CN115135671A - 抗白介素-23 p19的抗体及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本公开提供结合IL‑23p19的抗体及其抗体片段。所公开的抗体及其抗体片段可以调节IL‑23受体信号传导轴的生物学活性，因此可用于治疗免疫介导的炎性疾病。

Description

抗白介素-23 P19的抗体及其使用方法

相关申请的交叉引用

本国际专利申请要求于2019年12月20日提交的美国临时申请序列号 62/951,231的优先权，在此通过引用将其全文并入本文。

序列表

本申请包含已以ASCII格式通过电子提交的序列表，通过引用其全文并入本文。所述创建于2019年12月16日的ASCII副本，名为“122863-5002-WO_NVRB-004-001_ST25.TXT”，大小为13000字节。

技术领域

本公开通常涉及结合白介素-23的p19亚基的抗体及其抗体片段。这些抗体可用于治疗免疫介导的炎性疾病、自身免疫性疾病或癌症。

背景技术

调节性细胞因子的白介素-12(IL-12)家族包括一组独特的包含共价键合的异二聚体亚基的细胞因子(IL-12、IL-23、IL-27、IL-35和IL-39)。异二聚体IL-12 家族细胞因子成员由α链(p19、p28或p35)和β链(p40或Ebi3)组成。

IL-23是一种异二聚体细胞因子，包含独特的与p40亚基(IL-12同样地具有该亚基)相连的p19亚基。IL-23的主要来源是组织驻留的或募集的树突细胞和巨噬细胞。假设IL-23的生物作用通过受体复合物发生，所述受体复合物由以下两部分组成：i.)IL-12Rβ1，IL-12同样地具有的部分，以及ii.)IL-23R，特异于IL-23 的部分。

细胞因子的IL-12家族的成员通过指导先天性和适应性免疫反应来充当免疫组织者(immunological playmaker)。这些调节性细胞因子通过诱导T细胞亚群的发展(development)和改变许多免疫细胞群的功能和命运(fate)来发挥作用，所述免疫细胞群指导对感染、炎症和自身免疫性疾病结果的适应性免疫反应。IL-12 和IL-23是主要的促炎/促刺激细胞因子，分别在Th1和Th17细胞的发展中发挥作用。

功能性的IL-23受体是IL-12Rβ1亚基(IL-12受体同样地具有)与信号传导链 IL-23R(与p19亚基结合)相伴(partner)的异二聚体。IL-23的受体与Janus激酶2(Jak2)组成性相关，主要活化STAT3。主要在记忆T细胞和NK细胞上检测到IL-23受体的表达。单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞也以低水平表达IL-23受体。

有大量证据表明，IL-23反应性细胞与自身免疫性炎性疾病和癌症有关，对 IL-23活性的调节可以提供有希望的疗法。特别是，IL-23的异常调节与免疫介导的炎性疾病(IMID)有关，例如银屑病、银屑病关节炎、克罗恩病和溃疡性结肠炎。此外，促炎性细胞因子(包括IL-23和IL-12)的平衡在塑造抗肿瘤或促肿瘤免疫的发展中起着关键作用。

IL-23/IL-12通路参与涉及多种炎性疾病的病理生理学的细胞机制。已经设计了几种治疗策略以抑制IL-23活性，持续需要靶向促炎性的IL-23/IL-23受体信号传导轴的治疗剂，以治疗免疫介导的炎性病症。更特别地，仍然需要选择性的 IL-23p19拮抗剂抗体，其以高亲和力结合IL-23，特别是人IL-23的p19亚基，并且不结合相关细胞因子家族成员IL-12的p40亚基。

发明内容

本公开通过提供与IL-23的细胞因子p19亚基结合的抗体和抗体片段以解决上述需要。抗体和抗体片段可单独(例如，作为单药疗法)或与其他免疫治疗剂组合以用于治疗免疫介导的炎性疾病(IMID)(例如，自身免疫性疾病和炎性疾病)。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段与人IL-23的细胞因子p19 亚基结合。在进一步的实施方案中，抗体是全人抗体。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含重链可变区，其含有CDR1：SEQ ID NO：9、CDR2：SEQ ID NO：10和CDR3：SEQ ID NO：11；和/ 或轻链可变区，其含有CDR1：SEQ ID NO：12、CDR2：SEQ ID NO：13和CDR3： SEQ ID NO：14。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含重链可变区，其含有CDR1：SEQ ID NO：15、CDR2：SEQ ID NO：16和CDR3：SEQ ID NO：17；和 /或轻链可变区，其含有CDR1：SEQ ID NO：18、CDR2：SEQ ID NO：19和CDR3： SEQ ID NO：20。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含重链可变区，其含有CDR1：SEQ ID NO：21、CDR2：SEQ ID NO：22和CDR3：SEQ ID NO：23；和 /或轻链可变区，其含有CDR1：SEQ ID NO：24、CDR2：SEQ ID NO：25和CDR3： SEQ ID NO：26。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含重链可变区，其含有CDR1：SEQ ID NO：27、CDR2：SEQ ID NO：28和CDR3：SEQ ID NO：29；和 /或轻链可变区，其含有CDR1：SEQ ID NO：30、CDR2：SEQ ID NO：31和CDR3： SEQ ID NO：32。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含选自SEQ ID NO：1、 3、5和7的可变重链序列。

在其他实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含选自SEQ ID NO：2、4、6和8的可变轻链序列。

在其他实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含选自SEQ ID NO：1、 3、5和7的可变重链序列，以及选自SEQ ID NO：2、4、6和8的可变轻链序列。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体或抗体片段包含可变重链和可变轻链序列，其选自以下组合：

(a)包含SEQ ID NO：1的可变重链序列和包含SEQ ID NO：2的可变轻链序列；

(b)包含SEQ ID NO：3的可变重链序列和包含SEQ ID NO：4的可变轻链序列；

(c)包含SEQ ID NO：5的可变重链序列和包含SEQ ID NO：6的可变轻链序列；和

(d)包含SEQ ID NO：7的可变重链序列和包含SEQ ID NO：8的可变轻链序列。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体(例如，拮抗剂抗体)以高亲和力结合 IL-23的p19亚基，而不结合相关的细胞因子家族成员IL-12的p40亚基。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段表现出一种或多种以下特征：(a)特异于人IL-23p19并具有阻断IL-23与其受体(IL-23R)结合的能力； (b)抑制、干扰或调节IL-23p19与IL-23受体信号转导的相互作用；(c)抑制由IL-23在DB细胞中诱导的STAT3的活化；(d)抑制人IL-23在小鼠脾细胞中诱导的IL-17产生；(e)抑制人IL-23在活化的人PBMC中诱导的IL-17产生； (f)不抑制IL-23与IL-12Rβ1信号转导的相互作用；(g)不抑制人IL-12在人活化的T细胞(PBMC)中诱导的干扰素γ的产生；(h)不抑制食蟹猴IL-12在人活化的T细胞(PBMC)中诱导的干扰素γ的产生；以及(i)抑制人IL-23在鼠类银屑病模型中诱导的皮肤炎症。

在一方面，所公开的抗体和分离的抗原结合剂可用于抑制IL-23p19诱导的 IL-23受体信号传导网络(例如，促进自身免疫性疾病的炎性微环境的IL-23受体信号传导网络)。

抗IL-23p19抗体或其抗体片段可以表现出一种或多种以下特性：

(a)特异于人IL-23p19，并具有阻断IL-23与其受体IL-23受体结合的能力 (例如，阻断剂)；

(b)抑制、干扰或调节IL-23/IL-23受体介导的信号转导；

(c)阻断IL-23诱导的STAT3活化(由IL-23在DB细胞中诱导)；

(d)抑制IL-23在小鼠脾细胞中诱导的IL-17产生；

(e)抑制IL-23在人PBMC中诱导的IL-17产生；

(f)不抑制IL-23与IL-12Rβ1信号转导的相互作用；

(g)不阻断人IL-12在人PBMC中诱导的干扰素-γ产生；

(h)不抑制食蟹猴IL-12在人PBMC中诱导的干扰素γ产生；以及

(i)抑制IL-23在鼠类银屑病模型中诱导的皮肤炎症。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含CDR序列的组合，所述CDR序列源自选自SEQ ID NO：1、3、5和7的可变重链序列和选自SEQ ID NO： 2、4、6和8的可变轻链序列。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体及其抗体片段包含表1中公开的一种或多种重链可变区CDR和/或表2中公开的一种或多种轻链可变区CDR。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体或抗体片段是重组抗体(例如，嵌合抗体或人源化抗体)并且包含六(6)个CDR，其全部源自本文所公开的单个抗 IL-23p19抗体的VH或VL结构域。例如，结合剂可以包含抗IL-23p19抗体(称为Hu-2.18006B(用于人抗体))的全部六个CDR区。在代表性示例中，抗体或其抗体片段可以包含SEQ ID NO：9-11和SEQ ID NO：12-14的氨基酸序列，代表Hu-2.18006B抗体的可变重链区的CDR1、CDR2和CDR3以及可变轻链区的 CDR1、CDR2和CDR3。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体是全长抗体。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体是抗体片段。在进一步的实施方案中，抗体片段选自：Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、scFv和scFv-Fc片段、单链抗体、微型抗体和双抗体。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体是单克隆抗体。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体是人抗体。在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体是鼠抗体。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中，抗 IL-23p19抗体是双特异性抗体。在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体是人源化抗体。

抗IL-23p19抗体及其抗体片段可以用于治疗或预防免疫介导的炎性疾病 (IMID)(如自身免疫性疾病或炎性疾病)或癌症。这种用于治疗或预防IMID 或癌症的方法包括向需要其的受试者施用包含抗IL-23p19抗体或其抗体片段的组合物或制剂。在进一步的实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段可以单独施用(例如，作为单药疗法)或与其他免疫治疗剂和/或化学疗法组合施用。IMID可以选自银屑病、银屑病关节炎、炎性肠病(即，溃疡性结肠炎或克罗恩病)、强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮、化脓性汗腺炎、特应性皮炎、哮喘和家族性腺瘤性息肉病(FAP)。

附图说明

当结合附图阅读时，将更好地理解前述发明内容以及以下本公开的具体实施方式。出于阐明本公开的目的，图中所示的是目前优选的实施方案。然而，应当理解本公开不限于所示的精确安排、实施例和手段。

图1A至图1D提供了抗IL-23p19抗体的VH和VL结构域的氨基酸序列及其各自的CDR序列。提供了序列标识符，并且在可变结构域序列中对CDR加上下划线。

图2A、图2B、图2C、图2D和图2E显示通过BIAcore确定的抗IL-23p19 抗体与人IL-23、包含人p19和鼠p40亚基的重组细胞因子、人IL-12和人p40亚基的结合谱(profile)。

图3A、图3B和图3C显示通过ELISA确定的所选的代表性的IL-23p19抗体剂量依赖性地结合人IL-23以及包含人p19和鼠p40亚基的重组细胞因子。

图3D和图3E显示通过ELISA确定的所选的代表性的抗IL-23p19抗体与人 IL-12和人p40亚基没有结合。

图4显示通过ELISA确定的IL-23/IL-23受体的相互作用被四种IL-23p19抗体阻断。

图5显示两个具有代表性的不阻断IL-23/IL-12受体β1相互作用的IL-23p19 抗体。

图6A和图6B显示三个代表性的抗IL-23p19抗体在小鼠脾细胞测定(MSA) 中对IL-23诱导的IL-17产生的抑制。

图7显示两个代表性抗IL-23p19抗体在报告细胞测定中对IL-23诱导的STAT3 活化的抑制。

图8显示两个代表性抗IL-23p19的特异性抗体在人PBMC中不抑制人IL-12 诱导的IFN-γ产生。

图9显示两个代表性抗IL-23p19抗体在人PBMC中不抑制食蟹猴IL-12诱导的IFN-γ产生。

图10显示在实施例7中解释的鼠皮肤炎症模型中，两种代表性抗IL-23p19抗体在体内抑制IL-23介导的炎性反应(耳朵的厚度)。

图11A、图11B、图11C和图11D提供的图形表示，在实施例7中所示的鼠皮肤炎症模型中，在两个抗IL-23p19抗体进行处理后的第8天，对受处理的小鼠的病理学评分(冷冻的耳组织的H&E染色)效果。

图12A、图12B、图12C和图12D，显示在实施例7中所示的鼠皮肤炎症模型中，在体内研究的最后一天(第8天)，从处理的小鼠处收集的冷冻耳组织的苏木精和伊红(H&E)染色的代表性照片。

具体实施方式

IL-23是一种包含p19亚基的促炎性的异二聚体细胞因子，并与IL-23受体结合。靶向促炎性的IL-23/IL-23受体信号传导轴是一个激烈的治疗探索领域。本公开提供抑制人IL-23/IL-23受体信号传导轴的抗体及其抗体片段，其可用于治疗或预防IMID。有利地，本文公开的抗IL-23p19抗体允许完全抑制IL-23p19，导致更低剂量的制剂，导致更低的给药频率和/或更有效的给药，并导致降低成本和提高效率。

本文公开的抗IL-23p19抗体及其抗体片段特异性地结合人IL-23p19并拮抗 IL-23/IL-23受体信号传导轴。一方面，所公开的抗体及其抗体片段以高亲和力结合人IL-23并阻止其与IL-23R相互作用，从而阻断下游信号传导级联。在一个具体方面，抗体或其抗体片段抑制IL-23刺激的从小鼠脾细胞和人PBMC产生IL-17。在另一个方面，抗体或其抗体片段既不结合也不拮抗IL-12。

为了可以更容易地理解本公开，以下特别定义某些技术和科学术语。除非在本文其他地方特别定义，否则本文使用的所有其他技术和科学术语具有本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义。

在整个本公开中，将使用以下缩写：

mAb或Mab或MAb—单克隆抗体。

CDR—免疫球蛋白可变区中的互补决定区。

VH或VH—免疫球蛋白重链可变区。

VL或VL—免疫球蛋白轻链可变区。

FR—抗体框架区，不包含CDR区的免疫球蛋白可变区。

如本文所用，术语“白介素-23”(可以与IL-23互换使用)是指人IL-23异二聚体，其包括，例如人IL-23异二聚体，包含或由以下组成：具有UniProt条目 UniProtKB-P29460提供的氨基酸序列的蛋白质亚基(识别为IL-23亚基(p40))，通过二硫键连接到具有UniProt条目UniProtKB-Q9NPF7提供的氨基酸序列的蛋白质亚基(识别为白介素-23亚基α(p19))。

如本文所用，术语“IL-12R复合物”和“IL-12R”指包含IL-12Rβ1和 IL-12Rβ2亚基的高亲和力的IL-12细胞因子受体复合物。

如本文所用，术语“IL-23R复合物”和“IL-23R”是指包含IL-12Rβ1(IL-12R 复合物同样具有)和IL-23R亚基的高亲和力的IL-23细胞因子受体。

如本文所用，术语“白介素-12”(可在本公开中与IL-12互换使用)是指人IL-12异二聚体，其包括，例如人IL-12异二聚体，包含或由以下组成：具有UniProt 条目UniProtKB-P29459提供的氨基酸序列的蛋白质亚基(识别为白介素-12亚基α)，通过二硫键连接到具有UniProt条目UniProtKB-P29460提供的氨基酸序列的蛋白质亚基(识别为白介素-12亚基β(p40))。该术语包括包含通过二硫键连接在一起的35kD亚基(p35)和40kD亚基(p40)的异二聚体蛋白质。异二聚体蛋白称为“p70亚基”。人IL-12的结构进一步描述在，例如Kobayashi等人(1989) J.Exp Med.170：827-845和Ling等人(1995)J.Exp Med.154：116-127)。术语人IL-12旨在包括重组人IL-12(rh L-12)，其可以通过标准重组表达方法制备。

如本文所用，术语“白介素17”也称为“IL-17”或“IL-17A”，是20-30kD 糖基化的同二聚体蛋白质，其包括，例如包含或由以下组成的同二聚体蛋白质：具有UniProt条目UniProtKB-Q16552提供的氨基酸序列的蛋白质亚基。人IL-17 基因编码155个氨基酸的蛋白质，其具有19个氨基酸的信号序列和136个氨基酸的成熟区段。IL-17由在炎症部位的活化的T细胞分泌，但通常不存在于体循环中。 IL-17结合至称为IL-17R的I型跨膜受体，IL-17R是一种广泛表达的蛋白质，与其他已知的细胞因子受体没有显著的序列相似性。人IL-17与小鼠和大鼠氨基酸 IL-17序列显示出分别为62.5％和58％的氨基酸序列同一性。人IL-17与食蟹猴 IL-17显示出97.4％的氨基酸序列同一性。

本文所用的术语“抗体”以最广义使用，包括各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体和多特异性抗体(例如，双特异性抗体)。

示例性抗体如IgG包含两条重链和两条轻链。每条重链包含重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区。每条轻链包含轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定区。VH和VL区可进一步细分为高变区(称为互补决定区(CDR))，其间散布有更保守的区，称为框架区(FR)。每个VH和VL由3个CDR和4个FR 组成，按以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、 CDR3、FR4。

高变区通常包含轻链可变区中的约氨基酸残基24-34(LCDR1；“L”表示轻链)、 50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)以及重链可变区中的约31-35B(HCDR1；“H”表示重链)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)的氨基酸残基；Kabat等人， SEQUENCES OF PROTEINS OFIMMUNOLOGICAL INTEREST，第五版Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.(1991)和/或形成高变环的那些残基(例如，轻链可变区中的残基26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和 91-96(LCDR3)以及重链可变区中的残基26-32(HCDR1)、53-55(HCDR2) 和96-101(HCDR3)；Chothia和Lesk(1987)J.Mol.Biol.196：901-917。

本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群体获得的抗体，例如，构成群体的各抗体是相同的和/或结合相同的表位，除了可能的变体抗体，例如，含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂的生产过程中产生的(这些变体通常以少量存在)。与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂的每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。因此，修饰词“单克隆”表示从基本上同质的抗体群体中获得的抗体的特性，不应被解释为需要通过任何方法产生抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可以通过多种技术制备，包括但不限于杂交瘤法、重组DNA法、噬菌体展示法和利用含有全部或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，这些方法和制备单克隆抗体的其他示例性方法在本文中描述了。

术语“嵌合”抗体是指重组抗体，其中重链和/或轻链的部分源自特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分源自不同来源或物种。

