EA026073B1 - Состав бычьего гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и способ лечения с его использованием - Google Patents
Состав бычьего гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и способ лечения с его использованием Download PDFInfo
- Publication number
- EA026073B1 EA026073B1 EA201390206A EA201390206A EA026073B1 EA 026073 B1 EA026073 B1 EA 026073B1 EA 201390206 A EA201390206 A EA 201390206A EA 201390206 A EA201390206 A EA 201390206A EA 026073 B1 EA026073 B1 EA 026073B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- arginine
- citrate
- composition
- csf
- buffer
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
- C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
Abstract
В изобретении предложены стабильные водные составы для лечения заболевания, модулируемого бычьим гранулоцитарным колониестимулирующим фактором (бГ-КСФ), содержащие бГ-КСФ-T133pAF-20К ПЭГ, буфер на основе цитрата или сукцината и аргинин, причем указанные составы содержат менее 0,001% поверхностно-активного вещества. В изобретении также предложены способы лечения животного, имеющего мастит или транспортную лихорадку, включающие введение животному терапевтически эффективного количества указанных выше составов.
Description
Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (Г-КСФ) является членом суперсемейства генов гормонов роста. Г-КСФ стимулирует пролиферацию специфических клеток-предшественников костного мозга и их дифференцировку в гранулоциты. Кроме того, Г -КСФ является мощным стимулятором пролиферации и созревания нейтрофилов ίη νίνο (Сокеп е! а1., Ргос. №а!1. Асаб. §ск 1987; 84: 2484-2488; кее а1ко НеИап е! а1., УеГ 1тто1. 1типора!1о1. 2001; 81:45-57). Г-КСФ также способен индуцировать функциональную активацию или праймирование зрелых нейтрофилов ίη νίΙΐΌ (ХУеЕЬагГ КН. е! а1., Аппа1к о£ 1п1ета1 МеФсше 1989; 110:297-303). Было показано, что Г-КСФ праймирует гранулоциты человека, повышает высвобождение супероксид-радикала, стимулированное хемотаксическим пептидом Ν-формилметионил-лейцил-фенилаланином (δ. КЦада^а, е! а1., ВюсНет. ВюрНук. Ке8. Соттип. 1987; 144:1143114, и С.Р. №а!Нап В1ооб 1989; 74:301-306) и активирует 1дА-опосредованный фагоцитоз в нейтрофилах человека (ХУеЕЬагГ КН., е! а1., №а!иге 1988; 332: 647-649).
Обнаружено, что Г-КСФ можно применять в лечении состояний, при которых полезно увеличение количества нейтрофилов. Г-КСФ также можно применять в виде монотерапии или в комбинации с другими соединениями (такими как другие цитокины) для выращивания или размножения клеток в культуре, например для трансплантатов костного мозга.
Были описаны методики клонирования кДНК и экспрессии рекомбинантного Г-КСФ человека (чГ КСФ), при этом рекомбинантный чГ-КСФ демонстрирует большую часть, если не все, биологических свойств природной молекулы (Зон/а, Ь. е! а1., 8с1епсе 232, 61-65 (1986)). Анализ последовательности кДНК и клонов геномной ДНК позволил предсказать аминокислотную последовательность фактора и выявил, что белок содержит 204 аминокислоты с сигнальной последовательностью, состоящей из 30 аминокислот. Зрелый белок содержит 174 аминокислоты и не обладает центрами для потенциального Νсвязанного гликозилирования, но имеет несколько центров для возможного О-связанного гликозилирования.
Фармацевтические препараты, содержащие чГ-КСФ, известны в данной области техники и включают многочисленные составы. Например, различные составы чГ-КСФ описаны в Р1ебтоп!е е! а1., Αάνапсеά Эгид ЭеПуегу Βеγ^е\γк. 60: 50-58 (2008), Негтап е! а1., Рогти1а!юп, СНагаЩеп/аиоц апб §1аЫ1Иу о£ Рго!еш Эгидк, Кобпеу Реаг1тап апб Υ. 1оНп ^апд, ебк., Р1епит Ргекк, №е\у Уогк (1996), в патенте США № 5919757 МкНаеПк е! а1. и патенте США № 6908610 §а!о е! а1. Традиционно в составы чГ-КСФ включают поверхностно-активные вещества, которые могут защитить чГ-КСФ от потенциально дестабилизирующих условий, возникающих на границе раздела фаз, от поверхностей, возникающих в ходе приготовления, а также против изменения его конформационной стабильности.
Также были описаны способы клонирования кДНК и экспрессии рекомбинантного бычьего Г-КСФ (бГ-КСФ). Например, в патенте США № 5849883 раскрыты полинуклеотидная и полипептидная последовательности зрелого бГ-КСФ, а также описан способ клонирования, выделения и очистки полипептида и его аналогов. Зрелый бГ-КСФ содержит 174 аминокислоты и имеет 82% гомологии с чГ-КСФ. В работе НеИап е! а1., упомянутой выше, описан способ экспрессии и очистки бГ-КСФ, а также его биологические активности.
Введение бГ-КСФ крупному рогатому скоту может обеспечить терапевтические преимущества. Соответственно, для того чтобы использовать терапевтический потенциал бГ-КСФ, нужен фармацевтический состав, содержащий бГ-КСФ. Тем не менее, фармацевтические составы бГ-КСФ, разработанные в соответствии с традиционными способами, известными в данной области техники, приводят к возникновению нежелательных свойств препарата, таких как агрегация и дестабилизация бГ-КСФ полипептида и/или состава.
Таким образом, существует потребность в стабильном фармацевтическом составе бГ-КСФ с заданными свойствами, такими как минимальная агрегации и дестабилизирующие свойства продукта. Соответственно согласно настоящему изобретению предложены стабильные водные фармацевтические составы, содержащие полипептид бГ-КСФ или его вариант, которые обладают желаемыми свойствами, а также обеспечивают соответствующие преимущества.
В настоящем изобретении предложены стабильные водные составы для лечения заболевания, модулируемого бычьим гранулоцитарным колониестимулирующим фактором (бГ-КСФ), содержащие бГКСФ-Т133рАР-20К ПЭГ, буфер на основе цитрата или сукцината и аргинин, причем указанные составы содержат менее 0,001% поверхностно-активного вещества. В настоящем изобретении также предложены способы лечения животного, имеющего мастит или транспортную лихорадку, включающие введение животному терапевтически эффективного количества указанных выше составов.
Стабильные водные составы бычьего гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (бГКСФ) согласно настоящему изобретению содержат полипептид бГ-КСФ-Т133рАР-20К ПЭГ.
- 1 026073
Последовательность зрелого полипептида бГ-КСФ, составляющая 174 аминокислоты в длину, приведена ниже
ТРЬОРАК5ЕР()8РЕЕКСЕЕ<3¥КК1<ЗАООАЕЕ<ЗЕКЕСААНКЕ
СНРЕЕЕМЕЕКН8ЕО]Р()АРЕ88С88<38Е<>ЕТ8СЕК<ЗЕНООЕР
ΕΥ<?αΕΕρΑΕΑΟΙ8ΡΕΕΑΡΤΕΟΤΕ<2ΕθνΤΟΓΑΤΝΙ\νΕ<)ΜΕΟΕ
ΟΑΑΡΑν<3ΡΤ(3ΟΑΜΡΤΓΤδΑΡ<3ΚΚΑΟθνΕνΑδ<3ΕΗΚΡΕΕΕΑΥ
КОЬКУЬАЕР
Согласно изобретению неприродная аминокислота пара-ацетилфенилаланин (рАР) заменяет природную аминокислоту в позиции Т133.
Согласно изобретению бГ-КСФ-Т133рАР имеет последовательность
МТРЕОРАК8ЬР(35РЕЕК.СЕЕ(ЗУКК1(ЗАООАЕЕ(ЗЕКЕСААНК.
ЕСНРЕЕЕМЕЕКН5ЕО1РЕ>АРЕ88С85<}8Е()ЕТ8СЕХ<ЗЕНСгОЕ
ΡΕΥΟΟΕΕΟΑΕΑΟΙδΡΕΕΑΡΤΕΟΤΕΟΕΟνΤΟΡΑΤΝΙλνΕΟΜΕϋ
ЕОААРАУ(ЗРТ9ОАМРТРТ5АРС>КкАаОУЕ¥А89ЕНКРЕЕЕА
УКСЬКУБАЕР в которой одна аминокислота заменена на пара-ацетилфенилаланин в положении Т133.
Согласно некоторым вариантам реализации полипептид бГ-КСФ-Т133рАР связан с водорастворимым полимером - полиэтиленгликолевым фрагментом. Связь водорастворимых полимеров с полипептидом бГ-КСФ-Т133рАР может привести к изменениям, которые включают, но не ограничиваются перечисленными: увеличенный или измененный период полужизни в сыворотке, увеличенный или измененный терапевтический период полужизни по отношению к исходной форме, измененную иммуногенность, измененные физические характеристики ассоциации, такие как агрегация и формирование мультимеров, измененное связывание с рецептором, измененное связывание с одним или несколькими партнерами связывания, а также измененную димеризацию или мультимеризацию рецептора. Водорастворимый полимер может иметь или не иметь собственной биологической активности и может быть использован в качестве линкера для связывания бГ-КСФ-Т133рАР с другими веществами, включая один или несколько полипептидов бГ-КСФ-Т133рАР, или одну или несколько биологически активных молекул, но не ограничиваясь ими.
Согласно некоторым вариантам реализации изобретения водорастворимый полимер представляет собой полиэтиленгликолевый фрагмент. В еще одном варианте реализации водорастворимый полимер имеет молекулярную массу 20 кДа.
Согласно одному варианту реализации изобретения полипептид бГ-КСФ или его вариант представляет собой бГ-КСФ-Т133рАР, который имеет последовательность
МТРЕОРАК8ЕР98РЕЕКСБЕ()УКК]()АООАЕЕ9ЕКЕСААНК ЕСНРЕЕЕМЕЕКН8ЕО1Р<ЗАРЕ85С88С>8Е<ЗЕТ8СЕК<ЗЕНООЕ Ρ Е У О <3 Е Е О Л Е Л ОI δ Ρ Р. Е Л Ρ Τ Е Г) Τ Е Г) Е Г) V Т Г) Р Л Τ Ν I %'Е С) Μ Р. Г) ЕОААРАУ(ЗРТ(ЗОАМРТРТ8АГ<5КК.АООУЕУА5<ЗЕНК.ГЕЕЕА УКОБКУБАЕР в которой одна аминокислота в положении Т133 заменена на пара-ацетилфенилаланин (рАР), который связан с полиэтиленгликолевым фрагментом. Например, если полиэтиленгликолевый фрагмент имел молекулярную массу около 20 кДа, полипептид бГ-КСФ или его вариант согласно этому варианту реализации изобретения мог быть идентифицирован как бГ-КСФ-Т133рАР-20К ПЭГ, это свидетельствует о том, что полиэтиленгликолевый фрагмент массой 20 кДа связан с заменой рАР в положении Т133.
В настоящей заявке термины стабильность и стабильный применительно к составу, содержащему полипептид бГ-КСФ или его вариант, относятся к термическому и химическому разворачиванию, агрегации, деградации, денатурации, фрагментации или дестабилизации полипептида бГ-КСФ-Т133рАР20К ПЭГ в конкретных условиях производства, приготовления, транспортировки и хранения. Согласно настоящему изобретению стабильный состав поддерживает структурную целостность, что приводит к сохранению биологической активности, предпочтительно более чем на 80, 85, 90, 95, 98, 99 или 99,5% в конкретных условиях производства, приготовления, транспортировки и хранения. Стабильность состава может быть оценена по степени агрегации, депегилирования, деградации, денатурации или фрагментации способами, известными специалистам в данной области и описанными далее в настоящей заявке.
В настоящей заявке термин водный применительно к составу, содержащему полипептид бГ-КСФТ133рАР-20К ПЭГ, относится к воде, одному или нескольким водорастворимым органическим растворителям или их смеси. В настоящей заявке термин органический растворитель используется в общепринятом смысле для обозначения жидких органических соединений, как правило, мономерного органического вещества в виде жидкости, предпочтительно относительно невязкой жидкости, молекулярная структура которой содержит атомы водорода, атомы углерода и возможно другие атомы, и которая способна растворять твердые вещества, газы или жидкости.
- 2 026073
Фармацевтические составы могут содержать фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтически приемлемые носители частично определяются конкретной композицией, которую вводят, а также конкретным способом введения композиции (см., например, РепипфогА РЬагтасеийса1 Баепсех. 171Н ей. 1985)). Подходящие фармацевтически приемлемые носители включают, но не ограничиваются перечисленными: буферы и вспомогательные вещества, например, содержащие нормальный солевой раствор, буферный раствор, декстрозу, воду, глицерин, этанол и/или их комбинации. Подходящие носители могут включать буферные вещества, содержащие сукцинат, фосфат, борат, ΗΕΡΕδ, цитрат, гистидин, имидазол, ацетат, бикарбонат натрия, и другие органические кислоты. Подходящие носители могут быть представлены вспомогательными веществами, содержащими многоатомные сахарные спирты, аминокислоты, такие как аргинин, лизин, глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аланин, орнитин, лейцин, фенилаланин, глутаминовая кислота, треонин и др., органические сахара или сахарные спирты, такие как лактоза, трегалоза, стахиоза, маннит, сорбит, ксилит, рибит, миоинозитол, галактит, глицерин и т.п., в том числе циклические спирты, такие как инозит; полиэтиленгликоль; полиаминокислоты; серосодержащие восстановители, такие как мочевина, глутатион, тиоктовая кислота, тиогликолят натрия, тиоглицерин, αмонотиоглицерин и тиосульфат натрия; низкомолекулярные полипептиды (т.е. <10 остатков); белки, такие как человеческий сывороточный альбумин, бычий сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; моносахариды, такие как ксилоза, манноза, фруктоза и глюкоза, дисахариды, такие как лактоза, мальтоза и сахароза; трисахариды, такие как раффиноза, а также полисахариды, такие как декстран.
В соответствии с настоящим изобретением цитрат или сукцинат применяются в качестве буферных веществ в стабильных водных составах. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения буферное вещество имеет молярность приблизительно 30 мМ. Буферные вещества могут присутствовать в виде соответствующей свободной кислоты или в виде солей щелочных и щелочноземельных металлов или аммония. Помимо этого состав может содержать другие дополнительные фармацевтические вспомогательные вещества. Последовательность добавления различных вспомогательных веществ или активного вещества в процессе производства жидких фармацевтических составов в значительной степени зависит от стабилизирующего влияния при хранении, которое найдено согласно изобретению, и определяется по усмотрению специалиста в данной области.
В качестве вспомогательных веществ могут быть использованы хлорид натрия, трегалоза, сорбит, аргинин или их комбинации. Согласно одному из вариантов реализации изобретения вспомогательное вещество представляет собой аргинин. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения аргинин имеет молярность приблизительно 250 мМ.
Традиционно фармацевтические составы белков включают поверхностно-активные вещества (ПАВ). Включение поверхностно-активных веществ может защитить белки от потенциально дестабилизирующих условий, возникающих на границе раздела фаз, от поверхностей, которые возникают в процессе производства, а также от изменения их термодинамической конформационной стабильности. Поверхностно-активные вещества хорошо известны в данной области техники, например поверхностноактивные вещества на основе полисорбата. Одним из примеров ПАВ на основе полисорбата является полиоксиэтилен 20 сорбитанмонолаурат, также известный под торговой маркой Твин-20 (Тетееи20®). Тем не менее, исследования состава бГ-КСФ, содержащего следовые количества полиоксиэтилен 20 сорбитанмонолаурата, показывают, что после 5 дней инкубации при 25°С количество агрегатов увеличится до 3,2% (по данным эксклюзионной хроматографии). Таким образом, составы согласно настоящему изобретению, по существу, не содержат поверхностно-активного вещества, в частности полисорбата и/или полиоксиэтилен (20) сорбитанмонолаурата. В настоящей заявке термин по существу, не содержащий поверхностно-активное вещество, полисорбат и/или полиоксиэтилен (20) сорбитанмонолаурат относится к составу, содержащему менее 0,033, менее 0,001, менее 0,0005, менее 0,0003 или менее 0,0001% поверхностно-активного вещества, полисорбата и/или полиоксиэтилена (20) сорбитанмонолаурата. Согласно настоящему изобретению состав, по существу, не содержит поверхностно-активное вещество, полисорбат и/или полиоксиэтилен (20) сорбитанмонолаурат, что позволяет получить стабильный состав с заданными свойствами, такими как минимальная агрегация препарата и минимальная дестабилизация и, при необходимости, сниженное депегилирование.
В настоящей заявке термин биологически активная молекула означает любое вещество, которое может повлиять на любые физические или биохимические свойства биологической системы, пути, молекулы или взаимодействия, относящегося к организму, включая, но не ограничиваясь перечисленными: вирусы, бактерии, бактериофаги, транспозоны, прионы, насекомых, грибы, растения, животных и человека. В частности, в настоящей заявке биологически активные молекулы включают любые вещества, предназначенные для диагностики, терапии, облегчения, лечения или профилактики заболевания у человека или животных, в других случаях для улучшения физического или психического самочувствия человека или животных, но не ограничиваются ими. Примеры биологически активных молекул включают, но не ограничиваются перечисленными: пептиды, белки, ферменты, низкомолекулярные лекарственные препараты, вакцины, иммуногены, сильнодействующие наркотики, слабые наркотики, углеводы, неорга- 3 026073 нические атомы или молекулы, красители, липиды, нуклеозиды, радионуклиды, олигонуклеотиды, анатоксины, токсины, прокариотические и эукариотические клетки, вирусы, полисахариды, нуклеиновые кислоты и их фрагменты, полученные или произошедшие от вирусов, бактерий, насекомых, животных или любых других клеток или типов клеток, липосомы, микрочастицы и мицеллы.
Фармацевтические составы согласно настоящему изобретению включают составы, которые помимо полипептида бГ-КСФ-Т133рЛЕ-20К ПЭГ возможно содержат один или несколько других активных ингредиентов. В настоящей заявке термин активный ингредиент или терапевтический ингредиент относится к терапевтически активному соединению, а также к любым его пролекарственным формам и фармацевтически приемлемым солям, гидратам и сольватам соединения и пролекарствам. Другие активные ингредиенты могут быть объединены с полипептидом бГ-КСФ-Т133рЛР-20К ПЭГ и могут быть введены как отдельно, так и в одном фармацевтическом составе. Количество других активных ингредиентов, которые будут вводить, может быть легко определено специалистом в данной области техники на основании терапии бГ-КСФ.
