KR20220143005A - 항-인터루킨-23 p19 항체 및 이의 사용 방법 - Google Patents

항-인터루킨-23 p19 항체 및 이의 사용 방법 Download PDF

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밍 레이
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노바록 바이오테라퓨틱스 리미티드
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Abstract

본 개시내용은 IL-23p19에 결합하는 항체 및 이의 항체 단편을 제공한다. 개시된 항체 및 이의 항체 단편은 IL-23 수용체 신호전달 축의 생물학적 활성을 조절할 수 있으므로 면역-매개된 염증 장애의 치료에 유용하다.

Description

항-인터루킨-23 P19 항체 및 이의 사용 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
이 국제 특허 출원은 2019년 12월 20일에 출원된 미국 가출원 제 62/951,231호에 대한 우선권을 주장하며, 상기 문헌은 그 전문이 모두 본 명세서에 참조로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하고 그 전문이 본 명세서에 참조로 포함된다. 2019년 12월 16일에 생성된 ASCII 사본의 이름은 "122863-5002-WO_NVRB-004-001_ST25.TXT"이며 크기는 13킬로바이트이다.
본 개시내용은 일반적으로 인터루킨-23의 p19 하위단위(subunit)에 결합하는 항체 및 이의 항체 단편에 관한 것이다. 항체는 면역-매개된 염증 장애, 자가면역 질병 또는 암의 치료에 유용하다.
조절 사이토카인의 인터루킨-12(IL-12) 패밀리는 공유 결합된 이종이량체 하위단위를 포함하는 고유한 그룹의 사이토카인(IL-12, IL-23, IL-27, IL-35, 및 IL-39)을 포함한다. 이종이량체 IL-12 패밀리 사이토카인 구성원은 α-사슬(p19, p28 또는 p35)과 β-사슬(p40 또는 Ebi3)로 이루어진다.
IL-23은 IL-12와 공유되는 p40 하위단위와 연결된 고유한 p19 하위단위를 포함하는 이종이량체 사이토카인이다. IL-23의 주요 공급원은 조직 상주 또는 모집된 수지상 세포 및 대식세포이다. IL-23의 생물학적 작용은 다음 2개의 부분으로 이루어진 수용체 복합체를 통해 이루어진다고 가정된다: i.) IL-12Rβ-1, IL-12와 공통적인 부분, ii.) IL-23R, IL-23에 특이적인 부분.
사이토카인의 IL-12 패밀리의 구성원은 선천성 및 후천적 면역 반응을 유도함으로써 면역학적 플레이메이커로서 작용한다. 이러한 조절 사이토카인은 T-세포 하위 집단의 발달을 유도하고 감염, 염증 및 자가면역 질병 결과에 대한 후천적 면역 반응을 유도하는 많은 면역 세포 집단의 기능과 운명을 변경함으로써 작용한다. IL-12 및 IL-23은 각각 Th1 및 Th17 세포의 발달에 관여하는 주로 전염증/전자극 사이토카인이다.
기능적 IL-23 수용체는 IL-12 수용체와 공유되고 신호전달 사슬 IL-23R(p19 하위단위 결합)과 파트너가 되는 IL-12Rβ1 하위단위의 이종이량체이다. IL-23에 대한 수용체는 항시적으로 Janus 키나제 2(Jak2)와 관련되어 있으며 주로 STAT3를 활성화한다. IL-23 수용체의 발현은 주로 기억 T-세포와 NK 세포에서 검출된다. 단핵구, 대식세포 및 수지상 세포도 IL-23 수용체를 낮은 수준으로 발현한다.
IL-23 반응성 세포가 자가면역 염증 질병 및 암과 관련되어 있고 IL-23 활성의 조절이 유망한 치료법을 제공할 수 있다는 실질적인 증거가 있다. 특히, IL-23의 비정상적인 조절은 건선(psoriasis), 건선성 관절염(psoriatic arthritis), 크론병(Crohn's disease) 및 궤양성 대장염(ulcerative colitis)과 같은 면역-매개된 염증 질병(immune-mediated inflammatory disease; IMID)과 관련이 있다. 또한, IL-23 및 IL-12를 포함한 전염증 사이토카인의 균형은 항종양 또는 종양 면역의 발달을 형성하는데 중요한 역할을 한다.
IL-23/IL-12 경로는 다발성 염증 질병의 병태생리에 관련된 세포 기전에 관여한다. IL-23 활성을 억제하기 위해 다수의 치료 전략이 설계되었으며 면역-매개된 염증 장애의 치료를 위해 전염증 IL-23/IL-23 수용체 신호전달 축을 표적화하는 치료제가 계속해서 필요하다. 보다 구체적으로, IL-23, 특히 인간 IL-23의 p19 하위단위에 고친화도로 결합하고 관련 사이토카인 패밀리 구성원인 IL-12의 p40 하위단위에는 결합하지 않는 선택적 IL-23p19 길항제 항체에 대한 필요성이 남아 있다.
본 개시내용은 IL-23의 사이토카인 p19 하위단위에 결합하는 항체 및 항체 단편을 제공함으로써 상기 요구를 처리한다. 항체 및 항체 단편은 단독으로(예를 들어, 단독요법) 또는 다른 면역치료제와 조합하여 면역-매개된 염증 질병(IMID)(예를 들어, 자가면역 질병 및 염증 장애)의 치료에 유용하다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 인간 IL-23의 사이토카인 p19 하위단위에 결합한다. 추가의 실시형태에서, 항체는 완전히 인간이다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 CDR1: 서열번호 9, CDR2: 서열번호 10, 및 CDR3: 서열번호 11을 포함하는 중쇄 가변 영역(heavy chain variable region); 및/또는 CDR1: 서열번호 12, CDR2: 서열번호 13, 및 CDR3: 서열번호 14를 포함하는 경쇄 가변 영역(light chain variable region)을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 CDR1: 서열번호 15, CDR2: 서열번호 16, 및 CDR3: 서열번호 17을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는 CDR1: 서열번호 18, CDR2: 서열번호 19, 및 CDR3: 서열번호 20을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 CDR1: 서열번호 21, CDR2: 서열번호 22, 및 CDR3: 서열번호 23을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는 CDR1: 서열번호 24, CDR2: 서열번호 25, 및 CDR3: 서열번호 26을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 CDR1: 서열번호 27, CDR2: 서열번호 28, 및 CDR3: 서열번호 29를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및/또는 CDR1: 서열번호 30, CDR2: 서열번호 31, 및 CDR3: 서열번호 32를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 서열번호 1, 3, 5, 및 7로 이루어진 군으로부터 선택되는 가변 중쇄 서열을 포함한다.
다른 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 서열번호 2, 4, 6, 및 8로 이루어진 군으로부터 선택되는 가변 경쇄 서열을 포함한다.
다른 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 서열번호 1, 3, 5, 및 7로 이루어진 군으로부터 선택되는 가변 중쇄 서열, 및 서열번호 2, 4, 6, 및 8로 이루어진 군으로부터 선택되는 가변 경쇄 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 항체 단편은 다음 조합으로부터 선택되는 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열을 포함한다:
(a) 서열번호 1을 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열번호 2를 포함하는 가변 경쇄 서열;
(b) 서열번호 3을 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열번호 4를 포함하는 가변 경쇄 서열;
(c) 서열번호 5를 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열번호 6을 포함하는 가변 경쇄 서열; 및
(d) 서열번호 7을 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열번호 8을 포함하는 가변 경쇄 서열.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체(예를 들어, 길항제 항체)는 IL-23의 p19 하위단위에 고친화도로 결합하고 관련된 사이토카인 패밀리 구성원인 IL-12의 p40 하위단위에는 결합하지 않는다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 하기 특징 중 하나 이상을 나타낸다: (a) 인간 IL-23p19에 특이적이며 이의 수용체(IL-23R)에 대한 IL-23 결합을 차단하는 능력이 있고; (b) IL-23 수용체 신호 전달과의 IL-23p19 상호작용을 억제, 간섭 또는 조절하고; (c) DB 세포에서 IL-23에 의해 유도된 STAT3 활성화를 억제하고; (d) 마우스 비장세포에서 인간 IL-23에 의해 유도된 IL-17 생성을 억제하고; (e) 활성화된 인간 PBMC에서 인간 IL-23에 의해 유도된 IL-17 생성을 억제하고; (f) IL-12Rβ1 신호 전달과 IL-23 상호작용을 억제하지 않고; (g) 인간 활성화 T-세포(PBMC)에서 인간 IL-12 유도 인터페론 감마 생성을 억제하지 않고; (h) 인간 활성화 T-세포(PBMC)에서 사이노몰구스 원숭이(cynomolgus monkey) IL-12 유도 인터페론 감마 생성을 억제하지 않고; (i) 뮤린 건선-유사 모델에서 인간 IL-23에 의해 유도된 피부 염증을 억제한다.
일 양상에서, 개시된 항체 및 단리된 항원-결합제는 IL-23p19 유도된 IL-23 수용체 신호전달 네트워크(예를 들어, 자가면역 질병을 촉진하는 염증 미세환경)를 억제하기 위해 사용될 수 있다.
항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 다음 특성 중 하나 이상을 나타낼 수 있다.
(a) 인간 IL-23p19에 특이적이며 수용체 IL-23 수용체에 대한 IL-23 결합을 차단하는 능력이 있고(예를 들어, 차단제);
(b) IL-23/IL-23 수용체-매개된 신호 전달을 억제, 간섭 또는 조절하고;
(c) DB 세포에서 IL-23에 의해 유도된 IL-23 유도 STAT3 활성화를 차단하고;
(d) 마우스 비장세포에서 IL-23-유도된 IL-17 생성을 억제하고;
(e) 인간 PBMC에서 IL-23에 의해 유도된 IL-17 생성을 억제하고;
(f) IL-12Rβ1 신호 전달과 IL-23 상호작용을 억제하지 않고;
(g) 인간 PBMC에서 인간 IL-12-유도된 인터페론-γ 생성을 차단하지 않고;
(h) 인간 PBMC에서 사이노몰구스 원숭이 IL-12-유도된 인터페론 감마 생성을 억제하지 않고;
(i) 뮤린 건선-유사 모델에서 IL-23-유도된 피부 염증을 억제한다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 서열번호 1, 3, 5, 및 7로 이루어진 군으로부터 선택되는 가변 중쇄 서열, 및 서열번호 2, 4, 6, 및 8로 이루어진 군으로부터 선택되는 가변 경쇄 서열로부터의 CDR 서열의 조합을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 및 이의 항체 단편은 표 1에 개시된 하나 이상의 중쇄 가변 영역 CDR 및/또는 표 2에 개시된 하나 이상의 경쇄 가변 영역 CDR을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 항체 단편은 재조합 항체(예를 들어, 키메라 항체(chimeric antibody) 또는 인간화된 항체)이고 여섯(6)개의 CDR을 포함하며, 모두 본 명세서에 개시된 단일 항-IL-23p19 항체의 VH 또는 VL 도메인으로부터 유래된다. 예를 들어, 결합제는 Hu-2.18006B(인간 항체)로 명명된 항-IL-23p19 항체의 6개 CDR 영역 모두를 포함할 수 있다. 대표적인 예에서 항체 또는 이의 항체 단편은 Hu-2.18006B 항체의 가변 경쇄 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 가변 중쇄 영역의 CDR1, CDR2 및 CDR3을 나타내는 서열번호 9 내지 11 및 서열번호 12 내지 14의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 전장 항체(full-length antibody)이다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 항체 단편이다. 추가의 실시형태에서, 항체 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, scFv 및 scFv-Fc 단편, 단일-사슬 항체, 미니바디(minibody), 및 디아바디(diabody)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 단일클론 항체(monoclonal antibody)이다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 인간 항체이다. 일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 뮤린 항체(murine antibody)이다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 키메라 항체이다. 일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 이중특이적 항체(bispecific antibody)이다. 일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 인간화된 항체이다.
항-IL-23p19 항체 및 이의 항체 단편은 자가면역 질병 또는 염증 장애 또는 암과 같은 면역-매개된 염증 질병(IMID)의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다. IMID 또는 암의 치료 또는 예방을 위한 이러한 방법은 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편을 포함하는 조성물 또는 제형을 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 추가 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 단독으로 (예를 들어, 단일요법) 또는 다른 면역치료제 및/또는 화학요법과 조합하여 투여될 수 있다. IMID는 건선, 건선성 관절염, 염증 장 질병(inflammatory bowel diseases)(예를 들어, 궤양성 대장염(ulcerative colitis) 또는 크론병(Crohn's disease)) 강직성 척추염(ankylosing spondylitis), 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus), 화농한선염(hidradenitis suppurativa), 아토피 피부염(atopic dermatitis), 천식(asthma) 및 가족성 선종성 용종(familial adenomatous polyposis)(FAP)으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 개시내용의 다음의 상세한 설명뿐만 아니라, 전술한 요약은 첨부된 도면과 함께 읽을 때 더 잘 이해될 것이다. 본 개시내용을 예시할 목적으로, 도면에 도시된 것은 현재 바람직한 실시형태이다. 그러나, 본 개시내용은 도시된 정확한 배열, 예 및 수단으로 제한되지 않는다는 것을 이해해야 한다.
도 1a 내지 도 1d는 항-IL-23p19 항체의 VH 및 VL 도메인의 아미노산 서열 및 이의 각각의 CDR 서열을 제공한다. 서열 식별자가 제공되고 CDR은 가변 도메인 서열 관련하여 밑줄이 그어져 있다.
도 2a, 도 2b, 도 2c, 도 2d 및 도 2e는 BIAcore에 의해 결정된 인간 p19 및 뮤린 p40 하위단위, 인간 IL-12 및 인간 p40 하위단위를 포함하는 재조합 사이토카인인 인간 IL-23에 대한 항-IL-23p19 항체의 결합 특성을 나타낸다.
도 3a, 도 3b 및 도 3c는 ELISA에 의해 결정된 인간 IL-23 및 인간 p19 및 뮤린 p40 하위단위를 포함하는 재조합 사이토카인에 대한 선택된 대표적인 IL-23p19 항체의 투여량 의존적 결합을 나타낸다.
도 3d 및 도 3e는 ELISA에 의해 결정된 인간 IL-12 및 인간 p40 하위단위에 대한 선택된 대표적인 항-IL-23p19 항체의 결합을 나타내지 않는다.
도 4는 ELISA에 의해 결정된 4개의 IL-23p19 항체에 의한 IL-23/IL-23 수용체 상호작용의 차단을 나타낸다.
도 5는 IL-23/IL-12 수용체 β1 상호작용을 차단하지 않는 2개의 대표적인 IL-23p19 항체를 나타낸다.
도 6a 및 도 6b는 마우스 비장세포 분석(MSA)에서 3개의 대표적인 항-IL-23p19 항체에 의한 IL-23-유도된 IL-17 생성의 억제를 나타낸다.
도 7은 2개의 대표적인 항-IL-23p19 항체에 의한 리포터 세포 분석에서 IL-23-유도된 STAT3 활성화의 억제를 나타낸다.
도 8은 2개의 대표적인 항-IL-23p19 특이적 항체에 의한 인간 PBMC에서 인간 IL-12-유도된 IFN-γ 생성의 비억제를 나타낸다.
도 9는 2개의 대표적인 항-IL-23p19 항체에 의한 인간 PBMC에서 사이노몰구스 원숭이 IL-12-유도된 IFN-γ 생성의 비억제를 나타낸다.
도 10은 실시예 7에 기재된 뮤린 피부 염증 모델에서 2개의 대표적인 항-IL-23p19 항체에 의한 IL-23 매개된 염증 반응(귀 두께)의 생체내 억제를 나타낸다.
도 11a, 도 11b, 도 11c 및 도 11d는 실시예 7에 제시된 뮤린 피부 염증 모델에서 치료된 마우스로부터 치료 후 8일째에 2개의 항-IL-23p19 항체로부터의 병리학적 점수(동결된 귀 조직의 H&E 염색) 효과의 표현의 그래프를 제공한다.
도 12a, 도 12b, 도 12c 및 도 12d는 실시예 7에 제시된 뮤린 피부 염증 모델에서 치료된 마우스로부터 생체내 연구의 마지막 날(8일째)에 수집된 동결된 귀 조직의 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 염색의 대표적인 사진을 나타낸다. 실시예 7에 제시되어 있다.
IL-23은 p19 하위단위를 포함하고 IL-23 수용체에 결합하는 전염증 이종이량체 사이토카인이다. 전염증 IL-23/IL-23 수용체 신호전달 축을 표적화하는 것은 집중적인 치료 연구 영역이다. 본 개시내용은 인간 IL-23/IL-23 수용체 신호전달 축을 억제하고 IMID의 치료 또는 예방에 사용될 수 있는 항체 및 이의 항체 단편을 제공한다. 유리하게는, 본 명세서에 개시된 항-IL-23p19 항체는 IL-23p19의 완전한 억제를 가능하게 하고, 더 낮은 투여량 제형을 생성하고, 덜 빈번하고/거나 더 효과적인 투여를 야기하고, 감소된 비용 및 증가된 효율성을 유도한다.
본 명세서에 개시된 항-IL-23p19 항체 및 이의 항체 단편은 인간 IL-23p19에 특이적으로 결합하고 IL-23/IL-23 수용체 신호전달 축을 길항한다. 일 양상에서, 개시된 항체 및 이의 항체 단편은 높은 친화도로 인간 IL-23에 결합하고 이의 IL-23R과의 상호작용을 방지함으로써 하류 신호전달계를 차단한다. 특정 양상에서, 항체 또는 이의 항체 단편은 마우스 비장세포 및 인간 PBMC로부터 IL-17의 IL-23 자극 생성을 억제한다. 또 다른 양상에서, 항체 또는 이의 항체 단편은 IL-12에 결합하거나 길항하지 않는다.
본 개시내용을 보다 쉽게 이해할 수 있도록, 특정 기술 및 과학 용어를 이하에 구체적으로 정의한다. 이 문서의 다른 곳에서 구체적으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 다른 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 의미를 갖는다.
본 개시내용 전반에 걸쳐, 다음 약자가 사용된다:
mAb 또는 Mab 또는 MAb - 단일클론 항체.
CDR - 면역글로불린 가변 영역의 상보성-결정 영역.
VH 또는 VH - 면역글로불린 중쇄 가변 영역.
VL 또는 VL - 면역글로불린 경쇄 가변 영역.
FR - 항체 프레임워크 영역, CDR 영역이 제외된 면역글로불린 가변 영역
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "인터루킨-23"(IL-23과 상호 혼용됨)은 예를 들어, 인터루킨-23 하위단위 알파 (p19)로 확인된 UniProt 목록 UniProtKB - Q9NPF7에 제공된 아미노산 서열을 갖는 단백질 하위단위에 이황화물-연결된 아미노 IL-23 하위단위(p40)로 확인된 UniProt 목록 UniProtKB-P29460에 제공된 아미노산 서열을 갖는 단백질 하위단위를 포함하거나 이로 이루어진 인간 IL-23 이종이량체를 포함하는 인간 IL-23 이종이량체를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "IL-12R 복합체" 및 "IL-12R"은 IL-12Rβ1 및 IL-12Rβ2 하위단위를 포함하는 고친화도 IL-12 사이토카인 수용체 복합체를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "IL-23R 복합체" 및 "IL-23R"은 IL-12Rβ1(IL-12R 복합체와 공통) 및 IL-23R 하위단위를 포함하는 고친화도 IL-23 사이토카인 수용체를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "인터루킨-12"(본 개시내용 전반에 걸쳐 IL-12와 상호 혼용됨)는 예를 들어 UniProt 목록 UniProtKB-P29460에 제공된 아미노산 서열을 포함하는 단백질 하위단위(인터루킨-12 하위단위 베타) (p40)로 확인됨)에 이황화물-연결된 UniProt 목록 UniProtKB-P29459에 제공된 아미노산 서열을 갖는 단백질 하위단위(인터루킨-12 하위단위 알파로 확인됨)를 포함하거나 이로 이루어진 인간 IL-12 이종이량체를 포함하는 인간 IL-12 이종이량체를 지칭한다. 이 용어는 이황화물 가교로 함께 연결된 35 kD 하위단위(p35) 및 40 kD 하위단위(p40)을 포함하는 이종이량체 단백질을 포함한다. 이종이량체 단백질은 "p70 하위단위"로 지칭된다. 인간 IL-12의 구조는 예를 들어 문헌[Kobayashi, et al. (1989) J. Exp Med. 170:827-845 및 Ling, et al. (1995) J. Exp Med. 154:116-127)]에 추가로 기재되어 있다. 인간 IL-12라는 용어는 표준 재조합 발현 방법에 의해 제조될 수 있는 재조합 인간 IL-12(rh IL-12)를 포함하는 것으로 의도된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "인터루킨 17"은 "IL-17" 또는 "IL-17A"로도 지칭되며, 예를 들어, UniProt 목록 UniProtKB-Q16552에 제공된 아미노산 서열을 갖는 단백질 하위단위를 포함하거나 이로 이루어진 동종이량체 단백질을 포함하는 20 내지 30 kD의 글리코실화된 동종이량체 단백질이다. 인간 IL-17 유전자는 19개 아미노산 신호 서열과 136개 아미노산 성숙 단편을 갖는 155개 아미노산 단백질을 코딩한다. IL-17은 염증 부위에서 활성화된 T-세포에 의해 분비되지만 일반적으로 전신 순환계에는 존재하지 않는다. IL-17은 IL-17R이라고 하는 I형 막관통 수용체에 결합하며, 이 수용체는 널리 알려진 다른 사이토카인 수용체와 유의한 서열 유사성을 나타내지 않는 널리 발현되는 큰 단백질이다. 인간 IL-17은 마우스 및 랫트 아미노산 IL-17 서열에 대해 각각 62.5% 및 58%의 아미노산 서열 동일성을 나타낸다. 인간 IL-17은 사이노몰구스 원숭이 IL-17에 대해 97.4%의 아미노산 서열 동일성을 나타낸다.
본 명세서에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며 다음에 제한되는 것은 아니나, 단일클론 항체, 다클론 항체 및 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체)를 포함하는 다양한 항체 구조를 포함한다.
IgG와 같은 예시적인 항체는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본 명세서에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 이루어진다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본 명세서에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 이루어진다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)이라고 하는 더 보존된 영역이 산재되어 있는 상보성-결정 영역(CDR)이라고 하는 초가변 영역으로 더 세분화될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR과 4개의 FR로 구성되며, 아미노 말단에서 카복시 말단까지 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 배열된다.
초가변 영역은 일반적으로 경쇄 가변 영역에서 아미노산 잔기 약 24 내지 34(LCDR1; "L"은 경쇄를 나타냄), 50 내지 56(LCDR2) 및 89 내지 97(LCDR3) 및 중쇄 가변 영역에서 약 31 내지 35B(HCDR1; "H"는 중쇄를 나타냄), 50 내지 65(HCDR2) 및 95 내지 102(HCDR3); 문헌[Kabat et al., SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)] 및/또는 경쇄 가변 영역에서 초가변 루프를 형성하는 잔기(예를 들어, 잔기 26 내지 32(LCDR1), 50 내지 52(LCDR2) 및 91 내지 96(LCDR3) 및 중쇄 가변 영역에서 26 내지 32(HCDR1), 53 내지 55(HCDR2) 및 96 내지 101(HCDR3), 문헌[Chothia and Lesk(1987) J. Mol. Biol. 196:901-917]로부터의 아미노산 잔기를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "단일클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 획득된 항체를 지칭하고, 예를 들어 집단을 포함하는 개별 항체는 자연적으로 발생하는 돌연변이를 포함하거나 단일클론 항체 제제의 생성 중에 발생하는 가능한 변이체 항체를 제외하고는 동일하고/거나 동일한 에피토프에 결합하며, 이러한 변이체는 일반적으로 소량으로 존재한다. 통상적으로 상이한 결정기(에피토프)에 대해 유도된 상이한 항체를 포함하는 다클론 항체 제제와 달리, 단일클론 항체 제제의 각 단일클론 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대해 유도된다. 따라서, 수식어 "단일클론"은 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 획득되는 항체의 특성을 나타내며 어떠한 방법으로도 항체를 생성해야 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단일클론 항체는 다음에 제한되는 것은 아니나, 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파지 디스플레이 방법, 및 인간 면역글로불린 유전자좌위의 전부 또는 일부를 포함하는 트랜스제닉 동물을 사용하는 방법, 본 명세서에 기재된 단일클론 항체를 제조하는 이러한 방법 및 다른 예시적인 방법을 포함하는 다양한 기술에 의해 이루어질 수 있다.
