JP2023509373A - 抗インターロイキン－２３ ｐ１９抗体およびそれの使用方法 - Google Patents

抗インターロイキン－２３ ｐ１９抗体およびそれの使用方法 Download PDF

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Abstract

要約本開示は、ＩＬ－２３ｐ１９に結合する抗体およびそれの抗体断片を提供する。本開示の抗体およびそれの抗体断片は、ＩＬ－２３受容体シグナル伝達軸の生物学的活性をモジュレートすることができ、したがって、免疫介在性炎症性障害の処置に有用である。

Description

関連出願の相互参照
本国際特許出願は、そのすべてが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１９年１２月２０日出願の、米国仮出願第６２／９５１，２３１号の優先権を主張するものである。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０１９年１２月１６日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、「１２２８６３－５００２－ＷＯ＿ＮＶＲＢ－００４－００１＿ＳＴ２５．ＴＸＴ」と命名され、１３キロバイトのサイズである。
分野
本開示は全体として、インターロイキン－２３のｐ１９サブユニットに結合する抗体およびそれの抗体断片に関する。本抗体は、免疫介在性炎症性障害、自己免疫疾患、またはがんの処置に有用である。
調節性サイトカインのインターロイキン－１２（ＩＬ－１２）ファミリーには、共有結合したヘテロ二量体サブユニットを含むサイトカインの独自の群（ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＩＬ－３５、およびＩＬ－３９）が含まれる。ヘテロ二量体ＩＬ－１２ファミリーのサイトカインメンバーは、α鎖（ｐ１９、ｐ２８またはｐ３５）とβ鎖（ｐ４０またはＥｂｉ３）から構成される。
ＩＬ－２３は、ＩＬ－１２と共有するｐ４０サブユニットと連結された独自のｐ１９サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインである。ＩＬ－２３の主たる供給源は、組織常在性のまたは動員された樹状細胞およびマクロファージである。ＩＬ－２３の生物作用は、以下の２つの部分から構成される受容体複合体をとおして生じると仮説が立てられている：ｉ．）ＩＬ－１２Ｒβ１、ＩＬ－１２と共通した部分、およびｉｉ．）ＩＬ－２３Ｒ、ＩＬ－２３に固有の部分。
サイトカインのＩＬ－１２ファミリーのメンバーは、自然免疫応答および適応免疫応答を方向づけることにより、免疫学的司令塔として働く。これらの調節性サイトカインは、Ｔ細胞亜集団の発達を誘導すること、および、感染、炎症および自己免疫疾患の転帰に対する適応免疫応答を方向づけする多くの免疫細胞集団の機能と運命を変化させることによって作用する。ＩＬ－１２およびＩＬ－２３は主に、炎症誘発性／刺激性（prostimulatory）サイトカインであり、これらのサイトカインは、それぞれ、Ｔｈ１細胞およびＴｈ１７細胞の発達において役割を果たす。
機能的ＩＬ－２３受容体は、ＩＬ－１２Ｒβ１サブユニットのヘテロ二量体であり、このサブユニットは、ＩＬ－１２受容体と共有されかつシグナル伝達鎖ＩＬ－２３Ｒとパートナーを組む（ｐ１９サブユニット結合）。ＩＬ－２３の受容体は、ヤヌスキナーゼ２（Ｊａｋ２）と構成的に会合し、ＳＴＡＴ３を主に活性化する。ＩＬ－２３受容体の発現は、主としてメモリーＴ細胞およびＮＫ細胞で検出される。単球、マクロファージおよび樹状細胞も低レベルでＩＬ－２３受容体を発現する。
ＩＬ－２３応答性細胞が自己免疫炎症性疾患およびがんに関連していること、およびＩＬ－２３活性を調節することで有力な治療を提供することができることについて、かなりの証拠がある。特に、ＩＬ－２３の異常調節は、乾癬、乾癬性関節炎、クローン病および潰瘍性大腸炎などの免疫介在性炎症性疾患（ＩＭＩＤ）に関連している。加えて、ＩＬ－２３およびＩＬ－１２を含めて、炎症誘発性サイトカインのバランスは、抗腫瘍性または腫瘍促進性免疫の発達を形作る上でキーとなる役割を果たす。
ＩＬ－２３／ＩＬ－１２経路は、多発性炎症性疾患の病態生理学に関与する細胞メカニズムに関連している。いくつかの治療戦略がＩＬ－２３活性を阻害するように設計されており、免疫介在性炎症性障害の処置のために炎症誘発性ＩＬ－２３／１Ｌ－２３受容体シグナル伝達軸を標的とする治療薬へのニーズが引き続きある。より具体的には、ＩＬ－２３の、特にヒトＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに高親和性をもって結合するとともに、関連するサイトカインファミリーメンバー、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットに結合しない、選択的ＩＬ－２３ｐ１９アンタゴニスト抗体へのニーズが依然としてある。
本開示は、ＩＬ－２３のサイトカインｐ１９サブユニットに結合する抗体および抗体断片を提供することにより、上のニーズを解決する。抗体および抗体断片は、免疫介在性炎症性疾患（ＩＭＩＤ）（例えば、自己免疫疾患および炎症性障害）の処置にとって、単独で（例えば、単剤療法として）、または他の免疫療法剤との組合せでのいずれかで、有用である。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、ヒトＩＬ－２３のサイトカインｐ１９サブユニットに結合する。さらなる実施形態では、抗体は完全ヒト型である。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、ＣＤＲ１：配列番号９、ＣＤＲ２：配列番号１０、およびＣＤＲ３：配列番号１１を含む重鎖可変領域；ならびに／またはＣＤＲ１：配列番号１２、ＣＤＲ２：配列番号１３、およびＣＤＲ３：配列番号１４を含む軽鎖可変領域、を含む。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、ＣＤＲ１：配列番号１５、ＣＤＲ２：配列番号１６、およびＣＤＲ３：配列番号１７を含む重鎖可変領域；ならびに／またはＣＤＲ１：配列番号１８、ＣＤＲ２：配列番号１９、およびＣＤＲ３：配列番号２０を含む軽鎖可変領域、を含む。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、ＣＤＲ１：配列番号２１、ＣＤＲ２：配列番号２２、およびＣＤＲ３：配列番号２３を含む重鎖可変領域；ならびに／またはＣＤＲ１：配列番号２４、ＣＤＲ２：配列番号２５、およびＣＤＲ３：配列番号２６を含む軽鎖可変領域、を含む。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、ＣＤＲ１：配列番号２７、ＣＤＲ２：配列番号２８、およびＣＤＲ３：配列番号２９を含む重鎖可変領域；ならびに／またはＣＤＲ１：配列番号３０、ＣＤＲ２：配列番号３１、およびＣＤＲ３：配列番号３２を含む軽鎖可変領域、を含む。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、配列番号１、３、５、および７からなる群から選択される可変重鎖配列を含む。
他の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、配列番号２、４、６、および８からなる群から選択される可変軽鎖配列を含む。
他の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、配列番号１、３、５、および７からなる群から選択される可変重鎖配列、ならびに、配列番号２、４、６、および８からなる群から選択される可変軽鎖配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体または抗体断片は、以下の組合せ：
（ａ）配列番号１を含む可変重鎖配列および配列番号２を含む可変軽鎖配列；
（ｂ）配列番号３を含む可変重鎖配列および配列番号４を含む可変軽鎖配列；
（ｃ）配列番号５を含む可変重鎖配列および配列番号６を含む可変軽鎖配列；ならびに
（ｄ）配列番号７を含む可変重鎖配列および配列番号８を含む可変軽鎖配列
から選択される可変重鎖配列および可変軽鎖配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体（例えば、アンタゴニスト抗体）は、ＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに高親和性をもって結合し、関連するサイトカインファミリーメンバー、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットに結合しない。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を呈する：（ａ）ヒトＩＬ－２３ｐ１９に特異的であり、ＩＬ－２３の受容体（ＩＬ－２３Ｒ）へのＩＬ－２３結合を遮断する能力を有する；（ｂ）ＩＬ－２３受容体シグナル伝達とのＩＬ－２３ｐ１９相互作用を阻害、妨害、またはモジュレートする；（ｃ）ＤＢ細胞においてＩＬ－２３によって誘発されるＳＴＡＴ３活性化を阻害する；（ｄ）マウス脾細胞においてヒトＩＬ－２３によって誘発されるＩＬ－１７産生を阻害する；（ｅ）活性化されたヒトＰＢＭＣにおいてヒトＩＬ－２３によって誘発されるＩＬ－１７産生を阻害する；（ｆ）ＩＬ－１２Ｒβ１シグナル伝達とのＩＬ－２３相互作用を阻害しない；（ｇ）ヒト活性化Ｔ細胞（ＰＢＭＣ）においてヒトＩＬ－１２誘発性インターフェロンガンマ産生を阻害しない；（ｈ）ヒト活性化Ｔ細胞（ＰＢＭＣ）においてカニクイザルＩＬ－１２誘発性インターフェロンガンマ産生を阻害しない；および（ｉ）マウス乾癬様モデルにおいてヒトＩＬ－２３によって誘発される皮膚炎症を阻害する。
一態様では、本開示の抗体および単離された抗原結合剤を使用して、ＩＬ－２３ｐ１９誘発性ＩＬ－２３受容体シグナル伝達ネットワーク（例えば、自己免疫疾患を促進する炎症性微小環境の）を阻害することができる。
抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、以下の特性のうちの１つまたは複数を呈することができる：
（ａ）ヒトＩＬ－２３ｐ１９に特異的であり、ＩＬ－２３の受容体であるＩＬ－２３受容体へのＩＬ－２３結合を遮断する能力を有する（例えば、ブロッカー）；
（ｂ）ＩＬ－２３／ＩＬ－２３受容体介在性シグナル伝達を阻害、妨害、またはモジュレートする；
（ｃ）ＤＢ細胞においてＩＬ－２３によって誘発されるＩＬ－２３誘発性ＳＴＡＴ３活性化を遮断する；
（ｄ）マウス脾細胞においてＩＬ－２３誘発性ＩＬ－１７産生を阻害する；
（ｅ）ヒトＰＢＭＣにおいてＩＬ－２３誘発性ＩＬ－１７産生を阻害する；
（ｆ）ＩＬ－１２Ｒβ１シグナル伝達とのＩＬ－２３相互作用を阻害しない；
（ｇ）ヒトＰＢＭＣにおいてヒトＩＬ－１２誘発性インターフェロン－γ産生を遮断しない；
（ｈ）ヒトＰＢＭＣにおいてカニクイザルＩＬ－１２誘発性インターフェロンガンマ産生を阻害しない；および
（ｉ）マウス乾癬様モデルにおいてＩＬ－２３誘発性皮膚炎症を阻害する。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、配列番号１、３、５、および７からなる群から選択される可変重鎖配列、ならびに、配列番号２、４、６、および８からなる群から選択される可変軽鎖配列、に由来するＣＤＲ配列の組合せを含む。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体およびそれの抗体断片は、表１に開示の１つもしくは複数の重鎖可変領域ＣＤＲおよび／または表２に開示の１つもしくは複数の軽鎖可変領域ＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体または抗体断片は、組換え抗体（例えば、キメラ抗体またはヒト化抗体）であり、６つ（６）のＣＤＲを含むが、すべてが本明細書に開示の単一の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体のＶＨドメインまたはＶＬドメインに由来する。例えば、結合剤は、Ｈｕ－２．１８００６Ｂ（ヒト抗体の場合）と指定される抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体のＣＤＲ領域６つすべてを含むことができる。代表的な例では、抗体またはそれの抗体断片は、配列番号９～１１および配列番号１２～１４のアミノ酸配列を含むことができ、これらの配列は、Ｈｕ－２．１８００６Ｂ抗体の、可変重鎖領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに可変軽鎖領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を表す。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体は完全長抗体である。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体は抗体断片である。さらなる実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよびｓｃＦｖ－Ｆｃ断片、単鎖抗体、ミニボディ、およびダイアボディからなる群から選択される。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体はモノクローナル抗体である。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体はヒト抗体である。一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体はマウス抗体である。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体はキメラ抗体である。一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体は二重特異性抗体である。一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体はヒト化抗体である。
抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体およびそれの抗体断片は、自己免疫疾患もしくは炎症性障害などの免疫介在性炎症性疾患（ＩＭＩＤ）、またはがんの処置または予防に使用することができる。ＩＭＩＤまたはがんの処置または予防のためのかかる方法は、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片を含む組成物または製剤を、それを必要とする対象に投与するステップを含む。さらなる実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、単独で（例えば、単剤療法として）、または他の免疫療法剤および／または化学療法との組合せでのいずれかで投与することができる。ＩＭＩＤは、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎またはクローン病）、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、化膿性汗腺炎、アトピー性皮膚炎、喘息および家族性腺腫性ポリポーシス（ＦＡＰ）からなる群から選択することができる。
本開示の前述の概要、および以下の詳細な説明は、添付の図と併せて読むことで、よりよく理解されよう。本開示を例示する目的で、目下好ましい実施形態を図に示している。しかし、示されたまさにその通りの構成、例および手段に、本開示が限定されないことを理解されたい。
（図１Ａ及び１Ｂ）抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列ならびにそれらのそれぞれのＣＤＲ配列を提供する図である。配列識別子が提供されており、ＣＤＲについては可変ドメイン配列という状況において下線が引かれている。 （図１Ｃ及び１Ｄ）抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列ならびにそれらのそれぞれのＣＤＲ配列を提供する図である。配列識別子が提供されており、ＣＤＲについては可変ドメイン配列という状況において下線が引かれている。 ＢＩＡｃｏｒｅによって決定された、ヒトＩＬ－２３、ヒトｐ１９サブユニットおよびマウスｐ４０サブユニットを含む組換えサイトカイン、ヒトＩＬ－１２ならびにヒトｐ４０サブユニットに対する抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の結合プロファイルを示す図である。 ＢＩＡｃｏｒｅによって決定された、ヒトＩＬ－２３、ヒトｐ１９サブユニットおよびマウスｐ４０サブユニットを含む組換えサイトカイン、ヒトＩＬ－１２ならびにヒトｐ４０サブユニットに対する抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の結合プロファイルを示す図である。 ＢＩＡｃｏｒｅによって決定された、ヒトＩＬ－２３、ヒトｐ１９サブユニットおよびマウスｐ４０サブユニットを含む組換えサイトカイン、ヒトＩＬ－１２ならびにヒトｐ４０サブユニットに対する抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の結合プロファイルを示す図である。 ＢＩＡｃｏｒｅによって決定された、ヒトＩＬ－２３、ヒトｐ１９サブユニットおよびマウスｐ４０サブユニットを含む組換えサイトカイン、ヒトＩＬ－１２ならびにヒトｐ４０サブユニットに対する抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の結合プロファイルを示す図である。 ＢＩＡｃｏｒｅによって決定された、ヒトＩＬ－２３、ヒトｐ１９サブユニットおよびマウスｐ４０サブユニットを含む組換えサイトカイン、ヒトＩＬ－１２ならびにヒトｐ４０サブユニットに対する抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の結合プロファイルを示す図である。 図３Ａおよび３Ｂ：ＥＬＩＳＡによって決定された、ヒトＩＬ－２３を含む組換えサイトカインに対する、選択された代表的なＩＬ－２３ｐ１９抗体の、用量依存性結合を示す図である。 図３Ｃ：ＥＬＩＳＡによって決定された、ヒトｐ１９サブユニットおよびマウスｐ４０サブユニットを含む組換えサイトカインに対する、選択された代表的なＩＬ－２３ｐ１９抗体の、用量依存性結合を示す図である。図３Ｄおよび３Ｅ：ＥＬＩＳＡによって決定された、ヒトＩＬ－１２およびヒトｐ４０サブユニットに対する、選択された代表的な抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の結合がないことを示す図である。 ＥＬＩＳＡによって決定された、４種のＩＬ－２３ｐ１９抗体によるＩＬ－２３／ＩＬ－２３受容体相互作用の遮断を示す図である。 ＩＬ－２３／ＩＬ－１２受容体β１相互作用を遮断しない代表的な２種のＩＬ－２３ｐ１９抗体を示す図である。 （図６Ａおよび６Ｂ）マウス脾細胞アッセイ（ＭＳＡ）における代表的な３種の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体によるＩＬ－２３誘発性ＩＬ－１７産生の阻害を示す図である。 代表的な２種の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体によるレポーター細胞アッセイにおけるＩＬ－２３誘発性ＳＴＡＴ３活性化の阻害を示す図である。 代表的な２種の抗ＩＬ－２３ｐ１９特異的抗体によって、ヒトＰＢＭＣにおいてヒト１Ｌ－１２誘発性ＩＦＮ－γ産生の阻害はないことを示す図である。 代表的な２種の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体によって、ヒトＰＢＭＣにおいてカニクイザル１Ｌ－１２誘発性ＩＦＮ－γ産生の阻害はないことを示す図である。 実施例７で説明の、ネズミ皮膚炎症モデルにおける代表的な２種の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体によるＩＬ－２３介在性炎症応答（耳の厚さ）のｉｎ ｖｉｖｏ阻害を示す図である。 （図１１Ａ、１１Ｂ、１１Ｃおよび１１Ｄ）実施例７に提示のマウス皮膚炎症モデルにおける、処置されたマウスからの、処置後８日目の２種の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体からの病理学的スコア（凍結耳組織のＨ＆Ｅ染色）効果に関するグラフ表示を提供する図である。 （図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃおよび１２Ｄ）実施例７に提示のマウス皮膚炎症モデルにおける、処置されたマウスからの、ｉｎ ｖｉｖｏ研究の最終日（８日目）に採取された凍結耳組織のヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色の代表的な写真を示す、図である。
ＩＬ－２３は、ｐ１９サブユニットを含み、ＩＬ－２３受容体に結合する炎症誘発性ヘテロ二量体サイトカインである。炎症誘発性ＩＬ－２３／ＩＬ－２３受容体シグナル伝達軸を標的とすることは、懸命な治療的探求の領域である。本開示は、ヒトＩＬ－２３／ＩＬ－２３受容体シグナル伝達軸を阻害し、ＩＭＩＤの処置または予防に使用することができる抗体およびそれの抗体断片を提供する。有利には、本明細書に開示の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体によって、ＩＬ－２３ｐ１９の完全な阻害が可能となり、より低用量の製剤がもたらされ、より低頻度のおよび／またはより効果的な投薬がもたらされ、コストの低減および効率の向上につながる。
本明細書に開示の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体およびそれの抗体断片は、ヒトＩＬ－２３ｐ１９に特異的に結合し、ＩＬ－２３／ＩＬ－２３受容体シグナル伝達軸に拮抗する。一態様では、本開示の抗体およびそれの抗体断片は、高親和性をもってヒトＩＬ－２３に結合し、ＩＬ－２３Ｒとのその相互作用を妨げ、それにより、下流のシグナル伝達カスケードを遮断する。特定の態様では、抗体またはそれの抗体断片は、マウス脾細胞からのおよびヒトＰＢＭＣからのＩＬ－１７のＩＬ－２３刺激性産生を阻害する。別の態様では、抗体またはそれの抗体断片は、ＩＬ－１２に結合も拮抗も両方ともしない。
本開示がより容易に理解することができるように、ある特定の技術的および科学的用語について下に具体的に定義する。本文書の他の場所で特に定義されていない限り、本明細書で使用される他のすべての技術的および科学的用語は、本開示が属する技術分野の当業者であれば一般に理解される意味を有する。
本開示全体をとおして、以下の略語が使用される：
ｍＡｂまたはＭａｂまたはＭＡｂ － モノクローナル抗体。
ＣＤＲ － 免疫グロブリン可変領域の相補性決定領域。
ＶＨまたはＶＨ － 免疫グロブリン重鎖可変領域。
ＶＬまたはＶＬ － 免疫グロブリン軽鎖可変領域。
ＦＲ － 抗体フレームワーク領域、ＣＤＲ領域を除く免疫グロブリン可変領域。
本明細書で使用される場合、「インターロイキン－２３」（ＩＬ－２３と互換的に使用される）という用語は、例えば、インターロイキン－２３サブユニットアルファ（ｐ１９）として特定されるＵｎｉＰｒｏｔエントリＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＮＰＦ７で提供されるアミノ酸配列を有するタンパク質サブユニットに、ジスルフィド連結した、ＩＬ－２３サブユニット（ｐ４０）として特定される、ＵｎｉＰｒｏｔエントリＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ２９４６０で提供されるアミノ酸配列を有するタンパク質サブユニットを含むかまたはそれからなるヒトＩＬ－２３ヘテロ二量体を始めとするヒトＩＬ－２３ヘテロ二量体を指す。
本明細書で使用される場合、「ＩＬ－１２Ｒ複合体」および「ＩＬ－１２Ｒ」という用語は、ＩＬ－１２Ｒβ１サブユニットおよびＩＬ－１２Ｒβ２サブユニットを含む高親和性ＩＬ－１２サイトカイン受容体複合体を指す。
本明細書で使用される場合、「ＩＬ－２３Ｒ複合体」および「ＩＬ－２３Ｒ」という用語は、ＩＬ－１２Ｒβ１（ＩＬ－１２Ｒ複合体と共通で）サブユニットおよびＩＬ－２３Ｒサブユニットを含む高親和性ＩＬ－２３サイトカイン受容体を指す。
本明細書で使用される場合、「インターロイキン－１２」という用語（本開示全体をとおしてＩＬ－１２と互換的に使用される）は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔエントリＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ２９４６０で提供されるアミノ酸配列を含むタンパク質サブユニット（インターロイキン－１２サブユニットベータとして特定（ｐ４０））に、ジスルフィド連結した、ＵｎｉＰｒｏｔエントリＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ２９４５９で提供されるアミノ酸配列を有するタンパク質サブユニット（インターロイキン－１２サブユニットアルファとして特定）を含むかまたはそれからなるヒトＩＬ－１２ヘテロ二量体を始めとするヒトＩＬ－１２ヘテロ二量体を指す。上記用語には、３５ｋＤサブユニット（ｐ３５）と４０ｋＤサブユニット（ｐ４０）とを含むヘテロ二量体タンパク質が含まれ、これらサブユニットはどちらもジスルフィド架橋でともに連結している。上記ヘテロ二量体タンパク質は「ｐ７０サブユニット」と呼ばれる。ヒトＩＬ－１２の構造については、例えば、Kobayashi, et al. (1989) J. Exp Med. 170:827-845およびLing, et al. (1995) J. Exp Med. 154:116-127)にさらに記載されている。ヒトＩＬ－１２という用語は、標準的な組換え発現法によって調製することができる組換えヒトＩＬ－１２（ｒｈ ＩＬ－１２）が含まれることを意図するものである。
本明細書で使用される場合、「ＩＬ－１７」または「ＩＬ－１７Ａ」とも呼ばれる「インターロイキン１７」という用語は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔエントリＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ１６５５２で提供されるアミノ酸配列を有する、タンパク質サブユニットを含むかまたはそれからなるホモ二量体タンパク質を始めとする２０～３０ｋＤのグリコシル化ホモ二量体タンパク質である。ヒトＩＬ－１７遺伝子は、アミノ酸１９個のシグナル配列とアミノ酸１３６個の成熟セグメントを有するアミノ酸１５５個のタンパク質をコードする。ＩＬ－１７は、炎症の部位で活性化Ｔ細胞により分泌されるが、通常、体循環には存在しない。ＩＬ－１７は、ＩＬ－１７Ｒと称されるＩ型膜貫通型受容体に結合するが、これは、他の既知のサイトカイン受容体との有意な配列同一性を明示しない、遍在的に発現する大きなタンパク質である。ヒトＩＬ－１７は、それぞれ、マウスおよびラットのアミノ酸ＩＬ－１７配列と６２．５％および５８％のアミノ酸配列同一性を示す。ヒトＩＬ－１７は、カニクイザルＩＬ－１７と９７．４％のアミノ酸配列同一性を示す。
本明細書における「抗体」という用語は、最も広義に使用され、それらに限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、および多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を含めて、種々の抗体構造を包含する。