Фармацевтические составы согласно настоящего изобретению включают составы, которые помимо полипептида бГ-КСФ-Т133рАР-20К ПЭГ также возможно содержат один или несколько других неактивных ингредиентов. В настоящей заявке термин неактивный ингредиент относится к терапевтически неактивному соединению, а также любым его пролекарственным формам и фармацевтически приемлемым солям, гидратам и сольватам соединения и пролекарствам. Другие неактивные ингредиенты могут быть объединены с полипептидом бГ-КСФ-Т133рЛЕ-20К ПЭГ и могут быть введены как отдельно, так и в этом же фармацевтическом составе. Количество других активных ингредиентов, которые будут вводить, может быть легко определено специалистом в данной области техники на основании терапии бГКСФ.
Количество полипептида бГ-КСФ-Т133рЛЕ-20К ПЭГ в стабильных водных составах является достаточным для достижения терапевтического эффекта. В настоящей заявке термин терапевтически эффективное количество относится к количеству, которое приводит к желаемой пользе для животного и включает введение с целью лечения и профилактики. Количество будет варьировать для разных людей, и будет зависеть от ряда факторов, включая общее физическое состояние пациента и основную причину состояния, которое лечат. Количество полипептида бГ-КСФ-Т133рЛЕ-20К ПЭГ, использованное для терапии, дает приемлемую частоту изменений и сохраняет заданный терапевтический ответ на значимом уровне. Терапевтически эффективное количество композиций согласно настоящему изобретению может быть легко установлено специалистом в данной области техники с использованием общедоступных материалов и методик. Например, количество полипептида бГ-КСФ-Т133рЛЕ-20К ПЭГ может присутствовать в составе в концентрации приблизительно от 0,5 до 12 г/л, предпочтительно приблизительно 5 г/л.
В соответствии с настоящим изобретением стабильные водные составы полипептида бГ-КСФТ133рАГ-20К ПЭГ могут быть приготовлены при различных значениях рН. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения стабильный водный состав может иметь значение рН от приблизительно 5,7 до приблизительно 6,6. Согласно одному варианту реализации изобретения стабильный водный состав имеет рН от приблизительно 6,0 до приблизительно 6,3. Заданное значение рН состава доводят путем добавления оснований, таких как гидроксиды щелочных и щелочноземельных металлов или гидроксид аммония. Для корректировки рН предпочтительно использовать гидроксид натрия. Установление заданной величины рН в принципе может быть достигнуто путем добавления основных растворов. В целом могут быть использованы соли сильных оснований со слабой кислотой, например ацетат натрия, цитрат натрия, гидрофосфат динатрия или гидрофосфат дикалия или карбонат натрия. Если фармацевтический раствор вспомогательного вещества имеет основное значение рН, оно регулируется путем титрования кислотой до тех пор, пока не будет достигнуто заданное значение рН 4-5 или 7-8. В качестве кислот используются физиологически переносимые неорганические или органические кислоты, например соляная кислота, фосфорная кислота, уксусная кислота, лимонная кислота, или обычные растворы веществ с кислым рН. В связи с этим некоторые примеры веществ представляют собой соли сильных кислот со слабыми основаниями, такие как, например, дигидрофосфат натрия или дигидрофосфат калия.
Как показано в приведенных ниже примерах, составы бГ-КСФ согласно настоящему изобретению имеют заданную низкую концентрацию агрегатов полипептида бГ-КСФ-Т133рЛЕ-20К ПЭГ при неблагоприятных условиях хранения и условиях ускоренного старения. В настоящей заявке неблагоприятные условия хранения оценивают после инкубации образцов состава при 25°С в течение 5 дней. В настоящей заявке ускоренное старение оценивают после инкубации образцов состава при 40°С в течение 1 дня. Для целей настоящего изобретения условия хранения также могут быть исследованы при других температурах и сроках инкубации. Например, условия хранения могут быть исследованы после инкубации образцов состава при 25 °С в течение 28 дней или после инкубации образцов состава при 40°С в течение 3 дней.
Концентрацию агрегатов полипептида бГ-КСФ-Т133рЛЕ-20К ПЭГ исследуют после инкубации в неблагоприятных условиях хранения и условиях ускоренного старения. Согласно некоторым вариантам реализации составы полипептида бГ-КСФ в соответствии с настоящим изобретением имеют концентра- 4 026073 цию агрегатов полипептида бГ-КСФ-Т133рАР-20К ПЭГ ниже приблизительно 2,1% (мас./мас.) в неблагоприятных условиях хранения. Согласно другим вариантам реализации изобретения составы полипептида бГ-КСФ в соответствии с настоящим изобретением имеют концентрацию агрегатов полипептида бГ-КСФ-Т133рЛР-20К ПЭГ ниже приблизительно 1,5% (мас./мас.) в неблагоприятных условиях хранения. Согласно некоторым вариантам реализации составы пептида бГ-КСФ в соответствии с настоящим изобретением имеют концентрацию агрегатов полипептида бГ-КСФ-Т133рЛР-20К ПЭГ ниже приблизительно 1,5% (мас./мас.) в условиях ускоренного старения. Кроме того, для оценки стабильности состава согласно настоящему изобретению могут быть использованы исследования с применением принудительного перемешивания или замораживания-оттаивания. Например, исследование с принудительным перемешиванием может включать смешивание образца состава в стеклянном стакане на заданной скорости, например 60 об/мин, с помощью магнитной мешалки. Для того чтобы определить характеристики образца состав необходимо было перемешивать в течение определенного периода времени, например 2
ч. Цикл замораживания-оттаивания мог включать замораживание образца состава в течение 1 ч при температуре около -75°С и оттаивания при комнатной температуре в течение приблизительно 1 ч до исчезновения льда.
Более того, как показано в приведенных ниже примерах, составы бГ-КСФ согласно настоящему изобретению могут демонстрировать желаемые свойства в отношении дестабилизации и/или депегилирования полипептида бГ-КСФ-Т133рЛР-20К ПЭГ в неблагоприятных условиях хранения и в условиях ускоренного старения. В настоящей заявке термин депегилирование может относиться к стабильности присоединения пегилированных фрагментов, связанных с полипептидом бГ-КСФ-Т133рЛР-20К ПЭГ, независимо от того, остаются ли указанные пегилированные фрагменты связанными с полипептидом с течением времени, например, при хранении в водном растворе, или же они начинают отделяться, например, в результате гидролиза сложноэфирной связи.
Согласно некоторым вариантам реализации изобретения стабильные водные составы полипептида бГ-КСФ-Т133рЛР-20К ПЭГ могут быть приготовлены на основе цитрата в качестве буферного вещества и аргинина в качестве вспомогательного вещества. Согласно одному варианту реализации водный состав может быть приготовлен с использованием моногидрата лимонной кислоты (РкЬег, С/6200/60 или эквивалентной) в качестве буферного вещества и Ь-аргинина (81дша, А8094 или эквивалентный) в качестве вспомогательного вещества. Водный состав может быть приготовлен путем добавления 1,6±0,1 г моногидрата лимонной кислоты и 10,9±0,1 г Ь-аргинина к 200 мл воды высокого качества. После этого с помощью соляной кислоты доводят рН до 6,0±0,1, полученная смесь может быть разбавлена до 250 мл, используя воду высокого качества. Полученный состав может содержать 30 мМ цитрата, 250 мМ аргинина и полипептид бГ -КСФ-Т133рАР-20К ПЭГ при рН 6,0.
Водные препараты в соответствии с настоящим изобретением могут быть использованы для получения лиофилизатов с помощью стандартных способов лиофилизации или порошков. Препараты в соответствии с настоящим изобретением получают путем растворения лиофилизата в воде или других водных растворах. Термин лиофилизация, также известный как сублимационная сушка, обозначает общераспространенную методику для представления белка, которая используется для удаления воды из представляющего интерес белкового препарата. Лиофилизация представляет собой процесс, при котором материал для высушивания сначала замораживают, а затем лед или замороженный растворитель удаляют сублимацией в вакуумной среде. В состав до лиофилизации может быть включено вспомогательное вещество для повышения устойчивости в процессе сублимационной сушки и/или для повышения стабильности лиофилизированного продукта при хранении; например, см. Р|ка1, М. ВюрЬатш. 3(9)26-30 (1990) апб Атакама е! а1. Рйатш. Ке8. 8(3):285-291 (1991).
Сушка фармацевтических ингредиентов распылением также известна специалистам в данной области техники; например, см. ВгоабЬеаб, 1. е! а1., ТЬе 8ртау Бтушд οί РЬатшасеиЬсак в Эгид Бет. 1пб. РЬатш, 18 (11 & 12), 1169-1206 (1992). Помимо низкомолекулярных фармацевтических препаратов сушке распылением подвергался и ряд биологических материалов, в том числе: ферменты, сыворотки, плазма, микроорганизмы и дрожжи. Распылительная сушка является полезной методикой, так как с ее помощью жидкий фармацевтический препарат можно превратить в мелкодисперсный, безпыльный или агломерированный порошок за одну стадию. Основной метод состоит из следующих четырех стадий: а) распыление подаваемого раствора с образованием спрея, б) контакт спрея с воздухом, в) сушка спрея, и г) разделение высушенного продукта и сушильного воздуха. Например, патенты США №№ 6235710 и 6001800 описывают получение рекомбинантного эритропоэтина методом распылительной сушки.
Способы применения состава, содержащего полипептид бГ-КСФ-Т133рАР-20К ПЭГ, также включены в настоящее изобретение. бГ-КСФ обладает рядом видов биологической активности, включая, но не ограничиваясь перечисленными: связывание с его рецептором, которое приводит к димеризации рецепторов, стимуляцию выработки нейтрофилов и стимуляцию пролиферации и дифференцировки клеток. Примеры некоторых видов биологической активности гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и бГ-КСФ описаны выше, а также в патентах США №№ 6676947, 6579525, 6531121, 6521245, 6489293, 6368854, 6316254, 6268336, 6239109, 6165283, 5986047, 5830851, 5043156 и 5773569. Составы,
- 5 026073 содержащие полипептид бГ-КСФ-Т133рАР-20К ПЭГ, можно применять в лечении или предотвращении широкого спектра заболеваний. Предотвращение относится к снижению вероятности того, что реципиент препарата будет страдать или у него разовьется любое из патологических состояний, описанных здесь, и включает профилактическое введение. Термин предотвращение применим, в частности, к пациенту, который восприимчив к конкретному патологическому состоянию. Термин лечение относится к изменению заболевания или состояния и к предотвращению, обращению клинических эффектов заболевания, или смягчению дальнейшего прогрессирования или облегчению симптомов, связанных с заболеванием или состоянием.
Введение Г-КСФ-содержащих продуктов приводит к выработке лейкоцитов. Таким образом, введение состава, содержащего полипептид бГ-КСФ-Т133рЛТ-20К ПЭГ, согласно настоящему изобретению, может быть полезно для предотвращения инфекции у животных, которые находятся под угрозой заражения. Состав, содержащий полипептид бГ-КСФ-Т133рЛТ-20К ПЭГ, согласно настоящему изобретению, можно вводить инфицированным животным. Инфекции, которые можно лечить с помощью состава, содержащего полипептид бГ-КСФ-Т133рЛТ-20К ПЭГ, согласно настоящему изобретению, включают мастит и транспортную лихорадку, но не ограничиваются ими. Состав, содержащий полипептид бГ-КСФТ133рЛТ-20К ПЭГ, согласно настоящему изобретению возможно вводят животному, например, на протяжении от двух недель до одного дня до родов и, при необходимости, дополнительное введение могло быть сделано в день родов или в течение одной недели после родов. Согласно некоторым вариантам реализации животное, которому вводят препарат, содержащий полипептид бГ-КСФ-Т133рЛТ-20К ПЭГ согласно настоящему изобретению, это корова, и рождение называют отел. Согласно одному варианту реализации состав, содержащий полипептид бГ-КСФ-Т133рЛТ-20К ПЭГ согласно настоящему изобретению, может быть введен тельным коровам для профилактики мастита.
Согласно настоящему изобретению состав, содержащий полипептид бГ-КСФ-Т133рЛТ-20К ПЭГ, может быть введен любым обычным способом, который подходит для белка или пептида, включая, но не ограничиваясь, парентерально, например посредством инъекций, включая подкожные или внутривенные или любые другие формы инъекций или инфузий, но не ограничиваясь ими. Составы, содержащие полипептид бГ-КСФ-Т133рЛТ-20К ПЭГ, могут быть введены рядом способов, включая пероральный, внутривенный, внутрибрюшинный, внутримышечный, трансдермальный, подкожный, местный, подъязычный, внутрисосудистый, интрамаммарный или ректальный способы, но не ограничиваясь ими. Составы, содержащие полипептид бГ-КСФ-Т133рЛТ-20К ПЭГ, могут быть введены с использованием липосом. Такие способы введения и соответствующие составы широко известны специалистам в данной области. Составы, содержащие полипептид бГ-КСФ-Т133рЛТ-20К ПЭГ, отдельно или в комбинации с другими подходящими компонентами, также могут быть приготовлены в виде аэрозольных составов (например, они могут быть распылены) для введения путем ингаляции. Аэрозольные составы могут быть помещены в приемлемый газ-вытеснитель, находящийся под давлением, такой как дихлордифторметан, пропан, азот и тому подобное.
Составы, содержащие полипептид бГ-КСФ-Т133рАР-20К ПЭГ, подходящие для парентерального введения, такого как, например, внутрисуставное (в суставы), внутривенное, внутримышечное, внутрикожное, внутрибрюшинное и подкожное, включают водные и неводные, изотонические стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатические препараты, а также растворенные вещества, которые делают состав изотоническим в отношении крови предполагаемого реципиента, водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты, растворители, загустители, стабилизаторы и консерванты. Составы, содержащие полипептид бГКСФ-Т133рАР-20К ПЭГ, могут быть представлены в одноразовых или многоразовых герметичных контейнерах, таких как ампулы и флаконы. Составы, содержащие полипептид бГ-КСФ-Т133рАР-20К ПЭГ, также могут быть представлены в шприцах, таких как предварительно заполненные шприцы.
Состав согласно настоящему изобретению можно вводить парентерально и внутривенно. В частности, пути введения, используемые для лекарственных препаратов на основе гомологов природных аминокислот (включая, но не ограничиваясь, способы, которые обычно используют для эритропоетина, гормона роста, Г-КСФ, ГМ-КСФ, интерферонов, интерлейкинов, антител, факторы роста фибробластов, и/или любых других фармацевтически доставляемых белков), наряду с составами, используемыми в настоящее время, обеспечивают возможные способы введения и составы, содержащие полипептид бГКСФ-Т133рАР-20К ПЭГ согласно настоящему изобретению.
Согласно некоторым вариантам реализации состав по настоящему изобретению содержит полипептид бГ-КСФ-Т133рАР-20К ПЭГ в количестве от приблизительно 0,5 до приблизительно 12 г/л. В контексте настоящего изобретения вводимая животному доза достаточна для обеспечения полезного терапевтического ответа у животного с течением времени или другой соответствующей активности в зависимости от применения. Доза определяется эффективностью конкретного вектора или состава, а также активностью, стабильностью или периодом полужизни в сыворотке применяемого полипептида, который содержит некодируемую в природе аминокислоту, и состоянием животного, а также массой или площадью поверхности тела животного, которого лечат. Размер дозы определяется также наличием, характером и степенью любых нежелательных явлений, которые сопровождают введение конкретного вектора, состава
- 6 026073 и т.п., у конкретного животного.
В контексте настоящего изобретения введенная животному доза должна быть достаточной для обеспечения полезного терапевтического ответа у пациента с течением времени. В целом общее фармацевтически эффективное количество полипептида бГ-КСФ-Т133рЛЕ-20К ПЭГ согласно настоящему изобретению, введенное парентерально в расчете на одну дозу, составляет от 0,01 приблизительно мкг/кг/сут. до приблизительно 100 мкг/кг/сут. или от приблизительно 0,05 мг/кг до приблизительно 1 мг/кг массы тела животного, хотя доза выбирает в зависимости от терапевтических показаний. Кроме того, фармацевтически эффективное количество полипептида бГ-КСФ-Т133рЛЕ-20К ПЭГ согласно настоящему изобретению, вводимого парентерально, в расчете на одну дозу, составляет от приблизительно 1 мг до приблизительно 25 мг или от приблизительно 5 мг до приблизительно 20 мг. Например, фармацевтически эффективное количество полипептида бГ-КСФ-Т133рЛЕ-20К ПЭГ согласно настоящему изобретению, вводимого парентерально, в расчете на одну дозу, может быть приблизительно 14 мг. Частоту дозирования также выбирают на основании терапевтических показаний.
Фармацевтически эффективное количество полипептида бГ-КСФ-Т133рЛЕ-20К ПЭГ можно вводить животным в виде однократной дозы или в составе схемы многократного дозирования. Например, полипептид бГ-КСФ-Т133рЛЕ-20К ПЭГ может быть введен в составе схемы многократного дозирования, где схема включает по меньшей мере два режима дозирования. Согласно одному варианту реализации изобретения схема многократного дозирования состоит из двух режимов дозирования.
Согласно одному варианту реализации изобретения схема многократного дозирования включает первую дозу, которую вводят животному в период от 1 дня до 14 дней до родов, и вторую дозу, которую вводят животному в период примерно от 4 дней до 7 дней после родов. Согласно другому варианту реализации изобретения схема многократного дозирования включает первую дозу, которую вводят животному приблизительно за 7 дней до родов, и вторую дозу, которую вводят животному в день родов.
В настоящей заявке также предложены следующие варианты реализации.
1. Стабильный водный состав для лечения заболевания, модулируемого бычьим гранулоцитарным колониестимулирующим фактором (бГ-КСФ), содержащий бГ-КСФ-Т133рЛГ-20К ПЭГ, буфер на основе цитрата или сукцината и аргинин, причем указанный состав содержит менее 0,001% поверхностноактивного вещества.
2. Состав п.1, дополнительно содержащий противоион для аргинина.
3. Состав по п.2, отличающийся тем, что противоион для аргинина представляет собой хлорид или сульфат.
4. Состав по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат.
5. Состав по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что бГ-КСФ-Т133рЛГ-20К ПЭГ присутствует в количестве от 0,5 до 12 г/л, буферное вещество представляет собой цитрат и молярность цитратного буфера составляет приблизительно 30 мМ, молярность аргинина составляет приблизительно 250 мМ, причем состав имеет рН от 5,7 до 6,6.
6. Состав по любому из пп.1-5, включающий один или более других терапевтических ингредиентов.