용어 "키메라" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 공급원 또는 종으로부터 유래되고, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지는 다른 공급원 또는 종으로부터 유래되는 재조합 항체를 지칭한다.
"인간 항체"는 인간에 의해 생성된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하고/거나 당업자에게 공지된 인간 항체를 제조하기 위한 임의의 기술을 사용하여 제조된 항체이다. 인간 항체의 이러한 정의는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 구체적으로 배제한다. 인간 항체는 문헌[Cole et al, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al, J. Immunol, 147(I):86-95 (1991)]에 기재된 방법을 포함하는 당업계에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 또한 문헌[van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol, 5: 368-74 (2001)]을 참조한다. 인간 항체는 항원 유발 실험에 대한 반응으로 이러한 항체를 생성하도록 변형되었지만 내인성 유전자좌위가 불활성화된 트랜스제닉 동물, 예를 들어 면역화된 HuMab 마우스(예를 들어, HuMab 마우스에 대해 문헌[Nils Lonberg et al., 1994, Nature 368:856-859], WO 98/24884, WO 94/25585, WO 93/1227, WO 92/22645, WO 92/03918 및 WO 01/09187 참조), xenomice (예를 들어, XENOMOUSE™ 기술에 대해 미국 특허 제 6,075,181호 및 6,150,584 호 참조) 또는 Trianni 마우스 (예를 들어, WO 2013/063391, WO 2017/035252 및 WO 2017/136734 참조)에 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다.
용어 "인간화된 항체"는 비-인간(예를 들어, 마우스, 랫트 또는 햄스터)의 중쇄 및/또는 경쇄의 상보성-결정 영역(CDR)과 함께 가변 영역에 하나 이상의 인간 프레임워크 영역을 포함하도록 조작된 항체를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 인간화된 항체는 CDR 영역을 제외하고는 완전히 인간인 서열을 포함한다. 인간화된 항체는 일반적으로 비-인간화된 항체에 비해 인간에 대한 면역원성이 낮으므로 특정 상황에서 치료적 이점을 제공한다. 당해 분야의 숙련가는 인간화된 항체를 인지할 것이며 또한 이의 생성에 적합한 기술을 인지할 것이다. 예를 들어, 문헌[Hwang, W. Y. K., et al., Methods 36:35, 2005; Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:10029-10033, 1989; Jones et al., Nature, 321:522-25, 1986; Riechmann et al., Nature, 332:323-27, 1988; Verhoeyen et al., Science, 239:1534-36, 1988; Orlandi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:3833-37, 1989; U.S. Pat. Nos. 5,225,539; 5,530,101; 5,585,089; 5,693,761; 5,693,762; 6,180,370; and Selick et al., WO 90/07861]을 참조하고, 상기 문헌 각각은 그 전문이 본 명세서에 참조로 포함된다.
항체의 "클래스"는 이의 중쇄가 보유하는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 항체에는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 5가지 주요 클래스가 있으며, 이들 중 다수는 하위클래스(이소형)(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2)로 세분될 수 있다. 면역글로불린의 다른 클래스에 해당하는 중쇄 불변 도메인을 각각 α, δ, ε, γ 및 μ라고 한다.
항체의 "항원-결합 도메인"(또는 간단히 "결합 도메인")이라는 용어 또는 유사한 용어는 항원 복합체에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 "항원-결합 부분"이라는 용어에 포함되는 결합 단편의 예는 (i) Fab 단편, VL, VH, CL 및 CH 도메인으로 이루어진 1가 단편; (ii) F(ab')2 단편, 힌지 영역에서 이황화물 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편; (iii) VH 및 CH 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편(문헌[Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546]); (vi) 단리된 상보성-결정 영역(CDR), 및 (vii) 합성 링커에 의해 선택적으로 연결될 수 있는 2개 이상의 단리된 CDR의 조합을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "상보성-결정 영역" 또는 "CDR"은 주로 특이적 항원 인식을 매개하는 역할을 하는 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드 모두의 가변 영역 내의 짧은 폴리펩타이드 서열을 지칭한다. 각 VL 및 각 VH 내에 3개의 CDR(CDR1, CDR2 및 CDR3로 명명됨)이 있다.
당업자에 의해 이해되는 바와 같이, CDR의 정확한 번호 및 배치는 상이한 번호 시스템 사이에서 상이할 수 있다. 그러나, 가변 중쇄 및/또는 가변 경쇄 서열의 개시는 관련된 CDR의 개시를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 각각의 중쇄 가변 영역의 개시는 vhCDR(예를 들어, vhCDR1, vhCDR2 및 vhCDR3)의 개시이고, 각 경쇄 가변 영역의 개시는 vlCDR(예를 들어, vlCDR1, vlCDR2 및 vlCDR3)의 개시이다.
특정 실시형태에서, 항체의 CDR은 문헌[Lefranc M-P, (1999) The Immunologist 7: 132- 136 및 Lefranc M-P et al, (1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212]에 기재된 바와 같은 IMGT 번호 시스템에 따라 결정될 수 있으며, 상기 문헌 각각은 그 전문이 본 명세서에 참조로 포함된다. 본 명세서에서 달리 언급되지 않는 한, 항체의 가변 도메인에서 잔기 번호에 대한 언급은 IMGT 번호 시스템에 의한 잔기 번호를 의미한다.
다른 실시형태에서, 항체의 CDR은 문헌[MacCallum RM et al, (1996) J Mol Biol 262: 732-745]에 따라 결정될 수 있으며, 상기 문헌은 그 전문이 본 명세서에 참조로 포함된다. 문헌[Martin A. "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains," in Antibody Engineering, Kontermann and Diibel, eds., Chapter 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001)]을 참조하며, 상기 문헌은 그 전문이 본 명세서에 참조로 포함된다. 다른 실시형태에서, 항체의 CDR은 AbM 초가변 영역을 지칭하는 AbM 번호 방식에 따라 결정될 수 있으며, 이는 카밧 CDR과 초티아 구조 루프 사이의 절충안을 나타내고 Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어(Oxford Molecular Group, Inc.)에 의해 사용되며, 이는 그 전문이 본 명세서에 참조로 포함된다.
"프레임워크" 또는 "프레임워크 영역" 또는 "FR"은 초가변 영역(HVR) 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 4개의 FR 도메인(FR1, FR2, FR3 및 FR4)으로 이루어진다.
"인간 공통 프레임워크"는 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택에서 가장 흔히 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 하위그룹으로부터 이루어진다. 일반적으로, 서열의 하위그룹은 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda Md. (1991), Vols. 1-3]에서의 하위그룹이다. 일 실시형태에서, VL의 경우, 하위그룹은 문헌[Kabat et al., supra]에서와 같이 하위그룹 카파 I이다. 일 실시형태에서, VH의 경우, 하위그룹은 문헌[Kabat et al., supra]에서와 같이 하위그룹 III이다.
"힌지 영역"은 일반적으로 인간 IgG1의 216 내지 238(EU 번호) 또는 226 내지 251(카밧 번호)의 가닥으로 정의된다. 힌지는 상부, 중간(예를 들어, 코어) 및 하부 힌지의 세 가지 별개의 영역으로 세분될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "Fc 영역"은 불변 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 사용된다. 상기 용어는 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 일 실시형태에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226, 또는 Pro230으로부터 중쇄의 카복실-말단까지 연장된다. 그러나, Fc 영역의 C-말단 라이신(Lys447)은 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 본 명세서에서 달리 명시되지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역에서 아미노산 잔기의 번호를 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]에 기재된 바와 같은 EU 인덱스라고도 하는 EU 번호 시스템에 따른다.
"차단" 항체 또는 "길항제" 항체는 그것이 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제하거나 감소시키는 것이다. 특정 차단 항체 또는 길항제 항체는 항원의 생물학적 활성을 실질적으로 또는 완전히 억제한다.
용어 "효과기 기능"은 항체 이소형에 따라 달라지는 항체의 Fc 영역에 기인하는 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 효과기 기능의 예는 다음을 포함한다: C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성(CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존성 T-세포-매개된 세포독성(ADCC); 포식 작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B-세포 수용체)의 하향 조절; 및 B-세포 활성화.
참조 항체와 "동일한 에피토프에 결합하는 항체"는 참조 항체와 비교하여 항원의 아미노산 잔기의 중첩된 세트와 접촉하거나 경쟁 분석에서 참조 항체와 항원의 결합을 50% 이상 차단하는 항체를 지칭한다. 항원과 접촉하는 항체의 아미노산 잔기는, 예를 들어 항원과 복합체를 이루는 항체의 결정 구조를 결정하거나, 수소/중수소 교환을 수행함으로써 결정할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항원이 5Å 이내인 항체의 잔기는 항원과 접촉하는 것으로 고려된다. 일부 실시형태에서, 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체는 경쟁 분석에서 이의 항원과 참조 항체의 결합을 50% 이상 차단하고, 반대로 참조 항체는 경쟁 분석에서 항체와 이의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단한다.
용어 "항체 단편"은 완전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 완전한 항체의 일부를 포함하는 완전한 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 다음에 제한되는 것은 아니나, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab)2; 디아바디; 선형 항체; 단일 사슬 항체 분자(예를 들어, scFv)를 포함한다. 항체의 파파인 분해는 "Fab" 단편이라고 하는 두 개의 동일한 항원-결합 단편과 쉽게 결정화되는 능력을 반영하는 표시인 잔기 "Fc" 단편을 생성한다. Fab 단편은 중쇄(H)의 가변 영역 도메인(VH) 및 하나의 중쇄의 첫 번째 불변 영역(CH1)과 함께 전체 경쇄(L)로 이루어진다. 항체의 펩신 처리는 2가 항원-결합 활성을 갖고 여전히 항원을 교차-연결할 수 있는 2개의 이황화물 연결된 Fab 단편에 대략 상응하는 단일의 큰 F(ab)2 단편을 생성한다. Fab 단편은 항체 힌지 영역의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 CH1 도메인의 카복시 말단에 소수의 추가 잔기가 있다는 점에서 Fab' 단편과 다르다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올 기를 보유하는 Fab'에 대한 본 명세서의 표시이다. F(ab')2 항체 단편은 원래 그들 사이에 힌지 시스테인이 있는 Fab' 단편 쌍으로 생성되었다. 항체 단편의 다른 화학적 연결도 알려져 있다.
"Fv"는 강한 비공유 결합에서 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 영역 도메인의 이량체로 이루어진다. 이 두 도메인의 접힘으로부터 항원-결합을 위한 아미노산 잔기에 관여하고 항체에 항원-결합 특이성을 부여하는 6개의 초가변 루프(각각 H 및 L 사슬에서 3개의 루프)가 생성된다.
"sFv" 또는 "scFv"로도 약칭되는 "단일 사슬 Fv"는 단일 폴리펩타이드 사슬에 연결된 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 바람직하게는, sFv 폴리펩타이드는 sFv가 항원-결합을 위해 적절한 구조를 형성할 수 있게 하는 VH 및 VL 도메인 사이의 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함한다. sFv에 대한 검토는 문헌[Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315(1994)]을 참조한다.
항체의 "항원-결합 도메인"(또는 간단히 "결합 도메인")이라는 용어 또는 유사한 용어는 항원 복합체에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 "항원-결합 부분"이라는 용어에 포함되는 결합 단편의 예는 (i) Fab 단편, VL, VH, CL 및 CH 도메인으로 이루어진 1가 단편; (ii) F(ab')2 단편, 힌지 영역에서 이황화물 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편; (iii) VH 및 CH 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편(문헌[Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546]); (vi) 단리된 상보성-결정 영역(CDR), 및 (vii) 합성 링커에 의해 선택적으로 연결될 수 있는 2개 이상의 단리된 CDR의 조합을 포함한다.
용어 "다중특이적 항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고 구체적으로 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 항체를 포함하며, VH-VL 단위는 다중에피토프 특이성(예를 들어, 하나의 생물학적 분자에 있는 두 개의 다른 에피토프 또는 다른 생물학적 분자에 있는 각 에피토프에 결합할 수 있음)을 갖는다. 이러한 다중특이성 항체는 다음에 제한되는 것은 아니나, 전장 항체, 2개 이상의 VL 및 VH 도메인을 갖는 항체, 이중특이성 디아바디 및 트리아바디를 포함한다. "다중에피토프 특이성"은 동일하거나 상이한 표적(들) 상의 2개 이상의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 능력을 지칭한다.
"이중 특이성" 또는 "이중특이성"은 동일하거나 상이한 표적(들) 상의 2개의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 능력을 지칭한다. 그러나 이중특이성 항체(bispecific antibody)와 달리 이중-특이성 항체(dual-specific antibody)는 아미노산 서열이 동일한 2개의 항원-결합 아암을 가지며 각 Fab 아암은 2개의 항원을 인식할 수 있다. 이중-특이성은 항체가 단일 Fab 또는 IgG 분자로서 2개의 상이한 항원과 높은 친화도로 상호작용할 수 있도록 한다. 일 실시형태에 따르면, IgG1 형태의 다중특이적 항체는 5 μM 내지 0.001 pM, 3 μM 내지 0.001 pM, 1 μM 내지 0.001 pM, 0.5 μM 내지 0.001 pM 또는 0.1 μM 내지 0.001 pM의 친화도로 각각의 에피토프에 결합한다. "단일특이성"은 하나의 에피토프에만 결합하는 능력을 지칭한다. 다중-특이적 항체는 전체 면역글로불린 분자와 유사한 구조를 가질 수 있고 Fc 영역, 예를 들어 IgG Fc 영역을 포함할 수 있다. 이러한 구조는 다음에 제한되는 것은 아니나, IgG-Fv, IgG-(scFv)2, DVD-Ig, (scFv)2-(scFv)2-Fc 및 (scFv)2-Fc-(scFv)2를 포함할 수 있다. IgG-(scFv)2의 경우, scFv는 중쇄 또는 경쇄의 N-말단 또는 C-말단에 부착될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "이중특이성 항체"는 적어도 2개의 상이한 항원에 대한 결합 특이성을 갖는 단일클론, 종종 인간 또는 인간화된 항체를 지칭한다. 본 발명에서, 결합 특이성 중 하나는 IL-12 또는 IL-23에 대해 유도될 수 있고, 다른 하나는 임의의 다른 항원, 예를 들어 세포 표면 단백질, 수용체, 수용체 하위단위, 조직 특이적 항원, 바이러스 유래 단백질, 바이러스로 암호화(encoding)된 외피 단백질, 박테리아 유래 단백질 또는 박테리아 표면 단백질 등일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "디아바디"는 2개의 폴리펩타이드 사슬를 포함하는 2가 항체를 지칭하며, 각각의 폴리펩타이드 사슬는 너무 짧은 링커(예를 들어, 5개의 아미노산으로 이루어진 링커)에 의해 연결된 VH 및 VL 도메인을 포함하여, 동일한 펩타이드 사슬에서 VH 및 VL 도메인의 분자내 결합이 가능하다. 이 입체배열에서 동종이량체 구조를 형성하기 위해 각 도메인은 다른 폴리펩타이드 사슬의 상보적 도메인과 쌍을 형성한다. 따라서, 용어 "트리아바디"는 3개의 펩타이드 사슬을 포함하는 3가 항체를 지칭하며, 각각 매우 짧은 링커(예를 들어, 1 내지 2개의 아미노산으로 이루어진 링커)에 의해 연결된 1개의 VH 도메인 및 1개의 VL 도메인을 포함하여 동일한 펩타이드 사슬 내에서 VH 및 VL 도메인의 분자내 결합이 가능하다.
본 명세서에 개시된 다양한 항체를 기재하기 위해 사용될 때 용어 "단리된 항체"는 그것이 발현된 세포 또는 세포 배양물로부터 확인 및 분리 및/또는 회수된 항체를 의미한다. 자연 환경의 오염 성분은 일반적으로 폴리펩타이드의 진단 또는 치료 용도를 방해하는 물질이며 효소, 호르몬 및 기타 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 예를 들어 전기영동(예를 들어, SDS-PAGE, 등전점 전기영동(IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC) 접근방식에 의해 결정되는 바와 같이 95% 또는 99% 초과의 순도로 정제된다. 항체 순도 평가 방법에 대한 검토는 예를 들어 문헌[Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87(2007)]을 참조한다. 바람직한 실시형태에서, 항체는 (1) 회전 컵 서열분석기를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 획득하기에 충분한 정도로, 또는 (2) 쿠마시 블루(Coomassie blue) 또는 바람직하게는 은색 염료를 사용하여 비-환원 또는 환원 조건에서 SDS-PAGE에 의해 균질성으로 정제될 것이다.
표적 분자에 대한 항체의 결합과 관련하여, 특정 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드 표적 상의 에피토프에 대해 용어 "특이적 결합" 또는 "에 특이적으로 결합하다" 또는 "특이적이다"는 비특이적 상호 작용과 측정 가능하게 다른 결합을 의미한다. 특이적 결합은 예를 들어 대조군 분자의 결합과 비교하여 분자의 결합을 결정함으로써 측정될 수 있다. 예를 들어, 특이적 결합은 표적, 예를 들어 과량의 표지되지 않은 표적과 유사한 대조군 분자와의 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 이 경우, 표지된 표적과 프로브의 결합이 과량의 표지되지 않은 표적에 의해 경쟁적으로 억제되면 특이적 결합으로 지정된다. 본 명세서에 사용된 특정 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드 표적 상의 에피토프에 대해 용어 "특이적 결합" 또는 "에 특이적으로 결합하다" 또는 "특이적이다"는 예를 들어, 10-4 M 이하, 대안적으로 10-5 M 이하, 대안적으로 10-6 M 이하, 대안적으로 10-7 M 이하, 대안적으로 10-8 M 이하, 대안적으로 10-9 M 이하, 대안적으로 10-10 M 이하, 대안적으로 10-11 M 이하, 대안적으로 10-12 M 이하의 표적에 대한 Kd 또는 10-4 M 내지 10-6 M 또는 10-6 M 내지 10-10 M 또는 10-7 M 내지 10-9 M의 범위의 Kd를 갖는 분자에 의해 나타날 수 있다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 친화도 및 KD 값은 반비례한다. 항원에 대한 높은 친화도는 낮은 KD 값으로 측정된다. 일 실시형태에서, 용어 "특이적 결합"은 분자가 임의의 다른 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프에 실질적으로 결합하지 않고 특정 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드 상의 에피토프에 결합하는 결합을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "특이적 결합", "특이적으로 결합하다" 및 "선택적으로 결합하다"는 인간 인터루킨-23 p19의 에피토프에 결합하는 항체를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "친화도"는 에피토프에 대한 항체의 결합 강도를 의미한다. 항체의 친화도는 해리 상수 Kd에 의해 주어지며, [Ab]Х[Ag]/[Ab-Ag]로 정의되며, [Ab-Ag]는 항체-항원 복합체의 몰 농도이고, [Ab]는 결합되지 않은 항체의 몰 농도이고 [Ag]는 결합되지 않은 항원의 몰 농도이다. 친화도 상수 Ka는 1/Kd로 정의된다. mAb의 친화도를 결정하는 방법은 문헌[Harlow, et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988), 콜라이gan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1992, 1993), and Muller, Meth. Enzymol. 92:589-601 (1983)]에서 찾을 수 있으며, 상기 문헌은 그 전문이 본 명세서에 참조로 포함된다. mAb의 친화도를 결정하기 위한 당업계에 잘 알려진 한 가지 표준 방법은 표면 플라즈몬 공명(SPR) 스크리닝을 사용하는 것이다(예를 들어, BIAcore™ SPR 분석 장치를 사용한 분석).
"에피토프"는 항체와 이의 항원(들) 사이의 상호작용 부위 또는 부위들을 나타내는 기술 용어이다. 문헌[Janeway, C, Jr., P. Travers, et al. (2001). Immunobiology: the immune system in health and disease. Part II, Section 3- 8. New York, Garland Publishing, Inc.]에 기재돤 바와 같이: "항체는 일반적으로 단백질과 같은 큰 분자 표면의 작은 영역만 인식한다. [특정 에피토프]는 단백질 접힘에 의해 함께 결합된 [항원] 폴리펩타이드 사슬의 서로 다른 부분의 아미노산으로 구성될 가능성이 높다. 이러한 종류의 항원 결정기는 구조가 항원의 아미노산 서열에서 불연속적이지만 3차원 구조에서 함께 결합되는 단백질 절편으로 구성되기 때문에 입체형태적 또는 불연속적 에피토프로 알려져 있다. 이와 달리, 폴리펩타이드 사슬의 단일 절편으로 이루어진 에피토프는 연속 또는 선형 에피토프라고 칭한다"(문헌[Janeway, C. Jr., P. Travers, et al. (2001). Immunobiology: the immune system in health and disease. Part II, Section 3-8. New York, Garland Publishing, Inc.]).
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "KD"는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 상수를 지칭하는 것으로 의도된다. 이는 다음 공식으로 계산된다: Koff/Kon=KD
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "IC50"은 실시예 5: 인간 DB 세포 분석에서 STAT3 활성화의 억제에 기재된 생물분석에서 인간 림프종 DB 세포에 대한 IL-23의 생물활성을 50% 중화시키는데 필요한 본 발명의 항체의 유효 농도를 지칭하는 것으로 의도된다.
제제 및 특정 활성(예를 들어, 세포에 대한 결합, 효소 활성의 억제, 면역 세포의 활성화 또는 억제)에 관한 "EC50"은 이러한 활성에 대한 최대 반응 또는 효과의 50%를 생성하는 제제의 유효 농도를 지칭한다. 제제 및 특정 활성과 관련하여 "EC100"은 이러한 활성에 대해 실질적으로 최대 반응을 생성하는 제제의 유효 농도를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항체 기반 면역요법" 및 "면역요법"은 IL-23p19의 비정상적인 발현을 특징으로 하는 세포에 대한 직접 또는 간접적 효과를 매개하기 위해, 항-IL-23p19 항체, 이중특이적 분자, 다중-특이적 분자, 결합제, 또는 IL-23p19 특이적 결합제를 포함하는 융합 단백질의 표적화 특이성에 의존하는 임의의 형태의 요법을 광범위하게 지칭하기 위해 사용된다. 이 용어는 네이키드(naked) 항체, 이중특이적 항체(T-세포 결합, NK 세포 결합 및 기타 면역 세포/효과기 세포 결합 형식 포함), 항체 약물 접합체, IL-23p19-특이적 키메라 항원 수용체를 포함하도록 조작된 T-세포(CAR-T) 또는 NK 세포(CAR-NK)를 포함하는 세포 요법, 및 IL-23p19 특이적 결합제를 포함하는 종양 용해성 바이러스, 및 항-IL-23p19 항체의 항원-결합 서열 전달 및 생체내 상응하는 항체 단편 발현에 의한 유전자 요법을 사용한 치료 방법을 포함하는 의미이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "면역-매개된 염증 질병" 또는 "IMID"는 공통 염증 경로를 공유하고 선천성 및 후천적 면역계 기능의 조절장애에 의해 촉발되거나 그 결과를 초래하는 겉보기에는 관련이 없는 질병의 그룹을 포함한다. 이러한 병태에는 다음에 제한되는 것은 아니나, 건선, 류마티스 관절염, 염증 장 질병, 전신성 홍반성 루푸스, 강직성 척추염, 화농한선염, 아토피 피부염 및 천식이 포함된다. 모든 기관계는 IMID에 의해 영향을 받을 수 있으며 개체는 삶의 질의 상당한 감소, 유의한 이환율 및 수명 감소에 직면할 수 있다(문헌[Bunte, K and Beikler, T, Int. J. Mol. Sci., 20: 3394(2019)]). 본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같이, 단수 형태 ("a", "an" 및 "the")는 문맥상 명백하게 달리 유도하지 않는 한 복수 대상을 포함한다는 점에 유의한다.
IL-12/IL-23 수용체 신호전달 축
IL-23의 p19 하위단위(본 명세서에서 "IL-23p19" 및 "p19 하위단위"로도 지칭됨)은 21개 아미노산 리더 서열을 포함하는 189개 아미노산 폴리펩타이드이다(문헌[(Oppmann et al. Immunity 13:715) 2000)]). p19 하위단위의 생물학적 활성은 IL-12 p40 하위단위과 쌍을 형성하여 IL-23을 형성할 때만 검출된다. IL-12와 IL-23은 모두 분비된 이종이량체 사이토카인으로만 존재하며 IL-12 p35와 IL-23p19 하위단위는 p40과의 세포내 공유 결합 없이 분비되지 않는다. IL-12 및 IL-23 사이토카인이 공유하는 p40 하위단위는 수용체의 공통 IL-12Rβ1 구성요소에 결합하며, 신호 특이성은 각각의 고친화도 수용체의 IL-12Rβ2 및 IL-23R 구성요소에 결합하는 고유한 p35(Il-12) 및 p19(IL-23) 하위단위에 의해 결정된다. IL-12 및 IL-23과 동족 수용체의 상호작용은 선천성 및 후천적 면역 반응을 조정하는 복잡한 조절 네트워크의 일부를 형성한다.