“人抗体”是具有与人产生的抗体的氨基酸序列相对应的氨基酸序列的抗体，和/或已经使用本领域技术人员已知的制备人抗体的任何技术制备的抗体。人抗体的该定义特异性地排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。可以使用本领域已知的各种技术产生人抗体，包括在Cole等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss,第77页(1985)；Boerner等人J.Immunol，147(I)： 86-95(1991)描述的方法。还参见van Dijk和van de Winkel，Curr.Opin.Pharmacol， 5：368-74(2001)。可以通过将抗原施用至转基因动物来制备人抗体，所述转基因动物已被修饰以响应抗原挑战而产生此类抗体，但其内源性基因座已失效，例如，免疫的HuMab小鼠(参见，例如，关于HuMab小鼠的Nils Lonber等人，Nature 368：856-859、WO 98/24884、WO 94/25585、WO 93/1227、WO 92/22645、WO 92/03918和WO 01/09187)、xenomice(参见，例如关于XENOMOUSE^TM技术的美国专利号6,075,181和6,150,584)或Trianni小鼠(参见，例如WO 2013/063391、 WO 2017/035252和WO 2017/136734)。

术语“人源化抗体”是指经工程化以在可变区中包含一个或多个人框架区以及重链和/或轻链的非人(例如，小鼠、大鼠或仓鼠)互补决定区(CDR)的抗体。在某些实施方案中，除CDR区外，人源化抗体包含完全为人的序列。与非人源化抗体相比，人源化抗体对人的免疫原性通常较低，因此在某些情况下可提供治疗益处。本领域技术人员将了解人源化抗体，也将了解用于其产生的合适技术。参见，例如Hwang,W.Y.K.等人，Methods 36：35,2005；Queen等人， Proc.Natl.Acad.Sci.USA,86：10029-10033,1989；Jones等人，Nature,321：522-25, 1986；Riechmann等人，Nature,332：323-27,1988；Verhoeyen等人，Science,239：1534-36,1988；Orlandi等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,86：3833-37,1989；美国专利号5,225,539；5,530,101；5,585,089；5,693,761；5,693,762；6,180,370；和Selick 等人，WO90/07861，其中的每个通过整体引用并入本文。

抗体的“类别(class)”是指其重链所具有的恒定结构域或恒定区的类型。抗体主要有五类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中若干可进一步分为亚类(同种型)，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。

术语抗体的“抗原结合结构域”或抗体的(简单称为“结合结构域”)或类似术语是指保留特异性结合抗原复合物的能力的抗体的一个或多个片段。包含在术语抗体的“抗原结合部分”中的结合片段的示例包括(i)Fab片段，由VL、VH、 CL和CH结构域组成的单价片段；(ii)F(ab’)₂片段，包含在铰链区通过二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH结构域组成的Fd片段；(iv) 由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)由VH结构域组成的dAb 片段(Ward等人，(1989)Nature 341：544-546)；(vi)分离的互补决定区(CDR) 和(vii)两个或更多个分离的CDR的组合，其可以任选地通过合成接头连接。

本文所用术语“互补决定区”或“CDR”是指主要负责介导特异性抗原识别的重链和轻链多肽的可变区内的短多肽序列。每个V_L和每个V_H中各有三个CDR (称为CDR1、CDR2和CDR3)。

如本领域技术人员将理解的，CDR的准确编号和放置在不同编号系统中可以不同。然而，应当理解可变重链序列和/或可变轻链序列的公开包括相关CDR的公开。因此，每个可变重链区的公开是vhCDR(例如vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3) 的公开，每个可变轻链区的公开是vlCDR(例如，vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3) 的公开。

在某些实施方案中，可以根据Lefranc M-P，(1999)The Immunologist 7：132-136和Lefranc M-P等人(1999)Nucleic Acids Res 27：209-212中描述的IMGT编号系统确定抗体的CDR，其中的每一个都通过引用全文并入本文。除非本文另有说明，提及抗体可变结构域中的残基编号是指通过IMGT编号系统进行的残基编号。

在其他实施方案中，抗体的CDR可根据MacCallum RM等人，(1996)J Mol Biol262：732-745确定，通过引用将其全文并入本文。参见，例如，Martin A“Protein Sequenceand Structure Analysis of Antibody Variable Domains,”Antibody Engineering，Kontermann和Diibel编，第31章，第422-439页，Springer-Verlag,Berlin (2001)，其通过引用全文并入本文。在其他实施方案中，抗体的CDR可根据 AbM编号方案确定，其是指AbM高变区，其代表Kabat CDR和Chothia结构环之间的折中(compromise)，并由OxfordMolecular的AbM抗体建模软件 (Oxford Molecular Group，Inc.)使用，其通过引用全文纳入本文。

“框架”或“框架区”或“FR”是指除高变区(HVR)残基以外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由四个FR结构域：FR1、FR2、FR3和FR4组成。

“人共有框架”是表示人免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常见的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自可变结构域序列的亚组。通常，序列亚组是如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，NIHPublication 91-3242,Bethesda Md.(1991)，第1-3卷中的亚组。在一个实施方案中，对于VL，亚组是如上文Kabat等人所述的亚组κI。在一个实施方案中，对于VH，亚组是如上文Kabat等人所述的亚组Ill。

“铰链区”通常定义为从人IgG1的216-238(EU编号)或226-251(Kabat 编号)延伸。铰链可以进一步分成三个不同的区，上铰链、中铰链(例如核心) 和下铰链。

本文中的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C末端区，其包含至少一部分恒定区。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一个实施方案中，人IgG 重链Fc区从Cys226或从Pro230延伸至重链的羧基末端。但是，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)可存在或不存在。除非本文另有说明，Fc区或恒定区的氨基酸残基编号按照EU编号系统，也称为EU指数，描述在Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版PublicHealth Service,National Institutes of Health, Bethesda,Md.(1991)。

“阻断”抗体或“拮抗剂”抗体是抑制或降低其结合的抗原的生物活性的抗体。某些阻断抗体或拮抗剂抗体基本上或完全抑制抗原的生物活性。

术语“效应子功能”是指归因于抗体的Fc区的那些生物学活性，其随抗体同种型而变化。抗体效应子功能的示例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)； Fc受体结合；抗体依赖性T细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；下调细胞表面受体(例如，B细胞受体)；和B细胞活化。

与参考抗体“结合相同表位的抗体”是指与参考抗体相比接触一组重叠的抗原氨基酸残基的抗体，或在竞争试验中阻断50％或更多的参考抗体与其抗原结合的抗体。例如，可以通过测定与抗原复合的抗体的晶体结构或通过进行氢/氘交换来确定与抗原接触的抗体的氨基酸残基。在一些实施方案中，位于抗原

以内的抗体残基视为与抗原接触。在一些实施方案中，与参考抗体结合相同表位的抗体在竞争试验中阻断50％或更多的参考抗体与其抗原的结合，并且相反地，参考抗体在竞争试验中阻断50％或更多的抗体与其抗原的结合。

术语“抗体片段”是指除完整抗体之外的分子，其包含与抗原(所述抗原为完整抗体结合的抗原)结合的完整抗体的一部分。抗体片段的示例包括但不限于 Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab)₂；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如，scFv)。木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称为“Fab”片段和残留的“Fc”片段，这一名称反映了易于结晶的能力。Fab片段由完整的轻(L)链以及重(H)链的可变区结构域(VH)和一条重链的第一恒定结构域(CH1)组成。胃蛋白酶处理抗体产生单个大F(ab)₂片段，其大致对应于两个二硫键连接的Fab 片段，其具有二价抗原结合活性并且仍能够交联抗原。Fab片段与Fab’片段的不同之处在于，在CH1结构域的羧基末端有额外的几个残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’-SH在本文指Fab’，其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离巯基。F(ab’)₂抗体片段最初是作为其间有铰链半胱氨酸的Fab’片段对产生的。还已知抗体片段的其他化学偶联。

“Fv”由紧密的非共价结合的一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。从这两个结构域的折叠产生六个高变环(H链和L链各有3个环)，其为抗原结合提供氨基酸残基并赋予抗体抗原结合特异性。

“单链Fv”也缩写为“sFv”或“scFv”，是包含连接成单个多肽链的VH和 VL抗体结构域的抗体片段。优选地，sFv多肽进一步包含VH和VL结构域之间的多肽接头，其使sFv能够形成抗原结合所需的结构。有关sFv的综述，参见 Plückthun，The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies，113卷，Rosenburg和Moore 编，Springer-Verlag，New York，269-315页(1994)。

术语抗体的“抗原结合结构域”或抗体的(或简称为“结合结构域”)或类似术语指保留特异性结合抗原复合物的能力的抗体的一个或多个片段。包含在术语抗体的“抗原结合部分”中的结合片段的示例包括(i)Fab片段，由VL、VH、 CL和CH结构域组成的单价片段；(ii)F(ab’)₂片段，包含在铰链区通过二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH结构域组成的Fd片段；(iv) 由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)由VH结构域组成的dAb 片段(Ward等人，(1989)Nature 341：544-546)；(vi)分离的互补决定区(CDR)和(vii)两个或更多个分离的CDR的组合，其可以任选地通过合成接头连接。

术语“多特异性抗体”在最广泛的意义上使用，并特异性地覆盖包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)的抗体，其中VH-VL单元具有多表位特异性(即，能够结合一个生物分子上的两个不同表位或不同生物分子上的每个表位)。这种多特异性抗体包括但不限于全长抗体、具有两个或更多个VL和VH 结构域的抗体、双特异性双抗体和三抗体。“多表位特异性”是指特异性结合相同或不同目标上两个或更多个不同表位的能力。

“双重特异性(dual specificity)”或“双特异性(bispecificity)”是指特异性结合相同或不同目标上的两个不同表位的能力。然而，与双特异性抗体相反，双重特异性抗体具有氨基酸序列相同的两个抗原结合臂，并且每个Fab臂能够识别两个抗原。双重特异性允许抗体作为单个Fab或IgG分子与两种不同抗原以高亲和力相互作用。根据一个实施方案，IgG1形式的多特异性抗体以5μM至0.001 pM、3μM至0.001pM、1μM至0.001pM、0.5μM至0.001pM或0.1μM至0.001 pM的亲和力结合每个表位。“单特异性”是指仅结合一个表位的能力。多特异性抗体可以具有与完整免疫球蛋白分子相似的结构，并包括Fc区，例如IgG的Fc区。此类结构包括但不限于IgG-Fv、IgG-(scFv)₂、DVD-Ig、(scFv)₂-(scFv)₂-Fc和 (scFv)₂-Fc-(scFv)₂。在IgG-(scFv)₂的情况下，scFv可以连接到重链或轻链的N末端或C末端。

如本文所用，术语“双特异性抗体”是指对至少两种不同抗原具有结合特异性的单克隆抗体，通常是人或人源化抗体。在本发明中，结合特异性中的一种可以针对IL-12或IL-23，另一种可以针对任何其他抗原，例如针对细胞表面蛋白、受体、受体亚基、组织特异性抗原、病毒衍生蛋白、病毒编码的包膜蛋白、细菌衍生蛋白或细菌表面蛋白等。

如本文所用，术语“双抗体”指包含两条多肽链的二价抗体，其中每条多肽链包含通过接头连接的VH和VL结构域，所述接头太短(例如，由五个氨基酸组成的接头)以至于不允许同一肽链上的VH和VL结构域在分子内结合。这种构型迫使每个结构域与另一条多肽链上的互补结构域配对，从而形成同二聚体结构。因此，术语“三抗体”是指包含三条肽链的三价抗体，每条肽链包含通过接头连接的一个VH结构域和一个VL结构域，所述接头过分短(例如，由1-2个氨基酸组成的接头)以至于不允许同一肽链内的VH和VL结构域的分子内结合。

当用于描述本文公开的各种抗体时，术语“分离的抗体”是指已经从表达它的细胞或细胞培养物中鉴定和分离和/或回收的抗体。其天然环境中的污染物成分是通常会干扰多肽诊断或治疗用途的物质，可以包括酶、激素和其他蛋白质溶质或非蛋白质溶质。在一些实施方案中，将抗体纯化至大于95％或99％的纯度，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱(例如，离子交换或反相HPLC)方法测定。关于抗体纯度评估方法的综述，参见例如 Flatman等人，J.Chromatogr.B 848：79-87(2007)。在优选的实施方案中，将抗体纯化至：(1)足以通过使用转杯测序仪获得至少15个残基的N末端或内部氨基酸序列的程度，或(2)在使用考马斯蓝或优选银染色的非还原或还原条件下通过SDS-PAGE达到均质。

关于抗体与目标分子的结合，术语“特异性结合(specific binding)”或“特异性结合至(specifically binds to)”或“特异于(specific for)”特定多肽或特定多肽目标上的表位是指可测量地与非特异性相互作用不同的结合。例如，可以通过测定与对照分子的结合相比的分子的结合，来测量特异性结合。例如，可以通过与类似于目标的对照分子(例如，过量的未标记目标)竞争，来测定特异性结合。在这种情况下，如果标记目标与探针的结合被过量的未标记目标竞争性抑制，则指示特异性结合。如本文所用，术语“特异性结合(specific binding)”或“特异性地结合至(specifically binds to)”或“特异于(specific for)”特定多肽或特定多肽目标上的表位，可以表现为，例如，分子对目标的Kd为10-4M或更低、或者10-5M或更低、或者10-6M或更低、或者10-7M或更低、或者10-8M或更低、或者10-9M或更低、或者10-10M或更低、或者10-11M或更低或者10-12M 或更低，或Kd在10-4M至10-6M、或10-6M至10-10M或10-7M至10-9M的范围内。本领域技术人员将理解，亲和力和KD值是负相关。通过低KD值测量对抗原的高亲和力。在一个实施方案中，术语“特异性结合”是指其中分子结合至特定多肽或特定多肽上的表位而基本上不结合任何其他多肽或多肽表位的结合。如本文所用，术语“特异性结合”、“特异性地结合(specifically bind)”和“选择性结合”是指抗体与人白介素-23p19的表位相结合。

本文所用的术语“亲和力”是指抗体与表位的结合强度。抗体的亲和力由解离常数Kd给出，定义为[Ab]×[Ag]/[Ab-Ag]，其中[Ab-Ag]是抗体-抗原复合物的摩尔浓度，[Ab]是未结合抗体的摩尔浓度，以及[Ag]是未结合抗原的摩尔浓度。亲和常数 Ka定义为1/Kd。确定mAb亲和力的方法可以见于Harlow等人，Antibodies:A Laboratory Manual，ColdSpring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor,N.Y.， 1988)，Coligan等人编，Current Protocols in Immunology，Greene Publishing Assoc. 和WileyInterscience,N.Y.，(1992、1993)和Muller,Meth.Enzymol.92：589-601 (1983)，其参考文献通过引用全文并入本文。本领域熟知的一种测定mAb亲和力的标准方法是使用表面等离子体共振(SPR)筛选(例如，通过使用BIAcore^TM SPR 分析设备进行分析)。

“表位”是本领域术语，其指抗体与其抗原之间相互作用的一个或多个位点。描述见于(Janeway，C，Jr.，P.Travers等人(2001).Immunobiology:the immune system inhealth and disease.第II部分，第3-8节.New York,Garland Publishing,Inc.)：“抗体通常只识别大分子(如蛋白质)表面的一个小区域......[某些表位]可能由来自[抗原]多肽链不同部分的通过蛋白质折叠聚集在一起的氨基酸组成。这类抗原决定簇被称为构象表位或不连续表位，因为所识别的结构由在抗原氨基酸序列中不连续但在三维结构中聚集在一起的蛋白质的区段组成。相反，由多肽链的单个区段组成的表位被称为连续表位或线性表位”(Janeway,C.Jr.,P.Travers等人 (2001).Immunobiology:the immune system inhealth and disease.第II部分，第3-8 节.New York,Garland Publishing,Inc.)。

如本文所用，术语“KD”旨在指特定抗体-抗原相互作用的解离常数。其由以下式计算：Koff/Kon＝KD。

如本文所用，术语“IC50”旨在指在实施例5(在人DB细胞测定中对STAT3 活化的抑制)所述的生物测定中，用于中和在人淋巴瘤DB细胞中的IL-23的50％的生物活性所需的本发明抗体的有效浓度。

关于试剂和特定活性(例如，结合细胞、抑制酶活性、活化或抑制免疫细胞) 的“EC50”，是指产生其关于这种活性的最大反应或效应的50％的试剂的有效浓度。关于试剂和特定活性的“EC100”是指产生其关于这种活性的基本上最大反应的试剂的有效浓度。

如本文所用，术语“基于抗体的免疫疗法”和“免疫疗法”用于泛指依赖于抗IL-23p19抗体、双特异性分子、多特异性分子、结合剂、或包含IL-23p19特异性结合剂的融合蛋白的靶向特异性，用以介导对特征为IL-23p19异常表达的细胞进行直接或间接作用的任何形式的疗法。该术语意指包括使用裸抗体、双特异性抗体(包括T细胞接合，NK细胞接合和其他免疫细胞/效应细胞接合形式)、抗体药物偶联物的治疗方法，使用经工程化以包含IL-23p19特异性嵌合抗原受体的 T细胞(CAR-T)或NK细胞(CAR-NK)的细胞疗法，和包含IL-23p19特异性结合剂的溶瘤病毒，以及通过递送抗IL-23p19抗体的抗原结合序列并在体内表达相应抗体片段的基因疗法。

如本文所用，术语“免疫介导的炎性疾病”或“IMID”包括一组看似不相关的疾病，其共享共同的炎性通路，并由先天性和适应性免疫系统功能的失调所触发或导致。这些病状包括但不限于银屑病、类风湿性关节炎、炎性肠病、系统性红斑狼疮、强直性脊柱炎、化脓性汗腺炎、特应性皮炎和哮喘。任何器官系统都可以受到IMID的影响，个体的生活质量可能会明显下降，发病率高且寿命缩短 (Bunte,K和Beikler,T,Int.J.Mol.Sci.,20：3394(2019))。本文要注意的是，如在本说明书和所附权利要求书中所使用的，单数形式“一(a)”、“一个(an)”和“所述/该(the)”包括复数引用，除非上下文另有明确说明。

IL-12/IL-23受体信号传导轴

IL-23的p19亚基(本文也称为“IL-23p19”和“p19亚基”)是含有21个氨基酸前导序列的189个氨基酸多肽(Oppmann等人Immunity 13：715(2000))。 p19亚基的生物活性只有在其与IL-12p40亚基相伴形成IL-23时才能检测到。IL-12 和IL-23都仅作为分泌的异二聚体细胞因子存在，以及如果没有在细胞内与p40共价结合，则IL-12p35和IL-23p19亚基都不会被分泌。IL-12和IL-23细胞因子都具有的p40亚基结合其受体的共同IL-12Rβ1组分，通过独特的p35(Il-12)和p19 (IL-23)亚基(其结合其各自的高亲和力受体的IL-12Rβ2和IL-23R组分)确定信号传导的特异性。IL-12和IL-23与其同源受体的相互作用构成了一个复杂的协调先天性和适应性免疫反应的调节网络的部分。