7. Способ лечения животного, имеющего мастит или транспортную лихорадку, включающий введение указанному животному терапевтически эффективного количества состава по любому из пп.1-6.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что указанное заболевание представляет собой мастит и указанное животное представляет собой тельную корову.
Пример 1. Скрининговое исследование буферов и вспомогательных веществ.
Содержащие бГ-КСФ-Т133-20К ПЭГ составы, в основе которых отсутствует полиоксиэтилен (20) сорбитанмонолаурат, могут быть подвергнуты скринингу для оценки стабильности продукта с использованием нескольких буферов и вспомогательных веществ (хлорид натрия, трегалоза и аргинин). Заданное значение рН для всех диализных буферов составляет 6,0. Для сравнения может быть приготовлен состав, содержащий 10 мМ фосфата, 180 мМ маннита и 60 мМ трегалозы с рН 6,0. Состав может быть исследован в отношении воздействия на агрегацию белков и депегилирование в присутствии и при отсутствии кислорода.
Образцы могут быть получены путем диализа 1 мл бГ-КСФ-Т133-20К ПЭГ при температуре 2-8°С для каждого состава. Концентрация белка в образцах после диализа может быть определена перед нормализацией концентрации белка до 5 мг/мл. После диализа и нормализации концентрации примерно 3x1 мл аликвоты объединенных образцов после диализа и разведения могут быть внесены 5 мл стеклянные флаконы. Для того чтобы получить данные для начальных условий один набор образцов может быть протестирован. Второй набор может храниться при температуре 25°С/60% относительной влажности в течение 5 дней до начала испытания. Третий набор образцов может быть дегазирован в лиофилизационной камере, закрытой в атмосфере инертного газа (азота), а затем его хранят при 25°С/60% относительной влажности в течение 5 дней до начала испытания. Если уровень агрегации, измеренный с помощью эксклюзионной хроматографии, составляет через 5 дней менее 2,0%, то дегазированные и не дегазированные образцы могут быть проинкубированы при 40°С в течение одного дня.
- 7 026073
После пяти дней инкубации может быть измерена концентрация белка в каждом образце. В табл. 1 приведены концентрации белка.
Таблица 1
Концентрации белка, полученные в ходе исследования с целью скрининга буферов и вспомогательных веществ
Образец № | Описание образца | Концентрация через 5 дней при 2-8°С (мг/мл) | Концентрация через 5 дней при 25°С (мг/мл). недегазированный | Концентрация через 5 дней при 25°С (мг/мл), дегазированный |
1 | 10 мМ цитрата, 0,1 аргинина | 5,75 | 5,29 | 5,93 |
2 | 10 мМ цитрата, 0,15М1ЧаС1 | 6,35 | 6,71 | 5,45 |
3 | 10 мМ цитрата, 0,3 М трегалозы | 571 | 5,78 | 5,79 |
4 | 10 мМ гистидина, 0.15 М№С1 | 5,39 | 5,19 | 5,42 |
5 | 10 мМ гистидина, 0.3М трегалозы | 5,30 | 5,08 | 5,34 |
6 | 10 мМ гистидина, 0.1 М аргинина | 5,56 | 5,06 | 5,27 |
7 | 10 мМ малеата, 0.15М14аС1 | 5,50 | 5,40 | 5,73 |
8 | 10 мМ малеат, 0,ЗМ трегалозы | 4,41 | 4,01 | 4,13 |
9 | 10 мМ малеата, 0,1 М аргинина | 5,69 | 5,41 | 5,39 |
10 | 10 мМ сукцинат, 0.15М1ЧаС1 | 5,94 | 5,88 | 5,83 |
11 | 10 мМ сукцината, 0. ЗМ трегалозы | 5,57 | 5,79 | 5,66 |
12 | 10 мМ сукцината, 0,1 М аргинина | 4,96 | 4,92 | 4,78 |
13 | 10 мМ фосфата, О,15МТ4аС1 | 5,20 | 5,18 | 5,03 |
14 | 10 мМ фосфата, 0,3 М трегалозы | 5ДЗ | 5,30 | 5,24 |
15 | 10 мМ фосфата, 0,1 М аргинина | 5,22 | 5,04 | 5,12 |
16 | 10 мМ фосфата 180 мМ манита, 60 мМ трегалозы | 5,28 | 5,22 | 5,21 |
В табл. 2 приведены показатели рН для каждого образца.
Таблица 2
Показатели рН, полученные в ходе исследования с целью скрининга буферов и вспомогательных веществ
Состав буфера | рн диализного буфера | рН после диализа | рН через 5 дней при 28°С | рН через 5 дней при 25°С | рН дегазированного буфера через 5 дней при 25 °С |
10 мМ цитрата, 0,1 М аргинина | 6,49 | 6,44 | 6,48 | 6,57 | 6,53 |
10 мМ цитрата, 0,15 М1ЧаС1 | 6,51 | 6,47 | 652 | 6,55 | 6,61 |
10 мМ цитрата, 0,3 М трегалозы | 6,11 | 6,07 | 6,10 | 6,16 | 6,18 |
10 мМ гистидина, 0,15 М14аС1 | 5,86 | 5,85 | 5,91 | 5,91 | 5,95 |
10 мМ гистидина, 0,3 М трегалозы | 5,78 | 5,81 | 5,92 | 5,96 | 5,95 |
10 мМ гистидина, 0,1 | 6,22 | 623 | 6 30 | 6 32 | 6,29 |
- 8 026073
М аргинина | |||||
10 мМ малеата, 0,15 ΜΝ.'ιΟΙ | 6,22 | 6,22 | 6,28 | 6,32 | 6,29 |
10 мМ малеата, 0,3 М трегалозы | 6,06 | 6,03 | 6 11 | 6,13 | 6,12 |
10 мМ малеата, 0,1 М аргинина | 6,24 | 6,23 | 6,34 | 6,34 | 6,32 |
10 мМ сукцината, 0.15 М 1\аС1 | 6,14 | 6 13 | 6 19 | 626 | 6,31 |
10 мМ сукцината, 0,3 М трегалозы | 6,09 | 6,07 | 6,13 | 6,13 | 6,16 |
10 мМ сукцината, 0,1 М аргинина | 6,14 | 6,14 | 6,30 | 6,34 | 6,34 |
10 мМ фосфата, 0,15 МЧаС1 | 6,29 | 6,26 | 6,30 | 6,33 | 6,37 |
10 мМ фосфата, 0,3 М трегалозы | 5,97 | 5 98 | 6,03 | 6,10 | 6,13 |
10 мМ фосфата, 0,1 М аргинина | 6,40 | 6,38 | 6,41 | 6,47 | 6,47 |
10 мМ фосфата 180 мМ манита, 60 мМ трегалозы | 6,09 | 6,04 | 6,14 | 6,11 | 6,12 |
Уровни агрегации белков и депегилирования в каждом составе могут быть исследованы с помощью эксклюзионной хроматографии. В табл. 3 приведены результаты эксклюзионной хроматографии, которые показывают, что уровни агрегации белков и депегилирования были сопоставимыми во всех образцах.
- 9 026073
Таблица 3
Результаты эксклюзионной хроматографии, полученные в ходе исследования с целью скрининга буферов и вспомогательных веществ (после 5 дней инкубации)
Образец | Контрольные образцы (28 °С) | 5-дневная инкубация при 25 °С | 5-дневная инкубация при 25 :,С (дегазированный) | ||||||
Ср % агрегат ов | Ср % ПЭГ6ГКСФ | Ср % 6Г- КСФ | Ср % агрегатов | Ср % пэг- 6Г- КСФ | Ср % 6Г- КСФ | Ср % агрегатов | Ср % пэг- 6Г- КСФ | Ср % 6Г- КСФ | |
6Г-КСФ-Т13320К ПЭГ | 0,7 | 98,5 | 0,7 | Отсутствует |
ΝΒ10801-04-04 перед диализом | |||||||||
10 мМ цитрата, 0,1 аргинина | 1,2 | 98,3 | 0,5 | 1,6 | 98,0 | 0,5 | 1,6 | 98,0 | 0,4 |
10 мМ цитрата, 0,15 М ШС1 | 1,3 | 98,3 | 0,4 | 1,5 | 98,1 | 04 | 1-7 | 97,8 | 0,4 |
10 мМ цитрата, 0,3 Мтрегалозы | 1,3 | 98,2 | 0,4 | 1.4 | 98.1 | 0,5 | 1,5 | 98.0 | 0.5 |
10 мМ гистидин, 0,15 М№С1 | 1,3 | 98,1 | 0,6 | 1,5 | 97,8 | 0,7 | 1,6 | 97,8 | 0,7 |
10 мМ гистидина, О.ЗМ трегалозы | 1,3 | 98,2 | 0,5 | 1.7 | 97.8 | 0,5 | 1,9 | 97.6 | 0.5 |
10 мМ гистидина, 0,1 М аргинина | 1.3 | 98,1 | 0,6 | 1,3 | 98,1 | 0,7 | 1,5 | 97,8 | 0,6 |
ю мМ малеата, 0Д5МКзС1 | 1,4 | 98,1 | 0,5 | 1,6 | 97,8 | 0,6 | 1,7 | 97,7 | 0,6 |
10 мМ малеата, О.ЗМ трегалозы | 1,3 | 98,2 | 0,4 | 1,7 | 97,9 | 04 | 1,7 | 97,9 | 0,4 |
10 мМ малеата, ОД М аргинина | 1,3 | 98,2 | 0,6 | 1,3 | 98,1 | 0,6 | 1.4 | 97,9 | 0,6 |
10 мМ Сукцината, 0,15 М ЫаС1 | 1,4 | 98,1 | 0,5 | 1,6 | 97,8 | 0,6 | 1,9 | 97,5 | 0,5 |
10 мМ сукцината, О.ЗМ трегалозы | 1,3 | 98,3 | 0,4 | 1,7 | 97,9 | 04 | 1.9 | 97,7 | 0,4 |
10 мМ су кцината, 0,1 М аргинина | 1,5 | 98,0 | 0,6 | 1,5 | 97,9 | 0,6 | 2,0 | 97,4 | 0,6 |
ю мМ фосфата, 0Д5МКзС1 | 1Д | 98,2 | 0,7 | 1,3 | 98,0 | 0,7 | 1Д | 97,9 | 0,7 |
10 мМ фосфата, 0,ЗМ трегалозы | 1,1 | 98,4 | 0,5 | 1,7 | 97,8 | 0.6 | 1.8 | 97,6 | 0,6 |
ю мМ фосфата, ОД М аргинина | 1,1 | 98,2 | 0,6 | 1,3 | 98,1 | 0.7 | 1.5 | 97,8 | 0,7 |
10 мМ фосфата 180 мМ манита, 60 мМ трегалозы | 1,2 | 98,3 | 0,5 | 2,0 | 97,5 | 0,5 | 2Д | 97,4 | 0,5 |
В табл. 4 приведены результаты эксклюзионной хроматографии образцов, которые инкубировали при 40°С в течение одного дня. Сравнение композиции агрегатов свидетельствует, что содержащие аргинин составы имели самый низкий уровень агрегации препарата. Кроме того, в скрининговом исследовании контрольный состав, содержащий 10 мМ фосфата, 180 мМ маннита и 60 мМ трегалозы при рН 6, имел самый высокий уровень агрегирования по сравнению со всеми другими составами.
- 10 026073
Таблица 4
Результаты эксклюзионной хроматографии, полученные в ходе исследования с целью скрининга буферов и вспомогательных веществ (после 1 дня инкубации)
Образец | 1-дневная инкубация при 40 °С | 1-дневная инкубация при 40 °С (дегазированный) | ||||
Ср % агрегатов | Ср % пэг6Г-КСФ | Ср % 6ΓКСФ | Ср % агрегатов | Ср % пэг6Г-КСФ | Ср % 6ГКСФ | |
10 мМ цитрата, 0,1 аргинина | 6,5 | 93,3 | 0.1 | 7.2 | 92.7 | 0.1 |
10 мМ цитрата, 0,15 ΜΝλ€1 | 4Д | 95,8 | ОД | 4,3 | 95,6 | ОД |
10 мМ цитрата, 0,3 М трегалозы | 3.9 | 95,9 | 0,2 | 3,3 | 96,5 | 0,2 |
10 мМ гистидина, ОД5 МШС1 | 6,0 | 93,8 | 0,2 | 5,9 | 93,9 | 0,2 |
10 мМ гистидина, 0,3 М трегалозы | 8.4 | 91,5 | од | 9,3 | 90,6 | од |
10 мМ гистидина, 0,1 М аргинина | 3,0 | 96,7 | 0,3 | 2,9 | 96,8 | 0,3 |
ю мМ малеата, 0,15 М ИаС! | 5,9 | 93.9 | 0,2 | 6,0 | 93,9 | 0,1 |
10 мМ малеата, 0,3 М трегалозы | 7,3 | 92,7 | ОД | 7Д | 92,5 | од |
10 мМ малеата, од м аргинина | 3,0 | 96,8 | 0,2 | 3,1 | 96,7 | 0,2 |
10 мМ сукцината, 0,15 М14аС1 | 4,3 | 95,5 | 0,2 | 5,3 | 94,6 | од |
10 мМ сукцината, 0,3 м трегалозы | 9,6 | 90.3 | 0,1 | 10,8 | 89.1 | 0,1 |
10 мМ сукцината, ОД Маргинина | 2,1 | 97,6 | 0,3 | 2,6 | 97,2 | 0,2 |
10 мМ фосфата, о,15 ΜΝ3(Ί | 5,9 | 94,0 | 0,2 | 5,9 | 93,9 | ОД |
10 мМ фосфата, 0.3 М трегалозы | 16,0 | 84,0 | 0,0 | 18,2 | 81.8 | 0,0 |
10 мМ фосфата, од м аргинина | 4,5 | 95,2 | 0,2 | 3,8 | 96,0 | 0,2 |
10 мМ фосфата 180 мМ маннта, 60 мМ трегалозы | 22,8 | 77,2 | 0,0 | 25,0 | 75.0 | 0,0 |
Результаты этого скринингового исследования показывают, что все составы на основе сукцината, гистидина, малета и цитрата без полиоксиэтилен (20) сорбитанмонолаурата имеют незначительное увеличение количества агрегатов (менее 1% согласно данным эксклюзионной хроматографии) после пяти дней инкубации при температуре 25°С. Кроме того, отсутствуют различия в стабильности белка для дегазированных и недегазированных образцов. Более того, результаты эксклюзионной хроматографии образцов, инкубированных в неблагоприятных условиях при 40°С в течение одного дня, показывают, что содержащие 0,1 М аргинина составы меньше подвержены агрегации по сравнению с составами, содержащими такие вспомогательные вещества, как хлорид натрия и трегалоза.
Пример 2. Влияние полиоксиэтилен (20) сорбитанмонолаурата на составы, содержащие бГ-КСФ.
Для того чтобы установить влияние полиоксиэтилен (20) сорбитанмонолаурата на будущие составы для исследований с принудительным перемешиванием может быть проведена оценка его воздействия на агрегацию. Образцы могут быть получены путем диализа 4 мл бГ-КСФ-Т133-20К ПЭГ при температуре 2-8°С в 10 мМ фосфата и 150 мМ ЫаС1 при рН 6,0. После диализа к объединенной диализной фракции добавляют определенное количество 1% раствора полиоксиэтилен (20) сорбитанмонолаурата, а затем разбавляют 10 мМ фосфата и 150 мМ ЫаС1 с рН 6,0 до конечной концентрации белка 5 мг/мл. Образцы каждой композиции разделяют на 2х 1 мл аликвоты и вносят в 1 мл стеклянные флаконы для получения двух наборов образцов. Один набор может храниться при температуре 2-8°С и тестироваться в начальных условиях, в то время как второй набор может храниться при температуре 40°С в течение одного дня.
В табл. 5 представлены комплексные данные, полученные с использованием эксклюзионной хроматографии, которые свидетельствуют о том, что уровень агрегирования увеличивается с повышением концентрации полиоксиэтилен (20) сорбитанмонолаурата. Анализ проб с помощью эксклюзионной хроматографии свидетельствует, что агрегация бГ-КСФ-Т133-20К ПЭГ увеличивается с повышением концентрации полиоксиэтилен (20) сорбитанмонолаурата. В результате полиоксиэтилен (20) сорбитанмоно- 11 026073 лаурат может быть исключен из испытаний будущих составов для бГ-КСФ-Т133-20К ПЭГ.
Таблица 5
Результаты эксклюзионной хроматографии, полученные в ходе исследования влияния полиоксиэтилен (20) сорбитанмонолаурата (после 1-дневной инкубации)
Буфер | Начальные условия | 1-дневная инкубация при 40 °С | ||||
Ср % аггрегатов | Ср % ПЭГбГ-КСФ | Ср % 6Г-КСФ | Ср % аггрегатов | Ср % ПЭГбГ-КСФ | Ср % 6Г-КСФ |
Влияние различных концентраций аргинина наряду с другими ключевыми историческими параметрами состава может быть исследовано с целью определения основных эффектов, а также их взаимодействий. В дизайне эксперимента используют методологию расчёта на основе поверхности отклика, основанную на плане Бокса-Бенкена, где каждый числовой коэффициент изменяется как низкий, средний и высокий уровень. Кроме того, тип буфера может являться категорическим фактором. Сочетание параметров может быть повторено для цитрата и сукцината, каждое с тремя центральными точками. Значение рН может быть установлено на уровне 6,0 для всех условий. Для сравнения с полученными ранее результатами может быть включено контрольное условие, которое представляет собой раствор, содержащий 10 мМ фосфата, 150 мМ ЫаС1 и 0,0033% полиоксиэтилен (20) сорбитанмонолаурата при рН 6.
Все диализные буферы могут быть получены при рН 6,0±0,1. ПЭГ-бГ-КСФ может быть подвергнут диализу в 18 условиях, соответствующих различным буферам, приведенным в исследовании ΌΘΕ № 1. Выделение белка во время стадии диализа может составлять в целом >78% и, таким образом, является одинаковым в наборе образцов для диализа. После диализа концентрация белка в объединенной диализной фракции может быть откорректирована с использованием буфера для диализа до целевого значения, приведенного в плане Бокса-Бенкена для изучения поверхности отклика. В результате может быть получено 24 комбинации состава плюс три центральные точки для цитрата и три центральные точки для сукцината. Каждый состав можно разделить на 3 аликвоты х 1 мл, которые вносят в 1 мл стеклянные флаконы и получают три набора образцов: один набор может быть исследован для получения данных в начальных условиях и затем может храниться при температуре 2-8°С, второй набор может храниться при температуре 25°С в течение двух недель и третий набор может храниться при температуре 40°С в течение одного дня.