IL-12는 많은 세포내 병원체 및 바이러스에 대한 보호 면역 반응의 발달 및 종양 면역 감시에서 중요한 역할을 한다고 가정된다. 문헌[Kastelein, et al., Annual Review of Immunology, 2007, 25: 221-42; Liu, et al., Rheumatology, 2007, 46(8): 1266-73; Bowman et al., Current Opinion in Infectious Diseases, 2006 19:245-52; Fieschi and Casanova, Eur. J. Immunol. 2003 33:1461-4; Meeran et al., Mol. Cancer. Ther. 2006 5: 825-32; Langowski et al., Nature 2006 442: 461-5]을 참조한다. 따라서 IL-23 특이적 억제(IL-12 또는 공유 p40 하위단위를 절약함)는 IL-12 및 IL-23의 이중 억제와 비교하여 잠재적으로 우수한 안전성 특성을 가질 수 있다.
IL-23에 대한 수용체는 IL-23R이라고 하는 고유한 하위단위와 쌍을 형성하는 IL-12 수용체와 공통적으로 공유되는 IL-12Rβ1 하위단위를 포함하고, 한다(문헌[Parham et al. J. Immunol. 168:5699 (2002)]). IL-23R은 IL-23에 높은 친화도로 결합하는 것으로 보고되었다(KD=44 ±3 nM). 이와 달리, IL-23은 더 낮은 친화도로 IL-12Rβ1 하위단위에 결합한다(KD= 2 ± 1 uM). IL-23에 대한 IL-23R의 결합은 매우 높은 친화도로 IL-23에 대한 IL-12Rβ1 결합을 촉진한다(KD = 25 ± 5 nM)(문헌[Bloch et al, Immunity, 48, 45-58 (2018)]). IL-23R은 다양한 세포(자연살해세포, 대식세포, 수지상 세포, 기억 T-세포, 각질 세포)에 의해 발현된다. IL-23 생성은 IL-23R의 발현을 유도하여 IL-23 발현을 향상시키는 양성 피드백 루프를 생성한다.
IL-23은 활성화된 항원 제시 세포에 의해 생성되고 NK 세포 및 T-세포 상에서 발현되는 IL-23 수용체 복합체에 결합한다. IL-23은 단독으로 또는 다른 사이토카인(예를 들어, IL-1β)과 조합하여 IMID 장애에서 염증 반응에 관여하는 것으로 알려진 전염증 사이토카인인 IL-17A, IL-17F, IL-6 및 종양 괴사 인자 α(TNFα)의 생성을 촉진하는 것으로 나타났다.
IL-23p19의 IL-23R에 대한 결합은 IL-23p19 나선 도메인의 구조 조정 과정을 초래하고, 이는 IL-12 p40과 IL-12Rβ1의 결합을 가능하게 한다(문헌[Bloch, Y et al. Immunity. 2018; 48(1):45-58]). 이 과정은 JAK2 및 TYK2를 활성화하여 궁극적으로 전사 인자로 기능하는 STAT3 및 STAT4 형성을 유도한다(문헌[Parham, C. et al., Immunol. 168(11):5699-5708 (2002)]). IL-23은 나이브 CD4+ T-세포가 Th17 세포로 분화하는 후기 단계에서 핵심 역할을 한다(문헌[Gaffen, SL et al., Nat Rev Immunol. 14(9):585-600 (2014)]). IL-23R의 부재 하의 나이브 T-세포는 분화의 초기 단계를 조절하기 위해 형질전환 성장 인자(TGF)-β 및 IL-6과 같은 다른 사이토카인이 필요하다. 이러한 사이토카인은 전사 인자로서 레티노산 수용체 관련 고아 수용체-γt의 발현을 유도하여 IL-23R의 발현을 촉진한다. TGF-β 및 IL-6에 의해 유도된 미성숙 Th17 세포는 병원성을 얻기 위해 IL-23에 노출되어야 한다. 성숙되면 Th17 세포는 IL-17 및 TNF-α를 생성할 수 있다(문헌[Kashani, A et al., Gastroenterology & Hepatology 15(5):255-265 (2019)]).
2개의 사이토카인 사이의 구조적 유사성에도 불구하고, IL-23의 생물학적 활성/기능은 IL-12와 구별된다. IL-23은 나이브 CD4+ T-세포를 통상적인 Th1 및 Th2 세포와 구별되는 Th17 세포라고 하는 새로운 세포 하위 집합으로 분화 및 유지하는 것을 지원한다. Th17 세포는 인터루킨-17A(IL-17A) 및 인터루킨-17F(IL-17F)를 생성한다. Th17 세포는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α), 인터루킨-6(IL-6), 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF), CXCL1 및 CCL20을 포함하여 염증 반응을 유도하는 것으로 알려진 종양 괴사 인자를 포함하여 염증 반응을 유도하는 것으로 알려진 다양한 기타 인자를 생성한다. 림프 조직 유도(LTi)-유사 세포와 같은 선천 림프 세포 및 NK 세포는 IL-23에 반응하여 IL-23 수용체 및 레티노산 관련 고아 수용체(ROR) 감마를 발현하고 IL-17을 생성한다. IL-1β 및 IL-23은 또한 감마-델타 T-세포를 공동 자극하여 T-세포 수용체 결합 없이 IL-17 생성을 유도한다.
중요하게도, IL-23은 나이브 T-세포에서 별개의 Th17 세포 계통으로의 분화 및 확장을 유지한다. IL-23의 부재 하에 Th17 표현형이 손실된다. IL-23은 전염증 사이토카인 특성을 생성하는 세포독성 Th17 세포를 유지하는데 중요한 역할을 하기 때문에 IMID에서 면역 염증 반응의 "마스터 조절인자"로 기재되었다. IL-23의 병원성은 부분적으로 IL-17A, IL-17F 및 IL-22의 조절되지 않는 생성에 의존하며, 이는 면역요법을 위해 IL-23/IL-23R 축을 표적화하는 근거를 제공한다.
전염증 IL-23/IL-23 수용체 신호전달 축의 표적화
생체내에서 치료적 이점을 부여하는 것으로 보고된 항-IL-12/IL-23 항체는 항체 우스테키누맙(ustekinumab)(CNTO1275) 및 브리아키누맙(briakinumab)(ABT-874)을 포함한다. 두 항체 모두 IL-12Rβ1 결합에 중요한 p40 하위단위의 영역에서 공통 IL-12 p40 하위단위를 표적화한다(문헌[Clarke, A. et al. mAbs 2(5):539-549 (2010)]).
생체내에서 치료적 이점을 부여하는 것으로 보고된 항-IL-23 선택적 항체는 구셀쿠맙(guselkumab)(TREMFYA®), 틸드라키주맙(tildrakizumab)(ILUMYA®), 리산키주맙(risankizumab)(SKYRIZI®), 브라지쿠맙(brazikumab)(MEDI2070) 및 미라키주맙(mirakizumab)(Ly3074828)을 포함하며; 이들 모두는 IL-23의 p19 하위단위에 대해 특이적이다. 무작위, 위약 및 활성 대조 임상 3상 시험 데이터에 따르면 틸드라키주맙, 구셀쿠맙 및 리산키주맙은 중등도 내지 중증 건선 환자에게 유리한 위험-유익 특성을 나타낸다. 이러한 IL-23p19 억제제 중 어느 것에 대해서도 유의한 안전성 문제가 관찰되지 않았다.
IL-12에 의해 유도되는 Th1 세포는 이전에 많은 자가면역 질병에서 병원성 T-세포 하위집합인 것으로 생각되었지만, 보다 최근의 염증 장 질병, 건선, 염증 관절염 및 다발성 경화증 모델에서의 동물 연구에서 IL-12 대 IL-23의 개별 관여를 평가하여 IL-12가 아닌 IL-23이 자가면역/염증 질병의 핵심 유도인자임을 입증했다(문헌[Ahern et al., Immun. Rev. 226:147-159 (2008); Cua et al., Nature421:744-748 (2003); Yago et al., Arthritis Res and Ther. 9(5): R96 (2007)]).
면역-매개된 염증 반응에서 IL-23의 역할은 또한 유전자 연구에 의해 뒷받침된다. 게놈 전체 관련 연구(GWAS)는 IL-23R 다형성과 건선 및 건선성 관절염과 같은 자가면역 병태에 대한 소인을 연결했다(문헌[Liu et al., PLoS Genet. 4(3)e1000041 (2008), Reveille, et al., Nat. Genet. 42(2): 123-127 (2010), and Duerr et al., Science 314(5804):1461-1463 (2006)]). IL- 23R 유전자의 단일-뉴클레오타이드 다형성(SNP)인 rs11209026과 CD 사이의 결합이 확립되었다(문헌[Reveille, JD et al.]). 이 변이체는 CD 및 UC에 대해 보호하는 것으로 나타났다. rs11209026의 보호 특성은 이 SNP 변이체의 보유가 75,000건 초과의 사례 및 대조군 코호트에서 질병 위험도를 감소시켰다는 메타 분석에서 확인되었다(문헌[Jostins, L. Nature 491(7422):119-124 (2012)]). 이 SNP 변이체는 IL-23R의 소수의 다른 코딩 변이체와 함께 IL-23R의 발현의 감소를 야기하고, 따라서 IL-23 축을 통해 매개되는 면역 반응을 감소시킨다(문헌[J Biol Chem. 291(16):8673-8685 (2016)]).
IL-6 및 TGF-β1과 같은 사이토카인은 나이브 CD4+ T-세포로부터 RORγt+ Th17 세포의 분화를 촉진할 수 있지만, IL-23은 이들 세포의 완전한 염증 기능에 필요하다. 또한, 활성화된 RORγt+ Th17 세포의 수용체에 대한 IL-23의 결합은 IL-23 수용체(IL-23R)의 추가 발현을 유도하여 이러한 세포의 유지 및 증식을 위한 피드포워드 루프(feed-forward loop)를 제공한다(Singh, S, et al., MAbs 7(4):1493-1503 (2015).
IL-23/IL-17 축이 만성 염증의 발병에 중요한 역할을 한다는 강력한 증거가 있으며 유전자 연구는 IL-23 수용체(IL-23R) 또는 이의 리간드 및 건선, 염증 장 질병 및 이식편 대 숙주 질병을 포함하는 다수의 염증 질병 사이의 가능한 연계를 밝혀내었다. IL-23/IL-17 축의 표적화는 건선, 건선성 관절염, 염증 장 질병(궤양성 대장염 및 크론병), 강직성 척추염, 전신 홍반성 루푸스(SLE)를 포함한 IMID에서 집중적인 치료 연구 영역이다.
일반적으로 말해서, 구셀쿠맙, 틸드라키주맙, 리산키주맙, 브라지쿠맙 또는 미라키주맙과 같은 IL-23 특이적 항체는 IL-23p19에 선택적으로 결합하고 IL-23이 이의 수용체에 결합하는 것을 억제하고; 따라서 IL-23의 작용을 길항하여 IMID와 관련된 조직 염증, 파괴 및/또는 비정상적인 조직 복구에 관여하는 T 헬퍼(Th) 17 세포, 선천성 림프 세포, γδT-세포 및 자연 살해(NK) 세포를 유도 및 유지한다.
판상 건선 또는 건선(PsO)은 복잡한 병태생리학을 특징으로 하는 만성 염증 T-세포-매개된 피부 장애이다. 선진국에서 발생 빈도는 1 내지 4%이다. 건선은 약 750만 명의 사람들에서 발병하는 미국에서 가장 널리 퍼진 자가면역 질병이다. 판상 건선은 건선의 가장 흔한 형태로, 환자의 80 내지 90%에서 발병한다. 건선의 발병기전이 완전히 이해되지는 않았지만 다수의 환경 인자, T-세포, 수지상 세포, 수많은 사이토카인 및 45개의 확인된 유전자좌위가 모두 상호작용하여 전신 건선 질병 상태 및 궁극적으로 판상 건선을 생성한다(문헌[Nestle FO, et al., N Engl J Med. 361(5):496-509(2009), Mahil SK, et al Dermatol Clin.33(1):1-11(2015)]). 선천성 및 후천적 면역의 상호작용과 함께 유전적 및 환경적 인자의 상승작용적 효과는 결국 비정상적인 각질세포 증식 및 건선 병변의 형성으로 이어진다(문헌[Chan, J. R, et al., J. Exp. Med, 203(12)2577-2587 (2006)]).
PsO 플라크는 통상적으로 표피 비후를 특징으로 하는 잘 구분되는 홍반성 비늘 모양 피부 병변이다. 발병 각질세포는 수지상 세포를 활성화하고 국소 림프절로 이동하며 인터루킨 IL-12 및 IL-23을 포함한 다수의 사이토카인을 방출하여 각각 1형 T 헬퍼(Th1) 및 17형 T 헬퍼(Th17) 세포를 활성화한다. T 림프구 및 기타 세포 유형은 종양 괴사 인자(TNF)-α, IL-22 및 IL-17을 포함하는 추가 사이토카인을 방출하여 각질세포 활성화를 증가시키고 염증의 자체 추진 주기를 개시한다(문헌[Lowes MA et al., Trends Immunol.34(4):174-81 (2013)]). 조직학적으로, CD4+ T-세포, 수지상 세포, 대식세포 및 비만 세포를 포함하는 부전각화증 및 혼합 진피 침윤을 수반하는 현저한 표피 증식이 있다.
초기 간행물은 건선 피부 병변에서 IL-12 p40 및 IL-23 p40 메신저 RNA의 과발현을 수반하는 상승된 수준의 종양 괴사 인자-α 및 IL-12의 p40 하위단위의 존재를 보고하였다. 이러한 발견은 IL-12/23 p40 하위단위 단백질에 대한 중화 항체로 IL-12 및 IL-23을 억제하는 것이 건선 치료를 위한 효과적인 치료 접근법을 제공할 수 있음을 시사했다(문헌[Piskin G, et al., J Immunol 2006, 176: 1908-15]). 건선은 처음에 Th-1 매개된 질병으로 고려되었다(T 헬퍼 1형 세포: 인터루킨-2, 종양 괴사 인자(TNF)-α 및 인터페론(IFN)-γ의 특징적인 사이토카인 분비 특성에 기반).
건선의 발병기전에서 IL-23의 기본 역할이 명확해졌고, 이는 Th17 계통의 생물학과 관련이 있다. 나이브 T 림프구에서 Th17로의 초기 분화는 TGF-β1, IL-6, IL-1의 존재가 필요하고, IL-23은 전염증 사이토카인 IL-17, IL-22, IL-21 및 종양 괴사 인자-α를 분비하기 위해 Th17의 활성화와 유지에 필요하며, 이는 결과적으로 건선 피부 병변의 형성에 관여한다(문헌[Fotaidou, C. et al., Psoriasis: Targets and Therapy 8: 1-5(2018)]).
따라서, IL-12 및 IL-23이 모두 건선에서 Th1 면역 반응의 발달에 관여하는 것으로 알려져 있지만, IL-23은 현재 Th17 세포 분화 및 생존의 핵심 유도인자로 인식되고 있다. Th17 세포에 의해 생성되는 1차 사이토카인은 IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E, 및 IL-17F를 포함하는 전염증 IL-17 패밀리의 것이다. IL-17A 및 IL-17F는 유사하며 IL-17RA 및 IL-17RC 하위단위로 이루어진 이종이량체인 동일한 IL-17 수용체에 결합한다.
초기 치료 전략은 건선 발병의 중심 세포 유형으로서 Th1 세포를 표적화했지만, 신규한 모델은 IL-23/Th17 축에 초점을 맞췄다(문헌[Lowes MA, et al. Trends Immunol. 34(4):174-81(2013)]). 신규한 초점에 대한 근거는 IL-17이 건선의 발병기전에 핵심적인 역할을 한다는 확신과 IL-23이 Th17 세포 활성화를 유도한다는 정보에 근거한다. 또한, IL-23은 다른 Th17 사이토카인(예를 들어, IL-22)의 생성을 선천성 림프구 유형 3 세포 및 γδ T-세포를 포함하는 다른 세포 유형에 의해 자극한다(문헌[Ward, N.L., J Investig Dermatol. 134: 2305-2307(2014)]). IL-23의 억제가 Th17 세포에 의한 IL-17A 및 IL-22의 하류 생성을 차단하고 그 효과가 건선 면역병리 발생의 길항작용으로 해석된다는 것이 제안되었다.
IL-23/IL-17 축은 현재 건선의 발병기전에서 중요한 것으로 고려되며 선택적 IL-23p19 억제는 IL-12/23 p40 억제 또는 IL-17A 또는 이의 수용체의 말단 차단과 관련하여 다수의 이점을 가져올 수 있다(문헌[Torres, T Drugs 77:1493-1503 (2017)]). 현재까지 3개의 IL-23p19-하위단위 특이적 단일클론 항체(즉, 구셀쿠맙, 틸드라키주맙 및 리산키주맙)이 전신 요법 또는 광선 요법의 대상인 성인의 중등도 내지 중증 판상 건선 치료에 대해 미국 식품의약국(FDA) 및 유럽 의약국(EMA) 승인을 받았다. 2020년 7월 성인 활성 건선성 관절염 치료제로 구셀쿠맙이 FDA에 의해 승인되었다.
건선에서 IL-23 차단의 높은 효능은 초기 개념 증명 테스트 및 I상 임상 시험에서 입증되었다. 1상 연구에 따르면 구셀쿠맙의 단일 투여가 중등도 내지 중증 판상 건선 환자에서 유의한 임상 반응을 나타냈다(문헌[Sofen H, et al., J Allergy Clin Immunol; 133:1032-1040 (2014)]). I상 연구는 또한 인터루킨-23과 구셀쿠맙의 선택적 길항 작용이 표피 두께, T-세포 및 수지상 세포 침윤, 건선과 관련된 유전자 발현 및 혈청 IL-17A 수준의 감소를 특징으로 하는 건선의 임상적 개선을 초래했다고 보고했다. 구셀쿠맙의 단일 투여 후 중등도 내지 중증 건선 환자에서 측정 가능한 임상 반응의 보고된 결과는 IL-23의 선택적 중화가 유망한 치료 옵션이라는 새로운 이론을 뒷받침한다.
구셀쿠맙 활성의 빠른 개시가 또한 최대 40주의 연속 치료 동안 광범위한 투여 및 2개의 상이한 투여 간격에서 구셀쿠맙의 사용을 평가하는 II상 투여 연구(NCT01483599)에서 관찰되었다. 효능은 초기 평가(4주)에서 분명했다. 다수의 구셀쿠맙 요법은 건선 치료에 일반적으로 사용되는 생물학적 제제인 아달리무맙과 관련된 요법보다 상당히 우수한 반응률과 관련이 있었다(문헌[Gordon, KB et al., N Engl J Med 373:136-144 (2015)]). 구셀쿠맙의 효능은 16주차(일차 종료점 평가) 이후에도 계속 증가했으며 40주차까지 유지되었다. 또한, 100 mg 구셀쿠맙 그룹의 환자 대부분은 40주 연속 치료 후 PGA 점수에서 기준선으로부터 100% 개선(환자의 54%) 및 0의 PGA 점수(환자의 62%)로 표시되는 바와 같이 건선이 완전히 제거되었다. FDA와 EMA의 규제 승인은 부분적으로 3개의 중요한 3상 임상 시험 VOYAGE 1, (문헌[Blauvelt, A et al. J. Am. Acad. Dermatol. 76: 405-417 (2017)]) VOYAGE (문헌[Reich, K et al. J Am. Acad. Dermatol.,76: 418-431 (2017)]) 및 NAVIGATE (문헌[Langley, RG et al., Brit. J. Dermatol. 178:114-123 (2017)])의 결과에 의존했다.
VOYAGE 1(NCT02207231)은 101개의 전체 부위에서 수행된 III상, 무작위, 이중 맹검, 위약 및 활성 비교인자-대조 시험(2014년 12월 내지 2016년 4월)이었다. 연구는 구셀쿠맙이 아달리무맙과 비교되는 활성-비교인자 기간(0 내지 48주) 및 위약 대조 기간(0 내지 16주)으로 구성되었으며, 그 후 위약을 투여한 환자는 교차되어 48주까지 구셀쿠맙이 제공되었다. 구셀쿠맙은 공동 1차 평가변수 및 모든 주요 2차 평가변수에 대해 위약 및/또는 아달리무맙보다 우수하였다(모두 P < .001). 위약과 비교하여, 구셀쿠맙이 투여된 환자의 유의하게 더 높은 비율이 16주차에 IGA 0/1(6.9% 대 85.1%) 및 PASI 90(2.9% 대 73.3%)을 달성했다. 마찬가지로 구셀쿠맙 그룹의 PASI 100 반응은 24주와 48주차에 아달리무맙 그룹에 속한 자들보다 유의하게 더 높았다(P < .001). 16주차에 구셀쿠맙을 개시한 후, 위약 교차 그룹의 환자는 구셀쿠맙 그룹에서 관찰된 것과 유사한 반응을 달성했다. VOYAGE 1은 건선의 발병기전에서 IL-23의 역할을 확인한다. TNF-α 차단과 비교할 때, IL-23 경로의 선택적 표적화는 유리한 안전성 특성을 유지하면서 더 높은 정도의 효능으로 더 많은 건선 특이적 사이토카인 억제를 제공한다(문헌[Blauvelt, A,et al., J Investig Dermatol., 135: 1946-1953 (2015)]).
VOYAGE 1은 초기 시험 후 4년 동안 환자를 추적한 확장 표지 시험이었다. 환자들은 처음에 Tremfya 또는 위약을 투여받도록 무작위 배정되었지만 16주차에 모든 사람들이 Tremfya를 투여받았다. VOYAGE 1 연구에 따르면 처음에 Tremfya 또는 위약을 투여한 후 16주차에 Tremfya로 교차한 개체의 조합된 그룹에서 Tremfya를 투여받은 환자의 82%가 4년인 204주차에 Psoriasis Area Severity Index(PASI 90)의 적어도 90% 개선을 나타내고, 조사관의 종합 평가(IGA) 점수가 제거(0) 또는 최소 질병(1)인 것으로 나타났다.
건선성 관절염(PsA)은 건선 환자의 최대 40%에서 발생하는 만성 염증 근골격 질병이다. 결과적으로, PsA는 건선과 많은 공통 병원성 경로를 공유하는 질병 내의 질병으로 고려될 수 있다. 건선은 일반적으로 환자의 70%에서 PsA보다 먼저 발생하며, 15%의 환자에서 염증 피부 및 관절 질병이 동시에 발생하고 나머지 환자에서는 염증 관절염이 피부병보다 먼저 발생한다. 결과적으로, PsA를 가진 거의 모든 환자는 건선이 발생할 것이나, PsA의 임상 결과 및 경과는 매우 이질적이며 발병 관절의 분포를 기반으로 한 PsA의 5가지 뚜렷한 패턴이 기재되어 있다(문헌[Dobbin-Sears, I et al. Ther Adv Chronic Dis,. 9(10) 191 -198 (2018)]).
PsA는 말초 관절염, 축 질병, 골부착염, 손발톱염 및 피부 및 손발톱 질병의 조합을 포함하는 관절 및 관절외 징후를 갖는 이질적 병태이다(문헌[Quireo, R and Coto-Sequra, P, Expert Opinion On Biological Therapy, 18:9, 931-935 (2018)]). 선천 및 후천 면역 반응을 모두 활성화하는 유전적, 면역학적 및 환경적 인자는 PsA의 발병기전에 중요한 역할을 하는 것으로 보인다. 질병이 진행됨에 따라 환자는 다수의 패턴을 나타낼 수 있으며 관절염의 한 하위 집합에 제한되지 않다. PsA 환자의 약 2/3는 종종 기능 상실 및 장애와 관련된 진행성 관절 손상을 경험한다.
