectrometria de massa foi realizada como segue: Espectrometria de massa = Thermo Orbitrap Velos (0900865). Métodos: A. Fragmentação (para Peptídeos ID): tempo de aquisição de 12 minutoa (retardo do início de 3 minutos), FTMS de varredura completa em resolução de 30.000, sete varreduras dependentes de dados de armadilha de íon (CID). B. Realizações de MS: tempo de aquisição de 12 minutos (3 minutos de retardo do início), FTMS de varredura completa em resolução de 60.000.

[0355] Polipeptídeos de pepsina e protease XVIII foram identifica dos utilizando os dados de fragmentação e o programa Proteome Dis-coverer (Thermoscientific, Waltham, MA). Peptídeos identificados foram visualmente comparados (proteína sozinha vs. proteína com anticorpo presente) utilizando o software Xcalibur (Thermoscientific). Nenhuma mudança significativa na permuta foi observada quanto ao IL- 23 sozinho vs. IL-23 com anticorpo A fora da região de IL-23p19. Para a porção p19 da proteína, os dados foram analisados utilizando o programa PepMap (Thermoscientific). Este programa calcula a massa média quanto aos peptídeos permutados. Os resultados de PepMap foram verificados e aqueles peptídeos que não produziram resultados verificados foram calculados com o auxílio de Microsoft Excel.

[0356] As regiões da sequência IL-23 mostrando proteção signifi- cante de permuta devido à ligação do anticorpo A foram identificadas como resíduos de aminoácido 108 a 126 de SEQ ID N°: 181 e resíduos de aminoácido 137 a 151 de SEQ ID N°:181.

Exemplo 11: Composições Farmacêuticas

[0357] Exemplos de formulatções adequadas para um anticorpo da presente invenção são mostrados abaixo. Anticorpos utilizados nas formulações abaixo são, por exemplo, Anticorpo A, Anticorpo B, Anticorpo C ou Anticorpo D. Formulação 1

[0358] O pH de formulação 1 esl á tipicamente na faixa de pH 6,0 a 7,0, por exemplo, pH 6,5. Esta formulação é particularmente adequada para administração intravenosa.

[0359] Peso molecular (MW em g/mol) de excipientes utilizados: hexaidrato de succinato de dissódio = 270,14 g/mol; ácido succínico = 118,09 g/mol; cloreto de sódio = 58,44 g/mol.

[0360] A osmolaridade da formulação é 300 +/- 30 mOsmol/kg, como determinado utilizando um Osmomat 030 (Gonotec GmbH, Berlin, Alemanha). A densidade a 20°C da formulação é de aproximadamente 1.0089 g/cm3, como determinado utilizando uma unidade de medição DMA 4500 (Anton Paar GmbH, Ostfildern-Scharnhausen, Alemanha). Formulação 2: *O pH de formulação 2 está tipicamente na faixa de pH 5,5 a 6,5, por exemplo, 5,5 a 6,1, por exemplo, o pH é 5,8. Esta formulação é parti-cularmente adequada para administração subcutânea. Peso molecular (MW em g/mol) de excipientes utilizados: MW: Ácido succínico (C4H6O4)= 118,09 g/mol MW: Hexaidrato de Succinato de dissódio (C4O4Na2H4 x 6H2O) = 270,14 g/mol MW: Sorbitol = 182,17 g/mol MW: Polissorbato 20 = 1227,72 g/mol

[0361] A osmolaridade da formulação é de 300 +/- 30 mOsmol/kg, como determinado utilizando um Osmomat 030 (Gonotec GmbH, Berlin, Alemanha). A densidade a 20 °C da formulação é de aproximadamente 1,040 g/cm3, como determinado utilizando uma unidade de medição DMA 4500 (Anton Paar GmbH, Ostfildern-Scharnhausen, Alemanha). Formulação 3:

[0362] O pH de formulação 3 está tipicamente na faixa de pH 5,5 a 6,5, por exemplo, 5,5 a 6,1, por exemplo, o pH é 5,8. Esta formulação é particularmente adequada para administração subcutânea. Peso molecular (MW em g/mol) de excipientes utilizados: MW: Sorbitol = 182,17 g/mol MW: Polissorbato 20 = 1227,72 g/mol.

[0363] A osmolaridade da formulação é de 300 +/- 30 mOsmol/kg, como determinado utilizando an Osmomat 030 (Gonotec GmbH, Berlin, Alemanha).

Exemplo 12: Estabilidade das Composições Farmacêuticas

[0364] As composições farmacêuticas são armazenadas a 40°C durante 8 semanas em uma seringa no caso das formulações 2 e 3. As propriedades das formulações são medidas inicialmente e após 8 semanas em armazenagem a 40°C e são mostradas abaixo.

[0365] A turbidez é expressa em Unidade Nefelométrica de For mazina (FNU), quando medida utilizando nefelometria. A % de monô- mero é determinada por Cromatografia de Exclusão de Tamanho de Desempenho Elevado (HP-SEC). Estabilidade de Armazenagem das Formulações 2 e 3

Claims (13)

1. Composição farmacêutica compreendendo um anticorpo, caracterizada pelo fato de que a referida composição farmacêutica compreende: a) 1 a 40 mg/ml do referido anticorpo e também compreende 5 a 50 mM de tampão de succinato e 50 a 200 mM de cloreto de sódio, em que o pH da referida composição farmacêutica está na faixa de pH 6,0 a 7,0; ou b) 70 a 100 mg/ml do referido anticorpo e também compreende 100 a 300 mM de sorbitol, em que o pH da referida composição farmacêutica está na faixa de pH 5,5 a 6,5, e em que o referido anticorpo compreende uma cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 174 e uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID N°: 176.

2. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a referida composição farmacêutica de b) também compreende 25 mM ou menos de tampão de succinato.

3. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a referida composição farmacêutica compreende 2,5 a 30 mg/ml do referido anticorpo e também compreende 10 a 40 mM de tampão de succinato e 75 a 175 mM de cloreto de sódio, em que o pH da referida composição farmacêutica está na faixa de pH 6,0 a 7,0.

4. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a referida composição farmacêutica compreende 80 a 95 mg/ml do referido anticorpo e também compreende 150 a 300 mM de sorbitol e 10 mM ou menos de tampão de succinato, em que o pH da referida composição farmacêutica está na faixa de pH 5,5 a 6,5.

5. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a referida composição farmacêutica compreende 90 mg/ml do referido anticorpo e também compreende de 225 mM de sorbitol e 4,4 mM de tampão de succinato.

6. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que a referida composição farmacêutica compreende também 0,02% de polissorbato (Tween) 20.

7. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a referida composição farmacêutica compreende 90 mg/ml do referido anticorpo e também compreende de 240 mM de sorbitol

8. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que a referida composição farmacêutica compreende também 0,02% de polissorbato (Tween) 20.

9. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de ser para uso no tratamento de uma doença associada com IL-23, em que a doença é psoríase, doença inflamatória do intestino, artrite psoriática, esclerose múltipla, artrite reumatoide ou espondiloartrite, em que o referido anticorpo se liga a IL-23 humana.

10. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que a doença psoríase é psoríase de plaqueta, psoríase de plaqueta crônica ou psoríase de plaqueta crônica moderada a grave.

11. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que a doença psoríase é psoríase pustular palmar, psoríase gutata, psoríase inversa, psoríase pustular ou psoríase eritodérmica.

12. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que a doença inflamatória do intestino é doença de Crohn ou colite ulcerativa.

13. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que a doença espondiloartrite é espondilite anquilosante, espondiloartrite axial não radiográfica ou espondiloartrite periférica.