Изменения концентрации продукта могут быть исследованы с целью оценки стабильности продукта. В табл. 6 приведены концентрации продукта в образцах до и после инкубации. Образцы, приготовленные в буфере, содержащем 10 мМ цитрата, 300 мМ аргинина (8 мг/мл) и 10 мМ сукцината, имеют самое большое увеличение (0,5-0,6 мг/мл), тогда как для всех других образцов разность меньше.
- 12 026073
Сводные данные по концентрации белка из исследования ΌΘΕ № 1 (начальные условия и после 1-дневной инкубации при 40°С)
Таблица 6
Образец | Концентрация белка (мг/мл) | ||
Начальные условия | После 1дневной инкубации при 40 °С | Разность | |
10 мМ цитрата, 100 мМ аргинина (5 мг/мл) | 4,89 | 5,16 | 0.27 |
10 мМ цитрата, 300 мМ аргинина (2 мг/мл) | 1,89 | 2.05 | 0.06 |
10 мМ цитрата, 300 мМ аргинина (8 мг/мл) | 7,60 | 8,19 | 0,59 |
10 мМ цитрата, 500 мМ аргинина (5 мг/мл) | 4,97 | 4,89 | -0,08 |
30 мМ цитрата, 100 мМ аргинина (2 мг/мл) | 1,99 | 2,01 | 0.02 |
30 мМ цитрата, 100 мМ аргинина (8 мг/мл) | 8,23 | 8,14 | -0,09 |
30 мМ цитрата, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон А | 5,03 | 4,86 | -0,17 |
30 мМ цитрата, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон В | 5,07 | 4,93 | -0,14 |
30 мМ цитрата, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон С | 5,08 | 5,01 | -0,07 |
30 мМ цитрата, 500 мМ аргинина (2 мг/мл) | 2,00 | 2,01 | 0,01 |
30 мМ цитрата, 500 мМ аргинина (8 мг/мл) | 8,05 | 7,95 | -0,10 |
50 мМ цитрата, 100 мМ аргинина (5 мг/мл) | 5,07 | 5,01 | -0,06 |
50 мМ цитрата, 300 мМ аргинина (2 мг/мл) | 1,99 | 2,00 | 0,01 |
50 мМ цитрата, 300 мМ аргинина (8 мг/мл) | 8,17 | 8,17 | 0,00 |
50 мМ цитрата, 500 мМ аргинина (5 мг/мл) | 4,89 | 4,93 | 0,04 |
10 мМ сукцината, 100 мМ аргинина (5 мг/мл) | 8,25 | 5,08 | -0,19 |
10 мМ сукцината, 300 мМ аргинина (2 мг/мл) | 1,94 | 1,88 | -0,05 |
10 мМ сукцината, 300 мМ аргинина (8 мг/мл) | 8,21 | 8,72 | 0,51 |
10 мМ сукцината, 500 мМ аргинина (5 мг/мл) | 5,03 | 4,91 | -0,12 |
30 мМ сукцината, 100 мМ аргинина (2 мг/мл) | 2,04 | 1,75 | -0,29 |
30 мМ сукцината, 100 мМ аргинина (8 мг/мл) | 7,97 | 7,79 | -0,18 |
30 мМ сукцината, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон А | 4,92 | 4,77 | -0,15 |
30 мМ сукцината, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон В | 4,87 | 4,85 | -0,02 |
30 мМ сукцината, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон С | 4,97 | 4,80 | -0,17 |
30 мМ сукцината, 500 мМ аргинина (2 мг/мл) | 1,90 | 1,86 | -0,04 |
30 мМ сукцината, 500 мМ аргинина (8 мг/мл) | 7,81 | 7,69 | -0,12 |
50 мМ сукцината, 100 мМ аргинина (5 мг/мл) | 4,80 | 4,84 | 0,14 |
50 мМ сукцината, 300 мМ аргинина (2 мг/мл) | 1,86 | 1,84 | -0,02 |
50 мМ сукцината, 300 мМ аргинина (8 мг/мл) | 7,88 | 7,76 | -0,12 |
50 мМ сукцината, 500 мМ аргинина (5 мг/мл) | 4,91 | 4,92 | 0,00 |
10 мМ фосфата. 150 мМШС1? 0.0033 % Твин-20 (в/о) (5 мг/мл)4 | 5,05 | 5,02 | -0,02 |
Для того чтобы оценить рН стабильность образцов могут быть исследованы изменения рН. Все образцы могут иметь рН в пределах от 6,0 до 6,3. В табл. 7 приведены значения рН и разность по отношению к нулевому моменту времени. Значения рН образцов являются стабильными на всем протяжении исследования ΌΘΕ № 1.
- 13 026073
Сводные данные по значениям рН образцов в исследовании ΌΘΕ № 1 (начальные условия и после 1-дневной инкубации при 40°С)
Таблица 7
Образец | Показатель рН | ||
Начальные условия | После 1-дневной инкубации при 40 °С ' | Разность | |
10 мМ цитрата. 100 мМ аргинина (5 мг/мл) | 6,14 | 6,16 | 0,02 |
10 мМ цитрата, 300 мМ аргинина (2 мг/мл) | 6,10 | 6,12 | 0,02 |
10 мМ цитрата, 300 мМ аргинина (8 мг/мл) | 6,08 | 6,10 | 0.02 |
10 мМ цитрата. 500 мМ аргинина (5 мг/мл) | 6,25 | 6,27 | 0,02 |
30 мМ цитрата. 100 мМ аргинина (2 мг/мл) | 6,15 | 6,19 | 0,04 |
30 мМ цитрата, 100 мМ аргинина (8 мг/мл) | 6,13 | 6,19 | 0.06 |
30 мМ цитрата, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон А | 6,19 | 6,21 | 0,02 |
30 мМ цитрата, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон В | 6,31 | 6,21 | -0,10 |
30 мМ цитрата, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон С | 6,24 | 6,21 | -0,03 |
30 мМ цитрата. 500 мМ аргинина (2 мг/мл) | 6,16 | 6,16 | 0,00 |
30 мМ цитрата. 500 мМ аргинина (8 мг/мл) | 6,12 | 6,15 | 0,03 |
50 мМ цитрата, 100 мМ аргинина (5 мг/мл) | 6,28 | 6.22 | -0.06 |
50 мМ цитрата, 300 мМ аргинина (2 мг/мл) | 6.19 | 6.18 | -0.01 |
50 мМ цитрата. 300 мМ аргинина (8 мг/мл) | 6,19 | 6,16 | -0,03 |
50 мМ цитрата. 500 мМ аргинина (5 мг/мл) | 6,10 | 6,15 | -0,04 |
10 мМ сукцината. 100 мМ аргинина (5 мг/мл) | 6,11 | 6,16 | 0,05 |
10 мМ сукцината, 300 мМ аргинина (2 мг/мл) | 6,05 | 6,08 | 0,03 |
10 мМ сукцината, 300 мМ аргинина (8 мг/мл) | 6,04 | 6,05 | 0,01 |
10 мМ сукцината, 500 мМ аргинина (5 мг/мл) | 6,17 | 6,17 | 0.00 |
30 мМ сукцината, 100 мМ аргинина (2 мг/мл) | 6.25 | 6,23 | -0,02 |
30 мМ сукцината, 100 мМ аргинина (8 мг/мл) | 6,25 | 6,23 | -0,02 |
30 мМ сукцината, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон А | 6.31 | 6.31 | 0.00 |
30 мМ сукцината, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон В | 6,30 | 6,30 | 0,00 |
30 мМ сукцината, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон С | 6.30 | 6,29 | -0,01 |
30 мМ сукцината, 500 мМ аргинина (2 мг/мл) | 6,19 | 6,19 | 0,00 |
30 мМ сукцината, 500 мМ аргинина (8 мг/мл) | 6.19 | 6,18 | -0,01 |
50 мМ сукцината, 100 мМ аргинина (5 мг/мл) | 6,18 | 6,17 | -0,01 |
50 мМ сукцината, 300 мМ аргинина (2 мг/мл) | 6,22 | 6,19 | -0,03 |
50 мМ сукцината, 300 мМ аргинина (8 мг/мл) | 6,21 | 6,21 | 0.00 |
50 мМ сукцината, 500 мМ аргинина (5 мг/мл) | 6,22 | 6,21 | -0,01 |
10 мМ фосфата, 150 мМ ЧаС1 | 6,11 | 6,10 | -0,01 |
Для того чтобы оценить стабильности белка с помощью эксклюзионной хроматографии, могут быть исследованы изменения концентрации агрегатов, мономеров и уровня депегилирования. В табл. 8-10 приведено процентное содержание агрегатов, мономеров и уровень депегилирования в каждой композиции образца соответственно.
- 14 026073
Таблица 8
Результаты изучения уровня агрегатов с помощью эксклюзионной хроматографии в исследовании ΌΘΕ № 1
Образец | % Агрегатов для цитрата | % Агрегатов для сукцината | ||||
Началь ные условия | После 1- дневн ой инкуб ации при 40 °С | Разность | Начальные условия | После 1- дневной инкубации при 40 °С | Разность | |
Объединенная фракция ΝΒ1080Ι-04-04 до диализа | 1,1 | Отсутствует | 0,7 | Отсутствует | ||
10 мМ буфера, 100 мМ аргинина (5 мг/мл) | 1,1 | 1,5 | 0.4 | 1,3 | 2,0 | 1,6 |
10 мМ буфера, 300 мМ | 1,0 | 1,0 | 0,0 | 1,5 | 1,4 | -0,1 |
аргинина (2 мг/мл) | ||||||
10 мМ буфера, 300 мМ аргинина (8 мг/мл) | 1,0 | 1,2 | 0,2 | 1,2 | 1,4 | 0,3 |
10 мМ буфера, 500 мМ аргинина (5 мг/мл) | 1.1 | 1.3 | 0,2 | и | 1.4 | 0,2 |
30 мМ буфера, 100 мМ аргинина (2 мг/мл) | 1,2 | 1,3 | 0,0 | 1,6 | 1,7 | 0,1 |
30 мМ буфера, 100 мМ аргинина (8 мг/мл) | 1,1 | 1,5 | 0,4 | 1,2 | 2,6 | 1,3 |
30 мМ буфера, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон А | 1,1 | II | 0,0 | 1,4 | 1,4 | 0,0 |
30 мМ буфера, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон В | 1.0 | 1.2 | 0,2 | 1,2 | 1,5 | 0,3 |
30 мМ буфера, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон С | 1,0 | и | 0,1 | 1,2 | 1,4 | 0,2 |
30 мМ буфера, 500 мМ аргинина (2 мг/мл) | 1,1 | 1,2 | 0,1 | 1,9 | 1,4 | -0,5 |
30 мМ буфера, 500 мМ аргинина (8 мг/мл) | 1,1 | 1,3 | 0,2 | |,з | 1,4 | ОД |
50 мМ буфера, 100 мМ аргинина (5 мг/мл) | 1.3 | 1.5 | 0,2 | 1,5 | 2.7 | 1.3 |
50 мМ буфера, 300 мМ аргинина (2 мг/мл) | 1,2 | 1,1 | -0,1 | 1,6 | 1,4 | -0,2 |
50 мМ буфера, 300 мМ аргинина (8 мг/мл) | 1.1 | 1.4 | 0,3 | 1,3 | 1.8 | 0,5 |
50 мМ буфера, 500 мМ аргинина (5 мг/мл) | 1,4 | 1,2 | -0,2 | 1,4 | 1,4 | 0,0 |
10 мМ фосфата, 150 мМ ШС1, 0,0033 % Твин-20 | Начальные условия = 0,8 | После 1-дневной инкубации при 40 °С = 3,7 | Разность =2,8 |
Таблица 9
Результаты изучения уровня мономеров с помощью эксклюзионной хроматографии в исследовании ΌΘΕ № 1
Образец | % Мономе | ров для цитрата | % Мономеров для сукцината | |||
Начальны е условия | После 1- дневной инкубации при 40 :'С | Разность | Начальные условия | После 1- дневной инкубации при 40 °С | Разность | |
Объединенная фракция ΝΒ1080104-04 до диализа | 98,7 | Отсутствует | 99,0 | Отсутствует | ||
10 мМ буфера, 100 мМ аргинина (5 мг/мл) | 98,8 | 98,4 | -0,4 | 97,9 | 98,6 | -1,4 |
10 мМ буфера, 300 мМ аргинина (2 мг/мл) | 98,8 | 98,7 | -0,1 | 97,9 | 98,0 | 0,2 |
ю мМ буфера, зоо мМ аргинина (8 мг/мл) | 98,9 | 98,6 | -0,3 | 97,8 | 97,7 | -ОД |
- 15 026073
10 мМ буфера, 500 мМ аргинина (5 мг/мл) | 98,7 | 98,4 | -о,з | 97,9 | 97,8 | -од |
30 мМ буфера, 100 мМ аргинина (2 мг/мл) | 98,6 | 98,5 | -од | 98,0 | 97,9 | -од |
30 мМ буфера, 100 мМ аргинина (8 мг/мл) | 98,7 | 98,3 | -0,4 | 98,1 | 96,9 | -1,2 |
30 мМ буфера, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон А | 98,7 | 98,6 | -0,1 | 98,0 | 98,1 | од |
30 мМ буфера, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон В | 98,8 | 98,5 | -0,2 | 98,2 | 98,0 | -0,2 |
30 мМ буфера, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон С | 98,8 | 98,6 | -0,2 | 98,2 | 98,1 | -од |
30 мМ буфера, 500 мМ аргинина (2 мг/мл) | 98,7 | 98,5 | -0,2 | 97,6 | 98,1 | 0,4 |
30 мМ буфера, 500 мМ аргинина (8 мг/мл) | 98,7 | 98,4 | -о,з | 98,0 | 98,0 | 0,0 |
50 мМ буфера, 100 мМ аргинина (5 мг/мл) | 98,5 | 98,3 | -0,2 | 98,1 | 96,9 | -1,2 |
50 мМ буфера. 300 мМ аргинина (2 мг/мл) | 98.6 | 98.6 | 0.0 | 97,9 | 98,2 | 0,2 |
50 мМ буфера, зоо мМ аргинина (8 мг/мл) | 98,7 | 98,3 | -0,3 | 98.1 | 97,7 | -0,4 |
50 мМ буфера, 500 мМ аргинина (5 мг/мл) | 98,4 | 98.5 | од | 98,0 | 98,0 | 0,0 |
10 мМ фосфата, 150 мМ ИаС1, 0,0033 % Твнн-20 (5 мг/мл) | Начальные условия = 98,1 | После 1-дневной инкубации при 40 °С = 95,6 | Разность =-2,5 |
Таблица 10
Результаты изучения уровня депегилирования с помощью эксклюзионной хроматографии в исследовании ΌΘΕ № 1
Образец | % Депегилирования для цитрата | % Депегилирования для сукцината | ||||
Начальны е условия | После 1- дневной инкубации при 40 °С | Разность | Начальные условия | После 1 - дневной инкубации при 40 °С | Разность | |
Объединенная фракция ΝΒ1080104-04 до диализа | 0.2 | Отсутствует | 0,3 | Отсутствует | ||
10 мМ буфера, 100 мМ аргинина (5 мг/мл) | 0.2 | од | 0,0 | 0,8 | 0,6 | -0,3 |
10 им буфера, 300 мМ аргинина (2 | 0,2 | 0,3 | ОД | 0,6 | 0.6 | 0,0 |
- 16 026073
мг/мл) | ||||||
10 мМ буфера, 300 мМ аргинина (8 мг/мл) | 0,2 | 0,3 | 0.1 | 1,0 | 0,8 | -0.2 |
10 мМ буфера, 500 мМ аргинина (5 мг/мл) | 0,2 | 0,3 | 0,1 | 1,0 | 0.8 | -0,1 |
30 мМ буфера, 100 мМ аргинина (2 мг/мл) | 0,2 | 0,2 | 0,0 | 0,4 | 0,4 | 0,0 |
зо мМ буфера, юо мМ аргинина (8 мг/мл) | 0,2 | 0,2 | 0,0 | 0,6 | 0,5 | -0,1 |
30 мМ буфера, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон А | 0,2 | 0,3 | 0,1 | 0,6 | 0,5 | -0,1 |
зо им буфера, зоо мМ аргинина (5 мг/мл) флакон В | 0,2 | 0,3 | 0.1 | 0,6 | 0.5 | -0.1 |
30 мМ буфера, 300 мМ аргинина (5 мг/мл) флакон С | 0,2 | 0,2 | 0,0 | 0,6 | 0,5 | 0,0 |
30 мМ буфера, 500 мМ аргинина (2 мг/мл) | 0,2 | 0,3 | 0,1 | 0,5 | 0,5 | 0.0 |
30 мМ буфера, 500 мМ аргинина (8 мг/мл) | 0,2 | 0,3 | 0,1 | 0,7 | 0,7 | -0,1 |
50 мМ буфера, 100 мМ аргинина (5 мг/мл) | 0,2 | 0,2 | 0,0 | 0,4 | 0,4 | -0,1 |
50 мМ буфера, зоо мМ аргинина (2 мг/мл) | 0,2 | 0.3 | 0,1 | 0,4 | 0,4 | 0.0 |
50 мМ буфера, 300 мМ аргинина (8 мг/мл) | 0,2 | 0,2 | 0,0 | 0,8 | 0,6 | -0,1 |
50 мМ буфера. 500 мМ аргинина (5 мг/мл) | 0,2 | 0,3 | од | 0,6 | 0,6 | 0,0 |
10 мМ фосфата. 150 мМ ΝδΟ, 0,0033 % Твин-20 (5 мг/мл) | Начальные условия = 1,1 | После 1-дневной инкубации при 40 °С = 0,7 | Разность =-0,3 |
Результаты эксклюзионной хроматографии показывают, что уровень агрегатов в образцах с цитратом является относительно стабильным. Образцы с сукцинатом также имеют низкий уровень агрегатов, за исключением образцов с 100 мМ аргинина, это свидетельствует о том, что для сукцинатного буфера потребуется более 100 мМ аргинина для поддержания низкого уровня агрегации белков. В контрольном растворе (10 мМ фосфат, 150 мМ ЫаС1 и 0,0033% (вес/об.) полиоксиэтилен (20) сорбитанмонолаурата, рН 6 и 5 мг/мл) уровень агрегатов после 1-дневной инкубации при 40°С составлял 3,7% (см. табл. 8).