전염증 IL-23/IL-23 수용체 신호전달 축은 PsO 및 PsA 둘 모두에 관련되어 있다. 특히 Th-17 축(IL-23에 의해 억제됨)은 건선과 PsA 모두의 면역 병인 발생에 중요한 역할을 하는 것으로 고려된다. IL-23/IL-23-R 상호작용은 Th-17 세포의 IL-23 의존성 분화 및 활성화를 유도하고, IL-17 및 IL-22의 생성 및 분비는 활막 및 피부 염증 및 뼈 재건을 유발한다. PsA 병리와 특히 관련이 있는 IL-17은 RANKL의 상향 조절을 통해 골 침식을 촉진한다. 혼입 데이터 분석 결과에 따르면 우스테키누맙-치료된 환자(투여량에 관계없이)는 활성 PsA 환자에서 방사선학적으로 관절 손상의 진행을 유의하게 억제했다(문헌[Kavanaugh, A et al. Ann. Rheum. Dis. 73(6):1000-1006 (2014)]). 이는 대부분의 PsA 환자에서 발생하는 방사선학적 손상에서 IL-23 및 하류 Th17 경로의 역할을 뒷받침한다.
인간의 주요 염증 장 질병(IBD)인 크론병(CD) 및 궤양성 대장염(UC)은 둘 모두 장의 완전성 및 기능을 변이시키는 만성 조직 염증을 특징으로 하는 만성 재발 질병이다. 염증 장질병(IBD)(예를 들어, 크론병(CD) 및 궤양성 대장염(UC)) 환자의 장 점막, 혈장 및 혈청에서 인터루킨(IL)-23 및 T 헬퍼(Th) 17 세포 사이토카인의 수준 증가가 나타났다.
IL-23 및 IL-17 세포 경로의 요소를 암호화하는 다수의 유전자의 변이체는 IBD 위험과 관련이 있다. 특히, 위치 381의 아르기닌에서 글루타민으로의 아미노산 변화를 암호화하는 IL-23 수용체 유전자의 기능 상실 변이체는 IL-23 노출 시 STAT3 신호전달 감소 및 Th17 세포 반응 감소로 인해 IBD 위험을 감소시키는 것으로 관찰되었다(문헌[Barrett, JC et al. Nat. Genet. 40:955-962 (2008), Duerr, RH et al. Science 314:1461-1463 (2006), Allocca, M et al. Best Practice & Res. Clin. Gastro. 32-33:95-102 (2018)]).
크론병(CD)은 위장계의 재발성 및 침범을 특징으로 하는 만성 면역-매개된 병태이다. CD는 선천적 및 후천적 면역 반응의 조절 장애를 특징으로 한다. 병태생리학적 기전이 완전히 이해되지는 않았지만, 이 질병은 유전적으로 소인이 있는 개체의 장내 공생 식물군과 숙주 미생물 방어 간의 상호작용의 결과일 가능성이 있으며, 결과적으로 크론병에서 경벽 염증 반응을 일으킬 수 있다(문헌[Deepak, P 및 Loftus, E, Drug Design, Development and Therapy (10) 3685-3698) (2016)]). 장기간에 걸쳐 지속적인 경벽 염증 반응은 종종 입원 및/또는 수술이 필요한 협착 및/또는 누공의 발병으로 이어진다. IL-23/IL-17 경로의 발견 이후 CD에 대한 치료 패러다임은 비특이적 면역억제 요법(즉, 메토트렉세이트)에서 IL-2 및/또는/IL-17 경로를 표적화하는 면역요법으로 이동했다.
UC는 고름과 점액을 생성하는 작은 개방성 궤양 또는 궤양을 발생시키는 대장의 지속적인 점막 염증을 유발하는 만성 재발-관해 염증 장 질병이다. 미국에는 궤양성 대장염 환자는 약 100만 명에 달하고 UC가 유럽에서 260만 명에게 발병한 것으로 추산된다. 이 질병은 임의의 인종 또는 민족 그룹의 사람들에게 발병할 수 있지만 남성이 여성보다 진단될 가능성이 더 높지만 백인들 사이에서 더 흔하다. UC의 병인은 잘 알려져 있지 않지만 결장에서 만성 염증을 유발하는 유전적 소인을 가진 대상체에서 미생물군(미생물 식물군 및 병원체)에 대한 비정상적인 면역 반응에 부분적으로 기인하는 것으로 고려된다. 궤양성 대장염은 Th2형 사이토카인 특성을 나타내는 것으로 알려져 있다.
IBD에 대한 임상 조사 중인 IL-23-특이적 p19 길항제는 브라지쿠맙(MEDI2070), 리산키주맙(BI 655066), 미리키주맙(LY3074828), 및 구셀쿠맙(Tremfya, Janssen)을 포함한다. 현재까지 항-p19(항-IL-23) 항체인 브라지쿠맙과 리산키주맙은 II상 시험에서 중등도 내지 중증 CD에 효과적인 것으로 보고되었다.
II상 시험에서, 미리키주맙은 최근 중등도 내지 중증 UC에 효과적인 것으로 나타났다. 연구된 모든 투여량에서 위약으로 치료한 환자의 4.8%와 비교하여 미리키주맙으로 치료받은 환자의 11.5 퍼센트 내지 22.6 퍼센트가 임상적 관해를 달성하였다. 또한 미리키주맙으로 치료한 환자의 비율이 위약과 비교하여 12주차에 내시경적 관해 및 증상적 관해를 달성했다. 현재 IBD 치료에 승인된 p-19 선택적 항체는 없다. 항p19 제제(리산키주맙, 브라지쿠맙, 구셀쿠맙)의 임상 2상 및 3상이 진행 중이며, 효능 및 안전성 자체뿐만 아니라, 다수의 생물학적 제제와의 조합 치료의 진화하는 치료 개념 및 기존 생물학적 제제와 비교했을 때의 일대일 효능 등에 대한 추가 정보를 제공할 예정이다.
건선성 관절염과 같은 강직성 척추염(AS)은 IL-23 경로와 유전적으로 관련된 또 다른 척추관절병증이며; 비가역적인 척추 융합으로 이어질 수 있는 척추 염증과 관련된 통증성 병태이다. AS는 일반적으로 기존의 질병 수정 항류마티스 약물(DMARD)에 반응하지 않으며 AS에 대한 전신 요법은 비-스테로이드성 항-염증 약물(NSAID) 및 종양 괴사 인자 억제제로 이루어진다.
여러 증거 계통에서 IL-23이 AS에서 유망한 치료 표적으로 확인되었다(문헌[Paine A, et al. Curr. Opin. Rheumatol. 28:359-67 (2016)]). 유전자 수준에서, 사계-대조 게놈-범위 관련 연구에서 IL-23 수용체(IL-23R) 다형성이 AS 발병 위험 증가와 관련이 있음이 입증되었다(문헌[Reveille JD, et al Genet 42:123-7 (2010)]). 또한, IL-23R R381Q 다형성의 보호 효과는 AS에서 관찰된다(문헌[Sarin R, et al. Proc Natl Acad Sci USA; 108:9560-58 (2011)]). AS 환자의 후관절에서 IL-23-생성 세포의 증가된 수가 발견되었고(문헌[Appel H, et al. Arthritis Rheum; 65:1522-9 (2013)]), IL-23-반응성 T 헬퍼(Th) 22(Th22), Th17 및 감마/델타 T-세포의 수는 AS 환자로부터의 혈액에서 증가한다(문헌[Zhang L, et al. PLoS One (7):e31000 (2012)]).
AS의 치료를 위한 IL-17A 억제제인 세쿠키누맙의 최근 승인(문헌[Baeten D. et al., N Engl. J. Med. 373:2534-48 (2015)])은 IL-23의 직접적인 특이적 억제가 AS 환자에게 치료적 이점이 있을 것이라는 임상적 가정을 뒷받침하였다. 그러나 활성 AS 환자에서 리산키주맙의 효능(NCT02047110)을 평가한 무작위 배정, 이중 맹검, 위약 대조, 개념 증명, 투여량 발견 2상 연구의 결과를 보고한 최근 간행물은 리산키주맙 치료가 연구의 1차 평가변수를 충족하지 못했고 활성 AS 환자에서 위약과 비교하여 임상적으로 유의한 개선의 증거를 보여주지 않았다고 결론지었다(문헌[Baeten D, et al., Annals of the Rheumatic Diseases 77: 1295-1302 (2018)]).
IL-23p19 길항제
IL-23 수용체 복합체는 신호전달 사슬 IL-23R(p19 하위단위 결합)과 쌍을 형성하는 IL-12Rβ1로 이루어진다. IL-23은 T-세포와 자연살해(NK) 세포 표면에 IL-12Rβ1/IL-23R 수용체 복합체로 발현되는 2개의 수용체 사슬에 순차적으로 결합해 세포 활성을 매개한다.
재조합 IL-23의 억제를 위해 선택된 뮤린, 인간화 및 파지 디스플레이 항체가 기재되어 있고; 예를 들어 미국 특허 제 7,491,391호, WIPO Publications WO 1999/05280, WO 2007/0244846, WO 2007/027714, WO 2007/076524, WO 2007/147019, WO 2008/103473, WO 2008/103432, WO 2009/043933 및 WO 2009/082624를 참조한다.
IL-23 사이토카인의 p19 하위단위에 높은 친화도로 결합하는 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 도메인은 이의 활성을 중화시키고 결과적으로 이의 하류 효과를 차단할 수 있다. 현재까지 세(3)개의 항-p19 항체인 구셀쿠맙(TREMFYA®), 틸드라키주맙(ILUMYA®) 및 리산키주맙(SKYRIZI®)이 IMID 치료용으로 FDA 승인을 받았다. 2개의 다른 IL-23p19 하위단위 특이적 항체는 현재 후기 임상 개발 단계에 있는 MEDI2070(브라지쿠맙, 아스트라제네카/메디뮤(Medimmue)) 및 Ly3074828(미리키주맙, 엘리 릴리(Eli Lilly))이다. 미리키주맙은 인간화된 IgG4 단일클론 항체이다. IL-23을 차단함으로써 항-p19-특이적 항체는 전염증 사이토카인과 케모카인의 방출을 억제하여 염증 반응을 약화시킨다.
이 그룹의 IL-23 길항제는 p40 하위단위이 아니라 IL-23의 p19 하위단위를 표적화하기 때문에, IL-12 활성에 영향을 미치지 않는다. 이 기능은 IL-12 및 IL-23이 공유하는 공통 p40 하위단위를 표적화하는 우스테키누맙(STELARA)과 IL-23 수용체 길항제를 구별한다. 우스테키누맙의 효능 및 유리한 안전성 특성에도 불구하고, IMID에 대한 약물 개발은 IL-23/IL-17 경로를 선택적으로 길항하는 제제의 개발로 초점을 옮겼다.
구셀쿠맙(CNTO1959)은 인간 IL-23의 p19 하위단위에 높은 친화도로 결합하는 완전한 인간 단일클론 IgG1, λ 항체이다. 구셀쿠맙은 FDA 승인을 받은 최초의 항-p19-특이적 항체/IL-23 길항제이다. 이는 2017년 7월 13일 신속한 규제 검토를 거쳐 성인 중등도 내지 중증 판상 건선 치료제로 승인되었다. 이는 또한 캐나다, 유럽 연합, 일본 및 전 세계 다수의 국가에서 승인되었다. 구셀쿠맙은 Janssen에 의해 TREMFYA로 판매된다(미국 특허 제 7,935,344호 및 제 7,993,645호).
구셀쿠맙은 면역세포 표면에 발현되는 IL-23 수용체 단백질에 IL-23이 결합하는 것을 방지하여 인간 IL-23의 생리활성을 억제한다. 보다 구체적으로, 구셀쿠맙은 p19 하위단위를 통해 인간 IL-23 사이토카인에 결합하고 IL-23-IL-23R 복합체 형성 및 파트너 수용체 사슬의 후속 세포내 신호전달을 방지한다.
TREMFYA® 개발 프로그램은 현재 활성 건선성 관절염을 치료하기 위한 TREMFYA®의 효능을 평가하는 III상 시험, 크론병에 대한 IIb/III상 연구, 궤양성 대장염에 대한 IIb/III상 시험 및 화농한선염에 대한 구셀쿠맙을 평가하는 또 다른 임상 염구를 포함한다.
Janssen은 최근 구셀쿠맙의 임상 개발을 위장관 질병인 가족성 선종성 용종증(FAP)으로 더욱 확대할 계획이라고 발표했다. Janssen은 약 72명의 환자를 대상으로 구셀쿠맙 대 위약의 효능과 안전성을 평가할 1b상 개념 증명 임상 시험(NCT03649971)을 개시했다. FAP 증후군은 가장 흔한 선종성 용종증 증후군이다. 이는 결장 전체에 수백에서 수천 개의 선종 용종이 조기에 발병하는 것이 특징인 상염색체 우성 유전 질병이다. FAP는 전 세계적으로 약 8,300명 중 1명의 발병률을 나타내고 남녀 모두에게 균등하게 나타나며, 치료하지 않으면 이 증후군 환자는 결장직장암에 걸릴 가능성이 가장 높다. 또한, 다른 악성 종양의 발병 위험이 증가한다. 결장을 제거하는 것은 현재 이러한 환자에서 결장직장암이 발병하는 것을 예방하는 유일한 방법이다.
틸드라키주맙(MK322)은 Merck & Co./Sun Pharmaceutical에서 ILUMYA로 판매하는 인간화된 단일클론 IgG1, κ 항체이다(미국 특허 제 8,404,813호). 틸드라키주맙는 p19 하위단위에 선택적으로 결합하여 IL-23과 수용체의 상호작용을 억제하여 IL-23 매개된 전염증 사이토카인의 방출을 억제한다. 2018년 3월 FDA로부터 중등도 내지 중증 판상 건선을 가진 성인 환자에 대한 사용에 대한 첫 번째 전세계 승인을 받았다.
리산키주맙(BI 655066)은 AbbVie/Boehringer Ingelheim에 의해 SKYRIZI로 판매되는 인간화된 단일클론 IgG1, κ이다(미국 특허 제 8,778,346호). 리산키주맙은 IL-23의 고친화도 항체 길항제로 개발됐다.
리산키주맙은 인터루킨-23의 p19 하위단위(IL-23p19)에 높은 친화도(10 pmol/L 미만의 해리 상수)로 선택적으로 결합한다(문헌[Singh, S, et al., MAbs 7(4)77-791 (2015)]). 이는 IL-23의 p19 하위단위를 선택적으로 표적화하고 마우스 비장세포 분석에서 IL-23-유도(THP-1 세포에 의해 생성된 인간 IL-23) IL-17 생성을 강력하게 억제하며, IC50 값은 약 2 pM이다(문헌[Singh, S, et al., MAbs 7(4)77-791 (2015)]). 리산키주맙의 프레임워크 영역은 FcγR 수용체 및 보체 결합을 감소시키기 위해 Fc 영역에서 2개의 돌연변이로 조작되었다. 보다 구체적으로, Fc 리산키주맙의 Fc 일부는 Fcγ 수용체 및 보체 결합을 감소시키는 2개의 대체 돌연변이(Leu234Ala 및 Leu235Ala)가 있다. 리산키주맙은 2019년 4월 성인의 중등도 내지 중증 판상 건선 치료제로 FDA 승인을 받았다.
항-IL-23p19 항체
본 개시내용의 항-IL-23p19 항체는 IL-23의 p19 하위단위에 결합한다. 바람직하게는, 이러한 항체는 완전히 인간이고 IL-12의 p40 하위단위에 결합하지 않는다.
일 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 표 1에 개시된 CDR (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3) 세트를 갖는 VH를 포함한다. 예를 들어, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 표 1에 개시된 항-IL-23p19 항체 중 하나 이상에서 CDR에 상응하는 CDR 세트를 포함할 수 있다(예를 들어, Hu-2. 18006B 항체의 CDR).
또 다른 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 표 2에 개시된 바와 같은 CDR 세트(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)를 갖는 VL을 포함한다. 예를 들어, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 표 2에 개시된 항-IL-23p19 항체 중 하나 이상에서 CDR에 상응하는 CDR 세트를 포함할 수 있다(예를 들어, Hu-2. 18006B 항체의 CDR).
대안적 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 표 1에 개시된 바와 같은 CDR 세트(HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)를 갖는 VH, 및 표 2에 개시된 바와 같은 CDR 세트(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)를 갖는 VL을 포함한다.
인간 가변 중쇄 도메인의 CDR 서열
항-IL-23p19 Ab CDR1 CDR2 CDR3
Hu-2. 18006B 서열번호 9 서열번호 10 서열번호 11
Hu-4. 18006B 서열번호 15 서열번호 16 서열번호 17
Hu-5. 18006B 서열번호 21 서열번호 22 서열번호 23
Hu-6. 18006B 서열번호 27 서열번호 28 서열번호 29
인간 가변 경쇄 도메인의 CDR 서열
항-IL-23p19 Ab CDR1 CDR2 CDR3
Hu-2. 18006B 서열번호 12 서열번호 13 서열번호 14
Hu-4. 18006B 서열번호 18 서열번호 19 서열번호 20
Hu-5. 18006B 서열번호 24 서열번호 25 서열번호 26
Hu-6. 18006B 서열번호 30 서열번호 31 서열번호 32
실시형태에서, 항체는 인간 IL-23p19에 특이적으로 결합하는 단일클론, 키메라, 인간화된 또는 인간 항체 (또는 이의 항원-결합 부분)일 수 있다.
실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은
(i) CDR1: 서열번호 9, CDR2: 서열번호 10, CDR3: 서열번호 11;
(ii) CDR1: 서열번호 15, CDR2: 서열번호 16, CDR3: 서열번호 17;
(iii) CDR1: 서열번호 21, CDR2: 서열번호 22, CDR3: 서열번호 23; 및
(iv) CDR1: 서열번호 27, CDR2: 서열번호 28, CDR3: 서열번호 29
로 이루어진 군으로부터 선택되는 상보성-결정 영역의 세트 (CDR1, CDR2, 및 CDR3)를 갖는 VH를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은
(i) CDR1: 서열번호 12, CDR2: 서열번호 13, CDR3: 서열번호 14;
(ii) CDR1: 서열번호 18, CDR2: 서열번호 19, CDR3: 서열번호 20;
(iii) CDR1: 서열번호 24, CDR2: 서열번호 25, CDR3: 서열번호 26; 및
(iv) CDR1: 서열번호 30, CDR2: 서열번호 31, CDR3: 서열번호 32
로 이루어진 군으로부터 선택되는 상보성-결정 영역의 세트 (CDR1, CDR2, 및 CDR3)를 갖는 VL을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은
(a)
(i) CDR1: 서열번호 9, CDR2: 서열번호 10, CDR3: 서열번호 11;
(ii) CDR1: 서열번호 15, CDR2: 서열번호 16, CDR3: 서열번호 17;
(iii) CDR1: 서열번호 21, CDR2: 서열번호 22, CDR3: 서열번호 23; 및
(iv) CDR1: 서열번호 27, CDR2: 서열번호 28, CDR3: 서열번호 29
로 이루어진 군으로부터 선택되는 상보성-결정 영역의 세트 (CDR1, CDR2, 및 CDR3)를 갖는 VH; 및
(b)
(i) CDR1: 서열번호 12, CDR2: 서열번호 13, CDR3: 서열번호 14;
(ii) CDR1: 서열번호 18, CDR2: 서열번호 19, CDR3: 서열번호 20;
(iii) CDR1: 서열번호 24, CDR2: 서열번호 25, CDR3: 서열번호 26; 및
(iv) CDR1: 서열번호 30, CDR2: 서열번호 31, CDR3: 서열번호 32
로 이루어진 군으로부터 선택되는 상보성-결정 영역의 세트 (CDR1, CDR2, 및 CDR3)를 갖는 VL
을 포함한다.
실시형태에서, 항체는
(i) VH: CDR1: 서열번호 9, CDR2: 서열번호 10, CDR3: 서열번호 11, VL: CDR1: 서열번호 12, CDR2: 서열번호 13, CDR3: 서열번호 14;
(ii) VH: CDR1: 서열번호 15, CDR2: 서열번호 16, CDR3: 서열번호 17, VL: CDR1: 서열번호 18, CDR2: 서열번호 19, CDR3: 서열번호 20;
(iii) VH: CDR1: 서열번호 21, CDR2: 서열번호 22, CDR3: 서열번호 23, VL: CDR1: 서열번호 24, CDR2: 서열번호 25, CDR3: 서열번호 26; 및
(iv) VH: CDR1: 서열번호 27, CDR2: 서열번호 28, CDR3: 서열번호 29, VL: CDR1: 서열번호 30, CDR2: 서열번호 31, CDR3: 서열번호 32
로 이루어진 군으로부터 선택되는 상보성-결정 영역의 세트 (CDR1, CDR2 및 CDR3)를 갖는 VH 및 VL의 조합을 포함한다.
실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 : 서열번호 1, 3, 5, 및 7으로 이루어진 군으로부터 선택되는 가변 중쇄 서열; 및/또는 : 서열번호 2, 4, 6, 및 8로 이루어진 군으로부터 선택되는 가변 경쇄 서열을 포함한다.
실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 다음 조합으로부터 선택되는 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열의 쌍을 포함한다: 서열번호 1을 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열번호 2를 포함하는 가변 경쇄 서열; 서열번호 3을 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열번호 4를 포함하는 가변 경쇄 서열; 서열번호 5를 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열번호 6을 포함하는 가변 경쇄 서열; 및 서열번호 7을 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열번호 8을 포함하는 가변 경쇄 서열. 당업자는 가변 경쇄 및 가변 중쇄가 독립적으로 선택되거나 혼합 및 매칭되어 위에서 확인된 쌍과 구별되는 가변 중쇄 및 가변 경쇄의 조합을 포함하는 항-IL-23p19 항체를 제조할 수 있음을 이해할 것이다.
실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 다음 조합으로부터 선택되는 가변 중쇄 및 가변 경쇄 서열의 쌍을 포함한다: 서열번호 1에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 중쇄 서열 및 서열번호 2에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 경쇄 서열; 서열번호 3에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 중쇄 서열 및 서열번호 4에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 경쇄 서열; 서열번호 5에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 중쇄 서열 및 서열번호 6에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 경쇄 서열; 및 서열번호 7에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 중쇄 서열 및 서열번호 8에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 경쇄 서열. 당업자는 가변 경쇄 및 가변 중쇄가 독립적으로 선택되거나 혼합 및 매칭되어 위에서 확인된 쌍과 구별되는 가변 중쇄 및 가변 경쇄의 조합을 포함하는 항-IL-23p19 항체를 제조할 수 있음을 이해할 것이다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체(예를 들어, 길항제 항체)는 IL-23의 p19 하위단위에 고친화도로 결합하고 관련된 사이토카인 패밀리 구성원인 IL-12의 p40 하위단위에는 결합하지 않는다.
일부 실시형태에서, 항체는 전장 항체이다. 다른 실시형태에서, 항체는 예를 들어, Fab, Fab', F(ab)2, Fv, 도메인 항체 (dAbs), 및 상보성-결정 영역 (CDR) 단편, 단일-사슬 항체 (scFv), 키메라 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니항체, 및 폴리펩타이드에 IL-23 특이적 결합을 부여하기에 충분한 면역글로불린의 적어도 일부분을 포함하는 폴리펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체 단편을 포함하는 항체 단편이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-IL-23p19 항체의 가변 영역 도메인은 C-말단 아미노산에서 적어도 하나의 다른 항체 도메인 또는 이의 단편에 공유 결합에 의해 부착될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 가변 영역 도메인에 존재하는 VH 도메인은 면역글로불린 CH1 도메인 또는 이의 단편에 연결될 수 있다. 유사하게, VL 도메인은 CK 도메인 또는 이의 단편에 연결될 수 있다. 이러한 방식으로, 예를 들어, 항체는 항원-결합 도메인이 각각의 C-말단에서 CH1 및 CK 도메인에 공유 결합에 의해 연결된 관련 VH 및 VL 도메인을 포함하는 Fab 단편일 수 있다. CH1 도메인은 예를 들어 Fab 단편에 존재하는 힌지 영역 또는 힌지 영역 도메인의 일부를 제공하거나 항체 CH2 및 CH3 도메인과 같은 추가 도메인을 제공하기 위해 추가 아미노산으로 확장될 수 있다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체의 가변 영역 도메인은 C-말단 아미노산에서 적어도 하나의 다른 항체 도메인 또는 이의 단편에 공유 결합에 의해 부착될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 가변 영역 도메인에 존재하는 VH 도메인은 면역글로불린 CH1 도메인 또는 이의 단편에 연결될 수 있다. 유사하게, VL 도메인은 CK 도메인 또는 이의 단편에 연결될 수 있다. 이러한 방식으로, 예를 들어, 항체는 항원-결합 도메인이 각각의 C-말단에서 CH1 및 CK 도메인에 공유 결합에 의해 연결된 관련 VH 및 VL 도메인을 포함하는 Fab 단편일 수 있다. CH1 도메인은 예를 들어 Fab' 단편에 존재하는 힌지 영역 또는 힌지 영역 도메인의 일부를 제공하거나 항체 CH2 및 CH3 도메인과 같은 추가 도메인을 제공하기 위해 추가 아미노산으로 확장될 수 있다.