据推测，在针对许多细胞内病原体和病毒的保护性免疫反应的进展(development)以及在肿瘤免疫监视中，IL-12起关键作用。参见Kastelein等人， AnnualReview of Immunology,2007,25：221-42；Liu等人，Rheumatology,2007,46 (8)：1266-73；Bowman等人，Current Opinion in Infectious Diseases,2006 19： 245-52；Fieschi和Casanova,Eur.J.Immunol.2003 33：1461-4；Meeran等人， Mol.Cancer.Ther.2006 5：825-32；Langowski等人，Nature 2006 442：461-5。因此，与IL-12和IL-23的双重抑制相比，IL-23特异性抑制(忽略(sparing)IL-12或都具有的p40亚基)可能具有潜在的优越的安全性特征。

IL-23的受体包含IL-12Rβ1亚基(IL-12受体同样具有该亚基)，其与称为 IL-23R的独特亚基相伴(Parham等人J.Immunol.168：5699(2002))。据报道， IL-23R以高亲和力(KD＝44±3nM)与IL-23结合。与之相反，IL-23以低亲合力 (KD＝2±1uM)与IL-12Rβ1亚基结合。IL-23R与IL-23的结合促进IL-12Rβ1以非常高的亲和力(KD＝25±5nM)与IL-23结合(Bloch等人，Immunity，48,45-58 (2018))。IL-23R由多种细胞(自然杀伤细胞、巨噬细胞、树突细胞、记忆T 细胞、角质形成细胞)表达。IL-23的产生诱导IL-23R的表达，从而形成增强IL-23 表达的正反馈回路。

IL-23由活化的抗原呈递细胞产生，与NK细胞和T细胞上表达的IL-23受体复合物结合。单独或与其他细胞因子(例如，IL-1β)组合的IL-23已被证明可促进产生IL-17A、IL-17F、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNFα)，其是已知有助于IMID 病症中的炎性反应的促炎性细胞因子。

IL-23p19与IL-23R的结合导致IL-23p19螺旋结构域的重组过程，这使得 IL-12p40能够与IL-12Rβ1结合(Bloch,Y等人Immunity.2018；48(1)：45-58)。该过程活化JAK2和TYK2，导致STAT3和STAT4形成，最终作为转录因子起作用(Parham，C.等人，Immunol.168(11)：5699-5708(2002)。IL-23是初始CD4+T 细胞分化为Th17细胞的晚期阶段的关键参与者(Gaffen，SL等人，Nat Rev Immunol.14(9)：585-600(2014)。在没有IL-23R的情况下，初始T细胞需要其他细胞因子(如转化生长因子(TGF)-β和IL-6)以调节分化的早期阶段。这些细胞因子诱导视黄酸受体相关的孤儿受体-γt作为转录因子表达，这促进IL-23R 的表达。由TGF-β和IL-6诱导的未成熟Th17细胞需要暴露至IL-23才能获得致病性(pathogenicity)。当成熟时，Th17细胞就能够产生IL-17和TNF-α(Kashani,A 等人，Gastroenterology&Hepatology 15(5)：255-265(2019))。

尽管两种细胞因子之间的结构相似，但IL-23的生物活性/功能与IL-12的那些不同。IL-23支持初始CD4+T细胞分化为新的细胞亚群(称为Th17细胞)并将其维持，该亚群不同于经典的Th1和Th2细胞。Th17细胞产生白介素17A(IL-17A) 和白介素17F(IL-17F)。Th17细胞产生一系列已知驱动炎性反应的其他因子，包括已知驱动炎性反应的肿瘤坏死因子，包括肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素 6(IL-6)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、CXCL1和CCL20。NK 细胞和先天淋巴样细胞(如淋巴组织)诱导(LTi)样细胞表达IL-23受体和视黄酸相关孤儿受体(ROR)γ，并对IL-23作出反应，产生IL-17。IL-1β和IL-23还共同刺激γ-δ细胞以诱导IL-17产生，并且无需T细胞受体参与。

重要的是，IL-23维持初始T细胞分化成独特的Th17细胞谱系并扩增(expansion)。在没有IL-23的情况下，失去Th17表型。IL-23已被描述为IMID 中免疫炎性反应的“主要调节剂”，因为其在维持产生促炎细胞因子谱(profile) 的细胞毒性Th17细胞方面发挥着关键作用。IL-23的致病性部分取决于IL-17A、 IL-17F和IL-22的产生失调，这为靶向IL-23/IL-23R轴的免疫疗法提供依据。

靶向促炎性的IL-23/IL-23受体信号传导轴

据报道，在体内赋予治疗益处的抗IL-12/IL-23抗体包括抗体优特克单抗(ustekinumab)(CNTO1275)和布雷奴单抗(briakinumab)(ABT-874)。两种抗体都靶向共同的IL-12p40亚基，位于p40亚基中对IL-12Rβ1结合至关重要的区中(Clarke，A.等人mAbs 2(5)：539-549(2010))。

已报道在体内具有治疗益处的抗IL-23选择性抗体包括古塞库单抗(guselkumab)

替拉珠单抗(tildrakizumab)

瑞莎珠单抗(risankizumab)

布雷库单抗(brazikumab)(MEDI2070) 和mirakizumab(Ly3074828)；所有这些都特异于IL-23的p19亚基。来自随机、安慰剂和积极对照(active-controll)的3期临床试验的数据显示，替拉珠单抗、古塞库单抗和瑞莎珠单抗在中度至重度银屑病患者中具有良好的风险收益特征。没有观察到这些IL-23p19抑制剂的任何重大安全问题。

由IL-12驱动的Th1细胞在之前被认为是在许多自身免疫性疾病中的致病性T 细胞亚群，然而最近在炎性肠病、银屑病、炎性关节炎和多发性硬化模型中的动物研究中评估了IL-12与IL-23的各自贡献，并确定是IL-23而非IL-12是自身免疫/炎性疾病的关键驱动(Ahern等人，Immun.Rev.226：147-159(2008)；Cua等人，Nature421：744-748(2003)；Yago等人，Arthritis Res and Ther.9(5)：R96 (2007)。

IL-23在免疫介导的炎性反应中的作用也得到遗传学研究的支持。全基因组关联研究(genome-wide association study)(GWAS)将IL-23R多态性与自身免疫性病状(如银屑病和银屑病关节炎)的易感性联系起来(Liu等人，PLoS Genet.4 (3)e1000041(2008)，Reveille等人，Nat.Genet.42(2)：123-127(2010)和 Duerr等人，Science 314(5804)：1461-1463(2006)。已经建立了rs11209026 (IL-23R基因中的单核苷酸多态性(SNP))和CD之间的关联(Reveille，JD等人)。该变体显示对CD和UC具有保护作用。rs11209026的保护特性在一项荟萃分析(meta-analysis)中得到证实，该荟萃分析表明携带这种SNP变体在超过75,000 例病例和对照的组中降低了的疾病风险(Jostins,L.Nature 491(7422)：119-124(2012)。这种SNP变体与其他编码IL-23R变体中的一些，一起导致IL-23R表达减少，从而减少通过IL-23轴介导的免疫反应(J Biol Chem.291(16)：8673-8685 (2016)。

虽然细胞因子(如IL-6和TGF-β1)可以促进从初始CD4+T细胞中分化出 RORγt+Th17细胞，但IL-23是这些细胞发挥全部炎性功能所必需的。此外，IL-23 与在活化的RORγt+Th17细胞上的IL-23受体结合，进一步诱导表达IL-23受体 (IL-23R)，从而为这些细胞的维持和增殖提供前馈回路(feed-forward loop)(Singh, S等人，MAbs 7(4)：1493-1503(2015)。

有充分证据表明IL-23/IL-17轴在慢性炎症的发展中起重要作用，基因研究揭示IL-23受体(IL-23R)或其配体与几种炎性疾病(包括银屑病、炎性肠病和移植物抗宿主病)之间的潜在联系。靶向IL-23/IL-17轴是在IMID中的深入治疗探索领域，所述IMID包括银屑病、银屑病关节炎、炎性肠病(溃疡性结肠炎和克罗恩病)、强直性脊柱炎和系统性红斑狼疮(SLE)。

一般而言，IL-23特异性抗体，如古塞库单抗、替拉珠单抗、瑞莎珠单抗、布雷库单抗或mirakizumab，选择性结合IL-23p19并抑制IL-23与其受体结合；从而拮抗IL-23在诱导和维持T辅助(Th)17细胞、先天淋巴细胞、γδT细胞以及负责与IMID相关的组织炎症、破坏和/或异常组织修复的自然杀伤(NK)细胞中的作用。

斑块型银屑病或银屑病(PsO)是一种慢性炎性的、T细胞介导的皮肤病症，其特点是复杂的病理生理学。在发达国家其发生率为1-4％。银屑病是美国最普遍的自身免疫性疾病，其影响了大约750万人。斑块型银屑病是最常见的银屑病形式，影响80％至90％的患者。虽然银屑病的发病机理尚不完全清楚，但多种环境因素、T细胞、树突状细胞、众多细胞因子和45个已确定的基因位点都相互作用，造成全身性银屑病病势，最终形成银屑病斑块(Nestle FO等人，N Engl J Med.361 (5)：496-509(2009),Mahil SK等人DermatolClin.33(1)：1-11(2015)。遗传和环境因素的协同影响、以及先天免疫和适应性免疫的相互作用最终导致异常角质形成细胞增殖，并形成银屑病损伤(Chan,J.R等人，J.Exp.Med,203(12) 2577-2587(2006)。

PsO斑块通常是界限清楚的红斑、特征为表皮增厚的鳞状皮损。受影响的角质形成细胞活化树突状细胞，移动到局部淋巴结并释放几种细胞因子，包括白介素 IL-12和IL-23，它们分别活化1型T辅助细胞(Th1)和17型T辅助细胞(Th17)。 T淋巴细胞和其他细胞类型释放额外的细胞因子，包括肿瘤坏死因子(TNF)-α、 IL-22和IL-17，导致角质形成细胞活化增加和炎症的自驱循环的开启(Lowes MA 等人,Trends Immunol.34(4)：174-81(2013)。组织学上，有明显的表皮增生伴有角化不全和混合的真皮浸润，包括CD4+T细胞、树突状细胞、巨噬细胞和肥大细胞。

早期的出版物报道在银屑病皮损中存在肿瘤坏死因子α和IL-12的p40亚基的水平升高，伴随着IL-12p40和IL-23p40信使RNA的过表达。这些发现表明，用针对IL-12/23p40亚基蛋白的中和抗体抑制IL-12和IL-23，可能为治疗银屑病提供有效的治疗方法(Piskin G等人，J Immunol 2006，176：1908-15)。银屑病最初被认为是Th-1介导的疾病(基于T辅助1型细胞分泌的细胞因子谱：白介素2、肿瘤坏死因子(TNF)α和干扰素(IFN)γ)。

IL-23在银屑病发病机理中的基本作用已被阐明，其与Th17谱系的生物学有关。初始T淋巴细胞开始向Th17分化需要TGF-β1、IL-6和IL-1的存在，而IL-23 是活化和维持Th17以分泌促炎细胞因子IL-17、IL-22、IL-21和肿瘤坏死因子-α所必须的，最终促成形成银屑病皮损(Fotaidou,C.等人，Psoriasis:Targets and Therapy 8:1–5(2018))。

因此，虽然已知IL-12和IL-23都有助于银屑病中Th1免疫反应的发展，但IL-23 现在被认为是Th17细胞分化和存活的关键驱动因素。Th17细胞产生的主要细胞因子是促炎性IL-17家族的细胞因子，包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E 和IL-17F。IL-17A和IL-17F相似并结合相同的IL-17受体，其是包含IL-17RA和 IL-17RC亚基的异二聚体。

尽管早期的治疗策略以Th1细胞为目标，将其作为银屑病发病机理的中心细胞类型，但较新的模型关注IL-23/Th17轴(Lowes MA，等人Trends Immunol.34 (4)：174-81(2013)。新焦点的理由基于这样的观点：即IL-17是银屑病发病机理中的关键参与者，以及IL-23驱动Th17细胞活化的知识。此外，IL-23刺激其他细胞类型(包括先天淋巴样3型细胞和γδT细胞)产生其他Th17细胞因子(例如，IL-22)(Ward,N.L.，J InvestigDermatol.134：2305-2307(2014)。有人提出，抑制IL-23将阻断Th17细胞下游产生的IL-17A和IL-22，从而将该作用转化为对银屑病免疫发病机理的拮抗作用。

目前认为IL-23/IL-17轴在银屑病的发病机理中至关重要，选择性的IL-23p19 抑制可以带来若干关于IL-12/23p40抑制或IL-17A或其受体的远端阻断的优势(Torres,TDrugs 77：1493-1503(2017)。迄今为止，三种IL-23p19亚基特异性单克隆抗体(即古塞库单抗、替拉珠单抗和瑞莎珠单抗)已获得美国食品药品监督管理局(FDA)和欧洲药品管理局(EMA)的批准，用于作为全身治疗或光疗候选者的成人中治疗中度至重度的斑块型银屑病。2020年7月，古塞库单抗还被 FDA批准用于治疗患有活动性(active)银屑病关节炎的成人。

在早期的概念验证(proof-of-concept)测试和I期临床试验中证明了IL-23阻断在银屑病中的高效性。1期研究表明，单剂量的古塞库单抗在患有中度至重度斑块型银屑病患者中产生显著的临床反应(Sofen H,等人，J Allergy Clin Immunol； 133：1032-1040(2014)。I期研究还报告，用古塞库单抗选择性拮抗白介素-23 导致银屑病的临床改善，其特征是减少了表皮厚度、T细胞和树突细胞的浸润、银屑病相关基因的表达以及血清IL-17A的水平。报告发现，在患有中度至重度银屑病的患者中，在单剂量的古塞库单抗后具有可测量的临床反应，这支持了正在出现的理论，即IL-23的选择性中和是一种有希望的治疗选择。

在II期给药研究(NCT01483599)中也观察到了古塞库单抗活性的快速启动(onset)，该研究评估了古塞库单抗在广泛的剂量范围和两个不同的给药间隔下连续治疗长达40周的用途。疗效在最早的评估中(第4周)很明显。与阿达木单抗(通常用于治疗银屑病的生物制剂)相关的反应率相比，若干与古塞库单抗方案相关的反应率要好得多(Gordon,KB等人，N Engl J Med 373：136-144(2015)。古塞库单抗的疗效在第16周(主要终点评估)后继续增加，并一直持续到第40 周。此外，经过40周的连续治疗，在100mg古塞库单抗组中的大多数患者已完全清除银屑病，如PGA评分为0(62％的患者)和PASI评分较基线改善100％(54％的患者)所指示。FDA和EMA的监管批准部分依赖于三项关键性的III期临床试验的结果，即VOYAGE 1(Blauvelt,A等人J.Am.Acad.Dermatol.76：405–417(2017) VOYAGE(Reich,K等人J Am.Acad.Dermatol.,76：418–431(2017)和NAVIGATE (Langley,RG等人，Brit.J.Dermatol.178：114-123(2017)。

VOYAGE 1(NCT02207231)是一项在全球101个地点进行的III期、随机、双盲、安慰剂和活性对照试验(2014年12月至2016年4月)。该研究包括将古塞库单抗与阿达木单抗进行积极的比较(active-comparator)阶段(第0-48周)以及安慰剂对照阶段(第0-16周)，之后接受安慰剂的患者至第48周内交叉(cross over)接受古塞库单抗。古塞库单抗在共同的主要(coprimary)终点和所有主要的次要终点方面均优于安慰剂和/或阿达木单抗(全部P<.001)。与安慰剂相比，接受古塞库单抗的患者在第16周达到IGA0/1(6.9％vs 85.1％)和PASI90(2.9％vs 73.3％)的比例显著增加。同样，在第24周和第48周，古塞库单抗组中的PASI 100 反应显著优于在阿达木单抗组中的PASI 100反应(P<.001)。在第16周开始使用古塞库单抗后，安慰剂交叉组的患者获得的反应与古塞库单抗组中观察到的反应相似。VOYAGE 1证实了IL-23在银屑病的发病机理中的作用。与TNF-α阻断相比，选择性靶向IL-23通路提供对更多的银屑病特异性的细胞因子的抑制以及具有更高疗效，同时保持良好的安全性特征(Blauvelt,A,等人，J Investig Dermatol.， 135：1946-1953(2015)。

VOYAGE 1是一种在初始试验后跟踪患者四年的扩展的标记试验 (extended-label trial)。患者最初被随机分配接受Tremfya或安慰剂，但在16周时每个人都接受Tremfya。VOYAGE 1研究发现，在最初接受Tremfya或安慰剂，然后在第16周交叉接受Tremfya的合并组个体中，82％的接受Tremfya的患者显示出在银屑病面积严重性指数(Psoriasis Area Severity Index)(PASI 90)方面至少90％的改善，并且在第204周(即四年)的调查者整体评估(Investigator’s Global Assessment)(IGA)中评分为清除(0)或最小疾病(1)。

银屑病关节炎(PsA)是一种在多至40％的银屑病患者中发生的慢性炎性肌肉骨骼疾病。因此，PsA可以被认为是疾病中的疾病，其与银屑病有许多共同的致病通路。在70％的患者中，银屑病通常先于PsA，在15％的患者中同时发生炎性皮肤和关节疾病，在其余患者中炎性关节炎发生在皮肤病之前。最后，虽然几乎所有PsA患者都会发展为银屑病，但临床表现以及PsA的病程是相当异质的，已经描述了基于受累关节分布的五种不同的PsA模式(Dobbin-Sears，I等人Ther Adv Chronic Dis,.9(10)191–198(2018))。

PsA是一种具有关节和关节外表现的异质性病状，包括外周关节炎、轴性疾病、肌腱端炎、指炎以及皮肤和指甲疾病的组合(Quireo,R和Coto-Sequra,P,Expert Opinion OnBiological Therapy,18：9,931–935(2018))。活化先天性和获得性免疫反应的遗传、免疫学和环境因素似乎在PsA的发病机理中具有重要作用。随着疾病的发展，患者可能表现出多种模式，并且不限于关节炎的一个亚组。大约三分之二的PsA患者会经历进行性关节损伤，这通常与功能丧失和残疾有关。

促炎性的IL-23/IL-23受体信号传导轴参与了PsO和PsA。特别是，Th-17轴 (受IL-23抑制)被认为在银屑病和PsA的免疫发病机理中发挥重要作用。 IL-23/IL-23-R相互作用诱导IL-23依赖性的Th-17细胞的分化和活化以及产生并分泌IL-17和IL-22，最终导致滑膜和皮肤炎症以及骨重塑(bone remodeling)。与 PsA病理学特别相关的是，IL-17通过上调RANKL促进骨侵蚀。综合数据分析结果指示，优特克单抗治疗的患者(与剂量无关)显著抑制患有活动性PsA的患者中关节损伤的放射学进展(Kavanaugh，A等人。Ann.Rheum.Dis.73(6)：1000-1006 (2014)。这支持了IL-23和下游Th17通路在大多数PsA患者中发生的放射学损伤中的作用。

