ES2330220T3 - Usos de antagonistas de il-23; reactivos relacionados. - Google Patents

Abstract

El uso de un antagonista de IL-23 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de tumores que comprenden células tumorales, en el que el antagonista de IL-23 comprende: (a) un sitio de unión a antígeno de un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de p19 (SEC ID Nº: 2); o (b) un ácido nucleico antisentido o ARN de interferencia pequeño (siARN) que se une específicamente a un ácido nucleico que codifica p19 (SEC ID Nº: 1).

Description

Usos de antagonistas de IL-23; reactivos relacionados.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a usos de moléculas de citoquina de mamífero y reactivos relacionados. Más específicamente, la invención se refiere a la identificación de proteínas similares a citoquina de mamífero e inhibidores de las mismas, que se pueden usar en el tratamiento de trastornos proliferativos.

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Antecedentes de la invención

El sistema inmune puede controlar o erradicar cánceres y tumores. El sistema inmune incluye varios tipos de células linfoides y mieloides, por ejemplo, monocitos, macrófagos, células dendríticas (DC), eosinófilos, células T, células B y neutrófilos. Estas células linfoides y mieloides producen proteínas de señalización secretadas conocidas como citoquinas. Las citoquinas incluyen, por ejemplo, interleuquina-10 (IL-10), interferón-gamma (IFNgamma), IL-12 e IL-23. La respuesta inmune incluye inflamación, es decir, la acumulación de células inmunes sistémicamente o en un emplazamiento particular del organismo. En respuesta a un agente infeccioso o sustancia extraña, las células inmunes secretan citoquinas las cuales, a su vez, modulan la proliferación, desarrollo, diferenciación o migración de las células inmunes, por ejemplo, cuando implica inflamación excesiva, como en los trastornos autoinmunes, mientras que la respuesta inmune deteriorada puede dar como resultado cáncer. La respuesta antitumoral por el sistema inmune incluye inmunidad innata, por ejemplo, mediada por macrófagos, células NK y neutrófilos e inmunidad adaptativa, por ejemplo, mediada por células presentadoras de antígeno (APC), células T y células B (véase, por ejemplo, Abbas, et al. (eds.) (2000) Cellular and Molecular Immunology, W. B. Saunders Co., Filadelfia, PA; Oppenheim y Feldmann (eds.) (2001) Cytokine Reference, Academic Press, San Diego, CA; von Andrian y Mackay (2000) New Engl. J. Med. 343: 1020-1034; y Davidson y Diamond (2001) New Engl. J. Med. 345: 340-
350).

En el tratamiento de cánceres, por ejemplo, melanoma se han usado métodos de modulación de la respuesta inmune. Estos métodos incluyen tratamiento con citoquinas o anticuerpos anti-citoquinas, tales como IL-2, IL-12, factor de necrosis tumoral-alfa (FNTalfa), IFNgamma, factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF) y factor de crecimiento transformante (TGF). Donde una célula cancerosa puede producir una citoquina que mejora su propio crecimiento o su propia supervivencia, un anticuerpo anti-citoquina puede ser un agente terapéutico adecuado (véase, por ejemplo, Ramirez-Montagut, et al. (2003) Oncogene 22: 3180-3187; Braun, et al. (2000) J. Immunol. 164: 4025-4031; Shaw, et al. (1998) J. Immunol. 161: 2817-2824; Coussens y Werb (2002) Nature 420: 860-867; Baxevanis, et al. (2000) J. Immunol. 164: 3902-3912; Shimizu, et al. (1999) J. Immunol. 163: 5211-5218; Belardelli y Ferrantini (2002) TRENDS Immunol. 23: 201-208; Seki, et al. (2002) J. Immunol. 168: 3484-3492; Casares, et al. (2003) J. Immunol. 171: 5931-5939; y Oft, et al. (2002) Nature Cell Biol. 4: 487-
494).

La interleuquina-23 (IL-23) es una citoquina heterodimérica comprendida de dos subunidades, es decir, p19 y p40. La subunidad p19 está relacionada estructuralmente con IL-6, factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), y la subunidad p35 de IL-12. La subunidad p40 de IL-23 también es parte de IL-12, una citoquina heterodimérica que comprende p35 y p40. IL-23 media la señalización por unión a un receptor heterodimérico, comprendido de IL-23R e IL-12RbetaI. La subunidad IL-12RbetaI es compartida por el receptor de IL-12, que está compuesto de IL-12Rbeta e IL-12Rbeta2. Muchos de los primeros estudios demostraron que las consecuencias fisiológicas de una deficiencia genética en p40 (ratón knockout de p40; ratón p40KO; ratón p40^{-/-}), eran diferentes de, por ejemplo, más graves o menos graves, que las presentes en un ratón p35KO. Algunos de estos resultados se explicaron finalmente mediante el descubrimiento de IL-23 y el hallazgo de que p40KO evita la expresión de IL-12 e IL-23 (Oppmann, et al. (2000) Immunity 13: 715-725; Wiekowski, et al. (2001) J. Immunol. 166: 7563-7570; Parham, et al. (2002). J Immunol 168, 5699-708; Frucht (2002) Sci STKE 2002, E1-E3; Elkins, et al. (2002) Infection Immunity 70: 1936-1948; y Cua, et al. (2003) Nature 421: 744-748).

Los presentes métodos para el tratamiento de cáncer no son completamente eficaces, y citoquinas tales como IL-12 o IFNgamma producen efectos secundarios tóxicos (véase, por ejemplo, Naylor y Hadden (2003) Int. Immunopharmacol. 3: 1205-1215; Fernández, et al. (1999) J. Immunol. 162: 609-617). La presente invención aborda estos problemas, proporcionando métodos de uso de antagonistas de IL-23.

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Sumario de la invención

La presente invención se basa en el descubrimiento de que un agonista o antagonista de IL-23 puede modular el crecimiento tumoral.

La presente invención proporciona el uso de un antagonista de IL-23 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de tumores, como se indica en la reivindicación 1. También se proporciona el uso anterior, en el que el antagonista de IL-23 inhibe o previene el crecimiento de tumores; así como el uso anterior, en el que la célula tumoral expresa IL-23. La presente invención proporciona el método anterior, en el que el antagonista de IL-23 comprende una composición de unión que une específicamente un polipéptido o ácido nucleico de p19 (SEC ID Nº: 1, 2, 3 ó 4); o el uso anterior, en el que la composición de unión comprende: un sitio de unión a antígeno de un anticuerpo; un ácido nucleico antisentido o ARN de interferencia pequeño (siRNA); y el uso anterior, en el que la composición de unión comprende: un anticuerpo policlonal; un anticuerpo monoclonal; un anticuerpo humanizado, o un fragmento del mismo o un fragmento Fab, Fv o F(ab')_{2}.

Otra realización de la presente invención proporciona el uso anterior en el que la célula tumoral es: una célula de cáncer de colon; una célula de cáncer de ovario; una célula de cáncer mamario o una célula de melanoma.

En otro aspecto, la invención proporciona el uso de un antagonista de IL-23 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un sujeto que sufre de un cáncer o un tumor que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un antagonista de IL-23 como se ha indicado en la reivindicación 10; y el uso anterior, en el que el antagonista de IL-23 inhibe: crecimiento del cáncer o tumor; caquexia; anorexia o angiogénesis. También se proporciona el uso anterior, en el que el antagonista de IL-23 comprende una composición de unión que une específicamente un polipéptido o ácido nucleico de: p19 (SEC ID Nº: 1, 2, 3 ó 4). La presente invención proporciona el uso anterior, en el que la composición de unión comprende: un sitio de unión a antígeno de un anticuerpo; un ácido nucleico antisentido o ARN de interferencia pequeño (siRNA); y el uso anterior, en el que la composición de unión comprende: un anticuerpo policlonal; un anticuerpo monoclonal; un anticuerpo humanizado o un fragmento del mismo; o un fragmento Fab, Fv o F(ab')_{2}.

En otra realización, la invención proporciona el uso anterior, en el que el cáncer o tumor es del: tracto gastrointestinal; tracto respiratorio; sistema reproductivo; o sistema endocrino; así como el uso anterior, en el que el cáncer o tumor es: cáncer de colon; cáncer de ovario; un melanoma; o cáncer mamario.

En otro aspecto la presente invención proporciona un método para determinar si las células tumorales expresan IL-23 que comprende poner en contacto una muestra de un sujeto con un antagonista como se ha indicado en la reivindicación 19, así como el método anterior, en el que la composición de unión comprende una sonda de ácido nucleico o cebador que se une específicamente o hibrida al polinucleótido de SEC ID Nº: 1.

Otra realización de la presente invención proporciona un equipo para determinar si las células tumorales expresan IL-23 que comprende un antagonista de IL-23 como se ha indicado en la reivindicación 21 y un compartimento o instrucciones para uso o evacuación. También se proporciona el equipo anterior, en el que el antagonista comprende un anticuerpo que se une específicamente a p19 (SEC ID Nº: 2).

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Descripción detallada

Como se usa en este documento, incluyendo las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares de palabras tales como "un", "una" y "la" incluyen sus referencias plurales correspondientes, a menos que el contexto lo indique claramente de otra manera. Todas las referencias citadas en este documento se incorporan como referencia en el mismo alcance como si se indicara que cada publicación, solicitud de patente o patente individual, se incorporara específicamente e individualmente como referencia.

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I. Definiciones

"Activación", "estimulación" y "tratamiento", como se aplican a células o a receptores, pueden tener el mismo significado, por ejemplo, activación, estimulación o tratamiento de una célula o receptor con un ligando, a menos que se indique de otra manera mediante el contexto o explícitamente. "Ligando" abarca ligandos naturales y sintéticos, por ejemplo, citoquinas, variantes de citoquina, análogos, muteínas y composiciones de unión obtenidas de anticuerpos. "Ligando" abarca también moléculas pequeñas, por ejemplo, miméticos de péptidos de citoquinas y miméticos de péptidos de anticuerpos. "Activación" puede referirse a activación celular regulada por mecanismos internos, así como por factores externos o ambientales. "Respuesta", por ejemplo, de una célula, tejido, órgano u organismo, abarca un cambio en el comportamiento bioquímico o fisiológico, por ejemplo, concentración, densidad, adhesión o migración dentro de un compartimento biológico, velocidad de expresión génica o estado de diferenciación, en el que el cambio se correlaciona con activación, estimulación o tratamiento, o con mecanismos internos tales como programación
genética.