Депегилирование представляет собой другой механизм деградации белков. В таблице 10 приведены результаты исследования депегилирования продукта с помощью эксклюзионной хроматографии, которые показывают, что уровень депегилирования в образцах с сукцинатом выше (0,4%-0,8%), чем в содержащих цитрат образцах (<0,3%). Уровень депегилирования в контрольном растворе на основе фосфата выше, чем во всех образцах состава на основе цитрата и незначительно выше, чем в большинстве составов на основе сукцината.
Поскольку согласно результатам эксклюзионной хроматографии содержащие цитрат образцы, которые инкубировали 1 день при 40°С, имеют минимальный уровень агрегатов, некоторые образцы из исследования ΌΘΕ № 1 могут быть инкубированы при 25°С в течение 28 дней. Представленные ниже условия образцов могут быть исследованы с помощью эксклюзионной хроматографии:
1) 30 мМ цитрата, 100 мМ аргинина в 2 мг/мл;
2) 30 мМ цитрата, 500 мМ аргинина в 2 мг/мл;
3) 30 мМ цитрата, 100 мМ аргинина в 8 мг/мл;
4) 30 мМ цитрата, 500 мМ аргинина в 8 мг/мл;
5) 30 мМ цитрата, 300 мМ аргинина в 5 мг/мл.
В табл. 11 приведены результаты анализов с помощью эксклюзионной хроматографии в течение 28 дней эксперимента. Кроме того, отсутствие деградации продукта может быть подтверждено с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии образцов, инкубировавшихся в течение 28 дней. Эти результаты приведены в табл. 12.
- 17 026073
Таблица 11
Результаты эксклюзионной хроматографии образцов, инкубировавшихся в течение 28 дней при 25°С в исследовании ΌΘΕ № 1
Образец | 28-Дневная инкубация при 25 °С | ||
Ср. % агрегатов | Ср. % ПЭГ-бГ-КСФ | Ср. % бГ-КСФ | |
100 мМ аргинина 2 мг/мл | 1.3 | 98.1 | 0,6 |
100 мМ аргинина 8 мг/мл | 1,6 | 98,0 | 0,4 |
300 мМ аргинина 5 мг/мл флакон А | 1,4 | 98,0 | 0,7 |
300 мМ аргинина 5 мг/мг флакон В | 1,3 | 98,1 | 0,6 |
300 мМ аргинина 5 мг/мл флакон С | 1,3 | 98,0 | 0,7 |
500 мМ аргинина 2 мг/мл | 1,4 | 97,8 | 0,8 |
500 мМ аргинина 8 мг/мл | 1,5 | 97,7 | 0,7 |
Таблица 12
Результаты анализа образцов, инкубировавшихся в течение 28 дней при 25°С, с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ в исследовании ΌΘΕ № 1
Образец | % Мономеров | ||
Начальные условия | 28 Дней при 25 °С | Разность | |
100 мМ аргинина 2 мг/мл | 97,3 | 97,8 | 0,4 |
100 мМ аргинина 8 мг/мл | 97,0 | 97,4 | 0,4 |
300 мМ аргинина 5 мг/мл флакон А | 97.3 | 97,3 | 0.0 |
300 мМ аргинина 5 мг/мг флакон В | 97,1 | 95,2 | -2,0 |
300 мМ аргинина 5 мг/мл флакон С | 97,1 | 97,4 | 0,3 |
500 мМ аргинина 2 мг/мл | 97,2 | 97,0 | -0,2 |
500 мМ аргинина 8 мг/мл | 97,2 | 97,2 | 0,0 |
Пример 4. Оценка совместимости противоиона и шприца.
Может быть проведено сравнение анионов хлорида и сульфата в качестве противоионов для аргинина. Образец может содержать 30 мМ цитрата и 300 мМ аргинина в 5 мг/мл (рН 6). Кроме того, может быть проведено исследование совместимости продукта в 3 мл полипропиленовом шприце ΜΘΝΘΙΕΟΤ для заполнения лекарственными препаратами в сравнении с 1 мл стеклянными флаконами. Буфер на основе 30 мМ цитрата, 300 мМ аргинина с рН 6 (хлорид) может быть приготовлен с использованием цитрата натрия и аргинина-НС1, раствор может быть протитрован с помощью 6н. НС1. Буфер, содержащий 30 мМ цитрата, 300 мМ аргинина с рН 6 (сульфат), может быть приготовлен с использованием моногидрата лимонной кислоты, цитрата натрия и основного аргинина, раствор может быть протитрован с помощью концентрированной серной кислоты. Образец бГ-КСФ-Т133-20К ПЭГ может быть подвергнут диализу с использованием двух буферов. Образцы могут быть исследованы с помощью эксклюзионной хроматографии в нулевой момент времени. Один набор образцов может быть помещен в 1 мл стеклянный флакон для лиофилизации, а второй в 3 мл шприцы перед инкубацией при 40°С в течение 3 дней.
В табл. 13 приведены результаты эксклюзионной хроматографии. Эти результаты показывают, что в образцах, которые хранятся в шприцах, образование агрегатов в два-три раза выше, чем в образцах из стеклянных флаконов. Уровень депегилирования продукта остается таким же, как и в нулевой момент времени. При оценке двух противоионов установлено, что образцы в стеклянных флаконах имеют минимальные изменения уровня агрегатов после 3 дней инкубации при температуре 40°С. Таким образом, хлорид может быть использован вместо сульфата в качестве противоиона без влияния на уровень агрегатов.
- 18 026073
Таблица 13
Результаты эксклюзионной хроматографии, полученные в ходе исследования совместимости противоиона и шприца
Образец | Начальные условия | 1-дневная инкубации при 40 °С | 2-дневная инкубация при 40 ФС | 3 -дневная инкубации при 40 ФС | ||||||||
Ср % аггрегато в | Ср % пэг -6Г- кс ф | Ср % 6Г- кс ф | Ср % аггрегато в | Ср % пэг -6Г- кс ф | Ср % 6Г- кс ф | Ср % аггрегато в | Ср % пэг -6Г- кс ф | Ср % 6Г- кс ф | Ср % аггрегато в | ср % пэг -6Г- кс ф | Ср % 6Г- кс ф | |
Объединены ая фракция до диализа | 0,5 | 99, 2 | 0,3 | Отсутствует | ||||||||
Хлорид (Стеклянный флакон) | 1,2 | 98, 5 | 0,3 | 1,2 | 98, 6 | 0,4 | 1,2 | 98, 3 | 0,4 | 1*2 | 98, 2 | 0*7 |
Сульфат (стеклянный флакон) | 1,6 | 98, 1 | 0,3 | 1,2 | 98, 5 | 0,3 | 1*2 | 98, 3 | 0,5 | 1*4 | 97, 9 | 0,6 |
Хлорид (шприц) | 1,2 | 98, 5 | 0,3 | 2,2 | 97, 5 | 0,3 | 4,0 | 95, 5 | 0,4 | 4,9 | 94, 6 | 0,5 |
Сульфат (шприц) | 1,6 | 98, 1 | 0,3 | 2*1 | 97, 5 | 0,3 | 3,5 | 96, 1 | 0*4 | 4,6 | 95, 0 | 0,5 |
Пример 5. Полный план трехфакторного, 2-уровневого эксперимента (ΌΘΕ № 2).
Второе исследование ΌΘΕ может быть проведено с целью оценки влияния рН, концентрации аргинина и концентрация белка в цитратном буфере. В табл. 14 приведены условия состава, использованные в ΌΘΕ № 2.
Таблица 14
Условия составов, использованные для исследования ΌΘΕ № 2
Образец № | Концентрации аргинина (мМ) | рН | Концентрация продукта (мг/мл) |
1 | 200 | 5,0 | 2 |
2 | 200 | 5,0 | 8 |
3 | 200 | 6,0 | 2 |
4 | 200 | 6,0 | 8 |
5 | 250 | 5,5 | 6 |
6 | 250 | 5,5 | 5 |
7 | 250 | 6,5 | 5 |
8 | 300 | 6,0 | 8 |
9 | 300 | 5,0 | 2 |
10 | 300 | 6,0 | 8 |
11 | 300 | 6,0 | 2 |
бГ-КСФ-Т133-20К ПЭГ может быть подвергнут диализу в 5 буферных растворах. Образцы 1 и 2 могут быть подвергнуты диализу в буфере, содержащем 30 мМ цитрата и 200 мМ аргинина при рН 5,0. Образцы 3 и 4 могут быть подвергнуты диализу в буфере, содержащем 30 мМ цитрата и 200 мМ аргинина при рН 5,0. Образцы 5 и 6 могут быть подвергнуты диализу в буфере, содержащем 30 мМ цитрата и 250 мМ аргинина при рН 6,0. Образцы 7 и 8 могут быть подвергнуты диализу в буфере, содержащем 30 мМ цитрата и 300 мМ аргинина при рН 6,0. Образцы 9 и 10 могут быть подвергнуты диализу в буфере, содержащем 30 мМ цитрата и 300 мМ аргинина при рН 5,5. Каждый образец после диализа может быть доведен до конечной концентрации целевого продукта, а затем разделен на 2 аликвоты х 1 мл в стеклянных флаконах для лиофилизации с получением двух наборов образцов: один набор может храниться при температуре 2-8°С в качестве контроля, второй набор может храниться при температуре 40°С в течение трех дней.
В табл. 15 приведены результаты эксклюзионной хроматографии. Изменение уровня агрегатов варьируется от -0,1 до 2,1%. Более высокий уровень агрегатов строго коррелирует с более высокой концентрацией продукта. Разность уровней депегилирования варьирует от 0,1 до 0,8%. Незначительно более высокий уровень депегилирования коррелирует с низкой концентрацией продукта при низких значениях рН. При снижении рН уровень депегилирования увеличивается, и эта тенденция согласуется с более ранними наблюдениями в исследованиях свойств субстанций-кандидатов для использования в производстве готовых препаратов.
- 19 026073
Таблица 15
Совокупные результаты эксклюзионной хроматографии для исследования ΌΘΕ № 2
№ повтор а | % Агрегатов | % Мономеров | % Депегилирования | ||||||
Начальн ые УСЛОВИЯ | 40 °С в течени е 3 дней | Разност ь | Начальн ые условия | 40 °С в течени е 3 дней | Разност Ь | Начальн ые условия | 40 °С в течени е 3 дней | Разност ь | |
1 | 1,0 | 1,2 | 0,2 | 987 | 97.8 | -0,9 | 0,3 | 1.0 | 07 |
2 | 0,8 | 2,8 | 2.(1 | 98.9 | 96,6 | -2,3 | (1,3 | (1.7 | 0.4 |
3 | 1,4 | 17 | -ОД | 98,4 | 98,3 | -0,1 | 0,2 | 0,4 | ОД |
4 | 0,9 | 2,6 | 1,7 | 98,8 | 97,1 | -1,8 | 0,2 | 0,3 | од |
5 | 0,9 | 2,0 | 1.1 | 98.8 | 97,4 | -1,4 | (1,3 | (1.6 | 0.3 |
6 | 1,0 | 2,0 | 1,0 | 987 | 97,4 | -1,3 | 0,3 | 0,6 | о,з |
7 | 1,0 | 1,8 | 0,8 | 98,8 | 97,7 | -1Д | 0,3 | 0,6 | о,з |
8 | 1,1 | 1,2 | 07 | 98,6 | 97,7 | -0,9 | 0,3 | 1Д | 0,8 |
9 | 07 | 2,8 | 2.1 | 99.(1 | 96,4 | -2,6 | (1,3 | (1.8 | 0.5 |
10 | 1,2 | 1,2 | 0,0 | 98,6 | 98,4 | -0,2 | 0,2 | 0,5 | 0,2 |
11 | 0,9 | 2,2 | 17 | 98,8 | 97,3 | -1,5 | 0,3 | 0,4 | од |
Пример 6. Исследование с принудительным перемешиванием.
Может быть проведено исследование с принудительным перемешиванием с целью оценки стабильности белка в препаратах. Образцы могут быть получены путем диализа бГ-КСФ-Т133-20К ПЭГ (16,6 мг/мл белка в 10 мМ ацетата натрия, 5% сорбита при рН 4,0) против 30 мМ цитрата и 250 мМ аргинина при рН 6,0. Часть материала после диализа может быть разбавлена до целевой концентрации 5 мг/мл, с использованием буфера, содержащего 30 мМ цитрата и 250 мМ аргинина при рН 6,0. После этого объединенная фракция может быть профильтрована через 0,22-мкм фильтр и подвергнута принудительному перемешиванию в стеклянном стакане при 60 об/мин с помощью магнитной мешалки в течение 2 ч при комнатной температуре. Образцы могут быть отобраны каждые 30 мин.
Во всех временных точках все образцы были прозрачными, бесцветными и без видимых частиц. В табл. 16 приведены результаты измерения концентрации белка, поглощения при 550 нм и рН для каждого момента времени.
Таблица 16
Совокупные результаты измерения концентрации белка, А550, и рН в исследовании с принудительным перемешиванием (смешиванием)
Образец | Количественное определение | Ά280 нм | Поглощение А55О нм | рН | |
Концентрация белка (мг/мл) | Ст.откл. (%) | Остат стоткл. (%) | |||
То | 4,9 | 0,03 | 0,60 % | 0,00942 | 6,0 |
Тзомнн контроль | 5,0 | 0,01 | 0,30 % | -0,00015 | 6,0 |
Тзомнн перемешанный | 4,9 | 0,04 | 0,70 % | 0,00972 | 6,0 |
ТбОмнн контроль | 4,9 | 0,03 | 0,60 % | 0,00407 | 6,0 |
ТбОмнн перемешанный | 4,9 | 0,02 | 0,40 % | 0,03547 | 6,0 |
Тэомнн контроль | 5,0 | 0,05 | 1,00% | 0,09031 | 6,0 |
Термин перемешанный | 4,9 | 0,03 | 0,60 % | 0,08798 | 6,0 |
Тпомпн контроль | 5,0 | 0,03 | 0,60 % | 0,08761 | 6,0 |
Тпомкн перемешанный | 4,9 | 0,03 | 0,60 % | 0,08775 | 6,0 |
Концентрация белка остается стабильной в течение смешивания. Значение рН остается постоянным в течение всего эксперимента. Как показано в табл. 17, состав продукта согласно данным эксклюзионной хроматографии также является постоянным в течение всего исследования. В целом результаты этого исследования показывают, что белок является стабильным в течение всего периода принудительного перемешивания.
- 20 026073
Таблица 17
Совокупные результаты эксклюзионной хроматографии в исследовании с принудительным перемешиванием (смешиванием)
Образец | % Агрегатов | % ПЭГ 6Г-КСФ | % 6Г-КСФ |
То | 1,6 | 98,1 | 0,3 |
Тзомш контроль | 1,6 | 98,2 | 0,3 |
Тзомпи перемешанный | 1,6 | 98,2 | 0,3 |
ТбОмш, контроль | 1,6 | 98,1 | 0.3 |
ТбОмин перемешанный | 1,6 | 98,2 | 0,3 |
Ти)„„„ контроль | 1,6 | 98,2 | 0,3 |
Тодмин перемешанный | 1,6 | 98,2 | 0,3 |
т помин контроль | 1,6 | 98,1 | 0.3 |
ТпОмин перемешанный | 1,6 | 98,2 | 0,3 |
Пример 7. Исследование с использованием метода замораживания-оттаивания.
Исследование с использованием метода замораживания-оттаивания может быть проведено с целью определения концентрации белка и рН различных образцов. Белок в образцах может быть подвергнут пяти или менее циклам замораживания и оттаивания. Образцы могут быть профильтрованы через 0,22 мкм фильтры и распределены в 15 мл флаконы. Одна аликвота может быть использована в качестве контроля. Для трех оставшихся аликвот каждый цикл замораживания-оттаивания мог состоять из замораживания раствора белка в течение 1 ч при -75±5°С и оттаивания при комнатной температуре в течение примерно 1 ч до исчезновения льда. Раствор образца во флаконе может быть перемешан путем аккуратного вращения флакона три раза. Одна аликвота может быть оставлена для испытания после первого, второго и пятого цикла замораживания и оттаивания.
Во всех временных точках все образцы являются прозрачными, бесцветными и не имеют видимых частиц. В табл. 18 приведены результаты измерения концентрации белка, поглощения при 550 нм и рН для каждого момента времени.
Таблица 18
Совокупные результаты оценки концентрации белка, А550 и рН в исследовании с использованием метода замораживания-оттаивания
Образец | Количественное определение А280 нм | Поглощение А550 нм | рн | ||
Концентрация белка (мг/мл) | Ст.откл. (%) | Остат. ст.откл. < %) | |||
Цикл 0 | 20,6 | 0,5 | 2,20 % | 0,11583 | 5,9 |
Цикл 1 | 21,9 | 1,4 | 6,40 % | 0,09471 | 5,9 |
Цикл 2 | 22,6 | 0,3 | 1,40% | 0,12685 | 5,9 |
Цикл 5 | 21,3 | 1,0 | 4,60 % | 0,13357 | 5,9 |
Концентрация белка остается стабильной после каждого цикла замораживания-оттаивания. Кроме того, значение рН остается стабильным в течение пяти циклов замораживания-оттаивания. Состав продукта согласно данным эксклюзионной хроматографии является сопоставимым во всех временных точках и приведен в табл. 19.
Таблица 19
Совокупные результаты эксклюзионной хроматографии в исследовании с использованием метода замораживания-оттаивания
Образец | % Агрегатов | % ПЭГ 6Г-КСФ | % 6Г-КСФ |
Цикл 0 | 1,6 | 98,1 | 0,3 |
Цикл 1 | 1,5 | 98,1 | 0,4 |
Цикл 2 | 1.6 | 98,0 | 0,4 |
Цикл 5 | 1,5 | 98,1 | 0,4 |
Claims (7)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Стабильный водный состав для лечения заболевания, модулируемого бычьим гранулоцитарным колониестимулирующим фактором (бГ-КСФ), содержащий бГ-КСФ-Т133рАР, имеющий 20К ПЭГ, связанный с рАР, буфер на основе цитрата или сукцината и аргинин, причем указанный состав содержит менее 0,001% поверхностно-активного вещества.
- 2. Состав п.1, дополнительно содержащий противоион для аргинина.
- 3. Состав по п.2, отличающийся тем, что противоион для аргинина представляет собой хлорид или сульфат.
- 4. Состав по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат.
- 5. Состав по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что бГ-КСФ-Т133рАР, имеющий 20К ПЭГ, связанный с рАР, присутствует в количестве от 0,5 до 12 г/л, буферное вещество представляет собой цитрат и молярность цитратного буфера составляет приблизительно 30 мМ, молярность аргинина составляет приблизительно 250 мМ, причем состав имеет рН от 5,7 до 6,6.