克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)(人主要的炎性肠病(IBD))都是慢性复发性疾病，其特征为改变了肠道完整性和功能的慢性组织炎症。在炎性肠病(IBD)(例如，克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC))患者的肠黏膜、血浆和血清中发现白介素(IL)23和T辅助(Th)17细胞细胞因子的水平升高。

几个编码IL-23和IL-17细胞通路要素的基因的变体与IBD风险相关。特别是，已观察到IL-23受体基因的功能丧失变体(编码在第381位的从精氨酸到谷氨酰胺的氨基酸改变)，降低了IBD的风险，这归因于STAT3信号传导减少以及消除了Th17细胞暴露至IL-23后的反应(Barrett,JC等人Nat.Genet.40：955-962(2008), Duerr,RH等人Science 314：1461-1463(2006)，Allocca,M等人Best Practice& Res.Clin.Gastro.32-33：95-102(2018)。

克罗恩病(CD)是慢性免疫介导的病状，其特征是复发性和胃肠系统受累。 CD的特征是先天性和适应性免疫反应的失调。尽管尚未完全了解病理生理机制，但该疾病可能是肠道共生菌群与遗传易感个体的宿主微生物防御之间相互作用的结果，导致克罗恩病的透壁(transmural)炎性反应(Deepak,P和Loftus,E，Drug Design，Development and Therapy(10)3685–3698)(2016)。从长远来看，持续的透壁炎性反应通常会导致狭窄和/或瘘管的发展，这需要住院和/或手术。在发现IL-23/IL-17通路后，CD的治疗模式从非特异性免疫抑制疗法(即，甲氨蝶呤) 转向针对IL-2和/或/IL-17通路的免疫疗法。

UC是一种慢性、复发缓解型(relapsing-remitting)的炎性肠病，其会导致大肠持续的黏膜炎症，其会发展为微小的开放性疡(sore)或溃疡，从而产生脓液和粘液。据估计，近100万溃疡性结肠炎患者生活在美国，UC影响欧洲的260万人。尽管这种疾病可以影响任何种族或民族的人，但在高加索人中更为常见，并且男性比女性更容易被诊断出来。UC的病因知之甚少，但据信部分归因于具有导致结肠慢性炎症的遗传易感性的受试者对微生物群(microbiota)(微生物菌群和病原体)的异常免疫反应。已知溃疡性结肠炎表现出Th2型细胞因子特征。

在针对IBD的临床研究中，IL-23特异性的p19拮抗剂包括布雷库单抗(MEDI2070)、瑞莎珠单抗(BI 655066)、米吉珠单抗(mirikizumab)(LY3074828) 和古塞库单抗(Tremfya，Janssen)。迄今为止，据报道，在II期试验中抗p19(抗 IL-23)的抗体布雷库单抗和瑞莎珠单抗对中度至重度CD有效。

近期在一项II期试验中，米吉珠单抗被证明对中度至重度UC有效。在研究的所有剂量中，接受米吉珠单抗治疗的患者中有11.5％至22.6％达到临床缓解，相比之下接受安慰剂治疗的患者为4.8％。此外，与安慰剂相比，接受米吉珠单抗治疗的患者在12周内达到内镜缓解和症状缓解的比例更高。目前还没有p-19选择性的抗体被批准用于治疗IBD。抗p19试剂(瑞莎珠单抗、布雷库单抗、古塞库单抗)的2期和3期临床试验正在进行中，不仅将提供有关其疗效和安全性本身的进一步信息，还将提供与现有生物制剂(biologic)相比的头对头(head-to-head) 疗效，以及提供与多种生物制剂联合治疗的不断发展的治疗概念。

强直性脊柱炎(AS)与银屑病关节炎相似，是另一种与IL-23通路遗传相关的脊柱关节病；其是一种涉及脊柱炎症的疼痛病状，可导致不可逆的脊柱融合。 AS通常对传统的改善疾病的抗风湿药(DMARD)没有反应，AS的系统疗法(systemic therapy)包括非甾体抗炎药(NSAID)和肿瘤坏死因子抑制剂。

有几条证据证明，IL-23是AS中有希望的治疗靶点(Paine A等人Curr.Opin.Rheumatol.28：359-67(2016)。在遗传水平上，病例-对照全基因组关联研究表明，IL-23受体(IL-23R)多态性与患AS的风险增加有关(Reveille JD，等人Genet 42：123–7(2010))。此外，在AS中观察到IL-23R R381Q多态性的保护作用(Sarin R等人Proc NatlAcad Sci USA；108：9560–58(2011)。在AS 患者的关节面(facet joints)发现产生IL-23的细胞的数量增加(Appel H等人， Arthritis Rheum；65：1522–9(2013)，而AS患者血液中IL-23反应性T辅助(Th) 22(Th22)、Th17和γ/δT细胞的数量升高(Zhang L，等人PLoS One(7)：e31000 (2012))。

最近批准了IL-17A抑制剂苏金单抗(secukinumab)用于治疗AS(Baeten D. 等人，N Engl.J.Med.373：2534–48(2015))，这支持了直接和特异性抑制IL-23 将有益于AS患者的临床假设。然而，最近的一份出版物报告了随机、双盲、安慰剂-对照、概念验证、剂量发现2期研究的结果，其评估了瑞莎珠单抗在活动性AS 患者中的疗效(NCT02047110)，得出的结论是，使用瑞莎珠单抗治疗没有达到研究的主要终点，并且与安慰剂相比，在活动性AS患者中没有显示出临床上有意义的改善(Baeten D,等人，Annals of the Rheumatic Diseases77：1295-1302(2018))。

IL-23p19拮抗剂

IL-23受体复合物由与信号传导链IL-23R(p19亚基结合)相伴的IL-12Rβ1 组成。IL-23通过与T细胞和自然杀伤(NK)细胞表面上作为IL-12Rβ1/IL-23R受体复合物表达的2条受体链进行依次结合以介导细胞活性。

已经描述了选择用于抑制重组IL-23的鼠、人源化的和噬菌体展示的抗体；参见例如美国专利号7,491,391、WIPO公开WO 1999/05280、WO 2007/0244846、 WO 2007/027714、WO 2007/076524、WO 2007/147019、WO 2008/103473、WO 2008/103432、WO 2009/043933和WO 2009/082624。

以高亲和力结合至IL-23细胞因子的p19亚基的单克隆抗体或其抗原结合结构域，可以中和所述细胞因子的活性，从而阻断其下游作用。到目前为止，三(3) 种抗p19的抗体古塞库单抗

替拉珠单抗

和瑞莎珠单抗

已被FDA批准用于治疗IMID。其他两种对IL-23p19亚基特异性的抗体目前处于后期临床开发中，MEDI2070(布雷库单抗， Astrazeneca/Medimmue)和Ly3074828(米吉珠单抗，Eli Lilly)。米吉珠单抗是人源化的IgG4单克隆抗体。通过阻断IL-23，抗p19特异性抗体抑制促炎性细胞因子和趋化因子的释放，从而抑制炎性反应。

由于该组IL-23拮抗剂靶向IL-23的p19亚基而不是p40亚基，因此所述IL-23 拮抗剂不影响IL-12活性。这一特征将IL-23受体拮抗剂与优特克单抗(STELARA) 区分开来，优特克单抗靶向IL-12和IL-23都具有的共同p40亚基。虽然优特克单抗具有疗效和良好的安全性特征，但IMID的药物开发已将重点转移到选择性拮抗 IL-23/IL-17通路的试剂的开发上。

古塞库单抗(CNTO1959)是以高亲和力结合人IL-23的p19亚基的完全人单克隆IgG1、λ抗体。古塞库单抗是FDA批准的第一个抗p19特异性抗体/IL-23拮抗剂。在加快监管审查后，古塞库单抗于2017年7月13日获得批准以用于治疗患有中度至重度斑块型银屑病的成人。古塞库单抗还在加拿大、欧盟、日本和全球其他几个国家获得批准。古塞库单抗由Janssen以TREMFYA上市(美国专利号： 7,935,344和7,993,645)。

古塞库单抗通过阻止IL-23与免疫细胞表面表达的IL-23受体蛋白结合来抑制人IL-23的生物活性。更特别地，古塞库单抗通过p19亚基与人IL-23细胞因子结合，从而阻止IL-23-IL-23R复合物的形成以及随后相伴的(partner)受体链的细胞内信号传导。

开发计划目前包括评估

用于治疗活动性银屑病关节炎的疗效的III期试验、在克罗恩病中的IIb/III期研究、在溃疡性结肠炎中的IIb/III 期试验以及另一项评估古塞库单抗用于化脓性汗腺炎的临床研究。

Janssen最近宣布计划进一步将古塞库单抗的临床开发扩展到家族性腺瘤性息肉病(FAP)(一种胃肠道疾病)。Janssen已经启动了Ib期概念验证临床试验 (NCT03649971)，其在大约72名患者中评估古塞库单抗与安慰剂相比的疗效和安全性。FAP综合征是最常见的腺瘤性息肉病综合征。FAP综合征是常染色体显性遗传病，其特征是在整个结肠中早发成百上千个腺瘤性息肉。FAP在全球范围内的出生发病率约为8300人中有1人，男女表现相同，如果不及时治疗，患有该综合征的患者将很可能会发展为结肠直肠癌。此外，发展为其他恶性肿瘤的风险也在增加。目前，切除结肠是防止这些患者发展为结肠直肠癌的唯一方法。

替拉珠单抗(MK322)是人源化的单克隆IgG1、κ抗体，由Merck&Co./SunPharmaceutical以ILUMYA(美国专利号8,404,813)进行销售。替拉珠单抗选择性地结合p19亚基，从而抑制IL-23与其受体的相互作用，进而抑制IL-23介导的促炎性细胞因子的释放。替拉珠单抗于2018年3月首次获得FDA的全球批准，用于患有中度至重度斑块型银屑病的成人患者。

瑞莎珠单抗(BI 655066)是人源化的单克隆IgG1、κ，由AbbVie/BoehringerIngelheim以SKYRIZI进行销售(美国专利号：8,778,346)。瑞莎珠单抗已开发为拮抗IL-23的高亲和力抗体。

瑞莎珠单抗以高亲和力(解离常数<10pmol/L)选择性结合白介素-23的p19 亚基(IL-23p19)(Singh,S,等人，MAbs 7(4)77-791(2015)。瑞莎珠单抗选择性地靶向IL-23的p19亚基，并在小鼠脾细胞测定中有效抑制IL-23诱导的(由THP-1 细胞产生的人IL-23)IL-17产生，IC50值约为2pM((Singh,S,等人，MAbs 7(4)77-791(2015))。瑞莎珠单抗的框架区经过工程改造，在Fc区有两个突变，以减少FcγR受体和补体的结合。更特别地，瑞莎珠单抗的Fc部分具有两个取代突变(Leu234Ala和Leu235Ala)以减少Fcγ受体和补体的结合。瑞莎珠单抗于2019 年4月获得FDA批准用于在成人中治疗中度至重度斑块型银屑病。

抗IL-23p19抗体

本公开的抗IL-23p19抗体结合IL-23的p19亚基。优选地，此类抗体是全人抗体并且不结合IL-12的p40亚基。

在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含具有表1中公开的一组CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)的VH。例如，抗IL-23p19抗体或其抗体片段可以包含与表1中公开的一个或多个抗IL-23p19抗体中的那些CDR对应的一组CDR(例如，Hu-2.18006B抗体的CDR)。

在另一个实施方案中，抗IL-23p19抗体包含具有表2中公开的一组CDR (LCDR1、LCDR2和LCDR3)的VL。例如，抗IL-23p19抗体或其抗体片段可以包含与表2中公开的一个或多个抗IL-23p19抗体中的那些CDR对应的一组CDR (例如，Hu-2.18006B抗体的CDR)。

在一个可选择的实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含具有表1公开的一组CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)的VH以及具有表2公开的一组 CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的VL。

表1：人可变重链结构域的CDR序列

抗IL-23p19 Ab	CDR1	CDR2	CDR3
				Hu-2.18006B	SEQ ID NO:9	SEQ ID NO:10	SEQ ID NO:11
Hu-4.18006B	SEQ ID NO:15	SEQ ID NO:16	SEQ ID NO:17
				Hu-5.18006B	SEQ ID NO:21	SEQ ID NO:22	SEQ ID NO:23
Hu-6.18006B	SEQ ID NO:27	SEQ ID NO:28	SEQ ID NO:29

表2：人可变轻链结构域的CDR序列

抗IL-23p19 Ab	CDR1	CDR2	CDR3
				Hu-2.18006B	SEQ ID NO:12	SEQ ID NO:13	SEQ ID NO:14
Hu-4.18006B	SEQ ID NO:18	SEQ ID NO:19	SEQ ID NO:20
				Hu-5.18006B	SEQ ID NO:24	SEQ ID NO:25	SEQ ID NO:26
Hu-6.18006B	SEQ ID NO:30	SEQ ID NO:31	SEQ ID NO:32

在一个实施方案中，抗体可以是特异性结合人IL-23p19的单克隆、嵌合、人源化或人抗体(或其抗原结合部分)。

在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含具有一组互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)的VH，所述互补决定区选自：

(i)CDR1：SEQ ID NO：9、CDR2：SEQ ID NO：10、CDR3：SEQ ID NO： 11；

(ii)CDR1：SEQ ID NO：15、CDR2：SEQ ID NO：16、CDR3：SEQ ID NO： 17；

(iii)CDR1：SEQ ID NO：21、CDR2：SEQ ID NO：22、CDR3：SEQ ID NO： 23；和

(iv)CDR1：SEQ ID NO：27、CDR2：SEQ ID NO：28、CDR3：SEQ ID NO： 29。

在另一个实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含具有一组互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)的VL，所述互补决定区选自：

(i)CDR1：SEQ ID NO：12、CDR2：SEQ ID NO：13、CDR3：SEQ ID NO： 14；

(ii)CDR1：SEQ ID NO：18、CDR2：SEQ ID NO：19、CDR3：SEQ ID NO：20；

(iii)CDR1：SEQ ID NO：24、CDR2：SEQ ID NO：25、CDR3：SEQ ID NO： 26；和

(iv)CDR1：SEQ ID NO：30、CDR2：SEQ ID NO：31、CDR3：SEQ ID NO： 32。

在另一个实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含：

(a)具有一组选自以下的互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)的VH：

(i)CDR1：SEQ ID NO：9、CDR2：SEQ ID NO：10、CDR3：SEQ ID NO： 11；

(ii)CDR1：SEQ ID NO：15、CDR2：SEQ ID NO：16、CDR3：SEQ ID NO： 17；

(iii)CDR1：SEQ ID NO：21、CDR2：SEQ ID NO：22、CDR3：SEQ ID NO： 23；和

(iv)CDR1：SEQ ID NO：27、CDR2：SEQ ID NO：28、CDR3：SEQ ID NO： 29；以及

(b)具有一组选自以下的互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)的VL：

(i)CDR1：SEQ ID NO：12、CDR2：SEQ ID NO：13、CDR3：SEQ ID NO： 14；

(ii)CDR1：SEQ ID NO：18、CDR2：SEQ ID NO：19、CDR3：SEQ ID NO： 20；

(iii)CDR1：SEQ ID NO：24、CDR2：SEQ ID NO：25、CDR3：SEQ ID NO： 26；和

(iv)CDR1：SEQ ID NO：30、CDR2：SEQ ID NO：31、CDR3：SEQ ID NO： 32。

在一个实施方案中，抗体包含VH和VL的组合，其具有一组选自以下的互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)：

(i)VH：CDR1：SEQ ID NO：9、CDR2：SEQ ID NO：10、CDR3：SEQ ID NO：11，VL：CDR1：SEQ ID NO：12、CDR2：SEQ ID NO：13、CDR3：SEQ ID NO：14；

(ii)VH：CDR1：SEQ ID NO：15、CDR2：SEQ ID NO：16、CDR3：SEQ ID NO：17，VL：CDR1：SEQ ID NO：18、CDR2：SEQ ID NO：19、CDR3：SEQ ID NO：20；

(iii)VH：CDR1：SEQ ID NO：21、CDR2：SEQ ID NO：22、CDR3：SEQ ID NO：23，VL：CDR1：SEQ ID NO：24、CDR2：SEQ ID NO：25、CDR3：SEQ ID NO：26；和

(iv)VH：CDR1：SEQ ID NO：27、CDR2：SEQ ID NO：28、CDR3：SEQ ID NO：29，VL：CDR1：SEQ ID NO：30、CDR2：SEQ ID NO：31、CDR3：SEQ ID NO：32。

在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含选自SEQ ID NO：1、 3、5和7的可变重链序列；和/或选自SEQ ID NO：2、4、6和8的可变轻链序列。

在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含一对可变重链和可变轻链序列，其选自以下组合：包含SEQ ID NO：1的可变重链序列和包含SEQ ID NO：2的可变轻链序列；包含SEQ ID NO：3的可变重链序列和包含SEQ ID NO： 4的可变轻链序列；包含SEQ IDNO：5的可变重链序列和包含SEQ ID NO：6的可变轻链序列；以及包含SEQ ID NO：7的可变重链序列和包含SEQ ID NO：8的可变轻链序列。本领域技术人员将进一步理解，可变轻链和可变重链可以独立选择或混合以及匹配，以制备抗IL-23p19抗体，其包含不同于以上鉴定的成对的可变重链和可变轻链的组合。

在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含一对可变重链和可变轻链序列，其选自以下组合：与SEQ ID NO：1具有90％、95％或99％同一性的可变重链序列和与SEQ ID NO：2具有90％、95％或99％同一性的可变轻链序列；与 SEQ ID NO：3具有90％、95％或99％同一性的可变重链序列和与SEQ ID NO：4 具有90％、95％或99％同一性的可变轻链序列；与SEQ ID NO：5有90％、95％或 99％同一性的可变重链序列和与SEQ ID NO：6具有90％、95％或99％同一性的可变轻链序列；和与SEQ ID NO：7具有90％、95％或99％同一性的可变重链序列和与SEQ ID NO：8具有90％、95％或99％同一性的可变轻链序列。本领域技术人员将进一步理解，可变轻链和可变重链可以独立选择或混合以及匹配，以制备抗IL-23p19抗体，其包含不同于以上鉴定的成对的可变重链和可变轻链的组合。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体(例如，拮抗剂抗体)以高亲和力结合 IL-23的p19亚基，而不结合相关的细胞因子家族成员IL-12的p40亚基。

在一些实施方案中，抗体是全长抗体。在其他实施方案中，抗体是抗体片段，包括例如选自以下的抗体片段：Fab、Fab'、F(ab)₂、Fv、结构域抗体(dAbs)和互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、嵌合抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微型抗体和含有足以使IL-23与多肽特异性结合的至少一部分的免疫球蛋白的多肽。