La "actividad" de una molécula puede describir o referirse a la unión de la molécula a un ligando o a un receptor, para actividad catalítica; a la capacidad para estimular expresión génica o señalización, diferenciación o maduración celular; a actividad antigénica; a la modulación de actividades de otras moléculas y similares. La "actividad" de una molécula puede referirse también a actividad en la modulación o el mantenimiento de interacciones de célula a célula, por ejemplo, adhesión, o actividad para mantener una estructura de una célula, por ejemplo, membranas celulares o citoesqueleto. La "actividad" puede significar también actividad específica, por ejemplo, [actividad catalítica]/[mg de proteína] o [actividad inmunológica]/[mg de proteína], concentración en un compartimento biológico, o similares. La "actividad proliferativa" abarca una actividad que promueve, que es necesaria para, o que se asocia específicamente con, por ejemplo, división celular normal, así como cáncer, tumores, displasia, transformación celular, metástasis y angiogénesis.

"Administración" y "tratamiento", como se aplican a un animal, ser humano, sujeto experimental, célula, tejido, órgano o líquido biológico, se refieren al contacto de un agente de diagnóstico, composición o compuesto terapéutico farmacéutico exógeno con el animal, ser humano, sujeto, célula, tejido, órgano o líquido biológico. "Administración" y "tratamiento" se pueden referir, por ejemplo, a métodos terapéuticos, de placebo, farmacocinéticos, de diagnóstico, de investigación y experimentales. "Tratamiento de una célula" abarca el contacto de un reactivo con la célula, así como el contacto de un reactivo con un fluido, donde el fluido está en contacto con la célula. La "administración" y el "tratamiento" significan también tratamientos in vitro y ex vivo, por ejemplo, de una célula, mediante una composición de unión de diagnóstico de reactivo o mediante otra célula. El "tratamiento", como se aplica a un sujeto humano, veterinario o de investigación, se refiere a tratamiento terapéutico, medidas profilácticas o preventivas, para aplicaciones de investigación y de diagnóstico. El "tratamiento", como se aplica a un sujeto humano, veterinario o de investigación, o célula, tejido u órgano, abarca el contacto de un agonista de IL-23 o antagonista de IL-23 con un sujeto humano o animal, una célula, tejido, compartimento fisiológico o líquido fisiológico. El "tratamiento de una célula", abarca también situaciones en las que el agonista de IL-23 o antagonista de IL-23 entra en contacto con el receptor de IL-23 (heterodímero de IL-23R e IL-12RbetaI), por ejemplo, en la fase líquida o fase coloidal, así como situaciones en las que el agonista o antagonista entra en contacto con un fluido, por ejemplo, donde el fluido está en contacto con una célula o receptor, pero donde no se ha demostrado que el agonista o antagonista entra en contacto con la célula o el receptor.

La "composición de unión" se refiere a una molécula, molécula pequeña, macromolécula, anticuerpo, un fragmento o análogo de los mismos, o receptor soluble, capaz de unirse a una diana. La "composición de unión" puede referirse también a un complejo de moléculas, por ejemplo, un complejo no covalente, a una molécula ionizada o a una molécula modificada covalentemente o no covalentemente, por ejemplo, modificada mediante fosforilación, acilación, entrecruzamiento, ciclización o escisión limitada, la cual es capaz de unirse a una diana. La "composición de unión", puede referirse también a una molécula en combinación con un estabilizante, excipiente, sal, tampón, disolvente o aditivo. La "unión" puede definirse como una asociación de la composición de unión con una diana, donde la asociación da como resultado la reducción en el movimiento Browniano normal de la composición de unión, en casos en los que la composición de unión puede disolverse o suspenderse en solución.

"Caquexia" es un síndrome de agotamiento que implica pérdida de músculo (agotamiento muscular) y grasa, que se produce como resultado de un trastorno en el metabolismo. La caquexia ocurre en diversos cánceres, trastorno obstructivo pulmonar crónico (COPD), insuficiencia de órganos avanzada y SIDA. La "caquexia del cáncer" es la caquexia que ocurre con el cáncer. La caquexia del cáncer se caracteriza, por ejemplo, por pérdida de peso marcada, anorexia, astenia y anemia. La anorexia es un trastorno que se produce como resultado de la falta de motivación para comer, por ejemplo, aversión al alimento (véase, por ejemplo, MacDonald, et al. (2003) J. Am. Coll. Surg. 197: 143-161; Rubin (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100: 5384-5389; Tisdale (2002) Nature Reviews Cancer 2: 862-871; Argiles, et al. (2003) Drug Discovery Today 8: 838-844; Lelli, et al. (2003) J. Chemother. 15: 220-225; y Argiles, et al. (2003) Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care 6: 401-406).

"Variantes conservativamente modificadas" se aplica a secuencias tanto de aminoácidos como de ácido nucleico. Con respecto a secuencias de ácido nucleico particulares, las variantes conservativamente modificadas se refieren a aquellos ácidos nucleicos que codifican secuencias de aminoácidos idénticas o prácticamente idénticas o, donde el ácido nucleico no codifica una secuencia de aminoácidos, para secuencias de ácido nucleico esencialmente idénticas. Debido a la degeneración del código genético, un gran número de ácidos nucleicos funcionalmente idénticos puede codificar cualquier proteína dada.

En cuanto a las secuencias de aminoácidos, el especialista en la técnica reconocerá que una sustitución individual a una secuencia de ácido nucleico, péptido, polipéptido o proteína, que sustituye a un aminoácido o un porcentaje pequeño de aminoácidos en la secuencia codificada por un aminoácido conservado, es una "variante conservativamente modificada". Las tablas de sustitución conservativa que proporcionan aminoácidos funcionalmente similares se conocen en la técnica. Un ejemplo de una sustitución conservativa es el intercambio de un aminoácido en uno de los siguientes grupos por otro aminoácido del mismo grupo (véase la Patente de Estados Unidos Nº 5.767.063, expedida a Lee, et al.; y Kyte y Doolittle (1982) J. Mol. Biol. 157: 105-132):

(1)

Hidrófobos: Norleucina, Ile, Val, Leu, Phe, Cys o Met;

(2)

Hidrófilos neutros: Cys, Ser, Thr;

(3)

Ácidos: Asp, Glu;

(4)

Básicos: Asn, Gln, His, Lys, Arg;

(5)

Restos que influyen sobre la orientación de la cadena: Gly, Pro;

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(6)

Aromáticos: Trp, Tyr, Phe;

(7)

Aminoácidos pequeños: Gly, Ala, Ser.

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"Cantidad eficaz" abarca una cantidad suficiente para mejorar o prevenir un síntoma o signo de la afección médica. Cantidad eficaz significa también una cantidad suficiente para permitir o facilitar el diagnóstico. Una cantidad eficaz para un paciente o sujeto veterinario particular puede variar dependiendo de factores tales como la afección que se esté tratando, la salud general del paciente, el método, la vía y dosis de administración, y la gravedad de los efectos secundarios (véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.888.530, expedida a Netti, et al.). Una cantidad eficaz puede ser la dosis máxima o protocolo de dosificación que evita efectos secundarios o efectos tóxicos significativos. El efecto dará como resultado una mejora de una medida o parámetro de diagnóstico en al menos el 5%, habitualmente en al menos el 10%, más habitualmente al menos el 20%, muy habitualmente al menos 30%, preferiblemente al menos el 40%, más preferiblemente al menos el 50%, lo más preferible es que sea al menos el 60%, idealmente al menos el 70%, más idealmente al menos el 80% y muy idealmente al menos el 90%, donde el 100% se define como el parámetro de diagnóstico mostrado por un sujeto normal (véase, por ejemplo, Maynard, et al. (1996) A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice, Interpharm Press, Boca Ratón, FL; Dent (2001) Good Laboratory and Good Clinical Practice, Urch Publ., Londres, Reino Unido).

"Exógeno" se refiere a sustancias que se producen fuera de un organismo, célula o cuerpo humano, dependiendo del contexto. "Endógeno" se refiere a sustancias que se producen dentro de una célula, organismo o cuerpo humano, dependiendo del contexto.

"Afección inmune" o "trastorno inmune" abarca, por ejemplo, inflamación patológica, un trastorno inflamatorio y un trastorno o enfermedad autoinmune. La "afección inmune" se refiere también a infecciones, infecciones persistentes y afecciones proliferativas, tales como cáncer, tumores y angiogénesis, incluyendo infecciones, tumores y cánceres que resisten a la erradicación por el sistema inmune. La "afección cancerosa" incluye, por ejemplo, cáncer, células cancerosas, tumores, angiogénesis y afecciones precancerosas tales como displasia.

"Trastorno inflamatorio" significa un trastorno o proceso patológico en el que la patología se produce como resultado, totalmente o en parte, de, por ejemplo, un cambio en número, cambio en velocidad de migración o cambio en activación, de células del sistema inmune. Las células del sistema inmune incluyen, por ejemplo, células T, células B, monocitos o macrófagos, células presentadoras de antígeno (APC), células dendríticas, microglia, células NK, células NKT, neutrófilos, eosinófilos, mastocitos o cualquier otra célula asociada específicamente con la inmunología, por ejemplo, células epiteliales o endoteliales que producen citoquinas.

"Inhibidores" y "antagonistas" o "activadores" y "agonistas", se refieren a moléculas inhibidoras o activadoras, respectivamente, por ejemplo, para la activación de, por ejemplo, un ligando, receptor, cofactor, gen, célula, tejido u órgano. Un modulador de, por ejemplo, un gen, un receptor, un ligando o una célula, es una molécula que altera una actividad del gen, receptor, ligando o célula, donde la actividad se puede activar, inhibir o alterar en sus propiedades reguladoras. El modulador puede actuar solo o puede usar un cofactor, por ejemplo, una proteína, ión metálico o molécula pequeña. Los inhibidores son compuestos que disminuyen, bloquean, evitan, retardan la activación, inactivan, desensibilizan o regulan a la baja, por ejemplo, un gen, proteína, ligando, receptor o célula. Los activadores son compuestos que aumentan, activan, facilitan, potencian la activación, sensibilizan o regulan positivamente, por ejemplo, un gen, proteína, ligando, receptor o célula. Un inhibidor puede definirse también como una composición que reduce, bloquea o inactiva una actividad constitutiva. Un "agonista" es un compuesto que interacciona con una diana para causar o promover un aumento en la activación de la diana. Un "antagonista" es un compuesto que se opone a las acciones de un agonista. Un antagonista evita, reduce, inhibe o neutraliza la actividad de un agonista. Un antagonista puede también evitar, inhibir o reducir la actividad constitutiva de una diana, por ejemplo, un receptor diana, aún donde no existe un agonista identificado.