ＩｇＧなどの例示的な抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略される）および重鎖定常領域で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略される）および軽鎖定常領域で構成される。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分することができる。それぞれのＶＨおよびＶＬは、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置された、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。
超可変領域は一般に、軽鎖可変領域における、アミノ酸残基約２４～３４（ＬＣＤＲ１；「Ｌ」は軽鎖を示す）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）および８９～９７（ＬＣＤＲ３）からのアミノ酸残基、ならびに、重鎖可変領域における、約３１～３５Ｂ（ＨＣＤＲ１；「Ｈ」は重鎖を示す）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、および９５～１０２（ＨＣＤＲ３）周辺のアミノ酸残基を包含し；Kabat et al., SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)、ならびに／または、超可変ループを形成するそれら残基を包含する（例えば、軽鎖可変領域における、２６～３２残基（ＬＣＤＲ１）、５０～５２残基（ＬＣＤＲ２）および９１～９６残基（ＬＣＤＲ３）、ならびに、重鎖可変領域における、２６～３２残基（ＨＣＤＲ１）、５３～５５残基（ＨＣＤＲ２）および９６～１０１残基（ＨＣＤＲ３））；Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917。
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を指し、例えば、当該集団を構成する個々の抗体は、可能性のあるバリアント抗体を除いて、同一でありかつ／または同じエピトープに結合する。例えば、バリアント抗体は、天然に存在する突然変異を含有するかまたはモノクローナル抗体調製物の製造過程で発生するが、こういったバリアントは一般にマイナーな量で存在するものである。様々な決定基（エピトープ）に対して向けられた様々な抗体を通常では含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物のそれぞれのモノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に対して向けられたものである。したがって、修飾語「モノクローナル」とは、実質的に均一な集団の抗体から得られている抗体の性状を指示するものであり、任意の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、それらに限定されないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含めて、様々な技法によって作製することができ、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法およびその他の例示的な方法が、本明細書に記載されている。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖および／または軽鎖の一部分が特定の供給源または種に由来し、一方、重鎖および／または軽鎖の残部は異なる供給源または種に由来する、組換え抗体を指す。
「ヒト抗体」とは、ヒトによって生成される抗体のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を有する、および／または当業者にとっては既知のヒト抗体を作製するための技法のいずれかを使用して作製されている、抗体である。ヒト抗体に関する本定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に排除する。ヒト抗体は、Cole et al, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)；Boerner et al, J. Immunol, 147(I):86-95 (1991)に記載の方法を含めて、当技術分野で既知の種々の技法を使用して生成することができる。van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol, 5: 368-74 (2001)もまた参照されたい。ヒト抗体は、トランスジェニック動物に抗原を投与することによって調製することができるが、当該トランスジェニック動物は抗原負荷に応答してかかる抗体を産生するように改変されており、その動物の内因性の遺伝子座は無効とされている、例えば、免疫ＨｕＭａｂマウス（例えば、ＨｕＭａｂマウスに関しては、Nils Lonberg et al., 1994, Nature 368:856-859、国際公開第９８／２４８８４号パンフレット、国際公開第９４／２５５８５号パンフレット、国際公開第９３／１２２７号パンフレット、国際公開第９２／２２６４５号パンフレット、国際公開第９２／０３９１８号パンフレットおよび国際公開第０１／０９１８７号パンフレットを参照されたい）、ゼノマウス（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関しては、米国特許第６，０７５，１８１号明細書および同第６，１５０，５８４号明細書を参照されたい）またはＴｒｉａｎｎｉマウス（例えば、国際公開第２０１３／０６３３９１号パンフレット、国際公開第２０１７／０３５２５２号パンフレットおよび国際公開第２０１７／１３６７３４号パンフレットを参照されたい）である。
「ヒト化抗体」という用語は、重鎖および／または軽鎖の非ヒト（例えば、マウス、ラット、またはハムスター）相補性決定領域（ＣＤＲ）と一緒に、可変領域において１つまたは複数のヒトフレームワーク領域を含むように改変された抗体を指す。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域を除いて完全にヒト型である配列を含む。ヒト化抗体は通常では、非ヒト化抗体と比べてヒトに対する免疫原性が低く、したがってある特定の状況において治療効果を提供する。当業者であれば、ヒト化抗体について知っており、それらを生成するのに適した技法についても知っている。例えば、それらのそれぞれは全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Hwang, W. Y. K., et al., Methods 36:35, 2005；Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:10029-10033, 1989；Jones et al., Nature, 321:522-25, 1986；Riechmann et al., Nature, 332:323-27, 1988；Verhoeyen et al., Science, 239:1534-36, 1988；Orlandi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:3833-37, 1989；米国特許第５，２２５，５３９号明細書；同第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３，７６１号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書；同第６，１８０，３７０号明細書；およびSelick et al.、国際公開第９０／０７８６１号パンフレットを参照されたい。
抗体の「クラス」とは、その重鎖が有する定常ドメインまたは定常領域のタイプを指す。抗体に関し主たる５つのクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）に、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡｌ、およびＩｇＡ２にさらに分けることができる。免疫グロブリンの様々なクラスに相当する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。
抗体の「抗原結合ドメイン」という用語（または単に「結合ドメイン」）または同様の用語は、抗原複合体に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体の「抗原結合部分」という用語内に包含される結合断片の例には、以下が含まれる、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨの各ドメインからなる一価の断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片、（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546）、（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（ｖｉｉ）合成リンカーによって必要に応じて連結することができる２つ以上の単離されたＣＤＲの組合せ。
本明細書で使用される用語としての「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とは、特異的抗原認識を媒介することを主として司る重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内の短いポリペプチド配列を指す。各ＶＬおよび各ＶＨ内には３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と称される）が存在する。
当業者であれば理解されるように、ＣＤＲの正確なナンバリングおよび配置は、様々なナンバリングシステムのうちで異なってもよい。しかし、可変重配列および／または可変軽配列の開示には関連するＣＤＲの開示が含まれることを理解されたい。したがって、各可変重領域の開示は、ｖｈＣＤＲ（例えば、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、およびｖｈＣＤＲ３）の開示であり、各可変軽領域の開示は、ｖｌＣＤＲ（例えば、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、およびｖｌＣＤＲ３）の開示である。
ある特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、それらのそれぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Lefranc M-P, (1999) The Immunologist 7: 132- 136およびLefranc M-P et al, (1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212に記載のＩＭＧＴナンバリングシステムに従って決定することができる。本明細書で特に明記されない限り、抗体の可変ドメインにおける残基番号への言及は、ＩＭＧＴナンバリングシステムによる残基ナンバリングを意味する。
他の実施形態では、抗体のＣＤＲは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、MacCallum RM et al, (1996) J Mol Biol 262: 732-745に従って決定することができる。また、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Martin A. "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains," in Antibody Engineering, Kontermann and Diibel, eds., Chapter 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001)も、参照されたい。他の実施形態では、抗体のＣＤＲはＡｂＭナンバリングスキームに従って決定することができ、このスキームはＡｂＭ超可変領域を参照とするものであるが、この領域とは、ＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造ループとの間の妥協を表し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）により使用されている。
「フレームワーク」または「フレームワーク領域」または「ＦＲ」とは、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは一般には、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４から構成される。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンのＶＬフレームワーク配列またはＶＨフレームワーク配列の選択において最も普通に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンのＶＬ配列またはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループ由来である。一般に、配列のサブグループは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda Md. (1991), Vols. 1-3にあるような、サブグループである。一実施形態では、ＶＬの場合、サブグループは、Kabat et al.、上掲にあるような、サブグループカッパＩである。一実施形態では、ＶＨの場合、サブグループは、Kabat et al.、上掲にあるような、サブグループＩｌｌである。
「ヒンジ領域」は一般に、ヒトＩｇＧ１の２１６～２３８（ＥＵナンバリング）または２２６～２５１（カバットナンバリング）からのストレッチングとして定義される。ヒンジは、個別の３つの領域、上部、中間（例えばコア）、および下部の各ヒンジにさらに分けることができる。
本明細書での「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義して使用される。本用語には、天然配列のＦｃ領域およびバリアントＦｃ領域が含まれる。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端にまで及ぶ。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在しても存在しなくてもよい。本明細書で別段の指定がない限り、Ｆｃ領域または定常領域のアミノ酸残基のナンバリングは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)に記載のＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵナンバリングシステムに従う。
「遮断」抗体または「アンタゴニスト」抗体とは、これが結合する抗原の生物学的活性を阻害または低減する抗体である。ある特定の遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物学的活性を実質的にまたは完全に阻害する。
「エフェクター機能」という用語は、抗体アイソタイプによって異なる、抗体のＦｃ領域に起因するエフェクター生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性Ｔ細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」とは、抗原のアミノ酸残基のうちの、参照抗体と比較して重複するセットと接触するか、または競合アッセイにおいて参照抗体の抗原への結合を５０％以上で遮断する抗体を指す。抗原と接触する抗体のアミノ酸残基は、例えば、抗原と複合した抗体の結晶構造を決定することによって、または、水素／重水素交換を行うことによって決定することができる。一部の実施形態では、抗原に５Å以内である抗体の残基は抗原と接触すると考えられる。一部の実施形態では、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体は、競合アッセイにおいて、参照抗体の抗原への結合を５０％以上で遮断し、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて、当該抗体の抗原への結合を５０％以上で遮断する。
「抗体断片」という用語は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、当該インタクトな抗体の部分を含む、当該インタクトな抗体とは異なる分子を指す。抗体断片の例としては、それらに限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線状抗体；単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）が挙げられる。抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる同一の２つの抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映する表記である、残りの「Ｆｃ」断片とが生成される。Ｆａｂ断片は、重（Ｈ）鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）とともに軽（Ｌ）鎖全体、および１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）から構成される。抗体のペプシン処理により、単一の大きいＦ（ａｂ）２断片が得られ、これは、およそ、二価の抗原結合活性を有する２つのジスルフィド連結のＦａｂ断片に相当しており、依然として抗原を架橋することができる。Ｆａｂ断片は、抗体ヒンジ領域からの１つまたは複数のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にさらなる数個の残基を有する点でＦａｂ’断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、Ｆａｂ’に関する本明細書における表記であるが、この場合、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つ。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は当初、Ｆａｂ’断片の間にヒンジシステインを有する、Ｆａｂ’断片の対として生成されたものであった。抗体断片の他の化学的カップリングも知られている。
「Ｆｖ」は、緊密な、非共有結合の会合にある１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインとの二量体から構成される。これらの２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基を与えるとともに抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖にそれぞれ由来の３ループ）が生じる。
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「単鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に接続されたＶＨ抗体ドメインおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原結合にとって所望の構造を形成することを可能にする、ポリペプチドリンカーをＶＨドメインとＶＬドメインとの間にさらに含む。ｓＦｖの概説については、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)を参照されたい。
抗体の「抗原結合ドメイン」という用語（または単に「結合ドメイン」）または同様の用語は、抗原複合体に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体の「抗原結合部分」という用語内に包含される結合断片の例には、以下が含まれる、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨの各ドメインからなる一価の断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片、（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546）、（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（ｖｉｉ）合成リンカーによって必要に応じて連結することができる２つ以上の単離されたＣＤＲの組合せ。
「多重特異性抗体」という用語は、最も広義に使用され、特に、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体をカバーするが、この場合、ＶＨ－ＶＬ単位が多重エピトープ特異性を有する（例えば、１つの生体分子上の異なる２つのエピトープまたは異なる生体分子上の各エピトープに結合することができる）。かかる多重特異性抗体としては、それらに限定されないが、完全長抗体、２つ以上のＶＬドメインおよびＶＨドメインを有する抗体、二重特異性ダイアボディおよびトリアボディが挙げられる。「多重エピトープ特異性」とは、同じまたは異なる標的（複数可）上の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する能力を指す。
「デュアル特異性（Dual specificity）」または「二重特異性（bispecificity）」とは、同じまたは異なる標的（複数可）上の異なる２つのエピトープに特異的に結合する能力を指す。しかし、二重特異性抗体とは対照的に、デュアル特異性抗体はアミノ酸配列が同一である２つの抗原結合アームを有し、各Ｆａｂアームは２つの抗原を認識することができる。デュアル特異性によって、抗体は、単一のＦａｂまたはＩｇＧ分子として異なる２つの抗原と高親和性をもって相互作用することが可能となる。一実施形態によれば、ＩｇＧ１形態にある多重特異性抗体は、各エピトープに、５μＭ～０．００１ｐＭ、３μＭ～０．００１ｐＭ、１μＭ～０．００１ｐＭ、０．５μＭ～０．００１ｐＭ、または０．１μＭ～０．００１ｐＭの親和性で結合する。「単一特異性」とは、１つのエピトープのみに結合する能力を指す。多重特異性抗体は、完全な免疫グロブリン分子と類似の構造を有することができ、Ｆｃ領域、例えば、ＩｇＧ Ｆｃ領域を含む。かかる構造には、それらに限定されないが、ＩｇＧ－Ｆｖ、ＩｇＧ－（ｓｃＦｖ）２、ＤＶＤ－Ｉｇ、（ｓｃＦｖ）２－（ｓｃＦｖ）２－Ｆｃおよび（ｓｃＦｖ）２－Ｆｃ－（ｓｃＦｖ）２が含まれ得る。ＩｇＧ－（ｓｃＦｖ）２の場合、ｓｃＦｖは、重鎖もしくは軽鎖のいずれかのＮ末端もしくはＣ末端のいずれかに付着させることができる。
本明細書で使用される場合、「二重特異性抗体」という用語は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体、多くはヒトまたはヒト化抗体を指す。本発明では、結合特異性の一方は、ＩＬ－１２またはＩＬ－２３の方に向けることができ、もう一方は、任意の他の抗原、例えば、細胞表面タンパク質、受容体、受容体サブユニット、組織特異的抗原、ウイルス由来タンパク質、ウイルスによってコードされたエンベロープタンパク質、細菌に由来するタンパク質、または細菌性表面タンパク質等に向けることができる。
本明細書で使用される場合、「ダイアボディ」という用語は、２つのポリペプチド鎖を含む二価の抗体を指し、この場合、各ポリペプチド鎖は、同じペプチド鎖上のＶＨドメインとＶＬドメインとの分子内会合を可能とするには短すぎるリンカー（例えば、アミノ酸５個で構成されるリンカー）によって連結されたＶＨドメインとＶＬドメインを含む。この配置により、各ドメインが別のポリペプチド鎖上の相補ドメインと強制的に対になってホモ二量体構造を形成する。したがって、「トリアボディ」という用語は、３つのペプチド鎖を含む三価の抗体を指し、ペプチド鎖のそれぞれが、同じペプチド鎖内におけるＶＨドメインとＶＬドメインとの分子内会合を可能とするには極端に短いリンカー（例えば、アミノ酸１～２個から構成されるリンカー）によって連結された１つのＶＨドメインと１つのＶＬドメインを含有する。
「単離された抗体」という用語は、本明細書に開示の種々の抗体を説明して使用される場合、抗体が発現された細胞からまたは細胞培養物から特定されかつ分離および／または回収された抗体を意味する。その天然環境の混入成分とは、ポリペプチドの診断的または治療的用途を通常では妨害すると思われる物質であり、混入成分には酵素、ホルモン、およびその他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が含まれ得る。一部の実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフ（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）の各アプローチによって決定して、９５％または９９％を超える純度まで精製される。抗体の純度の評価方法の概説については、例えば、Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)を参照されたい。好ましい実施形態では、抗体は、（１）スピニングカップ配列決定装置の使用によりＮ末端もしくは内部のアミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで、または（２）クマシーブルーもしくは好ましくは銀染色を使用して非還元条件下または還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均一になるまで、精製される。
抗体の標的分子への結合に関して、「特異的結合」、あるいは特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピト－プ「に特異的に結合する」またはそれ「に特異的」であるという用語は、非特異的相互作用とは測定可能な程度に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、対照分子の結合と比較した分子の結合を決定することによって測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似する対照分子、例えば過剰な非標識標的との競合によって決定することができる。この場合、特異的結合は、プロ－ブへの標識標的の結合が、過剰な非標識標的によって競合的に阻害される場合に、指摘される。本明細書で使用される「特異的結合」、あるいは特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピト－プ「に特異的に結合する」またはそれ「に特異的」であるという用語は、例えば、１０－４Ｍ以下、代替的に１０－５Ｍ以下、代替的に１０－６Ｍ以下、代替的に１０－７Ｍ以下、代替的に１０－８Ｍ以下、代替的に１０－９Ｍ以下、代替的に１０－１０Ｍ以下、代替的に１０－１１Ｍ以下、代替的に１０－１２Ｍ以下の標的に対するＫｄを有する分子、または、１０－４Ｍ～１０－６Ｍもしくは１０－６Ｍ～１０－１０Ｍもしくは１０－７Ｍ～１０－９Ｍの範囲のＫｄを有する分子によって示され得る。当業者であれば理解するように、親和性およびＫＤの値は反比例している。抗原に対する高親和性は、低いＫＤ値によって測定される。一実施形態では、「特異的結合」という用語は、ある分子が、実質的に他のいずれのポリペプチドまたはポリペプチドエピト－プにも結合することなく、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピト－プに結合する、結合を指す。本明細書で使用される場合、「特異的結合」、「特異的に結合する」、および「選択的に結合する」という用語は、ヒトインターロイキン－２３ｐ１９のエピトープへの抗体の結合を指す。