在一些实施方案中，本文公开的抗IL-23p19抗体的可变区结构域可以在C末端氨基酸共价连接到至少一个其他抗体结构域或其片段。因此，例如，可变区结构域中存在的VH结构域可以与免疫球蛋白CH1结构域或其片段连接。类似地， VL结构域可以连接到CK结构域或其片段。以这种方式，例如，抗体可以是Fab 片段，其中抗原结合结构域包含相关的VH和VL结构域，其C末端分别共价连接到CH1和CK结构域。CH1结构域可以用其他的氨基酸延伸，例如，以提供铰链区或如Fab片段中存在的铰链区结构域的一部分，或提供其他的结构域，例如抗体CH2和CH3结构域。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体的可变区结构域可以在C末端氨基酸共价连接到至少一个其他抗体结构域或其片段。因此，例如，可变区结构域中存在的VH结构域可以与免疫球蛋白CH1结构域或其片段连接。类似地，VL结构域可以连接到CK结构域或其片段。以这种方式，例如，抗体可以是Fab片段，其中抗原结合结构域包含相关的VH和VL结构域，其C末端分别共价连接到CH1和CK 结构域。CH1结构域可以用其他的氨基酸延伸，例如，以提供铰链区或如Fab′片段中存在的铰链区结构域的一部分或提供其他结构域，例如抗体CH2和CH3结构域。

因此，在一个实施方案中，抗体片段包含至少一个如本文所述的CDR。如本文所述，抗体片段可以包含至少两个、三个、四个、五个或六个CDR。抗体片段进一步可以包含本文所述抗体的至少一个可变区结构域。可变区结构域可以是任何尺寸或氨基酸组分，并且通常将包含至少一个负责结合人IL-23p19的CDR序列，例如本文描述的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和/或CDR-L3，并且其与一个或多个框架序列相邻或在框架内。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗 IL-23p19抗体是人抗体。在可选择的实施方案中，抗IL-23p19抗体是鼠抗体。在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体是嵌合抗体、双特异性抗体或人源化抗体。

在另一方面，抗IL-23p19抗体或其抗体片段表现出一种或多种以下特性：

(a)特异于人IL-23p19，并具有阻断IL-23与其受体(IL-23R)结合的能力；

(b)抑制、干扰或调节IL-23p19与IL-23受体信号转导的相互作用；

(c)抑制由IL-23诱导的STAT3活化；

(d)抑制人IL-23在小鼠脾细胞中诱导的IL-17产生；

(e)抑制人IL-23在PBMC中活化的人T细胞中诱导的IL-17产生；

(f)不抑制IL-23与IL-12Rβ1信号转导的相互作用；

(g)不抑制人IL-12在人活化T细胞(PBMC)中诱导干扰素γ的产生；

(h)不抑制食蟹猴IL-12在人活化T细胞(PBMC)中诱导干扰素γ的产生；和

(i)抑制人IL-23在鼠类银屑病模型中诱导的皮肤炎症。

在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段可以减少、抑制、干扰和/ 或调节与IL-23相关的至少一种生物学反应，因此可以用于改善IL-23相关的疾病或病症的影响。此类抗体及其抗体片段可用于，例如减少、抑制、干扰和/或调节 IL-23信号传导、IL-23对Th17细胞的活化、IL-23对NK细胞的活化或诱导产生促炎细胞因子。

在一些实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含一个或多个保守的氨基酸置换。本领域技术人员将认识到保守的氨基酸置换是一个氨基酸被具有相似结构或化学性质的另一个氨基酸(如，例如相似的侧链)置换。本领域中描述了示例性的保守置换，例如，Watson等人，Molecular Biology of the Gene，The Benjamin/Cummings PublicationCompany，第4版(1987)。

“保守修饰”是指不显著影响或改变含有氨基酸序列的抗体的结合特性的氨基酸修饰。保守修饰包括氨基酸置换、添加和缺失。保守置换是指氨基酸被具有相似侧链的氨基酸残基取代。具有相似侧链的氨基酸残基家族定义明确，包括具有以下侧链的氨基酸：酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、色氨酸)、芳香族侧链(例如，苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸、酪氨酸)、脂肪族侧链(例如，甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸)、酰胺(例如，天冬酰胺、谷氨酰胺)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和含硫侧链(半胱氨酸、蛋氨酸)。此外，多肽中的任何天然残基也可以被丙氨酸取代，如前面所述的丙氨酸扫描诱变(MacLennan等人，(1998)ActaPhysiol Scand Suppl 643：55-67；Sasaki等人(1998)Adv Biophys 35：1-24)。本发明抗体的氨基酸置换可以通过已知方法进行，例如通过PCR诱变(美国专利号4,683,195)。

在一个实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含形成嵌合抗体或人源化抗体的Hu-2.18006B、Hu-4.18006B、Hu-5.18006B或Hu-6.18006B抗体的全部六个CDR区。在其他实施方案中，抗IL-23p19抗体或其抗体片段包含所公开的全人抗体之一的所有六个CDR区。

产生抗体的方法

可以通过本领域已知的任何方法制备抗IL-23p19抗体或其抗体片段。例如，可以使用可溶性重组人IL-23蛋白、或与其载体蛋白偶联的片段或肽免疫接受者 (recipient)。可以使用任何合适的免疫方法。此类方法可包括佐剂、其他免疫刺激剂、重复加强免疫以及使用一种或多种免疫途径。

任何合适的人IL-23来源都可用作产生本文公开的组合物和方法的非人或人抗IL-23p19抗体的免疫原。

不同形式的IL-23抗原可以用于产生足以产生生物活性的抗体。因此，引发性(eliciting)IL-23抗原可以是单个表位、多个表位、或整个蛋白单独或与一种或多种免疫原性增强剂组合。在一些方面，引发性抗原是分离的可溶性全长蛋白质，或包含少于全长序列的可溶性蛋白质(例如，使用包含IL-23的特定部分或表位的肽进行免疫)。如本文所用，术语“部分”指适于构成目的抗原的免疫原性表位的最少数量的氨基酸或核酸。可以使用适于转化目的细胞的任何遗传载体，包括但不限于腺病毒载体、质粒和非病毒载体，例如阳离子脂质体(lipid)。

需要从各种哺乳动物宿主如小鼠、啮齿动物、灵长类、人等制备单克隆抗体(mab)。制备此类单克隆抗体的技术描述可参见，例如Sties等人(编)BASIC AND CLINICALIMMUNOLOGY(第四版)Lance Medical Publication,Los Altos,CA，以及其中引用的参考：Harlow和Lane(1988)ANTIBODIES:A LABORATORY MANUAL CSH Press；Goding(1986)MONOCLONAL ANTIBODIES:PRINCIPLES AND PRACTICE(第二版)Academic Press,New York,NY。通常，来自使用所需抗原免疫的动物的脾细胞是永生化的，通常通过与骨髓瘤细胞融合。参见Kohler 和Milstein(196)Eur.J.Immunol.6：511-519。永生化的替代方法包括用爱泼斯坦巴尔病毒、癌基因或逆转录病毒转化，或本领域已知的其他方法。参见，例如Doyle等人(编1994和定期增刊)CELL AND TISSUE CULTURE:LABORATORY PROCEDURES,JohnWiley和Sons,New York,NY。筛选由单个永生化细胞产生的克隆以产生对抗原具有所需特异性和亲和力的抗体，且可通过各种技术(包括注射到脊椎动物宿主的腹膜腔中)提高由这种细胞产生的单克隆抗体的产量。或者，可以通过从人B细胞筛选DNA文库来分离编码单克隆抗体或其抗原结合片段的 DNA序列，根据例如Huse等人，Science 246：1275-1281概述的一般操作方案 1275-1281。因此，单克隆抗体可以通过本领域技术人员熟悉的多种技术获得。

其他合适的技术包括选择噬菌体、酵母、病毒或相似载体中的抗体文库。参见，例如Huse等人，见上；和Ward等人(1989)Nature 341：544-546。本文公开的多肽和抗体可以在修饰或不修饰的情况下使用，包括嵌合的或人源化抗体。通常，多肽和抗体将通过共价或非共价地连接提供可检测信号的物质进行标记。已知有多种标记和偶联技术，在科学和专利文献中均有广泛报道。合适的标记包括放射性核素、酶、底物、辅因子、抑制剂、荧光部分、化学发光部分、磁性颗粒等。教导使用此类标记物的专利包括美国专利号3,817,837；3,850,752；3,996,345； 4,277,437；4,275,149；和4,366,241。此外，可以产生重组免疫球蛋白，参见Cabilly 美国专利号4,816,567；和Queen等人(1989)Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86：10029-10023；或在转基因小鼠中制造，参见Nils Lonberg等人，(1994)，Nature 368：856-859；和Mendez等人(1997)Nature Genetics 15：146-156；TRANSGENIC ANIMALS ANDMETHODS OF USE(WO 2012/62118)，Medarex、Trianni、Abgenix、 Alexis、OminiAb、Harbor和其他技术。

在一些实施方案中，产生的抗体结合IL-23p19的能力可以使用标准结合测定进行评估，例如表面等离子共振(SPR)、Octet(BLI)、ELISA、蛋白质印迹、免疫荧光、流式细胞术分析、趋化性测定和细胞迁移测定。在一些方面，还可以评估产生的抗体抑制IL-23阻断IL-23受体β1信号转导和抑制IL-23p19和/或 IL-23p19介导的炎性微环境连续效应的能力，包括抑制IL-23诱导的Stat3磷酸化、 IL-17产生和/或IFN-γ产生。

从细胞中制备的抗体组合物可以使用，例如羟基磷灰石色谱、凝胶电泳、透析以及亲和色谱进行纯化，其中亲和色谱是通常的纯化技术。蛋白质A作为亲和配体的适用性取决于抗体中存在的任何免疫球蛋白Fc结构域的种类和同种型。蛋白质A可用于纯化基于人γ1、γ2或γ4重链的抗体(参见，例如Lindmark等人， 1983J.Immunol.Meth.62：1-13)。建议将蛋白质G用于所有小鼠同种型和人γ3(参见，例如Guss等人，1986EMBO J.5：1567-1575)。与亲和配体连接的基质通常是琼脂糖，但也可使用其他基质。机械性稳定的基质，如可控孔玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯，可实现比琼脂糖更快的流速和更短的加工时间。当抗体包含CH3 结构域时，Bakerbond ABX^TM树脂(J.T.Baker，Phillipsburg，N.J.)用于纯化。根据待回收的抗体，也可使用其他蛋白质纯化技术，如离子交换柱分馏、乙醇沉淀、反相HPLC、硅胶色谱、肝素SEPHAROSE^TM色谱、阴离子或阳离子交换树脂(如，聚天冬氨酸柱)色谱、色谱聚焦、SDS-PAGE和硫酸铵沉淀。

在任何初步纯化步骤之后，可使用pH在约2.5-4.5之间的洗脱缓冲液对包含目的抗体和污染物的混合物进行低pH的疏水相互作用色谱，通常在低盐浓度(例如约0-0.25M盐)进行。

还包括核酸，其在本文定义的低、中和高严谨条件下，与由编码本公开的抗体或抗体片段的分离的多核苷酸序列所表示的核苷酸序列的全部或部分(例如，编码可变区的部分)杂交。杂交核酸的杂交部分的长度通常为至少15(例如20、 25、30或50)个核苷酸。杂交核酸的杂交部分与编码抗IL-23p19多肽(例如重链或轻链可变区)的核酸的一部分或全部序列或其互补序列具有至少80％，例如至少90％，至少95％，或至少98％的同一性。本文所述类型的杂交核酸可用作，例如克隆探针、引物(例如PCR引物)或诊断探针。

多核苷酸、载体和细胞

其他实施方案包括包含编码抗IL-23p19抗体或其抗体片段的序列的分离的多核苷酸，包含该多核苷酸的载体和细胞，以及用于产生抗体的重组技术。分离的多核苷酸可编码任何所需形式的抗IL-23p19抗体，包括例如全长单克隆抗体、Fab、 Fab’、F(ab′)₂和Fv片段、双抗体、线性抗体、单链抗体分子、微型抗体和由抗体片段形成的多特异性抗体。

一些实施方案包括分离的多核苷酸，其包含编码具有SEQ ID NO：2、4、6 和8中的任一个的氨基酸序列的抗体或抗体片段的轻链可变区的序列。一些实施方案包括分离的多核苷酸，其包含编码具有SEQ ID NO：1、3、5和7的氨基酸序列的抗体或抗体片段的重链可变区的序列。

在一个实施方案中，分离的多核苷酸序列编码具有轻链和重链可变区的抗体或抗体片段，其包含氨基酸序列：

(a)包含SEQ ID NO：1的可变重链序列和包含SEQ ID NO：2的可变轻链序列；

(b)包含SEQ ID NO：3的可变重链序列和包含SEQ ID NO：4的可变轻链序列；

(c)包含SEQ ID NO：5的可变重链序列和包含SEQ ID NO：6的可变轻链序列；或者

(d)包含SEQ ID NO：7的可变重链序列和包含SEQ ID NO：8的可变轻链序列。

在一个实施方案中，分离的多核苷酸序列编码具有轻链和重链可变区的抗体或抗体片段，其包含氨基酸序列：

(a)与SEQ ID NO：1具有90％、95％或99％同一性的可变重链序列以及与 SEQ IDNO：2具有90％、95％或99％同一性的可变轻链序列；

(b)与SEQ ID NO：3具有90％、95％或99％同一性的可变重链序列以及与 SEQ IDNO：4具有90％、95％或99％同一性的可变轻链序列；

(c)与SEQ ID NO：5具有90％、95％或99％同一性的可变重链序列以及与 SEQ IDNO：6具有90％、95％或99％同一性的可变轻链序列；或者

(d)与SEQ ID NO：7具有90％、95％或99％同一性的可变重链序列以及与 SEQ IDNO：8具有90％、95％或99％同一性的可变轻链序列。

如本领域已知，包含编码抗IL-23p19抗体或其抗体片段的序列的多核苷酸可以与本领域已知的一种或多种调节或控制序列融合，并且可以包含在合适的表达载体或细胞中。每个编码重链或轻链可变结构域的多核苷酸分子可以独立地融合到编码恒定结构域(如人恒定结构域)的多核苷酸序列，从而能够产生完整的抗体。可选择地，可将多核苷酸或其部分融合在一起从而提供生产单链抗体的模板。

为了重组生产，将编码抗体的多核苷酸插入可复制的载体中用于克隆(DNA 的扩增)或表达。许多用于表达重组抗体的合适载体是可获得的。载体组分通常包括但不限于以下的一种或多种：信号序列、复制起点、一种或多种标记物基因、增强子元件、启动子和转录终止序列。

抗IL-23p19抗体或其抗体片段也可以作为融合多肽产生，其中抗体或片段与异源多肽(如信号序列、或在成熟蛋白或多肽的氨基末端具有特异性切割位点的其他多肽)融合。所选择的异源信号序列通常是被细胞识别和加工(即，被信号肽酶切割)的序列。对于不识别和加工抗IL-23p19抗体信号序列的原核细胞，信号序列可被原核信号序列取代。信号序列可以是，例如碱性磷酸酶、青霉素酶、脂蛋白、热稳定肠毒素II前导序列等。对于酵母分泌，天然信号序列可以被以下取代：例如，从酵母转化酶α-因子(包括酵母属(Saccharomyces)和克鲁维酵母属(Kluyveromyces)α因子前导序列)、酸性磷酸酶、白色念珠菌(C.albicans) 糖淀粉酶获得的前导序列或WO90/13646中描述的信号。在哺乳动物细胞中，可以使用哺乳动物信号序列以及病毒分泌前导物(leader)，例如单纯疱疹gD信号。这种前体区的DNA在阅读框中与编码抗IL-23p19抗体的DNA连接。

表达和克隆载体含有使载体在一种或多种选定的细胞中复制的核酸序列。通常，在克隆载体中，该序列是使载体独立于宿主染色体DNA复制的序列，包括复制起点或自主复制序列。多种细菌、酵母和病毒的此类序列是公知的。来自质粒 pBR322的复制起点适用于大多数革兰氏阴性菌，2-υ.质粒起点适用于酵母，各种病毒起点(SV40、多瘤病毒、腺病毒、VSV和BPV)可用于在哺乳动物细胞中克隆载体。一般而言，哺乳动物表达载体不需要复制起点组件(通常可以使用SV40 起点，只是因为它含有早期启动子)。

表达和克隆载体可以含有编码选择性标记物的基因，以促进表达的识别。典型的选择性标记物基因编码赋予对抗生素或其他毒素(例如氨苄青霉素、新霉素、甲氨蝶呤或四环素)抗性的蛋白质，或者可选择地，编码与营养缺陷型互补的蛋白，或者另外可选择地，编码提供在复合介质(complex media)中不存在的特定营养物质的蛋白，例如为杆菌(Bacilli)编码D-丙氨酸消旋酶的基因。

非治疗用途

本文所述的抗IL-23p19抗体或抗体片段可用作亲和纯化剂。在该过程中，使用本领域熟知的方法将抗体固定于固相，如蛋白A树脂。将固定的抗体与含有待纯化的IL-23p19蛋白(或其片段)的样品接触，然后用合适的溶剂洗涤支持物，该溶剂将基本上除去样品中除了与固定的抗体结合的IL-23p19蛋白之外的所有物质。最后，用另一种合适的溶剂洗涤支持物，该溶剂将从抗体中释放IL-23p19蛋白。

抗IL-23p19抗体或抗体片段也可用于诊断测定以检测和/或定量IL-23p19蛋白，例如检测IL-23p19在特定细胞、组织或血清中的表达。抗IL-23p19抗体可诊断性地用于，例如监测疾病的发展或进展以作为临床测试程序的一部分，例如用于确定给定治疗和/或预防方案的疗效。可以通过将抗IL-23p19抗体与可检测物质偶联以促进检测。可检测物质的示例包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料、生物发光材料、放射性材料、使用各种正电子发射断层扫描的正电子发射金属和非放射性顺磁性金属离子。对于可与抗体共轭以用作根据本公开的诊断剂的金属离子，参见例如美国专利号4,741,900。

抗IL-23p19抗体或抗体片段可用于诊断IL-23p19相关疾病(例如，以IL-23p19 异常表达为特征的疾病)、或用于确定受试者是否具有发展为IL-23p19相关疾病的增加的风险的方法中。此类方法包括将来自受试者的生物样品与抗IL-23p19抗体或其抗体片段接触，检测抗体与IL-23p19的结合。“生物样品”指从个体、细胞系、组织培养物或其他可能表达IL-23p19的细胞来源获得的任何生物样品。从哺乳动物获得组织活检和体液的方法在本领域是公知的。