따라서, 일 실시형태에서, 항체 단편은 본 명세서에 기재된 바와 같은 적어도 하나의 CDR을 포함한다. 항체 단편은 본 명세서에 기재된 바와 같이 적어도 2, 3, 4, 5 또는 6개의 CDR을 포함할 수 있다. 항체 단편은 본 명세서에 기재된 항체의 적어도 하나의 가변 영역 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 가변 영역 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성일 수 있으며 일반적으로 인간 IL-23p19에 대한 결합에 관여하는 적어도 하나의 CDR 서열, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 및/또는 CDR-L3을 포함하고, 이는 하나 이상의 프레임워크 서열에 인접하거나 프레임 내에서 존재한다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 단일클론 항체이다. 일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 인간 항체이다. 대안적 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 뮤린 항체이다. 일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체는 키메라 항체, 이중특이적 항체, 또는 인간화된 항체이다.
추가 양상에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 하기 특성 중 하나 이상을 나타낸다:
(a) 인간 IL-23p19에 특이적이며 IL-23이 수용체(IL-23R)에 결합하는 것을 차단하는 능력이 있고;
(b) IL-23 수용체 신호 전달과의 IL-23p19 상호작용을 억제, 간섭 또는 조절하고;
(c) IL-23에 의해 유도된 STAT3 활성화를 억제하고;
(d) 마우스 비장세포에서 인간 IL-23에 의해 유도된 IL-17 생성을 억제하고;
(e) PBMC에서 활성화된 인간 T-세포에서 인간 IL-23에 의해 유도된 IL-17 생성을 억제하고;
(f) IL-12Rβ1 신호 전달과 IL-23 상호작용을 억제하지 않고;
(g) 인간 활성화된 T-세포(PBMC)에서 인간 IL-12 유도 인터페론 감마 생성을 억제하지 않고;
(h) 인간 활성화된 T-세포(PBMC)에서 사이노몰구스 원숭이 IL-12 유도된 인터페론 감마 생성을 억제하지 않고;
(i) 뮤린의 건선-유사 모델에서 인간 IL-23에 의해 유도된 피부 염증을 억제한다.
일 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 IL-23과 관련된 생물학적 반응 중 적어도 하나를 감소, 억제, 간섭 및/또는 조절할 수 있고, 이와 같이, IL-23 관련 질병 또는 장애의 효과 개선에 유용하다. 이러한 항체 및 이의 항체 단편은 예를 들어 IL-23 신호전달, Th17 세포의 IL-23 활성화, NK 세포의 IL-23 활성화를 감소, 억제, 간섭 및/또는 조절하거나, 전염증 사이토카인 생성을 유도하는데 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 당업자는 보존적 아미노산 치환이 한 아미노산에서, 예를 들어 유사한 측쇄와 같은 유사한 구조적 또는 화학적 특성을 갖는 다른 아미노산으로의 치환임을 인식할 것이다. 예시적인 보존적 치환은 당업계, 예를 들어 문헌[Watson et al., Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Publication Company, 4th Ed. (1987)]에 기재되어 있다.
"보존적 변형"은 아미노산 서열을 포함하는 항체의 결합 특성에 유의한 영향을 미치거나 변경하지 않는 아미노산 변형을 지칭한다. 보존적 변형에는 아미노산 치환, 추가 및 결실이 포함된다. 보존적 치환은 아미노산이 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 잘 정의되어 있으며 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 비하전 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레오닌, 티로신, 트립토판), 방향족 측쇄(예를 들어, 트리피토페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘, 티로신), 지방족 측쇄(예를 들어, 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 세린, 트레오닌), 아미드(예를 들어, 아스파라긴, 글루타민), 베타-분지 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 황-포함 측쇄(시스테인, 메티오닌)를 갖는 아미노산을 포함한다. 더욱이, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발에 대해 이전에 기재된 바와 같이 폴리펩타이드의 임의의 천연 잔기는 또한 알라닌으로 치환될 수 있다(문헌[MacLennan et al. (1998) Acta Physiol Scand Suppl 643: 55-67; Sasaki et al. (1998) Adv Biophys 35: 1-24]). 본 발명의 항체에 대한 아미노산 치환은 공지된 방법, 예를 들어 PCR 돌연변이유발에 의해 이루어질 수 있다(미국 특허 제 4,683,195호).
일 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 키메라 또는 인간화된 항체로서 형성된 Hu-2. 18006B, Hu-4. 18006B, Hu-5. 18006B, 또는 Hu-6. 18006B 항체의 6개의 CDR 영역 모두를 포함한다. 다른 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 개시된 완전한 인간 항체 중 하나의 CDR 영역의 6개 모두를 포함한다.
항체 생성 방법
항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 수용체는 가용성 재조합 인간 IL-23 단백질, 또는 이의 담체 단백질과 접합된 단편 또는 펩타이드로 면역화될 수 있다. 적절한 면역화 방법을 사용할 수 있다. 이러한 방법에는 애주번트(adjuvant), 기타 면역 자극제, 반복 부스터 면역화 및 하나 이상의 면역화 경로의 사용이 포함될 수 있다.
인간 IL-23의 임의의 적합한 공급원은 본 명세서에 개시된 조성물 및 방법의 비-인간 또는 인간 항-IL-23p19 항체의 생성을 위한 면역원으로서 사용될 수 있다.
상이한 형태의 IL-23 항원을 사용하여 생물학적 활성을 생성하기에 충분한 항체를 생성할 수 있다. 따라서, 유발 IL-23 항원은 단일 에피토프, 다중 에피토프, 또는 전체 단백질 단독일 수 있거나 하나 이상의 면역원성 향상제와 조합된 것일 수 있다. 일부 양상에서, 유발 항원은 단리된 가용성 전장 단백질, 또는 전장 서열 미만을 포함하는 가용성 단백질(예를 들어, IL-23의 특정 부분 또는 에피토프를 포함하는 펩타이드로 면역화)이다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "일부"는 대상 항원의 면역원성 에피토프를 구성하기 위한 적절한 경우 최소 수의 아미노산 또는 핵산을 지칭한다. 다음에 제한되는 것은 아니나 아데노바이러스 벡터(vector), 플라스미드, 및 양이온성 지질과 같은 비바이러스 벡터를 포함하는 대상 세포의 형질전환에 적합한 임의의 유전 벡터가 사용될 수 있다.
마우스, 설치류, 영장류, 인간 등과 같은 다양한 포유류 숙주로부터 단일클론 항체(mAb)를 제조하는 것이 바람직하다. 이러한 단일클론 항체를 제조하는 기술에 대한 설명은 예를 들어 문헌[Sties et al. (eds.) BASIC AND CLINICAL IMMUNOLOGY (4th ed.) Lance Medical Publication, Los Altos, CA], 및 본 명세서에 인용된 참조 문헌; 문헌[Harlow and Lane (1988) ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL CSH Press; Goding (1986) MONOCLONAL ANTIBODIES: PRINCIPLES AND PRACTICE (2nd ed.) Academic Press, New York, NY]에서 찾을 수 있다. 일반적으로 적절한 항원으로 면역화된 동물의 비장 세포는 일반적으로 골수종 세포와의 융합에 의해 불멸화된다. 문헌[Kohler and Milstein (196) Eur. J. Immunol. 6:511-519]을 참조한다. 불멸화의 대안적인 방법은 엡스타인 바 바이러스(Epstein Barr Virus), 종양유전자 또는 레트로바이러스를 사용한 형질전환, 또는 당업계에 공지된 다른 방법을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Doyle et al. (eds. 1994 and periodic supplements) CELL AND TISSUE CULTURE: LABORATORY PROCEDURES, John Wiley and Sons, New York, NY]을 참조한다. 단일 불멸화 세포로부터 발생하는 콜로니는 항원에 대한 적절한 특이성 및 친화도의 항체 생성에 대해 스크리닝되며, 이러한 세포에 의해 생성된 단일클론 항체의 수율은 척추동물 숙주의 복강 내로의 주사를 포함하는 다양한 기술에 의해 향상될 수 있다. 대안적으로, 예를 들어 문헌[Huse et al., (1989) Science 246: 1275-1281]에 의해 요약된 일반 프로토콜에 따라 인간 B 세포로부터 DNA 라이브러리를 스크리닝함으로써 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 DNA 서열을 단리할 수 있다. 따라서, 항체는 당업자에게 친숙한 다양한 기술에 의해 획득될 수 있다.
다른 적합한 기술은 파지, 효모, 바이러스 또는 유사한 벡터(vector)에서 항체 라이브러리의 선택을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Huse et al., supra; 및 Ward et al., (1989) Nature 341:544-546]을 참조한다. 본 명세서에 개시된 폴리펩타이드 및 항체는 키메라 또는 인간화된 항체를 포함하여 변형의 존재 또는 부재 하에 사용될 수 있다. 흔히, 폴리펩타이드와 항체는 검출 가능한 신호를 제공하는 물질을 공유 결합에 의해 또는 비공유 결합에 의해 연결함으로써 표지될 것이다. 다양한 표지 및 접합 기술이 알려져 있으며 과학 및 특허 문헌 모두에 광범위하게 보고되어 있다. 적합한 표지는 방사성핵종, 효소, 기질, 보조인자, 억제제, 형광성 모이어티, 화학발광성 모이어티, 자성 입자 등을 포함한다. 이러한 표지의 사용을 교시하는 특허에는 미국 특허 제 3,817,837호; 제 3,850,752호; 제 3,996,345호; 제 4,277,437호; 제 4,275,149호; 및 제 4,366,241호를 포함한다. 또한, 재조합 면역글로불린이 생성될 수 있거나(문헌[Cabilly 미국 특허 제 4,816,567호; 및 Queen et al. (1989) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86: 10029-10023] 참조); 형질전환 마우스에서 제조된다(문헌[Nils Lonberg et al., (1994), Nature 368:856-859; and Mendez et al. (1997) Nature Genetics 15: 146-156; TRANSGENIC ANIMALS AND METHODS OF USE (WO 2012/62118)], Medarex, Trianni, Abgenix, Ablexis, OminiAb, Harbour 및 기타 기술 참조).
일부 실시형태에서, IL-23p19에 결합하는 생성된 항체의 능력은 표면 플라즈몬 공명(SPR), 옥텟(BLI), ELISA, 웨스턴 블롯, 면역형광, 유세포 분석, 주화성 분석 및 세포 이동 분석과 같은 표준 결합 분석을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 양상에서, 생성된 항체는 또한 IL-23 유도된 Stat3 인산화, IL-17 생성 및/또는 IFN-γ 생성의 억제를 포함하여 IL-23에 의한 IL-23 수용체 β1 신호 전달의 차단 억제, 및 IL-23p19 및/또는 IL-23p19-매개된 염증 미세환경 연속 효과 억제 능력에 대해 평가할 수 있다.
세포로부터 제조된 항체 조성물은 예를 들어 수산화인회석 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 및 친화도 크로마토그래피를 사용하여 정제할 수 있으며, 친화도 크로마토그래피가 대표적인 정제 기술이다. 친화도 리간드로서 단백질 A의 적합성은 항체에 존재하는 임의의 면역글로불린 Fc 도메인의 종 및 이소형에 따라 다르다. 단백질 A는 인간 γ1, γ2 또는 γ4 중쇄에 기반한 항체를 정제하는데 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Lindmark et al., 1983 J. Immunol. Meth. 62:1-13] 참조). 단백질 G는 모든 마우스 이소형 및 인간 γ3에 권장된다(예를 들어, 문헌[Guss et al., 1986 EMBO J. 5:1567-1575] 참조). 친화도 리간드가 부착된 매트릭스는 대부분 아가로스이지만 다른 매트릭스도 사용될 수 있다. 제어된 다공 유리 또는 폴리(스티렌디비닐) 벤젠과 같은 기계적으로 안정한 매트릭스는 아가로스로 달성할 수 있는 것보다 더 빠른 유속과 더 짧은 처리 시간을 가능하게 한다. 항체가 CH3 도메인을 포함하는 경우, Bakerbond ABX™ 수지(J. T. Baker, Phillipsburg, N.J.)가 정제에 유용하다. 이온 교환 컬럼에서 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 크로마토그래피, 헤파린 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환 수지 (예를 들어, 폴리아스파르트산 컬럼)에 대한 SEPHAROSE™ 크로마토그래피, 크로마토포커싱, SDS-PAGE, 황산암모늄 침전과 같은 단백질 정제를 위한 기타 기술이 또한 회수할 항체에 따라 이용 가능하다.
임의의 예비 정제 단계(들) 후에, 대상 항체 및 오염물을 포함하는 혼합물은 일반적으로 낮은 염 농도(예를 들어, 약 0 내지 0.25 M 염)에서 수행되는 약 2.5 내지 4.5의 pH에서 용출 완충액을 사용하여 낮은 pH 소수성 상호작용 크로마토그래피에 적용될 수 있다.
또한, 본 명세서에 정의된 바와 같은 낮은, 중간 및 높은 엄격도 조건 하에 본 개시내용의 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오타이드 서열(들)로 표시되는 뉴클레오타이드 서열의 전부 또는 일부(예를 들어, 가변 영역을 암호화하는 부분)에 혼성화하는 핵산이 포함된다. 혼성화 핵산의 혼성화 부분은 통상적으로 길이가 적어도 15개(예를 들어, 20, 25, 30 또는 50개) 뉴클레오타이드이다. 혼성화 핵산의 혼성화 부분은 항-IL-23p19 폴리펩타이드(예를 들어, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역), 또는 이의 상보체를 암호화하는 핵산의 일부 또는 전부의 서열과 적어도 80%, 예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 동일하다. 본 명세서에 기재된 유형의 혼성화 핵산은 예를 들어 클로닝 프로브, 프라이머, 예를 들어 PCR 프라이머, 또는 진단 프로브로서 사용될 수 있다.
폴리뉴클레오타이드, 벡터, 및 세포
다른 실시형태는 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편을 암호화하는 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드, 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터 및 세포, 및 항체의 생성을 위한 재조합 기술을 포함한다. 단리된 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어 전장 단일클론 항체, Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, 디아바디, 선형 항체, 단일 사슬-항체 분자, 미니항체, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하는 항-IL-23p19 항체의 임의의 적절한 형태를 암호화할 수 있다.
일부 실시형태는 서열번호 2, 4, 6 및 8 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 경쇄 가변 영역을 암호화하는 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 실시형태는 서열번호 1, 3, 5, 및 7의 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 항체 단편의 중쇄 가변 영역을 암호화하는 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
실시형태에서, 단리된 폴리뉴클레오타이드 서열(들)은
(a) 서열번호 1을 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열번호 2를 포함하는 가변 경쇄 서열;
(b) 서열번호 3을 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열번호 4를 포함하는 가변 경쇄 서열;
(c) 서열번호 5를 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열번호 6을 포함하는 가변 경쇄 서열; 또는
(d) 서열번호 7을 포함하는 가변 중쇄 서열 및 서열번호 8을 포함하는 가변 경쇄 서열
의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화한다.
또 다른 실시형태에서, 단리된 폴리뉴클레오타이드 서열(들)은
(a) 서열번호 1에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 중쇄 서열 및 서열번호 2에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 경쇄 서열;
(b) 서열번호 3에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 중쇄 서열 및 서열번호 4에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 경쇄 서열;
(c) 서열번호 5에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 중쇄 서열 및 서열번호 6에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 경쇄 서열; 또는
(d) 서열번호 7에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 중쇄 서열 및 서열번호 8에 90%, 95%, 또는 99% 동일한 가변 경쇄 서열
의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 갖는 항체 또는 항체 단편을 암호화한다.
항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편을 암호화하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드(들)는 당업계에 공지된 바와 같이 하나 이상의 조절 또는 제어 서열에 융합될 수 있고, 당업계에 공지된 바와 같은 적합한 발현 벡터 또는 세포에 포함될 수 있다. 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 암호화하는 각각의 폴리뉴클레오타이드 분자는 인간 불변 도메인과 같은 불변 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 독립적으로 융합되어 온전한 항체의 생성을 가능하게 할 수 있다. 대안적으로, 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 부분은 함께 융합되어 단일 사슬 항체의 생성을 위한 주형을 제공할 수 있다.
재조합 생성을 위해, 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 클로닝(DNA의 증폭) 또는 발현을 위해 복제가능한 벡터에 삽입된다. 재조합 항체를 발현시키기 위한 많은 적합한 벡터가 이용가능하다. 벡터 성분은 일반적으로 다음에 제한되는 것은 아니나, 신호 서열, 복제 기점, 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 요소, 프로모터, 및 전사 종결 서열 중 하나 이상을 포함한다.
항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 또한 융합 폴리펩타이드로서 생성될 수 있으며, 항체 또는 단편은 성숙한 단백질 또는 폴리펩타이드의 아미노 말단에 특정 절단 부위를 갖는 다른 폴리펩타이드 또는 신호 서열과 같은 이종 폴리펩타이드와 융합된다. 선택된 이종 신호 서열은 일반적으로 세포에 의해 인식되고 처리되는 것(즉, 신호 펩티다제에 의해 절단됨)이다. 항-IL-23p19 항체 신호 서열을 인식 및 처리하지 않는 원핵 세포의 경우, 신호 서열은 원핵 신호 서열로 치환될 수 있다. 신호 서열은 예를 들어 알칼리성 포스파타제, 페니실리나제, 지단백질, 열-안정성 장독소 II 리더 등일 수 있다. 효모 분비의 경우, 천연 신호 서열은 예를 들어 효모 인버타제(invertase) 알파-인자(사카로마이세스(Saccharomyces) 및 클루이베로마이세스(Kluyveromyces) α-인자 리더 포함), 산 포스파타제, C. 알비칸스(C. albicans) 글루코아밀라제, 또는 WO 90/13646에 기재된 신호로부터 획득되는 리더 서열로 치환될 수 있다. 포유류 세포에서 포유류 신호 서열뿐만 아니라, 바이러스 분비 리더, 예를 들어 단순 포진 gD 신호가 사용될 수 있다. 이러한 전구체 영역의 DNA는 리딩 프레임에서 항-IL-23p19 항체를 암호화하는 DNA에 연결된다.
발현 및 클로닝 벡터는 벡터가 하나 이상의 선택된 세포에서 복제될 수 있게 하는 핵산 서열을 포함한다. 일반적으로, 클로닝 벡터에서 이 서열은 벡터가 숙주 염색체 DNA와 독립적으로 복제할 수 있게 하는 것이고, 복제 기점 또는 자가 복제 서열을 포함한다. 이러한 서열은 다양한 박테리아, 효모 및 바이러스에 대해 잘 알려져 있다. 플라스미드 pBR322의 복제 기점은 대부분의 그람 음성 박테리아인 2-υ에 적합한다. 플라스미드 유래는 효모에 적합하고 다양한 바이러스 유래(SV40, 폴리오마, 아데노바이러스, VSV 및 BPV)은 포유류 세포에서 클로닝 벡터에 유용하다. 일반적으로 복제 기점 구성 요소는 포유류 발현 벡터에 필요하지 않다(SV40 기점은 일반적으로 초기 프로모터를 포함하기 때문에 사용할 수 있음).
발현 및 클로닝 벡터는 발현의 확인을 용이하게 하기 위해 선택가능한 마커를 암호화하는 유전자를 포함할 수 있다. 통상적인 선택 가능한 마커 유전자는 항생제 또는 기타 독소(예를 들어, 암피실린, 네오마이신, 메토트렉세이트 또는 테트라사이클린)에 대한 내성을 부여하거나 대안적으로 보체 영양요구성 결핍이거나 다른 대안에서 복합 배지에 존재하지 않는 특정 영양소를 공급하는 단백질을 암호화하며, 예를 들어 유전자는 바실리(Bacilli)에 대한 D-알라닌 라세마제를 암호화한다.
비치료적 용도
본 명세서에 기재된 항-IL-23p19 항체 또는 항체 단편은 친화도 정제제로서 유용하다. 이 과정에서, 항체는 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 단백질 A 수지와 같은 고체상에 고정된다. 고정된 항체를 정제할 IL-23p19 단백질(또는 이의 단편)을 포함하는 샘플과 접촉시킨 후, 지지체를, 고정된 항체에 결합되는 IL-23p19 단백질을 제외한 샘플에서 실질적으로 모든 물질을 제거하는 적합한 용매로 세척한다. 마지막으로 지지체를 항체로부터 IL-23p19 단백질을 방출하는 다른 적합한 용매로 세척한다.
항-IL-23p19 항체 또는 항체 단편은 또한 IL-23p19 단백질을 검출 및/또는 정량화하기 위한 진단 분석, 예를 들어 특정 세포, 조직 또는 혈청에서 IL-23p19 발현을 검출하는데 유용하다. 항-IL-23p19 항체는 예를 들어 소정의 치료 및/또는 예방 요법의 효능을 결정하기 위한 임상 시험 절차의 일부로서 질병의 발병 또는 진행을 모니터링하기 위해 진단적으로 사용될 수 있다. 항-IL-23p19 항체를 검출 가능한 물질에 연결함으로써 검출을 용이하게 할 수 있다. 검출 가능한 물질의 예로는 다양한 효소, 보결 그룹, 형광 물질, 발광 물질, 생물 발광 물질, 방사성 물질, 다양한 양전자 방출 단층 촬영을 사용하는 양전자 방출 금속 및 비방사성 상자성 금속 이온이 포함된다. 예를 들어, 본 개시내용에 따른 진단으로서 사용하기 위한 항체에 접합될 수 있는 금속 이온에 대한 미국 특허 제 4,741,900호를 참조한다.
항-IL-23p19 항체 또는 항체 단편은 IL-23p19-관련 장애(예를 들어, IL-23p19의 비정상적 발현을 특징으로 하는 장애)를 진단하거나 대상체가 IL-23p19 관련 장애가 발생할 위험이 증가하였음을 결정하기 위한 방법에 사용될 수 있다. 이러한 방법은 대상체의 생물학적 샘플을 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편과 접촉시키고 IL-23p19에 대한 항체의 결합을 검출하는 단계를 포함한다. "생물학적 샘플"은 IL-23p19를 잠재적으로 발현하는 개체, 세포주, 조직 배양 또는 기타 세포 공급원으로부터 얻은 임의의 생물학적 샘플을 의미한다. 포유류로부터 조직 생검 및 체액을 얻는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.
일부 실시형태에서, 본 방법은 환자 샘플에서 IL-23p19의 수준을 대조군 샘플(예를 들어, IL-23p19-관련 장애가 없는 대상체)과 비교하여 환자가 IL-23p19-관련 장애가 있거나 IL-23p19-관련 장애가 발생할 위험이 있는지를 결정하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시형태에서, 예를 들어 진단 목적을 위해 항체를 검출가능한 모이어티로 표지하는 것이 유리할 것이다. 방사성 동위원소, 형광성 표지, 효소 기질 표지 등을 포함하여 수많은 검출 가능한 표지를 사용할 수 있다. 표지는 다양한 공지된 기술을 사용하여 항체와 간접적으로 접합될 수 있다. 예를 들어, 항체는 비오틴과 접합될 수 있고 위에서 언급한 세 가지 광범위한 표지 범주 중 임의의 것이 아비딘과 접합될 수 있거나 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 비오틴은 아비딘에 선택적으로 결합하므로 이러한 간접적인 방식으로 표지를 항체와 접합시킬 수 있다. 대안적으로, 표지와 항체의 간접적인 접합을 달성하기 위해, 항체는 작은 합텐(hapten)(예를 들어, 디곡신(digoxin))과 접합될 수 있고 위에서 언급한 다른 유형의 표지 중 하나는 항-합텐 항체(예를 들어, 항-디옥신 항체)와 접합된다. 따라서 항체와 표지의 간접적인 접합이 달성될 수 있다.
예시적인 방사성 동위원소 표지는 35S, 14C, 125I, 3H, 및 131I를 포함한다. 항체는 예를 들어 문헌[Current Protocols in Immunology, Volumes 1 and 2, 1991, Coligen et al., Ed. Wiley-Interscience, New York, N.Y., Pubs]에 기재된 기술을 사용하여 방사성 동위원소로 표지될 수 있다. 방사능은 예를 들어 섬광 계수에 의해 측정될 수 있다.