本明細書で使用される「親和性」という用語は、抗体のエピトープへの結合強度を意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］×［Ａｇ］／［Ａｂ－Ａｇ］（式中、［Ａｂ－Ａｇ］は抗体－抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は未結合抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は未結合抗原のモル濃度である）として定義される解離定数Ｋｄにより与えられる。親和性定数Ｋａは、１／Ｋｄにより定義される。ｍＡｂの親和性を決定する方法は、Harlow, et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988)、Coligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1992, 1993)、およびMuller, Meth. Enzymol. 92:589-601 (1983)に見出すことができ、これらの参照文献は参照により全体が本明細書に組み込まれる。ｍＡｂの親和性を決定する当分野においてよく知られている一標準法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニング（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析装置による分析によるもの）の使用である。
「エピトープ」は、抗体とその抗原（複数可）との間の相互作用の部位（単数または複数）を指示する、技術用語である。（Janeway, C, Jr., P. Travers, et al. (2001). Immunobiology: the immune system in health and disease. Part II, Section 3- 8. New York, Garland Publishing, Inc.）：によって：「抗体は一般に、タンパク質などの大分子の表面上の小領域のみを一般に認識する…」と記載されているように：［ある特定のエピトープ］が、タンパク質の折り畳みによって一緒にされた、［抗原］ポリペプチド鎖の異なる部分からのアミノ酸で構成される可能性が高い。この種の抗原決定基は、認識される構造が、抗原のアミノ酸配列中では不連続であるが３次元構造では一緒になっているタンパク質のセグメントから構成されるので、立体配座エピトープまたは不連続エピトープとして知られている。対照的に、ポリペプチド鎖の単一セグメントから構成されるエピトープは、連続エピトープまたは線状エピトープと称される（Janeway, C. Jr., P. Travers, et al. (2001). Immunobiology: the immune system in health and disease. Part II, Section 3-8. New York, Garland Publishing, Inc.）。
「ＫＤ」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体－抗原相互作用の解離定数を指すことを意図するものである。これは、式：Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎ＝ＫＤにより算出される。
「ＩＣ５０」という用語は、本明細書で使用される場合、実施例５：ヒトＤＢ細胞アッセイにおけるＳＴＡＴ３活性化の阻害、に記載のバイオアッセイにおいて、ヒトリンパ腫ＤＢ細胞上でのＩＬ－２３の生物活性の５０％を中和するのに必要な本発明の抗体の有効濃度を指すことを意図するものである。
薬剤および特定の活性（例えば、細胞への結合、酵素活性の阻害、免疫細胞の活性化または阻害）に関する「ＥＣ５０」とは、かかる活性に関して薬剤の最大の応答または効果の５０％を生じる当該薬剤の効果的濃度を指す。薬剤および特定の活性に関する「ＥＣ１００」とは、かかる活性に関して薬剤の実質的に最大の応答を生じる当該薬剤の効果的濃度を指す。
本明細書で使用される場合、「抗体ベースの免疫療法」および「免疫療法」という用語は広義には、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体、二重特異性分子、多重特異性分子、結合剤またはＩＬ－２３ｐ１９特異的結合剤を含む融合タンパク質のターゲティング特異性に依存して、ＩＬ－２３ｐ１９の異常な発現によって特徴づけられる細胞に及ぼす直接的または間接的な影響を媒介する、任意の形態の療法を指して、使用される。本用語は、ネイキッド抗体、二重特異性抗体（Ｔ細胞結合、ＮＫ細胞結合、およびその他の免疫細胞／エフェクター細胞結合の各方式を含めて）、抗体薬物コンジュゲートを使用する処置の方法、ＩＬ－２３ｐ１９特異的キメラ抗原受容体を含むように改変されたＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）またはＮＫ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ）、およびＩＬ－２３ｐ１９特異的結合剤を含む腫瘍溶解性ウイルスを使用する細胞療法、ならびに抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の抗原結合配列を送達することによる遺伝子療法を包含することを意図するものであり、かつ、ｉｎ ｖｉｖｏで相当する抗体断片を発現させることを意図するものである。
本明細書で使用される場合、「免疫介在性炎症性疾患」または「ＩＭＩＤ」という用語には、共通の炎症経路を共有し、自然免疫系および適応免疫系の機能の調節不全によって引き起こされるかまたはそれがもたらされる、一群の一見無関係な疾患が含まれる。これらの状態には、それらに限定されないが、乾癬、関節リウマチ、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎、化膿性汗腺炎、アトピー性皮膚炎および喘息が含まれる。いかなる臓器系もＩＭＩＤによって打撃を受ける可能性があり、個人は生活の質のはなはだしい低下、かなりの罹患率、および寿命の短縮に遭遇するおそれがある（Bunte, K and Beikler, T, Int. J. Mol. Sci., 20: 3394 (2019)）。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈により明らかに他が指示されない限り、複数の参照を含むことを、ここで留意されたい。
ＩＬ－１２／ＩＬ－２３受容体シグナル伝達軸
ＩＬ－２３のｐ１９サブユニット（本明細書では「ＩＬ－２３ｐ１９」および「ｐ１９サブユニット」とも呼ばれる）は、アミノ酸２１個のリーダー配列を含有するアミノ酸１８９個のポリペプチドである（Oppmann et al. Immunity 13:715 (2000)）。ｐ１９サブユニットの生物学的活性は、ｐ１９サブユニットがＩＬ－１２ ｐ４０サブユニットとパートナーを組んで、ＩＬ－２３を形成する場合にのみ検出される。ＩＬ－１２とＩＬ－２３はどちらも分泌型ヘテロ二量体サイトカインとしてのみ存在し、ＩＬ－１２ ｐ３５サブユニットもＩＬ－２３ｐ１９サブユニットもどちらもｐ４０との細胞内共有結合性会合なしで分泌されることはない。ＩＬ－１２サイトカインとＩＬ－２３サイトカインによって共有されるｐ４０サブユニットは、それらの受容体の共通のＩＬ－１２Ｒβ１成分に結合するが、シグナル伝達の特異性は、それらのそれぞれの高親和性受容体であるＩＬ－１２Ｒβ２成分およびＩＬ－２３Ｒ成分に結合する独自のｐ３５（Ｉｌ－１２）サブユニットおよびｐ１９（ＩＬ－２３）サブユニットによって決定される。ＩＬ－１２およびＩＬ－２３の同起源受容体とのＩＬ－１２およびＩＬ－２３の相互作用によって、自然免疫応答および適応免疫応答をコーディネートする複雑な調節性ネットワークの一部が形成される。
ＩＬ－１２は、多くの細胞内病原体およびウイルスに対する防御免疫応答の発達においておよび腫瘍免疫監視において、極めて重要な役割を果たすのではないかと、仮説が立てられている。Kastelein, et al., Annual Review of Immunology, 2007, 25: 221-42；Liu, et al., Rheumatology, 2007, 46(8): 1266-73；Bowman et al., Current Opinion in Infectious Diseases, 2006 19:245-52；Fieschi and Casanova, Eur. J. Immunol. 2003 33:1461-4；Meeran et al., Mol. Cancer. Ther. 2006 5: 825-32；Langowski et al., Nature 2006 442: 461-5、を参照されたい。したがって、ＩＬ－２３特異的阻害（ＩＬ－１２または共有ｐ４０サブユニットを温存する）は、ＩＬ－１２とＩＬ－２３のデュアル阻害と比較して潜在的に優れた安全性プロファイルを有することができる。
ＩＬ－２３の受容体は、ＩＬ－２３Ｒと呼ばれる独自のサブユニットとパートナーを組むＩＬ－１２Ｒβ１サブユニットを含むが、このサブユニットは、ＩＬ－１２受容体と共通で共有される（Parham et al. J. Immunol. 168:5699 (2002)）。ＩＬ－２３Ｒは高い親和性（ＫＤ＝４４±３ｎＭ）をもってＩＬ－２３に結合することが報告されている。対照的に、ＩＬ－２３はより低い親和性（ＫＤ＝２±１ｕＭ）をもってＩＬ－１２β１サブユニットに結合する。ＩＬ－２３ＲのＩＬ－２３への結合によって、非常に高い親和性（ＫＤ＝２５±５ｎＭ）でのＩＬ－２３へのＩＬ－１２Ｒβ１の結合が容易となる（Bloch et al, Immunity, 48, 45-58 (2018)）。ＩＬ－２３Ｒは、非常に広い範囲の細胞（ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、樹状細胞、メモリーＴ細胞、ケラチノサイト）によって発現される。ＩＬ－２３産生は、ＩＬ－２３Ｒの発現を誘発し、ＩＬ－２３発現を増強する正のフィードバックループを創り出す。
ＩＬ－２３は、活性化された抗原提示細胞によって産生され、ＮＫ細胞およびＴ細胞上に発現されるＩＬ－２３受容体複合体に結合する。ＩＬ－２３は、単独で、または他のサイトカイン（例えばＩＬ－１β）との組合せで、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｆ、ＩＬ－６および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）の産生を促進すると示されているが、これらは、ＩＭＩＤ疾患における炎症性応答の一因であると知られている炎症誘発性サイトカインである。
ＩＬ－２３ｐ１９のＩＬ－２３Ｒへの結合によって、ＩＬ－２３ｐ１９ヘリカルドメインの再構築プロセスがもたらされ、このことによって、ＩＬ－１２ ｐ４０のＩＬ－１２Ｒβ１への結合が可能となる（Bloch, Y et al. Immunity. 2018; 48(1):45-58）。このプロセスはＪＡＫ２およびＴＹＫ２を活性化し、ＳＴＡＴ３およびＳＴＡＴ４の形成に至るが、これらは転写因子として最終的に機能する（Parham, C. et al., Immunol. 168(11):5699-5708 (2002)）。ＩＬ－２３は、ナイーブＣＤ４＋ Ｔ細胞のＴｈ１７細胞への分化の後期段階におけるキープレーヤーである（Gaffen, SL et al., Nat Rev Immunol. 14(9):585-600 (2014)）。ナイーブＴ細胞は、ＩＬ－２３Ｒを欠くので、分化の初期段階をモジュレートするのに、形質転換成長因子（ＴＧＦ）－βおよびＩＬ－６などの他のサイトカインが必要である。これらのサイトカインは、転写因子としてレチノイン酸受容体関連オーファン受容体－γｔの発現を誘発するが、これは、ＩＬ－２３Ｒの発現を促進する。ＴＧＦ－βおよびＩＬ－６によって誘発される未成熟Ｔｈ１７細胞が病原性を獲得するにはＩＬ－２３への曝露が必要である。成熟すると、Ｔｈ１７細胞はＩＬ－１７およびＴＮＦ－αを産生することができる（Kashani, A et al., Gastroenterology & Hepatology 15(5):255-265 (2019)）。
２つのサイトカインの間の構造的類似性にもかかわらず、ＩＬ－２３の生物学的活性／機能は、ＩＬ－１２のものとはまったく別である。ＩＬ－２３は、ナイーブＣＤ４＋ Ｔ細胞のＴｈ１７細胞と呼ばれる細胞の新たなサブセットへの分化および維持を支えるが、このＴｈ１７細胞は、古典的なＴｈ１細胞およびＴｈ２細胞とはまったく別である。Ｔｈ１７細胞は、インターロイキン－１７Ａ（ＩＬ－１７Ａ）およびインターロイキン－１７Ｆ（ＩＬ－１７Ｆ）を産生する。Ｔｈ１７細胞は、炎症応答を駆動すると知られている腫瘍壊死因子を含めて、炎症性応答を駆動することが知られている様々な他の因子を産生するが、それらには腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＸＣＬ１およびＣＣＬ２０が含まれる。ＮＫ細胞およびリンパ系組織誘導（ＬＴｉ）様細胞などの自然リンパ球は、ＩＬ－２３受容体およびレチノイン酸関連オーファン受容体（ＲＯＲ）ガンマを発現し、ＩＬ－２３に応答してＩＬ－１７を産生する。ＩＬ－１βおよびＩＬ－２３はまた、ガンマ－デルタＴ細胞も共刺激してＴ細胞受容体結合なしでＩＬ－１７産生を誘発する。
重要なことに、ＩＬ－２３は、ナイーブＴ細胞のまったく別のＴｈ１７細胞系統への分化および増殖を維持する。ＩＬ－２３の非存在下では、Ｔｈ１７表現型は失われる。ＩＬ－２３は、炎症誘発性サイトカインプロファイルを生みだす細胞傷害性Ｔｈ１７細胞を維持する上でのそれの極めて重要な役割から、ＩＭＩＤにおける免疫炎症応答の「マスターレギュレーター」として説明されてきた。ＩＬ－２３の病原性は、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７ＦおよびＩＬ－２２の調節不全の産生に部分的に依存しており、したがって、免疫療法についてＩＬ－２３／ＩＬ－２３Ｒ軸を標的とする理論的根拠が提供される。
炎症誘発性ＩＬ－２３／ＩＬ－２３受容体シグナル伝達軸を標的とする
ｉｎ ｖｉｖｏで治療効果を付与することが報告されている抗ＩＬ－１２／ＩＬ－２３抗体には、抗体ウステキヌマブ（ＣＮＴ０１２７５）およびブリアキヌマブ（ＡＢＴ－８７４）が含まれる。どちらの抗体も、ＩＬ－１２Ｒβ１結合に極めて重要であるｐ４０サブユニットの領域にある共通のＩＬ－１２ ｐ４０サブユニットを標的とする（Clarke, A. et al. mAbs 2(5):539-549 (2010)）。
ｉｎ ｖｉｖｏで治療効果を付与すると報告した抗ＩＬ－２３選択的抗体には、グセルクマブ（ＴＲＥＭＦＹＡ（登録商標））、チルドラキズマブ（ＩＬＵＭＹＡ（登録商標））、リサンキズマブ（ＳＫＹＲＩＺＩ（登録商標））、ブラジクマブ（ＭＥＤＩ２０７０）およびミラキズマブ（Ｌｙ３０７４８２８）が含まれる；これらはすべて、ＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに特異的である。無作為化、プラセボ対照および実薬対照の第３相治験からのデータが示すところは、チルドラキズマブ、グセルクマブおよびリサンキズマブが、中等症から重症の乾癬の患者に好ましい危険度－有益性プロファイルを有することである。これらのＩＬ－２３ｐ１９阻害剤のいずれについても、重大な安全性への懸念はまったく観察されていない。
ＩＬ－１２によって駆動されるＴｈ１細胞は、多くの自己免疫疾患における病原性Ｔ細胞サブセットであると以前は考えられていたが、しかし、ＩＬ－１２対ＩＬ－２３の個々の寄与について評価された、炎症性腸疾患、乾癬、炎症性関節炎および多発性硬化症のモデルにおけるより最近の動物研究によれば、ＩＬ－１２ではなくＩＬ－２３が自己免疫／炎症性疾患のキードライバーであることが立証された（Ahern et al., Immun. Rev. 226:147-159 (2008)；Cua et al., Nature421:744-748 (2003)；Yago et al., Arthritis Res and Ther. 9(5): R96 (2007)）。
免疫介在性炎症応答におけるＩＬ－２３の役割はまた、遺伝学的研究によっても裏付けられている。ゲノムワイド関連解析（ＧＷＡＳ）によって、ＩＬ－２３Ｒ多型が乾癬および乾癬性関節炎などの自己免疫状態にかかりやすい体質と結びつけられた（Liu et al., PLoS Genet. 4(3)e1000041 (2008)、Reveille, et al., Nat. Genet. 42(2): 123-127 (2010)、およびDuerr et al., Science 314(5804):1461-1463 (2006)）。ＩＬ－２３Ｒ遺伝子における単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）であるｒｓｌ１２０９０２６とＣＤとの間の関連性が立証された（Reveille, JD et al.）。このバリアントはＣＤおよびＵＣに対して防護的であることが示されている。ｒｓｌ１２０９０２６の防護的特徴がメタ分析で確認されたが、この分析が示したところは、このＳＮＰバリアントの保因によって、７５，０００を超える症例と対照のコホートにおいて、疾患リスクが減少したことである（Jostins, L. Nature 491(7422):119-124 (2012)）。このＳＮＰバリアントは、ＩＬ－２３Ｒの他のいくつかのコーディングバリアントとともに、ＩＬ－２３Ｒの発現の低下を招き、その結果、ＩＬ－２３軸を介した免疫応答を減少させた（J Biol Chem. 291(16):8673-8685 (2016)）。
ＩＬ－６およびＴＧＦ－β１などのサイトカインは、ナイーブＣＤ４＋ Ｔ細胞からのＲＯＲγｔ＋ Ｔｈ１７細胞の分化を促進することができるが、一方、ＩＬ－２３は、これらの細胞の完全な炎症機能に必要である。加えて、活性化されたＲＯＲγｔ＋ Ｔｈ１７細胞上のＩＬ－２３受容体へＩＬ－２３が結合すると、ＩＬ－２３受容体（ＩＬ－２３Ｒ）のさらなる発現が誘発され、したがって、これらの細胞の維持および増殖のためのフィードフォワードループがもたらされる（Singh, S, et al., MAbs 7(4):1493-1503 (2015）。
ＩＬ－２３／ＩＬ－１７軸が慢性炎症の発達において重要な役割を果たすという強力な証拠があり、そして遺伝学的研究によって、ＩＬ－２３受容体（ＩＬ－２３Ｒ）またはそのリガンドと、乾癬、炎症性腸疾患および移植片対宿主病を含めていくつかの炎症性疾患との間の潜在的な関連性が明らかとなった。ＩＬ－２３／ＩＬ－１７軸を標的とすることは、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病）、強直性脊椎炎、および全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を含めて、ＩＭＩＤにおける懸命な治療的探求の領域である。
一般的に言えば、グセルクマブ、チルドラキズマブ、リサンキズマブ、ブラジクマブまたはミラキズマブなどのＩＬ－２３特異的抗体は、ＩＬ－２３ｐ１９に選択的に結合し、ＩＬ－２３の受容体へのＩＬ－２３の結合を阻害する；それによって、ＩＬ－２３の作用に拮抗し、その結果、ＩＭＩＤに関連付けられる組織の炎症、破壊および／または異常な組織修復に関与するＴヘルパー（Ｔｈ）１７細胞、自然リンパ球、γδＴ細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を、誘発および維持する。
尋常性乾癬または乾癬（ＰｓＯ）は、複雑な病態生理学によって特徴づけられる慢性炎症性、Ｔ細胞介在性皮膚障害である。先進国でのその出現の発生率は１～４％である。乾癬は、米国で最も蔓延している自己免疫疾患であり、米国では概７５０万人がそれに罹患している。尋常性乾癬は乾癬の最もよくある形態であり、患者の８０％～９０％が侵されている。乾癬の病因は完全には理解されていないが、多重の環境因子、Ｔ細胞、樹状細胞、多数のサイトカイン、および同定された４５の遺伝子座すべてが相互作用して、全身性乾癬性疾患状態、最終的には乾癬性プラークが創り出される（Nestle FO, et al., N Engl J Med. 361(5):496-509 (2009)、Mahil SK, et al Dermatol Clin. 33(1):1-11 (2015)）。自然免疫と適応免疫の相互作用に伴う遺伝的要因と環境要因の相乗的影響は、異常なケラチノサイト増殖および乾癬病変の形成を最終的にはもたらす（Chan, J. R, et al., J. Exp. Med, 203(12)2577-2587 (2006)）。
ＰｓＯプラークとは通常では、表皮の肥厚によって特徴づけられる、境界明瞭な紅斑性の鱗屑性皮膚病変である。侵されたケラチノサイトは樹状細胞を活性化し、局所リンパ節に移動し、インターロイキンＩＬ－１２およびＩＬ－２３を始めとするいくつかのサイトカインを放出するが、ＩＬ－１２およびＩＬ－２３は、それぞれ、１型Ｔヘルパー（Ｔｈ１）細胞および１７型Ｔヘルパー（Ｔｈ１７）細胞を活性化する。Ｔリンパ球およびその他の細胞タイプは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－α、ＩＬ－２２、およびＩＬ－１７を含めて、さらなるサイトカインを放出し、その結果、ケラチノサイトの活性化を高め、炎症の自己推進サイクルの開始を招く（Lowes MA et al., Trends Immunol. 34(4):174-81 (2013)）。組織学的には、不全角化を伴う著しい表皮過形成と、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージおよび肥満細胞を含む混合真皮浸潤とがある。
初期の刊行物では、乾癬性皮膚病変におけるＩＬ－１２ ｐ４０およびＩＬ－２３ ｐ４０のメッセンジャーＲＮＡの過剰発現を伴う、腫瘍壊死因子－αおよびＩＬ－１２のｐ４０サブユニットのレベル上昇の存在が報告された。これらの発見によって、ＩＬ－１２／２３ ｐ４０のサブユニットタンパク質に対する中和抗体を用いてＬ－１２およびＩＬ－２３を阻害することは、乾癬の処置に効果的な治療アプローチを提供する可能性があるということが示唆された（Piskin G, et al., J Immunol 2006, 176: 1908-15）。乾癬は当初、Ｔｈ－１介在性疾患であると見なされていた（Ｔヘルパー１型細胞に特徴的なサイトカイン分泌プロファイル：インターロイキン－２、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－α、およびインターフェロン（ＩＦＮ）－γに基づいて）。
乾癬の病因におけるＩＬ－２３の基本的な役割は、解明されており、Ｔｈ１７系統の生物学と関連している。ナイーブＴリンパ球のＴｈ１７への最初の分化には、ＴＧＦ－β１、ＩＬ－６、およびＩＬ－１の存在が必要であるが、一方、炎症誘発性サイトカインＩＬ－１７、ＩＬ－２２、ＩＬ－２１および腫瘍壊死因子－αを分泌するために、ＩＬ－２３がＴｈ１７の活性化および維持にとって必要であり、このＴｈ１７は最終的に、乾癬性皮膚病変の形成の一因となる（Fotaidou, C. et al., Psoriasis: Targets and Therapy 8: 1-5 (2018)）。
したがって、ＩＬ－１２もＩＬ－２３もどちらも乾癬におけるＴｈ１免疫応答の発達の一因であると知られているが、ＩＬ－２３は今や、Ｔｈ１７細胞の分化および生存のキードライバーとして認識されている。Ｔｈ１７細胞によって産生される主たるサイトカインは、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｄ、ＩＬ－１７Ｅ、およびＩＬ－１７Ｆを含めて、炎症誘発性ＩＬ－１７ファミリーのものである。ＩＬ－１７ＡおよびＩＬ－１７Ｆは類似しており、ＩＬ－１７ＲＡサブユニットおよびＩＬ－１７ＲＣサブユニットで構成されるヘテロ二量体である、同じＩＬ－１７受容体に結合する。
初期の治療戦略は、乾癬の病因の中枢的な細胞型としてＴｈ１細胞を標的としたが、より新たなモデルは、ＩＬ－２３／Ｔｈ１７軸に焦点を合わせている（Lowes MA, et al. Trends Immunol. 34(4):174-81(2013）。新たな焦点の理論的根拠は、ＩＬ－１７は乾癬の病因におけるキープレーヤーであるという信念およびＩＬ－２３がＴｈ１７細胞の活性化を駆動するという認識を前提としている。さらに、ＩＬ－２３は、自然リンパ球３型細胞およびγδＴ細胞を含めて、他の細胞型による他のＴｈ１７サイトカイン（例えばＩＬ－２２）の産生を刺激する（Ward, N.L., J Investig Dermatol. 134: 2305-2307 (2014)）。ＩＬ－２３を阻害すると、Ｔｈ１７細胞によるＩＬ－１７ＡおよびＩＬ－２２の下流産生を遮断することになること、および、その効果は乾癬の免疫病原性の拮抗作用という形で現れることになること、が示唆された。
ＩＬ－２３／ＩＬ－１７軸は目下、乾癬の病因において極めて重要であると考えられており、選択的ＩＬ－２３ｐ１９阻害は、ＩＬ－１２／２３ ｐ４０阻害、またはＩＬ－１７Ａもしくはその受容体の遠位遮断に関していくつかの利点をもたらす可能性がある（Torres, T Drugs 77:1493 -1503 (2017)）。現在までに、３つのＩＬ－２３ｐ１９－サブユニット特異的モノクローナル抗体（すなわち、グセルクマブ、チルドラキズマブおよびリサンキズマブ）が、全身療法または光線療法の志願者である成人における中等症から重症の尋常性乾癬の処置向けに、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）および欧州医薬品庁（ＥＭＡ）から承認を受けた。２０２０年７月、グセルクマブも、ＦＤＡによって活動性乾癬性関節炎の成人の処置向けに承認された。
乾癬におけるＩＬ－２３遮断の高度の有効性が、初期の概念実証試験および第Ｉ相治験において実証された。第１相試験が示したところは、グセルクマブの単回投与により、中等症から重症の尋常性乾癬の患者において有意な臨床応答がもたらされたことである（(Sofen H, et al., J Allergy Clin Immunol; 133:1032-1040 (2014)）。第Ｉ相試験でまた報告されたところは、グセルクマブを用いるインターロイキン－２３の選択的拮抗作用により、表皮の厚さの減少、Ｔ細胞および樹状細胞の浸潤、乾癬に関連する遺伝子の発現、および血清ＩＬ－１７Ａレベルの減少によって特徴づけられる、乾癬の臨床上の改善という結果となったことである。グセルクマブの単回投与後の、中等症から重症の乾癬患者における測定可能な臨床応答に関して報告された発見によって、ＩＬ－２３の選択的中和が有力な治療選択肢であるという新たな理論が裏付けられた。
グセルクマブ活性の急速な作用発現も、広範囲の用量および連続処置の最大で４０週間の異なる２つの投薬間隔でのグセルクマブの使用について評価する第ＩＩ相投薬試験（ＮＣＴ０１４８３５９９）で観察された。有効性は、最も早い評価（４週目）で明白であった。グセルクマブレジメンのいくつかは、乾癬を処置するのによく使用される生物学的薬剤であるアダリムマブに伴うものよりもかなり良好な奏効率を伴っていた（Gordon, KB et al., N Engl J Med 373:136-144 (2015)）。グセルクマブの有効性は１６週（一次エンドポイント評価）を超えて引き続き向上し、４０週まで維持された。さらに、１００－ｍｇグセルクマブ群の患者の大多数では乾癬が完全に排除されたが、このことは、ＰＧＡスコア０（患者の６２％において）および継続処置４０週後のＰＡＳＩスコアのベースラインからの１００％の改善（患者の５４％において）によって指示される。ＦＤＡおよびＥＭＡによる規制当局の承認は、中心的な３つの第ＩＩＩ相治験、ＶＯＹＡＧＥ １（Blauvelt, A et al. J. Am. Acad. Dermatol. 76: 405-417 (2017)）、ＶＯＹＡＧＥ（Reich, K et al. J Am. Acad. Dermatol.,76: 418-431 (2017)）およびＮＡＶＩＧＡＴＥ（Langley, RG et al., Brit. J. Dermatol. 178:114-123 (2017)）の発見に一部依拠した。