Para examinar el alcance de inhibición, por ejemplo, muestras o ensayos que comprenden, por ejemplo, una proteína, gen, célula u organismo determinado, se tratan con un activador o inhibidor potencial y se comparan con muestras de control sin el inhibidor. A las muestras de control, es decir, no tratadas con antagonista, se les asigna un valor de actividad relativa del 100%. Se consigue inhibición cuando el valor de actividad con respecto al control es de aproximadamente el 90% o menos, típicamente el 85% o menos, más típicamente el 80% o menos, muy típicamente el 75% o menos, en general el 70% o menos, más generalmente el 65% o menos, muy generalmente el 60% o menos, típicamente el 55% o menos, habitualmente el 50% o menos, más habitualmente el 45% o menos, muy habitualmente el 40% o menos, preferiblemente el 35% o menos, más preferiblemente el 30% o menos, aún más preferiblemente el 25% o menos y lo más preferible es que sea menos del 25%. Se consigue activación cuando el valor de actividad con respecto al control es de aproximadamente el 110%, en general al menos el 120%, más generalmente al menos el 140%, muy generalmente al menos el 160%, con frecuencia al menos el 180%, con mayor frecuencia al menos dos veces, con mayor frecuencia al menos 2,5 veces, habitualmente al menos 5 veces, más habitualmente al menos 10 veces, preferiblemente al menos 20 veces, más preferiblemente al menos 40 veces y lo más preferible es que sea más de 40 veces mayor.

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Los puntos finales en activación o inhibición pueden controlarse de la manera siguiente. La activación, inhibición y respuesta al tratamiento, por ejemplo, de una célula, líquido fisiológico, tejido, órgano y sujeto animal o humano, puede controlarse mediante un punto final. El punto final puede comprender una cantidad o porcentaje predeterminado de, por ejemplo, un indicio de inflamación, oncogenicidad o desgranulación o secreción celular, tal como la liberación de una citoquina, oxígeno tóxico o una proteasa. El punto final puede comprender, por ejemplo, una cantidad predeterminada de flujo o transporte iónico; migración celular; adhesión celular; proliferación celular; potencial para metástasis; diferenciación celular y cambio en fenotipo, por ejemplo, cambio en expresión de genes que se relacionan con inflamación, apoptosis, transformación, ciclo celular o metástasis (véase, por ejemplo, Knight (2000) Ann. Clin. Lab. Sci. 30: 145-158; Hood y Cheresh (2002) Nature Rev. Cancer 2: 91-100; Timme, et al. (2003) Curr. Drug Targets 4: 251-261; Robbins e Itzkowitz (2002) Med. Clin. North Am. 86: 1467-1495; Grady y Markowitz (2002) Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 3: 101-128; Bauer, et al. (2001) Glia 36: 235-243; y Stanimirovic y Satoh (2000) Brain Pathol. 10: 113-126).

Un punto final de inhibición es generalmente el 75% del control o menos, preferiblemente el 50% del control o menos, más preferiblemente el 25% del control o menos, y lo más preferible es que sea el 10% del control o menos. En general, un punto final de activación es al menos el 150% del control, preferiblemente al menos dos veces el control, más preferiblemente al menos cuatro veces el control y lo más preferible es que sea al menos 10 veces el
control.

Una composición que está "marcada" es detectable, ya sea directamente o indirectamente, mediante métodos espectroscópicos, fotoquímicos, bioquímicos, inmunoquímicos, isotópicos o químicos. Por ejemplo, marcadores útiles incluyen ^{32}P, ^{33}P, ^{35}S, ^{14}C, ^{3}H, ^{125}I, isótopos estables, colorantes fluorescentes, reactivos de densidad electrónica, substratos, marcadores de epítopo o enzimas, por ejemplo, como se usan en inmunoensayos ligados a enzima o fluorettes (véase, por ejemplo, Rozinov y Nolan (1998) Chem. Biol. 5: 713-728).

"Ligando" se refiere, por ejemplo, a una molécula pequeña, péptido, polipéptido y molécula asociada a membrana o unida a membrana, o complejo de los mismos, que puede actuar como un agonista o antagonista de un receptor. "Ligando" abarca también un agente que no es un agonista o antagonista, pero que puede unirse al receptor sin que influya significativamente sobre sus propiedades biológicas, por ejemplo, señalización o adhesión. Además, el "ligando" incluye un ligando unido a membrana que se ha cambiado, por ejemplo, mediante métodos químicos o recombinantes, a una versión soluble del ligando unido a membrana. Por convención, donde un ligando está unido a membrana en una primera célula, el receptor se encuentra habitualmente en una segunda célula. La segunda célula puede tener la misma identidad o una identidad diferente a la primera célula. Un ligando o receptor puede ser enteramente intracelular, es decir, puede residir en el citosol, núcleo o algún otro compartimento intracelular. El ligando o receptor puede cambiar su emplazamiento, por ejemplo, desde un compartimento intracelular hasta la cara exterior de la membrana plasmática. El complejo de un ligando y receptor se denomina un "complejo ligando receptor". Cuando un ligando y receptor están implicados en una ruta de señalización, el ligando se encuentra en una posición cadena arriba y el receptor se encuentra en una posición cadena abajo de la ruta de señaliza-
ción.

Se proporcionan "moléculas pequeñas" para el tratamiento de fisiología y trastornos de tumores y cánceres. La expresión "molécula pequeña" se define como una molécula con un peso molecular que es menor de 10 kD, típicamente menor de 2 kD y preferiblemente menor de 1 kD. Las moléculas pequeñas incluyen, pero no están limitadas a, moléculas inorgánicas, moléculas orgánicas, moléculas orgánicas que contienen un componente inorgánico, moléculas que comprenden un átomo radiactivo, moléculas sintéticas, miméticos de péptido y miméticos de anticuerpo. Como un agente terapéutico, una molécula pequeña puede ser más permeable a células, menos sensible a la degradación y menos apta para inducir una respuesta inmune que las moléculas grandes. Se describen moléculas pequeñas, tales como miméticos de péptido de anticuerpos y citoquinas, así como toxinas de molécula pequeña (véase, por ejemplo, Casset, et al. (2003) Biochem. Biophys. Res. Commun. 307: 198-205; Muyldermans (2001) J. Biotechnol. 74: 277-302; Li (2000) Nat. Biotechnol. 18: 1251-1256; Apostolopoulos, et al. (2002) Curr. Med. Chem. 9: 411-420; Monfardini, et al. (2002) Curr. Pharm. Des. 8: 2185-2199; Domingues, et al. (1999) Nat. Struct. Biol. 6: 652-656; Sato y Sone (2003) Biochem. J. 371: 603-608; y la Patente de Estados Unidos Nº 6.326.482 expedida a Stewart,
et al.).

Que se une "específicamente" o "selectivamente", cuando se hace referencia a un ligando/receptor, anticuerpo/antígeno u otro par de unión, indica una reacción de unión que es determinativa de la presencia de la proteína en una población heterogénea de proteínas y otros materiales biológicos. Por tanto, en condiciones indicadas, un ligando especificado se une a un receptor particular y no se une en una cantidad significativa a otras proteínas presentes en la muestra. El anticuerpo, o composición de unión obtenida del sitio de unión a antígeno de un anticuerpo, del método contemplado se une a su antígeno o una variante o muteína del mismo, con una afinidad que es al menos dos veces mayor, preferiblemente al menos diez veces mayor, más preferiblemente al menos 20 veces mayor y lo más preferible es que sea al menos 100 veces mayor que la afinidad con cualquier otro anticuerpo o composición de unión derivada del mismo. En una realización preferida, el anticuerpo tendrá una afinidad que es mayor de aproximadamente 10^{9} litros/mol, según se determina, por ejemplo, mediante el análisis de Scatchard (véase Munsen, et al. (1980) Analyt. Biochem. 107: 220-239).

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II. General

Se describen métodos de uso de polipéptidos, ácidos nucleicos, variantes, muteínas y miméticos del heterodímero de IL-23, subunidad p19, subunidad p40, el heterodímero del receptor de IL-23, subunidad de IL-23R o subunidad de IL-12RbetaI. Se proporcionan también métodos para el uso de una hiperquina, es decir, una proteína de fusión que comprende, por ejemplo, la subunidad p19 enlazada a la subunidad p40, así como ácidos nucleicos que codifican la hiperquina (véase, por ejemplo, SEC ID Nº: 10 u 11) (Oppmann, et al., citado anteriormente; Fischer, et al. (1997) Nature Biotechnol. 15: 142-145; Rakemann, et al. (1999) J. Biol. Chem. 274: 1257-1266; y Peters, et al. (1998) J. Immunol. 161: 3575-3581).

La interleuquina-23 (IL-23; conocida también como IL-B30) es una citoquina heterodimérica compuesta de una subunidad p19 novedosa (SEC ID Nº: 2 ó 4) y la subunidad p40 (SEC ID Nº: 8 ó 9) de IL-12 (Oppmann, et al., citado anteriormente). Al igual que p35, p19 requiere co-expresión de p40 para actividad biológica (Wiekowski, et al., citado anteriormente). El receptor de IL-23 comprende una subunidad novedosa del receptor (IL-23R; SEC ID Nº: 6) que une p19 e IL-12RbetaI (SEC ID Nº: 7) que une p40 (véase, por ejemplo, Parham, et al. (2002) J. Immunol. 168: 5699-5708). Estas dos subunidades del receptor forman el complejo de señalización funcional y se expresan en células T de memoria CD4^{+}CD45Rb^{lo} así como macrófagos de médula ósea activados por IFNgamma (Parham, et al., citado anteriormente).

Se pueden generar anticuerpos para diversas proteínas de citoquinas, incluyendo variantes individuales, polimórficas, alélicas, de cepa o de especie, y fragmentos de las mismas, tanto en sus formas de origen natural (longitud completa) como en sus formas recombinantes (véase, por ejemplo, SEC ID Nº: 2, 4, 10 u 11). Además, se pueden generar anticuerpos para proteínas receptoras (véase, por ejemplo, SEC ID Nº: 6) tanto en sus formas nativas (o activas) como en sus formas inactivas, por ejemplo, desnaturalizadas. Se pueden usar también anticuerpos anti-
idiotípicos.