예시적인 형광 표지는 희토류 킬레이트(유로피움 킬레이트(europium chelate)) 또는 플루오레세인(fluorescein) 및 이의 유도체, 로다민(rhodamine) 및 이의 유도체, 단실(dansyl), 리사민(Lissamine), 피코에리트린(phycoerythrin) 및 텍사스 레드(Texas Red)로부터 유래된 표지를 포함한다. 형광 표지는 예를 들어 문헌[Current Protocols in Immunology]에 개시된 것과 같은 공지된 기술을 통해 항체에 접합될 수 있다. 형광은 형광계를 사용하여 정량화할 수 있다.
당업계에 잘 알려진 다양한 효소-기질 표지가 있다(예를 들어, 미국 특허 제 4,275,149호 참조). 효소는 일반적으로 다양한 기술을 사용하여 측정할 수 있는 발색 기질의 화학적 변이를 촉매한다. 예를 들어, 변이는 분광광도계로 측정할 수 있는 기질의 색상 변화일 수 있다. 대안적으로, 효소는 기질의 형광 또는 화학발광을 변이시킬 수 있다. 형광의 변화를 정량화하는 기술은 위에 기재되어 있다. 화학발광 기질은 화학 반응에 의해 전자적으로 여기되고, 예를 들어 화학발광계를 사용하여 측정할 수 있는 빛을 방출하거나 형광 수용체에 에너지를 제공할 수 있다.
효소 표지의 예는 반딧불이 루시퍼라제 및 박테리아 루시페라제(미국 특허 제 4,737,456호)와 같은 루시페라제, 루시페린, 2,3-디히드로프탈라진디온, 말레이트 탈수소효소, 우레아제, 퍼옥시다제, 예컨대 양고추냉이 퍼옥시다제(HRPO), 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 리소자임, 사카라이드 옥시다제(예를 들어, 글루코스 옥시다제, 갈락토스 옥시다제, 및 글루코스-6-포스페이트 탈수소효소), 헤테로사이클 옥시다제(예를 들어, 유리카제 및 크산틴 옥시다제), 락토페록시다제 및 마이크로퍼옥시다제를 포함한다. 항체에 효소를 접합하는 기술은 예를 들어 문헌[O'Sullivan et al., 1981, Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. (J. Langone & H. Van Vunakis, eds.), Academic press, N.Y., 73: 147-166]에 기재되어 있다.
효소-기질 조합의 예는 예를 들어 과산화수소를 기질로 하는 양고추냉이 퍼옥시다제(HRPO)를 포함하며, 과산화수소는 오르토페닐렌 디아민(OPD) 또는 3,3,5,5-테트라메틸 벤지딘 하이드로클로라이드(TMB); 발색 기질로서 파라-니트로페닐 포스페이트를 갖는 알칼리성 포스파타제(AP); 및 p-니트로페닐-β-D-갈락토시다아제 또는 형광 기질 4-메틸움벨리페릴-β-D-갈락토시다아제와 같은 발색 기질을 갖는 β-D-갈락토시다아제(β-D-Gal)를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 표지되지 않은 상태로 사용되고 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편에 결합하는 표지된 항체로 검출된다.
본 명세서에 기재된 항체 및 이의 항체 단편은 경쟁적 결합 분석, 직접 및 간접 샌드위치 분석, 및 면역침전 분석과 같은 임의의 공지된 분석 방법에 사용될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987)]을 참조한다.
항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 IL-23 수용체에 대한 리간드의 결합을 억제하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 방법은 항-IL-23p19 항체를 세포(예를 들어, 포유류 세포) 또는 세포 환경에 투여하여 IL-23 수용체에 의해 매개되는 신호전달을 억제하는 단계를 포함한다. 이들 방법은 시험관내 또는 생체내에서 수행될 수 있다. "세포 환경"은 세포를 둘러싼 조직, 배지 또는 세포외 기질을 의미한다.
치료 조성물 및 방법
본 개시내용은 또한, 예를 들어 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 면역-매개된 염증 장애 또는 자가면역 질병과 같은 질병 또는 장애(예를 들어, IL-23/IL-23 수용체 신호전달 축에 의해 매개되는 생물학적 활성을 포함하는 질병 또는 장애)의 치료, 예방 또는 개선을 위한 수많은 치료 용도를 갖는다.
본 명세서에 개시된 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편은 면역-매개된 염증 장애(IMID) 또는 자가면역 질병과 같은 다양한 질병 또는 장애의 치료에 유용하다. IL-23 관련 장애를 치료하는 방법은 치료적 유효량의 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편을 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. IMID는 건선, 건선성 관절염, 염증 장 질병(즉, 궤양성 대장염 또는 크론병) 강직성 척추염, 전신성 홍반성 루푸스, 화농한선염, 아토피성 피부염 및 천식으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 개시내용은 또한 항-IL-23p19 항체 또는 이의 항체 단편, 및 선택적으로 또 다른 면역-기반 요법을 포함하는 조성물 또는 제형을 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 IMID의 치료 또는 예방 방법을 제공한다.
개시된 항체는 또한 단독으로(예를 들어, 단일요법) 또는 다른 면역치료제 및/또는 화학요법과 조합하여 암을 치료하는 방법에 유용하다.
항체는 단독으로 또는 면역-매개된 염증 장애 또는 자가면역 질병을 치료하는데 유용한 다른 조성물과 조합하여 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 예를 들어, 항-IL-23p19 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물은 결합제에 접합되거나 접합되지 않은 치료제를 추가로 포함할 수 있다.
일부 양상에서, 본 명세서에 개시된 하나 이상의 항체를 포함하는 조성물, 예를 들어 약제학적 조성물이 제공된다. 약제학적 조성물은 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th Edition, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1995]에 개시된 것과 같은 통상적인 기술에 따라 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제뿐만 아니라, 임의의 다른 공지된 애주번트 및 부형제와 함께 제형화될 수 있다.
통상적으로, 주사에 의한 투여용 조성물은 멸균 등장성 수성 완충액 중의 용액이다. 필요한 경우, 약제는 주사 부위의 통증을 완화하기 위해 가용화제 및 리그노카인(lignocaine)과 같은 국소 마취제를 포함할 수도 있다. 일반적으로 성분은 개별적으로 또는 단위 투여 형태로 함께 혼합되어, 예를 들어, 활성제의 양을 표시하는 앰플(ampoule) 또는 사세트(sachette)와 같은 완전 밀폐 용기에 건조 동결건조 분말 또는 무수 농축액으로 제공된다. 약제를 주입하여 투여하는 경우 멸균 약제 등급의 물 또는 식염수가 포함된 주입 병과 함께 분배할 수 있다. 약제를 주사에 의해 투여하는 경우, 주사용 멸균수 또는 식염수 앰플을 제공하여 투여 전에 성분을 혼합할 수 있도록 할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 생리학적으로 상호 적합한 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항균제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 바람직하게는, 담체는 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 척수 또는 표피 투여(예를 들어, 주사 또는 주입)에 적합하다. 투여 경로에 따라, 활성 화합물, 즉 항체, 이중특이적 및 다중특이적 분자는 화합물을 불활성화시킬 수 있는 산 및 기타 천연 조건의 작용으로부터 화합물을 보호하기 위해 물질로 코팅될 수 있다.
조성물은 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 투여될 수 있다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 적절한 결과에 따라 달라질 것이다. 활성 화합물은 이식체, 경피 패치 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형과 같이 빠른 방출로부터 화합물을 보호할 담체와 함께 제조될 수 있다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산과 같은 생분해성, 생체적합성 중합체를 사용할 수 있다. 이러한 제형의 제조 방법은 일반적으로 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978]을 참조한다.
약제학적 조성물에서 활성 성분의 투여량 수준은 대상체에 대한 독성 없이 특정 대상체, 조성물 및 투여 방식에 대해 적절한 치료 반응을 달성하는데 효과적인 활성 성분의 양을 얻기 위해 다양할 수 있다. 선택된 투여량 수준은 사용된 특정 조성물의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정 화합물의 배출 속도, 치료 기간, 사용된 특정 조성물과 조합하여 사용되는 기타 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료되는 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 일반적 건강 및 이전 병력, 및 의학 분야에 널리 공지된 유사 인자를 포함하는 다양한 약동학적 인자에 따라 달라진다.
본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 유효량으로 투여될 수 있다. "유효량"은 단독으로 또는 추가 투여량과 함께 적절한 반응 또는 적절한 효과를 달성하는 양을 지칭한다. 특정 질병 또는 특정 병태의 치료의 경우, 적절한 반응은 바람직하게는 질병 경과의 억제와 관련된다. 이는 질병의 진행을 늦추는 것, 특히 질병의 진행을 방해하거나 역전시키는 것을 포함한다.
일부 양상에서, 본 명세서에 기재된 조성물은 본 명세서에 기재된 것과 같은 다양한 장애를 치료 또는 예방하기 위해 환자에게, 예를 들어 생체내 투여된다. 바람직한 환자는 IL-23/IL-23 수용체 신호전달 축의 생물학적 활성을 조절하는 제제를 투여함으로써 교정되거나 개선될 수 있는 장애를 갖는 인간 환자를 포함한다.
일부 양상에서, 통상적인 바이러스 및 비-바이러스 기반 유전자 전달 방법을 사용하여 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 유도체를 암호화하는 핵산을 포유류 세포 또는 표적 조직에 도입할 수 있다. 이러한 방법은 항체를 암호화하는 핵산을 시험관내에서 세포에 투여하는데 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 유도체를 암호화하는 핵산은 생체내 또는 생체외 유전자 요법 용도를 위해 투여된다. 다른 실시형태에서, 유전자 전달 기술은 세포 기반 또는 동물 모델에서 항체의 활성을 연구하는데 사용된다. 비-바이러스 벡터 전달 시스템에는 DNA 플라스미드, 네이키드 핵산 및 리포솜과 같은 전달 비히클과 복합된 핵산이 포함된다. 바이러스 벡터 전달 시스템에는 세포로 전달된 후 에피솜 또는 혼입 게놈이 있는 DNA 및 RNA 바이러스가 포함된다. 이러한 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.
본 개시내용의 조작된 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산의 비-바이러스 전달 방법은 리포펙션(lipofection), 미세주사(microinjection), 바이오리스틱(biolistic), 바이로솜(virosome), 리포솜(liposome), 면역리포솜(immunoliposome), 다중양이온 또는 지질:핵산 접합체, 네이키드 DNA, 인공 비리온, 및 DNA의 제제-증강 흡수를 포함한다. 리포펙션 방법 및 리포펙션 시약은 당업계에 잘 알려져 있다(예를 들어, Transfectam™ 및 Lipofectin™). 폴리뉴클레오타이드의 효율적인 수용체-인식 리포펙션에 적합한 양이온성 및 중성 지질은 Felgner, WO 91/17424, WO 91/16024의 것들을 포함한다. 전달은 세포(생체외 투여) 또는 표적 조직(생체내 투여)으로 이루어질 수 있다. 면역지질 복합체와 같은 표적화된 리포솜을 포함하는 지질:핵산 복합체의 제조는 당업자에게 잘 알려져 있다.
본 명세서에 기재된 항체를 암호화하는 핵산의 전달을 위한 RNA 또는 DNA 바이러스 기반 시스템의 사용은 바이러스를 신체의 특정 세포로 표적화하고 바이러스 내용물을 핵으로 수송하는 고도로 진화된 과정의 이점을 이용한다. 바이러스 벡터는 환자에게 직접 투여(생체내)하거나 시험관내에서 세포를 치료하는데 사용할 수 있고 변형된 세포를 환자에게 투여할 수 있다(생체외). 본 개시내용의 폴리펩타이드의 전달을 위한 통상적인 바이러스 기반 시스템은 유전자 전달을 위한 레트로바이러스, 렌티바이러스, 아데노바이러스, 아데노-연관 및 단순 포진 바이러스 벡터를 포함할 수 있다. 바이러스 벡터는 현재 표적 세포와 조직에서 가장 효율적이고 다재다능한 유전자 전달 방법이다. 숙주 게놈의 혼입은 레트로바이러스, 렌티바이러스 및 아데노-연관 바이러스 유전자 전달 방법으로 가능하며 종종 삽입된 전이유전자의 장기간 발현을 초래한다. 또한, 다양한 세포 유형 및 표적 조직에서 높은 형질도입 효율이 관찰되었다. 확인된 모든 특허 및 간행물은 예를 들어, 본 개시내용과 관련하여 사용될 수 있는 이러한 간행물에 기재된 방법론을 기재하고 개시할 목적으로 본 명세서에 참조로 명시적으로 포함된다. 이러한 간행물은 본 출원의 출원일 이전의 개시내용에 대해서만 제공된다. 이와 관련하여 어떠한 경우에도 본 발명자들이 선행 발명으로 또는 다른 이유로 이러한 개시내용보다 선행하지 않는다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안된다. 이 문서의 내용에 대한 날짜 또는 표현에 대한 모든 진술은 본 출원자가 사용할 수 있는 정보를 기반으로 하며 이러한 문서의 날짜 또는 내용이 정확하다는 것을 인정하는 것은 아니다.
아직 제시되지 않은 범위 내에서, 본 명세서에서 기재되고 예시된 다양한 실시형태 중 어느 하나가 본 명세서에 개시된 다른 실시형태 중 임의의 것에 제공된 특징을 혼입하는 것으로 추가로 수정될 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다.
본 개시내용의 넓은 범위는 하기 실시예를 참조하여 가장 잘 이해되며, 이는 본 개시내용을 특정 실시형태로 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본 명세서에 기재된 특정 실시형태는 단지 예로서 제공되며, 본 개시내용은 첨부된 청구범위와 관련하여 이러한 청구범위에 수반되는 균등물의 전체 범위와 함께 제한된다.
실시예
일반 방법
면역침전, 크로마토그래피 및 전기영동을 포함하는 단백질 정제 방법이 기재되어 있다. 문헌[Coligan et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York]. 화학적 분석, 화학적 변형, 번역 후 변형, 융합 단백질의 생성 및 단백질의 글리코실화에 대해 기재한다. 예를 들어, 문헌[Coligan et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, N.Y., pp. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, Mo.; pp. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., pp. 384-391]을 참조한다. 다클론 및 단일클론 항체의 생성, 정제 및 단편화가 기재되어 있다. 문헌[Coligan et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Harlow and Lane, supra].
HiTrap 단백질 G 컬럼(GE, 카탈로그 번호 17040401)을 통해 하이브리도마 상청액을 제조업체의 절차에 따라 정제하였다. 간단히 말해서, 단백질 G 컬럼을 5 CV의 DPBS(Gibco, 카탈로그 번호 14190-136)로 평형화하고 하이브리도마 상청액을 주변 온도 및 3분 체류 시간에 주사기/주입 펌프(Legato 200, KDS)를 통해 로딩했다. 컬럼을 5 CV의 DPBS로 세척하고 4 CV의 pH 2.8 용출 완충액(Fisher Scientific, 카탈로그 번호 PI21004)으로 용출을 수행했다. 용출물을 분획화하고, 분획을 1M Tris-HCL, pH 8.5(Fisher Scientific, 카탈로그 번호 50-843-270)로 중화하고 A280(DropSense96, Trinean)으로 분석했다. 피크 분획을 풀링하고 완충액을 DPBS로 교체했다. 원심 필터(EMD Millipore, 카탈로그 번호 UFC803024)를 2분 동안 4,000 x g에서 DPBS에서 평형화했다. 정제된 샘플을 로딩하고, DPBS를 첨가하고, 총 DPBS 부피가 6 DV 이상에 도달할 때까지 샘플을 5 내지 10분 회전 동안 4,000 x g에서 회전시켰다. 최종 풀을 A280으로 분석하였다.
분자 생물학의 표준 방법이 기재된다. 문헌[Maniatis et al., (1982) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, Calif. Standard methods also appear in Ausbel et al., (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols. 1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, N.Y., which describes cloning in bacterial cells and DNA mutagenesis (Vol. 1), cloning in mammalian cells and yeast (Vol. 2), glycoconjugates and protein expression (Vol. 3), and bioinformatics (Vol. 4)].
하이브리도마 클론에 대한 중쇄 및 경쇄 가변 영역에 대한 서열을 하기 기재된 바와 같이 결정하였다. Qiagen(Germantown, MD, USA)의 RNeasy Plus Mini 키트를 사용하여 1 내지 2 x106 하이브리도마 세포에서 총 RNA를 추출했다. cDNA를 Takara(Mountain View, CA, USA)의 SMARTer RACE 5'/3' 키트를 사용하여 5' RACE 반응을 수행하여 생성하였다. NEB(Ipswich, MA, USA)의 Q5 High-Fidelity DNA 중합효소를 사용하여 PCR을 수행하여 적절한 면역글로불린의 3' 마우스 불변 영역에 대한 유전자 특이적 프라이머와 조합하여 Takara Universal Primer Mix를 사용하여 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 증폭했다. 중쇄 및 경쇄에 대한 증폭된 가변 영역을 2% 아가로스 겔에서 구동하고 적절한 밴드를 절단한 다음 Qiagen의 Mini Elute Gel Extraction 키트를 사용하여 겔 정제했다. 정제된 PCR 산물을 Invitrogen(Carlsbad, CA, USA)의 Zero Blunt PCR Cloning 키트를 사용하여 클로닝하고, Takara의 Stellar Competent E. 콜라이 세포로 형질전환하였으며 LB 한천 + 50 μg/ml 카나마이신 플레이트에 플레이팅하였다. 직접 콜로니 Sanger 시퀀싱을 GeneWiz(South Plainfield, NJ, USA)에 의해 수행하였다. 생성된 뉴클레오타이드 서열을 생산적인 재배열을 확인하고 번역된 단백질 서열을 분석하기 위해 IMGT V-QUEST를 사용하여 분석하였다. CDR 결정은 IMGT 번호를 기반으로 했다.
형광 활성화 세포 분류 검출 시스템(FACS®)을 포함하는 유세포 분석 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Owens et al. (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, N.J.; Givan (2001) Flow Cytometry, 2nd ed.; Wiley-Liss, Hoboken, N.J.; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, N.J]. 핵산 프라이머 및 프로브, 폴리펩타이드 및 항체를 포함하여 예를 들어 진단 시약으로 사용하기 위한 핵산 변형에 적합한 형광 시약을 사용할 수 있다. 문헌[Molecular Probes (2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, Oreg; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, Mo].
양성 대조군(PC1 및 PC2), IL-23p19 및 IL-12/IL-23 p40 특이적 항체는 CRO(Biointron)에 의해 제조되었다. 예를 들어, 항체 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 293F 또는 ExpiCHO™ 발현 시스템(ThermoFisher Scientific, Waltham, MA)에 클로닝함으로써 대조군 항체를 임의의 적합한 발현 방법에 의해 제조할 수 있다. 이들 항체를 실시예에 기재된 결합 및 기능적 분석을 확립하기 위한 대조군으로서 사용하고, 개시된 새로 생성된 항-IL-23p19-특이적 항체와 함께 시험하였다. "PC1"은 US 7,935,344에 보고된 VH 및 VL 서열('344 특허의 VH 서열번호 106 및 VL 서열번호 116)을 기반으로 합성되고 인간 IL-123p19 하위단위(Biointron, 항목 번호 20180926A04)에 특이적인 것으로 알려진 참조 항체를 의미한다. "PC2"라는 용어는 US 6,902,734에 보고된 VH 및 VL 서열('734 특허의 VH 서열번호 7 및 VL 서열번호 8)을 기반으로 합성되고 인간 IL-12/IL-23 p40 하위단위(BIOINTRON 항목 번호 20180925A07)에 특이적인 것으로 알려진 참조를 지칭한다.
대조군 항체는 표준 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 대조군 항체의 서열을 포함하는 플라스미드를 제조업체의 프로토콜에 따라 포유류 시스템(293F 또는 ExpiCHO™)(카탈로그 번호 A29133, ThermoFisher Scientific, USA)을 사용하여 형질감염시킬 수 있다. 세포를 1일째에 37℃ 및 8% CO2에서 배양한 다음 키트에 제공된 배지에서 형질감염 후 32℃ 및 5% CO2에서 배양한다. 항체를 ExpiCHO™ 배양 배지를 10분 동안 1,000 g에서 원심분리한 다음 30분 동안 5,000 g에서 원심분리하여 정제한다. 그런 다음 상청액을 0.45 μm 필터에 이어 0.22 μm 필터를 사용하여 여과한다. 후속적으로, 상청액을 제조업체의 프로토콜에 따라 단백질 A/G 수지(Life Technologies, Carlsbad, CA; Catalog# 20424)를 사용하여 친화도 정제에 적용한다. ELISA 정제 전에, 배양 배지의 항체 역가를 대략적으로 결정하여 로딩된 배지의 양이 수지 결합 능력의 80% 미만을 차지하도록 한다. 인큐베이션 후, 수지를 PBS로 세척하고 용출 완충액(Life Technologies, Catalog# 21004)으로 용출한다. 용출 분획을 pH 8.0인 Tris 완충액을 첨가하여 생리학적 pH로 즉시 조정한다. 정제된 항체를 후속적으로 PBS 완충액에서 Amicon Ultra-15 원심분리 필터 유닛(Life Technologies, 카탈로그 번호 UFC900324)을 사용하여 완충액 교체 및 단백질 농축에 적용한다. 항체 농도를 BCA 단백질 분석에 의해 결정한다. SDS-PAGE 및 쿠마시-염색을 수행하여 항체 순도를 시험한다. 정제된 단백질을 분취하여 장기간 보관을 위해 -80℃에서 보관하거나 즉시 사용을 위해 4℃에서 보관한다.
항체의 완전성을 SDS-PAGE에 이어 비환원 대 환원 조건 하에 쿠마시 염색에 의해 검증할 수 있으며; 비환원 조건에서는 약 150 kDa에 하나의 뚜렷한 밴드가 있고, 환원 조건에서는 50 kDa와 25 kDa의 두 밴드가 관찰된다. 리간드/수용체 상호작용을 특성화하기 위한 표준 기술을 사용할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Coligan et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York]을 참조한다. 특정 작용 기전을 갖는 항체의 특성화에 적합한 항체 기능적 특성화의 표준 방법은 또한 당업자에게 잘 알려져 있다.
예를 들어, 항원 단편, 리더 서열, 단백질 접힘, 기능적 도메인, CDR 주석, 글리코실화 부위 및 서열 정렬을 결정하기 위한 소프트웨어 패키지 및 데이터베이스가 이용 가능하다.
실시예 1: 항-IL-23p19 항체의 생성
인간 항-IL-23p19 특이적 항체를 인간 Ig 트랜스제닉 마우스를 면역화하여 생성하였다(예를 들어, WO 2013/063391, TRIANNI® 마우스 참조).
면역화: TRIANNI® 마우스에 인간 IL-23 재조합 단백질 또는 인간 IL-23 단백질과 인간 p19 및 마우스 p40 단백질의 이종이량체의 조합을 복강내(IP), 피하(SC), 또는 발바닥 또는 꼬리 기저부를 통해 주사함으로써 면역화시켰다. 면역 반응을 안와 뒤 출혈로 모니터링했다. 인간 IL-23 이종이량체에 대한 결합 활성에 대해 혈장을 ELISA(하기 기재된 바와 같음)에 의해 스크리닝하였다. 충분한 역가를 갖는 마우스를 융합에 사용하였다. 마우스를 희생시키고 비장 및 배수 림프절을 제거하기 전에 면역원으로 부스팅하였다.
항-IL-23p19 항체를 생성하는 마우스의 선택: p19-특이적 항체를 생성하는 Trianni 마우스를 선택하기 위해, 면역화된 마우스로부터의 혈청을 재조합 인간 IL-23에 대한 결합에 대해 ELISA에 의해 스크리닝하였다. 요약하면, 재조합 인간 IL-23으로 코팅된 ELISA 플레이트를 면역화된 마우스의 혈청 희석액과 함께 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하고, 분석 플레이트를 세척하고, HRP-표지된 항-마우스 IgG 항체로 특이적 항체 결합을 검출하였다. 플레이트를 ELISA 판독기(Biotek)를 사용하여 판독하였다.