ＶＯＹＡＧＥ １（ＮＣＴ０２２０７２３１）とは、１０１のグローバルサイト（２０１４年１２月～２０１６年４月）で実施された第ＩＩＩ相、無作為化、二重盲検、プラセボ－および実薬－対照試験であった。本試験は、グセルクマブをアダリムマブと比較した実薬期間（０～４８週）とプラセボ対照期間（０～１６週）とを含み、その後、プラセボを服用している患者については、交差試験を行って、４８週までグセルクマブを投与した。グセルクマブは、共主要エンドポイントおよびすべての主要な副次的エンドポイントについてプラセボおよび／またはアダリムマブより優れていた（すべてＰ＜．００１）。プラセボと比較して、グセルクマブを服用している患者では有意により高い割合をもって、１６週目にＩＧＡ ０／１（６．９％ｖｓ８５．１％）およびＰＡＳＩ ９０（２．９％ｖｓ７３．３％）が達成された。同様に、グセルクマブ群のＰＡＳＩ １００応答は、２４週目と４８週目のアダリムマブ群の応答よりも有意に良好であった（Ｐ＜．００１）。１６週目にグセルクマブを開始した後、プラセボ交差試験群の患者は、グセルクマブ群で観察されたものと同様の応答を達成した。ＶＯＹＡＧＥ １によって、乾癬の病因におけるＩＬ－２３の役割が確認される。ＴＮＦ－α遮断と比較した場合、ＩＬ－２３経路の選択的ターゲティングによれば、好都合な安全性プロファイルを維持しつつ、有効性がより高い程度で、乾癬特異的サイトカイン阻害がいっそう可能となる（Blauvelt, A, et al., J Investig Dermatol., 135: 1946-1953 (2015)）。
ＶＯＹＡＧＥ １とは、最初の治験の後４年間患者をフォローした延長－ラベル治験であった。患者はまず、Ｔｒｅｍｆｙａまたはプラセボのいずれかを投与するように無作為化されたが、１６週目に全員がＴｒｅｍｆｙａを投与された。ＶＯＹＡＧＥ １研究で発見されたこととは、最初にＴｒｅｍｆｙａまたはプラセボを投与され、次いで１６週目にＴｒｅｍｆｙａに交差試験を行った個体を合わせた群において、Ｔｒｅｍｆｙａを投与された患者のうちの８２％が、乾癬領域重症度指数において少なくとも９０％の改善（ＰＡＳＩ ９０）を、そして、治験責任医師のグローバルアセスメント（ＩＧＡ）スコアに関して２０４週目で、これは４年であるが、除去（０）または微小病変（１）を示したことである。
乾癬性関節炎（ＰｓＡ）とは、乾癬の患者のうちの最大４０％で発生する慢性炎症性筋骨格疾患である。結果として、ＰｓＡは、乾癬と多くの共通の病原性経路を共有する、疾患の中の疾患と見なすことができる。乾癬は普通には、患者のうちの７０％でＰｓＡの先に起こり、炎症性皮膚および関節疾患が患者のうちの１５％で同時に発生し、残りの患者では、皮膚疾患の前に炎症性関節炎が発生する。最終的に、ＰｓＡのほぼすべての患者が乾癬を発生することになるが、ＰｓＡの臨床症状および臨床経過は全く不均一であり、罹患した関節の分布に基づいたＰｓＡの個別の５つのパターンが記載されている（Dobbin-Sears, I et al. Ther Adv Chronic Dis,. 9(10) 191 -198 (2018)）。
ＰｓＡとは、末梢関節炎、軸性疾患、腱付着部炎、指炎、ならびに皮膚および爪の疾患の組合せを含めて、関節および関節外の症状発現を伴う不均一な状態である（Quireo, R and Coto-Sequra, P, Expert Opinion On Biological Therapy, 18:9, 931-935 (2018)）。自然免疫応答と獲得免疫応答の両方を活性化する遺伝的、免疫学的および環境的要因が、ＰｓＡの病因に重要な役割を有しているように思われる。疾患の発展に伴い、患者は多重のパターンを呈する場合があり、関節炎の一サブセットに限定されることはない。ＰｓＡ患者のうちの概３分の２が、機能喪失および機能障害を多くの場合伴う進行性の関節損傷を経験することになる。
炎症誘発性ＩＬ－２３／ＩＬ－２３受容体シグナル伝達軸は、ＰｓＯとＰｓＡの両方に関与している。特に、Ｔｈ－１７軸（ＩＬ－２３によって阻害される）は、乾癬とＰｓＡの両方の免疫病原性において重要な役割を果たすと考えられている。ＩＬ－２３／ＩＬ－２３－Ｒの相互作用によって、Ｔｈ－１７細胞のＩＬ－２３依存性の分化および活性化が誘発され、ＩＬ－１７とＩＬ－２２の産生および分泌は、最終的には滑膜と皮膚の炎症、ならびに骨再形成が生じる。ＰｓＡの病理に特に関連するのは、ＩＬ－１７がＲＡＮＫＬの上方制御をとおして骨侵食を促進することである。統合データ解析の結果が指示したところは、ウステキヌマブ処置を受けた患者（用量に関係なく）では、活動性ＰｓＡの患者において関節損傷のＸ線写真上の進行が有意に阻害されたことである（(Kavanaugh, A et al. Ann. Rheum. Dis. 73(6):1000-1006 (2014)）。このことによって、ほとんどのＰｓＡ患者で発生するＸ線写真上の損傷におけるＩＬ－２３の役割および下流のＴｈ１７経路が裏付けされる。
ヒトにおける主たる炎症性腸疾患（ＩＢＤ）であるクローン病（ＣＤ）と潰瘍性大腸炎（ＵＣ）は両方とも、腸の完全性および機能を変化させる慢性の組織炎症によって特徴づけられる慢性再発性疾患である。インターロイキン（ＩＬ）－２３およびＴヘルパー（Ｔｈ）１７細胞サイトカインのレベル上昇が、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（例えば、クローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ））の患者の腸粘膜、血漿、および血清で見出される。
ＩＬ－２３およびＩＬ－１７の細胞経路のエレメントをコードするいくつかの遺伝子におけるバリアントが、ＩＢＤリスクと関連する。特に、３８１位のアルギニンからグルタミンへのアミノ酸変化をコードするＩＬ－２３受容体遺伝子の機能喪失性バリアントが、ＩＬ－２３への曝露時のＳＴＡＴ３シグナル伝達の低下およびＴｈ１７細胞応答の低減に起因する、ＩＢＤのリスクを低減させることが観察されている（Barrett, JC et al. Nat. Genet. 40:955-962 (2008)、Duerr, RH et al. Science 314:1461-1463 (2006)、Allocca, M et al. Best Practice & Res. Clin. Gastro. 32-33:95-102 (2018)）。
クローン病（ＣＤ）とは、再発性の性質および胃腸系の関与によって特徴づけられる慢性免疫介在性状態である。ＣＤは、自然免疫応答と適応免疫応答の両方の調節不全によって特徴づけられる。病態生理学的メカニズムについては完全には理解されていないが、本疾患は、腸の常在菌と遺伝的素因のある個体における宿主の微生物防御との相互作用であって、クローン病において貫壁性炎症応答をもたらすことになる、相互作用の結果であると思われる（Deepak, P and Loftus, E, Drug Design, Development and Therapy (10) 3685-3698) (2016)）。長期的に見て、持続性の貫壁性炎症応答は、入院および／または手術を必要とする狭窄および／または瘻の発達に至る場合が多い。ＩＬ－２３／ＩＬ－１７経路の発見の後、ＣＤの処置パラダイムは、非特異的免疫抑制療法（すなわち、メトトレキサート）からＩＬ－２および／またはＩＬ－１７経路を標的とする免疫療法へと転換した。
ＵＣとは、慢性の再発寛解型炎症性腸疾患であり、この疾患は、大腸の継続的な粘膜炎症を引き起こし、こういった炎症によって、膿および粘膜を生じる小さな開放創または潰瘍が発達する。潰瘍性大腸炎の患者は１００万人近くが米国で生活していると、およびヨーロッパでは２６０万人がＵＣに罹患していると推定される。本疾患は、白人の間でより普通であるが、あらゆる人種または民族群の人々が本疾患に罹患する可能性があり、男性は女性よりも診断される可能性が高い。ＵＣの病因についてはあまり理解されていないが、結腸の慢性炎症につながる遺伝的素因を有する対象のマイクロバイオータ（微生物叢と病原体）に対する異常な免疫応答が部分的に原因である考えられる。潰瘍性大腸炎は、Ｔｈ２型サイトカインプロファイルを呈することが知られている。
ＩＢＤについて臨床調査中のＩＬ－２３特異的ｐ１９アンタゴニストには、ブラジクマブ（ＭＥＤＩ２０７０）、リサンキズマブ（ＢＩ ６５５０６６）、ミリキズマブ（ＬＹ３０７４８２８）、およびグセルクマブ（Ｔｒｅｍｆｙａ、Ｊａｎｓｓｅｎ）が含まれる。現在までに、抗ｐ１９（抗ＩＬ－２３）抗体、ブラジクマブおよびリサンキズマブは、第ＩＩ相治験で中等症から重症のＣＤに効果的であると報告されている。
第ＩＩ相治験において、ミリキズマブが、中等症から重症のＵＣに対して効果的であることが最近示された。研究されたすべての用量にわたって、プラセボで処置された患者の４．８パーセントと比較して、ミリキズマブで処置された患者の１１．５パーセント～２２．６パーセントの間が臨床寛解を達成した。加えて、ミリキズマブで処置された患者の大部分は、１２週目でプラセボと比較して内視鏡寛解および症候性寛解を達成した。現在、ＩＢＤの処置に承認されているｐ－１９選択的抗体はない。抗ｐ１９剤（リサンキズマブ、ブラジクマブ、グセルクマブ）の第２相および第３相治験が進行中であり、これらの治験によって、それらの有効性と安全性自体に関するさらなる情報に限らず、既存の生物学的製剤と直接比較した有効性に関するさらなる情報も、多重の生物学的製剤との併用処置の進化する治療コンセプトに関するさらなる情報も、提供されるであろう。
強直性脊椎炎（ＡＳ）とは、乾癬性関節炎のように、ＩＬ－２３経路に遺伝的に関連する別の脊椎関節症である；これは、不可逆的な脊椎融合に至るおそれのある、脊椎の炎症を伴う疼痛状態である。ＡＳは一般に、従来の疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）に応答せず、ＡＳの全身療法は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）と腫瘍壊死因子阻害剤から構成される。
いくつかの一連の証拠により、ＩＬ－２３がＡＳの有力な治療標的として特定された（Paine A, et al. Curr. Opin. Rheumatol. 28:359-67 (2016)）。遺伝子レベルでは、症例－対照全ゲノム関連研究により、ＩＬ－２３受容体（ＩＬ－２３Ｒ）多型は、ＡＳを発生させるリスクの上昇と関連していることが実証された（Reveille JD, et al Genet 42:123-7 (2010)）。加えて、ＩＬ－２３Ｒ Ｒ３８１Ｑ多型の保護効果がＡＳで観察される（Sarin R, et al. Proc Natl Acad Sci USA; 108:9560-58 (2011)）。ＡＳの患者の椎間関節でＩＬ－２３産生細胞の数の増加が見出され（Appel H, et al. Arthritis Rheum; 65:1522-9 (2013)）、一方、ＩＬ－２３応答性Ｔヘルパー（Ｔｈ）２２（Ｔｈ２２）、Ｔｈ１７およびガンマ／デルタＴ細胞の数は、ＡＳの患者由来の血液で上昇している（Zhang L, et al. PLoS One (7):e31000 (2012)）。
ＡＳの処置向けにＩＬ－１７Ａ阻害剤であるセクキヌマブが最近承認されたことによって（Baeten D. et al., N Engl. J. Med. 373:2534-48 (2015)）、ＩＬ－２３の直接的かつ特異的な阻害はＡＳの患者にとって治療効果となると思われるという臨床仮説が裏付けられた。しかし、活動性ＡＳの患者におけるリサンキズマブの有効性を評価する無作為化二重盲検プラセボ対照の概念実証用量設定第２相試験の結果を報告する最近の刊行物（ＮＣＴ０２０４７１１０）において結論付けられたことは、リサンキズマブによる処置は、研究の主要エンドポイントを満たしておらず、かつ、活動性ＡＳの患者においてプラセボと比較して臨床的に意味のある改善に関する証拠をまったく示さなかった（Baeten D, et al., Annals of the Rheumatic Diseases 77: 1295-1302 (2018)）、ということである。
ＩＬ－２３ｐ１９アンタゴニスト
ＩＬ－２３受容体複合体は、シグナル伝達鎖ＩＬ－２３Ｒ（ｐ１９サブユニット結合）とパートナーを組んだＩＬ－１２Ｒβ１で構成される。ＩＬ－２３は、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の表面でＩＬ－１２Ｒβ１／ＩＬ－２３Ｒ受容体複合体として発現する２つの受容体鎖に逐次結合することをとおして細胞活性を媒介する。
組換えＩＬ－２３の阻害のために選択されたマウス抗体、ヒト化抗体およびファージディスプレイ抗体が記載されている；例えば、米国特許第７，４９１，３９１号明細書、ＷＩＰＯ公開の国際公開第１９９９／０５２８０号パンフレット、国際公開第２００７／０２４４８４６号パンフレット、国際公開第２００７／０２７７１４号パンフレット、国際公開第２００７／０７６５２４号パンフレット、国際公開第２００７／１４７０１９号パンフレット、国際公開第２００８／１０３４７３号パンフレット、国際公開第２００８／１０３４３２号パンフレット、国際公開第２００９／０４３９３３号パンフレットおよび国際公開第２００９／０８２６２４号パンフレットを参照されたい。
ＩＬ－２３サイトカインのｐ１９サブユニットに高親和性をもって結合するモノクローナル抗体またはそれの抗原結合ドメインは、ＩＬ－２３サイトカインの活性を中和し、その結果、その下流の効果を遮断することができる。現在までに、３つの（３）抗ｐ１９抗体、グセルクマブ（ＴＲＥＭＦＹＡ（登録商標））、チルドラキズマブ（ＩＬＵＭＹＡ（登録商標））、およびリサンキズマブ（ＳＫＹＲＩＺＩ（登録商標））が、ＩＭＩＤの処置向けにＦＤＡによって承認されている。他の２つのＩＬ－２３ｐ１９サブユニット特異的抗体は現在、後期段階の臨床開発中のＭＥＤＩ２０７０（ブラジクマブ、Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ／Ｍｅｄｉｍｍｕｅ）およびＬｙ３０７４８２８（ミリキズマブ、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）である。ミリキズマブはヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ＩＬ－２３を遮断することにより、抗ｐ１９特異的抗体は、炎症誘発性サイトカインおよびケモカインの放出を阻害し、それによって炎症応答を弱める。
ＩＬ－２３アンタゴニストのこういったグループは、ＩＬ－２３のｐ１９サブユニットを標的としｐ４０サブユニットを標的としないので、ＩＬ－１２活性に影響を及ぼさない。この特性によって、ＩＬ－１２とＩＬ－２３が共有する共通のｐ４０サブユニットを標的とするウステキヌマブ（ＳＴＥＬＡＲＡ）から、ＩＬ－２３受容体アンタゴニストが区別される。ウステキヌマブの有効性および好都合な安全性プロファイルにもかかわらず、ＩＭＩＤ用の薬物開発は、ＩＬ－２３／ＩＬ－１７経路に選択的に拮抗する薬剤の開発へと向けてその焦点を転換してきた。
グセルクマブ（ＣＮＴＯ１９５９）は、ヒトＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに高親和性をもって結合する完全ヒト型モノクローナルＩｇＧ１，λ抗体である。グセルクマブは、ＦＤＡ承認の最初の抗ｐ１９特異的抗体／ＩＬ－２３アンタゴニストである。これは、規制当局の迅速審査の後、中等症から重症の尋常性乾癬の成人の処置向けに、２０１７年７月１３日に承認された。また、これは、カナダ、欧州連合、日本、および世界のその他のいくつかの国でも承認されている。グセルクマブは、ＴＲＥＭＦＹＡとしてＪａｎｓｓｅｎによって販売されている（米国特許第７，９３５，３４４号明細書および同第７，９９３，６４５号明細書）。
グセルクマブは、免疫細胞の表面に発現されるＩＬ－２３受容体タンパク質にＩＬ－２３が結合するのを妨げることによって、ヒトＩＬ－２３の生物活性を阻害する。より具体的には、グセルクマブは、ｐ１９サブユニットを介してヒトＩＬ－２３サイトカインに結合し、ＩＬ－２３－ＩＬ－２３Ｒ複合体の形成および続いて起こるパートナー受容体鎖の細胞内シグナル伝達を妨げる。
ＴＲＥＭＦＹＡ（登録商標）開発プログラムとして、現在、活動性乾癬性関節炎を処置するためのＴＲＥＭＦＹＡ（登録商標）の有効性を評価する第ＩＩＩ相治験、クローン病における第Ｉｌｂ／ＩＩＩ試験、潰瘍性大腸炎における第ＩＩｂ／ＩＩＩ試験、および化膿性汗腺炎向けのグセルクマブを評価する別の臨床試験が挙げられる。
Ｊａｎｓｓｅｎは最近、グセルクマブの臨床開発を、胃腸管の疾患である家族性腺腫性ポリポーシス（ＦＡＰ）へとさらに拡大する計画を公表した。Ｊａｎｓｓｅｎは、概７２人の患者においてグセルクマブ対プラセボの有効性と安全性を評価する第Ｉｂ相概念実証治験（ＮＣＴ０３６４９９７１）を開始した。ＦＡＰ症候群は最もよくある腺腫性ポリポーシス症候群である。これは常染色体優性遺伝性障害であり、結腸全体にわたって数百から数千の腺腫性ポリープの早期発症によって特徴づけられる。ＦＡＰは、世界中で８，３００人のうち約１人の出生発生率を有し、男女両性において等しく顕在化して、治療せずに放置すると、本症候群の患者はほとんど間違いなく結腸直腸がんを発生することになる。加えて、他の悪性腫瘍の発生についてリスクの上昇が存在する。結腸を除去することが目下、そういった患者において結腸直腸がんが発生するのを予防する唯一の方法である。
チルドラキズマブ（ＭＫ３２２）は、ＩＬＵＭＹＡ（米国特許第８，４０４，８１３号明細書）としてＭｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．／Ｓｕｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌによって販売されているヒト化モノクローナルＩｇＧ１，κ抗体である。チルドラキズマブは、ｐ１９サブユニットに選択的に結合し、それによって、ＩＬ－２３の受容体とのＩＬ－２３の相互作用を阻害し、したがって、ＩＬ－２３介在性炎症誘発性サイトカインの放出を阻害する。チルドラキズマブは、中等症から重症の尋常性乾癬の成人患者での使用向けに、２０１８年３月にＦＤＡから世界初の承認を受けた。
リサンキズマブ（ＢＩ ６５５０６６）は、ＳＫＹＲＩＺＩ（米国特許第８，７７８，３４６号明細書）としてＡｂｂＶｉｅ／Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍによって販売されているヒト化モノクローナルＩｇＧ１，κである。リサンキズマブは、ＩＬ－２３の高親和性抗体アンタゴニストとして開発された。
リサンキズマブは、高親和性（解離定数＜１０ｐｍｏｌ／Ｌ）をもって、インターロイキン－２３（ＩＬ－２３ｐ１９）のｐ１９サブユニットに選択的に結合する（Singh, S, et al., MAbs 7(4)77-791 (2015)）。これはＩＬ－２３のｐ１９サブユニットを選択的に標的とし、概２ｐＭのＩＣ５０値をもってマウス脾細胞アッセイにおいてＩＬ－２３誘発性（ＴＨＰ－１細胞によって産生されるヒトＩＬ－２３）ＩＬ－１７産生を強力に阻害する（(Singh, S, et al., MAbs 7(4)77-791 (2015)）。リサンキズマブのフレームワーク領域は、ＦｃγＲ受容体および補体結合を減少させるようにＦｃ領域における２つの突然変異を用いて改変されている。より具体的には、リサンキズマブのＦｃ部分は、Ｆｃγ受容体および補体結合を減少させるように、２つの置換突然変異（Ｌｅｕ２３４ＡｌａおよびＬｅｕ２３５Ａｌａ）を有する。リサンキズマブは、２０１９年４月に成人の中等症から重症の尋常性乾癬の処置向けにＦＤＡによって承認された。
抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体
本開示の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体は、ＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに結合する。好ましくは、かかる抗体は完全ヒト型であり、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットに結合しない。
一実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、表１に開示の一連のＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を有するＶＨを含む。例えば、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、そういったＣＤＲに相当する一連のＣＤＲを、表１に開示の１つまたは複数の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体中に含むことができる（例えば、Ｈｕ－２．１８００６Ｂ抗体のＣＤＲ）。
別の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体は、表２に開示の一連のＣＤＲ（ＬＤＣＲ１、ＬＤＣＲ２、およびＬＤＣＲ３）を有するＶＬを含む。例えば、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、そういったＣＤＲに相当する一連のＣＤＲを、表２に開示の１つまたは複数の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体中に含むことができる（例えば、Ｈｕ－２．１８００６Ｂ抗体のＣＤＲ）。
代替の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、表１に開示の一連のＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を有するＶＨ、ならびに表２に開示の一連のＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を有するＶＬを含む。
Figure 2023509373000001
Figure 2023509373000002
一実施形態では、抗体は、ヒトＩＬ－２３ｐ１９に特異的に結合するモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体（またはそれの抗原結合部分）とすることができる。
一実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号９、ＣＤＲ２：配列番号１０、ＣＤＲ３：配列番号１１；
（ｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１５、ＣＤＲ２：配列番号１６、ＣＤＲ３：配列番号１７；
（ｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２１、ＣＤＲ２：配列番号２２、ＣＤＲ３：配列番号２３；および
（ｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号２７、ＣＤＲ２：配列番号２８、ＣＤＲ３：配列番号２９
からなる群から選択される一連の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を有するＶＨを含む。
別の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号１２、ＣＤＲ２：配列番号１３、ＣＤＲ３：配列番号１４；
（ｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１８、ＣＤＲ２：配列番号１９、ＣＤＲ３：配列番号２０；
（ｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２４、ＣＤＲ２：配列番号２５、ＣＤＲ３：配列番号２６；および
（ｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号３０、ＣＤＲ２：配列番号３１、ＣＤＲ３：配列番号３２
からなる群から選択される一連の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を有するＶＬを含む。
別の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、
（ａ）
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号９、ＣＤＲ２：配列番号１０、ＣＤＲ３：配列番号１１；
（ｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１５、ＣＤＲ２：配列番号１６、ＣＤＲ３：配列番号１７；
（ｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２１、ＣＤＲ２：配列番号２２、ＣＤＲ３：配列番号２３；および
（ｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号２７、ＣＤＲ２：配列番号２８、ＣＤＲ３：配列番号２９、
からなる群から選択される一連の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を有するＶＨと、
（ｂ）
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号１２、ＣＤＲ２：配列番号１３、ＣＤＲ３：配列番号１４；
（ｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１８、ＣＤＲ２：配列番号１９、ＣＤＲ３：配列番号２０；
（ｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２４、ＣＤＲ２：配列番号２５、ＣＤＲ３：配列番号２６；および
（ｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号３０、ＣＤＲ２：配列番号３１、ＣＤＲ３：配列番号３２、
からなる群から選択される一連の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を有するＶＬと、
を含む。
一実施形態では、抗体は、
（ｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号９、ＣＤＲ２：配列番号１０、ＣＤＲ３：配列番号１１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１２、ＣＤＲ２：配列番号１３、ＣＤＲ３：配列番号１４；
（ｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１５、ＣＤＲ２：配列番号１６、ＣＤＲ３：配列番号１７、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１８、ＣＤＲ２：配列番号１９、ＣＤＲ３：配列番号２０；
（ｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２１、ＣＤＲ２：配列番号２２、ＣＤＲ３：配列番号２３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２４、ＣＤＲ２：配列番号２５、ＣＤＲ３：配列番号２６；および
（ｉｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２７、ＣＤＲ２：配列番号２８、ＣＤＲ３：配列番号２９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号３０、ＣＤＲ２：配列番号３１、ＣＤＲ３：配列番号３２
からなる群から選択される一連の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）を有する、ＶＨおよびＶＬの組合せを含む。
一実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、配列番号１、３、５、および７からなる群から選択される可変重鎖配列、ならびに／または配列番号２、４、６、および８からなる群から選択される可変軽鎖配列を含む。