在一些实施方案中，该方法可以进一步包括将患者样品中的IL-23p19水平与对照样品(例如，没有IL-23p19相关病症的受试者)进行比较，以确定患者是否患有IL-23p19相关病症，或者有发展为IL-23p19相关病症的风险。

在一些实施方案中，例如，出于诊断目的去使用可检测部分标记抗体将是有利的。许多可检测的标记是可用的，包括放射性同位素、荧光标记、酶底物标记等。可以使用各种已知技术将标记与抗体间接偶联。例如，抗体可以与生物素偶联，上述三大类标记中的任何一种都可以与抗生物素蛋白偶联，反之亦然。生物素选择性地与抗生物素蛋白结合，因此标记可以以这种间接方式与抗体结合。可选择地，为了实现标记与抗体的间接偶联，可以将抗体与小的半抗原(如地高辛) 偶联，并且将上述不同类型的标记之一与抗半抗原抗体(例如，抗-地高辛抗体) 偶联。因此，可以实现标记与抗体的间接偶联。

示例性放射性同位素标记包括³⁵S、¹⁴C、¹²⁵I、³H和¹³¹I。抗体可以使用放射性同位素进行标记，其可以使用的技术描述见于，例如Current Protocols in Immunology，第1和2卷，1991，Coligen等人编，Wiley-Interscience,New York,N.Y. 出版。例如，可以通过闪烁计数来测量放射性。

可以使用的示例性荧光标记包括衍生自稀土螯合物(铕螯合物)或荧光素及其衍生物、罗丹明及其衍生物、丹磺酰、丽莎明、藻红蛋白和德州红的标记。荧光标记可以通过已知技术与抗体偶联，例如，如在Current Protocols in Immunology 中公开的那些。荧光可以使用荧光计进行定量。

存在本领域已知的各种充分表征的酶-底物标记(参见，例如美国专利号 4,275,149)。该酶通常催化显色底物的化学变化，这可以使用各种技术进行测量。例如，改变可以是底物颜色的变化，这可以通过分光光度法进行测量。或者，酶可以改变底物的荧光或化学发光。上面描述了用于定量荧光变化的技术。化学发光底物通过化学反应被电子激发，然后可以发射可以(例如使用化学发光计)测量的光，或者向荧光受体提供能量。

酶标记的示例包括萤光素酶，如萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(美国专利号4,737,456)、萤光素、2,3-二氢酞嗪二酮、苹果酸脱氢酶、脲酶、过氧化物酶(如辣根过氧化物酶(HRPO))、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖类氧化酶(如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)、杂环氧化酶(如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶)、乳过氧化物酶、微过氧化物酶等。用于将酶与抗体偶联的技术描述在，例如，O'Sullivan等人，1981，Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use inEnzyme Immunoassay,in Methods in Enzym.(J.Langone&H.Van Vunakis编)，Academicpress，N.Y.，73：147-166。

酶底物组合的示例包括，例如：以过氧化氢酶为底物的辣根过氧化物酶 (HRPO)，其中过氧化氢酶氧化染料前体，如邻苯二胺(OPD)或3,3,5,5-四甲基联苯胺盐酸盐(TMB)；以对硝基苯磷酸盐为显色底物的碱性磷酸酶(AP)；和β-D-半乳糖苷酶(β-D-Gal)，其具有显色底物(如对硝基苯基-β-D-半乳糖苷酶) 或荧光底物4-甲基伞形酮基-β-D-半乳糖苷酶。

在另一个实施方案中，使用的抗IL-23p19抗体或其抗体片段是未标记的，其用结合抗IL-23p19抗体或其抗体片段的标记的抗体进行检测。

本文所述的抗体及其抗体片段可以用于任何已知的测定方法，如竞争性结合测定、直接和间接夹心测定以及免疫沉淀测定。参见，例如，Zola，Monoclonal Antibodies:AManual of Techniques,第147-158页(CRC Press,Inc.1987)。

抗IL-23p19抗体或其抗体片段可以用于抑制配体与IL-23受体的结合。此类方法包括向细胞(例如，哺乳动物细胞)或细胞环境施用抗IL-23p19抗体，由此抑制由IL-23受体介导的信号传导。这些方法可以在体外或体内进行。“细胞环境”指细胞周围的组织、介质(medium)或细胞外基质。

组合物和治疗方法

本公开还提供了组合物，包括例如包含抗IL-23p19抗体或其抗体片段的药物组合物。此类组合物具有多种治疗用途，用于治疗、预防或改善疾病或病症(例如，涉及由IL-23/IL-23受体信号传导轴介导的生物活性的疾病或病症)，如免疫介导的炎性病症或自身免疫性疾病。

本文公开的抗IL-23p19抗体或其抗体片段可以用于治疗各种疾病或病症，例如免疫介导的炎性病症(IMID)或自身免疫性疾病。治疗IL-23相关病症的方法包括向需要其的受试者施用治疗有效量的抗IL-23p19抗体或其抗体片段。IMID可以选自银屑病、银屑病关节炎、炎性肠病(即，溃疡性结肠炎或克罗恩病)、强直性脊柱炎、系统性红斑狼疮、化脓性汗腺炎、特应性皮炎和哮喘。

本公开还提供了用于治疗或预防IMID的方法，其包括向需要其的受试者施用包含抗IL-23p19抗体或其抗体片段的组合物或制剂，以及任选地另一种基于免疫的疗法。

公开的抗体也可以单独(例如，作为单药疗法)或与其他免疫治疗剂和/或化学疗法组合用于治疗癌症的方法。

抗体可以单独施用、或与可以用于治疗免疫介导的炎性病症或自身免疫性疾病的其他组合物组合施用。在一些实施方案中，包含抗IL-23p19抗体的组合物(包括例如药物组合物)，还可以进一步包含与结合剂偶联或非偶联的治疗剂。

在一些方面，提供一种组合物(例如，药物组合物)，其包含一种或多种本文公开的抗体。药物组合物可以与药学上可接受的载体或稀释剂以及任何其他已知的佐剂和赋形剂按照常规技术进行配制，例如，那些公开于Remington：The Science and Practice ofPharmacy，第19版，Gennaro编，Mack Publishing Co.,Easton, Pa.,1995中的技术。

通常，注射施用的组合物是无菌等渗水性缓冲液中的溶液。必要时，药物还可以包含增溶剂和局部麻醉剂(如利多卡因)以减轻注射部位的疼痛。通常，成分以单位剂型单独提供或混合在一起提供，例如，作为密封容器(如指示活性剂量的安瓿或小袋)中的干燥冻干粉或无水浓缩物。当药物是通过输注施用时，则可以使用含有无菌药物级水或盐水的输液瓶进行分配。当药物是通过注射施用时，则可以提供一安瓿注射用无菌水或盐水，以便可以在施用前混合成分。

如本文所用，“药学上可接受的载体”包括生理学上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。优选地，载体适于静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、脊柱或表皮施用(例如，通过注射或输注)。根据施用途径，活性化合物(即，抗体、双特异性和多特异性分子)可以包被在材料中以保护化合物免受酸和其他可能使化合物失活的自然条件的作用。

组合物可以通过本领域已知的多种方法施用。如本领域技术人员将理解的，施用途径和/或模式将根据所需结果而变化。活性化合物可以与将保护化合物避免快速释放的载体(如控制释放制剂，包括植入物、透皮贴剂和微囊化递送系统) 一起制备。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。此类制剂的制备方法通常是本领域技术人员已知的。参见，例如Sustained andControlled Release Drug Delivery Systems, J.R.Robinson编，Marcel Dekker,Inc.,New York,1978。

药物组合物中活性成分的剂量水平可以变化，以获得有效实现特定受试者、组合物和施用方式的所需治疗响应而对受试者无毒性的活性成分的量。所选择的剂量水平将取决于各种药代动力学因素，包括采用的特定组合物的活性，施用途径，施用时间，采用的特定化合物的排泄速率，治疗持续时间，与采用的特定组合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料，待治疗患者的年龄、性别、体重、病状、一般健康状况和既往病史以及医学领域熟知的类似因素。

本文所述的药物组合物可以以有效量施用。“有效量”是指单独或与其他剂量一起实现所需反应或所需效果的量。在治疗特定疾病或特定病状的情况下，所需的反应优选涉及抑制疾病的病程。这包括减缓疾病的进展，特别是中断或逆转疾病的进展。

在一些方面，将本文所述的组合物(例如在体内)施用至患者以治疗或预防多种病症，如本文所述的那些病症。优选的患者包括具有病症的人患者，所述病症可以通过施用调节IL-23/IL-23受体信号传导轴的生物学活性的试剂来纠正或改善。

在一些方面，常规的基于病毒和非病毒的基因转移方法可以用于在哺乳动物细胞或目标组织中导入编码本文所述抗体或其衍生物的核酸。此类方法可以用于将编码抗体的核酸在体外施用于细胞。在一些实施方案中，施用编码抗体或其衍生物的核酸用于体内或离体基因疗法用途。在其他实施方案中，基因递送技术用于在基于细胞或动物模型中研究抗体的活性。非病毒载体递送系统包括DNA质粒、裸核酸和与递送载体(如脂质体)复合的核酸。病毒载体递送系统包括DNA和 RNA病毒，其在递送至细胞后具有游离或整合的基因组。此类方法在本领域是公知的。

编码本公开的工程化多肽的核酸的非病毒递送方法包括脂质转染、显微注射、基因枪法、病毒体、脂质体、免疫脂质体、聚阳离子或脂质：核酸偶联物、裸DNA、人工病毒粒子和试剂增强的DNA摄取。脂质转染方法和脂质转染试剂是本领域公知的(例如，Transfectam^TM和Lipofectin^TM)。适于多核苷酸的有效受体识别脂质转染的阳离子和中性脂质包括Felgner、WO 91/17424、WO 91/16024的那些。可以向细胞(离体施用)或目标组织(体内施用)递送。包含靶向的脂质体(如免疫脂质复合物)的脂质：核酸复合物的制备是本领域技术人员公知的。

使用基于RNA或DNA病毒的系统来递送编码本文描述的抗体的核酸利用了高度进化的过程，用于将病毒靶向身体中的特定细胞并将病毒有效载荷运输到细胞核。病毒载体可以直接施用于患者(体内)，或者其可以用于体外处理细胞并将修饰的的细胞施用至患者(离体)。用于递送本公开的多肽的常规的基于病毒的系统可以包括用于基因转移的逆转录病毒、慢病毒、腺病毒、腺相关病毒和单纯疱疹病毒载体。病毒载体是目前在目标细胞和组织中进行基因转移的最有效和最通用的方法。通过逆转录病毒、慢病毒和腺相关病毒基因转移方法，整合到宿主基因组中是可能的，通常导致插入的转基因的长期表达。此外，已在许多不同的细胞类型和目标组织中观察到高转导效率。出于描述和公开的目的，所有提及(identify)的专利和出版物通过引用明确并入本文，例如，在这些出版物中描述的方法可以与本公开结合使用。提供这些出版物仅是因为其在本申请提交日期之前公开。这方面的任何内容都不应被解释为承认发明人无权凭借之前的发明或出于任何其他原因而先于这些公开。所有关于日期的陈述、或对这些文件内容的陈述均基于申请人所掌握的信息，并不构成任何对这些文件日期或内容正确性的承认。

在尚未指出的程度上，本领域普通技术人员将理解，本文描述和示范的各种实施方案中的任一个均可以被进一步修改，以纳入本文公开的任何其他实施方案中显示的特征。

参考以下实施例可以最好地理解本公开的广泛范围，这些实施例并不旨在将本公开限制于特定实施例中。本文描述的特定实施方案仅以示例的方式提供，并且本公开将限制于所附权利要求的条款以及这些权利要求所赋予的等同物的全部范围内。

实施例

一般方法

描述了用于蛋白质纯化的方法，包括免疫沉淀、色谱和电泳。Coligan等人(2000)Current Protocols in Protein Science，第一卷，John Wiley and Sons,Inc.,NewYork。描述了化学分析、化学修饰、翻译后修饰、融合蛋白的产生和蛋白质的糖基化。参见，例如，Coligan等人(2000)Current Protocols in Protein Science，第二卷，John Wileyand Sons,Inc.,New York；Ausubel等人(2001)Current Protocols in MolecularBiology，第三卷，John Wiley and Sons,Inc.,NY,N.Y.，16.0.5-16.22.17 页；Sigma-Aldrich,Co.(2001)Products for Life Science Research,St.Louis,Mo.； 45-89页；Amersham Pharmacia Biotech(2001)BioDirectory,Piscataway,N.J.,384-391 页。描述了多克隆抗体和单克隆抗体的生产、纯化和片段化。Coligan等人(2001) CurrentProtocols in Immunology，第1卷，John Wiley and Sons,Inc.,New York； Harlow和Lane(1999)Using Antibodies,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold SpringHarbor,N.Y.；Harlow和Lane，见上。

根据制造商的方法，通过HiTrap蛋白质G柱(GE，目录号17040401)纯化杂交瘤上清液。简而言之，蛋白质G柱用DPBS(Gibco，目录号14190-136)平衡5CV，杂交瘤上清液通过注射器/输液泵(Legato 200，KDS)在环境温度中上样，停留(residence)时间为3分钟。使用5CV的DPBS洗涤柱，并使用4CV 的pH2.8洗脱缓冲液(Fisher Scientific，目录号PI21004)进行洗脱。将洗脱液进行分分级，用1M Tris-HCL，pH 8.5(Fisher Scientific，目录号50-843-270)中和级分，用A280(DropSense96，Trinean)进行测定。合并峰级分，将缓冲液交换至DPBS。离心过滤器(EMD Millipore，目录号UFC803024)在DPBS中以4,000×g 平衡2分钟。将纯化的样品上样，加入DPBS，将样品以4,000×g旋转5至10分钟，直到总DPBS体积达到≥6DV。通过A280分析最终合并物。

描述了分子生物学的标准方法。Maniatis等人，(1982)Molecular Cloning,ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.； Sambrook和Russell(2001)Molecular Cloning，第三版，Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；Wu(1993)Recombinant DNA，第217 卷，Academic Press,San Diego,Calif。标准的方法也出现在Ausbel等人，(2001) CurrentProtocols in Molecular Biology，第1至4卷，John Wiley and Sons,Inc.New York,N.Y.，其描述在细菌细胞中进行克隆和DNA诱变(第1卷)、在哺乳动物细胞和酵母中进行克隆(第2卷)、糖偶联物和蛋白表达(第三卷)和生物信息学 (第4卷)。

如下所述确定杂交瘤克隆的重链和轻链可变区的序列。使用来自Qiagen(Germantown，MD，USA)的RNeasy Plus微型试剂盒从1-2×10⁶杂交瘤细胞中提取总RNA。通过使用来自Takara(Mountainview，CA，USA)的SMARTer RACE 5’/3’试剂盒进行5’RACE反应以生成cDNA。使用Takara Universal Primer Mix组合针对合适的免疫球蛋白的3’小鼠恒定区的基因特异性引物，使用来自NEB (Ipswitch，MA，USA)的Q5高保真(High-Fidelity)DNA聚合酶进行PCR，以扩增重链和轻链的可变区。扩增的重链和轻链可变区在2％琼脂糖凝胶上运行，切下合适的条带，然后使用来自Qiagen的Mini Elute Gel Extraction试剂盒对凝胶进行纯化。使用来自Invitrogen(Carlsbad，CA，USA)的Zero Blunt PCR Cloning 试剂盒克隆纯化的PCR产物，并将其转化到来自Takara的Stellar感受态大肠杆菌细胞中，并铺板于LB琼脂+50ug/ml卡那霉素平板上。通过GeneWiz(South Plainfield，NJ，USA)进行直接菌落Sanger测序。使用IMGT V-QUEST分析得到的核苷酸序列，以鉴定生产性重排并分析翻译的蛋白质序列。CDR测定基于IMGT 编号。

可使用流式细胞术方法，包括荧光活化细胞分选检测系统

参见，例如，Owens等人(1994)Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice,John Wiley and Sons,Hoboken,N.J.；Givan(2001)Flow Cytometry，第二版； Wiley-Liss,Hoboken,N.J.；Shapiro(2003)Practical Flow Cytometry,John Wiley and Sons,Hoboken,N.J.。可获得适用于修饰核酸(包括核酸引物和探针)、多肽和抗体的荧光试剂，用作例如诊断试剂。Molecular Probes(2003)Catalogue,Molecular Probes,Inc.,Eugene,Oreg；Sigma-Aldrich(2003)Catalogue,St.Louis,Mo.。

阳性对照(PC1和PC2)、IL-23p19和IL-12/IL-23p40特异性抗体由CRO(Biointron)制备。对照抗体可以通过任何合适的表达方法制备。例如，通过将抗体重链和轻链可变区克隆到293F或ExpiCHO^TM表达系统(ThermoFisher Scientific， Waltham，MA)中。这些抗体用作对照以建立实施例中描述的结合和功能测定，并与公开的新产生的抗IL-23p19的特异性抗体一起进行测试。“PC1”是指参考抗体，其基于US 7,935,344中报道的VH和VL序列(‘344专利中的VH SEQ ID NO：106和VL SEQ ID NO：116)合成，并且已知特异于人IL-23p19亚基(Biointron，批号：20180926A04)。术语“PC2”指参考物抗体，其基于US 6,902,734中报道的VH和VL序列(‘734专利中的VH SEQ ID NO：7和VL SEQ ID NO：8)合成，并且已知特异于人IL-12/IL-23p40亚基(BIOINTRON批号：20180925A07)。

对照抗体可以通过标准方法制备。例如，可以使用哺乳动物系统(293F或ExpiCHO^TM)(目录号：A29133，ThermoFisher Scientific，USA)根据制造商的操作方案进行转染含有对照抗体序列的质粒。第1天，在37℃和8％CO₂下培养细胞，然后在转染后，在试剂盒提供的介质(media)中在32℃和5％CO₂下培养细胞。通过以1,000g离心10分钟接着以5,000g离心30分钟以使ExpiCHO^TM培养介质变澄清，从而纯化抗体。然后，使用0.45μm过滤器过滤上清液，接着使用 0.22μm过滤器过滤上清液。随后，根据制造商的操作方案，使用蛋白A/G树脂(Life Technologies，Carlsbad，CA；目录号20424)对上清液进行亲和纯化。在ELISA纯化前，粗略地确定培养介质中的抗体滴度，以确保上样的介质的量低于树脂结合能力的80％。孵育后，用PBS洗涤树脂，并用洗脱缓冲液(Life Technologies，目录号21004)进行洗脱。通过加入Tris缓冲液(pH 8.0)，立即将洗脱级分调节至生理pH。随后，使用AmiconUltra-15离心过滤装置(Life Technologies，目录号UFC900324)，在PBS缓冲液中对纯化的抗体进行缓冲液交换和蛋白质浓缩。抗体浓度采用BCA蛋白质测定法确定。采用SDS-PAGE和考马斯染色以测试抗体纯度。将纯化的蛋白等分并储存在-80℃下以便长期储存，或储存在4℃下以便立即使用。