하이브리도마의 생성: 본 개시내용의 인간 항체를 생성하는 하이브리도마를 생성하기 위해, 면역화된 마우스로부터 수확된 비장세포 및 배수 림프절 세포를 마우스 골수종 세포주와 같은 적절한 불멸화 세포주에 융합시켰다. 생성된 하이브리도마를 p19-특이적 항체의 생성에 대해 스크리닝하였다. 예를 들어, 면역화된 마우스의 비장세포 및 림프절 세포의 단일 세포 현탁액을 전기 융합에 의해 동일한 수의 Sp2/0 비-마우스 IgG 분비 골수종 세포(ATCC, CRL 1581)에 융합시켰다. 세포를 평평한 바닥 96-웰 조직 배양 플레이트에 플레이팅한 다음, 선택 배지(HAT 배지)에서 약 2주간 인큐베이션한 후, 하이브리도마 배양 배지로 교체하였다. 세포 플레이팅 후 대략 10 내지 14일 후에 개별 웰의 상청액을 위에서 기재한 대로 ELISA로 스크리닝했다. 항체-분비 하이브리도마를 24-웰 플레이트로 옮기고, 다시 스크리닝하고, 여전히 항-p19 활성에 대해 양성인 경우, 하이브리도마를 제한 희석 또는 단일 세포 분류기를 사용하여 분류함으로써 서브클로닝하였다. 그런 다음 안정한 서브클론을 시험관내에서 배양하여 정제 및 특성화에 사용할 소량의 항체를 생성했다.
하이브리도마 스크리닝: 전술한 바와 같이, 인간 IL-23, 인간 IL-12, 및 인간 p19/마우스 p40을 사용하여 하이브리도마 상청액을 IL-23 특이적 결합에 대해 ELISA에 의해 시험하였다.
실시예 2: 항-IL-23p19 특이적 항체의 결합
IL-23 단백질에 대한 항-IL-23p19-특이적 항체의 결합을 BIAcore에 의해 측정된 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 분석하였다. 간단히 말해서, 항-IL-23p19 항체 또는 대조군 항체의 연속 희석액을 아민 연결 키트(GE Healthcare, Catalog NO: BR- 1000-50, 항목 번호 2087295)를 사용하여 CM5 칩 상에 고정시킨 항-마우스 또는 인간 Fc 칩(들) 상에 포획하였다.
BIAcore 결합 분석에 사용된 대조군 항체는 PC1(p19 특이적 항체로 공지됨, Biointron, 항목 번호 20180926A04); PC2(인간 IL-12 및 IL-23의 p40 하위단위에 대한 특이성이 알려진 참조 항체, Biointron, 항목 번호 20180925A07); 인간 IgG 이소형 대조군(Invitrogen, 카탈로그 번호 02-7102, 항목 번호 TJ276309); 마우스 IgG2a 이소형 대조군(Novarock Biotherapeutics 제조) 및 인간 IgG4 이소형 대조군(Dendritics, 카탈로그 번호 DDXCH04P-100; 배치: DDXCH04-028)을 음성 대조군으로 사용하였다.
다음으로, 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% Tween 20, pH 7.4를 포함하는 구동 완충액에서 IL-23 재조합 단백질, 인간 p19/마우스 p40 이종이량체 단백질, 인간 IL-12 단백질 및 인간 p40 하위단위 단백질의 연속 희석액을 1분 동안 고정된 항체에 50 μl/분으로 주입한 후 2분 동안 해리시켰다. 각 주입 후 10 mM 글리신-HCl, pH 1.7 완충액의 60초 펄스를 사용한 재생 단계를 수행하였다. 실험 데이터의 적용을 BIAevaluation 소프트웨어(GE Healthcare)로 수행하였으며, Langmuir 1:1 모델에 적용하여 겉보기 결합을 결정했다.
정제된 항체의 결합 특성은 도 2에 도시되어 있다. 도 2a는 Hu-2 18006B(하이브리도마로부터 정제됨)의 결합 특성을 나타낸다. 도 2b는 Hu-5 18006B(하이브리도마로부터 정제됨)의 결합 특성을 나타낸다. 도 2c는 Hu-6 18006B*(재조합 mIgG2a)의 결합 특성을 나타낸다. 도 2d는 Hu-4 18006B*(*재조합, mIgG2a)의 결합 특성을 나타낸다. 도 2e는 Hu-4 18006B**(**재조합, hIgG4)의 결합 특성을 나타낸다. 표 3은 BIAcore에 의한 항-IL-23p19 항체 및 인간 IL-23 및 인간 p19/마우스 p40 이종이량체 단백질에 대한 결합 특이성을 요약한다. 재조합 항체는 표에서 별표로 지정된다.
BIAcore에 의한 IL-23p19 특이적 항체의 결합
항체 이소형 hIL23 hp19/mp40 hIL12 hp40
Hu-2 18006B mIgG1, 카파 + + - -
Hu-5 18006B mIgG2b, 람다 + + - -
Hu-6 18006B* mIgG2a, 카파 + + - -
Hu-4 18006B* mIgG2a, 카파 + + - -
Hu-4 18006B** hIgG4, 카파 + + - -
PC1 (p19 특이적) hIgG1, 람다 + + - -
PC2 (p40 특이적) hIgG1, 카파 + - + +
hIgG hIgG - - - -
mIgG2a mIgG2a - - - -
*=IL-23p19 재조합 항체; PC1 및 PC2는 재조합 항체이고; 나머지 IL-23p19 Ab는 하이브리도마로부터 정제된다.
결과는 항-IL-23p19 항체가 인간 IL-23 및 인간 p19/마우스 p40 이종이량체에 결합하지만 인간 IL-12 또는 인간 p40 하위단위에는 결합하지 않는다는 것을 나타낸다(도 2 및 표 3).
PC1은 인간 IL-23, 인간 p19/마우스 p40에 대해 양성이었고 인간 IL-12 및 인간 p40 하위단위에 대해 음성이었다(데이터는 나타내지 않음). PC2는 인간 IL-23, 인간 IL-12, 인간 p40 하위단위에 대해 양성이었고 인간 p19/마우스 p40 이종이량체에 대해 음성이었다. 이소형 대조군 mIgG2a 및 hIgG는 hIL-23, hp19/mp40, hIL-12 및 hp40 하위단위에 결합하지 않았다.
결과: 항-IL-23p19-특이적 항체를 인간 IL-23 및 인간 p19 및 마우스 p40 하위단위으로 이루어진 이종이량체를 포함하는 재조합 단백질에 대한 결합에 의해 특성화하였다. 이들 항체는 BIAcore에 의한 인간 IL-12 및 인간 p40 하위단위에 결합하지 않았다.
개시된 항-IL-23p19 항체의 결합 특이성을 또한 ELISA에 의해 평가하였다. 간단히 말해서, 비오틴화된 IL-23을 스트렙타비딘 코팅된 ELISA 플레이트를 통해 포획하였다. 인간 p19/마우스 p40, 인간 IL-12 및 인간 p40 하위단위를 ELISA 플레이트에 직접 코팅하였다. 그런 다음 정제된 항체를 플레이트에 첨가한 다음 염소-항-마우스 IgG-HRP(Jackson ImmunoResearch, 카탈로그 번호 115-036-071, 항목 번호 147271)로 검출했다. ABTS 기질(Moss Inc., 카탈로그 번호 ABTS-1000, 항목 번호 03086202)을 첨가한 후, ELISA 플레이트 판독기(Biotek)를 사용하여 ELISA 플레이트를 판독하였다. 도 3에 도시된 대조군: PC1은 참조 항체(p19 특이적 항체로 공지됨, Biointron, 항목 번호 20180926A04)를 지칭하고; PC2는 참조 항체(p40 특이적 항체로 알려짐, Biointron, 항목 번호 20180925A07)를 지칭하고; PC3은 참조 항체(MT155, Mabtech의 p19 특이적 항체로 알려짐, 카탈로그 번호 3457-6-100, 코드: 3457-6-1000)를 지칭하며, 음성 대조군은 인간 IgG4(Dendritics, 카탈로그 번호 DDXCHO4P- 100, 항목 번호 DDXCH04-028) 및 마우스 IgG2a(Novarock Biotherapeutics에 의해 생성됨)이다.
도 3은 개시된 p19-특이적 항체의 결합 활성을 나타낸다. 도 3a 및 도 3b는 Hu-4 18006B** (hIgG4) 및 Hu-5 18006B (mIgG2b), Hu-6 18006B* (mIgG2a), Hu-4 18006B* (mIgG2a) 및 Hu-2 18006B (mIgG1)가 투여량 의존적 방식으로 인간 IL-23에 결합하고; 양성 대조군 PC1은 투여량 의존적 방식으로 IL-23에 결합함을 나타낸다(도 3a). 도 3c는 이들 선택된 대표적인 항-IL-23p19 항체인 H-2 1800B (mIgG1), Hu-4 18006B (mIgG2c), Hu-4 18006B* (mIgG2a) 및 H-6 18006B* (mIgG2a)가 투여량 의존적 방식으로 인간 p19/마우스 p40 이종이량체에 결합함을 나타낸다. 도 3d는 이들 항-IL-23p19 항체가 hIL-12에 결합하지 않고 양성 대조군 항체 PC2는 투여량 의존적 방식으로 hIL-12에 결합한다는 것을 나타낸다. 도 3e는 이러한 항-IL-23p19 항체가 인간 p40 하위단위에 결합하지 않고 양성 대조군 PC2는 투여량 반응 방식으로 인간 p40 하위단위에 결합함을 나타낸다.
도 3a 내지 도 3e의 결과는 항-IL-23p19-특이적 항체가 ELISA에 의해 마우스 p40 하위단위과 결합된 인간 p19로 이루어진 이종이량체를 포함하는 재조합 단백질 및 인간 IL-23에 결합하는 것을 특징으로 하는 것으로 나타났다. 이러한 항체는 인간 IL-12 및 인간 p40 하위단위에 결합하지 않는다.
결합 및 기능 분석에서 KD 및 IC50 종점의 정확한 측정을 확인하기 위해, 항체를 시험 전에 하이브리도마 배양 상청액으로부터 정제하였다. 재조합 인간 IL-23에 대한 개시된 항-IL-23p19-특이적 항체의 결합 동역학을 항-마우스 IgG 항체(GE 카탈로그 번호 BR-1008-38)와의 아민 연결 화학을 통해 이전에 고정화된 CM5 칩과 접촉된 BIAcore 3000 시스템을 사용하는 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 결정하였다. 유동 세포 1을 계통적 기기 노이즈 및 이동을 제외하기 위한 참조 세포 역할을 하도록 변형되지 않은 상태로 유지하였다. Fc2-1 검출을 이중 블랭킹(Fc1 및 블랭크 분석물 완충액)으로 구동시켰다. 항체 샘플을 HBS-EP(GE, 카탈로그 번호 BR1001-88)에서 50 μg/mL로 희석하고 1분 동안 10 μL/분의 유속으로 주입했다. 다음으로, 0.156 내지 40 nM으로 희석된 hIL-23(R&D Systems, 카탈로그 번호 1290-IL/CF)을 50 μL/분으로 2분간 주입한 후 10분간 해리시켰다. 데이터를 BIAEvalution 소프트웨어(GE Healthcare)에서 전체 적합성을 갖는 1:1 결합 모델에 의해 분석하여 겉보기 결합 동역학을 결정했다.
개시된 항-IL-23p19 항체에 대한 결합 동역학 데이터는 표 4에 제공된다. 결과는 항-IL-23p19-특이적 항체가 3.84E-11 내지 6.62E-11 M 범위의 KD로 인간 재조합 IL-23에 결합함을 나타낸다. PC1(p19 특이적 항체로 공지됨, Biointron, 항목 번호 20180926A04)은 다회 구동에 걸쳐 3.77E-10 내지 1.10E-11 범위의 KD 값을 나타내었다.
SPR 결합 동역학
항-IL-23p19 mAb ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M)
Hu-2 18006B 1.57E+06 6.54E-05 4.16E-11
Hu-5 18006B 1.49E+06 9.89E-05 6.62E-11
Hu-6 18006B* 4.44E+06 1.71E-04 3.84E-11
Hu-4 18006B** 2.50E+06 1.43E-04 5.72E-11
실시예 3: IL-23 수용체와 IL-23 상호작용 차단
개시된 p19-특이적 항체가 이의 동족 고친화도 IL-23 수용체와의 IL-23 결합을 차단하는 능력을 ELISA에 의해 결정하였다. 간단히 말해서, 인간 IL-23 수용체를 96-웰 플레이트(2 μg/ml)에 코팅한 다음, 재조합 인간 IL-23(50 ng/mL)과 미리 혼합된 정제된 항-IL-23p19 항체의 연속 희석액을 플레이트에 첨가하였다. 30분 인큐베이션 후, 플레이트를 세척하였다. 그 다음, 비오틴화된 항-p40 항체(Invitrogen ref: 13-7129-85, 항목 2028761, 1/3000 희석)를 플레이트에 첨가하였다. 30분 인큐베이션 후, 플레이트를 세척한 다음 스트렙타비딘 HRP로 검출하였다. ABTS 기질을 첨가한 후 플레이트 판독기(OD 405 nM)를 사용하여 플레이트를 판독하였다. 이 차단 분석에 사용된 양성 대조군 항체 PC1은 참조 항체(p19 특이적 항체로 알려짐, Biointron, 항목 번호 20180926A04)이다. 음성 대조군은 마우스 IgG1(Novus, 카탈로그 번호 NBP1-97005, 항목 번호 35613), mIgG2a(NovaRock Biotherapeutics 제품) 및 hIgG4(Dendritics, 카탈로그 번호 DDXCHO4P-100, 항목 번호 DDXCH04-028)였다.
결과: 도 4의 데이터는 개시된 항-p19 항체 (Hu-2 18006B, Hu-6 18006B*, Hu-5 18006B 및 Hu-4 18006B**)가 투여량 의존적 방식으로 인간 IL-23과 인간 IL-23 수용체의 상호작용을 차단함을 보여주었다. 양성 대조군 PC1은 또한 투여량 반응 방식으로 IL-23/IL-23 수용체 상호작용을 차단했다. 음성 대조군 hIgG4 및 mIgG2a는 분석에서 음성이었다.
개시된 p19-특이적 항체의 특이성을 입증하기 위해, IL-12 수용체 β1과의 IL-23 결합을 차단하는 항체의 능력을 평가하기 위해 차단 분석을 설계하였다.
간단히 말해서, 인간 IL-12 수용체 β1을 96-웰 플레이트(2 μg/ml)에 코팅한 다음, 재조합 인간 IL-23(50 ng/ml)과 미리 혼합된 정제된 항-IL-23p19 항체의 연속 희석액을 플레이트에 추가했다. 차단 분석에 사용된 양성 대조군 항체는 PC2(IL-12/IL-23 p40의 p40 하위단위에 대한 특이성이 알려진 참조 항체, Biointron 항목 번호 20180925A07)였다. 음성 대조군은 마우스 IgG1(Novus, 카탈로그 번호 NBP1-97005, 항목 35613)이었다.
30분 인큐베이션 후, 플레이트를 세척하였다. 그런 다음, 비오틴화된 항-p40 항체(Invitrogen ref: 13-7129-85, 항목 2028761, 1/3000 희석)를 항-IL-23p19 항체가 포함된 웰에 첨가하고; 비오틴화된 항-p19 항체(Mabtech, 카탈로그 번호 MT155, 코드: 3457-6-1000)를 PC2 항체를 포함하는 웰에 첨가하였다. 30분 인큐베이션 후, 플레이트를 세척한 다음 스트렙타비딘 HRP로 검출하였다. ABTS 기질을 첨가한 후 플레이트 판독기(OD 405 nM)를 사용하여 플레이트를 판독하였다.
결과: 도 5의 데이터는 3개의 선택된 p19 특이적 항체(Hu-6 18006 B*, Hu-4 18006B* 및 Hu-4 18006 B**) 중 IL-23/IL-12 수용체 β1 결합 상호작용을 차단하지 않았음을 보여주었다. 유사하게, PC1 항체는 또한 IL-23/IL-12 수용체 β1 상호작용을 차단하지 않았다(데이터는 나타내지 않음). 그러나, p40 대조군 항체(PC2)는 예상대로 IL-23/IL-12 β1의 상호작용을 차단하였다.
실시예 4: 마우스 비장세포 분석에서 IL-17 생성의 억제
인간 IL-23이 뮤린 IL-23R에 결합하고 마우스 비장세포에서 뮤린 IL-17 생성을 유도한다는 것은 널리 알려져 있다. IL-2의 존재하에 인간 IL-23은 매우 낮은(피코몰) 농도에서 뮤린의 비장세포에서 IL-17의 생성을 자극하며, 이는 p40 또는 p19에 대한 억제제와의 공동 인큐베이션에 의해 억제될 수 있다(문헌[Aggarwal, S., et al., 2003, J Biol Chem ; 278: 1910-4; Singh et al., 2015, MAbs, July-Aug; 7(4): 778-791]).
인간 IL-23-유도된 IL-17 생성을 억제하는 개시된 항-IL-23p19-특이적 항체의 능력을 뮤린 비장세포 분석(MSA)에서 평가하였다. 인간 IL-23-유도된 IL-17 생성의 억제에 대한 효능을 결정하였다.
간략하게, 마우스 비장세포를 제조업체의 절차에 따라 유리 균질화기 및 Ficoll Pague 세포 단리 키트(Ge Healthcare, 카탈로그 번호 17-5442-02)를 사용하여 C57/BL-6 마우스로부터 단리하였다. 비장세포를 5분 동안 IL-2(5x106 세포/ml의 경우 20 ng/ml)로 활성화한 다음, 인간 IL-23(1.5 ng/ml)을 비장세포에 첨가하였다. 활성화된 비장세포를 96웰 플레이트에 100 ul/웰로 플레이팅했다. 100 ul/웰의 4개의 정제된 p19 항체, hu-6 18006B* (mIgG2a), Hu-4 18006B* (mIgG2a), Hu-4 18006** (hIgG4) 및 Hu-2 18006B (mIgG1)를 플레이트에 첨가했다. 판.
72시간 인큐베이션 후, 상청액을 quantikine ELISA 키트(R&D, M1700 또는 SM1700)를 사용하여 IL-17 정량 분석을 위해 플레이트 밖으로 옮겼다. IL-17 MSA에 포함된 대조군: 양성 대조군으로서 PC1(p19 특이적 항체로 알려진 참조 항체, Biointron 항목 번호 20180926A04); 음성 대조군으로 마우스 IgG1(Novus, 카탈로그 번호 NBP 1-97005) 및 인간 IgG4(Dendritics, Cat: DDXCHO4P-100, 항목 DDXCH04-028)를 사용했다.
결과: 도 6a 및 도 6b에 제시된 데이터는 개시된 항체가 IL-23과 IL-23R의 결합을 선택적으로 중화시키고, 따라서 투여량 의존적 방식으로 IL-17 생성을 억제한다는 결론을 뒷받침한다.
실시예 5: 리포터 세포 분석에 의한 STAT3 활성화의 억제
IL-23에 대한 수용체는 IL-23R과 쌍을 형성하는 IL-12 수용체와 공통적으로 공유되는 IL-12Rβ1 하위단위를 포함하는 것으로 알려져 있다. IL-23p19는 IL-23R에 선택적으로 결합하고 IL-23R을 통한 신호 전달은 STAT3를 활성화하는 Janus 키나제 2(JAK2)를 유도하여 RORγgt의 상향 조절을 유도하고 염증 사이토카인 IL-17 생성을 증가시킨다(문헌[Parham et al., J. Immunol.168:5699-5708, 2002]). 개시된 항-p19 항체가 STAT3 활성화를 억제할 수 있는지 결정하기 위해, 리포터 세포 분석에 의해 IL-23 유도된 STAT3 활성화에 대해 항체를 평가하였다. 인간 IL-23은 인간 림프종 DB 세포의 표면에서 IL-23R 결합 시 STAT3 인산화를 유도한다(US2013/0172272 실시예 13, 및 문헌[Desmet, J. et al., Nat. Commun. 5:5237 (2014)]).
DB 세포는 내인성 IL-23 수용체 및 STAT3을 발현하여 완전한 기능의 IL-23 신호전달 경로를 제공하는 인간 B 세포 림프종 세포주로부터 유래하였다. pGL4.47[luc2p/SIE/Hybro]로 DB 세포를 안정하게 형질감염시켜 DB 분석 세포를 생성했으며, 이를 통해 루시페라제 리포터 시스템을 사용하여 생리활성 인간 IL23을 정량적으로 검출할 수 있다.
이 DB 분석은 인간 IL-23에 의해 유도된 STAT3 활성화에 대한 개시된 항-IL-23 항체의 억제 활성을 측정하기 위한 것이다. 요약하면, DB 세포(ATCC, CRL-2289)를 2일 동안 성장 배지(RPMI + 10% FBS)에서 배양하였다. 실험 당일, 세포를 수확하고 성장 배지에 재현탁시켰다. 시험된 항체의 연속 희석액을 저결합 384웰 플레이트(ThermoScientific 264574)의 성장 배지에서 제조한 다음 인간 IL-23을 첨가하고 실온에서 30분 동안 인큐베이션했다. 이어서, 시험된 항체 및 인간 IL-23의 혼합물을 플레이트에 첨가하였다. 신호전달 분석 플레이트를 가습된 37℃/5% CO2 인큐베이터에서 16시간 동안 인큐베이션했다. OneGlo 시약을 첨가하고 혼합물을 실온에서 2분 동안 인큐베이션하였다. BioTek Neo2(BioTek. Winooski.VT)에서 발광을 판독하고 GraphPad® 소프트웨어(GraphPad Software Inc., San Diego, California, USA)를 사용하여 IC50 값을 결정했으며, 비율을 log-변환 항체 농도에 대해 그래프화하고, IC50 값을 S자형 투여량-반응의 비선형 회귀(곡선 적합)를 사용하여 결정하였다. STAT3 활성화 분석에 사용된 대조군 항체에는 양성 대조군으로 PC1(PC1은 p19에 특이적인 것으로 알려진 참조 항체, Biointron, 항목 번호 20180926A04) 및 음성 대조군으로 mIgG2a(자체 생성)가 포함되었다.
결과: 표 5에 나타낸 바와 같이, 분석에서 평가된 항-IL-23p19-특이적 항체는 최대 99 내지 100% 억제로 35.2pM 내지 264.6pM 범위의 IC50 값으로 STAT3 활성화를 억제하였다. 양성 대조군(PC1)은 24.30 pM 내지 117.20 pM 범위의 IC50 값을 가지며 다수의 실험에서 98 내지 99%의 억제를 나타내었다.
IL-23/IL-23 수용체 매개된 STAT3 활성화 억제
항-IL-23p19 mAb IC50 pM 상위 억제 %
Hu-2 18006B 157.7 97%
Hu-4 18006B 168.5 99%
Hu-5 18006B 226.4 99%
Hu-6 18006B 60.5 99%
Hu-6 18006B* 35.2 99%
Hu-4 18006B* 264.6 100%
Hu-4 18006B** 157.4 100%
도 7의 결과는 개시된 선택된 4개의 항-IL-23p19 항체(hu-4 18006B, hu-4-18006B*, hu-6 18006B 및 hu-6 18006B*)가 투여량 의존적 방식으로 STAT3 활성화를 억제함을 나타내었다. 양성 대조군(PC1)은 또한 예상대로 투여량 반응 방식으로 STAT3 활성화의 억제를 보여주었다.
실시예 6: 인간 PBMC에 의한 IL-12-의존적 IFN-γ 생성의 억제
PBMC의 IL-12 자극은 NK 세포 및 T-세포에 의한 IFN-γ의 생성을 자극하는 것으로 알려져 있다. 개시된 항-p19 항체가 IFN-γ 생성을 억제할 수 있는지를 결정하기 위해, 대표적인 개시된 인간 항-p19 항체를 PMBC IL-12 자극 분석에서 분석하였다.
간략하게, 인간 PBMC를 동결 원액으로부터 해동시키고 384 웰 플레이트에서 50 ng/ml의 IL-18(R&D, 9124-IL/CF) 플레이트를 포함하는 RPMI + 10% FBS에 재현탁시켰다. 시험 항체의 연속 희석액을 저결합 384웰 플레이트의 성장 배지에서 제조했다. 인간 IL-12(25 ng/ml) 또는 사이노몰구스 원숭이 IL-12(25 ng/ml)를 각 웰에 옮기고 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 혼합물(시험된 항체 + IL-12)을 PBMC 세포 플레이트에 플레이팅하였다. 세포를 가습된 37℃/5% CO2 인큐베이터에서 48시간 동안 인큐베이션했다. IFN-γ의 생성을 제조업체의 프로토콜에 따라 AlphaLISA(PerkinElmer, AL217C)에 의해 측정하였다.
인간 PBMC 분석에 사용된 대조군 항체: PC1(p19 특이적 항체로 알려진 참조 항체, Biointron, 항목 번호 20180926A04), PC2(IL-12의 p40 하위단위에 대해 특이성이 알려진 참조 항체 및 IL-23, Biointron, 항목 번호 20180925A07), 항-IL-23 p40 하위단위 Mab(Hu-19 18006*, 자체 생성); mIgG2a(NovaRock Biotherapeutics에 의해 생성됨) 및 인간 IgG4(Dendritics, 카탈로그 DDXCHO4P-100, 항목 DDXCH04-028)를 음성 대조군 항체로 사용하였다.