- 6. Способ лечения животного, имеющего мастит или транспортную лихорадку, включающий введение указанному животному терапевтически эффективного количества состава по любому из пп.1-5.
- 7. Способ по п.6, отличающийся тем, что указанное заболевание представляет собой мастит и указанное животное представляет собой тельную корову.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US38562910P | 2010-09-23 | 2010-09-23 | |
PCT/US2011/052692 WO2012040421A1 (en) | 2010-09-23 | 2011-09-22 | Formulations for bovine granulocyte colony stimulating factor and variants thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA201390206A1 EA201390206A1 (ru) | 2013-09-30 |
EA026073B1 true EA026073B1 (ru) | 2017-02-28 |
Family
ID=44721111
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201390206A EA026073B1 (ru) | 2010-09-23 | 2011-09-22 | Состав бычьего гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и способ лечения с его использованием |
Country Status (33)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11273202B2 (ru) |
EP (1) | EP2618830B1 (ru) |
JP (1) | JP5798628B2 (ru) |
KR (2) | KR20130055665A (ru) |
CN (1) | CN103096916B (ru) |
AR (1) | AR083006A1 (ru) |
AU (1) | AU2011305386B2 (ru) |
BR (1) | BR112013005697B1 (ru) |
CA (1) | CA2812704C (ru) |
CL (1) | CL2013000771A1 (ru) |
CO (1) | CO6690780A2 (ru) |
CR (1) | CR20130067A (ru) |
DK (1) | DK2618830T3 (ru) |
EA (1) | EA026073B1 (ru) |
ES (1) | ES2540862T3 (ru) |
HK (1) | HK1183247A1 (ru) |
HR (1) | HRP20150476T1 (ru) |
IL (1) | IL224848A (ru) |
MA (1) | MA34585B1 (ru) |
ME (1) | ME02103B (ru) |
MX (1) | MX342624B (ru) |
MY (1) | MY161665A (ru) |
NZ (1) | NZ608164A (ru) |
PE (1) | PE20131339A1 (ru) |
PL (1) | PL2618830T3 (ru) |
PT (1) | PT2618830E (ru) |
RS (1) | RS53962B1 (ru) |
SG (1) | SG188287A1 (ru) |
SI (1) | SI2618830T1 (ru) |
TW (1) | TWI480288B (ru) |
UA (1) | UA110799C2 (ru) |
WO (1) | WO2012040421A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201301208B (ru) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AR083006A1 (es) * | 2010-09-23 | 2013-01-23 | Lilly Co Eli | Formulaciones para el factor estimulante de colonias de granulocitos (g-csf) bovino y variantes de las mismas |
CN111565736B (zh) * | 2017-10-11 | 2024-03-08 | 礼蓝美国股份有限公司 | 猪g-csf变体和其用途 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE4242863A1 (de) * | 1992-12-18 | 1994-06-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von G-CSF |
US5919757A (en) * | 1992-12-18 | 1999-07-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Aqueous pharmaceutical preparations of G-CSF with a long shelf life |
EP0988861A1 (en) * | 1998-08-17 | 2000-03-29 | Pfizer Products Inc. | Stabilized protein compositions |
WO2005039620A1 (de) * | 2003-10-20 | 2005-05-06 | Hexal Biotech Forschungs Gmbh | Stabile wässrige g-csf-haltige zusammensetzungen |
WO2008122415A1 (en) * | 2007-04-05 | 2008-10-16 | Sandoz Ag | Stable aqueous g-csf formulations |
WO2010011735A2 (en) * | 2008-07-23 | 2010-01-28 | Ambrx, Inc. | Modified bovine g-csf polypeptides and their uses |
WO2011090305A2 (en) * | 2010-01-19 | 2011-07-28 | Hanmi Holdings Co., Ltd | Liquid formulations for long-acting g-csf conjugate |
Family Cites Families (299)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2489293A (en) | 1946-07-16 | 1949-11-29 | Fires Corp | Fire detecting cable |
US3773919A (en) | 1969-10-23 | 1973-11-20 | Du Pont | Polylactide-drug mixtures |
US4263428A (en) | 1978-03-24 | 1981-04-21 | The Regents Of The University Of California | Bis-anthracycline nucleic acid function inhibitors and improved method for administering the same |
US4289872A (en) | 1979-04-06 | 1981-09-15 | Allied Corporation | Macromolecular highly branched homogeneous compound based on lysine units |
ZA811368B (en) | 1980-03-24 | 1982-04-28 | Genentech Inc | Bacterial polypedtide expression employing tryptophan promoter-operator |
ATE12348T1 (de) | 1980-11-10 | 1985-04-15 | Gersonde Klaus Prof Dr | Verfahren zur herstellung von lipid-vesikeln durch ultraschallbehandlung, anwendung des verfahrens und vorrichtung zur durchfuehrung des verfahrens. |
IE52535B1 (en) | 1981-02-16 | 1987-12-09 | Ici Plc | Continuous release pharmaceutical compositions |
FR2504010B1 (fr) | 1981-04-15 | 1985-10-25 | Sanofi Sa | Medicaments anticancereux contenant la chaine a de la ricine associee a un anticorps antimelanome et procede pour leur preparation |
US4551433A (en) | 1981-05-18 | 1985-11-05 | Genentech, Inc. | Microbial hybrid promoters |
JPS57206622A (en) | 1981-06-10 | 1982-12-18 | Ajinomoto Co Inc | Blood substitute |
US4485045A (en) | 1981-07-06 | 1984-11-27 | Research Corporation | Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes |
NZ201705A (en) | 1981-08-31 | 1986-03-14 | Genentech Inc | Recombinant dna method for production of hepatitis b surface antigen in yeast |
US4401666A (en) | 1982-02-01 | 1983-08-30 | Olin Corporation | Use of metallic salts of pyridine-2-thione-N-oxide to treat or prevent bovine mastitis |
EP0088046B1 (de) | 1982-02-17 | 1987-12-09 | Ciba-Geigy Ag | Lipide in wässriger Phase |
US4671958A (en) | 1982-03-09 | 1987-06-09 | Cytogen Corporation | Antibody conjugates for the delivery of compounds to target sites |
DE3218121A1 (de) | 1982-05-14 | 1983-11-17 | Leskovar, Peter, Dr.-Ing., 8000 München | Arzneimittel zur tumorbehandlung |
EP0102324A3 (de) | 1982-07-29 | 1984-11-07 | Ciba-Geigy Ag | Lipide und Tenside in wässriger Phase |
US4512922A (en) | 1982-12-22 | 1985-04-23 | Genentech, Inc. | Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins |
US4511503A (en) | 1982-12-22 | 1985-04-16 | Genentech, Inc. | Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins |
US4511502A (en) | 1982-12-22 | 1985-04-16 | Genentech, Inc. | Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins |
US4820352A (en) | 1983-01-10 | 1989-04-11 | Bausch & Lomb Incorporated | Cleaning and conditioning solutions for contact lenses and methods of use |
US5089398A (en) | 1983-02-22 | 1992-02-18 | Chiron Corporation | Enhanced yeast transcription employing hybrid GAPDH promoter region constructs |
US4876197A (en) | 1983-02-22 | 1989-10-24 | Chiron Corporation | Eukaryotic regulatable transcription |
CA1341116C (en) | 1983-02-22 | 2000-10-17 | Rae Lyn Burke | Yeast expression systems with vectors having gapdh or pyk promoters and synthesis or foreign protein |
JPS59166086A (ja) | 1983-03-09 | 1984-09-19 | Teruhiko Beppu | 新規な発現型プラスミドとそれらを用いて仔牛プロキモシン遺伝子を大腸菌内で発現させる方法 |
US4859600A (en) | 1983-04-25 | 1989-08-22 | Genentech, Inc. | Recombinant procaryotic cell containing correctly processed human growth hormone |
US4755465A (en) | 1983-04-25 | 1988-07-05 | Genentech, Inc. | Secretion of correctly processed human growth hormone in E. coli and Pseudomonas |
EP0127839B1 (en) | 1983-05-27 | 1992-07-15 | THE TEXAS A&M UNIVERSITY SYSTEM | Method for producing a recombinant baculovirus expression vector |
US4544545A (en) | 1983-06-20 | 1985-10-01 | Trustees University Of Massachusetts | Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting |
JPS607934A (ja) | 1983-06-29 | 1985-01-16 | Dai Ichi Seiyaku Co Ltd | リポソ−ムの製造方法 |
HUT35524A (en) | 1983-08-02 | 1985-07-29 | Hoechst Ag | Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance |
US4689406A (en) | 1983-08-10 | 1987-08-25 | Amgen | Enhancement of microbial expression of polypeptides |
DE3486459D1 (de) | 1983-09-26 | 1997-12-11 | Udo Dr Med Ehrenfeld | Mittel und Erzeugnis für die Diagnose und Therapie von Tumoren sowie zur Behandlung von Schwächen der zelligen und humoralen Immunabwehr |
DE3474511D1 (en) | 1983-11-01 | 1988-11-17 | Terumo Corp | Pharmaceutical composition containing urokinase |
DK518384A (da) | 1984-01-31 | 1985-07-01 | Idaho Res Found | Vektor til fremstilling af et gen-produkt i insektceller, fremgangsmaade til dens fremstilling samt dens anvendelse |
EP0154316B1 (en) | 1984-03-06 | 1989-09-13 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified lymphokine and production thereof |
US5718893A (en) | 1984-04-15 | 1998-02-17 | Foster; Preston F. | Use of G-CSF to reduce acute rejection |
US4880734A (en) | 1984-05-11 | 1989-11-14 | Chiron Corporation | Eukaryotic regulatable transcription |
EP0164556B1 (en) | 1984-05-11 | 1994-03-02 | Chiron Corporation | Enhanced yeast transcription employing hybrid promoter region constructs |
US4542225A (en) | 1984-08-29 | 1985-09-17 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Acid-cleavable compound |
US4738921A (en) | 1984-09-27 | 1988-04-19 | Eli Lilly And Company | Derivative of the tryptophan operon for expression of fused gene products |
US4659839A (en) | 1984-10-10 | 1987-04-21 | Mallinckrodt, Inc. | Coupling agents for radiolabeled antibody fragments |
US4837148A (en) | 1984-10-30 | 1989-06-06 | Phillips Petroleum Company | Autonomous replication sequences for yeast strains of the genus pichia |
US4968618A (en) | 1984-11-16 | 1990-11-06 | University Of Florida | Composition and method for promoting growth of granulocytes |
GB8430252D0 (en) | 1984-11-30 | 1985-01-09 | Beecham Group Plc | Compounds |
ATE66469T1 (de) | 1985-01-14 | 1991-09-15 | Neorx Corp | Metall-radionuklid markiertes protein fuer diagnose und therapie. |
JPH0615477B2 (ja) | 1985-02-08 | 1994-03-02 | 中外製薬株式会社 | 感染防禦剤 |
WO1986004605A1 (en) | 1985-02-08 | 1986-08-14 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Human granulocyte colony stimulating factor |
DE3675588D1 (de) | 1985-06-19 | 1990-12-20 | Ajinomoto Kk | Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist. |
JP2524586B2 (ja) | 1985-06-26 | 1996-08-14 | シタス コーポレイション | ポリマ−接合を利用する医薬組成物用蛋白質の可溶化 |
US6004548A (en) | 1985-08-23 | 1999-12-21 | Amgen, Inc. | Analogs of pluripotent granulocyte colony-stimulating factor |
US4810643A (en) | 1985-08-23 | 1989-03-07 | Kirin- Amgen Inc. | Production of pluripotent granulocyte colony-stimulating factor |
JPS63500636A (ja) | 1985-08-23 | 1988-03-10 | 麒麟麦酒株式会社 | 多分化能性顆粒球コロニー刺激因子をコードするdna |
EP0238655A4 (en) | 1985-10-03 | 1989-09-11 | Biogen Nv | POLYPEPTIDES LIKE THE GRANULOCYTE-MACROPHOUS COLONY STIMULATION FACTORS (GM-CSF) AND THEIR METHODS OF PRODUCING LARGE QUANTITIES IN MICROBIAL CELLS. |
US4680338A (en) | 1985-10-17 | 1987-07-14 | Immunomedics, Inc. | Bifunctional linker |
AU6543286A (en) | 1985-10-25 | 1987-05-19 | Zymogenetics Inc. | Method of using bar1 for secreting foreign proteins |
NZ218336A (en) | 1985-12-09 | 1991-08-27 | Kirin Amgen Inc | Monoclonal antibodies to human pluripotent granulocyte colony stimulating factor (hpg-csf) |
US4699784A (en) | 1986-02-25 | 1987-10-13 | Center For Molecular Medicine & Immunology | Tumoricidal methotrexate-antibody conjugate |
GB8610600D0 (en) | 1986-04-30 | 1986-06-04 | Novo Industri As | Transformation of trichoderma |
JPH0618781B2 (ja) | 1986-10-18 | 1994-03-16 | 中外製薬株式会社 | 感染症治療剤 |
JPS63123383A (ja) | 1986-11-11 | 1988-05-27 | Mitsubishi Kasei Corp | ハイブリツドプロモ−タ−、発現調節dna配列および発現ベクタ− |
US5681720A (en) | 1986-12-23 | 1997-10-28 | Kyowa Hakko Co., Ltd. | DNA encoding human granulocyte colony stimulating factor plasmids and host cells comprising same, and methods of expressing the encoded polypeptide |
US5186933A (en) | 1986-12-30 | 1993-02-16 | Baylor College Of Medicine | Synthesis and immunogenicity of rotavirus genes using a baculovirus expression system |
JPH02502876A (ja) | 1987-03-16 | 1990-09-13 | アメリカン バイオジェネティック サイエンシズ インク | ワクチンと生物学的殺虫剤における組換えバクロウイルス閉塞体 |
CA1304020C (en) | 1987-03-23 | 1992-06-23 | Meher H. Irani | High level expression in yeast |
US5229490A (en) | 1987-05-06 | 1993-07-20 | The Rockefeller University | Multiple antigen peptide system |
WO1989001037A1 (en) | 1987-07-24 | 1989-02-09 | Cetus Corporation | Production of ricin toxins in a baculovirus-insect cell expression system |
CA1317244C (en) | 1987-07-24 | 1993-05-04 | Ernest Seigo Kawasaki | Production of biologically active forms of csf using a baculovirus (acnpv)-insect cell expression system |
US5080891A (en) | 1987-08-03 | 1992-01-14 | Ddi Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols |
US4929555A (en) | 1987-10-19 | 1990-05-29 | Phillips Petroleum Company | Pichia transformation |
US4904584A (en) | 1987-12-23 | 1990-02-27 | Genetics Institute, Inc. | Site-specific homogeneous modification of polypeptides |
CA1340772C (en) | 1987-12-30 | 1999-09-28 | Patricia Tekamp-Olson | Expression and secretion of heterologous protiens in yeast employing truncated alpha-factor leader sequences |
US4847325A (en) | 1988-01-20 | 1989-07-11 | Cetus Corporation | Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1 |
US5674706A (en) | 1988-05-06 | 1997-10-07 | Chiron Corporation | High level expression of proteins in yeast |
CA1324969C (en) | 1988-05-06 | 1993-12-07 | Jeffrey R. Shuster | High level expression of proteins in yeast |
KR0133561B1 (ko) | 1988-05-13 | 1998-04-21 | 스티븐 엠. 오드레 | 과립구 군체 자극인자의 정제방법 |
FR2631974B1 (fr) | 1988-05-31 | 1992-12-11 | Agronomique Inst Nat Rech | Baculovirus modifie, son procede de preparation et son application en tant que vecteur d'expression de genes |
AU4197389A (en) | 1988-08-05 | 1990-03-05 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York, The | In vivo infection of live insects with a recombinant baculovirus |
GB8819453D0 (en) | 1988-08-16 | 1988-09-21 | Roy P | Production of bluetongue virus non-structural proteins using baculovirus expression vector |
US5202117A (en) | 1988-08-24 | 1993-04-13 | Koichiro Tsuji | Method of treating thrombi with g-csf |
NZ230425A (en) | 1988-09-02 | 1992-07-28 | Molecular Eng Ass | Production of paramyxovirus fusion (f) protein using recombinant baculovirus expression vector |
US5218092A (en) | 1988-09-29 | 1993-06-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Modified granulocyte-colony stimulating factor polypeptide with added carbohydrate chains |
GB8824591D0 (en) | 1988-10-20 | 1988-11-23 | Royal Free Hosp School Med | Fractionation process |
US6780613B1 (en) | 1988-10-28 | 2004-08-24 | Genentech, Inc. | Growth hormone variants |
CA2001774C (en) | 1988-10-28 | 2001-10-16 | James A. Wells | Method for identifying active domains and amino acid residues in polypeptides and hormone variants |
WO1990005785A1 (en) | 1988-11-18 | 1990-05-31 | The Regents Of The University Of California | Method for site-specifically incorporating unnatural amino acids into proteins |
US5047335A (en) | 1988-12-21 | 1991-09-10 | The Regents Of The University Of Calif. | Process for controlling intracellular glycosylation of proteins |
US6166183A (en) | 1992-11-30 | 2000-12-26 | Kirin-Amgen, Inc. | Chemically-modified G-CSF |
DE68925966T2 (de) | 1988-12-22 | 1996-08-29 | Kirin Amgen Inc | Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor |
US4902502A (en) | 1989-01-23 | 1990-02-20 | Cetus Corporation | Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate |
WO1990010078A1 (en) | 1989-02-23 | 1990-09-07 | University Of Ottawa | Improved baculovirus expression system capable of producing foreign gene proteins at high levels |
EP0460071A4 (en) | 1989-02-24 | 1993-02-03 | Cell Analysis Systems, Inc. | Method and apparatus for determining a proliferation index of a cell sample |
HUT64022A (en) | 1989-04-19 | 1993-11-29 | Enzon Inc | Process for producing active polyalkileneoxide carbonates for the modification of polypeptides |
US5122614A (en) | 1989-04-19 | 1992-06-16 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
US5324844A (en) | 1989-04-19 | 1994-06-28 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
US5766883A (en) | 1989-04-29 | 1998-06-16 | Delta Biotechnology Limited | Polypeptides |
CA2033070A1 (en) | 1989-05-17 | 1990-11-18 | Lois K. Miller | Baculovirus expression vectors |
EP0400472B1 (en) | 1989-05-27 | 1996-04-03 | Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited | Process for preparing polyethylene glycol derivatives and modified protein. |
FR2649120B1 (fr) | 1989-06-30 | 1994-01-28 | Cayla | Nouvelle souche et ses mutants de champignons filamenteux, procede de production de proteines recombinantes a l'aide de ladite souche et souches et proteines obtenues selon ce procede |