一実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、一対の可変重鎖配列と可変軽鎖配列を含み、これは以下の組合せから選択される：配列番号１を含む可変重鎖配列と配列番号２を含む可変軽鎖配列；配列番号３を含む可変重鎖配列と配列番号４を含む可変軽鎖配列；配列番号５を含む可変重鎖配列と配列番号６を含む可変軽鎖配列；および配列番号７を含む可変重鎖配列と配列番号８を含む可変軽鎖配列。当業者であれば、可変軽鎖および可変重鎖を独立して選択して、または混合およびマッチさせて、上で特定されたペアリングとはまったく別である、可変重鎖と可変軽鎖の組合せを含む抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体を調製することができることを、さらに理解するであろう。
一実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、一対の可変重鎖配列と可変軽鎖配列を含み、これは以下の組合せから選択される：配列番号１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列と配列番号２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列；配列番号３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列と配列番号４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列；配列番号５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列と配列番号６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列；および、配列番号７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列と配列番号８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列。当業者であれば、可変軽鎖および可変重鎖を独立して選択して、または混合およびマッチさせて、上で特定されたペアリングとはまったく別である、可変重鎖と可変軽鎖の組合せを含む抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体を調製することができることを、さらに理解するであろう。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体（例えば、アンタゴニスト抗体）は、ＩＬ－２３のｐ１９サブユニットに高親和性をもって結合し、関連するサイトカインファミリーメンバー、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットに結合しない。
一部の実施形態では、抗体は完全長抗体である。他の実施形態では、抗体は、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、および相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニ抗体、およびそれにＩＬ－２３特異的結合を付与するのに十分である免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドからなる群から選択される抗体断片を始めとする抗体断片である。
一部の実施形態では、本明細書に開示の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の可変領域ドメインは、Ｃ末端アミノ酸で、少なくとも１つの他の抗体ドメインまたはそれの断片に共有結合で付着させることができる。したがって、例えば、可変領域ドメインに存在するＶＨドメインは、免疫グロブリンＣＨ１ドメインまたはそれの断片に連結することができる。同様に、ＶＬドメインはＣＫドメインまたはそれの断片に連結することができる。このように、例えば、抗体はＦａｂ断片とすることができるが、この場合、抗原結合ドメインは、会合したＶＨドメインおよびＶＬドメインを含有し、これらドメインは、そのＣ末端で、それぞれＣＨ１ドメインおよびＣＫドメインに共有結合で連結されている。ＣＨ１ドメインをさらなるアミノ酸で伸長させて、例えば、Ｆａｂ断片に見られるようなヒンジ領域またはヒンジ領域ドメインの一部を供給すること、または、抗体のＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインなどのさらなるドメインを供給することができる。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の可変領域ドメインは、Ｃ末端アミノ酸で、少なくとも１つの他の抗体ドメインまたはそれの断片に共有結合で付着させることができる。したがって、例えば、可変領域ドメインに存在するＶＨドメインは、免疫グロブリンＣＨ１ドメインまたはそれの断片に連結することができる。同様に、ＶＬドメインはＣＫドメインまたはそれの断片に連結することができる。このように、例えば、抗体はＦａｂ断片とすることができるが、この場合、抗原結合ドメインは、会合したＶＨドメインおよびＶＬドメインを含有し、これらドメインは、そのＣ末端で、それぞれＣＨ１ドメインおよびＣＫドメインに共有結合で連結されている。ＣＨ１ドメインをさらなるアミノ酸で伸長させて、例えば、Ｆａｂ’断片に見られるようなヒンジ領域またはヒンジ領域ドメインの一部を供給すること、または、抗体のＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインなどのさらなるドメインを供給することができる。
したがって、一実施形態では、抗体断片は、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＤＲを含む。抗体断片は、本明細書に記載の、少なくとも２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含むことができる。抗体断片は、本明細書に記載の抗体の少なくとも１つの可変領域ドメインをさらに含むことができる。可変領域ドメインは、任意のサイズであってもアミノ酸組成であってもよいが、全体として、ヒトＩＬ－２３ｐ１９への結合を担う少なくとも１つのＣＤＲ配列を、例えば、本明細書に記載のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、および／またはＣＤＲ－Ｌ３を含むことになるが、これは、１つまたは複数のフレームワーク配列に隣接しているかまたはそれとインフレームである。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体はモノクローナル抗体である。一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体はヒト抗体である。代替の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体はマウス抗体である。一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体はキメラ抗体、二重特異性抗体、またはヒト化抗体である。
さらなる態様では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、以下の特性のうちの１つまたは複数を呈する：
（ａ）ヒトＩＬ－２３ｐ１９に特異的であり、ＩＬ－２３の受容体（ＩＬ－２３Ｒ）へのＩＬ－２３結合を遮断する能力を有する；
（ｂ）ＩＬ－２３受容体シグナル伝達とのＩＬ－２３ｐ１９相互作用を阻害、妨害、またはモジュレートする；
（ｃ）ＩＬ－２３によって誘発されるＳＴＡＴ３活性化を阻害する；
（ｄ）マウス脾細胞においてヒトＩＬ－２３によって誘発されるＩＬ－１７産生を阻害する；
（ｅ）ＰＢＭＣ中の活性化されたヒトＴ細胞においてヒトＩＬ－２３によって誘発されるＩＬ－１７産生を阻害する；
（ｆ）ＩＬ－１２Ｒβ１シグナル伝達とのＩＬ－２３相互作用を阻害しない；
（ｇ）ヒト活性化Ｔ細胞（ＰＢＭＣ）においてヒトＩＬ－１２誘発性インターフェロンガンマ産生を阻害しない；
（ｈ）ヒト活性化Ｔ細胞（ＰＢＭＣ）においてカニクイザルＩＬ－１２誘発性インターフェロンガンマ産生を阻害しない；および
（ｉ）マウス乾癬様モデルにおいてヒトＩＬ－２３によって誘発される皮膚炎症を阻害する。
一実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、ＩＬ－２３に関連する生物学的応答のうちの少なくとも１つを低減、阻害、妨害、および／またはモジュレートすることができ、したがって、ＩＬ－２３関連の疾患または障害の影響を改善するのに有用である。かかる抗体およびそれの抗体断片は、例えば、ＩＬ－２３シグナル伝達、Ｔｈ１７細胞のＩＬ－２３活性化、ＮＫ細胞のＩＬ－２３活性化、または炎症誘発性サイトカインの産生を誘発することを低減、阻害、妨害および／またはモジュレートするために使用することができる。
一部の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、１つまたは複数の保存的アミノ酸置換を含む。当業者であれば、保存的アミノ酸置換とは、１つのアミノ酸と、類似した構造的または化学的特性、例えば類似した側鎖などを有する別のアミノ酸との置換であると理解するであろう。例示的な保存的置換は、当技術分野において、例えば、Watson et al., Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Publication Company, 4th Ed. (1987)に記載されている。
「保存的改変」とは、アミノ酸配列を含有する抗体の結合特性に有意に影響することがないまたはこれを変えることがないアミノ酸改変を指す。保存的改変には、アミノ酸の置換、付加、および欠失が含まれる。保存的置換とは、アミノ酸が類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられている置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーについては十分に定義されており、それとしては、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン、トリプトファン）、芳香族側鎖（例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン、チロシン）、脂肪族側鎖（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン）、アミド（例えば、アスパラギン、グルタミン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、および含硫側鎖（システイン、メチオニン）を有するアミノ酸が挙げられる。さらに、アラニンスキャニング突然変異誘発について既に記載されているように（MacLennan et al. (1998) Acta Physiol Scand Suppl 643: 55-67；Sasaki et al. (1998) Adv Biophys 35: 1-24）、ポリペプチド中の任意の天然残基をアラニンで置換することもできる。本発明の抗体に対するアミノ酸置換は、既知の方法によって、例えばＰＣＲ突然変異誘発によって行うことができる（米国特許第４，６８３，１９５号明細書）。
一実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、キメラ抗体またはヒト化抗体としてフォーマットされた、Ｈｕ－２．１８００６Ｂ、Ｈｕ－４．１８００６Ｂ、Ｈｕ－５．１８００６Ｂ、またはＨｕ－６．１８００６Ｂの各抗体のＣＤＲ領域の６つすべてを含む。他の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、開示された完全ヒト型抗体のうちの１つのＣＤＲ領域の６つすべてを含む。
抗体の作製方法
抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、当技術分野で知られている任意の方法によって作製することができる。例えば、レシピエントは、可溶性組換えヒトＩＬ－２３タンパク質、または断片、またはそれの担体タンパク質とコンジュゲートしたペプチドで免疫することができる。適切な任意の免疫方法を使用することができる。かかる方法としては、アジュバント、他の免疫刺激剤、反復ブースター免疫、および１つまたは複数の免疫経路の使用を挙げることができる。
ヒトＩＬ－２３の適切な任意の供給源を、本明細書に開示の組成物および方法の非ヒトまたはヒトの抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の生成のための免疫原として使用することができる。
様々な形態のＩＬ－２３抗原を使用して、生物学的活性を生みだすのに十分である抗体を生成することができる。したがって、誘発ＩＬ－２３抗原は、単独でまたは１つもしくは複数の免疫原性増強剤との組合せの、単一のエピトープであっても、多重のエピトープであっても、タンパク質全体であってもよい。一部の態様では、誘発抗原は、単離された可溶性完全長タンパク質、または完全長配列未満を含む可溶性タンパク質である（（例えば、ＩＬ－２３の特定の部分またはエピトープを含むペプチドで免疫する）。本明細書で使用される場合、「部分」という用語は、必要に応じて、目的の抗原の免疫原性エピトープを構成する、最小数のアミノ酸または核酸を指す。目的の細胞の形質転換に適したあらゆる遺伝的ベクターを用いることができ、それには、アデノウイルスベクター、プラスミド、およびカチオン性脂質などの非ウイルスベクターが含まれるが、これらに限定されない。
マウス、げっ歯類、霊長類、ヒト等などの種々の哺乳動物宿主から、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を調製することが望ましい。かかるモノクローナル抗体を調製する技法に関する記載が、例えば、Sties et al. (eds.) BASIC AND CLINICAL IMMUNOLOGY (4th ed.) Lance Medical Publication, Los Altos, CAに、およびそこで引用される参考文献；Harlow and Lane (1988) ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL CSH Press; Goding (1986) MONOCLONAL ANTIBODIES: PRINCIPLES AND PRACTICE (2nd ed.) Academic Press, New York, NYに見出すことができる。通常では、所望の抗原で免疫した動物由来の脾臓細胞が、普通には骨髄腫細胞との融合によって、不死化される。Kohler and Milstein (196) Eur. J. Immunol. 6:511-519を参照されたい。不死化についての代替の方法としては、エプスタイン・バーウイルス、癌遺伝子、もしくはレトロウイルスを用いる形質転換、または当該分野において知られている他の方法が挙げられる。例えば、Doyle et al. (eds. 1994 and periodic supplements) CELL AND TISSUE CULTURE: LABORATORY PROCEDURES, John Wiley and Sons, New York, NYを参照されたい。抗原に対する所望の特異性および所望の親和性の抗体の産生のために、単一の不死化細胞から生じるコロニーをスクリーニングする。かかる細胞により産生されるモノクローナル抗体の収量は、脊椎動物宿主の腹膜腔への注入を含めて、種々の技法によって増大することができる。あるいは、例えば、Huse et al., (1989) Science 246: 1275-1281に概説された一般的プロトコルに従って、ヒトＢ細胞由来のＤＮＡライブラリをスクリーニングすることによって、モノクローナル抗体またはそれの抗原結合断片をコードするＤＮＡ配列を単離することができる。したがって、抗体は、当技術分野で熟練した研究者によく知られている様々な技法によって得ることができる。
他の適切な技法には、ファージ、酵母、ウイルスまたは類似のベクターにおける抗体のライブラリの選択が関与する。例えば、Huse et al.、上掲；およびWard et al., (1989) Nature 341:544-546を参照されたい。本明細書で開示のポリペプチドおよび抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体を含めて、改変の有無にかかわらず使用することができる。しばしば、ポリペプチドおよび抗体は、検出可能なシグナルを供給する物質を、共有結合または非共有結合のいずれかで連結することによって、標識されることもある。科学文献と特許文献どちらにおいても、幅広い様々の標識およびコンジュゲーションの技法が、知られており、広く報告されている。適切な標識としては、放射性核種、酵素、基質、補因子、阻害因子、蛍光性の部分、化学発光性の部分、および磁性粒子等が挙げられる。かかる標識の使用を教示する特許としては、米国特許第３，８１７，８３７号明細書；同第３，８５０，７５２号明細書；同第３，９９６，３４５号明細書；同第４，２７７，４３７号明細書；同第４，２７５，１４９号明細書；および同第４，３６６，２４１号明細書が挙げられる。また、組換え免疫グロブリンも産生させることができる、Cabilly米国特許第４，８１６，５６７号明細書；およびQueen et al. (1989) Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 86: 10029-10023を参照されたい；または、トランスジェニックマウスにおいて作製することができる、Nils Lonberg et al., (1994), Nature 368:856-859；およびMendez et al. (1997) Nature Genetics 15: 146-156；TRANSGENIC ANIMALS AND METHODS OF USE （国際公開第２０１２／６２１１８号パンフレット）、Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｔｒｉａｎｎｉ、Ａｂｇｅｎｉｘ、Ａｂｌｅｘｉｓ、ＯｍｉｎｉＡｂ、Ｈａｒｂｏｕｒおよびそのほかの技法を参照されたい。
一部の実施形態では、ＩＬ－２３ｐ１９に結合する産生された抗体の能力は、標準的な結合アッセイを使用して、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、オクテット（ＢＬＩ）、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、免疫蛍光、フローサイトメトリー解析、走化性アッセイ、および細胞移動アッセイを使用して、評価することができる。一部の態様では、産生された抗体はまた、ＩＬ－２３にＩＬ－２３受容体β１シグナル伝達を遮断させないそれの能力、および、ＩＬ－２３誘発性のＳｔａｔ３リン酸化、ＩＬ－１７産生および／またはＩＦＮ－γ産生を阻害することを含む、ＩＬ－２３ｐ１９および／またはＩＬ－２３ｐ１９介在性炎症性微小環境の連続効果を阻害するそれの能力について評価することができる。
細胞から調製した抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、およびアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製することができ、アフィニティークロマトグラフィーが通常の精製技法である。プロテインＡのアフィニティーリガンドとしての適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡを使用して、ヒトγ１、γ２、またはγ４の各重鎖をベースとする抗体を精製することができる（例えば、Lindmark et al., 1983 J. Immunol. Meth. 62:1-13を参照されたい）。プロテインＧが、すべてのマウスアイソタイプにおよびヒトγ３に推奨される（例えば、Guss et al., 1986 EMBO J. 5:1567-1575を参照されたい）。アフィニティーリガンドが付着されるマトリクスはほとんどの場合アガロースであるが、その他のマトリクスも利用可能である。多孔性ガラス（controlled pore glass）またはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定なマトリクスによって、アガロースで得ることができるよりも早い流速および短い処理時間が可能となる。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）レジン（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎ．Ｊ．）が精製に有用である。イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）でのクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン交換樹脂（例えば、ポリアスパラギン酸カラム）でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈殿などのタンパク質精製向けの他の技法も、回収される抗体に応じて利用可能である。
任意の予備的精製ステップに続いて、目的の抗体と混入物を含む混合物を、通常では低塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍ塩から）で行うが、ｐＨ約２．５～４．５の間にての溶出緩衝剤を使用する低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供することができる。
また、本開示の抗体または抗体断片をコードする単離されたポリヌクレオチド配列により表わされるヌクレオチド配列の全部または一部（例えば、可変領域をコードする部分）に、本明細書で定義の、低、中および高のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする、核酸も含まれる。ハイブリダイズする核酸のハイブリダイズする部分は典型的には、少なくとも１５（例えば、２０、２５、３０または５０）ヌクレオチド長である。ハイブリダイズする核酸のハイブリダイズする部分は、抗ＩＬ－２３ｐ１９ポリペプチド（例えば、重鎖可変領域または軽鎖可変領域）をコードする核酸またはその相補鎖の一部または全部の配列と少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％同一である。本明細書に記載のタイプのハイブリダイズする核酸は、例えば、クローニングプローブ、プライマー、例えば、ＰＣＲプライマーまたは診断プローブとして使用することができる。
ポリヌクレオチド、ベクターおよび細胞
他の実施形態は、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド、上記ポリヌクレオチドを含むベクター、および細胞、ならびに上記抗体を作製するための組換え技法を包含する。単離されたポリヌクレオチドは、例えば、完全長モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片、ダイアボディ、線状抗体、単鎖抗体分子、ミニ抗体、および抗体断片から形成された多重特異性抗体を含めて、所望の任意の形態の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体をコードすることができる。
一部の実施形態には、配列番号２、４、６、および８のいずれかのアミノ酸配列を有する抗体または抗体断片の軽鎖可変領域をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチドが含まれる。一部の実施形態には、配列番号１、３、５、および７のアミノ酸配列を有する抗体または抗体断片の重鎖可変領域をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチドが含まれる。
一実施形態では、単離されたポリヌクレオチド配列は、
（ａ）配列番号１の可変重鎖配列および配列番号２の可変軽鎖配列；
（ｂ）配列番号３の可変重鎖配列および配列番号４の可変軽鎖配列；
（ｃ）配列番号５の可変重鎖配列および配列番号６の可変軽鎖配列；または
（ｄ）配列番号７の可変重鎖配列および配列番号８の可変軽鎖配列
のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域および重鎖可変領域を有する抗体または抗体断片をコードする。
別の実施形態では、単離されたポリヌクレオチド配列は、
（ａ）配列番号１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列および配列番号２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列；
（ｂ）配列番号３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列および配列番号４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列；
（ｃ）配列番号５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列および配列番号６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列；または、
（ｄ）配列番号７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列および配列番号８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列
のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域および重鎖可変領域を有する抗体または抗体断片をコードする。
抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片をコードする配列を含むポリヌクレオチドを、当技法分野で知られている、１つまたは複数の調節配列または制御配列に融合することができ、かつ、それを当技術分野において知られている適切な発現ベクターまたは細胞に含有せしめることができる。重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド分子それぞれを、独立して、ヒト定常ドメインなどの定常ドメインをコードするポリヌクレオチド配列に融合することができ、その結果、インタクトな抗体の作製が可能となる。あるいは、ポリヌクレオチドまたはその一部を互いに融合することができ、その結果、単鎖抗体の作製用の鋳型がもたらされる。
組換え産生の場合、抗体をコードするポリヌクレオチドを、クローニング用（ＤＮＡの増幅）または発現用の複製可能なベクターに挿入する。組換え抗体を発現させるための適切な多くのベクターが利用可能である。ベクター成分としては一般に、それらに限定されないが、以下の１つまたは複数が挙げられる：シグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。
抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片はまた、融合ポリペプチドとして産生されてもよく、この場合、抗体または断片は、シグナル配列などの異種ポリペプチド、または成熟タンパク質もしくはポリペプチドのアミノ末端に特異的な切断部位を有する他のポリペプチドと融合されている。選択された異種シグナル配列は典型的には、細胞によって認識されプロセシングされる（すなわちシグナルペプチダーゼによって切断される）ものである。抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体シグナル配列を認識かつプロセシングしない原核細胞の場合、シグナル配列を、原核生物のシグナル配列によって置換することができる。シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、リポタンパク質、熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダー等とすることができる。酵母での分泌の場合、天然シグナル配列を、例えば、酵母インベルターゼアルファ因子（サッカロマイセス（Saccharomyces）およびクルイベロマイセス（Kluyveromyces）のアルファ因子リーダーを含めて）、酸性ホスファターゼ、Ｃ．アルビカンス（C. albicans）グルコアミラーゼ、または国際公開第９０／１３６４６号パンフレットに記載のシグナルから得られるリーダー配列で置換することができる。哺乳動物細胞では、哺乳動物シグナル配列、ならびにウイルス分泌リーダー、例えば単純ヘルペスｇＤシグナルを使用することができる。かかる前駆体領域のＤＮＡを、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体をコードするＤＮＡにリーディングフレーム内でライゲートする。
発現ベクターおよびクローニングベクターは、１つまたは複数の選択された細胞においてベクターが複製することを可能とする核酸配列を含有する。一般には、クローニングベクター内でのその配列は、ベクターが宿主染色体ＤＮＡとは独立して複製することを可能とするものであり、これは複製起点または自律複製配列を含む。様々な細菌、酵母、およびウイルスについて、かかる配列はよく知られている。プラスミドｐＢＲ３２２由来の複製起点は大半のグラム陰性細菌にとって適切であり、２－υ．プラスミド起点は酵母に適切であり、種々のウイルス性起点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ、およびＢＰＶ）は哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。一般には、複製成分の起点は、哺乳動物発現ベクターには必要とされない（ＳＶ４０起点は、初期プロモーターを含有するという理由だけで、通常では使用することができる）。
発現ベクターおよびクローニングベクターは、発現の特定を容易にする選択マーカーをコードする遺伝子を含有することができる。通常の選択マーカー遺伝子は、抗生物質もしくはその他の毒素、例えばアンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、もしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質をコードする、または代替的には補完性の栄養要求性欠損症である、あるいは他の選択肢では、選択マーカー遺伝子は複合培地に存在しない特定の栄養分を供給する、例えば、上記遺伝子はバシラス綱（Bacilli）のためのＤ－アラニンラセミ化酵素をコードする。
非治療上の使用
本明細書に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体または抗体断片は、親和性の精製剤として有用である。本方法では、抗体は、当技術分野でよく知られた方法を使用してプロテインＡ樹脂などの固相上に固定される。固定された抗体は、精製するＩＬ－２３ｐ１９タンパク質（またはそれの断片）を含有する試料と接触させ、その後、支持体を適切な溶媒で洗浄するが、この溶媒によって、固定された抗体に結合したＩＬ－２３ｐ１９タンパク質以外の試料中の全物質が実質的に排除されることになる。最終的に、支持体を、ＩＬ－２３ｐ１９タンパク質を抗体から遊離させることになる別の適切な溶媒で洗浄する。
抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体または抗体断片はまた、例えば、特定の細胞、組織、または血清におけるＩＬ－２３ｐ１９発現を検出して、ＩＬ－２３ｐ１９タンパク質を検出および／または定量化するのに、診断アッセイにおいても有用である。抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体を診断上使用して、例えば、臨床試験手順の一部として疾患の発生または進行をモニタリングし、その結果、例えば、所与の処置および／または予防レジメンの有効性が決定することができる。抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体を検出可能な物質にカップリングさせることによって、検出を容易にすることができる。検出可能な物質の例には、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、種々のポジトロン放出断層撮影を使用するポジトロン放出金属、および非放射性常磁性金属イオンが含まれる。本開示による、診断として使用向けの抗体にコンジュゲートさせることができる金属イオンについては、例えば、米国特許第４，７４１，９００号明細書を参照されたい。
抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体または抗体断片は、ＩＬ－２３ｐ１９関連障害（例えば、ＩＬ－２３ｐ１９の異常発現によって特徴づけられる障害）の診断方法において使用することができる、または対象がＩＬ－２３ｐ１９関連障害を発生するリスクの上昇を有するかどうか判定するのに使用することができる。かかる方法は、対象からの生物学的試料を抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片と接触させるステップ、および抗体のＩＬ－２３ｐ１９への結合を検出するステップを含む。「生物学的試料」によって、個々の細胞株、組織培養物、またはＩＬ－２３ｐ１９を潜在的に発現する細胞のその他の供給源から得られる任意の生物学的試料が意図される。組織生検および体液を哺乳動物から得る方法は、当技術分野においてよく知られている。
一部の実施形態では、方法は、患者試料におけるＩＬ－２３ｐ１９のレベルを対照試料（例えば、ＩＬ－２３ｐ１９関連障害を有さない対象）と比較して、患者が、ＩＬ－２３ｐ１９関連障害を有するか、またはＩＬ－２３ｐ１９関連障害を発生するリスクがあるかどうか判定するステップを、さらに含むことができる。
一部の実施形態では、例えば診断目的の場合、検出可能な部分で抗体を標識することが有利であろう。ラジオアイソトープ、蛍光標識、酵素基質標識等を含めて、検出可能な多数の標識が利用可能である。標識は、種々の既知の技法を使用して抗体と間接的にコンジュゲートすることができる。例えば、抗体をビオチンとコンジュゲートさせることができ、上述の広範な３種のカテゴリーの標識のいずれかをアビジンとコンジュゲートすることができる、またはその逆も同様である。ビオチンはアビジンに選択的に結合し、したがって、標識は、この間接的な方法で抗体とコンジュゲートすることができる。あるいは、抗体との標識の間接的コンジュゲーションを得るために、抗体を小ハプテン（例えばジゴキシン）とコンジュゲートさせることができ、上述の標識の様々な種類の１つを、抗ハプテン抗体（例えば、抗ジゴキシン抗体）とコンジュゲートさせる。これによって、標識の抗体との間接的コンジュゲーションを得ることができる。
例示的なラジオアイソトープ標識には、３５Ｓ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、および１３１Ｉが含まれる。抗体は、例えば、Current Protocols in Immunology, Volumes 1 and 2, 1991, Coligen et al., Ed. Wiley-Interscience, New York, N.Y., Pubsに記載の技法を使用して、ラジオアイソトープで標識することができる。放射性活性は、例えばシンチレーション計測によって測定することができる。
例示的な蛍光標識には、レアアースキレート剤（ユーロピウムキレート剤）に由来する標識が含まれる、またはフルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、リサミン、フィコエリトリン、ならびにＴｅｘａｓ Ｒｅｄが利用可能である。蛍光標識は、既知の技法、例えばCurrent Protocol in Immunologyに開示のものなどを介して抗体にコンジュゲートさせることができる。蛍光は蛍光光度計を使用して定量化することができる。
当技術分野で知られている、種々の十分に特徴づけられた酵素基質標識が存在する（例えば、米国特許第４，２７５，１４９号明細書を参照されたい）。酵素は一般に、種々の技法を使用して測定することができる発色基質の化学的変化を触媒する。例えば、変化は、分光光度法で測定することができる基質の色相の変化とすることができる。あるいは、酵素は、基質の蛍光または化学発光を変化させることができる。蛍光の変化を定量化する技法は上述されている。化学発光基質は、化学反応によって電気的に励起され、次いで、例えば、ケミルミノメーターを使用して測定することが可能である光を放出することができる、または蛍光受容部にエネルギーを供与する。
酵素標識の例としては、ルシフェラーゼ、例えばホタルルシフェラーゼおよび細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号明細書）、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、リンゴ酸脱水素酵素、ウレアーゼ、ペルオキシダーゼ、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖類酸化酵素（例えばグルコース酸化酵素、ガラクトース酸化酵素、およびグルコース－６－リン酸塩脱水素酵素）、複素環酸化酵素（例えばウリカーゼおよびキサンチン酸化酵素）、ラクトペルオキシダーゼ、ミクロペルオキシダーゼ等が挙げられる。酵素を抗体にコンジュゲートさせる技法は、例えば、O'Sullivan et al., 1981, Methods for the Preparation of Enzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. (J. Langone & H. Van Vunakis, eds.), Academic press, N.Y., 73: 147-166に記載されている。
酵素－基質の組合せの例には、例えば、基質としての水素ペルオキシダーゼとの西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）、この場合、水素ペルオキシダーゼは、オルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ）または３，３，５，５－テトラメチルベンジジンヒドロクロライド（ＴＭＢ）などの色素前駆体を酸化する；発色基質としてのパラ－ニトロフェニルホスフェートとのアルカリホスファターゼ（ＡＰ）；およびｐ－ニトロフェニル－β－Ｄ－ガラクトシダーゼなどの発色基質または発蛍光性基質４－メチルウンベリフェリル－β－Ｄ－ガラクトシダーゼとのβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ（β－Ｄ－Ｇａｌ）が挙げられる。
別の実施形態では、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、無標識で使用され、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片に結合する標識抗体で検出される。
本明細書に記載の抗体およびそれの抗体断片は、任意の既知のアッセイ方法、例えば、競合的結合アッセイ、直接および間接サンドイッチアッセイ、および免疫沈降アッセイにおいて用いることができる。例えば、Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987)を参照されたい。
抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはその抗体断片を使用して、リガンドのＩＬ－２３受容体への結合を阻害することができる。かかる方法は、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体を細胞（例えば、哺乳動物細胞）または細胞環境に投与するステップを含み、それによって、ＩＬ－２３受容体によって媒介されるシグナル伝達が阻害される。これらの方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで行うことができる。「細胞環境」とは、組織、培地、または細胞を囲む細胞外マトリクスを意味する。
組成物および処置方法
本開示はまた、例えば、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片を含む医薬組成物を始めとする、組成物を提供する。かかる組成物は、免疫介在性炎症性障害または自己免疫疾患などの疾患または障害（例えば、ＩＬ－２３／ＩＬ－２３受容体シグナル伝達軸によって媒介される生物学的活性が関与する疾患または障害）の処置、予防、または改善のための多数の治療用途を有する。
本明細書に開示の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片は、免疫介在性炎症性障害（ＩＭＩＤ）または自己免疫疾患などの種々の疾患または障害の処置に有用である。ＩＬ－２３関連障害を処置する方法は、治療有効量の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片を、それを必要とする対象に投与するステップを含む。ＩＭＩＤは、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎またはクローン病）、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、化膿性汗腺炎、アトピー性皮膚炎、および喘息からなる群から選択することができる。
本開示はまた、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体またはそれの抗体断片を含む組成物または製剤、および必要に応じて別の免疫ベースの治療を、それを必要とする対象に投与するステップを含む、ＩＭＩＤの処置または予防のための方法も提供する。
本開示の抗体はまた、単独で（例えば、単剤療法として）、または他の免疫療法剤および／または化学療法との組合せでのいずれかで、がんの処置方法において有用である。
抗体は、単独で、または免疫介在性炎症性障害または自己免疫疾患を処置するのに有用である他の組成物との組合せでのいずれかで、投与することができる。一部の実施形態では、例えば、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体を含む医薬組成物を始めとする組成物は、結合剤にコンジュゲートしているかまたはコンジュゲートしてない治療剤をさらに含むことができる。
一部の態様では、組成物、例えば、本明細書に開示の１つまたは複数の抗体を含む医薬組成物が提供される。医薬組成物は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th Edition, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1995に開示のものなどの従来の技法に従って、医薬的に許容される担体または希釈剤、ならびにその他の任意の既知のアジュバントおよび賦形剤とともに製剤化することができる。
通常では、注射による投与用の組成物は、無菌等張水性緩衝剤の溶液である。必要であれば、医薬はまた、可溶化剤、および注射部位の疼痛を緩和するためのリグノカインなどの局所麻酔薬を含んでいてもよい。一般に、成分は、別々に供給されるか、または単位剤形で一緒に混合されて、例えば、活性薬剤の量を表示するアンプルまたはサシェットなどの密封容器内の、凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として供給される。医薬は、輸注によって投与する場合、無菌の医薬品等級の水または生理食塩水を含有する点滴瓶を用いて投薬することができる。医薬は、注射によって投与する場合、成分を投与前に混合することができるように、無菌注射用水または生理食塩水のアンプルを供給することができる。
本明細書で使用される場合、「医薬的に許容される担体」には、生理学的に適合性のあるあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等が含まれる。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮の各投与（例えば、注射または注入による）に適している。投与経路に応じて、活性化合物、すなわち抗体、二重特異性分子および多重特異性分子を、物質でコーティングして、化合物を不活性化するおそれのある酸およびその他の自然条件の作用から当該化合物を保護することができる。
組成物は、当技術分野で知られている様々な方法によって投与することができる。当業者であれば理解されるように、投与の経路および／または様式は、所望の結果に応じて異なる。活性化合物は、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化による送達系を含めて、制御放出製剤などの、急速な放出に対して化合物を保護することになる担体とともに調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。かかる製剤を調製する方法は一般に当業者に知られている。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978を参照されたい。
医薬組成物中の有効成分の投薬量レベルは、対象にとって毒性がなく、特定の対象、組成物および投与様式に関して所望の治療反応を達成するのに効果的である、活性成分の量が得られるように、変えることができる。選択される投薬量レベルは、採用する特定の組成物の活性、投与の経路、投与の時間、採用する特定の化合物の排泄速度、処置の期間、採用する特定の組成物との組合せで使用される他の薬物、化合物および／または物質、処置される患者の年齢、性別、体重、状態、全体的健康、および以前の病歴等の医学分野でよく知られている要因を含めて様々な薬物動態の要因に左右されるであろう。
本明細書に記載の医薬組成物は、有効量で投与することができる。「有効量」とは、単独で、もしくはさらなる用量とともに所望の反応または所望の効果を達成する量を指す。特定の疾患のまたは特定の状態の処置の場合、所望の反応は好ましくは、疾患の経過の阻害に関連する。このことは、疾患の進行を遅延させること、および特に、疾患の進行を中断または好転させることを含む。
一部の態様では、本明細書に記載の組成物は、本明細書に記載のものなどの様々な障害を処置または予防するために、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏで患者に投与される。好ましい患者としては、ＩＬ－２３／ＩＬ－２３受容体シグナル伝達軸の生物学的活性をモジュレートする薬剤を投与するステップによって矯正または改善することができる障害を有するヒト患者が挙げられる。
一部の態様では、従来のウイルスおよび非ウイルスベースの遺伝子導入法を使用して、本明細書に記載の抗体またはそれの誘導体をコードする核酸を哺乳動物細胞または標的組織中に導入することができる。かかる方法を使用して、抗体をコードする核酸をｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞に投与することができる。一部の実施形態では、抗体またはそれの誘導体をコードする核酸を、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏ遺伝子治療用途のために投与する。他の実施形態では、遺伝子送達技法を使用して、細胞ベースのモデルまたは動物モデルにおいて抗体の活性について研究する。非ウイルスベクター送達システムには、ＤＮＡプラスミド、ネイキッド核酸、およびリポソームなどの送達ビヒクルと複合体化された核酸が含まれる。ウイルスベクター送達システムには、細胞への送達後にエピソーム性のゲノムまたは組み込まれたゲノムのいずれかを有する、ＤＮＡウイルスおよびＲＮＡウイルスが含まれる。かかる方法は当技術分野でよく知られている。
本開示の改変されたポリペプチドをコードする核酸の非ウイルス送達の方法には、リポフェクション、マイクロインジェクション、遺伝子銃、ビロソーム、リポソーム、イムノリポソーム、ポリカチオンまたは脂質：核酸コンジュゲート、ネイキッドＤＮＡ、人工ビリオン、およびＤＮＡの薬剤強化取込みが含まれる。リポフェクション法およびリポフェクション試薬は当技術分野でよく知られている（例えば、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ（商標）およびＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標））。ポリヌクレオチドの効率的な受容体認識リポフェクションに適したカチオン性および中性脂質には、Ｆｅｌｇｎｅｒ、国際公開第９１／１７４２４号パンフレット、国際公開第９１／１６０２４号パンフレットのものが含まれる。細胞（ｅｘ ｖｉｖｏ投与）または標的組織（ｉｎ ｖｉｖｏ投与）に送達することができる。免疫脂質複合体などの標的化リポソームを含めて、脂質：核酸複合体の調製は、当業者によく知られている。
本明細書に記載の抗体をコードする核酸の送達用のＲＮＡウイルスベースまたはＤＮＡウイルスベースのシステムを使用すると、ウイルスを体内の特定の細胞に標的化するとともにウイルスペイロードを核に輸送するための、高度に発展した方法の利点が生かされる。ウイルスベクターを患者に直接投与することができる（ｉｎ ｖｉｖｏ）、またはそれらを使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞を処理することができそして改変細胞を患者に投与する（ｅｘ ｖｉｖｏ）。本開示のポリペプチドの送達向けの従来のウイルスベースのシステムとして、遺伝子導入用のレトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ヘルペスウイルス、および単純ヘルペスウイルスの各ベクターを挙げることができる。ウイルスベクターは現在、標的細胞および組織における遺伝子導入の最も効率的かつ汎用的な方法である。宿主ゲノムにおける統合が、レトロウイルス、レンチウイルス、およびアデノ随伴ウイルスの遺伝子導入法を用いて可能であり、多くの場合、挿入された導入遺伝子の長期的発現をもたらす。加えて、高度の形質導入効率が、様々な多くの細胞型および標的組織において観察されている。特定されるすべての特許および刊行物は、例えば、本開示に関連して使用することが可能なかかる刊行物に記載の方法論を、説明および開示することを目的として、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。これらの刊行物は、本願の出願日より前のそれらの開示ために提供されるに過ぎない。この点に関していかなるものも、本発明者らが、先行発明を理由としてまたは他のいかなる理由によっても、かかる開示に先行する権利を有さないことを承認するものと解釈されるべきではない。これらの文書の日付に関する声明または内容に関する表現はすべて、本出願人にとって入手可能な情報に基づいており、これらの文書の日付または内容の正確性に関していかなる承認も構成するものではない。
先に指示されていない限りでは、本明細書に記載および例示される様々な実施形態のいずれでも、本明細書に開示の他の実施形態のうちのいずれかに示される特性を組み込むようにさらに改変され得ることは、当業者であれば理解されるであろう。
本開示の広範な範囲は、以下の例を参照して最もよく理解されるが、本例は本開示を特定の実施形態に限定することを意図するものではない。本明細書に記載される特定の実施形態は、例としてのみ提供されるものであり、本開示は、添付の特許請求の範囲の条件によって、かかる特許請求の範囲が権利を有する均等物の全範囲を含めて、制限されるものである。
一般方法
免疫沈降、クロマトグラフィー、および電気泳動を始めとするタンパク質精製の方法が記載されている。Coligan et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York.。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の生成、およびタンパク質のグリコシル化が記載されている。例えば、Coligan et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York；Ausubel et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, N.Y., pp. 16.0.5-16.22.17；Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, Mo.; pp. 45-89；Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., pp. 384-391を参照されたい。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の産生、精製、および断片化が記載されている。Coligan et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York；Harlow and Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Harlow and Lane、上掲。
ハイブリドーマ上清を、ＨｉＴｒａｐプロテインＧカラム（ＧＥ、カタログ番号１７０４０４０１）によって、製造業者の手順に従って精製した。簡単に説明すると、プロテインＧカラムを５ＣＶのＤＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１４１９０－１３６）によって平衡化し、ハイブリドーマ上清を、シリンジ／注入ポンプ（Ｌｅｇａｔｏ ２００、ＫＤＳ）を介して、周囲温度および３分間の滞留時間でロードした。カラムを５ＣＶのＤＰＢＳで洗浄し、４ＣＶのｐＨ２．８溶出緩衝剤（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＰＩ２１００４）によって溶出を行った。溶出を分画し、画分を１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ、ｐＨ８．５（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号５０－８４３－２７０）で中和し、Ａ２８０（ＤｒｏｐＳｅｎｓｅ９６、Ｔｒｉｎｅａｎ）によってアッセイした。ピーク画分をプールし、緩衝剤をＤＰＢＳに交換した。遠心フィルター（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号ＵＦＣ８０３０２４）を、４，０００×ｇで２分間、ＤＰＢＳ中で平衡化した。精製した試料をロードし、ＤＰＢＳを添加し、試料を４，０００×ｇ、５～１０分間回転で、総ＤＰＢＳ体積が≧６ＤＶになるまで回転させた。最終プールをＡ２８０によって分析した。
分子生物学の標準方法が記載されている。Maniatis et al., (1982) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.；Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.；Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, Calif.。標準方法は、Ausbel et al., (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols. 1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, N.Y.にもみられ、これには、細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ突然変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳動物細胞および酵母におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質およびタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）が記載されている。