결과: 도 8 및 도 9에 나타낸 바와 같이, 항-IL-23p19 항체(Hu-6 18006B* 및 Hu-4 18006B* 및 PC1)는 인간 PBMC에 의한 인간 IL-12(도 8) 및 사이노몰구스 원숭이 IL-12 (도 9) 매개된 IFN-γ 생성을 억제하지 않았으나, 양성 대조군인 PC2 및 Hu-19 18006*은 인간(도 8) 및 사이노몰구스 원숭이(도 9) PBMC에서 예상대로 투여량 의존적 방식으로 억제하였다. 이 데이터는 개시된 p19 항체가 p19에 특이적이라는 결론을 뒷받침한다.
실시예 7: IL-23-유도된 뮤린 피부 염증 모델에서 항-p19-특이적 항체의 생체내 효능
인간 건선(PsO)의 주요 유도인자로서 IL-23/IL-17 경로의 역할은 잘 특성화되고 임상적으로 검증되었다. 건선(PsO)의 동물 모델은 인간 질병의 병태생리학을 이해하는데 중요하다. IL-23의 피내 주사는 설치류에서 IL-23 경로를 연구하는데 사용되었으며 PsO 치료에서 신규한 소분자/생물학적 제제의 약리학을 평가하는데 사용할 수 있다(문헌[Stephen B. Gauld et al., J. Dermatological Science, 92(2018) 45-53]).
인간 IL-23은 뮤린 IL-23 수용체에 결합하여 마우스에서 mIL-17 생성 및 염증을 유도하는 것으로 알려져 있다. 마우스 귀 염증을 유도하기 위해 마우스 귀에 인간 IL-23을 피내 주사하는 것은 인간 건선(PsO)에 대한 생물학적 약물을 특성화하기 위한 건선 모델에 사용되었다(문헌[Aggarwal et al., J Biol Chem 2003; 278: 1910-4; Singh et al., MAbs 2015 July-Aug; 7(4): 77-791]).
생체내에서 IL-23 기능을 차단하는 Hu-4 18006 B (mIgG2c), Hu-4 18006 B** (hIgG4), hu-5 18006B (mIgG2b) 및 Hu-6 18006 B* (mIgG2a) p19-특이적 항체의 능력을 평가하기 위해 항체를 인간 IL-23-유도된 뮤린 피부 염증 모델에서 시험했다. 이들 대표적인 항체를 염증 반응을 감소시키는 능력에 대해 평가하였다.
이 모델에서, 재조합 인간 IL-23(3 μg/10 μl/마우스/일)을 마우스 오른쪽 귀의 피부(즉, 피내)에 연속 8일(D0 - D7) 동안 주사하여 표피 증식, 부전각화증 및 국소 염증 침윤의 조직학적 증거와 함께 홍반 및 경화를 특징으로 하는 건선-유사 염증 피부 반응을 유도하였다.
마우스에 2개의 프로토콜에 따라 p19 특이적 항체(Biointron, 항목 번호 20180926A04)인 것으로 알려져 있는 참조 항체 PC1 또는 IL-23p19 항체 (hu-4 18006B, hu-4 18006B**, hu-5 18006B, 또는 hu-6 18006B*)을 복강내(i.p.) 주사하여 2회 처리하였다. 제1 프로토콜에서 마우스에 PBS 대조군(비히클) 또는 항체를 제공하였다. 제1 주사는 IL-23 주사 전날이었고 두 번째 주사는 IL-23 주사 후 3일차에 이루어졌다. 제2 프로토콜에서 마우스에 PBS 대조군 또는 항체를 제공하였다. 제1 주사는 IL-23 주사 1시간 전이었고 제2 주사는 IL-23 주사 후 3일차에 이루어졌다(도 10).
마우스의 체중, 귀 두께 및 귀 염증 점수에 대해 매일 측정하였다. 귀의 염증 점수를 다음 기준에 따라 0일, 2일, 4일, 6일 및 8일차에 계산하였다: 귓바퀴 모양(상대적으로 정상-0, 최소 변화-1, 중등도 내지 현저한 변화-2, 부종 및 중증 기형-3). 피부 색(상대적으로 정상-0; 최소 비대-1; 경미한 비대-2; 중증 비대-3) 및 흰색 비늘(상대적으로 정상-0, 최소-1, 경미-2, 명백-3). 각 마우스의 오른쪽 귀 두께를 0일, 2일, 4일, 6일 및 8일차에 측정하고 촬영했다.
실험 마지막 날(8일차)에 동물을 이산화탄소로 처리하고, 혈액 샘플을 수집하고, 혈청을 분리하였다(-80℃ 동결기에 보관). 모델링 귀를 수집하고 두 조각으로 절단했다: 한 조각은 10% 중성 완충 포르말린에 고정하고 다른 조각은 액체 질소에서 동결하여 -80℃ 동결기에 보관했다.
데이터는 평균 ± SEM으로 제공되었다. 통계적 유의도를 P 값이 0.05 미만일 때 고려하였다.
표 6 및 표 7에 제공된 데이터는 주사된 귀에 대한 전체 점수를 요약한다(귓바퀴 모양, 피부색, 미세혈관 변화 및 흰색 비늘의 점수를 추가함). 결과는 대표적인 p19 특이적 항체로 처리된 마우스가 IL-23 주사 모델 그룹에 비해 감소된 염증 반응을 경험했음을 나타내었다. 효과는 4일차부터 개시되어 8일차까지 계속되었다. 효과는 통계적으로 유의한 것이다. 이 결론은 요약 점수 값과 귀 두께 값 모두에서 분명하다.
주사된 귀의 전체 점수(x±s, n=10)
그룹 전체 점수##
D0 D2 D4 D6 D8
PBS 0.0±0.00 0.0±0.00 0.0±0.00 0.3±0.95 0.2±0.42
IL-23 0.0±0.00 0.0±0.00 1.9±1.37 9.6±2.37 10.8±1.93
PC1 (10 mg/kg) 0.0±0.00 0.0±0.00 0.6±0.97* 1.3±1.34*** 2.0±2.05***
Hu-4 18006B (10 mg/kg) 0.0±0.00 0.0±0.00 0.6±1.26* 1.7±1.83*** 3.2±3.05***
Hu-5 18006B (10 mg/kg) 0.0±0.00 0.0±0.00 0.8±1.23 2.1±1.60*** 4.1±2.33***
* p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001 대 모델.
IL-23이 주사된 귀의 전체 점수 (x±s, n=8)
그룹 전체 점수##
D0 D2 D4 D6 D8
PBS 0±0 0±0 0±0*** 0±0*** 0±0***
IL-23 0±0 0±0 1.88±0.3 5.63±0.6 7.75±0.53
PC1 3 mg/kg 0±0 0±0 0.5±0.19** 1.38±0.26*** 2.25±0.25***
PC-1 6 mg/kg 0±0 0±0 0.38±0.18** 1±0.33*** 1.75±0.25***
Hu-4 18006B** 3 mg/kg 0±0 0±0 0.5±0.27** 1.25±0.37*** 2.13±0.3***
Hu-4 18006B** 6 mg/kg 0±0 0±0 0.25±0.16** 1.13±0.3*** 1.88±0.23***
Hu-6 18006B* 3 mg/kg 0±0 0±0 0.38±0.18** 1.13±0.35*** 2.13±0.23***
Hu-6 18006B* 6 mg/kg 0±0 0±0 0.25±0.16** 1±0.27*** 1.75±0.31***
**p<0.01, ***p<0.001 대 모델
표 8 및 표 9에 나타낸 바와 같이, 마우스 귀 두께는 모델(IL-23 처리)와 비교하여 선택된 항-IL-23p19 항체의 처리에 의해 감소되었다. 치료 효과(피부에서 염증 면역 반응의 생체내 억제)는 4일차부터 개시하여 8일차까지 계속되었고 효과는 통계적으로 유의했다(p<0.001 대 모델, IL-23 치료).
0일부터 8일까지 주사된 귀의 귀 두께(x±s, n=10)
그룹 귀 두께(mm)
D0 D2 D4 D6 D8
PBS 0.22±0.02 0.19±0.01 0.22±0.01 0.23±0.02 0.26±0.02
IL-23 0.23±0.02 0.25±0.01 0.37±0.06 0.56±0.09 0.65±0.12
PC1 (10 mg/kg) 0.23±0.02 0.23±0.01 0.28±0.08** 0.35±0.04*** 0.33±0.03***
hu-4 18006B (10 mg/kg) 0.23±0.01 0.22±0.02 0.31±0.04* 0.35±0.03*** 0.43±0.07***
hu-5 18006B (10 mg/kg) 0.23±0.01 0.23±0.02 0.35±0.02 0.42±0.11** 0.50±0.15*
* p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001 대 모델.
IL-23이 주사된 귀의 귀 두께 (x±s, n=8)
그룹 귀 두께(mm)
D0 D2 D4 D6 D8
PBS 0.19±0 0.2±0*** 0.24±0*** 0.23±0*** 0.23±0.01***
IL-23 0.19±0 0.24±0.01 0.39±0.01 0.48±0.02 0.51±0.02
PC1 3 mg/kg 0.19±0 0.23±0 0.35±0** 0.33±0.01*** 0.34±0.01***
PC1 6 mg/kg 0.19±0 0.23±0 0.34±0*** 0.33±0.01*** 0.33±0.01***
Hu-4 18006B** 3 mg/kg 0.18±0 0.23±0 0.36±0.01** 0.35±0.01*** 0.36±0.01***
Hu-4 18006B** 6 mg/kg 0.18±0 0.23±0 0.35±0.01** 0.34±0.01*** 0.35±0.01***
Hu-6 18006B* 3 mg/kg 0.19±0 0.23±0 0.36±0** 0.33±0.01*** 0.35±0***
Hu-6 18006B* 6 mg/kg 0.19±0 0.23±0 0.34±0*** 0.33±0.01*** 0.34±0.01***
**p<0.01, ***p<0.001 대 모델
도 10에 제공된 데이터는 개시된 항-p19-특이적 항체 hu-4 18006B** 및 hu-6 18006B*가 비처리 대조군(인간 IL-23만이 처리된 모델)과 비교하여 귀 두께의 통계적으로 유의한 감소를 유도하였다.
도 11a, 도 11b, 도 11c 및 도 11d는 실험 과정에 걸쳐 얻어지고 아래에 기재된 바와 같은 점수 시스템으로 표시된 표피의 두께(도 11a), 진피의 두께(도 11b), 염증 세포의 침윤(도 11c) 및 과각화증 또는 부전증(도 11d)와 같은 H&E 병리학 염색 점수에 의해 결정된 염증 피부 반응에 대한 항-p19-특이적 항체의 효과를 확립하는 데이터를 제공한다.
간단히 말해서, 8일째에 마우스 귀를 수집하고 현미경으로 관찰하였다. 조직을 10% 중성 완충 포르말린에 고정시켰다. 고정 후 조직을 다듬고 탈수하고 포매하고 슬라이드에 절편화하고 관련 SOP에 따라 헤마톡실린/에오신(H&E)으로 염색했다. 연구 병리학자는 광학 현미경으로 조직 병리학 평가를 수행했다. 5단계 등급 시스템(상대적으로 정상, 최소, 경증, 중등도 내지 현저함, 중증)을 사용하여 현미경 소견을 분류했다.
결과: 항-p19 항체 hu4 18006B를 사용한 처리는 모델과 비교하여 IL-23 주사에 의해 유도된 부종 반응 및 염증 점수 둘 모두의 유의한 감소를 초래하였다. Hu-4 18006B는 3가지 점수, 표피 두께(도 11a), 진피 두께(도 11b) 및 염증 세포 침윤(도 11c)에서 PC1과 비교하여 우수한 억제 효과를 나타낸다. Hu-4는 또한 각화과다증의 억제를 나타내었다(도 11d).
도 12는 치료 후 8일째에 얻은 H&E 염색된 귀 절편의 대표적인 사진을 제공한다. H&E 염색 절차는 위에서 기재한 바와 같다.
결과: 선택된 개시된 항-IL-23p19 항체 치료(Hu-4 18006B)는 모델과 비교하여 마우스 피부 염증을 유의하게 억제하였다.
달리 명시되지 않는 한, 명세서 및 청구범위에 사용된 성분의 양, 분자량과 같은 특성, 반응 조건 등을 나타내는 모든 수치는 모든 경우에 "약"이라는 용어에 의해 수정되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 달리 표시되지 않는 한, 명세서 및 첨부된 청구범위에 기재된 수치 매개변수는 본 개시내용에 의해 얻고자 하는 적절한 특성에 따라 변할 수 있는 근사치이다. 최소한 청구범위에 대한 균등물 원칙의 적용을 제한하려는 시도가 아니라 각 수치 매개변수는 적어도 보고된 유효 자릿수의 관점에서 일반적인 반올림 기법을 적용하여 해석되어야 한다.
본 개시내용의 넓은 범위를 기재하는 수치 범위 및 매개변수가 근사치임에도 불구하고, 특정 실시예에 기재된 수치 값은 가능한 한 정확하게 보고된다. 그러나 임의의 수치에는 각각의 테스트 측정에서 나타난 표준 편차로 인해 필연적으로 발생하는 특정 오류가 포함되어 있다.
본 개시내용의 기재와 관련하여(특히 다음 청구범위 관련하여) 사용되는 용어 단수형("a", "an", "the") 및 유사한 용어는 본 명세서에 달리 명시되지 않거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한 단수 및 복수를 모두 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 본 명세서에 값의 범위의 언급은 범위 내에 속하는 각각의 개별 값을 개별적으로 언급하는 것의 약식 방법으로서 역할을 하는 것일 뿐이다. 본 명세서에 달리 표시되지 않는 한, 각각의 개별 값은 본 명세서에 개별적으로 열거된 것처럼 본 명세서에 포함된다. 본 명세서에 기재된 모든 방법은 본 명세서에 달리 표시되거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 임의의 적절한 순서로 수행될 수 있다. 본 명세서에 제공된 임의의 모든 예 또는 예시적인 언어(예를 들어, "예컨대")의 사용은 단지 본 개시내용을 더 잘 기재하기 위한 것이며 달리 청구된 개시내용의 범위를 제한하지 않는다. 본 명세서의 어떤 언어도 본 개시내용의 실행에 필수적인 임의의 청구되지 않은 요소를 나타내는 것으로 해석되어서는 안 된다.
본 명세서에 개시된 개시내용의 대안적인 요소 또는 실시형태의 그룹화는 제한으로 해석되어서는 안 된다. 각 그룹 구성원은 개별적으로 또는 그룹의 다른 구성원 또는 본 명세서에 존재하는 다른 요소와 임의의 조합으로 언급 및 청구될 수 있다. 그룹의 하나 이상의 구성원이 편의 및/또는 특허성을 이유로 그룹에 포함되거나 그룹에서 삭제될 수 있다. 이러한 임의의 포함 또는 삭제가 발생하면 본 명세서는 수정된 그룹을 포함하는 것으로 고려되어 첨부된 청구범위에 사용된 모든 Markush 그룹의 서면 기재내용을 충족한다.
본 개시내용을 수행하기 위해 본 발명자들에게 공지된 최적의 모드를 포함하여, 본 개시내용의 특정 실시형태가 본 명세서에 기재되어 있다. 물론, 이들 기재된 실시형태에 대한 변형은 전술한 설명을 읽을 때 당업자에게 명백해질 것이다. 본 발명자는 숙련된 기술자가 이러한 변형을 적절하게 사용하기를 기대하며, 본 발명자는 본 개시내용이 본 명세서에 구체적으로 기재된 것과 다르게 실시되기를 의도한다. 따라서, 본 개시내용은 관련 법률이 허용하는 바에 따라 본 명세서에 첨부된 청구범위에 인용된 대상의 모든 변형 및 균등물을 포함한다. 더욱이, 본 명세서에서 달리 나타내거나 달리 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 모든 가능한 변형에서 전술한 요소의 임의의 조합은 본 개시내용에 포함된다.
본 명세서에 개시된 특정 실시형태는 "~로 이루어진" 또는 "~로 필수적으로 이루어진"이라는 언어를 사용하는 청구범위에서 추가로 제한될 수 있다. 청구범위에서 사용될 때, 출원 또는 수정에 따라 추가되었는지에 관계없이 전환 용어 "~로 이루어진"은 청구범위에 명시되지 않은 요소, 단계 또는 성분을 배제한다. "~로 필수적으로 이루어진"이라는 전환 용어는 청구 범위를 지정된 재료 또는 단계와 기본적이고 신규한 특성(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것으로 제한한다. 그렇게 청구된 개시내용의 실시형태는 본 명세서에서 필수적으로 또는 명시적으로 기재되고 가능하게 된다.
본 명세서에 개시된 개시내용의 실시형태는 본 개시내용의 원리를 예시하는 것임을 이해해야 한다. 채용될 수 있는 다른 변형은 본 개시내용의 범위 내에 있다. 따라서, 제한이 아닌 예로서, 본 개시내용의 대안적인 구성이 본 명세서의 교시에 따라 이용될 수 있다. 따라서, 본 개시내용은 도시 및 기재된 바와 같이 정확하게 제한되지 않는다.
본 개시내용이 다양한 특정 재료, 절차 및 실시예를 참조하여 본 명세서에 기재되고 예시되었지만, 본 개시내용이 그 목적을 위해 선택된 재료 및 절차의 특정 조합으로 제한되지 않는 것으로 이해된다. 이러한 세부사항의 수많은 변형이 당업자에 의해 이해될 수 있는 바와 같이 암시될 수 있다. 본 명세서 및 실시예는 단지 예시적인 것으로 고려되어야 하며, 본 개시내용의 진정한 범위 및 사상은 다음 청구범위에 의해 도출된다. 본 출원에서 언급된 모든 참조문헌, 특허 및 특허 출원은 그 전문이 본 명세서에 참조로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> NOVAROCK BIOTHERAPEUTICS, LTD. <120> ANTI-INTERLEUKIN-23 P19 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF <130> 122863-5002 <160> 32 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-2_VH <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Trp Arg Ala Phe Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-2_VL <400> 2 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser 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Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 4 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu--4_VL <400> 4 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Gly Gly Ser 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Thr Tyr Ala Ser Gln Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Ile Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 5 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-5_VH <400> 5 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Ser Phe Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg His Gly Val Arg Gly Val Ile Pro His Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 6 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-5_VL <400> 6 Gln Thr Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Leu Asn Ser Gly Ser Val Ser Thr Ile 20 25 30 Tyr Tyr Pro Ser Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ala 35 40 45 Leu Ile Tyr Ser Thr Asn Thr Arg Ser Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Ile Leu Gly Asn Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Ala Asp Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Val Leu Phe Leu Gly Ser 85 90 95 Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 7 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-6_VH <400> 7 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Leu Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Gly Gln Lys Val 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Thr Glu Asn Ile Asn Trp Arg Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-6_VL <400> 8 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Gly Ser Ser 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Ser Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 9 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-2_VH-CDR1 <400> 9 Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Gly 1 5 <210> 10 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-2_VH-CDR2 <400> 10 Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr 1 5 <210> 11 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-2_VH-CDR3 <400> 11 Ala Arg Glu Trp Arg Ala Phe Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 1 5 10 <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-2_VL-CDR1 <400> 12 Gln Ser Leu Glu His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 13 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-2_VL-CDR2 <400> 13 Lys Val Ser 1 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-2_VL-CDR3 <400> 14 Thr Gln Ala Thr Gln Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 15 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-4_VH-CDR1 <400> 15 Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Gly 1 5 <210> 16 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-4_VH-CDR2 <400> 16 Ile Ser Ala Tyr Ser Gly Asn Thr 1 5 <210> 17 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-4_VH-CDR3 <400> 17 Ala Arg Ala Ser Ala Asn Trp Tyr Asp Tyr Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 18 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu--4_VL-CDR1 <400> 18 Gln Thr Ile Gly Gly Ser 1 5 <210> 19 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu--4_VL-CDR2 <400> 19 Tyr Ala Ser 1 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu--4_VL-CDR3 <400> 20 His Gln Ser Ser Ile Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 21 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-5_VH-CDR1 <400> 21 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Phe Tyr 1 5 10 <210> 22 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-5_VH-CDR2 <400> 22 Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 23 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hu-5_VH-CDR3 <400> 23 Ala Arg His Gly Val Arg Gly Val Ile Pro His Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 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Artificial Sequence <220> <223> Hu-6_VL-CDR3 <400> 32 His Gln Ser Ser Ser Leu Pro Tyr Thr 1 5

Claims (20)

  1. (a) CDR1: 서열번호 9, CDR2: 서열번호 10, 및 CDR3: 서열번호 11을 포함하는 중쇄 가변 영역(heavy chain variable region); 및 CDR1: 서열번호 12, CDR2: 서열번호 13, 및 CDR3: 서열번호 14를 포함하는 경쇄 가변 영역(light chain variable region);
    (b) CDR1: 서열번호 15, CDR2: 서열번호 16, 및 CDR3: 서열번호 17을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 CDR1: 서열번호 18, CDR2: 서열번호 19, 및 CDR3: 서열번호 20을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    (c) CDR1: 서열번호 21, CDR2: 서열번호 22, 및 CDR3: 서열번호 23을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 CDR1: 서열번호 24, CDR2: 서열번호 25, 및 CDR3: 서열번호 26을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    (d) CDR1: 서열번호 27, CDR2: 서열번호 28, 및 CDR3: 서열번호 29를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 CDR1: 서열번호 30, CDR2: 서열번호 31, 및 CDR3: 서열번호 32를 포함하는 경쇄 가변 영역
    을 포함하는, 항-IL-23p19 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체는
    (a) 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 서열, 및 서열번호 2의 경쇄 가변 영역 서열;
    (b) 서열번호 3의 중쇄 가변 영역 서열, 및 서열번호 4의 경쇄 가변 영역 서열;
    (c) 서열번호 5의 중쇄 가변 영역 서열, 및 서열번호 6의 경쇄 가변 영역 서열; 또는
    (d) 서열번호 7의 중쇄 가변 영역 서열, 및 서열번호 8의 경쇄 가변 영역 서열
    을 포함하는, 항-IL-23p19 항체.
  3. 제1항에 있어서, 상기 항체는 항-인간 IL-23p19 항체인, 항-IL-23p19 항체.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항체는 전장 항체(full-length antibody)인, 항-IL-23p19 항체.
  5. 제1항에 있어서, 상기 항체는 항체 단편인, 항-IL-23p19 항체.
  6. 제4항에 있어서, 항체 단편은 Fab, Fab', F(ab)2, Fd, Fv, scFv 및 scFv-Fc 단편, 단일-사슬 항체, 미니바디(minibody), 및 디아바디(diabody)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항-IL-23p19 항체.
  7. 제1항에 있어서, 상기 항체는 단일클론 항체(monoclonal antibody)인, 항-IL-23p19 항체.
  8. 제1항에 있어서, 상기 항체는 인간 항체인, 항-IL-23p19 항체.
  9. 제1항에 있어서, 상기 항체는 뮤린 항체(murine antibody)인, 항-IL-23p19 항체.
  10. 제1항에 있어서, 상기 항체는 키메라 항체(chimeric antibody)인, 항-IL-23p19 항체.
  11. 제1항에 있어서, 상기 항체는 이중특이적 항체(bispecific antibody)인, 항-IL-23p19 항체.
  12. 제1항에 있어서, 상기 항체는 인간화된 항체인, 항-IL-23p19 항체.
  13. 제1항에 있어서, 상기 항체는 IL-12의 p40 하위단위(subunit)에 결합하지 않는, 항-IL-23p19 항체.
  14. 제1항의 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  15. 면역-매개된 염증 질병(immune-mediated inflammatory disease)을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 본 방법은 제1항의 항체를 이를 필요로 하는 환자에 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  16. 제1항에 따른 항-IL-23p19 항체를 암호화(encoding)하는 서열을 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드.
  17. 제16항에 있어서, 서열번호 1, 3, 5, 또는 7 중 어느 하나에 제시된 바와 같은 서열을 암호화하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드.
  18. 제16항에 따른 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터(vector).
  19. 제16항에 따른 폴리뉴클레오타이드, 및/또는 제17항에 따른 벡터를 포함하는, 세포.
  20. 제1항에 따른 항-IL-23p19 항체를 생산하기 위한 방법으로서, 본 방법은 제19항의 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 방법.
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