La administración de un agonista de IL-23, es decir, IL-23 o hiperquina IL-23 puede inducir, por ejemplo, proliferación de células T de memoria, blastos PHA, y células T CD45RO; y mejora de la producción de interferón-gamma (IFNgamma) por blastos PHA o células T CD45RO. Por el contrario a IL-12, IL-23 estimula preferiblemente poblaciones de células T de memoria a diferencia de poblaciones de células T sin tratar tanto en el ser humano como en ratón. IL-23 activa varias moléculas de señalización celular intracelulares, por ejemplo, Jak2, Tyk2, Stat1, Stat2, Stat3 y Stat4. IL-12 activa este mismo grupo de moléculas, pero la respuesta de Stat4 a IL-23 es relativamente débil, mientras que la respuesta de Stat4 a IL-12 es fuerte (Oppmann, et al., citado anteriormente; Parham, et al. (2002) J. Immunol. 168: 5699-5708).

IL-12 e IL-23 emplean mecanismos similares de transducción de señal. IL-23 que emplea su complejo de receptores, activa a Jak2, Tyk2 y Stat-1, -3, -4 y -5, como lo hace IL-12. Sin embargo, la activación de Stat-4 es significativamente más débil en respuesta a IL-23 que a IL-12. Asimismo, por el contrario a IL-12, la Stat más importante inducida por IL-23 es Stat-3 (véase, por ejemplo, Parham, et al., citado anteriormente).

La administración de la subunidad p19 de IL-23 puede dar como resultado, por ejemplo, crecimiento atrofiado, infertilidad y muerte de animales, así como infiltrados inflamatorios, por ejemplo, en el tracto gastrointestinal, pulmones, piel e hígado e hiperplasia de células epiteliales, anemia microcítica, recuento de neutrófilos aumentado, FNT-alfa aumentado en suero; y expresión aumentada de genes de fase aguda en el hígado (véase Wiekowski, et al., citado anteriormente). Ocurrió expresión mejorada de IL-23 en líneas de células epiteliales inmortalizadas no transformadas. Por tanto, IL-23 puede proporcionar una señal temprana de potencial tumoral in vivo.

Otros estudios han demostrado que IL-23 modula la respuesta inmune a infección (véase, por ejemplo, Pirhonen, et al. (2002) J. Immunol. 169: 5673-5678; Broberg, et al. (2002) J. Interferon Cytokine Res. 22: 641-651; Elkins, et al. (2002) Infection Immunity 70: 1936-1948; y Cooper, et al. (2002) J. Immunol. 168: 1322-1327).

Con respecto a cáncer, la presencia de una cantidad relativamente alta de transcritos en tejido usado para biopsias de un individuo, indica una predisposición para el desarrollo de la enfermedad o puede proporcionar medios para detectar la enfermedad antes de la aparición de síntomas clínicos reales. Los datos de la expresión génica son una herramienta útil en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades y procesos patológicos (véase, por ejemplo, Li y Wong (2001) Genome Informatics 12: 3-13; Lockhart, et al. (1996) Nature Biotechnol. 14: 1675-1680; Homey, et al. (2000) J. Immunol. 164: 3465-3470; Debets, et al. (2000) J. Immunol. 165: 4950-4956).

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III. Agonistas, Antagonistas y Composiciones de Unión

Se describen métodos de uso de agonistas y antagonistas de IL-23. Un agonista de IL-23 abarca, por ejemplo, IL-23, una variante, muteína, hiperquina o mimético de péptido de IL-23, anticuerpos agonistas para IL-23R, y ácidos nucleicos que codifican estos agonistas. Los antagonistas de IL-23 incluyen, por ejemplo, anticuerpos para IL-23, anticuerpos de bloqueo para IL-23R, un receptor soluble basado en la región extracelular de una subunidad del IL-23R, miméticos de péptido para el mismo y ácidos nucleicos que codifican estos antagonistas.

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Se describen métodos de uso de agonistas y antagonistas de p19, el complejo de p19 y p40, IL-23R, y el complejo de IL-23R e IL-12Rbeta1, incluyendo composiciones de unión que se unen específicamente a proteínas y complejos de proteína de p19, el complejo de p19 y p40, IL-23R y el complejo de IL-23R e IL-12Rbeta1.

Una hiperquina de IL-23 abarca, por ejemplo, una proteína de fusión que comprende la secuencia polipeptídica de p19 y p40, donde p19 y p40 se encuentran en una cadena polipeptídica continua. Las secuencias de p19 y p40 pueden estar en cualquier orden. La proteína de fusión puede contener una secuencia de enlazador, que reside entre las secuencias de p19 y p40, en una cadena polipeptídica continua.

Se pueden usar regiones de antigenicidad aumentada para la generación de anticuerpos. Las regiones de antigenicidad aumentada de p19 de humano se encuentran, por ejemplo, en los aminoácidos 16-28; 57-87; 110-114; 136-154 y 182-186 de AAQ89442 del GenBank (gi: 37183284). Las regiones de antigenicidad aumentada de IL-23R de humano se encuentran, por ejemplo, en los aminoácidos 22-33; 57-63; 68-74; 101-112; 117-133; 164-177; 244-264; 294-302; 315-326; 347-354; 444-473; 510-530 y 554-558 de AAM44229 del GenBank (gi: 21239252). El análisis se realizó mediante una gráfica de Parker usando el Vector NTI® Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD). La presente invención proporciona también un antagonista de IL-23 que es un receptor soluble, es decir, que comprende una región extracelular de IL-23R, por ejemplo, los aminoácidos 1-353 de AAM44229 del GenBank o un fragmento del mismo, donde la región extracelular o fragmento del mismo se une específicamente a IL-23. El IL-23R de ratón es NP_653131 del GenBank (gi: 21362353). Se contemplan muteínas y variantes, por ejemplo, pegilación o mutagénesis, para retirar o reemplazar restos de Asn de desamidación.

Se pueden preparar anticuerpos monoclonales, policlonales y humanizados (véase, por ejemplo, Sheperd y Dean (eds.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, Nueva York, NY; Kontermann y Dubel (eds.) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, Nueva York; Harlow y Lane (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, págs. 139-243; Carpenter, et al. (2000) J. Immunol. 165: 6205; He, et al. (1998) J. Immunol. 160: 1029; Tang, et al. (1999) J. Biol. Chem. 274: 27371-27378; Baca, et al. (1997) J. Biol. Chem. 272: 10678-10684; Chothia, et al. (1989) Nature 342: 877-883; Foote y Winter (1992) J. Mol. Biol. 224: 487-499 y la Patente de Estados Unidos Nº 6.329.511 expedida a Vásquez, et al.).

No es necesaria la purificación de antígeno para la generación de anticuerpos. La inmunización se puede realizar mediante inmunización con vectores de ADN; véase, por ejemplo, Wang, et al. (1997) Virology 228: 278-284. Como alternativa, puede inmunizarse a animales con células que posean el antígeno de interés. Se pueden aislar entonces esplenocitos de los animales inmunizados y se pueden fusionar los esplenocitos con una línea de células de mieloma para producir un hibridoma (Meyaard, et al. (1997) Immunity 7: 283-290; Wright, et al. (2000) Immunity 13: 233-242 y Preston, et al. (1997) Eur. J. Immunol. 27: 1911-1918). Se pueden seleccionar hibridomas resultantes para la producción del anticuerpo deseado mediante ensayos funcionales o ensayos biológicos, es decir, ensayos que no dependen de la posesión del antígeno purificado. Se puede demostrar que la inmunización con células es superior para la generación de anticuerpos que la inmunización con antígeno purificado (Kaithamana, et al. (1999) J. Immunol. 163: 5157-5164).

Se pueden medir las propiedades de unión del anticuerpo al antígeno y del ligando al receptor, por ejemplo, mediante resonancia de plasmones superficiales (Karlsson, et al. (1991) J. Immunol. Methods 145: 229-240; Neri, et al. (1997) Nat. Biotechnol. 15: 1271-1275; Jonsson, et al. (1991) Biotechniques 11: 620-627) o mediante ELISA de competición (Friguet, et al. (1985) J. Immunol. Methods 77: 305-319; Hubble (1997) Immunol. Today 18: 305-306). Se pueden usar anticuerpos para purificación por afinidad para aislar el antígeno diana del anticuerpo y proteínas unidas asociadas, véase, por ejemplo, Wilchek, et al. (1984) Meth. Enzymol. 104: 3-55.

Los anticuerpos se unirán habitualmente con al menos una K_{D} de aproximadamente 10^{-3} M, más habitualmente al menos 10^{-6} M, típicamente al menos 10^{-7} M, más típicamente al menos 10^{-8} M, preferiblemente al menos 10^{-9} M y más preferiblemente al menos 10^{-10} M y lo más preferible es que sea al menos 10^{-11} M (véase, por ejemplo, Presta, et al. (2001) Thromb. Haemost. 85: 379-389; Yang, et al. (2001) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 38: 17-23; y Carnahan, et al. (2003) Clin. Cancer Res. (Supl.) 9: 3982s-3990s).

Se proporcionan receptores solubles que comprenden los dominios extracelulares de polipéptidos de receptor de IL-23R o IL12Rbeta1. Se pueden preparar receptores solubles y se pueden usar de acuerdo con métodos convencionales (véase, por ejemplo, Jones, et al. (2002) Biochim. Biophys. Acta 1592: 251-263; Prudhomme, et al. (2001) Expert Opinion Biol. Ther. 1: 359-373 y Fernández-Botran (1999) Crit. Rev. Clin. Lab Sci. 36: 165-224).

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IV. Composiciones, Métodos Terapéuticos

Se describe el uso de IL-23 y anti-IL-23R, por ejemplo, en el tratamiento de afecciones y trastornos proliferativos, que incluyen cáncer, tumores, angiogénesis, caquexia, caquexia del cáncer, anorexia y trastornos precancerosos, por ejemplo, displasia. Se proporcionan también ácidos nucleicos para estos usos terapéuticos, por ejemplo, ácidos nucleicos que codifican IL-23 o IL-23R o un fragmento antigénico de los mismos, los ácidos nucleicos antisentido correspondientes y productos de hibridación de los mismos. La invención proporciona también composiciones para siRNA de interferencia, (véase, por ejemplo, Arenz y Schepers (2003) Naturwissenschaften 90: 345-359; Sazani y Kole (2003) J. Clin. Invest. 112: 481-486; Pirollo, et al. (2003) Pharmacol. Therapeutics 99: 55-77 y Wang, et al. (2003) Antisense Nucl. Acid Drug Devel. 13: 169-189).