抗体的完整性可以通过SDS-PAGE以及之后在非还原和还原条件下进行考马斯染色得到验证；在非还原条件下，一条主带在150kDa左右，而在还原条件下，观察到两条带，50kDa和25kDa。可使用表征配体/受体相互作用的标准技术。参见，例如，Coligan等人(2001)Current Protocols in Immunology，第四卷，John Wiley, Inc.,New York。本领域技术人员还熟知适于表征具有特定作用机制的抗体的抗体功能表征的标准方法。

可获得用于确定，例如抗原性片段、前导序列、蛋白质折叠、功能结构域、 CDR注释、糖基化位点和序列比对的软件包和数据库。

实施例1：产生抗IL-23p19抗体

通过对人Ig转基因小鼠(参见，例如WO 2013/063391，

小鼠)进行免疫产生人抗IL-23p19的特异性的抗体。

免疫：通过对

小鼠进行腹膜内(IP)、皮下(SC)或经由足垫或尾根注射人IL-23重组蛋白、或人IL-23蛋白与人p19和小鼠p40蛋白的异二聚体的组合进行免疫。通过眼眶后出血对免疫反应进行监测。通过ELISA(如下所述) 筛选血浆与人IL-23异二聚体结合的活性。具有足够滴度的小鼠用于融合。用免疫原对小鼠进行加强免疫，然后处死小鼠并切除脾脏和引流(draining)淋巴结。

选择产生抗IL-23p19抗体的小鼠：为选择产生p19特异性抗体的Trianni小鼠，通过ELISA筛选免疫小鼠血清的与重组人IL-23的结合。简而言之，将包被有重组人IL-23的ELISA板与来自免疫小鼠的血清的稀释液在室温下孵育1小时，洗涤测定板，然后使用HRP标记的抗小鼠IgG抗体以检测特异性抗体结合。使用 ELISA酶标仪(Biotek)读取板。

杂交瘤的产生：为了生成产生本公开的人抗体的杂交瘤，从接受免疫的小鼠中收获的脾细胞和引流的淋巴结细胞与合适的永生化细胞系(如小鼠骨髓瘤细胞系)进行融合。针对产生p19特异性抗体对所得到的杂交瘤进行筛选。例如，将来自接受免疫的小鼠的脾细胞和淋巴结细胞的单细胞悬浮液通过电融合与等数量的Sp2/0非小鼠的分泌IgG的骨髓瘤细胞(ATCC，CRL 1581)进行融合。将细胞置于平底96孔组织培养板中，之后在选择介质(HAT介质)中孵育约2周，然后切换至杂交瘤培养介质。在细胞铺板约10-14天后，如上所述通过ELISA筛选各孔的上清液。将分泌抗体的杂交瘤转移至24孔板，再次筛选，如果所述杂交瘤仍然对抗P19活性是阳性，则使用单细胞分选器通过有限稀释或分选对阳性杂交瘤进行亚克隆。然后在体外培养稳定的亚克隆，以产生少量抗体用于纯化和表征。

杂交瘤筛选：使用与上述用于监测接受免疫小鼠的免疫反应相同的测定法，使用人IL-23、人IL-12和人p19/小鼠p40，通过ELISA测试杂交瘤上清液的IL-23 的特异性结合。

实施例2：抗IL-23p19特异性抗体的结合

通过由BIAcore确定，通过表面等离子共振(SPR)分析抗IL-23p19特异性抗体与IL-23蛋白的结合。简而言之，抗IL-23p19抗体或对照抗体的连续稀释液被捕获在抗小鼠或人Fc芯片上，其使用胺偶联试剂盒(GE Healthcare，目录号： BR-1000-50，批号：2087295)固定在CM5芯片上。

BIAcore结合测定中使用的对照抗体包括：PC1(已知为p19特异性抗体，Biointron，批号：20180926A04)；PC2(已知对人IL-12和IL-23的p40亚基具有特异性的参考抗体，Biointron，批号：20180925A07)；人IgG同种型对照(Invitrogen，目录号：02-7102，批号：TJ276309)；小鼠IgG2a同种型对照(由Novarock Biotherapeutics制造)和人IgG4同种型对照(Dendritics，目录号：DDXCH04P-100；批次：DDXCH04-028)作为阴性对照。

接下来，在含有10mM HEPES、150mM NaCl、3mM EDTA、0.005％Tween 20、pH 7.4的运行缓冲液中的IL-23重组蛋白、人p19/小鼠p40异二聚体蛋白、人 IL-12蛋白和人p40亚基蛋白的连续稀释液，以50μl/分钟在固定的抗体上注射1 分钟，然后解离2分钟。每次注射之后是再生步骤，使用60秒脉冲的10mM Glycine-HCl，pH 1.7缓冲液。使用BIA评价软件(GEHealthcare)对实验数据进行拟合，与Langmuir 1：1模型拟合以确定表观结合。

纯化抗体的结合谱如图2所示。图2A显示了Hu-2 18006B(从杂交瘤中纯化) 的结合谱。图2B显示了Hu-5 18006B(从杂交瘤中纯化)的结合谱。图2C显示了Hu-6 18006B*(重组mIgG2a)的结合谱。图2D显示了Hu-4 18006B*(*重组， mIgG2a)的结合谱。图2E显示了Hu-4 18006B**(**重组，hIgG4)的结合谱。表3总结了抗IL-23p19抗体，以及其通过BIAcore测定的对人IL-23和人p19/小鼠p40异二聚体蛋白的结合特异性。重组抗体在表中用星号表示。

表3：通过BIAcore测定的IL-23p19特异性抗体的结合

*＝IL-23p19重组抗体；PC1和PC2是重组抗体；其余的IL-23p19 Ab纯化自杂交瘤

结果显示，抗IL-23p19抗体与人IL-23和人p19/小鼠p40异二聚体结合，但不与人IL-12或人p40亚基结合(图2和表3)。

PC1对人IL-23、人p19/小鼠p40呈阳性，对人IL-12和人p40亚基呈阴性(数据未显示)。PC2对人IL-23、人IL-12、人p40亚基呈阳性，对人p19/小鼠p40 异二聚体呈阴性。同种型对照mIgG2a和hIgG不结合hIL-23、hp19/mp40、hIL-12 和hp40亚基。

结果：抗IL-23p19特异性抗体的特征在于其结合人IL-23和包含由人p19和小鼠p40亚基组成的异二聚体的重组蛋白。通过BIAcore测定，这些抗体不与人 IL-12和人p40亚基结合。

还通过ELISA评估了所公开的抗IL-23p19抗体的结合特异性。简而言之，通过链霉抗生物素蛋白包被的ELISA板捕获生物素化的IL-23。人p19/小鼠p40、人 IL-12和人p40亚基直接包被到ELISA板上。然后，将纯化的抗体添加到板中，之后通过山羊抗小鼠IgG-HRP(Jackson ImmunoResearch，目录号：115-036-071，批号：147271)检测。添加ABTS底物(MossInc.，目录号：ABTS-1000，批号：03086202) 后，使用ELISA酶标仪(Biotek)读取ELISA板。对照在图3中描绘：PC1指参考抗体(已知为p19特异性抗体，Biointron，批号：20180926A04)；PC2指参考抗体(已知为p40特异性抗体，Biointron，批号：20180925A07)；PC3指参考抗体(MT155，称为来自Mabtech的p19特异性抗体，目录号：3457-6-100，编号： 3457-6-1000)，阴性对照是人IgG4(Dendritics，目录号：DDXCHO4P-100，批号： DDXCH04-028)和小鼠IgG2a(由Novarock Biotherapeutics生产)。

图3显示了公开的p19特异性抗体的结合活性。图3A和图3B显示Hu-4 18006B**(hIgG4)和Hu-5 18006B(mIgG2b)、Hu-6 18006B*(mIgG2a)、Hu-4 18006B*(mIgG2a)和Hu-218006B(mIgG1)以剂量依赖性的方式结合人IL-23；阳性对照PC1以剂量依赖性的方式与IL-23结合(图3A)。图3C显示这些选择的代表性抗IL-23p19抗体，H-2 1800B(mIgG1)、Hu-418006B(mIgG2c)、Hu-4 18006B*(mIgG2a)和H-6 18006B*(mIgG2a)以剂量依赖性的方式与人p19/小鼠p40异二聚体结合。图3D显示这些抗IL-23p19抗体不结合hIL-12，而阳性对照抗体PC2以剂量依赖性的方式结合hIL-12。图3E显示这些抗IL-23p19抗体不与人p40亚基结合，而阳性对照PC2以剂量反应性的方式与人p40亚基结合。

图3A至图3E的结果指示，通过ELISA，抗IL-23p19特异性抗体的特征在于结合人IL-23和包含由人p19组合小鼠p40亚基组成的异二聚体的重组蛋白。这些抗体不结合人IL-12和人p40亚基。

为确保在结合和功能测定中准确测量KD和IC50终点，在测试之前从杂交瘤培养物上清液中纯化抗体。使用对接CM5芯片的BIAcore 3000系统、通过表面等离子共振(SPR)确定所公开的抗IL-23p19特异性抗体与重组人IL-23的结合动力学，所述CM5芯片之前通过胺偶联化学固定抗小鼠IgG抗体(GE目录号 BR-1008-38)。流通池1保持未修改，用作减去系统仪器噪音和漂移的参考池。 Fc2-1检测使用双空白(Fc1和空白分析物缓冲液)运行。抗体样品在HBS-EP(GE，目录号：BR1001-88)中稀释至50μg/mL并以10uL/分钟的流速注入1分钟。接下来是hIL-23(R&D系统，目录号：1290-IL/CF)稀释至0.156-40nM，以50μL/ 分钟注入2分钟，然后解离10分钟。在BIAEvalution软件(GE Healthcare)中通过具有全局拟合的1：1结合模型对数据进行分析以确定表观结合动力学。

表4中提供了所公开的抗IL-23p19抗体的结合动力学数据。结果指示，抗 IL-23p19特异性抗体与人重组IL-23结合，KD范围为3.84E-11至6.62E-11M。 PC1(已知为p19的特异性抗体，Biointron，批号：20180926A04)在多次运行中的KD值范围从3.77E-10至1.10E-11。

表4：SPR结合动力学

抗IL-23p19 mAb	ka(1/Ms)	kd(1/s)	KD(M)
				Hu-2 18006B	1.57E+06	6.54E-05	4.16E-11
Hu-5 18006B	1.49E+06	9.89E-05	6.62E-11
				Hu-6 18006B*	4.44E+06	1.71E-04	3.84E-11
Hu-4 18006B**	2.50E+06	1.43E-04	5.72E-11

实施例3：阻断IL-23与IL-23受体的相互作用

通过ELISA确定所公开的p19特异性抗体阻断IL-23与其同源高亲和力IL-23 受体结合的能力。简而言之，将人IL-23受体包被在96孔板(2μg/ml)上，然后将纯化的抗IL-23p19抗体的连续稀释液与重组的人IL-23(50ng/mL)预混合并添加到板中。孵育30分钟后，洗涤板。然后，将生物素化的抗p40抗体(Invitrogen 参考号：13-7129-85，批号：2028761，1/3000稀释)添加到板中。孵育30分钟后，洗涤板，然后用链霉亲和素HRP检测。在添加ABTS底物后，使用酶标仪(OD 405 nM)读取板。该阻断测定中使用的阳性对照抗体PC1是参考抗体(已知为p19特异性抗体，Biointron，批号：20180926A04)。阴性对照是小鼠IgG1(Novus，目录号：NBP1-97005，批号：35613)、mIgG2a(由NovaRock Biotherapeutics制造) 和hIgG4(Dendritics，目录号：DDXCHO4P-100，批号：DDXCH04-028)。

结果：图4中的数据显示，所公开的抗p19抗体(Hu-2 18006B、Hu-6 18006B*、 Hu-518006B和Hu-4 18006B**)以剂量依赖性的方式阻断人IL-23与人IL-23受体的相互作用。阳性对照PC1还以剂量反应性的方式阻断了IL-23/IL-23受体的相互作用。阴性对照hIgG4和mIgG2a在测定中为阴性。

为了证明所公开的p19特异性抗体的特异性，设计阻断测定以评估抗体在阻断IL-23与IL-12受体β1结合中的能力。

简而言之，将人IL-12受体β1包被在96孔板(2μg/ml)上，然后向板中加入与重组人IL-23(50ng/ml)预混合的纯化的抗IL-23p19抗体的连续稀释液。阻断测定中使用的阳性对照抗体是PC2(已知特异于IL-12/IL-23p40的p40亚基的参考抗体，Biointron，批号：20180925A07)。阴性对照是小鼠IgG1(Novus，目录号：NBP1-97005，批号35613)。

孵育30分钟后，洗涤板。然后，将生物素化的抗p40抗体(Invitrogen参考号： 13-7129-85，批号：2028761，1/3000稀释)添加到含有抗IL-23p19抗体的孔中；将生物素化的抗p19抗体(Mabtech，目录号：MT155，编号：3457-6-1000)添加到含有PC2抗体的孔中。孵育30分钟后，洗涤板，然后用链霉亲和素HRP检测。在添加ABTS底物后，使用酶标仪(OD 405nM)读取板。

结果：图5中的数据显示，3种选择的p19特异性抗体(Hu-6 18006B*、Hu-4 18006B*和Hu-4 18006B**)中没有阻断IL-23/IL-12受体β1结合相互作用。同样， PC1抗体也没有阻断IL-23/IL-12受体β1相互作用(数据未显示)。然而与预期相符，p40对照抗体(PC2)阻断IL-23/IL-12β1的相互作用。

实施例4：在小鼠脾细胞测定中对IL-17产生的抑制

众所周知，人IL-23与小鼠IL-23R结合并在小鼠脾细胞中诱导小鼠IL-17产生。在IL-2存在的情况下，人IL-23以极低(皮摩尔)浓度刺激小鼠脾细胞产生 IL-17，这可以通过与针对p40或p19的抑制剂共同孵育进行抑制(Aggarwal,S.等人，2003,J Biol Chem；278：1910-4；Singh等人，2015，MAbs,7月-8月；7(4)： 778-791)。

在小鼠脾细胞测定(MSA)中评估公开的抗IL-23p19特异性抗体抑制人IL-23 诱导的IL-17产生的能力。确定抑制人IL-23诱导的IL-17产生的效力。

简而言之，使用玻璃匀浆器和Ficoll Pague细胞分离试剂盒(Ge Healthcare，目录号：17-5442-02)按照制造商的方法从C57/BL-6小鼠中分离出小鼠脾细胞。脾细胞用IL-2(20ng/ml，5×10⁶个细胞/ml)活化5分钟,然后将人IL-23(1.5ng/ml) 添加到脾细胞中。将活化的脾细胞放置到96孔板中，100ul/孔。将100ul/孔的4 个纯化p19抗体：hu-6 18006B*(mIgG2a)、Hu-4 18006B*(mIgG2a)、Hu-4 18006** (hIgG4)和Hu-2 18006B(mIgG1)添加至板中。

孵育72小时后，将上清液从板中转移出来，使用quantikine ELISA试剂盒 (R&D，M1700或SM1700)进行IL-17定量测定。对照包含在IL-17MSA中： PC1(已知为p19特异性抗体的参考抗体，Biointron批号：20180926A04)作为阳性对照；小鼠IgG1(Novus，目录号：NBP1-97005)和人IgG4(Dendritics，目录号：DDXCHO4P-100，批号：DDXCH04-028)作为阴性对照。

结果：图6A和图6B中呈现的数据支持以下结论：所公开的抗体选择性地中和IL-23与IL-23R的结合，因此以剂量依赖性的方式抑制了IL-17的产生。

实施例5：通过报告细胞测定对STAT3活化的抑制

已知IL-23的受体包含与IL-12受体共有的IL-12Rβ1亚基，以及相伴的IL-23R。IL-23p19选择性地与IL-23R结合，通过IL-23R进行信号传导，诱导Janus激酶2 (JAK2)，其活化STAT3，导致RORγgt的上调和随后的炎性细胞因子IL-17的产生增加(Parham等人，J.Immunol.168：5699-5708，2002)。为了确定所公开的抗p19抗体是否可以抑制STAT3活化，通过报告细胞测定在IL-23诱导的STAT3 活化中对抗体进行评估。人IL-23通过结合在人淋巴瘤DB细胞表面的IL-23R来诱导STAT3磷酸化(US2013/0172272实施例13，和Desmet,J.等人，Nat.Commun.5： 5237(2014))。

DB细胞来源于人B细胞淋巴瘤细胞系，DB细胞表达内源性IL-23受体和 STAT3从而提供了全功能的IL-23信号传导通路。通过用pGL4.47[luc2p/SIE/Hybro] 稳定转染DB细胞产生DB测定细胞，其允许使用荧光素酶报告系统定量检测具有生物活性的人IL23。

该DB测定用于测量所公开的抗IL-23抗体对人IL-23诱导的STAT3活化的抑制活性。简而言之，将DB细胞(ATCC，CRL-2289)在生长介质(RPMI+10％ FBS)中培养2天。在实验当天，收获细胞并重悬于生长介质中。在低结合的384 孔板(Thermo Scientific 264574)中的生长介质中制备测试抗体的连续稀释液，然后加入人IL-23并在室温下孵育30分钟。然后，将测试抗体和人IL-23的混合物添加到板中。将信号传导测定板在湿润的37℃/5％CO2培养箱中孵育16小时。加入OneGlo试剂，将混合物在室温下孵育2分钟。在BioTek Neo2(BioTek.Winooski.VT)上读取发光，IC50值使用

软件(GraphPad SoftwareInc.，San Diego，California，USA)确定，其中比率对于对数转换的抗体浓度作图，IC50值使用非线性回归(曲线拟合)的S型剂量反应测定。STAT3 活化测定中使用的对照抗体包括作为阳性对照的PC1(PC1是已知对p19特异的参考抗体，Biointron，批号：20180926A04)和作为阴性对照的mIgG2a(内部生成)。

结果：如表5所示，在测定中评估的抗IL-23p19特异性抗体抑制STAT3活化，其中IC50值范围为35.2pM至264.6pM，最大抑制为99％-100％。阳性对照(PC1) 具有的IC50值范围为24.30pM至117.20pM，在多个实验的抑制为98-99％。

表5：IL-23/IL-23受体介导的STAT3活化的抑制

图7的结果指示，所公开的选择的4个抗IL-23p19抗体(hu-4 18006B、 hu-4-18006B*、hu-6 18006B和hu-6 18006B*)以剂量依赖性的方式抑制STAT3 活化。与预期相符，阳性对照(PC1)也以剂量反应性的方式显示出对STAT3活化的抑制。