ハイブリドーマクローンについて重鎖および軽鎖の可変領域の配列を下記のように決定した。全ＲＮＡは、Ｑｉａｇｅｎ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＭＤ、ＵＳＡ）製のＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔを使用して、１～２×１０６個のハイブリドーマ細胞から抽出した。ｃＤＮＡは、Ｔａｋａｒａ（Ｍｏｕｎｔａｉｎｖｉｅｗ、ＣＡ、ＵＳＡ）製のＳＭＡＲＴｅｒ ＲＡＣＥ ５’／３’Ｋｉｔを使用して５’ＲＡＣＥ反応を実行することによって生成した。ＰＣＲを、ＮＥＢ（Ｉｐｓｗｉｔｃｈ、ＭＡ、ＵＳＡ）製のＱ５ Ｈｉｇｈ－Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅを使用して実行して、適当な免疫グロブリンの３’マウス定常領域に対する遺伝子特異的プライマーとの組合せで、Ｔａｋａｒａ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｒｉｍｅｒ ｍｉｘを使用して重鎖および軽鎖からの可変領域を増幅した。重鎖および軽鎖について増幅可変領域を２％アガロースゲル上でランし、適当なバンドを切り取り、次いでＱｉａｇｅｎ製のＭｉｎｉ Ｅｌｕｔｅ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用してゲル精製した。精製ＰＣＲ産物を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）製のＺｅｒｏ Ｂｌｕｎｔ ＰＣＲ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔを使用してクローニングし、Ｔａｋａｒａ製のＳｔｅｌｌａｒ Ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ Ｅ．Ｃｏｌｉ細胞に形質転換し、ＬＢ寒天培地＋５０μｇ／ｍＬカナマイシンプレートに播種した。直接コロニーサンガー配列決定をＧｅｎｅＷｉｚ（Ｓｏｕｔｈ Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ、ＮＪ、ＵＳＡ）によって実行した。生成するヌクレオチド配列を、ＩＭＧＴ Ｖ－ＱＵＥＳＴを使用して分析して、生産的再編成を特定し、翻訳されたタンパク質配列を分析した。ＣＤＲ決定は、ＩＭＧＴナンバリングに基づいた。
蛍光活性化細胞ソーティング検出システム（ＦＡＣＳ（登録商標））を含めて、フローサイトメトリーの方法が利用可能である。例えば、Owens et al. (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, N.J.；Givan (2001) Flow Cytometry, 2nd ed.; Wiley-Liss, Hoboken, N.J.；Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, N.J.を参照されたい。例えば、診断試薬として使用するための、核酸プライマーおよびプローブ、ポリペプチド、ならびに抗体を含めて、核酸を修飾するのに適切な蛍光試薬が、利用可能である。Molecular Probes (2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, Oreg；Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, Mo.。
陽性対照（ＰＣ１およびＰＣ２）、ＩＬ－２３ｐ１９およびＩＬ－１２／ＩＬ－２３ ｐ４０特異的抗体は、ＣＲＯ（Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ）製であった。対照抗体は、適切な任意の発現方法によって、例えば抗体の重鎖および軽鎖の可変領域を２９３ＦまたはＥｘｐｉＣＨＯ（商標）発現システム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）へとクローニングすることによって、調製することができる。これらの抗体を、対照として使用して例に記載の結合アッセイおよび機能アッセイを確立し、開示の新たに創り出した抗ＩＬ－２３ｐ１９特異的抗体と並行して試験した。「ＰＣ１」とは参照抗体を指し、これは、米国特許第７，９３５，３４４号明細書（’３４４特許のＶＨ配列番号１０６およびＶＬ配列番号１１６）で報告されたＶＨ配列およびＶＬ配列に基づいて合成され、ヒトＩＬ－２３ｐ１９サブユニットに特異的であることが知られている（Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、ロット番号：２０１８０９２６Ａ０４）。「ＰＣ２」という用語はあるレファレンスを指し、これは、米国特許第６，９０２，７３４号明細書（’７３４特許のＶＨ配列番号７およびＶＬ配列番号８）で報告されたＶＨ配列およびＶＬ配列に基づいて合成され、ヒトＩＬ－１２／ＩＬ－２３ ｐ４０サブユニットに特異的であることが知られている（ＢＩＯＩＮＴＲＯＮ、ロット番号：２０１８０９２５Ａ０７）。
対照抗体は、標準方法によって作製することができる。例えば、対照抗体の配列を含有するプラスミドを、製造業者のプロトコルに従って哺乳動物システム（２９３ＦまたはＥｘｐｉＣＨＯ（商標））（カタログ番号：Ａ２９１３３、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）を使用してトランスフェクトすることができる。細胞を、１日目に３７℃および８％ＣＯ２で、次いでキットに供給される培地中でトランスフェクション後に、３２℃および５％ＣＯ２で培養した。抗体を、１，０００ｇで１０分間遠心分離し、これに続いて５，０００ｇで３０分間遠心分離することによって、ＥｘｐｉＣＨＯ（商標）培養培地を清澄化することによって精製する。次いで、上清を、０．４５μｍフィルター、これ続いて０．２２μｍフィルターを使用して濾過する。続いて、上清を、プロテインＡ／Ｇ樹脂（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ；カタログ番号２０４２４）を製造業者のプロトコルに従って使用して、親和性精製に供した。ＥＬＩＳＡ精製の前に、培養培地中の抗体力価を大まかに決定して、ロードされる培地の量によって占められるのが樹脂の結合能力の８０％未満であることを確実にする。インキュベーションの後、樹脂をＰＢＳで洗浄し、Ｅｌｕｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号２１００４）によって溶出する。溶出画分を、トリス緩衝剤、ｐＨ８．０を添加することによって、生理的ｐＨへと即座に調整する。続いて、精製抗体を、ＰＢＳ緩衝剤中でＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号ＵＦＣ９００３２４）を使用して、緩衝剤交換およびタンパク質濃縮に供する。抗体濃度を、ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙによって決定する。ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびクマシー染色を実行して、抗体純度を試験する。精製タンパク質を一定分量に分け、長期保存向けに－８０℃で保存するか、または即時使用向けに４℃で維持する。
抗体の完全性は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって、これに続いて、非還元条件下対還元条件下のクマシー染色によって検証することができる；非還元条件下では、およそ１５０ｋＤａの支配的な１つのバンド、一方、還元条件下では、５０ｋＤａおよび２５ｋＤａの２つのバンドが観察される。リガンド／受容体相互作用を特徴づけるための標準技法が利用可能である。例えば、Coligan et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New Yorkを参照されたい。特定の作用機構を備える抗体の特性評価に適当な抗体機能特性評価の標準方法も、当業者にはよく知られている。
例えば、抗原性断片、リーダー配列、タンパク質折り畳み、機能的ドメイン、ＣＤＲアノテーション、グリコシル化部位、および配列アラインメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよびデータベースが利用可能である。
[実施例１]
抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の生成
ヒト抗ＩＬ－２３ｐ１９特異的抗体は、ヒトＩｇトランスジェニックマウスを免疫することによって生成した（例えば、国際公開第２０１３／０６３３９１号パンフレット、ＴＲＩＡＮＮＩ（登録商標）マウスを参照されたい）。
免疫：ヒトＩＬ－２３組換えタンパク質を、またはヒトＩＬ－２３タンパク質とヒトｐ１９およびマウスｐ４０タンパク質のヘテロ二量体との組合せを、腹腔内（ＩＰ）に、皮下（ＳＣ）に、または足蹠もしくは尾の付け根を介して注射することによって、ＴＲＩＡＮＮＩ（登録商標）マウスを免疫した。免疫応答を、後眼窩採血によってモニタリングした。血漿を、ヒトＩＬ－２３ヘテロ二量体への結合の活性についてＥＬＩＳＡによって（下記のように）スクリーニングした。十分な力価を備えるマウスを融合に使用した。マウスを免疫原で追加免疫し、その後、屠殺し、脾臓および流入領域リンパ節を取り出した。
抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体を産生するマウスの選択：ｐ１９特異的抗体を産生するＴｒｉａｎｎｉマウスを選択するために、免疫マウスからの血清を、組換えヒトＩＬ－２３への結合についてＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。簡単に説明すると、組換えヒトＩＬ－２３でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートを免疫マウスからの血清の希釈液とともに室温で１時間インキュベートし、アッセイプレートを洗浄し、ＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ抗体を用いて特異的抗体結合を検出した。ＥＬＩＳＡリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ）を使用してプレートを読み取った。
ハイブリドーマの生成：本開示のヒト抗体を産生するハイブリドーマを生成するために、免疫マウスから回収した脾細胞および流入領域リンパ節細胞を、マウス骨髄腫細胞株などの適当な不死化細胞株に融合した。生成するハイブリドーマを、ｐ１９特異的抗体の産生についてスクリーニングした。例えば、免疫マウスからの脾細胞およびリンパ節細胞の単細胞懸濁液を、電気融合によって等数のＳｐ２／０マウスＩｇＧ非分泌性骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ１５８１）に融合した。細胞を平底９６ウェル組織培養プレートに播種し、これに続いて選択培地（ＨＡＴ培地）で約２週間インキュベーションし、次いでハイブリドーマ培養培地に切り替えた。細胞播種の概１０～１４日後に、個々のウェルからの上清を、上記のようにＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。抗体分泌性ハイブリドーマを２４ウェルプレートに移し、再びスクリーニングし、抗ｐ１９活性がなおも陽性である場合、ハイブリドーマを、限界希釈または単一細胞ソーターを使用するソーティングによって、サブクローニングした。次いで、安定したサブクローンをｉｎ ｖｉｔｒｏで培養して、精製および特性評価に使用する少量の抗体を生成した。
ハイブリドーマスクリーニング：ハイブリドーマ上清を、上記のように、免疫マウスの免疫応答をモニタリングするために使用されるのと同じアッセイを使用するＥＬＩＳＡによって、ヒトＩＬ－２３、ヒトＩＬ－１２、およびヒトｐ１９／マウスｐ４０を使用してＩＬ－２３特異的結合について試験した。
[実施例２]
抗ＩＬ－２３ｐ１９特異的抗体の結合
ＩＬ－２３タンパク質への抗ＩＬ－２３ｐ１９特異的抗体の結合を、ＢＩＡｃｏｒｅにより決定した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって解析した。簡単に説明すると、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体または対照抗体の連続希釈液を、アミンカップリングキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号：ＢＲ－１０００－５０、ロット番号：２０８７２９５）を使用してＣＭ５チップ上に固定化された抗マウスまたは抗ヒトのＦｃチップ上に捕捉した。
ＢＩＡｃｏｒｅ結合アッセイで使用される対照抗体には、以下が含まれた：ＰＣ１（ｐ１９特異的抗体であることが知られている、Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、ロット番号：２０１８０９２６Ａ０４）；ＰＣ２（ヒトＩＬ－１２およびＩＬ－２３のｐ４０サブユニットに対する既知の特異性を備える参照抗体、Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、ロット番号：２０１８０９２５Ａ０７）；陰性対象として、ヒトＩｇＧアイソタイプ対照（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号：０２－７１０２、ロット番号：ＴＪ２７６３０９）；マウスＩｇＧ２ａアイソタイプ対照（Ｎｏｖａｒｏｃｋ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ製）およびヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｓ、カタログ番号：ＤＤＸＣＨ０４Ｐ－１００；バッチ：ＤＤＸＣＨ０４－０２８）。
次に、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％Ｔｗｅｅｎ ２０、ｐＨ７．４を含有するランニング緩衝剤中に、ＩＬ－２３組換えタンパク質、ヒトｐ１９／マウスｐ４０ヘテロ二量体タンパク質、ヒトＩＬ－１２タンパク質およびヒトｐ４０サブユニットタンパク質を含む連続希釈を、５０μｌ／分で固定化抗体に１分間注入し、これに続いて、２分間解離させた。各注入の後に、１０ｍＭグリシン－ＨＣｌ、ｐＨ１．７緩衝剤の６０秒パルスによる再生ステップが続いた。実験データのフィッティングを、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて行い、Ｌａｎｇｍｕｉｒ １：１モデルにフィットさせて見かけの結合を決定した。
精製抗体の結合プロファイルを図２に図示する。図２Ａに、Ｈｕ－２ １８００６Ｂ（ハイブリドーマから精製）の結合プロファイルを示す。図２Ｂに、Ｈｕ－５ １８００６Ｂ（ハイブリドーマから精製）の結合プロファイルを示す。図２Ｃに、Ｈｕ－６ １８００６Ｂ＊（組換えｍＩｇＧ２ａ）の結合プロファイルを示す。図２Ｄに、Ｈｕ－４ １８００６Ｂ＊（＊組換え、ｍＩｇＧ２ａ）の結合プロファイルを示す。図２Ｅに、Ｈｕ－４ １８００６Ｂ＊＊（＊＊組換え、ｈＩｇＧ４）の結合プロファイルを示す。表３に、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体ならびに、ＢＩＡｃｏｒｅによる、ヒトＩＬ－２３およびヒトｐ１９／マウスｐ４０ヘテロ二量体タンパク質に対するそれら抗体の結合特異性をまとめる。組換え抗体は、表ではアスタリスクで指定されている。
Figure 2023509373000003
結果が示すところは、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体は、ヒトＩＬ－２３およびヒトｐ１９／マウスｐ４０ヘテロ二量体に結合するが、ヒトＩＬ－１２またはヒトｐ４０サブユニットには結合しないことである（図２および表３）。
ＰＣ１は、ヒトＩＬ－２３、ヒトｐ１９／マウスｐ４０で陽性であり、ヒトＩＬ－１２およびヒトｐ４０サブユニットで陰性であった（データ示さず）。ＰＣ２は、ヒトＩＬ－２３、ヒトＩＬ－１２、ヒトｐ４０サブユニットで陽性であり、ヒトｐ１９／マウスｐ４０ヘテロ二量体で陰性であった。アイソタイプ対照ｍＩｇＧ２ａおよびｈＩｇＧは、ｈＩＬ－２３、ｈｐ１９／ｍｐ４０、ｈＩＬ－１２、およびｈｐ４０サブユニットに結合しなかった。
結果：抗ＩＬ－２３ｐ１９特異的抗体は、ヒトＩＬ－２３ならびにヒトｐ１９およびマウスｐ４０サブユニットからなるヘテロ二量体を含む組換えタンパク質へのそれら抗体の結合によって特徴づけられた。これらの抗体は、ＢＩＡｃｏｒｅによってヒトＩＬ－１２およびヒトｐ４０サブユニットに結合しなかった。
本開示の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の結合特異性についてもまた、ＥＬＩＳＡによって評価した。簡単に説明すると、ビオチン化ＩＬ－２３を、ストレプトアビジンコーティングのＥＬＩＳＡプレートを介して捕捉した。ヒトｐ１９／マウスｐ４０、ヒトＩＬ－１２およびヒトｐ４０サブユニットをＥＬＩＳＡプレートに直接コーティングした。次いで、精製抗体をプレートに添加し、これに続いてヤギ抗マウスＩｇＧ－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号：１１５－０３６－０７１、ロット番号：１４７２７１）により検出した。ＡＢＴＳ基質（Ｍｏｓｓ Ｉｎｃ．、カタログ番号：ＡＢＴＳ－１０００、ロット番号：０３０８６２０２）の添加の後、ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ）を使用してＥＬＩＳＡプレートを読み取った。図３に図示された対照：ＰＣ１は、参照抗体（ｐ１９特異的抗体であると知られている、Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、ロット番号：２０１８０９２６Ａ０４）を指す；ＰＣ２は、参照抗体（ｐ４０特異的抗体であると知られている、Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、ロット番号：２０１８０９２５Ａ０７）を指す；ＰＣ３は参照抗体（ＭＴ１５５、Ｍａｂｔｅｃｈ製のｐ１９特異的抗体として知られている、カタログ番号：３４５７－６－１００、コード：３４５７－６－１０００）を指す、陰性対照はヒトＩｇＧ４（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｓ、カタログ番号：ＤＤＸＣＨＯ４Ｐ－１００、ロット番号：ＤＤＸＣＨ０４－０２８）およびマウスＩｇＧ２ａ（Ｎｏｖａｒｏｃｋ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって生成）である。
図３に、本開示のｐ１９特異的抗体の結合活性を示す。図３Ａおよび３Ｂが示すところは、Ｈｕ－４ １８００６Ｂ＊＊（ｈＩｇＧ４）およびＨｕ－５ １８００６Ｂ（ｍＩｇＧ２ｂ）、Ｈｕ－６ １８００６Ｂ＊（ｍＩｇＧ２ａ）、Ｈｕ－４ １８００６Ｂ＊（ｍＩｇＧ２ａ）およびＨｕ－２ １８００６Ｂ（ｍＩｇＧ１）は、用量依存性の様式でヒトＩＬ－２３に結合すること；陽性対照ＰＣ１は用量依存性の様式でＩＬ－２３に結合すること（図３Ａ）である。図３Ｃが示すところは、これらの選択された代表的な抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体、Ｈ－２ １８００Ｂ（ｍＩｇＧ１）、Ｈｕ－４ １８００６Ｂ（ｍＩｇＧ２ｃ）、Ｈｕ－４ １８００６Ｂ＊（ｍＩｇＧ２ａ）、およびＨ－６ １８００６Ｂ＊（ｍＩｇＧ２ａ）が用量依存性の様式でヒトｐ１９／マウスｐ４０ヘテロ二量体に結合することである。図３Ｄが示すところは、これらの抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体は、ｈＩＬ－１２に結合しないこと、一方、陽性対照抗体ＰＣ２は用量依存性の様式でｈＩＬ－１２に結合することである。図３Ｅが示すところは、これらの抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体はヒトｐ４０サブユニットに結合しないこと、一方、陽性対照のＰＣ２は用量応答の様式でヒトｐ４０サブユニットに結合することである。
図３Ａ～３Ｅからの結果が指示したところは、抗ＩＬ－２３ｐ１９特異的抗体が、ＥＬＩＳＡによって、ヒトＩＬ－２３への結合およびマウスｐ４０サブユニットと組み合わされたヒトｐ１９からなるヘテロ二量体を含む組換えタンパク質への結合によって特徴づけられることである。これらの抗体は、ヒトＩＬ－１２およびヒトｐ４０サブユニットに結合しない。
結合アッセイおよび機能アッセイにおいてＫＤエンドポイントおよびＩＣ５０エンドポイントの正確な測定を確実にするために、抗体を、試験に先立ちハイブリドーマ培養上清から精製した。組換えヒトＩＬ－２３に対する本開示の抗ＩＬ－２３ｐ１９特異的抗体の結合動態を、抗マウスＩｇＧ抗体（ＧＥ カタログ番号ＢＲ－１００８－３８）とのアミンカップリング化学反応を介して事前に固定化されたＣＭ５チップとドッキングしたＢＩＡｃｏｒｅ ３０００システムを使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定した。フローセル１を、未修正のままとして、系統的な機器ノイズおよびドリフトの差し引きための参照セルとして利用する。Ｆｃ２－１検出を、ダブルブランキング（Ｆｃ１およびブランクの分析物緩衝剤）を用いて行った。抗体試料をＨＢＳ－ＥＰ（ＧＥ、カタログ番号：ＢＲ１００１－８８）で５０μｇ／ｍＬに希釈し、１０ｕＬ／分の流速で１分間注入した。次に、０．１５６～４０ｎＭに希釈したｈＩＬ－２３（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号：１２９０－ＩＬ／ＣＦ）を、５０μＬ／分で２分間注入し、これに続いて、１０分間解離させた。データを、ＢＩＡＥｖａｌｕｔｉｏｎソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で、グローバルフィットで１：１結合モデルによって解析して、見かけの結合動態を決定した。
本開示の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の結合動態データを表４に提供する。結果が指示するところは、抗ＩＬ－２３ｐ１９特異的抗体が３．８４Ｅ－１１から６．６２Ｅ－１１Ｍまでの範囲のＫＤでヒト組換えＩＬ－２３に結合することである。ＰＣ１（ｐ１９特異的抗体であると知られている、Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、ロット番号：２０１８０９２６Ａ０４）は、複数回のランにわたって３．７７Ｅ－１０から１．１０Ｅ－１１までの範囲のＫＤ値を有した。
Figure 2023509373000004
[実施例３]
ＩＬ－２３受容体とのＩＬ－２３相互作用を遮断する
ＩＬ－２３の同族である高親和性ＩＬ－２３受容体とのＩＬ－２３結合を遮断する、開示のｐ１９特異的抗体の能力を、ＥＬＩＳＡによって決定した。簡単に説明すると、ヒトＩＬ－２３受容体を９６ウェルプレート（２μｇ／ｍｌ）にコーティングし、次いで、組換えヒトＩＬ－２３（５０ｎｇ／ｍＬ）とプレミックスした精製抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の連続希釈液をプレートに添加した。３０分のインキュベーション後、プレートを洗浄した。次いで、ビオチン化抗ｐ４０抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ｒｅｆ：１３－７１２９－８５、ロット：２０２８７６１、１／３０００希釈）をプレートに添加した。３０分のインキュベーション後、プレートを洗浄し、これに続いて、ストレプトアビジンＨＲＰにより検出した。ＡＢＴＳ基質の添加の後、プレートリーダー（ＯＤ ４０５ｎＭ）を使用してプレートを読み取った。このブロッキングアッセイで使用される陽性対照抗体ＰＣ１は、参照抗体（ｐ１９特異的抗体であると知られている、Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、ロット番号：２０１８０９２６Ａ０４）である。陰性対照は、マウスＩｇＧ１（Ｎｏｖｕｓ、カタログ番号：ＮＢＰ１－９７００５、ロット番号：３５６１３）、ｍＩｇＧ２ａ（ＮｏｖａＲｏｃｋ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ製）、およびｈＩｇＧ４（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｓ、カタログ番号：ＤＤＸＣＨＯ４Ｐ－１００、ロット番号：ＤＤＸＣＨ０４－０２８）であった。
結果：図４のデータが示したところは、本開示の抗ｐ１９抗体（Ｈｕ－２ １８００６Ｂ、Ｈｕ－６ １８００６Ｂ＊、Ｈｕ－５ １８００６ＢおよびＨｕ－４ １８００６Ｂ＊＊）が、用量依存性の様式で、ヒトＩＬ－２３受容体とのヒトＩＬ－２３の相互作用を遮断したことである。陽性対照ＰＣ１も、用量応答性の様式でＩＬ－２３／ＩＬ－２３受容体の相互作用を遮断した。陰性対照ｈＩｇＧ４およびｍＩｇＧ２ａはアッセイでは陰性であった。
本開示のｐ１９特異的抗体の特異性を実証するために、ブロッキングアッセイを設計して、ＩＬ－１２受容体β１とのＩＬ－２３結合を遮断する、抗体の能力について評価した。
簡単に説明すると、ヒトＩＬ－１２受容体β１を９６ウェルプレートにコーティングし（２μｇ／ｍｌ）、次いで、組換えヒトＩＬ－２３（５０ｎｇ／ｍｌ）とプレミックスした精製抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の連続希釈液をプレートに添加した。ブロッキングアッセイで使用した陽性対照抗体はＰＣ２（ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ ｐ４０のｐ４０サブユニットに対する既知の特異性を備える参照抗体、Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ ロット番号：２０１８０９２５Ａ０７）であった。陰性対照はマウスＩｇＧ１（Ｎｏｖｕｓ、カタログ番号：ＮＢＰ１－９７００５、ロット３５６１３）とした。
３０分のインキュベーション後、プレートを洗浄した。次いで、ビオチン化抗ｐ４０抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ｒｅｆ：１３－７１２９－８５、ロット：２０２８７６１、１／３０００希釈）を、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体を含有するウェルに添加した；ビオチン化抗ｐ１９抗体（Ｍａｂｔｅｃｈ、カタログ番号：ＭＴ１５５、コード：３４５７－６－１０００）を、ＰＣ２抗体を含有するウェルに添加した。３０分のインキュベーション後、プレートを洗浄し、これに続いて、ストレプトアビジンＨＲＰにより検出した。ＡＢＴＳ基質の添加の後、プレートリーダー（ＯＤ ４０５ｎＭ）を使用してプレートを読み取った。
結果：図５のデータが示したところは、３つの選択されたｐ１９特異的抗体（Ｈｕ－６ １８００６ Ｂ＊、Ｈｕ－４ １８００６Ｂ＊およびＨｕ－４ １８００６ Ｂ＊＊）が、ＩＬ－２３／ＩＬ－１２受容体β１結合相互作用を遮断しなかったことである。同様に、ＰＣ１抗体もＩＬ－２３／ＩＬ－１２受容体β１相互作用を遮断しなかった（データ示さず）。しかし、ｐ４０対照抗体（ＰＣ２）は、予想通りＩＬ－２３／ＩＬ－１２β１の相互作用を遮断した。