Para preparar composiciones farmacéuticas o estériles que incluyen un agonista o antagonista de IL-23, el análogo de citoquina o muteína, anticuerpo para el mismo o ácido nucleico del mismo, se mezcla con un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences y U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984). Se pueden preparar formulaciones de agentes terapéuticos y de diagnóstico, mediante mezcla con vehículos, excipientes o estabilizantes fisiológicamente aceptables en forma de, por ejemplo, polvos liofilizados, suspensiones, soluciones o suspensiones acuosas (véase, por ejemplo, Hardman, et al. (2001) Goodman y Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, Nueva York, NY; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams and Wilkins, Nueva York, NY; Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; y Weiner y Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., Nueva York, NY).

La vía de administración es, por ejemplo, mediante aplicación tópica o cutánea, inyección subcutánea, inyección o infusión mediante las vías intravenosa, intraperitoneal, intracerebral, intramuscular, intraocular, intraarterial, intracerebroespinal, intralesional o pulmonar, o mediante sistemas de liberación sostenida o un implante. Se han descrito vectores de transferencia génica, por ejemplo, para el sistema nervioso central (véase, por ejemplo, Cua, et al. (2001) J. Immunol. 166: 602-608; Sidman et al. (1983) Biopolymers 22: 547-556; Langer, et al. (1981) J. Biomed. Mater. Res. 15: 167-277; Langer (1982) Chem. Tech. 12: 98-105; Epstein, et al. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 3688-3692; Hwang, et al. (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4030-4034; y las Patentes de Estados Unidos Nº 6.350.466 y 6.316.024).

La selección de un régimen de administración para un agente terapéutico depende de varios factores, que incluyen la tasa de renovación de la entidad en el suero o tejido, el nivel de síntomas, la inmunogenicidad de la entidad y la accesibilidad de las células diana en la matriz biológica. Preferiblemente, un régimen de administración maximiza la cantidad de agente terapéutico administrado al paciente coherente con un nivel aceptable de efectos secundarios. Por consiguiente, la cantidad de agente biológico administrado depende en parte de la entidad particular y la gravedad de la afección que se esté tratando. Está disponible una guía para la selección de dosis apropiadas de anticuerpos, citoquinas y moléculas pequeñas (véase, por ejemplo, Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, Reino Unido; Kresina (ed.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, Nueva York, NY; Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, Nueva York, NY; Baert, et al. (2003) New Engl. J. Med. 348: 601-608; Milgrom, et al. (1999) New Engl. J. Med. 341: 1966-1973; Slamon, et al. (2001) New Engl. J. Med. 344: 783-792; Beniaminovitz, et al. (2000) New Engl. J. Med. 342: 613-619; Ghosh, et al. (2003) New Engl. J. Med. 348: 24-32; y Lipsky, et al. (2000) New Engl. J. Med. 343: 1594-1602).

Se pueden proporcionar anticuerpos, fragmentos de anticuerpo y citoquinas mediante infusión continua o mediante dosis a intervalos de, por ejemplo, un día, una semana o 1 a 7 veces por semana. Las dosis se pueden proporcionar por vía intravenosa, por vía subcutánea, por vía tópica, por vía oral, por vía nasal, por vía rectal, por vía intramuscular, por vía intracerebral, por vía intraespinal o por inhalación. Un protocolo de dosis preferido, es uno que implica la dosis o frecuencia de dosis máxima que evite efectos secundarios no deseables significativos. Una dosis semanal total es en general al menos 0,05 \mug/kg de peso corporal, más generalmente al menos 0,2 \mug/kg, muy generalmente al menos 0,5 \mug/kg, típicamente al menos 1 \mug/kg, más típicamente al menos 10 \mug/ml, muy típicamente al menos 100 \mug/ml, preferiblemente al menos 0,2 mg/kg, más preferiblemente al menos 1,0 mg/kg, lo más preferible es que sea al menos 2,0 mg/kg, óptimamente al menos 10 mg/kg, más óptimamente al menos 25 mg/kg y lo más óptimo es que sea al menos 50 mg/kg (véase, por ejemplo, Yang, et al. (2003) New Engl. J. Med. 349: 427-434; Herold, et al. (2002) New Engl. J. Med. 346: 1692-1698; Liu, et al. (1999) J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67: 451-456 y Portielji, et al. (2003) Cancer Immunol. Immunother. 52: 133-144). La dosis deseada de un agente terapéutico de molécula pequeña, por ejemplo, un mimético de péptido, producto natural o compuesto químico orgánico, es aproximadamente la misma que la de un anticuerpo o polipéptido, en una base de moles/kg.

Una cantidad eficaz para un paciente particular puede variar dependiendo de factores tales como la afección que se esté tratando, la salud general del paciente, el método, la vía y la dosis de administración y la gravedad de los efectos secundarios (véase, por ejemplo, Maynard, et al. (1996) A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice, Interpharm Press, Boca Ratón, FL y Dent (2001) Good Laboratory and Good Clinical Practice, Urch Publ., Londres, Reino Unido).

Sujetos veterinarios, experimentales o de investigación típicos, incluyen monos, perros, gatos, ratas, ratones, conejos, cobayas, caballos y seres humanos.

La determinación de la dosis adecuada la realiza el médico, por ejemplo, usando parámetros o factores conocidos o que se sospecha en la técnica que afectan el tratamiento o que se predice que afectan el tratamiento. En general, la dosis comienza con una cantidad un poco menor que la dosis óptima y se aumenta en aumentos pequeños a partir de entonces hasta que se logre el efecto deseado u óptimo con respecto a cualquier efecto secundario negativo. Medidas de diagnóstico importantes incluyen las de los síntomas de, por ejemplo, la inflamación o el nivel de citoquinas inflamatorias producidas. Preferiblemente, un agente biológico que se usará se obtiene de la misma especie que el animal elegido como diana para el tratamiento, reduciendo al mínimo de esta manera una respuesta humoral al
reactivo.

En la técnica se conocen bien los métodos para la co-administración o el tratamiento con un segundo agente terapéutico, por ejemplo, una citoquina, esteroide, agente quimioterapéutico, antibiótico o radiación (véase, por ejemplo, Hardman, et al. (eds.) (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10ª ed., McGraw-Hill, Nueva York, NY; Poole y Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice: A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Filadelfia, PA y Chabner y Longo (eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Filadelfia, PA). Una cantidad eficaz de agente terapéutico disminuirá los síntomas típicamente en al menos el 10%; habitualmente en al menos el 20%; preferiblemente al menos el aproximadamente el 30%; más preferiblemente al menos el 40% y lo más preferible es que sea en al menos el
50%.

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V. Equipos y Reactivos de Diagnóstico

Se describen proteínas de IL-23, fragmentos de las mismas, ácidos nucleicos y fragmentos de los mismos, en un equipo de diagnóstico. Se proporcionan también composiciones de unión, que incluyen anticuerpos o fragmentos de anticuerpo, para la detección de IL-23 y receptor de IL-23 y metabolitos y productos de degradación de los mismos. Típicamente, el equipo tendrá un compartimento que contiene un polipéptido p19 o un fragmento antigénico del mismo, una composición de unión para el mismo o un ácido nucleico, por ejemplo, una sonda o cebador de ácido nucleico. La sonda o cebador de ácido nucleico hibrida específicamente en condiciones rigurosas a un ácido nucleico que codifica p19 o IL-23R.

El equipo puede comprender, por ejemplo, un reactivo y un compartimento, un reactivo e instrucciones de uso o un reactivo con un compartimento e instrucciones de uso. El reactivo puede comprender p19, el complejo de p19 y p40, IL-23R, el complejo de IL-23R y IL-12Rbeta1 o un fragmento antigénico del mismo, una composición de unión o un ácido nucleico. Un equipo para la determinación de la unión de un compuesto de ensayo, por ejemplo, adquirido a partir de una muestra biológica o de una biblioteca química, puede comprender un compuesto de control, un compuesto marcado y un método para la separación del compuesto marcado libre del compuesto marcado
unido.

Se pueden usar ensayos de diagnóstico con matrices biológicas tales como células vivas, extractos de células, lisados de células, células fijadas, cultivos de células, fluidos corporales o muestras forenses. Los anticuerpos conjugados útiles para propósitos de diagnóstico o equipo, incluyen anticuerpos acoplados a colorantes, isótopos, enzimas y metales (véase, por ejemplo, Le Doussal, et al. (1991) New Engl. J. Med. 146: 169-175; Gibellini, et al. (1998) J. Immunol. 160: 3891-3898; Hsing y Bishop (1999) New Engl. J. Med. 162: 2804-2811; y Everts, et al. (2002) New Engl. J. Med. 168: 883-889). Existen diversos formatos de ensayo, tales como radioinmunoensayos (RIA), ELISA y laboratorio en una microplaca (Patentes de Estados Unidos Nº 6.176.962 y 6.517.234).

Se describen polipéptidos y ácidos nucleicos de IL-23 e IL-23R, fragmentos de los mismos, en un equipo de diagnóstico, por ejemplo, para el diagnóstico de afecciones proliferativas, cáncer, tumores y trastornos precancerosos, por ejemplo, displasia.

También se describen composiciones de unión, que incluyen anticuerpos o fragmentos de anticuerpo, para la detección de p19, el complejo de p19 y p40, IL-23R, el complejo de IL-23R e IL-12Rbeta1 y metabolitos y productos de degradación de los mismos. Típicamente, el equipo tendrá un compartimento que contiene un polipéptido de IL-23 o IL-23R o un fragmento antigénico del mismo, una composición de unión al mismo o un ácido nucleico, tal como una sonda de ácido nucleico, cebador o sonda fluorescible (véase, por ejemplo, Rajendran, et al. (2003) Nucleic Acids Res. 31: 5700-5713; Cockerill (2003) Arch. Pathol. Lab. Med. 127: 1112-1120; Zammatteo, et al. (2002) Biotech. Annu. Rev. 8: 85-101; y Klein (2002) Trends Mol. Med. 8: 257-260).