实施例6：对IL-12依赖性人PBMC的IFN-γ产生的抑制

已知PBMC的IL-12刺激会刺激NK细胞和T细胞产生IFN-γ。为确定公开的抗p19抗体是否可以抑制IFN-γ产生，在PMBC IL-12刺激测定中分析了代表性的公开的人抗p19抗体。

简而言之，将人PBMC从冷冻原液中解冻，并将其重新悬浮在含有50ng/ml 的IL-18(R&D，9124-IL/CF)的RPMI+10％FBS中，放置在384孔板中。在低结合的384孔板中在生长介质中制备测试抗体的连续稀释液。将人IL-12(25ng/ml) 或食蟹猴IL-12(25ng/ml)转移到每个孔中，然后在室温下孵育30分钟。将混合物(测试的抗体+IL-12)放入PBMC细胞板上。将细胞在湿润的37℃/5％CO2培养箱中培养48小时。由AlphaLISA(PerkinElmer,AL217C)按照制造商的操作方案测量IFN-γ的产生。

在人PBMC测定中使用的对照抗体：PC1(已知为p19特异性抗体的参考抗体，Biointron，批号：20180926A04)、PC2(已知特异于IL-12和IL-23的p40 亚基的参考抗体，Biointron，批号：20180925A07)、抗IL-23p40亚基Mab(Hu-19 18006*，内部生成)；mIgG2a(由NovaRock Biotherapeutics生产)和人IgG4 (Dendritics，目录号：DDXCHO4P-100，批号：DDXCH04-028)作为阴性对照抗体。

结果：与预期相符，如图8和图9所示，抗IL-23p19抗体(Hu-6 18006B*和 Hu-418006B*和PC1)不抑制人IL-12(图8)和食蟹猴IL-12(图9)介导的通过人PBMC产生IFN-γ，而阳性对照PC2和Hu-19 18006*以剂量依赖性的方式抑制人(图8)和食蟹猴(图9)PBMC。该数据支持所公开的p19抗体特异于p19的结论。

实施例7：在IL-23诱导的鼠皮肤炎症模型中，抗p19的特异性抗体的体内疗效

IL-23/IL-17通路作为人银屑病(PsO)的关键驱动因素的作用已得到充分表征和临床验证。银屑病(PsO)动物模型对于我们了解人疾病的病理生理学非常重要。皮内注射IL-23已用于研究啮齿动物中的IL-23通路，并可以用于评估新型小分子 /生物制剂在PsO治疗中的药理学(Stephen B.Gauld等人，J.Dermatological Science,92(2018)45-53)。

已知人IL-23与鼠IL-23受体结合，并在小鼠中诱导mIL-17的产生和炎症。将人IL-23通过皮内注射到小鼠耳朵中以诱导小鼠耳朵炎症，这已用于银屑病模型，用于表征人银屑病(PsO)的生物药物(Aggarwal等人，J Biol Chem 2003； 278：1910-4；Singh等人，MAbs2015 7月-8月；7(4)：77-791)。

为评估Hu-4 18006B(mIgG2c)、Hu-4 18006B**(hIgG4)、hu-5 18006B (mIgG2b)和Hu-6 18006B*(mIgG2a)p19-特异性抗体在体内阻断IL-23功能的能力，在人IL-23诱导的鼠皮肤炎症模型中测试抗体。评价这些代表性抗体降低炎性反应的能力。

在该模型中，将重组人IL-23(3μg/10μl/小鼠/天)连续8天(D0-D7)注射到小鼠右耳的皮肤中(即皮内)，以诱发银屑病样炎性皮肤反应，其特征在于红斑和硬结，具有表皮增生、角化不全和局部炎性浸润的组织学证据。

根据二种操作方案，对小鼠通过腹膜内(i.p.)注射两次IL-23p19抗体(hu-418006B、hu-4 18006B**、hu-5 18006B或hu-6 18006B*)或PC1(已知是p19特异性抗体的参考抗体)(Biointron，批号：20180926A04)进行处理。在第一种操作方案中，小鼠接受PBS对照(载剂)或抗体。第一次注射在IL-23注射前一天，第二次注射在IL-23注射后第三天。在第二种操作方案中，小鼠接受PBS对照或抗体。第一次注射在IL-23注射前一个小时，第二次注射在IL-23注射后第三天(图 10)。

每天测量小鼠的体重、耳朵厚度和耳朵的炎症评分。在第0天、第2天、第4 天、第6天和第8天计算耳朵的炎症评分，基于以下标准：耳廓形状(相对正常 -0；最小变化-1；中度至显著变化-2；肿胀和畸形重度-3)。皮肤颜色(相对正常-0；最小增生-1；轻微增生-2；重度增生-3)和白色鳞屑(相对正常-0；最小 -1；轻微-2；明显-3)。在第0天、第2天、第4天、第6天和第8天测量每只小鼠的右耳厚度并拍照。

在实验的最后一天(第8天)，用二氧化碳处置动物，收集血液样品，分离血清(储存在–80℃冰箱中)。收集建模耳朵并切成两块：一块固定在10％中性缓冲福尔马林中，另一块冷冻在液氮中并储存在–80℃冰箱中。

数据以平均值±SEM给出。当P值小于0.05时视为统计显著性。

表6和表7中提供的数据总结了受注射的耳朵的总评分(添加了对耳廓形状、皮肤颜色、微血管变化和白色鳞屑的评分)。结果指示，与IL-23注射模型组相比，用代表性p19特异性抗体处理的小鼠经历减弱了的炎性反应。效果从第4天开始，一直持续到第8天。效果是统计显著的。从总评分值和耳朵厚度值都可以显而易见地得出该结论。

表6：受注射耳朵的总评分(x±s，n＝10)

与模型相比，*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001。

表7：注射了IL-23的耳朵的总评分(x±s，n＝8)

与模型相比，**p<0.01、***p<0.001

如表8和表9所示，与模型(IL-23处理)相比，通过选择的抗IL-23p19抗体处理减少小鼠耳朵的厚度。治疗效果(体内抑制皮肤炎性免疫反应)从第4天开始并持续到第8天，效果是统计学显著的(与模型(IL-23处理)相比，p<0.001)。

表8：第0天至第8天受注射耳朵的耳朵厚度(x±s，n＝10)

与模型相比，*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001。

表9：注射了IL-23的耳朵厚度(x±s,n＝8)

与模型相比，**p<0.01、***p<0.001

图10中提供的数据显示，与未处理的对照(仅接受人IL-23处理的模型)相比，公开的抗p19特异性抗体hu-4 18006B**和hu-6 18006B*造成耳朵厚度的统计上显著的降低。

图11A、图11B、图11C和图11D提供的数据确定了抗p19特异性抗体对炎性皮肤反应的效果，如通过H&E病理学染色评分确定的，如在实验过程中获得的表皮的厚度(图11A)、真皮的厚度(图11B)、炎性细胞浸润(图11C)和角化过度或不足(图11D)，并由如下所述的评分系统表示。

简而言之，在第8天，收集小鼠耳朵并在显微镜下观察。将组织固定在10％的中性缓冲福尔马林中。固定后，根据相关SOP对组织进行修剪、脱水、包埋、切片并用苏木精/伊红(H&E)进行染色。研究病理学家通过光学显微镜进行组织病理学评价。使用五步分级系统(相对正常、最小、轻度、中度至显著、重度) 对显微镜检查结果进行分类。

结果：与模型相比，用抗p19抗体hu4 18006B处理导致由IL-23注射诱导的肿胀反应和炎症评分显著降低。Hu-4 18006B在3种评分中(表皮的厚度(图11A)、真皮的厚度(图11B)和炎性细胞浸润(图11C))显示出优于PC1的抑制效果。 Hu-4还显示出对角化过度的抑制(图11D)。

图12提供了在处理后第8天获得的H&E染色的耳朵切片的代表性照片。H&E 染色方法如上所述。

结果：与模型相比，所选择的公开的抗IL-23p19抗体处理(Hu-4 18006B)显著抑制小鼠皮肤炎症。

除非另有说明，否则在说明书和权利要求书中使用的表示成分数量、性质(如分子量、反应条件等)的所有数字在任何情况下均应理解为由术语“约”修饰。因此，除非有相反的说明，否则说明书和所附权利要求书中列出的数字参数是近似值，其可以根据本公开寻求获得的期望特性而变化。至少，并且不试图将等同原则的应用限制于权利要求的范围，每个数字参数应至少根据所报告的有效数字的数目并通过应用普通的舍入技术来解释。

尽管阐述本公开的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但是在特定实施例中阐述的数值被尽可能精确地报告。但是，任何数值都固有地包含某些误差，这些误差必定是由它们各自的测试测量中的标准偏差引起的。

除非本文另外指出或者与上下文明显矛盾，否则在描述本公开内容的上下文中使用的术语“一(a)”，“一个/一种(an)”，“该(the)”和类似指代(特别是在以下权利要求的上下文中)应解释为涵盖单数和复数两者。本文中数值范围的描述仅旨在用作单独指代落入该范围内的每个单独数值的简写方法。除非本文另外指出，否则每个单独的值都被并入说明书中，就如同其在本文中被单独引述一样。除非本文另外指出或与上下文明显矛盾，否则本文描述的所有方法可以以任何合适的顺序进行。本文提供的任何和所有实施例或示例性语言(例如，“如”)的使用仅旨在更好地阐明本公开，并且不对以其他方式要求保护的本公开的范围构成限制。说明书中的任何语言都不应被解释为表示任何未要求保护的对本公开的实施必不可少的要素。

本文公开的公开内容的替代要素或实施方案的分组不应被解释为限制。每个组的成员可以单独引用并要求保护，也可以与该组的其他成员或本文存在的其他要素组合使用。预期出于方便和/或可专利性的原因，组中一个或多个成员可以包含在组中、或从组中删除。当发生任何这样的包含或删除时，说明书被认为包含经修改的组，从而满足所附权利要求中使用的所有马库什组的书面描述。

本文描述了本公开的某些实施方案，包括发明人已知的用于执行本公开的最佳模式。当然，在阅读了前面的描述之后，这些描述的实施方案的变型对于本领域普通技术人员将变得显而易见。发明人预期熟练的技术人员将适当地采用这样的变型，并且发明人希望以不同于本文特别描述的方式来实践本公开。因此，本公开包括适用法律所允许的所附权利要求中记载的主题的所有修改和等同物。而且，除非本文另外指出或与上下文明显矛盾，否则本公开内容涵盖上述要素在其所有可能的变化中的任何组合。

可以使用“由……组成”或“基本上由……组成”的语言在权利要求中进一步限制本文公开的具体实施方案。当在权利要求书中使用时，无论是提交时使用还是根据修改增加，过渡词“由……组成”均不包括权利要求书中未指定的任何要素、步骤或成分。过渡术语“基本上由……组成”将权利要求的范围限制为指定的材料或步骤，以及那些不会实质性影响基本特征和新颖特征的材料或步骤。如此要求保护的本公开的实施方案在本文中被固有地或明确地描述和使用。

应当理解，本文公开的本公开的实施方案是本公开的原理的说明。可以采用的其他修改是在本公开的范围内。因此，通过示例而非限制的方式，可以根据本文的教导来利用本公开的替代配置。因此，本公开不限于精确地示出和描述的那些。

尽管本文已经通过参考各种特定的材料、方法和实施例描述和阐明本公开，但是应当理解，本公开并不限于为此目的选择的材料和方法的特定组合。如本领域技术人员将理解的，可以隐含这些细节的许多变化。说明书和实施例旨在仅被认为是示例性的，本公开的真实范围和精神由所附权利要求指示。本申请中引用的所有参考文献、专利和专利申请均通过引用整体并入本文。

序列表

<110> 新石生物制药有限公司

<120> 抗白介素23 P19的抗体及其使用方法

<130> 122863-5002

<160> 32

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-2_VH

<400> 1

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Trp Arg Ala Phe Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 2

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-2_VL

<400> 2

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu His Ser

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Asn Gln Pro

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Thr Gln Ala

85 90 95

Thr Gln Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 3

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-4_VH

<400> 3

Gln Val His Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Ser Gly Asn Thr Asp Tyr Ser Gln His Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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Ala Arg Ala Ser Ala Asn Trp Tyr Asp Tyr Phe Asp Pro Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 4

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu--4_VL

<400> 4

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Gly Gly Ser

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50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His Ser Leu Glu Ala

65 70 75 80

Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Ile Leu Pro Tyr

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<210> 5

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-5_VH

<400> 5

Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Ser Phe Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

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Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

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Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe

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Cys Ala Arg His Gly Val Arg Gly Val Ile Pro His Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 6

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-5_VL

<400> 6

Gln Thr Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Leu Asn Ser Gly Ser Val Ser Thr Ile

20 25 30

Tyr Tyr Pro Ser Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ala

35 40 45

Leu Ile Tyr Ser Thr Asn Thr Arg Ser Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

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Ser Gly Ser Ile Leu Gly Asn Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

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Gln Ala Asp Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Val Leu Phe Leu Gly Ser

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Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-6_VH

<400> 7

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr

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Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Gly Gln Lys Val

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Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 8

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-6_VL

<400> 8

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1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Gly Ser Ser

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Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

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<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-2_VH-CDR1

<400> 9

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1 5

<210> 10

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-2_VH-CDR2

<400> 10

Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr

1 5

<210> 11

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-2_VH-CDR3

<400> 11

Ala Arg Glu Trp Arg Ala Phe Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val

1 5 10

<210> 12

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-2_VL-CDR1

<400> 12

Gln Ser Leu Glu His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr

1 5 10

<210> 13

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-2_VL-CDR2

<400> 13

Lys Val Ser

1

<210> 14

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-2_VL-CDR3

<400> 14

Thr Gln Ala Thr Gln Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 15

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-4_VH-CDR1

<400> 15

Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Gly

1 5

<210> 16

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-4_VH-CDR2

<400> 16

Ile Ser Ala Tyr Ser Gly Asn Thr

1 5

<210> 17

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-4_VH-CDR3

<400> 17

Ala Arg Ala Ser Ala Asn Trp Tyr Asp Tyr Phe Asp Pro

1 5 10

<210> 18

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu--4_VL-CDR1

<400> 18

Gln Thr Ile Gly Gly Ser

1 5

<210> 19

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu--4_VL-CDR2

<400> 19

Tyr Ala Ser

1

<210> 20

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu--4_VL-CDR3

<400> 20

His Gln Ser Ser Ile Leu Pro Tyr Thr

1 5

<210> 21

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-5_VH-CDR1

<400> 21

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Phe Tyr

1 5 10

<210> 22

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-5_VH-CDR2

<400> 22

Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr

1 5

<210> 23

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-5_VH-CDR3

<400> 23

Ala Arg His Gly Val Arg Gly Val Ile Pro His Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 24

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-5_VL-CDR1

<400> 24

Ser Gly Ser Val Ser Thr Ile Tyr Tyr

1 5

<210> 25

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-5_VL-CDR2

<400> 25

Ser Thr Asn

1

<210> 26

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-5_VL-CDR3

<400> 26

Val Leu Phe Leu Gly Ser Gly Leu Val

1 5

<210> 27

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-6_VH-CDR1

<400> 27

Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr Gly

1 5

<210> 28

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-6_VH-CDR2

<400> 28

Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr

1 5

<210> 29

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-6_VH-CDR3

<400> 29

Val Thr Glu Asn Ile Asn Trp Arg Asp Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 30

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-6_VL-CDR1

<400> 30

Gln Thr Ile Gly Ser Ser

1 5

<210> 31

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-6_VL-CDR2

<400> 31

Tyr Ala Ser

1

<210> 32

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Hu-6_VL-CDR3

<400> 32

His Gln Ser Ser Ser Leu Pro Tyr Thr

1 5

Claims (20)

1.一种抗IL-23p19抗体，其包含：

(a)含有CDR1：SEQ ID NO：9、CDR2：SEQ ID NO：10和CDR3：SEQ ID NO：11的重链可变区；和含有CDR1：SEQ ID NO：12、CDR2：SEQ ID NO：13和CDR3：SEQ ID NO：14的轻链可变区；

(b)含有CDR1：SEQ ID NO：15、CDR2：SEQ ID NO：16和CDR3：SEQ ID NO：17的重链可变区；和含有CDR1：SEQ ID NO：18、CDR2：SEQ ID NO：19和CDR3：SEQ ID NO：20的轻链可变区；

(c)含有CDR1：SEQ ID NO：21、CDR2：SEQ ID NO：22和CDR3：SEQ ID NO：23的重链可变区；和含有CDR1：SEQ ID NO：24、CDR2：SEQ ID NO：25和CDR3：SEQ ID NO：26的轻链可变区；或者

(d)含有CDR1：SEQ ID NO：27、CDR2：SEQ ID NO：28和CDR3：SEQ ID NO：29的重链可变区；和含有CDR1：SEQ ID NO：30、CDR2：SEQ ID NO：31和CDR3：SEQ ID NO：32的轻链可变区。

2.根据权利要求1所述的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体包含：

(a)SEQ ID NO：1的重链可变区序列和SEQ ID NO：2的轻链可变区序列；

(b)SEQ ID NO：3的重链可变区序列和SEQ ID NO：4的轻链可变区序列；

(c)SEQ ID NO：5的重链可变区序列和SEQ ID NO：6的轻链可变区序列；或者

(d)SEQ ID NO：7的重链可变区序列和SEQ ID NO：8的轻链可变区序列。

3.根据权利要求1所述的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体是抗人IL-23p19的抗体。

4.根据权利要求1所述的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体是全长抗体。

5.根据权利要求1所述的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体是抗体片段。

6.根据权利要求4所述的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体片段选自：Fab、Fab'、F(ab)2、Fd、Fv、scFv和scFv-Fc片段、单链抗体、微型抗体和双抗体。

7.根据权利要求1所述的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。

8.根据权利要求1所述的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体是人抗体。

9.根据权利要求1所述的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体是鼠抗体。

10.根据权利要求1所述的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体是嵌合抗体。

11.根据权利要求1所述的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体是双特异性抗体。

12.根据权利要求1所述的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体是人源化抗体。

13.根据权利要求1所述的抗IL-23p19抗体，其中所述抗体不结合IL-12的p40亚基。

14.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的抗体和药学上可接受的载体。

15.一种治疗或预防免疫介导的炎性疾病的方法，所述方法包括将权利要求1所述的抗体施用于需要其的患者。

16.一种分离的多核苷酸，其包含编码权利要求1所述的抗IL-23p19抗体的序列。

17.根据权利要求16所述的分离的多核苷酸，其编码如SEQ ID NO.1、3、5或7中任一项所示的序列。

18.一种载体，其包含权利要求16所述的多核苷酸。

19.一种细胞，其包含权利要求16所述的多核苷酸和/或权利要求17所述的载体。

20.一种用于产生权利要求1所述的抗IL-23p19抗体的方法，所述方法包括培养权利要求19所述的细胞。

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