US5312808A (en) | 1989-11-22 | 1994-05-17 | Enzon, Inc. | Fractionation of polyalkylene oxide-conjugated hemoglobin solutions |
US5162601A (en) | 1989-11-22 | 1992-11-10 | The Upjohn Company | Plant potyvirus expression vector with a gene for protease |
GB9107846D0 (en) | 1990-04-30 | 1991-05-29 | Ici Plc | Polypeptides |
US5219564A (en) | 1990-07-06 | 1993-06-15 | Enzon, Inc. | Poly(alkylene oxide) amino acid copolymers and drug carriers and charged copolymers based thereon |
FR2664905B1 (fr) | 1990-07-18 | 1994-08-12 | Agronomique Inst Nat Rech | Baculovirus modifie, son procede d'obtention, et vecteurs d'expression obtenus a partir dudit baculovirus. |
WO1992001800A1 (en) | 1990-07-20 | 1992-02-06 | Chiron Corporation | Method for integrative transformation of yeast using dispersed repetitive elements |
IE912365A1 (en) | 1990-07-23 | 1992-01-29 | Zeneca Ltd | Continuous release pharmaceutical compositions |
WO1992002628A1 (en) | 1990-08-02 | 1992-02-20 | Chiron Corporation | Expression of human cmv glycoprotein-h using the baculovirus-insect cell expression system |
WO1992004363A1 (en) | 1990-09-04 | 1992-03-19 | The Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates, Inc. | Production of insulin-like growth factor-1 in methylotrophic yeast cells |
US5492821A (en) | 1990-11-14 | 1996-02-20 | Cargill, Inc. | Stabilized polyacrylic saccharide protein conjugates |
US5252714A (en) | 1990-11-28 | 1993-10-12 | The University Of Alabama In Huntsville | Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde |
ES2113940T3 (es) | 1990-12-03 | 1998-05-16 | Genentech Inc | Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas. |
US5231178A (en) | 1991-01-16 | 1993-07-27 | The Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates, Inc. | Method for the purification of intact, correctly-folded insulin-like growth factor-1 |
JPH05506673A (ja) | 1991-02-22 | 1993-09-30 | アムジエン・インコーポレーテツド | 迅速な創傷の治癒を促進するためのgm―csf及びg―csfの使用 |
US6565841B1 (en) | 1991-03-15 | 2003-05-20 | Amgen, Inc. | Pulmonary administration of granulocyte colony stimulating factor |
WO1992016555A1 (en) | 1991-03-18 | 1992-10-01 | Enzon, Inc. | Hydrazine containing conjugates of polypeptides and glycopolypeptides with polymers |
AU1651992A (en) | 1991-03-19 | 1992-10-21 | United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The | Expression of influenza nucleoprotein antigens in baculovirus |
US5595732A (en) | 1991-03-25 | 1997-01-21 | Hoffmann-La Roche Inc. | Polyethylene-protein conjugates |
US6126944A (en) | 1991-04-26 | 2000-10-03 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Baculovirus expression vectors and recombinant antigens for detecting type-specific antibodies to herpes simplex virus |
US5281698A (en) | 1991-07-23 | 1994-01-25 | Cetus Oncology Corporation | Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation |
US5290686A (en) | 1991-07-31 | 1994-03-01 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Expression of influenza a M2 protein in baculovirus |
IT1260468B (it) | 1992-01-29 | 1996-04-09 | Metodo per mantenere l'attivita' di enzimi proteolitici modificati con polietilenglicole | |
FR2686900B1 (fr) | 1992-01-31 | 1995-07-21 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides ayant une activite de stimulation des colonies de granulocytes, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
ATE156158T1 (de) | 1992-04-14 | 1997-08-15 | Cornell Res Foundation Inc | Makromoleküle auf basis von dendritischen polymeren und verfahren zur herstellung |
US5516657A (en) | 1992-05-11 | 1996-05-14 | Cambridge Biotech Corporation | Baculovirus vectors for expression of secretory and membrane-bound proteins |
ZA933926B (en) | 1992-06-17 | 1994-01-03 | Amgen Inc | Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules |
US5614184A (en) | 1992-07-28 | 1997-03-25 | New England Deaconess Hospital | Recombinant human erythropoietin mutants and therapeutic methods employing them |
AU5006993A (en) | 1992-08-21 | 1994-03-15 | Enzon, Inc. | Novel attachment of polyalkylene oxides to bio-effecting substances |
US5382657A (en) | 1992-08-26 | 1995-01-17 | Hoffmann-La Roche Inc. | Peg-interferon conjugates |
NZ250375A (en) | 1992-12-09 | 1995-07-26 | Ortho Pharma Corp | Peg hydrazone and peg oxime linkage forming reagents and protein derivatives |
US5298643A (en) | 1992-12-22 | 1994-03-29 | Enzon, Inc. | Aryl imidate activated polyalkylene oxides |
WO1994015625A1 (en) | 1993-01-15 | 1994-07-21 | Enzon, Inc. | Factor viii - polymeric conjugates |
US5349001A (en) | 1993-01-19 | 1994-09-20 | Enzon, Inc. | Cyclic imide thione activated polyalkylene oxides |
US5581476A (en) | 1993-01-28 | 1996-12-03 | Amgen Inc. | Computer-based methods and articles of manufacture for preparing G-CSF analogs |
US5321095A (en) | 1993-02-02 | 1994-06-14 | Enzon, Inc. | Azlactone activated polyalkylene oxides |
US5532142A (en) | 1993-02-12 | 1996-07-02 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Method of isolation and purification of fusion polypeptides |
IL104734A0 (en) | 1993-02-15 | 1993-06-10 | Univ Bar Ilan | Bioactive conjugates of cellulose with amino compounds |
WO1994028024A1 (en) | 1993-06-01 | 1994-12-08 | Enzon, Inc. | Carbohydrate-modified polymer conjugates with erythropoietic activity |
WO1995000162A1 (en) | 1993-06-21 | 1995-01-05 | Enzon, Inc. | Site specific synthesis of conjugated peptides |
US6385505B1 (en) | 1993-07-21 | 2002-05-07 | Omnicell.Com | Methods and apparatus for dispensing items |
GB9317618D0 (en) | 1993-08-24 | 1993-10-06 | Royal Free Hosp School Med | Polymer modifications |
US5762939A (en) | 1993-09-13 | 1998-06-09 | Mg-Pmc, Llc | Method for producing influenza hemagglutinin multivalent vaccines using baculovirus |
US5643575A (en) | 1993-10-27 | 1997-07-01 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
US5919455A (en) | 1993-10-27 | 1999-07-06 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
US5491076A (en) | 1993-11-01 | 1996-02-13 | The Texas A&M University System | Expression of foreign genes using a replicating polyprotein producing virus vector |
US5605792A (en) | 1993-11-04 | 1997-02-25 | The Ohio State University Research Foundation | Infectious bursal disease virus VP2 fusion protein expressed by baculovirus, use as diagnostic |
PT730470E (pt) | 1993-11-10 | 2002-08-30 | Enzon Inc | Conjugados melhorados de interferao-polimero |
US5951974A (en) | 1993-11-10 | 1999-09-14 | Enzon, Inc. | Interferon polymer conjugates |
US5446090A (en) | 1993-11-12 | 1995-08-29 | Shearwater Polymers, Inc. | Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules |
US5599705A (en) | 1993-11-16 | 1997-02-04 | Cameron; Robert B. | In vitro method for producing differentiated universally compatible mature human blood cells |
US5830851A (en) | 1993-11-19 | 1998-11-03 | Affymax Technologies N.V. | Methods of administering peptides that bind to the erythropoietin receptor |
US5773569A (en) | 1993-11-19 | 1998-06-30 | Affymax Technologies N.V. | Compounds and peptides that bind to the erythropoietin receptor |
FR2715664B1 (fr) | 1994-01-31 | 1996-04-12 | Proteine Performance Sa | Baculovirus recombinant et son utilisation pour la production d'anticorps monoclonaux. |
CA2139385C (en) | 1994-02-04 | 2001-12-25 | Gottfried Alber | Products containing g-csf and tnf binding protein |
US6316254B1 (en) | 1994-02-14 | 2001-11-13 | University Of Washington | Methods for stimulating erythropoiesis using hematopoietic proteins |
JP3090586B2 (ja) | 1994-03-15 | 2000-09-25 | 片倉工業株式会社 | システインプロテアーゼ遺伝子欠損バキュロウイルスおよびその製造法並びにこれを利用する有用タンパク質の製造法 |
US5473034A (en) | 1994-03-18 | 1995-12-05 | Hyogo Prefectural Government | Method for producing protein-synthetic polymer conjugate and said conjugate produced thereby |
US5536495A (en) | 1994-04-15 | 1996-07-16 | Foster; Preston F. | Use of G-CSF to reduce acute rejection |
US5629384A (en) | 1994-05-17 | 1997-05-13 | Consiglio Nazionale Delle Ricerche | Polymers of N-acryloylmorpholine activated at one end and conjugates with bioactive materials and surfaces |
WO1995033490A1 (en) | 1994-06-02 | 1995-12-14 | Enzon, Inc. | Method of solubilizing substantially water insoluble materials |
US5730990A (en) | 1994-06-24 | 1998-03-24 | Enzon, Inc. | Non-antigenic amine derived polymers and polymer conjugates |
US6403375B1 (en) | 1994-08-24 | 2002-06-11 | Boyce Thompson Institute For Plant Research, Inc. | Establishment of Trichoplusia ni cell lines in serum-free medium for recombinant protein and baculovirus production |
US5650234A (en) | 1994-09-09 | 1997-07-22 | Surface Engineering Technologies, Division Of Innerdyne, Inc. | Electrophilic polyethylene oxides for the modification of polysaccharides, polypeptides (proteins) and surfaces |
US5871986A (en) | 1994-09-23 | 1999-02-16 | The General Hospital Corporation | Use of a baculovirus to express and exogenous gene in a mammalian cell |
US5824784A (en) | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
WO1996041813A2 (en) | 1994-11-09 | 1996-12-27 | Offord Robin E | Functionalized polymers for site-specific attachment |
US5738846A (en) | 1994-11-10 | 1998-04-14 | Enzon, Inc. | Interferon polymer conjugates and process for preparing the same |
IL116085A (en) | 1994-12-16 | 1999-12-31 | Ortho Pharma Corp | Spray dried erythropoietin |
US5932462A (en) | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
AU720337B2 (en) | 1995-02-17 | 2000-05-25 | Stichting Dienst Landbouwkundig Onderzoek | Production of biologically active recombinant bovine follicle stimulating hormone (REC bFSH) in the baculovirus expression system |
FR2732035B1 (fr) | 1995-03-23 | 1997-05-30 | Agronomique Inst Nat Rech | Procede de regulation de l'expression d'un gene dans un baculovirus, par un site de fixation d'un recepteur de l'acide retinoique, et vecteur pour la mise en oeuvre du dit procede |
US6184344B1 (en) | 1995-05-04 | 2001-02-06 | The Scripps Research Institute | Synthesis of proteins by native chemical ligation |
NZ308772A (en) | 1995-05-17 | 1999-04-29 | Du Pont | Recombinant baculovirus insecticides |
AU5893696A (en) | 1995-06-07 | 1996-12-30 | Novo Nordisk A/S | Modification of polypeptides |
US5672662A (en) | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
GB9526733D0 (en) | 1995-12-30 | 1996-02-28 | Delta Biotechnology Ltd | Fusion proteins |
AU1690697A (en) | 1996-01-17 | 1997-08-11 | Schering Corporation | Baculovirus expression system for human interleukin 5 receptor and method of screening for interleukin antagonists |
US5861279A (en) | 1996-01-17 | 1999-01-19 | Schering Corporation | Baculovirus expression system for human interleukin 5 receptor and method of screening for interleukin 5 antagonists |
US5747639A (en) | 1996-03-06 | 1998-05-05 | Amgen Boulder Inc. | Use of hydrophobic interaction chromatography to purify polyethylene glycols |
TW517067B (en) | 1996-05-31 | 2003-01-11 | Hoffmann La Roche | Interferon conjugates |
TW586933B (en) | 1996-06-20 | 2004-05-11 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Compositions for treating liver-complaints using EPO |
CA2262994A1 (en) | 1996-08-02 | 1998-02-12 | Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. | Polypeptides having a single covalently bound n-terminal water-soluble polymer |
US5980948A (en) | 1996-08-16 | 1999-11-09 | Osteotech, Inc. | Polyetherester copolymers as drug delivery matrices |
US6214966B1 (en) | 1996-09-26 | 2001-04-10 | Shearwater Corporation | Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution |
US5998595A (en) | 1996-11-05 | 1999-12-07 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Azidohalogenobenzyl derivatives, sugar compounds and protection of hydroxy groups |
US6083910A (en) | 1996-12-13 | 2000-07-04 | Chiron Corporation | Therapeutic uses of resolved intact or clipped native-sequence PDGF-BB dimers |
ATE200030T1 (de) | 1997-01-29 | 2001-04-15 | Polymasc Pharmaceuticals Plc | Pegylationsverfahren |
GB9703406D0 (en) | 1997-02-19 | 1997-04-09 | Chiron Spa | Expression of heterologous proteins |
DK0974111T3 (da) | 1997-04-11 | 2003-04-22 | California Inst Of Techn | Apparat og metode til automatiseret design af proteiner |
AU7266898A (en) | 1997-04-30 | 1998-11-24 | Enzon, Inc. | Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof |
US6162426A (en) | 1997-05-05 | 2000-12-19 | La Gamma; Edmund F. | Use of G-CSF to enhance the immune system in neonates |
US5990237A (en) | 1997-05-21 | 1999-11-23 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines |
ATE469166T1 (de) | 1997-06-06 | 2010-06-15 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Chemisch modifizierte polypeptide |
US5965393A (en) | 1997-07-01 | 1999-10-12 | National Institute Of Immunology | Method for enhancing foreign gene expression in baculovirus expression vector system |
NZ502375A (en) | 1997-07-14 | 2001-11-30 | Bolder Biotechnology Inc | The addition of non-natural cysteine derivatives to cause the protein to act as antagonists of the GH family |
GB9715660D0 (en) | 1997-07-25 | 1997-10-01 | Zeneca Ltd | Proteins |
EP1003889A1 (en) | 1997-08-05 | 2000-05-31 | Chiron Corporation | NOVEL $i(PICHIA PASTORIS) GENE SEQUENCES AND METHODS FOR THEIR USE |
US6017876A (en) | 1997-08-15 | 2000-01-25 | Amgen Inc. | Chemical modification of granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) bioactivity |
DE19735593C2 (de) | 1997-08-15 | 1999-08-26 | Hepavec Ag Fuer Gentherapie | Hüllprotein-modifizierter Baculovirus-Vektor für die Gentherapie |
US6090584A (en) | 1997-08-21 | 2000-07-18 | University Technologies International Inc. | Baculovirus artificial chromosomes and methods of use |
US5989868A (en) | 1997-09-12 | 1999-11-23 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Fusion protein systems designed to increase soluble cytoplasmic expression of heterologous proteins in esherichia coli |
AU9393398A (en) | 1997-09-16 | 1999-04-05 | Egea Biosciences, Inc. | Method for the complete chemical synthesis and assembly of genes and genomes |
AU752037B2 (en) | 1997-09-26 | 2002-09-05 | Uab Research Foundation | Reduced antigenic cells and uses therefor |
US6201072B1 (en) | 1997-10-03 | 2001-03-13 | Macromed, Inc. | Biodegradable low molecular weight triblock poly(lactide-co- glycolide) polyethylene glycol copolymers having reverse thermal gelation properties |
US6004573A (en) | 1997-10-03 | 1999-12-21 | Macromed, Inc. | Biodegradable low molecular weight triblock poly(lactide-co-glycolide) polyethylene glycol copolymers having reverse thermal gelation properties |
US6165783A (en) | 1997-10-24 | 2000-12-26 | Neuro Spheres Holdings Ltd. | Erythropoietin-mediated neurogenesis |
DE19748489A1 (de) | 1997-11-03 | 1999-05-06 | Roche Diagnostics Gmbh | Polyethylenglykol-derivatisierte Biomoleküle und deren Verwendung in heterogenen Nachweisverfahren |
US6448369B1 (en) | 1997-11-06 | 2002-09-10 | Shearwater Corporation | Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation |
EP0924298A1 (en) | 1997-12-18 | 1999-06-23 | Stichting Instituut voor Dierhouderij en Diergezondheid (ID-DLO) | Protein expression in baculovirus vector expression systems |
US5981709A (en) | 1997-12-19 | 1999-11-09 | Enzon, Inc. | α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same |
US5985263A (en) | 1997-12-19 | 1999-11-16 | Enzon, Inc. | Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates |
US7258858B2 (en) | 1997-12-24 | 2007-08-21 | University Of Guelph | Method of identifying high immune response animals |
US6274158B1 (en) | 1998-02-04 | 2001-08-14 | Veronica L. Zaharia Czeizler | Treatment with recombinant human erythropoietin of bleeding in patients with normal and abnormal hemostasis |
CA2319701C (en) | 1998-02-09 | 2009-09-29 | University Of Southern California | Method of promoting erythropoiesis |
JP2002505110A (ja) | 1998-03-04 | 2002-02-19 | オニックス ファーマシューティカルズ,インコーポレイティド | 遺伝物質の高生産性発現のためのバキュロウイルス発現系及び方法 |
ATE279430T1 (de) | 1998-03-05 | 2004-10-15 | Chiron Corp | Verfahren zur verbesserung der serum halbwertszeit von biologisch aktiven molekülen |