Un método de diagnóstico puede comprender poner en contacto una muestra de un sujeto, por ejemplo, un sujeto de ensayo, con una composición de unión que se une específicamente a un polipéptido o ácido nucleico de p19, el complejo de p19 y p40, IL-23R y el complejo de IL-23R e IL-12RbetaI. El método puede comprender además poner en contacto una muestra de un sujeto de control, sujeto normal o tejido o fluido normal del sujeto de ensayo, con la composición de unión. Además, el método puede comprender adicionalmente comparar la unión específica de la composición al sujeto de ensayo con la unión específica de la composición al sujeto normal, sujeto de control o tejido o fluido normal del sujeto de ensayo. La expresión o actividad de una muestra de ensayo o sujeto de ensayo puede compararse con la de una muestra de control o sujeto de control. Una muestra de control puede comprender, por ejemplo, una muestra de tejido no afectada o no inflamada en un paciente que sufre de un trastorno inmune. La expresión o actividad de un sujeto de control o muestra de control se puede proporcionar como un valor predeterminado, por ejemplo, adquirido a partir de un grupo de sujetos de control estadísticamente
apropiado.

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VI. Usos

Se describen métodos de uso de agonistas y antagonistas de IL-23, para el tratamiento y diagnóstico de afecciones y trastornos inflamatorios, por ejemplo, enfermedades neoplásicas, cánceres, tumores, angiogénesis, afecciones precancerosas tales como displasias, anorexia, caquexia y caquexia del cáncer, mediante la modulación de la respuesta inmune.

Se describen métodos de tratamiento o de diagnóstico de una afección o trastorno proliferativo, por ejemplo, cáncer del útero, cérvix, mama, próstata, testículos, pene, tracto gastrointestinal, por ejemplo, esófago, orofaringe, estómago, intestinos delgado o grueso, colon o recto, riñón, célula renal, vejiga, hueso, médula ósea, piel, cabeza o cuello, hígado, vesícula biliar, corazón, pulmón, páncreas, glándula salival, glándula suprarrenal, tiroides, cerebro, ganglios, sistema nervioso central (SNC) y sistema nervioso periférico (SNP) y sistema inmune, por ejemplo, bazo o timo. Se describen métodos de tratamiento, por ejemplo, de tumores inmunógenos, tumores no inmunógenos, tumores latentes, cánceres inducidos por virus, por ejemplo, cánceres de células epiteliales, cánceres de células endoteliales, carcinoma de células escamosas, virus del papiloma, adenocarcinomas, linfomas, carcinomas, melanomas, leucemias, mielomas, sarcomas, teratocarcinomas, cánceres inducidos químicamente, metástasis y angiogénesis. La invención contempla también la reducción de la tolerancia a un antígeno de célula tumoral o célula cancerosa, por ejemplo, modulando la actividad de una célula T reguladora (Treg) (véase, por ejemplo, Ramirez-Montagut, et al. (2003) Oncogene 22: 3180-3187; Sawaya, et al. (2003) New Engl. J. Med. 349: 1501-1509; Farrar, et al. (1999) J. Immunol. 162: 2842-2849; Le, et al. (2001) J. Immunol. 167: 6765-6772; Cannistra y Niloff (1996) New Engl. J. Med. 334: 1030-1038; Osborne (1998) New Engl. J. Med. 339: 1609-1618; Lynch y Chapelle (2003) New Engl. J. Med. 348: 919-932; Enzinger y Mayer (2003) New Engl. J. Med. 349: 2241-2252; Forastiere, et al. (2001) New Engl. J. Med. 345: 1890-1900; Izbicki, et al. (1997) New Engl. J. Med. 337: 1188-1194; y Holland, et al. (eds.) (1996) Cancer Medicine Encyclopedia of Cancer, 4ª ed., Academic Press, San Diego, CA).

Se describen métodos para el tratamiento de una afección proliferativa, cáncer, tumor o afección precancerosa tal como una displasia, con un agonista o antagonista de IL-23, con al menos un agente terapéutico o de diagnóstico adicional. El al menos un agente terapéutico o de diagnóstico adicional puede ser, por ejemplo, una citoquina o antagonista de citoquina, tal como IL-12, interferón-alfa o receptor del factor de crecimiento anti-epidérmico, doxorrubicina, epirrubicina, un anti-folato, por ejemplo, metotrexato o fluorouracilo, irinotecano, ciclofosfamida, radioterapia, terapia hormonal o anti-hormonal, por ejemplo, andrógeno, estrógeno, anti-estrógeno, flutamida o dietilestilbestrol, cirugía, tamoxifeno, ifosfamida, mitolactol, un agente alquilante, por ejemplo, melfalán o cis-platino, etopósido, vinorelbina, vinblastina, vindesina, un glucocorticoide, un antagonista del receptor de histamina, un inhibidor de angiogénesis, radiación, un sensibilizante de radiación, antraciclina, alcaloide de vinca, taxano, por ejemplo, paclitaxel y docetaxel, un inhibidor del ciclo celular, por ejemplo, un inhibidor de quinasa dependiente de ciclina, un anticuerpo monoclonal, un complejo de anticuerpo monoclonal y toxina, un adyuvante de células T, trasplante de médula ósea o células presentadoras de antígeno, por ejemplo, terapia de células dendríticas. Se pueden proporcionar vacunas, por ejemplo, como una proteína soluble o como un ácido nucleico que codifique la proteína (véase, por ejemplo, Le, et al., citado anteriormente; Greco y Zellefsky (eds.) (2000) Radiotherapy of Prostate Cancer, Harwood Academic, Amsterdam; Shapiro y Recht (2001) New Engl. J. Med. 344: 1997-2008; Hortobagyi (1998) New Engl. J. Med. 339: 974-984; Catalona (1994) New Engl. J. Med. 331: 996-1004; Naylor y Hadden (2003) Int. Immunopharmacol. 3: 1205-1215; The Int. Adjuvant Lung Cancer Trial Collaborative Group (2004) New Engl. J. Med. 350: 351-360; Slamon, et al. (2001) New Engl. J. Med. 344: 783-792; Kudelka, et al. (1998) New Engl. J. Med. 338: 991-992 y van Netten, et al. (1996) New Engl. J. Med. 334: 920-921).

Se describen métodos para el tratamiento y diagnóstico de anorexia y caquexia, incluyendo caquexia del cáncer. La caquexia es un síndrome de agotamiento que aparece en muchas enfermedades, incluyendo cáncer, por ejemplo, cáncer de pulmón y del tracto gastrointestinal superior. La caquexia aparece en casi la mitad de los pacientes con cáncer. El diagnóstico de la caquexia es mediante una historia de pérdida de peso sustancial, pérdida del apetito y debilidad profunda, en el contexto de enfermedad avanzada y agotamiento muscular (pérdida de masa corporal magra). Se han asociado citoquinas, por ejemplo, IL-6, IL-1, FNTalfa e IFNgamma con la caquexia (véase, por ejemplo, MacDonald, et al., citado anteriormente; Rubin, citado anteriormente; Tisdale, citado anteriormente; Lelli, et al., citado anteriormente; y Argiles, et al., citado anteriormente).

Se proporcionan también métodos para el tratamiento de hematopoyesis extramedular (EMH) del cáncer. Se describe EMH (véase, por ejemplo, Rao, et al. (2003) Leuk. Lymphoma 44: 715-718; y Lane, et al. (2002) J. Cutan. Pathol. 29: 608-612).

El tracto gastrointestinal comprende, por ejemplo, los labios, boca, esófago, estómago, intestino delgado, apéndice, intestino grueso, colon, ano y recto. El tracto respiratorio comprende, por ejemplo, la tráquea, bronquíolos, bronquios, pulmones y alvéolos. El sistema reproductivo incluye, por ejemplo, los testículos, pene, ovarios, útero y trompas de Falopio. El sistema endocrino incluye, por ejemplo, la pituitaria, hipotálamo, glándula pineal, glándula tiroides, paratiroides, páncreas endocrino, islotes, gónadas y glándula suprarrenal.

El amplio alcance de esta invención se aprecia mejor con referencia a los siguientes ejemplos, los cuales tienen por objeto limitar la invención a las realizaciones específicas.

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Ejemplos I. Métodos Generales

Se describen métodos convencionales en biología molecular (Maniatis, et al. (1982) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook y Russell (2001) Molecular Cloning, 3ª ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA). También aparecen métodos convencionales en Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols. 1-4, John Wiley and Sons, Inc. Nueva York, NY, que describe la clonación en células bacterianas y mutagénesis de ADN (Vol. 1), clonación en células de mamífero y levadura (Vol. 2), glucoconjugados y expresión de proteínas (Vol. 3) y bioinformática (Vol. 4).

Se describen métodos para la purificación de proteínas, que incluyen inmunoprecipitación, cromatografía, electroforesis, centrifugación y cristalización (Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., Nueva York). Se describen análisis químico, modificación química, modificación post-traduccional, producción de proteínas de fusión, glicosilación de proteínas (véase, por ejemplo, Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., Nueva York; Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, págs. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; págs. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., págs. 384-391). Se describe la producción, purificación y fragmentación de anticuerpos monoclonales y policlonales (Coligan, et al. (2001) Current Protcols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., Nueva York; Harlow y Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow y Lane, citado anteriormente). Están disponibles técnicas convencionales para la caracterización de interacciones de ligando/receptor (véase, por ejemplo, Coligan, et al. (2001) Current Protcols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., Nueva York).

Están disponibles métodos para citometría de flujo, incluyendo separación de células activadas por fluorescencia (FACS) (véase, por ejemplo, Owens, et al. (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) Flow Cytometry, 2ª ed.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; y Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ). Están disponibles reactivos fluorescentes adecuados para la modificación de ácidos nucleicos, incluyendo cebadores y sondas de ácido nucleico, polipéptidos y anticuerpos para uso, por ejemplo, como reactivos de diagnóstico (Molecular Probes (2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO).

Se describen métodos convencionales de histología del sistema inmune (véase, por ejemplo, Muller-Harmelink (ed.) (1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, Nueva York, NY; Hiatt, et al. (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, and Wilkins, Filadelfia, PA; y Louis, et al. (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, Nueva York, NY).