[実施例４]
マウス脾細胞アッセイにおけるＩＬ－１７産生の阻害
ヒトＩＬ－２３がマウスＩＬ－２３Ｒに結合し、マウス脾細胞においてマウスＩＬ－１７産生を誘発することが、広く知られている。ＩＬ－２の存在下でのヒトＩＬ－２３は、極めて低い（ピコモルの）濃度でマウス脾細胞においてＩＬ－１７の産生を刺激するが、この産生は、ｐ４０またはｐ１９のいずれかに対する阻害剤とのコインキュベーションによって阻害することができる（Aggarwal, S., et al., 2003, J Biol Chem ; 278: 1910-4；Singh et al., 2015, MAbs, July-Aug; 7(4): 778-791)）。
本開示の抗ＩＬ－２３ｐ１９特異的抗体がヒトＩＬ－２３誘発性ＩＬ－１７産生を阻害する能力について、マウス脾細胞アッセイ（ＭＳＡ）で評価した。ヒト－ＩＬ－２３誘発性ＩＬ－１７産生の阻害の効力を決定した。
簡単に説明すると、マウス脾細胞を、ガラスホモジナイザーおよびＦｉｃｏｌｌ Ｐａｇｕｅ細胞単離キット（Ｇｅ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号：１７－５４４２－０２）を製造業者の手順に従って使用して、Ｃ５７／ＢＬ－６マウスから単離した。脾細胞を、ＩＬ－２（５×１０６細胞／ｍｌで２０ｎｇ／ｍｌ）で５分間活性化し、次いで、ヒトＩＬ－２３（１．５ｎｇ／ｍｌ）を脾細胞に添加した。活性化脾細胞を、９６ウェルプレートに播種した、１００ｕｌ／ウェル。４種の精製ｐ１９抗体、ｈｕ－６ １８００６Ｂ＊（ｍＩｇＧ２ａ）、Ｈｕ－４ １８００６Ｂ＊（ｍＩｇＧ２ａ）、Ｈｕ－４ １８００６＊＊（ｈＩｇＧ４）およびＨｕ－２ １８００６Ｂ（ｍＩｇＧ１）、１００ｕｌ／ウェルをプレートに添加した。
７２時間のインキュベーションの後、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ、Ｍ１７００またはＳＭ１７００）を使用するＩＬ－１７定量化アッセイのために、上清をプレートから移した。ＩＬ－１７ ＭＳＡに含まれる対照：陽性対照として、ＰＣ１（ｐ１９特異的抗体であると知られている参照抗体、Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ ロット番号：２０１８０９２６Ａ０４）；陰性対照として、マウスＩｇＧ１（Ｎｏｖｕｓ、カタログ番号：ＮＢＰ １－９７００５）およびヒトＩｇＧ４（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｓ、カタログ：ＤＤＸＣＨＯ４Ｐ－１００、ロット：ＤＤＸＣＨ０４－０２８）。
結果：図６Ａおよび６Ｂに提示のデータによって、本開示の抗体がＩＬ－２３のＩＬ－２３Ｒへの結合を選択的に中和し、したがって、用量依存性の様式でＩＬ－１７産生を阻害するという結論が、裏付けられる。
[実施例５]
レポーター細胞アッセイによるＳＴＡＴ３活性化の阻害
ＩＬ－２３の受容体は、ＩＬ－１２Ｒβ１サブユニットを含むが、このサブユニットは、ＩＬ－１２受容体と共通に共有され、ＩＬ－２３Ｒとパートナーを組むことが知られている。ＩＬ－２３ｐ１９はＩＬ－２３Ｒに選択的に結合し、ＩＬ－２３Ｒをとおしてのシグナル伝達は、ＳＴＡＴ３を活性化するヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）を誘発し、その結果、ＲＯＲγｇｔの上方制御がもたらされ、続いて、炎症性サイトカインＩＬ－１７の産生の上昇に至る（Parham et al., J. Immunol. 168:5699-5708, 2002）。本開示の抗ｐＩ９抗体がＳＴＡＴ３活性化を阻害することができるかどうか判定するために、レポーター細胞アッセイによってＩＬ－２３誘発性ＳＴＡＴ３活性化について、抗体を評価した。ヒトＩＬ－２３は、ヒトリンパ腫ＤＢ細胞の表面にてのＩＬ－２３Ｒ結合の際に、ＳＴＡＴ３リン酸化を誘発する（米国特許第２０１３／０１７２２７２号明細書の実施例１３、およびDesmet, J. et al., Nat. Commun. 5:5237 (2014)）。
ＤＢ細胞はヒトＢ細胞リンパ腫細胞株に由来したが、この株は、内因性ＩＬ－２３受容体およびＳＴＡＴ３を発現して、完全に機能的なＩＬ－２３シグナル伝達経路をもたらした。ＤＢアッセイ細胞を、ｐＧＬ４．４７［ｌｕｃ２ｐ／ＳＩＥ／Ｈｙｂｒｏ］によるＤＢ細胞の安定したトランスフェクションによって生成した。このことによって、ルシフェラーゼレポーターシステムを使用する生物活性ヒトＩＬ２３の定量的検出が可能となる。
このＤＢアッセイは、ヒトＩＬ－２３誘発性ＳＴＡＴ３活性化に対する本開示の抗ＩＬ－２３抗体の阻害活性を測定しようとするものである。簡単に説明すると、ＤＢ細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ－２２８９）を増殖培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ）で２日間培養した。実験当日、細胞を回収し、増殖培地に再懸濁した。試験抗体の連続希釈液を、Ｌｏｗ Ｂｉｎｄｉｎｇ３８４ウェルプレート（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ２６４５７４）において増殖培地で調製し、これに続いて、ヒトＩＬ－２３を添加し、室温で３０分間インキュベートした。次いで、試験抗体とヒトＩＬ－２３の混合物をプレートに添加した。シグナル伝達アッセイプレートを３７℃／５％ＣＯ２の加湿インキュベーターで１６時間インキュベートした。ＯｎｅＧｌｏ試薬を添加し、混合物を室温で２分間インキュベートした。ＢｉｏＴｅｋ Ｎｅｏ２（ＢｉｏＴｅｋ．Ｗｉｎｏｏｓｋｉ．ＶＴ）で発光を読み取り、ＧｒａｐｈＰａｄ（登録商標）ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）を使用してＩＣ５０値を決定したが、この場合、対数変換の抗体濃度に対して比をプロットし、ＩＣ５０値を、シグモイド用量応答の非線形回帰（カーブフィット）を使用して決定した。ＳＴＡＴ３活性化アッセイで使用される対照抗体には、陽性対照としてＰＣ１（ＰＣ１はｐ１９に特異的であることが知られている参照抗体である、Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、ロット番号：２０１８０９２６Ａ０４）、陰性対照としてｍＩｇＧ２ａ（社内で生成）が含まれた。
結果：表５に示すように、アッセイで評価された抗ＩＬ－２３ｐ１９特異的抗体は、３５．２ｐＭから２６４．６ｐＭまでの範囲のＩＣ５０値で、最大９９～１００％阻害をもって、ＳＴＡＴ３活性化を阻害した。陽性対照（ＰＣ１）は、複数の実験から９８～９９％阻害をもって、２４．３０ｐＭから１１７．２０ｐＭの範囲のＩＣ５０値を有した。
Figure 2023509373000005
図７からの結果が指示したところは、選択された本開示の４種の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体（ｈｕ－４ １８００６Ｂ、ｈｕ－４－１８００６Ｂ＊、ｈｕ－６ １８００６Ｂおよびｈｕ－６ １８００６Ｂ＊）が用量依存性の様式でＳＴＡＴ３活性化を阻害したことである。陽性対照（ＰＣ１）も、予想通り、用量応答様式でＳＴＡＴ３活性化の阻害を示した。
[実施例６]
ヒトＰＢＭＣによるＩＬ－１２依存性ＩＦＮ－γ産生の阻害
ＰＢＭＣのＩＬ－１２刺激は、ＮＫ細胞およびＴ細胞によるＩＦＮ－γの産生を刺激することが知られている。本開示の抗ｐ１９抗体がＩＦＮ－γ産生を阻害することができるかどうか判定するために、代表的な本開示のヒト抗ｐ１９抗体をＰＭＢＣ ＩＬ－１２刺激アッセイにおいて分析した。
簡単に説明すると、ヒトＰＢＭＣを凍結ストックから解凍し、３８４ウェルプレートでＩＬ－１８（Ｒ＆Ｄ、９１２４－ＩＬ／ＣＦ）５０ｎｇ／ｍｌを含有するＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳのプレートに再懸濁した。試験抗体の連続希釈液を、Ｌｏｗ Ｂｉｎｄｉｎｇ３８４ウェルプレートにおいて増殖培地で調製した。ヒトＩＬ－１２（２５ｎｇ／ｍｌ）またはカニクイザルＩＬ－１２（２５ｎｇ／ｍｌ）を各ウェルに移し、これに続いて、室温で３０分間インキュベーションした。混合物（試験抗体＋ＩＬ－１２）をＰＢＭＣ細胞プレートに播種した。細胞を３７℃／５％ＣＯ２の加湿インキュベーターで４８時間インキュベートした。ＩＦＮ－γの産生を、製造元のプロトコルに従って、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＡＬ２１７Ｃ）によって、測定した。
ヒトＰＢＭＣアッセイで使用される対照抗体：ＰＣ１（ｐ１９特異的抗体であることが知られている参照抗体、Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、ロット番号：２０１８０９２６Ａ０４）、ＰＣ２（ＩＬ－１２およびＩＬ－２３のｐ４０サブユニットに対する既知の特異性を備える参照抗体、Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、ロット番号：２０１８０９２５Ａ０７）、抗ＩＬ－２３ ｐ４０サブユニットＭａｂ（Ｈｕ－１９ １８００６＊、社内で生成）；陰性対照抗体として、ｍＩｇＧ２ａ（ＮｏｖａＲｏｃｋ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって生成）およびヒトＩｇＧ４（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｓ、カタログ：ＤＤＸＣＨＯ４Ｐ－１００、ロット：ＤＤＸＣＨ０４－０２８）。
結果：図８および９に示されるように、抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体（Ｈｕ－６ １８００６Ｂ＊およびＨｕ－４ １８００６Ｂ＊およびＰＣ１）は、ヒトＰＢＭＣによるヒトＩＬ－１２介在性（図８）およびカニクイザルＩＬ－１２介在性（図９）のＩＦＮ－γ産生を阻害しなかった、一方、陽性対照であるＰＣ２およびＨｕ－１９ １８００６＊は、予想通り、用量依存性の様式で、ヒト（図８）およびカニクイザル（図９）のＰＢＭＣにおいて、阻害した。このデータによって、本開示のｐ１９抗体がｐ１９に特異的であるという結論が裏付けられる。
[実施例７]
ＩＬ－２３誘発性マウス皮膚炎症モデルにおける抗ｐ１９特異的抗体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性
ヒト乾癬（ＰｓＯ）のキードライバーとしてのＩＬ－２３／ＩＬ－１７経路の役割は、十分に特徴づけられているとともに、臨床的に検証されている。乾癬（ＰｓＯ）の動物モデルは、ヒトの疾患の病態生理学に関する我々の理解にとって重要である。ＩＬ－２３の皮内注射を使用して、げっ歯類のＩＬ－２３経路について研究してきたが、ＰｓＯの処置における新規の小分子／生物学的製剤の薬理学を評価するために、その皮内注射を使用することができる（Stephen B. Gauld et al., J. Dermatological Science, 92 (2018) 45-53)）。
ヒトＩＬ－２３は、マウスにおいて、マウスＩＬ－２３受容体に結合し、ｍＩＬ－１７産生および炎症を誘発することが知られている。マウスの耳へヒトＩＬ－２３を皮内注射してマウスの耳炎症を誘発することが、ヒト乾癬（ＰｓＯ）用の生物学的薬物を特性評価する乾癬モデルに使用されてきた（Aggarwal et al., J Biol Chem 2003; 278: 1910-4；Singh et al., MAbs 2015 July-Aug; 7(4): 77-791）。
Ｈｕ－４ １８００６ Ｂ（ｍＩｇＧ２ｃ）、Ｈｕ－４ １８００６ Ｂ＊＊（ｈＩｇＧ４）、ｈｕ－５ １８００６Ｂ（ｍＩｇＧ２ｂ）およびＨｕ－６ １８００６ Ｂ＊（ｍＩｇＧ２ａ）の各ｐ１９特異的抗体がｉｎ ｖｉｖｏでＩＬ－２３機能を遮断する能力を評価するために、ヒトＩＬ－２３誘発性マウス皮膚炎症モデルにおいてこれら抗体を試験した。これらの代表的な抗体を、炎症応答を低下させるそれらの能力について評価した。
このモデルでは、組換えヒトＩＬ－２３（３μｇ／１０μｌ／マウス／日）を、マウス右耳の皮膚（すなわち、皮内）に８日間連続して注射して（Ｄ０～Ｄ７）、表皮過形成、不全角化および限局性炎症性浸潤の組織学的証拠とともに、紅斑および硬結によって特徴づけられる乾癬様の炎症性皮膚反応を誘発させた。
２つのプロトコルに従って、ＩＬ－２３ｐ１９抗体（ｈｕ－４ １８００６Ｂ、ｈｕ－４ １８００６Ｂ＊＊、ｈｕ－５ １８００６Ｂ、またはｈｕ－６ １８００６Ｂ＊）またはＰＣ１、ｐ１９特異的抗体であると知られている参照抗体（Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ、ロット番号：２０１８０９２６Ａ０４）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって２回、マウスを処置した。第１のプロトコルでは、マウスに、ＰＢＳ対照（ビヒクル）または抗体を投与した。第１の注射は、ＩＬ－２３注射の前日とし、第２の注射はＩＬ－２３注射後の第３日目とした。第２のプロトコルでは、マウスにＰＢＳ対照または抗体を投与した。第１の注射はＩＬ－２３注射の１時間前とし、第２の注射はＩＬ－２３注射後の第３日目とした（図１０）。
体重、耳の厚さ、および耳の炎症スコアについてマウスを毎日測定した。耳の炎症スコアを、０日目、２日目、４日目、６日目および８日目に以下の基準に基づいて算出した：耳介の形状（比較的正常－ ０；微小変化－ １；中等度から著名な変化－ ２；重度腫張と変形－ ３）。皮膚の色（比較的正常－ ０；最小の過形成－ １；軽度の過形成－ ２；重度の過形成－ ３）および白色の鱗屑（比較的正常－ ０；最小－ １；軽度－ ２；明らか－ ３）。０日目、２日目、４日目、６日目および８日目に、各マウスの右耳の厚さを測定し、写真を撮った。
実験の最終日（８日目）に、動物を二酸化炭素で処分し、血液試料を採取し、血清を分離した（－８０℃の冷凍庫に保存した）。モデリングの耳を採取し、２片に切断した：一片は１０％中性緩衝ホルマリンで固定し、もう一片は液体窒素で凍結し、－８０°Ｃの冷凍庫に保存した。
データを平均±ＳＥＭとして与えた。Ｐ値が０．０５未満である場合、統計学的有意性であるとした。
表６および表７に提供されるデータは、注射された耳の総合スコアを要約するものである（耳介の形状、皮膚の色、微小血管の変化および白色の鱗屑の各スコアを加えることによる）。結果が指示したところは、代表的なｐ１９特異的抗体で処置されたマウスが、ＩＬ－２３注射モデル群と比べて炎症応答の軽減を経験したことである。効果は４日目から始まり、８日目まで継続した。効果は統計学的に有意である。本結論は、サマリースコア値と耳の厚さの値の両方から明らかである。
Figure 2023509373000006
Figure 2023509373000007
表８および表９に示すように、マウスの耳の厚さは、モデル（ＩＬ－２３処置）と比較して、選択された抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の処置によって減少した。治療効果（皮膚の炎症性免疫応答のｉｎ ｖｉｖｏ阻害）は４日目から始まり、８日目まで継続し、効果は統計学的に有意である（ｐ＜０．００１ｖｓ．モデル、ＩＬ－２３処置）。
Figure 2023509373000008
Figure 2023509373000009
図１０に提供のデータが示すところは、本開示の抗ｐ１９特異的抗体ｈｕ－４ １８００６Ｂ＊＊およびｈｕ－６ １８００６Ｂ＊が、未処置の対照（ヒトＩＬ－２３処置のみを投与されているモデル）と比較して、耳の厚さの統計学的に有意な低下を引き起こしたことである。
図１１Ａ、１１Ｂ、１１Ｃおよび１１Ｄに、Ｈ＆Ｅ病理染色スコアにより決定した、炎症性皮膚反応に対する抗ｐ１９特異的抗体の効果を立証するデータ、例えば、実験の過程にわたって得られ、下記のスコアシステムによって表される、表皮の厚さ（図１１Ａ）、真皮の厚さ（図１１Ｂ）、炎症細胞の浸潤（図１１Ｃ）および角質増殖または機能不全（図１１Ｄ）を提供する。
簡単に説明すると、８日目に、マウスの耳を採取し、顕微鏡で観察した。組織を１０％中性緩衝ホルマリンで固定した。固定後、組織をトリミングし、脱水し、包埋し、スライドに切片を作製し、関連するＳＯＰに従ってヘマトキシリン／エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。病理学研究者が、光学顕微鏡による組織病理学的評価を行った。５段階の評点方式（比較的正常、最小、軽度、中等度から高度、重度）を使用して、顕微鏡所見を類別した。
結果：抗ｐ１９抗体ｈｕ４ １８００６Ｂによる処置によって、モデルと比較して、ＩＬ－２３注射により誘発される腫張応答と炎症スコアの両方に関して有意な減少という結果となった。Ｈｕ－４ １８００６Ｂによって、スコアの内で３つ、表皮の厚さ（図１１Ａ）、真皮の厚さ（図１１Ｂ）、および炎症細胞の浸潤（図１１Ｃ）に関し、ＰＣ１と比較して優れた阻害効果が示されている。Ｈｕ－４はまた、角質増殖の阻害も示した（図１１Ｄ）。
図１２に、処置後８日目に得られたＨ＆Ｅ染色の耳切片の代表的な写真を提供する。Ｈ＆Ｅ染色手順は上記の通りである。
結果：選択された本開示の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体処置（Ｈｕ－４ １８００６Ｂ）によって、モデルと比較して、マウスの皮膚の炎症が有意に阻害された。
特に指示のない限り、明細書および特許請求の範囲において使用される成分の量、分子量などの特性、反応条件等を表現するすべての数は、すべての場合において「約」という用語によって修飾されていると理解すべきである。したがって、そうではないと指示のない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲において記載する数値パラメータは、本開示によって得ようとする所望の特性に応じて異なってもよい近似値である。少なくとも、均等論の原則を特許請求の範囲に適用することを限定しようとする試みではなく、各数値パラメータは、報告された有効桁の数値を考慮してかつ通常の四捨五入技法を適用することによって、少なくとも解釈されるべきである。
本開示の幅広い範囲を示す数値範囲およびパラメータは近似値であるが、特定の例において記載される数値はできるだけ正確に報告されている。いずれの数値も、しかし、それらのそれぞれの試験測定値に見られる標準偏差から必然的に生じるある特定の誤差を本質的に含有する。
本開示を説明する文脈で（特に以下の特許請求の範囲の文脈で）使用される「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」という用語、および類似の指示対象は、本明細書に特に指示のない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、単数形と複数形の両方をカバーすると解釈される。本明細書における値の範囲の列挙は、単に、範囲に入る各個別の値に個々に言及することの省略方法としての役割を果たすことが意図されている。本明細書に特に指示のない限り、個々の値はそれぞれ、本明細書に個別に列挙されているかのように、本明細書に組み込まれる。本明細書に記載のすべての方法は、本明細書に特に指示のない限り、またはさもなければ文脈と明らかに矛盾しない限り、適切な任意の順序で行うことができる。本明細書で提供されるあらゆる例、または例示的な言い回し（例えば「などの（ｓｕｃｈ ａｓ）」）の使用は、単に、本開示をより良く例示することを意図するものであり、特に主張しない限り開示の範囲に限定を課すものではない。本明細書中のいかなる言い回しも、特許請求されていない要素が本発明の実施にとって必須であることを示すものと解釈すべきではない。
本明細書に開示された開示の代替要素または実施形態の群分けは、限定であると解釈すべきではない。各群の構成要素は、個々に、または群の他の構成要素もしくは本明細書に見出される他の構成要素との任意の組合せで、言及することができかつ特許請求することができる。ある群の１つまたは複数の構成要素が、便宜上および／または特許性の理由から、群に包含され、または群から削除され得る。なんらかのかかる包含または削除が生じる場合、本明細書は、改変された群を含み、したがって、添付の特許請求の範囲で使用される全マーカッシュ群の書面による明細を満足するものである。
本開示のある特定の実施形態が、発明者らが知っている本開示を実施するためのベストモードを含めて、本明細書に記載されている。もちろん、それら記載の実施形態の変形例は、前述の説明を読み解くことで当業者であれば明らかとなるであろう。本発明者らは、当業者であれば必要に応じてかかる変形を採用すると考えており、本開示が本明細書に具体的に記載のもの以外の方法で実行されることを意図している。したがって、本開示は、適用法が許すなら、本明細書に添付の特許請求の範囲に列挙された主題の改変形態および均等物すべてを包含する。さらに、それらの可能なすべての変形における上記の要素の任意の組合せも、本明細書に特に指示のない限り、またはさもなければ文脈と明らかに矛盾しない限り、本開示によって包含される。
本明細書に開示の具体的な実施形態は、「からなる」または「から本質的になる」という言い回しを使用して、特許請求の範囲においてさらに限定することができる。出願されたか、補正によって追加されたかにかかわらず、特許請求の範囲において使用される場合、「からなる」という移行句は、特許請求の範囲に規定されてないいかなる要素をも、ステップをもまたは成分をも、排除する。
「から本質的になる」という移行句は、請求項の範囲を、特定された材料またはステップ、ならびに基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を及ぼさないものに限定する。そのように特許請求される本開示の実施形態が、本明細書に本質的にまたは明示的に説明されており、本明細書において有効である。
本明細書に開示された本開示の実施形態は、本開示の原理の例示であることが理解されよう。採用することができる他の改変は、本開示の範囲内である。したがって、一例であって限定されないが、本開示の代替の構成が本明細書の教示に従って利用することができる。したがって、本開示は、示されかつ記載されたように厳密にそのものに限定されるものではない。
本開示を、種々の具体的な材料、手順および例を参照することによって、本明細書で説明し、例示してきたが、本開示は、その目的のために選択された材料および手順の特定の組合せに限定されるものではないと理解される。かかる詳細の多数の変形が、当業者であれば理解されるように、暗に含まれ得る。本明細書および例は、例示的なものに過ぎないと考えられ、本開示の真の範囲および趣旨は、以下の特許請求の範囲によって指示されることが意図される。本願で参照されたすべての参考文献、特許、および特許出願は、これらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

Claims (20)

  1. （ａ）ＣＤＲ１：配列番号９、ＣＤＲ２：配列番号１０、およびＣＤＲ３：配列番号１１を含む重鎖可変領域；ならびに、ＣＤＲ１：配列番号１２、ＣＤＲ２：配列番号１３、およびＣＤＲ３：配列番号１４を含む軽鎖可変領域；
    （ｂ）ＣＤＲ１：配列番号１５、ＣＤＲ２：配列番号１６、およびＣＤＲ３：配列番号１７を含む重鎖可変領域；ならびに、ＣＤＲ１：配列番号１８、ＣＤＲ２：配列番号１９、およびＣＤＲ３：配列番号２０を含む軽鎖可変領域；
    （ｃ）ＣＤＲ１：配列番号２１、ＣＤＲ２：配列番号２２、およびＣＤＲ３：配列番号２３を含む重鎖可変領域；ならびに、ＣＤＲ１：配列番号２４、ＣＤＲ２：配列番号２５、およびＣＤＲ３：配列番号２６を含む軽鎖可変領域；または
    （ｄ）ＣＤＲ１：配列番号２７、ＣＤＲ２：配列番号２８、およびＣＤＲ３：配列番号２９を含む重鎖可変領域；ならびに、ＣＤＲ１：配列番号３０、ＣＤＲ２：配列番号３１、およびＣＤＲ３：配列番号３２を含む軽鎖可変領域
    を含む抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体。
  2. （ａ）配列番号１の重鎖可変領域配列および配列番号２の軽鎖可変領域配列；
    （ｂ）配列番号３の重鎖可変領域配列および配列番号４の軽鎖可変領域配列；
    （ｃ）配列番号５の重鎖可変領域配列および配列番号６の軽鎖可変領域配列；または
    （ｄ）配列番号７の重鎖可変領域配列および配列番号８の軽鎖可変領域配列
    を含む、請求項１に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体。
  3. 抗ヒトＩＬ－２３ｐ１９抗体である、請求項１に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体。
  4. 完全長抗体である、請求項１に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体。
  5. 抗体断片である、請求項１に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体。
  6. 前記抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよびｓｃＦｖ－Ｆｃ断片、単鎖抗体、ミニボディ、ならびにダイアボディからなる群から選択される、請求項４に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体。
  7. モノクローナル抗体である、請求項１に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体。
  8. ヒト抗体である、請求項１に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体。
  9. マウス抗体である、請求項１に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体。
  10. キメラ抗体である、請求項１に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体。
  11. 二重特異性抗体である、請求項１に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体。
  12. ヒト化抗体である、請求項１に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体。
  13. ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットに結合しない、請求項１に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体。
  14. 請求項１に記載の抗体および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
  15. 免疫介在性炎症性疾患を処置または予防する方法であって、請求項１に記載の抗体をそれを必要とする患者に投与するステップを含む方法。
  16. 請求項１に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
  17. 配列番号１、３、５、または７のいずれか１つに記載の配列をコードする、請求項１６に記載の単離されたポリヌクレオチド。
  18. 請求項１６に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  19. 請求項１６に記載のポリヌクレオチド、および／または請求項１７に記載のベクターを含む細胞。
  20. 請求項１に記載の抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体の作製方法であって、請求項１９に記載の細胞を培養するステップを含む作製方法。

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