ES2307865T3 (es) | 1998-03-12 | 2008-12-01 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Metodo para preparar conjugados polimericos. |
DK0985697T3 (da) | 1998-03-24 | 2006-05-15 | Nof Corp | Oxiranderivater og fremgangsmåde til fremstilling deraf |
KR100264953B1 (ko) | 1998-04-03 | 2001-03-02 | 박현우 | 재조합 베큘로바이러스, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 미생물 살충제 |
IL124015A0 (en) | 1998-04-08 | 1999-01-26 | Yeda Res & Dev | Pharmaceutical compositions comprising a protein |
AR019025A1 (es) | 1998-04-09 | 2001-12-26 | Roche Diagnostics Gmbh | Uso de eritropoyetina en bajas dosis para producir un preparado farmaceutico para el tratamiento de hemocromatosis, preparado farmaceutico combinadoutilizado segun dicho uso y envase farmaceutico unitario que contiene al referido preparado farmaceutico combinado |
EP1075530A1 (en) | 1998-05-07 | 2001-02-14 | Transkaryotic Therapies, Inc. | Genomic sequences upstream of the coding region of the g-csf gene for protein production and delivery |
US6451986B1 (en) | 1998-06-22 | 2002-09-17 | Immunex Corporation | Site specific protein modification |
US6168932B1 (en) | 1998-07-13 | 2001-01-02 | Parker Hughes Institute | Recombinant DTctGMCSF fusion toxin in a baculovirus expression vector system |
US6245528B1 (en) | 1998-07-28 | 2001-06-12 | Academia Sinica | Latent baculovirus expression system |
US6368825B1 (en) | 1998-08-10 | 2002-04-09 | Academia Sinica | Baculovirus containing minimal CMV promoter |
CN1330675A (zh) | 1998-08-28 | 2002-01-09 | 格莱风科学公司 | 精确长度的聚酰胺链、其制备方法和其与蛋白质的缀合物 |
WO2000020032A1 (en) | 1998-10-06 | 2000-04-13 | Trustees Of Dartmouth College | RECOMBINANT CAT ALLERGEN, Fel dI, EXPRESSED IN BACULOVIRUS FOR DIAGNOSIS AND TREATMENT OF CAT ALLERGY |
US6420339B1 (en) | 1998-10-14 | 2002-07-16 | Amgen Inc. | Site-directed dual pegylation of proteins for improved bioactivity and biocompatibility |
ES2265693T3 (es) | 1998-10-16 | 2007-02-16 | Biogen Idec Ma Inc. | Proteinas de fusion con interferon-beta y usos. |
ES2630278T3 (es) | 1998-10-16 | 2017-08-21 | Biogen Ma Inc. | Conjugados poliméricos de interferón beta-1a y usos de los mismos |
US6403312B1 (en) | 1998-10-16 | 2002-06-11 | Xencor | Protein design automatic for protein libraries |
US6165283A (en) | 1998-10-23 | 2000-12-26 | Dahlin; William G. | Railcar cleaning method and apparatus |
CA2348822A1 (en) | 1998-10-30 | 2000-05-11 | Novozymes A/S | Glycosylated proteins having reduced allergenicity |
US6451346B1 (en) | 1998-12-23 | 2002-09-17 | Amgen Inc | Biodegradable pH/thermosensitive hydrogels for sustained delivery of biologically active agents |
US6281211B1 (en) | 1999-02-04 | 2001-08-28 | Euro-Celtique S.A. | Substituted semicarbazides and the use thereof |
JP2000247903A (ja) | 1999-03-01 | 2000-09-12 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 長期安定化製剤 |
US6994986B2 (en) | 1999-03-17 | 2006-02-07 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford University | In vitro synthesis of polypeptides by optimizing amino acid metabolism |
US6342216B1 (en) | 1999-03-17 | 2002-01-29 | The Board Of Regents, The University Of Texas System | Therapy of cancer by insect cells containing recombinant baculovirus encoding genes |
AU4325900A (en) | 1999-03-17 | 2000-10-04 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | In vitro macromolecule biosynthesis methods using exogenous amino acids and a novel atp regeneration system |
US6337191B1 (en) | 1999-03-22 | 2002-01-08 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Vitro protein synthesis using glycolytic intermediates as an energy source |
WO2000063268A1 (en) | 1999-04-16 | 2000-10-26 | Wm. Marsh Rice University | Poly(propylene fumarate) cross linked with poly(ethylene glycol) |
US6261805B1 (en) | 1999-07-15 | 2001-07-17 | Boyce Thompson Institute For Plant Research, Inc. | Sialyiation of N-linked glycoproteins in the baculovirus expression vector system |
US7144574B2 (en) | 1999-08-27 | 2006-12-05 | Maxygen Aps | Interferon β variants and conjugates |
AU2039501A (en) | 1999-10-15 | 2001-04-23 | Rockefeller University, The | System for rapid generation of recombinant baculovirus-based expression vectors for silkworm larvae |
US6348558B1 (en) | 1999-12-10 | 2002-02-19 | Shearwater Corporation | Hydrolytically degradable polymers and hydrogels made therefrom |
WO2001045796A2 (en) | 1999-12-22 | 2001-06-28 | Shearwater Corporation | Method for the preparation of 1-benzotriazolyl carbonate esters of poly(ethylene glycol) |
MXPA02006216A (es) | 1999-12-22 | 2004-02-26 | Nektar Therapeutics Al Corp | Derivados estericamente impedidos de polimeros solubles en agua. |
US6413507B1 (en) | 1999-12-23 | 2002-07-02 | Shearwater Corporation | Hydrolytically degradable carbamate derivatives of poly (ethylene glycol) |
US6555660B2 (en) | 2000-01-10 | 2003-04-29 | Maxygen Holdings Ltd. | G-CSF conjugates |
US6646110B2 (en) | 2000-01-10 | 2003-11-11 | Maxygen Holdings Ltd. | G-CSF polypeptides and conjugates |
WO2001062827A2 (en) | 2000-02-22 | 2001-08-30 | Shearwater Corporation | N-maleimidyl polymer derivatives |
AU2001257577A1 (en) | 2000-02-28 | 2001-09-03 | Shearwater Corporation | Water-soluble polymer conjugates of artelinic acid |
CA2337661A1 (en) | 2000-02-29 | 2001-08-29 | Pfizer Products Inc. | Stabilized granulocyte colony stimulating factor |
GB0012997D0 (en) | 2000-05-26 | 2000-07-19 | Eurogene Limited | Gene delivery |
US6586207B2 (en) | 2000-05-26 | 2003-07-01 | California Institute Of Technology | Overexpression of aminoacyl-tRNA synthetases for efficient production of engineered proteins containing amino acid analogues |
JP2002030098A (ja) | 2000-07-17 | 2002-01-29 | Institute Of Immunology Co Ltd | バキュロウィルスの発芽ウイルスからウイルスエンベロープを回収する方法 |
RU2003109746A (ru) | 2000-09-08 | 2005-01-27 | Грифон Терапьютикс, Инк. (Us) | Синтетические белки, стимулирующие эритропоэз |
US6436386B1 (en) | 2000-11-14 | 2002-08-20 | Shearwater Corporation | Hydroxyapatite-targeting poly (ethylene glycol) and related polymers |
TW593427B (en) | 2000-12-18 | 2004-06-21 | Nektar Therapeutics Al Corp | Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives |
US6531121B2 (en) | 2000-12-29 | 2003-03-11 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Protection and enhancement of erythropoietin-responsive cells, tissues and organs |
TWI246524B (en) | 2001-01-19 | 2006-01-01 | Shearwater Corp | Multi-arm block copolymers as drug delivery vehicles |
DE10112825A1 (de) | 2001-03-16 | 2002-10-02 | Fresenius Kabi De Gmbh | HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung |
JP2005502322A (ja) | 2001-04-19 | 2005-01-27 | ザ スクリップス リサーチ インスティテュート | 非天然アミノ酸のインビボ組込み |
GB0113657D0 (en) | 2001-06-05 | 2001-07-25 | Geneprot Inc | Improved native chemical ligation with three or more components |
US20040138412A1 (en) | 2001-09-07 | 2004-07-15 | Paolo Botti | Extended native chemical ligation |
US6908963B2 (en) | 2001-10-09 | 2005-06-21 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Thioester polymer derivatives and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith |
US7026440B2 (en) | 2001-11-07 | 2006-04-11 | Nektar Therapeutics Al, Corporation | Branched polymers and their conjugates |
CA2466746A1 (en) | 2001-11-14 | 2003-05-22 | Geneprot, Inc. | Extended native chemical ligation of three or more peptide fragments |
US6716821B2 (en) | 2001-12-21 | 2004-04-06 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same |
US7622248B2 (en) | 2002-02-15 | 2009-11-24 | The Research Foundation Of State University Of New York | Ribozymes with broad tRNA aminoacylation activity |
DE10207072A1 (de) | 2002-02-20 | 2003-08-28 | Supramol Parenteral Colloids | Stärkederivate, ihre Konjugate und Verfahren zur Herstellung derselben |
DE10209821A1 (de) | 2002-03-06 | 2003-09-25 | Biotechnologie Ges Mittelhesse | Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid |
DE10209822A1 (de) | 2002-03-06 | 2003-09-25 | Biotechnologie Ges Mittelhesse | Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid |
WO2003078461A1 (en) | 2002-03-20 | 2003-09-25 | Biopolymed Inc. | Preparation of g-csf stoichiometrically conjugated with biocompatible polymers at cystein residue |
US6790867B2 (en) | 2002-05-20 | 2004-09-14 | Schering-Plough Animal Health Corporation | Compositions and method for treating infection in cattle and swine |
EP2226316B1 (en) | 2002-05-30 | 2016-01-13 | The Scripps Research Institute | Copper-catalysed ligation of azides and acetylenes |
BR0314107A (pt) | 2002-09-11 | 2005-07-19 | Fresenius Kabi De Gmbh | Método de produção de derivados de hidroxialquil amido |
ATE445709T1 (de) | 2002-10-16 | 2009-10-15 | Scripps Research Inst | Glycoproteinsynthese |
MXPA05003983A (es) | 2002-10-16 | 2005-06-22 | Scripps Research Inst | Incorporacion en sitio especifico de cetoaminoacidos en proteinas. |
EP1583816A4 (en) | 2002-12-22 | 2007-06-13 | Scripps Research Inst | PROTEIN NETWORKS |
US7695723B2 (en) | 2002-12-31 | 2010-04-13 | Sygnis Bioscience Gmbh & Co. Kg | Methods of treating neurological conditions with hematopoietic growth factors |
CN101223272B (zh) | 2003-04-17 | 2013-04-03 | 斯克利普斯研究院 | 扩展真核生物遗传密码 |
AU2004267359B2 (en) | 2003-07-07 | 2010-09-09 | The Scripps Research Institute | Compositions of orthogonal lysyl-tRNA and aminoacyl-tRNA synthetase pairs and uses thereof |
US7527943B2 (en) | 2003-07-07 | 2009-05-05 | The Scripps Research Institute | Compositions of orthogonal glutamyl-tRNA and aminoacyl-tRNA synthetase pairs and uses thereof |
EP1704242A4 (en) | 2003-07-07 | 2008-06-18 | Scripps Research Inst | COMPOSITIONS WITH PAIRS OF ORTHOGONAL LEUCYL-TRNA AND AMINOACYL-TRNA-SYNTHETASE AND USES THEREOF |
US7182948B2 (en) | 2003-08-04 | 2007-02-27 | Ko Manufacturing, Inc. | Topical veterinary compositions and methods for the treatment and prevention of infection |
SG143252A1 (en) | 2003-10-09 | 2008-06-27 | Ambrx Inc | Polymer derivatives |
WO2005042024A1 (en) | 2003-11-04 | 2005-05-12 | Lek Pharmaceuticals D.D. | Stable pharmaceutical composition comprising granulocyte-colony stimulating factor |
AU2005211362B2 (en) | 2004-02-02 | 2008-03-13 | Ambrx, Inc. | Modified human interferon polypeptides and their uses |
WO2005092369A2 (en) | 2004-03-11 | 2005-10-06 | Fresenius Kabi Deutschland Gmbh | Conjugates of hydroxyethyl starch and erythropoietin |
WO2005092928A1 (en) | 2004-03-11 | 2005-10-06 | Fresenius Kabi Deutschland Gmbh | Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein, prepared by reductive amination |
US20060121073A1 (en) | 2004-07-12 | 2006-06-08 | Sandhya Goyal | Topical gel formulation comprising insecticide and its preparation thereof |
JP4990792B2 (ja) | 2004-12-22 | 2012-08-01 | アンブレツクス・インコーポレイテツド | アミノアシル−tRNAシンテターゼの組成物およびこの使用 |
JP5425398B2 (ja) | 2004-12-22 | 2014-02-26 | アンブレツクス・インコーポレイテツド | 非天然アミノ酸及びポリペプチドを含む組成物、非天然アミノ酸及びポリペプチドに関連する方法並び非天然アミノ酸及びポリペプチドその使用 |
BRPI0611221A2 (pt) * | 2005-06-01 | 2010-08-24 | Maxygen Holdings Ltd | polipeptÍdeos de g-csf peguilados e mÉtodos de produÇço dos mesmos |
KR100735784B1 (ko) | 2005-07-20 | 2007-07-06 | 재단법인 목암생명공학연구소 | 인간 과립구콜로니자극인자 변이체 및 이의 화학적 접합물 |
US8119667B2 (en) | 2005-12-29 | 2012-02-21 | Schering-Plough Animal Health Corporation | Carbonates of fenicol antibiotics |
ITMI20061624A1 (it) | 2006-08-11 | 2008-02-12 | Bioker Srl | Mono-coniugati sito-specifici di g-csf |
AR083006A1 (es) * | 2010-09-23 | 2013-01-23 | Lilly Co Eli | Formulaciones para el factor estimulante de colonias de granulocitos (g-csf) bovino y variantes de las mismas |
-
2011
- 2011-09-16 AR ARP110103377A patent/AR083006A1/es not_active Application Discontinuation
- 2011-09-16 TW TW100133501A patent/TWI480288B/zh active
- 2011-09-22 WO PCT/US2011/052692 patent/WO2012040421A1/en active Application Filing
- 2011-09-22 SG SG2013013768A patent/SG188287A1/en unknown
- 2011-09-22 MA MA35756A patent/MA34585B1/fr unknown
- 2011-09-22 SI SI201130474T patent/SI2618830T1/sl unknown
- 2011-09-22 RS RS20150280A patent/RS53962B1/en unknown
- 2011-09-22 PE PE2013000625A patent/PE20131339A1/es active IP Right Grant
- 2011-09-22 BR BR112013005697-5A patent/BR112013005697B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-09-22 ES ES11764063.1T patent/ES2540862T3/es active Active
- 2011-09-22 DK DK11764063T patent/DK2618830T3/en active
- 2011-09-22 JP JP2013530298A patent/JP5798628B2/ja active Active
- 2011-09-22 AU AU2011305386A patent/AU2011305386B2/en active Active
- 2011-09-22 MY MYPI2013000998A patent/MY161665A/en unknown
- 2011-09-22 UA UAA201303086A patent/UA110799C2/ru unknown
- 2011-09-22 NZ NZ608164A patent/NZ608164A/en unknown
- 2011-09-22 EP EP11764063.1A patent/EP2618830B1/en active Active
- 2011-09-22 EA EA201390206A patent/EA026073B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-09-22 ME MEP-2015-57A patent/ME02103B/me unknown
- 2011-09-22 KR KR1020137007318A patent/KR20130055665A/ko active Application Filing
- 2011-09-22 PL PL11764063T patent/PL2618830T3/pl unknown
- 2011-09-22 PT PT117640631T patent/PT2618830E/pt unknown
- 2011-09-22 CA CA2812704A patent/CA2812704C/en active Active
- 2011-09-22 MX MX2013003341A patent/MX342624B/es active IP Right Grant
- 2011-09-22 US US13/239,493 patent/US11273202B2/en active Active
- 2011-09-22 CN CN201180045228.7A patent/CN103096916B/zh active Active
- 2011-09-22 KR KR1020157012907A patent/KR101563852B1/ko active IP Right Grant
-
2013
- 2013-02-15 ZA ZA2013/01208A patent/ZA201301208B/en unknown
- 2013-02-18 CR CR20130067A patent/CR20130067A/es unknown
- 2013-02-21 IL IL224848A patent/IL224848A/en active IP Right Grant
- 2013-03-21 CL CL2013000771A patent/CL2013000771A1/es unknown
- 2013-03-22 CO CO13057093A patent/CO6690780A2/es unknown
- 2013-09-18 HK HK13110728.3A patent/HK1183247A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2015
- 2015-05-04 HR HRP20150476TT patent/HRP20150476T1/hr unknown
-
2022
- 2022-02-02 US US17/591,553 patent/US20220152155A1/en active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE4242863A1 (de) * | 1992-12-18 | 1994-06-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von G-CSF |
US5919757A (en) * | 1992-12-18 | 1999-07-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Aqueous pharmaceutical preparations of G-CSF with a long shelf life |
EP0988861A1 (en) * | 1998-08-17 | 2000-03-29 | Pfizer Products Inc. | Stabilized protein compositions |
WO2005039620A1 (de) * | 2003-10-20 | 2005-05-06 | Hexal Biotech Forschungs Gmbh | Stabile wässrige g-csf-haltige zusammensetzungen |
WO2008122415A1 (en) * | 2007-04-05 | 2008-10-16 | Sandoz Ag | Stable aqueous g-csf formulations |
WO2010011735A2 (en) * | 2008-07-23 | 2010-01-28 | Ambrx, Inc. | Modified bovine g-csf polypeptides and their uses |
WO2011090305A2 (en) * | 2010-01-19 | 2011-07-28 | Hanmi Holdings Co., Ltd | Liquid formulations for long-acting g-csf conjugate |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
PIEDMONTE, D.M. TREUHEIT, M.J.: "Formulation of Neulasta(R) (pegfilgrastim)", ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 60, no. 1, 30 November 2007 (2007-11-30), AMSTERDAM, NL, pages 50 - 58, XP022370571, ISSN: 0169-409X, DOI: 10.1016/j.addr.2007.04.017 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7003183B2 (ja) | 凍結乾燥した組換え型vwf製剤 | |
JP5784907B2 (ja) | 組換え型vwf製剤 | |
EP2586459B1 (en) | Vegf antagonist formulations | |
CA2151732C (en) | Stable lyophilized pharmaceutical preparations of g-csf | |
KR101662631B1 (ko) | Fsh의 액체 포뮬레이션 | |
EP3912639A1 (en) | Pharmaceutical formulations of tnf-alpha antibodies | |
KR20110086583A (ko) | 제8 인자 제형 | |
JP2000504327A (ja) | 高度に濃縮された、凍結乾燥された、および液体の、因子▲ix▼処方 | |
JP7208302B2 (ja) | 抗ヒトtslp受容体抗体含有医薬組成物 | |
KR20220062359A (ko) | 항-IL-23p19 항체 제형 | |
US20220152155A1 (en) | Formulations for bovine granulocyte colony stimulating factor and variants thereof | |
JP3479082B2 (ja) | トロンボポイエチン組成物 | |
EA045982B1 (ru) | СТАБИЛЬНЫЙ ЛИОФИЛИЗИРОВАННЫЙ СОСТАВ НА ОСНОВЕ G-CSF, СЛИТОГО С ГИБРИДНЫМ Fc | |
OA17126A (en) | Pharmaceutical formulations of TNF-alpha antibodies |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |
|
PC4A | Registration of transfer of a eurasian patent by assignment |