Se describen métodos para el tratamiento y diagnóstico de cáncer (véase, por ejemplo, Alison (ed.) (2001) The Cancer Handbook, Grove's Dictionaries, Inc., St. Louis, MO; Oldham (ed.) (1998) Principles of Cancer Biotherapy, 3ª ed., Kluwer Academic Publ., Hingham, MA; Thompson, et al. (eds.) (2001) Textbook of Melanoma, Martin Dunitz, Ltd., Londres, Reino Unido; Devita, et al. (eds.) (2001) Cancer: Principles and Practice of Oncology, 6ª ed., Lippincott, Filadelfia, PA; Holland, et al. (eds.) (2000) Holland-Frei Cancer Medicine, BC Decker, Filadelfia, PA; Garrett y Sell (eds.) (1995) Cellular Cancer Markers, Humana Press, Totowa, NJ; MacKie (1996) Skin Cancer, 2ª ed., Mosby, St. Louis; Moertel (1994) New Engl. J. Med. 330: 1136-1142; Engleman (2003) Semin. Oncol. 30 (3 Supl. 8): 23-29; y Mohr, et al. (2003) Onkologie 26: 227-233).

Están disponibles paquetes de software y bases de datos para la determinación, por ejemplo, de fragmentos antigénicos, secuencias líder, plegamiento de proteínas, dominios funcionales, sitios de glicosilación y alineamientos de secuencias (véase, por ejemplo, GenBank, Vector NTI® Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD); GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA); DeCypher® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); Menne, et al. (2000) Bioinformatics 16: 741-742; Menne, et al. (2000) Bioinformatics Applications Note 16: 741-742; Wren, et al. (2002) Comput. Methods Programs Biomed. 68: 177-181; von Heijne (1983) Eur. J. Biochem. 133: 17-21; y von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14: 4683-4690).

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II. Ratones e Inducción de Tumores

Se generaron ratones sin p19 de IL-23, como se describe en Cua, et al., citado anteriormente. Ratones que carecían específicamente de IL-23 (ratones p19KO; ratones knockout de p19; ratones p19^{-/-}), ratones p19^{+/-} y ratones de control de tipo silvestre p19^{+/+}, tenían un fondo de B6/129 F2.

Se indujeron químicamente tumores de piel en ratones de tipo silvestre (wt) o sin IL-23 (ratones p19KO). Se iniciaron tumores usando 50 microgramos de 7,12-dimetilbenz[a]antraceno (DMBA) seguido de etapas de promoción que consisten en dos tratamientos de 30 microgramos cada uno de TPA por semana (véase, por ejemplo, Oft, et al. (2002) Nat. Cell. Biol. 4: 487-494).

En estudios de tumores con ratones Ep2X1B1-nu/nu, los tumores hacen metástasis, mientras que no ocurre caquexia. Los ratones mueren, por ejemplo, de hematopoyesis extramedular (EMH). En estudios de tumores con ratones Ep2XB1-Balb/c, no ocurre metástasis tumoral, aparentemente debido al sistema inmune intacto en estos rato-
nes.

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III. Expresión de Subunidades de p19 e IL-23R

La expresión de la subunidad p19 de IL-23 y la subunidad IL-23R del receptor de IL-23 estaba elevada en varios cánceres, tumores y líneas de células, por ejemplo, cáncer del tracto gastrointestinal, tracto reproductivo, piel y mamario (Tabla 1).

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TABLA 1 Expresión de subunidades de p19 e IL-23R mediante análisis Taqman®, con respecto a ubiquitina (1.0). Los valores son de tejidos normales enfermos y adyacentes, donde se indica

1

2

Se extrajo ARN de tejidos o sedimentos celulares usando columnas RNeasy® (Qiagen, Valencia, CA) y se trató con DNasa I (Promega, Madison, WI). Se preparó ADNc y se usó como molde para PCR cuantitativa en tiempo real. Se analizó el ADNc (25 ng) para la expresión de una variedad de genes usando el Sistema de Detección de Secuencias GeneAmp®5700 (Applied Biosystems, Foster City, CA). El análisis de las muestras de ADNc de tejido de colon y ovario normal y tumoral se normalizó para la expresión del gen constitutivo, ubiquitina.

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IV. Los Antagonistas de p19 Previenen o Reducen los Tumores

Se erradicaron o se redujeron los tumores inducidos por células tumorales inyectadas o mediante carcinogénesis química en ratones tratados con antagonistas de IL-23, por ejemplo, mediante tratamiento con anticuerpo anti-p19 o mediante ablación genética de la subunidad p19 (p19KO). p19 es una subunidad sólo de IL-23, mientras que p40 es una subunidad de IL-23 e IL-12. Por el contrario, el tratamiento con una IL-12, en algunas condiciones, empeoró los tumores, es decir, dio como resultado un aumento en el volumen tumoral, con respecto a ratones de control.

Los tumores en ratones produjeron cáncer, caquexia del cáncer, hematopoyesis extramedular y muerte. El tratamiento de ratones Balb/c que portan tumores con anticuerpo anti-p19 dio como resultado parada de los aumentos en el volumen tumoral, mientras que el tratamiento con anticuerpo anti-p40 provocó ganancia de peso del animal, probablemente una reversión de la caquexia, pero un aumento en el volumen tumoral (Tabla 2).

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TABLA 2 Crecimiento de tumores en ratones Balb/c inoculados con células cancerosas Ep2 (conocidas también como células XTb) (células mamarias de ratón transformadas con ras)

3

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Se indujeron muerte por cáncer y caquexia del cáncer en ratones, donde el anticuerpo anti-p40 previno la muerte y la pérdida de peso. Se inyectaron 1 x 10^{6} células tumorales EpXT (s.c.) a ratones. Los ratones desnudos que portaban tumores (Ep2XB1 nu/nu) murieron de metástasis pulmonar mortal, ocurriendo las muertes en los días 22-42 después de la inyección. Los ratones Balb/c Exp2XB1 que portaban tumores murieron en aproximadamente los días 22-49 después de la inyección, donde los ratones Balb/c murieron en ausencia de metástasis pulmonar. Se indicó caquexia por la aparición de disminución en el peso corporal (antes de la muerte). Ocurrió pérdida de peso progresiva, comenzando en aproximadamente el día 16. El peso inicial en el día 1 fue de 22-23 gramos, mientras que el peso al morir estaba en el intervalo de 16-18 gramos.

El tratamiento con anticuerpo fue con anticuerpo anti-p40 de rata C17.8 (1 mg/semana). Con el tratamiento con anticuerpo, los ratones Ep2XB1-Balb/C (ratones inmunocompetentes) sobrevivieron hasta aproximadamente el día 64, después de lo cual ocurrieron las muertes hasta el día 85. El tratamiento con anticuerpo anti-p40 dio como resultado también el mantenimiento del peso corporal (a aproximadamente 17 gramos) en la mitad de los ratones, con un aumento progresivo en el peso corporal de los ratones restantes, hasta un máximo, dentro del periodo de tiempo del experimento, de 22-23 gramos. De esta manera, el anticuerpo anti-p40 dio como resultado mejora de la salud, de acuerdo con el tiempo de supervivencia y la ganancia de peso corporal otra vez, aunque anti-p40 podría dar como resultado también deterioro de la salud, como se muestra mediante un aumento en el tamaño tumoral (Tabla 2).

Se indujo químicamente cáncer mediante tratamiento con DMBA (50 microgramos) y 2 x 30 microgramos de 13-acetato de tetradecanoilforbol (TPA) por semana (Gschwendt, et al. (1991) Trends Biochem Sci. 16: 167-169). Se aplicaron tratamientos de carcinogénesis química a ratones de tipo silvestre B6/129 y a ratones p19KO. Los ratones de tipo silvestre desarrollaron rápidamente tumores, pero los ratones p19KO no adquirieron tumores (Tabla 3).

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TABLA 3 Los Ratones p19KO Resisten la Carcinogénesis Química

4

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Estudios separados demostraron que p19KO previno la formación de tumores, mientras que p35KO empeoró la formación de tumores (tabla 4).

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TABLA 4 Influencia de p19KO frente a p35KO sobre la carcinogénesis química

5

Se determinó la expresión de las subunidades de IL-23 y las subunidades de IL-12 en células y tejidos, después de tratamiento con carcinógenos. DMBA solo, TPA solo y DMBA con TPA, indujeron la expresión de la subunidad p19 de IL-23 y estos agentes químicos se aplicaron al dorso del ratón. Por ejemplo, dos días después del tratamiento con DMBA, se produjo un aumento en la expresión de p19 de 1,5 (no tratados) a 6,3 (a t = 2 días). La expresión de p40 aumentó, pero fue relativamente baja en este intervalo de tiempo (0,1 no tratados; 0,4 a t = 2 días). Cinco horas después del tratamiento con TPA, se produjo un aumento en la expresión de p19 (2,5 control; 15,5 con tratamiento con TPA), pero relativamente poco cambio en la expresión de p40 (2,0 control; 3,5 con tratamiento con TPA). Cinco horas después del tratamiento con DMBA más TPA se produjeron grandes aumentos en la expresión de p19 (6,0 control; 32,0 DMBA + TPA), pero niveles moderados de expresión de p40 (2,0 control; 4,0 DMBA + TPA).

Se determinó también la respuesta de queratinocitos humanos a, por ejemplo, DMBA, TPA y lipopolisacárido (LPS) (Tabla 5). TPA indujo específicamente p19, con poca o ninguna inducción de p40, la subunidad común de IL-23 e IL-12. LPS indujo p19, indicando un papel en IL-23 en la respuesta innata. Receptores de tipo toll que unen LPS se encuentran en queratinocitos (véase, por ejemplo, Song, et al. (2002) J. Invest. Dermatol. 119: 424-432). El etopósido es un agente anticanceroso que inhibe la topoisomerasa II e induce apoptosis (véase, por ejemplo, Robertson, et al. (2000) J. Biol. Chem. 275: 32438-32443; y Karpinich, et al. (2000) J. Biol. Chem. 277: 16547-16552).

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TABLA 5 Respuesta de Queratinocitos Humanos a Diversos Aditivos. N.D. significa no detectado

6

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Se ensayaron anticuerpos anti-p19 para determinar su efecto sobre el modelo de células de cáncer mamario de ratones 4T1. Se trató a ratones con anticuerpo mIgG1 de control (27F11) o con anticuerpo anti-p19 (29A2). Se controló el crecimiento tumoral los días 1, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 y 11. Se administraron anticuerpos (1 mg/dosis) los días 2, 5, 8 y 10. El día 4, el tamaño tumoral del ratón tratado con anticuerpo de control fue de aproximadamente 175 mm^{3}, mientras que el tamaño tumoral del ratón tratado con anticuerpo anti-p19 fue de aproximadamente 135 mm^{3}. De esta manera, el anticuerpo anti-p19 es eficaz en el tratamiento de un modelo de cáncer mamario. Después del día 4, los tumores en ambos grupos crecieron a aproximadamente la misma velocidad, indicando que la dosis del anticuerpo no fue suficiente para contrarrestar a la IL-23 expresada por el tumor en períodos de tiempo posteriores.

La histología del modelo de cáncer mamario de ratones Ep2 demostró co-localización de IL-23R y células NK, determinada mediante tinción para p19, que reside unida a IL-23R y mediante tinción para CD49B, un marcador para células NK. Esta co-localización se encontró en la parte central del tumor, es decir, en la región necrótica. La histología del cáncer mamario de ratones Ep2 demostró también co-localización de p19 y células T. Se determinó localización de células T mediante tinción para CD3. Esta co-localización se encontró en la parte periférica del tumor.

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V. Lista de Identificadores de Secuencias

SEC ID Nº: 1 es la secuencia de ácido nucleico de IL-23p19 de humano.

SEC ID Nº: 2 es la secuencia de aminoácidos de IL-23p19 de humano.

SEC ID Nº: 3 es la secuencia de ácido nucleico de IL-23p19 de ratón.

SEC ID Nº: 4 es la secuencia de aminoácidos de IL-23p19 de ratón.

SEC ID Nº: 5 es la secuencia de ácido nucleico del receptor de IL-23 de humano.

SEC ID Nº: 6 es la secuencia de aminoácidos del receptor de IL-23 de humano.

SEC ID Nº: 7 es la secuencia de aminoácidos de IL-12RbetaI de humano.

SEC ID Nº: 8 es la secuencia de aminoácidos de p40 de IL-12 de humano.

SEC ID Nº: 9 es la secuencia de aminoácidos de p40 de IL-12 de ratón.

SEC ID Nº: 10 es hiperquina IL-23 de ratón.

SEC ID Nº: 11 es hiperquina IL-23 de humano.

<110> Schering Corporation

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Oft, Martin

\hskip1cm

McClanahan, Terrill K

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<120> USOS DE AGONISTAS Y ANTAGONISTAS DE IL-23; REACTIVOS RELACIONADOS

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<130> DX06022WO01

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<150> U.S. 60/453.672

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<151> 10-03-2003

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\vskip0.400000\baselineskip

<160> 11

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<170> PatentIn versión 3.1

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<210> 1

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<211> 570

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<212> ADN

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<213> Homo sapiens

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<220>

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<221> CDS

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<222> (1)..(567)

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<223>

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<220>

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<221> péptido maduro

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<222> (64)..(567)

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<223>

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<400> 1

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\hskip0,8cm

7

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<210> 2

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<211> 189

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<212> PRT

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<213> Homo sapiens

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<400> 2

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\hskip0,8cm

8

\hskip4,2cm

9

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<210> 3

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<211> 1203

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<212> ADN

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<213> Mus musculus

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<220>

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<221> CDS

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<222> (113)..(700)

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<223>

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<220>

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<221> péptido maduro

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<222> (176)..(700)

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<223>

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<400> 3

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\hskip0,8cm

10

\hskip0,8cm

11

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<210> 4

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<211> 196

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<212> PRT

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<213> Mus musculus

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<400> 4

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\vskip1.000000\baselineskip

\hskip0,8cm

12

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\vskip0.400000\baselineskip

<210> 5

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<211> 2859

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<212> ADN

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<213> Homo sapiens

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\vskip0.400000\baselineskip

<220>

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<221> CDS

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<222> (119)..(2005)

\vskip0.400000\baselineskip

<223>

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\vskip0.400000\baselineskip

<220>

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<221> péptido maduro

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<222> (188)..(2005)

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<223>

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\vskip0.400000\baselineskip

<400> 5

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\vskip1.000000\baselineskip

\hskip0,8cm

13

\hskip0,8cm

14

\hskip0,8cm

15

\hskip0,8cm

16

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\vskip0.400000\baselineskip

<210> 6

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<211> 629

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<212> PRT

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<213> Homo sapiens

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<220>

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<221> característica diversa

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<222> (-21)..(-21)

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<223> `Xaa' en el sitio -21 representa Gln o His.

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<220>

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<221> característica diversa

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<222> (126)..(126)

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<223> `Xaa' en el sitio 126 representa Gly o Arg.

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<400> 6

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\hskip0,8cm

17

\hskip0,8cm

18

\hskip0,8cm

19

\hskip0,8cm

20

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<210> 7

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<211> 862

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<212> PRT

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<213> Homo sapiens

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<400> 7

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\vskip1.000000\baselineskip

\hskip0,8cm

21

\hskip0,8cm

22

\hskip0,8cm

23

\hskip0,8cm

24

\hskip0,8cm

25

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\vskip0.400000\baselineskip

<210> 8

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<211> 328

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<212> PRT

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<213> Homo sapiens

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\vskip0.400000\baselineskip

<400> 8

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\vskip1.000000\baselineskip

\hskip0,8cm

26

\hskip0,8cm

27

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\vskip0.400000\baselineskip

<210> 9

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<211> 335

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<212> PRT

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<213> Mus musculus

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\vskip0.400000\baselineskip

<400> 9

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\vskip1.000000\baselineskip

\hskip0,8cm

28

\hskip0,8cm

29

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\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 10

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<211> 531

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<212> PRT

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<213> Mus musculus

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\vskip0.400000\baselineskip

<400> 10

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\vskip1.000000\baselineskip

\hskip0,8cm

30

\hskip0,8cm

31

\hskip0,8cm

32

\hskip0,8cm

33

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\vskip0.400000\baselineskip

<210> 11

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<211> 521

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<212> PRT

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<213> Homo sapiens

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<400> 11

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\vskip1.000000\baselineskip

\hskip0,8cm

34

\hskip0,8cm

35

\hskip0,8cm

36

Claims (22)

1. El uso de un antagonista de IL-23 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de tumores que comprenden células tumorales, en el que el antagonista de IL-23 comprende:

(a)

un sitio de unión a antígeno de un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de p19 (SEC ID Nº: 2); o

(b)

un ácido nucleico antisentido o ARN de interferencia pequeño (siARN) que se une específicamente a un ácido nucleico que codifica p19 (SEC ID Nº: 1).

2. El uso de la reivindicación 1, en el que el antagonista de IL-23 inhibe o previene el crecimiento tumoral.

3. El uso de la reivindicación 1, en el que las células tumorales expresan p19 de IL-23.

4. El uso de la reivindicación 1, en el que el antagonista comprende un sitio de unión a antígeno de un anticuerpo.

5. El uso de la reivindicación 1, en el que el antagonista comprende un ácido nucleico antisentido o ARN de interferencia pequeño (siARN).

6. El uso de la reivindicación 1, en el que el antagonista comprende un anticuerpo monoclonal o un fragmento del mismo.

7. El uso de la reivindicación 6, en el que el anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo es un anticuerpo humanizado o fragmento del mismo.

8. El uso de la reivindicación 6, en el que el anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo es un fragmento de anticuerpo Fab, Fv o F(ab')2.

9. El uso de la reivindicación 1, en el que las células tumorales son:

a)

células de cáncer de colon;

b)

células de cáncer de ovarios;

c)

células de cáncer mamario; o

d)

células de melanoma.

10. El uso de un antagonista de IL-23 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un sujeto que sufre de un cáncer o tumor, en el que el antagonista de IL-23 comprende:

(a)

un sitio de unión a antígeno de un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de p19 (SEC ID Nº: 2); o

(b)

un ácido nucleico antisentido o ARN de interferencia pequeño (siARN) que se une específicamente a un ácido nucleico que codifica p19 (SEC ID Nº: 1).

11. El uso de la reivindicación 10, en el que el antagonista de IL-23 inhibe:

a)

crecimiento del cáncer o tumor;

b)

caquexia;

c)

anorexia; o

d)

angiogénesis.

12. El uso de la reivindicación 10, en el que el antagonista comprende un sitio de unión a antígeno de un anticuerpo.

13. El uso de la reivindicación 10, en el que el antagonista comprende un ácido nucleico antisentido o ARN de interferencia pequeño (siARN).

14. El uso de la reivindicación 12, en el que el antagonista comprende un anticuerpo monoclonal o un fragmento del mismo.

\newpage

15. El uso de la reivindicación 14, en el que el anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo es un anticuerpo humanizado o fragmento del mismo.

16. El uso de la reivindicación 14, en el que el anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo es un fragmento de anticuerpo Fab, Fv o F(ab')2.

17. El uso de la reivindicación 10, en el que el cáncer o tumor es de:

a)

tracto gastrointestinal;

b)

tracto respiratorio;

c)

sistema reproductivo; o

d)

sistema endocrino.

18. El uso de la reivindicación 10, en el que el cáncer o tumor es:

a)

cáncer de colon;

b)

cáncer de ovarios;

c)

un melanoma; o

d)

cáncer mamario.

19. Un método para determinar si células tumorales expresan IL-23 que comprende poner en contacto una muestra de un sujeto con un antagonista de IL-23 que comprende:

(a)

un sitio de unión a antígeno de un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de p19 (SEC ID Nº: 2); o

(b)

un ácido nucleico antisentido o ARN de interferencia pequeño (siARN) que se une específicamente a un ácido nucleico que codifica p19 (SEC ID Nº: 1).

20. El método de la reivindicación 19, en el que el antagonista comprende un ácido nucleico antisentido o ARN de interferencia pequeño que se une específicamente al polinucleótido de SEC ID Nº: 1.

21. Un equipo para determinar si células tumorales expresan IL-23 que comprende:

a)

un compartimento; y

b)

un antagonista de IL-23 que comprende (i) un sitio de unión a antígeno de un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de p19 (SEC ID Nº: 2) o (ii) un ácido nucleico antisentido o ARN de interferencia pequeño (siARN) que se une específicamente a un ácido nucleico que codifica p19 (SEC ID Nº: 1).

22. El equipo de la reivindicación 21, en el que el antagonista comprende un anticuerpo que se une específicamente a p19 (SEC ID Nº: 2).